RS59079B1

RS59079B1 - Dermalni injekcioni sterilni sastav

Info

Publication number: RS59079B1
Application number: RS20190862A
Authority: RS
Inventors: François Bourdon; Stéphane Meunier
Original assignee: Teoxane
Priority date: 2012-10-24
Filing date: 2013-10-24
Publication date: 2019-09-30
Also published as: PL2912074T3; FR2997014A1; WO2014064632A1; PL2912074T5; BR112015009162B1; CA2888616A1; DK2912074T3; US9907739B2; TR201911149T4; EP2912074A1; SI2912074T1; KR102178252B1; ES2735017T5; AU2013336274B2; RU2015118969A; JP2016507592A; RU2653729C2; DK2912074T4; EP2912074B2; FR2997014B1

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak odnosi se na oblast sterilnih injekcionih sastava na bazi hijaluronske kiseline ili na njihovu so i namenjene su za lečenje defekata i nedostataka na koži.

[0002] Hijaluronska kiselina, koja je prirodno prisutna u koži, poznata je po svojim viskoelastičnim svojstvima i veoma visokoj sklonosti da apsorbuje vodu. Njena svojstva u velikoj meri doprinose elastičnosti kože.

[0003] Imajući u vidu njene osobine i svojstva biokompatibilnosti, tolerancije i nedostatka toksičnosti, korišćene su prednosti ovog jedinjenja već više od 10 godina u mnogim primenama u medicinskoj i kozmetičkoj oblasti, a posebno u estetskim postupcima.

[0004] Prema tome, hijaluronska kiselina se koristi za punjenje bora i za smanjenje ili čak eliminisanje lokalnog slabljenja strukture dermisa predstavljenog borama ili udubljenjima na koži, generalno putem direktne injekcije u dermis, u području koje se razmatra.

[0005] Nemodifikovana hijaluronska kiselina je savršeno biokompatibilna i identična endogenoj hijaluronskoj kiselini.

[0006] Međutim, hijaluronska kiselina se koristi u suštini u obliku gela na bazi poprečno povezane hijaluronske kiseline i stoga u modifikovanom obliku s obzirom na povećanu otpornost ovog posebnog oblika na degradaciju, na toplotu i samim tim na sterilizaciju.

[0007] Ovi poprečno povezani gelovi hijaluronske kiseline mogu se dobiti različitim postupcima pripreme. Uopšteno, ovi procesi zahtevaju dva glavna koraka, od kojih se prvi sastoji iz hidriranja hijaluronske kiseline da bi se ona pretvorila u vodeni gel, a drugi ima za cilj poprečno povezanog vodenog gela u prisustvu sredstva koje može da izazove njegovo poprečno povezivanje (takođe se odnosi kao "sredstvo za poprečno povezivanje"). Ovo sredstvo se obično bira između epoksida, aldehida, poliaziridila ili divinilsulfona (DVS) ili butandiol diglicidil etra (BDDE) i stoga je po prirodi sintetički.

[0008] Kao ilustraciju ovih procesa, mogu se posebno pomenuti oni opisani u dokumentima US 2006/0105022, WO 2006/056204 i US 2007/0036745.

[0009] Poprečno povezani gelovi koji se trenutno nalaze na tržištu i koji se dobijaju sa konvencionalnim sredstvima za poprečno povezivanje imaju stepene modifikacije veće od 4% ili čak stepene modifikacije do 10%.

[0010] U svrhu predmetnog pronalaska, termin "stepen modifikacije" označava odnos između broja molova sredstva za poprečno povezivanje vezanog za hijaluronsku kiselinu i broja molova hijaluronske kiseline koja formira pomenuti poprečno povezani gel. Ova količina se može posebno meriti pomoću 1D<1>H NMR analize poprečno povezanog gela.

[0011] Termin "broj molova hijaluronske kiseline" označava broj molova ponavljajućih disaharidnih jedinica hijaluronske kiseline, pri čemu je disaharidna jedinica sastavljena od D-glukuronske kiseline i D-N-acetilglukozamina međusobno povezanih naizmenično beta-1,4 i beta-1,3 glikozidnim vezama.

[0012] Međutim, sa ciljem da se što je moguće više približi endogena hijaluronska kiselina, poželjno je da imaju poprečno povezane gelove hijaluronske kiseline sa manjim stepenom modifikacije.

[0013] Doduše, poprečno povezani gelovi sa nižim stepenom modifikacije (tj. između 1% i 2%) su već predloženi. Nažalost, oni se pokazali kao slabo kohezivni i imaju malu otpornost na drobljenje. Ovi nedostaci se manifestuju posebno u oscilatornoj reologiji kroz ograničeni visko-elastični opseg (opseg visko-elastičnosti je predstavljen rasponom naprezanja u kojem G' ostaje konstantan, tokom merenja sa obrtanjem napona. Obim ovog opsega viskoelastičnosti može se posebno proceniti merenjem naprezanja poprečnog preseka, tj. naprezanja kod kojeg se vrednost G' smanjuje i jednaka je vrednosti G").

[0014] Ovo ponašanje se stoga mora poboljšati za primenu u popunjavanju bora.

[0015] Preciznije, ostaje potreba za gelovima poprečno povezane hijaluronske kiseline sa najmanjim mogućim stepenom modifikacije, koji u isto vreme ostaju zadovoljavajući u pogledu izloženih mehaničkih svojstava.

[0016] Protiv svih očekivanja, pronalazači su primetili da se takav gel može dobiti kada se korak poprečnog povezivanja izvodi u prisustvu određenog tipa jedinjenja.

[0017] Prema tome, u skladu sa prvim aspektom pronalaska, njegov predmet je poprečno vezan gel hijaluronske kiseline koji potiče od poprečnog povezivanja hijaluronske kiseline ili njene soli u prisustvu najmanje efikasne količine najmanje jednog endogenog poliamina kao sredstvo za poprečno povezivanje, pomenuto poprečno povezivanje se izvodi pod uslovima koji su povoljni za kovalentno vezivanje navedene hijaluronske kiseline i pomenutog endogenog poliamina.

[0018] Doduše, poliamini, koji se ipak razlikuju od onih koji se razmatraju u skladu sa pronalaskom, već su predloženi za formiranje poprečno povezanih hidrogelova hijaluronske kiseline.

[0019] Stoga, objave od Xiang Mei Yuan i dr. (Journal of biomaterials Applications 0(0) 1-9; 27 February 2012) i od Junseok Yeom i dr. (Bioconjugate Chem., 1991(2) 232-241) i takođe patentna prijava WO 2012/008722, obezbede hidrogelove hijaluronske kiseline (HA) poprečno povezane u prisustvu heksametilendiamina (HMDA). Međutim, razmatrani poliamin, naime heksametilendiamin (HMDA) je sintetički diamin i stoga nije endogeni diamin. Štaviše, količine sredstva za poprečno povezivanje (HMDA) koje se koriste u ovom stanju tehnike kreću se između 25% i 72% i rezultira u veoma visokim stepenima modifikacije između 5% i 35%.

[0020] Termin "količina sredstva za poprečno povezivanje" označava odnos između broja molova poliamina i broja molova hijaluronske kiseline, koji se koristi za sintezu gela.

[0021] Konačno, kao što proizilazi iz primera koji slede, HA-HMDA gelovi su pokazali da su značajno manje efikasni u pogledu mehaničkih osobina od onih dobijenih prema pronalasku.

[0022] Što se tiče endogenih poliamina koji se razmatraju u skladu sa pronalaskom, primena WO 2008/015249 predlaže, sa svoje strane, da ih koristi zajedno sa česticama hijaluronske kiseline za lokalnu upotrebu kao aktivno sredstvo protiv starenja i kao antioksidant. Iz očiglednih razloga, takva smeša se veoma razlikuje od gelova koji se razmatraju u skladu sa pronalaskom.

[0023] Objava od Di Meo i dr. (Biomacromolecules, 2006, 7:1253-60) opisuje formiranje hidrogelova preko Ugi reakcije ili kondenzaciju hijaluronske kiseline i spermidina. Ovo, dakle, uključuje mehanizam koji se razlikuje od onog koji se razmatra u predmetnom pronalasku. Štaviše, tako dobijeni hidrogelovi koji nisu namenjeni za upotrebu u skladu sa pronalaskom su rezultat procesa koji koristi velike količine sredstva za poprečno povezivanje (između 5% i 25%).

[0024] Pronalazači su stoga primetili da endogeni poliamin predstavlja sredstvo za poprečno povezivanje po izboru za dobijanje poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline u skladu sa iznad navedenim očekivanjima, naime, koji ima smanjeni stepen modifikacije u poređenju sa onima koji su uočeni sa sredstvima za poprečno povezivanje koja se obično razmatraju, i mehaničke osobine i otpornost na sterilizaciju koja je posebno zadovoljavajuća.

[0025] Zaista, poprečno povezani gelovi prema pronalasku imaju značajno smanjen stepen modifikacije, odnosno manji ili jednak 1%, dok u isto vreme ostaju zadovoljavajući u pogledu mehaničkih svojstava.

[0026] Takođe je dokazano da je poprečno povezan gel prema pronalasku pogodan po tome što se sastoji od jedinjenja koja su prirodno prisutna u većini živih organizama i posebno ljudskih bića.

[0027] Sa stanovišta ove pseudo-naturalne prirode, ona zadovoljava sve veću potražnju potrošača u tom pogledu.

[0028] Konačno, verovatno je da su svojstva svojstvena endogenim poliamina koji se razmatraju u skladu sa pronalaskom, sačuvana u poprečno povezanom gelu hijaluronske kiseline dobijene prema pronalasku. Kako se to dešava, utoliko što ova svojstva imaju antioksidativni efekat ili čak i efekat protiv starenja, oni su posebno pogodni u kontekstu predmetnog pronalaska.

[0029] Prema drugom aspektu predmetnog pronalaska, predmet njegovog pronalaska je sterilna injekciona dermatološka smeša koja sadrži, u fiziološki prihvatljivoj podlozi, najmanje jedan poprečno povezani gel hijaluronske kiseline prema pronalasku.

[0030] U svrhu predmetnog pronalaska, termin "koža" obuhvata kožu lica, vrata, dekoltea, ruku, skalpa, trbuha i/ili nogu, ali i usne.

[0031] Termin "sterilan" je namenjen da kvalifikuje okruženje koje može garantovati jedinjenja razmatrana u sastavu prema pronalasku, i/ili pomenuti sastav koji ih sadrži, neškodljivost koja je potrebna za davanje na ili kroz kožu, posebno intra-epidermalna i/ili intradermalna i/ili subkutana primena. Naročito je bitno za sastav koji sadrži navedeno jedinjenje i koje se mora primenjivati u skladu sa tehnikom injekcije, na primer u skladu sa tehnikom mezoterapije, da bude lišena bilo kog kontaminirajućeg tela sposobnog da pokrene negativnu sporednu reakciju u organizmu domaćina.

[0032] U svrhu predmetnog pronalaska, termin "injekcioni" označava sastav od kojeg su mehanička svojstva prikladna za razmatranu upotrebu, odnosno njegovo davanje u ili kroz kožu, naročito, za popunjavanje bora.

[0033] Prema tome, sastav prema pronalasku je injektabilan preko finih potkožnih igala (naročito sa prečnikom manjim od 18 G, ili čak manje od 27 G) i poželjno ima modul elastičnosti (G') između 20 i 1000 Pa, poželjno između 40 Pa i 400 Pa, sa faznim uglom (δ) manjim od 45°.

[0034] Ovaj modul elastičnosti (G') i fazni ugao (δ) se mere protokolom koji je definisan u daljem tekstu.

[0035] Prema još jednom aspektu predmetnog pronalaska, njegov predmet je dermatološki ili kozmetički sastav koji sadrži najmanje jedan poprečno povezani gel hijaluronske kiseline prema pronalasku.

[0036] Ovo otelotvorenje, koje nije ograničeno u smislu puta primene, posledično dozvoljava topikalno davanje pomenutog sastava.

[0037] Prema drugom aspektu predmetnog pronalaska, predmet njegovog pronalaska je komplet koji sadrži:

• pakovanje koje sadrži najmanje jednu dozu poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline prema pronalasku ili sastava prema pronalasku; i

• uređaj za injektiranje u ili kroz kožu ili uređaj za mikroperforaciju kože, namenjen primeni navedene doze.

[0038] Prema još jednom aspektu pronalaska, predmet njegovog pronalaska je upotreba poprečno povezanog gela ili sastava prema pronalasku, za popunjavanje defekata volumena kože i posebno punjenje bora.

[0039] U skladu sa još jednim aspektom pronalaska, predmet njegovog pronalaska je upotreba poprečno povezanog gela ili sastava prema pronalasku za prevenciju i/ili lečenje kožnih znakova hronološkog starenja i/ili kožnih znakova koji su indukovani spoljašnjim faktorima kao što su stres, atmosfersko zagađenje, duvan ili produženo izlaganje ultraljubičastom (UV) zračenju.

[0040] Prema još jednom aspektu pronalaska, predmet njegovog pronalaska je upotreba poprečno povezanog gela ili sastava prema pronalasku, za sprečavanje i/ili lečenje modifikacije površinskog izgleda kože.

[0041] Prema još jednom aspektu pronalaska, predmet njegovog pronalaska je upotreba poprečno povezanog gela ili sastava prema pronalasku, za sprečavanje i/ili tretiranje modifikacije visko-elastičnih ili biomehaničkih svojstava kože.

[0042] U svrhu predmetnog pronalaska, termin "prevencija" treba da znači smanjenje rizika od pojave fenomena.

[0043] Prema drugom aspektu predmetnog pronalaska, njegov subjekat je postupak kozmetičke obrade kože, koji sadrži najmanje jedan korak davanja u ili kroz kožu, poprečno povezanog gela ili sastava prema pronalasku.

[0044] Prema još jednom aspektu predmetnog pronalaska, poslednje se odnosi na postupak za dobijanje poprečno povezanog gela prema pronalasku, koji sadrži najmanje korake koji se sastoje iz:

1. a) dobijanje vodenog gela hijaluronske kiseline ili njegove soli, u ne-poprečno povezanom stanju,

2. b) dovođenje gela dobijenog u koraku a) u kontakt sa efikasnom količinom najmanje jednog endogenog poliamina,

3. c) poprečno povezivanje navedene smeše formirane u koraku b), pri čemu se pomenuto poprečno povezivanje vrši pod uslovima koji su povoljni za kovalentno vezivanje navedene hijaluronske kiseline i pomenutog endogenog poliamina, i 4. d) rekuperiranje navedenog poprečno povezanog hidrogela.

[0045] Prema jednom posebnom otelotvorenju, postupak takođe obuhvata korak e) zaustavljanja poprečnog povezivanja, koje se sastoji iz izlaganja poprečno povezanog gela uslovima koji su povoljni za zaustavljanje njihovog poprečnog povezivanja, pri čemu je moguće da se ovaj korak izvrši pre, zajedno sa ili posle koraka d).

Poprečno povezani gel hijaluronske kiseline

[0046] Kao što je prethodno naznačeno, poprečno povezani gel hijaluronske kiseline prema pronalasku potiče od poprečnog povezivanja najmanje hijaluronske kiseline ili njene soli sa, sredstvom za poprečno povezivanje, najmanje jednim endogenim poliaminom, pri čemu se pomenuto poprečno povezivanje vrši pod uslovima pogodnim za spajanje pomenute hijaluronske kiseline i pomenutog endogenog poliamina.

[0047] Hijaluronske kiseline su linearni polisaharidi sa naizmeničnim D-glukuronskim kiselinama i N-acetil-D-glukozaminskim jedinicama.

[0048] Oni su prirodno prisutni u nekoliko tkiva i degradirani su hijaluronidazama, koje su prisutne u celom telu ili putem mehanizama oksidacije.

[0049] U svrhu predmetnog pronalaska, termin "endogeni poliamin" označava poliamin koji je prirodno prisutan u živim organizmima, a posebno u ljudskom telu.

[0050] Poliamin prema pronalasku se prema tome razlikuje od heksametilendiamina (HMDA) koji je poliamin sintetičkog porekla.

[0051] Za prikazivanje endogenih poliamina, posebno se može pomenuti, kod životinjskih eukariota, putrescin (ili 1,4-diaminobutan), spermidin (ili 1,8-diamino-5-azaoktana) i spermin (1,12-diamino-5,9-diazadodekan).

[0052] Spermin je tetraamin i sintetizovan je iz spermidina.

[0053] Pogodno, endogeni poliamin koji se koristi za dobijanje poprečno povezanog gela prema pronalasku može biti izabran od spermidina, spermina i njihove mešavine, i još bolje spermina.

[0054] Ova selekcija je još povoljnija jer su spermin i spermidin uključeni u brojne fundamentalne ćelijske mehanizme, kao što je sinteza DNK i ekspresija gena. Upotrebljeni topikalno, njihovi povoljni efekti na poboljšanje stanja kože i smanjenje znakova starenja su već opisani (videti naročito patentnu prijavu WO 2006/048671). Ova jedinjenja se takođe smatraju antioksidantima i aktivnim sredstvima protiv starenja.

[0055] Reakcija za spajanje koja se razmatra u predmetnom pronalasku da bi se postigla reakcija poprečnog povezivanja između hijaluronske kiseline i endogenog poliamina vrši se reakcijom između aminske funkcije i karboksilne kiseline, što dovodi do formiranja amidne funkcije.

[0056] Drugim rečima, reakcija poprečnog povezivanja koja se razmatra u predmetnog pronalasku dovodi do formiranja molekula poprečno povezane hijaluronske kiseline, kovalentno vezanih za endogeni poliamin. Nema elektrostatičkih interakcija.

[0057] U odnosu na sva očekivanja, dobijeni poprečno povezani gelovi, u svetlu stepena modifikacije koji se smatraju veoma redukovanim, pokazuju mehanička svojstva koja su veoma zadovoljavajuća ili čak nedostižna pomoću konvencionalnih postupaka kao što je prethodno pomenuto.

[0058] Prema tome, poprečno povezani gel prema pronalasku ima pogodan stepen modifikacije manji ili jednak 1%, poželjno između 0.1% i 1%, a još bolje između 0.4% i 0.8%.

[0059] Kao što je prethodno naznačeno, "stepen modifikacije" odgovara odnosu između broja molova endogenog poliamina vezanog za hijaluronsku kiselinu i broja molova hijaluronske kiseline koja formira pomenuti poprečno povezani gel. Ova količina se može posebno meriti pomoću 1D<1>H NMR analize poprečno povezanog gela.

[0060] Podseća se na termin "broj molova hijaluronske kiseline" označava broj molova ponavljajućih disaharidnih jedinica hijaluronske kiseline, pri čemu je disaharidna jedinica sastavljena od D-glukuronske kiseline i D-N-acetilglukozamina međusobno povezanih naizmenično beta-1,4 i beta-1,3 glikozidnim vezama.

[0061] Prema jednom posebnom otelotvorenju, poprečno povezan gel prema pronalasku je takav da može sadržati od 0.5% do 40% težine hijaluronske kiseline koja nije podvrgnuta reakciji poprečnog povezivanja, u odnosu na ukupnu količinu hijaluronske kiseline.

[0062] Prema sledećem posebnom otelotvorenju, poprečno povezan gel prema pronalasku može imati koncentraciju hijaluronske kiseline između 5 i 30 mg/g.

1

[0063] Prema još jednom posebnom otelotvorenju, poprečno povezan gel prema pronalasku može imati modul elastičnosti (G') između 20 i 1000 Pa, poželjno između 40 Pa i 400 Pa.

[0064] Prema jednom posebnom otelotvorenju, poprečno povezan gel prema pronalasku može biti u obliku pretežno elastičnog, visko-elastičnog hidrogela sa faznim uglom (δ) manjim od 45°.

[0065] Prema jednom poželjnom otelotvorenju, poprečno povezan gel prema pronalasku može imati modul elastičnosti (G') između 20 i 1000 Pa, poželjno između 40 Pa i 400 Pa, kombinovan sa faznim uglom (δ) manjim od 45°.

[0066] Naročito, poprečno povezan gel hijaluronske kiseline u skladu sa pronalaskom može biti injektabilan preko potkožne igle prečnika između 34 G i 18 G.

[0067] Prema još jednom posebnom otelotvorenju, poprečno povezan gel prema pronalasku je visoko kohezivan. Ova karakteristika se manifestuje naročito kroz visoki napon protresnog napona, veći od 100 Pa.

[0068] Modul elastičnosti (G', u Pa) i fazni ugao (δ, u °) mogu se meriti prema sledećem protokolu:

Merenja se izvode na 25°C na frekvenciji od 1 Hz, uz pometanje napona pomoću Thermo Haake RS3000 reometra sa geometrijom konusne ploče prečnika 1°/35 mm. G' i δ su zabeleženi pri primenjenom deformacionom naprezanju od 5 Pa, tj. u opsegu viskoelastičnosti gde G' i δ ostaju stabilni. Zatim se takođe beleži vrednost napona poprečnog preseka (kada se G' smanjuje do jednakog viskoznog modula G').

[0069] Za kohezivni gel prema pronalasku, ovaj napon poprečnog preseka je stoga veći od 100 Pa.

[0070] Konačno, prema jednom posebnom otelotvorenju, poprečno povezan gel prema pronalasku može imati visoku otpornost na sterilizaciju (gubitak G' izazvan sterilizacijom je manji od 50%).

[0071] Sterilizacija se može obaviti u autoklavu (vlažna toplota) na T° ≥ 121°C, kako bi se dobila vrednost F0 > 15 (sterilizaciona vrednost).

[0072] Kao što je prethodno naznačeno, reakcija poprečnog povezivanja za dobijanje poprečno povezanog gela u skladu sa pronalaskom se izvodi pod uslovima koji su povoljni za kovalentno povezivanje navedene hijaluronske kiseline i pomenutog endogenog poliamina.

[0073] U svrhu predmetnog pronalaska, termin "povoljni uslovi" označava element koji inicira pomenuto povezivanje.

[0074] Izbor ovog inicijativnog elementa je očigledno među veštinama stručnjaka.

[0075] Uopšteno, ovo povezivanje se vrši preko najmanje jednog "aktivatorskog" jedinjenja, gde je prikladno kombinovano sa najmanje jednim "pomoćnim sredstvom za spajanje".

[0076] Na primer, takav aktivator može da ima funkciju da ugljenik karboksilne grupe hijaluronske kiseline bude više elektrofilan i da na taj način stimuliše njegovu reaktivnost u odnosu na jednu od aminskih grupa endogenog poliamina.

[0077] Aktivator može pogodno biti kondenzaciono sredstvo, na primer piridinijumova so, na primer 2-hloro-l-metilpiridinijum kao što je opisano u dokumentu Magnani, A. i dr. (Polymers for Advanced Technologies 11, 488-495 (2000)), karbodiimid kao što je opisano u dokumentu Bulpitt, P. & Aeschlimann (J. of Biomed. Materials Res.47, 152-169 (1999)) ili derivat triazina kao što je opisano u dokumentu Bergman i dr. (Biomacromolecules 8, 2190-2195 (2007)).

[0078] Poželjno, takav aktivator može biti izabran od karbodiimida rastvorljivih u vodi, kao što su 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid (EDC), 1-etil-3- (3-trimetilaminopropil)karbodiimid (ETC), 1-cikloheksil-3-(2-morfilinoetil)karbodiimid (CMC), kao i njegove soli i njihove smeše, i poželjno je predstavljen sa EDC.

[0079] Poželjno, pomoćno vezujuće sredstvo, kada je prisutno, može se izabrati između N-hidroksisukcinimida (NHS), N-hidroksibenzotriazola (HOBt), 3,4-dihidro-3-hidroksi-4-okso1,2,3- benzotriazol (HOOBt), 1-hidroksi-7-azabenzotriazol (HAt) i N-hidroksisulfosukcinimid (sulfo NHS), i njihove smeše i poželjno je predstavljen sa HOBt.

[0080] Još poželjnije, takav aktivator može biti izabran iz EDC, kada je to prikladno u kombinaciji sa HOBt kao pomoćno sredstvo za spajanje.

[0081] EDC omogućava aktiviranje karboksilne kiseline formiranjem međujedinjenja sa karboksilatom. Dodavanje HOBt u reakcioni medijum omogućava posebno da se izbegne bilo kakva epimerizacija i da se promoviše reakcija.

Postupak za pripremu poprečno povezanog gela

[0082] Kao što je iznad navedeno, predmetni pronalazak se takođe odnosi na postupak za dobijanje poprečno povezanog gela prema pronalasku, koji sadrži najmanje korake koji se sastoje iz:

[0083] Prema jednom posebnom otelotvorenju, postupak takođe obuhvata korak e) zaustavljanja poprečnog povezivanja, koje se sastoji iz izlaganja poprečno povezanog gela uslovima koji su povoljni za zaustavljanje njihovog poprečnog povezivanja, pri čemu je moguće da se ovaj korak izvrši pre, zajedno sa ili posle koraka d).

[0084] U skladu sa jednim posebnim otelotvorenjem, korak poprečnog povezivanja c) može se izvesti u prisustvu najmanje jednog aktivatora, opciono kombinovan sa najmanje jednim pomoćnim sredstvom za spajanje, tj. jedinjenja koja stimulišu reaktivnost najmanje jednog od dva jedinjenja koja se spajaju, poželjno izabrana iz prethodno pomenutih.

1

[0085] Ovaj korak dodavanja aktivatora i opciono pomoćnog sredstva za spajanje, može se stoga povoljno izvesti zajedno sa korakom poprečnog povezivanja c).

[0086] Prema jednom posebnom otelotvorenju, hijaluronska kiselina koja se koristi za dobijanje gela prema pronalasku može biti u obliku soli.

[0087] Poželjno, so hijaluronske kiseline može biti izabrana od natrijumove soli, kalijumove soli, cinkove soli, soli srebra i njihove mešavine, poželjno natrijumove soli.

[0088] Pogodno, hijaluronska kiselina koja se koristi za dobijanje gela prema pronalasku može imati prosečnu molekulsku težinu u rasponu od 50000 do 10000000 daltona, poželjno od 500000 do 4000 000 daltona.

[0089] Podešavanje količine hijaluronske kiseline za izvođenje reakcije poprečnog povezivanja je jasno među veštinama stručnjaka u ovoj oblasti.

[0090] Pogodno je da se hijaluronska kiselina ili njena so mogu koristiti u postupku za dobijanje poprečno povezanog gela prema pronalasku u sadržaju između 0.5% i 12% težine, poželjno između 1% i 4% težine, u odnosu na ukupna težina smeše dobijene na kraju koraka b), tj. pre izvođenja koraka c) poprečnog povezivanja.

[0091] Podešavanje količine endogenih poliamina za izvođenje reakcije poprečnog povezivanja je jasno među veštinama stručnjaka u ovoj oblasti.

[0092] Količina sredstva za poprečno povezivanje odgovara odnosu između broja molova poliamina i broja molova hijaluronske kiseline, koji se koristi za sintezu gela.

[0093] Pogodno je da se jedan ili više endogenih poliamina mogu koristiti u postupku za pripremu poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline prema pronalasku u sadržaju između 0.1% i 3%, poželjno između 0.5% i 1.5% od broja molova poliamina u odnosu na broj molova hijaluronske kiseline koji su prisutni u reakcionoj podlozi, tj. smeši iz koraka b).

[0094] Pogodno je da se aktivator(i), gde je to prikladno kombinovano sa jednim ili više pomoćnih sredstava za spajanje, mogu koristiti u postupku za pripremu poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline prema pronalasku u takvom sadržaju da broj molova aktivatora i, gde je to prikladno, pomoćnih sredstava za spajanje, u odnosu na broj molova hijaluronske kiseline reakcione podloge (n aktivator/n HA) je između 0.1 i 2, poželjno između 0.5 i 1.5.

[0095] Prečišćeni gel hijaluronske kiseline se dobija uzimajući u obzir prisustvo najmanje jednog endogenog poliamina.

[0096] Prema tome, poprečno povezivanje se može izvesti samo upotrebom ovog tipa sredstva za poprečno povezivanje. Međutim, ovo poprečno povezivanje se takođe može izvesti uzimanjem u obzir simultanog prisustva bar jednog dodatnog, naročito konvencionalnog, sredstva za poprečno povezivanje.

[0097] Pogodno je da se ovo dopunsko sredstvo za poprečno povezivanje može uzeti u obzir u značajno smanjenoj količini u poređenju sa onima koja se konvencionalno zadržavaju kada se koriste kao jedino sredstvo za poprečno povezivanje.

[0098] Ovo dodatno sredstvo za poprečno povezivanje može se izabrati između epoksida, aldehida, poliaziridila, poliamina koji su različiti od endogenih poliamina, polifosfata, divinilsulfona (DVS) i njihovih smeša, poželjno iz epoksidnih sredstava za poprečno povezivanje, koja su poželjno bifunkcionalna ili višenamenska.

[0099] Poželjno, dodatno sredstvo za poprečno povezivanje može se izabrati između epoksida, preciznije iz 1,4-butandiol diglicidil etra (BDDE), diepoksioktana ili 1,2-bis(2,3-epoksipropil)-2,3-etilena, 1,4-bis(2,3-epoksipropoksi)butana, 1,4-bisglicidiloksi-butana, 1,2-bis(2,3-epoksipropoksi)etilena, 1-(2,3-epoksipropil)-2,3-epoksicikloheksana i njihovih smeša, i još bolje 1,4-butandiol diglicidil etra (BDDE).

[0100] Štaviše, prisustvo neorganske soli halogenida alkalnog metala može se takođe razmotriti tokom reakcije poprečnog povezivanja.

[0101] Zaista, neočekivano, pronalazači su primetili da prisustvo neorganske soli alkalnog halogenida prilikom izvođenja reakcije poprečnog povezivanja omogućava dalje poboljšanje reoloških svojstava poprečnog povezanog gela za isti stepen poprečnog povezivanja.

1

[0102] U svrhu predmetnog pronalaska, termin "so alkalnog halida" označava jedinjenje sastavljeno od alkalnog katjona i anjona koji nužno predstavlja atom halogena.

[0103] Pogodno, atom halogena može biti izabran iz fluora, hlora, broma i joda i poželjno je predstavljen sa hlorom.

[0104] Poželjno, neorganska so alkalnog halogenida prema pronalasku može biti izabrana iz natrijumovih soli, kalijumovih soli i cezijumovih soli, a još bolje je predstavljena sa natrijumovom soli.

[0105] Još poželjnije, neorganska so alkalnog halida prema pronalasku može biti NaCl.

[0106] U stvari, NaCl ima prednost što je fiziološki prihvatljiv i to je jedan od sastojaka jedne od sirovina koje su deo sastava poprečno povezanih gelova hijaluronske kiseline.

[0107] Povoljno je da se neorganska so alkalnog halida može koristiti u postupku prema pronalasku u sadržaju između 0.5% i 20% težine, poželjno između 1% i 10% težine, u odnosu na ukupnu težinu smeše dobijene na kraju koraka b).

[0108] U svetlu iznad navedenog, postupak za dobijanje poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline u skladu sa pronalaskom zahteva, prvo, obezbeđivanje vodenog gela koji sadrži najmanje hijaluronsku kiselinu u ne-poprečno povezanom obliku, kombinovan sa najmanje jednim endogenim poliaminom, kao sredstva za poprečno povezivanje.

[0109] U svrhu predmetnog pronalaska, termin "ne-poprečno povezan" označava vodeni gel hijaluronske kiseline koji nije poprečno povezan ili nije transformisan, tj. rastvor hijaluronske kiseline čiji lanci polimera nisu međusobno povezani pomoću jakih ili kovalentnih veza.

[0110] Specifičnije, vodeni gel koji se razmatra u koraku a) može se dobiti unapred tako što se spoji, u odgovarajućoj posudi:

1. (i) vodena podloga;

2. (ii) najmanje hijaluronska kiselina ili njena so, u ne-poprečno povezanom obliku; i 3. (iii) gde je pogodno, najmanje jedan endogeni poliamin; i homogenizovanje dobijene smeše, redosled dodavanja pomenutih jedinjenja (i), (ii) i (iii) u posudu koja nije bitna.

1

[0111] Drugim rečima, u slučaju da vodeni gel iz koraka a) uzima u obzir prisustvo najmanje jednog endogenog poliamina, koraci a) i b) postupka prema pronalasku se zatim sprovode istovremeno.

[0112] U skladu sa prvom varijantom otelotvorenja, ovaj vodeni gel može da se formira uvođenjem vodene podloge i hijaluronske kiseline u posudu, uz istovremenu i/ili uzastopnu homogenizaciju tako formirane smeše, i zatim, gde je pogodno, dodavanje sredstva za poprečno povezivanje sa simultanom i/ili uzastopnom homogenizacijom.

[0113] Prema drugoj varijanti otelotvorenja, ovaj vodeni gel se može dobiti uvođenjem vodene podloge, hijaluronske kiseline i sredstva za poprečno povezivanje u posudu, uz istovremenu i/ili uzastopnu homogenizaciju tako formirane smeše.

[0114] Ova druga varijanta otelotvorenja je povoljna u tome što se izvodi jedan korak homogenizacije.

[0115] Pogodno je da se ovaj korak formiranja vodenog gela može izvesti na temperaturi ispod 35°C, poželjno na temperaturi u rasponu od 15 do 25°C, a još bolje na temperaturi okoline.

[0116] Vodeni gel razmatran u koraku a) je povoljno homogen.

[0117] Ovaj kvalitet je zagarantovan operacijom u kojoj se vodeni gel homogenizuje, pri čemu navedena operacija može da čini korak pre prelaska na korak a).

[0118] Svrha ove operacije, opciono sprovedena u prisustvu sredstva za poprečno povezivanje, je naročito da hidrira i potpuno homogenizuje hijaluronsku kiselinu u vodenoj podlozi i, gde je pogodno, sredstvu za poprečno povezivanje, i na taj način da doprinese optimizaciji kvaliteta očekivanog poprečno povezanog gela.

[0119] Zaista, iz očiglednih razloga, homogenost poprečno povezanog gela je usko povezana sa homogenom prirodom gela pre poprečnog povezivanja.

1

[0120] Smatra se da je homogenizacija zadovoljavajuća kada dobijeni rastvor ima homogenu koloraciju, bez aglomerata, i jednoličnu viskoznost. Može se povoljno izvoditi pod blagim radnim uslovima kako bi se sprečila degradacija lanaca hijaluronske kiseline.

[0121] Ovaj korak je još važniji kada hijaluronska kiselina ima visoku molekularnu težinu. Hidratacija takvog jedinjenja u stvari ima tendenciju da generiše formiranje rastvora visoke viskoznosti u kojem se obično uočava pojava aglomerata.

[0122] Kao što proizlazi iz iznad navedenog, smeša formirana u koraku b), ili čak, gde je to prikladno, vodeni gel iz koraka a), kada se uzima u obzir prisustvo sredstva za poprečno povezivanje, zatim se podvrgava reakciji poprečnog povezivanja, ilustrovana korakom c) postupku za pripremu poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline prema pronalasku.

[0123] Kao što je prethodno naznačeno, ovo poprečno povezivanje se izvodi u uslovima povoljnim za spajanje navedene hijaluronske kiseline i pomenutog endogenog poliamina.

[0124] Povoljni uslovi koji treba da se zadrže da bi se indukovalo ovo spajanje, a time i reakcija poprečnog povezivanja, mogu zavisiti od molekulske težine hijaluronske kiseline, od vodene podloge i od prirode sredstva za poprečno povezivanje, u ovom slučaju potpuno ili delimično formirane pomoću endogenog poliamina.

[0125] Ovi povoljni uslovi se mogu naročito odraziti prisustvom najmanje jednog aktivatora, gde je prikladno kombinovan sa najmanje jednim pomoćnim sredstvom za spajanje, kao što je iznad navedeno.

[0126] Kao što je prethodno naznačeno, korak dodavanja aktivatora i, gde je pogodno, pomoćnog sredstva za spajanje, poželjno se može izvoditi zajedno sa korakom c) poprečnog povezivanja.

[0127] Međutim, u skladu sa jednim posebnim otelotvorenjem, aktivator i, tamo gde je pogodno, pomoćno sredstvo za spajanje se dodaje pre koraka c), a posebno pre koraka dodavanja najmanje jednog endogenog poliamina.

1

[0128] Prema još jednom otelotvorenju, ovaj korak dodavanja aktivatora i, gde je to prikladno, pomoćnog sredstva za spajanje se izvodi zajedno sa korakom b), u tom slučaju se korak b) izvodi zajedno sa korakom c).

[0129] Štaviše, stepen poprečnog povezivanja takođe zavisi od trajanja koraka poprečno povezivanja koji se primenjuje za smešu dobijenu na kraju koraka b). Što je duže vreme, to je veći stepen poprečnog povezivanja, sa, međutim, optimumom koji se ne sme prekoračiti, u suprotnom postoji rizik od razgradnje hijaluronske kiseline.

[0130] Prema tome, kada se poprečno povezivanja hijaluronske kiseline vrši u prisustvu EDC i HOBt, korak poprečnog povezivanja c) može se izvesti u periodu od 30 minuta do 72 sata, prvenstveno od 3 do 24 sata.

[0131] Kao što je prethodno opisano, zaustavljanje poprečnog povezivanja (korak e) može se desiti pre, zajedno sa ili posle koraka d) regeneracije gela.

[0132] Takav korak e) može zahtevati izlaganje poprečno povezanog gela ili gela koji je podvrgnut poprečnom povezivanju, ili čak i posude koje ga sadrže, uslovima koji su povoljni za zaustavljanje pomenutog poprečnog povezivanja, ili drugim uslovima koji mogu zaustaviti formiranje veza između različitih polisaharidnih lanaca.

[0133] Ovaj korak se može pokrenuti prirodno ako se svi reagensi konzumiraju tokom koraka c), ili se promoviše korak prečišćavanja koji dovodi gel nazad do fiziološkog pH i eliminiše rezidualne reagense koji nisu reagovali.

[0134] Prema jednoj poželjnoj varijanti otelotvorenja, korak e) se izvodi pre koraka d).

[0135] U skladu sa jednim naročito poželjnim otelotvorenjem, postupak prema pronalasku koristi (i) natrijum hijaluronat, (ii) spermin, kao sredstvo za poprečno povezivanje, i (iii) EDC, kao aktivator, u kombinaciji sa HOBt, kao pomoćno sredstvo za spajanje.

[0136] Iz očiglednih razloga, poprečno povezani gel koji se dobija na kraju postupka prema pronalasku generalno nije direktno injektabilan, jer odgovarajuća vodena formulacija možda nije kompatibilna sa fiziološkim uslovima, niti ima odgovarajući pH.

1

[0137] Prema tome, može se izvesti jedan ili više dodatnih koraka, koji su poznati stručnjacima u ovoj oblasti.

[0138] Konkretnije, korak prečišćavanja gela prema pronalasku omogućava da se ono ponovo vrati u fiziološki pH i da se eliminišu rezidualni reagensi koji nisu reagovali.

[0139] Ovaj korak prečišćavanja može biti posebno predstavljen korakom dijalize. Štaviše, naknadni koraci homogenizacije, inkorporacije ne-poprečno povezane hijaluronske kiseline i, opciono, frakcionisanja mogu takođe biti izvedeni u cilju daljeg poboljšanja kvaliteta implantata, u skladu sa znanjem stručnjaka u ovoj oblasti. Gel mora biti formulisan fiziološki kroz prisustvo soli u količinama ekvivalentnim onima ubrizgan podloge.

[0140] Konačno, dobijeni hidrogel može biti upakovan u špriceve u uslovima kontrolisane atmosfere, pri čemu je moguće da se pomenuti špricevi zatim podvrgnu sterilizacionom koraku, poželjno toplotnoj sterilizaciji.

Sastav

[0141] Prema drugom aspektu, kao što je iznad navedeno, predmetnog pronalaska, poslednje se takođe odnosi na sterilni dermatološki sastav za injektiranje koji sadrži, u fiziološki prihvatljivoj podlozi, najmanje jedan poprečno povezani gel hijaluronske kiseline, kao što je iznad definisano.

[0142] Zahvaljujući svojoj injektabilnoj prirodi, sastav prema pronalasku stoga nužno sadrži fiziološki prihvatljivu podlogu.

[0143] Termin "fiziološki prihvatljiva podloga" označava podlogu koja je lišena toksičnosti i koja je kompatibilna sa injekcijom i/ili primenom sastava u ili preko keratinskih materijala.

[0144] Sastav može da sadrži fiziološki prihvatljiv rastvarač ili smešu fiziološki prihvatljivih rastvarača.

[0145] Sastav može da sadrži fiziološki prihvatljivu vodenu podlogu.

2

[0146] Kao vodena podloga koja je pogodna za pronalazak, može se na primer pomenuti voda.

[0147] Kao izotonična sredstva koja su pogodna za dobijanje sastava koji je pogodan za pronalazak, mogu se pomenuti šećeri i natrijum hlorid.

[0148] Prema još jednom aspektu, kao što je iznad navedeno, predmetnog pronalaska, poslednje se odnosi na dermatološki ili kozmetički sastav koji sadrži najmanje jedan poprečno povezani gel hijaluronske kiseline prema pronalasku.

[0149] Ovo otelotvorenje, koje nije ograničeno u smislu puta primene, posledično dozvoljava topikalno davanje pomenutog sastava.

Dodatna aktivna sredstva

[0150] Sastav prema pronalasku može takođe da sadrži najmanje jedno dodatno aktivno sredstvo koje je kompatibilno sa upotrebom u polju sterilnih injektabilnih sastava.

[0151] Među dodatnim aktivnim sredstvima koji se mogu koristiti u predmetnom pronalasku, mogu se pomenuti antioksidanti, aminokiseline, vitamini, minerali, nukleinske kiseline, koenzimi, derivati koji sadrže adrenalin i njihove smeše.

[0152] Kao antioksidanti mogu se posebno pomenuti glutation, elaginska kiselina, spermin, resveratrol, retinol, L-karnitin, polioli, polifenoli, flavonoli, teaflavini, katehini, kofein, ubikinol, ubikinon i njihove smeše.

[0153] Pomoću aminokiselina može se posebno pomenuti arginin, izoleucin, leucin, lizin, glicin, valin, treonin, prolin, metionin, histidin, fenilalanin, triptofan i njihova smeša.

[0154] Putem vitamina ili njihovih derivata, mogu se posebno navesti vitamini E, A, C i B, posebno vitamini B6, B8, B4, B5, B9, B7i B12, i još bolje piridoksin.

[0155] Putem minerala, mogu se posebno pomenuti soli cinka, soli magnezijuma, soli kalcijuma, soli kalijuma, soli mangana, natrijumove soli i njihova smeša.

[0156] Putem nukleinske kiseline, mogu se posebno pomenuti derivati adenozina, citidina, guanozina, timidina, citodina i njihove smeše.

[0157] Putem koenzima, može se posebno pomenuti koenzim Q10, CoA, NAD, NADP i njihova smeša.

[0158] Putem derivata koji sadrže adrenalin, mogu se posebno pomenuti adrenalin i noradrenalin.

[0159] Štaviše, sastav prema pronalasku može takođe da sadrži bilo koji ekscipijens koji se normalno koristi u razmatranom tehničkom polju, kao što je, na primer, natrijum dihidrogen fosfat monohidrat i/ili dihidrat, i natrijum hlorid, u fiziološki pogodnom sadržaju.

[0160] Količine dodatnih aktivnih sredstava i/ili ekscipijenasa zavise, naravno, od prirode razmatranog jedinjenja, od željenog efekta i od odredišta sastava prema pronalasku.

[0161] Ovi parametri su među opštim veštinama stručnjaka.

[0162] Pogodno, sastav prema pronalasku može sadržati od 2 ppm do 10000 ppm, poželjno od 5 do 1000 ppm, i još bolje od 50 do 500 ppm dodatnih aktivnih sredstava i/ili ekscipijenasa u odnosu na ukupnu težinu navedenog sastava.

[0163] Osim toga, poznato je da injekcija sastava posvećene punjenju bora često izaziva bolni osećaj za pacijenta.

[0164] Prema tome, prema jednom posebnom otelotvorenju, sastav prema pronalasku može takođe da sadrži najmanje jedno anestetičko sredstvo.

[0165] Anestetičko sredstvo ima upravo prednost u smanjenju ili čak eliminisanju bolnog osećaja koje oseća pacijent u vreme i/ili nakon primene sastava u skladu sa pronalaskom.

[0166] Šta više, pronalazači su primetili da prisustvo takvog jedinjenja ne izaziva nikakav rizik od nekompatibilnosti sa drugim jedinjenjima koja se koriste u sastavu prema pronalasku, a posebno sa hijaluronskom kiselinom.

[0167] Anestetik koji se može koristiti u predmetnom pronalasku može se izabrati iz grupe koju čine ambukain, amolanon, amilokain, artikain, benoksinat, benzokain, betoksikain, bifenamin, bupivakain, butakain, butamben, butanilin, butetamin, butoksikain, karcin, hloroprokain, koketilen, kokaina, ciklometacin, dimetizokin, dimetokain, diperodon, diciklonin, ekgonidin, ekgonin, etil hlorid, etidokain, beta-eukain, euprocin, fenalkomin, formokain, heksilkain, hidroksitetrakain, izobutil p-aminobenzoat, leucinokain mesilat, levoksadrol, lidokain, mepivakain, meprilkain, metabutoksikain, metil hlorid, mirtekain, naepain, oktakain, ortokain, oketazain, paretokikain, fenacin, fenol, pipehokain prilokain, prokain, propanokain, proparkain, propipokain, propoksikain, pseudokokain, pirokain, ropivakain, salicil alkohol, tetrakain, tolikain, trimekain, zolamin ili njegova so.

[0168] Određenije, anestetik koji se može koristiti u ovom pronalasku može biti izabran iz grupe articaina, benzokaina, bupivakaina, hloroprokaina, lidokaina, mepivakaina, prilokaina, prokaina, ropivakaina i tetrakaina.

[0169] Poželjno, anestetik može biti lidokain, a još bolje lidokain hidrohlorid.

[0170] Sastav prema pronalasku može pogodno sadržati od 0.01% do 1% težine, poželjno od 0.1% do 0.5% težine anestetika, u odnosu na ukupnu težinu pomenutog sastava.

[0171] U skladu sa jednim posebnim otelotvorenjem, gel ili sastav prema pronalasku, pored hijaluronske kiseline u poprečno povezanom obliku, mogu takođe da sadrže hijaluronsku kiselinu u ne-poprečno povezanom obliku.

[0172] Takva kombinacija hijaluronske kiseline u slobodnoj i poprečno povezanom obliku odmah rezultira vlaženjem i održavanjem volumena kože. Pored toga, on izaziva pojačavanje dermalnih fibroblasta, uglavnom zbog prisustva slobodne hijaluronske kiseline, i ovo pojačavanje fibroblasta se produžava tokom vremena kako se poprečno povezana hijaluronska kiselina degradira in vivo. Sa funkcionalne tačke gledišta, prisustvo ne-poprečno povezane

2

hijaluronske kiseline omogućava da se značajno poboljšaju sile ekstruzije gela kroz iglu, čime se olakšava sila koju praktičar primenjuje za ubrizgavanje proizvoda.

Primena sterilnog, injekcionog, poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline ili dermatološkog sastava

[0173] Poprečno povezani gel hijaluronske kiseline ili sastav prema pronalasku može se ubrizgati korišćenjem bilo kog od načina koji su poznati stručnjacima.

[0174] Naročito, gel ili sastav prema pronalasku mogu biti davani pomoću injekcionog uređaja pogodnog za intraepidermalnu i/ili intradermalnu i/ili subkutanu injekciju.

[0175] Injekciona naprava može biti izabrana iz šprica, seta mikrošprica, hidrauličnog, laserskog uređaja, injekcionog pištolja, injekcionog uređaja bez igle ili valjka za mikroiglu.

[0176] Poželjno, injekciona naprava može biti izabrana iz špriceva ili seta mikrošpriceva.

[0177] Poželjno, takvo sredstvo može biti potkožna igla ili braunila.

[0178] Igla ili braunila prema pronalasku mogu imati prečnik u opsegu od 18 do 34 G, poželjno između 25 i 32 G i dužinu u opsegu od 4 do 70 mm, a poželjno od 4 do 25 mm.

[0179] Igla ili braunila su pogodni za jednokratnu upotrebu.

[0180] Pogodno je da se igla ili braunila kombinuju sa špricom ili bilo kojim drugim uređajem za ubrizgavanje navedenog injekcionoh sastava kroz iglu ili braunilu. Prema jednoj varijanti otelotvorenja, kateter se može ubaciti između igle/braunile i šprica.

[0181] Na poznati način, rukovalac može ručno da upravlja špricom ili pomoću sredstava šprica, kao što su pištolji.

Komplet

[0182] Prema drugom aspektu predmetnog pronalaska, poslednje se odnosi na komplet koji sadrži:

• pakovanje koje sadrži najmanje jednu dozu poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline ili sastava prema pronalasku; i

[0183] Pakovanje je pogodno za skladištenje najmanje jedne doze gela ili sastava prema pronalasku.

[0184] Pakovanje može biti raspoređeno tako da se omogući da se navedeni uzorak gela ili pomenutog sastava uzme kao uzorak.

[0185] Prema tome, u skladu sa prvim otelotvorenjem, navedena ambalaža se boduje tako da se omogući uzorak navedenog gela ili pomenutog sastava.

[0186] Na primer, može biti u obliku ampule, boce ili kapsule, naročito meke kapsule.

[0187] Poželjno, ambalaža može biti jednostruka doza i/ili imati završetak sa urezom.

[0188] Prema drugom otelotvorenju, navedena ambalaža ima poklopac koji omogućava hermetičko zaptivanje tokom skladištenja i koje može biti probušeno iglom ili braunilom u vreme korišćenja.

[0189] Što se tiče injekcionog uređaja, on može biti kao što je prethodno definisano i poželjno je da bude jednokratan.

[0190] Poželjno je da je injekcioni uređaj pogodan za intraepidermalnu i/ili intradermalnu i/ili subkutanu injekciju.

[0191] Poželjno je da je navedeni uređaj pogodan za tehniku mezoterapije.

Upotreba

[0192] Prema još jednom aspektu predmetnog pronalaska, poslednje se odnosi na upotrebu poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline ili sastava prema pronalasku, za prevenciju

2

i/ili lečenje kožnih znakova hronološkog starenja i/ili kožnih znakova koji su izazvani spoljašnjim faktorima kao što su stres, duvan i/ili produženo izlaganje UV zračenju.

[0193] Prečišćeni gel hijaluronske kiseline ili sastav prema pronalasku takođe ima prednost u tome što se može koristiti za prevenciju i/ili tretiranje modifikacije površinskog izgleda kože, modifikaciju visko-elastičnih ili biomehaničkih svojstava kože, smanjenje metabolizma ćelijske energije ili dehidracija kože.

[0194] Prečišćeni gel hijaluronske kiseline ili sastav u skladu sa pronalaskom je ponovo povoljan po tome što se može koristiti za popunjavanje volumena kože, naročito bora i/ili za obnavljanje sjaja kože.

Proces tretmana

[0195] Prema drugom aspektu predmetnog pronalaska, poslednje se odnosi na proces kozmetičkog tretmana kože koji sadrži najmanje jedan korak davanja, u ili kroz kožu, poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline ili sastava prema pronalasku.

[0196] U skladu sa jednim posebnim otelotvorenjem, korak primene može da se ponovi na celoj površini ili delu površine koji se tretira. Ponavljanje injekcija omogućava stvaranje sloja tako da se sastav prema pronalasku homogeno raspodeli u oblasti kože koja se tretira.

[0197] Prema jednom posebnom otelotvorenju, oblasti kože koje se pogodno tretiraju pomoću postupka prema pronalasku mogu biti koža i usne, a posebno koža lica, vrata, dekoltea, ruku, skalp, trbuh i/ili noge.

[0198] Gel ili sastav prema pronalasku može se pogodno ubrizgati na nivo bora i finih linija.

[0199] Postoji nekoliko tehnika ubrizgavanja.

[0200] Pomoću upotrebljivih tehnika može se navesti tehnika "višestrukog bolusa" koja se sastoji u izvođenju ubrizgavanja u površinskoj dermi u proseku 0.05 ml sastava prema pronalasku, koja se naziva bolus, pri čemu je svaki bolus oko 1 cm odvojen. Ova tehnika se posebno preporučuje za lice i dekolte.

2

[0201] Može se spomenuti i tehniku "povratnog traga", koja se sastoji u izvođenju injekcija linearnog praćenja u površinskoj dermi, u uvođenju igle pod uglom od 45° duž depresije kože i zatim deponovanje sastava prema pronalasku u površinskoj dermi, nežno povlačeći iglu.

[0202] Konačno, može se pomenuti "multipunkturna" tehnika koja se sastoji od izvođenja višestrukih injekcija malih količina sastava prema pronalasku u epidermi. Mesta ubrizgavanja su vrlo blizu jedan drugom, na primer otprilike na svakih 3 mm i ravnomerno su raspoređena po površini koja se tretira ili formiranjem linije duž bora. Ova tehnika se posebno preporučuje za objedinjavanje tena.

[0203] Proces tretmana u skladu sa predmetnim pronalaskom se takođe dokazuje kao pogodan za sprečavanje i/ili tretiranje kožnih znakova starenja ili fotostarenja, posebno odabranih iz naborane kože, kože koja pokazuje modifikaciju svojih visko-elastičnih ili biohemijskih svojstava, kože koja pokazuje modifikaciju u koheziji njenih tkiva, istanjene kože, kože koja pokazuje modifikaciju njenog površinskog izgleda, popuštanja kože.

[0204] Proces tretmana u skladu sa ovim pronalaskom se takođe dokazuje kao pogodan za prevenciju i/ili lečenje smanjenja metabolizma ćelijske energije ili dehidracije kože.

[0205] Proces tretmana u skladu sa predmetnim pronalaskom se takođe dokazuje kao pogodan za popunjavanje defekata volumena kože, posebno bora, i/ili obnavljanje sjaja kože.

[0206] Proces tretmana u skladu sa predmetnim pronalaskom može se poželjno izvoditi u epidermalnom, dermo-epidermalnom i/ili kožnom ili čak subkutanom regionu.

[0207] Kroz predmetnu patentnu prijavu, termin "koji sadrži" je sinonim za "obuhvata najmanje jedan" i "između ... i ..." i "od ... do ..." treba shvatiti kao ograničenja koja uključuju.

[0208] Sledeći primeri su dati kao neograničavajući prikaz predmetnog pronalaska.

PRIMERI

Primer 1: Protokol za dobijanje gela hijaluronske kiseline poprečno povezanog sa sperminom kao sredstva za poprečno povezivanje

2

[0209] Hijaluronska kiselina se rastvori u koncentraciji od 3% (težinski) u vodi. Nakon dobijanja homogenog rastvora, rastvor koji sadrži spermin (onaj ≥ 96% koji je prodala kompanija Sigma-Aldrich pod imenom Sigma), EDC kao aktivator (N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid ≥ 98.0% prodato od kompanije Sigma-Aldrich pod imenom Fluka) i HOBt kao pomoćno sredstvo za spajanje (1-hidroksibenzotriazol hidrat, > 97% koje je prodavala kompanija Sigma-Aldrich pod imenom Aldrich) dodaje se rastvoru hijaluronske kiseline. Zapremina ovog rastvora je definisana tako da se dobije ukupna smeša koja sadrži 2.3% hijaluronske kiseline.

[0210] PH ovog rastvora je podešen tako da se dobije pH ukupne smeše između 5.5 i 6.5 pre reakcije, korišćenjem razblaženog rastvora HCl ili NaOH.

[0211] Količine reagensa se podešavaju prema željenom stepenu modifikacije.

[0212] Oni se kreću između 5×10<-3>i 2×10<-2>mol/mol jedinica ponavljanja hijaluronske kiseline za poliamin i između 0.5 i 1 mol/mol jedinica ponavljanja hijaluronske kiseline za aktivator i pomoćno sredstvo za spajanje uključeno u reakcija spajanja. Korišćene stehiometrije su navedene u datim primerima.

[0213] Za poprečno povezivanje, vodeni gel je izložen tokom 7 do 24 h na 25°C.

[0214] Nakon poprečnog povezivanja, dobijeni gel se prečisti pomoću nekoliko kupki za dijalizu u periodu od 2 do 3 dana i, ako je potrebno, podesi na fiziološku pH vrednost.

[0215] Vodeni gel koji se dobija posle pranja sadrži koncentraciju hijaluronske kiseline blizu 20 mg/g.

[0216] Da bi se olakšale sile ekstruzije za propuštanje gela kroz iglu, zatim se inkorporira u ne-poprečno povezanu hijaluronsku kiselinu i homogenizuje u iznad dobijenom gelu.

[0217] Sterilizacija se obavlja u autoklavu (vlažna toplota) na T° ≥ 121°C, kako bi se dobila vrednost F0 > 15 (sterilizaciona vrednost).

2

Primer 2: Pripremanje poprečno povezanih gelova hijaluronske kiseline koji su u skladu sa pronalaskom (sa sperminom) i komparativni (sa HMDA)

[0218] Tri poprečno povezana gela hijaluronske kiseline su pripremljena na osnovu protokola definisanog u Primeru 1 iznad.

[0219] Za ova tri gela, n HOBt = n EDC = n HA.

[0220] Ova tri gela se razlikuju jedan od drugog zbog prirode poliamina koji se razmatra i/ili odnosa "poliamin/hijaluronska kiselina", kao što je ilustrovano u Tabeli 1 u daljem tekstu. Krajnja kolona [HA] ukazuje na koncentraciju hijaluronske kiseline dobijenih gelova.

Tabela 1:

1) Karakterizacija stepena modifikacije gelova A, B i C

Protokol za pripremanje uzorka

[0221] Gelovi A, B i C su isprani/istaloženi sa izopropanolom.

[0222] Dobijene čvrste supstance su osušene i zatim rastvorene u D2O i tretirane u prisustvu hijaluronidaze (tip VI-S, Sigma, 3kU) u 1 ml D2O za razgradnju gela, da bi se dobila tečna matrica za analizu.

[0223] Dobijena homogena smeša se zatim analizira sa<1>H NMR.

2

Merenje stepena modifikacije

[0224] Karakterizacija odgovarajućih stepena modifikacije gelova A, B i C se vrši NMR spektroskopijom.

[0225] Za poliamine,<1>H protonski pikovi za HMDA na 1.34 ppm i za spermin na 1.73 ppm su zadržani kao reference.

[0226] Stepen modifikacije svakog od tri poprečno povezana gela hijaluronske kiseline se zatim karakteriše korišćenjem integrala ovih referentnih maksimuma prema sledećoj formuli:

X: broj protona maksimuma zadržanog za merenje, tj.4 za spermin i HMDA.

δ-Acetamid: pomeranje koje odgovara acetamidnom maksimumu HA, stoga sadrži 3 protona.

[0227] NMR analiza je izvedena na Bruker Avance 1 spektrometru koji radi na 400 MHz (<1>H).

[0228] Različiti rezultati i zapažanja sažeti su u sledećoj tabeli 2:

Tabela 2

[0229] Iz tabele 2 iznad proizilazi da su stepeni modifikacije poprečno povezanih gelova B i C u skladu sa pronalaskom, u poređenju sa onima kontrolnog gela A, značajno smanjeni.

[0230] Hijaluronska kiselina koja je poprečno povezana sa sperminom je stoga manje modifikovana od one koja je rezultat poprečnog povezivanja sa HMDA.

2) Karakterizacija mehaničkih svojstava

a) Visko-elastična svojstva gelova A, B i C su karakterisana merenjem njihovog modula elastičnosti G' (u Pa) i njihovog faznog ugla δ (°), merenog na 1 Hz za naprezanje od 5 Pa.

[0231] Tabela 3 koja sledi predstavlja izmerene vrednosti.

Tabela 3

[0232] Kontrolni gel A, iako je poprečno povezan sa poliaminom (HMDA), nije dovoljan jer, iako je stepen modifikacije hijaluronske kiseline visok, njegova mehanička svojstva su slaba.

[0233] Uprkos smanjenom stepenu modifikacije, gelovi B i C pokazuju, s druge strane, reološko ponašanje koje je značajno poboljšano u poređenju sa komparativnim gelom A. b) Otpornost na sterilizaciju gela A, B i C se određuje karakterizacijom gubitka modula elastičnosti G' (u Pa) ovih gelova nakon izlaganja sterilizaciji koja se vrši u autoklavu

1

(vlažna toplota) na T° ≥ 121°C, kako bi se dobila vrednost F0> 15 (vrednost sterilizacije).

[0234] Tabela 4 koja sledi predstavlja izmerene vrednosti.

Tabela 4

[0235] Kontrolni gel A ponovo nije zadovoljavajući jer pokazuje slabu otpornost na sterilizaciju u poređenju sa gelovima B i C.

2

Claims

Patentni zahtevi

1. Poprečno povezani gel hijaluronske kiseline, koji potiče od poprečnog povezivanja hijaluronske kiseline ili njegove soli u prisustvu najmanje delotvorne količine najmanje jednog endogenog poliamina kao sredstva za poprečno povezivanje, pri čemu se pomenuto poprečno povezivanje izvodi u uslovima povoljnim za kovalentno povezivanje pomenute hijaluronske kiseline i pomenutog endogenog poliamina, navedenog gela koji ima stepen modifikacije manji ili jednak 1%, stepen modifikacije je odnos između broja molova endogenog poliamina vezanog za hijaluronsku kiselinu i broj molova hijaluronske kiseline koja formira pomenuti poprečno povezani gel.

2. Gel prema patentnom zahtevu 1, gde je endogeni poliamin izabran iz grupe koju čine spermidin, spermin i njihove smeše, a još bolje spermin.

3. Gel prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde se spajanje izvodi u prisustvu najmanje jednog aktivatora i, gde je pogodno, u kombinaciji sa najmanje jednim pomoćnim sredstvom za spajanje, pri čemu je navedeni aktivator poželjno izabran iz karbodiimida rastvorljivih u vodi, kao što je kao 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid (EDC), 1-etil-3-(3- trimetilaminopropil)karbodiimid (ETC), 1-cikloheksil-3-(2-morfilinoetil)karbodiimid (CMC), i takođe njihove soli, i njihove smeše, a posebno je predstavljen sa EDC, i pomenuto pomoćno sredstvo za spajanje, kada je prisutno, poželjno je izabrano iz grupe koju čine N-hidroksisukcinimid (NHS), N-hidroksibenzotriazol (HOBt), 3,4-dihidro-3-hidroksi-4-okso-1,2,3-benzotriazol (HOOBt), 1-hidroksi-7-azabenzotriazol (HAt) i N-hidroksisulfosukcinimid (sulfo NHS) i njihove smeše, a posebno predstavljano sa HOBt.

4. Gel prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde navedeni gel ima stepen modifikacije između 0.1% i 1%, a još bolje između 0.4% i 0.8%.

5. Gel prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde navedeni gel ima modul elastičnosti (G') između 20 i 1000 Pa, poželjno između 40 Pa i 400 Pa, kombinovan sa faznim uglom (δ) manjim od 45°.

6. Gel prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde navedeni gel ima poprečni prelazni napon veći od 100 Pa.

7. Postupak za pripremu gela poprečno povezane hijaluronske kiseline, kao što je definisano u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6, koji sadrži najmanje korake koji se sastoje iz:

a) dobijanje vodenog gela hijaluronske kiseline ili njegove soli, u ne-poprečno povezanom stanju,

b) dovođenje gela dobijenog u koraku a) u kontakt sa efikasnom količinom najmanje jednog endogenog poliamina i opciono u prisustvu dodatnog sredstva za poprečno povezivanje, c) poprečno povezivanje navedene smeše formirane u koraku b), pri čemu se pomenuto poprečno povezivanje vrši pod uslovima koji su povoljni za kovalentno vezivanje navedene hijaluronske kiseline i pomenutog endogenog poliamina,

d) rekuperiranje navedenog poprečno povezanog hidrogela i opciono

e) zaustavljanje poprečnog povezivanja u izlaganju poprečno povezanog gela uslovima koji su povoljni za zaustavljanje njihovog poprečnog povezivanja, ovaj neobavezni korak e) se izvodi pre, zajedno sa ili posle koraka d).

8. Postupak prema patentnom zahtevu 7, gde su endogeni poliamin(i) izabrani iz grupe koju čine spermidin, spermin i njihove smeše, a još bolje spermin.

9. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 7 i 8, pri čemu se endogeni poliamin(i) koristi u sadržaju između 0.1% i 3%, poželjno između 0.5% i 1.5%, prema broju molova poliamina u odnosu na broj molova hijaluronske kiseline koji su prisutni u smeši iz koraka b).

10. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 7 do 9, gde se hijaluronska kiselina ili njena so koriste u sadržaju između 0.5% i 12% težine, poželjno između 1% i 4% težine, u odnosu na ukupnu težinu smeše dobijene na kraju koraka b).

11. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 7 do 10, koji koristi (i) natrijum hijaluronat, (ii) spermin, kao sredstvo za poprečno povezivanje, i (iii) EDC u kombinaciji sa HOBt, kao, respektivno, aktivator i pomoćno sredstvo za spajanje.

4

12. Sterilni injekcioni dermatološki preparat koji sadrži, u fiziološki prihvatljivoj podlozi, bar jedan poprečno povezani gel hijaluronske kiseline, kako je definisan prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6.

13. Kozmetički ili dermatološki preparat, koji sadrži najmanje jedan poprečno povezani gel hijaluronske kiseline, kao što je definisan bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6.

14. Komplet sadrži:

- pakovanje koje sadrži najmanje jednu dozu poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline, kao što je definisano u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6 ili sastava kao što je definisano u patentnom zahtevu 12;

i

- uređaj za injektiranje u ili kroz kožu ili uređaj za mikroperforaciju kože, namenjen primeni navedene doze.

15. Upotreba poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline, kako je definisano u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6, ili sastava definisanog u patentnom zahtevu 12, za popunjavanje volumena kože i posebno popunjavanje bora.

16. Proces kozmetičkog tretmana kože, koji sadrži najmanje jedan korak davanja, u ili kroz kožu, poprečno povezanog gela hijaluronske kiseline, kao što je definisano u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6 ili sastava kao što je definisano u patentnom zahtevu 12.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5