RS60257B1 - Makrociklički mcl1 inhibitori za tretman raka - Google Patents

Description

Opis

Stanje tehnike

[0001] Leukemija mijeloidnih ćelija 1 (Mcl-1) je važan anti-apoptotski član BCL-2 porodice proteina i glavni regulator ćelijskog opstanka. Amplifikacija MCL1 gena i/ili prekomerno eksprimiranje Mcl-1 proteina primećeni su kod više vrsta raka, i obično su uključeni u razvoj tumora. U stvari, MCL1 je jedan od najčešće amplifikovanih gena kod ljudskog raka. U mnogim malignim bolestima Mcl-1 je kritični faktor preživljavanja, i pokazalo se da posreduje kod otpornosti na lekove za razne agense protiv raka.

[0002] Mcl-1 pospešuje opstanak ćelija vezivanjem na pro-apoptotske proteine poput Bim, Noxa, Bak, i Bax, i neutralizovanjem njihove aktivnosti izazivanja smrti. Inhibicija Mcl-1 stoga oslobađa ove pro-apoptotske proteine, što često dovodi do indukcije apoptoze u ćelijama tumora čije preživljavanje zavisi od Mcl-1. Zbog toga, terapeutsko ciljanje Mcl-1, samog ili u kombinaciji sa drugim terapijama, je obećavajuća strategija za tretman mnoštva malignih oboljenja i prevazilaženje otpornosti na lekove kod mnogih ljudskih rakova.

Sažetak

[0003] U jednom otelotvorenju, obelodanjena je 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

tridekaen-23-karboksilna kiselina (Formula I)

[0004] U jednom otelotvorenju, obelodanjena je (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina (Formula II)

ili njena farmaceutski prihvatljiva so.

[0005] U jednom otelotvorenju, obelodanjeno je jedinjenje koje je (Sa)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

-tridekaen-23-karboksilna kiselina (Formula III)

ili njena farmaceutski prihvatljiva so.

[0006] U jednom otelotvorenju, obelodanjen je čvrst oblik (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline (Formula II), ili njena farmaceutski prihvatljiva so.

[0007] U jednom otelotvorenju, obelodanjen je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski ekscipijens, nosač ili razblaživač.

[0008] U jednom otelotvorenju, obelodanjeno je jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu raka.

Kratak opis Slika

[0009]

Slika 1 ilustruje dijagram praškaste difrakcije X-zraka Oblika A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 2 ilustruje diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC) i termogravimetrijsku analizu (TGA) tragova Oblika A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 3 ilustruje dijagram praškaste difrakcije X-zraka Oblika C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 4 ilustruje diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC) i termogravimetrijsku analizu (TGA) tragova Oblika C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 5 ilustruje dijagram praškaste difrakcije X-zraka Oblika D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 6 ilustruje diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC) i termogravimetrijsku analizu (TGA) tragova Oblika D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 7 ilustruje dijagram praškaste difrakcije X-zraka Oblika E (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 8 ilustruje dijagram praškaste difrakcije X-zraka Oblika F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22

pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 9 ilustruje diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC) i termogravimetrijsku analizu (TGA) tragova Oblika F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 10 ilustruje dijagram praškaste difrakcije X-zraka natrijumove soli (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 11 ilustruje diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC) i termogravimetrijsku analizu (TGA) tragova natrijumove soli (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 12 ilustruje dijagram praškaste difrakcije X-zraka megluminske soli (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slika 13 ilustruje diferencijalnu skenirajuću kalorimetriju (DSC) i termogravimetrijsku analizu (TGA) tragova megluminske soli (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

Slike 14 ilustruju dozno-zavisnu anti-tumorsku aktivnost Primera 2 kod miševa koji nose MOLP-8 tumor.

Slike 15 ilustruju anti-tumorsku aktivnost Primera 2 u kombinaciji sa bortezomibom kod miševa koji nose NCI-H929 tumor.

Slika 16 ilustruje regresiju tumora indukovanu Primerom 2 kod miševa koji nose MV-4-11 tumor.

Detaljan opis

Jedinjenja

[0010] U jednom otelotvorenju, obelodanjena je 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina (Formula I)

ili njena farmaceutski prihvatljiva so. U nekim aspektima, obelodanjena je 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina. U nekim aspektima, obelodanjena je farmaceutski prihvatljiva so 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

[0011] U nekim otelotvorenjima, obelodanjena je (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

tridekaen-23-karboksilna kiselina (Formula II)

ili njena farmaceutski prihvatljiva so. U nekim aspektima, obelodanjena je (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina. U nekim aspektima, obelodanjena je farmaceutski prihvatljiva so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

[0012] U nekim otelotvorenjima, obelodanjena je (Sa)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

-tridekaen-23-karboksilna kiselina (Formula III)

ili njena farmaceutski prihvatljiva so. U nekim aspektima, obelodanjena je (Sa)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina. U nekim aspektima, obelodanjena je farmaceutski prihvatljiva so (Sa)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

[0013] Izraz „farmaceutski prihvatljiva so“ uključuje adicione kisele ili bazne soli koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva jedinjenja Formule (I), (II) i (III), i koje obično nisu biološki ili na drugi način nepoželjne. U mnogim slučajevima, jedinjenja Formule (I), (II) i (III) mogu da formiraju kisele i/ili bazne soli zahvaljujući prisustvu baznih i/ili karboksilnih grupa, ili grupa sličnih njima. U jednom otelotvorenju, farmaceutski prihvatljiva so uključuje kvartarne amonijum soli.

[0014] Farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli mogu se formirati sa neorganskim kiselinama i organskim kiselinama, npr. soli acetata, aspartata, benzoata, besilata, bromid/hidrobromida, bikarbonat/karbonata, bisulfat/sulfata, kamforsulfonata, hlorida/hidrohlorida, hlorteofilonata, citrata, etanedisulfonata, gluceptata, glukonata, glukuronata, hipurata, hidroiodida/jodida, izetionata, laktata, laktobionata, laurilsulfata, malata, maleata, malonata, mandelata, mezilata, metilsulfata, naftoata, napsilata, nikotina, nitrata, oktadekanoata, oleata, oksalata, palmitata, palmoata, fosfata/hidrogen fosfata/dihidrogen fosfata, poliglakturonata, propionata, stearata, sukcinata, subalicilata, sulfata/hidrogenisulfata, tartarata, tozilata i trifluoroacetata. Neorganske kiseline od kojih se mogu dobiti soli uključuju, na primer, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, fosfornu kiselinu i slično. Organske kiseline iz kojih se mogu dobiti soli uključuju, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malononsku kiselinu, sukcinsku kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzojevu kiselinu, mandelinsku kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, toluensulfonsku kiselinu, trifluorosirćetnu kiselinu, sulfosalicilnu kiselinu i slično.

[0015] Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli mogu se formirati sa neorganskim i organskim bazama. Neorganske baze od kojih se mogu dobiti soli uključuju, na primer, amonijak i soli amonijuma i metale iz kolona I do XII periodnog sistema elemenata. U nekim otelotvorenjima, soli se dobijaju od natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, gvožđa, srebra, cinka i bakra; naročito pogodne soli uključuju soli amonijuma, kalijuma, natrijuma, kalcijuma i magnezijuma. Organske baze od kojih se mogu dobiti soli uključuju, na primer, primarne, sekundarne i tercijarne amine, supstituisane amine uključujući prirodne supstituisane amine, ciklične amine, bazne jono-razmenjivačke smole i slično. Određeni organski amini uključuju izopropilamin, benzatin, holatin, dietanolamin, dietilamin, lizin, meglumin, piperazin i trometamin. U nekim aspektima, farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja Formule (I), (II) ili (III) je natrijumova so. U nekim aspektima, farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja Formule (I), (II) ili (III) je megluminska so.

[0016] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja Formule (I), (II) ili (III) mogu se sintetisati iz bazne ili kisele grupe uobičajenim hemijskim postupcima. Uopšteno, takve soli se mogu pripremiti reakcijom slobodnih kiselih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze (kao što su Na<+>, Ca<2+>, Mg<2+>, or K<+>hidroksid, karbonat, bikarbonat ili slično), ili reakcijom oblika slobodnih baza ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće kiseline. Takve reakcije se obično izvode u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u mešavini njih dva. Generalno, poželjna je upotreba nevodenog medijuma poput etra, etil acetata, etanola, izopropanola ili acetonitrila, gde je to moguće. Liste dodatnih pogodnih soli mogu se naći, na primer, u „Remington's Pharmaceutical Sciences,“ 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); Berge et al., „J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 i „Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use“ by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).

[0017] Sve ovde date formule su takođe namenjene da predstave neoznačene oblike kao i izotopski označene oblike za jedinjenje Formule (I), (II) ili (III). Izotopsko označena jedinjenja imaju strukture prikazane ovde datim formulama, osim što su jedan ili više atoma zamenjeni atomom istog elementa, ali sa različitim masenim brojem. Primeri izotopa koji se mogu ugraditi u jedinjenja Formule (I), (II) i (III) i njihove soli uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<35>S i<125>I. Jedinjenja Formule (I), (II) i (III) mogu da sadrže različita izotopno označena jedinjenja u kojima su prisutni radioaktivni izotopi, kao što su<3>H,<11>C,<14>C,<35>S i<36>Cl. Izotopno označena jedinjenja Formule (I), (II) i (III) mogu se uglavnom pripremiti konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima ili postupcima analognim onim opisanim u pratećim primerima, koristeći odgovarajuće izotopno označene reagense umesto prethodno neoznačenih reagenasa.

[0018] Jedinjenja Formule (I), (II) i (III) mogu imati različite izomerne oblike. Izraz „optički izomer“ ili „stereoizomer“ odnosi se na bilo koju od različitih stereoizomernih konfiguracija koje mogu postojati za dato jedinjenje Formule (I), (II) ili (III). Naročito, jedinjenja Formule (I), (II) ili (III) poseduju aksijalnu hiralnost, zahvaljujući ograničenoj rotaciji oko biarilne veze, i kao takva mogu postojati kao smeše enantiomera/atropizomera sa enantiomernim viškom između oko 0% i > 98% ee. Kada je jedinjenje čisti enantiomer, stereohemija u svakom hiralnom centru se može označiti pomoću Raili Sa. Takve oznake se takođe mogu koristiti za smeše koje su obogaćene jednim enantiomerom. Dalji opis atropizomerizma i aksijalne hiralnosti i pravila za dodelu konfiguracije može se pronaći kod Eliel, E.L. & Wilen, S. H. 'Stereochemistry of Organic Compounds' John Wiley and Sons, Inc.1994. Rastvorena jedinjenja čija apsolutna konfiguracija nije poznata mogu se označiti kao (+) ili (-), u zavisnosti od smera (dekstro- ili levorotatorno) kojim rotiraju ravnomerno polarizovano svetlo na talasnoj dužini natrijum D linije. Predmetno obelodanjenje obuhvata sve takve moguće izomere, uključujući racemske smeše, optički čiste oblike i međuproizvodne smeše. Optički aktivni (Ra)- i (Sa)-izomeri se mogu pripremiti upotrebom hiralnih sintona, hiralnih reagensa ili hiralnih katalizatora, ili rastvoriti pomoću uobičajenih tehnika dobro poznatih u struci, kao što je hiralna HPLC.

[0019] Ovde su takođe obelodanjeni Međuproizvodi 1-25 u Primerima, kao i njihove soli.

Čvrsti oblici

[0020] U nekim otelotvorenjima, obelodanjeni su čvrsti oblici jedinjenja Formule (I), (II) i (III), ili njihova farmaceutski prihvatljiva so. Izraz „čvrsti oblik“ uključuje polimorfe, kristalne soli, solvate, hidrate i amorfne oblike jedinjenja Formule (I), (II) ili (III). Izraz „polimorf“ uključuje kristalne materijale koji imaju isti hemijski sastav, ali različito molekularno pakovanje. Izraz „kristalna so“ uključuje kristalne strukture sa istim hemijskim materijalima, ali koje uključuju kisele ili bazne adicione soli unutar molekularnog pakovanja kristalne strukture. Izraz „solvat“ uključuje kristalne strukture istog hemijskog materijala, ali koje uključuju molekule rastvarača unutar molekularnog pakovanja kristalne strukture. Izraz „hidrati“ uključuje kristalne strukture istog hemijskog materijala, ali koje uključuju molekule vode unutar molekularnog pakovanja kristalne strukture. Izraz „amorfni oblik“ uključuje jedinjenja istog molekularnog materijala, ali bez molekularnog reda kristalne strukture (npr. polimorfne, kristalne soli, solvat ili hidrat) istog molekularnog materijala.

[0021] Opšte je poznato da se čvrsti materijali mogu okarakterisati konvencionalnim tehnikama kao što su praškasta difrakcija X-zraka (XRPD), diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC), termička gravimetrijska analiza (TGA), difuzna refleksna infracrvena Fourier transformacija (DRIFT), blizu-infracrvena (NIR) spektroskopija, spektroskopija nuklearne magnetne rezonance rastvora i/ili čvrstog stanja. Sadržaj vode u takvim čvrstim materijalima može se odrediti pomoću Karl Fischer analize.

[0022] Ovde opisani čvrsti oblici primenjuju XRPD dijagrame koji su u osnovi isti kao XRPD obrasci prikazani na Slikama, i imaju različite 2-teta (2θ) vrednosti kao što je prikazano u ovde uključenim Tabelama. Stručnjak će razumeti da se mogu dobiti XRPD dijagram ili difraktogram koji imaju jednu ili više mernih grešaka u zavisnosti od uslova snimanja, kao što su oprema ili mašina koja se koristi. Slično tome, opšte je poznato da intenziteti u XRPD dijagramu mogu da variraju u zavisnosti od uslova merenja ili pripreme uzorka kao rezultat poželjne orijentacije. Stručnjaci u oblasti XRPD će dalje shvatiti da na relativni intenzitet vrhova takođe može uticati, na primer, zrno veličine veće od 30 µm i neunitarni odnosi veličina. Stručnjak razume da na položaj refleksije može uticati tačna visina na kojoj uzorak stoji u difraktometru, kao i nulta kalibracija difraktometra. Površinska ravnina uzorka takođe može imati mali efekat.

1

[0023] Kao rezultat ovih razmatranja, predstavljene podatke difrakcionih dijagrama ne treba uzimati kao apsolutne vrednosti (Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography', Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), 'X-Ray Diffraction Procedures'). Takođe treba razumeti da čvrsti oblici koji su ovde predstavljeni nisu ograničeni na one koji pružaju XRPD dijagrame koji su identični XRPD dijagramu prikazanom na Slikama, i bilo koji čvrsti oblici koji pružaju XRPD dijagrame značajno iste kao što su oni prikazani na slikama su u okviru obima odgovarajućeg otelotvorenja. Stručnjak u oblasti XRPD je u stanju da proceni značajno identičnost XRPD dijagrama. Generalno, greška merenja difrakcionog ugla u XRPD iznosi približno 2θ (± 0,2°), i takav stepen greške u merenju treba uzeti u obzir pri razmatranju dijagrama praškaste difrakcije X-zraka na Slikama i pri čitanju podataka sadržanih u Tabelama koje su ovde uključene.

[0024] Stručnjak takođe razume da će vrednost ili raspon vrednosti primećeni u DSC termogramu određenog jedinjenja pokazati varijacije između serija različitih čistoća. Prema tome, dok za jedno jedinjenje raspon može biti mali, za druge raspon može biti prilično veliki. Generalno, greška merenja difrakcionog ugla u DSC termičkim događajima iznosi otprilike plus ili minus 5°C, i takav stepen merne greške trebalo bi uzeti u obzir kada se ovde razmatraju DSC podaci. TGA termogrami pokazuju slične varijacije, tako da stručnjak prepoznaje da bi greške u merenju trebalo uzeti u obzir prilikom procenjivanja značajne identičnosti TGA termograma.

[0025] U nekim otelotvorenjima, obelodanjen je čvrsti oblik (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli.

[0026] U nekim otelotvorenjima, obelodanjen je amofrni oblik (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli.

Oblik A

[0027] U nekim otelotvorenjima, obelodanjen je Oblik A monohidrata(Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

[0028] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na 7,0°.

[0029] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na 8,4°.

[0030] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na 12,5°.

[0031] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata(Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na 7,0° i 8,4°.

[0032] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata(Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na 7,0° i 12,5°.

[0033] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na 8,4° i 12,5°.

[0034] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na 7,0°, 8,4° i 12,5°.

[0035] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata(Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od 5,4°, 7,0°, 8,4°, 10,7°, 12,5°, 13,1°, 14,4°, 15,1°, 15,6°, 17,1° i 18,2°.

[0036] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od vrhova navedenih u Tabeli 2.

[0037] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram značajno sličan Slici 1.

1

[0038] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom desolvacije na oko 121°C, i vrhom na oko 152°C.

[0039] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom topljenja/razgradnje na oko 181°C, i vrhom na oko 194°C.

[0040] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC dijagram značajno sličan Slici 2.

[0041] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA termogram koji ispoljava gubitak mase od oko 4,0% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 160°C.

[0042] U nekim otelotvorenjima, Oblik A monohidrata(Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA dijagram značajno sličan Slici 2.

Oblik B

[0043] U nekim otelotvorenjima, obelodanjen je Oblik B metanol solvata (Ra)-17-hloro5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

Oblik C

[0044] U nekim otelotvorenjima, obelodanjen je Oblik C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

[0045] U nekim otelotvorenjima, Oblik C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od oko 5,1°, 6,8°, 8,1°, 10,1°, 12,0°, 14,1°, 14,8°, 15,3°, 16,5° i 17,2°.

[0046] U nekim otelotvorenjima, Oblik C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od vrhova navedenih u Tabeli 3.

[0047] U nekim otelotvorenjima, Oblik C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram značajno sličan Slici 3.

[0048] U nekim otelotvorenjima, Oblik C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom desolvacije na oko 123°C, i vrhom na oko 140°C.

[0049] U nekim otelotvorenjima, Oblik C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

1

1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom topljenja/razgradnje na oko 185°C, i vrhom na oko 196°C.

[0050] U nekim otelotvorenjima, Oblik C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC dijagram značajno sličan Slici 4.

[0051] U nekim otelotvorenjima, Oblik C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA termogram koji ispoljava gubitak mase od oko 6,4% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 160°C.

[0052] U nekim otelotvorenjima, Oblik C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA dijagram značajno sličan Slici 4.

Oblik D

[0053] U nekim otelotvorenjima, obelodanjen je Oblik D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

[0054] U nekim otelotvorenjima, Oblik D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od oko 5,7°, 8,0°, 11,7°, 13,4°, 14,7°, 16,5°, 18,5°, 19,5° i 21,9°.

[0055] U nekim otelotvorenjima, Oblik D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD

1

dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od vrhova navedenih u Tabeli 4.

[0056] U nekim otelotvorenjima, Oblik D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram značajno sličan Slici 5.

[0057] U nekim otelotvorenjima, Oblik D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom topljenja na oko 156°C, i vrhom na oko 175°C.

[0058] U nekim otelotvorenjima, Oblik D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC dijagram značajno sličan Slici 6.

[0059] U nekim otelotvorenjima, Oblik D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA termogram koji ispoljava gubitak mase od oko 3,6% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 170°C.

[0060] U nekim otelotvorenjima, Oblik D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA dijagram značajno sličan Slici 6.

Oblik E

[0061] U nekim otelotvorenjima, obelodanjen je Oblik E (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

1

[0062] U nekim otelotvorenjima, Oblik E (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od oko 8,3°, 10,2°, 11,6°, 12,6°, 13,9°, 14,9°, 16,0°, 16,5°, 17,5° i 18,6°.

[0063] U nekim otelotvorenjima, Oblik E (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od vrhova navedenih u Tabeli 5.

[0064] U nekim otelotvorenjima, Oblik E (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram značajno sličan Slici 7.

Oblik F

[0065] U nekim otelotvorenjima, obelodanjen je Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

[0066] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata(Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na oko 7,9°.

[0067] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na oko 11,9°.

1

[0068] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na oko 17,0°.

[0069] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na oko 7,9° i 11,9°.

[0070] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na oko 7,9° i 17,0°.

[0071] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na oko 11,9° i 17,0°.

[0072] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) na oko 7,9°, 11,9° i 17,0°.

[0073] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

1

1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od oko 5,4°, 7,9°, 10,6°, 11,9°, 12,9°, 14,3°, 14,9°, 15,7°, 17,0° i 18,9°.

[0074] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od vrhova navedenih u Tabeli 6.

[0075] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram značajno sličan Slici 8.

[0076] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom desolvacije na oko 40°C, i vrhom na oko 67°C.

[0077] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom topljenja/razgradnje na oko 185°C, i vrhom na oko 195°C.

[0078] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

2

1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC dijagram značajno sličan Slici 9.

[0079] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA termogram koji ispoljava gubitak mase od oko 4,3% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 100°C.

[0080] U nekim otelotvorenjima, Oblik F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA dijagram značajno sličan Slici 9.

Natrijumova so

[0081] U nekim otelotvorenjima, obelodanjena je natrijumova so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

[0082] U nekim otelotvorenjima, natrijumova so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od oko 10,7°, 11,5°, 13,4°, 15,3°, 16,3°, 18,0°, 18,6°, 19,2°, 19,9° i 23,2°.

[0083] U nekim otelotvorenjima, natrijumova so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od vrhova navedenih u Tabeli 7.

[0084] U nekim otelotvorenjima, natrijumova so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram značajno sličan Slici 10.

[0085] U nekim otelotvorenjima, natrijumova so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa širokim početkom desolvacije na oko 100°C do oko 200°C. U nekim otelotvorenjima, natrijumova so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom topljenja/razgradnje na oko 239°C, i vrhom na oko 246°C.

[0086] U nekim otelotvorenjima, natrijumova so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC dijagram značajno sličan Slici 11.

[0087] U nekim otelotvorenjima, natrijumova so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA termogram koji ispoljava gubitak mase od oko 4,0% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 175°C.

[0088] U nekim otelotvorenjima, natrijumova so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22

pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA dijagram značajno sličan Slici 11.

Megluminska so

[0089] U nekim otelotvorenjima, obelodanjena je megluminska so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline.

[0090] U nekim otelotvorenjima, megluminska so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od oko 6,3°, 7,6°, 8,5°, 9,2°, 11,8°, 12,9°, 14,3°, 15,7° i 18,2°.

[0091] U nekim otelotvorenjima, megluminska so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram koji obuhvata bar jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) izabran od vrhova navedenih u Tabeli 8.

[0092] U nekim otelotvorenjima, megluminska so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima XRPD dijagram značajno sličan Slici 12.

[0093] U nekim otelotvorenjima, megluminska so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom desolvacije na oko 69°C, i vrhom na oko

2

88°C. U nekim otelotvorenjima, megluminska so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC termogram koji obuhvata endoterm sa početkom topljenja/razgradnje na oko 102°C, i vrhom na oko 104°C.

[0094] U nekim otelotvorenjima, megluminska so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima DSC dijagram značajno sličan Slici 13.

[0095] U nekim otelotvorenjima, megluminska so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA termogram koji ispoljava gubitak mase od oko 10,6% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 150°C.

[0096] U nekim otelotvorenjima, megluminska so (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline ima TGA dijagram značajno sličan Slici 13.

Farmaceutski sastavi

[0097] U nekim otelotvorenjima, obelodanjeni su farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje Formule (I), (II) i (III) i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili razblaživač.

[0098] Izraz „farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili razblaživač“ uključuje jedinjenja, materijale, sastave i/ili oblike doziranja koji su, unutar raspona zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u dodiru sa tkivima ljudi i životinja bez preterane toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora ili drugog problema ili komplikacije, kako je utvrđeno od strane stručnjaka.

[0099] Obelodanjeni sastavi mogu biti u obliku pogodnom za oralnu upotrebu (na primer, u obliku tableta, pastila, tvrdih ili mekih kapsula, vodenih ili uljnih suspenzija, emulzija, disperzivnih prašaka ili granula, sirupa ili eliksira), za lokalnu upotrebu (na primer, kao kreme, masti, gelovi ili vodeni ili masni rastvori ili suspenzije), za primenu inhalacijom (na primer, u obliku fino podeljenog praška ili tečnog aerosola), za primenu inhalacijom (na primer, u obliku fino podeljenog praška) ili za parenteralnu primenu (na primer, kao sterilni vodeni ili masni rastvor za intravensko, subkutano, intramuskularno ili intramuskularno doziranje, ili kao supozitorijum za rektalno doziranje).

[0100] Obelodanjeni sastavi mogu se dobiti konvencionalnim postupcima upotrebom uobičajenih farmaceutskih ekscipijenasa dobro poznatih u struci. Prema tome, sastavi namenjeni oralnoj upotrebi mogu da sadrže, na primer, jedan ili više agenasa za bojenje, zaslađivanje, arome i/ili konzervanse.

[0101] Pogodni farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi za formulaciju tableta uključuju, na primer, inertne razblaživače kao što su laktoza, natrijum karbonat, kalcijum fosfat ili kalcijum karbonat; agensi za granulaciju i razgradnju kao što su kukuruzni skrob ili algininska kiselina; agense za vezivanje kao što je skrob; lubrikante kao što su magnezijum stearat, stearinska kiselina ili talk; konzervanse kao što su etil ili propil p-hidroksibenzoat; i antioksidante, kao što je askorbinska kiselina. Formulacije tableta mogu biti premazane ili obložene, bilo da modifikuju svoju razgradnju i posledičnu apsorpciju aktivnog sastojka u gastrointestinalnom traktu, ili da poboljšaju svoju stabilnost i/ili izgled korišćenjem konvencionalnih agenasa za oblaganje i postupaka dobro poznatih u struci.

[0102] Sastavi za oralnu upotrebu mogu biti u obliku tvrdih želatinskih kapsula u kojima je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim razblaživačem, na primer, kalcijum karbonatom, kalcijum fosfatom ili kaolinom, ili kao meke želatinske kapsule u kojima je aktivni sastojak pomešan sa vodom ili uljem, poput ulja kikirikija, tečnog parafina ili maslinovog ulja.

[0103] Vodene suspenzije uglavnom sadrže aktivni sastojak u obliku finog praška ili u obliku nano ili mikronizovanih čestica zajedno sa jednim ili više agenasa za suspendovanje, kao što su natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza, natrijum

2

alginat, polivinil-pirolidon, tragakant guma i akacija guma; agenasa za raspršivanje ili vlaženje, kao što su lecitin ili proizvodi kondenzacije alkilen oksida sa masnim kiselinama (na primer polioksetilen stearat), ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa dugim lancima alifatskih alkohola, na primer heptadekatilenoksicetanol, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa delimičnim estrima od masnih kiselina i heksitola kao što je polioksietilen sorbitol monooleat, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa alifatskim alkoholima dugačog lanca, na primer heptadekatilenoksicetanol, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa delimičnim estrima dobijenim od masnih kiselina i heksitola, poput polioksietilen sorbitol monooleata ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa delimičnim estrima koji se dobijaju od masnih kiselina i heksitol anhidrida, na primer polietilen sorbitan monooleat. Vodene suspenzije takođe mogu da sadrže jedan ili više konzervansa kao što je etil ili propil p-hidroksibenzoat; anti-oksidansi poput askorbinske kiseline; agense za bojenje; agense za aromatizaciju; i/ili zaslađivače kao što su saharoza, saharin ili aspartam.

[0104] Masne suspenzije mogu da se formulišu suspenzijom aktivnog sastojka u biljnom ulju kao što je ulje kikirikija, maslinovo ulje, susamovo ulje ili kokosovo ulje ili u mineralnom ulju kao što je tečni parafin. Uljne suspenzije takođe mogu da sadrže agens za zgušnjavanje poput pčelinjeg voska, tvrdog parafina ili cetil alkohola. Agensi za zaslađivanje poput onih koji su navedena iznad i agensi za aromatizaciju mogu se dodati da se obezbedi prijatan oralni preparat. Ovi sastavi se mogu sačuvati dodavanjem antioksidansa, poput askorbinske kiseline.

[0105] Praškovi i granule koji se mogu raspršiti, pogodni za pripremu vodene suspenzije dodatkom vode, obično sadrže aktivni sastojak zajedno sa agensom za raspršivanje ili vlaženje, agensom za suspendovanje i jednim ili više konzervansa. Pogodni agensi za raspršivanje ili vlaženje i agensi za suspendovanje su primer gore navedenih. Takođe mogu biti prisutni dodatni ekscipijensi, poput zaslađivača, aroma i boja.

[0106] Farmaceutski sastavi takođe mogu biti u obliku ulje-u-vodi emulzija. Uljana faza može biti biljno ulje, poput maslinovog ili ulja kikirikija, ili mineralno ulje, poput na primer tečnog parafina ili mešavine bilo kog od njih. Pogodni emulgatori mogu biti, na primer, gume koje se javljaju u prirodi, poput akacije gume ili tragakant gume, fosfatidi koji nastaju u prirodi, poput soje, lecitin, estri ili delimični estri dobijeni od masnih kiselina i anhidrida heksitola (na primer sorbitan monooleat) i proizvodi kondenzacije navedenih delimičnih

2

estara sa etilen oksidom, kao što je polioksietilen sorbitan monooleat. Emulzije mogu takođe da sadrže agense za zaslađivanje, aromu i konzervanse.

[0107] Sirupi i eliksiri mogu se formulisati sa sredstvima za zaslađivanje kao što su glicerol, propilen glikol, sorbitol, aspartam ili saharoza, i mogu takođe da sadrže i agens za razblaživanje, konzervans, arome i/ili boje.

[0108] Farmaceutski sastavi mogu takođe biti u obliku sterilne vodene ili uljne suspenzije za injekcije, koja se može formulisati poznatim postupcima, koristeći jedan ili više odgovarajućih agenasa za raspršivanje ili vlaženje i agenasa za suspendovanje, koji su gore navedeni. Sterilni preparat za injekcije takođe može biti sterilni rastvor za injekcije ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, rastvor u 1,3-butandiolu.

[0109] Sastavi za primenu inhalacijom mogu biti u obliku konvencionalnog aerosola pod pritiskom, koji je podešen da raspršuje aktivni sastojak, kao aerosol koji sadrži sitno podeljene čvrste ili tečne kapljice. Mogu se koristiti uobičajeni aerosolni potisni agensi, kao što su volatilni fluorisani ugljovodonici ili ugljovodonici, i aerosolni uređaj je pogodno postavljen da dozira odmerenu količinu aktivnog sastojka.

Za dalje informacije o formulaciji, čitalac se upućuje na Chapter 25.2 u Volume 5 od Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.

[0110] Količina aktivnog sastojka koja je kombinovana sa jednim ili više ekscipijenasa za dobijanje jednog oblika doziranja će nužno varirati u zavisnosti od tretiranog domaćina i određenog puta primene. Za dalje informacije o načinima primene i režimima doziranja čitalac se upućuje na Chapter 25.3 u Volume 5 od Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.

[0111] Jedinjenja Formule (I), (II) i (III) mogu se primenjivati jednom, dva puta, tri puta na dan, ili onoliko puta tokom 24 sata koliko je to medicinski neophodno. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja Formule (I), (II) i (III) mogu se primenjivati svakodnevno, jednom nedeljno, dva puta nedeljno, 3 puta nedeljno, 4 puta nedeljno, 5 puta nedeljno ili 6 puta nedeljno. Stručnjak bi lako mogao da odredi količinu svake pojedinačne doze na osnovu

2

pacijenta. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja Formule (I), (II) i (III) se primenjuju u jednom doznom obliku. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja Formule (I), (II) i (III) se primenjuju u više doznih oblika.

Način upotrebe

[0112] U jednom aspektu, obelodanjeni su postupci za tretman raka kod pacijenta koji ima potrebu za tim, koji obuhvataju primenu pacijentu efikasne količine jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0113] U jednom aspektu, obelodanjeno je jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu raka.

[0114] U jednom aspektu, obelodanjena je upotreba jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za tretman raka.

[0115] U jednom aspektu, obelodanjeni su farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu raka.

[0116] Izraz „rak“ uključuje, ali nije ograničen na, hematološke malignitete, poput akutne mijeloidne leukemije, multiplog mijeloma, limfoma plaštastih ćelija, hroničnih limfocitnih leukemija, difuznog limfoma velikih B ćelija, Burkitt-ovog limfoma, folikularnog limfoma i čvrstih tumora, na primer, rak ne-malih ćelija pluća (NSCLC), rak malih ćelija pluća (SCLC), rak dojke, neuroblastom, rak prostate, melanom, rak pankreasa, rak materice, rak endometrijuma i rak debelog creva.

[0117] U jednom aspektu, obelodanjeni su postupci za tretman multiplog mijeloma kod pacijenta koji ima potrebu za tim, koji obuhvataju primenu pacijentu efikasne količine jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0118] U jednom aspektu, obelodanjeno je jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu multiplog mijeloma.

[0119] U jednom aspektu, obelodanjena je upotreba jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za tretman multiplog mijeloma.

2

[0120] U jednom aspektu, obelodanjeni su farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu multiplog mijeloma.

[0121] U jednom aspektu, obelodanjeni su postupci za tretman akutne mijeloidne leukemije kod pacijenta koji ima potrebu za tim, koji obuhvataju primenu pacijentu efikasne količine jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0122] U jednom aspektu, obelodanjeno je jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu akutne mijeloidne leukemije.

[0123] U jednom aspektu, obelodanjena je upotreba jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za tretman akutne mijeloidne leukemije.

[0124] U jednom aspektu, obelodanjeni su farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu akutne mijeloidne leukemije.

[0125] U jednom aspektu, obelodanjeni su postupci za tretman raka kod pacijenta koji ima potrebu za tim, koji obuhvataju primenu pacijentu efikasne količine jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa agensom protiv raka, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli.

[0126] U jednom aspektu, obelodanjeno je jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u kombinaciji sa agensom protiv raka, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, za upotrebu u tretmanu raka.

[0127] U jednom aspektu, obelodanjena je upotreba jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u kombinaciji sa agensom protiv raka, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, u proizvodnja leka za tretman raka.

[0128] U jednom aspektu, obelodanjeni su farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje

2

Formule (I), (II) ili (III), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa agensom protiv raka, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, za upotrebu u tretmanu raka.

[0129] Izraz „u kombinaciji sa“ uključuje primenu jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i agensa protiv raka, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sekvencijalno, odvojeno ili istovremeno. U nekim aspektima, jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i agens protiv raka, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjuju se u istoj formulaciji, na primer, u formulaciji sa fiksnom dozom. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i agens protiv raka, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjuju se u odvojenim formulacijama i primenjuju se suštinski u isto vreme, sekvencijalno ili odvojeno.

[0130] Izraz „agens protiv raka“ uključuje, ali nije ograničen na, zračenje, alkilacione agense, inhibitore angiogeneze, antitela, antitelo-lek konjugate, antimetabolite, antimitotike, antiproliferativne agense, anti-viralne agense, inhibitore aurora kinaze, druge aktivatore ćelijske smrti (na primer, inhibitore Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w, Bfl-1), aktivatore puteva receptora smrti (na primer, FAS ili TRAIL agoniste), inhibitore Bcr-Abl kinaze, BET (bromodomenske) inhibitore, BiTE (pokretač bi-specifičnih T ćelija) antitela, modifikatore biološkog odgovora, inhibitore kinaze zavisne od ciklina, inhibitore ćelijskog ciklusa, inhibitore ciklooksigenaze-2, DVD (antitela dvostrukog varijabilnog domena), inhibitore receptora leukemije virusnog onkogena (ErbB2), inhibitore faktora rasta, EGFR inhibitore, inhibitore proteina toplotnog šoka (HSP), inhibitore histon deacetilaze (HDAC), hormonske terapije, imunološke agense, inhibitore inhibitora apoptoze proteina (IAP), antibiotike koji interkaliraju, inhibitore kinaze, inhibitore kinezina, Jak2 inhibitore, sisarski cilj inhibitora rapamicina (mTOR), mikroRNK, inhibitore mitogen-aktivirane ekstracelularne signalnoregulisane kinaze (MEK), inhibitore BRAF, multivalentne vezujuće proteine, nestaroidne protiv-upalne lekove (NSAID), inhibitore poli ADP (adenozin difosfat)-riboza polimeraze (PARP), hemoterapeutske agense na bazi platine, inhibitore polo-nalik kinaze (Plk), inhibitore fosfoinozit-3-kinaze, inhibitore proteozoma, analoge purina, analoge pirimidina, inhibitore tirozin-kinaze, etinoide/deltoide alkaloida biljaka, male inhibitorne ribonukleinske kiseline (siRNK), inhibitore topoizomeraze i inhibitore ubikvitin ligaze. Ovde su obelodanjene kombinacije bilo kog od jedinjenja Formule (I), (II) ili (III) i agensa protiv raka.

[0131] Agensi za alkilaciju uključuju altretamin, AMD-473, AP-5280, apazikven, bendamustin, brostalicin, busulfan, cisplatin, karboplatin, karbokven, karmustin (BCNU), hlorambucil, CLORETAZINE® (Iaromustin, VNP 40101M), ciklofosfamid, dekabrazin, estramustin, fotemustin, glufosfamid, ifosfamid, KW-2170, lomustin (CCNU), mafosfamid, melfalan, mitobronitol, mitolaktol, nimustin, azot ipirit N-oksid, nitrozouree, oksaliplatin, ranimustin, temozolomid, tiotepa, TREANDA® (bendamustin), treosulfan, rofosfamid i slično.

[0132] Inhibitori angiogeneze uključuju endotelno-specifični receptor, (Tie-2) inhibitore, inhibitore receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), inhibitore receptora insulinskog faktora rasta-2 (IGFR-2), inhibitore matrične metaloproteinaze-2 (MMP-2), inhibitore matrične metaloproteinaze-9 (MMP-9), inhibitore receptora faktora rasta izvedene iz trombocita (PDGFR), analoge trombospondina, inhibitore receptora vaskularnog endotelnog faktora rasta tirozin kinaze (VEGFR), inhibitore ALK i slično.

[0133] Antimetaboliti uključuju ALIMTA® (pemetreksed dinatrijum, LY231514, MTA), 5-azacitidin, XELODA® (kapecitabin), karmofur, LEUSTAT® (kladribin), klofarabin, citarabin, citarabin okfosfat, citozin arabinozid, decitabin, deferoksamin, doksifluridin, eflornitin, EICAR (5-etinil-1-β-D-ribofuranozilimidazol-4-karboksamid), enocitabin, etnilcitidin, fludarabin, 5-fluorouracil, samostalno ili u kombinaciji sa leukovorinom, GEMZAR® (gemcitabin), hidroksiurea, ALKERAN® (melfalan), merkaptopurin, 6-merkaptopurin ribozid, metotreksat, mikofenolna kiselina, nelarabin, nolatreksed, okfosfat, pelitreksol, pentostatin, pemekstred, raltitreksed, ribavirin, triapin, trimetreksat, S-1, tiazofurin, tegafur, TS-1, vidarabin, UFT i slično.

[0134] Inhibitori Bcl-2 proteina uključuju ABT-199, AT-101 ((-)gosipol), GENASENSE® (G3139 ili oblimersen (Bcl-2-ciljajući antisens oligonukleotid)), IPI-194, IPI-565, ABT-737, ABT -263, GX-070 (obatoklaks) i slično.

[0135] Btk inhibitori uključuju ibrutinib i akalabrutinib i slično.

[0136] Inhibitori bromodomena uključuju I-BET 762, OTX-015, CPI-203, LY294002 i slično. CDK inhibitori uključuju BMI-1040, BMS-032, BMS-387, CVT-2584, flavopiridol, GPC-286199, MCS-5A, PD0332991, PHA-690509, selicicib (CIC-202, R-roskovitin), ZK-

1

304709 i slično.

[0137] EGFR inhibitori uključuju EGFR antitela, ABX-EGF, anti-EGFR imunolipozom, EGF-vakcinu, EMD-7200, ERBITUX® (cetuksimab), HR3, IgA antitela, IRESSA® (gefitinib), TARCEVA® (erlotinib ili OSI-774), TP-38, EGFR fuzioni protein, TYKERB® (lapatinib), TAGRISSO (AZD9291) i slično.

[0138] ALK inhibitori uključuju krizotinib, ceritinib i slično.

[0139] Inhibitori ErbB2 receptora uključuju CP-724-714, CI-1033 (kanertinib), HERCEPTIN® (trastuzumab), TYKERB® (lapatinib), OMNITARG® (2C4, petuzumab), TAK-165, GW-572016 (ionafarnib), GW-282974, EKB-569, PI-166, dHER2 (HER2 vakcina), APC-8024 (HER-2 vakcina), anti-HER/2neu bispecifično antitelo, B7.her2IgG3, AS HER2 bifunkcionalna bispecifična antitela, mAB AR-209, mAB 2B-1 i slično.

[0140] Antitelo-lek konjugati uključuju anti-CD22-MC-MMAF, anti-CD22-MC-MMAE, anti-CD22-MCC-DM1, CR-011-vcMMAE, PSMA-ADC, MEDI-547, SGN-19Am SGN-35, SGN -75 i slično.

[0141] Inhibitori kinezina uključuju Eg5 inhibitore kao što su AZD4877, ARRY-520;

CENPE inhibitori kao što je GSK923295A i slično.

[0142] MEK inhibitori uključuju trametinib (GSK1120212), binimetinib (MEK162), selumetinib (AZD6244), kobimetinib (XL518), ARRY-142886, ARRY-438162, PD-325901, PD-98059 i slično.

[0143] BRAF inhibitori uključuju sorafenib, vemurafenib, dabrafenib, GDC-0879, LGX818 i slično.

[0144] Kemoterapeutici od platine uključuju cisplatin, ELOXATIN® (oksaliplatin) eptaplatin, lobaplatin, nedaplatin, PARAPLATIN® (karboplatin), satraplatin, picoplatin i slično.

[0145] VEGFR inhibitori uključuju AVASTIN (bevacizumab), ABT-869, AEE-788,

2

ANGIOZYME™ (ribozim koji inhibira angiogenezu (Ribozyme Pharmaceuticals (Boulder, Colo.) i Chiron, (Emeryville, Calif.), aksitinib (AG-13736), AZD-2171, CP-547,632, IM-862, MACUGEN (pegaptamib), NEXAVAR® (sorafenib, BAY43-9006), pazopanib (GW-786034), vatalanib (PTK-787, ZK-222584), SUTENT® (sunitinib, SU-11248), VEGF trap, ZACTIMA™ (vandetanib, ZD-6474), GA101, ofatumumab, ABT-806 (mAb-806), antitela specifična za ErbB3, antitela specifična za BSG2, antitela specifična za DLL4 i antitela specifična za C-met, i slično.

[0146] Antitumorski antibiotici uključuju interkalirajuće antibiotike aclarubicin, aktinomicin D, amrubicin, anamicin, adriamicin, BLENOXANE® (bleomicin), daunorubicin, CAELYX® ili MYOCET® (lipozomalni doksorubicin), elsamitrucin, epirbucin, glarbuicin, ZAVEDOS® (idarubicin), mitomicin C, nemorubicin, neocarzinostatin, peplomicin, pirarubicin, rebekamicin, stimalamer, streptozocin, VALSTAR® (valrubicin), zinostatin i slično.

[0147] Inhibitori mehanizama popravke DNK, kao što je CHK kinaza; inhibitori DNK-zavisne protein kinaze; inhibitori poli (ADP-riboza) polimeraze (PARP inhibitori), uključujući ABT-888 (veliparib), olaparib, KU-59436, AZD-2281, AG-014699, BSI-201, BGP-15, INO-1001, ONO-2231 i slično; i Hsp90 inhibitori kao što su tanespimicin i retaspimicin.

[0148] Inhibitori proteazoma uključuju VELCADE® (bortezomib), KYPROLIS (karfilzomib), NINLARO (iksazomib), MG132, NPI-0052, PR-171 i slično.

[0149] Primeri imunoloških lekova uključuju interferone i druge agense za povećanje imuniteta. Interferoni uključuju interferon alfa, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, interferon beta, interferon gama-1a, ACTIMMUNE® (interferon gama-1b) ili interferon gama-n1, njihove kombinacije i slično. Ostali agensi uključuju ALFAFERONE®, (IFN-α), BAM-002 (oksidovani glutation), BEROMUN® (tasonermin), BEXXAR® (tositumomab), CAMPATH® (alemtuzumab), dekarbazin, denileukin, epratuzumab, GRANOCYTE® (lenograstim), lentinan, leukocit alfa interferon, imikvimod, MDX-010 (anti-CTLA-4), vakcina protiv melanoma, mitumomab, molgramostim, MILOTARG™ (gemtuzumab ozogamicin), NEUPOGEN® (filgrastim), OncoVAC-CL, OVAREX® (oregovomab), pemtumomab (Y-muHMFG1), PROVENGE® (sipuleucel-T), sargaramostim, sizofilan, teceleukin, THERACYS® (Bacillus Calmette-Guerin), ubenimeks, VIRULIZIN® (imunoterapeutici, Lorus Pharmaceuticals), Z-100 ( Specific Substance of Maruyama (SSM)), WF-10 (tetrahlordekaoksid (TCDO)), PROLEUKIN® (aldesleukin), ZADAXIN® (timalfasin), ZENAPAX® (daclizumab), ZEVALIN® (90I-lbritumomab tiuksetan) i slično.

[0150] Analozi pirimidina uključuju citarabin (ara C ili Arabinozid C), citozin arabinozid, doksifluridin, FLUDARA® (fludarabin), 5-FU (5-fluorouracil), floksuridin, GEMZAR® (gemcitabin), TOMUDEX® (ratitreksed), TROXATYL™ (triacetiluridin troksacitabin) i slično.

[0151] Antimitotički agensa uključuju batabulin, epotilon D (KOS-862), N-(2-((4-hidroksifenil)amino)piridin-3-il)-4-metoksibenzensulfonamid, iksabepilon (BMS 247550), paklitaksel, TAXOTERE® (docetaksel), PNU100940 (109881), patupilon, XRP-9881 (larotaksel), vinflunin, ZK-EPO (sintetički epotilon) i slično.

[0152] Pored toga, jedinjenja Formule (I), (II) i (III) mogu se kombinovati sa drugim hemoterapeutskim agensima kao što su ABRAXANE™ (ABI-007), ABT-100 (inhibitor farnezil transferaze), ADVEXIN® (Ad5CMV-p53 vakcina), ALTOCOR® ili MEVACOR® (lovastatin), AMPLIGEN® (poli I:poli C12U, sintetička RNK), APTOSYN® (eksisulind), AREDIA® (pamidronska kiselina), arglabin, L-asparaginaza, atamestan (1-metil-3,17-dionandrosta-1,4-dien), AVAGE® (tazaroten), AVE-8062 (derivat kombreaastatina) BEC2 (mitumomab), kahektin ili kaheksin (faktor nekroze tumora), kanvaksin (vakcina), CEAVAC® (vakcina protiv raka), CELEUK® (celmoleukin), CEPLENE® (histamin dihidroklorid), CERVARIX® (vakcina protiv ljudskog papiloma virusa), CHOP® (C:

CYTOXAN® (ciklofosfamid); H: ADRIAMYCIN® (hidroksidoksorubicin); O: Vincristin (ONCOVIN®); P: prednizon), CYPAT™ (ciproteron acetat), kombrestatin A4P, DAB(389)EGF (katalitički i translokacioni domeni toksina difterije spojeni preko His-Ala veznika za ljudski epidermalni faktor rasta) ili TransMID-107R™ (toksini difterije), dakarbazin, daktinomicin, 5,6-dimetilksantenon-4-sirćetna kiselina (DMXAA), eniluracil, EVIZON™ (skvalamin laktat), DIMERICINE® (T4N5 lipozomski losion), diskodermolid, DX-8951f (ekatecan mesilat), enzastaurin, EPO906 (epitilon B), GARDASIL® (kvadrivalentni ljudski papiloma virus (Tipovi 6, 11, 16, 18), rekombinantna vakcina), GASTRIMMUNE®, GENASENSE®, GMK (gangliozid konjugat vakcina), GVAX® (vakcina protiv raka prostate), halofuginon, histerelin, hidroksikarbamid, ibandronska kiselina, IGN-101, IL-13-PE38, IL-13-PE38QQR (cintredekin besudotoks), IL-13-

4

pseudomonas egzotoksin, interferon-a, interferon-y, JUNOVAN™ ili MEPACT™ (mifamurtid), lonafarnib, 5,10-metilenetrahidrofolat, miltefosin (heksadecilfosfoholin), NEOVASTAT® (AE-941), NEUTREXIN® (trimetreksat glukuronat), NIPENT® (pentostatin), ONCONASE® (enzim ribonukleaze), ONCOPHAGE® (tretman vakcinom protiv melanoma), ONCOVAX® (IL-2 vakcina), ORATHECIN™ (rubitecan), OSIDEM® (ćeliski lek zasnovan na antitelu), OVAREX® MAb (mišje monoklonsko antitelo), paklitaksel, PANDIMEX™ (aglikonski saponini iz ginsenga koji sadrži 20(S) protopanaksadiol (aPPD) i 20(S)protopanaksatriol (aPPT)), panitumumab, PANVAC®- VF (vakcina protiv raka pod istraživanjem), pegaspargaza, PEG interferon A, fenoksodiol, prokarbazin, rebimastat, REMOVAB® (katumaksomab), REVLIMID® (lenalidomid), RSR13 (efaproksiral), SOMATULINE® LA (lanreotidin), SORIATANE® (acitretin), staurosporin (Streptomices staurospore), talabostat (PT100), TARGRETIN® (beksaroten), TAXOPREXIN® (DHA-paklitaksel), TELCYTA® (canfosfamid, TLK286), temilifen, TEMODAR® (temozolomid), tesmilifen, talidomid, THERATOPE® (STn-KLH), timitak (2-amino-3,4-dihidro-6-metil-4-okso-5-(4-piridiltio)hinazolin dihidroklorid), TNFERADE™ (adenovektor: DNK nosač koji sadrži gen za faktor-a nekroze tumora), TRACLEER® ili ZAVESCA® (bosentan), tretinoin (Retin-A), tetrandrin, TRISENOX® (arsenik trioksid), VIRULIZIN®, ukrain (derivat alkaloida iz biljke rusa (Chelidonium majus)), vitaksin (antialfavbeta3 antitelo), XCYTRIN® (moteksafin gadolinijum), XINLAY™ (atrasentan), XYOTAX™ (paklitaksel poliglumeks), YONDELIS® (trabectedin) ZD-6126, ZINECARD® (deksrazoksan), ZOMETA® (zolendronska kiselina), zorubicin i slično.

[0153] U jednom aspektu, obelodanjeni su postupci za tretman raka kod pacijenta koji ima potrebu za tim, koji obuhvataju primenu pacijentu efikasne količine jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa bortezomibom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli.

[0154] U jednom aspektu, obelodanjeno je jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so u kombinaciji sa bortezomibom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, za upotrebu u tretmanu raka.

[0155] U jednom aspektu, obelodanjena je upotreba jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u kombinaciji sa bortezomibom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, u proizvodnji leka za tretman raka

[0156] U jednom aspektu, obelodanjeni su farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa bortezomibom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, za upotrebu u tretmanu raka.

[0157] U jednom aspektu, obelodanjeni su postupci za tretman multiplog mijeloma kod pacijenta koji ima potrebu za tim, koji uključuju primenu pacijentu efikasne količine jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u kombinaciji sa bortezomibom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli.

[0158] U jednom aspektu, obelodanjeno je jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u kombinaciji sa bortezomibom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, za upotrebu u tretmanu multiplog mijeloma.

[0159] U jednom aspektu, obelodanjena je upotreba jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u kombinaciji sa bortezomibom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, u proizvodnji leka za tretman multiplog mijeloma.

[0160] U jednom aspektu, obelodanjeni su farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa bortezomibom, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, za upotrebu u tretmanu multiplog mijeloma.

[0161] U jednom aspektu, obelodanjeni su postupci inhibicije Mcl-1 kod pacijenta koji ima potrebu za tim, koji obuhvataju primenu pacijentu efikasne količine jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0162] U jednom aspektu, obelodanjeno je jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u inhibiciji Mcl-1

U jednom aspektu, obelodanjena je upotreba jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za inhibiranje Mcl-1.

[0163] U jednom aspektu, obelodanjeni su farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje Formule (I), (II) ili (III), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u inhibiciji Mcl-1.

[0164] Izraz „Mcl-1“ odnosi se na leukemiju mijeloidnih ćelija 1, anti-apoptotski član BCL-2 porodice proteina.

[0165] Izraz „efikasna količina“ uključuje količinu jedinjenja Formule (I), (II) ili (III) koja će izazvati biološki ili medicinski odgovor kod pacijenta, na primer, smanjenje ili inhibicija enzima ili proteinske aktivnosti povezane sa Mcl-1 ili rakom; ublažavanje simptoma raka; ili usporavanje ili odlaganje napredovanja raka. U nekim otelotvorenjima, izraz „efikasna količina“ uključuje količinu jedinjenja Formule (I), (II) ili (III), koje je, kada se primenjuje pacijentu, efikasna da bar delimično smanjiti, inhibira i/ili ublaži rak, ili inhibirati Mcl-1, i/ili smanjiti ili inhibirati rast tumora ili proliferaciju ćelija raka kod pacijenta.

[0166] Izraz „pacijent“ uključuje toplokrvne sisare, na primer, primate, pse, mačke, zečeve, pacove i miševe. U nekim otelotvorenjima, pacijent je primat, na primer, čovek. U nekim otelotvorenjima, pacijent boluje od raka. U nekim otelotvorenjima, pacijent ima potrebu za tretmanom (npr., pacijent će imati koristi od biološkog ili medicinskog tretmana).

[0167] Izraz „inhibicija“, „inhibira“ ili „inhibirati“ uključuje smanjenje osnovne vrednosti biološke aktivnosti ili procesa. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja Formule (I), (II) ili (III) inhibiraju Mcl-1.

[0168] Izraz „tretman“, „tretira“ i „tretirati“ uključuje smanjenje ili inhibiciju enzima ili proteinske aktivnosti povezane sa Mcl-1 ili rakom kod pacijenta, poboljšanje jednog ili više simptoma raka kod pacijenta, ili usporavanje ili odlaganje progresije raka kod pacijenta. Izraz „tretman“, „tretira“ i „tretirati“ takođe uključuje smanjenje ili inhibiciju rasta tumora ili proliferaciju ćelija raka kod pacijenta.

Primeri

[0169] Aspekti predmetnog obelodanjenja mogu se dalje definisati pozivanjem na naredne neograničavajuće primere, koji detaljno opisuju pripremu određenih jedinjenja i međuproizvoda predmetnog obelodanjenja, i postupke za upotrebu jedinjenja predmetnog obelodanjenja. Stručnjacima će biti očigledno da se mogu napraviti mnoge modifikacije, kako materijala, tako i postupaka.

[0170] Osim ukoliko nije navedeno drugačije:

(i) su sve sinteze izvedene na sobnoj temperaturi, tj. u rasponu od 17 do 25°C, i u atmosferi inertnog gasa, kao što je azot, osim ako nije drugačije navedeno;

(ii) isparavanje je izvršeno rotacionim isparavanjem ili korišćenjem Genevac opreme ili Biotage v10 isparivača pod sniženim pritiskom;

(iii) prečišćavanje silika gelu hromatografijom izvršeno je na automatizovanom Teledine Isco CombiFlash® Rf ili Teledine Isco CombiFlash® Companion® upotrebom unapred pripremljenih RediSep Rf Gold™ silika kolona (20-40 µm, sferne čestice), GraceResolv™ patrone (Davisil® silicijum dioksid) ili Silicycle patrone (40 - 63 µm).

(iv) hiralna preparativna hromatografija izvedena je na Waters Prep 100 SFC-MS instrumentu MS- i UV- izazvanim sakupljanjem ili Thar MultiGram III SFC instrumentom sa UV sakupljanjem.

(v) hiralna analitička hromatografija izvedena je bilo na Waters X5 SFC-MS sa UV detektovanjem ili na Waters UPC2 SFC-MS sa UV i ELSD detekcijom.

(vi) prinosi, ako su prisutni, nisu nužno maksimalni ostvarivi;

(vii) generalno, strukture krajnjih proizvoda Formule I su potvrđene NMR spektroskopijom; Vrednosti NMR hemijskog pomaka su merene na delta skali, korišćenjem rezidualnog vrha rastvarača kao interni standard [spektri protonske magnetne rezonance su određeni korišćenjem Bruker Avance 500 (500 MHz), Bruker Avance 400 (400 MHz), Bruker Avance 300 (300 MHz) ili Bruker DRX (300 MHz) instrumenta]; merenja su vršena na sobnoj temperaturi, osim ako nije drugačije određeno; korišćene su naredne skraćenice: s, singlet; d, dublet; t, triplet; k, kvartet; m, multiplet; dd, dublet dubleta; ddd, dublet doubleta doubleta; dt, duple tripleta; bs, široki signal; ABq, AB kvartet.

(viii) krajnji proizvodi Formule I su takođe karakterisani masenom spektroskopijom posle tečne hromatografije (UPLC); upotrebom Waters UPLC opremljenog sa Waters SQ masenim spektrometrom (temperatura kolone 40°C, UV = 220-300 nm ili 190-400 nm, maseni spektar = ESI sa pozitivnim/negativnim prebacivanjem) pri brzini protoka od 1 ml/min koristeći sistem rastvarača od 97% A 3% B do 3% A 97% B tokom 1,50 minuta (ukupno vreme izvođenja sa uravnotežavanjem nazad do početnih uslova itd.1,70 minuta), gde je A = 0,1% mravlja kiselina ili 0,05% trifluorosirćetna kiselina u vodi (za kiselu obradu) ili 0,1% amonijum hidroksid u vodi (za baznu obradu) i B = acetonitril. Za kisele analize, korišćena je Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1 x 50 mm) kolona, za baznu analizu korišćena je Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm, 2,1 x 50 mm) kolona. Alternativno, UPLC je izveden korišćenjem Waters UPLC opremljenog sa Waters SK masenim spektrometrom (temperatura kolone 30°C, UV = 210-400 nm, maseni spektar = ESI sa pozitivnim/negativnim prebacivanjem) pri brzini protoka od 1mL/min koristeći gradijent rastvarača od 2 do 98% B tokom 1,5 min (ukupno vreme izvođenja sa uravnotežavanjem nazad do početnih uslova 2 min), gde je A = 0,1% mravlja kiselina u vodi i B = 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu (za kiselu obradu) ili A = 0,1% amonijum hidroksid u vodi i B = acetonitril (za baznu obradu). Za kisele analize, korišćena je Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1 x 30 mm) kolona, i za baznu analizu korišćena je Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm, 2,1 x 30 mm) kolona;

Prijavljeni molekulski jon odgovara [M+H]+, osim ako nije drugačije određeno; za molekule sa više izotopskih obrazaca (Br, Cl, itd.) prijavljena vrednost je ona dobijena sa najvećim intenzitetom, osim ako nije drugačije određeno.

(x) srednja čistoća je procenjena hromatografijom tankog sloja, masenom spektroskopijom, LCMS, UPLC/MS, HPLC i/ili NMR analizom;

(xi) korišćene su naredne skraćenice:

ACN acetonitril

aq. vodeni

konc. koncentrisan

DCM dihlorometan

di-t-BPF 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen

DMAP 4-dimetilaminopiridin

DMF N,N-dimetilformamid

DSC diferencijalna skenirajuća kalorimetrija

DTBAD di-terc-butil diazen-1,2-dikarboksilat

e.e. enantiomerni višak

ekv. ekvivalent

ES elektrosprej režim

HPLC tečna hromatografija visokih performansi

Inj. Injekcija

IPA Izopropil alkohol

LAH litijum aluminijum hidrid

LCMS tečna hromatografija masena spektrometrija

MS masena spektrometrija

NaHMDS natrijum heksametildisilazan

NBS N-bromo sukcinimid

NMR nuklearna magnetna rezonanca

PE petrolej etar

PMB 4-metoksibenzil

RBF boca sa okruglim dnom

RT sobna temperatura / temperatura okruženja

zas. zasićen

SFC superkritična tečna hromatografija

TBAF tetrabutilamonijum fluorid

TBDPS terc-butildifenilsilil

TBDPSCI terc-butilhlorodifenilsilan

TFA trifluorosirćetna kiselina

TGA termogravimetrijska analiza

THF tetrahidrofuran

Tol. toluen

UPLC tečna hromatografija ultra visokih performansi

wt% težinski procenat

XRPD praškasta difrakcija X-zraka

Međuproizvod 1: Metil 7-bromo-6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1H-indol-2-karboksilat

[0171]

[0172] 2-Bromo-3-hloroanilin (600 g, 2,91 mol) i koncentrisan vodeni HCI (1500 mL, 49,4 mol) u vodi (1500 mL) su smešteni u bocu sa okruglim dnom i četiri grla. Smeša je mešana preko noći kako bi se dobio rastvor. Rastvor NaNO2(212 g, 3,07 mol) u vodi (720 mL) je dodat kapanjem uz mešanje na 0-5°C. Nakon 1,5 sata, rastvor KOAc (4020 g, 40,9 mol) u vodi (6000 mL) i metil 2-oksociklopentan-1-karboksilata (420 g, 2,95 mol) je dodat kapanjem uz mešanje na 0-5°C. Rezultujući rastvor je mešan na 0-5°C tokom 0,5 sati zatim tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Rastvor je zatim ekstrahovan sa 2 x10 L DCM.

4

Kombinovane organske faze su oprane sa 1 x 5 L rasola. Rastvor je osušen preko nevodenog Na2SO4i koncentrisan kako bi se kao prinos dobio metil 1-((2-bromo-3-hlorofenil)diazenil)-2-oksociklopentan-1-karboksilat (1070 g, 100%, 97 težinskih procenata).

[0173] Rastvor koncentrisane sumporne kiseline (1000 mL, 18,8 mol) u metanolu (10000 mL) i metil 1-((2-bromo-3-hlorofenil)diazenil)-2-oksociklopentan-1-karboksilat (1400 g, 3,89 mol) su smešteni u bocu sa okruglim dnom i četiri grla. Rezultujući rastvor je mešan na 70°C u uljanu kadu tokom 2 sata. Reakciona smeša je ohlađena do 20°C sa voda/led kadom. Čvrsta materija je prikupljena filtriranjem. Čvrsta materija je oprana sa 2 x 1 L MeOH i zatim osušena u peći pod redukovanim pritiskom kako bi se kao prinos dobio (E/Z)-dimetil 2-(2-(2-bromo-3-hlorofenil)hidrazono)heksanedioat (1200 g, 79%).

[0174] Rastvor koncentrisane sumporne kiseline (2 L, 37,5 mol) u metanolu (10 L) i (E/Z)-dimetil 2-(2-(2-bromo-3-hlorofenil)hidrazono)heksanedioat (1200 g, 2,96 mol, 1,00 equiv) su smešteni u bocu sa okruglim dnom i četiri grla. Rezultujući rastvor je mešan tokom 72 sata na 80°C u uljanu kadu. Reakciona smeša je ohlađena do 20°C sa voda/led kadom. Čvrsta materija je prikupljena filtriranjem, oprana sa 1 L MeOH i zatim osušena na vazduhu. Čvrsta materija je zatim suspendovana u 2250 mL MeOH, uz mešanje na 50°C tokom 30 minuta. Nakon hlađenja do 20°C, čvrsta materija je prikupljena filtriranjem i oprana je sa 500 mL MeOH i zatim osušena na vazduhu kako bi se kao prinos dobio metil 7-bromo-6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 1, 930 g, 84%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 374.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM- d) δ2,68 (t, 2H), 3,37 (t, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 7,25 (d, 1H), 7,62 (d, 1H), 8,83 (s, 1H).

Međuproizvod 2: (4-Bromo-1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)metanol

[0175]

[0176] NBS (47,4 g, 266 mmol) je dodat iz delova tokom 30 minuta rastvoru (1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)metanola (32,0 g, 253 mmol) u DCM (500 mL) na 0°C. Rezultujuća smeša je mešana na 25°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je razređena sa DCM (200 mL), i oprana sekvencijalno sa vodom (250 mL) i rasolom (150 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrisan kako bi se dobio ostatak koji je opran sa PE/EtOAc (1: 1) (10 mL) kako bi se dobio (4-bromo-1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)metanol (Međuproizvod 2, 48,0 g, 92%), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja; m/z (ES+), [M+H]<+>= 205.<1>H NMR (300 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,08 (s, 1H), 2,26 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,63 (s, 2H).

Međuproizvod 3: 4-Bromo-3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol [0177]

[0178] DMF (112 mL) je dodat (4-bromo-1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)metanolu (Međuproizvod 2, 3,74 g, 18,3 mmol) i rastvor je ohlađen do 0°C. NaH (0,840 g, 21,0 mmol) (60% u oil) je dodat. Smeša je mešana na 0°C tokom 10 minuta, omogućeno joj je da se zagreje do sobne temperature i mešan je tokom 20 minuta, rezultujući belom suspenzijom.

1-(hlorometil)-4-metoksibenzen (2,72 mL, 20,1 mmol) i KI (0,303 g, 1,83 mmol) su dodati i smeša je mešana tokom 1 sata i koncentrisana do suvoće. Voda (50 mL) je dodata i smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovane organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrisane do suvoće. Ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (heksani/EtOAc) kako bi se dobio 4-bromo-3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol (Međuproizvod 3, 5,69 g, 96%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 325.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,26 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 4,47 (s, 2H), 4,53 (s, 2H), 6,85 (d, 2H), 7,33 (d, 2H).

Međuproizvod 4: 3-(((4-Metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol

[0179]

[0180] THF (83 mL) je dodat 4-bromo-3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazolu (Međuproizvod 3, 3,02 g, 9,29 mmol) i rezultujući bistar rastvor je ohlađen do 78°C. Butillitijum (6,96 mL, 11,1 mmol) (1,6 M u heksanu) je dodat na -78°C pod Ar. Smeša je mešana na -78°C tokom 50 minuta. 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (2,65 mL, 13,0 mmol) je dodat. Aceton/suvi led kada je uklonjena. Smeša je polako zagrejana do sobne temperature i mešana je tokom 4 sata. Smeša je koncentrisana do suvoće i EtOAc (200 mL) je dodat. Rezultujuća suspenzija je filtrirana kroz ploču dijatomejske zemlje, oprana je sa EtOAc (50 mL). Filtrat je koncentrisan do suvoće i ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (heksani/EtOAc) kako bi se dobio 3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (Međuproizvod 4, 2,76 g, 80%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 373.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 1,28 (s, 12H), 2,40 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 4,57 (s, 2H), 4,61 (s, 2H), 6,86 (d, 2H), 7,33 (d, 2H).

Međuproizvod 5: 1-((terc-Butildifenilsilil)oksi)propan-2-on

[0181]

[0182] 1-hidroksipropan-2-on (34,9 mL, 463 mmol) je rastvoren u nevodenom DMF (150 mL) pod Ar. Imidazol (34,1 g, 501 mmol) i DMAP (2,37 g, 19,3 mmol) su dodati i rastvor je ohlađen do 0°C. TBDPSCI (100 mL, 386 mmol) je dodat polako. Smeša je mešana na 0°C tokom 15 minuta, zatim na sobnoj temperaturi tokom 18 sati pod Ar. Voda (1 L) je dodata i vodena faza je ekstrahovana sa heksanima (4 x 200 mL). Kombinovane organske faze su oprane sa rasolom, osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrisane kako bi se dobio 1-((terc-butildifenilsilil)oksi)propan-2-on (Međuproizvod 5, 120 g, 100%). Ovaj materijal je korišćen bez daljeg prečišćavanja; m/z (ES+), [M+18]<+>= 330.<1>H NMR (400 MHZ, HLOROFORM-D) δ 1,12 (s, 9H), 2,20 (s, 3H), 4,17 (s, 2H), 7,36-7,49 (m, 6H), 7,62-7,70 (m, 4H).

Međuproizvod 6: Etil 5-((terc-butildifenilsilil)oksi)-2-hidroksi-4-oksopent-2-enoat [0183]

[0184] THF (1,50 L) je dodat kalijum terc-butoksidu (69,0 g, 570 mmol) i rastvor je ohlađen

4

do 0°C. Dietil oksalat (78,1 g, 570 mmol) je dodat polako, održavajući temperaturu ispod 0°C. Rastvor je mešan tokom 30 minuta na 0°C.1-((terc-butildifenilsilil)oksi)propan-2-on (Međuproizvod 5, 150 g, 480 mmol) je dodat polako, održavajući temperaturu ispod 0°C. Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata, i zatim je EtOAc (300 mL) dodat.

Rezultujuća smeša je acidifikovana sa 1 N HCl do pH=2 do 3. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (4 x 300 mL). Kombinovane organske faze su oprane sa rasolom, osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrisane do suvoće kako bi se dobio etil 5-((terc-butildifenilsilil)oksi)-2-hidroksi-4-oksopent-2-enoat (Međuproizvod 6, 160 g, 80%) m/z (ES-), [M-H]<->= 411.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 1,13 (s, 9H), 1,39 (t, 3H), 4,31 (s, 2H), 4,39 (q, 2H), 6,88 (s, 1H) 7,39-7,44 (m, 6H), 7,65 - 7,68 (m, 4H).

Međuproizvod 7: Etil 5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilat [0185]

[0186] Etil 5-((terc-butildifenilsilil)oksi)-2-hidroksi-4-oksopent-2-enoat (Međuproizvod 6, 350 g, 848 mmol) je rastvoren u etanolu (80,5 mL). Rastvor je ohlađen do 0°C i hidrazin monohidrat (53,2 g, 848 mmol, 80 težinskih procenata) je dodat na 0°C. Smeša je mešana na 80°C tokom 2 sata. Nakon završetka, smeša je ohlađena do 60°C i rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je razređen sa EtOAc (161 mL), i opran sa zasićenim NH4Cl (64,6 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 64,6 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i ispareni kako bi se dobio sirov proizvod. Sirov proizvod je prečišćen fleš silika hromatografijom (0 do 20% EtOAc u PE) kako bi se dobio etil 5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilat (Međuproizvod 7, 176 g, 60%); m/z (ES-), [M-H]<->= 407.<1>H NMR (400 MHz, DMSO), (prijavljen kao smeša tautomera) δ 1,00 (s, 9H), 1,28 (t, 3H), 4,28 (q, 2H), 4,73 (d, 2H), 6,54 (s, 1Hmajor), 6,71 (s, 1Hminor), 7,42-7,50 (m, 6H), 7,62-7,65 (m.4H), 13.48 (s, 1Hmajor) 13,81 (s, 1Hminor).

Međuproizvod 8: Etil 5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-karboksilat

[0187]

[0188] Etil 5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1H-pirazol-3-karboksilat (Međuproizvod 7, 175 g, 428 mmol) je rastvoren u nevodenom THF (1750 mL). Rastvor je ohlađen do 0°C i NaHMDS (238 mL, 476 mmol, 2 M u THF) je dodat na 0°C. Rezultujuća smeša je mešana na 0°C tokom 10 minuta, zatim na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Jodometan (91,0 g, 642 mmol) je dodat i smeša je mešana tokom 2 sata. Nakon završetka reakcije, smeša je koncentrisana do suvoće. EtOAc (3500 mL) je dodat i rezultujući rastvor je opran sa zasićenim vodenim NH4Cl rastvorom (1750 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 3500 mL). Kombinovane organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene kako bi se dobio etil 5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-karboksilat (Međuproizvod 8, 160 g, 88%) koji je korišćen bez prečišćavanja; m/z (ES+), [M+H]<+>= 423.<1>H NMR (300 MHz, HLOROFORM-d) δ 1,05 (s, 9H), 1,41 (t, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,42 (q, 2H), 4,68 (s, 2H), 6,56 (s, 1H), 7,37-7,50 (m, 6H), 7,61-7,69 (m, 4H).

Međuproizvod 9: (5-(((terc-Butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metanol [0189]

[0190] THF (800 mL) je dodat etil 5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-karboksilatu (Međuproizvod 8, 160 g, 378 mmol) kako bi se dobio narandžasti rastvor. Rastvor je ohlađen do 0°C i LAH (189 mL, 47,3 mmol) (2,0 M u THF) je dodat kapanjem, održavajući temperaturu ispod 0°C. Rezultujuća smeša je mešana na 0°C tokom 1 sata.

Smeša je razređena sa dietil etrom (1600 mL) i voda (14,4 mL) je dodata kapanjem ispod 0°C, praćeno sa 15% vodenim NaOH rastvorom (14,4 mL), i vodom (43 mL). Rezultujuća smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Nevodeni Na2SO4je dodat i suspenzija je mešana tokom 15 minuta. Masa je filtrirana kroz ploču dijatomejske zemlje i oprana sa dietil etrom. Filtrat je koncentrisan kako bi se dobio (5-(((tercbutildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metanol (Međuproizvod 9, 140 g, 97%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 381.<1>H NMR (300 MHz, HLOROFORM-d) δ 1,06 (s, 9H), 3,85 (s, 3H), 4,62 (s, 2H), 4,64 (s, 2H), 6,02 (s, 1H), 7,35-7,53 (m, 6H), 7,62-7,72 (m, 4H).

4

Međuproizvod 10: 5-(((terc-Butildifenilsilil)oksi)metil)-3-(hlorometil)-1-metil-1H-pirazol [0191]

[0192] (5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metanol (Međuproizvod 9, 380 g, 998 mmol) je rastvoren u DCM (4560 mL). Rastvor je ohlađen do 0°C i tionil hlorid (87,4 mL, 1200 mmol) je dodat veoma polako na 0°C. Reakcionoj smeši je omogućeno da se zagreje do sobne temperature i mešana je tokom 1 sata. U drugoj boci rastvor zasićenog vodenog natrijum bikarbonata (6330 mL) je ohlađen do 0°C. Reakciona smeša je polako dodata rastvoru natrijum bikarbonata uz mešanje. Dvofazna smeša je mešana dok nije prestalo penušanje. Faze su razdvojene. Organska faza je oprana sa rasolom, osušena preko nevodenog Na2SO4, filtrirana i koncentrisana kako bi se dobio 5-(((tercbutildifenilsilil)oksi)metil)-3-(hlorometil)-1-metil-1H-pirazol (Međuproizvod 10, 392 g, 98%)m/z (ES+), [M+H]<+>= 399.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 1,05 (s, 9H), 3,83 (s, 3H), 4,55 (s, 2H), 4,64 (s, 2H), 6,05 (s, 1H), 7,34-7,49 (m, 6H), 7,59 - 7,7 (m, 4H).

Međuproizvod 11: S-((5-(((terc-Butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)etantioat

[0193]

[0194] 5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-3-(hlorometil)-1-metil-1H-pirazol (Međuproizvod 10, 390 g, 977 mmol) je rastvoren u acetonitrilu (4130 mL). Kalijum tioacetat (233 g, 1950 mmol) i natrijum jodid (149 g, 9,42 mmol) su dodati. Reakciona smeša je mešana tokom 12 sati. Nakon završetka reakcije, smeša je filtrirana kroz ležaj dijatomejske zemlje i oprana je sa dihlorometanom. Filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom i ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (0 do 20% EtOAc u heksanu) kako bi se dobio S-((5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)etantioat (Međuproizvod 11, 309 g, 72%) m/z (ES+), [M+H]<+>= 439.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 1,04 (s, 9H), 2,34 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 4,08 (s, 2H), 4,60 (s, 2 H), 5,92

4

(s, 1H), 7,35 - 7,5 (m, 6H), 7,58 - 7,69 (m, 4H).

Međuproizvod 12: 3-(Acetiltio)naftalen-1-il acetat

[0195]

[0196] I2(38,7 g, 152 mmol) je dodat iz jednog dela smeši natrijum 4-hidroksinaftalen-2-sulfonata (75,0 g, 305 mmol), Ph3P (320 g, 1220 mmol) i 18-kruna-6 (24,2 g, 91,4 mmol) u toluenu (750 mL) na 20°C pod azotom. Rezultujuća smeša je mešana na 100°C tokom 17 sati. 1,4-Dioksan (150 mL) i voda (75 mL) su dodati i smeša je mešana na 100°C tokom dodatnog 1 sata. Na2SO4je dodat. Čvrsta materija je uklonjena filtriranjem i filtrat je delimično koncentrisan pod vakuumom kako bi se dobio 3-merkaptonaftalen-1-ol (360 g, 14 težinskih procenata u toluen). Proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja; m/z (ES-), [M-H]<->= 175.

[0197] AC2O (162 mL, 1720 mmol) je dodat kapanjem smeši DMAP (3,49 g, 28,6 mmol), 3-merkaptonaftalen-1-ola (360 g, 286 mmol, 14 težinskih procenata u toluenu) i Et3N (80 mL, 572 mmol) u DCM (1000 mL) na 0°C tokom perioda od 10 minuta pod azotom. Rezultujuća smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Reakciona smeša je razređena sa DCM (200 mL), i oprana sekvencijalno sa vodom (4 x 750 mL) i zasićenim rasolom (500 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrisan do suvoće. Ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (PE/EtOAc) kako bi se dobio 3-(acetiltio)naftalen-1-il acetat (Međuproizvod 12, 40,0 g, 50% iz 2 koraka); m/z (ES+), [M+H]+ = 261.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,48 (s, 3H), 2,49 (s, 3H), 7,34 (d, 1H), 7,55-7,62 (m, 2H), 7,88-7,92 (m, 3H).

Međuproizvod 13: Metil 6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-7-(3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-1H-indol-2-karboksilat [0198]

4

[0199] 3-((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (Međuproizvod 4, 18,6 g, 50,1 mmol) je rastvoren u smeši 1,4-dioksana i vode (4:1, 100 mL). CS2CO3(26,1 g, 80,1 mmol), metil 7-bromo-6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 1, 15,0 g, 40,0 mmol) i dihloro[1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen] paladijum(II) (0,783 g, 1,20 mmol) su dodati, praćeno sa dodatnim dioksanom i vodom (300 mL, 4:1). Smeša je degazirana i napunjena sa N2tri puta. Rezultujuća bistra braon smeša je smeštena u uljanu kadu unapred zagrejanu do 100°C. Smeša je mešana na 100°C tokom 3 sata. Smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrisana do 100 mL. EtOAc (200 mL) i voda (100 mL) su dodati. Slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovane organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrisane. Ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (heksani/EtOAc) kako bi se dobio metil 6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-7-(3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 13, 20,0 g, 92%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 540.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,11 (s, 3H), 2,73 (t, 2H), 3,39-3,50 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 4,14 (d, 1H), 4,33 - 4,40 (m, 3H), 6,76 (d, 2H), 7,01 (d, 2H), 7,25 (d, 1H), 7,64 (d, 1H), 9,17 (s, 1H).

Međuproizvod 14: Metil 6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-7-(3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat [0200]

4

[0201] Metil 6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-7-(3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 13, 22,2 g, 37,2 mmol, 90,5 težinskih procenata) je rastvoren u nevodenom DMF (100 mL). Cs2CO3(18,2 g, 55,8 mmol) je dodat. Smeša je mešana tokom 20 minuta i Mel (4,65 mL, 74,4 mmol) je dodat. Smeša je mešana tokom 2,5 sati. Voda (300 mL) je dodata i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovane organske faze su koncentrisane do suvoće. Ostatak je rastvoren u EtOAc (300 mL) i rezultujući rastvor je opran sa vodom (3 x 50 mL) kako bi se dodatno uklonio DMF. Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana do suvoće kako bi se dobio metil 6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-7-(3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 14, 22,1 g, 100%, 93,1 težinskih procenata), koji je korišćen bez prečišćavanja; m/z (ES+), [M+H]<+>= 554.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,06 (s, 3H), 2,67 (t, 2H), 3,29 - 3,41 (m, 2H), 3,49 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 4,25 - 4,36 (m, 4H), 6,67 (d, 2H), 6,86 (d, 2H), 7,23 (d, 1H), 7,62 (d, 1H).

Međuproizvod 15: Metil 6-hloro-7-(3-(hidroksimetil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat

[0202]

[0203] Metil 6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-7-(3-(((4-metoksibenzil)oksi)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 14, 22,1 g, 37,3 mmol) je rastvoren u DCM (56 mL) i TFA (28,7 mL, 373 mmol) je dodat na 0°C. Ledena kada je uklonjena i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata. DCM (200 mL) je dodat. Organska faza je oprana sekvencijalno sa vodom (3 x 75 mL) i zasićenim vodenim NaHCO3(2 x 50 mL) i vodena faza je ekstrahovana sa DCM (100 mL). Organske faze su kombinovane i 2 mL MeOH i Et3N (2 mL) su dodati. Smeša je mešana tokom 30 minuta i koncentrisana do suvoće. Voda (50 mL) je dodata i vodena faza je ekstrahovana sa DCM (3 x

4

100 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana. Ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (DCM/EtOAc zatim 10% MeOH u DCM) kako bi se dobio metil 6-hloro-7-(3-(hidroksimetil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 15, 13,7 g, 85%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 434.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,07 (s, 3H), 2,67 (t, 2H), 3,34 (t, 2H), 3,54 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,48 (ABq, 2H), 7,24 (d, 1H), 7,65 (d, 1H).

Međuproizvod 16: Metil 6-hloro-7-(3-(hlorometil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat

[0204]

[0205] Metil 6-hloro-7-(3-(hidroksimetil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 15, 13,0 g, 29,9 mmol) je rastvoren u DCM (150 mL) pod Ar. Rastvor je ohlađen do 0°C i tionil hlorid (2,62 mL, 35,9 mmol) je dodat. Ledena kada je uklonjena i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, zatim je koncentrisana. DCM (50 mL) je dodat i rezultujući rastvor je opran sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3i rasolom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrisan kako bi se dobio metil 6-hloro-7-(3-(hlorometil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 16, 13,6 g, 100%) koji je korišćen bez prečišćavanja; m/z (ES+), [M+H]<+>= 452.<1>H NMR (300 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,06 (s, 3H), 2,68 (t, 2H), 3,58 (t, 2H), 3,56 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,45 (ABq, 2H), 7,26 (d, 1H), 7,66 (d, 1H).

Međuproizvod 17: Metil 6-hloro-7-(3-(jodometil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat

[0206]

[0207] Metil 6-hloro-7-(3-(hlorometil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 16, 13,5 g, 29,9 mmol) je rastvoren u acetonitrilu (100 mL) i natrijum jodid (7,86 g, 52,4 mmol) je dodat. Smeša je mešana na 80°C tokom 2,5 sata. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je filtrirana kroz ploču dijatomejske zemlje i koncentrisana. Voda (100 mL) i EtOAc (100 mL) su dodati, slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 100 mL). Kombinovana organska materija je osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana kako bi se dobio metil 6-hloro-7-(3-(jodometil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 17, 15,7 g, 96%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 544.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,06 (s, 3H), 2,69 (t, 2H), 3,37 (t, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 4,22 (ABq, 2H), 7,27 (d, 1H), 7,68 (d, 1H).

Međuproizvod 18: Metil 7-(3-((((5-((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metiltio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat

[0208]

[0209] Metil 6-hloro-7-(3-(jodometil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 17, 7,60 g, 13,9 mmol) je rastvoren u MeOH (30 mL) i THF (15 mL) kako bi se dobila suspenzija. K2CO3(1,93 g, 13,9 mmol) je dodat. Smeša je degazirana i napunjena sa N2. S-((5-(((terc-

1

butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil) etantioat (Međuproizvod 11, 6,74 g, 15,4 mmol) u degaziranom MeOH (15 mL) je dodat kapanjem tokom 5 minuta. Nakon dodavanja rastvora tioacetata, smeša je degazirana ponovo, zatim je mešana tokom 2 sata. Smeša je koncentrisana do suvoće i EtOAc (100 mL) je dodat. Organska faza je oprana sa vodom, osušena preko Na2SO4i koncentrisana. Ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (heksani/EtOAc) kako bi se dobio metil 7-(3-((((5-(((tercbutildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 18, 7,10 g, 63%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 812.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 1,04 (s, 9H), 2,04 (s, 3H), 2,65 (t, 2H), 3,32 (t, 2H), 3,52 - 3,57 (m, 5H), 3,61 (s, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,91 (s, 3H), 4,58 (s, 2H), 5,93 (s, 1H), 7,22 (d, 1H), 7,35 - 7,49 (m, 6H), 7,58 (d, 1H), 7,61-7,71 (m, 4H).

Međuproizvod 19: Metil 6-hloro-7-(3-((((5-(hidroksimetil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat

[0210]

[0211] Metil 7-(3-((((5-(((terc-butildifenilsilil)oksi)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-6-hloro-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 18, 13,9 g, 17,1 mmol) je rastvoren u THF (40 mL) i TBAF (17,1 mL, 17,1 mmol) (1 M u THF) je dodat. Smeša je mešana tokom 1 sata i zatim je koncentrisana. EtOAc (200 mL) je dodat i organska faza je oprana sekvencijalno sa vodom i rasolom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana. Ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (heksani/EtOAc) kako bi se dobio metil 6-hloro-7-(3-((((5-(hidroksimetil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 19, 8,40 g, 86%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 574.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,05 (s, 3H), 2,68 (dd, 2H),

2

3,35 (dd, 2H), 3,52 - 3,59 (m, 7H), 3,67 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,56 (s, 2H), 5,95 (s, 1H), 7,24 (d, 1H), 7,64 (d, 1H).

Međuproizvod 20: Metil 6-hloro-7-(3-((((5-(hlorometil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat

[0212]

[0213] Metil 6-hloro-7-(3-((((5-(hidroksimetil)-1-metil-1 H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 19, 8,70 g, 15,2 mmol) je rastvoren u nevodenom DCM (100 mL) pod Ar. Smeša je ohlađena do 0°C. Tionil hlorid (1,33 mL, 18,2 mmol) je dodat. Ledena kada je uklonjena. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta i zatim je koncentrisana. DCM (50 mL) je dodat. Rezultujući rastvor je opran sekvencijalno sa vodom, zasićenim vodenim NaHCO3i rasolom, osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrisan kako bi se dobio metil 6-hloro-7-(3-((((5-(hlorometil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 20, 9,00 g, 100%), koji je korišćen bez prečišćavanja; m/z (ES+), [M+H]<+>= 592.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,05 (s, 3H), 2,65 - 2,68 (m, 2H), 3,31 - 3,41 (m, 2H), 3,52 - 3,59 (m, 7H), 3,68 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,49 (s, 2H), 6,07 (s, 1H), 7,25 (d, 1H) 7,63 (d, 1H).

Međuproizvod 21: Metil 6-hloro-7-(3-((((5-(((4-hidroksinaftalen-2-il)tio)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat

[0214]

[0215] K2CO3(5,15 g, 37,3 mmol) je dodat smeši metil 6-hloro-7-(3-((((5-(hlorometil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilata (Međuproizvod 20, 9,20 g, 15,5 mmol) i 3-(acetiltio)naftalen-1-il acetata (Međuproizvod 12, 4,45 g, 17,1 mmol) u MeOH (120 mL). Rezultujuća smeša je mešana tokom 1 sata. Reakciona smeša je isparena do suvoće. Ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (150 mL). Rezultujući rastvor je opran sekvencijalno sa vodom (2 x 100 mL) i rasolom (100 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrisan. Ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (0-10% MeOH u DCM) kako bi se dobio metil 6-hloro-7-(3-((((5-(((4-hidroksinaftalen-2-il)tio)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 21, 7,42 g, 65,3%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 732.<1>H NMR (300 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,09 (s, 3H), 2,62 - 2,74 (m, 2H), 3,31 - 3,66 (m, 12H), 3,70 (s, 3H), 3,94 - 3,96 (m, 8H), 6,07 (s, 1H), 6,65 (d, 1H) 7,24 (d, 1H), 7,43 - 7,56 (m, 2H), 7,59 - 7,71 (m, 2H), 7,71 - 7,80 (m, 1H), 8,19-8,30 (m, 1H).

Međuproizvod 22: Metil 6-hloro-7-(3-((((5-(((4-hidroksinaftalen-2-il)tio)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-hidroksipropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat

[0216]

4

[0217] Metil 6-hloro-7-(3-((((5-(((4-hidroksinaftalen-2-il)tio)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-metoksi-3-oksopropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 21, 5,00 g, 6,83 mmol) je rastvoren u THF (20 mL) pod Ar. Rezultujući rastvor je ohlađen do 0°C i boran tetrahidrofuran kompleks (37,6 mL, 37,6 mmol) (1 M u THF) je dodat. Ledena kada je uklonjena i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5,5 sati. Reakciona smeša je koncentrisana i ohlađena do 0°C, praćeno sa dodavanjem MeOH (20 mL) i 6 N HCl (40 mL) (egzotermno). Rezultujući rastvor je mešan na 0°C tokom 10 minuta, zatim na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta. Zapremina smeše je redukovana do 1/3 pod redukovanim pritiskom. Voda (200 mL) je dodata i vodena faza je ekstrahovana sa 10% MeOH u DCM (9 x 50 mL). Kombinovane organske faze su oprane sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3(50 mL) i rasolom, osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrisane. Ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (heksani/EtOAc) kako bi se dobio racemski metil 6-hloro-7-(3-((((5-(((4-hidroksinaftalen-2-il)tio)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-hidroksipropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilat (Međuproizvod 22, 4,05 g, 84%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 704.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 1,93 - 2,03 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 3,18 (t, 2H), 3,41 - 3,64 (m, 10H), 3,68 (t, 2H), 3,91 - 3,98 (m, 8H), 6,05 (s, 1H), 6,64 (d, 1H), 7,25 (d, 1H) 7,43 - 7,58 (m, 2H), 7,61 - 7,68 (m, 2H), 7,72 - 7,81 (m, 1H), 8,26 (d, 1H).

Međuproizvod 23: Metil 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilat

[0218]

[0219] Trifenilfosfin (1,58 g, 6,02 mmol) je rastvoren u toluenu (30 mL) i rastvor di-tercbutil diazen-1,2-dikarboksilata (1,39 g, 6,02 mmol) i metil 6-hloro-7-(3-((((5-(((4hidroksinaftalen-2-il)tio)metil)-1-metil-1H-pirazol-3-il)metil)tio)metil)-1,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)-3-(3-hidroksipropil)-1-metil-1H-indol-2-karboksilata (Međuproizvod 22, 2,12 g, 3,01 mmol) u toluenu (27,6 mL) i THF (2,50 mL) je dodat levkom za dodavanje tokom 1 sata. Nakon dodavanja, smeša je mešana tokom 1 sata. Reakciona smeša je razređena sa EtOAc (50 mL) i MeOH (5 mL) i zatim oprana sekvencijalno sa vodom, 2 N HCI i rasola, osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana. MeOH (10 mL) je dodat do rezultujućem ostatku. Smeša je sonifikovana tokom 5 minuta kako bi se dobila bela suspenzija. Čvrsta materija je prikupljena, oprana sa MeOH (6 mL) i osušena kako bi se dobila prva serija proizvoda (1,34 g, 64%). Matična tečnost je koncentrisana i ostatak je prečišćen kolonom silika gel hromatografije (heksani/EtOAc) kako bi se dobila druga serija proizvoda. Ukupna količina metil 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilata (Međuproizvod 23) je 1,40 g (68%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 686.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,05 (s, 3H), 2,22 - 2,25 (m, 1H), 2,38 - 2,51 (m, 1H), 2,68 (d, 1H), 3,09 (d1H), 3,21 - 3,32 (m, 2H), 3,45-3,56 (m, 2H), 3,63 - 3,73 (m, 4H), 3,75 - 3,84 (m, 4H), 3,84 - 3,96 (m, 8H), 4,92 (s, 1H), 6,25 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,50 - 7,59 (m, 4H), 7,70 - 7,81 (m, 1H), 8,22 - 8,38 (m, 1H).

Međuproizvod 24 i Međuproizvod 25: (Ra)-(+)-metil 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilat i (Sa)-(-)-metil 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilat

[0221] Međuproizvod 23 (4,70 g, 6,85 mmol) je podvrgnut hiralnoj SFC (Chiralpak IA® kolona, 21 x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 40°C, 45:55 i-PrOH:CO2, UV detektovanje @ 220 nm, opterećenje= 150 mg/inj, koncentracija = 60 mg/mL, rastvarač=MeOH/DCM, stopa protoka = 60 mL/minuta, izlazni pritisak = 100 bar).

[0222] Međuproizvod 24, (Ra)-(+)-izomer eluiran prvi (1,87 g, 37%, >98% e.e.): m/z (ES+), [M+H]<+>= 686.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,05 (s, 3H), 2,22 - 2,25 (m, 1H), 2,38 - 2,51 (m, 1H), 2,67 (d, 1H), 3,09 (d, 1H) 3,19 - 3,32 (m, 2H), 3,45 - 3,56 (m, 2H), 3,63 -3,73 (m, 4H), 3,75 - 3,84 (m, 4H), 3,84 - 3,96 (m, 8H), 4,92 (s, 1H), 6,25 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,44 - 7,59 (m, 4H), 7,70 - 7,81 (m, 1H), 8,22 - 8,38 (m, 1H).

Provera čistoće enantiomernim viškom nakon prečišćavanja:

[0223] Postupak hiralne analize: SFC: Chiralpak IA® kolona, 4,6 x 100 mm, 5 µm, Temperatura = 40°C, 35:65 i-PrOH:CO2, UV detektovanje na 220 nm, stopa protoka = 5,0 mL/minuta, izlazni pritisak =125 bar. Vreme zadržavanja od 1,63 minuta, >98% ee, [α]D+64° (c = 0,1, MeOH)

[0224] Međuproizvod 25, (Sa)-(-)-izomer eluiran drugi: (1,40 g, 28%, >98% e.e.): m/z (ES+), [M+H]<+>= 686.<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ 2,05 (s, 3H), 2,22 - 2,25 (m, 1H), 2,38 - 2,51 (m, 1H), 2,67 (d, 1H), 3,09 (d, 1H) 3,19 - 3,32 (m, 2H), 3,45 - 3,56 (m, 2H), 3,63 - 3,73 (m, 4H), 3,75 - 3,84 (m, 4H), 3,84 - 3,96 (m, 8H), 4,92 (s, 1H), 6,25 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,44 - 7,59 (m, 4H), 7,70 - 7,81 (m, 1H), 8,22 - 8,38 (m, 1H).

Provera čistoće enantiomernim viškom nakon prečišćavanja:

[0225] Postupak hiralne analize kao za Međuproizvod 24. Vreme zadržavanja od 3,77 minuta, , >98% ee, [α]D-64° (c = 0,1, MeOH)

Primer 1: 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina

[0226]

[0227] MeOH (48 mL) i THF (48 mL) su dodati metil 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22 pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31 ,33,35-tridekaen-23-karboksilatu (Međuproizvod 23, 1,25 g, 1,78 mmol) kako bi se dobila suspenzija. LiOH (0,556 g, 23,2 mmol) i voda (12 mL) su dodati i suspenzija je degazirana i napunjena sa Ar. Smeša je mešana na 80°C tokom 2,5 sati. Nakon hlađenja do sobne temperature, 2 N HCI (20 mL) je dodat i smeša je koncentrisana do suvoće. Voda (50 mL) je dodat ostatku kako bi se dobila bela suspenzija. Bela čvrsta materija je prikupljena filtriranjem i oprana sa vodom (2 x 10 mL). Ova čvrsta materija je ponovo rastvorena u 10% MeOH u DCM (150 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana do suvoće kako bi se dobila 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina

(Primer 1, 1,05 g, 88%); m/z (ES+), [M+H]<+>= 672.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,97 (s, 3H), 2,20-2,30 (m, 1H), 2,35-2,50 (m, 1H), 2,90 (d, 1H), 3,07 - 3,19 (m, 3H), 3,40 - 3,47 (m, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,86 (dd, 1H), 4,07 - 4,15 (m, 1H), 4,27 (s, 2H), 4,76 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 7,14 (d, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,45-7,52 (m, 2H), 7,71 (d, 1H), 7,87 (d, 1H), 8,10 (d, 1H), 13,32 (br. S., 1H).

Primer 2: (Ra)-(+)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina

[0228]

[0229] (Ra)-(+)-metil 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta 1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilat (Međuproizvod 24, 1,87 g, 2,51 mmol) je rastvoren u MeOH (8,35 mL), THF (8,35 mL) i vodi (8,35 mL). LiOH (0,90 g, 37,6 mmol) je dodat. Smeša je mešana tokom 4 sata. Smeša je koncentrisana do suvoće. 2 N HCI (25 mL) je dodat. Vodena faza je ekstrahovana sa 5% MeOH u DCM (4 x 30 mL). Kombinovane organske faze su oprane sa rasolom, osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrisane. MeOH (20 mL) je dodat ostatku kako bi se dobio bistar rastvor. Ovaj bistar rastvor je koncentrisan kako bi se dobila bela čvrsta materija koja je osušena pod vakuumom kako bi se dobila (Ra)-(+)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina (Primer 2, 1,55 g, 92%, >98% e.e.); m/z (ES+), [M+H]<+>= 672.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,97 (s, 3H), 2,20-2,30 (m, 1H), 2,35-2,50 (m, 1H), 2,90 (d, 1H), 3,07 - 3,19 (m, 3H), 3,40 - 3,47 (m, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,86 (dd, 1H), 4,07 - 4,15 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 4,75 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 7,14 (d, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,45-7,52 (m, 2H), 7,71 (d, 1H), 7,87 (d, 1H), 8,10 (d, 1H), 13,32 (br. S.1H).

Provera čistoće enantiomernim viškom nakon prečišćavanja:

[0230] Postupak hiralne analize: SFC: Chiralpak ID® kolona, 4,6 x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 40°C, 40:60 MeOH:CO2, UV detektovanje na 220 nm, stopa protoka = 2,8 mL/minuta, izlazni pritisak = 100 bar, Vreme zadržavanja od 7,33 minuta, >98% e.e., [α]D+87° (c = 0,042, MeOH)

Primer 3: (Sa)-(-)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina

[0231]

[0232] Počevši od (Sa)-(-)-metil 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta 1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilata (Međuproizvod 25, 1,40 g, 2,04 mmol), ista procedura kao ona data za Primer 2 je izvršena kako bi se dobila (Sa)-(-)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina (Primer 3,1,25 g, 91%, >98% e.e.); m/z (ES+), [M+H]<+>= 672.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,97 (s, 3H), 2,20 - 2,30 (m, 1H), 2,35 - 2,50 (m, 1H), 2,90 (d, 1H), 3,07 - 3,19 (m, 3H), 3,40 - 3,47 (m, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,86 (dd, 1H), 4,07 - 4,15 (m, 1H), 4,27 (s, 2H), 4,76 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 7,14 (d, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,45 - 7,52 (m, 2H), 7,71 (d, 1H), 7,87 (d, 1H), 8,10 (d, 1H), 13,32 (br. S., 1H).

Provera čistoće enantiomernim viškom nakon prečišćavanja:

[0233] Postupak hiralne analize kao za Primer 2: Vreme zadržavanja od 9,36 minuta, >98% e.e., [α]D-92° (c = 0,048

Primer 4: In vitro aktivnost Primera 1, 2 i 3

Analiza aktivnosti kaspaze

[0234] Ovo je ćelijski test za merenje indukcije apoptoze u MOLP-8 (multipli mijelom), KMS-12-BM (multipli mijelom), MV-4-11 (akutna mijeloidna leukemija) i NCI-H23 (rak nemalih ćelija pluća) ćelijama posle 6 sati tretmana. Prvog dana je 3000 (MOLP-8, KMS-12-BM, MV-4-11) ili 1250 (NCI-H23) ćelija/komorica posejano u 50 µL medijuma za rast (IMDM 10% FBS 2 mM L-Glu za MV-4-11 i RPMI-1640 10% FBS 2 mM L-Glu za sve ostale ćelijske linije) na belim mikropločama sa 384 komorice, i inkubirano je preko noći (37°C, 5% C02, 80% RH). Drugog dana ćelije su tretirane inhibitorima Mcl-1 korišćenjem ECHO akustičnog tečnog agensa za rukovanje (10 tačaka polu-log serijskog razređivanja, 31,5 µM maksimalna koncentracija, 0,3% krajnja DMSO koncentracija). Posle 6 sati inkubacije (37°C, 5% C02, 80% RH), 25 µL Caspase-Glo 3/7 reagensa(Promega) je dodato u svaku komoricu, i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta zaštićene od svetlosti. Luminescencija je snimljeno korišćenjem Infinite M200 čitača mikroploča (Tecan) sa vremenom integracije od 100 ms. EC50vrednosti su izračunate korišćenjem GeneData softvera za analizu.

Tabela 1. Rezultati in vitro testa aktivnosti kaspaze

Primer 5: Čvrsti oblici (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

Analiza praškaste difrakcije X-zraka (XRPD)

[0235] XRPD analiza izvedena je korišćenjem Bruker D4 difraktometra, koji je komercijalno dostupan od Bruker AXS Inc™ (Madison, Wisconsin). XRPD spektri dobijeni su postavljanjem uzorka (približno 20 mg) materijala za analizu na jedan nosač silikonskog kristala (npr. Bruker silicijumski nosač uzorka sa nultom pozadinom difrakcije X-zraka) i širenjem uzorka u tankom sloju uz pomoć pločice mikroskopa. Uzorak je centrifugiran brzinom od 30 obrtaja u minuti (radi poboljšanja statistike brojanja) i ozračen je rendgenskim zracima generisanim bakarnim duguljastim fokusnim cevima koje rade na 40 kV i 40 mA sa talasnom dužinom od 1,5406 angstroma (tj. oko 1.54 angstroma). Uzorak je bio izložen 1

1

sekundu po 0,02 stepena 2-teta koraka (režim kontinuiranog skeniranja) tokom raspona od 2 stepena do 40 stepeni 2-teta u teta-teta režimu. Vreme trajanja bilo je 31 minut, 41 sekunda.

[0236] XRPD2θ vrednosti mogu varirati u razumnom rasponu, npr., u rasponu ± 0,2°, i XRPD intenziteti mogu da variraju ako se mere značajno za isti kristalni oblik iz različitih razloga, uključujući, na primer, poželjnu orijentaciju. XRPD principi su opisani u publikacijama, kao što su, na primer, Giacovazzo, C. et al. (1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. and Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; i Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York.

DSC analiza

[0237] DSC analiza je izvedena na uzorcima pripremljenim prema standardnim postupcima koristeći Q SERIES™ Q1000 DSC kalorimetar dostupan od TA INSTRUMENTS® (New Castle, Delaware). Uzorak (približno 2 mg) je izmeren u aluminijumskoj posudi za uzorke, i prebačen u DSC. Instrument je prečišćen azotom pri 50 ml/min, i podaci su prikupljeni između oko 22°C i 300°C, koristeći dinamičku brzinu zagrevanja od oko 10°C/minut.

Termički podaci su analizirani pomoću standardnog softvera, npr., Universal v.4.5A, od TA INSTRUMENTS®.

Termogravimetrijska analiza (TGA)

[0238] TGA je izvedena na uzorcima pripremljenim prema standardnim postupcima koristeći Q SERIES™ Q5000 termogravimetrijski analizator dostupan od TA Instruments INSTRUMENTS® (New Castle, Delaware). Uzorak (približno 5 mg) je stavljen u aluminijumsku posudu za uzorke i prebačen u TGA peć. Instrument je prečišćen azotom pri 50 ml/min, i podaci su prikupljeni između 25°C i 300°C, koristeći dinamičku brzinu zagrevanja od 10°C/minut. Termički podaci su analizirani pomoću standardnog softvera, npr., Universal v.4.5A, od TA INSTRUMENTS®.

Priprema Oblika A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

[0239]

Postupak 1: 10 mg (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

2

1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline je rastvoreno u 1,0 mL MeOH i 5 kapi vode. Rezultujući rastvor je isparen u uslovima okruženja do suvoće. Rezultujući beli prašak je identifikovan kao Oblik A.

Postupak 2: 10 mg (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline, Oblik C (ili Oblik F), je suspendovano u 0,2 mL vode. Rezultujuća suspenzija je mešana tokom 2 dana. Rezultujuća čvrsta materija je identifikovana kao Oblik A.

Postupak 3: Količina od 1,5 g (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilna kiselina (Oblik F) je dodat posudi i 4,5 mL MeOH i 0,5 mL H2O (9:1) su dodati kako bi se dobila suspenzija. Rezultujuća suspenzija je mešana preko noći i suspenzija je isparena do suvoće. XRPD je pokazao da je Oblik F konvertovan u Oblik A.

[0240] Oblik A (Postupak 3) je analiziran pomoću XRPD i rezultati su dati u tabeli u nastavku (Tabela 2) i prikazani na Slici 1.

Tabela 2. XRPD vrhovi za Oblik A

[0241] Oblik A (Postupak 3) je analiziran pomoću termičkih tehnika. DSC analiza je ukazala da Oblik A ima endotermni događaj desolvacije sa početkom na oko 121°C, i vrhom na oko 158°C, praćeno sa endotermnim događajem topljenja/razgradnje sa početkom na oko 181°C i vrhom na oko194°C. TGA ukazuje da Oblik A ispoljava gubitak mase od oko 4,0% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 160°C. Reprezentativni DSC/TGA termogram Oblika A je prikazan na Slici 2.

[0242] Pojedinačni kristali Oblika A su dobijeni sporim isparavanjem MeOH/H2O (1:1 odnos

4

zapremina). Analiza strukture pojedinačnih kristala potvrdila je da je Oblik A oblik monohidrata. Kristalografski podaci: Prostorna grupa monoklinički P2(1), dimenzije ćelijske jedinice: = 13,83(3) Å, b = 7,578(14) Å, c = 33,57(6) Å, β = 90,23(2)°, V = 3518(12) Å<3>.

Priprema Oblika B (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

[0243] Pojedinačni kristali (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline, Oblik B, su dobijeni sporim isparavanjem MeOH rastvora (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline sa 1:1 molarnim odnosom meglumina. Kad su se kristali pojavili od rastvora, jedan je ručno prikupljen. Analiza strukture pojedinačnih kristala potvrdila je da je Oblik B monometanolski solvat slobodne kiseline. Kristalografski podaci: Prostorna grupa Ortorombna P2(1)2(1)2(1), dimenzije ćelijske jedinice: = 7,530(7) Å, b = 13,956(12) Å, c = 34,44(3) Å, V = 3619(5) Å<3>.

Priprema Oblika C (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

[0244]

Postupak 1: 300 mg amorfne (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline je uzeto u EtOH (3 mL) i zagrevano do rastvaranja. Nakon hlađenja do sobne temperature, rastvor je mešan preko noći, kada se formirao čvrsti talog. On je prikupljen filtriranjem i osušen kako bi se kao prinos dobio Oblik C (266 mg, 81%).

Postupak 2: 10 mg amorfne (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline je suspendovano u 0,2 mL EtOH. Rezultujuća suspenzija je mešana tokom 1 dana. Oblik C je dobijen nakon isparavanja suspenzije u uslovima okruženja. Oblik C (Postupak 1) je analiziran pomoću XRPD i rezultati su dati u tabeli u nastavku (Tabela 3) i prikazani na Slici 3.

Tabela 3. XRPD vrhovi za Oblik C

[0245] Oblik C (Postupak 1) je analiziran pomoću termičkih tehnika. DSC analiza je ukazala da Oblik C ima endotermni događaj desolvacije sa početkom na oko 123°C, i vrhom na oko 140°C, praćeno sa endotermnim događajem topljenja/razgradnje sa početkom na oko 185°C, i vrhom na oko 196°C. TGA ukazuje da Oblik C ispoljava gubitak mase od oko 6,4% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 160°C. Reprezentativni DSC/TGA termogram Oblika C prikazan je na Slici 4.

Priprema Oblika D (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

[0246]

Postupak 1: 10 mg amorfne (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline je suspendovano u 0,2 mL EtOAc. Rezultujuća suspenzija je mešana tokom 1 dana i dobijen je delimično kristalni materijal. Spoljna temperatura bočice je zagrejana do 100°C i rezultujuća suspenzija je mešana tokom 15 minuta. Suspenzija je mešana tokom 3 dana nakon hlađenja do temperature okruženja i Oblik D je identifikovan.

Postupak 2: 10 mg amorfne (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline je rastvoreno u 0,2 mL vrućeg acetona, i bela čvrsta materija je taložena nakon što je bistar rastvor ohlađen do sobne temperature. Rezultujuća suspenzija je mešana tokom 3 dana. Oblik D je identifikovan.

[0247] Oblik D (Postupak 2) je analiziran pomoću XRPD i rezultati su dati u tabeli u nastavku (Tabela 4) i prikazani su na Slici 5.

Tabela 4. XRPD vrhovi za Oblik D

[0248] Oblik D (Postupak 2) je analiziran pomoću termičkih tehnika. DSC analiza je ukazala da Oblik D ima endotermni događaj topljenja sa početkom na oko 156°C, i vrhom na oko 175°C. TGA ukazuje da Oblik D ispoljava gubitak mase od oko 3,6% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 170°C. Reprezentativni DSC/TGA termogram Oblika D prikazan je na Slici 6.

Priprema Oblika E (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

[0249] 5 mg (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline je rastvoreno u 0,5 mL vrućeg IPA/H2O (3:1) i kristali su dobijeni nakon što je rastvor ohlađen. Rastvor je polako isparen do suvoće. Oblik E je identifikovan.

[0250] Oblik E je analiziran pomoću XRPD i rezultati su dati u tabeli u nastavku (Tabela 5) i prikazani na Slici 7.

Tabela 5. XRPD vrhovi za Oblik E

Priprema Oblika F pentahidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

[0251] 5 mg (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline je rastvoreno u 1,0 mL EtOH/H2O (3:1), i rezultujući rastvor je polako ispareni u okruženje. Rezultujući kristalni materijal je identifikovan kao Oblik F.

[0252] Oblik F je analiziran pomoću XRPD i rezultati su dati u tabeli u nastavku (Tabela 6) i prikazani su na Slici 8.

Tabela 6. XRPD vrhovi za Oblik F

[0253] Oblik F je analiziran pomoću termičkih tehnika. DSC analiza je ukazala da Oblik F ima endotermni događaj desolvacije sa početkom na oko 40°C, i vrhom na oko 67°C, praćeno sa endotermnim događajem topljenja/razgradnje sa početkom na oko 185°C, i vrhom na oko 195°C. TGA ukazuje da Oblik F ispoljava gubitak mase od oko 4,3% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 100°C. Reprezentativni DSC/TGA termogram za Oblik F prikazan je na Slici 9.

[0254] 10 mg (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline je rastvoreno u 1,0 mL aceton/aH2O (4:1), i rezultujući rastvor je polako isparen do suvoće kako bi se kao prinos dobio Oblik F. Analiza strukture pojedinačnih kristala je pokazala je da je u pitanju pentahidratni oblik. Kristalografski podaci: Prostorna grupa Triklinički P1, dimenzije ćelijske jedinice: = 7,458(9) Å, b = 13,993(17) Å, c = 16,90(2) Å, α = 96,298(15)°, β = 91,987(13)°, γ = 91,604(14)°, i V = 1751(4) Å<3>.

Priprema natrijumove soli (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

[0255] 135 mg (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline, Oblik C, (0,2 mmol) je suspendovano u 5 mL MeOH, i suspenziji je dodato 200 µL 1,0 N NaOH vodenog rastvora. Suspenzija je mešana dok se čvrsta materija nije rastvorila. Bistar rastvor je isparen, i rezultujuća čvrsta materija je suspendovana sa EtOAc tokom 3 dana. Kristalni materijal je dobijen nakon što je suspenzija isparena do suvoće.

[0256] Kristali su analizirani pomoću XRPD i rezultati su dati u tabeli u nastavku (Tabela 7) i prikazani na Slici 10.

Tabela 7. XRPD vrhovi za natrijumovu so

[0257] Natrijumova so je analizirana pomoću termičkih tehnika. DSC analiza je ukazala da natrijum so ima širok endotermni događaj desolvacije od oko 100°C do oko 200°C, praćeno sa endotermnim događajem topljenja sa početkom na oko 239°C, i vrhom na oko 246°C. TGA ukazuje da natrijum so ispoljava gubitak mase od oko 4,0% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 175°C. Reprezentativni DSC/TGA termogram natrijum soli prikazan je na Slici 11.

Priprema megluminske soli (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27,7,1,1<4,7>,0<11,15>0<16,21>,0<20,24>,0<30,35>]oktatriakonta-

1

1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline

[0258] 135 mg (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline (0,2 mmol) je suspendovano u 2 mL MeOH i dodato je 4 mL 0,05 M rastvora meglumina u MeOH.

Suspenzija je mešana preko noći i zatim isparena do suvoće. Oko 2 mL EtOAc je dodato kako bi se kao prinos dobila suspenzija, i suspenzija je mešana tokom 3 dana. Kristalni materijal je dobijen nakon što je suspenzija isparena do suvoće.

[0259] Megluminska so je analizirana pomoću XRPD i rezultati su dati u tabeli u nastavku (Tabela 8) i prikazani Slici 12.

Tabela 8. XRPD vrhovi za megluminsku so

[0260] Megluminska so je analizirana pomoću termičkih tehnika. DSC analiza je ukazala da megluminska so ima širok endotermni događaj desolvacije sa početkom na oko 69°C, i

2

vrhom na oko 88°C, praćeno sa endotermnim događajem desolvacije sa početkom na oko 102°C, i vrhom na oko 104°C. TGA ukazuje da megluminska so ispoljava gubitak mase od oko 10,6% nakon zagrevanja od oko 25°C do oko 150°C. Reprezentativni DSC/TGA termogram megluminske soli je prikazan na Slici 13.

Primer 6: Aktivnost pojedinačnog agensa i kombinacije iz Primera 2 in vivo u tumorskim modleima ljudskog multiplog mijeloma

[0261] Postupak: Primer 2 je formulisan u 30% 2-hidroksipropil-beta-ciklodekstrinu (HPBCD), pH 9 i doziran intravenski (iv) u količini od 5 ml/kg.5 x 10<6>MOLP-8 tumorskih ćelije ili 10<7>NCI-H929 tumorskih ćelija injektirano je subkutano u desni bok C.B-17 SCID ženki miševa u zapremini od 0,1 mL. Zapremina tumora (mereno šestarom) je izračunata po formuli: dužina (mm) x širina (mm)<2>/0,52. Za studije efikasnosti, miševi su nasumično podeljeni na osnovu zapremina tumora, i inhibicija rasta procenjena je poređenjem razlika u zapremini tumora između kontrolnih i tretiranih grupa. Doziranje je počelo kada je srednja veličina tumora dostigla približno 160 mm<3>za MOLP-8, i približno 230 mm<3>za NCI-H929.

[0262] Rezultati: Primer 2 je indukovao dozno-zavisnu anti-tumorsku aktivnost kod miševa koji nose MOLP-8 tumor (Slika 14). Jedna iv primena Primera 2 pri 10 ili 30 mg/kg rezultovala je značajnom inhibicijom rasta tumora od 52% i 92% inhibicije rasta tumora (TGI), respektivno. Jedna iv primena Primera 2 pri 60 ili 100 mg/kg izazvala je potpunu regresiju tumora kod 13 od 14 miševa, izmereno 10 dana nakon doziranja.

[0263] Primer 2 je takođe pokazao korist od kombinacije sa inhibitorom proteazoma bortezomibom kod miševa koji nose NCI-H929 tumor (Slika 15). Primena Primera 2 svake druge nedelje u dozi od 30 mg/kg u kombinaciji sa nedeljnom primenom bortezomiba u dozi od 1 mg/kg rezultovala je regresijom tumora, dok nije primećeno značajnije anti-tumorsko delovanje ni kod jednog agensa.

Primer 7:

Aktivnost pojedinačnog agensa in vivo u modelu tumora ljudske akutne mijeloidne leukemije.

[0264] Postupak: Primer 2 je formulisan u 30% 2-hidroksipropil-beta-ciklodekstrinu (HPBCD), pH 9 i doziran je kao pojedinačna intravenska (iv) primena u količini od 5 ml/kg.

10<6>MV-4-11 tumorske ćelije injektirane su supkutano u desni bok C.B-17 SCID ženki miševa u zapremini od 0,1 mL. Količine tumora (mereno šestarom), telesna težina životinja i stanja tumora značeni su dva puta nedeljno u toku trajanja studije. Zapremina tumora (mereno šestarom) je izračunata po formuli: dužina (mm) x širina (mm)2/0,52. Za studije efikasnosti, miševi su nasumično podeljeni na osnovu zapremina tumora i inhibicija rasta procenjena je poređenjem razlika u zapremini tumora između kontrolnih i tretiranih grupa. Doziranje je počelo kada je prosečna veličina tumora dostigla približno 230 mm<3>. Rezultati: Tretman sa Primerom 2 rezultovao je značajnom anti-tumorskom aktivnošću kod miševa koji nose potkožne MV-4-11 tumore. Miševi koji su primali jednu dozu 100 mg/kg Primera 2 doživeli su 100% regresiju tumora (Slika 16). Reakcija je bila trajna sa 4 od 6 miševa koji su istrajali bez tumora 16 dana nakon terapije. Miševi koji su jednom nedeljno primili iv 30 mg/kg Primera 2 takođe su doživeli regresiju tumora (~73% na Dan 6), gde je 1 od 6 miševa ostao bez tumora 16 dana nakon početka terapije.

Primer 8: Potencijal in vitro vezivanja Primera 1, 2 i 3

[0265] TR-FRET test biohemijskog vezivanja za merenje poremećaja kompleksa proteina, TR-FRET test korišćen je za procenu sposobnosti jedinjenja da poremete interakciju između rekombinantnog ljudskog Mcl-1 sa označenom BIM peptidnom sondom.

[0266] Analiza je konstruisana tako da je GST označen Mcl-1 protein inkubiran sa Evropijumom-označenim anti-GST antitelom i HyLite Fluor 647-označenim peptidom koji odgovara BH3 domenu od BIM. Vrednosti jedinjenja IC50su procenjene nakon 10-tačaka, log10šeme razblaživanja počevši od 100 µM ili 10 µM koncentracije jedinjenja. Konkretno, ljudski enzim Mcl-1 iz Mcl-1 (E171-G327) je kloniran u vektor prekomernog eksprimiranja, izražen kao N-terminalni fuzioni protein označen sa GST u E. coli, i zatim je prečišćen pomoću Glutathione Sepharose-afiniteta i hromatografije za isključivanje veličine. Ispitivanje je izvršeno na LV pločama sa 384 komorice (Greiner cat # 784075) i izvršeno je u prisustvu i u odsustvu jedinjenja od interesa. Svaka komorica od 12 µL ispitivane smeše sadrži 10 mM Tris (pH 7,4), 1,0 mM DTT, 0,005% Tween-20, 150 mM NaCl, 10% DMSO i 1,5 nM GST Mcl-1, 0,5 nM LanthaScreen Eu označenog GST antitela (Invitrogen katalog # PV5594),4,0 nM HyLite Fluor 647-označenog BIM peptida [C(Hilyte647 C2 Maleimid)-WIAQELRRIGDEFN (SEQ ID NO:1)]. Reakcije se inkubiraju na 24°C tokom 90 minuta pre očitavanja na Tecan M1000 spektrfluorometru sa ekscitacijom na 340 nm i emisijom na 612 nm i 665 nm. Zatim je za svaku reakciju izračunat odnos intenziteta fluorescentne emisije između 665 nm i 612 nm, i doza-odgovor odnosa prema koncentraciji ispitivanog jedinjenja je uklopljen kako bi se odabrao model koji odgovara najboljem kvalitetu upotrebe

4

automatskog parametra za dobijanje IC50vrednosti za svako ispitivano jedinjenje. Tabela 9 daje rezultate TR-FRET Mcl1 testa vezivanja.

Izračunavanje odnosa = Emisija 665nm / Emisija 612 * 10000

% inhibicije = 100 – [(Odnos testa – Min (kontrola jedinjenja))/(Max (DMSO kontrola) – Min (kontrola jedinjenja))]

Tabela 9

[0267] Napomena: Aktivnost kaspaze iz Primera 3 (Jedinjenje III), kao što je prikazano u Tabeli 1 i FRET aktivnost Primera 3 (Jedinjenje III) kao što je prikazano u Tabeli 9 je u velikoj meri zavisno od enantiomerne čistoće, pošto većina aktivnosti potiče od zaostalih nečistoća Raenantiomera (Primer 2, Jedinjenje II). Kao takvi, uzorci sa nižom enantiomernom čistoćom pokazuju povišenu potenciju u ovim ispitivanjima. Predstavljeni podaci predstavljaju geometrijsku sredinu višestrukih merenja iz uzoraka različite enantiomerne čistoće.

Claims (24)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje je 17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

   tridekaen-23-karboksilna kiselina (Formula I) ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1.
3. 3. Farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja prema patentnom zahtevu 1.
4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje Formule I ima strukturu (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-

   tridekaen-23-karboksilne kiseline (Formula II) ili njene farmaceutski prihvatljive soli.
5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4.
6. 6. Farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja prema patentnom zahtevu 4.
7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje Formule I ima strukturu (Sa)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta- -tridekaen-23-karboksilne kiseline (Formula III) ili njene farmaceutski prihvatljive soli.
8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 7.
9. 9. Farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja prema patentnom zahtevu 7.
10. 10. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema bilo kom patentnom zahtevu 1-9, u kristalnom obliku.
11. 11. Čvrsti oblik (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta- tridekaen-23-karboksilne kiseline (Formula II) ili njene farmaceutski prihvatljive soli.
12. 12. Čvrsti oblik prema patentnom zahtevu 11, gde čvrsti jeste Oblik A monohidrata (Ra)-17-hloro-5,13,14,22-tetrametil-28-oksa-2,9-ditija-5,6,12,13,22-pentaazaheptaciklo[27.7.1.1<4,7>.0<11,15>.0<16,21>.0<20,24>.0<30,35>]oktatriakonta-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-tridekaen-23-karboksilne kiseline sa XRPD dijagramom koji sadrži najmanje jedan vrh izražen kao 2Θ (±0,2°) odabran od 5,4°, 7,0°, 8,4°, 10,7°, 12,5°, 13,1°, 14,4°, 15,1°, 15,6°, 17,1° i 18,2°.
13. 13. Čvrsti oblik prema patentnom zahtevu 12, gde čvrsti oblik ima XRPD dijagram koji sadrži najmanje jedan vrh izražen kao 2θ (±0,2°) odabran od 7,0°, 8,4°i 12,5°.
14. 14. Čvrsti oblik prema patentnom zahtevu 12, gde čvrsti oblik ima XRPD dijagram koji je značajno sličan Slici 1.
15. 15. Čvrsti oblik prema patentnom zahtevu 12, gde čvrsti oblik ima DSC termogram koji sadrži endoterm sa početkom desolvacije na oko 121°C, i vrhom na oko 152°C.
16. 16. Čvrsti oblik prema patentnom zahtevu 12, gde čvrsti oblik ima DSC termogram koji sadrži endoterm sa početkom topljenja/raspadanja na oko 181°C, i vrhom na oko 194°C.
17. 17. Čvrsti oblik prema patentnom zahtevu 12, gde čvrsti oblik ima DSC obrazac koji je značajno sličan Slici 2.
18. 18. Čvrsti oblik prema patentnom zahtevu 12, gde čvrsti oblik ima TGA termogram koji pokazuje gubitak mase od oko 4% pri zagrevanju od oko 25°C do oko 160°C.
19. 19. Čvrsti oblik prema patentnom zahtevu 12, gde čvrsti oblik ima TGA obrazac koji je značajno sličan Slici 2.
20. 20. Farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu 1-11, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski ekscipijens, nosač ili razblaživač.
21. 21. Jedinjenje prema bilo kojem patentnom zahtevu 1-19, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu raka.
22. 22. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 21, gde je rak hematološki ili čvrsti tumor.
23. 23. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 22, gde je hematološki rak odabran od akutne mijeloidne leukemije, multiplog mijeloma, limfoma plaštastih ćelija, hronične limfocitne leukemije, difuznog limfoma velikih B ćelija, Burkitt-ovog limfoma i folikularnog limfoma.
24. 24. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 22, gde je čvrsti tumor odabran od raka ne-malih ćelija pluća, raka malih ćelija pluća, raka dojke, neuroblastoma, raka prostate, melanoma, raka pankreasa, raka materice, raka endometrijuma i raka debelog creva.