RS60785B1

RS60785B1 - Kompozicija za oralnu upotrebu u lečenju gastroezofagealne refluksne bolesti ili nelagode

Info

Publication number: RS60785B1
Application number: RS20200951A
Authority: RS
Inventors: Maio Umberto Di
Original assignee: Neilos S R L
Priority date: 2015-07-30
Filing date: 2016-07-27
Publication date: 2020-10-30
Also published as: EP3124048B1; LT3124048T; SI3124048T1; EP3124048A1; ITUB20152623A1; PL3124048T3; ES2811125T3

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na kompoziciju za upotrebu u lečenju gastroezofagealnih refluksnih bolesti ili poremećaja, poželjno u simptomatskom lečenju gastroezofagealnih refluksnih bolesti ili poremećaja. Pomenuta kompozicija je za oralnu upotrebu i, sa fizičkog stanovišta, ona je u bilo kom farmaceutski prihvatljivom obliku davanja. Dalje, pomenuta kompozicija obuhvata mešavinu koja obuhvata natrijumalginat, kalcijumkarbonat, natrijumbikarbonat, digestivni enzim aktinidin iz Actinidia chinensis Planch (Kivi) ekstrakta suvog voća, sa sadržajem aktinidina od 16000 CDU/g i slatkog korena (Glycyrrhiza glaba L.) u obliku ekstrakta suvog korena koji sadrži 3% glicirhizinske kiseline.

[0002] Poznato je da danas sve veći broj ljudi pati od gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja koji zahtevaju privremeno ili produženo lečenje određenim kompozicijama ili lekovima, u skladu sa ozbiljnošću. Gastroezofagealna refluksna bolest (GERD) je kliničko stanje koje karakteriše refluks gastroduodenalnog sadržaja u ezofagus, uz pojavu simptoma koji mogu da utiču na kvalitet života. Procenjuje se da se retrosternalna piroza javlja najmanje jednom dnevno kod 4-7% opšte populacije i kod 34-44% najmanje jednom mesečno. Procenjuje se da incidenca GERD iznosi 4.5/100.000, sa značajnim povećanjem nakon 40. godine života.

[0003] Gastroezofagealni refluks se odnosi na "nevoljni i nesvesni prolazak želudačnog sadržaja u ezofagus, bez udruženog učešća želudačnih i stomačnih mišića". Ezofagus je kanal, dužine 25-30 cm, koji povezuje usta sa želucem, i duž kojeg je moguće da se identifikuju dve strukture sfinktera: prva struktura sfinktera je između hipofarinksa i cervikalnog trakta ezofagusa (UES, gornji ezofagealni sfinkter), dok je druga struktura sfinktera, koja se naziva donji ezofagealni sfinkter (LES), na nivou gastro-ezofagealnog spajanja. Ova druga predstavlja zonu visokog pritiska koja predstavlja glavnu anti-refluksnu strukturu, zahvaljujući svom položaju između zone negativnog pritiska unutar grudnog koša i zone pozitivnog pritiska unutar abdomena. Stoga, u normalnim uslovima, povećanje abdominalnog pritiska ima reperkusije na nivou LES, čime se sprečava vraćanje svarenog materijala u ezofagus. U fiziološkim uslovima LES je zatvoren i otpušta se za vreme od oko 3-10 sekundi nakon degluticije.

[0004] Druge anatomske strukture koje pored LES doprinose održavanju anti-refluksne barijere su:

● Ugao His-a, akutni ugao koji se stvara između ezofagusa i želudačnog dna;

● frenoezofagealni ligament;

● dijafragmalna kragna, koja se sastoji od slojeva dijafragme, koji su obmotani oko ezofagusa poput šala i stežu lumen tokom udisanja.

[0005] Postoje brojni faktori koji prate patogenezu GERD, kao što su na primer:

1. Insuficijencija anti-refluksne barijere donjeg ezofagealnog sfinktera, koja za cilj ima da mehanički spreči oticanje želudačnih sokova u ezofagus.

2. Odlaganje pražnjenje želuca usled anatomskih anomalija ili funkcionalnih izmena: (i) anatomske anomalije: stenoza pilorusa (to je terminalni deo želuca, koji reguliše prolazak želudačnog sadržaja u duodenum); (ii) funkcionalne izmene: motorne izmene dna (deo koji je odgovoran za pražnjenje tečnosti).

3. Insuficijencija ezofagealnog mehanizma čišćenja, čiji je cilj da svede na minimum kontakt između ezofagealne sluzokože i želudačnih sokova putem dejstvovanjem, i putem ezofagealne perilstatike i neutralizacije kiselih ostataka zahvaljujući pljuvački.

4. Gastrična hiperkiselost.

5. Agresivnost želudačnog sadržaja koji se vraća nazad u ezofagus, usled dejstva HCl.

6. Duodenogastrični refluks sa prolaskom pankreasnih i žučnih sekrecija u stomak, koji u slučaju gastroezofagealnog refluksa, može da uzrokuje ozbiljne lezije. Drugi faktori predispozicije uključuju pušenje, nepravilno ponašanje u smislu ishrane (obilni obroci, visokomasna hrana, kofein), lekovi, trudnoća i gojaznost, koji mogu da pogoršaju GERD - gastroezofagealnu refluksnu bolest. Hijatalna hernija (produžetak dela želuca u grudni koš kroz otvor u dijafragmi koji se naziva ezofagealni hijatus) takođe često prati GERD i može da doprinese produženom izlaganju gastroduodenalnom sadržaju. Generalno, zidovi ezofagealnog hijatusa prianjaju blisko uz ezofagus, ali može da se desi da učvršćene strukture donjeg dela ezofagusa izgube ton, što pogoduje usponu malog dela želuca u grudni koš.

[0006] U svakom slučaju, koji god da je uzrok u pitanju, čest i ponovljen kontakt povraćanih želudačnih materijala sa želudačnom sluzokožom ima štetno dejstvo na nju, što postaje ozbiljnije sa dužim kontaktom i nižom pH refluksa (povraćanih želudačnih materijala). Vremenom, perzistentno flogističko dejstvo koje utiče na ezofagealnu sluzokožu dovodi do zapaljenske reakcije koja može da preraste u ulceracije, stenozu i takozvanu cilindričnu metaplaziju (ili Baretov epitel, pojedinačni najvažniji faktor rizika za razvoj ezofagealnog adenokarcinoma). Smatra se da su uobičajeni simptomi retrosternalna piroza (koju pacijent definiše kao osećaj pečenja koji počinje u želucu ili donjem delu grudnog koša i podiže se ka vratu) i regurgitacija (percepcija kisele i gorke tečnosti unutar usne duplje), pri čemu je specifičnost ovih simptoma za GERD jednaka, 89 odnosno 95%. Česti mada manje karakteristični simptomi su odinofagija, disfagija, podrigivanje, epigastrični bol, nadimanje i otežano varenje. Neke od ovih simptoma karakteriše dijagnoza funkcionalne dispepsije i poznato je da između 10% i 17% pacijenata koji zahtevaju medicinsku intervenciju zbog dispepsije imaju GERD - gastroezofagealnu refluksnu bolest.

[0007] WO 2015/105346 otkriva farmaceutske kompozicije za lečenje gastričnog refluksa koje obuhvataju natrijumalginat, kalcijumkarbonat i natrijumbikarbonat i ekstrakt Glycyrrhiza. Arome, uključujući i ekstrakt kivija, takođe mogu biti dodate.

[0008] US 2013/210762 otkriva farmaceutske kompozicije za lečenje dispepsije koje obuhvataju natrijumalginat, natrijumbikarbonat i kalcijumkarbonat.

[0009] Alim. Pharmac. Ther.2000, 14(6), 669 otkriva antacide bazirane na alginatu kao što je Gaviscon® koji obuhvata natrijumalginat, natrijumbikarbonat i kalcijumkarbonat.

[0010] US 2015/037315 otkriva dodatke ishrani za lečenje digestivne disfunkcije i gastrointestinalnih poremećaja (ili njihovih simptoma), kao što su gastrični refluks, koji obuhvataju ekstrakte voća kivija i amilazu.

[0011] US 2010/143319 otkriva da su ekstrakti iz voća kivi korisni za održavanje crevnog zdravlja i lečenje poremećaja gastrointestinalnog trakta, kao što je gastrični refluks.

[0012] J. Diet. Suppl.2015, 12(2), 138 otkriva mešavine kalcijumkarbonata i ekstrakta slatkog korena za upotrebu u lečenju gastroezofagealnog refluksa.

[0013] WO 2010/092468 otkriva kompozicije koje obuhvataju alginate, kao što su natrijumalginat, i antacide, uključujući kalcijumkarbonat i natrijumbikarbonat, za upotrebu u lečenju gastroezofagealnog refluksa i dispepsije.

[0014] Stoga, postoji konstantna potreba za postojanjem kompozicija ili lekova za lečenje gastroezofagealnog refluksa koji se dobro tolerišu, koji su efektivni i, ukoliko je to moguće, koji nemaju neželjena dejstva, posebno u slučaju pojedinaca koji su uzimali anti-refluksne lekove ili kompozicije duži vremenski period. Nakon dugog, intenzivnog istraživanja i razvoja, podnosilac ove prijave je identifikovao kombinaciju (mešavinu) jedinjenja i supstanci koji mogu efektivno da dejstvuju, međusobno u sinergiji, protiv gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja.

[0015] Poželjno, pomenuta kombinacija (mešavina) jedinjenja i supstanci se dobro toleriše i ne pokazuje nikakva neželjena dejstva, čak i ako se primenjuje tokom dužeg vremenskog perioda u obliku kompozicije za oralnu upotrebu.

[0016] Ovaj pronalazak se odnosi na kompoziciju koja obuhvata mešavinu, koja ima karakteristike kako su definisane u priloženom nezavisnom zahtevu.

[0017] Ovaj pronalazak se odnosi na pomenutu kompoziciju za upotrebu kao lek, koja ima karakteristike kako su definisane u priloženim zahtevima.

[0018] Ovaj pronalazak se odnosi na pomenutu kompoziciju za oralnu upotrebu u lečenju gastroezofagealnih refluksnih bolesti ili poremećaja, koji imaju karakteristike kako su definisane u priloženim zahtevima. Poželjno, lečenje gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja uključuje smanjenje vremena pražnjenja želuca.

[0019] Poželjni načini ostvarivanja ovog pronalaska su ilustrovani u nastavku.

[0020] Podnosilac ove prijave je razvio mešavinu jedinjenja i supstanci koje obavljaju aktivnost međusobno u sinergiji.

[0021] Prema ovom pronalasku, mešavina obuhvata natrijumalginat, kalcijumkarbonat, natrijumbikarbonat, digestivni enzim aktinidin iz Actinidia chinensis Planch (Kivi) ekstrakta suvog voća, sa sadržajem aktinidina od 16000 CDU/g, i slatki koren (Glycyrrhiza glaba L.) u obliku ekstrakta suvog korena koji sadrži 3% glicirhizinske kiseline.

[0022] Alginati, kao što je natrijumalginat, su prirodni polisaharidi koji se talože u dodiru sa želudačnom kiselinom, i na taj način nastaje gel niske gustine (sa gotovo neutralnom pH) za samo par minuta.

Promena pH koja je nastala usled bikarbonata i karbonata, koji su slično njima prisutni zajedno u mešavini ovog pronalaska, bez ugljendiokisda, koji je zarobljen unutar alginatnog gela, čime se uzrokuje da on lebdi u želudačnom sadržaju. Alginatni gel nastaje u delu stomaka blizu gastroezofagealnog spajanja, precizno tako gde se razvija kiselinski džep. Na ovaj način, refluks kiseline iz stomaka u ezofagealni kanal je blokiran ili izuzetno smanjen.

[0023] Natrijumbikarbonat i kalcijumkarbonat zajedno su efektivni u neutralisanju HCI, osnovne komponente želudačnog soka koji proizvode parijetalne ćelije želuca. Onog trenutka kada oni stignu u želudac, bikarbonati, kao što je natrijumbikarbonat, reaguju sa HCI, i time se proizvodi ugljendioksid, i obezbeđuju neposredno dejstvo antacida. Ugljendioksid proizveden na taj način je zarobljen unutar alginatnog gela, čime se uzrokuje da on lebdi u želudačnom sadržaju.

[0024] Drugi uzrok, po važnosti, pojavljivanja simptoma gastroezofagealnog refluksa, je odloženo pražnjenje želuca. Što duže hrana ostaje u želucu, više je verovatno da će se gastroezofagealna epizoda javiti.

[0025] Digestivni enzimi, uzeti zajedno, su suštinski za varenje proteina iz hrane, koji se smanjuju na molekulske fragmente koji su dovoljno mali da se omogući njihova apsorpcija. Kroz njihovo dejstvo, digestivni enzimi mogu da se razbiju na peptidne veze koje zajedno razne aminokiseline i čija ponovljena koncentracija dovodi do molekula proteina; ovo olakšava proces varenja.

[0026] Upotreba digestivnog enzima aktinidina iz Actinidia chinensis Planch (kiviji) u ovoj mešavini, zajedno sa natrijumalginatom, natrijumbikarbonatom i kalcijumkarbonatom služi da modifikuje vremena pražnjenja želuca, tako što ih smanjuje. Ovaj efekat nastaje usled kombinovanog, sinergijskog dejstva usled prisustva pojedinačnih jedinjenja/supstanci.

[0027] Efekat pražnjenje želuca dobijen za kraća vremena i poboljšane efikasnosti i kontrole nastaje usled kombinovanog, sinergijskog dejstva, koje je dobijeno zahvaljujući prisustvu pojedinačnih jedinjenja/supstanci, uključujući vezu između pomenutog digestivnog enzima aktinidina iz Actinidia Chinensis Planch (kiviji) i slatkog korena.

[0028] Poželjno, pomenuta kompozicija za oralnu upotrebu u lečenju gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja uključuje smanjenje vremena pražnjenja želuca, pri čemu pomenuta kompozicija obuhvata mešavinu koja ima karakteristike kako je definisano u priloženom patentnom zahtevu.

[0029] Slatki koren (Glycyrrhiza glaba L.) pripada porodici Leguminosae i sadrži, među svojim glavnim sastojcima, triterpenske saponine, pre svega glicirhizin (glicirhizinska kiselina). Slatki koren (Glycyrrhiza glaba L.) koji je prisutan u mešavini u obliku suvog ekstrakta (d.e.) korena ispoljava, u sinergiji sa drugim jedinjenjima ili supstancama prisutnim u mešavini, efektivno dejstvo na smanjenje želudačne sekrecije , koja je važna za smanjenje količine proizvedene kiseline, koliko je god to moguće.

[0030] Poželjno, mešavina ovog pronalaska i, kasnije, kompozicija koja je sadrži mogu da ispolje (i) antirefluksno dejstvo koje za cilj ima smanjenje prolaska kiseline iz želuca u ezofagus, (ii) antacidno dejstvo, koje za cilj ima neutralisanje želudačne hiperkiselosti, (iii) digestivno dejstvo, koje za cilj ima smanjenje vremena pražnjenja želuca i/ili (iv) anti-ulcerozno/anti-zapaljensko dejstvo.

[0031] Kompozicija ovog pronalaska obuhvata pomenutu mešavinu, koja obuhvata natrijumalginat, natrijumbikarbonat, kalcijumkarbonat, pomenuti digestivni enzim aktinidin from Actinidia chinensis Planch (kiviji) i slatki koren (Glycyrrhiza glaba L.) u obliku ekstrakta suvog korena; pri čemu je pomenuta kompozicija za upotrebu u lečenju gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja, poželjno u simptomatskom lečenju gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja. Pomenuta kompozicija je za oralnu upotrebu u bilo kom farmaceutski prihvatljivom obliku davanja, kao što je, na primer, u obliku kapsula, pastila, tableta, granula ili praškova rastvorljivih ili disperzibilnih u vodi upakovanih u štapiće ili kesice, sirupa ili rastvora. Poželjno, pomenuta kompozicija za upotrebu ovog pronalaska takođe validno može da se primenjuje kao gastroprotektivno sredstvo u lečenju gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja koje uključuje normalizovanje i poboljšanje digestivne funkcije.

[0032] Zajedno sa anti-refluksnim, antacidnim i anti-zapaljenskim dejstvom, kompozicija za upotrebu prema ovom pronalasku povezuje ciljano dejstvo digestivnog enzima aktinidina iz Actinidia chinensis Planch (kiviji), čime se obezbeđuje značajno smanjenje vremena pražnjenja želuca, zahvaljujući bržem i efektivnijem varenju, i istovremeno smanjenje količine proizvedene hlorovodonične kiseline koja dolazi u kontakt sa želudačnom sluzokožom. Smanjenje vremena pražnjenja želuca, smanjenje količine proizvedene hlorovodonične kiseline i smanjenje vremena kontakta između hlorovodonične kiseline i želudačne sluzokože zajedno obezbeđuju da kompozicija za upotrebu ovog pronalaska poboljša simptome GERD.

[0033] U poželjnom načinu ostvarivanja ovog pronalaska, kompozicija za upotrebu obuhvata mešavinu koja sadrži, u odnosu na 10 ml zapremine: (i) natrijumalginat: 500 mg; (ii) natrijumbikarbonat: 150 mg; (iii) kalcijumkarbonat: 266.66 mg; (iv) digestivni enzim aktinidin iz Actinidia chinensis Planch (kiviji) ekstrakta suvog voća, sadržaj aktidina 16000 CDU/g: 20 mg; i (v) Glycyrrhiza glabra L. (slatki koren) ekstrakt suvog korena koji sadrži 3% glicirhizinske kiseline: 30 mg. Kompozicija je pripremljena pomoću tehnika i opreme koji su poznati stručnjaku, koji može da pomeša različite komponente/supstance i da stvori farmaceutski oblik, npr. kapsule, pastile, tablete, granule ili praškove rastvorljive ili disperzibilne u vodi upakovane u štapiće ili kesice, sirup ili rastvor.

[0034] Kompozicija za upotrebu prema ovom pronalasku omogućava sinergiju sledećih dejstava:

● Antirefluksno dejstvo, koje za cilj ima smanjenje prolaska kiseline iz želuca u ezofagus;

● Dejstvo antacida, koje za cilj ima neutralisanje želudačne hiperkiselosti;

● Digestivno dejstvo, koje za cilj ima smanjenje vremena pražnjenja želuca;

● Antiulcerozno/antizapaljensko dejstvo.

[0035] Kao što je već napomenuto, GERD je uzrokovan nevoljnim i nesvesnim prolaskom dela želudačnog sadržaja u ezofagus; ovaj prolazak izaziva oštećenje ezofagealne sluzokože koje varira u zavisnosti od broja refluksa tokom vremena i količine kiseline koja dolazi u dodir sa sluzokožom. Na ovaj drugi faktor naročito mogu da utiču vremena pražnjenja želuca; zapravo, što duže hrana koja se unosi ostaje u želucu, veća će biti količina kiseline koju proizvode parietijalne ćelije, što za posledicu ima porast simptoma povezanih sa GERD.

[0036] Kada se jednom daju, alginati sadržani u proizvodu prema ovom pronalasku će stvoriti, kako je prethodno opisano, "čep" koji smanjuje količinu želudačnog soka koji se podiže od želuca prema ezofagusu, čime se svodi na minimum vreme izloženosti sluzokože kiselinama. Istovremeno, natrijumbikarbonat i kalcijumkarbonat reaguju sa HCI, i na taj način je neutrališu; dejstvo antacida smanjuje količinu HCI koja će se proliti u ezofagusu nakon sledećeg refluksa, čime će se smanjiti oštećenje ezofagealne sluzokože.

[0037] Digestivni enzim aktinidin iz Actinidia chinensis Planch (kiviji) može da razbije peptidne veze koje drže zajedno razne aminokiseline i čija ponovljena koncentracija dovodi do molekula proteina; ovo olakšava proces varenja. Teško je proceniti odnos između vremena pražnjenja želuca i vremena izloženosti ezofagusa želudačnim sokovima; odlaganje vremena pražnjenja želuca utiče na količinu kiseline koja prolazi pored gastroezofagealnog ventila, ali ne utiče na ukupan broj refluksa. Smanjenje vremena pražnjenja želuca smanjuje količinu kiseline koja se proizvodi tokom vremena; stoga, cilj dejstva digestivnih enzima je da smanji količinu kiseline koja prolazi kroz gastroezofagealni ventil, čime se smanjuju vremena izloženosti sluzokože štetnom dejstvu kiselina i dalje čime se štiti želudačna sluzokoža od produženog dejstva kiselina. Na kraju, antizapaljensko dejstvo slatkog korena poboljšava simptome povezane sa produženim izlaganjem sluzokože dejstvu želudačnih sokova.

Eksperimentalni deo

Ispitivanje izvedeno na kompoziciji ovog pronalaska za lečenje gastroezofagealnog refluksa.

[0038] Ocenjen je efekat kompozicije ovog pronalaska C1 i njegovih pojedinačnih sastojaka (kako bi se pratio sinergijski efekat među pojedinačnim komponentama) (i) na pražnjenje želuca, (ii) na refluksni ezofagitis, (iii) na želudačnu sekreciju (zapreminu želudačnog sadržaja, pH i ukupnu kiselost) i (iv) na želudačni čir.

Materijal i postupci: Životinje

[0039] Korišćeni su mužjaci miševa težine 20-25 g, ICR soja koje je obezbedila kompanija Charles River. Životinje su bile smeštene u prostorijama sa kontrolisanom temperaturom (temperatura od 23±2 °C, vlažnost 50±2%, 12-časovni ciklusi svetla i mraka).

[0040] Miševi su imali slobodan pristup vodi i hrani, što je podrazumevalo standardnu ishranu koju je obezbedila kompanija Mucedola Mangimi (Settimo Milanese, Italija).

[0041] Svi eksperimenti su izvedeni uz poštovanje zakonske uredbe br.116 od 27. januara 1992. i prema smernicama Saveta evropske unije (86/609/EEC i 2010/63/EU).

Pražnjenje želuca

[0042] Pražnjenje želuca je procenjeno postupkom koji su opisali Smits i Lefebvre (1996). Zbog određivanja pražnjenja želuca, životinjama je oralno dat marker (0.2 ml/miš suspenzije koja sadrži 50 mg crvenog fenola u 100 ml 1.5% karboksimetilceluloze). Nakon dvadeset minuta, životinje su žrtvovane u atmosferi zasićenoj CO2i želudac je uklonjen. Želudac je zatim stavljen unutar epruvete koja sadrži 4 ml slanog rastvora; nakon 20 sekundi mućkanja, dodata su 2 ml NaOH 1 M u svaku epruvetu kako bi se postigao maksimalni intenzitet boje.

[0043] Spektrofotometrijska analiza (560 nm) je izvedena na 1 ml ovog rastvora. Procenat pražnjenja želuca je izračunat prema sledećoj formuli: 100X(1-[količina crvenog fenola prisutna u želucu posle 20 min)/(količina crvenog fenola prisutna u želucu u 0 vreme]).

Refluksni ezofagitis i gastrična sekrecija/čir

[0044] Refluksni ezofagitis i gastrična sekrecija/čir su indukovani pomoću eksperimentalnog modela ligacije pilorusa koji su opisali Shay and coll. (1945). Životinje, koje su izgladnjivane 24 sata ali sa slobodnim pristupom vodi, su anestezirane, stomak im je bio otvoren a pilorus podvezan. Četiri sata nakon hirurškog postupka (vreme neophodno da se odredi submaksimalna lezija sluzokože ezofagusa), miševi su žrtvovani u atmosferi zasićenoj CO2a ezofagus i želudac su uklonjeni radi procene: 1) makroskopskog ezofagealnog i želudačnog oštećenja, 2) stepena ezofagealnog i gastričnog zapaljenja (dejstva mijeloperioksidaze) i 3) karakterističnih parametara gastričke sekrecije (zapremina želudačnog sadržaja, pH i ukupna kiselost).

1) Makroskopsko ezofagealno i gastrično oštećenje

[0045] Ezofagus (uzdužno otvoren) i želudac (otvoren duž većeg zakrivljenja), su raspoređeni na polistirenskom nosaču i analizirani pomoću mikroskopa kako bi se identifikovale lezije na sluzokoži. Oštećenje na mukozi je određeno pomoću skale sa bodovanjem kojom se razmatra ozbiljnost i veličina hiperamije i hemoragijskih erozija.

2) Stepen zapaljenja ezofagusa i želuca

[0046] Stepen zapaljenja ezofagusa i želuca je ocenjen određivanjem dejstva mijeloperioksidaze (MPO). MPO je protein koji se nalazi u azurofilnim granulama polimorfonuklearnog neutrofilisa i koristi se kao marker leukocitne infiltracije. Kako bi se ocenila aktivnost MPO, tkiva su podvrgnuta 3 ciklusa homogenizacije od kojih svaki traje po 10 sekundi, pri maksimalnoj brzini, u odgovarajućem liznom puferu definisanom kao MOPS (0.5% HTAB u MOPS 10 Mm), u odnosu od 50 mg tkiva/lml MOPS.

Homogenati su podvrgnuti centrifugi na 12,000 obrtaja po minutu tokom 20 min na 4°C. Nakon toga, supernatanti su inkubirani sa NaPP (pufer natrijumfosfata pH 5.5) i TMB 16 mM (tetrametilbenzidin) i, nakon pet minuta inkubacije na sobnoj temperaturi, dodat je H2O2razblažen u NaPP. Reakcija je blokirana hladnom sirćetnom kiselinom 2M i očitavanje od 1 ml reakcionog rastvora je uzeto na spektrofotometru na talasnoj dužini (X) od 650-655 nm. Dobijene vrednosti su upoređene sa standardnom MPO krivom a rezultati izraženi kao U/ml od MPO.

3) Procena karakterističnih parametara gastrične sekrecije

[0047] Želudačni sadržaj je sakupljen zbog određivanja pH vrednosti i ukupne količine želudačnog soka (zapremine). Nakon toga, u želudačni sadržaj su dodata 2 ml destilovane vode, koji su zatim centrifugirani na 5000 obrtaja po minutu tokom 15 min radi određivanja ukupne kiselosti, izvedenog na supernatantu titracijom do pH=7 (upotrebom 2% fenolftaleina kao indikatora) sa NaOH 0.01 N. Ukupna kiselost je izražena kao miliekvivalent[H+]/ml/4 h.

Farmakološko lečenje

[0048] Miševi su bili podeljeni u 6 grupa:

Grupa 1: kontrola, kompozicija C1 bazirana na standardnoj ishrani.

Grupa 2: kompozicija ovog pronalaska C2 bazirana na: natrijumbikarbonatu, natrijumalginatu, kalcijumkarbonatu, digestivnim enzimima i slatkom korenu,

Grupa 3: kompozicija C3 bazirana na: natrijumbikarbonatu, natrijumalginatu i kalcijumkarbonatu, Grupa 4: kompozicija C4 bazirana na: natrijumbikarbonatu, natrijumalginatu, kalcijumkarbonatu i digestivnim enzimima,

Grupa 5: kompozicija C5 bazirana na: [kompoziciji C2] mešavini biljnih ekstrakata koja se sastoji od bodljikave kruške d.e., masline d.e. i nane.

Grupa 6: kompozicija C6 bazirana na: kompoziciji C5 na polovini doze C5.

[0049] Terapije se daju oralno 30 minuta pre oralnog davanja markera usvojenog da bi se izmerilo pražnjenje želuca (ispitivanje pražnjenja želuca) i neposredno nakon podvezivanja pilorusa (ispitivanje gastrične sekrecije).

[0050] Ovaj pronalazak se odnosi na kompoziciju za oralnu upotrebu koja obuhvata mešavinu koja obuhvata ili se, alternativno, sastoji od natrijumbikarbonata, natrijumalginata, kalcijumkarbonata, digestivnih enzima (kako je prethodno opisano) i slatkog korena, zajedno sa mešavinom biljnih ekstrakata koja obuhvata ili, alternativno, koja se sastoji od bodljikave kruške d.e, masline d.e. i nane.

[0051] RefluWard™ način ostvarivanja obuhvata:

● biljni glicerin,

● natrijumalginat,

● kalcijumkarbonat,

● natrijumbikarbonat,

● mešavinu biljnih ekstrakata: Opuntia ficus-indica Mill. (bodljikava kruška) ekstrakt suvog kladoda, Olea europaea L. (maslina) ekstrakt suvog lista koji sadrži 3.7% polifenola, Glycyrrhiza glabra L. (slatki koren) ekstrakt suvog korena koji sadrži 3% glicirhizinske kiseline, Mentha x piperita L. (nana) ekstrakt suvog lista 1:4 i Actinidia chinensis Planch (kivi) ekstrakt suvog voća, sadržaj aktinidina 16000 CDU/g,

● konzervansi kalijumsorbat i natrijumbenzoat,

● arome.

[0052] Za dva pakovanja štapića od 10 ml za oralnu upotrebu:

Mešavina biljnih ekstrakata 326 mg, od kojih:

● Bodljikava kruška d.e.: 104 mg,

● Maslina d.e.: 76 mg,

● Polifenoli (dobijeni iz bodljikave kruške d.e. i masline d.e.): 12 mg,

● Slatki koren d.e.: 60 mg,

● Nana d.e.1:4, 60 mg,

● Kivi d.e. (aktinidin 16000 CDU/g): 40 mg.

[0053] Za 100 ml:

Mešavina biljnih ekstrakata 1630 mg, pri čemu:

● Bodljikava kruška d.e.: 520 mg,

● Maslina d.e.: 380 mg,

● Polifenoli (dobijeni od bodljikave kruške d.e. i masline d.e.): 60 mg,

● Slatki koren e.s: 300 mg,

● Nana d.e.1:4, 300 mg,

● Kivi d.e. (aktinidin 16000 CDU/g): 200 mg.

[0054] Opuntia ficus-indica (L.) Mill. (bodljikava kruška) je biljka koja pripada porodici Cactaceae; kladodi bodljikave kruške (polimeri koji sadrže sluz i pektin) izvode aktivnost zaceljivanja koja je korisna za lečenje čireva na želucu.

[0055] Olea europaea L. (maslina) je biljka koja prirada porodici Oleaceae. Maslina ima visoku antioksidantsku moć zahvaljujući aktivnim supstancama koje su prisutne u njenim ekstraktima, uključujući, između ostalih, oleinsku kiselinu, polifenole i skvalene. Antioksidantsko dejstvo masline je efektivno u lečenju gastroezofagealnog refluksa i drugih srodnih patologija kao što je ezofagitis. Refluks želudačnih sokova u ezofagusu je glavni faktor predispozicije za ezofagitis; ovaj poslednji može da nastane ne samo usled kontakta između kiselina u želucu i ezofagealne sluzokože, već takođe može da zavisi i od drugih faktora.

[0056] Mentha x Piperita L. (nana) je biljka koja pripada porodici Lamiaceae, koja je korisna u simptomatskom lečenju digestivnih poremećaja kao što je dispepsija (na primer, spastički poremećaji u gornjem gastrointestinalnom traktu) i gastritis (zapaljenska bolest sluzokože želuca). Obe ove patologije su u korelaciji sa GERD: prva predstavlja faktor predispozicije za bolest, dok druga može da bude posledica kontinuiranog kontakta želudačnih sokova sa želudačnom sluzokožom.

[0057] Podnosilac ove prijave je izveo sledeći in vivo eksperimentalni test, u kojem je ispitao tri formulacije, F1 (kompozicija ovog pronalaska), F2 i F3 – pogledati tabelu 1 (kompozicija F1), tabelu 2 (kompozicija F2), tabelu 3 (kompozicija F3) i Fig.1.

Tabela 1

Tabela 3

Materijali i postupci

Životinje

[0058] Korišćeni su mužjaci težine 20-25 g miševa ICR soja, koje je obezbedila kompanija Charles River. Životinje su bile smeštene u prostorijama sa kontrolisanom temperaturom (temperatura od 23±2 °C, vlažnost 50±2%, 12-časovni ciklusi svetla i mraka) i imale su slobodan pristup vodi i hrani (što je podrazumevalo standardnu ishranu koju je obezbedila kompanija Mucedola Mangimi (Settimo Milanese, Italija) izuzev 20 minuta (ili 18 sati) pre eksperimenta sa pražnjenjem želuca. Svi eksperimenti su izvedeni uz poštovanje zakonske uredbe br.116 od 27. januara 1992. i prema smernicama Saveta evropske unije (86/609/EEC i 2010/63/EU).

Pražnjenje želuca

[0059] Pražnjenje želuca je procenjeno postupkom koji su opisali Smits i Lefebvre (1996) [1]. Životinje su izgladnjivane 18 sati i nakon toga im je dozvoljeno da jedu 20 minuta pre početka eksperimenta sa ciljem da se osigura da je sadržaj hrane u želucu kod svake životinje što više sličan. Zbog određivanja pražnjenja želuca, životinjama je oralno dat marker (0.2 ml/miš suspenzije koja sadrži 50 mg crvenog fenola u 100 ml 1.5% karboksimetilceluloze). Posle dvadeset minuta, životinje su žrtvovane u atmosferi zasićenoj CO2i želudac je uklonjen. Želudac je zatim stavljen unutar epruvete koja sadrži 4 ml slanog rastvora; nakon 20 sekundi mućkanja, dodata su 2 ml NaOH 1 M u svaku epruvetu kako bi se postigao maksimalni intenzitet boje. Spektrofotometrijska analiza (560 nm) je izvedena na 1 ml ovog rastvora. Procenat pražnjenja želuca je izračunat prema sledećoj formuli: 100 x (1-[količina crvenog fenola prisutna u želucu posle 20 min)/(količina crvenog fenola prisutna u želucu u 0 vreme]).

Farmakološko lečenje

[0060] Terapije se daju oralno 30 minuta pre oralnog davanja markera usvojenog da bi se izmerilo pražnjenje želuca (ispitivanje pražnjenje želuca). Formulacije su suspendovane u glicerolu kako bi se dala konačna zapremina od 100 µl po mišu.

Statistička analiza

[0061] Rezultati su izraženi kao srednja vrednost ± standardna greška (SEM) n=8-10 eksperimenata i analizirani upotrebom Studentovog t-testa da bi se procenile pojedinačne terapije naspram srednje vrednosti kontrolne grupe i analize varijante nakon koje je usledio Tukey-Kramerov test radi višestrukog poređenja i analize sredstava lečenja. Vrednost od P<0.05 se smatrala statistički značajnom.

Rezultati

Pražnjenje želuca

[0062] Fig.1 pokazuje rezultate u pogledu efekta formulacija F1, F2 i F3 na pražnjenje želuca kod životinja koje su izgladnjivane 18 sati i nakon toga im je dozvoljeno da jedu 20 minuta pre početka eksperimenta kako bi se omogućilo prisustvo iste količine hrane u želudcima svih životinja. Kao što je moglo da se primeti, formulacija F1, koja je oralno data u dozi od 10 µl/miš, je mogla značajno da poveća pražnjenje želuca (maksimalni efekat: formulacija F141.1±0.6). Nasuprot tome, formulacije 2 i 3, date u istoj dozi od 10 µl/miš, su se pokazale kao neaktivne.

[0063] Fig.1 se odnosi na efekat formulacija F1-F2-F3 (10 µl/miš, per os) na pražnjenje želuca koje je procenjivano kod miševa koji su izgladnjivani 18 sati i nakon toga im je dopušteno da jedu 20 minuta pre početka davanja formulacija. Formulacije su davane 30 minuta pre početka eksperimenta. Svaka tačka predstavlja srednju vrednost od 8-10 životinja. *P<0.05 i *P<0.001 nasuprot kontrole; °°P<0.01.

[0064] Fig.1 pokazuje rezultate u pogledu efekta formulacija F1-F2-F3 na pražnjenje želuca kod životinja koje su izgladnjivane 18 sati i nakon toga im je dopušteno da jedu 20 minuta pre početka eksperimenta kako bi se obezbedilo prisustvo iste količine hrane unutar želuca svih životinja.

[0065] Kao što je moglo da se primeti, formulacija F1, koja je oralno data u dozi od 10 µl/miš, je mogla značajno da poveća pražnjenje želuca (maksimalni efekat: formulacija F141.1±0.6).

[0066] Nasuprot tome, kompozicija F2 [koja ne sadrži: i) digestivni enzim, i ii) slatki koren (Glycyrrhiza glaba L.) u obliku tečnog ekstrakta ili suvog ekstrakta] i kompoziciju F3 [koja ne sadrži: (ii) slatki koren (Glycyrrhiza glaba L.) u obliku tečnog ekstrakta ili suvog ekstrakta] koja se daje u istoj dozi od 10 µl/miš pokazuju procente pražnjenja želuca koji mogu da se porede sa kontrolnom grupom, koja se ne daje u bilo kojoj kompoziciji.

[0067] Trebalo bi zapamtiti da, nasuprot onome što neko možda očekuje, formulacija F3, koja takođe sadrži digestivni enzim aktinidin (ekstrakt kivija), u poređenju sa formulacijom F2, odlučno ima manji efekat na pražnjenje želuca od formulacije F2.

Claims

Reference [0068] [1] Smits GJ, Lefebvre RA. Influence of aging on gastric emptying of liquids, small intestine transit, and fecal output in rats. Exp Gerontol.1996; 31(5):589-96. Patentni zahtevi

1. Kompozicija koja obuhvata mešavinu koja obuhvata:

(i) natrijumalginat;

(ii) kalcijumkarbonat;

(iii) natrijumbikarbonat;

(iv) digestivni enzim aktinidin iz Actinidia chinensis Planch (kivi) ekstrakta suvog voća, sa sadržajem aktinidina od 16000 CDU/g, i

(v) slatki koren (Glycyrrhiza glaba L.) u obliku ekstrakta suvog korena koji sadrži 3% glicirhizinske kiseline.

2. Kompozicija prema zahtevu 1 u kojoj pomenuta mešavina dalje obuhvata mešavinu biljnih ekstrakata koja se sastoji od:

- Opuntia ficus-indica Mill. (bodljikava kruška), poželjno u obliku ekstrakta suvog kladoda,

- Olea europaea L. (maslina), poželjno u obliku ekstrakta suvog lista koji sadrži 3.7% polifenola, - Mentha x piperita L. (nana), poželjno u obliku ekstrakta suvog lista 1:4.

3. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1-2 za upotrebu kao lek.

4. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1-3 za oralnu upotrebu u lečenju gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja.

5. Kompozicija za upotrebu prema zahtevu 4, pri čemu lečenje gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja uključuje smanjenje vremena pražnjenja želuca.

6. Kompozicija za upotrebu prema zahtevu 4 ili 5, pri čemu lečenje gastroezofagealne refluksne bolesti ili poremećaja uključuje normalizovanje i poboljšanje digestivne funkcije.