RS60263B1

RS60263B1 - Test traka za detekciju minimalne inhibitorne koncentracije (mic)

Info

Publication number: RS60263B1
Application number: RS20200561A
Authority: RS
Inventors: Mustafa Remzi Kuleoglu; Enver Ali Kuleoglu
Original assignee: Mustafa Remzi Kuleoglu; Enver Ali Kuleoglu
Priority date: 2017-05-02
Filing date: 2017-07-04
Publication date: 2020-06-30
Also published as: HRP20200786T1; ES2789577T3; PT3399050T; LT3399050T; HRP20200786T8; EP3399050A1; PL3399050T3; EP3399050B1; SI3399050T1; HUE050154T2; TR201706407A2; WO2019074456A3; WO2019074456A2

Description

Opis

Oblast tehnike pronalaska

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na test trake za detekciju minimalne inhibitorne koncentracije (MIC - minimal inhibition concentration), koje se proizvode nanošenjem antibiotika na pamučne, lanene ili svilene tkanine, ili na tkanine od pamučno-polimerne mešavine.

Stanje tehnike pronalaska

[0002] Testovi antimikrobne osetljivosti su testovi koji su primenjeni kako bi se detektovala in vitro aktivnost antimikrobnih agensa prema određenoj vrsti bakterija i uglavnom se koriste dve metode naime, "difuziona" "i "diluciona".

[0003] Dilucioni testovi se primenjuju kako bi se detektovala minimalna koncentracija antimikrobnog agensa koja je potrebna da inhibira reprodukciju mikroorganizma ili da ga ubije. Dilucioni testovi se primenjuju na dva načina, naime kao "dilucioni u epruvetama" i "agar dilucioni".

[0004] Objava Irith Wiegand, Kai Hilpert i Roberta E.W. Hancock-a u Centre for Microbial Diseases and Immunity Research (163-175) (2008) od 17. januara 2008. stavlja na uvid javnosti da se metoda dilucije u epruvetama može primeniti na dva načina naime "makro" i "mikro". U principu, obe metode su iste ali se epruvete za testiranje koriste u makrodilukciji dok se "U" ili "V" zasnovane "mikroploče" koriste u mikrodiluciji. Metodom dilucije u epruvetama, Mueller-Hinton bujon u koji je dodat katjon (kalcijum i magnezijum) je korišćen kao medijum. Antibiotici koji se testiraju prvo se pripremaju u njihovim posebnim rastvaračima a zatim se razblažuju u ovom bujonu do dvostruko niže koncentracije. Standardni inokulum mikroorganizma se priprema i dodaje se u svaku epruvetu koja sadrži različita razblaženja antimikrobnog agensa u jednakim količinama. Pored toga, takođe se dodaje u kontrolnu epruvetu koja ne uključuje antibiotik i koja je pokazatelj reprodukcije. Epruveta ili bunarčić, gde bakterije nisu inokulisane već je samo medijum raspoređen, priprema se kao kontrolni medijum. Medijumi su ispitani u smislu zamućenosti, što pokazuje rast bakterija, nakon inkubacije od 16-20 sati na 37°C. Najniža koncentracija leka, koja sprečava rast bakterija i u kojoj nema vidljive zamućenosti, procenjuje se da je minimalna inhibitorna koncentracija (MIC). Vrednosti MIC dobijene kao rezultat dilucionih testova daju informacije kliničaru o koncentraciji antimikrobnog leka koja je potrebna da inhibira mikroorganizam koji izaziva infekciju (Slika 6).

[0005] U prijavi iz stanja tehnike, antibiotici su smanjeni s leva na desno i redom razređivani u bujonu, i jednaka zapremina i jednaka koncentracija mikroorganizama im je dodata. Epruvete u koje su dodati mikroorganizmi su inkubirane na 37°C tokom 16-20 sati i dobijeni rezultati su procenjeni. Koncentracija antibiotika u epruveti, u kojoj se mikroorganizmi nisu razmnožavali, je zabeležena kao MIC vrednost (6.25 µg/ml)<[1, 2]>.

[0006] Pronalazak stavljen na uvid javnosti u američkom patentnom dokumentu br. US47783758, poznatom u stanju tehnike, odnosi se na MIC testove korišćene za in vitro dijagnozu, a navedeno je da je upotrijebljena detekciona test traka prozirna, inertna i ima neporoznu površinu. Pomoću ovog patenta, umesto detekcije MIC izvršene testom dilucije u epruvetama, postignuto je da se inokulira na traku po prvi put.

[0007] "Etest Antimicrobial Susceptibility Testing", 31. decembar 2012 (2012-12-31), preuzet sa interneta:URL:http://www.ilexmedical.com/files/E-test-Package-Insert/ AST_WW.pdf [preuzet 2017-12-21] stavlja na uvid javnosti MIC test trake napravljene od plastike.

[0008] "Antimicrobial Susceptibility Testing", 31. decembar 2008 (2008-12-31), preuzet sa interneta:URL:http://www.oxoid.com/pdf/uk/MICE-monograph-march08.pdf [preuzet 2017-12-21] stavlja na uvid javnosti MIC test trake napravljene od polimera plastike.

[0009] MIC test trake od Oxoid Limited kompanije spomenute u objavi pod nazivom "M.I.C.E valuators (M.I.C.E.) Simple, Convenient Method for Accurate MIC Values" u RAPIDMICROBIOLOGY od 05/30/2008 su proizvedene od polimernog materijala. Osim toga, američki patenti dokument br. US6010910A gore spomenute kompanije stavlja na uvid javnosti da se trake u test kompletima mogu proizvesti od plastike, kartona ili sličnih materijala.

[0010] U pronalasku stavljenom na uvid javnosti u evropskom patentnom dokumentu pod brojem EP2480682 B1 od Liofilchem Srl kompanije, navodi se da su detekcione test trake korišćene za MIC testove proizvedene od papirnog materijala. Navodi se da se korišćenjem traka proizvedenih od papirnog materijala, formiranje mehurića vazduha u materijalu trake koji je prilepljen na medijum, u kojem se bakterije inokulišu, može sprečiti i da se može omogućiti kontakt vazduha traka sa okolinom. Pored toga, u metodi iz stanja tehnike, na materijal trake se pritiska pincetom kako bi se sprečilo formiranje mehurića vazduha nakon postavljanja materijala trake na medijum. Stoga, formiranje mehurića vazduha je moguće sprečiti nezavisno od materijala koji se koristi.

[0011] Pronalazak stavljen na uvid javnosti u kineskom dokumentu malog patenta br. CN2564584, još jednoj prijavi iz stanja tehnike, odnosi se na test traku pločice za detekciju napravljenu od membrane korišćene za detekciju minimalne antibakterijske koncentracije bacteriofaga. Filtraciono-membranska traka je učvršćena na podlozi, vodeći do pločice za detekciju testa osetljivosti bakterije na lekove. U navedenom pronalasku, dve detekcije se mogu obaviti odjednom uključujući osetljivost na lekove i minimalnu antibakterijsku koncentraciju (MIC). Navedeno je da je navedeni pronalazak povoljan zbog niskih troškova, jednostavne i lake primene, i pouzdanosti.

[0012] U poređenju sa prijavama iz stanja tehnike; vidi se da je proizvodnja detekcione test trake za minimalne inhibitorne koncentracije (MIC), pri čemu su trake napravljene od pamučne tkanine, lanene tkanine, svilene tkanine ili tkanine od pamučno-polimerne mešavine, povoljna u tome što je materijal koji se u njoj koristi lako nabaviti, ima nisku cenu, proizvodi se od materijala otpornih na habanje i kidanje, i omogućava lakšu i bržu difuziju materijala sa antibioticima.

Kratak opis pronalaska

[0013] Predmetni pronalazak odnosi se na test traku u skladu sa nezavisnim patentnim zahtevom 1. Poželjna tehnička rešenja su definisana u zavisnim zahtevima.

Detaljan opis pronalaska

[0014] "Test Traka za detekciju MIC (Minimalna inhibitorna koncentracija) " razvijena da ispuni cilj predmetnog pronalaska je ilustrovana na priloženim slikama u kojima,

Slika 1. je prikaz test trake za detekciju MIC (Minimalna inhibitorna koncentracija) u petri šolji.

Slika 2. je opšti prikaz test trake za detekciju MIC (Minimalna inhibitorna koncentracija). Slika 3. je prikaz slojeva test trake za detekciju MIC (Minimalna inhibitorna koncentracija).

Slika 4. je eksplodirani prikaz slojeva test trake za detekciju MIC (Minimalna inhibitorna koncentracija).

Slika 5. je ekspolodirani prikaz test trake za detekciju MIC (Minimalna inhibitorna koncentracija).

Slika 6. je prikaz primene metode dilucije u epruvetama.

[0015] Komponentama na slikama su date pozivne oznake kao što sledi:

1. Test traka za detekciju MIC (Minimalna inhibitorna koncentracija)

2. Sloj interakcije

3. Merni sloj

A. Mikroorganizmi

B. Petri šolja

C. Vrednost MIC

[0016] Inventivna test traka (1) za detekciju MIC (Minimalna inhibitorna koncentracija) je postavljena u petri šolju (B) koja sadrži pogodni agar medijum tako da njen sloj, na koji se inokulira lek, dođe u kontakt sa mikroorganizmima (A) inokuliranim u petri šolju (B) sa svrhom detektovanja mere interakcije (MIC vrednost (C)) mikroorganizama (A) sa antibakterijskim sredstvima (kod antibiotika, antimikostatici ili drugi biološki fluidi), pomoću in vitro dijagnostičkog uređaja (IVD); i poželjno je u obliku pravougaone pločice i postavljena je u petri šolju (B) tako da njen sloj, na koji se inokulira lek, dođe u kontakt sa mikroorganizmima (A) u petri šolji (B) i osigurava se da svi delovi istog prijanjaju laganim pritiskom istog pomoću pincete; i sadrži

- najmanje jedan sloj (2) interakcije koji je u obliku pravougaone pločice i pozicioniran je tako da dođe u kontakt sa mikroorganizmima (A) u petri šolji (B),

- najmanje jedan merni sloj (3) koji je u istom obliku i veličini sa slojem (2) interakcije i povezan je sa slojem (2) interakcije sa njegove strane koja ne ne dolazi u kontakt sa mikroorganizmima (A);

i karakterisana je

- slojem (2) interakcije; na koji antibiotik, čija će interakcija sa mikroorganizmima (A) biti ispitivana, se nanosi na površinu istog koja dolazi u kontakt sa mikroorganizmima (A) postepeno smanjujući količine između kratkih strana njegovog pravougaonog oblika; i koji je napravljen od pamučne tkanine, lanene tkanine, svilene tkanine ili tkanina od pamučnopolimerne mešavine,

- mernim slojem (3), koji, kako bi se utvrdila koncentracija antibiotika nanesena na sloj (2) interakcije, uključuje brojeve koji označavaju vrednost koncentracije i linije koje označavaju položaje koji odgovaraju ovim koncentracijama.

[0017] U jednom tehničkom rešenju pronalaska, merni sloj (3) je proizveden korišćenjem pamučne tkanine. Shodno tome, u ovom tehničkom rešenju pronalaska, merni sloj (3) i sloj (2) interakcije su proizvedeni zajedno kao jedan komad i nisu povezani. Test trake u skladu sa pronalaskom poželjno nemaju permeabilnost vazduha.

[0018] U jednom tehničkom rešenju pronalaska, polimer koji je korišćen u strukturama koje sadrže pamučne tkanine i kombinaciju polimera je poželjno da je kopolimer polipropilena i etilen butilakrilata.

[0019] U jednom tehničkom rešenju pronalaska, sloj (2) interakcije uključuje komore, koje omogućuju da inokulirani antibiotik lako difundira u medijum, na njegovoj površini kontaktirajući mikroorganizme (A).

[0020] U drugom tehničkom rešenju pronalaska, tkanina od polimerno-pamučne mešavine, čiji je apsorpcioni kapacitet veći od onih sa primenama papira u stanju tehnike, koristi se kao sloj (2) interakcije. U tom smislu, sintetičke tkanine koje imaju 50% ili više sadržaja pamuka takođe se koriste kao pamučna tkanina. Kao alternativa pamučnoj tkanini; pamučno platno, platno od mešavine pamuka i poliestra, laneno platno ili svileno platno se takođe koriste u obimu pronalaska, kako je definisano u patentnim zahtevima.

[0021] U drugom tehničkom rešenju pronalaska, merni sloj (3) se proizvodi od aluminijumske, plastične ili papirne nalepnice.

[0022] U jednom tehničkom rešenju pronalaska, merni sloj (3) je u obliku nalepnice i prijanja na površinu sloja (2) interakcije koja ne dolazi u kontakt sa mikroorganizmima (A). Nakon što se proizvede merni sloj (3), numeričke vrednosti i linije, koje omogućavaju očitavanje merenja, obezbeđuju se na njihovoj površini štampanjem u štampariji.

[0023] MIC test traka (1) predmetnog pronalaska omogućava i inokulaciju leka i da inokulirani lek prijanja na površinu i ostane tu ravnomerno. Inokulacija leka se vrši nakon što se merni sloj (3) i sloj (2) interakcije povežu i tako se formira struktura MIC test trake (1) predmetnog pronalaska. Inokulacija leka na sloju (2) interakcije vrši se između dve kratke strane sloja (2) interakcije na opadajući način, tj. gradijentno, u skladu sa vrednostima koncentracije u mernom sloju (3). MIC test trake u skladu sa predmetnim pronalaskom se poželjno proizvode u obliku pravougaone trake. Na ovaj način, ona se lako može postaviti na medijum kao što je u petri šolji (B) u koji se mikroorganizmi inokulišu, a tačka interakcije između leka i bakterija može se detektovati tačnije pomoću brojeva na lenjiru. Na ovaj način, omogućeno je izražavanje minimalne koncentracije antibiotika, kod koje se odvija interakcija mikroorganizam-antibiotik, označene kao MIC vrednost, dok brojčana vrednost olakšava procedure korisniku.

[0024] MIC test trake predmetnog pronalaska mogu se čuvati u opsegu od -20 do 8°C. S druge strane, MIC test trake su u skladu sa dve standardne vrednosti prihvaćene širom sveta, naime CLSI (Clinic and Laboratory Standards Institute - Institut za kliničke i laboratorijske standarde) u Sjedinjenim Državama i EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing - Evropski komitet za testiranje osetljivosti na antimikrobne agense) u Evropskoj uniji.

[0025] Postepeno smanjenje količine antibiotika dodaju se test trakama proizvedenim korišćenjem pamučne tkanine, lanene tkanine, svilene tkanine ili tkanine od pamučno-polimerne mešavine; a na sloju test trake štampan je lenjir, na koji se lek (antibiotik) ne inokuliše, i koji se proizvodi od aluminijumskog materijala, kako bi se mogao proceniti rezultat eksperimenta. Minimalna koncentracija antibiotika (mg/l), na kojoj je inhibiran rast bakterija, lenjira raspoređenog u skladu sa rasponima vrednosti MIC poznatih u literaturi je definisana kao MIC vrednost.

[0026] Upotrebom pamučne tkanine, lanene tkanine, svilene tkanine ili tkanina od pamučnopolimerne mešavine za njihovu proizvodnju omogućeno je dobijanje traka, koje su otpornije na kidanje i lomljenje, povoljnijih u pogledu cene i jednostavnosti nabavke, i koje omogućavaju da materijal sa antibioticima lakše i brže difundira. Nadalje, uočeno je da interakcija između antibiotika i bakterija može biti sprečena od uticaja vazduha u spoljnjom okruženju upotrebom traka koje nemaju permeabilnost vazduha.

[0027] U drugom tehničkom rešenju pronalaska, sloj test traka, na koje se lek ne inokuliše i lenjir se štampa, se proizvedi od plastičnog ili papirnog materijala.

[0028] U drugom tehničkom rešenju pronalaska, merni sloj se proizvodi upotrebom materijala od tkanine.

REFERENCE

[0029]

[1]. Bauer J.D., Ackerman P.G., Toro G., Clinical labroratory methods, 8. izdanje, The C.V. Mosby Company, Sent Luis, SAD 1974; 661-662

[2].Bauer J.D., Clinical laboratory methods, 9. izdanje, The C.V. Mosby Company, Sent Luis, SAD 1982 ; 883-884

Claims

Patentni zahtevi

1. Test traka (1) za detekciju minimalne inhibitorne koncentracije (MIC) pogodna za postavljanje u petri šolju (B), koja sadrži

- sloj (2) interakcije; koji je u obliku pravougaone pločice i koji se može pozicionirati tako da dođe u kontakt sa mikroorganizmima (A) u petri šolji (B) i na koji se antibiotik nanosi, na površini istog za dovođenje u kontakt sa mikroorganizmima (A), u postepeno smanjenim količinama između kratkih strana njegovog oblika pravougaone pločice;

- merni sloj (3), koji ima isti oblik i veličinu kao sloj (2) interakcije i povezan je sa slojem (2) interakcije sa njegove strane koja ne dolazi u kontakt sa mikroorganizmima (A) i koji, kako bi se utvrdila koncentracija antibiotika nanesena na sloj (2) interakcije, uključuje brojeve koji označavaju vrednost koncentracije antibiotika i linije koje označavaju položaje koji odgovaraju ovim koncentracijama antibiotika;

naznačena time što sloj interakcije je napravljen od pamučne tkanine, lanene tkanine, svilene tkanine ili tkanina od pamučno-polimerne mešavine.

2. Test traka (1) za detekciju MIC prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što merni sloj (3) je napravljen od pamučne tkanine i formiran je kao jedan komad sa slojem (2) interakcije.

3. Test traka (1) za detekciju MIC prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što sloj (2) interakcije nema permeabilnost vazduha.

4. Test traka (1) za detekciju MIC prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što polimer tkanina od pamučno-polimerne mešavine je kopolimer polipropilena i etilen butilakrilata.

5. Test traka (4) za detekciju MIC prema patentnom zahtevu 4, naznačena time što tkanine od pamučno-polimerne mešavine su sintetičke tkanine koje imaju 50% ili više sadržaja pamuka.

6. Test traka (1) za detekciju MIC prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što merni sloj (3) ja napravljen od aluminijumskog, plastičnog ili papirnog materijala.

7. Test traka (1) za detekciju MIC prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što su brojevi i linije štampani brojevi i linije.

8. Test traka (1) za detekciju MIC prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što merni sloj (3), je u obliku nalepnice i prijanja i učvršćen je na sloju (2) interakcije.