RS60155B1 - Derivati dihidroimidazopirazinona korisni za upotrebu u tretmanu raka - Google Patents

Derivati dihidroimidazopirazinona korisni za upotrebu u tretmanu raka

Info

Publication number
RS60155B1
RS60155B1 RS20200392A RSP20200392A RS60155B1 RS 60155 B1 RS60155 B1 RS 60155B1 RS 20200392 A RS20200392 A RS 20200392A RS P20200392 A RSP20200392 A RS P20200392A RS 60155 B1 RS60155 B1 RS 60155B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
methyl
compound
dihydroimidazo
pyrazin
formula
Prior art date
Application number
RS20200392A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard Andrew Ward
Clifford David Jones
Steven Swallow
Mark Andrew Graham
Andrew Hornby Dobson
James Francis Mccabe
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of RS60155B1 publication Critical patent/RS60155B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/416—1,2-Diazoles condensed with carbocyclic ring systems, e.g. indazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis
[0001] Ovaj opis se odnosi na neke derivate dihidroimidazopirazinona i na njihove farmaceutski-prihvatljive soli koji selektivno inhibiraju ERK i deluju anti-tumorski. Ovaj opis se takođe odnosi na upotrebu pomenutih derivata dihidroimidazopirazinona i na njihove farmaceutski-prihvatljive soli u postupcima za tretman ljudskog ili životinjskog tela, na primer kod prevencije ili tretmana raka. Ovaj opis se takođe odnosi na procese i na intermedijarna jedinjenja uključena u pripremi pomenutih derivata dihidroimidazopirazinona i na njihove farmaceutske kompozicije koje sadrže pomenute derivate dihidroimidazopirazinona i njihove farmaceutski-prihvatljive soli.
[0002] Proteinske kinaze igraju ključnu regulatornu ulogu u gotovo svakom aspektu ćelijske biologije. MAP-kinaze sisara se sastoje od citoplazmatskih proteinskih serin/treonin kinaza koje učestvuju u transdukciji ćelijskih signala iz plazma-membrane u jezgro. Postoje višestruke MAPK-signalne kaskade od kojih se svaka sastoji od 3 komponente: MAPK-kinaza (MAP3K), MAPK-kinaza (MAP2K) i MAPK. Aktivisane MAP-kinaze fosforilišu brojne supstrate uključujući druge proteinske kinaze, proteinske fosfataze, transkripcione faktore i druge funkcionalne belančevine. RAS-RAF-MEK-ERK-signalna kaskada učestvuje u regulisanju napredovanja ćelijskog ciklusa, ćelijske proliferacije, preživljavanja, metabolizmu i transkripciji.
[0003] ERK1 i ERK2 su sveprisutno eksprimirane MAPK-kinaze koje učestvuju u RAS-RAF-MEK-ERK-signalnoj kaskadi, a obe sadrže jedinstvene N- i C-terminalne produžetke koji obezbeđuju signalnu specifičnost, osim insercije duge 31-amino-kiselina u kinaznom domenu koje obezbeđuje dodatnu funkcionalnu specifičnost. ERK1 i ERK2 se aktivišu u brojnim ćelijskim tipovima preko mitogenih i drugih stimulusa, koje rezultuje aktivisanjem brojnih izoforma RAS (HRAS, NRAS i KRAS). Aktivisanje RAS dovodi do regrutovanja i aktivisanja RAF-izoforma (ARAF, BRAF i CRAF) i naknadnog aktivisanja MEK1 i MEK2, dvojnospecifičnih proteinskih kinaza koje posreduju fosforilaciju tirozina i treonina iz ERK1 i ERK2. ERK1 i ERK2 imaju veliki broj identifikovanih citoplazmatskih i jezgrinih supstrata (vidi Yoon S, Seger R. The extracellular signal-regulated kinase: multiple substrates regulate diverse cellular functions; Growth Factors 2006, 24, 21-44).
[0004] RAS-RAF-MEK-ERK-signalna kaskada je de-regulisana u brojnim bolestima uključujući ozledu mozga, rak, srčanu hipertrofiju, dijabetes i upalu. Specifično kod raka, mutacije u genu KRAS se pojavljuju sa verovatnoćom od približno 58% kod raka pankreasa, 33% kod kolorektalnog raka i 31% kod raka žučnog trakta, a NRAS-mutacije kod 18% melanoma. Onkogen-mutacije u RAS rezultuju povećanom ERK-aktivnosti kod brojnih tumora. Osim toga, BRAF-mutacije se javljaju kod približno 40-60% melanoma, 40% tipova raka štitaste žlezde i 20% kolorektalnih tumora (vidi Vakiani E, Solit DB. KRAS and BRAF; drug targets and predictive biomarkers; Journal of Pathology 2011, 223, 219-29). Ove opservacije pokazuju da je RAS-RAF-MEK-ERK-signalna kaskada privlačan put za antitumorske terapije protiv velikog broja ljudskih tumora. Dodatne informacije mogu da se pronađu u dokumentu WO2007/042784 i kod autora Bagdanoff, "Bioorg. & Med. Chem. Lett.", 2015, 25(18), str 3788-3792.
[0005] Mi smo pronašli serije hemijskih jedinjenja koja poseduju selektivnost inhibicije ERK naspram drugih kinaza iz iste signalne kaskade.
[0006] Kada se ovde govori o inhibiciji ERK, to znači da se misli na inhibiciju ERK1 i/ili ERK2, naročito ERK2.
[0007] U skladu sa jednim aspektom ovde je obezbeđeno jedinjenje sa Formulom (I):
u kojoj:
R<1>je vodonik, C1-3alkil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 (jednom) atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, difluorometila i trifluorometila; ili R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena uz pomoć supstituenta koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 (jednom) ili 2 (dva) atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halo, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2; a
R<3>je vodonik, C1-3alkil ili hloro;
ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0008] U jednoj izvedbi je obezbeđeno jedinjenje sa Formulom (I) kao šta je definisano iznad.
[0009] U jednoj izvedba je obezbeđena farmaceutski-prihvatljiva so nekog jedinjenja sa Formulom (I).
[0010] Termin "opciono supstituisan" znači "supstituisan ili ne-supstituisan".
[0011] Kao šta se ovde koristi, termin "alkil" se odnosi na ravno-lančane razgranate zasićene ugljovodonične radikale koji sadrže specifikovan broj atoma ugljenika. Individualne alkilne grupe poput "propila" su specifične samo za ravno-lančanu verziju, a individualne razgranate alkilne grupe poput 'izopropila' su specifične samo za razgranate verzije.
[0012] Primeri C1-3alkila su metil, etil, propil i izopropil.
[0013] Primeri C1-4alkila uključuju metil, etil, propil, izopropil, butil i tert-butil.
[0014] Termini "halogen" ili "halo," kao šta se ovde koriste, se odnose na fluoro, hloro, bromo i jodo. U nekim izvedbama, termin "halo" može da se odnosi na fluoro, hloro, i bromo. U nekim izvedbama, termin "halo" može da se odnosi na fluoro i hloro. U nekim izvedbama, termin "halo" može da se odnosi na fluoro. U nekim izvedbama, termin "halo" može da se odnosi na hloro. U nekim izvedbama, termin "halo" može da se odnosi na bromo.
[0015] U jednom aspektu R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe.
[0016] U jednom aspektu R<1>je metil ili -CH2OMe.
[0017] U jednom aspektu, R<1>je vodonik.
[0018] U jednom aspektu, R<1>je metil.
[0019] U jednom aspektu, R<1>je - CH2OMe.
[0020] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena uz pomoć supstituenta koji je nezavisno izabran iz grupe koja sadrži metil, difluorometil i trifluorometil; ili
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2.
[0021] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; ili R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2.
[0022] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; ili R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2.
[0023] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; ili R<2>je fenil opciono supstituisan na 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2.
[0024] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; ili R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, metoksi i -OCHF2.
[0025] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa difluorometilom; ili
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i hloro.
[0026] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila.
[0027] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa metilom.
[0028] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa difluorometilom.
[0029] U jednom aspektu, R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom.
[0030] U jednom aspektu, R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila ili trifluorometila.
[0031] U jednom aspektu, R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa metilom.
[0032] U jednom aspektu, R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa difluorometilom.
[0033] U jednom aspektu, R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom.
[0034] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2.
[0035] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, metoksi i -OCHF2.
[0036] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz fluoro, hloro ili metoksi.
[0037] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro i metoksi.
[0038] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro i metoksi.
[0039] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i hloro.
[0040] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i hloro.
[0041] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i hloro.
[0042] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i metoksi.
[0043] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i metoksi.
[0044] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa fluoro.
[0045] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa hloro.
[0046] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa difluorometilom.
[0047] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa trifluorometilom.
[0048] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa metoksi.
[0049] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa -OCHF2.
[0050] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 2 atoma ugljenika iz prstena sa fluoro.
[0051] U jednom aspektu, R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa hloro.
[0052] U jednom aspektu, R<2>je 6-metilpiridin-2-il, 4-(difluorometil)piridin-2-il, 6-(difluorometil)piridin-2-il, 4-(trifluorometil)piridin-2-il, 6-(trifluorometil)piridin-2-il, 2-(trifluorometil)piridin-4-il, 2-(trifluorometil)pirimidin-4-il, 6-(trifluorometil)pirimidin-4-il, 3-hlorofenil, 3,4-difluorofenil, 3,5-difluorofenil, 3-hloro-4-fluorofenil, 3-(difluorometoksi)fenil, 3-(difluorometil)fenil, 3-metoksifenil ili 4-fluoro-3-metoksifenil.
[0053] U jednom aspektu, R<2>je 6-(difluorometil)piridin-2-il, 3-hlorofenil, 3,4-difluorofenil ili 3,5-difluorofenil.
[0054] U jednom aspektu, R<2>je 6-metilpiridin-2-il.
[0055] U jednom aspektu, R<2>je 4-(difluorometil)piridin-2-il.
[0056] U jednom aspektu, R<2>je 6-(difluorometil)piridin-2-il.
[0057] U jednom aspektu, R<2>je 4-(trifluorometil)piridin-2-il.
[0058] U jednom aspektu, R<2>je 6-(trifluorometil)piridin-2-il.
[0059] U jednom aspektu, R<2>je 2-(trifluorometil)piridin-4-il.
[0060] U jednom aspektu, R<2>je 2-(trifluorometil)pirimidin-4-il.
[0061] U jednom aspektu, R<2>je 6-(trifluorometil)pirimidin-4-il.
[0062] U jednom aspektu, R<2>je 3-hlorofenil.
[0063] U jednom aspektu, R<2>je 3,4-difluorofenil.
[0064] U jednom aspektu, R<2>je 3,5-difluorofenil.
[0065] U jednom aspektu, R<2>je 3-hloro-4-fluorofenil.
[0066] U jednom aspektu, R<2>je 3-(difluorometoksi)fenil.
[0067] U jednom aspektu, R<2>je 3-(difluorometil)fenil.
[0068] U jednom aspektu, R<2>je 3-metoksifenil.
[0069] U jednom aspektu, R<2>je 4-fluoro-3-metoksifenil.
[0070] U jednom aspektu, R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0071] U jednom aspektu, R<3>je vodonik ili metil.
[0072] U jednom aspektu, R<3>je vodonik.
[0073] U jednom aspektu, R<3>je metil.
[0074] U jednom aspektu, R<3>je hloro.
[0075] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0076] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
1
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; ili
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2; a
R<3>is vodonik, metil ili hloro.
[0077] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan n 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; ili
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0078] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; ili
R<2>je fenil opciono supstituisan na 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0079] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; ili
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, metoksi i -OCHF2; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0080] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je metil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa difluorometilom; ili
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i hloro; a R<3>je vodonik ili metil.
[0081] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; a R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0082] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa metilom; a R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0083] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa difluorometilom; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0084] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0085] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0086] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0087] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
1
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0088] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila i metoksi; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0089] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro i metoksi; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0090] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je fenil opciono supstituisan na 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro i metoksi; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0091] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i hloro; a R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0092] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i metoksi; a R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0093] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je fenil opciono supstituisan na 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i hloro; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0094] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je fenil opciono supstituisan na 2 atoma ugljenika iz prstena sa supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro i metoksi; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0095] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je 6-metilpiridin-2-il, 4-(difluorometil)piridin-2-il, 6-(difluorometil)piridin-2-il, 4-(trifluorometil)piridin-2-il, 6-(trifluorometil)piridin-2-il, 2-(trifluorometil)piridin-4-il, 2-(trifluorometil)pirimidin-4-il, 6-(trifluorometil)pirimidin-4-il, 3-hlorofenil, 3,4-difluorofenil, 3,5-difluorofenil, 3-hloro-4-fluorofenil, 3-(difluorometoksi)fenil, 3-(difluorometil)fenil, 3-metoksifenil ili 4-fluoro-3-metoksifenil; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0096] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
1
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je 6-(difluorometil)piridin-2-il, 3-hlorofenil, 3,4-difluorofenil ili 3,5-difluorofenil; a R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0097] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je metil ili -CH2OMe;
R<2>je 6-(difluorometil)piridin-2-il, 3-hlorofenil, 3,4-difluorofenil ili 3,5-difluorofenil; a R<3>je vodonik ili metil.
[0098] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je 6-(difluorometil)piridin-2-il; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0099] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je 3-hlorofenil; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0100] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je 3,4-difluorofenil; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
[0101] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe;
R<2>je 3,5-difluorofenil; a
R<3>je vodonik, metil ili hloro.
1
[0102] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je metil ili -CH2OMe;
R<2>je 6-(difluorometil)piridin-2-il; a
R<3>je vodonik ili metil.
[0103] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je metil ili -CH2OMe;
R<2>je 3-hlorofenil; a
R<3>je vodonik ili metil.
[0104] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je metil ili -CH2OMe;
R<2>je 3,4-difluorofenil; a
R<3>je vodonik ili metil.
[0105] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, gde:
R<1>je metil ili -CH2OMe;
R<2>je 3,5-difluorofenil; a
R<3>je vodonik ili metil.
[0106] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđen je bilo koji ili više pomenutih specifičnih primera ili neka njihova farmaceutski-prihvatljiva so. U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeni su specifični primeri (ovde opisani) ili neka njihova farmaceutski-prihvatljiva so, pri čemu jedan ili više od pomenutih primera je isključeno. U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje koje je izabrano iz grupe koja obuhvata:
• 2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
1
(S)-7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
2-(5-Metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
7-(3-hlorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
7-(3-(difluorometil)benzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; (R)-7-(3-hlorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-
1
4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(4-fluoro-3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; (S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-(difluorometoksi)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((4-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-((4-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; 7-(3,4-difluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(R)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
1
• (R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; • (R)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; i
• (R)-7-(3-metoksibenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; ili neka njihova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0107] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje koje je izabrano iz sledeće grupe:
• (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt etansulfonske kiseline; i
• (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on adukt adipinske kiseline.
[0108] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje koje je izabrano iz sledeće grupe:
• (S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; i
• (S)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
ili neka njihova farmaceutski-prihvatljiva so.
2
[0109] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđen je (S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0110] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđen je (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0111] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđen je (S)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0112] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđen je (S)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0113] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje iz Primera 18 ili neki njegov farmaceutski-prihvatljivi adukt.
[0114] Neka jedinjenja sa Formulom (I) poseduju hiralni centar, a vidljivo je da takvo jedinjenje sa Formulom (I) može da se pripremi, izoluje i/ili obezbedi sa ili bez prisutnosti, dodatno, jednog ili više drugih od 2 moguća enantiomerna izomera jedinjenja sa Formulom (I) u bilo kojem relativnom omeru. Priprema enantio-obogaćenih/enantio-čistih jedinjenja može da se provede primenom standardnih tehnika organske hemije koje su veoma dobro poznate stanju tehnike, na primer uz pomoć sinteze iz enantio-obogaćenog ili enantio-čistog početnog materijala, upotrebe odgovarajućeg enantio-obogaćenog ili enantio-čistog katalizatora tokom sinteze, i/ili uz pomoć rezolucije racemske ili delomično obogaćene smeše stereoizomera, na primer pomoću hiralne hromatografije.
[0115] Za primenu u nekom farmaceutskom kontekstu, bolje je da se obezbedi jedinjenje sa Formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so bez velikih količina drugih stereoizomernih forma koje su prisutne.
[0116] U skladu sa tim, u jednoj izvedbi, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so, opciono zajedno sa jednim ili više drugih stereoizomernih forma jedinjenja sa Formulom (I) ili neke njegove farmaceutskiprihvatljive soli, pri čemu je u samoj kompoziciji pomenuto jedinjenje sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, prisutno u enantiomernom višku (%ee) od ≥90%.
[0117] U jednoj dodatnoj izvedbi, pomenuti %ee u iznad pomenutoj kompoziciji iznosi ≥95%.
[0118] U jednoj dodatnoj izvedbi, pomenuti %ee u iznad pomenutoj kompoziciji iznosi ≥98%.
[0119] U jednoj dodatnoj izvedbi, pomenuti %ee u iznad pomenutoj kompoziciji iznosi ≥99%.
[0120] U jednoj dodatnoj izvedbi, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razblaživačem ili nosiocem.
[0121] U jednoj izvedbi je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa nekim farmaceutskiprihvatljivim razblaživačem ili nosiocem, a opciono dodatno sadrži jednu ili više drugih stereoizomernih forma jedinjenja sa Formulom (I) ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, pri čemu su pomenuto jedinjenje sa Formulom (I) ili neka njegova farmaceutskiprihvatljiva so u kompoziciji prisutni u enantiomernom višku (%ee) od ≥90%.
[0122] U jednoj dodatnoj izvedbi, pomenuti %ee u iznad-pomenutoj kompoziciji iznosi ≥95%.
[0123] U jednoj dodatnoj izvedbi, pomenuti %ee u iznad-pomenutoj kompoziciji iznosi ≥98%.
[0124] U jednoj dodatnoj izvedbi, pomenuti %ee u iznad-pomenutoj kompoziciji iznosi ≥99%.
[0125] Jedinjenja sa Formulom (I) i njihove farmaceutski-prihvatljive soli mogu da se pripreme, koriste ili isporuče u amorfnoj formi, kristalnoj formi, ili polu-kristalnoj formi, a bilo koje jedinjenje sa Formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so može da se dobije u više od jedne kristalne/polimorfne forme, uključujući hidratizovanu (na primer, hemi-hidrat, mono-hidrat, di-hidrat, tri-hidrat ili neka druga stehiometrija hidrata) i/ili solvatiranu formu. Podrazumeva se da ovaj opis obuhvata sve takve čvrste forme jedinjenja sa Formulom (I) i njegovih farmaceutski-prihvatljivih soli.
[0126] U dodatnim izvedbama je obezbeđeno jedinjenje sa Formulom (I), koje može da se dobije primenom postupaka koji su opisani u delu 'Primeri'.
[0127] Ovaj opis uključuje sve izotope atoma koji su prisutni u pomenutim jedinjenjima. Poznato je da izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve. Na primer, izotopi vodonika uključuju tricijum i deuterijum. Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C.
[0128] Neka prikladna farmaceutski-prihvatljiva so jedinjenja sa Formulom (I) je, na primer, neka kisela adiciona so.
[0129] Dodatna prikladna farmaceutski-prihvatljiva so jedinjenja sa Formulom (I) je, na primer, neka so koja nastaje u ljudskom ili životinjskom telu nakon administriranja nekog jedinjenja sa Formulom (I) pomenutom čoveku ili životinji.
[0130] Prikladna farmaceutski-prihvatljiva so nekog jedinjenja sa Formulom (I) takođe može da bude, na primer, neka kisela-adiciona so nekog jedinjenja sa Formulom (I), na primer neka kisela-adiciona so sa nekom anorganskom ili organskom kiselinom poput hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline ili trifluorosirćetne kiseline. Farmaceutski-prihvatljive soli jedinjenja sa Formulom (I) mogu takođe da budu kisele-adicione soli sa nekom kiselinom poput jedne od sledećih: sirćetna kiselina, adipinska kiselina, benzensulfonska kiselina, benzoeva kiselina, cinaminka kiselina, limunska kiselina, D,L-mlečna kiselina, etan-disulfonska kiselina, etan-sulfonska kiselina, fumarna kiselina, L-vinska kiselina, maleinska kiselina, jabučna kiselina, malonska kiselina, metan-sulfonska kiselina, napadisilna kiselina, fosforna kiselina, saharin, sukcinska kiselina ili toluen-sulfonska kiselina (poput p-toluensulfonske kiseline). Podrazumeva se da farmaceutski-prihvatljiva so nekog jedinjenja sa Formulom (I) formira poseban aspekt ovog opisa.
[0131] Jedinjenje sa Formulom (I) može da se pripremi kao ko-kristalna čvrsta forma. Radi izbegavanja sumnje, ko-kristal se odnosi na čvrste materije koje su kristalni jedno-fazni materijali sastavljeni od jedinjenja sa Formulom (I) ili barem jednog različitog molekularnog i/ili jonskog jedinjenja, ovde označenog kao ko-prethodni, obično u nekom stehiometrijskom
2
omeru, a koji nisu solvati niti su jednostavne soli. Opšte uzeto, ako za jedinjenje sa Formulom (I) i za njegov ko-partner vredi ΔpKa (pKa (baza) – pKa (kiselina)) > 1, postojao bi značajni protonski transfer koji bi dovodio do jonizacije i potencijalnog formiranja neke soli umesto kokristala. Sa druge strane, ako za jedinjenje sa Formulom (I) i za njegov ko-partner vredi ΔpKa (pKa (baza) – pKa (kiselina)) < 1, postojao bi manji protonski transfer. Ukoliko je zadovoljen ovaj kriterijum, entitet jedinjenje-ko-partner treba da se klasifikuju kao ko-kristal. U nekom ko-kristalu, molekuli jedinjenja i ko-partnera verovatno reaguju međusobnim vodonikovim vezama umesto drugačijim ne-kovalentnim interakcijama. Treba da se pomene da sam kokristal može da formira solvate, uključujući hidrate.
[0132] Farmaceutski-prihvatljivi ko-kristali nekog jedinjenja sa Formulom (I) mogu da budu, na primer, ko-kristali sa adipinskom kiselinom ili sa fumarnom kiselinom. Podrazumeva se da neki farmaceutski-prihvatljivi ko-kristal nekog jedinjenja sa Formulom (I) formira neki drugi aspekt ovog opisa.
[0133] Podrazumeva se da se termin "adukt", kao šta je ovde opisan, odnosi na farmaceutskiprihvatljive soli i na farmaceutski-prihvatljive ko-kristale jedinjenja sa Formulom (I). Stručnjak može da proceni da li je došlo do formiranja neke soli ili nekog ko-kristala na bazi razlike pKa jedinjenja i njegovog ko-partner kao šta je opisano iznad. U jednom aspektu, adukt je so. U lekom aspektu, adukt je ko-kristal.
[0134] Generalno, podrazumeva se da formulacija "farmaceutski-prihvatljiva so nekog jedinjenja sa Formulom (I)" (ili jedan ili više Primera) u bilo kojoj izvedbi ili aspektu uključuje jedinjenje sa Formulom (I) (ili jedan ili više Primera) koje je predstavljeno u formi nekog farmaceutski-prihvatljivog ko-kristala ili još generalnije opisano kao (farmaceutskiprihvatljivi) adukt, osim ako kontekst zahteva drugačije.
[0135] Termin "farmaceutski-prihvatljiv ko-kristal nekog jedinjenja sa Formulom (I)" se odnosi na neki ko-kristal koji je nastao između jedinjenja sa Formulom (I) i nekog njegovog farmaceutski-prihvatljivog kontra-jona (ko-partner). Slično, termin "farmaceutski-prihvatljivi adukt nekog jedinjenja sa formulom (I)" se odnosi na neki adukt (so ili ko-kristal) koji je nastao između pomenutog jedinjenja sa Formulom (I) i nekog njegovog farmaceutski-prihvatljivog kontra-jona (ko-partner).
[0136] (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt etansulfonske kiseline, ovde označen kao Forma 1, je karakterizovan time šta poseduje barem jednu od sledećih 2θ vrednosti izmerenih primenom CuKα-radijacije: 23.3 i 16.7.
[0137] (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt etansulfonske kiseline, Forma 1, je karakterizovan time šta poseduje obrazac difrakcije X-zraka na prahu, koji se značajno poklapa sa onim prikazanim na Slici 1. U Tabeli 1 su prikazana deset šiljka difrakcije X-zraka na prahu:
Tabela 1: Deset šiljaka difrakcije X-zrak na prahu za (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1
[0138] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-
2
dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline.
[0139] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, koji poseduje barem jedan specifičan šiljak difrakcije X-zraka na prahu od oko 2-teta = 23.3°.
[0140] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, koji poseduje barem jedan specifičan šiljak difrakcije X-zraka na prahu od oko 2-teta = 16.7°.
[0141] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, koji poseduje barem dva specifična šiljka difrakcije X-zraka na prahu od oko 2-teta = 23.3° i 16.7°.
[0142] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod oko 2-teta = 23.3, 16.7, 21.6, 13.6, 7.3, 19.6, 25.8, 28.1, 14.5, 11.0°.
[0143] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu koji je suštinski podjednak sa difrakcijskim obrascem X-zraka na prahu koji je prikazan na Slici 1.
[0144] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa barem jednim specifičnim šiljkom kod 2-teta = 23.3° plus ili minus 0.2° 2-teta.
2
[0145] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa barem jednim specifičnim šiljkom kod 2-teta = 16.7° plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0146] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa barem dva specifična šiljka kod 2-teta = 23.3° i 16.7° pri čemu pomenute vrednosti mogu da variraju plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0147] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod 2-teta = 23.3, 16.7, 21.6, 13.6, 7.3, 19.6, 25.8, 28.1, 14.5, 11.0° pri čemu pomenute vrednosti mogu da variraju plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0148] DSC-analiza (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, pokazuje endotermu topljenja sa početkom kod 203.8 °C i šiljkom kod 204.6 °C (Slika 2).
[0149] Takva DSC-analiza pokazuje da (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt etansulfonske kiseline, Forma 1, predstavlja čvrstu materiju sa visokom tačkom topljenja uz početak topljenja kod oko 203.8 °C i šiljkom kod oko 204.6 °C.
[0150] (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt adipinske kiseline, ovde označen kao Forma 1, je karakterizovan sa time da poseduje barem jednu od sledećih 2θ vrednosti izmerenih primenom CuKα-radijacije: 8.6 i 9.8.
2
[0151] (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt adipinske kiseline, Forma 1, je karakterizovan sa time da poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu, koji je suštinski isti kao i onaj na Slici 3. U Tabeli 2 je prikazano deset difrakcijskih šiljaka X-zraka na prahu:
Tabela 2
[0152] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline.
2
[0153] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa barem jednim specifičnim šiljkom kod oko 2-teta = 8.6°.
[0154] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa barem jednim specifičnim šiljkom kod oko 2-teta = 9.8°.
[0155] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa najmanje dva specifična šiljka kod oko 2-teta = 8.6° i 9.8°.
[0156] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod oko 2-teta = 8.6, 9.8, 17.8, 6.3, 10.3, 25.8, 19.1, 22.8, 25.1, 13.2°.
[0157] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu koji je suštinski podjednak sa difrakcijskim obrascem X-zraka na prahu koji je prikazan na Slici 3.
[0158] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa barem jednim specifičnim šiljkom kod 2-teta = 8.6°
2
plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0159] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa najmanje jednim specifičnim šiljkom kod 2-teta = 9.8° plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0160] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu sa barem dva specifična šiljka kod 2-teta = 8.6° i 9.8° pri čemu pomenute vrednosti mogu da variraju plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0161] U skladu sa ovim opisom, obezbeđena je kristalna forma (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, koji poseduje difrakcijski obrazaca X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod 2-teta = 8.6, 9.8, 17.8, 6.3, 10.3, 25.8, 19.1, 22.8, 25.1, 13.2° pri čemu pomenute vrednosti mogu da variraju plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0162] DSC-analiza (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, pokazuje endotermu topljenja sa početkom kod 185.4 °C i šiljkom kod 186.2 °C (Slika 4).
[0163] Takva DSC-analiza pokazuje da je (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt adipinske kiseline, Forma 1, čvrsta materija sa visokom tačkom topljenja sa početkom kod 185.4 °C i šiljkom kod 186.2 °C.
[0164] Kada je navedeno da se ovaj opis odnosi na kristalnu formu (R)-7-(3,4-Difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1, i/ili kristalnu formu (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1, tada se podrazumeva da je stepen kristalnosti prikladno veći od oko 60%, bolje prikladno veći od oko 80%, preferirano veći od oko 90%, a još bolje veći od oko 95%. Najbolje je da stepen kristalnosti bude veći od oko 98%.
[0165] (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt etansulfonske kiseline, Forma 1, poseduje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu koji je suštinski isti kao i difrakcijski obrasci X-zraka na prahu koji su prikazani na Slici 1 i ima deset pomenutih vrednosti (ugao 2-teta) prikazanih u Tabeli 1. (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt adipinske kiseline, Forma 1, poseduje difrakcijske obrasce X-zraka na prahu koji su suštinski podjednaki kao i difrakcijski obrasci X-zraka na prahu prikazanih na Slici 3 i ima deset pomenutih (ugao 2-teta) vrednosti prikazanih u Tabeli 2. Podrazumeva se da pomenute 2-teta vrednosti difrakcijskog obrasca X-zraka na prahu mogu da blago variraju od mašine do mašine ili od primerka od primerka, pa prema tome navedene vrednosti ne treba da se uzimaju kao apsolutne.
[0166] Poznato je da može da se dobije difrakcijski obrazac X-zraka na prahu koji sadrži jednu ili više mernih grešaka u zavisnosti o uslovima merenja (poput korišćene opreme ili mašine). Naročito, opšte je poznato da intenziteti difrakcijskih obrazaca X-zraka na prahu mogu da fluktuiraju u zavisnosti o mernim uslovima. Prema tome, podrazumeva se da (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt etansulfonske kiseline, Forma 1, iz ovog opisa nije ograničen na kristale koji su obezbedili difrakcijske obrasce X-zraka na prahu koji su identični sa difrakcijskim obrascem X-zraka na prahu koji je prikazan na Slici 1, već svaki kristal koji obezbeđuje difrakcijski obrazac X-zraka na prahu, koji je suštinski podjednak sa onim prikazanim na Slici 1, spada u okvire ovoga opisa. Osim toga, podrazumeva se da (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt adipinske kiseline, Forma 1, iz ovoga opisa nije ograničen samo na kristale koji obezbeđuju difrakcijske obrasce X-zraka na prahu koji su identični sa difrakcijskim obrascem X-zraka na prahu koji je prikazan na Slici 3, već bilo koji kristal koji obezbeđuje difrakcijske obrasce X-zraka na prahu koji su
1
suštinski podjednaki sa onima koji su prikazani na Slici 3 spada u okvire ovoga opisa. Stručnjak za difrakciju X-zraka na prahu može da proceni bazičnu identičnost različitih difrakcijskih obrazaca X-zrak na prahu.
[0167] Stručnjaci difrakcije X-zraka na prahu znaju da relativni intenzitet šiljaka može da bude pod uticajem, na primer, zrna većih od 30 µm i omera ne-unitarnog aspekta, koje može da utiče na analizu primeraka. Stručnjak takođe razume da pozicija refleksija može da bude pod uticajem tačne visine na koju seda sam primerak u difraktometru i nulte kalibracije difraktometra. Površina koja je planarna primerku takođe može da ima manji efekat. Tako, predstavljeni podaci za difrakcijski obrazac ne treba da se smatraju apsolutnim vrednostima. (Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures).
[0168] Generalno, merna greška ugla difrakcije u difraktogramu X-zraka na prahu iznosi približno plus ili minus 0.2° 2-teta, a takav stepen merne greške treba da se uzima u obzir kada se razmatra difrakcijski obrazaca X-zraka na prahu iz Slike 1, a i kada se čita Tabela 1. Nadalje, podrazumeva se da intenziteti mogu da fluktuiraju u zavisnosti o eksperimentalnim uslovima i načina pripreme primerka (preferirana orijentacija).
[0169] Bilo koja kristalna forma koja obezbeđuje XRPD-difraktogram ili DSC-termogram koji je suštinski podjednak sa onima koji su ovde opisani, spada u okvire ovog opisa. Stručnjak može da odredi suštinsku podjednakost difraktograma, spektara i termograma.
[0170] Uslovi za XRPD- i DSC-metodologiju su opisani u Primerima.
[0171] Podrazumeva se da neki prikladni farmaceutski-prihvatljivi pro-lek jedinjenja sa Formulom (I) takođe formira aspekt ovog opisa. U skladu sa time, jedinjenja iz ovoga opisa mogu da se administriraju u formi pro-leka, koji je jedinjenje koje se raspada u ljudskom ili životinjskom telu kako bi se oslobodilo jedinjenje iz ovoga opisa. Pro-lek može da se koristi sa ciljem menjanja fizičkih karakteristika i/ili farmakokinetičkih karakteristika nekog jedinjenja iz ovoga opisa. Pro-lek može da se formira kada jedinjenje iz ovoga opisa sadrži neku prikladnu grupu ili supstituent na koji može da se veže grupa koja menja neku karakteristiku. Primeri za pro-lekove uključuju derivate estera ili amida koji mogu da se
2
pocepaju in-vivo, a koji mogu da se formiraju na karboksi-grupi u jedinjenju sa Formulom (I).
[0172] U skladu sa time, jedan aspekt ovoga opisa uključuje ona jedinjenja sa Formulom (I), kao šta je ovde definisano, koja su moguća organskom sintezom i koja nastaju unutar ljudskog ili životinjskog tela uz pomoć cepanja njihovog pro-leka. U skladu sa time, ovaj opis uključuje ona jedinjenja sa Formulom (I) koja mogu da se proizvedu uz pomoć organske sinteze, a takođe i takva jedinjenja koja nastaju u ljudskom ili životinjskom telu preko metabolizma prekursorjedinjenja, odnosno neko jedinjenje sa Formulom (I) može da bude sintetičko jedinjenje ili jedinjenje koje nastaje metaboličkim putem.
[0173] Neki prikladni farmaceutski-prihvatljivi pro-lek nekog jedinjenja sa Formulom (I) je takav koji se bazira na razumnoj medicinskoj proceni da je prikladan za administriranje u ljudsko ili životinjsko telo bez da uzrokuje neželjene farmakološke aktivnosti i bez prekomerne toksičnosti.
[0174] Brojne forme pro-lekova su opisane, na primer u sledećim dokumentima:
a) Methods in Enzymology, vol.42, str.309-396, ur.: K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);
b) Design of Pro-drugs, ur.: H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);
c) A Textbook of Drug Design and Development, ur.: Krogsgaard-Larsen & H.
Bundgaard, poglavlje 5. "Design and Application of Pro-drugs", od H. Bundgaard str.
113-191 (1991);
d) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);
e) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988);
f) N. Kakeya, et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 692 (1984);
g) T. Higuchi & V. Stella, "Pro-Drugs as Novel Delivery Systems", A.C.S. Symposium Series, vol.14; i
h) E. Roche (urednik), "Bioreversible Carriers in Drug Design", Pergamon Press, 1987.
[0175] Neki prikladni farmaceutski-prihvatljivi pro-lek nekog jedinjenja sa Formulom (I) koji poseduje karboksi-grupu je, na primer, neki njegov ester koji može da se pocepa in-vivo. Ester jedinjenja sa Formulom (I) koji može da se pocepa in-vivo i koji sadrži karboksi-grupu je, na primer, neki farmaceutski-prihvatljivi ester koji može da se pocepa u ljudskom ili životinjskom telu kako bi se proizvela parentna kiselina. Prikladni farmaceutski-prihvatljivi esteri za karboksi-grupu uključuju (1-6C)alkil estere poput metila, etila i tert-butila, (1-6C)alkoksimetil estere poput metoksimetil estera, (1-6C)alekaoiloksimetil estere poput pivaloiloksimetil estera, 3-ftalidil estera, (3-8C)cikloalkilkarboniloksi-(1-6C)alkil estere poput ciklopentilkarboniloksimetil i 1-cikloheksilkarboniloksietil estera, 2-okso-1,3-dioksolenilmetil estere poput 5-metil-2-okso-1,3-diokpojedinačnan-4-ilmetil estera i (1-6C)alkoksikarboniloksi-(1-6C)alkil estere poput metoksikarboniloksimetil i 1-metoksikarboniloksietil estera.
[0176] Neki prikladni farmaceutski-prihvatljivi pro-lek nekog jedinjenja sa Formulom (I) koji sadrži karboksi-grupu je, na primer, neki amid koji može da se pocepa in-vivo poput N-C1-
6alkila i N,N-di-(C1-6alkil)amida poput N-metila, N-etila, N-propila, N,N-dimetila, N-etil-N-metila ili N,N-dietilamida.
[0177] In-vivo efekti jedinjenja sa Formulom (I) mogu da se uspostave delomično uz pomoć jednog ili više metabolita koji nastaju u ljudskom ili životinjskom telu nakon administriranja nekog jedinjenja sa Formulom (I). Kao šta je ranije navedeno, in-vivo efekti nekog jedinjenja sa Formulom (I) mogu takođe da se uspostave preko metabolizma prekursor-jedinjenja (prolek).
[0178] Radi izbegavanja zabune, podrazumeva se da kada se u ovoj specifikacija neka grupa kvalifikuje uz pomoć termina 'definisano u gornjem tekstu' ili 'definisano ovde', pomenuta grupa obuhvata prvu i najširu definiciju kao i svaku i sve ostale alternativne definicije za pomenutu grupu.
[0179] Drugi aspekt ovoga opisa obezbeđuje proces za pripremu jedinjenja sa Formulom (I), ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so. Jedan prikladan proces je ilustrovan uz pomoć sledećih reprezentativnih varijacija procesa u kojima, osim ako je drugačije navedeno, R<1>do R<3>imaju bilo koja značenja definisana u gornjem tekstu. Neophodni početni materijali mogu da se dobiju primenom standardnih procedura organske hemije ili su komercijalno dostupni. Priprema takvih početnih materijala je opisana zajedno sa sledećim reprezentativnim varijacijama procesa u sklopu pridruženih Primera. Alternativno, neophodni početni materijali mogu da se dobiju primenom procedura koje su analogne onima koje su ilustrovane, a spadaju u uobičajeno znanje stručnjaka tj. organskih hemičara.
4
[0180] Jedinjenje sa formulom (I) može da se pripremi iz jedinjenja sa formulom (II), u kojoj L<1>je neka prikladna izlazna grupa (poput halogena, ili -SO2Me, itd.), uz pomoć reagovanja sa jedinjenjem sa formulom (XII), u kojoj P<1>je vodonik, sa nekom prikladnom bazom (poput NaH, Na2CO3, Cs2CO3ili K2CO3) u nekom prikladnom rastvaraču (poput N,N-dimetilformamida ili N,N-dimetilacetamida) ili u prisutnosti nekog prikladnog Pd-katalizatora i fosfin-liganda sa prikladnom bazom (na primer, Cs2CO3) u nekom prikladnom rastvaraču (poput dioksana), u uslovima ambijentalne ili povećane temperature (poput temperature koja se postiže grejanjem ili mikrotalasnim zračenjem). Alternativno, jedinjenje sa formulom (I) može da se pripremi iz jedinjenja sa formulom (II), u kojoj L<1>je neka prikladna izlazna grupa (poput halo, ili -SO2Me, itd.), uz pomoć reagovanja sa jedinjenjem sa formulom (XII), u kojoj P<1>je neka prikladna grupa koja nije atom vodonika (poput formila ili trifluoroacetamida) sa nekom prikladnom bazom (poput NaH, Na2CO3, Cs2CO3ili K2CO3) u nekom prikladnom rastvaraču (poput N,N-dimetilformamida ili N,N-dimetilacetamida) ili u prisutnosti nekog prikladnog Pd-katalizatora i fosfin-liganda sa nekom prikladnom bazom (na primer, Cs2CO3) u nekom prikladnom rastvaraču (poput dioksana), u uslovima povećane temperature (poput temperature koja se postiže grejanjem ili mikrotalasnim zračenjem), nakon čega sledi odstranjivanje zaštitne grupe P<1>u prisutnosti neke prikladne baze poput natrijum hidroksida u nekom prikladnom rastvaraču i vodi.
[0181] Podrazumeva se da jedinjenje sa formulom (I) može da se preobrazi u neko drugo jedinjenje sa formulom (I) u uslovima koji su poznati stanju tehnike.
[0182] Jedinjenja sa formulom (XII) su komercijalno dostupna ili su dobro poznata stanju tehnike.
[0183] Jedinjenje sa formulom (II) može da se pripremi iz jedinjenja sa formulom (III), u kojoj L<1>je neka prikladna izlazna grupa (poput Cl ili -SO2Me), uz pomoć reagovanja sa nekim jedinjenjem sa formulom (XIII) u kojoj L<2>je neka prikladna izlazna grupa (poput halogena, ili - OSO2Me, -Tos, itd.), u prisutnosti neke prikladne baze (poput natrijum hidrida ili K2CO3) i nekog prikladnog rastvarača (poput N,N-dimetilformamida).
[0184] Jedinjenja sa formulom (XIII) su komercijalno dostupna ili su dobro poznata stanju tehnike.
[0185] Alternativno, jedinjenja sa formulom (II) mogu da se pripreme iz jedinjenja sa formulom (VI), u kojoj R<4>je neka alkilna grupa (poput metila ili etila), uz pomoć reagovanja sa jedinjenjima sa formulom (X) u prisutnosti nekog prikladnog reagensa za redukovanje (poput NaBH3CN) i nekog prikladnog rastvarača (poput tetrahidrofurana) nakon čega sledi naknadna laktamizacija u nekom prikladnom rastvaraču (poput MeOH) sa nekom prikladnom bazom (poput amonijaka), ili sa Lewis-ovom kiselinom (katalizator; poput trimetilaluminijuma).
[0186] Jedinjenja sa formulom (X) su komercijalno dostupna ili su dobro poznata stanju tehnike.
[0187] Jedinjenje sa formulom (II) u kojoj L<1>je prekursor za neku prikladnu izlaznu grupu (poput -SMe, itd.) može da se pripremi iz jedinjenja sa formulom (V), u kojoj L<3>je neka prikladna metalna grupa (poput trimetil stanana, itd.), uz pomoć reakcije sa jedinjenjem sa formulom (XI) u kojoj L<2>je neka prikladna izlazna grupa (poput halo, ili OSO2CF3), u prisutnosti nekog prikladnog Pd-katalizatora i fosfin-liganda u nekom prikladnom rastvaraču (poput smeše N,N-dimetilformamida, dimetoksietana, vode i etanola) u prikladnim uslovima poput grejanja (termalno ili u mikrotalasnom reaktoru).
[0188] Jedinjenja sa formulom (XI) su komercijalno dostupna ili su dobro poznata stanju tehnike.
[0189] Jedinjenje sa formulom (V), u kojoj R<1>je vodonik ili alkilna grupa (poput metila), može da se pripremi iz jedinjenja sa formulom (VII), uz pomoć reagovanja sa jedinjenjem sa formulom (XIV) u kojoj L<4>je neka prikladna izlazna grupa (poput halo, ili OSO2CF3), u prisutnosti neke prikladne baze (poput natrijum hidrida ili K2CO3) i nekog prikladnog rastvarača (poput N,N-dimetilformamida ili acetona).
[0190] Jedinjenja sa formulom (XIV) su komercijalno dostupna ili su dobro poznata stanju tehnike.
[0191] Jedinjenje sa formulom (VI), u kojoj R<4>je alkilna grupa (poput metila ili etila), može da se pripremi iz jedinjenja sa formulom (VIII), uz pomoć reagovanja sa jedinjenjem sa formulom (XV), u kojoj L<5>je neka prikladna izlazna grupa (poput halo, -OSO2Me ili -OSO2CF3), a P<3>je prikladna zaštitna grupa (poput -Boc), ili sa jedinjenjem sa formulom (XVI) u kojoj P<3>je neka prikladna zaštitna grupa (poput -Boc), u prisutnosti neke prikladne baze (poput natrijum hidrida ili K2CO3) u nekom prikladnom rastvaraču (poput dioksana ili MeCN) u uslovima ambijentalne ili povećane temperature (poput temperature koja se postiže grejanjem ili mikrotalasnim zračenjem). U slučaju kada se koristi jedinjenje sa formulom (XVI), može biti neophodno da se odstrani intermedijarna sulfaminka kiselina u uslovima vodene kiseline (poput HCl) u nekom prikladnom rastvaraču (poput etanola). Zaštitna grupa P<3>može da se odstrani iz jedinjenja sa formulom (XV) i (XVI) uz pomoć neke prikladne kiseline (poput HC1) u nekom prikladnom rastvaraču (poput dioksana ili etanola), u uslovima ambijentalne temperature. Jedinjenje sa formulom (VI) može da se izoluje kao so, poput neke hidrohloridne ili dihidrohloridne soli.
[0192] Jedinjenja sa formulama (XV) i (XVI) su komercijalno dostupna ili su dobro poznata stanju tehnike.
[0193] Reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) sa ciljem pripreme jedinjenja sa formulom (VI) je nova reakcija i obezbeđuje dodatan aspekt ovoga opisa.
[0194] Prema tome, ovaj pronalazak otkriva proces za pripremu jedinjenja sa formulom (VI), pri čemu pomenuti proces podrazumeva:
a) reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) u prisutnosti neke prikladne baze u nekom prikladnom rastvaraču, u uslovima ambijentalne ili povećane temperature;
pri čemu R<1>i R<3>su definisani kod jedinjenja sa formulom (I) u tekstu iznad; L<1>je izlazna grupa ili prekursor za izlaznu grupu;
P<3>je zaštitna grupa; a
R<4>je alkilna grupa; i
b) opciono, intermedijarna sulfaminka kiselina se odstranjuje u uslovima vodene kiseline u nekom prikladnom rastvaraču; i
c) odstranjivanje zaštitne grupe P<3>u prisutnost neke prikladne kiseline u nekom prikladnom rastvaraču, na ambijentalnoj temperaturi.
[0195] U jednoj izvedbi, L<1>je -SMe ili halogen.
[0196] U jednoj izvedbi, L<1>je -SMe ili Cl.
[0197] U jednoj izvedbi, R<4>je alkilna grupa.
[0198] U jednoj izvedbi, R<4>je C1-4alkil.
[0199] U jednoj izvedbi, R<4>je metil ili etil.
[0200] U jednoj izvedbi, R<4>je metil.
[0201] U jednoj izvedbi, R<4>je etil.
[0202] U jednoj izvedbi, prikladna baza je natrijum hidrid ili K2CO3.
[0203] U jednoj izvedbi, prikladna baza je natrijum hidrid.
[0204] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi u dioksanu ili MeCN.
[0205] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi u dioksanu.
[0206] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi u MeCN.
[0207] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi od oko 20° C.
[0208] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi od 18-25° C.
[0209] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi >20° C.
[0210] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi >50° C.
[0211] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi >80° C.
[0212] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi ≥85° C.
[0213] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi ≥85° C i ≤100° C.
[0214] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi ≤100° C.
[0215] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi ≥80° C i ≤110° C.
4
[0216] U jednoj izvedbi, reagovanje jedinjenja sa formulom (VIII) sa jedinjenjem sa formulom (XVI) se provodi na temperaturi ≤110° C.
[0217] U jednoj izvedbi, prikladna vodena kiselina je HC1.
[0218] U jednoj izvedbi, odstranjivanje intermedijarne sulfaminke kiseline se provodi u etanolu.
[0219] U jednoj izvedbi, P<3>je -Boc.
[0220] U jednoj izvedbi, prikladna baza je K2CO3.
[0221] U jednoj izvedbi, prikladna kiselina je HC1.
[0222] U jednoj izvedbi, odstranjivanje zaštitne grupe P<3>se provodi u dioksanu ili etanolu.
[0223] U jednoj izvedbi, odstranjivanje zaštitne grupe P<3>se provodi u etanolu.
[0224] U jednoj izvedbi, odstranjivanje zaštitne grupe P<3>se provodi u dioksanu.
[0225] U jednoj izvedbi, odstranjivanje zaštitne grupe P<3>se provodi na temperaturi od 18°-25° C.
[0226] U jednoj izvedbi, odstranjivanje zaštitne grupe P<3>se provodi na temperaturi od 22°-28° C.
[0227] U jednoj izvedbi, odstranjivanje zaštitne grupe P<3>se provodi na temperaturi od oko 20° C.
[0228] U jednoj izvedbi, odstranjivanje zaštitne grupe P<3>se provodi na temperaturi od oko 25° C.
[0229] Jedinjenje sa formulom (VIII) u kojoj L<1>je neka prikladna izlazna grupa (poput halogena, ili -SO2Me, itd.) može da se pripremi iz jedinjenja sa formulom (IX), u kojoj R<4>je alkilna grupa (poput metila, itd.), a P<4>je neka zaštitna grupa (poput SEM) uz pomoć reagovanja sa jedinjenjem sa formulom (XVII) u kojoj L<5>je neka prikladna izlazna grupa (poput halo, ili OSO2CF3), u prisutnost nekog prikladnog Pd-katalizatora i fosfin-liganda, uz neku prikladnu bazu (poput cezijum karbonata) u nekom prikladnom rastvaraču (poput smeše dioksana i vode), u prikladnim uslovima poput grejanja (termalno ili u mikrotalasnom reaktoru).
[0230] Jedinjenje sa formulom IX može da se pripremi primenom postupaka koji su dobro poznati stanju tehnike.
[0231] Jedinjenje sa formulom (III) može takođe da se pripremi iz jedinjenja sa formulom (VI) u kojoj R<4>je neka alkilna grupa (poput metila ili etila) primenom tretmana sa prikladnom bazom (poput amonijaka) u nekom prikladnom rastvaraču (poput MeOH).
[0232] Kada je potrebna neka farmaceutski-prihvatljiva so jedinjenja sa Formulom (I), pomenuta može da se dobije uz pomoć, na primer, reagovanja pomenutog jedinjenja sa nekom prikladnom kiselinom ili prikladnom bazom.
[0233] Kada je potreban neki farmaceutski-prihvatljivi pro-lek jedinjenja sa Formulom (I), pomenuti može da se dobije primenom neke konvencionalne procedure. Na primer, neki ester jedinjenja sa Formulom (I), koji može da se pocepa in-vivo, može da se dobije, na primer, reagovanjem jedinjenja sa Formulom (I) koje sadrži neku karboksilnu grupu sa nekim farmaceutski-prihvatljivim alkoholom. Dodatne informacije o pro-lekovima su dostupne u gornjem tekstu.
[0234] Podrazumeva se da u nekim gore pomenutim reakcijama može da bude neophodno ili poželjno da se zaštite osetljive grupe u jedinjenjima. Slučajevi kada je zaštita neophodna ili poželjna, ali i prikladni postupci za zaštitu, su poznati stručnjacima. Mogu da se koriste konvencionalne zaštitne grupe u skladu sa standardnom praksom (za ilustraciju vidi T.W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991). Tako, ako reaktanti uključuju grupe poput amino, karboksi ili hidroksi, može da bude poželjno da se pomenuta grupa zaštiti u nekim ovde opisanim reakcijama.
[0235] Prikladna zaštitna grupa za neku amino ili alkilamino grupu je, na primer, acilna grupa, na primer alkanoilna grupa poput acetila, alkoksikarbonilna grupa, na primer metoksikarbonil, etoksikarbonilna ili t-butoksikarbonilna grupa, arilmetoksikarbonilna grupa, na primer benziloksikarbonil, ili neka aroilna grupa, na primer benzoil. Uslovi za otklanjanje malopre pomenutih zaštitnih grupa neizbežno variraju sa izborom zaštitne grupe. Tako, na primer, acilna grupa poput alekaoilne ili alkoksikarbonilne grupe ili aroilna grupa mogu da se odstrane, na primer, uz pomoć hidrolize sa nekom prikladnom bazom poput alkalo-metalnog hidroksida, na primer litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, acilna grupa poput t-butoksikarbonilne grupe može da se odstrani, na primer, uz pomoć tretmana sa nekom prikladnom kiselinom poput hlorovodonične, sumporne ili fosforne kiseline ili trifluorosirćetne kiseline, a arilmetoksikarbonilna grupa poput benziloksikarbonilne grupe može da se odstrani, na primer, uz pomoć hidrogenacije preko nekog katalizatora poput paladijuma-na-ugljeniku, ili uz pomoć tretmana sa nekom Lewis-ovom kiselinom, na primer, boron tris(trifluoroacetat). Prikladna alternativna zaštitna grupa za primarnu amino-grupu je, na primer, ftaloilna grupa koja može da se odstrani uz pomoć tretmana sa nekim alkilaminom, na primer, dimetilaminopropilamin, ili sa hidrazinom.
[0236] Prikladna zaštitna grupa za hidroksi-grupu je, na primer, neka acilna grupa, na primer alkanoilna grupa poput acetila, aroilna grupa, na primer benzoil, ili arilmetilna grupa, na primer benzil. Uslovi za otklanjanje malopre pomenutih zaštitnih grupa svakako variraju sa izborom same zaštitne grupe. Tako, na primer, acilna grupa poput alekaoila ili aroilna grupa mogu da se odstrane, na primer, uz pomoć hidrolize sa nekom prikladnom bazom poput alkalo-metalnog hidroksida, na primer litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, arilmetilna grupa poput
4
benzilne grupe može da se odstrani, na primer, uz pomoć hidrogenacije preko nekog katalizatora poput paladijuma-na-ugljeniku.
[0237] Prikladna zaštitna grupa za karboksilnu grupu je, na primer, neka esterificirajuća grupa, na primer metilna ili etilna grupa koja može da se odstrani, na primer, uz pomoć hidrolize sa nekom bazom poput natrijum hidroksida, ili na primer neka t-butilna grupa koja može da se odstrani, na primer, uz pomoć tretmana sa nekom kiselinom, na primer organska kiselina poput trifluorosirćetne kiseline, ili na primer benzilna grupa koja može da se odstrani, na primer, uz pomoć hidrogenacije preko nekog katalizatora poput paladijuma-na-ugljeniku.
[0238] Zaštitne grupe mogu da se odstrane u bilo kojoj fazi (koja je prikladna) tokom sinteze primenom konvencionalnih tehnika koje su dobro poznate stanju tehnike.
[0239] Određeni intermedijari (na primer, jedinjenja sa Formulama II, III, IV, V, VI i VII, naročito Formule II i VI), koja su ovde definisana, su nova, a ovde su obezbeđena kao dodatne karakteristike ovoga opisa.
Biološka ispitivanja
[0240] Sledeći testovi (opiti) su bili korišćeni sa ciljem da se izmere efekti jedinjenja iz ovoga opisa.
Rukovanje sa jedinjenjima
[0241] Sva jedinjenja ili DMSO (dimetil sufoksid) za testove ERK2 masene spektrometrije i A375 fosfo-p90RSK su istisnuta iz izvornih ploča, koje sadrže jedinjenja u koncentraciji 10 mM u 100% (v/v) DMSO ili samo 100% DMSO, direktno u pločice za testiranje uz pomoć Echo 555 Acoustic dispenser (Labcit Inc™). U zavisnosti o testu, obavljena su dva preparata na posebnim pločicama. U Workflow A, stock-jedinjenja (10 mM) su razblažena 1:100 uz pomoć fixed-tip 96-head Agilent VPrep liquid handler (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) koje omogućava četiri intermedijarna razblaženja (10 mM, 100 µM, 1 µM, 10 nM). U Workflow B, stock-jedinjenja (10 mM) su razblažena 1:10 uz pomoć Tecan Freedom Evo (Tecan Group Ltd., Švajcarska), a tada 1:100 uz pomoć Echo 555 i Labcit LX sa ciljem da se proizvedu tri intermedijarna razblaženja preko tri Labcyte-qualified izvornih pločica (1 mM, 10 µM, 100 µM). Ove pločice sa intermedijarnim razblaženjima su tada manipulirane uz pomoć Echo 555 sa ciljem da se generišu finalne pločice sa jedinjenjima koja su spremna za testiranje u doznom rasponu od 12 tačaka (10, 3, 1, 0.25, 0.1, 0.03, 0.01, 0.0025, 0.001, 0.0003, 0.0001, 0.0000125 µM), a sa ciljem da se izračunaju IC50-vrednosti jedinjenja u totalnoj koncentraciji DMSO (u testu) od 1%. Za potrebe ERK2 masene spektrometrije je korišćen test Workflow B. Za potrebe A375 fosfo-p90RSK ćelijskog testa je korišćena pločica sa intermedijarnim razblaženjem (1:100) koje je opisano u Workflow A uz pomoć Echo kako bi se jedinjenja i DMSO izlila direktno u pločice sa ćelijama u doznom rasponu od 12 tačaka (30, 10, 3.125, 1.25, 0.3, 0.1, 0.03125, 0.0125, 0.003, 0.001, 0.0003125, 0.00003 µM) sa ciljem da se izračuna IC50-vrednost jedinjenja uz totalnu koncentraciju DMSO (u testu) od 0.3%.
Inhibicija testa katalize uz pomoć ERK2 Rapidfire masene spektrometrije
[0242] MEK U911-aktivisana ERK2-belančevina je eksprimirana i prečišćena in-house. Rastvori za encim i supstrat su pripremljeni u puferu za testiranje koji se sastoji od 50 mM Tris (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 0.1 mM EGTA (etilen glikol tetrasirćetna kiselina), 10 mM DTT (ditiotreitol) i 0.01% (v/v) CHAPS (3-[(3-holamidopropil)dimetilamonio]-1-propansulfonat).
1.2 nM ERK2-belančevine je pripremljeno u puferu za testiranje, a 10 µl je bilo dodano u svaku komorica sa polipropilenom, pri čemu pločica sa 384-komorica (#781201, Greiner) sadrži testirana i referentna kontrolna jedinjenja. Nakon pre-inkubacije (15 min) encima i jedinjenja na sobnoj temperaturi, dodano je 10 µl rastvora sa supstratom koji se sastoji od 16 µM Erktide (IPTTPITTTYFFFK, #61777, AnaSpec) i 120 µM ATP (adenozin trifosfat) (izmereni Km) u puferu za testiranje. Reakcija je ostavljena da se razvija tokom 20 min na sobnoj temperaturi pre no je ugašena dodavanjem 80 µl 1% (v/v) mravlje kiseline. Pločice za testiranje su tada vožene na RapidFire-platformi za masenu spektrometriju (Agilent) sa ciljem da se izmere nivoi supstrata (ne-fosforilisani Erktide) i produkta (fosforilisani Erktide). Podaci su analizirani, a IC50(pola maksimalne inhibitorne koncentracije) su izračunati uz primenom programa Genedata Screener<®>.
A375 fosfo-p90RSK ćelijski test
[0243] Fosfo-p90RSK ćelijski test je proveden uz pomoć ćelijske linije A375 tj. ćelije ljudskog malignog melanoma koje sadrži BRAF-mutaciju koja pozitivno reguliše MAPK-put i, tako, povećava endogene nivoe fosfo-ERK i fosfo-p90RSK. A375-ćelije su uzgajane u ćelijskom medijumu koji sadrži DMEM (Dulbecco-ov modifikovan Eagle-ov medijum), 10% (v/v)
4
fetalni kravlji serum i 1% (v/v) L-glutamin. Nakon sakupljanja, ćelije su dodane u crne, Costarpločice sa 384-komorica (#3712, Corning) koje obezbeđuje 2400 ćelija po komorici u ukupnom volumenu od 40 µl ćelijskog medijuma, a tada su inkubirane preko noći na 37° C, 90% relativne vlažnost uz 5% CO2u rotacionom inkubatoru. Testirana jedinjenja i referentne kontrole su dozirane direktno u ćelijske pločice uz pomoć akustičnog dispensera Labcit Echo 555. Pločice sa ćelijama su tada inkubirane tokom 2 h na 37° C pre fiksiranja uz pomoć dodavanja 20 µl 12% formaldehida u PBS/A (finalna koncetracija: 4%), nakon čega sledi inkubacija na sobnoj temperaturi tokom 20 min, a tada ispiranje (2x) sa 150 µl PBS/A (slani rastvor bez fosfata koji sadrži albumin) uz pomoć BioTek ELx405 platewasher. Ćelije su permeabilizovane sa 20 µl 0.1% Triton X-100 u PBS/A tokom 20 min na sobnoj temperaturi, a tada su ispirane (1x) sa 100 µl PBS/A. Primarno zečje monoklonsko antitelo protiv fosfo-p90RSK (Thr359) (D1E9) (#8753, Cell Signaling Technology) je razblaženo 1:1000 u puferu za testiranje (0.05% (v/v) Tween, 5% (v/v) fetalni kravlji serum, u PBS/A), 20 µl je dodano po komorici, a pločice su inkubirane na 4° C preko noći. Pločice sa ćelijama su ispirane (2x) sa 200 µl PBS/T (slani rastvor bez fosfata koji sadrži Tween-20), a tada je u komorice dodano po 20 µl kozjeg antizečjeg IgG-sekundarnog antitela (#A31573, Molecular Probes, Life Technologies) koje je bilo razblaženo 1:500 u test-puferu Alexa Fluor<®>647, uz Hoechst 33342 razblažen 1:5000. Nakon inkubacije na sobnoj temperaturi tokom 90 min, pločice su ispirane (2x) sa 200 µl PBS/T, pa je dodano 40 µl PBS/A po komorici. Obojene pločice sa ćelijama su prekrivene sa crnim poklopcima, a tada su očitane na Cellomics ArrayScanTM VTI imaging platform (Termo Scientific) uz primenu XF53-filtera sa objektivom od 10x, uz izvora LED-svetla koji je bio podešen da analizira jezgrino bojanje uz pomoć Hoechst 33342 (405 nm) i bojanje uz pomoć sekundarnog antitela vezanog na fosfo-p90RSK (647 nm). Podaci su analizirani, a IC50su izračunati uz pomoć programa Genedata Screener<®>.
[0244] Jedinjenja za koja se ovde zahteva patentna zaštita generalno pokazuju encimsku aktivnost u malopre opisanom testu od <0.5 mM, poput <0.2 mM.
[0245] Sledeći podaci su generisani za Primere (podaci ispod rezultuju iz jednog pojedinačnog eksperimenta ili iz proseka dva ili više eksperimenata; odstupanja od podataka prikazanih u aplikacijama za koje ova prijava zahteva patentna prava su produkt dodatnih ponavljanja pomenutog testa koje uzrokuje manje promene u prosečnim vrednostima):
4
4
[0246] Jedinjenja iz primera 1, 2, 3, 4, 6, 7, 9, 10, 11, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 i 28 pokazuju barem 500-puta veće selektivnosti prema ERK2 u odnosu na MEK koje je određeno primenom testa MEK-autofosforilacije (MEK Autophosphorylation ADP-Glo Assay) ispod.
Test ADP-Glo MEK-autofosforilacije
[0247] Aktivisana MEK-belančevina je isporučena od MRC-PPU (DU911, Dundee, UK) ili je eksprimirana i prečišćena in-house. MEK-test je proveden uz pomoć kompleta hemikalija ADP-Glo™ Kinase Assay Kit (Promega, Madison, WI, SAD) u belim Greiner-pločicama sa 384-komorica sa malim volumenom. 2 µl 6 nM aktivisane MEK-belančevine, u test-puferu
4
koja sadrži 50 mM Tris (pH 7.5), 10 mM DTT, 0.1 mM EGTA, 0.01% v/v Tween 20 i 10 mM MgCl2, je dodano u svaku komoricu pločice koja je sadržavala jedinjenja za testiranje i referentna kontrolna jedinjenja. Nakon pre-inkubacije encima i jedinjenja na sobnoj temperaturi tokom 15 min, 2 µl rastvora supstrata, koji sadrži 20 µM ATP (KMapp<ATP>) je dodano u test-pufer. Reakcija je ostavljena da se odvija tokom 90 min na sobnoj temperaturi pre zaustavljanja reakcije uz pomoć dodavanja 2 µl reagensa ADP-Glo. Pločice su tada prekrivene i inkubirane tokom 40 min na sobnoj temperaturi. Dodano je 4 µl reagensa za detektovanje kinaze, a pločice su inkubirane tokom 30 min, pre no je očitan luminiscentni signal uz pomoć čitača pločica PHERAstar (BMG Labtech GmbH, Offenburg, Nemačka).
Studije kombinovanja
Materijali i postupci
[0248] A549 je ljudska ćelija linija ne-sitnoćelijskog raka pluća koja sadrži onkogenu mutaciju u genu KRAS (G12S). Ženke golih miševa (Harlan, UK) su u levi bok supkutano (s.c.) primili 5x10<6>A549-ćelija (ATCC) po mišu.
[0249] Rast tumora je praćen dva puta sedmično uz pomoć merenja sa šublerom, a volumeni su izračunati primenom eliptične formule (pi/6 × širina × širina × dužina). Jednom kada su tumori dosegli volumen od ∼200-300 mm<3>, životinje su nasumično raspoređene u grupe od 7-11 pa su tretirane sa kontinuiranim rasporedom kombinovanja sa selumetiniba-om (ARRY-142886), 25 mg/kg BiD i Primera 18a, 25 mg/kg QD (četiri časa nakon prve doze selumetiniba), pri čemu su obe doze primljene preko peroralne rute. Volumeni tumora su izmereni dva puta sedmično nakon početka doziranja.
[0250] Selumetinib je bio formulisan u HPMC/Tween (0.5% metocel [hidroksipropil metoceluloza]/0.1% polisorbat 80), a suspenzija je mešana preko noći. Primer 18a je bio formulisan u 10% DMSO, 90% od 40% rastvora kleptoze (kleptoza je dobivena iz hidroksipropil betaciklodekstrina od Roquett-Pharma [zaštićeni brend] – prikladan za in vivo primenu i za formulacije).
Inhibicija rasta tumora uz pomoć Primera 18a u kombinaciji sa MEK-inhibitorom (selumetinib)
4
[0251] Studije su provedene na modelu A549-ksenotransplanta. Selumetinib je doziran dva puta dnevno (BiD) u razmaku od 8 h, a Primer 18a je doziran jednom dnevno (QD) i to 4 h nakon prve doze selumetiniba. Oba jedinjenja su dozirana kontinuirano tokom 3 sedmice. Oba prenosnika su dozirana u grupi sa prenosnikom. Oba leka, selumetinib i Primer 18a su smanjila tumorski rast u odnosu na kontrolu samo sa prenosnikom (prikazano na Slici 5). Kombinovanje selumetiniba sa Primerom 18a rezultuje dodatnim smanjivanjem tumorskog rasta, sa znakovima regresije u nekim životinjama.
Studije kombinovanja – inhibicija ćelijskog rasta
Ćelijske linije i tretmani
[0252] A549 je ljudska ćelijska linija ne-sitnoćelijskog raka pluća koja sadrži onkogenu mutaciju u genu KRAS (G12S). H2122 je ljudska ćelijska linija ne-sitnoćelijskog raka pluća koja sadrži onkogenu mutaciju u genu KRAS (G12C). H2009 je ljudska ćelijska linija nesitnoćelijskog raka pluća koja sadrži onkogenu mutaciju u genu KRAS (G12A). Calu6 je ljudska ćelijska linija ne-sitnoćelijskog raka pluća koja sadrži mutaciju u genu KRAS (G13K). Sve ćelijske linije su nabavljene iz American Type Culture Collection.
[0253] Sve ćelijske linije su održavane na 37° C uz 5% CO2u vlažnoj atmosferi i uzgajane u medijumu za rast RPMI-1640 koji je bio obogaćen sa 10% FBS i 2 mmol/L glutaminom. Identitet svih ćelijskih linija je bio potvrđen uz pomoć analize kratkih tandemskih ponavljanja kao šta je ranije opisano (Davies BR, Greenwood H, Dudley P, et al: Preclinical pharmacology of AZD5363, an inhibitor of AKT: Pharmacodynamics, antitumor activity, and correlation of monotherapy activity with genetic background. Mol Cancer Ther 11(4):873-87, 2012). Jedinjenja su rastvorena u DMSO do koncetracije od 10 mmol/L pa su skladištena u azotu.
Određivanje ćelijskog rasta
[0254] Ćelije su posejane u crne pločice sa prozirnim dnom i 384-komorica (Greiner Bio-On, Stonhouse, UK), a uzgajane su tokom 18-24 h pa su tretirane sa rastućim koncetracijama Primera 18 i selumetiniba (0-10 µmol/L) u doznoj matrici od 6x6. Ćelije su posejane u koncetraciji tako da je u ne-tretiranim komoricama bilo približno 80% konfluentnih ćelija na kraju testa. Nakon 3 dana tretmana, broj živih ćelija je određen uz pomoć Sytox Green endpoint kao šta je opisano ranije ("Davies BR, Greenwood H, Dudley P, et al: Preclinical pharmacology of AZD5363, an inhibitor of AKT: Pharmacodynamics, antitumor activity, and correlation of monotherapy activity with genetic background. Mol Cancer Ther 11(4):873-87, 2012"). Ukratko, Sytox Green boja za nukleinsku kiselinu (Invitrogen), razblažena u TBS-EDTA-puferu, je dodana u ćelije u finalnoj koncetraciji od 0.13 µmol/L, a broj mrtvih ćelija je određen uz pomoć Acumen Explorer (TTP Labtech, Melbourn, UK). Ćelije su tada permeabilizovane uz pomoć dodavanja saponina preko noći (finalna koncetracija: 0.03%, razblažen u TBS-EDTA-puferu) pa je određen ukupan broj ćelija. Broj živih ćelija je tada određen oduzimanjem broja mrtvih ćelija po komorici od ukupnog broja ćelija. Pre-dozna merenja omogućavaju otkrivanje broja živih ćelija početku eksperimenta, koje predstavlja indikaciju da li je režim tretmana rezultovao smrću ćelija. Podaci su predstavljeni kao % rasta uz pomoć NCI-formula kako sledi;
za vrednosti za koje Ti>/=Tz
za koncetracije za koje Ti<Tz
pri čemu, Tz predstavlja broj živih ćelija u vremenu nula, C predstavlja rast kontrolne, a Ti predstavlja broj živih ćelija kod svakog režima davanja leka. Ova formula obezbeđuje procenat od 0% do 200%. Anti-proliferativni efekti su indicirani sa rezultatima od 0% (nema efekta na rast ćelija) do 100% (potpuna inhibicija rasta ćelija); ubijanje ćelija je indicirano sa rezultatima od 100% (nema ubijanja ćelija) do 200% (ubija sve ćelije).
1
Analiza delovanja raznih kombinacija
[0255] Delovanje određenog kombinovanja (sinergija), preko dozne matrica od 6x6, je analizirano programom Genedata Screener12 (Genedata, Bazal, Švajcarska) uz primenu Loewe-ovog modela aditivne doze (doza-aditivnosti) kao šta je opisano ranije (Lehar J, Krueger AS, Avery W, et al: Synergistic drug combinations tend to improve therapeutically relevant selectivity. Nat Biotechnol 27(7):659-66, 2009 i Rickles RJ, Tam WF, Giordano TP, 3<rd>, et al: Adenosine A2A and beta-2 adrenergic receptor agonists: Novel selective and synergistic multiple myeloma targets discovered through systematic combination screening. Mol Cancer Ther 11(7):1432-42, 201229). Ovaj model aditivnosti obezbeđuje nultu referencu koja je predviđena uz pomoć odgovora na izlaganje kada su oba agensa isti tip leka. Površina 3-dimenzionalnog modela, predviđena iz dve krivulje odgovora na pojedinačni-agens, je oduzeta iz eksperimentalno-izvedene 3-dimenzionalne površine doznog efekta koje generiše razliku volumena. Ovaj višak volumena matrice može da se integriše kako bi se generisao rezultat sinergije. Cutoff-rezultata sinergije od >5 je korišćen za identifikovanje kombinovanja koja su od interesa u inicijalnom pretraživanju visoke propusnosti (high-throughput).
[0256] Rezultati (prikazani na Slikama 6-17) pokazuju da Primer 18 može da inhibira rast celog panela linija tumorskih ćelija koje sadrže KRAS-mutacije kao mono-terapija, a ovaj efekt je sinergistički pojačan uz pomoć tretmana sa selumetinibom. Rezultati sinergije za svaku ćelijsku liniju su 25 (A549), 14.3 (H2122), 67.5 (H2009), i 3 (Calu6). Pomenuti rezultati sinergije predstavljaju prosek od tri ili više nezavisnih eksperimenata.
[0257] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga opisa, obezbeđena je farmaceutska kompozicija, koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I), ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so, kao šta je malopre definisano zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razblaživačem ili nosiocem.
[0258] Prikladni farmaceutski-prihvatljivi ekscipijenti za formulisanje tableta uključuju, na primer, inertne razblaživaće, agense za granulaciju i rahljenje, vezne agense, lubrikante, konzervanse i antioksidanse. Kao dodatni prikladni farmaceutski-prihvatljivi ekscipijent može da bude neki helotna agens. Tabletarne formulacije mogu da budu premazane ili bez premaza sa ciljem modifikovanja raspadanja i naknadne apsorpcije aktivnog sastojaka u gastrointestinalnom traktu, ili sa ciljem poboljšanja njihove stabilnosti i/ili izgleda, ali u
2
svakom slučaju, uz primenu konvencionalnih premaza i procedura koji su dobro poznati stanju tehnike.
[0259] Kompozicije za oralnu primenu mogu, alternativno, da budu u formi kapsula od tvrdog želatina u kojima je aktivni sastojak pomešan sa nekim inertnim čvrstim razblaživačem, ili u formi kapsula od mekog želatina u kojima je aktivni sastojak pomešan sa vodom ili sa nekim uljem.
[0260] Vodene suspenzije generalno sadrže aktivni sastojak u formi finog praha zajedno sa jednim ili više agenasa za suspendovanje, dispergovanje ili agenasa za vlaženje. Vodene suspenzije mogu takođe da sadrže jedan ili više konzervanasa, anti-oksidanasa, sredstava za bojanje, za ukus, i/ili zaslađivaće.
[0261] Uljne suspenzije mogu da se formulišu uz pomoć suspendovanja aktivnog sastojaka u nekom biljnom ulju ili u nekom mineralnom ulju. Uljne suspenzije mogu takođe da sadrže neki agens za ugošćavanje. Zaslađivaći poput onih malopre pomenutih, i sredstva za ukus mogu da se dodaju sa ciljem da se obezbedi prijatan oralni preparat. Ove kompozicije mogu da se konzervišu dodavanjem nekog anti-oksidansa.
[0262] Prahovi za raspršivanje i granule prikladne za pripremu vodene suspenzije uz pomoć dodavanja vode generalno sadrže aktivni sastojak zajedno sa nekim sredstvom za dispergovanje ili za vlaženje, za suspendovanje i jedan ili više konzervanasa. Dodatni ekscipijenti poput sredstva za zaslađivanje, ukus i bojanje, takođe mogu da budu prisutni.
[0263] Farmaceutske kompozicije iz ovoga opisa takođe mogu da budu u formi emulzija tipa ulje-u-vodi. Uljana faza može da bude neko biljno ulje ili neko mineralno ulje ili neka smeša pomenutih. Ove emulzije mogu takođe da sadrže sredstva za zaslađivanje, ukus, ali i konzervanse.
[0264] Sirupi i eliksiri mogu da se formulišu sa zaslađivaćima, a takođe mogu da sadrže i neko sredstvo za formiranje filma (demulcent), razne konzervanse, agense za ukus i/ili sredstva za bojanje.
[0265] Farmaceutske kompozicije takođe mogu da budu u formi neke sterilne, vodene ili uljane suspenzije za injektiranje, koja može da bude formulisana uz pomoć poznatih procedura uz korišćenje jednog ili više odgovarajućih sredstava za dispergovanje ili za vlaženje, ali i agenasa za suspendovanje, koji su već pomenuti iznad. Sterilan preparat za injektiranje takođe može da bude neki sterilan rastvor ili suspenzija za injektiranje u nekom ne-toksičnom parenteralnoprihvatljivom razblaživaću ili sistemu rastvarača.
[0266] Kompozicije za administriranje uz pomoć inhalacija mogu da budu u formi nekog konvencionalnog aerosola pod pritiskom pri čemu može da se istisne aktivni sastojak ili kao aerosol koji sadrži fine čvrste ili tečne kapljice. Konvencionalni propelanti sa aerosolom poput isparljivih fluorisanih ugljovodonika ili ugljovodonika takođe mogu da se koriste, a naprava za aerosol je konvencionalno podešena da istisne izmerenu količinu aktivnog sastojaka. Inhaleri za suvi prah takođe su prikladni.
[0267] Za dodatne informacije o formulaciji čitatelju preporučujemo poglavlje 25.2 u 5. volumenu Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; predsednik redakcije), Pergamon Press 1990.
[0268] Količina aktivnog sastojka koja se kombinuje sa jednim ili više ekscipijenata sa ciljem proizvodnje pojedinačne dozne forme nužno varira u zavisnosti o tretiranom domaćinu i izabranoj ruti za administriranje. Na primer, oralno administriranje kod ljudi generalno zahteva, na primer, od 1 mg do 2 g aktivnog agensa (bolje od 100 mg do 2 g, na primer od 250 mg do 1.8 g, poput od 500 mg do 1.8 g, naročito od 500 mg do 1.5 g, a konvencionalno od 500 mg do 1 g) koji se administrira zajedno sa odgovarajućom i prikladnom količinom ekscipijenata koja može da varira od oko 3% do oko 98% (težinski procenti) od ukupne kompozicije. Podrazumeva se da, kada je potrebno doziranje veće količine, mogu da se koriste višekratne dozne forme, na primer dve ili više tableta ili kapsula, sa dozom aktivnog sastojka koja je konvencionalno podeljena između višekratnika. Tipično, unitarne dozne forme će sadržavati oko 10 mg do 0.5 g nekog jedinjenja iz ovoga opisa, mada unitarna dozna forma može da sadrži do 1 g. Konvencionalno, neka pojedinačna čvrsta dozna forma može da sadrži između 1 i 300 mg aktivnog sastojka.
[0269] Veličina doze za terapeutske ili profilaktičke primene jedinjenja iz ovoga opisa očekivano varira u skladu sa prirodom i ozbiljnosti bolesnog stanja, dobi i polu životinje ili pacijenta, ali i o ruti za administriranje, u skladu sa dobro poznatim principima medicine.
4
[0270] Kada se jedinjenja iz ovoga opisa primenjuju terapeutski ili profilaktički, generalno treba da se administrira tako da se ostvari dnevna doza u rasponu od, na primer, 1 mg/kg do 100 mg/kg telesne težine, ako su potrebne podeljene doze. Opšte uzeto, niže doze se administriraju kada se koristi parenteralna ruta. Tako, na primer, za intravenozno administriranje, generalno će se koriti doza u rasponu od, na primer, 1 mg/kg do 25 mg/kg telesne težine. Slično, za administriranje inhalacijom će se koristi doza u rasponu od, na primer, 1 mg/kg do 25 mg/kg telesne težine. Oralno administriranje je, međutim, preferirano, a naročito u formi tablete.
[0271] U jednom aspektu ovoga opisa, jedinjenja iz ovoga opisa ili neke njihove farmaceutskiprihvatljive soli, se administriraju kao tablete koje sadrže 10 mg do 500 mg jedinjenja sa Formulom (I) (ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli), pri čemu se administrira jedna ili više tableta kako bi se zadovoljila željena doza.
[0272] Kao šta je navedeno malopre, poznato je da signaliziranje preko ERK uzrokuje tumorogenezu preko jednog ili više efekata posredovanja proliferacije tumorskih i drugih ćelija, posredovanja angiogenih događaja i posredovanja pokretnosti, migracije i invazivnosti tumorskih ćelija. Mi smo pronašli da jedinjenja iz ovoga opis poseduju snažnu anti-tumorsku aktivnost za koju verujemo da se ostvaruje inhibicijom ERK koji je uključen u prenosu signala tj. koracima koji dovode do proliferacije i preživljenja tumorskih ćelija, ali i u invazivnosti i sposobnosti migriranja metastazirajućih tumorskih ćelija.
[0273] U skladu sa time, jedinjenja iz ovoga opisa su vredni anti-tumorski agensi, a naročito kao selektivni inhibitori proliferacije, preživljavanja, pokretnosti, širenju i invazivnosti tumorskih ćelija sisara koje dovodi do inhibicije rasta tumora i preživljavanja, ali i do inhibicije tumorskih metastaza. Naročito, jedinjenja iz ovoga opisa su vredni anti-proliferativni i antiinvazivni agensi za obuzdavanje i/ili tretman bolesti čvrstih tumora. Naročito, jedinjenja iz ovoga opisa mogu da budu korisna kod prevencije ili tretmana onih tumora koji su osetljivi na inhibiciju ERK i koji su uključeni u koracima signalne transdukcije koji vode ka proliferaciji i preživljavanju tumorskih ćelija, a i u sposobnosti migracije i invazivnosti metastazirajućih tumorskih ćelija. Dalje, jedinjenja iz ovoga opisa mogu da budu korisna kod prevencije ili tretmana onih tumora koji su posredovani sa ili barem delomično sa inhibicijom ERK, tj. pomenuta jedinjenja mogu da se koriste za uzrokovanje efekta koji inhibira ERK u nekoj toplokrvnoj životinji u potrebi takvog tretmana.
[0274] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije za primenu kao lek za neku toplo-krvnu životinju poput čoveka.
[0275] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije za primenu u uzrokovanju anti-proliferativnog efekta u nekoj toplo-krvnoj životinji poput čoveka.
[0276] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije za primenu u nekoj toplo-krvnoj životinji poput čoveka kao anti-invazivni agens sa ciljem obuzdavanja i/ili tretmana bolesti čvrstog tumora.
[0277] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka za poticanje anti-proliferativnog efekta u nekoj toplo-krvnoj životinji poput čoveka.
[0278] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka za upotrebu u nekoj toplo-krvnoj životinji poput čoveka kao anti-invazivni agens sa ciljem obuzdavanja i/ili tretmana bolesti čvrstog tumora.
[0279] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, za primenu kod prevencije ili tretmana raka u nekoj toplo-krvnoj životinji poput čoveka.
[0280] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka za upotrebu kod prevencije ili tretmana raka u nekoj toplo-krvnoj životinji poput čoveka.
[0281] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, za primenu kod prevencije ili tretmana bolesti čvrstog tumora u nekoj toplo-krvnoj životinji poput čoveka.
[0282] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za prevenciju ili tretman bolesti čvrstog tumora u nekoj toplo-krvnoj životinji poput čoveka.
[0283] Fraza "efektivna količina" ili "terapeutski-efektivna količina" označava onu količinu koja (i) tretira neku određenu bolest, stanje ili poremećaj, (ii) ublažava, poboljšava ili uklanja jedan ili više simptoma neke bolesti, stanja ili poremećaja, (iii) odgađa ili sprečava početak jednog ili više simptoma neke bolesti, stanja ili poremećaja koji je ovde opisan. U slučaju raka, pomenuta efektivna količina može da smanji broj tumorskih ćelija; smanji veličinu tumora; inhibira (na primer, donekle uspori, a preferirano zaustavi) infiltraciju tumorskih ćelija u periferne organe; inhibira tumorske metastaze; donekle inhibira rast tumora; i/ili donekle ublaži jedan ili više simptoma povezanih sa rakom. Kod terapije raka, efikasnost može da se izmeri uz pomoć procene, na primer, vremena do napredovanja bolesti (TTP) i/ili uz pomoć procene stope odgovora (RR).
[0284] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, namenjeno za prevenciju ili tretman hiper-proliferativne bolesti ili poremećaja koji su posredovani sa kinazama RAS/RAF/MEK/ERK.
[0285] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za prevenciju ili tretman neke hiper-proliferativne bolesti ili poremećaja posredovanog sa kinazama RAS/RAF/MEK/ERK.
[0286] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, namenjeno za prevenciju ili tretman neke hiper-proliferativne bolesti ili poremećaja posredovanog sa ERK.
[0287] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za prevenciju ili tretman neke hiper-proliferativne bolesti ili poremećaja posredovanog sa ERK.
[0288] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, namenjeno za prevenciju ili tretman onih tumora koji su osetljivi na inhibiciju ERK.
[0289] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za prevenciju ili tretman onih tumora koji su osetljivi na inhibiciju ERK.
[0290] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, namenjeno za ostvarivanje efekta koji inhibira ERK.
[0291] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za ostvarivanje efekta koji inhibira ERK.
[0292] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, manjeno za ostvarivanje efekta koji selektivno inhibira ERK2.
[0293] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka koji je namenjen ostvarivanju efekta koji selektivno inhibira ERK2.
[0294] Jedinjenja sa Formulom (I) mogu da budu efektivna kod tretmana bilo kojeg tumora u kojem je aktivisan put RAS/RAF/MEK/ERK-kinaza. Primeri za tumore za koje se zna da je u njihovim stanicama aktivisan taj put uključuju akutnu mijelocitnu leukemiju (AML), hroničnu mijelomonocitnu leukemiju, multipli mijelom, hroničnu mijelocitnu leukemiju, kolorektalni rak (CRC), rak dojke, rak bešike, rak glave i vrata, rak mozga, glioblastom, neuroblastom, ne-Hodgkins-ov limfom, rak pankreasa, rak jajnika, rak testisa, rak štitaste žlezde, ne-sitnoćelijski rak pluća (NSCLC), sitnoćelijski rak pluća, melanom, neurofibromatozu tip 1 (NF1), rak žučnog trakta.
[0295] U jednom aspektu, jedinjenja mogu da budu efektivna kod tretmana raka koji je izabran iz NSCLC, raka pankreasa, CRC, melanoma, uvealnog melanoma, pedijatrijskog NF1, raka diferencirane štitaste žlezde i raka žučnog trakta.
[0296] U jednom aspektu, jedinjenja mogu da budu efektivna kod tretmana tumora sa mutacijama u genu KRAS ili BRAF.
[0297] U jednom aspektu, jedinjenja mogu da budu efektivna kod tretmana tumora koji zavise o MAPK-putu poput NSCLC, raka pankreasa i CRC; u nekim izvedbama takvi tumori su oni sa mutacijama u genu KRAS kao šta je opisano u daljnjem tekstu.
[0298] U drugom aspektu, jedinjenja mogu da budu efektivna kod tretmana melanoma sa mutiranim genom BRAF.
[0299] U jednom dodatnom aspektu, jedinjenja mogu da budu efektivna kod tretmana nekog tumora koji je izabran iz melanoma sa mutiranim genom NRAS, uvealnog melanoma, pedijatrijskog NF1, raka diferencirane štitaste žlezde i raka žučnog trakta.
[0300] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, namenjeno za tretman NSCLC, raka pankreasa, CRC, melanoma, uvealnog melanoma, pedijatrijskog NF1, raka diferencirane štitaste žlezde i raka žučnog trakta.
[0301] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, namenjeno za tretman NSCLC, raka pankreasa i CRC.
[0302] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, namenjeno za tretman melanoma u kojem je mutiran gen BRAF.
[0303] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, namenjeno za tretman melanoma u kojem je mutiran gen NRAS, uvealnog melanoma, pedijatrijskog NF1, raka diferencirane štitaste žlezde i raka žučnog trakta.
[0304] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano ranije, namenjeno za tretman raka koji je posredovan sa ERK, pri čemu pomenuti rak je razvio otpornost na jedan ili više drugih inhibira MAPK-puta.
[0305] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenje sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za tretman raka koji je izabran iz NSCLC, raka pankreasa, CRC, melanoma, uvealnog melanoma, pedijatrijskog NF1, raka diferencirane štitaste žlezde i raka žučnog trakta.
[0306] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenje sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za tretman rak koji je izabran iz NSCLC, raka pankreasa i CRC.
[0307] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenje sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za tretman melanoma koji ima mutirani gen BRAF.
[0308] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenje sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za tretman melanoma u kojem je mutiran gen NRAS, uvealnog melanoma, pedijatrijskog NF1, raka diferencirane štitaste žlezde i raka žučnog trakta.
[0309] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđena je primena jedinjenje sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano ranije, u proizvodnji leka namenjenog za tretman raka koji je posredovan sa ERK, pri čemu je pomenuti rak razvio otpornost na više drugih inhibitora MAPK-put.
[0310] Kao šta je navedeno ranije, in vivo efekti jedinjenja sa Formulom (I) mogu da se delomično uspostave uz pomoć jednog ili više metabolita koji nastaju unutar ljudskog ili životinjskog tela nakon administriranja jedinjenja sa Formulom (I).
[0311] U iznad-pomenutim kompozicijama, postupcima i primenama, određena jedinjenja sa Formulom (I) su upravo jedinjenja iz Primera, ili njihove farmaceutski-prihvatljive soli. Dodatni ilustrativni primeri za kompozicije, postupke i razne primene su:
• 2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1 ,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1 ,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• 2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[l,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; • (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• 7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• 7-(3-hlorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• 7-(3-(difluorometil)benzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• 7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-
1
il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1 ,2-a]pirazin-8(5H)-on; (R)-7-(3-hlorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(4-fluoro-3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; (S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-(difluorometoksi)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-methy1-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((4-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-((4-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
2
• (S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• 7-(3,4-difluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt etansulfonske kiseline;
• (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt adipinske kiseline;
• (R)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; • (R)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; i
• (R)-7-(3-metoksibenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on.
[0312] Anti-tumorski tretman koji je definisan ovde može da se primenjuje kao pojedinačna terapija ili može da uključuje, osim jedinjenja iz ovoga opisa, i konvencionalnu hirurgiju ili radioterapiju ili hemoterapiju. U nekim izvedbama, jedinjenje sa formulom (I) se kombinuje sa drugim jedinjenjem koje ima anti-hiper-proliferativne karakteristike ili koje je korisno u tretiranju hiper-proliferativnog poremećaja. Ovo dodatno jedinjenje može prikladno da ima komplementarna delovanja prema jedinjenju sa formulom (I), na primer oba jedinjenja ne deluju međusobno štetno. U nekim aspektima takva kombinovana terapija može da spreči ili odgodi inherentnu ili stečenu otpornost koja može da se pripiše aktivisanju puta RAS/RAF/MEK/ERK koje je primećeno kod inhibicije MEK, a može da spreči ili odgodi inherentnu ili stečenu otpornost posredovanu preko aktivisanja RAS-puta.
[0313] Osim obezbeđivanja poboljšanog tretmana za određeni hiper-proliferativni poremećaj, administriranje nekih kombinacija može da poboljšanja kvalitet života pacijenta u odnosu na kvalitet života kada je isti pacijent primao neki drugu tretman. Na primer, administriranje neke kombinacije pacijentu može da obezbedi poboljšani kvalitet života u odnosu na kvalitet života koji je pacijent imao kada je primao samo jedan od pojedinačnih agenasa kao terapiju. Na primer, neka kombinovana terapija može da smanji dozu potrebnih terapeutskih agenasa. Ovo kombinovanje takođe može da smanji teret tumora čime se smanjuju prateća loša stanja.
[0314] U skladu sa time, u jednoj izvedbi je obezbeđeno jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, i neka dodatna anti-tumorska supstanca za udruženi tretman raka.
[0315] Anti-tumorski tretman koji je definisan ranije, može da se primenjuje kao pojedinačna terapija ili može da uključuje, osim jedinjenja iz ovoga opisa, i konvencionalnu hirurgiju ili radioterapiju ili hemoterapiju. Takva hemoterapija može da uključuje jednu ili više od sledećih kategorija anti-tumorskih agenasa:
i. anti-proliferativne/anti-neoplastične lekove i njihove kombinacije, kao šta se primenjuju u medicinskoj onkologiji, poput alkilirajućih agenasa (na primer, cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, ciklofosfoamid, azotni iperit, melfalan, hlorambucil, busulfan, temozolamid i razne nitrozouree); antimetabolita (na primer, gemcitabin i antifolati poput fluoropirimidina kao 5-fluorouracil i tegafur, raltitreksed, metotreksat, citozin arabinozid, i hidroksiurea); antitumorskih antibiotika (na primer, antraciklini poput adriamicina, bleomicina, doksorubicina, daunomicina, epirubicina, idarubicina, mitomicina-C, daktinomicina i mitramicina); antimitotičkih agenasa (na primer, vinka alkaloidi poput vinkristin, vinblastin, vindezin i vinorelbin i taksoida kao taksol i taksoter i inhibitori polokinaze); i inhibitora topoizomeraza (na primer, epipodofilotoksini poput etopozida i tenipozida, amsakrin, topotekan i kamptotecin); ii. anti-hormonalni agensi poput anti-estrogena (na primer, tamoksifen, fulvestrant, toremifen, raloksifen, droloksifen i jodoksifen), anti-androgena (na primer, bikalutamid, flutamid, nilutamid i ciproteron acetat), antagonista LHRH ili agonista LHRH (na primer, goserelin, leuprorelin i buserelin), progestogena (na primer,
4
megestrol acetat), inhibitora aromataze (na primer, anastrozol, letrozol, vorazol i eksemestan) i inhibitora 5α-reduktaze poput finasterida;
iii. inhibitori fukcije faktora rasta i njihovi nizvodni signalni putevi:
• uključeni su Ab-modulatori bilo kojeg faktora rasta ili mete receptora faktora rasta, koje je pregledno opisano od strane autora Stern et al. Critical Reviews in Oncology/Haematology, 2005, 54, str.11-29;
• takođe su uključeni inhibitori takvih meta sa malim molekulima, na primer inhibitori kinaze – primeri uključuju anti-erbB2 antitelo trastuzumab [Herceptin™], anti-EGFR antitelo panitumumab, anti-EGFR antitelo cetuksimab [Erbitux, C225] i inhibitori tirozin-kinaze uključujući inhibitore porodice erbB-receptora, poput inhibitora tirozin-kinaze iz porodice epidermalnog faktora rasta (EGFR/erbB1) kao šta su gefitinib ili erlotinib, inhibitori erbB2-tirozin-kinaze poput lapatiniba, i mešani inhibitori erb1/2 poput afataniba; slične strategije su dostupne i za druge klase faktora rasta i njihovih receptora, na primer inhibitori porodice hepatocitnog faktora rasta ili njihovih receptora uključujući c-met i ron; inhibitori insulina i porodice insulinskog faktora rasta ili njihovih receptora (IGFR, IR); inhibitori porodice faktora rasta izvedenih iz krvnih pločica i njihovih receptora (PDGFR); i inhibitori signalnih puteva posredovanih drugim receptorskim tirozin-kinazama poput c-kit, AnLK, i CSF-1R;
• takođe su uključeni modulatori koji ciljaju signalne belančevine u širem PI3-kinaznom signalnom putu, na primer, inhibitori drugih izoforma PI3-kinaze poput PI3K-β, i ser/thr-kinaze poput AKT, mTOR, PDK, SGK, PI4K ili PIP5K;
• takođe su uključeni inhibitori serin/treonin-kinaza koje nisu navedene iznad, na primer raf-inhibitora poput vemurafeniba, inhibitori MEK poput selumetiniba (AZD6244, ARRY-142886), kobimetiniba ili GDC-0623 (vidi na primer dokument WO2015/0832840), inhibitori Abl poput imatiniba ili nilotiniba, inhibitori Btk poput ibrutiniba, inhibitori Syk poput fostamatiniba, inhibitori aurora-kinaze (na primer AZD1152), inhibitori drugih ser/thr-kinaza poput raznih JAK, raznih STAT i IRAK4, i inhibitori ciklin-zavisne kinaze;
iv. modulatori signalnih puteva DNA-oštećenja, na primer inhibitori PARP (na primer, olaparib), inhibitori ATR ili inhibitori ATM;
v. modulatori puteva apoptoze i puteva ćelijske smrti poput modulatora porodice Bcl (na primer, ABT-263/navitoklaks, ABT-199);
vi. anti-angiogeni agensi poput onih koji inhibiraju efekte vaskularnog endotelijalnog faktora rasta, [na primer, antitelo bevacizumab (Avastin™) protiv vaskularnog endotelijalnog faktora rasta i, na primer, inhibitor VEGF-receptorske tirozin-kinaze poput sorafeniba, aksitiniba, pazopaniba, sunitiniba i vandetaniba (i jedinjenja koja deluju preko drugih mehanizama (na primer, linomid, inhibitori delovanja integrina αvβ3 i angiostatin)];
vii. agensi koji oštećuju vaskularno tkivo, poput kombretastatina A4;
viii. anti-invazivni agensi, [na primer inhibitori porodice c-Src-kinaze poput dasatiniba (J.
Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661) i bosutiniba (SKI-606), i inhibitori metaloproteinaze poput marimastata, inhibitori receptorske funkcije urokinazog plasminogenog aktivatora ili antitela protiv heparinaze];
ix. pristupi uz pomoć imunoterapije, uključujući na primer ex vivo i in vivo pristupi sa ciljem porasta imunogenosti tumorskih ćelija pacijenta, poput transfekcije sa citokinima poput interleukina 2, interleukina 4 ili faktora koji stimuliše koloniju granulocitmakrofag, pristupi koji smanjuju anergiju T-ćelija, pristupi koji koriste transfektovane imuno-ćelije poput dendritičnih ćelija transfektovanih sa citokinom, pristupi koji koriste tumorske ćelijske linije transfektovane sa citokinom i pristupi koji koriste antiidiotipska antitela. Specifični primeri uključuju monoklonska antitela koja ciljaju PD-1 (na primer, BMS-936558), PDL-1 ili CTLA4 (na primer, ipilimumab i tremelimumab);
x. antisense-terapije ili terapije na bazi RNAi-tehnologije, na primer oni koji su usmereni prema navedenim metama;
xi. pristupi genske terapije, uključujući na primer pristupe koji menjaju aberantne gene poput aberantnog p53 ili aberantnog BRCA1 ili BRCA2; pristupi GDEPT (genedirected enzyme pro-drug therapy) poput onih koji koriste citozin-deaminazu, timidinkinazu ili bakterijsku nitroreduktazu i pristupi koji povećavaju toleranciju pacijenta na hemoterapiju ili radioterapiju poput genske terapije otpornosti na više lekova.
[0316] U skladu sa ovim aspektom, obezbeđena je kombinacija koja je prikladna za primenu u tretmanu raka, a koja sadrži neko jedinjenje sa Formulom (I), kao šta je definisano ranije, ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so i neki drugi anti-tumorski agens, naročito neki od anti-tumorskih agenasa navedenih u tačkama (i) - (xi) iznad. Naročito, pomenuti anti-tumorski agens naveden u tačkama (i) - (xi) iznad predstavlja standardnu negu (standard of care) nekog specifičnog raka koji se tretirana; stručnjak razume značenje fraze "standardna nega".
[0317] Prema tome, u jednom daljnjem aspektu je obezbeđeno jedinjenje sa Formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so zajedno sa nekim drugim anti-tumorskim agensom, a naročito nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste navedene u tačkama (i) - (xi) iznad.
[0318] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so koji su kombinovani sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkama (i) - (xi) iznad, zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razblaživačem ili nosiocem.
[0319] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so koji su kombinovani sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkama (i) - (xi) iznad, zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razblaživačem ili nosiocem, a koja je namenjena tretiranju raka.
[0320] U skladu sa drugom karakteristikom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I) ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli kombinovano sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkama (i) - (xi) iznad u proizvodnji leka koji je namenjen tretmanu raka u nekoj toplo-krvnoj životinji, poput čoveka.
[0321] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so u kombinaciji sa nekim drugim anti-tumorskim agensom, a naročito sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkom (i) iznad.
[0322] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđena je kombinacija koja je prikladna za upotrebu u tretmanu raka i koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I), kao šta je definisano ranije, ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so i bilo koji od anti-tumorskih agenasa navedenih pod (i) iznad.
[0323] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so zajedno sa nekim antitumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkom (i) iznad, uz neki farmaceutskiprihvatljivi razblaživać ili nosilac.
[0324] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkom (i) iznad, zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razblaživačem ili nosiocem pri čemu je pomenuta kompozicija namenjena za tretiranje raka.
[0325] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I) ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli u kombinaciji sa nekim anti-tumorskom agensom koji je izabran iz liste pod točkom (i) iznad, u proizvodnji leka koji je namenjen za upotrebu u tretmanu raka u nekoj toplo-krvnoj životinji, poput čoveka.
[0326] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so u kombinaciji sa nekim drugim anti-tumorskim agensom, a naročito sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkom (iii) iznad.
[0327] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđena je kombinacija koja je prikladna za primenu u tretmanu raka i koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I), kao šta je definisano ranije, ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so i bilo koji od anti-tumorskih agenasa navedenih pod tračkom (iii) iznad.
[0328] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkom (iii) iznad, zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razblaživačem ili nosiocem.
[0329] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkom (iii) iznad, zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razblaživačem ili nosiocem pri čemu je pomenuta kompozicija namenjena za tretiranje raka.
[0330] U skladu sa jednom dodatnom karakteristikom, obezbeđena je primena jedinjenja sa Formulom (I) ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli u kombinaciji sa nekim antitumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkom (iii) iznad, u proizvodnji leka namenjenog za tretman raka u nekoj toplo-krvnoj životinji, poput čoveka.
[0331] UI jednom aspektu, prikladni primeri za anti-tumorske agense navedene pod (iii) iznad su oni agensi koji takođe deluju i na MAPK-kinaze, naročito na signalnu kaskadu RAS-RAF-MEK-ERK poput MEK-inhibitora.
[0332] U jednom dodatnom aspektu, obezbeđena je kombinacija koja je prikladna za primenu u tretmanu raka i koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I), kao šta je definisano ranije, ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so i neki MEK-inhibitor, poput selumetiniba (ARRY-142886).
[0333] U jednom aspekt, malopre pomenuta kombinacija jedinjenja sa formulom (I) i selumetiniba (ARRY-142886) je prikladna za primenu u tretmanu bilo kojeg tumora koji je zavisan o MAPK-putu, poput NSCLC, raznih tumora pankreasa ili CR, opciono kombinovano sa terapijom standardne nege.
[0334] Kombinovanje jedinjenja sa Formulom (I) sa nekim anti-tumorskim agensom navedenim pod (iii) iznad, naročito sa nekim agensom koji deluje na MAPK-kinaze, a naročito na signalnu kaskadu RAS-RAF-MEK-ERK poput raznih MEK-inhibitora može da bude naročito korisno kod tretiranja tumora sa većom prevalencijom mutacija u genu KRAS ili BRAF.
[0335] Naročite kombinacije iz ovoga opisa sadrže bilo koje od jedinjenja iz Primera (ili neku njihovu farmaceutski-prihvatljivu so) i neki MEK-inhibitor poput selumetiniba (ARRY-142886) kao šta je opisano iznad. Dodatni ilustrativni primeri za kombinovanje (iz ovoga opisa) sa nekim MEK-inhibitorom poput selumetiniba (ARRY-14288) su:
• 2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (S)-7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
7-(3-hlorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
7-(3-(difluorometil)benzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; (R)-7-(3-hlorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(4-fluoro-3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; (S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3-(difluorometoksi)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-methy1-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((4-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-((4-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidm-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; 7-(3,4-difluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1 ,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
(R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt etansulfonske kiseline;
1
• (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt adipinske kiseline;
• (R)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on;
• (R)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(tnfluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; • (R)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; i
• (R)-7-(3-metoksibenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on.
[0336] U svim iznad-pomenutim kombinacijama se podrazumeva da određena kombinacija može da takođe da bude dozirana uz tretman standardne nege, koje je poznato stručnjacima, poput nekih drugih tretmana iz tačaka (i) do (xi) iznad. U drugim aspektima, prikladna standardna nega može da bude izabrana iz tačke (i) iznad.
[0337] Prema tome, u jednom dodatnom aspektu ovoga opisa, obezbeđena je trostruka kombinacija prikladna za primenu u tretmanu raka:
a) jedinjenje sa formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so;
b) jedinjenje izabrano iz tačke (iii) iznad (poput nekog drugog jedinjenja koje deluje na MAPK-kinaze) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so; i
c) terapija standardne nege za rak koji se tretira.
[0338] Prikladna terapija standardne nege može da bude dozirana u skladu sa njenim uobičajenim doznim režimom, koje je poznato stručnjacima.
[0339] U skladu sa jednim drugim aspektom, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so u kombinaciji sa
2
nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz liste pod tačkama (i) - (xi) iznad.
[0340] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđen je komplet hemikalija koja sadrži:
a) jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so u prvoj unitarnoj doznoj formi;
b) anti-tumorski agens izabran iz liste pod tačkama (i) - (xi) iznad u drugoj unitarnoj doznoj formi; i
c) kontejnere koji sadrže pomenute prvu i drugu doznu formu.
[0341] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, obezbeđen je komplet hemikalija koja sadrži:
a) jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so u prvoj unitarnoj doznoj formi;
b) anti-tumorski agens izabran iz liste pod tačkama (i) - (xi) iznad u drugoj unitarnoj doznoj formi;
c) kontejner koji sadrži pomenutu prvu i drugu doznu formu; i opciono
d) instrukcije za primenu.
[0342] Ovde, kada se koristi termin "kombinovanje", podrazumeva se da se pomenuti odnosi na istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno administriranje. U jednom aspektu ovoga opisa, "kombinovanje" se odnosi na istovremeno administriranje. U drugom aspektu ovoga opisa, "kombinovanje" se odnosi na odvojeno administriranje. U jednom dodatnom aspektu ovoga opisa, "kombinovanje" se odnosi na sekvencijalno administriranje. Kada je administriranje sekvencijalno ili odvojeno, odgađanje administriranja druge komponente ne treba da bude takva da se izgubi koristan efekt.
[0343] Mada jedinjenja sa Formulom (I) primarno imaju vrednost kao terapeutski agensi namenjeni za primenu u toplo-krvnim životinjama (uključujući čoveka), pomenuta su takođe korisna kada god ima potrebe da se inhibira ERK. Tako, pomenuta jedinjenja su korisna i kao farmakološki standardi namenjeni razvoju novih bioloških testova, ali i istraživanju novih farmakoloških agenasa.
Personalizovana zdravstvena zaštita
[0344] Drugi aspekt ovoga opisa se bazira na identifikovanju veze između statusa gene koji kodira KRAS i osetljivosti na tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I). Ovo, prema tome, obezbeđuje mogućnosti, postupke i alate za izbor pacijenata za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I), a naročito pacijenta koji pate od raka, i/ili izbegavanja tretmana pacijenata za koje je manje verovatno da mogu da odgovore terapeutski na pomenuti tretman pri čemu se izbegavaju nepotrebni tretman i bilo koje nus-pojave koje mogu da budu povezane sa takvim ne-delujućim tretmanom.
[0345] Ovaj opis se odnosi na alate i postupke za izbor pacijenata (uključujući personalizovanu medicinu). Izbor se bazira na tome da li tumorske ćelije, koje će se tretirati, poseduju divlji-tip ili mutirani gen KRAS. Status gena KRAS, prema tome, može da se koristi kao biomarker za osetljivost na tretman sa nekim inhibitorom ERK.
[0346] Postoji jasna potreba za biomarkerima koji omogućavaju izbor pacijenata čiji tumori mogu da odgovore na tretman sa nekim inhibitorom ERK, poput jedinjenja sa Formulom (I). Biomarkeri za izbor pacijenata koji identifikuju pacijente koji najverovatnije mogu da odgovore na neki agens je ideal u tretmanu raka zbog toga jer otklanja nepotrebno tretiranje pacijenata koji pate od tumora koji ne mogu da odgovore na određeni tretman, a i eliminira uticaj nus-pojava nakon takvog tretmana.
[0347] Biomarker može da se opiše kao "karakteristika koja je objektivno izmerena i procenjena kao indikator normalnih bioloških procesa, patogenih procesa, ili farmakološki odgovora na neku terapeutsku intervenciju". Biomarker je bilo koji indikator koji može da se identifikuje i izmeri, a koji je povezan sa nekim određenim stanjem ili bolesti pri čemu postoji korelacija između prisutnosti ili nivoa pomenutog biomarkera i nekog aspekta pomenutog stanja ili bolesti (uključujući prisutnost, nivo ili nivo koji se menja, tip, fazu, osetljivost na stanje ili bolest, ili odzivnost na lek koji se koristi za tretiranje pomenutog stanja ili bolesti). Korelacija može da bude kvalitativna, kvantitativna, ili zajedno kvalitativna i kvantitativna. Tipično, biomarker je neko jedinjenje, fragment jedinjenja ili grupa jedinjenja. Takva jedinjenja mogu da budu sva jedinjenja koja se nalaze ili se proizvode u nekom organizmu, uključujući belančevine (i peptide), nukleinske kiseline i druga jedinjenja.
[0348] Biomarkeri mogu da poseduju predikativnu moć, a kao takvi mogu da se koriste sa ciljem da se predviđa ili otkrije prisutnost, nivo, tip ili faza nekih naročitih stanja ili bolesti (uključujući prisutnost ili nivo naročitih mikroorganizama ili toksina), osetljivost (uključujući
4
genetičku osetljivost) prema nekim stanjima ili bolestima, ili odgovor na naročite tretmane (uključujući tretmane sa lekovima). Smatra se da će biomarkeri igrati sve važniju ulogu u otkrivaju i razvoju budućih lekova, tako šta će da poboljšavaju efikasnost programa istraživanja i razvoja. Biomarkeri mogu da se koriste kao agensi za dijagnostiku, monitori za praćenje napredovanja bolesti, monitori za tretman i predviđanja kliničkog ishoda. Na primer, brojni projekti istraživanja biomarkera nastoje da identifikuju markere za specifične tipove raka i za specifične kardiovaskularne i imunološke bolesti. Veruje se da će razvoj novih potvrđenih biomarkera da dovede do značajnih ušteda u zdravstvenoj zaštiti i u razvoju lekova, a takođe i do značajnih poboljšanja u tretmanu širokog raspona bolesti i stanja.
[0349] Sa ciljem da se optimalno dizajniraju klinička ispitivanja i da se izvuku najbolje informacije iz takvih ispitivanja, potrebni su biomarkeri. Marker može da se meri u surogattkivima i u tumorskim tkivima. U idealnim uslovima je potrebno da ovi markeri takođe korelišu sa efikasnosti pa, posledično, mogu da se koriste u izboru pacijenata.
[0350] Tako, tehnički problem koji karakteriše ovaj aspekt opisa je identifikacija sredstava za stratifikaciju pacijenata kandidata za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I). Ovaj tehnički problem je rešen uz pomoć izvedaba koje su karakterizovane u zahtevima i/ili ovde opisane.
[0351] Ovaj opis obezbeđuje postupak za određivanje osetljivosti ćelija na jedinjenje sa Formulom (I). Postupak podrazumeva određivanje statusa gena KRAS u pomenutim ćelijama. Ćelije se identifikuju da su verovatno osetljive na jedinjenje sa Formulom I ako pomenute ćelije sadrže mutirani KRAS-gen. Za pacijente sa mutiranim KRAS-genom se, prema tome, predviđa da su naročito osetljivi na tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I). Neka ćelija je definisana kao osetljiva na jedinjenje sa Formulom (I) ako pomenuto inhibira porast broja ćelija u testu ćelijskog rasta (ili preko inhibicije ćelijskog preživljavanja i/ili preko porasta ćelijske smrti). Postupci iz ovoga opisa su korisni za predviđanje za kojih je ćelija više verovatno da odgovore na jedinjenje sa Formulom (I) preko inhibicije rasta.
[0352] Ovaj opis se dalje bazira, delomično, na postupke koji mogu da se koriste da se odredi pacijentova odzivnost na jedinjenje sa Formulom (I) uključujući i određivanje da li da se administrira neko jedinjenje sa Formulom (I). Specifično, postupci iz ovoga opisa podrazumevaju određivanje statusa gena KRAS. Prisutnost mutiranog KRAS-gena ukazuje da će tumorske ćelije verovatno da odgovore inhibiranjem rasta kada dođu u kontakt sa jedinjenjem sa Formulom (I). Status gena KRAS može, prema tome, da se koristi za izbor pacijenata za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I).
[0353] Primerak "reprezentativan za tumor" može da bude primerak izolovan iz samog tumora, ili može da bude primerak koji je bio dodatno procesiran, na primer, nukleinska kiselina iz tumorskog primerka koja je bila umnožena PCR-om.
Definicije:
[0354] U delu Personalizovana zdravstvena zaštita:
• "alel" se odnosi na neku određenu formu nekog genskog lokusa, koja se razlikuje od drugih forma istog lokusa time šta ima posebnu nukleotidnu ili amino-kiselinsku sekvencu.
• "reakcija umnožavanja" je reakcija na nukleinskoj kiselini koja rezultuje specifičnim umnožavanjem ciljane nukleinske kiseline umesto ne-ciljanih nukleinskih kiselina. Lančana reakcija polimerazom (PCR) je dobro poznata reakcija za takvo umnožavanje. • "rak", kao šta se ovde koristi, se odnosi na neoplastični rast koji je posledica ćelijske transformacije u neoplastični fenotip. Takva ćelijska transformacija često uključuje gensku mutaciju.
• "gen" je segment DNA koji sadrži sve informacije za regulisanu biosintezu RNA-produkta, uključujući promotor, egzone, introne, i druge elemente koji mogu da budu locirani u 5'- ili 3'-bočnim regionima (ne unutar delova gena koji se transkribiraju) koji kontrolišu ekspresiju.
• "status gena" se odnosi na to da li je neki gen divlji-tip ili ne (tj. da li je mutant).
• "oznaka" se odnosi na neku kompoziciju koja je sposobna da proizvede detektabilni signal koji ukazuje na prisutnost ciljanog polinukleotida u testiranom primerku. Prikladne oznake uključuju radioizotope, nukleotidne hromofore, encime, supstrate, fluorescentne molekule, hemiluminescentne ostatke, magnetne čestice, bioluminescentne ostatke, i sl. Kao takva, oznaka je bilo koja kompozicija koja je detektabilna uz pomoć spektroskopskih, fotohemijskih, biohemijskih, imunohemijskih, električnih, optičkih ili hemijskih pristupa.
• "ne-sinonimna varijacija" se odnosi na neku varijaciju (promenljiva karakteristika) u samoj kodirajućoj sekvenci ili takva koja se preklapa sa kodirajućom sekvencom nekog gena koje rezultuje proizvodnjom različite (promenjene) polipeptidne sekvence. Ove varijacije mogu, ali ne moraju da utiču na funkciju belančevina i uključuju missensevarijante (koje rezultuju zamenom jedne amino-kiseline sa drugom), nonsense-varijante (koje rezultuju skraćenim polipeptidom usled generisanja preuranjenog stop-kodona) i insercije/delecije.
• "sinonimna varijacija" se odnosi na neku varijaciju (promenljiva karakteristika) u kodirajućoj sekvenci nekog gena koja ne utiče na kodirani polipeptid. Ove varijacije mogu da utiču na funkciju belančevine indirektno (na primer, menjanjem ekspresije gena), ali, ako nema potvrde suprotnog, za pomenute se generalno smatra da su bezazlene.
"nukleinska kiselina" se odnosi na jedno-lančane ili dvo-lančane DNA i RNA molekule uključujući prirodne nukleinske kiseline i/ili modifikovane, veštačke nukleinske kiseline koje sadrže modifikovane okosnice ili baze, kao šta je poznato stanju tehnike. "prajmer" se odnosi na jedno-lančanu oligonukleotidnu DNA-sekvencu koja može da posluži kao tačka inicijacije sinteze koja dovodi do produživanja prajmera proizvodeći produkt koji je komplementaran sa lancem nukleinske kiseline koji treba da se kopira. Dužina i sekvenca prajmera moraju da bude takve da omogućavaju početak sinteze produženog produkta. Tipični prajmer sadrži barem oko 7 nukleotida u dužini sekvence koja je suštinski komplementarna sa ciljanom sekvencom, ali preferirani su nešto duži prajmeri. Uobičajeno prajmeri sadrže oko 15-26 nukleotida, ali duži ili kraći prajmeri mogu takođe da se primenjuju.
"polimorfno mesto" je pozicija unutar nekog lokusa za koju postoje barem dve alternativne sekvence u populaciji.
"polimorfizam" se odnosi na varijaciju sekvence koja postoji kod neke individue u pomenutom polimorfnom mestu. Polimorfizmi uključuju nukleotidne zamene, insercije, delecije i mikrosatelite i mogu, ali ne moraju, da rezultuju detektabilnim razlikama u genskoj ekspresiji ili funkciji belančevine. U nedostatku dokaza postojanja efekta na ekspresiju ili na funkciju belančevine, za uobičajene polimorfizme, uključujući ne-sinonimne varijante, se generalno smatra da su uključeni u definiciji sekvence divljeg-tipa gena. Katalog ljudskih polimorfizama i pridruženih anotacija, uključujući validaciju, primećene frekvencije, i povezanost sa bolestima, se vodi u NCBI (dbSNP: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/). Potrebno je se primeti da termin "polimorfizam", kada se koristi u kontekstu genskih sekvenca, ne treba da se zameni sa istim terminom "polimorfizam" kada ga se koristi u kontekstu opisivanja čvrste forme nekog jedinjenja, tj. kristalne ili amorfne prirode tog jedinjenja. Stručnjak razume predviđeno značenje na osnovu zadanog konteksta.
"proba" se odnosi na jedno-lančanu sekvencu specifičnih oligonukleotida koja sadrži sekvencu koja je potpuno komplementarna sa ciljanom sekvencom alela koji se detektuje.
"odgovor" je definisan uz pomoć merenja obavljenih u skladu sa kriterijumima za procenu odgovora u čvrstim tumorima (Response Evaluation Criteria in Solid Tumours, RECIST) koje uključuje klasifikaciju pacijenata u dve glavne grupe: oni koji pokazuju delomičan odgovor ili stabilnu bolest i oni koji pokazuju znakove progresivne bolesti. • "strogi uslovi za hibridizaciju" se odnosi na preko-noćnu inkubaciju na 42 °C u nekom rastvoru koji sadrži 50% formamida, 5x SSC (750 mM NaCI, 75 mM trinatrijum citrat), 50 mM natrijum fosfat (pH 7.6), 5x Denhardt-ov rastvor, 10% dekstran sulfat, i 20 pg/mL denaturirane, pocepane DNA sperme lososa, nakon čega sledi ispiranje filtera u 0.1x SSC na oko 65 °C.
• "preživljavanje" obuhvata pacijentovo ukupno preživljavanje i preživljavanje bez progresije.
• "ukupno preživljavanje" (OS) je definisano kao vreme od inicijacije administriranja leka do smrt iz bilo kojeg razloga. Termin "preživljavanje bez progresije (progressionfree survival, PFS)" je definisano kao vreme od inicijacije administriranja leka do prve pojave progresivne bolesti ili smrti usled bilo kojeg razloga.
[0355] Ovaj pronalazak otkriva postupak za izbor pacijenta koji pati od raka i koji je prikladan za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I), pri čemu pomenuti postupak podrazumeva (a) testiranje pacijenta koji boluje od raka da se utvrdi da li je gen KRAS u njegovom tumoru divlji-tip ili mutant; i (b) izbor pacijenta za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) na osnovu prethodnog.
[0356] U jednoj izvedbi, status gena KRAS u pacijentovom tumoru se određivanje na osnovu biološkog primerka koji je dobiven iz spomenutog pacijenta. U drugoj izvedbi, biološki primerak koji sadrži tumorske ćelije. U jednoj izvedbi, biološki primerak je takav da sadrži tumorsku DNA, poput primerka krvi. U skladu sa jednim aspektom ovoga opisa, obezbeđen je postupak za izbor pacijenta za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I), pri čemu pomenuti postupak podrazumeva pribavljanje primerka od nekog pacijenta koji sadrži tumorske ćelije ili nukleinsku kiselinu iz tumorskih ćelija; određivanje da li je gen KRAS u pacijentovim tumorskim ćelijama divlji-tip ili je mutant; a izbor pacijenta za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) na bazi prethodnog.
[0357] Pomenuti postupak može da uključuje ili isključuje korak izolovanja pacijentovog primerka. Tako, u skladu sa jednim aspektom ovoga opisa, obezbeđen je postupak za izbor pacijenta za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I), pri čemu pomenuti postupak podrazumeva određivanje da li je gen KRAS u tumorskoj ćeliji ili u nukleinskoj kiselini, iz prethodno izolovanog primerka, divlji-tip ili je mutant; i izbor pacijenta za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) na bazi prethodnog.
[0358] U jednoj izvedbi, pacijent je izabran za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) ako tumorska ćelija sadrži mutirani gen KRAS.
[0359] U skladu sa jednim drugim aspektom ovoga opisa, obezbeđen je postupak za predviđanje pacijentove odzivnosti na jedinjenje sa Formulom (I), pri čemu pomenuti postupak podrazumeva određivanje da li je gen KRAS u pacijentovim tumorskim ćelijama divlji-tip ili je mutant i nakon toga, a na bazi prethodnog, predviđanje pacijentove odzivnosti na jedinjenje sa Formulom (I).
[0360] U skladu sa jednim drugim aspektom ovoga opisa, obezbeđen je postupak za određivanje verovatnoće efektivnosti tretmana sa jedinjenjem sa formulom I u ljudskom pacijentu koji boluje od raka koji obuhvata: određivanje da li je gen(i) KRAS u pacijentovim tumorskim ćelijama divlji-tip ili je mutant i nakon toga, a na bazi prethodnog, predviđanje pacijentove odzivnosti na tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I).
[0361] Za potrene ovog opisa, status gena divlji-tip označava normalan ili gen sa odgovarajućom ekspresijom i normalnom funkcijom kodirane belančevine. Suprotno, status mutant znači abnormalan ili gen sa neprikladnom ekspresijom, ili ekspresija belančevine sa izmenjenom funkcijom, u skladu sa poznatim delovanjima mutiranog gena KRAS kod raka (kao šta je ovde opisano). Bilo koja genetička ili epigenetička izmena, uključujući, ali bez ograničavanja, mutaciju, umnožavanje, deleciju, genomski rearanžman, ili promene u profilu metilacije, može da rezultuje statusom mutanta. Međutim, ako takve izmene svejedno rezultuju odgovarajućom ekspresijom koja proizvodi normalnu belančevinu, ili neku funkcionalnu ekvivalentnu varijantu, tada se status gena smatra divljim-tipom. Primeri za varijante koje tipično rezultuju u neki status funkcionalno mutiranog gena uključuju sinonimne kodirajuće varijante i uobičajene polimorfizame (sinonimne ili ne-sinonimne). Kao šta je ovde otkriveno, status gena može da se proceni uz pomoć funkcionalnog testa, ili može da bude predviđen na osnovu prirode detektovanih devijacija od referentne sekvence.
[0362] U nekim izvedbama, status divlji-tip ili mutant za gen KRAS se određuje preko prisutnosti ili odsutnosti ne-sinonimnih varijacija u nukleinskoj kiselini tj. genima. Primećene ne-sinonimne varijacije koje odgovaraju uobičajenim polimorfizmima bez anotiranih funkcionalnih efekata ne pridonose genskom statusu mutant.
Detalji pritupa sekvenci gena KRAS u Gene bank: KRAS NM_004985
Podrazumeva se da sekvence gena i mRNA prikazane za gen KRAS i sekvenca KRAS-belančevine su sve reprezentativne sekvence. Kod normalnih individua postoje dva kopije svakog gena u genomu, majčina i očeva kopija, koje verovatno sadrže iste razlike u sekvenci, ali štaviše u populaciji će postojati brojne alelne varijante iste genske sekvence. Druge sekvence koje se divljeg-tipa uključuju one koje poseduju jednu ili više sinonimnih promena u sekvenci nukleinske kiseline (ove promene ne menjaju sekvencu kodirane belančevine), nesinonimnih uobičajenih polimorfizama (na primer, polimorfizmi germinativne linije) koji menjaju sekvencu belančevine, ali ne utiču na funkciju belančevine, i intronske promene sekvence u mesti gde ne nastupa splajsovanje (non-splice-site).
[0363] U skladu sa jednim drugim aspektom ovog opisa, obezbeđen je postupak za određivanje verovatnoće efektivnosti tretmana sa jedinjenjem sa Formulom (I) u ljudskom pacijentu koji pati od raka, pri čemu pomenuti postupak obuhvata: određivanje prisutnost ili odsutnosti barem jedne ne-sinonimne varijacije nukleinske kiseline u genu KRAS iz pomenutog pacijenta u odnosu na sekvencu gena divljeg-tipa, pri čemu prisutnost barem jedne somatske ne-sinonimne varijacije nukleinske kiseline u genu KRAS ukazuje da će tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) verovatno da bude efektivan.
[0364] U skladu sa jednim drugim aspektom ovoga opisa, obezbeđen je postupak za procenu osetljivost neke individue na tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I), pri čemu pomenuti postupak obuhvata:
(i) određivanje statusa ne-sinonimne mutacije u genu KRAS u nukleinskoj kiselini iz tumorske ćelije iz pomenute individe; i
(ii) određivanje verovatne osetljivosti pomenute individue na tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) pozivajući se na status ne-sinonimne mutacije u genu KRAS iz tumorskih ćelija.
[0365] Stručnjaku na raspolaganje stoje brojne tehnike za određivanje statusa gena KRAS. Status ovog gena može da se utvrdi uz pomoć određivanja sekvence nukleinske kiseline. To
1
može da se ostvari direktnim sekvenciranjem gena pune dužine ili preko analize specifičnih mesta u genu, na primer uobičajenih mutiranih mesta.
[0366] Alternativna sredstva za određivanje da li je gen KRAS divlji-tip ili je mutant je procena funkcije transkribovanog genskog produkta. Funkcionalna mutacija u genu KRAS će proizvesti belančevinu koja ima narušenu sposobnost hidrolize GTP. Mutirani gen KRAS ustraje u aktivnom, GTP-vezanom stanju koje dovodi do konstitutivne i deregulisane stimulacije nizvodnog signaliziranja u ćelijama, uključujući, ali bez ograničenja, aktivisanje puteva Raf, PI3K i Ral.
[0367] Testovi za procenu funkcionalnog statusa varijanata gena KRAS kada su eksprimirane u ćelijama uključuju, ali bez ograničenja, sledeće:
(i) pojačano vezanje na Ras-vezni domen (RBD) u Raf1,
(ii) povećane nivoe fosforilisanih ERK1/2, MEK1/2, ili Akt;
(iii) pojačano formiranje fokusa i kolonija NIH-3T3-ćelija transfektovanih sa varijantom gena KRAS.
Primerci
[0368] Pacijentov primerak koji će se testirati radi utvrđivanja statusa gena može da bude bilo koje tumorsko tkivo, primerak koji sadrži tumorske ćelije ili tumorsku nukleinsku kiselinu, a koji je dobiven ili može da se dobije iz neke individue. Test-primerak je konvencionalno neki primerak krvi, bris iz usta, biopsija, ili neka druga telesna tečnost ili tkivo koje je dobiveno iz neke individue. Naročiti primerci uključuju: tumorske ćelije koje cirkulišu, DNA koja cirkuliše u plazmi ili serumu, ćelije izolovane iz ascitne tečnosti pacijentica koje pate od raka jajnika, plućni ispljuvak kod pacijenata koji pate od tumora u plućima, aspirat iz pacijenata koji pate od raka dojke, urin, a periferno krv, sastrugane ćelije, folikula dlake, ubod iz kože ili obraza.
[0369] Podrazumeva se da test-primerak može podjednako da bude sekvenca nukleinske kiseline koja odgovara sekvenci u test-primerku, odnosno ceo ili deo regiona u primerku nukleinske kiseline treba najpre (pre analize) da bude umnožen primenom bilo koje prikladne tehnike na primer, lančana reakcija polimerazom (PCR). Nukleinska kiselina može da bude genomska DNA ili parcijalna ili sva ćelijska RNA. U naročitim izvedbama, RNA je sva ćelijska RNA, a koristi se direktno kao matrica za označavanje prvog-lanca cDNA uz pomoć
2
nasumičnih prajmera ili poli-A prajmera. Nukleinska kiselina ili belančevina u test-primerku može da bude ekstrahovana iz primerka primenom standardnih metodologija (vidi Green & Sambrook, ur., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4. izdanje, vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.).
[0370] Dijagnostički postupci iz ovoga opisa mogu da se provedu uz pomoć primeraka koji je uzet ranije sa individue ili pacijenta. Takvi primerci mogu da se skladište uz pomoć smrzavanja ili fiksiranja i uklapanja u formalin-parafinu ili drugom medijumu. Alternativno, može da se uzme i koristi sveži primerak tumorskih ćelija.
[0371] Postupci iz ovoga opisa mogu da se primene na ćelijama iz bilo kojeg tumora. Prikladni tumori za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) su opisani ranije.
Postupci za detektovanje nukleinskih kiselina
[0372] U kontekstu ovoga opisa, može da se primeni detektovanje nukleinskih kiselina mutiranih gena KRAS sa ciljem da se predvidi odgovor na tretman sa lekom. Budući da se mutacije u pomenutim genima javljaju na nivou DNA, postupci iz ovoga opisa mogu da se baziraju na detektovanju mutacija ili varijacija u genomskoj DNA, kao i u transkriptima i u samim belančevinama. Može da bude poželjno da se potvrde mutacije u genomskoj DNA uz pomoć analize transkripata i/ili polipeptida, a sa ciljem da se obezbedi da se detektovana mutacija stvarno eksprimira u subjektu.
[0373] Stručnjacima je poznat veliki broj analitičkih procedura koje mogu da se koriste za detektovanje prisutnost ili odsutnosti nukleotidinih varijanata na jednoj ili više pozicija u genu. Opšte uzeto, detektovanje alelne varijacije zahteva korišćenje tehnike diskriminacija mutacija, opciono neku reakciju umnožavanja (na primer na bazi lančene reakcije polimerazom) i opciono neki sistem za generisanje signala. Stanje tehnike poznaje puno tehnika za detektovanje mutacija, a pomenute mogu da se primenjuju zajedno sa nekim sistemom za generisanje signala. Mnogi postupci za detektovanje alelne varijacije su pregledno opisani od strane autora Nollau et al., Clin. Chem., 1997, 43, 1114-1120; Anderson SM. Expert Rev Mol Diagn., 2011, 11, 635-642; Meyerson M. et al., Nat Rev Genet., 2010, 11, 685-696; i u standardnim udžbenicima, na primer "Laboratory Protocols for Mutation Detection", ur.: U. Landegren, Oxford University Press, 1996 i "PCR", 2. izdanje od Newton & Graham, BIOS Scientific Publishers Limited, 1997.
[0374] Kao šta je navedeno iznad, određivanje prisutnosti ili odsutnosti neke naročite varijacije ili mnoštva varijacija u genu KRAS iz nekog pacijenta koji pati od raka može da se provodi na brojne načine. Takvi testovi se uobičajeno provode na DNA ili RNA koje su izolovane iz bioloških primeraka, na primer, tkiva iz biopsija, urina, stolice, ispljuvka, krvi, ćelija, sastruženog tkiva, aspirata iz dojke ili drugih ćelijskih materijala, a može da se provede promenom raznih postupaka uključujući, ali bez ograničenja, PCR, hibridizaciju sa alelspecifičnim probama, detektovanje encimske mutacije, hemijsko cepanje pogrešno sparenih baza, masene spektrometrije ili DNA-sekvencranja, uključujući mini-sekvenciranje.
[0375] Prikladne tehnike za detektovanje mutacija uključuju tehnike amplification refractory mutation system (ARMS™), amplification refractory mutation system linear extension (ALEX™), competitive oligonucleotide priming system (COPS), Taqman, Molecular Beacons, restriction fragment length polymorphism (RFLP), i restriction site based PCR and fluorescence resonance energy transfer (FRET).
[0376] U nekim posebnim izvedbama, postupak koji je primenjen za određivanje nukleotid(a) u genu-biomarkeru je izabran iz grupe koja obuhvata: alel-specifično umnožavanje (alelspecifični PCR) – poput amplification refractory mutation system (ARMS), sekvenciranja, testa diskriminacije alela, hibridizacije, restriction fragment length polymorphism (RFLP) ili test ligiranja oligonukleotida (OLA).
[0377] Generisanje nukleinskih kiselina iz primeraka za analizu generalno zahteva umnožavanje nukleinske kiseline. Mnogi postupci za umnožavanje se baziraju na encimskoj lančanoj reakciji (poput lančane reakcije polimerazom, ligazne lanačane reakcije, ili selfsustained sequence replication) ili na replikaciji celog ili dela vektor u kojem je pomenuta klonirana. Preferirano, umnožavanje u skladu sa ovim opisom je eksponencijalno umnožavanje, kao na primer ono u lančanoj reakciji polimerazom.
[0378] Mnogi postupci za umnožavanje mete i za signaliziranje su opisani u literaturi, na primer, opšti pregled ovih postupaka može da se vidi kod autora Landegren, U., et al., Science, 1988 242, 229-237 i Lewis, R., Genetic Engineering News 1990, 10, 54-55. Ovi postupci za umnožavanje mogu da se primenjuju u postupcima iz ovoga opisa, a uključuju lančanu reakciju
4
polimerazom (PCR), PCR in situ, ligaznu reakciju umnožavanja (ligase amplification reaction, LAR), ligaznu hibridizaciju, replikazu iz Qβ-bakteriofaga, sistem za umnožavanje na bazi transkripcije (transcription-based amplification system, TAS), genomsko umnožavanje sa sekvenciranjem transkripta (genomic amplification with transcript sequencing, GAWTS), umnožavanje na bazi sekvence nukleinske kiseline (nucleic acid sequence-based amplification, NASBA) i in situ hibridizaciju. Prajmeri koji su prikladni za primenu u brojnim tehnikama umnožavanja mogu da se pripreme u skladu sa postupcima koji su poznati stanju tehnike.
[0379] Lančana reakcija polimerazom (PCR). PCR je postupak za umnožavanje nukleinske kiseline koji je opisan inter alia u U.S. pat. br. 4,683,195 i 4,683,202. PCR obuhvata ponovljene cikluse reakcije produžavanja prajmera generisanih DNA-polimerazom. DNA mete se denaturira, a tada se dodaju dva oligonukleotida, koji prepoznaju sekvencu-metu na suprotnim lancima DNA koja treba da se amplifikuje. Ovi oligonukleotidi sada postaju prajmeri koje koristi DNA-polimeraza. DNA se kopira produžavanjem prajmera kako bi se proizvele kopije oba lanca. Ponavljanjem ciklusa toplotne denaturacije, hibridizacije prajmera i njihov produžetak, ciljana DNA može da se amplifikuje milion ili više puta u približno dva do četiri sata. PCR je alat molekularne biologije koji mora da se koristi zajedno sa tehnikama detektovanja sa ciljem da se utvrdi rezultat umnožavanja. Prednost PCR-a je ta da povećava osetljivost amplifikovanjem količine ciljane DNA za 1 miliona- pa do 1 milijardi-puta za približno 4 sata. PCR može da se koristi da se amplikuje bilo koja poznata nukleinska kiselina u nekom dijagnostičkom kontekstu (Mok et al., Gynaecologic Oncology, 1994, 52: 247-252,).
[0380] Tehnika specifičnog umnožavanja alela poput amplification refractory mutation system (ARMS™) (Newton et al., Nucleic Acids Res., 1989, 17, 2503-2516) takođe može da se koristi za detektovanje mutacija u pojedinačnim bazama. U odgovarajuće uslovima PCR-umnožavanja, jedna pogrešno-sparena baza locirana na 3'-kraju prajmera je dovoljna za preferencijalno umnožavanje potpuno sparenog alela (Newton et al., 1989, supra), koje dozvoljava diskriminaciju blisko srodnih vrsta. Ideja uza sistema za umnožavanje uz pomoć malopre opisanih prajmera je da oligonukleotidi sa pogrešno-sparenim 3'-ostatkom neće funkcionirati kao prajmeri u PCR-reakciji pod određenim uslovima. Ovaj sistem umnožavanja omogućava genotipizaciju samo na osnovu provere reakcionih smeša nakon elektroforeze na agaroznom gelu.
[0381] Analiza umnoženih produkata može da se provode primenom bilo kojeg postupka koji je sposoban da razdvoji umnožene produkte prema njihovoj veličini, uključujući automatizovanu i ručnu gel-elektroforezu, masenu spektrometriju, i sl.
[0382] Postupci za izolovanje nukleinske kiseline, umnožavanje i analizu su rutinski za stručnjaka, a primeri za protokole mogu da se pronađu, na primer, kod autora Green & Sambrook, ur., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4. izdanje, vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.). Naročito korisni izvor protokola za postupke koji se primenjuju kod PCR-amplifikacije je knjiga PCR (Basics: From Background to Bench) od M. J. McPherson, S. G. Mailer, R. Beynon, C. Howe, Springer Verlag; 1. izdanje (15. oktobar 2000.), ISBN: 0387916008.
[0383] U još nekim dodatnim izvedbama, ovaj opis se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) namenjeno za prevenciju i tretman raka za čije je tumorske ćelije identifikovano da sadrže mutirani gen KRAS.
[0384] Za sve aspekte opisane iznad, mutirane forme gena KRAS su određene/identifikovane na svim pozicijama duž gena.
[0385] U nekim dodatnim aspektima, jedinjenja iz ovoga opisa mogu takođe da budu korisna u tretiranju tumora u kojima je mutiran gen BRAF. Informacija koja je navedena iznad u delu Personalizovana zdravstvena zaštita, a odnosi se na tumore sa mutiranim genom KRAS može da se primenjuje analogno i na tumore u kojima je mutiran gen BRAF, osim detalja o pristupnim informacijama u Gene Bank. Pristupi podaci za gen BRAF u Gene Bank su: BRAF NM_004333.
Opis Slika
[0386]
• Slika 1 prikazuje obrazac difrakcije X-zraka na prahu (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1 (Primer 18a).
• Slika 2 prikazuje DSC-termogram (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1 (Primer 18a).
• Slika 3 prikazuje obrazac difrakcije X-zraka na prahu (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1 (Primer 34).
• Slika 4 prikazuje DSC-termogram (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1 (Primer 34).
• Slika 5 prikazuje inhibiciju rasta tumora uz pomoć Primera 18a u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886) u modelu A549-ksenotransplanta.
• Slika 6: inhibicija ćelijskog rasta linije A549 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Dozna matrica predstavlja procenat inhibicije rasta uzet iz podešenih kriva odgovora na dozu.
• Slika 7: inhibicija ćelijskog rasta linije A549 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Loewe-ov model aditivnosti izračunat iz kriva odgovora na dozu (monoterapija).
• Slika 8: inhibicija ćelijskog rasta linije A549 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Excess heatmap (sinergija) izračunata oduzimanjem podataka Loewe-ovog modela aditivnosti iz podešenih podataka.
• Slika 9: inhibicija ćelijskog rasta linije H2122 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Dozna matrica predstavlja procenat inhibicije rasta uzet iz podešenih kriva odgovora na dozu.
Slika 10: inhibicija ćelijskog rasta linije H2122 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Loewe-ov model aditivnosti izračunat iz kriva odgovora na dozu (monoterapija).
Slika 11: inhibicija ćelijskog rasta linije H2122 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Excess heatmap (sinergija) izračunata oduzimanjem podataka Loewe-ovog modela aditivnosti iz podešenih podataka.
Slika 12: inhibicija ćelijskog rasta linije H2009 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primer 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Dozna matrica predstavlja procenat inhibicije rasta uzet iz podešenih kriva odgovora na dozu.
Slika 13: inhibicija ćelijskog rasta linije H2009 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Loewe-ov model aditivnosti izračunat iz kriva odgovora na dozu (monoterapija).
Slika 14: inhibicija ćelijskog rasta linije H2009 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Excess heatmap (sinergija) izračunata oduzimanjem podataka Loewe-ovog modela aditivnosti iz podešenih podataka.
Slika 15: inhibicija ćelijskog rasta linije Calu6 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Dozna matrica predstavlja procenat inhibicije rasta uzet iz podešenih kriva odgovora na dozu.
Slika 16: inhibicija ćelijskog rasta linije Calu6 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Loewe-ov model aditivnosti izračunat iz kriva odgovora na dozu (monoterapija).
Slika 17: inhibicija ćelijskog rasta linije Calu6 ne-sitnoćelijskog raka pluća sa mutiranim genom KRAS (NSCLC) uz pomoć Primera 18 u kombinaciji sa selumetinibom (ARRY-142886). Excess heatmap (sinergija) izračunata oduzimanjem podataka Loewe-ovog modela aditivnosti iz podešenih podataka.
Primeri
[0387] Ovaj opis će sada biti ilustrovan u sledećim Primerima u kojima, generalno vredi:
(i) operacije su provedene na ambijentalnoj temperaturi, tj. u rasponu od 17-25° C i u atmosferi nekog inertnog gasa poput azota osim ako je drugačije navedeno; (ii) isparavanja su provedena primenom rotacionog isparavanja ili uz pomoć Genevacopreme ili evaporatora Biotage v10 u uslovima in vacuo, a procedure dorade su provedene nakon odstranjivanja zaostalih čvrstih materija uz pomoć filtracije; (iii) prečišćavanja fleš-hromatografijom su provedena na automatizovanom Teledyne Isco CombiFlash<®>Rf ili na Teledyne Isco CombiFlash<®>Companion<®>uz korišćenje pre-spakovanih silika-kolona RediSep Rf Gold™ (20-40 µm, sferične čestice), punjenja GraceResolv™ (silika od Davisil<®>) ili punjenja Silicycle (40-63 µm). (iv) preparativna hromatografija je provedena na instrumentu Gilson prep HPLC sa UV-sakupljanje;
(v) hiralna-preparativna hromatografija je provedena na instrumentu Gilson sa UV-sakupljanjem (233 injektor/kolektor frakcija, 333 & 334 pumpe, 155 UV-detektor), ili na sistemu Interchim PuriFlash 4250-250 ili na sistemu Novasep LC50 sa detektorom Knauer K2501 UV;
(vi) prinosi, kada su navedeni, ne predstavljaju nužno maksimalnu količinu koja može da se dobije;
(vii) opšte uzeto, strukture krajnjih produkata sa Formulom I su potvrđene uz pomoć nuklearne magnetne rezonance (NMR-spektroskopija); vrednosti NMR-hemijskih pomaka su izmerene na delta-skali [spektari protonske magnetne rezonance su određeni uz pomoć instrumenta Bruker Avance 500 (500 MHz) ili Bruker Avance 400 (400 MHz)]; merenja su obavljena na ambijentalnoj temperaturi osim ako je drugačije specifikovano; sledeće skraćenice su korišćene: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; dd, dvostruki dubleti; ddd, dublet dubleta dubleta; dt, doublet tripleta; bs, široki signal; pri čemu "DMSO" se odnosi na rastvarač koji je korišćen tokom NMR, a podrazumeva se da je to d6-DMSO;
(viii) opšte uzeto, krajni-produkti sa Formulom I su takođe karakterizovani uz pomoć masene spektroskopije nakon tečne hromatografije (LCMS ili UPLC); UPLC je proveden na aparatu Waters UPLC koji je bio opremljen sa Waters SQ masenim spektrometrom (temp. kolone: 40, UV = 220-300 nm, maseni spek. = ESI sa podešavanjem pozitivno/negativno) kod stope protoka od 1 ml/min uz pomoć sistema rastvarača: 97% A 3% B do 3% A do 97% B tokom 1.50 min (ukupno vreme voženja sa ekvilibracijom na početne uslove itd.1.70 min), pri čemu A = 0.1% mravlja kiselina u vodi (za kiseli rad) ili 0.1% amonijak u vodi (za bazni rad), a B = acetonitril. Za kiselu analizu, korišćena kolona je bila Waters Acquity HSS T31.8 µm 2.1 x 50 mm, a za baznu analizu korišćena kolona je bila Waters Acquity BEH 1.7 µm 2.1 x 50 mm; LCMS je proveden uz pomoć Waters Alliance HT (2795) koji je bio opremljen sa Waters ZQ ESCi masenim spektrometrom i kolonom Phenomenex Gemini -NX (50 x 2.1 mm, 5 µm) kod stope protoka od 1.1 ml/min 95% A do 95% B tokom 4 min uz zadržavanje od 0.5 min. Modifikator je držan konstantan na 5% C (acetonitril:voda = 50:50, 0.1% mravlja kiselina) ili D (acetonitril:voda = 50:50, 0.1% amonijum hidroksid (0.88 SG) u zavisnosti o tome da li se radilo o kiselom ili baznom postupku.
(ix) prečišćavanje jonskom izmenom je generalno provođeno uz pomoć punjenja SCX-2 (Biotage, silika koja je bila funkcionalizovana sa propilsulfonskom kiselinom. Proizvedena uz pomoć trifunkcionalnog silana. Bez zaštita na krajevima).
(x) čistoća intermedijara je bila procenjena uz pomoć tanko-slojne hromatografije, maseno-spektralnom analizom, HPLC (tečna hromatografija visoke performanse) i/ili NMR-analizom.
(xi) difrakcija X-zraka na prahu je provedena na aparatu Bruker D4. Difraktogram X-zraka na prahu je određen praćenjem kristalnog primerka na vaflu za postavljanje tj. na Bruker-ovom pojedinačnom silikonskom kristalu (SSC) uz razmazivanje primerka u tankom sloju uz pomoć mikroskopskog stakalca. Primerak je okretan na 30 revolucija po minutu (sa ciljem da se poboljšanja statistika brojanja) i zračenjem sa X-zrakama koje su generisane uz pomoć bakrene duge i fine fokusne tube kod 40 kV i 40 mA na talasnoj dužini od 1.5418 angstrema. Kolimitiran izvor X-zraka je proveden kroz automatski varirajući divergentni prorez podešen na V20, a reflektovana radijacija je usmerena kroz prorez (5.89 mm) koji sprečava raspršivanje i kroz prorez za detektovanje od 9.55 mm. Primerci su izmerenih u reflektivnoj geometriji u konfiguraciji θ-2θ tokom perioda skeniranja od 2° do 40° 2θ sa nominalnim sekundarnim (0.12) izlaganjem uz porast od 0.02°. Instrument je bio opremljen sa poziciono-osetljivim detektorom (Lynxeye). Stručnjaci za difrakciju X-zraka na prahu znaju da relativni intenzitet šiljaka može da bude pod uticajem, na primer, zrna veličine iznad 30 µm i ne-unitarnog aspekta omera koje može da utiče na analizu primeraka. Stručnjak takođe zna da pozicija refleksija može da bude pod uticajem tačne visine na koju primerak leži u difraktometru i nulte kalibracije samog difraktometra. Planarna površina primerka može takođe da ima manji efekat. Tako, predstavljeni podaci za obrasce difrakcije ne treba da se smatraju apsolutnim vrednostima.
(xii) Diferncijalna skening kalorimetrija (differential scanning calorimetry, DSC) je provedena uz pomoć TA Instruments Q2000 DSC. Tipično, manje od 5 mg materijala stavljenog u standardnu aluminijumsku posudu sa poklopcem je grejano na temperaturnom rasponu od 25° C do 300° C uz konstantnu stopu grejanja od 10° C po minutu. Korišćen je azot kao gas za pročišćavanje – stopa protoka: 50 ml/min. (xiii) sledeće skraćenice su korišćene:
XantPhos-prekatalizator 2. generacije
hloro[(4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten)-2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II)
18-kruna-6
1,4,7,10,13,16-heksaoksaciklooktadekan
vod.
vodeno
atm
jedinica atmosferskog pritiska
Boc
tert-butoksikarbonil
BrettPhos-prekatalizator 3. generacije
[2-(di-1-adamantilfosfino)-2',4',6'-triizopropil-3,6-dimetoksibifenil][2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II) metansulfonat
CDCl3
deutero-hloroform
DAST
(dietilamino)sulfur trifluorid
DCM
dihlorometan
DIEA
N,N-diizopropiletilamin
1
DIPEA
diizopropiletilamin
DMF
dimetilformamid
DMSO
dimetil sufoksid
DSC
diferencijalna skening kalorimetrija EtOH
etanol
EtOAc
etil acetat
IPA
izo-propilalkohol
MeOH
metanol
MeTHF
rac-2-metiltetrahidrofuran
NBS
N-bromosukcinimid
Pd2dba3tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) st/ST
sobna temperatura
zas.
zasićen
SEM-Cl
2-(trimetilsilil)etoksimetil hlorid TEA
trietilamin
THF
tetrahidrofuran
Tos
tosil
2 XPhos prekatalizator 2. generacije
hloro(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II)
XRPD
Diffrakcija X-zraka na prahu.
Primer 1
2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0388]
[0389] NaH (12.05 mg, 0.50 mmol) je dodan u 7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-2-(2-(metilsulfonil)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 1; 100 mg, 0.25 mmol) i N-(1-metil-1H-pirazol-5-il)formamid (Intermedijar 2; 94 mg, 0.75 mmol) u THF (1.5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 3 h. Dodan je EtOH (2 mL), a smeša je mešana tokom 10 min. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (50 mL) pa je ekstrahovana u EtOAc (30 x 25 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje sirovi produkt. Pomenuti sirovi produkt je prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: Waters XBridge Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 100 mm), uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.1% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje su sadržavale željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje 2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 1; 40 mg, 38%) u formi bele čvrste materije.
<1>HNMR (300 MHz, DMSO, 26°C) δ 2.51 (3H, s), 3.70 (3H, s), 3.84-3.88 (2H, m), 4.40-4.44 (2H, m), 4.76 (2H, s), 6.30 (1H, s), 7.14-7.18(2H, m), 7.32-7.35 (2H, m), 7.64-7.69 (1H, m), 7.93 (1H, s), 8.46 (1H, d), 9.38 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 416.
Intermedijar 1
7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-2-(2-(metilsulfonil)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0390]
[0391] Kalijum persulfat (1.01 g, 3.75 mmol) je, deo po deo, dodan u 7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-2-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 3; 275 mg, 0.75 mmol) u MeOH (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 25° C tokom 12 h. Reakciona smeša je tada grejana do 40 °C pa je mešana tokom dodatnih 6 h. Reakciona smeša je tada razblažena sa DCM (100 mL), pa je ispirana sa vodom (2 x 25 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 10% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-2-(2-(metilsulfonil)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 1; 210 mg, 70%) u formi bele čvrste materije.<1>HNMR (300 MHz, DMSO, 26 °C) δ 2.50 (3H, s), 3.46 (3H, s), 3.85-3.95 (2H, m), 4.42-4.46 (2H, m), 4.86 (2H, s), 7.15-7.20 (2H, m), 7.64-7.69 (1H, m), 8.15 (1H, d), 8.40 (1H, s), 9.05 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 399.
4
Intermedijar 2
N-(1-metil-1H-pirazol-5-il)formamid
[0392]
[0393] Mravlja kiselina (3.1 mL, 67.35 mmol) je dodana u sirćetni anhidrid (7.7 mL, 75.42 mmol) koje daje bezbojni rastvor. Nastao rastvor je mešan na 45 °C tokom 45 min. Reakciona smeša je tada ohlađena do 0 °C pa je dodan 1-metil-1H-pirazol-5-amin (2 g, 20.59 mmol). Nastao rastvor je mešan na 0 °C tokom 10 min. Reakciona smeša je tada izlivena u smešu sa vodom (50 mL) i EtOAc (50 mL), a reakcionoj smeši je podešen pH do 8 uz pomoć zasićenog K2CO3. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (6 x 50 mL) pa je ispiran sa vodom (2 x 50 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje željeni produkt, N-(1-metil-1H-pirazol-5-il)formamid (intermedijar 2; 1.21 g, 47%) u formi bele čvrste materije.<1>H-NMR (300 MHz, CDCl3, 26°C) 3.80 (3H, s), 6.11 (1H, s), 7.44 (2H, s), 8.35 (1H ,s). m/z (ES+), [M+H]+ = 126.
Intermedijar 3
7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-2-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-On
[0394]
[0395] 4-tributilstanil-2-tiometilpirimidin (2.66 g, 6.41 mmol) je dodan u 2-bromo-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 4; 1.87 g, 5.82 mmol) i Pd-118 ([1,1'-bis(di-tert-butilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II)) (0.204 g, 0.29 mmol) u DMF (5 mL) pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 150 °C u mikrotalasnom reaktoru tokom 8 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit, razblažena sa EtOAc (200 mL), i ispirana sekvencijalno sa vodom (2 x 50 mL). Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen uz pomoć C18-fleš-hromatografije u gradijentu elucije od 0 do 50% MeCN u vodi. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-2-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 3; 0.28 g, 13%) u formi sive čvrste materije.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3,22 °C) δ 2.50 (3H, s), 2.63 (3H, s), 3.85-3.89 (2H, m), 4.39-4.43 (2H, m), 4.85 (2H, s), 7.15-7.19 (2H, m), 7.59-7.69 (2H, m), 8.23 (1H, s), 8.63 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 367.
Intermedijar 4
2-bromo-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0396]
[0397] Natrijum acetat (3.24 g, 39.6 mmol) je, deo po deo, dodan u etil 1-(2-aminoetil)-4-bromo-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 5; 5.3 g, 15.8 mmol) i 6-metil-2-piridinkarboksaldehid (1.92 g, 15.8 mmol) u MeOH (100 mL) koji su bili ohlađeni na 0 °C u atmosferi azota. Nastao rastvor je tada mešan na 0 °C tokom 15 min. Dodan je natrijum triacetoksiborohidrid (10.1 g, 47.5 mmol), deo po deo na 0 °C, a nastao rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Reakcionoj smeši je tada podešen pH do 7-8 uz pomoć zasićenog NaHCO3pa je razblažena sa DCM (250 mL). DCM-faza je tada ispirana sekvencijalno sa vodom (2 x 50 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 9% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 2-bromo-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 4; 2.5 g, 49%) u formi bele čvrste materije.<1>H-NMR (300 MHz, DMSO, 27 °C) δ 2.44 (3H, s), 3.80-3.84 (2H, m), 4.28-4.32 (2H, m) 4.73 (2H, s), 7.137.16 (2H, m), 7.63-7.68 (1H, m), 7.96 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 321.
Intermedijar 5
Etil 1-(2-aminoetil)-4-bromo-1H-imidazol-2-karboksilat dihidrohlorid
[0398]
[0399] Etil 4-bromo-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 6; 4.6 g, 12.70 mmol) je dodan u HCl (višak) u 1,4-dioksanu (40 mL), a nastao rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a nastala čvrsta materija je titrirana sa heptanom pa je filtrirana koje daje etil 1-(2-aminoetil)-4-bromo-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 5; 5.30 g, 140%) u formi bele čvrste materije.<1>H-NMR (300 MHz, DMSO, 25 °C) δ 1.33 (3H, t), 3.03-3.16 (2H, m), 4.35 (2H, q), 4.63 (2H, t), 7.34 (1H, s).
Intermedijar 6
Etil 4-bromo-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0400]
[0401] NBS (10.05 g, 56.5 mmol) je, deo po deo, dodan u etil 1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 7; 16 g, 56.5 mmol) u DCM (80 mL) i DMF (80 mL) na 0 °C pod azotom. Nastao rastvor je tada mešan na temperaturi od 0 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (300 mL), pa je ispirana sekvencijalno sa vodom (2 x 100 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 20% EtOAc u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 4-bromo-1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 6; 4.60 g, 22.49%) u formi bele čvrste materije.<1>H-NMR (300 MHz, DMSO, 27 °C) δ 1.39-1.44 (12H, m), 3.47-3.53 (2H, m), 4.37-4.44 (2H, q), 4.53 (1H, s), 7.04 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 362.
Intermedijar 7
Etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0402]
[0403] tert-butil (2-bromoetil)karbamat (17.59 g, 78.49 mmol) je dodan u etil 1H-imidazol-2-karboksilat (10 g, 71.36 mmol) i K2CO3(11.83 g, 85.63 mmol) u DMF (200 mL) pod azotom, a nastala smeša je mešana na 80 °C tokom 8 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (300 mL), pa je ispirana sekvencijalno sa vodom (2 x 50 mL). Vodeni sloj je tada dodatno ekstrahovan sa EtOAc (5 x 50 mL). Spojene organske faze su osušene preko MgSO4, filtrirane i isparene koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 100% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 7; 10.7 g, 53%) u formi bezbojne tečnosti.<1>HNMR (400 MHz, DMSO, 21 °C) δ 1.20 (3H, t), 1.29 (9H, s), 3.26-3.34 (2H, m) 4.27 (2H, q) ,4.32-4.40 (2H, m), 6.90 (1H, s), 7.06 (1H, s), 7.32 (1H, s).
Primer 2
(S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0404]
[0405] (S)-7-(3-hlorobenzil)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 8; 216 mg, 0.56 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (59.4 mg, 0.61 mmol), cezijum karbonat (363 mg, 1.11 mmol) i BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (25.2 mg, 0.03 mmol) su suspendovani u tert-butanolu (8 mL) i de-gazirani sa azotom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana do 80 °C tokom 2 dana pod azotom. Reakciona smeša je tada ostavljena da se ohladi do sobne temperature pa je razblažena sa etil acetatom (100 mL) i ispirana sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (25 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4i koncentrovane in vacuo koje daje smeđu čvrstu materiju (250 mg). Ova čvrsta materija je rastvorena u DMSO (5 mL) pa je filtrirana. DMSO-rastvor sirovog produkta je tada prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: Waters XBridge Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 30 mm, dužina: 100 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 1% NH3) i MeCN kao eluente. Rastvarač je odstranjen iz frakcija koje sadrže produkt, čvrsta materija je rastvorena u smeši DCM i metanola, a tada je apsorbirana u silikagel. Sirovi produkt je tada prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 15% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 2; 43 mg, 17.22%) u formi bele čvrste materije.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 1.13 (3H, d), 3.71 (3H, s), 3.95 - 4.02 (1H, m), 4.28 - 4.45 (3H, m), 5.07 (1H, d), 6.31 (1H, d), 7.32 - 7.43 (5H, m), 7.46 (1H, s), 7.92 (1H, s), 8.48 (1H, d), 9.33 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 449.
Intermedijar 8
(S)-7-(3-hlorobenzil)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0406]
[0407] Natrijum hidrid (60% disperzija) (25.03 mg, 0.63 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 9; 150 mg, 0.57 mmol) u DMF (12 mL) pod azotom. Nastala suspenzija je mešana na 20 °C tokom 30 min. Dodan je 3-hlorobenzil hlorid (101 mg, 0.63 mmol), nakon toga i tetrabutilamonijum jodid (42.0 mg, 0.11 mmol), a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je izlivena u zasićeni vodeni NH4Cl (25 mL), a vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (75 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4i koncentrovane in vacuo koje daje (S)-7-(3-hlorobenzil)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 8; 221 mg, 100%) u formi svetlo-smeđe čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 21 °C) 1.13 (3H, d), 4.00 (1H, td), 4.27 (1H, dd), 4.38 (1H, d), 4.46 (1H, dd), 5.07 (1H, d), 7.36 - 7.4 (2H, m), 7.41 (1H, dd), 7.47 (1H, s), 7.93 (1H, d), 8.27 (1H, s), 8.75 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 388.
Intermedijar 9
(S)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0408]
[0409] Smeša (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloropirimidin-4-il)-1Himidazol-2-
1
karboksilat.HCl (intermedijar 10; 2.16 g, 6.24 mmol) i 7N amonijaka u metanolu (107 ml, 748.7 mmol) je mešana pod azotom na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom, a nastale čvrste materije su smrvljene sa dietiletrom i DCM koje daje prljavo-belu čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je dodatno smrvljena sa vodom i ispirana sa dietiletrom, a tada je apsorbirana u siliku iz smeše DCM/metanol. Sirovi produkt je prečišćen primenom hromatografije na silika-gelu uz eluciju sa 0-10% metanolom u DCM. Čiste frakcije su spojene i isparene koje daje belu čvrstu materiju koja je bila smrvljena sa dietiletrom koje daje (S)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 9; 0.6 g, 37%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 1.22 (3H, d), 3.93 - 4.08 (2H, m), 4.39 (1H, d), 7.89 (1H, d), 8.23 (1H, s), 8.36 (1H, s), 8.73 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 264.
Intermedijar 10
(S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, hidrohlorid
[0410]
[0411] U rastvor (S)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)-4-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilata (intermedijar 11; 2.56 g, 6.25 mmol) u 1,4-dioksanu (50 mL) je dodana HCl (4N u 1,4-dioksanu, 39 mL, 156.2 mmol), a reakciona smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 2 h. Isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom koje daje (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat.HCl (intermedijar 10; 2.16 g) u formi gume koja je rastvorena u preparat intermedijara 9 bez dodatnog prečišćavanja. m/z: ES+ [M+H]+ 310.
1 1
Intermedijar 11
(S)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)-4-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0412]
[0413] K2CO3(4.32 g, 31.3 mmol) je dodan u (S)-tert-butil 4-metil-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid (intermedijar 12; 2.23 g, 9.38 mmol), etil 4-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 14; 1.58 g, 6.25 mmol) i 1,4,7,10,13,16-heksaoksaciklooktadekan (0.413 g, 1.56 mmol) u 1,4-dioksanu (50 mL) na 22 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 3 h. Isparavanje organske faze daje gumu, koja je bila suspendovana u dihlorometanu pa je ekstrahovana sa vodom i osušena propuštanjem kroz punjenje za razdvajanje faza. Isparavanje daje (S)-etil 1-(2-((tertbutoksikarbonil)amino)propil)-4-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 11; 2.56 g, 100%) u formi čvrste materije. m/z: ES+ [M+H]+ 410.
Intermedijar 12
(4S)-tert-butil 4-metil-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid
[0414]
[0415] Rutenijum(III) hlorid hidrat (0.062 g, 0.28 mmol) je dodan u mešanu smešu tert-butil (4S)-4-metil-2-oksido-oksatiazolidin-2-ijum-3-karboksilata (intermedijar 13; 87.36 g, 394.80 mmol) u acetonitrilu (778 mL) i vodi (419 mL) na 15 °C, nakon čega sledi dodavanje natrijum perjodata (93 g, 434.29 mmol), deo po deo. Bifazna smeša je mešana na 20 °C tokom 1 h.
1 2
Dodana je voda (600 mL), a smeša je ekstrahovana u etil acetatu (3 x 600 mL). Spojene organske materije su ispirane sa vodom (500 mL), slanicom (250 mL), osušene preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane in vacuo koje daje (S)-tert-butil 4-metil-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid (intermedijar 12; 84.3 g, 355 mmol, 90%) u formi prljavo-bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.51 (3H, d), 1.55 (9H, s), 4.19 (1H, dd), 4.37 -4.46 (1H, m), 4.66 (1H, dd).
Intermedijar 13
tert-butil (4S)-4-metil-2-oksido-oksatiazolidin-2-ijum-3-karboksilat
[0416]
[0417] U rastvor 1H-imidazola (106 g, 1553.20 mmol) i trietilamina (124 mL, 893.09 mmol) u bezvodnom dihlorometanu (1427 mL) na -55 °C je dodan tionil hlorid (32.6 mL, 446.54 mmol), kap po kap (egzotermički, uz održavanje T < -40 °C). Smeša je mešana tokom 5 min uz hlađenje do -60 °C, a rastvor (S)-tert-butil 1-hidroksipropan-2-ilkarbamata (Sigma-Aldrich; 68.04 g, 388.30 mmol) u bezvodnom dihlorometanu (1427 mL) je dodavan kap po kap tokom 3.5 h uz pomoć levka za kapanje. Reakciona smeša je mešana dok se grejala do sobne temperature preko noći. Dodana je voda (750 mL), a faze su odvojene. Vodena faza je dodatno ekstrahovana u dihlorometanu (500 mL). Spojene organske materije su ispirane sa vodom (250 mL), zasićenom slanicom (250 mL), osušene preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane in vacuo koje daje tert-butil (4S)-4-metil-2-oksido-oksatiazolidin-2-ijum-3-karboksilat (intermedijar 13; 87.3 g, 395 mmol, 100%) u formi bledog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.50 (3H, d), 4.29 (1H, d), 4.68 (1H, t), 4.77 (1H, dd).
1
Intermedijar 14
Etil 4-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0418]
[0419] XPhos-prekatalizator 2. generacije (0.435 g, 0.55 mmol) je dodan u degazirani rastvor etil 4-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilata (intermedijar 15; 3.86 g, 11.05 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (4.21 g, 16.58 mmol) i KOAc (2.17 g, 22.10 mmol) u dioksanu (100 mL) na ambijentalnoj temperaturi pod azotom, a nastao rastvor je grejan do 85 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do 50 °C pa su dodani cezijum karbonat (7.20 g, 22.10 mmol), 2,4-dihloropirimidin (1.646 g, 11.05 mmol) i voda (20 mL) nakon čega i Pd(PPh3)4(0.638 g, 0.55 mmol), a reakciona smeša je grejana na 85 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je tada propuštena kroz celit pa je ispirana sa MeOH, a isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom. Dodani su voda i DCM, a organski sloj je ekstrahovan i osušen uz pomoć propuštanja kroz punjenje za razdvajanje faza. Isparljive materije su tada odstranjene pod smanjenim pritiskom koje daje prljavu smeđu čvrstu materiju etil 4-(2-hloropirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilata (4.24 g, 11.07 mmol). U etil 4-(2-hloropirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (4.24 g, 11.07 mmol) u DCM (100 mL) je dodana 2,2,2-trifluorosirćetna kiselina (8.48 mL, 110.73 mmol), nastao rastvor je mešan na ambijentalnoj temperaturi tokom 2 h, a tada je ostavljen da stoji na ambijentalnoj temperaturi tokom 16 h. Isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom, a nastala čvrsta materija je rastvorena u DCM i vodi pa je filtrirana kroz sloj od celita. Vodeni sloj je odvojen i doveden u bazno područje uz pomoć zasićenog natrijum bikarbonata pa je ekstrahovan u DCM, nakon čega je osušen propuštanjem kroz punjenje za razdvajanje faza, a rastvarač je odstranjen koje daje čvrstu materiju. Organski sloj je propušten kroz punjenje za razdvajanje faza, spojen sa pomenutom čvrstom materijom i pre-apsorbiran u siliku nakon čega je podvrgnut hromatografiji na silici uz eluciju sa 0-100% dietiletrom u DCM. Čiste frakcije su spojene i isparene koje daje etil 4-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 14; 1.58 g, 57%) u formi čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30°C)
1 4
1.35 (3H, t), 4.38 (2H, q), 7.93 (1H, d), 8.19 (1H, s), 8.73 (1H, d), 13.95 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 253.
Intermedijar 15
Etil 4-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0420]
[0421] NBS (26.3 g, 147.93 mmol) je dodan u etil 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 16; 40 g, 147.93 mmol) u DMF (150 mL) pod azotom, a nastala smeša je mešana na 25° C tokom 20 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (200 mL), ekstrahovana sa EtOAc (2 x 300 mL), organski slojevi su ispirani sa slanicom i osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 10% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 4-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 15; 21 g, 41%) u formi bezbojnog ulja koje je očvrsnulo nakon stajanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 25 °C) δ 0.02 (9H, s), 0.92 - 1.01 (2H, m), 1.45 (3H, t), 3.56 - 3.65 (2H, m), 4.45 (2H, q), 5.79 (2H, s), 7.28 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 349/351.
1
Intermedijar 16
Etil 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0422]
[0423] SEM-Cl (18.98 mL, 107.04 mmol) je dodan u etil 1H-imidazol-2-karboksilat (10 g, 71.36 mmol) i NaH (4.28 g, 107 mmol) u DMF (50 mL) na 0 °C pod azotom. Nastala smeša je tada mešana na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (50 mL), ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 30 do 70% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 16; 20 g, 100%) u formi žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) δ 0.00 (9H, s), 0.03 - 0.08 (2H, m), 1.37 (3H, t), 3.53 - 3.62 (2H, m), 4.37 (2H, q), 5.76 (2H, s), 7.18 (1H, d), 7.68 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 271.
Primer 3
(S)-7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo [1,2-a] pirazin-8(5H)-on
[0424]
[0425] (S)-7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-
1
dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 17; 226 mg, 0.56 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (59.4 mg, 0.61 mmol), cezijum karbonat (363 mg, 1.11 mmol) i BrettPhosprekatalizator 3. generacije (25.2 mg, 0.03 mmol) su suspendovani u tert-butanolu (8 mL), a smeša je de-gazirana sa azotom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana do 80 °C tokom 2 dana pod azotom. Reakciona smeša je tada ohlađena do sobne temperature, razblažena sa etil acetatom (100 mL), a organska faza je ispirana sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (25 mL), osušena preko Na2SO4i koncentrovana in vacuo koje daje smeđu gumu. Ova guma je rastvorena u DMSO (5 mL) pa je filtrirana. DMSO-rastvor sirovog produkta je tada prečišćen promenom preparativne HPLC (kolona: Waters XBridge Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 100 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 1% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje sirovi materijal. Pomenuti je rastvoren u minimalnoj količini DCM, pa je apsorbiran u silika-gel uz koncetrovanje pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je tada dodatno prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu za eluciju od 0 do 15% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 3; 40 mg, 15%) u formi prljavo-bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) δ 1.13 (3H, d), 3.71 (3H, s), 3.96 - 4.03 (1H, m), 4.26 - 4.39 (2H, m), 4.41 (1H, dd), 5.04 (1H, d), 6.30 (1H, d), 7.35 (2H, dd), 7.39 - 7.44 (2H, m), 7.55 - 7.69 (1H, m), 7.92 (1H, s), 8.48 (1H, d), 9.33 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 467.
Intermedijar 17
(S)-7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0426]
[0427] Natrijum hidrid (60% disperzija, 25 mg, 0.63 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 9; 150 mg, 0.57 mmol)
1
u DMF (12 mL) pod azotom. Nastala suspenzija je mešana na 20 °C tokom 30 min. Dodan je 2-hloro-4-(hlorometil)-1-fluorobenzen (112 mg, 0.63 mmol) nakon čega sledi i tetrabutilamonijum jodid (42.0 mg, 0.11 mmol), a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je izlivena u zasićeni vodeni NH4Cl (25 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (75 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4i koncentrovane in vacuo koje daje (S)-7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 17; 230 mg, 100%) u formi svetlo-smeđe čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 33°C) δ 1.13 (3H, d), 4.01 (1H, ddd), 4.26 (1H, dd), 4.36 (1H, d), 4.46 (1H, dd), 5.05 (1H, d), 7.39 - 7.41 (1H, m), 7.42 (1H, s), 7.59 - 7.66 (1H, m), 7.93 (1H, d), 8.27 (1H, s), 8.74 (1H, dd). m/z: ES+ [M+H]+ 406.
Primer 4
(S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0428]
[0429] (S)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 18; 218 mg, 0.56 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (59.7 mg, 0.62 mmol), cezijum karbonat (364 mg, 1.12 mmol) i BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (25.3 mg, 0.03 mmol) su suspendovani u tert-butanolu (8 mL) i de-gazirani sa azotom tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana do 80 °C tokom 18 h pod azotom. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa etil acetatom (100 mL) i ispirana sa zasićenim vodenim NaHCO3(25 mL), osušena preko Na2SO4i koncentrovana in vacuo koje daje smeđu čvrstu materiju. Sirovi materijal je rastvoren u DCM, koncentrovan in vacuo i apsorbiran u siliku. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 15% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 4; 88 mg, 34.9%) u formi prljavo-bele
1
čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) δ 1.13 (3H, d), 3.71 (3H, s), 3.96 - 4.03 (1H, m), 4.27 - 4.38 (2H, m), 4.43 (1H, dd), 5.05 (1H, d), 6.30 (1H, d), 7.22 - 7.28 (1H, m), 7.35 (2H, dd), 7.37 - 7.5 (2H, m), 7.92 (1H, s), 8.47 (1H, d), 9.33 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 451.
Intermedijar 18
(S)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0430]
[0431] Natrijum hidrid (60% disperzija) (25.03 mg, 0.63 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 9; 150 mg, 0.57 mmol) u DMF (12 mL) pod azotom. Nastala suspenzija je mešana na 20 °C tokom 30 min. Dodan je 4-(bromometil)-1,2-difluorobenzen (130 mg, 0.63 mmol) nakon čega sledi i tetrabutilamonijum jodid (42.0 mg, 0.11 mmol), a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je izlivena u zasićeni vodeni NH4Cl (25 mL) pa je ekstrahovana sa etil acetatom (75 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4i koncentrovane in vacuo koje daje (S)-2-(2-hloropirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 18; 222 mg, 100%) u formi smeđe gume.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30°C) δ 1.14 (3H, d), 3.94 - 4.07 (1H, m), 4.27 (1H, dd), 4.36 (1H, d), 4.47 (1H, dd), 5.06 (1H, d), 7.26 (1H, s), 7.37 - 7.51 (2H, m), 7.93 (1H, d), 8.26 (1H, s), 8.74 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 390.
1
Primer 5
2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(triftuorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0432]
[0433] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (10.72 mg, 0.01 mmol) je dodan u 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 19; 50 mg, 0.12 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (22.97 mg, 0.24 mmol) i Cs2CO3(96 mg, 0.30 mmol) u 1,4-dioksanu (3 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 120 °C tokom 8 h. Rastvarač je odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 4% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je dodatno prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.05% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje su sadržavale željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje 2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 5; 23.5 mg, 41%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20.1 °C) δ 2.51 (3H, s), 3.70 (3H, s), 3.90 - 3.98 (2H, m), 4.43 - 4.51 (2H, m), 4.91 (2H, s), 6.31 (1H, d), 7.34 (1H, d), 7.76 (1H, d), 7.84 (1H, d), 7.95 (1H, s), 8.10 (1H, t), 8.33 (1H, s), 9.24 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 484.
11
Intermedijar 19
2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0434]
[0435] NH3(7N u MeOH, 3 mL) je dodan u etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)amino)etil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 20; 60 mg, 0.13 mmol) na 25 °C pod vazduhom, a nastao rastvor je mešan na 50 °C tokom 12 h. Rastvarač je odstranjen promenom destilacije u vakuumu koje daje 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 19; 50 mg, 92%) u formi bele čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 423.
Intermedijar 20
Etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)amino)etil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0436]
[0437] 6-(trifluorometil)pikolinaldehid (114 mg, 0.65 mmol) je dodan u etil 1-(2-aminoetil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 21; 250 mg, 0.65 mmol) u DCM (10 mL) na 25 °C pod vazduhom. Nastao rastvor je mešan na 40 °C tokom 3 h. U reakcionu smešu je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (415 mg, 1.96 mmol) na 25 °C, a nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (10 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (3 x 15 mL). Organski slojevi su spojeni i ispirani sa slanicom (15 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani, a isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 2 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)amino)etil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 20; 60 mg, 19.6%) u formi bele čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 469.
Intermedijar 21
1-(2-aminoetil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat. HCl [0438]
[0439] HCl (4N u 1,4-dioksanu, 50 mL) je dodan u etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 22; 3.2 g, 7.81 mmol) na 25 °C pod vazduhom, a nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 12 h. Rastvarač je odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu, a sirovi talog je smrvljen sa EtOAc koje daje čvrste materije koje su skupljene uz pomoć filtracije i osušene u vakuumu koje daje etil 1-(2-aminoetil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat.HCl (intermedijar 21; 2.90 g, 97%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20.1°C) δ 1.35 (3H, t), 2.60 - 2.65 (3H, m), 4.38 (2H, q), 4.75 (2H, t), 8.37 (3H, s), 8.46 (1H, s), 8.63 (1H, d), 10.17 (2H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 310.
Intermedijar 22
Etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0440]
[0441] tert-butil 1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid (2.76 g, 12.37 mmol) je dodan, deo po deo, u etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 23; 3.0 g, 11.25 mmol), K2CO3(4.66 g, 33.75 mmol) i 18-kruna-6 etar (0.595 g, 2.25 mmol) u 1,4-dioksanu (60 mL) na 100 °C pod vazduhom. Nastao rastvor je mešan na 100 °C tokom 2 h. Smeša je ohlađena, filtrirana, a nastala čvrsta materija je ispirana sa etil acetatom. Filtrat je tada koncentrovan pod smanjenim pritiskom.
[0442] Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 25 do 30% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)etil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 22; 3.20 g, 69.4%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20.2 °C) δ 1.25 (9H, s), 1.35 (3H, t), 2.62 (3H, s), 3.35 (2H, dd), 4.37 (2H, q), 4.49 (2H, t), 6.93 (1H, t), 8.18 (1H, s), 8.61 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 410.
Intermedijar 23
Etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0443]
11
[0444] Trifluorosirćetna kiselina (20 mL, 259.60 mmol) je dodana u etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 24; 5.6 g, 14.11 mmol) u DCM (20 mL) na 25 °C, a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 12 h. Isparljive materije su tada odstranjene pod smanjenim pritiskom, a reakciona smeša je dovedena u bazno područje sa zasićenim NaHCO3. Nastao precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispiran sa vodom (100 mL) i osušen u vakuumu koje daje etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 23; 3.50 g, 93%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 23 °C) δ 1.35 (3H, t), 2.62 (3H, s), 4.37 (2H, q), 8.13 (1H, s), 8.62 (1H, s), NH nije primećen. m/z (ES+), [M+H]+ = 267.
[0445] Alternativni postupak za pripremu Intermedijara 23:
Etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 24; 176 g, 443.38 mmol) je dodan u TFA (500 mL, 6489.91 mmol) u DCM (500 mL). Nastala reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Isparljive materije su tada odstranjene pod smanjenim pritiskom. Dodan je višak zasićenog vodenog Na2CO3, a nastao precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispiran sa vodom (1 L) i osušen u vakuumu. Sirova čvrsta materija je smrvljen sa MeCN koje daje čvrstu materiju koja je skupljena filtracijom i osušena u vakuumu koje daje etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 23; 106 g, 90%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, DMSO, 19.7 °C) δ 1.34 (3H, t), 2.61 (3H, s), 4.33-4.41 (2H, m), 8.13 (1H, s), 8.61 (1H, s), 13.99 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 267.
[0446] Alternativni postupak za sintezu Intermedijara 23 u jednoj retorti:
Korak 1:
U mešani rastvor 3,4,7,8-tetrametil-1,10-fenantrolina (3.72 g, 15,41 mmol) i di-mumetoksiobis(1,5-ciklooktadien)diiridijuma (I) (5.21 g, 7.71 mmol) u bezvodnom MeTHF (900 mL) postupno su dodan bis(pinakolato)diboron (108 g, 423.86 mmol) i rastvor etil 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilata (114.5 g, 385.33 mmol) u MeTHF (100 mL) u atmosferi azota. Nastala smeša je degazirana 3 puta pod azotom, grejana do 70 °C i mešana tokom 3 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (25 mL), organska faza je odvojena i koncentrovana do 500 mL. Ovaj rastvor je korišćen direktno u Koraku 2 bez prečišćavanja.
Korak 2:
Rastvor MeTHF (500 mL) proizveden u Koraku 1 polako je dodan u mešanu smešu vodenog K2CO3(161 g, 1156 mmol) u vodi (500 mL), 2,4-dihloro-5-metilpirimidina (77 g, 462.4 mmol) i 1,1'-bis(difenilfosfino) ferocen dihloropaladijum (II), dihlorometanskog adukta (9.44 g, 15.56 mmol) u MeTHF (500 mL) na 40° C tokom 3 h. Nakon završetka dodavanja, slojevi su odvojeni, a organski sloj je ispiran sa vodom (500 mL) pa je koncentrovan do 500 mL. Taj produkt je korišćen direktno u Koraku 3 bez prečišćavanja.
Korak 3:
HCl u izo-propilalkoholu (5-6 N, 116 mL, 578 mmol) je dodan u rastvor proizveden u Koraku 2 na sobnoj temperaturi, a smeša je mešana tokom 30 min. Reakciona smeša je tada razblažena sa vodom (500 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa MeTHF (500 mL), a spojeni organski slojevi su ispirani sa vodenim natrijum bikarbonatom (4% w/w rastvor, 500 mL) i vodom (200 mL). Organska faza je koncentrovana do pola pa je mešana sa heptanom (1000 mL). Nastao precipitat je filtriran, ispiran sa smešom MeTHF/heptan (1:4, 500 mL) pa je osušen pod vakuum koje daje etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat u formi čvrste materije (intermedijar 23, 60.5 g, 59%, ukupan prinos iz sva tri koraka).<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 23 °C) δ 1.35 (3H, t), 2.62 (3H, s), 4.37 (2H, q), 8.13 (1H, s), 8.62 (1H, s), NH nije primećen. m/z (ES+), [M+H]+ = 267.
Intermedijar 24
Etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0447]
[0448] Pd(Ph3P)4(1.158 g, 1.00 mmol) je dodan u (2-(etoksikarbonil)-1-((2-
11
(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)boronsku kiselinu (intermedijar 25; 6.3 g, 20.05 mmol), 2,4-dihloro-5-metilpirimidin (3.27 g, 20.05 mmol) i Cs2CO3(13.07 g, 40.10 mmol) u 1,4-dioksanu (120 mL) i vodi (20 mL) na 25 °C pod azotom, a nastala smeša je mešana na 85 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je izlivena u vodu (200 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 250 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 10% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 24; 5.60 g, 70.4%) u formi bledo-žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 23°C) δ 0.02 (9H, s), 0.93 - 1.03 (2H, m), 1.48 (3H, t), 2.71 - 2.76 (3H, m), 3.59 - 3.69 (2H, m), 4.48 (2H, q), 5.85 (2H, s), 8.16 (1H, s), 8.42 - 8.47 (1H, m). m/z (ES+), [M+H]+ = 397.
[0449] Alternativni postupak za pripremu Intermedijara 24:
Šarža 1: Pd(Ph3P)4(1.655 g, 1.43 mmol) je dodan u (2-(etoksikarbonil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)boronsku kiselinu (intermedijar 25; 9 g, 28.64 mmol), 2,4-dihloro-5-metilpirimidin (4.67 g, 28.64 mmol) i Cs2CO3(28.0 g, 85.93 mmol) u 1,4-dioksanu (80 mL) i vodi (20 mL) pod azotom. Reakciona smeša je tada mešana na 85 °C tokom 2 h, a tada je ohlađena do sobne temperature.
Šarža 2: Pd(Ph3P)4(24.82 g, 21.48 mmol) je dodan u 2,4-dihloro-5-metilpirimidin (70.0 g, 429.64 mmol), (2-(etoksikarbonil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)boronsku kiselinu (intermedijar 25; 135 g, 429.64 mmol) i Cs2CO3(420 g, 1288.91 mmol) u 1,4-dioksanu (2000 mL) i vodi (400 mL) pod azotom. Reakciona smeša je tada mešana na 85 °C tokom 2 h, a tada je ohlađena do sobne temperature.
Šarže 1 i 2 iznad su spojene i isparene do suvoće. Talog je rastvoren u EtOAc (2 L) pa je ispiran sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3(450 mL), vodom (300 mL) i slanicom (350 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana, a isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (kolona) u gradijentu elucije od 0 do 5% EtOAc u petroleum etru. Frakcije koje su sadržavale čisti produkt su isparene do suvoće koje daje etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 24; 123 g, 67.4%) u formi čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 23 °C) δ 0.02 (9H, s), 0.93 - 1.03 (2H, m), 1.48 (3H, t), 2.71
11
- 2.76 (3H, m), 3.59 - 3.69 (2H, m), 4.48 (2H, q), 5.85 (2H, s), 8.16 (1H, s), 8.42 - 8.47 (1H, m). m/z (ES+), [M+H]+ = 397.
Intermedijar 25
Etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0450]
[0451] XPhos-prekatalizator 2. generacije (0.788 g, 1.00 mmol) je dodan u etil 4-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 25a, takođe komercijalno dostupan; 7 g, 20.04 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (7.63 g, 30.06 mmol) i KOAc (3.93 g, 40.08 mmol) u 1,4-dioksanu (100 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je tada mešana na 85 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je filtrirana, a filtrat je korišćen u sledećem koraku direktno bez dodatnog prečišćavanja. m/z (ES+), [M+H]+ = 315.
[0452] Alternativni postupak za pripremu Intermedijara 25:
2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-tri-izo-propil-1,1'-bifenil (12.28 g, 25.77 mmol) je dodan u tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0)-hloroform, adukt (11.11 g, 10.74 mmol) u 1,4-dioksanu (2000 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom. Nastala smeša je tada mešana na sobnoj temperaturi tokom 45 h. Dodani su etil 4-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (150 g, 429.43 mmol), bis(pinakolato)diboron (131 g, 515.32 mmol) i kalijum acetat (126 g, 1288.29 mmol) na sobnoj temperaturi pod azotom. Nastala smeša je mešana na 80 °C tokom 8 h. Reakciona smeša je tada filtrirana kroz celit. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom koje daje (2-(etoksikarbonil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)boronsku kiselinu (intermedijar 25; 135 g, 100%) u formi žutog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 315.
11
Intermedijar 25a
Etil 4-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0453]
[0454] NBS (158 g, 887.56 mmol) je dodan, deo po deo, u etil 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 25b; 160 g, 591.71 mmol) u DMF (1200 mL) i DCM (1300 mL) na 0 °C. Nastala reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 48 h. Isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom pa je dodan EtOAc (7 L). Organska faza je tada ispirana sekvencijalno uz pomoć zasićenog NaHCO3(1 L), vode (1 L), i zasićene slanice (750 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje sirovi produkt koji je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu za eluciju od 0 do 4% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 4-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 25a; 106 g, 51.3%) u formi bledo-žutog ulja koje je očvrsnulo nakon stajanja.<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ - 0.07 (9H, s), 0.77-0.85 (2H, m), 1.29 (3H, t), 3.53 (2H, t), 4.30 (2H, q), 5.66 (2H, s), 7.83 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 349/351.
11
Intermedijar 25b
Etil 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0455]
[0456] SEM-Cl (286 g, 1712.55 mmol) je dodan, kap po kap, u etil 1H-imidazol-2-karboksilat (200 g, 1427.12 mmol) i K2CO3(592 g, 4281.37 mmol) u acetonu (3 L) na 0 °C. Nastala smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 16 h. Nastao precipitat je odstranjen uz pomoć filtracije pa je ispiran sa EtOAc (1 L). Spojeni organski slojevi su tada osušeni preko Na2SO4, a isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom. Nastao sirovi materijal je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 30% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 25b; 328 g, 85%) u formi bledo-žutog ulja.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ -0.01 (9H, s), 090-0.97 (2H, m), 1.45 (3H, t), 3.50-3.63 (2H, m), 4.43 (2H, q), 5.81 (2H, s), 7.22 (1H, s), 7.28 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 271.
Primer 6
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0457]
11
[0458] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (20.95 mg, 0.02 mmol) je dodan u (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 26; 100 mg, 0.24 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (intermedijar 26; 57.2 mg, 0.59 mmol) i Cs2CO3(154 mg, 0.47 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom, a nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Produkt je dodatno prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajućepolarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 6; 16.00 mg, 14%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 22 °C) δ 1.15 (3H, d), 3.71 (3H, s), 4.00 (1H, s), 4.34 (2H, d), 4.47 (1H, dd), 5.07 (1H, d), 6.32 (1H, s), 7.27 (1H, s), 7.35 (1H, d), 7.38 - 7.51 (2H, m), 8.19 (1H, s), 8.54 (1H, s), 9.73 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 485.
Intermedijar 26
(S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0459]
[0460] Rastvor (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-((3,4-difluorobenzil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilata (intermedijar 27; 200 mg, 0.43 mmol) u NH3(7N u MeOH, 5 mL, 35.00 mmol) je mešan na 50 °C tokom 2 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je tada prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene to suvoće koje daje (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-
12
on (intermedijar 26; 100 mg, 55.4%) u formi žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 424.
Intermedijar 27
(S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-((3,4-difluorobenzil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0461]
[0462] 3,4-difluorobenzaldehid (74.9 mg, 0.53 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 28; 200 mg, 0.48 mmol) u DCM (10 mL) na 25 °C pod azotom. Nakon mešanja na 40 °C tokom 3 h je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (305 mg, 1.44 mmol), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je tada ugašena sa zasićenim NaHCO3(20 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 50 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje sirovi produkt (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-((3,4-difluorobenzil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 27; 200 mg, 89%) u formi žute čvrste materije. Produkt je korišćen u sledećem koraku direktno bez dodatnog prečišćavanja. m/z (ES+), [M+H]+ = 470.
Intermedijar 28
(S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat dihidrohlorid
[0463]
[0464] Rastvor (S)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilata (intermedijar 29; 2.8 g, 6.30 mmol) u HCl (4N u 1,4-dioksanu, 20 mL) je mešan na 25 °C preko noći. Precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispiran sa EtOAc (20 mL) i osušen u vakuumu koje daje (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 28; 2.50 g, 95%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 24 °C) δ 1.26 (3H, d), 1.37 (3H, t), 3.75 (1H, s), 4.40 (2H, d), 4.63 (2H, d), 8.05 (3H, s), 8.61 (1H, s), 8.94 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 344.
Intermedijar 29
(S)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0465]
[0466] 1M HCl (20 mL, 20.00 mmol) je dodana u (S)-(tert-butoksikarbonil)(1-(4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-2-(etoksikarbonil)-1H-imidazol-1-il)propan-2-il)sulfaminku kiselinu (intermedijar 30; 6 g, 11.44 mmol) u EtOH (20 mL) na 25 °C pod vazduhom. Nastala smeša je mešana na 50 °C tokom 20 min. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(50 mL), ekstrahovana sa DCM (3 x 100 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 30% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 29; 2.80 g, 55.1%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) δ 1.24 (3H, d), 1.35 (9H, s), 1.46 (2H, t), 4.03 - 4.17 (1H, m), 4.46 (2H, q), 4.58 - 4.69 (2H, m), 5.30 (1H, s), 8.08 (1H, s), 8.58 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 444.
Intermedijar 30
(S)-(tert-butoksikarbonil)(1-(4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-2-(etoksikarbonil)-1H-imidazol-1-il)propan-2-il)sulfaminka kiselina
[0467]
[0468] (S)-tert-butil 4-metil-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid (intermedijar 12; 4.59 g, 19.33 mmol) je dodan, deo po deo, u etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 31; 3.7 g, 12.89 mmol) i K2CO3(5.34 g, 38.66 mmol) u acetonitrilu (30 mL) na 80 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 85 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je tada filtrirana i ispirana sa MeCN. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom koje daje željeni produkt, (S)-(tert-butoksikarbonil)(1-(4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-2-(etoksikarbonil)-1H-imidazol-1-il)propan-2-il)sulfaminku kiselinu (intermedijar 30; 6.00 g, 89%) u formi žutog ulja. Produkt je korišćen u sledećem koraku direktno bez dodatnog prečišćavanja. m/z (ES+), [M+H]+ = 524.
Intermedijar 31
12
Etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0469]
[0470] Trifluorosirćetna kiselina (20 mL, 259.60 mmol) je dodana u etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 32; 5.6 g, 13.42 mmol) u DCM (20 mL) na 25 °C. Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 12 h. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a reakciona smeša je dovedena u bazno područje (alkalizovana) sa viškom zasićenog NaHCO3. Nastao precipitat je skupljen filtracijom, ispiran sa vodom (100 mL) i osušen u vakuumu koje daje etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 31; 3.70 g, 96%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 25 °C) δ 1.36 (3H, t), 4.39 (2H, q), 7.59 (1H, s), 8.32 (1H, s), 8.90 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 287.
Intermedijar 32
Etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0471]
[0472] Pd(Ph3P)4(1.14 g, 0.99 mmol) je dodan u (2-(etoksikarbonil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-4-il)boronsku kiselinu (intermedijar 25; 6.2 g, 19.73 mmol), 2,4,5-trihloropirimidin (3.62 g, 19.73 mmol) i Cs2CO3(9.64 g, 29.60 mmol) u 1,4dioksanu (160 mL) i vodi (40 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 85 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je izlivena u vodu (150 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 250 mL), organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 10% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 32; 5.60 g, 68%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 25 °C) δ 0.01 (9H, s), 0.93 - 1.02 (2H, m), 1.48 (3H, t), 3.60 - 3.69 (2H, m), 4.48 (2H, q), 5.89 (2H, s), 8.29 (1H, s), 8.63 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 417.
Primer 7
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0473]
[0474] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (31.9 mg, 0.04 mmol) je dodan u (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 33; 150 mg, 0.36 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (87 mg, 0.90 mmol) i Cs2CO3(234 mg, 0.72 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Talog je dodatno prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje su sadržavale željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-
12
7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 7; 31.0 mg, 18.05%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20 °C) δ 1.13 (3H, d), 3.71 (3H, s), 3.76 (3H, s), 3.96 (1H, d), 4.26 - 4.36 (2H, m), 4.41 (1H, dd), 5.09 (1H, d), 6.32 (1H, s), 6.84 - 6.91 (1H, m), 6.96 (2H, d), 7.24 - 7.38 (2H, m), 8.20 (1H, s), 8.54 (1H, s), 9.74 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 479.
Intermedijar 33
(S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0475]
[0476] TEA (0.162 mL, 1.16 mmol) je dodan u (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-((3-metoksibenzil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 34; 180 mg, 0.39 mmol) u toluenu (8 mL) na 25 °C pod vazduhom. Nastala smeša je mešana na 140 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 3% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 33; 150 mg, 93%) u formi žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+Na]+ = 418. (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 33) je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.
12
Intermedijar 34
(S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-((3-metoksibenzil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0477]
[0478] 3-metoksibenzaldehid (71.8 mg, 0.53 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 28; 200 mg, 0.48 mmol) u DCM (10 mL) na 25 °C pod azotom. Nakon mešanja na 40 °C tokom 3 h je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (305 mg, 1.44 mmol), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(20 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 50 mL), organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-((3-metoksibenzil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 34; 180 mg, 81%) u formi žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 464.
12
Primer 8
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0479]
[0480] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (12.41 mg, 0.01 mmol) je dodan u (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 35; 64 mg, 0.14 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (33.9 mg, 0.35 mmol) i Cs2CO3(91 mg, 0.28 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom, a nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajućepolarnih smeša sa vodom (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje su sadržavale željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 8; 15.2 mg, 21%) u formi bele čvrste materije.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20.1 °C) δ 1.25 (3H, d), 3.71 (3H, s), 4.18 (1H, ddd), 4.42 (1H, dd), 4.60 - 4.69 (2H, m), 5.23 (1H, d), 6.32 (1H, d), 7.35 (1H, d), 7.94 (1H, d), 8.25 (1H, s), 8.55 (1H, s), 9.03 (1H, d), 9.74 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 519.
12
Intermedijar 35
(S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0481]
[0482] TEA (0.129 mL, 0.93 mmol) je dodan u (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-(((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 36; 156 mg, 0.31 mmol) u toluenu (3 mL) na 25 °C pod vazduhom. Nastala smeša je mešana na 140 °C tokom 4 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 4% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 35; 64.0 mg, 45.2%) u formi žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 458.
Intermedijar 36
(S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-(((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0483]
[0484] 2-(trifluorometil)pirimidin-4-karbaldehid (127 mg, 0.72 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-
12
aminopropil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 28; 300 mg, 0.72 mmol) u DCM (10 mL) na 25 °C pod vazduhom. Nastao rastvor je mešan na 40 °C tokom 3 h. U reakcionu smešu je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (457 mg, 2.16 mmol) na 25 °C. Nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (10 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (3 x 15 mL). Organski slojevi su spojeni i ispirani sa slanicom (15 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuto ulje. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 2 do 3% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-(((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 36; 156 mg, 43%) u formi žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.2 °C) δ 1.26 - 1.38 (3H, m), 1.44 (3H, t), 2.85 (1H, s), 4.01 (2H, q), 4.33 - 4.51 (2H, m), 4.55 - 4.70 (1H, m), 4.92 (2H, s), 7.65 (1H, d), 8.65 (1H, d), 8.74 - 8.85 (1H, m), 8.91 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 504.
Primer 9
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0485]
[0486] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (24.28 mg, 0.03 mmol) je dodan u (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 37; 120 mg, 0.27 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (66.3 mg, 0.68 mmol) i Cs2CO3(178 mg, 0.55 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša
1
vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 9; 27 mg, 19.8%) u formi bele čvrste materije.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 23 °C) δ 1.21 (3H, d), 3.71 (3H, s), 4.12 (1H, s), 4.38 (1H, d), 4.48 - 4.63 (2H, m), 5.22 (1H, d), 6.32 (1H, s), 6.97 (1H, t), 7.35 (1H, d), 7.59 - 7.67 (2H, m), 8.00 (1H, t), 8.23 (1H, s), 8.54 (1H, s), 9.72 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 500.
Intermedijar 37
(S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a] pirazin-8(5H)-on
[0487]
[0488] Rastvor (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilata (intermedijar 38; 200 mg, 0.41 mmol) u NH3(7N u MeOH, 5 mL, 35.00 mmol) je mešan na 50 °C tokom 2 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 37; 120 mg, 66.3%) u formi žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 439.
1 1
Intermedijar 38
(S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0489]
[0490] 6-(difluorometil)pikolinaldehid (intermedijar 39; 226 mg, 1.44 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 28; 200 mg, 0.48 mmol) u DCM (15 mL) na 25 °C pod azotom. Nakon mešanja na 40 °C tokom 3 h je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (305 mg, 1.44 mmol), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(20 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (2 x 50 mL). Spojeni organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje željeni produkt (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 38; 200 mg, 86%) u formi žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 485.
Intermedijar 39
6-(difluorometil)pikolinaldehid
[0491]
[0492] LiAlH4(1.141 g, 30.07 mmol) je dodan u 6-(difluorometil)-N-metoksi-N-
1 2
metilpikolinamid (intermedijar 40; 5 g, 23.13 mmol) u THF (80 mL), ohlađen do -78 °C pod azotom, a nastao rastvor je mešan na -78 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (6 mL) pa je ugašena sa vodom (1 mL) na -78 °C. Dodani su NaOH (15% vodeni rastvor, 3.0 mL) i voda (1.0 mL), a nastale čvrste materije su odstranjene filtriranjem. Filtrat je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje 6-(difluorometil)pikolinaldehid (intermedijar 39; 3.60 g, 99%) u formi žutog ulja. Produkt je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. m/z (ES+), [M+H]+ = 158.
Intermedijar 40
6-(difluorometil)-N-metoksi-N-metilpikolinamid
[0493]
[0494] Oksalil dihlorid (7.92 g, 62.39 mmol) je dodan, kap po kap, u 6-(difluorometil)pikolinsku kiselinu (intermedijar 41; 5.4 g, 31.19 mmol) i DMF (0.242 mL, 3.12 mmol) u DCM (30 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom koje daje željeni produkt, 6-(difluorometil)pikolinoil hlorid (6.00 g, 100%) u formi žutog ulja koje je odmah korišćeno. N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorid (4.58 g, 46.98 mmol) je dodan, deo po deo, u 6-(difluorometil)pikolinoil hlorid (6.0 g, 31.32 mmol) i TEA (17.46 mL, 125.29 mmol) u DCM (50 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je tada mešana na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (50 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 100 mL), organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 30% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 6-(difluorometil)-N-metoksi-N-metilpikolinamid (intermedijar 40; 5.00 g, 73.8%) u formi žute tečnost.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) δ 3.42 (3H, s), 3.80 (3H, s), 6.68 (1H, t), 7.74 (2H, d), 7.98 (1H, t). m/z (ES+), [M+H]+ = 217.
1
Intermedijar 41
6-(difluorometil)pikolinska kiselina
[0495]
[0496] Rastvor metil 6-(difluorometil)pikolinata (intermedijar 42; 6.2 g, 33.13 mmol) u HCl (30 mL, 360.00 mmol) je grejan na 90 °C tokom 8 h. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom koje daje željeni produkt, 6-(difluorometil)pikolinsku kiselinu (intermedijar 41; 5.40 g, 94%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20 °C) δ 7.05 (1H, t), 7.94 (1H, t), 8.16- 8.22 (2H, m), 13.56 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 174.
Intermedijar 42
Metil 6-(difluorometil)pikolinat
[0497]
[0498] 2-bromo-6-(difluorometil)piridin (intermedijar 43; 8.5 g, 40.86 mmol), kalijum acetat (8.02 g, 81.73 mmol) i Pd(dppf)Cl2(1.495 g, 2.04 mmol) u MeOH (100 mL) su mešani u atmosferi CO na 10 atm na 70 °C tokom 6 h. Reakciona smeša je tada filtrirana, a filtrat je isparen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 20% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje metil 6-(difluorometil)pikolinat (intermedijar 42; 6.20 g, 81%) u formi bezbojne tečnosti.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) δ 4.06 (3H, s), 6.79 (1H, t), 7.89 (1H, d), 8.05 (1H, t), 8.24 - 8.31 (1H, m). m/z (ES+), [M+H]+ = 188.
Intermedijar 43
1 4
2-bromo-6-(difluorometil)piridin
[0499]
[0500] DAST (17.76 mL, 134.40 mmol) je dodan, kap po kap, u 6-bromopikolinaldehid (10 g, 53.76 mmol) u DCM (150 mL), smeša je ohlađena do 0 °C tokom perioda od 10 min. Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (20 mL) pa je dovedena u bazno područje uz pomoć dodavanja NaHCO3(zas. vod.). Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 x 150 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje smeđu tečnost. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 8% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 2-bromo-6-(difluorometil)piridin (intermedijar 43; 9.00 g, 80%) u formi bezbojne tečnosti.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 22 °C) δ 6.59 (1H, t), 7.58 - 7.65 (2H, m), 7.71 (1H, t). m/z (ES+), [M+H]+ = 208/210.
Primer 10
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(triftuorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0501]
[0502] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (14.97 mg, 0.02 mmol) je dodan u (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 44; 77 mg, 0.17 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (40.9 mg, 0.42 mmol) i Cs2CO3(110 mg, 0.34 mmol) u 1,4-dioksanu (3 mL)
1
na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 6 h. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom, a sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 5 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žuti sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je dodatno prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koja sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 10; 18.5 mg, 21%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 23.0 °C) δ 1.22 (3H, d), 3.71 (3H, s), 4.15 (1H, ddd), 4.40 (1H, dd), 4.53 - 4.64 (2H, m), 5.23 (1H, d), 6.32 (1H, d), 7.35 (1H, d), 7.75 - 7.87 (2H, m), 8.10 (1H, t), 8.23 (1H, s), 8.54 (1H, s), 9.73 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 518.
Intermedijar 44
(S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0503]
[0504] NH3(7N u MeOH, 3 mL) je dodan u (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 45; 98 mg, 0.19 mmol). Nastao rastvor je mešan na 50 °C tokom 2 h. Rastvarač je odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu koje daje (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 44; 77 mg, 86%) u formi bezbojnog ulja. Produkt je korišćen u sledećem koraku direktno bez dodatnog prečišćavanja. m/z (ES+), [M+H]+ = 457.
1
Intermedijar 45
(S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0505]
[0506] 6-(trifluorometil)pikolinaldehid (115 mg, 0.66 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 28; 250 mg, 0.60 mmol) u DCM (10 mL) na 20 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 40 °C tokom 4 h. Tada je na 20 °C dodan natrijum triacetoksiborohidrid (254 mg, 1.20 mmol), a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (10 mL), ekstrahovana sa DCM (3 x 15 mL). Spojeni organski slojevi su ispirani sa slanicom (15 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuto ulje. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 2 do 2.5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-etil 4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
(intermedijar 45; 98 mg, 32.5%) u formi žutog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 503.
1
Primer 11
(S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0507]
[0508] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (26.4 mg, 0.03 mmol) je dodan u (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 46; 120 mg, 0.30 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (72.2 mg, 0.74 mmol) i Cs2CO3(194 mg, 0.60 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koja sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(5-hloro-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 11; 50 mg, 36.2%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 22 °C) δ 1.19 (3H, d), 2.47 (3H, s), 3.70 (3H, s), 4.08 (1H, d), 4.32 - 4.43 (2H, m), 4.53 (1H, dd), 5.15 (1H, d), 6.31 (1H, d), 7.21 (2H, dd), 7.34 (1H, d), 7.68 (1H, t), 8.21 (1H, s), 8.53 (1H, s), 9.72 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 464.
1
Intermedijar 46
(S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0509]
[0510] Natrijum acetat (118 mg, 1.44 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 28; 200 mg, 0.48 mmol) i 6-metilpikolinaldehid (63.9 mg, 0.53 mmol) u MeOH (10 mL) na 20 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 30 min. Dodan je natrijum triacetoksiborohidrid (203 mg, 0.96 mmol), a reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 18 h. Reakcija je ugašena sa zasićenim vodenim NaHCO3(25 mL), a vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 x 50 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2,5-dihloropirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-metilpiridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 46; 120 mg, 62.1%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 24 °C) δ 1.33 (3H, d), 2.60 (3H, s), 4.09 (1H, d), 4.19 - 4.46 (2H, m), 4.52 (1H, d), 5.42 (1H, d), 7.15 (1H, s), 7.34 (1H, s), 7.63 (1H, s), 8.02 (1H, s), 8.61 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 403.
1
Primer 12
7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0511]
[0512] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (63.9 mg, 0.07 mmol) je dodan u 7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 47; 292 mg, 0.72 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (140 mg, 1.44 mmol) i Cs2CO3(585 mg, 1.80 mmol) u 1,4-dioksanu (3 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 100 °C tokom 4 h. Rastvarač je odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu, a sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 7% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže produkt su isparene do suvoće koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajućepolarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.05% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje 7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 12; 59.7 mg, 17.79%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.1 °C) δ 2.70 (3H, s), 3.72 (2H, dd), 3.81 (3H, s), 4.26 - 4.34 (2H, m), 4.77 (2H, s), 6.31 (1H, d), 6.98 (1H, s), 7.15 (1H, t), 7.23 - 7.32 (1H, m), 7.45 (1H, dd), 7.49 (1H, d), 7.73 (1H, s), 8.30 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 467.
14
Intermedijar 47
7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0513]
[0514] NaH (68.3 mg, 1.71 mmol) je dodan u 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 48; 150 mg, 0.57 mmol) u DMF (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je tada mešan na 25 °C tokom 30 min. Dodan je 4-(bromometil)-2-hloro-1-fluorobenzen (254 mg, 1.14 mmol) na 25 °C, a mešanje je nastavljeno tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim vodenim NaHCO3(25 mL), nastao precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispiran sa vodom (50 mL) i osušen u vakuumu koje daje 7-(3-hloro-4-fluorobenzil)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 48; 292 mg, >100%) u formi žute čvrste materije, koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20.1 °C) δ 2.64 (3H, s), 3.74 - 3.82 (2H, m), 4.35 - 4.43 (2H, m), 4.70 (2H, s), 7.34 - 7.49 (2H, m), 7.60 (1H, ddd), 8.25 (1H, s), 8.61 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 406.
Intermedijar 48
2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0515]
[0516] NH3(7N u MeOH, 15 mL) je dodan u etil 1-(2-aminoetil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 21; 1.3 g, 3.40 mmol) na 20 °C pod vazduhom, a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 12 h. Rastvarač je odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu, nastale čvrste materije su ugušćene sa vodom (50 mL), filtrirane i osušene u vakuumu koje daje 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 48; 0.80 g, 89%) u formi bele čvrste materije, koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20.3 °C) δ 2.62 (3H, s), 3.61 (2H, ddd), 4.29 - 4.37 (2H, m), 8.26 (1H, s), 8.35 (1H, t), 8.59 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 264.
Primer 13
7-(3-hlorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0517]
[0518] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (62.0 mg, 0.07 mmol) je dodan u 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-hlorobenzil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 49; 271 mg, 0.70 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (136 mg, 1.40 mmol) i Cs2CO3(569 mg, 1.75 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 100 °C tokom 4 h. Rastvarač je tada odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu, a sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 7% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže produkt su isparene do suvoće koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je dodatno prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.05% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje 7-(3-hlorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 13; 43.5 mg, 13.9%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.1 °C) δ 2.69 (3H, s), 3.68 - 3.76 (2H, m), 3.81 (3H, s), 4.29 (2H, dd), 4.80 (2H, s), 6.31 (1H, d), 7.06 (1H, s), 7.25 - 7.29 (1H, m), 7.30 - 7.34 (2H, m), 7.36 - 7.39 (1H, m), 7.49 (1H, d), 7.73 (1H, s), 8.29 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 449.
Intermedijar 49
2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-hlorobenzil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0519]
[0520] NaH (68.3 mg, 1.71 mmol) je dodan u 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 48; 150 mg, 0.57 mmol) u DMF (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 30 min. Dodan je 1-(bromometil)-3-hlorobenzen (234 mg, 1.14 mmol), a nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(25 mL), nastao precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispiran sa vodom (50 mL) i osušen u vakuumu koje daje 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-hlorobenzil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 49; 271 mg) u formi žute čvrste materije, koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.1 °C) δ 2.64 (3H, s), 3.74 - 3.82 (2H, m), 4.36-4.44 (2H, m), 4.72 (2H, s), 7.39-7.48 (4H, m), 8.26 (1H, s), 8.61 (1H, s). m/z (ES+) [M+H]+ = 388.
14
Primer 14
7-(3-(difluorometil)benzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0521]
[0522] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (61.6 mg, 0.07 mmol) je dodan u 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 50; 280 mg, 0.69 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (135 mg, 1.39 mmol) i Cs2CO3(565 mg, 1.73 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 100 °C tokom 4 h. Rastvarač je tada odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 7% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže jedinjenje su isparene do suvoće koje daje prljavi produkt. Ovaj prljavi produkt je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolena: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz pomoć opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.05% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje 7-(3-(difluorometil)benzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 14; 14; 69.6 mg, 21.6%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.2 °C) δ 2.70 (3H, s), 3.68 - 3.76 (2H, m), 3.81 (3H, s), 4.24 - 4.32 (2H, m), 4.88 (2H, s), 6.31 (1H, d), 6.66 (1H, t), 6.98 (1H, s), 7.43 - 7.56 (5H, m), 7.73 (1H, s), 8.30 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 465.
Intermedijar 50
2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0523]
[0524] NaH (68.3 mg, 1.71 mmol) je dodan u 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (150 mg, 0.57 mmol) u DMF (5 mL) na 25 °C pod azotom, a nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 30 min. Dodan je 1-(bromometil)-3-(difluorometil)benzen (251 mg, 1.14 mmol), a nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(25 mL), a nastao precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispiran sa vodom (50 mL) pa je osušen u vakuumu koje daje 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 50; 280 mg) u formi žute čvrste materije, koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 19.9 °C) δ 2.64 (3H, s), 3.74 - 3.82 (2H, m), 4.36 - 4.44 (2H, m), 4.79 (2H, s), 7.06 (1H, td), 7.49-7.56 (4H, m), 8.26 (1H, s), 8.61 (1H, s).
Primer 15
7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0525]
[0526] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (22.95 mg, 0.03 mmol) je dodan u 2-(2-hloro-5-
14
metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 51; 205 mg, 0.51 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (123 mg, 1.27 mmol) i Cs2CO3(330 mg, 1.01 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) na 25 °C pod azotom, a nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže jedinjenje su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša sa vodom (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje 7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 15; 122 mg, 51.8%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20°C) δ 2.50 (3H, s), 3.70 (3H, s), 3.87 - 3.95 (2H, m), 4.42 - 4.50 (2H, m), 4.87 (2H, s), 6.30 (1H, d), 6.95 (1H, t), 7.33 (1H, d), 7.61 (2H, t), 7.94 (1H, s), 8.00 (1H, t), 8.32 (1H, s), 9.24 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 466.
Intermedijar 51
2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0527]
[0528] 6-(difluorometil)pikolinaldehid (Intermedijar 39; 123 mg, 0.78 mmol) je dodan u etil 1-(2-aminoetil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 21; 200 mg, 0.52 mmol), DIPEA (0.274 mL, 1.57 mmol) i AcOH (0.090 mL, 1.57 mmol) u DCM (10 mL) na 25 °C pod azotom. Nakon mešanja na 25 °C tokom 1 h je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (332 mg, 1.57 mmol), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h pa je grejana na 50 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(20 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 75 mL), spojene organske faze su osušene preko Na2SO4,
14
filtrirane i isparene koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 51; 205 mg, 97%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) δ 2.74 (3H, d), 3.95 - 4.04 (2H, m), 4.27 - 4.39 (2H, m), 4.94 (2H, s), 6.43 - 6.73 (1H, m), 7.57 (2H, d), 7.84 (1H, t), 7.96 (1H, s), 8.42 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 405.
Primer 16
(R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0529]
[0530] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (30.3 mg, 0.03 mmol) je dodan u (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 52; 150 mg, 0.33 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (81 mg, 0.84 mmol) i Cs2CO3(218 mg, 0.67 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) na 25 °C pod azotom, a nastala smeša je mešana na 120 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Nastao talog je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM koje daje žuti talog. Ovaj talog je dodatno prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 16; 27 mg, 15.9%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 25 °C) δ 2.50 (3H,s), 3.20 (3H, s), 3.34 - 3.42 (1H, m), 3.52 (1H, dd), 3.71 (3H, s), 4.15 (1H, s), 4.59 (3H, d), 5.24 (1H, d), 6.28 - 6.33 (1H, m), 6.97 (1H, t), 7.34 (1H, d), 7.59 - 7.66 (2H, m), 7.95
14
- 8.04 (2H, m), 8.32 (1H, s), 9.21 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 510.
Intermedijar 52
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0531]
[0532] Rastvor (R)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)amino)-3-metoksipropil)-1H-imidazol-2-karboksilata (intermedijar 53; 360 mg, 0.73 mmol) u NH3u MeOH (20 mL, 140.00 mmol) je mešan na 25 °C tokom 48 h. Isparljive materije su tada odstranjene pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 52; 300 mg, 92%) u formi žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 449.
14
Intermedijar 53
(R)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)amino)-3-metoksipropil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0533]
[0534] 6-(difluorometil)pikolinaldehid (442 mg, 2.81 mmol) je dodan u (R)-etil 1-(2-amino-3-metoksipropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 54; 400 mg, 0.94 mmol) u DCM (20 mL) na 25 °C pod azotom. Nakon mešanja na 40 °C tokom 3 h je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (596 mg, 2.81 mmol), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(20 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 50 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)amino)-3-metoksipropil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 53; 360 mg, 78%) u formi žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 495.
14
Intermedijar 54
(R)-etil 1-(2-amino-3-metoksipropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid
[0535]
[0536] Rastvor (R)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)-3-metoksipropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilata (intermedijar 55; 1 g, 2.20 mmol) u smeši 1,4-dioksan/HCl (20 mL) je mešan na 25 °C preko noći. Precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispiran sa EtOAc (20 mL) i osušen u vakuumu koje daje (R)-etil 1-(2-amino-3-metoksipropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 54; 0.80 g, 85%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 22 °C) δ 1.36 (3H, t), 2.64 (3H, s), 3.48 - 3.66 (5H, m), 3.85 (1H, s), 4.39 (2H, q), 4.64 - 4.79 (2H, m), 8.36 (2H, s), 8.41 (1H, s), 8.62 - 8.67 (1H, m). m/z (ES+), [M+H]+ = 354.
Intermedijar 55
(R)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)-3-metoksipropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0537]
[0538] 1M HCl (20 mL, 20.00 mmol) je dodana u (R)-(tert-butoksikarbonil)(1-(4-(2-hloro-5-
1
metilpirimidin-4-il)-2-(etoksikarbonil)-1H-imidazol-1-il)-3-metoksipropan-2-il)sulfaminku kiselinu (intermedijar 56; 5 g, 9.36 mmol) u EtOH (20 mL) na 25 °C pod vazduhom, a nastala smeša je mešana na 50 °C tokom 20 min. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(50 mL), ekstrahovana sa DCM (3 x 100 mL), organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 30% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)-3-metoksipropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 55; 1.0 g, 23.53%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 22 °C) δ 1.32 (9H, s), 1.47 (3H, t), 2.71 (3H, s), 3.40 (3H, s), 3.51 (2H, qd), 4.24 (1H, d), 4.41 - 4.57 (3H, m), 4.73 (1H, dd), 5.11 (1H, d), 7.98 (1H, s), 8.41 (1H, s).
Intermedijar 56
(R)-(tert-butoksikarbonil)(1-(4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-2-(etoksikarbonil)-1H-imidazol-1-il)-3-metoksipropan-2-il)sulfaminka kiselina
[0539]
[0540] (S)-tert-butil 4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid (intermedijar 57; 3.26 g, 12.19 mmol) je dodan, deo po deo, u etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 23; 2.5 g, 9.37 mmol), K2CO3(3.89 g, 28.12 mmol) i 18-kruna-6 (0.496 g, 1.87 mmol) u 1,4-dioksanu (30 mL) na 100 °C pod azotom, a nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je tada filtrirana i ispirana sa DCM, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom koje daje željeni produkt, (R)-(tertbutoksikarbonil)(1-(4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-2-(etoksikarbonil)-1H-imidazol-l-il)-3-metoksipropan-2-il)sulfaminku kiselinu (5.00 g, 100%) u formi žutog ulja, koje je korišćeno
1 1
direktno u sledećoj fazi. m/z (ES+), [M+H]+ = 534.
Intermedijar 57
(S)-tert-butil 4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid
[0541]
[0542] U rastvor (4S)-tert-butil 4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2-oksida (intermedijar 58; 3.34 g, 13.29 mmol) u acetonitrilu (30 mL) na 0 °C pod azotom sekvencijalno su dodani natrijum metaperjodat (3.13 g, 14.62 mmol), rutenijum(III) hlorid (0.276 g, 1.33 mmol) i voda (30.0 mL), a smeša je tada mešana na 0 °C tokom 3 h. Reakciona smeša je razblažena sa vodom (100 mL) pa je filtrirana sa ciljem da se odstrane ne-rastvorljive anorganske soli. Nastao rastvor je ekstrahovan sa etrom (2 x 100 mL), ispiran sa slanicom (2 x100 mL) i osušen preko MgSO4koje daje (S)-tert-butil 4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid (intermedijar 57; 2.86 g, 80%) u formi ulja.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.56 (9H, s), 3.41 (3H, s), 3.59 (1H, t), 3.66 (1H, ddd), 4.38 (1H, dddd), 4.52 -4.67 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 268.
Alternativna priprema Intermedijara 57:
[0543] Rastvor natrijum metaperjodata (95 g, 444.49 mmol) i rutenijum hlorida (0.349 g, 1.33 mmol) u vodi (800 mL) je dodan u rastvor tert-butil (4S)-4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2-oksida (intermedijar 58; 111.7 g, 444.49 mmol) u acetonitrilu (800 mL) na 10 °C. Praćenje postupkom<1>H-NMR je pokazalo da je reakcija bila kompletovana odmah nakon dodavanja. Reakciona smeša je razblažena sa MTBE (1000 mL), a slojevi su odvojeni. Organski sloj je ispiran sa vodom (2 x 500 mL) pa je koncentrovan koje daje (S)-tert-butil 4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid (intermedijar 57; 115 g, 95%) u formi ulja.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 1.54 (s, 9H), 3.40 (s, 3H), 3.61 (d, 2H), 4.46 (qd, 1H), 4.60 (dd, 1H), 4.68 (dd, 1H).
1 2
Intermedijar 58
(4S)-tert-butil 4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2-oksid
[0544]
[0545] Imidazol (1.629 g, 23.92 mmol) je dodan, i jednoj porciji, u tionil hlorid (1.75 mL, 23.92 mmol) i trietilamin (3.33 mL, 23.92 mmol) u DCM (100 mL) pa je sve ohlađeno do -78 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan tokom 20 min. Dodan je rastvor (R)-tert-butil (1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il)karbamata (intermedijar 59; 4.91 g, 23.92 mmol) u DCM (26.7 mL), kap po kap tokom 10 min. Nastao rastvor je mešan na -78 °C tokom 3 h, a tada je ostavljen da se ugreje do sobne temperature. U reakcionu smešu je dodana voda (100 mL), a tada je smeša ekstrahovana sa DCM (2 x 100 mL). Organske materije su spojene i ispirane sa slanicom (100 mL), osušene preko MgSO4i isparene koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) uz eluciju sa 10% Et2O u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (4S)-tert-butil 4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2-oksid (intermedijar 58; 3.34 g, 55.6%) u formi bezbojnog ulja i kao smeša diastereomera (2:1).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.55 - 1.58 (9H, d), 3.31 (0.5H, t), 3.41 (3H, s), 3.52 - 3.63 (1H, m), 3.90 (0.5 H, dd), 4.17 - 4.4 (1H, m), 4.64 - 4.92 (1H, m), 4.94 - 5.07 (1H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 252.
Alternativna priprema Intermedijara 58:
[0546] U rastvor 1H-imdiazola (672 g, 9.76 mol) u dihlorometanu (5 L) je dodan trietilamin (568 g, 5.61 mol), a nastao rastvor je ohlađen do -60 °C. U smešu je, kap po kap, dodan tionil hlorid (377 g, 3.17 mol) uz održavanje temperature ispod -50 °C (2 h). Tada je dodan (R)-tertbutil (1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il)karbamat (intermedijar 59; 500 g, 2.44 mol), rastvoren u dihlorometanu (5 L), kap po kap, tokom perioda od 4 do 5 h uz održavanje temperature ispod -55 °C tokom dodavanja. Jednom kada je dodan sav početni materijal, reakciona smeša je
1
ostavljena preko noći da se ugreje do sobne temperature. Reakciona smeša je tada izlivena u vodu (∼3 L), slojevi su odvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (1 L). Spojeni organski slojevi su osušeni preko MgSO4, a smeša je filtrirana kroz pločicu od silike (2 kg) uz eluciju sa dihlorometanom pa je koncentrovana pod smanjenim pritiskom koje daje ulje. Ovo ulje je držano u visokom vakuumu uz mešanje sa ciljem da se odstrani preostao dihlorometan koje daje (4S)-tert-butil 4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2-oksid (intermedijar 58; 489 g, 80%) u formi ulja i kao smeša diastereomera (36:64).
Intermedijar 59
(R)-tert-butil (1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il)karbamat
[0547]
[0548] izo-butil hloroformat (0.599 mL, 4.56 mmol) je dodan, kap po kap, u (S)-2-((tertbutoksikarbonil)amino)-3-metoksipropionsku kiselinu (1 g, 4.56 mmol) i N-metilmorfolin (0.501 mL, 4.56 mmol) u THF (6 mL), a smeša je ohlađena do 0 °C tokom perioda od 15 min pod azotom. Nastala suspenzija je mešana na 0 °C tokom dodatnih 15 min. Natrijum borohidrid (0.500 g, 13.23 mmol), rastvoren u vodi (1.2 mL), je polako dodan u reakcionu smešu na 0 °C. Reakciona smeša je mešana tokom 30 min pre razblaživanja sa EtOAc (50 mL), a tada je neutralizovana sa vodenom HCl (2 M). Dodana je voda (50 mL), a organski sloj je odvojen, ispiran sa slanicom (50 mL) i osušen preko MgSO4. Isparavanje rastvarača daje sirovi produkt koji je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-tert-butil (1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il)karbamat (intermedijar 59; 0.510 g, 54.5%) u formi bezbojnog ulja.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.45 (9H, s), 3.36 (3H, s), 3.5 - 3.62 (2H, m), 3.64 - 3.73 (1H, m), 3.74 - 3.84 (2H, m), 5.16 (1H, s). m/z: ES+ [M+Na]+ 228.
Primer 17
1 4
(R)-7-(3-hlorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0549]
[0550] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (30.8 mg, 0.03 mmol) je dodan u (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-hlorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 60; 150 mg, 0.35 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (84 mg, 0.87 mmol) i Cs2CO3(226 mg, 0.69 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže produkt su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže produkt su isparene do suvoće koje daje (R)-7-(3-hlorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 17; 34.0 mg, 19.9%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 24 °C) δ 2.51(3H, s), 3.18 (3H, s), 3.29 (1H, s), 3.40 (1H, dd), 3.70 (3H, s), 4.04 (1H, s), 4.39 - 4.57 (3H, m), 5.09 (1H, d), 6.30 (1H, d), 7.31 - 7.50 (5H, m), 7.94 (1H, s), 8.32 (1H, s), 9.21 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 493.
1
Intermedijar 60
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-hlorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0551]
[0552] 1-(bromometil)-3-hlorobenzen (187 mg, 0.91 mmol) je dodan u (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 61; 140 mg, 0.45 mmol) i NaH (54.6 mg, 1.36 mmol) u DMF (5 mL) na 25 °C pod azotom, a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (25 mL) pa je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 25 mL). Spojene organske faze su ispirane sa slanicom, osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-hlorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 60; 150 mg, 76%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 25 °C) δ 2.81 (3H, s),3.30 (4H, s), 3.41 (1H, s), 3.84 (1H, s), 4.17 - 4.28 (2H, m), 4.43 (1H, d), 5.44 (1H, d), 7.33 (2H, d), 7.40 (2H, s), 7.97 (1H, s), 8.04 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 432.
Intermedijar 61
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0553]
1
[0554] Rastvor (R)-etil 1-(2-amino-3-metoksipropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilata, dihidrohlorida (intermedijar 54; 400 mg, 0.94 mmol) u NH3u MeOH (15 mL, 105.00 mmol) je mešan na 25 °C preko noći. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 61; 280 mg, 97%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 23 °C) δ 2.78 (3H, s), 3.43 (3H, s), 3.49 - 3.58 (2H, m), 4.16 - 4.33 (2H, m), 4.37 (1H, dd), 6.56 (1H, s), 8.01 (1H, s), 8.45 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 308.
Alternativna priprema Intermedijara 61:
[0555] Rastvor tert-butil (S)-4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksida (intermedijar 57; 105 g, 383.60 mmol) u acetonu (500 mL) je dodan u mešanu suspenziju etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilata (intermedijar 23; 93 g, 348.73 mmol) i K2CO3(57.8 g, 418.47 mmol) u smeši acetona (500 mL) i 1,4 dioksana (500 mL) na sobnoj temperaturi. Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je filtrirana, a filtrat je koncentrovan do 500 mL. U koncentrovani rastvor je dodana HCl u izopropilalkoholu (5-6 N, 500 mL, 2500 mmol) pa je mešan na 25 °C tokom 24 h. Tada je dodan Et3N (486 mL, 3487.26 mmol), a smeša je mešana na 55 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (1500 mL), a nastala čvrsta materija je filtrirana. Čvrsti kolač je ispiran sa vodom (400 mL) i smešom aceton/voda (1:1; 2 × 200 mL) koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo [1,2-a]pirazin-8(5H)-on (82 g, 76%) u formi čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20 °C) δ 2.62 (s, 3H), 3.27 (s, 3H), 3.39 (dd, 2H), 3.99 (s, 1H), 4.30 (dd, 1H), 4.43 (dd, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.59 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 308.
1
Primer 18
(R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0556]
[0557] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (0.784 g, 0.86 mmol) je dodan u (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 62; 7.5 g, 17.29 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (4.20 g, 43.22 mmol) i Cs2CO3(11.27 g, 34.58 mmol) u 1,4-dioksanu (200 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže produkt su isparene do suvoće koje daje talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen primenom C18-fleš-hromatografije u gradijentu elucije od 5 do 50% MeCN u vodi (0.1% NH4HCO3). Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 18; 5.50 g, 64.3%) u formi čvrste materije. Uz pomoć XRPD je određeno da je jedinjenje (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on amorfno.
Alternativna priprema Primera 18:
[0558] U smešu (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 62; 104.7 g, 225.64 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amina (33.5 g, 338.47 mmol) u 2-metil tetrahidrofuranu (1200 mL) i Cs2CO3(147 g, 451.29 mmol) u vodi (120 mL) su dodani 2'-(dicikloheksilfosfoanil)-N,N-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amin (7.10 g, 18.05 mmol) i Pd2(dba)3(8.27 g, 9.03 mmol) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je degazirana 3 puta pod azotom, a tada je mešana na 70 °C tokom 24 h. Reakciona smeša je ohlađena so sobne temperature, a slojevi su odvojeni. Organski
1
sloj je postupno ispiran sa vodom (500 mL), vodenom limunskom kiselinom (IN, 600 mL) i vodom (200 mL). U organski sloj je dodan je silicycle (Si-SH, 150 g) na 40 °C, a smeša je mešana tokom 20 h. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan, a talog je prečišćen primenom SFC-hromatografije uz pomoć klone Kromasil DIOL u gradijentu elucije od 25% smeše EtOH/NH3(100/0.5) u CO2(140 bar). Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 18; 72.6 g, 65%) u formi čvrste materije.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 2.51 (3H, s), 3.17 (3H, s), 3.30 (1H, dd), 3.39 (1H, dd), 3.69 (3H, s), 4.03 (1H, dtd), 4.38 (1H, d), 4.44 (1H, dd), 4.51 (1H, dd), 5.08 (1H, d), 6.30 (1H, d), 7.22 - 7.28 (1H, m), 7.33 (1H, d), 7.41 (1H, dt), 7.47 (1H, ddd), 7.93 (1H, s), 8.31 (1H, s), 9.21 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 495.
Primer 18a
Priprema (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forma 1
[0559]
[0560] U vrući rastvor (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 18; 114 g, 200.56 mmol) u MeCN (500 mL) na 55 °C je dodan rastvor etansulfonske kiseline (17.02 mL, 210.59 mmol) u acetonitrilu (100 mL). Reakciona smeša je polako ohlađena do 5 °C tokom 24 h, a nastala čvrsta materija je filtrirana i ispirana sa hladnim MeCN (200 mL) koje daje adukt etansulfonske kiseline, Formu 1 (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 18a; 119 g, 98%) u formi čvrste materije. Uz pomoć<1>H NMR ovom aduktu je određen molarni omer etansulfonske kiseline u odnosu na (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-
1
a]pirazin-8(5H)-on od 1:1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 24 °C) δ 1.08 (3H, t), 2.44 - 2.49 (2H, m), 2.51 (3H, s), 3.16 (3H, s), 3.32 (1H, dd), 3.41 (1H, dd), 3.76 (3H, s), 3.97 - 4.12 (1H, m), 4.32 - 4.62 (3H, m), 5.08 (1H, d), 6.48 (1H, d), 7.17 - 7.30 (1H, m), 7.34 - 7.52 (2H, m), 7.55 (1H, d), 8.04 (1H, s), 8.39 (1H, s), 9.67 (1H, s). Uz pomoć XRPD za (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta etansulfonske kiseline, Forme 1 je određeno da je kristalna materija (Slika 1) sa tačkom topljenja od 203.8 °C (početak) (Slika 2).
Intermedijar 62
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0561]
[0562] 4-(bromometil)-1,2-difluorobenzen (6.05 g, 29.25 mmol) je dodan u (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 61; 6 g, 19.50 mmol) i NaH (2 g, 50 mmol) u DMF (80 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(400 mL), ekstrahovana sa EtOAc (3 x 250 mL), organski slojevi su ispiran sa slanicom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 62; 8.00 g, 95%) u formi svetlo žute čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3δ 2.76 (3H, s), 3.25-3.35 (1H, m), 3.28 (3H, s), 3.35-3.42 (1H, m), 3.78-3.85 (1H, m), 4.18-4.26 (2H, m), 4.42 (1H, d), 5.34 (1H, d), 7.08-7.30 (3H, m), 7.95 (1H, s), 8.43 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 434.
Alternativna priprema Intermedijara 62:
1
[0563] Cs2CO3(115 g, 354.44 mmol) je dodan u (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 61: 79.5 g, 253.17 mmol) u MeCN (800 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je grejana do 40 °C, a MeCN (100 mL) je odstranjen destilacijom. Dodan je 4-(bromometil)-1,2-difluorobenzen (64.2 g, 303.80 mmol) na 60 °C, a smeša je mešana na 60-70 °C tokom 20 h. Reakciona smeša je koncentrovana do 500 mL pa je razblažena sa EtOAc (1000 mL) i vodom (500 mL). Slojevi su odvojeni, organski sloj je ispiran sa vodom (2 x 500 mL), a isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom. Talog je mešan u smeši MTBE (120 mL) i heptana (480 mL) na 40 °C, nastala čvrsta materija je filtrirana i ispirana sa heptanom (250 mL) koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (100 g, 91%) u formi čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 24 °C) δ 2.37 (3H,s,), 3.04 (3H, s), 3.11 - 3.19 (1H, m), 3.28 (1H, dd), 3.92 (1H, m), 4.27 (1H, d), 4.35 (2H d), 4.95 (1H, d), 7.06 - 7.22 (1H, m), 7.22 - 7.48 (2H, m), 8.13 (1H, s), 8.47 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 434..
Primer 19
(S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0564]
[0565] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (33.1 mg, 0.04 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 63; 150 mg, 0.37 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (91 mg, 0.93 mmol) i Cs2CO3(243 mg, 0.75 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 4 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čisti frakcije su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Ovaj talog je dodatno
1 1
prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 19; 71.0 mg, 41.1%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 24 °C) δ1.14 (3H, d), 2.53 (3H, s), 3.70 (3H, s), 4.00 (1H, s), 4.30 - 4.48 (3H, m), 5.07 (1H, d), 6.30 (1H, d), 7.31 - 7.45 (4H, m), 7.48 (1H, s), 7.93 (1H, s), 8.33 (1H, s), 9.22 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 463.
Intermedijar 63
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0566]
[0567] 1-(bromometil)-3-hlorobenzen (1332 mg, 6.48 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 64; 300 mg, 1.08 mmol) i NaH (259 mg, 6.48 mmol) u DMF (10 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (25 mL), ekstrahovana sa EtOAc (2 x 25 mL), organski slojevi su ispirani sa slanicom i osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 10 do 60% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 63; 300 mg, 69.0%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 22 °C) δ 1.24 - 1.34 (3H, m), 2.81 (3H, s), 3.84 - 3.92 (1H, m), 4.03 - 4.19 (2H, m), 4.37 (1H, dd), 5.45 (1H, d), 7.27 (1H, d), 7.30 - 7.34 (2H, m), 7.38 (1H, s), 7.99 (1H, s), 8.45 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 402.
Intermedijar 64
1 2
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0568]
[0569] Rastvor (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilata, dihidrohlorida (intermedijar 65; 2.8 g, 7.77 mmol) u NH3(7 N u MeOH, 20 mL, 140 mmol) je mešan na 25 °C preko noći. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom koje daje željeni produkt, (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (2.1 g, 97%) u formi bele čvrste materije, koja je korišćena u sledećem korak bez prečišćavanja. m/z (ES+), [M+H]+ = 278.
Intermedijar 65
(S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat dihidrohlorid
[0570]
[0571] Rastvor (S)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilata (intermedijar 66; 3.4 g, 8.02 mmol) u 33% HCl (gas) u EtOH (20 mL) je mešan na 25 °C preko noći. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom koje daje željeni produkt, (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 65; 2.80 g, 97%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 24 °C) δ 1.28 (3H, d), 1.35 (3H, t), 2.64 (3H, s), 3.74 (1H, s), 4.39 (2H, q), 4.58 - 4.76 (2H, m), 8.37 (2H, s), 8.47 (1H, s), 8.61 - 8.67 (1H, m). m/z (ES+), [M+H]+
1
Intermedijar 66
(S)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0572]
[0573] 1M HCl (20 mL, 20.00 mmol) je dodana u (S)-(tert-butoksikarbonil)(1-(4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-2-(etoksikarbonil)-1H-imidazol-1-il)propan-2-il)sulfaminku kiselinu (intermedijar 67; 5 g, 9.92 mmol) u EtOH (20 mL) na 25 °C pod vazduhom. Nastala smeša je mešana na 50 °C tokom 20 min. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(50 mL), ekstrahovana sa DCM (3 x 100 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 30% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-etil 1-(2-((tert-butoksikarbonil)amino)propil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 66; 3.40 g, 81%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 24 °C) δ 1.27 (3H, dd), 1.35 (9 H, s), 1.48 (3H, t), 2.72 (3H, s), 4.09 - 4.18 (1H, m), 4.47 (3H, qd), 4.64 (2H, dd), 8.01 (1H, s), 8.42 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 424.
1 4
Intermedijar 67
(S)-(tert-butoksikarbonil)(1-(4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-2-(etoksikarbonil)-1H-imidazol-1-il)propan-2-il)sulfaminka kiselina
[0574]
[0575] (S)-tert-butil 4-metil-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid (intermedijar 12; 3.34 g, 14.06 mmol) je dodan, deo po deo, u etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 23; 3 g, 11.25 mmol) i K2CO3(3.11 g, 22.50 mmol) u acetonitrilu (3 mL) na 80 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 85 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je filtrirana i ispirana sa MeCN, rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom koje daje željeni produkt, (S)-(tert-butoksikarbonil)(1-(4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-2-(etoksikarbonil)-1H-imidazol-1-il)propan-2-il)sulfaminku kiselinu (5.00 g, 88%) u formi žutog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 504.
Primer 20
(S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0576]
[0577] (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-
1
dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 68; 189 mg, 0.47 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (91 mg, 0.94 mmol), Cs2CO3(457 mg, 1.40 mmol) i BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (42.4 mg, 0.05 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) su mešani u atmosferi azota na 110 °C tokom 8 h. Rastvarač je odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 4 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žutu čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je dodatno prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.01% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 20; 63.8 mg, 29.3%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 24.8 °C) δ 1.14 (3H, d), 2.53 (3H, d), 3.70 (3H, s), 3.95 - 4.03 (1H, m), 4.29 - 4.38 (2H, m), 4.44 (1H, dd), 5.06 (1H, d), 6.30 (1H, d), 7.27 (1H, s), 7.34 (1H, d), 7.37 - 7.53 (2H, m), 7.93 (1H, s), 8.33 (1H, d), 9.21 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 465.
Intermedijar 68
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0578]
[0579] NaH (108 mg, 2.70 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 64; 250 mg, 0.90 mmol) u DMF (5 mL) na 0 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 0 °C tokom 30 min. Tada je dodan 4-(bromometil)-1,2-difluorobenzen (373 mg, 1.80 mmol), a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (15 mL), ekstrahovana sa EtOAc (4 x 10 mL). Organski slojevi su spojeni i ispirani sa vodom (3 x 20 mL), slanicom (20 mL). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuto ulje. Sirovi produkt je
1
prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 3% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 68; 189 mg, 52%) u formi žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 404.
Primer 21
(S)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a] pirazin-8(5H)-on
[0580]
[0581] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (12.44 mg, 0.02 mmol) je dodan u Cs2CO3(304 mg, 0.93 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (91 mg, 0.93 mmol) i (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 69; 130 mg, 0.31 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 4 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.1% mravlju kiselinu) i MeCN kao eluente. Frakcije koje su sadržavale željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 21; 85 mg, 57.1%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, DMSO, 23 °C) δ 1.12 (3H, s), 2.40 (3H, s), 3.70 (3H, s), 3.90-4.10 (1H, m), 4.36-4.44 (3H, m), 5.14 (1H, d), 6.29 (1H, d), 7.04 (1H, t), 7.33 (1H, d), 7.50-7.59 (4H, m), 7.93 (1H, s), 8.32 (1H, s), 9.21 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 479.
Intermedijar 69
1
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0582]
[0583] 1-(bromometil)-3-(difluorometil)benzen (207 mg, 0.94 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 64; 130 mg, 0.47 mmol) i NaH (56.2 mg, 1.40 mmol) u DMF (3 mL). Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je izlivena u zasićeni NaHCO3(50 mL), ekstrahovana sa EtOAc (2 x 50 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje sirovu materiju. Ovaj sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 4% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (130 mg, 66.5%) u formi bledo-žutog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 418.
Primer 22
(S)-7-(3,5-l)ifluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0584]
[0585] Brettphos-prekatalizator 3. generacije (12.88 mg, 0.02 mmol) je dodan u 1-metil-1H-pirazol-5-amin (94 mg, 0.97 mmol), (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 70; 130 mg,
1
0.32 mmol) i Cs2CO3(315 mg, 0.97 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 4 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 7% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje talog. Sirovi produkt je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.1% mravlju kiselinu) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 22; 60 mg, 40.1%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, DMSO, 23°C) δ 1.15 (3H, d), 2.60 (3H, s), 3.70 (3H, s), 3.90-4.10 (1H, m), 4.32-4.38 (2H, m), 4.46-4.52 (1H, dd), 5.08 (1H, d), 6.29 (1H, d), 7.12-7.18(3H, m), 7.33(1H, s), 7.93 (1H, s), 8.32 (1H, s), 9.21 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 465.
Intermedijar 70
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0586]
[0587] 1-(bromometil)-3,5-difluorobenzen (194 mg, 0.94 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 64; 130 mg, 0.47 mmol) i NaH (37.4 mg, 0.94 mmol) u DMF (3 mL), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je izlivena u zasićeni NaHCO3(50 mL), ekstrahovana sa EtOAc (2 x 50 mL), organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 4% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 70; 130 mg, 68.8%) u formi bledo-žutog ulja.<1>H NMR (400
1
MHz, DMSO, 20 °C) δ 1.15 (3H, d), 2.64 (3H, s), 4.02 (1H, s), 4.26 - 4.42 (2H, m), 4.47 - 4.57 (1H, m), 5.09 (1H, d), 7.15 (3H, d), 8.27 (1H, s), 8.61 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 404.
Primer 23
(S)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0588]
[0589] (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 71; 193 mg, 0.49 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (94 mg, 0.97 mmol), Cs2CO3(474 mg, 1.46 mmol) i BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (44.0 mg, 0.05 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) su mešani u atmosferi azota na 120 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 5% MeOH u DCM, a frakcije koje sadrže jedinjenje su isparene do suvoće koje daje žutu čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je dodatno prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajućepolarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.01% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 23; 81 mg, 36.2%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 22.4 °C) δ 1.12 (3H, d), 2.53 (3H, d), 3.70 (3H, s), 3.76 (3H, s), 3.90 - 3.99 (1H, m), 4.25 - 4.44 (3H, m), 5.09 (1H, d), 6.31 (1H, d), 6.87 (1H, ddd), 6.92 - 7.00 (2H, m), 7.29 (1H, t), 7.34 (1H, d), 7.93 (1H, s), 8.33 (1H, d), 9.22 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 459.
Intermedijar 71
1
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0590]
[0591] Šarža 1: NaH (8.64 mg, 0.22 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 64; 20 mg, 0.07 mmol) u DMF (1 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 30 min.1-(bromometil)-3-metoksibenzen (29.0 mg, 0.14 mmol) je dodan u reakcionu smešu, a nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 2 h. Šarža 2: NaH (56.2 mg, 1.40 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (130 mg, 0.47 mmol) u DMF (3 mL) na 20 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 30 min. 1-(bromometil)-3-metoksibenzen (188 mg, 0.94 mmol) je dodan u reakcionu smešu, a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 2 h. Materijal iz 2 pomenute šarže je spojen, a na spojene šarže je primenjena sledeća procedura: reakcija je ugašena sa zasićenim NaHCO3(15 mL), a smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 15 mL). Organski slojevi su spojeni i ispirani sa vodom (2 x 15 mL), slanicom (15 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje žuto ulje. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 4% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 71; 193 mg, 89%) u formi žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 23.0 °C) δ 1.29 (3H, d), 2.81 (3H, s), 3.80 - 3.93 (4H, m), 3.98 - 4.13 (1H, m), 4.34 (1H, dd), 5.32 (1H, s), 5.50 (1H, d), 6.84 - 6.99 (3H, m), 7.31 (1H, d), 7.97 (1H, s), 8.45 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 398.
Primer 24
(S)-7-(4-fluoro-3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-
1 1
il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0592]
[0593] (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(4-fluoro-3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 72; 205 mg, 0.49 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (96 mg, 0.99 mmol), Cs2CO3(482 mg, 1.48 mmol) i BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (44.7 mg, 0.05 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) su mešani u atmosferi azota na 120 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žutu čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je dodatno prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.01% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-7-(4-fluoro-3-metoksibenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 24; 59.0 mg, 25.1%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 22.3 °C) δ 1.13 (3H, d), 2.53 (3H, d), 3.70 (3H, s), 3.85 (3H, s), 3.95 (1H, dd), 4.23 - 4.44 (3H, m), 5.10 (1H, d), 6.31 (1H, d), 6.96 (1H, ddd), 7.14 - 7.24 (2H, m), 7.34 (1H, d), 7.93 (1H, s), 8.33 (1H, d), 9.22 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 477.
1 2
Intermedijar 72
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(4-fluoro-3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0594]
[0595] Šarža 1: NaH (56.2 mg, 1.40 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (130 mg, 0.47 mmol) u DMF (3 mL) na 20 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 30 min. 4-(bromometil)-1-fluoro-2-metoksibenzen (205 mg, 0.94 mmol) je dodan u reakcionu smešu, a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 2 h. Šarža 2: NaH (8.64 mg, 0.22 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (20 mg, 0.07 mmol) u DMF (1 mL) na 20 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 30 min. 4-(bromometil)-1-fluoro-2-metoksibenzen (31.6 mg, 0.14 mmol) je dodan u reakcionu smešu, a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 2 h. Materijal iz pomenute dve šarže je spojen, a na spojene šarže je primenjena sledeća procedura: reakcija je ugašena sa zasićenim NaHCO3(15 mL), a smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 15 mL). Organski slojevi su spojeni i ispirani sa vodom (2 x 15 mL), slanicom (15 mL), a organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje žuto ulje. Ovaj sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 4% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(4-fluoro-3-metoksibenzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (205 mg, 91%) u formi žutog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 416.
1
Primer 25
(S)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0596]
[0597] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (0.541 g, 0.60 mmol) je dodan u Cs2CO3(11.67 g, 35.81 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (3.48 g, 35.81 mmol) i (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 73; 5 g, 11.94 mmol) u 1,4-dioksanu (100 mL). Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je tada filtrirana, a rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen sa C18-fleš-hromatografijom u gradijentu elucije od 5 do 40% MeCN u vodi (koja sadrži 0.1% NH4CO3). Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 25; 3.50 g, 61.1%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, DMSO, 23 °C) δ 1.19 (3H, d), 2.45 (3H, s), 2.61 (3H, s), 3.70 (3H, s), 4.03-4.17 (1H, m), 4.33-4.41 (1H, dd), 4.45-4.520 (2H, m), 5.22 (1H, d), 6.30 (1H, d), 6.97 (1H, t), 7.34 (1H, d), 7.60-7.69 (2H, m), 7.96 (1H, s), 7.97-8.02 (1H, t), 8.33 (1H, s), 9.23 (1H, s); m/z (ES+), [M+H]+ = 480.
1 4
Intermedijar 73
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0598]
[0599] Natrijum acetat (2.047 g, 24.95 mmol) je dodan u (S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 74; 5.8 g, 12.48 mmol) u etanolu (apsolutan, 99.5%, 100 mL). Nastala smeša je mešana na 70 °C tokom 18 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 73; 5.00 g, 96%) u formi bledo-žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 419.
Intermedijar 74
(S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0600]
1
[0601] Natrijum triacetoksiborohidrid (9.62 g, 45.37 mmol) je dodan u DIPEA (7.92 mL, 45.37 mmol), (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 65; 6 g, 15.12 mmol), 6-(difluorometil)pikolinaldehid (3 g, 19.09 mmol) i sirćetnu kiselinu (2.60 mL, 45.37 mmol) u DCM (100 mL). Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je izlivena u zasićeni NaHCO3(300 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (2 x 150 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4, a isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 74; 5.8 g, 82%) u formi bledo-žutog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 465.
Primer 26
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0602]
[0603] (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 75; 60 mg, 0.14 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (39.9 mg, 0.41 mmol), Cs2CO3(134 mg, 0.41 mmol) i BrettPhosprekatalizator 3. generacije (12.42 mg, 0.01 mmol) u 1,4-dioksanu (2.5 mL) su mešani u atmosferi azota na 120 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žutu čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je dodatno prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.01% NH4HCO3) i MeCN kao eluente.
1
Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 26; 21 mg, 30.7%) u formi svetlo-žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 25.5 °C) δ 1.44 (3H, d), 2.74 (3H, s), 3.88 (3H, s), 4.21 (1H, dd), 4.30 (1H, t), 4.42 (1H, d), 4.63 (1H, dd), 5.48 (1H, d), 6.38 (1H, d), 7.52 (1H, d), 7.68 (1H, d), 8.09 (1H, s), 8.31 (1H, s), 8.53 (1H, s), 8.90 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 499.
Intermedijar 75
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0604]
[0605] NH3(7 N u MeOH, 10 mL) je dodan u (S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 76; 100 mg, 0.21 mmol) na 20 °C pod vazduhom. Nastao rastvor je mešan na 50 °C tokom 16 h. Rastvarač je tada odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 75; 60 mg, 66.3%) u formi bezbojnog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 438.
1
Intermedijar 76
(S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0606]
[0607] 2-(trifluorometil)pirimidin-4-karbaldehid (147 mg, 0.83 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 65; 250 mg, 0.69 mmol) u DCM (10 mL) pod vazduhom. Nastao rastvor je mešan na 40 °C tokom 12 h. Dodan je natrijum triacetoksiborohidrid (441 mg, 2.08 mmol), a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 12 h. Reakcija je ugašena sa vodom (5 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (5 x 10 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje žuto ulje. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 2 do 4% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((2-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 76; 110 mg, 32.8%) u formi bezbojnog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 484.
1
Primer 27
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0608]
[0609] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (11.90 mg, 0.01 mmol) je dodan u 1-metil-1H-pirazol-5-amin (87 mg, 0.89 mmol), Cs2CO3(291 mg, 0.89 mmol) i (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 77; 130mg, 0.30 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 4 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM, a frakcija koja sadrži produkt je isparena koje daje čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je dodatno prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.1% mravlju kiselinu) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 27; 100 mg, 67.5%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, DMSO, 23 °C) δ 1.20 (3H, d), 2.56 (3H, s), 3.70 (3H, s), 4.05-4.18 (1H, m), 4.37-4.41 (1H, m), 451-4.60 (2H, m),5.212 (1H, d), 6.30 (1H, d), 7.34 (1H, d), 7.76-7.83 (2H, m), 7.96 (1H, s), 8.06-8.11 (1H, m), 8.32 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 498.
1
Intermedijar 77
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0610]
[0611] (S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 78; 140 mg, 0.29 mmol) je dodan u rastvor NH3(7 N u MeOH; 10 mL), a nastala smeša je mešana na 50 °C tokom 5 h. Rastvarač je odstranjen pod smanjenim pritiskom. To daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 77; 110 mg, 87%) u formi bele čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 437.
Intermedijar 78
(S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0612]
[0613] 6-(trifluorometil)pikolinaldehid (110 mg, 0.63 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-
1
aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 64; 250 mg, 0.63 mmol) u DCM (15 mL), a nastala smeša je mešana na 40 °C tokom 4 h. Nakon šta je ohlađena do sobne temperature, dodan je natrijum triacetoksiborohidrid (267 mg, 1.26 mmol), a reakciona smeša je mešana tokom 1 h. Reakcija je tada ugašena sa zasićenim NaHCO3(50 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (2 x 50 mL). Organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni koje daje bledo-žuto ulje. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 78; 140 mg, 46%) u formi bledo-žutog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 483.
Primer 28
(S)-7-(3-difluorometoksi)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0614]
[0615] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (11.99 mg, 0.01 mmol) je dodan u 1-metil-1H-pirazol-5-amin (87 mg, 0.90 mmol), (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometoksi)benzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 79, 130 mg, 0.30 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) pod azotom, a nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 4 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Ovaj sirovi produkt je prečišćena primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 7% MeOH u DCM, a frakcije koja sadrže jedinjenje su isparene koje daje čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je dodatno prečišćena primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.1) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su
1 1
isparene do suvoće koje daje (S)-7-(3-(difluorometoksi)benzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 28; 80 mg, 54%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, DMSO, 23 °C) δ 1.11(3H, d), 2.60 (3H, s), 3.70 (3H, s), 3.90-4.10 (1H, m), 4.31-4.45 (3H, m), 5.10 (1H, d), 6.29 (1H, d), 7.00-7.50 (4H, m), 7.92 (1H, s), 7.83 (1H, s), 8.21 (1H, s), 8.32 (1H, s), 9.21 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 495.
Intermedijar 79
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometoksi)benzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0616]
[0617] 3-(difluorometoksi)benzaldehid (108 mg, 0.63 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 64; 250 mg, 0.63 mmol) u DCM (15 mL), a nastala smeša je mešana na 40 °C tokom 4 h. Tada je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (267 mg, 1.26 mmol), a reakciona smeša je dodatno mešana tokom 1 h. Reakciona smeša je tada izlivena u zasićeni NaHCO3(50 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (2 x 50 mL). Spojene organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje sirovu materiju. Ovaj sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje belu čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je tada tretirana sa NH3(7 N u MeOH, 15.00 mL) pa je grejana tokom 5 h na 50 °C. Isparljive materije su tada odstranjene pod smanjenim pritiskom koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometoksi)benzil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (130 mg, 47.5%) u formi svetlo-žutog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 434.
Primer 29
1 2
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((4-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0618]
[0619] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (31.1 mg, 0.03 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((4-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 80; 300 mg, 0.69 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (167 mg, 1.72 mmol) i Cs2CO3(448 mg, 1.37 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže jedinjenje su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((4-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 28; 141 mg, 41.3%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20 °C) δ 1.21 (3H, d), 2.52 (3H, s), 3.71 (3H, s), 4.13 (1H, dd), 4.37 (1H, dd), 4.52 (1H, dd), 4.58 (1H, d), 5.26 (1H, d), 6.31 (1H, d), 7.34 (1H, d), 7.71 (1H, d), 7.82 (1H, s), 7.95 (1H, s), 8.33 (1H, s), 8.84 (1H, d), 9.24 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 498.
1
Intermedijar 80
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((4-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0620]
[0621] 4-(trifluorometil)pikolinaldehid (136 mg, 0.78 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 64; 280 mg, 0.71 mmol), DIPEA (0.37 mL, 2.12 mmol) i AcOH (0.121 mL, 2.12 mmol) u DCM (10 mL) na 25 °C pod azotom. Nakon mešanja na 25 °C tokom 1 h je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (449 mg, 2.12 mmol), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 2 h, a tada je grejana na 50 °C tokom 8 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(20 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (2 x 75 mL). Spojeni organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((4-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 80; 300 mg, 97%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) δ 1.60 (3H, s), 2.79 (3H, s), 4.07 - 4.20 (1H, m), 4.26 (1H, s), 4.36 - 4.45 (1H, m), 4.50 (1H, dd), 5.54 (1H, d), 7.49 (1H, d), 7.72 (1H, s), 8.00 (1H, s), 8.45 (1H, s), 8.75 (1H, d).
1 4
Primer 30
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0622]
[0623] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (31.1 mg, 0.03 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 81; 300 mg, 0.69 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (167 mg, 1.72 mmol) i Cs2CO3(448 mg, 1.37 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 5 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže jedinjenje su isparene do suvoće koje daje žuti talog.
[0624] Ovaj talog je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajućepolarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 30; 200 mg, 58.5%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, DMSO, 23 °C) δ 1.18 (3H, d), 2.61 (3H, s), 3.70 (3H, s), 4.00-4.13 (1H, m), 4.30-4.40 (1H, d), 4.45-4.60 (2H, m), 5.18 (1H, d), 6.30 (1H, s), 6.20 (1H, d), 7.73 (1H, d), 7.91 (1H, s), 7.96 (1H, s), 8.33 (1H, s), 8.73 (1H, d), 9.23 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 498.
1
Intermedijar 81
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0625]
[0626] 2-(trifluorometil)izonikotinaldehid (170 mg, 0.97 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 64; 350 mg, 0.88 mmol), DIPEA (0.462 mL, 2.65 mmol) i AcOH (0.152 mL, 2.65 mmol) u DCM (15 mL) na 25 °C pod azotom. Nakon mešanja na 25 °C tokom 1 h je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (561 mg, 2.65 mmol), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h pa je grejana na 50 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(50 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (2 x 75 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((2-(trifluorometil)piridin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (320 mg, 83%) u formi žutog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 437.
Primer 31
(S)-7-((4-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0627]
1
[0628] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (51.9 mg, 0.06 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((4-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 82; 240 mg, 0.57 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (111 mg, 1.15 mmol) i Cs2CO3(373 mg, 1.15 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 120 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 4 do 6% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže produkt su isparene do suvoće koje daje čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je dodatno prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.05% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-7-((4-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 31; 92 mg, 33.5%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.2 °C) δ 1.36 (3H, d), 2.69 (3H, s), 3.82 (3H, s), 4.09 (1H, dd), 4.22 (1H, tt), 4.37 - 4.49 (2H, m), 5.50 (1H, d), 6.31 (1H, d), 6.64 (1H, t), 7.01 (1H, s), 7.36 - 7.43 (1H, m), 7.50 (1H, d), 7.61 (1H, s), 7.75 (1H, s), 8.29 (1H, s), 8.69 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 480.
Intermedijar 82
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((4-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0629]
[0630] 4-(difluorometil)pikolinaldehid (intermedijar 83; 154 mg, 0.98 mmol) je dodan u (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 64; 300 mg, 0.76 mmol), DIPEA (0.396 mL, 2.27 mmol) i AcOH (0.130 mL, 2.27 mmol) u DCM (10 mL) na 25 °C pod azotom. Nakon mešanja na 25 °C tokom 0.5 h je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (481 mg, 2.27 mmol), a reakciona smeša je
1
mešana na 25 °C tokom 0.5 h pa je grejana na 50 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(20 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (2 x 75 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 4% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((4-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 82; 240 mg, 76%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.5 °C) δ 1.37 (3H, d), 2.79 (3H, d), 4.10 (1H, dd), 4.25 (1H, tdd), 4.35 - 4.53 (2H, m), 5.50 (1H, d), 6.64 (1H, t), 7.33 - 7.47 (1H, m), 7.61 (1H, s), 7.99 (1H, s), 8.44 (1H, d), 8.69 (1H, dd). m/z (ES+), [M+H]+ = 419.
Intermedijar 83
4-(difluorometil)pikolinaldehid
[0631]
[0632] LiAlH4(0.274 g, 7.22 mmol) je dodan u 4-(difluorometil)-N-metoksi-N-metilpikolinamid (intermedijar 84; 1.2 g, 5.55 mmol) u THF (10 mL) ohlađenom na -78 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na -78 °C tokom 20 min. Dodan je EtOAc (1 mL), a reakcija je tada ugašena sa vodom (0.3 mL) na -78 °C. Tada je dodan 15% vodeni rastvor NaOH (1.5 mL) pa voda (0.3 mL), a nastale čvrste materije su odstranjene uz pomoć filtracije. Filtrat je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje 4-(difluorometil)pikolinaldehid (intermedijar 83; 1.09 g) u formi zelenog ulja. Produkt je korišćen u sledećem koraku direktno, bez dodatnog prečišćavanja. m/z (ES+), [M+H]+ = 158.
1
Intermedijar 84
4-difluorometil)-N-metoksi-N-metilpikolinamid
[0633]
[0634] Trimetilaluminijum (2M u n-heksanu, 40.1 mL, 80.15 mmol) je dodan u N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorid (6.25 g, 64.12 mmol) u DCM (80 mL) na 0 °C tokom perioda od 20 min pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 0 °C tokom 20 min. U reakcionu smešu je dodan metil 4-(difluorometil)pikolinat (intermedijar 85; 3.0 g, 16.03 mmol) u DCM (20 mL) na 0 °C, a nastao rastvor je mešan na 0 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena sa 2M NaOH (50 mL) na 0 °C pa je ekstrahovana sa DCM (3 x 100 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje žuto ulje. Sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 30 do 40% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 4-(difluorometil)-N-metoksi-N-metilpikolinamid (intermedijar 84; 2.47 g, 71.3%) u formi žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, MeOD, 20.3 °C) δ 3.42 (3H, s), 3.73 (3H, s), 6.94 (1H, t), 7.65 - 7.72 (1H, m), 8.75 - 8.82 (1H, m). m/z (ES+), [M+H]+ = 217.
Intermedijar 85
Metil 4-(difluorometil)pikolinat
[0635]
[0636] 2-hloro-4-(difluorometil)piridin (intermedijar 86; 6.9 g, 42.19 mmol), kalijum acetat (8.28 g, 84.38 mmol) i Pd(dppf)Cl2(1.543 g, 2.11 mmol) u MeOH (150 mL) su mešani u
1
atmosferi CO na 10 atm na 70 °C tokom 24 h. Smeša je tada filtrirana, a filtrat je isparen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 20 do 30% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje metil 4-(difluorometil)pikolinat (intermedijar 85; 6.30 g, 80%) u formi žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, MeOD, 20.1 °C) δ 4.03 (3H, s), 6.98 (1H, t), 7.79 - 7.86 (1H, m), 8.30 (1H, dd), 8.86 (1H, dd). m/z (ES+), [M+H]+ = 188.
Intermedijar 86
2-hloro-4-(difluorometil)piridin
[0637]
[0638] DAST (20.53 mL, 155.42 mmol) je dodan, kap po kap, u 2-hloroizonikotinaldehid (10 g, 70.64 mmol) u DCM (150 mL) na 0 °C tokom perioda od 10 min pod azotom. Temperatura je povećana do sobne temperature, a smeša je mešana tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena, a pH je podešen do 7-8 uz pomoć zasićenog NaHCO3na 0 °C. Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 x 150 mL), organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje žuto ulje. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 5 do 10% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 2-hloro-4-(difluorometil)piridin (intermedijar 86; 7.00 g, 60.6%) u formi žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.5 °C) δ 6.65 (1H, t), 7.38 (1H, dd), 7.49 (1H, s), 8.55 (1H, dd). m/z (ES+), [M+H]+ = 164.
1
Primer 32
(S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0639]
[0640] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (12.42 mg, 0.01 mmol) je dodan u (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 87; 120 mg, 0.27 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (66.5 mg, 0.69 mmol) i Cs2CO3(179 mg, 0.55 mmol) u 1,4-dioksanu (4 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen promenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Ovaj talog je dodatno prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (S)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 32; 60 mg, 43.9%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ 1.25 (d, 3H), 3.71 (s, 3H), 4.14 - 4.21 (m, 1H), 4.34 - 4.46 (m, 1H), 4.56 - 4.71 (m, 2H), 5.27 (d, 1H), 6.32 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.98 (s, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.34 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 9.41 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 499.
1 1
Intermedijar 87
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0641]
[0642] Natrijum acetat (212 mg, 2.58 mmol) je dodan u (S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 88; 250 mg, 0.52 mmol) u EtOH (5 mL), a nastala smeša je mešana na 80 °C tokom 20 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 87; 120 mg, 53.1%) u formi bledo-žute čvrste materije.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 20.5 °C) δ 1.45 (d, 3H), 2.79 (s, 3H), 4.43 (d, 1H), 4.15-4.25 (m 1H), 4.60 (dd, 1H), 5.50 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 9.34 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 438.
Intermedijar 88
(S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat
[0643]
1 2
[0644] Cp2ZrHCl (492 mg, 1.91 mmol) je dodan u N-metoksi-N-metil-6-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksamid (intermedijar 89; 300 mg, 1.28 mmol) u THF (10 mL) pod azotom. Nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 20 min nakon čega je odmah korišćena. Dodani su natrijum triacetoksiborohidrid (385 mg, 1.81 mmol), sirćetna kiselina (0.104 mL, 1.81 mmol), (S)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 64; 240 mg, 0.60 mmol) i DIPEA (0.317 mL, 1.81 mmol) u DCM (15 mL), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h. Dodana je dodatna količina natrijum triacetoksiborohidrida (385 mg, 1.81 mmol), a smeša je dodatno mešana tokom 1 h. Reakciona smeša je tada izlivena u zasićeni NaHCO3(75 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (3 x 25 mL). Organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% DCM u MeOH. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1-(2-(((6-(trifluorometil)pirimidin-4-il)metil)amino)propil)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 88; 250 mg, 85%) u formi bledo-žute čvrste materije. m/z (ES+), [M+H]+ = 484.
Intermedijar 89
N-metoksi-N-metil-6-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksamid
[0645]
[0646] Trimetilaluminijum (2M u n-heksanu, 72.8 mL, 145.54 mmol) je dodan, kap po kap, u N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorid (10.65 g, 109.16 mmol) u DCM (150 mL) na 0 °C tokom perioda od 20 min pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 0 °C tokom 20 min. U reakcionu smešu na 0 °C je dodan metil 6-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilat (intermedijar 90; 7.5 g, 36.39 mmol) u DCM (70 mL), kap po kap. Reakciona smeša je tada mešana tokom 1 h na 0 °C. Reakcija je ugašena sa 2M NaOH (100 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (3 x 150 mL).
1
Organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene koje daje žuto ulje. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 25% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje N-metoksi-N-metil-6-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksamid (intermedijar 89; 5.63 g, 65.8%) u formi žutog ulja.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.2 °C) δ 3.42 (3H, s), 3.79 (3H, s), 7.90 (1H, s), 9.41 - 9.47 (1H, m). m/z (ES+), [M+H]+ = 236.
Intermedijar 90
Metil 6-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilat
[0647]
[0648] 4-hloro-6-(trifluorometil)pirimidin (10 g, 54.79 mmol), kalijum acetat (10.75 g, 109.57 mmol) i Pd(dppf)Cl2(2.00 g, 2.74 mmol) u MeOH (300 mL) su mešani u atmosferi CO na 10 atm i 70 °C tokom 6 h. Smeša je filtrirana, a filtrat je isparen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 20% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje metil 6-(trifluorometil)pirimidin-4-karboksilat (intermedijar 90; 7.86 g, 69.6%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.3 °C) δ 4.11 (3H, s), 8.37 (1H, d), 9.55 - 9.61 (1H, m). m/z (ES+), [M+H]+ = 207.
1 4
Primer 33
7-(3,4-difluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0649]
[0650] XantPhos-prekatalizator 2. generacije (78 mg, 0.09 mmol) je dodan u 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 91; 340 mg, 0.87 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (169 mg, 1.74 mmol) i Cs2CO3(568 mg, 1.74 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 100 °C tokom 12 h. Rastvarač je tada odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je dodatno prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.05% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje 7-(3,4-difluorobenzil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 33; 89 mg, 22.6%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20.1 °C) δ 2.68 (3H, d), 3.68 - 3.76 (2H, m), 3.80 (3H, s), 4.25 - 4.33 (2H, m), 4.77 (2H, s), 6.29 (1H, d), 6.90 (1H, s), 7.07 - 7.28 (3H, m), 7.49 (1H, d), 7.69 (1H, s), 8.29 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 451.
1
Intermedijar 91
2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0651]
[0652] NaH (91 mg, 2.28 mmol) je dodan u 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 48; 200 mg, 0.76 mmol) u DMF (5 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 30 min. Dodan je 4-(bromometil)-1,2-difluorobenzen (314 mg, 1.52 mmol), a nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je izlivena u vodu (50 mL), precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispiran sa vodom (50 mL) i osušen u vakuumu koje daje 2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 91; 340 mg) u formi žute čvrste materije, koja je korišćena direktno bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 19.9 °C) δ 2.64 (3H, s), 3.74 - 3.82 (2H, m), 4.36 - 4.44 (2H, m), 4.70 (2H, s), 7.37 - 7.51 (3H, m), 8.26 (1H, s), 8.61 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 390.
Primer 34
Priprema (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Forma 1
[0653]
1
[0654] 50 mg (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 18) je rastvoreno u približno 0.5 mL metanola. Za pomoć u rastvaraju je korišćen toplotni pištolj.16 mg adipinske kiseline je rastvoreno u približno 0.5 ml metanola.
[0655] Za pomoć u rastvaraju je korišćen toplotni pištolj. Rastvor (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on je tada polako dodan u rastvor adipinske kiseline. Smeša se nastavila ponašati kao rastvor. Stavljen je magnetni štapić za mešanje, a rastvor je ostavljena da se meša na ambijentalnoj temperaturi. Precipitat se počeo pojavljivati nakon približno 15 min. Dodavani su dodatni volumeni metanola sve do pojave slobodnog precipitata koji je ostavljen da se meša preko noći. Precipitat je tada filtriran koje daje (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt adipinske kiseline (Primer 34), Forma 1, u molarnom omeru adipinska kiselina : (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on od 1 : 2 kao šta je bilo određeno uz pomoć<1>H NMR.<1>H NMR (500 MHz, Metanold4, 27 °C) δ 8.24 (1H, s), 7.82 (1H, s), 7.41 (1H, d), 7.35 (1H, ddd), 7.28 - 7.20 (3H, m), 6.31 (1H, d), 5.18 (1H, d), 4.52 - 4.39 (3H, m), 4.03 - 4.00 (1H, m), 3.73 (3H, s), 3.46 - 3.43 (1H, m), 3.39 - 3.35 (1H, m), 3.23 (3H, s), 2.53 (3H, s), 2.30 (2H, m), 1.63 (2H, m), izmenjivi protoni karboksilne kiseline nisu primećeni. Primerak je analiziran uz pomoć XRPD (vidi Sliku 3) i DSC (vidi Sliku 4). Uz pomoć XRPD za (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukta adipinske kiseline, Formu 1, je određeno da ima kristalnu formi sa tačkom topljenja od 185.4 °C (početak).
1
Primer 35
Priprema adukta etansulfonske kiseline (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0656]
[0657] (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 35a; 2.2 g, 5.07 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (0.754 g, 7.61 mmol) i cezijum karbonat (3.30 g, 10.14 mmol) su rastvoreni u 2-MeTHF (25 mL) i vodi (2.5 mL) pa su degazirani uz pomoć azota. Dodani su 2'-(dicikloheksilfosfoanil)-N,N-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amin (0.160 g, 0.41 mmol) i Pd2dba3(0.186 g, 0.20 mmol), a smeša je dodatno degazirana sa azotom. Reakciona smeša je tada grejana na 80 °C tokom 24 h. Reakciona smeša je ohlađena do ambijentalne temperature pa su dodani 2'-(dicikloheksilfosfoanil)-N,N-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amin (0.160 g, 0.41 mmol) i Pd2dba3(0.186 g, 0.20 mmol), a reakciona smeša je degazirani sa azotom. Reakciona smeša je tada mešana na 80 °C tokom 16 h. Dodan je silicycle (1.2 g, SiliaMetS Tiol), a reakciona smeša je ohlađena do ambijentalne temperature. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit uz ispiranje sa EtOAc. Reakciona smeša je ekstrahovana sa etil acetatom, ispirana sa vodenom limunskom kiselinom (0.5 M) i zasićenim natrijum bikarbonatom. Isparljive materije su tada odstranjene pod smanjenim pritiskom. Prečišćavanje uz pomoć preparativne superkritične tečne hromatografije (kolona: Kromasil DIOL, 250 mm x 50 mm, 10 µm, mobilna faza: 25% EtOH/NH3100/0.5 u CO2, 140 bar) daje (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (1.38 g) koji je u sledećoj fazi korišćen bez dodatnog prečišćavanja. (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (1.3 g, 1.93 mmol) iz prethodnog koraka je rastvoren u acetonitrilu (2 mL) pa je grejan na 66 °C. Tada je dodana etansulfonska kiselina (0.22 mL, 2.63 mmol) u acetonitrilu (2 mL). Reakciona smeša je tada mešana na ambijentalnoj
1
temperaturi tokom 1 h. Primećen je precipitiat. Dodane su dodatne količine acetonitrila (3 mL), a precipitat je filtriran, ispiran sa acetonitrilom (3 mL) i osušen u vakuumu tokom 66 h koje daje etansulfonski adukt (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (0.41 g). Filtrat je isparen pod smanjenim pritiskom pa su dodani acetonitril (3 mL) i MTBE (2 mL). Nastao precipitat je filtriran i osušen u vakuumu koje daje dodatnu količinu etansulfonskog adukta (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (0.73 g). Pomenute dve šarže su spojene koje daje adukt etansulfonske kiseline (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 35; 1.14 g, 72%) u molarnom omeru etansuflonska kiselina : (S)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on od 1 : 2 kao šta je određeno uz pomoć<1>H NMR.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 27 °C) 1.08 (1.5H, t), 2.42 (1H, q), 2.52 (3H, m), 3.18 (3H, s), 3.32 (1H, dd), 3.41 (1H, dd), 3.73 (3H, s), 4.05 (1H, dtd), 4.39 (1H, d), 4.43 - 4.56 (2H, m), 5.09 (1H, d), 6.38 (1H, d), 7.19 - 7.32 (1H, m), 7.38 - 7.45 (2H, m), 7.48 (1H, ddd), 7.98 (1H, s), 8.36 (1H, d), 9.38 (1H, s). m/z (ES+) [M+H]+ 495.
Intermedijar 35a
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0658]
[0659] (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 35b; 1.8 g, 5.85 mmol) i Cs2CO3(2.67 g, 8.19 mmol) su ugušćeni u acetronitrilu (20 mL) pa su grejani na 70 °C pod azotom. 4-(bromometil)-1,2-difluorobenzen (1.48 g, 7.02 mmol) u acetonitrilu (3 mL) je dodan uz pomoć šprica u gustu kašu, a reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 23 h. Isparljive materije su tada odstranjene
1
pod smanjenim pritiskom, a u talog su dodani etil acetat (30 mL) i voda (20 mL). Faze su odvojene, a vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 20 mL). Organske faze su spojene, a isparljive materije su odstranjene pod smanjenim pritiskom. Nastala čvrsta materija je suspendovana u smeši heptan/MTBE (4:1, 30 mL) pa je mešana na 50 °C tokom 2 h. Čvrsta materija je sakupljena filtriranjem pa je osušena pod smanjenim pritiskom koje daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 35a; 2.36 g, 93%) u formi čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 25 °C) δ 2.77 (3H, s), 3.28 (4H, s), 3.38 (1H, dd), 3.81 (1H, m), 4.22 (2H, m), 4.41 (1H, dd), 5.37 (1H, d), 7.10 - 7.26 (3H, m), 7.94 (1H, s), 8.42 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 434.
Intermedijar 35b
(S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0660]
[0661] Etil 4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat (intermedijar 23; 2 g, 7.42 mmol) i K2CO3(1.23 g, 8.91 mmol) su suspendovani u 1,4-dioksanu (20 mL) i acetonu (20 mL). Dodavan je tert-butil (R)-4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid (intermedijar 35c; 2.18 g, 8.17 mmol) u acetonu (15 mL) na ambijentalnoj temperaturi tokom 3 dana. Smeša je filtrirana kroz celit, a čvrste materije su isprane sa acetonom (15 mL). Filtrat je tada koncentrovan do ukupnog volumena od 10 mL. Dodan je rastvor HCl (5 M u izopropanolu, 10.39 mL), a reakciona smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 16 h. Polako je dodan trietilamin (10.33 mL, 74.24 mmol), a nakon toga i izopropanol (15 mL) koje daje suspenziju. Reakciona smeša je tada grejana na 50 °C tokom 3 h. Dodana je voda (40 mL) koje rezultuje finom suspenzijom. Suspenzija je mešana na 50 °C tokom 30 min, a tada na ambijentalnoj temperaturi tokom 16 h. Precipitat je tada filtriran pa je ispiran sa 50% acetonom u vodi (2 x 25 mL) i osušen pod smanjenim pritiskom na 40 °C tokom 4 dana koje
2
daje (S)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 35b; 1.95 g, 85%) u formi čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20 °C) δ 2.61 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 3.33 - 3.45 (m, 2H), 3.99 (br s, 1H), 4.30 (dd, 1H), 4.44 (dd, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.58 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 308.
[0662] Intermedijar 35c je pripremljen na analogan način kao i Intermedijar 57 započinjući sa (S)-tert-butil (1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il)karbamatom.
Intermedijar 35c
tert-butil (R)-4-(metoksimetil)-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksid
[0663]
[0664]<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 1.54 (s, 9H), 3.40 (s, 3H), 3.61 (d, 2H), 4.46 (qd, 1H), 4.60 (dd, 1H), 4.68 (dd, 1H). m/z: ES+ [M+H]+ 268.
Primer 36
(R)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0665]
[0666] (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 91; 187 mg, 0.43 mmol), 1-metil-1H-
2 1
pirazol-5-amin (104 mg, 1.07 mmol), Cs2CO3(279 mg, 0.86 mmol) i XantPhos-prekatalizator 2. generacije (38.0 mg, 0.04 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) su mešani u atmosferi azota na 110 °C tokom 16 h. Rastvarač je odstranjen uz pomoć destilacije u vakuumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 5% MeOH u DCM. Produkt je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.01% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (R)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (112 mg, 52.6%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20.9 °C) δ 1.22 (3H, d), 2.52 (3H, s), 3.35 (1H, s), 3.71 (3H, s), 4.13 (1H, ddd), 4.40 (1H, dd), 4.51 - 4.63 (2H, m), 5.22 (1H, d), 6.31 (1H, d), 7.34 (1H, d), 7.78 (1H, d), 7.84 (1H, d), 7.97 (1H, s), 8.10 (1H, t), 8.33 (1H, d), 9.24 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 498.
Intermedijar 92
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0667]
[0668] 6-(trifluorometil)pikolinaldehid (126 mg, 0.72 mmol) je dodan u (R)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 93; 260 mg, 0.66 mmol), DIPEA (0.343 mL, 1.97 mmol) i AcOH (0.113 mL, 1.97 mmol) u DCM (10 mL) na 25 °C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 20 min. U reakcionu smešu je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (417 mg, 1.97 mmol), nastao rastvor je mešan na 25 °C tokom 1 h, a tada i na 50 °C tokom 12 h. Reakciona smeša je izlivena u vodu (10 mL), ekstrahovana sa DCM (3 x 15 mL), organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje žuto ulje. Sirovi produkt je prečišćen primenom flešhromatografije (silika) u gradijentu elucije od 3 do 4% MeOH u DCM. Čiste frakcije su
2 2
isparene do suvoće koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-metil-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 92; 187 mg, 65.3%) u formi bezbojnog ulja. m/z (ES+), [M+H]+ = 437.
Intermedijar 93
(R)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat dihidrohlorid
[0669]
[0670] Intermedijar 93 je pripremljen na analogan način kao i Intermedijar 65 uz korišćenje (R)-tert-butil 4-metil-1,2,3-oksatiazolidin-3-karboksilat 2,2-dioksida. Intermedijar 93 ima sledeće analitičke podatke:<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 22 °C) δ 1.27 (3H, d), 1.36 (3H, t), 2.64 (3H, s), 3.57 (3H, s), 3.74 (1H, s), 4.33 - 4.44 (2H, m), 4.58 - 4.75 (2H, m), 8.33 (3H, s), 8.47 (1H, s), 8.64 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 324.
2
Primer 37
(R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0671]
[0672] BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (60.6 mg, 0.07 mmol) je dodan u (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 94; 280 mg, 0.67 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (162 mg, 1.67 mmol) i Cs2CO3(436 mg, 1.34 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) na 25 °C pod azotom. Nastala smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h. Rastvarač je tada odstranjen pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 6% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žuti talog. Talog je dodatno prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 19 mm, dužina: 150 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 0.03% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (R)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 37; 119 mg, 37.1%) u formi čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20 °C) δ 1.20 (3H, d), 2.51 (3H, s), 3.70 (3H, s), 4.10 (1H, d), 4.34 - 4.43 (1H, m), 4.47 - 4.61 (2H, m), 5.21 (1H, d), 6.30 (1H, d), 6.97 (1H, t), 7.34 (1H, d), 7.59 - 7.66 (2H, m), 7.94 - 8.04 (2H, m), 8.33 (1H, s), 9.23 (1H, s). m/z (ES+) [M+H]+ 480.
2 4
Intermedijar 94
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0673]
[0674] 6-(difluorometil)pikolinaldehid (214 mg, 1.36 mmol) je dodan u (R)-etil 1-(2-aminopropil)-4-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-imidazol-2-karboksilat, dihidrohlorid (intermedijar 93; 270 mg, 0.68 mmol), DIPEA (0.357 mL, 2.04 mmol) i AcOH (0.117 mL, 2.04 mmol) u DCM (10 mL) na 25 °C pod azotom. Nakon mešanja na 25 °C tokom 1 h je dodan natrijum triacetoksiborohidrid (433 mg, 2.04 mmol), a nastala smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h pa je grejana na 50 °C tokom 5 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NaHCO3(20 mL) pa je ekstrahovana sa DCM (2 x 75 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen koje daje žuti talog. Sirovi produkt je prečišćen primenom fleš-hromatografije (silika) u gradijentu elucije od 0 do 5% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Intermedijar 94; 280 mg, 98%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20 °C) δ 1.21 (3H, d), 2.64 (3H, d), 4.09 - 4.16 (1H, m), 4.35 (1H, dd), 4.49 - 4.64 (2H, m), 5.22 (1H, d), 6.82 - 7.12 (1H, m), 7.60 - 7.68 (2H, m), 7.95 - 8.05 (1H, m), 8.30 (1H, s), 8.61 (1H, s). m/z (ES+) [M+H]+ 419.
2
Primer 38
(R)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo [1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0675]
[0676] (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 95; 288 mg, 0.64 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (68.7 mg, 0.71 mmol), cezijum karbonat (419 mg, 1.29 mmol) i BrettPhosprekatalizator 3. generacije (29.1 mg, 0.03 mmol) su suspendovani u tert-butanolu (6 mL), a smeša je degazirana tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana do 80 °C tokom 18 h pod azotom. Reakciona smeša je tada razblažena sa etil acetatom (75 mL) pa je ispirana sa zasićen vodenim natrijum bikarbonatom (25 mL), osušena (natrijum sulfat) i koncentrovana in vacuo koje daje smeđu gumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: Waters XBridge Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 30 mm, dužina: 100 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 1% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (R)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 38; 88 mg, 26.9%) u formi bele čvrste materije.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 30 °C) 2.53 (2H, s), 3.19 (1H, d), 3.33 (3H, d), 3.40 (1H, dd), 3.71 (3H, d), 4.03 (1H, q), 4.09 (1H, q), 4.4 - 4.57 (3H, m), 5.17 (1H, d), 6.31 (1H, d), 7.05 (1H, t), 7.34 (1H, d), 7.5 - 7.56 (2H, m), 7.56 - 7.63 (2H, m), 7.95 (1H, s), 8.33 (1H, s), 9.20 (1H, s). m/z ES+ [M+H]+ 509.
2
Intermedijar 95
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0677]
[0678] Natrijum hidrid (60% disperzija) (28.6 mg, 0.71 mmol) je dodan u (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 61; 200 mg, 0.65 mmol) u DMF (15 mL) pod azotom. Nastala suspenzija je mešana na 20 °C tokom 30 min. Dodan je 1-(hlorometil)-3-(difluorometil)benzen (126 mg, 0.71 mmol) nakon čega i tetrabutilamonijum jodid (24.01 mg, 0.06 mmol), a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 18 h. Smeša je razblažena sa zasićenim vodenim amonijum hloridom (30 mL) pa je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 70 mL). Spojene organske materije su osušene (natrijum sulfat) i koncentrovane in vacuo koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-(difluorometil)benzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 95; 321 mg, >100%) u formi gume koja je korišćena u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 2.64 (3H, s), 3.17 (3H, s), 3.40 (2H, dd), 3.99 - 4.11 (1H, m), 4.4 - 4.59 (3H, m), 5.15 (1H, d), 7.03 (1H, t), 7.5 - 7.53 (2H, m), 7.59 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.59 (1H, s). m/z ES+ [M+H]+ 448.
2
Primer 39
(R)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0679]
[0680] (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 96; 201 mg, 0.43 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (46.0 mg, 0.47 mmol), cezijum karbonat (281 mg, 0.86 mmol) i BrettPhos-prekatalizator 3. generacije (19.51 mg, 0.02 mmol) su suspendovani u tert-butanolu (5 mL), a smeša je degazirana tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana do 80 °C tokom 18 h pod azotom. Reakciona smeša je tada razblažena sa etil acetatom (75 mL) pa je ispirana sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (25 mL), osušena (natrijum sulfat) i koncentrovana in vacuo koje daje smeđu gumu. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: Waters XBridge Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 30 mm, dužina: 100 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 1% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (R)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 39; 68 mg, 29.9%) u formi čvrste materije.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 30 °C) 3.18 (1H, d), 3.20 (3H, d), 3.32 (3H, s), 3.39 (1H, dd), 3.54 (1H, dd), 3.71 (3H, d), 4.51 - 4.63 (2H, m), 4.66 (1H, d), 5.24 (1H, d), 6.31 (1H, d), 7.34 (1H, dd), 7.78 (1H, d), 7.83 (1H, d), 7.98 (1H, s), 8.09 (1H, t), 8.33 (1H, s), 9.20 (1H, s). m/z ES+ [M+H]+ 528.
2
Intermedijar 96
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-7-((6-(triftuorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0681]
[0682] Natrijum hidrid (60% disperzija) (19.16 mg, 0.48 mmol) je dodan u (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 61; 134 mg, 0.44 mmol) u DMF (10 mL) pod azotom. Nastala suspenzija je mešana na 20 °C tokom 30 min. Dodan je 2-(bromometil)-6-(trifluorometil)piridin (115 mg, 0.48 mmol), a nastao rastvor je mešan na 20 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je ugašena sa zasićenim vodenim amonijum hloridom (30 mL) pa je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 70 mL). Spojene organske materije su osušene (natrijum sulfat) i koncentrovane in vacuo koje daje (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-6-(metoksimetil)-7-((6-(trifluorometil)piridin-2-il)metil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 96; 203 mg, 100%) u formi gume.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 2.63 (3H, s), 3.20 (3H, s), 3.37 - 3.42 (1H, m), 3.54 (1H, dd), 4.20 (1H, dt), 4.56 (2H, d), 4.67 (1H, d), 5.23 (1H, d), 7.80 (2H, dd), 8.09 (1H, t), 8.29 (1H, s), 8.59 (1H, d). m/z ES+ [M+H]+ 467.
Primer 40
(R)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0683]
2
[0684] (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 97; 280 mg, 0.65 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (68.9 mg, 0.71 mmol), cezijum karbonat (421 mg, 1.29 mmol) i BrettPhosprekatalizator 3. generacije (29.3 mg, 0.03 mmol) su suspendovani u tert-butanolu (6 mL), a smeša je degazirana tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana do 80 °C tokom 18 h pod azotom. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (75 mL) pa je ispirana sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (25 mL), osušena (natrijum sulfat) i koncentrovana in vacuo koje daje smeđu gumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: Waters XBridge Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 30 mm, dužina: 100 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 1% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (R)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 40; 80 mg, 25.1%) u formi prljavo-bele čvrste materije.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 30 °C) 2.52 (3H, s), 3.19 (1H, s), 3.19 (3H, s), 3.35 (1H, dd), 3.43 (1H, dd), 3.71 (3H, s), 4.43 (1H, d), 4.48 - 4.57 (2H, m), 5.12 (1H, d), 6.30 (1H, d), 7.15 (3H, td), 7.34 (1H, d), 7.94 (1H, s), 8.32 (1H, s), 9.18 (1H, s). m/z ES+ [M+H]+ 495.
[0685] Intermedijar 97 je pripremljen na analogan način kao i Intermedijar 96 uz korišćenje Intermedijara 61 i 1-(bromometil)-3,5-difluorobenzena.
Intermedijar 97
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0686]
[0687]<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 2.64 (3H, s), 3.18 (3H, s), 3.44 (2H, dd), 4.08 (1H, dd), 4.4 - 4.59 (3H, m), 5.10 (1H, d), 7.13 (3H, dt), 8.25 (1H, s), 8.56 - 8.62 (1H, m). m/z ES+
21
[M+H]+ 434.
Primer 41
(R)-7-(3-metoksibenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0688]
[0689] (R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (intermedijar 98; 164 mg, 0.38 mmol), 1-metil-1H-pirazol-5-amin (40.9 mg, 0.42 mmol), cezijum karbonat (250 mg, 0.77 mmol) i BrettPhosprekatalizator 3. generacije (17.37 mg, 0.02 mmol) su suspendovani u tert-butanolu (5 mL) i degazirani tokom 10 min. Reakciona smeša je grejana do 80 °C tokom 18 h pod azotom. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (75 mL) pa je ispirana sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (25 mL), osušena (natrijum sulfat) i koncentrovana in vacuo koje daje smeđu gumu. Sirovi produkt je prečišćen primenom preparativne HPLC (kolona: Waters XBridge Prep C18 OBD, 5µ silika, dijametar: 30 mm, dužina: 100 mm) uz korišćenje opadajuće-polarnih smeša vode (koja je sadržavala 1% NH3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (R)-7-(3-metoksibenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on (Primer 41; 58.0 mg, 31%) u formi prljavo-bele čvrste materije.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 30°C) 2.53 (3H, s), 3.18 (3H, d), 3.19 (1H, d), 3.38 (1H, dd), 3.70 (3H, s), 3.76 (3H, s), 3.95 - 4.02 (1H, m), 4.33 - 4.43 (2H, m), 4.49 - 4.55 (1H, m), 5.12 (1H, d), 6.30 (1H, d), 6.88 (1H, dd), 6.98 (2H, s), 7.27 - 7.31 (1H, m), 7.34 (1H, d), 7.93 (1H, s), 8.29 - 8.36 (1H, m), 9.18 (1H, s). m/z ES+ [M+H]+ 489.
[0690] Intermedijar 98 je pripremljen na analogan način kao i Intermedijar 96 uz korišćenje Intermedijara 61 i 1-(bromometil)-3-metoksibenzena.
Intermedijar 98
(R)-2-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-7-(3-metoksibenzil)-6-(metoksimetil)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on
[0691]
[0692]<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 2.64 (3H, s), 3.17 (3H, s), 3.37 - 3.42 (2H, m), 3.76 (3H, s), 3.98 (1H, s), 4.33 - 4.45 (2H, m), 4.49 (1H, d), 5.04 - 5.19 (1H, m), 6.88 (1H, d), 6.97 (2H, d), 7.29 (1H, t), 8.24 (1H, s), 8.60 (1H, s). m/z ES+ [M+H]+ 428.

Claims (19)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje, naznačeno time, što ima Formulu (I) ili neki njegov farmaceutskiprihvatljivi adukt
    u kojoj: R<1>je vodonik, C1-3alkil ili -CH2OMe; R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 (jednom) atomu ugljenika iz prstena sa nekim supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od C1-3alkila, difluorometila i trifluorometila; ili R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 (jednom) atomu ugljenika iz prstena sa nekim supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od C1- 3alkila, difluorometila i trifluorometila; ili R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 (jednom) ili 2 (dva) atoma ugljenika iz prstena sa nekim supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od halo, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2; a R<3>je vodonik, C1-3alkil ili hloro.
  2. 2. Jedinjenje, naznačeno time, što ima formulu (I) ili neki njegov farmaceutskiprihvatljivi adukt, kao šta se zahteva u zahtevu 1, u kojoj: R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe; R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa nekim supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa nekim supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa nekim supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila, trifluorometila, metoksi i -OCHF2; a R<3>je vodonik, metil ili hloro.
  3. 3. Jedinjenje, naznačeno time, što ima formulu (I) ili neki njegov farmaceutskiprihvatljivi adukt, kao šta se zahteva u zahtevu 1 ili zahtevu 2, u kojoj: R<1>je vodonik, metil ili -CH2OMe; R<2>je piridinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa nekim supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od metila, difluorometila i trifluorometila; ili R<2>je pirimidinil, opciono supstituisan na 1 atomu ugljenika iz prstena sa trifluorometilom; ili R<2>je fenil opciono supstituisan na 1 ili 2 atoma ugljenika iz prstena sa nekim supstituentom koji je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od fluoro, hloro, difluorometila i metoksi; a R<3>je vodonik, metil ili hloro.
  4. 4. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevima 1 do 3, ili neki njegov farmaceutskiprihvatljivi adukt, naznačeno time, što R<2>je 6-(difluorometil)piridin-2-il, 3-hlorofenil, 3,4-difluorofenil ili 3,5-difluorofenil.
  5. 5. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevima 1 do 4, ili neki njegov farmaceutskiprihvatljivi adukt, naznačeno time, što R<2>je 6-(difluorometil)piridin-2-il.
  6. 6. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevima 1 do 4, ili neki njegov farmaceutskiprihvatljivi adukt, naznačeno time, što R<2>je 3-hlorofenil.
  7. 7. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevima 1 do 4, ili neki njegov farmaceutskiprihvatljivi adukt, naznačeno time, što R<2>je 3,4-difluorofenil.
  8. 8. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevima 1 do 4, ili neki njegov farmaceutskiprihvatljivi adukt, naznačeno time, što R<2>je 3,5-difluorofenil.
  9. 9. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevu 1, ili neki njegov farmaceutski-prihvatljivi adukt, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje je: • (S)-7-(3-hlorobenzil)-6-metil-2-(2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; • (S)-7-((6-(difluorometil)piridin-2-il)metil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; • (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on; ili • (S)-7-(3,5-difluorobenzil)-6-metil-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on.
  10. 10. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevu 1, ili neki njegov farmaceutski-prihvatljivi adukt, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje je: • (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on.
  11. 11. Farmaceutski-prihvatljivi adukt nekog jedinjenja sa formulom (I) kao šta se zahteva u zahtevu 1, naznačen time, što pomenuti adukt je (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt etansulfonske kiseline.
  12. 12. Kristalna forma, naznačena time, da pripada (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, aduktu etansulfonske kiseline kao šta se zahteva u zahtevu 11.
  13. 13. Farmaceutski-prihvatljivi adukt nekog jedinjenja sa formulom (I) kao šta se zahteva u zahtevu 1, naznačen time, što pomenuti adukt je (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7-dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, adukt adipinske kiseline.
  14. 14. Kristalna forma, naznačena time, što pripada (R)-7-(3,4-difluorobenzil)-6-(metoksimetil)-2-(5-metil-2-((1-metil-1H-pirazol-5-il)amino)pirimidin-4-il)-6,7- 21 dihidroimidazo[1,2-a]pirazin-8(5H)-on, aduktu adipinske kiseline kao šta se zahteva u zahtevu 13.
  15. 15. Jedinjenje kao šta se zahteva u bilo kojem od prethodnih zahteva, ili neki njegov farmaceutski-prihvatljivi adukt, naznačeno time, što je namenjeno da se upotrebljavaju kao lek.
  16. 16. Jedinjenje kao šta se zahteva u bilo kojem od zahteva od 1 do 14, ili neki njegov farmaceutski-prihvatljivi adukt, naznačeno time, što je namenjeno prevenciji ili tretmanu raka kod neke toplo-krvne životinje poput čoveka.
  17. 17. Jedinjenje sa Formulom (I), ili neki njegov farmaceutski-prihvatljivi adukt, kao šta se zahteva u bilo kojem od zahteva od 1 do 14, naznačeno time, što je namenjeno za tretman NSCLC, raka pankreasa ili kolorektalnog raka.
  18. 18. Farmaceutska kompozicija, naznačena time, što sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neki njegov farmaceutski-prihvatljivi adukt, kao šta se zahteva u bilo kojem od zahteva od 1 do 14 i neki farmaceutski-prihvatljivi razblaživač ili nosilac.
  19. 19. Kombinacija koja je prikladna za primenu u tretmanu raka, naznačena time, što sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neki njegov farmaceutski-prihvatljivi adukt, kao šta se zahteva u bilo kojem od zahteva od 1 do 14, i neki drugi anti-tumorski agens. 21
RS20200392A 2015-11-09 2016-11-08 Derivati dihidroimidazopirazinona korisni za upotrebu u tretmanu raka RS60155B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562252726P 2015-11-09 2015-11-09
US201662401351P 2016-09-29 2016-09-29
EP16791420.9A EP3374359B1 (en) 2015-11-09 2016-11-08 Dihydroimidazopyrazinone derivatives useful in the treatment of cancer
PCT/EP2016/076932 WO2017080979A1 (en) 2015-11-09 2016-11-08 Dihydroimidazopyrazinone derivatives useful in the treatment of cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS60155B1 true RS60155B1 (sr) 2020-05-29

Family

ID=57241113

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20200392A RS60155B1 (sr) 2015-11-09 2016-11-08 Derivati dihidroimidazopirazinona korisni za upotrebu u tretmanu raka

Country Status (35)

Country Link
US (2) US9902731B2 (sr)
EP (1) EP3374359B1 (sr)
JP (1) JP6877423B2 (sr)
KR (1) KR20180074788A (sr)
CN (1) CN108349983B (sr)
AU (1) AU2016351813B2 (sr)
BR (1) BR112018008397B1 (sr)
CA (1) CA3003549A1 (sr)
CL (1) CL2018001226A1 (sr)
CO (1) CO2018004857A2 (sr)
CR (1) CR20180316A (sr)
CY (1) CY1123627T1 (sr)
DK (1) DK3374359T3 (sr)
EA (1) EA038028B1 (sr)
ES (1) ES2780650T3 (sr)
HR (1) HRP20200342T1 (sr)
IL (1) IL258953A (sr)
LT (1) LT3374359T (sr)
ME (1) ME03770B (sr)
MX (1) MX376639B (sr)
MY (1) MY197626A (sr)
NI (1) NI201800058A (sr)
PE (1) PE20181288A1 (sr)
PH (1) PH12018500987A1 (sr)
PL (1) PL3374359T3 (sr)
PT (1) PT3374359T (sr)
RS (1) RS60155B1 (sr)
SG (1) SG11201803066VA (sr)
SI (1) SI3374359T1 (sr)
SM (1) SMT202000152T1 (sr)
SV (1) SV2018005687A (sr)
TN (1) TN2018000119A1 (sr)
TW (1) TWI730012B (sr)
WO (1) WO2017080979A1 (sr)
ZA (1) ZA201803742B (sr)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3365334B1 (en) 2015-10-21 2024-07-17 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Benzolactam compounds as protein kinase inhibitors
RS60155B1 (sr) * 2015-11-09 2020-05-29 Astrazeneca Ab Derivati dihidroimidazopirazinona korisni za upotrebu u tretmanu raka
GB201706327D0 (en) 2017-04-20 2017-06-07 Otsuka Pharma Co Ltd A pharmaceutical compound
US20210386737A1 (en) * 2018-10-10 2021-12-16 Shenzhen Targetrx, Inc. Dihydroimidazopyrazinone compound, composition including same, and use thereof
BR112021017957A2 (pt) 2019-03-28 2021-11-23 Jiangsu Hengrui Medicine Co Derivado tienoeterocíclico, método de preparação do mesmo e uso médico do mesmo
JP2022534224A (ja) 2019-05-24 2022-07-28 江蘇恒瑞医薬股▲ふん▼有限公司 置換縮合二環式誘導体、その調製方法、および医薬におけるその適用
MX2021014961A (es) 2019-06-06 2022-01-24 Hutchison Medipharma Ltd Compuestos triciclicos y su uso.
AU2020397222B2 (en) * 2019-12-05 2023-07-06 Astrazeneca Ab Process and intermediates for the production of formula (i)
WO2021110169A1 (zh) * 2019-12-06 2021-06-10 南京明德新药研发有限公司 作为erk抑制剂的噻唑并内酰胺类化合物及其应用
WO2022068860A1 (zh) 2020-09-29 2022-04-07 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种吡咯并杂环类衍生物的晶型及其制备方法
CN117529321A (zh) * 2021-06-18 2024-02-06 上海德琪医药科技有限公司 Erk抑制剂和kras抑制剂的组合及其用途
WO2022268065A1 (en) * 2021-06-22 2022-12-29 Fochon Biosciences, Ltd. Compounds as erk inhibitors
CN117677398A (zh) 2021-07-27 2024-03-08 东丽株式会社 用于癌的治疗和/或预防的药品
US20250127789A1 (en) 2021-11-04 2025-04-24 Skyhawk Therapeutics, Inc. Compositions useful for modulating splicing
US20250340570A1 (en) 2022-04-27 2025-11-06 Skyhawk Therapeutics, Inc. Compositions useful for modulating splicing
US20250304593A1 (en) 2022-05-12 2025-10-02 Skyhawk Therapeutics, Inc. Compositions useful for modulating splicing
WO2024006971A2 (en) * 2022-07-01 2024-01-04 The Scripps Research Institute Antimalarial compounds

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US7485640B2 (en) * 2002-11-06 2009-02-03 Merck Sharp & Dohme Limited Imidazopyrazinones as GABA-A receptor anxiolytics
GB0520958D0 (en) * 2005-10-14 2005-11-23 Cyclacel Ltd Compound
CN101611007A (zh) * 2006-12-20 2009-12-23 先灵公司 新颖的jnk抑制剂
SG191097A1 (en) * 2010-12-22 2013-08-30 Janssen Pharmaceutica Nv 5,6-DIHYDRO-IMIDAZO[1,2-a]PYRAZIN-8-YLAMINE DERIVATIVES USEFUL AS INHIBITORS OF BETA-SECRETASE (BACE)
SG11201502728WA (en) * 2011-10-10 2015-05-28 Lundbeck & Co As H Pde9i with imidazo pyrazinone backbone
JP2013166727A (ja) * 2012-02-16 2013-08-29 Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd ジヒドロイミダゾピラジノン誘導体
HUE053994T2 (hu) 2012-03-01 2021-08-30 Array Biopharma Inc Szerin/treonin kináz inhibitorok
US9532987B2 (en) 2013-09-05 2017-01-03 Genentech, Inc. Use of a combination of a MEK inhibitor and an ERK inhibitor for treatment of hyperproliferative diseases
EP3077401B1 (en) * 2013-12-06 2018-04-18 Genentech, Inc. Serine/threonine kinase inhibitors
KR102379517B1 (ko) 2013-12-30 2022-03-25 제넨테크, 인크. 세린/트레오닌 키나아제 억제제
JP6642942B2 (ja) * 2013-12-30 2020-02-12 アレイ バイオファーマ、インコーポレイテッド セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤
MY188526A (en) 2014-04-09 2021-12-18 Genentech Inc Process for the manufacturing of medicaments
US10412619B2 (en) * 2014-11-14 2019-09-10 Qualcomm Incorporated Buffer status report for eDCS
WO2016162325A1 (en) * 2015-04-07 2016-10-13 Astrazeneca Ab Substituted 3,4-dihydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-1 (2h)-one derivatives as kinase inhibitors
WO2016192064A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 Js Innopharm (Shanghai) Ltd. Heterocyclic compounds for treating psoriasis
CN107849046B (zh) 2015-06-03 2020-06-12 常州捷凯医药科技有限公司 作为erk抑制剂的杂环化合物
RS60155B1 (sr) * 2015-11-09 2020-05-29 Astrazeneca Ab Derivati dihidroimidazopirazinona korisni za upotrebu u tretmanu raka

Also Published As

Publication number Publication date
JP6877423B2 (ja) 2021-05-26
PH12018500987A1 (en) 2019-01-28
PT3374359T (pt) 2020-03-27
EA038028B1 (ru) 2021-06-24
US20170204100A1 (en) 2017-07-20
ZA201803742B (en) 2020-08-26
BR112018008397A2 (pt) 2018-10-23
HK1256283A1 (en) 2019-09-20
DK3374359T3 (da) 2020-03-30
HRP20200342T1 (hr) 2020-06-12
TWI730012B (zh) 2021-06-11
CL2018001226A1 (es) 2018-10-05
CN108349983B (zh) 2021-02-26
EP3374359B1 (en) 2020-01-08
EP3374359A1 (en) 2018-09-19
BR112018008397B1 (pt) 2023-12-12
CN108349983A (zh) 2018-07-31
JP2019503337A (ja) 2019-02-07
CR20180316A (es) 2018-10-05
WO2017080979A1 (en) 2017-05-18
ES2780650T3 (es) 2020-08-26
US20180237443A1 (en) 2018-08-23
CO2018004857A2 (es) 2018-07-19
ME03770B (me) 2021-04-20
EA201891063A1 (ru) 2018-12-28
SI3374359T1 (sl) 2020-04-30
TW201728586A (zh) 2017-08-16
SV2018005687A (es) 2018-07-20
CY1123627T1 (el) 2022-03-24
MX376639B (es) 2025-03-07
MY197626A (en) 2023-06-29
PL3374359T3 (pl) 2020-06-29
AU2016351813B2 (en) 2019-05-30
MX2018005725A (es) 2018-08-14
TN2018000119A1 (en) 2019-10-04
AU2016351813A1 (en) 2018-06-21
SG11201803066VA (en) 2018-05-30
KR20180074788A (ko) 2018-07-03
IL258953A (en) 2018-06-28
US10202391B2 (en) 2019-02-12
PE20181288A1 (es) 2018-08-07
CA3003549A1 (en) 2017-05-18
NI201800058A (es) 2018-10-18
LT3374359T (lt) 2020-03-25
US9902731B2 (en) 2018-02-27
SMT202000152T1 (it) 2020-05-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10202391B2 (en) Chemical compounds
US12077530B2 (en) Chemical compounds
WO2017080980A1 (en) Dihydropyrrolopyrazinone derivatives useful in the treatment of cancer
EP2948447B1 (en) Chemical compounds
WO2016162325A1 (en) Substituted 3,4-dihydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-1 (2h)-one derivatives as kinase inhibitors
KR20180052623A (ko) 신규 화합물
HK1256283B (en) Dihydroimidazopyrazinone derivatives useful in the treatment of cancer
HK40026812B (en) 6,7,8,9-tetrahydro-3h-pyrazolo[4,3-f]isoquinoline derivatives useful in the treatment of cancer
HK40026812A (en) 6,7,8,9-tetrahydro-3h-pyrazolo[4,3-f]isoquinoline derivatives useful in the treatment of cancer
RS62937B1 (sr) Derivati 6,7,8,9-tetrahidro-3h-pirazolo[4,3-f]izohinolina korisni u tretmanu raka
EA037533B1 (ru) 6,7,8,9-ТЕТРАГИДРО-3H-ПИРАЗОЛО[4,3-f]ИЗОХИНОЛИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ, ПРИМЕНИМЫЕ В ЛЕЧЕНИИ РАКА
HK1214592B (en) Chemical compounds
EA038160B1 (ru) Модуляторы рецептора эстрогена