RS59108B1 - Postupak za pripremu sastava koji sadrže hijaluronsku kiselinu i mepivakain hidrohlorid - Google Patents

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na oblast sterilnih i injekcionih sastava koji sadrže hijaluronsku kiselinu ili njenu so, a naročito sastave za popunjavanje mekog tkiva, naročito za povećanje i/ili popravljanje mekog tkiva, uključujući parodontalno tkivo, a naročito za lečenje oštećenja i nesavršenosti keratinskih materija, poput kože. Pronalazak se odnosi na postupak pripreme takvih sastava.

OPIS SRODNOG STANJA TEHNIKE

[0002] Bilo je napora da se razviju sastavi korisni za ispravljanje oštećenja na koži kao što su ožiljci i bore ili da se poveća tkivo ispitanika u cilju poboljšanja izgleda kože, naročito kože lica. Glavni postupak koji se koristi za ispravljanje takvih oštećenja uključuje ubrizgavanje sastava punila u dermalni sloj kože za neposredan učinak ili željeno uvećanje tkiva.

[0003] Hijaluronska kiselina je glavna komponenta vanćelijskog matriksa (ECM). Stoga se nalazi u velikim količinama uglavnom u koži. Takođe je glavna fiziološka komponenta matriksa zglobnih hrskavica i posebno je obilna sinovijalnom tečnošću.

[0004] Prema tome, hijaluronska kiselina u svom obliku kiseline ili soli je biomaterijal koji se u velikoj meri koristi kao materijal za ubrizgavanje za inženjersku primenu u tkivima i posebno za povećanje dermalnog tkiva ili drugog mekog tkiva poput gingivalnog tkiva.

[0005] Hijaluronska kiselina je linearni ne-sulfatni glikozaminoglikan sastavljen iz ponavljajućih jedinica D-glukuronske kiseline i N-acetil-D-glukozamina (Tammi R., Agren UM., Tuhkanen AL., Tammi M. Hyaluronan metabolism in skin. Progress in Histochemistry & Cytochemistry 29 (2):1.-81, 1994).

[0006] U koži se hijaluronska kiselina sintetiše pre svega dermalnim fibroblastima i epidermalnim keratinocitima (Tammi R., citirano iznad). Kroz svoje ostatke koji nose negativan naboj, hijaluronska kiselina deluje kao vodena pumpa za održavanje elastičnosti kože.

[0007] Pored toga, ECM je dinamična struktura sa strukturnom i regulatornom ulogom za tkiva. ECM se sastoji od kolagena i elastina, a takođe je od osnovne supstance, uglavnom vode, minerala i proteoglikana. Ova matrica daje koži njen turgor i mehanička svojstva čvrstine, elastičnosti i tonusa.

[0008] Što se tiče kože, primećuje se da s godinama, količina hijaluronske kiseline i njen stepen polimerizacije opadaju, što rezultira smanjenjem količine vode koja se zadržava u vezivnom tkivu.

[0009] U međuvremenu, ECM komponente se razgrađuju, uglavnom enzimima endopeptidaze koji se nazivaju matrične metaloproteinaze ili MMP.

[0010] Konačno, smanjivanje ćelijske odbrane povećava oštećenja i poremećaje izazvane spoljašnjim naprezanjem, kao što je oksidativni stres.

[0011] Koža se zatim podvrgava procesu starenja što dovodi do pojave oštećenja i mrlja keratinskih supstanci, posebno kože.

[0012] U polju punila bora, gelovi koji se sastoje uglavnom iz hijaluronske kiseline, slučaj hemijski umreženih, ubrizgavaju se intradermalno da bi se ispunila stvorena depresija.

[0013] Umrežavanje može povećati postojanost proizvoda u dermisu. Takvi gelovi na bazi hijaluronske kiseline, ako je potrebno umreženi, omogućavaju smanjenje bora mehaničkim efektom punila koji nastaje usled vakuumske bore na koži.

[0014] Međutim, poznato je da ubrizgavanje takvih gelova često izaziva bolne senzacije za pacijenta, pri čemu se taj osećaj još više pogoršava što je gel visoko viskozan i/ili elastičan.

[0015] Danas, kako bi se prevazišao ovaj tehnički problem, glavna punila na bazi hijaluronske kiseline dostupna su sa lokalnim anestetičkim sredstvom kako bi se osigurala veća udobnost pacijenta. Ovo lokalno anestetičko sredstvo je samo lidokain, sa doziranjem od oko 0.3%.

[0016] Međutim, poznato je da lidokain može pokazati nedostatak, u pogledu njegovih vazodilatatornih svojstava, da podrazumeva prebrzu apsorpciju od strane pacijentovog tela, a ponekad i pojačane pojave hematoma, koje je iz očiglednih estetskih razloga moguće izbeći što je više moguće. Rešenje za prevazilaženje gore pomenutih problema može se sastojati u primeni lidokaina u kombinaciji sa vazokonstriktorom, posebno epinefrinom (J. Endod.2013 May; 39(5):597-9). Međutim, prisustvo vazokonstriktora poput epinefrina može zahtevati dodavanje konzervansa koji nije uvek inertan u odnosu na pacijenta i može dovesti do alergije.

[0017] Stoga ostaje potreba za razvijanjem gelova koji se sastoje uglavnom iz hijaluronske kiseline, slučaj koji je hemijski umrežen, koji prevazilazi iznad navedene tehničke probleme bolnog osećaja za pacijenta tokom injekcije i koji takođe ne uključuju nikakav problem alergije niti pojačana pojava hematoma.

SUŠTINA PRONALASKA

[0018] Pronalazak se odnosi na postupak za pripremu sterilnih i injektirajućih sastava, tačnije sastava punila mekog tkiva, pri čemu postupak sadrži najmanje korake:

a) obezbeđivanje najmanje jednog gela hijaluronske kiseline ili njene soli, pri čemu je navedena hijaluronska kiselina odabrana iz oblika umrežene hijaluronske kiseline, neumreženog oblika hijaluronske kiseline ili njene smeše;

b) dodavanje pomenutom gelu hijaluronske kiseline najmanje mepivakain hidrohlorida kao anestetičkog sredstva; i

c) sterilizacija smeše dobijene u koraku b).

[0019] FR 2979 539 opisuje sterilni i injektabilni sastav na bazi hijaluronske kiseline za lečenje oštećenja kože, ali koja sadrži samo lidokain hidrohlorid kao anestetičko sredstvo. WO 2012/104419 obelodanjuje sterilne i injektirajuće sastave koji sadrže gel hijaluronske kiseline, anestetičko sredstvo i askorbinsku kiselinu. Mepivakain hidrohlorid nije predložen kao lokalno sredstvo za anesteziju. WO 2004/032943 odnosi se na sastav koji sadrži neumreženu hijaluronsku kiselinu i bar anestetičko sredstvo za lečenje degenerativnih i traumatičnih bolesti svih zglobova, kao i za lečenje promena na koži i sluzokoži. Mepivakain hidrohlorid nije predložen kao anestetičko sredstvo. WO 2005/067994 posebno se bavi hidratacijom čestica hijaluronske kiseline vodenim rastvorom koji sadrži bioaktivno sredstvo koje se razlikuje od mepivakain hidrohlorida. EP 2404619 predlaže kombinovanje sa lekom, posebno anestetičkim sredstvom, komponentom gela za poboljšanje njegove efikasnosti. Lokalna sredstva za anesteziju navedena u prethodnom dokumentu razlikuju se od mepivakain hidrohlorida. WO 2013/186493 obelodanjuje sastave korisne za augumentaciju bora i koje sadrže hijaluronsku kiselinu i najmanje jednu oktansulfat saharozu rastvorljivu u vodi ([00035]). Mepivakain hidrohlorid nije opisan niti predlagan u njemu.

[0020] Dokument J. Oral Maxillofac Surg.2008, 66, 286 i WO 2013/092860 razmatraju upotrebu mepivakain hidrohlorida, ali ne u skladu sa postupkom ovog pronalaska iz patentnog zahteva. Stoga, dokument J. Oral Maxillofac Surg.2008, 66, 286 upravo raspravlja o uticaju kombinovanja injekcije hijaluronidaze na vreme delovanja mepivakaina.

[0021] Naročito se mepivakain hidrohlorid koristi u kombinaciji sa epinefrinom.

[0022] Međutim, ne obelodanjuje nijedan postupak za pripremu injekcionog i sterilnog sastava koji sadrži gel hijaluronske kiseline. Što se tiče WO 2013/092860, njegov primer 1 obelodanjuje postupak za pripremanje vodenog rastvora koji se ubrizgava načinjenog od vodenog rastvora hijaluronske kiseline i rastvora skandikaina (mepivakain hidrohlorid).

[0023] Međutim, ne precizira da li je hijaluronska kiselina nabubrila, pa je stoga u obliku gela pomešana sa skandikainom i nema obelodanjivanja o koraku sterilizacije.

DETALJNI OPIS PRONALASKA

[0024] Prvo, za razliku od lidokaina, mepivakain ne pokazuje značajna vazodilataciona svojstva u odnosu na lidokain.

[0025] Pored toga, mepivakain ima pKa od 7.6, dok lidokain ima pKa od 7.9.

[0026] Stoga, mepivakain koji ima pKa niži od lidokaina, pokazuje bolju rastvorljivost lipida što poboljšava njegovu difuziju kroz lipidne barijere. Zbog toga, zbog činjenice da se mepivakain može apsorbovati brže od lidokaina, mepivakain je stoga prikladan za bolje sprečavanje bolnog osećaja tokom injekcije.

[0027] Ali iznad svega, pronalazači su neočekivano primetili da sastav punila dobijene u skladu sa postupkom ovog pronalaska, tj. uključujući mepivakain hidrohlorid kao anestetičko sredstvo, mogu biti sterilisane bez značajnog uticaja na stabilnost gela hijaluronske kiseline.

[0028] Zaista je poznato da su gelovi hijaluronske kiseline posebno osetljivi na termički tretman kao što je potreban za njihovu sterilizaciju i da se ta niska stabilnost može povećati prisustvom dodatnih materija poput anestetika. Neočekivano, ovaj nepoželjni fenomen je značajno spušten sa mepikavain hidrohloridom uporedno sa lidokainom, kao što je prikazano u sledećim primerima 1 i 2. Pored toga, pronalazači su pokazali da sastav dobijen prema postupku pronalaska dalje ispunjava zahteve u pogledu stabilnosti u vremenu, kao što je ovde kasnije prikazano u primeru 3.

[0029] Prema pronalazačima, manifestacija ovih iznad navedenih povoljnih efekata unutar mekih tkivnih sastava koji sadrže hijaluronsku kiselinu nije bila poznata.

Hijaluronska kiselina

[0030]

[0031] Kao što je iznad pomenuta hijaluronska kiselina (koja se takođe naziva hijaluronan ili hijaluronat) je linearni ne-sulfatni glikozaminoglikan sastavljen od ponavljajućih jedinica D-glukuronske kiseline i N-acetil-D-glukozamina (Tammi R., Agren UM., Tuhkanen AL., Tammi M. Hyaluronan metabolism in skin. Progress in Histochemistry & Cytochemistry 29 (2): 1. -81, 1994).

[0032] U koži se hijaluronska kiselina sintetiše pre svega dermalnim fibroblastima i epidermalnim keratinocitima (Tammi R., citirano iznad). Kroz svoje ostatke koji nose negativan naboj, hijaluronska kiselina deluje kao vodena pumpa za održavanje elastičnosti kože.

[0033] Kao što je iznad pomenuto, predmetni pronalazak razmatra primenu hijaluronske kiseline kao takve, ali i njenu so.

[0034] Zbog toga se hijaluronska kiselina u skladu sa pronalaskom može naročito odabrati između fiziološki prihvatljivih soli kao što su natrijumova so, kalijumova so, cinkova so, srebrna so i njihove smeše, poželjno natrijumova so.

[0035] Poželjno, hijaluronska kiselina prema pronalasku ima visoku prosečnu molekulsku težinu, poželjno u rasponu od 50000 do 10000 000 Daltona, poželjno od 500000 do 4000 000 daltona.

[0036] Jedna naročito poželjna so hijaluronske kiseline je natrijum hijaluronat (NaHA).

[0037] Kao što je iznad pomenuto, hijaluronska kiselina se daje injekcijama u efikasnoj količini.

[0038] "Efektivna količina" hijaluronske kiseline je odgovarajuća količina za postizanje željenog tehničkog efekta, naročito tako da ima vidljiv rezultat na površinskom izgledu kože. Posebno, efikasna količina hijaluronske kiseline je odgovarajuća količina hijaluronske kiseline za dobro popunjavanje zapreminskih oštećenja kože, a naročito za popunjavanje bora.

[0039] Podešavanje količine hijaluronske kiseline spada u nadležnost stručnjaka.

[0040] Povoljno je da hijaluronska kiselina ili njena so u postupku prema pronalasku bude prisutna u rastvoru.

[0041] S tim u vezi, efikasna količina hijaluronske kiseline može biti u opsegu od 0.1 do 5 tež.%, poželjno od 1 do 3 tež.% u odnosu na ukupnu masu pomenutog rastvora koji sadrži hijaluronsku kiselinu ili njenu so.

[0042] Prema posebnom ostvarenju, hijaluronska kiselina može biti prisutna u neumreženom obliku.

[0043] U svrhu predmetnog pronalaska, termin "neumreženi" ili "bez umrežavanja" se u kontekstu predmetnog pronalaska podrazumeva da podrazumeva gel hijaluronske kiseline koji nije umrežen ili je blago umrežen, to jest gel koji ima fazni ugao pomaka δ, mereno pod uslovima dinamičke reologije na 1 Hz, koji je veći od 40° kada je izložen stresu iznad 1 Pa.

[0044] Prema drugom posebnom otelotvorenju, hijaluronska kiselina može biti prisutna u umreženom obliku.

[0045] Prema drugom posebnom otelotvorenju, hijaluronska kiselina može biti prisutna u umreženim i neumreženim oblicima.

[0046] S tim u vezi, težinski odnos "umrežene hijaluronske kiseline/neumrežene hijaluronske kiseline" je poželjno veći od 1.

[0047] Kada je hijaluronska kiselina umrežena, pomenuta hijaluronska kiselina ima stepen modifikacije u opsegu od 0.1 do 20%, poželjno od 0.4 do 10%.

[0048] Pod "stepenom modifikacije" podrazumeva se, u smislu predmetnog pronalaska, odnos između broja molova sredstva za umrežavanje vezanog sa hijaluronskom kiselinom i broja molova hijaluronske kiseline koji formiraju pomenuti umreženi gel hijaluronske kiseline.

[0049] Ova vrednost može se izmeriti NMR analizom 1D 1H umreženog gela.

[0050] "Broj molova hijaluronske kiseline" označava se broj molova ponavljajući disaharidne jedinice hijaluronske kiseline, a disaharidna jedinica je sastavljena od D-glukuronske kiseline i DN-acetilglukozamina povezanih zajedno naizmeničnim beta-1,4 i beta-1,3 glikozidne veze.

[0051] Ovaj stepen modifikacije može se posebno ceniti kao što je ovde obelodanjeno.

[0052] Stoga se karakterizacija stepena modifikacije hijaluronske kiseline vrši spektroskopijom NMR (spektrometar Bruker Avance 1 koji radi na 400 MHz (<1>H)).

[0053] Za BDDE stepen modifikacije se dobija integrisanjem signala<1>H NMR N-acetil grupe (δ ≈ 2 ppm) prisutnog u hijaluronskoj kiselini i signala prisutnog u sredstvu umrežavanja (dve -CH2- grupe, δ ≈ 1.6 ppm ). Odnos integrala ova dva signala (sredstvo za umrežavanje/NaHA) odnosi se na stepen modifikacije, nakon korekcije broja protona vezanih za svaki signal:

Unakrsno povezano sredstvo

[0054] Pod terminom "sredstvo za umrežavanje" se podrazumeva svako jedinjenje koje može da indukuje umrežavanje između različitih lanaca hijaluronske kiseline.

[0055] Izbor ovog sredstva za umrežavanje očigledno spada u kompetentnost osobe koja je vešta u ovoj oblasti.

[0056] Sredstvo za umrežavanje u skladu sa pronalaskom može biti izabrano između disfunkcionalnih ili multifunkcionalnih epoksi sredstava za umrežavanje, ali i poliamina kao što je na primer heksametilendiamin (HMDA) ili endogeni poliamini.

[0057] Pod "endogenim poliaminom", u smislu predmetnog pronalaska, podrazumeva se poliamin koji je prirodno prisutan u živim organizmima, a posebno u ljudskom telu. Kao reprezentativni endogeni poliamini, mogu se posebno pomenuti oni navedeni u životinjama eukariota, poput putrescina (ili 1,4-diaminobutana), spermidina (ili 1,8-diamino-5-azaoktana) i spermina (1,12 -diamino-5,9-diazadodekan), poželjno spermin.

[0058] Tačnije, sredstvo za umrežavanje prema predmetnom pronalasku može biti poželjno izabrano iz grupe koja se sastoji od 1,4-butandiol diglicidil etra (BDDE), 1,4-bis(2,3-epoksipropoksi)butana, 1,4-bisglicidiloksibutana 1,2-bis(2,3-epoksipropoksi) etilen i 1-(2,3-epoksipropil)-2,3-epoksicikloheksan, endogeni poliamin i njihove smeše.

[0059] Poželjno, sredstvo za umrežavanje prema pronalasku je 1,4-butandiol diglicidil eter (BDDE).

[0060] U posebnom otelotvorenju gde je sredstvo za umrežavanje poliamin, a naročito endogeni poliamin, reakcija spajanja sa hijaluronskom kiselinom može se izvesti u prisustvu najmanje jednog aktivatora, a slučaj koji nastaje povezan sa najmanje jednim pomoćnim spajanjem.

[0061] S tim u vezi, aktivator može biti izabran od karbodiimida rastvorljivih u vodi kao što su 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid (EDC), 1-etil-3-(3-25 trimetilaminopropil)karbodiimid hidrohlorid (ETC), 1-cikloheksil-3-(2-morfilinoetil)karbodiimid (CMC) i njegova so, i njihove smeše, poželjno je predstavljen EDC.

[0062] Što se tiče pomoćnog sredstva za spajanje, kada je prisutno, može se odabrati između N-hidroksi sukcinimida (NHS), N-hidroksibenzotriazola (HOBt), 3,4-dihidro-3-hidroksi-4-okso-1,2,3-benzotriazola (HOOBt), 1-hidroksi-7-7azabenzotriazola (HAt) i N-hidroksisilfosukcinimida (sulfo NHS), i njihove smeše, poželjno je predstavljen sa HOBt.

[0063] Sredstvo za umrežavanje se realizuje u efikasnoj količini.

[0064] "Efektivna količina" sredstva za umrežavanje je odgovarajuća količina za postizanje odgovarajućeg stepena umrežavanja hijaluronske kiseline.

[0065] Podešavanje količine sredstva za umrežavanje spada u nadležnost osobe koja je vešta u ovoj oblasti.

[0066] Poželjno, efikasna količina sredstva za umrežavanje može da se kreće od 0.05 do 15 mas.% u odnosu na ukupnu masu hijaluronske kiseline ili njene soli.

[0067] Povoljno, kada je hijaluronska kiselina umrežena i kada je sredstvo za umrežavanje BDDE, količina u molskom odnosu nBDDE/n hijaluronske kiseline može biti u rasponu između 0.01 i 0.5, poželjno između 0.04 i 0.25.

Anestetičko sredstvo

[0068] Anestetičko sredstvo prema predmetnom pronalasku ima posebnu prednost da smanji ili eliminiše osećaj bola koji je iskusio pacijent tokom i/ili posle injekcije.

1

[0069] Štaviše, anestetičko sredstvo prema predmetnom pronalasku je izabrano među jedinjenjima koja ne povećavaju rizik od nekompatibilnosti sa drugim jedinjenjima koja se koriste u sastavu dobijenom u skladu sa postupkom predmetnog pronalaska, naročito sa hijaluronskom kiselinom i najmanje je mepivakain hidrohloridom.

[0070] Mepivakain je lokalni anestetik porodice amino-amida formule (I):

[0071] Mepivakain prodaje se pod imenom Carbocaine® od strane kompanije Cook-Waite.

[0072] Mepivakain je molekul dobre stabilnosti. Njegov glavni produkt razgradnje je 2,6-dimetilanilin. Mepivakain je molekul koji sadrži hiralni centar (asimetrični ugljenik). Dakle, postoje R i S enantiomeri. U sledećim primerima smatra se racemskom smešom dva oblika mepivakaina.

[0073] Povoljno je da je mepivakain hidrohlorid u postupku prema pronalasku prisutan u rastvoru.

[0074] S tim u vezi, efikasna količina mepivakain hidrohloridema se kreće od 0.05 do 3 tež.% u odnosu na masu rastvora koji sadrži navedeni mepivakain hidrohlorid.

[0075] Sastav dobijen prema postupku pronalaska

Sterilni i injektirajući sastav, naročito mekani sastav punila dobijen u skladu sa postupkom iz patentnog zahteva, sadrži efikasnu količinu najmanje hijaluronske kiseline ili njene soli, uključujući efikasnu količinu od najmanje mepivakain hidrohlorida kao anestetičkog sredstva.

[0076] Pod "sterilnim", u smislu predmetnog pronalaska, podrazumeva se okruženje koje može garantovati razmatrana jedinjenja u sastavu dobijenom u skladu sa postupkom predmetnog pronalaska, bezbednosnim zahtevima za načine primene, kao što je iznad pomenuto, naročito u ili kroz kožu. Zaista, iz očiglednih razloga, od suštinskog je značaja da sastav dobijen u skladu sa postupkom predmetnog pronalaska bude bez kontaminiranog tela koje može pokrenuti neželjenu nuspojavu u organizmu domaćina.

[0077] Hijaluronska kiselina, sredstvo za umrežavanje i sredstvo za anesteziju su takvi kao što je iznad pomenuto.

[0078] Kada je reč o hijaluronskoj kiselini, smeša dobijena prema postupku iz predmetnog pronalaska može da sadrži od 0.1 do 5 tež.%, poželjno od 1 do 3 tež.% hijaluronske kiseline, u odnosu na ukupnu težinu pomenutog sastava.

[0079] Kao što je iznad pomenuto, hijaluronska kiselina može biti prisutna u umreženim i neumreženim oblicima.

[0080] S tim u vezi, težinski odnos "umrežene hijaluronske kiseline/neumrežene hijaluronske kiseline" je poželjno veći od 1.

[0081] Tačnije, sastav dobijen prema postupku iz predmetnog pronalaska može da sadrži: • od 50% do 99% po težini, poželjnije 70% do 95% težine hijaluronske kiseline koja je prisutna u obliku umreženog gela,

• od 1% do 50% po težini, poželjnije 5% do 30% težine hijaluronske kiseline koja je prisutna u neumreženom obliku,

odnos između mase umreženog gela hijaluronske kiseline i težine neumrežene hijaluronske kiseline je između 1:1 i 1:0.02.

[0082] Kada je reč o anestetičkim agensima, smeša dobijena prema postupku pronalaska može da sadrži od 0.01 do 5 tež.%, poželjno od 0.05 do 3 tež.% anestetičkog sredstva, u odnosu na ukupnu težinu pomenutog sastava.

[0083] Svojim ubrizgavajućim karakterom, sastav dobijen prema postupku pronalaska nužno sadrži fiziološki prihvatljivu podlogu.

[0084] "Fiziološki prihvatljiva podloga" znači podloga bez toksičnosti i kompatibilna sa ubrizgavanjem i/ili primenom sastava kao što je ovde razmatrano.

[0085] Sastav može da sadrži rastvarač ili smešu fiziološki prihvatljivih rastvarača.

[0086] Sastav može da sadrži fiziološki prihvatljivu vodenu podlogu.

[0087] Kao vodena podloga pogodna za pronalazak, može biti na primer pomenuta voda.

[0088] Kao izotonična sredstva pogodna za dobijanje smeše dobijene u skladu sa postupkom pronalaska, mogu se pomenuti šećeri i natrijum hlorid.

[0089] Sastav dobijen u skladu sa postupkom predmetnog pronalaska može dalje da sadrži najmanje uravnoteženi rastvor soli.

[0090] Primena ovog uravnoteženog rastvora soli je posebno interesantna po tome što omogućava još uvek smanjenje bol pri ubrizgavanju (videti Farley J.S. i dr., Regional Anesthesia A., 1994, Vol.19: 48).

[0091] Poželjno, navedeni balansirani rastvor soli je fiziološki rastvor pufera sa fosfatima, a naročito je fiziološka otopina puferisana fosfatima i naročito KH2PO4/K2HPO4slani pufer.

[0092] Rečeni rastvor soli može dalje da sadrži najmanje jedno jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od alfa-lipoične kiseline; N-Acetil-L-cistein; redukovani glutation; aminokiseline kao što su L-arginin, L-izoleucin, L-leucin, monohidratirani L-lizin, glicin, L-valin, L-treonin, L-prolin; piridoksin Hidroklorid; dehidrirani cink acetat; pentahidrata bakar sulfata i njihove mešavine.

[0093] Sastav dobijen prema postupku iz predmetnog pronalaska može dalje da sadrži najmanje jedno jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji iz alfa-lipoične kiseline; N-Acetil-L-cistein; redukovani glutation; aminokiseline kao što su L-arginin, L-izoleucin, L-leucin, monohidratirani L-lizin, glicin, L-valin, L-treonin, L-prolin; piridoksin Hidroklorid; dehidrirani cink acetat; pentahidrata bakar sulfata i njihove mešavine.

[0094] Sastav dobijen u skladu sa postupkom prema predmetnom pronalasku može da sadrži, pored pomenutih jedinjenja, najmanje jedno dodatno jedinjenje kompatibilno sa upotrebom u oblasti mešavina sastava punila mekog tkiva.

1

[0095] S tim u vezi, dodatna jedinjenja koja se mogu primeniti u sastavu dobijenom u skladu sa postupkom pronalaska mogu biti izabrana od bakarne soli, alfa-lipoične kiseline, acetiliranog derivata cisteina ili njihove smeše.

[0096] Količine ovih dodatnih jedinjenja zavise od prirode predmetnog jedinjenja, željenog efekta i odredišta sastava dobijenog u skladu sa postupkom pronalaska.

[0097] Ovi parametri pripadaju opštoj veštini tehnike.

[0098] Sastav dobijen u skladu sa postupkom pronalaska, koja dalje sadrži najmanje jednu bakarnu so, može poželjno da sadrži pomenutu so bakra u količini u rasponu od 0.1 do 50 ppm na osnovu ukupne težine pomenutog sastava.

[0099] Sastav dobijen u skladu sa postupkom pronalaska, koji dalje sadrži najmanje jednu alfa-lipoičnu kiselinu, poželjno sadrži pomenutu alfa-lipoičnu kiselinu u količini u opsegu od 0.5 do 10000 ppm, poželjno od 5 do 100 ppm alfa-lipoične kiseline, na bazi na ukupnu težinu pomenutog sastava.

[0100] Sastav dobijen u skladu sa postupkom pronalaska, koji dalje sadrži najmanje jedan acetilirani derivat cisteina, poželjno sadrži navedeni acetilirani derivat cisteina u količini u rasponu od 0.5 do 10000 ppm na osnovu ukupne težine pomenutog sastava.

[0101] Među ostalim dodatnim jedinjenjima koja se mogu koristiti u ovom pronalasku, mogu se pomenuti antioksidanti, aminokiseline, vitamini, minerali, nukleinske kiseline, koenzimi, derivati nadbubrežne kiseline i njihove smeše, pri čemu su navedena jedinjenja različita od iznad navedenih.

[0102] Kao antioksidans mogu se pomenuti glutation, elaginska kiselina, spermin, resveratrol, retinol, L-karnitin, polioli, polifenoli, flavonoli, teflavini, katehini, kofein, ubikinol, ubikinon i njihove smeše.

[0103] Kao aminokiseline mogu se pomenuti arginin, izoleucin, leucin, lizin, glicin, valin, treonin, prolin, metionin, histidin, fenilalanin, triptofan i njihove smeše.

[0104] Kao vitamini i njihovi derivati, mogu se bolje spomenuti vitamini E, A, C, B, posebno vitamini B6, B8, B4, B5, B9, B7, B12 i piridoksin.

[0105] Kao minerali mogu se posebno pomenuti cinkove soli, magnezijumove soli, kalcijumove soli, kalijumove soli, manganove soli, natrijumove soli i njihove smeše.

[0106] Kao nukleinske kiseline mogu se posebno pomenuti derivati adenozina, citidina, guanozina, timidina, citodina i njihove smeše.

[0107] Kao koenzimi mogu se navesti koenzimi Q10, CoA, NAD, NADP i njihove smeše. Kao derivati adrenalina mogu se pomenuti adrenalin, noradrenalin.

[0108] Pored toga, sastav dobijen u skladu sa postupkom iz predmetnog pronalaska može dalje da sadrži bilo koji pomoćni sastojak koji se obično koristi u tehničkom polju, kao što su na primer mono- i/ili dihidratizovani dihidrogenofosfat natrijum i natrijum hlorid, u fiziološkim koncentracijama.

[0109] Količine dodatnih aktivnih sredstava i/ili ekscipijenasa, naravno, zavise od prirode predmetnog jedinjenja, željenog dejstva i odredišta sastava kao što je ovde opisano.

[0110] Sastav dobijen prema postupku iz predmetnog pronalaska može imati složenu viskoznost η* između oko 5 Pa*s i oko 450 Pa*s kada se meri na oko 1Hz.

[0111] Sastav dobijen u skladu sa postupkom predmetnog pronalaska sačinjen od umrežene hijaluronske kiseline može imati viskozitet između 200 i 2000 Pa.s, poželjno između 1000 i 1800 Pa.s.

[0112] Viskoelastična svojstva sastava dobijenog u skladu sa postupkom pronalaska mogu se meriti korišćenjem reometra (posebno Haake RS6000) sa geometrijom konusa/ploče (ugao konusa 1°/ploča prečnika 35 mm). Provodi se ispitivanje naprezanja i mere se elastični modul G' (u Pa) i ugao faznog pomaka δ (u °) za napon od 5 Pa.

1

Postupak pripreme sterilnog i injekcijskog preparata, prema pronalasku

[0113] Kao što je iznad pomenuto, pronalazak se odnosi na postupak za pripremu sterilne i injektirajuće sastave, tačnije sastava punila mekog tkiva, pri čemu postupak sadrži najmanje korake:

a) obezbeđivanje najmanje jednog gela hijaluronske kiseline ili njene soli, pri čemu je navedena hijaluronska kiselina odabrana iz oblika umrežene hijaluronske kiseline, neumreženog oblika hijaluronske kiseline ili njene smeše;

b) dodavanje pomenutom gelu hijaluronske kiseline najmanje mepivakain hidrohlorida kao anestetičkog sredstva; i

c) sterilizacija smeše dobijene u koraku b).

[0114] Prema poželjnom otelotvorenju, mepivakain hidrohlorid se dodaje injekcionom obliku hijaluronske kiseline.

[0115] Drugim rečima, gel hijaluronske kiseline koji se razmatra u koraku a) već pokazuje koncentraciju hijaluronske kiseline, u ostacima sredstava za umrežavanje ako postoje, i fiziološkim i/ili pH uslovima koji su kompatibilni sa upotrebom injekcija, naročito u poljima iznad razmatrane primene.

[0116] Na ovaj način, rizici koji utiču na stabilnost hijaluronske kiseline u mešavini hijaluronske kiseline i mepivakain hidrohlorida nametanjem dodatnih koraka prečišćavanja, kao što je iznad definisano, značajno su smanjeni.

[0117] Smeša je podvrgnuta samo jednom koraku sterilizacije. Ovaj korak se poželjno izvodi na smeši koja je već upakovana u uređaj za isporuku, obično u špric, kao što je ovde definisano.

[0118] Povoljno je da se korak sterilizacije izvodi termičkim putem.

[0119] Povoljno je da se sterilizacija vrši na temperaturi koja varira od 120 do 140°C.

[0120] Konkretno, korak sterilizacije može se izvesti u autoklavu (vlažna toplota)

121°C, da bi se dobio F0> 15 (vrednost sterilizacije).

1

[0121] S tim u vezi, i kao što je iznad pomenuto, sastav dobijen prema pronalasku je naročito povoljan jer pokazuje veoma zanimljivu visoku otpornost na ovaj korak sterilizacije.

[0122] Zapravo, kao što je prikazano u primerima 1 i 2, gubitak G' koji nastaje sterilizacijom za sastav dobijen u skladu sa postupkom pronalaska je manji nego za sastav koji sadrži lidokain umesto mepivakaina.

[0123] Prema posebnom otelotvorenju, postupak pripreme gela hijaluronske kiseline prema pronalasku može dalje da obuhvata korak d) koji se sastoji iz dodavanja dodatnog anestetskog sredstva ili njegove soli, različite od mepivakain hidrohlorida, pomenuti korak d) koji se sprovodi pre, istovremeno i/ili posle koraka b).

[0124] Ovo dalje anestetičko sredstvo može biti posebno izabrano između ambukajna, amolanona, amilokaina, benoksinata, benzokaina, betoksikaina, bifenamina, bupivakaina, butakaina, butamben, butanilikaina, butetamina, butoksikaina, karicaina, hloroprokaina, kokaetilena, kokaina, ciklometikaina, dibukaina, dimetisokvina, dimetokaina, diperodona, diciklonina, ekgonidina, ekgonina, etil hlorida, etidokaina, beta-eukaina, euprocin fenalkomina, formokaina, heksilkaina, hidroksitetrakaina, izobutil p-aminobenzoata, leucinokain mezilata, levoksadrola, lidokaina, meprilkaina, metabutoksikaina, metil hlorida, mirtekaina, naepaina, oktakaina, ortokaina, oketazaina, paretoksikaina, fenakaina, fenola, piperokaina, piridokaina, polidokanola, pramokina, prilokaina, prokaina, propanokaina, propakaina, propipokaina, propoksikaina, pseudokokaina, pirokaina, ropivakaina, salicil alkohola, tetrakaina, tolikakana, trimekaina, zolamina ili njegova so i smeša.

[0125] Kada gel razmotren u koraku a) sadrži umreženi oblik hijaluronske kiseline, ovaj poslednji se može prethodno dobiti od neumreženog oblika hijaluronske kiseline.

[0126] Retikulacija se može izvesti na konvencionalan način sa najmanje jednim sredstvom za umrežavanje, kao što je prethodno pomenuto.

[0127] Vodena smeša koja sadrži sredstvo za umrežavanje i hijaluronsku kiselinu za umrežavanje je pogodno homogenizovano pre obavljanja umrežavanja.

1

[0128] Svrha ove operacije je tačnije da se hijaluronska kiselina ili njena so u vodenoj podlozi savršeno hidriraju i homogenizuju i tako pomognu u optimizaciji očekivanih svojstava gela hijaluronske kiseline. Ovaj korak homogenizacije je važniji kada hijaluronska kiselina ima visoku molekulsku težinu, jer hidratacija takvog jedinjenja teži da rezultira stvaranjem rastvora visoke viskoznosti u kome se obično primećuje pojava aglomerata.

[0129] Svrha ove operacije je takođe tačno da se homogenizuje sredstvo umrežavanja unutar smeše kako bi se kasnije osigurala homogena reakcija umrežavanja.

[0130] Homogenizacija se smatra zadovoljavajućom kada je dobijeni rastvor jednolično obojen, bez aglomerata i ima ujednačenu viskoznost. Homogenizacija se može pogodno provesti u blagim radnim uslovima tako da se spreči razgradnja lanaca hijaluronske kiseline.

[0131] Trajanje ovog koraka homogenizacije zavisi od prirode hijaluronske kiseline ili njene soli, tačnije od molekularne težine i njene koncentracije, od uslova rada unutar vodenog medijuma i od korišćenog homogenizujućeg uređaja, obično uređaja koji omogućava mekano mehaničko mešanje.

[0132] Poželjno, korak homogenizacije se može izvesti tokom vremena kraćeg od 200 minuta, poželjno manje od 150 minuta, ili čak između 15 i 100 minuta.

[0133] Svrha reakcije umrežavanja je stvaranje mostova između lanaca hijaluronske kiseline koji omogućavaju dobijanje guste čvrste trodimenzionalne mreže iz viskoznog rastvora.

[0134] Posebni uslovi koji treba da se usvoje za stimulisanje reakcije umrežavanja mogu zavisiti od molekulske težine hijaluronske kiseline, vodenog medijuma i prirode sredstva za umrežavanje. Uopšteno, ta se retikulacija može postići dovođenjem smeše koja sadrži neumreženu hijaluronsku kiselinu i barem jedno sredstvo za umrežavanje, kao što je iznad spomenuto, u kontakt sa aktivirajućim elementom ili stimulansom, poput na primer granjem ili izlaganjem UV ili čak dovođenjem navedene smeše u kontakt sa materijalom tipa katalizatora.

[0135] Izbor takvog pokretačkog elementa spada u opšte znanje stručnjaka iz ove oblasti.

1

[0136] U kontekstu predmetnog pronalaska, ovaj pokretački element je pogodno predstavljen povećanjem temperature smeše "neumrežene hijaluronske kiseline/vodene podloge/sredstva za umrežavanje".

[0137] Naročito pogodna temperatura za reakciju umrežavanja je između 35°C i 60°C, poželjno između 45 i 55°C, a još bolje između 48 i 52°C.

[0138] Stepen umrežavanja takođe zavisi od vremena umrežavanja i temperature koja se postavlja smeši „neumrežene hijaluronske kiseline/vodene podloge/sredstva za umrežavanje“. Što je vreme duže, to će biti veći stepen umrežavanja, s tim da je optimalno da se ne premaši bez rizika od razgradnje hijaluronske kiseline.

[0139] Prema tome, pri temperaturi u rasponu od 35°C i 60°C, reakcija umrežavanja može se izvesti tokom vremena u rasponu od 30 do 300 minuta, poželjno 100 do 200 minuta, a još bolje 150 do 190 minuta.

[0140] Poželjno, uslovi umrežavanja se podešavaju da bi se dobio stepen umrežavanja tako da je gelom umrežene hijaluronske kiseline formiran viskozan, viskoelastični gel ili čak čvrsti gel.

[0141] Zaustavljanje reakcije umrežavanja zahteva izlaganje umreženog gela ili, tokom umrežavanja, čak i posudu koja ga sadrži, uslovima pogodnim za zaustavljanje umrežavanja ili drugim uslovima koji mogu zaustaviti stvaranje veza između različitih lanaca hijaluronske kiseline.

[0142] Na primer, u pogledu toplotnih uslova koji će se primeniti da stimulišu proces umrežavanja, umrežavanje se može zaustaviti:

• jednostavnim uklanjanjem posude iz termostatske kupke i hlađenjem dok se ne vrati na sobnu temperaturu;

• stavljanjem posude u kadu sa hladnom vodom, po mogućnosti na temperaturi nižoj od sobne temperature, sve dok temperatura unutar navedene posude ne bude blizu sobne temperature; ili čak

• ekstrahiranjem gela iz navedene posude.

1

[0143] Prema posebnom otelotvorenju, homogenizacija i umrežavanje mogu se izvesti u hermetičkoj šupljini koja je bar delimično ograničena deformabilnim zidom, poželjno napravljenim unutar vreće za deformaciju, koja se može deformisati barem ručno palpacijom, kao što je posebno opisano u WO 2010/131175.

[0144] Gel dobijen na kraju koraka umrežavanja generalno se ne može ubrizgati direktno, naročito zbog visoke koncentracije hijaluronske kiseline i/ili zbog mogućeg prisustva ostataka sredstva za umrežavanje ili zbog njegovih fizioloških i/ili pH uslova koji nisu kompatibilni sa upotreba u iznad razmatranim aplikacijama.

[0145] Dalje, neki gelovi mogu naročito imati preveliku krutost da bi se kao takvi ubrizgali pacijentu. Zbog toga se može izvesti nekoliko dodatnih koraka, koji su poznati stručnjacima sa ciljem dobijanja hidrogela za ubrizgavanje. Tačnije, potreban je korak neutralizacije i širenja ovog gela kako bi mu se dali svojstvima implantata. Lanci mreže hijaluronske kiseline se zatim istežu i hidriraju, dok se pH dovodi do dermisa.

[0146] Korak zaštite i ponovnog učvršćivanja gela takođe se može izvesti radi daljeg poboljšanja kvaliteta implantata, u skladu sa stručnjacima. Gel mora biti fiziološki formulisan zahvaljujući prisustvu soli u ekvivalentnim količinama od onih koji se ubrizgavaju u podlogu.

[0147] Za još veću čistoću, takođe se može izvesti dodatni korak prečišćavanja.

[0148] Povoljno je da se na kraju ovog protokola za pripremu injekcionog oblika hijaluronske kiseline, neposredno pre koraka sterilisanja, kao što je iznad definisano, dodaju mepivakain hidrohlorid i, slučaj koji nastaju, dodatni (i) anestetik (i).

[0149] Prema posebnom otelotvorenju, hidrogel dodat mepivakain hidrohlorid i opciono dodatna anestetička sredstva mogu da se koriste za punjenje šprica u uslovima kontrolisane atmosfere, a navedeni špricevi tada mogu proći korak sterilizacije, poželjno korak termičke sterilizacije, kao što je iznad definirano.

Davanje smeše dobijene u skladu sa postupkom pronalaska

[0150] Sastav dobijen prema postupku iz predmetnog pronalaska može se ubrizgati koristeći bilo koji od poznatih postupaka u stanju tehnike.

2

[0151] Posebno, smeša se može primeniti pomoću injekcionog uređaja pogodnog za intraepidermalno i/ili intradermalno i/ili subkutano.

[0152] Sastav se takođe može primeniti pomoću injekcionog uređaja pogodnog za gingivalni zglobni i/ili intraokularni region.

[0153] Uređaj za ubrizgavanje, naročito kada se kompozicija primenjuje pomoću injekcionog uređaja pogodnog za intraepidermalnu i/ili intradermalno i/ili potkožno, može da se izabere iz špriceva, skupa mikro-špriceva, laserskog uređaja, hidrauličkog uređaja, injekcije pištolj, uređaj za ubrizgavanje bez igala, rolera sa mikro-nožicama.

[0154] Poželjno, uređaj za ubrizgavanje može biti izabran iz špriceva ili seta mikro-špriceva.

[0155] Kao alternativa, uređaj za ubrizgavanje može se prilagoditi tehnici mezoterapije.

[0156] Mezoterapija je tehnika lečenja intraepidermalnim i/ili intradermalno i/ili subkutano aktivnim proizvodima.

[0157] Primena intraepidermalno i/ili intradermalno i/ili subkutano treba da se ubrizga sastav u epidermalni region, dermo-epidermalni i/ili dermalni.

[0158] Uređaj za ubrizgavanje može sadržati bilo koju konvencionalno korišćenu injekciju, poput hipodermičke igle ili kanile.

[0159] Igla ili kanila mogu imati prečnik između 18 i 34 G, poželjno 25 do 32 G, i dužinu koja varira od 4 do 70 mm, poželjno 4 do 25 mm.

[0160] Poželjno je da su igla ili kanila za jednokratnu upotrebu.

[0161] Povoljno je da igla ili kanila budu povezane sa špricom ili drugim uređajem koji može da se isporuči kroz iglu ili kanilo pomenutog injekcijskog preparata. Kateter se može umetnuti između igle/kanile i špriceva.

[0162] Na poznati način, praktikant može ručno da upravlja ručicom ili držač injekcije kao pištolj.

[0163] Kroz opis, uključujući patentne zahteve, termin "koji sadrži" treba razumeti kao sinonim za "sadrži najmanje jedan", osim ako nije izričito drugačije navedeno.

[0164] Termini "između ... i ..." i "u rasponu od ... do ..." treba shvatiti da znače da su ograničenja inkluzivna, osim ako nije drugačije određeno.

[0165] Sledeći primeri i slike su predstavljeni pomoću neograničavajuće ilustracije pronalaska.

PRIMERI:

Materijal i postupak:

[0166] Protokol ovde definisan nakon mera viskoelastičnih svojstava smeše primenjuje se za sledeće primere.

[0167] Viskoelastična svojstva sastava mere se reometrom (Haake RS6000) sa geometrijom konusa/ploče (1°ugao konusa/ploča prečnika 35 mm). Provodi se ispitivanje naprezanja i mere se elastični modul G' (u Pa) i ugao faznog pomaka δ (u °) za napon od 5 Pa.

Primer 1: protokol za pripremu smeše za primenu neumrežene hijaluronske kiseline i analizu njene stabilnosti na sterilizaciju

[0168] 3 g hijaluronske kiseline (1.5MDa) i 197 g fosfatnog pufera (kao što je definisano u FR 2979 539) je pomešano.

[0169] Protokol pripreme je sledeći:

1. trodimenzionalna homogenizacija smeše "hijaluronska kiselina fosfatni pufer" na sobnoj temperaturi u hermetički zatvorenoj posudi (tegla Nalgene) najmanje 20 sati;

2. odvajanje dobijenog neumreženog gela u 2 ekvivalentne frakcije (koje se u daljem tekstu nazivaju frakcije A1 i A2);

3. u odnosu na frakciju A1, dodavanje u gelu 1 tež.% rastvora mepivakaina (30 tež.% u podlozi fosfatnog pufera) i 0.4 tež.% rastvora NaOH 1%; ili

4. u odnosu na frakciju A2, dodavanje u gelu 1 tež.% rastvora mepivakaina (30 tež.% u podlozi fosfatnog pufera) i 0.4 tež.% rastvora NaOH 1%; i

5. homogenizacija, pakovanje u špriceve od 1 ml za ubrizgavanje i autoklaviranje (F0> 15).

Rezultati:

[0170] Tabele ispod daju vrednosti modula elastičnosti G' (u Pa) dobijenih hidrogela i ekstruzijske sile F(N).

[0171] Gubitak u sterilizaciji za G' pri F = 5 Hz izračunava se na sledeći način:

(103.3 - 45.0)/103.3 = 56.4 (en %)

[0172] S obzirom na iznad navedeno, čini se da je stabilnost na korak sterilizacije sastava koji sadrži neraskidivu hijaluronsku kiselinu najmanje ekvivalentna mepivakainu nego lidokainu.

[0173] Rezultati su čak značajno bolji kod mepivakaina.

2

Primer 2: protokol za pripremu smeše za primenu umrežene i neumrežene hijaluronske kiseline i analizu njene stabilnosti na sterilizaciju

[0174] Primenjeno je 8 g hijaluronske kiseline (4MDa), 58.7 g natrijum hidroksida (NaOH) i 0.6 g butandiol diglicidil etra (BDDE). Reakcija umrežavanja indukuje se inkubacijom tokom 3 sata na 52 °C.

[0175] Protokol pripreme je sledeći:

1. Homogenizacija smeše "hijaluronska kiselina NaOH 1%" na sobnoj temperaturi u hermetički i deformabilnom kontejneru (kesica kao što je razmatrano u patentnoj prijavi WO 2010/131175) tokom oko 1H30, tako da se dobije savršeno homogeni viskozni rastvor;

2. Dodavanje sredstva za umrežavanje (BDDE) u posudu i novo homogenizovanje na sobnoj temperaturi oko 20 minuta;

3. Inkubacija tokom 3 sata na 52 °C u posudi koja sadrži viskozni rastvor hijaluronske kiseline/natrijum hidroksida 1%/BDDE tako da se započne korak umrežavanja;

4. Neutralizacija, oticanje i homogenizacija dobijene čvrste materije (rastvor umrežene hijaluronske kiseline) u fosfatnom puferu (kao što je definisano u FR 2979 539), i dodavanje neumreženog gela koji sadrži 4 g HA 4MDa i 668 g dopunjenog fosfatnog pufera, tako da se dobije hidrogel sa 11 mg/g hijaluronske kiseline, pri pH oko neutralnosti;

5. Prečišćavanje dijalizom tokom 48 sati, a zatim sakupljanje prečišćenog gela u posudu za homogenizaciju;

6. Prosejavanje celog gela (230µm);

7. Odvajanje prikupljenog gela u dve frakcije (Frakcija B1 i B2);

8. Uključivanje u gel 1 tež.% rastvora mepivakaina (30 tež.% u srednjem fosfatnom puferu) i 0.4 tež.% rastvora NaOH 1% (= Frakcija B1);

9. Uključivanje u gel 1 tež.% rastvora mepivakaina (30 tež.% u srednjem fosfatnom puferu) i 0.4 tež.% rastvora NaOH 1% (= Frakcija B2);

10. Homogenizacija, pakovanje u špriceve od 1mL za injekcije i sterilizaciju.

Rezultati:

[0176] Tabele ispod daju vrednosti modula elastičnosti G' (u Pa) dobijenih hidrogela i ekstruzijske sile F(N).

[0177] Gubitak u sterilizaciji se izračunava kao što je prikazano u primeru 1.

[0178] S obzirom na iznad navedeno, čini se da je stabilnost na korak sterilizacije sastava koji sadrži umreženu i neumreženu hijaluronsku kiselinu najmanje ekvivalentnu mepivakainu nego lidokainu.

[0179] Rezultati su čak bolji kod mepivakaina.

Primer 3: protokol za pripremu smeše za primenu umrežene i neumrežene hijaluronske kiseline i analizu njene stabilnosti u vremenu

[0180] Meša se 10 g hijaluronske kiseline (1.5MDa) 73 g natrijum hidroksida 1% i 0.9 g butandiol diglicidil etra (BDDE). Zatim se reakcija umrežavanja indukuje inkubacijom tokom 3 sata na 52 °C.

2

[0181] Postupak pripreme je sledeći:

1. homogenizovanje smeše na sobnoj temperaturi "hijaluronska kiselina natrijum hidroksid 1%, u hermetički i deformabilnom kontejneru (džep) oko 1H30 da bi se dobio savršeno homogen viskozan rastvor;

2. dodavanje sredstva za umrežavanje (BDDE) u posudu i dalje homogenizovanje na sobnoj temperaturi oko 20 minuta;

3. inkubacija tokom 3 sata na 52 °C posude koja sadrži viskozni rastvor hijaluronske kiseline/natrijum hidroksida 1%/BDDE tako da se započne korak umrežavanja;

4. neutralizacija, oticanje i homogenizacija dobijene čvrste materije (rastvor umrežene hijaluronske kiseline) u fosfatnom puferu koji sadrži 2 g neumrežene hijaluronske kiseline (1.5 MDa), tako da se dobije hidrogel sa 25 mg/g hijaluronske kiseline na pH blizu neutralnosti;

5. prečišćavanje dijalizom (tokom 48 sati), a zatim sakupljanje prečišćenog gela u posudi za odmašćivanje/homogenizacija;

6. ugrađivanje u gelu od 1 tež.% rastvora mepivakaina (30 tež.% u medijumu za fosfatni pufer) i 0.4 tež.% rastvora NaOH 1%;

7. homogenizacija, gasifikacija, pakovanje u špriceve po 1 ml za ubrizgavanje i sterilizaciju (F0> 15).

Rezultati:

[0182] Tabela ispod daje vrednosti ugla faznog pomaka δ (°) i sile ekstruzije.

[0183] Rezultati dobijeni 19 meseci nakon datuma proizvodnje gela ekvivalentni su onima koji su dobijeni na početku i tako pokazuju stabilnost gela.

2

Claims (4)

Patentni zahtevi

1. Postupak za pripremu sterilnog sastava za injekcije, pri čemu postupak sadrži najmanje korake:

a) obezbeđivanja najmanje jednog gela hijaluronske kiseline ili njene soli, pri čemu je navedena hijaluronska kiselina odabrana iz oblika umrežene hijaluronske kiseline, neumreženog oblika hijaluronske kiseline ili njene smeše;

b) dodavanja pomenutom gelu hijaluronske kiseline najmanje mepivakain hidrohlorida kao anestetičkog sredstva; i

c) sterilizacije smeše dobijene u koraku b).

2. Postupak prema patentnom zahtevu 1, gde se navedeni korak c) izvodi na temperaturi u rasponu od 120 do 140°C.

3. Postupak prema patentnom zahtevu 1, gde hijaluronska kiselina ima prosečnu molekulsku masu u rasponu od 50000 do 10000 000 Daltona.

4. Postupak prema patentnom zahtevu 1, gde je umrežena hijaluronska kiselina iz koraka a) prethodno dobijena umrežavanjem neumrežene hijaluronske kiseline sa efektivnom količinom od najmanje jednog sredstva za umrežavanje izabranog iz grupe koja se sastoji iz 1,4-butandiola diglicidil etera (BDDE), 1,4-bis (2,3-epoksipropoksi)butana, 1,4-bisglicidiloksibutana, 1,2-bis(2,3-epoksipropoksi)etilena, 1-(2,3-epoksipropil)-2,3-epoksicikloheksana, putrescina, spermidina, spermina i njihove smeše.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5

2