RS61038B1 - Jedinjenja i metodi za lečenje epileptičnog poremećaja - Google Patents

Jedinjenja i metodi za lečenje epileptičnog poremećaja

Info

Publication number
RS61038B1
RS61038B1 RS20201007A RSP20201007A RS61038B1 RS 61038 B1 RS61038 B1 RS 61038B1 RS 20201007 A RS20201007 A RS 20201007A RS P20201007 A RSP20201007 A RS P20201007A RS 61038 B1 RS61038 B1 RS 61038B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
clemizole
compound
pharmaceutically acceptable
acceptable salts
administered
Prior art date
Application number
RS20201007A
Other languages
English (en)
Inventor
Scott C Baraban
Original Assignee
Univ California
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ California filed Critical Univ California
Publication of RS61038B1 publication Critical patent/RS61038B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/27—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carbamic or thiocarbamic acids, meprobamate, carbachol, neostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A61K31/36—Compounds containing methylenedioxyphenyl groups, e.g. sesamin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4015—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. piracetam, ethosuximide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4166—1,3-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. phenytoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/433—Thidiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/473—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. acridines, phenanthridines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Opis
VEZE SA SRODNIM PATENTNIM PRIJAVAMA
[0001] Ova prijava koristi pravo U.S. privremene patentne prijave br.61/867,397, podnete 19. avgusta 2013.
IZJAVA O PRAVIMA IZRADE PRONALAZAKA U OKVIRU FEDERALNO SPONZORISANOG ISTRAŽIVANJA I RAZVOJA
[0002] Ovaj pronalazak izrađen je uz podršku Vlade, grant broj R01 NS079214 03 koji je dodelio Nacionalni institut za zdravlje (National Institutes of Health). Vlada ima izvesna prava na pronalazak.
OSNOV PRONALASKA
[0003] Dravetov sindrom (Dravet syndrome, DS) je katastrofična pedijatrijska epilepsija sa jakom intelektualnom onesposobljenošću, ometenim socijalnim razvojem i upornim napadima rezistentnim na lekove. Jedan od njegovih osnovnih uzroka je mutacija u Nav1.1 (SCN1A), voltažno-zavisnom kanalu za prolaz natrijuma. Napadi koje doživljavaju osobe sa DS i drugim epileptičnim poremećajima ne mogu se adekvatno kontrolisati raspoloživim antiepileptičnim lekovima (antiepileptic drugs, AED) i deca sa DS loši su kandidati za neurohiruršku resekciju. Prema tome, u struci postoji potreba za opcijama za lečenje epilepsije, posebno opcijama za lečenje DS i srodnih katastrofičnih pedijatrijskih epilepsija. U ovom tekstu data su rešenja za ove probleme i druge probleme u oblasti.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0004] U ovom tekstu dato je, između ostalog, korišćenje klemizola, klemizolskog analoga, ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, za upotrebu u metodu lečenja epileptičnog poremećaja. U jednom aspektu, metod uključuje primenu, kod subjekta kojem je to potrebno, terapijski efikasne količine klemizola, klemizolskog analoga, ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. U drugom aspektu, metod uljučuje primenu, kod subjekta kojem je to potrebno, farmaceutske kompozicije koja uključuje terapijski efikasnu količinu klemizola, klemizolskog analoga, ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.
[0005] Pored toga, u ovom tekstu su obezbeđene farmaceutske kompozicije za lečenje epileptičnih poremećaja. U jednom aspektu je farmaceutska kompozicija koja uključuje klemizol, klemizolski analog, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u lečenju epileptičnog poremećaja.
KRATAK OPIS SLIKA
[0006]
Sl 1. Molekulska karakterizacija scn1Lab mutanata zebrice. (A) Sekvenciranje je potvrdilo T-u-G mutaciju u cDNK scn1Lab mutanta. (B) Verifikacija smanjene ekspresije u scn1Lab mutantima u poređenju sa rođačkim ("brat/sestra") kontrolama 3, 5 i 7 dpf, uz korišćenje qPCR. Podaci su prikazani kao srednja vrednost ± S.E.M; *značajnost je postavljena na p < 0.05, Studentov t-test. Podaci su normalizovani u odnosu na β-aktin kao endogeni kontrolni gen. Vrednosti predstavljaju proseke za pet nezavisnih bioloških uzoraka (1 uzorak = 10 pulovanih larvi) za svaki od 3 razvojna stupnja. Podaci su prikazani kao srednja vrednost ± S.E.M; *značajnost je postavljena na p < 0.05, Studentov t-test. (C) Relativna ekspresija scn8aa i scn8ab u Nav1.1 mutantima (n = 5) i rođačkim kontrolama (n = 5) na 5 dpf. Podaci su predstavljeni kao u B. (D) In situ hibridizacija na čitavom kalupu za scn1Lab kod larve zebrice na 3, 5 i 7 dpf. Larve divljeg tipa prikazane su bočno; ekspresija je prikazana tamnoljubičasto. Ekspresija scn1Laa na 3 dpf prikazana je radi poređenja. Srce je označeno vrhovima strelica na panelima za 5 i 7 dpf. (E) Ekspresija scb1Laa na 3 dpf, pogled odozgo; zapaziti upadljivu ekspresiju u regionima koji odgovaraju CNS larve zebrice. Skraćenice: Tel, telencefalon; TeO, optički tektum; Cb, cerebelum. Barovi = 0.35 mm na D, 0.2 mm na E.
Sl 2. Analiza scn1Lab mutanata zebrice na mikročipu (microarray). (A) Toplotne karte prikazuju ekspresiju gena diferencijalno eksprimiranih kod scn1Lab mutantnih i rođačkih kontrolnih larvi 5 dpf. Redovi predstavljaju pojedinačne gene. Kolone predstavljaju različite larve. Geni koji se visoko eksprimiraju u scn1Lab mutantima u odnosu na kontrole su kako je prikazano. (B) MA dijagram normalizovanih podataka sa mikročipa za sve 44000 gena. Log-odnos M i prosečni intenzitet fluorescencije A izračunati su kao proseci svih ponavljanja. (C) Spisak 30 gena koji pokazju najveće razlike u ekspresiji kod scn1Lab mutanata i rođačkih kontrola.
Sl 3. Kvantitativna RT-PCR analiza scn1Lab mutanata zebrice. (A) Upoređivanje promena u ekspresiji gena, dobijenih analizom na mikročipu ("čip") i analizom qPCR u realnom vremenom. Y-osa prikazuje koliko je puta u proseku promenjena ekspresija svakog gena zebrice na 5 dpf. X-osa prikazuje različite gene. (B) qPCR analiza tri gena uključena u epileptogenezu. Relativna ekspresija gena prikazana je u vidu log2odnosa prema najmanje zastupljenom transkriptu (log2ΔΔct). Podaci su normalizovani u odnosu na β-aktin kao endogeni kontrolni gen. Vrednosti predstavljaju proseke za pet nezavisnih bioloških uzoraka (1 uzorak 10 pulovanih larvi). Stubići prikazuju S.E.M; *p < 0.05 t-test. (C) Ontološka klasifikacija gena za diferencijalno eksprimirane gene detektovane u scn1Lab mutantima na 5 dpf (p < 0.05 jednofaktorska ANOVA i broj puta promene >1.5). Prikazani su biološki procesi koji pokazuju najmanje 5 genskih anotacija u najmanje jednoj kategoriji.
Sl 4. Spontani napadi kod scn1Lab mutanata zebrice. (A) Prikazane su imobilisane i u agar uklopljene larve zebrice. Slike su dobijene korišćenjem objektiva 4x i uveličanja 2x, na uspravnom Olympus mikroskopu tokom elektrofizioloških merenja u prednjem mozgu kod larvi rođačke kontrole (A, levo) i scn1Lab mutanta (A, sredina), 5 dpf. Zapaziti tamnu pigmentaciju kod mutanata. Elektrode za registrovanje mogu se videti na panelima A1-2, a približna pozicija vrha elektrode za registrovanje u prednjem mozgu (crveni kružić) prikazana je korišćenjem reprezentativne HuC:GFP obeležene larve A, desno. Bar: 100 μm. (B) Reprezentativni dijagram putanje lokomocije larvi rođačke kontrole (B, levo) i scn1Lab mutanta (B, desno) 5 dpf. (C) Reprezentativni zapisi desetominutnih epoha, dobijeni na prednjem mozgu paralisanih, imobilisanih i u agar uklopljenih scn1Lab mutantnih larvi između 3 i 7 dpf. Zapaziti prisustvo spontanog pražnjenja impulsa u naletu, male i velike amplitude; dodatna temporalna širenja aktivnosti napada. Prikazan je i reprezentativni snimak, pod identičnim uslovima, za rođačku kontrolnu larvu, na 5 dpf. Bar: 2 mV; 30 sec.
Sl 5. Farmakološka validacija scn1Lab mutanata zebrice. (A) Toplotna karta prikazuje odgovor na devet različitih AED. Svaka kolona predstavlja procenat promene u frekvenciji pražnjenja (bazalna vrednost - lek/bazalna vrednost x 100) za svakog pojedinačnog mutanta zebrice. Lekovi koji inhibiraju napade prikazani su tamnoplavo. Svi lekovi su testirani u koncentraciji od 1 mM. Zapaziti da su u nekim ogledima karbamazepin i vigabatrin povećali frekvenciju pražnjenja iznad početnih bazalnih nivoa. (B) Dijagram prosečne promene frekvencije impulsnog naleta i standardna greška za podatke prikazane na toplotnoj karti. Parni t-test ili Wilcoxonov test (Wilcoxon signed rank sum test) za podatke koji nisu prošli test normalne raspodele pokazali su sledeće značajnosti: diazepam (p = 0.002; n = 7), kalijum bromid (p = 0.016; n = 7), stiripentol (p = 0.024; n = 7), i valproat (p = 0.004; n = 7). (C) Dijagram trajanja impulsnog naleta za sva tri ogleda prikazana na A. Podaci su iskazani kao srednja vrednost ± S.E.M. za elektrografske napade u bazalnom stanju (crni stubići) i posle izlaganja leku (beli stubići). Insert prikazuje reprezentativni dvominutni zapis tokom ogleda sa stiripentolom; barovi: veliki trag 1 mV, 1 sec; mali trag, 1 mV, 100 msec. (D) Dijagram frakcionog vremena provedenog u napadu za sve oglede prikazane na A. Podaci su prikazani kao srednja vrednost ± S.E.M. za elektrografske napade u bazalnom stanju (crni stubići) i posle izlaganja leku (beli stubići). Studentov t-test ili Mann-Whitneyjev test zbira rangova za podatke koji nisu prošli test normalne raspodele pokazali su sledeće značajnosti: diazepam (p = 0.001; n = 7); kalijum bromid (p = 0.043; n = 7); stiripentol (p = 0.007; n = 7) i valproat (p = 0.007; n = 7 (E) Dijagrami putanja lokomocije za 10 pojedinačnih mutantnih larvi -embrionalni medijum (gornji red) ili ketogena dijeta, 48 h. Dijagrami prikazuju putanje i brzinu plivanja, pri čemu tamnije boje označavaju veće brzine; prikazani su desetominutni ogledi. (F) Reprezentativne desetominutne epohe vanćelijskog registrovanja za iste jedinke prikazane na E; na dijagramima lokomocije reprezentativni primeri označeni su *. Barovi: 1 mV, 30 sec. Insert prikazuje impulsni nalet pri višoj temporalnoj rezoluciji (označeno #); bar: 1 mV, 100 msec.
Sl 6. Identifikovanje lekova koji zaustavljaju napad kod scn1Lab mutantnog epileptičnog fenotipa. (A) Pravougaoni dijagram prosečne brzine (u mm/s) za dva uzastopna snimka larve mutanta u embrionalnom medijumu. Eksperimenti su izvedeni tako što se larva mutanta najpre smesti u embrionalni medijum da se dobije bazalni lokomotorni odgovor, embrionalni medijum se zatim zameni novim embrionalnim medijumom (čime se imitira postupak upotrebljen za testna jedinjenja) da se dobije drugi lokomotorni odgovor. Prikazan je procenat promene brzine u odnosu na bazalnu vrednost (registrovanje #1) u poređenju sa eksperimentom (registrovanje #2). U pravougaonom dijagramu, dno i vrh pravougaonika predstavljaju 25. persentil, odnosno 75. persentil. Linija koja prolazi kroz pravougaonik predstavlja vrednost medijane, a vertikalne linije obuhvataju čitav opseg vrednosti. Ovaj dijagram predstavlja normalne promene aktivnosti u odsustvu leka. (B) Dijagram efekta jedanaest poznatih antiepileptičnih lekova na lokomociju u napadu kod scn1Lab mutanata, 5 dpf. Test baziran na fenotipu izveden je u formatu 96 bunarčića (na primer, vidi panel 5C1). Stubići predstavljaju procenat promene prosečne brzine kada se upoređuje bazalno registrovanje aktivnosti mutanta tokom napada sa istim mutantnom posle primene leka. Za svaki izučavani lak u eksperimentu je korišćeno 6-12 jedinki. Lekovi su testirani u koncentracijama od 1 mM; diazepam (Dzp; p < 0.001), karbamazepin (Karb, p = 0.024), ganaksolon (Gan; p = 0.003), stiripentol (Stp; p = 0.001), valproat (Vpa, p = 0.026) i 48 h izlaganja ketogenoj dijeti (KD; p = 0.003) smanjili su aktivnost tokom napada, izmereno kao promena brzine, za više od 34% (isprekidana linija na B; prikazuje koliko je puta promena veća od standardne devijacije u kontrolnim registrovanjima). Acetazolamid (Acet, p < 0.001) i etosuksimid (Ets; p = 0.250) povećali su ponašanje napada; levetiracetam (Lev; p = 0.243), i lamotrigin (Ltg; p = 0.058) nisu imali efekat. (C) Dijagram lokomotornog ponašanja u vezi sa napadom za scn1Laab mutante, 5 dpf, za 320 testiranih jedinjenja. Obojeni kružići predstavljaju pozitivne pogotke; jedinjenja koja su smanjila aktivnost za 100% obično su bila toksična; 6-12 jedinki po ogledu. Vrh strelice pokazuje prvi ogled sa klemizolom. Zapaziti da su neka jedinjenja povećala aktivnost napada, kao što je i bilo očekivano. (D) Dijagram ponovljenih ogleda za lekove, na različitim leglima scn1Lab mutanta, 5 dpf; 100 μM po leku; 10 jedinki po ogledu. Skraćenice: Klem, klemizol; Klem PTZ, klemizol 15 mM PTZ; Klorg, klorgilin; Tolp, tolperizon; Zoks, zoksazolamin. Akutni efekat klemizola na ponašanje u vezi sa napadom indukovanim korišćenjem PTZ, prikazan je za larve divljeg tipa. Stubići predstavljaju prosečnu vrednost ± S.E.M. Za panele B i D: Studentov parni t-test ili Mann-Whitneyjev test zbira rangova sa značajnošću postavljenom na p = 0.01 (*) ili p < 0.001 (**). (E) Primer registrovanja elektrofiziološkoe aktivnosti scn1Lab mutanata izloženih klemizolu, najpre u testu lokomocije (panel D), a zatim korišćenjem vanćelijskih registrujućih elektroda za prednji mozak (gornji zapis; pražnjenje slično iktalnoj aktivnosti prikazano je na insertu). Slični zapisi prikazani su za netretiranog Nav1.1 mutanta (srednji zapis) i mutanta tretiranog zoksazolaminom (donji zapis). Analiza impulsnih naleta za netretirane mutante (n = 3): frekvencija impulsnih naleta = 1.5 ± 0.3 impulsnih naleta/min; trajanje impulsnog naleta = 926 ± 414 msec; frakciono vreme u napadu = 0.73 ± 0.17% u poređenju sa mutantima tretiranim klemizolom (n = 7): frekvencija impulsnih naleta = 0.2 ± 0.01 impulsnih naleta /min; trajanje impulsnog naleta = 154 ± 127 msec; frakciono vreme u napadu = 0.03 ± 0.02%; p = 0.001 za sva poređenja, Kruskal-Wallis ANOVA sa Dunnovim parnim testom višestrukog poređenja). Barovi: veliki trag 0.5 mV, 10 sec; insert 0.5 mV, 100 msec.
Sl. 7: Potvrda aktivnosti klemizola kod scn1Laa mutanata. (A) Registrovanje reprezentativnih desetominutnih epoha u prednjem mozgu paralizovanih, imobilisanih i u agar uklopljenih scn1Laa larvi mutanata, 6 dpf. Zapaziti prisustvo spontanih impulsnih naleta malih i velikih amplituda. (B) Dijagrami lokomotornih putanja za 10 pojedinačnih larvi mutanata i rođačkih larvi divljeg tipa. Dijagrami pokazuju brzinu plivanja i lokomotorne putanje, tamnije boje prikazuju veće brzine; prikazani su desetominutni ogledi. Napadi su ocenjivani na osnovu sistema opisanog u Baraban et al. (Neuroscience 2005). S0, malo ili nimalo aktivnosti plivanja; S1, povećana lokomocija; S2 aktivnost plivanja sličnog kovitlanju i S3; konvulzije celog tela sa brzim plivanjem i gubitkom stava. (C) Pravougaoni dijagram prosečne brzine (u mm/sec) za 96 zebrica, pri čemu su jedinke sortirane kao pretpostavljeni scn1Laa i rođački kontrolni pul, na osnovu goreopisanih stadijuma napada. Eksperimenti su izvedeni tako što se larva mutanta najpre smesti u embrionalni medijum da se dobije bazalni lokomotorni odgovor, embrionalni medijum se zatim zameni novim embrionalnim medijumom da se dobije drugi lokomotorni odgovor. Prikazan je procenat promene brzine u odnosu na bazalnu vrednost (registrovanje #1) u poređenju sa eksperimetom (registrovanje #2). U pravougaonom dijagramu, dno i vrh pravougaonika predstavljaju 25. persentil, odnosno 75. persentil. Linija koja prolazi kroz pravougaonik predstavlja vrednost medijane, a vertikalne linije obuhvataju čitav opseg vrednosti. Prikazani su dijagrami za svih 96 jedinki (levo), pretpostavljenu scn1Laa zebricu (sredina) i rođačke kontrole (levo). PCR analiza koja je usledila izvršena je da bi se potvrdili mutantni i kontrolni pulovi. (D) Dijagram efekta stiripentola (Stp), diazepama (Dzp), klemizola (Klem) i lamotrigina (Ltg) na lokomotorno ponašanje povezano sa napadom kod scn1Laa mutanata, 5 dpf. Prosečna brzina prikazana je pre i posle primene leka. N = 7 jedinki za svaki lek. Stubići predstavljaju prosečnu vrednost ± S.E.M. Studentov parni t-test ili Mann-Whitnijev test zbira rangova, značajnost je postavljena na p = 0.01 (*) ili p < 0.001 (**).
Sl. 8: Antihistaminici nemaju antiepileptična svojstva kod scn1Lab mutanata.
Dijagram efekta različitih antihistaminika u testu lokomocije u vezi sa napadom, uz korišćenje scn1Lab mutanata, 5 dpf. Prikazana je prosečna brzina pre i posle primene leka. N = 7 jedinki korišćeno za svaki lek. Dodatna jedinjenja navedena su desno.
Stubići predstavljaju prosečnu vrednost ± S.E.M. Studentov parni t-test ili Mann-Whitnijev test zbira rangova, značajnost je postavljena na p = 0.01 (*) ili p < 0.001 (**). Zapaziti: u ovom testu neki antihistaminici su povećali aktivnost napada.
Sl. 9: Studije koncentraciono-zavisnog odgovora na klemizol kod scn1Lab. Dijagrami iz dve različite studije odgovora zavisnog od koncentracije pokazuju procenat inhibicije srednje brzine u odnosu na bazalnu vrednost. N = 7 jedinki po koncentraciji i ogledi su vršeni na zasebnim leglima mutantnih larvi.
DETALJNI OPIS PRONALASKA
[0007] "Analog" ili "analogno" koriste se u skladu sa svojim opštim uobičajenim značenjem u okviru hemije i biologije i označavaju hemijsko jedinjenje koje je strukturno slično drugom jedinjenju (tj., takozvano "referentno" jedinjenju), ali se razlikuje po sastavu, npr., po zameni jednog atoma atomom različtog elementa, ili po prisustvu određene funkcionalne grupe, ili po zameni jedne funkcionalne grupe drugom funkcionalnom grupom, ili po apsolutnoj stereohemiji jednog ili više hiralnih centara referentnog jedinjenja. Prema tome, analog je jedinjenje koje je sa referentnim jedinjenjem slično ili uporedivo po funkciji i izgledu, ali ne i po strukturi ili poreklu.
[0008] "Klemizol" označava jedinjenje koje ima formulu:
[0009] Klemizol uključuje farmaceutski prihvatljive soli i formulacije klemizola, kako je opisano u ovom tekstu (npr. "klemizolska so "). Kao primer, klemizolske soli uključuju, ali se ne ograničavaju na klemizol-HCl, klemizolpenicilin, klemizolsulfat, ili klemizol-undecilat.
[0010] "Klemizolski analog", kako se navodi u ovom tekstu, označava jedinjenja slične strukture. Takva jedinjenja uključuju, na primer, jedinjenja navedena u PCT/US2008/076804, i U.S. pat. br. 4011322. Drugi primeri analoga klemizola navedeni su, na primer, u: US 2012/0232062; PCT pub. br. 2009/038248; US 2010/107739; US 2010/107742, WO 2002/089731. WO 2005/032329, WO 2009/039248, WO 2010/039195, WO 2010/107739, i WO2010/107742. Klemizolski analozi opisani u ovom tekstu (uključujući jedinjenja opisana u gornjim referencama) mogu biti supstituisani (tj. modifikovani) na 1 ili 2 pozicije, kako je navedeno u nastavku u formuli (I) (pravougaonici Y i Z). Klemizolski analozi mogu biti supstituisani (tj. modifikovani) na 4, 5, 6, ili 7 pozicije, kako je naznačeno pravougaonikom X u formuli (I).
[0011] Izraz "farmaceutski prihvatljive soli" uključuje soli aktivnih jedinjenja pripremljene sa relativno netoksičnim kiselinama ili bazama, zavisno od određenih supstituenata koji se nalaze na jedinjenjima opisanim u ovom tekstu. Kada klemizol ili klemizolski analog sadrže relativno kisele funkcionalnosti, bazne adicione soli mogu se dobiti dovođenjem u kontakt neutralne forme takvih jedinjenja sa dovoljnom količinom željene baze, čiste ili u pogodnom inertnom rastvaraču. Primeri farmaceutski prihvatljivih baznih adicionih soli uključuju natrijumove, kalijumove, kalcijumove, amonijumove, organske amino, ili magnezijumove soli, ili slične soli. Kada klemizol ili klemizolski analog sadrže relativno bazne funkcionalnosti, kisele adicione soli mogu se dobiti dovođenjem u kontakt neutralne forme takvih jedinjenja sa dovoljnom količinom željene kiseline, čiste ili u pogodnom inertnom rastvaraču. Primeri farmaceutski prihvatljivih kiselih adicionih soli uključuju one koje su izvedene iz neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična, bromovodonična, azotna, karbonska, monohidrogenkarbonska, fosforna, monohidrogenfosforna, dihidrogenfosforna, sumporna, monohidrogensumporna, jodovodonična, ili fosforasta kiselina i slično, kao i soli izvedene iz relativno netoksičnih organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, izobuterna, maleinska, malonska, benzoeva, sukcinska, suberinska, fumarna, mlečna, mandelična, ftalna, benzensulfonska, p-tolilsulfonska, limunska, tartarna, oksalna, metansulfonska, i slično. Uključene su i soli amino-kiselina kao arginat i slično, i soli organskih kiselina kao što su glukuronska ili galakturonska kiselina i slično (vidi, na primer, Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Klemizol ili klemizolski analog mogu sadržati i baznu i kiselu funkcionalnu grupu, što omogućava konverziju ili u baznu ili u kiselu adicionu so.
[0012] Prema tome, klemizol ili klemizolski analog mogu postojati kao soli, na primer sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama. Predmetni pronalazak uključuje takve soli.
Neograničavajući primeri takvih soli uključuju hidrohloride, hidrobromide, fosfate, sulfate, metansulfonate, nitrate, maleate, acetate, citrate, fumarate, proprionate, tartarate (npr., (+)-tartarte, (-)-tartarate, ili njihove mešavine uključujući racemske mešavine), sukcinate, benzoate, i soli sa amino-kiselinama kao što je glutaminska kiselina, i kvaternarne amonijumove soli (npr. metil jodid, etil jodid, i slično). Ove soli mogu se pripremiti metodima koji su poznati stručnjacima u oblasti.
[0013] Neutralne forme klemizola ili klemizolskog analoga poželjno se regenerišu dovođenjem u kontakt soli sa bazom ili kiselinom i izolovanjem matičnog jedinjenja na uobičajen način. Matična forma jedinjenja može se razlikovati od različitih slanih formi po određenim fizičkim osobinama, na primer rastvorljivosti u polarnim rastvaračima.
[0014] Pored slanih formi, klemizol ili klemizolski analog mogu se obezbediti u formi proleka. Prolekovi klemizola ili klemizolskog analoga su ona jedinjenja koja pod fiziološkim uslovima lako podležu hemijskim promenama dajući jedinjenja predmetnog pronalaska. Prolekovi klemizola ili klemizolskog analoga mogu da se posle primene konvertuju in vivo. Pored toga, prolekovi klemizola ili klemizolskog analoga mogu da se u aktivna jedinjenja konvertuju hemijskim ili biohemijskim metodima u ex vivo okruženju, kao na primer, kada dođu u kontakt sa pogodnim enzimom ili hemijskim reagensom.
[0015] Klemizol ili klemizolski analog mogu postojati u nesolvatisnim formama kao i u solvatisanim formama, uključujući hidratisane forme. Uopšteno, solvatisane forme su ekvivalentne nesolvatisanim formama i obuhvaćene su obimom predmetnog pronalaska. Klemizol ili klemizolski analog mogu postojati u više kristalnih ili amorfnih formi. Uopšteno, za upotrebe razmatrane u predmetnom pronalasku sve fizičke forme su ekvivalentne i treba da budu obuhvaćene obimom predmetnog pronalaska.
[0016] "Efikasna količina" je količina dovoljna da klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ostvare navedenu svrhu, u poređenju sa sa situacijom u odsustvu klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) (npr. postizanje efekta zbog kojeg se primenjuju, lečenja bolesti, smanjenja proteinske/enzimske aktivnosti, povećanja proteinske/enzimske aktivnosti, smanjenja aktivnosti signalnog puta, ili smanjenja jednog ili više simptoma bolesti ili stanja). Primer "efikasne količine" je količina klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) dovoljna da doprinese lečenju, prevenciji, ili smanjenju simptoma bolesti, što se može označiti i kao "terapijski efikasna količina". "Smanjenje" jednog ili više simptoma (i gramatički ekvivalenti ove fraze) označava smanjenje jačine ili frekvencije jednog ili više simptoma ili eliminaciju jednog ili više simptoma (npr. napada).
1
"Profilaktički efikasna količina" leka je količina leka koja će, kada se primeni kod subjekta, ostvariti željeni profilaktički efekat, npr., preveniraće ili odložiti javljanje (ili ponovno javljanje) povrede, bolesti, patologije ili stanja, ili redukovati verovatnoću javljanja (ili ponovnog javljanja) povrede, bolesti, patologije ili stanja, ili njihovih simptoma (npr. napada). Puni profilaktički efekat ne mora se obavezno postići primenom jedne doze, i može se postići samo posle primene niza doza. Prema tome, profilaktički efikasna količina može se primeniti u jednom ili više davanja. Tačne količine će zavisiti od svrhe lečenja i može ih utvrditi iskusan stručnjak u oblasti, korišćenjem poznatih tehnika (vidi, npr., Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); i Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins).
[0017] Terapijski efikasna količina klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) može se početno odrediti testovima na ćelijskim kulturama. Ciljne koncentracije će biti one koncentracije jednog ili više aktivnih jedinjenja kojima mogu da se ostvare metodi opisani u ovom tekstu, što se meri korišćenjem ovde opisanih ili u struci poznatih metoda.
[0018] Kao što je u struci dobro poznato, terapijski efikasne količine za upotrebu kod ljudi mogu da se odrede i na osnovu životinjskih modela. Na primer, doza za ljude može da se formuliše tako da se postigne koncentracija za koju je nađeno da je efikasna kod životinja. Doziranje kod ljudi može da se podesi praćenjem efikasnosti jedinjenja i postepenim povećavanjem ili smanjivanjem doze, kako je gore opisano. Podešavanje doze za postizanje maksimalne efikasnosti kod ljudi, bazirano na metodima opisanim ranije u ovom tekstu i drugim metodima, u okviru je sposobnosti prosečno obučenog stručnjaka u oblasti.
[0019] Doziranje može varirati u zavisnosti od pacijentovih potreba i datog jedinjenja koje se koristi. Doza koja se daje pacijentu, u kontekstu predmetnog pronalaska trebalo bi da bude dovoljna da se tokom vremena kod pacijenta postigne korisni terapijski odgovor. Veličina doze biće određena i postojanjem, prirodom i obimom nekog od neželjenih sporednih efekata. Određivanje odgovarajuće doze za određenu situaciju u okviru je veštine lekara. Obično, lečenje počinje upotrebom manjih doza koje su niže od optimalne doze jedinjenja. Posle toga, doza se povišava u malim koracima do postizanja optimalnog efekta pod datim uslovima.
[0020] Količine i intervali doziranja mogu se podešavati individualno kako bi se obezbedili nivoi primene jedinjenja efikasni za određenu kliničku indikaciju koja se leči. Ovim će se obezbediti terapijski režim srazmeran jačini bolesnog stanja osobe.
[0021] Korišćenjem uputstava datih u ovom tekstu, efikasni profilaktički ili terapijski režim lečenja može da se planira tako da ne izazove bitnu toksičnost, a da bude efikasan u lečenju kliničkih simptoma koje određeni pacijent ispoljava. Ovaj plan treba da uključi pažljivi izbor aktivnog jedinjenja, uz razmatranje faktora kao što su jačina jedinjenja, relativna bioraspoloživost, pacijentova telesna težina, prisustvo i jačina neželjenih sporednih dejstava, poželjan način primene i profil toksičnosti odabranog sredstva.
[0022] "Kontrola" ili "kontrolni eksperiment" koriste se u skladu sa svojim opštim uobičajenim značenjima i odnose se na eksperiment u kojem se subjekti ili reagensi eksperimenta tretiraju kao u paralelnom eksperimentu, osim što se izostavlja postupak, reagens, ili varijabla eksperimenta. U nekim slučajevima, kontrola se koristi kao standard poređenja u evaluaciji efekata eksperimenta. U nekim primerima izvođenja, kontrola je merenje aktivnosti proteina u odsustvu klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli).
[0023] "Testno jedinjenje", kako se koristi u ovom tekstu, označava eksperimentalno jedinjenje upotrebljeno u procesu skrininga za identifikovanje aktivnosti, neaktivnosti, ili druge modulacije određenog biološkog cilja ili puta. Testno jedinjenje može biti klemizolski analog opisan u ovom tekstu, uključujući njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0024] Izrazi "modulacija", "modulisati", ili "modulator" koriste se u skladu sa svojim opštim uobičajenim značenjem i označavaju čin promene ili variranja jedne ili više osobina. "Modulator" označava kompoziciju koja povišava ili snižava nivo ciljnog molekula ili funkcije ciljnog molekula ili fizičkog stanja ciljnog molekula. "Modulacija" označava proces menjanja ili variranja jedne ili više osobina. Na primer, kada se odnosi na efekte modulatora na biološki cilj, modulisati znači menjati, smanjivanjem ili povećavanjem, osobinu ili funkciju biološkog cilja ili količinu biološkog cilja
[0025] Kako je definisano u ovom tekstu, izrazi "inhibicija", "inhibirati", "inhibira" i slično, u vezi sa interakcijom proteina i inhibitora, označavaju negativan uticaj (npr. smanjivanje) na aktivnost ili funkciju proteina u odnosu na aktivnost ili funkciju proteina u odsustvu inhibitora. U nekim primerima izvođenja inhibicija označava smanjenje bolesti ili simptoma bolesti. U nekim primerima izvođenja, inhibicija označava smanjenje aktivnosti određenog proteinskog ili nukleinskokiselinskog cilja. Prema tome, inhibicija uključuje, bar delom, parcijalno ili potpuno blokiranje stimulacije, smanjenje, prevenciju, ili odlaganje aktivacije, ili inaktivaciju, desenzitizaciju, ili nishodnu regulaciju signalne transdukcije ili proteinske/enzimske aktivnosti ili količine proteina. Inhibicija, kako se koristi u ovom tekstu, može da označi inhibiciju voltažno-zavisnog natrijumskog kanala.
[0026] Izrazi "aktivacija" ili "aktivira" i slično označavaju interakcije proteina i jedinjenja koje pozitivno utiču na aktivnost ili funkciju proteina (npr. povećavaju je) u odnosu na aktivnost ili funkciju proteina u odsustvu aktivatora. Aktivacija može da označava povećanje aktivnosti određenog proteinskog cilja. Aktivacija može da označava obnavljanje izgubljene funkcije mutiranog proteinskog cilja. Aktivacija, kako se koristi u ovom tekstu, može da označava aktivaciju voltažno-zavisnog natrijumskog kanala.
[0027] "Dovesti u kontakt" koristi se u skladu sa svojim opštim uobičajenim značenjem i označava proces dopuštanja da se najmanje dve različite vrste (npr. hemijska jedinjenja uključujući biomolekule, ili ćelije) međusobno dovoljno približe da bi reagovale, interagovale ili se fizički dotakle. Treba međutim imati u vidu da dobijeni reakcioni proizvod može da se nastane direktno u reakciji između reagenasa koji su stupili u kontakt, ili može da se proizvede od intermedijara jednog ili više reagenasa koji su stupili u kontakt, proizvedenog u reakcionoj mešavini.
[0028] Izraz "dovesti u kontakt" može uključiti dopuštanje da dve vrste reaguju, interaguju ili stupe u fizički kontakt, pri čemu dve vrste mogu biti jedinjenje opisano u ovom tekstu i protein ili enzim. U nekim primerima izvođenja, "dovesti u kontakt" uključuje dopuštanje da jedinjenje opisano u ovom tekstu interaguje sa proteinom ili enzimom uključenim u signalni put.
[0029] Izrazi "udružen" ili "udružen sa", u kontekstu supstance ili aktivnosti ili funkcije supstance udružene sa bolešću, znače da je bolest prouzrokovana (u potpunosti ili delom), ili je simptom bolesti prouzrokovan (u potpunosti ili delom) supstancom ili aktivnošću ili funkcijom supstance.
[0030] "Pacijent" ili "subjekt kojem je to potrebno" označavaju živi organizam koji boluje ili je podložan bolesti ili stanju koje može da se leči primenom farmaceutske kompozicije obezbeđene u ovom tekstu. Neograničavajući primeri uključuju ljude, druge sisare, goveda, pacove, miševe, pse, majmune, koze, ovce, krave, jelene i nesisarske vrste kao što je zebrica. Pacijent može biti čovek.
[0031] "Bolest" ili "stanje" označavaju stanje bitisanja ili zdravstveni status pacijenta ili subjekta koji može da se leči jedinjenjima ili metodima obezbeđenim u ovom tekstu.
[0032] Izrazi "epileptični poremećaj", "epileptički poremećaj", "poremećaj sa napadima" ili "epilepsija" u ovom tekstu označavaju spektar hroničnih neuroloških poremećaja koji se najčešće karakterišu prisustvom neizazvanih napada. Vidi, npr. Noebels et. al., Jasper’s Basic Mechanisms of the Epilepsies, 4th edition, Bethesda (MD): National Center for Biotechnology Information (US); 2012. Epilepsija, kako se koristi u ovom tekstu, može
1
označavati povredu mozga (npr. usled traume, moždanog udara ili kancera) ili genetičku mutaciju. Simptomi epileptičnog poremećaja mogu biti rezultat abnormalne elektrohemijske signalizacije između neurona u mozgu. Može se smatrati da epilepsiju imaju pacijenti koji su iskusili dva ili više neizazvana napada.
[0033] Tipovi epileptičnog poremećaja uključuju, na primer, benignu Rolandovu epilepsiju, epilepsiju frontalnog lobusa, infantilne spazme, juvenilnu miokloničnu epilepsiju (juvenile myoclonic epilepsy, JME), juvenilnu apsansnu epilepsiju, apsansnu epilepsiju dečjeg uzrasta (npr. piknolepsija), febrilne napade, progresivnu miokloničnu epilepsiju Lafora, Lennox-Gastautov sindrom, Landau-Kleffnerov sindrom, Dravetov sindrom (DS), generalizovanu epilepsiju sa febrilnim napadima (generalized epilepsy with febrile seizures, GEFS+), tešku mikloničnu epilepsiju u ranom detinjstvu (severe myoclonic epilepsy of infancy, SMEI), benigne neonatalne familijarne konvulzije (benign neonatal familial convulsions, BFNC), Westov sindrom, Ohtahara sindrom, rane mioklonične encefalopatije, migrirajuću parcijalnu epilepsiju, infantilne epileptičke encefalopatije, kompleks tuberozne skleroze (tuberous sclerosis complex, TSC), žarišnu korteksnu displaziju, lisencefaliju tipa I, Miller-Diekerov sindrom, Angelmanov sindrom, sindrom fragilnog X hromozoma, epilepsiju u spektru autističnih poremećaja, supkortikalnu trakastu heterotopiju, Walker-Warburgov sindrom, Alzheimerovu bolest, posttraumatsku epilepsiju, progresivne mioklonične epilepsije, refleksnu epilepsiju, Rasmussenov sindrom, epilepsiju temporalnog lobusa, limbičnu epilepsiju, status epilepticus, abdominalnu epilepsiju, masivni bilateralni mioklonus, katamenijalnu epilepsiju, poremećaj sa Jacksonovim napadima, Unverricht-Lundborgovu bolest, ili epilepsiju fotosenzitivnosti.
[0034] "Farmaceutski prihvatljivi ekscipijent" i "farmaceutski prihvatljivi nosač" ili "nosačka komponenta" odnose se na supstancu koja pomaže u primeni i apsorpciji klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) kod subjekta i koja može biti uključena u kompoziciju, a da kod pacijenta ne izazove značajan toksični sporedni efekat. Neograničavajući primeri farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata uključuju vodu, NaCl, normalne slane rastvore, Ringerov rastvor dopunjen laktozom, normalnu glukozu, povezivače, potporne supstance, dezintegrišuća sredstva, lubrikanse, sredstva za oblaganje, zaslađivače, sredstva za poboljšanje ukusa, slane rastvore (kao što je Ringerov rastvor), alkohole, ulja, želatine, ugljene hidrate kao što su laktoza, amiloza ili skrob, estre masnih kiselina, hidroksimeticelulozu, polivinil pirolidin, i boje, i slično. Takvi preparati mogu da se sterilizuju i, po želji, pomešaju sa pomoćnim sredstvima kao što su lubrikansi, prezervansi, stabilizeri, sredstva za vlaženje, emulgatori, soli koje utiču na osmotski pritisak, puferi, sredstva za bojenje, i/ili aromatične supstance i slično, koje ne reaguju štetno sa jedinjenjima pronalaska. Stručnjak u oblasti prepoznaće da su u predmetnom pronalasku korisni i drugi farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti.
[0035] Izraz "preparat" treba da uključi formulaciju klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) sa inkapsulirajućim materijalom kao nosačem koji obezbeđuje kapsulu gde je aktivna komponenta sa ili bez drugih nosača, okružena nosačem, koji je dakle, u asocijaciji sa njom. Slično tome, uključeni su kašeti i lozenge. Tablete, praškovi, kapsule, pilule, kašeti, i lozenge mogu se koristiti kao čvrste dozne forme pogodne za oralnu primenu.
[0036] Kako se koristi u ovom tekstu, izraz "primenjivati" označava oralnu primenu, primenu u vidu supozitorije, primenu površinskim kontaktom, intravensku, intraperitonealnu, intramuskularnu, intralezionu, intratekalnu, intranazalnu ili supkutanu primenu, ili implantaciju uređaja za sporo oslobađanje, npr., miniosmotska pumpa, kod subjekta. Primena se izvodi bilo kojim putem, uključujući parenteralni i transmukozni (npr., bukalni, sublingvalni, palatalni, gingivalni, nazalni, vaginalni, rektalni, ili transdermalni). Parenteralna primena uključuje, npr., intravensku, intramuskularnu, intraarteriolarnu, intradermalnu, supkutanu, intraperitonealnu, intraventrikularnu, i intrakranijalnu. Drugi načini dostave uključuju, ali se ne ograničavaju na upotrebu lipozomskih formulacija, intravenskih infuzija, transdermalnih flastera, itd.
[0037] Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) i njihove farmaceutske kompozicije mogu se dostaviti transdermalno, površinskim putem, formulisane kao štapići za aplikovanje, rastvori, suspenzije, emulzije, gelovi, kremovi, masti, paste, želei, premazi, praškovi, i aerosoli. Oralni preparati uključuju tablete, pilule, prašak, dražeje, kapsule, tečnosti, lozenge, kašete, gelove, sirupe, guste suspenzije, suspenzije, itd., pogodne da ih pacijent unese ingestijom. Čvrste forme preparata uključuju praškove, tablete, pilule, kapsule, kašete, supozitorije, i disperzibilne granule. Tečne forme preparata uključuju rastvore, suspenzije, i emulzije, na primer, rastvore u vodi ili vodi/propilen glikolu. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu dodatno uključivati komponente za obezbeđivanje trajnog oslobađanja i/ili udobnosti. Takve komponente uključuju anjonske mukomimetičke polimere velike molekulske težine, želatinizirajuće polisaharide i fino usitnjene supstrate-nosače lekova. O ovim komponentama detaljnije se govori u U.S. pat. br.4,911,920; 5,403,841; 5,212,162; i 4,861,760. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se dostavljati i kao mikrosfere sa sporim oslobađanjem u telu. Na primer, mikrosfere mogu da se primene
1
intradermalnom injekcijom mikrosfera koje sadrže lek, koji će se sporo oslobađati ispod kože (vidi Rao, J. Biomater Sci. Polym. Ed. 7:623-645, 1995; kao biodegradabilne i injektabilne gel formulacije (vidi, npr., Gao Pharm. Res. 12:857-863, 1995); ili kao mikrosfere za oralnu primenu (vidi, npr., Eyles, J. Pharm. Pharmacol.49:669-674, 1997). Formulacije kompozicija klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se dostaviti korišćenjem lipozoma koji se fuzionišu sa ćelijskom membranom ili se unose endocitozom, tj., korišćenjem receptorskih liganada prikačenih za lipozom, koji se vezuju za proteinske receptore na površini ćelijske membrane, što rezultuje endocitozom. Korišćenjem lipozoma, posebno kada lipozom na površini nosi receptorske ligande specifične za ciljne ćelije, ili je na drugi način preferentno usmeren ka specifičnom organu, moguće je usmeriti dostavu kompozicija klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ka ciljnim ćelijama in vivo. (Vidi, npr., Al-Muhammed, J. Microencapsul.
13:293-306, 1996; Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 6:698-708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm. 46:1576-1587, 1989). Kompozicije se mogu dostavljati i kao nanočestice.
[0038] "Uporeda primena" znači da se kompozicija opisana u ovom tekstu primenjuje u isto vreme, neposredno pre, ili odmah posle primene jednog ili više dodatnih načina lečenja. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se kod pacijenta primeniti sami ili se mogu primenjivati uporedo. Uporeda primena treba da uključi istovremenu ili sekvencijalnu primenu jedinjenja, pojedinačno ili u kombinaciji (više od jednog jedinjenja). Prema tome, preparati mogu biti i kombinovani, po želji, sa drugim aktivnim supstancama (npr., da bi se smanjila metabolička razgradnja). Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se dostavljati transdermalno, površinskim putem, ili formulisani u vidu štapića za aplikovanje, rastvora, suspenzija, emulzija, gelova, kremova, masti, pasta, želea, namaza, praškova, i aerosola.
[0039] Izrazi "dodatna terapija", "add-on terapija", "adjunktna terapija" i "adjunktivna terapija" koriste se naizmenično u ovom tekstu i označavaju kombinovanje klemizola, klemizolskog analoga, ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli sa drugim antikovulzantom, za lečenje epilepsije.
[0040] "Lek protiv napada", "antiepileptični lek", "AED" ili "antikonvulzant" koriste se naizmenično u ovom tekstu i u skladu sa svojim opštim uobičajenim značenjem, i uključuju kompozicije za smanjenje ili eliminisanje napada. Antikonvulzanti uključuju, ali se ne ograničavaju na acetazolamid, benzodiazepin, kanabadiole, karbamazepin, klobazam, klonazepam, eslikarbazepin acetat, etosuksimid, etotoin, felbamat, fenfluramin, fosfenitoin, gabapentin, ganaksolon, huperzin A, lakozamid, lamotrigin, levetiracetam, nitrazepam,
1
okskarbazepin, perampanel, piracetam, fenobarbital, fenitoin, kalijum bromid, pregabalin, primidon, retigabin, rufinamid, natrijum valproat, stiripentol, tiagabin, topiramat, vigabatrin, ili zonisamid.
I. Metodi lečenja
[0041] U ovom tekstu obezbeđeni su metodi lečenja epileptičnog poremećaja. U jednom aspektu, metod je metod lečenja epileptičnog poremećaja primenom, kod subjekta kojem je to potrebno, terapijski efikasne količine klemizola ili klemizolskog analoga, ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. U drugom aspektu, metod je metod lečenja epileptičnog poremećaja primenom, kod subjekta kojem je to potrebno, farmaceutske kompozicije opisane u ovom tekstu, pri čemu farmaceutska kompozicija uključuje klemizol ili klemizolski analog, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. Analog klemizola može uključivati jedinjenja čija je struktura slična navedenim, na primer, u PCT/US2008/076804, WO10107739, WO2009039248, ili U.S. pat. br. 4011322. Farmaceutski prihvatljiva so može biti klemizol HCl. Subjekt može biti na ketogenoj dijeti (npr., može se hraniti u skladu sa ketogenom dijetom). Subjekt može biti dete (npr. subjekt koji ima pedijatrijsko epileptično stanje).
[0042] Epileptični poremećaj može biti benigna Rolandova epilepsija, epilepsija frontalnog lobusa, infantilni spazmi, juvenilna mioklonična epilepsija (JME), juvenilna apsansna epilepsija, apsansna epilepsija dečjeg uzrasta (npr. piknolepsija), febrilni napadi, progresivna mioklonična epilepsija Lafora, Lennox-Gastautov sindrom, Landau-Kleffnerov sindrom, Dravetov sindrom, generalizovana epilepsija sa febrilnim napadima (GEFS+), teška miklonična epilepsija u ranom detinjstvu (SMEI), benigne neonatalne familijarne konvulzije (BFNC), Westov sindrom, Ohtahara sindrom, rane mioklonične encefalopatije, migrirajuća parcijalna epilepsija, infantilne epileptičke encefalopatije, kompleks tuberozne skleroze (TSC), žarišna korteksna displazija, lisencefalija tipa I, Miller-Diekerov sindrom, Angelmanov sindrom, sindrom fragilnog X hromozoma, epilepsija u spektru autističnih poremećaja, supkortikalna trakasta heterotopija, Walker-Warburgov sindrom, Alzheimerova bolest, posttraumatska epilepsija, progresivne mioklonične epilepsije, refleksna epilepsija, Rasmussenov sindrom, epilepsija temporalnog lobusa, limbična epilepsija, status epilepticus, abdominalna epilepsija, masivni bilateralni mioklonus, katamenijalna epilepsija, poremećaj sa Jacksonovim napadima, Unverricht-Lundborgova bolest, ili epilepsija fotosenzitivnosti. Epilepsija može uključivati generalizovane napade ili delimične (tj. žarišne) napade.
[0043] Epileptični poremećaj može biti Dravetov sindrom, Lennox-Gastaut sindrom, infantilni spazam, ili Ohtahara sindrom. Epileptični poremećaj može biti Dravetov sindrom,
1
Lennox-Gastaut sindrom, infantilni spazam, ili Ohtahara sindrom, ili pedijatrijski epileptični poremećaj. Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti benigna epilepsija dečjeg uzrasta, benigne neonatalne familijarne konvulzije (BFNC), febrilni napadi, Dravetov sindrom, Lennox-Gastaut sindrom, infantilni spazam, Ohtahara sindrom, juvenilna mioklonična epilepsija, juvenilna apsansna epilepsija, apsansna epilepsija dečjeg uzrasta (npr. piknolepsija), infantilni spazmi. Epileptični poremećaj može biti Dravetov sindrom.
[0044] Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti benigna epilepsija dečjeg uzrasta. Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti predstavljen benignim neonatalnim familijarnim konvulzijama (BFNC). Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti predstavljen febrilnim napadima. Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti Dravetov sindrom. Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti Lennox-Gastaut sindrom. Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti infantilni spazam. Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti Ohtahara sindrom. Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti juvenilna mioklonična epilepsija. Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti juvenilna apsansna epilepsija. Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti apsansna epilepsija dečjeg uzrasta (npr. piknolepsija). Pedijatrijski epileptični poremećaj može biti predstavljen infantilnim spazmima.
[0045] Epileptični poremećaj može biti rezultat neurološkog oboljenja ili povrede, kao na primer, encefalitisa, cerebritisa, apscesa, moždanog udara, tumora, traume, genetičkog porekla, tuberozne skleroze, cerebralne disgeneze, ili hipoksično-ishemijske encefalopatije. Epileptični poremećaj može biti udružen sa neurodegenerativnim oboljenjima kao što su, na primer, Alzheimerova bolest ili Parkinsonova bolest. Epileptični poremećaj može biti udružen sa autizmom. Epileptični poremećaj može biti udružen sa mutacijom jednog gena. Epileptično oboljenje može biti udruženo sa kompulzivnim ponašanjima ili elektrografskim napadima. Primena klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli može inhibirati kompulzivna ponašanja ili elektrografske napade u epileptičnom poremećaju, kod subjekta sa Alzheimerovom bolešću (npr. subjekt oboleo od Alzheimerove bolesti), kod autističnog subjekta (npr. subjekt koji ima autizam), ili kod subjekta sa Parkinsonovom bolešću (npr. subjekt oboleo od Parkinsonove bolesti). Prema tome, klemizol, klemizolski analog ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu inhibirati kompulzivna ponašanja ili elektrografske napade u epileptičnom poremećaju. Klemizol, klemizolski analog ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu inhibirati kompulzivna ponašanja ili elektrografske napade kod subjekta sa Alzheimerovom bolešću. Klemizol, klemizolski analog ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu inhibirati kompulzivna ponašanja ili elektrografske napade kod subjekta sa autizmom. Klemizol, klemizolski analog ili njihove farmaceutski
1
prihvatljive soli mogu inhibirati kompulzivna ponašanja ili elektrografske napade kod subjekta sa Parkinsonovom bolešću.
[0046] Primena klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli može smanjiti incidencu (npr. broj pojavljivanja) neizazvanih napada kod subjekta u poređenju sa situacijom u odsustvu klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. Prema tome, pacijentov odgovor na primenu klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli može se pratiti progresivno u odnosu na vreme pre primene jedinjenja opisanih u ovom tekstu (npr., kontrola ili kontrolno vreme).
[0047] Primena klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli može smanjiti ili prevenirati mioklonične napade ili status epilepticus kod subjekta, u poređenju sa situacijom u odsustvu klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. Primena klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli može smanjiti ili prevenirati mioklonične napade kod subjekta, u poređenju sa situacijom u odsustvu klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. Primena klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli može, smanjiti ili prevenirati epileptični status kod subjekta, u poređenju sa situacijom u odsustvu klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. Prema tome, pacijentov odgovor na primenu klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli može se pratiti progresivno u odnosu na vreme pre primene jedinjenja opisanih u ovom tekstu (npr., kontrola ili kontrolno vreme).
[0048] Epileptični poremećaj može biti epileptični poremećaj koji ne odgovara na lečenje antiepileptičnim lekom (AED). Subjekt može biti na ketogenoj dijeti. Epileptični poremećaj može biti epileptični poremećaj kod adulta (npr. više od oko 16 godina starosti).
[0049] Epileptični poremećaj može biti epileptični poremećaj kod deteta. Prema tome, epileptični poremećaj može biti pedijatrijski epileptični poremećaj. Dete može biti staro manje od oko nedelju dana. Dete može biti staro manje od oko 1 meseca. Dete može biti staro manje od oko 6 meseci. Dete može biti staro manje od oko 12 meseci. Dete može biti staro manje od oko 2 godine. Dete može biti staro manje od oko 3 godine. Dete može biti staro manje od oko 4 godine. Dete može biti staro manje od oko 5 godina. Dete može biti staro manje od oko 6 godina. Dete može biti staro manje od oko 7 godina. Dete može biti staro manje od oko 8 godina. Dete može biti staro manje od oko 9 godina. Dete može biti staro manje od oko 10 godina. Dete može biti staro manje od oko 12 godina.
[0050] Dete može biti staro više od oko nedelju dana. Dete može biti staro više od oko 1 meseca. Dete može biti staro više od oko 6 meseci. Dete može biti staro više od oko 12
1
meseci. Dete može biti staro više od oko 2 godine. Dete može biti staro više od oko 3 godine. Dete može biti staro više od oko 4 godine. Dete može biti staro više od oko 5 godina. Dete može biti staro više od oko 5 godina. Dete može biti staro više od oko 6 godina. Dete može biti staro više od oko 7 godina. Dete može biti staro više od oko 8 godina. Dete može biti staro više od oko 9 godina. Dete može biti staro više od oko 10 godina. Dete može biti staro više od oko 11 godina. Dete može biti staro više od oko 12 godina.
[0051] Dete može imati epliptični poremećaj koji se tretira AED. kako je opisano u ovom tekstu. Prema tome, klemizol, klemizolski analog ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu se primenjivati kod takvog deteta (npr. kao dodatna terapija).
[0052] U sledećem aspektu je metod lečenja Dravetovog sindroma. Metod lečenja Dravetovog sindroma uključuje primenu, kod subjekta kojem je to potrebno, terapijski efikasne količine klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. Metod lečenja Dravetovog sindroma može uključivati primenu, kod subjekta kojem je to potrebno, farmaceutske kompozicije klemizola, klemizolskog analoga ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, kako je opisano u ovom tekstu. Klemizolski analog može uključivati jedinjenja formule (I) opisana u ovom tekstu i može uključivati jedinjenja slične strukture kako je navedeno u na primer, PCT/US2008/076804, WO10107739, WO2009039248, ili U.S. pat. br. 4011322. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se, kod subjekta kojem je to potrebno primenjivati uporedo sa AED, kako je opisano u ovom tekstu.
[0053] U metodima opisanim u ovom tekstu, klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primenjivati uporedo sa antiepileptičnim lekom (AED). AED može biti acetazolamid, benzodiazepin, kanabadioli, karbamazepin, klobazam, klonazepam, eslikarbazepin acetat, etosuksimid, etotoin, felbamat, fenfluramin, fosfenitoin, gabapentin, ganaksolon, huperzin A, lakozamid, lamotrigin, levetiracetam, nitrazepam, okskarbazepin, perampanel, piracetam, fenobarbital, fenitoin, kalijum bromid, pregabalin, primidon, retigabin, rufinamid, natrijum valproat, stiripentol, tiagabin, topiramat, vigabatrin, ili zonisamid. AED može biti valproinska kiselina, valproat, klonazepam, etosuksimid, felbamat, gabapentin, karbamazepin, okskarbazepin, lamotrigin, levetiracetam, benzodiazepin, fenobarbital, pregabalin, primidon, tiagabin, topiramat, kalijum bromid, fenitoin, stiripentol, vigabatrin, ili zonisamid. AED može biti valproinska kiselina, valproat, gabapentin, topiramat, karbamazepin, okskarbazepin, ili vigabatrin.
[0054] AED može biti acetazolamid. AED može biti benzodiazepin. AED može biti kanabadioli AED može biti karbamazepin. AED može biti klobazam. AED može biti
2
klonazepam. AED može biti eslikarbazepin acetat. AED može biti etosuksimid. AED može biti etotoin. AED može biti felbamat. AED može biti fenfluramin. AED može biti fosfenitoin. AED može biti gabapentin. AED može biti ganaksolon. AED može biti huperzin A. AED može biti lakozamid. AED može biti lamotrigin. AED može biti levetiracetam. AED može biti nitrazepam. AED može biti okskarbazepin. AED može biti perampanel. AED može biti piracetam. AED može biti fenobarbital. AED može biti fenitoin. AED može biti kalijum bromid. AED može biti pregabalin. AED može biti primidon. AED može biti retigabin. AED može biti rufinamid. AED može biti natrijum valproat. AED može biti stiripentol. AED može biti tiagabin. AED može biti topiramat. AED može biti vigabatrin. AED može biti zonisamid. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutska kompozicija klemizola ili klemizolskog analoga mogu se primeniti kao adjuvantna terapija uz jedan ili više AED opisanih u ovom tekstu.
[0055] Klemizol, klemizolski analog ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu se, prema tome, primeniti kao dodatak (npr. u kombinaciji sa) AED lekovima za lečenje napada, uključujući napade udružene sa epileptičnim poremećajima opisanim u ovom tekstu. Klemizol, klemizolski analog ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu se, prema tome, primeniti kao dodatna terapija (npr. u kombinaciji sa) AED lekovima za lečenje napada, uključujući napade udružene sa epileptičnim poremećajima opisanim u ovom tekstu.
[0056] Epileptični poremećaj može da se karakteriše parcijalnim napadima ili generalizovanim napadima. Epileptični poremećaj može da se karakteriše parcijalnim napadima. Epileptični poremećaj može da se karakteriše generalizovanim napadima. Parcijalni napad može biti jednostavni žarišni napad, kompleksni žarišni napad, ili parcijalni žarišni napad sa sekundarnom generalizacijom. Generalizovani napad može biti generalizovani tonično-klonični napad, apsantni napad (tj. petit mal), mioklonični napad, klonični napad, tonični napad, ili atonični napad.
[0057] Kada se primenjuju uporedo sa AED opisanim u ovom tekstu, klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti istovremeno. Kada se primenjuju istovremeno, klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se formulisati zajedno sa AED (tj. u jednoj doznoj jedinici). Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se formulisati za primenu odvojeno od AED, ali se primeniti u isto vreme. Kada se primenjuju uporedo sa AED opisanim u ovom tekstu, klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti sekvencijalno (npr. pre ili posle) primene AED. Kako je navedeno u ovom tekstu, stručnjak u oblasti lako može odrediti redosled primene.
[0058] Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 1 mg/kg do oko 1000 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 10 mg/kg do oko 1000 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 500 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 400 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 350 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 300 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 250 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 200 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 150 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 100 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 75 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg do oko 50 mg/kg. Kako se koristi u ovom tekstu "mg/kg" označava mg po kg telesne težine subjekta. Doze opisane u ovom tekstu uključuju primenu klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) u vidu jednog terapijski aktivnog sredstva ili primenu klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) kao terapijski aktivnog sredstva u kombinaciji (kako je opisano u ovom tekstu) sa AED opisanim u ovom tekstu.
[0059] Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 1 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 5 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 10 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 20 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 25 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 30 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 40 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 50 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 75 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 100 mg/kg.
[0060] Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 125 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 150 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 175 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 200 mg/kg Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 225 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 250 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 275 mg/kg.
[0061] Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 300 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 325 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 350 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 375 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 400 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 425 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 450 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 475 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 500 mg/kg.
[0062] Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 600 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 700 mg/kg. Klemizol
2
ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 800 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 900 mg/kg. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozi od oko 1000 mg/kg.
[0063] Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primeniti u dozama opisanim u ovom tekstu najmanje jednom dnevno (npr., jednom na 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, ili 12 sati). Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primenjivati dnevno u dozama opisanim u ovom tekstu. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primenjivati najmanje dva puta nedeljno u dozama opisanim u ovom tekstu. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primenjivati najmanje tri puta nedeljno, kako je opisano u ovom tekstu. Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se primenjivati mesečno, kako je opisano u ovom tekstu.
II. Farmaceutske kompozicije
[0064] U ovom tekstu obezbeđene su farmaceutske kompozicije za lečenje epileptičnog oboljenja opisanog u ovom tekstu. U jednom aspektu je farmaceutska kompozicija koja uključuje klemizol, klemizolski analog ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. Farmaceutska kompozicija može uključivati i farmaceutski prihvatljivi ekscipijent. Farmaceutski prihvatljiva so klemizola u farmaceutskoj kompoziciji može biti klemizol HCl. Farmaceutska kompozicija može biti formulisana kao tableta, prašak, kapsula, pilula, kašet ili lozenga, kako je opisano u ovom tekstu. Farmaceutska kompozicija može biti formulisana kao tableta, kapsula, pilula, kašet ili lozenga za oralnu primenu. Farmaceutska kompozicija može biti formulisana za rastvaranje u rastvoru za primenu tehnikama kao što je na primer, intravenska primena. Farmaceutska kompozicija može biti formulisana za oralnu primenu, primenu u vidu supozitorije, površinsku primenu, intravensku primenu, intraperitonealnu primenu, intramuskularnu primenu, intralezionu primenu, intratekalnu primenu, intranazalnu primenu, supkutanu primenu, implantaciju, transdermalnu primenu, ili transmukoznu primenu, kako je opisano u ovom tekstu.
[0065] Kada se primenjuju kao farmaceutska kompozicija, farmaceutske kompozicije mogu uključivati optičke izomere, dijastereomere, enantiomere, izoforme, polimorfe, hidrate, solvate ili proizvode, ili farmaceutski prihvatljive soli klemizola ili klemizolskog analoga opisane u ovom tekstu (npr. sredstva, modulatore, inhibitore, antagoniste). Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) uključeni u farmaceutsku kompoziciju, mogu biti kovalentno spojeni sa nosačkom komponentom, kako je opisano ranije u ovom tekstu. Alternativno, klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) uključeni u farmaceutsku kompoziciju, nisu kovalentno povezani sa nosačkom komponentom.
[0066] Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se, kod subjekta kojem je to potrebno, primeniti sami ili uporedo sa AED, kako je opisano u ovom tekstu. Farmaceutske kompozicije klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli). Uporeda primena treba da uključi istovremenu ili sekvencijalnu primenu, kako je opisano u ovom tekstu, klemizola ili klemizolskog analoga, pojedinačno ili u kombinaciji (npr., više od jednog jedinjenja - npr. AED opisan u ovom tekstu). Preparati mogu i da se kombinuju, po želji, sa drugim aktivnim supstancama (npr. da bi se prevenirali napadi).
1. Formulacije
[0067] Klemizol, klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutska kompozicija, opisani u ovom tekstu, mogu se pripremiti i primeniti u vidu velikog broja različitih oralnih, parenteralnih i površinskih doznih formi. Prema tome, klemizol, klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutska kompozicija, opisani u ovom tekstu, mogu se primeniti injekcijom (npr. intravenski, intramuskularno, intrakutano, supkutano, intraduodenalno, ili intraperitonealno). Isto tako, klemizol, klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutska kompozicija, opisani u ovom tekstu, mogu se primeniti inhalacijom, na primer, intranazalno. Pored toga, klemizol, klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutska kompozicija, opisani u ovom tekstu, mogu se primeniti transdermalno. Isto tako, ima se u vidu da se veći broj puteva primene (npr., intramuskularni, oralni, transdermalni) može koristiti za primenu klemizola, klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutske kompozicije. Farmaceutska kompozicija opisana u ovom tekstu može uključivati farmaceutski prihvatljivi nosač ili ekscipijent i jedno ili više od klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli). Farmaceutska kompozicija opisana u ovom tekstu može uključivati farmaceutski prihvatljivi nosač ili ekscipijent, jedno ili više od klemizola ili
2
klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) i jedan ili više AED, kako je opisano u ovom tekstu.
[0068] Preparat može uključivati farmaceutski prihvatljive nosače. Farmaceutski prihvatljivi nosači mogu biti čvrsti ili tečni. Čvrste forme preparata uključuju praškove, tablete, pilule, kapsule, kašete, supozitorije, i disperzibilne granule. Čvrsti nosač može biti predstavljen jednom ili većim brojem supstanci koje mogu delovati i kao razblaživači, sredstva za poboljšanje ukusa, povezivači, prezervansi, sredstva za dezintegrisanje tableta, ili inkapsulirajući materijal.
[0069] U praškovima, nosač može biti fino usitnjeni čvrsti materijal u mešavini sa fino usitnjenom aktivnom komponentom. U tabletama, aktivna komponenta može biti pomešana sa nosačem koji ima potrebne vezujuće osobine u pogodnim proporcijama i komprimovane u željeni oblik i veličinu.
[0070] Praškovi i tablete poželjno sadrže od 5% do 70% aktivnog jedinjenja. Pogodni nosači su magnezijum karbonat, magnezijum stearat, talk, šećer, laktoza, pektin, dekstrin, skrob, želatin, tragant, metilceluloza, natrijum karboksimetilceluloza, vosak niske tačke topljenja, kakao buter, i slično. Izraz "preparat" treba da uključi formulaciju aktivnog jedinjenja sa inkapsulirajućim materijalom kao nosačem, koji obezbeđuje kapsulu u kojoj je aktivna komponenta sa ili bez drugih nosača, okružena nosačem koji je udružen sa njom. Slično tome, uključeni su kašeti i lozenge. Tablete, praškovi, kapsule, pilule, kašeti i lozenge mogu da se koriste kao čvrste dozne forme pogodne za oralnu primenu.
[0071] Pogodni čvrsti ekscipijenti uključuju, ali se ne ograničavaju na magnezijum karbonat; magnezijum stearat; talk; pektin; dekstrin; skrob; tragant; vosak niske tačke topljenja; kakao buter; ugljene hidrate; šećere uključujući, ali ne ograničavajući se na laktozu, saharozu, manitol, ili sorbitol, skrob kukuruza, pšenice, pirinča, krompira ili drugih biljaka; celuloze kao što su metil celuloza, hidroksipropilmetil-celuloza ili natrijum karboksimetilceluloza; i smole uključujući arabiku i tragant; kao i proteine uključujući, ali ne ograničavajući se na želatin i kolagen. Po želji, mogu se dodati dezintegrišuća ili stabilišuća sredstva kao što su unakrsno povezani polivinil pirolidon, agar, alginska kiselina ili njene soli, na primer natrijum alginat.
[0072] Jezgra za dražeje data su sa pogodnim omotačima kao što su koncentrovani rastvori šećera koji mogu sadržati i gumiarabiku, talk, polivinilpirolidon, karbopol gel, polietilen glikol, i/ili titanijum dioksid, lakirajuće rastvore i pogodne organske rastvarače ili mešavine rastvarača. Boje ili pigmenti mogu se dodati tabletama ili omotačima dražeja radi identifikacije proizvoda ili karakterizacije količine klemizola, klemizolskog analoga
2
(uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutske kompozicije (tj., doze). Farmaceutski preparati opisani u ovom tekstu mogu se koristiti oralno, uz upotrebu na primer, "push-fit" kapsula napravljenih od želatina, kao i mekih, zalivenih kapsula napravljenih od želatina i omotača kao što je glicerol ili sorbitol.
[0073] Za pripremanje supozitorija, vosak niske tačke topljenja kao što je mešavina glicerida masnih kiselina ili kakao buter, najpre se istopi i aktivna komponenta se homogeno disperguje u njemu mešanjem. Istopljena homogena mešavina se zatim ulije u kalupe odgovarajuće veličine i ostavi da se ohladi i očvrsne.
[0074] Tečne forme preparata uključuju rastvore, suspenzije i emulzije, na primer, rastvore u vodi ili vodi/propilen glikolu. Za parenteralnu injekciju, tečni preparati mogu da se formulišu u vodenom rastvoru polietilen glikola.
[0075] Kada je potrebna ili poželjna parenteralna primena, posebno pogodne mešavine za klemizol, klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutsku kompoziciju su injektabilni sterilni rastvori, poželjno uljani ili vodeni rastvori, kao i suspenzije, emulzije ili implanti, uključujući supozitorije. Preciznije, nosači za parenteralnu primenu uključuju vodene rastvore dekstroze, slani rastvor, čistu vodu, etanol, glicerol, propilen glikol, ulje kikirikija, susamovo ulje, polioksietilen-blok polimere, i slično. Ampule su pogodne jedinične doze. Klemizol, klemizolski analog (uuključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutska kompozicija mogu takođe da se inkorporišu u lipozome ili primene preko transdermalnih pumpi ili flastera. Farmaceutske mešavine pogodne za upotrebu u ovom tekstu uključuju one koje su opisane, na primer, u Pharmaceutical Sciences (17th Ed., Mack Pub. Co., Easton, PA) i WO96/05309.
[0076] Vodeni rastvori pogodni za oralnu upotrebu mogu se pripremiti rastvaranjem aktivne komponente u vodi i dodavanjem pogodnih sredstava za bojenje, poboljšanje ukusa, stabilizera i zgušnjivača, po želji. Vodene suspenzije pogodne za oralnu upotrebu mogu se napraviti dispergovanjem u vodi fino usitnjene aktivne komponente sa viskoznim materijalom, na primer prirodnim ili veštačkim gumama, smolama, metilcelulozom, natrijum karboksimetilcelulozom, natrijum alginatom, polivinilpirolidonom, tragantovom gumom i akacijinom gumom, i dispergujućim ili vlažećim sredstvima kao što su prirodni fosfatidi (npr., lecitin), kondenzacioni proizvod alkilen oksida i masnih kiselina (npr., polioksietilen stearat), kondenzacioni proizvod etilen oksida i dugolančanog alifatičnog alkohola (npr., heptadekaetilen oksicetanol), kondenzacioni proizvod etilen oksida i parcijalnog estra izvedenog iz masne kiseline i heksitola (npr., polioksietilen sorbitol mono-oleat), ili kondenzacioni proizvod etilen oksida i parcijalnog estra izvedenog iz masne kiseline i
2
heksitol anhidrida (npr., polioksietilen sorbitan mono-oleat). Vodena suspenzija može sadržati i jedan ili više prezervanasa kao što su etil ili n-propil p-hidroksibenzoat, jedno ili više sredstava za bojenje, jedno ili više sredstava za poboljšanje ukusa i jedno ili više sredstava za zaslađivanje kao što su saharoza, aspartam ili saharin. Formulacije se mogu podešavati u pogledu osmolarnosti.
[0077] Ovde su uključene i čvrste forme preparata, koje neposredno pre upotrebe treba da se konvertuju u tečne forme preparata za oralnu primenu. Takve tečne forme uključuju rastvore, suspenzije i emulzije. Pored aktivne komponente, ovi preparati mogu sadržati boje, sredstva za poboljšanje ukusa, stabilizere, pufere, veštačke i prirodne zaslađivače, disperzante, zgušnjivače, solubilišuća sredstva i slično.
[0078] Uljane suspenzije mogu sadržati sredstvo za zgušnjavanje kao na primer pčelinji vosak, tvrdi parafin ili cetil alkohol. Da bi se obezbedio ukusan oralni preparat, mogu se dodati sredstva za zaslađivanje kao glicerol, sorbitol ili saharoza. Ove formualcije mogu da se prezerviraju dodavanjem antioksidanta kao što je askorbinska kiselina. Za primer injektabilnog uljanog prenosnika, vidi Minto, J. Pharmacol. Exp. Ther. 281:93-102, 1997. Farmaceutske formulacije opisane u ovom tekstu mogu biti i u formi emulzije ulja u vodi. Uljana faza može biti biljno ulje ili mineralno ulje opisano gore, ili njihova mešavina. Pogodna emulgujuća sredstva uključuju prirodne gume kao što su akacijina guma i tragantova guma, prirodne fosfatide kao sojin lecitin, estre ili parcijalne estre izvedene iz masnih kiselina i heksitol anhidrida, na primer sorbitan mono-oleat, i kondenzacione proizvodi ovih parcijalnih estara sa etilen oksidom, na primer polioksietilen sorbitan mono-oleat. Emulzija može sadržati i sredstva za zaslađivanje i sredstva za poboljšanje ukusa, kao u formulaciji sirupa i eliksira. Takve formulacije mogu sadržati i demulcent, prezervans ili sredstvo za bojenje.
[0079] Farmaceutski preparat je poželjno u jediničnoj doznoj formi. U toj formi preparat je podeljen u jedinične doze koje sadrže odgovarajuće količine aktivne komponente. Jedinična dozna forma može biti predstavljena pakovanim preparatom, pakovanje sadrži zasebne količine preparata kao što su pakovane tablete, kapsule i praškovi u fiolama ili ampulama. Isto tako, jedinična dozna forma može biti kapsula, tableta, kašet, ili lozenga, ili to može biti odgovarajući broj bilo kojeg od njih, u pakovanju.
[0080] Količina aktivne komponente u jediničnom doznom preparatu može varirati ili se podešavati od 0.1 mg do 10 000 mg, u zavisnosti od određene primene i jačine aktivne komponente. Kompozicija po želji može sadržati i druga kompatibilna terapijska sredstva.
2
[0081] Formulacija može uključivati surfaktant ili drugi odgovarajući korastvarač u kompoziciji. Takvi korastvarači uključuju: Polysorbate 20, 60, i 80; Pluronic F-68, F-84, i P-103; ciklodekstrin; i Polyoxyl 35 ricinusovo ulje. Takvi korastvarači koriste se tipično u nivou između oko 0.01% i oko 2% po težini. Viskoznost veća od viskoznosti jednostavnih vodenih rastvora može biti poželjna da bi se smanjilo variranje u dispenzaciji formulacije, fizičko razdvajanje komponenti suspenzije ili emulzije formulacije, i/ili da bi se na drugi način poboljšala formulacija. Takva sredstva za povećanje viskoznosti uključuju, na primer, polivinil alkohol, polivinil pirolidon, metil celulozu, hidroksi propil metilcelulozu, hidroksietil celulozu, karboksimetil celulozu, hidroksi propil celulozu, hondroitin sulfat i njegove soli, hijaluronsku kiselinu i njene soli, i kombinacije napred pomenutog. Takva sredstva se tipično upotrebljavaju u nivou između oko 0.01% i oko 2% po težini.
[0082] Viskoznost veća od viskoznosti jednostavnih vodenih rastvora može biti poželjna da bi se smanjilo variranje u dispenzaciji formulacije, fizičko razdvajanje komponenti suspenzije ili emulzije formulacije, i/ili da bi se na drugi način poboljšala formulacija. Takva sredstva za podizanje viskoznosti uključuju, na primer, polivinil alkohol, polivinil pirolidon, metil celulozu, hidroksi propil metilcelulozu, hidroksietil celulozu, karboksimetil celulozu, hidroksi propil celulozu, hondroitin sulfat i njegove soli, hijaluronsku kiselinu i njene soli, kombinacije napred pomenutog i druga sredstva poznata stručnjaku u oblasti. Takva sredstva se tipično upotrebljavaju u nivou između oko 0.01% i oko 2% po težini. Određivanje prihvatljivih količina bilo kojeg od gornjih adjuvanasa lako utvrđuje stručnjak u oblasti.
[0083] Farmaceutske kompozicije dodatno mogu uključivati komponente za obezbeđivanje trajnog oslobađanja i/ili udobnosti. Takve komponente uključuju anjonske mukomimetičke polimere velike molekulske težine, želatinizirajuće polisaharide i fino usitnjene supstratenosače lekova. O ovim komponentama detaljnije se govori u U.S. pat. br. 4,911,920; 5,403,841; 5,212,162; i 4,861,760.
[0084] Farmaceutska kompozicija može biti namenjena za intravensku upotrebu. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijent može uključivati pufer za podešavanje pH do opsega poželjnog za intravensku upotrebu. Poznati su mnogi puferi koji uključuju soli neorganskih kiselina kao što su fosfat, borat, i sulfat.
[0085] Klemizol, klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihova farmaceutska kompozicija mogu se dostaviti transdermalno za lečenje epileptičnih poremećaja opisanih u ovom tekstu, površinskim putem, formulisani u vidu štapića za aplikovanje, rastvora, suspenzija, emulzija, gelova, kremova, masti, pasta, želea, namaza, praškova i aerosola.
2
[0086] Klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu se obezbediti u vidu soli u farmaceutskim kompozicijama opisanim u ovom tekstu i mogu se formirati sa mnogim kiselinama uključujući, ali ne ograničavajući se na hlorovodoničnu, sumpornu, sirćetnu, mlečnu, tartarnu, jabučnu, sukcinsku, itd. Soli teže većoj rastvorljivosti u vodenim ili drugim protonskim rastvaračima koji su u obliku odgovarajuće slobodne baze.
[0087] Klemizol, klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihova farmaceutska kompozicija dati za lečenje epileptičnih poremećaja opisanih u ovom tekstu mogu se primeniti parenteralnim putem, na primer intravenski (IV) ili primenom preko telesne šupljine ili lumena organa. Formulacija za primenu će obično sadržati rastvor kompozicija predmetnog pronalaska u farmaceutski prihvatljivom nosaču. Među prihvatljivim prenosnicima i rastvaračima koji se mogu upotrebiti su voda i Ringerov rastvor, izotonični natrijum hlorid. Pored toga, sterilna fiksirana ulja mogu se konvencionalno koristiti kao rastvarač ili suspendujući medijum. U tu svrhu, može se upotrebiti svako blago fiksirano ulje uključujući veštačke mono- ili digliceride. Pored toga, za pripremanje injektabilnih preparata mogu se koristiti i masne kiseline kao što je oleinska kiselina. Ovi rastvori su sterilni i obično ne sadrže neželjene materije. Ove formulacije mogu se sterilisati konvencionalnim, dobro poznatim tehnikama sterilizacije. Formulacije mogu sadržati farmaceutski prihvatljive pomoćne supstance potrebne za približavanje fiziološkim uslovima kao što je podešavanje pH, i puferišuća sredstva, sredstva za podešavanje toksičnosti, npr., natrijum acetat, natrijum hlorid, kalijum hlorid, kalcijum hlorid, natrijum laktat i slično. Koncentracija kompozicija predmetnog pronalaska u ovim formulacijama može široko varirati, i odabraće se prvenstveno na osnovu zapremine tečnosti, viskoznosti, telesne težine, i slično, u skladu sa posebnim odabranim načinom primene i pacijentovim potrebama. Za IV primenu, formulacija može biti sterilni injektabilni preparat kao što je sterilna injektabilna vodena ili uljana suspenzija. Ova suspenzija može se formulisati u skladu sa onim što je poznato u struci, korišćenjem pogodnih dispergujućih ili vlažećih sredstava i suspendujućih sredstava. Sterilni injektabilni preparat može biti i sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom pareneralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, kao što je rastvor 1,3-butandiola.
[0088] Farmaceutske formulacije klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) za lečenje epileptičnog poremećaja mogu se dostaviti korišćenjem lipozoma koji se fuzionišu sa ćelijskom membranom ili unose endocitozom, tj., upotrebom liganada prikačenih za lipozom, ili prikačenih direktno za oligonukleotid, koji se vezuju za proteinske receptore na površini ćelijske membrane, što rezultuje endocitozom.
Korišćenjem lipozoma, posebno kada lipozom na površini nosi ligande specifične za ciljne ćelije, ili je na drugi način preferencijalno usmeren ka specifičnom organu, dostava kompozicija predmetnog pronalaska se može usmeriti ka ciljnim ćelijama in vivo. (Vidi, npr., Al-Muhammed, J. Microencapsul. 13:293-306, 1996; Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 6:698-708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm.46:1576-1587, 1989).
[0089] Uporeda primena uključuje primenu jednog aktivnog sredstva (npr. klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli)) unutar 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, ili 24 sata od primene drugog aktivnog sredstva (npr. antikonvulzanta). Uporeda primena može uključivati primenu jednog aktivnog sredstva unutar 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, ili 24 sata od primene drugog aktivnog sredstva. Uporeda primena može uključivati primenu dva aktivna sredstva istovremeno, približno istovremeno (npr., unutar oko 1, 5, 10, 15, 20, ili 30 minuta primene jednog u odnosu na drugi), ili sekvencijalno, bilo kojim redom. Uporeda primena može da se obavi koformulisanjem, tj., pripremanjem jedne farmaceutske kompozicije koja uključuje oba aktivna sredstva. U drugim primerima izvođenja, aktivna sredstva se mogu formulisati odvojeno. Aktivna i/ili dodatna sredstva mogu biti povezana ili spojena jedno sa drugim.
[0090] Uporeda primena uključuje i kombinaciju sa tretmanima epileptičnih poremećaja kao što su posebni zahtevi u ishrani ili promene načina ishrane. Prema tome, klemizol, klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihova farmaceutska kompozicija mogu se primeniti kod subjekta na specijalizovanim dijetama, uključujući, ali ne ograničavajući se na ketogenu dijetu (npr. dijeta sa visokim sadržajem masti, adekvatnim sadržajem proteina i niskim sadržajem ugljenih hidrata).
2. Efikasne doze
[0091] Farmaceutska kompozicija može uključivati klemizol ili klemizolski analog (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) sadržane u terapijski efikasnoj količini, tj., u količini u kojoj su efikasni za ispunjavanje svrhe kojoj su namenjeni. Stvarna količina efikasna za određenu primenu zavisiće, pored ostalog, od stanja koje treba da se leči. Na primer, kada se primenjuju u metodima lečenja epileptičnog poremećaja (npr. Dravetov sindrom), takve kompozicije će sadržati količine klemizola, klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihove farmaceutske kompozicije efikasne za postizanje željenog rezultata (npr. inhibiranje napada).
[0092] Doza i frekvencija (jedna ili više doza) primene klemizola, klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihove farmaceutske kompozicije
1
mogu varirati u zavisnosti od različitih faktora, uključujući put primene; veličinu, starost, pol, zdravstveno stanje, telesnu težinu, indeks telesne mase i dijetu primaoca; prirodu i obim simptoma bolesti koja se leči; prisustvo drugih oboljenja ili zdravstvenih problema; vrste istovremenog tretmana; i komplikacije bilo koje bolesti ili režima lečenja. Drugi terapijski režimi ili sredstva mogu da se koriste zajedno sa metodima opisanim u ovom tekstu.
[0093] Terapijski efikasne količine klemizola, klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihove farmaceutske kompozicije za lečenje epileptičnih poremećaja opisanih u ovom tekstu mogu se inicijalno odrediti testovima na ćelijskim kulturama. Ciljne koncentracije biće one koncentracije klemizola, klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihove farmaceutske kompozicije koje su u stanju da inhibiraju ili na drugi način umanje napade koji se javljaju kod pacijenta.
[0094] Terapijski efikasne količine klemizola, klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihove farmaceutske kompozicije za upotrebu kod ljudi mogu se odrediti na osnovu animalnih modela. Na primer, doza za ljude može se formulisati tako da se postigne koncentracija koja je kod životinja pokazala efikasnost. Doza za ljude može da se podesi praćenjem pacijentovog odgovora na lečenje i postepenim povećavanjem ili smanjivanjem doze, kako je opisano ranije u ovom tekstu.
[0095] Doze mogu varirati u zavisnosti od zahteva subjekta i jedinjenja koje se upotrebljava. Doza koja se daje subjektu, u kontekstu farmaceutskih kompozicija prikazanih u ovom tekstu, trebalo bi da bude dovoljna za postizanje korisnog terapijskog odgovora kod subjekta tokom vremena. Veličina doze biće određena i postojanjem, prirodom i obimom nekog od neželjenih sporednih efekata. Obično, lečenje počinje upotrebom manjih doza koje su niže od optimalne doze jedinjenja. Posle toga, doza se povišava u malim koracima do postizanja optimalnog efekta pod datim uslovima.
[0096] Količine i intervali doziranja mogu se podeđšavati individualno da bi se obezbedili nivoi primene klemizola, klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihove farmaceutske kompozicije efikasni za određeni epileptični poremećaj koji se leči. Ovim će se obezbediti terapijski režim srazmeran jačini bolesnog stanja osobe.
[0097] Korišćenjem uputstava datih u ovom tekstu, efikasni profilaktički ili terapijski režim lečenja može da se planira tako da ne izaziva bitnu toksičnost, a da je u potpunosti efikasan u lečenju kliničkih simptoma koji se ispoljavaju kod određenog pacijenta. Ovo planiranje treba da uključi pažljivi izbor klemizola, klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili njihove farmaceutske kompozicije, uz razmatranje faktora kao što su
2
jačina jedinjenja, relativna bioraspoloživost, telesna težina pacijenta, prisustvo i jačina neželjenih sporednih dejstava, poželjan način primene i profil toksičnosti odabranog sredstva.
3. Toksičnost
[0098] Odnos između toksičnosti i terapijskog efekta za određeneo jedinjenje predstavljen je njegovim terapijskim indeksom i može se izraziti kao odnos između LD50(količina jedinjenja letalna za 50% populacije) i ED50(količina jedinjenja efikasna za 50% populacije). Poželjna su jedinjenja koja ispoljavaju visoke terapijske indekse. Podaci o terapijskom indeksu dobijeni testovima na ćelijskoj kulturi i/ili u studijama na životinjama mogu se upotrebiti za formulisanje opsega doza za upotrebu kod ljudi. Doziranje takvih jedinjenja poželjno je unutar opsega koncentracija u plazmi koje uključuju ED50uz malo ili nimalo toksičnosti. Doze mogu varirati unutar ovog opsega zavisno od upotrebljene dozne forme i upotrebljenog puta primene. Vidi, npr. Fingl et al., In: THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Ch.1, p.1, 1975. Tačnu formulaciju, put primene i dozu može odabrati svaki pojedinačni lekar, u svetlu pacijentovog stanja i određenog metoda u okviru kojeg se jedinjenje koristi.
[0099] Kada je potrebna ili poželjna parenteralna primena, posebno pogodne mešavine klemizola ili klemizolskog analoga (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) uključene u farmaceutsku kompoziciju mogu biti injektabilni, sterilni rastvori, uljani ili vodeni rastvori, kao i suspenzije, emulzije ili implanti, uključujući supozitorije. Posebno, nosači za parenteralnu primenu uključuju vodene rastvore dekstroze, slani rastvor, čistu vodu, etanol, glicerol, propilen glikol, ulje kikirikija, susamovo ulje, polioksietilen-blok polimere, i slično. Ampule su pogodne jedinične doze. Farmaceutske mešavine pogodne za upotrebu u farmaceutskim kompozicijama prikazanim u ovom tekstu uključuju one koje su opisane, na primer, u Pharmaceutical Sciences (17th Ed., Mack Pub. Co., Easton, PA) i WO96/05309.
III. Primeri
1. Primer 1
[0100] Epilepsija se može dobiti kao rezultat povrede mozga ili genetičke mutacije. Među genetički uzrokovanim epilepsijama više od 650 varijanti identifikovano je u genu SCN1A (Harkin, L.A. et al. The spectrum of SCN1A-related infantile epileptic encephalopathies. Brain 130, 843-852 (2007); Mulley J. C., et al., SCN1A mutations and epilepsy. Hum. Mutat.
25, 535-542 (2005)). "Missense" mutacije (mutacija pogrešnog smisla) ili mutacije pomaka rama čitanja u ovom genu, udružene su sa generalizovanom epilepsijom sa febrilnim napadima "plus" (generalized epilepsy with febrile seizures plus, GEFS+) (Ceulemans, B. P., et al., Clinical correlations of mutations in the SCN1A gene: from febrile seizures to severe myoclonic epilepsy in infancy. Pediatric Neurol. 30, 236-243 (2004)) kao i sa ozbiljnijim poremećajem poznatim kao Dravetov sindrom. Deca sa DS u početku imaju normalan razvoj, ali često tokom prve godine života imaju epizode febrilnih napada, sa progresijom ka jakim spontanim rekurentnim napadima, intelektualnom zaostajanju, ataksiji, i psihomotornoj disfunkciji. Korišćenjem raspoloživih antiepileptičnih lekova (AED) napadi ne mogu da se kontrolišu na odgovarajući način i ova deca su loši kandidati za neurohiruršku resekciju (Bender, A. C., et al., SCN1A mutations in Dravet syndrome: Impact of interneuron dysfunction on neural networks and cognitive outcome. Epilepsy Beh.23, 177-186 (2012)).
[0101] U mozgu sisara postoje četiri glavna podtipa alfa subjedinice voltažno-zavisnih kanala za prolaz natrijuma: NaV1.1, NaV1.2, NaV1.3 i NaV1.6, koje kodiraju četiri gena SCN1A, SCN2A, SCN3A, odnosno SCN8A. Otvaranjem ovih kanala formira se struja natrijuma i dolazi do brze depolarizacije ćelijske membrane, npr., što je sastavni deo inicijacije akcionog potencijala (Catterall, W. A., et al., Nav1.1 channels and epilepsy. J. Physiol.588, 1849-1859 (2010)). Kod miševa, Nav1.1 široko se eksprimira u centralnom nervnom sistemu uključujući inicijalni segment aksona parvalbumin-pozitivnih hipokampusnih interneurona i ekscitatornih glavnih ćelija (Kim, D. Y., et al., Reduced sodium channel Na(v)1.1 levels in BACE1-null mice. J. Biol. Chem. 286, 8106-8116 (2011); Chen, C., et al., Mice lacking sodium channel beta1 subunits display defects in neuronal excitability, sodium channel expression, and nodal architecture. J.Neurosci. 24, 4030-4042 (2004)). Heterozigotna delecija Nav1.1 kod miševa dovodi do smanjenja sposobnosti okidanja akutno disociranih brzoimpulsirajućih interneurona (Yu, F. H., et al., Reduced sodium current in GABAergic interneurons in a mouse model of severe myoclonic epilepsy in infancy. Nat. Neurosci. 9, 1142-1149 (2006)). Miševi sa opštom ili interneuron-specifičnom heterozigotnom delecijom Nav1.1 ispoljavaju temperaturom indukovane i spontane napade, blagu ataksiju, ponašanje slično autističnom i preranu smrt (Yu, F. H., et al., Reduced sodium current in GABAergic interneurons in a mouse model of severe myoclonic epilepsy in infancy. Nat. Neurosci. 9, 1142-1149 (2006); Oakley, J. C., et al., Temperature- and age-dependent seizures in a mouse model of severe myoclonic epilepsy in infancy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106, 3994-3999 (2009); Cheah, C. S., et al., Specific deletion of Nav1.1 sodium channels in inhibitory interneurons causes seizures and premature death in a mouse model of Dravet syndrome. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109, 14646-14651 (2012)). "Knock-in" miš koji nosi prevremeni stop-kodon u domenu III Nav1.1 kanala
4
ispoljava i pad amplitude akcionog potencijala tokom produženog okidanja interneurona i povećanu osetljivost prema temperaturom-indukovanim napadima (Ogiwara, I., et al., Nav1.1 localizes to axons of parvalbumin-positive inhibitory interneurons: a circuit basis for epileptic seizures in mice carrying an Scnla gene mutation. J. Neurosci. 27, 5903-5914 (2007)).
[0102] Generisanje i karakterizacija validnih životinjskih modela kritični su u nastojanju da se razume patofiziologija DS, i da se pomogne u identifikaciji novih terapija. Iako je značajna pažnja posvećena modelovanju SCN1A mutacija kod miševa, pokazano je da se ove životinje teško razmnožavaju, a osnovna genetika soja snažno utiče na epileptični fenotip. Od DS pacijenata moguće je generisati indukovane pluripotentne matične ćelije, ali pojedinačni neuroni ne rekapituliraju mrežno okruženje potrebno za generisanje in vivo napada. Danio rerio (zebrica), je jednostavna vrsta vertebrata koja obezbeđuje alternativni model-sistem sa značajnim prednostima u smislu genetičke manipulacije, efikasnog razmnožavanja i in vivo otkrivanja lekova (Lessman, C. A., The developing zebrafish (Danio rerio): a vertebrate model for high-throughput screening of chemical libraries. Birth Defects Res. C. Embryo Today 93, 268-280 (2011); Delvecchio, C., et al., The zebrafish: a powerful platform for in vivo, HTS drug discovery. Assay Drug Dev. Technol.9, 354-361 (2011); Rinkwitz, S., et al., Zebrafish: an integrative system for neurogenomics and neurosciences. Prog. Neurobiol. 93, 231-243 (2011)). Idealno, životinjski model bi trebalo da se zasniva na poznatom genetičkom uzroku bolesti (mutacija SCN1A), da precizno rekapitulira ključne osobine oboljenja (epilepsija), i odgovara ili ne odgovara na terapije koje se obično koriste kod pacijenata sa tim oboljenjem (farmakološka validacija). Ako je uspešan, takav model može da pruži informacije za razumevanje procesa bolesti i da katališe istraživanja prema novim terapijama.
[0103] Kod zebrice, familija voltažno-zavisnih natrijumskih kanala sastoji se od četiri seta dupliciranih gena: scn1Laa i scn1Lab, scn4aa i scn4ab, scn5Laa i scn5Lab, i scn8aa i scn8ab (Novak, A. E., et al., Embryonic and larval expression of zebrafish voltage-gated sodium channel alpha-subunit genes. Dev. Dyn. 235, 1962-1973 (2006)). Zebricin scn1Lab gen ima 77% identičnosti sa humanim SCN1A i eksprimira se u centralnom nervnom sistemu. Homozigotni mutant zebrice za ovaj gen (originalno označen kao didys552) otkriven je u skriningu hemijske mutageneze, korišćenjem optokinetičkog odgovora kao testa (Schoonheim, P. J., Arrenberg, A. B., Del Bene, F., & Baier H., Optogenetic localization and genetic perturbation of saccade-generating neurons in zebrafish. J. Neurosci. 30, 7111-7120 (2010)). Ovi tipovi skrininga baziraju se na indukovanju nasumičnih tačkastih mutacija korišćenjem alkilirajućeg sredstva N-etil-Nnitrozouree (N-ethyl-Nnitrosourea, ENU), nastale mutacije su tipično mutacije gubitka funkcije i recesivne su. Iako je ovo homozigotna mutacija, scn1Lab mutantne zebrice su relevantne za autozomno dominantni Dravetov sindrom kod ljudi, s obzirom na genomsku duplikaciju kod zebrice i prisustvo dodatnog Nav1.1 homologa (scn1Laa). scn1Lab mutanti su okarakterisani na molekulskom i ponašajnom nivou, pokazano je da mutanti ispoljavaju spontane napade rezistentne na lekove, i zatim su korišćeni u novom programu visokopropusnog skrininga za identifikovanje jedinjenja koja poboljšavaju epileptični fenotip. Skriningom baziranim na fenotipu, klemizol, jedinjenje koje je odobrila FDA, identifikovano je kao efikasni inhibitor spontanih konvulzivnih ponašanja i elektrografskih napada kod ovih mutanata.
[0104] Ekspresija scn1Lab i karakterizacija mutantnih zebrica Zebrice sa mutacijom u domenu III voltažno-zavisnog natrijumskog kanala identifikovao je Dr. Herwig Baier tokom istraživanja hemijske mutageneze (Schoonheim, P. J., Arrenberg, A. B., Del Bene, F., & Baier H., Optogenetic localization and genetic perturbation of saccade-generating neurons in zebrafish. J. Neurosci. 30, 7111-7120 (2010)). Originalni scn1Lab mutanti su povratno ukrštani na backcrossed onto the Tupfel long (TL) genetičkoj osnovi tokom 7-10 generacija i potvrđena je mutacija metionin (M) u arginin (R) u koloniji (Sl. 1A). Reverzna transkriptaza (reverse transcriptase, RT) i kvantitativna (quantitative, q) PCR otkrila je smanjenje ekspresije mRNK za scn1Lab u mutantnim larvama 3, 5 i 7 dana posle fertilizacije (days postfertilization, dpf) (Sl. 1B); antitela koja prepoznaju ovaj protein zebrice nisu dostupna. Kako se i očekivalo (Novak, A. E., et al., Embryonic and larval expression of zebrafish voltagegated sodium channel alpha-subunit genes. Dev. Dyn. 235, 1962-1973 (2006)), scn1Lab se upadljivo eksprimira tokom ranih stupnjeva razvića larve (Sl. 1B) i specifično u centralnom nervnom sistemu 3 dpf (Sl.1D, E). In situ hibridizacija na celom kalupu otkrila je difuznu, ali upadljivu ekspresiju u regionima mozga koji odgovaraju prednjem mozgu (telencefalon), optičkom tekstumu i cerebelumu. Sličan obrazac ekspresije zapažen je za scn1Laa na 3 dpf. Petog i sedmog dana dpf, ekspresija u CNS ostala je upadljiva i nejasan scn1Lab signal zapažen je i u srcu (Sl. 1D). Relativna ekspresija scn8aa ili scn8ab (Nav1.6) npr., subjedinica za koju se mislilo da deluje kao genetički modifikator DS (Martin, M. S., et al., The voltagegated sodium channel Scn8a is a genetic modifier of severe myoclonic epilepsy of infancy. Hum. Mol. Gen. 16, 2892-2899 (2007)), nije otkrila značajnu razliku u ekspresiji između mutanata i rođačkih kontrola na 5 dpf (Sl.1C). Slično, analiza na mikročipu, na 5 dpf takođe nije detektovala kompenzatornu promenu u ekspresiji mRNK kod trinaest različitih scn subjedinica zebrice (Tabela I) uključujući drugi homolog (scn1Laa). Ovi rezultati su poakazali selektivni defekat u Nav1.1 genu zebrice eksprimiranom u CNS tokom ranog razvića.
[0105] Transkriptomska analiza velikog obima scn1Lab mutanata. Iako se nasledni poremećaj voltažno-zavisnih jonskih kanala prepoznaje kao etiološki faktor epilepsije, do sada nisu saopštavani rezultati ispitivanja transkripcionih promena ni za jednu od kanalopatija povezanih sa epilepsijom. Da bi se nepristrasno detektovale razlike u genskoj ekspresiji, upotrebljen je Agilent Danio rerio čip koji pokriva ∼44,000 proba (Sl. 2A, B). Hijerarhijske klaster-analize pokazale su da se ∼2.5% (1099) ovih proba diferencijalno eksprimiralo kod mutanata i rođačkih kontrola, 5 dpf (p ≤ 0.01, t test; 674 ushodno regulisanih i 425 nishodno regulisanih); 405 bilo je svrstano u kategoriju "nepoznate funkcije". Spisak 30 nishodno i ushodno regulisanih poznatih gena koji pokazuju najveće razlike u ekspresiji prikazan je na Sl. 2C. Ove razlike su umerene jer je za 90% (990/1099) identifikovanih gena broj koji pokazuje koliko je puta promenjena ekspresija iznosio između 0.8 i 2.0. Slično analizi na mikročipu Mecp2 miševa sa mutacijom jednog gena (Jordan, C., et al., Cerebellar gene expression profiles of mouse models for Rett syndrome reveal novel MeCP2 targets. BMC Med. Genet. 8, 36 (2007)), mnogi od ovih identifikovanih gena nemaju očiglednu funkciju i/ili ekspresiju povezanu sa CNS.
[0106] Dva gena sa najvećim brojem koji pokazuje koliko je puta promenjena ekspresija, somatolaktin β i Na, K-ATPaza, imaju ekspresiju ograničenu prvenstveno na hipofizu (smtlb) (Lopez, M., et al., Expression of the somatolactin β gene during zebrafish embryonic development. Gene Expr. Patterns 6, 156-161 (2006)) ili uvo, intestinalni bulbus ili pronefrosni kanal (atp1a1a.5) (Blasiole, B., et al., Cloning, mapping, and developmental expression of a sixth zebrafish Na, K-ATPase alpha1 subunit gene (atplala.5). Mech. Dev.
119, Suppl 1:S211-S214 (2002)). Probe za nekoliko gena povezanih sa apoptozom (casp8, casp8b i casp3b) nisu pokazale nikakve statistički značajne promene u studijama na mikročipu. Od gena sa izmenjenom ekspresijom kod scn1Lab mutanata, šest je ranije bilo povezivano sa neurološkim poremećajima npr., pcdh19 (infantilna epileptična encefalopatija), cyfip1i fxr2 (sindrom fragilnog X hromozoma), ocrl (Loweov sindrom), ubap2l (Parkinsonova bolest) i oca2 (Angelmanov sindrom). Merenja genske ekspresije bazirana na mikročipu bila su verifikovana za 14 nasumično odabranih gena, korišćenjem qPCR (Sl.3A).
[0107] Biološke funkcije pripisane su svim genima korišćenjem anotacija ontologije gena (gene ontology, GO) i 482 gena koja su pokazala promenu ekspresije od najmanje 1.5 puta i p vrednost < 0.01 bila su dalje kategorisana (Sl. 3C). Geni povezani sa vezivanjem jona kalcijuma uključuju aneksinA1c, A1b i 2a, spektrin α2, neureksin 2a, kalsintenin 1 i parvalbumin 3. Zapažene su i značajne promene u genu "gap junction channel" (gen za protein kanala pukotinaste veze, cx43), uključenom u grupisanje voltažno-zavisnih jonskih kanala inicijalnog segmenta aksona (spna2) i ubikvitinskog domena GABA receptora (map1lc3b). Tri dodatna gena koja nisu nađena na mikročipu odabrana su za qPCR analizu (Sl. 3B): hcn1, gen za koji je pokazano da je korelisan sa SCN1A korišćenjem pretrage podataka i koji je nishodno regulisan u nekoliko modela napada (Noam, Y., et al., Towards an integrated view of HCN channel role in epilepsy. Curr. Opin. Neurobiol.21, 873-879 (2011)) bio je značajno smanjen kod scn1Lab mutanata u poređenju sa rođačkom kontrolom (p < 0.05 dvosmerni Studentov t-test). Međutim, homer i bdnf, npr., geni uključeni u sinaptogenezu, povezani sa formiranjem rekurentnih ekscitatornih sinapsi i epilepsijom (Avedissian, M., et al., Hippocampal gene expression analysis using the ORESTES methodology shows that homer 1a mRNA is upregulated in the acute period of the pilocarpine epilepsy model. Hippocampus 17, 130-136 (2007); Tongiorgi, E., et al., Brain-derived neurotrophic factor mRNA and protein are targeted to discrete dendritic laminas by events that trigger epileptogenesis. J. Neurosci.24, 6842-6852 (2004)), bili su nepromenjeni.
[0108] Spontani napadi kod scn1Lab mutanata zebrice scn1Lab mutanti posmatrani su u vezi sa pojavom spontanih elektrografskih napada koji počinju 3 dpf npr., prvi larveni stupanj na kojem može da se detektuje epileptiformno pražnjenje (Baraban, S.C., et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007); Hortopan, G. A., et al., Spontaneous seizures and altered gene expression in GABA signaling pathways in a mind bomb mutant zebrafish. J. Neurosci.30, 13718-13728 (2010); Hunt, R. F., Hortopan, G. A., Gillespie, A., & Baraban, S. C., A novel zebrafish model of hyperthermiainduced seizures reveals a role for TRPV4 channels and NMDA-type glutamate receptors. Exp. Neurol. 237, 199-206 (2012); Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005); Chege, S. W., Hortopan, G. A., Dinday, M. T., & Baraban, S.C., Expression and function of KCNQ channels in larval zebrafish. Dev. Neurobiol. 72, 186-198 (2012)). Mutantne larve identifikovane su na osnovu "crne" obojenosti (Sl.4A), koja je pokazala defekt u agregaciji pigmenta i uginule su prerano između 10. i 12. dpf, kako je bilo saopšteno ranije (Novak, A. E., et al., Embryonic and larval expression of zebrafish voltage-gated sodium channel alphasubunit genes. Dev. Dyn. 235, 1962-1973 (2006)). Registrovanje električne aktivnosti vanćelijskog polja prednjeg mozga paralisanih i u agaru imobilisanih scn1Lab mutanata bilo je obeleženo čestim kratkim impulsnim naletima nalik interiktalnim, i dugotrajnim događajima nalik iktalnim, velike amplitude, sa početkom na 3 dpf (n = 4), koji su postepeno postajali upadljiviji između 4. i 7.
dpf (n = 132) (Sl.2C). Ovi događaji potvrđeni su u 100% mutanata na 3 dpf, 100% na 4 dpf, 97% na 5 dpf, 98% na 6 dpf i 100% na 7 dpf.
[0109] Abnormalni električni događaji nisu zapaženi kod rođačkih kontrola odgovarajuće starosti, ni na jednom stupnju razvića (n = 36). Napadi indukovani hipertermijom (Hunt, R. F., Hortopan, G. A., Gillespie, A., & Baraban, S. C., A novel zebrafish model of hyperthermia-induced seizures reveals a role for TRPV4 channels and NMDA-type glutamate receptors. Exp. Neurol. 237, 199-206 (2012)) mogli su da se pobude kod scn1Lab mutanata na 5 dpf i kod kontrola sa izgleda sličnim temperaturnim pragovima (mutant: 26.9 ± 0.5 C°; n = 14; kontrola: 25.9 ± 0.5 C°; n = 14; p = 0.164 t-test). Međutim, kod mutanata su ova merenja bila komplikovana istovremenom pojavom visokofrekventnih spontanih epileptiformnih pražnjenja. Mutanti su imali povećane nivoe aktivnosti plivanja i ispoljavali su ponašanje slično ponašanju u neizazvanom napadu, koje se sastojalo od konvulzija čitavog tela i brzog kretanja u jednom smeru, sa početkom 4. dpf (n = 36). Reprezentativni dijagram lokomotorne putanje scn1Lab mutanta koji pokazuje hiperaktivnost i konvulzivno ponašanje prikazan je na Sl. 4B. Ponašanje je slično onome koje je klasifikovano kao Stupanj III napada kod larve izložene pentilentetrazolu (Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005)). Ponašanje napada nikada nije zapaženo kod kontrola, ni na jednom stupnju razvića (n = 36). U pulovima mutantnih i rođačkih kontrolnih larvi, scn1Lab mutanti ostaju blizu stranicama Petrijeve posude, što se smatra za formu tigmotaksije kod riba (Ellis, L. D., Seibert, J., & Soanes, K. H., Distinct modes of induced hyperactivity in zebrafish larvae. Brain Res. 1449, 46-59 (2012)). Ovi rezultati otkrivaju striktno epileptični fenotip scn1Lab mutantnih zebrica.
[0110] Farmakološka evaluacija scn1Lab mutantnih zebrica Napadi udruženi sa SCN1A mutacijama slabo odgovaraju na većinu AED. Da bi se evaluirala farmakosenzitivnost, pravljeni su zapisi spontanih elektrografskih napada kod scn1Lab mutanata ukalupljenih u agar (5-6 dpf) pod bazalnim uslovima, i ponovo posle primene komercijalno dostupnih AED. Svi lekovi su primenjeni preko kupatila u koncentraciji od 1 mM; sedam jedinki testirano je za svaki lek. Frekvencija epileptiformnih događaja (uključujući pražnjenja slična interiktalnim i pražnjenja slična iktalnim) i frakciono vreme provedeno u napadu kod scn1Lab mutanata bili su smanjeni valproatom, diazepamom, kalijum bromidom i stiripentolom (Sl. 5A, B, D). Trajanja impulsnih naleta nisu bitno promenjena prilikom izlaganja nekom od lekova (Sl.5C).
[0111] Kao što je očekivano, većina AED nije imala efekta, a epileptiformna aktivnost postajala je češća posle izlaganja karbamazepinu (kod 2 od 7 jedinki), etosuksimidu (4 od 7 jedinki) ili vigabatrinu (6 od 7 jedinki). Zbog toga što deca sa DS često odgovaraju na ketogenu dijetu (KD) (Dravet, C., et al., Severe myoclonic epilepsy in infancy: Dravet syndrome. Adv. Neurol. 95, 71-102 (2005)) zasebna legla scn1Lab mutanata, rođačke i WT (wild type, divlji tip) kontrole izlagani su dijeti tokom 48 h počevši od 4. dpf. Podaci dobijeni praćenjem lokomocije larvi izloženih KD na 6 dpf potvrdili su smanjenje ponašanja sličnog napadu do kontrolnog nivoa kod 7 od 10 mutanata (Sl. E; prosečna brzina, tretirani mutanti = 0.43 ± 0.09 mm/sec, n = 16; netretirani mutantni = 0.81 ± 0.05 mm/sec, n = 28; p < 0.05 Kruskal-Wallis ANOVA na rangovima sa Dunnovim parnim višestrukim poređenjem). Nisu zapažene značajne razlike u ponašanju plivanja kod rođačkih kontrola tretiranih KD (prosečna brzina = 0.63 ± 0.05 mm/sec, n = 20) u poređenju sa netretiranim WT larvama na 6 dpf (prosečna brzina = 0.62 ± 0.07 mm/sec; n = 20). Akutno izlaganje (20 min) dijeti nije imalo efekta na ponašanje napada mutanata u testu lokomocije (n = 14; promena prosečne brzine < 34%). Podaci registrovanja aktivnosti u polju prednjeg mozga, koje je zatim usledilo, dobijeni od istih zebrica koje su korišćene u testu lokomocije (Sl.5F, gornji zapis) potvrdili su pojavu spontanog epileptiformnog pražnjenja kod scn1Lab mutanata izloženih embrionalnom medijumu i supresiju aktivnosti impulsnog naleta kod mutanata izloženih KD u trajanju od 48 h (Sl. 5F, donji zapis). Ovi rezultati pokazuju da farmakološki profil scn1Lab mutanata podseća na onaj viđen kod dece sa DS.
[0112] Visokopropusni skrining lekova kod scn1Lab mutanata Pošto se ponašanje u napadu lako i brzo prati korišćenjem formata putanje lokomocije (Baraban, S.C., et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007); Hortopan, G. A., et al., Spontaneous seizures and altered gene expression in GABA signaling pathways in a mind bomb mutant zebrafish. J. Neurosci. 30, 13718-13728 (2010); Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005); Chege, S. W., Hortopan, G. A., Dinday, M. T., & Baraban, S.C., Expression and function of KCNQ channels in larval zebrafish. Dev. Neurobiol. 72, 186-198 (2012); Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., & Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res.75, 18-28 (2007); Baxendale, S., et al., Identification of compounds with anti-convulsant properties in a zebrafish model of epileptic seizures. Dis. Model. Mech. 5, 773-774 (2012); Cario, C. L., Farrell, T. C., Milanese, C., & Burton, E. A., Automated measurement of zebrafish larval movement. J. Physiol. 589, 3703-3708 (2011); Winter, M. J., et al., Validation of a larval zebrafish locomotor assay for assessing the seizure liability of early-stage development drugs.
4
J. Pharm. Tox. Methods 5, 176-187 (2008); Orellana-Paucar, A. M., et al., Anticonvulsant activity of bisabolene sesquiterpenoids of Curcuma longa in zebrafish and mouse seizure models. Epilepsy Beh.24, 14-22 (2012) (Sl.4B i 5B1).
[0113] Dizajnirana je visokopropusna, na fenotipu zasnovana strategija skrininga hemijskih biblioteka za jedinjenja koja smanjuju ponašanje mutanta do stupnja 0 (veoma mala aktivnost plivanja) ili stupnja I (povećana, ali nekonvulzivna aktivnost plivanja) npr., ponašanje ekvivalentno onome koje se viđa kod normalnih WT mutanata. Automatizovano merenje aktivnosti larvi vršeno je korišćenjem EthoVision sofvera za praćenje (Noldus Information Technology) i kamere velike brzine. Prethodne studije potvrdile su da kretanje velike brzine ≥ 20 mm/sec odgovara paroksizmalnim konvulzijama sličnim napadu (stupanj III) (Winter, M. J., et al., Validation of a larval zebrafish locomotor assay for assessing the seizure liability of early-stage development drugs. J. Pharm. Tox. Methods 5, 176-187 (2008); Orellana-Paucar, A. M., et al., Anticonvulsant activity of bisabolene sesquiterpenoids of Curcuma longa in zebrafish and mouse seizure models. Epilepsy Beh.24, 14-22 (2012)).
[0114] Korišćenjem formata sa 96 bunarčića, automatski je praćena bazalna aktivnost plivanja mutanata, a zatim ponovo posle dodavanja testnog jedinjenja (100 μl); svako jedinjenja testirano je na 6 do 12 pojedinačnih larvi, 5. dpf. Promena u aktivnosti plivanja mutanta u dve zasebne epohe registrovanja u embrionalnom medijumu uzeta je kao bazalni nivo i prikazana na Sl. 6A (n = 28). Na osnovu standardne devijacije od 17.3 za bazalne zapise udružene jednostavno sa promenom rastvora, tražena su jedinjenja koja inhibiraju kretanje (mereno kao promena prosečne brzine) za ≥ 34%. Da bi se validirao ovaj pristup, korišćenjem ovog testa najpre je urađen skrining jedanaest AED i KD. Kao što je bilo očekivano posle elektrofizioloških testova (Sl. 5), diazepam, kalijum bromid, stiripentol, valproat i 48 h izlaganja KD efikasno su inhibirali ponašanje napada u testu baziranom na lokomociji (Sl.
6B); ganaksolon, neuroaktivni steroid povezan sa alopregnalonom, takođe je bio efikasan. Posle toga, izvršen je skrining testnih jedinjenja u početnoj koncentraciji od 667 μM iz biblioteke koja je uključivala lekove odobrene i toksikološki testirane od strane Uprave za hranu i lekove SAD (US Food and Drug Administration, FDA).
[0115] Među 320 jedinjenja korišćenih u skriningu in vivo, za 18 je nađeno da značajno inhibiraju spontane napade kod scn1Lab mutanata do nivoa koji se može uporediti sa ponašanjem stupnja 0 ili stupnja I i/ili smanjuju prosečnu brzinu plivanja (crveni kružići na Sl. 6C). Ovih 18 jedinjenja zatim je ponovo testirano na zasebnim leglima scn1Lab mutanata u koncentracijama od 667, 67 i 6.7 μM. U inicijalnom skriningu, 81 jedinjenje je identifikovano kao letalno tj., posle 30 min izlaganja nije bilo vidljivih srčanih otkucaja ili pokreta, ponovo su evaluirani u razblaženju od 1:100; nijedno od njih nije dalje razmatrano. Biblioteka lekova uključivala je dodatna jedinjenja sa pretpostavljenim antikonvulzantnim osobinama (beklamid, aminohidroksibuterna kiselina, i tiletamin) koja su takođe neefikasna u testu lokomocije u 96 bunarčića, pri koncentraciji od 667 μM. Četrnaest od ponovo testiranih jedinjenja ili nije uspelo da inhibira ponašanje napada u drugom leglu scn1Lab mutanata ili je samo suprimiralo ponašanje pri najvećoj koncentraciji leka. Sledeća 4 (od 18) jedinjenja koja su efikasna u smanjenju aktivnosti plivanja izazvanog napadom i smanjenju prosečne brzine, pri sve tri koncentracije izabrana su za dalje testiranje: zoksazolamin, klemizol HCl, klorgilin HCl i tolperizon HCl (Sl. 6D). Svako od ovih jedinjenja evaluirano je treći put u testu lokomocije u koncentraciji od 100 μM, i zatim je praćena elektrografska aktivnost prednjeg mozga. Klorgilin (inhibitor monoamin oksidaze A) i miorelaksanti zoksazolamin (Hadra, R. & Millichap J. G., Quantitative assessment of motor function in cerebral palsy: evaluation of zoxazolamine (flexin), a new muscular relaxant agent. Neurology 6, 843-852 (1956)) i tolperizon (Sakitama, K., The effects of centrally acting muscle relaxants on the intrathecal noradrenaline-induced facilitation of the flexor reflex mediated by group II afferent fibers in rats. Jpn. J. Pharmacol. 63, 369-736 (1993)) identifikovani su kao "lažno pozitivni" jer su smanjili aktivnost plivanja u ovoj koncentraciji, ali kada je isti mutant bio uklopljen u agar elektrografski napadi su se i dalje uočavali (vidi Sl.6E).
[0116] Samo jedno jedinjenje, klemizol (antihistaminik i inhibitor vezivanja NS4B RNK) (Finkelstein, M., Kromer, C. M., Sweeney, S. A., & Delahunt C. S., Some aspects of the pharmacology of clemizole hydrochloride. J. Am. Pharm. Assoc. Am. Pharm. Assoc. 49, 18-22 (1960); Einav, S., Sobol, H. D., Gehrig, E., & Glenn J. S., Discovery of a hepatitis C target and its pharmacological inhibitors by microfluidic affinity analysis. Nat. Biotechnol. 26, 1019-1027 (2008)), bilo je efikasno u supresiji aktivnosti spontanog napada u oba testa (Sl.
6D-E). Klemizol nije imao značajan efekat na ponašanje napada u testu lokomocije u koncentracijama između 6.25 i 50 μM (n = 33). Kao dodatna evaluacija terapijskog potencijala akutnog lečenja klemizolom, pokazano je da je klemizol u koncentraciji od 100 μM efikasan u smanjenju ponašanja napada kod WT zebrice izložene uticaju 15 mM pentilentetrazola (Sl. 6D; n = 10) tj., u modelu akutnih napada, baziranom na antagonizmu GABA receptora. Ovi rezultati sugerišu da scn1Lab mutanti mogu da se koriste u visokopropusnom skriningu za identifikovanje potencijala vodećih jedinjenja za Dravetov sindrom.
[0117] scn1Lab mutant zebrice opisan u ovom tekstu je prvi jednostavni vertebratski model mutacije natrijumskog kanala koji rekapitulira svojstva Dravetovog sindroma, katastrofične forme epilepsije kod dece, rezistentne na lekove. Ovi mutanti pokazuju hiperaktivnost, uključujući konvulzivno ponašanje, spontane elektrografske napade, skraćen životni vek i farmakološki profil sličan uslovima kod ljudi. Dodatna molekulska analiza scn1Lab mutanata sugeriše odsustvo velikih promena u globalnoj ekspresiji gena i odsustvo kompenzacije, na nivou RNK, drugim subjedinicama voltažno-zavisnog Na<+>kanala. Dvostepena strategija skrininga lekova, bazirana na fenotipu, za identifikovanje vodećih jedinjenja sa potencijalom da poboljšaju epileptične fenotipove udružene sa mutacijom SCN1A identifikovala je jedan lek (klemizol) odobren od strane FDA.
[0118] Kod pacijenata sa DS elektroencefalografska (electroencephalographic, EEG) aktivnost je tipično normalna u prvoj godini života, a između 1. i 9. godine starosti razvija se u abnormalnu paroksizmalnu aktivnost sa velikim brojem "spajkova". Kod larvi zebrice u razviću ovaj obrazac zavisan od starosti imitira se na stupnju na kojem ekspresija scn1a postaje značajna. Vanćelijsko registrovanje aktivnosti prednjeg mozga kod veoma mladih larvi (3 dpf) izgleda uglavnom normalno, sa povremenom aktivnošću malih impulsnih naleta. Frekventna kratka aktivnost slična interiktalnoj sa impulsnim naletima velike amplitude, postaje upadljivija sa starenjem larve. Arhitektura ovih električnih događaja podseća na ono što je ranije opisano kod larvi divljeg tipa izloženih pentilentetrazolu (Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005)), 4-aminopiridinu (Baraban, S.C., et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007)), linopirdinu (Chege, S. W., Hortopan, G. A., Dinday, M. T., & Baraban, S.C., Expression and function of KCNQ channels in larval zebrafish. Dev. Neurobiol. 72, 186-198 (2012)) ili hipertermiji (Hunt, R. F., Hortopan, G. A., Gillespie, A., & Baraban, S. C., A novel zebrafish model of hyperthermia-induced seizures reveals a role for TRPV4 channels and NMDA-type glutamate receptors. Exp. Neurol.237, 199-206 (2012)).
[0119] Pojava aktivnosti elektrografskog napada odgovara hiperaktivnosti, konvulzijama celog tela sa pridruženom aktivnošću plivanja velikom brzinom i kratkim gubitkom položaja kod mutanata koji su slobodni. Ovi tipovi spontanog ponašanja nikada se ne zapažaju kod larvi divljeg tipa i, ponovo, podsećaju na ono što je ranije zapaženo samo tokom izlaganja konvulzivnim lekovima. Ova ponašanja indirektno ukazuju na aktivnost napada i mogu se koristiti za brzu in vivo evaluaciju lečenja lekovima i letaliteta, u formatu sa velikim brojem bunarčića, uz korišćenje softvera za automatizovano praćenje lokomocije (Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., & Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007);
4
Baxendale, S., et al., Identification of compounds with anticonvulsant properties in a zebrafish model of epileptic seizures. Dis. Model. Mech.5, 773-774 (2012); Winter, M. J., et al., Validation of a larval zebrafish locomotor assay for assessing the seizure liability of earlystage development drugs. J. Pharm. Tox. Methods 5, 176-187 (2008)). Napadi kod scn1Lab mutanata zebrice odgovarali su na ketogenu dijetu i četiri AED (npr., valproat, benzodiazepin, kalijum bromid i stiripentol) koji se klinički prepisuju pacijentima sa DS.
[0120] Zanimljivo, događaji elektrografskog napada kod scn1Lab mutanata ostaju nepromenjeni (ili se možda pogoršavaju) u odgovoru na nekoliko komercijalno dostupnih AED. Iako je moguće da su za obustavljanje električnih događaja potrebne koncentracije leka više od 1 mM, one bi se smatrale za visoke i potencijalno neselektivne koncentracije. U ogledima sa lekovima, uz korišćenje modela akutnog napada indukovanog PTZ kod larvi zebrice (Baraban, S.C., et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizure-resistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007); Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., & Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007); Baxendale, S., et al.. Identification of compounds with anti-convulsant properties in a zebrafish model of epileptic seizures. Dis. Model. Mech. 5, 773-774 (2012); Afrikanova, T., et al., Validation of the zebrafish pentylenetetrazol seizure model: locomotor versus electrographic responses to antiepileptic drugs. PLoS One 8, e54166 (2013)), koncentracije AED od 1 mM i niže obično su bile dovoljne za procenu antiepileptične aktivnosti. Uz izostanak odgovora na sedam različitih AED, ovaj model se uklapa u kliničku definiciju epilepsije rezistentne na lekove (de Toffol, B., et al., ESPERA study: Applicability of the new ILAE criteria for antiepileptic drug resistance of focal epilepsies in current clinical practice. Epilepsy Beh 25, 166-169 (2012)).
[0121] Tokom skori 40 godina, otkriće i identifikacija novih AED gotovo su se u potpunosti zasnivali na prekliničkim animalnim modelima stečenih ili akutnih napada kod glodara (Loscher, W. & Schmidt, D., Modern antiepileptic drug development has failed to deliver: Ways out of the current dilemma. Epilepsia 52, 657-658 (2011)). Ovaj pristup uspešno je identifikovao lekove koji blokiraju generalizovane tonično-klonične napade kod ljudi (Bialer, M. & White H. S., Key factors in the discovery and development of new antiepileptic drugs. Nat. Rev. Drug Discov. 9, 10-19 (2012)), ali i dalje traži dosta vremena, zahtevan je u pogledu resursa, skup je i teško se izvodi. Iako testiranja PTZ napada ili drugih tipova stečenih napada kod larvi zebrice može biti efikasnije od sličnih testova na glodarima (Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., & Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res.75, 18-28 (2007); Baxendale, S., et al., Identification of compounds with anti-convulsant properties in a zebrafish model of epileptic seizures. Dis. Model. Mech.5, 773-774 (2012) Afrikanova, T., et al., Validation of the zebrafish pentylenetetrazol seizure model: locomotor versus electrographic responses to antiepileptic drugs. PLoS One 8, e54166 (2013)), njima treba na kraju da budu identifikovane iste klase jedinjenja.
[0122] Nasuprot tome, ovde je opisana alternativna strategija skrininga korišćenjem formata sa 96 bunarčića za brzo automatizovano nadgledanje ponašanja, praćenog osetljivim elektrofiziološkim testom spontane aktivnosti elektrografskih napada kod ribljeg mutanta koji imitira poznati genetički poremećaj kod ljudi. Ova in vivo strategija istovremeno prati letalitet i nije ograničena na SCN1A, već može da se primeni na bilo koji epileptični poremećaj. Uistinu, ovaj pristup zasnovan na fenotipu može formirati osnovu genetički informisanog ili "personalizovanog" pristupa u otkrivanju lekova. Iako su razvijeni genetički modifikovani miševi koji imitiraju poznate mutacije SCN1A i ispoljavaju epilepsiju, razmnožavanje može biti komplikovano, osnovni soj može modifikovati fenotipove napada i AED se retko testiraju na tim životinjama. Na primer, kod Scn1a<RX/+>mutantnih miševa, stiripentol i klobazam evaluirani su samo u pogledu efekata na pragove napada izazvanih hipertermijom (Cao, D., et al., Efficacy of stiripentol in hyperthermia-induced seizures in a mouse model of Dravet syndrome. Epilepsia 53, 1140-1145 (2012)). Lečenje of Scn1a<+/->mutantnih miševa klonazepamom, alosteričkim modulatorom GABA-A receptora, pomoglo je kod nekih od ponašanja sličnih autističnom ponašanju, ali ovaj lek nije evaluiran kao antiepileptik (de Toffol, B., et al., ESPERA study: Applicability of the new ILAE criteria for antiepileptic drug resistance of focal epilepsies in current clinical practice. Epilepsy Beh 25, 166-169 (2012)).
[0123] Kada su opisani glodarski modeli epilepsije rezistentne na lekove, na primer podgrupa pacova divljeg tipa odabrana iz "kindling" modela (model stimulacije) ili modela postepileptičnog statusa (Han, S., et al., Autistic-like behaviour in Scnla+/- mice and rescue by enhanced GABA- mediated neurotransmission. Nature 489, 385-390 (2012)), oni su ostali loše okarakterisani i nisu pogodni za početne visokopropusne stupnjeve skrininga lekova. Nasuprot tome, korišćenjem scn1Lab mutant zebrice sa preko 75% sekvencione identičnosti za mutaciju natrijumskog kanala kod ljudi, završeno je profilisanje u velikom obimu transkriptoma za preko 44000 proba, pokazana razvojna progresija ekspresije scn1Lab kanala i epileptičnog fenotipa analizirani efekti raspoloživih antiepileptičnih terapija, i izvršen skrining hemijske biblioteke od 320 jedinjenja protiv spontanih neizazvanih napada. Iako je prvi skrining "dokaza principa" izveden sa jednom jedinkom po bunarčiću, 6 do 12 jedinki po ogledu i jednim ogledom nedeljno, lakoća sa kojom se može povećavati broj zebrica (posebno
4
u komercijalnoj postavci) da bi se izučavale stotine ili hiljade larvi nedeljno, čine je atraktivnim sistemom za prvi stupanj programa brzog otkrivanja lekova u velikom obimu. Istovremena in vivo evaluacija toksičnosti - jedan od najvećih izvora neuspeha u prevođenju vodećih jedinjenja iz laboratorije u kliničku upotrebu - je kritična prednost ovog pristupa u poređenju sa raspoloživom organotipskom hipokamusnom kulturom - ili strategijama skrininga baziranim na radu in silica.
[0124] Iako svaki podatak u vezi sa otkrivanjem lekova dobijen na animalom modelu treba razmatrati sa oprezom, klemizol, jedinjenje sa HI-antagonističkim i NS4B RNK-inhibirajućim osobinama, je lek odobren od strane FDA, sa bezbednim toksikološkim profilom, koji se izdvojio u ovom skriningu i koji nudi uzbuljivo polazište za dalje istraživanje. Na primer, iako je nedavno prepoznato da antihistaminici inhibiraju indukovane napade kod neonatalnih pacova (Yamada, K., Takizawa, F., Tamura, T., & Kanda T., The effect of antihistamines on seizures induced by increasing-current electroshocks: ketotifen, but not olopatadine, promotes the seizures in infant rats. Biol. Pharm. Bull. 35, 693-697 (2012)), bez vezivanja za neku određenu teoriju, to verovatno nije mehanizam dejstva u ovom slučaju. Pokazali smo da četiri druga H1 antihistaminika (pimetiksen maleat, hloropiramin HCl, mebhidrolin naftalensulfonat i iproheptin) nisu uspela da suprimiraju konvulzivno ponašanje kod scn1Lab mutanata. Pored toga, dokazi ukazuju na potencijal H1 antihistaminika da neželjeno modifikuju napade kod dece (Miyata, I., Saegusa, H., & Sakurai, M., Seizure-modifying potential of histamine H1 antagonists: a clinical observation. Pediatr. Int. 53, 706-708 (2011)) što ukazuje na potrebu detaljnije analize da bi se identifikovao mehanizam dejstva. S obzirom na to da je klemizol efikasan i u verziji metrazolskog testa na zebrici, moglo bi biti korisno sprovesti dodatna preklinička testiranja u okviru programa ispitivanja antikonvulzivnih lekova, koji sponzoriše NIH, pri Univerzitetu Jute. Kao najvažnije, ove studije sugerišu da bi in vivo skrining lekova i eksperimentalna analiza scn1Lab mutantnih zebrica mogli da se pokažu kao izuzetno vredni za razumevanje (i lečenje) Dravetovog sindroma.
[0125] Životinje. Embrioni Scn1Lab (didy<s552>) zebrice dobijeni su na poklon ljubaznošću Herwiga Baiera. Adultne HuC:GFP zebrice dobijene su na poklon ljubaznošću Stephena Ekkera. Zebrice su razmnožavane i držane u skladu sa uputstvima Odbora za korišćenje i brigu o eksperimentalnim životinjama Univerziteta u Kaliforniji, San Francisko. Larve zebrice držane su u "embrionalnom medijumu" koji se sastojao od 0.03% Instant Ocean (Aquarium Systems, Inc., Mentor, OH, U.S.A.) u dejonizovanoj vodi sa 0.002% metilenskog plavog kao fungicidom. Legla larvi zebrice odgajana su od scn1Lab heterozigotnih životinja koje su povratno ukrštane sa TL divljim tipom ili HuC:GFP zebricama tokom najmanje 7
4
generacija. Korišćeni su homozigotni mutanti (klasirani na osnovu pigmentacije) rođačke larve odgovarajuće starosti. Iako tačan genetički defekt odgovoran za pigmentaciju kože nije poznat, zanimljivo je da je u podacima dobijenim na mikročipu primećen porast ekspresije gena kodirajućeg za melanokortinski 5a receptor,.
[0126] Nadgledanje napada. Procedure za praćenje lokomocije i elektrofiziološke procedure opisane su ranije (Baraban, S.C., et al., A large-scale mutagenesis screen to identify seizureresistant zebrafish. Epilepsia 48, 1151-157 (2007); Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005)). U pilot-eksperimentima, HuC:GFP zebrice korišćene su u elektrofiziološkim eksperimentima za dobijanje procene o lokaciji snimajućih elektroda. Dijagrami lokomocije dobijeni su od jedne jedinke po bunarčiću, pri epohi registrovanja od 10 min, uz korišćenje DanioVision sistema sa EthoVision XT softverom (Noldus Information Technology; Leesburg, VA). Ocenjivanje napada izvedeno je kako je opisano (Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005)). Sa dijagrama lokomocije analizirani su pređeno rastojanje (u mm) i prosečna brzina (u mm/sec). Epileptiformni događaji analizirani su u pClamp (Molecular Devices; Sunnyvale, CA) i definisani su kao uzlazne ili nizlazne deflekcije membrane veće od dvostrukog bazalnog nivoa šuma i klasifikovane ili kao slične interiktalnim (trajanje 100 do 300 msec) ili kao slične iktalnim (trajanje 1000 do 5000 msec). Frekvencija impulsnih naleta određena je utvrđivanjem broja epileptiformnih događaja u minutu tokom desetominutne epohe registrovanja. Trajanje impulsnih naleta određeno je merenjem intervala od pojave do prestanka, za sve događaje tokom iste epohe.
[0127] Lekovi su dobijeni od Sigma-Aldrich i rastvoreni u embrionalnom medijumu. Stokrastvori pripremljeni su u embrionalnom medijumu u koncentraciji od 1 mM i pH je podešen na ∼7.5. Ganaksolon je dobijen ljubaznošću BioCrea GmbH (Radebeul, Germany). Jedinjenja za skrining lekova kupljena su od MicroSource Discovery Systems, Inc. (International Drug Collection; Gaylordsville, CT) i obezbeđena su kao 10 mM rastvori u DMSO. Testna jedinjenja rastvorena su u embrionalnom medijumu i testirana su u koncentracijama između 6.7 i 667 μM; finalna koncentracija DMSO je ∼7%. Početna koncentracija za skrining od 667 μM odabrana je za studije ponašanja kod slobodnoplivajućih jedinki jer spada u niže koncentracije AED za koje je ranije saopšteno da su efikasne protiv napada indukovanih PTZ (10-20 mM) kod larvi zebrice (0.1 do 25 mM) (Baraban, S. C., Taylor, M. R., Castro, P. A., & Baier H., Pentylenetetrazole induced changes in zebrafish behavior, neural activity and c-fos
4
expression. Neuroscience 131, 759-768 (2005); Berghmans, S., Hunt, J., Roach, A., & Goldsmith, P., Zebrafish offer the potential for a primary screen to identify a wide variety of potential anticonvulsants. Epilepsy Res. 75, 18-28 (2007); Afrikanova, T., et al., Validation of the zebrafish pentylenetetrazol seizure model: locomotor versus electrographic responses to antiepileptic drugs. PLoS One 8, e54166 (2013)) i najefikasnija je bila upotreba male zapremine stok-rastvora (250 μL) obezbeđenog od strane MicroSource Discovery Systems, Inc. Malo viša koncentracija (1 mM) odabrana je za početne testove validacije AED na Slikama 5 i 6 da bi se objasnila svaka moguća komplikacija udružena sa difuzijom kroz agar. Toksičnost DMSO je evaluirana pri razblaženjima između 0.01 i 100% uz korišćenje larvi divljeg tipa (n = 12 jedinki po koncentraciji); DMSO pri > 25% bio je letalan.
[0128] U svim studijama skrininga lekova, jedinjenja su obeležena kodom i eksperimenti su izvođeni bez uvida istraživača u prirodu jedinjenja. Zapisi bazalnih vrednosti aktivnosti napada dobijeni su na mutantima u embrionalnom medijumu; drugi dijagram je potom dobijen posle zamene rastvora testnim jedinjenjem. Svako testno jedinjenje klasifikovano kao "pozitivni pogodak" u testu lokomocije vizuelno je potvrđeno kao "živo" na osnovu kretanja larve u odgovoru na dodir i vidljivih srčanih otkucaja. Aktivnost spontanog plivanja kod WT jedinki bila je odsutna ili minimalna tokom registrovanja ovih desetominutnih epoha (vidi Sl.
3B) i one nisu korišćene u testovima otkrivanja lekova.
[0129] Postupci analize na mikročipu, kvantitativne PCR i in situ hibridizacije na celom kalupu opisani su ranije (Hortopan, G. A., et al., Spontaneous seizures and altered gene expression in GABA signaling pathways in a mind bomb mutant zebrafish. J. Neurosci. 30, 13718-13728 (2010)).
[0130] Podaci su prikazani kao srednja vrednost i SEM, ako nije drugačije rečeno. Statistička značajnost između grupa određena je Studentovim dvosmernim t-testom za nezavisne uzorke, ANOVA ili Mann-Whitneyjevim testom zbira rangova, kako je pogodno, ako nije drugačije rečeno. Značajnost razlika je postavljena na P < 0.05, ako nije drugačije naznačeno.
1. Primer 2
[0131] Na osnovu naše prethodne diskusije i neke aktivnosti zapažene pri dozama od 100 i 300 mg/kg u kvalitativnom MES skriningu kod miševa, nastavili smo sa kvantitativnim testiranjem na mišjem MES/scMET/Tox modelu da bismo odredili ED50/TD50. Tokom određivanja TPE u MES modelu, nije zapažena aktivnost pri početnoj dozi od 300 mg/kg. Međutim, aktivnost je zapažena pri dozi od 500 mg/kg, pri čemu su 2/4 životinje zaštićene na 0.25 min i 4/4 životinje zaštićene na 30 minuta. Aktivnost ili toksičnost (nesposobnost da se
4
održi na rotirajućoj gredici) nisu zabeležene ni u jednoj drugoj dozi ili vremenskoj tački testiranja. Aktivnost nije zapažena u scMET modelu. Podaci iz MES modela pokazuje da postoji značajna aktivnost/zaštita sa ASP469016 u ovom mišjem modelu, sa ED50 < 400 mg/kg.
Rezultati skrininga antikonvulzanata - Miševi IP kvantifikacija
[0132]
ED50 vrednost
[0133]
ED50 biološki odgovor
[0134]
Vreme do postizanja maksimalnog efekta
4
Komentari za NIH:
Komentari za MES doze 350 m/kg i 400 m/kg i Scmet doze 200 m/kg rađene sa dobavljača: Ori serijom i sve druge doze rađene sa A serijom. Nedovoljno materijala za nastavak testiranja
2. Primer 3
[0136] ASP469016 je testiran u našem početnom T31 (MES/scMET/Tox) skriningu pri 30, 100, i 300 mg/kg. Podaci za svaki uslov prikazani su kao N/F, gde je N jednako broju zaštićenih životinja i F je jednako broju testiranih životinja. Za testove toksičnosti (TOX), N je jednako broju životinja koje su pokazale toksične efekte i F je jednako broju testiranih životinja. Kodovi u koloni C odnose se na komentare tehničara koji su izvodili eksperiment i definisani su u odeljku sa komentarima, po potrebi. Smrtni slučajevi su notirani ako ih je bilo. Kako je pokazano na modelu 6 Hz (32 mA), samo 1/4 životinje bila je zaštićena sa 100 mg/kg, na 30 min. U modelu MES-indukovanog napada samo 1/4 životinje bila je zaštićena sa 100 mg/kg i 300 mg/kg na 30 min. Nisu zabeležene toksičnost (nemogučnost zadržavanja na rotirajućoj gredici) ili aktivnost ni pri jednoj testiranoj dozi ni vremenskoj tački.
[0137] Rezultati skrininga antikonvulzanata - Miševi MES i 6 Hz identifikacija
Odgovor
[0138]
1

Claims (16)

PATENTNI ZAHTEVI
1. Jedinjenje koje se bira između klemizola ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u metodu lečenja epileptičnog poremećaja, pri čemu pomenuti metod uključuje primenu, kod subjekta kojem je to potrebno, terapijski efikasne količine jedinjenja, gde je farmaceutski prihvatljiva so adiciona so klemizola sa neorganskom kiselinom, kvaternarna amonijumova so klemizola ili adiciona so klemizola sa organskom kiselinom, odabrana između maleata, acetata, citrata, fumarata, propionata, izobutirata, undecilata, malata, malonata, suberata, laktata, mandelata, ftalata, oksalata, benzensulfonata, p-tolilsulfonata, metansulfonata, tartrata, sukcinata, benzoata i soli klemizola sa amino-kiselinom.
2. Jedinjenje za upotrebu iz patentnog zahteva 1, naznačeno time, što je farmaceutski prihvatljiva so klemizol hidrohlorid, klemizol hidrobromid, klemizol hidrojodid, klemizol sulfat, klemizol fosfat, klemizol monohidrogenfosfat, klemizol dihidrogenfosfat, klemizol nitrat, klemizol karbonat, klemizol monohidrogenkarbonat, klemizol maleat, klemizol acetat, klemizol citrat, klemizol fumarat, klemizol propionat, klemizol izobutirat, klemizol undecilat, klemizol malat, klemizol malonat, klemizol suberat, klemizol laktat, klemizol mandelat, klemizol ftalat, klemizol oksalat, klemizol benzensulfonat, klemizol p-tolilsulfonat, klemizol metansulfonat, klemizol tartrat, klemizol sukcinat, klemizol benzoat, so klemizola sa amino-kiselinom ili kvaternarna amonijumova so klemizola.
3. Jedinjenje za upotrebu iz patentnog zahteva 1 ili patentnog zahteva 2, naznačeno time, što je pomenuti epileptični poremećaj:
(i) Dravetov sindrom, Lennox-Gastautov sindrom, infantilni spazam, ili Ohtahara sindrom; ili
(ii) Dravetov sindrom; ili
(iii) pedijatrijski epileptični poremećaj.
4. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time, što jedinjenje inhibira kompulzivno ponašanje ili elektrografske napade kod subjekta koji ima epilepsiju, subjekta koji ima Alzheimerovu bolest, subjekta koji ima autizam, ili subjekta koji ima Parkinsonovu bolest.
2
5. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 4, naznačeno time, što primena jedinjenja smanjuje incidencu neizazvanih napada kod pomenutog subjekta u poređenju sa stanjem u odsustvu jedinjenja.
6. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time, što primena jedinjenja smanjuje ili prevenira mioklonične napade ili status epilepticus kod pomenutog subjekta u poređenju sa stanjem u odsustvu jedinjenja.
7. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 6, naznačeno time, što je pomenuti subjekt na ketogenoj dijeti.
8. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 7, naznačeno time, što:
(i) jedinjenje se primenjuje kod subjekta u količini od oko 0.1 mg do oko 1000 mg po kg telesne težine; ili
(ii) jedinjenje se primenjuje kod subjekta u dnevnoj dozi od oko 0.1 mg do oko 1000 mg po kg telesne težine pomenutog subjekta.
9. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 8, naznačeno time, što je jedinjenje klemizol HCl.
10. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 9, naznačeno time, što se jedinjenje primenjuje kao farmaceutska kompozicija, opciono pri čemu farmaceutska kompozicija uključuje terapijski efikasnu količinu jedinjenja.
11. Jedinjenje za upotrebu iz patentnog zahteva 10, naznačeno time, što farmaceutska kompozicija sadrži još i farmaceutski prihvatljivi ekscipijent.
12. Jedinjenje za upotrebu iz patentnog zahteva 10 ili patentnog zahteva 11, naznačeno time, što pomenuta farmaceutska kompozicija uključuje jedinjenje i antiepileptični lek (AED).
13. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 11, naznačeno time, što se jedinjenje primenjuje uporedo sa antiepileptičnim lekom (AED).
14. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 11, naznačeno time, što jedinjenje predstavlja adjunktivnu terapiju sa antiepileptičnim lekom (AED).
15. Jedinjenje za upotrebu iz patentnog zahteva 13 ili patentnog zahteva 14, naznačeno time, što se AED primenjuje istovremeno ili sekvencijalno sa jedinjenjem.
16. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kojeg od patentnih zahteva 12 do 15, naznačeno time, što je pomenuti AED
(i) acetazolamid, benzodiazepin, kanabadioli, karbamazepin, klobazam, klonazepam, eslikarbazepin acetat, etosuksimid, etotoin, felbamat, fenfluramin, fosfenitoin, gabapentin, ganaksolon, huperzin A, lakozamid, lamotrigin, levetiracetam, nitrazepam, okskarbazepin, perampanel, piracetam, fenobarbital, fenitoin, kalijum bromid, pregabalin, primidon, retigabin, rufinamid, natrijum valproat, stiripentol, tiagabin, topiramat, vigabatrin, ili zonisamid; ili
(ii) valproinska kiselina, valproat, klonazepam, etosuksimid, felbamat, gabapentin, karbamazepin, okskarbazepin, lamotrigin, levetiracetam, benzodiazepin, fenobarbital, pregabalin, primidon, tiagabin, topiramat, kalijum bromid, fenitoin, stiripentol, vigabatrin, ili zonisamid; ili
(iii) valproinska kiselina, valproat, gabapentin, topiramat, karbamazepin, okskarbazepin, ili vigabatrin.
4
RS20201007A 2013-08-19 2014-08-19 Jedinjenja i metodi za lečenje epileptičnog poremećaja RS61038B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361867397P 2013-08-19 2013-08-19
PCT/US2014/051731 WO2015026849A1 (en) 2013-08-19 2014-08-19 Compounds and methods for treating an epileptic disorder
EP14838223.7A EP3035926B1 (en) 2013-08-19 2014-08-19 Compounds and methods for treating an epileptic disorder

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61038B1 true RS61038B1 (sr) 2020-12-31

Family

ID=52484102

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201007A RS61038B1 (sr) 2013-08-19 2014-08-19 Jedinjenja i metodi za lečenje epileptičnog poremećaja

Country Status (13)

Country Link
US (5) US9925172B2 (sr)
EP (2) EP3035926B1 (sr)
CY (1) CY1123460T1 (sr)
DK (1) DK3035926T3 (sr)
ES (1) ES2813450T3 (sr)
HR (1) HRP20201302T1 (sr)
HU (1) HUE053282T2 (sr)
LT (1) LT3035926T (sr)
PT (1) PT3035926T (sr)
RS (1) RS61038B1 (sr)
SI (1) SI3035926T1 (sr)
SM (1) SMT202000515T1 (sr)
WO (1) WO2015026849A1 (sr)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9549909B2 (en) 2013-05-03 2017-01-24 The Katholieke Universiteit Leuven Method for the treatment of dravet syndrome
DK3035926T3 (da) 2013-08-19 2020-08-31 Univ California Forbindelser og fremgangsmåder til behandling af en epilepsilidelse
HUE059559T2 (hu) * 2015-02-25 2022-12-28 Univ California 5HT agonisták az epilepsziás rendellenességek kezelésére
KR102481631B1 (ko) 2015-08-24 2022-12-27 조게닉스 인터내셔널 리미티드 펜플루라민을 사용하여 레녹스-가스토 증후군을 치료하는 방법
EP3387007B1 (en) * 2015-12-09 2022-02-16 The University of Queensland Proteinaceous molecules and methods of use
ES3024232T3 (en) 2015-12-22 2025-06-04 Zogenix International Ltd Fenfluramine compositions and methods of preparing the same
WO2017112701A1 (en) 2015-12-22 2017-06-29 Zogenix International Limited Metabolism resistant fenfluramine analogs and methods of using the same
SG11201900975XA (en) 2016-08-24 2019-03-28 Zogenix International Ltd Formulation for inhibiting formation of 5-ht 2b agonists and methods of using same
WO2018064498A1 (en) * 2016-09-30 2018-04-05 Pairnomix, Llc Methods of treating epilepsy and related neurological conditions
WO2018068082A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Effusiontech Pty Ltd A method of forming 3d objects.
WO2018098500A1 (en) * 2016-11-28 2018-05-31 Praxis Precision Medicines, Inc. Compounds and their methods of use
DK3548033T3 (da) 2016-11-28 2024-07-15 Praxis Prec Medicines Inc Forbindelser og deres fremgangsmåde til anvendelse
WO2018098491A1 (en) 2016-11-28 2018-05-31 Praxis Precision Medicines, Inc. Compounds and their methods of use
US11492345B2 (en) 2017-02-13 2022-11-08 Praxis Precision Medicines, Inc. Compounds and their methods of use
WO2018187480A1 (en) 2017-04-04 2018-10-11 Praxis Precision Medicines, Inc. Compounds and their methods of use
WO2018195055A1 (en) * 2017-04-17 2018-10-25 Baylor College Of Medicine Therapies for treating infantile spasms and other treatment-resistant epilepsies
BR112019023882A2 (pt) 2017-05-16 2020-06-02 Evogen, Inc. Biomarcadores e métodos para detecção de convulsões e epilepsia
JP7252908B2 (ja) 2017-06-14 2023-04-05 トレベナ・インコーポレイテッド Ｓ１ｐ１活性を調節するための化合物およびその使用法
US11278535B2 (en) 2017-08-15 2022-03-22 Praxis Precision Medicines, Inc. Compounds and their methods of use
US10682317B2 (en) 2017-09-26 2020-06-16 Zogenix International Limited Ketogenic diet compatible fenfluramine formulation
US20190125697A1 (en) * 2017-09-26 2019-05-02 Zogenix International Limited Method of reduction in convulsive seizure frequency
WO2019216919A1 (en) 2018-05-11 2019-11-14 Zogenix International Limited Compositions and methods for treating seizure-induced sudden death
MX2020012838A (es) 2018-05-30 2021-07-16 Praxis Prec Medicines Inc Moduladores de los canales ionicos.
EP3806835A1 (en) 2018-06-14 2021-04-21 Zogenix International Limited Compositions and methods for treating respiratory depression with fenfluramine
JP2021530541A (ja) * 2018-07-27 2021-11-11 ゼノン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドXenon Pharmaceuticals Inc. てんかんの治療方法
EA202092908A1 (ru) 2018-09-28 2021-05-14 Праксис Пресижн Медсинз, Инк. Модуляторы ионных каналов
EA202191079A1 (ru) 2018-11-19 2021-09-20 Зодженикс Интернэшнл Лимитед Способы лечения синдрома ретта с применением фенфлурамина
US11773099B2 (en) 2019-05-28 2023-10-03 Praxis Precision Medicines, Inc. Compounds and their methods of use
US11279700B2 (en) 2019-05-31 2022-03-22 Praxis Precision Medicines, Inc. Ion channel modulators
US11505554B2 (en) 2019-05-31 2022-11-22 Praxis Precision Medicines, Inc. Substituted pyridines as ion channel modulators
AU2020341464A1 (en) * 2019-09-05 2022-04-21 Trevena, Inc. Methods of treating epilepsy using the same
MX2022005766A (es) 2019-11-19 2022-08-08 Trevena Inc Compuestos y métodos para la preparación de compuestos moduladores de esfingosina 1-fosfato tipo 1 (s1p1).
US11767325B2 (en) 2019-11-26 2023-09-26 Praxis Precision Medicines, Inc. Substituted [1,2,4]triazolo[4,3-a]pyrazines as ion channel modulators
PE20221280A1 (es) 2019-11-27 2022-09-05 Praxis Prec Medicines Inc Formulaciones de moduladores de canales ionicos y metodos de preparacion y uso de moduladores de canales ionicos
US11612574B2 (en) 2020-07-17 2023-03-28 Zogenix International Limited Method of treating patients infected with severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2)
JP2024529509A (ja) * 2021-07-30 2024-08-06 エピジェニクス セラピューティクス インコーポレーテッド クレミゾール製剤
KR20250005348A (ko) 2022-04-26 2025-01-09 프락시스 프리시젼 메디신즈, 인크. 신경 장애의 치료
CN116392445B (zh) * 2023-03-22 2025-06-03 中南民族大学 一种司替戊醇脂质体及其制备方法与应用

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2436883C2 (de) 1974-07-29 1985-08-22 Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen Benzimidazol-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende Arzneimittel
US4911920A (en) 1986-07-30 1990-03-27 Alcon Laboratories, Inc. Sustained release, comfort formulation for glaucoma therapy
JO1410B1 (en) * 1984-11-03 1986-11-30 سميث كلاين اند فرينش لابوراتوريز ليمتد Compounds
FR2588189B1 (fr) 1985-10-03 1988-12-02 Merck Sharp & Dohme Composition pharmaceutique de type a transition de phase liquide-gel
JP2594486B2 (ja) 1991-01-15 1997-03-26 アルコン ラボラトリーズ インコーポレイテッド 局所的眼薬組成物
US5212162A (en) 1991-03-27 1993-05-18 Alcon Laboratories, Inc. Use of combinations gelling polysaccharides and finely divided drug carrier substrates in topical ophthalmic compositions
US6309853B1 (en) 1994-08-17 2001-10-30 The Rockfeller University Modulators of body weight, corresponding nucleic acids and proteins, and diagnostic and therapeutic uses thereof
US7326536B2 (en) 2001-05-03 2008-02-05 Eli Lilly And Company Agents for treatment of HCV and methods of use
US6559293B1 (en) * 2002-02-15 2003-05-06 Transform Pharmaceuticals, Inc. Topiramate sodium trihydrate
WO2005032329A2 (en) 2003-08-22 2005-04-14 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for identifying anti-hcv agents
CA2646755A1 (en) * 2006-03-31 2007-10-11 Astrazeneca Ab Bicyclic benzimidazole compounds and their use as metabotropic glutamate receptor potentiators
WO2008036586A2 (en) 2006-09-20 2008-03-27 Waters Investments Limited Apparatus and methods of fluid chromatography
KR101475248B1 (ko) 2007-04-06 2014-12-22 코닌클리케 필립스 엔.브이. 공기 오염 센서 시스템
EP2152276A4 (en) * 2007-05-09 2011-09-14 Traffick Therapeutics Inc SCREENING ASSAY FOR IDENTIFYING CORRECTORS FOR PROTEIN TRANSPORT TROUBLESHOOTING
WO2009021129A1 (en) * 2007-08-08 2009-02-12 Janssen Pharmaceutica N.V. Sulfamide derivative useful for the treatment of epilepsy
JP5715820B2 (ja) * 2007-09-18 2015-05-13 スタンフォード ユニバーシティー フラビウイルス科ファミリーのウイルスへの感染を治療する方法ならびに、フラビウイルス科ファミリーのウイルスへの感染を治療するための組成物
KR100925176B1 (ko) 2007-09-21 2009-11-05 한국전자통신연구원 지리 정보를 이용한 네트워크 상태 표시장치 및 방법
US20110217265A1 (en) 2008-09-23 2011-09-08 Glenn Jeffrey S Screening for Inhibitors of HCV Amphipathic Helix (AH) Function
EP2408449A4 (en) * 2009-03-18 2012-08-08 Univ Leland Stanford Junior METHOD AND COMPOSITIONS FOR TREATING FLAVIVIRIDAE VIRUS INFECTIONS
EP2408448A4 (en) 2009-03-18 2012-09-19 Univ Leland Stanford Junior METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING INFECTION WITH A FLAVIVIRIDAE FAMILY VIRUS
CN102666537A (zh) 2009-10-20 2012-09-12 艾格尔生物制药股份有限公司 治疗黄病毒科病毒感染的氮杂吲唑
WO2012149472A2 (en) * 2011-04-27 2012-11-01 Ignite Institute For Individualized Health Methods, compositions, and kits for treating and preventing neurological conditions
US20130172342A1 (en) * 2011-12-28 2013-07-04 Allergan, Inc. Benzimidazole derivatives as selective blockers of persistent sodium current
DK3035926T3 (da) 2013-08-19 2020-08-31 Univ California Forbindelser og fremgangsmåder til behandling af en epilepsilidelse

Also Published As

Publication number Publication date
US20200323825A1 (en) 2020-10-15
US20190167642A1 (en) 2019-06-06
HUE053282T2 (hu) 2021-06-28
US12419866B2 (en) 2025-09-23
US20230372304A1 (en) 2023-11-23
SMT202000515T1 (it) 2020-11-10
EP3035926B1 (en) 2020-07-29
US20160235718A1 (en) 2016-08-18
ES2813450T8 (es) 2021-03-31
HRP20201302T1 (hr) 2021-02-05
EP3636264A1 (en) 2020-04-15
DK3035926T3 (da) 2020-08-31
US20180235937A1 (en) 2018-08-23
PT3035926T (pt) 2020-09-01
US11291653B2 (en) 2022-04-05
HK1225984A1 (en) 2017-09-22
EP3035926A4 (en) 2017-01-11
EP3035926A1 (en) 2016-06-29
CY1123460T1 (el) 2022-03-24
US9925172B2 (en) 2018-03-27
SI3035926T1 (sl) 2020-11-30
LT3035926T (lt) 2020-11-25
US11684609B2 (en) 2023-06-27
US10695325B2 (en) 2020-06-30
WO2015026849A1 (en) 2015-02-26
ES2813450T3 (es) 2021-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12419866B2 (en) Compounds and methods for treating an epileptic disorder
US12447144B2 (en) 5HT agonists for treating disorders
HK40079848A (en) The 5ht agonist clemizole for use in treating epilepsy disorders
HK40016257A (en) Compounds and methods for treating an epileptic disorder
HK1225984B (en) Compounds and methods for treating an epileptic disorder