RS59040B1 - Supstituisani biciklični dihidropirimidinoni i njihova primena kao inhibitori aktivnosti neutrofilne elastaze - Google Patents

Supstituisani biciklični dihidropirimidinoni i njihova primena kao inhibitori aktivnosti neutrofilne elastaze

Info

Publication number
RS59040B1
RS59040B1 RS20190942A RSP20190942A RS59040B1 RS 59040 B1 RS59040 B1 RS 59040B1 RS 20190942 A RS20190942 A RS 20190942A RS P20190942 A RSP20190942 A RS P20190942A RS 59040 B1 RS59040 B1 RS 59040B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
formula
compound
inhibitors
acid
Prior art date
Application number
RS20190942A
Other languages
English (en)
Inventor
Thorsten Oost
Ralf Anderskewitz
Christian Gnamm
Holger Hoesch
Gerd Morschhaeuser
Stefan Peters
Uwe Joerg Ries
Original Assignee
Boehringer Ingelheim Int
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim Int filed Critical Boehringer Ingelheim Int
Publication of RS59040B1 publication Critical patent/RS59040B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Ovaj pronalazak se odnosi na supstituisane biciklične dihidropirimidinone formule 1
i njihovu primenu kao inhibitore aktivnosti neutrofilne elastaze, farmaceutske kompozicije koje sadrže isto, i postupke primene istih kao agensi za lečenje i/ili prevenciju plućnih, gastrointestinalnih i genitourinarnih oboljenja, inflamatornih oboljenja kože i očiju i drugih autoimunih i alergijskih poremećaja, alograft odbacivanja, i onkoloških oboljenja.
STANJE TEHNIKE
x Sledeće referenca opisuju inhibitore neutrofilne elastaze sa monocikličnim dihidropirimidinon jezgrom: GB2392910, WO04024700, WO05082864, WO05082863, DE102006031314, US100010024, WO10115548, WO09080199, DE102007061766, WO06136857, WO06082412, WO12002502.
x Sledeće referenca opisuju inhibitore neutrofilne elastaze sa bicikličnim tetrahidropirolopirimidindion jezgrom: WO07129060, WO08135537, US090093477,
WO09013444, WO09060206, WO09060203, WO09060158, US110034433.
x Sledeće referenca opisuju inhibitore neutrofilne elastaze sa strukturama jezgra osim onih gore pomenutih: WO04020412, WO04020410, WO03053930, WO10078953,
WO09135599, DE102009004197, WO11110858, WO11110859, WO09060158,
WO09037413, WO04024701, US130065913, WO13018804, WO12002502, US
2014/0171414, WO14009425, WO2014029831, WO2014029832 i WO2014029830, WO14122160, WO14135414<.>
x Za pregled raznih inhibitora neutrofilen elastaze videti: P. Sjö (Future Med. Chem.
2012, 4, 651-660).
KRATAK PREGLED PRONALASKA
Neutrofil elastaza (NE) je 29 kDa serin proteaza. Iskazana je u pekursor ćelijama koštane srži, smeštena u granulu perifernih granulocita krvi pri visokim koncentracijama i otpušta se nakon ćelijske aktivacije. Supstratima NE pripadaju glavni elementi ekstracelularnog matriksa (ECM): elastin, fibronectin, laminin, kolagen i proteoglikani. Aktivnost neutrofilne elastaze vodi do ECM degradacije, povećane migracije i hemotaksis monocita i vaskularne glatke mišićne ćelije i direktno utiče na komponente koagulacije i fibrinolitičke puteve (PAI-1 i TFPI). Povećana aktivnost neutrofilne elastaze je povezana sa hroničnom inflamacijom i fibroznim oboljenjima nekoliko organa. Potencijal inhibitora neutrofilne elastaze kao antiinflamatorne terapije je razmatran od strane P. A. Henriksen u Current Opinion in Hematology 2014, 21, 23-28. Inhibitori neutrofilne elastaze će stoga imati važnu ulogu u lečenju različitih bolesti kao što su COPD, idiopatska plućna fibroza i druge fibrozne bolesti, rak, akutna povreda pluća, akutni respiratorni distres sindrom, bronhiektazija, cistična fibroza, nedostatak alfa1-antitripsina i drugi.
Problem predmetnog pronaalska jeste da se dobiju nova jedinjenja koja na osnovu njihove farmaceutske efikasnosti kao inhibitora aktivnosti neutrofilne elastaze, se mogu koristiti terapeutski, kao što je lečenje patofizioloških postupaka izazvane povećanom aktivnosti neutrofilne elastaze.
Iznenađujuće je pronađeno da jedinjenja predmetnog pronalaska imaju sledeća svojstva koja su povoljna s obzirom na indikacije ovog pronalaska.
Jedinjenja prema predmetnom pronalaskom, uključujući i fiziološki prihvatljive soli, su efikasna kao inhibitori neutrofilne elastaze i pokazuju povoljnu inhibitornu moć, kao što je određeno polu maksimalnom inhibitornom koncentracijom (IC50), u analizi enzimske inhibicije.
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvatljive soli, su dodatno efikasna kao inhibitori neutrofilne serin proteaze proteinaze 3 i pokazuju povoljni inhibitorni potencijal, kao što je određeno polu maksimalnom inhibitornom koncentracijom (IC50), u analizi enzimske aktivnosti. Ova inhibitorna aktivnost na drugoj neutrofilnoj serin proteazi može biti korisna za farmakološku efikasnost.
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljni inhibitorni potencijal, kao što je određeno polu maksimalnom inhibitornom koncentracijom (EC50), u analizi plazme ili krvi, na prime kao što je opisano u T. Stevens et al. (J. Pharm. Exp. Ther.2011, 339, 313-320).
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljni in vivo potencijal, kao što je određeno, na primer, sa polu maksimalnom efikasnom dozom (ED50), u modelima povrede pluća izazvana humanom neutrofilnom elastazom kod miša ili pacova, na primer kao što je opisano u Tremblay et al. (Chest 2002, 121, 582-588) ili T. Stevens et al. (J. Pharm. Exp. Ther. 2011, 339, 313-320).
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljnu metaboličku stabilnost u in vitro mikrosomalnoj analizi za stabilnost metabolizma kao što je opisano u E. Kerns & L. Di (Drug-like properties: concepts, structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1<st>ed, 2008), poglavlje 29 i reference u njima.
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljnu metaboličku stabilnost u in vitro hepatocitnoj analizi za metaboličku stabilnost kao što je opisano u E. Kerns & L. Di (Drug-like properties: concepts, structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1<st>ed, 2008), poglavlje 29 i reference u njima.
2čekuje se da poboljšana metabolička stabilnost u in vitro test sistemu prevede u smanjenu in vivo jasnoću (CL), jer je metabolička konverzija u jetri smanjena. Na osnovu farmakokinetičke jednačine CL/Foral= Doza / AUC (Foral: oralna biodostupnost, AUC: područje ispod krive), smanjena in vivo jasnoća se očekuje da vodi do visoko dozne normalizacije sistemskog izlaganja (AUC) leku.
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljnu permeabilnost u in vitro Caco-2 ćelijskom slojnom postupku za permeabilnost kao što je opisano u E. Kerns & L. Di (Drug-like properties: concepts, structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1<st>ed, 2008), poglavlje 26 i reference u njemu. Za oralni lek, poboljšana permeabilnost se očekuje da prevodi u više frakcije leka absorbovan u intestinalnom traktu, prema tome, rezultujući u visokom doznom-normalizacijskom sistemskom izlaganju (AUC).
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljno, da je nizak koeficijent isticanja (propusnost u pravcu isticanja podeljena sa propustljivošću u smeru dotoka) u in vitro Caco-2 ili MDCK ćelijksom slojnom postupku kao što je opisano u E. Kerns & L. Di (Drug-like properties: concepts, structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1<st>ed, 2008), poglavlje 26 i 27 i reference u njima. Za oralni lek, poboljšanje, očekuje se da se smanjeni odnos izlaza prevede u veći deo leka koji se apsorbuje u intestinalnom traktu, prema tome, rezultujući u visokom doznom-normalizacijskom sistemskom izlaganju (AUC).
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljnu rastvorljivost u vodi u kinetičkom ili termodinamičkom postupku rastvorljivosti kao što je opisano u E. Kerns & L. Di (Drug-like properties: concepts, 15 structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1<st>ed, 2008), poglavlje 25 i reference u njima. Za oralni lek, očekuje se da će poboljšana rastvorljivost u vodi prevesti u višu frakciju leka koji se apsorbuje u intestinalnom traktu, što dovodi do visokog dozno-normalizacijskog sistemskog izlaganja (AUC) i/ili oralne biodostupnosti (Foral) i/ili pik plazma koncentracije posle primene (Cmax). Pored toga, očekuje se da će poboljšana rastvorljivost u vodi smanjiti rizik od razvojnih izazova, kao što su skupe formulacije, produženo vreme razvoja, visoko opterećenje lekom.
Komparativno visoko dozno-normalizacijsko sistemsko izlaganje (AUC) može biti korisno na nekoliko načina: (1) Ako se za efikasnost mora postići određena sistemska izloženost (AUC), lek se može dozirati u manjoj količini. Niže doze imaju prednosti nižeg opterećenja lekom (roditeljski lek i njegovi metaboliti) za pacijenta koji izaziva potencijalno manje neželjenih efekata i niže troškove proizvodnje za lek. (2) Komparativno visoko doznonormalizacijsko sistemsko izlaganje (AUC) može dovesti do povećane efikasnosti ili produženog trajanja delovanja leka kada se primeni ista doza.
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljnu metaboličku stabilnost, povoljnu permeabilnost i povoljnu rastvorljivost u vodi. Prema tome, od nekih jedinjenja predmetnog pronalaska se očekuje da pokazuju povoljna farmakokinetička (PK) svojstva nakon oralnog doziranja, posebno povoljne sistemske izloženosti (površina ispod krive, AUC), što dovodi do povoljne efikasnosti in vivo.
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljne farmakokinetičke (PK) osobine. PK osobine mogu se odrediti u prekliničkim životinjskim vrstama, na primer miševima, pacovima, hrčcima, psima, zamorcima, malim svinjama, cinomolgus majmunima, resus majmunima. PK osobine jedinjenja se mogu opisati, na primer, sledećim parametrima: Srednje vreme zadržavanja (MRT), eliminacija polu veka (t1/2), obim distribucije (VD), područje ispod krive (AUC), uklanjanje (CL) i biodostupnost posle oralne primene (Foral), pik koncentracije plazme posle primene (Cmax), vreme da se dostigne Cmax (Tmax).
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljnu, to jest, nisku inhibiciju citokrom P450 (CYP) izozima u odgovarajućim in vitro testovima za inhibiciju CYP izozima kao što je opisano u E. Kerns & L. Di (Druglike properties: concepts, structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1<st>ed, 2008), poglavlje 32 i reference u njemu. Smanjena inhibicija CYP izozima ima za očekivanje da se prevede u smanjeni rizik za neželjene interakcije leklek koje predstavljaju interferenciju jednog leka sa normalnim metaboličkim ili farmakokinetičkim ponašanjem istovremeno primenjenog leka.
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljni, niski Cytochrome P450 (CYP) indukcioni potencijal. CYP indukcija može uticati na farmakokinetiku molekula leka nakon višestrukog doziranja, koji rezultuje u neželjenim farmakokinetičkim interakcijama lek-lek sa istovremeno davanim lekovima. CYP indukcija može voditi do smanjene izloženosti indukcionog jedinjenja (npr.
autoindukcija) ili smanjenog izlaganja istovremeno davanog jedinjenja metaboliziran sa indukovanim enzimom. CYP indukcija takođe može voditi do povećanja u metabolizmu leka izazivajući promene u farmakološkom (aktivni metabolit) i toksikološkom (toskični metabolit) ishodu.
Neka jedinjenja prema predmetnom pronalasku, uključujući fiziološki prihvaljive soli, pokazuju povoljnu, nisku, inhibiciju hERG kanala u analizi patch clamp kao što je opisano u E. Kerns & L. Di (Drug-like properties: concepts, structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1<st>ed, 2008), poglavlje 34 i reference koje su navedene u njemu.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Jedinjenje formule 1
,
R<2>je
a R<3>je H;
ili
, R<2>je
a R<3>je CH3;
ili
R<1>je
,
a R<3>je CH3;
ili nejgova farmaceutski prihvatljiva so.
KORIŠûENI TERMINI I DEFINICIJE
Termini koji nisu ovde posebno definisani treba da imaju značenja koja bi im dao stručnjak iz ove oblasti u oblasti pronalaska i konteksta. Kako se koristi u opisu, međutim, ukoliko nije drugačije naznačeno, sledeći termini imaju navedeno značenje i sledeće konvencije se pridržavaju.
U grupama, radikalima ili delovima definisanim u daljem tekstu, broj atoma ugljenika je često određen predviđajući grupu, na primer, C1-6-alkil označava alkil grupu ili radikal koji ima 1 do 6 atoma ugljenika.
Uopšteno u pojedinačnim grupama kao što je HO, H2N, S(O), S(O)2, NC (cijano), HOOC, F3C ili slično, stručnjak može da vidi tačku(e) vezivanja radikala za molekul iz slobodne valence same grupe. Za kombinovane grupe koje sadrže dve ili više podgrupa, poslednji dat naziv podgrupe predstavlja tačku vezivanja radikala, na primer, supstituent "aril-C1-3-alkil-" označava aril grupu koja se vezuje za C1-3-alkil-grupu, ostatak koji je vezan za jezgro ili grupu za koju je supstituent vezan.
U slučaju da je jedinjenje predmetnog pronalaska prikazano u obliku hemijskog naziva i kao formula u slučaju bilo kakvog neslaganja, formula će prevladati. Zvezdica se može koristiti u pod-formulama da označi vezu koja je povezana sa molekulom jezgra kako je definisano.
Na primer, termin "3-karboksipropil-grupa” predstavlja sledeći supstituent:
gde je karboksi grupa vezana za treći atom ugljenika propil grupe. Termini "1-metilpropil-", "2,2-dimetilpropil-" ili "ciklopropilmetil-" grupa predstavljaju sledeće grupe:
Zvezdica se može koristiti u pod-formulama da ukaže na vezu koja je spojena za jezgro molekula kao što je definisano.
Mnogi od sledećih termina mogu biti korišćeni više puta u definiciji formule ili grupe i u svakom slučaju imaju jedno od gore navedenih značenja, nezavisno jedan od drugog.
Termin "supstituisan" kao što je korišćeno ovde, označava da je bilo koji ili više vodonika na naznačenom atomu zamenjeno sa odabranim iz naznačene grupe, obezbeđujući da normalna valenca naznačenog atoma nije premašena, i da supstitucija rezultuje u stabilno jedinjenje.
1
Termini "prevencija", "profilaksa", "profilaktičko lečenje" ili "preventivno lečenje" koji se ovde koriste treba da se razumeju kao sinonimi i u smislu da je rizik za razvoj prethodno pomenutog stanja smanjen, posebno kod pacijenta koji ima povećan rizik za navedena stanja ili odgovarajuće anamneze, npr. povećan rizik od razvoja metaboličkog poremećaja kao što je dijabetes ili gojaznost ili neki drugi poremećaj koji se ovde navodi. Prema tome, izraz "prevencija bolesti", kako je ovde korišćen, označava upravljanje i brigu pojedinca sa rizikom razvoja bolesti pre kliničkog početka bolesti. Svrha prevencije je borba protiv razvoja bolesti, stanja ili poremećaja, i uključuje davanje aktivnih jedinjenja za sprečavanje ili odlaganje početka simptoma ili komplikacija i za sprečavanje ili odlaganje razvoja srodnih bolesti, stanja ili poremećaja. Uspeh navedenog preventivnog lečenja se statistički odražava smanjenom učestalošću navedenog stanja u populaciji pacijenata pod rizikom od ovog stanja u odnosu na ekvivalentnu populaciju pacijenata bez preventivnog lečenja.
Izraz "lečenje" ili "terapija" označava terapeutsko lečenje pacijenata koji su već razvili jedan ili više navedenih stanja u manifestnoj, akutnoj ili hroničnoj formi, uključujući simptomatsko lečenje u cilju ublažavanja simptoma specifične indikacije ili uzročnog lečenja kako bi se obrnulo ili delimično obrnulo stanje ili odložilo napredovanje indikacije koliko je to moguće, u zavisnosti od stanja i njegove ozbiljnosti. Prema tome, izraz "lečenje bolesti", kako je ovde korišćeno, označava upravljanje i brigu pacijenta koji je razvio bolest, stanje ili poremećaj. Svrha lečenja je borba protiv bolesti, stanja ili poremećaja. Lečenje uključuje davanje aktivnih jedinjenja da eliminiše ili kontroliše bolest, stanje ili poremećaj, kao i da ublaži simptome ili komplikacije povezane sa bolešću, stanjem ili poremećajem.
Ukoliko nije posebno naznačeno, u celom opisu i priloženim patentnim zahtevima, data hemijska formula ili naziv će obuhvatiti tautomere i sve stereo, optičke i geometrijske izomere (npr. enantiomere, diastereomere, E/Z izomere itd…) i njegove racemate kao i smeše u različitim porcijama odvojenih enantiomera, smeše diastereomera, ili smeše bilo kojih prethodno navedenih oblika gde takvi izomeri i enantiomeri postoje, kao i soli, uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli i njihove solvate kao što su na primer hidrati koji uključuju solvate slobodnih jedinjenja ili solvate soli jedinjenja.
Podrazumeva se da jedinjenja predmetnog pronalaska sadrže najmanje jedan asimetrično supstituisan atom ugljenika, i stoga se mogu izolovati kao čisti enantiomeri ili kao racemska ili ne-racemska smeša oba enantiomera. Podrazumeva se da neka od jedinjenja iz predmetnog pronalaska sadrže više od jednog stereogenog centra, koji je više od jednog asimetrično supstituisanog atoma ugljenika ili sumpora, i stoga se mogu izolovati kao čisti dijastereomeri ili kao diastereomerne smeše, oba u optički aktivnim ili racemskim oblicima.
Pronalazak razmatra sve moguće stereoizomere, naročito dijastereomere i enantiomere koji su ovde navedeni, npr. u suštinski čistom obliku, u obogaćenom obliku (npr. u suštini bez bilo kog ili svih drugih neželjenih enantiomera i/ili diastereomera i/ili u bilo kom odnosu mešanja, uključujući racemske oblike, kao i njihove soli.
Uopšteno, suštinski čisti stereoizomeri mogu da se dobiju prema sintetičkim principima koji su poznati stručnjaku iz ove oblasti, npr. odvajanjem odgovarajućih smeša, korišćenjem stereohemijski čistih polaznih materijala i/ili stereoselektivnom sintezom. U struci je poznato kako se pripremaju optički aktivni oblici, kao što je rezolucija racemskih oblika ili sintezom, npr. polazeći od optički aktivnih polaznih materijala i/ili upotrebom hiralnih reagensa.
Enantiomerski čista jedinjenja ovog pronalaska ili intermedijeri mogu da se pripreme asimetričnom sintezom, na primer pripremom i naknadnim odvajanjem odgovarajućih dijastereomernih jedinjenja ili intermedijera koji se mogu razdvojiti poznatim metodama (npr. hromatografskom separacijom ili kristalizacijom) i/ili upotrebom hiralnih reagensa kao što su hiralni polazni materijali, hiralni katalizatori ili hiralne pomoćne supstance. Dalje, stručnjaku je poznato kako se pripremaju enantiomerno čista jedinjenja iz odgovarajućih racemskih smeša, kao što je hromatografsko razdvajanje odgovarajućih racemskih smeša na hiralnim stacionarnim fazama; ili rezolucijom racemske smeše koristeći odgovarajući agens za rastvaranje, npr. pomoću formiranja dijastereomerne soli racemskog jedinjenja sa optički aktivnim kiselinama ili bazama, naknadnim razdvajanjem soli i oslobađanjem željenog jedinjenja iz soli; ili derivatizacijom odgovarajućih racemskih jedinjenja sa optički aktivnim hiralnim pomoćnim reagensima, naknadno razdvajanje dijastereomera i uklanjanje hiralne pomoćne grupe; ili kinetičkom rezolucijom racemata (npr. enzimatskom rezolucijom); enantioselektivnom kristalizacijom iz konglomerata enantiomorfnih kristala pod pogodnim uslovima; ili (frakcionom) kristalizacijom iz pogodnog rastvarača u prisustvu optički aktivne hiralne pomoćne supstance.
Termin halogen uopšteno označava fluor, hlor, brom i jod.
Fraza "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi da označi ona jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili dozne oblike koji su, u okviru medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugih problema ili komplikacija, i srazmerni sa razumnim odnosom korist/rizik.
Kao što se korsiti ovde, "farmaceutski prihvatljive soli" se odnose na derivate otkrivenih jedinjenja gde je roditeljsko jedinjenje modifikovano pravljenjem njegove kiselinske ili bazne soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli obuhvataju, ali nisu ograničena na, mineralne ili organske kiselinske soli baznog ostatka kao što su amini; alkalne ili organske soli kiselinskih ostataka kao što su karboksilne kiseline; i slično. Na primer, takve soli uključuju soli iz amonijaka, L-arginina, betaina, benetamina, benzatina, kalcijum hidroksida, holina, deanola, dietanolamina (2,2’-iminobis(etanol)), dietilamina, 2-(dietilamino)-etanola, 2-aminoetanola, etilendiamina, N-etil-glukamina, hidrabamina, 1H-imidazola, lizina, magnezijum hidroksida, 4-(2-hidroksietil)-morfolina, piperazina, kalijum hidroksida, 1-(2-hidroksietil)-pirolidina, natrijum hidroksida, trietanolamina
(2,2’,2"-nitrilotris(etanol)), trometamina, cink hidroksida, sirćetne kiseline, 2.2-dihlorosirćetne kiseline, adipinske kiseline, algininske kiseline, askorbinske kiseline, L-aspartinske kiseline, benzensumporne ksieline, benzoeve kiseline, 2,5-dihidroksibenzoeve kiseline, 4-acetamido-benzoeve kiseline, (+)-kamforne kiseline, (+)-kamfor-10-sulfonske kiseline, karbonske kiseline, cinaminske kiseline, limunske kiseline, ciklaminske kiseline, dekanske kiseline, dodecilsulfurne kiseline, etan-1,2-disulfonske kiseline, etansulfonske kiseline, 2-hidroksi-etan-sulfonske kiseline, etilendiamintetraacetatne kiseline, mravlje kiseline, fumarne kiseline, galaktarske kiseline, gentisinske kiseline, D-glukoheptonske kiseline, D-glukonske kiseline, D- glukuronske kiseline, glutaminske kiseline, glutarne kiseline, 2-okso-glutarne kiseline, glicerofosforne kiseline, glicina, glikolne kiseline, heksanske kiseline, hipurne kiseline, hidrobromne kiseline, hlorovodonične kiseline, izobutirne kiseline, DL-mlečne kiseline, laktobionske kiseline, laurinske kiseline lizin, maleinska
1
kiselina, (-) - L-jabučna kiselina, malonska kiselina, DL mandelinska kiselina, metansulfonska kiselina, galaktarska kiselina, naftalen-1,5-disulfonska kiselina, naftalen-2-sulfonska kiselina, 1-hidroksi-2-naftoinska kiselina kiselina, nikotinska kiselina, azotna kiselina, oktanska kiselina, oleinska kiselina, orotična kiselina, oksalna kiselina, palmitinska kiselina, pamoinska kiselina (embonska kiselina), fosforna kiselina, propionska kiselina, (-) - L-piroglutaminska kiselina, salicilna kiselina, 4- amino-salicilna kiselina, sebacinska kiselina, stearinska kiselina, sukcinska kiselina, sumporna kiselina, taninska kiselina, (+) - L-vinska kiselina, tio cijansku kiselinu, p-toluensulfonsku kiselinu i undecilensku kiselinu. Druge farmaceutski prihvatljive soli mogu biti formirane sa katjonima iz metala kao što su aluminijum, kalcijum, litijum, magnezijum, kalijum, natrijum, cink i slično. (takođe videti Pharmaceutical salts, Berge, S.M. et al., J. Pharm. Sci., (1977), 66, 1-19).
Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska mogu se sintetizovati iz matičnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli deo uobičajenim hemijskim postupcima. Uopšteno, takve soli se mogu dobiti reakcijom slobodnih kiselinskih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa dovoljnom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom razblaživaču kao što su eter, etil acetat, etanol, izopropanol ili acetonitril, ili njihove smeše.
Soli drugih kiselina od gore navedenih, koje su, na primer, korisne za prečišćavanje ili izolovanje jedinjenja predmetnog pronalaska (npr. soli trifluoro-acetata) takođe obuhvataju deo pronalaska.
Pod terminom "halo" koji se dodaje "alkilnoj", "alkilenskoj" ili "cikloalkilnoj" grupi (zasićenoj ili nezasićenoj) se podrazumeva takva alkil ili cikloalkil grupa u kojoj je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno atomom halogena izabranim između fluora, hlora ili broma, poželjno fluora i hlora, posebno poželjan je fluor. Primeri uključuju: H2FC-, HF2C-, F3C-.
REŠENJA
Obuhvaćena su gornja jedinjenja formule 1, izabrana iz grupe koja se sastoji od jedinjenja 1.a do 1.c.
1.c
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
Obuhvaćena su gornja jedinjenja formule 1, gde konfiguracija formule 1 je formula 1'
1
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
Obuhvaćena su gornja jedinjenja formule 1', odabrana iz grupe koja se sastoji od jedinjenja 1.a' do 1.c'
1.c'
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
1
Obuhvaćena su gornja jedinjenja formule 1, gde su jedinjenja odabrana iz grupe koja se sastoji od primera B.1.2B, C5.1, C.5.2 i D.5A ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
Drugo rešenje pronalaska je gore navedeno jedinjenje formule 1 za primenu kao medikament.
Drugo rešenje pronalaska je gore navedeno jedinjenje formule 1 za primenu kao medikamet za lečenje astme i alergijskih oboljenja, gastrointestinalnih inflamatornih oboljenja, glomerulonefritis, eozinofilična oboljenja, hronično obstruktivnog oboljenja pluća, infekcija patogenim mirkobima i remuatoidni artritis.
Drugo rešenje pronalaska je gore navedeno jedinjenje formule 1 za primenu kao medikamet za lečenje neutrofilnih oboljenja, cistične fibroze (CF), ne-cistične fibroze, idiopatične pulmonarne fibroze, bronhiektaze, ANCA-povezanog vasculitisa, raka pluća, ne-ciktične fibrozne bronhiektaze, emfiseme, hroničnog bronhitisa, akutne povrede pluća (ALI), akutnog respiratornog distres sindroma (ARDS), pulmonarne hipertenzije, pulmonarne arterialne hipertenzije (PAH) i Alfa-1-antitripsin deficiencije (AATD).
Drugo rešenje pronalaska je gore navedeno jedinjenje formule 1 za primenu kao medikamet za lečenje gojaznosti i povezanih inflamacija, insulinske rezistencije, dijabetea, masne jetre i steatoze jetre.
Drugo rešenje pronalaska je gore navedeno jedinjenje formule 1 za primenu kao medikamet za lečenje traumatske povrede mozga, abdominalnog aortnog aneurizma i Graft protiv Oboljenja Domaćina (GvHD).
Drugo rešenje pronalaska je farmaceutska kompozicija, koja sadrži jedan ili više prethodno navedenih jedinjenja formule 1 ili njegova farmaceutski aktivna so.
Drugo rešenje pronalaska je farmaceutska kompozicija koja dodatno sadrži prethodno navedeno jedinjenje formule 1, farmaceutsko aktivno jedinjenje obabrano između grupe koja se sastoji od betamimetika, antiholinergika, kortikosteroida, PDE4-inhibitora, LTD4-antagonista, EGFR-inhibitora, Katepsin C inhibitora, CRTH2 inhibitora,
1
5-LO-inhibitora, Histamine receptor antagonista i SYK-inhibitora, ali takođe i kombinaciju dve ili tri aktine supstance.
DOBIJANJE
Jedinjenja prema predmetnom pronalasku i njihovi intermedijeri mogu se dobiti primenom postupaka sinteze koje su poznate stručnjaku i opisane u literaturi o organskoj sintezi. Poželjno, jedinjenja se dobijaju na analogan način prema postupcima dobijanja koji su detaljnije objašnjeni u daljem tekstu, naročito kao što je opisano u eksperimentalnom delu. U nekim slučajevima, redosled u izvođenju reakcionih koraka može varirati. Varijante reakcionih postupaka koji su poznati stručnjaku u ovoj oblasti, ali ovde nisu detaljno opisani, takođe se mogu koristiti. Opšti postupci za dobijanje jedinjenja prema pronalasku biće očigledni stručnjaku iz ove oblasti, proučavajući sledeće šeme. Polazni materijali su komercijalno dostupni ili se mogu dobiti postupcima koji su opisani u literaturi ili ovde, ili se mogu pripremiti na analogan ili sličan način. Bilo koje funkcionalne grupe u polaznim materijalima ili intermedijerima mogu biti zaštićene korišćenjem konvencionalnih zaštitnih grupa. Ove zaštitne grupe se mogu ponovo odvojiti u pogodnoj fazi u reakcionoj sekvenci koristeći postupke poznate stručnjaku.
Jedinjenja pronalaska VI su dostupna korišćenjem sintetskog puta prikazanog u Šemi 1; R<I>, R<E.1>, R<E.2>imaju značenje kao što je definisano ranije i dalje u tekstu.
ŠEMA 1
1
<E.2>II III R VI
Intermedijeri II (Korak A, intermedijer I o intermedijer II) se mogu dobiti kao što je opisano u Vovk et al. (Synlett 2006, 3, 375-378) ili u PL2004/369318, zagrevanjem alifatičnog ili aromatičnog aldehida I sa karbamatom, na primer metil karbamat, etil karbamat (uretan) ili benzil karbamat u prisustvu jake Brønsted ili Lewis kiseline, na primer sumporne kiseline, vodonik hlorida, p-toluensulfonske kiseline, Amberlyst 15, tetrafluoroborne kiseline, trifluorosirćetna kiselina ili boron trifluorid, ili bez rastvarača kao rastvor ili u pogodnom rastvaraču, kao što je benzen, toluen, acetonitril, dietil etar, hloroform, acetatni anhidrid ili njihove smeše. Reakcija se odvija unutar 1 do 24 sata. Poželjne reakcione temperature su između sobne temperature i 160 °C, ili tačke ključanja rastvarača. Poželjno je da se reakcija odvija sa otopljenim etil karbamatom kao reaktantom i katalitičkom količinom koncentrovane sumporne kiseline na temperaturama od 140-160°C bez bilo koje dodatne soli.
Hlorinacija (Korak B, intermedijer II o intermedijer III) se može izvesti kao što je opisano u Vovk et al. (Synlett 2006, 3, 375-378) i Sinitsa et al. (J. Org. Chem. USSR 1978, 14, 1107) zagrevanjem intermedijera II zajedno sa hlorisanim agensom, na primer fosfor pentahloridom, fosforil hloridom ili sulfuril hloridom u organskom rastvaraču, na primer benzenu ili toluenu. Reakcija se odvija unutar 1 do 24 sata. Poželjne temperature reakcije su između 50 °C i 150 °C.
Alternativno, intermedijeri III se mogu dobiti kao što je opisano u Jochims et al. (Chem. Ber. 1982, 115, 860-870) sa Į-halogenacijom alifatičnih izocijanata, na primer benzil izo-
1
cijanata, korišćenjem na primer brominacionog agensa, na primer N-bromosukcinimid. Izocijanati se mogu sintetizovati kao što je opisano u US6207665 i u Charalambides et al. (Synth. Commun.2007, 37, 1037-1044) , reakcijom aminskog prekursora sa fosgenom.
Intermedijeri V (Korak C, intermedijer IV o intermedijeri V) se mogu dobiti kao što je opisano u Chen et al. (Synth. Commun.2010, 40, 2506-2510) i Tietcheu et al. (J.
Heterociklic Chem.2002, 39, 965-973) reakcijom ciklopentan-1,3-diona (IV) i alifatičnog ili aromatičnog amina u prisustvu katalizatora, na primer Ytterbium triflat [Yb(OTf)3] ili kiselina, na primer vodonik hlorid, sirćetna kiselina ili p-toluensulfonska kiselina, opciono u rastvaraču, na primer vodi, sirćetnoj kiselini, acetonitrilu, benzenu, toluenu. Reakcija se odvija unutar 1-24 sata. Poželjne temperature reakcije su između sobne temperature i 120 °C, najpoželjnije sobna temperatura.
Alternativno, intermedijeri V se mogu dobiti kao što je opisano u Scott et al. (J. Med.
Chem. 1993, 36, 1947-1955) direktnom kondenzacijom 1,3-dikarbonil jedinjenja sa alifatičnim ili aromatičnim aminom pod refluksom u pogodnom rastvaraču, na primer benzen ili toluen sa azeotropičnim uklanjanjem vode. Alternativno, intermedijeri V se mogu dobiti kao što je opisano u Mariano et al. (J. Org. Chem.1984, 49, 220-228) reakcijom alifatičnog ili aromatičnog amina sa 3-hloro-2-ciklopenten-1-on, koji se može dobiti iz ciklopentan-1,3-dion.
Jedinjenja prema predmetnom pronalasku (Korak D, intermedijeri III o jedinjenja pronalaska VI) se mogu dobiti kao što je opisano u Vovk et al. (Synlett 2006, 3, 375-378), Vovk et al. (Russ. J. Org. Chem.2010, 46, 709-715) i Kushnir et al. (Russ. J. Org. Chem.
2011, 47, 1727-1732) reakcijom intermedijera III sa intermedijerima V u organskom rastvaraču, na primer dihlorometan, hloroform, benzen ili toluen. Reakcija se odvija unutar 1-24 sata. Poželjne temperature reakcije su između 0 °C i 100 °C.
Jedinjenja prema predmetnom pronalasku VII su dostupna preko sintetskog puta prikazanog u šemi 2; R<E.1>, R<E.2>, R<E.3>imaju značenja kao što je definisano ranije i kasnije u tekstu.
2
ŠEMA 2
Jedinjenja pronalaska VII (Korak E, jedinjenja pronalaska VI o jedinjenja pronalaska VII, R<E.3>= alkil ili supstituisani alkil) se mogu dobiti kao što je opisano u WO04024700 reakcijom jedinjenja pronalaska VI sa alkilacionim agensom, na primer dialkil sulfat, na primer dimetil sulfat, alkil halid, na primer metil jodid ili alkil sulfonilat, na primer benzil tosilat, u prisustvu pogodne baze, na primer natrijum hidrid, natrijum hidroksid, cezijum karbonat, litijum diizopropilamid, kalijum heksametildisilazid, litijum heksametildisilazid, organolitijum reagens, na primer terc-butillitijum ili Grignard reagens, na primer izopropilmagnezijumhlorid, u organskom rastvaraču, na primer tetrahidrofuran,
N,N-dimetilformamid, acetonitril, 1,4-dioksan, dihlorometan ili toluen. Reakcija se odvija unutar 1-72 sata. Poželjne temperature reakcije su između 0 °C i 100 °C.
Jedinjenja prema predmetnom pronalasku XIII su dostupna preko sintetskog puta prikazanog u šemi 3; R<III>, R<IV>, R<E.1>, R<E.2>imaju značenja kao što je definisano ranije i kasnije u tekstu.
ŠEMA 3
<VI>XII XIII
4-Nitrofenil karbamat intermedijeri XII (Korak K, jedinjenja pronalaska VI o intermedijeri XII) mogu se dobiti kao što je opisano u WO09080199, reakcijom jedinjenja pronalaska VI sa 4-nitrofenil hloroformatom u prisustvu baze, na primer trietilamin, N,N-diizopropiletilamin ili N-metilmorfolin, opciono u prisustvu katalizatora, na primer 4-dimetilaminopiridin, u organskom rastvaraču, na primer dihlorometan, tetrahidrofuran, acetonitril ili N,N-dimetilformamid. Reakcija se odvija unutar 1-24 sata. Poželjne temperature reakcije su između 0 °C i 50 °C, najpoželjnija sobna temperatura.
Jedinjenja pronalaska XIII (Korak L, 4-nitrofenil karbamat intermedijeri XII o jedinjenja pronalaska XIII) mogu se dobiti kao što je opisano u WO09080199, reakcijom intermedijera XII sa aminom R<III>NH2ili R<III>R<IV>NH u organskom rastvaraču, na primer dihlorometan, acetonitril, tetrahidrofuran, 1,4-dioksan, toluen ili N,N-dimetilformamid. Reakcija se odvija unutar 1-72 sata. Poželjne temperature reakcije su između 0 °C i 50 °C, najpoželjnija sobna temperatura.
Pored načina sinteze prikazanog u Šemi 1, jedinjenja pronalaska VI su takođe dostupna korišćenjem sintetskog puta prikazanog u Šemi 4, R<E.1>, R<E.2>imaju značenja kao što je definisano ranije i kasnije u tekstu.
ŠEMA 4
<E.2>
XV R<I>XVI
Step Q Step R
VI
Intermedijeri XV (Korak O, intermedijer I o intermedijer XV) se mogu dobiti kao što je opisano u Best et al. (J. Am. Chem. Soc.2012, 134, 18193-18196) ili u Yang et al. (Org. Synth. 2009, 86, 11-17), reakcijom aromatičnog aldehida I sa pogodnim sulfinatom, na primer natrijum benzenesulfinska kiselina, i pogodnim karbamatom, na primer metil karbamat ili terc-butil karbamat, u prisustvu pogdne kiseline, na primer mravlje kiseline, u pogodnom rastvaraču, na primer tetrahidrofuran, etanol, metanol ili smeši rastvarača, na primer tetrahidrofuran i voda. Alternativno, kao što je opisano u Reingruber et al. (Adv. Synth. Catal.2009, 351, 1019-1024) ili u WO06136305, pogodna Lewis kiselina, na primer trimetilsilil hlorid, se može koristiti kao kiselina i acetonitril ili toluen se može koristiti kao rastvarač. Reakcija se odvija unutar 1-6 dana. Poželjne temperature reakcije su između 0 °C i 50 °C, najpoželjnija sobna temperatura.
Intermedijeri XVI (Korak P, intermedijer XV o intermedijer XVI) se mogu pripremiti analogno postupku opisanom za dobijanje jedinjenja pronalaska VI (Šema 1, Korak D, intermedijer III o jedinjenje pronalaska VI), reakcijom intermedijera XV sa intermedijerima V u prisustvu pogodne baze, na primer natrijum hidrid ili natrijum tercbutoksid, u pogodnom rastvaraču, na primer tetrahidrofuran ili 2-metiltetrahidrofuran. Reakcija se odvija unutar 1-24 h. Poželjne temperature reakcije su između 0 °C i 50 °C, najpoželjnija sobna temperatura.
Intermedijeri XVII (Korak Q, intermedijer XVI o intermedijer XVII) se mogu dobiti reakcijom intermedijera XVI sa pogodnom kiselinom, na primer hlorovodonična, u pogodnom rastvaraču, na primer 1,4-dioksan. Reakcija se odvija unutar 1-72 sata. Poželjne temperature reakcije su između 0 °C i sobne temperature, najpoželjnija sobna temperatura.
Jedinjenja pronalaska VI (Korak R, intermedijer XVII o jedinjenje pronalaska VI) se mogu dobiti kao što je opisano u Csćtörtöki et al. (Tetrahedron Lett.2011, 67, 8564-8571) ili u WO11042145, reakcijom intermedijera XVII sa pogodnim reagensom, na primer fosgen, trifosgen ili karbonil diimidazol, u prisustvu pogodne baze, na primer trietilamin, N,N-diizopropiletilamin, piridin ili natrijum karbonat, u pogodnom rastvaraču, na primer acetonitril, dihlorometan ili toluen. Reakcija se odvija unutar 1-72 sata. Poželjne temperature reakcije su između 0 °C i 50 °C, najpoželjnija sobna temperatura.
Jedinjenja pronalaska XX su takođe dostupna korišćenjem sintetskog puta prikazanog u Šemi 5; R<V>, R<E.2>, R<E.3>imaju značenja kao što je definisano ranije i kasnije u tekstu.
2
ŠEMA 5
XVIII XIXXX
Intermedijeri XIX (Korak S, jedinjenja XVIII o jedinjenja XIX, R<E.3>= H ili alkil) se mogu dobiti reakcijom intermedijera fluora XVIII sa tiolom R<V>-SH u prisustvu baze, na primer natrijum hidrida, natrijum hidroksid, cezijum karbonat, litijum diizopropilamid, kalijum heksametildisilazid, litijum heksametildisilazid, organolitijum reagens, na primer tert-butillitijum ili Grignard reagens, na primer izopropilmagnezijumhlorid, u organskom rastvaraču, na primer N,N-dimetilformamid, tetrahidrofuran, acetonitril, 1,4-dioksan, dihlorometan ili toluen. Reakcija se odvija unutar 1-72 sata. Poželjne temperature reakcije su između 0 °C i 100 °C.
Jedinjenja pronalaska XX se mogu dobiti oksidacijom sulfidnih intermedijera XIX (Korak T, intermedijeri XIX o jedinjenja pronalaska XX, R<E.3>= H ili alkil) sa oksidacionim agensom, na primer vodonik peroksid, 3-hloro-perbenzoeva kiselina, perjodična kiselina, natrijum perjodat, kalijum permanganat, urea-hidrogen peroksid adduct, opciono u prisustvu metalnog katalizatora, u pogodnom rastvaraču, na primer dihlorometan, hloroform, metanol, etanol, voda ili njihove smeše. Reakcija se odvija unutar 1-72 sata. Poželjne temperature reakcije su između. Reakcija se odvija unutar 1-72 sata. Poželjne temperature reakcije su između sobne temperature i tačke ključanja korišćenog rastvarača.
Jedinjenja pronalaska koja nose sulfoksidne grupe se mogu dobiti oksidacijom odgovarajućih sulfidnih intermedijera sa oksidacionim agensom, na primer vodonik peroksid, 3-hloro-perbenzoeva kiselina, perjodična kiselina, natrijum periodat, terc-butil hidroperoksid, urea-vodonik peroksid adduct, opciono u prisustvu metalnog katalizatora, na primer metiltrioksorhenijum, FeCl3, Sc(OTf)3, titanijum (IV) kompleksi, u pogodnom rastvaraču, na primer dihlorometan, hloroform, metanol etanol, voda ili njihove smeše. Reakcija se odvija unutar 1-72 sata. Poželjne temperature reakcije su između sobne temperature i tačke ključanja korišćenog rastvarača.
PRELIMENARNE PRIMEDBE
Termin sobna temperatura označava temperaturu od oko 20 °C. Kao pravilo,<1>H NMR speltra ili maseni spaktar je dobijen za dobijena jedinjenja. Data vremena zadržavanja su izmerena pod sledećim uslovima (TFA: trifluorosirćetna kiselina, DEA: dietilamin, scCO2: superkritični ugljen dioksid):
2
2
2
2
SINTEZE POLAZNIH MATERIJALA
Sledeći polazni materijal je dobijen kao što je opisano u citiranoj literaturi:
3-(3-(Trifluorometil) fenilamino) ciklopent-2-enon: Aust. J. Chem. 2005, 58, 870-876.
2
SINTEZE INTERMEDIJERA
INTERMEDIJER A.1
terc-Butil estar {(2-bromo-4-ciano-fenil)-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-karbaminske kiseline
Korak 1:
terc-Butil ester [benzensulfonil-(2-bromo-4-cijano-fenil)-metil]-karbaminske kiseline Mravlja kiselina (3.9 mL, 104 mmol) je dodata smeši terc-butil karbamata (1.90 g, 16.2 mmol), 2-bromo-4-cijanobenzaldehida (CAS# 89891-69-0, 3.41 g, 16.2 mmol) i natrijum benzensulfinata (2.67 g, 16.2 mmol) u smeši THF (7.0 mL) i vode (60 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 6 dana. Dodata je voda (180 mL) i talog je filtriran i ispran sa vodom. Talog je tretiran sa terc-butil metil etrom (30 mL), i smeša je mešana 30 min. Talog je filtriran, ispran sa terc-butil metil etrom i osušen. Prinos: 3.35 g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 451 (struktura izotopa broma); Vreme zadržavanja HPLC: 0.66 min (X012_S01).
Korak 2:
terc-Butil estar {(2-bromo-4-cijano-fenil)-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-karbaminske kiseline
Natrijum hidrid (60% u mineralnom ulju, 360 mg, 9.00 mmol) je dodat u malim porcijama smeši 3-(3-(trifluorometil) fenilamino) ciklopent-2-enona (2.16 g, 8.96 mmol) i 2-metiltetrahidrofurana (30 mL). Posle 30 min terc-butil estar [benzensulfonil-(2-bromo-4-cijanofenil)-metil]-karbaminske kiseline (Korak 1, 3.35 g, 7.43 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Dodata je voda i faze su odvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa etil acetatom i spojene organske faze su isprane sa vodom, osušene preko MgSO4i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je tretiran sa terc-butil metil etrom i smeša je mešana 15 min. Talog je filtriran, ispran sa terc-butil metil etrom i osušen. Prinos: 3.18 g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 550 (struktura izotopa broma) ; Vreme zadržavanja HPLC: 0.73 min (X012_S01).
INTERMEDIJER A.2
4-{Amino-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-3-bromobenzonitril hidrohlorid
Rastvor vodonik hlorida u 1,4-dioksanu (4 M, 15.2 mL, 61 mmol) je dodat smeši terc-butil estar {(2-bromo-4-cijano-fenil)-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-karbaminske kiseline (INTERMEDIJER A.1, 6.71 g, 12.2 mmol) u 1,4-dioksanu (30 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h i potom ohlađena u ledenom kupatilu. Talog je filtriran, ispran sa hladnim acetonitrilom i dietil etrom i osušen. Prinos: 5.90g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 450 (struktura izotopa broma); Vreme zadržavanja HPLC: 1.17 min (V011_S01).
INTERMEDIJER A.3
1
3-Bromo-4-[2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
Trietilamin (4.11 mL, 29.3 mmol) je dodat smeši 4-{amino-[5-okso-2-(3-trifluorometilfenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-3-bromo-benzonitril hidrohlorida (INTERMEDIJER A.2, 28.5 g, 58.6 mmol) i 1,1’-karbonildiimidazola (11.9 g, 73.2 mmol) u acetonitrilu (290 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda (1.5 L) i talog je filtriran, ispran sa vodom i osušen. Prinos: 24.5 g. ESI maseni spektrum: [M+H]<+>= 476 (struktura izotopa broma); Vreme zadržavanja HPLC: 1.11 min (V011_S01).
INTERMEDIJER A.4
3-Bromo-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
Metiljodid (3.61 mL, 58.0 mmol) je dodat smeši 3-bromo-4-(2,5-diokso-1-(3-(trifluoro metil) fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il) benzonitrila (INTERMEDIJER A.3, 23.0 g, 48.3 mmol) i cezijum karbonata (20.5 g, 62.8 mmol) u
2
DMF (230 mL) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Voda i etil acetat su dodati i faze su odvojene. Organska faza je isprana sa vodom, osušena preko MgSO4i koncentrovana. Prinos: 24.0 g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 490 (struktura izotopa broma); Vreme zadržavanja HPLC: 1.18 min (V011_S01).
INTERMEDIJER A.5
Metil estar 5-cijano-2-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzoeve kiseline
Rastvor 3-bromo-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitrila (INTERMEDIJER A.4, 11.85 g, 24.2 mmol), 1.1-bis(difenilfosfino)-ferocena (1.34 g, 2.42 mmol), paladijum acetata (0.27 g, 1.21 mmol) i natrijum acetata (5.95 g, 72.5 mmol) je tretiran sa ugljen monoksidom na 5 bara i 100 °C 40 h. Posle uparavanja isparljivih komponenti pod sniženim pritiskom, dodata je voda i etil acetat i faze su odvojene. Organska faza je osušena preko MgSO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen sa brzom hromatografijom na silici (cikloheksan/etil acetat 1:1). Prinos: 8.0. g. ESI maseni spaktar: [M+H]<+>= 470; Vreme zadržavanja HPLC: 1.15 min (V011_S01).
INTERMEDIJER A.6
5-Cijano-2-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzoeva kiselina
Smeša metil estra 5-cijano-2-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzoeve kiseline (INTERMEDIJER A.5, 6.70 g, 14.3 mmol) i litijum hidroksida (1.03 g, 42.8 mmol) u 1,4-dioksanu (135 ml) i vodi (67.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 90 min. Dodata je voda (250 mL) i hlorovodonična kiselina (1.0 M, 44 mL) i reakciona smeša je ekstrakovana sa etil acetatom. Organska faza je isprana sa vodom, osušena preko MgSO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prinos: 6.2. g. ESI maseni spektrum: [M+H]<+>= 456; Vreme zadržavanja HPLC: 0.63 min (X012_S01).
INTERMEDIJER A.7
3-Formil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
4
Dess-Martin perjodinan (2.36 g; 5.57 mmol) je dodat rastvoru 3-hidroksimetil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitrila (PRIMER A.1; 2.05 g; 4.644 mmol) u dihlorometanu (100 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 90 min. Reakciona smeša je zaustavljena sa smešom 10% rastvora natrijum tiosulfata (50 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(50 mL) i faze su odvojene. Vodeni sloj je ekstrakovan sa dihlorometanom. Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko MgSO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen sa brzom hromatografijom na silici (dihlorometan/ metanol 98:2). Prinos: 510 mg; ESI maseni spktar: [M+H]<+>= 440; Vreme zadržavanja HPLC: 0.63 min (X012_S02).
INTERMEDIJER B.1
terc-Butil ester {(4-cijano-2-fluoro-fenil)-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-karbaminske kiseline
INTERMEDIJER B.1 je dobijen na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER A.1, zamenom 2-bromo-4-cijanobenzaldehida sa 3-fluoro-4-formil-benzonitrilom (CAS# 105942-10-7) kao polaznim materijalom. Prečišćavanje sirovog materijala je urađeno sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradijent acetonitrila u vodi, 0.1% mravlja kiselina). ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 490; Vreme zadržavanja HPLC: 1.13 min
(Z018_S04).
INTERMEDIJER B.2
4-{Amino-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-3-fluorobenzonitril hidrohlorid
INTERMEDIJER B.2 je dobijen na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER A.2, zamenom INTERMEDIJER A.1 sa INTERMEDIJER B.1 kao polaznim materijalom. ESI maseni spektar: [M+H-NH3]<+>= 373; Vreme zadržavanja HPLC: 0.81 min (Z018_S04).
INTERMEDIJER B.3
4-[2,5-Diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-fluoro-benzonitril
INTERMEDIJER B.3 je dobijen na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER A.3, zamenom INTERMEDIJER A.2 sa INTERMEDIJER B.2 kao polaznim materijalom. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 416; Vreme zadržavanja HPLC: 0.97 min (Z018_S04).
INTERMEDIJER B.4
4-[2,5-Diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-(3-hidroksi-propilsulfanil)-benzonitril
Smeši natrijum hidrida (55% u minaralnom ulju, 32 mg, 0.73 mmol) u DMF (0.30 mL) dodat je na 0°C 3-merkapto-1-propanol (55 µL, 0.64 mmol) i smeša je mešana na 0°C 25 min. Rastvor 4-[2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-fluoro-benzonitrila (INTERMEDIJER B.3, 110 mg, 0.21 mmol) u DMF (0.30 mL) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2.5 h. Reakciona smeša je zaustavljena sa vodom, zakiseljena sa razblaženom sirćetnom kiselinom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradijent acetonitrila u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 13 mg. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 488; Vreme zadržavanja HPLC: 0.93 min (Z018_S04).
Sledeći INTERMEDIJER B.4.1 je dobijen na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER B.4, zamenom 3-merkapto-1-propanola sa 2-metoksi-etanetiolom kao polaznim materijalom.
INTERMEDIJER B.5
3-Fluoro-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
INTERMEDIJER B.5 je dobijen na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIDATE A.4, zamenom INTERMEDIJER A.3 sa INTERMEDIJER B.3. Reakciona smeša je prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Agilent ZORBAX<TM>SB-C18, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% TFA). ESI maseni spektar [M+H]<+>= 430; Vreme zadržavanja HPLC: 1.02 min (Z018_S04).
INTERMEDIJER B.6
3-(2-Hidroksi-etilsulfanil)-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
INTERMEDIJER B.6 je dobijen na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER B.4, menjajući INTERMEDIJER B.3 sa INTERMEDIJER B.5 i 3-merkapto-1-propanol sa 2-merkaptoetanol kao polazni materijali, respektivno. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 488; Vreme zdražavanja HPLC: 0.97 min (Z018_S04).
Sledeći INTERMEDIJERI B.6.1 i B.6.2 su dobijeni na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER B.6, angažovanjem odgovarajućeg tiola kao polaznog materijala, respektivno.
INTERMEDIJER C.1
4-Formil-3-metilsulfanil-benzonitril
Kalijum karbonat (3.8 g; 27.2 mmol) je dodat smeši 3-fluoro-4-formil-benzonitrila (2.0 g; 13.4 mmol) i natrijum tiometanolata (1.175 g; 16.77 mmol) u DMF (10 mL) i smeša je mešana na 120°C 2 h. Reakciona smeša je ohlađena sa ledenim kupatilom. Dodata je voda i talog je filtriran, ispran sa vodom i osušen. Prinos: 1.98 g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 178; Vreme zadržavanja HPLC: 0.73 min (Z011_S03).
INTERMEDIJER C.2
3-Etilsulfanil-4-formil-benzonitril
INTERMEDIJER C.2 je dobijen na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER C.1, menjajući natrijum tiometanolat sa natrijum tioetanolatom (temperatura reakcije 50°C). ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 192; Vreme zadržavanja HPLC: 0.81 min (Z011_S03).
INTERMEDIJER C.3
terc-Butil estar {(4-cijano-2-metilsulfanil-fenil)-[5-okso-2-(3-trifluorometilfenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-karbaminske kiseline
4
INTERMEDIJER C.3 je dobijen na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER A.1, menjajući 2-bromo-4-cijanobenzaldehid sa 4-formil-3-metilsulfanil-benzonitrilom (INTERMEDIJER C.1). ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 518; Vreme zadržavanja HPLC: 1.14 min (Z017_S04).
INTERMEDIJER C.4
terc-Butil estar {(4-cijano-2-etilsulfanil-fenil)-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-karbaminske kiseline
INTERMEDIJER C.4 je dobijen na analogan način kao što je opisnao za INTERMEDIJER A.1, menjajući 2-bromo-4-cijanobenzaldehid sa 3-etilsulfanil-4-formil-benzonitrilom (INTERMEDIJER C.2). ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 532; Vreme zadržavanja HPLC: 1.19 min (Z018_S04).
INTERMEDIJER C.5
4-{Amino-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-3-metil sulfanil-benzonitril hidrohlorid
Rastvor vodonik hlorida u 1,4-dioksanu (4 M, 5 mL, 20 mmol) je dodat smeši terc-butil estra {(4-cijano-2-metilsulfanil-fenil)-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-karbaminske kiseline (INTERMEDIJER C.3, 4.3 g, čistoće 80%, 6.7 mmol) u acetonitrilu (10 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Talog je filtriran, ispran sa hladnim acetonitrilom i osušen. Prinos: 4.14g. ESI maseni spaktar: [M+H]<+>= 418; Vreme zadržavanja HPLC: 0.90 min (Z011_S03).
INTERMEDIJER C.6
4-{Amino-[5-okso-2-(3-trifluorometil-fenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-3-etil sulfanil-benzonitril hidrohlorid
INTERMEDIJER C.6 je dobije na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER C.5, manjajući INTERMEDIJER C.3 sa INTERMEDIJER C.4. ESI maseni spektar:
[M+H]<+>= 432; Vreme zadržavanja HPLC: 0.94 min (Z011_S03).
INTERMEDIJER C.7
4-[2,5-Diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-metilsulfanil-benzonitril
Trietilamin (95 µL, 0.68 mmol) je dodat smeši 4-{amino-[5-okso-2-(3-trifluorometilfenilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-3-metilsulfanil-benzonitril hidrohlorida (INTERMEDIJER C.5, 570 mg, 1.13 mmol na osnovu 90% čistoće) i 1,1’-karbonildiimidazola (220 mg, 1.36 mmol) u acetonitrilu (3 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je tretiran sa vodom. Talog je filtriran, ispran sa vodom i osušen. Prinos: 460 mg; ESI maseni spektar: [M+ H]<+>= 444; Vreme zadržavanja HPLC: 0.98 min (Z017_S04).
INTERMEDIJER C.8
4-[2,5-Diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-etilsulfanil-benzonitril
4
INTERMEDIJER C.8 je dobije na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER C.7, manjajući INTERMEDIJER C.5 sa INTERMEDIJER C.6. ESI maseni spektar:
[M+H]<+>= 458; Vreme zadržavanja HPLC: 1.03 min (Z018_S04).
INTERMEDIJER C.9
4-[3-Metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-metilsulfanil-benzonitril
Metiljodid (834 µL, 13.4 mmol) je dodat smeši 4-[2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-metilsulfanil-benzonitrila (INTERMEDIJER C.7; 1.981 g; 4.467 mmol) i cezijum karbonata (2.911 g, 8.935 mmol) u DMF (5 mL) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Smeša je prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Stablebond, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 1.145 g. ESI maseni spaktar: [M+H]<+>= 458; Vreme zadržavanja HPLC: 1.03 min (Z017_S04).
INTERMEDIJER C.10
4-[3-Metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-etilsulfanil-benzonitril
INTERMEDIJER C.10 je dobije na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER C.9, menjajući INTERMEDIJER C.7 sa INTERMEDIJER C.8. ESI maseni spaktar:
[M+H]<+>= 472; Vreme zadržavanja HPLC: 1.09 min (Z018_S04).
INTERMEDIJER C.11.1 I INTERMEDIJER C.11.2
3-Metansulfinil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
3-Hloroperoksibenzoeva kiselina (77%, 46 mg, 0.203 mmol) je dodata na sobnoj temperaturi rastvoru 4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-metilsulfanil-benzonitrila (INTERMEDIJER C.9, 93 mg, 0.203 mmol) u dihlorometanu (5 mL), i smeša je mešana 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Sunfire, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% TFA) dajući prinos dva diastereomera.
4
INTERMEDIJER C.11.1:
Prinos: 46 mg; ESI maseni spaktar [M+H]<+>= 474; Vreme zadržavanja HPLC: 0.94 min (ranije eluiran diastereomer) (Z018_S04).
INTERMEDIJER C.11.2:
Prinos: 46 mg; ESI maseni spaktar [M+H]<+>= 474; Vreme zadržavanja HPLC: 0.96 min (kasnije eluiran diastereomer) (Z018_S04).
INTERMEDIJER C.12.1 I INTERMEDIJER C.12.2
4-[2,5-Diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-metanesulfinil-benzonitril
3-Hloroperoksibenzoeva kiselina (77%, 51 mg, 0.226 mmol) je dodata na sobnoj temperaturi rastvoru 4-[2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-metilsulfanil-benzonitrila (INTERMEDIJER C.7, 100 mg, 0.226 mmol) u dihlorometanu (3 mL) i smeša je mešana 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Sunfire, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% TFA) dajući dva diastereomera.
INTERMEDIJER C.12.1:
Prinos: 35 mg; ESI maseni spaktar [M+H]<+>= 460 ; Vreme zadržavanja HPLC: 0.90 min (ranije eluiran diastereomer) (Z018_S04).
INTERMEDIJER C.12.2:
Prinos: 26 mg; ESI maseni spaktar [M+H]<+>= 460; Vreme zadržavanja HPLC: 0.92 min (kasnije eluiran diastereomer) (Z018_S04).
4
INTERMEDIJER C.13
Metilamid 4-(4-Cijano-2-etilsulfanil-fenil)-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-1,2,4,5,6,7-heksahidro-ciklopentapirimidine-3-karboksilne kiseline
Smeši 4-[2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-etilsulfanil-benzonitrila (INTERMEDIJER C.8; 100 mg; čistoća 90%; 0.20 mmol) i diizopropiletilamina (130µL; 0.76 mmol) u acetonitrilu (1 mL) na sobnoj temperaturi je dodata mala porcija tokom perioda od 5 h 4-nitrofenilhloroformata (160 mg; 0.79 mmol) i 4-dimetilaminopiridina (140 mg; 1.15 mmol). Metilamin (1M in THF; 1 mL; 1.00 mmol) je dodat smeši koja sadrži 4-nitrofenil karbamat intermedijer i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Sunfire, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 58 mg. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 515; Vreme zadržavanja HPLC: 1.08 min (Z018_S04).
INTERMEDIJER D.1
terc-Butil estar [benzensulfonil-(4-cijano-2-metansulfonil-fenil)-metil]-karbaminske kiseline
4
Mravlja kiselina (6.2 mL, 164 mmol) je dodata smeši terc-butil karbamata (3.05 g, 26.0 mmol), 4-formil-3-(metilsulfonil)benzonitrila (dobijen prema US 2011/34433, 5.44 g, 26.0 mmol) i natrijum benzensulfinata (4.27 g, 26.0 mmol) u THF (10.0 mL) i vodi (25.0 mL) i rekaciona smeša je mešana na sobnoj temepraturi 4 dana. Voda je dodata i talog je filtriran, ispran sa vodom i acetonitrilom i osušen. Prinos: 5.10 g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 451; Vreme zadržavanja HPLC: 0.59 min (X012_S01).
INTERMEDIJER D.2
terc-butil estar [benzensulfonil-(4-cijano-2-etanesulfonil-fenil)-metil]-karbaminska kiselina
INTERMEDIJER D.2 je dobijen na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER D.1, menjajući 4-formil-3-(metilsulfonil)benzonitril sa 3-etanesulfonil-4-formilbenzonitrilom (dobijen prema US 2011/34433). ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 465; Vreme zadržavanja HPLC: 1.03 min (Z017_S04).
INTERMEDIJER D.3
3-(2-Trifluorometil-piridin-4-ilamino)-ciklopent-2-enon
Rastvor 1.3-ciklopentanediona (3.03 g, 30.8 mmol) i 4-amino-2-trifluorometilpiridina (5.00 g, 30.8 mmol) u sirćetnoj kiselini (15.0 mL) je mešan na 130 °C u mikrotalasnoj pećnici 5 h. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom i vodom i prečišćena sa reverznom fazom
4
HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% mravlja kiselina). Prinos: 4.52 g; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 243; Vreme zadržavanja HPLC: 0.77 min (Z018_S04).
INTERMEDIJERS D.3.1 – D.3.4 su dobijeni na analogan način kao što je opisnao za INTERMEDIJER D.3, angažujući odgovarjući amin kao polazni materijal, respektivno.
Tabela 1
4
INTERMEDIJER D.4
terc-Butil estar {(4-cijano-2-metanesulfonil-fenil)-[5-okso-2-(2-trifluorometil-piridin-4-ilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-karbaminska kiselina
Natrijum hidrid (60% u mineralnom ulju, 515 mg, 12.9 mmol) je dodat u malim porcijama smeši 3-(2-(trifluorometil) piridin-4-ilamino) ciklopent-2-enona (INTERMEDIJER D.3, 2.60 g, 10.7 mmol) u 2-metiltetrahidrofuranu (40.0 mL). Posle 10 min terc-butil estar [benzensulfonil-(4-cijano-2-metanesulfonil-fenil)-metil]-karbaminske kiseline (INTERMEDIJER D.1, 4.83 g, 10.7 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temepraturi 30 min. Dodati su voda i etil acetat i faze su odvojene. Organska faza je isprana sa vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prinos: 6.20 g; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 551; Vreme zadržavanja HPLC: 1.12 min (Z018_S04).
INTERMEDIJERI D.4.1 – D.4.5 su dobijeni na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER D.4, angažujući polazne materijale navedeni u sledećoj tabeli.
Tabela 2
1
INTERMEDIJER D.5
4-{Amino-[5-okso-2-(2-trifluorometil-piridin-4-ilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-3-metansulfonil-benzonitril hidrohlorid
2
Rastvoru terc-butil estra {(4-cijano-2-metansulfonil-fenil)-[5-okso-2-(2-trifluorometilpiridin-4-ilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-karbaminske kiseline (INTERMEDIJER D.4, 5.20 g, 9.45 mmol) u 1,4-dioksanu (100 mL) dodat je vodonik hlorid u 1,4-dioksanu (4 M, 50.0 mL, 200 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa metil-terc-butiletrom i talog je filtriran, ispran sa metil-terc-butiletrom i osušen. Prinos: 4.40g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 451; Vreme zadržavanja HPLC: 0.78 min (Z018_S04).
INTERMEDIJERI D.5.1 – D.5.5 su dobijeni na analogan način kao što je opisano za INTERMEDIJER D.5, angažujući polazne materijale navedeni u sledećoj tabeli.
Tabela 3
4
INTERMEDIJER D.6
4-[2,5-Diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-metansulfonil-benzonitril
Rastvoru 4-{amino-[5-okso-2-(2-trifluorometil-piridin-4-ilamino)-ciklopent-1-enil]-metil}-3-metansulfonil-benzonitril hidrohlorida (INTERMEDIJER D.5, 4.78 g, 9.81 mmol) u acetonitrilu (100 mL) dodat je 1,1’-karbonildiimidazol (1.99 g, 12.3 mmol) i trietilamin (0.34 mL, 2.45 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je tretiran sa vodom, talog je filtriran, ispran sa vodom i osušen. Prinos: 3.73 g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 477; Vreme zadržavanja HPLC: 0.90 min (Z018_S04).
INTERMEDIJER D.6A I INTERMEDIJER D.6B: ENANTIOMERI RACEMSKOG INTERMEDIJERA D.6
Enantiomeri racemskog INTERMEDIJERA D.6 (300 mg, 0.63 mmol) su odvojeni sa preparativnom superkritičnom tečnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IC, 20 x 250 mm, 5 µm, 20% MeOH 20 mM amonijak u superkritičnom CO2, 40 °C, 120 bar povratni pritisak).
INTERMEDIJER D.6A:
Prinos: 92 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 477; Vreme zadržavanja: 2.67 min (ranije eluiran enantiomer) (I_IB_20_MeOH_NH3).
INTERMEDIJER D.6B:
Prinos: 96 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 477; Vreme zadržavanja: 3.03 min (kasnije eluiran enantiomer) (I_IB_20_MeOH_NH3).
INTERMEDIJER D.7
3-(3-(Difluorometil)fenilamino)ciklopent-2-enon
Smeša ciklopentan-1,3-diona (2.00 g, 20.4 mmol), 3-(difluorometil) anilina (2.92 g, 20.4 mmol) i iterbijum(III) trifluormetansulfonata (63 mg, 0.10 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Metanol i voda su dodati i rezutlujući talog je filtriran i osušen. Prinos: 2.75 g; ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 224; Vreme zadržavanja HPLC: 0.82 min
(V012_S01).
INTERMEDIJER D.8
terc-Butil estar {(4-cijano-2-etansulfonil-fenil)-[2-(3-difluorometil-fenilamino)-5-oksociklopent-1-enil]-metil}-karbaminska kiselina
Natrijum hidrid (60% u mineralnom ulju, 155 mg, 3.88 mmol) je dodat u malim porcijama smeši 3-(3-(difluorometil) fenilamino) ciklopent-2-enona (INTERMEDIJER D.7; 936 mg, 4.20 mmol) u 2-metiltetrahidrofuranu (10 mL). Posle 30 min terc-butil estar [benzensulfonil-(4-cijano-2-etansulfonil-fenil)-metil]-karbaminske kiseline (INTERMEDIJER D.2, 1.50 g, 3.23 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodati su etil acetat i voda i faze su odvojene. Organska faza je isprana sa vodom, osušena preko MgSO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Prinos: 2.35 g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 546; Vreme zadržavanja HPLC: 1.14 min (Z017_S04).
INTERMEDIJER D.9
4-{Amino-[2-(3-difluorometil-fenilamino)-5-okso-ciklopent-1-enil]-metil}-3-etan sulfonil-benzonitril hidrohlorid
Rastvor vodonik hlorida u 1,4-dioksanu(4 M, 3.0 mL, 12.0 mmol) je dodat rastvoru tercbutil estra {(4-cijano-2-etanesulfonil-fenil)-[2-(3-difluorometil-fenilamino)-5-oksociklopent-1-enil]-metil}-karbaminske kiseline (INTERMEDIJER D.8, 2.35 g, čistoće 75%, 3.23 mmol) u acetonitrilu (6 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h, a potom ohlađena u ledenom kupatilu. Talog je filtriran, ispran sa hladnim acetonitrilom i osušen. Prinos: 1.52 g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 446; Vreme zadržavanja HPLC: 0.86 min (Z017_S04).
INTERMEDIJER E.1
Dietil (4-bromo-2-metilsulfonil)fenil)metilendikarbamat
Trogrli okrugli balon sa ravnim dnom opremljen sa cevi za ekstrakciju napunjen sa kalcijum hloridom i ulazom za azot, 4-bromo-2-metanesulfonil-benzaldehid (4.50 g, 17.10 mmol) i etil karbamatom (3.35 g, 37.63 mmol) su zagrevani na 145 °C oko 5 h. Balon je očišćen sa protokom azota, i koncentrovana sumporna kisleina (ca. 200 µL, ca.3 mmol) je dodata polako kap po kap. Posle 7 h očvrsnuta reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, usitnjena, izmešana temeljno sa vodom i osušena. Ostatak je prečišćen sa brzom hromatografijom na silici (gradient dihlorometan do dihlorometan/metanol 95:5). Prinos: 5.05 g; ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 423 (struktura izotopa broma); Vreme zadržavanja HPLC: 0.77 min (Z011_S03).
INTERMEDIJER E.2
4-(4-Bromo-2-metansulfonil-fenil)-1-(3-trifluorometil-fenil)-3,4,6,7-tetrahidro-1H-ciklopentapirimidin-2,5-dion
Korak 1:
4-Bromo-1-(hloro (izocijanato) metil)-2-(metilsulfonil) benzen
Fosforni pentahlorid (5.47 g, 26.2 mmol) je dodat suspenziji dietil (4-bromo-2-metil sulfonil) fenil) metilendikarbamata (INTERMEDIJER E.1, 5.05 g, 11.9 mmol) u toluenu (30 mL) i smeša je zagrevana do refluksa 3 h. Toluen je uparen pod sniženim pritiskom i smeša je potom prečišćena sa destilacijom pod sniženim pritiskom (ca.160 °C, 0.1 mbar). Prinos: 945 mg.
Korak 2:
4-(4-Bromo-2-metansulfonil-fenil)-1-(3-trifluorometil-fenil)-3,4,6,7-tetrahidro-1H-ciklopentapirimidin-2,5-dion
3-(3-(Trifluorometil) fenilamino) ciklopent-2-enon (234 mg, 0.97 mmol) je dodat rastvoru 4-bromo-1-(hloro (izocijanato) metil)-2-(metilsulfonil) benzena (Korak 1, 945 mg, 2.91 mmol) u dihlorometanu (10 mL). Smeša je zagrevana na refluksu preko noći i potom koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen sa reverznom fazom HPLC (Agilent ZORBAX<TM>SB-C18, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% mravlja kiselina). Prinos: 110 mg; ESI maseni spektar: [M+ H]<+>= 529 (struktura izotopa broma); Vreme zadržavanja HPLC: 1.21 min (Z017_S04).
INTERMEDIJER E.3
4-(2,5-Diokso-1-(3-(trifluorometil) fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il)-3-(metilsulfonil) benzonitril
Pod atmosferom argona, smeša 4-(4-bromo-2-(metilsulfonil) fenil)-1-(3-(trifluorometil) fenil)-3,4,6,7-tetrahidro-1H-ciklopentapirimidin-2,5-diona (INTERMEDIJER E.2, 110 mg, 0.21 mmol), cink cijanida (32 mg, 0.27 mmol) i tetrakis (trifenilfosfin) paladijum(0) (24 mg, 21 µmol) u DMF (2 mL) je zagrevana na 110 °C preko noći i potom ohlađena do sobne temperature. Dodata je voda i smeša je filtrirana. Talog je prečišćen sa brzom hromatografijom na silici (gradient cikloheksan/ etil acetat 8:2 do 3:7). Prinos: 40 mg; ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 476; Vreme zadržavanja HPLC: 0.94 min (Z017_S04).
INTERMEDIJER E.3A I INTERMEDIJER E.3B: ENANTIOMERI INTERMEDIJERA E.3
Enantiomeri racemskog 4-(2,5-diokso-1-(3-(trifluorometil)fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il)-3-(metilsulfonil) benzonitrila (INTERMEDIJER E.3, 1.82 g, 3.83 mmol) su odvojeni sa preparativnom superkritičnom tečnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IB, 20 x 250 mm, 5 µm, 15% MeOH 0.2% dietilamin u superkritičnom CO2, 40 °C, 120 bar povratni pritisak).
INTERMEDIJER E.3A:
Prinos 620 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 476; Vreme zadržavanja: 2.52 min (ranije eluiran enantiomer) (I_IB_20_MeOH_DEA).
INTERMEDIJER E.3B:
Prinos 554 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 476; Vreme zadržavanja: 2.78 min (kasnije eluiran enantiomer) (I_IB_20_MeOH_DEA).
INTERMEDIJER E.4
2-[4-(4-cijano-2-metansulfonil-fenil)-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-1,2,4,5,6,7-heksahidro-ciklopentapirimidin-3-il]-etil estar sirćetne kiseline
Smeši 4-(2,5-diokso-1-(3-(trifluorometil) fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il)-3-(metilsulfonil) benzonitrila (INTERMEDIJER E.3, 300 mg, 0.57 mmol) i cezijum karbonata (463 mg, 1.42 mmol) uDMF (5.0 mL) dodat je 2-bromoetilacetat (0.20 mL, 1.82 mmol) i smeša je mešana na 50°C oko 3 dana. Reakciona smeša je razblažena sa acetonitrilom i vodom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 104 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 562; Vreme zadržavanja HPLC: 1.03 min (Z018_S04).
1
SINTEZE PRIMERA
Referentni PRIMER A.1
3-Hidroksimetil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
Rastvoru 5-cijano-2-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzoeve kiseline (INTERMEDIJER A.6; 700 mg; 1.537 mmol) u THF (10.5 ml) je dodat 1,1’-karbonildiimidazol (274 mg; 1.691 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h i ohlađena do 5°C. Natrijum borohidrid (87 mg; 2.31 mmol) u vodi (1.4 mL) je dodat u kapima, održavajući temepraturu između 5°C i 10°C. Reakciona smeša je mešana 45 min i zaustavljena sa 1M vodenom HCl. Dodati su etil acetat i voda, i faze su odvojene. Organski sloj je ispran sa vodom, osušen preko MgSO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen sa brzom hromatografijom na silici (dihlorometan/metanol 95:5 Æ 75:25). Prinos: 390 mg; ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 442; Vreme zadržavanja HPLC: 0.61 min (X012_S02).
Referentni PRIMERI A.1A I A.1B: ENANTIOMERI PRIMERA A.1
Enantiomeri PRIMERA A.1 (1220 mg) su odvojeni sa preparativnom superkritičnom fluidnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IC, 20 x 250 mm, 5 µm, 30% MeOH 20 mM amonijak u superkritičnom s CO2, protok 10 mL/min; 150 bar povratni pritisak).
Referentni PRIMER A.1A :
2
Prinos 330 mg; ESI maseni spektar [M+H]+ = 442; Vreme zadržavanja: 2.93 min (ranije eulirani enantiomer) (I_IC_40_MEOH_NH3).
Referentni PRIMER A.1B:
Prinos 314 mg; ESI maseni spektar [M+H]+ = 442; Vreme zadržavanja: 4.54 min (kasnije eluirani enantiomer) (I_IC_40_MEOH_NH3).
Referentni PRIMER A.2
3-(1-Hidroksi-1-metil-etil)-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
Rastvoru metil estra 5-cijano-2-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzoeve kiseline (INTERMEDIJER A.5; 400 mg; 0.852 mmol) u THF (5ml) dodat je rastvor metilmagnezijumhlorida u THF (3M, 625 µL; 1.875 mmol) u kapima na 0°C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zaustavljena sa 1M HCl. Dodati su etil acetat i voda i faze su odvojene.
Organski sloj je ispran sa vodom, osušen preko MgSO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen sa reverznom fazom HPLC (Waters Xbridge<TM>-C18, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 90 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 470; Vreme zadržavanja HPLC: 0.69 min (X012_S02).
Referentni PRIMER A.3
3-(1-Hidroksi-etil)-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksa hidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
Rastvor metilmagezijumhlorida u THF (3M, 0.239 mL; 0.717 mmol) je dodat na 5°C rastvoru 3-formil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitrila (INTERMEDIJER A.7, 300 mg; 0.683 mmol) u dietiletru (3 mL) i THF (2.5 mL). Reakciona smeša je mešana na 0°C 15 min i 1 h na sobnoj temperaturi. Dodati su voda i 1M vodene HCl dok pH nije kisela. Dodat je etil acetat i faze su odvojene. Organski sloj je osušen preko MgSO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen sa brzom hromatografijom na silici (prvo prikazivanje: dihlorometane/ metanol 98:2, drugo prikazivanje: cikloheksan/ etil acetat 2:8). Prinos: 112 mg; ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 456; Vreme zadržavanja HPLC: 0.62 min (X012_S02).
PRIMER B.1
4
4-[2,5-Diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-(3-hidroksi-propan-1-sulfonil)-benzonitril
Rastvoru 4-[2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-(3-hidroksi-propilsulfanil)-benzonitrila (INTERMEDIJER B.4, 13 mg, 0.027 mmol) u dihlorometanu (2.0 mL) je dodat 3-hloroperoksibenzoeva kiselina (40 mg, 0.18 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Agilent ZORBAX<TM>SB-C18, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 5 mg. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 520; Vreme zadržavanja HPLC: 0.93 min (Z018_S04).
Sledeći PRIMERI ili Reefrentni Primeri B.1.1 – B.1.4 su dobijeni na analogan način kao što je opisano za PRIMER B.1, angažujući polazne materijale koji su naznačeni u sledećoj tabeli.
Tabela 4
PRIMER B.1.2A i PRIMER B.1.2B: Enantiomeri PRIMERA B.1.2
Enantiomeri PRIMER B.1.2 (142 mg) su odvojeni sa preparativnom superkritičnom tečnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IB, 10 x 250 mm, 5 µm, 20% MeOH 20 mM NH3u superkritičnom CO2, protok 10 mL/min, 120 bar povratni pritisak, 40°C).
PRIMER B.1.2A:
Prinos 65 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 520; Vreme zadržavanja: 2.15 min (ranije eulirani enantiomer) (I_IB_20_MEOH_NH3).
PRIMER B.1.2B:
Prinos 63 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 520; Vreme zadržavanja: 2.77 min (kasnije eluiran enantiomer) (I_IB_20_MEOH_NH3).
Rengenska struktura PRIMERA B.1.2B vezana za neutrofilnu elastazu otkriva sledeću strukturu i konfiguraciju na ugljeniku označen sa zvezdicom:
Referentni PRIMER B.1.3A i Referentni PRIMER B.1.3B: Enantiomeri PRIMERA B.1.3 Enantiomeri Referentnog PRIMERA B.1.3 (120 mg) su odvojeni sa preparativnom superktitičnom fluidnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IB, 20 x 250 mm, 5 µm, 15% MeOH 20 mM NH3u superkritičnom CO2, protok 60 mL/min, 150 bar povratni pritisak, 40°C).
Referentni PRIMER B.1.3A:
Prinos 60 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 534; Vreme zadržavanja: 2.03 min (ranij eeuliran enantiomer) (I_IB_20_MEOH_NH3).
Referentni PRIMER B.1.3B:
Prinos 54 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 534; Vreme zadržavanja: 2.27 min (kasnije eluiran enantiomer) (I_IB_20_MEOH_NH3).
Referentni PRIMER C.1A i Referentni PRIMER C.1B: Enantiomeri INTERMEDIJERA C.11.1
Enantiomeri INTERMEDIJERA C.11.1 (ranije eluirani diastereomer, 490 mg, 1.035 mmol) su odvojeni preparativnom superkritičnom fluidnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IB, 10 x 250 mm, 5 µm, 20% MeOH 20 mM NH3u suprkritičnom CO2, protok 10 mL/min, 120 bar obrnuti pritisak).
Referentni PRIMER C.1A:
Prinos 167 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 474; Vreme zadržavanja: 2.83 min (ranije eluirani enantiomer) (I_IB_20_MEOH_NH3).
Reference PRIMER C.1B:
Prinos 170 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 474; Vreme zadržavanja: 3.25 min (kasnije eluirani enantiomer) (I_IB_20_MEOH_NH3).
Rengenska struktura Referentnog PRIMERA C.1B vezana za neutrofilnu elastazu otkriva sledeću strukturu i konfiguraciju na ugljeniku označen sa zvezdicom:
Referentni
Referentni PRIMER C.2A i Referentni PRIMER C.2B: Enantiomeri INTERMEDIJERA C.11.2
Enantiomeri INTERMEDIJERA C.11.2 (kasnije eluiran diastereomer, 317 mg, 0.670 mmol) su odvojeni preparativnom superkritičnom fluidnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IA, 20% MeOH 20 mM NH3u superkritičnom CO2, protok 60 mL/min, 150 bar obrnuti pritisak).
Referentni PRIMER C.2A
Prinos 126 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 474; Vreme zadržavanja: 1.58 min (ranije eluiran enantiomer) (I_IA_20_MEOH_NH3).
Referentni PRIMER C.2B
Prinos 126 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 474; Vreme zadržavanja: 2.33 min (kasnije eluiran enantiomer) (I_IA_20_MEOH_NH3).
Rengenska struktura Referentnog PRIMERA C.2A vezana za neutrofilnu elastazu otkriva sledeću strukturu i konfiguraciju na ugljeniku označen sa zvezdicom:
Referentni
Stoga, Referentni PRIMER C.1B i Referentni PRIMER C.2A imaju istu konfigiuraciju na ugljeniku označen sa zvezdicom i razlikuje se u odnosu na konfiguraciju atoma sumpora. Stoga, Referentni PRIMER C.1B i Referentni PRIMER C.2A su diastereomeri.
Referentni PRIMER C.3
Etilamid 4-(4-cijano-2-metansulfinil-fenil)-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-1,2,4,5,6,7-heksahidro-ciklopentapirimidin-3-karboksilne kiseline
Smeši 4-[2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-metansulfinil-benzonitrila (INTERMEDIJER C.12.2, kasnije eluiran diastereomer, 26 mg; 0.057 mmol), diizopropiletilamina (38 µL; 0.23 mmol) i 4-dimetilaminopiridina (8 mg; 0.06 mmol) u acetonitrilu (3 mL) dodat je 4-nitrofenilhloroformat (12.6 mg; 0.062 mmol) na sobnoj temperaturi i reakciona smeša je mešana oko 5 h. Etilamin (2M in THF; 114 µL; 0.228 mmol) je dodat reakcionoj smeši koja sadrži 4-nitrofenil karbamatni intermedijer i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona semša je prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Sunfire, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 4 mg. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 531; Vreme zadržavanja HPLC: 1.02 min (Z018_S04).
Referentni PRIMER C.4.1 I PRIMER C.4.2
4-[2,5-Diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-etansulfinil-benzonitril
3-Hloroperoksibenzoeva kiselina (77%, 45 mg, 0.201 mmol) je dodata na sobnoj temperaturi rastvoru 4-[2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-etilsulfanil-benzonitrila (INTERMEDIJER C.8, 106 mg, 0.210 mmol) u dihlorometanu (2 mL), i smeša je mešana 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom reverznom fazom HPLC (Sunfire, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA) dajući dva diastereomera.
Referentni PRIMER C.4.1:
Prinos: 15 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 474; Vreme zadržavanja HPLC: 0.91 min (ranije eluirani diastereomer) (Z018_S04).
Referentni PRIMER C.4.2:
Prinos: 32 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 474; Vreme zadržavanja HPLC: 0.93 min (kasnije eulirani diastereomer) (Z018_S04).
PRIMER C.5.1 I PRIMER C.5.2
3-Etansulfinil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
3-Hloroperoksibenzoeva kiselina (77%, 24 mg, 0.107 mmol) je dodata na sobnoj temperaturi rastvoru 4-[3-metil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-etilsulfanil-benzonitrila (INTERMEDIJER C.10, 53 mg, 0.112 mmol) u dihlorometanu (1 mL) i smeša je mešana 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen sa reverznom fazom HPLC (Sunfire, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA) dajući dva diastereomera.
PRIMER C.5.1:
Prinos: 26 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 488 ; Vreme zadržavanja HPLC: 0.96 min (ranije eulirani diastereomer) (Z018_S04).
PRIMER C.5.2:
Prinos: 17 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 488; Vreme zadržavanja HPLC: 0.97 min (kasnije eluirani diastereomer) (Z018_S04).
Referentni PRIMER C.6.1 I Referentni PRIMER C.6.2
1
Metil amid 4-(4-cijano-2-etansulfinil-fenil)-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-1,2,4,5,6,7-heksahidro-ciklopentapirimidin-3-karboksilne kiseline
3-Hloroperoksibenzoeva kiselina (77%, 24 mg, 0.107 mmol) je dodata na sobnoj temperaturi rastvoru metilamida 4-(4-cijano-2-etilsulfanil-fenil)-2,5-diokso-1-(3-trifluoro metil-fenil)-1,2,4,5,6,7-heksahidro-ciklopentapirimidin-3-karboksilne kiseline (INTERMEDIJER C.13, 58 mg, 0.113 mmol) u dihlorometanu (2 mL), i smeša je mešana 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen sa reverznom fazom HPLC (Sunfire, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA) dajući dva diastereomera.
Referentni PRIMER C.6.1:
Prinos: 7 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 531; Vreme zadržavanja HPLC: 0.98 min (ranije eluirani diastereomer) (Z018_S04).
Reference PRIMER C.6.2:
Prinos: 15 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 531; Vreme zadržavanja HPLC: 1.00 min (kasnije eluirani diastereomer) (Z018_S04).
Referentni PRIMER D.1A
2
(Enantiomer 1)
3-Metansulfonil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
Smeši 4-[2,5-diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-metansulfonil-benzonitrila (INTERMEDIJER D.6A, ranije eluirani enantiomer, 92 mg, 0.19 mmol) i cezijum karbonat (126 mg, 0.39 mmol) u DMF (3.0 mL) je dodat rastvoru metil jodida u metil-terc-butiletra (c =2 mol/L, 116 µL, 0.23 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 h. Reakcionoj smeši je dodat led, smeša je zakiseljena sa trifluorosirćetnom kiselinom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 54 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 491; Vreme zadržavanja HPLC: 0.98 min (Z018_S04). Pošto je polazni materijal čist enantiomer, predpostavlja se da je PRIMER D.1A čist enantiomer i ima istu konfiguraciju kao polazni materijal.
Referentni PRIMER D.1B
(Enantiomer 2)
3-Metansulfonil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
PRIMER D.1B je dobijen na analogan način kao što je opisano za PRIMER D.1A, menjajući INTERMEDIJER D.6A (ranije eluirani enantiomer) sa INTERMEDIJER D.6B (kasnije eluiranim enantiomer) kao polaznim materijalom. ESI maseni spektar [M+H]<+>= 491; Vreme zadržavanja HPLC: 0.98 min (Z018_S04). Referentni PRIMER D.1B je enantiomer PRIMER D.1A. Kao polazni materijal je čist enantiomer, pretpostavlja se da je Referetni PRIMER D.1B čist enantiomer i da ima istu konfiguraciju kao polazni materijal.
Referentni PRIMER D.2
4-[2,5-Diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-etansulfonil-benzonitril
Rastvoru 4-{amino-[5-okso-2-(2-trifluorometil-piridin-4-ilamino)-ciklopent-1-enil] -metil}-3-etansulfonil-benzonitril hidrohlorida (INTERMEDIJER D.5.1, 706 mg, 1.41 mmol) i trietilamina (50 µL, 0.36 mmol) u acetonitrilu (3.0 mL) dodat je 1,1’-karbonildiimidazol (260 mg, 1.60 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 15 min. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% mravlja kiselina). Prinos: 562 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 491; Vreme zadržavanja HPLC: 0.94 min (Z018_S04).
Referentni PRIMERI D.2.1 – D.2.4 su dobijeni na analogan način kao što je opisano za Referentni PRIMER D.2, angažujući polazne materijale navedene u sledećoj tabeli, respektivno.
4
Tabela 5
Referentni PRIMER D.3
3-Etansulfonil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
Rastvor metiljodida u metil-terc-butiletru (c = 2 mol/L, 97 µL, 0.19 mmol) je dodat smeši 4-[2,5-diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-etansulfonil-benzonitrila (PRIMER D.2, 80 mg, 0.16 mmol) i cezijum karbonata (97 mg, 0.30 mmol) u DMF (1.0 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zakiseljena sa sirćetnom kiselinom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 63 mg. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 505; Vreme zadržavanja HPLC: 1.02 min (Z018_S04).
Referentni PRIMER D.3A AND Referentni PRIMER D.3B: ENANTIOMERI Referentnog PRIMERA D.3
Enantiomeri racemskog 3-etansulfonil-4-[3-metil-2,5-diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitrila (PRIMER D.3, 104 mg, 0.206 mmol) su odvojeni preparativnom superkritičnom tečnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IC, 10 x 250 mm, 5 µm, 30% MeOH 20 mM NH3u superkritičnom CO2, 40 °C, 120 bar pozadinski pritisak).
Referentni PRIMER D.3A:
Prinos 45 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 505; Vreme zadržavanja: 1.94 min (ranije eluirani enantiomer) (I_IC_30_MeOH_NH3).
Reference PRIMER D.3B:
Prinos 47 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 505; Vreme zadržavanja: 2.36 min (kasnije eluirani enantiomer) (I_IC_30_MeOH_NH3).
Referentni PRIMERI D.3.1 – D.3.4 su dobijeni na analogan način kao što je opisano za PRIMER D.3, angažujući polazne materijale navedene u sledećoj tabeli, respektivno.
Tabela 6
Referentni PRIMER D.4
Metiamid 4-(4-cijano-2-etanesulfonil-fenil)-2,5-diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-1,2,4,5,6,7-heksahidro-ciklopentapirimidin-3-karboksilne kiseline
Smeša 4-[2,5-diokso-1-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-etansulfonil-benzonitrila (PRIMER D.2, 80 mg, 0.16 mmol), 4-nitrofenil hloroformata (100 mg, 0.50 mmol), 4-dimetilaminopiridina (70 mg, 0.57 mmol) i diizopropiletilamina (0.12 mL, 0.71 mmol) u acetonitrilu (1.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Metilamin (c = 2 mol/L, 1.0 mL; 2.00 mmol) je dodat smeši koja sadrži 4-nitrofenil karbamat intermedijer i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Reakciona smeša je zakiseljena sa sirćetnom kiselinom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 43 mg. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 548; Vreme zadržavanja HPLC: 0.99 min (Z018_S04).
Referentni PRIMERI D.4.1 – D.4.10 su dobijeni na analogan način kao što je opisano za Referentni PRIMER D.4, angažujući polazne materijale navedene u sledećoj tabeli, respektivno.
Tabela 7
*Pošto je polazni materijal INTERMEDIJER D.6.A čist enantiomer, pretpostavlja se da je Referentni PRIMER D.4.10 čist enantiomer i ima istu konfiguraciju kao polazni materijal.
Referentni PRIMER D.4.1A I Referentni PRIMER D.4.1B: ENANTIOMERI Referentnog PRIMERA D.4.1
Enantiomeri racemskog etilamida 4-(4-cijano-2-etanesulfonil-fenil)-2,5-diokso-1-(2-tri fluorometil-piridin-4-il)-1,2,4,5,6,7-heksahidro-ciklopentapirimidine-3-karboksilne kiseline (PRIMER D.4.1, 127 mg, 0.226 mmol) su odvojeni preparativnom superkritičnom tečnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IA, 10 x 250 mm, 5 µm, 25% MeOH u superkritičnom CO2, 40 °C, 120 bar pozadinski pritisak).
Referentni PRIMER D.4.1A:
Prinos 56 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 562; Vreme zadržavanja: 1.51 min (ranije eluirani enantiomer) (I_IA_25_MeOH_NH3).
Reference PRIMER D.4.1B:
Prinos 54 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 562; Vreme zadržavanja: 2.59 min (kasnije eluirani enantiomer) (I_IC_25_MeOH_NH3).
PRIMER D.5
1
4-[1-(3-Difluorometil-fenil)-2,5-diokso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-etansulfonil-benzonitril
Trietilamin (238 µL, 1.699 mmol) je dodat smeši 4-{amino-[2-(3-difluorometilfenilamino)-5-okso-ciklopent-1-enil]-metil}-3-etansulfonil-benzonitril hidrohlorida (INTERMEDIJER D.9, 1.516 g, čistoće 90%, 2.831 mmol) i 1,1’-karbonildiimidazola (551 mg, 3.40 mmol) u acetonitrilu (10 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je tretiran sa vodom. Talog je filtriran i osušen. Prinos: 1.24 g. ESI maseni spektar: [M+H]<+>= 472; Vreme zadržavanja HPLC: 0.92 min (Z017_S04).
PRIMER D.5A I PRIMER D.5B: ENANTIOMERI PRIMERA D.5
Enantiomeri racemata 4-[1-(3-difluorometil-fenil)-2,5-diokso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-etansulfonil-benzonitrila (PRIMER D.5, 490 mg, 1.04 mmol) su odvojeni sa preparativnom superkritičnom tečnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Lux C1, 20 x 250 mm, 5 µm, MeOH, 21 mL/min brzina protoka).
PRIMER D.5A:
Prinos 262 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 472; Vreme zadržavanja: 2.95 min (ranije eluirani enantiomer) (I_IB_20_MeOH_NH3).
PRIMER D.5B:
Prinos 223 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 472; Vreme zadržavanja: 3.66 min (kasnije eluirani enantiomer) (I_IB_20_MeOH_NH3).
2
Referentni PRIMER D.6
4-[1-(3-Difluorometil-fenil)-3-metil-2,5-diokso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il]-3-etansulfonil-benzonitril
Metiljodid (20 µL, 0.32 mmol) je dodat smeši 4-[1-(3-difluorometil-fenil)-2,5-diokso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-etansulfonil-benzonitrila (PRIMER D.5, 50 mg, 0.106 mmol) i cezijum karbonata(69 mg, 0.212 mmol) u DMF (1 mL), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je prečišćena sa reveznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 36 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 486; Vreme zadržavanja HPLC: 0.79 min (005_CA01).
Referentni PRIMER D.7
Metilamid 4-(4-cijano-2-etansulfonil-fenil)-1-(3-difluorometil-fenil)-2,5-diokso-1,2,4,5,6,7-heksahidro-ciklopentapirimidin-3-karboksilne kiseline 4-Nitrofenilhloroformat (23 mg; 0.12 mmol) je dodat smeši 4-[1-(3-difluorometil-fenil)-2,5-diokso-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-etansulfonil-benzonitrila (PRIMER D.5; 50 mg; 0.106 mmol), DIPEA (72 µL; 0.42 mmol) i 4-dimetilaminopiridina (14 mg; 0.12 mmol) u acetonitrilu (1 mL) i smeša je mešana na sobnoj temeparturi 2 h.4-Nitrofenilhloroformat (23 mg; 0.12 mmol) je dodat i reakcija je mešana 1 h. Metilamin (2M u THF, 159 µL; 0.318 mmol) je dodat smeši koja sadrži 4-nitrofenil karbamat intermedijer i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je prečišćena reverznom fazom HPLC (Stablebond, gradient acetonitrila u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 32 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 529; Vreme zadržavanja HPLC 0.98 min (Z017_S04).
Referentni PRIMER E.1
4-[3-(2-Hidroksi-etil)-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-metansulfonil-benzonitril
2-[4-(4-Cijano-2-metansulfonil-fenil)-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-1,2,4,5,6,7-heksahidro-ciklopentapirimidin-3-il]-etil estar sirćetne kiseline (INTERMEDIJER E.4, 40 mg, 0.071 mmol) je mešan sa trifluorosirćetnom kiselinom (2.0 mL, 26 mmol) na 60°C preko noći i smeša je koncentrovana pod sniženim prittiskom. Ostatak je mešan sa acetonitrilom i vodom 2 h (Æhidroliza estra trifluorosirćetne kiseline) i potom prečišćen sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 17 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 520; Vreme zadržavanja HPLC: 0.96 min (Z018_S04).
4
Referentni PRIMER E.2
(Enantiomer)
4-[3-(3-Hidroksi-propil)-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-3-metansulfonil-benzonitril
Smeši 4-(2,5-diokso-1-(3-(trifluorometil) fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il)-3-(metilsulfonil) benzonitrila (INTERMEDIJER E.3A, ranije eluirani enantiomer, 150 mg, 0.32 mmol) i cezijum karbonat (206 mg, 0.63 mmol) u DMF (2.0 mL) je dodat 3-bromo-1-propanol (55 µL, 0.63 mmol) i smeša je mešana na 50°C preko noći. Reakciona smeša je tretirana sa ledenom vodom, zakiseljena sa trifluorsirćetnom ksielinom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 40 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 534; Vreme zadržavanja HPLC: 0.97 min (Z018_S04). Kao polazni materijal je čist enantiomer, predpostavlja se da je PRIMER E.2 čist enantiomer i ima istu konfiguraciju kao polazni materijal.
Referentni PRIMER E.3
3-Metansulfonil-4-[3-oksetan-3-ilmetil-2,5-diokso-1-(3-trifluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitril
Smeši 4-(2,5-diokso-1-(3-(trifluorometil) fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopenta pirimidin-4-il)-3-(metilsulfonil) benzonitrila (INTERMEDIJER E.3, 150 mg, 0.32 mmol) i cezijum karbonata (206 mg, 0.63 mmol) u DMF (2.0 mL) dodat je 3-bromometil-oksetan (95 mg, 0.63 mmol) i smeša je mešana na 50°C preko noći. Reakciona smeša je tretirana sa ledenom vodom, zakiseljena sa trifluorosirćetnom kiselinom i prečišćena sa reverznom fazom HPLC (Waters SunFire<TM>-C18, gradient acetonitril u vodi, 0.1% TFA). Prinos: 55 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 546; Vreme zadržavanja HPLC: 1.01 min (Z018_S04).
Referentni PRIMER E.3A I Referentni PRIMER E.3B: ENANTIOMERI Referentnog PRIMERA E.3
Enantiomeri racemskog 3-metansulfonil-4-[3-oksetan-3-ilmetil-2,5-diokso-1-(3-tri fluorometil-fenil)-2,3,4,5,6,7-heksahidro-1H-ciklopentapirimidin-4-il]-benzonitrila (Referentni PRIMER E.3, 55 mg, 0.065 mmol) su odvojeni sa preparativnom superkritičnom fluidnom hromatografijom na hiralnoj fazi (Daicel Chiralpak IC, 10 x 250 mm, 5 µm, 30% MeOH 20 mM NH3u superktitičnom CO2, 40 °C, 120 bar pozadinski pritisak).
Referentni PRIMER E.3A:
Prinos 11 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 546; Vreme zadržavanja: 4.12 min (ranije eluirani enantiomer) (I_IC_30_MeOH_NH3).
Referentni PRIMER E.3B:
Prinos 11 mg; ESI maseni spektar [M+H]<+>= 546; Vreme zadržavanja: 4.66 min (kasnije eluirani enantiomer) (I_IC_30_MeOH_NH3).
FARMAKOLOŠKI PODACI
Druge karakteristike i prednosti predmetnog pronalaska će postati očigledne iz sledećih više detaljnijih primera koji ilustruju, nizom primera, principe pronalaska.
ANALIZA HUMANE NEUTROFILNE ELASTAZE
Materijali: Humana neutrofilna elastaza je nabavljena od Calbiochem (Cat.No.: 324681), a supstrat elastaze MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC od Bachem (Cat.No.: I-1270). Svi drugi materijali su najveće ocene komericijalno dostupni.
Sledeći puferi su korišćeni: Pufer jedinjenja: 100mM Tris, 500 mM NaCl, podešen na pH 7.5; Pufer analize: 100mM Tris, 500 mM NaCl, podešen na pH 7.5, koji sadrži 0.01% BSA.
Uslovi analize: Test jedinjenja su prethodno razblažena u DMSO a potom u puferu jedinjenja (5% DMSO finalni).5 ĆL ovog razbaženog jedinjenja je izmešano sa 10 Ćl
Neutrofilnom elastazom (9 ng/ml u puferu analize) u crnoj 384 posudi OptiPlate (Perkin Elmer, Cat No.: 6007270) i inkubirani 15 min na sobnoj temperaturi. Potom je dodato 10 Ć
L supstratnog rastvora u puferu analize (250 ĆM finalna koncentracija) i ploče su
inkubirane 60 min na sobnoj temparturi. Posle inaktivacije enzima, fluorescentni intenziteti su izmereni na 380 nm ekscitacije i 460 nm emisije svetlosnih talasa.
Svaka ploča sadrži bunarčLće sa visokom kontrolom vrednosti (DMSO enzim supstrat) i bunarčLće sa niskom kontrolom vrednosti (DMSO inaktivirani enzimi supstrat). IC50vrednosti su procenjene koristeći sigmoidalnu koncentracionu krivu odgovora sa varijabilnim padom. Srednje vrednosti niskih vrednosti su uzete kao 0 %, srednje vrednosti visokih vrednosti kao 100 %. IC50vrednosti odabranih jedinjenja kod analize Neutrofil Elastaze su navedene u Tabeli 8.
TABELA 8
ANALIZA ZA ODREĈIVANJEbINHIBITORNE AKTIVNOSTI NEUTROFILNE ELASTAZE U HUMANOJ PLAZMI
Citratna krv iz zdravog ljudskog donora je izmešana sa zimosanom suspenzijom i inkubirana na sobnoj temperaturi. Ovo vodi do stimulacije neutrofila i otpuštanja neutrofilne elastaze u plazmu. Stimulisana krv je centrifugirana kako bi se generisala plazma obogaćena neutrofilnom elastazom.
Priprema zimosanog radnog rastvora:
Zimosan (100 mg) je izmešan sa slanim rastvorom (0.9%, 10 mL) i mešan na 4 °C oko jedne nedelje (napomena: zimosan se ne rastvara u slanom rastvoru i koristi se kao suspenzija).
Stimilacija krvi:
• Pojedinačan uzorak krvi od 45 ml je uzet u 50 ml epruvetu koja sadrži citrat (3.13%, 5 mL) i epruveta je nežno invertovana 4 puta.
• Odmah posle uzimanja krvi, radni rastvor zimosan (5 mL) je dodat.
• Posle dodavanja radnog rastvora zimosan, epruveta je zatvorena, nežno izmešana i inkubirana na 22 °C 15 min na tresilici od 20 rpm.
• Napravljen je 10 ml alikvota posle vremena inkubacije.
• Centrifugirno je 15 ml epruvete na 800g 15 min na 4°C u Jouan centrifugi.
• Plazma je zasejana i napravljeno 1-5 ml alikvota.
• Skladištena je plazma na -80 °C.
Razne koncentracije inhibitora neutrofilne elastaze su inkubirane sa plazmom. Potom, enzimska aktivnost je izmerena koristeći fluorogenski supstrat MeOSuc-Ala-Ala-Pro-ValAMC (Bachem Cat. No. I-1270, koncentracija supstrata: 250 µM, pH 7.5, 25 mM TRIS pufer, 250 mM NaCl) na analogan način kao što je opisano za analizu humanog neutrofila. Kriva odgovora doze je generisana kako bi se izračunala EC50vrednost inhibitora. Analiza podataka je izvedena računanjem procenta fluorescencije u prisustvu test jedinjenja u poređenju sa fluorescencijom kontrolnog nosača posle praćenja pozadinske fluorescencije: Inhibitor neutrofilnog elastaznog enzima će dati vrednosti između 100 % kontrolni (nema inhibicije) i 0 % kontrolne (potpuna inhibicija).
EC50vrednosti odabranih jedinjenja u analizi humane plazme prethodno opisane su navedene u Tabeli 9.
Tabela 9
1
ANALIZA ZA ODREĈIVANJE METABOLIýKE STABILNOSTI SA HUMANIM MIKROZOMIMA JETRE
Metabolička degradacija testiranog jedinejnja je analizirana na 37 °C sa izvučenim humanim mikrozomima jetre. Finalna zapremina inkubacije 100 ȝl po vremenskoj tački sadrži TRIS pufer pH 7.6 (0.1 M), magnezijum hlorid (5 mM), mikrozomalni protein (1 mg/ml) i test jedinjenje pri finalnoj koncentraciji od 1 ȝM. Prateći kratak period prethodne inkubacije na 37 °C, reakcije su započete dodavanjem beta-nikotinamid adenin dinukleotid fosfata, redukovani oblik (NADPH, 1 mM), i prekinute prebacivanjem alikvota u acetonitril posle različith vremenskih tačaka. Dodatno, NADPH-nezavisna degradacija je praćena u inkubaciji bez NADPH, prekinuta u poslednjoj vremenskoj tački. [%] preostalog test jedinjenja posle NADPH nezavisne inkubacije je reflektovan sa parametrom c(kontrol) (metabolička stabilnost). Zaustavljene inkubacije su iscentrifugirane sa centrifugom (10’000 g, 5 min). Alikvot supernatanta je analiziran sa LC-MS/MS za količinu srodnog jedinjenja.
Polu vek (t1/2INVITRO) je određen padom semilogaritmičkog plota profila koncentracija -vreme. Intrinzička jesnoča (CL_INTRINSIC) je izračunata uzimajući u obzir količinu proteina u inkubaciji:
CL_INTRINSIC [ȝl/min/mg protein] = (ln 2 / (polu vek [min] * sadržaj proteina [mg/ml])) *1’000.
Vrednosti polu veka (t1/2INVITRO) odabranih jedinjenja u analizi metaboličke stabilnosti prethodno opisane su navedene u Tabeli 10.
Tabela 10
2
ANALIZA ZA ODREĈIVANJE METABOLIýKE STABILNOSTI SA HUMANIM HEPATOCITIMA
Metabolička degradacija test jedinjenja je analizirana u humanoj hepatocitnoj suspenziji. Humani hepatociti (obično krio čuvani) su inkubirani u odgovarajućem pufernom sistemu (npr. Dulbecco ́s modifikovani eagle medijum plus 3.5 µg glukagon / 500 mL, 2.5 mg insulin / 500 mL i 3.75 mg / 500 mL hidrokortizon) koji sadrži 5 % uzorkovanog seruma. Prateći (obično) 30 min prethodnu inkubaciju u inkubatoru (37 °C, 10 % CO2), 5 µl rastvora test jedinjenja (80 µM; iy 2 mM tasrcor šarže u DMSO razblažen 1:25 sa medijumom) su dodati u 395 µl hepatocitnu suspenziju (gustina ćelije u opsegu 0.25-5*10<6>ćelija/mL, obično 1*10<6>ćelija/mL; finalna koncentracija test jedinjenja 1µM, finalna DMSO koncentracija 0.05 %). ûelije su inkubirane šest sati (inkubator, orbitalna tresilica) i uzorci (25 µl) su uzeti na 0, 0.5, 1, 2, 4 i 6 sati. Uzorci su prebačeni u acetonitril i centrifugirani sa centrifugom (5 min). Supernatant je prebačen u novu ploču sa 96 bunarčLća, uparen pod atozom i resuspendovan. Dobijeno srodno jedinjenje je anlizirano sa LC-MS/MS.
Intrinzična jasnoća CL_INTRINSIC je izračunata ko što sledi:
CL_INTRINSIC = Doza / AUC = (C0/CD) / (AUD clast/k) * 1’000/60
(C0: početna koncentracija u inkubaciji [µM], CD: gustina ćelije vitalnih ćelija
[10<6>ćelije/mL], AUD: područje ispod podataka [µM * h], clast: koncentracija poslednje tačke podatka [µM], k: pad regresijske linije za srodno odbijanje [h<-1>])
Izračunata in vitro hepatična intrinzična jasnoća može biti postavljena do intrinzične in vivo hepatične jasnoće i da se korsiti za predviđanje hepatične in vivo jasnoće krvi (CL) primenom modela jetre (dobro izmešan model):
CL_INTRINSIC_INVIVO [ml/min/kg] = (CL_INTRINSIC [µL/min/10<6>ćelije] * hepatocelularnost [10<6>ćelije/g jetre] * faktor jetre [g/kg telesne težine]) / 1’000
CL [ml/min/kg] = CL_INTRINSIC_INVIVO [ml/min/kg] * hepatični protok krvi [ml/min/kg] / (CL_INTRINSIC_INVIVO [ml/min/kg] hepatični portok krvi [ml/min/kg])
Qh[%] = CL [ml/min/kg] / hepatič protok krvi [ml/min/kg])
(Hepatocelularnost, humani: 120*10<6>ćelije / g jetre; jetre, human: 25.7 g / kg telesne težine; protok krvi, humani: 21 ml/(min * kg))
Na osnovu ove analize, Primer C.2A pokazuje predviđenu hepatičnu in vivo jasnoći krvi 3% humanog hepatičnog protoka krvi.
ANALIZA ZA ODREĈIVANJE PRENOSA LEKA KROZ HUMANE CACO-2 ûELIJE
Analiza obezbeđuje informaciju o mogućnosti jedinjenja da prođe ćelijsku membranu, na opseg oralne apsorpcije, kao i na šta se jedinjenje aktivno transportuje pomoću transportera za prihvatanje i/ili efluks. Za merenje propustljivosti preko polarizovanih, konfluentnih ćelija humanog kancera karcinoma debelog creva 2 (Caco-2) ćelijski monoslojevi koji se uzgajaju na propusnim filterskim nosačima koriste se kao model apsorpcije in vitro.
Izmereni su očigledni koeficijenti permeabilnosti (PE) jedinjenja preko Caco-2 monoslojeva (pH 7.2, 37 °C) u apikalni do bazni (AB) (absorptivni) i bazni do apikalni (BA) (sekretorni) smer transporta. AB permeabilnost (PEAB) predstavlja apsorpciju leka iz
4
creva u krvotok, a BA permeabilnost (PEBA) sekreciju leka iz krvotoka nazad u crevo putem obe pasivne permeabilnosti kao i aktivnih transportnih mehanizama posredovani sa efluksom i transporterima koji se izražavaju na Caco-2 ćelije. Jedinjenja se pripisuju klasama permeabilnosti / apsorpcije upoređivanjem permeabilnosti AB sa permeabilnostima AB referentnih jedinjenja sa poznatom in vitro permeabilnošću i oralnom apsorpcijom u čoveku. Identične ili slične permeabilnosti u oba pravca transporta ukazuju na pasivnu permeaciju, vektorska permeabilnost ukazuje na dodatne aktivne transportne mehanizme. Više PEBA nego PEAB sugeriše uključivanje apikalnog efluksnog transportera (kao što je P-gp) i/ili transportera bazalateralnog preuzimanja; veća PEAB nego PEBA permeabilnost predlaže uključivanje apikalnog transportera (kao što je PepT1) i/ili bazolateralnog efluks transportera (kao MRP3). Aktivni transport je zasićen koncentracijom.
Caco-2 ćelije (1-2 * 10<5>ćelije/cm<2>površine) su zasejane na filternom ulošku (Costar transwell polikarbonat ili PET filteri, 0.4 ȝm veličina pore) i kultivisane (DMEM) 10 do 25 dana.
Jedinjenja su rastvorena u odgovarajućem rastvaraču (kao što je DMSO, 1-20 mM rastvora bujona). Rastvori bujona su razblaženi sa HTP-4 puferom (128.13 mM NaCl, 5.36 mM KCl, 1 mM MgSO4, 1.8 mM CaCl2, 4.17 mM NaHCO3, 1.19 mM Na2HPO4x7H2O, 0.41 mM NaH2PO4xH2O, 15 mM HEPES, 20 mM glukoza, pH 7.2) kako bi se dobili transportni rastvori (obično 10 ȝM jedinjenja, finalna DMSO <= 0.5 %). Transportni rastvor (TL) se primenjuje na apikalnu ili bazolateralnu donatorsku stranu za merenje A-B ili B-A permeabilnost (3 zamenjena filtera), respektivno. Strana prijema sadrži HTP-4 pufer suplementovan sa 2% BSA. Uzorci su prikupljeni na početku i na kraju eksperimenta od donora i u raznim vremenskim intervalima do 2 sata takođe od strane koja prima za merenje koncentracije sa LC-MS/MS ili scintilacionog brojanja. Zapremine prijemnika zamenjene su novim rešenjem prijemnika.
2čigledni koeficijenti permeabilnosti (PEAB i PEBA) odabranih jedinjenja u Caco-2 testu transporta leka prethodno opisanom navedeni su u Tabeli 11.
TABELA 11
ANALIZA ZA ODREĈIVANJE VODENE RASTVORLJIVOSTI (“Metod visoke putanje”)
Rastvorljivost jedinjenja u vodi je određena upoređivanjem količine rastvorene u vodenom puferu (koji sadrži 2,5% DMSO) sa količinom rastvorenom u rastvoru acetonitril / voda (1/1). Počevši od 10 mM osnovnog rastvora DMSO, alikvoti su razblaženi sa acetonitrilom / vodom (1/1) i McIlvaine puferom pH 6,8, respektivno. Posle 24 h mućkanja, rastvori ili suspenzije su filtrirani i analizirani pomoću LC-UV. Količina rastvorena u puferu se upoređuje sa količinom rastvorenom u rastvoru acetonitril / voda (1/1). Rastvorljivost se meri od 0.001 do 0.125 mg / ml u DMSO koncentraciji od 2.5%. Ako je više od 90% jedinjenja rastvoreno u puferu, vrednost je označena sa ">".
Rastvorljivost vodenog rastvora odabranih jedinjenja u prethodno opisanom testu rastvorljivosti je navedena u Tabeli 12.
TABELA 12
ANALIZA ZA ODRĈIVANJE VODENE RASTVORLJIVOSTI (“Postupak posude koja se trese”)
Zasićeni rastvori se pripremaju u pločama sa bunarčLćima dodavanjem odgovarajuće zapremine odabranog vodenog medijuma (obično u opsegu od 0,25 - 1,5 ml) u svakom bunarčLću u koja sadrži poznatu količinu čvrste lekovite supstance (tipično u opsegu 0,5 -5,0 mg). Bunari se mućkaju ili mešaju tokom unapred određenog vremenskog perioda (obično u opsegu od 2 - 24 h) i zatim filtriraju upotrebom odgovarajućih filter membrana (obično PTFE-filteri sa veličinom pora 0,45 um). Apsorpcija filtera se izbegava diskardovanjem prvih nekoliko kapi filtrata. Količina rastvorene lekovite supstance se određuje pomoću UV spektroskopije ili pomoću HPLC sa UV-detekcijom. Dodatno, pH zasićenog vodenog rastvora se meri upotrebom pH metra staklene elektrode. Prajmeri u Tabeli 12 pokazuju rastvorljivost > 0.01 mg / mL na pH 6.8 (McIlvaine pufer) u ovom testu rastvorljivosti
ANALIZA ZA ODREĈIVANJE INHIBITORA CITOHROM P4502C9
Inhibicija citohrom P4502C9-izoenzimske katalizovane hidroksilacije Diklofenaka sa test jedinjenjem je analizirana na 37°C sa mikrozomima humane jetre. Sve analize su izvedene na robotičnom sistemu na pločama sa 96 bunarčLća. Finalna zaprema inkubacije sadrži TRIS pufer (0.1 M), MgCl2(5 mM), mikrozome humane jetre (0.1 mg/ml), Diklofenak (10 µM) i test jedinjenje u pet različitih koncentracija ili bez jedinjenja (visoke kontrole) u duplikatu (npr. najviša koncentracija 10-50 µM sa naknadnim serijskim 1:4 razblaženjima). Prateći kratak period prethodne inkubacije, reakcije su započete sa kofaktorom (NADPH, 1 mM) i zaustavljene hlađenjem inkubatora do 8 °C i potom dodavanjem jedne zapremine acetonitrila. Unutrašnji standardni rastvor – obično stabilni izotop obrazovanog metabolita – je dodat posle zaustavljanja inkubacije. Analitički maksimum površine (= formirani metabolit) i unutrašnji standard se određuju pomoću LC-MS/MS. Rezultujući odnos analita prema unutrašnjem standardu u ovim inkubacijama se upoređuje sa kontrolnom aktivnošću koja ne sadrži test jedinjenje. Unutar svakog testas, određen je IC50inhibitora pozitivne kontrole (sulfafenazol). Eksperimentalno IC50vrednosti su izračunate sa najmanjom kvadratnom regresijom prema sledećoj jednačini:
% kontrolne aktivnosti = (100 % kontrolne aktivnosti/(1+(I/IC50)*S))-B
(I = koncentracija inhibitora, S = faktor nagiba, B = pozadinska aktivnost)
Ako je inhibicija reakcije već > 50% pri najnižoj koncentraciji ispitivanog jedinjenja, IC50je dodeljen "<testiranoj najnižoj koncentraciji" (obično < 0.4 µM). Ako je inhibicija reakcije još uvek < 50% pri najvećoj koncentraciji ispitivanog jedinjenja, IC50je dodeljen "> najvećoj testiranoj koncentraciji" (obično > 50 µM). Primer A.1A, Primer B.1.2B i Primer C.2A pokazuju IC50vrednosti > 50 µM u ovom testu.
ANALIZA ZA ODREĈIVANJE INHIBITORA CITOHROM P4502C19
Inhibicija citohrom P4502C9-izoenzimske katalizovane hidroksilacije Diklofenaka sa test jedinjenjem je analizirana na 37°C sa mikrozomima humane jetre. Sve analize su izvedene na robotičnom sistemu na pločama sa 96 bunarčLća. Finalna zaprema inkubacije sadrži TRIS pufer (0.1 M), MgCl2(5 mM), mikrozome humane jetre (0.1 mg/ml), Diklofenak (10 µM) i test jedinjenje u pet različitih koncentracija ili bez jedinjenja (visoke kontrole) u duplikatu (npr. najviša koncentracija 10-50 µM sa naknadnim serijskim 1:4 razblaženjima).
Prateći kratak period prethodne inkubacije, reakcije su započete sa kofaktorom (NADPH, 1 mM) i zaustavljene hlađenjem inkubatora do 8 °C i potom dodavanjem jedne zapremine acetonitrila. Unutrašnji standardni rastvor – obično stabilni izotop obrazovanog metabolita – je dodat posle zaustavljanja inkubacije. Analitički maksimum površine (= formirani metabolit) i unutrašnji standard se određuju pomoću LC-MS/MS. Rezultujući odnos analita prema unutrašnjem standardu u ovim inkubacijama se upoređuje sa kontrolnom aktivnošću koja ne sadrži test jedinjenje. Unutar svakog testas, određen je IC50inhibitora pozitivne kontrole (sulfafenazol). Eksperimentalno IC50vrednosti su izračunate sa najmanjom kvadratnom regresijom prema sledećoj jednačini:
% kontrolne aktivnosti = (100 % kontrolne aktivnosti /(1+(I/IC50)*S))-B
(I = koncentracija inhibitora, S = faktor nagiba, B = pozadinska aktivnost)
Ako je inhibicija reakcije već > 50% pri najnižoj koncentraciji ispitivanog jedinjenja, IC50je dodeljen "<testiranoj najnižoj koncentraciji" (obično < 0.4 µM). Ako je inhibicija reakcije još uvek < 50% pri najvećoj koncentraciji ispitivanog jedinjenja, IC50je dodeljen "> najvećoj testiranoj koncentraciji" (obično > 50 µM). Primer A.1A, Primer B.1.2B i Primer C.2A pokazuju IC50vrednosti > 50 µM u ovom testu.
ANALIZA ZA ODREĈIVANJE INHIBITORA CITOHROM P4502C8
Inhibicija citohrom P4502C9-izoenzimske katalizovane deetilacije Amodiahina sa test jedinjenjem je analizirana na 37°C sa mikrozomima humane jetre. Sve analize su izvedene na robotičnom sistemu na pločama sa 96 bunarčLća. Finalna zaprema inkubacije sadrži TRIS pufer (0.1 M), MgCl2(5 mM), mikrozome humane jetre (0.1 mg/ml), Diklofenak (10 µM) i test jedinjenje u pet različitih koncentracija ili bez jedinjenja (visoke kontrole) u duplikatu (npr. najviša koncentracija 10-50 µM sa naknadnim serijskim 1:4 razblaženjima). Prateći kratak period prethodne inkubacije, reakcije su započete sa kofaktorom (NADPH, 1 mM) i zaustavljene hlađenjem inkubatora do 8 °C i potom dodavanjem jedne zapremine acetonitrila. Unutrašnji standardni rastvor – obično stabilni izotop obrazovanog metabolita – je dodat posle zaustavljanja inkubacije. Analitički maksimum površine (= formirani metabolit) i unutrašnji standard se određuju pomoću LC-MS/MS. Rezultujući odnos analita prema unutrašnjem standardu u ovim inkubacijama se upoređuje sa kontrolnom aktivnošću koja ne sadrži test jedinjenje. Unutar svakog testas, određen je IC50inhibitora pozitivne kontrole (sulfafenazol). Eksperimentalno IC50vrednosti su izračunate sa najmanjom kvadratnom regresijom prema sledećoj jednačini:
% kontrolne aktivnosti = (100 % kontrolne aktivnosti /(1+(I/IC50)*S))-B
(I = koncentracija inhibitora, S = faktor nagiba, B = pozadinska aktivnost)
Ako je inhibicija reakcije već > 50% pri najnižoj koncentraciji ispitivanog jedinjenja, IC50je dodeljen "<testiranoj najnižoj koncentraciji" (obično < 0.4 µM). Ako je inhibicija reakcije još uvek < 50% pri najvećoj koncentraciji ispitivanog jedinjenja, IC50je dodeljen "> najvećoj testiranoj koncentraciji" (obično > 50 µM). Primer A.1A, Primer B.1.2B i Primer C.2A pokazuju IC50vrednosti > 50 µM u ovom testu.
ANALIZA ZA ODREĈIVANJE INDUKCIJE CITOHROM P450
Kako bi se odredila indukcija metabolizujućeg enzima CYP3A4, krio sačuvane HepaRG® ćelije su zasejane pri gustini od 1.0 x 105 po 96 bunarčLća. ûelijama je dozvoljeno da se uravnoteže 72 sata pre izlaganja 10 µM testa u trajanju od 48 sati sa obnavljanjem test artikla svakih 24 sata. Poznati prototipski induktori CIP3A4 Rifampicin se koristi kao pozitivna kontrola u koncentraciji od 25 µM. Posle 48 sati izlaganja, medijum koji sadrži ispitivani proizvod je uklonjen i ćelije su isprane sa fosfatnim puferom (PBS) pre izolacije mRNK.
Računanje:
Indukcija presavijanja = (Enzimski mRNK Jedinjenje) / (Enzimski mRNK Kontrolni Rastvarač)
Faza Indukcije = (Preklopljeno Jedinjenje)/(Preklopljeni Rifampicin)*100
1
ANALIZA ZA ODREĈIVANJE hERG INHIBICIJE
Inhibicija kalijumovog kanala hERG (human etar-a-go-go-srodni gen) može se odrediti kao što je opisano u Rast, G., & Guth, B.D., Journal of Pharmacological and Toxicological Metods (2014), http://dx.doi.org/10.1016/j.vascn.2014.08.001.
hERG inhibicija odabranih jedinjenja u ovoj patch clamp analizi je navedena u Tabeli 13.
TABELA 13
KOMBINACIJE
Jedinjenja opšte formule 1 mogu da se koriste sami ili da se kombinuju sa drugim aktivnim supstancama formule 1 prema pronalasku. Jedinjenja opšte formule 1 mogu takođe opciono da budu kombinovana sa drugim farmakološkim aktivnim supstancama. Ovo uključuje, ß2-adrenoceptor-agoniste (kratko i dugo delujući), anti-holinergici (kratko i dugo delujući), anti-inflamatorni steroidi (oralni i topični kortikosteroidi), kromoglicat, metilksantin, disocirani-glucokortikoidmimetici, PDE3 inhibitori, PDE4- inhibitori, PDE7- inhibitori, LTD4 antagonisti, EGFR- inhibitori, Dopamine agonisti, PAF antagonisti, Lipoxin A4 derivativi, FPRL1 modulatori, LTB4-receptor (BLT1, BLT2) antagonisti, Histamine H1 receptor antagonisti, Histamine H4 receptor antagonisti, dual Histamine H1/H3-receptor antagonisti, PI3-kinase inhibitori, inhibitori ne-receptor tirozin kinaze kao na primer LYN, LCK, SYK, ZAP-70, FYN, BTK ili ITK, inhibitori MAP kinaze kao na primer p38, ERK1, ERK2, JNK1, JNK2, JNK3 ili SAP, inhibitori NF-țB signalne putanje kao na primer IKK2 kinaza inhibitori, iNOS inhibitori, MRP4 inhibitori, leukotrien biosinteza inhibitori kao na primer 5-Lipoksigenaza (5-LO) inhibitori, cPLA2 inhibitori, Leukotriene A4 Hidrolase inhibitori ili FLAP inhibitori, MMP9-inhibitori, MMP12-inhibitori, ne-steroidni antiinflamatorni agensi (NSAIDs), Cathepsin C (or DPPI / Dipeptidilaminopeptidaza I)
1 1
inhibitori, CRTH2 antagonisti, DP1-receptor modulatori, Thromboxane receptor antagonisti, CCR3 antagonisti, CCR4 antagonisti, CCR1 antagonisti, CCR5 antagonisti, CCR6 antagonisti, CCR7 antagonisti, CCR8 antagonisti, CCR9 antagonisti, CCR30 antagonisti, CXCR3 antagonisti, CXCR4 antagonisti, CXCR2 antagonisti, CXCR1 antagonisti, CXCR5 antagonisti, CXCR6 antagonisti, CX3CR3 antagonisti, Neurokinin (NK1, NK2) antagonisti, Sphingosine 1-Phosphate receptor modulatori, Sphingosine 1 fosfat liaza inhibitori, Adenozin receptor modulatori kao na primer A2a-agonisti, modulatori purinergikreceptora kao na primer P2X7 inhibitori, Histone Deacetilase (HDAC) activatori, Bradykinin (BK1, BK2) antagonisti, TACE inhibitori, PPAR gama modulatori, Rho-kinase inhibitori, interleukin 1-beta konvertujući enzimski (ICE) inhibitori, Toll-Like receptor (TLR) modulatori, HMG-CoA reductase inhibitori, VLA-4 antagonisti, ICAM-1 inhibitori, SHIP agonisti, GABAa receptor antagonist, ENaC-inhibitori, Prostasin-inhibitori, Melanocortin receptor (MC1R, MC2R, MC3R, MC4R, MC5R) modulatori, CGRP antagonisti, Endothelin antagonisti, TNFĮ antagonisti, anti-TNF antitela, anti-GM-CSF antitela, anti-CD46 antitela, anti-IL-1 antitela, anti-IL-2 antitela, anti-IL-4 antitela, anti-IL-5 antitela, anti-IL-13 antitela, anti-IL-4/IL-13 antitela, anti-TSLP antitela, anti-OX40 antitela, mukoregulatori, imunoterapeutični agensi, jedinjenja protiv oticanja disajnih puteva, jedinjenja protiv kašlja, VEGF inhibitori, ali takođe i kombinacije dve ili tri aktivne supstance.
Poželjni su betamimetici, antiholinergici, kortikosteroidi, PDE4-inhibitori, LTD4-antagonisti, EGFR-inhibitori, Katepsin C inhibitori, CRTH2 inhibitori, 5-LO-inhibitori, Histamin receptor antagonisti i SYK-inhibitori, naročito Katepsin C inhibitori, ali takođe kombinacije dve ili tri aktivne kombinacije dve ili tri aktivne supstance, a to su:
x Betamimetici sa kortikosteroidima, PDE4-inhibitorima, CRTH2-inhibitorima ili LTD4-antagonistima,
x Antiholinergici sa betamimeticima, kortikosteroidima, PDE4-inhibitorima, CRTH2-inhibitorima ili LTD4-antagonistima,
x Kortikosteroidi sa PDE4-inhibitorima, CRTH2-inhibitorima ili LTD4-antagonistima x PDE4-inhibitori sa CRTH2-inhibitorima ili LTD4-antagonistima
x CRTH2-inhibitori sa LTD4-antagonistima.
1 2
FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE
Prikladni preparati za davanje jedinjenja formule će biti očigledni onima sa uobičajenim veštinama u tehnici i koji obuhvataju na primer tablete, pilule, kapsule, supozitorije, lozenge, pastile, rastvore, sirupe, eliksire, kesice, injekcije, inhalatore i praškove itd.
Pogodne tablete se mogu dobiti, na primer, mešanjem jednog ili više jedinjenja prema formuli I sa poznatim ekscipijensima, na primer, inertnim razblaživačem, nosačima, dezintegrantima, adjuvansima, površinskim supstancama, vezivnim supstancama i/ili lubrikantima. Tablete mogu takođe da se sastoje od nekoliko slojeva.
INDIKACIJE
Jedinjenja pronalaska i njihove farmaceutske prihvatljive soli imaju aktivnost kao lekovi, naročito kao inhibitori neutrolfil elastaze, i prema tome se mogu koristiti u lečenju:
1. respiratornog trakta: opstruktivne bolesti disajnih puteva uključujući: astmu, uključujući bronhijsku, alergijsku, unutrašnju, spoljašnju, indukovanu vežbom, izazvanu lekom (uključujući aspirin i NSAID-indukovanu) i prašinu izazvanu astmu, i povremene i trajne i svih težina, i druge uzroke hiper odgovora disajnih puteva; hronična opstruktivna plućna bolest (COPD); bronhitis, uključujući infektivni i eozinofilni bronhitis; emfisema; nedostatak alfa1-antitripsina; bronhiektazije; Cistična fibroza; sarkoidoza; pluća farmera i srodne bolesti; hiper-senzitivni pneumonitis; fibroza pluća, uključujući kriptogeni fibrozni alveolitis, idiopatičke intersticijalne pneumonije, fibrozu koja komplikuje antineoplastičnu terapiju i hroničnu infekciju, uključujući tuberkulozu i aspergilozu i druge gljivične infekcije; komplikacije plućne transplantacije; vaskulitički i trombotski poremećaji vaskulature pluća i pulmnernarna hipertenzija; antitusična aktivnost uključujući tretman hroničnog kašlja povezanog sa upalnim i sekretornim stanjima dišnih puteva i jatrogenim kašljem; akutni i hronični rinitis uključujući medikamentoze rinitisa i vazomotorni rinitis; višegodišnji i morski alergijski rinitis uključujući rinitis nervosa (peludna groznica); nazalna polipoza; akutna virusna infekcija uključujući zajedničku prehladu i infekciju usled respiratornog sincicijalnog virusa, gripa, korona¬virusa (uključujući SARS) i adenovirusa; akutna povreda pluća; akutni respiratorni distres sindrom;
1
2. kože: psorijaza, atopični dermatitis, kontaktni dermatitis ili druge ekcematske dermatoze, i hipersenzitivne reakcije odloženog tipa; fito- i fotodermatitis; seborejični dermatitis, dermatitis herpetiformis, lišaj planus, lišaj sklerozus et atrophica, pioderma gangrenosum, kožni sarkoid, discoidni lupus eritematozus, pemfigus, pemfigoid, epidermolizna buloza, urtikaria, angioedema, vaskulitides, toksićni eritemas, kutaneozni eozinofilias, alopecia areata, muška ćelavost, Sweetov sindrom, Weber-Christian sindrom, eritema multiform; celulitis, obe infektivne i ne infektivne; paniculitis; kutaneozna limfoma, ne-melanomski rak kože i druge displastične lezije; poremećaji izazvani lekovima uključujući fiksne erupcije lekova;
3. očiju: blefaritis; konjunktivitis, uključujući perenijalni alergijski konjunktivitis; iritis; prednji i posteriorni uveitis; horoiditis; autoimune, degenerativne ili upalne poremećaje koji utiču na retinu; oftalmitis uključujući simpatetLčki oftalmitis; sarkoidoza; infekcije, uključujući virusne, gljivične i bakterijske;
4. genitourinarnog sistema: nefritis uključujući intersticijalni i glomerulonefritis; nefrotski sindrom; cistitis uključujući akutni i hronični (intersticijalni) cistitis i Hunnerov čir; akutni i hronični uretritis, prostatitis, epididimitis, ooforitis i salpingitis; vulvo-vaginitis; Peironievu bolest; erektilne disfunkcije (i muške i ženske);
5. alograft odbacivanja: akutno i hronično praćenje, na primer, transplantacije bubrega, srca, jetre, pluća, koštane srži, kože ili rožnjače ili nakon transfuzije krvi; ili hronične bolest transplantata protiv domaćina;
6. drugih autoimunih i alergisjkih poremećaja uključujući reumatoidni artritis, sindrom iritabilnog creva, sistemskog eritematoznog lupusa, multiple skleroze, Hašimoto tiroiditisa, Gravesovog oboljenja, Addisonove bolesti, dijabetes melitusa, idiopatičnog trombocitopaenične purpure, eozinofilni fascitisa, hiper-IgE sindroma, antifosfolipidnog sindroma i Sazary sindroma;
7. okologije: lečenje čestih karcinoma uključujući tumore prostate, dojke, pluća, jajnika, pancrektatike, creva i debelog creva, želuca, kože i mozga i maligniteta koji utiču na koštanu srž (uključujući leukemije) i limfoproliferativne sisteme, kao što su Hodgkinovi i
1 4
ne Hodgkinov limfom; uključujući prevenciju i lečenje metastatskih bolesti i recidiva tumora i paraneoplastičnih sindroma; i
8. infektivnih oboljenja: virusne bolesti kao što su genitalne bradavice, uobičajene bradavice, plantarne bradavice, hepatitis B, hepatitis C, herpes simpleks virus, molluscum kontagiosum, variola, virus humane imunodeficijencije (HIV), humani papiloma virus (HPV), citomegalovirus (CMV), varičela virus zoster (VZV), rinovirus, adenovirus, koronavirus, influenca, para-influenca; bakterijske bolesti kao što su tuberkuloza i micobacterium avium, lepra; druge zarazne bolesti, kao što su gljivične bolesti, klamidija, Candida, aspergillus, kriptokokni meningitis, Pneumocistis karnii, kriptosporidioza, histoplazmoza, toksoplazmoza, infekcija tripanosomom i leishmanijaza i,
9. drugih bolesti: traumatska povreda mozga, aneurizam abdominalne aorte
Predmetni pronalazak je usmeren na jedinjenja opšte formule 1 koja su korisna u prevenciji i/ili lečenju oboljenja i/ili stanja pri čemu je aktivnost inhibitora neutrofilne elastaze od terapeutske koristi, uključujući ali ne ograničavajući se na lečenje i/ili prevenciju astme i alergijskih bolesti, gastrointestinalne inflamatorne bolesti, glomerulonefritis, eozinofilne bolesti, hroničnu opstruktivnu bolest pluća, infekciju patogenih mikroba, reumatoidni artritis, neutrofilna oboljenja, cistična fibroza (CF), ne-cistična fibroza, idiopatska pulmonarna fibroza, bronhiektazija, vaskulitis povezan sa ANCA, rak pluća, bronhiektazija nekisiklične fibroze, emfizem, hronični bronhitis, akutna povreda pluća (ALI), akutni respiratorni sindrom distresa (ARDS), plućna hipertenzija, plućna arterijska hipertenzija (PAH), nedostatak alfa-1-antitripsina (AATD), gojaznost i srodna upala, npr. hronična upala adipoznog tkiva, upala masnog tkiva, zapaljenje uzrokovano visokim unosom masnoće, insulinska rezistencija, dijabetes, masna jetra i steatoza jetre.
Korelacija između biološke aktivnosti i medicinskih indikacija je opisana u literaturi npr. “Henriksen, P. A. Current Opinion in Hematology (2014), 21(1), 23-28”
Shodno tome, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje opšte formule 1 kao lek.
Za lečenje gore opisanih oboljenja i stanja, terapeutski efikasna doza će generalno biti u opsegu od oko 0.01 mg do oko 100 mg/kg telesne težine po doziranju jedinjenja
1
pronalaska; poželjno, od oko 0.1 mg do oko 20 mg/kg telesne težine po doziranju. Na primer, za davanje osobi od 70 kg, opseg doze bi bio od oko 0.7 mg do oko 7000 mg po dozi jedinjenja pronalaska, poželjno od oko 7.0 mg do oko 1400 mg po doziranju. Može se zahtevati određeni stepen rutinske optimizacije doze da bi se odredio optimalni nivo doziranja i šablon. Aktivni sastojak se može davati od 1 do 6 dana dnevno.
Stvarna farmaceutski efikasna količina ili terapeutska doza će naravno zavisiti od faktora poznatih stručnjacima, kao što su starost i težina pacijenta, način primene i težina bolesti. U svakom slučaju aktivni sastojak će se primenjivati u dozama i na način koji omogućava da se farmaceutski efikasna količina dostavi na osnovu jedinstvenog stanja pacijenata.
LISTA SKRAûENICA
1
1

Claims (1)

PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule 1 i R<3>je H; ili R<1>je R<2>je i R<3>je CH3; ili , i R<3>je CH3; 1 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, formule 1.a
1.a ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 3. Jedinjenje prema zahtevu 1, formule 1.b
1.b 11 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 4. Jedinjenje prema zahtevu 1, formule 1.c
1.c ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 5. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 4, pri čemu konfiguracija formule 1 je formula 1'
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 6. Jedinjenje prema zahtevu 5, formule 1.a'
1.a' ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 7. Jedinjenje prema zahtevu 5, formule 1.b'
1.b' ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 8. Jedinjenje prema zahtevu 5, formule 1.c'
1.c' ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 9. Jedinjenje formule 1 prema bilo kom od zahteva 1 do 8 za primenu kao medikament. 10. Jedinjenje formule 1 prema bilo kom od zahteva 1 do 8 za primenu kao medikament za lečenje astme i alergijskih oboljenja, gastrointestinalnih inflamatornih oboljenja, glomerulonefritisa, eozinofiličnih oboljenja, hroničnog obstruktivnog pulmonarnog oboljenja, infekcija sa patogenim mikrobima i reumatoidnog artritisa. 11. Jedinjenje formule 1 prema bilo kom od zahteva 1 do 8 za primenu kao medikament za lečenje neutrofilnih oboljenja, cistične fibroze (CF), ne-cistične fibroze, idiopatične pulmonarne fibroze, bronhiectaze, ANCA-povezanog vaskulitisa, kancera pluća, ne-cistične fibroze bronhiektaze, emfiseme, hroničnog bronhitisa, akutne povrede pluća (ALI), akutnog respiratornog distres sindroma (ARDS), pulmonarne hipertenzije, pulmonarne arterialne hipertenzije (PAH) i Alfa-1-antitripsin deficijencije (AATD). 12. Jedinjenje formule 1 prema bilo kom od zahteva 1 do 8 za primenu kao medikament za lečenje gojaznosti i srodne inflamacije, insulinske rezistencije, dijabetesa, masne jetre i jetrene steatoze. 11 13. Jedinjenje formule 1 prema bilo kom od zahteva 1 do 8 za primenu kao medikament za lečenje traumatične povrede mozga, abdominalnog aortnog aneurizma i Graft vs. Host Oboljenja (GvHD). 14. Farmaceutska kompozicija, naznačena time, što sadrži jedno ili više jedinjenja formule 1 prema bilo kom od zahteva 1 do 8 ili njegova farmaceutska prihvatljiva so. 15. Farmaceutska kompozicija koja sadrži dodatno jedinjenje formule 1, prema bilo kom od zahteva 1 do 8, farmaceutski aktivno jedinjenje odabrano između grupe koja se sastoji od betamimetika, antiholinergika, kortikosteroida, PDE4-inhibitora, LTD4-antagonista, EGFR-inhibitora, Katepsin C inhibitora, CRTH2 inhibitora, 5-LO-inhibitora, Histamin receptor antagonista i SYK-inhibitora, ali takođe i kombinaciju dve ili tri aktivne supstance. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20190942A 2014-07-31 2015-07-30 Supstituisani biciklični dihidropirimidinoni i njihova primena kao inhibitori aktivnosti neutrofilne elastaze RS59040B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14179288 2014-07-31
PCT/EP2015/067501 WO2016016365A1 (en) 2014-07-31 2015-07-30 Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
EP15744229.4A EP3174861B1 (en) 2014-07-31 2015-07-30 Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59040B1 true RS59040B1 (sr) 2019-08-30

Family

ID=51257371

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190942A RS59040B1 (sr) 2014-07-31 2015-07-30 Supstituisani biciklični dihidropirimidinoni i njihova primena kao inhibitori aktivnosti neutrofilne elastaze

Country Status (32)

Country Link
US (1) US9475779B2 (sr)
EP (2) EP3174861B1 (sr)
JP (1) JP6345337B2 (sr)
KR (1) KR102420210B1 (sr)
CN (2) CN107253933B (sr)
AP (1) AP2016009632A0 (sr)
AU (1) AU2015295283B2 (sr)
CA (1) CA2956745C (sr)
CL (1) CL2017000117A1 (sr)
CO (1) CO2017000745A2 (sr)
CY (1) CY1121933T1 (sr)
DK (1) DK3174861T3 (sr)
EA (1) EA033263B1 (sr)
ES (1) ES2740428T3 (sr)
HR (1) HRP20191353T1 (sr)
HU (1) HUE045530T2 (sr)
IL (1) IL249687B (sr)
LT (1) LT3174861T (sr)
ME (1) ME03526B (sr)
MX (1) MX2017001347A (sr)
MY (1) MY182438A (sr)
NZ (1) NZ727554A (sr)
PE (1) PE20170524A1 (sr)
PH (1) PH12017500114A1 (sr)
PL (1) PL3174861T3 (sr)
PT (1) PT3174861T (sr)
RS (1) RS59040B1 (sr)
SA (1) SA517380781B1 (sr)
SG (1) SG11201700658UA (sr)
SI (1) SI3174861T1 (sr)
UA (1) UA118130C2 (sr)
WO (1) WO2016016365A1 (sr)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3101274A1 (en) * 2018-04-24 2019-10-31 Ph Pharma Co., Ltd. Use of neutrophil elastase inhibitors in liver disease
CN114650819A (zh) 2019-09-17 2022-06-21 美莱奥生物制药第四有限公司 用于治疗移植物排斥、闭塞性细支气管炎综合征和移植物抗宿主病的阿维来司他
WO2021209740A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Mereo Biopharma 4 Limited Methods involving neutrophil elastase inhibitor alvelestat for treating coronavirus infection
EP4419102A1 (en) 2021-10-20 2024-08-28 Mereo Biopharma 4 Limited Neutrophil elastase inhibitors for use in the treatment of fibrosis
CN115109066B (zh) * 2022-06-30 2023-04-07 武汉工程大学 一种大斯托克斯位移检测弹性蛋白酶的荧光探针及其制备方法与应用
WO2026032210A1 (zh) * 2024-08-05 2026-02-12 上海壹迪生物技术有限公司 一种含嘧啶酮的化合物、其药物组合物及其用途

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6207665B1 (en) 1997-06-12 2001-03-27 Schering Aktiengesellschaft Piperazine derivatives and their use as anti-inflammatory agents
DE60214428T2 (de) 2001-12-20 2007-09-20 Bayer Healthcare Ag 1, 4-dihydro-1, 4-diphenylpyridin-derivate
JP4619122B2 (ja) 2002-08-27 2011-01-26 バイエル・シェーリング・ファルマ・アクチェンゲゼルシャフト Ｈｎｅインヒビターとしてのジヒドロピリジノン誘導体
GB0219896D0 (en) 2002-08-27 2002-10-02 Bayer Ag Dihydropyridine derivatives
EP1546113B1 (en) 2002-09-10 2013-05-01 Bayer Intellectual Property GmbH Pyrimidinone derivatives as therapeutic agents against acute and chronic inflammatory, ischaemic and remodelling processes
GB2392910A (en) 2002-09-10 2004-03-17 Bayer Ag 2-Oxopyrimidine derivatives and their use as human leukocyte elastase inhibitors
US7566723B2 (en) 2002-09-10 2009-07-28 Bayer Healthcare Ag 1-phenyl1-3,4-dihydropyrimidin-2(1H)-one derivatives and their use
CA2557271C (en) 2004-02-26 2012-08-21 Bayer Healthcare Ag 1,4-diaryl-dihydropyrimidin-2-ones and their use as human neutrophil elastase inhibitors
ES2428503T3 (es) 2004-02-26 2013-11-08 Bayer Intellectual Property Gmbh 1,4-Diaril-dihidropirimidin-2-onas y su uso como inhibidores de elastasa de neutrófilos humanos
GB0502258D0 (en) 2005-02-03 2005-03-09 Argenta Discovery Ltd Compounds and their use
DE102005028845A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Substituierte Heterocyclen, ihre Verwendung als Medikament sowie enthaltende pharmazeutische Zubereitungen
GB0512940D0 (en) 2005-06-24 2005-08-03 Argenta Discovery Ltd Compounds and their use
WO2009013444A1 (en) 2007-07-25 2009-01-29 Argenta Discovery Limited Tetrahydropyrrolopyrimidinediones and their use as human neutrophil elastase inhibitors
NZ572250A (en) * 2006-05-04 2011-10-28 Pulmagen Therapeutics Inflammation Ltd Tetrahydropyrrolopyrimidinediones and their use as human neutrophil elastase inhibitors
US8198288B2 (en) 2006-05-04 2012-06-12 Pulmagen Therapeutics (Inflammation) Limited Tetrahydropyrrolopyrimidinediones and their use in therapy
GB0608844D0 (en) * 2006-05-04 2006-06-14 Argenta Discovery Ltd Enzyme inhibitors
DE102006031314A1 (de) 2006-07-01 2008-01-03 Bayer Healthcare Aktiengesellschaft Verwendung von 1,4-Diaryl-dihydropyrimidin-2-on-Derivaten zur Behandlung der pulmonalen arteriellen Hyptertonie
US20100010024A1 (en) 2006-07-01 2010-01-14 Bayer Healthcare Ag Use of1,4-diaryl-dihydropyrimidine-2-on derivatives for treating pulmonary arterial hypertension
WO2009037413A1 (en) 2007-09-19 2009-03-26 Argenta Discovery Limited Dimers of 5- [ (4-cyanophenyl) sulfinyl] -6-methyl-2-oxo-1- [3- (trifluoromethyl)phenyl] -1,2-dihydropyridine-3-carboxamide as inhibitors of human neutrophil elastase for treating respiratory diseases
WO2009060158A1 (en) 2007-11-07 2009-05-14 Argenta Discovery Limited 4- (4-cyanophenyl) -1- (3-trifluoromethylphenyl) -3,4, 6, 7-tetrahydro-1h-pyrrolo [3, 4- d] pyrimidine-2, 5-dione derivatives and their use as human neutrophil elastase inhibitors
WO2009060206A1 (en) 2007-11-07 2009-05-14 Argenta Discovery Limited 3,4,6,7-tetrahydro-1h-pyrrolo[3,4-d]pyrimidine-2,5-diones and their therapeutic use
GB0721866D0 (en) 2007-11-07 2007-12-19 Argenta Discovery Ltd Pharmaceutical compounds having dual activities
DE102007061766A1 (de) 2007-12-20 2009-06-25 Bayer Healthcare Ag 4-(4-Cyano-2-thioaryl)-dihydropyrimidinone und ihre Verwendung
US8288402B2 (en) * 2007-12-20 2012-10-16 Bayer Intellectual Property Gmbh 4-(4-cyano-2-thioaryl)dihydropyrimidinones and their use
DE102008022521A1 (de) 2008-05-07 2009-11-12 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft 1,4-Diaryl-pyrimidopyridazin-2,5-dione und ihre Verwendung
DE102009004197A1 (de) 2009-01-09 2010-07-15 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Heterocyclisch anellierte Diaryldihydropyrimidin-Derivate und ihre Verwendung
DE102009016553A1 (de) 2009-04-06 2010-10-07 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Sulfonamid- und Sulfoximin-substituierte Diaryldihydropyrimidinone und ihre Verwendung
WO2011042145A1 (en) 2009-10-07 2011-04-14 Siena Biotech S.P.A. Wnt pathway antagonists
GB201004178D0 (en) 2010-03-12 2010-04-28 Pulmagen Therapeutics Inflamma Enzyme inhibitors
GB201004179D0 (en) 2010-03-12 2010-04-28 Pulmagen Therapeutics Inflamma Enzyme inhibitors
JP2013177318A (ja) 2010-06-30 2013-09-09 Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd ジヒドロピリミジノン誘導体およびその医薬用途
CN104024241B (zh) 2011-08-01 2016-01-20 大日本住友制药株式会社 尿嘧啶衍生物和其用于医学目的的用途
AR087841A1 (es) 2011-09-14 2014-04-23 Chiesi Farma Spa Derivados de tetrahidrotriazolopirimidina
RU2638537C2 (ru) 2012-07-12 2017-12-14 КЬЕЗИ ФАРМАЧЕУТИЧИ С.п.А. Ингибирование ферментов
US20140057926A1 (en) 2012-08-23 2014-02-27 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted 4-pyridones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
US9102624B2 (en) 2012-08-23 2015-08-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted 4-pyridones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
US20140057920A1 (en) 2012-08-23 2014-02-27 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted 4-pyridones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
WO2014035414A1 (en) 2012-08-31 2014-03-06 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Printable medium
NZ709153A (en) 2012-12-18 2019-01-25 Chiesi Farm Spa Pyrimidinone derivatives having human neutrophil elastase inhibitory activity
US20140221335A1 (en) * 2013-02-06 2014-08-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
US9115093B2 (en) 2013-03-04 2015-08-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
EP3050418A1 (de) 2015-01-28 2016-08-03 Horsch Maschinen GmbH Dosiersystem einer landwirtschaftlichen maschine

Also Published As

Publication number Publication date
KR102420210B1 (ko) 2022-07-13
AP2016009632A0 (en) 2016-12-31
MY182438A (en) 2021-01-25
SG11201700658UA (en) 2017-02-27
CY1121933T1 (el) 2020-10-14
BR112017001554A2 (pt) 2017-11-21
EA033263B1 (ru) 2019-09-30
US20160031829A1 (en) 2016-02-04
CA2956745A1 (en) 2016-02-04
CN106660988B (zh) 2019-06-21
CN107253933A (zh) 2017-10-17
CL2017000117A1 (es) 2017-09-15
WO2016016365A1 (en) 2016-02-04
PE20170524A1 (es) 2017-05-19
PH12017500114A1 (en) 2017-05-29
EP3539952A1 (en) 2019-09-18
EP3174861A1 (en) 2017-06-07
KR20170032465A (ko) 2017-03-22
CN107253933B (zh) 2021-10-26
LT3174861T (lt) 2019-07-10
SI3174861T1 (sl) 2019-08-30
ME03526B (me) 2020-04-20
UA118130C2 (uk) 2018-11-26
EP3174861B1 (en) 2019-05-15
CN106660988A (zh) 2017-05-10
EP3539952B1 (en) 2022-06-22
IL249687A0 (en) 2017-02-28
SA517380781B1 (ar) 2020-09-21
EA201790282A1 (ru) 2017-07-31
JP6345337B2 (ja) 2018-06-20
US9475779B2 (en) 2016-10-25
PT3174861T (pt) 2019-09-04
MX2017001347A (es) 2017-04-27
NZ727554A (en) 2022-09-30
CA2956745C (en) 2023-03-14
AU2015295283A1 (en) 2017-01-12
HRP20191353T1 (hr) 2019-11-01
IL249687B (en) 2019-11-28
ES2740428T3 (es) 2020-02-05
PL3174861T3 (pl) 2019-11-29
JP2017525687A (ja) 2017-09-07
DK3174861T3 (da) 2019-08-12
CO2017000745A2 (es) 2017-04-10
AU2015295283B2 (en) 2019-12-19
HUE045530T2 (hu) 2020-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9670166B2 (en) Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
EP3174860B1 (en) Substituted dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
EP3174862B1 (en) Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
RS59040B1 (sr) Supstituisani biciklični dihidropirimidinoni i njihova primena kao inhibitori aktivnosti neutrofilne elastaze
JP6591529B2 (ja) 置換二環式ジヒドロピリミジノンおよび好中球エラスターゼ活性の阻害薬としてのそれらの使用
US20140249129A1 (en) Substituted Bicyclic Dihydropyrimidinones And Their Use As Inhibitors Of Neutrophil Elastase Activity
US9657015B2 (en) Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
USRE47493E1 (en) Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
HK1232871B (en) Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
HK1232871A1 (en) Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
BR112017001554B1 (pt) Di-hidropirimidinonas bicíclicas substituídas, seu sal, composição farmacêutica que os compreende e seu uso como inibidores de atividade da elastase neutrófila