RS59219B1 - Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink - Google Patents

Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink

Info

Publication number
RS59219B1
RS59219B1 RSP20190842A RS59219B1 RS 59219 B1 RS59219 B1 RS 59219B1 RS P20190842 A RSP20190842 A RS P20190842A RS 59219 B1 RS59219 B1 RS 59219B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
tumor
compounds
cancer
cells
Prior art date
Application number
Other languages
English (en)
Inventor
Cai Xiong
Haixiao Zhai
Chengjung Laii
Changgeng Qian
Rudi Bao
Original Assignee
Curis Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Curis Inc filed Critical Curis Inc
Publication of RS59219B1 publication Critical patent/RS59219B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system having sulfur as a ring hetero atom, e.g. ticlopidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/166—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the carbon of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. procainamide, procarbazine, metoclopramide, labetalol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/28—Radicals substituted by singly-bound oxygen or sulphur atoms
    • C07D213/30—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

[0001] Fosfoinozitidi (PIs), koji su fosforilovani derivati fosfatidilinozitola, su esencijalni u eukariotskim ćelijama, regulišući nuklearne procese, dinamiku citoskeleta, signalizaciju i trgovinu membranom. Među enzimima uključenim u metabolizam PI, PI3-kinaze (PI3K) su privukle posebnu pažnju zbog svojih onkogenih svojstava i potencijala kao meta za lekove. PI3-kinaze fosforilišu fosfatidilinozitole ili PI na položaju 3 inozitolnog prstena. (Lindmo i sar. Journal of Cell Science 119, 605-614, 2006).3-fosforilovani fosfolipidi generisani aktivnošću PI3K vezuju se za plekstrin homolognu (PH) domenu protein kinaze B (PKB), izazivajući translokaciju PKB u ćelijsku membranu i kasniju fosforilaciju PKB. Fosforilovani PKB inhibira apoptozu-indukujuće proteine kao što su FKHR, Bad i kaspaze, i smatra se da igra važnu ulogu u progresiji raka. PI3K su podeljeni u klase I-III, a klasa I je dalje podklasifikovana u klase Ia i Ib. Među ovim izoformama, smatra se da enzimi klase Ia igraju najvažniju ulogu u ćelijskoj proliferaciji kao odgovor na aktivaciju putanje faktora rasta-tirozin kinaze (Haiakava i sar., Bioorganic & Medicinal Chemistri 146847-6858, 2006). Tri česte mutacije raka konstitutivno aktiviraju PI3Ka i, kada se eksprimiraju u ćelijama, one pokreću onkogenu transformaciju i hroničnu aktivaciju nizvodne signalizacije pomoću molekula kao što su PKB, S6K i 4E bp1 koji se obično vide u ćelijama raka. (Stephens et al., Current Opinion in Pharmacologi, 5 (4) 357-365, 2005). Kao takve, PI3-kinaze su atraktivne mete za lečenje proliferativnih bolesti.
[0002] Postoji nekoliko poznatih inhibitora PI3-kinaze, uključujući Vortmannin i LI294002. Iako je Vortmanin moćan inhibitor PI3K sa niskom nanomolarnom IC50 vrednošću, on ima nisku in vivo anti-tumorsku aktivnost. (Haiakava et al., Bioorg. Med. Chem.14 (20), 6847-6858 (2006)). Nedavno, za grupu morfolin supstituisanih kinazolina, piridopirimidina i tienopirimidinskih jedinjenja je navedeno da su efikasna u inhibiranju PI3kinaze p110a. (Haiakava, 6847-6858). Oralna doza morfolin supstituisanog tienopirimidinskog jedinjenja (GDC-0941) je pokazala supresiju tumora u glioblastomskim ksenograftima in vivo. (Folkes et al., Journal of Medicinal Chemistri, 51, 5522-5532, 2008). Sledeće publikacije opisuju seriju tienopirimidinskih, piridopirimidinskih i kinazolinskih inhibitora PI3-kinaze: VO 2008/073785; VO 2008/070740; VO 2007/127183; U.S. Patent Publication 20080242665; U.S. Patent Application Publication US20100222343.
[0003] Acetilacija histona je reverzibilna modifikacija, pri čemu je deacetilacija katalizovana porodicom enzima nazvanih histon deacetilaze (HDACs). HDAC-ovi su predstavljeni sa 18 gena kod ljudi i podeljeni su u četiri različite klase (J Mol Biol, 2004, 338: 1, 17-31). Kod sisara klase I HDAC (HDAC1-3 i HDAC8) su povezani sa kvascem RPD3 HDAC, klasa 2 (HDAC4-7, HDAC9 i HDAC10) koji se odnosi na kvasac HDA1, klasa 4 (HDAC11) i klasu 3 (različita klasa koja obuhvata sirtuini koji se odnose na kvasac Sir2).
[0004] Csordas, Biochem. J., 1990, 286: 23-38 navodi da su histoni podložni posttranslacijskoj acetilaciji e-amino grupa N-terminalnih lizinskih ostataka, reakciji koja je katalizirana sa histon acetil transferazom (HAT1). Acetilacija neutrališe pozitivni naboj lizinskog bočnog lanca i smatra se da utiče na strukturu hromatina. Zaista, pristup transkripcionih faktora predlošcima hromatina pojačan je histonskom hiperacetilacijom, a obogaćenje u underacetilated histonu H4 je pronađeno u transkripcijalno tihim regionima genoma (Taunton et al., Science, 1996, 272: 408-411). U slučaju gena za supresor tumora, transkripciono utišavanje zbog modifikacije histona može dovesti do onkogene transformacije i raka.
[0005] Nekoliko klasa inhibitora HDAC se trenutno procenjuju od strane kliničkih istraživača. Primeri uključuju derivate hidroksamske kiseline, suberoilanilid hidroksamsku kiselinu (SAHA), PKSD101 i LAK824, koji su trenutno u kliničkom razvoju. U benzamid klasi inhibitora HDAC, MS-275, MGCD0103 i CI-994 su dostigli klinička ispitivanja. Morne et al. (Apstrakt # 4725, AACR 2005), pokazuju da tiofenil modifikacija benzamida značajno povećava inhibitornu aktivnost HDAC protiv HDAC1
[0006] Neki karcinomi su efikasno tretirani takvim kombinatornim pristupom; međutim, režimi tretmana korišćenje koktela citotoksičnih lekova često je ograničeno toksičnostima koje ograničavaju dozu i interakcijama leka i leka. Novija dostignuća u vezi sa molekularno ciljanim lekovima omogućila su nove pristupe kombinovanom lečenju raka, omogućavajući istovremeno korišćenje više ciljnih agenasa, ili kombinovanje ovih novih terapija sa standardnim hemioterapeuticima ili radijacijom da bi se poboljšao ishod bez postizanja toksičnosti koje ograničavaju dozu. Međutim, mogućnost upotrebe takvih kombinacija trenutno je ograničena na lekove koji pokazuju kompatibilna farmakološka i farmakodinamička svojstva. Pored toga, regulatorni zahtevi za dokazivanje bezbednosti i efikasnosti kombinovanih terapija mogu biti skuplji i dugotrajniji od odgovarajućih ispitivanja pojedinačnih agenasa. Kada se jednom odobre, kombinovane strategije mogu biti povezane sa povećanim troškovima za pacijente, kao i smanjenjem usaglašenosti pacijenta zbog zahtevnijih paradigmi doziranja.
Sažetak pronalaska
[0008] U skladu sa pronalaskom, obezbeđen je postupak za dobijanje jedinjenja 1 kao što je definisano u priloženim patentnim zahtevima. Takođe je obezbeđen intermedijer (108) kako je definisan u priloženim patentnim zahtevima. Bilo koji predmet koji nije obuhvaćen obimom patentnih zahteva ne čini deo pronalaska i samo je prikazan u ilustrativne svrhe.
[0008] Ovo otkriće se odnosi na jedinjenje formule I
I njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde R je vodonik ili acil grupa. Acil grupa je poželjno R1C (O) -, gde je R1 supstituisani ili nesupstituisani C1-C24-alkil, poželjno C1-C10-alkil, a još poželjnije C1-C6-alkil; supstituisani ili nesupstituisani C2-C24-alkenil, poželjno C2-C10-alkenil, a još poželjnije C2-C6-alkenil; supstituisani ili nesupstituisani C2-C24-alkinil, poželjno C2-C10-alkinil, i još poželjnije C2-C6-alkinil; supstituisani ili nesupstituisani aril, poželjno supstituisani ili nesupstituisani fenil; ili supstituisani ili nesupstituisani heteroaril.
[0009] Ovo otkriće se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje Formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom ili nosačem.
[0010] Jedinjenja formule I i, naročito, jedinjenje 1, imaju povoljna svojstva za upotrebu kao terapeutska sredstva, kao što su za lečenje raka i drugih bolesti i poremećaja povezanih sa aktivnošću PI3 kinaze i / ili HDAC aktivnosti. Jedinjenje 1, na primer, ima jaku inhibitornu aktivnost protiv molekularnih ciljeva PI3K i HDAC i snažnu antiproliferativnu aktivnost protiv različitih ćelijskih linija raka in vitro. Jedinjenje 1 ima značajnu oralnu biodostupnost kako je primećeno na životinjskim modelima. Nakon oralne ili intravenske primene kod miševa koji nose ksenotransplantat tumora, jedinjenje pokazuje značajan unos tkiva tumora i farmakodinamičku aktivnost u tumorskom tkivu. Jedinjenje 1 takođe pokazuje značajnu antitumorsku aktivnost u mišjim ksenograftskim tumorskim modelima nakon oralne ili intravenske primene. Jedinjenje takođe ima povoljan bezbednosni profil, kao što je pokazano, na primer, ispitivanjem genotoksičnosti korišćenjem Amesovog testa.
[0011] Ovo otkriće se dalje odnosi na upotrebu jedinjenja prema pronalasku u lečenju bolesti i poremećaja povezanih sa PI3K kao što je rak. Ova jedinjenja dalje deluju kao inhibitor HDAC zbog svoje sposobnosti da vezuje ione cinka. Jedinjenja su aktivna na više terapijskih ciljeva i efikasna su u lečenju raznih bolesti. Štaviše, u nekim slučajevima je nađeno da ova jedinjenja imaju povećanu aktivnost u poređenju sa aktivnostima kombinacija odvojenih molekula pojedinačno koji imaju PI3-kinaznu aktivnost i HDAC inhibitornu aktivnost. Drugim rečima, kombinacija PI3-kinaze i HDAC inhibitorne aktivnosti u jednom molekulu može obezbediti sinergistički efekat u poređenju sa PI3-kinazom i HDAC inhibitorima odvojeno.
[0012] Štaviše, efikasnost inhibitora PI3K puteva sa jednim agensom je ograničena prisustvom primarnih / stečenih genetskih promena i aktiviranjem višestrukih puteva preživljavanja i rasta (Engelman (2009) Nature Revievs Cancer, 9: 550-562) . Inhibicija PI3K pomoću inhibitora PI3K sa jednim agensom može zapravo povećati signalizaciju putanje RAF-MEK-ERK oslobađanjem petlji negativnih povratnih informacija. Jedinjenja pronalaska, na osnovu njihovih integrisanih inhibitornih aktivnosti PI3K / HDAC, obezbeđuju potencijal za prevazilaženje ograničenja u lečenju karcinoma sa jednim-ciljnim PI3K inhibitorima. Jedinjenja pronalaska ometaju mreže kancera u in vivo i in vitro
eksperimenata, koji su rezultat trajne inhibicije PI3K-AKT-mTOR puta, inhibicije RAF-MEK-ERK puta i smanjenja nivoa proteinskih receptora tirozin kinaze (RTK). Pored toga, jedinjenja iz pronalaska indukuju zaustavljanje ćelijskog ciklusa i apoptozu koja je rezultat povećane regulacije tumorskih supresora p53 i p21 u tumorskim ćelijskim linijama in vitro. Prema tome, jedinjenja pronalaska imaju potencijal da prevaziđu primarnu i stečenu otpornost na lekove i mogu biti efikasnija od mono-tretmana sa inhibitorima PI3K puta sa jednim agensom u kliničkoj primeni.
[0013] Drugi aspekt ovog otkrića obezbeđuje postupke za inhibiranje aktivnosti PI3 kinaze, kontaktiranjem PI3 kinaze sa efektivnom inhibitornom količinom jedinjenja Formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
Kratak opis crteza
Slika 1 je grafikon koncentracije jedinjenja 1 u odnosu na vreme u plazmi i tumorskom tkivu nakon oralne primene na golih miševa sa ksenograftom H2122.
Slika 2A je grafikon koncentracije jedinjenja 1 u plazmi u odnosu na vreme u Daudi ksenotransplantata tumora koji nose Scid miševe posle oralnog doziranja od 25, 50 i 100 mg / kg.
Slika 2B je grafikon koncentracije tumora jedinjenja 1 u odnosu na vreme u Daudi ksenotransplantata tumora koji nose Scid miševe posle oralnog doziranja od 25, 50 i 100 mg / kg.
Slika 2C je grafikon koncentracije jedinjenja 1 u odnosu na vreme u plazmi i tumorskom tkivu kod miševa Scudi koji nose Daudi ksenograft tumora posle oralnog doziranja od 100 mg / kg.
Slika 3 predstavlja Vestern blot ekstrakt tkiva tumora iz kontrole i tretiran sa Jedinjenjem 1 (25, 50 i 100 mg / kg) Scid miševa koji nose ksenograftove Daudi tumora.
Slika 4 je graf koncentracije jedinjenja 1 u plazmi u odnosu na vreme kod pasa beaglea nakon oralnog ili intravenskog doziranja.
Slika 5A je grafikon rasta tumora u odnosu na vreme u miševima koji su nosioci tumora sa H2122 ksenograftom i koji su tretirani sa Jedinjenjem 1 ili nosačem.
Slika 5B je grafikon rasta tumora u odnosu na vreme kod golih miševa koji nose Daudi ksenograft tumora i tretirani sa Jedinjenjem 1 ili nosačem.
Slika 5C je grafikon rasta tumora u odnosu na vreme u miševima koji su nosili OPM2 ksenograft tumor koji nose tumor i tretirani sa Jedinjenjem 1 ili nosačem.
Slika 6 je grafikon koji prikazuje nivoe cirkulišućih krvi T i B limfocita nakon tretmana sa Jedinjenjem 1 ili nosačem.
Slike 7A do 7G prikazuju Vestern blot ekstrakte iz kontrolne i H460 (Kras, PI3K) ćelije tretirane sa Jedinjenjem 1. GDC je GDC-0941; LBH je LBH-589.
Slike 8A do 8C prikazuju Vestern blot ekstrakte iz kontrole i Jedinjenje 1 tretirano H1975 (EGFR, PI3K), BT474 (HER2, PI3K), H1975 (EGFR, PI3K), A375 (B-Raf) i RPMI-822 (p53-) ćelije.
Slika 9 je grafikon rasta tumora u odnosu na vreme u miševima koji su nosili scudodulte u tumoru sa Daudi, lečeni oralno sa Jedinjenjem 1 ili nosačem.
Slika 10 je grafikon rasta tumora u odnosu na vreme u Daudi ksenograft tumora koji nose Scid miševe tretirane sa nosačem, Jedinjenje 1, SAH, GDC-0941 ili kombinacija SAHA i GDC-0941.
Slika 11 je grafikon rasta tumora u odnosu na vreme kod golih miševa koji su nosili tumornosilac SU-DHL4 i tretirani oralno sa Jedinjenjem 1 ili nosačem.
Slika 12 je grafikon rasta tumora u odnosu na vreme kod miševa kose gena koji su nosioci OPM2 ksenograft tumora tretiranih sa Jedinjenjem 1 ili nosačem.
Slika 13 je grafikon rasta tumora u odnosu na vreme u MM IS ksenotransplantata koji nose SCID miševe tretirane sa Jedinjenjem 1 ili nosačem.
Slika 14 je grafikon rasta tumora u odnosu na vreme u MM1R ksenotransplantatom koji nosi SCID miševe tretirane sa Jedinjenjem 1 ili nosačem.
Slika 15 prikazuje zapadne mrlje ekstrakta tumora iz SCID miševa sa jedinjenjem 1 koji nose Daudi, SuDHL-4, HS-sultan, DOHH-2, OPM-2, MM1R ili MM1S tumore ksenografta. Slika 16 je graf rasta tumora u odnosu na vreme u SCUD miševima koji nose Daudi tumor koji su tretirani sa Jedinjenjem 1, CAL-101 ili nosačem.
Slika 17 je graf rasta tumora u odnosu na vreme u SCUD miševima koji nose Daudi tumor koji su tretirani sa Jedinjenjem 1, ciklofosfamidom, kombinacijom jedinjenja 1 i ciklofosfamidom ili nosačem.
Slika 18 je graf rasta tumora u odnosu na vreme u MMIS tumor-nosivih SCID miševa tretiranih sa Jedinjenjem 1, lenalidomidom, kombinacijom jedinjenja 1 i lenalidomida ili nosača.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0015] U poželjnoj realizaciji, jedinjenje Formule I je prikazano u nastavku:
(u daljem tekstu "Jedinjenje 1", takođe označeno kao N-hidroksi-2 - (((2- (6-metoksipiridin-3-il) -4-morfolinotieno [3,2-d] piridin-6-il) metil ) (metil) amino) pirimidin-5-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0016] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje postupke za prevenciju ili lečenje bolesti ili stanja koja uključuju nenormalnu proliferaciju, diferencijaciju ili preživljavanje ćelija. U jednoj realizaciji, pronalazak dalje obezbeđuje upotrebu jednog ili više jedinjenja pronalaska u proizvodnji leka za zaustavljanje ili smanjivanje bolesti koje uključuju aberantnu proliferaciju, diferencijaciju ili preživljavanje ćelija. U poželjnoj realizaciji, bolest je rak. U jednoj realizaciji, opis se odnosi na postupak za lečenje kancera kod subjekta kome je potrebno lečenje, koji se sastoji od davanja navedenom subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska.
[0017] Izraz "rak" se odnosi na bilo koji kancer izazvan proliferacijom malignih neoplastičnih ćelija, kao što su tumori, neoplazme, karcinomi, sarkomi, leukemije, limfomi i slično. Na primer, kanceri uključuju, ali nisu ograničeni na, mezoteliom, leukemije i limfome kao što su kožni T-ćelijski limfomi (CTCL), ne-kožni peerferalni T-ćelijski limfomi, limfomi povezani sa humanim T-ćelijskim limfotrofnim virusom (HTLV). kao leukemija / limfom odraslih T-ćelija (ATLL), limfom B-ćelija, akutna ne-limfocitna leukemija, hronična limfocitna leukemija, hronična mijelogena leukemija, akutna mijelogena leukemija, limfomi i multipli mijelom, ne-Hodgkin limfom, akutna limfna leukemija (ALL) , hronična limfna leukemija (CLL), Hodgkinov limfom, Burkittov limfom, limfom leukemije odraslih T-ćelija, akutno-mijeloidna leukemija (AML), hronična mijeloidna leukemija (CML) ili hepatocelularni karcinom. Dalji primeri uključuju mielodisplastični sindrom, solidne tumore u detinjstvu kao što su tumori mozga, neuroblastom, retinoblastom, Vilmsov tumor, tumore kostiju i sarkome mekog tkiva, uobičajene solidne tumore odraslih kao što su rak glave i vrata (npr. Oralni, laringealni, nazofaringealni i ezofagealni), genitalno-urinarni kanceri (npr., prostata, bešika, bubrega, materice, jajnika, testisa), rak pluća (npr. male ćelije i male ćelije), rak dojke, rak pankreasa, melanom i drugi kancer kože, rak želuca , tumori mozga, tumori povezani sa Gorlinovim sindromom (npr. medullobostem, meningioma, itd.) i rak jetre. Dodatni primeri oblika raka koji se mogu lečiti predmetnim jedinjenjima uključuju, ali nisu ograničeni na, kancer skeletnog ili glatkog mišića, rak želuca, kancer tankog creva, karcinom rektuma, rak pljuvačne žlezde, rak endometrija, adrenalni rak, rak analnog tkiva, rak rektuma, rak žlijezde i rak hipofize
[0018] Dodatni kanceri koje ovde opisana jedinjenja mogu biti korisna u sprečavanju, lečenju i proučavanju su, na primer, karcinom debelog creva, karcinom familijarne adenomatozne polipoze i nasledni nepolipozni kolorektalni kancer, ili melanom. Dalje, kanceri uključuju, ali nisu ograničeni na, karcinom labijala, karcinom larinksa, karcinom hipofarinksa, karcinom jezika, karcinom pljuvačne žlezde, želučani karcinom, adenokarcinom, rak štitne žlezde (medularni i papilarni karcinom štitnjače), karcinom bubrega, karcinom bubrežnog parenhima, grlić materice karcinom, karcinom materice, karcinom endometrijuma, horionski karcinom, karcinom testisa, urinarni karcinom, melanom, tumori mozga kao što su glioblastom, astrocitom, meningioma, medulloblastom i periferni neuroektodermalni tumori, karcinom žučnog mehurja, bronhijalni karcinom, multipli mijelom, retinoblastom, choroidea melanom, poluomom, rabdomiosarkom, kraniofaringeom, osteosarkom, hondrosarkom, miosarkom, liposarkom, fibrosa- rkom, Evingov sarkom i plazmocitom. U jednom aspektu ovog pronalaska, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jednog ili više jedinjenja iz pronalaska u proizvodnji leka za lečenje kancera.
[0019] U jednom izvođenju, jedinjenja iz otkrića se koriste za lečenje hematološkog karcinoma ili hematološkog prekanceroznog stanja. Hematološki kanceri uključuju leukemije, limfome i multipli mijelom. Primeri uključuju limfocitne leukemije, kao što su akutna limfocitna leukemija, uključujući prekursor B akutne limfoblastične leukemije, akutnu limfoblastnu leukemiju T, Burkittovu leukemiju i akutnu bifenotipsku leukemiju; i hronične limfocitne leukemije, uključujući prolimfocitnu leukemiju B-ćelija; i miologene leukemije, kao što su akutna miologena leukemija, uključujući akutnu promijelocitnu leukemiju, akutnu mieloblastičnu leukemiju i akutnu megakarioblastičnu leukemiju; i hronično
miologene leukemije, uključujući hroničnu monocitnu leukemiju; akutna monocitna leukemija. Ostale leukemije uključuju leukemiju dlakavih ćelija; T-ćelijska prolimfocitna leukemija; velika granularna limfocitna leukemija; i odrasla T-ćelijska leukemija. Limfomi uključuju Hodgkinov limfom i ne-Hodgkinov limfom, uključujući limfome B-ćelija, limfome T-ćelija, kao što su kožni limfom T-ćelija i limfomi NK ćelija. Hematološki prekancerozni poremećaji uključuju mijelodisplastični sindrom i mijeloproliferativne poremećaje, kao što su primarna mielofibroza, policitemija vera i esencijalna trombocitemija.
[0020] Pokazano je da jedinjenja iz ovog otkrića izazivaju reverzibilnu limfopeniju i zbog toga se koriste za uklanjanje ili smanjenje cirkulišućih nivoa ćelija kancera limfocitne loze. Takva jedinjenja se takođe koriste za lečenje autoimunih poremećaja ili za modulaciju imunog odgovora.
[0021] U jednom izvođenju, opis pruža metod za smanjenje broja cirkulišućih limfocita u subjektu, koji se sastoji od davanja subjektu efikasne količine jedinjenja pronalaska. U poželjnoj realizaciji, smanjeni broj cirkulacionih limfocita je reverzibilan, to jest, broj cirkulirajućih limfocita se vraća u normalni opseg nakon što je doziranje sa jedinjenjem iz pronalaska zaustavljeno. U jednoj realizaciji, smanjeni broj cirkulacionih limfocita je ispod normalnog opsega i subjekt je limfopeničan. Poželjno je da subjekt dobije terapeutsku ili profilaktičku korist od smanjenog broja cirkulišućih limfocita. Takvi subjekti uključuju one koji pate od hematološke bolesti, kao što je hematološki rak, oni koji pate od autoimunog poremećaja, i oni koji zahtevaju modulaciju imunog odgovora kao što su pacijenti koji pate od dijabetesa ili primalaca transplantata organa. U ljudskog subjekta, broj cirkulirajućih limfocita, na primer, B-limfociti, T-limfociti ili oba, mogu da padnu iz normalnog opsega u opseg limfopenije. U nekim bolestima broj cirkulirajućih limfocita je abnormalno visok. U takvim bolestima broj cirkulirajućih limfocita može biti redukovan do normalnog opsega ili do limfopeničnog stanja.
[0022] U jednom izvođenju, predmetno otkriće uključuje upotrebu jednog ili više jedinjenja pronalaska u proizvodnji medikamenta koji sprečava dalju aberantnu proliferaciju, diferencijaciju ili preživljavanje ćelija. Na primer, jedinjenja prema pronalasku mogu biti korisna u sprečavanju povećanja veličine tumora ili dostizanja metastatskog stanja. Predmetna jedinjenja se mogu ordinirati da zaustave napredovanje ili napredovanje raka ili da indukuju apoptozu tumora ili da inhibiraju angiogenezu tumora. Pored toga, predmetni pronalazak uključuje upotrebu predmetnih jedinjenja da bi se sprečilo ponavljanje raka.
[0023] Ovo otkriće dalje obuhvata tretman ili prevenciju ćelijskih proliferativnih poremećaja kao što su hiperplazije, displazije i pre-kancerozne lezije. Displazija je najraniji oblik predkancerozne lezije koja se prepoznaje u biopsiji patologa. Predmetna jedinjenja se mogu primenjivati u cilju sprečavanja da se hiperplazije, displazije ili pre-kancerozne lezije nastave da šire ili da postanu kancerogene. Primeri predkancerogenih lezija se mogu pojaviti u koži, tkivu jednjaka, dojki i cervikalnom intra-epitelnom tkivu.
[0024] "Kombinovana terapija" uključuje primenu predmetnih jedinjenja u daljoj kombinaciji sa drugim biološki aktivnim sastojcima (kao što su, ali ne ograničavajući se na, drugi i različiti antineoplastični agens) i ne-lekovite terapije (kao što su, ali nisu ograničene operacije ili zračenja). Na primer, jedinjenja prema pronalasku mogu da se koriste u kombinaciji sa drugim farmaceutski aktivnim jedinjenjima, poželjno jedinjenjima koja su u stanju da poboljšaju efekat jedinjenja pronalaska. Jedinjenja prema pronalasku mogu se davati istovremeno (kao jedan preparat ili odvojeni preparat) ili sekvencijalno drugoj terapiji lekovima. Generalno, kombinovana terapija predviđa davanje dva ili više lekova tokom jednog ciklusa ili tokom terapije.
[0025] U jednom aspektu otkrića predmetna jedinjenja mogu biti administrirana u kombinaciji sa jednim ili više odvojenih agenasa koji moduliraju protein kinaze uključene u različita bolesna stanja. Primeri takvih kinaza mogu uključivati, ali nisu ograničeni na: serin / treonin specifične kinaze, receptorske tirozinske specifične kinaze i ne-receptorske specifične kinaze. Serin / treonin kinaze uključuju mitogen aktivirane proteinske kinaze (MAPK), meioznu specifičnu kinazu (MEK), RAF i aurora kinazu. Primeri porodica receptorskih kinaza uključuju receptor za epidermalni faktor rasta (EGFR) (npr., HER2 / neu, HER3, HER4, ErbB, ErbB2, ErbB3, ErbB4, Ksmrk, DER, Let23); receptor faktora rasta fibroblasta (FGF) (npr., FGF-R1, GFF-R2 / BEK / CEK3, FGF-R3 / CEK2, FGF-R4 / TKF, KGF-R); receptor za rast / faktor rasipanja hepatocita (HGFR) (npr., MET, RON, SEA, SEKS); receptor insulina (npr. IGFI-R); Eph (npr., CEK5, CEK8, EBK, ECK, EEK, EHK-1, EHK-2, ELK, EPH, ERK, HEK, MDK2, MDK5, SEK); Akl (npr. Mer / Nik, Rse); RET; i receptor faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGFR) (npr., PDGFa-R, PDGb-R, CSF1-R / FMS, SCF-R / C-KIT, VEGF-R / FLT, NEK / FLK1, FLT3 / FLK2 / STK -1). Porodice ne-receptorskih tirozin kinaza uključuju, ali nisu ograničene na, BCR-ABL (npr., P43abl, ARG); BTK (npr. ITK / EMT, TEC); CSK, FAK, FPS, JAK, SRC, BMKS, FER, CDK i SIK.
[0026] U drugom aspektu otkrića predmetna jedinjenja se mogu primenjivati u kombinaciji sa jednim ili više odvojenih agenasa koji moduliraju ne-kinazne biološke ciljeve ili procese. Takvi ciljevi obuhvataju histonske deacetilaze (HDAC), DNK metiltransferazu (DNMT), proteine toplotnog šoka (npr. HSP90), proteine povezane sa hedgehog stazama (npr. Zvučni jež, zakrpan, izglađen) i proteozome.
[0027] U poželjnoj realizaciji, predmetna jedinjenja se mogu kombinovati sa antineoplastičnim agensima (npr. Male molekule, monoklonska antitela, antisense RNA i fuzioni proteini) koji inhibiraju jedan ili više bioloških ciljeva kao što su Zolinza, Tarceva, Iressa, Tikerb, Gleevec, Sutent, Spricel, Nekavar, Sorafinib, CNF2024, RG108, BMS387032, Affinitak, Avastin, Herceptin, Erbituk, AG24322, PD325901, ZD6474, PD184322, Obatodak, ABT737, GDC-0449, IPI-926,
BMS833923, LDE225, PF-04449913 i AEE788. Takve kombinacije mogu povećati terapeutsku efikasnost u odnosu na efikasnost postignutu bilo kojim od samih agenasa i mogu sprečiti ili odložiti pojavu rezistentnih mutacijskih varijanti.
[0028] U određenim poželjnim izvođenjima, jedinjenja pronalaska se daju u kombinaciji sa hemoterapeutskim sredstvom. Hemoterapeutska sredstva obuhvataju širok spektar terapijskih tretmana u oblasti onkologije. Ovi agensi se daju u različitim fazama bolesti u svrhu smanjivanja tumora, uništavajući preostale ćelije raka preostale nakon operacije, izazivajući remisiju, održavanje remisije i / ili ublažavanje simptoma koji se odnose na rak ili njegovo liječenje. Primeri takvih agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, alkilirajući agensi kao što su derivati senfa (Mekloretamin, ciklofosfamid, hlorambucil, melfalan, ifosfamid), etilenimini (tiotepa, heksametilmelanin), Alkilsulfonati (Busulfan), Hidrazini i Triazini (Altretamin, Prokarbazin) , Dakarbazin i Temozolomid), Nitrosoureas (Carmustine, Lomustine i Streptozocin), Ifosfamid i soli metala (Carboplatin, Cisplatin i Oksaliplatin); biljni alkaloidi kao što su Podofilotoksini (Etoposide i Tenisopide), Taksani (Paclitakel i Docetakel), Vinca alkaloidi (Vincristin, Vinblastin, Vindesin i Vinorelbin), i Camptothecan analozi (Irinotekan i Topotekan); anti-tumorski antibiotici kao što su hromomicini (daktinomicin i plikamicin), antraciklini (doksorubicin, daunorubicin, epirubicin, mitoksantron, valrubicin i idarubicin) i razni anti-biotici kao što su mitomicin, aktinomicin i bleomicin; anti-metaboliti kao što su antagonisti folne kiseline (metotreksat, pemetreksed, Raltitreksed, aminopterin), pirimidinski antagonisti (5-fluorouracil, floksuridin, citarabin, kapecitabin i gemcitabin), antagonisti purina (6-merkaptopurin i 6-tioguanin) i inhibitori adenozin deaminaze (Kladribin, fludarabin, merkaptopurin, klofarabin, tioguanin, nelarabin i pentostatin); inhibitori topoizomeraze kao što su inhibitori topoizomeraze I (Ironotecan, topotecan) i inhibitori topoizomeraze II (amsakrin, etopozid, etopozid fosfat, tenipozid); monoklonska antitela (Alemtuzumab, Gemtuzumab ozogamicin, Rituksimab, Tras-tuzumab, Ibritumomab Tioksetan, Cetuksimab, Panitumumab, Tositumomab, Bevacizumab); i razni anti-ne-oplastici kao što su inhibitori ribonukleotid reduktaze (hidroksiurea); inhibitor adrenokortikalnog steroida (Mitotane); enzimi (asparaginaza i pegaspargaza); sredstva protiv mikrotubula (Estramustin); retinoidi (Beksaroten, Izotretinoin, Tretinoin (ATRA) i Lenalidomid.
[0029] U određenim poželjnim rešenjima, jedinjenja pronalaska se daju u kombinaciji sa hemoprotektivnim agensom. Hemoprotektivni agensi štite telo ili umanjuju neželjene efekte hemoterapije. Primeri takvih agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, amfostin, mesna i deksrazoksan.
[0030] U jednom aspektu pronalaska, predmetna jedinjenja se administriraju u kombinaciji sa radioterapijom. Zračenje se obično isporučuje interno (implantacija radioaktivnog materijala u blizini mesta raka) ili spolja iz mašine koja koristi foton (rendgen ili gama) ili zračenje čestica. Tamo gde kombinovana terapija dalje obuhvata radijaciono lečenje, zračenje se može sprovesti u bilo koje pogodno vreme tako dugo dok se postigne blagotvoran efekat kodelovanja kombinacije terapeutskih agenasa i zračenja. Na primer, u odgovarajućim slučajevima, blagotvoran efekat se još uvek postiže kada se tretman zračenjem privremeno ukloni iz ordiniranja terapeutskih agenasa, možda danima ili čak nedeljama.
[0031] Podrazumeva se da se jedinjenja pronalaska mogu koristiti u kombinaciji sa imunoterapeutskim agensom. Jedan oblik imunoterapije je generisanje aktivnog sistemskog tumor-specifičnog imunog odgovora porekla domaćina davanjem kompozicije vakcine na mestu udaljenom od tumora. Predloženi su različiti tipovi vakcina, uključujući izolovane vakcine protiv tumora i antigena i vakcine protiv idiotipa. Drugi pristup je upotreba tumorskih ćelija iz subjekta koji se tretira, ili derivata takvih ćelija (pregledano od Schirrmacher et al., (1995) J. Cancer Res. Clin. Oncol.121: 487). U U.S.5,484,596, Hanna Jr., et al. zahtevaju postupak za lečenje resektabilnog karcinoma za sprečavanje recidiva ili metastaza, koji obuhvata hirurško uklanjanje tumora, disperziju ćelija sa kolagenazom, ozračivanje ćelija i vakcinaciju pacijenta sa najmanje tri uzastopne doze od oko 107 ćelija.
[0032] Podrazumeva se da se jedinjenja prema pronalasku mogu korisno koristiti zajedno sa jednim ili više pomoćnih terapijskih agenasa. Primeri pogodnih agenasa za dodatnu terapiju uključuju 5HT1 agonist, kao što je triptan (npr. Sumatriptan ili naratriptan); agonist adenozin A1; EP ligand; NMDA modulator, kao što je glicinski antagonist; blokator natrijumskih kanala (npr. lamotrigin); antagonist supstance P (npr., antagonist NK1); kanabinoid; acetaminofen ili fenacetin; inhibitor 5-lipoksigenaze; antagonist leukotrien receptora; DMARD (npr. metotreksat); gabapentin i srodna jedinjenja; triciklični antidepresiv (npr. amitriptilin); antiepileptički lek koji stabilizuje neuron; mono-aminergički inhibitor preuzimanja (npr. venlafaksin); inhibitor matrične metaloproteinaze; inhibitor sintaze dušikovog oksida (NOS), kao što je iNOS ili inhibitor nNOS; inhibitor otpuštanja ili dejstva faktora tumorske nekroze a. terapija antitelima, kao što je terapija monoklonskim antitelima; antivirusno sredstvo, kao što je inhibitor nukleozida (npr. lamivudin) ili modulator imunog sistema (npr., interferon); opioidni analgetik; lokalni anestetik; stimulans, uključujući kofein; H2-antagonist (npr. ranitidin); inhibitor protonske pumpe (npr. omeprazol); antacid (npr. aluminijum ili magnezijum hidroksid); antiflatulent (npr. simetikon); dekongestant (npr., fenilefranin, fenilpropanolamin, pseudoefedrin, oksimetazolin, epinefrin, nafazolin, ksilometazolin, propilhekserin ili levodezoksiefedrin); antitusik (npr. kodein, hidrokodon, karmifen, karbetapentan ili dekstrametorfan); diuretik; ili sedativni ili ne-sedativni antihistamin.
[0033] Jedinjenja se takođe mogu koristiti u tretmanu poremećaja koji se odnosi, ili se odnosi na, ili je povezan sa disregulacija histon deacetilaze (HDAC). Postoji veliki broj poremećaja koji su implicirani ili poznati da su posredovani bar delimično aktivnošću HDAC, gde je poznato da HDAC aktivnost igra ulogu u pokretanju početka bolesti, ili čiji su simptomi poznati ili se pokazalo da su ublaženi inhibitorima HDAC. Poremećaji ovog tipa za koje se očekuje da će biti podložni tretmanu sa jedinjenjima iz ovog pronalaska uključuju sledeće, ali nisu ograničeni na: Anti-proliferativni poremećaji (npr., Kanceri); Neurodegenerativne bolesti uključujući Huntington-ovu bolest, poli-glutaminsku bolest, Parkinsonovu bolest, Alzheimerovu bolest, napade, Striatonigral degeneraciju, progresivnu supra-nuklearnu paralizu, torzionu distoniju, spazmodičnu tortikolis i diskineziju, familijarni tremor, Gilles de la Tourette sindrom, bolest difuznog leviju, Progresivna supranuklearna paraliza, Pick-ova bolest, intracerebralna hemoragija, primarna lateralna skleroza, spinalna mišićna atrofija, amiotrofna lateralna skleroza, hipertrofična intersticijalna polineuropatija, retinitis pigmentosa, nasledna atrofija, nasledna spastična paraplegija, progresivna ataksija i Shi-Drager sindrom; Metaboličke bolesti uključujući dijabetes tipa 2; Degenerativne bolesti oka uključujući glaukom, starosnu makularnu degeneraciju, Rubeotski glaukom; Upalne bolesti i / ili poremećaji imunskog sistema uključujući reumatoidni artritis (RA), osteoartritis, juvenilni hronični artritis, graft nasuprot bolesti domaćina, psorijaza, astma, spondiloartropatija, Kronova bolest, zapaljenska bolest crijeva Kolitis ulcerosa, alkoholni hepatitis, dijabetes, Sjoegrensov sindrom , Multipla skleroza, Ankilozantni spondilitis, Membranozna glomerulopatija, Discogenic bol, Sistemski lupus eritematozus; Bolest koja uključuje angiogenezu uključujući rak, psorijazu, reumatoidni artritis; Psihološki poremećaji uključujući bipolarnu bolest, šizofreniju, maniju, depresiju i demenciju; Kardiovaskularne bolesti uključujući prevenciju i lečenje vaskularnog i miokardijalnog oštećenja tkiva povezanog sa ishemijom ili reperfuzijom, srčane insuficijencije, restenoze i arterioskleroze; Fibrotične bolesti uključujući fibrozu jetre, cističnu fibrozu i angiofibromu; Infektivne bolesti, uključujući gljivične infekcije, kao što su kandidijaza ili Candida Albicans, Bakterijske infekcije, virusne infekcije, kao što su herpes simpleks, poliovirus, rinovirus i coksackievirus, protozoalne infekcije, kao što su malarija, Leishmania infekcija, Tripano- boma brucei infekcija, toksoplazmoza i kokcidoze i hematopoetski poremećaji uključujući talasemiju, anemiju i anemiju srpastih ćelija.
[0034] Jedinjenja iz opisa mogu takođe da se koriste u tretmanu poremećaja koji se odnosi, ili se odnosi na disregulaciju PI3 kinaze. Aktivnost PI3 kinaze je uključena u ili je pokazala da je uključena u različite poremećaje. U određenim slučajevima, aktivnost PI3 kinaze je uključena u pokretanje bolesti, dok su u drugima poznati simptomi ili se pokazalo da su ublaženi inhibitorima aktivnosti PI3 kinaze. Poremećaji ovog tipa za koje se očekuje da će biti podložni tretmanu sa jedinjenjima iz ovog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na kancer, uključujući leukemiju, rak kože, rak bešike, rak dojke, rak materice, rak jajnika, rak prostate, rak pluća. rak debelog creva, rak pankreasa, rak bubrega, rak želuca i rak mozga; restenoza, ateroskleroza, poremećaji kostiju, artritis, dijabetička retinopatija, psorijaza, benigna hipertrofija prostate, ateroskleroza, zapaljenje, angiogenoza, imunološki poremećaji, pankreatitis i bolest bubrega.
[0035] U jednom izvođenju, jedinjenja prema pronalasku mogu da se koriste da indukuju ili inhibiraju apoptozu, proces fiziološke smrti stanice kritičan za normalan razvoj i homeostazu. Izmene apoptotskih puteva doprinose patogenezi raznih ljudskih bolesti. Jedinjenja iz ovog pronalaska, kao modulatori apoptoze, biće korisna u lečenju raznih humanih oboljenja sa aberacijama kod apoptoze uključujući rak (posebno, ali ne ograničavajući se na, folikularne limfome, karcinom sa mutacijama p53, hormonski zavisne tumore dojke. , prostate i jajnika, i prekancerozne lezije kao što je porodična adenomatozna polipoza), virusne infekcije (uključujući, ali ne ograničavajući se na, virus herpesa, poksvirusa, Epstein-Barr virusa, Sindbis virusa i adenovirusa), autoimune bolesti (uključujući, ali ne ograničavajući se na sistemski lupus, eritematozus, imunološki posredovani glomerulonefritis, reumatoidni artritis, psorijaza, inflamatorne bolesti creva i autoimuni diabetes mellitus), neurodegenerativni poremećaji (uključujući, ali ne ograničavajući se na, Alchajmerovu bolest, demenciju povezanu sa AIDS-om, Parkinsonovu bolest, amiotrofičnu lateralnu sklerozu, retinitis pigmentosa, spinalna mišićna atrofija i cerebelarna degeneracija), AIDS, mielodisplastični sindromi, aplastični emia, infarkti miokarda povezani sa ishemijom, moždani udar i reperfuzijska povreda, aritmija, ateroskleroza, toksin-indukovane ili alkoholom izazvane bolesti jetre, hematološke bolesti (uključujući, ali ne ograničavajući se na, hroničnu anemiju i aplastičnu anemiju), degenerativne bolesti mišićnoskeletnog sistema ( uključujući, ali ne ograničavajući se na, osteoporozu i artritis), aspirin-senzitivni rinosinusitis, cističnu fibrozu, multiplu sklerozu, bolesti bubrega i bol u raku.
[0036] U jednom aspektu, otkriće obezbeđuje upotrebu jedinjenja pronalaska za lečenje i / ili prevenciju imunog odgovora ili imunom-posredovanih odgovora i bolesti, kao što je prevencija ili lečenje odbacivanja posle transplantacije sintetičkog ili organskog presađivanja. materijale, ćelije, organe ili tkiva da zamene sve ili deo funkcije tkiva, kao što su srce, bubreg, jetra, koštana srž, koža, rožnica, krvne sudove, pluća, pankreas, creva, udovi, mišić, nervno tkivo, duodenum, mala creva, pankreasna-otočić-ćelija, uključujući kseno-transplantate, itd; za lečenje ili prevenciju bolesti graft-versus-host, autoimune bolesti, kao što su reumatoidni artritis, sistemski eritematozni lupus, tiroiditis, Hashimotov tiroiditis, multipla skleroza, miastenija gravis, uveitis tipa I, uveitis, juvenilni ili nedavno nastali dijabetes, uveitis , Gravesova bolest, psorijaza, atopični dermatitis, Crohnova bolest, ulcerativni kolitis, vaskulitis, bolesti posredovane auto-antitelima, aplastična anemija, Evanov sindrom, autoimuna hemolitička anemija i slično; i dalje da leče infektivne bolesti koje izazivaju nenormalan imuni odgovor i / ili aktivaciju, kao što je traumatska ili patogena indukovana imunološka disregulacija, uključujući, na primer, one koje su izazvane infekcijama hepatitisa B i C, HIV, sta infekcija philococcus aureus, virusni encefalitis, sepsa, parazitske bolesti kod kojih je oštećenje izazvano inflamatornim odgovorom (npr. leprom); i za sprečavanje ili lečenje cirkulatornih bolesti, kao što su arterioskleroza, ateroskleroza, vaskulitis, poliarteritis nodoza i miokarditis. Pored toga, ovaj pronalazak se može koristiti za sprečavanje / suzbijanje imunog odgovora koji je povezan sa tretmanom genske terapije, kao što je uvođenje stranih gena u autologne ćelije i ekspresiju kodiranog proizvoda. Prema tome, u jednoj realizaciji, opis se odnosi na postupak za lečenje bolesti ili poremećaja imunog odgovora ili imunom-posredovanog odgovora ili poremećaja kod subjekta kome je potrebno lečenje, a koji se sastoji od davanja navedenom subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja pronalaska.
[0037] U jednom aspektu, otkriće obezbeđuje upotrebu jedinjenja pronalaska u lečenju raznih neurodegenerativnih bolesti, čiji neiscrpni spisak uključuje: I. Poremećaje karakterisane progresivnom demencijom u odsustvu drugih istaknutih neuroloških znake, kao što je Alchajmerova bolest; Senilna demencija Alchajmerovog tipa; i Pickovu bolest (lobarska atrofija); II. Sindromi koji kombinuju progresivnu demenciju sa drugim istaknutim neurološkim abnormalnostima kao što su: A) sindromi koji se javljaju uglavnom kod odraslih (npr.
Huntingtonova bolest, višestruka atrofija sistema, kombinovanje demencije sa ataksijom i / ili manifestacije Parkinsonove bolesti, progresivna supranuklearna paraliza (Steel- Richardson-Olszevski) , difuzna bolest Levi tela, i kortikodentatonigral degeneracija i B) sindromi koji se javljaju uglavnom kod dece ili mladih odraslih osoba (npr. Hallervorden-Spatz bolest i progresivna porodična mioklonična epilepsija); III. Sindromi postepenog razvoja abnormalnosti držanja i pokreta kao što su paraliza agitans (Parkinsonova bolest), striatonigralna degeneracija, progresivna supranuklearna paraliza, torziona distonija (torzijski spazam; distonia musculorum deformans), spazmični tortikolis i druge diskineze, porodični tremor i Gilles de la Tourette sindrom; IV. Sindromi progresivne ataksije kao što su cerebelarne degeneracije (npr. Cerebelarna kortikalna degeneracija i olivopon-tocerebelarna atrofija (OPCA)); i degeneracija spinocerebelara (Friedreichova atazija i srodni poremećaji); V.
Sindrom kvara centralnog autonomnog nervnog sistema (Shi-Drager sindrom); VI. Sindromi mišićne slabosti i gubitka bez senzornih promena (motorneuronska bolest kao što je amiotrofična lateralna skleroza, spinalna mišićna atrofija (npr. Infantilna spinalna mišićna atrofija (Verdnig-Hoffman), juvenilna spinalna mišićna atrofija (Vohlfart-Kugelberg-Velander) i drugi oblici porodične spinalna mišićna atrofija), primarna lateralna skleroza, i nasledna spastična paraplegija, VII sindromi koji kombinuju mišićnu slabost i gubitak sa senzornim promenama (progresivna neuronska mišićna atrofija; hronične familijarne polineuropatije) kao što je peronealna mišićna atrofija (Charcot-Marie-Tooth), hipertrofični intersticijalni polineuropatija (Dejerine-Sottas) i razni oblici hronične progresivne neuropatije, VIII sindromi progresivnog gubitka vida kao što su pigmentna degeneracija mrežnjače (retinitis pigmentosa) i nasledna atrofija optičkog sistema (Leberova bolest). Izum se može uključiti u remodeliranje hromatina.
[0038] Otkriće obuhvata farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja pronalaska kao što je gore opisano. Pronalazak takođe obuhvata solvate jedinjenja pronalaska i farmaceutske kompozicije koje sadrže takve solvate, kao što su hidrati, metanolati ili etanolati. Termin "solvat" se odnosi na čvrsti, poželjno kristalni oblik jedinjenja koji uključuje prisustvo molekula rastvarača unutar kristalne rešetke. Solvat jedinjenja koje sadrži određeni rastvarač se obično priprema kristalizacijom jedinjenja iz tog rastvarača. Solvati mogu da uključuju različite rastvarače, uključujući vodu, metanol i etanol. Termin "hidrat" se odnosi na solvat u kome je rastvarač voda, i uključuje, ali nije ograničen na, hemihidrat, monohidrat, dihidrat, trihidrat i slično. Pronalazak dalje obuhvata farmaceutske kompozicije koje sadrže bilo koji čvrsti ili tečni fizički oblik jedinjenja pronalaska, uključujući kristalne i kristalne solvatne oblike. Na primer, jedinjenja mogu biti u kristalnom obliku, u amorfnom obliku i imati bilo koju veličinu čestica. Čestice mogu biti mikronizirane, ili mogu biti aglomerirane, granulama u obliku čestica, prašcima, uljima, uljnim suspenzijama ili bilo kojim drugim oblikom čvrstog ili tečnog fizičkog oblika.
[0039] Jedinjenja pronalaska i njihovi derivati, fragmenti, analozi, homologi, farmaceutski prihvatljive soli ili solvati mogu biti inkorporirani u farmaceutske kompozicije pogodne za davanje, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijentom. Takve kompozicije tipično sadrže terapeutski efikasnu količinu bilo kog od gore navedenih jedinjenja, i farmaceutski prihvatljiv nosač. Poželjno, efikasna količina za tretiranje raka je količina efikasna da selektivno indukuje terminalnu diferencijaciju pogodnih neoplastičnih ćelija i manje od količine koja izaziva toksičnost kod pacijenta.
[0040] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se primenjivati na bilo koji pogodan način, uključujući, bez ograničenja, parenteralno, intravenozno, intramuskularno, subkutano, implantaciju, oralno, sublingvalno, bukalno, nazalno, plućno, transdermalno, lokalno, vaginalno, rektalno, i transmukozne administracije ili slično. Lokalna primena može takođe uključiti upotrebu transdermalne primene kao što su transdermalni flasteri ili uređaji za jontoforezu. Farmaceutski preparati obuhvataju čvrsti, polukruti ili tečni preparat (tableta, pelet, trohe, kapsula, supozitorij, krema, mast, aerosol, prah, tečnost, emulzija, suspenzija, sirup, injekcija, itd.) Koji sadrži jedinjenje pronalaska kao aktivni sastojak, koji je pogodan za odabrani način primene. U jednoj realizaciji, farmaceutske kompozicije se daju oralno, i stoga su formulisane u obliku pogodnom za oralnu primenu, tj. Kao čvrsti ili tečni preparat. Pogodne čvrste oralne formulacije obuhvataju tablete, kapsule, pilule, granule, pelete, kesice i šumeće prahove, i slično. Pogodne tečne oralne formulacije obuhvataju rastvore, suspenzije, disperzije, emulzije, ulja i slično. U jednom ostvarenju ovog pronalaska, kompozicija je formulisana u kapsuli. U skladu sa ovom realizacijom,
kompozicije predmetnog pronalaska sadrže pored aktivnog jedinjenja i inertnog nosača ili razblaživača, tvrdu želatinsku kapsulu.
[0041] Bilo koji inertni ekscipijent koji se obično koristi kao nosač ili razblaživač može se koristiti u formulacijama iz ovog pronalaska, kao što je na primer guma, skrob, šećer, celulozni materijal, akrilat ili njihove smeše.. Poželjan razblaživač je mikrokristalna celuloza.
Kompozicije mogu dalje da sadrže sredstvo za dezintegraciju (npr. Natrijum kroskarmelozu) i lubrikant (npr. Magnezijum stearat), i mogu dodatno da sadrže jedan ili više aditiva izabranih od veziva, pufera, inhibitora proteaze, surfaktanta, sredstva za solubilizaciju plastifikator, emulgator, stabilizator, sredstvo za povećanje viskoznosti, zaslađivač, agens koji formira film ili bilo koja njihova kombinacija. Pored toga, kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti u obliku formulacija sa kontrolisanim oslobađanjem ili formulacijama sa trenutnim otpuštanjem.
[0042] Za tečne formulacije, farmaceutski prihvatljivi nosači mogu biti vodeni ili nevodeni rastvori, suspenzije, emulzije ili ulja. Primeri ne-vodenih rastvarača su propilen glikol, polietilen glikol i injektabilni organski estri kao što je etil oleat. Vodeni nosači uključuju vodu, alkoholne / vodene rastvore, emulzije ili suspenzije, uključujući slanu i puferisanu podlogu. Primeri ulja su naftna, životinjska, biljna ili sintetička, na primer, ulje kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, maslinovo ulje, suncokretovo ulje i ulje riblje jetre. Rastvori ili suspenzije mogu takođe uključiti sledeće komponente: sterilni razblaživač kao što je voda za injekcije, slan rastvor, fiksirana ulja, polietilen glikoli, glicerin, propilen glikol ili drugi sintetski rastvarači; antibakterijska sredstva kao što su benzil alkohol ili metil parabeni; antioksidanti kao što su askorbinska kiselina ili natrijum bisulfit; helatna sredstva kao što je etilendiamin-tetraacetatna kiselina (EDTA); pufere kao što su acetati, citrati ili fosfati, i sredstva za podešavanje toničnosti kao što je natrijum hlorid ili dekstroza. PH se može podesiti pomoću kiselina ili baza, kao što je hlorovodonična kiselina ili natrijum hidroksid.
[0043] Pored toga, kompozicije mogu dalje da sadrže veziva (npr. Akaciju, kukuruzni skrob, želatin, karbomer, etil celulozu, guar gumu, hidroksipropil celulozu, hidroksipropil metil celulozu, povidon), sredstva za dezintegraciju (npr. Kukuruzni skrob, skrob od krompira, alginski kiselina, silicijum dioksid, natrijum kroskarmeloza, krospovidon, guar guma, natrijum skrob glikolat, Primogel), puferi (npr., tris-HCl., acetat, fosfat) različitih pH i jonskih snaga, aditivi kao što su albumin ili želatin za sprečavanje apsorpcije površine, deterdženti (npr.
Tveen 20, Tveen 80, Pluronic F68, soli žučne kiseline), inhibitori proteaze, surfaktanti (npr. natrijum lauril sulfat), sredstva za poboljšanje propusnosti, sredstva za solubilizaciju (npr. glicerol, polietilen glicerol, polietilen glikol), glidant (npr. koloidni silicijum dioksid), antioksidanti (npr. askorbinska kiselina, natrijum metabisulfit, butilovani hidroksianizol), stabilizatori (npr. hidroksipropil celuloza, hidroksipropilmetil celuloza), sredstva za povećanje viskoznosti (npr. karbomer, koloidni silicijum dioksid, etil celuloza, guar guma), zaslađivači (npr. saharoza, aspartam, limunska kiselina), sredstva za poboljšanje ukusa (npr. pepermint, metil salicilat ili ukus narandže), preparati (npr. Thimerosal) benzil alkohol, parabeni), lubrikanti (npr. stearinska kiselina, magnezijum stearat, polietilen glikol, natrijum lauril sulfat), pomoćna sredstva za protok (npr. koloidni silicijum dioksid), plastifikatori (npr. dietil ftalat, trietil citrat), emulgatori (npr. , karbomer, hidroksipropil celuloza, natrijum lauril sulfat), polimerni premazi (npr. poloksameri ili poloksamini), agensi za formiranje prevlake i filma (npr. etil celuloza, akrilati, polimetakrilati) i / ili adjuvanti.
[0044] U jednom izvođenju, aktivna jedinjenja su pripremljena sa nosačima koji će zaštititi jedinjenje od brze eliminacije iz tela, kao što je formulacija sa kontrolisanim oslobađanjem, uključujući implantate i mikroinkapsulirane sisteme za isporuku. Mogu se koristiti biološki razgradljivi, biokompatibilni polimeri, kao što su etilen vinil acetat, polianhidridi, poliglikolna kiselina, kolagen, poliortoestri i polimlečna kiselina. Postupci za pripremu takvih formulacija biće očigledni stručnjacima. Materijali se takođe mogu dobiti komercijalno od Alza Corporation i Nova Pharmaceuticals, Inc. Liposomske suspenzije (uključujući liposome ciljane na inficirane ćelije sa monoklonskim antitelima na virusne antigene) mogu se takođe koristiti kao farmaceutski prihvatljivi nosači. Oni se mogu pripremiti prema postupcima koji su poznati stručnjacima, na primer, kao što je opisano u U.S.4,522,811.
[0045] Posebno je pogodno formulirati oralne kompozicije u jediničnom doznom obliku za jednostavnost davanja i ujednačenost doziranja. Jedinični oblik doziranja, kako se ovde koristi, odnosi se na fizički odvojene jedinice koje su pogodne kao jedinstvene doze za subjekt koji se tretira; svaka jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivnog jedinjenja izračunatu da proizvede željeni terapeutski efekat u vezi sa potrebnim farmaceutskim nosačem. Specifikacija oblika jedinične doze prema pronalasku je diktirana i direktno zavisna od jedinstvenih karakteristika aktivnog jedinjenja i određenog terapeutskog efekta koji se želi postići, i ograničenja koja su svojstvena stanju tehnike za jedinjenje takvog aktivnog jedinjenja za lečenje pojedinci.
[0046] Formulacije iz ovog pronalaska namenjene za oralnu primenu mogu uključivati jedan ili više pojačivača propusnosti, uključujući masne kiseline dugog lanca ili njihove soli, kao što su dekanoična kiselina i natrijum dekanoat.
[0047] U jednoj poželjnoj realizaciji, jedinjenje se može formulisati u vodenom rastvoru za intravensku injekciju. U jednoj realizaciji, sredstva za solubilizaciju mogu biti pogodno upotrebljena. Posebno poželjno sredstvo za solubilizaciju uključuje ciklodekstrine i modifikovane ciklodekstrine, kao što je derivat p-ciklodekstrina sulfonske kiseline ili njegovu so, uključujući sulfobutil derivatizovan-P-ciklodekstrin, kao što je sulfobutileter-7-P-ciklodekstrin koji se prodaje od strane CiDek, Inc. trgovačko ime CAPTISOL®.
[0048] Farmaceutske kompozicije mogu biti uključene u kontejner, pakovanje ili dozator zajedno sa uputstvima za ordiniranje.
[0049] Svakodnevno davanje može se ponoviti neprekidno u periodu od nekoliko dana do nekoliko godina. Oralno lečenje može da traje između jedne sedmice i života pacijenta.
Poželjno je da primena može da se odvija pet uzastopnih dana, nakon čega se pacijent može proceniti da bi se odredilo da li je potrebna dalja primena. Primena može biti kontinualna ili intermitentna, npr., Tretman za određeni broj uzastopnih dana nakon čega sledi period odmora. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se primenjivati intravenozno prvog dana tretmana, uz oralnu primenu drugog dana i svih narednih dana posle toga.
[0050] Priprema farmaceutskih kompozicija koje sadrže aktivnu komponentu dobro se razume u struci, na primer, postupcima mešanja, granulacije ili formiranja tableta. Aktivni terapeutski sastojak se često meša sa ekscipijentima koji su farmaceutski prihvatljivi i kompatibilni sa aktivnim sastojkom. Za oralno davanje, aktivni agensi su pomešani sa aditivima koji su uobičajeni za ovu svrhu, kao što su nosači, stabilizatori, ili inertni razblaživači, i konvertovani uobičajenim metodama u pogodne oblike za davanje, kao što su tablete, obložene tablete, tvrde ili meke želatinske kapsule, vodene, alkoholne ili uljne rastvore i slično kao što je gore opisano.
[0051] Količina jedinjenja koja se daje pacijentu je manja od količine koja bi izazvala toksičnost kod pacijenta. U određenim aspektima, količina jedinjenja koja se daje pacijentu je manja od količine koja uzrokuje da koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta bude jednaka ili veća od toksičnog nivoa jedinjenja. Poželjno, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 10 nM. U jednoj realizaciji, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 25 nM. U jednoj realizaciji, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 50 nM. U jednoj realizaciji, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 100 nM. U jednoj realizaciji, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 500 nM. U jednoj realizaciji, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 1000 nM. U jednoj realizaciji, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 2500 nM. U jednoj realizaciji, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 5000 nM.
Optimalna količina jedinjenja koja treba da se daje pacijentu u praksi ovog pronalaska će zavisiti od određenog korišćenog jedinjenja i tipa raka koji se leči.
Definicije
[0052] Dolje su navedene definicije različitih termina koji se koriste za opisivanje ovog pronalaska. Ove definicije se odnose na termine kako se koriste u ovoj specifikaciji i patentnim zahtevima, osim ako nije drugačije ograničeno u određenim slučajevima, bilo pojedinačno ili kao deo veće grupe.
[0053] Termin "acil" se odnosi na vodonik, alkil, delimično zasićeni ili potpuno zasićeni cikloalkil, delimično zasićeni ili potpuno zasićeni heterociklični, aril i heteroaril supstituisane karbonilne grupe. Na primer, acil uključuje grupe kao što su (Ci-C6) alkanoil (npr., Formil, acetil, propionil, butiril, valeril, kaproil, t-butilacetil, itd.), (C3-C6) cikloalkilkarbonil (npr., Ciklopropilkarbonil, ciklobutilkarbonil, ciklopentilkarbonil, cikloheksilkarbonil, itd.), heterociklični karbonil (npr. pirolidinilkarbonil, pirolid-2-on-5-karbonil, piperidinilkarbonil, piperazinilkarbonil, tetrahidrofuranilkarbonil, itd.), aroil (npr. benzoil) i heteroaroil (npr. tiofenil- 2-karbonil, tiofenil-3-karbonil, furanil-2-karbonil, furanil-3-karbonil, 1H-pirol-2-karbonil, 1H-pirol-3-karbonil, benzo [b] tiofenil-2-karbonil, itd. ). Pored toga, alkil, cikloalkil, heterocikl, aril i heteroaril deo acil grupe može biti bilo koja od grupa opisanih u odgovarajućim definicijama. Kada je naznačeno da su "opciono supstituisani", acil grupa može biti nesupstituisana ili opciono supstituisana sa jednim ili više supstituenata (tipično, jedan do tri supstituenta) nezavisno izabrana iz grupe supstituenata navedenih ispod u definiciji za "supstituisani" ili alkil cikloalkil, heterocikl, aril i heteroaril deo acil grupe mogu biti supstituisani kao što je gore opisano u poželjnoj i poželjnijoj listi supstituenata.
[0054]Termin "alkil" obuhvata linearne ili razgranate radikale koji imaju jedan do dvadeset atoma ugljenika ili, poželjno, jedan do oko dvanaest atoma ugljenika. Poželjniji alkil radikali su "niži alkil" radikali koji imaju jedan do deset atoma ugljenika. Najpoželjniji su niži alkilni radikali koji imaju jedan do oko osam atoma ugljenika. Primeri takvih radikala uključuju metil, etil, npropil, izopropil, n-butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, pentil, izo-amil, heksil i slično.
[0055] Termin "alkenil" obuhvata linearne ili razgranate radikale koji imaju bar jednu ugljenikugljenik dvostruku vezu od dva do dvadeset atoma ugljenika ili, poželjno, dva do oko dvanaest atoma ugljenika. Poželjniji alkenil radikali su "niži alkenil" radikali koji imaju dva do oko deset atoma ugljenika i još poželjnije oko dva do oko osam atoma ugljenika. Primeri alkenil radikala uključuju etenil, alil, propenil, butenil i 4-metilbutenil. Izrazi "alkenil" i "niži alkenil" obuhvataju radikale koji imaju "cis" i "trans" orijentacije, ili alternativno, "E" i "Z" orijentacije.
[0056] Termin "alkinil" obuhvata linearne ili razgranate radikale koji imaju najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik od dva do dvadeset atoma ugljenika ili, poželjno, dva do oko dvanaest atoma ugljenika. Poželjniji alkinilni radikali su "niži alkinil" radikali koji imaju dva do oko deset atoma ugljenika i još poželjnije oko dva do oko osam atoma ugljenika. Primeri alkinil radikala uključuju propargil, 1-propinil, 2-propinil, 1-butin, 2-butinil i 1-pentinil.
[0057] Izraz "aril", sam ili u kombinaciji, označava karbociklični aromatični sistem koji sadrži jedan, dva ili tri prstena gde se takvi prstenovi mogu vezati zajedno na viseći način ili mogu biti fuzionisani. Termin "aril" obuhvata aromatične radikale kao što su fenil, naftil, tetrahidronaftil, indan i bifenil.
[0058] Termini "heterociklil", "heterociklični", "heterociklični" ili "heterociklični" obuhvataju zasićene, delimično nezasićene i nezasićene prstenaste radikale koji sadrže heteroatom, koji se takođe mogu nazvati "heterociklil", "heterocikloalkil" i "heteroaril", gde heteroatomi mogu biti izabrani od azota, sumpora i kiseonika. Primeri zasićenih heterociklil radikala uključuju zasićenu 3 do 6-članu heteromonocikličnu grupu koja sadrži 1 do 4 atoma azota (npr.
Pirolidinil, imidazolidinil, piperidino, piperazinil, itd.); zasićenu 3 do 6-članu heteromonocikličnu grupu koja sadrži 1 do 2 atoma kiseonika i 1 do 3 atoma azota (npr. morfolinil, itd.); zasićenu 3 do 6-članu heteromonocikličnu grupu koja sadrži 1 do 2 atoma sumpora i 1 do 3 atoma azota (npr. tiazolidinil, itd.). Primeri delimično nezasićenih heterociklil radikala uključuju dihidrotiofen, dihidropiran, dihidrofuran i dihidrotiazol. Heterociklilni radikali mogu da uključuju pentavalentni azot, kao što je u tetrazolijum i piridinijum radikalima. Termin "heterocikl" takođe obuhvata radikale gde su heterociklilni radikali fuzionisani sa arilnim ili cikloalkilnim radikalima. Primeri takvih spojenih bicikličnih radikala uključuju benzofuran, benzotiofen i slično.
[0059] Termin "heteroaril" obuhvata nezasićene heterociklilne radikale. Primeri heteroaril radikala uključuju nezasićenu 3- do 6-članu, poželjno 5 ili 6-članu, heteromonocikličnu grupu koja sadrži 1 do 4 atoma azota, na primer, pirolil, pirolinil, imidazolil, pirazolil, piridil, pirimidil, pirazinil, piridazinil, triazolil (npr.4H-1,2,4-triazolil, 1H-1,2,3-triazolil, 2H-1,2,3-triazolil, itd.) Tetrazolil (npr.1H-tetrazolil, 2H-tetrazolil, itd.), Itd..; nezasićena kondenzovana heterociklil grupa koja sadrži 1 do 5 atoma azota, na primer, indolil, izoindolil, indolizinil, benzimidazolil, kinolil, izohinolil, indazolil, benzotriazolil, tetrazolopiridazinil (npr. tetrazolo [1,5-b] piridazinil, itd.) ; nezasićena 3 do 6-člana, poželjno 5- ili 6-člana, heteromonociklična grupa koja sadrži atom kiseonika, na primer, piranil, furil, itd .; nezasićene 3 do 6-člane heteromonociklične grupe koja sadrži atom sumpora, na primer, tienil, itd .; nezasićena 3- do 6-člana, poželjno 5- ili 6-člana, heteromonociklična grupa koja sadrži 1 do 2 atoma kiseonika i 1 do 3 atoma azota, na primer, oksazolil, izoksazolil, oksadiazolil (npr., 1,2,4-oksadiazolil, 13,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, itd.) Itd .; nezasićena kondenzovana heterociklil grupa koja sadrži 1 do 2 atoma kiseonika i 1 do 3 atoma azota (npr. benzoksazolil, benzoksadiazolil, itd.); nezasićena 3- do 6-člana, poželjno 5- ili 6-člana, heteromonociklična grupa koja sadrži 1 do 2 atoma sumpora i 1 do 3 atoma azota, na primer, tiazolil, tiadiazolil (npr., 1,2,4-tiadiazolil, 1,34-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, itd.) Itd .; nezasićena kondenzovana heterociklilna grupa koja sadrži 1 do 2 atoma sumpora i 1 do 3 atoma azota (npr., benzotiazolil, benzotiadiazolil, itd.) i slično.
[0060] Termin "heterocikloalkil" obuhvata heterociklo-supstituisane alkilne radikale. Poželjniji heterocikloalkil radikali su "niži heterocikloalkil" radikali koji imaju jedan do šest atoma ugljenika u heterocikličkim radikalima.
[0061] Termin "supstituisan" se odnosi na zamenu jednog ili više vodoničnih radikala u datoj strukturi sa radikalom određenog supstituenta uključujući, ali bez ograničenja: halo, alkil, alkenil, alkinil, aril, heterociklil, tiol, alkiltio, ariltio, alkiltioalkil, ariltioalkil, alkilsulfonil, alkilsulfonilalkil, arilsulfonilalkil, alkoksi, ariloksi, aralkoksi, aminokarbonil, alkilaminokarbonil, arilaminokarbonil, ariloksikarbonil, nitro, alkilamino, arilamino, alkilamino, alkilamino, arilamino, alkilamino arilaminoalkil, aminoalkilamino, hidroksi, alkoksialkil, karboksialkil, alkoksikarbonilalkil, aminokarbonilalkil, acil, aralkoksikarbonil, karboksilna kiselina, sulfonska kiselina, sulfonil, fosfonska kiselina, aril, heteroaril, heterociklična i alifatična grupa.
Podrazumeva se da supstituent može biti dalje supstituisan.
[0062] Radi jednostavnosti, hemijske grupe su definisane i pomenute u celini mogu biti jednovalentne hemijske grupe (npr., Alkil, aril, itd.) Ili multivalentne grupe u odgovarajućim strukturnim okolnostima jasnim onima koji su verzirani u stanje tehnike. Na primer, "alkil" ostatak se može odnositi na monovalentni radikal (npr., CH3-CH2-), ili u drugim slučajevima, bivalentna vezna grupa može biti "alkil", u kom slučaju će stručnjaci iz ovog područja razumeti alkil je dvovalentni radikal (npr. -CH2-CH2-), koji je ekvivalentan terminu "alkilen." Slično tome, u okolnostima u kojima su potrebne dvovalentne grupe i koje su navedene kao "alkoksi", "alkilamino", "ariloksi", "alkiltio", "aril", "heteroaril", "heterociklični", "alkil", "alkenil", "alkinil", "alifatik", ili "cikloalkil", oni koji su verzirani u stanje tehnike će razumeti da su izrazi alkoksi "," alkilamino "," ariloksi "," alkiltio "," aril "," heteroaril "," heterociklični ", "alkil", "alkenil", "alkinil", "alifatski", ili "cikloalkil" se odnosi na odgovarajući dvovalentni ostatak.
[0063] Termini "halogen" ili "halo" kako se ovde koriste, odnose se na atom izabran od fluora, hlora, broma i joda.
[0064] Kako se ovde koristi, ovaj pojam "neprirodna proliferacija se odnosi na nenormalan rast ćelije.
[0065] Izraz "dodatna terapija" obuhvata lečenje subjekta sa agensima koji smanjuju ili izbegavaju prateća dejstva povezana sa kombinovanom terapijom prema ovom pronalasku, uključujući, ali se ne ograničava na, one agense, na primer, koji smanjuju toksična dejstva antikancenih lekova, npr., inhibitore resorpcije kostiju, kardiozaštitne agense, spreči ili smanji pojavu mučnine i povraćanje povezano sa hemoterapijom, radioterapijom ili operacijom; ili smanji pojavu infekcije povezane sa načinom primene mijelosupresivnih antikancernih lekova.
[0066] Pojam "angiogeneza," se koristi ovde, se odnosi na formiranje krvnih sudova. Specifično, angiogeneza je višestepeni proces gde se endotelijalne ćelije fokusno raspadaju i napadaju kroz sopstvenu membranu osnove, migriraju kroz intersticijalne strome prema angiogenskom stimulansu (draž) prema angiogenskom stimulusu, raste se blizu vrha migracije, organizuje u krvne sudove, i ponovo spaja na novo sintetizovanu membranu osnove (videti Folkman et al., Adv. Cancer Res., Vol. 43, pp. 175-203 (1985)). Antiangiogenski agensi se meašju sa ovim procesom. Primeri agenasa koji se mešaju sa nekoliko ovih koraka obuhvataju trompospondin5, angiostatin, endostatin, interferon alfa i jedinjenja kao što je matriks metaloproteinaza (MMP) inhibitore koji blokiraju aktivnosti enzimi koje čiste i kreiraju putanje za novo formirane krvne sudove koji kao nastavak slede; jedinjenja, kao inhibitori alfa naspram beta 3, koji se mešaju sa molekulima koje ćelije krvnog suda koriste za premošćavanje između roditeljskog krvnog suda i tumora, agensa, kao što su COX-2 inhibitori, koji sprečavaju rast ćelija koje formiraju nove krvne sudove, i jedinjenja na bazi proteina koja se istovremeno mešaju sa nekoliko ovih ciljeva.
[0067] Pojam "apoptoza" kako se ovde koristi se odnosi na programiranu smrt ćelije kako je signalizirano putem nukleusa kod ljudskih i životinjskih ćelija koje normalno funkcionišu kada starost iili zdravstveno stanje ćelije i uslovi diktira. "Agens koji izaziva apoptozu" okida postupak programirane smrti ćelije.
[0068] Pojam "kancer" kako se ovde koristi označava klasu bolesti ili poremećaja koje karakteriše nekontrolisana podela ćelija i sposobnost ovih ćelija da napadnu druga tkiva, bilo direktnim rastom u susedno tkivo ili kroz invaziju ili ugradnju u udaljena mesta metastazama.
[0069] Pojmovi “jedinjenje” i “jedinjenje prema ovom pronalasku”, kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenja prema Formuli I i njihove farmaceutski prihvatljive soli. Jedinjenja prema ovom pronalasku može da se dobije u različitim oblicima, uključujući kristalne i amorfne oblike. Ova jedinjenja mogu takođe da se jave kao solvati, na primer, hidrati, ili solvati organskog rastvarača, preporučljivo farmaceutski prihvatljiv rastvarač. Jedinjenja mogu takođe da se jave u višestrukim kristalnim, ili polimorfnim, oblicima. Jedinjenja prema ovom pronalasku još obuhvataju farmaceutski prihvatljive prolekove i estre jedinjenja prema Formuli I.
[0070] Pojam "uređaj" se odnosi na bilo koji uređaj, obično mehanički ili električni, namenjen da se izvodi određena funkcija.
[0071] Kako se ovde koristi, pojam "displazija" se odnosi na nenormalan rast ćelije, i obično se odnosi na najraniji oblik prekancerne lezije koju u biopsiji prepoznaje patolog.
[0072] Kako se ovde koristi, pojam "delotvorna količina predmetnih jedinjenja," u vezi sa predmetnim načinom lečenja se odnosi na količinu predmetnog jedinjenja koja, kada se isporuči kao deo željenog režima doze, daje kao rezultat, npr. promenu u brzini rasta ćelije i/ili stanju diferencijacije i/ili brzini opstanka ćelije na klinički prihvatljivim standardima. Ova količina može još da ublaži u izvesnoj meri jedan ili više simptoma poremećaja neoplazije, uključujući ali ne ograničavajući se na: 1) smanjenje broja kancernih ćelija; 2) smanjenje veličine tumora; 3) inhibiranje (t.j. usporavanje u izvesnoj meri, poželjno zaustavljanje) infiltriranja kancerne ćelije u periferne organe; 4) inhibiciju (t.j., usporavanje. u izvesnoj meri, poželjno zaustavljanje) metastaze tumora; 5) inhibiranje, u izvesnoj meri, rasta ćelije; 6) ublažavanje ili smanjenje u izvesnoj meri jednog ili više simptoma povezanih sa poremećajem; i/ili 7) ublažavanje ili smanjenje neželjenih dejstava povezanih sa administriranjem antikancernih agenasa.
[0073] Pojam "hiperplazija," kako se ovde koristi, se odnosi na prekomernu podelu ćelije ili rast.
[0074] Fraza "imunoterapijski agens" se odnosi na agense korišćene za prenos imuniteta donatora imuniteta; npr., druge osobe ili životnje, na domaćina putem inokulacije. Pojam obuhvata upotrebu seruma ili gema globulina koji sadrže izvedena antitela proizvedena pomoću druge individue ili životinje; nespecifičnu sistemsku stimulaciju; ađuvanse; aktivnu specifičnu imunoterapiju; i adoptivnu imunoterapiju. Adoptivna imunoterapija se odnosi na lečenje bolesti terapijom ili agensima koji obuhvataju vakcinaciju domaćina senzitizovanih limfocita, faktor transfera, imuni RNK, ili antitela u serumu ili gama globulinu.
[0075] Pojam "inhibicija," u kontekstu neoplazije, rast tumora ili rast ćelije tumora, može da se proceni odloženom pojavom primarnih ili sekundarnih tumora, usporenim rastom primarnih ili sekundarnih tumora, smanjenom pojavom primarnih ili sekundarnih tumora, usporena ili smanjena ozbiljnost sekundarnih dejstava bolesti, zakočenog rasta tumora i regresije tumora, između ostalog. U ekstremnom slučaju, potpuna inhibicija koja se ovde pominje kao sprečavanje ili hemoprevencija.
[0076] Pojam "metastaza," kako se ovde koristi, se odnosi na migraciju ćelija kancera iz originalnog mesta tumora kroz krvne sudove i limfne sudove da se proizvedu kanceri u drugim tkivima. Metastaza je takođe pojam korišćen za sekundarni rast kancera na udaljenom mestu.
[0077] Pojam "neoplazam," kako se ovde koristi, se odnosi na nenormalnu masu tkiva koja nastaje kao rezultat iz prekomerne podele ćelije. Neoplazmi mogu da budu benigni (ne kancerni), ili maligni (kancerni) i mogu da se zovu tumor. Pojam "neoplazija" je patološki proces koji kao rezultat daje formiranje tumora.
[0078] Kako se ovde koristi, pojam "prekancerni" se odnosi na stanje koje nije maligno, ali je verovatno da će postati maligno ako se ostavi netretirano.
[0079] Pojam "proliferacija" se odnosi na ćelije koje prolaze mitozu.
[0080] Fraza "PI3 bolesti povezane sa kinazom ili poremećaj se odnosi na bolest ili poremećaj koji karakteriše neodgovarajuća aktivnost fosfoinozitid-3-kinaze ili prekomerna aktivnost fosfoinozitid-3-kinaze. Neodgovarajuća aktivnost se odnosi na bilo;
(i) ispoljavanje PI3 kinaze u ćelijama koje normalno ne ispoljavaju PI3 kinazu; (ii) povećano ispoljavanje PI3 kinaze dovodi do neželjenog rasta ćelije, diferencijacije i/ili rasta; ili, (iii) smanjenog ispoljavanja PI3 kinaze što dovodi do neželjenih smanjenja u proliferaciji ćelije, diferencijaciji i/ili rastu. Prekomerna aktivnost PI3 kinaze se odnosi na bilo pojačavanje gena koji kodira određenu PI3 kinazu ili proizvodnju nivoa PI3 aktivnosti kinaze koja može da se dovodi u vezu sa rastom ćelije, diferencijacijom i/ili poremećajem rasta (to jest, kako se nivo PI1 kinaze povećava, ozbiljnost jednog ili više simptoma poremećaja ćelije se povećava).
[0081] Faza "radio terapijskog agensa" se odnosi na upotrebu elektromagnetnog zračenja ili zračenja čestice kod lečenja neoplazije.
[0082] Pojam "angiogeneza," kako se koristi ovde, se odnosi na vraćanje kancera posle perioda reemisije. Ovo može biti zbog nepotpunog uklanjanja ćelija iz početnog kancera i može nastati lokalno (isto mesto kao kod početnog kacera), regionalno (u blizini početnog kancera, moguće u limfnim čvorovima ili tkivu), i/ili distalno kao rezultat metastaza.
[0083] Pojam "lečenje" se odnosi na bilo koji pproces, aktivnost, primenu, terapiju, ili slično, gde se sisar, uključujući ljudsko biće, izlaže medicinskoj pomoći u cilju poboljšanja stanja sisara, direktno ili indirektno.
[0084] Pojam "vakcina" obuhvata agense koji podstiču imuni sistem pacijenta da izgrad odgovor imunosistema protiv tumora napadom na ćeije koje ispoljavaju antigene povezane sa tumorom (Teas).
[0085] Kako se ovde koristi, pojam "farmaceutski prihvatljiva so" se odnosi na one soli koje su, u okviru obima nepristrasne medicinske procene, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i njižim životinjama bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora i slično, i proporcionalne su razumnom odnosu korist/rizik. Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u tehnici. Na primer, S. M. Berge, et al. opisuje farmaceutski prihvatljive soli detaljno u (J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977))). Soli se mogu pripremiti<in situ>tokom finalne izolacije i prečišćavanja jedinjenja prema ovom pronalasku, ili odvojeno dovođenje u reakciju funkcije slobodne baze sa odgovarajućom organskom kiselinom i neorganskom kiselinom. Primeri farmaceutski prihvatljivih netoksičnih soli dodate kiseline obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, soli amino grupe formirane sa neorganskim kiselinama kao što je hlorovodonična kiselina, bromvodonična kiselina, fosforna kiselina, sumporna kiselina, perhlorna kiselina ili sa organskim kiselinama kao što je sirćetna kiselina, maleinska kiselina, tartarna kiselina, limunska kiselina, sukcinska kiselina, laktobionska kiselina ili malonska kiselina ili korišćenjem drugih postupaka koji se koriste u nauci kao što je jonska izmena. Druge farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, adipat, alginat, askorbat, aspartat, benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butirat, kamforat, kamforsulfonat, citrat, ciklopentanpropionat, diglukonat, dodecilsulfat, etansulfonat, format, fumarat, glukoheptanoat, glicerofosfat, glukonat, hemisulfat, heptanoat, heksanoat, hidrojodid, 2-hidroksi-etanesulfonat, laktobionat, laktat, laurat, lauril sulfat, malat, maleat, malonat, metanesulfonat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, pektinat,persulfat, 3-fenilpropionat, fosfat, pikrat, pivalat, propionat, stearat, sukcinat, sulfat, tartrat, tiocijanat, ptoluenesulfonat, undekanoat, soli valerata, i tome slično. Reprezentativni alkali ili alkalini soli zemnog metala obuhvataju natrijum, litijum, kalijum, kalcijum, magnezijum, i slično. Druge farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, kada je pogodno, netoksični amonijak, kvartarni amonijak, i katjone amina formirane korišćenjem kontrajona kao što je halid, hidroksid, karboksilat, sulfat, fosfat, nitrat, alkil sulfonat koji ima od 1 do 6 atoma ugljenika, sulfonat i aril sulfonat. Neke soli kao što je natrijum, kalijum i soli baze holina kao i kisele soli kao što je sulfat i metansulfonatne soli su pokazale da poboljšavaju rastvorljivost jedinjenja prema Formuli I u farmaceutski prihvatljivim vodenim podlogama. U jednom izvođenj, farmaceutski prihvatljiva so Jedinjenja 1 je so holina. Preporučene soli Jedinjenja 1 obuhvataju natrijum so i kalijum so. Druge preporučene soli obuhvataju soli sulfata i metansulfonata.
[0086] Kako se ovde koristi, pojam "farmaceutski prihvatljiv estar" se odnosi na estre koji se hidrolizuju in vivo i obuhvataju one koji su spremini za pucanje u ljudskom telu da ostave roditeljsko jedinjenje ili so ovog jedinjenja<.>Odgovarajuće grupe estara obuhvataju, na primer, one koje su izvedene iz farmaceutski prihvatljivih alifatik karboksilnih kiselina, posebno alkanoičnih, alenoičnih, cikloalkanoičnih i alkanedoičnih kiselina, kod kojih svaki deo alkila ili alkenila kao prednost ima ne više od 6 atoma ugljenika. Primeri određenih estara obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, formate, acetate, propionate,
butirate, akrilate i etilsukcinate.
[0087] Pojam "farmaceutski prihvatljivi prolekovi" kako se ovde koriste se odnosi na one prolekove jedinjenja prema ovom pronalasku koja su, u okviru obima nepristrasne medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i donjih životinja sa prekomernom toksičnošću, iritacijoproporcionalne odnosu razumne koristi/rizika, i delotvorne za njihovu predviđenu upotrebu, kao i dipolarne (cvtierjonske) oblike, gde je moguće, jedinjenja prema ovom pronalasku. "Prolek", kako se ovde koristi znači jedinjenje koje je konvertibilno in vivo metaboličkim sredstvima (npr. putem hidrolize) za jedinjenje prema ovom pronalasku. Različiti oblici prolekova su poznati u nauci, na primer, kako je objašnjeneo u (Bundgaard, (ed.), Design of Prodrugs, Elsevier (1985); Widder, et al. (ed.), Methods in Enzymology, Vol. 4, Academic Press (1985); Krogsgaard-Larsen, et al., (ed). "Design and Application of Prodrugs, Textbook of Drug Design and Development, Chapter 5, 113-191 (1991); Bundgaard, et al., Journal oƒ Drug Deliver Reviews, 8:1-38(1992); Bundgaard, J. of Pharmaceutical Sciences, 77:285 et seq. (1988); Higuchi and Stella (eds.) Prodrugs as Novel Drug Delivery Systems, American Chemical Society (1975); and Bernard Testa & Joachim Mayer, "Hydrolysis In Drug And Prodrug Metabolism: Chemistry, Biochemistry And Enzymology, John Wiley and Sons, Ltd. (2002).
[0088] Kako se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljiv nosač" je namenjen da obuhvati bilo koji i sve rastvarače, disperzione podloge,obloge, antibakterijski i antimikrobni agensi, izotonični agensi i agensi za odlaganje apsorpcije, i slično, kompatibilni sa farmaceutskom primenom, kao što je sterilna voda bez pirogena.. Pogodni nosači su opisani u najnovijem izdanju Remington's Pharmaceutical Sciences, standardnom referentnom tekstu u ovoj oblasti, koji je ugrađen ovde u vidu reference. Preporučeni primeri takvih nosača ili rastvarača obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, vodu, slani rastvor, Ringerovi rastvori, dekstrosni rastvor, i 5% ljudskog serumskog albumina. Lipzomi i nevodena prenosna sredstva kao što su neisparljiva ulja takođe je moguće koristiti. Upotreba takvih medija i agenasa za farmaceutski aktivne supstance je dobro poznata u nauci. Osim ukoliko je kao bilo koja konvencionalna podloga ili agens nekompatibilan sa aktivnim jedinjenjem, njegova upotreba u jedinjenjima se razmatra. Dopunska aktivna jedinjenja mogu takođe da budu ugrađena u ova jedinjenja.
[0089] Kako se ovde koristi, pojam "prekancerni" se odnosi na stanje koje nije maligno, ali je verovatno da će postati maligno ako se ostavi netretirano.
[0090] Pojam "subjekta," kako se ovde koristi, se odnosi životinju. Poželjno je da je životinja sisar. Još poželjnije je da je sisar ljudsko biće. Subjekat se takođe odnosi na, na primer, pse, mačke, konje, krave, svinje, gvinejske svinje, ribu, ptice i slično.
[0091] Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da budu modifikovana dodavanjem odgovarajućih funkcionalnosti da se poboljšaju selektivna biološka svojstva. Takve modifikacije su poznate u nauci i mogu da obuhvate one koje povećavaju biološki prodor u dati biološki sistem (npr. krv, limfni sistem, centralni nervni sistem), povećanje oralne dostupnosti, povećanje rastvorljivosti da se omogući primena ubrizgavanjem, menja se metabolizam i menja se brzina izlučivanja.
[0092] Sintetizovana jedinjenja mogu da se odvoje iz reakcione mešavine još prečiste postupkom kao što je hromatografija u koloni, tečna hromatografija pod visokim pritiskom, ili rekristalizacija. Kao što vešt stručnjak može da uvidi, dodatni postupci sintetizovanja jedinjenja ovih formula biće očigledni običnom stručnjaku u ovoj oblasti. Dodatno, različitii koraci sinteze mogu da se izvedu u alternativnom nizu ili redosledu da bi se dobila željena jedinjenja. Sintetičke hemijske transformacije i metodologije zaštitne grupe (zaštita i uklanjanje zaštite) je korisno u sintetizovanju ovde opisanih jedinjenja su poznate u ovoj oblasti i obuhvataju, na primer, one koje su opisane kod (R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), and subsequent editions thereof.
Farmaceutska jedinjenja
[0093] Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku sadrže terapijski delotvornu količinu jedinjenja prema ovom pronalasku formulisanu zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili ekscipijenata.
[0094] Preporučljivo, pojam "farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijent" znači netoksična, inertna čvrsta supstanca, polučvrsta supstanca ili tečni punilac, razblaživač, materijal za stavljanje u kapsulu ili pomoćnu formulaciju bilo kog tipa. Neki primeri materijala koji služe kao farmaceutski prihvatljivi nosači su šećeri kao što je laktoza, glukoza i saharoza, ciklodekstrini kao što su alfa- (α), beta- (β) i gama- (γ) ciklodekstrini; skrobovi kao što je kukuruzni skrob i krompir skrob; celuloza i njeni derivati kao što je natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celulozni acetat; tragakant u prahu; salt; želatin, talk, ekscipijenti kao što je kako puter i gelatin; talc; supozitorije u vosku; ulje kao što je ulje kikirikija, ulje semena pamuka, ulje šafrana, ulje susama maslinovo ulje, kukuruzno ulje i ulje sojinog zrna, glikoli kao što je propilen glikol; estri kao što je etil oleat i etil laureat; agar; puferski agensi kao što je magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; alginijska kiselina; voda bez pirogena; izonični slani rastvor; Ringerov rastvor; etil alkohol, i fosfatni puferski rastvori, kao i druga netoksična kompatibilna maziva kao što je natrijum lauril sulfat i magnezijum stearat, kao i agensi za bojenje, agensi za otpuštanje, agensi za oblaganje, agensi za zaslađivanje, agensi za aromu i parfimisanje, konzervansi i antioksidansi mogu takođe da budu prisutni u ovom jedinjenju, prema proceni formulatora.
[0095] Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da se administriraju oralno, parenteralno, inhalacioni sprej, topikalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili preko ugrađenog rezervoara, poželjno oralnu primenu ili primenu ubrizgavanje. Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da sadrže bilo koje konvencionalne netoksične farmaceutski prihvatljive nosače, ađuvanse ili prenosna sredstva. U nekim slučajevima, pH formulacije može da se podesi sa farmaceutski prihvatljivim solima, bazama ili puferskim sredstvima da se pojača stabilnost formulisanog jedinjenja ili njegov oblik isporuke. Pojam parenteralni kako se ovde koristi obuhvata potkožno, intrakutano, intravensko, intramuskularno, intraarterijsko, intrasinovijalno, intrasternalno, intratekalno, intralezono i intrakranijalno ubrizgavanje ili tehnike infuzije.
[0096] Tečni oblici doze za oralnu primenu obuhvataju farmaceutski prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Pored aktivnih jedinjenja, oblici tečne doe mogu da sadrže inertne rastvarače koji se uobičajeno koriste u ovoj oblasti kao što je, na primer, voda ili drugi rastvarači, agensi za rastvaranje i emulzifikatori kao što je etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, dimetilformamid, ulja (posebno, iz semena pamuka, ulje iz oraha, kukuruza, klica, maslina, ricinusovo ulje, i susamovo ulje), glicirelo, tetrahidrofurfuril alkohol, glikoli polietilena i estri masne kiseline sorbitan, i njihove mešavine Pored inertnih razblaživača, jedinjenja za oralnu primenu mogu takođe da obuhvate ađuvanse kao što su agensi za vlaženje, agensi za emulzifikovanje i suspenziju, zaslađivanje, aromatizovanje, i parfimisanje.
[0097] Preparati za ubrizgavanje, na primer, sterilne injektibilne vodene ili uljne suspenzije, mogu da se formulišu u skladu sa poznatim u ovoj oblasti za upotrebu pogodnim agensima koji se raspršuju ili agense koji održavaju vlažnost i agense za suspenziju. Sterilni injektibilni preparati mogu takođe da budu sterilni injektibilni rastvor, suspenzija ili emulzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim prenosnim sredstvima i rastvaračima koji mogu da se koriste su voda, Ringerov rastvor, U.S.P. i izotonični rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna, fiksna ulja su zgodno upotrebljena kao rastvarač ili medijum za suspenziju. U ovu svrhu svako neisparljivo ulje sa blagim ukusom može da se koristi uključujući sintetičke mono ili digliceride. Pored toga, masne kiseline kao što je oleinska kiselina se koriste u pripremi preparata za ubrizgavanje.
[0098] Formulacije koje se ubrizgavaju mogu da se sterilišu, na primer, filtriranjem kroz filter koji sadrži bakterije, ili ugradnjom sterilizujućih agenasa kao sterilnih čvrstih jedinjenja u obliku čvrste supstance koji se mogu rastvoriti ili raspršiti u sterilnoj vodi ili drugoj podlozi koja se ubrizgava pre upotrebe.
[0099] Da bi se produžilo dejstvo leko, često je poželjno usporiti apsorpciju leka iz potkožnog ili intramuskularnog ubrizgavanja. Ovo je moguće izvesi upotrebom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala sa lošom rastvorljivošću u vodi. Brzina apsorpcije leka zatim zavisi od brzine rastvaranja, koja, zauzvrat, može da zavisi od veličine kristala i kristalnog oblika. Alternativno, odložena apsorpcija parenteralno primenjenog oblika leka se izvodi rastvaranjem ili držanjem u suspenziji leka ili prenosnog sredstva u vidu ulja. Depo oblici koji se ubrizgavaju se prave formiranjem matrica stavljenih u mikro kapsule leka u biodegradabilne polimere kao što je polilaktid-poliglikolid. Zavisno od odnosa leka prema polimeru i prirode određenog polimera koji se koristi, brzinu otpuštanja leka je moguće kontrolisati. Primeri drugih biorazgradivih polimera obuhvataju poli(ortoestre) i poli(anhidride). Depo formulacije koje se ubrizgavaju se takođe pripremaju tako što se lipozomi ili mikroemulzije koje su kompatibilne sa telesnim tkivima obuhvate lek.
[0100] Jedinjenja za rektalnu ili vaginalnu primenu su poželjno supozitorije koji mogu da se pripreme mešanjem jedinjenja prema ovom pronalasku sa odgovarajućim neiritirajućim ekscipijentima ili nosačima kao što je kako puter, polietilen glikol ili supozitorije u obliku voska koje su čvrste na temperaturi okoline ali tečnost na telesnoj temperaturi i samim tim da se otopi u rektumu ili vaginalnoj šupljini i otpusti aktivno jedinjenje.
[0101] Čvrsti oblici doze za oralno administriranje obuhvataju kapsule, tablete, pilule, prahove, i granule. U takvim čvrstim oblicima doze, aktivno jedinjenje je pomešano sa najmanje jednim inertnim, farmaceutski prihvatljivom ekscipijentu ili nosaču kao što je natrijum citrat ili dikalcijum fosfat i/ili: a) punioci ili proširivači kao što su skrobovi, laktoza, saharaoza, glukoza, manitol, i silicijumska kiselina, b) vezivna sredstva kao što je, na primer, karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivinilpirolidinon, saharoza, i akacija, c) humektanti kao što je glicerol, d) agensi razgradnje kao što je agar-agar, kalcijum karbonat, krompir ili tapioka skrob, alginijska kiselina, izvesni silikati, i natrijum karbonat, e) rastvor agenasa za zadržavanje kao što je parafin, f) pospešivači apsorpcije kao što su kvternarna jedinjenja amonijaka, g) agensi za vlaženje kao što je, na primer, cetil alkohol i glicerol monostearat, h) apsorbenti kao što je kaolin i bentonit glina, i i) lubrikanti kao što je talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilenski glikoli, natrijum lauril sulfat, i njihove mešavine. U slučaju kapsula, tablete i pilule, oblik doze može takođe da sadrži puferske agense.
[0102] Čvrsta jedinjenja sličnog tipa može takođe da se koristi kao punioci u meko i tvrdo punjenim želatinastim kapsulama korišćenjem takvih ekscipijenata kao što je laktoza ili šećerno mleko kao glikoli polietilena visoke molekularne težine i slično.
[0103] Čvrsti oblici doze tableta, dražeja, kapsula, pilula, i granule mogu da se pripreme sa oblogama i ljuskice kao enterne obloge i druge obloge dobro poznate u oblasti farmaceutske formulacije<.>Oni mogu opciono da sadrže neprovidne agense i mogu takođe da budu supstanca koja otpušta samo aktivne sastojke, ili preferencijalno, u izvesnom delu intestinalni trakt, opciono, na zadržan način. Primeri jedinjenja za ugradnju koja mogu da se koriste obuhvataju polimerne supstance i voskove.
[0104] Dozni oblici za topikalnu ili transdermalnu primenu jedinjenja ovog pronalaska obuhvataju masti, paste, kreme, lokacije, gelovi, prahovi, rastvori, sprejevi, inhalatori, inhalanti ili flasteri. Aktivna komponenta se meša pod sterilinim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i bilo koji potrebni konzervansi ili puferska sredstva kao što mogu biti potrebni. Oftalmička formulacija, kapi za uho, masti za oko, prahovi i rastvori se takođe razumeju kao da su u okviru obima ovog pronalaska.
[0105] Masti, paste, kreme i gelovi mogu da sadrže, pored aktivnog jedinjenja prema ovom pronalasku, ekscipijenti kao što su životinjske i biljne masti, ulja, voskovi, parafini, skrobovi, tragakanti, derivati celuloze, polietilenski glikoli, glikoli polietilena, silikoni, bentoniti, silicijumska kiselina,, talk i cink oksid, ili njihove mešavine.
[0106] Prahovi i sprejevi mogu da sadrže, pored jedinjenja prema ovom pronalasku, ekscipijente kao što je laktoza, talk, silicijumska kiselina, aluminijum hidroksid, kalcijum silikati i poliamid prah, ili mešavine ovih supstanci. Sprejevi mogu dodatno da sadrže uobičajene propelente kao što su hlorofluorohidrougljenici.
[0107] Ttransdermalni flasteri imaju su dodatnu prednost pružanja kontrolisanu isporuku jedinjenja u telo. Takvi oblici doze mogu se naprave rastvaranjem ili raspršivanjem jedinjenja u odgovarajućem medijumu. Pospešivači apsorpcije mogu takođe da se koriste da se poveća fluks jedinjenja preko kože. Brzina može da se kontroliše bilo obezbeđivanjem opne za kontrolisanje brzine ili raspršivanje jedinjenja u polimernu matricu ili gel.
[0108] Za isporuku u plućima, jedinjenje koje se koristi za terapiju prema ovom pronalasku se formuliše i administrira pacijentu u čvrstoj supstanci ili u obliku tečnog partikulata direktnom primenom npr., udisanjem u respiratorni sistem. Čvrsti ili tečni oblici partikulata aktivnog jedinjenja pripremljn za praktičnu primenu ovog jedinjenja obuhvataju čestice respirabilne veličine: to znači, čestice veličine dovoljno male da prođu kroz usta i grkljan po udisanju i u bronhijama i alveolama pluća. Isporuka aerosolizovanih lekovitih supstanci, posebno aerosolizovanih antibiotika, je poznata u nauci (videti, na primer američke patente (U.S. Pat. No.
5,767,068 to VanDevanter et al., U.S. Pat. No. 5,508,269 to Smith et al., i WO 98/43650 by Montgomery, svi su ovde nalaze kao referenca). Diskusija o pulmornarnoj isporuci antibiotika se takođe nalazi u američkom patentu (U.S. Pat. No.6,014,969), i ovde postoji kao referenca.
[0109] "Terapijski delotvornu količinu" jedinjenja prema pronalasku je namenjen količina jedinjenja koja će predati terapijsko dejstvo na subjekat koji se leči, u razumnoj koristi/odnos rizika koji se primenjuje na medicinsko lečenje. Terapijsko dejstvo može da bude cilj (t.j. koji se meri nekim ispitivanjem ili markerom) ili sujektivno (t.j. subjekat daje indikaciju ili osećaj efekta). Delotvorna količina opisanog jedinjenja gore predstavljeni mogu da se kreću od oko 0,1 mg/Kg do oko 500 mg/Kg, poželjno od oko 1 do oko 50 mg/Kg. Delotvorne doze će takođe da varira zavisno od rute primene, kao mogućnost zajedničke upotrebe sa drugim agensima. Jasno je, međutim, da će o ukupnoj dnevnoj dozi jedinjenja i jedinjenja prema ovom pronalasku odlučiti odgovorni lekar u okviru obima nepristrasnog medicinskog mišljenja. Specifičan nivo terapijske delotvorne doze za bilo kog određenog subjekta će zavisiti od raznovrsnih faktora koji uključuju poremećaj koji se leči i ozbiljnost poremećaja, aktivnost specifičnog korišćenog jedinjenja, specifično korišćeno jedinjenje; starosno doba, telesna težina, generalno zdravlje, pol i način ishrane pacijenta; vreme primene, ruta primene, i brzina izlučivanja specifičnog korišćenog jedinjenja, trajanje terapije; lekovi korišćeni u kombinaciji ili istovremeno sa specifičnim korišćenim jedinjenjem; i slični faktori dobro poznati u medicini.
[0110] Ukupna dnevna doza jedinjenja prema ovom pronalasku koja je data čoveku ili drugoj životinj u jednoj ili u podeljenim dozama može da bude u količinama, na primer, od 0,01 do 50 mg/kg telesne težine ili više obično od 0,1 do 25 mg/kg telesne težine. Jedinjenja pojedinačne doze mogu da sadrže takve količine ili njihove višestruke podkoličine da nadoknade dnevnu dozu. Generalno, režimi lečenja prema ovom pronalasku sadrže primenu pacijentu kome je potrebno takve terapije od oko 10 mg do oko 1000 mg jedinjenja ovog pronalaska na dan u jednostrukoj dozi ili u višestrukim dozama.
[0111] Jedinjenja prema ovde opisanim formulama mogu, na primer, da se administriraju ubrizgavanjem, intravenozno, intraarterijski, potkožno, intraperitonealno, intramuslukarlno, ili potkožno; ili oralno, bukalno, nazalno, transmukozalno, topikalno, u oftalmološkom preparatu, ili inhaliranjem, doze koje se kreće od oko 0,1 do oko 500 mg/kg telesne težine, alternativno između 1 mg i 1000 mg/doze, svaka 4 do 120 sati, ili prema zahtevima određenog leka. Ove metode razmatraju davanje delotvorne količine leka jedinjenja ili supstance jedinjenja da se dostigne željeno ili navedeno dejstvo. Obično, farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku će se primeniti od oko 1 do oko 6 puta dnevno ili alternativno, kao kontrinualna infuzija. Takva primena može da se koristi kao hronična ili akutna terapija. Količina aktivnog sastojka koja može da se kombinuje sa farmaceutskim ekscipijentima ili nosačima da se proizvede jedan oblik doze će se razlikovati zavisno od stanja koje se leči i određenog načina primene leka. Uobičajen preparat će sadržati od oko 5% do oko 95% aktivnog jedinjenja ((w/w)masenog procenta). Obično, takvi preparati mogu sadržati od oko 20% do oko 80% aktivnog jedinjenja.
[0112] Niže ili više doze od onih koje su gore navedene mogu biti potrebne. Specifični režimi doze i terapije za svakog specifičnog subjekta će zavisiti od raznovrsnih faktora, uključujući aktivnost specifičnog korišćenog jedinjenja, starosnu dob, telesnu težinu, opšte zdravstveno stanje, pol, dijetu, vreme primene, brzinu izlučivanja, kombinaciju leka, ozbiljnost i tok bolesti, stanje ili simptome, pacijentov odnos prema bolesti, stanju ili simptomima, i procenu nadležnog lekara.
[0113] Posle poboljšanja pacijentovog stanja, doza za održavanje jedinjenja, supstance jedinjenja ili kombinacije iz ovog pronalaska može da se primenjuje, ako je potrebno. Shodno tome, doza ili frekvencija primene, ili oba, mogu da se smanje, kao funkcija simptoma, do nivoa na kom se poboljšano stanje zadržava kada su simptomi ublaženi do željenog nivoa. Pacijent može, međutim, da zahteva lečenje sa prekidom na dugoročnoj bazi posle ponovne pojave simptoma bolesti.
PRIMERI
[0114] Jedinjenja i postupci prema ovom pronalasku će se bolje razumeti u vezi sa sledećim primerima, koji su uzeti samo kao ilustracija a ne i za ograničenje obima ovog pronalaska. Različite promene i izmene na opisanim izvođenjima će biti očigledne stručnjaku ovoj oblasti i takve promene i modifikacije uključujući, bez ograničenja, one koje se odnose na hemijske strukture, supstituente, derivate, formulacije, i/ili postupke prema ovom pronalasku mogu da se naprave bez udaljavanja od duha ovog pronalaska i obima pridodatih patentnih zahteva. Bilo koja tema koja nije obuhvaćena obimom priloženih patentnih zahteva ne čini deo pronalaska i ona je samo ilustrativno prikazana.
[0115] Sinteza Jedinjenja 1 i njihove soli metansulfonata, natrijuma, kalijuma i holina se ilustruje na šemama ispod
Intermedijar 107-1 ili 107-2 može da se pripremi reagovanjem 106 sa bilo R-2-1 ili R-2-2, respektivno. Šeme sinteze za sintezuu R-2-1 i R-2-2 su ilustrovane dole:
Ili alternativnim postupkom:
Intermedijar 108-1 i 108-2 može da se prirpemi reakcijom spajanja 107-1 ili 107-2 sa bilo R-3-1 ili R-3-2, gde R-3-1 i R-3-2 može da se pripremi priprema u skladu sa sledećom šemom:
PRIMER 1: Priprema N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid (Jedinjenje 1)
Korak a: (Z)-etil-2-(etoksimetil)-3-metoksiakrilat (Jedinjenje 202)
[0116] Natrijum (40,9 g, 1,78 mol) je dodato u etanol (750 mL) u delovima pažljivo i rastvor je koncentrovan da da NaOEt prah pošto nestane sav natrijum metal. Tokom mešanja, heksan (1.0 L) je dodat i mešavina je ohlađena ledenom vodenom kupkom. Mešavina 201 (130 g, 0,89 mol) i etil format (131 g, 1,78 mol) je dodata ukapavanjem na 0-5°C. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Dimetil sulfat (224 g, 1,78 mol) je dodat ukapavanjem uz hlađenje kupkom od ledene vode. Dobijena mešavina je zagrejana na 50°C tokom 2 h. U mešavinu je dodat trietilamonijak hlorid (122 g) i natrijum hidroksid (20 g). Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata i filtrira. Filtrat je opran vodom i osušen iznad Na2SO4. Koncentrovan je da se dobije jedinjenje navedeno u naslovu (140 g, 37%) kao bezbojno ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. Korak b: Etil 2-okso-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-5-karboksilat (Jedinjenje 203)
[0117] Mešavina jedinjenja 202 (140 g, 0,745 mol), uree (40,0 g, 0,697 mol), i koncentrovane hlorovodonične kiseline (34 mL) u etanolu (500 mL) je zagrejana na refluksu tokom noći. Posle isparavanja 50% zapremine reakcije, dobijena kao rezultat suspenzija je filtrirana, oprana malom količinom etanola, i osušena da da jedinjenje 203 (47 g, 37%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: 171 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): 1,19 (t, J= 7,2 Hz , 3H), 3,92 (s, 2H), 4,08 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 7,0 (s, 1H), 7,08 (d, J = 6,0 Hz , 1H), 8,83 (d, br, J= 4,8 Hz, 1H).
Korak c: Etil 2-okso-1,2-dihidropirimidin-5-karboksilat (Jedinjenje 204)
[0118] Rastvoru jedinjenja 203 (47 g, 280 mmol) u sirćetnoj kiselini (500 mL) je dodat bromin (49,0 g, 307 mmol). Mešavina je zagrejana na refluksu tokom 2 h, ohlađena na sobnoj temperaturi, još ohlađena na 0-5°C i filtrirana da se dobije jedinjenje prema naslovu 204 kao žuta čvrsta supstanca (38 g, 54%). LCMS: 169 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, D2O): 1,28 (t, J = 7,2 Hz , 3H), 4,32 (q, J= 7,2 Hz , 2H), 9,00 (br, s, 2H).
Korak d: Etil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (Jedinjenje R-2-1)
[0119] Mešavina jedinjenja 204 (38,0 g, 153 mmol) i fosforil trihlorida (300 mL) i N,N-dimetilanilina (3 mL) je zagrejana na refluksu tokom 2 sata, ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana. Ostatak je ugašen pažljivo ledenom vodom, podešena je pH vrednost na 7-8 sa natrijum karbonatom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovane organske materije su oprane ledenom vodom i slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4, ispareni, i prečišćeni hromatografijom u koloni (isprani sa EtOAc/heksanima, 10%) da se dobije jedinjenje R-2-1 (15 g, 52%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: 187 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): 1.36 (t, J = 7.5 Hz , 3H), 4.39 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 9.08 (s, 2H).
Korak e: Natrijum (Z)-2-(dimetoksimetil)-3-metoksi-3-oksoprop-1-en-1-olat (Jedinjenje 206)
[0120] Mešavina NaH (27 g, 60% u mineralnom ulju, 0,675mol) i anhidrovanog 1,2-dimetoksietana (300 mL) je zagrejana na 40-50 ºC i metil 3,3-dimetoksi propionat (205) (100 g, 0,675 mol) je dodat ukapavanjem. Dobijena mešavina je mešana tokom 0,5 h i anhidrovani metil format (81 g, 1,35 mol) je dodat ukapavanjem na 40-50 ºC. Dobijena mešavina je mešana na 40-50 ºC (unutrašnja temperatura) tokom 2 sata pre nego što je ohlađena na 0 ºC. Reakciona mešavina je zatim ostavljena da se zagreje do 25 ºC i mešana je tokom noći. Et2O (150 mL) je dodata i mešana tokom 30 min. Dobijena suspenzija je filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana Et2O (700 mL) i prikupljena i osušena da bi se dobilo jedinjenje prema naslovu 206 (82 g, 61%) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 130,8 [M+1]<+>.<1>HNMR (400 MHz, CD3OD): 3.36 (s, 6H), 3.60 (s, 3H), 5.34 (s, 1H), 8.92 (s, 1H).
Korak f: 2-amino-pirimidin-5-karboksilna kiselina metil estar (Jedinjenje 207)
[0121] Mešavina jedinjenja guanidin hidrohlorida (42,2 g, 0,44 mol) u DMF (300 mL) je dodata jedinjenju 206 (80 g, 0,40 mol). Dobijena mešavina je zagrejana na 100 ºC tokom 1 sat. Reakciona mešavina je filtrirana pre nego što je ohlađena. Filtrirana pogača je oprana sa 50 mL DMF-a i kombinovani filtrat je koncentrovan da ostavi ostatak koji je držan u suspenziji u hladnom EtOH i opran hladnim EtOH (50 mL) da se dobije jedinjenje 207 (38 g, 61,5%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 154,2 [M+1]<+>, 195,1[M+42]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): 3.88 (s, 3H), 8.77 (s, 2H).
Korak g: Metil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (Jedinjenje R-2-2)
[0122] Jedinjenje 207 (7 g, 0,046 mol) je dodato u mešavinu koncentrovane hlorovodonične kiseline (15,2 mL) i CH2Cl2(60 mL). Posle hlađenja, ZnCl2(18,6 g, 0,138 mol) je dodat na 15-20 °C. Mešavina je mešana na 15-20 °C za 0,5 h i ohlađen do 5-10°C. NaNO2 (9,5 g, 0,138 mol) je dodat u delovima uz održavanje unutrašnje temperature 5-10 ºC. Reakcija je nastavljenatokom 2 sata, reakciona mešavina je sipana u ledeno hladnu vodu (50 mL). Organski sloj Organski sloj je odvojen, i vodena faza je ekstrahovana sa CH2Cl2(30 mL*2). Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani da se dobije sirovi proizvod (4,2 g). Sirovo jedinjenje je držano u suspenziji heksana (20 mL), zagrejano na 60 ºC tokom 30 minuta i filtrirano. Filtrat je koncentrovan da se dobije jedinjenje prema naslovu R-2-2 (3,5 g, 44,4 %) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 214,1[M+42]<+>.<1>HNMR (400 MHz, CDCl3): 4.00 (s, 3H), 9.15 (s, 2H).
Korak h: 5-bromo-2-metoksipiridin (Jedinjenje 303)
[0123] Rastvor 2-metoksi-piridina (100 g, 0,92 mol), NBS (180 g, 1,0 mol) u acetonitrilu (1,0 L) je mešan na refluksu tokom 21 h. TLC je pokazao da je reakcija bila završena. Reakciona mešavina je zatim ohlađena do sobne temperature i koncentrovana 900 ml rastvarača je prikupljeno. Dobijena suspenzija je filtrirana i oprana sa n-heksanom ( 400 mL) Filtrat je koncentrovan ponovo da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvod je destilovan pod smanjenim pritiskom (30°C/ 0,3 mmHg) da se dobije jedinjenje prema naslovu kao bistro ulje (146 g, prinos 84%). LCMS (m/z): 190,0 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): 3.90 (s, 3H), 6.65 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62 (dd, J= 8.8 Hz, 2.4Hz, 1H), 8.19 (s, 1H).
Korak i: 6-metoksipiridin-3-ilboronska kiselina (R-3-1):
[0124] U rastvor jedinjenja 303 (20 g, 0,11 mol) u anhidrovanom THF (180 ml) je dodat ukapavanjem n-BuLi (59 mL, 2M u THF) na -78 °C, dobijena mešavina je mešana tokom 1 h. Triizopropil borat (37mL) je dodat na -78 °C i rekaciona mešavina je zagrejana do sobne temperature i nastavljeno je mešanje tokom noći. TLC (heksani/etil acetat =5:1) je pokazao reakciju završenom. Mešavini je podešena pH vrednost na 3-4 sa 4N HCl (90 ml). Talog je prikupljen filtriranjem da se dobije sirovo jedinjenje R-3-1 (21 g, 128%). Sirovo jedinjenje R-3-1 (21g) je rastovreno u vodi (200 ml) i rastvoru je podešena pH vrednost na 8-9 sa koncentrovanim rastvorom amonijaka, talog je prikupljen filtriranjem da se dobije jedinjenjae prema naslovu u čistom obliku R-3-1 kao bela čvrsta supstanca. (11 g, 67%). LCMS (m/z): 154,1 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 3.86 (s, 3H), 6.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.99 (dd, J = 8.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 8.05 (br, 2H), 8.52 (d, J = 2.0 Hz, 1H).
Korak j: 2-metoksi-5-(4,4,5,5,-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (Jedinjenje R-3-2)
[0125] Mešavina jedinjenja 303 (55 g, 0,29 mol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil -2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (90 g, 0,35 mol), kalijum acetat (57 g, 0,58 mol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorid (2,2 g, 3 mmol) u anhidrovanom dioksanu (500 mL) je zagrejan na 108°C pod atmosferom N2 tokom noći. Reakciona mešavina je koncentrovana i prečišćena hromatografijom u koloni eluiranom sa heksanim/etil acetatom da se dobije jedinjenje prema naslovu R-3-2 (58 g, 84 %)..
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 1.30 (s, 12H), 3.88 (s, 3H), 6.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.0 Hz, 2.0Hz, 1H), 8.41 (d, J = 2.0Hz, 1H).
Korak k: Tieno[3,2-d]pirimidin-2,4(1H,3H)-dion (Jedinjenje 102)
[0126] Postupak sa ureom: Mešavina metil 3-aminotiofen-2-karboksilata (101) (90,0 g, 573 mmol, 1,0 eq) i uree (277.6 g, 4,6 mol, 8,0 ekv.) je zagrejan na 190°C za 3-4 h i ohlađen na sobnoj temperaturi. U reakcionu mešavinu je dodata voda NaOH (10%, 800 mL). Posle mešanja na temperaturi ambijenta tokom 1 sat, čvrsta supstanca je uklonjena filtriranjem. Filtrat je acidifikovani sa HCl na pH 3-4, talogom stvorena čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem, oprana vodom i osušena in vacuo da se dobije proizvod željenog jedinjenja 102 kao beličasta čvrsta supstanca (87 g, 89%). m.p.:280-285°C. LCMS (m/z): 169,0 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO- d6): 6.92 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 11.0-11.5 (br, 2H).
[0127] Postupak sa KOCN: U mešavinu 3-aminotiofen-2-karboksilata (101) (100,0 g, 636,9 mmol, 1,0 ekv.), sirćetne kiseline (705 mL) i vode (600 mL) je dodat rastvor kalijum cijanata (154,8 g, 1,91 mol, 3,0 eq) u vodi (326 mL) lagano tokom perioda od 1 h. Dobijena mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 h, filtrirana i isprana vodom (500 mL). Pogačom je napunjen reaktor odgovarajuće veličine i 2 M vodenog rastvora natrijum hidroksida (1.65 L) je dodato, ova emulzija je mešana tokom 2 h i LCMS je potvrdio formiranje željenog proizvoda. Mešavina je ohlađena na 10°C i 3 M vodene hlorovodonične kiseline (1,29 L) je dodato sve dok pH = 5,0 6,0. Ova emulzija je filtrirana, isprana vodom (700 mL), i osušena u vakuumskoj rerni na 50°C tokom 24 h da se dobije jedinjenje 102 (100 g, 94%) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 169,1 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 6,92 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,04 (d,J = 5,2 Hz, 1H), 11,14 (s, 1H), 11,51 (s, 1H).
Korak 1: 2,4-dihlorotieno[3,2-d]pirimidin (Jedinjenje 103)
[0128] Fosforni oksihlorid (152 mL, 1,67 mol, 7,0 ekv) je dodat lagano u hladni rastvor jedinjenja 102 (40 g, 238 mmol, 1,0 ekv) i N,N-dimetilanilin (22,5 mL, 179 mmol, 0,75 ekv.) u acetonitrilu (250 mL) dok je temperatura održavana ispod 20°C. Mešavina je zagrejana na 85°C i mešana tokom 24 h. Reakciona mešavina je ohlađena do 15°C, i zatim je sipana lagano na mešavinu leda i hladne vode (360 mL). Dobijena emulzija je filtrirana, isprana hladnom vodom (200 mL). Pogača je osušena u vakumskoj rerni na 40°C tokom 24 h da se dobije jedinjenje 103 (40,5 g, 83%) kao beličasta čvrsta supstanca. M.p.:245-250°C. LCMS (m/z): 205,0 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 7.75 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 5.2 Hz, 1H).
Korak m: (2-hloro-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin (Jedinjenje 104)
[0129] U mešavinu jedinjenja 103 (34,2 g, 167 mmol, 1,0 ekv) i metanola (500 mL) je dodat morfolin (31,2 mL, 367 mmol, 2,2 ekv.) lagano. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Talog je prikupljen filtriranjem, opran metanolom i osušen in vacuo da se dobije jedinjenje željenog proizvoda 104 kao svetložuta čvrsta supstanca (39 g, 91%). M.p.: 250-255°C. LCMS (m/z): 256,0 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 3.76 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.92 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 7.42 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.32 (d, J= 5.2 Hz, 1H).
Korak n: 2-hloro-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-karbaldehid (Jedinjenje 105)
[0130] U suspenziju jedinjenja 104 (20 g, 78,4 mmol, 1,0 ekv) u THF (anhidrovani, 320 mL) na -78°C je dodat n-BuLi (u heksanima, 2,4 M, 40,8 mL, 102 mmol, 1,3 ekv) lagano pod azotom. Dobijena emulzija je ostavljena da se zagreva do -60°C da se pretvori u bistar braon rastvor. Dobijena mešavina je ohlađena do -78°C i DMF (anhidrovanog, 9,1 mL, 118 mmol, 1,5 ekv.) je dodat polako. Dobijeni rastvor je mešan na -78°C tokom 0,5 sati, zagrejan do 0°C tokom 1 h i sipan lagano u mešavinu vodenog HCl (0,25 M, 660 mL) i ledene vode (320 mL). Dobijena emulzija je mešana na 0-10°C tokom 0,5 h, filtrirana, isprana hladnom vodom i osušena u in vacuo da se dobije jedinjenje 105 kao žuta čvrsta supstanca (22 g, 98%). M.p.:260-265°C. LCMS (m/z): 284.0 [M+1]<+ 1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 3.77 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.96 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 8.30 (s, 1H), 10.21 (s, 1H).
Korak o: (2-hloro-4-morfolin-4-il-tieno [3,2-d] pirimidin-6-ilmetil) -metilamin (Uniti 106)
[0131] U rastvor jedinjenja105 (20,0 g, 70,4 mmol, 1,0 ekv) u metanolu (125 mL) je dodat rastvor metilamina u metanolu (27% v/v, 75 mL, 563,2 mmol ) pod atmosferom azota. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj sobnoj temperaturi tokom noći i rastvarač je uklonjen in vacuo da se dobije sirov proizvod u obliku čvrste supstance, koji je rastvoren u metanolu (550 mL) i THF (220 mL) pod nitrogenom. Natrijum borohidrid (8 g, 211, 2 mmol) je dodat u delovima i reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Reakciona mešavina je isparavana in vacuo i dodata je voda (300 mL). Vodena mešavina je ekstrahovana sa metilen hlorid i kombinovani ekstrakti su osušeni iznad Na2SO4 i koncentrovani. Ostatak je rastvoren u 6M HCl (230 mL) i mešan tokom 30 min. Vodeni rastvor je opran sa metilen hloridom tokom nekoliko puta, i podešen na pH 9-10 sa NaOH (4N). Nataložena čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem i osušena (60°C, 6 h) sa se dobije svetlo žuta čvrsta supstanca (18 g, 85%). M.p.: 240-245°C. LCMS (m/z): 299 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2.32 (s, 3H), 3.74 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.88 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.96 (s, 2H), 7.24 (s, 1H).
Korak p(a): 2-[(2-hloro-4-morfolin-4-il-tieno[3,2-d]pirimidin-6-ilmetil)-metil-amino]-pirimidin-5-karboksilna kiselina etil estar (Jedinjenje 107-1)
[0132] U mešavinu 106 (10 g, 33,6 mmol) i R-2-1 (6,8 g, 36,4 mmol) u CH3CN (400 mL) na sobnoj temperaturi je dodat diizopropiletilamin (220 mL, 1,26 mol). Dobijena mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Mešavina je zatim isparavana i posle toga je usledilo dodavanje metilen hlorida (300 mL). Organska faza je oprana vodom, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana u vakumu da ostavi ostatak. U ostatak je dodat etil acetat i dobijena mešavina je mešana na temperaturi led/vodene kupke tokom 50 min. Dobijena čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem da bi dala proizvod prema naslovu 107-1 kao belu čvrstu supstancu (10,6 g, 70%). LCMS: 449 [M+1]<+>.<1>H NMR(400 MHz, DMSO- d6): 1.30 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.71 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.83 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 4.29 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 7.39 (s, 1H), 8.87 (s, 2H).
Korak p(b): 2-[(2-hloro-4-morfolin-4-il-tieno[3,2-d]pirimidin-6-ilmetil)-metil-amino] -pirimidin-5-karboksilna kiselina metil estar (Jedinjenje 107-2)
[0133] Mešavina jedinjenja 106 (25 g, 84 mmol), CH3CN (500 mL) i R-2-2 (16 g, 92 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi. Diizopropiletilamin (DIPEA) (500 mL, 2,9 mol) je dodat. Rastvor je mešan tokom noći i isparavan. Pošto je dodat metilen hlorid (500 mL), organska faza je oprana vodom, osušena sa Na2SO4i koncentrovana in vacuo. U ostatak je dodat etil acetat (200 mL) i mešavina je mešana u ledu/vodenoj kupki tokom 50 min. Proizvod iz naslova je prikupljen kao bela čvrsta supstanca (29,4 g, 81%). LCMS (m/z): 435,2 [M+l]<+>.<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): 3.25 (s, 3H), 3.71 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.82-3.84 (m, 7H), 5.21 (s, 2H), 7.39 (s, 1H), 8.87 (s, 2H).
Korak q (a): Etil-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno [3,2-d]pirimidin- 6-il) metil) (metil)amino)pirimidin--5-karboksilat (Jedinjenje 108-1)
[0134] Metod A: Mešavina jedinjenja 107-1 (12 g, 26,7 mmol), R-3-1 (4,9 g, 32 mmol), NaHCO3(6,7 g, 80,1 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (188 mg, 0,267 mmol) u mešavini rastvorenog toluena (80 ml), etanola (50 ml) i voda (10 ml) je zagrejan na 108°C tokom 4,5 h pod atmosferom N2. TLC pokazao je da je reakcija završena. Reakciona mešavina je zatim ohlađena do sobne temperature i dodata je voda (20 ml). Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana i držana u suspenziji i etanolu (100 mL). Suspenzija je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 sata i filtrirana. Prikupljena čvrsta supstanca je oprana sa etanolom i osušena in vacuo da se dobije jedinjenje prema naslovu 108 -1 kao bela čvrsta supstanca (10g, 72%).
[0135] Metod B: Mešavina jedinjenja 107-1 (1,5 g, 3,34 mmol), R-3-2 (1,6 g, 6,68 mmol), NaHCO3(0,84 g,10,0 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (118 mg, 0,167 mmol) u mešavini rastvarača toluena (24 ml), etanola (15 ml) i voda (3 ml) je zagrejan na 108°C tokom pod atmosferom N2. Reakciona mešavina je podeljena između dihlorometana i vode. Organski sloj je odvojen, opran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i isparavan in vacuo da bi dao ostatak koji je prečišćen hromatografijom u stubu eluiran sa heksanima/etil acetatom da se dobije jedinjenje 108-1 kao bela čvrsta supstanca (1,7 g, 98 %).
[0136]m.p.198-202°C. LCMS: 522,30 [M+1]<+>.<1>H NMR(400MHz, DMSO-d6): 1.31 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.76 (t, J= 4.4 Hz, 4H), 3.93 (t, J= 4.4 Hz, 4H), 3.94 (s, 3H), 4.30 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 5.24 (s, 2H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz,
1H), 7.47 (s, 1H), 8.57 (dd, J = 8.8 Hz, 2.0Hz, 1H), 8.88 (s, 2H), 9.15 (d, J = 2.0 Hz, 1H).
Korak q(b): Metil-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno [3,2-d]pirimidin- -6-il) metil) (metil)amino)pirimidin--5-karboksilat (Jedinjenje 108-2)
[0137] U mešavinu jedinjenja 107-2 (20 g, 46,0 mmol), B-3-1 (9,2 g, 60,2 mmol, 1,3 ekv.) u dioksanu (540 mL) na sobnoj temperaturi je dodata čvrsta supstanca NaHCO3(11,6 g, 138,1 mmol, 3 ekv.) posle čega je usledilo dodavanje vode (40 mL). Ova dobijena mešavina je degasovana provlačenjem N2kroz površinu rastvora. Bis(trifenilfosfin) paladijum(II) hlorid (323 mg, 0,46 mmol, 0,01ekv.) je zatim dodat i dobijena mešavina je zagrejana na 108°C tokom 15 h.
TLC i LCMS pokazao da je reakcija završena. Reakciona mešavina je filtrirana kroz Celite dok je i dalje bila vruća (>90°C) i isprana sa dioksanom (70 mL). Filtrat je ohlađen postepeno do sobne temperature i beli fini kristali su formirani tokom perioda hlađenja.. Suspenzija je filtrirana i oprana dioksanom (80 mL) da se dobije jedinjenje prema naslovu 108-2 kao bela čvrsta supstanca (18g, 78%). LCMS (m/z): 508,3 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 3.28 (s, 3H), 3.76 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 3.82 (s, 3H); 3.92 (m, 4H), 3.93 (s, 3H), 5.20 (s, 2H), 6.91 (d, J = 8.8Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 8.57 (dd, J= 8.8Hz, 2.4Hz, 1H), 8.88 (s, 2H), 9.15 (d, J = 2.0Hz, 1H).
Korak r: N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-yl)-4-morfolinotieno[3,2-d] pirimidin-6-il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid (Jedinjenje 1) Priprema rastvora hidroksilamin metanola
,
[0138] Mešavina NH2OH.HCl (80 g, 1,12 mol) u MeOH (400 mL) je zagrejana na 60-65 °C tokom 1h da bi se formirao bistar rastvor. Zatim je ohlađena u kupki ledene-vode. U hladnu mešavinu je dodat rastvor KOH (96 g, 1,68 mol) u MeOH (240 mL) ukapavan dok je održavana reakciona temperatura na 0-10 °C. Dobijena mešavina je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i zatim je filtrirana kroz točir sa konstantnim pritiskom napunjena anhidrovanim Na2SO0 (700 g). Filtrat je prikupljen pod ledenom-kupkom i čuvan u frižideru za buduću upotrebu.
Priprema Jedinjenja 1 iz jedinjenja 108-1
[0139] Jedinjenje 108-1 (10 g, 19 mmol) je držano u suspenziji u gornjem sveže pripremljenom rastvoru hidroksilamin metanola (1,79M, 350 ml). U ovu mešavinu je dodat dihlorometan (100 mL). Reakciona laboratorijska boca okruglog dna je zaptivena i mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h pre nego što je pretvorena u bistar rastvor. Reakcioni rastvor je mešan dodatnih 9 sati i filtriran da ukloni bilo kakvu nerastvorljivu čvrstu supstancu. Filtrat je podešen na pH 6-7 uz dodavanje sirćetne kiseline da se dobije čvrsti talog. Čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem i oprana vodom i minimalnom količinom metanola, osušena in vacuo na 60°C tokom 5 h da se dobije jedinjenje 1 kao bela čvrsta supstanca (9,2 g, 96%). m.p. 177-180°C. LCMS: 509,3 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 3.24 (s, 3H), 3.76 (t, J = 5 Hz, 4H), 3.92 (t, J = 5 Hz, 4H), 3.92 (s, 3H), 5.20 (s, 2H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 8.57 (dd, J = 8.8 Hz, 2.4Hz, 1H), 8.75 (s, 2H), 9.01 (s, 1H), 9.14 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 11.08 (s, 1H).
Priprema Jedinjenja 1 iz jedinjenja 108-2
[0140] U suspenziju jedinjenja 108-2 (31 g, 61.1 mmol) u dihlorometanu (310 mL) na sobnoj temperaturi doda se iznad sveže pripremljenog rastvora hidroksilamin metanola (1.79M, 744 ml). Reakciona posuda je zapečaćena i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakciona smeša je postala bistar rastvor. Reakcioni rastvor je filtriran da bi se uklonila svaka nerastvorna čvrsta supstanca. Filtratu je zatim dodana voda (310 mL) i tokom dodavanja nije formirana čvrsta supstanca. Dodata je sirćetna kiselina (18.5 mL) da bi se pH podesio na 10.20 (kontinualno praćen pomoću pH metra) uz mešanje. Nije bilo unutrašnje promene temperature tokom dodavanja sirćetne kiseline. Rezultujuća reakciona smeša je nastavljena da se meša još 4 h. Postepeno se formirala bela čvrsta masa. Suspenzija je filtrirana i isprana sa minimalnom količinom metanola (100 mL k 3). Sakupljena bela čvrsta supstanca je ponovo suspendovana u metanolu (620 mL) i vodi (124 mL) da bi se formirala suspenzija. U gore navedenu suspenziju dodata je još sirćetne kiseline (11 g) da se podesi pH na 5-6. Uočena je promena čvrstog oblika. Suspenzija je nastavljena da se meša još 2 h i filtrirana kroz filter papir i isprana sa minimalnom količinom metanola (100 mL k 3). Sakupljena bela čvrsta supstanca je sušena u peći (50 ° C) tokom 12 h da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 1 kao bela čvrsta supstanca (23.6 g, 76.0%). m. p .: 255-259 ° C. LCMS (m / z): 509.3 [M l] .
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 83.24 (s, 3H), 3.76 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.92 (t, J = 5.2Hz, 4H), 3.92 (s, 3H), 5.20 (s, 2H), 6.91 (d, J = 8.4Hz, IH), 7.45 (s, IH), 8.57 (dd, J = 8.4Hz, 2.4Hz, IH), 8.75 (s, 2H), 9.07 s, IH), 9.14 (d, J = 2.4Hz, IH), 11.14 (s, 1H).
[0141] Metod A: U mešavinu Jedinjenja 1 (300 mg, 0,59 mmol) i MeOH/Et2O (3/1, 40 mL) je dodat rastvor metanesulfonske kiseline (114 mg, 1,18 mmol) u MeOH (3 mL) na 0°C. Dobijena mešavina je mešana na 0°C tokom 3 h. Talog je prikupljen filtriranjem i opran sa Et2O da se dobije Jedinjenje 2 kao bela čvrsta supstanca (260 mg, 73%).
[0142] Metod B: Suspenziji Jedinjenja 1 (1,5 g, 2,95 mmol) u dihlorometanu/MeOH (40 mL/10 mL) je dodata metansulfonska kiselina (341 mg, 3,55 mmol, u 2 mL MeOH) na sobnoj temperaturi (15ºC) da se dobije bistar rastvor. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Reakciona mešavina je i dalje bila bistra. Etil acetat (40mL) je dodat u mešavinu i nastavljeno je mešanje tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni talog je prikupljen filtriranjem filtriranjem da se dobije Jedinjenje 2 kao bela čvrsta supstanca (1,45g, 83%).
[0143] m.p.: 179-185 °C. LCMS: 509,3 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 2.35 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 3.78 (t, J = 9.6 Hz, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.03 (t, J = 9.2 Hz, 4H), 5.24 (s, 2H), 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 8.54 (dd, J = 8.8 Hz, 2.4 Hz, 1H), 8.76 (s, 2H), 9.12 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 11.11 (br, 1H).
PRIMER 3: Priprema N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid natrijum so (Jedinjenje 3)
[0144] Suspenziji Jedinjenja 1 (300 mg, 0,59 mmol) u metanolu (30 mL) na 0°C je dodatlagano t-BuONa (85 mg, 0,88 mmol). Dobijena mešavina je zagrejana na sobnu temperaturu i nstavljeno je mešanje tokom 2 h. Reakciona mešavina je koncentrovana i ostatak je triturisan i opran etanolom posle čega je usledilo filtriranje da se dobije Jedinjenje 3 kao bela čversta supstanca (230 mg, 73%). m.p.: 178-183 °C. LCMS: 509,3 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 3.17 (s, 3H), 3.75 (s, 4H),3.92 (s,7H),5.16 (s, 2H), 6.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (s,1H),8.57 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.65 (s, 2H), 9.14 (s, 1H).
PRIMER 4: Priprema N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d] pirimidin-6-il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid kalijum soli (Jedinjenje 4)
[0145] Mešavini Jedinjenja 1 (400 mg, 0,78 mmol) u metanolu (50 mL) je dodat t-BuOK (132 mg, 1,17 mmol) na 0°C pod N2. Mešavina je mešana na 0°C tokom 1h i nastavljeno je mešanje na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h. Nerastovrljiva čvrsta supstanca je uklonjena filtriranjem i filtrat je ohlađen do -20°C. Et2O (100 mL) je dodat u filtrat. Dobijeni rastvor je mešan na -20°C tokom 1 sat. Heksani (70 mL) su dodati i mešavina je mešana neprestano na -20°C tokom 2 h. Čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem i osušena in vacuo da se dobije Jedinjenje 4 kao bela čvrsta supstanca (150 mg, 35%). m.p.: 174-179°C. LCMS: 509.3[M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): β3.16 (s, 3H), 3.74-3.76 (m, 4H), 3.90-3.93 (m, 7H), 5.15 (s, 2H), 6.90 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 8.39 (br, 1H), 8.58 (d, J = 8.8Hz, 1H), 8.62 (s, 2H), 9.15 (s, 1H).
PRIMER 5: Priprema N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid holin so (Jedinjenje 5)
[0146] Rastvoru jedinjenja 1 (200 mg, 0,39 mmol) u DCM/MeOH (60 mL/12 mL) je dodat holin hidroksid (106 mg, 0,39 mmol, 45% u MeOH). Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata i zatim je koncentrovana da se ukoni β 30 mL rastvarača. Etil acetat (60 mL) je dodat i mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Posle male količine formiranog taloga, mešavina je koncentrovana da se ukloni β~ 40 mL rastvarača i dodatni etil acetat (60 mL) je dodat Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h i filtrirana da se dobije Jedinjenje 5 kao bela čvrsta supstanca (180 mg, 76%). m.p.: 181-185°C. LCMS: 509,3[M+1]<+>.<1>H NMR (400MHz, DMSO- d6): β3.11 (s, 9H), 3.17 (s, 3H), 3.40 (t, J = 4.8Hz, 2H), 3.75 (t, J = 4.8Hz, 4H), 3.84 (br, 2H), 3.90-3.93 (m, 7H), 5.15 (s, 2H), 6.89 (d, J = 8.8Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 8.57 (dd, J = 8.8Hz, 2.4Hz, 1H), 8.64 (s, 2H), 9.14 (d, J = 2.0Hz, 1H).
PRIMER 6: Priprema N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d] pirimidin-6-il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid sulfata (Jedinjenje 6)
[0147] Rastvoru jedinjenja 1 (200 mg, 0,39 mmol) u DCM/MeOH (30 mL/7,5 mL) je dodata sumporna kiselina (77 mg, 0,79 mmol, u 1 mL MeOH) da se formira bistar rastvor. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Formiran je talog i dodat je tert-butil metil etar (60 mL). Dobijena mešavina je i dalje mešana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Talog je prikupljen filtriranjem da se dobije Jedinjenje 6 kao bela čvrsta supstanca (180 mg, 76%). M.p.: 243-246°C. LCMS: 509,3 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): β3.26 (s , 3H), 3.78 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.96 (s, 3H), 4.03 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 5.24 (s, 3H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.50 (s , 1H), 8.54 (dd, J = 8.8 Hz, 2.4 Hz, 1H), 8.76 (s, 2H), 9.12 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 11.06 (br , 1H).
Primer 7: Ogled za aktivnost PI3 kinaze
[0148] Sledeći ogledi su korišćeni da se odredi sposobnost Jedinjenja 1 da inhibira različite izoforme i mutante PI3K.
PI3K α
[0149] PI3K αaktivnost je izmerena korišćenjem ogleda ADP-Glo luminescentne kinaze. P13K α, kompleks N-terminalnog GST-om označenog rekombinantnog celom dužinom ljudskog p110 αi neoznačenog rekombinantnog celom dužinom ljudskog p85 su zajedno ispoljeni u baculovirusom inficiranom sistemu ispoljavanja Sf9 ćelije. (GenBank pristupni br. za p110 α, U79143; za p85 α, XM_043865). Proteini su prečišćeni afinitetnom hromatografijom iz jednog koraka korišćenjem glutation-agaroze. Konkurentni ogled je izveden da se izmeri količina ADP koja je generisana iz ATPu prisustvu prečišćenog rekombinantnog PI3K α(p110 α/p85 α) i PIP2. PI3K α je inkubirana sa 20 μM PIP2 supstrata u puferskom sredstvu reakcije (50 mM HEPES, pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM MgCl2, 3 uM Naortovanadat, 1 mM DTT, 10 μM ultra čist ATP i 0,5% DMSO) tokom 30 minuta na 30°C. ADP je generisan u reakciji i zatim je izmeren pomoću ADP-Glo ogleda. Ogled je izveden u dva koraka, prvo jednaka zapremina ADP-GLO™ Reagensa (Promega) je dodat da se završi reakcija kinaze i da se isprazni preostali ATP. U drugom koraku, dodat je reagens za detekciju kinaze, koji istovremeno pretvara ADP u ATP. Novo sintetisan ATP je izmeren korišćenjem spojene reakcije luciferaze/luciferina. IC50je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio manji od 100 nM. Sposobnost Jedinjenja 1 da inhibira PI3K αmutante H1047R i E545K je takođe određena korišćenjem opšteg gore opisanog postupka. IC50određen za oba mutanta je bio manji od 100 μm.
PI3Kβ
[0151] Aktivnost PI3K αje izmerena korišćenjem ogleda sa tranferom energije pomoću vremenski rešene fluorescencije (TR-FRET) korišćenjem tehnologije homogene vremenski rešene fluorescencije. P13K α kompleks N-terminalnog histidinom označenog rekombinantnog celom dužinom ljudskog p110 αi neoznačenog rekombinantnog celom dužinom ljudskog p85 α su zajedno ispoljeni u Sf21 sistemu ispoljavanja ćelije inficiranom Baculovirusom. (GenBank pristupni br. za p110 α, NM_006219; za p85 μ, XM_043865). Proteini su prečišćeni afinitetnom hromatografijom iz jednog koraka korišćenjem glutation-agaroze. Konkurentni ogled je izveden da se izmeri količina PIP3 koja je generisana iz PIP2 u prisustvu prečišćenog rekombinantnog PI3Kbeta(p110 αp85 α. PI3K α je inkubiran sa 10 mM PIP2 supstrata u puferskom sredstvu reakcije (20 mM HEPES, pH 7,5, 10 mM NaCl, 4 mM MgCl2, 2 mM DTT, 10 mM ATP i 1% DMSO) tokom 30 minuta na 30°C. Proizvod reakcije je bio zatim pomešan sa PIP3 proteinskim detektorom, europijumom-označeno antitelo, biotinom-označena PIP3 proba i alofikocijaninomoznačen Streptavidin. Kompleks senzora se formira da se generiše stabilan TR-FRET signal u reakcionoj mešavini. Intenzitet signala se smanjuje kako se biotinom označena sonda vezuje na PIP3 detektor je zamenjen sa PIP3 koji je proizveden enzimskom aktivnošću nevezane biotinom označene PIP3 sonde u mešavini se povećava. TR-FRET signal je određen korišćenjem čitača mikroploče sa pozadinskim oduzimanjem.
[0152] IC50je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio između 100 i 1000 μM.
PI3Kβ
[0153] Aktivnost PI3K δ je izmerena korišćenjem ogleda sa fluorescentnom polarizacijom. P13K δ kompleks N-terminalnog histidinom označenog rekombinantnog celom dužinom ljudskog p110i neoznačeni rekombinantni celom dužinom ljudski p85 αsu zajedno ispoljeni u Bacilovirusom inficiranog Sf9 sistem ispoljavanja ćelije. (GenBank pristupni br. za p110 δ, NM_005026). Proteini su prečišćeni afinitetnom hromatografijom iz jednog koraka korišćenjem glutation-agaroze. Konkurentni ogled je izveden da se izmeri količina PIP3 koja je generisana iz PIP2 u prisustvu prečišćenog rekombinantnog PI3K δ(p110 δ p85 α). PI3K δ je inkubiran sa 10 µM PIP2 podloga u reakcionom puferskom sredstvu (20 mM HEPES, (pH 7,5), 10 mM NaCl, 4 mM MgCl2, 2 mM DTT, 10 µM ATP i 1% DMSO) tokom 1 sat na 30°C. Reakcioni proizvod je zatim pomešan sa PIP3 detektorskim proteinom i fluorescentnom PIP3 sondom. Vrednosti polarizacije (mP) se smanjuju kako se fluorescentna sonda vezuje na PIP3 detektor je zamenjen sa PIP3, on koji proizvede enzimsku aktivnost i količinu nevezane fluorescentne sonde u mešavini se povećava. Vrednost stepenia polarizacije (mP) je određena korišćenjem čitača mikroploča sa pozadinskim oduzimanjem.
[0154] IC<50>je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio manji od 100 nM.
PI3K γ
[0155] Aktivnost PI3K γ je izmerena korišćenjem ogleda sa tranferom energije pomoću vremenski rešene fluorescencije (TR-FRET) korišćenjem tehnologije homogene vremenski rešene fluorescencije. N-terminalni histidinom označen ljudski P13K δ je ispoljen u Baculovirusom inficiranog sistema ispoljavanja ćelije Sf9. (GenBank pristup AF327656). Proteini su prečišćeni afinitetnom hromatografijom iz jednog koraka korišćenjem glutation-agaroze. Konkurentni ogled je izveden da se izmeri količina PIP3 koja je generisana iz PIP2 u prisustvu prečišćenog rekombinantnog PI3K γ(p120 γ. PI3K γ (2 nM) je inkubiran sa 10 µM PIP2 supstrata u puferskom sredstvu reakcije (20 mM HEPES, pH 7,5, 10 mM DTT, 10 µM ATP i 1% DMSO) tokom 30 minuta va 30°C. Proizvod reakcije je zatim pomešan sa PIP3 proteinskim detektorom, europijumomoznačeno antitelo, biotinom-označena PIP3 proba i alofikocijaninom-označen Streptavidin. Kompleks senzora se formira da se generiše stabilan TR-FRET signal u reakcionoj mešavini. Intenzitet signala se smanjuje kako se biotinom označena sonda vezuje na PIP3 detektor je zamenjen sa PIP3 koji je proizveden enzimskom aktivnošću nevezane biotinom označene PIP3 sonde u mešavini se povećava. TR-FRET signal je određen korišćenjem čitača mikroploče sa pozadinskim oduzimanjem.
[0156] IC50je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio između 100 i 1000 μM.
Primer 8: Ogled za aktivnost histonske deacetilaze (HDAC)
[0157] HDAC inhibitorna aktivnost je procenjena korišćenjem Biomol Color de Lys sistemom (AK-500, Biomol, Plymouth Meeting, PA). Kratko, nuklearni ekstrakt HeLa ćelije su korišćeni kao izvor HDAC. Različite koncentracije oglednih jedinjenja su serijski razblažene u dimetilsulfoksida (DMSO) i dodati su na nuklearne ekstrakte HeLa ćelije u prisustvu kolorimetrijske veštačke podloge. Krajnje stanje ogleda je sadržalo 50 mM Tris/Cl, pH 8,0, 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl i 1 mM MgCl2. Reakcije su nošene u sobnoj temperaturi (25°C) za 1 sat pre dodavanja razvijača za kraj. Relativna aktivnost enzima je izmerena u WALLAC Victor II 1420 čitača mikro ploče kao fluorescentnom intenzitetu (pobuđivanje: 350- 380 nm; emisija: 440-460 nm). Podaci su analizirani korišćenjem GraphPad Prism (v4.0a) sa sigmoidnim odgovorom na dozu podešavanje krivulje a IC50 kalkulacije. IC50je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio manji od 100 nM.
[0158] Aktivnosti Jedinjenja 1 protiv HDAC izotipa su takođe određeni. Ogledi za specifičnosti histonske deacetilaze (HDAC) su izvedeni BPS Bioscience (San Diego, CA), pridržavanjem njihove standardne procedure rada. Ukratko, prečišćena oznaka- (ljudski HDAC-1), NCOR2-(ljudski HDAC3), GST- (ljudski HDAC4, 6, 7, 10 i 11) ili His- (ljudski HDAC 2, 5, 8 i 9) označeni enzimi su ispoljeni u Sf9 ćelijama insekta i prečišćeni pre upotrebe. Supstrat korišćen za HDAC1, 2, 3, 6, 7, 8, 9 i 11 je bio supstrat 3 histonske deacetilaze (HDAC) koji je razvila kompanija BPS Bioscience. Za druge enzime histonske deacetilaze (HDAC), korišćen je supstrat HDAC klase 2a. Sve enzimske reakcije su sprovedene u duplikatu na 37ºC tokom 30 minuta, izuzev ogleda enzima HDAC11, koji je sproveden na sobnoj temperaturi tokom 3 sata.
[0159] Tabela u nastavku iznosi rezultate za svaki HDACs 1-11, sa IC50 vrednostima datim kao u nastavku: I > 1000 nM; 100 nM < II < 1000 nM; 10 nM < III < 100 nM; IV < 10 nM.
Primer 9: Ogled sa proliferacijom ćelija
[0160] Linije ćelije kancera kod čoveka su kupljene od kompanije American Type Culture Collection (Manassas, VA) i raspoređene na ploče na 5.000 do 10.000 po pregrardi na pločama sa ravnim dnom sa 96 pregrada, kako je naveo davalac usluge. Ćelije su zatim inkubirane sa jedinjenjima pri različitim koncentracijama tokom 72 sata u podlozi kulture dopunjene sa 0,5% (v/v) seruma goveđeg fetusa (FBS). Inhibiranje rasta je procenjeno u ogledu sa sadržajem adenozin trifosfata (ATP) korišćenjem Promega CellTiter-Glo kompleta. Promega CellTiter-Glo komplet je ATP sistem nadzora koji se zasniva na luciferazi svitaca. Ukratko, 16 µl rastvora za lizu ćelija sisara i rastvor supstrata je dodato u 84 µl podloge kulture po pregradi da se uradi liza ćelija i stabilizuje ATP. Ova mešavina je mešana i inkubirana tokom 30 minuta i posle toga je izmerena luminiscencija. IC50su izračunate korišćenja PRISM softvera (GraphPad Software) sa sigmoidnim podešavanjem krivulje prema odgovoru na dozu.
[0161] Tabela 1 pokazuje antiproliferativnu aktivnost u ovim ogledima na bazi ćelija za Jedinjenje 1 i referentna jedinjenja SAHA, GDC-0941 i kombinaciju SAHA i GDC-0941. U ovim ogledima, korišćeno je sledeće gradiranje. I > 10.000 nM, 10.000 nM II ≥1000 nM, 1000 nM > III ≥100 nM, 100 nM > IV ≥10 nM, i V < 10 nm za IC50.
Tabela 1
(nastavak)
(nastavak)
Primer 10: Formulacije Jedinjenja 1
a. Jedinjenje 1 u 30% Kaptisol (10 mg/mL):
[0162] U bočicu koja sadrži jedinjenje 1 (10 mg) je dodato 30% Kaptisola (0,937 ml). Ova mešavina je sonikatorom obrađena (pobuđena ultrazvučnim zvučnim talasima) tokom 2 min. Ovoj mešavini je dodat natrijum hidroksid (1 N, 39,3 µl, 2 ekv.) je sonikovana/vrtložno mešana da bi dala bistar rastvor (pH =12). Rastvor je zatim podešen na pH = 10 sa hlorovodoničnom kiselinom (1 N, 23,6 µl, 1,2 ekv.).
b. Jedinjenje 1 u 30% Kaptisol (7,5 mg/mL):
[0163] U bočicu koja sadrži jedinjenje 1 (7,5 mg) je dodato 30% Kaptisola (0,941 ml). Ova mešavina je sonikatorom obrađena (pobuđivana ultrazvučnim zvučnim talasima) tokom 2 min. Ovoj mešavini je dodat natrijum hidroksid (1 N, 29,5 µl, 2 ekv.) je sonikovana/vrtložno mešana da bi dala bistar rastvor (pH =12). Rastvor je zatim podešen na pH = 5 sa hlorovodoničnom kiselinom (1 N, 29,5 µl, 2 ekv.).
c. Jedinjenje 1 u C10/PEG1450/PEG400 (5 mg/mL):
[0164] U bočicu koja sadrži jedinjenje 1 (5 mg), natrijum dekanoata (20 mg), PEG400 (40 µl), i PEG1450 (40 mg) je dodato H2O (0,88 ml) i NaOH (1 N, 24.6 µl, 2,5 ekv.). Mešavina je obrađena sonikatorom i vrtložno mešana da bi dala bistar rastvor koji je zatim podešen na pH = 10 sa HCl (1 N, 7,4 µl, 0,75 ekv.).
Primer 11: Farmakokinetičke i farmakodinamičke studije na miševima koji nose tumor
Laboratorijski miševi koji nose tumore H2122
[0165] Laboratorijski miševi koji nose H2122 (liniju ćelija nesitnoćelijskog kancera pluća kod čoveka) ksenograft tumore su korišćeni za farmakokinetičke studije. Jedinjenje 1 je formulisano u vodi sa natrijum dekanoatom i PEG400 (5 mg/ml) i primenjeno oralno (PO) putem gavaže svakoj životinji u dozi od 50 mg/kg. U različitim vremenskim razmacima posle primene jedinjenja, tri miša po vremenskom trenutku su eutanizirana sa CO2, i prikupljeni su krv i tkiva tumora. Krva je prikupljena u epruvete koje sadrže natrijum heparin. Plazma je odvojena putem centrifugiranja. Plazma i tkiva su skladišteni na –80C za kasniju analizu. PE Sciex API-3000 LC-MS/MS sistem (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) je korišćen da analizira koncentracije jedinjenja u plazmi i tkviima koje je zahvatio tumor.
[0166] Rezultati ove studije su pregledno prikazani na Slici 1 i Tabeli 2, dole. Slika 1 je grafikon koncentracije jedinjenja 1 u plazmi i tkivu tumora naspram vremena posle oralne primene. Rezultati pokazuju da se Jedinjenje 1 preferencijalno akumulira u tkivu tumora. Ovo je podržano rezultatima iznetim u Tabeli 3, koji pokazuju značajno duži poluživot u Jedinjenju 1 u tkivu tumora nego u plazmi kao i značajno veću izloženost tkiva tumora na Jedinjenju 1 (AUC).
Tabela 2
SCID Miševi koji nose Daudi Tumore
[0167] Daudi (neHodžkinova linija ćelije limfoma) ćelije su ugrađene u ženske (ozbiljan kompleks nedostatka imunog sistema) miševe. Posle uspostavljanja tumora, životinjama su date doze oralne gavaže sa 25, 50 ili 100 mg/kg o. Jedinjenja 1, formulisanog u 30% Kaptisol, pH 10, pri koncentraciji od 1,875, 3,75 ili 7,5 mg/mL, respektivn
[0168] U različitim vremenskim razmacima posle primene jedinjenja, tri miša po vremenskom trenutku su eutanizirana sa CO2, i prikupljeni su uzorci krvi i tkiva tumora. Krv je prikupljena u epruvete koje sadrže natrijum heparin. Plazma je odvojena centrifugiranjem. Plazma i tkiva su skladišteni na –80C za kasniju analizu. PE Sciex API-3000 LC-MS/MS sistem (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) je korišćen da se analiziraju koncentracije jedinjenja u plazmi.
[0169] Rezultati ove studije su pregledno prikazani na Slikama 2A, 2B i 2C i Tabeli 3, dole. Slika 2A je grafikon koncentracije Jedinjenja 1 u plazmi naspram vremena posle oralne primene i pokazuje od doze zavisnu izloženost prema jedinjenju. Slika 2B je grafikon koncentracije Jedinjenja 1 u plazmi i tkivu tumora naspram vremena posle oralne primene. Rezultati pokazuju da se Jedinjenje 1 preferencijalno akumulira u tkivu tumora na način koji zavisi od primljene doze. Koncentracije plazme i tumora posle 100 mg/kg doze se porede na Slici 2C, koja pokazuje da tkivo tumora preferencijalno upija Jedinjenje 1. Ovo je podržano rezultatima iznetim u Tabeli 3, koji pokazuju značajno duži poluživot u Jedinjenju 1 u tkivu tumora nego u plazmi kao i značajno veću izloženost tkiva tumora Jedinjenju 1 (AUC).
Tabela 3
Farmakodinamika
[0170] Tumori su prikupljeni za PD evaluaciju posle terapije jednom dozom Jedinjenja 1 na 25 mg/Kg, 50 mg/kg i 100mg/kg. Protein je ekstrahovan iz tkiva tumora korišćenjem uređaja za lizu tkiva Tissuelyser (Qiagen, Valencia, CA) u skladu sa uputstvima proizvođača.30 ug proteina je rutinski korišćeno za WB analizu kako je gore opisano. Lizati ćelije su ponovo rastvoreni na NuPAGE Novex 4-12% Bis-Tris gelovima (Invitrogen) i preneti na nitrocelulosne membrane (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Dobijene mrlje su ispitivane sa različitim primarnim antitelima tokom noći na 4°C. GAPDH (gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaza, 1:30.000, Abcam, Cambridge, MA) je korišćen kao unutrašnja kontrola za svaki ogled. Membrane su zatim inkubirane sa infracrveno označenim sekundarnim antitelima (1:10000) conjugovanim-IR Dye800 (Rockland Immunochemicals, Inc. Gilbertsville, PA) očo konjugovanim-Alexa 680 (Invitrogen). Membrane su slikovno prikazane sa sistemom za infracrveno prikazivanje slikom Odyssey (Li-Cor Biotechnology, Lincoln, NE).
[0171] Rezultati ove studije su izneti na Slici 3, što predstavlja Western blotove ekstrakata tkiva tumora iz tri grupe doza. Ovi rezultati pokazuju da Jedinjenje 1 inhibira PI3K-AKT-mTOR putanju, suzbija RAF-MEK-ERK puteve, reguliše nivoe RTK proteina u donjem toku i nivoe potiskivača tumora p53 i p21 u gornjem toku.
Primer 12: Farmakokinetička studija na psima
[0172] Farmakokinetička studija Jedinjenja 1 na bigl-psima je takođe sprovedena korišćenjem iv primene na 5 mg/kg u vodi sa natrijum dekanoatom/PEG400 (5 mg/ml) i oralnu primenu na 5 mg/kg sa natrijum dekanoatom/PEG4000/PEG1450 (pH 10) u enteričnim kapsulama. Plazma je prikupljena u različitim vremenskim razmacima i analizirana za koncentraciju Jedinjenja1 pomoću LC-MS/MS. Rezultati ove studije su prikazani na Slici 4 i Tabeli 4, dole. Slika 4 je grafikon plazma koncentracije naspram vremena za oralno i iv doziranje. Značajni nivoi plazme Jedinjenja 1 su postignuti preko oralnog doziranja.
Tabela 4
Primer 13: Farmakokinetička studija na pacovima
[0173] Svrha ove studije je bila da odredi farmakokinetiku plazme Jedinjenja 1 kod mužjaka Sprague-Dawley pacova posle primene Jedinjenja 1.
[0174] Jedinjenje 1 je rastvoreno u 30% Kaptisola u vodi da se dobiju nominalne koncentracije 10 mg/mL (pH=10) za oralnu primenu. Dobijeni bistar žuti rastvor je skladišten na sobnoj temperaturi sve dok nije preuzet za doziranje.
[0175] U ovoj studiji su korišćena tri muška Sprague-Dawley pacova iz kompanije Charles River Laboratories. Ishrana sa dosta masnoće (VHFD, D12492i) iz Research Diets Inc. je data ad libitum tokom dela studije kada se ispitivanja vrše na živim organizmima. Jedinjenje 1 je primenjeno preko jedne oralne (PO) doze gavažom od 20 mg/kg.
[0176] Uzorci krvi (približna količina 150 µL) su uzeti iz vene iz repa na 0,25, 0,5, 1, 3, 6, i 24 sati posle doze. Uzorci krvi su stavljeni u epruvete koje sadrže natrijum heparin i centrifugirane na 8.000 ob/min tokom 6 minuta na 4°C da se odvoji plazma od uzoraka. Posle centrifugiranja, dobijena plazma je preneta na čiste epruvete i čuvana zamrznuta na -80°C do predstojeće bioanalize.
[0177] Koncentracije Jedinjenja 1 i njegovog primarnog metabolita u uzorcima plazme su određeni korišćenjem PE Sciex API-3000 LC-MS/MS sistema (PE-Sciex., Foster City, CA).
[0178] Farmakokinetički parametri su određeni na osnovu podataka srednjeg vremena koncentracije kod testiranih subjekata. Da bi se izračunali parametri korišćeno je modeliranj sa pregradama i to WINNONLIN® Professional 5.2. Bilo koje koncentracije koje su bile ispod granice kvantifikacije (donja granica kvantifikacije = 1 ng/mL) su izostavljene iz proračuna parametara kod pojedinačnih životinja.
[0179] Posle oralne primene Jedinjenja 1, srednje vrednosti Cmaxi Tmaxza Jedinjenje 1 su bile 39,5 μg/L i 0,1 hr, respektivno.Srednja vrednostAUC(0- ) je bila 163,6 μg/L*hr. Vrednost vremena poluraspada (T©) je bila 11,7 hr.
Primer 14: Procena Jedinjenja 1 na modelima ksenograft tumora
A. SU-DHL4, H2122, Daudi i OPM2 modeli ksenograft tumora
[0180] SU-DHL4 (difuzna velika B ćelija linija limfoma ćelijee), H2122 (human NSCLC cell line), Daudi (neHodžkinova linija ćelije limfoma) i OPM2 (linija ćelija tumora višestrukih mijeloma) ćelije su ugrađene u u bilo laboratorijski ili Scid ženske miševe (sa ozbiljnim nedostatkom imunog kompleksa). Posle uspostavljanja tumora, životinje sa dovoljnom veličinom tumora su nasumično raspoređene u aktivnu grupu (Jedinjenje 1) i kontrolnu (pomoćno sredstvo) grupu. Jedinjenje 1 je formulisano za oralnu primenu kao u Primeru 7(b), i isporučeno oralnom gavažom na osnovu telesne težine svake pojedinačne životinje. Kontrolne grupe su tretirane sa pomoćnim sredstvom korišćenjem istog rasporeda doziranja kao i odgovarajuća aktivna grupa.
[0181] H2122 tumor grupa (laboratorijski miševi) primila je Jedinjenje 1 u dozama od 75 mg/kg dvaput dnevno na početku a zatim 0 mg/Kg dvaput dnevno od 11. dana tokom pet dana po nedelji zbog gubitka telesne težine u dozi od 75 mg/Kg. U jednoj studiji, Daudi tumor grupa (Scid mice) je primila Jedinjenje 1 u dozama od 25, 50 ili 100 mg/Kg pet dana nedeljno. U drugoj studiji, Daudi tumor grupa je dozirana na 50 mg/Kg dvaput dnevno tokom pet dana nedeljno. U drugoj studiji, efikasnost oralno primenjenog Jedinjenja 1 na modelu Daudi tumora je upoređena sa oralnim GDC-0941 i oralnim vorinostat, i pojedinačno i u kombinaciji. OPM2 tumor grupa je primila Jedinjenje 1 u dozama od 50 mg/kg dvaput dnevno tokom pet dana nedeljno. SU-DHL4 tumor grupa je dozirana na 100 mg/Kg oralno ili 50 mg/Kg intravenski.
[0182] Tumori su izmereni tokom perioda studije sa elektronskim kalibarskim šestarom, i telesne težine su izmerene dvaput nedeljno. Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
Zapremina tumora = (dužina X širina<2>)/2
[0183] Procenat promene zapremine tumora je korišćen da opiše aktivnost jedinjenja tokom perioda lečenja.
[0184] Rezultati ovih studija su sažeto prikazani na Slikama 5A do 5C i 9 do 12, koje pokazuju veličinu tumora naspram vremena za aktivnu grupu i kontrolnu grupu za svaki od tipova tumora. Slike 5A, 5B, 5C i 12 pokazuju da je Jedinjenje 1 efikasno za modele tumora H2122, Daudi i OPM2. Kao što je izneto na Slici 9, Jedinjenje 1 je inhibiralo rast Daudi tumora na od doze zavisan način. Slika 10 poredi antitumornu aktivnost Jedinjenja 1 na 100 mg/Kg na Daudi modelu sa samo bilo GDC-0941 ili vorinostatom, ili u kombinaciji. Indikovane doze su doze koje se maksimalno tolerišu (MTD) za svaku terapiju, i veličina tumora pre terapije je bila 157 ± 65 mm3 (srednja ± SE). Podaci ukazuju na to da je Jedinjenje 1 efikasije od vorinostata, GDC-0941, ili kombinacije ova dva. Najzad, Jedinjenje 1 je jako inhibiralo rast tumora za SU-DHL4 difuznog modela ksenografta limfoma velike B ćelije posle intravenske (IV) primene od 50 mg/kg ili oralne (PO) od 100 mg/kg (Slika 11). Veličina tumora pre terapije je bila 147 ± 21 mm3.
MM1S ksenograft model
[0186] Ženski SCID/Bež miševi stari 4 nedelje su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom (INNOCAGE®IVC, Innovive Inc., San Diego, CA) u kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000) ad libitum i obezbeđena im je sterilisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID/bež miševe su sterilisani pomoću autoklava pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima unutar biosigurnosnog kabineta (za injekcije) ili laminarne komore sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0187] MM1S ljudske MM ćelije (Goldman-Leikin RE, et al., J Lab Clin Invest. 1980; 113:335-345) su originalno dobijeni iz periferne krvi pacijenta sa višestrukim mijelomom. Kriokonzervisane ćelije su otopljene na 37°C vodene kupke i kultivisane u RPMI podlozi plus 10% serum goveđeg fetusa (FBS) u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2. Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje kontaminirajućih agenasa i glodarskih patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, Mouse Antibody Production (proizvodnja mišjeg antitela)). Kada su ćelije u kulturi dovoljne za implantaciju, one su oprane Hank-ovim izbalansiranim slanim rastvorom bez seruma (HBSS). Najzad su ćelije razblažene u HBSS tokom implantacije . Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90% (isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 20 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,2 ml HBSS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem 1CC šprica sa 26G hipodermične igle, uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi. Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože. Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi.
[0188] Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
Zapremina tumora = (dužina X širina<2>)/2
[0189] Tri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prosek od 194,6 ± 32 mm3. Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora i oblika su nasumično raspoređene u dve grupe od osam životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedno kontrolno pomoćno sredstvo i jedna grupa terapije.
[0190] Jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: 7,5 mg/ml je rastvoren u 30% Kaptisola sa 2 molarna ekvivalenta NaOH i HCl svaki i dozirani oralnom gavažom svakog dana pet puta nedeljno na osnovu telesne težine svakog miša. Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisola) korišćenje iste paradigme za doziranje.
[0191] Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gode pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima. Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno. Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo. Pored toga, prema sa tumorom povezanim parametarima garantovanog davanja eutanazije: davanje eutanazije: (1) opterećenje tumorom je prekoračeno 2500 mm<3>i/ili (2) nedostataka 20% početne telesne težine. Pored određivanja promena veličine tumora, poslednje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti), standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule: % T/C = 100 x T/ C if T > 0. U slučajevima kada se regresija tumora pojavi ,korišćena je sledeća formula: % T/T0= 100 x AT/TO if T < 0.
[0192] Period terapije je bio 15 dana. Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije.
[0193] Kako je prikazano na Slici 13, Jedinjenje 1 jedan agens je inhibirao rast tumora za model potkožnog tumora MMIS. T/C vrednosti su izračunate da jesu 27,37% (p<0,0001, ANOVA) na osnovu 14. Nema gubitka telesne težine ili drugih pratećih efekata primećenih za Jedinjenje 1 terapijsku grupu sa jednim agensom.
MM1R ksenograft model
[0194] Ženski SCID/Bež miševi stari 4 nedelje su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom (INNOCAGE®IVC, Innovive Inc., San Diego, CA) u kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000) ad libitum i obezbeđena im je sterilisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID/bež miševe su sterilisani pomoću autoklava pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima unutar biosigurnosnog kabineta (za injekcije) ili laminarne komore sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0195] MM1R human MM ljudske MM ćelije su originalno dobijene iz periferne krvi pacijenta sa višestrukim mijelomom (Goldman- Leikin RE, et al., J Lab Clin Invest. 1980, 113:335-345). Kriokonzervisane ćelije su otopljene na 37°C vodene kupke i kultivisane u RPMI podlozi plus 10% serum goveđeg fetusa (FBS) u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2. Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje kontaminirajućih agenasa i glodarskih patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, Mouse Antibody Production (proizvodnja mišjeg antitela )). Kada su ćelije u kulturi dovoljne za implantaciju, one su oprane Hank-ovim izbalansiranim slanim rastvorom bez seruma (HBSS). Najzad su ćelije razblažene u HBSS tokom implantacije. Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90% (isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 15 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,1 ml HBSS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem šprica od 1 CC (kubnih centimetara) i hipodermičke igle 26G, uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi. Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože. Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi.
[0196] Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Ova sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
Zapremina tumora = (dužina X širina<2>)/2
[0197] Tri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prosek od 131,7 ± 28,7 mm3. Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora i oblika su nasumično raspoređene u dve grupe od osam životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedno kontrolno pomoćno sredstvo i jedna grupa terapije.
[0198] Jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: 7,5 mg/ml je rastvoren u 30% Kaptisola sa 2 molarna ekvivalenta NaOH i HCl svaki i dozirani oralnom gavažom svakog dana pet puta nedeljno na osnovu telesne težine svakog miša. Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisola) korišćenje iste paradigme za doziranje.
[0199] Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gode pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima. Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno. Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo. Pored toga, prema sa tumorom povezanih parametara garantovanog davanja eutanazije: davanje eutanazije: (1) opterećenje tumorom je prekoračeno 2500 mm<3>i/ili (2) nedostataka 20% početne telesne težine. Pored određivanja promena veličine tumora, poslednje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti), standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule: % T/C = 100 x ΔT/ ΔC if ΔT > 0. U slučajevima kada se pojavi regresija tumora, međutim, korišćena je sledeća formula: % T/T0= 100 x AT/TO if ΔT < 0.
[0200] Period terapije je bio 18 dana. Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije.
[0201] Kako je prikazano na Slici 14, Jedinjenje 1 jedan agens je inhibirao rast tumora za MM1R model potkožnog tumora. T/C vrednosti su izračunate da jesu 21,15% (p<0,0001, ANOVA) na osnovu podataka za dan 17. Nema gubitka telesne težine ili drugih pratećih efekata primećenih za Jedinjenje 1 terapijsku grupu sa jednim agensom.
Primer 15: Dejstvo Jedinjenja 1 na cirkulišuće limfocite
[0202] Studija koja ispituje dejstvo Jedinjenja 1 na cirkulišuće T i B limfocite je sprovedena na CD1 miševima divljeg tipa. Pet miševa je lečeno jedinjenjem Jedan formulisanim kao u Primeru 8(b) (5 mg/mL) od 100 mg/kg oralno tokom pet uzastopnih dana. Još 5 miševa je lečeno pomoćnim sredstvom. Uzeta je krv u različitim vremenskim trenucima (uključujući pre davanja doze, tokom davanja doze i posle doziranja) iz mandibularne vene. Krv je analizirana sa citometrom protoka za kvantifikacijom T i B ćelije.
[0203] Dejstvo Jedinjenja 1 na T i B nivoe limfocita u limfoidnim organima, jetri i limfnim čvorovima, je takođe procenjena. Miševi su tretirani sa Jedinjenjem 1 oralno na 100 mg/kg tokom pet uzastopnih dana. Životinje su žrtvovane, i limfoidni organi su prikupljeni. Ćelije su bile fizički razdružene od tkiva i analizirane uređajem za anlizu na bazi protočne citometrije. Anti-CD3 i -CD19 antitela su korišćena za bojenje T i B ćelija, respektivno.
[0204] Rezultati ovih studija su prikazani na Slici 6, grafikon prkazuje nivoe limfocita u krvi tokom vremena. Jedinjenje 1 pokazuje značajno reverzibilno smanjenje nivoa krvi i T i B limfocita u poređenju sa kontrolom. Slično dejstvo se vidi za nivoe limfocita u jetri i limfnim čvorovima. Oba ova organa pokazuju značajno smanjeje i T i B limfocita posle doziranja sa Jedinjenjem 1 u poređenju sa kontrolama.
Primer 16: Dejstvo Jedinjenja 1 na hematopoietične ćeije u koštanoj srži
[0205] Koštana srž je takođe uklonjena iz miševa koji su žrtvovani u Primeru 12. Sadržaj koštane srži je uzet iz dugih kostiju miševa i analiziran sa uređajem za anlizu na bazi protočne citometrije. Različiti markeri za limfocite progenitora ili zrele limfocite su korišćeni. Rezultati su pokazali da je terapija Jedinjenjem 1, dok prouzrokuje smanjenje u broju perifernih T i B limfocita, izazvala kompenzatorno povećanje za ćelije progenitora limfocita koštane srži u poređenju sa kontrolama.
Primer 17: Ogled sa reverznom mutacijom mini-Salmonella/Mikrozoma sisara
[0206] Ova studija je sprovedena da proceni sposobnost Jedinjenja 1 da izazove reverzne mutacije bilo u prisustvu ili odsustvu mikrosomalnih enzima koji potiču od sisara (S9 miks) na lokusu histidina u genomu 2 soja Salmonella typhimurium (TA98 i TA100).
[0207] Ispitivač sojeva korišćeni u ogledu za mutagenost su bili Salmonella typhimurium ispitivač sojeva TA98 (za detektovanje reverzne mutacije pomeranja okvira čitanja) i TA100 (za detektovanje reverzne mutacije samo jednog baznog para DNK). Ogled je sproveden i u prisustvu i u odsustvu S9 mešavine zajedno sa istovremenim pomoćnim sredstvom (DMSO, 20 l/pregradi) i pozitivnim kontrolama u duplikatu korišćenjem ploča sa 6 pregrada. Pet koncentracija sa 2X sukcesivnih razblaženjima koji se kreću u opsegu od 1000 do 62.5 µg/pregradi (ekvivalentno 5000 do 312.5 µg/ploči u standardnom ogledu Ames) su ispitivane za svako od ovih jedinjenja. Posle inkubacije na 37°C tokom 48-72 sata, ploče su posmatane za nerastvorljivost i citotoksičnost jedinjenja, i skenirane da se prebroje kolonije revertanata (mutanata dobijenih ponovnom mutacijom). Dvostruko povećanje koje bilo izvodljivo (>2x kontrolnog pomoćnog sredstva) revertantnih kolonija tokom dnevne prosečne kontrolne vrednosti je razmatrano kao pozitivan odgovor mutacije gena za svaki soj.
[0208] Jedinjenje 1 je rastvoreno u dimetil sulfoksidu (DMSO), koji je takođe služio kao negativno (pomoćno sredstvo) kontrola. 2-nitrofluoren i natrijum azid su služili kao pozitivne kontrole u odsustvu S9 za TA98 i TA100 respektivno. 2-aminoantracen je služio kao pozitivne kontrole u prisustvu S9 za TA98 i TA100.
Rezultati
[0209] Jedinjenje 1 formiralo je crveno-kestenjast rastvor kada je rastvoreno u DMSO pri koncentraciji od 50 mg/ml, što je bilo najkoncentrovanija zaliha rastvora. Testirani artikal je ostao svetlo crveno-kestenjastu boju rastvora sve do bezbojnog rastvora u svih 2X sukcesivnih rastvora sve do 3,125 mg/ml. Talog testirani artikal je praćen kada su testirani artikal i meki agar mešani zajedno pri koncentracijama od 250μg/pregradi i više. Posle inkubacije od 48-72 sata, talog testiranog artikla je viđen kao nešto drugačije veličine pod stereo mikroskopom pri 250 μg/pregradi sa TA98 i TA100 samo u odsustvu S9 mešavine, talozi testiranog artikla i manje smanjenje pozadinske podloge su viđeni kao nešto drugačije do umerene veličine na 500 i 1000 μg/pregradi sa TA98 i TA100 u prisustvu i odsustvu S9 mešavine. Nije bilo nikakvog dokaza o značajnom povećanju srednjeg broja revertantnih kolonija u poređenju sa prosečnom kontrolom kada je rađeno ispitivanje u prisustvu i odsustvu S9 mešavine sa sojevima TA98 i TA100 (Tabela 5).
[0210] Rezultati iz trenutne studije su pokazali da Jedinjenje 1 nije izazvalo pozitivan mutageni odgovor sa sojevima TA98 i TA100 u prisustvu i odsustvu mikrosomnih enzima kada su tstirani artikli testirani sve do maksimalne koncentracije od 1000 g/pregradi (ekvivalentno sa 5000 g/ploči u standardnom ogledu Ames).
Tabela 5 Rezultati ogleda mutagenosti za Jedinjenje 1
<a>TA98: 2-nitrofluoren, 0,4 µg/pregradi; TA100: Natrijum azid, 2,0 µg/pregradi
<b>TA98 i TA100: 2-aminoantracen, 0,8 µg/pregradi
<c>Background Lawn Evaluation Codes:
5. pojačani rast u poređenju sa kontrolama rastvarača,
4. slično kao kontrola pomoćnog sredstva (normalna, nema toksičnosti),
3. manje od 25% smanjenja (manje od 25% citotoksičnosti),
2. više od 25% ali manje od 50% smanjenja (manje od 50% citotoksičnosti),
1. više od 50% smanjenja (više od 50% citotoksičnosti),
0. nema rasta (100% citotoksičnost).
sp=blagi talog mp=umereni talog hp=teški talog
*: pozitivno povećanje
Primer 18: Farmakodinamička studija u linijama ćelija tumora
[0211] Linije ćelija tumora H460 (Kras, PI3K), BT474 (HER2, PI3K), A375 (B-Raf) i H1975 (EGFR, PI3K) su kultivisane i tretirane samo sa DMSO (kontrolno pomoćno sredstvo) ili 0,1 µmol/L Jedinjenja 1 ili referentnim jedinjenjem tokom 16 sati. Ekstrakti ćelija su pripremljeni u prisustvu SDS i 2-merkaptoetanola i ponovo rastvoreni u poliakrilamidnim gelovima. Proteini su preneti na nitrocelulozni filter i bloting (tehnika mrljanja) je urađena korišćenjem standardnih procedura sa rešenjima za blokiranje (Li-Cor Bioscience) koja sadrži navedeno primarno antitelo. Primarna antitela naspram p-EGFR, EGFR, p-HER2, HER2, p-HER3, HER3, p-MET, MET, pbRaf, p-cRaf, pMEK, MEK, p-ERK, ERK i tubulin su kupljena iz Cell Signaling Technology. Sekundarno antitelo konjugovano sa IRdye (infracrvenim fluorescentnim bojama) 680, 800CW su korišćene i signal je detektovan sa Li-Cor Odyssey Imager.
[0212] ICitohemija imunocita je izvedena na ćelijama poraslim u kulturi monosloja koje su tretirane kako je navedeno na legendama slike i zatim fiksirano u 4% (w/v) paraformaldehida. Posle ispiranja u 1× PBS, izvedeno je imunobojenje u Li-Cor rastvoru za blokiranje koji sadrži navedena primarna antitela i sa IRDye 680- ili 800CW konjugovana sekundarna antitela. Za incell-western probu, za detekciju i kvantifikaciju rezultata je korišćen infracrveni skener Li-Cor Odyssey.
[0213] Za histološko ispitivanje farmakodinamičkih markera, ksenografti tumora su prikupljeni i umetnuti u parafin, i zatim su pripremljeni 4-5-mm odeljci. Odeljci su montirani na slajdovima i reagovali su sa primarnim antitelima posle čega je usledilo sekundarno antitelo konjugovano renom (Envision polymer-HRP, Dako, Glostrup, Denmark). Boja reakcije je zatim izvedena korišćenjem diaminobenzidina (DAB) kako je preporučio dobavljač. Kontrabojenje deloa je rađeno sa hematoksilinom.
[0214] Rezultati ove studije su pregledno prikazani na Slikama 7A-7g i 8A-8C 5.0 Jedinjenje 1 inhibira HDAC aktivnost i PI3K signalni put kod KRAS- i PI3KCA-mutanta H460 ćelija nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC). Ćelije su tretirane samo sa DMSO (kontrolno pomoćno sredstvo) ili tako što su sadržale testirana jedinjenja tokom 1 h pre nego što je izveden ogled analize tipa Western blot ili in-cell-western blot. Slika 7A pokazuje da Jedinjenje 1 pri 1 µmol/L povećava nivoe acetilisanog histona 3 (Ac-H3), tubulin (Ac-Tub), i p53 (Ac-p53). Jedinjenje takođe povećava regulaciju ukupnog p53 i p21 sadržaja. Izneti podaci na Slikama 7B-7E pokazuju da Jedinjenje 1 povećava nivoe acetilisanog tubulina (Slika 7B), acetilisanog histona 3 (Slika 7C), acetilisanog p53 (Figure 7D), i acetilisanog p21 (Slika 7E) na od doze zavisan način. Dobijene IC50 vrednosti nagoveštavaju da Jedinjenje 1 ima uporedivu HDAC inhibitornu jačinu prema LBH 589 u ispitanim ćelijama kancera. Pri 1 µmol/L, Jedinjenje 1 inhibira aktivaciju AKT i nizvodne signalne proteine 4EBP-1 i p70S6 (Slika 7F). Jedinjenje 1 takođe uporno i snažno inhibira fosforilaciju Akt-a na od doze zavisan način (Slika 7G).
[0215] Jedno veće ograničenje PI3K inhibitora kod lečenja kancera je aktivacija RAF-MEK-ERK putanje. HDAC inhibitori su sposobni da inhibiraju nivoe kinaze u ovoj signalnoj putanje u ćelijama kancera preko epigenetske modifikacije.. U ćelijama tumora sa različitim mutacijama, kao što je KRAS i PI3K mutacije u H460 ćelijama, B-Raf mutacije u A375 ćelijama, HER2 i PI3K mutacije u BT-474 ćelijama, i EGFR mutacije u H1975 ćelijama, 100 nM Jedinjenje 1 je potislo aktivaciju Raf, MEK, i ERK. Jaki HDAC inhibitor LBH 589 je pokazao slične aktivnosti kod nekih od ovih Western blot ogleda (Slika 8A).
[0216] Pored inhibicije PI3K i MEK pueva, terapija RPMI-8226 ćelija mijeloma sa 1 µM Jedinjenjem 1 tokom 16 h je inhibirala p-STAT3 (Y-705) i p-Src (Slika 8B).
[0217] Kod EGFR-L858R-T790M dvostruko-mutiranih H1975 NSCLC ćelija i HER2 sa prekomernim ispoljavanjem BT-474 ćelija kancera dojke, Jedinjenje 1 je pokazalo da se smanjuju nivoi fosforilisane kinaze i ukupne tirozin kinaze receptora EGFR, HER2, HER3, i MET posle inkubacije tokom 16 h. Slična regulacija donjeg toka istih kinaza je primećena posle terapije ovih ćelija sa LBH 589 (Slika 8C).
Primer 19. Ispoljavanje P13K110 α, β, γ I δ na modelima hematološkog ksenograf tumora
[0218] Ženski miševi sa nedostatkom imunog sistema (Bež/SCID) stari 6-8 nedelja su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom u kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000) ad libitum i obezbeđena im je sterilisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID bež miševe su bili na raspolaganju, i kupljeni su ozračeni od kompanije Innovive pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima unutar biosigurnosnog kabineta (za injekcije) ili laminarne komore sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0219] Ljudske hematološke linije ćelije kancera su originalno dobijene od ljudi kao pacijenata sa kancerom. Kriokonzervisane ćelije su otopljene na 37°C vodene kupke i kultivisane u podlozi RPMI medium plus -15% serum goveđeg fetusa (FBS) u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2. Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje kontaminirajućih agenasa i glodarskih patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, proizvodnja mišjeg antitela).
[0220] Mada su ćelije u kulturi dostigle željeni broj, one su prikupljene i oprane Dulbecco-ovim fosfatno-puferskim slanim rastvorom bezh seruma (DPBS). Najzad su ćelije razblažene u DPBS tokom implantacije. Samo jednoćelijske suspenzije veće od 90% održivosti (isključivanjem tripansko plavog) su korišćene za ubrizgavanje. Posle nekoliko dana perioda aklimatizacije, 10 do 20 miliona ćelija po životinji je držano u suspenziji u 0,1 ml DPBS je ubrizgano potkožno (SC) u region desnog zadnjeg boka životinje korišćenjem 0,5 CC šprica sa 26 G hipodermičnom iglom, vodeći računa da se izbegnu krvni sudovi. Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože. Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi.
[0221] Tumori su bili detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
Zapremina tumora = (dužina X širina<2>)/2
[0222] Kada su veličine tumora dostigle oko 150-300 mm3, miševi su odvojeni u četiri grupe uključujući tri terapijske grupe (25 mg/kg, 50 mg/kg i 100 mg/kg) i jednu kontrolnu grupu. Posle doziranja sa Jedinjenjem 1, tumori su prikupljeni na 15 minuta, 1, 3, 6, 24 sata (3 miša za svaku vremensku vremensku tačku). Tumori su prikupljeni u skladu sa vremenskim tačkama navedenim iznad pošto su miševi dobili eutanaziju sa CO2. Uzorci sustavljeni u suvi led sve do prenosa u zamrzivač od -80°C za Western blot analizu.
[0223] Protein je ekstrahovan iz tkiva tumora korišćenjem homogenizatora (Tissuelyser (Qiagen, Valencia, CA) u skladu sa uputstvima proizvođača. Adapteri za držanje epruveta sa tkivima su zamrznute na -20°C, i pufersko sredstvo lize i perlice su ohlađene na 4°C pre upotrebe.
[0224] 100-200 µg tkivo homogenizovano u 300 µl T-PER reagens za ekstrakciju proteina tkiva sisara (Pierce, Rockford, IL) dopunjen sa inhibitorima fosfataze (1:100 v/v, Tyr i Ser/Thr kokteli inhibitora fosfataze, Upstate). Uzorci su provereni vizuelno posle svakog ciklusa (vreme: 0,15 minuta; frekvencija: 30Hz) sve dok tkiva nisu bila potpuno homogenizovana. Približno četiri ciklusa je bilo potrebno u većini slučajeva. Lizati tkiva su centrifugirani na 14.000 ob/min na 4° C tokom 10 minuta.200 µl supernatant je prikupljen i zadržan na -80°C. Koncentracija proteina je izmeren korišćenjem BCA komplet za ogled za proteine (Pierce, Rockford, IL) u skladu sa uputstvima proizvođača.
[0225] 30 µg ukupnog ekstrakta proteina je otopljeno na NuPAGE Novex 4-12% Bis-Tris gelove (Invitrogen) i prenet na mikrocelulozne membrane (Bio-Rad) korišćenjem mašine za polusuvi prenos Bio-Rad (Semi-Dry Transfer Machine). Blotovi su inkubirani sa 10 ml blokirajućeg puferskog sredstva (Odyssey Infrared Imaging System) tokom 1 sat i zatim su ispitivani sa primarnim antitelom tokom noći na 4°C na uređaju za mešanje (šejkeru). Blotovi su ispitivani sa primarnim antitelom tokom noći na 4°C. Primarna antitela su obuhvatila PI3 kinazu p110 (#4249, 1:1000, ćelijsko signaliziranje), PI3 kinazu p110 (#3011, 1:1000, ćelijsko signaliziranje), PI3 kinazu p110 (#5405, 1:1000, ćelijsko signaliziranje), PI3 kinazu p110 (SC-7176 (1:1000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). GAPDH (gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaza, 1/30,000, Abcam, Cambridge, MA) je korišćen kao unutrašnja kontrola za svaki ogled.
[0226] Membrana je isprana četiri puta sa Tris-puferskim slanim rastvorom Tween-20 (TBST;DAKO) i inkubirana tokom 1 sat na sobnoj temperaturi sa infracrvenim konjugovanim sekundarnim antitelima (1:10000): anti-začjim konjugovanom-IR bojom 800(Rockland), ili antimišjim konjugovanim-Alexa 680(Molecular Probes). Membrana je oprana u sistemu za infracrveno prikazivanje slikom Odyssey (Odyssey Infrared Imaging System) za prikazivanje slikom i analizu.
[0227] Rezultati su izneti na Slici 15, koja pokazuje Western blotove PI3K p110 izoforme, AKT i pAKT iz nekoliko ksenografta neHodžkinovog limfoma i višestrukog mijeloma. Rezultati pokazuju da je aktivacija AKT vođena višestrukim PI3K P110 izoformama.
[0228] Ženski miševi sa nedostatkom imunog sistema (Bež/SCID) stari 6-8 nedelja su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom u kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000) ad libitum i obezbeđena im je sterilisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID bež miševe su na raspolaganju, i kupljeni su ozračeni od kompanije Innovive pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima u biosigurnosnom kabinetu (za injekcije) ili laminarnoj komori sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0229] Daudi ćelije Burkitovog limfoma kod kljudi su originalno dobijene od čoveka-pacijenta bolesnog od Burkitovog limfoma. Kriokonzervisane ćelije su otopljene na 37°C vodene kupke i kultivisane u RPMI-1640 medium plus 15% serum goveđeg fetusa (FBS), 1% Glutamaksa u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2. Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, Mouse Antibody Production).. Kada su élije u kulturi dostigle željene brojeve, one su pokupljene centrifugiranjem. Posle prikupljanja, ćelije su oprane sa Dulbekoovim fosfatnopuferskim slanim rastvorom bez seruma (DPBS). Najzad su ćelije razblažene u DPBS tokom implantacije. Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90% (isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 20 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,1 ml DPBS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem šprica od 0,5 CC (kubnih centimetara) i hipodermičke igle 26G, uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi. Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože. Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi.
[0230] Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
Zapremina tumora = (dužina X širina<2>)/2
[0230] Četiri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prosek od 300 ± 32 mm3. Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora i oblika su nasumično raspoređene u tri grupe od osam životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedna grupa sa kontrolnim pomoćnim sredstvom i dve terapijske grupe.
[0232] Jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: Jedinjenje 1 (7.5 mg/ml) je rastvoreno u 30% Kaptisola sa 2 molarnim ekvivalentima od NaOH, izbalansiranim sa 2 molarna ekvialenta HCl, i dozirani preko oralne gavaže dnevno od ponedeljka do petka. Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisola) korišćenjem iste paradigme za doziranje kao 100 mg/kg zapremine (6,67 ul/g).
[0233] Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gore pomenute pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima. Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno. Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo. Pored toga, sledeći parametri koji se odnose na tumore su garantovali obezbeđivanje eutanazije: opterećenost tumorom koja prekoračuje 2.500 mm<3>i/ili manje od 20% početne telesne težine. Pored određivanja promena veličine tumora, poslednje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti), standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule: % T/C = 100 x ΔT/ ΔC ako je ΔT > 0. U slučajevima kada se javi regresija tumora, međutim, korišćena je sledeća formula: % T/T0= 100 x AT/TO ako je ΔT < 0.
[0234] Period lečenja je bio 15 dana za pomoćno sredstvo i CAL-101 grupe, što je zahtevalo raniji završetak usled veličine tumora koja je premašivala 10% telesne težine, i 18 dana za grupu sa Jedinjenjem 1. Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije.
[0235] Rezultati studije su predstavljeni na Slici 16, koja pokazuje rast tumora za aktivnu grupu i kontrolnu grupu kao funkciju vremena terapije. Grupa sa Jedinjenjem 1 grupa je pokazala značajno smanjen rast tumora u poređenju sa CAL-101 i kontrolnim grupama.
Primer 21. Kombinacija Jedinjenja 1 i ciklofosfamida na modelu
[0236] Ženski SCID/Bež miševi stari 6-8 nedelja su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom i kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000) ad libitum i obezbeđena im je sterilisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID bež miševe su na raspolaganju, i kupljeni su ozračeni od kompanije Innovive pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima u biosigurnosnom kabinetu (za injekcije) ili laminarnoj komori sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0237] Daudi ćelije Burkitovog limfoma kod kljudi su originalno dobijene od čoveka-pacijenta bolesnog od Burkitovog limfoma. Kriokonzervisane ćelije su otopljene na 37°C vodene kupke i kultivisane u RPMI-1640 medium plus 15% serum goveđeg fetusa (FBS), 1% Glutamaksa u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2. Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, proizvodnja mišjeg antitela). Kada su élije u kulturi dostigle željene brojeve, one su pokupljene centrifugiranjem. Posle prikupljanja, ćelije su oprane sa Dulbekoovim fosfatnopuferskim slanim rastvorom bez seruma (DPBS). Najzad su ćelije razblažene u DPBS tokom implantacije. Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90% (isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 20 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,1 ml DPBS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem šprica od 0,5 CC (kubnih centimetara) i hipodermičke igle 26G, uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi. Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože. Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi.
[0238] Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
Zapremina tumora = (dužina X širina<2>)/2
[0239] Četiri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prosek od 189 ± 47 mm3. Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora i oblika su nasumično raspoređene u četiri grupe od osam životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedna sa kontrolnim pomoćnim sredstvom i tri gerapijske grupe.
[0240] Jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: Jedinjenje 1 (7,5 mg/ml) je rastvoreno u 30% Kaptisola sa 2 molarna ekvivalenta od NaOH, izbalansiranim sa 2 molarna ekvialenta HCl, i dozirana preko oralne gavaže dnevno od ponedeljka od petka kao 75 mg/kg. Ciklofosfamid (“CTX”) je rastvoren u 0,9% NS na 5 mg/ml, i dozian je iv (injekcija u repnu venu) životinjama na 50 mg/kg na dan-0. Grupa koja je primala kombinaciju je dozirana i sa Jedinjenjem 1 i CTX korišćenjem istog rasporeda doziranja. Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisol) i 0,9% NS korišćenjem iste paradigme kao za kombinaciju.
[0241] Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gore pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima. Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno. Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo. Pored toga, sledeći parametri koji se odnose na tumore su garantovali obezbeđivanje eutanazije: opterećenost tumorom koja prekoračuje 2.500 mm<3>i/ili manje od 20% početne telesne težine. Pored određivanja promena veličine tumora, poslednje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti), standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule: % T/C = 100 x ΔT/ ΔC ako je ΔT > 0. U slučajevima kada se pojavi regresija tumora, međutim, korišćena je sledeća formula: % T/T0= 100 x AT/TO ako je ΔT < 0.
[0242] Period terapije je bio 2 nedelje. Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije.
[0243] Rezultati ove studije su izneti na Slici 17, koja pokazuje rast tumora kao funkciju perioda terapije za kontrolnu grupu i grupe za tretiranje. Kao samostalni agensi, Jedinjenje 1 i
ciklofosfamid sa sličnom aktivnošću na ovom modelu. Kombinacija Jedinjenja 1 i ciklofosfamida je pokazala pretežno veću efikasnost nego bilo koji drugi agens sam.
Primer 22. Jedinjenje 1 u kombinaciji sa Lenalidomidom za MMIS ksenograft model
[0244] Ženski SCID/Bež miševi stari 4 nedelje su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom (INNOCAGE®IVC, Innovive Inc., San Diego, CA) u kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000) ad libitum i obezbeđena im je sterilisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID/bež miševe su sterilisani pomoću autoklava pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima unutar biosigurnosnog kabineta (za injekcije) ili laminarne komore sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0245] Kriokonzervisane MM1S ljudkse MM ćelije su otopljene na 37°C vodene kupke i kultivisane u podlozi RPMI medium plus 10% serum goveđeg fetusa (FBS) u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2. Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje kontaminirajućih agenasa i glodarskih patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, Mouse Antibody Production). Kada su ćelije u kulturi dovoljne za implantaciju, one su oprane Hank-ovim izbalansiranim slanim rastvorom bez seruma (HBSS). Najzad su ćelije razblažene u HBSS tokom implantacije. Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90% (isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 20 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,2 ml HBSS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem šprica od 1 CC (kubnih centimetara) i hipodermičke igle 26G, uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi. Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože. Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi.
[0246] Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Ovi sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
Zapremina tumora = (dužina X širina<2>)/2
[0247] Tri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prosek od 192 ± 32 mm3. Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora i oblika su nasumično raspoređene u 6 grupa od 7 životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedna sa kontrolnim pomoćnim sredstvom i šest gerapijske grupe.
[0248] Jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: Jedinjenje 1 (7,5 mg/ml) je rastvoreno u 30% Kaptisola sa 2 molarna ekvivalenta od NaOH, izbalansiranim sa 2 molarna ekvialenta HCl, i dozirana preko oralne gavaže dnevno od ponedeljka od petka kao 75 mg/kg. Lenalidomid (Selleck, 2,5 mg/ml) je formulisan u MCT (0,5% metil celuloze i 0,2% Tween 80), i doziran kao 12,5 mg/kg ili 25 mg/kg. Dve kombinovane grupe su dozirane sa Jedinjenjem 1 kao 75 mg/kg plus nivo jedne doze od lenalidomida (bilo 12,5 ili 25 mg/kg). Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisol) i MCT korišćenjem iste paradigme kao za kombinaciju.
[0249] Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gode pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima. Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno. Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo. Pored toga, posle sa tumorom povezanih parametara garantovanog davanja eutanazije: (1) opterećenje tumorom je prekoračeno 2500 mm<3>i/ili (2) nedostataka 20% početne telesne težine. Pored određivanja promena veličine tumora, poslednje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti), standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule: % T/C = 100 x ΔT/ ΔC ako je ΔT > 0. U slučajevima kada se pojavi regresija tumora, međutim, korišćena je sledeća formula: % T/T0= 100 x AT/TO ako je ΔT < 0.
[0250] Period terapije je bio 17 dana. Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije.
[0251] Rezultati ove studije su predstavljeni na Slici 18, koja pokazuje rast tumora kao funkciju vremena terapije. Rezultati pokazuju da je Jedinjenje 1 pri 75 mg/Kg PO delotvornije od Lenalidomida pri bilo 12,5 ili 25 mg/Kg PO kao zasebnog agenasa. Rezultati takođe pokazuju da je kombinacija Jedinjenja 1 i lenalidomide značajno delotvornija nego bilo koje od ova dva jedinjenja kada se koristi zasebno.
[0252] Patentna i naučna literatura koja se ovde navodi uspostavlja znanje koje je dostupno stručnjacima.
[0253] Mada je ovaj pronalazak posebno prikazan i opisan sa referencama o njegovim poželjnim realizacijama, stručnjacima u ovoj oblasti će biti jasno da u njemu mogu biti napravljene različite promene u obliku i detaljima bez odstupanja od obima pronalaska obuhvaćenog priloženim zahtevima.
[0254] U sledećim paragrafima dalje su opisani aspekti i oblici uklanjanja:

Claims (8)

  1. Patentni zahtevi 1. Postupak za dobijanje jedinjenja 1,
    koji obuhvata korak reakcije jedinjenja 108,
    gde R je metil ili etil, sa hidroksilaminom, čime se dobija jedinjenje 1.
  2. 2. Postupak prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što dalje sadrži korak reakcije jedinjenja 107
    sa jedinjenjem formule
    da se dobije Jedinjenje 108.
  3. 3. Postupak prema patentnom zahtevu 2, naznačen time što dalje sadrži korak reakcije jedinjenja 106
    sa jedinjenjem formule
    gde je R metil ili etil, da bi se proizveo jedinjenje 107.
  4. 4. Postupak prema patentnom zahtevu 3, naznačen time što dalje sadrži korak reakcije jedinjenja 105,
    sa natrijum borohidridom u smeši metilamina i metanola da se dobije Jedinjenje 106.
  5. 5. Postupak prema patentnom zahtevu 4, naznačen time što dalje sadrži korak reakcije jedinjenja 104,
    sa n-butillitijumom u smeši tetrahidrofurana i N, N-dimetilformamida da bi se dobilo jedinjenje 105
  6. 6. Postupak prema zahtevu 5, naznačen time, što dalje obuhvata korak reakcije jedinjenja 103
    sa morfolinom u metanolu da se dobije jedinjenje 104.
  7. 7. Postupak prema patentnom zahtevu 6, naznačen time što dalje sadrži reakciju jedinjenja 102
    sa POCl3 da se dobije Jedinjenje 103.
  8. 8. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time što sadrži korake (a) reakcija Jedinjenja 101
    sa ureom ili KOCN da se dobije jedinjenje 102 (b) reakcija jedinjenja 102
    sa POCl3da se dobije jedinjenje 103 (c) reakcija jedinjenja 103
    sa morfolinom u metanolu da se dobije jedinjenje 104
    (d) reakcija Jedinjenja 104 sa n-butillitijumom u smeši tetrahidrofurana i N, N-dimetilformamida do proizvode jedinjenje 105,
    (e) reakcija Jedinjenja 105 sa natrijum borohidridom u smeši metilamina i metanola da se dobije jedinjenje 106,
    (f) reakcija jedinjenja 106 sa jedinjenjem formule
    gde je R metil ili etil, da bi se proizveo jedinjenje 107
    (g) reakcija jedinjenja 107 sa jedinjenjem formule
    ili da se dobije jedinjenje 108,
    i (h) reagovanje Jedinjenja 108 sa hidroksilaminom. 8. Jedinjenje formule (108)
    gde je R etil ili metil.
RSP20190842 2011-04-01 2012-03-30 Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink RS59219B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161470849P 2011-04-01 2011-04-01
US201161559489P 2011-11-14 2011-11-14
EP16166266.3A EP3111938B1 (en) 2011-04-01 2012-03-30 Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59219B1 true RS59219B1 (sr) 2019-10-31

Family

ID=46931927

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP20190842 RS59219B1 (sr) 2011-04-01 2012-03-30 Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink
RS20160457A RS54903B1 (sr) 2011-04-01 2012-03-30 Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160457A RS54903B1 (sr) 2011-04-01 2012-03-30 Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink

Country Status (29)

Country Link
US (7) US8710219B2 (sr)
EP (2) EP3111938B1 (sr)
JP (3) JP6242331B2 (sr)
KR (2) KR101902325B1 (sr)
CN (2) CN105461736B (sr)
AU (1) AU2012236367B2 (sr)
BR (1) BR112013025340B1 (sr)
CA (1) CA2830822C (sr)
CL (1) CL2013002823A1 (sr)
CY (2) CY1117785T1 (sr)
DK (2) DK3111938T3 (sr)
EA (1) EA022434B9 (sr)
ES (2) ES2577982T3 (sr)
HR (2) HRP20160545T1 (sr)
HU (2) HUE028910T2 (sr)
IL (2) IL228588A (sr)
LT (1) LT3111938T (sr)
ME (2) ME03523B (sr)
MX (1) MX340577B (sr)
PE (1) PE20141382A1 (sr)
PL (2) PL2694075T3 (sr)
PT (2) PT3111938T (sr)
RS (2) RS59219B1 (sr)
SG (2) SG10201602569RA (sr)
SI (2) SI3111938T1 (sr)
SM (2) SMT201900435T1 (sr)
TW (1) TWI571469B (sr)
WO (1) WO2012135571A1 (sr)
ZA (2) ZA201307082B (sr)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA024252B1 (ru) 2009-01-08 2016-08-31 Кьюрис, Инк. Ингибиторы фосфоинозитид-3-киназ с цинксвязывающей группой
WO2012135571A1 (en) 2011-04-01 2012-10-04 Curis, Inc. Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
SG11201402004YA (en) 2011-11-14 2014-05-29 Cephalon Inc Uracil derivatives as axl and c-met kinase inhibitors
CN104725301A (zh) * 2013-12-20 2015-06-24 北京蓝贝望生物医药科技股份有限公司 一种1,2-二氢吡啶-2-酮衍生物的制备方法
US10227347B2 (en) 2015-04-21 2019-03-12 Guizhou Bailing Group Pharmaceutical Co., Ltd. Purinyl-N-hydroxyl pyrimidine formamide derivative, preparation methods and uses thereof
CA3030660C (en) * 2016-07-19 2023-01-17 National Institute Of Plant Genome Research Mutated protein from burkholderia gladioli strain ngj1 against fungal pathogens
EA201991069A1 (ru) * 2016-11-02 2019-10-31 Комбинированная терапия ингибитором фосфоинозитид-3-киназы и связывающим цинк агентом
US11406647B2 (en) * 2017-11-06 2022-08-09 Cold Spring Harbor Laboratory Method and compositions for forming a copper-containing complex and uses thereof
CN113164466B (zh) 2018-09-11 2025-07-08 柯瑞斯公司 使用具有锌结合部分的磷酸肌醇3-激酶抑制剂的联合治疗
EP3968215A1 (en) 2020-09-09 2022-03-16 Koninklijke Philips N.V. Determining target object type and position
WO2023212574A1 (en) * 2022-04-26 2023-11-02 Olivia Szu Hsieh Lee Nakaya Compositions and methods for modulating rhythmic activity of pacemaker cardiomyocytes

Family Cites Families (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4828991A (en) 1984-01-31 1989-05-09 Akzo N.V. Tumor specific monoclonal antibodies
US5369108A (en) 1991-10-04 1994-11-29 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Potent inducers of terminal differentiation and methods of use thereof
US5502187A (en) 1992-04-03 1996-03-26 The Upjohn Company Pharmaceutically active bicyclic-heterocyclic amines
US5497763A (en) 1993-05-21 1996-03-12 Aradigm Corporation Disposable package for intrapulmonary delivery of aerosolized formulations
US5508269A (en) 1994-10-19 1996-04-16 Pathogenesis Corporation Aminoglycoside formulation for aerosolization
US6777217B1 (en) 1996-03-26 2004-08-17 President And Fellows Of Harvard College Histone deacetylases, and uses related thereto
US6083922A (en) 1996-04-02 2000-07-04 Pathogenesis, Corp. Method and a tobramycin aerosol formulation for treatment prevention and containment of tuberculosis
US5767068A (en) 1997-02-13 1998-06-16 Pathogenesis Corporation Pure biologically active colistin, its components and a colistin formulation for treatment of pulmonary infections
KR100774855B1 (ko) 2000-04-27 2007-11-08 아스텔라스세이야쿠 가부시키가이샤 축합 헤테로아릴 유도체
US6608053B2 (en) 2000-04-27 2003-08-19 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Fused heteroaryl derivatives
CN100445276C (zh) 2002-03-13 2008-12-24 詹森药业有限公司 用作组蛋白去乙酰酶抑制剂的磺酰基衍生物
MXPA04008797A (es) 2002-03-13 2004-11-26 Janssen Pharmaceutica Nv Inhibidores de histona desacetilasa.
EA007099B1 (ru) 2002-03-13 2006-06-30 Янссен Фармацевтика Н. В. Сульфонилпроизводные в качестве ингибиторов гистон-деацетилазы
HRP20040805A2 (en) 2002-03-13 2005-04-30 Janssen Pharmaceutica N.V. Carbonylamino derivatives as novel inhibitors histone deacetylase
AU2003255845A1 (en) 2002-08-22 2004-03-11 Piramed Limited Phosphadidylinositol 3,5-biphosphate inhibitors as anti-viral agents
EP1591446B1 (en) 2003-01-29 2013-03-06 Takeda Pharmaceutical Company Limited Thienopyrimidine compounds and use thereof
CN101010298A (zh) 2004-04-05 2007-08-01 默克Hdac研究有限责任公司 组蛋白脱乙酰酶抑制剂前药
WO2005117909A2 (en) 2004-04-23 2005-12-15 Exelixis, Inc. Kinase modulators and methods of use
US7557112B2 (en) 2004-10-08 2009-07-07 Astellas Pharma Inc. Aromatic-ring-fused pyrimidine derivative
GB0423653D0 (en) 2004-10-25 2004-11-24 Piramed Ltd Pharmaceutical compounds
JP5156392B2 (ja) 2005-02-03 2013-03-06 トポターゲット ユーケー リミテッド Ｈｄａｃ阻害剤を用いる併用療法
ES2553178T3 (es) 2005-05-18 2015-12-04 Janssen Pharmaceutica N.V. Derivados sustituidos de aminopropenil piperidina o morfolina como nuevos inhibidores de histona deacetilasa
WO2007082874A1 (en) 2006-01-19 2007-07-26 Janssen Pharmaceutica N.V. Pyridine and pyrimidine derivatives as inhibitors of histone deacetylase
US7888360B2 (en) 2006-01-19 2011-02-15 Janssen Pharmaceutica N.V. Pyridine and pyrimidine derivatives as inhibitors of histone deacetylase
DK1981871T3 (da) 2006-01-19 2012-02-13 Janssen Pharmaceutica Nv Heterocyclylalkylderivater som hidtil ukendte inhibitorer af histondeacetylase
TW200801012A (en) * 2006-04-26 2008-01-01 Piramed Ltd Phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and methods of use
TWI498332B (zh) 2006-04-26 2015-09-01 Hoffmann La Roche 作為pi3k抑制劑之嘧啶衍生物及相關製備方法、醫藥組合物、用途、套組及產物
WO2007129161A2 (en) 2006-04-26 2007-11-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Thieno [3, 2-d] pyrimidine derivative useful as pi3k inhibitor
US20100016435A1 (en) 2006-05-16 2010-01-21 Mcgill University Hybrid molecules having mixed vitamin d receptor agonism and histone deacetylase inhibitory properties
WO2008033747A2 (en) 2006-09-11 2008-03-20 Curis, Inc. Multi-functional small molecules as anti-proliferative agents
US7547781B2 (en) 2006-09-11 2009-06-16 Curis, Inc. Quinazoline based EGFR inhibitors containing a zinc binding moiety
AU2007296746B2 (en) 2006-09-11 2012-07-05 Curis, Inc. Quinazoline based EGFR inhibitors containing a zinc binding moiety
JP2010502741A (ja) 2006-09-11 2010-01-28 キュリス，インコーポレイテッド Ｐｔｋインヒビターとしての亜鉛結合部分を含む置換２−インドリノン
AU2007296743B2 (en) 2006-09-11 2012-02-16 Curis, Inc. Tyrosine kinase inhibitors containing a zinc binding moiety
US20080161320A1 (en) 2006-09-11 2008-07-03 Xiong Cai Fused bicyclic pyrimidines as ptk inhibitors containing a zinc binding moiety
CN105481788A (zh) 2006-10-28 2016-04-13 梅特希尔基因公司 组蛋白脱乙酰酶抑制剂
MX2009005950A (es) * 2006-12-07 2009-10-12 Genentech Inc Compuestos inhibidores de fosfoinositido 3-quinasas y metodos de uso.
RU2470936C2 (ru) 2006-12-07 2012-12-27 Дженентек, Инк. Соединения-ингибиторы фосфоинозитид 3-киназы и способы применения
US20100069458A1 (en) 2007-02-15 2010-03-18 Peter Wisdom Atadja Combination of lbh589 with other therapeutic agents for treating cancer
CN101674833A (zh) 2007-03-20 2010-03-17 柯瑞斯公司 含有锌结合半族的Raf激酶抑制剂
WO2009036020A1 (en) 2007-09-10 2009-03-19 Curis, Inc. Mek inhibitors containing a zinc binding moiety
WO2009036057A1 (en) 2007-09-10 2009-03-19 Curis, Inc. Antiproliferative agents containing a zinc binding moiety
TW200922590A (en) 2007-09-10 2009-06-01 Curis Inc VEGFR inhibitors containing a zinc binding moiety
TW200922564A (en) 2007-09-10 2009-06-01 Curis Inc CDK inhibitors containing a zinc binding moiety
WO2009036066A1 (en) 2007-09-10 2009-03-19 Curis, Inc. Vegfr inhibitors containing a zinc binding moiety
EP2205242B1 (en) 2007-09-12 2015-04-15 Genentech, Inc. Combinations of phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2009042646A1 (en) 2007-09-24 2009-04-02 Curis, Inc. Anti-proliferative agents
JP5348725B2 (ja) 2007-10-25 2013-11-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド チエノピリミジン化合物の製造方法
US20090149511A1 (en) 2007-10-30 2009-06-11 Syndax Pharmaceuticals, Inc. Administration of an Inhibitor of HDAC and an mTOR Inhibitor
WO2009086012A1 (en) 2007-12-20 2009-07-09 Curis, Inc. Aurora inhibitors containing a zinc binding moiety
WO2010008847A2 (en) 2008-06-24 2010-01-21 Takeda Pharmaceutical Company Limited Pi3k/m tor inhibitors
WO2009155659A1 (en) 2008-06-27 2009-12-30 The University Of Queensland Combination therapy
US8196911B2 (en) 2008-10-27 2012-06-12 Honda Motor Co., Ltd. Adjustable rate subframe mount
EA024252B1 (ru) * 2009-01-08 2016-08-31 Кьюрис, Инк. Ингибиторы фосфоинозитид-3-киназ с цинксвязывающей группой
JP5844159B2 (ja) 2009-02-09 2016-01-13 ユニヴェルシテ デクス−マルセイユＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅ Ｄ’Ａｉｘ−Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ Ｐｄ−１抗体およびｐｄ−ｌ１抗体ならびにその使用
JP5709766B2 (ja) 2009-03-12 2015-04-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 造血器腫瘍の治療のためのホスホイノシチド３キナーゼ阻害剤化合物と化学療法剤の併用
CA2776944A1 (en) 2009-10-12 2011-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Combinations of a pi3k inhibitor and a mek inhibitor
JP2013525308A (ja) * 2010-04-16 2013-06-20 キュリス，インコーポレイテッド Ｋ−ｒａｓ変異を有する癌の治療
WO2012135571A1 (en) * 2011-04-01 2012-10-04 Curis, Inc. Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
US20130102595A1 (en) 2011-04-15 2013-04-25 Curis, Inc. Treatment of cancers having k-ras mutations
MX368257B (es) 2011-08-01 2019-09-26 Genentech Inc Antagonistas de unión al eje pd-1e inhibidores de mek y sus usos en el tratamiento de cáncer.
JP6980980B2 (ja) 2015-06-25 2021-12-15 イミューノメディクス、インコーポレイテッドImmunomedics, Inc. 抗ｈｌａ‐ｄｒまたは抗ｔｒｏｐ‐２抗体と微小管阻害剤、ｐａｒｐ阻害剤、ブルトンキナーゼ阻害剤またはホスホイノシチド３‐キナーゼ阻害剤との併用は癌の治療効果を有意に改善する
EA201991069A1 (ru) * 2016-11-02 2019-10-31 Комбинированная терапия ингибитором фосфоинозитид-3-киназы и связывающим цинк агентом

Also Published As

Publication number Publication date
DK2694075T3 (en) 2016-08-01
AU2012236367A1 (en) 2013-04-18
LT3111938T (lt) 2019-06-25
SI2694075T1 (sl) 2016-07-29
KR101902325B1 (ko) 2018-09-28
TWI571469B (zh) 2017-02-21
EP2694075B1 (en) 2016-04-27
WO2012135571A1 (en) 2012-10-04
US20200215039A1 (en) 2020-07-09
EP2694075A1 (en) 2014-02-12
KR20140023333A (ko) 2014-02-26
US20170304279A1 (en) 2017-10-26
IL228588A (en) 2016-11-30
SMT201900435T1 (it) 2019-09-09
RS54903B1 (sr) 2016-10-31
ME03523B (me) 2020-04-20
PT3111938T (pt) 2019-07-10
EA201301114A1 (ru) 2014-04-30
CN103582483B (zh) 2016-02-17
IL228588A0 (en) 2013-12-31
BR112013025340B1 (pt) 2021-12-21
US8710219B2 (en) 2014-04-29
US9249156B2 (en) 2016-02-02
JP6275784B2 (ja) 2018-02-07
NZ705039A (en) 2016-03-31
SI3111938T1 (sl) 2019-08-30
US10543197B2 (en) 2020-01-28
CA2830822C (en) 2018-10-02
ME02451B (me) 2016-09-20
CA2830822A1 (en) 2012-10-04
JP6242331B2 (ja) 2017-12-06
HRP20191091T1 (hr) 2019-09-20
JP2016188255A (ja) 2016-11-04
IL248597B (en) 2018-04-30
ZA201307082B (en) 2015-04-29
US10111864B2 (en) 2018-10-30
SG10201602569RA (en) 2016-05-30
SG193563A1 (en) 2013-11-29
US11135205B2 (en) 2021-10-05
CL2013002823A1 (es) 2014-04-11
EA022434B1 (ru) 2015-12-30
EP3111938A1 (en) 2017-01-04
BR112013025340A2 (pt) 2016-12-13
PT2694075T (pt) 2016-07-11
ES2733128T3 (es) 2019-11-27
CN105461736B (zh) 2018-06-12
US20130090335A1 (en) 2013-04-11
MX340577B (es) 2016-07-13
ES2577982T3 (es) 2016-07-19
US9657032B2 (en) 2017-05-23
EA022434B9 (ru) 2016-02-29
JP2018052987A (ja) 2018-04-05
NZ615586A (en) 2015-02-27
EP2694075A4 (en) 2014-10-01
US20160185796A1 (en) 2016-06-30
HRP20160545T1 (hr) 2016-06-17
JP2014509653A (ja) 2014-04-21
HUE028910T2 (en) 2017-01-30
HUE045041T2 (hu) 2019-12-30
IL248597A0 (en) 2016-12-29
MX2013011132A (es) 2014-03-12
TW201247678A (en) 2012-12-01
CN105461736A (zh) 2016-04-06
PE20141382A1 (es) 2014-11-04
DK3111938T3 (da) 2019-07-01
PL2694075T3 (pl) 2016-09-30
AU2012236367B2 (en) 2014-10-09
PL3111938T3 (pl) 2019-09-30
US11654136B2 (en) 2023-05-23
SMT201600179B (it) 2016-08-31
KR20180108848A (ko) 2018-10-04
US20190091211A1 (en) 2019-03-28
CY1121825T1 (el) 2020-07-31
CN103582483A (zh) 2014-02-12
CY1117785T1 (el) 2017-05-17
EP3111938B1 (en) 2019-05-08
US20140243330A1 (en) 2014-08-28
HK1194969A1 (zh) 2014-10-31
ZA201406167B (en) 2015-03-25
US20220168284A1 (en) 2022-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11654136B2 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
HK1232775A1 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
HK1232775B (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
HK1194969B (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
AU2014280913A1 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
NZ615586B2 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
NZ705039B2 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety