RS60483B1 - Inhibitori beta-laktamaze - Google Patents

Inhibitori beta-laktamaze

Info

Publication number
RS60483B1
RS60483B1 RS20200740A RSP20200740A RS60483B1 RS 60483 B1 RS60483 B1 RS 60483B1 RS 20200740 A RS20200740 A RS 20200740A RS P20200740 A RSP20200740 A RS P20200740A RS 60483 B1 RS60483 B1 RS 60483B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
c4alkyl
beta
compound
mmol
optionally substituted
Prior art date
Application number
RS20200740A
Other languages
English (en)
Inventor
Anthony Casarez
Markus Furegati
Guido Koch
Xiaodong Lin
Flavio Ossola
Folkert Reck
Robert Lowell Simmons
Qingming Zhu
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of RS60483B1 publication Critical patent/RS60483B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/18—Bridged systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/407—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. ketorolac, physostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/429—Thiazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/43—Compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula, e.g. penicillins, penems
    • A61K31/431—Compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula, e.g. penicillins, penems containing further heterocyclic rings, e.g. ticarcillin, azlocillin, oxacillin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/5025—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/542—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/545—Compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins, cefaclor, or cephalexine
    • A61K31/546—Compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins, cefaclor, or cephalexine containing further heterocyclic rings, e.g. cephalothin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Opis
UNAKRSNO POZIVANJE NA POVEZANU PRIJAVU
[0001] Ova prijava poziva se na prioritet U.S. provizione prijave br.62/401,022, podnete 28. septembra 2016.
OBLAST PRONALASKA
[0002] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja koja inhibiraju beta-laktamaze, postupke za pripremu ovih jedinjenja, i njihovu upotrebu u kombinaciji sa beta-laktamskim antibioticima za lečenje bakterijskih infekcija.
POZADINA
[0003] Tokom nekoliko poslednjih decenija, učestalost antimikrobijalne otpornosti i njena veza sa ozbiljnim infektivnim bolestima povećala se do zabrinjavajućih stopa. Rastuća prevalenca otpornosti među nozokomijalnim patogenima naročito je zabrinjavajuća. Od preko 2 miliona nozokomijalnih infekcija koje se javljaju svake godine u Sjedinjenim Državama, 50 do 60% je prouzrokovano sojevima bakterija koje su otporne na antimikrobe. Visoka stopa otpornosti na uobičajeno primenjivane antibakterike povećava morbidnost, smrtnost i troškove povezane sa nozokomijalnim infekcijama. U Sjedinjenima Državama, smatra se da nozokomijalne infekcije doprinose ili prouzrokuju više od 77,000 smrtnih slučajeva godišnje i trošak od približno $5 do $10 milijardi godišnje.
[0004] Među najznačajnijim antibioticima, trenutno je dostupno nekoliko klasa jedinjenjima koja sadrže beta-laktamski pristen, uključujući peniciline, peneme, karbapeneme, cefalosporine, monobaktame i sulfaktame. Ovi beta-laktamski antibiotici inhibiraju biosintezu ćelijskog zida vezivanjem za proteine nazvane penicilin-vezujući proteini (PBP), koji su suštinski za sintezu peptidoglikana, glavne komponente ćelijskog zida gram-negativne i gram-pozitivne bakterije. Dok beta-laktamski antibiotici ostaju veoma značajni širom sveta, njihova obilna upotreba dovela je do velikog i rastućeg problema: bakterije su razvile otpornost na beta-laktame, kao što su razvile i prema većini drugih dostupnih antibiotika. Zaista, Svetska Zdravstvena Organizacija (WHO) navodi da otpornost na antibiotike predstavlja "ozbiljnu, svetsku pretnju ...".
[0005] Identifikovano je nekoliko različitih mehanizama otpornosti na beta-laktamske antibiotike: neki otporni sojevi poseduju efluks pumpe za izlučivanje antibiotika, a drugi razvijaju mutantne PBP koji su manje osetljivi na taj antibiotik. Naročito zabrinjavajući oblik otpornosti je razvoj bakterijskih enzima koji reaguju sa ovim antibioticima, uništavajući antibiotik otvaranjem beta-laktamskog prstena. Ovi antibiotik-degradirajući enzimi nazivaju se beta-laktamaze, i naročito su problematični jer mogu da potpomognu otpornost na mnoge različite beta-laktamske antibiotike, i mogu se transferovati putem plazmida između različitih bakterijskih sojeva i vrsta. Među gram-negativnim bakterijama, postoje četiri klase beta-laktamaza, serin beta-laktamaze klasa A, C i D, i metalo beta-laktamaze (klasa B).
[0006] Značajni razlozi otpornosti na beta-laktamske antibiotike uključuju beta-laktamaze proširenogspektra (ESBL), serin karbapenemaze klase A, (npr. KPC-2) i klase D (npr. OXA-48) kod Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, i Proteus mirabilis, kao i visoku otpornost na cefalosporin treće generacije posredovan klasom C beta-laktamaza AmpC među Enterobacter vrstama i Citrobacter freundii, i sojeve otprone na više lekova kao što su Pseudomonas, Acinetobacter, i Stenotrophomonas. Problem antibakterijske otpornosti je sačinjen postojanjem bakterijskih sojeva koji sadrže višestruke betalaktamaze. Na primer, Klebsiella pneumonia koja čuva NDM-1 metalo-beta-laktamazu često nosi dodatne serin-beta-laktamaze na istom plazmidu koji nosi NDM-1.
[0007] Kako su beta-laktamski antibiotici među nekoliko klasa koje su efektivne protiv gram-negativnih bakterija, učinjeno su mnogi napori da se učvrsti njihova sposobnost kontrole otpornih bakterijskih sojeva, kako bi se zaobišlo gubljenje ovih enormno dragocenih antibakterika. Na primer, neki betalaktami strukturalno su modifikovani kako bi postali manje podložni na beta-laktamaze, iako je ovaj pristup komplikovan zbog činjenice da već postoje mnoge različite beta-laktamaze, a nove se konstantno javljaju. Još jedan pristup ogleda se u inhibiranju enzima beta-laktamaza koji degradiraju ove antibiotike primenom inhibitora beta-laktamaze malih molekula (BLI) u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom. Ovi BLI mogu da se primenjuju u kombinaciji sa odobrenim beta-laktamskim antibiotikom u cilju lečenja pacijenata inficiranih bakterijama koje su otporne na sam antibiotik zbog aktivnosti betalaktamaze. Primeri odobrenih BLI uključuju klavulansku kiselinu, sulbaktam, tazobaktam, i avibaktam. Ostali (relebaktam, vaborbaktam (RPX7009), zidebaktam, i nakubaktam) su navodno u razvoju.
[0008] Kod gram-pozitivnih organizama, otpornost na penicilin posredovana penicilinskim betalaktamazama je značajan mehanizam otpornosti kod Staphylococcus aureus (MSSA). Otpornost na peniciline posredovana beta-laktamazama takođe je zapažena kod anaerobnih vrsta, kao što su bakteroidi.
[0009] Tri najčešće upotrebljavana inhibitora serinske beta-laktamaze, klavulanska kiselina, tazobaktam i sulbaktam, poseduju potentno dejstvo samo protiv nekih klasa A beta-laktamaze, isključujući serinske karbapenemaze. Avibaktam je član diazabiciklooktana (DBO) klase inhibitora beta-laktamaze i široko pokriva klasu A (uključujući KPC), klasu C i neku inhibiciju klase D. Zajedno sa inhibicijom betalaktamaze, avibaktam takođe poseduje antibakterijsko dejstvo protiv nekih kliničkih sojeva putem inhibicije penicilin vezujućeg proteina 2 (PBP-2) (Asli et al, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 60, No 2, 752, 2016). Antibakterijska jedinjenja sa ovakvim mehanizmom delovanja, uključujući DBO, odabrana su zbog otpornosti pri veoma visokim frekvencijama in vitro (Doumith et al, J. Antimicrobial Chemotherapy 2016, 71, 2810-2814). Zbog toga, bilo kakva potencijalna klinička korist svojstvenog antibakterijskog dejstva nekog DBO inhibitora beta-laktamaze, trenutno je nejasna. Slaba antibakterijska aktivnost avibaktama možda nije klinički relevantna, jer je klinička doza avibaktama veoma niska, međutim, ona može da zakomplikuje in vitro ispitivanje osetljivosti i/ili da promoviše otpornost. In vitro ispitivanje osetljivosti kombinacija avibaktam/beta-laktam protiv kliničkih izolata obično se izvodi primenom visokih fiksnih koncentracija avibaktama (4 µg/mL) koje vrlo verovatno ne pokazuju klinički postignute nivoe. Direktan doprinos avibaktama antibakterijskom dejstvu pod ovim veštačkim uslovima in vitro ispitivanja može da utiče na tačnost u predviđanju kliničke efikasnosti kombinacija avibaktam/ beta-laktamaza. DBO inhibitor beta-laktamaze lišen značajnog antibakterijskog dejstva ne bi imao ovu veoma zbunjujuću aktivnost, i in vitro protokoli za ispitivanja bi merili samo preokret otpornosti posredovane beta-laktamazama u kliničkim izolatima, što bi omogućilo preciznije predviđanje kliničke efikasnosti bazirane na rezultatima in vitro osetljivosti.
[0010] Pored BLI koji su trenutno dostupni za upotrebu, druga jedinjenja sa BLI aktivnošću su opisana u WO2002/100860, US2003/0199541, US2004/0157826, WO2008/039420, i
WO2009/091856, US2010092443, WO2010/126820, WO2013/122888, WO2013/038330, US2013/0225 554, WO2013149121, WO2013149136, WO2014141132 i WO2014/033560.
[0011] Farmakokinetičke i fizičke osobine prethodno opisanih BLI ne moraju biti idealne za upotrebu sa svakim beta-laktamskim antibiotikom. Štaviše, poznati BLI navodno vremenom gube efikasnost (K. Bush, Int. J. Antimicrob. Agents 46(5), 483-93 (Nov 2015)), kako se razvijaju novi otporni bakterijski sojevi i kontinuirano proizilaze novi enzimi beta-laktamaza. Shodno tome, ostaje potreba za novim inhibitorima beta-laktamaze radi produžetka korisnosti dragocenih beta-laktamskih antibiotika; zaista, novi BLI takođe mogu da pobede otpornost kod poznatih BLI kao i otpornost na poznate i u budućnosti razvijene beta-laktamske antibiotike. Ovaj pronalazak obezbeđuje nove inhibitore beta-laktamaze koji pojačavaju aktivnost raznih beta-laktamskih antibiotika, dok ispoljavaju malo svojstvene unutrašnje (direktne) antibiotske aktivnosti.
KRATAK PREGLED
[0012] Ovaj pronalazak uključuje nova BLI jedinjenja, farmaceutske kombinacije i formulacije koje uključuju ova jedinjenja, i medicinske primene takvih jedinjenja i kompozicije za lečenje pacijenata sa bakterijskim infekcijama. BLI se koriste u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom, npr. derivatima penicilina, penemom, karbapenemom, cefalosporinom (cefem), monobaktamom ili sulfaktamom, i primarno su korisni za lečenje gram-negativnih bakterijskih infekcija, ali su takođe korisni i za lečenje gram-pozitivnih i anaerobnih infekcija, kod kojih je otpornost posredovana kroz bakterijsku proizvodnju beta-laktamaze. Ovaj pronalazak uključuje jedinjenja formule (A) i njegove varijante,
i soli ovih jedinjenja, uključujući jedinjenja formule (I):
pri čemu jedinjenja formule (I) mogu biti u obliku soli ili cviterjonskom obliku, kako je opisano u nastavku.
[0013] BLI jedinjenja ovog pronalaska se koriste u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom, čiji su primeri ovde opisani, za lečenje bakterijskih infekcija, naročito gram-negativnih bakterijskih infekcija. BLI i beta-laktamski antibiotik mogu da se daju zajedno ili odvojeno, a BLI pojačava efikasnost betalaktamskog antibiotika protiv najmanje bakterijskih sojeva koji ispoljavaju otpornost na beta-laktamske antibiotike, pri čemu je ta otpornost posredovana dejstvom beta-laktamaze. Kombinacije betalaktamskog antibiotika i BLI formule (A) mogu da se primenjuju za lečenje infekcije koju prouzrokuje gram-negativna bakterija, uključujući Enterobacteriaceae, kao što je Salmonella, E. coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus, Enterobacter, Serratia, i Citrobacter, nefermetišuća bakterija,
uključujući Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter, Burkholderia, Moraxella i Stenotrophomonas, gram-pozitivna bakterija, kao što je Staphylococcus aureus koja proizvodi betalaktamazu, kao i anaerobne bakterije, kao što je Bacteroides fragilis ili Bacteroides thetaiotaomicron.
[0014] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje nova jedinjenja formule (A) i formule (I), uključujući njihove oblike soli ili cviterjonske oblike, koji su efektivni kao inhibitori jedne ili više bakterijskih beta-laktamaza. Ova jedinjenja su korisna u potenciranju antibakterijskog dejstva betalaktamskog antibiotika. Zbog toga se mogu primenjivati u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom. BLI i beta-laktamski antibiotik mogu da se daju zajedno ili odvojeno; u nekim načinima ostvarivanja, BLI formule (A) ili formule (I) i beta-laktamski antibiotik kombinuju se u farmaceutskoj kompoziciji koja uobičajeno takođe obuhvata najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0015] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje postupke za pripremu jedinjenja formule (A) ili formule (I) i nove prekursore korisne za pripremu jedinjenja formule (A) ili formule (I) kako je ovde opisano. Određenije, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za konvertovanje jedinjenja formule (V) u jedinjenje formule (IV); i postupak za konvertovanje jedinjenja formule (III) u jedinjenja formule (I).
[0016] U još jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje obuhvataju jedinjenja formule (A) i formule (I) pomešana sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom. U nekim načinima ostvarivanja, ova kompozicija obuhvata dva ili više takvih nosača ili ekscipijensa. Opciono, farmaceutska kompozicija dalje uključuje beta-laktamski antibiotik, iako BLI jedinjenje može da se formuliše i daje odvojeno od beta-laktamskog antibiotika.
[0017] U još jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (A) ili formule (I), uključujući oblike farmaceutski prihvatljive soli ili cviterjonske oblike, za upotrebu u lečenju bakterijske infekcije, pri čemu se to jedinjenje koristi u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom. On takođe uključuje upotrebu jedinjenja formule (A) ili formule (I), ili njegove soli ili cviterjonskog oblika, u proizvodnji leka. Poželjno, lek predstavlja pravi lek za upotrebu u lečenju gram-negativne bakterijske infekcije, naročito onaj sa dejstvom beta-laktamaze dovoljnim da oslabi neki nivo otpornosti na betalaktamski antibiotik, pri čemu je taj lek prilagođen za upotrebu u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom kao što su oni opisani ovde. Beta-laktamski antibiotik i BLI jedinjenje formule (A) ili formule (I) mogu da se daju istovremeno ili odvojeno i bilo kojim redosledom, pod uslovom da je BLI prisutan in vivo istovremeno sa beta-laktamskim antibiotikom kako bi potencirao efikasnost beta-laktamskog antibiotika. U određenim načinima ostvarivanja, subjekat je sisar i u nekim načinima ostvarivanja subjekat je čovek.
[0018] Gram-negativne bakterije mogu biti roda odabranog od Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Bacteroides, Burkholderia, Campylobacter, Neisseria, i Stenotrophomonas. Određenije, bakterijska infekcija prouzrokovana vrstama Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, ili Acinetobacter može da se leči ovde opisanom medicinskom primenom. Posebne bakterijske vrste za takvo lečenje uključuju Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oksitoca, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Salmonella vrste, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, i Acinetobacter baumannii, kao i Bacteroides fragilis, Burkholderia cepacia, Campylobacter jejuni, Neisseria gonorrhoeae, i Stenotrophomonas maltophilia. Gram-pozitivna bakterija može biti, na primer, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus ili Streptococcus pneumoniae.
[0019] U još jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (A) ili formule (I) za upotrebu u inhibiranju bakterijskog rasta ili modulisanju virulencije bakterijske infekcije, pri čemu taj postupak obuhvata davanje pacijentu, kome je potrebna takva inhibicija, jedinjenja formule (A) ili formule (I) i beta-laktamskog antibiotika. Pogodni beta-laktamski antibiotici za upotrebu u ovim medicinskim primenama su opisani ovde.
[0020] Ovde su obezbeđene farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku koje uključuju bilo koje od ovde opisanih jedinjenja i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim načinima ostvarivanja ova kompozicija uključuje dodatni terapeutski agens kao što je beta-laktamski antibiotik.
[0021] Ovde su opisani i drugi aspekti ovog pronalaska.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0022]
Fig.1. SEM kristalnog jedinjenja formule (VII).
Fig.2. XRPD kristalnog jedinjenja formule (VII).
Fig.3. Termogravimetrijska analiza i analiza diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom kristalnog jedinjenja formule (VII).
DETALJAN OPIS
[0023] Za potrebe tumačenja ove specifikacije, primenjuju se sledeće definicije osim ukoliko nije drugačije naznačeno ili je jasno u suprotnosti sa kontekstom. Gde god je prikladno, pojmovi koji se upotrebljavaju u jednini takođe uključuju i množinu i obrnuto.
Definicije
[0024] Pojmovi koji se koriste u ovoj specifikaciji, imaju sledeća značenja:
Kako se ovde koristi, pojam "subjekat" se odnosi na životinju. U određenim aspektima, životinja je sisar. subjekat se takođe odnosi na, na primer, primate (npr., ljude), krave, ovce, koze, konje, pse, mačke, zečeve, pacove, miševe, ribe, ptice i slično. U određenim načinima ostvarivanja, subjekat je čovek.
[0025] Kako se ovde koristi, pojam "inhibicija" ili "inhibiranje" se odnosi na redukciju ili supresiju datog stanja, simptoma, ili poremećaja, ili bolesti, ili značajno smanjenje u aktivnosti osnovne linije biološke aktivnosti ili postupka, ili smanjenje vijabilnosti, broja ili brzine rasta bakterijske populacije.
[0026] Kako se ovde koristi, pojam "tretiranje" ili "lečenje" bilo koje bolesti ili poremećaja se odnosi u jednom načinu ostvarivanja, na ublažavanje bolesti ili poremećaja (tj., usporavanje ili zaustavljanje ili redukovanje razvoja bolesti ili najmanje jednog od njenih kliničkih simptoma). U još jednom načinu ostvarivanja "tretiranje" ili "lečenje" se odnosi na olakšavanje ili ublažavanje najmanje jednog fizičkog parametra uključujući one koji ne moraju biti uočljivi od strane pacijenta. U još jednom načinu ostvarivanja, "tretiranje" ili "lečenje" se odnosi na modulisanje bolesti ili poremećaja, bilo fizički, (npr., stabilizacija uočljivog simptoma), fiziološkim rastvorom, (npr., stabilizacija fizičkog parametra), ili oboje. U još jednom načinu ostvarivanja, "tretiranje" ili "lečenje" se odnosi na sprečavanje ili odlaganje početka ili razvoja ili napredovanja bolesti ili poremećaja.
[0027] Kako se ovde koristi, pojam "jedan," "neki," "ovaj" i slični pojmovi koji se koriste u kontekstu ovog pronalaska (naročito kontekstu patentnih zahteva) trebalo bi da se tumače tako da pokriju i jedninu i množinu ukoliko nije drugačije naznačeno ili jasno u suprotnosti sa kontekstom.
[0028] Svi ovde opisani postupci mogu se izvesti bilo kojim pogodnim redosledom osim ako nije drugačije naznačeno ili jasno u suprotnosti sa kontekstom. Upotreba bilo kog i svih primera, ili primernog izražavanja (npr. "kao što je") koji su ovde obezbeđeni namenjeno je boljem rasvetljavanju ovog pronalaska i ne predstavlja ograničenje obima ovog pronalaska osim ako nije tako navedeno.
[0029] Pojam "antibakterijski agens" se odnosi na agense sintetizovane ili modifikovane u laboratoriji koji imaju ili baktericidnu ili bakteriostatičnu aktivnost. "Aktivni" agens u ovom kontekstu inhibiraće rast P. aeruginosa i / ili druge gram-negativne bakterije. Pojam "inhibiranje rasta" ukazuje na to da je brzina povećanja brojeva populacije određene bakterije smanjena. Tako, pojam uključuje situacije u kojima se bakterijska populacija povećava, ali pri smanjenoj brzini, kao i situacije u kojima je rast populacije zaustavljen, kao i situacije u kojima su brojevi bakterija u populaciji smanjeni ili je ta populacija čak eliminisana.
[0030] Pojam "beta-laktamski antibiotik" se odnosi na antibakterijski agens koji sadrži 4-člani laktamski prsten, koji se takođe naziva beta-laktam, koji ima antibakterijsko dejstvo. Klase beta-laktamskih antibiotika uključuju peniciline, cefalosporine, monobaktame, karbapeneme, oksapeneme, cefeme, karbacefeme, oksacefeme, peneme, pename, sulbaktame i klavame. Posebni beta-laktamski antibiotici pogodni za upotrebu u postupcima i kompozicije ovog pronalaska ovde su opisani, i uključuju aztreonam, piperacilin, ceftazidim, meropenem, i beta-laktam 5.
[0031] Pojam beta-laktamaza" kako se ovde koristi se odnosi na enzimatsku aktivnost koju ima ili ispoljava bakterija, koja katalizuje degradaciju ili inaktivaciju beta-laktamskog antibiotika. Obično, ona katalizuje hidrolizu beta-laktamskog prstena monocikličnog ili bicikličnog beta-laktamskog antibiotika, i izražena je kod gram-negativne ili gram-pozitivne bakterije koja može da prouzrokuje infekciju kod subjekta sisara, naročito ljudi. Beta-laktamaze od interesa uključuju Klasu A (uključujući proširen spektar beta-laktamaze i serin karbapenemaze), kao i Klase C i D beta-laktamaza.
[0032] Pojam "inhibitor beta-laktamaze" ili "BLI" kako se ovde koristi se odnosi na jedinjenje koje inhibira najmanje jednu bakterijsku beta-laktamazu. To znači da on inhibira najmanje jednog člana klase serinske beta-laktamaze, npr. klase A, C ili D beta-laktamaza. Redukovanjem aktivnosti beta-laktamaze, ova jedinjenja pojačavaju aktivnost beta-laktamskog antibiotika koji se koristi u kombinaciji sa BLI; ovde se ovaj efekat naziva potencijacija, budući da BLI ne poseduje svojstveno značajno antibakterijsko dejstvo već pojačava ili potencira antibakterijsko dejstvo antibiotika kod bakterija koje poseduju aktivnost beta-laktamaze. Potencijacija proizilazi iz činjenice da BLI omogućava da beta-laktamski antibiotik potraje duže in vivo u bakterijskom periplazmičkom odeljku ili u blizini bakterijskih patogena, čime je taj antibiotik efektivniji, ili čineći ga efektivnim pri nižim dozama od potrebnih u odsustvu BLI formule (A). Poželjno, BLI je efektivan pri 50% inhibitornoj koncentraciji ispod oko 100 µg/mL (mikrograma/mL), ili ispod oko 50 µg/mL, ili ispod oko 25 µg/mL.
[0033] Pogodni beta-laktamski antibiotici za upotrebu u kombinaciji sa BLI ovog pronalaska uključuju, na primer, aztreonam, imipenem, ertapenem, meropenem, doripenem, biapenem, piperacilin, ceftriakson, cefoperazon, cefotaksim, ceftazidim, ceftolozan, cefepim, panipenem, tikarcilin, ampicilin, amoksicilin, karbenicilin, azlocilin, mezlocilin, tikarcilin, cefoperazon, beta-laktam 5 (ovde prikazan), i njima slične.
[0034] "Opciono supstituisan" označava grupu za koju je navedeno da može biti supstituisana na jednoj ili više položaja jednom ili bilo kojom kombinacijom radikala navedenih nakon toga. Takva supstitucija uključuje zamenu atoma vodonika nesupstituisane grupe nekom drugom grupom; na taj način, broj supstituenata koji se može dodati bilo kojoj nesupstituisanoj grupi jednak je broju atoma vodonika na nesupstituisanoj grupi. Ukoliko nije drugačije naznačeno, 'opciono supstituisan' znači da mogu da budu prisutne do tri ne-vodonične supstituentske grupe.
[0035] "Halo" ili "halogen", kako se ovde koristi, može biti fluor, hlor, brom ili jod.
[0036] "C1-C6alkil", ili "C1-6alkil" kako se ovde koristi, označava ravno lančani ili razgranati alkil sa 1-6 atoma ugljenika. Ukoliko je naznačen različit broj atoma ugljenika, kao što je C8ili C3, tada se definicija tako i shvata, tako što će "C1-C4alkil" uključivati metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sek-butil i terc-butil.
[0037] "C1-C6alkoksi", ili "C1-6alkoksi" kako se ovde koristi, označava ravno lančani ili razgranati alkoksi sa 1-6 atoma ugljenika. Ukoliko je naznačen različit broj atoma ugljenika, kao što je C8ili C3, onda se definicija tako i shvata, npr., "C1-C4alkoksi" predstavljaće metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, butoksi, izobutoksi, sek-butoksi i terc-butoksi.
[0038] "C1-C4-Haloalkil" ili "C1-4haloalkil" kako se ovde koristi, označava ravno lančani ili razgranati alkil sa 1-4 atoma ugljenika, gde je najmanje jedan vodonik zamenjen halogenom. Ukoliko je naznačen različit broj atoma ugljenika, kao što je C6ili C3, onda se definicija tako i shvata, pa tako "C1-C4-Haloalkil" predstavlja metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, sek-butil i terc-butil koji imaju najmanje jedan vodonik supstituisan halogenom, kao što tamo gde je halogen je fluor: CF3CF2-, (CF3)2CH-, CH3-CF2-, CF3CF2-, CF3, CF2H-, CF3CF2CHCF3ili CF3CF2CF2CF2-.
[0039] "C3-C8-cikloalkil" ili "C3-8cikloalkil" kako se ovde koristi se odnosi na zasićen monociklični ugljovodonični prsten od 3 do 8 atoma ugljenika. Primeri takvih grupa uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil. Ukoliko je naznačen različit broj atoma ugljenika, kao što je C3-C6, onda se definicija tako i shvata.
[0040] "4- do 8-člani heterociklil", "5- do 6- člani heterociklil", "3- do 10-člani heterociklil", "3- do 14-člani heterociklil", "4- do 14-člani heterociklil" i "5- do 14-člani heterociklil", odnose se, redom, na 4- do 8-člani, 5- do 6-člani, 3- do 10-člani, 3- do 14-člani, 4- do 14-člani i 5- do 14-člani heterociklične prstenove koji sadrže 1 do 7, 1 do 5 ili 1 do 4 heteroatoma odabrana iz grupe koju čine azot, kiseonik i sumpor, koji može biti zasićen, ili delimično zasićen. "Heterociklik" se može naizmenično koristiti sa "heterociklilom". Heterociklična grupa može biti vezana za heteroatom ili atom ugljenika. Pojam "heterociklil" uključuje grupe pojedinačnih prstenova, grupe fuzionisanih prstenova i premošćene grupe. Primeri takvog heterociklila uključuju, pirolidin, piperidin, piperazin, oksazolidin, pirolidinon, morfolin, tetrahidrofuran, tetrahidrotiofen, tetrahidrotiopiran, tetrahidropiran, 1,4-dioksan, 1,4-oksatian, 8-azabiciklo[3.2.1]oktan, 3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan, 3-oksa-8-aza-biciklo[3.2.1]oktan, 8-oksa-3-azabiciklo[3.2.1]oktan, 2-oksa-5-aza-biciklo[2.2.1]heptan, 2,5-Diaza-biciklo[2.2.1]heptan, azetidin, etilendiokso, oksetan i tiazolidin. Poželjno, heterociklična ili heterociklil grupa je zasićena ili delimično zasićena monociklična grupa ukoliko nije drugačije naznačeno, i sadrži 5-7 atoma prstena sa do dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članovi prstena. U nekim načinima ostvarivanja, heterociklična grupa dalje uključuje biciklične sisteme prstena koji sadrže 1 ili 2 heteroatoma kao što je N, O ili S kao članovi prstena i koja obuhvata dva fuzionisana 3-, 4-, 5-, ili 6-člana prstena, kao što je 3-azabiciklo[3.1.0]heksan, 8-aza-biciklo[3.2.1]oktan, 3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan, 3-oksa-8-azabiciklo[3.2.1]oktan, 8-oksa-3-aza-biciklo[3.2.1]oktan, 2-oksa-5-aza-biciklo[2.2.1]heptan, 2,5-Diazabiciklo[2.2.1]heptan.
[0041] "Heteroaril" je potpuno nezasićen (aromatični) prsten. Pojam "heteroaril" se odnosi na 5-14 člani monociklični- ili biciklični- ili triciklični-aromatični sistem prstena, sa 1 do 8 heteroatoma odabranih od N, O i S. Tipično, heteroaril je 5-10 člani sistem prstena (npr., 5-6 člani monocikl ili 8-10 člani bicikl) ili 5-6 člani sistem prstena. Ukoliko nije drugačije naznačeno, heteroaril je poželjno izolovani 5-6 člani prsten koji sadrži do 4 heteroatoma odabranih od N, O i S kao članove prstena. Tipične heteroarilne grupe uključuju furan, izotiazol, tiadiazol, oksadiazol, indazol, indol, kvinolin, 2- ili 3-tienil; 2- ili 3-furil; 2- ili 3-pirolil; 1-, 2-, 4-, ili 5-imidazolil; 1, 3-, 4-, ili 5- pirazolil; 2-, 4-, ili 5-tiazolil, 3-, 4-, ili 5-izotiazolil, 2-, 4-, ili 5-
1
oksazolil, 3-, 4-, ili 5-izoksazolil, 3- ili 5-(1,2,4-triazolil), 4- ili 5-(1,2, 3-triazolil), tetrazolil, triazin, pirimidin, 2-, 3-, ili 4-piridil, 3- ili 4-piridazinil, 3-, 4-, ili 5-pirazinil, 2-pirazinil, i 2-, 4-, ili 5-pirimidinil.
[0042] Pojam "hidroksi" ili "hidroksil" se odnosi na grupu -OH, ili kada se koristi kao deo naziva grupe kao što je hidroksialkil, on se odnosi na nazvanu grupu supstituisanu sa - OH.
[0043] "Cviterjon" je molekul koji ima i pozitivno-naelektrisane i negativno-naelektrisane grupe ali nema ukupno naelektrisanje tj. i – naelektrisanja balansirana su unutar molekula. Za konvertovanje anjonskog molekula u neutralni molekul, anjoni bi tipično bili zamenjeni neutralnim grupama, ali za konvertovanje anjonskog molekula u cviterjon, neutralna grupa bila bi zamenjena katjonskom grupom.
[0044] Jedinjenja formule (A) postoje u slobodnom obliku, kao so ili kao cviterjon. U ovoj specifikaciji, ukoliko nije drugačije naznačeno, izraz kao što je "jedinjenja formule (A)" treba shvatiti da on obuhvata jedinjenja u bilo kom obliku, na primer u obliku slobodne baze ili u obliku adicione soli sa kiselinom ili u obliku izmenjivačke soli. Soli koje mogu biti nepogodne za farmaceutske primene, ali koje se mogu upotrebiti, na primer, za izolovanje ili prečišćavanje slobodnog jedinjenja formule (A), kao što su pikrati ili perhlorati, takođe su uključene. Za terapeutsku primenu, koriste se samo farmaceutski prihvatljive soli, cviterjoni ili slobodna jedinjenja (gde je primenjivo u obliku farmaceutskih preparata), i prema tome su poželjni. Soli su poželjno fiziološki prihvatljive soli, formirane, kako je primenjivo, dodavanjem kiseline ili baze ili jonoizmenjivanjem.
[0045] Jedinjenja formule (A) mogu da postoje u obliku raznih cviterjona. Na primer, jedinjenja formule (A) mogu da pokažu protonovane amino-grupe i deprotonovane sulfat-grupe. U ovoj specifikaciji, crtež jedinjenja u slobodnom obliku uključuje i druge moguće cviterjone. Cviterjoni jedinjenja formule (A) takođe su obuhvaćeni ovim pronalaskom.
[0046] Jedinjenja formule (A) mogu da postoje u optički aktivnom obliku ili u obliku mešavina optičkih izomera, npr. u obliku racemskih mešavina ili diastereomernih mešavina. Određenije, asimetrični atom(i) ugljenika može biti prisutan u jedinjenjima formule (A) i njihovim solima. Svi optički izomeri i njihove mešavine, uključujući racemske mešavine, obuhvaćene su ovim pronalaskom. Ovde su opisani razni načini ostvarivanja ovog pronalaska. Podrazumeva se da osobine naznačene u svakom načinu ostvarivanja mogu biti kombinovane sa drugim naznačenim osobinama radi obezbeđivanja daljih načina ostvarivanja. Sledeći nabrojani načini ostvarivanja predstavljaju dodatne aspekte ovog pronalaska.
[0047] U jednom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (A):
gde p je 1 ili 2;
R<1>i R<2>su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od halo, CN, -OR, okso, i -NRR';
Z je NR<3>ili N-OR<3>;
R<3>je nezavisno odabran pri svakom pojavljivanju od H, Cy, i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od Cy, halo, CN, -OR, i -NRR';
Cy je C3-C6cikloalkilni prsten ili 4-6 člani heterociklični prsten koji sadrži jedan ili dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članovi prstena, a Cy je opciono supstituisan sa do tri grupe odabrane od okso, halo, C1-C2alkila, CN, -OR, i -NRR'; i
R i R' su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2, ili R i R' uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu da obrazuju prsten odabran iz grupe koju čine piperidin, morfolin, pirolidin, i azetidin, pri čemu je taj prsten opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C2alkila, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2;
ili njegova so ili cviterjonski oblik.
[0048] Posebni načini ostvarivanja ovih jedinjenja uključuju jedinjenja sledećih formula:
ili njihovu so ili cviterjonski oblik.
[0049] Jedan način ostvarivanja od posebnog značaja je jedinjenje formule (I):
u kojoj:
R<1>i R<2>su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od halo, CN, -OR, okso, i -NRR';
Z je NR<3>ili N-OR<3>;
R<3>je nezavisno odabran pri svakom pojavljivanju od H, Cy, i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od Cy, halo, CN, -OR, i -NRR';
Cy je C3-C6cikloalkilni prsten, ili 4-6 člani heterociklični prsten koji sadrži jedan ili dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članovi prstena, a Cy je opciono supstituisan sa do tri grupe odabrane od okso, halo, C1-C2alkila, CN, -OR, i -NRR'; i
R i R' su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2, ili R i R' uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu da obrazuju prsten odabran iz grupe koju čine piperidin, morfolin, pirolidin, i azetidin, pri čemu je taj prsten opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C2alkila, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2;
Y je katjonska grupa;
n je 0 ili 1; i
kada n predstavlja 0, jedinjenje formule I je u cviterjonskom obliku.
[0050] Svako od jedinjenja iz ovde navedenih primera, predstavlja specifičan način ostvarivanja ovog pronalaska.
[0051] Jedinjenje bilo kog od prethodnih načina ostvarivanja, gde Z je NR<3>,
a R<3>je H ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa -OR ili -NRR', ili njegova so ili cviterjonski oblik.
[0052] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 4, gde R<3>je C1-C2alkil opciono supstituisan sa -OR ili -NRR', ili njegova so ili cviterjonski oblik.
[0053] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 4, gde R<3>je H, ili njegova so ili cviterjonski oblik.
[0054] Jedinjenje prema bilo kom od načina ostvarivanja 1-6, gde R<1>i R<2>oba predstavljaju H, ili njegovu so ili cviterjonski oblik.
[0055] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 1, koje ima ovu strukturu:
gde X je -OR ili -NRR';
Y je katjonska grupa;
n je 0 ili 1; i
kada n je 0, jedinjenje formule II je u cviterjonskom obliku.
1
[0056] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 1, koje je odabrano od:
kao njegova so ili cviterjonski oblik.
[0057] Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih načina ostvarivanja, gde n je 1, a Y je odabran iz grupe koju čine natrijum, kalijum, amonijum, kalcijum, magnezijum, železo, srebro, cink, i bakar.
[0058] Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih načina ostvarivanja, gde Y je natrijum.
[0059] Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih načina ostvarivanja, koje je farmaceutski prihvatljiva so ili cviterjon.
[0060] Jedan način ostvarivanja od posebnog značaja je jedinjenje formule (VI):
u kojem:
R<1>i R<2>su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od halo, CN, -OR, okso, i -NRR';
Z je NR<3>ili N-OR<3>;
R<3>je nezavisno odabran pri svakom pojavljivanju od H, Cy, i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od Cy, halo, CN, -OR, i -NRR';
Cy je C3-C6cikloalkilni prsten ili 4-6 člani heterociklični prsten koji sadrži jedan ili dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članovi prstena, i Cy je opciono supstituisan sa do tri grupe odabrane od okso, halo, C1-C2alkila, CN, -OR, i -NRR'; i
R i R' su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C2alkila, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, - NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2, ili R i R' uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu da obrazuju prsten odabran iz grupe koju čine piperidin, morfolin, pirolidin, i azetidin, pri čemu je taj prsten opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C2alkil, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2;
A je H ili -CH2-Ph, gde Ph predstavlja fenil opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C4alkila, C1-C4alkoksi;
ili njegova so ili cviterjon.
[0061] Jedan način ostvarivanja od posebnog značaja je jedinjenje formule (VII):
[0062] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 12 u kristalnom obliku.
[0063] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 13, koje pokazuje endoterm na diferencijalnoj skenirajućoj kalorimetriji između 283 °C i 350 °C.
[0064] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 13, naznačeno time, što ima XRPD pikove na uglovima difrakcije (2Teta) od 8.3 i 16.6 stepeni.
1
[0065] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 15, dalje naznačeno time, što ima jedan ili više dodatnih XRPD pikova na uglovima difrakcije (2Teta) od 25.1 ili 31.3 stepeni.
[0066] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 16, dalje naznačeno time, što ima jedan ili više dodatnih XRPD pikova na uglovima difrakcije (2Teta) od 27.4 ili 28.7 stepeni.
[0067] Jedinjenje prema načinu ostvarivanja 17, dalje naznačeno time, što ima dodatne XRPD pikove na uglovima difrakcije (2Teta) od 19.5 stepeni ili 21.7 stepeni.
[0068] Postupak za pripremu jedinjenja formule (I),
prema načinu ostvarivanja 3, kao njegova so ili cviterjonski oblik;
gde taj postupak obuhvata dovođenje u kontakt jedinjenja formule (III)
kako je definisano u načinu ostvarivanja 3,
sa agensom za sulfonilaciju u prisustvu baze.
[0069] Postupak prema načinu ostvarivanja 19, gde Z je NR<3>, a R<3>je H ili C1-C2alkil opciono supstituisan sa -OR ili -NRR',
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0070] Postupak prema načinu ostvarivanja 19 ili 20, gde jedinjenje formule (I) je formule
ili njegova so ili cviterjonski oblik.
[0071] Postupak prema bilo kom od načina ostvarivanja 19 do 21, gde R<3>je H.
[0072] Jedinjenja formule (III) su korisna za sintetizovanje jedinjenja formule (I) kako je opisano u načinu ostvarivanja 3 i drugim prethodnim načinima ostvarivanja.
1
[0073] Specifična jedinjenja formule (A) i formule (I) uključuju:
ili njihovu so ili cviterjon.
[0074] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje:
Farmaceutsku kombinaciju koja obuhvata (a) prvi terapeutski agens koji je jedinjenje ovog pronalaska, npr. jedinjenje formule (A) ili bilo koju njegovu ovde opisanu podformulu, i (b) drugi terapeutski agens kako je prethodno opisano. Drugi terapeutski agens je tipično beta-laktamski antibiotik.
[0075] Postupak kakav je prethodno definisan, koji obuhvata zajedničko davanje, npr. istovremeno ili sekvencijalno, terapeutski efektivne količine jedinjenja ovog pronalaska, npr. jedinjenja formule (A) ili bilo koje njene podformule koja je ovde opisana, i drugog terapeutskog agensa kako je prethodno opisano.
[0076] Pojmovi "zajedničko davanje" ili "kombinovano davanje" ili slično kako se ovde koriste namenjeni su da obuhvate davanje odabranih terapeutskih agenasa jednom pacijentu, i namenjeni su da uključe režime lečenja u kojima se agensi ne moraju nužno davati istim putem davanja ili u isto vreme. Fiksne kombinacije su takođe u okviru ovog pronalaska. Davanje farmaceutske kombinacije ovog pronalaska dovodi do pozitivnog efekta, npr. sinergističkog terapeutskog efekta, u poređenju sa monoterapijom koja primenjuje samo jedan od svojih farmaceutski aktivnih sastojaka.
[0077] Svaka komponenta kombinacije prema ovom pronalasku može da se daje odvojeno, zajedno, ili u bilo kojoj njihovoj kombinaciji.
[0078] Jedinjenje ovog pronalaska i bilo koji dodatni agens može biti formulisan u odvojenim doznim oblicima. Alternativno, da bi se smanjio broj doznih oblika koji se daju pacijentu, jedinjenje ovog
1
pronalaska i bilo koji dodatni agens mogu biti formulisani zajedno u bilo kojoj kombinaciji. Na primer, jedinjenje inhibitora prema ovom pronalasku može biti formulisano u jednom doznom obliku, a dodatni agens može biti formulisan zajedno u drugom doznom obliku. Bilo koji odvojeni dozni oblici mogu da se daju u isto vreme ili različito vreme.
[0079] Alternativno, kompozicija ovog pronalaska obuhvata dodatni agens kako je ovde opisano. Svaka komponenta može biti prisutna u pojedinačnim kompozicijama, kombinaciji kompozicije, ili u pojedinačnoj kompoziciji.
[0080] Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti sintetizovana opštim putevima sinteze navedenim u nastavku, čiji su specifični primeri detaljnije opisani u primerima.
[0081] Jedinjenja ovog pronalaska i intermedijeri takođe mogu biti konvertovani jedan u drugi prema postupcima opšte poznatim stručnjaku iz ove oblasti.
[0082] U okviru ovog teksta, jedino je lako uklonjiva grupa koja nije sastavni deo posebno poželjnog krajnjeg proizvoda jedinjenja ovog pronalaska, označena kao "zaštitna grupa", ukoliko se iz konteksta ne upućuje na drugačije. Zaštita funkcionalnih grupa takvim zaštitnim grupama, same zaštitne grupe, i njihove reakcije cepanja opisani su na primer u standardnim referentnim radovima, kao što je J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973, u T. W. Greene i P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999, u "The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, u " Methoden der organischen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke i H. Jeschkeit, "Aminosäuren, Peptide, Proteine" (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, i Basel 1982, i u Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhidrat: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974. Karakteristika zaštitnih grupa je da se lako mogu ukloniti (tj. bez javljanja neželjenih sekundarnih reakcija) na primer solvolizom, redukcijom, fotolizom ili alternativno pod fiziološkim uslovima (npr. enzimatskim cepanjem).
[0083] Soli jedinjenja ovog pronalaska sa najmanje jednom so-formirajućom grupom mogu biti pripremljene na način poznat stručnjaku iz ove oblasti. Na primer, soli jedinjenja ovog pronalaska sa kiselim grupama mogu biti formirane, na primer, tretiranjem jedinjenja, ili soli jedinjenja poput tetrabutilamonijum soli, jedinjenjem metala, kao što su soli alkalnih metala pogodnih organskih karboksilnih kiselina, npr. natrijumova so 2-etilheksanske kiseline u odgovarajućem pogodnom rastvaraču, kao što je mešavina izobutanol/voda, koji može da olakša taloženje neželjenog jonskog para (npr. tetrabutil amonijum 2-etilheksanoat ukoliko se koristi tetrabutilamonijumova so). Poželjno, so jedinjenja ovog pronalaska, kao što je amonijumova so, može biti podvrgnuta jonoizmenjivačkoj smoli u obliku svog alkalnog metala ili zemno-alkalnog metala radi promovisanja izmene kontrajona. Adicione
1
soli sa kiselinom ili izmenjivačke soli jedinjenja ovog pronalaska dobijaju se na uobičajeni način, npr. tretiranjem jedinjenja kiselinom ili pogodnim anjonsko izmenjivačkim reagensom. Cviterjoni ili unutrašnje soli jedinjenja ovog pronalaska koje sadrže kisele i bazne so-formirajuće grupe, npr. slobodna sulfatna grupa i slobodna amino grupa, mogu biti formirane, npr. neutralizacijom soli, kao što su adicione soli sa kiselinom, u izoelektričnoj tački, npr. sa slabim bazama, ili tretiranjem jonoizmenjivačima.
[0084] Soli se mogu konvertovati u slobodna jedinjenja u skladu sa postupcima poznatim stručnjacima iz ove oblasti. Hidrohloridne soli mogu se konvertovati, na primer, tretiranjem sa pogodnim baznim agensom. Mešavine izomera koje se mogu dobiti prema ovom pronalasku generalno mogu biti odvojene na način poznat stručnjaku iz ove oblasti na pojedinačne izomere; diastereoizomeri mogu biti odvojeni, na primer, deljenjem između polifazne mešavine rastvarača, rekristalizacijom i/ili hromatografskim odvajanjem, na primer preko gela silicijumdioksida ili npr. tečnom hromatografijom umerenog pritiska preko reverzno fazne kolone, a racemati mogu biti odvojeni, na primer, formiranjem soli sa optički čistim so-formirajućim reagensima i odvajanjem mešavine diastereoizomera koji se na taj način mogu dobiti, na primer frakcionalnom kristalizacijom, ili hromatografijom preko optički aktivnih materijala kolone.
[0085] Intermedijeri i konačno proizvodi mogu biti obrađeni i/ili prečišćeni prema standardnim postupcima, npr. primenom hromatografskih postupaka, distribucionih postupaka, (re-)kristalizacije, i slično.
[0086] Sledeće se generalno primenjuje na sve postupke koji su prethodno ili u nastavku navedeni.
[0087] Sve faze postupka za pripremanje jedinjenja ovog pronalaska mogu se izvesti pod reakcionim uslovima poznatim stručnjacima iz ove oblasti, uključujući one posebno navedene, u prisustvu ili, uobičajeno, u prisustvu rastvarača ili razblaživača, uključujući, na primer, rastvarače ili razblaživače koji su inertni prema upotrebljenim reagensima i rastvaraju ih, u odsustvu ili u prisustvu katalizatora, agenasa za kondenzaciju ili neutralizaciju, na primer jonoizmenjivača, kao što su katjonoizmenjivači, npr. u H+ obliku, zavisno od prirode reakcije i/ili reaktanata pri sniženoj, normalnoj ili povišenoj temperaturi, na primer u temperaturnom opsegu od oko -100 °C do oko 190 °C, uključujući, na primer, od približno -80 °C do približno 150 °C, na primer na od -80 do -60 °C, na sobnoj temperaturi, na od -20 do 40 °C ili na temperaturi refluksa, pod atmosferskim pritiskom ili u zatvorenom sudu, gde je poželjno pod pritiskom, i/ili u inertnoj atmosferi, na primer pod atmosferom argona ili azota.
[0088] U svim fazama reakcija, mešavine izomera koje se formiraju mogu biti odvojene na pojedinačne izomere, na primer diastereoizomere ili enantiomere, ili na bilo koje poželjne mešavine izomera, na primer racemate ili mešavine diastereoizomera.
[0089] Rastvarači od kojih se mogu izabrati oni rastvarači koji su pogodni za bilo koju određenu reakciju uključuju one posebno navedene ili, na primer, vodu, estre, kao što su niži alkil-niži alkanoati, na primer
1
etil acetat, etre, kao što su alifatični etri, na primer dietil etar, ili ciklični etri, na primer tetrahidrofuran ili dioksan, tečne aromatične ugljovodonike, kao što je benzen ili toluen, alkohole, kao što je metanol, etanol ili 1- ili 2-propanol, nitrile, kao što je acetonitril, halogenovane ugljovodonike, kao što je metilen hlorid ili hloroform, amide kiselina, kao što je dimetilformamid ili dimetil acetamid, baze, kao što su heterociklične azotne baze, na primer piridin ili N-metilpirolidin-2-on, anhidride karboksilne kiseline, kao što su niži anhidridi alkanoične kiseline, na primer sirćetni anhidrid, ciklični, linearne ili razgranate ugljovodonike, kao što je cikloheksan, heksan ili izopentan, metilcikloheksan, ili mešavine ovih rastvarača, na primer vodeni rastvori, ukoliko nije drugačije naznačeno u opisu postupaka. Takve mešavine rastvarača takođe mogu da se primenjuju u obradi, na primer hromatografijom ili pariticionisanjem.
[0090] Jedinjenja ovog pronalaska, uključujući njihove soli, takođe se mogu dobiti u obliku hidrata, ili njihovi kristali mogu, na primer, da uključuju rastvarač upotrebljen za kristalizaciju. Mogu biti prisutni različiti kristalni oblici.
[0091] Svi polazni materijali, gradivni blokovi, reagensi, kiseline, baze, agensi za dehidrataciju, rastvarači i katalizatori upotrebljeni u sintezi jedinjenja ovog pronalaska su ili komercijalno dostupni ili se mogu proizvesti postupcima organske sinteze poznatim stručnjaku iz ove oblasti.
[0092] Pojam "optički izomer" ili "stereoizomer" se odnosi na bilo koju od raznih stereoizomernih konfiguracija koje mogu da postoje za dato jedinjenje ovog pronalaska i uključuje geometrijske izomere. Podrazumeva se da supstituent može biti vezan na hiralnom centru atoma ugljenika. Pojam "hiralni" se odnosi na molekule koji imaju svojstvo ne-superponiranja na svog partnera slike u ogledalu, dok se pojam "ahiralni" odnosi na molekule koji se mogu superponirati na svog partnera slike u ogledalu.
Prema tome, ovaj pronalazak uključuje enantiomere, diastereomere ili racemate jedinjenja.
"Enantiomeri" predstavljaju par stereoizomera koji su međusobne nesuperponirajuće slike u ogledalu.
1:1 mešavina para enantiomera je "racemska" mešavina. Ovaj pojam je namenjen da označi racemsku mešavinu gde je to pogodno. "Diastereoizomeri" su stereoizomeri koji imaju najmanje dva asimetrična atoma, ali koji nisu međusobne slike u ogledalu. Apsolutna stereohemija je naznačena prema sistemu Cahn-Ingold-Prelog R-S. Kada je jedinjenje čist enantiomer, stereohemija na svakom hiralnom ugljeniku može biti naznačena ili sa R ili sa S. Razdvojena jedinjenja čije ja apsolutna konfiguracija nepoznata, mogu biti označena sa (+) ili (-) zavisno od smera (dekstro- ili levorotacija) kojim se rotiraju oko polarizovanog svetla ravni pri talasnoj dužini natrijumske D linije. Određena ovde opisana jedinjenja sadrže jedan ili više asimetričnih centara ili osa i zbog toga mogu dati enantiomere, diastereomere, i druge stereoizomerne oblike koji se mogu definisati, u smislu apsolutne stereohemije, kao (R)- ili (S)-.
[0093] Zavisno od izbora polaznih materijala i postupaka, jedinjenja mogu biti prisutna u obliku jednog od mogućih izomera ili kao njegove mešavine, na primer kao čisti optički izomeri, ili kao mešavine izomera, kao što su racemati i diastereoizomerne mešavine, zavisno od broja asimetričnih atoma
2
ugljenika. Predviđeno je da ovaj pronalazak uključi sve takve moguće stereoizomere, uključujući racemske mešavine, diasteriomerne mešavine i optički čiste oblike. Optički aktivni (R)- i (S)-izomeri mogu biti pripremljeni primenom hiralnih sintona ili hiralnih reagenasa, ili razdvojeni primenom konvencionalnih tehnika. Ukoliko jedinjenje sadrži dvostruku vezu, supstituent može biti E ili Z konfiguracija. Ako jedinjenje sadrži disupstituisan cikloalkil, cikloalkilni supstituent može imati cis- ili trans-konfiguraciju. Svi tautomerni oblici takođe su namenjeni da budu uključeni.
[0094] Bilo koje dobijene mešavine izomera mogu biti odvojene na bazi fizičkohemijskih razlika konstituenata, na čiste ili suštinski čiste geometrijske ili optičke izomere, diastereomere, racemate, na primer, hromatografijom i/ili frakcionalnom kristalizacijom.
[0095] Bilo koji od dobijenih racemata finalnih proizvoda ili intermedijera, može biti razdvojen na optičke antipode poznatim postupcima, npr., odvajanjem njihovih diastereomernih soli, dobijenih sa optički aktivnom kiselinom ili bazom, i oslobađanjem optički aktivnog kiselog ili baznog jedinjenja. Određenije, bazna grupa tako može biti upotrebljena za razdvajanje jedinjenja ovog pronalaska na njihove optičke antipode, npr., frakcionalnom kristalizacijom soli formirane sa optički aktivnom kiselinom, npr., vinskom kiselinom, dibenzoil vinskom kiselinom, diacetil vinskom kiselinom, di-O,O'-ptoluoil vinskom kiselinom, mandelinskom kiselinom, jabučnom kiselinom ili kamfor-10-sulfonskom kiselinom. Racemski proizvodi takođe mogu biti razdvojeni hiralnom hromatografijom, npr., tečnom hromatografijom visokog pritiska (HPLC) primenom hiralnih adsorbenta.
[0096] Pored toga, jedinjenja ovog pronalaska, uključujući njihove soli, takođe mogu biti dobijena u obliku njihovih hidrata, ili uključuju druge rastvarače koji se koriste za njihovu kristalizaciju. Jedinjenja ovog pronalaska mogu inherentno ili po dizajnu da formiraju solvate sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima (uključujući vodu); prema tome, predviđeno je da ovaj pronalazak obuhvati i solvatisane i nesolvatisane oblike. Pojam "solvat" se odnosi na molekulski kompleks jedinjenja ovog pronalaska (uključujući njegovu so ili cviterjonske oblike) sa jednim ili više molekula rastvarača. Takvi molekuli rastvarača su oni koji se uobičajeno koriste u oblasti farmacije, za koje se zna da su neškodljivi za primaoca, npr., voda, etanol, i slično. Pojam "hidrat" se odnosi na kompleks u kojem je molekul rastvarača voda.
[0097] Jedinjenja ovog pronalaska, uključujući njihove soli, hidrate i solvate, mogu inherentno ili po dizajnu da formiraju polimorfe.
[0098] Kako se ovde koristi, pojmovi "so" ili "soli" se odnosi na adicione soli sa kiselinom ili adicione soli sa bazom, jedinjenja ovog pronalaska. "Soli" uključuju određenije "farmaceutski prihvatljive soli". Pojam "farmaceutski prihvatljive soli" se odnosi na soli koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva jedinjenja ovog pronalaska i, koje tipično nisu biološki ili na neki drugi način nepoželjne. U mnogim slučajevima, jedinjenja ovog pronalaska mogu da formiraju soli sa kiselinom i/ili bazom prisustvom amino i/ili sulfatnih grupa ili grupa sličnih njima.
[0099] Farmaceutski prihvatljive adicione soli sa kiselinom ili izmenjivačke soli se mogu formirati sa neorganskim kiselinama i organskim kiselinama, npr., acetatne, aspartatne, benzoatne, bezilatne, bromidne/hidrobromidne, bikarbonatne/karbonatne, bisulfatne/sulfatne, kamforsulfonatne, hloridne/hidrohloridne, hlorteofilonatne, citratne, etandisulfonatne, fumaratne, gluceptatne, glukonatne, glukuronatne, hipuratne, hidrojodidne/jodidne, izetionatne, laktatne, laktobionatne, laurilsulfatne, malatne, maleatne, malonatne, mandelatne, mezilatne, metilsulfatne, naftoatne, napsilatne, nikotinatne, nitratne, oktadekanoatne, oleatne, oksalatne, palmitatne, pamoatne, fosfatne/vodonikfosfatne/divodonikfosfatne, poligalakturonatne, propionatne, stearatne, sukcinatne, sulfosalicilatne, tartratne, tozilatne i trifluoroacetatne soli.
[0100] Neorganske kiseline ili "anjonske grupe" koje se mogu uvesti ili iz kojih se mogu izvesti soli uključuju, na primer, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, fosfornu kiselinu, i njima slične.
[0101] Organske kiseline ili "anjonske grupe" koje se mogu uvesti ili iz kojih se mogu izvesti soli uključuju, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, ćilibarnu kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzojevu kiselinu, mandelinsku kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, toluensulfonsku kiselinu, sulfosalicilnu kiselina, i njima slične. Farmaceutski prihvatljive adicione soli sa bazom ili izmenjivačke soli mogu da se formiraju sa neorganskim i organskim bazama.
[0102] Neorganske baze ili "katjonske grupe" koje mogu da se uvedu ili iz kojih mogu da se izvedu soli uključuju, na primer, amonijumove soli i metale iz kolona I do XII periodnog sistema. U određenim načinima ostvarivanja, soli su izvedene iz katjonskih grupa natrijum, kalijum, amonijum, kalcijum, magnezijum, železo, srebro, cink, i bakar; naročito pogodne soli uključuju amonijumove, kalijumove, natrijumove, kalcijumove i magnezijumove soli.
[0103] Organske baze ili "katjonske grupe" koje mogu da se uvedu ili iz kojih se mogu da se izvedu soli uključuju, na primer, primarne, sekundarne, i tercijerne amine, supstituisane amine uključujući prirodne supstituisane amine, ciklične amine, bazne jonoizmenjivačke smole, i slično. Određeni organski amini uključuju izopropilamin, benzatin, holinat, dietanolamin, dietilamin, lizin, meglumin, piperazin i trometamin.
[0104] Soli ovog pronalaska mogu biti sintetizovane iz bazne ili kisele grupe, konvencionalnim hemijskim postupcima. Generalno, takve soli mogu da se pripreme reagovanjem oblika slobodnih kiselina ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze (kao što je Na, Ca, Mg, ili K hidroksid, karbonat, bikarbonat ili slično), ili reagovanjem oblika slobodne baze ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće kiseline. Poželjno, so jedinjenja ovog pronalaska, kao što je amonijumova so, može biti podvrgnuta jonoizmenjivačkoj smoli u obliku svog alkalnog metala ili zemno alkalinog metala radi promovisanja kontrajonoizmenjivanja. Adicione soli sa kiselinom ili izmenjivačke soli jedinjenja ovog pronalaska dobijaju se na uobičajeni način, npr. tretiranjem jedinjenja kiselinom ili pogodnim anjonoizmenjivačkim reagensom. Cviterjoni ili unutrašnje soli jedinjenja ovog pronalaska, koje sadrže kisele i bazne so-formirajuće grupe, npr. slobodna sulfatna grupa i slobodna amino grupa, mogu biti formirani, npr. neutralizacijom soli, kao što su adicione soli sa kiselinom, u izoelektičnoj tački, npr. slabom bazom, ili tretiranjem jonoizmenjivačima. Takve reakcije tipično se izvode u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u mešavini ova dva. Generalno, upotreba ne-vodene podloge poput etra, etil acetata, etanola, izopropanola, ili acetonitrila je poželjna, gde se može izvesti. Dodatne pogodne soli mogu se naći, npr., u "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); i u "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" od Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).
[0105] Bilo koja ovde data formula takođe je predviđena da predstavlja neobeležene oblike kao i izotopno obeležene oblike jedinjenja ovog pronalaska. Izotopno obeležena jedinjenja imaju strukture prikazane ovde datim formulama osim što je jedan ili više atoma zamenjeno atomom sa odabranom atomskom masom ili masenim brojem. Primeri izotopa koji se mogu uključiti u jedinjenja ovog pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora, i hlora, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>F<31>P,<32>P,<35>S,<36>Cl,<125>I redom. Ovaj pronalazak uključuje razna izotopno obeležena jedinjenja ovog pronalaska, na primer ona u kojima su prisutni radioaktivni izotopi, kao što je<3>H i<14>C, ili ona u kojima su prisutni ne-radioaktivni izotopi, kao što je<2>H i<13>C. Takva izotopno obeležena jedinjenja su korisna u metaboličkim ispitivanjima (sa<14>C), ispitivanjima reakcionih kinetika (sa, na primer<2>H ili<3>H), tehnikama detekcije ili snimanja, kao što je pozitron emisiona tomografija (PET) ili jednofotonska emisione kompjuterizovana tomografija (SPECT) uključujući ispitivanja distribucije leka ili supstrata u tkivu, ili kod radioaktivnog lečenja pacijenata. Određenije,<18>F obeleženo jedinjenje ovog pronalaska može biti naročito poželjno za PET ili SPECT ispitivanja. Izotopno-obeležena jedinjenja ovog pronalaska generalno mogu biti pripremljena konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima iz ove oblasti ili postupcima analognim onim opisanim u pratećim Primerima i Pripremanjima koristeći odgovarajući izotopno-obeležen reagens umesto prethodno upotrebljenog neobeleženog reagensa.
[0106] Dalje, supstitucija težim izotopima, naročito deuterijumom (tj.,<2>H ili D) može dati određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer povećan in vivo poluživot ili sniženi zahtevi doziranja ili poboljšanje terapeutskog indeksa. Podrazumeva se da se deuterijum u ovom kontekstu smatra supstituentom jedinjenja ovog pronalaska. Koncentracija takvog težeg izotopa, specifično deuterijuma, može biti definisana faktorom izotopskog obogaćivanja. Pojam "faktor izotopskog obogaćivanja" kako se ovde koristi označava odnos između izotopne zastupljenosti i prirodne zastupljenosti naznačenog izotopa. Ako je supstituent u jedinjenju ovog pronalaska označen kao deuterijum, takvo jedinjenje ima faktor izotopskog obogaćivanja za svaki označeni atom deuterijuma od najmanje 3500 (52.5% inkorporacija deuterijuma na svakom označenom atomu deuterijuma), najmanje
2
4000 (60% inkorporacija deuterijuma), najmanje 4500 (67.5% inkorporacija deuterijuma), najmanje 5000 (75% inkorporacija deuterijuma), najmanje 5500 (82.5% inkorporacija deuterijuma), najmanje 6000 (90% inkorporacija deuterijuma), najmanje 6333.3 (95% inkorporacija deuterijuma), najmanje 6466.7 (97% inkorporacija deuterijuma), najmanje 6600 (99% inkorporacija deuterijuma), ili najmanje 6633.3 (99.5% inkorporacija deuterijuma).
[0107] Farmaceutski prihvatljivi solvati u skladu sa ovim pronalaskom uključuju one kod kojih rastvarač kristalizacije može biti izotopno supstituisan, npr. D2O, d6-aceton, d6-DMSO.
[0108] Jedinjenja ovog pronalaska koja sadrže grupe koje mogu da dejstvuju kao donori i/ili primači vodoničnih veza mogu biti sposobne za obrazovanje kokristala sa pogodnim kokristalnim formiračima. Ovi kokristali mogu biti pripremljeni od jedinjenja ovog pronalaska poznatim postupcima za formiranje kokristala. Takvi postupci uključuju mlevenje, grejanje, kosublimiranje, zajedničko topljenje, ili dovođenje u kontakt rastvora jedinjenja ovog pronalaska sa formiračem kokristala u uslovima kokristalizacije i izolovanjem kokristala formiranih na taj način. Pogodni kokristalni formirači uključuju one opisane u WO 2004/078163. Na taj način ovaj pronalazak dalje obezbeđuje kokristale koji obuhvataju jedinjenje ovog pronalaska.
[0109] Svi ovde opisani postupci mogu da se izvedu bilo kojim pogodnim redosledom osim ako nije drugačije naznačeno ili jasno u suprotnosti sa kontekstom. Upotreba bilo kog i svih primera, ili primernog izražavanja (npr. "kao što je") koji su ovde obezbeđeni namenjeno je boljem rasvetljavanju ovog pronalaska i ne predstavlja ograničenje obima ovog pronalaska osim ako nije tako navedeno.
[0110] Ovaj pronalazak obezbeđuje nova jedinjenja, farmaceutske formulacije koje uključuju jedinjenja, i medicinske upotrebe kod tretiranja gram-negativnih bakterijskih infekcija. Naročito, ova jedinjenja su pogodna za upotrebu u lečenju infekcije koju prouzrokuje Burkholderia, Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Pseudomonas, Proteus, Salmonella, Serratia, Acinetobacter, Bacteroides, Campylobacter, Neisseria, ili Stenotrophomonas bakterija, uključujući ovde navedene vrste.
[0111] Supstitucija težim izotopima kao što je deuterijum, tj.<2>H, može dati određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećan in vivo polu-život ili sniženi zahtevi doziranja, i stoga to može da bude poželjno u nekim okolnostima. Na primer, supstitucija deuterijumom na neizmenjivim ugljovodoničnim vezama (npr., C-H) može usporiti epimerizaciju i/ili metaboličku oksidaciju in vivo.
[0112] Izotopno-obeležena jedinjenja ovog pronalaska, tj. jedinjenja formule (A), generalno mogu biti pripremljena konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima iz ove oblasti ili postupcima analognim onima opisanim u pratećim primerima i odeljcima pripreme gde se koristi pogodan izotopno-obeležen reagens umesto prethodno korišćenih neobeleženih reagenasa.
[0113] U još jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (A) ili formule (I) za upotrebu u tretiranju subjekta bakterijskom infekcijom, postupak koji obuhvata fazu davanja subjektu kome je potrebno, antibakterijski efektivne količine jedinjenja ovog pronalaska, npr., jedinjenja formule (A) ili njegove soli sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom. Pogodni beta-laktamski antibiotici za upotrebu u ovim postupcima uključuju, ali nisu ograničeni na, peniciline kao što je penicilin G, penicilin V, meticilin, oksacilin, kloksacilin, dikloksacilin, nafcilin, ampicilin, amoksicilin, karbenicilin, tikarcilin, mezlocilin, piperacilin, azlocilin, temocilin, cefalosporine kao što je cepalotin, cefapirin, cefradin, cefaloridin, cefazolin, cefamandol, cefuroksim, cefalesin, cefprozil, cefaklor, lorakarbef, cefoksitin, cefinetazol, cefotaksim, ceftizoksim, ceftriakson, cefoperazon, ceftazidim, cefiksim, cefpodoksim, ceftibuten, cefdinir, cefpirom, cefepim, ceftolozan; karbapenem kao što je doripenem, imipenem, meropenem, panipenem, biapenem; i monobaktame kao što je aztreonam, i beta-laktam 5, koje su ovde opisani.
[0114] "Efektivna količina" jedinjenja ovog pronalaska je neka količina koja suštinski potencira aktivnost beta-laktamskog antibiotika koji se koristi u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska, kao što je neka količina koja izaziva da antibiotik bude najmanje četiri puta aktivniji protiv ciljane bakterije, tj. količina koja snižava najmanju inhibitornu koncentraciju (ili "minimalna inhibitorna koncentracija", "MIC") za ciljanu bakteriju za najmanje 4x i poželjno za najmanje 8x.
[0115] "Efektivna količina" kombinacije BLI plus beta-laktamskog antibiotika kako se ovde koristi se odnosi na neku količinu efektivnu za lečenje bakterijske infekcije kod subjekta, tipično humanog subjekta. Efektivna količina zavisi od osetljivosti inficirajuće bakterije na odabrani antibiotik i od stepena potencijacije obezbeđene putem BLI upotrebljenog u kombinaciji. Stručnjak može da odredi efektivnu količinu takve kombinacije na osnovu parametara subjekta koji se tretira, inficirajuće bakterije, i kombinacije koja se koristi, koja može da uključi određivanje MIC za posebnu kombinaciju na ciljanoj bakteriji. Tipično, bakterija koja se tretira je ona koja je otporna na najmanje neki od beta-laktamskih antibiotika jer bakterija ispoljava aktivnost beta-laktamaze.
[0116] Jedinjenja ovog pronalaska takođe su korisna u lečenju pacijenata koji pate od ili su podložni kožnim infekcijama, upali pluća, sepsi, cističnoj fibrozi, stvaranju rana, komplikovanom dijabetesnom stopalu, komplikacijama intraabdominalnih infekcija ili komplikovanim infekcijama urinarnog trakta i polnim bolestima koje prouzrokuju gram-negativni ili gram-pozitivni patogeni. Jedinjenja ovog pronalaska takođe su korisna kod stanja koja su prouzrokovana vrstama Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Bacteroides, Burkholderia, Campylobacter, Neisseria, ili Stenotrophomonas. Određenije, bakterijska infekcija prouzrokovana vrstama Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, ili Acinetobacter može se lečiti ovde navedenim postupcima.
Posebne bakterijske vrste za takvo lečenje uključuju Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter cloacae, Enterobacter faecalis, Enterobacter faecium, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Klebsiella oksitoca, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Salmonella vrste, Serratia
2
marcescens, Pseudomonas aeruginosa, i Acinetobacter baumannii, kao i Bacteroides fragilis, Burkholderia cepacia, Campylobacter jejuni, Neisseria gonorrhoeae, i Stenotrophomonas maltophilia.
[0117] Pod pojmom "kombinacija", podrazumeva se ili fiksna kombinacija u jednom doznom jediničnom obliku, ili komplet ili instrukcije za kombinovano davanje u kojem se jedinjenje ovog pronalaska i kombinacija partnera beta-laktamskog antibiotika mogu davati nezavisno ili zajedno, u isto vreme ili odvojeno unutar istih vremenskih intervala koji naročito omogućavaju da ova kombinacija partnera pokaže kooperativni, npr., sinergistički, efekat, ili bilo koju njihovu kombinaciju.
[0118] Jedan način ostvarivanja ovog pronalaska obezbeđuje jedinjenja ovog pronalaska u farmaceutskoj kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom i trećim terapeutskim agensom. U nekim načinima ostvarivanja, treći terapeutski agens je dodatni antibakterijski agens ili dodatni inhibitor betalaktamaze. U nekim načinima ostvarivanja, kombinacija uključuje najmanje jedan drugi antibakterijski agens, koji može biti neki drugi beta-laktamski antibiotik ili neki drugi antibakterijski agens odabran iz dole opisanih klasa. Neograničavajući primeri dodatnih antibakterijskih agenasa za upotrebu u farmaceutskim kombinacijama ovog pronalaska mogu biti odabrani iz sledećih grupa:
(1) Makrolidi ili ketolidi kao što je eritromicin, azitromicin, claritromicin, i telitromicin;
(2) Beta-laktamski antibiotici uključujući penicilin kao što je penicilin G, penicilin V, meticilin, oksacilin, kloksacilin, dikloksacilin, nafcilin, ampicilin, amoksicilin, karbenicilin, tikarcilin, mezlocilin, piperacilin, azlocilin, temocilin, cefalosporin kao što je cepalotin, cefapirin, cefradin, cefaloridin, cefazolin, cefamandol, cefuroksim, cefaleksin, cefprozil, cefaklor, lorakarbef, cefoksitin, cefinetazol, cefotaksim, ceftizoksim, ceftriakson, cefoperazon, ceftazidim, cefiksim, cefpodoksim, ceftibuten, cefdinir, cefpirom, cefepim, ceftolozan i karbapenem kao što je doripenem, imipenem, meropenem, panipenem, i monobaktame kao što je aztreonam, i ovde naveden beta-laktam 5;
(3) Glikopeptidi kao što je vankomicin i teikoplanin;
(4) Kvinoloni kao što je nalidiksinska kiselina, oksolinska kiselina, norfloksacin, pefloksacin, enoksacin, ofloksacin, levofloksacin, ciprofloksacin, temafloksacin, lomefloksacin, fleroksacin, grepafloksacin, sparfloksacin, trovafloksacin, clinafloksacin, gatifloksacin, moksifloksacin, sitafloksacin, ganefloksacin, gemifloksacin, delafloksacin i pazufloksacin;
(5) Antibakterijski sulfonamidi i antibakterijski sulfanilamidi, uključujući para-aminobenzojevu kiselinu, sulfadiazin, sulfisoksazol, sulfametoksazol i sulfatalidin;
(6) Aminoglikozidi kao što je streptomicin, neomicin, kanamicin, paromicin, gentamicin, tobramicin, amikacin, netilmicin, spectinomicin, sizomicin, dibekalin, plazomicin i izepamicin;
(7) Tetraciklini kao što je tetraciklin, hlortetraciklin, demeklociklin, minociklin, oksitetraciklin, metaciklin, doksiciklin, tigeciklin i eravaciklin;
(8) Rifamicini kao što je rifampicin (takođe nazvan rifampin), rifapentin, rifabutin, bezoksazinorifamicin i rifaksimin;
2
(9) Linkozamidi kao što je linkomicin i klindamicin;
(10) Streptogramini kao što je kvinupristin i daflopristin;
(11) Oksazolidinoni kao što je linezolid ili tedizolid;
(12) Polimiksin, kolistin i kolimicin;
(13) Trimetoprim i bacitracin; i
(14) Inhibitori efluks pumpi
(15) Inhibitori beta-laktamaze, kao što su inhibitori metalo beta-laktamaze.
[0119] Beta-laktam ili drugi antibakterijski agens mogu da se daju u kombinaciji sa jedinjenjima ovog pronalaska gde se beta-laktamski ili drugi antibakterijski agens daje pre, jednovremeno, ili posle jedinjenja ili jedinjenja ovog pronalaska. Kada je poželjno jednovremeno davanje jedinjenja ovog pronalaska sa drugim ili trećim agensom, a put davanja je isti, tada jedinjenje ovog pronalaska može biti formulisano sa drugim ili trećim agensom u istom doznom obliku. Primer doznog oblika koji sadrži jedinjenje ovog pronalaska i drugi ili treći agens je intravenozno davanje. Alternativni primer je intramuskularno davanje rastvora koji obuhvata jedinjenje ovog pronalaska i drugi ili treći agens.
[0120] Ovde opisana jedinjenja i kompozicije mogu se primeniti ili davati u kombinaciji sa betalaktamom i jednim ili više terapeutskih agenasa koji dejstvuju kao imunomodulatori, npr., aktivator kostimulirajućeg molekula, ili inhibitor imuno-inhibitornog molekula, ili vakcina. Protein programirane smrti 1 (PD-1) je inhibitorni član proširene CD28/CTLA4 familije T ćelijskih regulatora (Okazaki et al. (2002) Curr Opin Immunol 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J. Immunol.170:711-8). PD-1 je eksprimiran na aktiviranim B ćelijama, T ćelijama, i monocitima. PD-1 je imuno-inhibitorni protein koji negativno reguliše TCR signale (Ishida, Y. et al. (1992) EMBO J.11:3887-3895; Blank, C. et al. (Epub 2006 Dec.29) Immunol. Immunother.56(5):739-745), i regulisan je rastuće regulisan kod hroničnih infekcija. Interakcija između PD-1 i PD-L1 može da dejstvuje kao imuno kontrolna tačka, koja može da vodi ka, npr., smanjenju u infiltriranju limfocita, smanjenju u T-ćelijski receptor posredovanoj proliferaciji, i/ili imuno evaziji kancerogenih ili inficiranih ćelija (Dong et al. (2003) J. Mol. Med.81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother.54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res.10:5094-100). Imuno supresija može da se preokrene inhibiranjem lokalne interakcije PD-1 sa PD-L1 ili PD-L2; taj efekat je dodatan kada je interaksija PD-1 sa PD-L2 takođe blokirana (Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol.170:1257-66). Imunomodulacija se može postići vezivanjem bilo za imuno-inhibitorni protein (npr., PD-1) ili za vezujuće proteine koji modulišu taj inhibitorni protein (npr., PD-L1, PD-L2).
[0121] U jednom načinu ostvarivanja, kombinovane terapije ovog pronalaska uključuju imunomodulator koji je inhibitor ili antagonist inhibitornog molekula imuno kontrolne tačke. U još jednom načinu ostvarivanja imunomodulator vezuje se za protein koji prirodno inhibira imuno-inhibitorni molekul kontrolne tačke. Kada se koristi u kombinaciji sa antibakterijskim jedinjenjima, ovi imunomodulatori
2
mogu da pojačavaju antimikrobni odgovor, i tako pojačavaju efikasnost u odnosu na lečenje u kojem se koristi samo antibakterijsko jedinjenje.
[0122] Pojam "imuno kontrolne tačke" se odnosi na grupu molekula na ćelijskoj površini CD4 i CD8 T ćelija. Ovi molekuli mogu efektivno da služe kao "kočnice" radi modulisanja na dole ili inhibiranja adaptivnog imuno odgovora. Molekuli imuno kontrolne tačke uključuju, ali nisu ograničeni na, Programiranu smrt 1 (PD-1), Citotoksični T-Limfocitni Antigen 4 (CTLA-4), B7H1, B7H4, OX-40, CD137, CD40, i LAG3, koji direktno inhibiraju imuno ćeliju. Imunoterapeutski agensi koji mogu da dejstvuju kao inhibitori imuno kontrolne tačke korisni u postupcima ovog pronalaska, uključuju, ali nisu ograničeni na, inhibitore PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 i/ili TGFR beta. Inhibicija inhibitornog molekula može da se izvede inhibicijom na DNK, RNK ili proteinskom nivou. U nekim načinima ostvarivanja, inhibitorna nukleinska kiselina (npr., dsRNK, siRNK ili shRNK), može da se primeni da inhibira ekspresiju inhibitornog molekula. U drugim načinima ostvarivanja, inhibitor inhibitornog signala je polipeptid, npr., rastvorljiv ligand, ili antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji se vezuje za inhibitorni molekul.
[0123] Pod "u kombinaciji sa," predviđeno je da se označi da se terapija ili terapeutski agensi moraju davati u isto vreme i/ili formulisani za zajedničku isporuku, iako su ovi postupci isporuke unutar ovde opisanog obima. Imunomodulator se može davati istovremeno sa, pre, ili posle, jednog ili više jedinjenja ovog pronalaska i beta-laktamskim partnerom, i opciono jednom ili više dodatnih terapija ili terapeutskih agenasa. Terapeutski agensi u kombinaciji se mogu davati bilo kojim redosledom.
Generalno, svaki agens davaće se u dozi i/ili vremenskom rasporedu određenom za taj agens. Dalje se podrazumeva da terapeutski agensi koji se koriste u ovoj kombinaciji mogu da se daju zajedno u jednoj kompoziciji ili mogu da se daju odvojeno u različitim kompozicijama. Generalno, očekuje se da se svaki od terapeutskih agenasa upotrebljen u kombinaciji koristi u nivoima koji ne premašuju nivoe na kojima se koriste pojedinačno. U nekim načinima ostvarivanja, nivoi koji se koriste u kombinaciji biće niži od onih koji se koriste pojedinačno.
[0124] U određenim načinima ostvarivanja, ovde opisan beta -inhibitor daje se u kombinaciji sa betalaktamom i jednim ili više imunomodulatora koji su inhibitori PD-1, PD-L1 i/ili PD-L2. Svaki takav inhibitor može biti antitelo, njegov antigen vezujući fragment, imunoadhesin, fuzioni protein, ili oligopeptid. Primeri takvih imunomodulatora poznati su u tehnici.
[0125] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je anti-PD-1 antitelo odabrano od MDX-1106, Merck 3475 ili CT- 011.
[0126] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je imunoadhesin (npr., imunoadhesin koji obuhvata ekstracelularni ili PD-1 vezujući deo PD-LI ili PD-L2 fuizionisanog za konstantni region (npr., Fc region imunoglobulinske sekvence).
[0127] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je PD-1 inhibitor kao što je AMP-224.
2
[0128] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je PD-LI inhibitor kao što je anti-PD-LI antitelo.
[0129] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je anti-PD-LI vezujući antagonist odabran od YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, ili MDX-1105. MDX-1105, takođe poznat kao BMS-936559, on je anti-PD-LI antitelo opisano u WO2007/005874. Antitelo YW243.55.S70 je anti-PD-LI opisan u WO 2010/077634.
[0130] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je nivolumab (CAS registarski broj: 946414-94-4). Alternativni nazivi za nivolumab uključuju MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, ili BMS-936558. Nivolumab je potpuno humano IgG4 monoklonalno antitelo koje specifično blokira PD-1. Nivolumab (klon 5C4) i druga humana monoklonalna antitela koja se specifično vezuju za PD-1 opisana su u US 8,008,449, EP2161336 i WO2006/121168.
[0131] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je anti-PD-1 antitelo pembrolizumab.
Pembrolizumab (koji se takođe naziva lambrolizumab, MK-3475, MK03475, SCH-900475 ili KEYTRUDA®; Merck) je humanizovano IgG4 monoklonalno antitelo koji se vezuje za PD-1. Pembrolizumab i druga humanizovana anti-PD-1 antitela opisana su u Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44, US 8,354,509, WO2009/114335, i WO2013/079174.
[0132] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je Pidilizumab (CT-011; Cure Tech), humanizovano IgG1k monoklonalno antitelo koje se vezuje za PD1. Pidilizumab i druga humanizovana anti-PD-1 monoklonalna antitela opisana su u WO2009/101611.
[0133] Druga anti-PD1 antitela korisna kao imunomodulatori za upotrebu u ovde opisanim postupcima uključuju AMP 514 (Amplimuno), i anti-PD1 antitela opisana u US 8,609,089, US 2010028330, i/ili US 20120114649. U nekim načinima ostvarivanja, anti-PD-L1 antitelo je MSB0010718C. MSB0010718C (koje se takođe naziva A09-246-2; Merck Serono) je monoklonalno antitelo koje se vezuje za PD-L1.
[0134] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je MDPL3280A (Genentech / Roche), humano Fc optimizovano IgG1 monoklonalno antitelo koje se vezuje za PD-L1. MDPL3280A i druga humana monoklonalna antitela za PD-L1 opisana su u U.S. patentu br.: 7,943,743 i U.S objavi br.: 20120039906. Drugi anti-PD-L1 vezujući agensi korisni kao imunomodulatori za postupke ovog pronalaska uključuju YW243.55.S70 (videti WO2010/077634), MDX-1105 (koji se takođe naziva BMS-936559), i anti-PD-L1 vezujući agensi opisani u WO2007/005874.
[0135] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je AMP-224 (B7-DCIg; Amplimuno; npr., opisan u WO2010/027827 i WO2011/066342), on je PD-L2 Fc fuziono rastvorljiv receptor koji blokira interakciju između PD1 i B7-H1.
[0136] U nekim načinima ostvarivanja, imunomodulator je anti-LAG-3 antitelo kao što je BMS-986016. BMS-986016 (koje se takođe naziva BMS986016) je monoklonalno antitelo koje se vezuje za LAG-3. BMS-986016, a druga humanizovana anti-LAG-3 antitela opisana su u US
2011/0150892, WO2010/019570, i WO2014/008218
2
[0137] U određenim načinima ostvarivanja, kombinovane terapije opisane ovde uključuju modulator kostimulirajućeg molekula ili inhibitornog molekula, npr., ko-inhibitorni ligand ili receptor.
[0138] U jednom načinu ostvarivanja, kostimulatorni modulator, npr., agonist, kostimulirajućeg molekula je odabran od agonista (npr., agonističko antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, ili rastvorljiva fuzija) za OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 ili CD83 ligand.
[0139] U još jednom načinu ostvarivanja, kombinovane terapije opisane ovde uključuju imunomodulator koji je kostimulatorni molekul, npr., agonist povezan sa pozitivnim signalom koji uključuje kostimulatorni domen za CD28, CD27, ICOS i/ili GITR.
[0140] Primerni GITR agonisti uključuju, npr., GITR fuzione proteine i anti-GITR antitela (npr., bivalenta anti-GITR antitela), kao što je, GITR fuzioni protein opisan u U.S. patentu br.: 6,111,090, evropskom patentu br.: 090505B1, U.S patentu br.: 8,586,023, PCT objavama br.: WO 2010/003118 i 2011/090754, ili anti-GITR antitelo opisano, npr., u U.S. patentu br.: 7,025,962, evropskom patentu
br.: 1947183B1, U.S. patentu br.: 7,812,135, U.S. patentu br.: 8,388,967, U.S. patentu br.: 8,591,886, evropskom patentu br.: EP 1866339, PCT objavi br.: WO 2011/028683, PCT objavi br. :WO 2013/039954, PCT objavi br.: WO2005/007190, PCT objavi br.: WO 2007/133822, PCT objavi br.:
WO2005/055808, PCT objavi br.: WO 99/40196, PCT objavi br.: WO 2001/03720, PCT objavi br.:
WO99/20758, PCT objavi br.: WO2006/083289, PCT objavi br.: WO 2005/115451, U.S. patentu Br.: 7,618,632, i PCT objavi br.: WO 2011/051726.
[0141] U jednom načinu ostvarivanja, upotrebljeni imunomodulator je rastvorljivi ligand (npr., CTLA-4-Ig), ili antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za PD-L1, PD-L2 ili CTLA4. Na primer, molekul anti-PD-1 antitela može se davati u kombinaciji sa anti-CTLA-4 antitelom, npr., ipilimumabom, na primer.
Primerna anti-CTLA4 antitela uključuju tremelimumab (IgG2 monoklonalno antitelo dostupno od Pfizer, prethodno poznat kao ticilimumab, CP-675,206); i ipilimumab (CTLA-4 antitelo, takođe poznato kao MDX-010, CAS Br.477202-00-9).
[0142] U jednom načinu ostvarivanja, molekul anti-PD-1 antitela daje se posle tretiranja jedinjenjima ovog pronalaska kako je ovde opisano.
[0143] U još jednom načinu ostvarivanja, molekul anti-PD-1 ili PD-L1 antitela daje se u kombinaciji sa anti-LAG-3 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom. U još jednom načinu ostvarivanja, molekul anti-PD-1 ili PD-L1 antitela daje se u kombinaciji sa anti-TIM-3 antitelom ili njegovim antigenvezujućim fragmentom. U nekim drugim načinima ostvarivanja, molekul anti-PD-1 ili PD-L1 antitela daje se u kombinaciji sa anti-LAG-3 antitelom i anti-TIM-3 antitelom, ili njegovim antigen-vezujućim fragmentima. Kombinacija ovde navedenih antitela može se davati odvojeno, npr., kao odvojena antitela, ili linkovana, npr., kao molekul bispecifičnog ili trispecifičnog antitela. U jednom načinu ostvarivanja, daje se bispecifično antitelo koje uključuje molekul anti-PD-1 ili PD-L1 antitela i anti-TIM-3 ili anti-LAG-3 antitela, ili njegov antigen-vezujući fragment. U određenim načinima ostvarivanja, kombinacija ovde navedenih antitela koristi se za tretiranje kancera, npr., kancera kakav je ovde opisan (npr., čvrsti tumor). Efikasnost gore pomenutih kombinacija može da se ispita na životinjskim modelima poznatim u struci. Na primer, životinjski modeli za ispitivanje sinergističkog efekta anti-PD-1 i anti-LAG-3, opisani su, npr., u Woo et al. (2012) Cancer Res.72(4):917-27).
[0144] Primerni imunomodulatori koji se mogu primeniti u kombinovanim terapijama uključuju, ali nisu ograničeni na, npr., afutuzumab (dostupno od Roche®); pegfilgrastim (Neulasta®); lenalidomid (CC-5013, Revlimid®); talidomid (Thalomid®), aktimid (CC4047); i citokine, npr., IL-21 ili IRX-2 (mešavina humanih citokina uključujući interleukin 1, interleukin 2, i interferon γ, CAS 951209-71-5, dostupno od IRX Therapeutics).
[0145] Primerne doze takvih imunomodulatora koji se mogu primeniti u kombinaciji sa antibakterijskim jedinjenjima ovog pronalaska uključuju dozu molekula anti-PD-1 antitela od oko 1 do 10 mg/kg, npr., 3 mg/kg, i dozu anti-CTLA-4 antitela, npr., ipilimumaba, od oko 3 mg/kg.
[0146] Primeri načina ostvarivanja primene jedinjenja ovog pronalaska u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom i imunomodulatorom uključuju
i. tretiranje bakterijske infekcije kod subjekta, koje obuhvata davanje subjektu jedinjenje formule (A) kako je ovde opisano, i imunomodulator.
ii. način ostvarivanja i, gde je imunomodulator neki aktivator kostimulirajućeg molekula ili inhibitor molekula imuno kontrolne tačke.
iii. bilo koji od načina ostvarivanja i i ii, gde je aktivator kostimulatornog molekula agonist jednog ili više OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 i CD83 liganda.
iv. bilo koji od gornjih načina ostvarivanja i-iii, gde je inhibitor molekula imuno kontrolne tačke odabran od PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 i TGFR beta.
v. bilo koji od načina ostvarivanja i-iii, gde je inhibitor molekula imuno kontrolne tačke odabran od inhibitora PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 ili CTLA4, ili bilo koji njihove kombinacije.
vi. bilo koji od gornjih načina ostvarivanja i-v, gde je inhibitor molekula imuno kontrolne tačke rastvorljivi ligand ili antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, koji se vezuje za molekul imuno kontrolne tačke.
vii. bilo koji od gornjih načina ostvarivanja i-vi, gde je antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment od IgG1 ili IgG4 (npr., humano IgG1 ili IgG4).
viii. bilo koji od gornjih načina ostvarivanja i-vii, gde je antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment izmenjeno, npr., mutirano, radi povećanja ili smanjenje jednog ili više od: Fc receptor vezivanje, glkolizacija antitela, broj cisteinskih ostataka, funkcija efektro ćelije, ili funkcija komplementa.
1
ix. bilo koji od gornjih načina ostvarivanja i-viii, gde je molekul antitela molekul bispecifičnog ili multispecifičnog antitela koji poseduje prvu vezujuću specifičnost za PD-1 ili PD-L1 i drugu vezujuću specifičnost za TIM-3, LAG-3, ili PD-L2.
x. bilo koji od gornjih načina ostvarivanja i-ix, gde je imunomodulator anti-PD-1 antitelo odabrano od nivolumaba, pembrolizumaba ili pidilizumaba.
xi. bilo koji od gornjih načina ostvarivanja i-x, gde je imunomodulator anti-PD-L1 antitelo odabrano od YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, ili MDX-1105.
xii. bilo koji od gornjih načina ostvarivanja i-x, gde je imunomodulator molekul anti-LAG-3 antitela. xiii. način ostvarivanja xii, gde je molekul anti-LAG-3 antitela BMS-986016,
xiv. bilo koji od gornjih načina ostvarivanja i-x, gde je imunomodulator molekul anti-PD-1 antitela koji se daje injekcijom (npr., subkutano ili intravenozno) pri dozi od oko 1 do 30 mg/kg, npr., oko 5 do 25 mg/kg, oko 10 do 20 mg/kg, oko 1 do 5 mg/kg, ili oko 3 mg/kg., npr., jednom nedeljno do jednom svake 2, 3, ili 4 nedelje.
xv. način ostvarivanja xiv, gde se molekul anti-PD-1 antitela daje pri dozi od oko 10 do 20 mg/kg svake druge nedelje.
xvi. način ostvarivanja xv, gde se molekul anti-PD-1 antitela, npr., nivolumab, daje intravenozno pri dozi od oko 1 mg/kg do 3 mg/kg, npr., oko 1 mg/kg, 2 mg/kg ili 3 mg/kg, svake dve nedelje. xvii. način ostvarivanja xv, gde se molekul anti-PD-1 antitela, npr., nivolumab, daje intravenozno pri dozi od oko 2 mg/kg u 3-nedeljnim intervalima.
[0147] Izraz "efektivna količina" jedinjenja je ona količina potrebna ili dovoljna da se pojača efikasnost beta-laktamskog antibiotika koji se koristi za lečenje ili prevenciju bakterijske infekcije i/ili bolesti ili stanja koji su ovde opisani. U jednom primeru, efektivna količina jedinjenja je neka količina dovoljna za lečenje bakterijske infekcije kod subjekta, kada se dozira zajedno sa beta-laktamom. U još jednom primeru, efektivna količina jedinjenja je neka količina dovoljna za lečenje bakterijske infekcije, kada se dozira u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom, koju prouzrokuje, ali se ne ograničava na vrste Enterobacteriaceae i slično kod subjekta. Efektivna količina može da varira zavisno od takvih faktora kao što je veličina i težina subjekta, vrste bolesti, karakteristika bakterijskog patogena koji prouzrokuje bolest (na primer vrsta i nivo proizvodnje beta-laktamaze) ili posebnog jedinjenja ovog pronalaska, kao i beta-laktamskog antibiotika koji se koristi zajedno sa jedinjenjem ovog pronalaska. Na primer, izbor jedinjenja ovog pronalaska može da utiče na to šta konstituiše "efektivnu količinu." Stručnjaku je lako da ispita ovde sadržane faktore i odredi saglasno tome efektivnu količinu jedinjenja ovog pronalaska bez nepotrebnih eksperimenata.
[0148] Režim davanja može da utiče na to šta čini efektivnu količinu. Jedinjenje ovog pronalaska može da se daje subjektu ili pre ili posle početka bakterijske infekcije. Tipično, jedinjenje se daje subjektu kome je dijagnostikovana bakterijska infekcija i kome je shodno tome potrebno lečenje. Dalje, nekoliko
2
podeljenih doza, kao i raspoređenih doza, može se davati svakih 6 sati, svakih 8 sati, svakih 12 sati ili dnevno ili sekvencijalno, ili ta doza može biti kontinuirano infuzirana, ili može biti bolus injekcija. Dalje, doze jedinjenja(a) ovog pronalaska mogu biti proporcionalno povećane ili smanjenje kako je ukazano potrebom terapeutske ili profilaktičke situacije. Tipično, jedinjenje ovog pronalaska se daje tokom najmanje 5 dana, uobičajenije najmanje 7 dana ili najmanje 10 dana ili najmanje 14 dana, kroz 3 ili 4 infuzije na dan (svakih 6 ili 8 sati).
[0149] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se primeniti u lečenju stanja, poremećaja ili bolesti kako je ovde opisano, ili za proizvodnju farmaceutskih kompozicija za upotrebu u lečenju ovih bolesti. Ovaj pronalazak obezbeđuje postupke upotrebe jedinjenja ovog pronalaska u lečenju ovih bolesti ili farmaceutike sa jedinjenjima ovog pronalaska za lečenje ovih bolesti.
[0150] Izraz "farmaceutska kompozicija" uključuje preparate pogodne za davanje sisarima, npr., ljudima. Kada se jedinjenja ovog pronalaska daju kao farmaceutici sisarima, npr., ljudima, oni se mogu davati per se ili kao farmaceutska kompozicija koja sadrži, na primer, 0.1 do 99.5% (poželjnije, 0.5 do 90%) aktivnog sastojka u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0151] Izraz "farmaceutski prihvatljiv nosač" u struci je prepoznat i uključuje farmaceutski prihvatljiv materijal, kompoziciju ili nosač, pogodan za davanje jedinjenja ovog pronalaska sisarima. Nosači uključuju tečni ili čvrsti punilac, razblaživač, ekscipijens, rastvarač ili enkapsulirajući materijal, uključen u nošenje ili transport predmetnog agensa iz jednog organa, ili dela tela, do drugog organa, ili dela tela. Svaki nosač mora biti "prihvatljiv" u smislu da je kompatibilan sa drugim sastojcima formulacije i neškodljiv za pacijenta. Neki primeri materijala koji mogu da služe kao farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju: šećere, kao što je laktoza, glukoza i saharoza; skrobove, kao što je kukuruzni skrob i krompirov skrob; celulozu, i njeni derivati, kao što je natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celuloza acetat; praškasti tragakant; slad; želatin; talk; ekscipijense, kao što je kakao buter i supozitorni voskovi; ulja, kao što je ulje kikirikija, ulje semena pamuka, safranovo ulje, susamovo ulje, maslinovo ulje, kukuruzno ulje i sojino ulje; glikole, kao što je propilenglikol; poliole, kao što je glicerin, sorbitol, manitol i polietilen glikol; estre, kao što je etil oleat i etil laurat; agar; puferujuće agense, kao što je magnezijumhidroksid i aluminjumhidroksid; alginske kiseline; vode bez pirogena; izotonični slani rastvor; Ringer-ov rastvor; etil alkohol; fosfatne puferske rastvore; i druge ne-toksične komaptibilne supstance koje se primenjuju u farmaceutskim formulacijama. U nekim načinima ostvarivanja, farmaceutski prihvatljiv nosač je sterilizovan pre kombinovanja sa jedinjenjem ovog pronalaska.
[0152] U nekim načinima ostvarivanja, farmaceutska kompozicija ovog pronalaska obuhvata jedinjenje bilo kog od navedenih načina ostvarivanja i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens. U određenim načinima ostvarivanja, farmaceutska kompozicija ovog pronalaska obuhvata jedinjenje bilo kog od navedenih načina ostvarivanja i najmanje dva farmaceutski prihvatljiva nosača ili ekscipijensa.
[0153] Agensi vlaženja, emulzifikatori i ovlaživači, kao što je natrijumlaurilsulfat i magnezijumstearat, kao i konzervansi i antioksidansi takođe mogu biti prisutni u ovim kompozicijama.
[0154] Primeri farmaceutski prihvatljivih antioksidanasa uključuju: u vodi rastvorljivi antioksidans, kao što je askorbinska kiselina, cisteinhidrohlorid, natrijumbisulfat, natrijummetabisulfit, natrijumsulfit i slično; u ulju rastvorljivi antioksidans, kao što je askorbilpalmitat, butilovan hidroksianizol (BHA), butilovan hidroksitoluen (BHT), lecitin, propilgalate, α-tokoferol, i slično; i metal helirajuće agense, kao što je limunska kiselina, etilendiaminska tetrasirćetna kiselina (EDTA), sorbitol, vinska kiselina, fosforna kiselina, i slično.
[0155] Formulacije ovog pronalaska uključuju one pogodne za oralno, nazalno, inhalaciono, topikalno, transdermalno, bukalno, sublingvalno, rektalno, vaginalno i/ili parenteralno davanje. Tipično, jedinjenja ovog pronalaska mogu da se daju intravenozno, u obliku rastvora koji je često izotoničan, kao što je slani ili glukozni rastvor. Formulacije mogu pogodno biti prisutne u jediničnom doznom obliku i mogu biti pripremljene bilo kojim od postupaka poznatih u farmaciji. Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa materijalom nosača radi proizvodnje pojedinačnog doznog oblika, generalno će biti ona količina jedinjenja koja proizvodi terapeutski efekat. Generalno, u odnosu na sto procenata, ova količina kreće se od oko 1 procenta do oko devedeset i devet procenata aktivnog sastojka, poželjno od oko 5 procenata do oko 70 procenata, najpoželjnije od oko 10 procenata do oko 30 procenata.
[0156] Postupci pripremanja ovih formulacija ili kompozicija uključuju fazu spajanja jedinjenje ovog pronalaska sa nosačem i, opciono, jednim ili više dodatnih sastojaka. Generalno, formulacije se pripremaju uniformnno i intimno dovode u kontakt jedinjenje ovog pronalaska sa tečnim nosačima.
[0157] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska pogodne za parenteralno davanje obuhvataju jedno ili više jedinjenja ovog pronalaska u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih sterilnih izotoničnih vodenih ili nevodenih rastvora, disperzija, suspenzija ili emulzija, ili sterilnih praškova koji mogu biti rekonstruisani u sterilne injektabilne rastvore ili disperzije neposredno pre upotrebe, koji mogu da sadrže antioksidanse, pufere, bakteriostatike, rastvore koji čine formulaciju izotoničnu sa krvlju namenjenog primaoca ili agensima za suspendovanje ili zgušnjavanje.
[0158] Primeri pogodnih vodenih i nevodenih nosača koji se mogu uposliti u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska uključuju vodu, etanol, poliole (kao što je glicerol, propilen glikol, polietilen glikol, i slično), i njihove pogodne mešavine, biljna ulja, kao što je maslinovo ulje, i injektabilne organske estre, kao što je etiloleat. Pogodna fluidnost može da se održava, na primer, upotrebom oblagajućih materijala, kao što je lecitin, održavanjem potrebne veličine čestica u slučaju disperzija, i upotrebom surfaktanata.
[0159] Ove kompozicije takođe mogu da sadrže adjuvanse kao što su konzervansi, agensi vlaženja, emulzifikatori i agensi za dispergovanje. Sprečavanje dejstva mikroorganizama može da se obezbedi uključivanjem raznih antibakterijskih i antifungalnih agenasa, na primer, parabena, hlorobutanola, fenol
4
sorbinske kiseline, i slično. Takođe može biti poželjno da se u kompozicije uključe izotonični agensi, kao što su šećeri, natrijumhlorid, i slično. Pored toga, produžena apsorpcija injektabilnog farmaceutskog oblika može da se obezbedi uključivanjem agenasa koji odlažu apsorpciju kao što je aluminijummonostearat i želatin.
[0160] Oblici injektabilnog depoa pripremaju se formiranjem mikroenkapsulirajućih matrica predmetnog jedinjenja u biodegradabilnim polimerima kao što je polilaktid-poliglikolid. Zavisno od odnosa leka prema polimeru, i prirode pojedinačnih uključenih polimera, može se kontrolisati brzina oslobađanja leka. Primeri drugih biodegradabilnih polimera uključuju poli(ortoestre) i poli(anhidride). Formulacije injektabilnog depoa takođe se pripremaju oblaganjem leka u lipozome ili mikroemulzije koji su kompatibilni sa telesnim tkivima.
[0161] Pripravci ovog pronalaska mogu da se daju oralno, parenteralno, topikalno, ili topikalno. Oni se naravno daju oblicima koji su pogodni za svaki put davanja. Na primer, daju se u tabletama ili u obliku kapsula, injekcijom, inhalacijom, kao losion za oči, mast, supozitorija, itd., davanje injekcijom, infuzijom ili inhalacijom; topikalno losionom ili mašću; i rektalno supozitorijama. Poželjno je intravenozno davanje.
[0162] Izrazi "parenteralno davanje" i "davati parenteralno" kako se ovde koristi, označava načine davanja koji se razlikuju od enteralnog i topikalnog davanja, obično injekcijom, i uključuje, bez ograničavanja, intravenozno, intramuskularno, intraarterijalno, intratekalno, intrakapsularno, intraorbitalno, intrakardijalno, intradermalno, intraperitonealno, transtrahealno, subkutano, subkutikularno, intraartikularno, subkapsularno, subarahnoidno, intraspinalno i intrasternalnom injekcijom i infuzijom.
[0163] Izrazi "sistemsko davanje," "davati sistemski," "periferno davanje" i "davati periferno" kako se ovde koristi, označava davanje jedinjenja, leka ili drugog materijala a da to nije direktno u centralni nervni sistem, tako da ulazi u sistem pacijenta i, na taj način, biva podvrgnut metabolizmu i drugim sličnim procesima, na primer, subkutanim davanjem.
[0164] Ova jedinjenja mogu da se daju ljudima i životinjama kao terapija bilo kojim pogodnim putem davanja, uključujući intramuskularnu injekciju, oralno, nazalno, putem inhalacije kao, na primer, sprej, topikalno, intravaginalno, parenteralno, intracisternalno i topikalno, putem praškova, masti ili kapi, uključujući bukalno i sublingvalno. U nekim načinima ostvarivanja, jedinjenje ovog pronalaska daje se injekcijom ili infuzijom, često infuzijom, i može se zajednički davati sa beta-laktamskim antibiotikom. Beta-laktamski antibiotik može se davati bilo kojim pogodnim putem; u nekim načinima ostvarivanja, beta-laktamski antibiotik se daje oralno, a u drugim načinima ostvarivanja beta-laktamski antibiotik daje se injekcijom ili infuzijom. Kada se jedinjenje ovog pronalaska zajednički daje sa beta-laktamskim antibiotikom i oba se daju istim putem, oni se opciono mogu pomešati za davanje injekcijom ili infuzijom, ili se mogu davati odvojeno pod uslovom da je inhibitor beta-laktamaze prisutan sistemski kod tretiranog subjekta zajedno sa beta-laktamskim antibiotikom kako bi došlo do potencijacije.
[0165] Bez obzira na odabran put davanja, jedinjenja ovog pronalaska, koja se mogu koristiti u pogodnom hidratisanom obliku, i/ili farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska, formulisana su u farmaceutski prihvatljive dozne oblike konvencionalnim postupcima poznatim stručnjacima iz ove oblasti.
[0166] Stvarni dozni nivoi aktivnih sastojaka kod farmaceutskih kompozicija ovog pronalaska mogu varirati tako da se dobije neka količina aktivnog sastojka koja je efektivna da bi se postigao željeni terapeutski odgovor za posebnog pacijenta, kompozicija, i način davanja, a da nije toksična za pacijenta.
[0167] Odabrani dozni nivo zavisiće od raznih faktora uključujući aktivnost posebnog jedinjenja ovog pronalaska koje je uključeno, ili njegove soli, puta davanja, vremena davanja, brzine izlučivanja posebnog jedinjenja koje je uposleno, trajanja lečenja, drugih lekova, jedinjenja i/ili materijala koji su upotrebljeni sa posebnim jedinjenjem je koje je uposleno, starosti, pola, težine, stanja, opšteg zdravlja i prethodne medicinske istorije pacijenta koji se tretira, roda, vrste i soja bakterijskog patogena koji prouzrokuje infekciju i sličnih faktora dobro poznatih u oblastima medicine.
[0168] Generalno, pogodna dnevna doza jedinjenja ovog pronalaska biće ona količina jedinjenja koja je doza efektivna da proizvede terapeutski efekat. Takva efektivna doza generalno će zavisiti od prethodno opisanih faktora. Generalno, intravenozne i subkutane doze jedinjenja ovog pronalaska za pacijenta, kada se koristi u kombinaciji sa beta-laktamom radi indikovanih antibakterijskih efekata, kretaće se od oko 2 do oko 100 mg po kilogramu telesne mase na dan, poželjnije od oko 5 do oko 100 mg po kg na dan, i još poželjnije od oko 10 do oko 50 mg po kg na dan. Efektivna količina je ona količina koja leči bakterijsku infekciju, kada se dozira u kombinaciji sa beta-laktamskim antibiotikom.
[0169] Ako je poželjno, efektivna dnevna doza aktivnog jedinjenja može da se daje kao dve, tri, četiri, pet, šest ili više pod-doza koje se daju odvojeno u pogodnim intervalima tokom dana, opciono, u jediničnim doznim oblicima, ili kao kontinuirana infuzija.
[0170] Dok je moguće da se jedinjenje ovog pronalaska daje samo, poželjno je da se to jedinjenje daje kao farmaceutska kompozicija.
[0171] Jedinjenja kakva su definisana u načinima ostvarivanja mogu biti sintetizovana opštim sintetičkim putevima navedenim u nastavku, čiji su specifični primeri opisani detaljnije u primerima.
Opšte sintetičke šeme
[0172] Jedan postupak za sintetizovanje jedinjenja formule (I) prikazan je u sledećim reakcionim šemama. Šema A ilustruje funkcionalizaciju poznatog kostura diazabiciklooktana u zaštićenom obliku radi uvođenja aminoalkilne grupe, kako je opisano radnim primerima. Šema B ilustruje formiranje fuzionisanog laktamskog prstena, koji je takođe ilustrovan primerima. Šema C ilustruje kako se laktam može lako N-alkilovati radi uvođenja opciono-supstituisane alkil grupe.
[0173] Primeri agenasa za sulfonilaciju uključuju, ali nisu ograničeni na kompleks sumportrioksidpiridina i slično.
[0174] Primeri baza uključuju, ali nisu ograničeni na piridin i njemu slične.
PRIMERI
[0175] Ovaj pronalazak je dalje ilustrovan primerima koji slede, koje ne treba shvatiti kao ograničavajuće. Ogledi koji se koriste kroz primere si prihvaćeni. Demonstracija efikasnosti u ovim ogledima prediktivna je za efikasnost kod subjekata.
Opšti uslovi
[0176] Maseni spektri dobijeni su na LC-MS, SFC-MS, ili GC-MS sistemima korišćenjem postupaka elektrospreja, hemijske i jonizacije elektronskog udara od raspona instrumenata sledećih konfiguracija: Waters ACQUITY UPLC sistem i opremljen sa ZQ 2000 ili SQD MS sistemom u kojem se (M+1) odnosi na protonovan molekulski jon hemijske vrste, (M+) se odnosi na neprotonovan kvaternarni amonijumov katjon,a (M-1) se odnosi na deprotonovan molekulski jon hemijske vrste.
[0177] NMR spektri pokretani su na Bruker BioSpin 600MHz, Bruker AVANCE 500MHz ili Varian 400MHz NMR spektrometrima primenom ICON-NMR, pod TopSpin programskom kontrolom. Spektri su izmereni na 298K, ukoliko nije drugačije naznačeno, i označeni u odnosu na rezonancu rastvarača.
Instrumentacija
[0178]
MS Postupci:
Skraćenice:
[0179]
AA amonijumacetat
ACN acetonitril
app očigledan
ATP adenozin 5'-trifosfat
BINAP racemska 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftil Boc tercijerni butil karboksi
br širok
br s širok singlet
BSA albumin goveđeg seruma
d dublet
dd dublet dubleta
DCC dicikloheksilkarbodiimid
DCE 1,2-dihloroetan
DCM dihlorometan
DIAD diizopropilazodikarboksilat
DIPEA diizopropiletilamin
DMAP 4-(N,N-dimetilamino)piridin
DME 1,4-dimetoksietan
DMF N,N-dimetilformamid
DMSO dimetilsulfoksid
4 EDTA etilendiamin tetrasirćetna kiselina
ESI elektrosprej jonizacija
EtOAc etil acetat
FA mravlja kiselina
g gram
h sat(i)
HATU 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b] piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat HBTU 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-benzotriazoliumheksafluorofosfat(1-) 3-oksid
HCl hlorovodonična kiselina
HOBt 1-hidroksibenzotriazol
HPLC tečna hromatografija visokih performansi
LCMS tečni hromatografija i masena spektrometija
LDA litijumdiizopropilamid
MeOH metanol
MS masena spektrometrija
m multiplet
mg miligram
MIC najmanja ili minimalna inhibitorna koncentracija
min minuti
mL mililitar
mmol milimol
m/z odnos masa prema naelektrisanja
NMR nuklearna magnetna rezonanca
o/n preko noći
p pentet
PdCl2(dppf)-CH2Cl2kompleks 1,1'-Bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlorometana ppm delova na milion
PyBOP benzotriazol-1-iloksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat
q kvartet
rac racemska
rbf boca okruglog dna
rt sobna temperatura
Rtvreme zadržavanja
s singlet
t triplet
TBME metil terc-butil etar
TFA trifluorosirćetna kiselina
TFAA anhidrid trifluorosirćetne kiseline
THF tetrahidrofuran
Tris·HCl aminotris(hidroksimetil)metan hidrohlorid
Priprema Intermedijera
[0180]
[0181] Intermedijer A: Metil (2S, 5R)-6-(benziloksi)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilat. Rastvoru (2S,5R)-6-(benziloksi)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilne kiseline (5.0 g, 18.1 mmol), MeOH (880 µL, 21.7 mmol) i DMAP (44 mg, 0.36 mmol) u DCM (50 mL) na 0 °C dodat je DCC (3.92 g, 19.0 mmol). Nakon 2 h na rt razblažen je sa DCM i opran vodom zatim fiziološkim rastvorom. Vodeni slojevi ekstraktovani su sa DCM (2x) , a kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4, filtrirani zatim koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak trituriran je dietiletrom, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni filtrat prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida da bi se dobilo nazivno jedinjenje (4.3 g, 82%). LCMS Rt= 0.87 min, m/z = 291.3 (M+1), Postupak 2 MIN_PRAĆENJE_REAKCIJE.
[0182] Intermedijer B: Metil (5R)-6-(benziloksi)-7-okso-2-(fenilselanil)-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilat. Rastvoru diizopropilamina (29.6 ml, 210 mmol) u THF (800 mL) na -70 °C dodat je nbutillitijum (1.6 M u heksanima, 108 ml, 172 mmol) ukapavanjem preko 10 minuta. Nakon umešavanja tokom 50 minuta na -73°C rastvor metil (2S,5R)-6-(benziloksi)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilata (43.5 g, 150 mmol) u THF (350 mL) dodat je ukapavanjem preko 45 minuta. Nakon umešavanja na -78°C tokom 1.5 satam, fenilselenil hlorid (57.4 g, 300 mmol) u THF (260 mL) dodat je ukapavanjem preko 45 minuta. Nakon umešavanja na -78 °C tokom 45 min ostavljen je da se zagreje do -10 °C preko 60 minuta i umešavan dodatni sat, nakon čega je ohlađen na -30 °C i ugašen sa HCI (2 M, 50 mL) praćeno dodavanjem metanola (250 mL). Mešavina je ostavljena da dostigne rt preko 15 min zatim razblažena sa TBME (1 L) i oprana fiziološkim rastvorom:vodom (2:1, 2 L). Faze su odvojene i organska faza je oprana fiziološkim rastvorom (2 L). Vodeni slojevi ekstraktovani su sa TBME (2x500 mL).
Kombinovane organske faze osušene su preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane u vakuumu.
Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida, dajući nazivno jedinjenje (23.70 g, 36%, 3:1 mešavina diastereomera) u obliku braon ulja. LCMS Rt= 1.12/1.16 min, m/z = 447.3 (M+1), Postupak 2 MIN_PRAĆENJE_REAKCIJE;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3, glavni diastereomer) δ 7.59 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.42-7.30 (m, 8H), 5.00 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.88 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.35 (s, 1H), 3.18 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 2.44 (ddd, J = 17.4, 11.8, 6.6 Hz, 1H), 2.07-2.01 (m, 1H), 1.91 (dd, J = 16.6, 5.8 Hz, 1H), 1.72 (td, J = 12.9, 6.0 Hz, 1H).
[0183] Intermedijer C: Metil (5R)-6-(benziloksi)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]okt-2-en-2-karboksilat. Rastvoru intermedijera B u THF:voda (20:1, 22 mL) na 0 °C dodata je H2O2(30% aq, 0.8 mL, 7.83 mmol) i AcOH (0.55 mL, 9.61 mmol). Nakon umešavanja tokom 1 sata na 0 °C razblažen je sa EtOAc i dodat je kalijumsulfitom (5% aq). Nakon uništavanja svih peroksida (KJ-stärke-test), faze su odvojene i organski sloj opran je fiziološkim rastvorom. Vodeni slojevi ekstraktovani su sa EtOAc , a kombinovani organski slojevi oprani su sa NaHCO3(5% aq), fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida da bi se dobilo nazivno jedinjenje (419 mg, 81%). LCMS: Rt= 0.88 min, m/z = 288.1 (M+1), Postupak 2_MIN_FINALNA_ANALIZA.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 7.45-7.41 (m, 2H), 7.40-7.33 (m, 3H), 6.88-6.86 (m, 1H), 4.89 (s, 2H), 3.96 (br s, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.35-3.28 (m, 1H), 2.82 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 2.58-2.52 (m, 1H), 2.38 (s, 1H), 2.34 (s, 1H).
[0184] Intermedijer D: N-benzil-N-(terc-butoksikarbonil)glicin. Suspenziji N-benzilglicina (24.3 g, 147 mmol) u THF:voda (1:1, 500 mL) dodat je Boc-anhidrid (33.7 g, 154 mmol). Nakon 6.5 h mešavina je razblažena sa TBME (250 mL) i dodata je limunska kiselina (33 g) do pH = 4. Nakon 10 min umešavanja, faze su odvojene i organska faza je oprana fiziološkim rastvorom (250 ml). Vodeni sloj opran je sa TBME (2x100 ml) i kombinovane organske faze osušene su preko Na2SO4, filtrirane zatim koncentrovane u vakuumu (45°C), dajući nazivno jedinjenje (40.70 g) kao bezbojno ulje, koje počinje da se kristalizuje posle sleganja. HPLC: 99.7% by UV, LCMS: Rt= 0.94 min, m/z = 264.3 (M-H), Postupak LCMS_ 2_MIN_FINALNA_ANALIZA.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6)* δ 12.62 (br s, 1 H), 7.44-7.09 (m, 5 H), 4.41
4
(d, J = 8.1 Hz, 2 H) 1.44-1.24 (m, 9 H) 3.89-3.67 (m, 2 H). *Kao mešavina sa O(Boc)2(ca.9%).
[0185] Intermedijer E: terc-butil (2-(alil(benzil)amino)-2-oksoetil)(benzil)karbamat.1500 mL-4-grla reakciona boca sa mehaničkim mešačem, unutrašnjim termometrom, kondenzatorom i dovodom azota napunjena je intermedijerom D (31.6 g, 107 mmol) praćeno EtOAc (500 ml). Reakciona mešavina ohlađena je u ledenom kupatilu (4°C) praćeno dodavanjem N-alilbenzilamina (16.44 g, 107 mmol) i propilfosfoničnog anhidrida (T3P, 136 g, 214 mmol, 50% u etil acetatu). Ovoj mešavini dodat je trietilamin (90 ml, 643 mmol), ukapavanjem preko 5 min. Braon rastvor umešavan je tokom 20 min na rt zatim sipan u umešanu mešavinu ledene vode (500 ml). Faze su odvojene i organska faza je oprana sukcesivno sa HCl (0.5 N, 500 mL), zasićenim NaHCO3(500 mL) i fiziološkim rastvorom (500 mL). Inicijalni vodeni sloj ekstraktovan je sa EtOAc (2x250 mL), a kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu na (45 °C), dajući nazivno jedinjenje (43.94 g) u obliku braon ulja. LCMS: Rt= 1.31, min m/z = 395.5 (M+1), postupak LCMS_ 2_MIN_FINALNA_ANALIZA.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.53-6.99 (m, 10 H), 5.94-5.55 (m, 1 H), 5.24-4.97 (m, 2 H) 4.55-4.25 (m, 4 H), 4.16-3.68 (m, 4 H), 1.42-1.28 (m, 9 H).
[0186] Intermedijer F: N-alil-N-benzil-2-(benzilamino)acetamid. 750 ml 4-grla reakciona boca opremljena sa mehaničkim mešačem, unutrašnjim termometrom, kondenzatorom i dovodom azota napunjena je intermedijerom E (43.9 g, 108 mmol) u DCM (400 mL). Tom rastvoru dodat je TFA (83 ml, 1.079 mol). Nakon umešavanja o/n žuti rastvor polako je sipan (brzo razvijanje gasa) u umešanu mešavinu zasićenog NaHCO3rastvora (aq, 1.5 L) i leda (1 kg). Nakon 10 min umešavanja faze su odvojene i organska faza je oprana sa 1⁄2 zasićenim NaHCO3(aq, 0.5 L) zatim fiziološkim rastvorom (0.5 L). Vodeni sloj ekstraktovan je sa DCM (0.5 L) , a kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu (45 °C) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (31.30 g) u obliku braon ulja. LCMS: Rt= 0.71 min m/z = 295.3 (M+1), postupak LCMS_2_MIN_FINALNA_ANALIZA.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.49-7.04 (m, 10 H), 5.90-5.55 (m, 1 H), 5.19-4.92 (m, 2 H), 4.64-4.37 (m, 2 H), 3.98-3.76 (m, 2 H), 3.73-3.61 (m, 2 H), 3.44-3.32 (m, 2 H), 2.44-2.28 (m, 1 H).
[0187] Intermedijer G: rac etil (2S*,3aS*,6aS*)-1,5-dibenzil-6-oksooktahidropirolo[3,4-b]pirol-2-karboksilat. U azotom inertizovan 60 L Buechi reaktor CR60 opremljen Huber termostatom 390W, Flexy ALR sa automatizovanom temperaturom, kontrolom doziranja i dovodom azota dodati su rastvor intermedijera F (1.460 kg, 4.81 mol) u toluenu (20 L), magnezijum sulfat (2.32 kg, 19.24 mol) i trietilamin (0.872 L, 6.25 mol). Svetlo žuta suspenzija zagrevana je do refluksa unutar 1 sata. U refluksujuću mešavinu, dodat je etil glioksilat (50% u toluenu, 1.179 kg, 5.77 mol) preko 15 h putem dozirne pumpe. Nakon umešavanja tokom dodatnih 6 h do refluksa, žuta suspenzija ohlađena je do 15 °C (unutrašnja temp), nakon čega je dodata voda (20 L) (egzotermno). Nakon umešavanja tokom 15 min, mešavina je transferovana u 80 L-sud za odvajanje i faze su odvojene. Organski sloj ekstraktovan je sukcesivno vodom (15 L) zatim fiziološkim rastvorom (15 L). Vodeni sloj opran je sa TBME (2x10 L). Druga TBME isplaka filtrirana je kroz celit (koji je sadržavao nerastvorljiv materijal), eluirajući sa TBME. Kombinovane organske faze delimično su koncentrovane u vakuumu (45 °C) do zapremine od 6 L, osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane u vakuumu (50 °C). Ovaj materijal dalje je osušen preko noći (50°C, 10 mbar) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (1.970 kg) u obliku braon ulja koje je 5.2:1 mešavina diastereomera. LCMS: Rt= 1.21 min (67.1% a) m/z = 379.3 (M+1); (12.9% a) na Rt= 1.16 min m/z = 379.3 (M+1), postupak LCMS_ 2_MIN_FINALNA_ANALIZA.
[0188] Intermedijer H: rac (2S*,3aS*,6aS*)-1,5-dibenzil-2-(hidroksimetil)-heksahidropirolo-[3,4-b]pirol-6(1H)-on. Rastvoru intermedijera G (1.967 kg, 5.847 mol) u THF (20 L) na 0 °C u azotom inertizovanom 30 L Büchi reaktoru CR30 opremljenom Huber termostatom 1015W, Flexy ALR, automatizovanom kontrolom temperature i dovodom azota u porcijama je dodavan je litijum borohidrid (0.238 kg, 10.39 mol) preko 10 min (blago egzoterman). Nakon 5 dana na rt uveden je dodatni litijum borohidrid (0.025 kg, 1.143 mol). Nakon dodatnih 5 dana na rt dodat je litijum borohidrid (0.017 kg, 0.780 mol). Nakon još 6 dana mešavina je ohlađena do -10 °C, nakon čega je dodat HCl (2 N, 8 L) ukapavanjem putem dozirne pumpe preko 2 h čime je postignuta pH = 3 (oprez: stvaranje veoma jakog gasa i pene!). Nakon snažnog umešavanja, formirana je žuta suspenzija koja je umešavana tokom 30 min na 0 °C. Dodat je zasićeni NaHCO3(aq, 10 L) i mešavina je transferovana u 80 L-sud za odvajanje i ekstraktovana sa TBME (20 L) nakon dodavanja vode (8L), što je potpomoglo fazu razdvajanja. Organska faza je oprana fiziološkim rastvorom (2x10 L) i vodeni sloj je ekstraktovan sa TBME (2x7 L). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani u vakuumu (45 °C) do zapremine od 8 L, zatim osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu (50 °C). Ostatak je rastvoren u toluenu (3 L), koncentrovan u vakuumu i sušen
4
tokom 3 h (50 °C, 10 mbar) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (1.630 kg) u obliku žuto-braon ulja, koje je 10.5:1 mešavina diastereomera. LCMS: Rt= 0.77 min* m/z = 337.3 (M+1), postupak LCMS_ 2_MIN_FINALNA_ANALIZA. *Glavni diastereomer.
[0189] Intermedijer I: rac (3R*,4aS*, 7aS*)-1,6-dibenzil-3-hidroksioktahidro-7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-on. Suspenziji intermedijera H (1.627 kg, 4.836 mol), molekulskih prosejavanja (4 Å, 2.5 kg) i THF (23 L) u azotom inertizovanom 30 L troslojnom Amsi Glas reaktoru opremljenom automatizovanom kontrolom temperature, Unistat 390W, refluks kondenzatorom i dovodom azota na -5 °C dodavan je TFAA (0.820 L, 5.81 mol), ukapavanjem preko 35 min. Nakon umešavanja tokom 15 min na 0 °C, trietilamin (3.37 L, 24.18 mol) je dodavan preko 10 min, nakon čega je zagrevan do refluksa (unutrašnja temperature 68 °C) u toku 6 dana, čime je postignuta ravnotežna proporcija proizvoda u odnosu na početni materijal od 9:1. Mešavina je transferovana u 80 L sud za odvajanje koji sadrži ledeni NaOH (1 M, 24 L) i umešavana je tokom 15 min. Braon suspenziji je dodat celit (3 kg), gde je umešavan tokom 15 minuta zatim filtriran preko uloška od celita, pri čemu je opran sa TBME. Filtrat je ekstraktovan sa TBME (20 L). Organska faza je oprana zasićenom NaHCO3(aq, 10 L) zatim fiziološkim rastvorom (1x15 L). Vodeni slojevi ekstraktovani su sa TBME (2x7 L) , a kombinovani organski slojevi su koncentrovani u vakuumu (45 °C) do zapremine od 8 L i osušeni preko Na2SO4(2 kg). Suspenzija je filtrirana preko gela silicijumdioksida (1 kg, 40-63 µm), oprana sa EtOAc (4x2 L). Eluent je koncentrovan u vakuumu (45 °C) i sušen tokom 3 h (50 °C, 15 mbar) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (1.366 kg) u obliku tamno braon ulja. LCMS: Rt= 0.84 min, m/z = 337.3 (M+1), postupak LCMS_ 2_MIN_FINALNA_ANALIZA.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 7.40-7.15 (m, 10 H), 4.69-4.57 (m, 1 H), 4.65-4.56 (m, 1 H), 4.43 (d, J = 13.8 Hz, 1 H), 4.29-4.21 (m, 1 H), 3.62-3.49 (m, 1 H), 3.46-3.39 (m, 1 H), 3.18 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 2.86 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 2.70 (dd, J = 10.7, 2.7 Hz, 1 H), 2.66-2.56 (m, 1 H), 1.83-1.67 (m, 2 H), 1.39-1.29 (m, 1 H).
[0190] Intermedijer J: (3R,4aS, 7aS)-1, 6-dibenzil-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]-piridin-3-il acetat. Suspenzija intermedijera I (1.364 kg, 3.04 mol), vinilacetata (4.20 L, 45.6 mol), lipaze QLM (Alcaligenes sp oblik Meito Sangyo, aktivnost: 101400 U/g, 25 g, 3.04 mol) i TBME (21 L) u azotom inertizovanom 30 L troslojnom reaktoru sa automatizovanom kontrolom temperature, Unistat 390W, kondenzatorom i dovodom azota je umešavana na 30 °C (unutrašnja temp) tokom 6 dana. Mešavina je ohlađena do 20 °C i filtrirana preko hifloa (500 g). Filtrat je koncentrovan u vakuumu (35 °C) do zapremine od 3 L, nakon čega je toluen (1 L) dodat zatim dalje koncentrovan u vakuumu (35 °C zatim na 50 °C). Neprečišćeni
4
proizvod je rastvoren u TBME:heptan (2:1, 3 L) i prečišćen u nekoliko porcija hromatografijom na gelu silicijumdioksida (heptan-EtOAc-metanol), dajući nazivno jedinjenje (626 g) u obliku braon ulja. LCMS: Rt= 1.16 min, m/z = 379.3 (M+1), Postupak LCMS_ 2_MIN_FINALNA_ANALIZA. HPLC: Rt= 33.45 min, 98.2% ee (manji enantiomer: Rt= 23.92 min) postupak HPLC_ HIRALNI.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.41-7.22 (m, 10 H), 4.74-4.65 (m, 1 H) 4.56-4.51 (m, 1 H), 4.36-4.26 (m, 2 H), 3.75 (d, J = 14.3 Hz, 1 H) 3.30-3.21 (m, 2 H) 3.00 (dd, J = 9.5, 5.9 Hz, 1 H), 2.75-2.68 (m, 1 H), 2.62 (sxt, J = 6.2 Hz, 1 H), 2.23 (dd, J = 11.6, 7.2 Hz, 1 H), 1.97 (s, 3 H), 1.66 (t, J = 6.05 Hz, 2 H).
[0191] Intermedijer K: (3R,4aS,7aS)-1,6-dibenzil-3-hidroksioktahidro-7H-pirolo[3,4-b]-piridin-7-on. Mešavina intermedijera J (616 g, 1221 mmol), THF (4 L) i NaOH (2 N, 3.97 L, 7.94 mol) u 20 L boci okruglog dna Büchi Rotavapora je snažno umešavana tokom 18 h na 25 °C i 6 h na 40 °C, nakon čega je ohlađena do 25 °C praćeno dodavanjem MeOH (2 L) i on je umešavan o/n. Mešavina je ekstraktovana sa TBME (6 L) i organska faza je oprana fiziološkim rastvorom (4 L). Vodeni sloj je ekstraktovan sa TBME (3x3 L) i kombinovane organske faze su koncentrovane u vakuumu (45 °C) do zapremine od 5 L, zatim osušene preko bezvodnog natrijumsulfata (1 kg), filtrirane i koncentrovane u vakuumu (45°C). Ostatak je rastvoren u toluenu (3 L) i ponovo koncentrovan zatim osušen tokom 2 h (60 °C, 20 mbar), dajući nazivno jedinjenje (555 g) u obliku braon ulja. LCMS: Rt= 0.84 min, m/z = 337.3 (M+1), Postupak LCMS_ 2_MIN_FINALNA_ANALIZA.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 7.58-7.04 (m, 10 H), 4.66-4.5 (m, 2 H), 4.43 (d, J = 13.9 Hz, 1 H), 4.25 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 3.54 (tq, J = 9.3, 4.5 Hz, 1 H), 3.47-3.39 (m, 1 H), 3.18 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 2.85 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 2.70 (dd, J = 11.0, 2.8 Hz, 1 H), 2.64-2.57 (m, 1 H), 1.78-1.67 (m, 2 H), 1.27 - 1.39 (m, 1 H).
[0192] Intermedijer L: (3R,4aS,7aS)-1-benzil-3-hidroksioktahidro-7H-pirolo[3,4-b]-piridin-7-on. U 30 L Büchi reaktor CR30 opremljen Huber termostatom 1015, Flexy ALR sa automatizovanom kontrolom temperature, argonom i dovodom amonijaka sa inertizovanim argonom, koji je prethodno ohlađen do -80°C, napunjen tečnim amonijakom (bezvodni, 10.0 kg, 587 mol), sa odvodom povezanim sa čistačem gasa napunjenim sumpornom kiselinom (30%, 100 L), dodat je rastvor intermedijera K (543 g, 1.614 mol) u THF (1.5 L) praćeno etanolom (bezvodni, 236 mL, 4.04 mol). Dobijenom rastvoru je u porcijama dodavan litijum (granularni, 44.8 g, 6.46 mol), preko 15 min (temp povišena sa -72°C na -63°C). Sivoj mešavini, nakon 1 h, dodati su litijum (22.4 g, 3.23 mol) i etanol (bezvodni, 94 mL, 1.616 mol) pri čemu
4
je umešavanje održavano na -60 °C. Nakon 1 h, dodati su dodatni litijum (11.2 g, 1.615 mol) i etanol (bezvodni, 47 mL, 0.808 mol). Nakon 45 min dodato je još litijuma (11.2 g, 1.615 mol). Nakon 15 h dodat je etanol (bezvodni, 94 mL, 1.616 mol) tamno plavoj mešavini. Umešavanje je nastavljeno do <5% početni materijal je ostao i ugašen je dodavanjem amonijumhlorida (2.0 kg, 37.4 mol), u porcijama preko 10 min. Reakciona mešavina je umešavana tokom 17 h na -28°C i ∼2 h na 2°C, što dovodi do potpunog isparavanja amonijaka. Ovoj mešavini je dodata voda (15 L) i TBME (8 L) praćeno HCI (32%) dok nije postignuta pH = 9-10. Faze su odvojene i organski sloj je opran fiziološkim rastvorom (5 L). Vodeni sloj je ekstraktovan sa DCM (3x2 L) , a kombinovani organski slojevi su koncentrovani u vakuumu na 45 °C do zapremine od 3 L zatim osušeni preko Na2SO4(1 kg), filtrirani i koncentrovani u vakuumu (45 °C zatim 2 h na 65 °C, 20 mbar), dajući nazivno jedinjenje (373 g) u obliku braon ulja. LCMS: Rt= 0.75, m/z = 247.2 (M+H), Postupak LCMS_ 2_MIN_POLAR.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 7.78 (s, 1 H), 7.34-7.24 (m, 4 H), 7.27-7.16 (m, 1 H), 4.65-4.60 (m, 1 H), 4.32 (d, J = 13.9 Hz, 1 H), 3.64-3.54 (m, 1 H), 3.44 (d, J = 13.9 Hz, 1 H), 3.13 (d, J = 8.1 Hz, 2 H), 2.69 (dd, J = 10.82, 2.75 Hz, 1 H), 2.66-2.62 (m, 1 H), 2.60-2.54 (m, 1 H), 1.80-1.69 (m, 2 H), 1.41-1.30 (m, 1 H).
[0193] Intermedijer M: terc-butil (3R,4aS, 7aS)-3-hidroksi-7-oksooktahidro-1H-pirolo-[3,4-b]piridin-1-karboksilat. Rastvoru intermedijera L (372.0 g, 1.51 mol) i Boc-anhidrida (346 g, 1.59 mol) u THF (4.0 L) dodat je Pd-C 10% (15 g). Mešavina je mešana u uređaju za mešanje na 22-25°C i 0.1 bar H2i pritisku tokom 89 h. Nakon 57% apsorpcije vodonika dodata je druga porcija Pd-C 10% (15 g). Mešavina je filtrirana preko celita, oprana sa THF i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio neprečišćeni proizvod (545 g) u obliku bledo braon čvrste materije. Ostatak je suspendovan u EtOAc (1 L) i umešavan 1 sat na 75 °C. Suspenziji je dodat heptan (1.5 L), polako na 75 °C. Nakon umešavanja tokom 2 h na rt, proizvod je sakupljen filtracijom, čvrsta materija je oprana heptanom zatim osušena u vakuumu (45 °C), dajući nazivno jedinjenje (278.5 g) u obliku belih kristala. LCMS: Rt= 0.86 min, m/z = 257.3 (M+1), Postupak LCMS_ 2_MIN_POLAR.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 7.83-7.65 (m, 1 H), 4.80-4.49 (m, 2 H), 3.93-3.67 (m, 2 H), 3.43-3.37 (m, 1 H), 2.72 (br d, J = 9.5 Hz, 1 H), 2.60 (br d, J = 12.5 Hz, 1 H), 2.48-2.39 (m, 1 H), 1.82-1.70 (m, 1 H), 1.40 (br d, J = 6.8 Hz, 9 H) 1.36-1.27 (m, 1 H).
[0194] Intermedijer N: terc-butil (3S,4aS, 7aS)-3-hidroksi-7-oksooktahidro-1H-pirolo-[3,4-b]piridin-1-karboksilat. Rastvoru intermedijera M (270 g, 948 mmol) u THF (13 L) sadržanom u azotom
4
inertizovanom 20 L troslojnom reaktoru (Amsi Glas) sa automatizovanom kontrolom temperature, Unistat 390W, kondenzatorom i dovodom azota na -5°C (unutrašnja temp) dodata je 4-nitrobenzojeva kiselina (323 g, 1.90 mol) i trifenilfosfin (524 g, 1.90 mol). Dobijenom rastvoru je dodat rastvor DIAD (359 ml, 1.85 mol) u THF (1.3 L), ukapavanjem preko 30 min pri čemu se unutrašnja temperatura održava na -4 do -10 °C. Mešavina je ostavljena da se zagreje do rt i umešana je o/n zatim koncentrovana u vakuumu (45 °C) radi obezbeđivanja neprečišćenog materijala (1.64 kg, vlažnog) u obliku braon ulja. Rastvoru uljanog ostatka u MeOH (15 L) dodat je K2CO3(393 g, 2.844 mol). Nakon umešavanja 1 h suspenzija je koncentrovana u vakuumu (40 °C), čime je obezbeđena narandžasta čvrsta materija kojoj je dodat DCM (6 L). Nakon 30 min, suspenzija je filtrirana, oprana sa DCM i filtrat je koncentrovan u vakuumu (45 °C). Ostatak je suspendovan u DCM:MeOH (97:3, 4 L) i umešavan 30 min na rt. Suspenzija je filtrirana, oprana sa DCM i filtrat je koncentrovan u vakuumu (45 °C) do zapremine od 3 L i prečišćena u dve porcije hromatografijom na gelu silicijumdioksida, dajući proizvod (189 g) u obliku čvrste materije. Ovom materijalu rastvorenom u DCM:MeOH (95:5, 5 L) je na 45°C polako dodat heptan (5 L). Rastvor je delimično koncentrovan (45 °C), pri čemu je uklonjeno nešto DCM, što je uzrokovalo da se proizvod kristalizuje nakon 15 min. Nakon 1 h na rt, čvrsta materija je sakupljena filtracijom, oprana heptanom i osušena u vakuumu (45 °C) dok nije dobijena konstantna masa, dajući nazivno jedinjenje (167.7 g) u obliku kristala. LCMS: Rt= 0.95 min, m/z = 257.3 (M+1), Postupak LCMS_ 2_MIN_POLAR.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6)* δ 7.80 (d, J = 20.2 Hz, 1H), 4.97 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.57 (dd, J = 92.2, 7.0 Hz, 1H), 3.89 (ddd, J = 18.8, 9.3, 6.5 Hz, 1H), 3.33-3.23 (m, 1H), 2.75 (ddd, J = 9.7, 4.6, 2.0 Hz, 1H), 2.43 (ddt, J = 16.9, 11.8, 6.1 Hz, 1H), 2.08 (ddd, J = 86.6, 12.5, 10.7 Hz, 1H), 1.94 (dd, J = 12.2, 5.5 Hz, 1H), 1.39 (d, J = 22.6 Hz, 9H), 1.04 (dq, J = 15.2, 12.0 Hz, 1H). *Prijavljeno kao primećeni rotameri.
Primer 1. Natrijum (4R,5aS,8aS)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat.
[0195]
[0196] Faza 1: Metil (2S,3S,5R)-6-(benziloksi)-3-(((terc-butoksikarbonil)amino)-metil)-7-okso-1,6-
4
diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilat. Intermedijer C (0.82 g, 2.84 mmol), Boc-Gly-OH (1.00 g, 5.69 mmol) i Ir[df(CF3)ppy2(dtbpy)]PF6(32 mg, 0.028 mmol) su rastvoreni u DMF (20 mL). Tom rastvoru je dodat fino mleveni dibazni kalijumfosfat (0.59 g, 3.41 mmol) i dobijena suspenzija je ozračena pod argonom (balonom) u 500 mL levku za dokapavanje (zatvorenom sa bocom okruglog dna na dnu i pregradom na vrhu) tokom 7 dana sa 8W UVA fluorescentnom cevi. Sud je postavljen horizontalno na vrhu lampe (ohlađen vazduhom) da bi se obezbedila maksimalna iradijacija. Nakon 4 dana dodat je Ir[df(CF3)ppy2(dtbpy)]PF6(32 mg, 0.028 mmol).
[0197] Ovoj mešavini dodati su voda (100 mL) zatim zasićeni NaHCO3(aq, 100 mL) i ekstraktovana je sa TBME (4x80 mL). Kombinovane organske faze su oprane sekvencijalno sa zasićenim NaHCO3(aq, 50 mL), vodom (50 mL) zatim fiziološkim rastvorom (50 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-heptan, 15-100%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (108 mg, 9%) u obliku ulja. LCMS: Rt= 1.04 min, Postupak 2m_kiseo.
[0198] Faza 2: (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-dion. Rastvoru metil (2S,3S,5R)-6-(benziloksi)-3-(((terc-butoksikarbonil)amino)-metil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilata (108 mg, 0.26 mmol) u DCM (3 mL) na rt ukapavanjem je dodat TFA (1.0 mL, 13 mmol). Ostavljen je radi umešavanja na rt tokom 3 h, nakon čega je koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni ostatak je rastvoren u DCM (3 mL), ohlađen do 0 °C, i dodat je trietilamin (0.31 mL, 2.3 mmol). Nakon još 1 h dodati su trietilamin (0.11 mL, 0.75 mmol) i DCM (5 mL). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakciona mešavina je umešavana na rt preko noći (o/n), nakon čega je oprana limunskom kiselinom (10 mL, ca 20% aq). Vodena faza je ekstraktovana sa DCM (3x8 mL) a kombinovane organske faze su oprane vodom (5 mL), fiziološkim rastvorom (2x10 mL), osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (DCM-MeOH, 2-7%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (47 mg, 61%) u obliku bež čvrste materije. LCMS: Rt= 0.61 min, m/z = 288 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0199] Faza 3: (4R,5aS,8aS)-3-hidroksiheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-dion. Suspenzija (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin2,8(3H)-diona (80 mg, 0.278 mmol) i Pd-C (10 % Degussa tip 101, 50% voda, 34 mg) u MeOH (1.8 mL) je evakuisana i ispunjena sa H2(3x). Nakon 2.5 h je filtrirana kroz čep celita, oprana sa MeOH i koncentrovana u vakuumu, dajući nazivno jedinjenje (40 mg, 74%). LCMS: Rt= 0.13 min, m/z = 198.1 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0200] Faza 4: Natrijum (4R,5aS,8aS)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. Suspenziji neprečišćenog (4R,5aS,8aS)-3-hidroksiheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-diona (40.7 mg, 0.206 mmol) u piridinu (2 mL) na 0 °C je dodat SO3·Py kompleks (335 mg, 2.064 mmol). Nakon 19 h snažnog umešavanja suspenzija je filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Neprečišćeni ostatak je rastvoren u THF:voda (1:1, 6 mL) i dodata je Amberlite 200 Naizmenjivačka smola (1.5 g). Suspenzija je umešavana tokom 2 h, nakon čega je filtrirana, delimično koncentrovana u vakuumu, zamrznuta i liofilizirana. Dobijena čvrsta materija je podvrgnuta hromatografiji na gelu silicijumdioksida (voda-acetonitril, 2-5%), dajući nazivno jedinjenje (12.3 mg, 16%, preko 2-fazni) u obliku amorfne čvrste materije. LCMS: Rt= 0.25 min, m/z = 278.0 (M+1) Postupak T3_3m_polarni;<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 4.24-4.18 (m, 2H), 3.52 (dd, J = 10.7, 6.2 Hz, 1H), 3.33 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.10 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 2.95 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 2.81 (p, J = 8.5 Hz, 1H), 2.54-2.46 (m, 1H), 1.65 (dd, J = 14.7, 9.2 Hz, 1H).
Primer 1. Alternativni postupak. Natrijum (4R,5aS,8aS)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat.
[0201]
[0202] Faza 1: (2S,3S,5R)-metil 6-(benziloksi)-3-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilat. Umešana mešavina intermedijera C (3 g, 10.41 mmol), 2-((tercbutoksikarbonil)amino)sirćetne kiseline (2.55 g, 14.57 mmol), Ir[df(CF3)ppy]2(dtbpy)PF6(0.117 g, 0.104 mmol), i kalijumfosfata dibaznog (2.72 g, 15.61 mmol) u DMF (30.6 mL) je degasirana putem
1
raspršivanja N2u toku 15 minuta i ozračena je sa Kessil H150-Blue LED (hlađenje fenom), pod N2tokom 92 h. Dodati su 2-((terc-butoksikarbonil)amino)sirćetna kiselina (2.55 g, 14.57 mmol), kalijumfosfat dibazni (2.72 g, 15.61 mmol), i Ir[df(CF3)ppy2(dtbpy)PF6(0.117 g, 0.104 mmol) i mešavina je ozračena sa Kessil H150-Blue LED (hlađenje fenom), pod N2tokom dodatnih 20 h. Mešavina je razblažena zasićenom NaHCO3(aq) i ekstraktovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi oprani su vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Neprečišćeni materijal prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptani, 0-100%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (352 mg, 8%) u obliku žute pene. LC/MS: Rt= 0.87 min; m/z = 420.2 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 7.46-7.42 (m, 2H), 7.42-7.34 (m, 3H), 6.84 (br s, 1H), 4.93 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 3.88 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.76 (br s, 1H), 3.66-3.65 (m, 3H), 3.21 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.12-3.03 (m, 1H), 2.86-2.78 (m, 2H), 2.14 (br s, 1H), 2.00-1.93 (m, 1H), 1.51 (t, J = 12.3 Hz, 1H), 1.34 (s, 9H)
[0203] Faza 2: (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion. Rastvoru (2S,3S,5R)-metil 6-(benziloksi)-3-(((terc-butoksikarbonil)amino)metil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilata (352 mg, 0.839 mmol) u DCM (4.19 mL) dodat je TFA (1.61 mL, 20.98 mmol), ukapavanjem. Nakon 90 min koncentrovan je u vakuumu, rastvoren u DCM i ponovo koncentrovan (3x). Ostatku, rastvorenom u DCM (5 mL) na 0 °C dodat je TEA (1.17 mL, 8.39 mmol), nakon čega je uklonjeno kupatilo za hlađenje. Nakon 20 h na rt, mešavina je razblažena zasićenom NaHCO3(aq) i ekstraktovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su oprani vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni materijal prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-20%), dajući nazivno jedinjenje (158 mg, 66%, 2-fazni) u obliku bistrog filma. LC/MS: Rt= 0.65 min; m/z = 288.0 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H), 7.48-7.33 (m, 5H), 4.99-4.88 (m, 2H), 3.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.59 (br s, 1H), 3.32-3.22 (m, 1H), 2.89 (br d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.75 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 2.63 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.26-2.17 (m, 1H), 1.38 (ddd, J = 14.3, 9.2, 1.9 Hz, 1H)
[0204] Faza 3: (4R,5aS,8aS)-3-hidroksiheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion. Suspenzija (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-
2
2,8(8aH)-diona (158 mg, 0.550 mmol) i Pd-C (10 % Degussa tip 101, 50% voda, 117 mg, 0.055 mmol) u MeOH:DCM (3:1, 3.67 mL) je evakuisana i ispunjena H2. Nakon 2 h, mešavina filtrirana je kroz celit i koncentrovana u vakuumu (temp kupatila < 30 °C) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (102 mg, 94%) u obliku beličaste čvrste materije. LC/MS: Rt= 0.12 min; m/z = 198.0 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0205] Faza 4: Tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. Rastvoru neprečišćenog (4R,5aS,8aS)-3-hidroksiheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-diona (102 mg, 0.517 mmol) u piridinu (5.17 mL) dodat je SO3·Py (412 mg, 2.59 mmol). Nakon 19 h snažnog umešavanja, mešavina je filtrirana i koncentrovana u vakuumu (temp kupatila < 30 °C). Dobijeni materijal je rastvoren u NaH2PO4(1 M, 10 mL), nakon čega je dodat tetrabutilamonijum vodoniksulfat (263 mg, 0.776 mmol). Nakon 30 min umešavanja ekstraktovan je sa IPA:CHCl3(1:4, 3x). Kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu (temp kupatila < 30 °C). Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-30%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (180 mg, 67%) u obliku bele pene. LC/MS: Rt= 0.13 min; m/z = 278 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 7.97 (s, 1H), 3.98 (br s, 1H), 3.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.28 (dd, J = 6.1, 9.9 Hz, 1H), 3.19 - 3.13 (m, 8H), 2.98 (br d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.78 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 2.65 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.49-2.44 (m, 1H), 2.28-2.19 (m, 1H), 1.63-1.51 (m, 8H), 1.40 (br dd, J = 9.3, 12.7 Hz, 1H), 1.31 (sxt, J = 7.4 Hz, 8H), 0.93 (t, J = 7.3 Hz, 12H)
[0206] Faza 5: Natrijum (4R,5aS,8aS)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-ilsulfat. DOWEX 50Wx8 oblik vodonika 200-400 promera je kondicioniran umešavanjem sa NaOH (2 N) u toku 3 h. Kolona je napunjena smolom i oprana vodom do vrednosti pH od ∼6. Zatim je oprana sa 1:1 voda/aceton. tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat (180 mg, 0.347 mmol) je rastvoren u 1:1 aceton/voda i eluiran kroz smolu sa 1:1 aceton/voda. Uzorak je delimično koncentrovan u vakuumu (temp kupatila < 30 °C), i liofiliziran da bi se dobilo nazivno jedinjenje (75 mg, 68%) u obliku bele čvrste materije. LC/MS: Rt= 0.25 min; m/z = 278.0 (M+1) Postupak T3_3m_polarni;<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 4.24-4.18 (m, 2H), 3.51 (dd, J = 10.7, 6.2 Hz, 1H), 3.33 (br d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.10 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 2.95 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 2.81 (p, J = 8.1 Hz, 1H), 2.54-2.46 (m, 1H), 1.65 (dd, J = 14.7, 9.2 Hz, 1H).
[0207] Postupak alternativne faze 5: (4R,5aS,8aS)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-ilvodoniksulfat. Rastvoru tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfata (6.9 g, 13.30 mmol) u izobutanolu (20.8 mL) i vodi (1.35 mL) na 40 °C dodat je rastvor natrijum 2-etilheksanoata (4.56 g, 26.6 mmol) u izobutanolu (20.8 mL) i vodi (1.35 mL) preko dozirne pumpe na 8 mL/h. Mešavina je umešavana tokom 1 h na 40 °C zatim ohlađena do rt i umešana preko noći, nakon čega je filtrirana Buchner levkom pomoću Whatman kvalitativnog filter papira. Filter kolač je opran sa izobutanolom (3x) a zatim ledenim acetonom (3x). Na levak je primenjen vakuum sa N2protokom preko filter kolača tokom 3 h što je praćeno liofilizacijom tokom 3 dana, čime je obezbeđeno nazivno jedinjenje (3.05 g, 73%) u obliku kristalne bele čvrste materije. LC/MS: Rt= 0.25 min; m/z = 278.0 (M+1) Postupak T3_3m_polarni.
[0208]<1>H NMR (500MHz, D2O) δ =4.20 - 4.12 (m, 2H), 3.48 (dd, J=6.2, 10.7 Hz, 1H), 3.33 - 3.25 (m, 1H), 3.05 (d, J=10.7 Hz, 1H), 2.90 (d, J=12.2 Hz, 1H), 2.82 - 2.71 (m, 1H), 2.46 (tdd, J=2.8, 8.7, 14.7 Hz, 1H), 1.66 - 1.56 (m, 1H)
[0209] Spektar praškaste difrakcije X-zraka za natrijumovu so je prikazan na Fig.1.
Instrument: difraktometar X-zraka (Bruker, model D8)
Izvor - Cu k α
Širina faze 0.02°
Napon 40 kV
Struja 40 mA
Vreme po fazi 120 sekundi
Opseg skeniranja 3 do 39°
4
Primer 2. Natrijum (4R,5aS,8aS)-7-metil-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat.
[0210]
[0211] Faza 1: (2S,3S,5R)-metil 6-(benziloksi)-3-(((terc-butoksikarbonil)(metil)amino)metil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilat. Umešana mešavina intermedijera C (3 g, 10.41 mmol), 2-((tercbutoksikarbonil)(metil)amino)sirćetne kiseline (2.56 g, 13.53 mmol), Ir[df(CF3)ppy2(dtbpy)PF6(0.117 g, 0.104 mmol), i kalijumfosfata dibaznog (2.175 g, 12.49 mmol) u DMF (30 mL) je degasirana penušanjem N2kroz suspenziju tokom 15 min a zatim je ostavljena pod linijom N2i ozračena sa Kessil H150-Blue LED (hlađenje fenom) tokom 48 h. Reakcija je razblažena zasićenom NaHCO3i ekstraktovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi oprani su vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni materijal prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptani, 0-100%) da bi se dobila narandžasta pena (233 mg). Ovaj materijal je ponovo prečišćen hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptani, 0-70%) dajući nazivno jedinjenje (140 mg, 3%) u obliku žute čvrste materije. LC/MS: Rt= 0.92 min; m/z = 434.1(M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 7.46-7.42 (m, 2H), 7.41-7.33 (m, 3H), 4.98-4.91 (m, 2H), 3.88-3.81 (m, 1H), 3.78 (br s, 1H), 3.68 (br s, 3H), 3.26-3.03 (m, 2H), 2.84 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H), 1.97-1.88 (m, 1H), 1.62 (br t, J = 12.6 Hz, 1H), 1.34 (br s, 9H)
[0212] Faza 2: (2S,3S,5R)-metil 6-(benziloksi)-3-((metilamino)metil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilat. Umešanom rastvoru (2S,3S,5R)-metil 6-(benziloksi)-3-(((tercbutoksikarbonil)(metil)amino)metil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilata (140 mg, 0.323 mmol) u DCM (1.6 mL), ukapavanjem je dodavan TFA (0.622 mL, 8.07 mmol) na rt pod N2. Reakcija je umešavana na rt tokom 90 min a zatim koncentrovana i zajedno uparena sa DCM (3x). Ostatak je rastvoren u DCM (2 mL) i ohlađen do 0 °C. Dodat je TEA (0.450 mL, 3.23 mmol), ledeno kupatilo je uklonjeno i reakcija umešana na rt tokom 90 min. Reakcija je razblažena zasićenom NaHCO3i ekstraktovana EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi oprani su vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni materijal prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-20%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (86 mg, 88%) u obliku bistrog filma. LC/MS: Rt= 0.46 min; m/z = 301.9 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7.50-7.32 (m, 5H), 5.03-4.86 (m, 2H), 3.86 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 3.60 (br s, 1H), 3.39-3.34 (m, 1H), 2.93-2.83 (m, 2H), 2.76 (s, 3H), 2.57 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.49-2.42 (m, 1H), 2.32-2.18 (m, 1H), 1.38 (ddd, J = 14.3, 9.0, 1.9 Hz, 1H)
[0213] Faza 3: (4R,5aS,8aS)-3-hidroksi-7-metilheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion. (2S,3S,5R)-metil 6-(benziloksi)-3-((metilamino)metil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan2-karboksilat (143 mg, 0.475 mmol) je rastvoren u metanolu (2.4 mL) i dodat je Pd-C (10 %, Degussa tip 101, 50% voda, 101 mg, 0.047 mmol). Mešavina je evakuisana pod vakumom i ispunjena H2. Nakon umešavanja 1 h, mešavina je filtrirana kroz celit i koncentrovana u vakuumu (temp kupatila < 30 °C) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (63 mg, 63%) u obliku bele čvrste materije. LC/MS: Rt= 0.11 min; m/z = 211.9 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0214] Faza 4: tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-7-metil-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. (4R,5aS,8aS)-3-hidroksi-7-metiltheksahidro-2H-1,4-metanopiroto[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion (63 mg, 0.298 mmol) je rastvoren u piridinu (2.9 mL) i dodat je SO3·piridin (237 mg, 1.49 mmol). Reakcija je umešavana na rt tokom 20 h. Reakcija je filtrirana kroz plastični filter za jednokratnu upotrebu i koncentrovana je pod sniženim pritiskom (temp kupatila < 30°C). Ovaj materijal je rastvoren u NaH2PO4(1 M, 10 mL) i dodat je tetrabutilamonijumvodoniksulfat (152 mg, 0.447 mmol). Nakon umešavanja tokom 30 min na rt ekstraktovan je sa EtOAc (4x). Kombinovani organski slojevi oprani su fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Vodeni sloj je dalje ekstraktovan sa 20% IPA u CHCl3(2x), osušen preko natrijumsulfata i koncentrovan u vakuumu (temp kupatila < 30 °C). Kombinovani organski materijal je prečišćen hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-30%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (62 mg, 39%) u obliku bistrog filma. LC/MS: Rt= 0.13 min; m/z = 291.9 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 4.34 (br s, 1H), 4.04 (br d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.44 (dd, J = 10.0, 5.6 Hz, 1H), 3.34 (br d, J = 2.6 Hz, 1H), 3.28 (br dd, J = 10.3 Hz, 5.1 Hz, 8H), 2.97-2.91 (m, 4H), 2.80 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.75-2.61 (m, 2H), 1.74-1.60 (m, 9H), 1.44 (sxt, J = 7.4 Hz, 8H), 1.00 (t, J = 7.3 Hz, 12H).
[0215] Faza 5: natrijum (4R,5aS,8aS)-7-metil-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. DOWEX 50Wx8 oblik vodonika 200-400 promera je kondicioniran umešavanjem sa NaOH (2 N) tokom 3 h. Staklena kolona je napunjena smolom i oprana vodom do vrednosti od pH ∼6. Zatim je oprana sa vodom:acetonom (1:1). Tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-7metil-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanpirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat (62 mg, 0.12 mmol) je rastvoren u 1:1 aceton:voda i propušten niz kolonu sa aceton:voda (1:1). Uzorak je delimično koncentrovan u vakuumu (temp kupatila < 30 °C) zatim liofiliziran da bi se dobilo nazivno jedinjenje (32 mg, 83%) u obliku belog praška. LC/MS: Rt= 0.48 min; m/z = 291.8 (M+1) Postupak T3_3m_polarni;<1>H NMR (500MHz, D2O) δ = 4.20-4.15 (m, 2H), 3.60 (dd, J = 10.6, 6.4 Hz, 1H), 3.30 (dddd, J = 12.3, 4.0, 2.7, 1.3 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.90 (s, 3H), 2.86 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.77-2.69 (m, 1H), 2.49 (tdd, J = 14.8, 8.8, 3.0 Hz, 1H), 1.59 (ddd, J = 14.8, 8.9, 2.0 Hz, 1H).
Primer 3. Natrijum (4R,5aS,8aS)-7-ciklopropil-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat.
[0216]
[0217] Faza 1: (2S,3S,5R)-metil 6-(benziloksi)-3-(((terc-butoksikarbonil)(ciklopropil)amino)metil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilat. Umešana mešavina intermedijera C (4 g, 13.87 mmol), 2-((terc-butoksikarbonil)(ciklopropil)amino)sirćetne kiseline (3.88 g, 18.04 mmol), Ir[df(CF3)ppy2(dtbpy)]PF6(0.156 g, 0.139 mmol), i kalijumfosfat dibazni (2.90 g, 16.65 mmol) u DMF (40 mL) je degasirana pomoću raspršivanja N2tokom 15 min. Mešavina je ozračena pod N2sa Kessil H150-Blue LED (hlađenje fenom) tokom 42 h, nakon čega je razblažena zasićenim NaHCO3, filtrirana i ekstraktovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su oprani vodom, fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptani, 0-100%). Ovaj materijal je ponovo prečišćen još dva puta hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptani, 0-100% zatim EtOAc-Heptani, 0-70%) dajući nazivno jedinjenje (190 mg, 3% Prinos) u obliku bistrog filma. LC/MS: Rt= 0.99min; m/z = 460.2 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.45-7.34 (m, 5H), 5.05 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.89 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.09 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.37-3.25 (m, 2H), 3.17-3.07 (m, 1H), 2.92-2.83 (m, 1H), 2.64-2.52 (m, 1H), 2.44-2.35 (m, 1H), 2.09-1.98 (m, 1H), 1.68 (t, J = 12.7 Hz, 1H), 1.581.52 (m, 1H), 1.44-1.39 (m, 9H), 0.80-0.66 (m, 2H), 0.59-0.46 (m, 2H)
[0218] Faza 2: (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-7-ciklopropilheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion. Umešanom rastvoru (2S,3S,5R)-metil 6-(benziloksi)-3-(((tercbutoksikarbonil)(ciklopropil)amino)metil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilata (190 mg, 0.413 mmol) rastvorenom u DCM (4.1 mL), dodat je TFA (0.796 mL, 10.34 mmol) ukapavanjem na rt pod N2. Rastvor je umešavan na rt tokom 90 min i zatim koncentrovan u vakuumu, razblažen sa DCM i ponovo koncentrovan (3x). Ostatak je rastvoren u DCM (2 mL) i ohlađen do 0 °C. Dodat je TEA (0.576 mL, 4.13 mmol) i umešavan je tokom 18 h na rt. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom a neprečišćeni materijal je prečišćen hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-20%), dajući nazivno jedinjenje (103 mg, 76%) u obliku bistrog filma. LC/MS: Rt= 0.69min; m/z = 328.0 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ = 7.46-7.42 (m, 2H), 7.41-7.33 (m, 3H), 4.97-4.89 (m, 2H), 3.87 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.59 (br s, 1H), 3.31-3.27 (m, 1H), 2.91-2.85 (m, 1H), 2.76 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 2.66 (tt, J = 7.5, 4.1 Hz, 1H), 2.56 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.42 (dd, J = 8.5, 6.1 Hz, 1H), 2.19 (ddt, J = 14.3, 8.5, 3.0 Hz, 1H), 1.31 (ddd, J = 14.3, 9.2, 1.9 Hz, 1H), 0.78-0.68 (m, 2H), 0.66-0.55 (m, 2H).
[0219] Faza 3: (4R,5aS,8aS)-7-ciklopropil-3-hidroksiheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion. (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-7-ciklopropilheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion (103 mg, 0.315 mmol) je rastvoren u MeOH (3.2 mL) i dodat je Pd-C (10% Degussa tip 101, 50% voda, 67.0 mg, 0.031 mmol). Mešavina je degasirana u vakuumu i ispunjena H2. Nakon umešavanja tokom 40 min, filtrirana je kroz celit i koncentrovana u vakuumu (temp kupatila < 30 °C) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (75 mg, 100%) u obliku bele čvrste materije. LC/MS: Rt= 0.54 min; m/z = 238.0 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0220] Faza 4: Tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-7-ciklopropil-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. Rastvoru (4R,5aS,8aS)-7-ciklopropil-3-hidroksiheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion (75 mg, 0.316 mmol) u piridinu (3.16 mL) dodat je SO3·piridin (151 mg, 0.948 mmol). Nakon umešavanja tokom 20 h, suspenzija je filtrirana i koncentrovana u vakuumu (temp kupatila < 30 °C). Neprečišćeni ostatak je rastvoren u zasićenoj NaH2PO4(10 mL) i opran sa EtOAc. Vodenom sloju je dodat tetrabutilamonijumvodoniksulfat (161 mg, 0.474 mmol). Nakon umešavanja tokom 45 min ekstraktovan je sa DCM (4x), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu (temp kupatila < 30 °C). Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (Aceton-DCM, 0-100%) da bi se dobilo 121 mg bistrog filma. LC/MS: Rt= 0.14 min; m/z = 318.0 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 3.93 (br s, 1H), 3.87 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.34-3.29 (m, 1H), 3.19-3.13 (m, 8H), 2.99-2.94 (m, 1H), 2.78 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 2.68 (tt, J = 7.4, 4.2 Hz, 1H), 2.57 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.46-2.36 (m, 1H), 2.26-2.17 (m, 1H), 1.61-1.52 (m, 8H), 1.35-1.26 (m, 9H), 0.93 (t, J = 7.3 Hz, 12H), 0.78-0.69 (m, 2H), 0.66-0.57 (m, 2H).
[0221] Faza 5: Natrijum (4R,5aS,8aS)-7-ciklopropil-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-ilsulfat. DOWEX 50Wx8 oblik vodonika 200-400 promera je kondicioniran umešavanjem sa NaOH (2 N) tokom 3 h. Staklena kolona je napunjena smolom i oprana vodom (do pH ≈ 6) praćeno vodom:acetonom (1:1). Rastvor tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-7-ciklopropil-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfata (121 mg, 0.217 mmol) u vodi:acetonu (1:1) je napunjen u i propušten kroz kolone, eluirajući sa vodom:acetonom (1:1). Uzorak je koncentrovan u vakuumu (temp kupatila < 30 °C) i liofiliziran, dajući nazivno jedinjenje (51 mg, 66% Prinos) u obliku belog praška. LC/MS: Rt= 0.36 min; m/z = 318.0 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (500MHz, D2O) δ 4.20-4.14 (m, 2H), 3.55 (dd, J = 10.6, 6.1, Hz, 1H), 3.32-3.26 (m, 1H), 3.09 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 2.73-2.65 (m, 2H), 2.50-2.42 (m, 1H), 1.51 (dd, J = 14.6, 9.1 Hz, 1H), 0.90-0.74 (m, 3H), 0.71-0.63 (m, 1H).
Primer 4. Natrijum (4R,5aS,8aS)-7-(2-hidroksietil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat.
[0222]
[0223] Faza 1: terc-butil (3S,4aS,7aS)-6-alil-3-hidroksi-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilat. Rastvoru terc-butil (3S,4aS,7aS)-3-hidroksi-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata (1.50 g, 5.62 mmol) u DMF (56 mL) na 0 °C dodat je kalijum terc-butoksid (1 M u THF, 5.6 ml, 5.6 mmol). Nakon 5 min uklonjeno je hladno kupatilo i ostavljen je da se umešava na rt tokom 30 min zatim je ohlađen do 0 °C, nakon čega je ukapavanjem dodat alilbromid (490 µL, 5.66 mmol).
Uklonjeno je hladno kupatilo nakon 5 min i nakon dodatnih 2 h na rt, koncentrovan je u vakuumu i prečišćen direktno hromatografijom na gelu silicijumdioksida (etilacetat-heptan, 0-100%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (1.688 g, 81%) u obliku bele čvrste materije. LC/MS: Rt= 0.70 min; m/z = 297.1 (M+1) Postupak 2m_kiseo;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6)* δ = 5.72 (ddt, J = 16.4, 11.1, 5.9 Hz, 1H), 5.23-5.15 (m, 2H), 4.96 (s, 1H), 4.77 (d, J = 7.1 Hz, 0.5H), 4.62 (d, J = 7.1 Hz, 0.5H), 3.97-3.85 (m, 1.5H), 3.85-3.75 (m, 1H), 3.71 (dd, J = 15.3, 6.3 Hz, 0.5H), 3.49-3.42 (m, 1H), 2.83 - 2.77 (m, 1H), 2.50-2.40 (m, 1H), 2.14 (t, J = 11.6 Hz, 0.5H), 2.03-1.91 (m, 1.5H), 1.42 (s, 4.5H), 1.38(s, 4.5H) 0.96 (p, J = 12.1 Hz, 1H).
*Prijavljeno kao mešavina rotamera.
[0224] Faza 2: terc-butil (3S,4aS, 7aS)-3-hidroksi-6-(2-hidroksietil)-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilat. Rastvor terc-butil (3S,4aS,7aS)-6-alil-3-hidroksi-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-
1
b]piridin-1-karboksilata (2.72 g, 9.18 mmol) u DCM (92 ml) na -78 °C je raspršavan sa O3tokom 30 min. Zatim je prečišćen penušanjem O2dodatnih 20 min na -78 °C. Bistrom rastvoru je dodat dimetilsulfid (6.74 ml, 92 mmol) i zagrevan je do rt i umešavan tokom 30 min. Ohlađen je do 0 °C i MeOH (18 mL) je dodat praćen natrijumborohidridom (694 mg, 18.4 mmol) zatim je ostavljen da se polako zagreva do rt. Nakon 14 h na rt je ohlađen do 0 °C i dodat je zasićeni NH4Cl (aq, 10 mL). Nakon 20 min na rt koncentrovan je u vakuumu praćen dodavanjem MeOH i ponovo je koncentrovan. Ostatak je sakupljen u MeOH, filtriran zatim ponovo koncentrovan. Dodat je tolen i suspenzija je izložena ultrazvučnim zracima zatim ponovo koncentrovana. LCMS: Rt= 0.40 min; m/z = 301.4 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0225] Faza 3: terc-butil (3S,4aS, 7aS)-6-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-3-hidroksi-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilat. Rastvoru terc-butil (3S,4aS,7aS)-3-hidroksi-6-(2-hidroksietil)-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata (9.18 mmol) u piridinu (18 ml) je dodat TBS-CI (1.384 g, 9.18 mmol). Nakon umešavanja tokom 24 h na rt koncentrovan je u vakuumu i sakupljen u EtOAc i opran vodom. Vodeni sloj je ekstraktovan sa EtOAc (2x), a kombinovani organski slojevi oprani su fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida, dajući nazivno jedinjenje (2.433 g, 64% 3-faze) u obliku bele čvrste materije. LCMS: Rt= 0.89 min; m/z = 415.4 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0226] Faza 4: terc-butil (3R,4aS,7aS)-3-((N-(benziloksi)-2-nitrofenil)sulfonamido)-6-(2-((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilat. Rastvoru terc-butil (3S,4aS,7aS)-6-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-3-hidroksi-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata (2.411 g, 5.82 mmol), N-(benziloksi)-2-nitrobenzensulfonamida (2.160 g, 7.01 mmol) i trifenilfosfina (1.830 g, 6.98 mmol) u THF (65 ml) na -17 °C dodat je DIAD (1.40 ml, 6.98 mmol) kao rastvor u THF (10 mL), ukapavanjem. Ostavljen je da se polako zagreva do rt i umešava tokom 18 h zatim je koncentrovan u vakuumu i prečišćen direktno hromatografijom na gelu silicijumdioksida, dajući nazivno jedinjenje (1.785 g, 44% prinos) u obliku bele čvrste materije. LCMS: Rt= 1.15 min; m/z = 705.4
2
(M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0227] Faza 4: N-(benziloksi)-N-((3R,4aS, 7aS)-6-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-3-il)-2-nitrobenzensulfonamid. U sud napunjen cink(II) bromidom (1.21 g, 5.37 mmol, osušen na 200 °C tokom 3 h, dodat je rastvor terc-butil (3R,4aS,7aS)-3-((N-(benziloksi)-2-nitrofenil)sulfonamido)-6-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata (1.79 g, 2.53 mmol) u DCM (8.5 mL). Nakon umešavanja na rt tokom 18 h, razblažen je sa DCM i ugašen sa zasićenim NaHCO3. Nakon prestanka penušanja, slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstraktovan sa DCM (3x). Kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu, čime je dobijena bela pena. LCMS: Rt= 0.94 min; m/z = 605.3 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0228] Faza 5: (3R,4aS,7aS)-3-((benziloksi)amino)-6-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)oktahidro-7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-on. Suspenziji N-(benziloksi)-N-((3R,4aS,7aS)-6-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-3-il)-2-nitrobenzensulfonamida (1.53 g, 2.53 mmol) i K2CO3(1.753 g, 12.68 mmol)u ACN (25 mL) dodat je tiofenol (1.343 ml, 12.65 mmol). Nakon 22 h filtrirana je i koncentrovana u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida, dajući nazivno jedinjenje (919 mg, 87%, 2-fazni) u obliku beličaste pene. LCMS: Rt= 0.82 min; m/z = 420.4 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0229] Faza 6: (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-7-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-dion. Rastvoru (3R,4aS,7aS)-3-((benziloksi)amino)-6-(2-((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)oktahidro-7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-ona (919 mg, 2.19 mmol) i DIPEA (1.2 mL, 6.87 mmol) u acetonitrilu (68.4 mL) na 0 °C dodat je fozgen (15-20% u toluenu, 1.60 mL, 2.24 mmol) u obliku rastvora u acetonitrilu (10 mL) pri brzini od 8 mL/h. Ostavljen je da se polako podigne do rt. Nakon 20 h koncentrovan je u vakuumu, particionisan između EtOAc/HCl (aq, 0.2 M) i faze su odvojene. Vodeni sloj ekstraktovan je sa EtOAc (2x), a kombinovani organski slojevi oprani su fiziološkim rastvorom, zasićeni NaHCO3, osušeni preko Na2SO4/MgSO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu.
Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida, dajući nazivno jedinjenje (549 mg, 56%) u obliku bele pene. LCMS: Rt= 0.95 min; m/z = 446.4 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0230] Faza 7: (4R,5aS,8aS)-7-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-3-hidroksiheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-dion. Suspenzija (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-7-(2-((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-diona (110 mg, 0.247 mmol) i Pd-C (10% Degussa tip 101, 50% voda, 25 mg, 0.012 mmol) u MeOH (2.5 mL) je degasirana i ispunjena H2(3x). Nakon 3 h snažnog umešavanja suspenzija je prečišćena sa N2, filtrirana kroz celit i koncentrovana u vakuumu. Dodat je toluen i izložena je ultrazvučnim zracima zatim ponovo koncentrovana. Pretpostavljeni kvantitativni prinos. LCMS: Rt= 0.71 min; m/z = 356.4 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0231] Faza 8: Tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-7-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-ilsulfat. Rastvoru (4R,5aS,8aS)-7-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-3-hidroksiheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-diona (0.247 mmol) u piridinu (1.6 mL) dodat je SO3·Py (197 mg, 1.24 mmol). Nakon umešavanja tokom 17 h na rt mešavina je koncentrovana u vakuumu i suspendovana u DCM zatim filtrirana i ponovo koncentrovana u vakuumu. Dobijena čvrsta materija je rastvorena u NaH2PO4(1 M aq, 20 mL), nakon čega je dodat tetrabutilamonijumvodoniksulfat (131 mg, 0.386 mmol). Nakon umešavanja tokom 45 min ekstraktovan je sa DCM (4x) , a kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4, filtrirani i
4
koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak je prečišćen hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-20%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (56 mg, 34%, 3-faze) u obliku beličaste pene. LCMS: Rt= 0.81 min; m/z = 436.3 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0232] Faza 9: Natrijum (4R,5aS,8aS)-7-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-ilsulfat. DOWEX 50Wx8 oblik vodonika 200-400 promera je kondicioniran umešavanjem sa NaOH (2 N) tokom 3 h. Staklena kolona je napunjena smolom i oprana vodom (do pH ≈ 6) praćeno vodom:acetonom (1:1). Rastvor tetrabutilamonijuma (4R,5aS,8aS)-7-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfata (56 mg, 0.083 mmol) u vodi:acetonu (1:1) je napunjen u i propušten kroz kolone, eluirajući sa vodom:acetonom (1:1). Uzorak je koncentrovan u vakuumu (temp kupatila < 30 °C) i liofiliziran, dajući nazivno jedinjenje (36 mg, 95% Prinos) u obliku belog praška. LCMS: Rt= 0.84 min; m/z = 436.3 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0233] Faza 10: Natrijum (4R,5aS,8aS)-7-(2-hidroksietil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. Suspenziji natrijum (4R,5aS,8aS)-7-(2-((terc-butildimetilsilil)oksi)etil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfata (36 mg, 0.079 mmol) u acetonitrilu (790 µL) dodat je trietilamintrihidrofluorid (13.07 µl, 0.079 mmol), ukapavanjem i dobijeni rastvor je zagrevan do 45 °C tokom 3 h. Dodatni trietilamintrihidrofluorid (13.07 µl, 0.079 mmol) je dodat i zagrevan je do 45 °C tokom 2 h zatim koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni ostatak je sakupljen u fosfatnom puferu (pH = 6) i prečišćen pripremom reverzne faze HPLC (T3, Atlantis kolone, 30 x 100 mm, 5 ∟m, C18 kolone; ACN-voda sa 3.75 mmol NH4OAC pufer, 20-60 mL/min), dajući nazivno jedinjenje (13.9 mg) u obliku belog praška. LCMS: Rt= 0.34 min; m/z = 322.2 (M+1) Postupak T3_3m_polarni.<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 4.8 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.14 (s, 1H), 3.69 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.61 (dd, J = 10.7, 6.3 Hz, 1H), 3.49-3.37 (m, 2H), 3.29-3.22 (m, 1H), 3.17-3.14 (m, 1H), 2.84 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 2.75 - 2.67 (m, 1H), 2.45 (ddt, J = 14.7, 8.7, 3.0 Hz, 1H), 1.54 (ddd, J = 14.8, 9.0, 2.0 Hz, 1H).
Primer 5. (4R,5aS,8aS)-7-(2-aminoetil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il vodoniksulfat.
[0234]
[0235] Faza 1: (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-7-(2-hidroksietil)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-dion. Rastvoru (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-7-(2-((tercbutildimetilsilil)oksi)etil)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-diona (530 mg, 1.19 mmol) u THF (12 mL) na 0 °C dodat je TBAF (1.2 mL, 1.20 mmol). Nakon 1 h na 0 °C koncentrovan je u vakuumu, particionisan između EtOAc/voda i faze su odvojene. Vodeni sloj je ekstraktovan sa EtOAc (2x) , a kombinovani organski slojevi su oprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4/MgSO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-7%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (268 mg, 68%) u obliku bele čvrste materije. LCMS: Rt= 0.55 min; m/z = 332.3 (M+1) Postupak 2m_kiseo.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3-d) δ 7.48-7.36 (m, 5H), 5.09 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.93 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.87-3.75 (m, 2H), 3.66-3.54 (m, 2H), 3.42-3.35 (m, 1H), 3.30 (s, 1H), 3.10 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 3.03 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 2.81-2.72 (m, 2H), 2.48-2.39 (m, 2H), 1.38 (dd, J = 14.2, 9.2 Hz, 1H).
[0236] Faza 2: 2-((4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-2,8-dioksooktahidro-7H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-7-il)etil metansulfonat. Rastvoru (4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-7-(2-hidroksietil)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-diona (265.4 mg, 0.801 mmol) i TEA (140 µl, 1.00 mmol) u DCM (4.0 mL) je dodat MsCl (65.5 µl, 0.841 mmol). Nakon 45 min opran je vodom. Vodeni sloj ekstraktovan je sa DCM (2x), a kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4/MgSO4, filtrirani i kondicionirani u vakuumu, dajući nazivno jedinjenje (332 mg) u obliku bele čvrste materije. LCMS: Rt= 0.55 min; m/z = 410.3 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0237] Faza 3: Di-terc-butil (2-((4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-2,8-dioksooktahidro-7H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-7-il)etil)iminodikarboksilat. Rastvoru di-terc-butil-iminodikarboksilata (153 mg, 0.704 mmol) u DMF (3.2 mL) dodat je kalijum terc-butoksid (1 M u THF, 700 µL, 0.700 mmol). Nakon 30 min na rt, dodat je rastvor 2-((4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-2,8-dioksooktahidro-7H-14-metanopirolo[3,4-d][13]diazepin-7-il)etil metansulfonata (262 mg, 0.640 mmol) u DMF (2 mL, 2x500 µL isplake).
Umešavan je na rt tokom 10 min, zagrevan do 50 °C tokom 100 min zatim umešavan na rt tokom 12 h, nakon čega je razblažen sa EtOAc i opran fiziološkim rastvorom (1⁄2 zasićen). Vodeni sloj ekstraktovan je sa EtOAc (2x), a kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4/MgSO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu od silicijumdioksida (EtOAcheptan, 0-90%), dajući nazivno jedinjenje (293 mg, 86%) u obliku bele čvrste materije. LCMS: Rt= 0.87 min; m/z = 431.4 (M - Boc 1) Postupak 2m_kiseo.
[0238] Faza 4: terc-butil (2-((4R,5aS,8aS)-3-hidroksi-2,8-dioksooktahidro-7H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-7-il)etil)karbamat. Suspenzija di-terc-butil (2-((4R,5aS,8aS)-3-(benziloksi)-2,8-dioksooktahidro-7H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-7-il)etil)iminodikarboksilata (226.8 mg, 0.427 mmol) i Pd-C (10% Degussa tip 101, 50% voda, 45.3 mg, 0.021 mmol) u MeOH (4.2 mL) je degasirana i ispunjena H2(3x). Nakon 3 h snažnog umešavanja suspenzija je prečišćena sa N2, filtrirana kroz celit i koncentrovana u vakuumu. Toluen je dodat i izložena je ultrazvučnim zracima zatim ponovo koncentrovan. Pretpostavljeni kvantitativni prinos. LCMS: Rt= 0.65 min; m/z = 341.4 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0239] Faza 5: Piridin-1-ium (4R,5aS,8aS)-7-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. Rastvoru terc-butil (2-((4R,5aS,8aS)-3-hidroksi-2,8-dioksooktahidro-7H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-7-il)etil)karbamatein piridina (3 mL) dodat je SO3·Piridin (335 mg, 2.10 mmol). Nakon 15 h na rt koncentrovan je u vakuumu, suspendovan u DCM i filtriran, dajući nazivno jedinjenje u obliku beličaste čvrste materije. Pretpostavljeni kvantitativni prinos. LCMS: Rt= 0.59 min; m/z = 321.4 (M - Boc 1) Postupak 2m_kiseo.
[0240] Faza 6: (4R,5aS,8aS)-7-(2-aminoetil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il vodoniksulfat. Suspenziji piridin-1-ium (4R,5aS,8aS)-7-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfata (210 mg, 0.421 mmol) u DCM (4.2 mL) na 0 °C dodat je TFA (973 µl, 12.63 mmol). Nakon 2.5 h na 0 °C koncentrovana je u vakuumu, suspendovana u DCM i ponovo koncentrovana. Neprečišćeni ostatak je sakupljen u fosfatnom puferu (pH = 6), filtriran i prečišćen pripremom reverzne faze HPLC (T3, Atlantis kolone, 30 x 100 mm, 5 ∟m, C18 kolone; voda sa 3.75 mmol NH4OAC pufer, 20-60 mL/min), dajući nazivno jedinjenje (155 mg) u obliku belog praška. LCMS: Rt= 0.22 min; m/z = 321.4 (M+1) Postupak T3_3m_polar.<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 4.00 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.94 (s, 1H), 3.61 (dt, J = 14.3, 6.9 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 10.5, 6.4 Hz, 1H), 3.28 (dt, J = 14.8, 5.6 Hz, 1H), 3.06 (brd, J = 12.4 Hz, 1H), 2.96 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.92 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.68 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 2.55 (p, J = 8.3 Hz, 1H), 2.31-2.21 (m, 1H), 1.38 (dd, J = 14.9, 9.1 Hz, 1H).
Primer 6. Natrijum (4R,5aS,8aS)-2,8-diokso-7-propilheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat.
[0241]
[0242] Faza 1: terc-butil (3R,4aS,7aS)-6-alil-3-((N-(benziloksi)-2-nitrofenil)sulfonamido)-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilat. Rastvoru terc-butil (3S,4aS,7aS)-6-alil-3-hidroksi-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata(786.4 mg, 2.65 mmol), N-(benziloksi)-2-nitrobenzensulfonamida (900 mg, 2.92 mmol) i trifenilfosfina (835 mg, 3.18 mmol) u THF (29 mL) na -17 °C dodat je DIAD (0.640 mL, 3.18 mmol) kao rastvor u THF (4.1 mL) ukapavanjem na 6:30 pm. Ostavljen je da se polako zagreva do rt i umešavan je tokom 22 h zatim koncentrovan u vakuumu i prečišćen direktno hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-heptan, 0-40%), dajući nazivno jedinjenje (846 mg, 54%) u obliku beličaste čvrste materije. LCMS: Rt= 0.95 min; m/z = 587.3 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0243] Faza 2: N-((3R,4aS,7aS)-6-alil-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-3-il)-N-(benziloksi)-2-nitrobenzensulfonamid. U sud napunjen cink(II) bromidom (681 mg, 3.02 mmol, osušen na 200 °C tokom 4 h) i terc-butil (3R,4aS,7aS)-6-alil-3-((N-(benziloksi)-2-nitrofenil)sulfonamido)-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilatom (845 mg, 1.44 mmol), pod N2, dodat je DCM (4.8 mL). Nakon umešavanja na rt tokom 15 h, razblažen je sa DCM i ugašen sa zasićenim NaHCO3. Nakon prestanka penušanja, slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstraktovan sa DCM (3x). Kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4i koncentrovani u vakuumu, čime je dobijena bela pena. Pretpostavljeni kvantitativni prinos. LCMS: Rt = 0.70 min; m/z = 487.2 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0244] Faza 3: (3R,4aS,7aS)-6-alil-3-((benziloksi)amino)oktahidro-7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-on. Suspenziji N-((3R,4aS,7aS)-6-alil-7-oksooktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-3-il)-N-(benziloksi)-2-nitrobenzensulfonamida (1.44 mmol) i K2CO3(995 mg, 7.20 mmol) u ACN (14.4 mL) dodat je tiofenol (764 ∟L, 7.20 mmol). Nakon 21 h filtrirana je i koncentrovana u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-8%), dajući nazivno jedinjenje (385 mg, 89%, 2-fazni) u obliku beličaste pene. LCMS: Rt = 0.49 min; m/z = 302.4 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0245] Faza 4: (4R,5aS,8aS)-7-alil-3-(benziloksi)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-dion. Rastvoru (3R,4aS,7aS)-6-alil-3-((benziloksi)amino)oktahidro-7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-ona (385 mg, 1.28 mmol) i DIPEA (670 µL, 3.83 mmol) u ACN (40 mL) na 0 °C je dodat fozgen (1.20 mL, 1.66 mmol) kao rastvor u ACN (5.7 mL) pri brzini od 6.5 mL/h. Ostavljen je da se polako podigne do rt. Nakon 20 h koncentrovan je u vakuumu, particionisan između EtOAc/HCl (0.2 N) i faze su odvojene. Vodeni sloj je ekstraktovan sa EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi oprani su fiziološkim rastvorom i zasićeni NaHCO3. Isplaka fiziološkog rastvora je kombinovana sa zasićenom NaHCO3isplakom i rastvor je ekstraktovan sa 10% MeOH/DCM (2x). Kiseo vodeni sloj je ponovo ekstraktovan sa 10% MeOH/DCM (2x), a kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-10%), dajući nazivno jedinjenje (369.2 mg, 88%) u obliku bele pene. LCMS: Rt = 0.60 min; m/z = 328.4 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0246] Faza 5: (4R,5aS,8aS)-3-hidroksi-7-propilheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-dion. Suspenzija (4R,5aS,8aS)-7-alil-3-(benziloksi)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-diona (209 mg, 0.638 mmol) i Pd-C (10% Degussa tip 101, 50% voda, 41 mg, 0.019 mmol) u MeOH (6.4 mL) je degasirana i ispunjena H2(3x). Nakon 5 h snažnog umešavanja suspenzija je prečišćena sa N2, dodat je još Pd-C (10% Degussa tip 101, 50% voda, 41 mg, 0.019 mmol) i degasirana je i ispunjena sa H2(3x). Nakon 2 h snažnog umešavanja prečišćena je sa N2zatim filtrirana kroz celit i koncentrovana u vakuumu. Toluen je dodat i izložena je ultrazvučnim zracima zatim ponovo koncentrovana. Pretpostavljeni kvantitativni prinos. LCMS: Rt= 0.27 min; m/z = 240.3 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0247] Faza 6: Tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-2,8-diokso-7-propilheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. Rastvoru (4R,5aS,8aS)-3-hidroksi-7-propilheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-diona (0.638 mmol) u piridinu (6.4 mL) dodat je SO3·Py (508 mg, 3.19 mmol). Nakon umešavanja tokom 13 h na rt mešavina je filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Dobijena čvrsta materija je rastvorena u NaH2PO4(1 M aq, 40 mL), nakon čega je dodat tetrabutilamonijumvodoniksulfat (325 mg, 0.957 mmol). Nakon umešavanja tokom 1.5 h ekstraktovana je sa DCM (4x), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak je prečišćen hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-15%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (229 mg, 64%, 3-faze) u obliku bele čvrste materije. LCMS: Rt= 0.81 min; m/z = 436.3 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0248] Faza 7: Natrijum (4R,5aS,8aS)-2,8-diokso-7-propilheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. DOWEX 50Wx8 oblik vodonika 200-400 promera je kondicioniran umešavanjem sa NaOH (2 N) tokom 2 h. Staklena kolona je napunjena smolom i oprana vodom (do pH ≈ 6) praćeno vodom:acetonom (1:1). Rastvor tetrabutilamonijum (4R,5aS,8aS)-2,8-diokso-7-propilheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfata (228 mg, 0.408 mmol) u vodi:acetonu (1:1) je napunjen u i propušten kroz kolone, eluirajući sa vodom:acetonom (1:1). Uzorak je koncentrovan u vakuumu (temp kupatila < 30 °C) i liofiliziran, dajući nazivno jedinjenje (120 mg, 85%) u
1
obliku belog praška. LCMS: Rt= 0.30 min; m/z = 320.3 (M+1) Postupak 2m_kiseo.<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 4.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.14 (s, 1H), 3.54 (dd, J = 10.9, 6.3 Hz, 1H), 3.32-3.17 (m, 3H), 3.10 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.80 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 2.69 (p, J = 8.2 Hz, 1H), 2.50-2.41 (m, 1H), 1.57-1.47 (m, 3H), 0.81 (t, J = 7.4, 3H).
Primer 7. Natrijum (4R,5aR,9aS)-2,9-dioksooktahidro-1,4-metanopirido[3,4-d][1,3]diazepin-3(2H)-il vodoniksulfat.
[0249]
[0250] Faza 1: 1-(terc-butil) 2-etil (2S,5R)-5-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)piperidin-1,2-dikarboksilat. Suspenziji (2S,5R)-etil 5-((benziloksi)amino)piperidin-2-karboksilat oksalata (13.25 g, 36.0 mmol) u EtOAc (200 mL) dodati su Na2CO3(2.0 M, 80 mL, 160 mmol) i natrijumhidroksid (1.0 M, 40 mL, 40 mmol). Mešavina je umešavana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Formirani talog je filtriran i dva sloja giltrata su odvojena. Organski sloj je opran fiziološkim rastvorom (50 ml), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu, čime je dobijeno viskozno ulje (10.0 g). Rastvoru ovog ulja (10.0 g, 35.9 mmol) u THF (100ml) dodati su Boc-anhidrid (23.5 g, 108 mmol), trietilamin (15.0 ml, 108 mmol) i DMAP (4.38 g, 35.9 mmol). Reakciona mešavina je umešavana tokom 60 h a zatim zagrejana na 50 °C tokom 2 dana. Rastvarač je uklonjen u vakuumu i vraćen u EtOAc/Heptan (300 mL, 1/1), opran vodom (100 mL), HCl (0.1 N, 50 mL), fiziološkim rastvorom (50 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptan, 0-40%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (9.6 g, 55%) u obliku ulja. LCMS: Rt= 1.19 min , m/z = 479.2 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0251] Faza 2: (2S,5R)-5-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-2-karboksilna kiselina. Rastvoru 1-(terc-butil) 2-etil (2S,5R)-5-((benziloksi)(terc-
2
butoksikarbonil)amino)piperidin-1,2-dikarboksilata (9.60 mg, 20.06 mmol) u THF:MeOH (3:1, 80 mL) na 0 °C polako je dodat rastvor natrijumhidroksida (1 N, 40 mL). Nakon 5 h na rt, polako je dodat HCl (1 N, 41 mL) i ekstraktovan je sa EtOAc (300 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo nazivno jedinjenje (8.78 g, 97%) u obliku meke čvrste materije LCMS: Rt= 1.05 min, m/z = 451.2 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0252] Faza 3: terc-butil (2S,5R)-5-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-2-(kvinolin-8-ilkarbamoil)piperidin-1-karboksilat. Rastvoru (2S,5R)-5-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-1-(tercbutoksikarbonil)piperidin-2-karboksilne kiseline (6.010 g, 13.34 mmol) u DCM (100 mL) na 0 °C dodat je kvinolin-8-amin (2116 mg, 14.67 mmol) praćen DIPEA (4.66 mL, 26.7 mmol) i HATU (6.087 g, 16.01 mmol). Nakon umešavanja pod argonom na rt tokom 2.5 h, mešavina je sipana u vodu (150 mL) i ekstraktovana sa DCM (100 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni ostatak je prečišćen hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptan, 10-40%), dajući nazivno jedinjenje (6.60 g, 86%) u obliku meke čvrste materije LCMS: Rt= 1.22 min, m/z = 577.3 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0253] Faza 4: terc-butil (2S,3S,5R)-5-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-3-(2-metoksi-2-oksoetil)-2-(kvinolin-8-ilkarbamoil)piperidin-1-karboksilat. Rastvoru terc-butil (2S,5R)-5-((benziloksi)(tercbutoksikarbonil)amino)-2-(kvinolin-8-ilkarbamoil)piperidin-1-karboksilata (5.580 g, 9.68 mmol) u 2-metil-2-butanolu (95 mL) dodati su dibenzilvodonikfosfat (538 mg, 1.94 mmol), srebrokarbonat (5.336 mg, 19.35 mmol), Pd(II) acetat (434 mg, 1.94 mmol) i metil 2-bromoacetat (2.83 mL, 29.0 mmol).
Mešavina je prečišćena sa argonom, zaptivena i zagrejana do 110 °C tokom 20 h. Dodatni Pd(II) acetat (217 mg, 0.97 mmol) i metil 2-bromoacetat (1.88 mL, 19.36 mmol) su dodati i reakciona mešavina je umešavana na 110 °C tokom drugih 20 h. Mešavina je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa DCM (100 ml), filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptan, 0-35%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (2.170 g, 35%) u obliku viskoznog ulja. LCMS: Rt= 1.26 min, m/z = 649.3 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0254] Faza 5: terc-butil (2S,3S,5R)-5-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-3-(2-hidroksietil)-2-(kvinolin-8-ilkarbamoil)piperidin-1-karboksilat. Rastvoru terc-butil (2S,3S,5R)-5-((benziloksi)(tercbutoksikarbonil)amino)-3-(2-metoksi-2-oksoetil)-2-(kvinolin-8-ilkarbamoil)piperidin-1-karboksilata (2.40 g, 3.70 mmol) u THF (60 mL) na 0 °C dodat je super-hidrid (1.0 M u THF, 18.50 mL, 18.5 mmol). Nakon umešavanja na 0 °C tokom 5 h, dodat je AcOH (50% aq, 10 ml) praćen zasićenim NH4Cl (30 mL) i EtOAc (150 mL). Slojevi su odvojeni i organski sloj je opran fiziološkim rastvorom (50 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni ostatak je prečišćen hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptan, 10-60%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (680 mg, 30%). LCMS: Rt= 1.16 min, m/z = 621.1 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0255] Faza 6: terc-butil (2S,3S,5R)-5-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-3-(2-((metilsulfoni)oksi)etil)-2-(kvinolin-8-i/karbamoil)pperidin-1-karboksilat. Rastvoru terc-butil (2S,3S,5R)-5-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-3-(2-hidroksietil)-2-(kvinolin-8-ilkarbamoil)piperidin-1-karboksilata (680 mg, 1.10 mmol) u dihlorometanu (20 mL) na 0 °C dodati su trietilamin (0.30 mL, 2.19 mmol) i metilsulfonil hlorid (0.17 mL, 2.19 mmol). Nakon umešavanja tokom 20 h na rt mešavina je razblažena vodom (20 mL) i EtOAc (100 mL) i umešavana je dodatnih 5 min, nakon čega su slojevi odvojeni. Organski sloj je opran sa NaH2PO4(1.0 M, 2x40 mL), fiziološkim rastvorom (30 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu, dajući nazivno jedinjenje (kvantitativni prinos) u
4
obliku meke čvrste materije LCMS: Rt= 1.22 min, m/z = 699.4 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0256] Faza 7: terc-butil (3R,4aR,8aS)-3-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-8-okso-7-(kvinolin-8-il)oktahidro-1,7-naftiridin-1(2H)-karboksilat. Rastvoru terc-butil (2S,3S,5R)-5-((benziloksi)(tercbutoksikarbonil)amino)-3-(2-((metilsulfonil)oksi)etil)-2-(kvinolin-8-ilkarbamoil)piperidin-1-karboksilata (690 mg, 0.99 mmol) u THF (16 mL) na 0 °C dodat je LDA (1.0 M u THF/heksan, 1.97 mL). Nakon umešavanja na 0 °C tokom 2.5 h, zagrejan je do rt i umešavan preko noći. Dodat je zasićeni rastvor NH4Cl (20 mL) i mešavina je ekstraktovana sa EtOAc (80 mL). Organski sloj je opran fiziološkim rastvorom (20 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptan, 30-80%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (680 mg, 45%) u obliku meke čvrste materije LCMS: Rt= 1.03 min, m/z = 603.4 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0257] Faza 8: terc-butil (3R,4aR,8aS)-3-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-8-oksooktahidro-1,7-naftiridin-1(2H)-karboksilat. Rastvor terc-butil (3R,4aR,8aS)-3-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-8-okso-7-(kvinolin-8-il)oktahidro-1,7-naftiridin-1(2H)-karboksilat (270 mg, 0.448 mmol) u suvom DCM (15 mL) na -78 °C je raspršen sa O3dok je ostajao plave boje, nakon čega je uklonjena linija raspršivanja. Nakon umešavanja na -78 °C tokom 45 min, plava boja je nestala i ponovo je raspršen sa O3dok je trajala plava boja. Nakon 15 min umešavanja, sistem je raspršen sa O2dok nije ostao bezbojan. Tom rastvoru dodat je dimetilsulfid (100 µL, 1.36 mmol). Nakon umešavanja na sobnoj temperaturi tokom 1 h, mešavina je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je ponovo rastvoren u THF (5 mL) i dodat je NH4OH (25% aq, 5 mL). Nakon umešavanja tokom 16 h, mešavina je razblažena sa EtOAc (50 mL) i organski sloj je opran vodom (20 ml), fiziološkim rastvorom (20 ml), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (EtOAc-Heptan, 70-100%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (96 mg, 45%) u obliku čvrste materije. LCMS: Rt= 1.00 min, m/z = 476.2 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0258] Faza 9: (3R,4aR,8aS)-3-((benziloksi)amino)oktahidro-1,7-naftiridin-8(2H)-on. Rastvoru terc-butil (3R,4aR,8aS)-3-((benziloksi)(terc-butoksikarbonil)amino)-8-oksooktahidro-1,7-naftiridin-1(2H)-karboksilata (120 mg, 0.252mmol) u DCM (3 mL) na 0 °C polako je dodat TFA (1.5 mL). Nakon 3 h na 0 °C zatim na rt tokom 1 h, koncentrovan je u vakuumu (temp kupatila <30 °C). Ostatak je sakupljen u DCM:EtOH (5:1, 30 mL) i dodat je Na2CO3(2 M, 10 mL). Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstraktovan sa DCM:EtOH (5:1, 2x30 mL). Kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 10-25%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (60 mg, 86%) u obliku čvrste materije. LCMS: Rt= 0.58 min, m/z = 276.1 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0259] Faza 10: (4R,5aR,9aS)-3-(benziloksi)heksahidro-1,4-metanopirido[3,4-d][1,3]diazepin-2,9(3H,6H)-dion. Rastvoru (3R,4aR,8aS)-3-((benziloksi)amino)oktahidro-1,7-naftiridin-8(2H)-ona (56 mg, 0.20 mmol) u ACN (21 mL) na 0°C pod N2dodat je DIPEA (140 µL, 0.81 mmol). Rastvor trifozgen (24 mg, 0.08 mmol) u ACN (3 mL) dodat je putem dozirne pumpe (0.1 mL/min). Nakon umešavanja na 0 °C tokom 6 h delimično je koncentrovan (∼10 mL) u vakuumu, razblažen sa DCM (40 mL), opran vodom (20 mL), fiziološkim rastvorom (20 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-5%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje (50 mg, 82%) u obliku beličaste čvrste materije. LCMS: Rt= 0.65 min, m/z = 302.0 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0260] Faza 11: (4R,5aR,9aS)-3-hidroksiheksahidro-1,4-metanopirido[3,4-d][1,3]diazepin-2,9(3H,6H)-dion. Suspenzija (4R,5aR,9aS)-3-(benziloksi)heksahidro-1 ,4-metanopirido[3,4-d][1,3]diazepin-2,9(3H,6H)-diona (50 mg, 0.17 mmol) i Pd-C (10% Degussa tip 101, 50% voda, 27 mg) u MeOH:DCM (3:1, 4 mL) je evakuisana i ispunjena H2. Nakon 2 h snažnog umešavanja, filtrirana je kroz čep celita, oprana sa MeOH, i koncentrovana u vakuumu. LCMS: Rt= 0.20 min, m/z = 212.0 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0261] Faza 12: Tetrabutilamonijum (4R,5aR,9aS)-2,9-dioksooktahidro-1,4-metanopirido[3,4-d][1,3]diazepin-3(2H)-il sulfat. Suspenziji neprečišćenog (4R,5aR,9aS)-3-hidroksiheksahidro-1,4-metanopirido[3,4-d][1,3]diazepin-2,9(3H,6H)-diona (35 mg, 0.17 mmol) u piridinu (3 ml) na 0 °C dodat je SO3·Py (132 mg, 0.83 mmol). Nakon snažnog umešavanje na rt tokom 20 h, suspenzija je filtrirana i čvrsta materija je oprana hladnim DCM (5 mL). Filtrat je koncentrovan u vakuumu (temp kupatila <30 °C) i neprečišćeni ostatak je rastvoren u NaH2PO4(1 M, 10 mL), nakon čega je dodat tetrabutilamonijumvodoniksulfat (84 mg, 0.25 mmol). Nakon 30 min ekstraktovan je sa CHCl3:IPA (4:1, 3x30 mL). Kombinovani organski slojevi osušeni su preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Neprečišćeni ostatak prečišćen je hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 5-20%) da bi se dobilo nazivno jedinjenje u obliku bele pene. LCMS: Rt= 0.15 min, m/z = 292.0 (M+1), Postupak 2m_kiseo.
[0262] Faza 13: Natrijum (4R,5aR,9aS)-2,9-dioksooktahidro-1,4-metanopirido[3,4-d][1,3]diazepin-3(2H)-il vodoniksulfat. DOWEX 50Wx8 oblik vodonika 200-400 promera je kondicioniran umešavanjem sa NaOH (2 N) tokom 2 h. Staklena kolona je napunjena smolom i oprana vodom (do pH ≈ 6) praćeno vodom:acetonom (1:1). Tetrabutilamonijum (4R,5aR,9aS)-2,9-dioksooktahidro-1,4-metanopirido[3,4-d][1,3]diazepin-3(2H)-il sulfat (228 mg, 0.408 mmol) u aceton:voda (1:1) je napunjen u, i propušten kroz kolone, eluirajući sa vodom (20 ml) zatim sa aceton:voda (1:4, 30 ml). Uzorak je liofiliziran da bi se dobilo nazivno jedinjenje (28 mg, 52%) u obliku bele čvrste materije. LCMS: Rt= 0.29 min, m/z = 291.8 (M+1) Postupak T3_3m_polarni;<1>H NMR (500 MHz, D2O) δ 4.31(m, 1H), 4.09 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 3.55 (td, J = 12.8, 4.3 Hz, 1H), 3.26-3.34 (m, 2H), 2.87 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 2.55-2.64 (m, 1H), 2.21-2.30 (m, 1H), 1.99-2.09 (m, 1H), 1.80-1.88 (m, 1 H) 1.72-1.79 (m, 1H).
Primer 8. Natrijum (4R,5aS,6R,8aS)-6-(metoksimetil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il vodoniksulfat
[0263] Faza 1: Metil (5R)-6-(benziloksi)-3-(1-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-metoksietil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilat (mešavina diastereoizomera).
[0264] Intermedijer C (1.10 g, 3.82 mmol), Boc-L-Ser(OMe)-OH (1.04 g, 4.58 mmol) i Ir[df(CF3)ppy2(dtbpy)]PF6(43 mg, 0.04 mmol) su rastvoreni u DMF (16 mL). Tom rastvoru dodat je fino samleven kalijumfosfat dibazni (0.62 g, 4.58 mmol) i dobijena suspenzija je umešavana i zračena tokom 12 dana sa Kessil H150-Blue lampom sa udaljenosti ≤2 cm. Nakon 3 i nakon 9 dana dodat je (ukupno 3 mol% katalizatora) Ir[df(CF3)ppy2(dtbpy)]PF6(43 mg, 0.04 mmol). Reakcionoj mešavini je dodata voda (15 mL) praćena zasićenim NaHCO3(aq, 15 mL), koja je zatim ekstraktovana sa TBME (3x60 mL).
Kombinovane organske faze su oprane fiziološkim rastvorom (10 mL), osušene preko Na2SO4i koncentrovane u vakuumu, čime je dobijeno nazivno jedinjenje (1.85 g) u obliku žutog ulja koje se sastoji od 4 diastereoizomera (odnos 39:16:11:34). LCMS: Rt= 1.02 min, 1.05 min, 1.08 min, 1.12 min sve sa m/z = 464 (M+1), LCMS_2 MIN_PRAĆENJE_REAKCIJE.
[0265] Faza 2: (4R,5aS,6R,8aS)-3-(benziloksi)-6-(metoksimetil)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(3H)-dion.
[0266] Rastvoru metil (5R)-6-(benziloksi)-3-(1-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-metoksietil)-7-okso-1,6-diazabiciklo[3.2.1]oktan-2-karboksilata (1.85 g, 4.0 mmol) u DCM (60 mL) na 0 °C dodat je TFA (15.4 mL, 200 mmol), ukapavanjem. Reakciona mešavina je umešana na rt tokom 1.5 h, zatim koncentrovana u vakuumu. Neprečišćeni ostatak je rastvoren u DCM (60 mL) zatim je dodat trietilamin (11.1 mL, 80 mmol), ukapavanjem. Reakciona mešavina je umešana na rt preko noći, nakon čega je koncentrovana da bi se dobilo crvenkasto ulje (6.8 g). Dodata je voda (20 mL) i mešavina je ekstraktovana sa TBME (3x80 mL). Kombinovane organske faze osušene su preko Na2SO4i koncentrovane u vakuumu da bi se dobilo žuto ulje (1.13 g). Vodena faza je zasićena sa NaCl (s) i dalje ekstraktovana sa DCM (3x80 mL). Kombinovane organske faze osušene su preko Na2SO4i koncentrovane u vakuumu da bi se dobio neprečišćen proizvod (0.95 g). Kombinovan neprečišćen proizvod je prečišćen HPLC hromatografijom (Sunfire-C18, 5um, 50x250mm, voda/ACN 0.1% TFA, 100 ml/min, 18-38% preko 21min, ukupno 35min) gde je pH frakcija podešena na 6.9 dodavanjem zasićenog NaHCO3(aq) i liofilizirana da bi se dobio svetao braon ostatak (0.59 g). Ovaj ostatak je rastvoren u ACN/vodi i prečišćen preko C18 kertridža (ACN-voda), nakon čega je liofilizirani materijal obezbedio nazivno jedinjenje (62 mg, 4.1% 3-faze). LCMS: Rt= 0.70 min, m/z = 332 (M+1), LCMS_2 MIN_PRAĆENJE_REAKCIJE.
[0267] Faza 3: (4R,5aS,6R,8aS)-3-hidroksi-6-(metoksimetil)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion. (4R,5aS,6R,8aS)-3-(benziloksi)-6-(metoksimetil)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-dion (59 mg, 0.178 mmol) je rastvoren u MeOH:DCM (1:1, 1.78 mL). Mešavina je prečišćena azotom, dodat je Pd-C (10 % Degussa tip,101, 50% voda, 37.9 mg, 0.018 mmol), zatim je ostavljen pod atmosferom H2tokom 90 min. Mešavina je filtrirana kroz celit, eluirajući sa DCM:MeOH (1:1) i koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo nazivno jedinjenje (49 mg, kvantitativni) u obliku čvrste materije. LC/MS: Rt= 0.12 min; m/z = 242.0 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0268] Faza 4: tetrabutilamonijum (4R,5aS,6R,8aS)-6-(metoksimetil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat. Rastvoru (4R,5aS,6R,8aS)-3-hidroksi-6-(metoksimetil)heksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-2,8(8aH)-diona (42 mg, 0.174 mmol) u piridinu (1.85 mL) dodat je SO3·piridin (139 mg, 0.870 mmol). Mešavina je umešavana tokom 18 h, zatim filtrirana kroz membranski filter i koncentrovana u vakuumu (temp kupatila < 30°C). Neprečišćeni ostatak je rastvoren u zasićenom NaH2PO4i opran sa EtOAc. Slojevi su odvojeni i vodenoj fazi je dodat tetrabutilamonijumvodoniksulfat (89 mg, 0.261 mmol). Mešavina je umešavana tokom 30 minuta, zatim ekstraktovana sa DCM, osušena preko natrijumsulfata, i koncentrovana u vakuumu. Neprečišćeni ostatak je prečišćen hromatografijom na gelu silicijumdioksida (MeOH-DCM, 0-30%) dajući nazivno jedinjenje (57 mg, 58%) u obliku bezbojnog filma. LC/MS: Rt= 0.12min; m/z = 322.0 (M+1) Postupak 2m_kiseo.
[0269] Faza 5: Natrijum (4R,5aS,6R,8aS)-6-(metoksimetil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-ilvodoniksulfat. DOWEX 50Wx8 oblik vodonika 200-400 promera je umešan sa NaOH (2 N) tokom 3 h zatim je napunjen u kolone i opran vodom dok pH eluanta nije bila ∼6, praćeno pranjem sa voda-aceton (1:1). Tetrabutilamonijum (4R,5aS,6R,8aS)-6-(metoksimetil)-2,8-dioksoheksahidro-2H-1,4-metanopirolo[3,4-d][1,3]diazepin-3(4H)-il sulfat (57 mg, 0.101 mmol) je rastvoren u aceton-voda (1:1) i pušten je kroz kolone, eluirajući sa 1:1 aceton/voda. Frakcije su koncentrovane u vakuumu i liofilizirane da bi se dobio željeni proizvod (27 mg, 70%) u obliku bezbojnog praška. LC/MS: Rt= 0.41 min; m/z = 321.9 (M+1) Postupak T3_3m_polarni;<1>H NMR (500MHz, D2O) δ = 4.30 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.24 (br s, 1H), 3.60-3.56 (m, 1H), 3.56-3.45 (m, 3H), 3.39 (s, 3H), 3.38-3.34 (m, 1H), 2.97 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 2.67 (q, J=8.4 Hz,1H), 2.64-2.56 (m, 1H), 1.72 (dd, J = 14.7, 8.4 Hz, 1H).
Ispitivanje osetljivosti
[0270] MIC su određene postupkom mikrorazblaživanja bujona u skladu sa smernicama Clinical and Laboratories Institute (CLSI). Ukratko, sveže bakterijske kulture koje su stajale preko noći su suspendovane u sterilnom slanom rastvoru, i podešene na 0.5 McFarland standard za turbidnost.
Bakterijske suspenzije su zatim razblažene u Mueller-Hinton bujonu (MHB II; BBL) podešenom pomoću katjona da bi se dobio finalni inokulum od približno 5x10<5>jedinica koje formiraju kolonije (CFU)/mL. Glavna ploča antibiotika je pripremljena u koncentraciji koja je ekvivalentna koncentraciji koja je sto puta veća od najveće željene konačne koncentracije u 100% dimetil sulfoksidu (DMSO). Glavna ploča antibiotika je zatim razblažena serijom dvostrukog razblaženja sa višekanalnom pipetom. Jedinjenja dobijena nakon serije razblaženja su razblažena u odnosu 1:10 sterilnom vodom ili rastvorom inhibitora beta-laktamaze pripremljenim u koncentraciji koja je ekvivalentna koncentraciji koja je jedanaest puta veća od željene konačne koncentracije u dejonizovanoj vodi koja daje 10% DMSO konačne koncentracije. Zapremina od 10 µL serija razblaženja leka je transferovana u ploče za ispitivanje sa 96 bunarčića. Ploče za ispitivanje su inokulisane sa 90 µL bakterijskih suspenzija i inkubirane na 35°C tokom 20 sati. Ploče za ispitivanje su očitane upotrebom čitača mikrotiter ploča (Molecular Devices) na 600nm kao i vizuelnim praćenjem ogledalom za očitavanje. Najniža koncentracija jedinjenja koja je sprečavala vidljivi rast je zabeležena kao MIC. Učinak ispitivanja je praćen ispitivanjem aztreonama naspram sojeva iz laboratorije za kontrolu kvaliteta u skladu sa CLSI smernicama.
[0271] Sledeći inhibitori beta-laktamaze i beta-laktamski antibiotici su navedeni u tabelama koje slede: Inhibitor beta-laktamaze 1: Avibaktam
Inhibitor beta-laktamaze 2: Relebaktam
Inhibitor beta-laktamaze 3: Tazobaktam
Beta-Laktam 2: Ceftazidim
1
Beta-Laktam 4: Piperacilin
Sinergija sa Beta-laktamima kroz inhibiciju beta-laktamaze
[0272] Sinergija ili potencijacija beta-laktamskih antibiotika kroz inhibiciju ∟-laktamaza je ocenjena u odnosu na izogeni panel sojeva E. coli, pri čemu je svaki eksprimirao jedinstvenu beta-laktamazu, u odnosu na kliničke sojeve.
[0273] Konstrukcija izogenih sojeva E. coli NB27273-CDY0026 (matični), NB27273-CDY0033 (KPC-2), NB27273-CDY0030 (SHV-12), NB27273-CDY0034 (CTX-M-15) i NB27273-CDY0036 (AmpC).
[0274] Soj NB27273 (BW25113 pspB::Km<r>) je dobijen od Keio kolekcije umetanja transpozona. Soj ima pspB gen zamenjen markerom otpornosti na kanamicin (BW25113 pspB::Km<r>). Ovaj soj je izlečen od transpozona u pspB putem FLP rekombinaze upotrebom objavljene metodologije. Dobijeni soj, BW25113 pspB, je korišćen kao domaćin za mnoštva kopija vektora koji eksprimiraju ključne betalaktamaze. Plazmidi mnoštva kopija koji usmeravaju konstitutivnu ekspresiju beta-laktamaza su osnovani na sledeći način: sintetički, geni optimizovani kodonom koji kodiraju E. coli KPC-2, SHV-12 i CTX-M-15 beta-laktamaze su napravljeni putem DNA2.0 (Palo Alto, CA). Svaki od sintetičkih fragmenata je dizajniran da sadrži Notl i Ncol restriktivna mesta na njihovim terminalima, pri čemu se dopušta ligacija u Notl/Ncol razloženom pET28a(+) derivatu za ekspresiju proteina. Umetanja u ovim vektorima su služila kao DNK templat za amplifikaciju PCR gena koji kodiraju KPC-2, SHV-12 i CTX-M-15 upotrebom parova prajmera E225 (tcgcCTCGAGgcgactgcgctgacgaatttgg) (SEQ ID NO:1) i E202 (aatcGAATTCttactgaccattaacgcccaagc) (SEQ ID NO:2) i E227 (tcgcCTCGAGgcgagcccgcaaccgctgga) (SEQ ID NO:3) i E204 (aatcGAATTCttaacgctgccagtgctcaatc) (SEQ ID NO:4) i E226 (cgctCTCGAGagcgtcccgctgtacgcacaaacg) (SEQ ID NO:5) i E203, (aatcGAATTCttacagaccgtcggtgacaatc) (SEQ
2
ID NO:6), redom. Nukleotidne sekvence optimizovane kodonom i informacije o prepoznavanju relevantnog prajmera su prikazane ispod:
KPC-2
E225 TCGCCTCGAGGCGACTGCGCTGACGAATTTGG (SEQ ID NO:8)
E202 AATCGAATTCTTACTGACCATTAACGCCCAAGC (SEQ ID NO:9)
REV. COMP. E202 GCTTGGGCGTTAATGGTCAGTAAGAATTCGATT (SEQ ID NO:10) PODVUČENO = DNK KOJA KODIRA BL
SHV-12
E227 TCGCCTCGAGGCGAGCCCGCAACCGCTGGA (SEQ ID NO:12)
E204 AATCGAATTCTTAACGCTGCCAGTGCTCAATC (SEQ ID NO:13)
REV. COMP. E204 GATTGAGCACTGGCAGCGTTAAGAATTCGATT (SEQ ID NO:14)
CTX-M-15
E226 cgctCTCGAGagcgtcccgctgtacgcacaaacg (SEQ ID NO:15)
E203, aatcGAATTCttacagaccgtcggtgacaatc (SEQ ID NO:16)
[0275] Gen koji kodira AmpC je PCR amplifikovan od genoma soja P. aeruginosa PAO1 (NB52019) (GenBank ID U5R279) upotrebom para prajmera E252 (gccCTCGAGggcgaggccccggcggatcgc) (SEQ ID NO: 17) i E253 (tgaGAATTCtcagcgcttcagcggcacct) (SEQ ID NO: 18).
[0276] PCR proizvodi su zatim razloženi sa Xhol i EcoRI i vezani u slično razložen plazmid pAH63-pstS(BlaP). Plazmid pAH63-pstS(BlaP) je derivat plazmida pAH63 (J Bacteriol:183(21): 6384-6393) napravljen kloniranjem TEM-1 (bla) promotera i signalnog peptida koji kodira region od plazmida pBAD (J Bacteriol.1995 Jul.177(14):4121-30) u plazmid pAH63. Ovaj fragment je PCR pojačan od pBAD upotrebom para prajmera E192 (ttcaCTGCAGtgaacgttgcgaagcaacggC) (SEQ ID NO:19) i E194 (TCGAggatcctcgagagcaaaaacaggaaggcaaaatgccg) (SEQ ID NO:20), razložen sa Pstl i BamHI i umetnut u slično razložen plazmid pAH63. Prema tome, ekspresija beta-laktamaza od konstrukata baziranih na pAH63-pstS(BlaP) je konstitutivna i signalna sekvenca je obezbeđena da usmeri ove proteine na
4
periplazam. Vektori bazirani na plazmidu pAH63 se koriste za umetanje u genom u jednoj kopiji, međutim, radi obezbeđivanja viših nivoa ekspresije da bi se obezbedila osetljivija detekcija osetljivosti jedinjenja na eksprimirane beta-laktamaze, inserti za eksprimiranje koji su sadržani u ovim vektorima su pomereni u replikativno mnoštvo kopija vektora pBAD-Kan (J Bacteriol.1995 Jul.177(14):4121-30). Da bi se ovo postiglo, inserti koji obuhvataju gene beta-laktamaze, sa pratećim TEM promoterom i signalne sekvence, su PCR amplifikovani od njihovih odgovarajućih vektora upotrebom prajmera E268 (ccgTCTAGAcggatggcctttttgcgtttc) (SEQ ID NO:21) i E202 (aatcGAATTCttactgaccattaacgcccaagc) (SEQ ID NO:22) za KPC2 konstrukt, E204 (aatcGAATTCttaacgctgccagtgctcaatc) (SEQ ID NO:23) za SHV-12 konstrukt i E203 (aatcGAATTCttacagaccgtcggtgacaatc) (SEQ ID NO:24) za CTX-M-15 konstrukt. Ovi fragmenti su zatim razloženi sa Xbal i EcoRI, i svaki je umetnut u pBAD18-kan koji je razložen istim enzimima kako bi se stvorilo mnoštvo kopija vektora koji eksprimiraju KPC-2, SHV-12 i CTX-M-15, redom. Ovi vektori su transformisani u BW25113 pspB da bi se stvorili sojevi NB27273-CDY0033 (koji eksprimira KPC-2), NB27273-CDY0030 (koji eksprimira SHV-12), NB27273-CDY0034 (koji eksprimira CTX-M-15) i NB27273-CDY0036 (koji eksprimira AmpC). pBAD18-kan vektor takođe sadrži TEM region promotera i signalnu sekvencu, (ali mu nedostaju bilo kakvi intaktni geni beta-laktamaze) i transformisan je u BW25113 pspB upotrebom standardnih protokola da bi se stvorio kontrolni soj NB27273-CDY0026. Ekspresija beta-laktamaza je potvrđena verifikovanjem smanjene osetljivosti na primer ispitivanja antibiotika koji su poznati supstrati KPC-2, SHV-12, CTX-M-15 ili AmpC.
[0277] Konstrukcija izogenih sojeva E. coli, NB27273-CDY0105 (OXA-18) i NB27273-CDY0048 (TEM-10). Vektor plazmida za ekspresiju OXA-18, je konstruisan na sledeći način: geni koji kodiraju GIM-1 (GenBank ID Q704V1) i (OXA-18 (GenBank ID 007293) su sintetizovani putem Life Technologies sa 5'-tgccttcctgtttttgctctcgag i gaattcgctagcccaaaaaaacgg-3' (SEQ ID NO:25) flankirajućim sekvencama. GIM-1 koji kodira fragment je razložen sa Xhol i EcoRI i umetnut u prethodno opisan konstrukt KPC-2 ekspresije sa kojeg je KPC-2 koji kodira gen uklonjen razlaganjem sa XhoI i EcoRI. Konfirmatorno nukleotidno sekvencioniranje je otkrilo XhoI mesto u kičmi vektora koje je zatim uklonjeno mutagenezom koja je usmerena na mesto upotrebom para prajmera E396 (cgtcttgctccaggccgcgattaaattcc) (SEQ ID NO:26) i E397 (tcgcggcctggagcaagacgtttc) (SEQ ID NO:27). Gen koji kodira OXA-18 je zatim razložen sa XhoI i EcoRI i insertovan u ovaj vektor, sa kojeg je gen za GIM-1 uklonjen sa XhoI i EcoRI.
[0278] Da bi se generisao vektor koji eksprimira TEM-10, plazmid pBAD18 (J Bacteriol.1995 Jul.
177(14):4121-30), koji sadrži gen koji kodira TEM-1, je korišćen kao templat za PCR bazirano mesto usmereno na mutagenezu za konvertovanje gena koji kodira TEM-1 u jedan koji kodira TEM-10. Od ovog templata DNK, generisana su tri fragmenta putem PCR upotrebom sledećih parova prajmera;
B124 (tcacgtagcgatagcggag) (SEQ ID NO:28) i E387 (tggagccggtaagcgtgggtctcgcggt) (SEQ ID NO:28) da bi se generisao fragment A koji kodira E237K supstituciju
E389 (cgcgagacccacgcttaccggctccaga) (SEQ ID NO:29) i E391 (ctcgccttgatagttgggaaccgga) (SEQ ID NO:30) da bi se generisao fragment B koji kodira E237K i R162S supstitucije
E393 (cggttcccaactatcaaggcgagt) (SEQ ID NO:31) i E289 (gacattgccgtcactgcgtct) SEQ ID NO:32) da bi se generisao fragment C, takođe se uvodi R162 supstitucija.
[0279] Fragmenti A, B i C su zatim korišćeni kao templat da bi se generisao potpun gen koji kodira TEM-10 kao što sledi:
Fragmenti A i B su korišćeni kao templat za PCR upotrebom prajmera B124 (tcacgtagcgatagcggag) (SEQ ID NO:33) i E390 (gtaactcgccttgatagttgggaaccggagctgaatgaagc) (SEQ ID NO:34) da bi se kombinovali fragmenti A i B u fragment D
Fragmenti B i C su korišćeni kao templat za PCR upotrebom prajmera E290 (gcgggaccaaagccatgaca) (SEQ ID NO:35) i E388 (accgcgagacccacgcttaccggctccagatttatcagcaataaacc) (SEQ ID NO:36) da bi se kombinovali fragmenti B i C u fragment E
[0280] Finalno, fragmenti D i E su korišćeni kao templat za PCR upotrebom prajmera E395 (gtaaGAATTCttaccaatgcttaatcagtgaggc) (SEQ ID NO:37) E268 (ccgTCTAGAcggatggcctttttgcgtttc) (SEQ ID NO:38) da bi se kombinovali fragmenti D i E u intaktni TEM-10 kodirajući proizvod. Ovaj fragment je zatim razložen sa Xbal i EcoRI i umetnut u pBAD-kan koji je takođe isečen sa istim enzimima.
[0281] Ovi konačni vektori za ekspresiju OXA-18 i TEM-10 su transformisani u BW25113 pspB kako bi se generisali sojevi NB27273-CDY0105 (koji eksprimira OXA-18) i NB27273-CDY0048 (koji eksprimira TEM-10). Ekspresija beta-laktamaze je potvrđena verifikovanjem smanjene osetljivosti na primer ispitivanja antibiotika koji su poznati supstrati OXA-18 ili TEM-10.
Tabela A: Minimalne inhibitorne koncentracije (MIC), u µg/mL odabranih BLI-a
[0282] Tabela 1 iznad pokazuje da dok neki inhibitori beta-laktamaze kao što je avibaktam ispoljavaju direktno antibakterijsko dejstvo, jedinjenja formule (A) pokazuju malo direktne aktivnosti.
[0283] Sledeći podaci pokazuju da efekat potencijacije ili sinergistička aktivnost jedinjenja ovog pronalaska, kako je ilustrovano jedinjenjem iz primera 1, kada se koristi u kombinaciji sa raznim betalaktamskim antibioticima. Pošto jedinjenje iz primera 1 ne pokazuje mnogo direktne aktivnosti antibiotika (videti tabelu 1), sinergija ili potencijacija je ovde definisana kao četvorostruko veća redukcija kod MIC beta-laktamskog antibiotika koju prouzrokuje prisustvo jedinjenja formule (A), u poređenju sa samim beta-laktamskim antibiotikom. Poželjno, kombinacije ovog pronalaska pokazuju najmanje 8-struku redukciju kod MIC kada se uporede sa samim beta-laktamskim antibiotikom.
Potencijacija aktivnosti (MIC u µg/mL) aztreonama inhibitorima beta-laktamaze kod izogenskih sojeva E.
coli koji eksprimiraju pojedinačne beta-laktamaze.
Potencijacija aktivnosti (MIC u µg/mL) ceftazidima inhibitorima beta-laktamaze kod izogenskih sojeva E.
coli koji eksprimiraju pojedinačne beta-laktamaze.
Potencijacija aktivnosti (MIC u µg/mL) meropenema inhibitorima beta-laktamaze kod izogenskih sojeva E. coli koji eksprimiraju pojedinačne beta-laktamaze.
Potencijacija aktivnosti (MIC u µg/mL) piperacilina inhibitorima beta-laktamaze kod izogenskih sojeva E.
coli koji eksprimiraju pojedinačne beta-laktamaze.
Piperacilin E.coli (KPC- E.coli (TEM- E.coli (SHV- E.coli (CTX- E.coli (AmpC) E.coli (OXA-
Potencijacija aktivnosti (µg/mL) Beta -Laktama 5 inhibitorima beta-laktamaze kod izogenskih sojeva E.
coli koji eksprimiraju pojedinačne beta-laktamaze.
Potencijacija aktivnosti (µg/mL) aztreonama inhibitorima beta-laktamaze kod kliničkih izolata otpornih na beta-laktam.
Potencijacija aktivnosti (µg/mL) Piperacilina inhibitorima beta-laktamaze kod kliničkih izolata otpornih na beta-laktam.

Claims (20)

  1. [0284] Ovi podaci pokazuju da je potencijacija jedinjenjima ovog pronalaska slična ili je superiornija u odnosu na potencijaciju nekih inhibitora beta-laktamaze koji se koriste u kliničkoj praksi kada se koriste u kombinaciji sa komercijalnim beta-laktamskim antibioticima za lečenje infekcija uzrokovanih bakterijama koje su otporne na neke poznate beta-laktamske antibiotike. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (A):
    u kojoj p je 1 ili 2; R<1>i R<2>su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od halo, CN, -OR, okso, i -NRR'; Z je NR<3>ili N-OR<3>; R<3>je nezavisno odabran pri svakom pojavljivanju od H, Cy, i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od Cy, halo, CN, -OR, i -NRR'; Cy je C3-C6cikloalkilni prsten ili 4-6 člani heterociklični prsten koji sadrži jedan ili dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članovi prstena, a Cy je opciono supstituisan sa do tri grupe odabrane od okso, halo, C1-C2alkila, CN, -OR, i -NRR'; a R i R' su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2, ili R i R' uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu da obrazuju prsten odabran iz grupe koju čine piperidin, morfolin, pirolidin, i azetidin, pri čemu je taj prsten opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C2alkila, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2; ili njegova so ili cviterjonski oblik.
  2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je jedinjenje jedne od sledećih formula:
    ili njegova so ili cviterjonski oblik.
  3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je jedinjenje formule (I):
    u kojoj: R<1>i R<2>su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od halo, CN, -OR, okso, i -NRR'; Z je NR<3>ili N-OR<3>; R<3>je nezavisno odabran pri svakom pojavljivanju od H, Cy, i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od Cy, halo, CN, -OR, i -NRR'; Cy je C3-C6cikloalkilni prsten, ili 4-6 člani heterociklični prsten koji sadrži jedan ili dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članovi prstena, a Cy je opciono supstituisan sa do tri grupe odabrane od okso, halo, C1-C2alkila, CN, -OR, i -NRR'; i R i R' su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2, ili R i R' uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu da obrazuju prsten odabran iz grupe koju čine piperidin, morfolin, pirolidin, i azetidin, pri čemu je taj prsten opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C2alkila, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2; Y je katjonska grupa; n je 0 ili 1; i kada n predstavlja 0, jedinjenje formule I je u cviterjonskom obliku.
  4. 4. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili zahtevu 3, gde Z je NR<3>, a R<3>je H ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa -OR ili -NRR', ili njegova so ili cviterjonski oblik, i gde R<3>naročito predstavlja (i) C1-C2alkil opciono supstituisan sa -OR ili -NRR', ili njegovu so ili cviterjonski oblik, ili (ii) H, ili njegovu so ili cviterjonski oblik.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-3, gde R<1>i R<2>oba predstavljaju H, ili njegovu so ili cviterjonski oblik.
  6. 6. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 3, koje ima strukturu:
    gde X je -OR ili -NRR'; kao njegova so ili cviterjonski oblik.
  7. 7. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 3, koje je odabrano od:
    i njihova so ili cviterjonski oblici.
  8. 8. Jedinjenje prema jednom od zahteva 1-3, gde n je 1, a Y je odabran iz grupe koju čine natrijum, kalijum, amonijum, kalcijum, magnezijum, železo, srebro, cink, i bakar, naročito od natrijuma.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-3, koje je u obliku farmaceutski prihvatljive soli ili cviterjonskom obliku.
  10. 10. Jedinjenje formule (VI):
    u kojoj: R<1>i R<2>su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe odabrane od halo, CN, -OR, okso, i -NRR'; Z je NR<3>ili N-OR<3>; R<3>je nezavisno odabran pri svakom pojavljivanju od H, Cy, i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa do tri grupe lani heterociklični prsten koji sadrži jedan ili dva heteroatoma odabrana od N, O i S kao članovi prstena, a Cy je opciono supstituisan sa do tri grupe odabrane od okso, halo, C1-C2alkila, CN, -OR, i -NRR'; a R i R' su nezavisno odabrani od H i C1-C4alkila opciono supstituisanog sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C2alkila, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2, ili R i R' uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani mogu da obrazuju prsten odabran iz grupe koju čine piperidin, morfolin, pirolidin, i azetidin, pri čemu je taj prsten opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C2alkila, -OH, -CN, -O-(C1-C4alkila), okso, -NH2, -NH(C1-C4alkila), i -N(C1-C4alkila)2; A je H ili -CH2-Ph, gde Ph predstavlja fenil opciono supstituisan sa jednom ili dve grupe odabrane od halo, C1-C4alkila, C1-C4alkoksi; ili njegova so.
  11. 11. Jedinjenje formule (VII):
  12. 12. Jedinjenje prema zahtevu 11 u kristalnom obliku, koje naročito pokazuje endoterm na diferencijalnoj skenirajućoj kalorimetriji između 283 °C i 350 °C i koje je opciono naznačeno time, što ima XRPD pikove na uglovima difrakcije (2Teta) od 8.3 i 16.6 stepeni, opciono dalje naznačeno time, što ima jedan ili više dodatnih XRPD pikova na uglovima difrakcije (2Teta) od 25.1 ili 31.3 stepeni, opciono dalje naznačeno time, što ima jedan ili više dodatnih XRPD pikova na uglovima difrakcije (2Teta) od 27.4 ili 28.7 stepeni i opciono dalje naznačeno time, što ima dodatne XRPD pikove na uglovima difrakcije (2Teta) od 19.5 stepeni ili 21.7 stepeni.
  13. 13. Postupak za pripremu jedinjenja formule (I),
    prema zahtevu 3; pri čemu taj postupak obuhvata dovođenje u kontakt jedinjenja formule (III)
    u kojem su Z, R<1>i R<2>i R<3>kako su definisani u zahtevu 3, naročito u kojem Z je NR<3>, a R<3>je H ili C1-C2alkil opciono supstituisan sa -OR ili -NRR', sa agensom za sulfonilaciju u prisustvu baze.
  14. 14. Postupak prema zahtevu 13, gde jedinjenje formule (I) ima formulu
    i u kojoj R<3>naročito predstavlja H.
  15. 15. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 12 i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
  16. 16. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 12 za upotrebu u terapiji.
  17. 17. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-12 za upotrebu u lečenju bakterijske infekcije, naročito u lečenju gram-negativne bakterijske infekcije, određenije u lečenju gram-negativne bakterijske infekcije prouzrokovane vrstama Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Moraxella, Providencia, Clostridium, Pseudomonas, Proteus, Salmonella, Serratia, Acinetobacter, Bacteroides, Prevotella, Campylobacter, Neisseria, Enterococcus ili Stenotrophomonas.
  18. 18. Farmaceutska kombinacija, koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 12 i betalaktamski antibiotik.
  19. 19. Farmaceutska kombinacija prema zahtevu 18 za upotrebu u lečenju gram-negativne bakterijske infekcije, gde se jedinjenje formule (A) naročito može davati u nekoj količini efektivnoj da potencira antibakterijsko dejstvo beta-laktamskog antibiotika.
  20. 20. Farmaceutska kombinacija prema zahtevu 18 za upotrebu u lečenju bakterijske infekcije koja je nozokomijalna pneumonija, intraabdominalna infekcija, ili infekcija urinarnog trakta prouzrokovane vrstama Enterobacteriaceae ili Pseudomonas.
RS20200740A 2016-09-28 2017-09-28 Inhibitori beta-laktamaze RS60483B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662401022P 2016-09-28 2016-09-28
PCT/IB2017/055973 WO2018060926A1 (en) 2016-09-28 2017-09-28 Beta-lactamase inhibitors
EP17791737.4A EP3519419B1 (en) 2016-09-28 2017-09-28 Beta-lactamase inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS60483B1 true RS60483B1 (sr) 2020-08-31

Family

ID=60191429

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20200740A RS60483B1 (sr) 2016-09-28 2017-09-28 Inhibitori beta-laktamaze

Country Status (42)

Country Link
US (2) US10065957B2 (sr)
EP (2) EP3519419B1 (sr)
JP (1) JP7094275B2 (sr)
KR (1) KR20190058492A (sr)
CN (1) CN109843894B (sr)
AR (1) AR109737A1 (sr)
AU (1) AU2017335405B2 (sr)
BR (1) BR112019002195A2 (sr)
CA (1) CA3030373A1 (sr)
CL (1) CL2019000232A1 (sr)
CO (1) CO2019001995A2 (sr)
CR (1) CR20190104A (sr)
CU (1) CU24562B1 (sr)
CY (1) CY1123062T1 (sr)
DK (1) DK3519419T3 (sr)
EA (1) EA036675B1 (sr)
EC (1) ECSP19016602A (sr)
ES (2) ES2801874T3 (sr)
HR (1) HRP20200986T1 (sr)
HU (1) HUE049788T2 (sr)
IL (1) IL265626B (sr)
JO (1) JOP20190061A1 (sr)
LT (1) LT3519419T (sr)
MA (2) MA50427A (sr)
MD (1) MD3519419T2 (sr)
ME (1) ME03735B (sr)
MX (1) MX380076B (sr)
MY (1) MY189632A (sr)
PE (1) PE20190459A1 (sr)
PH (1) PH12019500331A1 (sr)
PL (1) PL3519419T3 (sr)
PT (1) PT3519419T (sr)
RS (1) RS60483B1 (sr)
SG (1) SG11201900394SA (sr)
SI (1) SI3519419T1 (sr)
SM (1) SMT202000343T1 (sr)
TN (1) TN2019000020A1 (sr)
TW (1) TWI746652B (sr)
UA (1) UA123833C2 (sr)
UY (1) UY37424A (sr)
WO (1) WO2018060926A1 (sr)
ZA (1) ZA201900137B (sr)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JOP20190061A1 (ar) 2016-09-28 2019-03-26 Novartis Ag مثبطات بيتا-لاكتاماز
EP3854786B1 (en) 2018-09-21 2026-02-18 UBE Corporation Method for producing amino acid derivatives
AU2021473165B2 (en) * 2021-11-09 2025-05-22 Guangzhou HC New Drug Research Co., Ltd. PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING β-LACTAM COMPOUND AND USE THEREOF
CN115368261A (zh) * 2022-07-29 2022-11-22 武汉理工大学 N-烯丙基-n-苄基-2-(苄基氨基)乙酰胺的合成方法

Family Cites Families (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0090505B1 (en) 1982-03-03 1990-08-08 Genentech, Inc. Human antithrombin iii, dna sequences therefor, expression vehicles and cloning vectors containing such sequences and cell cultures transformed thereby, a process for expressing human antithrombin iii, and pharmaceutical compositions comprising it
CA2143519A1 (en) * 1994-03-11 1995-09-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Beta-lactams
ES2308787T3 (es) 1996-08-16 2008-12-01 Schering Corporation Antigenos de superficie de celular de mamiferos; reactivos relacionados.
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
JP2001520039A (ja) 1997-10-21 2001-10-30 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド ヒト腫瘍壊死因子レセプター様タンパク質、ｔｒ１１，ｔｒ１１ｓｖ１およびｔｒ１１ｓｖ２
AU2591599A (en) 1998-02-09 1999-08-23 Genentech Inc. Novel tumor necrosis factor receptor homolog and nucleic acids encoding the same
AU6085700A (en) 1999-07-12 2001-01-30 Genentech Inc. Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovascularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs
FR2812635B1 (fr) 2000-08-01 2002-10-11 Aventis Pharma Sa Nouveaux composes heterocycliques, preparation et utilisation comme medicaments notamment comme anti- bacteriens
FR2825705B1 (fr) 2001-06-08 2005-05-20 Aventis Pharma Sa Nouveaux composes heterocycliques, leur preparation et leur utilisation comme medicaments, notamment comme anti-bacteriens
FR2835186B1 (fr) 2002-01-28 2006-10-20 Aventis Pharma Sa Nouveaux composes heterocycliques, actifs comme inhibiteurs de beta-lactamases
WO2004078163A2 (en) 2003-02-28 2004-09-16 Transform Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical co-crystal compositions of drugs such as carbamazepine, celecoxib, olanzapine, itraconazole, topiramate, modafinil, 5-fluorouracil, hydrochlorothiazide, acetaminophen, aspirin, flurbiprofen, phenytoin and ibuprofen
US7439253B2 (en) 2002-12-06 2008-10-21 Novexel Heterocyclic compounds, their preparation and their use as medicaments, in particular as antibacterials and beta-lactamase inhibitors
FR2848210B1 (fr) 2002-12-06 2007-10-19 Aventis Pharma Sa Nouveaux composes heterocycliques, leur preparation et leur utilisation comme medicaments, notamment comme anti-bacteriens et inhibiteurs de beta-lactamases
CN1753912B (zh) 2002-12-23 2011-11-02 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
JP4638876B2 (ja) 2003-05-23 2011-02-23 ワイス Ｇｉｔｒリガンド及びｇｉｔｒリガンド関連分子及び抗体及びその使用
WO2005007190A1 (en) 2003-07-11 2005-01-27 Schering Corporation Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer
EP1692318A4 (en) 2003-12-02 2008-04-02 Genzyme Corp COMPOSITIONS AND METHODS FOR DIAGNOSIS AND TREATMENT OF LUNG CANCER
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
EP1765402A2 (en) 2004-06-04 2007-03-28 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
AU2006230099B2 (en) 2005-03-25 2012-04-19 Gitr, Inc. GITR binding molecules and uses therefor
RU2494107C2 (ru) 2005-05-09 2013-09-27 Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами
CN104356236B (zh) 2005-07-01 2020-07-03 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
WO2007133822A1 (en) 2006-01-19 2007-11-22 Genzyme Corporation Gitr antibodies for the treatment of cancer
EP2069347A2 (en) 2006-09-27 2009-06-17 Merck & Co., Inc. Novel inhibitors of beta-lactamase
HRP20131167T1 (hr) 2007-06-18 2014-01-03 Merck Sharp & Dohme B.V. Antitijela za humani receptor programirane smrti pd-1
ES2776406T3 (es) 2007-07-12 2020-07-30 Gitr Inc Terapias de combinación que emplean moléculas de enlazamiento a GITR
WO2009091856A2 (en) * 2008-01-18 2009-07-23 Merck & Co., Inc. Beta-lactamase inhibitors
PT2242773T (pt) 2008-02-11 2017-09-15 Cure Tech Ltd Anticorpos monoclonais para o tratamento de tumores
WO2009114335A2 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Merck & Co., Inc. Pd-1 binding proteins
NZ590667A (en) 2008-07-02 2013-01-25 Emergent Product Dev Seattle Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
CN102203132A (zh) 2008-08-25 2011-09-28 安普利穆尼股份有限公司 Pd-1拮抗剂的组合物和使用方法
WO2010098788A2 (en) 2008-08-25 2010-09-02 Amplimmune, Inc. Pd-i antagonists and methods for treating infectious disease
JPWO2010030002A1 (ja) 2008-09-12 2012-02-02 国立大学法人三重大学 外来性ｇｉｔｒリガンド発現細胞
FR2936951B1 (fr) 2008-10-10 2010-12-03 Novexel Nouvelles combinaisons de composes heterocycliques azotes antibacteriens avec d'autres composes antibacteriens et leur utilisation comme medicaments
AU2009333580B2 (en) 2008-12-09 2016-07-07 Genentech, Inc. Anti-PD-L1 antibodies and their use to enhance T-cell function
WO2010089411A2 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Universite De La Mediterranee Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
US20120053350A1 (en) 2009-04-30 2012-03-01 Ian Mangion Preparation of alkyl esters of n-protected oxo-azacycloalkylcarboxylic acids
EP2473531A4 (en) 2009-09-03 2013-05-01 Merck Sharp & Dohme Anti-gitr antibodies
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
WO2011066342A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Amplimmune, Inc. Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
CN102958942A (zh) 2009-12-29 2013-03-06 新兴产品开发西雅图有限公司 异二聚体结合蛋白及其应用
CA2845108C (en) * 2011-08-30 2015-06-16 Wockhardt Limited 1,6-diazabicyclo[3,2,1]octan-7-one derivatives and their use in the treatment of bacterial infections
CA2846107C (en) 2011-09-13 2016-06-21 Wockhardt Limited Nitrogen containing compounds and their use
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
HRP20201595T1 (hr) 2011-11-28 2020-12-11 Merck Patent Gmbh Anti-pd-l1 protutijela i njihova uporaba
US8796257B2 (en) 2011-12-02 2014-08-05 Naeja Pharmaceutical Inc. Bicyclic compounds and their use as antibacterial agents and β-lactamase inhibitors
US9025112B2 (en) 2012-02-02 2015-05-05 Apple Inc. Display with color mixing prevention structures
EP2814483A2 (en) 2012-02-15 2014-12-24 Rempex Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating bacterial infections
WO2013149136A1 (en) 2012-03-30 2013-10-03 Cubist Pharmaceuticals, Inc. ISOXAZOLE β-LACTAMASE INHIBITORS
US8940897B2 (en) 2012-03-30 2015-01-27 Cubist Pharmaceuticals, Inc. 1,3,4-oxadiazole and 1,3,4-thiadiazole β-lactamase inhibitors
AR090539A1 (es) 2012-04-02 2014-11-19 Astrazeneca Ab COMPUESTOS INHIBIDORES DE b LACTAMASA
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
RU2614418C2 (ru) 2012-08-25 2017-03-28 Вокхардт Лимитед Производные 1,6-диазабицикло[3.2.1]октан-7-она и их применение для лечения бактериальных инфекций
WO2014141132A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Naeja Pharmaceutical Inc. NEW HETEROCYCLIC COMPOUNDS AND THEIR USE AS ANTIBACTERIAL AGENTS AND β-LACTAMASE INHIBITORS
IN2013MU03216A (sr) * 2013-10-11 2015-07-03 Wockhardt Ltd
WO2016116788A1 (en) * 2015-01-24 2016-07-28 Wockhardt Limited Nitrogen containing bicyclic compounds and their use in treatment of bacterial infections
EP3075381A1 (en) * 2015-04-03 2016-10-05 Mutabilis Heterocyclic compounds and their use in preventing or treating bacterial infections
WO2016156597A1 (en) * 2015-04-03 2016-10-06 Mutabilis Heterocyclic compounds and their use in preventing or treating bacterial infections
JOP20190061A1 (ar) 2016-09-28 2019-03-26 Novartis Ag مثبطات بيتا-لاكتاماز

Also Published As

Publication number Publication date
CY1123062T1 (el) 2021-10-29
CU24562B1 (es) 2022-01-13
ECSP19016602A (es) 2019-03-29
JOP20190061A1 (ar) 2019-03-26
HUE049788T2 (hu) 2020-10-28
EP3519419B1 (en) 2020-05-27
CN109843894B (zh) 2022-02-08
UY37424A (es) 2018-04-30
SMT202000343T1 (it) 2020-07-08
HRP20200986T1 (hr) 2020-10-16
US20190177324A1 (en) 2019-06-13
KR20190058492A (ko) 2019-05-29
CU20190016A7 (es) 2019-10-04
US10597396B2 (en) 2020-03-24
WO2018060926A1 (en) 2018-04-05
AU2017335405B2 (en) 2021-08-12
IL265626A (en) 2019-05-30
IL265626B (en) 2021-08-31
CO2019001995A2 (es) 2019-03-08
MA46356B1 (fr) 2020-08-31
MX380076B (es) 2025-03-11
EP3519419A1 (en) 2019-08-07
EP3698796A1 (en) 2020-08-26
EA036675B1 (ru) 2020-12-07
SG11201900394SA (en) 2019-04-29
ES2801874T3 (es) 2021-01-14
ES2902579T3 (es) 2022-03-29
CL2019000232A1 (es) 2019-05-10
TWI746652B (zh) 2021-11-21
TW201817730A (zh) 2018-05-16
PH12019500331A1 (en) 2019-08-05
AR109737A1 (es) 2019-01-16
MA50427A (fr) 2021-05-12
TN2019000020A1 (en) 2020-07-15
LT3519419T (lt) 2020-09-10
MX2019003640A (es) 2019-08-12
PT3519419T (pt) 2020-06-26
SI3519419T1 (sl) 2020-09-30
BR112019002195A2 (pt) 2019-05-14
JP7094275B2 (ja) 2022-07-01
CR20190104A (es) 2019-05-02
MD3519419T2 (ro) 2020-08-31
PL3519419T3 (pl) 2020-11-02
CA3030373A1 (en) 2018-04-05
DK3519419T3 (da) 2020-06-29
CN109843894A (zh) 2019-06-04
PE20190459A1 (es) 2019-04-01
EP3698796B1 (en) 2021-10-27
US10065957B2 (en) 2018-09-04
ZA201900137B (en) 2019-09-25
ME03735B (me) 2021-01-20
MY189632A (en) 2022-02-22
EA201990819A1 (ru) 2019-08-30
AU2017335405A1 (en) 2019-01-31
UA123833C2 (uk) 2021-06-09
JP2019529469A (ja) 2019-10-17
US20180086762A1 (en) 2018-03-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2022202403B2 (en) Aryl, heteroaryl, and heterocyclic pharmaceutical compounds for treatment of medical disorders
AU2015236369B2 (en) Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
US10160726B2 (en) Quinolone derivatives as antibacterials
AU2024219343A1 (en) Antimicrobial organosilanes
US20240024488A1 (en) Compounds and uses thereof
EP3519419B1 (en) Beta-lactamase inhibitors
US20180318311A1 (en) Tricyclic 2-quinolinones as antibacterials
HK40036799A (en) Pharmaceutical combination of a tricyclic beta-lactamase inhibitor with specific beta-lactam antibiotics
HK40036799B (en) Pharmaceutical combination of a tricyclic beta-lactamase inhibitor with specific beta-lactam antibiotics
HK40005785B (en) Beta-lactamase inhibitors
HK40005785A (en) Beta-lactamase inhibitors
NZ786969A (en) Beta-lactamase inhibitors