RS60211B1

RS60211B1 - Kombinovana terapija

Info

Publication number: RS60211B1
Application number: RS20200297A
Authority: RS
Inventors: Hugh Griffith
Original assignee: NuCana plc
Priority date: 2015-12-23
Filing date: 2016-12-21
Publication date: 2020-06-30
Also published as: AU2016375861A1; ZA201804155B; MD3393478T2; SG11201805184TA; MX2018007772A; EP3393478B1; HK1255110A1; EP3393478A1; KR20180096698A; US20190022117A1; PL3393478T3; SI3393478T1; JP2019509253A; MY194629A; CY1122835T1; CN108697725A; ES2778933T3; HRP20200423T1; WO2017109486A1; IL260076A

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na kombinaciju gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata (hemijsko ime: 2’-deoksi-2’,2’-difluoro-D-citidin-5’-O-[fenil(benzoksi-L-alaninil)] fosfat) (NUC-1031) i antikancerskog sredstva na bazi platine, koje je odabrano od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina.

OSNOV PRONALASKA

NUC-1031

[0002] Gemcitabin (1; na tržištu prisutan kao Gemzar®) predstavlja efikasan nukleozidni analog koji je trenutno odobren za lečenje raka dojke, nesitnoćelijskog raka pluća, raka jajnika i raka pankreasa i koji se široko koristi za lečenje drugih kancera uključujući rak bešike, bilijarni i kolorektalni kancer i limfom.

[0003] Klinička korist od gemcitabina ograničena je izvesnim brojem inherentih i stečenih mehanizama rezistencije. Na ćelijskom nivou, rezistencija zavisi od tri parametra: (i) smanjenja ekspresije deoksicitidin kinaze neophodne za aktivaciju u fosforilisanu komponentu; (ii) smanjenja ekspresije transporterskih molekula nukleozida, konkretno hENT1, neophodnog za preuzimanje u ćelije raka; i (iii) pojačanja ekspresije katalitičkih enzima, posebno citidin deaminaze koja razgrađuje gemcitabin.

[0004] WO2005/012327 opisuje seriju nukleotidnih analoga za gemcitabin i srodne molekule nukleozidnih lekova. Među njima je gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat (NUC-1031;

2) identifikovan kao naročito efikasno jedinjenje. Ovi protidi uspevaju da izbegnu mnoge od mehanizama inherentne i stečene rezistencije koji ograničavaju korist od gemcitabina (’Application of ProTide Technology to Gemcitabin: A Successful Approach to Overcome the Key Cancer Resistance Mechanisms Leads to a New Agent (NUC-1031) in Clinical Development’; Slusarczyk et al; J. Med. Chem.; 2014, 57, 1531-1542).

[0005] NUC-1031 2 se uobičajeno priprema u vidu smeše dva dijastereoizomera, epimerna na fosfatnom centru (S-epimer 3 i R-epimer 4), koji mogu da se razdvoje i da se primenjuju kao pojedinačni epimeri.

[0006] ProGem1 je bila otvorena studija faze I, sprovedena u dva stadijuma, „prvi put na ljudima“ (FTIH), u kojoj je ispitivana bezbednost, podnošenje, klinička efikasnost, farmakokinetika (PK) i farmakodinamika (PD) NUC-1031, davanog prema dva paralelna rasporeda za doziranje, subjektima sa uznapredovalim čvrstim malignitetima (EudraCT broj: 2011-005232-26). Pri uključivanju u studiju, subjekti su imali sledeće vrste tumora: kolorektalni kancer (7 subjekata), nepoznat primarni (3), rak jajnika (12), rak dojke (4), rak pankreasa (9), holangiokarcinom (7), kancer endometrijuma (3), cervikalni kancer (2), rak pluća (7), mezoteliom (3), rak jednjaka (3), rak jajovoda (1), trofoblasta (1), rak bubrega (1), rak želuca (1), analni kancer (1), rak timusa (1) i osteosarkom (1). Studija je potvrdila antitumorsku aktivnost NUC-1031 kod pacijenata sa uznapredovalim progresivnim kancerima, koji su iscrpeli sve standardne mogućnosti lečenja, pri čemu su mnogi kanceri bili rezistentni ili refraktorni na prethodno lečenje nukleozidnim analozima, uključujući gemcitabin. Posebno treba istaći da su farmakokinetički podaci pokazali da NUC-1031 kao jedino sredstvo, daje oko 10 puta višu maksimalnu unutarćelijsku koncentraciju (Cmax) aktivne trifosfatne komponente (dFdCTP) nego gemcitabin kao jedino sredstvo pri ekvimolarnoj dozi. Osim toga, unutarćelijska izloženost tokom vremena ili „površina ispod krive“ (AUC) dFdCTP komponenti, bila je 27 puta veća za NUC-1031 u poređenju sa starijim podacima za gemcitabin iz niza objavljenih studija. Konačno, analize su pokazale da NUC-1031 oslobađa manje od polovine nivoa potencijalno toksičnog metabolita 2’,2’-difluoro-2’-deoksiuridina (dFdU) koji je uobičajeno povezan sa gemcitabinom.

Kancer bilijarnog trakta

[0007] Kanceri bilijarnog trakta (BTC) povezani su sa visokom stopom smrtnosti (približno 23 na populaciju od milion, sa incidencom od 0.7% malignih tumora u adultnoj populaciji, tj. približno 1200 novih slučajeva godišnje registrovanih u Engleskoj i Velsu. Kanceri bilijarnog trakta su prema mestu porekla svrstani u podgrupe kao:

• kancer žučne kese

• distalnog žučnog kanala

• ampularni tumori

• intrahepatični holangiokarcinom

• hilarni (Klatskin-ov) holangiokarcinom

[0008] Ovi kanceri su češći kod pacijenata starih između 50 i 70 godina, sa većom učestalošću kod muškaraca, u slučaju holangiokarcinoma i ampularnih karcinoma, odnosno kod žena, u slučaju kancera žučne kese. Iako više od 90% BTC kancera predstavlja adenokarcinome, moguće je naći i druge histološke podtipove kao što su skvamozni i neuroendokrini tumori, limfomi ili sarkomi. Glavni etiološki faktor BTC su kamenovi u žuči, urođene anomalije žučnih puteva, primarni sklerozirajući holangitis, hronične bolesti jetre i sindrom nasledne polipoze.

[0009] Hirurgija nudi jedinu šansu za dugoročno izlečenje; međutim, usled agresivne prirode BTC kancera, kod većine pacijenata (>65%) dijagnoza se postavi u uznapredovalim stadijumima kada operacija nije izvodljiva i kada je palijativna hemioterapija jedini dostupan oblik lečenja. Prognoza kod pacijenata sa dijagnozom uznapredovalog (metastatska ili neoperabilna, lokalno uznapredovala bolest) kancera bilijarnog trakta je loša. Petogodišnje ukupno preživljavanje za stadijum III i IV iznosi 10% i 0%, redom. Bez obzira na to, dublet hemioterapija kao prva linija lečenja pokazala je poboljšanje ukupnog preživljavanja i kvaliteta života u poređenju sa terapijom samo jednim sredstvom.

[0010] Najaktivniji hemioterapeutski lekovi za lečenje BTC su gemcitabin, fluoropirimidini i sredstva sa platinom. Studijom ABC-02 engleskog NCRN, cisplatin i gemcitabin su ustanovljeni kao referentni režim za prvu liniju lečenja pacijenata sa BTC. Rezultati dobijeni u ovoj randomizovanoj studiji faze III sa 410 pacijenata, u kojoj je poređena prednost dublet hemioterapije cisplatinom/gemcitabinom u odnosu na monoterapiju gemcitabinom, pokazali su prednost kad je u pitanju ukupno preživljavanje (medijana 11.7 prema 8.1 meseci; p<0.001) kao i preživljavanje bez progresije (medijana 8 prema 5 meseci; p<0.001). Prednost u veoma sličnoj meri, uočena je u Japanskoj randomizovanoj studiji faze II u kojoj su korišćeni isti režimi lečenja (studija BT-22) gde je sa cisplatinom/gemcitabinom dokumantovano srednje preživljavanje od 11.2 meseca. Usled robusnosti studije ABC-02, s obzirom na njenu veličinu i uočenu prednost kad je preživljavanje u pitanju, kombinacija cisplatina i gemcitabina je ustanovljena kao standard u lečenju, i ona je od tada široko usvojena u Velikoj Britaniji i internacionalno (na primer smernice NCCN u SAD).

[0011] Cilj ovog pronalaska je da obezbedi kombinovanu terapiju za lečenje raka. Cilj nekih izvođenja ovog pronalaska je da obezbede terapiju koja je efikasnija od postojećih načina lečenja.

[0012] Neki primeri izvođenja ovog pronalaska zadovoljavaju neke od, ili sve prethodno navedene ciljeve.

KRATAK PREGLED PRONALASKA

[0013] U skladu sa predmetnim pronalaskom, obezbeđen je gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat, za upotrebu u lečenju raka u kombinaciji sa antikancerskim sredstvom na bazi platine odabranim od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina.

[0014] Pronalazak takođe obezbeđuje gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat u kombinaciji sa antikancerskim sredstvom na bazi platine odabranim od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina. Ova kombinacija će se uobičajeno koristiti za lečenje raka.

[0015] Pronalazak takođe obezbeđuje antikancersko sredstvo na bazi platine, odabrano od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina, za upotrebu u kombinaciji sa gemcitabin-[fenilbenzoksi-L-alaninil)]-fosfatom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju ili solvatom.

[0016] Pronalazak takođe obezbeđuje postupak za lečenje raka, pri čemu taj postupak sadrži primenu terapeutski efikasne količine gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili solvata, u kombinaciji sa antikancerskim sredstvom na bazi platine odabranim od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina, kod subjekta kome je to potrebno.

[0017] Pronalazak takođe obezbeđuje gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, u kombinaciji sa antikancerskim sredstvom na bazi platine odabranim od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina, za upotrebu u proizvodnji medikamenta za lečenje raka.

[0018] Pronalazak takođe obezbeđuje gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, za upotrebu u proizvodnji medikamenta za lečenje raka, u kombinaciji sa antikancerskim sredstvom na bazi platine odabranim od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina.

[0019] Pronalazak takođe obezbeđuje antikancersko sredstvo na bazi platine odabrano od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina za upotrebu u proizvodnji medikamenta za lečenje raka, u kombinaciji sa gemcitabin-[fenilbenzoksi-L-alaninil)]-fosfatom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju ili solvatom.

[0020] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja sadrži gemcitabin-[fenilbenzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, zajedno sa antikancerskim sredstvom na bazi platine odabranim od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0021] Formulacija može da sadrži jediničnu dozu gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata i jediničnu dozu antikancerskog sredstva na bazi platine. Jedinične doze mogu da budu iste, ali će uobičajeno biti različite.

[0022] Pronalazak takođe obezbeđuje dve odvojene formulacije, koje se koriste zajedno, pri čemu su formulacije:

prva formulacija koja sadrži gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens; i

druga formulacija koja sadrži antikancersko sredstvo na bazi platine, odabrano od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0023] Formulacije mogu da budu u obliku kita. Formulacije (tj. kit koji sadrži navedene formulacije) uobičajeno će biti namenjene za lečenje kancera.

[0024] Načini lečenja prema predmetnom pronalasku zasnivaju se na činjenici da kombinacija dva sredstva (tj. gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata i antikancerskog sredstva na bazi platine) pokazuje veću efikasnost kada se primeni kombinovano, nego što je to slučaj kada se jedno od njih primeni samo. Izraz ’u kombinaciji’ ili ’zajedno’ u kontekstu predmetnog pronalaska odnosi se na činjenicu da se ova dva sredstva oba primenjuju kod istog pacijenta tokom perioda lečenja. Primena može da bude odvojena u tom smislu što se obezbeđuje u odvojenim dozama, ili može da bude u istoj dozi. Primena može da se odigrava istovremeno ili u sekvenci, bilo neposredno jedan posle drugog, bilo sa vremenskim intervalom između primene dva sredstva. Izraz ’samo’ u kontekstu ove diskusije, označava primenu samo jednog aktivnog sredstva i odsustvo primene drugog sredstva tokom perioda lečenja, čak i nakon nekog vremenskog intervala.

[0025] Kombinovana terapija u skladu sa pronalaskom obuhvata ko-primenu ili sekvencijalnu primenu dva aktivna sredstva na način koji poboljšava ukupne terapijske rezultate u odnosu na primenu jednog od aktivnih sredstava tokom ukupnog perioda lečenja. Farmaceutska formulacija(e) koje se kriste u ove svrhe mogu da budu pojedinačne, tj. odvojene formulacije, ili predstavljene u vidu jedne formulacije. Jedna, ili svaka od, formulacija može da bude u tečnom obliku, razblažena ili spremna za razblaživanje, ili može da bude u čvrstom obliku. Čvrsti oblici mogu da budu obezbeđeni za rastvaranje u pogodnom medijumu za rastvaranje. Čvrsti oblici mogu takođe da budu predstavljeni koncentrovanim oblicima jedinica za doziranje, u obliku tableta, kapsula, lozengi itd.

[0026] Konkretno, pronalazači predmetnog pronalaska su utvrdili da cisplatin senzitivizuje neke ćelijske linije raka, npr. ćelijsku liniju raka bešike HT1376, na NUC-1031, dovodeći do jakog sinergističkog dejstva. Dodatno, pronalazači su utvrdili da, in vivo, kombinacija NUC-1031 i cisplatina dovodi do porasta unutarćelijskog t1/2za dFdCTP, i pokazali su da ova kombinacija može da bude efikasna u lečenju kancera bilijarnog trakta.

[0027] Sinergija koja je uočena za gemcitabin i jedinjenja platine pripisana je porastu od 1.5 puta, nivoa dFdCTP (gemcitabin trifosfata), koji je aktivni metabolit i gemcitabina i NUC-1031 (van Moorsel et al., British Journal of Cancer, 1999, 80(7), 981-990), što je opisano kao rezultat poboljšane aktivnosti deoksicitidin kinaze (dCK). Predložena su dva mehanizma na bazi platine koji prilikom kombinovanja sa gemcitabinom, posredovano putem dCK povećavaju nivoe dFdCTP. Prvi ćelijski mehanizam uključuje inhibiciju ribonukleotid reduktaze, enzima koji je odgovoran za sintezu deoksicitidin trifosfata (dCTP), za koji se zna inhibira dCK (Bajetta et al., Annals of Oncology, 2003, 14, 242-247). U drugom molekularnom mehanizmu oštećenje DNK indukovano platinom aktivira proces popravke isecanjem nukleotida, za koji su neophodni deoksiribonukleotidi (dNTP). Zbog toga dolazi do pojačane ekspresije nekoliko enzima uključenih u sintezu dNTP, uključujući dCK (van Moorsel et al., 1999). NUC-1031 se sintetiše kao nukleotidni analog, u obliku monofosfata, čime se zaobilazi dCK-zavisno obrazovanje dFdCTP, tako da izgleda da sinergija uočena prilikom kombinovanja NUC-1031 i cisplatina potiče od različitog i još nepoznatog puta.

[0028] U nekim poželjnim primerima izvođenja, antikancersko sredstvo na bazi platine je cisplatin.

[0029] Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat može da predstavlja smešu fosfatnih dijastereoizomera ili može da bude u obliku (S)-epimera ili (R)-epimera u suštinski čistom dijastereoizomernom obliku. Za potrebe ovog pronalaska ’suštinski dijastereoizomerno čisto’ se definiše kao dijastereoizomerna čistoća od više od oko 90%. Ukoliko je prisutan u suštinski dijastereoizomerno čistom obliku, gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat može da ima dijastereoizomernu čistoću veću od 95%, 98%, 99%, ili čak 99.5%.

[0030] Kancer može da bude kancer sa čvrstim tumorom. Kancer može da bude kancer odabran od: raka pankreasa, raka dojke, raka jajnika, raka bešike, kolorektalnog kancera, raka pluća, kancera bilijarnog trakta (npr. kancer odabran od kancera žučne kese, kancera distalnog žučnog kanala, ampularnog kancera, hilarnog holangiokarcinoma i intrahepatičnog holangiokarcinoma), raka prostate, raka bubrega, limfoma, leukemije, raka grlića materice, raka timusa, raka nepoznatog primarnog porekla, raka jednjaka, mezotelioma, raka nadbubrežne žlezde, raka materice, raka jajovoda, endometrijalnog kancera, raka testisa, kancera glave i vrata, kancera centralnog nervnog sistema i tumora klicinih ćelija.

[0031] U nekim poželjnim primerima izvođenja, kancer je odabran od raka bešike, raka jajnika, ne-sitnoćelijskog raka pluća i kancera bilijarnog trakta (npr. kancer odabran od kancera žučne kese, kancera distalnog žučnog kanala, ampularnog kancera, hilarnog holangiokarcinoma i intrahepatičnog holangiokarcinoma). U nekim poželjnim primerima izvođenja, kancer je odabran od raka bešike, raka jajnika, i kancera bilijarnog trakta (npr. kancer odabran od kancera žučne kese, kancera distalnog žučnog kanala, ampularnog kancera, hilarnog holangiokarcinoma i intrahepatičnog holangiokarcinoma). U nekim poželjnim primerima izvođenja, kancer je kancer bilijarnog trakta. U drugim poželjnim primerima izvođenja, kancer je rak bešike. Kombinacije u kojima je antikancersko sredstvo na bazi platine cisplatin naročito su poželjne za lečenje ovih konkretnih kancera. U nekim poželjnim primerima izvođenja, kancer je odabran od raka jajnika, ne-sitnoćelijskog raka pluća i kancera bilijarnog trakta (npr. kancer odabran od raka žučne kese, kancera distalnog žučnog kanala, ampularnog kancera, hilarnog holangiokarcinoma i intrahepatičnog holangiokarcinoma), a antikancersko sredstvo na bazi platine je cisplatin. U nekim poželjnim primerima izvođenja, kancer je odabran od raka jajnika i kancera bilijarnog trakta (npr. kancer je odabran od raka žučne kese, kancera distalnog žučnog kanala, ampularnog kancera, hilarnog holangiokarcinoma i intra-hepatičnog holangiokarcinoma) i antikancersko sredstvo na bazi platine predstavlja cisplatin. Dakle, kancer može da bude kancer bilijarnog trakta, a antikancersko sredstvo na bazi platine je cisplatin. Slično tome, kancer može da bude rak bešike, a antikancersko sredstvo na bazi platine je cisplatin.

[0032] Kancer može da bude prethodno hemioterapijski netretiran. Alternativno, kancer (npr. kancer bilijarnog trakta ili bešike) može da bude rekurentan. Dakle, može da se desi da se kancer ponovo pojavio ili progredirao posle jedne ili više prethodnih tura hemioterapije (koje su mogle da uključuju ili da ne uključuju tretman sredstvom odabranim od cisplatina, gemcitabina ili gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata. Kancer (npr. kancer bilijarnog trakta ili bešike) može da bude refraktoran, rezistentan ili delimično rezistentan na antikancersko sredstvo na bazi platine (npr. cisplatin). Alternativno, kancer (npr. kancer bilijarnog trakta ili bešike) može da bude senzitivan na antikancersko sredstvo na bazi platine (npr. cisplatin). Kancer (npr. kancer bilijarnog trakta ili bešike) može da bude metastatski.

[0033] Solvat će uobičajeno biti hidrat. Dakle, gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat može da bude u obliku soli ili hidrata, ili solvata (npr. hidrata) soli. Moguće je da gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat ne bude u obliku soli i moguće je da ne bude u obliku solvata ili hidrata. Poželjno, gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat je u obliku slobodne baze.

[0034] Primena kombinacije može da obezbeđuje unutarćelijsko t1/2za dFdCTP od više od 10 sati. Primena kombinacije može da obezbeđuje unutarćelijsko t1/2za dFdCTP od više od 15 sati. Primena kombinacije može da obezbeđuje unutarćelijsko t1/2za dFdCTP od više od 18 sati. Primena kombinacije može da obezbeđuje unutarćelijsko t1/2za dFdCTP od više od 20 sati.

[0035] Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat i antikancersko sredstvo na bazi platine mogu da se primenjuju istovremeno ili mogu da se primenjuju sekvencijalno. Tamo gde se primenjuju istovremeno, mogu da se primenjuju kao jedna formulacija ili mogu da se primenjuju u vidu odvojenih formulacija. Tamo gde se primenjuju sekvencijalno, mogu da se primenjuju istog dana ili mogu da se primenjuju različitim danima tokom perioda lečenja. Moguće je i da se nekim danima tokom perioda lečenja gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat i antikancersko sredstvo na bazi platine primenjuju istovremeno ili istog dana, a da se nekih drugih dana u programu lečenja primenjuje samo jedno od sredstava.

Formulacije NUC-1031

[0036] Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat može da se primenjuje parenteralno, npr. intravenski, potkožno ili intramuskularno. Poželjno, gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat se primenjuje intravenski.

[0037] Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat može da se primenjuje parenteralno u vidu vodene formulacije koja izborno takođe sadrži polarni organski rastvarač, npr. DMA. U slučaju parenteralne (npr. intravenske) primene, formulacija poželjno takođe sadrži i polarni aprotični organski rastvarač, npr. DMA.

[0038] Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat može da bude sadržan u formulaciji. Formulacija može da bude za razblaživanje prethodno određenom količinom, neposredno pre primene, tj. najviše do 48 sati (npr. do 24, 12 ili 2 sata) pre primene.

[0039] Formulacija takođe može da sadrži farmaceutski prihvatljiva sredstva za povećanje rastvorljivosti, npr. farmaceutski prihvatljiva ne-jonska sredstva za povećanje rastvorljivosti. Sredstva za povećanje rastvorljivosti mogu takođe da se zovu surfaktanti ili emulgatori. Ilustrativna sredstva za povećanje rastvorljivosti uključuju polietoksilovane masne kiseline i estre masnih kiselina i njihove smeše. Pogodna sredstva za povećanje rastvorljivosti mogu da budu, ili da sadrže, polietoksilovano ricinusovo ulje (npr. ono koji se nalazi u prodaji pod registrovanim imenom Kolliphor® ELP); ili mogu da budu ili da sadrže polietoksilovanu hidroksi-stearinsku kiselinu (npr. one koje se nalaze u prodaji pod registrovanim imenima Solutol® ili Kolliphor® HS15); ili mogu da budu ili da sadrže polietoksilovani (npr. polioksietilen (20)) sorbitan monooleat, (npr. onaj koji se nalazi u prodaji pod registrovanim imenom Tween® 80).

[0040] U nekim poželjnim primerima izvođenja, formulacija sadrži više od jednog farmaceutski prihvatljivog sredstva za povećanje rastvorljivosti.

[0041] Formulacija takođe može da sadrži vodeni vehikulum. Formulacija može da bude spremna za primenu, u kom slučaju uobičajeno sadrži vodeni vehikulum.

[0042] Premda je gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat poželjno formulisan za parenteralnu primenu npr. za intravensku, potkožnu ili intramuskularnu primenu, u nekim primerima izvođenja prema pronalasku, može da bude primenjen oralno. Poželjno, formulacija je za intravensku primenu. Primena može da se obavlja kroz centralni venski kateter (CVAD) ili može da se obavlja kroz perifernu venu.

[0043] Ukupna doza gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata u formulaciji pogodnoj za primenu, uobičajeno će iznositi 250 mg do 3 g, npr. od 1 g do 2 g, npr. oko 1.5 g.

Formulacije stok rastvora

[0044] Polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) može da predstavlja 30% ili više, po zapremini formulacije. Dakle, polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) može da predstavlja 50% ili više, npr.

60% ili više, po zapremini formulacije. Polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) može da predstavlja 95% ili manje, po zapremini formulacije, npr. 90% ili manje. Formulacija može takođe da sadrži vodeni vehikulum (npr. fiziološki rastvor). Vodeni vehikulum može da bude zastupljen sa 50% ili manje, po zapremini formulacije, npr. 30% ili manje, po zapremini

1

formulacije. Uobičajeno, vodeni vehikulum (npr. fiziološki rastvor) će predstavljati 5% ili više, npr. 10% ili više, po zapremini formulacije.

[0045] Koncentracija gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata u formulaciji rastvarača (ili više njih) može da bude 500 mg ili manje, po mL. Koncentracija može da bude 100 mg ili više, po mL. Poželjno, koncentracija iznosi od 200 mg do 300 mg, npr. od 225 mg do 275 mg, npr. oko 250 mg, po mL.

[0046] Neke poželjne formulacije sadrže:

od 30 % do 95% po zapremini DMA;

od 5% do 50% po zapremini vodenog vehikuluma; i

od 100 mg do 400 mg (npr. od 100 mg do 300 mg) po mL gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata.

[0047] Poželjnije formulacije sadrže:

od 70 % do 90% po zapremini DMA;

od 10% do 30% po zapremini vodenog vehikuluma (npr. fiziološkog rastvora); i

od 200 mg do 300 mg po mL gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata.

[0048] Formulacije opisane u prethodna četiri odeljka, u kojima je polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) prisutan kao glavna komponenta mogu da budu za primenu (npr. infuzijom ili putem injekcije) formulacije bez njenog razblaživanja pre primene. One, na primer, mogu da budu za primenu kroz CVAD. Kada se primenjuje putem CVAD, formulacija se uobičajeno ne razblažuje.

[0049] Alternativno, ove formulacije mogu da budu stok rastvori koji se razblažuju pre upotrebe kako bi obrazovali formulaciju pogodnu za upotrebu, npr. kroz perifernu venu.

Formulacije rastvora sa površinskom aktivnošću

[0050] Polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) može da predstavlja 10% ili više, npr. 20% ili više, po zapremini formulacije. Tako, polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) može da predstavlja 80% ili manje, npr. 70% ili manje, po zapremini formulacije. Polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) može da predstavlja 55% ili manje, po zapremini formulacije. Formulacija takođe može da sadrži jedno ili više sredstava za povećanje rastvorljivosti (npr. jednu ili više polietoksilovanih masnih kiselina). Jedno ili više sredstava za povećanje rastvorljivosti mogu da predstavljaju 70% ili manje, po zapremini formulacije, npr. 60% ili manje, po zapremini formulacije. Uobičajeno će jedno ili više sredstava za povećanje rastvorljivosti predstavljati 20% ili više, npr. 35%, po zapremini formulacije. Formulacija takođe može da sadrži vodeni vehikulum, npr. u količini od 1% do 15% po zapremini ili od 5% do 12% po zapremini.

[0051] Koncentracija gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata u formulaciji rastvarača(ili više njih) može da bude 200 mg ili manje po mL, npr. 150 mg ili manje ili 130 mg ili manje. Koncentracija može da bude 40 mg ili više po mL, npr. 60 mg ili više. Poželjno, koncentracija iznosi od 70 mg do 120 mg po mL, npr. oko 100 mg po mL.

[0052] Neke poželjne formulacije sadrže:

od 20 % do 70% po zapremini DMA;

od 20% do 70% po zapremini sredstva za povećanje rastvorljivosti ili više sredstava za povećanje rastvorljivosti; i

od 50 mg do 150 mg po mL gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata. Formulacija može takođe da sadrži vodeni vehikulum, npr. u količini od 1% do 15% po zapremini.

[0053] Neke naročito poželjne formulacije sadrže:

od 30 % do 60% po zapremini DMA;

od 10% do 35% po zapremini prvog sredstva za povećanje rastvorljivosti;

od 10% do 35% po zapremini drugog sredstva za povećanje rastvorljivosti;

od 2% do 15% po zapremini vodenog vehikuluma; i

od 50 mg do 150 mg po mL gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata. Prvo sredstvo za povećanje rastvorljivosti mogu da budu pelietoksilovana ricinusova ulja (npr. ulje koje se prodaje pod zaštićenim imenom Kolliphor® ELP). Drugo sredstvo za povećanje rastvorljivosti može da bude pelietoksilovani sorbitan monooleat (npr. onaj koji se prodaje pod zaštićenim imenom Tween® 80).

[0054] Formulacija može da sadrži:

od 35 % do 50% po zapremini DMA;

od 15% do 30% po zapremini prvog sredstva za povećanje rastvorljivosti;

od 15% do 30% po zapremini drugog sredstva za povećanje rastvorljivosti;

od 5% do 12% po zapremini vodenog vehikuluma; i

od 50 mg do 150 mg po mL gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata.

[0055] U prethodnih pet odeljaka opisane formulacije rastvora sa površinskom aktivnošću, u kojima je polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) prisutan kao glavna komponenta, uobičajeno se, pre primene, razblažuju vodenim vehikulumom. One se uobičajeno pripremaju od prethodno pomenutih stok rastvora, pre nego što se dalje razblaže, kako bi bile spremne za primenu. Jednom razblažene, one mogu da se primenjuju kroz perifernu venu.

[0056] Ove formulacije mogu da se obrazuju razblaživanjem stok rastvora formulacije koja ne sadrži bilo koja sredstva za povećanje rastvorljivosti, rastvorom koji sadrži sredstva za povećanje rastvorljivosti.

Formulacije rastvora za infuziju

[0057] Polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) može da predstavlja 0.1% ili više, npr. 0.5% ili više ili 1% ili više, po zapremini formulacije. Dakle, DMA može da predstavlja 12% ili manje, npr. 10% ili manje ili 8% ili manje, po zapremini formulacije. Formulacija takođe može da sadrži vodeni vehikulum (npr. fiziološki rastvor ili VZI). vodeni vehikulum može da bude zastupljen sa 99.5% ili manje, po zapremini formulacije, npr. 99% ili 98% ili manje, po zapremini formulacije. Uobičajeno će vodeni vehikulum predstavljati 80% ili više, npr. 95% ili više, po zapremini formulacije. Formulacija može takođe da sadrži jedno ili više sredstva za povećanje rastvorljivosti (npr. jednu ili više polietoksilovanih masnih kiselina). Jedno ili više sredstava za povećanje rastvorljivosti može da bude prisutno sa 12% ili manje, po zapremini formulacije, npr. 10% ili manje ili 8% ili manje, po zapremini formulacije. Uobičajeno će jedno ili više sredstava za povećanje rastvorljivosti biti zastupljeno sa 0.1% ili više, npr. 0.5% ili više ili 1% ili više, po zapremini formulacije.

[0058] Koncentracija gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata u formulaciji rastvarača (ili više njih) može da bude 15.0 mg ili manje po mL ili 12.0 mg ili manje po mL, npr. 10.0 mg ili manje ili 8 mg ili manje po mL. Koncentracija može da bude 1.0 mg ili više po mL, npr. 2.0 mg ili više. Poželjno, koncentracija iznosi od 2.5 mg do 12 mg po mL, npr. od 3 mg do 11 mg po mL.

[0059] Neke poželjne formulacije sadrže:

od 0.1 % do 10% po zapremini DMA;

od 0.1% do 10% po zapremini sredstva za povećanje rastvorljivosti ili više sredstava za povećanje rastvorljivosti;

1

od 85% do 99% po zapremini vodenog vehikuluma; i

od 2.0 mg do 12.0 mg po mL gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata.

[0060] Neke naročito poželjne formulacije sadrže:

od 1 % do 8% po zapremini DMA;

od 0.5 % do 4% po zapremini prvog sredstva za povećanje rastvorljivosti;

od 0.5 % do 4% po zapremini drugog sredstva za povećanje rastvorljivosti;

od 85% do 99% po zapremini vodenog vehikuluma; i

od 2.0 mg do 12.0 mg po mL gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata. Prvo sredstvo za povećanje rastvorljivosti može da bude pelietoksilovano ricinusovo ulje (npr. ono koje se prodaje pod zaštićenim imenom Kolliphor® ELP). Drugo sredstvo za povećanje rastvorljivosti može da bude pelietoksilovani sorbitan monooleat (npr. onaj koji se prodaje pod zaštićenim imenom Tween® 80).

[0061] U prethodna četiri odeljka opisane formulacije rastvora za infuziju, u kojima je polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) prisutan kao manjinska komponenta, uobičajeno će biti pripremane razblaživanjem koncentrovanog rastvora gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata vodenim vehikulumom, najviše 48 sati pre primene. Navedeni koncentrovani rastvor može da bude ili rastvor gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata u polarnom aprotičnom rastvaraču (videti pod naslovom ’formulacije stok rastvora’, prethodno u tekstu), rastvor gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata u smeši polarnog aprotičnog rastvarača i sredstva za povećanje rastvorljivosti (videti pod naslovom ’formulacije rastvora sa površinskom aktivnošću’, prethodno u tekstu). Ove formulacije u kojima je polarni aprotični rastvarač (npr. DMA) prisutan kao manjinska komponenta, mogu da se primenjuju kroz perifernu venu. Niske koncentracije polarnog aprotičnog rastvarača (npr. DMA) u navedenim formulacijama, znače da oni nemaju tendenciju da izazivaju bol prilikom periferne primene.

Kitovi

[0062] Pronalazak obezbeđuje kit za lečenje kancera, pri čemu kit sadrži:

prvu formulaciju koja sadrži gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens; i

drugu formulaciju koja sadrži antikancersko sredstvo na bazi platine i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0063] U nekim konkretnim izvođenjima, kit može da sadrži:

prvu formulaciju koja sadrži:

od 30 % do 95% po zapremini DMA;

od 5% do 50% po zapremini vodenog vehikuluma; i

od 100 mg do 400 mg (npr. od 100 mg do 300 mg) po mL gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata;

drugu formulaciju koja sadrži antikancersko sredstvo na bazi platine i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens; i

treću formulaciju koja sadrži:

od 30 % do 95% po zapremini DMA;

od 5% do 50% po zapremini vodenog vehikuluma.

[0064] Treća formulacija uobičajeno neće sadržavati aktivni sastojak. Dakle, ona uobičajeno neće sadržati ni gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ni antikancersko sredstvo na bazi platine. Treća formulacija može da bude obezbeđena u dva odvojena suda ili u samo jednom sudu.

[0065] Kit koji se pominje u prethodna dva odeljka, koristan je u slučaju kada se gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat primenjuje intravenski, putem CVAD. CVAD se pre primene prve formulacije ispira trećom formulacijom. Ovo ublažava rizik od taloženja gemcitabin-[fenilbenzoksi-L-alaninil)]-fosfata u, ili na ulazu u, aparaturu za intravensku primenu, tj. CVAD, tako što se izbegava direktan kontakt aktivnog sastojka formulacije sa vodenim medijumima (npr. fiziološkim rastvorom za ispiranje). CVAD takođe može da se ispira trećom formulacijom nakon primene prve formulacije. Ovo dodatno sprečava taloženje.

[0066] U nekim konkretnim primerima izvođenja, kit može da sadrži:

prvu formulaciju koja sadrži:

od 30 % do 95% po zapremini DMA;

od 5% do 50% po zapremini vodenog vehikuluma; i

1

treću formulaciju koja sadrži:

od 10 % do 50% po zapremini DMA;

od 20% do 60% po zapremini prvog sredstva za povećanje rastvorljivosti;

od 20% do 60% po zapremini drugog sredstva za povećanje rastvorljivosti.

[0067] Treća formulacija uobičajeno neće sadržavati bilo koji aktivni sastojak. Dakle, ona uobičajeno neće sadržati ni gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, niti antikancersko sredstvo na bazi platine.

[0068] Kit pominjan u prethodna dva paragrafa je koristan kada se gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat primenjuje intravenski putem periferne vene. Prva formulacija se razblažuje trećom formulacijom najviše 48h, npr. najviše do 24h pre primene kako bi se obrazovala četvrta formulacija. Četvrta formulacija se dodatno pre primene razblažuje vodenim vehikulumom do željene koncentracije, kako bi se obrazovala formulacija, koja se koristi primenjena putem infuzije ili injekcije kod pacijenta. Da bi se dobile formulacije za perifernu primenu koje su stabilne kada se radi o taloženju gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata, uobičajeno je poželjno uključiti sredstva za povećanje rastvorljivosti. Međutim, gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat može da bude podložan degradaciji u prisustvu takvih sredstava za povećanje rastvorljivosti. Tako postupak razblaživanja u dva stadijuma, u nekim primerima izvođenja prema pronalasku, predstavlja poželjno sredstvo pomoću koga se dobijaju formulacije gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata za perifernu primenu.

Ilustracija metodologije za primenu gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata

[0069] Ilustracija metodologije za primenu gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata je sledeća:

Rastvor sa 250 mg/mL gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata (S-epimer, R-epimer ili njihova smeša) obrazuju se u smeši DMA i 0.9% fiziološkog rastvora u odnosu 80:20 (po zapremini). Ova formulacija stok rastvora je uobičajeno dovoljno stabilna za dugotrajno skladištenje i transport protida. Ova formulacija stok rastvora može da se primenjuje kod pacijenata intravenski, putem CVAD (npr. Hikmanov kateter, PICK kateter, kateter Portacath),

1

npr. brzinom od 20 ml/sat. Aparat za intravensku primenu uobičajeno će se ispirati smešom DMA i 0.9% fiziološkog rastvora u odnosu 80:20 (po zapremini) (rastvor za ispiranje pomenut u primeru 4 u tekstu koji sledi), kako pre, tako i posle primene formulacije koja sadrži gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat. Ovo pomaže da se smanji rizik od bilo kog potencijalnog taloženja gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata u aparaturi za intravensku primenu pri kontaktu sa fiziološkim rastvorom za ispiranje. Alternativno, kada je intravenska primena u perifernu venu poželjan postupak primene formulacije, stok rastvor se zatim razblažuje do 100 mg/mL, rastvorom razblaživača koji predstavlja smešu DMA:Tween® 80:Kolliphor® ELP u odnosu 20%:40%:40% (npr. 6.7 mL rastvora sa 250 mg/ml gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata u 80:20 DMA:0.9% fiziološkog rastvora, dodaje se u 10 mL DMA:Tween®80:Kolliphor® ELP rastvora za razblaživanje). Dobijena formulacija (rastvora sa površinskom aktivnošću) je uobičajeno stabilna najviše do 5 dana. Formulacija rastvora za infuziju se zatim priprema razblaživanjem ove formulacije sa rastvorom sa površinskom aktivnošću, do željene koncentracije, pomoću 0.9% fiziološkog rastvora.

[0070] Primena gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata u ABC-08 studiji, koja je opisana u primerima, sprovedena je upotrebom ove metodologije za primenu, gde je S epimer gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata primenjen putem CVAD.

Formulacije antikancerskog sredstva na bazi platine

[0071] Antikancersko sredstvo na bazi platine može da se primenjuje parenteralno, npr. intravenski, intraperitonealno, potkožno ili intramuskularno. Poželjno, antikancersko sredstvo na bazi platine se primenjuje intravenski.

[0072] Antikancersko sredstvo na bazi platine uobičajeno će se primenjivati u vidu vodenog rastvor, npr. u vidu sterilnog voden rastvora koncentracije 1 mg/mL. Vodeni rastvor će uobičajeno biti fiziološki rastvor (npr. 0.9% fiziološki rastvor). Vodeni rastvor može takođe da sadrži manitol (npr. pri 10 mg/mL).

[0073] Kada se antikancersko (npr. cisplatin) sredstvo na bazi platine primenjuje u dozi manjoj od 50 mg/mL, uobičajeno se primenjuje u vidu infuzije iz kese od 100-250mL tokom 15-60 minuta. Kada se antikancersko (npr. cisplatin) sredstvo na bazi platine primenjuje u dozi koja je veća ili jednaka 50 mg/mL, uobičajeno se primenjuje u vidu infuzije iz kese od 250 do 500 mL tokom 15 to 60 minuta.

[0074] Dodatne informacije o primeni cisplatina dostupne su, na primer, na etiketi za Platinol® koju je odobrila američka FDA.

1

Režimi doziranja

[0075] NUC-1031 može da se primeni dvaput u ciklusu od 21 dana. Antikancersko sredstvo na bazi platine (npr. cisplatin) može da se primeni dvaput u ciklusu od 21 dana. U poželjnom režimu doziranja NUC-1031 se primenjuje na dan 1 i dan 8 ciklusa od 21 dana. Antikancersko sredstvo na bazi platine (npr. cisplatin) takođe može da se primeni na dan 1 i dan 8 ciklusa od 21 dana. NUC-1031 i antikancersko sredstvo na bazi platine (npr. cisplatin) mogu da se primenjuju istovremeno, na dan 1 i dan 8 ciklusa od 21 dana.

[0076] Doza NUC-1031 primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni, poželjno je u opsegu od 250 mg/m2 do 1250 mg/m2. Doza NUC-1031 primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni može da bude u opsegu od 300 mg/m2 do 1000 mg/m2. Doza NUC-1031 primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni može da bude u opsegu od 400 mg/m<2>do 900 mg/m<2>, npr. od 600 mg/m<2>do 800 mg/m2 , ili od 300 do 750 mg/m2. Doza NUC-1031 primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni može da bude oko 750 mg/m<2>.

[0077] Doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin) primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni može da bude od 10 mg/m<2>do 200 mg/m<2>. Doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin) primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni može da bude od 20 mg/m2 do 100 mg/m2. Doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin) primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni može da bude od 20 mg/m<2>do 60 mg/m<2>. Doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin) primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni može da bude od 30 mg/m2 do 90 mg/m2.

[0078] Doza NUC-1031, ili doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin), ili doza oba jedinjenja, može da ostaje suštinski ista u svakom ciklusu lečenja. Na primer, doza NUC-1031 od oko 750 mg/m2 po jednoj primeni, i doza cisplatina od oko 50 mg/m2 , mogu da se koriste u višestrukim ciklusima lečenja.

[0079] Alternativno, doza NUC-1031, ili doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin), ili doza oba jedinjenja, može da se smanji od prvog ciklusa lečenja do drugog (ili sledećeg) ciklusa lečenja. Na primer, doza NUC-1031 primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni može da se smanji od 750 mg/m<2>u prvom ciklusu lečenja, do oko 625 mg/m<2>u drugom (ili sledećem) ciklusu lečenja. Doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin) može da se smanji od oko 90 mg/m2 u prvom ciklusu lečenja, do oko 60 mg/m<2>, ili do oko 50 mg/m<2>u drugom (ili sledećem) ciklusu lečenja.

[0080] Pogodni režimi lečenja mogu da koriste smanjenja (kao što je izloženo u prethodnom odeljku) kako doza NUC-1031, tako i doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatina) od prvog ciklusa lečenja do drugog (ili narednog) ciklusa lečenja. Na primer, doza

1

NUC-1031 primenjena pri svakoj pojedinačnoj primeni može da se smanji od oko 750 mg/m<2>, u prvom ciklusu lečenja, do oko 625 mg/m<2>drugom (ili sledećem) ciklusu lečenja, i doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin) može da se smanji od oko 90 mg/m<2>u prvom ciklusu lečenja, do oko 60 mg/m<2>, ili do oko 50 mg/m<2>drugom (ili sledećem) ciklusu lečenja.

[0081] U slučaju da se doza NUC-1031 smanjuje od prvog do drugog, ili narednog, ciklusa lečenja (kao što je od oko 750 mg/m<2>po pojedinačnoj primeni, do oko 625 mg/m<2>po pojedinačnoj primeni), doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin) može da ostane ista u prvom i drugom, ili narednim ciklusima lečenja (na primer, oko 50 mg/m<2>u svakom ciklusu).

[0082] U slučaju da doza NUC-1031 ostaje ista u prvom i drugom, ili narednim ciklusima lečenja (kao što je oko 625 mg/m<2>po pojedinačnoj primeni), doza antikancerskog sredstva na bazi platine (npr. cisplatin) može da se smanji između prvog i drugog, ili narednih ciklusa lečenja (na primer, od 90 mg/m<2>u prvom ciklusu lečenja, do oko 60 mg/m<2>, ili do oko 50 mg/m<2>u drugom, ili narednom, ciklusu lečenja).

[0083] Očekuje se da prethodno pomenuti režim doziranja obezbedi ravnotežu u kojoj je toksičnost svake od komponenti kombinacije na prihvatljivom nivou, a da se i dalje uočava terapeutska korist koju donosi kombinacija.

[0084] Prethodno pomenuti režim doziranja može da obezbedi poboljšanu stopu preživljavanja kod pacijenata. Moguće je da obezbedi stabilno stanje bolesti kod 50% pacijenata. Moguće je da obezbedi jedan ili više prethodno pomenutih prednosti sa prihvatljivim nivoom sporednih efekata. Moguće je da doziranje bude takvo da AUC za dFdCTP bude viša za kombinaciju nego za NUC-1031 kada se primenjuje kao jedino sredstvo. Moguće je da doziranje bude takvo da odnos AUC i Cmaxza dFdCTP bude viši za kombinaciju nego za NUC-1031 kada se primenjuje kao jedino sredstvo.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0085] Primeri izvođenja prema pronalasku su dodatno opisani u tekstu koji sledi uz upućivanje na prateće crteže, u kojima:

Slika 1 prikazuje hromatograf razdvajanja jedinjenja 3 i 4 putem HPLC uz upotrebu kolone Chiralpak AD i sistema rastvarača sa n-heptan/IPA gradijentom.

Slika 2 prikazuje sinergistički efekat pokazan pomoću metode pomaka krive za cisplatin/NUC-1031 u ćelijskoj liniji kancera bešike, HT1376

1

DETALJAN OPIS

[0086] ’Istovremeno’ bi trebalo da znači „suštinski istovremeno“, npr. sa manje od 30 minuta razmaka. ’Sekvencijalno’ podrazumeva primenu sa razmakom od više od 30 minuta.

[0087] Kroz celu ovu specifikaciju, izraz S-epimer ili S-dijastereoizomer odnosi se na gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-(S)-fosfat. Slično tome, kroz celu ovu specifikaciju, izraz R-epimer ili R- dijastereoizomer odnosi se na gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-(R)-fosfat.

[0088] Jedinjenja prema pronalasku mogu da se dobijaju, skladište i/ili primenjuju u obliku farmaceutski prihvatljive soli. Pogodne farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničene na, soli farmaceutski prihvatljivih neorganskih kiselina kao što su soli hlorovodonične, sumporne, fosforne, azotne, ugljene, borne, sulfaminske, bromovodonične kiseline, ili soli farmaceutski prihvatljivih organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, buterna, vinska, maleinska, hidroksimaleinska, fumarna, jabučna, limunska, mlečna, sluzna, glukonska, benzoeva, ćilibarna, oksalna, fenilsirćetna, metansulfonska, toluensulfonska, benzensulfonska, salicilna, sulfanilinska, asparaginska, glutaminska, EDTA, stearinska, palmitinska, oleinska, laurinska, pantotenska, taninska, askorbinska i valerna kiselina. Pogodne bazne soli se obrazuju od baza koje formiraju netoksične soli. Primeri uključuju soli aluminijuma, arginina, benzatina, kalcijuma, holina, dietilamina, diolamina, glicina, lizina, magnezijuma, meglumina, olamina, kalijuma, natrijuma, trometamina i cinka. Takođe mogu da se obrazuju hemi-soli kiselina i baza, na primer, soli hemisulfata, hemioksalata i hemikalcijuma. U nekim primerima izvođenja, naročito u onima gde se koristi s-epimer, jedinjenje je u obliku soli HCl soli ili soli hemioksalata.

[0089] Jedinjenja prema pronalasku mogu da postoje u vidu pojedinačnog kristalnog oblika ili u smeši kristalnih oblika, ili mogu da budu amorfne. Dakle, jedinjenja prema pronalasku, namenjena za farmaceutsku upotrebu, mogu da se primenjuju kao kristalni ili amorfni proizvodi. Mogu da se dobiju, na primer, kao čvrsta punjenja, praškovi, ili filmovi, postupcima kao što su precipitacija, kristalizacija, sušenje zamrzavanjem, ili sušenje raspršivanjem, ili sušenje uparavanjem. U ovom cilju mogu da se koriste i mikrotalasno ili radiofrekventno sušenje.

[0090] Za prethodno u tekstu pomenuta jedinjenja prema pronalasku, primenjena doza će, naravno, varirati, u zavisnosti od upotrebljenog jedinjenja, načina primene, željenog tretmana i naznačenog poremećaja. Na primer, ako se jedinjenje prema pronalasku primeni parenteralno, onda doza jedinjenja prema pronalasku može da bude u opsegu od 0.1 do 5 g/m<2>, npr. od 0.5 do 2 g/m2. Veličina doze jedinjenje prema pronalasku koja se koristi u terapeutske svrhe, normalno

2

će varirati, prema dobro poznatim principima medicine, u skladu sa prirodom i ozbiljnošću stanja, starosnom dobi i polom životinje ili pacijenta, i rutom primene.

[0091] Očekuje se da se nivoi doziranja, učestalost doze i trajanje lečenja za jedinjenja prema pronalasku, razlikuju u zavisnosti od formulacije i kliničke indikacije, starosne dobi i komorbidnih medicinskih stanja pacijenta.

[0092] Jedinjenje prema pronalasku, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, mogu da se koriste samostalno ali će se generalno primenjivati u obliku farmaceutske kompozicije u kojoj su jedinjenja prema pronalasku, ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, u asocijaciji sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem. Konvencionalni postupci za odabir i pripremu pogodnih farmaceutskih formulacija opisani su u, na primer, "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988.

[0093] U zavisnosti od načina primene jedinjenja prema pronalasku, farmaceutska kompozicija koja se koristi kako bi se primenilo jedinjenja prema pronalasku poželjno će sadržavati od 0.05 do 99 %tež. (procenata po težini) jedinjenja prema pronalasku, poželjnije od 0.05 do 80 %tež. jedinjenja prema pronalasku, još poželjnije od 0.10 do 70 %tež. jedinjenja prema pronalasku, i još više poželjno od 0.10 do 50 %tež. jedinjenja prema pronalasku, gde se svi procenti po težini baziraju na ukupnoj kompoziciji.

[0094] U cilju oralne primene, jedinjenja prema pronalasku mogu da se mešaju sa adjuvansom ili nosačem, na primer, laktozom, saharozom, sorbitolom, manitolom; skrobom, na primer, krompirovim skrobom, kukuruznim skrobom ili amilopektinom; derivatom celuloze; vezujućim sredstvom, na primer, želatinom ili polivinilpirolidonom; i/ili lubrikantom, na primer, magnezijum stearatom, kalcijum stearatom, polietilen glikolom, voskom, parafinom, i slično, a zatim komprimuje u tablete. Ako su neophodne obložene tablete, jezgro, pripremljeno na način opisan prethodno u tekstu, mogu da budu obložene koncentrovanim rastvorom šećera, koji može da sadrži, na primer, gumi arabiku, želatin, talk i titanijum dioksid. Alternativno, tableta može da bude obložena pogodnim polimerom rastvorenim u lako isparljivom organskom rastvaraču.

[0095] Za pripremu mekih želatinskih kapsula, jedinjenja prema pronalasku mogu da se mešaju sa, na primer, biljnim uljem ili polietilen glikolom. Tvrde želatinske kapsule mogu da sadrže granule jedinjenja uz upotrebu bilo kog od prethodno pomenutih ekscipijenasa za tablete. Tvrde želatinske kapsule takođe mogu da se pune tečnim ili polu-čvrstim formulacijama jedinjenja prema pronalasku.

[0096] Tečne preparacije za oralnu primenu mogu da budu u obliku sirupa ili suspenzija, na primer, pri čemu rastvori sadrže jedinjenje prema pronalasku, a balans je šećer i smeša etanola, vode, glicerola i propilen glikola. Ovakve tečne preparacije mogu izborno da sadrže sredstva za bojenje, arome, zaslađivače (kao što je saharin), konzervanse i/ili karboksimetilcelulozu kao sredstvo za zgušnjavanje, ili druge ekscipijense poznate stručnjacima u oblasti.

[0097] U cilju parenteralne (npr. intravenske) primene, jedinjenja mogu da se primene kao sterilni vodeni ili uljani rastvor. Jedinjenja prema pronalasku su veoma lipofilna. Vodene formulacije će, stoga, uobičajeno, takođe da sadrže farmaceutski prihvatljiv polarni organski rastvarač.

[0098] Veličina doze jedinjenje prema pronalasku koja se koristi u terapeutske svrhe, normalno će varirati, prema dobro poznatim principima medicine, u skladu sa prirodom i ozbiljnošću stanja, starosnom dobi i polom životinje ili pacijenta, i rutom primene.

[0099] Očekuje se da se nivoi doziranja, učestalost doze i trajanje lečenja za jedinjenja prema pronalasku, razlikuju u zavisnosti od formulacije i kliničke indikacije, starosne dobi i komorbidnih medicinskih stanja pacijenta.

[0100] Predmetni pronalazak takođe uključuje sve farmaceutski prihvatljive izotopski obeležene oblike jedinjenja 2, 3 ili 4 u kojima su jedan ili više atoma zamenjeni atomima koji imaju isti atomski broj, ali različitu atomsku masu ili maseni broj od atomske mase ili masenog broja predominantnog izotopa koji se obično nalazi u prirodi.

[0101] Primeri izotopa pogodnih za uključivanje u jedinjenja prema pronalasku uključuju izotope vodonika kao što su<2>H i<3>H, ugljenika, kao što su<11>C,<13>C i<14>C, hlora, kao što je<36>Cl, fluora kao što je<18>F, joda, kao što su<123>I i<125>I, azota, kao što su<13>N i<15>N, kiseonika, kao što su 15O, 17O i 18O, fosfora, kao što je<32>P, i sumpora, kao što je<35>S.

[0102] Neka izotopski obeležena jedinjenja, na primer, jedinjenja u koja su ugrađeni radioaktivni izotopi, korisna su u studijama distribucije leka i/ili supstrata u tkivima. Radioaktivni izotopi tricijum, tj. 3H, i ugljenik-14, tj.14C, naročito su korisni za ovu svrhu s obzirom na to da se lako ugrađuju i da postoje gotova sredstva za njihovu detekciju.

[0103] Supstitucija težim izotopima kao što je deuterijum, tj.<2>H, mogu da obezbede terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, produženi polu-život in vivo ili potrebu da se doze smanje, i stoga mogu da budu poželjne u nekim okolnostima.

[0104] Supstitucija izotopima koji emituju pozitrone, kao što su<11>C,<18>F, 1<5>O i<13>N, može da bude korisna u studijama pozitronske emisione tomografije (PET), koje ispituju zauzetost receptora supstratom.

[0105] Izotopski obeležena jedinjenja mogu u principu da se pripreme konvencionalnim tehnikama koje poznaju stručnjaci u oblasti ili postupcima analognim sa postupcima koji su opisani, a u kojima se, umesto prethodno korišćenog neobeleženog reagensa, koristi reagens koji je na odgovarajući način izotopski obeležen.

[0106] Postupak lečenja ili jedinjenje za upotrebu u lečenju kancera može da uključi, pored gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata i antikancerskog jedinjenja na bazi platine, konvencionalnu hirurgiju ili radioterapiju ili hemioterapiju. Ta hemioterapija može da uključuje primenu jednog ili više drugih aktivnih sredstava.

[0107] Dakle, svaka, ili bilo koja od farmaceutskih formulacija može da sadrži drugo aktivno sredstvo.

[0108] Jedno, ili više drugih aktivnih sredstava, mogu da budu u jednoj ili više sledećih kategorija antitumorskih sredstava:

(i) antiproliferativni/antineoplastični lekovi i njihove kombinacije, kao što su alkilirajuća sredstva (na primer ciklofosfamid, azotni iperit, bendamustin, melfalan, hlorambucil, busulfan, temozolamid i nitrozouree); antimetaboliti (na primer gemcitabin i antifolati kao što su fluoropirimidini kao 5-fluorouracil i tegafur, raltitreksed, metotreksat, pemetreksed, citozin arabinozid i hidroksiurea); antimitotska sredstva (na primer vinka alkaloidi kao vinkristin, vinblastin, vindezin i vinorelbin i taksoidi kao taksol i taksoter i inhibitori polokinaze); inhibitori proteazoma, na primer karfilzomib i bortezomib; interferonska terapija; i inhibitori topoizomeraza (na primer epipodofilotoksini kao etopozid i tenipozid, amsakrin, topotekan, mitoksantron i kamptotecin);

(ii) citostatička sredstva kao što su antiestrogeni (na primer tamoksifen, fulvestrant, toremifen, raloksifen, droloksifen i jodoksifen), antiandrogeni (na primer bikalutamid, flutamid, nilutamid i ciproteron acetat), antagonisti LHRH ili agonisti LHRH (na primer goserelin, leuprorelin i buserelin), progestogeni (na primer megestrol acetat), inhibitori aromataza (na primer kao anastrozol, letrozol, vorazol i eksemestan) i inhibitori 5αreduktaza kao finasterid;

(iii) anti-invaziona sredstva, na primer dasatinib i bosutinib (SKI-606), i inhibitori metaloproteinaza, inhibitori receptorske funkcije urokinaznog aktivatora plazminogena ili antitela na heparanazu;

(iv) inhibitori funkcije faktora rasta: na primer ti inhibitori uključuju antitela na faktore rasta i antitela na receptore faktora rasta, na primer anti-erbB2 antitelo trastuzumab [Herceptin™], anti-EGFR antitelo panitumumab, anti-erbB1 antitelo cetuksimab, inhibitore tirozin kinaza, na primer inhibitore familije epidermalnog faktora rasta (na primer inhibitori tirozin kinaze EGFR familije kao što su gefitinib, erlotinib i 6-akrilamido-N-(3-hloro-4-fluorofenil)-7-(3-morfolinopropoksi)-hinazolin-4-amin (Cl 1033), inhibitori tirozin kinaza erbB2 kao što je lapatinib); inhibitori familije faktora rasta hepatocita; inhibitori familije insulinskih faktora

2

rasta; modulatori proteinskih regulatora apoptoze ćelija (na primer inhibitori Bcl-2); inhibitori familije trombocitnih faktora rasta kao što su imatinib i/ili nilotinib (AMN107); inhibitori serin/treonin kinaza (na primer inhibitori Ras/Raf signalnog puta kao što su inhibitori farnezil transferaze, na primer sorafenib, tipifarnib i lonafarnib), inhibitori ćelijskih signalnih puteva preko MEK i/ili AKT kinaza, inhibitori c-kit, inhibitori abl kinaze, inhibitori PI3 kinaze, inhibitori Plt3 kinaze, inhibitori CSF-1R kinaze, inhibitori kinaze IGF receptora; inhibitori aurora kinaze i inhibitori ciklin-zavisne kinaze kao što su inhibitori CDK2 i/ili CDK4;

(v) antiangiogenetska sredstva kao što su sredstva koja inhibiraju efekte faktora rasta vaskularnog endotela, [na primer, antitelo protiv faktora rasta vaskularnih endotelnih ćelija, bevacizumab (Avastin™); talidomid; lenalidomid; i, na primer, inhibitor tirozin kinaze VEGF receptora, kao što su vandetanib, vatalanib, sunitinib, aksitinib i pazopanib;

(vi) pristupi genske terapije, uključujući, na primer, pristupe zamene aberantnih gena kao što je aberantni p53 ili aberantni BRCA1 ili BRCA2;

(vii) imunoterapijski pristupi, uključujući, na primer, terapiju antitelima kao što su alemtuzumab, rituksimab, ibritumomab, tiuksetan (Zevalin®) i ofatumumab; interferoni kao što je interferon a; interleukini kao što je IL-2 (aldesleukin); inhibitori interleukina, na primer, IRAK4 inhibitori; vakcine protiv raka, uključujući vakcine za profilaksu i lečenje kao što su HPV vakcine, na primer Gardasil, Cervariks, Onkofag i Sipuleucel-T (Provenge); i modulatori toll-u sličnih receptora, na primer agonisti TLR-7 ili TLR-9; i

(viii) citotoksična sredstva, na primer fludaribin (fludara), kladribin, pentostatin (Nipent™);

(ix) steroidi kao što su kortikosteroidi, uključujući glukokortikoide i mineralokortikoide, na primer aklometazon, aklometazon dipropionat, aldosteron, amcinonid, beklometazon, beklometazon dipropionat, betametazon, betametazon dipropionat, betametazon natrijum fosfat, betametazon valerat, budesonid, klobetazon, klobetazon butirat, klobetazol propionat, kloprednol, kortizon, kortizon acetat, kortivazol, deoksikorton, dezonid, dezoksimetazon, deksametazon, deksametazon natrijum fosfat, deksametazon izonikotinat, difluorokortolon, fluklorolon, flumetazon, flunisolid, fluocinolon, fluocinolon acetonid, fluocinonid, fluokortin butil, fluorokortizon, fluorokortolon, fluokortolon kaproat, fluokortolon pivalat, fluorometolon, flupredniden, flupredniden acetat, flurandrenolon, flutikazon, flutikazon propionat, halcinonid, hidrokortizon, hidrokortizon acetat, hidrokortizon butirat, hidrokortizon aceponat, hidrokortizon buteprat, hidrokortizon valerat, ikometazon, ikometazon enbutat, meprednizon, metilprednizolon, mometazon parametazon, mometazon furoat monohidrat, prednikarbat, prednizolon, prednizon, tiksokortol, tiksokortol pivalat, triamcinolon, triamcinolon acetonid, triamcinolon alkohol i njihovi respektivni farmaceutski prihvatljivi derivati. Može da se koristi kombinacija steroida, na primer kombinacija dva ili više steroida koji su pomenuti u ovom odeljku;

(x) usmerene terapije, na primer PI3Kd inhibitori, na primer idelalisib i perifosin; ili jedinjenja koja inhibiraju PD-1, PD-L1 i CAR T.

[0109] Jedno ili više drugih aktivnih sredstva mogu takođe da budu antibiotici (na primer antraciklini kao što su adriamicin, bleomicin, doksorubicin, daunomicin, epirubicin, idarubicin, mitomicin-C, daktinomicin i mitramicin).

[0110] Kroz čitav opis i patentne zahteve ove specifikacije, reči „da sadrže“ i „sadrže“ i njihove varijacije, znače „uključujući, ali ne ograničeno na“, i nije im namena da isključe (niti isključuju) druge komponente, aditive, sastavne delove, celobrojne vrednosti ili korake. Kroz čitav opis i patentne zahteve ove specifikacije, jednina obuhvata i množinu, izuzev ako kontekst zahteva drugačije. Konkretno, tamo gde se koristi neodređeni član, potrebno je podrazumevati da se u specifikaciji ima u vidu množina, kao i jednina, izuzev ako kontekst zahteva drugačije.

[0111] Potrebno je podrazumevati da su svojstva, celobrojne vrednosti, osobine, jedinjenja, hemijske komponente ili grupe, opisane u vezi sa konkretnim aspektom, primerom izvođenja ili primerom pronalaska, primenjive na bilo koji drugi ovde opisani aspekt, primer izvođenja ili primer, osim ako su sa njim nekompatibilni. Sva svojstva prikazana u ovoj specifikaciji (uključujući bilo koje prateće zahteve, apstrakte i crteže), i/ili svi koraci bilo kog, na taj način prikazanog, postupka ili procesa, mogu da se kombinuju u bilo kojoj kombinaciji, izuzev u kombinacijama u kojima se najmanje neka od takvih svojstava i/ili koraka, međusobno isključuju. Pronalazak nije ograničen na detalje bilo kog od prethodno datih primera izvođenja. Pronalazak se proširuje na bilo koje novo svojstvo, ili bilo koju novu kombinaciju svojstava prikazanih u ovoj specifikaciji (uključujući bilo koje prateće zahteve, apstrakte i crteže), ili na bilo koji novi korak ili na kombinaciju koraka u bilo kom postupku ili procesu koji su prikazani na taj način.

Primer 1 – Pojedinačni dijastereoizomeri NUC-1031

[0112] Izomeri (R) i (S) mogu da se razdvoje putem HPLC, pod sledećim uslovima:

Oprema: Agilent 1200™ serije sa DAD detektorom

Brzina protoka: 1.0 mL/min

2

Kolona: Chiralpak AD™; 250 x 4.6 mm ID (normalna faza)

Temperatura: sredine

Veličina čestica: 20 µm

Napoj: rastvoren u MeOH; 10g/L

Rastvarač: n-heptan/IPA 10 ->50% izopropil alkohol

[0113] Hromatogram je prikazan na slici 1. (S)-epimer se eluirao na 8.6 min, a (R)-epimer se eluirao na 10.3 minuta.

[0114] Metode i materijali za karakterizaciju: NMR spektri protona (1H), ugljenika (13C), fosfora (31P) i fluora (19F) snimljeni su na spektrometru Bruker Avance 500 na 25°C. Spektri su auto-kalibrisani u odnosu na maksimum deuterisanog rastvarača i svi<13>C NMR i<31>P NMR spektri su bili sa dekuplovanim protonima. Čistoća finalnih jedinjenja može da se potvrdi HPLC analizom, uz upotrebu kolone Varian Polaris C18-A (10 µM) kao analitičke kolone, sa gradijentom elucije H2O/MeOH od 100/0 do 0/100 za 35 min. HPLC analiza je sprovedena pomoću sistema Varian Prostar (LC radna stanica-Varian prostar 335 LC detektor).

2’-deoksi-2’,2’-difluoro-D-citidin-5’-O-[fenil(benziloksi-L-alaninil)]-(S)-fosfat 3

[0115] (ES+) m/z, nađeno: (M Na<+>) 603.14. C25H27F2N4O8NaP traženo: (M+) 580.47.

<31>P NMR (202 MHz, MeOD): δP3.66

<1>H NMR (500 MHz, MeOD): δH7.58 (d, J = 7.5 Hz, 1H, H-6), 7.38 - 7.32 (m, 7H, ArH), 7.26 -7.20 (m, 3H, ArH), 6.24 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-1’), 5.84 (d, J = 7.5 Hz, 1H, H-5), 5.20 (AB sistem, JAB= 12.0 Hz, 2H, OCH2Ph), 4.46 - 4.43 (m, 1H, H-5’), 4.36 - 4.31 (m, 1H, H-5’), 4.25 -4.19 (m, 1H, H-3’), 4.07 - 4.00 (m, 2H, H-4’, CHCH3), 1.38 (d, J = 7.2 Hz, 3H, CHCH3).

<19>F NMR (470 MHz, MeOD): δF- 118.0 (d, J = 241 Hz, F), - 120.24 (široki d, J = 241 Hz, F).<13>C NMR (125 MHz, MeOD): δC174.61 (d, 3JC-P= 5.0 Hz, C=O, estar), 167.63 (C-NH2), 157.74 (C=O baza), 152.10 (d, 2JC-P= 7.0 Hz, C-Ar), 142.40 (CH-baza), 137.22 (C-Ar), 130.90, 129.63, 129.39, 129.32, 126.32 (CH-Ar), 124.51 (d, 1JC-F= 257 Hz, CF2), 121.47, 121.43 (CH-Ar), 96.67 (CH-baza), 85.92 (široki signal, C-1’), 80.31 (C-4’), 71.27 (prividni t,<2>JC-F= 23.7 Hz, C-3’), 68.03 (OCH2Ph), 65.73 (d, 2JC-P= 5.30 Hz, C-5’), 51.66 (CHCH3), 20.42 (d, 3JC-P= 6.25 Hz, CHCH3).

[0116] Reversna HPLC, uz eluciju pomoću H2O/MeOH od 100/0 do 0/100 za 35 min, pokazala je jedan maksimum dijastereoizomera sa tR= 22.53 min.

2’-deoksi-2’,2’-difluoro-D-citidin-5’-O-[fenil(benziloksi-L-alaninil)]-(R)-fosfat 4.

[0117] (ES+) m/z, nađeno: (M Na<+>) 603.14. C25H27F2N4O8NaP traženo: (M+) 580.47.

2

<31>P NMR (202 MHz, MeOD): δP3.83

<1>H NMR (500 MHz, MeOD): δH7.56 (d, J = 7.5 Hz, 1H, H-6), 7.38 - 7.31 (m, 7H, ArH), 7.23 -7.19 (m, 3H, ArH), 6.26 (t, J = 7.5 Hz, 1H, H-1’), 5.88 (d, J = 7.5 Hz, 1H, H-5), 5.20 (s, 2H, OCH2Ph), 4.49-4.46 (m, 1H, H-5’), 4.38 - 4.34 (m, 1H, H-5’), 4.23 - 4.17 (m, 1H, H-3’), 4.07 -4.01 (m, 2H, H-4’, CHCH3), 1.38 (d, J = 7.2 Hz, 3H, CHCH3).

<19>F NMR (470 MHz, MeOD): δF- 118.3 (d, J = 241 Hz, F), - 120.38 (široki d, J = 241 Hz, F).<13>C NMR (125 MHz, MeOD): δC174.65 (d, 3JC-P= 5.0 Hz, C=O, ester), 167.65 (C-NH2), 157.75 (C=O baza), 152.10 (d, 2JC-P= 7.0 Hz, C-Ar), 142.28 (CH-baza), 137.50 (C-Ar), 130.86, 129.63, 129.40, 129.32, 126.31 (CH-Ar), 124.50 (d, 1JC-F= 257 Hz, CF2), 121.44, 121.40 (CH-Ar), 96.67 (CH-baza), 85.90 (široki signal, C-1’), 80.27 (C-4’), 71.30 (prividni t,<2>JC-F= 23.7 Hz, C-3’), 68.02 (OCH2Ph), 65.50 (C-5’), 51.83 (CHCH 3

3), 20.22 (d, JC-P= 7.5 Hz, CHCH3).

[0118] Reversna HPLC, uz eluciju pomoću H2O/MeOH od 100/0 do 0/100 za 35 min, pokazala je jedan maksimum dijastereoizomera sa tR= 21.87 min.

Primer 2 – In vitro studija kombinacije NUC-1031 i cisplatina.

2.1 Materijali i metode

Ćelijske kulture i reagensi

[0119] A2780, SK-OV-3, OVCAR-3, NCI-H460, NCI-H1975, NCI-H2122, 5637 i HT1376 su gajene u medijumu RPMI 1640 (Invitrogen-22400105) suplementiranom sa 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS; Invitrogen-10099141). Sve ćelijske linije su održavane u vlažnom inkubatoru na 37°C, sa 5% CO2. Medijumi i suplementi za ćelijsku kulturu su kupovani od kompanije Invitrogen, a flaskovi za ćelijske kulture su kupovani od kompanije Corning, ploče sa 96 bunarčića i sa 384 bunarčića su kupovane od kompanije Greiner. Kitovi CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay su kupljeni od kompanije Promega (Promega-G7573), brojač ćelija Vi-Cell je kupljen od kompanije Beckman, instrument za detekciju Envision je kupljen od kompanije PerkinElmer.

[0120] Paklitaksel (koji se koristi kao referenca) i cisplatin su kupljeni od kompanije SELLECK, i bili su najviše dostupne čistoće. Sva jedinjenja su dostigla rastvorljivost koju imaju u DMSO i kada su razblaživana medijumima za gajenje ćelija. DMSO, rastvori jedinjenja i medijumi za ćelijske kulture su zagrevani do 37°C u cilju pripreme i razblaživanja rastvora.

Test citotoksičnosti

[0121] Preko noći je omogućena adhezija 8 ćelijskih linija za ploče sa 96 bunarčića (100µL/bunarčiću), u cilju tretmana lekovima razblaženim po 3.16 puta, u 9 doznih tačaka, u

2

triplikatima ili sa kontrolom za vehikulum, stok rastvori jedinjenja su pripremljeni u DMSO i dodati u bunarčiće kako bi se dobile naznačene finalne koncentracije lekova. Finalna koncentracija DMSO je iznosila 0.5%. Koncentracije ATP u ćelijama su procenjene pomoću testa CellTiter-Glo Cell Viability Assay po uputstvima proizvođača, 72 h nakon dodavanja leka.

Analize kombinacija

[0122] Preko noći je omogućena adhezija 8 ćelijskih linija za ploče sa 384 bunarčića (60 µL/bunarčiću), u cilju studije na kombinacijama, gde će dva jedinjenja biti ispitana dva puta, uz održavanje fiksirane koncentracije jednog jedinjenja i istovremeno povećavanje koncentracije drugog jedinjenja (razblaženje od 10 puta, 5 doznih tačaka), stok rastvori jedinjenja su pripremljeni u DMSO i pomoću digitalnog dispenzera D300e dodati u bunarčiće kako bi se dobile naznačene finalne koncentracije lekova. Finalna koncentracija DMSO je iznosila 0.5%.

[0123] Koncentracije ATP u ćelijama su procenjene pomoću testa CellTiter-Glo Cell Viability Assay po uputstvima proizvođača, 72 h nakon dodavanja leka.

[0124] Dakle, studija je uključila dva stadijuma:

Stadijum 1: Određivanje IC50 jednog sredstva

[0125] U stadijumu 1 je određena IC50 (koristeći 5 ili više koncentracija) svakog pojedinačnog jedinjenja (cisplatin, gemcitabin i NUC-1031) u relevantnim ćelijskim linijama.

Tabela 1: Najviša koncentracija pojedinačnih sredstava koja su serijski razblažena 3.16 puta u 9 tačaka, i testirana u triplikatima.

Stadijum 2: Kombinovani tretmani

[0126] Stadijum 2 odredio je interakciju odabranih kombinacija jedinjenja i ćelijskog rasta ćelija raka. Ukupno 8 uslova je testirano na relevantnim ćelijskim linijama. Ovo znači da su četiri

2

kombinacije od dva jedinjenja ispitivane dva puta, pri čemu je koncentracija jednog jedinjenja bila fiksirana dok je koncentracija drugog jedinjenja povećavana.

Tabela 2: Plan za tretmane kombinacijom, koji su izvedeni u kvadripletima, 5 tačaka sa razblaženjem od 10 puta.

2.2 Analitičke metode

[0127] Sledeća terminologija će se koristiti kako bi se okarakterisao efekat kombinacija jedinjenja:

• „Sinergija“, definisana na sledeći način: uočeni efekat kombinovanih jedinjenja je jači od efekta predviđenog na osnovu efekata pojedinačnih jedinjenja.

• „Aditivni“ efekat, definisan na sledeći način: uočeni efekat kombinacije jedinjenja jednak predviđanju na osnovu zbira efekata pojedinačnih jedinjenja.

• „Antagonizam“ definisan na sledeći način: značajno slabiji efekat kombinovanih jedinjenja nego predviđanja na osnovu efekata pojedinačnih jedinjenja.

Chou-Talalay metod

[0128] Chou-Talalay metod kombinovanja lekova, zasniva se na jednačini za medijanu efekta, izvedenu na osnovu zakona o delovanju masa, gde dobijene teorema indeksa kombinacije (CI) po Chou-Talalay-u nudi kvantitativnu definiciju za aditivni efekat (CI = 1), sinergizam (CI< 1) u kombinacijama lekova.

Bliss-ov model nezavisnosti

2

[0129] Ovaj metod poredi uočeni odgovor kombinacije (YO) sa predviđenim odgovorom kombinacije (YP), koji se dobija na osnovu pretpostavke da nikakav efekat ne potiče od interakcija lek-lek.

[0130] Pretpostavimo da dva leka, A i B, oba inhibiraju rast tumora: lek A pri dozi a inhibira rast tumora u procentu Ya i lek B pri dozi b inhibira rast tumora u procentu Yb. Ako ova dva leka operišu nezavisno, kombinovana procentualna inhibicija Y<ab>, P može da se predvidi upotrebom potpune aditivnosti prema teoriji verovatnoće kao Y<ab>P =Y<a>+Y<b>-Y<a>Y<b>

Analiza pomaka krive

[0131] Pretpostavlja se da dva leka deluju nezavisno, lek A se održava na fiksiranoj koncentraciji a koncentracija leka B se menja, efekat kombinacije se normalizuje na osnovu fiksirane koncentracije A, porede se krive efekta doze dobijene za lek B, pomak ulevo krivih doza-efekat u odnosu na sinergiju, pomak na desno ukazuje na antagonizam, a preklapanje ukazuje na aditivni efekat.

2.3 Rezultati

Stadijum 1: Test citotoksičnosti sa pojedinačnim sredstvima

[0132] U stadijumu 1 studije citotoksičnosti, pojedinačna sredstva, cisplatin, NUC-1031 i gemcitabin su ispitivana kako bi se dobila informacija o najpogodnijim koncentracijama za rad sa kombinacijama u stadijumu 2.

� Pregled podataka – Sažetak rezultata dobijenih pomoću sve tri analitičke metode

[0133] Tabela 4 u tekstu koji sledi pokazuje ishod analize u kojoj se koriste 3 metode (Chou-Talalay, Bliss-ova nezavisnost i pomak krive, kako bi se okarakterisali efekti kombinacije jedinjenja NUC-1031 i cisplatina.

Tabela 4: Ishod 3 analitičke metodologije korišćene za procenu efekta kombinovanih jedinjenja na rast kancerskih ćelija

[0134] Usklađivanje rezultata između sve tri analitičke metode pokazalo je da se sinergija uočava sa kombinacijama dva jedinjenja pri delovanju na ćelijsku liniju raka HT1376 i ovo je sumirano u tabeli 5.

Tabela 5: Sinergija kombinovanih tretmana uočena sa sve tri metode

2

Rezultati pojedinačnih metodologija

• Podaci analizirani Chou-Talalay metodom [0135] CI < 1, ukazuje na sinergiju

[0136] CI > 1, ukazuje na antagonizam

• Podaci analizirani metodom pomaka krive

[0137] Efekat sinergije prikazan u tekstu koji sledi, za ćelijsku liniju raka bešike HT1376, prikazan je na slici 2

• Podaci analizirani Bliss-ovom nezavisnom metodom

[0138]

4

PRIMER 3 – Dodatna in vitro studija kombinacije NUC-1031 i cisplatina

Ćelijska kultura i reagensi

[0139] SKOV3 ćelije su kupljene od Američke tipske kolekcije kultura (ATCC). Gajene su na 37°C i sa 5% CO2u Gibco™ medijumu RMPI 1640 GlutaMAX™-I (Life Technologies; 61870-010) sa 10% Gibco™ FBS (Life Technologies; 10270-106) i 1% Gibco™ Penicilinstreptomicina (Life Technologies; 15140122), koji je poznat kao kompletni medijum, u flaskovima za ćelijsku kulturu. Cisplatin je kupljen od firme TEVA UK Limited (PL 00289/1146). I Fluvastatin i Sulforafan su kupljeni od kompanije Merck Millipore Corporation (kataloški brojevi 344096 i 574215 redom). (S)-NUC-1031 je obezbedila kompanija NuCana® Ltd.

Ćelijska kultura sa primenama leka

[0140] SKOV3 ćelije su zasejane pri gustini od 250 ćelija u 200µl po bunarčiću, u srednjih 60 bunarčića u pločama sa 96 bunarčića, Costar® 3596, pri čemu je spoljašnjih 36 bunarčića napunjeno sa po 200 µl PBS. Ćelijama je omogućeno da rastu u kompletnom medijumu tokom 48 sati, pre nego što su različita jedinjenja leka dodata. Za pojedinačna sredstva, cisplatin, (S)-NUC-1031, fluvastatin i sulforafan su dodavani u kompletnom medijumu , u 10 različitih koncentracija, u srednjih 60 bunarčića (dan 0). Svaka koncentracija je testirana u šest ponovaka. Ćelije su izložene jedinjenjima tokom 24 sata i jedinjenja su zamenjena čistim kompletnim medijumom. Eksperiment sa fluvastatinom je ponovljen sa izlaganjem od 4 dana umesto 24 sata. Ploče su fiksirane sa 50 µl 25% rastvora TCA na 4°C tokom 60 minuta, 4. dana nakon što su jedinjenja dodata, u cilju izvođenja testa sa saulforodaminom B (videti u tekstu koji sledi).

[0141] Za kombinaciju dva sredstva, različite kombinacije cisplatina i fluvastatina, i dve fiksirane koncentracije cisplatina u kombinaciji sa različitim koncentracijama fluvastatina, zasejane su u ploče sa 96-bunarčića, Costar® 3596, u triplikatima, u srednjih 60 bunarčića. Spoljašnjih 36 bunarčića je napunjeno sa po 200 µl PBS (dan 0). Omogućeno je da ćelije budu izložene jedinjenjima lekova tokom 24 sata, pa su jedinjenja aspirirana i zamenjena čistim kompletnim medijumom na dan 1. Eksperiment je ponovljen sa cisplatinom sa sulforafanom i sa cisplatinom sa (S)-NUC-1031, gde je svaka koncentracija takođe nalivana u triplikatu. Ploče su fiksirane sa 50 µl 25% rastvora TCA na 4°C tokom 60 minuta na dan 4, u cilju izvođenja testa sa saulforodaminom B (videti u tekstu koji sledi).

Kolorimetrijski test sa sulforodaminom B (SRB)

[0142] Posle dodavanja rastvora TCA, ploče su isprane pod mlazom tekuće vode 10 puta i omogućeno je njihovo sušenje u sušnici na 50°C. Ćelije su zatim obojene sa 50 µl SRB boje, i boja je 4 puta isprana sa 1% glacijalnom sirćetnom kiselinom, 30 minuta nakon dodavanja SRB. Ploče su zatim osušene u sušnici. Omogućeno je rastvaranje boje SRB u 150 µl 10mM rastvora Tris pufera tokom 60 minuta na linearnoj mešalici. Ploče su očitane na čitaču mikrotitar ploča Biohit BP800 (Biohit Healthcare) i apsorbancija je merena na 540nm. Rezultati eksperimenata kako za pojedinačna sredstva, tako i za kombinacije, upotrebljeni su za računanje IC50jedinjenja lekova, pomoću softvera Prism Software (GraphPad), što predstavlja koncentraciju leka koja izaziva inhibiciju od 50%. Kao i kod rezultata dobijenih za kombinaciju dva sredstva, ove vrednosti su korišćene za računanje indeksa kombinacije (CI) jedinjenja, koristeći softver CalcuSyn Software (Biosoft).

REZULTATI:

[0143] IC50 cisplatina i sulforafana bile su 2.436 µM i 7.002 µM, redom. IC50 fluvastatina i NUC-1031 nije bilo moguće izračunati zbog toga što su inhibitorni efekti bili neuočljivi. CI vrednosti za cisplatin sa fluvastatinom varirale su od 0.355 do 0.557, pokazujući sinergiju. CI vrednosti za cisplatin sa sulforafanom varirale su od 0.891 do 1.474, pokazujući antagonizam. CI vrednosti za cisplatin sa NUC-1031 pri 0.1 - 0.5 µM i 1 – 2 µM na SKOV3 ćelijama varira od 0.871 do 0.957, i 1.067 do 1.756, redom.

Zaključak

[0144] Sinergistička inhibicija je uočena pri niskim koncentracijama NUC-1031 (0.1 - 0.5 µM) sa cisplatinom na SKOV3 ćelijama, što njegovu kliničku upotrebu čini verovatnijom, pošto niže koncentracije lekova obično produkuju nižu toksičnost. Ovaj rezultat može da posluži kao osnov za dalja ispitivanja preciznih optimalnih doza kombinacija, pre nego što se pristupi testiranju na pacijentima, kako bi se osigurala efikasnost i bezbednost. Personalizovani tretman kod pojedinaca, nakon evaluacije, bio bi optimalan usled raznolikosti genetičkih profila i odgovora na lek, tako da svaki pacijent može da prima optimalne doze lekova.

PRIMER 4 – Farmakokinetička analiza koncentracija dFdCTP iz kliničke studije ABC-008 (NUC-1031 u kombinaciji sa cisplatinom) i poređenje sa rezultatima iz kliničke studije ProGem1 (samo NUC-1031).

[0145] Inicijalna farmakokinetička analiza je sprovedena na uzorcima dobijenim od prva tri pacijenta uključena u kliničku studiju ABC-008.

[0146] Detalji za pacijente su sledeći:

Pacijent 1: starost 71 godina - metastatski karcinom bilijarnog trakta - početna doza: 625mg/m2 (S)-NUC-1031 25mg/m2 cisplatina

Pacijent 2: starost 78 godina - metastatski karcinom bilijarnog trakta - početna doza: 625mg/m2 (S)-NUC-1031 25mg/m2 cisplatina

Pacijent 3: starost 78 godina - metastatski karcinom bilijarnog trakta - početna doza: 625mg/m2 (S)-NUC-1031 25mg/m2 cisplatina

[0147] I NUC-1031 i cisplatin su primenjeni 1. i 8. dana ciklusa od 21 dan.

[0148] Pogodna doza od 625mg/m2 NUC-1031 pripremljena je u luer lok špricu. Data doza se zasnivala na visini i težini subjekta, uz upotrebu standardnog izračunavanja površine tela (BSA). Polietilenski kateter je pripremljen ispiranjem sa najviše 1.5 ml rastvora za ispiranje, pre nego što je sa njim spojen špric koji sadrži NUC-1031.

[0149] Infuziona cev je povezana sa centralnim venskim kateterom (CVAD), i NUC-1031 je injektiran brzinom od 20 ml/sat pomoću špric pumpe.

[0150] Kada je injektiranje završeno, špric sa NUC-1031 je odvojen od katetera i on je zatim ispran dodatnom zapreminom od najviše 3 ml rastvora za ispiranje.

Materijali i metode

1. Materijali

[0151] Referentno jedinjenje dFdCTP dobijeno je od firme Biorbyt, Velika Britanija. Limfoprep od firme STEMCELL Technologies Inc., Velika Britanija. Perhlorna kiselina (PCA), amonijum acetat (NH4Ac) i amonijak su svi dobijeni od firme Sigma Aldrich, Velika Britanija. Voda, metanol, acetonitril i mravlja kiselina sa stepenom čistoće za LC-MS su dobijeni od firme Fisher Scientific, Velika Britanija.

2. Metode

[0152] A. Sakupljanje krvi i preparacija PBMC: 6 ml krvi je sakupljeno pomoću heparinskih epruveta za sakupljanje krvi. Nakon centrifugiranja i odvajanja plazme, penasti sloj je sakupljen i prebačen u novu epruvetu koja je sadržala 3 ml Limfoprep gradijenta gustine. Nakon centrifugiranja, gornja međufaza koja sadrži PBMC, prebačena je u novu epruvetu. Nakon ispiranja fosfatnim puferom (PBS), PBMC su resuspendovane u 100 µl PBS. Zatim je dodato drugih 100 µl 0.8 M PCA i smeša je vorteksovana i centrifugirana nakon čega je 100 µl supernatanta prebačeno u novu epruvetu. PCA ekstrakti su skladišteni na -80°C do momenta kada su analizirani.

[0153] B. Ekstrakcija uzorka (PBMC): PCA ekstrakti su puferovani pomoću 50 µl of 1M NH4Ac, a zatim neutralisani pomoću 20 µl 10% rastvora amonijaka. Na kraju je dodato 5 µl koji su sadržavali unutrašnji standard 8-hloroATP i 5 µl dejonizovane vode. Ekstrakti su prebačeni u vajle za LC-MS i 10 µl je injektirano u UPLC-MS/MS sistem.

3. Hromatografski metod i analiza uzoraka

[0154] Pripremljen je stok rastvor analita, koncentracije 10mg/mL, i alikvoti su zamrznuti na -80°C do trenutka upotrebe. Analit je razdvojen upotrebom sistema tečne hromatografije visokog učinka (Accela UPLC, Thermo Scientific, Velika Britanija) opremljenog kolonom Biobasic AX, 5 µm, 50 × 2.1 mm (Thermo Electron Corporation, Murrieta, CA, SAD) i mobilne faze koja se sastojala od smeše 10 mM NH4Ac u ACN/H2O (30 : 70 zap./zap.), pH 6.0 (A), i 1 mM NH4Ac u ACN/H2O (30 : 70 zap./zap.), pH 10.5 (B). Korišćen je gradijent mobilne faze, uključujući: pufer A = 95% na 0 - 0.5 min, od 95 do 0% tokom 1.25 minuta, zadržavanje na 0% tokom 1.75 minuta, od 0 do 95% za 0.1 minuta, završavajući sa 95% tokom 2.9 minuta, sve to pri brzini protoka od 500 µl/min.

4. Metod masene spektrometrije

[0155] Eluirana jedinjenja od interesa su detektovana pomoću Vantage sistema za masenu spektrometriju (Thermo Scientific, Velika Britanija) sa trostrukim kvadrupolom i sa izvorom elektrosprej jona. Uzorci su analizirani praćenjem višestrukih reakcija (MRM), u pozitivnim (+ve) i negativnim (-ve) jonskim modovima, pri naponu spreja od 3500 i 3000 V, redom. Azot je korišćen kao noseći i pomoćni gas, pri brzini protoka od 50 i 20 arbitrarnih jedinica, redom. Argon je korišćen kao kolizioni gas sa pritiskom od 1.5 mTorr.

Rezultati

[0156] Inicijalni rezultati su predstavljeni u tabelama 9 i 10

Tabela 10: Poređenje srednje vrednosti PK parametara iz ProGem1 i ABC-008 studija

Diskusija

[0157] PK parametri NUC-1031 u plazmi pokazali su povećanje AUC od 2.1 puta i povećanje Cmaxod 1.9 puta u poređenju sa ProGem1 (prva studija faze jedan, sprovedena na ljudima, sa samo jednim sredstvom, NUC-1031). PK parametri NUC-1031 u plazmi takođe su pokazali povećanje polu-života od 3.6 puta u poređenju sa NUC-1031 kao jedinim sredstvom.

[0158] Unutarćelijski parametri dFdCTP (aktivna antikancerska komponenta) bili su veoma slični kao i u ProGem1, sa uočljivim izuzetkom t1/2koje je duže. Ovo duže t1/2može da bude posledica održavanja viših nivoa unutarćelijskog dFdCTP tokom perioda od 4 sata koliko traje uzimanje uzoraka za PK. Sinergija uočena za nivoe dFdCTP nakon tretmana sa NUC-1031 sa cisplatinom ima značajne potencijalne kliničke implikacije, uključujući širu kliničku primenjivost za lečenje kancera, kada su visoki nivoi dFdCTP neophodni tokom dužih vremenskih perioda kako bi se blokirao rast tumora, kao i za lečenje rekurentnih kancera nakon upotrebe samo jednog sredstva.

[0159] Treba istaći da produženo vreme poluživota dFdCTP, uočeno prilikom tretmana u kojima su korišćene kombinacije gemcitabin-[fenil-benzoksil-L-alaninil]-fosfata, njegovog solvata, sa ovde opisanim antikancerskim sredstvima na bazi platine, obezbeđuje prednosti prilikom lečenja raka, u nekolicini konteksta. Glavna prednost se uočava u fleksibilnosti doziranja koju obezbeđuje ovo produženo vreme polu-života. Na primer, ovakve medicinske upotrebe omogućavaju efikasne režime lečenja kod kojih su učestalosti tretmana u kojima se koriste aktivna sredstva manje od onih tretmana koji se trenutno koriste. Samo kao primeri, tretmani prema pronalasku mogu da se obezbede za pacijenta sa isključivo jednom primenom dnevno, umesto da tokom dana bude neophodno više primena. Učestalost tretmana, na primer takvi jednokratni tretmani, pogodno može da zahteva relativno brzo obezbeđivanje aktivnih sredstva, umesto produžene primene, na primer putem infuzije. Gemcitabin-[fenil-benzoksil-L-alaninil]-fosfat, i antikancersko sredstvo na bazi platine sa kojim se on koristi, mogu da budu formulisani (bilo u kombinaciji ili pojedinačno) u vidu medikamenta za jednu primenu u toku dana, kod pacijenta. Medikamenti ovog tipa, za jednu primenu dnevno, mogu da budu korisni za lečenje rekurentnih kancera.

[0160] Tretmani u skladu sa pronalaskom, upotrebom gemcitabin-[fenil-benzoksil-L-alaninil]-fosfata u kombinaciji sa antikancerskim sredstvom na bazi platine, u kombinaciji ili sekvencijalno, mogu da se koriste kao obezbeđeni tretmani sa učestalošću na svaka dva dana, svaka tri dana, svaka četiri dana, svakih pet dana, svakih šest dana ili svakih nedelju dana. U stvari, tretmani u skladu sa pronalaskom mogu da se koriste kao obezbeđeni tretmani sa učestalostima koje se nalaze na razmaku od jedne, dve ili tri nedelje jedne od drugih.

PRIMER 5 - Poređenje ključnih vremenskih tačaka preživljavanja bez progresije, do sada dobijenih u studiji ABC-08 i povezanih radioloških odgovora, sa medijanama vremenskih tačaka koje su za preživljavanje bez progresije ustanovljene u studiji ABC-02, za terapiju Gemcitabinom kao jedinim sredstvom i kombinacijom Gemcitabin/Cisplatin.

Osnovne informacije o studiji ABC-02:

[0161] Studija ABC-02 ustanovila je kombinaciju Gemcitabin/Cisplatin kao superiorni standard u lečenju u poređenju sa samim Gemcitabinom, u okruženju metastatske bilijarne bolesti. Ustanovljena medijana preživljavanja bez progresije kod pacijenata koji su primali Gemcitabin/Cisplatin, iznosila je 8 meseci. Ustanovljena medijana preživljavanja bez progresije kod pacijenata koji su primali Gemcitabin kao terapiju samo jednim sredstvom, iznosila je 5 meseci. (Valle J, Wasan H, Palmer DH et al u 2010.)

Poređenje sa ABC-08:

[0162] Vremenske tačke preživljavanja bez progresije koje su do sada dobijene u studiji ABC-08 premašile su medijane kako za Gemcitabin kao jedino sredstvo, tako i za kombinovanu terapiju Gemcitabinom/Cisplatinom. Konkretni slučajevi se navode u tekstu koji sledi:

4

Pacijent 02: - zabeleženo je smanjenje od 60% sa NUC-1031 dozom od 375mg/m<2>i prateće smanjenje od 25% sa cisplatinom. Bez obzira na to, kako se detaljno navodi u daljem tekstu, nastavila je da se uočava serija produženih smanjenja zapremine tumora.

[0163] Pacijent je dostigao vremensku tačku preživljavanja bez progresije od 9 meseci, a preživljavanje i dalje traje. Ovo predstavlja najdužu vremensku tačku preživljavanja bez progresije uočenu u studiji ABC-08 i trenutno premašuje medijanu ustanovljenu u studiji ABC-02.

[0164] Kod ovog pacijenta su putem više različitih radioloških procena pokazana produžena smanjenja zapremine tumora koja i dalje traju.

• Snimanje posle 3 meseca: smanjenje od 17% – stabilna bolest

• Snimanje posle 6 meseci: smanjenje od 24% - stabilna bolest

• Snimanje posle 9 meseci: smanjenje od 41% - delimični odgovor.

[0165] Pacijent 05 - starost 55 godina - metastatski karcinom bilijarnog trakta - početna doza: 625 mg/m2 (S)-NUC-1031 25mg/m2 cisplatina

[0166] Kod ovog pacijenta je dostignuta vremenska tačka preživljavanja bez progresije od 5.5 meseci i preživljavanje se nastavlja, čime je premašena medijana vremenske tačka preživljavanja bez progresije od 5 meseci, ustanovljena za pacijente koji primaju Gemcitabin kao jedino sredstvo.

[0167] Kod ovog istog pacijenta pokazano je značajno smanjenje zapremine tumora prilikom prve radiološke procene:

• Snimak posle 3 meseca: smanjenje od 54% - delimični odgovor.

[0168] Iako potiču od pojedinačnih pacijenata, ovi rezultati predstavljaju obećavajuće kliničke rezultate u vezi sa kombinacijom prema pronalasku.

Claims

Patentni zahtevi

1. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili solvat za upotrebu u lečenju raka u kombinaciji sa antikancerskim sredstvom na bazi platine odabranim od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina.

2. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što antikancersko sredstvo na bazi platine predstavlja cisplatin.

3. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, naznačen time što gemcitabin-[fenilbenzoksi-L-alaninil)]-fosfat predstavlja gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-(S)-fosfat u esencijalno dijastereoizomerno čistom obliku.

4. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, naznačen time što gemcitabin-[fenilbenzoksi-L-alaninil)]-fosfat predstavlja smešu fosfatnih dijastereoizomera.

5. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, naznačen time što je gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat u obliku slobodne baze.

6. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačen time što se gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat primenjuje intravenski.

7. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, naznačen time što kancer predstavlja čvrsti tumor, npr. kancer odabran od raka jajnika, raka bešike i kancera bilijarnog trakta.

8. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, naznačen time što kancer predstavlja kancer bilijarnog trakta, npr. kancer odabran od raka žučna kese, kancera distalnog žučnog kanala, ampularnog kancera, hilarnog holangiokarcinoma i intrahepatičnog holangiokarcinoma.

9. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, naznačen time što je kancer rekurentan.

10. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, naznačen time što je kancer metastatski.

11. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10, naznačen time što je kancer refraktoran, rezistentan ili delimično rezistentan na antikancersko sredstvo na bazi platine.

12. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, naznačen time što je kancer osetljiv na antikancersko sredstvo na bazi platine.

13. Gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12, naznačen time što doza gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfata primenjena prilikom svake pojedinačne primene iznosi između 250 mg/m<2>i 1250 mg/m<2>, a doza antikancerskog sredstva na bazi platine, primenjena prilikom svake pojedinačne primene, iznosi između 10 mg/m<2>i 200 mg/m<2>.

14. Antikancersko sredstvo na bazi platine odabrano od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina, za upotrebu u lečenju raka u kombinaciji sa gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfatom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju ili solvatom.

15. Farmaceutska formulacija koja sadrži gemcitabin-[fenil-benzoksi-L-alaninil)]-fosfat, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili solvat, zajedno sa antikancerskim sredstvom na bazi platine, odabranim od cisplatina, pikoplatina, lipoplatina i triplatina, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

16. Kit koji sadrži dve odvojene formulacije koje se koriste zajedno, pri čemu su formulacije:

4