RS58700B1 - Gsk3 inhibitori i postupci njihove primene - Google Patents

Description

Opis

Povezane prijave

[0001] Saglasno 35 U.S.C. § 119(e) ova prijava zahteva prioritet U.S. privremenih patentnih prijava, U.S.S.N.61/713,314, podnetoj 12. oktobra 2012, i U.S.S.N.61/779,394, podnetoj 13. marta 2013.

Stanje tehnike

[0002] Potraga za novim terapeutskim agensima je u poslednjim godinama u velikoj meri potpomognuta boljim razumevanjem strukture enzima i drugih biomolekula povezanih sa bolestima. Jedna važna klasa enzima koja je bila predmet opsežnog istraživanja su proteinske kinaze.

[0003] Proteinske kinaze čine veliku familiju strukturno srodnih enzima koji su odgovorni za kontrolu različitih procesa transdukcije signala unutar ćelije. Smatra se da su proteinske kinaze evoluirale iz zajedničkog genetskog predaka zbog očuvanja njihove strukture i katalitičke funkcije. Skoro sve kinaze sadrže sličan katalitički domen od 250-300 aminokiselina. Kinaze se mogu svrstati u porodice po supstratima koje fosforilišu (npr., protein-tirozin, protein-serin/treonin, lipidi, itd.).

[0004] Generalno, proteinske kinaze posreduju u intraćelijskoj signalizaciji tako što izvršavaju transfer fosforila od nukleozidnog trifosfata do akceptora proteina koji je uključen u signalni put. Ovi događaji fosforilacije deluju kao molekularni prekidači za uključivanje/isključivanje koji mogu modulirati ili regulisati biološku funkciju ciljanog proteina. Ovi događaji fosforilacije se na kraju aktiviraju kao odgovor na različite ekstracelularne i druge stimulanse. Primeri takvih stimulusa uključuju signale stresa u okolini i hemijskom sastavu (npr., osmotski šok, toplotni šok, ultraljubičasto zračenje, bakterijski endotoksin i H2O2), citokini (npr., interleukin-1 (IL-I) i faktor tumorske nekroze α (TNF-α)) i faktori rasta (npr., faktor stimulacije kolonije granulocitnog makrofaga (GM-CSF) i faktor rasta fibroblasta (FGF)). Ekstracelularni stimulus može uticati na jedan ili više ćelijskih odgovora koji se odnose na rast ćelija, migraciju, diferencijaciju, lučenje hormona, aktivaciju transkripcionih faktora, kontrakciju mišića, metabolizam glukoze, kontrolu sinteze proteina i regulaciju ćelijskog ciklusa.

[0005] Mnoge bolesti su povezane sa abnormalnim ćelijskim odgovorima izazvanim događajima posredovanih protein kinazama, kao što je gore opisano. Ove bolesti uključuju, ali nisu ograničene na, autoimune bolesti, upalne bolesti, bolesti kostiju, metaboličke bolesti, neurološke i neurodegenerativne bolesti, rak, kardiovaskularne bolesti, alergije i astmu, Alchajmerovu bolest, metaboličke poremećaje (npr., dijabetes) i bolesti povezane sa hormonima. Prema tome, ostaje potreba da se pronađu inhibitori protein kinaze, posebno inhibitori GSK3, korisni kao terapeutski agensi.

Quiroga J. i dr, Tetrahedron, vol 57, no. 32, stranice 6947-6953 obelodanjuje regioselektivnu sintezu 4,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(6H)-ona. Drizin I. i dr., Bioorganica & Medicinal Chemistry Letters, vol.12, stranice 1481-1484 obelodanjuje studije strukturalne aktivnosti za seriju tricikličnih dihidropirimidina kao otvarače KATP kanala (KCO). WO 2007/012972 obelodanjuje 1,4-dihidropiridin-fuzionisane heterocikle, postupak za njihovu pripremu, upotrebu i sastave koji ih sadrže.

Sažetak pronalaska

[0006] Važno je da se identifikuju inhibitori selektivne kinaze kako bi se smanjili ili eliminisali efekti koji nisu ciljani. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja opisana ovde su inhibitori selektivne kinaze.

[0007] U nekim otelotvorenjima, predmetni pronalazak pruža jedinjenje formule I:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde su R<1>, R<2>, R<3>, R<4a>, R<4b>, R<5a>, R<5b>, R<6a>, i R<6b>kako je definisano ovde. U određenim otelotvorenjima, predmetni pronalazak pruža jedinjenje formule II:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde su R<2>, R<3>, R<5a>, R<5b>, R<7>, i n kako je definisano ovde. U određenim otelotvorenjima, predmetni pronalazak pruža jedinjenje formule III:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde su Prsten A, R<2>, R<3>, R<5a>, R<5b>, R<7>, i n kako je definisano ovde.

[0008] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje opisano ovde je enantiomerno obogaćeno. Na primer, u određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je formule II-a-i or II-a-ii:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0009] U nekim otelotvorenjima pruženi su farmaceutski sastavi koji sadrže ovde opisano jedinjenje (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.

[0010] U nekim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja inhibiraju aktivnost jedne ili više kinaza (npr., glikogen sintaza kinaza 3 (GSK3), kazein kinaza 1 (CK1)). U nekim otelotvorenjima, pružena su jedinjenja koja se koriste u postupcima inhibicije kinaze koja obuhvataju dovođenje u dodir kinaze, ili mutanta ili njegove varijante, sa efikasnom količinom jedinjenja formule I, II, ili III, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Kinaza može biti prečišćena ili sirova, i može biti prisutna u ćeliji, tkivu ili pacijentu. Prema tome, takvi postupci obuhvataju i inhibiciju in vitro i in vivo aktivnosti kinaze. U nekim otelotvorenjima, pružena su jedinjenja koja se koriste u postupcima inhibicije GSK3, koja sadrže dovođenje u dodir GSK3, ili njegovog mutanta ili varijante, sa efikasnom količinom ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U određenim otelotvorenjima, GSK3 je divlji tip GSK3. U nekim otelotvorenjima, GSK3 je GSK3β. U određenim otelotvorenjima, GSK3 je GSK3α. U određenim otelotvorenjima, GSK3 je u ćeliji. U određenim otelotvorenjima, pružena su jedinjenja koja se koriste u postupcima inhibicije CK1, koja sadrže dovođenje u dodir CK1, ili njegovog mutanta ili varijante, sa efikasnom količinom ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli. U određenim otelotvorenjima, CK1 je u ćeliji. U određenim otelotvorenjima, CK1 je divlji tip CK1. U nekim otelotvorenjima, CK1 je CK1δ. U određenim otelotvorenjima, CK1δ je divlji tip CK1δ. U određenim otelotvorenjima, CK1δ je u ćeliji. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je selektivno za GSK3 u odnosu na CK1.

[0011] U nekim otelotvorenjima, pružena su jedinjenja za upotrebu u postupcima za tretman poremećaja posredovanih sa kinazom, koja obuhvataju primenu pacijentu, koji pati od poremećaja posredovanog kinazom, efikasne količinom ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U određenim otelotvorenjima, pružena su jedinjenja za upotrebu u postupcima za tretman poremećaja posredovanih sa GSK3 koji obuhvataju primenu pacijentu koji pati od poremećaja posredovanog GSK3 efikasnom količinom ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa GSK3 je poremećaj posredovan sa GSK3β, kao što je neurološka bolest, psihijatrijski poremećaj, rak (npr., glioma, rak pankreasa), ili metabolički poremećaj (npr., dijabetes (npr., dijabetes tipa II)). U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa GSK3 je neurodegenerativni poremećaj, kao što je Alchajmerova bolest, frontotemporalna demencija (uključujući progresivnu supranuklearnu paralizu, kortikobazalna degeneracija), ili amiotrofna lateralna skleroza (ALS). U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa GSK3 je psihijatrijski poremećaj, kao što je bipolarni poremećaj, šizofrenija, autizam, Fragile X sindrom, ili depresija (npr., depresija otporna na litijum). U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa GSK3 je poremećaj posredovan sa GSK3α. U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa GSK3α je rak. U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa GSK3α je leukemija, kao što je akutna mijeloidna leukemija. U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa GSK3α je metabolički poremećaj (npr., dijabetes (npr. dijabetes tipa II)). U određenim otelotvorenjima, pružena su jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja poremećaja posredovanog sa CK1 koji obuhvataju primenu pacijentu koji pati od poremećaja posredovanog sa CK1 efikasnom količinom ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U određenim otelotvorenjima, pružena su jedinjenja za upotrebu u postupcima za tretman poremećaja posredovanih sa CK1δ, koji obuhvataju primenu pacijentu koji pati od poremećaja posredovanog sa CK1δ efikasne količine ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa CK1δ je neuropsihatrijski poremećaj, kao što je hiperkinetički poremećaj (ADHD). U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje stimuliše neurogenezu (npr., ljudskih neurona).

[0012] U nekim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja pokazuju poboljšanu potentnost, selektivnost i/ili stabilnost u odnosu na prethodno opisane inhibitore kinazue (npr, GSK3, CK1δ). U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je potentno za GSK (npr., <1 µM). U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je selektivno za GSK u odnosu na selektivnost za druge kinaze (npr., >10-struki IC50). U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje inhibira Tau fosforilaciju (npr., IC50<10 µM). U određenim aspektima, pruženo jedinjenje aktivira Wnt signalizaciju (npr., IC50<10 µM). U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je potentno za CK1δ (npr., <1 µM). U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je selektivno za CK1δ u poređenju sa selektivnošću za druge kinaze (npr., >10-ostruki IC50). U nekim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja pokazuju poboljšani farmakokinetički profil, kao što je pojačana penetracija u mozak.

[0013] U nekim otelotvorenjima, jedinjenja koja su ovde opisana su korisna kao jedinjenja sonde za istraživanje uloge signalizacije kinaze, npr, GSK3 signalizacija, u patofiziologiji raznih poremećaja, npr., bipolarni poremećaj i drugi psihijatrijski poremećaji. U određenim otelotvorenjima, pružena jedinjenja su korisna kao jedinjenja sonde za moduliranje ljudske neurogeneze.

[0014] Ova prijava se odnosi na različite izdate patente, objavljene patentne prijave, članke iz časopisa i druge publikacije.

Definicije

Hemijske definicije

[0015] Definicije specifičnih funkcionalnih grupa i hemijskih izraza su detaljnije opisane u nastavku. Hemijski elementi su identifikovani u skladu sa Periodnim sistemom elemenata, CAS verzija, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed., unutrašnji okvir, i specifične funkcionalne grupe su generalno definisane kao što je tamo opisano. Pored toga, opšti principi organske hemije, kao i specifične funkcionalne grupe i reaktivnost opisani su kos Thomas Sorrell, Organic Chemistry, University Science Books, Sausalito, 1999; Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry, 5. izdanje, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001; Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989; i Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3. izdanje, Cambridge University Press, Cambridge, 1987.

[0016] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu sadržati jedan ili više asimetričnih centara, i prema tome mogu postojati u različitim izomernim oblicima, npr., enantiomerima i/ili diastereomerima. Na primer, jedinjenja koja su ovde opisana mogu biti u obliku pojedinačnog enantiomera, dijastereomera ili geometrijskog izomera, ili mogu biti u obliku smeše stereoizomera, uključujući racemične smeše i smeše obogaćene jednim ili više stereoizomera. Izomeri se mogu izolovati iz smeša postupcima koji su poznati stručnjacima, uključujući hiralnu tečnu hromatografiju visokog pritiska (HPLC) i formiranje i kristalizaciju hiralnih soli; ili poželjni izomeri mogu biti pripremljeni asimetričnom sintezom. Pogledati, na primer, Jacques i dr., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981); Wilen i dr., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); i Wilen, Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972).

Predmetni pronalazak dodatno obuhvata jedinjenja koja su ovde opisana kao pojedinačne izomere koji su u suštini bez drugih izomera, i alternativno, kao smeše različitih izomera.

[0017] Ukoliko nije drugačije navedeno, strukture koje su ovde prikazane su takođe obuhvaćene jedinjenjima koja se razlikuju samo po prisustvu jednog ili više izotopno obogaćenih atoma. Na primer, jedinjenja koja su ovde opisana, gde su jedinjenja obogaćena deuterijumom, tricijumom,<18>F,<13>C, i/ili<14>C, u okviru su obelodanjenja. Takva jedinjenja su korisna, na primer, kao analitička sredstva ili sonde u biološkim testovima.

[0018] Izraz „alifatični“ uključuje i zasićene i nezasićene, nearomatične, ravanolančane (tj., nerazgranate), razgranate, aciklične i ciklične (tj., karbociklične) ugljovodonike. U nekim otelotvorenjima, alifatična grupa je opciono supstituisana sa jednom ili više funkcionalnih grupa (npr., halo, kao što je fluor). Kako će razumeti stručnjak u ovoj oblasti, „alifatik“ je ovde namenjen da uključuju alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil i cikloalkinil ostatke.

[0019] Kada je naveden niz vrednosti, on treba da obuhvati svaku vrednost i pod-opseg unutar opsega. Na primer „C1-6 „alkil“ obuhvata, C1, C2, C3, C4, C5, C6, C1-6, C1-5, C1-4, C1-3, C1-25, C2-6, C2-5, C2-4, C2-3, C3-6, C3-5, C3-4, C4-6, C4-5, i C5-6alkil.

[0020] „Alkil“ se odnosi na radikal ravnolančane ili razgranate zasićene ugljovodonične grupe koja ima od 1 do 20 atoma ugljenika („C1-20alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 do 10 atoma ugljenika („C1-10alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 do 9 atoma ugljenika („C1-9alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 do 8 atoma ugljenika („C1-8alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 do 7 atoma ugljenika („C1-7alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 do 6 atoma ugljenika („C1-6alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 do 5 atoma ugljenika („C1-5alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 do 4 atoma ugljenika („C1-4alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 do 3 atoma ugljenika („C1-3alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 do 2 atoma ugljenika („C1-2alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 1 atom ugljenika („C1alkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa ima 2 do 6 atoma ugljenika („C2-6alkil“). Primeri C1-6alkil grupa uključuju metil (C1), etil (C2), n-propil (C3), izopropil (C3), n-butil (C4), terc-butil (C4), sek-butil (C4), izo-butil (C4), n-pentil (C5), 3-pentanil (C5), amil (C5), neopentil (C5), 3-metil-2-butanil (C5), tercijarni amil (C5), i n-heksil (C6). Dodatni primeri alkil grupa uključuju n-heptil (C7), n-oktil (C8) i slično. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaki primer alkil grupe je nezavisno opciono supstituisan, npr., nesupstituisan („nesupstituisani alkil“) ili supstituisan („supstituisani alkil“) sa jednim ili više supstituenata. U nekim otelotvorenjima, alkil grupa je nesupstituisani C1-10alkil (npr.,-CH3). U nekim otelotvorenjima, alkil grupa je supstituisani C1-10alkil.

[0021] U nekim otelotvorenjima, alkil grupa je supstituisana sa jednim ili više halogena. „Perhaloalkil“ je supstituisana alkil grupa kako je definisano ovde gde su svi atomi vodonika nezavisno zamenjeni sa halogenom, npr., fluoro, bromo, hloro, ili jodo. U nekim otelotvorenjima, alkil deo ima 1 do 8 atoma ugljenika („C1-8perhaloalkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil deo ima 1 do 6 atoma ugljenika („C1-6perhaloalkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil deo ima 1 do 4 atoma ugljenika („C1-4perhaloalkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil deo ima 1 do 3 atoma ugljenika („C1-3perhaloalkil“). U nekim otelotvorenjima, alkil deo ima 1 do 2 atoma ugljenika („C1-2perhaloalkil“). U nekim otelotvorenjima, svi atomi vodonika su zamenjeni sa fluoro. U nekim otelotvorenjima, svi atomi vodonika su zamenjeni sa hloro. Primeri perhaloalkil grupa uključuju-CF3, -CF2CF3, -CF2CF2CF3, -CCl3, -CFCl2, -CF2Cl, i slično.

[0022] „Alkenil“ se odnosi na ravnolančane ili razgranate zasićene ugljovodonične grupe koje imaju od 2 do 20 atoma ugljenika, jednu ili više ugljenik-ugljenik dvostrukih veza, i nemaju trostrukih veza („C2-20alkenil“). U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa ima 2 do 10 atoma ugljenika („C2-10alkenil“). U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa ima 2 do 9 atoma ugljenika („C2-9alkenil“). U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa ima 2 do 8 atoma ugljenika („C2-8alkenil“). U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa ima 2 do 7 atoma ugljenika („C2-7alkenil“). U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa ima 2 do 6 atoma ugljenika („C2-6alkenil“). U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa ima 2 do 5 atoma ugljenika („C2-5alkenil“). U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa ima 2 do 4 atoma ugljenika („C2-4alkenil“). U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa ima 2 do 3 atoma ugljenika („C2-3alkenil“). U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa ima 2 atoma ugljenika alkenil“). Jedna ili više ugljenikugljenik dvostrukih veza mogu biti unutrašnje (kao kod 2-butenila) ili terminalne (kao kod 1-butenila). Primeri C2-4alkenil grupa uključuju etenil (C2), 1-propenil (C3), 2-propenil (C3), 1-butenil (C4), 2-butenil (C4), butadienil (C4), i slično. Primeri C2-6alkenil grupa uključuju gore pomenute C2-4alkenil grupe kao i pentenil (C5), pentadienil (C5), heksenil (C6), i slično.

Dodatni primeri alkenila uključuju heptenil (C7), oktenil (C8), oktatrienil (C8), i slično.

Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaki primer alkenil grupe je nezavisno opciono supstituisan, npr, nesupstituisan („nesupstituisani alkenil“) ili supstituisan („supstituisani alkenil“) sa jednim ili više supstituenata. U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa je nesupstituisani C2-10alkenil. U nekim otelotvorenjima, alkenil grupa je supstituisani C2-10alkenil.

[0023] „Alkinil“ se odnosi na ravnolančane ili razgranate zasićene ugljovodonične grupe koje imaju od 2 do 20 atoma ugljenika, jednu ili više ugljenik-ugljenik trostrukih veza, i opciono jednu ili više dvostrukih veza („C2-20alkinil“). U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa ima 2 do 10 atoma ugljenika („C2-10alkinil“). U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa ima 2 do 9 atoma ugljenika („C2-9alkinil“). U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa ima 2 do 8 atoma ugljenika („C2-8alkinil“). U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa ima 2 do 7 atoma ugljenika („C2-7alkinil“). U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa ima 2 do 6 atoma ugljenika („C2-6alkinil“). U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa ima 2 do 5 atoma ugljenika („C2-5alkinil“). U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa ima 2 do 4 atoma ugljenika („C2-4alkinil“). U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa ima 2 do 3 atoma ugljenika („C2-3alkinil“). U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa ima 2 atoma ugljenika alkinil“). Jednu ili više ugljenikugljenik trostruka veza može biti unutrašnja (kao kod 2-butinila) ili terminalna (kao kod 1-butinila). Primeri C2-4alkinil grupa uključuju, bez ograničenja, etinil (C2), 1-propinil (C3), 2-propinil (C3), 1-butinil (C4), 2-butinil (C4), i slično. Primeri C2-6alkenil grupa uključuju gore pomenute C2-4alkinil grupe kao i pentinil (C5), heksinil (C6), i slično. Dodatni primeri alkinila uključuju heptinil (C7), oktinil (C8), i slično. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svako pojavljivanje alkinil grupe je nezavisno opciono supstituisan, npr, nesupstituisan („nesupstituisani alkinil“) ili supstituisan („supstituisani alkinil“) sa jednim ili više supstituenata. U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa je nesupstituisani C2-10alkinil. U nekim otelotvorenjima, alkinil grupa je supstituisani sa C2-10alkinil.

[0024] [0024] „Karbociklil“ ili „karbociklični“ se odnosi na radikal ne-aromatične ciklične ugljovodonične grupe koja ima od 3 do 10 atoma ugljenika prstena („C3-10karbociklil“) i nula heteroatoma u ne-aromatičnom sistemu prstena. U nekim otelotvorenjima, karbociklil grupa ima 3 do 8 atoma ugljenika prstena („C3-8karbociklil“). U nekim otelotvorenjima, karbociklil grupa ima 3 do 6 atoma ugljenika prstena („C3-6karbociklil“). U nekim otelotvorenjima, karbociklil grupa ima 3 do 6 atoma ugljenika prstena („C3-6karbociklil“). U nekim otelotvorenjima, karbociklil grupa ima 5 do 10 atoma ugljenika prstena („C5-10karbociklil“). Primerne C3-6karbociklil grupe uključuju, bez ograničenja, ciklopropil (C3), ciklopropenil (C3), ciklobutil (C4), ciklobutenil (C4), ciklopentil (C5), ciklopentenil (C5), cikloheksil (C6), cikloheksenil (C6), cikloheksadienil (C6), i slično. Primerne C3-8karbociklil grupe uključuju, bez ograničenja, gore pomenute C3-6karbociklil grupe kao i cikloheptil (C7), cikloheptenil (C7), cikloheptadienil (C7), cikloheptatrienil (C7), ciklooktil (C8), ciklooktenil (C8),

1

biciklo[2,2,1]heptanil (C7), biciklo[2,2,2]oktanil (C8), i slično. Primerne C3-10karbociklil grupa uključuju, bez ograničenja, gore pomenute C3-8karbociklil grupe kao i ciklononil (C9), ciklononenil (C9), ciklodecil (C10), ciklodecenil (C10), oktahydro-1H-indenil (C9), decahydronaphthalenil (C10), spiro[4,5]dekanil (C10), i slično. Kako prethodni primeri ilustruju, u određenim otelotvorenjima, karbociklična grupa je ili monociklična („monociklični karbociklil“) ili sadrži fuzionisani, premošćeni ili spiro sistem prstena kao što je biciklični sistem („biciklični karbociklil“). Karbociklil može biti zasićen, i zasićeni karbociklil se naziva „cikloalkil.“ U nekim otelotvorenjima, karbociklil je monociklična, zasićena karbociklil grupa koja ima od 3 do 10 atoma ugljenika prstena („C3-10cikloalkil“). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa ima 3 do 8 atoma ugljenika prstena („C3-8cikloalkil“). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa ima 3 do 6 atoma ugljenika prstena („C3-6cikloalkil“). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa ima 5 do 6 atoma ugljenika prstena („C5-6cikloalkil“). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa ima 5 do 10 atoma ugljenika prstena („C5-10cikloalkil“). Primeri C5-6cikloalkil grupa uključuju ciklopentil (C5) i cikloheksil (C5). Primeri C3-6cikloalkil grupa uključuju gore pomenute C5-6cikloalkil grupe kao i ciklopropil (C3) i ciklobutil (C4). Primeri C3-8cikloalkil grupa uključuju gore pomenute C3-6cikloalkil grupe kao i cikloheptil (C7) i ciklooktil (C8). Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaki primer cikloalkil grupe je nezavisno nesupstituisan („nesupstituisani cikloalkil“) ili supstituisan („supstituisani cikloalkil“) sa jednim ili više supstituenata. U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa je nesupstituisani C3-10cikloalkil. U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa je supstituisani C3-10cikloalkil. Karbociklil može biti delimično nezasićen. Karbociklil koji uključuje jednu ili više C=C dvostrukih veza u karbocikličnom prstenu se naziva „cikloalkenil“. Karbociklil koji uključuje jednu ili više C≡C trostrukih veza u karbocikličnom prstenu naziva se „cikloalkinil.“ Karbociklil uključuje aril.

„Karbociklil“ takođe uključuje sisteme prstena gde je karbociklični prsten, kao što je definisano gore, fuzionisan sa jednom ili više aril ili heteroaril grupa gde je tačka vezivanja na karbociklil prstenu, i u takvim slučajevima, broj ugljenika nastavlja da označava broj ugljenika u karbocikličnom sistemu prstena. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaki primer karbociklične grupe je nezavisno opciono supstituisan, npr., nesupstituisani („nesupstituisani karbociklil“) ili supstituisani („supstituisani karbociklil“) sa jednim ili više supstituenata. U nekim otelotvorenjima, karbociklil grupa je nesupstituisani C3-10karbociklil. U nekim otelotvorenjima, karbociklil grupa je supstituisani C3-10karbociklil.

[0025] U nekim otelotvorenjima, „karbociklil“ je monociklična, zasićena karbociklična grupa koja ima od 3 do 10 atoma ugljenika prstena („C3-10cikloalkil“). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa ima 3 do 8 atoma ugljenika prstena („C3-8cikloalkil“). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa ima 3 do 6 atoma ugljenika prstena („C3-6cikloalkil“). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa ima 5 do 6 atoma ugljenika prstena („C5-6cikloalkil“). U nekim otelotvorenjima, cikloalkil grupa ima 5 do 10 atoma ugljenika prstena („C5-10cikloalkil“). Primeri C5-6cikloalkil grupa uključuju ciklopentil (C5) i cikloheksil (C5). Primeri C3-6cikloalkil grupa uključuju gore pomenute C5-6cikloalkil grupe kao i ciklopropil (C3) i ciklobutil (C4). Primeri C3-8cikloalkil grupa uključuju gore pomenute C3-6cikloalkil grupe kao i cikloheptil (C7) i ciklooktil (C8). Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaka pojava cikloalkil grupe je nezavisno nesupstituisana („nesupstituisani cikloalkil“) ili supstituisana („nesupstituisani cikloalkil“) sa jednim ili više supstituenata. U određenim otelotvorenjima, cikloalkil grupa je nesupstituisani C3-10cikloalkil. U određenim otelotvorenjima, cikloalkil grupa je supstituisani C3-10cikloalkil.

[0026] „Heterociklil“ ili „heterociklični“ se odnosi na radikal 3- do 10-članog nearomatičnog sistema prstena koji ima ugljenikov atom prstena i 1 do 4 heteroatoma prstena, gde je svaki heteroatom nezavisno izabran od azota, kiseonika i sumpora („3-10-očlani heterociklil“). U heterociklil grupama koje sadrže jedan ili više atoma azota, tačka vezivanja može biti atom ugljenika ili azota, kako valenca dozvoljava. Heterociklil grupa može biti ili monociklična („monociklični heterociklil“) ili fuzionisani, premošćeni ili spiro sistem prstena, kao što je biciklični sistem („biciklični heterociklil“), i može biti zasićena ili može biti delimično nezasićena. Delimično nezasićene heterociklil grupe uključuju heteroaril. Heterociklični biciklični sistemi prstena mogu uključiti jedan ili više heteroatoma u jednom ili oba prstena. „Heterociklil“ takođe uključuje sisteme prstena gde je heterociklični prsten, kako je gore definisan, fuzionisan sa jednom ili više karbocikličnih grupa, gde je tačka vezivanja bilo na karbociklil ili heterociklil prstenu, ili sisteme prstena gde je heterociklil prsten, kako je gore definisan, fuzionisan sa jednom ili više arilnih ili heteroaril grupa, gde je tačka vezivanja na heterociklil prstenu, i u takvim slučajevima, broj članova prstena nastavlja da označava broj članova prstena u heterociklil sistemu prstena. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaki primer heterociklila je nezavisno opciono supstituisan, npr, nesupstituisani („nesupstituisani heterociklil“) ili supstituisani („supstituisani heterociklil“) sa jednim ili više supstituenata. U određenim otelotvorenjima, heterociklil grupa je nesupstituisani 3-10-očlani heterociklil. U nekim otelotvorenjima, heterociklil grupa je supstituisani 3-10-očlani heterociklil.

[0027] U nekim otelotvorenjima, heterociklil grupa je 5-10-očlani ne-aromatični sistem prstena koji ima atome ugljenika prstena i 1-4 heteroatome prstena, gde je svaki heteroatom nezavisno izabran od azota, kiseonika i sumpora („5-10-očlani heterociklil“). U nekim otelotvorenjima, heterociklil grupa je 5-8-očlani ne-aromatični sistem prstena koji ima atome ugljenika prstena i 1-4 heteroatome prstena, gde je svaki heteroatom nezavisno izabran od azota, kiseonika i sumpora („5-8-očlani heterociklil“). U nekim otelotvorenjima, heterociklil grupa je 5-6-očlani ne-aromatični sistem prstena koji ima atome ugljenika prstena i 1-4 heteroatome prstena, gde je svaki heteroatom nezavisno izabran od azota, kiseonika i sumpora („5-6-očlani heterociklil“). U nekim otelotvorenjima, 5-6-očlani heterociklil ima 1-3 heteroatoma prstena izabrana od azota, kiseonika i sumpora. U nekim otelotvorenjima, 5-6-očlani heterociklil ima 1-2 heteroatoma prstena izabrana od azota, kiseonika i sumpora. U nekim otelotvorenjima, 5-6-očlani heterociklil ima jedan heteroatom prstena izabran od azota, kiseonika i sumpora.

[0028] Primeri 3-očlanih heterociklil grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, bez ograničenja, azirdinil, oksiranil, tiorenil. Primeri 4-očlanih heterociklil grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, bez ograničenja, azetidinil, oksetanil i tietanil. Primeri 5-očlanih heterociklil grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, bez ograničenja, tetrahidrofuranil, dihidrofuranil, tetrahidrotiofenil, dihidro-tiofenil, pirolidinil, dihidropirolil i pirolil-2,5-dion. Primeri 5-očlanih heterociklil grupa koje sadrže dva heteroatoma uključuju, bez ograničenja, dioksolanil, oksasulfuranil, disulfuranil i oksazolidin-2-on. Primeri 5-očlanih heterociklil grupa koje sadrže tri heteroatoma uključuju, bez ograničenja, triazolinil, oksadiazolinil i tiadiazolinil. Primeri 6-očlanih heterociklil grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, bez ograničenja, piperidinil, tetrahidropiranil, dihidropiridinil i tianil. Primeri 6-očlanih heterociklil grupa koje sadrže dva heteroatoma uključuju, bez ograničenja, piperazinil, morfolinil, ditianil i dioksanil. Primeri 6-očlanih heterociklil grupa koje sadrže dva heteroatoma uključuju, bez ograničavanja, triazinanil. Primeri 7-očlanih heterociklil grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, bez ograničavanja, azepanil, oksepanil i tipanil. Primeri 8-očlanih heterociklil grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, bez ograničenja, azocanil, oksekanil i tiokanil. Primeri 5-očlanih heterociklil grupa spojenih na C6arilni prsten (koji se ovde takođe označava kao 5,6-biciklični heterociklični prsten) obuhvataju, bez ograničenja, indolinil, izoindolinil, dihidrobenzofuranil, dihidrobenzotienil, benzoksazolinonil i slično. Primeri 6-očlanih heterociklil grupa spojenih na arilni prsten (koji

1

se takođe ovde označavaju kao 6,6-biciklični heterociklični prsten) uključuju, bez ograničenja, tetrahidrokinolinil, tetrahidroizokinolinil i slično.

[0029] „Aril“ se odnosi na radikal monocikličnog ili policikličnog (npr, biciklični ili triciklični) 4n+2 aromatičnog sistema prstena (npr., koji ima 6, 10 ili 14 π elektrona koji se dele u cikličnom nizu) koji ima 6-14 atoma ugljenika u prstenu i nula heteroatoma u aromatičnom sistemu prstena („C6-14aril“). U nekim otelotvorenjima, aril grupa ima šest atoma ugljenika prstena aril"; npr., fenil). U nekim otelotvorenjima, aril grupa ima deset atoma ugljenika prstena („C10aril"; npr., naftil kao što su 1-naftil i 2-naftil). U nekim otelotvorenjima, aril grupa ima četrnaest atoma ugljenika prstena („C14aril"; npr., antracil). „Aril“ takođe uključuje sisteme prstena gde je arilni prsten, kako je definisan gore, fuzionisan sa jednom ili više karbociklil ili heterociklil grupa gde su radikal ili tačka vezivanja na arilnom prstenu, i u takvim slučajevima, broj atoma ugljenika se nastavlja da označi broj atoma ugljenika u arilnom sistemu prstena. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaki primer aril grupe je nezavisno opciono supstituisan, npr, nesupstituisan („nesupstituisani aril“) ili supstituisan („supstituisani aril“) sa jednim ili više supstituenata. U nekim otelotvorenjima, arilna grupa je nesupstituisani C6-14aril. U nekim otelotvorenjima, arilna grupa je supstituisani C6-14aril.

[0030] „Heteroaril“ se odnosi na radikal 5-10-članog monocikličnog ili bicikličnog 4n+2 aromatičnog sistema prstena (npr., koji ima 6 ili 10 π elektrona koji se dele u cikličnom nizu) koji imaju atome ugljenika prstena i 1-4 heteroatoma prstena u aromatičnom sistemu prstena, gde je svaki heteroatom nezavisno izabran od azota, kiseonika i sumpora („5-10-očlani heteroaril“). U heteroarilnim grupama koje sadrže jedan ili više atoma azota, tačka vezivanja može biti atom ugljenika ili azota, kako valenca dozvoljava. Heteroarilni biciklični sistemi prstena mogu uključiti jedan ili više heteroatoma u jednom ili oba prstena.

„Heteroaril“ uključuje sisteme prstena gde je heteroarilni prsten, kako je gore definisan, fuzionisan sa jednom ili više karbociklil ili heterociklil grupa u kojima je tačka vezivanja na heteroarilnom prstenu, i u takvim slučajevima, broj članova prstena nastavlja da označava broj članova prstena u sistemu heteroarilnog prstena. „Heteroaril“ takođe uključuje sisteme prstena gde je heteroarilni prsten, kako je gore definisan, fuzionisan sa jednom ili više aril grupa, gde je tačka vezivanja ili na arilnom ili heteroarilnom prstenu, i u takvim slučajevima, broj članova prstena označava broj članova prstena u spojenom (aril/heteroaril) sistemu prstena. Biciklične heteroaril grupe gde jedan prsten ne sadrži heteroatom (npr, indolil, kinolinil, karbazolil i slično) tačka vezivanja može biti na bilo kom prstenu, npr., ili prsten koji nosi heteroatom (npr., 2-indolil) ili prsten koji ne sadrži heteroatom (npr., 5-indolil).

[0031] U nekim otelotvorenjima, heteroaril grupa je 5-10-očlani aromatični sistem prstena koji ima atome ugljenika prstena i 1-4 heteroatome prstena pružene u aromatičnom sistemu prstena, gde je svaki heteroatom nezavisno izabran od azota, kiseonika i sumpora („5-10-očlani heteroaril“). U nekim otelotvorenjima, heteroaril grupa je 5-8-očlani aromatični sistem prstena koji ima atome ugljenika prstena i 1-4 heteroatoma prstena pruženih u aromatičnom sistemu prstena, gde je svaki heteroatom nezavisno izabran od azota, kiseonika i sumpora („5-8-očlani heteroaril“). U nekim otelotvorenjima, heteroaril grupa je 5-6-očlani aromatični sistem prstena koji ima atome ugljenika prstena i 1-4 heteroatoma prstena pruženih u aromatičnom sistemu prstena, gde je svaki heteroatom nezavisno izabran od azota, kiseonika i sumpora („5-6-očlani heteroaril“). U nekim otelotvorenjima, 5-6-očlani heteroaril ima 1-3 heteroatoma prstena izabrana od azota, kiseonika i sumpora. U nekim otelotvorenjima, 5-6-očlani heteroaril ima 1-2 heteroatoma prstena izabrana od azota, kiseonika i sumpora. U nekim otelotvorenjima, 5-6-očlani heteroaril ima 1 heteroatom prstena izabran od azota, kiseonika i sumpora. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svaka pojava heteroaril grupe je nezavisno opciono supstituisana, npr., nesupstituisana („nesupstituisani heteroaril“) ili supstituisana („supstituisani heteroaril“) sa jednim ili više supstituenata. U određenim otelotvorenjima, heteroaril grupa je nesupstituisani 5-14-očlani heteroaril. U nekim otelotvorenjima, heteroaril grupa je supstituisani 5-14-očlani heteroaril.

[0032] Primeri 5-očlanih heteroaril grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, bez ograničavanja, pirolil, furanil i tiofenil. Primeri 5-očlanih heteroaril grupa koje sadrže dva heteroatoma uključuju, bez ograničenja, imidazolil, pirazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil i izotiazolil. Primeri 5-očlanih heteroaril grupa koje sadrže tri heteroatoma uključuju, bez ograničavanja, triazolil, oksadiazolil i tiadiazolil. Primeri 5-očlanih heteroaril grupa koje sadrže četiri heteroatoma uključuju, bez ograničenja, tetrazolil. Primeri 6-očlanih heteroaril grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, bez ograničenja, piridinil. Primeri 6-očlanih heteroaril grupa koje sadrže dva heteroatoma uključuju, bez ograničenja, piridazinil, pirimidinil i pirazinil. Primeri 6-očlanih heteroaril grupa koje sadrže tri ili četiri heteroatoma uključuju, bez ograničenja, triazinil i tetrazinil, respektivno. Primeri 7-očlanih heteroaril grupa koje sadrže jedan heteroatom uključuju, bez ograničenja, azepinil, oksepinil i tiepinil. Primeri 5,6-bicikličnih heteroaril grupa uključuju, bez ograničenja, indolil, izoindolil,

1

indazolil, benzotriazolil, benzotiofenil, izobenzotiofenil, benzofuranil, benzoizofuranil, benzimidazolil, benzoksazolil, benzizoksazolil, benzoksadiazolil, benzotiazolil, benzitadiazolil, indolizinil, i purinil. Primeri 6,6-bicikličnih heteroaril grupa uključuju, bez ograničenja, naftiridinil, pteridinil, kinolinil, izohinolinil, cinolinil, kinoksalinil, ftalazinil i hinazolinil.

[0033] „Delimično nezasićen“ se odnosi na grupu koja uključuje najmanje jednu dvostruku ili trostruku vezu. Izraz „delimično nezasićen“ ima za cilj da obuhvati prstene koji imaju višestruka mesta nezasićenosti, ali nije predviđen da obuhvata aromatične grupe (npr, aril ili heteroaril grupe) kao što je ovde definisano. Slično, „zasićen“ se odnosi na grupu koja ne sadrži dvostruku ili trostruku vezu, tj. sadrži sve jednostruke veze.

[0034] U nekim otelotvorenjima, alifatične, alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aril i heteroaril grupe, kao što je ovde definisano, su opciono supstituisane (npr, „supstituisani“ ili „nesupstituisana“ alkil, „supstituisana“ ili „nesupstituisana“ alkenil, „supstituisana“ ili „nesupstituisana“ alkinil, „supstituisana“ ili „nesupstituisana“ karbociklil, „supstituisana“ ili „nesupstituisana“ heterociklil, „supstituisana“ ili „nesupstituisana“ aril ili „supstituisana“ ili „nesupstituisana“ heteroaril grupa). Uopšteno, izraz „supstituisan", bez obzira da li mu prethodi izraz „opciono“ ili ne, znači da je najmanje jedan vodonik prisutan u grupi (npr., atom ugljenika ili azota) zamenjen sa dozvoljenim supstituentom, npr, supstituentom koji nakon supstitucije dovodi do stabilnog jedinjenja, npr., jedinjenja koje se spontano transformiše preraspodelom, ciklizacijom, eliminacijom ili drugom reakcijom. Ukoliko nije drugačije naznačeno, „supstituisana“ grupa ima supstituent na jednom ili više supstituisanih položaja grupe, i kada je supstituisano više od jednog položaja u bilo kojoj datoj strukturi, supstituent je ili isti ili različit u svakom položaju. Izraz „supstituisan“ podrazumeva supstituciju sa svim dozvoljenim supstituentima organskih jedinjenja, bilo kojim od supstituenata koji su ovde opisani, što rezultuje formiranjem stabilnog jedinjenja. Predmetno obelodanjenje razmatra bilo koju i sve takve kombinacije, kako bi se došlo do stabilnog jedinjenja. U svrhu ovog obelodanjenja, heteroatomi kao što je azot mogu imati supstituente vodonika i/ili bilo koji pogodan supstituent kao što je ovde opisano, koji zadovoljavaju valence heteroatoma i rezultuju formiranjem stabilne grupe.

[0035] Primerni supstituenti atoma ugljenika uključuju, ali nisu ograničeni na, halogen, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, -OH, -OR<aa>, -ON(R<bb>)2, -N(R<bb>)2, -N(R<bb>)3<+>X-, -N(OR<cc>)R<bb>,-SH, -

1

SR<aa>, -SSR<cc>, -C(=O)R<aa>, -CO2H, -CHO, -C(OR<cc>)2, -CO2R<aa>, -OC(=O)R<aa>,-OCO2R<aa>, -C(=O)N(R<bb>)2, -OC(=O)N(R<bb>)2, -NR<bb>C(=O)R<aa>, -NR<bb>CO2R<aa>,-NR<bb>C(=O)N(R<bb>)2, -C(=NR<bb>)R<aa>, -C(=NR<bb>)OR<aa>, -OC(=NR<bb>)R<aa>, -OC(=NR<bb>)OR<aa>,-C(=NR<bb>)N(R<bb>)2, -OC(=NR<bb>)N(R<bb>)2, -NR<bb>C(=NR<bb>)N(R<bb>)2, -C(=O)NR<bb>SO2R<aa>,-NR<bb>SO2R<aa>, -SO2N(R<bb>)2, -SO2R<aa>, -SO2OR<aa>, -OSO2R<aa>, -S(=O)R<aa>, -OS(=O)R<aa>,-si(R<aa>)3, -OSi(R<aa>)3-C(=S)N(R<bb>)2, -C(=O)SR<aa>, -C(=S)SR<aa>, -SC(=S)SR<aa>, -SC(=O)SR<aa>, -OC(=O)SR<aa>, -SC(=O)OR<aa>, -SC(=O)R<aa>, -P(=O)2R<aa>, -OP(=O)2R<aa>, -P(=O)(R<aa>)2,-OP(=O)(R<aa>)2, -OP(=O)(OR<cc>)2, -P(=O)2N(R<bb>)2, -OP(=O)2N(R<bb>)2, -P(=O)(NR<bb>)2,-OP(=O)(NR<bb>)2, -NR<bb>P(=O)(OR<cc>)2, -NR<bb>P(=O)(NR<bb>)2, -P(R<cc>)2, -P(R<cc>)3, -OP(R<cc>)2,-OP(R<cc>)3, -B(R<aa>)2, -B(OR<cc>)2, -BR<aa>(OR<cc>), C1-10alkil, C1-10perhaloalkil, C2-10alkenil, C2-10alkinil, C3-10karbociklil, 3-14-očlani heterociklil, C6-14aril, i 5-14-očlani heteroaril, gde je svaki alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aril, i heteroaril nezavisno supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 R<dd>grupa;

ili dva geminalna vodonika na atomu ugljenika su zamenjena sa grupom =O, =S, =NN(R<bb>)2, =NNR<bb>C(=O)R<aa>, =NNR<bb>C(=O)OR<aa>, =NNR<bb>S(=O)2R<aa>, =NR<bb>, ili =NOR<cc>;

svaka pojava R<aa>je, nezavisno, izabrana iz grupe koju čine C1-10alkil, C1-10perhaloalkil, C2-10alkenil, C2-10alkinil, C3-10karbociklil, 3-14-očlani heterociklil, C6-14aril, i 5-14-očlani heteroaril, ili su dve R<aa>grupe spojene kako bi formirale 3-14-očlani heterociklil ili 5-14-očlani heteroaril prsten, gde je svaki alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aril, i heteroaril nezavisno supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 R<dd>grupa;

svaka pojava R<bb>je, nezavisno, izabrana iz grupe koju čine vodonik, -OH, -OR<aa>,-N(R<cc>)2, -CN, -C(=O)R<aa>, -C(=O)N(R<cc>)2, -CO2R<aa>, -SO2R<aa>, -C(=NR<cc>)OR<aa>,-C(=NR<cc>)N(R<cc>)2, -SO2N(R<cc>)2, -SO2R<cc>, -SO2OR<cc>, -SOR<aa>, -C(=S)N(R<cc>)2, -C(=O)SR<cc>,-C(=S)SR<cc>, -P(=O)2R<aa>, -P(=O)(R<aa>)2, -P(=O)2N(R<cc>)2, -P(=O)(NR<cc>)2, C1-10alkil, C1-10perhaloalkil, C2-10alkenil, C2-10alkinil, C3-10karbociklil, 3-14-očlani heterociklil, C6-14aril, i 5-14-očlani heteroaril, ili su dve R<bb>grupe spojene kako bi formirale 3-14-očlani heterociklil ili 5-14-očlani heteroaril prsten, gde je svaki alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aril, i heteroaril nezavisno supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 R<dd>grupa;

svaka pojava R<cc>je, nezavisno, izabrana iz grupe koju čine vodonik, C1-10alkil, C1-10perhaloalkil, C2-10alkenil, C2-10alkinil, C3-10karbociklil, 3-14-očlani heterociklil, C6-14aril, i 5-14-očlani heteroaril, ili su dve R<cc>grupe spojene kako bi formirale 3-14-očlani heterociklil ili 5-14-očlani heteroaril prsten, gde je svaki alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aril, i heteroaril nezavisno supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 R<dd>grupa;

svaka pojava R<dd>je, nezavisno, izabrana iz grupe koju čine halogen, -CN, -NO2, -N3,-SO2H, -SO3H, -OH, -OR<ee>, -ON(R<ff>)2, -N(R<ff>)2, -N(R<ff>)3<+>X-, -N(OR<ee>)R<ff>, -SH, -SR<ee>,-SSR<ee>, -

1

C(=O)R<ee>, -CO2H, -CO2R<ee>, -OC(=O)R<ee>, -OCO2R<ee>, -C(=O)N(R<ff>)2,-OC(=O)N(R<ff>)2, -NR<ff>C(=O)R<ee>, -NR<ff>CO2R<ee>, -NR<ff>C(=O)N(R<ff>)2, -C(=NR<ff>)OR<ee>,-OC(=NR<ff>)R<ee>, -OC(=NR<ff>)OR<ee>, -C(=NR<ff>)N(R<ff>)2, -OC(=NR<ff>)N(R<ff>)2,-NR<ff>C(=NR<ff>)N(R<ff>)2,-NR<ff>SO2R<ee>, -SO2N(R<ff>)2, -SO2R<ee>, -SO2OR<ee>, -OSO2R<ee>, -S(=O)R<ee>, -Si(R<ee>)3, -OSi(R<ee>)3, -C(=S)N(R<ff>)2, -C(=O)SR<ee>, -C(=S)SR<ee>, -SC(=S)SR<ee>, -P(=O)2R<ee>,-P(=O)(R<ee>)2, -OP(=O)(R<ee>)2, -OP(=O)(OR<ee>)2, C1-6alkil, C1-6perhaloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-10karbociklil, 3-10-očlani heterociklil, C6-10aril, 5-10-očlani heteroaril, gde je svaki alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aril, i heteroaril nezavisno supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 R<gg>grupa, ili dva geminalna R<dd>supstituenta mogu da se spoje kako bi formirali =O ili =S;

svaka pojava R<ee>je, nezavisno, izabrana iz grupe koju čine C1-6alkil, C1-6perhaloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-10karbociklil, C6-10aril, 3-10-očlani heterociklil, i 3-10-očlani heteroaril, gde je svaki alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aril, i heteroaril nezavisno supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 R<gg>grupa;

svaka pojava R<ff>je, nezavisno, izabrana iz grupe koju čine vodonik, C1-6alkil, C1-6perhaloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-10karbociklil, 3-10-očlani heterociklil, C6-10aril i 5-10-očlani heteroaril, ili su dve R<ff>grupe spojene kako bi formirale 3-14-očlani heterociklil ili 5-14-očlani heteroaril prsten, gde je svaki alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aril, i heteroaril nezavisno supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 R<gg>grupa; i

svaka pojava R<gg>je, nezavisno, halogen, -CN, -NO2, -N3, -SO2H, -SO3H, -OH, -OC1-6alkil, -ON(C1-6alkil)2, -N(C1-6alkil)2, -N(C1-6alkil)3<+>X-, -NH(C1-6alkil)2<+>X-, -NH2(C1-6alkil)<+>X-, -NH3<+>X-, -N(OC1-6alkil)(C1-6alkil), -N(OH)(C1-6alkil), -NH(OH), -SH, -SC1-6alkil, -SS(C1-6alkil), -C(=O)(C1-6alkil), -CO2H, -CO2(C1-6alkil), -OC(=O)(C1-6alkil), -OCO2(C1-6alkil), -C(=O)NH2, -C(=O)N(C1-6alkil)2,-OC(=O)NH(C1-6alkil), -NHC(=O)(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)C(=O)(C1-6alkil),-NHCO2(C1-6alkil), -NHC(=O)N(C1-6alkil)2, -NHC(=O)NH(C1-6alkil), -NHC(=O)NH2,-C(=NH)O(C1-6alkil),-OC(=NH)(C1-6alkil), -OC(=NH)OC1-6alkil, -C(=NH)N(C1-6alkil)2, -C(=NH)NH(C1-6alkil), -C(=NH)NH2, -OC(=NH)N(C1-6alkil)2, -OC(NH)NH(C1-6alkil), -OC(NH)NH2, -NHC(NH)N(C1-6alkil)2, -NHC(=NH)NH2, -NHSO2(C1-6alkil),-SO2N(C1-6alkil)2, -SO2NH(C1-6alkil), -SO2NH2,-SO2C1-6alkil, -SO2OC1-

6alkil,-OSO2C1-6alkil, -SOC1-6alkil, -Si(C1-6alkil)3, -OSi(C1-6alkil)3-C(=S)N(C1-6alkil)2, C(=S)NH(C1-6alkil), C(=S)NH2, -C(=O)S(C1-6alkil), -C(=S)SC1-6alkil, -SC(=S)SC1-6alkil, -P(=O)2(C1-6alkil), -P(=O)(C1-6alkil)2, -OP(=O)(C1-6alkil)2, -OP(=O)(OC1-6alkil)2, C1-6alkil, C1-6perhaloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C3-10karbociklil, C6-10aril, 3-10-očlani heterociklil, 5-10-očlani heteroaril; ili dva geminalna R<gg>supstituenta mogu da se spoje kako bi formirali =O ili =S; gde je X<->kontrajon.

1

[0036] „Kontrajon“ ili „anjonski kontrajon“ je negativno naelektrisana grupa povezana sa katjonskom kvarternom amino grupom u cilju održavanja elektronske neutralnosti. Primeri kontrajona uključuju halidne jone (npr., F-, Cl-, Br-, I-), NO3-, ClO4-, OH-, H2PO4-, HSO4-, jone sulfonata (npr, metansulfonat, trifluorometansulfonat, p-toluensulfonat, benzensulfonat, 10-kamfor sulfonat, naftalen-2-sulfonat, naftalen-1-sulfonska kiselina-5-sulfonat, etan-1-sulfonska kiselina-2-sulfonat, i slično), i jone karboksilata (npr., acetat, etanoat, propanoat, benzoat, glicerat, laktat, tartarat, glikolat i slično).

[0037] „Halo“ ili „halogen“ se odnosi na fluor (fluoro, -F), hlor (hloro, -Cl), brom (brom, -Br), ili jod (jod, -I).

[0038] Atomi azota mogu biti supstituisani ili nesupstituisani kako valenca dozvoljava, i uključuju primarne, sekundarne, tercijarne i kvartarne atome azota. Primeri supstituenata atoma azota uključuju, ali nisu ograničeni na, vodonik, -OH, -OR<aa>, -N(R<cc>)2, -CN,-C(=O)R<aa>, -C(=O)N(R<cc>)2, -CO2R<aa>, -SO2R<aa>, -C(=NR<bb>)R<aa>, -C(=NR<cc>)OR<aa>,-C(=NR<cc>)N(R<cc>)2, -SO2N(R<cc>)2, -SO2R<cc>, -SO2OR<cc>, -SOR<aa>, -C(=S)N(R<cc>)2, -C(=O)SR<ee>,-C(=S)SR<cc>, -P(=O)2R<aa>, -P(=O)(R<aa>)2, -P(=O)2N(R<cc>)2, -P(=O)(NR<cc>)2, C1-10alkil, C1-10perhaloalkil, C2-10alkenil, C2-10alkinil, C3-10karbociklil, 3-14-očlani heterociklil, C6-14aril, i 5-14-očlani heteroaril, ili su dve R<cc>grupe vezane za atom azota spojene kako bi formirale 3-14-očlani heterociklil ili 5-14-očlani heteroaril prsten, gde je svaki alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aril, i heteroaril nezavisno supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 R<dd>grupe, i gde R<aa>, R<bb>, R<cc>i R<dd>su kako je definisano iznad.

[0039] U određenim otelotvorenjima, supstituent prisutan na atomu azota je zaštitna grupa azota (takođe označena kao amino zaštitna grupa). Zaštitne grupe azota uključuju, ali nisu ograničene na, -OH, -OR<aa>, -N(R<cc>)2, -C(=O)R<aa>, -C(=O)N(R<cc>)2, -CO2R<aa>, -SO2R<aa>, -C(=NR<cc>)R<aa>, -C(=NR<cc>)OR<aa>, -C(=NR<cc>)N(R<cc>)2, -SO2N(R<cc>)2, -SO2R<cc>,-SO2OR<cc>, -SOR<aa>, -C(=S)N(R<cc>)2, -C(=O)SR<ee>, -C(=S)SR<cc>, C1-10alkil (npr., aralkil, heteroaralkil), C2-10alkenil, C2-10alkinil, C3-10karbociklil, 3-14-očlani heterociklil, C6-14aril, i 5-14-očlane heteroaril grupe, gde je svaki alkil, alkenil, alkinil, karbociklil, heterociklil, aralkil, aril, i heteroaril nezavisno supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, ili 5 R<dd>grupa, i gde R<aa>, R<bb>, R<cc>, i R<dd>kako je definisano ovde. zaštitne grupe azota su dobro poznate u struci i uključuju one koje su

1

detaljno opisane u Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons, 1999.

[0040] Amidne zaštitne grupe azota (npr., -C(=O)R<aa>) uključuju, ali nisu ograničene na, formamid, acetamid, hloroacetamid, trihloroacetamid, trifluoracetamid, fenilacetamid, 3-fenilpropanamid, pikolinamid, 3-piridilkarboksamid, N-benzoilfenilalanil derivat, benzamid, p-fenilbenzamid, o-nitofenilacetamid, o-nitrofenoksiacetamid, acetoacetamid, (N- -ditiobenziloksiacilamino) acetamid, 3 -(p-hidroksifenil) propanamid, 3-(o-nitrofenil) propanamid, 2-metil-2-(o-nitrofenoksi) propanamid, 2-metil-2-(o-fenilazofenoksi) propanamid, 4-hlorobutanamid, 3-metil-3-nitrobutanamid, o-nitrocinamid, N-acetilmetionin, o-nitrobenzamid, i o-(benzoiloksimetil) benzamid.

[0041] Karbamatne zaštitne grupe azota (npr., -C(=O)OR<aa>) uključuju, ali nisu ograničene na, metil karbamat, etil karbamat, 9-fluorenilmetil karbamat (Fmoc), 9-(2-sulfo)fluorenilmetil karbamat, 9-(2,7-dibromo)fluoroenilmetil karbamat, 2,7-di-t-butil-[9-(10,10-diokso-10,10,10,10-tetrahidrotioksantil)]metil karbamat (DBD-Tmoc), 4-metoksifenacil karbamat (fenoc), 2,2,2-trihloroetil karbamat (Troc), 2-trimetilsililetil karbamat (Teoc), 2-feniletil karbamat (hZ), 1-(1-adamantil)-1-metiletil karbamat (Adpoc), 1,1-dimetil-2-haloetil karbamat, 1,1-dimetil-2,2-dibromoetil karbamat (DB-t-BOC), 1,1-dimetil-2,2,2-trihloroetil karbamat (TCBOC), 1-metil-1-(4-bifenilil)etil karbamat (Bpoc), 1-(3,5-di-t-butilfenil)-1-metiletil karbamat (t-Bumeoc), 2-(2'- i 4'-piridil)etil karbamat (Pyoc), 2-(N,N-dicikloheksilkarboksamido)etil karbamat, t-butil karbamat (BOC), 1-adamantil karbamat (Adoc), vinil karbamat (Voc), alil karbamat (Alloc), 1-izopropilalil karbamat (Ipaoc), cinamil karbamat (Coc), 4-nitrocinamil karbamat (Noc), 8-hinolil karbamat, N-hidroksipiperidinil karbamat, alkilditio karbamat, benzil karbamat (Cbz), p-metoksibenzil karbamat (Moz), pnitobenzil karbamat, p-bromobenzil karbamat, p-hlorobenzil karbamat, 2,4-dihlorobenzil karbamat, 4-metilsulfinilbenzil karbamat (Msz), 9-antrilmetil karbamat, difenilmetil karbamat, 2-metiltioetil karbamat, 2-metilsulfoniletil karbamat, 2-(p-toluenesulfonil)etil karbamat, [2-(1,3-dithianil)]metil karbamat (Dmoc), 4-metiltiofenil karbamat (Mtpc), 2,4-dimetiltiofenil karbamat (Bmpc), 2-phosphonioetil karbamat (Peoc), 2-trifenilphosphonioisopropil karbamat (Ppoc), 1,1-dimetil-2-cijanoetil karbamat, m-hloro-paciloksibenzil karbamat, p-(dihidroksiboril)benzil karbamat, 5-benzisoksazolilmetil karbamat, 2-(trifluorometil)-6-hromonilmetil karbamat (Tcroc), m-nitrofenil karbamat, 3,5-dimetoksibenzil karbamat, o-nitrobenzil karbamat, 3,4-dimetoksi-6-nitrobenzil karbamat,

2

fenil(o-nitrofenil)metil karbamat, t-amil karbamat, S-benzil tiokarbamat, p-cijanobenzil karbamat, ciklobutil karbamat, cikloheksil karbamat, ciklopentil karbamat, ciklopropilmetil karbamat, p-deciloksibenzil karbamat, 2,2-dimetoksiaklivinil karbamat, o-(N,N-dimetilkarboksamido)benzil karbamat, 1,1-dimetil-3-(N,N-dimetilkarboksamido)propil karbamat, 1,1-dimetilpropinil karbamat, di(2-piridil)metil karbamat, 2-furanilmetil karbamat, 2-jodoetil karbamat, izoborinl karbamat, izobutil karbamat, izonicotinil karbamat, p-(p'-metoksifenilazo)benzil karbamat, 1-metilciklobutil karbamat, 1-metilcikloheksil karbamat, 1-metil-1-ciklopropilmetil karbamat, 1-metil-1-(3,5-dimetoksifenil)etil karbamat, 1-metil-1-(pfenilazofenil)etil karbamat, 1-metil-1-feniletil karbamat, 1-metil-1-(4-piridil)etil karbamat, fenil karbamat, p-(fenilazo)benzil karbamat, 2,4,6-tri-t-butilfenil karbamat, 4-(trimetilammonium)benzil karbamat, i 2,4,6-trimetilbenzil karbamat.

[0042] Sulfonamidne zaštitne grupe azota (npr., -S(=O)2R<aa>) uključuju, ali nisu ograničene na, p-toluenesulfonamid (Ts), benzensulfonamid, 2,3,6,-trimetil-4-metoksibenzensulfonamid (Mtr), 2,4,6-trimetoksibenzensulfonamid (Mtb), 2,6-dimetil-4-metoksibenzensulfonamid (Pme), 2, 3,5,6-tetrametil-4-metoksibenzensulfonamid (Mte), 4-metoksibenzensulfonamid (Mbs), 2,4,6-trimetilbenzensulfonamid (Mts), 2,6-dimetoksi-4-metilbenzensulfonamid (iMds), 2,2, 5,7,8-pentametilhroman-6-sulfonamid (Pmc), metansulfonamid (Ms), P-trimetilsililetansulfonamid (SES), 9-antracenesulfonamid, 4-(4 ', 8'-dimetoksinaftilmetil) benzensulfonamid (DNMBS), benzilsulfonamid, trifluorometilsulfonamid i fenacilsulfonamid.

[0043] Druge zaštitne grupe azota uključuju, ali nisu ograničene na, fenotiazinil-(10)-acil derivat, N'-p-toluenesulfonilaminoacil derivat, N'-fenilaminotioacil derivat, N-benzoilfenilalanil derivat, N-acetilmetionin derivat, 4,5-difenil-3-oksazolin-2-on, N-ftalimid, N-ditiasukcinimid (Dts), N-2,3-difenilmaleimid, N-2,5-dimetilpirol, N-1,1,4,4-tetrametildisililazaciklopentan adukt (STABASE), 5-supstituisan 1,3-dimetil-1,3,5-triazacikloheksan-2-on, 5-supstituisan 1,3-dibenzil-1,3,5-triazacikloheksan-2-on, 1-supstituisan 3,5-dinitro-4-piridon, N-metilamin, N-alilamin, N-[2-(trimetilsilil)etoksi]metilamin (SEM), N-3-acetoksipropilamin, N-(1-izopropil-4-nitro-2-okso-3-piroolin-3-il)amin, kvaternarne amonijum soli, N-benzilamin, N-di(4-metoksifenil)metilamin, N-5-dibenzosuberilamin, N-trifenilmetilamin (Tr), N-[(4-metoksifenil)difenilmetil]amin (MMTr), N-9-fenilfluorenilamin (PhF), N-2,7-dihloro-9-fluorenilmetileneamin, N-ferocenilmetilamino (Fcm), N-2-pikolilamino N'-oksid, N-1,1dimetiltiometileneamin, N-benzilideneamin, N-p-metoksibenzilideneamin, N-difenilmetileneamin, N-[(2-piridil)mesitil]metileneamin, N-(N',N'-dimetilaminometilene)amin, N,N'-izopropilidenediamin, N-p-nitrobenzilideneamin, N-salicilideneamin, N-5-hlorosalicilideneamin, N-(5-hloro-2-hidroksifenil)fenilmetileneamin, N-cikloheksilideneamin, N-(5,5-dimetil-3-okso-1-cikloheksenil)amin, N-boran derivat, N-difenilborinska kiselina derivat, N-[fenil(pentaacilhromijum- ili tungsten)acil]amin, N-bakar helat, N-cink helat, N-nitroamin, N-nitrosoamin, amin N-oksid, difenilfosfinamid (Dpp), dimetiltiofosfinamid (Mpt), difeniltiofosfinamid (Ppt), dialkil fosforamidati, dibenzil fosforamidat, difenil fosforamidat, benzenesulfenamid, o-nitrobenzenesulfenamid (Nps), 2,4-dinitrobenzenesulfenamid, pentahlorobenzenesulfenamid, 2-nitro-4-metoksibenzenesulfenamid, trifenilmetilsulfenamid, i 3-nitropiridinesulfenamid (Npys).

[0044] U određenim otelotvorenjima, supstituent koji je prisutan na atomu kiseonika je zaštitna grupa kiseonika (koja se takođe naziva zaštitna grupa hidroksila). Zaštitne grupe kiseonika uključuju, ali nisu ograničene na, -R<aa>, -N(R<bb>)2, -C(=O)SR<aa>, -C(=O)R<aa>, -CO2R<aa>,-C(=O)N(R<bb>)2, -C(=NR<bb>)R<aa>, -C(=NR<bb>)OR<aa>, -C(=NR<bb>)N(R<bb>)2, -S(=O)R<aa>, -SO2R<aa>,-Si(R<aa>)3, -P(R<cc>)2, -P(R<cc>)3, -P(=O)2R<aa>, -P(=O)(R<aa>)2, -P(=O)(OR<cc>)2, -P(=O)2N(R<bb>)2, i-P(=O)(NR<bb>)2, gde su R<aa>, R<bb>, i R<cc>kako je ovde definisano. Zaštitne grupe kiseonika su dobro poznate u struci i uključuju one detaljno opisane kod Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons, 1999.

[0045] Primeri zaštitnih grupa kiseonika uključuju, ali nisu ograničene na, metil, metoksilmetil (MOM), metiltiometil (MTM), t-butiltiometil, (fenildimetilsilil)metoksimetil (SMOM), benziloksimetil (BOM), p-metoksibenziloksimetil (PMBM), (4-metoksifenoksi)metil (p-AOM), gvajakolmetil (GUM), t-butoksimetil, 4-penteniloksimetil (POM), siloksimetil, 2-metoksietoksimetil (MEM), 2,2,2-trihloroetoksimetil, bis(2-hloroetoksi)metil, 2-(trimetilsilil)etoksimetil (SEMOR), tetrahidropiranil (THP), 3-bromotetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, 1-metoksicikloheksil, 4-metoksitetrahidropiranil (MTHP), 4-metoksitetrahidrotiopiranil, 4-metoksitetrahidrotiopiranil S,S-dioksid, 1-[(2-hloro-4-metil)fenil]-4-metoksipiperidin-4-il (CTMP), 1,4-dioksan-2-il, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofuranil, 2,3,3a,4,5,6,7,7a-oktahidro-7,8,8-trimetil-4,7-metanobenzofuran-2-il, 1-etoksietil, 1-(2-hloroetoksi)etil, 1-metil-1-metoksietil, 1-metil-1-benziloksietil, 1-metil-1-benziloksi-2-fluoroetil, 2,2,2-trihloroetil, 2-trimetilsililetil, 2-(fenilselenil)etil, t-butil, alil, phlorofenil, p-metoksifenil, 2,4-dinitrofenil, benzil (Bn), p-metoksibenzil, 3,4-dimetoksibenzil, o-nitrobenzil, p-nitrobenzil, p-halobenzil, 2,6-dihlorobenzil, p-cijanobenzil, p-fenilbenzil, 2-pikolil, 4-pikolil, 3-metil-2-pikolil N-oksido, difenilmetil, p,p'-dinitrobenzhidril, 5-dibenzosuberil, trifenilmetil, α-naftildifenilmetil, p-metoksifenildifenilmetil, di(pmetoksifenil)fenilmetil, tri(p-metoksifenil)metil, 4-(4'-bromofenaciloksifenil)difenilmetil, 4,4',4"-tris(4,5-dihloroftalimidofenil)metil, 4,4',4"-tris(levulinoiloksifenil)metil, 4,4',4"-tris(benzoiloksifenil)metil, 3-(imidazol-1-il)bis(4',4"-dimetoksifenil)metil, 1,1-bis(4-metoksifenil)-1'-pirenilmetil, 9-antril, 9-(9-fenil)ksantenil, 9-(9-fenil-10-okso)antril, 1,3-benzodisulfuran-2-il, benzisotiazolil S,S-dioksido, trimetilsilil (TMS), trietilsilil (TES), triizopropilsilil (TIPS), dimetilizopropilsilil (IPDMS), dietilizopropilsilil (DEIPS), dimetiltheksilsilil, t-butildimetilsilil (TBDMS), t-butildifenilsilil (TBDPS), tribenzilsilil, trip-ksililsilil, trifenilsilil, difenilmetilsilil (DPMS), t-butilmetoksifenilsilil (TBMPS), format, benzoilformat, acetat, hloroacetat, dihloroacetat, trihloroacetat, trifluoroacetat, metoksiacetat, trifenilmetoksiacetat, fenoksiacetat, p-hlorofenoksiacetat, 3-fenilpropionat, 4-oksopentanoat (levulinate), 4,4-(etileneditio)pentanoat (levulinoilditioacetal), pivaloat, adamantoat, krotonat, 4-metoksikrotonat, benzoat, p-fenilbenzoat, 2,4,6-trimetilbenzoate (mesitoat), alkil metil karbonat, 9-fluorenilmetil karbonat (Fmoc), alkil etil karbonat, alkil 2,2,2-trihloroetil karbonat (Troc), 2-(trimetilsilil)etil karbonat (TMSEC), 2-(fenilsulfonil) etil karbonat (Psec), 2-(trifenilfosfonio) etil karbonat (Peoc), alkil izobutil karbonat, alkil vinil karbonat alkil alil karbonat, alkil p-nitrofenil karbonat, alkil benzil karbonat, alkil p-metoksibenzil karbonat, alkil 3,4-dimetoksibenzil karbonat, alkil o-nitrobenzil karbonat, alkil p-nitrobenzil karbonat, alkil S-benzil tiokarbonat, 4-etoksi-1-naftil karbonat, metil ditiokarbonat, 2-jodobenzoat, 4-azidobutirat, 4-nitro-4-metilpentanoat, o-(dibromometil)benzoat, 2-formilbenzenesulfonat, 2-(metiltiometoksi)etil, 4-(metiltiometoksi)butirat, 2-(metiltiometoksimetil)benzoat, 2,6-dihloro-4-metilfenoksiacetat, 2,6-dihloro-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)fenoksiacetat, 2,4-bis(1,1-dimetilpropil)fenoksiacetat, hlorodifenilacetat, izobutirat, monosukcinoat, (E)-2-metil-2-butenoat, o-(metoksiacil)benzoat, α-naftoat, nitrat, alkil N,N,N',N'-tetrametilfosforodiamidat, alkil N-fenilkarbamat, borat, dimetilfosfinotioil, alkil 2,4-dinitrofenilsulfenat, sulfat, metanesulfonat (mesilat), benzilsulfonat, i tosilat (Ts).

[0046] U određenim otelotvorenjima, supstituent prisutan na atomu sumpora je zaštitna grupa sumpora (koja se takođe naziva zaštitna grupa tiola). Zaštitne grupe sumpora uključuju, ali nisu ograničene na, -R<aa>, -N(R<bb>)2, -C(=O)SR<aa>, -C(=O)R<aa>, -CO2R<aa>,-C(=O)N(R<bb>)2, -C(=NR<bb>)R<aa>, -C(=NR<bb>)OR<aa>, -C(=NR<bb>)N(R<bb>)2, -S(=O)R<aa>, -SO2R<aa>,-si(R<aa>)3, -P(R<cc>)2, -P(R<cc>)3, -P(=O)2R<aa>, -P(=O)(R<aa>)2, -P(=O)(OR<cc>)2, -P(=O)2N(R<bb>)2, i-P(=O)(NR<bb>)2, gde su

2

R<aa>, R<bb>, i R<cc>kako je definisano ovde. Zaštitne grupe sumpora su dobro poznate u struci i uključuju one koje su detaljno opisane kod Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3. izdanje, John Wiley & Sons, 1999.

[0047] Ovi i drugi primeri supstituenata su detaljnije opisani u detaljnom opisu, primerima i patentnim zahtevima. Nije namereno da se predmetno obelodanjenje na bilo koji način ograniči gore navedenim primerenim popisom supstituenata.

Druge definicije

[0048] „Farmaceutski prihvatljiva so“ odnosi se na one soli koje su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodne za upotrebu u dodiru sa tkivima ljudi i drugih životinja bez nepotrebne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora i slično, i srazmerne su razumnom odnosu koristi i rizika. Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u struci. Na primer, Berge i dr., opisuju farmaceutski prihvatljive soli detaljno u J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66:1-19. Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja koja su ovde opisana obuhvataju one dobijene od pogodnih neorganskih i organskih kiselina i baza. Primeri farmaceutski prihvatljivih, neotrovnih kiselinskih adicionih soli su soli amino grupe formirane sa neorganskim kiselinama kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, fosforna kiselina, sumporna kiselina i perhlorna kiselina ili sa organskim kiselinama kao što su sirćetna kiselina, oksalna kiselina, maleinska kiselina, vinske kiseline, limunske kiseline, jantarne kiseline ili malonske kiseline ili korišćenjem drugih postupaka koje se koriste u struci, kao što je jonska izmena. Druge farmaceutski prihvatljive soli uključuju adipat, alginat, askorbat, aspartat, benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butirat, kamforat, kamforsulfonat, citrat, ciklopentanepropionat, diglukonat, dodecilsulfat, etansulfonat, formijat, fumarat, glukoheptonat, glicerofosfat, glukonat, glukoheptonat, glicerofosfat, glukonat, glukoheptonat, glicerofosfat, glukonat, glukoheptat, heksanoat, hidrojodid, 2-hidroksi-etansulfonat, laktobionat, laktat, laurat, lauril sulfat, malat, maleat, malonat, metansulfonat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, pektinat fenilpropionat, fosfat, pikrat, pivalat, propionat, stearat, sukcinat, sulfat, tartarat, tiocijanat, ptoluenesulfonat, undekanoat, valeratne soli i slično. Soli izvedene iz odgovarajućih baza uključuju alkalni metal, zemnoalkalni metal, amonijum i N<+>(C1-4alkil)4soli. Reprezentativne soli alkalnih ili zemnoalkalnih metala obuhvataju natrijum, litijum, kalijum, kalcijum, magnezijum i slično. Dalje, farmaceutski prihvatljive soli uključuju, kada je pogodno, kvaterne soli.

[0049] „Pacijent“ za kog se razmatra primena uključuje, ali nije ograničen na, ljude (npr., muškarac ili žena bilo koje starosne grupe, npr., pedijatrijski pacijent (na primer, beba, dete, adolescent) ili odrasle pacijente (npr, mlade odrasle osobe, odrasle osobe srednje ili starije dobi)) i/ili druge životinje koje nisu ljudi, na primer sisari (npr., primati (npr., cinomolgus majmuni, rezus majmuni); komercijalno relevantni sisare kao što su goveda, svinje, konji, ovce, koze, mačke i/ili psi), ptice (npr, komercijalno relevantne ptice kao što su pilići, patke, guske i/ili ćurke), gmizavci, vodozemci i ribe. U određenim aspektima, životinja koja nije čovek je sisar. Životinja koja nije čovek može biti mužjak ili ženka u bilo kojoj fazi razvoja. Životinja koja nije čovek može biti transgena životinja.

[0050] „Stanje,“ „bolest“ i „poremećaj“ se ovde koriste naizmenično.

[0051] „Tretirati", „tretiranje“ i „tretman“ obuhvataju delovanje, koje se dešava dok pacijent pati od stanja, koje smanjuje ozbiljnost stanja ili ublažava ili usporava napredovanje stanja („terapijski tretman“). „Tretirati", „tretiranje“ i „tretman“ takođe obuhvataju delovanje koje se dešava pre nego što pacijent počne da pati od stanja, i koje inhibira ili smanjuje težinu stanja („profilaktički tretman“).

[0052] „Efikasna količina“ jedinjenja se odnosi na količinu dovoljnu da izazove željeni biološki odgovor, npr., tretiranje stanja. Kao što će biti razumljivo od strane stručnjaka u ovoj oblasti, efikasna količina jedinjenja koje je ovde opisano može varirati u zavisnosti od faktora kao što je željeni biološki cilj, farmakokinetika jedinjenja, stanja koje se tretira, načina primene, i starosti i zdravlja pacijenta. Efikasna količina obuhvata terapeutski i profilaktički tretman.

[0053] „Terapeutski efikasna količina“ jedinjenja je količina dovoljna da pruži terapeutsku korist u tretmanu stanja, ili da odloži ili minimizuje jedan ili više simptoma povezanih sa stanjem. Terapeutski efikasna količina jedinjenja označava količinu terapeutskog agensa, samog ili u kombinaciji sa drugim terapijama, koja pruža terapeutsku korist u tretmanu stanja. Izraz „terapeutski efikasna količina“ može obuhvatiti količinu koja poboljšava ukupnu terapiju, smanjuje ili izbegava simptome ili uzroke stanja, ili povećava terapeutsku efikasnost drugog terapeutskog agensa.

2

[0054] „Profilaktički efikasna količina“ jedinjenja je količina dovoljna da se spreči stanje, ili jedan ili više simptoma povezanih sa stanjem ili da se spreči njihovo ponavljanje.

Profilaktički efikasna količina jedinjenja označava količinu terapeutskog agensa, samog ili u kombinaciji sa drugim agensima, koja pruža profilaktičku korist u prevenciji stanja. Izraz „profilaktički efikasna količina“ može obuhvatiti količinu koja poboljšava ukupnu profilaksu ili poboljšava profilaktičku efikasnost drugog profilaktičkog agensa.

[0055] Izraz „kinaza“ predstavlja enzime klase transferaza koji su u stanju da prenesu fosfatnu grupu iz molekula donora u molekul akceptora, npr., aminokiselinski ostatak proteina ili molekula lipida. Reprezentativni, neograničavajući primeri kinaza uključuju Abl, ACK, Akt1/PKBα, Akt2/PKBβ, Akt3/PKBγ, ALK1, ALK2, Alk4, AMPKα1/β1/γ1, AMPKα1/β1/γ2, AMPKα1/β1/γ3, AMPKα1/β2/γ1, AMPKα2/β1/γ1, AMPKα2/β2/γ2, Abl2, ARKS, Ask1, Aurora A, Aurora B, Aurora C, Axl, BARK1, Blk, Bmx, B-Raf, Brk, BrSK1, BrSK2, Btk, CaMK1α, CaMK1β, CaMK1γ, CaMK1δ, CAMK2α, CaMK2β, CAMK2δ, CAMK2γ, CAMK4, CAMKK1, CAMKK2, CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK9, CDK1/ciklin B, CDK2/ciklin A, CDK2/ciklin E, CDK3/ciklin E, CDK5/p25, CDK5/p35, CDK6/ciklinD3, CDK7/ciklin H/MAT1, CDK9/ciklin T1, CHK1, CHK2, CK1α, CK1γ, CK1δ, CK1ε, OPK1β1, CK1γ1, CK1γ2, CK1γ3, CK2α1, CK2α2, cKit, c-RAF, CLK1, CLK2, CLK3, COT, Csk, DAPK1, DAPK2, DAPK3, DCAMLK2, DDR2, DMPK, DRAK1, DYRK1A, DYRK2, DYRK3, eEF2K, EGFR, EPHA1, EPHA2, EPHA3, EPHA4, EPHA5, EPHA6, EPHA7, EPHA8, EphB1, EphB2, EphB3, EphB4, ErbB4, Erk1, Erk2, FAK, Fer, Fes, FGFR1, Flt2, Flt4, FLT3 D835Y, FGFR2, FGFR3, FGFR4, Fgr, Flt1, Flt3, Fms, FRK, FynA, GCK, GPRK5, GRK2, GRK4, GRK6, GRK7, GSK3α, GSK3β, Hck, HER2, HER4, HIPK1, HIPK2, HIPK3, HIPK4, IGF1R, IKKβ, IKKα, IKKε, IR, InsR, IRR, IRAK1, IRAK2, IRAK4, Itk, JAK2, JAK3, JNK1, JNK2, JNK3, KDR, KHS1, Kit, Lck, LIMK1, LKB1, LOK, LRRK2, Lyn A, Lyn B, MAPK1, MAPK2, MAPK12, MAPKAP-K2, MAPKAP-K3, MAPKAPK2, MAPKAPK3, MAPKAPK5, MARK1, MARK2, MARK3, MARK4, MELK, MEK1, MEK2, MEKK2, MEKK3, Mer, Met, MET M1250T, MINK, MKK4, MKK6, MKK7β, MLCK, MLK1, MLK3, MNK1, MNK2, MRCKα, MRCKβ, MSK1, MSK2, MSSK1, STK23, STK4, STK3, STK24, MST1, MST2, MST3, MST4, MUSK, mTOR, MYO3β, MYT1, NDR1, NEK11, NEK2, NEK3, NEK6, NEK7, NEK9, NLK, NUAK2, p38α, p38β, p38δ, p38γ, p70S6K, S6K, SRK, PAK1/CDC42, PAK2, PAK3, PAK4, PAK5, PAK6, PAR-1Bα, PASK, PBK, PDGFRα, PDGFRβ, PDK1, PEK, PHKG2, PI3Kα, PI3Kβ,

2

PI3Kγ, PI3Kδ, Pim1, Pim2, PKAcα, PKAcβ, PKAcy, PKA(b), PKA, PKBα, PKBβ, PKBγ, PKCα, PKCβ1, PKCβ2, PKCβ11, PKCδ, PKCε, PKCγ, PKCµ, PKCη, PKCι, PKCθ, PKCζ, PKD1, PKD2, PKD3, PKG1α, PKG1B, PKN1, PKN2, PKR, PLK1, PLK2, PLK3, PLK4, Polo, PRAK, PRK2, PrKX, PTK5, PYK2, QIK, Raf1, Ret, RIPK2, RIPK5, ROCK1, ROCK2, RON, ROS, Rse, RSK1, RSK2, RSK3, RSK4, SAPK2a, SAPK2b, SAPK3, SAPK4, SGK1, SGK2, SGK3, SIK, MLCK, SLK, Snk, Src, SRPK1, SRPK2, STK33, SYK, TAK1-TAB1, TAK1, TBK1, TAO1, TAO2, TAO3, TBK1, TEC, TESK1, TGFβR1, TGFβR2, Tie2, TLK2, TrkA, TrkB, TrkC, TSSK1, TSSK2, TTK, TXK, TYK2, TYRO3, ULK1, ULK2, WEE1, WNK2, WNK3, Yes1, YSK1, ZAK, ZAP70, ZC3, i ZIPK.

[0056] Izraz „mutant“ se odnosi na sekvencu (npr, sekvenca proteina ili sekvenca nukleinske kiseline) koja ima najmanje jednu mutaciju. Izraz „mutacija", kad se ovde koristi, odnosi se na supstituciju ostatka u sekvenci, npr., sekvence nukleinske kiseline ili aminokiseline, sa drugim ostatkom, ili brisanjem ili umetanjem jednog ili više ostataka unutar sekvence.

[0057] Izraz „varijanta“ se odnosi na varijacije sekvenci nukleinske kiseline ili aminokiseline biomolekula od interesa. U okviru izraza „varijanta“ obuhvaćene su nukleotidne i aminokiselinske supstitucije, umetci ili brisanja. Takođe, u okviru izraza

„varijanta“ obuhvaćeni su hemijski modifikovani prirodni i sintetički biomolekuli. Na primer, varijanta se može odnositi na polipeptide koji se razlikuju od referentnog polipeptida.

Generalno, razlike između polipeptida koji se razlikuje u sekvenci aminokiselina od referentnog polipeptida, i referentnog polipeptida su ograničeni tako da su aminokiselinske sekvence referentne. i varijante blisko slične u celini i, u nekim regionima, identične.

Varijanta i referentni polipeptid mogu se razlikovati u aminokiselinskoj sekvenci sa jednom ili više supstitucija, brisanja, umetanja, fuzija i skraćivanja koja mogu biti konzervativna ili ne-konzervativna i mogu biti prisutna u bilo kojoj kombinaciji. Na primer, varijante mogu biti one u kojima je nekoliko, na primer od 50 do 30, od 30 do 20, od 20 do 10, od 10 do 5, od 5 do 3, od 3 do 2, od 2 do 1 ili 1 aminokiselina umetnuto, supstituisano ili izbrisano, u bilo kojoj kombinaciji. Pored toga, varijanta može biti fragment polipeptida koji se razlikuje od referentne polipeptidne sekvence time što je kraći od referentne sekvence, kao što je terminalno ili unutrašnje brisanje. Varijanta polipeptida takođe uključuje polipeptid koji zadržava suštinski istu biološku funkciju ili aktivnost kao takav polipeptid, npr., prekursorski proteini koji se mogu aktivirati razdvajanjem prekursorskog dela kako bi se proizveo aktivni zreli polipeptid. Ove varijante mogu biti alelne varijacije karakterisane razlikama u

2

nukleotidnim sekvencama strukturnog gena koji kodiraju protein, ili mogu da uključuju diferencijalno spajanje ili post-translacionu modifikaciju. Varijante takođe uključuju srodne proteine koji imaju suštinski istu biološku aktivnost, ali su dobijeni od različitih vrsta.

Stručnjak može proizvesti varijante koje imaju jednostruke ili višestruke aminokiselinske supstitucije, brisanja, umetanja ili zamene. Ove varijante mogu uključivati, između ostalog: (i) one u kojima su jedan ili više aminokiselinskih ostataka supstituisani sa konzerviranim ili nekonzerviranim aminokiselinskim ostatkom (poželjno konzervirani aminokiselinski ostatak) i takav supstituisani aminokiselinski ostatak može ali ne mora biti kodiran genetskim kodom, ili (ii) one u kojima su jedna ili više aminokiselina izbrisane iz peptida ili proteina, ili (iii) one u kojima se jedna ili više aminokiselina dodaju polipeptidu ili proteinu, ili (iv) j one u kojima jedan ili više aminokiselinskih ostataka uključuju supstituentsku grupu, ili (v) one u kojima je zreli polipeptid fuzionisan sa drugim jedinjenjem, kao što je jedinjenje da poveća poluživot polipeptida (na primer, polietilen glikol), ili (vi) one u kojima su dodatne aminokiseline fuzionisane sa zrelim polipeptidom kao što je lider ili sekreciona sekvenca ili sekvenca koja se koristi za prečišćavanje zrelog polipeptida ili sekvence prekursora proteina. Varijanta polipeptida može takođe biti varijanta koja se javlja u prirodi, kao što je prirodna alelna varijanta, ili može biti varijanta za koju nije poznato da se javlja prirodno.

[0058] Izraz „rak“ se odnosi na klasu bolesti karakterisanu razvojem abnormalnih ćelija koje se nekontrolisano razmnožavaju i imaju sposobnost infiltriranja i uništavanja normalnih telesnih tkiva. Pogledati, npr., Stedman's Medical Dictionary, 25th ed.; Hensyl ed.; Williams & Wilkins: Philadelphia, 1990. Primeri raka uključuju, ali nisu ograničeni na, grupu koju čine akustični neurom; adenokarcinom; rak nadbubrežne žlezde; analni rak; angiosarkom (npr., limfangiosarkom, limfangioendotelni sarkom, hemangio sarkom); rak slepog creva; benigna monoklonska gamopatija; bilijarni rak (npr, holangiorak); rak bešike; rak dojke (npr., adenokarcinom dojke, papilarni rak dojke, rak dojke, medularni rak dojke); tumor na mozgu (npr., meningiom, glioblastom, gliom (npr., astrocitom, oligodendrogliom), meduloblastom); rak bronhija; karcinoidni tumor; rak grlića materice (npr, cervikalni adenokarcinom); horiorak; hordoma; kraniofaringiom; kolorektalni kancer (npr, rak debelog creva, rak rektuma, kolorektalni adenokarcinom); rak vezivnog tkiva; epitelni rak; ependimom; endotheliosarkom (npr, Kaposijev sarkom, višestruki idiopatski hemoragijski sarkom); kancer endometrijuma (npr., rak materice, sarkom uterusa); kancer jednjaka (npr., adenokarcinom jednjaka, Barrett-ov adenokarcinom); Ewing-ov sarkom; rak oka (npr, intraokularni melanom, retinoblastom); poznata hipereozinofilija; rak žučne kese; rak želuca

2

(npr, adenokarcinom želuca); gastrointestinalni stromalni tumor (GIST); rak germ ćelija; rak glave i vrata (npr., rak skvamoznih ćelija glave i vrata, oralni rak usne (npr., rak skvamoznih ćelija u ustima), rak grla (npr., rak larinksa, faringealni rak, rak nazofarinksa, orofaringealni rak)); hematopoetski rakovi (npr., leukemija kao što je akutna limfocitna leukemija (ALL) (npr., B-ćelijska ALL, T-ćelijska ALL), akutna mijelocitna leukemija (AML) (npr., B-ćelijska AML, T-ćelijska AML), hronična mijelocitna leukemija (CML) (npr., B-ćelijski CML, T-ćelijski CML) i hronična limfocitna leukemija (CLL) (npr., B-ćelijska CLL, T-ćelijska CLL)); limfom kao što je Hodgkin-ov limfom (HL) (npr., B-ćelijski HL, T-ćelijski HL) i ne-Hodgkin-ov limfom (NHL) (npr., B-ćelijski NHL kao što je difuzni limfom velikih ćelija (DLCL) (npr, difuzni veliki limfom B-ćelija), folikularni limfom, hronična limfocitna leukemija/mali limfocitni limfom (CLL/SLL), limfom plaštastih ćelija (MCL), limfomi B-ćelija u marginalnoj zoni (npr., limfomsko tkivo povezano sa sluzokožom (MALT), limfom B-ćelije nodalne marginalne zone, limfom B-ćelije granične zone slezine), primarni limfom B-ćelija medijastinalne ćelije, Burkitt-ov limfom, limfoplazmatični limfom (tj. Waldenstromova makroglobulinemija), leukemija dlakavih ćelija (HCL), imunoblastični limfom velikih ćelija, prekursor B-limfoblastičnog limfoma i primarni limfom centralnog nervnog sistema (CNS); i T-ćelijski NHL kao što je prekursor T-limfoblastičnog limfoma/leukemije, periferni T-ćelijski limfom (PTCL) (npr., kožni T-ćelijski limfom (CTCL) (npr., mycosis fungiodes, Sezary sindrom), angioimunoblastični T-ćelijski limfom, ekstranodalni prirodni T-ćelijski limfom, enteropatski limfom tipa T-ćelija, subkutani panikulitisu sličan T-ćelijski limfom, i anaplastični limfom velikih ćelija); smešu jedne ili više leukemija/limfoma kao što je gore opisano; i multipli mijelom (MM)), bolest teškog lanca (npr., bolest alfa lanca, bolest gama lanca, bolest mu lanca); hemangioblastom; rak hipofarinksa; upalni miofibroblastični tumori; imunocitična amiloidoza; rak bubrega (npr., nefroblastoma a.k.a. Wilms-ov tumor, rak bubrežnih ćelija); rak jetre (npr., hepatocelularni rak (HCC), maligni hepatom); rak pluća (npr., bronhogeni rak, rak malih ćelija pluća (SCLC), rak ne-malih ćelija pluća (NSCLC), adenokarcinom pluća); leiomiosarkom (LMS); mastocitoza (npr., sistemska mastocitoza); rak mišića; mijelodisplastični sindrom (MDS); mezotelioma; mijeloproliferativni poremećaj (MPD) (npr., policitemia vera (PV), esencijalna trombocitoza (ET), agnogena mijeloidna metaplazija (AMM) takođe poznata kao mijelofibroza (MF), hronična idiopatska mijelofibroza, hronična mijelocitna leukemija (CML), hronična neutrofilna leukemija (CNL), hipereozinofilni sindrom (HES)); neuroblastom; neurofibrom (npr, neurofibromatoza (NF) tipa 1 ili tipa 2, švanomatoza); neuroendokrini rak (npr, gastroenteropankreasni neuroendoktrinski tumor (GEP-NET), karcinoidni tumor); osteosarkom (npr, rak kostiju); rak

2

jajnika (npr., cistadenokarcinom, rak embriona jajnika, adenokarcinom jajnika); papilarni adenokarcinom; kancer pankreasa (npr., pankreasni adenokarcinom, intraduktalne papilarne mucinozne neoplazme (IPMN), tumori ćelija ostrvaca); rak penisa (npr., Paget-ova bolest penisa i skrotuma); pinealoma; primitivni neuroektodermalni tumor (PNT); neoplazija ćelija plazme; paraneoplastični sindromi; intraepitelne neoplazme; rak prostate (npr, adenokarcinom prostate); rak rektuma; rabdomiosarkom; rak pljuvačne žlezde; rak kože (npr, rak skvamoznih ćelija (SCC), keratoakantom (KA), melanom, rak bazalnih ćelija (BCC)); rak debelog creva (npr, rak slepog creva); sarkom mekih tkiva (npr, maligni fibrozni histiocitom (MFH), liposarkom, tumor malignih perifernih živaca (MPNST), hondrosarkom, fibrosarkom, miksosarkom); rak lojne žlezde; rak tankog creva; rak znojne žlezde; sinovioma; kancer testisa (npr., seminoma, embrionalni rak testisa); tiroidni kancer (npr., papilarni rak štitne žlezde, papilarni rak štitaste žlezde (PTC), medularni rak štitaste žlezde); rak uretre; rak vagine; i rak vulve (npr., Paget-ova bolest vulve).

[0059] Izraz „metabolički poremećaj“ odnosi se na bilo koji poremećaj koji uključuje promenu u normalnom metabolizmu ugljenih hidrata, lipida, proteina, nukleinskih kiselina ili njihove kombinacije. Metabolički poremećaj povezan je ili sa nedostatkom ili suviškom u metaboličkom putu što dovodi do neravnoteže u metabolizmu nukleinskih kiselina, proteina, lipida i/ili ugljenih hidrata. Faktori koji utiču na metabolizam uključuju, i nisu ograničeni na, endokrini (hormonski) sistem kontrole (npr., put insulina, enteroendokrini hormoni uključujući GLP-1, PII ili slično), nervni kontrolni sistem (npr, GLP-1 u mozgu), ili slično. Primeri metaboličkih poremećaja uključuju, ali nisu ograničeni na, dijabetes (npr, tip 1 dijabetes, dijabetes tipa 2, gestacijski dijabetes), hiperglikemija, hiperinsulinemija, insulinska rezistencija i gojaznost. U nekim otelotvorenjima, metabolički poremećaj je dijabetes tipa II.

Kratak opis crteža

[0060]

Slika 1 prikazuje podatke o stabilnosti za Jedinjenje 54 u PBS puferu (pH 7,4, 23°C). Slika 2 prikazuje primernu putanju za razvoj sonde.

Slika 3 pokazuje dozno-zavisnu aktivnost Jedinjenja 54 na cilju (GSK3β, vrh) i anticilju (CDK5, dno). Prikazane su reprezentativne krive sa dupliranim podacima (krugovi i trouglovi).

Slika 4 prikazuje a) dijagram trake koji prikazuje kristalnu strukturu GSK3β vezanu za Jedinjenje 22 u ATP vezujućem džepu i b) površinski prikaz koji pokazuje mesto vezivanja, orijentaciju vezivanja i apsolutnu konfiguraciju Jedinjenja 22 u kristalnoj strukturi.

Slika 5 prikazuje procenat kinoma (311 kinaza) inhibiranih od strane CHIR99021 i tri jedinjenja predmetnog pronalaska.

Slika 6 pokazuje poznate GSK3 inhibitore.

Slika 7 pokazuje efekat Jedinjenja 22 u poređenju sa nosačem za ublažavanje hiperaktivnosti izazvane amfetaminom tokom vremena nakon intracerebroventrikularne ICV injekcije.

Slika 8 pokazuje efekat Jedinjenja 22 na ukupnu aktivnost hiperaktivnosti izazvane amfetaminom, u poređenju sa nosačem.

Slika 9 pokazuje Lineweaver-Burk dijagram kompetitivne inhibicije Jedinjenja 22 za GSK3β.

Slika 10 pokazuje da, u poređenju sa jedinjenjem CHIR99021, Jedinjenje 137 pokazuje poboljšani farmakokinetički profil, kao što je sistemska izloženost i distribucija u mozgu, kada se dozira mužjacima C57BL/6 miševa. Konc.: koncentracija. AUC: površina ispod krive. T1/2: polu-život. Cmax: maksimalna koncentracija.

Slika 11A pokazuje efekat Jedinjenja 70 u poređenju sa nosačem za ublažavanje hiperaktivnosti izazvane amfetaminom tokom vremena nakon sistemske intraperitonealne injekcije. Slika 11B pokazuje efekat Jedinjenja 70 na ukupnu aktivnost hiperaktivnosti izazvane amfetaminom, u poređenju sa nosačem.

Slika 12 pokazuje da selektivni GSK3 inhibitor 70 indukuje morfološke dokaze diferencijacije AML (akutna mijeloidna leukemija). May-Grunwald Giemsa bojenje AML ćelijskih linija tri dana nakon tretmana sa Jedinjenjem 70 pokazalo je ćelijsku diferencijaciju u poređenju sa kontrolama koje su tretirane nosačem.

Slike 13A do 13B pokazuju da Jedinjenje 70 indukuje diferencijaciju AML (akutnu mijeloidnu leukemiju) pomoću GE-HTS potpisa. HL-60 i U937 ćelije su tretirane tri dana sa jedinjenjem 70 ili nosačem. Potpis 32-genske diferencijacije je kvantifikovan pomoću pristupa zasnovanog na LMA/perlama i određen je ponderisani zbirni rezultat (ocena diferencijacije) izračunat za sve gene za svako stanje. Linije greške označavaju srednju vrednost ± SD od 8 ponavljanja i statistička značajnost razlika između ovih rezultata diferencijacije izvedena je korišćenjem jednosmerne ANOVA sa Bonferroni korekcijom.

1

Slike 14A do 14B pokazuju rezultate Jedinjenja 54 u p-Tau ELISA SH-SY5Y testu i TCF/LEF reporterskom testu.

Slika 15 prikazuje rezultate Jedinjenja 22 u testu neurogeneze.

Detaljan opis određenih otelotvorenja

[0061] Predmetni pronalazak pruža jedinjenja koja su korisna za inhibiranje kinaza, npr., GSK3 ili CK1. Predmetni pronalazak dalje pruža farmaceutske sastave ovde opisanih jedinjenja i postupke za korišćenje ovde opisanih jedinjenja. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je inhibitor GSK3 (npr, inhibitor GSK3α, inhibitor GSK3β). U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je inhibitor CK1 (npr., inhibitor CK1δ). U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje se koristi za prevenciju i/ili tretman poremećaja posredovanih sa kinazom (npr., poremećaj posredovan sa GSK ili poremećaj posredovan sa CK1) kod pacijenta.

[0062] Serin/treonin kinaza glikogen sintaza kinaza-3 beta (GSK3β) je poznati glavni regulator za nekoliko ćelijskih puteva koji uključuju signalizaciju insulina i sintezu glikogena, signalizaciju neurotrofnih faktora, Wnt signalizaciju, signalizaciju neurotransmitera i dinamiku mikrotubula (Forde, i dr. Cell Mol Life Sci, 2007, 64(15):1930-44; Phiel, i dr. Nature, 2003, 423(6938):435-9; Beaulieu, i dr. Trends Pharmacol Sci, 2007, 28(4):166-72). Shodno tome, ovaj enzim ima kritičnu ulogu u metabolizmu, transkripciji, razvoju, preživljavanju ćelija i neuronskim funkcijama, i uključen je u višestruke ljudske poremećaje uključujući neurološke bolesti (npr., Alchajmerova bolest), psihijatrijski poremećaji (npr., bipolarni poremećaj), neinsulin-zavisni dijabetes melitus, hipertrofija srca i rak (Gould, TD, i dr. Curr Drug Targets, 2006, 7(11):1399-409; Matsuda, i dr. Proc Natl Acad Sci USA, 2008, 105(52):20900-5; Biechele, i dr. Methods Mol Biol, 2008, 468:99-110; Woodgett, Curr Drug Targets Immune Endocr Metabol Disord, 2003, 3(4):281-90;

Manoukian, i dr. Adv Cancer Res, 2002, 84:203-29). Na primer, akutna mijeloidna leukemija (AML) je rak koji se karakteriše višestrukim ćelijskim poremećajima, uključujući blokadu kod diferencijacije mijeloidnih ćelija. I dok trenutne terapije za većinu pacijenata sa AML koriste visoku dozu citotoksične hemoterapije, najuspešnije lečeni podtip AML-a, akutna promijelocitna leukemija, kombinuje terapiju diferencijacije sve-trans-retinske kiseline sa niskom dozom citotoksične terapije (Ades L, Guerci A, Raffoux E, Sanz M, Chevallier P, Lapusan S, Recher C, Thomas X, Rayon C, Castaigne S, Tournilhac O, de Botton S, Ifrah N, Cahn JY, Solary E, Gardin C, Fegeux N, Bordessoule D, Ferrant A, Meyer-Monard S, Vey

2

N, Dombret H, Degos L, Chevret S, Fenaux P. Very long-term outcome of acute promyelocytic leukemia after treatment with all-trans retinoic acid and chemotherapy: the European APL Group experience. Blood.1 15:1690-1696). Kako bi se identifikovali novi ciljevi diferencijacije AML, izvedena su dva nezavisna skrininga biblioteke malih molekula i skrining shRNK. Glikogen sintaza kinaza-3α (GSK3α) pojavila se kao meta na preseku ova tri skrininga (Banerji V, Frumm SM, Ross KN, Li LS, Schinzel AC, Hahn CK, Kakoza RM, Chow KT, Ross L, Alexe G, Tolliday N, Inguilizian H, Galinsky I, Stone RM, DeAngelo DJ, Roti G, Aster JC, Hahn WC, Kung AL, Stegmaier K. The intersection of genetic and chemical genomic screens identifies GSK-3alpha as a target in human acute myeloid leukemia. J Clin Invest.2012;122:935-947). Pokazano je da alfa-specifični gubitak GSK3 indukuje diferencijaciju kod AML višestrukih merenja, uključujući morfološke promene, eksprimiranje markera površine ćelija u skladu sa mijeloidnim sazrevanjem i indukcijom programa eksprimiranja gena koji je u skladu sa mijeloidnim sazrevanjem. GSK3α-specifična supresija takođe dovodi do narušenog rasta i proliferacije in vitro, indukcija apoptoze, gubitka formiranja kolonija u metilcelulozi i anti-AML aktivnosti in vivo. Važno je da selektivna inhibicija GSK3α u AML ne dovodi do stabilizacije β-katenina. Stabilizacija βkatenina je nepoželjna u terapiji AML, jer β-katenin promoviše populaciju AML matičnih ćelija (Wang Y, Krivtsov AV, Sinha AU, North TE, Goessling W, Feng Z, Zon LI, Armstrong SA. The Wnt/beta-catenin pathway is required for the development of leukemia stem cells in AML. Science.2010;327:1650-1653). Iako se većina literature fokusirala na ulogu pan GSK3 inhibicije u AML, postojali su podaci koji podržavaju ulogu selektivnih GSK3α inhibitora u ovoj bolesti (Wang Z, Smith KS, Murphy M, Piloto O, Somervaille TC, Cleary ML. Glycogen synthase kinase 3 in MLL leukaemia maintenance and targeted therapy. Nature.2008;455:1205-1209; Wang Z, Iwasaki M, Ficara F, Lin C, Matheny C, Wong SH, Smith KS, Cleary ML. GSK-3 promotes conditional association of CREB and its coactivators with MEIS1 to facilitate HOX-mediated transcription and oncogenesis. Cancer Cell. 2010;17:597-608). Štaviše, sve više literature sugeriše širu ulogu perturbiranja GSK3α kod raka (Piazza F, Manni S, Tubi LQ, Montini B, Pavan L, Colpo A, Gnoato M, Cabrelle A, Adami F, Zambello R, Trentin L, Gurrieri C, Semenzato G. Glycogen Synthase Kinase-3 regulates multiple myeloma cell growth and bortezomib-induced cell death. BMC Cancer. 2010;10:526; Bang D, Wilson W, Ryan M, Yeh JJ, Baldwin AS. GSK-3alpha promotes oncogenic KRAS function in pancreatic cancer via TAK1-TAB stabilization and regulation of noncanonical NF-kappaB. Cancer discovery.2013;3:690-703).

[0063] Pokazano je da litijum direktno inhibira aktivnost kinaze GSK3, kroz konkurenciju sa magnezijumom, i indirektno, povećavajući inhibitornu fosforilaciju GSK3 (Beaulieu i dr., 2004, 2008; Chalecka-Franaszek and Chuang, 1999; De Sarno i dr., 2002; Klein and Melton, 1996). Osim toga, GSK3α null ili GSK3β haploinsuficitni miševi fenokopiraju efekat litijuma od prigušivanja aberantnog ponašanjea (Beaulieu i dr., 2004; Kaidanovich-Beilin i dr., 2009; O'Brien i dr., 2004). Nasuprot tome, miševi koji prekomerno eksprimiraju GSK3β ili nose mutacije koje sprečavaju inhibitornu fosforilaciju GSK3α (Ser21) i GSK3β (Ser9) pokazuju ponašanja koja modeliraju psihijatrijske simptome, kao i miševi sa ciljanim prekidom AKT1, koji fosforilišu i inaktiviraju GSK3α (Ser21) i GSK3β (Ser9) (Emamian i dr., 2004; Lai i dr., 2006; Polter i dr., 2010; Prickaerts i dr., 2006).

[0064] Pan i dr. su pokazali da su inhibitori GSK3β efikasni u modelima koji nisu osetljivi na litijum (Pan i dr., Neuropsychopharmacology, 2011, 36(7):1397-411). Prema tome, inhibitori GSK3β mogu biti efikasni kod bipolarnih pacijenata otpornih na litijum.

[0065] AKT/GSK3 signalizacija je uključena u patofiziologiju neuropsihijatrijskih poremećaja kroz biohemijske i genetičke studije udruživanja pacijenata (Emamian i dr., 2004; Tan i dr., 2008; Thiselton i dr., 2008). Pored litijuma, antidepresivi, antipsihotici i drugi stabilizatori raspoloženja takođe modulišu aktivnost GSK3 (Beaulieu i dr., 2009), dalje podržavajući njegovo učešće u psihijatrijskim bolestima. Različite farmakološke probe GSK3 su korišćene za impliciranje aktivnosti kinaze GSK3 u regulaciji ponašanja in vivo (Beaulieu i dr., 2007a; Gould i dr., 2004).

[0066] Kod Beurel i dr. (Mol. Psych., 2011), uklanjanje GSK3β inhibicije pokazalo je neosetljivost na model antidepresantnog tretmana ketaminom. Pored toga, nedavno se inhibiranje GSK3β pokazalo efikasnim u modelima fragilnog X sindroma (Franklin i dr., Biol. Psychiatry.2013 Sep. 13, Glycogen Synthase Kinase-3 Inhibitors Reverse Deficits in Long-term Potentiation and Cognition in Fragile X Mice). Prema tome, inhibiranje GSK3β može dovesti do višestruke indikacije za tretman mentalnih bolesti i poremećaja raspoloženja.

[0067] U određenim otelotvorenjima, potrebni su visoko selektivni mali molekulski modulatori koji pomažu da se objasni funkcija GSK3β i regulacija u poremećajima centralnog nervnog sistema. Trenutno, ne postoji takav mali molekul sa ispravnom

4

kombinacijom selektivnosti i farmakokinetičkih svojstava koji bi precizno poremetio ulogu GSK3β u ustanovljenim modelima pamćenja i raspoloženja glodara.

[0068] Postoje značajni dokazi za kritičnu ulogu signalizacije GSK3 u regulaciji neurogeneze, neurorazvojnosti i neuroplastičnosti. Funkcija GSK3 je modulirana kako stabilizatorima raspoloženja koji tretiraju pacijente sa bipolarnim poremećajem, tako i antipsihoticima za tretman šizofrenije. Aberantna GSK3 signalizacija je dalje uključena u etiologiju neuropsihijatrijskih poremećaja koja pokazuje ulogu za inhibiciju GSK3 od strane gena DISCI sa šizofrenijom (Mao I, i dr. Cell 2009, 136 (6): 1017-1031). Shodno tome, mali molekuli koji inhibiraju GSK3 signalizaciju su korisni kao dragocena sredstva za ispitivanje uloge Wnt/GSK3 signalizacije u patofiziologiji bipolarnog poremećaja i drugih neuropsihijatrijskih poremećaja i takođe kao terapeutici za modulaciju ljudske neurogeneze.

[0069] U određenim otelotvorenjima, jedinjenja koja su ovde opisana su korisna kao jedinjenja sonde za istraživanje uloge signalizacije kinaze, na primer, GSK3 signalizacija, u patofiziologiji raznih poremećaja, npr., bipolarni poremećaj i drugi neuropsihijatrijski poremećaji. U određenim aspektima, pruženo jedinjenje je korisno kao sredstvo za ispitivanje GSK/Wnt molekularnih puteva kako u in vitro studijama sa ljudskim i glodalnim neuralnim progenitorima, tako i/ili in vivo. Pokazano je da signalizacija Wnt/GSK3 igra važnu ulogu u regulaciji neurogeneze sisara i neurorazvoja (Chen, i dr. J Neurochem.2000, 75(4):1729-34; Wexler, i dr. Mol Psychiatry. 2008, 13(3):285-92). U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno kao sredstvo za ispitivanje efekta smanjenja Tau fosforilacije. Aberantna Tau fosforilacija, uključujući na GSK3 mestima, uključena je u patofiziologiju brojnih neurodegenerativnih poremećaja kod ljudi, uključujući Alchajmerovu bolest i primarne tauopatije (npr., progresivna supranuklearna paraliza i druge frontotemporalne demencije). (Lee, i dr. Cold Spring Harb Perspect Med.2011, 1(1):a006437; Hooper, i dr. J Neurochem.

2008, 104(6):1433-9) Stoga smanjenje fosforilacije Tau sa selektivnim GSK3 inhibitorom može da pruži uvid u mehanizme osnovne bolesti i može da pruži metod za preokretanje simptoma bolesti.

[0070] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno kao sredstvo za procenu da li postoje razlike u odgovoru indukovanih pluripotentnih neuralnih matičnih ćelija (iPSC) (iPSC-NPCs) od pacijenata sa neuropsihijatrijskim poremećajima do modulatora GSK3 od onih bez takvih poremećaja. Na primer, može se koristiti panel iPSC modela razvijenih od pacijenata sa bipolarnim poremećajem, šizofrenijom i/ili Fragile X sindromom; postoje dokazi da su takvi poremećaji povezani sa deregulacijom GSK3 signalizacije.

[0071] U određenim aspektima, pruženo jedinjenje je korisno kao sredstvo za ispitivanje da li selektivna inhibicija GSK3 može spasiti deficite uzrokovane genetičkom varijacijom u ljudskom/mišjem DISC1, uključujući u analizama neurogeneze in vivo kod embriona i odraslih miševa. Uloga signala DISC1/GSK3 u patofiziologiji neuropsihijatrijskih poremećaja (Mao, i dr. Cell.2009, 136(6): 1017-1031) je oblast u kojoj su ispitivanja u toku.

[0072] U određenim aspektima, pruženo jedinjenje modulira post-natalnu i/ili odraslu neurogenezu, pružajući terapeutski put za više neuropsihijatrijskih i neurodegenerativnih poremećaja uključujući bipolarni poremećaj, veliku depresiju, traumatsku povredu mozga, Alchajmerovu bolest, Parkinsonovu bolest i Huntington-ovu bolest.

Jedinjenja

[0073] Kao što je uopšteno opisano iznad, ovde su pružena jedinjenja korisna kao inhibitori kinaze, npr., GSK3 inhibitori ili CK1 inhibitori. U nekim otelotvorenjima, predmetni pronalazak pruža jedinjenje formule I:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

gde

R<1>i R<2>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<1>i R<2>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1>i R<2>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten;

R<3>je izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, -

C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)N(R<B>)2,

NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, -NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -

C(=S)R<A>, - C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2;

svaki R<A>je nezavisno vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, ili opciono supstituisan heteroaril;

svaki R<B>je nezavisno vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, opciono supstituisan heteroaril, ili su dve R<B>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan heterociklični prsten;

R<4a>i R<4b>su nezavisno vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, ili opciono supstituisan alifatik, ili R<4a>i R<4b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

R<5a>i R<5b>su nezavisno vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<5a>i R<5b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten; i

R<6a>i R<6b>su nezavisno vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, ili opciono supstituisan alifatik, ili R<6a>i R<6b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

gde svaka pojava arila ima nezavisno 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i

gde je svaka pojava heteroarila nezavisno 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima nezavisno 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor.

[0074] U određenim aspektima, predmetni pronalazak pruža jedinjenje formule I-a:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<3>, R<4a>, R<4b>, R<5a>, R<5b>, R<6a>, i R<6b>kako je definisano za formulu I, i R<1'>i R<2'>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<1'>i R<2'>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1'>i R<2'>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten.

[0075] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je formule II:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<2>, R<3>, R<5a>, i R<5b>kako je definisano za formulu I,

svaki R<7>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN,-NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -

C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2,-

OC(=O)N(R<B>)2, -NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, -

NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>, -C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -

NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2; ili su dve susedne R<7>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; ili R<2>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; i

n je 0, 1, 2, 3, 4, ili 5.

[0076] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je formule II-a:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<3>, R<5a>, R<5b>, R<7>, i n kako je definisano za formulu II, i R<2'>je izabran iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<2'>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; gde aril ima 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i gde heteroaril je 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor.

[0077] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je formule II-a-i ili II-a-ii:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0078] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je formule III:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<2>, R<3>, R<5a>, i R<5b>kako je definisano za formulu I,

Prsten A je 5- do 6-člani heteroaril, 4- do 6-člani karbociklil, ili 4- do 6-člani heterociklil;

svaki R<7>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN,-NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -

C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2,-

OC(=O)N(R<B>)2, -NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2,-

NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>, -C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -

NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2; ili su dve susedne R<7>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; ili R<2>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten;

svaki R<A>je nezavisno vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, ili opciono supstituisan heteroaril; i

svaki R<B>je nezavisno vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, opciono supstituisan heteroaril, ili su dve R<B>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan heterociklični prsten; i

n je 0, 1, 2, 3, ili 4, kako valenca dozvoljava.

[0079] U nekim otelotvorenjima, Prsten A je 5- do 6-člani heteroaril.

[0080] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je formule III-a:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<3>, R<5a>, R<5b>, R<7>, i n kako je definisano za formulu III, i R<2'>je izabran iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<2'>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; gde aril ima 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i gde heteroaril je 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor.

[0081] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je formule III-a-i ili III-a-ii:

4

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0082] Kako je uopšteno definisano iznad, R<1>i R<2>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<1>i R<2>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1>i R<2>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten. Kako je uopšteno definisano iznad, R<1'>i R<2'>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril, ili R<1'>i R<2'>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1'>i R<2'>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten.

[0083] U nekim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan alifatik. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je nesupstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je supstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je metil, etil, ili propil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je metil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan cikloalkil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, ili cikloheksil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je nesupstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je supstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan alkinil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je nesupstituisan alkinil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je supstituisan alkinil. U nekim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan aril. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan fenil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je nesupstituisan fenil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je supstituisan fenil. U nekim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan 5- do 6-člani heteroaril koji ima 1-3 heteroatoma izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je nesupstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je supstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan tiofenil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je nesupstituisan tiofenil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je supstituisan tiofenil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan 2-tiofenil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan 3-tiofenil. U nekim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan piridil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1>je nesupstituisan piridil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je supstituisan piridil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan 2-piridil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan 3-piridil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan 4-piridil. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan 9- do 10-člani heteroaril koji ima 1-4 heteroatoma izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor. U određenim otelotvorenjima, R<1>ili R<1'>je opciono supstituisan benzoksadiazolil.

[0084] U nekim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan alifatik. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je nesupstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je supstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je metil, etil, ili propil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je metil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je etil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je propil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan cikloalkil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, ili cikloheksil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je nesupstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je supstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan alkinil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je nesupstituisan alkinil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je supstituisan alkinil. U nekim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan aril. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan fenil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je nesupstituisan fenil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je supstituisan fenil. U nekim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan 5-6-očlani heteroaril koji ima 1-3 heteroatoma izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je nesupstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je supstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je nesupstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je supstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan tiofenil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je nesupstituisan tiofenil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je supstituisan tiofenil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan 2-tiofenil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan 3-tiofenil. U nekim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan piridil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je nesupstituisan piridil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je supstituisan piridil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan 2-piridil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan 3-piridil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan 4-piridil. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan 9- do 10-člani heteroaril koji ima 1-4 heteroatoma izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor. U određenim otelotvorenjima, R<2>ili R<2'>je opciono supstituisan benzoksadiazolil.

[0085] U nekim otelotvorenjima, R<1>je opciono supstituisan fenil, i R<2>je opciono supstituisan alifatik. U nekim otelotvorenjima, R<1>je opciono supstituisan heteroaril, i R<2>je opciono supstituisan alifatik. U nekim otelotvorenjima, R<1>je opciono supstituisan alifatik, i R<2>je opciono supstituisan alifatik. U nekim otelotvorenjima, R<1>je opciono supstituisan fenil, i R<2>je metil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je opciono supstituisan heteroaril, i R<2>je metil. U nekim otelotvorenjima, R<1>je opciono supstituisan alifatik, i R<2>je metil. U nekim otelotvorenjima, R<1'>je opciono supstituisan fenil, i R<2'>je opciono supstituisan alifatik. U nekim otelotvorenjima, R<1'>je opciono supstituisan heteroaril, i R<2'>je opciono supstituisan alifatik. U nekim otelotvorenjima, R<1'>je opciono supstituisan alifatik, i R<2'>je opciono supstituisan alifatik. U nekim otelotvorenjima, R<1'>je opciono supstituisan fenil, i R<2'>je metil. U nekim otelotvorenjima, R<1'>je opciono supstituisan heteroaril, i R<2'>je metil. U nekim otelotvorenjima, R<1'>je opciono supstituisan alifatik, i R<2'>je metil. U određenim otelotvorenjima, barem jedan od R<1>, R<1'>, R<2>i R<2'>je etil. U određenim otelotvorenjima, barem jedan od R<1>i R<2>je etil. U određenim otelotvorenjima, barem jedan od R<1'>i R<2'>je etil.

[0086] U određenim otelotvorenjima, R<1>i R<2>ili R<1'>i R<2'>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten. U određenim otelotvorenjima, R<1>i R<2>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani

4

zasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde je prsten fuzionisan do aril ili heteroaril prstena (npr., kako bi formirali indanski prsten).

[0087] Kako je uopšteno definisano iznad, R<3>je izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>,-C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2,-OC(=O)N(R<B>)2, -NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2,-NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>, -C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2, gde R<A>i R<B>su kako je opisano ovde. U određenim otelotvorenjima, R<3>je vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<3>nije vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<3>je -OH. U određenim otelotvorenjima, R<3>nije -OH. U određenim otelotvorenjima, R<3>je metil. U određenim otelotvorenjima, R<3>nije metil. U nekim otelotvorenjima, R<3>je opciono supstituisan alifatik. U određenim otelotvorenjima, R<3>je opciono supstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je nesupstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je supstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je metil, etil, n-propil, izopropil, ili terc-butil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je metil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je izopropil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je terc-butil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je izobutil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je haloalkil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je trifluorometil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je opciono supstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je nesupstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je supstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je opciono supstituisan alkinil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je nesupstituisan alkinil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je supstituisan alkinil. U nekim otelotvorenjima, R<3>je halo. U određenim otelotvorenjima, R<3>je fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<3>je hloro. U određenim otelotvorenjima, R<3>je bromo. U određenim otelotvorenjima, R<3>je nesupstituisan cikloalkil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je ciklopropil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je ciklobutil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je ciklopentil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je cikloheksil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je supstituisan cikloalkil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je cikloalkil supstituisan sa jednim ili više fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<3>je ciklopropil supstituisan sa jednim ili više fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<3>je ciklobutil supstituisan sa jednim ili više fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<3>je difluorociklobutil. U određenim otelotvorenjima, R<3>je ciklopentil supstituisan sa jednim ili više fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<3>je cikloheksil supstituisan sa jednim ili više fluoro. U nekim otelotvorenjima, R<3>je opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, ili opciono supstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<3>je fenil. U nekim otelotvorenjima, R<3>je -N(R<B>)2ili -SR<A>. U određenim otelotvorenjima, R<3>je -OR<A>. U određenim otelotvorenjima, R<3>je -OR<A>, gde R<A>nije vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<3>je-C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>,-NR<B>C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)N(R<B>)2, -NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>,-C(=NR<B>)N(R<B>)2, -NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>, -C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>,-SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, ili -SO2N(R<B>)2.

[0088] Kako je uopšteno definisano iznad, R<3'>je izabran iz grupe koju čine halo, -CN, -NO2, supstituisan C1alkil, opciono supstituisan C2-6alkil, opciono supstituisan alkoksi, opciono supstituisan alkenil, opciono supstituisan alkinil, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2,-OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)N(R<B>)2, -NR<B>C(=O)OR<A>,-SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, -NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>, -C(=S)N(R<B>)2,-NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2, gde R<A>i R<B>su kako je opisano ovde. U nekim otelotvorenjima, R<3'>je supstituisan C1alifatik. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je -CF3. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je opciono supstituisan C2-6alkil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je nesupstituisan C2-6alkil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je supstituisan C2-6alkil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je metil, etil, n-propil, izopropil, terc-butil, ili izobutil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je haloalkil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je trifluorometil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je opciono supstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je nesupstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je supstituisan alkenil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je opciono supstituisan alkinil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je nesupstituisan alkinil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je supstituisan alkinil. U nekim otelotvorenjima, R<3'>je opciono supstituisan alkoksi. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je metoksi ili etoksi. U nekim otelotvorenjima, R<3'>je halo. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je hloro. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je bromo. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je nesupstituisan karbociklil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je nesupstituisan cikloalkil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je ciklopropil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je ciklobutil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je ciklopentil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je cikloheksil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je supstituisan karbociklil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je supstituisan cikloalkil. U

4

određenim otelotvorenjima, R<3'>je karbociklil supstituisan sa jednim ili više fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je ciklobutil supstituisan sa jednim ili više fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je difluorociklobutil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je opciono supstituisan cikloalkenil. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je opciono supstituisan cikloalkinil. U nekim otelotvorenjima, R<3'>je opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, ili opciono supstituisan heteroaril. U određenim otelotvorenjima, R<3'>je fenil. U nekim otelotvorenjima, R<3'>je -N(R<B>)2ili -SR<A>. U nekim otelotvorenjima, R<3'>je -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>,-C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2,-OC(=O)N(R<B>)2, -NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2,-NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>, -C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, ili -SO2N(R<B>)2.

[0089] U određenim otelotvorenjima, R<3>ili R<3'>je fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<3>ili R<3'>je opciono supstituisan alifatik. U određenim otelotvorenjima, R<3>ili R<3'>je metil. U određenim otelotvorenjima, R<3>ili R<3'>je trifluorometil. U određenim otelotvorenjima, R<3>ili R<3'>je terc-butil ili izobutil. U određenim otelotvorenjima, R<3>ili R<3'>je ciklopropil. U određenim otelotvorenjima, R<3>ili R<3'>je difluorociklobutil.

[0090] Kako je uopšteno definisano iznad, R<4a>i R<4b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili su R<4a>i R<4b>uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten. U određenim otelotvorenjima, R<4a>je vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<4a>nije vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<4b>je vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<4b>nije vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<4a>i R<4b>su oba vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<4a>i R<4b>ni jedan ni drugi nisu vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<4a>je vodonik, i R<4b>nije vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<4a>i R<4b>su oba opciono supstituisan alifatik. U određenim otelotvorenjima, R<4a>i R<4b>su metil.

[0091] Kako je uopšteno definisano iznad, R<5a>i R<5b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<5a>i R<5b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten. U određenim otelotvorenjima, R<5a>je vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<5a>nije vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<5b>je vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<5b>nije vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<5a>i R<5b>su

4

oba vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<5a>i R<5b>ni jedan ni drugi nisu vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<5a>je vodonik, i R<5b>nije vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<5a>i R<5b>su oba opciono supstituisan alifatik. U određenim otelotvorenjima, R<5a>i R<5b>su metil.

[0092] Kako je uopšteno definisano iznad, R<6a>i R<6b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<6a>i R<6b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten. U određenim otelotvorenjima, R<6a>je vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<6a>nije vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<6b>je vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<6b>nije vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<6a>i R<6b>su oba vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<6a>i R<6b>ni jedan ni drugi nisu vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<6a>je vodonik, i R<6b>nije vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<6a>i R<6b>su oba opciono supstituisan alifatik. U određenim otelotvorenjima, R<6a>i R<6b>su metil.

[0093] U nekim otelotvorenjima, R<4a>, R<4b>, R<6a>, i R<6b>su vodonik, i R<5a>i R<5b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<5a>i R<5b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten. U određenim otelotvorenjima, R<4a>, R<4b>, R<6a>, i R<6b>su vodonik, i R<5a>i R<5b>su metil.

[0094] U nekim otelotvorenjima, R<4a>, R<4b>, R<5a>, i R<5b>su vodonik, i R<6a>i R<6b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<6a>i R<6b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten. U određenim otelotvorenjima, R<4a>, R<4b>, R<5a>, i R<5b>su vodonik, i R<6a>i R<6b>su metil.

[0095] U nekim otelotvorenjima, R<5a>, R<5b>, R<6a>, i R<6b>su vodonik, i R<4a>i R<4b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<4a>i R<4b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten. U određenim otelotvorenjima, R<5a>, R<5b>, R<6a>, i R<6b>su vodonik, i R<4a>i R<4b>su metil.

[0096] U nekim otelotvorenjima, R<4a>, R<4b>, R<5a>, R<5b>, R<6a>, i R<6b>su vodonik.

4

[0097] Kako je uopšteno definisano iznad, svaki R<7>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril,-OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>,-NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)N(R<B>)2, -NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>,-C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, -NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>, -C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>,-S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2; ili su dve susedne R<7>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; ili R<2>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan, karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten.

[0098] U nekim otelotvorenjima, R<7>je halo. U određenim otelotvorenjima, R<7>je fluoro. U određenim otelotvorenjima, R<7>je hloro. U određenim otelotvorenjima, R<7>je bromo. U nekim otelotvorenjima, R<7>je opciono supstituisan alifatik. U određenim otelotvorenjima, R<7>je opciono supstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<7>je nesupstituisan alkil. U određenim otelotvorenjima, R<7>je metil. U određenim otelotvorenjima, R<7>je haloalkil. U određenim otelotvorenjima, R<7>je trifluorometil. U nekim otelotvorenjima, R<7>je -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>. U određenim otelotvorenjima, R<7>je -OCH3ili -SCH3. U određenim otelotvorenjima, R<7>je -OCF3. U nekim otelotvorenjima, R<7>je -CN. U nekim otelotvorenjima, R<7>grupa je orto. U nekim otelotvorenjima, R<7>grupa je meta. U nekim otelotvorenjima, R<7>grupa je para. U nekim otelotvorenjima, dve susedne R<7>grupe su uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan karbociklični (npr., aril ili zasićen karbociklični) ili heterociklični (npr., heteroaril ili zasićen heterociklični) fuzionisani prsten. Na primer, U nekim otelotvorenjima, dva R<7>grupe su uzete zajedno kako bi formirale fuzionisanu metilenedioksi grupu. U nekim otelotvorenjima, R<2>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan karbociklični (npr., aril ili zasićen karbociklični) ili heterociklični (npr., heteroaril ili zasićen heterociklični) fuzionisani prsten.

[0099] Kako je uopšteno definisano iznad, n je 0, 1, 2, 3, 4, ili 5, kako valenca dozvoljava. U nekim otelotvorenjima, n je 0. U nekim otelotvorenjima, n je 1. U nekim otelotvorenjima, n je 2. U nekim otelotvorenjima, n je 3. U nekim otelotvorenjima, n je 4. U nekim otelotvorenjima, n je 5.

4

[0100] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je jedno od narednih:

4

�

�

i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

[0101] U određenim otelotvorenjima, predmetni pronalazak pruža jedinjenja formule I, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde:

R<1>i R<2>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<1>i R<2>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1>i R<2>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten;

R<3>je vodonik ili fluoro;

R<4a>i R<4b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<4a>i R<4b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

R<5a>i R<5b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<5a>i R<5b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten; i

R<6a>i R<6b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN,-OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<6a>i R<6b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

gde svaka pojava arila ima nezavisno 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i

4

gde je svaka pojava heteroarila nezavisno 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima nezavisno 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor.

[0102] U određenim otelotvorenjima, predmetni pronalazak pruža jedinjenja formule I, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde:

R<1>i R<2>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril, gde barem jedan od R<1>i R<2>je etil; R<3>je izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, -

C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)N(R<B>)2,-

NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, -NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -

C(=S)R<A>,-C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2;

svaki R<A>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril;

svaki R<B>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril, ili su dve R<B>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan heterociklični prsten;

R<4a>i R<4b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<4a>i R<4b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

R<5a>i R<5b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<5a>i R<5b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten; i

R<6a>i R<6b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN,-OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<6a>i R<6b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

gde svaka pojava arila ima nezavisno 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i

gde je svaka pojava heteroarila nezavisno 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima nezavisno 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor.

[0103] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje inhibira kinazu, ili njenog mutanta ili varijantu. U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje inhibira GSK3. U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje inhibira CK1. U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje inhibira kinazu (npr., GSK3 ili CK1), npr., kako je mereno u ovde opisanom testu. U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje inhibira kinazu (npr., GSK3 ili CK1) pri IC50manjem ili jednakom 30 µM. U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje inhibira kinazu pri IC50manjem ili jednakom 5 µM. U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje inhibira kinazu pri IC50manjem ili jednakom 1 µM. U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje inhibira kinazu pri IC50manjem ili jednakom 0,1 µM. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je selektivno za GSK3 kada se poredi sa drugim kinazama. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je selektivno za GSK3α i GSK3β kada se poredi sa drugim kinazama. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je selektivno za GSK3α kada se poredi sa drugim kinazama. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je selektivno za GSK3β kada se poredi sa drugim kinazama. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je selektivno za GSK3 kada se poredi sa CDK5. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je barem 10 puta aktivnije protiv GSK3 u poređenju sa drugim kinazama (npr., CDK5). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je barem 5 puta aktivnije protiv GSK3 u poređenju sa drugim kinazama (npr., CDK5). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je barem 2 puta aktivnije protiv GSK3 u poređenju sa drugim kinazama (npr., CDK5). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je selektivno za CK1 kada se poredi sa drugim kinazama. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je selektivno za CK1 kada se poredi sa CDK5. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je barem 10 puta aktivnije protiv CK1 u poređenju sa drugim kinazama (npr., CDK5). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je barem 5 puta aktivnije protiv CK1 u poređenju sa drugim kinazama (npr., CDK5). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje je barem 2 puta aktivnije protiv CK1 u poređenju sa drugim kinazama (npr., CDK5). U određenim otelotvorenjima, GSK3α selektivni inhibitor ima prednosti u odnosu na pan GSK3 inhibitor. U određenim otelotvorenjima, GSK3β selektivni inhibitor ima prednosti u odnosu na pan GSK3 inhibitor.

Postupci pripreme jedinjenja

[0104] U jednom aspektu, predmetni pronalazak pruža postupke pripreme ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenja formule I, i njegovih soli). U određenim otelotvorenjima, postupci pronalaska uključuju dovođenje u dodir jedinjenja formule A, ili njegove soli, sa jedinjenjem formule B, ili njegovom soli, i jedinjenjem formule C, ili njegovom soli, pod odgovarajućim uslovima kako bi se dobilo jedinjenje formule I, ili njegova so:

gde:

R<1>i R<2>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<1>i R<2>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1>i R<2>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten;

R<3>je izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, -

C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)N(R<B>)2,-

NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, -NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -

C(=S)R<A>,-C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2;

svaki R<A>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril;

svaki R<B>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril, ili su dve R<B>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan heterociklični prsten;

R<4a>i R<4b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<4a>i R<4b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

R<5a>i R<5b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<5a>i R<5b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten; i

R<6A>i R<6b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<6a>i R<6b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

gde svaka pojava arila ima nezavisno 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i

gde je svaka pojava heteroarila nezavisno 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima nezavisno 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor.

[0105] U drugom aspektu, predmetni pronalazak pruža postupke pripreme jedinjenja formule I':

ili njegove soli, gde postupak uključuje:

dovođenje u dodir jedinjenja formule C, ili njegove soli, sa jedinjenjem formule D, ili njegovom soli, pod odgovarajućim uslovima kako bi se dobilo jedinjenje formule E, ili njegova so:

konjugovanje jedinjenja formule E, ili njegove soli, sa jedinjenjem formule A, ili njegovim soli, pod odgovarajućim uslovima kako bi se dobilo jedinjenje formule F, ili njegova so: i

ciklizacija jedinjenja formule F, ili njegove soli, pod odgovarajućim uslovima kako bi se dobilo jedinjenje formule I', ili njegova so, gde:

R<1a>i R<1b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik i opciono supstituisan alifatik, ili R<1a>i R<1b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen ili nezasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1a>i R<1b>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten;

R<2>je izabran iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril, ili R<1a>i R<2>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen ili nezasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1a>i R<2>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten;

R<3>je izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)N(R<B>)2,-NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, -NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>,-C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2;

svaki R<A>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril;

svaki R<B>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril, ili su dve R<B>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan heterociklični prsten;

R<4a>i R<4b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<4a>i R<4b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

R<5a>i R<5b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<5a>i R<5b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

R<6a>i R<6b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, - OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<6a>i R<6b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

R<1a>i R<1b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik i opciono supstituisan alifatik;

gde svaka pojava arila ima nezavisno 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i

gde je svaka pojava heteroarila nezavisno 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima nezavisno 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor.

[0106] Drugi aspekt predmetnog pronalaska odnosi se na postupke pripreme jedinjenja formule I':

ili njegove soli, gde postupak obuhvata:

zaštitu primarne amino grupe jedinjenja formule C, ili njegove soli, kako bi se dobilo jedinjenje formule G, ili njegova so:

halogenizaciju jedinjenja formule G, ili njegove soli, kako bi se dobilo jedinjenje formule H, ili njegova so:

zaštitu sekundarne amino grupe jedinjenja formule H, ili njegove soli, kako bi se dobilo jedinjenje formule J, ili njegove soli;

spajanje jedinjenja formule J, ili njegove soli, sa boronskom kiselinomili esterom formule K, ili njegovom soli, kako bi se dobilo jedinjenje formule L, ili njegova so:

uklanjanje zaštite primarne amino grupe jedinjenje formule L, ili njegove soli, kako bi se dobilo jedinjenje formule M, ili njegova so:

konjugovanje jedinjenja formule M, ili njegove soli, sa jedinjenjem formule A, ili njegovom soli, kako bi se dobilo jedinjenje formule N, ili njegova so:

1

uklanjanje zaštite sekundarne amino grupe jedinjenje formule N, ili njegove soli, kako bi se dobilo jedinjenje formule F, ili njegova so:

ciklizacija jedinjenja formule F, ili njegove soli, pod odgovarajućim uslovima kako bi se dobilo jedinjenje formule I', ili njegova so, gde:

R<1a>i R<1b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik i opciono supstituisan alifatik, ili R<1a>i R<1b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen ili nezasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1a>i R<1b>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten;

R<2>je izabran iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril, ili su R<1a>i R<2>uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen ili nezasićen karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1a>i R<2>može opciono biti fuzionisan za aril ili heteroaril prsten;

R<3>je izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)N(R<B>)2,-NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, -NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>,-C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2;

2

svaki R<A>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril;

svaki R<B>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril, ili su dve R<B>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan heterociklični prsten;

R<4a>i R<4b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<4a>i R<4b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

R<5a>i R<5b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo,-CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<5a>i R<5b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

R<6a>i R<6b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN,-OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<6a>i R<6b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen karbociklični ili heterociklični prsten;

svaka pojava P<1>je nezavisno zaštitna grupa azota, ili dva pojave P<1>spojene kako bi formirale opciono supstituisan heterociklični prsten;

X je halogen;

P<2>je zaštitna grupa azota i drugačiji je od bilo koje pojave P<1>;

R<2a>i R<2b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik i opciono supstituisan alifatik; i

svaka pojava R<8>je nezavisno vodonik, supstituisan ili nesupstituisan acil, supstituisan ili nesupstituisan alkil, supstituisan ili nesupstituisan karbociklil, supstituisan ili nesupstituisan heterociklil, supstituisan ili nesupstituisan aril, ili supstituisan ili nesupstituisan heteroaril, ili su dve pojave R<8>spojene kako bi formirale supstituisan ili nesupstituisan heterociklični prsten;

gde svaka pojava arila ima nezavisno 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i

gde je svaka pojava heteroarila nezavisno 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima nezavisno 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor.

[0107] U određenim otelotvorenjima, dva pojave P<1>su spojene kako bi formirale ftalimido. U određenim otelotvorenjima, P<2>je EtOCH(CH3)-. U određenim otelotvorenjima, R<1a>i R<1b>su svaki vodonik. U određenim otelotvorenjima, R<3>je vodonik, fluor, hlor, ili metil. U određenim otelotvorenjima, R<4a>, R<4b>, R<6a>, i R<6b>su svaki vodonik. U određenim otelotvorenjima, X je jod ili brom. U određenim otelotvorenjima, X je jod. U određenim otelotvorenjima, dva pojave R<8>su svaka vodonik, ili su dve pojave R<8>spojene kako bi formirale heterociklični prsten formule:

U određenim otelotvorenjima, dva pojave R<8>su svaka vodonik. U određenim otelotvorenjima, odgovarajući uslovi obuhvataju prisustvo kiseline ili temperature od barem oko 25 °C, ili njihovu kombinaciju. U određenim otelotvorenjima, odgovarajući uslovi obuhvataju prisustvo kiseline (npr., p-toluensulfonska kiselina (PTSA) ili trifluorosirćetna kiselina (TFA)). U određenim otelotvorenjima, odgovarajući uslovi obuhvataju prisustvo alkohola (npr., etanol ili metanol). U određenim otelotvorenjima, odgovarajući uslovi obuhvataju temperaturu od barem oko 25 °C (npr., barem oko 40 °C, barem oko 70 °C, barem oko 110 °C, ili barem oko 150 °C). U određenim otelotvorenjima, odgovarajući uslovi obuhvataju mikrotalasno zračenje. U određenim otelotvorenjima, odgovarajući uslovi su kombinacija ovde opisanih odgovarajućih uslova.

Farmaceutski sastavi i primena

[0108] Predmetni pronalazak daje farmaceutske sastave koji sadrže ovde opisano jedinjenje, npr., jedinjenje formule I, II, ili III, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao što je ovde opisano, i opciono farmaceutski prihvatljiv ekscipijent. Stručnjaku će biti jasno da jedinjenja koja su ovde opisana, ili njihove soli, mogu biti prisutna u različitim oblicima, npr, amorfni, hidrati, solvati ili polimorfi. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje koje je ovde opisano je pruženo kao prolek. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje koje je ovde opisano, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, je pruženo u efikasnoj količini u farmaceutskom sastavu. U određenim aspektima, efikasna količina je terapeutski efikasna količina. U nekim otelotvorenjima, efikasna količina je količina koja je efikasna za inhibiranje kinaze (npr.,

4

GSK3 ili CK1). U određenim otelotvorenjima, efikasna količina je količina efikasna za tretman poremećaja posredovanih sa kinazom. U nekim otelotvorenjima, efikasna količina je profilaktički efikasna količina. U nekim otelotvorenjima, efikasna količina je količina koja je efikasna u sprečavanju poremećaja posredovanog kinazom.

[0109] Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti uključuju bilo koji i sve rastvarače, razblaživače ili druge tečne nosače, disperzije, agense za suspenziju, površinski aktivne agense, izotonične agense, agense za zgušnjavanje ili emulgiranje, konzervanse, čvrste veznike, lubrikante i slično, kao pogodne za određenu dozu željenog oblika. Opšta razmatranja o formulaciji i/ili proizvodnji farmaceutskih preparata mogu se naći, na primer, kod Remington's Pharmaceutical Sciences, 16. izdanje, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980), i Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition (Lippincott Williams & Wilkins, 2005).

[0110] Farmaceutski sastave koji su ovde opisani mogu biti pripremljeni bilo kojim postupkom poznatim u farmakologiji. Uopšteno, takvi pripremni postupci uključuju korake dovođenja jedinjenja opisanog ovde („aktivni sastojak“) u vezu sa nosačem i/ili jednim ili više drugih pomoćnih sastojaka, i zatim, ako je potrebno i/ili poželjno, oblikovanje i/ili ili pakovanje proizvoda u željenu jedinicu sa jednom ili više doza.

[0111] Farmaceutski sastavi mogu biti pripremljeni, pakovani i/ili prodavani na veliko, kao pojedinačna jedinična doza, i/ili kao mnoštvo pojedinačnih jediničnih doza. „Jedinična doza“ je diskretna količina farmaceutskog sastava koja sadrži prethodno određenu količinu aktivnog sastojka. Količina aktivnog sastojka je generalno jednaka dozi aktivnog sastojka koja se daje pacijentu i/ili pogodan fragment takve doze kao što je, na primer, jedna polovina ili jedna trećina takve doze.

[0112] Relativne količine aktivnog sastojka, farmaceutski prihvatljivog ekscipijenta i/ili bilo kojih dodatnih sastojaka u farmaceutskom sastavu predmetnog pronalaska će varirati, u zavisnosti od identiteta, veličine i/ili stanja tretiranog pacijenta, i dalje u zavisnosti od puta pomoću kojih se daje sastav. Kao primer, sastav može sadržati između 0,1% i 100% (w/w) aktivnog sastojka.

[0113] Farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti koji se koriste u proizvodnji datih farmaceutskih sastava uključuju inertne razblaživače, agense za raspršivanje i/ili granulaciju, površinski aktivne agense i/ili emulgatore, agense za dezintegraciju, vezivne agense, konzervanse, pufere, agense lubrikante i/ili ulja. Dodaci kao što su kakao maslac i voskovi za supozitorijume, agensi za bojenje, agensi za oblaganje, zaslađivači, agensi za poboljšanje ukusa i mirisi mogu takođe biti prisutni u sastavu.

[0114] Primeri razređivača su kalcijum karbonat, natrijum karbonat, kalcijum fosfat, dikalcijum fosfat, kalcijum sulfat, kalcijum hidrogen fosfat, natrijum fosfat laktoza, saharoza, celuloza, mikrokristalna celuloza, kaolin, manitol, sorbitol, inozitol, natrijum hlorid, suvi skrob, kukuruzni skrob, praškasti šećera i njihove smeše.

[0115] Primeri granulacionih i/ili disperzionih agenasa su krompirni skrob, kukuruzni skrob, tapioka skrob, natrijum skrob glikolat, gline, alginska kiselina, guar guma, citrusna pulpa, agar, bentonit, celuloza i proizvodi od drveta, prirodna spužva, katjonske smole, kalcijum karbonat, silikati, natrijum karbonat, unakrsno povezani poli(vinil-pirolidon) (krospovidon), natrijum karboksimetil skrob (natrijum skrob glikolat), karboksimetil celuloza, umrežena natrijum karboksimetil celuloza (kroskarmeloza), metilceluloza, preželatinizovani skrob (skrob 1500), mikrokristalni skrob, skrob nerastvoran u vodi, kalcijum karboksimetil celuloza, magnezijum aluminijum silikat (Veegum), natrijum lauril sulfat, kvaterna amonijum jedinjenja i njihove smeše.

[0116] Primeri površinski aktivnih agenasa i/ili emulgatora uključuju prirodne emulgatore (npr, akacija, agar, alginska kiselina, natrijum alginat, tragakant, hondruks, holesterol, ksantan, pektin, želatin, žumance jajeta, kazein, vuna, holesterol, vosak i lecitin), koloidne gline (npr., bentonit (aluminijum silikat) i Veegum (magnezijum aluminijum silikat)), aminokiseline sa dugim lancem, alkohole velike molekulske mase (npr, stearil alkohol, cetil alkohol, oleil alkohol, triacetin monostearat, etilen glikol distearat, gliceril monostearat, i propilen glikol monostearat, polivinil alkohol), karbomere (npr, karboksi polimetilen, poliakrilna kiselina, polimer akrilne kiseline i karboksivinil polimer), karagenan, celulozne derivate (npr, natrijum karboksimetilceluloza, celuloza u prahu, hidroksimetil celuloza, hidroksipropil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, metilceluloza), sorbitan estre masnih kiselina (npr, polioksietilen sorbitan monolaurat (Tween 20), polioksietilen sorbitan (Tween 60), polioksietilen sorbitan monooleat (Tween 80), sorbitan monopalmitat (Span 40), sorbitan monostearat (Span 60), sorbitan tristearat (Span 65), gliceril monooleat, sorbitan monooleat (Span 80)), polioksietilen estre (npr., polioksietilen monostearat (Mirj 45), polioksietilen hidrogenizovano ricinusovo ulje, polietoksilovano ricinusovo ulje, polioksimetilen stearat i Solutol), estere saharoze masnih kiselina, estri polietilen glikola i masnih kiselina (npr, Cremo hor™™), polioksietilen etere, (npr., polioksietilen lauril etar (Brij 30)), poli(vinilpirolidon), dietilen glikol monolaurat, trietanolamin oleat, natrijum oleat, kalijum oleat, etil oleat, oleinska kiselina, etil laurat, natrijum lauril sulfat, Pluronic F68, Poloxamer 188, cetrimonijum bromid cetilpiridinijum hlorid, benzalkonijum hlorid, dokusat natrijum, i/ili njihove smeše.

[0117] Primeri vezujućih agenasa uključuju skrob (npr., kukuruzni skrob i skrobna pasta), želatin, šećere (npr, saharoza, glukoza, dekstroza, dekstrin, melasa, laktoza, laktitol, manitol, itd.), prirodne i sintetičke gume (npr, akacija, natrijum alginat, ekstrakt irske mahovine, panvar guma, ghati guma, sluz izapolske ljuske, karboksimetilceluloza, metilceluloza, etilceluloza, hidroksietilceluloza, hidroksipropil celuloza, poli(vinil-pirolidon), magnezijum aluminijum silikat (Veegum) i arabogalaktan arisa, alginati, polietilen oksid, polietilen glikol, neorganske soli kalcijuma, silicijumska kiselina, polimetakrilati, voskovi, voda, alkohol i/ili njihove smeše.

[0118] Primeri konzervansa su antioksidanti, helatni agensi, antimikrobni konzervansi, antifungalni konzervansi, konzervansi alkohola, kiseli konzervansi i drugi konzervansi.

[0119] Primeri antioksidanata uključuju alfa tokoferol, askorbinsku kiselinu, akorbil palmitat, butilovani hidroksianizol, butilovani hidroksitoluen, monotioglicerol, kalijum metabisulfit, propionsku kiselinu, propil galat, natrijum askorbat, natrijum bisulfit, natrijum metabisulfit i natrijum sulfit.

[0120] Primeri helatnih agenasa uključuju etilendiamintetraacetatnu kiselinu (EDTA) i njene soli i hidrate (npr., natrijum edetat, dinatrijum edetat, trinatrijum edetat, kalcijum-natrijum edetat, dikalijum edetat i slično), limunsku kiselinu i njene soli i hidrate (npr., monohidrat limunske kiseline), fumarnu kiselinu i njene soli i hidrate, jabučnu kiselinu i njene soli i hidrate, fosfornu kiselinu i njene soli i hidrate, i vinsku kiselinu i njene soli i hidrate. Primeri antimikrobnih konzervansa uključuju benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid, benzil alkohol, bronopol, cetrimid, cetilpiridinijum hlorid, hlorheksidin, hlorobutanol, hlorokrezol, hloroksilenol, krezol, etil alkohol, glicerin, heksetidin, imidureu, fenol, fenoksietanol, feniletil alkohol, fenol, fenoksietanol, feniletil alkohol, fenol, fenoksietanol, feniletil alkohol, fenol, fenoksietanol, feniletil alkohol, fenol, fenoksietanol, feniletil alkohol, fenol, fenoksietanol glikol i timerosal.

[0121] Primeri antifungalnih konzervansa su butil paraben, metil paraben, etil paraben, propil paraben, benzojeva kiselina, hidroksibenzojeva kiselina, kalijum benzoat, kalijum sorbat, natrijum benzoat, natrijum propionat i sorbinska kiselina.

[0122] Primeri konzervansa alkohola uključuju etanol, polietilen glikol, fenol, fenolna jedinjenja, bisfenol, hlorobutanol, hidroksibenzoat i feniletil alkohol.

[0123] Primeri kiselih konzervansa uključuju vitamin A, vitamin C, vitamin E, beta-karoten, limunsku kiselinu, sirćetnu kiselinu, dehidroacetatnu kiselinu, askorbinsku kiselinu, sorbinsku kiselinu i fitinsku kiselinu.

[0124] Ostali konzervansi uključuju tokoferol, tokoferol acetat, deteroksim mezilat, cetrimid, butilovani hidroksianisol (BHA), butilovani hidroksitoluen (BHT), etilendiamin, natrijum lauril sulfat (SLS), natrijum lauril eter sulfat (SLES), natrijum bisulfit, natrij metabisulfit, kalijum sulfit, kalijum metabisulfit, Glydant Plus, fenonip, metilparaben, Germall 115, Germaben II, Neolone, Kathon i Euxyl. U nekim otelotvorenjima, konzervans je antioksidant. U drugim otelotvorenjima, konzervans je helatni agens.

[0125] Primeri puferskih agenasa uključuju rastvore citratnog pufera, rastvore acetatnog pufera, rastvore fosfatnog pufera, amonijum hlorid, kalcijum karbonat, kalcijum hlorid, kalcijum citrat, kalcijum glubionat, kalcijum gluceptat, kalcijum glukonat, D-glukonska kiselina, kalcijum glicerofosfat, kalcijum laktat, propanoična kiselina kalcijum levulinat, pentanonska kiselina, dvobazni kalcijum fosfat, fosforna kiselina, tribazni kalcijum fosfat, kalcijum hidroksid fosfat, kalijum acetat, kalijum hlorid, kalijum glukonat, smeše kalijuma, dvobazni kalijum fosfat, monobazni kalijum fosfat, mešavine kalijum fosfata, natrijum acetat, natrijum bikarbonat, natrijum hlorid, natrijum citrat, natrijum laktat, dvobazni natrijum fosfat, monobazni natrijum fosfat, smeše natrijum fosfata, trometamin, magnezijum hidroksid, aluminijum hidroksid, alginsku kiselinu, vodu bez pirogena, izotonični rastvor, Ringer-ov rastvor, etil alkohol i njihove smeše.

[0126] Primeri lubrikanata obuhvataju magnezijum stearat, kalcijum stearat, stearinsku kiselinu, silicijum dioksid, talk, slad, gliceril behanat, hidrogenisana biljna ulja, polietilen glikol, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid, leucin, magnezijum lauril sulfat, natrijum lauril sulfat i njihove smeše.

[0127] Primeri prirodnih ulja obuhvataju badem, košticu kajsije, avokado, babasu, bergamot, crnu trenutnu semenku, boražinu, cade, kamilicu, kanolu, kim, karnauba, ricinus, cimet, kokosov maslac, kokos, jetra bakalara, kafu, kukuruz, seme bakalara, emu, eukaliptus, noćurka, ribu, laneno seme, geraniol, tikvu, seme grožđa, lešnik, isop, izopropil miristat, jojoba, kukui orah, lavandin, lavanda, limun, litsea cubeba, makademija, slez, seme mango, seme lavande, mink, muskatni oraščić, maslina, pomorandža, narandža, palmi, kernel, breskva, kikiriki, mak, seme bundeve, uljana repa, rižine mekinje, ruzmarin, šafran, sandalovina, soskan, ukusan, silikon, soja, suncokret, čajno drvo, čičak, tsubaki, vetiver, orah i pšenična klice. Primeri sintetičkih ulja uključuju, ali nisu ograničeni na, butil stearat, kaprilni triglicerid, kaprični triglicerid, ciklometikon, dietil sebacat, dimetikon 360, izopropil miristat, mineralno ulje, oktildodekanol, oleil alkohol, silikonsko ulje i njihove smeše.

[0128] Tečni dozni oblici za oralnu i parenteralnu primenu uključuju farmaceutski prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Pored aktivnih sastojaka, tečni dozni oblici mogu da sadrže inertne razblaživače koji se uobičajeno koriste u struci, kao što su, na primer, voda ili drugi rastvarači, sredstva za solubilizaciju i emulgatori kao što su etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, dimetilformamid, ulja (npr, pamučno seme, kikiriki, kukuruz, klica, maslina, ricinusovo i susamovo ulje), glicerol, tetrahidrofurfuril alkohol, polietilen glikoli i esteri masnih kiselina sorbitana, i njihove smeše. Pored inertnih razblaživača, oralni sastavi mogu uključivati adjuvanse kao što su agensi za vlaženje, emulgatori i agensi za suspendovanje, agensi za zaslađivanje, arome i mirise. U nekim otelotvorenjima za parenteralnu primenu, ovde opisana jedinjenja su pomešana sa agensima za solubilizaciju kao što su Cremophor™, alkoholi, ulja, modifikovana ulja, glikoli, polisorbati, ciklodekstrini, polimeri i njihove smeše.

[0129] Preparati za injekcije, na primer, sterilne vodene ili uljane suspenzije za injekcije, mogu se formulisati u skladu sa poznatom tehnikom primenom pogodnih agenasa za raspršenje ili vlaženje i agenasa za suspendovanje. Sterilni preparat za injekcije može biti sterilni rastvor za injekcije, suspenzija ili emulzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim nosačima i rastvaračima koji se mogu koristiti su voda, Ringer-ov rastvor, U.S.P. i izotonični rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna, fiksirana ulja se konvencionalno koriste kao rastvarač ili medijum za suspendovanje. U tu svrhu se može koristiti bilo koje blago fiksirano ulje uključujući sintetske mono- ili digliceride. Pored toga, masne kiseline kao što je oleinska kiselina se koriste u pripremi injekcija.

[0130] Formulacije koje se mogu injektirati mogu se sterilisati, na primer, filtracijom kroz filter za zadržavanje bakterija, ili ugradnjom sterilizacionih agenasa u obliku sterilnih čvrstih sastava koji se mogu rastvoriti ili raspršiti u sterilnoj vodi ili drugom sterilnom injektabilnom medijumu pre upotrebe.

[0131] Kako bi se produžio efekat leka, često je poželjno usporiti apsorpciju leka iz subkutane ili intramuskularne injekcije. Ovo se može postići upotrebom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala sa slabom rastvorljivošću u vodi. Brzina apsorpcije leka tada zavisi od brzine rastvaranja, koja može zavisiti od veličine kristala i kristalnog oblika. Alternativno, odložena apsorpcija parenteralno primenjenog oblika leka se postiže rastvaranjem ili suspendovanjem leka u uljanom nosaču.

[0132] Sastavi za rektalnu ili vaginalnu primenu su tipično supozitorijumi koji se mogu pripremiti mešanjem jedinjenja koja su ovde opisana sa pogodnim ne-iritirajućim ekscipijentima ili nosačima kao što su kakao maslac, polietilen glikol ili vosak za supozitorijume, koji su čvrsti na sobnoj temperaturi, ali su tečni pri telesnoj temperaturi i stoga se tope u rektumu ili vaginalnoj šupljini i oslobađaju aktivni sastojak.

[0133] Čvrsti dozni oblici za oralnu primenu uključuju kapsule, tablete, pilule, praškove i granule. U takvim čvrstim doznim oblicima, aktivni sastojak je pomešan sa najmanje jednim inertnim, farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom ili nosačem kao što je natrijum citrat ili dikalcijum fosfat i/ili a) punilima ili proširivačima kao što su skrobovi, laktoza, saharoza, glukoza, manitol, i silicijumska kiselina, b) vezivima kao što su, na primer, karboksimetilceluloza, alginati, želatina, polivinilpirolidinon, saharoza i akacija, c) humektanti kao što je glicerol, d) agensima za dezintegraciju kao što su agar, kalcijum karbonat, krompir ili tapioka skrob, alginska kiselina, određeni silikati, i natrijum karbonat, e) agensima za usporavanje rastvora kao što su parafin, f) agensima za ubrzanje apsorpcije kao što su kvaterna jedinjenja amonijaka, g) agensima za vlaženje kao što su, na primer, cetil alkohol i glicerol monostearat, h) apsorbensima kao što su kaolin i bentonitna glina, i i) lubrikantima kao što su talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat i njihove smeše. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozni oblik može sadržati puferske agense.

[0134] Čvrsti sastavi sličnog tipa mogu se koristiti kao punioci u mekim i tvrdim želatinskim kapsulama upotrebom ekscipijenata kao što su laktoza ili mlečni šećer, kao i polietilen glikoli visoke molekulske mase i slično. Čvrsti dozni oblici tableta, dražeja, kapsula, pilula i granula mogu biti pripremljeni sa premazima i ljuskama kao što su enterički premazi i drugi premazi koji su dobro poznati u oblasti farmaceutske formulacije. Oni mogu opciono sadržati agense za neprozirnost i mogu biti takvog sastava da oslobađaju samo aktivni sastojak (ili više njih), ili poželjno, u određenom delu intestinalnog trakta, opciono, na odloženi način. Primeri ugrađenih sastava koji se mogu koristiti uključuju polimerne supstance i voskove. Čvrsti sastavi sličnog tipa mogu se koristiti kao punioci u mekim i tvrdim želatinskim kapsulama upotrebom ekscipijenata kao što su laktoza ili mlečni šećer, kao i polietilen glikoli visoke molekulske mase i slično.

[0135] Aktivni sastojak može biti u mikrokapsuliranom obliku sa jednim ili više ekscipijenata, kao što je gore navedeno. Čvrsti dozni oblici tableta, dražeja, kapsula, pilula i granula mogu se pripremiti sa premazima i ljuskama kao što su enterički premazi, premazi koje kontrolišu otpuštanje i drugi premazi dobro poznati u struci za farmaceutsku formulaciju. U takvim čvrstim doznim oblicima aktivni sastojak može biti pomešan sa najmanje jednim inertnim razblaživačem kao što je saharoza, laktoza ili skrob. Takvi dozni oblici mogu sadržati, kao što je uobičajena praksa, dodatne supstance osim inertnih razblaživača, npr., lubrikante za tabletiranje i druga pomagala za tabletiranje kao što je magnezijum stearat i mikrokristalna celuloza. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozni oblici mogu sadržati puferske agense. Oni mogu opciono sadržati agense za neprozirnost i mogu biti takvog sastava da oslobađaju samo aktivni sastojak (ili više njih), ili poželjno, u određenom delu intestinalnog trakta, opciono, na odloženi način. Primeri ugrađenih sastava koji se mogu koristiti uključuju polimerne supstance i voskove.

1

[0136] Dozni oblici za lokalnu i/ili transdermalnu primenu datog jedinjenja mogu uključivati masti, paste, kreme, losione, gelove, prahove, rastvore, sprejeve, inhalante i/ili flastere.

Generalno, aktivni sastojak je pomešan u sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i/ili bilo kojim željenim konzervansom i/ili puferom, kao što se može biti potrebno. Dodatno, ovaj opis obuhvata upotrebu transdermalnih flastera, koji često imaju dodatnu prednost u pružanju kontrolisane isporuke aktivnog sastojka telu. Takvi dozni oblici se mogu pripremiti, na primer, rastvaranjem i/ili raspodelom aktivnog sastojka u odgovarajućem medijumu. Alternativno ili dodatno, brzina se može kontrolisati bilo obezbeđivanjem membrane koja kontroliše brzinu i/ili raspršivanjem aktivnog sastojka u polimernoj matrici i/ili gelu.

[0137] Pogodni uređaji za upotrebu u isporuci intradermalnih farmaceutskih sastava koji su ovde opisani obuhvataju uređaje kratke igle kao što su oni opisani u US Patentima 4,886,499; 5,190,521; 5,328,483; 5,527,288; 4,270,537; 5,015,235; 5,141,496; i 5,417,662.

Intradermalne sastavi mogu se primenjivati pomoću uređaja koji ograničavaju efikasnu dužinu prodiranja igle u kožu, kao što su oni opisani u PCT objavi WO 99/34850 i njihovi funkcionalni ekvivalenti. Pogodni su uređaji za mlazne injekcije koji isporučuju tečne vakcine u dermis preko injekcije sa tečnim mlazom i/ili preko igle koja probija stratum corneum i proizvodi mlaz koji dostiže dermis. Uređaji za mlazne injekcije su opisani, na primer, u U.S. Patentima 5,480,381; 5,599,302; 5,334,144; 5,993,412; 5,649,912; 5,569,189; 5,704,911; 5,383,851; 5,893,397; 5,466,220; 5,339,163; 5,312,335; 5,503,627; 5,064,413; 5,520,639; 4,596,556; 4,790,824; 4,941,880; 4,940,460; i PCT objavama WO 97/37705 i WO 97/13537. Uređaji za isporuku balističkog praška/čestica koji koriste komprimovani gas za ubrzavanje vakcine u obliku praška kroz spoljašnje slojeve kože do dermisa su pogodni. Alternativno ili dodatno, uobičajeni špricevi se mogu koristiti u klasičnom mantouk postupku intradermalnog primene.

[0138] Formulacije pogodne za lokalnu primenu uključuju, ali nisu ograničene na, tečne i/ili polu-tečne preparate kao što su linimenti, losioni, emulzije ulje u vodi i/ili voda u ulju, kao što su kreme, masti i/ili paste, i/ili rastvori. i/ili suspenzije. Formulacije za topikalnu primenu mogu, na primer, da sadrže od oko 1% do oko 10% (w/w) aktivnog sastojka, mada koncentracija aktivnog sastojka može biti visoka kao granica rastvorljivosti aktivnog sastojka

2

u rastvaraču. Formulacije za topikalnu primenu mogu dalje da sadrže jedan ili više ovde opisanih dodatnih sastojaka.

[0139] Pruženi farmaceutski sastav može biti pripremljena, upakovana i/ili prodata u formulaciji koja je pogodna za pulmonarnu primenu preko bukalne šupljine. Takva formulacija može da sadrži suve čestice koje sadrže aktivni sastojak i koje imaju prečnik u opsegu od oko 0,5 do oko 7 nanometara ili od oko 1 do oko 6 nanometara. Takve sastavi su pogodno u obliku suvih prašaka za primenu upotrebom uređaja koji sadrži rezervoar za suvi prašak na koji se može usmeriti tok propelanta kako bi se raspršio prašak, i/ili koristi prašak sa sopstvenim potiskom/kontejner za raspršivanje praška, kao uređaj koji obuhvata aktivni sastojak rastvoren i/ili suspendovan u propelantu sa niskim ključanjem u zatvorenom kontejneru. Takvi praškovi sadrže čestice kod kojih najmanje 98% težine čestica ima prečnik veći od 0,5 nanometara i najmanje 95% količine čestica ima prečnik manji od 7 nanometara. Alternativno, najmanje 95% težine čestica ima prečnik veći od 1 nanometra i najmanje 90% količine čestica ima prečnik manji od 6 nanometara. Sastavi suvog praška mogu uključivati čvrsti fini praškasti razblaživač kao što je šećer, i obično se dobijaju u obliku jedinične doze.

[0140] Propelanti sa niskim ključanjem obično uključuju tečne propelante koji imaju tačku ključanja ispod 65°F pri atmosferskom pritisku. Generalno, propelant može činiti 50 do 99,9% (w/w) sastava, i aktivni sastojak može činiti 0,1 do 20% (w/w) sastava. Propelant može dalje da sadrži dodatne sastojke kao što je tečni nejonski i/ili čvrsti anjonski surfaktant i/ili čvrsti razblaživač (koji može imati veličinu čestica istog reda kao i čestice koje sadrže aktivni sastojak).

[0141] Farmaceutski sastavi formulisani za pulmonarnu isporuku mogu dati aktivni sastojak u obliku kapljica rastvora i/ili suspenzije. Takve formulacije mogu biti pripremljene, upakovane i/ili prodate kao vodeni i/ili razblaženi alkoholni rastvori i/ili suspenzije, opciono sterilni, koji sadrže aktivni sastojak, i mogu se pogodno primenjivati korišćenjem bilo kog uređaja za atomizaciju i/ili nebulizaciju. Takve formulacije mogu dalje sadržati jedan ili više dodatnih sastojaka uključujući, ali ne ograničavajući se na, agens za poboljšanje ukusa kao što je natrijum saharin, isparljivo ulje, puferski agens, površinski aktivan agens i/ili konzervans kao što je metilhidroksibenzoat. Kapljice pružene ovim putem primene mogu imati prosečni prečnik u opsegu od oko 0,1 do oko 200 nanometara.

[0142] Formulacije koje su ovde opisane kao korisne za pulmonarnu isporuku su korisne za intranazalnu isporuku farmaceutskog sastava. Druga formulacija pogodna za intranazalnu primenu je grubi prašak koji sadrži aktivni sastojak i koji ima prosečnu česticu od oko 0,2 do 500 mikrometara. Takva formulacija se primenjuje brzom inhalacijom kroz nazalni prolaz iz kontejnera praška koji se drži blizu nozdrva.

[0143] Formulacije za nazalnu primenu mogu, na primer, da sadrže od oko 0,1% (w/w) i do 100% (w/w) aktivnog sastojka, i mogu da sadrže jedan ili više dodatnih sastojaka koji su ovde opisani. Pruženi farmaceutski sastav može biti pripremljen, pakovan i/ili prodat u formulaciji za bukalnu primenu. Takve formulacije mogu, na primer, biti u obliku tableta i/ili pastila napravljenih korišćenjem konvencionalnih postupaka, i mogu da sadrže, na primer, 0,1 do 20% (w/w) aktivnog sastojka, i ravnoteža obuhvata oralno rastvorljiv i/ili razgradiv sastav i, opciono, jedan ili više dodatnih sastojaka koji su ovde opisani. Alternativno, formulacije za bukalnu primenu mogu da sadrže prašak i/ili aerosolizovani i/ili atomizovani rastvor i/ili suspenziju koja sadrži aktivni sastojak. Takve formulacije u obliku praška, aerosola i/ili aerosola, kada su raspršene, mogu imati prosečnu veličinu čestica i/ili kapljica u opsegu od oko 0,1 do oko 200 nanometara, i mogu dalje da sadrže jedan ili više ovde opisanih dodatnih sastojaka.

[0144] Pruženi farmaceutski sastav može biti pripremljena, upakovana i/ili prodata u formulaciji za oftalmičku primenu. Takve formulacije mogu, na primer, biti u obliku kapi za oči uključujući, na primer, 0,1/1,0% (w/w) rastvor i/ili suspenziju aktivnog sastojka u vodenom ili uljanom tečnom nosaču. Takve kapi mogu dalje sadržati puferske agense, soli i/ili jedan ili više drugih ovde opisanih dodatnih sastojaka. Druge formulacije za oftalmičku primenu koje su korisne uključuju one koje sadrže aktivni sastojak u mikrokristalnom obliku i/ili u lipozomalnom preparatu. Smatra se da su kapi za uši i/ili kapi za oči unutar obima ovog obelodanjenja.

[0145] Iako su opisi farmaceutskih sastava koji su ovde dati uglavnom usmereni na farmaceutske sastave koji su pogodni za primenu ljudima, stručnjak će razumeti da su takvi sastavi generalno pogodni za primenu životinjama svih vrsta. Modifikacija farmaceutskih sastava pogodnih za primenu ljudima kako bi se napravili sastavi pogodne za primenu

4

različitim životinjama je dobro poznata, i obično veterinarski farmakolog može dizajnirati i/ili izvesti takvu modifikaciju sa uobičajenim eksperimentisanjem.

[0146] Ovde dobijena jedinjenja su tipično formulisana u jediničnom doznom obliku za jednostavnu primenu i uniformnost doziranja. Podrazumeva se, međutim, da će ukupna dnevna upotreba datih sastava biti određena od strane lekara u okviru zdrave medicinske procene. Specifični terapeutski efikasni nivo doze za bilo kog određenog pacijent ili organizam će zavisiti od različitih faktora uključujući bolest, poremećaj ili stanje koje se tretira i ozbiljnost poremećaja; aktivnost korišćenog specifičnog aktivnog sastojka; specifičnog sastava koji se koristi; starosti, telesne težine, opšteg zdravlja, pola i ishrane pacijenta; vremena primene, puta primene i brzine izlučivanja specifičnog aktivnog sastojka koji se koristi; trajanje tretmana; lekova koji se koriste u kombinaciji ili koincidentalno sa upotrebljenim aktivnim sastojkom; i sličnih faktora koji su dobro poznati u medicini.

[0147] Jedinjenja i sastavi koji su ovde dati mogu da se primene bilo kojim putem, uključujući enteralnu (npr, oralno), parenteralno, intravenozno, intramuskularno, intraarterijski, intramedularno, intratekalno, subkutano, intraventrikularno, transdermalno, interdermalno, rektalno, intravaginalno, intraperitonealno, lokalno (kao praškovi, masti, kreme i/ili kapi), mukozno, nazalno, bukalna, sublingvalno; intratrahealnom instilacijom, bronhijalnom instilacijom i/ili inhalacijom; i/ili kao oralni sprej, nazalni sprej i/ili aerosol. Specifično razmatrani putevi su oralna primena, intravenska primena (npr, sistemska intravenska injekcija), regionalna primena putem snabdevanja krvlju i/ili limfom i/ili direktna primena na zahvaćeno mesto. Uopšteno, najprikladniji način primene će zavisiti od različitih faktora, uključujući prirodu agensa (npr., njegova stabilnost u okruženju gastrointestinalnog trakta), i/ili stanje pacijenta (npr., da li je pacijent sposoban da toleriše oralnu primenu).

[0148] Tačna količina jedinjenja koja je potrebna da se postigne efikasna količina će varirati od pacijenta do pacijenta, u zavisnosti, na primer, od vrste, starosti i opšteg stanja pacijenta, ozbiljnosti sporednih efekata ili poremećaja, identiteta određenog jedinjenja, načina primene, i slično. Željena doza se može isporučivati tri puta dnevno, dva puta dnevno, jednom dnevno, svaki drugi dan, svaki treći dan, svake nedelje, svake dve nedelje, svake tri nedelje, ili svake četiri nedelje. U određenim otelotvorenjima, željena doza se može isporučiti koristeći višestruke primene (npr., dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset, jedanaest, dvanaest, trinaest, četrnaest, ili više primena).

[0149] U određenim otelotvorenjima, efikasna količina jedinjenja za primenu jednog ili više puta dnevno odraslom čoveku od 70 kg može sadržati oko 0,0001 mg do oko 3000 mg, oko 0,0001 mg do oko 2000 mg, oko 0,0001 mg do oko 1000 mg, oko 0,001 mg do oko 1000 mg, oko 0,01 mg do oko 1000 mg, oko 0,1 mg do oko 1000 mg, oko 1 mg do oko 1000 mg, oko 1 mg do oko 100 mg, oko 10 mg do oko 1000 mg, ili oko 100 mg do oko 1000 mg jedinjenja po jediničnom doznom obliku.

[0150] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje koje je ovde opisano može biti primenjeno u dozama koje su dovoljne da dostave od oko 0,001 mg/kg do oko 1000 mg/kg, od oko 0,01 mg/kg do oko mg/kg, od oko 0,1 mg/kg do oko 40 mg/kg, od oko 0,5 mg/kg do oko 30 mg/kg, od oko 0,01 mg/kg do oko 10 mg/kg, od oko 0,1 mg/kg do oko 10 mg/kg, ili od oko 1 mg/kg kg do oko 25 mg/kg, telesne težine pacijenta dnevno, jedan ili više puta dnevno, kako bi se dobio željeni terapeutski efekat.

[0151] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje koje je ovde opisano se daje jedan ili više puta dnevno, tokom više dana. U nekim otelotvorenjima, režim doziranja se nastavlja danima, nedeljama, mesecima ili godinama.

[0152] Podrazumeva se da opsezi doza, kao što je ovde opisano, daju smernice za primenu farmaceutskih sastava za odrasle. Količina koja se daje, na primer, detetu ili adolescentu može biti određena od strane lekara ili stručnjaka u ovoj oblasti i može biti niža ili ista kao ona koja se daje odrasloj osobi.

[0153] Takođe će biti jasno da jedinjenje ili sastav, kao što je ovde opisano, može da se primeni u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih agenasa. Jedinjenja ili sastavi mogu se primenjivati u kombinaciji sa dodatnim terapeutski aktivnim agensima koja poboljšavaju njihovu efikasnost, potentnost i/ili bioraspoloživost, smanjuju i/ili modifikuju njihov metabolizam, inhibiraju njihovo izlučivanje i/ili modifikuju njihovu distribuciju unutar organizma. Takođe će biti razumljivo da upotrebljena terapija može postići željeni efekat za isti poremećaj, i/ili može postići različite efekte.

[0154] Jedinjenje ili sastav se može primenjivati istovremeno sa, pre ili posle, jednog ili više dodatnih terapeutski aktivnih agenasa. Uopšteno, svaki agens će biti primenjen u dozi i/ili na vremenskom rasporedu određenom za taj agens. Dalje će se shvatiti da se dodatni terapeutski aktivni agens koji se koristi u ovoj kombinaciji može primenjivati zajedno u jednom sastavu ili primenjivati odvojeno u različitim sastavima. Posebna kombinacija koja se koristi u režimu će uzeti u obzir kompatibilnost datog jedinjenja sa dodatnim terapeutski aktivnim agensom i/ili željenim terapeutskim efektom koji se želi postići. Uopšteno, očekuje se da se dodatni terapeutski aktivni agensi, koji se primenjuju u kombinaciji, koriste na nivoima koji ne prelaze nivoe na kojima se koriste pojedinačno. U nekim otelotvorenjima, nivoi korišćeni u kombinaciji će biti niži od onih koji se koriste pojedinačno.

[0155] Primeri dodatnih terapeutski aktivnih agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, antimikrobne agense, antifungalne agense, antiparazitske agense, anti-upalne agense i agens za ublažavanje bola. Terapeutski aktivni agensi uključuju male organske molekule kao što su jedinjenja leka (npr, jedinjenja odobrena od strane U.S. Food and Drug Administration kako je određeno u Code of Federal Regulations (CFR)), peptidi, proteini, ugljeni hidrati, monosaharidi, oligosaharidi, polisaharidi, nukleoproteini, mukoproteini, lipoproteini, sintetički polipeptidi ili proteini, mali molekuli povezani na proteine, glikoproteine, steroide, nukleinske kiseline, DNK, RNK, nukleotide, nukleozide, oligonukleotide, antisense oligonukleotide, lipide, hormone, vitamine i ćelije.

[0156] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje se kombinuje sa dodatnim terapeutski aktivnim agensom (npr, litijum i/ili ketamin) za upotrebu u tretmanu bipolarnog poremećaja i/ili depresije (npr., depresija otporna na litijum). Litijum je dugo bio terapija izbora za bipolarni poremećaj i manične sindrome, iako je tačan mehanizam delovanja teško razaznati (J. A. Quiroz, T. D. Gould and H. K. Manji, Mol. Interv., 2004, 4, 259). Poznato je da litijum utiče na funkciju raznih enzima, efekt koji se pripisuje kompetitivnom litijumu za esencijalna mesta vezivanja magnezijuma (W. J. Ryves and A. J. Harwood, Biochem.

Biophys. Res. Commun., 2001, 280, 720) Terapeutski efikasne doze Li+ (0,6-1,2 mM nivoi u plazmi) ne prilaze svojoj GSK3 IC50( IC50= 2 mM) (Annual Reports in Medicinal Chemistry, 2005, Volume 40, stranica 137).

[0157] U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje se kombinuje sa dodatnim terapeutski aktivnim agensom (npr., sve-trans retinoična kiselina) za upotrebu u tretmanu AML. U nekim otelotvorenjima, kombinacija datog jedinjenja i dodatnog terapeutski aktivnog agensa pokazuje sinergetsko dejstvo u tretmanu neurološke bolesti, psihijatrijskog poremećaja (npr., bipolarni poremećaj ili depresija (npr., depresija otporna na litijum)), poremećaj metabolizma (npr, dijabetes) i/ili rak (npr., AML).

[0158] Takođe obuhvaćeni ovim opisom su kompleti (npr., farmaceutski paketi). Dostavljeni kompleti mogu sadržati pružen farmaceutski sastav ili jedinjenje i kontejner (npr, bocu, ampule, bocu, špric i/ili pakovanje za doziranje, ili drugu pogodnu posudu). U nekim otelotvorenjima, pruženi kompleti mogu opciono dalje uključivati drugi kontejner koji sadrži farmaceutski ekscipijent za razblaživanje ili suspenziju datog farmaceutskog sastava ili jedinjenja. U nekim otelotvorenjima, pruženi farmaceutski sastav ili jedinjenje pruženi u kontejneru i drugom kontejneru su kombinovani da formiraju jedan jedinični dozni oblik. Upotreba i tretmani

[0159] Jedinjenja i sastavi koji su ovde opisani su generalno korisni za inhibiciju jedne ili više kinaza. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja i sastavi koji su ovde opisani su korisni za inhibiranje aktivnosti GSK3. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja i sastavi koji su ovde opisani su korisni za inhibiranje CK1. U nekim otelotvorenjima, pružena su jedinjenja koja su ovde opisana za upotrebu u postupcima za tretiranje poremećaja posredovanih sa kinazom kod pacijentu, koji sadrže primenu efikasne količine ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu kom je potreban tretman. U određenim aspektima, efikasna količina je terapeutski efikasna količina. U nekim otelotvorenjima, efikasna količina je profilaktički efikasna količina. U nekim otelotvorenjima, pacijent pati od poremećaja posredovanog kinazom. U određenim otelotvorenjima, pacijent je osetljiv na poremećaj posredovan sa kinazom. U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa kinazom je poremećaj posredovan sa GSK3 (npr., poremećaj posredovan sa GSK3α, poremećaj posredovan sa GSK3β). U određenim otelotvorenjima, poremećaj posredovan sa kinazom je poremećaj posredovan CK1 (npr., poremećaj posredovan CK1δ).

[0160] Izraz „poremećaj posredovan sa kinazom“ (npr, poremećaj posredovan sa GSK3, poremećaj posredovan CK1) označava bilo koju bolest, poremećaj ili drugo štetno stanje u kom je poznato da jedna ili više kinaza (npr, GSK3 ili CK1), ili njen mutant, igraju ulogu. Shodno tome, u nekim otelotvorenjima, ovaj pronalazak se odnosi na tretman ili smanjenje ozbiljnosti jedne ili više bolesti u kojima je poznato da jedna ili više kinaza (npr, GSK3 ili CK1) igraju ulogu.

[0161] U nekim otelotvorenjima, ovaj pronalazak dalje pruža jedinjenje kao što je ovde opisano za upotrebu u postupku inhibiranja kinaze, koji se sastoji od dovođenja u dodir kinaze sa efikasnom količinom ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim otelotvorenjima, predmetno obelodanjenje pruža jedinjenje kako je ovde opisano za upotrebu u postupku inhibicije GSK3 koji se sastoji od dovođenja u dovođenje u dodir GSK3 sa efikasnom količinom ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim otelotvorenjima, predmetno obelodanjenje pruža jedinjenje kako je ovde opisano za upotrebu u postupku inhibicije CK1, koji se sastoji od dovođenja u dovođenje u dodir CK1 sa efikasnom količinom ovde opisanog jedinjenja (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Kinaza može biti prečišćena ili sirova, i može biti prisutna u ćeliji, tkivu ili pacijentu. Prema tome, takve postupci obuhvataju i inhibiciju in vitro i in vivo aktivnost kinaze. U određenim otelotvorenjima, postupak je in vitro postupak, npr., kao što je postupak testa koristan kao alat za istraživanje.

[0162] U nekim otelotvorenjima, pruženo je jedinjenje kako je ovde opisano za upotrebu u postupku inhibicije aktivnosti kinaze kod pacijenta kom je to potrebno (npr., koji imaju veću aktivnost kinaze nego što je normalno) što uključuje primenu pacijentu efikasne količine jedinjenja koje je ovde opisano (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim otelotvorenjima, pružen je postupak inhibicije aktivnosti GSK3 kod pacijenta kom je to potrebno, koji se sastoji od primene pacijentu efikasne količine jedinjenja koje je ovde opisano (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim otelotvorenjima, pruženo je jedinjenje kao što je ovde opisano za upotrebu u postupku inhibicije aktivnosti CK1 kod pacijenta kom je to potrebno, i koji se sastoji od primene pacijentu efikasne količine jedinjenja koje je ovde opisano (npr., jedinjenje formule I, II, ili III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0163] U nekim otelotvorenjima, motivacija za primenu jedinjenja prema nekim otelotvorenjima je namera da se tretira neurološka bolest ili psihijatrijski poremećaj kod pacijenta. U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu neurološke bolesti (npr., neurološka bolest koja je ovde opisana). Neurološka bolest koja se tretira pruženim jedinjenjem može biti GSK3α- i/ili GSK3β-posredovana. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu psihijatrijskog poremećaja (npr., psihijatrijski poremećaj koji je ovde opisan). Psihijatrijski poremećaj koji se tretira pruženim jedinjenjem može biti GSK3α- i/ili GSK3β-posredovan.

[0164] Izraz „neurološka bolest“ se odnosi na stanje koje ima kao komponentu poremećaj centralnog ili perifernog nervnog sistema. Neurološka bolest može prouzrokovati poremećaj u strukturi ili funkciji nervnog sistema usled razvojnih i funkcionalnih abnormalnosti, bolesti, genetskih defekata, povreda ili toksina. Ovi poremećaji mogu uticati na centralni nervni sistem (npr., mozak, moždano stablo i cerebelum), periferni nervni sistem (npr., kranijalni nervi, kičmeni živci i simpatički i parasimpatički nervni sistem) i/ili autonomni nervni sistem (npr., deo nervnog sistema koji reguliše nevoljno delovanje i koji je podeljen na simpatički i parasimpatički nervni sistem). Prema tome, neurodegenerativna bolest je primer za neurološko oboljenje.

[0165] Izraz „neurodegenerativna bolest“ se odnosi na stanje koje karakteriše gubitak neuronskih ćelija ili ćelija koje podržavaju neuronske ćelije, što izaziva kognitivnu i/ili motoričku disfunkciju i/ili invaliditet. Prema tome, izraz se odnosi na bilo koju bolest ili poremećaj koji se može preokrenuti, ometati, upravljati, tretirati, poboljšati ili eliminisati sa agensima koji stimulišu generisanje novih neurona. Primeri neurodegenerativnih bolesti su: (i) hronične neurodegenerativne bolesti kao što su familijarna i sporadična amiotrofična lateralna skleroza (FALS i ALS), familijarna i sporadična Parkinsonova bolest, Huntingtonova bolest, familijarna i sporadična Alchajmerova bolest, Fragile X sindrom, multipla skleroza, olivopontocerebelarna atrofija, atrofija više sistema, progresivna supranuklearna paraliza, difuzna bolest Levijevog tela, kortikodentatonigralna degeneracija, progresivna familijarna mioklonična epilepsija, strionigralna degeneracija, torziona distonija, familijarni tremor, Daunov sindrom, Turetov sindrom, Hallervorden-Spatz bolest, demencija pugilistika, AIDS demencija, starosna demencija, oštećenje pamćenja povezano sa godinama i neurodegenerativne bolesti povezane sa amiloidozom kao što su one uzrokovane prionskim proteinom (PrP) koji je povezan sa transmisivnom spongiformnom encefalopatijom (Creutzfeldt-Jakobova bolest, Gerstmann-Straussler-Scheinker sindrom, skrapik, i kuru), i one uzrokovane viškom akumulacije cistatina C (nasledna angiopatija cistatina C); i (ii) akutne neurodegenerativne poremećaje kao što je traumatska povreda mozga (npr, povrede mozga povezane sa operacijom), cerebralni edem, oštećenje perifernih nerva, povreda kičmene moždine, Leigh-ova bolest, Guillain-Barre-ov sindrom, poremećaji lizosomalnog skladištenja kao što je lipofuscinoza, Alper-ova bolest, vrtoglavica kao rezultat degeneracije CNS-a; patologije koje nastaju usled hroničnog zloupotrebe alkohola ili droge, uključujući, na primer, degeneraciju neurona u coeruleus lokusu i cerebelumu; patologije koje nastaju starenjem uključujući degeneraciju cerebelarnih neurona i kortikalnih neurona, što dovodi do kognitivnih i motoričkih oštećenja; i patologije koje se javljaju kod hronične zloupotrebe amfetamina, uključujući degeneraciju neurona bazalnih ganglija što dovodi do motoričkih oštećenja; patološke promene koje nastaju usled fokalne traume kao što je moždani udar, fokalna išemija, vaskularna insuficijencija, hipoksikisemijska encefalopatija, hiperglikemija, hipoglikemija ili direktna trauma; patologije koje nastaju kao negativni sporedni efekti terapijskih lekova i tretmana (npr, degeneracija neurona cingulata i entorhinalnog korteksa kao odgovor na antikonvulzivne doze antagonista NMDA klase receptora glutamata) i povezana Wernicke-Korsakoff-ova demencija. Neurodegenerativne bolesti koje utiču na senzorne neurone uključuju Friedreich-ovu ataksiju i neuronsku degeneraciju retine. Druge neurodegenerativne bolesti uključuju povredu nerva ili traumu povezanu sa povredom kičmene moždine. Neurodegenerativne bolesti limbičkog i kortikalnog sistema uključuju cerebralnu amiloidozu, Pick-ovu atrofiju i Rett-ov sindrom. Prethodni primeri nisu zamišljeni da budu sveobuhvatni, već služe samo kao ilustracija izraza „neurodegenerativni poremećaj“.

[0166] Alchajmerova bolest je degenerativni poremećaj mozga koji karakterišu kognitivni i nekognitivni psihijatrijski simptomi. Psihijatrijski simptomi su česti kod Alchajmerove bolesti, sa psihozom (halucinacijama i zabludama) prisutnim kod oko pedeset procenata obolelih. Slično šizofreniji, pozitivni psihotični simptomi su česti kod Alchajmerove bolesti. Deluzije se obično javljaju češće nego halucinacije. Pacijenti koji boluju od Alchajmerove bolesti takođe mogu pokazivati negativne simptome, kao što su disengenzija, apatija, smanjena emocionalna reakcija, gubitak volje i smanjena inicijativa. Zaista, antipsihotična jedinjenja koja se koriste za ublažavanje psihoze šizofrenije su takođe korisna u ublažavanju psihoze kod pacijenata sa Alchajmerovom bolešću. Izraz „demencija“ se odnosi na gubitak kognitivnih i intelektualnih funkcija bez narušavanja percepcije ili svesti. Demenciju tipično karakterišu dezorijentacija, poremećeno pamćenje, rasuđivanje i intelekt, kao i plitko labilni uticaj.

[0167] Fragile X sindrom, ili Martin-Bell-ov sindrom, je genetski sindrom, koji rezultuje spektrom karakterističnih fizičkih, intelektualnih, emocionalnih i bihejvioralnih karakteristika koje se kreću od ozbiljnih do blagih pojava. Sindrom je povezan sa ekspanzijom jedne trinukleotidne genske sekvence (CGG) na X hromozomu, i rezultuje neuspehom u

1

eksprimiranju FMRP proteina koji je potreban za normalan nervni razvoj. Postoje četiri opšteprihvaćena oblika Fragile X sindroma koji se odnose na dužinu ponovljenog CGG niza u FMR1 gen; Normalan (29-31 CGG ponavljanja), Premutacija (55-200 CGG ponavljanja), Puna mutacija (više od 200 CGG ponavljanja), i Srednja ili siva zone (40 - 60 ponavljanja). Normalno, FMR1 gen sadrži između 6 i 55 ponavljanja CGG kodona (trinukleotidna ponavljanja). Kod ljudi sa Fragile X sindromom, FMR1 alel ima preko 230 ponavljanja ovog kodona. Ekspanzija CGG ponavljajućeg kodona do takvog stepena dovodi do metilacije tog dela DNK, efikasno utišavajući eksprimiranje FMR1 proteina. Za ovu metilaciju FMR1 lokusa u hromozomskom pojasu Xq27.3 se veruje da rezultuje suženjem X hromozoma koji se u tom trenutku čini 'krhkim' (Fragile) pod mikroskopom, što je tom sindromu dalo ime. Mutacija FMR1 gena dovodi do transkripcionog utišavanja krhkog proteina X-mentalne retardacije, FMRP. Smatra se da kod normalnih osoba FMRP reguliše značajnu populaciju mRNK: FMRP igra važnu ulogu kod učenja i pamćenja, i čini se i da je uključen u razvoj aksona, formiranje sinapsi, i ožičenje i razvoj neuronskih kola.

[0168] Amiotrofna lateralna skleroza (ALS), koja se naziva i Lou Gehrig-ova bolest, je progresivna, fatalna neurološka bolest. ALS se javlja kada specifične nervne ćelije u mozgu i kičmenoj moždini koje kontrolišu dobrovoljno kretanje postepeno degenerišu i uzrokuju da mišići pod njihovom kontrolom oslabe i otpadnu, što dovodi do paralize. Trenutno ne postoji lek za ALS; niti postoji dokazana terapija koja će sprečiti ili preokrenuti tok poremećaja.

[0169] Parkinsonova bolest je poremećaj dobrovoljnog kretanja u kom mišići postaju ukočeni i tromi. Simptomi bolesti su teška i nekontrolisana ritmička trzanja grupa mišića koji proizvode drhtanje ili potrese. Bolest je uzrokovana degeneracijom pre-sinaptičkih dopaminergičkih neurona u mozgu, i posebno u moždanom stablu. Kao rezultat degeneracije, neadekvatno oslobađanje hemijskog predajnika dopamina javlja se tokom neuronske aktivnosti. Trenutno, Parkinsonova bolest se tretira sa nekoliko različitih jedinjenja i kombinacija. Levodopa (L-dopa), koji se pretvara u dopamin u mozgu, često se daje za obnavljanje kontrole mišića. Perindopril, ACE inhibitor koji prelazi krvno-moždanu barijeru, koristi se za poboljšanje motoričkih odgovora pacijenata na L-dopu. Karbidopa se primenjuje sa L-dopom kako bi se odložila konverzija L-dopa u dopamin dok ne stigne do mozga, i takođe se smanjuju sporedni efekti L-dope. Ostali lekovi koji se koriste u terapiji Parkinsonove bolesti su dopamin mimikeri Mirapex (pramipeksol dihidrohlorid) i Requip

2

(ropinirol hidrohlorid) i Tasmar (tolkapon), COMT inhibitor koji blokira ključni enzim odgovoran za razbijanje levodope pre nego što stigne do mozga.

[0170] Izraz „psihijatrijski poremećaj“ odnosi se na stanje ili poremećaj koji se odnosi na funkcionisanje mozga i kognitivne procese ili ponašanje. Psihijatrijski poremećaji mogu se dalje klasifikovati na osnovu tipa neuroloških poremećaja koji utiču na mentalne sposobnosti. Psihijatrijski poremećaji se izražavaju prvenstveno u abnormalnostima misli, osećanja, emocija i/ili ponašanja koji stvaraju ili uznemirenost ili oštećenje funkcije (na primer, narušavanje mentalnih funkcija kao što su demencija ili senilnost). Izraz „psihijatrijski poremećaj“ se, prema tome, ponekad koristi naizmenično sa izarazom „mentalni poremećaj“ ili izarazom „duševna bolest“.

[0171] Psihijatrijski poremećaj često karakteriše psihološki ili bihejvioralni obrazac koji se javlja kod pojedinca i za koji se smatra da izaziva nelagodu ili invaliditet koji se ne očekuje kao deo normalnog razvoja ili kulture. Definicije, procene i klasifikacije mentalnih poremećaja mogu da variraju, ali kriterijumi smernica nabrojani su u International Classification of Diseases and Related Health Problems (ICD, objavljeno od strane Svetske zdravstvene organizacija, SZO), ili u Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM, objavljeno od strane American Psychiatric Association, APA) i drugim priručnicima koji su široko prihvaćeni od strane stručnjaka za mentalno zdravlje. Pojedinci se mogu proceniti za različite psihijatrijske poremećaje koristeći kriterijume izložene u ovim i drugim publikacijama prihvaćenim od strane medicinskih radnika na terenu, i manifestacija i ozbiljnost psihijatrijskog poremećaja mogu se odrediti kod pojedinca koristeći ove publikacije.

[0172] Kategorije dijagnoza u ovim šemama mogu uključivati disocijativne poremećaje, poremećaje raspoloženja, anksiozne poremećaje, psihotične poremećaje, poremećaje u ishrani, poremećaje u razvoju, poremećaje ličnosti i druge kategorije. Postoje različite kategorije mentalnog poremećaja, i mnogo različitih aspekata ljudskog ponašanja i ličnosti koje mogu postati poremećene.

[0173] Jedna grupa psihijatrijskih poremećaja uključuje poremećaje mišljenja i razuma, kao što su šizofrenija i delirijum. Druga grupa psihijatrijskih poremećaja uključuje poremećaje raspoloženja, kao što su afektivni poremećaji i anksioznost. Treća grupa psihijatrijskih poremećaja uključuje poremećaje socijalnog ponašanja, kao što su defekti karaktera i poremećaji ličnosti. Četvrta grupa psihijatrijskih poremećaja uključuje poremećaje učenja, pamćenja i inteligencije, kao što su mentalna retardacija i demencija. Shodno tome, psihijatrijski poremećaji obuhvataju šizofreniju, delirijum, poremećaj deficita pažnje (ADD), šizoafektivni poremećaj, depresiju (npr, litijum-rezistentna depresija), maniju, poremećaj nedostatka pažnje, narkomaniju, demenciju, uznemirenost, apatiju, anksioznost, psihoze, poremećaje ličnosti, bipolarne poremećaje, unipolarni afektivni poremećaj, opsesivnokompulsivne poremećaje, poremećaje ishrane, posttraumatske stresne poremećaje, razdražljivost, poremećaj ponašanja adolescenata i dezinhibiciju.

[0174] Neke bolesti klasifikovane kao neurodegenerativne bolesti, na primer Alchajmerova bolest, takođe ponekad pokazuju aspekte psihijatrijskih poremećaja koji su ovde navedeni, na primer poremećaji pamćenja ili demencija. Neke neurodegenerativne bolesti ili njihove manifestacije mogu se, prema tome, takođe nazivati psihijatrijskim poremećajima. Ovi termini, dakle, nisu međusobno isključivi.

[0175] Stanje anksioznosti ili straha može postati poremećeno, tako da je neuobičajeno intenzivno ili generalizovano tokom dužeg vremenskog perioda. Uobičajene kategorije anksioznih poremećaja uključuju specifičnu fobiju, generalizirani anksiozni poremećaj, socijalni anksiozni poremećaj, panični poremećaj, agorafobiju, opsesivno-kompulsivni poremećaj, posttraumatski stresni poremećaj.

[0176] Relativno dugotrajna afektivna stanja takođe mogu biti poremećena. Poremećaj raspoloženja koji uključuje neuobičajeno intenzivnu i održivu tugu, melanholiju ili očajanje poznat je kao klinička depresija (ili velika depresija), i može se općenito opisati kao emocionalna disregulacija. Blaža, ali dugotrajna depresija može biti dijagnostikovana kao distimija. Bipolarni poremećaj uključuje abnormalno „visoka“ ili stanja raspoloženja pod pritiskom, poznata kao manija ili hipomanija, naizmenično sa normalnim ili depresivnim raspoloženjem.

[0177] Obrasci uverenja, upotreba jezika i percepcija mogu biti poremećeni. Psihotični poremećaji koji centralno uključuju ovaj domen uključuju šizofreniju i deluzioni poremećaj. Šizoafektivni poremećaj je kategorija koja se koristi za pojedince koji pokazuju aspekte šizofrenije i afektivnih poremećaja. Šizotipija je kategorija koja se koristi za pojedince koji

4

pokazuju neke od osobina povezanih sa šizofrenijom, ali bez zadovoljenja kriterijuma preseka.

[0178] Osnovne karakteristike osobe koje utiču na njegove ili njene spoznaje, motivacije i ponašanja u situacijama i vremenu - mogu se posmatrati kao poremećene zbog toga što su abnormalno rigidne i neprilagođene. Kategorijske šeme navode niz različitih poremećaja ličnosti, kao što su oni koji su klasifikovani kao ekscentrični (npr., paranoidni poremećaj ličnosti, šizoidni poremećaj ličnosti, šizotipni poremećaj ličnosti), oni koji se opisuju kao dramatični ili emocionalni (antisocijalni poremećaj ličnosti, granični poremećaj ličnosti, histrionski poremećaj ličnosti, narcisoidni poremećaj ličnosti) ili oni koji se doživljavaju kao povezani sa strahom (poremećaj ličnosti izbegavanja, zavisni poremećaj ličnosti, opsesivnokompulsivni poremećaj ličnosti).

[0179] Drugi poremećaji mogu uključivati i druge atribute ljudskog funkcionisanja. Praksa ishrane može biti poremećena, bilo sa prinudnim prekomernim unosom hrane, ili nedovoljnim unosom hrane. Kategorije poremećaja u ovoj oblasti uključuju anoreksija nervozu, bulimiju, bulimiju vežbanja ili poremećaj prejedanja. Poremećaji spavanja kao što je nesanica takođe postoje i mogu poremetiti normalne obrasce spavanja. Poremećaji seksualnog i rodnog identiteta, kao što su poremećaj dispereunije ili rodnog identiteta ili egodistonična homoseksualnost. Ljudi koji su abnormalno nesposobni da se odupru porivima ili impulsima, da izvrše radnje koje mogu biti štetne za sebe ili druge, mogu se klasifikovati kao poremećaj kontrole impulsa, uključujući razne vrste Tic poremećaja kao što je Turetov sindrom i poremećaji kao što je kleptomanija (krađa) ili piromanija (paljenje vatre).

Poremećaji u upotrebi supstanci uključuju poremećaj zloupotrebe supstanci. Zavisnost od kockanja može se klasifikovati kao poremećaj. Nemogućnost da se dovoljno prilagodi životnim okolnostima može se klasifikovati kao poremećaj prilagođavanja. Kategorija poremećaja prilagođavanja je obično rezervisana za probleme koji počinju u roku od tri meseca od događaja ili situacije i završavaju se u roku od šest meseci nakon što stresor prestane ili se eliminiše. Ljudi koji trpe ozbiljne poremećaje svog identiteta, pamćenja i opšte svesti o sebi i okolini mogu biti klasifikovani kao disocijativni poremećaj identiteta, kao što je poremećaj depersonalizacije (koji je takođe nazvan poremećaj višestruke ličnosti, ili „podeljena ličnost“). Činjenični poremećaji, kao što je Munchausen-ov sindrom, takođe postoje tamo gde su simptomi doživljeni i/ili prijavljeni za ličnu korist.

[0180] Poremećaji koji se pojavljuju u telu, ali smatraju se mentalnim, poznati su kao somatoformni poremećaji, uključujući somatizacijski poremećaj. Postoje i poremećaji percepcije tela, uključujući i dismorfni poremećaj tela. Neurastenija je kategorija koja uključuje somatske žalbe, kao i umor i nisko raspoloženje/depresiju, što je zvanično priznato od ICD-a (verzija 10), ali ne i od DSM-a (verzija IV). Memorijski ili kognitivni poremećaji, kao što su amnezija ili Alchajmerova bolest, takođe se ponekad klasifikuju kao psihijatrijski poremećaji.

[0181] Drugi predloženi poremećaji uključuju: samo-poražavajući poremećaj ličnosti, sadistički poremećaj ličnosti, pasivno-agresivni poremećaj ličnosti, predmenstrualni disforični poremećaj, zavisnost od video igara ili poremećaj zavisnosti od interneta.

[0182] Bipolarni poremećaj je psihijatrijska dijagnoza koja opisuje kategoriju poremećaja raspoloženja definisanih prisustvom jedne ili više epizoda abnormalno povišenog raspoloženja koje se klinički naziva manija ili, ako je blaže, hipomanija. Pojedinci koji doživljavaju manične epizode takođe često doživljavaju depresivne epizode ili simptome, ili mešovite epizode u kojima su karakteristike i manije i depresije prisutne u isto vreme. Ove epizode su obično razdvojene periodima „normalnog“ raspoloženja, ali kod nekih pojedinaca, depresija i manija mogu brzo da se izmenjuju, poznate kao brzo kruženje. Ekstremne manične epizode ponekad mogu dovesti do psihotičnih simptoma kao što su obmane i halucinacije. Poremećaj je podeljen na bipolarni I, bipolarni II, ciklotimiju i druge tipove, na osnovu prirode i težine epizoda doživljenog raspoloženja; opseg se često opisuje kao bipolarni spektar.

[0183] Autizam (koji se takođe naziva poremećaj autističnog spektra ili ASD) je poremećaj koji ozbiljno narušava funkcionisanje pojedinaca. Karakteriše ga samo-apsorpcija, smanjena sposobnost komunikacije ili reagovanja na spoljašnji svet, rituali i kompulsivne pojave i mentalna retardacija. Autistični pojedinci su takođe pod povećanim rizikom od razvoja napada, kao što je epilepsija. Iako je stvarni uzrok autizma nepoznat, čini se da uključuje jedan ili više genetskih faktora, što ukazuje na činjenicu da je stopa konkordancije veća kod monozigotnih blizanaca nego kod dizigotnih blizanaca, i može uključivati i imunološke i ekološke faktore, kao što je dijeta, otrovne hemikalije i infekcije.

[0184] Šizofrenija je poremećaj koji pogađa oko jedan procenat svetske populacije. Tri opšta simptoma šizofrenije često se nazivaju pozitivnim simptomima, negativnim simptomima i neorganizovanim simptomima. Pozitivni simptomi mogu uključivati zablude (abnormalna verovanja), halucinacije (abnormalne percepcije) i neorganizovane misli. Halucinacije šizofrenije mogu biti slušne, vizuelne, olfaktorne ili taktilne. Neorganizovane misli mogu se manifestovati kod šizofrenih pacijenata pomoću nepovezanog govora i nemogućnosti održavanja logičkih misaonih procesa. Negativni simptomi mogu predstavljati odsustvo normalnog ponašanja. Negativni simptomi uključuju emocionalnu otupelost ili nedostatak izražavanja, i mogu se karakterisati socijalnim povlačenjem, smanjenom energijom, smanjenom motivacijom i smanjenom aktivnošću. Katatonija može biti povezana sa negativnim simptomima šizofrenije. Simptomi šizofrenije treba neprekidno da traju oko šest meseci kako bi se pacijentu postavila dijagnoza šizofrenije. Na osnovu tipova simptoma koje pacijent otkriva, šizofrenija se može svrstati u podtipove uključujući katatoničnu šizofreniju, paranoidnu šizofreniju i neorganizovanu šizofreniju.

[0185] Primeri antipsihotičnih lekova koji se mogu koristiti za tretman šizofrenih pacijenata uključuju fenotizine, kao što su hlorpromazin i trifluo-bromazin; tioksanteni, kao što je hlorprotiksen; flufenazin; butiropenoni, kao što je haloperidol; loksapin; mesoridazin; molindon; kvetiapin; tiotiksen; trifluoperazin; perfenazin; tioridazin; risperidon; dibenzodiazepini, kao što je klozapin; i olanzapin. Iako ova jedinjenja mogu ublažiti simptome šizofrenije, njihova primena može dovesti do neželjenih sporednih efekata uključujući simptome slične Parkinsonovoj bolesti (drhtanje, mišićna rigidnost, gubitak izraza lica); distonija; nemir; tardivna diskinezija; dobijanje na težini; problemi sa kožom; suva usta; konstipacija; zamagljen vid; pospanost; nejasan govor i agranulocitoza.

[0186] Poremećaji raspoloženja se obično karakterišu prožimajućim, produženim i onseposobljavajućim prekomernim doživljavanjem raspoloženja i uticaja koji su povezani sa bihejvioralnim, fiziološkim, kognitivnim, neurohemijskim i psihomotornim disfunkcijama. Glavni poremećaji raspoloženja uključuju, ali nisu ograničeni na veliki depresivni poremećaj (takođe poznat kao unipolarni poremećaj), bipolarni poremećaj (takođe poznat kao manična depresivna bolest ili bipolarna depresija), distimički poremećaj.

[0187] Izraz „depresija", koji se ponekad koristi naizmenično sa „depresivnim poremećajem“, odnosi se na poremećaje raspoloženja koji se manifestuju kao morbidna tuga, potištenost ili melanholija. Depresivni poremećaji mogu uključivati serotonergičke i noradrenergične neuronske sisteme zasnovane na trenutnim terapijskim režimima koji ciljaju receptore serotonina i noradrenalina. Manija može biti rezultat neravnoteže određenih hemijskih mesindžera u mozgu. Prijavljeno je da primena fosfotidil holina ublažava simptome manije. U određenim otelotvorenjima, ovde opisana depresija je depresija otporna na litijum.

[0188] Manija je kontinuirana forma euforije koja pogađa milione ljudi u Sjedinjenim Američkim Državama koji pate od depresije. Manične epizode mogu biti okarakterisane povišenim, ekspanzivnim ili razdražljivim raspoloženjem koje traje nekoliko dana, i često je praćeno i drugim simptomima, kao što su prekomerna aktivnost, preterana želja za pričanjem, društvena nametljivost, povećana energija, pritisak uzrokovan idejama, grandioznost, slaba pažnja, smanjena potreba za spavanjem i nepromišljenost. Manični pacijenti mogu takođe iskusiti zablude i halucinacije.

[0189] Anksiozni poremećaji se odlikuju čestom pojavom simptoma straha, uključujući uzbuđenje, nemir, pojačane reakcije, znojenje, ubrzano srce, povišen krvni pritisak, suva usta, želju za bekstvom, i ponašanje izbegavanja. Generalizovana anksioznost traje nekoliko meseci i povezana je sa motoričkom napetošću (drhtanje, trzanje, bolovi u mišićima, nemir); autonomna hiperaktivnost (kratak dah, palpitacije, povišen broj otkucaja srca, znojenje, hladne ruke), i budnost i skeniranje (osećaj bivanja na ivici, preteran odgovor na strah, poteškoće sa koncentracijom). Benzodiazepini, koji pojačavaju inhibitorne efekte receptora gama amino buterne kiseline (GABA) tipa A, često se koriste za tretman anksioznosti.

Buspiron je još jedan efikasan tretman anksioznosti.

[0190] Šizo-afektivni poremećaj opisuje stanje u kom su prisutni i simptomi poremećaja raspoloženja i šizofrenije. Osoba može ispoljiti poteškoće u percepciji ili izražavanju stvarnosti, najčešće u obliku slušnih halucinacija, paranoidnih ili bizarnih zabluda ili dezorganizovanog govora i razmišljanja, kao i diskretne manične i/ili depresivne epizode u kontekstu značajnih društvenih ili profesionalnih epizoda. disfunkcija.

[0191] U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu poremećaja hiperaktivnosti (ADHD). U nekim otelotvorenjima, tretman ADHD se vrši inhibicijom CKld (pogledati, npr., Zhou, i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2010, 107:4401).

[0192] U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje stimuliše neurogenezu. Prema tome, u nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu bolesti koje su povezane sa neurogenezom. Na primer, pruženo jedinjenje je korisno za tretman neurološkog poremećaja kod pacijenta koji se sastoji od primene pacijentu efikasne količine datog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim otelotvorenjima, neurološki poremećaj je kognitivni pad povezan sa normalnim starenjem, traumatskim povredama mozga, Parkinsonovom bolesti, glavnom depresijom, bipolarnim poremećajem, epilepsijom, spinocerebelarnom ataksijom, Huntington-ovom bolesti, ALS-om, moždanim udarom, zračenjem, posttraumatskim stresnim poremećajem, Daunovim sindrom, hroničnim stresom, retinalnom degeneracijom, povredom kičmene moždine, povredom perifernih živaca, fiziološkim gubitkom težine povezanim sa različitim stanjima, zloupotrebom neuroaktivnog leka, povredom kičmene moždine ili kognitivnim padom povezanim sa hemoterapijom.

[0193] U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u regulaciji cirkadijalnog ritma kod pacijenta kom je to potrebno. U nekim otelotvorenjima, regulacija abnormalnih cirkadijalnih ritmova se vrši inhibicijom CK1δ.

[0194] U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu alopecije.

[0195] U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno kao imunopotentator.

[0196] U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu raka. Rak koji se tretira sa datim jedinjenjem može biti posredovan sa GSK3α- i/ili GSK3β. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu ovde opisanog raka. Na primer, u nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu leukemije. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu akutne mijeloične leukemije (AML). U određenim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu akutne limfocitne leukemije (ALL), hronične mijelocitne leukemije (CML) i/ili hronične limfocitne leukemije (CLL). U nekim otelotvorenjima, tretman leukemije (npr, akutna mijeloidna leukemija) se vrši inhibicijom GSK3α. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu multiplog mijeloma. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu glioma ili raka pankreasa. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu raka dojke, raka pluća ne-malih ćelija, raka tiroidne žlezde, leukemije T-ćelija ili B-ćelija, ili tumora izazvanog virusom.

[0197] GSK3α i GSK3β su takođe uključeni u metaboličke poremećaje, kao što je dijabetes (npr, dijabetes tipa II) (A. S. Wagman, K. W. Johnson and D. E. Bussiere, Curr. Pharm. Design, 2004, 10, 1105). Aktivnost GSK3 je povećana kod dijabetesa kod ljudi i glodara, i različiti inhibitori GSK3 poboljšavaju toleranciju glukoze i osetljivost na insulin kod glodarskog modela gojaznosti i dijabetesa. Za razliku od GSK3β mutanata, koji umiru pre rođenja, GSK3α knockout (GSK3α KO) životinje su održive, ali pokazuju povećanu glukozu i osetljivost na insulin praćenu smanjenom masom masti (Katrina i dr., Cell Metabolism 6, 329-337, October 2007). Sadržaj hepatičkog glikogena, nakon suzdržavanja od hrane, i stimulisan glikozom, povećan je kod GSK3α KO miševa, dok je glikogen u mišićima bio nepromenjen. Fosforilacija insulinom stimulisane protein kinaze B (PKB/Akt) i GSK3β bila je viša u GSK3α KO jetrama u poređenju sa divljim tipom miševa iz istog legla, i eksprimiranje IRS-1 je bilo značajno povećano. Zaključeno je da GSK3 izoform pokazuju tkivno specifične fiziološke funkcije, i da su GSK3α KO miševi osetljivi na insulin, pojačavajući potencijal GSK3 kao terapeutski cilj za dijabetes tipa II.

[0198] U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu metaboličkog poremećaja. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu dijabetesa (npr., dijabetes tipa 1, dijabetes tipa 2 ili gestacijski dijabetes). U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu dijabetesa tipa 2. U nekim otelotvorenjima, pruženo jedinjenje je korisno u tretmanu gojaznosti.

Primeri

[0199] Kako bi se ovde opisani pronalazak mogao potpunije razumeti, navedeni su sledeći primeri. Treba razumeti da su ovi primeri samo za ilustrativne svrhe, i ne treba ih tumačiti kao ograničavanje ovog pronalaska na bilo koji način.

[0200] Biblioteka od preko tri stotine i dvadeset hiljada jedinjenja je prikazana na ljudskom GSK3β. Među identifikovanim inhibitorima, Jedinjenje 1 pokazalo je pristojnu potentnost i odličnu selektivnost inhibirajući samo četiri druge kinaze od preko tri stotine kinaza na 10 µM za više od pedeset procenata. Naknadne hemijske modifikacije Jedinjenja 1, vođene kokristalnom strukturom sa GSK3β, i baterijom biohemijskih i ćelijskih testova dovela je do Jedinjenja 54 koji inhibira GSK3β sa IC50između 10-30 nM. Jedinjenje 54 ima superiorni profil selektivnosti širom kinoma u poređenju sa CHIR99021. Dalje, Jedinjenje 54 pokazuje odličnu ćelijsku aktivnost u inhibiranju GSK3β-posredovane Tau fosforilacije u SH-SY5Y ćelijama neuroblastoma (IC50od 1 µM), i kod ublažavanja negativne regulacije GSK3β na ćelijskoj degradaciji β-katenina i aktivnostima promotera TCF/LEF sa EC50od 5 µM u oba testa. U isto vreme, ćelijska toksičnost od strane Jedinjenja 54 je opažena u SH-SY5Y ćelijama pri najvišoj test koncentraciji od 30 µM. Uzeto zajedno, Jedinjenje 54 je potentna i visoko selektivna mala molekularna sonda protiv GSK3β, što omogućava bolje istraživanje i tumačenje GSK3β ćelijskih funkcija ranije poznatih inhibitora. Skela Jedinjenja 54 takođe obećava da će isporučiti dodatna jedinjenja sa dalje poboljšanim biohemijskim, ćelijskim i farmakokinetičkim svojstvima pogodnim za istraživanje in vivo uloge GSK3β u odgovarajućoj fiziologiji i patologiji životinja.

Sintetički postupci

[0201] Opšti detalji. Sve reakcije osetljive na kiseonik i/ili vlagu su izvedene pod atmosferom azota (N2) u staklenoj posudi koja je osušena plamenom pod vakuumom (približno 0,5 mm Hg) i pročišćena sa N2pre upotrebe. Svi reagensi i rastvarači su nabavljeni od komercijalnih dobavljača i korišćeni kao primljeni, ili sintetizovani prema već prijavljenim postupcima. NMR spektri su snimljeni na Bruker 300 (300 MHz<1>H, 75 MHz<13>C) ili UNITY INOVA 500 (500 MHz<1>H, 125 MHz<13>C) spektrometrima. Hemijski pomaci protona i ugljenika su prikazani u ppm (δ) i odnose se na NMR rastvarač. Podaci su prikazani

1

na sledeći način: hemijski pomaci, multiplicitet (br = širok, s = singlet, d = dublet, t = triplet, k = kvartet, m = multiplet; konstanta kuplovanja u Hz).

[0202] Ukoliko nije drugačije naznačeno, NMR podaci su sakupljeni na 25°C. Fleš hromatografija je izvedena koristeći 40-60 µm Silica Gel (60 Å mreža) na Isco Combiflash Rf. Tandem tečna hromatografija/masena spektrometrija (LC/MS) je izvedena na Waters 2795 separacionom modulu i 3100 masenom detektoru. Analitička tankoslojna hromatografija (TLC) je izvedena na EM Reagent 0,25 mm silika gel 60-F pločama.

Vizualizacija je izvedena sa ultraljubičastom (UV) svetlošću i mrljom vodenog kalijum permanganata (KMnO4), nakon čega sledi zagrevanje. Maseni spektri visoke rezolucije su dobijeni na MIT Mass Spectrometry Facility (Bruker Daltonics APEXIV 4.7 Tesla Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometer).

[0203] U Protokolu sinteze A (Šema la), 1,3-dion (1,0 ekvivalent), aldehid (1,0 ekvivalent) i amin (1,35 ekvivalenata) su rastvoreni u etanolu (0,4 M) i smeša je zagrejana na 150°C u mikrotalasnoj tokom 15 minuta. Reakciona smeša je ohlađena i etanol je uparen. Sirova reakciona smeša je prečišćena hromatografijom na koloni sa silicijum dioksidom (ISCO).

4-(2-metoksifenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on:

[0204]

[0205] 5,5-Dimetilcikloheksan-1,3-dion (824 mg, 5,88 mmol), 2-metoksibenzaldehid (800 mg, 5,88 mmol) i 3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5-amin (1199 mg, 7,93 mmol) su pomešani

2

zajedno u mikrotalasnoj bočici i etanol (14,7 mL, 0,4 M) je dodat tome. Reakciona smeša je zagrejana u mikrotalasnoj peći tokom 15 minuta pri 150 °C. Smeša je ohlađena i rastvarač je isparen. Rezultujuća smeša je zatim pročišćena kolonskom hromatografijom preko silika gela (heksan/etil acetat: 100/0 do 20/80) kako bi se dobio željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (372,0 mg).<1>H NMR (300 MHz, MeOD) δ 7,19 (d, J= 7,4 Hz, 1H), 7,12 - 7,03 (m, 1H), 6,78 (dd, J= 13,8, 7,4 Hz, 2H), 5,39 (s, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,56 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 2,42 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 2,24 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 2,04 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 1,08 (s, 3H), 0,97 (s, 3H). LRMS (ESI+) (M+): 391,82.

[0206] Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobili (R)-4-(2-metoksifenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on (Jedinjenje 54) i (S)-4-(2-metoksifenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on (Jedinjenje 55).

[0207] U Protokolu B sinteze, 1,3-dion (1,0 ekvivalent) je rastvoren u trifluorosirćetnoj kiselini (0,45 M) praćeno dodavanjem ketona (10,0 ekvivalenata) iz jednog dela. Reakcija je refluksovana tokom 3 sata pri 190 °C, praćeno dodavanjem amina (1,5 ekvivalenata) i refluks je nastavljen tokom dodatnih 2,5 sata pri 190 °C. Reakciona smeša je ohlađena i isparena (kako bi se uklonio TFA). Sirova reakciona smeša je pročišćena sa HPLC.

4,7,7-trimetil-4-fenil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0208]

[0209] U 25 mL bocu sa okruglim dnom, 5,5-dimetilcikloheksan-1,3-dion (1402,0 mg, 10,0 mmol, 1,0 ekvivalent) je rastvoren u trifluorosirćetnoj kiselini (10,0 mL, 0,47 molar), praćeno dodavanjem acetofenona (11,44 mL, 100,0 mmol, 10,0 ekvivalent) iz jednog dela. Reakcija je refluksovana tokom 3 sata pri 190 °C, praćeno dodavanjem 3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5-amina (1511,0 mg, 10,0 mmol, 1,5 ekvivalent) i refluks je nastavljen tokom dodatnih 2,5 sata pri 190 °C. Reakciona smeša je ohlađena i isparena kako bi se uklonio TFA. Sirova reakciona smeša je pročišćena sa HPLC kako bi se dobio željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (17,0 mg).<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ 7,24 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,14 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 6,99 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 2,43 (d, J = 4,7 Hz, 2H), 2,01 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 1,92 (s, 3H), 1,86 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 0,99 (s, 3H), 0,92 (s, 3H). LRMS (ESI+) (M+H): 376,24, vreme zadržavanja 0,67 minuta.

[0210] Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo Jedinjenje 70 ili Jedinjenje 71.

7,7-dimetil-4-fenil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0211]

[0212]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 10,14 (s, 1H), 7,23 - 7,12 (m, 2H), 7,12 - 7,00 (m, 3H), 5,07 (s, 1H), 2,56 - 2,35 (m, 2H), 2,15 - 2,09 (m, 1H), 1,95 - 1,90 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,88 (s, 3H). LRMS (ESI+): 362 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,62 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(tiofen-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0213]

4

[0214]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,63 (s, 1H), 9,54 (s, 1H), 6,9 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 6,57 (t, J = 3,0, 6,0 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,07 (s, 1H), 2,18 - 2,08 (m, 2H), 1,95 -1,76 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 0,77 (s, 3H), 0,75 (s, 3H). LRMS (ESI+): 314 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,57 minuta. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo Jedinjenje 6 i Jedinjenje 7.

3,7,7-trimetil-4-(tiofen-3-il)-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0215]

[0216]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,77 (s, 1H), 9,68 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 6,95 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,09 (s, 1H), 2,49 - 2,33 (m, 2H), 2,17 - 2,08 (m, 2H), 2,0 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,94 (s, 3H). LRMS (ESI+): 314 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,57 minuta.

4-(5-hlorotiofen-2-il)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on.

[0217]

[0218]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,71 (s, 1H), 9,62 (s, 1H), 6,54 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 6,3 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,99 (s, 1H), 2,3 - 2,07 (m, 2H), 1,9 (s, 3H), 1,95 - 1,81 (m, 2H), 0,75 (s, 3H), 0,73 (s, 3H). LRMS (ESI+): 348 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,64 minuta.

4-(2-fluorofenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0219]

[0220]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,77 (s, 1H), 9,76 (s, 1H), 7,10 - 7,01 (m, 4H), 5,18 (s, 1H), 2,45 - 2,32 (m, 2H), 2,15 - 1,95 (m, 2H), 1,88 (s, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,96 (s, 3H). LRMS (ESI+): 327 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,59 minuta.

4-(3-fluorofenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0221]

[0222]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,8 (s, 1H), 9,76 (s, 1H), 7,23 (m, 1H), 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,90 - 6,84 (m, 2H), 4,97 (s, 1H), 2,44 - 2,37 (m, 2H), 2,15 - 1,93 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,94 (s, 3H). LRMS (ESI+): 327 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,61 minuta.

4-(4-fluorofenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0223]

[0224]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,77 (s, 1H), 9,73 (s, 1H), 7,13 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 4,94 (s, 1H), 2,43 - 2,35 (m, 2H), 2,14 - 1,91 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,93 (s, 3H). LRMS (ESI+): 327 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,60 minuta.

4-(3-hlorofenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0225]

[0226]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,57 (s, 1H), 9,54 (s, 1H), 7,00 - 6,95 (m, 1H), 6,87 - 6,83 (m, 3H) 4,7 (s, 1H), 2,25 - 2,12 (m, 2H), 1,91 - 1,69 (m, 2H), 1,66 (s, 3H), 0,76 (s, 3H), 0,69 (s, 3H). LRMS (ESI+): 342 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,62 minuta.

4-(4-hlorofenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0227]

[0228]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,60 (s, 1H), 9,57 (s, 1H), 7,05 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,74 (s, 1H), 2,25 - 2,22 (m, 2H), 1,95 - 1,72 (m, 2H), 1,70 (s, 3H), 0,81 (s, 3H), 0,74 (s, 3H). LRMS (ESI+): 342 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,64 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(p-tolil)-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0229]

[0230]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,65 (s, 1H), 9,61 (s, 1H), 6,99 (m, 4H), 4,89 (s, 1H), 2,44 - 2,30 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,24 - 2,19 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). LRMS (ESI+): 322 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,62 minuta.

4-(2-metoksifenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0231]

[0232]<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11,39 (s, 1H), 9,38 (s, 1H), 6,79 (t, J = 6,0, 15,0 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,52 (t, J = 6,0, 15,0 Hz, 1H), 5,08 (s, 1H), 3,6 (s, 3H), 2,22-2,14 (m, 2H), 1,90 - 1,71 (m, 2H), 1,67 (s, 3H), 0,78 (s, 3H), 0,75 (s, 3H). LRMS (ESI+): 339 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,58-0,59 minuta.

4-(3-metoksifenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0233]

[0234]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,5 (s, 1H), 9,45 (s, 1H), 6,85 (t, J = 6,0, 15,0 Hz, 1H), 6,48 - 6,37 (m, 3H), 4,66 (s, 1H), 3,43 (s, 3H), 2,21 - 2,12 (m, 2H), 1,92 - 1,71 (m, 2H), 1,69 (s, 3H), 0,77 (s, 3H), 0,72 (s, 3H). LRMS (ESI+): 339 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,59 minuta.

4-(4-metoksifenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0235]

[0236]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,71(s, 1H), 9,65 (s, 1H), 7,2 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,72 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,87 (s, 1H), 3,66 (s, 3H), 2,42 - 2,34 (m, 2H), 2,13 - 1,96 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,93 (s, 3H). LRMS (ESI+): 339 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,58 minuta.

4-(benzo[d][1,3]dioksol-5-il)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0237]

[0238]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,75 (s, 1H), 9,68 (s, 1H), 6,70 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,59 (m, 2H), 5,90 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 4,86 (s, 1H), 2,42 - 2,35 (m, 2H), 2,14 - 1,95 (m, 2H), 1,92 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,94 (s, 3H). LRMS (ESI+): 352 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,57 minuta.

4-(2-hloro-4-fluorofeoil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0239]

[0240]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,56 (s, 1H), 9,56 (s, 1H), 6,97 (m, 1H), 6,83 (m, 2H), 5,06 (s, 1H), 2,20 - 2,11 (m, 2H), 1,88 - 1,69 (m, 2H), 1,63 (s, 3H), 0,76 (s, 3H), 0,70 (s, 3H). LRMS (ESI+): 360 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,64 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0241]

[0242]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,52 (s, 1H), 9,51 (s, 1H), 8,17 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,41 (t, J = 6,0 Hz, 15,0 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,87 (t, J = 6,0, 12,0 Hz, 1H), 4,89 (s, 1H), 2,31 - 2,26 (m, 2H), 1,97 - 1,76 (m, 5H), 0,83 (s, 6H). LRMS (ESI+): 310 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,50 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(piridin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

1

[0244]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,64 (s, 1H), 9,62 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,06 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,01 (t, J = 6,0, 12,0 Hz, 1H), 5,57 (s, 1H), 2,26 -2,22 (m, 2H), 1,96 - 1,73 (m, 2H), 1,69 (s, 3H), 0,81 (s, 3H), 0,73 (s, 3H). LRMS (ESI+): 310 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,49 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(piridin-4-il)-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0245]

[0246]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,61 (s, 1H), 9,6 (s, 1H), 8,12 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 6,88 (d, J= 6,0 Hz, 2H), 4,7 (s, 1H), 2,21 - 2,14 (m, 2H), 1,92 - 1,70 (m, 2H), 1,66 (s, 3H), 0,77 (s, 3H), 0,71 (s, 3H). LRMS (ESI+): 310 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,48 minuta.

4-(5-bromopiridin-2-il)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0247]

1 1

[0248]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,52 (s, 1H), 9,51 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,61 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,83 (s, 1H), 2,20 - 2,17 (m, 2H), 1,91 - 1,71 (m, 2H), 1,69 (s, 3H), 0,77 (s, 3H), 0,75 (s, 3H). LRMS (ESI+): 389 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,57 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(1H-pirazol-5-il)-6,7,8,9-tetrahidro-1H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0249]

[0250] 1<H>NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 12,20-11,40(m, 1H), 9,60-9,25 (m, 1H), 7,25-6,80(m, 1H), 5,70-5,30 (m, 1H), 4,90-4,75 (m, 1H), 2,20 (br s, 3H), 2,00-1,75 (m, 4H), 0,80-0,70 (br s, 6H),. LRMS (ESI+): 299 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,45 minuta.

4-(2-hlorofenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0251]

[0252]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,77 (s, 1H), 9,77 (s, 1H), 7,27 (d, J = 7,6, 1H), 7,19-7,02 (m, 3H), 5,34 (s, 1H), 2,48 - 2,23 (m, 2H), 2,17-2,04 (m, 1H), 1,88 (s, 3H), 1,96 -1,81 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LRMS (ESI+): 342 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,61 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(o-tolil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0253]

1 2

[0254]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,70 (s, 1H), 9,69 (s, 1H), δ 6,98 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 6,93 - 6,87 (m, 2H), 5,05 (s, 1H), 3,17 (d, J = 5,2, 3H), 2,49-2,31 (m, 2H), 2,15-2,03 (m, 1H), 1,96- 1,85 (m, 1H), 1,79 (s, 3H), 1,00 (s, 1H), 0,91 (s, 1H); LRMS (ESI+): 322 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,62 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(4-(trifluorometil)fenil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0255]

[0256]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,83 (s, 1H), 9,83 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8,1, 2H), 7,34 (d, J = 8,0, 2H), 5,03 (s, 1H), 2,49-2,35 (m, 2H), 2,17-2,08 (m, 1H), 1,98-1,90 (m, 1H), 1,88 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,93 (s, 3H); LRMS (ESI+): 376 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,68 minuta.

3,4,7,7-tetrametil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0257]

1

[0258]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,70 (s, 1H), 9,45 (s, 1H), δ 3,84 (q, J = 6,4Hz, 1H), 2,29 (s, 2H), 2,12 (s, 3H), 2,09 (d, J = 3,6 Hz, 2H), 1,03 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,98 (s, 3H); LRMS (ESI+): 246 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,52 minuta.

4-cikloheksil-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0259]

[0260]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,72 (s, 1H), 9,40 (s, 1H), 3,76 (s, 1H), δ 2,37-2,38 (m, 2H), 2,20 - 2,04 (m, 5H), 1,71 - 1,39 (m, 6H), 1,39 - 1,20 (m, 2H), 1,02 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,63 - 0,46 (m, 2H); LRMS (ESI+): 314 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,65 minuta.

4-deutero-3,7,7-trimetil-4-feoil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0261]

[0262]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,73 (s, 1H), 9,70 (s, 1H), δ 7,21 - 7,09 (m, 4H), 7,03 (t, J= 6,9 Hz, 1H), 2,47-2,33 (m, 2H), 2,18-2,06 (m, 1H), 1,99-1,85 (m, 4H), 1,00 (s, 3H), 0,94 (s, 3H); LRMS (ESI+): 309 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,59 minuta.

4-ciklopropil-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0263]

1 4

[0264]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,80 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), δ 3,91 (d, J = 5,6Hz, 1H), 2,35 - 2,28 (m, 2H), 2,19 - 2,06 (m, 5H), 1,03 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,96 - 0,87 (m, 1H), 0,20 - 0,02 (m, 3H), -0,12- -0,22 (m, 1H); LRMS (ESI+): 272 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,56 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(m-tolil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0265]

[0266]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,72 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 7,09 - 7,01 (m, 1H), 6,94-6,82 (m, 3H), 4,87 (s, 1H), 2,46-2,33 (m, 2H), 2,20 (s, 3H), 2,16-2,04 (m, 1H), 2,01-1,83 (m, 4H), 1,00 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LRMS (ESI+): 322 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,61 minuta.

4-(2-metoksifenil)-3,6,6-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0267]

[0268]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 11,60 (s, 1H), 9,54 (s, 1H), 7,05-6,98 (m, 1H), 6,92-6,84 (m, 2H), 6,77-6,69 (m, 1H), 5,31 (s, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,30-2,24 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,79-1,70 (m, 2H), 0,94 (s, 3H), 0,85 (s, 3H); LRMS (ESI+): 338 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,62 minuta.

2-(3,7,7-trimetil-5-okso-4,5,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-4-il)benzonitril [0269]

1

[0270]<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11,74 (s, 1H), 9,70 (s, 1H), δ 7,21 - 6,99 (m, 4H), 4,91 (s, 1H), 2,46-2,33 (m, 2H), 2,16 - 2,07 (m, 1H),1,98-1,85 (m, 4H), 1,00 (s, 1H), 0,94 (s, 1H) ; LRMS (ESI+): 333 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,57 minuta.

3-(3,7,7-trimetil-5-okso-4,5,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-4-il)benzonitril [0271]

[0272]<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11,89 (s, 1H), 9,93 (s, 1H), 7,69-7,63 (m, 1H), 7,56-7,48 (m, 1H), 7,29-7,18 (m, 2H), 5,23 (s, 1H), 2,48-2,33 (m, 2H), 2,18-2,05 (m, 1H), 1,97 -1,80 (m, 4H), 1,01 (s, 3H), 0,95 (s, 3H); LRMS (ESI+): 333 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,58 minuta.

4-(3,7,7-trimetil-5-okso-4,5,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-4-il)benzonitril [0273]

[0274]<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11,84 (s, 1H), 9,84 (s, 1H), 7,66 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 5,05 (s, 1H), 2,44 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 2,12 (d, J = 16,7 Hz, 1H),

1

1,94 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 1,87 (s, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,92 (s, 3H); LRMS (ESI+): 333 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,54 minuta.

3,4,7,7-tetrametil-4-fenil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0275]

[0276]<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11,69 (s, 1H), 9,69 (s, 1H), 7,27-7,22 (m, 1H), 7,08-6,92 (m, 3H), 5,44 (s, 1H), 2,48 - 2,32 (m, 2H), 2,16-2,04 (m, 1H), 1,95-1,84 (m, 4H), 1,00 (s, 3H), 0,95 (s, 3H).; LRMS (ESI+): 322 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,62 minuta.

4-(2-metoksifenil)-3-metil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0277]

1

[0280] LRMS (ESI+): 376 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,64-0,66 minuta. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo Jedinjenje 28 i Jedinjenje 29.

3,7,7-trimetil-4-(3-(trifluorometil)fenil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0281]

[0282] LRMS (ESI+): 376 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,66 minuta.

4-(2-metoksifenil)-7,7-dimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0283]

[0284] LRMS (ESI+): 324 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,57 minuta.

3-izopropil-4-(2-metoksifenil)-7,7-dimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0285]

[0286] LRMS (ESI+): 366 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,63 minuta.

1

4-(2-metoksifenil)-7,7-dimetil-3-fenil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0287]

[0288] LRMS (ESI+): 400 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,67 minuta.

3-(terc-butil)-4-(2-metoksifenil)-7,7-dimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0289]

[0290] LRMS (ESI+): 380 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,65 minuta.

3-etil-4-(2-metoksifenil)-7,7-dimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0291]

[0292] LRMS (ESI+): 352 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,62 minuta.

3,7,7-trimetil-4-(2-(metiltio)fenil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

1

[0294] LRMS (ESI+): 354 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,62 minuta.

4-(benzo[c][1,2,5]oksadiazol-4-il)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0295]

[0296] LRMS (ESI+): 350 ([M+H]+), vreme zadržavanja 0,54 minuta.

4'-(2-metoksifenil)-3'-metil-4',6',8',9'-tetrahidrospiro[cikloheksan-1,7'-pirazolo[3,4-b]hinolin]-5'(2'H)-on

[0297]

[0298]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) 9,57 (s, 1H), 7,06 - 6,97 (m, 1H), 6,94 - 6,83 (m, 2H), 6,78 - 6,69 (m, 1H), 5,27 (s, 1H), 3,78 (s, 3H), 2,62 - 2,40 (m, 4H), 2,07 (s, 2H), 1,88 (s, 3H), 1,50-1,26 (m, 10H). LRMS (ESI+) ([M+H]+): 378, vreme zadržavanja 0,67 minuta.

11

4-(2-fluorofenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0299]

[0300]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 10,32 (s, 1H), 6,96 - 6,83 (m, 1H), 6,79 - 6,70 (m, 1H), 6,70 - 6,57 (m, 2H), 5,29 (s, 1H), 2,48 - 2,32 (m, 2H), 2,28 - 2,12 (m, 1H), 2,09 - 1,94 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M]+): 379, vreme zadržavanja 0,59 minuta.

4-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0301]

[0302]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 10,29 (s, 1H), 7,66 - 7,61 (m, 1H), 7,22 - 7,09 (m, 1H), 6,93 - 6,86 (m, 1H), 5,68 (s, 1H), 2,51 - 2,40 (m, 2H), 2,19 - 2,09 (m, 1H), 2,01 - 1,91 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,89 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M+H]+): 448, vreme zadržavanja 0,55 minuta.

4-(3-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0303]

[0304]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 10,28 (s, 1H), 7,53 - 7,42 (m, 1H), 7,21 - 7,11 (m, 1H), 6,99 - 6,92 (m, 1H), 5,78 (s, 1H), 2,49 - 2,30 (m, 2H), 2,19 - 2,10 (m, 1H), 2,0 - 1,87 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,85 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M+H]+): 448, vreme zadržavanja 0,66 minuta.

4-(5-fluoro-2-(trifluorometoksi)fenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0305]

[0306]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 10,30 (s, 1H), 7,25 - 7,14 (m, 1H), 7,14 - 7,02 (m, 2H), 5,31 (s, 1H), 2,48 - 2,34 (m, 2H), 2,18 - 2,07 (m, 1H), 2,01 - 1,92 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,92 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M+H]+): 464, vreme zadržavanja 0,58 minuta.

4-(2,5-difluorofenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0307]

[0308]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 10,35 (s, 1H), 6,81 - 6,69 (m, 2H), 6,69 - 6,60 (m, 2H), 6,55 - 6,43 (m, 2H), 5,25 (s, 2H), 2,48 - 2,34 (m, 2H), 2,25 - 2,13 (m, 1H), 2,08 - 1,96 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,89 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M]+): 397, vreme zadržavanja 0,48 minuta.

4-(2-fluorofenil)-4,7,7-trimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0309]

[0310]<1>H NMR (300 MHz, d<4>-MeOD) δ 7,63 - 7,52 (m, 1H), 7,17 - 7,01 (m, 2H), 6,88 - 6,74 (m, 1H), 2,46 (q, J = 16,5 Hz, 2H), 2,18 - 2,01 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 1,07 (s, 3H), 1,01 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M+H]+): 394, vreme zadržavanja 0,67 minuta.

7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-4-(2-(trifluorometil)fenil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0311]

[0312]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 10,22 (s, 1H), 7,52 - 7,40 (m, 2H), 7,31 - 7,22 (m, 1H), 7,20 - 7,13 (m, 1H), 5,69 (s, 1H), 2,60 - 2,34 (m, 2H), 2,21 - 2,05 (m, 1H), 1,96 - 1,86 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M+H]+): 430, vreme zadržavanja 0,66 minuta. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo Jedinjenje 72 i Jedinjenje 73.

11

4-(4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0313]

[0314]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 10,28 (s, 1H), 7,41 - 7,30 (m, 2H), 7,25 - 7,15 (m, 1H), 5,66 (s, 1H), 2,59 - 2,35 (m, 2H), 2,19 - 2,08 (m, 1H), 1,98 - 1,88 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,87 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M+H]+): 448, vreme zadržavanja 0,56 minuta.

4-(2,6-difluorofenil)-7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0315]

[0316]<1>H NMR (300 MHz, d<6>-DMSO) δ 10,08 (s, 1H), 6,97 - 6,81 (m, 1H), 6,55 - 6,34 (m, 2H), 5,50 (s, 1H), 2,51 - 2,41 (m, 1H), 2,39 - 2,24 (m, 1H), 2,12 - 2,08 (m, 1H), 2,03 - 1,88 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,91 (s, 3H). LRMS (ESI+): 397 ([M]+), vreme zadržavanja 0,50 minuta.

7,7-dimetil-4-(3-(trifluorometoksi)fenil)-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0317]

[0318]<1>H NMR (300 MHz, MeOD) δ 7,31 - 7,23 (m, 1H), 7,18 - 7,12 (m, 1H), 7,08 - 6,96 (m, 2H), 5,24 (s, 1H), 2,63 - 2,42 (m, 2H), 2,32 - 2,22 (m, 1H), 2,15 - 2,03 (m, 1H), 1,09 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M+H]+): 446.

7,7-dimetil-3-(trifluorometil)-4-(4-(trifluorometil)piridin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0319]

[0320] LRMS (ESI+) ([M+H]+): 431.

3-bromo-7,7-dimetil-4-fenil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0321]

[0322]<1>H NMR (400 MHz, d<6>-DMSO): δ 12,72 (s, 1H), 9,89 (s, 1H), 7,20-7,04 (m, 5H), 4,85 (s, 1H), 2,50-2,30 (m, 2H), 2,13 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 1,96 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 1,00 (s, 3H), 0,926 (s, 3H). ESI+ LCMS: m/z 372 ([M+H]+).

7,7-dietil-3-metil-4-fenil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

11

[0324]<1>H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7,18-7,15 (m, 4H), 7,06-7,04 (m, 1H), 5,00 (s, 1H), 2,58-2,47 (m, 2H), 2,22-2,11 (m, 2H), 1,93 (s, 3H), 1,46-1,37 (m, 4H), 0,85 (t, J = 7Hz, 3H), 0,78 (t, J = 7,5Hz, 3H). ESI+ LCMS: m/z 336 ([M+H]+).

7,7-dimetil-4-(piridin-3-il)-3-(trifluorometil)-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0325]

[0326]<1>H NMR (400 MHz, d<6>-DMSO): δ 13,63 (bs, 0,5H), 13,32 (bs, 0,5H), 10,27-10,20 (m, 1H), 8,31 (d, J= 22,0 Hz, 2H), 7,43-7,41 (m, 1H), 7,24-7,21 (m, 1H), 5,12-5,09 (m, 1H), 2,50-2,30 (m, 2H), 2,16 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 1,97 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 1,00 (s, 3H), 0,86 (s, 3H). ESI+ LCMS: m/z 363 ([M+H]+).

3'-metil-4'-fenil-4',6',8',9'-tetrahidrospiro[ciklopropan-1,7'-pirazolo[3,4-b]hinolin]-5'(2'H)-on

[0327]

11

[0328]<1>H NMR (500 MHz, d<6>-DMSO): δ 11,71 (bs, 1H), 9,68-9,66 (m, 1H), 7,20-7,16 (m, 4H), 7,04 (t, J = 7 Hz, 1H), 4,98 (s, 1H), 2,59 (d, J = 17 Hz, 1H), 2,35-2,25 (m, 2H), 1,93(s, 3H), 1,87 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 0,41-0,27 (m, 4H). ESI+ LCMS: m/z 306 ([M+H]+).

3'-metil-4'-fenil-4',6',8',9'-tetrahidrospiro[ciklobutane-1,7'-pirazolo[3,4-b]hinolin]-5'(2'H)-on

[0329]

[0330]<1>H NMR (500 MHz, d<6>-DMSO): δ 11,68 (s, 1H), 9,68 (s, 1H), 7,16-6,99 (m, 5H), 4,90 (s, 1H), 2,71-2,59 (m, 2H), 2,30-2,25 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,85-1,72 (m, 5H), 1,62-1,57 (m, 1H). ESI+ LCMS: m/z 320 ([M+H]+).

3'-metil-4'-fenil-4',6',8',9'-tetrahidrospiro[ciklopentan-1,7'-pirazolo[3,4-b]hinolin]-5'(2'H)-on

[0331]

[0332]<1>H NMR (500 MHz, d<6>-DMSO): δ 11,69 (s, 1H), 9,64 (s, 1H), 7,19-7,10 (m, 4H), 7,03 (t, J = 7 Hz, 1H), 4,91 (s, 1H), 2,65-2,50 (m, 2H), 2,21 (d, J = 16 Hz, 1H), 2,06 (d, J = 16 Hz, 1H), 1,90 (s, 3H), 1,62-1,51 (m, 4H), 1,49-1,37 (m, 3H), 1,30-1,26 (m, 1H). ESI+ LCMS: m/z 334 ([M+H]+) .

4-(2-bromofenil)-3,7,7-trimetil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on [0333]

11

[0334]<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11,78 (s, 1H), 9,77 (s, 1H), 7,44 (d, J = 6,95 Hz, 1H), 7,19 (t, J = 6,95 Hz, 1H), 7,10 - 6,92 (m, 2H), 5,31 (s, 1H), 2,56 - 2,35 (m, 2H), 2,15 - 2,05 (m, 1H), 1,95 - 1,84 (m, 4H), 1,01 (s, 3H), 0,95 (s, 3H). LRMS (ESI+) ([M+H]+): 388. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo Jedinjenje 80 i Jedinjenje 81.

3,7,7-trimetil-4-fenil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on

[0335]

[0336] LRMS (ESI+): 308 ([M+H]+). Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo Jedinjenje 3 i Jedinjenje 2.

[0337] Ovde opisana jedinjenja se takođe mogu pripremiti prema Protokolima C do F sinteze kako je prikazano u Šemi 1c.

11

[0338] U Protokolu C sinteze (Šema 1c), ketone (1,0 ekvivalent) i amin (1,0 ekvivalent) su rastvoreni u tolueni (0,1-0,5 M). p-toluensulfonska kiselina (0,1 ekvivalent) je dodata, i smeša je zagrejana na 110 °C. Reakciona smeša je ohlađena, i toluen je isparen. Sirova reakciona smeša je pročišćena sa kolonskom hromatografijom na silici kako bi se dobio međuproizvod I1. Rezultujući međuproizvod I1 (1,0 ekvivalent) je zatim rastvoren u toluenu, i 1,3-diketon (1,0 ekvivalent) praćeno sa p-toluensulfonskom kiselinom (0,1 ekvivalent) su dodati. Smeša je zagrejana na 110 °C tokom 30-60 minuta kako bi se dobio neciklizovan međuproizvod I2 kvantitativno. Toluen je isparen kako bi se uklonila voda generisana u reakciji formiranja enamina. Svež toluen je dodat i smeša je zagrejana na 110 °C. Nakon potpune konverzije neciklizovanog međuproizvoda 12, toluen je isparen, i sirova smeša je pročišćena sa kolonskom hromatografijom na silici kako bi se dobio ciklizovani proizvod.

[0339] U Protokolu D sinteze, neciklizovan međuproizvod I2 je rastvoren u toluenu i trifluorosirćetna kiselina (1,0 ekvivalent) je dodata. Smeša je zagrejana na 150 °C u mikrotalasnom reaktoru. Nakon potpune konverzije neciklizovanog međuproizvoda, isparljive materije su isparene, i sirova smeša je pročišćena sa kolonskom hromatografijom na silici kako bi se dobio ciklizovan proizvod.

11

[0340] U Protokolu E sinteze, neciklizovan međuproizvod I2 je rastvoren u trifluorosirćetnoj kiselini (0,5 M), i smeša je zagrejana na 73 °C. Nakon potpune konverzije neciklizovanog međuproizvoda, isparljive materije su isparene, i sirova smeša je pročišćena sa kolonskom hromatografijom na silici kako bi se dobio ciklizovan proizvod.

[0341] U Protokolu F sinteze, neciklizovan međuproizvod I2 je rastvoren u trifluorosirćetnoj kiselini (0,5 M), i smeša je zagrejana na 140 °C u mikrotlasnom reaktoru. Nakon potpune konverzije neciklizovanog međuproizvoda, isparljive materije su isparene, i sirova smeša je pročišćena sa kolonskom hromatografijom na silici kako bi se dobio ciklizovan proizvod.

[0342] Ovde opisana jedinjenja se takođe mogu pripremiti prema Protokolu G sinteze kako je prikazano u Šemi 1d, gde R<3>je -CF3, izopropil, ili grupa veća od -CF3ili izopropila.

12

[0343] Mešanom rastvoru 5-trifluorometil-1H-pirazol-3-amina (jedinjenje G1) (2 g, 1,0 ekvivalent) u dioksanu (30 mL) je dodat ftalički anhidrid (2,15 g, 1,1 ekvivalent) pod atmosferom azota na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je refluksovana tokom 24 sata. Isparljive materije su isparene pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio sirovi ostatak (jedinjenje G2). Sirovo jedinjenje G2 je korišćeno u sledećem koraku kao takvo, bez daljeg pročišćavanja (sirovi prinos: 3 g, 81% prinos).

[0344] Mešanom rastvoru sirovog jedinjenja G2 (3 g, 1,0 ekvivalent) u ACN (acetonitril, 50 mL) je dodat N-jodosukcinimid (NIS, 5,04 g, 2 ekvivalent) pod atmosferom azota na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je refluksovana tokom 16 sati, i reakciona smeša je ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum sulfita i ekstrakovana sa EtOAc. Organski sloj je razdvojen, opran sa vodom i rasolom, osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom kako bi se dobilo sirovo jedinjenje G3. Sirovo jedinjenje G3 je korišćeno u sledećem koraku kao takvo, bez daljeg pročišćavanja (sirovi prinos: 3 g, 69% prinos).

[0345] Mešanom rastvoru sirovog jedinjenja G3 (2 g, 1,0 ekvivalent) u toluenu (20 mL) su dodati etilvinileter (0,92 mL, 2 ekvivalent) i kataitička količina koncentrovane HCl (5 kapi) pod atmosferom azota na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i ekstrakovana sa EtOAc. Organski sloj je razdvojen, opran sa vodom i rasolom, osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom kako bi se dobilo sirovo jedinjenje G4. Sirovo jedinjenje G4 je pročišćeno sa kolonskom hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 30% EtOAc u heksanima kako bi se dobilo čisto jedinjenje G4: 1,88 g, 80% prinos.

[0346] Smeša jedinjenja G4 (500 mg, 1 ekvivalent), boronske kiseline kako je prikazano u Šemi Id (230 mg, 1,5 ekvivalent), Pd(PPh3)4(120 mg, 0,1 ekvivalent), i K2CO3(288 mg, 2 ekvivalent) u smeši rastvarača [toluen (3 mL), voda (3 mL), i etanol (1mL)] je degazirana sa argonom i zagrejana na 100 °C u mikrotalasnom reaktoru tokom 1 sata. Nakon završetka, reakcija je razređena sa vodom, i proizvod je ekstrakovan sa EtOAc. Organski sloj je razdvojen, opran sa vodom i rasolom, osušen preko Na2SO4, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom kako bi se dobilo sirovo jedinjenje G5. Sirovo jedinjenje G5 je pročišćeno sa kolonskom hromatografijom eluiranjem sa 20% EtOAc u heksanima kako bi se dobila smeša jedinjenja koja sadrži jedinjenje G5. LCMS analiza izolovane smeše pokazala je 56% željene mase jedinjenja G5. Sirovo jedinjenje G5 je korišćeno u sledećem koraku kao takvo, bez daljeg pročišćavanja.

[0347] Mešanom rastvoru sirovog jedinjenja G5 (1 g, 1 ekvivalent) u metanolu (20 mL) je dodat N2H4· H2O (0,5 mL, 2,8 ekvivalent). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 sati. Nakon završetka, reakciona smeša je ugašena sa vodom, i proizvod je ekstrakovan sa EtOAc. Organski sloj je opran sa vodom i rasolom, osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom kako bi se dobilo sirovo jedinjenje G6. Sirovo jedinjenje G6 je pročišćeno sa kolonskom hromatografijom eluiranjem sa 30% EtOAc u heksanima kako bi se dobilo čisto jedinjenje G6: 0,6 g, 84% prinos.

[0348] Mešanom rastvoru jedinjenja G6 (600 mg, 1,0 ekvivalent) u toluenu (20 mL) su dodati dimedon (388 mg, 1,5 ekvivalent), PTSA (p-toluensulfonska kiselina, 702 mg, 2 ekvivalent) pod atmosferom azota na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je refluksovana tokom 2 sata. Nakon završetka (praćeno sa TLC), reakcija je ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i ekstrakovana sa EtOAc. Organski sloj je razdvojen, opran sa vodom i rasolom, osušen preko nevodene Na2SO4, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio sirovi ostatak. Sirovi ostatak je pročišćen sa kolonskom hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 2% MeOH u DCM (dihlorometan) kako bi se dobila smeša jedinjenja koja sadrži jedinjenje G7 (62,8% željene mase jedinjenja G7 i 23% nečistoće imina; sirovi prinos 240 mg, 34% prinos). Sirovo jedinjenje G7 je korišćeno za sledeći korak kao takvo bez daljeg pročišćavanja.

[0349] Mešanom rastvoru sirovog jedinjenja G7 (240 mg, 1,0 ekvivalent) u toluenu (10 mL) je dodat PTSA (486 mg, 4 ekvivalent) pod atmosferom azota na sobnoj temperaturi.

Reakciona smeša je refluksovana tokom 12 sati. Nakon završetka (praćeno sa TLC), reakcija je ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i ekstrakovana sa EtOAc. Organski sloj je opran sa vodom i rasolom, osušen preko nevodene Na2SO4, i koncentrovan pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio sirovi ostatak. Sirovi ostatak je pročišćen sa kolonskom hromatografijom eluiranjem sa 2% MeOH u DCM kako bi se dobilo čisto konačno jedinjenje 68: 120 mg (50% prinos). Nakon hiralnog razdvajanja, 40 mg svakog od dva enantiomera, jedinjenja 70 i jedinjenja 71, je dobijeno.

9-etil-1,6,6-trimetil-9-fenil-5,6,7,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-8(4H)-on (89)

[0350]

[0351] LCMS: m/z 336 [M+H]<+>;<1>H NMR (300 MHz, MeOD): 7,35 (d, J = 7,3Hz, 2H), 7,16 (t, J = 7,3Hz, 2H), 7,01 (t, J = 7,3Hz, 1H), 2,52 (s, 2H), 2,2-1,9 (m, 4H), 1,63 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,05 (s, 3H), 0,75 (t, J = 7,3Hz, 3H) ppm. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo jedinjenje 125 i jedinjenje 126.

1,6,6-trimetil-9-fenil-9-(trifluorometil)-5,6,7,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-8(4H)-on (92, 93, i 94)

[0352]

[0353] LCMS: m/z 376 [M+H]<+>;<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7,4-7,3 (m, 2H), 7,23 (t, J = 7,3Hz, 2H), 7,13 (t, J = 7,3Hz, 2H), 2,7-2,5 (m, 2H), 2,2-2,0 (m, 2H), 1,47 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,08 (s, 3H) ppm. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo jedinjenje 93 i jedinjenje 94.

3-(1,6,6,9-tetrametil-8-okso-4,5,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-9-il)benzonitril (95, 96, i 97)

[0354]

12

[0355] LCMS: m/z 347 [M+H]<+>;<1>H NMR (500 MHz, d6-DMSO): 11,71 (s, 1H), 9,74 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8,5Hz, 1H), 7,48 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,38 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 2,42-2,35 (m, 2H), 1,98 (d, J = 30,0Hz, 1H), 1,89 (d, J = 30,0Hz, 1H), 1,81 (s, 3H), 1,60 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,94 (s, 3H) ppm. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo jedinjenje 96 i jedinjenje 97.

3-(3,4,7,7-tetrametil-5-okso-4,5,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-4-il)benzamid (90)

[0356]

[0357] LCMS: m/z 365 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,62 (s, 1H), 9,64 (s, 1H), 7,87 (bs, 1H), 7,83 (bs, 1H), 7,53 (d, J = 7,6Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,24-7,19 (m, 2H), 2,50-2,40 (m, 2H), 2,04-1,97 (m, 1H), 1,90-1,80 (m, 4H), 1,59 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,96 (s, 3H) ppm.

3',7',7'-trimetil-2,3,6',7',8',9'-heksahidrospiro[inden-1,4'-pirazolo[3,4-b]hinolin]-5'(2'H)-on (91)

[0358]

[0359] LCMS: m/z 334 [M+H]<+>;<1>H NMR (300 MHz, MeOD): δ 7,25-6,95 (m, 3H), 6,85-6,70 (m, 1H), 3,40-3,25 (m, 1H), 3,20-3,00 (m, 1H), 2,70-2,45 (m, 3H), 2,30-2,00 (m, 3H), 1,57 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 1,07 (s, 3H) ppm.

3',7',7'-trimetil-6',7',8',9'-tetrahidro-2H-spiro[benzofuran-3,4'-pirazolo[3,4-b]hinolin]-5'(2'H)-on (98)

[0360]

[0361] LCMS: m/z 334 [M-H]-;<1>H NMR (300 MHz, MeOD): δ 7,03 (td, J = 7,1Hz, J = 1,6Hz, 1H), 7,80-7-65 (m, 3H), 4,81 (d, J = 8,2Hz, 1H), 4,36 (d, J = 8,2Hz, 1H), 2,65-2,45 (m, 2H), 2,25-2,05 (m, 2H), 1,71 (s, 3H), 1,09 (s, 6H) ppm.

3',7',7'-trimetil-3,4,6',7',8',9'-heksahidro-2H-spiro[naftalen-1,4'-pirazolo[3,4-b]hinolin]-5'(2'H)-on (99)

[0362]

[0363] LCMS: m/z 346 [M-H]-;<1>H NMR (300 MHz, MeOD): δ 7,0-6,9 (m, 4H), 3,1-2,9 (m, 1H), 2,85-2,75 (m, 1H), 2,6-2,4 (m, 2H), 2,3-2,0 (m, 4H), 1,90-1,80 (m, 2H), 1,48 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,08 (s, 3H) ppm.

Jedinjenje 100

[0364]

12

[0365] LCMS: m/z 288 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 11,61 (s, 1H), 9,24 (s, 1H), 2,55-2,50 (m, 2H), 2,31 (bs, 3H), 2,12-2,05 (m, 5H), 1,38-1,28 (m, 2H), 1,00 (s, 6H), 0,54 (t, J = 7,2Hz, 5H) ppm.

Jedinjenje 101

[0366]

[0367] LCMS: m/z 316 [M+H]<+>;<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 2,65-2,50 (m, 2H), 2,41-2,35 (m, 2H), 2,24-2,10 (m, 5H), 1,47-1,20 (m, 5H), 1,12-0,95 (m, 7H), 0,84-0,72 (m, 6H) ppm.

Jedinjenje 102

[0368]

[0369] LCMS: m/z 286 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 11,66 (s, 1H), 9,43 (s, 1H), 2,32-2,28 (m, 2H), 2,18-2,12 (m, 5H), 2,10-2,06 (m, 2H), 2,04-1,94 (m, 2H), 1,79 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 1,64-1,54 (m, 2H), 0,98 (s, 6H) ppm.

Jedinjenje 103

[0370]

[0371] LCMS: m/z 299 [M]<+>;<1>H NMR (CD3OD, 300 MHz): δ 2,60-2,40 (m, 5H), 2,25-1,55 (m, 12H), 1,10-1,00 (m, 6H) ppm.

Jedinjenje 104

[0372]

12

[0373] ESI+ MS: m/z 366 [M+H]<+>.

Jedinjenje 105

[0374]

[0375] ESI+ LCMS: m/z 319 (M+H);<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 13,62 (bs, 1H), 10,17 (s, 1H), 7,25-7,20 (m, 2H), 7,15-7,08 (m, 3H), 5,12 (s, 1H), 2,47-2,40 (m, 2H), 2,15 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 2,00 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 1,02 (s, 3H), 0,97 (s, 3H) ppm.

Jedinjenja 107, 108, i 109

[0376]

[0377] LCMS: m/z 308 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz,DMSO-d6): δ 11,90 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 7,27 (d, J = 7,2Hz, 2H), 7,16 (t, J = 7,6Hz, 2H), 7,08 (s, 1H), 6,99 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 2,44 (s, 2H), 2,05 (d, J = 15,6Hz, 1H), 1,97-1,95 (m, 1H), 1,92 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,99 (s, 3H) ppm. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo jedinjenje 108 i jedinjenje 109.

Jedinjenje 106

[0378]

12

[0379] LCMS: m/z 326 [M+H]<+>;<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7,36-7,25 (m, 2H), 7,25-7,13 (m, 2H), 7,12-7,00 (m, 1H), 2,50 (bs, 2H), 2,25-1,90 (m, 5H), 1,09 (s, 3H), 1,06 (s, 3H) ppm.

Jedinjenje 110

[0380]

[0381] ESI+ MS: m/z 341 [M]<+>.

Jedinjenje 111

[0382]

[0383] LCMS:m/z 386 [M]<+>:<1>H NMR (400 MHz,DMSO-d6): δ 12,57 (s, 1H), 9,80 (s, 1H), 7,26 (d, J = 7,6Hz, 2H), 7,16 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,00 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 2,45-2,35 (m, 2H),2,05-2,00 (m, 1H), 1,94 (s, 3H), 1,90-1,85 (m, 1H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H) ppm. Jedinjenja 113, 114, i 115

[0384]

12

[0385] ESI+ MS: m/z 348 [M+H]<+>;<1>H NMR (CD3OD, 300 MHz): δ 7,36 (d, J = 3,0Hz, 2H), 7,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 7,10-6,98 (m, 1H), 2,52-2,48 (m, 2H), 2,25-2,00 (m, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,25-1,00 (m, 1H), 1,08 (s, 3H), 1,08 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,80-0,73 (m, 1H), 0,60-0,46 (m, 1H), 0,46-0,26 (m, 1H), 0,26-0,15 (m, 1H) ppm. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo jedinjenje 114 i jedinjenje 115.

Jedinjenje 112

[0386]

[0387] ESI+ MS: m/z 402 [M+H]<+>.

Jedinjenje 116

[0388]

[0389] ESI+ MS: m/z 366 ([M+H]<+>);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,37 (s, 1H), 9,59 (s, 1H), 7,57-7,51 (m, 1H), 7,11-7,03 (m, 2H), 6,89-6,83 (m, 1H), 2,42 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 2,30 (d, J = 16,0Hz, 1H), 2,02 (d, J = 16,0 Hz, 1H) 1,92 (s, 3H), 1,85 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 1,13-1,05 (m, 1H), 0,99 (s, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,70-0,65 (m, 1H), 0,51-0,46 (m, 1H), 0,33-0,21 (m, 2H) ppm.

Jedinjenja 118, 130, i 131

12

[0391] LCMS: m/z 416 [M+H]<+>. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo jedinjenje 130 i jedinjenje 131.

Jedinjenja 117,132, i 133

[0392]

[0393] ESI+ MS: m/z 373 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 11,55 (s, 1H), 9,76 (s, 1H), 7,66 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 7,6Hz, 1H), 7,38 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 2,45 (s, 2H), 2,00 (d, J = 15,6Hz, 1H), 1,93-1,88 (m, 1H), 1,93 (s, 3H), 1,18-1,10 (m, 1H), 0,99 (s, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,75-0,68 (m, 1H), 0,60-0,52 (m, 1H), 0,37-0,28 (m, 1H), 0,15-0,08 (m, 1H) ppm. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo jedinjenje 132 i jedinjenje 133.

Jedinjenje 119

[0394]

[0395] LCMS: m/z 361 [M]<+>.

1

Jedinjenje 120, 127, i 128

[0396]

[0397] LCMS: m/z 397 [M+H]<+>;<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7,36 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 7,19 (t, J = 9,0 Hz, 2H), 7,05 (t, 9,0 Hz, 1H), 2,90-2,60 (m, 3H), 2,49 (s, 2H), 2,20-1,75 (m, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,80-1,60 (m, 1H), 1,07 (s, 3H), 1,03 (s, 3H) ppm. Racemična smeša je razdvojena hiralnom HPLC kako bi se dobilo jedinjenje 127 i jedinjenje 128.

4,7,7-trimetil-3,4-difenil-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-b]hinolin-5(4H)-on (121) [0398]

[0399] LCMS: m/z 384 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7,40-7,25 (m, 3H), 7,26-7,02 (m, 5H), 6,59 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 2,40-2,25 (m, 2H), 2,25-2,00 (m, 2H), 1,81 (s, 3H), 1,06 (s, 3H), 0,99 (s, 3H) ppm.

Jedinjenje 122

[0400]

[0401] LCMS: m/z 321 [M]<+>;<1>H NMR (300 MHz,DMSO-d6): δ 11,58 (s, 1H), 9,39 (s, 1H), 7,22-7,10 (m, 3H), 6,88 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 4,08 (dd, J = 3,0, 9,0 Hz, 1H), 2,80-2,60 (m, 1H), 2,50-2,13 (m, 5H), 1,41 (s, 3H), 0,99 (s, 3H), 0,98 (s, 3H) ppm.

1 1

[0402] ESI<+>MS: m/z 322 ([M+H]<+>):<1>H NMR (500 MHz, d6-DMSO): δ 11,91 (s, 1H), 9,63 (s, 1H), 7,28 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,15 (t, J = 7,2Hz, 2H), 7,05 (s, 1H), 7,01-6,97 (m, 1H), 2,92-2,88 (m, 1H), 2,50-2,42 (m, 2H), 2,07-1,97 (m, 3H), 1,04 (s, 3H), 1,02 (s, 3H), 0,65 (t, J = 7,5Hz, 3H) ppm.

[0403] ESI<+>MS: m/z 333 ([M+H]<+>):<1>H NMR (400 MHz,CD3OD): δ 7,72-7,64 (m, 2H), 7,01 (s, 1H), 2,60-2,50 (m, 1H), 2,16 (d, J = 16,0Hz, 1H), 2,08 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 1,98 (s, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,07 (s, 3H) ppm.

[0404] ESI<+>MS: m/z 376 ([M+H]<+>);<1>H NMR (500 MHz, d6-DMSO): δ 12,01 (s, 1H), 9,81 (s, 1H), 7,60 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,45-7,36 (m, 2H), 7,17 (s, 1H), 2,50-2,40 (m, 2H), 2,08(d, J = 15,5 Hz, 1H), 1,93 (s, 3H), 1,94-1,90 (m, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,97 (s, 3H) ppm.

[0405] ESI<+>MS: m/z 382 ([M+H]<+>);<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO): δ 11,32 (s, 1H), 9,66 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 1,2Hz, 7,6Hz, 1H), 7,27-7,21 (m, 1H), 7,17-7,13 (m, 1H), 7,11-7,05 (m,

1 2

1H), 2,42-2,26 (m, 2H), 2,01-1,84 (m, 5H), 0,99 (s, 3H), 0,98 (s, 3H), 0,95-0,87(m, 1H), 0,64-0,55 (m, 1H), 0,53-0,45 (m, 1H), 0,25-0,14 (m, 2H) ppm.

[0406] Druga jedinjenja. Bilo koja druga jedinjenja koja su ovde opisana mogu biti napravljena na sličan način kao što je gore opisano. Ona se mogu analizirati pomoću UPLC kao što je opisano u nastavku.

Vreme zadržavanja UPLC postupka

[0407] Čistoća i identičnost jedinjenja određeni su pomoću UPLC-MS (Waters, Milford, MA). Čistoća je merena pomoću UV apsorbancije na 210 nm. Identičnost je određen na SQ masenom spektrometru pozitivnom i negativnom elektrosprej jonizacijom. Mobilna faza A se sastojala ili od 0,1% amonijum hidroksida ili 0,1% trifluorosirćetne kiseline u vodi, dok se mobilna faza B sastojala od istih aditiva u acetonitrilu. Gradijent se kretao od 5% do 95% mobilne faze B tokom 0,8 minuta na 0,45 ml/min. Korišćena je Acquity BEH C18, 1,7 µm, 1,0x50 mm kolona, sa temperaturom kolone koja je održavana na 65°C. Jedinjenja su rastvorena u DMSO u nominalnoj koncentraciji od 1 mg/mL, i injekcijom je dato 0,25 µl ovog rastvora.

Dodatni analitički testovi

[0408] Rastvorljivost. Rastvorljivost je određena u fosfatnom puferu (PBS) pH 7,4 sa 1% DMSO. Svako jedinjenje je pripremljeno u duplikatu na 100 µM u 100% DMSO i PBS sa 1% DMSO. Jedinjenja su ostavljena da se uravnoteže na sobnoj temperaturi sa 250 o/min orbitalnog mućkanja tokom 24 sata. Nakon uravnoteženja, uzorci su analizirani pomoću UPLC-MS (Waters, Milford, MA) sa jedinjenjima detektovanim SIR detekcijom na jednom kvadrupolnom masenom spektrometru. DMSO uzorci su korišćeni za kreiranje dve tačke kalibracione krive na koju se uklapao odgovor u PBS. Rezultati su prikazani u Tabeli 3.

[0409] PBS stabilnost. Stabilnost je određena u prisustvu PBS pH 7,4 sa 0,1% DMSO. Svako jedinjenje je pripremljeno u duplikatu na šest odvojenih ploča i ostavljeno da se izjednači na sobnoj temperaturi sa 250 o/min orbitalnog mućkanja tokom 48 sati. Jedna ploča je uklonjena u svakoj vremenskoj tački (0, 2, 4, 8, 24 i 48 sati). Alikvot je uklonjen iz svake komorice i analiziran pomoću UPLC-MS (Waters, Milford, MA) sa jedinjenjima detektovanim pomoću SIR detekcije na jednom kvadrupolnom masenom spektrometru. Dodatno, u preostali materijal u svakoj vremenskoj tački, dodat je acetonitril kako bi se

1

raspršilo jedinjenje (kako bi se testirala rekuperacija jedinjenja). Alikvot ovog uzorka je takođe analiziran pomoću UPLC-MS.

[0410] GSH stabilnost. Stabilnost je određena u prisustvu PBS pH 7,4 µM i 50 µM glutationa sa 0,1% DMSO. Svako jedinjenje je pripremljeno u duplikatu na šest odvojenih ploča i ostavljeno da se izjednači na sobnoj temperaturi sa 250 o/min orbitalnog mućkanja tokom 48 sati. Jedna ploča je uklonjena u svakoj vremenskoj tački (0, 2, 4, 8, 24 i 48 sati). Alikvot je uklonjen iz svake komorice i analiziran pomoću UPLC-MS (Waters, Milford, MA) sa jedinjenjima detektovanim pomoću SIR detekcije na jednom kvadrupolnom masenom spektrometru. Dodatno, u preostali materijal u svakoj vremenskoj tački, dodat je acetonitril kako bi se raspršilo jedinjenje (da se testira povratak jedinjenja). Alikvot ovog uzorka je takođe analiziran pomoću UPLC-MS.

[0411] Vezivanje proteina plazme. Vezivanje proteina plazme određeno je ravnotežnom dijalizom korišćenjem Rapid Equilibrium Dialysis (RED) uređaja (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) za ljudsku i mišju plazmu. Svako jedinjenje je pripremljeno u duplikatu na 5 µM u plazmi (0,95% acetonitrila, 0,05% DMSO) i dodato na jednu stranu membrane (200 µl) sa dodatkom PBS pH 7,4 na drugu stranu (350 µl). Jedinjenja su inkubirana na 37°C tokom 5 sati sa 250 o/min orbitalnog mućkanja. Nakon inkubacije, uzorci su analizirani pomoću UPLC-MS (Waters, Milford, MA) sa jedinjenjima detektovanim SIR detekcijom na jednom kvadrupolnom masenom spektrometru. Rezultati su prikazani u Tabeli 3.

[0412] Stabilnost plazme. Stabilnost plazme je određena na 37°C na 5 sati u ljudskoj i mišjoj plazmi. Svako jedinjenje je pripremljeno u duplikatu na 5 µM u plazmi razblaženoj 50/50 (v/v) sa PBS pH 7,4 (0,95% acetonitril, 0,05% DMSO). Jedinjenja su inkubirana na 37°C tokom 5 sati sa 250 o/min orbitalnog mućkanja sa vremenskim tačkama uzetim na 0 i 5 sati. Uzorci su analizirani pomoću UPLC-MS (Waters, Milford, MA) sa jedinjenjima detektovanim SIR detekcijom na jednom kvadrupolnom masenom spektrometru. Rezultati su prikazani u Tabeli 3.

Primarni HTS

[0413] GSK3β primarni skrining je izveden u 1536 ploča pripremljenim za test (Aurora 29847) koje sadrže 2,5 nL/komorica od 10 mM jedinjenja. Ljudski GSK3β kao GST fuzija eksprimirana u bakuloviralnom sistemu je nabavljena od BPS Bioscience (San Diego, CA).

1 4

GSK3β peptidni supstrat je od American Peptide (Sunnyvale, CA; Cat 311153).1 µL/komorica CABPE (22,5 nM GSK3β, 8 µM peptida u AB puferu (12,5 mM DTT, 0,25 mg/mL BSA, 0,5 jedinica/mL Heparin)), 0,5 µl/komorica 125 µM ATP, i 1 µl/komorica pozitivne kontrole 50 µM GW8510 (pozitivna kontrola) ili AB (DMSO samo neutralna kontrola) u odgovarajućim komoricama prema dizajnu ploče koristeći BioRAPTR (Beckman, Brea, CA). Reakcije su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta.2,5 µl/komorica ADP-Glo (Promega, V9103) je dodato sa BioRAPTR, i inkubirano na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta praćeno dodavanjem 5 µl/komorica ADP-Glo detektujućeg reagensa (Promega, V9103) sa Combi nL (Thermo, Waltham, MA) i inkubacija na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Ploče su čitane na ViewLux (PerkinElmer, Waltham, MA) za luminescenciju. Podaci su skalirani korišćenjem pozitivnih i neutralnih kontrola i uklopljeni za IC50kao što je opisano u nastavku.

[0414] 1 µL/komorica CABPE, 0,5 µl ATP i 1 µl pozitivne kontrole GW8510 ili AB su raspoređeni u odgovarajuće komorice prema dizajnu ploče na 1536-komoričnim pločama pripremljenim za test (Aurora 29847) koje sadrže 2,5 nL/komorica od 10 mM jedinjenja koristeći BioRAPTR (Beckman) za početak reakcije. Ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta. Dodato je 2,5 µl/komorica ADP-Glo (Promega, V9103) sa BioRAPTR i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta. Dodato je 5 µl/komorica ADP-Glo (Promega, V9103) sa Combi nL (Thermo), i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Ploče su očitane na ViewLux (PerkinElmer) za luminescenciju.

Rastvori:

[0415]

AB:

GW8510 (in AB, Sigma G7791)

CABPE (in AB):

1

Peptid: Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Pro-Ser-Pro-Ser-Leu-Ser-Arg-His-Ser-Ser-Pro-His-Gln-Ser(PO3H2)-Glu-Asp-Glu-Glu-Glu (SEQ ID NO.: 1)

ATP (in AB, Promega V9103 komponenta):

Potvrdni test

[0416] Potvrdni test je bio ponovni test aktivnih jedinjenja u gore navedenom primarnom HTS-u, zajedno sa nekim njihovim negativnim analozima. Test je izveden na isti način kao primarni skrining, osim što su jedinjenja testirana u dozama i sa replikatima.

[0417] 1 µL/komorica CABPE, 0,5 µl ATP i 1 µl pozitivne kontrole GW8510 ili AB su raspoređeni u odgovarajuće komorice prema dizajnu ploče na 1536-komoričnim pločama pripremljenim za test (Aurora 29847) koje sadrže 2,5 nL/komorica od 10 mM jedinjenja koristeći BioRAPTR (Beckman) za početak reakcije. Ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta. Dodato je 2,5 µl/komorica ADP-Glo (Promega, V9103) sa BioRAPTR i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta. Dodato je 5 µl/komorica ADP-Glo (Promega, V9103) sa Combi nL (Thermo), i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Ploče su očitane na ViewLux (PerkinElmer) za luminescenciju.

Rastvori:

[0418]

AB:

GW8510 (in AB, Sigma G7791)

1

CABPE (in AB):

Peptid: Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Pro-Ser-Pro-Ser-Leu-Ser-Arg-His-Ser-Ser-Pro-His-Gln-Ser(PO3H2)-Glu-Asp-Glu-Glu-Glu (SEQ ID NO.: 1)

ATP (in AB, Promega V9103 komponenta):

Skrining brojanja ADP-Glo reagensa

[0419] Skrining brojanja reagensa ADP-Glo služi da identifikuje lažne pozitivne rezultate zbog inhibicije ADP-Glo sistema detekcije.2,5 µl od 5 µM ADP je inkubirano direktno sa jedinjenjima u dozama na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta.2,5 µl/komorica ADP-Glo (Promega, V9103) je dodato sa BioRAPTR, i inkubirano na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta praćeno dodavanjem 5 µl/komorica od ADP-Glo detekcijom (Promega, V9103) sa Combi nL (Thermo, Waltham, MA) i inkubacijom na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Ploče su čitane na ViewLux (PerkinElmer, Waltham, MA) za luminescenciju. Podaci su skalirani korišćenjem pozitivne i neutralne kontrole i podešeni za IC50 kao što je opisano u nastavku.

[0420] 2,5 µL od 5 µM ADP ili pufera AB je raspoređeno u komorice na 1536-komoričnim pločama pripremljenim za test prema dizajnu ploče (Aurora 29847) generisanom akustičkim prenosom koristeći Labcyte Echo koji sadrži 7,5 nL/komorica jedinjenja u dozama. Dodato je 2,5 µl/komorica ADP-Glo (Promega, V9103) sa Combi nL (Thermo) i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta. Dodato je 5 µl/komorica ADP-Glo (Promega, V9103) sa Combi nL (Thermo), i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 35 minuta. Ploče su očitane na ViewLux (PerkinElmer) za luminescenciju.

Rastvori:

[0421]

AB: 25 mM TrisCl pH7,5, 10 mM MgCl2

1

ADP: 5 µM ADP (in AB, Promega V9103 komponenta)

Inhibitorna analiza pojedinačnih tačaka izabranih jedinjenja (Carna Biosciences)

[0422] Ukratko, selekcija jedinjenja je pregledana na panelu kinaza u jednoj koncentraciji od 10 µM. Kinaze su izabrane iz svih porodica kinoma i skupa predstavljaju 60% ukupnog kinoma za ukupno 311 kinaza. Ovo je kompletirano korišćenjem jednog od dva testa u zavisnosti od ispitivane kinaze.

[0423] Testirana jedinjenja su rastvorena i razblažena sa dimetilsulfoksidom (DMSO) kako bi se dobio rastvor 100X uzorka. Ona su zatim razblažena do 4X uzoraka u puferu za analizu kako bi se dobili konačni rastvori test jedinjenja. Referentna jedinjenja za kontrolu testa su pripremljena na sličan način.

[0424] IMAP test. Rastvor 4X inhibitora (5 µl), 4X rastvor supstrata/ATP/metala (5 µl), i 2X rastvor kinaze (10 µl) je pripremljeno sa puferom za ispitivanje (20 mM HEPES, 0,01% Tween-20, 2mM DTT, pH 7,4) i pomešano/inkubirano na 384-komoričnim crnim pločama tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Rastvor IMAP vezujućeg reagensa (IMAP Screening Express komplet; Molecular Devices) (60 µl) je dodat u svaku komoricu i inkubiran 30 minuta. Nivo aktivnosti kinaze je zatim procenjen fluorescentnom polarizacijom na 485 nM (exc) i 530 nM (emm) svake komorice.

[0425] Test izmene pokretljivosti izvan čipa (MSA). Rastvor 4X inhibitora (5 µl), 4X rastvor supstrata/ATP-metala (5 µl) i 2X rastvor kinaze (10 µl) je pripremljen sa puferom za ispitivanje (20 mM HEPES, 0,01% Triton X-100, 2 mM DTT, pH 7,5) i pomešan/inkubiran u 384-komoričnim pločama tokom 1 ili 5 sati u zavisnosti od ispitivane kinaze, na sobnoj temperaturi. Rastvor terminacionog pufera (QuickScout Screening assist MSA; Carna Biosciences) (60 µl) je dodat u svaku komoricu. Celokupna reakciona smeša je zatim primenjena na LabChip3000 sistem (Caliper Life Science) i vrhovi peptida proizvoda i supstrata su odvojeni i kvantifikovani. Vrednovanje aktivnosti kinaze je zatim određeno na osnovu odnosa izračunatih visina pika proizvoda (P) i supstrata (S) peptida (P/(P+S)).

Određivanje odgovora doze IC50 odabranih jedinjenja protiv odabranih kinaza [0426] Izbor jedinjenja je pregledan u odnosu na izabran panel kinaza na osnovu inhibitorne sposobnosti jedne tačke da odredi apsolutnu inhibitornu aktivnost, što dovodi do merenja

1

selektivnosti. Korišćeni test je bio identičan onom kod određivanja inhibitorne aktivnosti u jednoj tački (MSA), ali se odvijao u odgovoru doze. Rastvor 4X inhibitora (5 µl), 4X rastvor supstrata/ATP metala (5 µl) i 2X rastvor kinaze (10 µl) je pripremljeno sa puferom za ispitivanje (20 mM HEPES, 0,01% Triton X-100, 2mM DTT, pH 7,5 ) i pomešano/inkubirano u 384-komoričnim pločama tokom 1 ili 5 sati u zavisnosti od kinaze, na sobnoj temperaturi. Rastvor završnog pufera (QuickScout Screening assist MSA; Carna Biosciences) (60 µl) je dodat u svaku komoricu. Celokupna reakciona smeša je zatim primenjena na LabChip3000 sistem (Caliper Life Science) i vrhovi peptida proizvoda i supstrata su odvojeni i kvantifikovani. Vrednovanje aktivnosti kinaze je zatim određeno na osnovu odnosa izračunatih visina vrhova proizvoda (P) i supstrata (S) peptida (P/(P+S)).

Tau fosforilacija i ukupni tau test

[0427] SH-SY5Y ćelije su održavane u DMEM dopunjenom sa 10% toplotno inaktiviranog FBS i 1% penicilin-streptomicina (Invitrogen) ukoliko nije drugačije navedeno. ELISA setovi za fosfo-Tau (Ser199) i ukupna Tau detekcija su nabavljeni od Invitrogen (KHB0041, i KHB7041, respektivno). Ukratko, SH-SY5Y ćelije su posejane na 50,000 ćelija/200 µl/komorica u 96-komoričnim pločama i posle inkubacije preko noći, tretirane sa različitim dozama hemijskih jedinjenja pri 0,2 µl/komorica. Sledeći dan ćelije su isprane sa PBS dva puta pre nego što su lizirane u 100 µl pufera za lizu/komorica. 50 µl ćelijskog lizata svakog uzorka je prebačeno u ELISA bocu obloženu snimljenim antitelom, i smeša je inkubirana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, pre nego što je supernatant aspiriran, i svaka komorica je isprana četiri puta.100 µl detektujućeg antitela je zatim dodato u svaku komoricu, inkubirano tokom 1 sata, i zatim isprano četiri puta. Količina fosfo-Tau i ukupnog Tau je merena dodavanjem 100 µl radnog rastvora anti-zečjeg IgG peroksidaze rena u svaku komoricu, i apsorbancija svake komorice na 450 nM je očitana na EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA). Podaci su skalirani korišćenjem pozitivne i neutralne kontrole i uklopljeni za IC50.

[0428] Upotrebljen je standardni protokol koji koristi komplet za imunološku analizu za kvantifikaciju ukupnog Tau proteina i fosfo-Tau (Ser199) proteina u SH-SY5Y ćelijama neuroblastoma. Ljudski Tau (ukupni) ELISA komplet (#KHB0041) i ljudski fosfor-Tau (Ser199) ELISA komplet su nabavljeni od Invitrogen-a (#KHB7041)

[0429] 50,000 ćelija je posejano sa 200 µl po komorica u medijumu za kulturu ćelija (250,000 ćelija/ml). Ćelije su inkubirane preko noći na 37°C. Ćelije su indukovane sa

1

odgovarajućim dozama inhibitora i inkubirane približno 24 sata na 37°C. Ćelijski lizati su sakupljeni ispiranjem ćelija jednom sa hladnim PBS-om, i dodavanjem 100 µl hladnog pufera za lizu i snažno pipetirane uzlazno i dole. Lizat je prebačen u PCR 96-komoričnu ploču i centrifugiran na 4,000 o/min tokom 20 minuta na 4°C.

[0430] Ljudski Tau (Total) standard je rekonstituisan sa 1300 µl standardnog pufera za razblaživanje. Serijska razblaženja standarda napravljena su prema sledećoj tabeli:

[0431] Ljudski pTau (Ser199) standard je rekonstituisan sa 1730 µl standardnog pufera za razblaživanje, blago pomešan, i ostavljen da odstoji 10 minuta. Serijska razblaženja standarda napravljena su prema sledećoj tabeli:

[0432] Anti-zečji IgG HRP za ljudski Tau (ukupni) i ljudski pTau (Ser199) je razblažen tako što je omogućio da dostigne sobnu temperaturu, i zatim koristi sledeću tabelu:

14

[0433] Pufer za ispiranje je razblažen sa 25X koncentrata prema sledećem: Količina pufera za ispiranje = (x)*(8)*(400)*(4)*(3), gde je x = broj traka ELISA ploče

[0434] Razblažiti 24 zapremine sa dejonizovanom vodom (tj.5 ml koncentrata u 120 ml vode).

[0435] Trake sa komoricama su zagrejane i umetnute u okvir.100 µl standardnog pufera za razblaživanje je napunjeno u ZERO komorice, i 100 µl svake standardne koncentracije (i ukupan Tau i pTau) su stavljene u komorice u duplikatu. Uzorci su napunjeni u svaku komoricu koja bi bila analizirana za ukupni Tau, 85 µl standardnog pufera za razblaživanje i 15 µl ćelijskog lizata. U svaku komoricu koja će biti analizirana na pTau (Ser199) dodato je 50 µl standardnog pufera za razblaživanje 50 µl ćelijskog lizata. Ploče se lagano pomeraju na stranu kako bi se pomešale. Određene komorice su ostavljene prazne za hromogen. Ploče su prekrivene i inkubirane 2 sata na sobnoj temperaturi. Komorice su aspirirane 4 puta (400 µl razblaženog pufera za ispiranje, ostavljene 30 sekundi, aspirirane su sve komorice; alternativno se upotrebljava automatska mašina za pranje ploča i programirana je sa zadržavanjem od 30 sekundi između svakog ciklusa).100 µl rastvora za detekciju antitela je dodato u svaku komorica osim u hromogenske praznine. Anti-ukupni Tau je dodat u komorice koje su analizirane za totalni Tau, anti-pTau (Ser199) je dodat u komorice koje su analizirane za pTau (Ser199), i ploče su lagano pomerane na stranu kako bi se mešale. Ploče su prekrivene i inkubirane 1 sat na sobnoj temperaturi, zatim su komorice aspirirani i isprani 4 puta kao što je gore opisano. 100 µl radnog rastvora anti-zečjeg IgG HRP (pripremljenog unapred) je dodato u svaku komorica osim praznog hromogena, i ploče su pokrivene i inkubirane tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi, zatim su komorice aspirirane i isprane 4 puta kao što je gore opisano. 100 µl stabilizovanog hromogena dodato je u svaku komoricu (tečnost je postala plava). Ploče su inkubirane tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi u mraku, zatim je u svaku komoricu dodato 100 µl rastvora za zaustavljanje, i ploče su lagano pomerane na stranu kako bi se mešale. Apsorbancija svake komorice je očitana na 450 nm (unutar 2 sata od dodavanja zaustavnog rastvora).

Test nuklearne lokalizacije β-Katenina

[0436] U2-OS ćelije koje stabilno eksprimiraju dva komplementarna fragmenta βgalaktozidaze (jedan deo na β-Katenin i drugi konstitutivno eksprimiran u ćelijskom jezgru) održavane su u DMEM F12 dopunjenom sa 10% FBS. Kada se β-katenin translocira u nukleus, komplementarni fragmenti formiraju kompletnu β-galaktozidazu, čija se količina zatim kvantifikuje aktivnostima β-galaktozidaze (DiscoveRx). Ćelije su posejane u 384-komorične CulturPlate (Perkin Elmer, Boston, MA) sa 10,000 po komorici u 20 µl DMEM F12 koji sadrži 10% FCS, 100 U/ml penicilina i 100 µg/mL streptomicina. Posle inkubacije preko noći na 37°C, ćelije su stimulisane sa 100 nL test jedinjenja/komorica i zatim vraćene u inkubator tokom 6 sati. Ćelije su poremećene korišćenjem 12 µl pufera za lizu koji sadrži supstrat iz PathHunter Detection Kit u formulaciji koju je odredio dobavljač (DiscoveRx). Ploče su inkubirane u mraku tokom 1 sata na sobnoj temperaturi pre merenja aktivnosti βgalaktozidaze (luminiscencija) na EnVision čitaču ploča (PerkinElmer, Waltham, MA). Udaljenost između ploče i detektora iznosila je 0,2 mm. Vreme merenja = 0,1; Korekcioni faktor sjaja (CT2) = 0.

TCF/LEF reporter test

[0437] HEK293-pBARL ćelije su izvedene iz HEK293 ćelija i stabilno su eksprimirale reporter gen luciferaze svica, podstaknute promoterom koji sadrži 12 kopija TCF/LEF vezujućih sekvenci. Ove ćelije su održavane u DMEM i dopunjavane sa 10% FBS i 1% penicilin-streptomicinom (Invitrogen). Testovi reporter gena su sprovedeni u medijumu bez antibiotika. Aktivnost TCF/LEF reporter gena je testirana kao što je prethodno opisano (Pan i dr., 2011, Neuropsychopharmacology). Ove ćelije su takođe sadržale renila-luciferaza reporter gen koji je kao kontrola bio podstaknut od strane sveprisutnog EF1α promotera. HEK293-pBarl reporter ćelijske linije su posejane u 384-komorične ploče za kulturu (Corning) pri 6000 ćelija/komorica.24 sata nakon nanošenja, ćelije su tretirane preko noći sa relevantnim jedinjenjima i testirane korišćenjem DualGlo test kompleta (Promega).

Intenziteti luminiscenta su očitavani od strane EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA).

Intenzitet luciferaze svica normalizuje se intenzitetom renila luciferaze. Detaljan protokol se razmatra u nastavku.

[0438] Reagensi: Reagens Dual-Glo Luciferaze testa od Promega (E2940) (Luciferaza pufer, supstrat luciferaze, Stop & Glo Luciferaza pufer, Stop & Glo Luciferaza supstrat); Tip ploče:

Corning 384-komorična bela, ploče za kulturu tretirane sa TC (3707)

[0439] Ćelije su kultivisane u 384-komoričnim pločama do odgovarajuće gustine (40 µl ukupne zapremine). 24 sata nakon nanošenja, ćelije su tretirane sa 100 µl jedinjenja.24 sata nakon inkubacije sa jedinjenjima (48 sati posle nanošenja), reagensi su pripremljeni mešanjem Luciferaza test rastvora sa Luciferaza supstratom, i Stop & Glo rastvora sa Stop & Glo supstratom (dodatni reagensi mogu biti alikvotirani i zamrznuti za buduću upotrebu i stabilni su najmanje jedan ciklus zamrzavanja/odmrzavanja). Zapremina luciferaza reagensa je dodata jednaka zapremini medijuma u svakoj komorici (na primer, u 384-komoričnoj ploči sa 40 µl u svakoj komorici, dodato je 10 µl kako bi se dobila konačna zapremina od 50 µl). Ploča je spuštena i dozvoljeno je 10 minuta za stabilizaciju signala. Signal luciferaze na Perkin Elmer EnVision koristi sledeće parametre: Udaljenost između ploče i detektora (mm) = 0,2; Vreme merenja = 0,1; Korekcioni faktor sjaja (CT2) = 0. Kada su početni podaci sigurni, svakoj komorici se doda zapremina Stop & Glo koja je jednaka zapremini Luciferaza reagensa koji je dodat iznad (Ako je dodato 10 µl Luciferaza reagensa, 10 µl Stop & Glo je takođe dodato). Ploča je spuštena i dozvoljeno je 10 minuta za stabilizaciju signala. Ploča je očitana na EnVision-u koristeći iste parametre koji su gore navedeni.

Određivanje afiniteta sekundarne površinske plazmonske rezonance

[0440] Približno 20,000 odzivnih jedinica (RU) anti-GST-antitela (GE Healthcare Life Sciences) imobilisano je na Flow Cell (FC) 1 i FC2 novog, sveže uslovljenog CM5 SensorChip (GE Healthcare Life Sciences) u Biacore T100 instrumentu koji koristi čarobnjaka za imobilizaciju programskog paketa T100. Približno 1,200 RU rekombinantnog GST-a (GE Healthcare Life Sciences) je zatim uhvaćeno na FC1 koristeći protokol čarobnjaka za snimanje softverskog paketa T100. FC1 se koristi kao referentna tačka oduzimanja za ovaj i sve SPR testove. Približno 2,500 RU rekombinantnog GST-GSK3β je zatim uhvaćeno na FC2 korišćenjem protokola čarobnjaka za snimanje programskog paketa T 100. FC2 se koristi kao aktivna protočna ćelija za ovaj i sve SPR testove. Ploča analita se generiše u modusu odgovora na dozu u TBS puferu koji sadrži konačnu koncentraciju 2%

14

DMSO, sa konačnom koncentracijom analita od 10 µM do 10 nM sa 2X faktorom razređenja. Nulta vrednost se određuje sprovođenjem injekcija pufera koji sadrži samo 2% DMSO i bez analita. Sve injekcije se izvode u duplikatu i referenca se oduzima od FC1. Razvijen je postupak koji se sastoji od 60 sekundi vremena dodira i 60 sekundi vremena pranja sa brzinom protoka od 30 µl/min. Interna standardna kriva za DMSO vrednosti je dobijena sa sedam injekcija DMSO koje se sastoje od 1, 1,25, 1,5, 2, 2,25, 2,5 i 3% DMSO u TBS tečnom puferu. Analiza jedinjenja je izvršena korišćenjem modela vezivanja 1:1 i merenja afiniteta u softverskom paketu za procenu Biacore T100.

Generisanje pufera:

[0441] PBS: Mešano 900 mL filtrirane DI vode sa 100 mL 10X PBS puferskog rastvora (Invitrogen).

In-house TBS: Dodato je 1,21 g Tris i 8,7 g NaCl do 950 mL filtrirane DI vode. pH je podešen upotrebom 6M HC1 do 7,35. Napunjen do oznake od 1000 mL. Filtrirano i sakupljeno 900 mL u jednoj boci, filtrirano i sakupljeno 100 mL u drugoj boci. Dodato je 450 µL P20 deterdženta (GE Healthcare Life Sciences) u bocu 1, dodato je 50 µl P20 deterdženta u bocu 2 i dobro pomešano. Preneseno 18 mL pufera iz boce 1 u bocu 2 kako bi se dobio TBS tečni pufer. Dodato je 18 mL DMSO (Aldrich) u bocu 1 kako bi se dobio 2% DMSO pufer.

[0442] Generisanje GSK3β CM5 senzor čipova: Kondicioniranje novog čipa: PBS imobilizacioni pufer je stavljen u policu pufera i ubačen u pufersku liniju A. Neiskorišćeni CM5 senzorski čip je ubačen u instrument po uputstvu za korisnika. Čip je napunjen sa 6 minuta pufera za davanjem injekcijom pri 30 µl/min. Inicirano je ručno pokretanje i injekcijom je dato preko protočne ćelije (FC) 1 i 2 naizmeničnim davanjem injekcijom lizinskog pufera (GE Healthcare Life Sciences) i pufera natrijum hidroksida (GE Healthcare Life Sciences) pri protoku od 30 µL/min za 30 sekundi po injekciji. Imobilizacija anti GST antitela: Čip je ponovo prajmovan kao što je gore opisano. Generisan je anti-GST antitelo rastvor mešanjem 4,5 µL anti GST antitela (GE Healthcare Life Sciences, GST Capture Kit) sa 95,5 µL imobilizacionim puferom (GE Healthcare Life Sciences, GST Capture Kit).

Staviti rastvor u 700 µL malu bocu i zatvoriti je. Ponoviti. Obe bočice staviti u stalak za reagense 1 od Biacore T100 instrumenta, i umetnuti u mašinu po uputstvima za upotrebu. Inicirana imobilizacija anti GST antitela korišćenjem čarobnjaka protokola imobilizacije od Biacore T100 softvera. Imobilisalo je približno 20,000 jedinica odgovora (RU) anti GST antitela na FC1 i FC2. Snimanje referentnih i aktivnih proteina na FC1 i FC2 respektivno: Uklonjen je PBS imobilizacioni pufer iz pufera i zamenjen sa TBS 2% DMSO puferom. Ubačena je linija pufera A. Ponovljena procedura prajmovanja. Generisan je GST rastvor proteina mešanjem 2 µl rekombinantnog GST (GE Healthcare Life Sciences, GST Capture Kit) sa 98 µl TBS 2% DMSO pufera. Generisan je GST-GSK3β rastvor proteina mešanjem 5 µl rekombinantnog GST-GSK3β sa 95 µl TBS 2% DMSO pufera. Postavljen je GST rastvor proteina u poziciji B1 na reaktantskom stalku 1. Postavljen je GST-GSK3β rastvor proteina na poziciji C1 na reaktantskom stalku 1. Pokrenuo je ručno davanjem injekcijom tokom 30 sekundi na 5 µL/min GST rastvora proteina na FC1 kako bi se dobio referentni protok ćelija. Inicirano je ručno davanjem injekcijom i davanjem injekcijom u trajanju od 30 sekundi pri 5 µL/min GST-GSK3β rastvora proteina na FC2 kako bi se dobila aktivna protočna ćelija. Snimljeno je približno 1000 RU GST proteina na FC1. Snimljeno je približno 2500 RU GST-GSK3β proteina na FC2.

[0443] Analiza inhibitora GSK3β malih molekula: Za analizu je generisana ploča analita. Koristeći standardnu 384-komoričnu ploču duboke zapremine, stavi se 100 µl 10 µM TBS 2% DMSO rastvora željenog analita u komorice A1 i A2. Stavi se 100 µl 5 µM TBS 2% DMSO rastvora željenog analita u komorice A3 i A4. U komorice A5 i A6 stavi se 100 µl rastvora TBS 2% DMSO rastvora 2,5 µm željenog analita. Ponavljaju se ove faze sa serijski razređenim analitima do 10 nM u komoricama A21 i A22. Stavi se 100 µl TBS 2% DMSO pufera za puštanje u komorice A23 i A24. Ponovljeni su koraci za naredne analite.

Postavljena ploča za analizu u Biacore T100 po uputstvu za upotrebu. Generisani postupak koji se sastoji od sledećeg: davanje injekcijom analita preko FC1 i FC2 sa referentnim oduzimanjem; 30 µL/min brzina protoka analita, 60 sekundi vremena dodira analita; 60 sekundi vremena pranja pufera; Generisanje DMSO standardne krive korišćenjem 1, 1,5, 1,75, 2, 2,5, 2,75 i 3% DMSO u TBS tečnom puferu. Analiza jedinjenja je izvršena i jedinjenja su rangirana prema KD određivanju korišćenjem opcije merenja afiniteta u Biacore T100 softveru.

[0444] CK1δ CM5 Generator čipova senzora: Približno 20,000 odzivnih jedinica (RU) anti-GST-antitela (GE Healthcare Life Sciences) imobilisano je na Flow Cell (FC) 1 i FC2 novog, sveže kondicioniranog CM5 SensorChip (GE Healthcare Life Sciences) u Biacore T100 instrumentu koji koristi čarobnjaka za imobilizaciju programskog paketa T100.

Približno 1500 RU rekombinantnog GST-a (GE Healthcare Life Sciences) je zatim uhvaćeno

14

na FC1 koristeći protokol čarobnjaka za hvatanje softverskog paketa T100. FC1 se koristi kao referentna tačka oduzimanja za ovaj i sve SPR testove. Približno 2,700 RU rekombinantnog GST-CK1δ je zatim uhvaćeno na FC2 korišćenjem protokola čarobnjaka za hvatanje softverskog paketa T100. FC2 se koristi kao aktivna protočna ćelija za ovaj i sve SPR testove. Ploča analita se generiše u modusu odgovora na dozu u TBS puferu koji sadrži konačnu koncentraciju od 2% DMSO, sa konačnom koncentracijom analita od 10 µM, 100 nM i 10 nM. Nulta vrednost se određuje sprovođenjem injekcija pufera koji sadrži samo 2% DMSO i nema analita. Sve injekcije se izvode u duplikatu i referenca se oduzima od FC1. Upotrebljen je postupak koji se sastoji od 60 sekundi vremena dodira i 60 sekundi vremena pranja sa brzinom protoka od 30 µl/min. Interna standardna kriva za DMSO vrednosti je dobijena sa sedam injekcija DMSO koje se sastoje od 1, 1,25, 1,5, 2, 2,25, 2,5 i 3% DMSO u TBS tečnom puferu. Analiza jedinjenja je izvršena korišćenjem modela vezivanja 1:1 i merenja afiniteta u softverskom paketu za procenu Biacore T100.

[0445] CK1δ CM5 Generator čipova senzora: Kondicioniranje novog čipa: PBS imobilizacioni pufer je stavljen u policu pufera i ubačen u pufer A. Neiskorišćeni CM5 senzorski čip je učitan u instrument po uputstvu proizvođača. Čip je napunjen sa 6 minuta pufera za davanjem injekcijom pri 30 µl/min. Ručno pokretanje je inicirano i preko protočne ćelije (FC) 1 i 2 naizmenično je dat injekcijom lizinski pufer (GE Healthcare Life Sciences) i pufer natrijum hidroksida (GE Healthcare Life Sciences) pri protoku od 30 µL/min tokom 30 sekundi po injekciji.

[0446] Imobilizacija anti GST antitela: Čip je ponovo prajmovan kao što je gore opisano. Generisan je anti-GST antitelo rastvor mešanjem 4,5 µL anti GST antitela (GE Healthcare Life Sciences, GST Capture Kit) sa 95,5 µL imobilizacionim puferom (GE Healthcare Life Sciences, GST Capture Kit). Staviti rastvor u 700 µL malu bocu i zatvoriti je. Ponoviti. Obe bočice staviti u stalak za reagense 1 od Biacore T100 instrumenta, i umetnuti u mašinu po uputstvima za upotrebu. Inicirana imobilizacija anti GST antitela korišćenjem čarobnjaka protokola imobilizacije od Biacore T100 softvera. Imobilisalo je približno 20,000 jedinica odgovora (RU) anti GST antitela na FC1 i FC2. Snimanje referentnih i aktivnih proteina na FC1 i FC2 respektivno: Uklonjen je PBS imobilizacioni pufer iz pufera i zamenjen sa TBS 2% DMSO puferom. Ubačena je linija pufera A. Ponovljena procedura prajmovanja.

Generisan je GST rastvor proteina mešanjem 2 µl rekombinantnog GST (GE Healthcare Life Sciences, GST Capture Kit) sa 98 µl TBS 2% DMSO pufera. Generisan je GST-GSK3β

14

rastvor proteina mešanjem 5 µl rekombinantnog GST-GSK3β sa 95 µl TBS 2% DMSO pufera. Postavljen je GST rastvor proteina u poziciji B1 na reaktantskom stalku 1. Postavljen je GST-GSK3β rastvor proteina na poziciji C1 na reaktantskom stalku 1. Pokrenuo je ručno davanjem injekcijom tokom 30 sekundi na 5 µL/min GST rastvora proteina na FC1 kako bi se dobio referentni protok ćelija. Inicirano je ručno davanjem injekcijom i davanjem injekcijom u trajanju od 30 sekundi pri 5 µL/min GST-GSK3β rastvora proteina na FC2 kako bi se dobila aktivna protočna ćelija. Snimljeno je približno 1500 RU GST proteina na FC1. Snimljeno je približno 2700 RU GST-GSK3β proteina na FC2.

[0447] Analiza malih molekula liganda CK1δ: Za analizu je generisana ploča analita. Koristeći standardnu 384-komoričnu ploču duboke zapremine, stavi se 100 µl 10 µM TBS 2% DMSO rastvora željenog analita u komorice A1 i A2. Stavi se 100 µl 50 nM analita u TBS 2% rastvor DMSO u komorice A3 i A4. Stavi se 100 µl 10 nM analita u TBS 2% rastvor DMSO u komorice A5 i A6. Stavi se 100 µl TBS 2% DMSO pufera za puštanje u komorice A7 i A8. Ponovljeni koraci za naredne analite. Postavljena ploča za analizu u Biacore T100 po uputstvu za upotrebu. Generisana postupak koji se sastoji od sledećeg: davanjem injekcijom analita preko FC1 i FC2 sa referentnim oduzimanjem; 30 µL/min brzina protoka analita, 60 sekundi vremena kontakta analita; 60 sekundi vremena pranja pufera; Generisanje DMSO standardne krive korišćenjem 1, 1,5, 1,75, 2, 2,5, 2,75 i 3% DMSO u TBS tečnom puferu. Analiza jedinjenja je izvršena i jedinjenja su rangirana prema KD određivanju korišćenjem opcije merenja afiniteta u Biacore T100 softveru.

Test mikrofluidne mobilnosti-pomaka GSK3β

[0448] Prečišćeni GSK3β je inkubiran sa ispitivanim jedinjenjima u dozama u prisustvu 4,3 µM ATP i 1,5 µM peptidnog supstrata (Peptid 15 od Caliper) tokom 60 minuta na sobnoj temperaturi u 384-komoričnim pločama (Seahorse Bioscience, MA), u test puferu koji je sadržao 100 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl22,5mM DTT, 0,004% Tween-20 i 0,003% Briji-35. Reakcije su prekinute dodavanjem 10 mM EDTA. Supstrat i proizvod su odvojeni elektroforetski, i intenzitet fluorescencije supstrata i proizvoda određen je sa Labchip EZ Reader II (Caliper Life Sciences, MA). Aktivnost kinaze je merena kao procenat konverzije. Reakcije su izvedene u duplikatu za svaki uzorak. Pozitivna kontrola (GW8510 na 20 µM; CID 6539118) je uključena u svaku ploču i korišćena za skaliranje podataka zajedno sa DMSO kontrolama na ploči. Rezultati su analizirani pomoću Genedata Assay Analyzer.

14

Postotak inhibicije je izveden u odnosu na koncentraciju jedinjenja i vrednost IC50 je određena iz logističke krive doze-odgovora.

ADP Glo test protokol (10 µM ATP) u 384-komoričnom formatu

[0449] 20 µL/komorica od 4,7 nM GSK3β i 7 µM peptida u KBA (250 mM HEPES (pH 7,5), 50 mM MgCl2, 5 mM EGTA, 0,05% BRIJ-35) su raspodeljeni na belu neprozirnu 384-komoričnu ploču. 100 nL/komorica jedinjenja je postavljeno. Dodato je 1 µl/komorica od 140 µM ATP u KBA. Inkubira se na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta. Dodato je 20 µl/komorica ADP-glo (Promega, V9103) sa Combi i inkubirano na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta. Dodato je 40 µl/komorica ADP-glo (Promega, V9103) sa Combi, inkubirano na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Pročitano je na Envision za luminiscenciju.

AIH in vivo protokol

[0450] Hiperaktivnost izazvana amfetaminom je izvedena kao što je opisano u Pan i dr.

Neuropsychopharmacology, 2011).

[0451] Hirurgija: Miševi koji su primali intrakranijalne infuzije su implantirani sa nerđajućom čeličnom braunilom (Plastics One, Roanoke, VA) usmerenom na dorzalnu treću komoru. Miševi su anestezirani sa ketamin/ksilazinom (150 mg/kg, odnosno 10 mg/kg; 5 ml/kg zapremine injekcije). Upotrebom stereotaksičnog aparata, navođena braunila (C232GC, 26 merenja, Plastics One) sa umetnutom lažnom braunilom (C232DC) bila je usmerena ka dorzalnoj trećoj komori (-0,5 mm iza Bregme, ± 0,0 lateralno do srednje linije i -3,0 (mesto injekcije) ventralno na površinu lobanje), (Paxinos, 2001). Miševi su se oporavili najmanje 5 dana pre testiranja. Tokom infuzija, miševi su blago vezani. Lažna braunila je zamenjena sa injekcionom braunilom (26 merenja, koja se protezala 1,0 mm iza vrha 2,0 mm vodiča; C232I) pričvršćenom za polietilensku cev (PE50) povezanu na 10 µl Hamilton špric. Infuzije su kontrolisane mikroinfuzionom pumpom (KDS 100, KD Scientific, New Hope, PA).

[0452] Bihejvioralne procedure u vezi sa miševima doziranim sa jedinjenjem 22:

Hiperaktivnost izazvana amfetaminom (AIH) ispitivana je u osam identičnih komora otvorenog prostora (16,5" x 16" x 12"; AccuScan Instruments, Columbus, OH). Aktivnost je detektovana infracrvenim zracima i snimljena automatski pomoću VersaMax softvera

14

(AccuScan). Dnevne sesije su automatski prebacivane u intervalima od 5 minuta (VersaDat; AccuSacn) za statističku analizu.

Dan 1: Miševi su se aklimatizovali na postupak infuzije tako što su blago vezani i uklonjena im je lažna braunila. Miševi su vezani tri minuta, nakon čega je zamenjena lažna braunila. Miševi su zatim stavljeni u otvoren prostor 20 minuta i zatim uklonjeni za injekciju fiziološkog rastvora. Miševi su vraćeni na otvoren prostor dodatnih 30 minuta, nakon čega su miševi vraćeni u svoj kavez.

Dan 2 je vođen identično Danu 1, sa izuzetkom da je drugi dan trajao jedan sat (20 minuta → injekcija → 40 minuta), i aklimatizacija vezivanja uključivala je infuziju slanog rastvora ICV (2 minuta infuzije praćeno jednom minutom za difuziju leka) od injekcione kanile).

Dan 3 je bio dan za izazove amfetamina. Miševi su prethodno tretirani infuzijom jedinjenja 22 ili nosačem 40 minuta pre postavljanja na otvoren prostor. Posle 20 minuta, miševi su uklonjeni i izazvani amfetaminom, i stavljeni na otvoren prostor 80 minuta.

[0453] Doziranje: 3 mg/kg, 10 mg/kg, ili 30 mg/kg. Nosač: 45% PEG400, 45% Fiziološki rastvor; 10% DMSO. Rezultati su prikazani na Slikama 7 i 8.

Postupci ponašanja u vezi sa miševima kojima je dozirano jedinjenje 70

[0454] Hiperaktivnost izazvana amfetaminom (AIH) ispitana je u osam identičnih komora otvorenog polja (16,5" × 16" × 12"; AccuScan instrumenti). Aktivnost je detektovana prekidima infracrvenog snopa i snimljena automatski pomoću VersaMax softvera (AccuScan Instruments). Dnevne sesije su automatski ubacivane u intervalima od 5 minuta (VersaDat; AccuSacn) za statističku analizu.

• Dan 1: Miševi su stavljeni u otvoren prostor 20 minuta pre uklanjanja za injekciju slanog rastvora. Miševi su zatim vraćeni u otvoren prostor dodatnih 30 minuta, nakon čega su miševi vraćeni u svoj kavez.

• Dan 2 je vođen identično danu 1, sa izuzetkom da je u danu 2 ukupno vreme bilo jedan sat (20 minuta pre injekcije, nakon čega sledi sa 40 minuta praćenja aktivnosti). • Dan 3 je bio dan za izazove amfetamina. Miševi su prethodno tretirani sa jedinjenjem 137 (i.p. (intraperitonealno)) 30 minuta pre postavljanja na otvoren prostor. Nakon 20 minuta, miševi su uklonjeni, izazvani sa amfetaminom, i stavljeni nazad u otvoren prostor tokom 80 minuta.

14

[0455] Doziranje: 3 mg/kg, 10 mg/kg, ili 30 mg/kg. Nosač: 45% PEG400, 45% Fiziološki rastvor; 10% DMSO. Rezultati su prikazani na Slici 11.

Rezultati

Pregled rezultata skrininga

[0456] Slika 2 prikazuje primer putanje za razvoj sondi.

[0457] Skrining visokog protoka od približno 320.000 jedinjenja je završen u poređenju sa ljudskim GSK3β u formatu 1536-komorične ploče. Skrining je imao prosečan Z' > 0,8. Približno 1000 jedinjenja pokazalo je da je više od 25% inhibicije izabrano kao aktivno.

[0458] Ova aktivna jedinjenja, zajedno sa oko 1,000 negativnih analoga u biblioteci, su izabrana i njihove potencije (IC50) u odnosu na GSK3β procenjene su u dozama u potvrdnom testu. Paralelno, završen je i kontra-skrining kako bi se isključile lažne pozitivnosti usled inhibicije reagensa za detekciju. Jedinjenja koja obećavaju potenciju (IC50<10 µM u odnosu na GSK3β u ovoj fazi), ali ne inhibiraju reagense za detekciju su dalje procenjena za strukturne karakteristike koje mogu da pruže novost, selektivnost i podnošljivost.

[0459] Traženi su visoko selektivni i jaki inhibitori GSK3β. Imajući u vidu da je urađeno mnogo posla na GSK3β cilju, fokus je bio na strukturalnim serijama koje ne poseduju skele zajedničke poznatim inhibitorima kinaze. Ovaj početni filter dozvoljava odabir ograničenog broja skela iz originalne biblioteke više od 320,000 malih molekula koji su prikazani. Izbor pirazolodihidropiridinske skele (Šema 1) polazna tačka početne sonde je izvršena na osnovu rezultata eksperimenata ADP-Glo (vide infra, Tabela 2, Unos 1) koji ukazuje na potenciju protiv GSK3β u sub-mikromolarnom opsegu. Na osnovu pretrage PubChem-a, ova skela je analizirana u velikom izboru testova (> 600), ali je potvrđena kao aktivna u samo jednom testu, osim ovde opisanih testova, koji se nisu odnosili na inhibiciju kinaze. Drugo, kao što je ilustrovano u Šemama 1a i b, sinteza ove skele omogućila je brzo uvođenje hemijske raznolikosti. Ova visoka sintetička pokretljivost bila je za atraktivan cilj sa hemijske perspektive. Napravljena je početna analiza selektivnosti kako bi se odredio procenat kinoma koji je inhibiran našim početnim HTS udarcem (Jedinjenje 1) korišćenjem širokog profila kinoma (Carna Biosciences). Gore opisani test selektivnosti ispituje inhibitornu sposobnost pirazolodihidropiridinskog jedinjenja 1 protiv 311 kinaza (koje predstavljaju 60% postojećeg

1

kinoma) pri zadržanoj koncentraciji od 10 µM. U Tabeli 1 u nastavku su prikazani snimljeni rezultati jedine inhibirane kinaze veće od 50% tretiranjem sa Jedinjenjem 1 na 10 µM.

Tabela 1. Procenat inhibicije izabranih kinaza od strane HTS udarca (Jedinjenje 1) pri 10

µM.

[0460] CHIR99021 (ili CHIR 99021), je najnoviji GSK3β inhibitor. Kada je ovo jedinjenje upoređeno za selektivnost sa istim kriterijumima kao HTS udarac, CHIR99021 inhibira 21 kinazu veću od 50% pri 10 µM. Ova početna analiza selektivnosti u kombinaciji sa odličnom potencijom dovela je do zaključka da bi pirazolodihidropiridinska skela bila odličan izbor za dalju analizu kao kandidat za sondu ili kao potencijalno terapeutsko sredstvo. Jedinjenje 3, enantiomer jedinjenja 1, ispitano je za aktivnost prema listi prethodno određenih kinaza (Tabela 1), ilustrujući da je Jedinjenje 3 selektivno za GSK3α/β i nije inhibirao nijednu CK1 porodicu kao što je viđeno pri ispitivanju racemske smeše.

Ispitivanja površinske plazmonske rezonance

[0461] Test direktnog vezivanja je zatim korišćen kao sekundarna analiza aktivnosti jedinjenja. Površinska plazmonska rezonanca (SPR) je upotrebljena za ispitivanje male kolekcije derivata pirazolodihidropiridina koja je ovde opisana. Nakon ispitivanja upotrebom ovog testa, otkriveno je da supstitucija arilnog prstena na položaju 2 dovodi do dvostrukog povećanja afiniteta ovih molekula za GSK3β. HTS udarac (Jedinjenje 1) ima eksperimentalno određen KDod 130 nM. Jedinjenje 20 ima eksperimentalno određen KDod 60 nM.

Razdvajanje enantiomera

[0462] Razdvajanje dva enantiomera Jedinjenja 20 je završeno kako bi se došlo do jednog jedinjenja. Jedinjenje 22, R-enantiomer Jedinjenja 20, inhibiralo 8 kinaza pri više od 50% na 10 µM, i bilo je selektivno za GSK3 za više od 22 puta (22 puta do sledeće najbliže kinaze, CDK5) (pogledati Tabelu 5). Apsolutna stereohemija enantiomera je određena kokristalizacijom jedinjenja 22 sa GSK3β (pogledati Sliku 4). Kristalna struktura je takođe

1 1

potvrdila da se jedinjenje vezuje na mestu vezivanja ATP. Kako bi se generisalo ko-kristali GSK3β/jedinjenja 22, korišćen je sledeći postupak: (1) 5-ostruki molarni višak jedinjenja 22 (u 100% DMSO) je dodat u razblaženi GSK3β, i zatim pažljivo mešan; i (2) Kompleks GSK3β/jedinjenja 22 je inkubiran na ledu tokom 30 minuta, koncentrovan do 5 mg/mL, i zatim skriningova postupcima opisanim gore. Kristali su nastali u roku od četiri dana i postali su maksimalni nakon nedelju dana. Kristali za GSK3β/jedinjenje 22 su prebačeni u sinhrotronsko postrojenje NSLS-a, u Brookhaven National Laboratory, i procenjeni korišćenjem X29 linije zračenja.

[0463] Jedinjenja su dizajnirana i sintetisana da istražuju SAR u različitim hemijskim delovima pirazolodihidropiridinske skele, poboljšavaju željena svojstva uključujući potenciju, selektivnost, rastvorljivost, i u nekim slučajevima i mikrosomalnu stabilnost, i smanjuju nepovoljnosti. Racemične smeše određenih analoga su razdvojene i izmerene su aktivnosti enantiomera (Tabela 2).

[0464] Biohemijska karakterizacija ovih sintetisanih jedinjenja ispitivana je protiv GSK3β i CDK5/p25, sa CDK5/p25 koji služi kao kontra meta GSK3β selektivnosti. Dodatna biohemijska karakterizacija potencijala i selektivnosti je takođe izvedena u Carna Biosciences. Baterija testova baziranih na ćelijama je takođe izvedena kako bi se procenila ćelijska aktivnost podgrupe ovih jedinjenja. Ovi testovi zasnovani na ćelijama uključuju Tau fosforilaciju u SH-SY5Y ćelijama ljudske patofiziologije, beta-katenin nuklearnu translokaciju i TCF/LEF reporter test koji prati Wnt signalni put u HEK293 ćelijama. Efekti ovih jedinjenja na preživljavanje SH-SY5Y ćelija patofiziologije su takođe praćeni.

Jedinjenje 54 dosledno pokazuje 10-20 nM potenciju protiv GSK3β, 150-380-ostruku selektivnost u odnosu na CDK5/p25, superiorni kinomni selektivni profil u poređenju sa CHIR99021, i snažnu ćelijska aktivnost.

[0465] Pretraživanje PubChem-a za jedinjenje udarac sa primarnog skrininga (Jedinjenje 1) pokazalo je da je testirano na 652 biotesta i potvrđeno je da je aktivno samo u jednom testu, osim ovde opisanih testova. Test je bio skrining za inhibitore hidroksisteroid (17-beta) dehidrogenaze 4 (HSD17B4) sa jačinom od 25,1 µM. Na osnovu ovih informacija, čini se da jedinjenje nije promiskuitetni inhibitor, takođe skela ne sadrži nikakve očigledne hemijske nepovoljnosti.

1 2

SAR analiza

[0466] Rezultati su opisani u Tabeli 2.

Tabela 2. Primeri rezultata ispitivanja.

1

14

1

[0467] Za Tabela 2, „A“ označava IC50ili Kdod ≤ 0,100 µM, „B“ označava IC50ili Kdod 0,101 - 1,000 µM, „C“ označava IC50ili Kdod 1,001 - 5,000 µM, „D“ označava IC50ili Kdod 5,001 - 30,000 µM, i „E“ označava IC50ili Kd> 30 µM.

1

[0468] Uz zadržavanje R<3>kao metil grupe, istraživane su različite supstitucije na fenil prstenu. Priroda supstituenta imala je mali uticaj na potenciju jedinjenja, fluoro, hloro, trifluormetil, metil, metoksi i cijano, što je rezultovalo jedinjenjima slične jačine. Međutim, položaj supstituenta imao je dublji uticaj na aktivnost. Zamena na orto-položaju rezultovala je najpotentnjim jedinjenjima, mada, generalno, i najnižom selektivnosti u odnosu na CDK5. Jedinjenja supstituisana na meta- položaju bila su nešto manje potentna, ali su pokazala veću selektivnost u odnosu na CDK5. Jedinjenja koja su supstituisana para-položaju rezultovala su značajnim padom aktivnosti GSK3 koji se može predvideti na osnovu vezivanja primećenog u kristalnoj strukturi (Slika 4). Kristalna struktura pokazuje da, iako postoje džepovi za supstituente na položaju 2 i 3, vezivanje na položaju 4 fenil prstena je suviše čvrsto kako bi se tolerisale grupe veće od vodonika. Jedinjenja koja su bila posebno interesantna zbog svoje aktivnosti u primarnom testu i ćelijskim testovima su 2-fluoro jedinjenje, 2-trifluorometil, 2-metoksi, 2-metiltio, 3-trifluorometil i 3-cijano.

[0469] U slučajevima kada je R<3>je zadržan konstantna kao metil grupa, ispitana je zamena fenil grupe sa heteroaromatima. Zamena fenil grupe sa tiofenima dovela je do pada potencije protiv GSK3, i nije imala povećanje aktivnosti ćelija. Zamena imidazola takođe je dovela do pada potencije protiv GSK3. Zamena sa 3-piridil grupom dovela je do jedinjenja koje je bilo ekvipotentno sa jedinjenjem udarcem i povećala je rastvorljivost, ali nije imala značajnu ćelijsku aktivnost. Druge zamene piridila rezultovale su padom potencije u poređenju sa jedinjenjem udarcem.

[0470] Istražujući čitav niz uobičajenih zamena i supstitucija za fenil grupu, 2-metoksi fenil je izabran zbog svoje potencije, selektivnosti i fizičkih svojstava da se koristi kao bazno jedinjenje za dalje SAR studije. Kretanje geminalne dimetil grupe na α-položaj karbonila, rezultovalo je jedinjenjem koje je imalo pad potencije u primarnom testu i gubitkom aktivnosti u testovima ćelija. Uklanjanje geminalne dimetil grupe rezultovalo je umerenim gubitkom aktivnosti. Zamenom šestočlanog prstena sa petočlanim prstenom pruženo je aromatizovano jedinjenje, koje nije imalo aktivnost protiv GSK3. Uklanjanje keto koji sadrži prsten rezultovalo je značajnim padom aktivnosti. Zamena germinalnog dimetila sa cikloheksilnom grupom pružila je jedinjenje koje je bilo slično potentno kao jedinjenje olova, međutim izgubilo je aktivnost u testovima ćelija.

1

[0471] Ispitivana su jedinjenja za koja je pirazol zamenjen ili supstituisan u metil grupi.

Uklanjanje metil grupe iz pirazola dovodi do jedinjenja koje ima uporedivu potenciju sa jedinjenjem olova koje ukazuje da metil grupa nije vitalna za aktivnost. Zamena metila sa većim alkilnim grupama, kao što je etil, izo-propil, i terc-butil pokazuju trend smanjenja aktivnosti kada se grupa povećava u veličini. Ovo se može objasniti kristalnom strukturom jer na tom položaju postoji mali džep koji se može iskoristiti za supstituciju, čime se povećava veličina do etila, ali dalje povećanje rezultuje negativnim interakcijama. Fenilna zamena rezultuje padom potencije i smanjenjem aktivnosti u ćelijskim testovima. Pirazol koji sadrži trifluorometil, dok je slično potentan na jedinjenje olova u primarnom testu, pokazuje značajno poboljšanje u testovima ćelija, verovatno zbog povećanja propustljivosti. Zamena pirazola sa oksazolom ili fenilom daje jedinjenja sa ograničenom aktivnošću.

[0472] Mikrosomalna stabilnost određenih jedinjenja je loša. Izgleda da je benzilski položaj sklon oksidaciji. Kao što je ranije pomenuto, aromatizovani analog pogodne supstance je neaktivan. Pošto naš primarni način metabolizma verovatno dovodi do aromatizovanih proizvoda, jedinjenja su sintetisana da blokiraju ovo mesto metabolizma. Kako bi se testiralo da li je P450 posredovana hidroksilacija benzilskog položaja ključna za loš profil metaboličke stabilnosti serije, jedinjenje u kom je vodonik na benzilskom položaju bio zamenjen deuterijumom je sintetizovano u pokušaju da potencijalno iskoristi prednost sekundarnog izotopa i pruži analog sa poboljšanom metaboličkom stabilnošću. Zamena deuterijuma pruža jedinjenje koje je imalo sličnu aktivnost u odnosu na jedinjenje udarac, međutim, nije bilo poboljšanja u mikrosomalnoj stabilnosti. Kristalna struktura je pokazala da se supstitucija u benzilnom položaju sa metil grupom može tolerisati, npr., Jedinjenje 67 je pokazalo poboljšanu mikrosomalnu stabilnost (6% do 32%) i takođe nije rezultovalo gubitkom potencijala protiv GSK3, međutim ovo jedinjenje nije pokazalo aktivnost u testovima ćelija. Budući napori će biti usmereni na jedinjenja koja imaju metil u benzilnom položaju sa poboljšanom aktivnošću ćelija.

[0473] Na osnovu rezultata zamene fenila i pirazola prikazanog u Tabeli 2, sintetisano je nekoliko hibridnih jedinjenja. Zamena metila na pirazolu pogođenog jedinjenja sa trifluorometilom dovodi do povećanja potencije u primarnom testu i aktivnosti u testovima ćelija, što ukazuje da je trifluorometil koristan za ćelijsku permeabilnost. Mono- ili di-

1

supstitucija fenila sa fluoro i trifluorometil grupama, dovodi do jedinjenja koja, iako su jaka u primarnom testu, gube aktivnost u testovima baziranim na ćelijama.

[0474] Rezultati iz Tabele 2 pokazali su da je jedan enantiomer u racemskim smešama jedinjenja odgovoran za posmatranu aktivnost koja je zatim objašnjena vezivanjem aktivnog enantiomera u kristalnoj strukturi, tako da je izvršeno razdvajanje enantiomera nekoliko jedinjenja. Za ova jedinjenja, otkriveno je da je enantiomer gde je arilna grupa „dole“ kao što je prikazano u strukturama ispod je tipično jači za GSK3β.

Hemijska karakterizacija Jedinjenja 54

[0475] Jedinjenje 54 je analizirano pomoću UPLC,<1>H i<13>C NMR spektroskopije, i masene spektrometrije visoke rezolucije. Podaci dobijeni iz NMR i masene spektroskopije bili su u skladu sa strukturom Jedinjenja 54 (podaci nisu prikazani), i UPLC ukazuje na izolovanu čistoću >95%.

[0476] Rastvorljivost Jedinjenja 54 je eksperimentalno određena da iznosi 85 µM u rastvoru fosfatom puferisanom fiziološkom rastvoru (PBS, pH 7,4, 23°C). Vezivanje proteina plazme (PPB) određeno je da iznosi 93% vezano u ljudskoj plazmi. Jedinjenje 54 je stabilno u ljudskoj plazmi, sa približno 97% preostalog nakon 5-časovnog perioda inkubacije.

Otkriveno je da je jedinjenje stabilno u glutationu (GSH) sa 99% koji ostaje posle 48 sati.

1

[0477] Stabilnost Jedinjenja 54 u PBS (0,1% DMSO) je merena tokom 48 sati. Koncentracija Jedinjenja 54 stalno se povećavala tokom 48 sati na oko 200% (podaci nisu prikazani). Bez želje da se veže za teoriju, veruje se da je postepeno povećanje koncentracije direktan rezultat više rastvaranja jedinjenja u PBS tokom vremena. Drugim rečima, PBS test stabilnosti je izveden u preporučenim uslovima, kinetička rastvorljivost Jedinjenja 54 je merena u PBS, i nije njegova stabilnosti. Prema tome, ukupna količina Jedinjenja 54 koja je prisutna u komoricama nakon što je jedinjenje tretirano samo sa PBS, određivana je za dato vreme. Acetonitril je dodat u različitim vremenskim tačkama u komorice koje sadrže Jedinjenje 54 u PBS, i izmerena je ukupna količina jedinjenja. Ovaj rezultat je prikazan na Slici 1. Iz ovih rezultata, čini se da je Jedinjenje 54 stabilno u PBS, pošto je više od 95% još uvek prisutno nakon 48 sati inkubacije.

Dodatna analitička analiza

[0478] Otkriveno je da je Jedinjenje 5493% i 91% vezano za ljudsku i mišju plazmu respektivno, i stabilno u ljudskoj i mišjoj plazmi sa 97% i 99% preostale količine nakon 5 sati. Pogodno jedinjenje, racemska sonda i sedam analoga su podvrgnuti mikrosomima miša za analizu stabilnosti (Tabela 3). Otkriveno je da je racemska sonda nestabilna kod mikrosoma miša sa <1% koji ostaje posle 1 sata. Svi drugi analozi koji su bili nesupstituisani u benzilnom položaju imali su <7% preostale količine nakon 1 sata, što ukazuje da je primarna metabolička odgovornost benzil položaja. Supstitucija na benzil položaju sa metilnom grupom rezultuje sa 32% jedinjenja koje ostaje posle 1 sata. Dalja jedinjenja sa supstitucijom u benzilnom položaju mogu dati povećanu potenciju uz održavanje ili poboljšanje ovog dobitka metaboličke stabilnosti.

Tabela 3: Rastvorljivost, vezivanje proteina, stabilnost plazme i mikrosomalna stabilnost odabranih jedinjenja.

1

Sve vrednosti su prosek od najmanje dva ponavljanja

Ćelijska aktivnost

[0479] GSK3β je konstitutivno aktivan i često služi kao negativni regulator ćelijske signalizacije. Inhibicija GSK3β uklanja ovu negativnu regulaciju koja rezultuje aktivacijom različitih ćelijskih puteva. Mnogi proteini, uključujući beta-katenin u Wnt signalnom putu i Tau protein u dinamici mikrotubula, podložni su GSK3β fosforilaciji. Specifično, GSK3β direktno fosforiliše Tau protein na Ser199 i modulira Tau samo-montažu. Hiperfosforilacija Tau je uključena u patofiziologiju Alchajmerovog poremećaja. Beta-katenin je fosforilisan sa GSK3βin N-terminalnog regiona i ova fosforilacija obeležava protein za degradaciju.

Akumulacija beta-katenina nakon GSK3β inhibicije translocira se u nukleus i aktivira gene koje pokreće TCF/LEF promoter u kanonskom Wnt putu. Tau i β-katenin su izabrani kao dva nezavisna supstrata za procenu GSK3β inhibicije u tri ćelijska testa:

1) Proceniti količinu Tau-fosforilacije (Ser199) u SH-SY5Y ćelijama nakon GSK3β inhibicije (AID 624057);

2) Proceniti količinu nuklearne akumulacije beta-katenina nakon inhibicije GSK3β u ćelijama U2OS (AID 624086) i naknadne aktivacije TCF/LEF povećanjem nuklearnog beta-katenina u HEK293 ćelijama (AID 624088).

[0480] Mono supstitucija na fenil grupi je istražena, i neka enzimatski aktivna jedinjenja su dalje procenjena u ćelijskim testovima. Hloro-, metoksi i trifluorometil supstitucija na 2-položaju fenil grupe koja je generisala jedinjenja sa <1 µM IC50u enzimskim testovima, i bili su aktivni u inhibiranju Tau-fosforilacije (IC50<10 µM) pomoću GSK3β.3-supstitucija sa trifluorometil grupom na fenilnom prstenu je takođe aktivni fosfo-Tau test. Ova jedinjenja su bila slično aktivna u testu beta-katenin nuklearne translokacije i TCF/LEF reporterskom testu sa IC50između 5 i 25 µM.

1 1

[0481] Na osnovu 2-metoksi na fenilnom prstenu, istraživane su supstitucije na pirazolu. Trifluorosupstitucija na pirazolu imala je najbolju ćelijsku aktivnost unutar serije, sa submikromolarnom (0,48 µM) IC50u p-Tau ELISA, i EC50u TCF/LEF reporter testu <10 µM.

[0482] Trifluorna supstitucija na pirazolu je fiksirana i supstitucija na fenilnom prstenu je dalje procenjena u enzimatskim i ćelijskim testovima, i otkriveno je da 2-metoksi na fenilnom prstenu ima superiorni profil ćelijske aktivnosti.

[0483] Kao što se očekivalo, otkriveno je da su enzimski aktivni enantiomeri aktivni u ćelijama. Dok Jedinjenje 47, Jedinjenje 50 i Jedinjenje 51 imaju slične enzimske aktivnosti, Jedinjenje 50 je pokazalo smanjenu selektivnost protiv CDK5. Jedinjenje 54 je izabrano kao sonda zbog svoje odlične potencije i selektivnosti.

[0484] Rezultati Tau, β-Katenin i TCF/LEF testova prikazani su u Tabeli 4 i na Slikama 14A do 14B.

Tabela 4. Rezultati iz primernih Tau, β-Katenin i TCF/LEF testova.

1 2

1

14

Testovi profilisanja

[0485] Široka selektivnost kinoma. Ključna komponenta za generisanje korisne sonde za određivanje uloge GSK3β u CNS-u je učvršćivanje selektivnosti dejstva. Na Slici 5 su ilustrovani grafici koji prikazuju procenat kinoma koji je inhibiran od strane svakog ispitivanog jedinjenja. Kao što je pokazano, CHIR99021 je veoma niske selektivnosti u poređenju sa ovde opisanim pirazolodihidropiridinima. HTS udarac (Jedinjenje) 1 pokazuje odličnu funkcionalnu selektivnost prema ovom panelu od 311 kinaza, inhibirajući samo 5 kinaza kao što je ranije opisano. Dva druga jedinjenja ispitana na ovaj način (Jedinjenje 22 and Jedinjenje 54) pokazali su slične impresivne oznake selektivnosti, inhibirajući samo 2,3 i 2,6% kinoma (311 kinaza), respektivno, sa značajno poboljšanim potencijama koje se razmatraju u sledećem odeljku.

[0486] Određivanje apsolutne selektivnosti. Drugi graničnik koji se koristi u dolasku do Jedinjenja 54 je apsolutna selektivnost kod IC50svakog jedinjenja protiv ciljane kinaze (npr., GSK3β) i sledećeg najbližeg anti-cilja. U tri gorenavedena slučaja (Jedinjenje 1, Jedinjenje 22 i Jedinjenje 54) izbor sa kojim jedinjenjem treba nastaviti dalje postaje veoma jasan kada se posmatraju ove vrednosti. Ilustrovana ispod (Tabela 5) su IC50određivanja za dva od ovih jedinjenja protiv izabranih kinaza koje su inhibirane više od 50% u koncentraciji od 10 µM.

[0487] Korišćenje apsolutnog merenja umesto opšteg profila selektivnosti omogućava zaključak da je Jedinjenje 54 mnogo selektivnije od Jedinjenja 22 (faktor selektivnosti od 150 u poređenju sa 23 u odnosu na CDK5, kinazu inhibiranu sa najvećim % pri 10 µM). Faktor selektivnosti u ovom slučaju se određuje upoređivanjem IC50jedinjenja u odnosu na GSK3β, u odnosu na druge konkurentne kinaze. O pitanju selektivnosti detaljnije se govori u odeljku za diskusiju.

1

Farmakokinetika i distribucija u mozgu jedinjenja 70

[0488] Jedna intraperitonealna doza jedinjenja 70 (struktura prikazana na Slici 10) ili CHIR99021 su primenjene muškim C57BL/6 miševima pri 30 mg/kg ili 12,5 mg/kg, respektivno. Farmakokinetika (npr, koncentracija u plazmi i distribucija u mozgu) jedinjenja 70 i CHIR99021 su mereni posle doze u različitim vremenskim tačkama (do oko 8 sati). Rezultati (prikazani na Slici 10) pokazuju da, u poređenju sa jedinjenjem CHIR99021, jedinjenje 70 pokazuje poboljšani farmakokinetički profil, kao što je sistemska izloženost i distribucija u mozgu.

Jedinjenje 70 indukuje morfološke promene u AML ćelijskim linijama u skladu sa mijeloidnom diferencijacijom

[0489] Tri dana posle hemijskog tretmana, izvedeni su preparati citospina. Promene u morfologiji ćelija su procenjene pomoću May-Grunwald Giemsa bojenja (Sigma Aldrich). Slike su dobijene svetlosnom mikroskopijom pri uvećanju od 400X. Rezultati su pokazali da je May-Grunwald Giemsa bojenje AML ćelijskih linija tri dana nakon tretmana sa jedinjenjem 70 pokazalo ćelijsku diferencijaciju u poređenju sa kontrolama koje su tretirane nosačem (Slika 12).

Jedinjenje 70 indukuje potpisivanje eksprimiranja gena u AML ćelijskim linijama u skladu sa mijeloidnom diferencijacijom

[0490] GE-HTS je sproveden korišćenjem prethodno opisanih postupaka za procenu potpisa eksprimiranja sastavljenog od gena koji razlikuju AML od neutrofilnog ili monocitno diferenciranog stanja (Banerji V, Frumm SM, Ross KN, Li LS, Schinzel AC, Hahn CK, Kakoza RM, Chow KT, Ross L, Alexe G, Tolliday N, Inguilizian H, Galinsky I, Stone RM, DeAngelo DJ, Roti G, Aster JC, Hahn WC, Kung AL, Stegmaier K. The intersection of genetic and chemical genomic screens identifies GSK-3alpha as a target in human acute myeloid leukemia. J Clin Invest.2012;122:935-947; Hahn CK, Berchuck JE, Ross KN, Kakoza RM, Clauser K, Schinzel AC, Ross L, Galinsky I, Davis TN, Silver SJ, Root DE, Stone RM, DeAngelo DJ, Carroll M, Hahn WC, Carr SA, Golub TR, Kung AL, Stegmaier K. Proteomic and genetic approaches identify Syk as an AML target. Cancer Cell.2009;16:281-294). 32 marker gena za mijeloidnu diferencijaciju izabrana su korišćenjem prethodno objavljenih skupova podataka vezanih za AML-povezane setove podataka (Stegmaier K, Ross KN, Colavito SA, O'Malley S, Stockwell BR, Golub TR. Gene expression-based highthroughput screening(GE-HTS) and application to leukemia differentiation. Nat Genet.

1

2004;36:257-263). Pomoću t-testa pokazalo se da ovi geni prave razliku između AML i neutrofila ili monocita sa p <0,05, i da prave razliku između nediferenciranih u odnosu na HL-60 diferencirane sa ATRA, Phorbol 12-miristat 13-acetat, ili 1,25-dihidroksivitamin D3 sa p <0,05. Ovaj test koristi amplifikaciju posredovanu ligacijom sa sistemom detekcije na bazi fluorescentne kuglice za kvantifikaciju eksprimiranja do 500 gena u jednoj komorici. Za kvantifikaciju indukcije 32-genskog potpisa mijeloidne diferencijacije koriste se dva primarnapostupka ocenjivanja. Zbirni rezultat kombinuje odnos eksprimiranja (marker gen/kontrolni gen) tako što ih sabira sa znakom koji je određen očekivanim pravcem regulacije od ATRA-tretiranih pozitivnih kontrola. Ponderisani zbirni rezultat kombinuje proporcije eksprimiranja tako što ih sabira sa ponderom i znakom koji je određen odnosom signal-šum za svaki odnos eksprimiranja za uzorke pozitivne kontrole (tretirane sa ATRA) i negativne kontrole (tretirane sa DMSO). Kako bi se procenila statistička značajnost razlika između ovih rezultata diferencijacije upotrebljena je jednosmerna ANOVA sa Bonferroni korekcijom kao post-hoc test. Rezultati pokazuju da je jedinjenje 70 indukovalo je potpisivanje eksprimiranja gena u AML ćelijskim linijama u skladu sa mijeloidnom diferencijacijom (Slike 13A i 13B).

Diskusija

[0491] Počevši od udarca od HTS-a, SAR od četiri regiona molekula je ispitan kroz sintezu višestrukih jedinjenja, benzil položaj, pirazol grupu, fenil prsten i prsten izveden od diketona na zapadnom delu molekula vođen analizom kristalne strukture (pogledati Sliku 4).

Supstitucija na benzil položaju sa metil grupom je tolerisana. Oksidacija centralnog prstena dovela je do gubitka aktivnosti. Modifikacije pirazola su tolerisane, kao što je supstitucija sa trifluorometil grupom. Kroz SAR od fenilnog prstena, otkriveno je da su jedinjenja koja imaju supstituciju na položaju 2 ili 3 posebno aktivna. Supstitucija sa heteroaromatima je tolerisana. Otkriveno je da jedinjenja sa supstitucijom na položaju 4 pokazuju neku aktivnost. Otkriveno je da je jedinjenje koje ima trifluorometil ili metoksi supstituciju na položaju 2 ili 3 posebno aktivno u ćelijama. Jedinjenje 54 je identifikovano kao mnogo jače od jedinjenja udarca, naročito u ćelijskim testovima u kojima je jedinjenje udarac bilo slabo aktivno.

[0492] Sve u svemu, podaci podržavaju identifikaciju potentne (npr., IC50= 0,02 µM) sonde (Jedinjenje 54) koja inhibira GSK3 i selektivna je protiv 309 drugih kinaza sa više od 150-ostrukom selektivnosti (vida infra). Za Jedinjenje 54 je otkriveno da je aktivno u tri različita

1

testa ćelija koji pokazuju sposobnost jedinjenja da inhibira GSK3 u različitim ćelijskim kontekstima.

Prednosti u odnosu na prethodno obelodanjene inhibitore

[0493] Postoje i drugi inhibitori GSK3β; međutim, za ova jedinjenja koja su testirana u odnosu na druge kinaze je otkriveno da im nedostaje selektivnosti (Leclerc, i dr. J Biol Chem, 2001; 276: 251-260; Meijer, i dr. Chem Biol, 2003; 10:1255-1266; Polychronopoulos, i dr. J Med Chem, 2004; 47:935-946; Leost, i dr. Eur J Biochem, 2000; 267:5983-5994; Chang, i dr. Chem Biol, 1999; 7:51-63). Kinaze koje najčešće inhibiraju jedinjenja su ciklin-zavisne kinaze (CDK), na koje je GSK3 najbliže povezan. Profili selektivnosti su upoređeni sa prethodno postojećim inhibitorima GSK3, kao što je CHIR 99021 (Slika 6). CHIR 99021 je testiran na skriningu protiv >300 kinaza koje potvrđuju da jedinjenje inhibira CDK2 zajedno sa mnogim drugim kinazama uključujući CDK5, CDK9, LIMK1, CLK1, PLK1, ERK5 pri više od 50% na 10 µM. Poređenje aktivnosti i fizičkih svojstava Jedinjenja 54 i CHIR 99021 je prikazano u Tabeli 6 i poređenje aktivnosti Jedinenja 54 sa profilom kinaze od CHIR 99021 prikazano je u Tabela 7. Kao što se može pogledati u tabelama ispod, Jedinjenje 54 pokazuje sličnu jačinu u odnosu na CHIR 99021 u svim testovima, dok pokazuje značajno veću selektivnost u odnosu na kinome. Dalje, na osnovu mikrosomalnih podataka u Tabela 3,razvoj GSK3 inhibitora ove klase sa mikrosomalnom stabilnošću i potencijom je obećavajuć, što omogućava in vivo studije koje nisu moguće sa CHIR 99021 zbog loših fizičkih svojstava. U poređenju sa GSK3 inhibitorima poznatim u struci, opisana jedinjenja su stabilnija u mikrosomima i pokazuju poboljšane farmakokinetičke i/ili profile selektivnosti.

Tabela 6. Poređenje aktivnosti i fizičkih svojstava CHIR99021 i Jedinjenja 54.

1

Tabela 7. Poređenje CHIR 99021 Kinaznog profila i Jedinjenja 54 (% Inhibicije na 10 µM).

Mehanizam ispitivanja delovanja

[0494] Jedinjenje 54 pokazuje inhibitorne karakteristike koje su u skladu sa time da je ATP-kompetitivni inhibitor. IC50su mereni na GSK3β pri dve različite koncentracije ATP. U poređenju sa IC50od 24 nM ri 7 µM ATP, IC50Jedinjenja 54 pri 100 µM od ATP je povećan na 143 nM, što ukazuje na ATP-kompetitivnu inhibiciju.

[0495] Ćelijski, inhibicija GSK3β od strane Jedinjenja 54 uklanja negativnu regulaciju dva važna signalna puta u dinamici mikrotubula i Wnt signalizaciji. Beta-katenin u Wnt putu i Tau protein u dinamici mikrotubula, podložni su GSK3β fosforilaciji. GSK3β je konstitutivno aktivan i često služi kao negativni regulator ćelijske signalizacije. Specifično, inhibicija

1

GSK3β inhibira fosforilaciju Tau proteina, i inhibicija fosforilacije beta-katenina sprečava degradaciju b-katenina, promoviše njegovu nuklearnu translokaciju i zatim aktivira TCF/LEF reporter. Kao takvo, ovo jedinjenje i drugi opisani ovde bi bili odlični alati za istraživanje putanje Wnt kao i sonde za dinamiku mikrotubula u ćelijama i potencijalno kod životinja.

[0496] Jedinjenja 22 i 54 su testirana u ćelijskim testovima, uključujući kao sredstvo za ispitivanje GSK/Wnt molekularnih puteva in vitro upotrebom ljudskih i glodarskih neuralnih progenitorskih ćelija kako bi se odredila njihova sposobnost da promovišu neurogenezu. Kroz upotrebu indukovanih pluripotentnih matičnih ćelija-neuralnih progenitorskih ćelija (iPSC-NPC) od pacijenata sa neuropsihijatrijskim poremećajima, kao što su bipolarni poremećaji i šizofrenija, ispitano je da li postoje razlike u odgovoru na modulatore GSK3. Ovo je omogućilo određivanje uloge disregulisane GSK3 signalizacije u osnovnim patologijama. Ono što je takođe određeno je efekat selektivne GSK3 inhibicije na ćelije koje imaju genetičku varijaciju u DISCI kako bi razumele ulogu DISC1/GSK3 signalizacije u patofiziologiji neuropsihijatrijskih poremećaja.

Test neurogeneze

[0497] Ćelije ljudskih neuroprogenitora su generisane i izvedene prema postupcima poznatim u struci. Pogledati, npr., Zhao i dr., J Biomol Screen.2012 Oct;17(9):1252-63. Suspenzije sa jednom ćelijom su pripremljene iz ljudskih iPSC-NPC, stabilno integrisane sa reporterom TCF/LEF-luciferaze, i raspodeljene u ploče sa 96 ili 384 komorica pri gustinama sejanja od 20,000 ili 6,000 po komorici, koristeći Matrix WellMate (Thermo Scientific) dozer mikroploče. Za merenje Wnt3a i litijuma (rastvor litijum-hlorida, 10 M; Fluka, St. Louis, MO) primenjen je format ploče sa 96-komorica, dok je za sve tretmane sonde i hemijski skrining malih molekula korišćen format ploče od 384 komorica. Sledećeg dana, ćelije su podvrgnute različitim 24-časovnim tretmanima. Neposredno pre očitavanja luminescencije, ploče su izvađene iz inkubatora od 37°C i ekvilibrirane na sobnu temperaturu tokom 30 minuta pre nego što je rastvoren SteadyGlo reagens (Promega, Madison, WI) (zapremina jednaka 1:1 SteadyGlo:medijum kulture). Luminescencija je merena posle 10-minutne inkubacije upotrebom EnVision čitača ploča sa više oznaka (PerkinElmer, Waltham, MA). Primeri rezultata su prikazani na Slici 15, što ukazuje da je Jedinjenje 22 promovisalo neurogenezu.

[0498] Ovde opisana jedinjenja takođe mogu biti testirana in vivo, kao što je testiranje efekta selektivnih GSK3 inhibitora na mišje modele za neuropsihijatrijske poremećaje, kao što je

1

model hiperaktivnosti indukovane amfetaminom (AIH) za maniju i test prisilnog plivanja i testovi naučene bespomoćnosti za depresiju.

Ekvivalenti i opseg

[0499] U patentnim zahtevima, oblici množine mogu označavati i množinu. Patentni zahtevi ili opisi koji uključuju „ili“ između jednog ili više članova grupe smatraju se ispunjenim ako su jedan, više od jednog, ili svi članovi grupe prisutni, upotrebljeni u, ili na drugi način relevantni za dati proizvod ili proces, ukoliko nije naznačeno suprotno ili na drugi način vidljivo iz konteksta. Pronalazak obuhvata otelotvorenja u kojima je tačno jedan član grupe prisutan u, upotrebljen u, ili na drugi način relevantan za dati proizvod ili proces. Pronalazak obuhvata otelotvorenja u kojima je prisutno više od jednog člana, ili su svi članovi grupe, upotrebljeni u, ili na drugi način relevantni za dati proizvod ili proces.

[0500] Ova prijava se odnosi na različite objavljene patente, objavljene patentne prijave, članke iz časopisa i druge publikacije. Ako postoji sukob između bilo koje reference i trenutne specifikacije, specifikacija ima prednost. Pored toga, bilo koje posebno otelotvorenje ovog pronalaska koja spada u stanje tehnike može biti eksplicitno isključena iz bilo kog ili više patentnih zahteva. Zbog toga što se smatra da su takva otelotvorenja poznata stručnjaku u ovoj oblasti, ona mogu biti isključene čak i ako isključenje nije izričito ovde navedeno. Bilo koje posebno otelotvorenje pronalaska može biti isključeno iz bilo kog patentnog zahteva, iz bilo kog razloga, bez obzira na to da li se odnosi na postojanje prethodnog stanja tehnike ili ne.

1 1

Claims (26)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule I:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: R<1>i R<2>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<1>i R<2>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen, karbociklični ili heterociklični prsten, gde prsten formiran od strane R<1>i R<2>je opciono fuzionisan do aril ili heteroaril prstena; R<3>je izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, -C(=O)SR<A>, - C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)N(R<B>)2, - NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, -NR<B>C(=NR<B>)R<B>, - C(=S)R<A>, - C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, -NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2; svaki R<A>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; svaki R<B>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan karbociklil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril, ili su dve R<B>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan heterociklični prsten; R<4a>i R<4b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<4a>i R<4b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen, karbociklični ili heterociklični prsten; R<5a>i R<5b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<5a>i R<5b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen, karbociklični ili heterociklični prsten; i R<6a>i R<6b>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, -OR<A>, -N(R<B>)2, i opciono supstituisan alifatik, ili R<6a>i R<6b>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan 3- do 7-člani zasićen, karbociklični ili heterociklični prsten; gde svaka pojava arila ima nezavisno 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i gde je svaka pojava heteroarila nezavisno 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima nezavisno 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor; gde oblici jednine mogu značiti jedan ili više od jednog; i uz uslov da jedinjenje nema formule:
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima formulu II:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde u formula II: R<2>, R<3>, R<5a>, i R<5b>su kako je definisano u patentnom zahtevu 1; svaki R<7>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, - NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, - C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, - OC(=O)N(R<B>)2, - NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, - 1 NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>, - C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, - NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2; ili su dve susedne R<7>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan, karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; ili R<2>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan, karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; i n je 0, 1, 2, 3, 4, ili 5; ili gde jedinjenje ima formulu III:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde u formula III: R<2>, R<3>, R<5a>, i R<5b>su kako je definisano u patentnom zahtevu 1; Prsten A je 5- do 6-člani heteroaril, 4- do 6-člani karbociklil, ili 4- do 6-člani heterociklil; svaki R<7>je nezavisno izabran iz grupe koju čine vodonik, halo, -CN, - NO2, opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan fenil, opciono supstituisan heterociklil, opciono supstituisan heteroaril, -OR<A>, -N(R<B>)2, -SR<A>, -C(=O)R<A>, -C(=O)OR<A>, - C(=O)SR<A>, -C(=O)N(R<B>)2, -OC(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)R<A>, -NR<B>C(=O)N(R<B>)2, - OC(=O)N(R<B>)2, - NR<B>C(=O)OR<A>, -SC(=O)R<A>, -C(=NR<B>)R<A>, -C(=NR<B>)N(R<B>)2, - NR<B>C(=NR<B>)R<B>, -C(=S)R<A>, - C(=S)N(R<B>)2, -NR<B>C(=S)R<A>, -S(=O)R<A>, -SO2R<A>, - NR<B>SO2R<A>, i -SO2N(R<B>)2; ili su dve susedne R<7>grupe uzete zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirale opciono supstituisan, karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; ili R<2>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan, karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; i n je 0, 1, 2, 3, ili 4, kako valenca dozvoljava.
3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, gde jedinjenje ima formulu II-a: 1 4

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde u formula II-a: R<3>, R<5a>, R<5b>, R<7>, i n su kako je definisano u patentnom zahtevu 2; i R<2'>je izabran iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<2'>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan, karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; gde aril ima 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i gde heteroaril je 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor; na primer, gde jedinjenje formule II-a je jedinjenje formule II-a-i ili II-a-ii:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, gde jedinjenje formule III ima formulu III-a:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde u formuli III-a: Prsten A, R<3>, R<5a>, R<5b>, R<7>, i n su kako je definisano u patentnom zahtevu 2; i 1 R<2'>je izabran iz grupe koju čine opciono supstituisan alifatik, opciono supstituisan aril, i opciono supstituisan heteroaril; ili R<2'>i R<7>su uzeti zajedno sa svojim intervenišućim atomima kako bi formirali opciono supstituisan, karbociklični ili heterociklični, fuzionisani prsten; gde aril ima 6 do 14 atoma ugljenika prstena; i gde heteroaril je 5- do 10-člani, i monociklični ili biciklični, i ima 1 do 4 heteroatoma prstena nezavisno izabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik, i sumpor; na primer, gde je jedinjenje formule III-a jedinjenje koje ima formulu III-a-i ili III-a-ii:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<3>vodonik ili fluoro.
6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<3>opciono supstituisan alifatik.
7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 6 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<3>je metil; ili gde je R<3>trifluorometil.
8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 6 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je R<3>etil, n-propil, izopropil, ili terc-butil.
9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<2>ili R<2'>opciono supstituisan alifatik.
10. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 9 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<2>ili R<2'>metil. 1
11. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 9 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<2>ili R<2'>etil ili propil.
12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde su R<5a>i R<5b>metil.
13. 13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima formulu:

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima formulu:

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 1
15. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima formulu:

    1

    �

    �

    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 11
16. 16. Sastav koji sadrži jedno ili više jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1-14, ili jednu ili više njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.
17. 17. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili sastav prema patentnom zahtevu 16 za upotrebu u inhibiranju glikogen sintaze kinaze 3 (GSK3) ili kazein kinaze 1 (CK1), poželjno gde je GSK3 u ćeliji; ili poželjno gde je CK1 u ćeliji; ili poželjno gde CK1 jeste CK1δ.
18. 18. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili sastav prema patentnom zahtevu 16, za upotrebu u tretmanu poremećaja posredovanog glikogen sintaza kinazom 3 (GSK3) ili poremećaj posredovan kazein kinazom 1 (CK1).
19. 19. Jedinjenje za upotrebu, farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu, ili sastav za upotrebu prema patentnom zahtevu 17 ili 18, gde je GSK3 glikogen sintaza kinaza 3α (GSK3α).
20. 20. Jedinjenje za upotrebu, farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu, ili sastav za upotrebu prema patentnom zahtevu 17 ili 18, gde je GSK3 glikogen sintaza kinaza 3β (GSK3β).
21. 21. Jedinjenje za upotrebu, farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu, ili sastav za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, gde je poremećaj posredovan sa GSK3: - poremećaj posredovan glikogen sintaza kinazom 3β (GSK3β); ili - neurološka bolest, na primer, neurodegenerativna bolest, kao što je traumatska povreda mozga, Parkinsonova bolest, Huntington-ova bolest, Alchajmerova bolest, frontotemporalna demencija, amiotrofična lateralna skleroza (ALS), progresivna supranuklearna paraliza ili kortikobazalna degeneracija; ili - psihijatrijski poremećaj; na primer, bipolarni poremećaj, šizofrenija, depresija ili posttraumatski stresni poremećaj; ili - poremećaj raspoloženja; ili - dijabetes tipa II.
22. 22. Jedinjenje za upotrebu, farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu, ili sastav za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, gde je poremećaj posredovan sa GSK3: 1 2 - poremećaj posredovan glikogen sintaza kinazom 3α (GSK3α); ili - psihijatrijski poremećaj; na primer, autizam ili Fragile X sindrom; ili - rak; ili - leukemija; ili - akutna mijeloidna leukemija; ili - rak glioma ili pankreasa; ili - dijabetes tipa II; ili gde CK1 jeste CK1δ, poželjno kad je poremećaj posredovan sa CK1δ hiperkinetički poremećaj (ADHD).
23. 23. Jedinjenje za upotrebu, farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu, ili sastav za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, gde je poremećaj posredovan sa GSK3 akutna limfocitna leukemija, hronična mijelocitna leukemija, hronična limfocitna leukemija ili multipli mijelom.
24. 24. Sastav koji sadrži najmanje jedno jedinjenje prema patentnom zahtevu 15, ili najmanje jednu njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
25. 25. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 15, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili sastav prema patentnom zahtevu 24 za upotrebu u tretmanu poremećaja posredovanog glikogen sintaza kinazom 3 (GSK3) ili poremećaja posredovanog kazein kinazom 1 (CK1).
26. 26. Jedinjenje za upotrebu, farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu, ili sastav za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 25, gde: GSK3 je glikogen sintaza kinaza 3α (GSK3α); ili GSK3 je glikogen sintaza kinaza 3β (GSK3β); ili poremećaj posredovan sa GSK3 je: - poremećaj posredovan glikogen sintaza kinazom 3β (GSK3β); ili - neurološka bolest, na primer, neurodegenerativna bolest, kao što je traumatska povreda mozga, Parkinsonova bolest, Huntington-ova bolest, Alchajmerova bolest, frontotemporalna demencija, amiotrofična lateralna skleroza (ALS), progresivna supranuklearna paraliza ili kortikobazalna degeneracija; ili 1 - psihijatrijski poremećaj; na primer, bipolarni poremećaj, šizofrenija, depresija, posttraumatski stresni poremećaj, autizam ili Fragile X sindrom; ili - poremećaj raspoloženja; ili - dijabetes tipa II; ili - poremećaj posredovan glikogen sintaza kinazom 3a (GSK3α); ili - rak; ili - leukemija; ili - akutna mijeloidna leukemija; ili - rak glioma ili pankreasa; ili - akutna limfocitna leukemija, hronična mijelocitna leukemija, hronična limfocitna leukemija ili multipli mijelom; ili CK1 jeste CK18, poželjno kad je poremećaj posredovan sa CK1δ hiperkinetički poremećaj (ADHD). 1 4