RS59409B1

RS59409B1 - 7-(morfolinil)-2-(n-piperazinil) metil tieno [2, 3-c]piridinski derivati kao antikancerski lekovi

Info

Publication number: RS59409B1
Authority: RS
Inventors: Durga Prasad Konakanchi; Subba Rao Pula; Rama Krishna Pilli; Lakshmana Viswa Venkata Pavan Kumar Maddula; Srinivasa Krishna Murthy Konduri; Janaki Rama Rao Ravi; Naga Vasanta Srinivasu Vuppalapati; Sandeep Kumar Thoota; Pulla Reddy Muddasani; Kali Satya Bhujanga Rao Adibhatla; Venkaiah Chowdary Nannapaneni
Original assignee: Natco Pharma Ltd
Priority date: 2014-12-11
Filing date: 2014-12-11
Publication date: 2019-11-29
Also published as: JP2017537139A; MA40110B2; IL252254B; DK3230289T3; HRP20192041T1; EP3230289A1; UA117318C2; NZ729078A; CN107074873A; SG11201702162PA; PH12017500342B1; CA2959980A1; CA2959980C; JP6454419B2; LT3230289T; WO2016092556A1; ZA201701036B; AP2017009749A0; SMT201900622T1; SI3230289T1

Description

Opis pronalaska

Oblast tehnike na koju se pronalazak odnosi

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na serije novih supstituisanih 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)-metil tieno[2,3-c]piridina koji su korisni u lečenju raznih kancera mozga, dojke, pluća, pankreasa i prostate i sličnog. Predmetni pronalazak obezbeđuje serije novih supstituisanih 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)-metil tieno[2,3-c]piridina formule I ili njihovu farmaceutski prihvatlјivu so,

gde

R1 može biti -H, C1-C6 alkil, C3-C6 cikloalkil, -C(O)R5, -S(O)2R5, -C(O)2R5, C1-C6 alkil supstituisan sa R6, C3-C6 cikloalkil supstituisan sa R6, -aril, -aril supstituisan sa R6, -heteroarilne grupe supstituisane sa R6;

R2, R3 i R4 su svaki nezavisno -H, -OH, -SH, halo, amino, cijano, nitro, C1-C6 alkil, C3-C6 cikloalkil, aril, -C(O)R5, -S(O)2R5, -C(O)2R5, -C=C(H)-R6, aminokarbonil supstituisan sa R6, alkilamino grupa supstituisana bilo sa R6 i koja po izboru sadrži-C3-C6 cikloalkil, alkilaminokarbonil, supstituisani heteroaril, po izboru supstituisan sa H ili amino, kondenzovan bicikličan ili tricikličan heteroaril koji sadrži 1, 2 ili 3 heteroatoma izabrana od N, O i S ili aril, po izboru supstituisan sa hidroksi, hidroksi alkil, amino, aminoalkil, amino karbonil, cijano, halogenom, ariloksi grupom ili R6;

R5 je H, alkil, amino, -aril supstituisan sa R6, heteroaril supstituisan sa R6, kondenzovan heteroaril supstituisan sa R6, -trifluorometil;

R6 je -H, hidroksi grupa, halogena, cijano, nitro, amino ili C1-C6 alkil grupa.

Poznato stanje tehnike

[0002] PCT prijava WO 2007/122410 određena jedinjenja tieno[2,3-c]pirimidina koja deluju mehanizmom preko PI3 kinaze i korisna su u lečenju raznih proliferativnih poremećaja mozga, dojke, pluća itd. Struktura glavnog jedinjenja GDC-0941, danas nazvanog Piktilisib (Pictilisib), navedena je ispod:

Piktilisib

Određeni tieno[2,3-c]piridini kao PI3 kinaze

[0003] WO2009071901A1 opisuje klasu fuzionisanih tricikličnih derivata triazola i tiofena kao inhibitora PI3 kinaze koji su korisni u lečenju inflamatornih, autoimunih, kardiovaskularnih, neurodegerativnih, metaboličkih, onkoloških, nociceptivnih ili oftalmičkih poremećaja.

[0004] US patentna prijava br. 20090247567A1 opisuje određene tieno[2,3-c]piridine, fuzionisani benzopiran i fuzionisani benzoksipen kao inhibitore PI3 kinaze.

[0005] US8653089 opisuje kako pripremu heterocikličnih jedinjenja tako i selektivne inhibitore izoforme PI3 kinaze tipa p110 delta, za lečenje inflamacije, imunih oboljenja i određenih oblika kancera.

Tieno [2,3-c]piridini za druge primene

[0006] US3579526A opisuje serije tienopiridinskih jedinjenja kao korisnih intermedijera boja, insekticida, herbicida, pesticida i lubrikantnih uljanih aditiva.

[0007] GB2010249A opisuje određene tieno [2,3-c] - [3,2-c] piridine i njihove terapijske primene u vidu inhibitora inflamacije.

[0008] GB2031428A opisuje nove derivate tieno [2,3-c] piridina i njihove terapijske primene kao antiinflamatornih jedinjenja.

[0009] EP0292051A2 opisuje pripremu 2-[(tienopiridinilmetil)tio]benzimidazola kao antiulkusnih sredstava. Ovi derivati benzimidazola i tienopiridina su odlična antiulkusna sredstva.

[0010] WO2000075145A1 i US6232320 opisuju pripremu tienopiridina i tienopirimidina kao antiinflamatornih jedinjenja koja inhibiraju ćelijsku adheziju.

[0011] WO2005110410A2 opisuje pripremu fuzionisanih heterocikličnih jedinjenja kao inhibitora kinaze. Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja ili farmaceutski prihvatlјive soli kao inhibitore kinaza, naročito COT ili MK2 kinaza.

Predmetni pronalazak

[0012] Glavni cilј predmetnog pronalaska je da obezbedi seriju novih supstituisanih 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)-metiltieno[2,3-c]piridina opšte formule I koja je prethodno definisana, ili njihovih farmaceutski prihvatlјivih soli.

[0013] Sledeći cilј predmetnog pronalaska je da obezbedi serije novih supstituisanih 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)-metiltieno[2,3-c]piridina opšte formule I koja je prethodno definisana, i njihovih farmaceutski prihvatlјivih soli, a koji su potentni i selektivni inhibitori PI3 kinaze i stoga su korisni u lečenju i prevenciji raznih tegoba kod ljudi poput kancera.

[0014] Još jedan cilј predmetnog pronalaska je da obezbedi nove serije supstituisanih 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)-metiltieno[2,3-c]piridina opšte formule I koja je prethodno definisana, kao i njihovih farmaceutski prihvatlјivih soli, koji su sa odličnom in vivo aktivnošću kod solidnih tumora kao što su plućni, pankreasa itd.

[0015] Sledeći cilј predmetnog pronalaska je da obezbedi proces za pripremu serija novih supstituisanih 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)-metiltieno[2,3-c] piridina, opšte formule I koja je prethodno definisana, i njihovih farmaceutski prihvatlјivih soli.

Detalјan opis pronalaska

[0016] Jedinjenja u skladu sa predmetnim pronalaskom su stoga, kao potentni i selektivni inhibitori PI3 kinaze, korisna u lečenju i prevenciji raznih tegoba kod ljudi poput kancera.

[0017] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule I i njihove farmaceutski prihvatlјive soli koji se mogu pripremiti bilo kojim procesom za koji je poznato da je primenlјiv na hemijski srodna jedinjenja.

[0018] Pronalazak se odnosi na nove supstituisane 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)metil tieno [2,3-c]piridine formule-I ili na njihovu farmaceutski prihvatlјivu so,

gde

R1 je -H, C1-C6 alkil, C3-C6 cikloalkil, -C(O)R5, -S(O)2R5, -C(O)2R5,

C1-C6 alkil supstituisan sa R6, C3-C6 cikloalkil supstituisan sa R6, -aril, -aril supstituisan sa R6, -heteroarilne grupe supstituisane sa R6;

R2, R3 i R4 su svaki nezavisno H, -OH, -SH, halo, amino, cijano, nitro, C1-C6 alkil, C3-C6 cikloalkil, aril, -C(O)R5, -S(O)2R5, -C(O)2R5, -C=C(H)-R6, aminokarbonil supstituisan sa R6, alkilamino grupa supstituisana bilo sa R6 i koja po izboru sadrži C3-C6 cikloalkil, alkilaminokarbonil, heteroaril, po izboru supstituisan sa H ili amino, kondenzovan bicikličan ili tricikličan heteroaril koji sadrži 1,2 ili 3 heteroatoma izabrana od N, O i S ili aril, po izboru supstituisan sa hidroksi, hidroksi alkil, amino, aminoalkil, amino karbonil, cijano, halogenom, ariloksi grupom ili R6;

R5 je H, alkil, amino, aril supstituisan sa R6, hetero aril supstituisan sa R6, fuzionisan heteroaril supstituisan sa R6, -trifluorometil;

R6 je H, hidroksi, halogena, cijano, nitro, amino ili C1-C6 alkil grupa.

[0019] Jedinjenja formule-I i njihove farmaceutski prihvatlјive soli mogu biti pripremljena bilo kojim procesom za koji je poznato da je primenlјiv na hemijski srodna jedinjenja.

[0020] U principu, aktivna jedinjenja mogu biti napravljena od odgovarajućih supstituisanih 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)metil-tieno[2,3-c]piridinskih jedinjenja izvedenih od prethodnika supstituisanih tieno[2,3-c]piridinskih derivata.

[0021] Aktivna jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti pripremljena po sintetskoj Šemi I koja sledi.

Šema I

gde su R1, R2, R3 i R4 kao što je to prethodno definisano.

Razna jedinjenja formule-I se pripremaju potupcima koji slede

a) Priprema formule - III

[0022]

[0023] Jedinjenje II je tretirano rastvorom natrijum nitrita, u prisustvu bromovodične kiseline, a diazotizovan rastvor je polako dodat u bakar (I) bromid da bi se dobila formula III. Gde je R2kao što je prethodno definisano. Sredstvo za halogenovanje može biti vodeni rastvor bromovodonične kiseline, bromovodonična kiselina u sirćetnoj kiselini, hlorovodonična kiselina. Reakcija može biti izvedena bez bilo kakvog rastvarača ili sa bromovodoničnom kiselinom, DM vodom itd. Temperatura reakcije je održavana između -5°C i 110 °C, poželјno na temperaturi refluksa reagensa za halogenovanje.

b) Priprema formule - IV

[0024]

[0025] Estarska grupa jedinjenja formule-III je hidrolizovana u derivate karboksilne kiseline jedinjenja formule-III. Jedinjenja formule-III su tretirana rastvorom natrijum hidroksida u prisustvu tetrahidrofurana, metanola i vode. Konačnim zakišeljavanjem sa hlorovodoničnom kiselinom je dobijena formula IV (gde je R2 kao što je prethodno definisano). Temperatura reakcije je održavana između od 5°C do 110°C, poželјno između od 25°C do 35°C.

c) Priprema formule - VI

[0026]

[0027] Sa cijanacionim agensima, kao što je supstituisani benzoil acetonitrile, u prisustvu natrijum alkoksida i nižeg alkohola kao rastvarača, ili u prisustvu vode, hlorovodonične kiseline itd., jedinjenja formule IV su prevedena u cijanometilne derivate tiofena formule-VI (gde je R2 kao što je prethodno definisano). Temperatura reakcije je održavana između 5°C i 110°C, poželјno na temperaturi refluksa rastvarača.

d) Priprema formule - VII

[0029] Jedinjenja formule VI su tretirana fosfor trihalidom, sa katalitičkom količinom dimetilformamida, čistim ili u prisustvu rastvarača kao što su halogenovani aril ili alkani, da bi se dobila jedinjenja formule-VII (gde su R2, R3 i X kao što je prethodno definisano). Temperatura reakcije je održavana između od 25°C do 180°C, poželјno od 120°C do 125°C.

e) Priprema formule - VIII

[0030]

[0031] Jedinjenja formule VII su tretirana morfolinom i etanolom da bi se dobila jedinjenja formule VIII (gde su R2, R3 i X kao što je prethodno definisano). Temperatura reakcije je održavana između od 25°C do 140°C, poželјno od 105°C do 110°C.

f) Priprema formule - IX

[0032]

[0033] Jedinjenja formule-VIII su tretirana sa n-butil litijumom, u heksanu i dimetil formamidu, da bi se dobila jedinjenja formule IX (gde su R2, R3 i X kao što je prethodno definisano). Temperatura reakcije je održavana između -80°C i 0°C, poželјno od -60°C do -70°C.

g) Priprema formule - XI

[0034]

[0035] Jedinjenja formule IX su tretirana formulom X i trimetil ortoformatom, natrijum triacetoksi borohidridom, da bi se dobila jedinjenja formule XI (gde su R1, R2, R3 i X kao što je prethodno definisano). Temperatura reakcije je održavana između od 0°C do 110°C, poželјno na od 25°C do 35°C.

h) Priprema formule - I

[0036]

[0037] Jedinjenja formule XI su tretirana formulom XII boronskih estara ili boronskih kiselina u prisustvu bis trifenilfosfin (II) dihlorida, vodenog rastvora natrijum karbonata i toluena i etanola, da bi se dobila jedinjenja formule I (gde su R1, R2, R3 i R4 kao što je prethodno definisano). Temperatura reakcije je održavana između od 0°C do 160°C, poželјno od 115°C do 120°C.

[0038] Alternativno, jedinjenja formule-XVII mogu biti pripremljna po Šemi-II koja sledi:

Šema - II

Korak (c)

i) Priprema jedinjenja formule-XIV

[0039]

Aceton

Korak (a)

[0040] Supstituisane 3-metil-2-tiofen karboksilne kiseline (formule-XIII) su tretirane sa dimetil sulfatom i kalijum karbonatom u acetonskom rastvaraču da bi se dobila jedinjenja formule -XIV. Temperatura reakcije je održavana između 15°C i 55°C, poželјno od 25°C do 30°C.

j) Priprema jedinjenja formule-XV

[0041]

[0042] Jedinjenja formule-XIV su tretirana sa N-bromosukcinimidom i benzoil peroksidom u ugljentetrahloridnom rastvaraču da bi se dobila jedinjenja formule-XV. Temperatura reakcije je održavana između 25°C i 110°C, poželјno na od 40°C do 80°C i poželјnije na od 75°C do 80°C.

k) Priprema jedinjenja formule-XVI

[0043]

[0044] Jedinjenja formule-XV su tretirana natrijum cijanidom u vodi, da bi se dobila jedinjenja formule-XVI. Temperatura reakcije je održavana između 25°C i 90°C, poželјno na od 50°C do 55°C.

l) Priprema jedinjenja formule -XVII

[0045]

[0046] Jedinjenja formule XVI su tretirana rastvorom natrijum hidroksida u prisustvu tetrahidrofurana i metanola i na kraju su zakišelјena rastvorom hlorovodonične kiseline da bi se dobila Formula-XVII. Temperatura reakcije je održavana između 25°C i 60°C, poželјno na od 25°C do 30°C.

[0047] Pronalazak se naročito odnosi na sintetisane nove fuzionisane derivate piridina kao antikancerske lekove.

[0048] Detalјi pronalaska su navedeni u primerima koji su dati u tekstu koji sledi i koji su obezbeđeni samo radi ilustracije, te stoga ove primere ne treba tumačiti ograničavajućim za područje pronalaska.

Primer-1: priprema metil 3-bromo-4-metil-2-tiofenkarboksilata

[0049]

[0050] U mešani rastvor 50 g (0,292 mol) metil 3-amino-4-metiltiofen-2-karboksilata u 110 ml bromovodonične kiseline, u kapima je dodato 21,17 g (0,306 mol) natrijum nitrita u 50 ml vode, uz održavanje temperature reakcione smeše na 0-5°C, hlađenjem u ledenom vodenom kupatilu. Kada je dodavanje završeno, rastvor je mešan na 0-5°C tokom 60 min. Diazotizovan rastvor je zatim dodat u kapima u rastvor 44,0 g (0,306 mol) bakar (I) bromida u 130 ml bromovodonične kiseline, uz održavanje temperature reakcione smeše na 0-5°C, hlađenjem u ledenom vodenom kupatilu. Kada je dodavanje završeno, rastvor je mešan na 0-5°C tokom 30 minuta, a zatim je reakciona smeša grejana u kupatilu sa konstantnom temperaturom od 65°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je daljerazblažena sa 600 ml vode uz održavanje temperature na 25-30°C hlađenjem, pa je ekstrahovana dva puta sa po 400 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni, isprani dva puta sa po 400 ml vode i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Etil acetat je uklonjen destilacijom pod vakuumom, na 60°C, da bi se dobio metil 3-bromo-4-metil-2-tiofenkarboksilat, 65,5 g (95,3%), u vidu žute čvrste supstance, tačke topljenja od 73° C do 76,5° C i HPLC čistoće od 86 %.<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 2,21 (d, CH3, 3H), 3,82 (s, O-CH3, 3H), 7,759-7,761 (d, 1H).<13>CNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 15,80(1C), 52,13(1C), 119,21(1C), 126,37(1C), 128,38 (1C), 138,98 (1C), 160,38(1C). Masa: 237,0 [M+2], 235,0 [M].

Primer-2: priprema 3-bromo-4-metiltiofen-2-karboksilne kiseline

[0051]

[0052] Metil 3-bromo-4-metil-2-tiofenkarboksilat (64,0 g; 0,272 mol) je rastvoren u smeši metanola (288 ml) i tetrahidrofurana (288 ml), pa je dodat 1N vodeni rastvor natrijum hidroksida (420 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. i potom je zakišelјena sa 1N hlorovodoničnom kiselinom da bi se dobilo 35,5 g (59,0%) 3-bromo-4-metiltiofen-2-karboksilne kiseline kao beličaste čvrste supstance, tačke toplјenja od 227°C do 229°C i HPLC čistoće od 97,3%.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 2,21 (d, CH3, 3H), 7,692-7,794 (d, 1H), 13,30 (s, OH, 1H)<13>CNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 15,98(1C), 118,45(1C), 127,77(1C), 128,24(1C), 138,96(1C), 161,54(1C). Masa: 221,0 [M].

Primer-3: Sinteza 3-(cijanometil)-4-meti-tiofen-2-karboksilne kiseline

[0053]

[0054] Benzoil acetonitril (73,8 g; 0,508 mol) je dodat ohlađenom rastvoru natrijum etoksida (pripremlјenom rastvaranjem 19,5 g metala natrijuma, 0,847 mol, u etanolu, 1125 ml), pa je dodata 3-bromo-4-metil-tiofen-2-karboksilna kiselina (75,0 g; 0,339 mol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Zatim je dodato 4,5 g (0,0247 mol; 0,07 meq) anhidrovanog bakar (II) acetata i smeša je kuvana na temperaturi refluksa tokom 2 sata. Dalje je dodato 4,5 g (0,0247 mol; 0,07 meq) anhidrovanog bakar (II) acetata i smeša kuvana na temperaturi refluksa tokom 8 sati. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i masa je izdvojena filtriranjem. Etanol je uklonjen destilacijom pod vakuumom, na temperaturi od 60°C. Reakciona smeša je dalje razblažena sa 750 ml vode, uz održavanje temperature na 25-30°C hlađenjem, nakon čega je rastvor zakišelјen hlorovodoničnom kiselinom i ekstrahovan dva puta sa po 750 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni i ekstrahovani dva puta sa po 750 ml 5% rastvora natrijum karbonata. Vodeni ekstrakti natrijum karbonata su spojeni, rastvor je zakišelјen hlorovodoničnom kiselinom i ekstrahovan dva puta sa po 325 ml etil acetata. Etil acetat je uklonjen destilacijom pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod, a rekristalizacijom sirovog proizvoda iz izopropil etra je dobijeno 35,10 g (57,14%) žute čvrste supstance, tačke topljenja od 140°C do 143°C i HPLC čistoće od 94,1%.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 2,24 (s, CH3, 3H), 4,25 (s, CH2, 2H), 7,58 (d, 1H), 13,65 (s, OH, 1H).<13>CNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 14,05(1C), 117,46(1C), 128,10(1C), 130,18 (2C), 135,58 (1C), 138,55 (1C), 163,02 (1C). Masa: 180,1 [M-1]

Primer-4: priprema 5,7-dibromo-3-metiltieno [2,3-c]piridina

[0055]

[0056] 3-(Cijanometil)-4-metil-2-tiofenkarboksilna kiselina (56,0 g; 0,309 mol) je uvdena u reakciju u fosfor tribromidu (371 ml) i dimetilformamidu (35 ml, na 120-125°C, tokom 4 sata. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature. Nakon hlađenja, reakciona smeša je presuta u ledenu vodu (3920 ml) da bi se dobio čvrst sirovi proizvod. Sirovi proizvod je rastvoren u metilen hloridu (560 ml), nakon čega je ispran sa 560 ml vode i osušen upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Metilen hlorid je uklonjen destilacijom pod vakuumom, a čvrsta supstanca je triturisana heksanom da bi se dobilo 67,7 g (71,2%) svetlo smeđe čvrste supstance, tačke topljenja od 148°C do 150°C i HPLC čistoće od 94,3%.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 2,41 (d, 3H), 7,41 (d, 1H), 7,76 (s, 1H)<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 13,78 (1C), 119,46(1C), 130,03 (1C), 132,37(1C), 133,31(1C), 134,06 (1C), 138,68 (1C), 148,18 (1C). Masa: 308,12 [M+1].

Primer-5: priprema 4-(5-bromo-3-metiltieno-[2,3-c] piridin-7-il)-morfolina

[0057]

[0058] Rastvor 100 g (0,325 mola) 5,7-dibromo-3-metiltieno [2,3-c] piridina, rastvorenog u 275 ml etanola i 284,4 g (3,271 mol) morfolina, grejan je u zaptivenoj epruveti na konstantnoj temperaturi od 105-110°C tokom 4 sata. Etanol i višak morfolina su uklonjeni destilacijom pod vakuumom, a sirovi proizvod je rastvoren u metilen hloridu (2000 ml), ispran četiri puta sa po 600 ml vode i osušen upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Metilen hlorid je potom uklonjen destilacijom pod vakuumom, pa je čvrsta supstanca triturisana di-izopropil etrom, da bi se dobilo 61,17 g (60,0%) svetlo smeđe čvrste supstance, HPLC čistoće 97,4%.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 2,36 (d, CH3, 3H), 3,71-3,73 (t, 4H, 2 CH2), 3,86-3,88 (t, 4H, 2 CH2), 7,19-7,20 (d, 1H), 7,27 (s, 1H).<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 13,65 (1C), 48,08 (2C), 66,82 (2C), 112,11 (2C), 122,07(1C), 126,13(1C), 130,78 (1C), 133,93 (1C), 149,74 (1C), 154,95 (1C). Masa: 313,21 [M]

Primer-6: priprema 1-metan sulfonilpiperazina

[0059]

[0060] U mešani rastvor 100,0 g (1,16 mola) piperazina, rastvorenog u 2000 ml metilen hlorida, u kapima je dodato 133,2 g (1,16 mol) metansulfonil hlorida na 25-30°C. Kada je dodavanje završeno, reakciona smeša je mešana 16 sati. i masa je alkalizovana sa 25 % (tež.) vodenim rastvorom natrijum hidroksida. Reakciona masa je zatim profiltrirana i isprana sa 800 ml vode, pa osušena upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Metilen hlorid je uklonjen destilacijom pod vakuumom, a da bi se dobio 81,2 g (42,5%) beličaste čvrste supstance, čistoće od 98,3% (hemijska analiza).

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 1,64 (s, NH, 1H), 2,77 (s, CH3, 3H), 2,95-2,98 (t, 4H, 2 CH2), 3,18-3,21 (t, 4H, 2 CH2).<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 33,85(1C), 45,34 (2C), 46,54 (2C). Masa: 165,1 [M+1]

Primer-7: priprema 5-bromo-3-metil-7-morfolino-tieno [2,3-c] piridina

[0061]

[0062] U mešani rastvor 50 g (0,1597 mol) 4-(5-bromo-3-metiltieno-[2,3-c] piridin-7-il)-morfolina u suvom tetrahidrofuranu (750 ml), na od -60° do -70°C, dodato je 120 ml (0,192 mol) 1,6 M n-butil litijuma u heksanu. Nakon mešanja od 1 i po sata, dodato je 29,0 g (0,39 mmol) suvog dimetil formamida. Reakciona smeša je zatim mešana tokom 1 sata. na od -60° do -70°C, pa je polako zagrejana do sobne temperature. Nakon još 2 sata održavanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je presuta u led/vodu (2250 ml) i ekstrahovana dva puta sa po 1000 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Etil acetat je uklonjen destilacijom pod vakuumom, na 60°C, da bi se dobilo 35,30 g (64,7%) žute čvrste supstance, tačke toplјenja od 170°C do 182,5°C, čistoće 96,4% (HPLC analiza).

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 2,41 (s, 3H, CH3), 3,63 (t, 4H, 2 CH2), 3,73 (t, 4H, 2CH2), 8,16 (s, 1H), 10,34 (s, 1H).<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 11,9 (1C), 48,7 (2C), 66,6 (2C), 112,4 (1C), 123,2(1C), 132,4(1C), 134,5(1C), 147,3(1C), 150,0 (1C), 155,1(1C), 183,8 (1C, C=0). Masa: 340,9 [M]

Primer-8: priprema 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il) metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il] morfolina

[0063]

[0064] U mešani rastvor 107,0 g (0,3137 mol) 5-bromo-3-metil-7-morfolino-tieno [2,3-c] piridina, 82,0 g (0,50 mola) 1-metan sulfonilpiperazina i 700 g trimetil ortoformata u 3210 ml 1,2-dihloroetana, tokom 4 sata je dodavano 700 g trimetil ortoformata, pa je reakciona smeša mešana tokom 16 sati. na sobnoj temperaturi. Ovome je zatim dodato 205,5 g (0,9693 mol) natrijum triacetoksi borohidrida i 1070 ml 1,2-dihloroetana. Reakciona smeša je dalje mešana tokom 4 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija smeša je zaustavljena sa 5350 ml vode, nakon čega je smeša ekstrahovana dva puta sa po 1750 ml metilen hlorida. Ekstrakti metilen hlorida su spojeni i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Rastvarači su uklonjeni destilacijom pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi čvrsti proizvod je dva puta rekristalisan iz acetonitrila (640 ml) da bi se dobilo 84,2 g (54,87%) smeđe čvrste supstance, tačke topljenja od 212°C do 215°Ci HPLC čistoće od 94,7%.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 2,27 (s, 3H, CH3), 2,64 (t, 4H, 2 CH2), 2,8 (s, 3H, CH3), 3,27 (t, 4H, 2 CH2), 3,67 (t, 4H, 2 CH2), 3,79 (s, 2H, 1CH2), 3,85 (t, 4H, 2 CH2), 7,20 (s, 1H).<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost ppm) 11,7(1C), 34,4(1C), 45,7(2C), 48,1(2C), 52,5(2C), 54,9 (2C), 66,8(1C), 112,0(1C), 120,7(1C), 128,5(1C), 134,0 (1C), 141,3 (1C), 150,9 (1C), 154,6(1C). Masa: 491,1 [M+2], 489,1[M]

Primer-9: priprema 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il] pirimidin-2-amina (Jedinjenje-1).

[0065]

[0066] Smeša 44,0 g (0,0899 mol) 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il] morfolina, 21,80 g (0,086 mola, 1,10 meq) pinakol estra 2-aminopirimidin-5-boronske kiseline, 4,0 g (0,0056 mola, 0,06 meq) bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorida, etanola (300 ml), toluena (300 ml), vode (100 ml) i 33,30 g (0,3146 mol; 3,50 meq) natrijum karbonata je grejana do 125-130°C, u zaptivenoj staklenoj epruveti, tokom 5 sati. Reakciona smeša je zatim ohlađena, pa su rastvarači uklonjeni destilacijom pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi čvrsti proizvod je prečišćen postupkom kiselo-baznog prećišćavanja da bi se dobilo 35,10 g (77,65%) svetlo smeđe čvrste supstance, HPLC čistoće od 99,7%.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 2,36 (s, 3H, CH3), 2,58 (t, 4H, 2-CH2), 2,89 (s, 3H), 3,13 (t, 4H, 2-CH2), 3,59 (t, 4H, 2-CH2), 3,79 (t, 4H, 2-CH2), 3,83 (s, 2H, CH2), 5,24 (s, 2H, NH2), 7,70 (s, 1H), 9,00 (s, 2H).<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost ppm): 11,5(1C), 33,7(1C), 45,3 (2C), 47,9 (2C), 51,8 (2C), 53,9 (2C), 66,1(1C), 103,6 (1C), 119,6 (1C), 121,4 (1C), 129,1 (1C), 140,7 (1C), 145,4 (1C), 149,5 (1C), 154,4 (1C), 156,1 (2C), 163,2(1C). Masa: 504,1[M+1]

Primer-10: priprema 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il) metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il] pirimidin-2-amin dihidrohlorida (Jedinjenje-1.2HCl).

[0067]

[0068] U mešani rastvor 15,0 g 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolinotieno[2,3-c]piridin-5-il] pirimidin-2-amina u 75,0 ml koncentrovane hlorovodonične kiseline je dodato 600 ml vode. Reakciona smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi, a tokom tog vremena se izdvajao i postepeno drobio žuti talog. Čvrsta supstanca je zatim izdvojena filtriranjem, pa je isprana sa 1N hlorovodoničnom kiselinom, osušena pod vakuumom, na 80-85°C, da bi se dobilo 15,10 g (88,0%) žute čvrste supstance, HPLC čistoće od 99,4% i sa teorijskim sadržajem dihidrohlorida od 99,13%.

Primer-11: priprema 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il) metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il] pirimidin-2-amin ditozilata (Jedinjenje-1. di-tozilat)

[0069]

[0070] U mešani rastvor 10,0 g (0,01985 mol) 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2-amina, u metilen hloridu (500 ml) i metanolu (100 ml), je dodat monohidrat p-toluen sulfonske kiseline (8,30 g; 0,04367 mol; 2,20 meq). Rastvarači su zatim uklonjeni, destilacijom pod vakuumom, da bi se dobila žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je dalje triturisana sa 300 ml acetona, osušena pod vakuumom, na 40-45°C, da bi se dobilo 15,10 g (89,97%) žute čvrste supstance, HPLC čistoće od 99,7% i sa teorijskim sadržajem ditozilata od 100,5% (w/w).

Primer-12: priprema 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il) metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il] pirimidin-2-amin dimezilata (Jedinjenje-1. dimezilat)

[0071]

[0072] U mešani rastvor 12,0 g (0,02382 mol) 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il] pirimidin-2-amina, u metilen hloridu (600 ml) i metanolu (120 ml), je dodato 9,40 g (0,0952 mol; 4,0 meq) metan sulfonske kiseline. Reakciona smeša je mešana 3 sata. na sobnoj temperaturi. Za to vreme je postepeno drobljen nastali žuti talog. Čvrsta supstanca je izdvojena filtriranjem i zatim je isprana acetonom (180 ml), pa osušena pod vakuumom, na 50-55°C, da bi se dobilo 16,10 g (97,16%) žute čvrste supstance HPLC čistoće od 99,8% i sa teorijskim sadržajem dimezilata od 99,6% w/w.

Primer-13: priprema 4-[5-(1H-indazol-4-il)-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]tieno[2,3-c]piridin-7 -il]morfolina (Jedinjenje-6)

[0074] Smeša 200 mg (0,40 mmol) 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il] morfolina, 200 mg (0,80 mmol, 2,0 meq) 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioksoborolan-2-il)-1H-indazola, 50,0 mg (0,07 mmol, 0,17 meq) bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorida, etanola (4 ml), toluena 4 ml), vode (1 ml), 200 mg natrijum karbonata, zagrejana je do 115-120°C, u zaprivenoj staklenoj epruveti, tokom 3 sata. Reakciona smeša je zatim ohlađena, pa su rastvarači uklonjeni destilacijom pod vakuumom, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni, upotrebom heksana i etil acetata, da bi se dobilo 120 mg (55,8%) u vidu svetlo smeđe čvrste supstance.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 2,37(s,3H,CH3), 2,59(t, 4H, 2-CH2), 2,90(s, 3H), 3,15(t, 4H, 2-CH2), 3,64(t, 4H, 2-CH2), 3,84(t, 4H, 2-CH2), 3,92(2H, CH2), 7,45(s, 1H), 7,94(s, 1H), 7,56(d, 1H), 7,58(d, 1H), 7,69(d, 1H), 13,1(s, 1H). Masa: 527,2[M+1]

Primer-14: priprema [3-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il) metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il] fenil]metanola (Jedinjenje-7)

[0075]

[0076] Smeša 200 mg (0,40 mmol) 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolina, 124 mg (0,8 mmol, 2,0 meq) 3-(hidroksimetil) fenilboronske kiseline, 50,0 mg (0,142 mmol, 0,17 meq) bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorida, etanola (4 ml), toluena 4 ml), vode (1 ml) i 200 mg natrijum karbonata, grejana je do 115-120°C, u zaptivenoj staklenoj epruveti, tokom 3 sata. Reakciona smeša je zatim ohlađena, pa su rastvarači uklonjeni destilacijom pod vakuumom, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi čvrsti proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni, upotrebom heksana i etil acetata, da bi se dobilo 95 mg (45,2%) u vidu žute čvrste supstance.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO) δ-vrednost (ppm): 2,40(s,3H,CH3), 2,59(t, 4H,2-CH2), 2,90(s, 3H, CH3), 3,14(t, 4H, 2-CH2), 3,60(t, 4H, 2-CH2), 3,82 (t, 4H, 2-CH2), 3,85(s,2H, CH2), 4,58(d, 2H), 5,24(t,1H,), 7,33(d, 1H), 7,41(t, 1H), 7,76(s,1H), 8,0(d,1H), 8,10(s,1H).<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost ppm): 11,7(1C), 33,9(1C), 45,4(2C), 48,2(2C), 51,9(2C), 54,0(1C), 63,0(1C), 66,2(2C), 105,7(1C), 120,6(1C), 124,6(1C), 125,0(1C), 126,6(1C), 128,4(1C), 129,5(1C), 139,2 (1C), 140,9(1C), 142,7(1C), 149,0(1C), 149,6(1C), 154,5(1C). Masa: 517,3 [M+1]

Primer-15: priprema metil 3-bromo-2-tiofenkarboksilata

[0077]

[0078] Metil-estar 3-amino-2-tiofenkarboksilne kiseline (100 g; 0,6369 mol) je resuspendovan u bromovodoničnoj kiselini (220 ml), pa je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Smeša je ohlađena na 0-5°C i u kapima je dodat natrijum nitrit (46,0 g; 0,666 mol) u vodi (100 ml), ispod 5°C. Smeša je zatim mešana tokom 1 sata i dodat je bakar (I) bromid (96,0 g; 0,6692 mol) u bromovodoničnoj kiselini (260 ml) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana na 60-65°C tokom 2 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena sa 1200 ml vode, uz održavanje temperature na 25-30°C hlađenjem, pa je ekstrahovana dva puta sa po 600 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni, isprani dva puta sa po 600 ml vode i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Etil acetat je uklonjen destilacijom pod vakuumom, na 60°C, da bi se dobilo 129,0 g (91,6%) u vidu žute čvrste supstance, tačke toplјenja od 47°C do 48°C i HPLC čistoće od 96%.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 3,90(s, O-CH3, 3H), 7,09 (d, 1H), 7,46 (d, 1H).

<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 52,10(1C), 116,96(1C), 127,12(1C), 130,61 (1C), 133,63 (1C), 161,0 (1C).

Masa: 222,8 [M+1].

Primer-16: priprema 3-bromo-2-tiofen karboksilne kiseline

[0079]

[0080] Metil 3-bromo-2-tiofenkarboksilat 128,0 g (0,5791 mol) je rastvoren u smeši metanola (576 ml), pa su dodati tetrahidrofuran (576 ml) i 1N vodeni natrijum hidroksid (876 ml). Smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata i dalje je zakišelјena sa 1 H hlorovodoničnom kiselinom, nakon čega je ekstrahovana dva puta sa po 740 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni, isprani sa 740 ml vode i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Dobijeni proizvod je bila beličasta čvrsta supstanca, tačke topljenja od 192°C do 198,5°C i HPLC čistoće od 98,1%.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 7,25-7,26 (d, 1H), 7,91-7,93 (d, 1H), 13,43 (s, OH, 1H).<13>CNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 116,02(1C), 128,35(1C), 133,19(2C), 161,66 (1C). Masa: 207 [M].

Primer-17: priprema 3-cijanometil-2-tiofenkarboksilne kiseline

[0081]

[0082] Ohlađenom rastvoru natrijum-etoksida (pripremlјenom od natrijuma 19,5 g; 0,847 mola, i etanola, 1125 ml) je dodat benzoil acetonitril (73,8 g; 0,550 mol), a zatim je dodata i 3-bromo-2-tiofen-2-karboksilna kiselina (75,0 g; 0,362 mol), nakon čega je smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Dalje je dodato 4,5 g (0,0247 mol) anhidrovanog bakar (II) acetata i smeša je kuvana na temperaturi refluksa tokom 2 sata. Potom je ponovo dodato 4,5 g (0,0247 mola) anhidrovanog bakar (II) acetata i smeša je kuvana na temperaturi refluksa tokom 8 stai. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i masa je profiltrirana. Etanol je uklonjen destilacijom pod vakuumom, na temperaturi od 60°C. Reakciona smeša je razblažena sa 750 ml vode, uz održavanje temperature na 25-30°C hlađenjem, pa je rastvor zakišelјen hlorovodoničnom kiselinom i ekstrahovan dva puta sa po 750 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni i ekstrahovani dva puta sa po 750 ml 5% rastvora natrijum karbonata. Vodeni ekstrakti natrijum karbonata su spojeni, rastvor je zakišelјen hlorovodoničnom kiselinom i ekstrahovan dva puta sa po 325 ml etil acetata. Etil acetat je uklonjen destilacijom pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod, a rekristalizacijom sirovog proizvoda iz izopropil etra je dobijeno 34,8 g (56,65%) u vidu žute čvrste supstance, tačke topljenja od 102°C do 106°C i HPLC čistoće od 97,1 %.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 4,25 [s, CH2(2H)], 7,24 (d, 1H), 7,88(d, 1H), 13,44[s, (širok opseg), OH, 1H].<13>CNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ-vrednost (ppm): 17,72 (1C), 118,5 (1C), 129,5(1C), 130,6(1C), 132,46(1C), 137,0 (1C), 162,9 (1C). Masa: 167,0 [M], 166,0 [M-1]

Primer-18: priprema 5,7-dibromotieno[2,3-c]piridina

[0083]

[0084] 3-(Cijanometil)-2-tiofenkarboksilna kiselina (56,0 g; 0,335 mol) je reagovala sa fosfor tribromidom (371 ml) i dimetilformamidom (35 ml), na 120-125°C, tokom 4 sata, pa je reakciona smeša ohlađena do sobne temperature. Nakon hlađenja, reakciona smeša je presuta u ledenu vodu (3920 ml) da bi se dobio čvrsti sirovi proizvod. Sirovi proizvod je rastvoren u metilen hloridu (560 ml), ispran sa 560 ml vode i osušen upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Metilen hlorid je uklonjen destilacijom pod vakuumom, a čvrsta supstanca je triturisana heksanom (400 ml) da bi se dobilo 67,7 g (71,2%) u vidu svetlo smeđe čvrste supstance, tačke topljenja od 114°C do 126,8°C.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 7,42 (d, 1H), 7,80(d, 1H), 7,87(s, 1H)<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 121,0(1C), 123,31(1C), 133,49(1C), 133,9(1C), 134,9(1C), 138,4(1C), 147,8(1C). Masa: 295,9 [M+2], 293,9 [M]

Primer-19: priprema 4-(5-bromotieno[2,3-c]piridin-7-il)morfolina

[0085]

[0086] Rastvor 50 g (0,1706 mola) 5,7-dibromotieno[2,3-c]piridina, rastvorenog u 230 ml etanola i 230 g morfolina, je grejan u zaptivenoj epruveti na konstantnoj temperaturi od 105-110°C tokom 4 sata. Etanol i višak morfolina su uklonjeni destilacijom pod vakuumom, pa je sirovi proizvod rastvoren u metilen hloridu (1200 ml), ispran četiri puta sa po 400 ml vode i osušen upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Metilen hlorid je uklonjen destilacijom pod vakuumom, da bi se dobilo 45,7 g (89,5%) u vidu svetlo smeđe čvrste supstance.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 3,62 (t, 4H, 2 CH2), 3,76 (t, 4H, 2 CH2), 7,43 (d, 1H), 7,37(s, 1H) 8,05 (d, 1H).<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 47,50 (2C), 65,90 (2C), 113,0 (1C), 120,89 (1C), 123,19 (1C), 132,80 (1C), 133,0 (1C), 149,7(1C), 154,2(1C).

Masa: 299,15 [M], 297,2 [M-2]

Primer-20: priprema 5-bromo-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-2-karbaldehida

[0087]

[0088] U mešani rastvor 42 g (0,1404 mol) 4-(5-bromotieno[2,3-c]piridin-7-il) morfolina u suvom tetrahidrofuranu (750 ml), na od -60° do -70°C, dodato je 105 ml (0,168 mola) 1,6 M n-butil litijuma u heksanu. Nakon mešanja od jednog i po sata, dodato je 20,5 g (0,28 mol) suvog dimetil formamida. Reakciona smeša je zatim mešana tokom 1 sata. na od -60° do -70°C, a zatim je lagano zagrejana do sobne temperature. Nakon dodatna 2 sata na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je presuta u led/vodu (1000 ml) i ekstrahovana dva puta sa po 420 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Etil acetat je uklonjen destilacijom pod vakuumom, na 60°C, da bi se dobilo 38,40 g (83,7%) u vidu žute čvrste supstance, tačke topljenja od 140°C do 153,5°C i HPLC čistoće od 95,0%.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 3,75 (t, 4H, 2 CH2), 3,86 (t, 4H, 2 CH2), 7,43 (s, 1H), 7,88(s, 1H), 10,13 (s, 1H).<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 48,0 (2C), 66,6 (2C), 114,3 (1C), 123,7(1C), 131,54(1C), 134,6(1C), 146,2(1C), 148,2(1C), 155,0(1C), 184,3(1C). Masa: 328,0 [M+1]

Primer-21: priprema 4-[5-bromo-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil] tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolina

[0089]

[0090] U mešani rastvor 50,0 g (0,1529 mol) 5-bromo-7-morfolino-tieno [2,3-c] piridin-2-karbaldehida, 40,0 g (0,2439 mol; 1,60 meq) 1-metan sulfonilpiperazina i 325 g trimetil ortoformata, u 1500 ml 1,2-dihloretana, tokom 4 sata. je dodato 325 g trimetil ortoformata, pa je reakciona smeša mešana tokom 16 sati. na sobnoj temperaturi. U smešu je dalje dodato 100 g (0,4716 mola, 3 meq) natrijum triacetoksi borohidrida i 1000 ml 1,2-dihloroetana. Reakciona smeša je mešana 4 sata. na sobnoj temperaturi. Zatim je reakcija smeše zaustavljena sa 2500 ml vode i smeša je ekstrahovana dva puta sa po 2000 ml metilen hlorida. Ekstrakti metilen hlorida su spojeni i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Rastvarači su uklonjeni destilacijom pod vakuumom, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi čvrsti proizvod je dva puta rekristalisan iz acetonitrila (300 ml), a da bi se dobilo 45,1 g (62,1%) u vidu smeđe čvrste supstance, tačke topljenja od 218°C do 224°C i HPLC čistoće od 95,4%.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 2,64 (t, 4H, 2 CH2), 2,79 (s, 3H, CH3), 3,27 (t, 4H, 2 CH2), 3,68 (t, 4H, 2 CH2), 3,83 (s, 2H, 1CH2), 3,85 (t, 4H, 2 CH2), 7,0 (s, 1H), 7,2(s, 1H), Masa: 477,01[M+2]

Primer-22: priprema 5-[2-[(4-metilsulfonil piperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il] pirimidin-2-amina (jedinjenje-2)

[0092] Smeša 40,0 g (0,08421 mol) 4-[5-bromo-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il) metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il] morfolina, 20,4 g (0,0923 mol; 1,10 meq) pinakol estra 2-aminopirimidin-5-boronske kiseline, 3,54 g (0,0056 mol; 0,06 meq) bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorida, etanola (300 ml), toluena (300 ml), vode (100 ml), 31,20 g natrijum karbonata (0,2943 mol; 3,50 meq) je grejana na 125-130°C, u zaptivenoj staklenoj epruveti, tokom 5 sati. Reakciona smeša je zatim ohlađena i rastvarači su uklonjeni destilacijom pod vakuumom, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi čvrsti proizvod je prečišćen postupkom kiselo-baznog prečišćavanja da bi se dobilo 33,150 g (80,15%) u vidu svetlo smeđe čvrste supstance, HPLC čistoće 99,6%.

Primer-23: priprema 4-[5-(1H-indazol-4-il)-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il] morfolina (jedinjenje-3)

[0093]

[0094] Smeša 1,0 g (2,1 mmol) 4-[5-bromo-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil] tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolina, 1,02 g (4,2 mmol, 2,0 meq) 4-(4, 4, 5, 5-tetrametil-[1,3,2]dioksoborolan-2-il)-1H-indazola, 200,0 mg (0,28 mmol, 0,13 meq) bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorida, etanola (20 ml), toluena 40 ml), vode (4 ml), 800 mg natrijum karbonata, je grejana na 115-120°C, u zaptivenoj staklenoj epruveti, tokom 3 sata. Reakciona smeša je zatim ohlađena i rastvarači su uklonjeni destilacijom pod vakuumom, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi čvrsti proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni, upotrebom heksana i etil acetata, da bi se dobilo 0,8 g (74,7%) u vidu svetlo smeđe čvrste supstance.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost (ppm): 2,59(t, 4H, 2-CH2), 2,90(s, 3H), 3,15(t, 4H, 2-CH2), 3,64(t, 4H, 2-CH2), 3,84(t, 4H, 2-CH2), 3,92(2H, CH2), 7,45(s, 1H), 7,94(s, 1H), 7,56(d, 1H), 7,58(d, 1H), 7,69(d, 1H), 7,43(d, 1H), 13,1(s, 1H) . Masa: 514,0[M+2], 513,0[M+1]

Primer-24: priprema [3-[2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il] fenil]metanola (jedinjenje-4 )

[0095]

[0096] Smeša 0,5 g (1,05 mmol) 4-[5-bromo-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil] tieno[2,3-c]piridin-7-il] morfolina, 0,32 g (2,10mmol, 2,0 meq) 3-(hidroksimetil) fenilboronske kiseline, 100,0 mg (0,142 mmol, 0,13 meq) bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorida, etanola (20 ml), toluena 20 ml), vode (2 ml), 400 mg natrijum karbonata, grejana je na 115-120°C, u zaptivenoj staklenoj epruveti, tokom 3 sata. Reakciona smeša je ohlađena i rastvarači su uklonjeni destilacijom pod vakuumom, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi čvrsti proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni, upotrebom heksana i etil acetata, da bi se dobilo 450 mg (86,5%) u vidu žute čvrste supstance.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO) δ-vrednost (ppm): 2,57(t, 4H, 2-CH2), 2,89(s, 3H,CH3), 3,14(t, 4H, 2-CH2), 3,60(t, 4H, 2-CH2), 3,82(t, 4H, 2-CH2), 3,89(s, 2H, CH2), 4,47(d, 1H), 4,57(d, 2H), 7,29(t, 2H), 7,42(t, 2H), 7,99(s, 1H), 8,0(s, 1H).<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost ppm): 33,8 (1C), 45,4(2C), 48,3(2C), 51,8(2C), 56,2(1C), 59,8(1C), 63,1(1C), 66,2(2C), 107,1(1C), 121,4(1C), 122,8(1C), 124,8(1C), 126,6(1C), 127,2(1C), 132,5(1C), 139,0 (1C), 141,2(1C), 142,8(1C), 147,7(1C), 154,4(1C). Masa: 504,1[M+2], 503,1[M+1]

Primer-25: priprema 3-[2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il]anilina (jedinjenje-5)

[0098] Smeša 1,0 g (2,1 mmol) 4-[5-bromo-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil] tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolina, 0,65 g (4,2 mmol, 2,0 meq) monohidrata 3-aminofenilboronske kiseline, 200,0 mg (0,28 mmol, 0,13 meq) bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorida, etanola (20 ml), toluena (40 ml), vode (4 ml), 800 mg natrijum karbonata, je grejana na 125-130°C, u zaptivenoj staklenoj epruveti, tokom 5 sati. Reakciona smeša je zatim ohlađena i rastvarači su uklonjeni destilacijom pod vakuumom, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi čvrsti proizvod je prečišćen rekristalizacijom, upotrebom heksana i etil acetata, da bi se dobilo 0,78 g (76,4%) svetle smeđe čvrste supstance.<1>HNMR (400 MHz, DMSO) δ-vrednost (ppm): 2,57(t, 4H, 2-CH2), 2,89(s, 3H,CH3), 3,14(t, 4H, 2-CH2), 3,61(t, 4H, 2-CH2), 3,80(t, 4H, 2-CH2), 3,87(s,2H, CH2), 5,13(s, 2H, NH2), 6,57(d, 1H), 7,0(t,1H), 7,21(d,1H), 7,38(s,1H), 7,68(1H).

<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost ppm): 33,8 (1C), 45,4(2C), 48,1(2C), 51,8(2C), 56,3(1C), 66,2(2C), 106,9(1C), 112,1(1C), 114,2(1C), 114,3(1C), 121,1(1C), 122,9(1C), 129,1(1C), 139,9(1C), 147,5(1C), 148,6(1C), 148,7(1C), 149,7(1C), 154,3(1C). Masa: 488,3[M+1]

Primer-26: Priprema 3-[3-metil-2-[(4-metil sulfonilpiperazin-1-il) metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il]anilina (jedinjenje 8)

[0099]

[0100] Smeša 1,0 g (2,1 mmol) 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il] morfolina, 0,92 g (4,2 mmol; 2,0 meq) pinakol estra 3-aminofenil boronske kiseline, 200,0 mg (0,28 mmol, 0,13 meq) bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorida, etanola (20 ml), toluena (40 ml), vode (4 ml), 800 mg natrijum karbonata, grejana je na 125-130°C, u zaptivenoj staklenoj epruveti, tokom 5 sati. Reakciona smeša je zatim ohlađena i rastvarači su uklonjeni destilacijom pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi čvrsti proizvod je prečišćen, upotrebom heksana i etil acetata, da bi se dobilo 0,82 g (80%) svetlo smeđe čvrste supstance.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO) δ-vrednost (ppm): 2,57(t, 4H,2-CH2), 2,89(s, 3H,CH3), 3,14(t, 4H, 2-CH2), 3,60(t, 4H, 2-CH2), 3,79(t, 4H, 2-CH2), 3,88(s,2H, CH2), 6,87(s, 2H,NH2), 7,32(s, 1H), 7,73(s, 1H), 8,93(s, 2H).

<13>CNMR (400 MHz, CDCl3) δ-vrednost ppm): 33,8(1C), 45,4(2C), 48,0(2C), 51,8(2C), 56,2(1C), 66,2(2C), 105,1(1C), 120,6(1C), 121,5(1C), 121,5(1C), 122,7(1C), 145,5(1C), 147,8(1C), 148,6(1C), 154,5(1C), 156,2(1C), 163,2(1C).

Masa: 491,3[M+2], 490,3[M+1]

Primer-27: priprema metil 3-metiltiofen-2-karboksilata

[0101]

[0102] U mešani rastvor 100 g (0,7023 mola) 3-metil-2-tiofen karboksilne kiseline, u 1000 ml acetona, dodato je 122,0 g (0,8827 mola) kalijum karbonata u 500 ml acetona, pa je u kapima dodato 89,0 g (0,7056 mol) dimetil sulfata, uz održavanje temperature reakcione smeše na 25-30°C. Kada je dodavanje završeno, rastvor je mešan na 25-30°C tokom 4 sata. Aceton je uklonjen destilacijom pod vakuumom i reakciona smeša je razblažena sa 3000 ml vode uz održavanje temperature na 25-30°C hlađenjem, nakon čega je smeša ekstrahovana tri puta sa po 1000 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni, isprani dva puta sa po 1000 ml vode i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Etil acetat je uklonjen destilacijom pod vakuumom, na 60°C, da bi se dobilo 105,2 g (95,6%) svetlo žute ulјane mase, HPLC čistoće od 99,8%.

Primer-28: priprema metil 3-(bromometil) tiofen-2-karboksilata

[0103]

[0104] U mešani rastvor 200 g (1,2805 mola) metil 3-metiltiofen-2-karboksilata, u 1220 ml ugljentetrahlorida, dodato je 228,0 g (1,2805 mol) N-bromosukcinimida i 12,40 g (0,0512 mol) benzoil peroksida, uz održavanje temperature reakcione smeše na 25-30°C. Kada je dodavanje završeno, reakciona smeša je zagrejana do 75-80°C i mešana tokom 4 sata. Reakciona smeša je dalje profiltrirana i isprana sa 100 ml ugljenik tetrahlorida. Masa filtrata je tretirana dva puta sa po 1660 ml 5% natrijum karbonata i dva puta sa po 1660 ml vode, pa je osušena upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Tetahlorid uglјenika je uklonjen destilacijom pod vakuumom, na 65°C, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je dalje triturisan heksanom (540 ml) da bi se dobilo 190,0 g (63,0 %) u vidu čvrste supstance HPLC čistoće od 97,4%.

Primer-29: priprema 3-cijanometil-2-tiofen-2-karboksilata

[0105]

[0106] U mešani rastvor 51,50 g (1,05 mol) natrijum-cijanida u 220 ml vode, je dodato 185,0 g (0,7868 mol) 3-(brommetil) tiofen-2-karboksilata i 500 ml metanola. Kada je dodavanje završeno, reakciona smeša je zagrejana do 50-55°C i mešana 2 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena sa 4800 ml vode, uz održavanje temperature na 25-30°C hlađenjem, pa je smeša ekstrahovana dva puta sa po 1800 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni, isprani dva puta sa po 1800 ml vode i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Etil acetat je uklonjen destilacijom pod vakuumom, na 60°C, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je dalje triturisan heksanom (680 ml) da bi se dobilo 119,0 g (83,0%) u vidu svetlo smeđe čvrste supstance, HPLC čistoće od 88,8%.

Primer-30: priprema 3-cijanometil-2-tiofenkarboksilne kiseline

[0107]

[0108] 115,0 g (0,6352 mol) 3-cijanometil-2-tiofen-2-karboksilata je rastvoreno u smeši metanola (575 ml) i tetrahidrofurana (575 ml), pa je dodat 1N vodeni natrijum hidroksid (900 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. nakon čega je reakciona smeša razblažena sa 3450 ml vode, zakišelјena sa 1N hlorovodoničnom kiselinom i ekstrahovana dva puta sa po 1725 ml etil acetata. Ekstrakti etil acetata su spojeni, isprani sa 3450 ml vode i osušeni upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata. Etil acetat je uklonjen destilacijom pod vakuumom na 60°C, da bi se dobio sirovi proizvod.

[0109] Sirovi proizvod je dalje triturisan heksanom (1150 ml) da bi se dobilo 95,2 g (89,7%) u vidu beličaste čvrste supstance, HPLC čistoće od 89,4%.

Primer-31: Priprema 5-bromo-3-metil-7-morfolino-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-2-karbaldehida:

[0110]

[0111] Smeša 13g (38 mmol) 5-bromo-3-metil-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-2-karbaldehida je reagovala sa 11,2 mL (95 mmol, 2,3 meq) 70% azotne kiseline u sirćetnoj kiselini (200 mL), na 5-10°C, u boci sa okruglim dnom i 4 grla, tokom 1 h. Reakcija smeše je zaustavljena u izdroblјenom ledu, pa je smeša profiltrirana da bi se dobilo 12,5 g 5-bromo-3-metil-7-morfolino-4-nitro-tieno[2,3-c] piridin-2-karbaldehida u vidu žućkasto zeleno obojene čvrste supstance.<1>HNMR (400 MHz, CDCl3, δ ppm): 2,58 (s, 3H, CH3); 3,89 (m, 8H, 4 X CH2); 10,34 (s, 1H, CHO). Masa: 388,1 [M+2]

Primer-32: Priprema 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il) metil]-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolina

[0112]

[0113] Smeša 500 mg (1,3 mmol) 5-bromo-3-metil-7-morfolino-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-2-karbaldehida je reagovala sa 366 mg (2,2 mmol; 1,6 meq) 1-metilsulfonilpiperazina, u prisustvu 5,92 g (55,8 mmol, 40 meq) trimetilortoformata (TMOF), nakon čega je sledila redukcija upotrebom 1,37 g (6,5 mmol, 5,0 meq) natrijum-acetoksiborohidrida (STAB) u metilen hloridu, na sobnoj temperaturi. Reakcija smeša je zaustavljena u vodi, pa je smeša ekstrahovana metilen hloridom. Rastvarač je uklonjen destilacijom, pa je dobijeni sirovi proizvod prečišćen hromatografijom na koloni, upotrebom etil acetata i heksana, da bi se dobilo 600 mg 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolina u vidu čvrste supstance žute boje.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3, δ ppm): 2,07 (s, 3H, CH3); 2,60-2,62 (m, 4H, 2 X CH2); 2,90 (s, 3H, CH3); 3,12-3,13 (m, 4H, 2 X CH2), 3,76 (s, 8H, 4 X CH2); 3,89 (s, 2H, CH2).

Primer-33: Priprema 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-4-nitrotieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2-amina (jedinjenje 9)

[0114]

[0115] Smeša 750 mg (14,4 mmol) 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il) metil]-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-7-il] morfolina, 640 mg (28,9 mmol; 2,0 meq) 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin-2-amina, toluena (30 ml), etanola (15 ml), vodenog natrijum karbonata (3 ml) i 132 mg (0,13meq) PdCl2(TPP)2je zagrejana do 115-120°C, u zaptivenoj staklenoj epruveti, tokom 2,5 sata. Reakciona smeša je zatim ohlađena, pa je rastvarač uklonjen destilacijom pod vakuumom, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni, upotrebom smeše etil acetata, heksana i metanola, da bi se dobilo 500 mg 5-[3-metil-2-[(4metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2-amina u vidu žuto obojenog praha.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3, δ ppm): 2,11 (s, 3H, CH3); 2,60-2,62 (m, 4H, 2 X CH2); 2,90 (s, 3H, CH3); 3,13-3,14 (m, 4H, 2 X CH2), 3,74-3,78 (s, 8H, 4 X CH2); 3,90 (s, 2H, CH2); 8,41 (s, 2H, Ar-H).

Primer-34: Priprema 5-(2-amino-pirimidin-5-il)-3-metil-2-[(4-metilsulfonil piperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-4-amina (jedinjenje 10)

[0116]

[0117] Smeša 50 mg (0,09 mmol) 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2-amina je redukovana upotrebom 120 mg (0,9 mmol; 10,0 meq) cink-bakarnog kompleksa i 80% hidrazinskog hidrata (2,4 ml) u metanolu (5 ml), na 50-55°C i u atmosferi azota, tokom 7h. Reakciona smeša je zatim ohlađena, pa je rastvarač uklonjen destilacijom pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je ekstrahovan sa hloroformom (200 mL) i ispran vodom. Rastvor je osušen upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata i profiltriran. Rastvarač je uklonjen destilacijom, upotrebom vakuuma, da bi se dobilo 20 mg 5-(2-amino-pirimidin-5-il)-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-4-amina u vidu bledo žuto obojene čvrste supstance. HPLC čistoća je iznosila > 95%.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3, δ ppm): 2,64 (s, 3H, CH3); 2,66-2,68 (m, 4H, 2 X CH2,); 2,81 (s, 3H, CH3); 3,28-3,30 (m, 4H, 2 X CH2), 3,36-3,38 (m, 4H, 2 X CH2); 3,78 (s, 2H, CH2); 3,88-3,90 (m, 4H, 2 X CH2); 4,00 (bs, 2H, NH2, mogućnost izmene sa D2O); 5,18 (s, 2H, NH2, mogućnost izmene sa D2O); 8,69 (s, 2H, Ar-H). Masa: 519,6 [M+1]

Primer-35: Priprema 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-4-nitrotieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2,4-diamina (Jedinjenje 11)

[0118]

[0119] Smeša 55 mg (0,106 mmol) 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolina je kondenzovana sa sirovim 5-(4,4,5,5-tetra metil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin-2,4-diaminom (pripremlјenim reakcijom 0,5 g (2, 4-diamino-5-bromopirimidina i 1,34 g bis(pinakalato)diborona u prisustvu PdCl2(TPP)2i kalijum acetata u 1,4-dioksanu), u toluenu (4 ml), etanolu (4 ml), vodenom natrijum-karbonatu (0,4 ml) i sa 10 mg PdCl2(TPP)2, zagrevanjem do 115-120°C, u zaptivenoj staklenoj epruveti, tokom 2,5 sata. Reakciona smeša je zatim ohlađena, pa je rastvarač uklonjen destilacijom pod vakuumom, da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni, upotrebom smeše etil acetata, heksana i metanola, da bi se dobilo 10 mg 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2,4-diamina kao čvrste supstance žute boje.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3, δ ppm): 2,18 (s, 3H, CH3); 2,67-2,69 (m, 4H, 2 X CH2); 2,82 (s, 3H, CH3); 3,29-3,30 (m, 4H, 2 X CH2); 3,72-3,74 (m, 4H, 2 X CH2); 3,82 (s, 2H, CH2); 3,88-3,89 (m, 4H, 2 X CH2); 5,12 (bs, 2H, NH2, mogućnost izmene sa D2O); 5,50 (bs, 2H, NH2, mogućnost izmene sa D2O); 7,94 (s, 1H, Ar-H). Masa: 564,06 [M+1]; DSC: 249-252°C.

Primer-36: Priprema 5-[4-amino-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolinotieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2,4-diamina (jedinjenje 12)

[0120]

[0121] Smeša 110 mg (0,19 mmol) 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-5-il] pirimidin-2,4-diamina je redukovana upotrebom 300 mg (1,95 mmol; 10,0meq) cink-bakarnog kompleksa i 80% hidrazinskog hidrata (6,0 ml) u metanolu (20 ml), na 5055°C i u atmoferi azota, tokom 7h. Reakciona smeša je zatim ohlađena, pa je rastvarač uklonjen pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je ekstrahovan sa hloroformom (200 mL) i ispran vodom. Rastvor je osušen upotrebom anhidrovanog natrijum sulfata i profiltriran. Rastvarač je uklonjen destilacijom, upotrebom vakuuma, nakon čega je sledilo prečišćavanje na koloni da bi se dobilo 57 mg 5-[4-amino-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2,4-diamina kao čvrste supstance bledo žute boje. HPLC čistoća je iznosila > 95%.

<1>HNMR (400 MHz, CDCl3, δ ppm): 2,63 (s, 3H, CH3); 2,67-2,68 (m, 4H, 2 X CH2,); 2,81 (s, 3H, CH3); 3,30-3,32 (m, 8H, 4 X CH2); 3,78 (s, 2H, CH2); 3,89-3,90 (m, 4H, 2 X CH2); 4,03 (s, 2H, NH2, mogućnost izmene sa D2O); 4,84 (s, 2H, NH2, mogućnost izmene sa D2O); 5,55 (bs, 2H, NH2, mogućnost izmene sa D2O); 8,17 (s, 1H, Ar-H). Masa: 534,2 [M+1]

Biološka ispitivanja:

[0122] A: In vitro studije: Za in vitro studije, jedinjenje-1 i 2 su rastvoreni u medijumu ćelijske kulture i DMSO-u, u koncentraciji od 10 mM. Osnovni rastvor je dalјe razblažen sa istim medijumom za ćelijsku kulturu i jedinjenja su upotrebljena u koncentracijama od 0,01 µm do 10 µm. Za studiju, čiji su rezultati ovde opisani, ćelijske linije solidnih tumora pluća, dojke, pankreasa, prostate i glioma.

[0123] Analiza proliferacije ćelija MTT testom je izvedena na sledeći način: zasejano je od 1000 do 10 000 ćelija po bunariću mikrotitarske ploče sa 96 mesta, pa su u triplikatima dodavane različite koncentracije jedinjenja-1 i 2 u opsegu od 10)1m do 0,1 µm. Nakon inkubacije ćelija sa jedinjenjem-1 i 2, tokom potrebnog vremenskog perioda od 24-72h, dodato je 15 µl 5mg/ml MTT-a i ćelije su inkubirane tokom ododatnih 4 sata na 37°C i sa 5% CO2. Nakon 4 sata, kristali formazana su rastvoreni u solubilizujućem puferu, preko noći na 37°C. Apsorbanca je merena na Elisa čitaču, na dve talasne dužine od 570-630-nm. Pomoću MTT testa su izračunate IC50 vrednosti jedinjenja 1 i 2. IC 50 vrednosti dobijene MTT testom su prikazane tablearno, u okviru Slike 1.

B: In vivo studije:

a. MTD (studija maksimalno tolerisane doze kod miševa)

[0124] Postupak je izveden prema OECD proceduri. Studija je urađena upotrebom 5 (2 mužjaka 3 ženke) Švajcarskih albino miševa, težine između 18-30 g. Pre oralne primene leka, sve životinje su izložene gladovanju u trajanju od 3 sata. Nakon pripreme uzorka, isti je odmah primenjen u organizam svih životinja srazmerno njihovoj težini. Nakon primene leka, sve životinje su praćene tokom 1/2, 1 sata, 2 sata, 4 sata, a smrtnost je praćena tokom 14 dana. Na kraju perioda od 14 dana, sve preživele životinje su podvrgnute autopsiji i sečenjem im je otvoren stomak, pa je praćena apsorpcija leka kroz gastrointestinalni trakt. Rezultat je prikazan u okviru Slike-1.

➢ JEDINJENJE 2: MTD > 2000 mg.kg, p.o (jednokratna doza, posmatranje tokom 14 dana) ➢ JEDINJENJE 1: MTD = 500 mg/kg, p.o (jednokratna doza, posmatranje tokom 14 dana)

b. Antagonizam u tumoru indukovanom sa MIAPaca - 2 kod “golih” (engl. nude) miševa:

[0125] Ovo istraživanje je urađeno upotrebom 20 mužjaka “golih” miševa. Merenje težine “golih” miševa je urađeno na početku, pre inokulacije ćelijske linije, i miševi su podelјeni u četiri grupe.

[0126] Ćelijska linija je inokulirana “golim” miševima subkutano, u bok zadnjeg desnog uda, u koncentraciji od 1 X 10<7>ćelija/0,2 ml. Životinje su svakodnevno posmatrane da bi se ispratila pojava tumora. Zapremina tumora je merena upotrebom formule: 1⁄2 l X w<2>(l = dužina tumora & w = širina tumora). Kada je zabeležena srednja zapremina tumora iznad 400 mm<3>, započeto je lečenje lekovima koji su prethodno navedeni. Prethodno navedeni lekovi su primenjivani oralno, svakodnevno tokom 30 dana, izuzev Gemcitabin hidrohlorida koji je primenjivan prvog i trećeg dana svake nedelјe. Težina “golih” miševa je merena svakog dana, pre primene dnevne doze, a merenje tumora je vršeno svakog drugog dana, upotrebom digitanog Vernier-ovog nonijusa. Preživele životinje su žrtvovane po završetku primene doza, nakon 30 dana, kada su prikupljeni organi (tumor sa kožom i pankreas). Miševima koji su uginuli tokom trajanja eksperimenta su izolovani tumor sa kožom i pankreas, pri čemu je tumor sa kožom čuvan u 10% puferisanom formalinu, dok je pankreas čuvan u Boenovom rastvoru. Svi organi su nakon prikupljanja poslati na histopatološku analizu. Rezultati koji su uočeni su objašnjeni u tekstu koji sledi.

[0127] Kontrola: Utvrđeno je da je srednja površina tumora iznosila 33,13 mm<2>. Dva od 5 (40%) tumora nije karakterisala nikakva invazija u okolno tkivo, dok je jednak broj (40%) karakterisala vaskularna invazija. Jedan tumor je karakterisalo širenje prema dermisu.

[0128] JEDINJENJE 2 (200 mg/kg, p.o): Srednja površina tumora je iznosila 10,90 mm<2>. Tri od 5 (60%) tumora je bilo lokalizovano i nije uočena invazija tumora, dok je preostale (40%) karakterisala vaskularna invazija.

[0129] JEDINJENJE 1 (50 mg/kg, p.o): Srednja površina tumora je iznosila 8,60 mm<2>i samo 1/5-u (20%) je karakterisala invazija na mišić koji se nalazio ispod, dok preostalih 80% nije ispoljilo veću aktivnost. Rezultati su prikazani na Slici 2.

[0130] Standard [Erlotinib (50 mg/kg, p.o) Gemcitabin (120 mg/kg, ip)]: Srednja površina tumora je iznosila 11,10 mm<2>. Jedan uzorak je bio bez prisustva tumora, dok 60% tumora nije karakterisala invazija, pri čemu je samo 1 (20%) karakterisala vaskularna invazija.

c. Antagonizam u tumoru indukovanom sa NCI-H292 kod “golih” miševa:

[0131] Ispitivanje je izvedeno sa 15 “golih” miševa (8 mužjaka 7 ženki). Merenje težine “golih” miševa je urađeno na početku, pre inokulacije ćelijske linije, i miševi su podelјeni u četiri grupe. Grupisanje je urađeno na sledeći način:

Grupa-I: Pozitivna kontrola (4 mužjaka 1 ženka)

Grupa-II: JEDINJENJE 2 (2 mužjaka 3 ženke) (200 mg/kg, p.o) (prikazano na Slici-4)

Grupa-III: JEDINJENJE 1 (2 mužjaka 3 ženke) (50 mg/kg, p.o) (prikazano na Slici -3)

[0132] Ćelijska linija je inokulirana “golim” miševima subkutano, u bok zadnjeg desnog uda, u koncentraciji od 6,25 X 10<5>ćelija/0,2 ml. Životinje su posmatrane svakog dana da bi se ispratila pojava tumora. Zapremina tumora je merena upotrebom formule: 1⁄2 l X w<2>(l = dužina tumora & w = širina tumora). Kada je zabeležena srednja zapremina tumora iznad 400 mm<3>, započeto je lečenje lekovima koji su prethodno navedeni. Prethodno navedeni lekovi su primenjivani oralno, svakog dana, tokom 40 dana. Težina “golih” miševa je merena svakodnevno, pre primene dnevne doze, a merenje tumora je rađeno svakog drugog dana, upotrebom digitanog Vernier-ovog nonijusa. Preživele životinje su žrtvovane po zavšetku režima doziranja, nakon 40 dana, kada su prikupljeni organi (tumor sa kožom i jetra). Miševima koji su uginuli tokom trajanja eksperimenta su izolovani tumor sa kožom i jetra koji su potom čuvani u 10% puferisanom formalinu. Svi organi su nakon prikupljanja poslati na histopatološku analizu.

Histopatološka zapažanja:

[0133] Histopatološki izveštaj ukazuje da je kod pozitivne kontrole bio prisutan potkožni tumor koga je karakterisala invazija na mišić, kod svih životinja (5 životinja). JEDINJENJE 2 u dozi od 200 mg/kg je tokom 7 dana lečenja imalo efekta na klirens tumora u svim životinjama (5/5). JEDINJENJE 1 u dozi od 50 mg/kg je tokom 15 dana imalo efekta na klirens tumora kod 80% životinja (4/5). Navedeno ukazuje na antitumorsku aktivnost ka NCI-H292 (kancer pluća rezistentan na Erlotinib).

Prednosti:

[0134]

1. Nova jedinjenja 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)-metil tieno [2,3-c] piridina formule-I koja su korisna u lečenju kancerskih oboljenja kod toplokrvnih vrsta.

2. Proces rezultuje obezbeđivanjem novih intermedijara.

3. Proces takođe rezultuje pripremom čistih derivata tieno[2,3-c]piridina formule-I koji su pogodni za bilo koji obim rada

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje 7-(morfolinil)-2-(N-piperazinil)metil tieno[2,3-c]piridin Formule-I ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so,

gde: R1je H, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, -C(O)R5, -S(O)2R5, -C(O)2R5, C1-C6alkil supstituisan sa R6, C3-C6cikloalkil supstituisan sa R6, aril, aril supstituisan sa R6ili heteroaril supstituisan sa R6; svaki od R2, R3i R4je nezavisno H, -OH, -SH, halo, amino, cijano, -nitro, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, aril, -C(O)R5, -S(O)2R5, -C(O)2R5, -C=C(H)-R6, aminokarbonil supstituisan sa R6, alkilamino grupa supstituisana sa R6koja po izboru sadrži C3-C6cikloalkil, alkilaminokarbonil, heteroaril, po izboru supstituisan sa H ili amino, kondenzovan bicikličan ili tricikličan heteroaril koji sadrži 1,2 ili 3 heteroatoma izabrana od N, O i S, ili aril, po izboru supstituisan sa hidroksi, hidroksialkil, amino, aminoalkil, aminokarbonil, cijano, halogenom, ariloksi grupom ili R6; R5je H, alkil, amino, aril supstituisan sa R6, heteroaril supstituisan sa R6, fuzionisani heteroaril supstituisan sa R6ili -trifluorometil; R6je H, hidroksi, halogena, cijano, nitro, amino ili C1-C6alkil grupa.
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, jedinjenje koje je: i) 5-[3-metil-2-[(4-metil sulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolinotieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2-amin; ii) 5-[2-[(4-metilsulfonil piperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2-amin; iii) 4-[5-(1H-indazol-4-il)-2-[(4-metilsulfonil piperazin-1-il)metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il] morfolin; iv) [3-[2-[(4-metilsulfonil piperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il]fenil]metanol; v) 3-[2-[(4-metilsulfonil piperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il]anilin; vi) 4-[5-(1H-indazol-4-il)-3-metil-2-[(4-metil sulfonil piperazin-1-il) metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolin; vii) [3-[3-metil-2-[(4-metil sulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolinotieno[2,3-c]piridin-5-il]fenil]metanol; viii) 3-[3-metil-2-[(4-metil sulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolinotieno[2,3-c]piridin-5-il]anilin; ix) 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-4-nitrotieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2-amin; x) 5-(2-amino-pirimidin-5-il)-3-metil-2-[(4-metilsulfonil piperazin-1-il)metil]-7-morfolinotieno[2,3-c]piridin- 4-amin; xi) 5-[3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-4-nitrotieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2,4- diamin; ili xii) 5-[4-amino-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolinotieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2,4-diamin.
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, jedinjenje koje je 5-[3-metil-2-[(4-metil sulfonilpiperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2-amin ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, jedinjenje koje je 5-[2-[(4-metilsulfonil piperazin-1-il)metil]-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-5-il]pirimidin-2-amin ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so.
5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, jedinjenje koje je jedinjenje Formule-II

gde je X halogen.
6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5, jedinjenje koje je: i) 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]-4-nitrotieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolin; ii) 4-[5-bromo-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolin; ili iii) 4-[5-bromo-3-metil-2-[(4-metilsulfonilpiperazin-1-il)metil]tieno[2,3-c]piridin-7-il]morfolin.
7. Jedinjenje Formule-III,

gde: svaki od R2i R3je nezavisno H, -OH, -SH, halo, amino, cijano, -nitro, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, aril, -C(O)R5, -S(O)2R5, -C(O)2R5, -C=C(H)-R6, aminokarbonil supstituisan sa R6, alkilamino grupa supstituisana sa R6koja po izboru sadrži C3-C6cikloalkil, alkilaminokarbonil, heteroaril, po izboru supstituisan sa H ili amino, fuzionisan bicikličan ili tricikličan heteroaril koji sadrži 1,2 ili 3 heteroatoma izabrana od N, O i S ili aril, po izboru supstituisan sa hidroksi, hidroksialkil, amino, aminoalkil, aminokarbonil, cijano, halogenom, ariloksi grupom ili R6; i X je halogen.
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 7, jedinjenje koje je: i) 5-bromo-3-metil-7-morfolino-4-nitro-tieno[2,3-c]piridin-2-karbaldehid; ii) 5-bromo-3-metil-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-2-karbaldehid; ili iii) 5-bromo-7-morfolino-tieno[2,3-c]piridin-2-karbaldehid.
9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži: (a) terapeutski efiektivnu količinu jedinjenja definisanog u patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtev 2 ili njihove farmaceutski prihvatlјive soli; i (b) farmaceutski prihvatlјiv nosač, razblaživač ili rastvarač.
10. Jedinjenje definisano u bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 4 ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, za upotrebu u lečenju organizma čoveka ili životinjskog organizma.
11. Jedinjenje definisano u bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 4 ili njegova farmaceutski prihvatlјiva so, za upotrebu u lečenju kancera.
12. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 11, pri čemu kancer predstavlja kancer pluća, kancer pankreasa, kancer prostate, kancer dojke, kancer mozga ili kancer jajnika.
13. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 11 i 12, pri čemu lečenje kancera obuhvata oralnu, parenteralnu ili rektalnu primenu efektivne antikancerske količine jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatlјive soli čoveku.