RS59565B1

RS59565B1 - Nova jedinjenja gadolinijum helata za primenu pri snimanju magnetnom rezonancom

Info

Publication number: RS59565B1
Application number: RS20191466A
Authority: RS
Inventors: Markus Berger; Jessica Lohrke; Christoph-Stephan Hilger; Gregor Jost; Thomas Frenzel; Detlev Sülzle; Johannes Platzek; Olaf Panknin; Hubertus Pietsch
Original assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 2015-06-04
Filing date: 2016-05-30
Publication date: 2019-12-31
Also published as: HRP20211467T1; WO2016193190A1; EP3611169A1; CA2987993C; UY36711A; IL255945A; NZ737707A; TN2017000505A1; PT3303307T; MX2017015669A; GEAP202014664A; SA517390476B1; CN107667096A; US20190083659A1; PT3611169T; MX374249B; AU2016272602B2; KR102162742B1; CY1122323T1; DK3611169T3

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na stavke koje su okarakterisane u patentnim zahtevima, a to su novi vanćelijski gadolinijum helati visoke relaksivnosti zasnovani na jezgrima poliaminima niske molekulske težine, postupke pripreme navedenih jedinjenja, primenu navedenih jedinjenja kao MRI kontrastnih agenasa i njihovu primenu u telu sisara.

STANJE TEHNIKE

1. Uvod

[0002] Devet kontrastnih agenasa na bazi gadolinijuma (GBCA) odobreno je za kliničku upotrebu: gadopentetat dimeglumin (Magnevist®), gadoterat meglumin (Dotarem®), gadoteridol (ProHance®), gadodiamid (Omniscan®), gadobutrol (Gadovist®), gadoversetamid (OptiMARK®), gadoksetinska kiselina (Primovist®), gadobenat dimeglumin (MultiHance®) i gadofosveset trinatrijum (Vasovist®/Ablavar®). Uz izuzetak gadoksetinske kiseline, gadobenat dimeglumina i gadofosveset trinatrijuma, GBCA pokazuju strogo vanćelijsku pasivnu distribuciju u telu i izlučuju se isključivo putem bubrega.

[0003] Gadoksetinska kiselina i gadobenat dimeglumin pokazuju drugačiji farmakokinetički profil od ostalih agenasa. Pored vanćelijske distribucije, oni se unose i takođe se delimično izlučuju i kroz jetru. Ovo omogućava, pored klasičnih mogućnosti snimanja (npr. centralnog nervnog sistema, angiografije, ekstremiteta, srca, glave/lica/vrata, abdomena i dojke), takođe i snimanje jetre usled poboljšanja jetrenog parenhima uzrokovanog unosom GBCA u hepatocite.

[0004] Za razliku od ostalih GBCA, gadofosveset trinatrijum ne pokazuje pasivnu difuziju u telu i ostaje u vaskularnom prostoru. Dugački period u krvnim žilama uzrokovan reverzibilnim vezivanjem za HSA (ljudski serumski albumin) omogućava MR angiografije visoke rezolucije.

[0005] Različiti GBCA razlikuju se po svojoj efikasnosti koja je data njihovom uzdužnom (r1) i poprečnom (r2) relaksivnošću, i zavise od jačine magnetnog polja, temperature i različitih intrinzičnih faktora metalnih helata. Parametri koji utiču na relaksivnost uglavnom su broj molekula vode direktno vezanih za gadolinijum (tzv. voda iz unutrašnje sfere, q), srednje vreme zadržavanja molekula vode unutrašnje sfere (τm), broj i vreme zadržavanja molekula vode u drugoj hidratacionoj sferi (tzv. voda druge sfere) i rotacione difuzije (τr) (Helm L. et. al., Future Med Chem.2010; 2: 385-396). Što se tiče njihove relaksivnosti, svi komercijalno dostupni GBCA veoma su slični jedni drugima i potiču iz raspona od 4 do 7 L mmol<-1>s<-1>.

[0006] Strategije za povećanje osetljivosti GBCA često su opisane u literaturi (Caravan P. et. al. Chem. Soc. Rev., 2006, 35, 512-523, Helm i dr. Future Med Chem. 2010; 2:385-396, Jacques V. Invest Radiol.2010;45:613-624). Jedna od strategija je povećanje molekula vode unutrašnje sfere (q) koji su molekuli vode koji su direktno koordinirani sa gadolinijum-jonom u helatu. Kao što pokazuju primeri AAZTA i HOPO-zasnovanih liganda, povećanje molekula vode unutrašnje sfere sa jednog na dva dovodi do značajnog povećanja relaksivnosti. Druga strategija za povećanje relaksivnosti je usporavanje rotacione difuzije molekula. Takozvana stopa premeštanja (τr, pogledati uvod) opisuje premeštanje molekula u rastvoru i na nju uglavnom utiču molekularna veličina i vezivanje proteina od GBCA (Merbach A.S. et. al., The Chemistry of Contrast Agents in Medical Magnetic Resonance Imaging, 2013, ISBN: 978-1-119-99176-2).

[0007] Dalja važna karakteristika GBCA je stabilnost njihovih kompleksa. Potencijal GBCA da oslobađa slobodne toksične Gd<3+>jone glavni problem bezbednosti i od najvećeg značaja, posebno za pacijente sa krajnjim stadijumom bubrežne bolesti. Nefrogena sistemska fibroza (NSF) je redak i ozbiljan sindrom koji je povezan sa izlaganjem GBCA kod pacijenata sa teškim otkazivanjem bubrega. NSF uključuje fibrotičke promene na koži i mnogim organima. U 2010. godini, Food and Drug Administration (FDA) objavila je revidirane preporuke za obeležavanje četiri GBCA koji su u principu implicirani u NSF, uključujući gadodiamid (Omniscan®), gadobenat dimeglumin (MultiHance®), gadopentetat dimeglumin (Magnevist®) i gadoversetamid (OptiMARK®) (Yang L et. al. Radiology.2012;265:248-253). Na prvi pogled stabilnost svih GBCA je vrlo velika, ali postoje značajne razlike između linearnih i makrocikličkih agenasa i između jonskih i ne-jonskih predstavnika linearnih agenasa. Makrociklički GBCA poseduju najveću stabilnost kompleksa (Frenzel T. et. al. Invest Radiol.2008; 43:817-828). Zbog bolje informisanosti o rizičnim pacijentima, upotrebe nižih doza i šire upotrebe makrocikličkih GBCA, učestalost NSF se smanjila poslednjih godina (Wang Y. i dr. Radiology.2011;260:105-111 and Becker S. i dr. Nephron Clin Pract.

2012; 121:c91-c94).

[0008] Ključno pitanje za kliničke primene je in vivo stabilnost. Kinetička inertnost u kombinaciji sa termodinamičkom stabilnošću posebno je u pogledu rizika od nefrogene sistemske fibroze (NSF) najbolji prediktor in vivo toksičnosti q=2 helata (Merbach A.S. et. al., The Chemistry of Contrast Agents in Medical Magnetic Resonance Imaging, 2013, ISBN: 978-1-119-99176-2, page 157-208). Kompleksi sa q=2 pokazuju dvostruko povećanje relaksivnosti, ali, nažalost, imaju nižu stabilnost od q=1 jedinjenja (Hermann P. i dr. Dalton Trans., 2008, 3027-3047).

2. Opis stanja tehnike, problema koji treba rešiti i njihovog rešenje

[0009] Nekoliko makrocikličnih jedinjenja je opisano u struci.

[0010] EP1931673 B1 i EP2457914 B1 se odnose na pyDO3A (q=2), DO3A i DOTA jedinjenja koja sadrže kratke lance aminoalkohola i metalne komplekse za medicinsko snimanje.

[0011] Makrociklični lantanidni DO3A- i DOTA- nalik GBCA opisani su u struci.

[0012] Ranganathan R.S. i dr.(Investigative Radiology 1998;33:779-797) istražili su uticaj multimerizacije na relaksivnost makrocikličkih gadolinijum helata. WO199531444 odnosi se na monomerna i multimerna jedinjenja koja imaju pojačanu relaksivnost.

[0013] US 5679810 se odnosi na linearna oligomerna polihelantna jedinjenja i helate nastale sa njima, koji imaju naizmenične helatne i veznik delove povezane amidnim ili estarskim ostacima, i na njihovu upotrebu u dijagnostičkom snimanju.

[0014] US 5650133 se odnosi na dihelante, posebno jedinjenja koja imaju dve makrocikličke helatne grupe povezane mostom koji sadrži estarsku ili amidnu vezu i njihove metalne helate i njihovu upotrebu u dijagnostičkom snimanju.

[0015] WO 97/32862 A1 opisuje gadolinijum polihelante kao agense za snimanje magnetnom rezonancom koja povezuju najmanje dve jedinice helanta sa amino grupama ciljane nosive strukture (poput proteina, aminokiseline ili peptida).

[0016] US 2007/202047 se odnosi na jedinjenja gadolinijum helata za upotrebu pri snimanju magnetnom rezonancom, koja su izvedena iz helirajućeg molekula odabranog od 1,4,7,10-tetraazaciklo-dodekan-1,4,7,10-tetra sirćetne kiseline (DOTA) i dietilentriaminpenta sirćetne kiseline (DTPA), gde bar jedna od karboksilnih grupa helirajućeg molekula reaguje sa aminom.

[0017] GBCA sa većom relaksivnošću pružaju, sa jedne strane, mogućnost značajnog smanjenja doze, i sa druge povećanu osetljivost tokom MRI pregleda mnogih bolesti korišćenjem standardne doze (Giesel FL. i dr. Eur Radiol 2010, 20: 2461-2474).

[0018] Međutim, postoji nezadovoljena medicinska potreba da se pruže GBCA za opštu upotrebu pri snimanju magnetnom rezonancom koji:

• pokazuju visoku relaksivnost

• pokazuju povoljan farmakokinetički profil,

• potpuno se izlučuju,

• hemijski održivi,

• pokazuju visoku rastvorljivost u vodi,

• nude potencijal za značajno smanjenje doze,

• pogodni su za snimanje različitih područja tela i

• dobro se podnose.

[0019] Stanje tehnike opisano iznad ne opisuje specifična visoko relaksivna jedinjenja vanćelijskog gadolinijum helata opšte formule (I) predmetnog pronalaska kao što je ovde definisano, niti njegov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat ili so, niti njihovu smešu, kao što je ovde opisano i definisano, i kao što se u daljem tekstu naziva „jedinjenja predmetnog pronalaska“.

[0020] Sada je otkriveno, i to predstavlja osnovu predmetnog pronalaska, da navedena jedinjenja predmetnog pronalaska imaju iznenađujuća i povoljna svojstva.

[0021] Naročito, navedena jedinjenja predmetnog pronalaska pokazuju uravnotežen profil visoke relaksivnosti, povoljan farmakokinetički profil, potpuno izlučivanje, visoku stabilnost, visoku rastvorljivost, potencijal za značajno smanjenje doze i potencijal za snimanje celog tela i zbog toga se mogu koristiti kao kontrastni agensi za magnetnu rezonancu (MRI).

SAŽETAK

[0022] Predmetni pronalazak opisuje novu klasu visoko relaksivnih kompleksa vanćelijskog gadolinijum helata, postupke za njihovu pripremu i njihovu upotrebu kao MRI kontrastni agensi.

OPIS PRONALASKA

[0023] U skladu sa prvim aspektom, predmetni pronalazak pokriva jedinjenja opšte formule (I),

gde :

predstavlja

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>;

R<1>predstavlja grupu R<3>;

n predstavlja ceo broj 4;

R<2>predstavlja atom vodonika;

R<3>predstavlja grupu izabranu od:

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula;

R<4>predstavlja atom vodonika;

R<5>predstavlja atom vodonika ili metil grupu; ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, ili solvat, ili njihovu smešu.

[0024] Takođe su obelodanjena jedinjenja opšte formule (I), koja obuhvataju 4, 5, 6, 7 ili 8 gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa,

predstavlja grupu izabranu od:

i

gde grupe a i b predstavljaju, nezavisno jedna od druge, ceo broj 1 ili 2;

i,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>;

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili grupu izabranu od: R<3>,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A ,

uz uslov da samo jedan od supstituenata R<1>može da predstavlja atom vodonika;

n predstavlja ceo broj 3 ili 4;

R<2>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil grupu;

R<3>predstavlja grupu izabranu od:

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula;

R<4>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil grupu;

R<5>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil grupu; ili njihov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili so, ili njihovu smešu.

[0025] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da sadrže jedan ili više asimetričnih centara, zavisno od mesta i prirode različitih željenih supstituenata. Asimetrični atomi ugljenika mogu biti prisutni u (R) ili (S) konfiguraciji, što može rezultovati racemskim smešama u slučaju jednog asimetričnog centra, i dijastereomernim smešama u slučaju više asimetričnih centara. U određenim slučajevima, asimetrija može da bude prisutna i zbog ograničene rotacije oko date veze, na primer, centralne veze uz dva supstituisana aromatična prstena navedenih jedinjenja.

Poželjna jedinjenja su ona koja proizvode poželjniju biološku aktivnost. Odvojeni, čisti ili delimično prečišćeni izomeri i stereoizomeri ili racemske ili dijastereomerne smeše jedinjenja predmetnog pronalaska su takođe obuhvaćeni obimom predmetnog pronalaska. Prečišćavanje i odvajanje takvih materijala može se izvršiti standardnim tehnikama poznatim u struci.

Optički izomeri se mogu dobiti razblaživanjem racemskih smeša prema uobičajenim postupcima, na primer, formiranjem dijastereoizomernih soli korišćenjem optički aktivne kiseline ili baze ili formiranjem kovalentnih dijastereomera. Primeri odgovarajućih kiselina su vinska, diacetil-vinska, ditoluoiltartarna i kamforsulfonska kiselina. Smeše dijastereoizomera mogu se razdvojiti na svoje pojedinačne dijastereomere na osnovu svojih fizičkih i/ili hemijskih razlika postupcima poznatim u struci, na primer, hromatografijom ili frakcionalnom kristalizacijom. Zatim se optički aktivne baze ili kiseline oslobađaju razdvojenih dijastereomernih soli. Drugačiji postupak za odvajanje optičkih izomera uključuje upotrebu hiralne hromatografije (npr., hiralne HPLC kolone), sa ili bez konvencionalne derivatizacije, optimalno izabrane da maksimizuje odvajanje enantiomera. Odgovarajuće hiralne HPLC kolone proizvodi Daicel, npr., Chiracel OD i Chiracel OJ, između ostalih, i svi se mogu rutinski birati. Enzimska odvajanja, sa ili bez derivatizacije, takođe su korisna. Optički aktivna jedinjenja predmetnog pronalaska se takođe mogu dobiti hiralnim sintezama koristeći optički aktivne polazne materijale.

[0026] Kako bi se razdvojile različite vrste izomera jedne od drugih, poziva se na IUPAC Rules Section E (Pure Appl Chem 45, 11-30, 1976).

[0027] Predmetni pronalazak uključuje sve moguće stereoizomere jedinjenja predmetnog pronalaska kao pojedinačne stereoizomere ili kao bilo koju mešavinu navedenih stereoizomera, npr. R- ili S-izomeri, ili E- ili Z-izomeri, u bilo kom odnosu. Izolacija jednog stereoizomera, npr. jedan enantiomer ili jedan dijastereomer jedinjenja predmetnog pronalaska, može se postići bilo kojom pogodnim tehnikom, poput hromatografije, na primer, hiralne hromatografije.

[0028] Dalje, jedinjenja predmetnog obelodanjenja mogu postojati kao N-oksidi, koji su definisani tako što je bar jedan azot jedinjenja predmetnog obelodanjenja oksidisan.

Predmetno obelodanjenje uključuje sve takve moguće N-okside.

[0029] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na korisne oblike jedinjenja koja su ovde obelodanjena, kao što su metaboliti, hidrati, solvati, soli, naročito farmaceutski prihvatljive soli i koprecipitati.

[0030] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da postoje kao hidrat ili kao solvat, gde jedinjenja predmetnog pronalaska sadrže polarne rastvarače, naročito vodu, metanol ili etanol, na primer kao strukturni element kristalne rešetke jedinjenja. Količina polarnih rastvarača, posebno vode, može postojati u stehiometrijskom ili nestehiometrijskom odnosu. U slučaju stehiometrijskih solvata mogući su, npr. hidrat, hemi-, (polu-), mono-, seskvi-, di-, tri-, tetra-, penta- itd. solvati ili hidrati. Predmetni pronalazak uključuje sve takve hidrate ili solvate.

[0031] Dalje, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu postojati u obliku soli. Navedena so može biti ili neorganska ili organska adiciona so, posebno bilo koja farmaceutski prihvatljiva neorganska ili organska adiciona so, koja se uobičajeno koristi u farmaciji.

[0032] Izraz „farmaceutski prihvatljiva so“ odnosi se na relativno netoksičnu, neorgansku ili organsku adicionu so jedinjenja predmetnog pronalaska. Na primer, pogledati SS. M. Berge, i dr. „Pharmaceutical Salts,“ J. Pharm. Sci.1977, 66, 1-19. Proizvodnja posebno neutralnih soli je opisana u US 5,560,903.

[0033] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja prema pronalasku uključuju soli mineralnih kiselina i karboksilnih kiselina, na primer, bez ograničavanja na, soli hlorovodonične kiseline, sumporne kiseline, fosforne kiseline, sirćetne kiseline, propionske kiseline, mlečne kiseline, vinske kiseline, jabučne kiseline, limunske kiseline, fumarne kiseline, maleinske kiseline, asparaginske kiseline i glutaminske kiseline.

[0034] Stručnjaci će dalje prepoznati da kisele adicione soli navedenih jedinjenja mogu da se pripreme reakcijom jedinjenja sa odgovarajućom neorganskom ili organskom kiselinom bilo kojim od mnoštva poznatih postupaka.

[0035] predmetni pronalazak uključuje sve moguće soli jedinjenja predmetnog pronalaska kao pojedinačne soli, ili kao bilo koju mešavinu navedenih soli, u bilo kom odnosu.

[0036] U ovom tekstu, posebno u Eksperimentalnom odeljku, za sintezu međuproizvoda i primera predmetnog pronalaska, kada se jedinjenje pominje kao oblik soli sa odgovarajućom bazom ili kiselinom, tačan stehiometrijski sastav navedenog oblika soli, kako je dobijeno odgovarajućim postupkom pripreme i/ili prečišćavanja, u većini slučajeva nije poznat.

[0037] To se analogno odnosi na slučajeve u kojima su dobijeni sintezni međuproizvodi ili primeri jedinjenja ili njihovih soli, opisanim postupcima pripreme i/ili prečišćavanja, kao solvati, kao što su hidrati sa (ako je definisano) nepoznatim stehiometrijskim sastavom.

[0038] Takođe su obelodanjena jedinjenja opšte formule (I), supra, koja obuhvataju 4, 5 ili 6, gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa, gde:

predstavlja grupu izabranu od:

gde grupe a i b predstavljaju, nezavisno jedna od druge, ceo broj 1 ili 2;

i,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>;

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A ,

uz uslov da samo jedan od supstituenata R<1>može da predstavlja atom vodonika;

n predstavlja ceo broj 3 ili 4;

R<2>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil grupu;

R<3>predstavlja grupu izabranu od:

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula;

R<4>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil grupu;

[0039] Takođe su obelodanjena jedinjenja opšte formule (I), supra, koja obuhvataju 4, 5 ili 6, gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa, gde:

predstavlja grupu izabranu od:

gde grupe a i b predstavljaju ceo broj 1;

i,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>;

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A ,

uz uslov da samo jedan od supstituenata R<1>može da predstavlja atom vodonika;

n predstavlja ceo broj 3 ili 4;

R<2>predstavlja atom vodonika;

R<3>predstavlja grupu izabranu od:

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula;

R<4>predstavlja atom vodonika;

R<5>predstavlja atom vodonika ili metil grupu; ili njihov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili so, ili njihovu smešu.

[0040] Takođe su obelodanjena jedinjenja opšte formule (I), supra, koja obuhvataju 4, 5 ili 6, gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa, gde:

predstavlja grupu izabranu od:

gde grupe a i b predstavljaju ceo broj 1;

i,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>;

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A ,

uz uslov da samo jedan od supstituenata R<1>može da predstavlja atom vodonika;

n predstavlja ceo broj 3 ili 4;

R<2>predstavlja atom vodonika;

R<3>predstavlja grupu izabranu od:

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula;

R<4>predstavlja atom vodonika;

R<5>predstavlja metil grupu; ili njihov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili so, ili njihovu smešu.

[0041] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), koja obuhvataju 4, 5, 6, 7 ili 8 gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa.

[0042] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), koja obuhvataju 4, 5 ili 6 gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa.

[0043] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), koja obuhvataju 4 gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa.

[0044] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), koja obuhvataju 5 gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa.

[0045] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), koja obuhvataju 6 gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa.

[0046] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), koja obuhvataju 7 gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa.

[0047] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), koja obuhvataju 8 gadolinijum [4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il] grupa.

[0048] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

predstavlja grupu izabranu od:

i

gde grupe a i b predstavljaju, nezavisno jedna od druge, ceo broj 1 ili 2;

i,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0049] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

predstavlja grupu izabranu od:

gde grupe a i b predstavljaju, nezavisno jedna od druge, ceo broj 1 ili 2;

i,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0050] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

predstavlja grupu izabranu od:

gde grupe a i b predstavljaju ceo broj 1;

i ,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0051] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

grupu,

gde grupe a i b predstavljaju, nezavisno jedna od druge, ceo broj 1 ili 2; i,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0052] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

grupu,

gde grupe a i b predstavljaju ceo broj 1;

i,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0053] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0054] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>,

i

R<2>predstavlja atom vodonika.

[0055] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

grupu, u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0056] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0057] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

predstavlja

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0058] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

predstavlja

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0059] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0060] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>.

[0061] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili grupu izabranu od:

R<3>,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A ,

uz uslov da samo jedan od supstituenata R<1>može da predstavlja atom vodonika.

[0062] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, grupu izabranu od:

R<3>,

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A.

[0063] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, grupu izabranu od:

R<3>, i

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A.

[0064] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, grupu izabranu od:

R<3>, i

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A.

[0065] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, grupu izabranu od:

R<3>, i

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A.

[0066] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja grupu R<3>.

[0067] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja

grupu, u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A.

[0068] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja

grupu, u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A.

[0069] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A.

[0070] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili R<3>grupu, uz uslov da samo jedan od supstituenata R<1>može da predstavlja atom vodonika.

[0071] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili

grupa

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A,

uz uslov da samo jedan od supstituenata R<1>može da predstavlja atom vodonika.

[0072] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A,

uz uslov da samo jedan od supstituenata R<1>može da predstavlja atom vodonika.

[0073] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<1>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa A,

uz uslov da samo jedan od supstituenata R<1>može da predstavlja atom vodonika.

[0074] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

n predstavlja ceo broj 3 ili 4.

[0075] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

n predstavlja ceo broj 3.

[0076] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

n predstavlja ceo broj 4.

[0077] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<2>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil grupu.

[0078] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<2>predstavlja atom vodonika.

[0079] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<2>predstavlja metil grupu.

[0080] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<3>predstavlja grupu izabranu od:

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula.

[0081] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<3>predstavlja

grupu,

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula.

[0082] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<3>predstavlja

grupu;

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula.

[0083] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<3>predstavlja

grupu;

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula; i

R<5>predstavlja atom vodonika ili metil grupu.

[0084] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<3>predstavlja

grupu; u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula; i R<5>predstavlja atom vodonika.

[0085] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<3>predstavlja

grupu;

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula; i

R<5>predstavlja metil grupu.

[0086] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<4>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil grupu.

[0087] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<4>predstavlja atom vodonika.

[0088] U daljem otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<4>predstavlja metil grupu.

[0089] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<5>predstavlja, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil grupu.

[0090] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<5>predstavlja atom vodonika.

[0091] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I), gde:

R<5>predstavlja metil grupu.

[0092] Smatra se da se predmetni pronalazak takođe odnosi i na bilo koju kombinaciju gore navedenih otelotvorenja pronalaska.

[0093] Drugo otelotvorenje predmetnog obelodanjenja su jedinjenja formule (I) :

Pentagadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,10,18,22,25-heksaokso-26-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-14-[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-9,19-bis({[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14,17,21,24-heptaazaheptakosan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-acetat,

heksagadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,10,15,19,22-heksaokso-23-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,16-bis({[({2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-11-(2-{[3-{[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-propanoil}amino)acetil]amino}-2-({[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)propanoil]amino}etil)-4,7,11,14,18,21-heksaazatetrakosan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat, Tetragadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat, Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat, Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat, Pentagadolinijum [4-(1-{[2-(bis{2-[({1,4-bis[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetra-azaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-1,4-diazepan-6-il}karbonil)amino]etil}-amino)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-7,10-bis(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat,

heksagadolinijum 2,2',2",2'",2'''',2'"",2""",2"''''',2'''''''',2''''''''',2'''''''''',2''''''''''',2'''''''''''',2''''''''''''',2'''''''''''''', 2''''''''''''''',2'''''''''''''''',2'''''''''''''''''-{etan-1,2-diilkarbamoil-1,4-diazepan-6,1,4-triiltris[(2-okso-etan-2,1-diil)imino(1-oksopropan-1,2-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]}oktadekaacetat, heksagadolinijum,2',2",2'",2'''',2""',2""",2''''''',2"""",2""""',2""""",2''''''''''',2'''''''''''',2''''''''''''',2'''''''''''''' , 2''''''''''''''',2'''''''''''''''',2'''''''''''''''''-(1,4,7-triazonan-1,4,7-triiltris{karbonil-1,4-diazepan-6,1,4-triilbis[(2-oksoetan-2,1-diil)imino(1-oksopropan-1,2-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]})oktadekaacetat,

Tetragadolinijum 2,2',2",2'",2"",2""',2'''''',2''''''',2'''''''',2''''''''',2'''''''''',2'''''''''''-{1,4,7,10-tetraazaciklo-dodekan-1,4,7,10-tetrailtetrakis[(2-oksoetan-2,1-diil)imino(1-oksopropan-1,2diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]}dodekaacetat, heksagadolinijum,2',2",2'",2'''',2""',2'''''',2"""',2"""",2""""',2'''''''''',2''''''''''',2'''''''''''',2''''''''''''',2'''''''''''''', 2''''''''''''''',2'''''''''''''''',2'''''''''''''''''-{3,7,10-triazatriciklo[3.3.3.0<1,5>]undekan-3,7,10-triiltris[karbonil-(3,6,11,14-tetraokso-4,7,10,13-tetraazaheksadekan-8,2,15-triil)di-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]}oktadekaacetat,

Tetragadolinijum 2,2',2",2"',2"",2""',2""",2"""',2"""",2""""',2""""",2"""""'-(3,7,9-triazabiciklo-[3.3.1]nonan-3,7-diilbis{karbonil-1,4-diazepan-6,1,4-triilbis[(2-oksoetan-2,1-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]})dodekaacetat,

Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)metil]propil}amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat, i

Tetragadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat,

ili njihov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat, ili so, ili njihova smeša.

[0094] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I) izabrano iz grupe koju čine:

Tetragadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat, Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat, Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat, Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)metil]propil}amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat, i

ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, ili solvat, ili njihova smeša.

[0095] U daljem otelotvorenju gore navedenog aspekta, pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I) koje je:

Tetragadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat,

ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, ili solvat, ili njihova smeša.

[0096] U skladu sa drugim aspektom, predmetni pronalazak pokriva postupke za dobijanje jedinjenja predmetnog pronalaska, gde navedeni postupci sadrže korake kao što je ovde opisano u Eksperimentalnom odeljku.

[0097] U skladu sa daljim aspektom, predmetni pronalazak pokriva međuproizvod jedinjenja koja su korisna za dobijanje jedinjenja opšte formule (I), supra.

[0098] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na međuproizvod jedinjenje opšte formule (I) za pripremu jedinjenja prema pronalasku,

gde :

predstavlja

grupu;

u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>;

R<1>predstavlja grupu R<3>;

n predstavlja ceo broj 4;

R<2>predstavlja atom vodonika;

R<3>predstavlja grupu izabranu od:

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula;

R<4>predstavlja atom vodonika;

R<5>predstavlja atom vodonika ili metil grupu; ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, solvat, ili so, ili njihovu smešu.

[0099] U skladu sa daljim otelotvorenjem, predmetni pronalazak se odnosi na međuproizvod jedinjenje opšte formule (I) za pripremu jedinjenja prema pronalasku, koje je izabrano iz grupe koju čine:

[4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetna kiselina,

{4,10-Bis(karboksimetil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetna kiselina,

{4,10-Bis(karboksimetil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetna kiselina,

{4,10-bis(karboksimetil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)metil]propil}amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklo-dodekan-1-il}sirćetna kiselina, i

[4,10-bis(karboksimetil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetna kiselina,

ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, solvat, ili so, ili njihovu smešu.

[0100] U skladu sa daljim otelotvorenjem, predmetni pronalazak se odnosi na međuproizvod jedinjenje opšte formule (I) za pripremu jedinjenja prema pronalasku, koje je:

ili njegov stereoizomer, tautomer, hidrat, solvat, ili so, ili njihovu smešu.

[0101] Obelodanjenje se odnosi na jedinjenja opšte formule (II-a) :

gde je kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 2, 3 i 4, i njihove soli;

i

jedinjenja opšte formule (II-b) :

i

jedinjenja opšte formule (II-c) :

gde je kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 2, 3 i 4, i njihove soli.

[0102] Obelodanjenje se dalje odnosi na međuproizvod jedinjenja koja su obelodanjena u odeljku sa primerima, infra.

[0103] Obelodanjenje se dalje odnosi na primenu jedinjenja opšte formule (II-a) :

gde je kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 2, 3 i 4, i njihove soli, za pripremu jedinjenja opšte formule (I) kako je definisano supra.

[0104] Obelodanjenje se dalje odnosi na primenu jedinjenja opšte formule (II-b) :

[0105] Obelodanjenje se dalje odnosi na primenu jedinjenja opšte formule (II-c) :

[0106] Obelodanjenje se dalje odnosi na primenu jedinjenja opšte formule (III) :

gde R<5>je kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I), supra, i LG predstavlja aktiviranje odlazeće grupe, kao što je na primer 4-nitrofenol, ili grupa kako je definisano za sintezu jedinjenja opšte formule (I-a) infra, za pripremu jedinjenja opšte formule (I) kako je definisano supra.

[0107] U skladu sa daljim aspektom, predmetni pronalazak se odnosi na primenu jedinjenja opšte formule (III) :

gde R<5>je kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I) pronalaska, supra, i LG predstavlja aktiviranje odlazeće grupe, kao što je na primer 4-nitrofenol, za pripremu jedinjenja opšte formule (I) kako je definisano supra.

[0108] Obelodanjenje se dalje odnosi na primenu jedinjenja opšte formule (IV) :

gde R<4>je kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I), supra, i Ⓐ predstavlja tetraamin kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I), supra, za pripremu jedinjenja opšte formule (I) kako je definisano supra.

[0109] Drugi aspekt pronalaska je primena jedinjenja opšte formule (I) pronalaska za dijagnostičko snimanje.

Poželjno, primena jedinjenja pronalaska pri dijagnozi se vrši korišćenjem snimanja magnetne rezonance (MRI).

[0110] Obelodanjenje se dalje odnosi na jedinjenja opšte formule (I) za primenu pri dijagnostičkom snimanju.

[0111] Drugi aspekt pronalaska su jedinjenja opšte formule (I) pronalaska za primeni pri snimanju magnetnom rezonancom (MRI).

[0112] Pronalazak takođe sadrži jedinjenja opšte formule (I) pronalaska za proizvodnju dijagnostičkih agenasa.

[0113] Naredni aspekt predmetnog pronalaska je upotreba jedinjenja opšte formule (I) pronalaska ili njegovih smeša za proizvodnju dijagnostičkih agenasa.

[0114] Naredni aspekt predmetnog pronalaska je upotreba jedinjenja opšte formule (I) pronalaska ili njegovih smeša za proizvodnju dijagnostičkih agenasa za magnetnu rezonancu (MRI).

[0115] Naredni aspekt predmetnog pronalaska je upotreba jedinjenja opšte formule (I) pronalaska ili njegovih smeša za proizvodnju kontrastnih agenasa za magnetnu rezonancu.

[0116] Naredni aspekt predmetnog pronalaska je postupak snimanja telesnog tkiva kod pacijenta, koji sadrži korake primene pacijentu efikasne količine jednog ili više jedinjenja opšte formule (I) pronalaska u farmaceutski prihvatljivom nosaču i podvrgavanja pacijenta NMR tomografiji. Takav postupak je opisan u US 5,560,903.

[0117] Za proizvodnju dijagnostičkih agenasa, na primer, za primenu ljudima ili životinjama, jedinjenja opšte formule (I) ili smeše će se pogodno formulisati zajedno sa farmaceutskim nosačima ili ekscipijentima. Kontrastni medijumi predmetnog pronalaska mogu pogodno da sadrže pomoćne farmaceutske formulacije, na primer stabilizatore, antioksidanse, agense za podešavanje pH, arome i slično. Proizvodnja dijagnostičkog medijuma prema pronalasku se takođe izvodi na način poznat u struci US 5,560,903. Oni mogu biti formulisani za parenteralnu ili enteralnu primenu ili za direktno davanje u telesne šupljine. Na primer, parenteralne formulacije sadrže sterilni rastvor ili suspenziju u dozi od 0,0001-5 mmol gadolinijuma/kg telesne težine, naročito 0,005-0,5 mmol gadolinijuma/kg telesne težine jedinjenja formule (I) prema predmetnom pronalasku. Prema tome, medijumi pronalaska mogu biti u uobičajenim farmaceutskim formulacijama kao što su rastvori, suspenzije, disperzije, sirupi, itd. u fiziološki prihvatljivim nosačima, pogodno u vodi za injekcije. Kada je kontrastni medijum formulisan za parenteralnu primenu, on će biti pogodno izotoničan ili hipertoničan i blizu pH 7,4.

[0118] U daljem aspektu, pronalazak je usmeren na postupak dijagnostikovanja i praćenja zdravlja pacijenata. Ovaj postupak obuhvata: a) primenu čoveku, kom je potrebna takva dijagnoza, jedinjenje pronalaska za detektovanje jedinjenja kod čoveka kao što je opisano iznad i ovde, i b) merenje signala koji nastaje od primene jedinjenja na čoveka, poželjno magnetnom rezonancom (MRI).

OPŠTA SINTEZA

[0119] Jedinjenja prema obelodanjenju mogu se dobiti prema sledećim šemama 1 do 12.

[0120] Šeme i postupci opisani u nastavku ilustruju puteve sinteze do jedinjenja opšte formule (I) obelodanjenja, i nisu predviđeni da budu ograničavajući. Stručnjaku je očigledno da redosled transformacija, kao što je prikazano u šemama, može da se modifikuje na različite načine. Prema tome, redosled transformacija koji je prikazan u šemama nije ograničavajući. Odgovarajuće zaštitne grupe i njihovo unošenje i cepanje su dobro poznati stručnjacima u oblasti (pogledati na primer T.W. Greene and P.G.M. Wuts in Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, Wiley 1999). Konkretni primeri su opisani u narednim paragrafima.

[0121] Izraz „aminska zaštitna grupa“ kako se ovde koristi, sam ili kao deo druge grupe, poznat je ili očigledan stručnjaku iz ove oblasti, i bira se, ali nije ograničen na klasu zaštitnih grupa, na primer, karbamate, amide, imide, N-alkil amine, N-aril amine, imine, enamine, borane, N-P zaštitne grupe, N-sulfenil, N-sulfonil i N-silil, i koji se bira od, ali nije ograničen na one opisane u udžbeniku Greene i Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, treće izdanje, strane 494-653, koji je ovde uključen referencom. „Aminska zaštitna grupa“ je poželjno karbobenziloksi (Cbz), p-metoksibenzil karbonil (Moz ili MeOZ), tercbutiloksikarbonil (BOC), 9-fluorenilmetiloksikarbonil (FMOC), benzil (Bn), p-metoksibenzil (PMB), 3,4-dimetoksibenzil (DMPM), p-metoksifenil (PMP), trifenilmetil (Tritil), metoksifenil difenilmetil (MMT) ili je aminska zaštitna grupa 1,3-diokso-1,3-dihidro-2H-izoindol-2-il (phthalimido) ili azido grupa.

[0122] Izraz „karboksilna zaštitna grupa“ kako se ovde koristi, sam ili kao deo druge grupe, je poznat ili očigledan stručnjaku iz ove oblasti, koji se bira od, ali nije ograničen na klasu zaštitnih grupa, na primer, estre, amide i hidrazide, i koji se bira od, ali nije ograničen na one opisane u udžbeniku Greene i Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, treće izdanje, strane 369-453, koji je ovde uključen referencom. „Karboksilna zaštitna grupa“ je poželjno metil, etil, propil, butil, terc-butil, alil, benzil, 4-metoksibenzil ili 4-metoksifenil.

[0123] Sadržaj ovde citiranih dokumenata uključuje se referencom.

[0124] Način pripreme jedinjenja opšte formule (I-a) je opisan u Šemi 1.

Šema 1: Put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-a), gde

i R<5>imaju značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, n' predstavlja ceo broj 2,

3 i 4, i PG predstavlja aminsku zaštitnu grupu, kao što je na primer a terc-butiloksikarbonilna grupa (BOC) ili grupa kako je definisano u nastavku.

[0125] Polazni materijali 1 su ili komercijalno dostupni poliamini ili njihove soli [na primer CAS 111-40-0, CAS 28634-67-5, CAS 4730-54-5, CAS 4742-00-1, CAS 294-90-6] ili poliamini ili njihove soli koji su poznati iz literature, ili ili koji se mogu pripremiti analogno jedinjenjima koja su opisana u literaturi ili u eksperimentalnom odeljku, infra [na primer CAS 41077-50-3]. Triamin ili tetraamin 1 ili njihova so se reaguju sa zaštićenom 3-amino-2-(aminometil)propionskom kiselinom 2-a, [na primer CAS 496974-25-5] ili njenom soli, što vodi do međuproizvoda 3-a. Odgovarajuće aminske zaštitne grupe za 3-amino-2-(aminometil)propionsku kiselinu su na primer karbobenziloksi (Cbz), p-metoksibenzil karbonil (Moz ili MeOZ), terc-butiloksikarbonil (BOC), 9-fluorenilmetiloksikarbonil (FMOC), benzil (Bn), p-metoksibenzil (PMB), 3,4-dimetoksibenzil (DMPM), p-metoksifenil (PMP), trifenilmetil (Tritil), metoksifenil difenilmetil (MMT) ili je aminska zaštitna grupa 1,3-diokso-1,3-dihidro-2H-izoindol-2-il (ftalimido) ili azido grupa. Reakcija spajanja poliamina 1 sa derivatima propionske kiseline 2-a Izvodi se upotrebom standardnih uslova spajanja peptida, kao što je na primer spajanje u prisustvu HATU i N,N-diizopropiletilamina, u pogodnom rastvaraču kao što je na primer N,N-dimetilformamid, u temperaturnom rasponu od sobne temperature do 80°C, radi dobijanja međuproizvoda opšte formule 3-a.

[0126] Deprotekcija međuproizvoda opšte formule 3-a koja dovodi do međuproizvoda opšte formule (II-a) ili njihovih soli izvodi se analogno postupcima opisanim u udžbeniku Greene i Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, drugo izdanje, strane 309-405, koji je ovde uključen referencom. Aminska zaštitna grupa terc-butiloksikarbonil (BOC) se uklanja rastvaranjem BOC-zaštićenog međuproizvoda opšte formule 3-a u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer alkohol, tetrahidrofuran, dioksan ili N,N-dimetilformamid, ili njihova smeša, dodavanjem odgovarajućih kiselina, kao što su na primer vodena hlorovodonična ili bromovodična kiselina ili trifluorosirćetna kiselina u organskim rastvaračima kao što je dihlorometan. Reakcija uklanjanja zaštite se izvodi na temperaturama u rasponu od sobne temperature do tačke ključanja odgovarajućeg rastvarača ili smeše rastvarača, poželjno je da se reakcija vrši na temperaturama u rasponu od sobne temperature do 80°C.

[0127] Međuproizvodi opšte formule (II-a) ili njihove soli reaguju sa Gd-kompleksima opšte formule (III), koji se aktiviraju odlazećom grupom (LG), kao što su na primer pentafluorofenol, 4-nitrofenol, 1-hidroksipirrolidine-2,5-dion, hidroksibenzotriazol ili 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol, što dovodi do jedinjenja opšte formule (I-a). Dobijanje aktiviranih estara dobro je poznato stručnjaku i detaljno je opisano na primer od C.A.

Montalbetti and V. Falque in Tetrahedron 61 (2005), stane 10827-10852. Na primer, dobijanje gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata je detaljno opisano u WO 2001051095 A2. Reakcija međuproizvoda opšte formule (II-a) sa aktiviranim Gd-kompleksima opšte formule (III) se izvodi u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer dimetil sulfoksid, N,N-dimetilformamid, piridin ili njihova smeša, opciono se reakcija izvodi u prisustvu baze. Pogodne baze su na primer trialkilamin, kao što je na primer trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin. Reakcija se izvodi na temperaturama u rasponu od sobne do 100°C, poželjno je da se reakcija izvodi na temperaturama u rasponu od 50°C do 70°C.

[0128] Način pripreme jedinjenja opšte formule (I-b) je opisan u Šemi 2.

Šema 2: Put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-b), gde

3 i 4, i PG predstavlja aminsku zaštitnu grupu, kao što je na primer a terc-butiloksikarbonilna grupa (BOC) ili grupa definisana za sintezu jedinjenja opšte formule (I-a) supra.

[0129] Jedinjenja opšte formule (I-b) sintetisana su analogno jedinjenjima opšte formule (I-a), kao što je opisano iznad.

Polazni materijali 1 su ili komercijalno dostupni poliamini ili njihove soli [na primer CAS 111-40-0, CAS 28634-67-5, CAS 4730-54-5, CAS 4742-00-1, CAS 294-90-6] ili poliamini ili njihove soli koji su poznati iz literature, ili koji se mogu dobiti analogno jedinjenjima koja su opisana u literaturi ili eksperimentalnom delu, infra [na primer CAS 41077-50-3].

Triamin ili tetraamin 1 ili njihova so reaguju sa zaštićenom 2,3-diaminopropionskom kiselinom 2-b [na primer CAS 201472-68-6] ili njenim solima, kako bi se dobio međuproizvod opšte formule 3-b, koji posle uklanjanja zaštite daje međuproizvod opšte formule (II-b) ili njegovu so. U završnom koraku međuproizvod opšte formule (II-b) ili njegova so reaguje sa Gd-kompleksom opšte formule (III), što dovodi do jedinjenja opšte formule (I-b).

[0130] Način pripreme jedinjenja opšte formule (I-c) je opisan u Šemi 3.

Šema 3: Put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-c), gde

i R<5>imaju značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, n' predstavlja ceo broj

2, 3 i 4, i PG predstavlja aminsku zaštitnu grupu, kao što je na primer tercbutiloksikarbonilna grupa (BOC) ili grupa definisana za sintezu jedinjenja opšte formule (I-a) supra.

[0131] Jedinjenja opšte formule (I-c) sintetisana su analogno jedinjenjima opšte formule (I-a), kao što je opisano iznad.

Triamin ili tetraamin 1 ili njegova so reaguju sa zaštićenom 1,4-diazepan-6-karboksilnom kiselinom 2-c, koja se može sintetisati kako je opisano u eksperimentalnom delu infra, polazeći od metil 1,4-dibenzil-1,4-diazepan-6-karboksilata [pogledati US 5,866,562], kako bi pružila međuproizvod opšte formule 3-c, koji posle uklanjanja zaštite daje međuproizvod opšte formule (II-c) ili njegovu so. U završnom koraku međuproizvod opšte formule (II-c) ili njegova so reaguje sa Gd-kompleksom opšte formule (III), što dovodi do jedinjenja opšte formule (I-c).

[0132] Način pripreme jedinjenja opšte formule (I-d) je opisan u Šemi 4.

Šema 4: Put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-d), gde

R<5>ima značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, predstavlja tetraamin kao što je dato za opštu formulu (I), supra, i LG predstavlja aktivirajnje odlazeće grupe, kao što je na primer 4-nitrofenol, ili grupa definisana za sintezu jedinjenja opšte formule (I-a) supra.

[0133] Polazni materijali 4 su ili komercijalno dostupni tetraamini ili njihove soli [na primer CAS 4742-00-1, CAS 294-90-6] ili tetraamini ili njihove soli koji su poznati iz literature ili koji se mogu dobiti analogno jedinjenjima koja su opisana u literaturi.

Tetraamin 4 ili njegova so reaguje sa Gd-kompleksom opšte formule (III), koji se aktivira odlazećom grupom (LG), kao što su na primer pentafluorofenol, 4-nitrofenol, 1-hidroksipirolidin-2,5-dion, hidroksibenzotriazol ili 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol, što dovodi do jedinjenja opšte formule (I-d). Dobijanje aktiviranih estara dobro je poznato stručnjaku i detaljno je opisano na primer od strane C.A. Montalbetti i V. Falque u Tetrahedron 61 (2005), strane 10827-10852. Na primer, priprema 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklodode-can-1,4,7-triil]triacetata je detaljno opisana u WO 2001051095 A2. Reakcija poliamina 4 ili njegove soli sa aktiviranim Gd-kompleksima opšte formule (III) se izvodi u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer dimetil sulfoksid, N,N-dimetilformamid, piridin ili njihova smeša, opciono se reakcija izvodi u prisustvu baze. Pogodne baze su na primer trialkilamin, kao što je na primer trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin. Reakcija se izvodi na temperaturama u rasponu od sobne do 100°C, poželjno je da se reakcija izvodi na temperaturama u rasponu od 50°C do 70°C.

[0134] Način pripreme jedinjenja opšte formule (I-e) je opisan u Šemi 5.

Šema 5: Put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-e), gde

R<4>ima značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, predstavlja tetraamin kao što je dato za opštu formulu (I), supra, i LG predstavlja aktivirajnje odlazeće grupe, kao što je na primer 4-nitrofenol, ili grupa definisana za sintezu jedinjenja opšte formule (I-a) supra.

[0135] Polazni materijali 4 su ili komercijalno dostupni tetraamini ili njihove soli [na primer CAS 4742-00-1, CAS 294-90-6] ili tetraamini ili njihove soli koji su poznati iz literature ili koji se mogu dobiti analogno jedinjenjima koja su opisana u literaturi.

Tetraamin 4 ili njegova so reaguje sa derivatom 5 [4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetne kiseline, koji se aktivira odlazećom grupom (LG), kao što su na primer pentafluorofenol, 4-nitrofenol, 1-hidroksipirolidin-2,5-dion [na primer, synthesis of tri-terc-butil 2,2',2"-(10-{2-[(2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi]-2-oksoetil}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil)triacetat, kako je detaljno opisano od strane Cong Li i dr., J. Am.Chem.Soc. 2006, 128, p.15072-15073; S3-5 i Galibert i dr., Biorg. i Med. Chem. Letters 20 (2010), 5422 - 5425] ili hidroksibenzotriozol, što dovodi do međuproizvoda 6. Dobijanje aktiviranih estara dobro je poznato stručnjaku i detaljno je opisano, na primer kod C.A.

Montalbetti i V. Falque u Tetrahedron 61 (2005), strane 10827-10852. Reakcija spajanja poliamina 4 sa derivatima 5 od [4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetne kiseline izvodi se u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer N,N-dimetilformamid ili dimetil sulfoksid, ili njihova mešavina, u temperaturnom rasponu od sobne temperature do 80°C, radi dobijanja međuproizvoda 6. Razdvajanje karboksilnih zaštitnih grupa međuproizvoda 6 kako bi se dobili međuproizvodi opšte formule (IV), može se postići kao što je opisano u udžbeniku od Greene i Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, drugo izdanje, strane 245-247. Deprotekcija se, na primer, vrši rastvaranjem i mešanjem međuproizvoda 6 u trifluorosirćetnoj kiselini na sobnoj temperaturi tokom nekoliko sati. Kompleksiranje međuproizvoda opšte formule (IV) sa pogodnim jedinjenjima ili solima gadolinijuma (III), kao što su na primer gadolinijum trioksid, gadolinijum triacetat ili hidrati gadolinijum triacetata, gadolinijum trihlorid ili gadolinijum trinitrat, dobro su poznati stručnjaku. Međuproizvodi opšte formule (IV) su rastvoreni u vodi, i posle dodavanja pogodnih jedinjenja gadolinijuma (III), dobijene smeše se mešaju u temperaturnom rasponu od sobne temperature do 100°C, pri pH = 1-7, tokom nekoliko sati, kako bi dali jedinjenja opšte formule (I-e). Međuproizvodi opšte formule (IV) su, na primer, rastvoreni u vodi, dodat je gadolinijum triacetat tetrahidrat, pH je podešen na 3,5 – 5,5 dodavanjem pogodne baze, kao što je na primer vodeni rastvor natrijum hidroksida. Reakcija se izvodi na temperaturama u rasponu od 50°C do 80°C, što dovodi do jedinjenja opšte formule (I-e).

[0136] Način pripreme jedinjenja opšte formule (I-f) je opisan u Šemi 6.

Šema 6: Put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-f), gde

n' predstavlja ceo broj 2, ako predstavlja triamin kako je definisano supra, ili

n' predstavlja ceo broj 3, ako predstavlja tetraamin kako je definisano supra, i R<5>ima značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, i LG predstavlja aktiviranje odlazećih grupa, kao što je na primer 4-nitrofenol ili grupa kao što je definisano u nastavku.

[0137] Međuproizvodi opšte formule (II-a) ili njihove soli, kako je opisano u Šemi 1 i u

eksperimentalnom delu infra, gde n' predstavlja ceo broj 2 i predstavlja jezgro triamina kako je definisano supra, ili međuproizvode opšte formule (II-a) ili njihove soli, gde n'

predstavlja ceo broj 3 i predstavlja jezgro tetraamina kako je definisano supra, reaguju se sa Gd-kompleksima opšte formule (III), koji se aktiviraju odlazećom grupom (LG), kao što su na primer pentafluorofenol, 4-nitrofenol, 1-hidroksipirolidin-2,5-dion, hidroksibenzotriozol ili 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol, što dovodi do jedinjenja opšte formule (If). Dobijanje aktiviranih estara dobro je poznato stručnjaku i detaljno je opisano na primer od strane C.A. Montalbetti i V. Falque u Tetrahedron 61 (2005), strane 10827-10852. Na primer, dobijanje gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetat je detaljno opisano u WO 2001051095 A2. Reakcija međuproizvoda opšte formule (II-a) ili njihovih soli sa aktiviranim Gd-kompleksima opšte formule (III) se izvodi u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer dimetil sulfoksid, N,N-dimetilformamid, piridin ili njihova smeša, opciono se reakcija izvodi u prisustvu baze. Pogodne baze su na primer trialkilamin, kao što su na primer trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin. Reakcija se izvodi na temperaturama u rasponu od sobne do 100°C, poželjno je da se reakcija izvodi na temperaturama u rasponu od 50°C do 70°C.

[0138] Način pripreme jedinjenja opšte formule (I-g) je opisan u Šemi 7.

Šema 7: Put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-g), gde

n' predstavlja ceo broj 3 ako predstavlja tetraamin kako je definisano supra,

i R<5>ima značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, i LG predstavlja aktiviranje odlazećih grupa, kao što su na primer 4-nitrofenol ili grupa kao što je definisano u nastavku.

[0139] Jedinjenja opšte formule (I-g) sintetisana su analogno jedinjenjima opšte formule (I-f), kao što je opisano iznad.

Međuproizvodi opšte formule (II-b) ili njihove soli, kako je opisano u Šemi 2, gde n' predstavlja ceo broj 2 i predstavlja jezgro triamina kako je definisano supra, ili međuproizvodi opšte formule (II-b) ili njihove soli, gde n' predstavlja ceo broj 3 i

predstavlja jezgro tetraamina kako je definisano supra, reaguju sa Gd-kompleksima opšte formule (III), koji se aktiviraju odlazećom grupom (LG), kao što su na primer pentafluorofenol, 4-nitrofenol, 1-hidroksipirolidin-2,5-dion, hidroksibenzotriazol ili 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol, što dovodi do jedinjenja opšte formule (Ig).

[0140] Način pripreme jedinjenja opšte formule (I-h) je opisan u Šemi 8.

Šema 8: Put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-h), gde

n' predstavlja ceo broj 2, ako predstavlja triamin kako je definisano supra, ili n' predstavlja ceo broj 3, ako predstavlja tetraamin kako je definisano supra,

i R<5>ima značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, i LG predstavlja aktiviranje odlazećih grupa, kao što je na primer 4-nitrofenol ili grupa kao što je definisano u nastavku.

[0141] Jedinjenja opšte formule (I-h) sintetisana su analogno jedinjenjima opšte formule (I-f), kao što je opisano iznad.

Međuproizvodi opšte formule (II-c) ili njihove soli, kako je opisano u Šemi 3, gde n' predstavlja ceo broj 2 i predstavlja jezgro triamina kako je definisano supra, ili međuproizvodi opšte formule (II-c) ili njihove soli, gde n' predstavlja ceo broj 3 i

predstavlja jezgro tetraamina kako je definisano supra, reaguju sa Gd-kompleksima opšte formule (III), koji se aktiviraju odlazećom grupom (LG), kao što su na primer pentafluorofenol, 4-nitrofenol, 1-hidroksipirolidin-2,5-dion, hidroksibenzotriazol ili 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol, što dovodi do jedinjenja opšte formule (Ih).

[0142] Način pripreme jedinjenja opšte formule (I-k) je opisan u Šemi 9.

Šema 9: Put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-k), gde

i R<4>imaju značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, n' predstavlja ceo broj 2, 3 i 4, LG predstavlja aktiviranje odlazećih grupa, kao što je na primer 1-hidroksipirolidin-2,5-dion, ili grupu definisanu za sintezu jedinjenja opšte formule (I-a) supra, i PG predstavlja karboksil zaštitnu grupu, kao što je na primer metil ili etil grupa.

[0143] Polazni materijali 1 su ili komercijalno dostupni poliamini ili njihove soli [na primer CAS 111-40-0, CAS 28634-67-5, CAS 4730-54-5, CAS 4742-00-1, CAS 294-90-6] ili poliamini ili njihove soli koji su poznati iz literature, ili koji se mogu dobiti analogno jedinjenjima koja su opisana u literaturi ili eksperimentalnom delu, infra [na primer CAS 41077-50-3].

Diamini 7 ili njihove soli su komercijalno dostupni [na primer CAS 1417898-94-2] ili se mogu sintetisati postupcima koji su dobro poznati stručnjaku. Diamini 7 ili njihove soli mogu reagovati sa derivatom 5 [4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetne kiseline, koji se aktivira odlazećom grupom (LG), kao što su na primer pentafluorofenol, 4-nitrofenol, 1-hidroksipirolidin-2,5-dion [na primer, sinteza tri-terc-butil 2,2',2"-(10-{2-[(2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi]-2-oksoetil}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil)triacetata je detaljno opisana kod Cong Li i dr., J.

Am.Chem.Soc. 2006, 128, p.15072-15073; S3-5 i. Galibert i dr., Biorg. i Med. Chem. Letters 2010, 20, p.5422-5425] ili hidroksibenzotriazol, što dovodi do međuproizvoda 8. Dobijanje aktiviranih estara dobro je poznato stručnjaku i detaljno je opisano na primer kod C.A.

Montalbetti i V. Falque u Tetrahedron 2005, 61 strane 10827-10852. Zaštitna grupa PG međuproizvoda 8 može se razdvajati pod baznim uslovima, kao što je na primer tretiranjem hidroksidima alkalnih metala, kao što su na primer litijum hidroksid, u vodi ili smeši vode i tetrahidrofurana, kako bi se dobila odgovarajuća so karboksilne kiseline. Ova so može da se poveže sa poliaminima 1 upotrebom standardnih uslova spajanja peptida, kao što je na primer spajanje u prisustvu HATU i 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b] piridin-3-ol u prisustvu N,N-diizopropiletilamina, u pogodnom rastvaraču, kao što je na primer dihlorometan, na sobnoj temperaturi, kako bi se dobili međuproizvodi opšte formule (V). Razdvajanje karboksilnih zaštitnih grupa međuproizvoda opšte formule (V) može se postići korišćenjem standardnih uslova, kao što je na primer rastvaranje i mešanje međuproizvoda (V) u vodenoj hlorovodoničnoj kiselini na sobnoj temperaturi. Prateće kompleksiranje sa pogodnim jedinjenjima ili solima gadolinijuma (III), kao što su na primer gadolinijum trioksid, gadolinijum triacetat ili hidrati gadolinijum triacetata, gadolinijum trihlorid ili gadolinijum trinitrat, dobro je poznato stručnjacima u oblasti i može, na primer, da se postigne reakcijom sa pogodnim jedinjenjima gadolinijuma (III) u temperaturnom rasponu od sobne temperature do 100°C pri pH = 1-7 tokom nekoliko sati, dajući jedinjenja opšte formule (I-k). Sirove karboksilne kiseline izvedene iz jedinjenja opšte formule (V), na primer, reaguju sa gadolinijum trioksidom na 80°C, što dovodi do jedinjenja opšte formule (I-k).

[0144] Način pripreme jedinjenja opštih formula (I-m) i (I-n) je opisan u Šemi 10.

Šema 10: Put za dobijanje jedinjenja opštih formula (I-m) i (I-n), gde

i R<4>imaju značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, n' predstavlja ceo broj 2, 3

i 4, LG predstavlja aktiviranje odlazećih grupa, kao što je na primer 1-hidroksipirolidin-2,5-dion, ili grupu definisanu za sintezu jedinjenja opšte formule (I-a) supra, i PG predstavlja karboksilnu zaštitnu grupu, kao što je na primer metil ili etil grupa.

[0145] Kada se umesto diamina formule 7, kao što je opisano u Šemi 9, diamini formule 9 i 10 ili njihove soli koriste u analognoj sintezi kao što je opisano u Šemi 9, mogu se dobiti jedinjenja opštih formula (I-m) i (I-n).

Diamini 9 ili njihove soli su komercijalno dostupni [na primer CAS 159029-33-1, CAS 440644-06-4] ili se mogu sintetisati postupcima koji su dobro poznati stručnjaku.

Diamini 10 ili njihove soli su komercijalno dostupni [na primer CAS 20610-20-2, CAS 6059-44-5] ili se mogu sintetisati postupcima koji su dobro poznati stručnjaku.

[0146] Alternativni put onome opisanom u Šemi 4 za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-d) je opisan u Šemi 11.

Šema 11: Alternativni put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-d), gde

[0147] R<5>ima značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, predstavlja tetraamin kao što je dato za opštu formulu (I), supra, i LG predstavlja aktivirajnje odlazeće grupe, kao što je na Primer 3H-[1,2,3]triazolo[ 4,5-b]piridin-3-ol, ili grupa definisana za sintezu jedinjenja opšte formule (Ia) supra.

[0148] Polazni materijali 4 su ili komercijalno dostupni tetraamini ili njihove soli [na primer CAS 4742-00-1, CAS 294-90-6] ili tetraamini ili njihove soli koji su poznati iz literature ili koji se mogu dobiti analogno jedinjenjima koja su opisana u literaturi. Polazni materijali 14 ili su komercijalno dostupni ili poznati iz literature ili se mogu sintetisati analogno jedinjenjima koja su opisana u literaturi, npr. postupnim alkiliranjem cikličnog jezgra.

Tetraamin 4 ili njegova so reaguju sa derivatom aminokiseline 11, koji se aktivira odlazećom grupom (LG), kao što su na primer 1-hidroksipirolidin-2,5-dion, pentafluorofenol, 4-nitrofenol ili 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol, što dovodi do međuproizvoda 12.

Dobijanje aktiviranih estara dobro je poznato stručnjaku i detaljno je opisano na primer od strane C.A. Montalbetti i V. Falque u Tetrahedron 61 (2005), strane 10827-10852. Reakcije spajanja poliamina 4 sa derivatima aminokiselina 11 se izvode u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer dihlorometan ili N,N-dimetilformamid, u temperaturnom rasponu od sobne temperature do 50°C, radi dobijanja međuproizvoda 12. Razdvajanje amino zaštitnih grupa (PG) međuproizvoda 12 kako bi se dobili međuproizvodi 13, može se postići kako je opisano u udžbeniku Greene i Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, drugo izdanje. U slučaju terc-butoksikarbonilnih zaštitnih grupa, uklanjanje zaštite se, na primer, izvodi reakcijom međuproizvoda 12 sa HCI u CPME u pogodnom rastvaraču, kao što je na primer CPME ili 1,4-dioksan ili njihova smeša u temperaturnom rasponu od 0°C do sobne temperature tokom nekoliko sati.

Tetraamin 13 ili njegova so reaguju sa derivatom 14 [4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetne kiseline, koji se aktivira odlazećom grupom (LG), kao što je na Primer 3H-[1,2,3]triazolo[ 4,5-b] piridin-3-ol, 4-nitrofenol ili 1-hidroksipirolidin-2,5-dion što dovodi do međuproizvoda 15. Reakcija spajanja tetraamina 13 sa derivatom 14 [4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetne kiseline izvodi se u pogodnom rastvaraču, kao što su na primer N,N-dimetilacetamid ili dimetil sulfoksid, ili njihova smeša, u temperaturnom rasponu od sobne temperature do 80°C, radi dobijanja međuproizvoda 15.

Razdvajanje karboksilnih zaštitnih grupa međuproizvoda 15 kako bi se dobili međuproizvodi opšte formule (VI), može se postići kao što je opisano u udžbeniku Greene i Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, drugo izdanje, strane 245-247. Uklanjanje zaštite se, na primer, vrši rastvaranjem i mešanjem međuproizvoda 15 u trifluorosirćetnoj kiselini na sobnoj temperaturi nekoliko sati.

Kompleksiranje međuproizvoda opšte formule (VI) sa pogodnim jedinjenjima ili solima gadolinijuma (III), kao što su na primer gadolinijum trioksid, gadolinijum triacetat ili hidrati gadolinijum triacetata, gadolinijum trihlorida ili gadolinijum trinitrata, dobro su poznati stručnjaku. Međuproizvodi opšte formule (VI) su rastvoreni u vodi i posle dodavanja pogodnih jedinjenja gadolinijuma (III), dobijene smeše se mešaju u temperaturnom rasponu od sobne temperature do 100°C, pri pH = 1-7, tokom nekoliko sati, kako bi se dobila jedinjenja opšte formule (I-d). Međuproizvodi opšte formule (VI) su, na primer, rastvoreni u vodi, dodaje se gadolinijum triacetat tetrahidrat i pH se podešava na 3,5 - 5,5 dodavanjem pogodne baze, kao što je na primer vodeni rastvor natrijum hidroksida. Reakcija se izvodi na temperaturama u rasponu od 50°C do 80°C, što dovodi do jedinjenja opšte formule (I-d).

[0149] Alternativni put onome opisanom u Šemi 4 za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-d) je opisan u Šemi 12.

Šema 12: Alternativni put za dobijanje jedinjenja opšte formule (I-d), gde

R<5>ima značenje kao što je dato za opštu formulu (I), supra, predstavlja tetraamin kao što je dato za opštu formulu (I), supra, i LG predstavlja aktivirajnje odlazeće grupe, kao što je na Primer 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol, ili grupa definisana za sintezu jedinjenja opšte formule (Ia) supra.

[0150] Polazni materijali 4 su ili komercijalno dostupni tetraamini ili njihove soli [na primer CAS 4742-00-1, CAS 294-90-6] ili tetraamini ili njihove soli koji su poznati iz literature ili koji se mogu dobiti analogno jedinjenjima koja su opisana u literaturi. Polazni materijali 16 ili su poznati iz literature ili se mogu sintetisati analogno jedinjenjima koja su opisana u literaturi, npr. postupnim alkiliranjem cikličnog jezgra.

Tetraamin 4 ili njegova so reaguju sa derivatom 16 [4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetne kiseline, koji se aktivira odlazećom grupom (LG), kao što je na primer 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol, 4-nitrofenol ili 1-hidroksipirolidin-2,5-dion što dovodi do međuproizvoda 15. Reakcija spajanja tetraamina 4 sa derivatima 16 [4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetne kiseline izvodi se u pogodnom rastvaraču, kao što je na primer N,N-dimetilformamid, radi dobijanja međuproizvoda 16.

Kompleksiranje međuproizvoda opšte formule (VI) sa pogodnim jedinjenjima ili solima gadolinijuma (III), kao što su na primer gadolinijum trioksid, gadolinijum triacetat ili hidrati gadolinijum triacetata, gadolinijum trihlorida ili gadolinijum trinitrata, dobro je poznato stručnjaku. Međuproizvodi opšte formule (VI) su rastvoreni u vodi i posle dodavanja pogodnih jedinjenja gadolinijuma (III), dobijene smeše se mešaju u temperaturnom rasponu od sobne temperature do 100°C, pri pH = 1-7, tokom nekoliko sati, kako bi se dobila jedinjenja opšte formule (I-d). Međuproizvodi opšte formule (VI) su, na primer, rastvoreni u vodi, dodaje se gadolinijum triacetat tetrahidrat i pH se podešava na 3,5 - 5,5 dodavanjem pogodne baze, kao što je na primer vodeni rastvor natrijum hidroksida. Reakcija se izvodi na temperaturama u rasponu od 50°C do 80°C, što dovodi do jedinjenja opšte formule (I-d).

[0151] U skladu sa otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje se takođe odnosi na postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-a) kako je definisano supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenju opšte formule (II-a) :

gde je Ⓐ kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 2, 3 i 4, ili njegova so,

da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (III) :

gde je R<5>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i LG predstavlja aktiviranje odlazeće grupe, kao što je na primer 4-nitrofenol, ili grupa kako je definisano za sintezu jedinjenja opšte formule (I-a) supra,

čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-a) :

gde su Ⓐ i R<5>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I) supra, i n' predstavlja ceo broj 2, 3 i 4.

[0152] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje se takođe odnosi na postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-b) kako je definisano supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenju opšte formule (II-b) :

da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (III) :

čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-b) :

gde suⒶ i R<5>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I) supra, i n' predstavlja ceo broj 2, 3 i 4.

[0153] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje se takođe odnosi na postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-c) kako je definisano supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenju opšte formule (II-c) :

da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (III) :

čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-c) :

[0154] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje se takođe odnosi na postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-d) kako je definisano supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja jedinjenju formule 4,

gde je tetraamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, ili njegova so,

da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (III) :

čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-d) :

gde je R<5>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I) supra, i je tetraamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra.

[0155] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetni pronalazak se takođe odnosi na postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-d) kako je definisano supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja jedinjenju formule 4,

gde je tetraamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I) pronalaska, supra, ili njegova so, da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (III) :

gde je R<5>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I) pronalaska, supra, i LG predstavlja aktiviranje odlazeće grupe, kao što je na primer 4-nitrofenol,

čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-d) :

gde je R<5>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I) pronalaska, supra, i je tetraamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I) pronalaska, supra.

[0156] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje se takođe odnosi na postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-e) kako je definisano supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenju opšte formule (IV) :

gde je R<4>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i je tetraamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra,

da reaguje sa gadolinijum (III) jedinjenjem, kao što su na primer gadolinijum trioksid, gadolinijum triacetat ili hidrati gadolinijum triacetata, gadolinijum trihlorida ili gadolinijum trinitrata, ili sa njihova so,

čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-e) :

gde je R<4>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i je tetraamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra.

[0157] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje se takođe odnosi na postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-f) kako je definisano supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenju opšte formule (II-a) :

gde je triamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i n' predstavlja

ceo broj 2, ili njegova so, ili gde je tetraamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 3, ili njegova so,

da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (III) :

čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-f) :

gde je R<5>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i gde je triamin kako

je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 2, ili

tetraamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 3.

[0158] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje se takođe odnosi na postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-h) kako je definisano supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenju opšte formule (II-c) :

da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (III) :

čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-h) :

gde je R<5>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i gde je triamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 2, ili gde je

tetraamin kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo

broj 3.

[0159] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje se takođe odnosi na postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-k) kako je definisano supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenju opšte formule (V) :

gde su R<4>kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 2, 3 i 4,

da u prvom koraku reaguje reaguje sa kiselinom, kao što je na primer vodena hlorovodonična kiselina, i

da u drugom koraku reaguje reaguje sa gadolinijum (III) jedinjenjem, kao što su na primer gadolinijum trioksid, gadolinijum triacetat ili hidrati gadolinijum triacetata, gadolinijum trihlorida ili gadolinijum trinitrata, ili sa njihova so,

čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-k) :

gde su kako je definisano za jedinjenje opšte formule (I), supra, i n' predstavlja ceo broj 2, 3 i 4.

OPIS SLIKA

[0160]

Slika 1 prikazuje kinetiku krvne plazme iz Primera 3 u odnosu na Gadovist® kod pacova. Farmakokinetički profil iz Primera 3 uporediv je sa onim od Gadovist®.

Slika 2 prikazuje evoluciju relativne paramagnetne stope uzdužne relaksacije vodenog protona R1<p>(t)/R1<p>(0) u odnosu na vreme iz Primera 3, Referentno jedinjenje 1 (Gadovist®), Referentno jedinjenje 2 (Magnevist®) i Referentno jedinjenje 3 (Primovist®). Stabilnost Primera 3 je uporediva sa makrocikličkim Referentnim jedinjenjem 1 visoke stabilnosti (Gadovist®).

Slika 3 prikazuje podatke angiografije magnetne rezonance kod mužjaka novozelandskih belih zečeva: (A) 30 µmol Gd/kg telesne težine Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®); (B) 30 µmol Gd/kg telesne težine Primera 3 i (C) 100 µmol Gd/kg telesne težine Referentnog jedinjenja 1. Pojačanje kontrasta protokola pri malim dozama sa Primerom 3 (B) uporedivo je sa standardnom dozom Referentnog jedinjenja 1 (C). Pored toga, kvalitet slike protokola niskih doza iz Primera 3 (B) je značajno bolji od protokola sa malim dozama Referentnog jedinjenja 1 (A). Studija angiografije pokazuje potencijal Primera 3 za značajno smanjenje doze.

Slika 4 MR slike pre i posle primene kontrastnog agensa. Reprezentativne slike glave i vrata pre i 1,4 minuta nakon primene Primera 3 (A) i Referentnog jedinjenja 1 (B). Snažno pojačanje signala je vidljivo na primer u srcu, jeziku i vratnom mišiću.

Slika 5 MR slike pre i posle primene kontrastnog agensa. Reprezentativne slike abdominalne regije pre i 0,5 minuta nakon primene Primera 3 (A) i Referentnog jedinjenja 1 (B). Snažno pojačanje signala je vidljivo na primer u aorti, bubrezima, jetri i slezini.

Slika 6 MR slike pre i posle primene kontrastnog agensa. Reprezentativne slike karlične regije pre i 2,9 minuta nakon primene Primera 3 (A) i Referentnog jedinjenja 1 (B). Snažno pojačanje signala je vidljivo, na primer, u vaskularnom sistemu (sudovima) i mišićima ekstremiteta.

Slika 7 Poboljšanje MRI signala za različite oblasti tela.

Pojačanje signala tokom vremena nakon primene Primera 3 i Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®) za jezik, mišiće usta, jetru, slezinu, aortu i mišiće ekstremiteta. Nisu primećene razlike u vremenskom toku promene signala između Primera 3 i Referentnog jedinjenja 1. Ovo pokazuje identična farmakokinetička svojstva i ukazuje na potencijal Primera 3 za snimanje različitih oblasti tela. Kao što se očekuje od približno dvostruko veće relaksivnosti (pogledati primer A), primećena poboljšanja kontrasta iz Primera 3 bila su veća u poređenju sa Referentnim jedinjenjem 1 (Gadovist®). Vertikalni stubići predstavljaju standardnu devijaciju.

Figura 8 Korelacija tkivne koncentracije gadolinijuma i pojačavanje MRI signala.

Koncentracija gadolinijuma je merena u uzorcima tkiva mozga, jezika, jetre, slezine, krvi i mišića ekstremiteta (mišića) i odgovarajućim promenama MRI signala utvrđenim in vivo, nakon primene Primera 3 i Referentnog jedinjenja 1. Vertikalni i horizontalni stubići greške predstavljaju standardnu devijaciju. Isprekidane linije predstavljaju linearnu regresiju između koncentracije gadolinijuma i promene MRI signala.

Slika 9 Difuzija različitih kontrastnih agenasa kroz polupropusne membrane (20 kDa).

Izvršena su dinamička CT merenja koja pokazuju sposobnost različitih kontrastnih agenasa da se raspršuju kroz polupropusnu membranu. (A) CT slike iz Primera 1, 2, 3, 4, 5 i 6 u poređenju sa Referentnim jedinjenjem 1 (Gadovist®) i 4 (Gadomer). Na Slici A1 je prikazano reprezentativno područje merenja za procenu signala tokom vremena.

Slika 10 Analiza signala fantomske studije dinamičke CT difuzije tokom vremena. Signal u Hounsfield jedinicama (HU) tokom vremena dijalizne kasete u rastvoru fetusa goveda za Primer 1-6 i Referentna jedinjenja 1 i 4 pokazuje da, suprotno od Referentnog jedinjenja 4 (Gadomer), sva ispitivana jedinjenja su sposobna da prođu polupropusnu membranu (20 kDa).

Slika 11 Slike magnetne rezonance sa pojačanim kontrastom GS9L tumora mozga kod pacova (obeležene belim strelicama). (A) Intraindividualno poređenje Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®) i Primera 3 u istoj dozi od 0,1 mmol Gd/kg telesne težine. Primer 3 pokazao je veći kontrast lezija-i-mozga i odlično razgraničenje oboda tumora. (B) Poređenje Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®) pri 0,3 mmol Gd/kg telesne težine i Primera 3 pri 0,1 mmol Gd/kv telesne težine. Primer 3 pokazuje sličan kontrast lezija-i-mozga kod jedna trećina doze Referentnog jedinjenja 1.

EKSPERIMENTALNI ODELJAK

[0161]

Skraćenice

Materijali i instrumenti

[0162] Hemikalije korišćene za sintetički rad bile su kvaliteta reagensa i korišćene su kako su dobijene.

[0163] Svi reagensi, za koje sinteza nije opisana u eksperimentalnom odeljku, su ili komercijalno dostupni, ili su poznata jedinjenja ili se mogu formirati od poznatih jedinjenja postupcima poznatim stručnjaku.

[0164]<1>H-NMR spektri su mereni u CDCl3, D2O or DMSO-d6, respektivno (sobna temperatura, Bruker Avance 400 spektrometar, frekvenca rezonance: 400,20 MHz za<1>H ili Bruker Avance 300 spektrometar, frekvenca rezonance: 300,13 MHz za<1>H. Hemijske promene su date u ppm u odnosu na natrijum (trimetilsilil) propionat-d4(D2O) ili tetrametilsilan (DMSO-d6) kao spoljni standardi (δ = 0 ppm).

[0165] Jedinjenja i međuproizvodi proizvedeni u skladu sa postupcima predmetnog pronalaska mogu zahtevati prečišćavanje. Prečišćavanje organskih jedinjenja dobro je poznato stručnjaku i može postojati više načina prečišćavanja istog jedinjenja. U nekim slučajevima prečišćavanje možda neće biti potrebno. U nekim slučajevima, jedinjenja se mogu prečistiti kristalizacijom. U nekim slučajevima se nečistoće mogu mešati korišćenjem pogodnog rastvarača. U nekim slučajevima, jedinjenja se mogu prečistiti hromatografijom, posebno fleš hromatografijom na koloni, koristeći na primer prethodno pripremljene patrone sa silika gelom, npr. Biotage SNAP patrone KP-Sil® ili KP-NH® u kombinaciji sa Biotage sistemom samo-prečišćavača (SP4® ili Isolera Four®) i eluentima poput gradijenata heksana/etil acetata ili DCM/metanola. U nekim slučajevima, jedinjenja se mogu prečistiti preparativnom HPLC upotrebom, na primer, Waters samo-prečišćavača opremljenog detektorom niza dioda i/ili on-line masenim spektrometrom elektrosprej jonizacije u kombinaciji sa pogodnom unapred pripremljenom kolonom reverzne faze i eluentima kao što su gradijenti vode i acetonitril koji može da sadrži aditive kao što su trifluorosirćetna kiselina, mravlja kiselina ili vodeni amonijak.

[0166] Primeri su analizirani i okarakterisani sledećim analitičkim postupcima zasnovanim na HPLC kako bi se odredilo karakteristično vreme zadržavanja i maseni spektar:

Postupak 1: UPLC (ACN-HCOOH):

Instrument: Waters Acquity UPLC-MS SQD 3001; kolona: Acquity UPLC BEH C181,7 µm, 50x2,1mm; eluent A: voda 0,1% mravlja kiselina, eluent B: acetonitril; gradijent: 0-1,6 minuta 1-99% B, 1,6-2,0 minuta 99% B; protok 0,8 mL/minuta; temperatura: 60 °C; injekcija: 2 µl; DAD skeniranje: 210-400 nm; ELSD.

Postupak 2: UPLC (ACN-HCOOH polarni):

Instrument: Waters Acquity UPLC-MS SQD 3001; kolona: Acquity UPLC BEH C181,7 µm, 50x2,1mm; eluent A: voda 0,1% mravlja kiselina, eluent B: acetonitril; gradijent: 0-1,7 minuta 1-45% B, 1,7-2,0 minuta 45-99% B; protok 0,8 mL/minuta; temperatura: 60 °C; injekcija: 2 µl; DAD skeniranje: 210-400 nm; ELSD.

Postupak 3: UPLC (ACN-HCOOH dugačko trajanje):

Instrument: Waters Acquity UPLC-MS SQD 3001; kolona: Acquity UPLC BEH C181,7 µm, 50x2,1mm; eluent A: voda 0,1% mravlja kiselina, eluent B: acetonitril; gradijent: 0-4,5 minuta 0-10% B; protok 0,8 mL/minuta; temperatura: 60 °C; injekcija: 2 µl; DAD skeniranje: 210-400 nm; ELSD.

Postupak 4: UPLC (ACN-NH3):

Instrument: Waters Acquity UPLC-MS ZQ2000; kolona: Acquity UPLC BEH C181,7 µm, 50x2,1 mm; Eluent A: voda 0,2% amonijak, eluent B: acetonitril; gradijent: 0-1,6 minuta 1-99% B, 1,6-2,0 minuta 99% B; stopa protoka 0,8 mL/minuta; temperatura: 60 °C; injekcija: 1 µL; DAD skeniranje: 210-400 nm; ELSD.

Postupak 5: LC-MS:

Instrument: Agilent 1290 UHPLCMS Tof; kolona: BEH C 18 (Waters) 1,7 µm, 50x2,1 mm; eluent A: voda 0,05 vol-% mravlja kiselina (99%), eluent B: acetonitril 0,05% mravlja kiselina; gradijent: 0-1,7 minuta 98-10% A, 1,7-2,0 minuta 10% A, 2,0-2,5 minuta 10-98% A, protok 1,2 mL/minuta; temperatura: 60 °C; DAD skeniranje: 210-400 nm.

Primerna jedinjenja

Primer 1

Pentagadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,10,18,22,25-heksaokso-26-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-14-[({2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-9,19-bis({[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14,17,21,24-heptaazaheptakosan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat

[0167]

Primer 1a

Di-terc-butil (2-{[(2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi]karbonil)propan-1,3-diil)biskarbamat

[0168]

[0169] 3,60 g (11,3 mmol, 1 ekvivalent) 3-[(terc-butoksikarbonil)amino]-2-{[(tercbutoksikarbonil)amino]-metil}propanonska kiselina (pogledati WO 2006/136460 A2) i 1,43 g (12,4 mmol, 1,1 ekvivalent) 1-hidroksipirolidin-2,5-dion su rastvoreni u 120 mL THF. Reakcionoj smeši je kapanjem dodat rastvor 2,57 g (12,4 mmol, 1,1 ekvivalent) N,N'-dicikloheksilkarbodiimida u 60 mL THF. Nakon mešanja tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, rezultujuća suspenzija je ohlađena do 0°C i taložena urea je filtrirana. Bistar rastvor je isparen do suvoće dajući kao prinos 5,50 g (13,24 mmol, 117 %) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,15 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 416,3 (M H)<+>.

Primer 1b

Terc-butil (7,17-bis{[(terc-butoksikarbonil)amino]metil}-2,2-dimetil-4,8,16-triokso-3-oksa-5,9,12,15-tetraazaoktadekan-18-il)karbamat

[0170]

[0171] 4,70 g (11,3 mmol, 2,22 ekvivalent) Di-terc-butil (2-{[(2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi]karbonil}propan-1,3-diil)biskarbamata (primer 1a) je rastvoreno u 120 mL THF. Reakcionoj smeši je kapanjem dodat rastvor 0,53 g (5,10 mmol, 1 ekvivalent) N-(2-aminoetil)etan-1,2-diamina i 1,14 g (11,3 mmol, 2,22 ekvivalent) trietilamina u 40 mL THF. Nakon mešanja tokom 3 sata na sobnoj temperaturi, rezultujuća suspenzija je rastvorena sa dihlorometanom. Organski rastvor je opran sa vodenim natrijum hidroksidom (0,1 M), sa vodom i osušen je preko natrijum sulfata. Sirov proizvod je izolovan isparavanjem pod redukovanim pritiskom i pročišćen je slika gel hromatografijom dajući kao prinos 2,81 g (3,99 mmol, 78%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,36 (s, 36 H), 2,39 - 2,47 (m, 3 H), 2,52 - 2,58 (m, 4 H), 2,95 - 3,20 (m, 12 H), 6,64 (t, 4 H), 7,72 (t, 2 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,06 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 704,6 (M<+>+ H).

Primer 1c

N,N'-(Iminodietan-2,1-diil)bis[3-amino-2-(aminometil)propanamid]pentahidrohlorid

[0172]

[0173] 600 mg (0,85 mmol) terc-butil (7,17-bis{[(terc-butoksikarbonil)amino]metil}-2,2-dimetil-4,8,16-triokso-3-oksa-5,9,12,15-tetraazaoktadekan-18-il)karbamata (primer 1b) je rastvoreno u 9,6 mL metanola i 2,85 mL vodene hlorovodonične kiseline (37%). Reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem tokom 2 sata na 50°C. Za izolaciju suspenzija je isparena do suvoće dajući kao prinos 423 mg (0,87 mmol, 102%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 3,04 - 3,15 (m, 2 H), 3,17 - 3,27 (m, 8 H), 3,29 - 3,38 (m, 4 H), 3,55 (t, 4 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,19 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 304,2 (M H)<+>, slobodna baza.

Primer 1

Pentagadolinijum[4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,10,18,22,25-heksaokso-26-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-14-[({2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-9,19-bis({[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14,17,21,24-heptaazaheptakosan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat

[0174] 150 mg (309 µmol, 1 ekvivalent) N,N-(Iminodietan-2,1-diil)bis[3-amino-2-(aminometil)-propan-amid] pentahidrohlorida (primer 1c) je rastvoreno u 60 mL DMSO. Nakon dodavanja 499 mg (3,86 mmol, 12,5 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamina i 4,06 g (5,40 mmol, 17,5 ekvivalent) gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata (pogledati WO 2001051095 A2) rezultujuća reakciona smeša je mešana i zagrejana tokom 8 sati na 50°C. Ohlađeni rastvor je koncentrisan pod redukovanim pritiskom do konačne zapremine od 15 - 20 mL. Koncentrat je sipan pod mešanjem u 400 mL etil acetata, formirani talog je filtriran i osušen je u vakuumu. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan. Sirov proizvod pročišćen je RP-hromatografijom dajući kao prinos 668 mg (64%, 199 µmol) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,46 minuta.

MS (ES-): m/z (z = 2) = 1680,5 (M - 2H)<2->; (ES<+>): m/z (z =3) = 1121,3 (M H)<3+>, m/z (z = 4) = 841,4 [(M H)<4+>.

Primer 2

heksagadolinijum[4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,10,15,19,22-heksaokso-23-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,16-bis({[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-amino}metil)-11-(2-{[3-{[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-2-({[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)propanoil]-amino}etil)-4,7,11,14,18,21-heksaazatetrakosan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat

[0175]

Primer 2a

terc-butil (12-{2-[(3-[(terc-butoksikarbonil)amino]-2-{[(terc-butoksikarbonil)amino]-metil)propanoil)amino]etil)-7,14-bis{[(terc-butoksikarbonil)amino]metil)-2,2-dimetil-4,8,13-triokso-3-oksa-5,9,12-triazapentadekan-15-il)karbamat

[0176]

[0177] 890 mg (2,80 mmol, 3 ekvivalent) 3-[(terc-butoksikarbonil)amino]-2-{[(tercbutoksikarbonil)amino]-metil}propanonske kiseline (pogledati WO 2006/136460 A2) je rastvoreno u 22 mL DMF. Rastvoru su dodati 434 mg (3,36 mmol, 3,6 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamin i 1,28 g (3,36 mmol, 3,6 ekvivalent) HATU. Rezultujuća reakciona smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon dodavanja kapanjem rastvora 96,1 mg (0,93 mmol, 1 ekvivalent) N-(2-amino-etil)etan-1,2-diamina i 434 mg (3,36 mmol, 3,6 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamina u 9 mL DMF, rezultujuća reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem tokom 3 sata na 70°C. Nakon hlađenja i rastvaranja sa dihlorometanom, rastvor je opran sa vodenim natrijum hidroksidom (0,1 M), vodenom limunskom kiselinom (1%) i vodom i osušen je preko natrijum sulfata. Sirov proizvod je izolovan isparavanjem pod redukovanim pritiskom i pročišćen je slika gel hromatografijom dajući kao prinos 451 mg (0,45 mmol, 48%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,37 (s, 54 H), 2,36 - 2,49 (m, 3 H), 2,81 - 3,30 (m, 17 H), 3,36 - 3,70 (m, 3 H), 6,16 - 6,92 (m, 6 H), 7,77 - 8,35 (m, 2 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,49 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 1004,6 (M H)<+>.

Primer 2b

3-Amino-N,N-bis(2-{[3-amino-2-(aminometil)propanoil]amino}etil)-2-(aminometil)-propanamid heksahidrohlorid

[0178]

[0179] 581 mg (0,58 mmol) terc-butil (12-{2-[(3-[(terc-butoksikarbonil)amino]-2-{[(tercbutoksi-karbonil)amino]metil}propanoil)amino]etil}-7,14-bis{[(tercbutoksikarbonil)amino]metil}-2,2-dimetil-4,8,13-triokso-3-oksa-5,9,12-triazapentadekan-15-il)karbamata (primer 2a) je rastvoreno u 9,3 mL metanola i 2,9 mL vodene hlorovodonične kiseline (37%). Reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem tokom 2 sata na 50°C. Za izolaciju suspenzija je isparena do suvoće dajući kao prinos 376 mg (0,60 mmol, 103%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 3,13 - 3,27 (m, 2 H), 3,28 - 3,85 (m, 21 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,19 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 404,3 (M H)<+>, slobodna baza.

Primer 2

[0180] 150 mg (241 µmol, 1 ekvivalent) 3-Amino-N,N-bis(2-{[3-amino-2-(aminometil)propanoil]amino}-etil)-2-(aminometil)propanamid heksahidrohlorida (primer 2b) je rastvoreno u 60 mL DMSO. Nakon dodavanja 467 mg (3,62 mmol, 15 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamin i 3,80 g (5,06 mmol, 21 ekvivalent) gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata (pogledati WO 2001051095 A2) rezultujuća reakciona smeša je mešana i zagrejana tokom 8 sati na 50°C. Ohlađeni rastvor je koncentrisan pod redukovanim pritiskom do konačne zapremine od 15 - 20 mL. Koncentrat je sipan pod mešanjem u 400 mL etil acetata, formirani talog je filtriran i osušen je u vakuumu. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan. Sirov proizvod pročišćen je RP-hromatografijom dajući kao prinos 677 mg (166 µmol, 69%) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,44 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 3) = 1357,4 (M 3H)<3+>, m/z (z = 4) = 1018,8 (M 4H)<4+>], m/z (z = 5) = 815,7 (M 5H)<5+>.

Primer 3

Tetragadolinijum[4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris-(karboksi)atometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat

[0181]

[0182] 225 mg (1,65 mmol, 1 ekvivalent) 2,2-Bis(aminometil)propan-1,3-diamina (pogledati W. Hayes i dr., Tetrahedron 59 (2003), 7983 - 7996) je rastvoreno u 240 mL DMSO. Nakon dodavanja 1,71 g (13,2 mmol, 8 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamina i 14,9 g (19,85 mmol, 12 ekvivalent) gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata (pogledati WO 2001051095 A2) rezultujuća reakciona smeša je mešana i zagrejana tokom 8 sati na 50°C. Ohlađeni rastvor je koncentrisan pod redukovanim pritiskom do konačne zapremine od 40 -50 mL. Koncentrat je sipan pod mešanjem u 600 mL etil acetata, formirani talog je filtriran i osušen je u vakuumu. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan. Sirov proizvod pročišćen je RP-hromatografijom dajući kao prinos 3,42 g (80%, 1,33 mmol) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,42 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 2) = 1290,4 (M H)<2+>, m/z (z = 3) = 860,7 (M H)<3+>.

[0183] Primer 3 obuhvata smešu stereoizomera, koja ispoljava naredne apsolutne konfiguracije:

sve-R, sve-S, RRRS, SSSR, RRSS.

Primer 3-1

Tetragadolinijum{4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)-acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklo-dodekan-1-il}acetat

[0184]

Primer 3-1a

terc-butil {10,10-bis[({[(terc-butoksikarbonil)amino]acetil)amino)metil]-2,2-dimetil-4,7,13-triokso-3-oksa-5,8,12-triazatetradekan-14-il}karbamat

[0185]

[0186] Smeša 2,2-bis(aminometil)propan-1,3-diamin tetrahidrohlorid (851 mg, 3,06 mmol, 1 ekvivalent; pogledati W. Hayes i dr., Tetrahedron 59 (2003), 7983 - 7996) u dihlorometanu (50 mL) je tertirana sa N,N-diizopropiletilaminom (6,00 ekvivalent, 3,20 mL, 18,4 mmol) i 2,5-dioksopirolidin-1-il N-(terc-butoksikarbonil)glicinatom (CAS No. [3392-07-2]; 6,00 ekvivalent, 5,00 g, 18,4 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi tokom 2,5 dana. Reakciona smeša je rastvorena sa vodom, formirani talog je filtriran i opran sa vodom i dihlorometanom. Taloženi materijal je podvrgnut slika gel hromatografiji (dihlorometan/metanol) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (800 mg, 34%).

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,36 (s, br, 36H), 2,74 - 2,76 (m, 8H), 3,48 - 3,50 (m, 8H), 6,96 (s, br, 0,4H*), 7,40 - 7,42 (m, 3,6H*), 7,91 - 8,00 (m, 4H) ppm.

LC-MS (ES<+>): m/z = 761,4 (M H)<+>; Rt. = 1,16 minuta.

Primer 3-1b

2-Amino-N-(3-[(aminoacetil)amino]-2,2-bis{[(aminoacetil)amino]metil}propil)acetamid tetrahidrohlorid

[0187]

[0188] Suspenzija terc-butil {10,10-bis[({[(terc-butoksikarbonil)amino]acetil}amino)metil]-2,2-dimetil-4,7,13-triokso-3-oksa-5,8,12-triazatetradekan-14-il}karbamata (1,00 ekvivalent, 800 mg, 1,05 mmol) iz Primera 11a u CPME (10 mL) je ohlađena do 0°C i tertirana kapanjem sa HCI u CPME (10 ekvivalent, 3,5 mL od 3 M rastvora, 10,5 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata i na sobnoj temperaturi preko noći nakon čega su dioksan (4 mL) i druga količina HCI u CPME (30 ekvivalent, 11 mL od 3 M rastvora, 32 mmol) dodati i mešanje na sobnoj temperaturi je nastavljeno tokom 2 dana. Rezultujuća suspenzija je koncentrisan u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (575 mg, kvantitativno) koje nije dalje prečišćavano.

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 3,17 - 3,18 (m, 8H), 3,59 - 3,61 (m, 8H), 8,21 (s, br, 12H), 8,55 (t, 4H) ppm.

LC-MS (ES<+>): m/z = 361,2 (M - 3HCl - Cl-)<+>; Rt. = 0,10 minuta.

Primer 3-1c

Benzil (2S)-2-{[(trifluorometil)sulfonil]oksi}propanoat

[0189]

[0190] Pripremljeno prema H.C.J. Ottenheim i dr., Tetrahedron 44 (1988), 5583 - 5595: Rastvor (S)-(-)-mlečna kiselina benzil estra (CAS No. [56777-24-3]; 1,00 ekvivalent, 5,00 g, 27,7 mmol) u suvom dihlorometanu (95 mL) je ohlađen do 0°C i tertiran sa trifluorometansulfonskim anhidridom (CAS No. [358-23-6]; 1,1 ekvivalent, 5,2 mL, 8,6 g, 31 mmol). Nakon mešanja tokom 5 minuta 2,6-dimetilpiridin (1,15 ekvivalent, 3,72 mL, 3,42 g) je dodat i mešanje je nastavljeno tokom dodatnih 5 minuta. Dobijena reakciona smeša je direktno korišćena u narednom koraku.

Primer 3-1d

Benzil (2R)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoat

[0192] Rastvor tri-terc-butil 2,2',2"-(1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil)triacetata (CAS No. [122555-91-3]; 1,00 ekvivalent, 9,52 g, 18,5 mmol) u suvom dihlorometanu (75 mL) je ohlađen do 0°C i tertiran sa reakcionom smešom benzil (2S)-2-{[(trifluorometil)sulfonil]oksi}propanoata u dihlorometanu pripremljenom u Primeru 3-1c; i N,N-diizopropiletilamina (3,0 ekvivalent, 9,7 mL, 55 mmol). Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 6 dana nakon čega je rastvoren sa etil acetatom i opran sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata i koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni materijal pročišćen je amino fazom slika gel hromatografije (KP-NH®, heksan/etil acetat do dihlorometana/metanoal) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,92 g, 14%).

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,20 (d, 3H), 1,37 - 1,45 (m, 27H), 1,98 - 2,01 (m, 3H), 2,08 - 2,24 (m, 5H), 2,57 - 2,84 (m, 7H), 2,94 - 3,11 (m, 4H), 3,38 - 3,48 (m, 3H), 3,75 (q, 1H), 5,07 - 5,17 (m, 2H), 7,32 - 7,40 (m, 5H) ppm.

LC-MS (ES<+>): m/z = 677,5 (M H)<+>, m/z (z =2) = 339,2 (M H)<2+>; Rt. = 1,06 minuta.

Primer 3-1e

(2R)-2-[4,7,10-Tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-propanonska kiselina

[0193]

[0194] Rastvor benzil (2R)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoata (Primer 3-1d; 1,92 g, 2,84 mmol) u metanolu (17,5 mL) je tertiran sa Pd/C (10% težine; 0,050 ekvivalent, 151 mg, 0,14 mmol) i mešan pod atmosferom vodonika na sobnoj temperaturi tokom 20 sati. Reakciona smeša je filtrirana preko Celite®, oprana sa metanolom i filtrat je koncentrisan u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,51 g, 88%) koje nije dalje prečišćavano.

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,11 (s, br, 3H), 1,42 - 1,43 (m, 27H), 1,97 - 2,13 (m, 5H), 2,56 - 2,82 (m, 7H), 2,97 - 3,07 (m, 4H), 3,34 - 3,53 (m, 7H), 12,8 (s, br, 1H) ppm. UPLC (ACN-NH3): Rt. = 1,31 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 587 (M H)<+>.

LC-MS (ES<+>): m/z = 587 (M H)<+>, m/z (z =2) = 294,2 (M H)<2+>; Rt. = 0,79 minuta.

Primer 3-1f

Terc-butil {4,10-bis(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}-amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklo-dodekan-1-il}acetat

[0195]

[0196] Smeša (2R)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanonske kiseline (Primer 3-1e; 12,0 ekvivalent, 1,50 g, 2,56 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (15 mL) je tertirana sa HATU (14,4 ekvivalent, 1,17 g, 3,07 mmol) i N,N-diizopropiletilaminom (14,4 ekvivalent, 534 µL, 3,07 mmol) i mešana je na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta. Suspenzija 2-amino-N-(3-[(aminoacetil)amino]-2,2-bis{[(aminoacetil)amino]metil}propil)acetamid tetrahidrohlorida (Primer 3-1b; 1,00 ekvivalent, 108 mg, 213 µmol) u N,N-dimetilacetamidu (6 mL) je dodata i rezultujuća smeša je mešana na 50°C preko noći. Reakciona smeša je koncentrisana pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je podvrgnut amino fazi slika gel hromatografije (KP-NH®, etil acetat do etil acetata/metanola) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (260 mg, 42%).

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,03 (s, br, 5H), 1,28 (s, br, 7H), 1,36 - 1,43 (m, 108H), 1,87 - 2,24 (m, 23H), 2,42 (s, br, 4H), 2,53 - 2,84 (m, 41H), 2,97 - 3,18 (m, 17H), 3,28 (s, br, 5H), 3,39 - 3,46 (m, 6H), 3,58 (s, br, 7H), 3,76 (s, br, 2H), 4,01 (s, br, 3H), 7,81 (s, br, 5H), 8,33 (s, br, 2H), 9,27 (s, br, 1H) ppm.

UPLC (ACN-NH3): Rt. = 1,23 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z =4) = 660 (M H)<4+>.

LC-MS (ES<+>): m/z (z =2) = 1318 (M H)<2+>, m/z (z =3) = 879 (M H)<3+>, m/z (z =4) = 660 (M H)<4+>; Rt. = 0,94 minuta.

Primer 3-1g

{4,10-Bis(karboksimetil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetna kiselina [0197]

[0198] Terc-butil {4,10-bis(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}-acetat (Primer 3-1f; 260 mg, 0,099 mmol) je tertiran sa TFA (25 mL) pod mešanjem na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je koncentrisana pod redukovanim pritiskom, dobijeni ostatak je uzet sa vodom (20 mL) i liofilizovan. Sirov proizvod je korišćen bez dalje karakterizacije u narednom hemijskom koraku.

Primer 3-1

Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)-acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklo-dodekan-1-il}acetat

[0199] Sirov materijal {4,10-bis(karboksimetil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetne kiseline iz Primera 3-1g je rastvoren u vodi (20 mL). Tris(acetato-kappaO)gadolinijum tetrahidrat (298 mg, 0,734 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na 70°C tokom 2 sata. pH vrednost rezultujućeg rastvora je prilagođena do 4,5 dodavanjem vodenog rastvora natrijum hidroksida (2 N) i mešanje na 70°C je nastavljeno tokom 2 dana. Rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom (7x100 mL) koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan dajući kao prinos jedinjenje iz naslova (70 mg, 27% iz dva koraka).

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,39 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 2) = 1290,1 (M H)<2+>, m/z (z = 3) = 860,3 (M H)<3+>.

LC-MS (ES<+>): m/z (z = 2) = 1290,3 (M H)<2+>, m/z (z = 3) = 860,9 (M H)<3+>, m/z (z = 4) = 645,6 (M H)<4+>; Rt. = 0,25 minuta.

Primer 3-2

Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}-acetat

[0200]

Primer 3-2a

Benzil (2R)-2-{[(trifluorometil)sulfonil]oksi}propanoat

[0201]

[0202] Pripremljen analogno odgovarajućem S-izomeru (Primer 3-1c) od (R)-(+)-mlečna kiselina benzil estra (CAS No. [74094-05-6]; 8,00 g, 44,4 mmol) u dihlorometanu. Dobijena reakciona smeša je direktno korišćena u narednom koraku.

Primer 3-2b

Benzil (2S)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-propanoat

[0203]

[0204] Pripremljen analogno odgovarajućem R-izomeru (Primer 3-1d) tri-terc-butil 2,2',2"-(1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil)triacetata (CAS No. [122555-91-3]; 1,00 ekvivalent, 15,2 g, 29,6 mmol) i reakcione smeše benzil (2R)-2-{[(trifluorometil)sulfonil]oksi}propanoata u dihlorometanu pripremljenom u Primeru 3-2a.

LC-MS (ES<+>): m/z = 677,4 (M H)<+>, m/z (z =2) = 339,2 (M H)<2+>; Rt. = 0,94 minuta.

Primer 3-2c

(2S)-2-[4,7,10-Tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-propanonska kiselina

[0205]

[0206] Pripremljen analogno odgovarajućem R-izomeru (Primer 3-1e) benzil (2S)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoata (Primer 3-2b).

UPLC (ACN-NH3): Rt. = 1,31 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 587 (M H)<+>.

LC-MS (ES<+>): m/z = 587,4 (M H)<+>, m/z (z =2) = 294,2 (M H)<2+>; Rt. = 0,82 minuta.

Primer 3-2d

terc-butil {4,10-bis(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}-amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat

[0207]

[0208] Pripremljen analogno odgovarajućem R-izomeru (Primer 3-1f) (2S)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanonske kiseline (Primer 3-2c) i 2-amino-N-(3-[(aminoacetil)amino]-2,2-bis{[(aminoacetil)amino]metil}propil)acetamid tetrahidrohlorida (Primer 3-1b).

LC-MS (ES<+>): m/z (z =2) = 1318 (M H)<2+>, m/z (z =3) = 879 (M H)<3+>, m/z (z =4) = 660 (M H)<4+>; Rt. = 0,95 minuta.

Primer 3-2e

{4,10-Bis(karboksimetil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetna kiselina [0209]

[0210] Pripremljen analogno odgovarajućem R-izomeru (Primer 3-1g) terc-butil {4,10-bis(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat (Primer 3-2d). Sirov proizvod je korišćen bez dalje karakterizacije u narednom hemijskom koraku.

Primer 3-2

Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16

[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}-acetat

[0211] Pripremljen analogno odgovarajućem R-izomeru (Primer 3-1) {4,10-bis(karboksimetil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetne kiseline (Primer 3-2e) i tris(acetatokappaO)gadolinijum tetrahidrata pri pH 4,5. Rezultujući rastvor reakcije je ultrafiltriran sa vodom (8x100 mL) koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan i prečišćen preparativnom HPLC.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,41 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 2) = 1290 (M H)<2+>, m/z (z = 3) = 861 (M H)<3+>.

LC-MS (ES<+>): m/z (z = 2) = 1290 (M H)<2+>, m/z (z = 3) = 860 (M H)<3+>, m/z (z = 4) = 645,6 (M H)<4+>; Rt. = 0,23 minuta.

Primer 4

Pentagadolinijum [4-(1-{[2-(bis{2-[({1,4-bis[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]-1,4-diazepan-6-il}karbonil)-amino]etil}amino)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-7,10-bis(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat

[0212]

Primer 4a

6-(Metoksikarbonil)-1,4-diazepanediijum dihlorid

[0213]

[0214] 6,00 g (17,7 mmol) Metil 1,4-dibenzil-1,4-diazepan-6-karboksilat [pogledati US 5,866,562] je rastvoreno u 30 mL metanola. Nakon dodavanja 6 mL vodene hlorovodonične kiseline (37%), 6 mL vode i 600 mg paladijuma na uglju (10%), reakciona smeša je hidrogenizovana (1 atm) tokom 17 sati na 40°C. Katalizator je filtriran i rastvor je isparen pod redukovanim pritiskom dajući kao prinos 4,1 g (17,7 mmol, 100%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 3,62 - 3,84 (m, 9 H), 3,87 (s, 3 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,20 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 159,1 (M H)<+>, slobodna baza.

Primer 4b

1,4-Di-terc-butil 6-metil 1,4-diazepan-1,4,6-trikarboksilat

[0215]

[0216] 4,00 g (17,3 mmol, 1 ekvivalent) 6-(Metoksikarbonil)-1,4-diazepanediijum dihlorida (primer 4a) je rastvoreno u 80 mL DMF. Nakon dodavanja 7,71 g (76,2 mmol, 4,4 ekvivalent) trimetil amina i 8,31 g (38,1 mmol, 2,2 ekvivalent) di-terc-butil dikarbonata, rezultujuća reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Suspenzija je filtrirana, filtrat je isparen pod redukovanim pritiskom i rastvoren sa etil acetatom.

Rezultujući rastvor je opran sa vodenom limunskom kiselinom (pH = 3 - 4), polu zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom, osušen je preko natrijum sulfata i isparen pod redukovanim pritiskom dajući kao prinos 4,92 g (13,7 mmol, 79%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1,36 (s, 18 H), 2,69 - 3,27 (m, 4 H), 3,35 - 4,00 (m, 5 H), 3,62 (s, 3 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,32 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 359,2 (M H)<+>.

Primer 4c

1,4-Bis(terc-butoksikarbonil)-1,4-diazepan-6-karboksilna kiselina

[0217]

[0218] 4,86 g (13,66 mmol) 1,4-Di-terc-butil 6-metil 1,4-diazepan-1,4,6-trikarboksilata (primer 4b) je rastvoreno u 82 mL THF. Nakon dodavanja 27 mL vodenog natrijum hidroksida (2 M) rezultujuća reakciona smeša je mešana tokom 20 sati na sobnoj temperaturi, rastvorena je sa vodom i acidifikovana je (pH = 3 - 4) dodavanjem limunske kiseline. Sirov proizvod je ekstrahovan sa dihlorometanom, organski sloj je opran sa rasolom, osušen preko natrijum sulfata i isparen do suvoće dajući kao prinos 4,67 g (12,4 mmol, 91%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,38 (s, 18 H), 2,58 - 2,86 (m, 1 H), 2,94 - 4,00 (m, 8 H), 12,50 (s, br, 1 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,12 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 345,2 (M H)<+>.

Primer 4d

Di-terc-butil 6-{[(2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi]karbonil}-1,4-diazepan-1,4-dikarboksilate

[0219]

[0220] 1,76 g (5,11 mmol, 1 ekvivalent) 1,4-Bis(terc-butoksikarbonil)-1,4-diazepan-6-karboksilne kiseline (primer 4c) i 0,65 g (5,62 mmol, 1,1 ekvivalent) 1-hidroksipirolidin-2,5-diona je rastvoreno u 50 mL THF. Rastvor 1,16 g (5,62 mmol, 1,1 ekvivalent) N,N'-dicikloheksilkarbodiimida u 30 mL THF je dodat i rezultujuća reakciona smeša je refluksovana tokom 5 sati. Suspenzija je ohlađena do 0°C i taložena urea je filtrirana.

Konačni rastvor aktiviranog estra je direktno korišćen u sledećem hemijskom koraku.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,24 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 442,3 (M H)<+>.

Primer 4e

Tetra-terc-butil 6,6'-[iminobis(etan-2,1-diilkarbamoil)]bis(1,4-diazepan-1,4-dikarboksilat)

[0221]

[0222] Rastvoru aktiviranog estra (5,11 mmol, 2,2 ekvivalent) di-terc-butil 6-{[(2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi]karbonil}-1,4-diazepan-1,4-dikarboksilata iz Primera 4d je dodato 517 mg (5,11 mmol, 2,2 ekvivalent) trietilamina i 240 mg (2,32 mmol, 1 ekvivalent) N-(2-aminoetil)etan-1,2-diamina. Rezultujuća reakciona smeša je mešana tokom 20 sati na sobnoj temperaturi i je rastvorena sa dihlorometanom. Rastvor je opran sa vodenim natrijum hidroksidom (0,1 M), sa vodom i osušen je preko natrijum sulfata. Sirov proizvod je izolovan isparavanjem i pročišćen je slika gel hromatografijom dajući kao prinos 1,20 g (1,59 mmol, 68%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,37 (s, 36 H), 2,51 - 2,70 (m, 7 H), 2,85 - 3,28 (m, 12 H), 3,45 - 4,10 (m, 8 H), 7,69 - 8,27 (m, 2 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,20 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 756,7 (M H)<+>.

Primer 4f

N,N'-(Iminodietan-2,1-diil)bis(1,4-diazepan-6-karboksamid) pentahidrohlorid

[0223]

[0224] 385 mg (0,51 mmol) Tetra-terc-butil 6,6'-[iminobis(etan-2,1-diilkarbamoil)]bis(1,4-di-azepan-1,4-dikarboksilata) (primer 4e) je rastvoreno u 5,7 mL metanola i 1,7 mL vodene hlorovodonične kiseline (37%). Reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem tokom 2 sata na 50°C. Za izolaciju suspenzija je isparena do suvoće dajući kao prinos 277 mg (0,51 mmol, 100%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 3,18 (t, 4 H), 3,32 - 3,40 (m, 2 H), 3,51 (t, 4 H), 3,57 - 3,69 (m, 16 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,24 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 356,3 (M H)<+>, slobodna baza.

Primer 4

[0225] 150 mg (279 µmol, 1 ekvivalent) N,N'-(Iminodietan-2,1-diil)bis(1,4-diazepan-6-karboksamid) pentahidrohlorida (primer 4f) je rastvoreno u 60 mL DMSO. Nakon dodavanja 451 mg (3,49 mmol, 12,5 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamina i 3,67 g (4,88 mmol, 17,5 ekvivalent) gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata (pogledati WO 2001051095 A2), rezultujuća reakciona smeša je mešana i zagrejana tokom 8 sati na 50°C. Ohlađeni rastvor je koncentrisan pod redukovanim pritiskom do konačne zapremine od 15 - 20 mL. Koncentrat je sipan pod mešanjem u 400 mL etil acetata, formirani talog je filtriran i osušen je u vakuumu. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan. Sirov proizvod pročišćen je RP-hromatografijom dajući kao prinos 672 mg (197 µmol, 70%) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,43 minuta.

MS (ES-): m/z (z = 2) = 1706,3 (M - 2H)<2->m; (ES<+>): m/z (z = 4) = 854,5 (M 4H)<4+>.

Primer 5

Heksagadolinijum 2,2',2",2'",2"",2""',2""",2"""',2"""",2""""',2""""",2"""""',2"""""", 2""""""',2""""""",2"""""""',2"""""""",2""""""""'-{etan-1,2-diilkarbamoil-1,4-diazepan-6,1,4-triiltris[(2-oksoetan-2,1-diil)imino(1-oksopropan-1,2-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]}oktadekaacetat

[0226]

Primer 5a

heksa-terc-butil 6,6',6"-(etan-1,2-diilkarbamoil)tris(1,4-diazepan-1,4-dikarboksilat)

[0227]

[0228] 1,20 g (3,48 mmol, 3 ekvivalent) 1,4-Bis(terc-butoksikarbonil)-1,4-diazepan-6-karboksilne kiseline (primer 4c), 540 mg (4,18 mmol, 3,6 ekvivalent) diizopropiletilamin i 1,59 g (4,18 mmol, 3,6 ekvivalent) HATU su rastvoreni u 30 mL DMF i mešani tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon dodavanja kapanjem rastvora 120 mg (1,16 mmol, 1 ekvivalent) N-(2-aminoetil)etan-1,2-diamina i 540 mg (4,18 mmol, 3,6 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamina u 8 mL DMF, rezultujuća reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem tokom 3 sata na 70°C. Nakon hlađenja i rastvaranja sa dihlorometanom, rastvor je opran sa vodenim natrijum hidroksidom (0,1 M), sa vodenom limunskom kiselinom (1%), sa vodom i osušen je preko natrijum sulfata. Sirov proizvod je izolovan isparavanjem pod redukovanim pritiskom i pročišćen je slika gel hromatografijom dajući kao prinos 660 mg (0,61 mmol, 52%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1,38 (s, 54 H), 2,55 - 4,06 (m, 35 H), 7,90 - 8,52 (m, 2 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,64 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 1082,7 (M H)<+>.

Primer 5b

N,N-Bis{2-[(1,4-diazepan-6-ilkarbonil)amino]etil}-1,4-diazepan-6-karboksamid heksahidrohlorid

[0229]

[0230] 654 mg (0,60 mmol) heksa-terc-butil 6,6',6"-(etan-1,2-diilkarbamoil)tris(1,4-diazepan-1,4-dikarboksilata) (primer 5a) je rastvoreno u 6,8 mL metanola i 3 mL vodene hlorovodonične kiseline (37%). Reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem tokom 2,5 sati na 50°C. Za izolaciju suspenzija je isparena do suvoće dajući kao prinos 441 mg (0,63 mmol, 105%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 3,20 - 3,71 (m, 35 H), 8,50 - 8,80 ppm (m, 2 H), 9,76 (s, br, 12 H).

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,19 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 482,3 (M H)<+>, slobodna baza.

Primer 5

heksagadolinijum

2,2',2",2"',2"",2""',2""",2"""',2"""",2""""',2""""",2"""""',2"""""", 2""""""',2""""""",2"""""""',2"""""""",2""""""""'-{etan-1,2-diilkarbamoil-1,4-diazepan-6,1,4-triiltris[(2-oksoetan-2,1-diil)imino(1-oksopropan-1,2-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]}oktadekaacetat

[0231] 150 mg (214 µmol, 1 ekvivalent) N,N-Bis{2-[(1,4-diazepan-6-ilkarbonil)amino]etil}-1,4-diazepan-6-karboksamid heksahidrohlorida (primer 5b) je rastvoreno u 60 mL DMSO. Nakon dodavanja 0,42 g (3,21 mmol, 15 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamina i 3,38 g (4,50 mmol, 21 ekvivalent) gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata (pogledati WO 2001051095 A2), rezultujuća reakciona smeša je mešana i zagrejana tokom 8 sati na 50°C. Ohlađeni rastvor je koncentrisan pod redukovanim pritiskom do konačne zapremine od 15 -20 mL. Koncentrat je sipan pod mešanjem u 400 mL etil acetata, formirani talog je filtriran i osušen je u vakuumu. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan. Sirov proizvod pročišćen je RP-hromatografijom dajući kao prinos 595 mg (143 µmol, 67%) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,41 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 3) = 1384,6 (M H)<3+>, m/z (z = 4) = 1039,5 (M H)<4+>, m/z (z = 5) = 831,6 (M H)<5+>.

Primer 6

Heksagadolinijum 2,2',2",2'",2"",2""',2""",2"""',2"""",2""""',2""""",2"""""',2"""""", 2""""""',2""""""",2"""""""',2"""""""",2""""""""'-(1,4,7-triazonan-1,4,7-triiltris{karbonil-1,4-diazepan-6,1,4-triilbis[(2-oksoetan-2,1-diil)imino(1-oksopropan-1,2-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]})oktadekaacetat

[0232]

Primer 6a

heksa-terc-butil 6,6',6"-(1,4,7-triazonan-1,4,7-triiltrikarbonil)tris(1,4-diazepan-1,4-dikarboksilat)

[0233]

[0234] 800 mg (2,32 mmol, 3 ekvivalent) 1,4-Bis(terc-butoksikarbonil)-1,4-diazepan-6-karboksilne kiseline (primer 4c), 360 mg (2,79 mmol, 3,6 ekvivalent) diizopropiletilamina i 1,06 g (2,79 mmol, 3,6 ekvivalent) HATU je rastvoreno u 20 mL DMF i mešano tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon dodavanja kapanjem rastvora 100 mg (774 µmol, 1 ekvivalent) 1,4,7-triazonan trihidrohlorida i 360 mg (2,79 mmol, 3,6 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamina u 5 mL DMF, rezultujuća reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem tokom 3 sata na 70°C. Nakon hlađenja i rastvaranja sa dihlorometanom, rastvor je opran sa vodenim natrijum hidroksidom (0,1 M), sa vodenom limunskom kiselinom (1%), sa vodom i osušen je preko natrijum sulfata. Sirov proizvod je izolovan isparavanjem pod redukovanim pritiskom i pročišćen je slika gel hromatografijom dajući kao prinos 545 mg (492 µmol, 63%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 1,47 (s, 54 H), 2,85 - 4,45 (m, 39 H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,73 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 1108,8 (M H)<+>.

Primer 6b

1,4,7-Triazonan-1,4,7-triiltris(1,4-diazepan-6-ilmetanon) heksahidrohlorid

[0235]

[0236] 380 mg (343 µmol) heksa-terc-butil 6,6',6"-(1,4,7-triazonan-1,4,7-triiltrikarbonil)tris(1,4-diazepan-1,4-dikarboksilata) (primer 6a) je rastvoreno u 3,90 mL metanola i 1,72 mL vodene hlorovodonične kiseline (37%). Reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem tokom 2,5 sati na 50°C. Za izolaciju suspenzija je isparena do suvoće dajući kao prinos 257 mg (354 µmol, 103%) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,19 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 508,4 (M H)<+>, slobodna baza.

Primer 6

[0237] 175 mg (241 µmol, 1 ekvivalent) 1,4,7-Triazonan-1,4,7-triiltris(1,4-diazepan-6-ilmetanon) heksahidrohlorida (primer 6b) je rastvoreno u 60 mL DMSO. Nakon dodavanja 467 mg (3,61 mmol, 15 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamina i 3,80 g (5,06 mmol, 21 ekvivalent) gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata (pogledati WO 2001051095 A2), rezultujuća reakciona smeša je mešana i zagrejana tokom 8 sati na 50°C. Ohlađeni rastvor je koncentrisan pod redukovanim pritiskom do konačne zapremine od 15 - 20 mL. Koncentrat je sipan pod mešanjem u 400 mL etil acetata, formirani talog je filtriran i osušen je u vakuumu. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan. Sirov proizvod pročišćen je RP-hromatografijom dajući kao prinos 590 mg (141 µmol, 58%) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,43 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 3) = 1393,1 (M 3H)<3+>, m/z (z =4) = 1045,5 (M 4H)<4+>, m/z (z = 5) = 837,0 [(M 5H)<5+>.

Primer 7

Tetragadolinijum 2,2',2",2"',2"",2""',2""",2"""',2"""",2""""',2""""",2"""""'-{1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7,10-tetrailtetrakis[(2-oksoetan-2,1-diil)imino(1-oksopropan-1,2-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]}dodekaacetat

[0238]

[0239] 35 mg (203 µmol, 1 ekvivalent) 1,4,7,10-Tetraazaciklododekan je rastvoreno u 60 mL DMSO. Nakon dodavanja 2,14 g (2,84 mmol, 14 ekvivalent) gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata (pogledati WO 2001051095 A2), rezultujuća reakciona smeša je mešana i zagrejana tokom 8 sati na 50°C. Ohlađeni rastvor je koncentrisan pod redukovanim pritiskom do konačne zapremine od 15 - 20 mL. Koncentrat je sipan pod mešanjem u 400 mL etil acetata, formirani talog je filtriran i osušen je u vakuumu. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan. Sirov proizvod pročišćen je RP-hromatografijom dajući kao prinos 28 mg (10,6 µmol, 5%) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,41 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 2) = 1311,7 (M 2H)<2+>, m/z (z = 3) = 873,1 (M 3H)<3+>.

Primer 8

Heksagadolinijum 2,2',2",2'",2"",2""',2""",2"""',2"""",2""""',2""""",2"""""',2"""""", 2""""""',2""""""",2"""""""',2"""""""",2""""""""'-{3,7,10-triazatriciklo[3,3,3,0<1,5>]un-dekan-3,7,1 0-triiltris[karbonil(3,6,11,14-tetraokso-4,7,10,13-tetraazaheksadekan-8,2,15-triil)di-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7tetrail]}oktadekaacetat

[0240]

Primer 8a

Tetrahidro-1H,4H-3a,6a-(metanoiminometano)pirolo[3,4-c]pirol

[0241]

[0242] 4,0 g (6,5 mmol) 2,5,8-Tris((4-metilfenil)sulfonil)tetrahidro-1H,4H-3a,6a-(metanoimino-metano)pirolo[3,4-c]pirol (pripremljen procedurama navedenim u J. Org. Chem. 1996, 61, 8897-8903) je refluksovan u 44 mL vodene bromovodonične kiseline (47%) i 24 mL sirćetne kiseline tokom 18 sati. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, ostatak je rastvoren u vodi i vodena faza je oprana dva puta sa dihlorometanom. Vodena faza je liofilizovana i uzeta je u maloj količini vode i provučena je kroz kolonu anjonske razmene (DOWEX 1X8) eluiranjem sa vodom. Bazni fragment je prikupljen i koncentrisan kako bi kao prinos dao 0,89 g tetrahidro-1H,4H-3a,6a-(metanoiminometano)pirolo[3,4-c]pirol kao slobodnu bazu.

<1>H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 2,74 (s, 12 H) ppm.

Primer 8b

Terc-butil-{1-[5,8-bis{2,3-bis[(terc-butoksikarbonil)amino]propanoil}dihidro-1H,4H-3a,6a-(metanoiminometano)pirolo[3,4-c]pirol-2(3H)-il]-3-[(terc-butoksikarbonil) amino]-1-oksopropan-2-il}karbamat

[0243]

[0244] Rastvor pripremljen od 431,5 mg (0,89 mmol, CAS [201472-68-6]) N-(tercbutoksikarbonil)-3-[(terc-butoksikarbonil)amino]alanin N,N-dicikloheksilamonijum soli, 0,44 mL (2,54 mmol) N,N-diizopropiletilamina i 386 mg (1,0 mmol) HATU u 4,3 mL DMF je dodat do 38,9 mg (254 µmol) tetrahidro-1H,4H-3a,6a-(metanoiminometano)pirolo[3,4-c]pirola u 2 mL DMF. Nakon mešanje kombinovane smeša tokom 20 minuta na sobnoj temperaturi rastvarač je uklonjen u vakuumu i ostatak je prečišćen hromatografijom na amino fazi silika gela (etil acetat u heksanu, 0 do 100%) praćeno preparativnom HPLC (C18-Chromatorex 10 µm, acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina, 65% do 100%) kako bi kao prinos dao 68,6 mg terc-butil-{1-[5,8-bis{2,3-bis[(tercbutoksikarbonil)amino]propanoil}dihidro-1H,4H-3a,6a-(metanoimino-metano)pirolo[3,4-c]pirol-2(3H)-il]-3-[(terc-butoksikarbonil)amino]-1-oksopropan-2-il}-karbamata.

<1>H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 1,43 s, br, 54H), 3,34 - 3,97 (m, 18H), 4,48 (s, br, 3H), 5,01-5,67(m, 6H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 1,48 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 1012,6 (M H)<+>.

Primer 8c

3,3',3"-[1H,4H-3a,6a-(metanoiminometano)pirolo[3,4-c]pirol-2,5,8(3H,6H)-triil]-tris(3-oksopropan-1,2-diaminijum) heksahlorid

[0245]

[0246] 65 mg (60 µmol) terc-butil-{1-[5,8-bis{2,3-bis[(tercbutoksikarbonil)amino]propanoil}dihidro-1H,4H-3a,6a-(metanoiminometano)pirolo[3,4-c]pirol-2(3H)-il]-3-[(terc-butoksi-karbonil)amino]-1-oksopropan-2-il}karbamata (primer 8b) je rastvoreno u 2,0 mL DMF i 0,48 mL hlorovodonične kiseline u dioksanu (4 M, 0,19 mmol) je dodato. Reakciona smeša je zagrejana pod mikrotalasnim zračenjem tokom 10 minuta na 80°C uz mešanje. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, ostatak je uzet u maloj količini vode i liofilizovan kako bi kao prinos dao 38,9 mg 3,3',3"-[1H,4H-3a,6a-(metanoiminometano)pirolo[3,4-c]pirol-2,5,8(3H,6H)-triil]tris(3-oksopropan-1,2-diaminijum) heksahlorida.

<1>H-NMR (600 MHz, D2O): δ = 3,40 - 3,50 (m, 3H), 3,52 - 3,56 (m, 3H), 3,79 - 4,19 (m, 12H), 4,51 - 4,54 (m, 3H) ppm.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,20 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 412,3([M H)<+>, slobodna baza.

Primer 8

Heksagadolinijum 2,2',2",2"',2"",2""',2""",2"""',2"""",2""""',2""""",2"""""',2"""""", 2""""""',2""""""",2"""""""',2"""""""",2""""""""'-{3,7,10-triazatriciklo[3,3,3,0<1,5>]un-dekan-3,7,10-triiltris[karbonil(3,6,11,14-tetraokso-4,7,10,13-tetraazaheksadekan-8,2,15-triil)di-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7tetrail]}oktadekaacetat

[0247] 30 mg (48 µmol) 3,3',3"-[1H,4H-3a,6a-(metanoiminometano)pirolo[3,4-c]pirol-2,5,8 (3H,6H)-triil]tris(3-oksopropan-1,2-diaminijum) heksahlorida (primer 8c) je rastvoreno u smeši 1,8 mL DMSO, 1,8 mL DMF, i 116 µL piridina. Na 60°C 281 mg (0,38 mmol, WO 2001051095 A2) gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata je dodato praćeno sa 44 µL trimetilamina i rezultujuća reakciona smeša je mešana tokom 15 sati na 60°C i na sobnoj temperaturi tokom dva dana. Druga količina gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata (56 mg, 75 µmol) i trimetilamina (5,4 µL) je dodata na 60°C i mešanje na 60°C je nastavljeno tokom 15 sati. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, ostatak je uzet u 200 mL vode i rezultujući rastvor je ultrafiltriran koristeći 1 kDa membranu. Nakon razaređivanja retentata dva puta sa dodatnih 200 mL dejonizovane vode i nastavljanja ultrafiltracije konačni retentat je liofilizovan. Ostatak je rastvoren u smeši od 1,6 mL DMSO, 1,6 mL DMF, i 105 µL piridina i dodavanje 261 mg (0,35 mmol) gadolinijum 2,2',2"-[10-(1-{[2-(4-nitrofenoksi)-2-oksoetil]amino}-1-oksopropan-2-il)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil]triacetata i 48 µL trietilamina na 60°C je ponovljeno treći put. Nakon mešanja tokom 18 sati na 60°C, procedura ultrafiltracije koristeći 1 kDa membranu je ponovljena i liofilizovan je retentat nakon tri 200 mL filtracije. Sirov proizvod pročišćen je preparativnom HPLC (XBrigde C18, 5µm, acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina, 0% do 7%) kako bi kao prinos dao 51 mg jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH dugačko trajanje): Rt. = 2,95 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z =3) = 1360,4 (M 3H)<3+>, m/z (z =4) = 1021,3 (M 4H)<4+>, m/z (z = 5) = 817,5 (M 5H)<5+>.

Primer 9

Tetragadolinijum 2,2',2",2'",2"",2'"",2""",2'""",2"""",2'"""",2""""",2'"""""-(3,7,9-triaza-biciklo[3,3,1]nonan-3,7-diilbis{karbonil-1,4-diazepan-6,1,4-triilbis[(2-oksoetan-2,1-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]})dodekaacetat

[0248]

Primer 9a

3,7,9-Triazabiciklo[3,3,1]nonan

[0249]

[0250] 220 mg (0,49 mmol) 3,9-Dibenzil-7-(fenilsulfonil)-3,7,9-triazabiciklo[3,3,1]nonana (pripremljeno procedurama navedenim u Tetrahedron Letters, 2005, 46, 5577-5580) je refluksovano u 3,4 mL vodene bromovodonične kiseline (47%) i 1,8 mL sirćetne kiseline tokom 17 sati. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, ostatak rastvoren u vodi i vodena faza je oprana dva puta sa dihlorometanom. Vodena faza je liofilizovana i uzeta je u maloj količini vode i provučena je kroz kolonu anjonske razmene (DOWEX 1X8) eluiranjem sa vodom. Bazni fragment je prikupljen i koncentrisan kako bi kao prinos dao 29,6 mg 3,7,9-triazabiciklo[3,3,1]nonana kao slobodnu bazu.

<1>H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 2,88 (t, 2H), 3,15 (d, 8H) ppm.

Primer 9b

6-(Metoksikarbonil)-1,4-diazepanediijum dihlorid

[0252] 8,3 g (24,5 mmol) metil 1,4-dibenzil-1,4-diazepan-6-karboksilata (Pripremljen analogno do US005866562A, p,9) u 42 mL metanola je dodato 8,3 mL koncentrisane hlorovodonične kiseline, 2 mL vode i 830 mg paladijuma na uglju (10%). Suspenzija je mešana pod atmosferom vodonika tokom 5 sati na 40°C i 17 sati na sobnoj temperaturi. Smeša je filtrirana kroz put od celita i filtrat je koncentrisan u vakuumu nakon čega je toluen dodat dva puta i uklonjen je u vakuumu. Ostatak je rastvoren u vodi i liofilizovan kako bi kao prinos dao 5,65 g 6-(metoksikarbonil)-1,4-diazepanediijum dihlorida.

<1>H-NMR (400 MHz, D2O): δ = 3,49 - 3,68 (m, 9H), 3,70 - 3,73 (m, 4H), 3,75 (s, 3H) ppm.

Primer 9c

Metil 1,4-bis{[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}-1,4-diazepan-6-karboksilat

[0253]

[0254] Do 200 mg (0,78 mmol) 6-(metoksikarbonil)-1,4-diazepanediijum dihlorida u 10 mL dihlorometanu je dodato 10 mL (6,2 mmol) N,N-diizopropiletilamina i smeša je mešana tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi.1,04 g (1,56 mmol) tri-terc-butil 2,2',2"-(10-{2-[(2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi]-2-oksoetil}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil)triacetata (Pripremljen analogno Cong Li i dr., J. Am.Chem.Soc. 2006, 128, p,15072-15073; S3-5 i Galibert i dr., Bioorg. Med. Chem. Letters 2010 (20), 5422-5425) je dodat i smeša je mešana tokom 18 sati na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom i ostatak pročišćen je hromatografijom na amino fazi silika gela (etil acetat u heksan, 20 do 100%, zatim etanol u etil acetatu 0 do 100%) kako bi kao prinos dao 210 mg jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,94 minuta.

MS (ES<+>): m/z = 1267,6 (M 1H)<+>

Primer 9d

Dodeka-terc-butil 2,2',2",2'",2"",2'"",2""",2'""",2"""",2'"""",2""""",2"""""'-(3,7,9-triaza-biciklo[3,3,1]nonan-3,7-diilbis{karbonil-1,4-diazepan-6,1,4-triilbis[(2-oksoetan-2,1-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]})dodekaacetat

[0255]

[0256] 305 mg (0,24 mmol) Metil 1,4-bis{[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetra azaciklododekan-1-il]acetil}-1,4-diazepan-6-karboksilata (primer 9c) je rastvoreno u 3,9 mL THF i rastvor 6,6 mg litijum hidroksida u 0,87 mL vode je dodat. Nakon mešanja tokom 15 minuta rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom i sirov litijum 1,4-bis{[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}-1,4-diazepan-6-karboksilat (300 mg) je rastvoren u 2,0 mL dihlorometana. 120 µL (0,71 mmol) N,N-Diizopropiletilamin, 112 mg (0,30 mmol) HATU i 40 mg (0,30 mmol) 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ol su dodati i nakon mešanja tokom 15 minuta rastvor 15 mg (0,12 mmol) 3,7,9-triazabiciklo[3,3,1]nonana u 1 mL dihlorometana je dodat i smeša je mešana tokom 3 dana. Dodatnim 170 mg sirovog litijum 1,4-bis{[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}-1,4-diazepan-6-karboksilata u 1 mL dihlorometana dodato je 67 mg (0,18 mmol) HATU, 24 mg (0,18 mmol) 3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-ola tokom 15 minuta i 50 µL N,N-diizopropiletilamina. Nakon mešanja tokom 15 minuta sveže pripremljen HATU rastvor je dodat reakcionoj smeši. Nakon jednog dana rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom nakon čega je toluen dodat šest puta i uklonjen je u vakuumu. Ostatak je pročišćen hromatografijom na amino fazi silika gela (etil acetat u heksanu, 0 do 100%, zatim etanol u etil acetatu 0 do 40%) kako bi kao prinos dao 181 mg jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,78-0,84 minuta.

MS (ES-): m/z (z = 2) = 1298,7 (M - 2H)<2->

Primer 9

[0257] 390 mg (mmol) Dodeka-terc-butil 2,2',2",2"',2"",2""',2""",2"""',2"""",2""""',2""""",2"""""'-(3,7,9-triazabiciklo [3,3,1]nonan-3,7-diilbis{karbonil-1,4-diazepan-6,1,4-triilbis[(2-oksoetan-2,1-diil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-10,1,4,7-tetrail]})dodekaacetat (primer 9d) je rastvoreno u 10,8 mL vode i rastvor je prilagođen do pH 2,5 dodavanjem vodene hlorovodonične kiseline (2M). 440 mg (1,25 mmol) gadolinijum(III)oksida je dodato i smeša je mešana na 80°C tokom 17 sati, dok je pH suspenzije promenjen do pH 5. Smeša je rastvorena sa vodom, sonifikovana i filtrirana. Filtrat je ultrafiltriran koristeći 1 kDa membranu. Nakon razaređivanja retentata dva puta sa dodatnih 100 mL dejonizovane vode i nastavljanja ultrafiltracija konačni retentat je liofilizovan. Sirov proizvod pročišćen je preparativnom HPLC (C18 YMC-ODS AQ, 10 µm, acetonitril u vodi 0,1% mravlja kiselina, 1% do 10%) kako bi kao prinos dao 14,5 mg jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,34 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 2) = 1272,9 (M 2H)<2+>

Primer 10

Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(karboksilato-metil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)metil]propil}-amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat

[0258]

Primer 10a

Terc-butil {4,10-bis(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(2-tercbutoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)metil]-propil}amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat

[0259]

[0260] 6,6 mg (49,8 µmol, 1 ekvivalent) 2,2-Bis(aminometil)propan-1,3-diamina (pogledati W. Hayes i dr., Tetrahedron 59 (2003), 7983 - 7996) je rastvoreno u 7 mL DMSO. Nakon dodavanja 77 mg (0,6 mmol, 12 ekvivalent) N,N-diizopropiletilamina i 400 mg (0,6 mmol, 12 ekvivalent) tri-terc-butil 2,2',2"-(10-{2-[(2,5-dioksopirolidin-1-il)oksi]-2-oksoetil}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1,4,7-triil)triacetata (pogledati M. Galibert i dr., Bioorg. Med. Chem. Letters 2010 (20), 5422-5425 i J. Am.Chem.Soc. 2006, 128, p,15072-15073; S3-5) rezultujuća reakciona smeša je mešana i zagrejana preko noći na 50°C. Ohlađeni rastvor je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Sirov proizvod je korišćen bez dalje karakterizacije u sledećem hemijskom koraku.

Primer 10b

{4,10-bis(karboksimetil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)metil]propil}amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetna kiselina

[0261]

[0262] Sirov terc-butil {4,10-bis(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)metil]propil}-amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat iz Primera 10a je rastvoren u 40 mL TFA. Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi i koncentrisan je pod redukovanim pritiskom. Sirov proizvod je korišćen bez dalje karakterizacije u sledećem hemijskom koraku.

Primer 10

[0263] Sirova {4,10-bis(karboksimetil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetra-azaciklododekan-1-il]acetil}amino)metil]propil}amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklodo-dekan-1-il}sirćetna kiselina iz Primera 10b je rastvorena u 10 mL vode. Nakon dodavanja 326 mg tris(acetato-kappaO)gadolinijum tetrahidrata pH vrednost rezultujućeg rastvora je prilagođena do 3,5 - 4,5 dodavanjem vodenog rastvora natrijum hidroksida. Reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem preko noći na 70°C. Rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan.

Sirov proizvod pročišćen je RP-hromatografijom dajući kao prinos 65 mg (28 µmol, 46%) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,40 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 2) = 1149,7 (M 2H)<2+>, m/z (z =3) = 766,0 (M 3H)<3+>.

Primer 11

Tetragadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}-metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat

[0264]

Primer 11a

Terc-butil [4,10-bis(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}-metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat

[0266] 2,99 g (4,75 mmol, 12 ekvivalent) N-{[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklo-dodekan-1-il]acetil}glicina (pogledati M. Suchy i dr., Org. Biomol. Chem. 2010, 8, 2560 - 2566) i 732 mg (5,70 mmol, 14,4 ekvivalent) etildiizopropilamina su rastvoreni u 40 mL N,N-dimetilformamida. Nakon dodavanja 2,17 g 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfata (HATU; 5,70 mmol, 14,4 ekvivalent) reakciona smeša je mešana tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi. 100,1 mg (396 µmol, 1 ekvivalent) 2,2-bis(ammoniometil)propan-1,3-diaminijum tetrahlorid (pogledati W. Hayes i dr., Tetrahedron 59 (2003), 7983 - 7996) i 982,7 mg (7,60 mmol, 19,2 ekvivalent) etildiizopropilamin su dodati i rezultujuća reakciona smeša je mešana preko noći na 50°C. Ohlađeni rastvor je koncentrisan pod redukovanim pritiskom. Sirov proizvod je korišćen bez dalje karakterizacije u sledećem hemijskom koraku.

Primer 11b

[4,10-bis(karboksimetil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetna kiselina

[0267]

[0268] Sirov terc-butil [4,10-bis(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris(2-terc-butoksi-2-oksoetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}-metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat iz Primera 11a je rastvoren u 125 mL TFA. Rezultujući rastvor je mešan tokom 2 sata na 70°C, preko noći na sobnoj temperaturi i koncentrisan je pod redukovanim pritiskom. Uljasti proizvod je rastvoren u 200 mL vode, izolovan je liofilizacijom i korišćen je bez dalje karakterizacije u narednom hemijskom koraku.

Primer 11

Tetragadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat

[0269] Sirova [4,10-bis(karboksimetil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetna kiselina iz Primera 11b je rastvorena u 100 mL vode. Nakon dodavanja 2,89 g tris(acetato-kappaO)gadolinijum tetrahidrat pH vrednost rezultujućeg rastvora je prilagođena do 3,0 - 3,5 dodavanjem vodenog rastvora natrijum hidroksida. Reakciona smeša je zagrejana pod mešanjem tokom 24 sati na 70°C. Rezultujući rastvor je ultrafiltriran sa vodom koristeći 1 kDa membranu i konačni retentat je liofilizovan. Sirov proizvod pročišćen je RP-hromatografijom dajući kao prinos 296 mg (120 µmol, 30%) jedinjenja iz naslova.

UPLC (ACN-HCOOH): Rt. = 0,41 minuta.

MS (ES<+>): m/z (z = 2) = 1262,8 (M 2H)<2+>, m/z (z =3) = 841,5 (M 3H)<3+>.

Referentno jedinjenje 1

[0270] Gadovist® (gadobutrol, Bayer AG, Leverkusen, Germany)

Referentno jedinjenje 2

[0271] Magnevist® (gadopentetat dimeglumin, Bayer AG, Leverkusen, Germany)

Referentno jedinjenje 3

[0272] Primovist® (gadoksetat dinatrijum, Bayer AG, Leverkusen, Germany)

Referentno jedinjenje 4

[0273] Gadomer-17 je sintetisan kako je opisano u EP0836485B1, Primer 1k.

In vitro i in vivo karakterizacija Primernih jedinjenja

[0274] Primeri su testirani u odabranim testovima jedan ili više puta. Kada se testira više od jednom, podaci se prijavljuju ili kao prosečne vrednosti ili kao srednje vrednosti, gde

• prosečna vrednost, koja se takođe naziva srednja aritmetička vrednost, predstavlja zbir dobijenih vrednosti deljenih sa brojem testiranja, i

• srednja vrednost predstavlja srednji broj grupe vrednosti kada se rangiraju uzlaznim ili silaznim redosledom. Ako je broj vrednosti u skupu podataka neparan, srednja je srednja vrednost. Ako je broj vrednosti u skupu podataka paran, srednja je aritmetička sredina dve srednje vrednosti.

[0275] Primeri su sintetisani jedan ili više puta. Kada su sintetisani više od jednom, podaci iz ispitivanja predstavljaju prosečne vrednosti ili srednje vrednosti izračunate korišćenjem skupova podataka dobijenih testiranjem jedne ili više serija sinteze.

Primer A

Merenja relaksivnosti pri 1,4 T

[0276] Merenja relaksivnosti pri 1,41 T izvedena su korišćenjem MiniSpec mq60 spektrometra (Bruker Analytik, Karlsruhe, Germany) koji radi na rezonantnoj frekvenciji od 60 MHz i temperaturi od 37°C. T1vremena relaksacije su određena korišćenjem postupka standardnog inverzionog oporavka (IR) sa fiksnim kašnjenjem relaksacije od najmanje 5 x T1. Promenljivo vreme inverzije (TI) je automatski izračunato standardnim softverom MiniSpec mq60 (8 koraka). T2merenja su izvršena korišćenjem Carr-Purcell-Meiboom-Gill (CPMG) impulsne sekvence, primenjujući odlaganje relaksacije od najmanje 5 x T1.

[0277] Svako merenje relaksivnosti izvršeno je korišćenjem tri različite koncentracije Gd (3 koncentracije između 0,05 i 2 mM). The T1i T2vremena relaksacije primernih jedinjenja 1-10 merena su u različitim medijumima, na primer u vodi, fetalnom goveđem serumu (FBS, Sigma, F7524) i ljudskoj plazmi.

[0278] Priprema ljudske plazme: Za svaki eksperiment uzeta je sveža krv od dobrovoljaca pomoću 10 ml citratnih epruveta (Sarstedt S-Monovette 02.1067.001, 10 mL, citrat).10 ml citratnih epruveta pažljivo se invertuje 10 puta kako bi se pomešali krv i antikoagulans i centrifugirano je 15 minuta pri 1811 g na sobnoj temperaturi (Eppendorf, Centrifuga 5810R).

[0279] Relaksiviteti ri(gde je i=1,2) izračunati su na osnovu izmerenih stopa relaksacije Riu vodi i plazmi:

gde Ri(0)predstavljaju stopu relaksacije odgovarajućeg rastvarača i CGdkoncentraciju jedinjenja se normalizovana za Gadolinijum. Koncentracije gadolinijuma u ispitivanim rastvorima su verifikovane pomoću induktivno spojene masene spektroskopije plazme (Inductively Coupled Plasma Mass Spectroscopy) (ICP-MS Agilent 7500a, Walbronn, Germany).

[0280] Utvrđene vrednosti relaksivnosti predstavljene su u Tabeli 1.

Tabela 1: Relaksivnost ispitivanih jedinjenja u vodi, fetalnom goveđem serumu (FBS) i ljudskoj plazmi pri 1,41 T i relaksivnosti Referentnih jedinjenja 1-4 (RC1-RC4) pri 1,5 T u vodi i goveđoj plazmi. Sve vrednosti su merene na 37°C, normalizovane su na Gd i date u L mmol<-1>s<-1>.

Merenja relaksivnosti pri 3,0 T

[0281] Merenja relaksivnosti na 3.0 T izvedena su sa MR skenerom čitavog tela 3.0 T (Philips Intera, Philips Healthcare, Hamburg, Deutschland) korišćenjem kolenastog kalema (SENSE-Knee-8, Philips Healthcare, Hamburg, Deutschland). Epruvete za uzorke

( CryoTubetm Vials, Thermo Scientific 1,8 ml, Roskilde, Denmark) su smeštene u 3 reda od 4 i 5 epruveta u plastičnom držaču u kutiji napunjenoj vodom. Temperatura je podešena na 37°C. Za MRI sekvencu korišćeno je najkraće moguće eho-vreme (TE) od 7,46 milisekundi. Vremena inverzije su izabrana kako bi se optimizova redosled merenja T1vrednosti koje odgovaraju procenjenom T1rasponu svih vremena relaksacije kontrastnih medijuma koji sadrže rastvor. Primenjena su sledeća vremena inverzije (TI): 50, 100, 150, 200, 300, 500, 700, 1000, 1400, 2100, 3200 i 4500 milisekundi. Sekvenca je vođena sa konstantnim kašnjenjem relaksacije od 3,4 sekunde nakon registracije poslednjeg eha (promenljiva TR u rasponu od 3450 do 7900 milisekundi). Za detalje o postupku, pogledati Rohrer i dr. (Invest. Radiol. 2005; 40, 11: 715-724). Eksperimentalna matrica fantomskog merenja je bila 320 x 320. Relaksivnosti su procenjene korišćenjem tri različite koncentracije svakog jedinjenja (3 koncentracije između 0,05 i 2 mM).

[0282] T1vremena relaksacije Primernih jedinjenja 1-6 su merena u vodi i ljudskoj plazmi. Priprema ljudske plazme: Za svaki eksperiment uzeta je sveža krv od dobrovoljaca pomoću 10 ml mL epruveta (Sarstedt S-Monovette 02.1067.001, 10 mL, citrat).10 mL citratnih epruveta pažljivo se invertuje 10 puta kako bi se pomešali krv i antikoagulans i centrifugira se 15 minuta pri 1811 g na sobnoj temperaturi (Eppendorf, Centrifuga 5810R).

[0283] Relaksiviteti ri(gde je i=1,2) izračunati su na osnovu izmerenih stopa relaksacije Riu vodi i plazmi:

gde Ri(0)predstavljaju stopu relaksacije odgovarajućeg rastvarača i CGdkoncentracija jedinjenja se normalizovana za Gadolijuma (Tabela 2).

Tabela 2: Relaksivnosti (normalizovane za Gd) u vodi i ljudskoj plazmi pri 3,0 T i 37°C [L mmol<-1>s<-1>]

Primer B

Farmakokinetički parametri

[0284] Farmakokinetički parametri jedinjenja iz Primera 3 su određeni kod muških pacova (Han-Wistar, 220-230 g, n=3). Jedinjenje je primenjeno kao sterilni vodeni rastvor (52,5 mmol Gd/L) kao bolus u repnoj veni životinja. Doza je bila 0,1 mmol Gd/kg. Uzet je uzorak krvi 1, 3, 5, 10, 15, 30, 60, 90, 120, 240, 360, 480 i 1440 minuta nakon injekcije, i koncentracija Gd je određena induktivno spojena masenom spektroskopijom plazme (ICP-MS Agilent 7500a, Walbronn, Germany). Nivo u krvi je pretvoren u koncentraciju u plazmi deljenjem sa 0,625 (udeo plazme u krvi pacova, pretpostavljajući striktno vanćelijsku distribuciju). Kao kontrola, 3 životinje su tretirane na isti način sa Gadovist®, kontrastnim agensom niske molekulske težine. Vremenski tokovi nivoa plazme u krvi prikazani su na sSici 1.

[0285] Prilagođavanje dobijenih podataka modelu tri komore (Phoenix - WinNonlin) dalo je farmakokinetičke parametre koji su prikazani u Tabeli 3.

Tabela 3: Vremenski tokovi nivoa plazme u krvi

Primer C

Izlučivanje i koncentracija rezidualnog gadolinijuma u organima nakon 5 dana [0286] Izlučivanje i distribucija u organima Primera 3 su određeni kod muških pacova (Han-Wistar, 100-110 g, n=3). Jedinjenje je primenjeno kao sterilni vodeni rastvor (54 mmol Gd/L) kao bolus u repnoj veni životinja. Doza je bila 0,1 mmol Gd/kg. Urin je skupljen u narednim vremenskim periodima 0-1 sata, 1-3 sata, 3-6 sata, 6-24 sata, 1-2 dana i 2-5 dana posle injekcije, i izmet je sakupljen 0-1 dana, 1-2 dana i 2-5 dana posle injekcije. Kao kontrola, 3 životinje su tretirane na isti način sa Gadovist®, kontrastnim agensom niske molekulske težine. Sedmog dana životinje su žrtvovane i secirani su sledeći organi: krv, jetra, bubreg, slezina, srce, pluća, mozak, mezenterični limfni čvorovi, mišići, koža, želudac, creva, kosti i koštana srž. Ostaci leševa su osušeni smrzavanjem i mleveni u fini prah. Koncentracija Gd u organima i trupu određena je pomoću ICP-MS (ICP-MS Agilent 7500a, Walbronn, Germany). Rezultati distribucije u organima Primera 3 i Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®) sumirani su u Tabeli 4. Primer 3 se brzo izlučuje putem bubrega. Nakon 3 sata pronađeno je 95,8% ± 3,4% injektirane doze u urinu i 96,9% ± 3,7% nakon 5 dana. Oko 1,4% ± 0,6% se izlučuje putem izmeta. Manje od 0,5% primenjene doze bilo je prisutno u organizmu 7 dana nakon injekcije. Pojedinačni organi su sadržali manje od 0,03% ubrizgane doze, osim bubrega koji je organ za izlučivanje.

Tabela 4: Izlučivanje i distribucija u organima Primera 3 i Gadovist® kod pacova

Primer D

Hemijska stabilnost

[0287] Primeri 1, 2, 3 i 6 su odvojeno rastvoreni u 10 mM Tris-HCI puferu, pH 7,4, u krajnjoj koncentraciji od 5 mmol Gd/L. Alikvot je uklonjen, i ostatak bistrog i bezbojnog rastvora je tretiran autoklavom na 121°C tokom 20 minuta. Posle autoklava, rastvor je i dalje bio bistar i bezbojan. Alikvot uklonjen pre i posle autoklava analiziran je sa HPLC-ICP-MS kako bi se utvrdio integritet jedinjenja.

[0288] HPLC: Kolona: Hypercarb 2,5 mm x 15 cm. Rastvarač A: 0,1% mravlje kiseline u vodi. Rastvarač B: acetonitril. Gradijent od 100% A do 5% A 95% B za 10 minuta. Protok 1 ml/minut. Detektovanje od strane ICP-MS, podešeno na<158>Gd. Hromatogrami, koji pokazuju intenzitet detektovanog Gd, vizuelno su upoređeni. Nisu otkrivene promene u hromatogramima pre i posle autoklava. Jedinjenja su bila stabilna tokom postupka autoklava.

Primer E

Oslobađanje gadolinijuma nakon dodavanja cinka i fosfata

[0289] Opisan je protonski relaksometrijski protokol za procenu transmetalacije za određivanje stabilnosti MRI kontrastnog medijuma Laurent S. i dr. (Invest. Radiol. 2001; 36, 2: 115-122). Tehnika je zasnovana na merenju evolucije paramagnetne stope uzdužne relaksacije u fosfatnom puferu (pH 7,00, 26 mmol/L, KH2PO4Merck, Hessen, Germany) koji sadrži 2,5 mmol/L gadolinijum kompleksa i 2,5 mmol/L ZnCl2Sigma-Aldrich, Munich, Germany). Sto mikrolitara 250 mmol/L rastvora ZnCl2dodato je u 10 ml puferisanog rastvora paramagnetnog kompleksa (Referentna jedinjenja 1-4 i Primer 3). Smeša je snažno mešana i 300 µL je izvučeno za relaksometrijsko ispitivanje za 0 minuta, 60 minuta, 120 minuta, 3 sata, 4 sata, 5 sati, 24 sata, 48 sati i 72 sata. Merenja su izvršena na MiniSpec mq60 spektrometru (Bruker Analytik, Karlsruhe, Germany) na 60 MHz i 37°C. Rezultati Primera 3 u poređenju sa Referentnim jedinjenjem 1 (Gadovist®), Referentnim jedinjenjem 2 (Magnevist®) i Referentnim jedinjenjem 3 (Primovist®) prikazani su na Slici 2. Ako je transmetalacija gadolinijuma aktivirana Zn<2+>jonima u fosfatno puferisanom rastvoru, tada oslobođeni Gd3+ reaguje bi sa slobodnim PO4<3->jonima koji stvaraju GdPO4. Zbog male rastvorljivosti GdPO4, deo gadolinijuma se taloži kao čvrsta supstanca i nema dalji uticaj na stopu uzdužne relaksacije vode. Smanjivanje stope protonske relaksacije primećeno je kod gadolinijum helata sa niskom stabilnošću [pogledati linearni kontrastni agens na Slici 2: Referentna jedinjenja 2 (Magnevist®) i 3 (Primovist®)]. Stabilnost Primera 3 je uporediva sa visokom stabilnošću Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®).

Primer F

Stabilnost Gd-kompleksa u ljudskoj plazmi pri 37°C, 15 dana

[0290] Primeri 3 i 10 su odvojeno rastvoreni u ljudskoj plazmi pri 1 mmol Gd/L. Kao referenca za oslobođeni Gd<3+>0,1 mmol/L, gadolinijum hlorid (GdCl3) je rastvoren u ljudskoj plazmi. Uzorci plazme su inkubirani 15 dana na 37°C, pod 5% CO2atmosferom za održavanje pH na 7,4. Alikvoti su uzeti na početku i na kraju inkubacije. Količina Gd<3+>oslobođena iz kompleksa je određena pomoću HPLC-ICP-MS. Kolona: helirajuća sefaroza (HiTrap, 1mL). Rastvarač A: 10 mM BisTris-HCI pH 6,0. Rastvarač B: 15 mM HNO3.

Gradijent: 3 minuta pri 100% A, od 3 do 10 minuta pri 100% B. Protok 1 mL/minuta.

Detektovanje od strane ICP-MS, podešeno do<158>Gd. Hromatogrami, koji pokazuju intenzitet detektovanog Gd, procenjeni su analizom vršne površine. Zabeležena je veličina vrha Gd<3+>, eluirajući posle promene sa rastvarača od A u B. Za oba jedinjenja povećanje ovog vrha i samim tim oslobađanje Gd<3+>bilo je ispod granice kvantifikacije (<0,1% injektirane ukupne količine gadolinijuma). Oba Gd-kompleksa su stabilna u fiziološkim uslovima.

Primer G

Rastvorljivost u vodi

[0291] Rastvorljivost jedinjenja u vodi je određena na sobnoj temperaturi (20°C) u 0,5 ml puferskog rastvora (10 mM Tris-HCl) u epruvetama za mikrocentrifugu (Eppendorf, 2,0 mL sigurnosne kapice). Čvrsto jedinjenje je dodavano postupno u puferski rastvor. Suspenzija je mešana korišćenjem šejkera (Heidolph Reax 2000) i tretirana 5 minuta u ultrazvučnoj kadi (Bandelin, Sonorex Super RK255H). Suspenzija je smeštena na sobnoj temperaturi (20°C) tokom noći, i konačna koncentracija gadolinijuma je određena induktivno spojene masene spektrometrije plazme (ICP-MS). Rezultati su sumirani u Tabeli 5.

Tabela 5: Rastvorljivost jedinjenja u vodi na 20°C.

Primer H

Angiografija magnetne rezonance pojačana kontrastom (CE-MRA)

[0292] Potencijal značajnog smanjenja doze pokazao se intraindividualnom poređenjem 100 µmol gadolinijuma po kilogramu telesne težine [100 µmol Gd/kg telesne težine], što je uporedivo sa ljudskom standardnom dozom, i protokolom male doze koristeći 30 µmol gadolinijuma po kilogramu telesne težine. Referentno jedinjenje 1 (Gadovist®), kao odobreni predstavnik kontrastnih agenasa na bazi Gadolinijuma, korišćeno je u oba protokola doze (100 µmol Gd/kg telesne težine i 30 µmol Gd/kg telesne težine) i u poređenju sa primerom 3 (30 µmol Gd/kg telesne težine).

[0293] Studija angiografije magnetne rezonance pojačana kontrastom izvedena je na kliničkom 1,5 T Scanner (Magnetom Avanto, Siemens Healthcare, Erlangen, Germany). Za optimalnu eksploataciju signala za prikupljanje podataka korišćen je standardni kalem.

Ispitivanje je urađeno pomoću mužjaka novozelandskih belih zečeva (težina 2,5-2,9 kg, n=6, Charles River Kisslegg). Sve životinje su u početku anestezirane korišćenjem intramuskularne injekcije, prilagođene telesnoj težini, smeše (1+2) ksilazin hidrohlorida (20 mg/mL, Rompun 2%, Bayer Vital GmbH, Leverkusen) i ketamin hidrohlorida (100 mg/mL, Ketavet, Pfizer, Pharmacia GmbH, Berlin) koristeći 1 mL/kg telesne težine. Kontinuirana anestezija intubiranih životinja (endotrahealna cev, Rueschelit Super Safe Clear, manžetna 3,0 mm, Willy Ruesch AG, Kernen, Germany) postignuta je intravenskom injekcijom 0,9 mg propofola po kilogramu na sat (10 mg/mL, Propofol-Lipuro 1%, B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany). Kontinuirana intravenska injekcija izvedena je korišćenjem MR infuzionog sistema (Kontinualni MR infuzioni sistem, Medrad Europe B. V., AE Beek, Deutschland). Trahealno disanje (SV 900C, Maquet, Rastatt, Germany) izvedeno je sa 55% kiseonika, četrdeset udisaja u minuti i zapreminom disanja od 7 ml po kilogramu telesne težine u minuti.

[0294] Na osnovu sekvence lokalizatora orijentisane u koronalnom, aksijalnom i sagitalnom pravcu dobijen je anatomski tok aorte. Vreme do vrhunca određeno je korišćenjem malog intravenskog test bolusa (0,25 mL/2,5-2,7 kg ili 0,3 mL/2,8-2,9 kg telesne težine, Referentno jedinjenje 1) i 3D FLASH sekvence (test bolus sekvenca: vreme ponavljanja: 36,4 milisekunde, vreme eha 1,45 milisekunde, ugao okretanja: 30 stepeni, prostorna rezolucija: 1,0x0,8x17 mm). 3D FLASH sekvenca angiografije određena je vremenom ponavljanja od 3,24 milisekunde, vremenom eha 1,17 milisekundi, uglom okretanja od 25 stepeni i debljinom isečka 0,94 mm. Vidno polje 141x300 mm kombinovano je sa matricom 150x320 što rezultuje prostornom rezolucijom od 0,9x0,9x0,9 mm i čitavim vremenom snimanja od 13 sekundi po 3D bloku.3D FLASH sekvenca izvedena je jednom pre i neposredno nakon ubrizgavanja kontrastnog agensa. Vremenski interval za intra-individualno poređenje između različitih primena kontrastnih agenasa bio je dvadeset do trideset minuta (n = 3 životinje).

[0295] Rezultujući angiografi magnetne rezonance intraindividualnog poređenja kod zečeva su prikazani na Slici 3: (A) 30 µmol Gd/kg telesne težine Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®); (B) 30 µmol Gd/kg telesne težine Primer 3 i (C) 100 µmol Gd/kg telesne težine Referentnog jedinjenja 1. Pojačanje kontrasta protokola sa niskim dozama sa Primerom 3 (B) uporedivo je sa standardnom dozom Referentnog jedinjenja 1 (C). Pored toga, kvalitet slike protokola niskih doza iz Primera 3 (B) je značajno bolji od protokola sa niskim dozama Referentnog jedinjenja 1 (A). Ispitivanje angiografije pokazuje potencijal Primera 3 za značajno smanjenje doze.

Primer J

Slika celog tela

[0296] Klasični kontrastni agensi na bazi gadolinijuma pokazuju brzu vanćelijsku pasivnu distribuciju u celom telu i izlučuju se isključivo putem bubrega. Brza vanćelijska distribucija u celom telu omogućava klasične mogućnosti snimanja, na primer angiografiju i snimanje centralnog nervnog sistema, ekstremiteta, srca, glave/lica/vrata, abdomena i dojke.

Uporedljivost farmakokinetičkog i dijagnostičkog ponašanja Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®) i drugih ECCM je prikazana i čini osnovu za premošćivanje efikasnosti svih delova tela koji se obično snimaju u dijagnostičkoj obradi različitih bolesti (Tombach B i dr., Eur Radiol 2002;12(6):1550-1556). Opisana studija magnetne rezonance sa pojačanim kontrastom upoređuje farmakokinetičku distribuciju i dijagnostičke performanse Primera 3 sa Referentnim jedinjenjem 1 (Gadovist®), kao odobreni predstavnik MRI kontrastnih agenasa na bazi gadolinijuma.

[0297] Kako bi pokazali da Primer 3 ima isti način delovanja, intenzitet MRI signala tokom vremena i koncentracije Gd su određeni u različitim tkivima. Studija je obavljena na kliničkoj MRI čitavog tela opremljenoj kalemom kičme, fleksibilnim kalemom trbuha, kalemom za vrat (1,5 T Magnetom Avanto, Siemens Healthcare, Erlangen, Germany). Ispitivanje je urađeno pomoću mužjaka novozelandskih belih zečeva (težina 2,3-3,0 kg, n = 8, Charles River Kisslegg). Sve životinje su u početku anestezirane korišćenjem intramuskularne injekcije prilagođene telesnoj težini smeše (1+2) ksilazin hidrohlorida (20 mg/mL, Rompun 2%, Bayer Vital GmbH, Leverkusen) i ketamin hidrohlorida (100 mg/mL, Ketavet, Pfizer, Pharmacia GmbH, Berlin) koristeći 1 mL/kg telesne težine. Kontinuirana anestezija intubiranih životinja (endotrahealna cev, Rueschelit Super Safe Clear, manžetna 3,0 mm, Willy Ruesch AG, Kernen, Germany) postignuta je intravenskom injekcijom 0,9 mg propofola po kilogramu na sat (10 mg/mL, Propofol- Lipuro 1%, B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany). Kontinuirana intravenska injekcija izvedena je korišćenjem MR infuzionog sistema (Continuum MR Infusion System, Medrad Europe B. V., AE Beek, Deutschland). Trahealno disanje (SV 900C, Maquet, Rastatt, Germany) izvedeno je sa 55% kiseonika, četrdeset udisaja u minuti i zapreminom disanja od 7 ml po kilogramu telesne težine u minuti.

[0298] Dinamička merenja MRI do 22 minuta nakon ubrizgavanja sa naknadnom kvantitativnom analizom signala (Siemens Mean Curve softver (SYNGO Task Card, Siemens Healthcare, Erlangen, Germany) izvedena su za tri različita regiona glave i vrata (mozak, jezik, mišići usana, vratni mišića), trbuha (slezina, jetra, krv) i karlice (mišića ekstermiteta). Za tri različite grupe rezova korišćena je 3D T1-izmerena Vibe sekvenca (TR = 4,74ms, TE = 2,38, flip=10°, 1:29 minuta). Dinamička merenja tri grupe rezova (glava/vrat: 1:29 minuta, trbuh: 0:49 minuta, karlica: 1:16 minuta) izvršena su do 22 minuta nakon injekcije: 1. glava/vrat : osnovica 1,4, 5,2, 8,9, 12,8, 16,5, 20,4 minuta, 2. Trbušnjaci: osnovica, 0,5, 4,3, 8,1, 11,9, 15,7, 19,5 minuta i 3. Karlica: osnovna linija, 2,9, 6,7, 10,5, 14,4, 18,1, 22,0 minuta. 30 minuta nakon injekcije životinje su žrtvovane i koncentracije Gd su merene pomoću induktivno spojene masene spektroskopije plazme (ICP-MS Agilent 7500a, Waldbronn, Germany) Uzorci tkiva: krv, mozak, jezik, jetra i mišići ekstremiteta.

Kvantitativno procenjivanje slike izvršeno je za vremensku tačku od 30 minuta p.i. zbog kombinacije kvantitativne ICP-MS koncentracije gadolinijuma i analize MRI regiona od interesa.

[0299] Primena kontrastnog agensa dovodi do povećanja signala u vaskularnom sistemu i u vanvaskularnom, vanćelijskom prostoru tela. Pojačanje signala zasniva se na farmakokinetičkim i fizikalno-hemijskim svojstvima kontrastnih agenasa. Slika 4 prikazuje reprezentativne slike glave i vrata pre i 1,4 minuta nakon primene Primera 3 i Referentnog jedinjenja 1. Slika 5 prikazuje reprezentativne slike trbuha pre i 0,5 minuta nakon primene Primera 3 i Referentnog jedinjenja 1. Slika 6 prikazuje reprezentativne slike oblasti karlice pre i 0,5 minuta nakon primene Primera 3 i Referentnog jedinjenja 1. Sve slike pokazuju jasno pojačanje signala, na primer u srcu, jeziku, aorti, bubrezima, jetri, slezini, celom vaskularnom sistemu i mišićima.

[0300] Krive vremena i signala prikazuju promenu signala tokom vremena nakon primene kontrastnog agensa i predstavljaju farmakokinetiku kontrastnog agensa u odgovarajućem tkivu (Slika 7). U svim ispitivanim tkivima primećen je brzi porast intenziteta signala nakon ubrizgavanja kontrastnog agensa posle čega je usledilo kontinuirano smanjenje signala.

Stepen ovih pojačanja kontrasta je specifičan za tkivo. Međutim, nisu primećene razlike u vremenskom toku pojačanja kontrasta između Primera 3 i Referentnog jedinjenja 1. Ovo pokazuje identična farmakokinetička svojstva i pokazuje da je Primer 3 pogodan za različita područja tela (Slike 7). Amplituda pojačanja kontrasta zavisi od karakteristika tkiva, posebno od perfuzije tkiva i fizičko-hemijskih svojstava, naročito od relaksivnosti. Kao što se očekuje od približno dvostruko veće relaksivnosti (pogledati Primer A), pojačanje kontrasta korišćenjem Primera 3 je veće u poređenju sa Referentnim jedinjenjem 1.

[0301] Veza između koncentracije Gadolinijuma i promene MRI signala je ispitivana poređenjem količine Gadolinijuma u tkivu od 30 minuta p.i. sa promenom signala na MRI merenju izvršenom u 19,5 minuta p.i. (abdomen), 20,4 minuta p.i. (glava i vrat) i 22,0 minuta p.i. (karlica). Odgovarajući podaci za Primer 3 i Referentno jedinjenje 1 prikazani su na slici 8. Primećena je linearna korelacija između koncentracije Gadolinijuma u različitim tkivima i odgovarajućih promena MRI signala. Ovo pokazuje da je efikasnost Primera 3 i Referentnog jedinjenja 1 nezavisna od oblasti tela ili tkiva koje je ispitivano. Primećeno je neznatno odstupanje od ove korelacije za slezenu, što pokazuje veće poboljšanje signala MRI nego što bi se očekivalo od koncentracije Gadolinijuma u tkivau Ovo je primećeno za oba kontrastna agensa i odnosi se na značajno veću zapreminu krvi u slezini u poređenju sa drugim organima i tkivima. Zbog toga slezina gubi veći deo svoje koncentracije gadolinijuma eksangunacijom što zauzvrat rezultuje neusklađenošću in vivo snimanja i ex-vivo određivanja gadolinijuma. Povezanost izmene signala i koncentracije gadolinijuma u tkivima svih ostalih tkiva i organa, što predstavlja odgovarajuću relaksivnost, zavisi od efikasnosti korišćenog kontrastnog agensa. Veći nagib je određen za Primer 3 (1,9) nego za Referentno jedinjenje 1 (1,0), što se podudara sa poznatom većom relaksivnošću iz Primera 3 (slika 8; pogledati takođe podatke o relaksivnosti opisane u primeru A).

Primer K

Fantomska studija dinamičke CT difuzije

[0302] Kao što je naznačeno u primeru A, Referentno jedinjenje 4 ima relaksivnost koja je u sličnom rasponu kao jedinjenja predmetnog pronalaska. Nakon intravenske injekcije, svi klinički odobreni mali monomeri GBCA (gadopentetat dimeglumin, gadoterat meglumin, gadoteridol, gadodiamid, gadobutrol i gadoversetamid) distribuiraju se u krvi i vanvaskularnom/vanćelijskom prostoru pasivnom raspodelom (Aime S et. al., J Magn Reson Imaging. 2009; 30, 1259-1267). Kontrastni agensi sa visokim vezivanjem za proteine, na primer tadodrijum gadofosveset sa produženim vremenskim periodom u krvnim sudovima izazvanim reverzibilnim vezivanjem na HSA ili velikim hidrodinamičkim veličinama, kao na primer Referentno jedinjenje 4, imaju poteškoća da prođu kroz zid sudova. Za dobre rezultate snimanja potrebna je brza difuzija kroz zidove sudova zbog brzog bubrežnog izlučivanja` GBCA.

[0303] Opisana studija dinamičke CT difuzije upoređuje sposobnost Šrimera 1, 2, 3, 4, 5, 6 i Referentnih jedinjenja 1 i 4 da prođu polupropusnu membranu (20 kDa). Klinički CT uređaj od 128 redova (SOMATOM Definition, 128; Siemens Healthcare, Forchheim, Germany) korišćen je za nadgledanje difuzije kroz polupropusnu membranu na 100 kV i 104 mA. Pojedinačna merenja izvršena su na 0 minuta, 1 minuta, 2 minuta, 3 minuta, 5 minuta, 10 minuta, 15 minuta, 20 minuta, 30 minuta, 45 minuta, 60 minuta, 2 sata, 3 sata, 5 sati, 7 sati, 22 sata, 24 sata, 30 sata, 46 sata i sata h nakon stavljanja dijalizne kasete (Slide-A-Lyser, 20,000 MWCO, kapacitet 0,1-0,5 ml, Thermo Scientific, Roskilde, Denmark) napunjene kontrastnim agensom u rastvoru fetalnog goveđeg seruma (FBS, Sigma, F7524). Slike su rekonstruisane debljinom odseka 2,4 mm i B30 konvulcionim jezgrom. Korišćena koncentracija u dijaliznim kasetama ispitivanih Primera 1, 2, 3, 4, 5, 6 i Referentnih jedinjenja 1 i 4 je bila 20 mmol Gd/L. Rezultati snimanja za sve ispitivane Primere i Referentna jedinjenja 1 i 4 za vremenske tačke 0 minuta i 48 sati nakon stavljanja kaseta u FBS rastvor su prikazani na Slici 9. Za analizu slike, oblasti od interesa su ručno crtane na 1 centralno smešteni odsečak za svaku vremensku tačku (reprezentativno područje merenja prikazano je na Slici 9: Slika 1A). Rezultati Hounsfield jedinica (HU) analiziranih područja tokom vremena prikazani su na Slici 10. Izračunati difuzioni polu-životi ispitivanih primera i Referentnih jedinjenja sumirani su u Tabeli 6.

Tabela 6: Difuzioni polu-život kroz polupropusnu membranu (20 kDa)

[0304] Slika 10 i izračunati podaci o polu-životu pokazuju, slično kao Referentno jedinjenje 1 (Gadovist®), i suprotno od Referentnog jedinjenja 4, da Primeri 1-6 mogu da prođu polupropusnu membranu. Dalje, podaci ispitivanih jedinjenja pokazuju, suprotno drugim agensima visoke relaksivnosti, koji imaju visok stepen vezivanja proteina ili vrlo sporo taloženje (npr. Referentno jedinjenje 4), da jedinjenja prema predmetnom pronalasku imaju hidrodinamičke dimenzije koje mogu pravovremeno savladati barijere. Ovi nalazi ukazuju na sposobnost jedinjenja predmetnog pronalaska da savladaju barijere, na primer endotelne zidove u vaskularnom sistemu, što je uslov za snimanje celog tela.

Primer L

Procena potencijalnih nuspojava

[0305] Nijedno od ispitivanih primera jedinjenja nije pokazalo neželjene negativne sporedne efekte kod životinja nakon primene. Pored toga, aktivnost van cilja Primera 3 je prikazana u komercijalnom ispitivanju radioliganda i vezivanja enzima (LeadProfilingScreen®, Eurofins Panlabs, Taipei, Taiwan) i nije bilo kritičnih nalaza.

Primer M

MRI tumora mozga kod pacova

[0306] Potencijal značajnog smanjenja doze pokazao se intraindividualnim poređenjem 0,3 mmol Gadolinijuma po kilogramu telesne težine (300 µmol Gd/kg telesne težine) i protokolom male doze koristeći 0,1 mmol gadolinijuma po kilogramu telesne težine (100 µmol Gd/kg telesne težine). Referentno jedinjenje 1 (Gadovist®), kao odobreni predstavnik kontrastnih agenasa na bazi Gadolinijuma, korišćeno je u oba protokola doze (0,3 mmol Gd/kg telesne težine i 0,1 mmol Gd/kg telesne težine) i u poređenju sa primerom 3 (0,1 mmol Gd/kg telesne težine).

[0307] GS9L ćelijska linija (European Collection of Cell Cultures, Cancer Res 1990;50:138-141; J Neurosurg 1971;34:335) uzgajana u Dulbecco-vom modifikovanom Eagle-ovom medijumu (DMEM, GlutaMAX™, Ref: 31966-021, Gibco) uz dodatak 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS, Sigma F75249) i 1% Penicilin-Streptomicina (10.000 jedinica/mL, Gibco). Ispitivanje je urađeno pomoću mužjaka Fisher pacova (F344, težina 170-240 g, n=4, Charles River Kisslegg). Inokulacija je izvedena pod anestezijom ketamina/ksilazina korišćenjem intramuskularne injekcije prilagođene telesnoj težini smeše (1+2) ksilazin hidrohlorida (20 mg/mL, Rompun 2%, Bayer Vital GmbH, Leverkusen) i ketamin hidrohlorida (100 mg/mL, Ketavet, Pfizer, Pharmacia GmbH, Berlin) koristeći 1 mL/kg telesne težine. Za ortotopsku intracerebralnu implantaciju anestezirane životinje su fiksirane u stereotaktički aparat i 1,0E+06 GS9L ćelije suspendovane u količini od 5 µl medijuma u mozak pomoću Hamilton-ovog šprica.

[0308] MRI studija sa pojačanim kontrastom izvedena je na kliničkom 1,5 T skeneru (Magnetom Avanto, Siemens Healthcare, Erlangen, Germany). Za prikupljanje podataka korišćena je kalem glave pacova (kalem i držač za životinje za pacove, RAPID Biomedical GmbH). Pacovi su anestezirani korišćenjem smeše izooflurana (2,25%), gasa sa kiseonikom (približno 0,5 L/minuta) i azot oksidom (protok oko 1 L/minuta). MR snimanje je rađeno pomoću 3D turbo-spin eho sekvence (12 isečci od 1 mm u 3 D bloku, vidno polje: 80 mm (33% oversampling), vreme ponavljanja: 500 milisekundi, vreme eha 19 milisekundi, prostorna rezolucija: 0,3x0,3x1,0 mm). Životinje su snimljene dva uzastopna dana. Prvog dana Referentno jedinjenje 1 (Gadovist®) i Primer 3 su upoređeni intraindividualno u istoj dozi od 0,1 mmol Gd/kg telesne težine, što je uporedivo sa ljudskom standardnom dozom. Drugi dan je Referentno jedinjenje 1 (Gadovist®) sa 0,3 mmol Gd/kg telesne težine, što je uporedivo sa trostrukom ljudskom dozom (klinički odobreno u određenim indikacijama CNS) upoređeno je sa standardnom dozom iz Primera 3 (0,1 mmol Gd/kg telesne težine).

Rezultujuće MR slike GS9L tumora mozga pacova prikazane su na Slici 11: (A) Intraindividualna poređenje Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®) i Primera 3 u istoj dozi od 0,1 mmol Gd/kg telesne težine (bw). Primer 3 pokazao je pri istoj dozi veći kontrast lezija-imozga i odlično razgraničenje oboda tumora. (B) Poređenje Referentnog jedinjenja 1 (Gadovist®) pri 0,3 mmol Gd/kg telesne težine (trostruka doza) i Primera 3 pri 0,1 mmol Gd/kg telesne težine (standardna doza). Primer 3 pokazuje sličan kontrast lezija-i-mozga pri jednoj trećini doze Referentnog jedinjenja 1.

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje opšte formule (I),

grupu, u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>; R<1>predstavlja grupu R<3>; n predstavlja ceo broj 4; R<2>predstavlja atom vodonika; R<3>predstavlja grupu izabranu od:

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula; R<4>predstavlja atom vodonika; R<5>predstavlja atom vodonika ili metil grupu; ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, ili solvat, ili njihova smeša.
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde : R<5>predstavlja metil grupu.
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde : R<3>predstavlja

grupu.
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili 2, gde : R<3>predstavlja

grupu.
5. Jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu 1, 2, 3 ili 4, koje je izabrano iz grupe koju čine : Tetragadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat, Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat, Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat, Tetragadolinijum {4,10-bis(karboksilatometil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1 il]acetil}amino)metil]propil}amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}acetat, i Tetragadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat, ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, ili solvat, ili njihova smeša.
6. Jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu 1, 3 ili 4, koje je Tetragadolinijum [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({2-[4,7,10-tris-(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}-metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il}-14,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetat,

ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, ili solvat, ili njihova smeša.
7. Postupak pripreme jedinjenja opšte formule (I-d) prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja jedinjenju formule 4, gde je tetraamin kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I) prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6, ili njegova so, da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (III) :

gde je R<5>kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I) prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6, i LG predstavlja aktiviranje odlazeće grupe, kao što je na primer 4-nitrofenol, čime se dobija jedinjenje opšte formule (I-d) :

gde je R<5>kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I) prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 4, i tetraamin kako je definisano prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6.
8. Jedinjenja prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6, za upotrebu pri snimanju magnetnom rezonancom (MRI).
9. Upotreba jedinjenja ili njihovih smeša prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6, za proizvodnju dijagnostičkih agenasa.
10. Upotreba jedinjenja ili njihovih smeša prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6, za proizvodnju kontrastnih agenasa za magnetnu rezonancu.
11. Postupak snimanja telesnog tkiva kod pacijenta, koji sadrži korake primene pacijentu efikasne količine jednog ili više jedinjenja prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6 u farmaceutski prihvatljivom nosaču, i podvrgavanje pacijenta magnetnoj rezonanci.
12. Upotreba jedinjenja opšte formule (III) :

gde je R<5>kako je definisano za jedinjenja opšte formule (I) prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6, i LG predstavlja aktiviranje odlazeće grupe, kao što je na primer 4-nitrofenol za pripremu jedinjenja opšte formule (I) prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 6.
13. Međuproizvod jedinjenje opšte formule (I) za pripremu jedinjenja bilo kog patentnog zahteva 1, 2, 3, 4, 5 ili 6,

grupu; u kojoj * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa R<1>; R<1>predstavlja grupu R<3>; n predstavlja ceo broj 4; R<2>predstavlja atom vodonika; R<3>predstavlja grupu izabranu od:

u kojima * ukazuje na tačku vezivanja navedene grupe sa ostatkom molekula; R<4>predstavlja atom vodonika; R<5>predstavlja atom vodonika ili metil grupu; ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, solvat, ili so, ili njihovu smešu.
14. Međuproizvod jedinjenje prema patentnom zahtevu 13, koje je izabrano iz grupe koju čine: [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetna kiselina, {4,10-Bis(karboksimetil)-7-[(2R,16R)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2R)-2-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetna kiselina, {4,10-Bis(karboksimetil)-7-[(2S,16S)-3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({(2S)-2-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetna kiselina, {4,10-bis(karboksimetil)-7-[2-okso-2-({3-({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)-2,2-bis[({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)metil]propil}amino)etil]-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il}sirćetna kiselina, i [4,10-bis(karboksimetil)-7-{2,5,11,14-tetraokso-15-[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-8,8-bis({[({[4,7,10-tris(karboksimetil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]acetil}amino)acetil]amino}metil)-3,6,10,13-tetraazapentadek-1-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetna kiselina, ili njihov stereoizomer, tautomer, hidrat, solvat, ili so, ili njihova smešu.
15. Međuproizvod jedinjenje prema patentnom zahtevu 14, koje je : [4,10-bis(karboksilatometil)-7-{3,6,12,15-tetraokso-16-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]-9,9-bis({[({2-[4,7,10-tris(karboksilatometil)-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]propanoil}amino)acetil]amino}metil)-4,7,11,14-tetraazaheptadekan-2-il}-1,4,7,10-tetraazaciklododekan-1-il]sirćetna kiselina,

ili njen stereoizomer, tautomer, hidrat, solvat, ili so, ili njihova smešu.