RS60551B1 - Farmaceutska kompozicija - Google Patents

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju. Konkretno, odnosi se na farmaceutsku kompoziciju nitizinona koja je izuzetno stabilna pri skladištenju.

[0002] Nitizinon (IUPAC naziv: 2-[2-nitro-4-(trifluorometil)benzoil] cikloheksan-1,3-dion) je trenutno odobren pod trgovačkim nazivom ORFADIN (FDA NDA N021232) za lečenje nasledne tirozinemije tipa 1 (HT-1). To je redak genetski poremećaj kod koga organizam novorođenčeta ne može da razlaže aminokiselinu tirozin, što izaziva stvaranje toksičnih metabolita koji mogu da dovedu do slabosti jetre, disfunkcije bubrega i neuroloških problema. Dnevni tretman nitizinonom (dozom od 1 mg / kg) sprečava stvaranje toksičnih metabolita.

[0003] Nitizinon ima strukturnu formulu:

[0004] Kao komercijalni proizvod ORFADIN, nitizinon se trenutno primenjuje oralno, u obliku kapsule, dostupne u tri doze, 2, 5 i 10 mg. To je formulacija nitizinona u vidu kapsule sa trenutnim oslobađanjem sa preželatinizovanim skrobom kao jedinim ekscipijensom.

[0005] Međutim, jedan od glavnih nedostataka trenutno dostupnog komercijalnog proizvoda je to što, zbog problema sa stabilnošću, mora da se skladišti na 2-8°C (tj. mora da se čuva u frižideru). To je značajna smetnja za pacijente obolele od HT-1 i njihove porodice. Zbog toga, cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi kompoziciju nitizinona koja je stabilna u nizu temperaturnih uslova, tako da skladištenje više ne predstavlja problem. Prednost takve formulacije je to, što će pacijentima sa HT-1 biti omogućeno da putuju slobodnije i steknu veću nezavisnost bez brige o čuvanju leka u potrebnim uslovima skladištenja.

[0006] Prema tome, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju pogodnu za oralnu primenu, gde kompozicija sadrži nitizinon, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, najmanje jedan saharid i gliceril dibehenat, uz uslov da kompozicija ne sadrži jone metala i preželatinizovani skrob ili skrob.

[0007] Jedan od glavnih faktora koji doprinose nestabilnosti nitizinona na sobnoj temperaturi je njegova sklonost da ireverzibilno formira neželjene sporedne proizvode. Konkretno, pokazano je da je nitizinon sklon formiranju proizvoda ciklizacije na povišenoj temperaturi. Reakcija ciklizacije, koja je prikazana ispod, uključuje ciklizaciju jedne od karbonilnih grupa cikloheksandionskog prstena na fenilni prsten, i gubitak nitro grupe.

[0008] Identifikovana ciklizovana nečistoća ne sme da prelazi prag kvalifikacije (tj. vrednost ispod koje nije neophodno ispitivanje toksičnosti) od 0,15% tež./tež. (u odnosu na ukupnu količinu nitizinona) ili 1,0 mg/dan (šta god je niže) u skladu sa smernicama ICH (međunarodna konferencija o harmonizaciji tehničkih zahteva za registraciju farmaceutika za humanu upotrebu) za nečistoće u supstanci leka Q3A(R2), pri ograničenju na maksimalnu dnevnu dozu API od 2 g/dan. Za farmaceutske kompozicije koje sadrže nitizinon, nečistoća ne bi trebalo da prelazi prag kvalifikacije od 0,2% ili 0,5% tež./tež. (u odnosu na ukupnu količinu nitizinona u kompoziciji), u zavisnosti od doze nitizinona koja se primenjuje.

[0009] Moguće alternativne kompozicije kapsula i tableta nitizinona uključuju one koje su opisane u EP0591275. Ove kompozicije tipično sadrže brojne sastojke, konkretno lubrikant magnezijum stearat. Međutim, pronalazači ovog pronalasku su otkrili da magnezijum stearat, i joni metala uopšte, čine kompozicije nestabilnim pri skladištenju pod različitim temperaturnim uslovima. Iznenađujuće, kompozicije tableta koje ne sadrže magnezijum stearat nisu sklone formiranju ciklizovane nečistoće povezane sa nitizinonom, posebno tokom skladištenja.

[0010] Prema tome, kompozicija ne sadrži jone metala. Pored toga, kompozicija ne sadrži preželatinizovani skrob, i poželjno ne sadrži nikakav skrob. Osim toga, kompozicija takođe sadrži najmanje jedan saharid i najmanje jedan lipid koji je gliceril dibehenat. Ove dodatne komponente mogu dodatno da poboljšaju stabilnost predmetne kompozicije.

[0011] Kompozicija može da bude predstavljena u bilo kom fizičkom obliku. Međutim, poželjno je obezbeđena kao komprimovani dozni oblik, kao što je tableta. Pokazano je da kompozicija pronalaska u obliku tablete ispoljava izuzetnu stabilnost pod uslovima ubrzanog, kao i dugotrajnog ispitivanja. Konkretno, zapaženo je veoma malo ili nimalo proizvoda ciklizacije. Oblik tablete je takođe pogodan iz ugla pacijenta, jer olakšava uzimanje potrebnog leka.

[0012] U poželjnom primeru izvođenja pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija pogodna za oralnu primenu, pri čemu kompozicija sadrži nitizinon, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, najmanje jedan saharid, gde je saharid disaharid ili oligosaharid, i gliceril dibehenat, uz uslov da kompozicija ne sadrži jone metala ili skrob. Kao što je ovde razmatrano, pokazano je da kompozicije koje sadrže magnezijum stearat i/ili skrob podstiču formiranje neželjenih nečistoća (tj. ciklizovanog proizvoda) koje krše regulatorne smernice za medicinske proizvode.

[0013] Pojam „farmaceutski prihvatljiva so“, kako se ovde koristi, odnosi se na soli nitizinona i uključuje soli sa organskim bazama, soli sa neorganskim kiselinama, soli sa organskim kiselinama i soli sa baznim ili kiselim aminokiselinama. Soli sa kiselinama mogu, posebno, da se koriste u nekim slučajevima. Primeri soli uključuju hidrohloridnu so, acetatnu so, trifluorosirćetnu so, metansulfonatnu so, 2-hidroksipropan-1,2,3-trikarboksilatnu so, (2R,3R)-2,3-dihidroksisukcinatnu so, fosfatnu so, sulfatnu so, benzoatnu so, 2-hidroksi-benzoatnu so, S-(+)-mandelatnu so, S-(-)-malatnu so, S-(-) piroglutamatnu so, piruvatnu so, p-toluensulfonatnu so, 1-R-(-)-kamforsulfonatnu so, fumaratnu so i oksalatnu so. Nitizinon koji se koristi u kompoziciji pronalaska može da bude u obliku solvata (npr. hidrata) ili u nesolvatnom obliku (npr. nehidratnom).

[0014] Opšti postupci za dobijanje soli dobro su poznati stručnjaku u ovoj oblasti. Farmaceutska prihvatljivost soli zavisiće od različitih faktora, uključujući svojstva obrade formulacije i ponašanje in vivo, i stručnjak u ovoj oblasti će lako biti u stanju da proceni takve faktore imajući u vidu predmetno otkriće.

[0015] U poželjnom primeru izvođenja pronalaska, saharid može da bude monosaharid, disaharid ili oligosaharid. Jedan ili više monosaharida može takođe da bude prisutan, pored disaharida ili oligosaharida.

[0016] Pogodni monosaharidi uključuju glukozu (dekstrozu), fruktozu (levulozu), galaktozu, ribozu, arabinozu, alozu, fukozu, altrozu, manitol, manozu, sorbitol i ksilozu. Pogodni disaharidi uključuju laktozu, laktulozu, saharozu, sukralozu, trehalozu i robinozu. Pogodni oligosaharidi uključuju saharide koji sadrže od 3 do 9 monosaharida, poželjno od 3 do 6 monosaharida, ili od 2 do 4 disaharida, ili njihove odgovarajuće kombinacije.

[0017] U poželjnom primeru izvođenja pronalaska, saharid je monosaharid ili disaharid, kao što je manitol, sorbitol, fruktoza ili laktoza, poželjno fruktoza ili laktoza. Takvi saharidi dobro funkcionišu kao punioci u kompoziciji pronalaska i pomažu da se smanji hemijska labilnost API nitizinona, konkretno formiranje ciklizovanog proizvoda. Najpoželjnije, saharid je disaharid, kao laktoza (npr. SuperTab® 30GR).

[0018] Kompozicija pronalaska sadrži lipid koji je gliceril dibehenat (npr. Compritol<®>888), diglicerid čije su grupe masne kiseline zasićene i sadrže 22 atoma ugljenika. Takav lipid obezbeđuje korisna svojstva kao lubrikant pri pripremi kompozicije pronalaska (posebno kada je kompozicija tableta). Iznenađujuće, i nasuprot lubrikantu magnezijum stearatu, nađeno je da ovaj lipid doprinosi stabilnosti kompozicije sprečavajući formiranje nečistoće na sličan način kao saharidna komponenta. Ova supstanca može da obezbedi dodatno poboljšanu stabilnost kompozicije, posebno u smislu sprečavanja formiranja gore pomenutog ciklizovanog proizvoda.

[0019] U posebno poželjnom primeru izvođenja pronalaska, saharid je laktoza i lipid je glicerol dibehenat. Pokazano je da ova kombinacija ekscipijenasa obezbeđuje kompoziciju koja ima očiglednu stabilnost u smislu dugotrajnog skladištenja (npr. bez degradacije lekovite supstance), posebno u formulacijama koje obuhvataju komprimovanu tabletu.

[0020] Stabilnost predmetnih farmaceutskih kompozicija je značajna prednost pronalaska. Prema tome, farmaceutske kompozicije pronalaska mogu da se okarakterišu time što su stabilne (tj. imaju do 0,5% nečistoća nitizinona, poželjno do 0,2% nečistoća nitizinona, konkretno ciklizovanih nečistoća, mereno HPLC metodom prema smernicama ICH) najmanje 2 meseca na sobnoj temperaturi (npr.15 do 25 °C), poželjno najmanje 4 meseca ili 6 meseci, najpoželjnije 12 meseci na sobnoj temperaturi. Alternativno, kompozicije mogu da budu stabilne najmanje 2 meseca na 25 do 50 °C, poželjno najmanje 4 meseca ili 6 meseci, najpoželjnije 12 meseci. U poželjnom aspektu, kompozicije mogu da ispolje stabilnost od najmanje 2 meseca pod uslovima ubrzanog ispitivanja pri skladištenju na 40 °C i 75% relativne vlažnosti, poželjno najmanje 4 meseca, i/ili najmanje 2 meseca, poželjno najmanje 4 meseca, pod uslovima dugotrajnog ispitivanja pri skladištenju na 25 °C i 60% relativne vlažnosti. Dodatno, ili alternativno, kompozicije mogu da ispolje stabilnost od najmanje 2 meseca pod intermedijernim uslovima od 30 °C i 65% relativne vlažnosti, poželjno najmanje 4 meseca ili 6 meseci, najpoželjnije 12 meseci. Poželjnije, kompozicije su stabilne najmanje 6 meseci, poželjno najmanje 12 meseci, pod uslovima ubrzanog ispitivanja na 40 °C i 75% relativne vlažnosti, i/ili najmanje 6 meseci, poželjno najmanje 12 meseci, pod uslovima dugotrajnog ispitivanja na 25 °C i 60% relativne vlažnosti. Čak poželjnije, kompozicija ima stabilnost takvu, da HPLC metodom ne može da se detektuje suštinsko povećanje ciklizovanih nečistoća tokom perioda od najmanje 2 meseca, poželjno najmanje 4 ili 6 meseci, čak poželjnije najmanje 12 meseci.

[0021] Pri određivanju stabilnosti farmaceutskih kompozicija pronalaska, nivo ciklizovanog proizvoda može da se odredi HPLC metodom definisanom u primerima.

[0022] U još jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju prema pronalasku, za upotrebu u terapiji. Dodatno, obezbeđena je kompozicija pronalaska, za upotrebu u lečenju tirozinemije, kao što je nasledna tirozinemija tipa 1 (HT-1), ili alkaptonurije. Upotreba u lečenju nasledne tirozinemije tipa 1 (HT-1) je najpoželjnija.

[0023] U predmetnom otkriću, obezbeđen je postupak za proizvodnju nitizinona, pri čemu postupak obuhvata ekstrakciju proizvoda nitizinona u baznim uslovima, na primer na pH 8 ili više, poželjno 9 ili više, 10 ili više, ili 11 ili više, najpoželjnije 11 do 13, npr. oko 12. Iznenađujuće, nađeno je da kada se ekstrakcija proizvoda nitizinona sprovodi pod ovim uslovima, prinos je poboljšan zbog smanjenja degradacije proizvoda tokom postupka obrade. Slično, prinos je povećan kada postupak dodatno obuhvata precipitaciju proizvoda nitizinona putem acidifikacije do pH od približno 2.

[0024] Kada se postupak odvija preko O-acil intermedijera proizvedenog u reakciji 1,3-cikloheksandiona sa bazom i 2-nitro-4-(trifluorometil)benzoil hloridom, takođe je nađeno da prinos može da se poboljša pažljivim dodavanjem Luisove kiseline, poželjno TMSCN (trimetilsilil cijanida). Zbog dugoročne nestabilnosti O-acil intermedijera, poželjno je da obrada O-acil intermedijera Luisovom kiselinom započne unutar oko četiri časa od formiranja O-acil intermedijera. Posle četiri časa, O-acil intermedijer počinje da se razgrađuje.

[0025] U predmetnom otkriću, obezbeđen je postupak za proizvodnju kristalne forme nitizinona, pri čemu postupak obuhvata rekristalizaciju uzorka nitizinona iz sistema rastvarača aceton:voda. Poželjno, rekristalizacija se izvodi na temperaturi do 50 °C, poželjnije do 45 °C. Dodatno, poželjno je da se rekristalizacija izvodi uz upotrebu odnosa aceton:voda od 3:7 do 7:3, poželjnije od 3:4 do 6:3.

[0026] Pronalazak će sada biti detaljnije opisan samo u ilustrativne svrhe i uz pozivanje na sledeće slike.

Slika la prikazuje podatke o stabilnosti leka pod uslovima ubrzanog ispitivanja za ORFADIN i formulaciju tablete prema pronalasku u odnosu na prag kvalifikacije od 0,5%.

Slika 1b prikazuje podatke o stabilnosti leka pod uslovima ubrzanog ispitivanja za ORFADIN u odnosu na prag kvalifikacije od 0,2%.

Slika 1c prikazuje podatke o stabilnosti leka pod uslovima ubrzanog ispitivanja za formulaciju kapsule od 160 mg sa laktozom, kao što je ovde opisano, u odnosu na prag kvalifikacije od 0,2%.

Slika 1d prikazuje podatke o stabilnosti leka pod uslovima ubrzanog ispitivanja za formulaciju tablete od 160 mg prema pronalasku u odnosu na prag kvalifikacije od 0,2%. Slika 1e prikazuje podatke o stabilnosti leka pod uslovima ubrzanog ispitivanja za formulaciju tablete od 120 mg prema pronalasku u odnosu na prag kvalifikacije od 0,2%. Slika 2a prikazuje podatke o stabilnosti leka pod uslovima dugotrajnog ispitivanja za ORFADIN i formulaciju tablete prema pronalasku u odnosu na prag kvalifikacije od 0,5%. Slika 2b prikazuje podatke o stabilnosti leka pod uslovima dugotrajnog ispitivanja za ORFADIN u odnosu na prag kvalifikacije od 0,2%.

Slika 2c prikazuje podatke o stabilnosti leka pod uslovima dugotrajnog ispitivanja za formulaciju kapsule od 160 mg sa laktozom, kao što je ovde opisano, u odnosu na prag kvalifikacije od 0,2%.

Slika 2d prikazuje podatke o stabilnosti leka pod uslovima dugotrajnog ispitivanja za formulaciju tablete od 160 mg prema pronalasku u odnosu na prag kvalifikacije od 0,2%.

Primeri

Primer 1 - Sinteza nitizinona

[0027] Sinteza nitizinona prikazana je na donjoj šemi. Konkretno, modifikacije faze 1, posebno koraka ekstrakcije i precipitacije, i vreme obrade O-acil intermedijera pomoću TMSCN, poboljšale su prinos sa manje od 50% na više od 85%, uz održavanje čistoće veće od 95% (u poređenju sa putem opisanim u SAD patentu 5,550,165). Promena rastvarača koji se koristi za rekristalizaciju proizvoda iz etil acetata, kao što je takođe opisano u SAD patentu 5,550,165, u smešu aceton/voda poboljšala je prinose sa 37% na više od 90%, uz održavanje čistoće veće od 99,9%. Dodatna prednost upotrebe takvih rastvarača za rekristalizaciju je to što oni odgovaraju smernicama ICH u vezi sa nivoima rezidualnog rastvarača.

[0028] U opštoj proceduri, 2-nitro-4-(trifluorometil) benzoeva kiselina pretvara se u odgovarajući acil hlorid dodavanjem 1,03 ekvivalenta oksalil hlorida u dihlorometanu. 1,3-cikloheksandion se pretvara u enol dodavanjem 3,0 ekvivalenata trietilamina, što je praćeno dodavanjem prethodno pripremljenog acil hlorida. Dodaje se katalitički trimetilsilil cijanid, TMSCN, (0,05 ekvivalenata) i reakcija se meša preko noći. Reakciona smeša se pere 2M hlorovodoničnom kiselinom, ekstrahuje u 1M natrijum hidroksid na pH 12, acidifikuje do pH 2, ekstrahuje u izopropilacetat i kristalizuje da bi se dobio nitizinon.

Poboljšanje postupka

[0029] Dok je čistoća uzoraka bila visoka (99,4-99,6%), ukupan prinos faze 1 bio je izuzetno nizak 28-50%. Da bi se reakcija dodatno razumela i da bi se odredilo gde dolazi do gubitaka, urađene su studije da bi se ispitala stabilnost O-acil intermedijera i nitizinona pod uslovima pod kojima se odvija faza 1 (tabela 1).

Tabela 1: Stabilnost O-acil intermedijeraa

[0030] Rezultati pokazuju da je O-acil intermedijer nestabilan i počinje da se razgrađuje posle 4 časa (tabela 1, unosi 3,5 h i 6 h). TMSCN je stoga dodat posle sedam časova i reakcija je ostavljena preko noći. Intermedijer nije zapažen posle dvadeset četiri časa ili posle obrade i rekristalizacije iz izopropilacetata. Zbog nestabilnosti O-acil intermedijera, dodavanje TMSCN bi trebalo da se obavi pre isteka četiri časa. Dodatni eksperimenti su pokazali da dodavanje može da se obavi posle samo dvadeset minuta bez štetnog delovanja na prinos ili čistoću. U okviru ispitivanja stabilnosti nitizinona, dodavanje TMSCN posle dvadeset minuta i naknadno praćenje pokazalo je da je formiranje nitizinona završeno u roku od 2 h, i da je on stabilan tokom mešanja preko noći.

[0031] Zbog visokog procenta nitizinona pre obrade i niskog prinosa zapaženog u fazi 1, ispitivani su gubici prilikom obrade i rekristalizacije iz izopropilacetata. U pokušaju da se prinos poboljša i izbegne rekristalizacija koja nije neophodna, rastvor je acidifikovan do pH 2 i rezultujući precipitat je filtriran, opran vodom i osušen u vakuumskoj sušnici na 40 °C (tabela 2). Zapaženo je značajno povećanje prinosa (30% do 90%). Proračuni su pokazali da bi prilikom povećanja obima proizvodnje acidifikacija upotrebom 2 M hlorovodonične kiseline dala postupak sa nepovoljnim zapreminskim odnosom (tj. mala veličina serije/zapremini suda), stoga je, u pokušaju da se smanji zapremina pri obradi, acidifikacija do pH 2 sprovedena upotrebom koncentrovane 36% hlorovodonične kiseline (tabela 2, serija 9). Nije zapažen nikakav gubitak prinosa ili čistoće i bila je potrebna ∼1/10 zapremine kiseline.

Tabela 2: Rezultati revidiranih uslova obrade

[0032] Ispitani su razni rastvarači za pogodne uslove rekristalizacije (tabela 3).

Tabela 3: Ispitivanje rastvarača za rekristalizaciju za fazu 2

[0033] Temperature rekristalizacije nisu prelazile 45°C iz predostrožnosti. Faza 1 je rastvorena u minimalnoj količini rastvarača uz zagrevanje do 45°C, mešanje deset minuta, dodavanje korastvarača po potrebi, mešanje dodatnih 20 minuta na 45°C, hlađenje do 0°C, mešanje 30 minuta i filtriranje. Pokazalo se da je rekristalizacija iz smeše aceton/voda dala najbolji odnos čistoće i prinosa i pogodnu zapreminu rastvarača (94% prinosa, 99,9% čistoće iz sedam zapremina rastvarača). Ovi uslovi su dalje ispitivani na većem obimu proizvodnje i na različitim temperaturama da bi se odredili odnosi zapremine rastvarača. Uslovi koji podrazumevaju upotrebu smeše aceton/voda na 45°C odabrani su za odvijanje finalne rekristalizacije, jer zahtevaju najmanje zapremine rastvarača i obezbeđuju materijal sa dobrim prinosom i čistoćom.

[0034] Prema zahtevima Dobre proizvođačke prakse (GMP), finalna rekristalizacija treba da uključuje filtraciju kroz filter za klarifikaciju kako bi se uklonile čestice, i prema tome, postupak u skladu sa zahtevima GMP uključivao bi filtraciju vrućeg rastvora acetona. To znači da je verovatno da bi rastvor nitizinona u acetonu na 45°C mogao da bude izložen povišenoj temperaturi tokom dužeg vremenskog perioda. Stabilnost faze 1 na 45°C ispitivana je tokom perioda od 6 časova da bi se potvrdilo da se nitizinon ne bi razgradio pod ovim uslovima (tabela 4). Nije zapažen gubitak čistoće. Prema tome, aceton bi mogao da se koristi u koraku filtracije vrućeg rastvora prema GMP postupku.

Tabela 4: Stabilnost faze 1 u acetonu

[0035] Uslovi finalne rekristalizacije: faza 1 rastvara se u acetonu (4 x šarža faze 1 u ml) uz zagrevanje do 45°C i mešanje deset minuta, kap po kap se dodaje voda (3 x šarža faze 1 u ml) i rezultujuća suspenzija meša dodatnih 20 minuta na 45°C, hladi do 0°C, meša 30 minuta i filtrira.

[0036] Finalna rekristalizacija je takođe odlična i za pročišćavanje preostale supstituisane benzoeve kiseline do veoma niskih nivoa.

[0037] Pri povećanju obima proizvodnje, sušenje za uklanjanje vode može često da traje mnogo duže nego pri laboratorijskoj proizvodnji i može potencijalno da dovede do razgradnje proizvoda, posebno u slučaju proizvoda koji je potencijalno podložan hidrolizi. Nakon filtracije nitizinona iz finalne rekristalizacije, filter-kolač se pere vodom da bi se uklonile preostale matične tečnosti. Zbog njegove velike rastvorljivosti u acetonu i drugim organskim rastvaračima, ispiranje rastvaračem nije pogodno jer bi verovatno dovelo do velikih gubitaka prinosa. Pranje vodom takođe pomaže pri uklanjanju preostalih neorganskih supstanci. Zbog toga je sprovedeno ispitivanje postupka sušenja u cilju određivanja stabilnosti rekristalizovanog materijala i pokušaja da se osigura da neće biti neočekivane razgradnje proizvoda tokom faze sušenja pri proizvodnji velikog obima (tabela 5).

Tabela 5: Ispitivanje sušenja u fazi 2

[0038] Dve odvojene serije su zagrevane tokom perioda od 60 časova uz merenje čistoće i vrednosti KF (unosi 1-10). Obe serije su pokazale da je rekristalizovani nitizinon bio stabilan tokom produženih perioda sušenja uz malo, ili nimalo, gubitka čistoće (smatra se da su sve promene u okviru eksperimentalne greške). Uzorak nitizinona je suspendovan u vodi i zagrevan na 40°C bez vakuuma tokom 60 časova (unosi 11-13), da simulira slabo sušenje. Nije primećen gubitak čistoće što potvrđuje stabilnost nitizinona u vodi. Drugi uzorak je bio nakvašen svakog jutra i sušen pod vakuumom preko noći da bi se ispitali efekti ponovljenog kvašenja i sušenja uzorka (unosi 14-19). Neočekivana nepoznata nečistoća primećena je u uzorku od 48 časova što može da se pripiše nečistoći kolone, budući da nije primećeno nijednom pre ili posle toga (čak ni u istom uzorku). Pokazalo se da je aceton/voda održiv sistem rastvarača za rekristalizaciju, sa dobijenim proizvodom koji je stabilan tokom produženih perioda sušenja, čak i od vode.

[0039] Pokazalo se da je ceo postupak sinteze ponovljiv pri industrijskom obimu proizvodnje, sve do 120 g, uz dobijanje materijala čistoće 99,97% sa visokim prinosom (80%).

Primer 2 – Studija stabilnosti

[0040] Studija stabilnosti API pokazala je da je nitizinon pripremljen prema gore prikazanoj proceduri sinteze stabilan u pogledu koncentracija ciklizovane nečistoće, ostajući unutar granica koje daje ICH, pod uslovima skladištenje pri dugotrajnom (25°C/60%RH), kao i ubrzanom ispitivanju (40°C/75%RH). Zaista, nije zapaženo formiranje gore pomenute ciklizovane nečistoće u API. Međutim, ORFADIN kapsule nisu bile stabilne pod uslovima skladištenja pri dugotrajnom ili ubrzanom ispitivanju, pokazujući ubrzano formiranje ciklizovane nečistoće u poređenju sa samim API nitizinona, što ukazuje na to da reakcija između API nitizinona i ekscipijensa preželatinizovanog skroba izaziva formiranje nečistoće.

[0041] Podaci su dobijeni u programu ispitivanja stabilnosti sprovedenom na ispitivanoj supstanci uskladištenoj u pakovanju koje se zaista koristi za skladištenje i distribuciju. Ovo je urađeno kako bi se utvrdilo da li supstanca ostaje usaglašena sa ICH kriterijumima specifikacije kada se ispituje tokom perioda roka trajanja plus godinu dana.

[0042] Uzorak od približno 150 g supstance upotrebljen je u programu ispitivanja, sa pojedinačnim uzorcima veličine oko 7 g. Test je dizajniran tako da simulira pakovanje proizvoda, tj. uzorak je upakovan u polietilensku kesu, zatvoren i zatim smešten u drugu polietilensku oblogu. Uzorak je zatim uskladišten u posudi od vlaknaste ploče sa poklopcem od vlaknaste ploče.

[0043] Uzorak je skladišten u inkubatoru koji je održavan na 25°C ± 2°C / 60% ± 5 % relativne vlažnosti (RH), i 40°C ± 2°C / 75% ± 5 % RH.

[0044] Nakon ispitivanja polaznog uzorka, uzorak je ispitivan u određenim vremenskim intervalima (tabela 6), tj. mesečno (0 m, 1 m, 2 m, itd.).

[0045] Pripremljeni API nije pokazao odstupanje od specifikacije ni u uslovima skladištenja pri ubrzanom, kao ni pri dugotrajnom ispitivanju. Nije došlo do opadanja čistoće, a ciklizovana nečistoća ostala je ispod praga identifikacije (0,10%) tokom celog ispitivanja stabilnosti (mereno HPLC metodom).

Tabela 6: Stabilnost API tokom vremena

Primer 3 – Kompatibilnost kompozicije

[0046] Kako bi se identifikovali pogodni ekscipijensi za razvoj temperaturno stabilne formulacije, 4 standardna punioca i 5 lubrikanata je pomešano sa nitizinonom i uskladišteno pod uslovima ubrzanog ispitivanja tokom 1 nedelje i 3 nedelje. Za svaki eksperiment pripremljeno je po 10 preparata odmeravanjem približno 10 mg nitizinona i 500 mg ekscipijenasa u staklenu bočicu i njihovim mešanjem laganim mućkanjem. U 5 lotova preparata, dodato je 50 µl vode da bi se uzorak nakvasio. Za kontrolu, pripremljeno je 10 preparata lekovite supstance odmeravanjem približno 10 mg nitizinona u pogodnu staklenu bočicu i u 5 lotova preparata, dodato je 50 µl vode da bi se uzorak nakvasio.

[0047] Za kvantitativno određivanje relativne količine ciklizovane nečistoće (RRT 0,7) za svaku formulaciju u svakoj vremenskoj tački (tabele 7 i 8) upotrebljena je HPLC analiza.

Tabela 7: Dejstvo lubrikanta

Tabela 8: Dejstvo punioca

[0048] Kompatibilnost ekscipijenasa pokazala je da lubrikanti koji sadrže jon metala (magnezijum ili natrijum) ubrzavaju formiranje ciklizovane nečistoće u odnosu na uzorak koji sadrži samo API, dok je glicerol dibehenat značajno usporio formiranje nečistoće.

[0049] Brojni punioci takođe ubrzavaju formiranje ciklizovane nečistoće, primetno i najznačajnije preželatinizovani skrob, koji se trenutno koristi u odobrenoj formulaciji kapsula ORFADIN. Upotreba laktoze nije podsticala formiranje ciklizovane nečistoće.

Primer 4 – Formulacije tableta

[0050] Razvijene su formulacije tableta sa trenutnim oslobađanjem nitizinona sa istim doznim jačinama kao ORFADIN (tabele 9a i 9b).

Tabela 9a: Formulacija tablete (160 mg)

[0051] Ekscipijensi i aktivni farmaceutski sastojak (API) su propušteni kroz sito promera 500 µm pre mešanja u turbularnoj mešalici (30 minuta na 30 obr/min). Tablete su zatim komprimovane do čvrstoće od oko 3 KP (2,5-3,5) upotrebom kružnog alata standardne zakrivljenosti od 7 mm. Tablete su imale finalnu težinu od 160 mg.

Tabela 9b: Formulacija tablete (120 mg)

[0052] Ekscipijensi i aktivni farmaceutski sastojak (API) su propušteni kroz sito promera 400 µm pre mešanja. Tablete su zatim komprimovane do čvrstoće od oko 5,5 KP (5-6) upotrebom kružnog alata standardne zakrivljenosti od 7 mm. Tablete su imale finalnu težinu od 120 mg.

[0053] Glicerol dibehenat, u obliku Compritol 888, je registrovana GRAS supstanca bez gornje granice prihvatljivog dnevnog unosa (ADI). Količina glicerol dibehenata koja se koristi u formulaciji je u okviru količina koje su prethodno korišćene u drugim formulacijama navedenim u FDA uputstvu za neaktivne sastojke (do 60 mg/dozi).

[0054] Tablete (ili kapsule) kompozicije mogu da budu smeštene u boce od polietilena velike gustine (HDPE). U bocama koje sadrže kompoziciju pronalaska nije potrebno sredstvo za sušenje, budući da je studija kompatibilnosti ekscipijensa pokazala da veći sadržaj vode povećava stabilnost proizvoda.

[0055] Konkretno, formulacija je razvijena tako da ostane unutar granica specifikacije pod uslovima skladištenja pri ubrzanom ispitivanju tokom perioda od najmanje 6 meseci, što je zatim omogućilo ekstrapolaciju podataka iz ispitivanja stabilnosti na uslove dugotrajnog ispitivanja, kako bi se demonstriralo skladištenje proizvedene formulacije leka na sobnoj temperaturi. U svim fazama, nova formulacija je direktno upoređena sa komercijalno dostupnim lekom ORFADIN.

Primer 5 – Formulacija kapsule nasuprot tablete nasuprot formulacije ORFADIN

[0056] Formulacija kapsule je razvijena za poređenje sa formulacijom tablete iste smeše ekscipijenasa, kao što je prikazano u donjoj tabeli (tabela 10), kako bi se utvrdio uticaj doznog oblika na stabilnost.

Tabela 10: Formulacija kapsule

[0057] Ekscipijensi i API su propušteni kroz sito promera 1000 µm pre mešanja u turbularnoj mešalici (30 minuta na 30 obr/min). Nakon mešanja, 160 mg smeše stavljeno je u HPMC kapsule veličine 3 upotrebom mašine za automatsku inkapsulaciju (Bonapace In-cap).

[0058] Sve tri formulacije leka (ORFADIN, kapsula i tableta) podvrgnute su ispitivanju stabilnosti pod uslovima skladištenja pri dugotrajnom (25°C ± 2°C / 60% ± 5% RH) i ubrzanom (40°C ± 2°C / 75% ± 5% RH) ispitivanju. U svakoj vremenskoj tački, proizvedeni lek je upoređivan sa specifikacijom sledećim metodama: test (mg nitizinona), srodne supstance i rastvaranje.

[0059] Za svaku od formulacija nitizinona o kojoj je reč (ORFADIN, kapsula i tableta), pokazalo se da je jedino svojstvo koje se menja tokom vremena povećanje količine ciklizovane nečistoće (i smanjenje nitizinona). Ovo je identifikovano analitičkim HPLC metodom za ukupne srodne supstance pri retencionom vremenu od 0,7. Prema tome, stabilnost svake formulacije i posledična poređenja sprovedena su samo na osnovu količine ciklizovane nečistoće (RRT 0,7).

[0060] Podaci o rezultatima stabilnosti za uslove ubrzanog i dugotrajnog ispitivanja sažeto su prikazani u tabeli 11, odnosno tabeli 12.

Tabela 11: Analiza nečistoća pod uslovima ubrzanog ispitivanja

Tabela 12: Analiza nečistoća pod uslovima dugotrajnog ispitivanja

Uslovi ubrzanog ispitivanja

[0061] Rezultati skladištenja pod uslovima ubrzanog ispitivanja prikazani su u tabeli 11 i na slikama 1a-1e.

[0062] Nađeno je da je količina ciklizovane nečistoće u ORFADIN kapsulama od 2 mg i 5 mg iznad praga kvalifikacije od 0,5% unutar 3 meseca pod uslovima ubrzanog ispitivanja, i predviđa se da će kapsule od 10 mg preći ovaj prag unutar 6 meseci. Za stroži prag kvalifikacije od 0,2%, nađeno je da količina ciklizovane nečistoće u ORFADIN kapsulama od 2 mg i 5 mg prelazi prag kvalifikacije unutar 1 meseca pod uslovima ubrzanog ispitivanja, a unutar 3 meseca u kapsulama od 10 mg. Videti sliku 1b.

[0063] Formulacija kapsule sa laktozom pokazala je značajno poboljšanje stabilnosti u poređenju sa formulacijom ORFADIN; međutim, predviđanja su pokazala da bi količina ciklizovane nečistoće prešla prag kvalifikacije od 0,5% unutar 6 meseci kod kapsula od 2 mg. Za prag kvalifikacije od 0,2%, količina ciklizovane nečistoće prešla bi prag kvalifikacije za 1 mesec kod kapsula od 2 mg. Videti sliku 1c.

[0064] Formulacija tablete sa laktozom nije pokazala povećanje količine ciklizovane nečistoće tokom prva 2 meseca, pokazujući veliku stabilnost čak i pod uslovima ubrzanog ispitivanja, i zbog toga se predviđa da neće preći prag kvalifikacije od 0,5% tokom 6 meseci. Za prag kvalifikacije od 0,2%, nije zapaženo povećanje količine ciklizovane nečistoće tokom prva 4 meseca, i zbog toga se predviđa da neće preći prag kvalifikacije tokom 6 meseci. Videti slike 1d i 1e.

Uslovi dugotrajnog ispitivanja

[0065] Rezultati skladištenja pod uslovima ubrzanog ispitivanja prikazani su u tabeli 12 i na slikama 2a-c.

[0066] Iako je količina ciklizovane nečistoće kod formulacije ORFADIN ostala ispod praga kvalifikacije od 0,5%, izgleda da se brzina njenog formiranja povećavala. Ekstrapolacijom brzine formiranja sa 3 meseca na 6, predviđa se da će kapsula od 2 mg premašiti prag kvalifikacije od 0,5% tokom 12 meseci. Očekuje se da će kapsule od 5 mg i 10 mg ostati u okviru praga kvalifikacije od 0,5% tokom 12 meseci. Za prag kvalifikacije od 0,2%, kapsula od 2 mg prešla je prag unutar 6 meseci. Ekstrapolacijom brzine formiranja sa 3 meseca na 6, predviđa se da će kapsula od 5 mg preći prag kvalifikacije od 0,2% unutar 12 meseci. Očekuje se da će kapsule od 10 mg ostati u okviru praga kvalifikacije od 0,2% tokom 12 meseci. Videti sliku 2b.

[0067] Formulacija kapsule sa laktozom jačine 2 mg pokazala je veoma malo povećanje količine ciklizovane nečistoće u prvom mesecu, dok formulacija tablete ponovo nije pokazala povećanje količine ciklizovane nečistoće. Videti slike 2c i 2d.

[0068] Prema tome, dok kapsule ORFADIN od 5 mg i 10 mg mogu da ostanu 12 meseci unutar specifikacije pod uslovima skladištenja pri uslovima dugotrajnog ispitivanja, uslovi ubrzanog ispitivanja su pokazali da su one veoma osetljive na bilo kakvo povećanje temperature zbog povećane ciklizacije supstance leka.

[0069] Nasuprot tome, formulacija tablete prema predmetnom pronalasku pokazala je stabilnost i pod uslovima dugotrajnog i pod uslovima ubrzanog ispitivanja, bez zapaženog formiranja ciklizovane nečistoće. Ovo pokazuje da su uslovi skladištenja na sobnoj temperaturi odgovarajući i da farmaceutski proizvod nije osetljiv na povećanje temperature zbog uslova skladištenja.

Uslovi izvođenja hromatografije

[0070] U gore navedenim primerima, uslovi izvođenja HPLC bili su sledeći:

Tabela 13: Uslovi izvođenja HPLC

Tabela 14: Gradijent upotrebljen za HPLC

Claims (9)

Patentni zahtevi

1. Farmaceutska kompozicija pogodna za oralnu primenu, naznačena time, što kompozicija sadrži nitizinon, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, najmanje jedan saharid i gliceril dibehenat, i gde kompozicija ne sadrži jone metala i preželatinizovani skrob ili skrob.

2. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 1 u obliku komprimovane tablete.

3. Farmaceutska kompozicija prema patentnim zahtevima 1 ili 2 naznačena time, što je saharid monosaharid, disaharid ili oligosaharid.

4. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 3 naznačena time, što je saharid disaharid.

5. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 4, naznačena time, što je saharid laktoza.

6. Farmaceutska kompozicija pogodna za oralnu primenu, prema patentnim zahtevima 4 ili 5, naznačena time, što je kompozicija u obliku komprimovane tablete i ne sadrži magnezijum stearat.

7. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time, što kompozicija ima stabilnost nečistoće (do 0,5% nečistoće, poželjno do 0,2% nečistoće, izmereno HPLC metodom prema smernicama ICH) najmanje 2 meseca na sobnoj temperaturi.

8. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, za upotrebu u terapiji.

9. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, za upotrebu u lečenju tirozinemije, kao što je nasledna tirozinemija tipa 1 (HT-1), ili alkaptonurije.