RS60023B1 - Smeša masnih kiselina (gmk, grupa masnih kiselina) za primenu u lečenju inflamatornih patologija - Google Patents

Description

Opis

STANJE TEHNIKE

[0001] Masne kiseline su alifatične karboksilne kiseline i one predstavljaju gradivne sastojke skoro svih kompleksnih lipida i bilnjih i životinjskih masti. Ova jedinjenja se mogu klasifikovati prema dužini ugljenikovog lanca i/ili prisustvu dvostrukih veza unutar navedenog lanca (zasićene, nezasićene masne kiseline).

[0002] Posebno, neke nezasićene masne kiseline se smatraju esencijalnim jer se one ne sintetišu od strane tela, nego one se moraju nadoknaditi ishranom. Među ovima, neke kiseline se razlikuju prema položaju poslednje dvostruke veze u ugljenikovom lancu, kao što je omega-3, gde se poslednja dvostruka veza nalazi na trećem ugljeniku od kraja (na primer linolenska kiselina), omega-6 gde se poslednja dvostruka veza nalazi na šestom ugljeniku od kraja (na primer linolna kiselina) ili, takođe, omega-9 gde se poslednja dvostruka veza nalazi na devetom ugljeniku od kraja (npr. oleinska kiselina).

[0003] Bergstrom, Samuelsson et al. Su 1964. u (Nutrition classics. Biochimica et Biophysica Acta 90:207-10, 1964. The enzymatic formation of prostaglandin E2 from arachidonic acid. Prostaglandins and related factors 32) demonstrirali ulogu i biološke efekte lipida u inflamatornom procesu i u drugim bolestima.

[0004] 1979. je otkriven prvi fosfolipid, naime fosfatidilinozitol, zajedno sa njegovom ulogom u aktivaciji procesa ćelijskog odgovora, navedeni fosfolipid koji je bio u stanju da aktivira i kontroliše reaktivnost preko elemenata za razmenu poruka.

[0005] Lipidi, stoga, igraju različite uloge u telu, uključujući delovanje kao hemijskih prenosioca poruka koji mogu da uzrokuju promene u ulozi pojedinačne ćelije ili da utvrde delovanja koja mogu da promene mikrosredinu, kao što je u slučaju procesa uključenih u odgovor na inflamatorne povrede. Lipidi u esterifikovanom obliku mogu da se uklope u membranu i budu transportovani kao signalni elementi za druge ćelije. Ova jedinjenja se takođe vezuju za određene proteine i ostaju neaktivna dok ne dospeju do mesta delovanja i vežu za odgovarajući receptor. Za esencijalne masne kiseline, kao što su linolna kiselina i linolenska kiselina, je poznato da su prekursori arahidonske kiseline prisutne na membranskim fosfolipidima (npr. oni kod ćelijske membrane) i mnogih različitih tipova eikozanoida, tj. supstanci uključenih u telesni inflamatorni odgovor, uključujući hidroksieikozatetraenoinseke kiseline, prostanoide (prostaglandine, tromboksane, i prostacikline), leukotriene, lipoksine i rezolvine, hemijske medijatore koji igraju važnu ulogu u bolu, groznici, edemima, koagulaciji krvi i, uopštenije, inflamaciji.

[0006] Kao što je poznato, inflamatorni odgovor je multifaktorijalna fiziološka reakcija okarakterisana učešćem različitih ćelija iz imunog sistema, npr. mast ćelija, makrofaga, bazofila i/ili limfocita, sa različitim vremenima intervencija.

[0007] Jedne od prvih ćelija za intervenciju u inflamatornom procesu su mast ćelije, čiji je kapacitet za odgovor i pokretanje inflamatornog procesa reda mikrosekundi. Njihova aktivacija stvara seriju reakcija koje dovode do oslobađanja prethodno formiranih medijatora sadržanih u njihovoj citoplazmi; u brzom sledu, makrofage se povlače i aktiviraju.

[0008] Funkcija makrofaga je strukturirana u dve faze: prva, poznat kao M1, uključuje aktivaciju niza reakcija koje dovode do oslobađanja u mikrosredinu hemijskih faktora, kao što su NGF (Nerve Growth Factor – faktor rasta nerva), VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor – vaskularni endotelijalni faktor rasta), FGF (Fibroblast Growth Factor – faktor rasta fibroblasta), histamin, interleukini, citokini, i lipidni proizvodi, kao što su arahidonska kiselina, prostaglandini i heparin, koji mogu da pokrenu i podrže inflamatorni proces kao i da "privuku" ostale ćelije u imunom sistemu na mesto inflamacije. Druga faza, poznata kao M2, uključuje aktivaciju fenomena „sakupljača“ sa ciljem eliminisanja otpada koji nastaje iz razgradnje agensa odgovornog za inflamatorno dejstvo. Između makrofagne aktivacione faze u M1 i M2, bazofili – čija je uloga da oslobode histamin u mikrosredinu koja je podvrgnuta agresiji inflamatornog agensa – su privučeni i aktivirani, vodeći ka vazodilataciji i, posledično, edemu kao rezultatu dijapedeze imunih ćelija ili ekstravazacije.

[0009] Kada inflamatorna reakcija dostigne fazu dijapedeze, limfociti – čija je uloga da se suprotstavljaju patogenom agensu – dostižu u oblast. Celokupni inflamatorni proces se pokreće u samo nekoliko sekundi.

[0010] Svi složeni biološki sistemi su regulisani sistemom suprotnosti zasnovanom na mehanizmima agonizma i antagonizma. Uopštenije, degranulacija mast ćelijskih medijatora otpočinje niz fenomena koji su sintetisani tokom inflamatornog procesa. Gore pomenute ćelije u imunom sistemu su samo-regulisane pomoću finih receptorskih mehanizama koji uključuju sofisticirani sistem receptora, eksprimiranih u citoplazmatskoj membrani, koji mogu biti prekomerno eksprimirani tokom stimulacionih procesa.

[0011] Ovo prekomerno eksprimiranje određuje oslobađanje, u vanćelijski prostor, niza hemijskih medijatora, koji otpočinju niz događaja čija je svrha da brane tkivnu mikrosredinu i da dovedu do fenomena popravke. Sistem je regulisan proizvodnjom antagonista receptora, koje proizvodi sama ćelija, iz masnih kiselina uzetih iz ćelijske membrane.

[0012] Ovi biološki sistemi su zasnovani na receptorskoj kontroli: nakon stimulacije patogenog agensa, ćelije eksprimiraju specifične receptore koji su zasićeni sa sopstvenoproizvedenim medijatorima, tj. formirani iz masnih kiselina koje izgrađuju membrane navedenih ćelija. Eksprimiranje receptora je sredstvo pomoću kojeg su ćelije uključene u inflamatorni proces u stanju da prenesu faktore rasta, interleukine, citokine, itd., u mikrosredinu. Zasićenje ovih receptora dozvoljava prvo smanjenje i potom modulaciju degranulacije medijatora prisutnih u citoplazmi ćelija uključenih u inflamatorni proces ( mast ćelija posebno) sve dok se stimulacija indukovana prisustvom patogenog agensa ne zaustavi.

[0013] Ovaj način regulacije, međutim, se završava kada kontinuirano smanjenje masnih kiselina u ćelijskim membranama izaziva patnju samoj ćeliji. U ovom stanju, receptori su prekomerno eksprimirani i, za ćeliju, ovo uspostavlja degranulacioni signal usmeren na medijatore koji započinju fenomen odbrane koji više nisu potrebni.

[0014] Prema tome, ukoliko nema receptora za kontrolu receptora, ćelije će očigledno indukovati degranulaciju svega prisutnog u citoplazmi, vodeći ka privlačenju drugih ćelija u mikrosredinu. Ovo bi potom vodilo ka iritaciji sistema, koji – ostajući aktivan – bi mogao postati izvor oštećenja, dovodeći do inflamatornih patologija i autoimunih bolesti, kao što su reumatoidni artritis, multipla skleroza, i sistemski eritemski lupus.

[0015] Stoga je veoma važno da, u ovim patološkim stanjima, telo može kontrolisati prekomerno aktivan inflamatorni proces kroz formiranje antagonista receptora koji se sastoji od masnih kiselina uzetih iz membrane istih ćelija.

[0016] Trenutno, da bi se ispunila ova potreba, istraživanje se fokusiralo na strategije ishrane dizajnirane da se smanji sinteza pro-inflamatornih hemijskih medijatora, kao što su prostaglandini, smanjenjem potrošnje biljnih ulja i masnog mesa, i povećanjem unosa ribe i nekih posebnih ulja, kao što su lana i konoplje. Ovom metodom, smatra se da će veće količine eikozapentaenske kiseline i dokozaheksaenske kiseline (omega-3) biti ugrađene u fosfolipide membrane umesto arahidonske kiseline.

[0017] Ipak, dobro je poznato da ove strategije ishrane nisu dovoljne da se uklone velike inflamatorne patologije kao što su reumatoidni artritis, hronični ulcerativni kolitis, sistemski eritemski lupus, pelvična inflamatorna bolest, ili ateroskleroza, i preusmeravanje na farmakološke terapije je neophodno.

[0018] Trenutno, farmakološke terapije primenjivane za inflamatorne patologije uključuju kortikosteroide (kao što su kortizon i analogne supstance) ili NSAID (non-steroidal antiinflammatory drugs – nesteroidne antiinflamatorne lekove), koji deluju na različite nivoe kaskade arahidonske kiseline. Kortikosteroidi suzbijaju oslobađanje arahidonske kiseline iz fosfolipida preko inhibicije aktivnosti fosfolipaze, uključujući fosfolipazu A2 (PLA2) i fosfolipazu C (PLC). Posebno, mehanizam pomoću koga kortikosteroidi vrše svoje antiinflamatorno i imunosupresivno dejstvo je visoko organizovan i uključuje nekoliko biohemijskih procesa implementiranih od strane ćelije u odgovoru na potencijalno štetne stimuluse (npr. infektivne agense, alergene, strane supstance, abnormalne ćelije, itd.).

[0019] Uloga ovog mehanizma je da otpočne imuni odgovor, održi ga dok se ne ukloni rizik i potom priguši odgovor tako da se ne nastavlja i postane štetan (kao što se dešava, na primer, u slučajevima hronične inflamacije ili autoimunim bolestima). Posebno, kortikosteroidi inhibiraju ćelijske procese koji vode sintezi pro-inflamatornih i imunostimulatornih supstanci i, obratno, aktiviraju ćelijske procese koji vode sintezi anti-inflamatornih i imunosupresivnih supstanci, da bi se smanjili simptomi bolesti.

[0020] Za razliku od anti-inflamatonog/imunosupresivnog efekta, sporedni efekti sintetisanih kortikosteroida uopšteno proističu iz činjenice da oni ometaju telesne homeopatske sisteme i stoga mogu izazvati: hipertenziju, zadržavanje vode, hiperglikemiju, kubitak kalijuma, osteoporozu, mišićnu hipertrofiju, kapilarnu fragilnost, odloženo zarastanje rana, hiperlipidemije, nagomilavanje adipoznog tkiva na licu, vratu i abdomenu, gastroduodenalne čireve, povećanu koaguabilnost krvi, hematološke poremećaje, euforiju, i insomniju.

[0021] U produženom lečenju, štaviše, ove farmakološke supstance imaju tendenciju da inhibiraju proizvodnju analognih prirodnih hormona od strane nadbubrežnih žlezda, time prouzrokujući situaciju adrenalne insuficijencije, koja se javlja sa ozbiljnim posledicama, naročito nakon prekida terapije. Pored toga, produžena primena kortikosteroida je povezana sa njihovim imunosupresivnim dejstvom, koje povećava sklonost ka infekcijama.

[0022] NSAID, u međuvremenu, ometaju kaskadu arahidonske kiseline na drugačijem nivou, inhibiranjem ciklooksigenaza COX1 i 2, koje su uključene u inflamatorne procese. Najuobičajniji sporedni efekti su oni koji utiču na digestivni sistem, posebno, stomak, i uključuju bol, osećaje pečenja, ili mučnine, i ulceraciju gastrične mukoze sa mogućim krvarenjem; kao i kožne reakcije kod podložnih pojedinaca (eritem, koprivnjača).

[0023] Pored toga, US2010/113387A1 stavlja na uvid javnosti kompoziciju koja sadrži miristinsku kiselinu, palmitinsku kiselinu, stearinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, linolnu kiselinu, eikozapentaensku kiselinu (EPA), dokozaheksaensku kiselinu (DHA) i ekscipijense u lečenju virusnih infekcija, bakterijskih infekcija i inflamacije. US2012/252888A1 stavlja na uvid javnosti farmaceutsku tečnu kompoziciju koja sadrži DHA, EPA, linolnu kiselinu, gama linolensku kiselinu, i ekscipijense u lečenju neurodegenerativnih poremećaja, multiple skleroze i autoimunih bolesti.

[0024] US2005/208162A1 stavlja na uvid javnosti kompoziciju masnih kiselina koja sadrži palmitinsku kiselinu, stearinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, linolnu kiselinu, linolensku, miristinsku kiselinu i ekscipijense u lečenju i prevenciji različitih tipova artritisa i inflamatornih stanja zglobova, periodontalnih bolesti i psorijaze.

[0025] JP2009149599A stavlja na uvid javnosti medicinske masti i ulja koja sadrže palmitinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, stearinsku kiselinu, linolnu kiselinu, miristinsku kiselinu i ekscipijense za lečenje inflamacije, tj. atopičnog dermatitisa i WO2011/027373A1 se odnosi na kompoziciju za farmaceutsku ili veterinarsku primenu, koja sadrži palmitoiletanolamid za humanu ili veterinarsku primenu, koja sadrži terapijski efikasnu količinu palmitoiletanolamida u ultra-mikronizovanom obliku, pri čemu više od 90% po masi palmitoiletanolamida ima veličinu čestica manju od 6 mikrona, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima.

[0026] Stoga, postoji potreba da se identifikuje jedno ili više jedinjenja za lečenje inflamacije koje može efikasno da blokira hiperaktivnost inflamatornog procesa, redukujući sporedne efekte povezane sa konvencionalnim lečenjima.

KRATAK OPIS SLIKA

[0027]

Slika 1: Sumarna tabela koja sadrži hemijske strukture masnih kiselina predmetnog pronalaska.

Slika 2: Mehanizam delovanja makrofaga

Slika 3: Određivanje IC50za AS66

Slika 4: Standardna kriva i procenat inhibicije IL-8 sa AS66

Slika 5: Standardna kriva i procenat inhibicije IL-6 sa AS66

Slika 6: Određivanje IC50za LC88

Slika 7: Standardna kriva i procenat inhibicije IL-6 sa LC88

OPIS

[0028] Iznenađujuće, nađeno je da smeša specifičnih masnih kiselina može efikasno da leči inflamatorni proces, sa pojačanom kontrolom regulatornog sistema i bez sporednih efekata, pomoću biološke modulacije ćelija uključenih u inflamatorni proces (BMIC Biological Modulation of Inflammatory Cells).

[0029] Stavljena je na uvid javnosti smeša barem tri masne kiseline, koje sadrže od 8 do 24 atoma ugljenika, navedene masne kiseline mogu biti bilo zasićene, nezasićene, ili smeša istih.

[0030] Smeša poželjno sadrži od tri do deset masnih kiselina, i, poželjnije, navedena smeša sadrži četiri, pet, osam ili devet masnih kiselina.

[0031] Navedene masne kiseline su poželjno odabrane od palmitinske kiseline, oleinske kiseline, stearinske kiseline, linolne kiseline, alfa-linolenske kiseline, gama-linolenske kiseline, eikozapentaenske kiseline (EPA), dokozaheksaenske kiseline (DHA), azelainske kiseline i miristinske kiseline, ili smeše istih.

[0032] Izraz "palmitinska kiselina", prema ovom pronalasku, se odnosi na heksadekansku kiselinu, tj. zasićenu monokarboksilnu kiselinu koja sadrži 16 toma ugljenika (Slika 1).

[0033] Izraz "oleinska kiselina", prema ovom pronalasku, se odnosi na cis-9-oktadekensku kiselinu, tj. nezasićenu monokarboksilnu kiselinu (omega-9) koja sadrži 18 atoma ugljenika (Slika 1).

[0034] Izraz "stearinska kiselina", prema ovom pronalasku, se odnosi na oktadekansku kiselinu, tj. zasićenu monokarboksilnu kiselinu koja sadrži 18 atoma ugljenika (Slika 1).

[0035] Izraz "linolna kiselina", prema ovom pronalasku, se odnosi na cis,cis-9,12-oktadekensku kiselinu, tj. nezasićenu monokarboksilnu kiselinu (omega-6) koja sadrži 18 atoma ugljenika (Slika 1).

[0036] Izraz "alfa-linolenska kiselina", prema ovom pronalasku, odnosi se na cis,cis,cis-9,12,15-oktadekatriensku kiselinu, tj. Nezasićenu monokarboksilnu kiselinu (omega-3) koja sadrži 18 ugljenikovih atoma (Slika 1).

[0037] Izraz "gama-linolenska kiselina", prema ovom pronalasku, odnosi se na cis,cis,cis-6,9,12-oktadekatriensku kiselinu, tj. nezasićenu monokarboksilnu kiselinu (omega-6) koja sadrži 18 atoma ugljenika (Slika 1).

[0038] Izraz "eikozapentaenska kiselina (EPA)", prema ovom pronalasku, odnosi se na (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-Eikoza-5,8,11,14,17-pentensku kiselinu, tj. na nezasićenu monokarboksilnu kiselinu (omega-3) koja sadrži 20 atoma ugljenika (Slika 1).

[0039] Izraz "dokozaheksaenska kiselina (DHA)", prema ovom pronalasku, odnosi se na (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-dokoza-4,7,10,13,16,19-heksaensku kiselinu, tj. na nezasićenu monokarboksilnu kiselinu (omega-3) koja sadrži 22 atoma ugljenika (Slika 1).

[0040] Izraz "azelainska kiselina", prema ovom pronalasku, odnosi se na nonandionsku kiselinu, tj. zasićenu dikarboksilnu kiselinu koja sadrži 9 atoma ugljenika (Slika 1).

[0041] Izraz "miristinska kiselina", prema ovom pronalasku, odnosi se na tetradekansku kiselinu, tj. zasićenu monokarboksilnu kiselinu koja sadrži 14 ugljenikovih atoma (Slika 1).

[0042] Poželjno, smeša stavljena na uvid javnosti sadrži šest masnih kiselina, naime: palmitinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, linolnu kiselinu, alfa-linolensku kiselinu, gamalinolensku kiselinu, i eikozapentaensku kiselinu (EPA). Poželjno, smeša stavljena na uvid javnosti sadrži sedam masnih kiselina, naime: palmitinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, stearinsku kiselinu, linolnu kiselinu, alfa-linolensku kiselinu, i eikozapentaensku kiselinu (EPA) i dokozaheksaensku kiselinu (DHA).

[0043] Poželjnije, smeša stavljena na uvid javnosti sadrži četiri masne kiseline, naime: palmitinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, stearinsku kiselinu, i linolnu kiselinu.

[0044] Poželjnije, smeša stavljena na uvid javnosti sadrži pet masnih kiselina, naime: palmitinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, stearinsku kiselinu, linolnu kiselinu, i alfa-linolensku kiselinu.

[0045] Poželjnije, navedena smeša sadrži osam masnih kiselina, naime: palmitinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, stearinsku kiselinu, linolnu kiselinu, alfa-linolensku kiselinu, gamalinolensku kiselinu, eikozapentaensku kiselinu (EPA) i dokozaheksaensku kiselinu (DHA).

[0046] Poželjnije, navedena smeša sadrži devet masnih kiselina, naime: palmitinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, stearinsku kiselinu, linolnu kiselinu, alfa-linolensku kiselinu, gamalinolensku kiselinu, eikozapentaensku kiselinu (EPA), dokozaheksaensku kiselinu (DHA) i azelainsku kiselinu.

[0047] Prema jednoj objavi palmitinska kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.2 % i 48 % po masi; oleinska kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.2 % i 38% po masi; stearinska kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 42% po masi; linolna kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 40% po masi; alfa-linolenska kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 38% po masi; gama-linolna kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 30% po masi; eikozapentaenska kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 25% po masi; dokozaheksaenska kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.2 % i 25% po masi; azelainska kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 40% po masi; miristinska kiselina je sadržana u smeši u količini sadržanoj između 0.005% i 0.01% po masi;

[0048] Gore pomenuti procenti su količine po masi izražene u odnosu na ukupnu masu smeše.

[0049] Kada gorepomenuta smeša sadrži četiri masne kiseline, palmitinska kiselina je sadržana u gorepomenutoj smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 48% po masi, poželjno između 30% i 45% po masi, i poželjnije do oko 40% ukupne mase smeše.

[0050] U gorepomenutoj smeši, oleinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2 % i 38 % po masi, poželjno između 15% i 30% po masi, i poželjnije do oko 25% ukupne mase smeše.

[0051] U gorepomenutoj smeši, stearinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2 % i 42% po masi, poželjno između 20% i 35% po masi, i poželjnije do oko 32% ukupne mase smeše.

[0052] U gorepomenutoj smeši, linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 38% po masi, poželjno između 1% i 4% po masi, i poželjnije do oko 3% ukupne mase smeše.

[0053] Kada gorepomenuta smeša sadrži pet masnih kiselina, palmitinska kiselina je sadržana u gorepomenutoj smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 48% po masi, poželjno između 20% i 40% po masi, i poželjnije do oko 38% ukupne mase smeše.

[0054] U gorepomenutoj smeši, oleinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 38% po masi, poželjno između 20% i 30% po masi, i poželjnije do oko 27% ukupne mase smeše.

[0055] U gorepomenutoj smeši, stearinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 42% po masi, poželjno između 7% i 15% po masi, i poželjnije do oko 10% ukupne mase smeše.

[0056] U gorepomenutoj smeši, linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 40% po masi, poželjno između 8% i 20% po masi, i poželjnije do oko 15% ukupne mase smeše.

[0057] U gorepomenutoj smeši, alfa-linolenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 38% po masi, poželjno između 2% i 15% po masi, i poželjnije do oko 10% ukupne mase smeše.

[0058] Kada gorepomenuta smeša sadrži osam masnih kiselina, palmitinska kiselina je sadržana u gorepomenutoj smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 48% po masi, poželjno između 20% i 38% po masi, i poželjnije do oko 30% ukupne mase smeše.

[0059] U gorepomenutoj smeši, oleinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 38% po masi, poželjno između 10% i 15% po masi, i poželjnije do oko 12% ukupne mase smeše.

[0060] U gorepomenutoj smeši, stearinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 42% po masi, poželjno između 8% i 15% po masi, i poželjnije do oko 12% ukupne mase smeše.

[0061] U gorepomenutoj smeši, linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 40% po masi, poželjno između 10% i 20% po masi, i poželjnije do oko 18% ukupne mase smeše.

[0062] U gorepomenutoj smeši, alfa-linolenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 38% po masi, poželjno između 10% i 15% po masi, i poželjnije do oko 12% ukupne mase smeše.

[0063] U gorepomenutoj smeši, gama-linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 30% po masi, poželjno između 1% i 3% po masi, i poželjnije do oko 2% ukupne mase smeše.

[0064] U gorepomenutoj smeši, eikozapentaenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 25% po masi, poželjno između 5% i 10% po masi, i poželjnije do oko 8% ukupne mase smeše.

[0065] U gorepomenutoj smeši, dokozaheksaenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 25% po masi, poželjno između 4% i 10% po masi, i poželjnije do oko 6% ukupne mase smeše.

[0066] Kada gorepomenuta smeša sadrži devet masnih kiselina, palmitinska kiselina je sadržana u gorepomenutoj smeši u količini sadržanoj između 0.2% i 48% po masi, poželjno između 20% i 30% po masi, i poželjnije do oko 25% ukupne mase smeše.

[0067] U gorepomenutoj smeši, oleinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 38% po masi, poželjno između 10% i 16% po masi, i poželjnije do oko 14% ukupne mase smeše.

[0068] U gorepomenutoj smeši, stearinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 42% po masi, poželjno između 8% i 15% po masi, i poželjnije do oko 12% ukupne mase smeše.

[0069] U gorepomenutoj smeši, linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 40% po masi, poželjno između 15% i 25% po masi, i poželjnije do oko 20% ukupne mase smeše.

[0070] U gorepomenutoj smeši, alfa-linolenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 38%po masi, poželjno između 5% i 10% po masi, i poželjnije do oko 8% ukupne mase smeše.

1

[0071] U gorepomenutoj smeši, gama-linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 30% po masi, poželjno između 2% i 6% po masi, i poželjnije do oko 4% ukupne mase smeše.

[0072] U gorepomenutoj smeši, eikozapentaenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 25% po masi, poželjno između 5% i 10% po masi, i poželjnije do oko 7% ukupne mase smeše.

[0073] U gorepomenutoj smeši, dokozaheksaenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 25% po masi, poželjno između 5% i 10% po masi, i poželjnije do oko 8% ukupne mase smeše.

[0074] U gorepomenutoj smeši, azelainska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 40% po masi, poželjno između 1% i 3% po masi, i poželjnije do oko 2% ukupne mase smeše.

[0075] Prema objavi, kada smeša sadrži četiri masne kiseline, kao što su palmitinska kiselina, oleinska kiselina, stearinska kiselina, i linolna kiselina, one su prisutne u masenom odnosu od oko 1.6:1:1.28.0.12, redom.

[0076] Prema poželjnoj objavi, kada smeša sadrži pet masnih kiselina, kao što su palmitinska kiselina, oleinska kiselina, stearinska kiselina, linolna kiselina, i alfa-linolenska kiselina, one su prisutne u masenom odnosu od oko 1.9:1.35:0.5:0.75:0.5, redom.

[0077] Prema poželjnoj objavi kada smeša prema ovom pronalasku sadrži osam masnih kiselina, kao što su palmitinska kiselina, oleinska kiselina, stearinska kiselina, linolna kiselina, alfa-linolenska kiselina, gama-linolenska kiselina, eikozapentaenska kiselina, i dokozaheksaenska kiselina, one su prisutne u masenom odnosu od oko 2.4:0.96:0.96:1.44:0.96:0.16:0.64:0.48 redom.

[0078] Prema daljoj poželjnoj objavi, kada smeša prema ovom pronalasku sadrži devet masnih kiselina, kao što su palmitinska kiselina, oleinska kiselina, stearinska kiselina, linolna kiselina, alfa-linolenska kiselina, gama-linolenska kiselina, eikozapentaenska kiselina, dokozaheksaenska kiselina i azelainska kiselina, one su poželjno prisutne u masenom odnosu od oko 2.25:1.26:1.08:1.80:0.72:0.36:0.63:0.72:0.18 redom,.

[0079] Iznenađujuće, primećeno je da uspostavljanjem skupine gorepomenutih masnih kiselina, posebno od četiri, pet, osam, ili devet masnih kiselina prema ovom pronalasku, bilo je moguće da se uspostavi kontrola ćelija koje su uključene u inflamatorne procese, kao što su mast ćelije, makrofage, bazofili, i limfociti.

[0080] Ovaj sistem administracije masnih kiselina ima dve važne prednosti:

1) brži i reaktivniji odgovor na hiperstimulaciju indukovanu inflamatornim agensom: membranski lipidi u ćeliji se ne iščezavaju, time rezultujući temporalnu disperziju; 2) značajne uštede energije: ćelija ne mora da koristi energiju da obnovi lipide iz membrana i potom ih zameni.

[0081] Zaista, opaženo je da, obezbeđivanjem skupine masnih kiselina prema ovom pronalasku, dobija se poboljšana kontrola inflamatornog procesa i fiziološki uslovi i normalni uslovi mikrosredine koji su uključeni su vraćeni u kraćim vremenima, sve u vezi sa stanjem tehnike.

[0082] Dalja objava je farmaceutska, kozmetička, i/ili dijetetska kompozicija koja sadrži iznad pomenutu smešu i barem jedan fiziološki prihvatljiv ekscipijens.

[0083] Fiziološki prihvatljiv ekscipijens je bilo koji ekscipijens koji je poznat stručnjaku iz oblasti da je koristan u pripremi farmaceutskih i/ili kozmetičkih kompozicija.

[0084] Drugi ekscipijensi su obično klasifikovani u skladu sa funkcijom koju izvode u konačnoj kompoziciji. Poželjni pogodni ekscipijensi prema ovom pronalasku uključuju, na primer, razblaživače, apsorbense, glidante, vezivna sredstva, lubrikante, surfaktante, sredstva za raspadanje, konzervanse, antioksidanse, ili smeše istih.

[0085] Alternativno, ekscipijensi mogu biti klasifikovani prema funkcionalnoj grupi prisutnoj u njihovoj hemijskoj strukturi, kao što su šećeri, amidi, etri, alkoholi i slično.

[0086] Posebno poželjan ekscipijens stavljen na uvid javnosti je N-2-hidroksietil palmitamid.

[0087] Prema jednom tehničkom rešenju ovog pronalaska, gorepomenuta kompozicija sadrži smešu barem tri masne kiseline odabrane od sledećih: palmitinska kiselina, oleinska kiselina, stearinska kiselina, linolna kiselina, alfa-linolenska kiselina, gama-linolenska kiselina, eikozapentaenska kiselina (EPA), dokozaheksaenska kiselina (DHA), azelainska kiselina i miristinska kiselina, i N-2-hidroksietil palmitamid.

[0088] Prema jednom tehničkom rešenju ovog pronalaska, palmitinska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 5 % i 45 % po masi; oleinska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 2 % i 35% po masi; stearinska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 2 % i 35% po masi; linolna kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 1% i 40% po masi; alfa-linolenska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 1% i 25% po masi; gama-linolenska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 0.5% i 10% po masi; eikozapentaenska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 1% i 20% po masi; dokozaheksaenska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 1 % i 25% po masi; azelainska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 0.5% i 10% po masi; miristinska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 0.05% i 1% po masi; Gorepomenuti procenti su količine po masi izražene u odnosu na ukupnu masu kompozicije.

[0089] Prema objavi, navedena kompozicija sadrži smešu koja sadrži četiri masne kiseline i bar jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0090] Kada smeša sadrži četiri masne kiseline, palmitinska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 2% i 40% po masi, poželjno između 5% i 25% po masi, i poželjnije do oko 6% ukupne mase kompozicije.

[0091] U gorepomenutoj kompoziciji, oleinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 1% i 35% po masi, poželjno između 2% i 10% po masi, i poželjnije do oko 4% ukupne mase kompozicije.

[0092] U gorepomenutoj kompoziciji, stearinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.5% i 15% po masi, poželjno između 2% i 10% po masi, i poželjnije do oko 5% ukupne mase kompozicije.

[0093] U gorepomenutoj kompoziciji, linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.5% i 5% po masi, poželjno između 1% i 3% po masi, i poželjnije do oko 1% ukupne mase kompozicije.

[0094] Prema poželjnom tehničkom rešenju navedena kompozicija sadrži smešu od pet masnih kiselina, kao što su palmitinska kiselina, oleinska kiselina, stearinska kiselina, linolenska kiselina i alfa linolenska kiselina.

[0095] Kada smeša predmetnog pronalaska sadrži pet masnih kiselina, palmitinska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 1% i 20% po masi, poželjno između 3% i 10% po masi, i poželjnije do oko 6% ukupne mase kompozicije.

[0096] U gorepomenutoj kompoziciji, oleinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 1% i 15% po masi, poželjno između 2% i 8% po masi, i poželjnije do oko 4.5% ukupne mase kompozicije.

[0097] U gorepomenutoj kompoziciji, stearinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.5% i 7%, poželjno između 1% i 5% po masi, i poželjnije do oko 2% ukupne mase kompozicije.

[0098] U gorepomenutoj kompoziciji, linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.5% i 10% po masi, poželjno između 1% i 5% po masi, i poželjnije do oko 2.5% ukupne mase kompozicije.

1

[0099] U gorepomenutoj kompoziciji, alfa-linolenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.5% i 10% po masi, poželjno između 1% i 6% po masi, i poželjnije do oko 2% ukupne mase kompozicije.

[0100] Prema poželjnom tehničkom rešenju lovog pronalaska, navedena kompozicija sadrži smešu koja sadrži eight masne kiseline i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0101] Kada smeša predmetnog pronalaska sadrži osam masnih kiselina, palmitinska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 1% i 30% po masi, poželjno između 3% i 10% po masi, i poželjnije do oko 6% ukupne mase kompozicije.

[0102] U gorepomenutoj kompoziciji, oleinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 1% i 25% po masi, poželjno između 5% i 15% po masi, i poželjnije do oko 10% ukupne mase kompozicije.

[0103] U gorepomenutoj kompoziciji, stearinska kompozicija je sadržana u količini sadržanoj između 1% i 25% po masi, poželjno između 5% i 15% po masi, i poželjnije do oko 10% ukupne mase kompozicije.

[0104] U gorepomenutoj kompoziciji, linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 10% po masi, poželjno između 0.7% i 5% po masi, i poželjnije do oko 1% ukupne mase kompozicije.

[0105] U gorepomenutoj kompoziciji, alfa-linolenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 6% po masi, poželjno između 0.5% i 4% po masi, i poželjnije do oko 1% ukupne mase kompozicije.

[0106] U gorepomenutoj kompoziciji, gama-linolenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.04% i 3% po masi, poželjno između 0.2% i 1% po masi, i poželjnije do oko 0.5% ukupne mase kompozicije.

[0107] U gorepomenutoj kompoziciji, eikozapentaenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 1% i 15% po masi, poželjno između 2% i 6% po masi, i poželjnije do oko 3% ukupne mase kompozicije.

[0108] U gorepomenutoj kompoziciji, dokozaheksaenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.5% i 7% po masi, poželjno između 1% i 4% po masi, i poželjnije do oko 2% ukupne mase kompozicije.

[0109] U dalje poželjnom tehničkom rešenju ovog pronalaska, navedena kompozicija sadrži smešu koja sadrži devet masnih kiselina i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0110] Kada smeša predmetnog pronalaska sadrži devet masnih kiselina, palmitinska kiselina je sadržana u kompoziciji u količini sadržanoj između 1% i 30% po masi, poželjno između 3% i 10% po masi, i poželjnije do oko 7% ukupne mase kompozicije.

[0111] U gorepomenutoj kompoziciji, oleinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 1% i 25% po masi, poželjno između 5% i 15% po masi, i poželjnije do oko 10% ukupne mase kompozicije.

[0112] U gorepomenutoj kompoziciji, stearinska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 1% i 25% po masi, poželjno između 5% i 15% po masi, i poželjnije do oko 10% ukupne mase kompozicije.

[0113] U gorepomenutoj kompoziciji, linolna kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 6% po masi, poželjno između 0.5% i 3% po masi, i poželjnije do oko 1% ukupne mase kompozicije.

[0114] U gorepomenutoj kompoziciji, alfa-linolenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.2% i 6% po masi, poželjno između 0.5% i 4% po masi, i poželjnije do oko 1% ukupne mase kompozicije.

[0115] U gorepomenutoj kompoziciji, gama-linolenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.04% i 3% po masi, poželjno između 0.2% i 1% po masi, i poželjnije do oko 0.5% ukupne mase kompozicije.

[0116] U gorepomenutoj kompoziciji, eikozapentaenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 1% i 15% po masi, poželjno između 2% i 6% po masi, i poželjnije do oko 3% ukupne mase kompozicije.

[0117] U gorepomenutoj kompoziciji, dokozaheksaenska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.5% i 7% po masi, poželjno između 1% i 4% po masi, i poželjnije do oko 2% ukupne mase kompozicije.

[0118] U gorepomenutoj kompoziciji, azelainska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.05% i 2% po masi, poželjno između 0.2% i 1% po masi, i poželjnije do oko 0.5% ukupne mase kompozicije.

[0119] Kompozicija ovog pronalaska može biti formulisana u obliku pogodnom za oralnu, topikalnu, rektalnu, vaginalnu, oftalmičku, ili parenteralnu administraciju.

[0120] U poželjnom tehničkom rešenju ovog pronalaska navedeni oralni oblik može biti odabran od tableta, kapsula, granula, uljanih kapsula, rastvora, suspenzija, nosača, ili rastvora za raspršivanje, i poželjnije je odabran od kapsula, tableta ili rastvora.

[0121] Kapsula može biti meka želatinozna kapsula, tvrda kapsula, ili kapsula koja sadrži granule.

[0122] Prema dodatnom poželjnom tehničkom rešenju ovog projnalaska, navedeni topikalni oblik može biti odabran od kreme, masti, gela, rastvora, suspenzije, spreja, flastera, ili

1

liofiliziranog granulisanog praška, poželjnije je odabran od kreme, gela, spreja, masti i liofiliziranog granulisanog praška.

[0123] Prema dodatnom poželjnom tehničkom rešenju ovog pronalaska, navedeni oblik pogodan za vaginalnu administraciju je pesar, kateter, gel ili rastvor za endokavitarnu primenu. Prema dodatnom poželjnom tehničkom rešenju ovog pronalaska, navedeni oblik pogodan za rektalnu administraciju je supozitorija, klistir, ili rastvor za endokavitarnu primenu.

[0124] Prema dodatnom poželjnom tehničkom rešenju ovog pronalaska, navedeni oblik pogodan za oftalmičku administraciju su očne kapi, kupka, krema, ili mast.

[0125] Izraz "kupka" se shvata kao rastvor za ispiranje očiju.

[0126] Prema drugom poželjnom tehničkom rešenju ovog pronalaska, navedeni oblik pogodan za parenteralnu administraciju može biti bilo vodeni pufer rastvor ili uljana suspenzija, i poželjno navedeni parenteralni oblik je uljana suspenzija.

[0127] Prema dodatnom poželjnom tehničkom rešenju ovog pronalaska, gorepomenuta kompozicija je dermokozmetička kompozicija, farmaceutska supstanca, dodatak ishrani, ili lek.

[0128] Smeša masnih kiselina u predmetnog pronalaska je poželjno sadržana u gorepomenutim formulacijama u količini koja varira od 10% do 60% po masi, i poželjno od 15% do 45% ukupne mase formulacije .

[0129] Prema jednom opisu, kompozicija predmetnog pronalaska koja sadrži smešu od četiri masne kiseline je poželjno formulisana u topikalni oblik.

[0130] Prema jednom tehničkom rešenju ovog pronalaska kompozicija predmetnog pronalaska koja sadrži smešu pet masnih kiselina je poželjno formulisana u topikalni oblik ili oralni oblik.

[0131] Prema jednom tehničkom rešenju ovog pronalaska, kompozicija predmetnog pronalaska koja sadrži smešu osam masnih kiselina je poželjno formulisana u oralni oblik, i poželjnije u oblik tablete ili oblik suspenzije.

[0132] Navedena kompozicija koja sadrži smešu od osam masnih kiselina je poželjno formulisana u parenteralni oblik ili u rektalni oblik.

[0133] Prema dodatnom tehničkom rešenju ovog pronalaska, kompozicija pronalaska koja sadrži smešu devet masnih kiselina je formulisana u oralni oblik, poželjnije u oblik tablete ili oblik suspenzije, ili u topikalni oblik, i poželjnije u oblik kreme, oblik gela, ili oblik masti.

1

[0134] U gorepomenutom oralnom obliku koji sadrži navedenu smešu od devet masnih kiselina, azelainska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.04% i 0.5% po masi, poželjno između 0.08% i 0.4% po masi, i poželjnije do oko 0.2%.

[0135] U gorepomenutom topikalnom obliku koji sadrži navedenu smešu od devet masnih kiselina, azelainska kiselina je sadržana u količini sadržanoj između 0.05% i 2% po masi, poželjno između 0.2% i 1% po masi, i poželjnije do oko 0.5%.

[0136] Prema pronalasku kompozicija predmetnog pronalaska može biti administrirana ljudima, sa namerom da obuhvati i odrasle i "paedijatrijsku populaciju" (gde izraz "paedijatrijska populacija" se shvata kao deo populacije koja se kreće od rođenja do osamnaest godina starosti), i životinjama.

[0137] Dalji cilj predmetnog pronalaska je smeša koja sadrži najmanje pet masnih kiselina i/ili kompoziciju koja sadrži navedenu smešu, za primenu u lečenju inflamatornih patologija.

[0138] Gorepomenute inflamatorne patologije su akutnog ili hroničnog varijeteta i uključuju: dermatološke patologije, kao što su atopični dermatitis, dermazomiozitis, skleroderma, psorijaza, polimiozitis, pemfigus, pemfigoidna bulozna epidermoliza; oftalmičke patologije, kao što su Sjogrenov sindrom, simpatička oftalmija, uveitis, i uveo-retinitis; mukozne patologije, kao što su inflamacija gastrointestinalnih mukoznih membrana (Kronova bolest) i inflamacija oralne i genitalne mukoze; patologije zgloba i vezivnog tkiva, kao što su reumatoidni artritis, psorijatični artritis, artritis iz eritemskog lupusa, i diskoidni i sistemski eritemski lupus; hronične patološke inflamacije, kao što su hronični solarni dermatitis, astma i crevna i plućna fibroza, i hronični artritis, degenerativne patologije koje pogađaju periferni nervni sistem (PNS) i centralni nervni sistem (CNS), kao što su multipla skleroza, autoimune neurodegenerativne patologije, ne-autoimune neurodegenerativne patologije, inflamatorni procesi povezani sa CNS, kao što su Parkinsonova bolest, senilna demencija, bakterijski meningitis, HIV infekcija i traumatske povrede, i patologije PNS-a, kao što su radikulopatija izazvana inflamacijom; patologije centralnog i perifernog nervnog sistema gde inflamatorni procesi prate prvi ishemijski insult, kao što su neuropatije usled kompresije, kao i traumatske neuropatije, moždani udari i kranijalne traume; kardiološke bolesti koje nastaju od perfuzionog fenomena kao posledica ishemijskih povreda; inflamatorne patologije udružene sa fibrozom, kao što su alergijski konjuktivitis, gigantski papilarni konjuktivitis, alergije na hranu, abnormalna cikatrizacija, kao što su hipertrofični ožiljak, keloidi i okularni cikatricijalni pemfigoid; patologije u kojima renalna funkcija je izmenjena kao rezultat inflamacije bubrega. Što se tiče administracije životinjama kompozicije predmetnog pronalaska, lokalno i/ili sistemsko anti-inflamatorno dejstvo izvršeno od strane skupine

1

masnih kiselina je korisno u lečenju neurogene inflamacije (npr. kompresije kičmene moždine, nervnih lezija kod pasa), patologija zgloba i vezivnih tkiva kao što su laminitis kod konja (gde primena kortizonskih lekova nije moguća), artritis, respiratornih patologija, oftalmičkih inflamacija, keratokonjuktivitisa sika, i alergijskih inflamatornih manifestacija, uključujući alergije na hranu.

[0139] Kompozicija za primenu ovog pronalaska je poželjno administrirana svakodnevno, i ljudima i životinjama, u opsegu od jedne do četiri doze na dan.

[0140] Pomenute doze poželjno sadrže od 0.1 do 50 mg kompozicije/kg telesne mase pacijenta, i poželjnije od 0.5 do 20 mg/kg telesne mase pacijenta. Prema poželjnom tehničkom rešenju, navedena kompozicija se administrira tokom najmanje četiri nedelje.

EKSPERIMENTALNI DEO

PRIMERI

[0141] Sledeće smeše su pripremljene.

Primer 1: (samo kao referenca)

[0142]

• Eikozapentaenska kiselina (EPA) u rasponu od 0.5% do 15%

• Dokozaheksaenska kiselina (DHA) u rasponu od 0.5% do 15%

• Palmitinska kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

• Oleinska kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

• Stearinska kiselina u rasponu od 0.5% do 15%

• Gama-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 15%

• Alfa-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 15%

• Azelainska kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

• Linolna kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

Primer 2: (samo kao referenca)

[0143]

• Eikozapentaenska kiselina (EPA) u rasponu od 3% do 10%

• Dokozaheksaenska kiselina (DHA) u rasponu od 3% do 10%

1

• Palmitinska kiselina u rasponu od 10% do 35% • Oleinska kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

• Stearinska kiselina u rasponu od 0.5% do 9%

• Gama-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 10%

• Alfa-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 10%

• Azelainska kiselina u rasponu od 0.5% do 20%

• Linolna kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

Primer 3: (samo kao referenca)

[0144]

• Eikozapentaenska kiselina (EPA) u rasponu od 0.5% do 15% • Dokozaheksaenska kiselina (DHA) u rasponu od 0.5% do 15% • Palmitinska kiselina u rasponu od 1% do 35

• Oleinska kiselina u rasponu od 0.6% do 35%

• Stearinska kiselina u rasponu od 0.3% do 15%

• Gama-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 20%

• Alfa-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

• Azelainska kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

• Linolna kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

Primer 4: (samo kao referenca)

[0145]

• Eikozapentaenska kiselina (EPA) u rasponu od 2% do 12% • Dokozaheksaenska kiselina (DHA) u rasponu od 2% do 12% • Palmitinska kiselina u rasponu od 10% do 45%

• Oleinska kiselina u rasponu od 1% do 35%

• Stearinska kiselina u rasponu od 0.5% do 25%

• Gama-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 10%

• Alfa-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 30%

• Azelainska kiselina u rasponu od 0.5% do 20%

• Linolna kiselina u rasponu od 3% do 35%

1

Primer 5: (samo kao referenca)

[0146]

• Eikozapentaenska kiselina (EPA) u rasponu od 35% do 24% • Dokozaheksaenska kiselina (DHA) u rasponu od 3% do 24% • Palmitinska kiselina u rasponu od 10% do 40%

• Oleinska kiselina u rasponu od 15% do 35%

• Stearinska kiselina u rasponu od 0.5% do 40%

• Gama-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 25%

• Alfa-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 20%

• Azelainska kiselina u rasponu od 0.5% do 25%

• Linolna kiselina u rasponu od 0.5% do 35%

Primer 6: (samo kao referenca)

[0147]

• Eikozapentaenska kiselina (EPA) u rasponu od 1% do 20% • Dokozaheksaenska kiselina (DHA) u rasponu od 3% do 12% • Palmitinska kiselina u rasponu od 1% do 30%

• Oleinska kiselina u rasponu od 2% do 15%

• Stearinska kiselina u rasponu od 0.5% do 15%

• Gama-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 15%

• Alfa-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 20%

• Azelainska kiselina u rasponu od 0.5% do 10%

• Linolna kiselina u rasponu od 5% do 35%

Primer 7: (samo kao referenca)

[0148]

• Eikozapentaenska kiselina (EPA) u rasponu od 0.5% do 12% • Dokozaheksaenska kiselina (DHA) u rasponu od 0.5% do 12% • Palmitinska kiselina u rasponu od 0.5% do 45%

• Oleinska kiselina u rasponu od 10% do 35%

2

• Stearinska kiselina u rasponu od 0.5% do 10% • Gama-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 20% • Alfa-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 20%

• Azelainska kiselina u rasponu od 0.5% do 10%

• Linolna kiselina u rasponu od 0.5% do 15%

Primer 8: (samo kao referenca)

[0149]

• Eikozapentaenska kiselina (EPA) u rasponu od 1% do 12% • Dokozaheksaenska kiselina (DHA) u rasponu od 1% do 12% • Palmitinska kiselina u rasponu od 0.5% do 25%

• Oleinska kiselina u rasponu od 10% do 35%

• Stearinska kiselina u rasponu od 0.5% do 10%

• Gama-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 15% • Alfa-linolenska kiselina u rasponu od 0.5% do 15%

• Azelainska kiselina u rasponu od 0.5% do 10%

• Linolna kiselina u rasponu od 2% do 35%

Primer 9 (samo kao referenca)

[0150]

- Palmitinska kiselina 14% - Linolna kiselina 12% - Oleinska kiselina 15% - Stearinska kiselina 14% - Alfa-linolenska kiselina 15% - Gama-linolenska kiselina 0.5% - Azelainska kiselina 0.5% - Eikozapentaenska kiselina (EPA) 14% - Dokozaheksaenska kiselina (DHA) 15%

Primer 10

- Palmitinska kiselina 20%

- Linolna kiselina 10%

- Oleinska kiselina 15%

- Stearinska kiselina 7%

- Alfa-linolenska kiselina 10%

- N-2-hidroksietil palmitamid (PEA) 38%

IN VITRO PROCENA ANTIINFLAMATORNE AKTIVNOSTI

[0152] Antiinflamatorna aktivnost smeše koja sadrži devet masnih kiselina (videti Primer 9), identifikovane kao AS66 je procenjena je kroz dva eksperimentalna testa:

1. MTT test vitalnosti tako da identifikuje najveću necitotoksičnu dozu

2. Procenjivanje sposobnosti smeše da redukuje oslobađanje pro-inflamatornih medijatora (IL-6 i IL-8) humanom ćelijskom linijom makrofaga prethodno senzibilisanom sa LPS-om

Eksperimentalni dizajn

[0153] In vivo, inflamatorna reakcija je rezultat kompleksnog procesa koji je određen odgovorom različitih ćelijskih populacija u različitim oblastima ljudskog tela. Pojednostavljujući, možemo razlikovati sledeće faze: spoljna agresija (bakterijska ili druga) praćena ili ne stvarnom povredom tkiva, oslobađanje proinflamatornih medijatora, pozivanje kompetentnih ćelija, proizvodnja antitela, eliminacija antigena, aktivacija procesa popravljanja i zaceljivanja.

[0154] Monociti i makrofagi su presudni igrači i u prirodnom i u stečenom imunološkom odgovoru. Makrofagi postoje u gotovo svakom tkivu u telu, i pokazuju upečatljivu morfološku heterogenost u različitim tkivima. Monociti su krvlju-prenošeni prekursori makrofaga.

[0155] U slučaju infekcije, oštećenje tkiva ili druga povreda, veliki broj monocita se regrutuje iz krvotoka u mesto napada i diferencira se u odgovarajući fenotip makrofaga (videti Sl.2).

[0156] Makrofagi su takođe važni modulatori različitih imunoloških odgovora, putem sekrecije velikog niza citokina i hemokina. Među medijatorima proizvedenim pomoću monocita/makrofaga, u ovoj studiji su izabrani jedan citokin (Interleukin 6) i jedan hemokin (Interleukin 8).

[0157] Interleukin 8 (IL-8) je izabran zbog svoje ključne uloge u primarnom inflamatornom odgovoru. Proizvodi se konstitutivno od strane različitih ćelijskih populacija (monociti/makrofagi, T limfociti, endotelijalne ćelije, neutrofili, keratinociti, fibroblasti, i hondrociti), i ovo mu daje važnu ulogu u operacijama "nadzora" i "hitnih slučajeva" u tkivima.

[0158] Interleukin 6 (IL-6) je izabran jer je tipičan za kasnu fazu inflamatorne reakcije.

[0159] IL-6 je glikoprotein od 26 kDa koji se konstitutivno ne proizvodi, on se sintetiše kao odgovor na druge proinflamatorne medijatore naime „prevremene“ kao što su IL-8, IL-1α i TNF, koji se takođe nazivaju primarni citokini inflamatornog odgovora.

[0160] IL-6 ima ulogu i u urođenoj (nespecifičnoj) i u humoralnoj (specifičnoj) imunološkoj reakciji. U urođenom imunitetu, stimuliše proizvodnju proteina akutne faze od strane ćelija jetre, koji su odgovorni za pojavu simptoma sistemske alergijske reakcije, i stimuliše sazrevanje neutrofila iz nesazrelih prekursora u koštanoj srži. U specifičnom humoralnom odgovoru, on stimuliše proliferaciju klonova B limfocita koji proizvode antitela specifična za alergen koji je pokrenuo reakciju.

Ćelijski model

[0161] S obzirom na centralnu ulogu monocita/makrofaga u ćelijski posredovanom imunološkom odgovoru i njihovu ulogu u modulaciji inflamatornog odgovora u ovoj studiji odabrana je humana ćelijska linija monocita nazvana THP-1 (Humana Akutna monocitna leukemija - Human Acute monocytic leukemia). Ove ćelije imaju Fc i C3b receptore, fagocitne su i rastu u suspenziji koja ne prijanjaju na tikvicu za kulturu.

[0162] Ćelije su kupljene od Istituto Zooprofilattico della Lombardia ed Emilia Romagna (lokacija Breša - Italija) i sertifikovane su da su bez bakterijskih i mikoplazmatskih kontaminacija.

Materijali i metode

2

[0163] Inflamatorna realcija u THP-1 ćelijama je izazvana izlaganjem istih rastvoru lipopolisaharida (LPS), poznatom inflamatornom agensu ekstrahovanom iz E. coli Grammikroorganizma, u koncentraciji od 1 ug/ml tokom dva sata.

o Medijum za kulturu: RPMI 1640, sa dodatkom glutamina 2mM, 10% upotpunjenog fetalnog telećeg seruma, neesencijalnih aminokiselina, 2-merkaptoetanola (0.05mM) i mešavine antibiotika Penicilina 2000 UI/ml, Streptomicina 1000 UI/ml, Fungizona 2ug/ml (Euroclone).

∘ MTT polazni rastvor: 5 mg/ml u vodi. (Sigma Aldrich)

∘ MTT radni rastvor: 1mg/ml u RPMI 1640

∘ Pufer za oblaganje: fosfatni pufer sa dodatkom soli (PBS - Phosphate Buffer Saline) ∘ Pufer za ispitivanje: PBS sa albuminom iz goveđeg seruma (BSA – Bovine Serum Albumin) 4%

∘ Pufer za ispiranje: 50 mM Tris, 0.2% Tween 20

∘ TMB rastvor supstrata

∘ Stop rastvor: 0.18 M H2SO4

1. Identifikacija najveće necitotoksične doze

[0164] Generalno, prvi izbor necitotoksične doze je doza kod koje rezidualni % vijabilnosti ćelija se ne razlikuje više od 15% vijabilnosti negativne kontrole.

Dan 1: Zasejavanje ćelija

[0165] Posle provere vitalnosti ćelija u kulturi, iste su sakupljene i centrifugirane (10 minuta pri 900 o/min), pelet je zatim resuspendovan u odgovarajućoj zapremini RPMI 1640 i ćelije su brojane elektronskim brojačem ćelija (Scepter - Millipore). Zatim, ćelijska suspenzija je pripremljena sa gustinom od 400.000 ćelija / ml. Ova suspenzija je distribuirana u ploče sa 24 mikrobunarčića sa 2 : 1 ml suspenzije po bunarčiću (400.000 ćelija / bunarčiću). Zatim ploče su stavljene u inkubator na 37 °C i pri atmosferi obogaćenoj sa 5% CO2do sledećeg dana (20-22 sata).

Dan 2:

Priprema uzorka:

[0166] 1 gr uzorka (smeša Primera 9) se izmeri i ponovo suspenduje u zapremini etanola dovoljnoj da se dobije finalna koncentracija od 5 mg / ml. Iz ovog polaznog rastvora postavljeno je niz razblaženja (2x) od 2 mg / ml do 0.312 mg / ml u RPMI medijumu sa 5% FBS-a.

[0167] Inokulacija uzorka: nakon provere zdravstvenog stanja i gustine ćelija zasejanih na dan 1, iz svakog bunarića je sakupljena zapremina od 0.5 ml medijuma za kulturu koji je kasnije zamenjen istom zapreminom 2x razblaženja uzorka koja su prethodno pripremljena. 6 različitih doza uzorka je inokulirano: od 1 mg/ml i 5 dodatnih dvostrukih razblaženja je pripremljeno iz matičnog rastvora u medijum sa 5% FBS. Ploče su zatim smeštene u inkubator na 37 °C i pri atmosferi obogaćenoj sa 5% CO2tokom 20-22 sata.

[0168] Negativna kontrola se sastoji od ćelija izloženih samo medijumu za kulturu koji predstavlja 100% vitalnosti.

Dan 3:

[0169] nakon provere zdravstvenog stanja i gustine ćelija izloženih uzorku, MTT test vitalnosti je izveden

MTT test vitalnosti

[0170] MTT je tetrazolijumova so koja je, u svom oksidovanom obliku, rastvorljiva i žute boje. Konvertuje se u svoj redukovani oblik formazan so pomoću citoplazmatskih i mitohondrijalnih dehidrogeneza (sukcinat dehidrogenaza), u ovom obliku so je nerastvorljiva i taloži se da formira purpurno plave kristale. Dodavanje izopropanola rastvara kristale, formirajući ljubičasti rastvor čija je jačina, procenjena spektrofotometarskim čitanjem na 540 nm±30, proporcionalna količini živih ćelija prisutnih u trenutku izvođenja testa.

[0171] Inokulum je uklonjen i zamenjen istom zapreminom MTT radnog rastvora.

[0172] Ploče su smeštene u inkubator na tri sata. Na kraju perioda inkubacije so je bila uklonjena i zamenjena sa istom zapreminom izopropanola. Zatim, nakon 5 minuta mućkanja, optička gustina je očitana na 570 nm (±30nm) pomoću spektrofotometra (Victor X5-Perkin-Elmer)

[0173] Iz analize dobijenih rezultata 0.1, 0.06 i 0.03 mg/ml koncentracije uzorka su odabrane za antiinflamatorni test.

2. Procena antiinflamatorne aktivnosti

2

Dan 1: Zasejavanje ćelija

[0174] Posle provere vitalnosti ćelija u kulturi, iste su sakupljene i centrifugirane (10 minuta pri 900 o/min), pelet je zatim resuspendovan u odgovarajućoj zapremini RPMI 1640 i ćelije su brojane elektronskim brojačem ćelija (Scepter - Millipore). Zatim, ćelijska suspenzija je pripremljena sa gustinom od 400.000 ćelija / ml. Ova suspenzija je distribuirana u ploče Petrijeve šolje: 3 ml ćelijske suspenzije/ml (1.200.000 ćelija po tanjiriću). Zatim su ploče smeštene u inkubator na 37 °C i pri atmosferi obogaćenoj sa 5% CO2do sledećeg dana (20-22 sata)

Dan 2:

Pripremanje uzorka:

[0175] 1 gr praha (smeša Primera 9) se izmeri i ponovo suspenduje u zapremini etanola dovoljnoj da se dobije finalna koncentracija od 5 mg / ml. Iz ovog polaznog rastvora postavljeno je tri razblaženja (2x): 0.2, 0.12 i 0.06 mg / ml u RPMI medijum sa 5% FBS-a.

Kontrola kvaliteta (QC - Quality Control):

[0176] QC je predstavljena rastvorom lokoidona 0.1% pri 1 mg/ml, poznatim antiinflamatornim proizvodom koji sadrži kortizol. Rastvor je pripremljen u RPMI medijumu 1640 sa 5% FBS-a.

Pozitivna kontrola

[0177] Pozitivna kontrola je predstavljena ćelijama izloženim rastvoru LPS 1µg/ml

Indukcija inflamatorne reakcije:

[0178] nakon što je kultura prenoćila šolje su uklonjene i otprilike polovina medijuma za kulturu je zamenjena istom zapreminom rastvora LPS-a 2 µg/ml (finalna koncentracija 1 µg/ml). Izloženost LPS-u je nastavljena tokom dva sata.

Inokulacija uzorka:

[0179] Na kraju vremena inkubacije sa LPS-om, nakon provere zdravstvenog stanja ćelija, rastvor LPS-a je zamenjen sa istom zapreminom različitih doza uzorka koje su prethodno

2

pripremljene. Ploče su zatim smeštene u inkubator na 37 °C i pri atmosferi obogaćenoj sa 5% CO2tokom 20-22 sata.

Dan 3

[0180] nakon provere zdravstvenog stanja tretiranih ćelija, ćelijska suspenzija je sakupljena u epruvetama od 1.5ml i centrifugirana (1000g tokom 10 minuta). Zatim je ELISA test izveden kako bi se procenila IL-6 i IL-8 koncentracija u medijumu za kulturu.

[0181] Konačno, da bi se isključili lažni pozitivni efekti, tj. da bi se izbeglo da se kao antiinflamatorni efekat klasifikuje nedostatak živih i vitalnih ćelija, nakon centrifugiranja, ćelije su podvrgnute testu vijabilnosti ćelija MTT.

Rezultati

[0182] Procenat preživljavanja ćelija

% Vitalnosti = [(ODuzorak/ ODNeg.kontrola) x100]

% Inhibicije Vitalnosti = (100 - % Vitalnosti)

O.D.: optička gustina

O.D.uzorak: optička gustina dobijena iz ćelija izloženih uzorku

O.D.NegativnaKontrola: optička gustina dobijena iz ćelija izloženih samo medijumu za kulturu (100% Vitalnosti)

[0183] Procena nivoa IL-6 i IL-8 izlučenih u medijumu za kulturu

Antiinflamatorna efikasnost

[0184]

IL-8 % Inhibicije = (100 - (pg/ml IL-8uzorak/pg/ml IL-8poz kontrola) * 100) ;;pg/ml IL-8uzorak: pg/ml od IL-8 izlučenog od strane ćelija izloženih rastvoru LPS-a a zatim različitim razblaženjima uzorka ;;;2 ;pg/ml IL-8poz konrola: pg/ml od IL-8 izlučenog od strane ćelija izloženih samo rastvoru LPS-a. ;;IL-6 % Inhibicije = (100 – (pg/ml IL-6uzorak/pg/ml IL-6poz kontrola) * 100)

pg/ml IL-6uzorak: pg/ml IL-6 izlučenog od strane ćelija izloženih rastvoru LPS-a a zatim različitim razblaženjima uzorka

pg/ml IL-6poz.kontrola: pg/ml IL-8 izlučenog od strane ćelija izloženih samo rastvoru LPS-a. Kriterijum prihvatanja testa

[0185] Test ispunjava kriterijum prihvatanja metode ako jednačina linije regresije standardne krive ima koeficijent određivanja (R2) ≥ 0.8 (između 0.8 i 1).

[0186] Koeficijent varijacije neobrađenih podataka mora biti <20%

[0187] p vrednost (T test): <0.05

a) IC50

IC50= 0.8 mg/ml (videti Sliku 3)

Tabela 1

IC50odgovara dozi uzoraka koja ubija 50% ćelija u periodu inkubacije.

b) IL-8

Tabela 2

2

Standardna kriva za IL-8 i procenat inhibicije za IL-8 prikazani su na Slici 4.

Tabela 3

c) IL-6

Tabela 4

2

Standardna kriva za IL-6 i procenat inhibicije za IL-6 prikazani su na Slici 5.

Tabela 5

[0188] Kao što se može razumeti, ni jedna od testiranih doza nije pokazala citotoksično delovanje koje bi moglo narušiti ishod procene antiinflamatorne aktivnosti testiranog uzorka AS66(smeša Primera 9).

[0189] Sve analizirane doze AS66 su pokazale da mogu da inhibiraju oslobađanje oba analizirana citokina.

[0190] Izvedeni testovi su identifikovali maksimalnu efikasnu dozu jednaku 0,03 mg / ml: pri ovoj koncentraciji, antiinflamatorna aktivnost od AS66 određuje inhibiciju oslobađanja IL-6 i IL-8 jednaku 51 % i 66.7 % redom.

[0191] Drugim rečima, manje koncentracije smeše prema predmetnom pronalasku dovode do veće antiinflamatorne aktivnosti, u odsustvu citotoksičnih efekata.

[0192] Ista dva eksperimentalna testa su izvedena takođe na kompoziciji koja sadrži smešu pet masnih kiselina i N-2-hidroksietil palmitamid (PEA) (videti Primer 10), identifikovanu kao LC88.

[0193] Kao u prethodnom testu, IC50je identifikovana i iznosi 0.38 mg / ml (videti Sliku 6).

[0194] Podaci dobijeni u vezi sa procentom inhibicije za IL-6 prikazani su u tabeli ispod i na Slici 7.

Tabela 6

[0195] Kao što se može lako shvatiti iz gore navedenih podataka, ni jedna od doza nije pokazala citotoksično delovanje koje bi moglo narušiti ishod procene antiinflamatorne aktivnosti testiranog uzorka.

[0196] Sve LC88 doze su pokazale da mogu da inhibiraju oslobađanje IL-6 sa značajnim efektom doza/odgovor.

IN VIVO TESTIRANJE

1. In vivo testiranje na životinjama

[0197] Nekoliko studija je obavljeno na životinjama kako bi se potvrdila efikasnost i sigurnost smeše predmetnog pronalaska (videti Primer 9), posebno za kontrolu simptomatologije u spoljnom uhu kućnih ljubimaca (mačke, psi).

[0198] Od aprila 2013. do oktobra 2013. godine sudelovalo je 33 tipičnih i mačaka i pasa koji pripadaju različitim rasama, sa mnogo različitih patologija u spoljnom slušnom kanalu. Posebno 23 psa i 10 mačaka je bilo posmatrano..

[0199] Što se tiče pasa: 5 mastifa, 8 lovačkih pasa, 10 terijera.

[0200] Što se tiče mačaka posmatrano je 10 mačaka, od kojih 8 evropske rase i 2 sijamske rase, koje žive zajedno u dve kolonije.

1

[0201] Svi psi su podeljeni na osnovu etiopatogeneze/patologije i pripadnosti rasi i klasifikaciji FCI (International Cynologic Federation - Međunarodne kinološke federacije).

Studija 1: klinička studija o psima koji pripadaju klasi 2: Mastif više legala koje pate od Malassezia (Pityrosporum)

[0202] 5 pasa Mastif, starih između 8 meseci i 5 godina, tri mužjaka i dve ženke

[0203] Pri prvoj poseti spoljni slušni kanal je bio edematozni i eritemski u oba uva, sa prisustvom materijala ušnog voska i lošeg mirisa. Citologija uva otkriva prisustvo Malassezia u veoma velikom broju za svaki uzorak. Terapija omogućava primenu veterinarskog dezinficijensa za uvo na bazi hloreksidina koji se administrira dva puta dnevno, ujutru i uveče, tokom 15 dana. Pri drugoj poseti, tj. deset dana posle, dodali smo administriranje kapi za uši na bazi masnih kiselina jer su kvasci koji prekomerno rastu bili kontrolisani, ali slušni kanal je još bio eritematozan sa upornim simptomima kod životinje. Nakon administriranja kapi za uši na bazi smeše iz Primera 9, sledeća kontrola posle 4 dana pokazala je da se spoljni slušni kanal normalizuje bez eritema i bez ikakvih simptoma prikazanih kod životinje.

[0204] Zaključci: u normalnoj praksi, najmanje 40% pasa bi imalo pogoršanje kvasca (Pityrosporum Ovale ili Malassezia), u ostalih 40% bi za normalizaciju tkiva trebalo najmanje 15/30 dana, u preostalih 20% izlečenje i normalizacija tkiva bi se desili u periodu od 30/45 dana. Kapi za uši na bazi smeše iz Primera 9 su omogućile potpunu remisiju inflamacije i izlečenje tokom perioda od samo 3/ 4 dana u svim primerima koji su tretirani. Veoma je važno naglasiti kontrolu inflamacije u tkivima, jer se ovim pristupom izbegavaju podsticaji za češanje izbegavajući na taj način pogoršanje patologije i omogućavajući veoma brzo izlečenje.

Studija 2: klinički slučajevi kod pasa koji pripadaju klasi 7 (lovački psi): etiopatogeneza stranog tela:

[0205] Razmatrano je 8 pasa, 5 setera, 3 pointera, starih između 2 i 5 godina, 5 mužjaka i 3 ženke, dovedenih u veterinarsku kliniku zbog problema sa jednim uvom.

[0206] U spoljnom slušnom kanalu bilo je istaknuto prisustvo stranog tela. Nakon uklanjanja navedenog stranog tela i utvrđivanja integriteta bubne opne, nakon čišćenja slušnog kanala, administriran je proizvod za uši na bazi smeše iz Primera 9 tokom 5 dana dva puta dnevno

2

ujutru i uveče u zahvaćeno uvo. Posle 5 dana lečenja kontrolna poseta je pokazala potpunu normalizaciju tkiva i nestanak eritema.

[0207] Zaključci: u normalnoj praksi 30% životinja bi razvilo prekomernu infekciju i bilo bi lečeno antibioticima, 40% bi imalo upornu inflamaciju tokom najmanje 20/30 dana nakon uklanjanja stranog tela i zarastanja u vremenu između 30 do 40 dana, kod ostalih 30% životinja približna normalizacija u 20 dana. Sa primenom kapi za uši na bazi masnih kiselina u posthirurškoj fazi (uklanjanje stranog tela), inflamacija je kontrolisana omogućavajući potpunu normalizaciju tkiva u 4/5 dana izbegavajući početak prevelike infekcije.

Studija 3: klinički slučajevi kod pasa koji pripadaju klasi 3, terijer, etiopatogeneza atopičnog dermatitisa, alergija i hormonalnih promena.

[0208] 10 pasa, 5 zapadnoškotskih belih terijera, 3 Džek Raselovog terijera, 2 jorkširska terijer, je posmatrano, starosti između 1 i 10 godina, 7 ženki i 3 mužjaka.

[0209] Sve životinje su bile pogođene alergijskim dermatitisom, atopičnim dermatitisom sa simptomatskim otitisom. Neki psi (5) tokom posete pokazali su prisustvo eksudata sa kožnim ljuskama u spoljnoj aurikuli. Administrirana im je smeša iz Primera 9 kao jedinstveno terapijsko sredstvo. Rezultati su bili zapanjujući; u samo 3 dana situacija se značajno poboljšala sve dok nije imala skoro normalnu kožu, što je dozvolilo mogućnost da se izvede dubinski pregled sa otoskopom.

[0210] Zaključci: otitis usled alergijskog dermatitisa je prilično čest kod 15% populacije pasa. Jedinstvena primena smeše predmetnog pronalaska je omogućila rešavanje patologije, sa normalizacijom tkiva u veoma kratkom vremenu samo 3/4 dana.

Studija 4: klinički slučajevi kod evropskih i sijamskih mačaka: etiopatogeneza ušne infekcije parazitima

[0211] 10 mačaka, 8 evropskih i 2 sijamske, 7 ženki i 3 mužjaka kastriranih, starih između 6 meseci i 5 godina, donetih u posetu zbog otitisa koji je pokazao parazitsku prirodu. Sve mačke su pokazale obilan materijal u oba ušna kanala sa prisustvom grinja i jakog svraba a kod 3 su se razvili oto hematomi. Terapiji sa Salamectina spot-on, dodat je proizvod na bazi masne kiseline za normalizaciju tkiva koja je odredila optimalno rešavanje u samo 2/3 dana.

[0212] Zaključci: kod 70% životinja u istim patološkim stanjima edem i svrab bi bili uporni tokom više dana do 20/30 dana, određujući na ovaj način dalje oštećenje tkiva koje je već upaljeno. Administracija smeše prema Primeru 9 omogućila je normalizaciju tkiva u vrlo kratkom vremenu, normalizujući i eritematozni i inflamatorni proces, i eliminišući osećaj svraba.

Zaključak studija:

[0213] Primetili smo vrlo brzo rešavanje patologije do nestanka simptomatologije u vrlo kratkom vremenu. Smeša predmetnog pronalazak se prema tome smatra validnim terapijskim instrumentom za kontrolu i napredovanje inflamatornih procesa raznovrsnih etiologija patologija koje utiču na spoljno uvo kućnih ljubimaca.

[0214] Ovi rezultati su potvrđeni daljom kliničkom stufijom perioftalmičke kreme na osnovu smeše iz Primera 9 za lečenje kućnih ljubimaca sa perioftalmičkim patologijama, svi primeri koji su učestvovali u studiji i srodne patologije prikazani su u tabeli ispod.

Tabela 7

4

[0215] Sve mačke i psi primili su tretman oftalmičkom kremom na osnovu smeše predmetnog pronalaska, simptomatološki status je rešen u prosečnom vremenu od 5 dana (od 3 do 9 dana) sa prosečnom primenom dva puta dnevno.

[0216] Perioftalmička krema bazirana na 9 masnih kiselina, pokazala je da je efikasna u kontroli i progresiji simptomatologije povezane sa inflamacijom raznovrsne prirode kod kapaka mačaka i pasa.

2. In vivo testiranje na ljudima

[0217] Sledeći podaci odnose se na uporednu studiju GutLife i EvaLife vaginalne kreme, pri čemu obe sadrže smešu predmetnog pronalaska i PEA, za administriranje pacijentima koji primaju hemo-zračenje za SCC anusa/analnog kanala. Ova studija je sprovedena u Onkološkom centru u Sautemptonu (Southampton oncology centre).

[0218] Donedavno je postojala ograničena količina proizvoda koji su dostupni ovoj grupi pacijenata za primenu zbog bilo koje kožne reakcije koja se razvija tokom radioterapije.

[0219] GutLife i EvaLife (pH uravnotežen za žene) su kreme koje sadrže smešu predmetnog pronalaska (videti Primer 10) i koje se mogu koristiti za lečenje promena na koži/sluzokoži (svrab, peckanje, crvenilo, otok i osetljivost) u analnoj i perianalnoj oblasti kod pacijenata koji su podvrgnuti zračenju ili hemoterapiji.

[0220] GutLife je analna i perianalna krema koju mogu da koriste i muški i ženski pacijenti. EvaLife je specijalno za ženske pacijente da se koristi oko vagine i vulve, pH balansirana je da bude korisnija za ženske pacijente.

Studija

[0221] Predlaže se da ispitamo GutLife i EvaLife da bi se procenila njenu korist kod pacijenta i da li smanjuje prijem u bolnicu za ovu grupu pacijenata. Studija koristi RTOG skalu za procenu kože kao što je savetovano od strane Društva radiografa i koristi se u Onkološkom centru u Sautemptonu. Kliničar i/ili kolorektalni radiograf procenjuje i snima to nedeljno. RTOG i rezultati bola su korišćeni za četiri pacijenta (dva muška i dva ženska) kao kontrolna grupa u poređenju sa drugom grupom koja je koristila GutLife i EvaLife proizvode. Procene su vršene u istom nedeljnom pregledu klinički svake nedelje za vreme toka lečenja pacijenta. Rezultati se mogu sumirati i sakupiti u tabeli

Propisivanje doze

[0222]

Faza I: 30.6 Gy do MPD (ICRU referentna tačka) u 17 frakcija

Faza II: 19.8 Gy do 100% za konformni plan (ICRU referentna tačka) u 11 dnevnih frakcija. Maksimalna doza 107%, minimalna 95% unutar PTV-a (Planning Target Volume - Planirana ciljna zapremina).

[0223] OR: 19.8 Gy do MPD u 11 dnevnih frakcija ako su paralelna suprotna polja

[0224] Konkurentna hemoterapija

[0225] Pacijenti su primili istovremenu hemoterapiju preko PICC (peripherally inserted central catheter - periferno ubačeni centralni kateter) linije kao ambulantni pacijenti.

[0226] Mitomicin C 12mg/m<2>IV bolus Dan 1 (maksimalno 20mg) 5-Fluorouracil 1000mg/m<2>/dan dani neprekidne infuzije: 1-4 (nedelja 1) i dan 29-32 (nedelja 5).

[0227] Hemoterapija je isporučena pre primanja prve frakcije radioterapije. RTOG alat za procenu kože je korišćen kao što je savetovalo Društvo radiografa kako bi se procenila kožna reakcija (videti tabelu 8)

Tabela 8

[0228] Pacijenti su podvrgnuti radikalnom lečenju radioterapijom za SCC anusa/analnog kanala sa konkurentnom hemoterapijom od aprila 2012. do aprila 2013. u Onkološkom centru u Sautemptonu. 28 ženskih pacijenata i 11 muških pacijenata je lečeno u ovom periodu.

[0229] Iz podataka prikupljenih tokom proteklih 12 meseci bilo je 39 pacijenata lečenih tokom ovog perioda od kojih je bilo 6 potvrđenih prijema na odeljenje zbog neželjenih kožnih reakcija pripisanih radioterapiji, iz ove grupe 4 su bile ženski pacijenti i 2 muškarca.

Tabela 9: Ishodi kod pacijenata sa analnim kancerom (kontrolna grupa)

Tabela 10: Ishodi kod pacijenata sa analnim kancerom (grupa za ispitivanje)

Rezime

[0230] Zbog ograničene dostupnosti GutLife-a i EvaLife-a, proizvodi bi se mogli koristiti samo za četiri pacijenta. Iako je broj pacijenata ograničen još uvek postoje validna zapažanja i indikacije iz ove studije.

[0231] Maksimalni RTOG rezultat za sve pacijente u kontrolnoj grupi bio je 3 u poređenju sa dva pacijenta koji su bodovani 3 (1 muški, 1 ženski) korišćenjem GutLife-a i EvaLife-a takođe najviši RTOG rezultat za pacijente koji su koristili GutLife/EvaLife javlja se kasnije tokom lečenja u poređenju sa kontrolnom grupom. Ovo bi sugerisalo da GutLife i EvaLife deluju preventivno.

[0232] Izgleda da postoji izrazit kontrast između maksimalnih rezultata bola kontrolne grupe i GutLife/EvaLife grupe. Najviši rezultat bola zabeležen za kontrolnu grupu je bio 8 (zabeležen kod dva pacijenta) sa najmanjim rezultatom 6 (zabeležen kod 1 pacijenta) u poređenju sa visokim rezultatom 7 u studijskoj grupi (zabeležen kod 1 pacijenta), najmanji rezultat bola zabeležen u ispitivanoj grupi je bio 4.

[0233] Jedan pacijent je primljen u bolnicu iz kontrolne grupe zbog kožne reakcije koja se razvila iz lečenja. Jedan pacijent je primljen u bolnicu iz studijske grupe, ali to nije bilo usled kožne reakcije.

[0234] Iz ove ograničene studije pacijenti koji su koristili GutLife i EvaLife kremu su upravljali kožnom reakcijom izazvanom radioterapijom bolje nego oni u kontrolnoj grupi, izveštavajući o prosečno nižem rezultatu bola, nižem maksimalnom RTOG rezultatu kao i odlaganju početka kožne reakcija do poslednje dve nedelje lečenja. Na osnovu ovih povoljnih rezultata konsultanti za radioterapiju za analni kancer bi podržali veće multicentrično ispitivanje i/ili uključili GutLife i EvaLife kremu da se koristi za rutinsku negu kože pacijenata sa analnim kancerom koji su podvrgnuti radioterapiji u Onkološkom centru u Sautemptonu.

Claims (19)

Patentni zahtevi

1. Farmaceutska, kozmetička i/ili dijetetska kompozicija koja sadrži smešu od najmanje pet masnih kiselina, odabranih od palmitinske kiseline, oleinske kiseline, stearinske kiseline, linolne kiseline, alfa-linolenske kiseline, gama-linolenske kiseline, eikozapentaenske kiseline (EPA), dokozaheksaenske kiseline (DHA), azelainske kiseline i miristinske kiseline i fiziološki prihvatljiv ekscipijens N-2 hidroksietil palmitamid.

2. Farmaceutska, kozmetička i/ili dijetetska kompozicija prema patentnom zahtevu 1, koja sadrži smešu naznačena time da ona sadrži pet masnih kiselina, kao što su palmitinska kiselina, oleinska kiselina, stearinska kiselina, linolna kiselina i alfa-linolenska kiselina.

3. Farmaceutska, kozmetička i/ili dijetetska kompozicija prema patentnom zahtevu 1, koja sadrži smešu naznačena time da ona sadrži osam masnih kiselina, kao što su palmitinska kiselina, oleinska kiselina, stearinska kiselina, linolna kiselina, alfa-linolenska kiselina, gamalinolenska kiselina, eikozapentaenska kiselina i dokozaheksaenska kiselina.

4. Farmaceutska, kozmetička i/ili dijetetska kompozicija prema patentnom zahtevu 1, koja sadrži smešu naznačena time da ona sadrži devet masnih kiselina, kao što su palmitinska kiselina, oleinska kiselina, stearinska kiselina, linolna kiselina, alfa-linolenska kiselina, gamalinolenska kiselina, eikozapentaenska kiselina, dokozaheksaenska kiselina i azelainska kiselina.

5. Farmaceutska, kozmetička i/ili dijetetska kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time da palmitinska kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po masi sadržanoj između 0.2% i 48%; oleinska kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po masi sadržanoj između 0.2% i 38%; stearinska kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po masi sadržanoj između 0.2% i 42%; linolna kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po masi sadržanoj između 0.2% i 40%; alfa linolenska kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po masi sadržanoj između 0.2% i 38%; gama linolenska kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po masi sadržanoj između 0.2% i 30%; eikozapentaenska kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po masi sadržanoj između 0.2% i 25%; dokozaheksaenska kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po masi sadržanoj između 0.2% i 25%; azelainska kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po

4

masi sadržanoj između 0.2% i 40%, miristinska kiselina je sadržana u navedenoj smeši u količini po masi sadržanoj između 0.005% i 0.01%, u odnosu na ukupnu masu smeše.

6. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time da palmitinska kiselina je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 5% i 45%; oleinska kiselina je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 2% i 35%; stearinska kiselina je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 2% i 35%; linolna kiselina je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 1% i 40%; alfa linolenska kiselina je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 1% i 25%; gama linolenska je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 0.5% i 10%; eikozapentaenska kiselina je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 1% i 20%; dokozaheksaenska kiselina je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 1% i 25%, azelainska kiselina je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 0.5% i 10%, miristinska kiselina je sadržana u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 0.05% i 1%, u odnosu na ukupnu masu kompozicije.

7. Kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, naznačena time da je ona oralni, topikalni, rektalni, vaginalni, oftalmički ili parenteralni oblik.

8. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time da navedeni oralni oblik je odabran od tablete, kapsule, granule, uljane perle, rastvora, suspenzije, nosača i aerosola, poželjno navedeni oralni oblik je tableta, kapsula ili rastvor.

9. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time da navedeni topikalni oblik je odabran od kreme, masti, gela, rastvora, suspenzije, spreja, flastera i granuliranog liofiliziranog praška, poželjno navedeni topikalni oblik je krem, gel, sprej, mast ili granulirani liofilizirani prašak.

10. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time da navedeni parenteralni oblik je odabran od vodenog rastvora pufera i uljane suspenzije, poželjno navedeni parenteralni oblik je uljana suspenzija.

11. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time da navedeni rektalni oblik je supozitorija, enema ili rastvor za endokavitarnu primenu.

12. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time da navedeni vaginalni oblik je ovula, kanila, gel ili rastvor za endokavitarnu primenu.

13. Kompozicija prema patentnom zahtevu 7, naznačena time da navedeni oftalmički oblik su očne kapi, sredstvo za ispiranje oka, krem ili mast.

14. Kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-13, naznačena time da smeša prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5 je prisutna u navedenoj kompoziciji u količini po masi sadržanoj između 10% i 60%, poželjno između 15% i 45% u odnosu na ukupnu masu kompozicije.

15. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time da je dermokozmetička kompozicija, medikament, dodatak ishrani ili medicinsko sredstvo.

16. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15, za primenu u lečenju inflamatornih patologija, poželjno navedene inflamatorne patoligije su u akutnoj ili hroničnoj fazi.

17. Farmaceutska kompozicija za primenu prema patentnom zahtevu 16, naznačena time da navedene inflamatorne patologije su dermatološke patologije odabrane od atopičnog dermatitisa, dermatomiozitisa, skleroderme, psorijaze, polimiozitisa, pemfigusa i bulozne pemfigoidne epidermolize, ili oftamičke patologije odabrane od Sjogren-ovog sindroma, simpatičke oftalmije, uveitisa i uveoretinitisa, ili mukozne bolesti odabrane od inflamacije gastrointestinalnih mukoznih membrana (Kronova bolest) i inflamacije oralne i genitalne mukoze, ili patologije zgloba i vezivnog tkiva odabrane od reumatoidnog artritisa, psorijatičnog artritisa, eritemskog lupusa i diskoidnog i sistemskog eritemskog lupusa, ili hronična patološka inflamacija odabrana od solarnog hroničnog dermatitisa, astme i intestinalne i plućne fibroze i hroninog artritisa, ili degenerativne bolesti perifernog nervnog sistema i centralnog nervnog sistema odabrane od multiple skleroze, autoimunih neurodegenerativnih poremećaja, ne-autoimunih neurodegenerativnih poremećaja, inflamatornih procesa povezanih sa centralnim nervnim sistemom kao Parkinson-ova bolest, senilna demencija, bakterijski meningitis, HIV infekcija i traumatska povreda, i bolesti perifernog nervnog sistema kao radikulopatije inflamatorng porekla, ili bolesti perifernog i centralnog nervnog sistema gde inflamatorni procesi prate prvi insult ishemijskog porekla, kao što je neuropatija usled kompresije i traumatska neuropatija, moždani udar i traumatska povreda mozga, ili kardiološke bolesti koje proizilaze iz fenomena perfuzije kao rezultat ishemijskog oštećenja.

18. Farmaceutska kompozicija za primenu prema patentnom zahtevu 17, naznačena time da se administrira čoveku ili životinji, poželjno kada se administrira životinji, navedena smeša i/ili kompozicija se primenjuje za lečenje neurogene inflamacije, bolesti zglobova i vezivnog tkiva kao što je laminitis kod konja, artritisa, respiratornih patologija, oftalmičke inflamacije, suvog keratokonjunktivitisa, i inflamatornog alergijskog događaja.

19. Farmaceutska kompozicija za primenu prema patentnom zahtevu 18, naznačena time da se administrira dnevno, od jedne do četiri doze na dan, poželjno da se administrira tokom najmanje 4 nedelje, poželjnije navedena doza sadrži od 0.1 do 50 mg kompozicije/kg telesne mase pacijenta, poželjno od 0.5 do 20 mg/kg telesne mase pacijenta.