RS61165B1 - Kondenzovani derivati tiofena korisni kao napi-iib inhibitori - Google Patents

Kondenzovani derivati tiofena korisni kao napi-iib inhibitori

Info

Publication number
RS61165B1
RS61165B1 RS20201471A RSP20201471A RS61165B1 RS 61165 B1 RS61165 B1 RS 61165B1 RS 20201471 A RS20201471 A RS 20201471A RS P20201471 A RSP20201471 A RS P20201471A RS 61165 B1 RS61165 B1 RS 61165B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
amino
methyl
ethyl
phenyl
carbonyl
Prior art date
Application number
RS20201471A
Other languages
English (en)
Inventor
David Andrew Coates
Kevin Robert Fales
Jeffrey Alan Peterson
Jeffrey Michael Schkeryantz
Quanrong Shen
Matthew John Valli
Ii John Rowley Wetterau
Dariusz Stanislaw Wodka
Yangping Xu
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of RS61165B1 publication Critical patent/RS61165B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/50—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D333/52—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes
    • C07D333/62—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D333/66—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/381—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4995—Pyrazines or piperazines forming part of bridged ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Description

Opis
[0001] Pronalazak obezbeđuje jedinjenja za lečenje viška fosfata ili hiperfosfatemije povezane sa hroničnim oboljenjem bubrega (CKD) kod pacijenata na dijalizi u poslednjem stadijumu bubrežne bolesti (ESRD) i povezanim kardiovaskularnim bolestima.
[0002] Kod pacijenata sa smanjenom renalnom funkcijom, kao što su hronično oboljenje bubrega i pacijenti na dijalizi u završnom stadijumu bolesti bubrega, fosfor nagomilan u organizmu dovodi do porasta koncentracije fosfora u krvi i do viška fosfata.
[0003] Kod nekih pacijenata ovaj porast fosfata dostiže stanje označeno kao hiperfosfatemija. Kao rezultat povećanih vrednosti fosfata u CKD i ESRD dolazi do hipersekrecije paratiroidnih hormona, to jest, sekundarnog hiperparatiroidizma, što izaziva lezije kostiju. Hiperfosfatemija je povezana sa kalcifikacijom koronarnih arterija i aorte, kao i kardiovaskularnih i svih uzroka smrtnosti. Smatra se da vaskularna kalcifikacija dovodi do disfunkcije srca što vodi ka smrti. Disfunkcija regulacije fosfata ima ozbiljne kliničke posledice, a studije su pokazale da čak i malo povećanje vrednosti fosfata u serumu, u okviru normalnih ili skoro normalnih vrednosti, može da bude u korelaciji sa povećanim morbiditetom i mortalitetom. Višak fosfata kod pacijenata u fazama tri i četiri CKD i kompenzacioni odgovori organizma na višak fosfata utiče na povezane kardiovaskularne morbiditete i mortalitete. Smanjenje apsorpcije fosfata kod pacijenata u trećoj i četvrtoj fazi CKD može da ublaži ili spreči ove odgovore i sačuva kardiovaskularno zdravlje. Rana kontrola unosa fosfata u CKD može da ublaži ili spreči morbiditet i mortalitet kod obolelih pacijenata (C. S. Ritter and E. Slatopolsky, Fosfat Toxicity in CKD: The Killer Among Us, Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 11:1088-1100, 2016).
[0004] Identifikovana su tri izooblika NaPi-II. NaPi-IIa (tip IIa, takođe označen kao SLC34A1) se uglavnom ekspresuje u bubrezima, dok se NaPi-IIb (tip IIb, takođe označen kao SLC34A2) ekspresuje u tankom crevu i može da se reguliše vitaminom D. NaPi-IIc (tip IIc, takođe označen kao SLC34A3) se takođe ekspresuje u bubrezima. Apsorpcija fosfata u gastrointestinalnom traktu se vrši najvećim delom pomoću NaPi-IIb, dok se fosfat u krvi filtrira renalnom glomerulacijom i reapsorbuje u potrebnim količinama uglavnom pomoću NaPi-IIa i NaPi-IIc u renalnim tubusima (Miyamoto i saradnici, Natrijum-Dependent Fosfat Cotransporters: Lessons from Gene Knockout and Mutation Studies, J. Pharm. Science, 100(9):3719-30, 2011).
[0005] Uprkos postignutom progresu u tretmanu viška fosfata i/ili hiperfosfatemije i dalje postoji značajna nezadovoljena potreba za bezbednom i efektivnom terapijom u lečenju ovih stanja. Savremenmi tretmani koriste adsorbente fosfata za sprečavanje apsorpcije fosfata u gastrointestinalnom traktu. Ovo uključuje, na primer, nemetalne polimer adsorbente, na primer sevelamer karbonat i sevelamer hidrohlorid, preparate kalcijumovih soli, na primer, precipitirani kalcijum karbonat i metalne adsorbente, na primer, lantan karbonat. Međutim, za svaki od ovih agenasa je objavljeno da imaju neželjena dejstva kao što su konstipacija, dijareja, hiperkalcemija i akumulacija metala. Pored toga, tretman sa adsorbentima zahteva dnevni unos nekoliko grama adsorbenta a i neprihvatanje terapije je čest problem. U skladu sa tim, ostaje nezadovoljena potreba za tretmanom viška fosfata i/ili hiperfosfatemije koja obezbeđuje povećanu bezbednost, efikasnost i prihvatljivost.
[0006] Kao pristup za lečenje hiperfosfatemije, inhibicija NaPi-IIb može da zaustavi apsorpciju fosfata u gastrointestinalnom traktu što dovodi do smanjenja koncentracije fosfata u krvi (Sabbagh i saradnici, Intestinal Fosfat Transport, Adv. Chronic Kidney Dis., 18(2):85-90, 2011). Supresija apsorpcije fosfata inhibicijom NaPi-IIb koristi različiti mehanizam delovanja u poređenju sa postojećim adsorbentima fosfata i može da obezbedi klinički korisne prednosti za prevenciju i tretman viška fosfata i/ili hiperfosfatemije. Pored toga, uopšteno govoreći, inhibitori NaPi-IIb transportera mogu da obezbede dodatne koristi za sekundarni hiperparatiroidizam, hronične bolesti bubrega i/ili kardiovaskularne bolesti povezane sa hroničnim oboljenjem bubrega, smanjenjem apsorpcije fosfata iz hrane.
[0007] Jedinjenja iz ovog pronalaska su inhibitori NaPi-IIb transportera i pokazuju potentnu inhibiciju NaPi-IIb. Kao takva, veruje se da su jedinjenja iz ovog pronalaska korisna za tretman stanja u kojima igra ulogu apsorpcija fosfata posredstvom NaPi-Iib kao što su hronična bolest bubrega i hiperfosfatemija.
[0008] United States Application Publication US 2013/0053369 otkriva neka jedinjenja tetrahidrobenzotiofena kao inhibitore NaPi-IIb i navodi jedinjenja kao korisna u lečenju brojnih bolesti uključujući hiperfosfatemiju. Kao druge reference mogu da se navedu WO2016/026372, WO2014/003153 i EP 2772 490.
[0009] Potreba za bezbednim i prihvatljivim tretmanom viška fosfata, hiperfosfatemije, hronične bolesti bubrega i/ili kardiovaskularnih bolesti povezanih sa hroničnom bolešću bubrega, bez negativnih osobina koje ispoljavaju adsorbenti, ili druga sredstva poznata u ovoj oblasti, nastavljaju da budu briga za tretman pacijenata sa oboljenjem bubrega. Ovaj pronalazak obezbeđuje alternativna jedinjenja koja su korisna u tretmanu viška fosfata, hiperfosfatemije, hronične bolesti bubrega i/ili kardiovaskularnih bolesti povezanih sa hroničnim oboljenjem bubrega. Pored toga, jedinjenja obezbeđuju način zadovoljenja potrebe za tretman stanja povezanih sa aktivnošću NaPi-IIb uz profile poboljšane efikasnosti i/ili smanjenog neželjenog efekta i tolerancije.
[0010] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule:
gde je Y kondenzovani cikloheksan prsten ili kondenzovani fenil prsten, pri čemu je A
gde ukrštene linije pokazuju veze za tačku vezivanja za jezgro Formule II a isprekidane linije pokazuju veze za tačke vezivanja za R<2>,
gde je R<2>izabran iz grupe koja se sastoji od -CH3, -(CH2)3OH, -(CH2)3OCH3, -(CH2)3CO2H, -COOCH3, -COCH3, -CO(CH2)3CH3, -COCH(CH3)2, -CO(CH2)2CO2H, -COCH2NH2, -COCH2N(CH3)2, -SO2N[(CH2)2OCH3]2, -SO2NHCH3, -SO2(CH2)2OCH3, -CONH(CH2)4OH, -CONH(CH2)4OCH3, -CONHCH3, -CONH(CH2)2CO2H, -CONH(CH2)2OCH3, -CON(CH2CH2OCH3)2, -CSNHCH3,
gde isprekidane linije predstavljaju tačku vezivanja, pri čemu je R’ -CO2H ili -CONH2grupa, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0011] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenje Formule II kako je prethodno opisano, pri čemu je Y kondenzovani cikloheksan prsten, A je
i R’ je -CO2H, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0012] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenje Formule II kako je prethodno opisano, gde je Y kondenzovani cikloheksan prsten, A je
i R’ je -CO2H, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0013] Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule:
gde je R izabran iz grupe koja se sastoji od -(CH2)3OH, -(CH2)3OCH3,
-(CH2)3CO2H, -CONH(CH2)4OH, -COCH2NH2, -SO2N[(CH2)2OCH3]2, -CONH(CH2)4OCH3i -CO(CH2)2CO2H, gde je R’ -CO2H ili -CONH2grupa,
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0014] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenje Formule I kako je prethodno opisano pri čemu je R’ -CO2H grupa, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0015] Naredna određena ostvarenja su jedinjenja i/ili soli Formule I i/ili II.
[0016] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
[0017] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(3-hidroksipropil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0018] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[bis(2-metoksietil)sulfamoil]-2,2- dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
[0019] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(3-karboksipropil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
[0020] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(3-metoksipropil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
[0021] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-aminoacetil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
[0022] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-metoksibutilkarbamoil)- 2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
[0023] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je 4-[4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-karbamoilfenil)etil]-3,5-difluorofenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-il]-4-okso-buterna kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
[0024] Ovaj pronalazak obezbeđuje so koja je dinatrijumova so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil ]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline.
[0025] Ovaj pronalazak obezbeđuje formulaciju čvrste disperzije dinatrijumove soli 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutil- karbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline, pri čemu formulacija uključuje 30% dinatrijumovu so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil ]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline i 70% polivinilpirolidonvinil acetat.
[0026] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, izabranu iz grupe koja se sastoji od:
soli mravlje kiseline 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[(2,2,4-trimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline;
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-dimetil-4-(metilkarbamoil)piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeve kiseline;
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-dimetil-4-(metilkarbamotionil)piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeve kiseline; 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-karboksietilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeve kiseline; soli mravlje kiseline 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(metilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]benzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline;
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[(4-metoksikarbonil-2,2-dimetil-piperazin-1-il)metil ]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline; 4-(2,6-diftuoro-4-(2-(3-(((1R,5S)-8-pentanoil-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)metil)benzamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-3-carboksamido)fenetil)benzoeve kiseline;
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-dimetil-4-(metilsulfamoil)piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeve kiseline;
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(tetrahidropiran-4-ilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline;
4-[2-[4-[[2-[[3-[(8-acetil-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoata;
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(2-metoksietilsulfonil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]- 4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata; 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(2-metoksietilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3 .2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata; 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(4-metoksibutilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata; 4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[bis(2-metoksietil)karbamoil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoata;
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(2-metilpropanoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata; 4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[2-(dimetilamino)acetil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoeve kiseline;
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-[1-(metoksimetil)ciklopropankarbonil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline;
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-[2-(4-metilpiperazin-1-il)acetil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline;
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]benzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline; i
4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-acetil-2,2-dimetil-piperazin-1-il)metil ]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeve kiseline.
[0027] Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili podlogu. Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje formule II, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili podlogu.
[0028] Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I ili II, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji. Ovaj pronalazak obezbeđuje so koja je dinatrijumova so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutil- karbamoil)-2,2-dimetilpiperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline, za upotrebu u terapiji.
[0029] Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu hiperfosfatemije. Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule II, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu hiperfosfatemije. Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I ili II, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu hronične bolesti bubrega. Ovaj pronalazak obezbeđuje so koja je dinatrijumova so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)- 2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline, za upotrebu u tretmanu hiperfosfatemije. Ovaj pronalazak obezbeđuje formulaciju čvrste disperzije dinatrijumove soli 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline, pri čemu formulacija uključuje 30% dinatrijumovu so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline i 70% polivinilpirolidonvinil acetat za upotrebu u tretmanu hiperfosfatemije.
[0030] Ovaj pronalazak obezbeđuje so koja je dinatrijumova so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil ]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline, za upotrebu u tretmanu hronične bolesti bubrega. Ovaj pronalazak obezbeđuje formulaciju čvrste disperzije dinatrijumove soli 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetilpiperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline, pri čemu formulacija uključuje 30% dinatrijumovu so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline i 70% polivinilpirolidon-vinil acetat za upotrebu u tretmanu hronične bolesti bubrega.
[0031] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje ili so koje je 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u tretmanu kardiovaskularnih bolesti povezanih sa hroničnim oboljenjem bubrega. Ovaj pronalazak obezbeđuje so koja je dinatrijumova so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4- hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline, za upotrebu u tretmanu kardiovaskularnih bolesti povezanih sa hroničnim oboljenjem bubrega. Ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje kardiovaskularnih bolesti povezanih sa hroničnim oboljenjem bubrega, koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno efektivne količine jedinjenja ili soli koje je 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]- 4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
[0032] Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I ili II, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za proizvodnju medikamenta za lečenje hiperfosfatemije i/ili hronične bolesti bubrega.
[0033] Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje hiperfosfatemija, koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno, efektivne količine jedinjenja formule I,
1
ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje hiperfosfatemija, koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno efektivne količine jedinjenja formule II, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0034] Pored toga, pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje hiperfosfatemija koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno efektivne količine 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin- 1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli. Pored toga, pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje hiperfosfatemija koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno efektivne količine dinatrijumove soli 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline. Pored toga, pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje hiperfosfatemija koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno efektivne količine formulaciju čvrste disperzije dinatrijumove soli 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil ]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline, pri čemu formulacija uključuje 30% dinatrijumovu so 4-[2-[2,6-dif- luoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetilpiperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil] benzoeve kiseline i 70% polivinilpirolidon-vinil acetat.
[0035] Naziv "farmaceutski prihvatljiva so" uključuje so nastalu dodatkom kiseline koja egzistira zajedno sa baznim delom jedinjenja formule I ili II, ili so nastalu dodatkom baze koja egzistira zajedno sa kiselim delom jedinjenja formule I ili II. Ovakve soli uključuju farmaceutski prihvatljive soli, koje su na primer navedene u Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, P. H. Stahl and C. G. Wermuth (Eds.), Wiley-VCH, New York, 2002 i koje su poznate stručnjaku sa iskustvom u tehnici.
[0036] Pored farmaceutski prihvatljivih soli, u pronalasku su razmatrane i druge soli. One mogu da služe kao međuproizvodi pri prečišćavanju jedinjenja, ili u izradi drugih farmaceutski prihvatljivih soli ili su korisni za identifikaciju, karakterizaciju ili prečišćavanje jedinjenja iz pronalaska.
[0037] Kako se ovde koristi, naziv "pacijent" se odnosi na toplokrvnu životinju kao što su sisari i uključuju ljude. Ljudi su preferirani pacijent.
[0038] Kardiovaskularne bolesti povezane sa hroničnim oboljenjem bubrega mogu da uključe iznenadnu kardijačnu smrt, aritmiju, anginu, infarkt miokarda i insuficijenciju srca (Kestenbaum i saradnici, Serum Fosfat Levels and Mortality Risk Among People with Chronic Kidney Disease, J. Am. Soc. Nephrol. 16: 520-528, 2005).
[0039] Stručnjak sa iskustvom u tehnici može da leči hiperfosfatemiju i/ili hronično oboljenje bubrega kod pacijenta kod koga su ispoljeni simptomi primenom efektivne količine jedinjenja formule I. Prema tome, nazivi "tretman" i "lečenje" treba da se odnose na sve procese u kojima može da se uspori, prekine, zaustavi, kontroliše ili obustavi progresija postojećeg poremećaja i/ili njegovih simptoma, ali nije neophodno da se potpuno eliminišu svi simptomi.
[0040] Stručnjak sa iskustvom u tehnici može da leči hiperfosfatemiju i/ili hronično oboljenje bubrega primenom na pacijentu koji ima prepoznate faktore rizika za hiperfosfatemiju i/ili hronično oboljenje bubrega, efektivne količine jedinjenja formule I. Na primer, kod pacijenata koji imaju vrednosti fosfata iznad normalnih vrednosti, u razmatranju sa drugim faktorima kao što su hipertenzija i/ili dijabetes, može da se smatra da imaju prepoznatljiv rizik za hiperfosfatemiju i/ili hronično oboljenje bubrega i kardiovaskularnu bolest povezanu sa hroničnim oboljenjem bubrega.
[0041] Kako se ovde koristi, naziv "efektivna količina" jedinjenja formule I ili II se odnosi na količinu koja je efikasna u lečenju poremećaja, kao što su hiperfosfatemija i/ili hronično oboljenje bubrega, kako je ovde opisano. Stručnjak sa iskustvom u tehnici može da odredi efektivnu količinu primenom uobičajenih tehnika i razmatranjem rezultata dobijenih pod okolnostima koje se smatraju informativnim za tekućeg pacijenta. U određivanju efektivne količine ili doze jedinjenja formule I ili II, razmatraju se brojni faktori, kao što su, koje jedinjenje formule I ili II se primenjuje, da li postoji istovremena primena drugih sredstava; vrsta sisara; njihova veličina, starost i opšte zdravstveno stanje; stepen uključenosti ili ozbiljnosti poremećaja, kao što su hiperfosfatemija i/ili hronično oboljenje bubrega; odgovor pojedinačnog pacijenta; način primene; karakteristike bioraspoloživosti primenjenog preparata; izabrani režim doziranja; i druge relevantne okolnosti.
[0042] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da se primene sama ili u obliku farmaceutske kompozicije kombinovane sa farmaceutski prihvatljivim nosačima ili podlogama, čiji su odnos i priroda određeni preko rastvorljivosti i hemijskih osobina, uključujući stabilnost izabranog jedinjenja, izabranog načina primene i standarda farmaeutske prakse. Jedinjenja iz ovog pronalaska, mada su sama efikasna, mogu takođe da se formulišu i primene u obliku svojih farmaceutski prihvatljivih soli.
[0043] Stručnjak sa iskustvom u tehnici izrade formulacija može lako da izabere odgovarajući oblik i način primene u zavisnosti od određenih karakteristika izabranog jedinjenja, poremećaja i stanja koje se tretira, stepena poremećaja ili stanja i drugih relevantnih okolnosti (Videti, na primer, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, L.V. Allen, Editor, 22nd Edition, Pharmaceutical Press, 2012).
[0044] Neke skraćenice su definisane na sledeći način: "AcOH" se odnosi na sirćetnu kiselinu; "ACN" se odnosi na acetonitril; "BOP" se odnosi na benzotriazol-1-il-oksi-tris-(dimetilamino)-fosfonijum heksafluorofosfat; "DCM" se odnosi na dihlormetan ili metilen hlorid; "DIPEA" se odnosi na N,N-diizopropiletilamin; "DMF" se odnosi na N,N-dimetilformamid; "DMSO" se odnosi na dimetilsulfoksid; "EDCl" se odnosi na 3-(etiliminometilenamino)-N,N-dimetilpropan-1-amin; "EtOAc" se odnosi na etil acetat;
"EtOH" se odnosi na etanol; "FBS" se odnosi na serum fetusa govečeta; "HATU" se odnosi na 1-[bis(dimetil-amino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pirimidinijum 3-oksid heksafluorofosfat; "HEPES" se odnosi na 2-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etansulfonsku kiselinu’ "HOBT" se odnosi na hidroksibenzotriazol; ’hr" se odnosi na sat ili sate; " IC50" se odnosi na koncentraciju sredstva koja obezbeđuje 50% maksimalnog inhibitornog odgovora mogućeg za to sredstvo; "LC-ES/MS" se odnosi na tečnu hromatografiju elektrosprej masenu spektrometriju; "min" se odnosi na minut ili minute; "MeOH" se odnosi na metanol ili metil alkohol; "MTBE" se odnosi na metil-tert-butil etar; "<33>P" se odnosi na fosfor-33; "psi" se odnosi na funtu po kvadratnom inču; "PyBOP" se odnosi na benzotriazol-1-iloksitripirolidinfosfonijum heksafluorofosfat; "RT" se odnosi na sobnu temperaturu; "TEA" se odnosi na trietilamin; "TFA" se odnosi na trifluorosirćetnu kiselinu; "THF" se odnosi na tetrahidrofuran; "Tris" se odnosi na 2-amino-2-hidroksimetil-propan-1,3-diol ; "U/mL" se odnosi na jedinice po mililitru; "PVP-VA" se odnosi na polivinilpirolidon-vinil acetat.
1
Šema 1
[0045] Šema 1 opisuje način sinteze jedinjenja formule Ix. Generalno, alkil halid jedinjenja Ii može da se aminuje pod različitim uslovima dobro poznatim u tehnici, na primer, upotrebom amina i odgovarajuće ne-nukleofilne baze kao što su TEA, DIPEA, ili u pogodnom organskom rastvaraču kao što su THF, ACN, ili DMF. Konkretnije, približno 2 ekvivalenta terc-butil 3,3-dimetilpiperazin-1-karboksilata može da se zagreje mikrotalasima u reaktivnoj posudi na 110 °C u prisustvu približno 1 ekvivalenta alkil halida II i približno 12 ekvivalenata DIPEA u ACN da se dobije alkil amin III. Boc zaštitna grupa Jedinjenja III može da se ukloni pod kiselim uslovima dobro opisanim u tehnici. Još preciznije, jedinjenje II može da se tretira sa viškom HCl u 1,4-dioksanu u DCM da se dobije hidrohloridna so IV.
[0046] Naredna alkilacija jedinjenja IV može da se izvede pod širokom lepezom uslova dobro poznatim u tehnici, kao što je tretman sa alkil halidom pod uslovima alkilacije, na primer, sa odgovarajuće supstituisanim alkil halidom i aminom IV u prisustvu ne-nukleofilne baze kao što su TEA, DIPEA, piridin, ili 1,8-diazabicikloundek-7-en, u odgovarajućem organskom
1
rastvaraču kao što su DCM, ACN ili DMF. Pored toga, alkilacija jedinjenja IV može da se izvede pod uslovima reduktivne aminacije, kao što je sa odgovarajuće supstituisanim aldehidom u prisustvu redukcionog sredstva, kao što su natrijum borhidrid, natrijum triacetoksiborhidrid, ili natrijum cijanoborhidrid i katalitičke količine organske kiseline kao što su AcOH ili TFA, u odgovarajućem organskom rastvaraču, kao što su MeOH, EtOH, ACN, DCM, THF, ili DMF. Konkretnije, jedinjenje IV može da se tretira sa približno 2 ekvivalenta DIPEA i nakon toga tretira sa 3-metoksiproprionaldehidom ili metil estrom 4-oksobuterne kiseline u prisustvu približno 2 ekvivalenta natrijum triacetoksiborhidrida i katalitičke količine AcOH u DCM, da se dobiju jedinjenja Va i Vb, tim redom.
[0047] Acilacija ili sulfonilacija jedinjenja IV može da se izvrši pod uslovima dobro poznatim u tehnici, na primer, upotrebom acil halida ili sulfonil halida pod baznim uslovima upotrebom odgovarajuće ne-nukleofilne baze kao što su TEA ili DIPEA u višku, u pogodnom organskom rastvaraču kao što su DCM, THF, ACN, ili DMF. Konkretnije, jedinjenje IV može da se tretira sa približno 4 ekvivalenta DIPEA i približno 2 ekvivalenta N-(4-hidroksibutil)-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksamid hidrohlorida u smeši od približno 1:10 MeOH:ACN i zagreva u mikrotalasnom reaktoru na 100 °C, da se dobije jedinjenje Vc. Acilacija amina IV može takođe da se izvrši pod standardnim uslovima udvajanja amida dobro poznatim u tehnici, na primer, upotrebom EDCl i HOBT, HATU, BOP, ili PyBOP, u prisustvu nenukleofilne baze kao što su TEA ili DIPEA i u pogodnom organskom rastvaraču kao što su MeOH, ACN, THF, DCM ili DMF, ili njihovim kombinacijama. Konkretnije, približno 1.2 ekvivalenta jedinjenja IV može da se tretira sa približno 0.9 ekvivalenata 1,8-diazabiciklo [5.4.0]undek-7-ena i nakon toga tretira sa približno 1 equivalentom N-(tercbutoksikarbonil)glicina, 0.5 equivalenata HOBT i 1.2 equivalenta EDCl u DMF da se dobije jedinjenje Vd. Sulfonilacija jedinjenja IV može da se izvede u prisustvu približno 1.5 equivalenata bis(2-metoksietil)sulfamoil hlorida i približno 5 equivalenata TEA u DMF uz zagrevanje, da se dobije jedinjenje Ve.
[0048] Osim toga, acilacija amina nukleifilnim dodavanjem amina u izocijanat pod baznim uslovima da se dobiju uree, je takođe dobro opisana u tehnici. Preciznije, približno 1 equivalent jedinjenja IV može da se tretira sa približno 2 ekvivalenta 1-izocijanat-4-metoksibutana u prisustvu približno 4 equivalenta TEA u DCM da se dobije jedinjenje Vf.
[0049] Jedinjenja formule Ix mogu da se izrade saponifikacijom metil estar grupe jedinjenja V pod ili kiselim ili baznim uslovima, kako je dobro poznato u tehnici. Konkretnije, jedinjenja Va-Vf mogu da se tretiraju sa približno 1-5 ekvivalenata LiOH u THF, MeOH, H2O, ili
1
njihove odgovarajuće smeše, da se dobiju jedinjenja formule Ia-f. Pod ovim uslovima može istovremeno da se saponifikuje dodatna estarska grupa u jedinjenju Vb. Dodate zaštitne grupe mogu da se uklone dobro poznatim postupcima, na primer, tretmanom jedinjenja Ve sa viškom 4 M rastvora HCl u dioksanu, nakon čega je završena saponifikacija estra. Osim toga, dodatni alkil halidi zaštićeni heteroatomom, posebno 3-[(terc-butildimetilsilil)oksi]-1-propanal, mogu da se tretiraju sa jedinjenjem IV pod uslovima reduktivne aminacije kako je prethodno opisano, deprotektuju in situ i na kraju saponifikuju kako je prethodno opisano. Konkretnije, 3-[(terc-butildimetilsilil)oksi]-1-propanal i jedinjenje IV mogu da se tretiraju pod uslovima reduktivne aminacije, upotrebom natrijum triacetoksiborhidrida i katalitičke količine AcOH kako je prethodno opisano, nakon toga uklanjanjem silil grupe in situ, koristeći višak HCl u 1,4-dioksanu. Može da se izvrši konačna saponifikacija sa LiOH, kako je prethodno opisano, da se dobije jedinjenje formule Ig.
1
Šema 2
1
[0050] Alternativna sinteza jedinjenja formule Ic je opisana u Šemi 2. Smeša približno 1 equivalenta metil 4-[2-(4-amino-2,6-difluoro-fenil)etil]benzoata XII i 1.1 equivalenata 3-(terc-butoksikarbonilamino)-4,5,6,7- tetrahidrobenzotiofen-2-karboksilne kiseline (Aurum Pharmatech) u DCM može da se tretira sa približno 1.25 ekvivalenata bis-(2-okso-3-
1
oksazolidinil)fosfonijum hlorida u prisustvu približno 5 ekvivalenata DIPEA da se dobije produkt jedinjenja VII, koji može da se deprotektuje pod standardnim uslovima dobro poznatim u tehnici, posebno sa viškom 4 N HCl u 1,4-dioksanu i DCM kao rastvaračem, da se dobije amin, jedinjenje VIII. Amin VIII može da se podvrgne uslovima acilacije kako je prethodno opisano, posebno sa približno 1.1 ekvivalenata 3-(hlormetil)benzoil hlorida u prisustvu piridina sa DCM kao rastvaračem, da se dobije jedinjenje IX. Alkil hlorid IX može da se aminuje pod širokom lepezom uslova aminacije dobro poznatim u tehnici. Još preciznije, sa približno 2 ekvivalenta N-(4-hidroksibutil)-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksamid hidrohlorida u prisustvu približno 4 ekvivalenta DIPEA u smeši ACN/MeOH kako je prethodno opisano, da se dobije jedinjenje X a nakon toga saponifikacijom kako je prethodno opisano, može da se dobije jedinjenje formule Ic.
Šema 3
[0051] Sinteza anilin jedinjenja XII je opisana u Šemi 3. Generalno, Sonogashira unakrsno udvajanje između aril halida i supstituisanog acetilena posredstvom paladijum-bakra je dobro poznato u tehnici. Preciznije, približno 1 ekvivalent 3,5-difluoro-4-jodanilina (AstaTech) i približno 1 ekvivalent metil 4-etinilbenzoata (Alfa Aesar) mogu da se zagrevaju u prisustvu približno 0.4 ekvivalenta bis(trifenilfosfin)-paladijum(II) dihlorida i 0.07 ekvivalenata CuI sa približno 10 ekvivalenata DIPEA u THF da se dobije diaril acetilen jedinjenja XI, koje može da se redukuje pod standardnim uslovima dobro opisanim u tehnici, posebno katalitičkom hidrogenacijom na približno 60 psi, u prisustvu crnog paladijuma u smeši rastvarača THF/ H2O, da se dobije neophodni anilin jedinjenje XII.
2
Šema 4
[0052] Šema 4 ilustruje sintezu amina XV. Nukleofilnom adicijom 1 ekvivalenta t-butil 2,2-dimetilpiperazin-1-karboksilata u približno 1.1 ekvivalent metil 4-izocijanatbutanoata u prisustvu 3 ekvivalenta DIPEA sa DCM kao rastvaračem u reakciji može da se dobije urea, jedinjenje XIII. Redukcija estarske grupe može da se izvrši širokom lepezom uslova dobro opisanim u literaturi, uključujući BH3, litijum borhidrid i diizobutil aluminijum hidrid. Konkretnije, 1 ekvivalent estra XII može da se tretira sa približno 3 ekvivalenta litijum borohidrida u THF da se dobije redukovani produkt XIV; nakon toga se uklanjanjem BOC zaštitne grupe kako je prethodno opisano, dobija neophodno jedinjenje XV.
[0053] Šema 5 opisuje sintezu jedinjenja formule Iy. Hidroliza estarske grupe u jedinjenju XVI može da se izvrši pod uslovima dobro poznatim u tehnici, kao što je sa alkalnom bazom kao što su NaOH, KOH, ili LiOH u vodenom, organskom ili bifaznim smešama rastvarača. Još preciznije, estar XVI može da se tretira sa 5 ekvivalenata LiOH u smeši vodenog rastvora THF; blagim zakiseljavanjem saponificirane kiseline može da se dobije jedinjenje XVII. Nakon toga direktna amidacija preko kiselog hlorida može da se izvede pod blagim uslovima (E. Valeur i M. Bradley, Chem. Soc. Rev., 2009, 38, 606-631). Još preciznije, kiseli hlorid kiselog jedinjenja XVII može da se generiše in situ sa 1.2-2.5 ekvivalenata bis(2-okso-3-oksazolidinil)fosfonijum hlorida na sobnoj temperaturi a nakon toga tretmanom sa amonijumom u višku da se dobije željeni primarni amid XVIII. Uklanjanjem BOC zaštitne grupe kako je prethodno opisano dobija se neophodno jedinjenje XIX kako je prethodno opisano. Acilacija nezaštićenog azota piperazina može da se izvrši pod uslovima dobro poznatim u tehnici, preciznije tretmanom jedinjenja XIX sa 5 ekvivalenata pogodne nenukleofilne baze kao što je DIPEA, u prisustvu sredstva za acilaciju kao što je sukcinatni anhidrid da se dobije jedinjenje formule Iy. Druga jedinjenja formule I i/ili II stručnjak sa iskustvom u tehnici može da izradi po procedurama analognim sa ovde opisanim procedurama upotrebom odgovarajućih početnih materijala i modifikacijama po potrebi.
2
Šema 6
[0054] Sinteza jedinjenja X je opisana u Šemi 6. Udvajanjem amida posredstvom BOPC1 se dobija jedinjenje A. Uklanjanjem BOC zaštitne grupe kako je prethodno opisano dobija se neophodno jedinjenje B. Acilacija amino grupe može da se izvrši pod uslovima dobro poznatim u tehnici, preciznije tretmanom B sa 3-(hlormetil)-benzoil hloridom u prisustvu piridina da se dobije jedinjenje C. Nukleofilnom supstitucijom benzil hlorida sa supstituisanim piperazinom se dobija metil benzoat D. Nakon toga se saponifikacijom, kako je prethodno opisano, dobija jedinjenje X.
Izrade i Primeri
[0055] Naredne Izrade i Primeri dalje ilustruju pronalazak i predstavljaju tipične sinteze jedinjenja iz pronalaska. Reagensi i početni materijali su lako raspoloživi ili mogu jednostavno da se sintetišu od strane stručnjaka sa iskustvom u tehnici. Treba da se razume da su Izrade i Primeri dati kao ilustracija a ne ograničenje i da stručnjak sa iskustvom u tehnici može da izvrši različite modifikacije.
[0056] LC-ES/MS se izvodi na AGILENT® HP1100 sistemu za tečnu hromatografiju.
Elektrosprej masena spektrometrijska merenja (izvršena u pozitivnom i/ili negativnom modalitetu) su izvršena na masenom selektivnom detektoru kvadropolnim masenim spektrometrom povezanim sa HP1100 HPLC. LC-MS uslovi (nizak pH): kolona:
PHENOMENEX® GEMINI® NX C182.1 x 50 mm 3.5 µm; gradijent: 5-100% B u 3 min, nakon toga 100% B u 0.75 min, ili 5-95% B u 1.5 min, nakon toga 95% B u 0.25 min; temperatura kolone: 50 °C /-10 °C; brzina protoka: 1.2 mL/min; Rastvarač A: dejonizovana voda sa 0.1% HCOOH; Rastvarač B: ACN sa 0.1% mravlje kiseline; talasna dužina 214 nm. Alternativni LC-MS uslovi (visoki pH): kolona: XTERRA® MS C18 kolone 2.1x50 mm, 3.5 µm; gradijent: 5% rastvarača A za 0.25 min, gradijent od 5% do 100% rastvarač B u 3 min i 100% rastvarač B za 0.5 min ili 10% do 100% rastvarač B u 3 min i 100% rastvarač B za 0.75 min ili 5-95% B u 1.5 min, nakon toga 95% B za 0.25 min; temperatura kolone: 50 °C /-10 °C; brzina protoka: 1.2 mL/min; Rastvarač A: 10 mM NH4HCO3pH 9; Rastvarač B: ACN; talasna dužina: 214 nm.
[0057] NMR spektar je dobijen na Bruker AVIII HD 400 MHz NMR spektrometru ili Varian VNMRS 300 ili 400 MHz NMR spektrometru, dobijen kao CDCl3ili DMSO-d6rastvori izraženi u ppm, koristeći rezidualni rastvarač [CDCl3, 7.26 ppm; DMSO-d6, 2.50 ppm] kao referentni standard. Kada su zabeležni višestruki pikovi, mogu da se koriste sledeće skraćenice: s (singlet), d (dablet), t (triplet), q (kvartet), m (multiplet), br s (široki singlet), dd (dablet dableta), dt (dablet tripleta). Kada su zabeležene konstante udvajanja (J), zabeležene
2
su u hercima (Hz).
Izrada 1
metil 4-[2-(4-amino-2,6-difluoro-fenil)etinil]benzoat
[0058]
[0059] Suspenzija 3,5-difluoro-4-jodanilina (14.7 g, 55.9 mmol), CuI (0.745 g, 3.91 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorida (1.59 g, 2.24 mmol), metil 4-etinilbenzoata (9.05 g, 55.9 mmol), TEA (114 mL) i THF (44.1 mL) se meša 3 h na 60 °C. Smeša se ohladi na RT i rastvarač upari do sušenja pod sniženim pritiskom. Dodaju se EtOAc (100 mL) i H2O (100 mL) i dobijena čvrsta supstanca se filtrira preko dijatomejske zemlje. Organski sloj iz filtrata se izdvoji, suši preko MgSO4i upari do sušenja pod sniženim pritiskom. U dobijeni ostatak se doda 1:1 smeša DCM:heptan (400 mL) i smeša se meša na RT u toku noći. Dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (8.0 g, 45.8% prinos) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 3.86 (s, 3H), 6.26-6.37 (m, 4H), 7.59 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.96 (d, J = 8.5 Hz, 2H).
Izrada 2
metil 4-[2-(4-amino-2,6-difluoro-fenil)etil]benzoat
[0060]
2
[0061] U Parr shaker zapremine 500 mL se sipa crni Pd (0.53 g, 5.0 mmol) u atmosferi N2. Doda se degasiran 4:1 rastvor MeOH/THF (25 mL) a nakon toga degasiran rastvor metil 4-[2-(4-amino-2,6-difluoro-fenil)etinil]benzoata (1.17 g, 3.38 mmol) u 4:1 smeši MeOH/THF (25 mL) u atmosferi N2. Dobijena smeša se prečisti sa N2i podvrgne pritisku H2od 60 psi.
Zatvorena posuda se zagreva 14 h na 40 °C. Dobijena suspenzija se filtrira kroz ploču dijatomejske zemlje u atmosferi N2i upari do sušenja pod vakuumom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom preko silika gela, eluira sa gradijentom 25-35% heksani/THF, da se nakon uparavanja rastvarača i sušenja pod vakuumom dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (404 mg, 40% prinos).<1>H NMR (400.13 MHz, DMSO-d6) δ, 2.71-2.83 (m, 4H), 3.84 (s, 3H), 5.52 (s, 2H), 6.10-6.15 (m, 2H), 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.85 (d, J = 8.2 Hz, 2H). LC-ES/MS (m/z) 292 [M+1].
Izrada 3
terc-butil 4-[(4-metoksi-4-okso-butil)karbamoil]-2,2-dimetil-piperazin-1-karboksilat
[0062]
[0063] U scintilacionu bočicu zapremine 30 mL se sipaju t-butil 2,2-dimetilpiperazin-1-karboksilat (500 mg, 2.28 mmol) i DCM (12 mL). Dobijeni rastvor se ohladi u kupatilu sa vodom i ledom i DIPEA (1.20 mL, 6.85 mmol) se doda u jednoj porciji. U kapima se u toku 5 min dodaje rastvor metil 4-izocijanatbutanoata (447 mg, 2.97 mmol) u DCM (3 mL).
Reaktivna smeša se polako zagreva na RT i meša još 15 min. Smeša se podeli između 5% vodenog rastvora limunske kiseline (100 mL) i DCM (20mL). Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj se ekstrahuje još dva puta sa DCM (20 mL svaki). Kombinovani organski
2
ekstrakti se isperu po redu sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(30 mL) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (30 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i upare pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 30-50% heksani/aceton, da se nakon uklanjanja rastvarača i sušenja pod vakuumom dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno viskozno ulje (848mg, 95% prinos).
<1>H NMR (399.8 MHz, CDCl3) δ 1.34 (s, 6H), 1.45 (s, 9H), 1.83 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.37 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.25-3.30 (m, 2H), 3.37 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.47 (s, 2H), 3.65 (s, 3H), 3.71 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.65-4.68 (m, 1H). LC-ES/MS (m/z) 358 [M+1].
Izrada 4
terc-butil 4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-karboksilat
[0064]
[0065] 2 M rastvor LiBH4u THF (3.02 mL, 6.04 mmol) se u kapima na RT doda u bocu okruglog dna zapremine 100 mL koja sadrži terc-butil 4-[(4-metoksi-4-okso-butil)karbamoil]-2,2-dimetil-piperazin-1-karboksilat (783 mg, 2.01 mmol) i THF (2 mL). Dobijena smeša se meša 12 h na RT. Reaktivna smeša se neutrališe sa 0.5 mL MeOH, meša 20 min na RT i podeli između 5% vodenog rastvora NaHCO3(150 mL) i DCM (50 mL). Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj se ekstrahuje još dva puta sa DCM (50 mL svaki). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i upare do sušenja pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (634mg, 96% prinos).<1>H NMR (399.8 MHz, CDCl3) δ 1.36 (s, 6H), 1.46 (s, 9H), 1.58-1.63 (m, 4H), 3.31-3.28 (m, 2H), 3.49 (s, 2H), 3.66-3.69 (m, 2H), 3.71-3.74 (m, 2H), 3.37-3.39 (m, 2H). LC-ES/MS (m/z) 330 [M+1].
Izrada 5
2
N-(4-hidroksibutil)-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksamid hidrohlorid
[0066]
[0067] U scintilacionu bočicu zapremine 30 mL se sipa rastvor terc-butil 4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetilpiperazin-1-karboksilata (631 mg, 1.92 mmol) u DCM (20 mL). U kapima se u toku 5 min dodaje 4 N rastvor HCl u dioksanu (2.4 mL, 9.58 mmol) i dobijeni rastvor se meša 2 h na RT. Isparive supstance se uklone pod vakuumom a ostatak se suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao higroskopna bela masna čvrsta supstanca (100% prinos, kvantitativni), pogodna za upotrebu u sledećoj fazi bez naknadnog prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z) 230 [M+1].
Izrada 6
metil 4-[2-[4-[[2-(terc-butoksikarbonilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat
[0068]
2
[0069] U bocu okruglog dna zapremine 100mL se sipaju metil 4-[2-(4-amino-2,6-difluorofenil)etil]benzoat (2.11 g, 7.24 mmol), 3-(terc-butoksikarbonilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-karboksilna kiselina (2.37 g, 7.97mmol) i DCM (60 mL). Dobijena suspenzija se ohladi u kupatilu sa vodom i ledom i u kapima se doda DIPEA (5.05 mL, 29.0 mmol) da se dobije žuto-braon zamućeni rastvor. Čvrsti bis-(2-okso-3-oksazolidinil)fosfinat hlorid (2.30 g, 9.05 mmol) se na 0 °C dodaje u malim porcijama u toku 30 min. Reaktivna smeša se nakon toga zagreje na RT i meša 24 h. Doda se još čvrste 3-(tercbutoksikarbonilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-karboksilne kiseline (0.6 g, 2.0 mmol) a nakon toga još DIPEA (1.26 mL, 7.25 mmol) i čvrstog bis-(2-okso-3-oksazolidinil)fosfinat hlorida (0.58 g, 2.26 mmol) u malim porcijama u toku 5 min. Dobijena zamućena braon reaktivna smeša se meša 12 h na RT. Reaktivna smeša se podeli između 5% vodenog rastvora limunske kiseline (150 mL) i DCM (25 mL), Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj se ekstrahuje još dva puta sa DCM (50 mL svaki). Kombinovani organski ekstrakti se isperu po redu sa 10% vodenim rastvorom NaHCO3(50 mL), zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom.
Dobijena braon uljasta čvrsta supstanca se prečisti hromatografijom na silika gelu i eluira sa gradijentom 15-40% heksani/(10% MTBE u DCM). Sakupljene frakcije koje sadrže željeni produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom a dobijeni ostatak se triturira sa MTBE (15 mL). Dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.75 g, 66% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.44 (s, 9H), 1.69-1.77 (m, 4H), 2.53-2.65 (m, 4H), 2.91 (br s, 4H), 3.84 (s, 3H), 7.30-7.34 (m, 4H), 7.86 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 9.80 (br s, 1H), 9.94 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 569 [M-1].
Izrada 7
metil 4-[2-[4-[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil)amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat hidrohlorid
[0070]
[0071] U scintilacionu bočicu zapremine 30 mL se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-(tercbutoksikarbonilamino)-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat (351 mg, 0.61 mmol) i DCM (6 mL). Dobijeni svetlo žuti rastvor se degasira propuštanjem kroz blagu struju N2. U kapima se u toku 5 min dodaje 4 N rastvor HCl u dioksanu (155 mL, 6.1 mmol) i dobijeni rastvor se meša 12 h na RT. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i dobijeni svetlo žuti ostatak se triturira sa minimalnom količinom DCM. Dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasti prašak (337 mg, 99% prinos).<1>H NMR (399.8 MHz, DMSO-d6) δ 1.73-1.75 (m, 4H), 2.40-2.44 (m, 2H), 2.56-2.59 (m, 2H), 2.85 (s, 4H), 3.80 (s, 3H), 7.26-7.28 (m, 4H),7.81-7.83 (m, 2H), 9.21 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 571 [M+1].
Izrada 8
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(hlormetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat
[0072]
1
[0073] Suspenzija metil 4-[2-[4-[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil)amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat hidrohlorida (2.43 g, 4.55 mmol) u DCM (80 mL) u boci okruglog dna zapremine 250mL se ohladi na 0 °C u kupatilu sa vodom i ledom. U kapima se uz mešanje u toku 5 min doda piridin (0.92 mL, 11 mmol). Dobijeni bledo žućkasti rastvor se meša još 5 min na 0 °C i u kapima se u toku 5 min dodaje rastvor 3-(hlormetil)benzoil hlorida (0.71 mL, 5.0 mmol) u DCM (20 mL). Reaktivna smeša se meša još 30 min na 0 °C.
Reaktivna smeša se razblaži sa 150 mL 10% vodenog rastvora limunske kiseline i meša 1 h na RT. Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj se ekstrahuje još dva puta sa DCM (50 mL svaki). Kombinovani organski ekstrakti se isperu po redu sa 5% vodenim rastvorom NaHCO3(2 x 50 mL) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i upare do sušenja pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se triturira sa EtOH (30 mL) a dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere sa EtOH (15 mL) i suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žutomrka čvrsta supstanca (2.61 g, 92% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ, 1.73-1.81 (m, 4H), 2.68 (m, 4H), 2.92 (s, 4H), 3.84 (s, 3H), 4.83 (s, 2H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2H) 7.38-7.344 (m, 2H), 7.56 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.96 (br s, 1H), 10.10 (s, 1H), 11.34 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z-) 621 [M-1].
Izrada 9
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0074]
2
[0075] U mikrotalasnu bočicu zapremine 2 mL se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(hlormetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat (50 mg, 0.08 mmol), N-(4-hidroksibutil)-3,3-dimetilpiperazin-1-karboksamid hidrohlorid (42.7 mg, 0.16 mmol) i DIPEA (0.056 mL, 0.32 mmol) u smeši ACN (1.5 mL) i MeOH (50 µL). Dobijena žuta suspenzija se zagreva 4 h na 110 °C u BIOTAGE® inicijalnom mikrotalasnom sintesajzeru. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između 5% vodenog rastvora NaHCO3(75 mL) i DCM (25 mL). Organski sloj se izdvoji, vodeni sloj se ekstrahuje još dva puta sa DCM (25 mL svaki) i kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i upare do sušenja pod sniženim pritiskom.
Dobijeni ostatak se prečisti reverzno faznom hromatografijom preko C-18 silika gela, eluira sa gradijentom 0-100% smeše 5% HCOOH u H2O/ACN, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao svetlo žuta penasta čvrsta supstanca (30.2 mg, 46% prinos).
<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.05 (s, 6H), 1.37-1.44 (m, 4H), 1.80-1.85 (m, 4H), 2.25-2.27 (m, 2H), 2.65-2.677 (m, 4H), 2.91 (br s, 4H), 2.96-3.05 (m, 2H), 3.12 (s, 2H), 3.17-3.26 (m, 2H), 3.35-3.41 (m, 2H), 3.51 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 4.36 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 6.35-6.39 (m, 1H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.51-7.56 (m, 4H), 7.70-7.80 (m, 1H), 7.87 (m, 3H), 10.01 (br s, 1H), 11.45 (br s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 816 [M+1].
Izrada 10
terc-butil 4-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat
[0076]
[0077] U mikrotalasnu reaktivnu posudu zapremine 20mL se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(hlormetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat (1.85 g, 2.97 mmol), terc-butil 3,3- dimetilpiperazin-1-karboksilat (0.91 g, 4.16 mmol) i DIPEA (2.07 mL, 11.9 mmol) u 15 mL ACN. Dobijena žuta suspenzija se zagreva 4 h na 110 °C u BIOTAGE® inicijalnom mikrotalasnom sintesajzeru. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između 5% vodenog rastvora NaHCO3(150 mL) i DCM (50 mL). Organski sloj se izdvoji, vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 0-100% smeše 9:1 DCM/aceton u heksanu, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca (1.63 g, 69% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.04 (s, 6H), 1.38 (s, 9H), 1.81-1.74 (m, 4H), 2.28 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 2.70 (br s, 4H), 2.91 (s, 4H), 3.13 (s, 2H), 3.26 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 7.31 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.44-7.39 (m, 2H), 7.55-7.46 (m, 2H), 7.75 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.87 (m, 3H), 9.99 (s, 1H), 11.49 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 801 [M+1].
Izrada 11
4
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorid
[0078]
[0079] Rastvor terc-butil 4-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilata (1.13 g, 1.41 mmol) u DCM (14.1 mL) se meša na RT i doda se 4 N rastvor HCl u dioksanu (3.5 mL, 14.1 mmol) pomoću šprica. Nakon završenog dodavanja, reakcija se meša na RT u toku noći i koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom. Čvrsta supstanca se triturira sa DCM/ Et2O, dobijeni precipitat se sakupi filtriranjem pod vakuumom i filter pogača se suši u vakuumskoj pećnici na 50°C da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (0.93 g, 1.20 mmol, 85% prinos). LC-ES/MS (m/z) 701 [M+1].
Izrada 12
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[bis(2-metoksietil)sulfamoil]-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat
[0081] U rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorida (190.8 mg, 0.24 mmol) i TEA (0.165 mL, 1.18 mmol) u 4 mL THF se u kapima doda bis(2-metoksietil)sulfamoil hlorid (87 mg, 0.36 mmol) u 4 mL THF. Dobijena smeša se zagreva 18 h na 50 °C. Nakon hlađenja na RT, reaktivna smeša se razblaži sa smešom 5% vodenog rastvora NaHCO3(75 mL) i DCM (25 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ispere sa novom količinom DCM (2 x 25 mL). Organski ekstrakti se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 10-30% smeše aceton u heksanima, da se nakon uparavanja rastvarača dobije željeni produkt kao svetlo žuta čvrsta supstanca (150.1 mg, 70.8% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.13 (s, 6H), 1.85-1.70 (m, 4H), 2.43-2.36 (m, 2H), 2.75-2.65 (m, 4H), 3.03-2.86 (m, 8H), 3.24 (s, 6H), 3.36-3.32 (m, 4H), 3.44 (t, J= 5.8 Hz, 4H), 3.54 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 7.32 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.52-7.38 (m, 3H), 7.56 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.74 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.91-7.84 (m, 3H), 10.00 (s, 1H), 11.47 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 896 [M+1].
Izrada 13
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-metoksi-4-okso-butil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0083] U rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil] amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil] benzoat dihidrohlorida (148.4 mg, 0.1688 mmol), DIPEA (60 µL, 0.34 mmol) i metil estra 4-oksobuterne kiseline (40 mg, 0.34 mmol) u 4 mL DCM se doda AcOH (0.01 mL), a nakon toga natrijum triacetoksiborhidrid (0.073 g, 0.34 mmol). Dobijena reaktivna smeša se ostavi 12 h da se meša na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa smeša 5% vodenog rastvora NaHCO3(75 mL) i DCM (25 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ispere sa novom količinom DCM (2 x 25 mL). Organski ekstrakti se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, koristeći gradijent 35-40% smeše 9:1 EtOH/DCM u heksanu, da se nakon uparavanja rastvarača dobije željeni produkt kao svetlo žuta čvrsta supstanca (132.1 mg, 91.8% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.09 (s, 6H), 1.70-1.58 (m, 2H), 1.87-1.70 (m, 4H), 2.20-2.09 (m, 2H), 2.36-2.27 (m, 4H), 2.63-2.54 (m, 2H), 2.75-2.64 (m, 4H), 2.92 (s, 4H), 3.30-3.28 (m, 2H), 3.65-3.53 (m, 5H), 3.84 (s, 3H), 7.32 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.58-7.37 (m, 4H), 7.72-7.69 (m, 1H), 7.91-7.83 (m, 3H), 9.99 (s, 1H), 11.45 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 801 [M+1].
Izrada 14
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(3-metoksipropil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0084]
[0085] U rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil] amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil] benzoat dihidrohlorida (0.108 g, 0.13 mmol), 3-metoksipropionaldehida (0.023 g, 0.25 mmol) i DIPEA (0.043 mL, 0.25 mmol) u 4 mL DCM se doda AcOH (0.01 mL), a nakon toga natrijum triacetoksiborhidrid (0.053 g, 0.25 mmol). Dobijena reaktivna smeša se meša 12 h na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa 5% vodenim rastvorom NaHCO3(75 mL) i DCM (25 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ispere sa novom količinom DCM (2 x 25 mL).
Organski ekstrakti se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, koristeći gradijent 25-80% aceton u heksanu, da se nakon uparavanja rastvarača dobije željeni produkt kao svetlo žuta čvrsta supstanca (26.2 mg, 27.6% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 11.44 (m, 1H), 9.98 (m, 1H), 7.92-7.82 (m, 3H), 7.76-7.70 (m, 1H), 7.57-7.38 (m, 4H), 7.36-7.27 (m, 2H), 3.84 (s, 4H), 3.27-3.16 (m, 4H), 2.97-2.87 (m, 4H), 2.76-2.64 (m, 4H), 2.37-2.28 (m, 2H), 2.25-2.15 (m, 2H), 1.90-1.71 (m, 4H), 1.67-1.54 (m, 2H), 1.09 (s, 6H). LC-ES/MS (m/z) 773 [M+1].
Izrada 15
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[2-(terc-butoksikarbonilamino)acetil]-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat
[0086]
[0087] U bocu okruglog dna se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]- 4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat dihidrohlorid (500 mg, 1.4 mmol), DMF (25 mL) i 1,8-diazabiciklo [5.4.0]undek-7-en (0.19 mL, 1.27 mmol). Smeša je kratko meša i tretira sa HOBT (103 mg, 0.67 mmol), EDCl (250 mg, 1.6 mmol) i N-(terc-butoksikarbonil)glicinom (132 mg, 0.75 mmol). Smeša se meša 18 sati na RT. Smeša se razblaži sa vodom (25 mL) i dobijena suspenzija se meša 3 h na RT. Dobijena svetlo žuta čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere sa vodom i suši na vazduhu. Dobijeni prašak se rastvori u DCM, suši preko anhidrovanog MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa 15% EtOAc u DCM u toku 20 min a nakon toga sa 25% EtOAc u DCM, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje (451 mg, 38% prinos).<1>H NMR (400.13 MHz, DMSO) δ 11.52-11.46 (m, 1H), 9.99 (s, 1H), 7.90-7.86 (m, 3H), 7.76-7.74 (m, 1H), 7.57-7.55 (m, 1H), 7.52-7.47 (m, 1H), 7.44-7.39 (m, 2H), 7.33 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 6.76-6.71 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.81-3.76 (m, 2H), 3.57-3.54 (m, 2H), 3.43-3.38 (m, 2H), 3.32 (s, 12H, water), 3.28-3.22 (m, 2H), 2.91 (s, 4H), 2.70 (s, 4H), 2.51-2.50 (m, 16H, DMSO), 2.39-2.35 (m, 2H), 1.87-1.81 (m, 4H), 1.40-1.35 (m, 10H), 1.29-1.25 (m, 1H), 1.07 (d, J= 21.1 Hz, 6H). LC-ES/MS (m/z) 858 [M+1].
Izrada 16
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-metoksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0088]
[0089] U scintilacionu bočicu zapremine 30 mL, rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorida (120 mg, 0.155 mmol) i TEA (63 mg, 0.62 mmol) u DCM (3 mL) se meša na RT i pomoću šprica se doda rastvor 1-izocijanat-4-metoksibutana (30 mg, 0.23 mmol) u DCM (1 mL). Dobijena reaktivna smeša se ostavi da se meša 4 sata na RT. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom i prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 0-100% EtOAc/heksani, da se nakon
4
uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao žutomrka pena (102 mg, 79% prinos).
<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.03 (s, 6H), 1.35-1.45 (m, 4H), 1.68-1.82 (m, 4H), 2.21-2.25 (m, 2H), 2.63-2.70 (m, 4H), 2.89 (s, 4H), 2.95-3.02 (m, 2H), 3.095 (s, 2H), 3.18 (s, 3H); 3.15-3.22 (m, 2H), 3.25-3.30 (m, 2H), 3.48 (s, 2H), 3.815 (s, 3H), 6.334 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.35-7.42 (m, 2H), 7.42-7.50 (m, 1H),), 7.50-7.55 (m, 1H), 7.71 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.83-7.89 (m, 3H), 9.981 (s, 1H), 11.44 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 830 [M+1].
Izrada 17
4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-terc-butoksikarbonil-2,2-dimetil-piperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina
[0090]
[0091] U scintilacionu bočicu zapremine 60 mL se sipaju terc-butil 4-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat (3.92 g, 4.8 mmol), litijum hidroksid (570 mg, 24 mmol), THF (20 mL), MeOH (10 mL) i H2O (10 mL) i dobijena suspenzija se meša 12 h na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa H2O (40 mL) i koncentruje pod vakuumom do ~ 1⁄2 zapremine. pH dobijene smeše se podesi na ~ 5-6 sa 10 % vodenim rastvorom limunske kiseline i dobijena bezbojna suspenzija se podeli između 150 mL vode i 50 mL 4:1 hlorform/izopropanol. Organski sloj se izdvoji, pH vodenog sloja se ponovo podesi na pH ~5 sa 10 % vodenim rastvorom limunske kiseline i smeša se ekstrahuje dva puta sa dodatnom količinom 4:1 hlorform/izopropanol (2 x 50 mL). Organski slojevi se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.7 g, >99% prinos) kao beličasta čvrsta supstanca koja može da se koristi u narednoj fazi bez naknadnog prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z) 787 [M+1].
Izrada 18
terc-butil 4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-karbamoilfenil)etil]-3,5-difluoro-fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat
[0092]
[0093] U bocu okruglog dna zapremine 500mL se sipa rastvor 4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-tercbutoksikarbonil-2,2-dimetil-piperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeve kiseline (3.50 g, 4.45 mmol) i DIPEA (3.1 mL, 17.8 mmol) u DCM (75 mL). U ovaj rastvor se u malim porcijama u toku 10 min dodaje čvrsti bis(2-okso-3-oksazolidinil)fosfinat hlorid (1.4 g, 5.3 mmol) i dobijena suspenzija se meša 10 min na RT. U jednoj poriji se doda 0.5 M rastvor NH3u 1,4-dioksanu (40 mL, 22.25 mmol) i dobijena suspenzija se meša 2 h na RT. U malim porcijama se u toku 5 min dodaje još bis(2-okso-3-oksazolidinil)fosfinat hlorida (0.7g, 2.7 mmol) i dobijena suspenzija se ostavi da se meša 12 h na RT. Ponovo se u malim porcijama u toku 5 min dodaje još bis(2- okso-3-oksazolidinil)fosfinat hlorida (0.7g, 2.7 mmol) i dobijena suspenzija se ostavi da se meša 12 h na RT. Dobijena reaktivna smeša se podeli između 300 mL 5% vodenog rastvora NaHCO3i 50 mL DCM. Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se ekstrahuje dva puta sa novom količinom DCM (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod vakuumom. Dobijeni žuti penasti ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 10-12% aceton/DCM; nakon toga se koristi mobilna faza 35% MeOH / DCM. Sakupljene frakcije koje sadrže željeni produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom a ostatak se triturira sa DCM. Dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje. Triturirani filtrat se izdvoji i upari do sušenja pod vakuumom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 5-10% MeOH u DCM i sakupljene frakcije koje sadrže željeni produkt se kombinuju, upare i dodaju dobijenom materijalu iz prvog prečišćavanja da se dobije naslovljeno jedinjenje kao svetlo žuta čvrsta supstanca (2.43 g, 70% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.05 (s, 6H), 1.39 (s, 9H), 1.68-1.90 (m, 4H), 2.29 (m, 2H), 2.70 (m, 4H), 2.89 (m, 4H), 3.14 (s, 2H), 3.28 (s, 2H), 3.51 (s, 2H), 7.16-7.34 (m, 3H), 7.36-7.58 (m, 4H), 7.68-7.73 (m, 3H), 7.90 (m, 2H), 10.00 (s, 1H), 11.49 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 786 [M+1].
Izrada 19
N-[4-[2-(4-karbamoilfenil)etil]-3,5-difluoro-fenil]-2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karboksamid dihidrohlorid
[0094]
4
[0095] Rastvor terc-butil 4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-karbamoilfenil)etil]-3,5-difluorofenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilata (2.43 g, 3.1 mmol) u smeši DCM (80 mL) i MeOH (8 mL) u boci okruglog dna zapremine 250 mL se pažljivo degasira u atmosferi azota i u kapima se u toku 10 min dodaje 4 N rastvor HCl u 1,4-dioksanu (16 mL, 62 mmol). Dobijeni rastvor se meša 12 h na RT. Isparljive komponente se uklone pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta, higroskopna čvrsta supstanca (2.45 g, >99%) koja može da se koristi u sledećoj fazi bez naknadnog prečišćavanja.
Izrada 20
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[(2,2,4-trimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0096]
[0097] U mikrotalasnu reaktivnu posudu zapremine 5mL se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(hlormetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat (225 mg, 361 mmol) i rastvor 1,3,3-trimetilpiperazina (65 mg, 0.488 mmol) i DIPEA (0.25 mL, 1.4 mmol) u 3 mL ACN. Dobijena žuta suspenzija se zagreva u BIOTAGE® inicijalnom mikrotalasnom sintesajzeru 3 h na 110 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između 5% vodenog rastvora NaHCO3(75 mL) i DCM (25 mL). Organski sloj se izdvoji a vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 20-50% smeše 10% 7N NH3/MeOH u DCM u MTBE, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao svetlo žuta čvrsta supstanca (195 mg, 76% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6): δ 1.11 (dva s, 6H).1.90-1.64 (m, 4H), 2.25-1.94 (m, 4H), 2.40-2.26 (m, 2H), 2.50 (under residual dmso resonance, 3H), 2.79-2.60 (br s, 4H), 2.92 (s, 4H), 3.77-3.76 (br, 2H), 3.84 (s, 3H), 7.32 (m, 2H), 7.60-7.36 (m, 4H), 7.79-7.67 (m, 1H), 7.87 (m, 3H), 9.99 (s, 1H), 11.46 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 715 [M+1].
Izrada 21
terc-butil 4-[(3-metoksi-3-okso-propil)karbamoil]-2,2-dimetil-piperazin-1-karboksilat
[0098]
4
[0099] U scintilacionu bočicu zapremine 20 mL se sipa rastvor terc-butil 2,2-dimetilpiperazin-1-karboksilata (500 mg, 2.29 mmol) u DCM (12 mL) i ohladi u ledenom kupatilu. U toku hlađenja, doda se DIPEA (1.20 mL, 6.86 mmol) a nakon toga se u kapima u toku 5min dodaje rastvor metil 3-izocijanatpropanoata (404 mg, 2.97 mmol) u DCM (3 mL). Dobijena smeša se ostavi da se zagreje na rt i meša 15min na rt. Reaktivna smeša se razblaži sa 5% vodenim rastvorom limunske kiseline (100 mL) i DCM (25 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Organski ekstrakti se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 30-53% aceton u heksanu, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno gusto ulje (726 mg, materijal sadrži ~10% ostatka DCM, 83% prinos).<1>H NMR (399.8 MHz, CDCl3): δ 1.34 (s, 6H), 1.45 (s, 9H), 2.58-2.48 (m, 2H), 3.37 (t, J= 5.7 Hz, 2H), 3.54-3.43 (m, 4H), 3.75-3.62 (m, 5H), 5.08-4.99 (m, 1H). LC-ES/MS (m/z) 344 [M+1].
Izrada 22
metil 3-[(3,3-dimetilpiperazin-1-karbonil)amino]propanoat hidrohlorid
[0100]
[0101] U scintilacionu bočicu zapremine 20 mL koja sadrži rastvor terc-butil 4-[(3-metoksi-3-oksopropil)karbamoil]-2,2-dimetil-piperazin-1-karboksilata (250 mg, 0.65 mmol) u DCM (7 mL) se u kapima uz mešanje doda 4 N rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (1.63 mL,
4
6.54 mmol). Dobijena suspenzija se meša 1 h na rt, koncentruje pod vakuumom i ostatak se suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela higroskopna čvrsta supstanca koja se koristi u sledećoj fazi kao što jeste bez prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z) 244 [M+1].
Izrada 23
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-[(3-metoksi-3-okso-propil)karbamoil]-2,2-dimetilpiperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0102]
[0103] U mikrotalasnu reaktivnu posudu zapremine 5mL se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(hlormetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat (180 mg, 0.29 mmol), rastvor metil 3-[(3,3-dimetilpiperazin-1-karbonil)amino]propanoat hidrohlorida (162 mg, 0.58 mmol) i N,N-DIPEA (0.202 mL, 1.16 mmol) u smeši 3 mL ACN i 0.5 mL MeOH. Dobijena žuta suspenzija se zagreva u BIOTAGE® inicijalnom mikrotalasnom sintesajzeru 3 h na 110 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između 5% vodenog rastvora NaHCO3(75 mL) i DCM (25 mL). Organski sloj se izdvoji; a vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom.
4
Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa gradijentom 15-80% smeše 0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% smeše mravlja kiselina/H2O u toku 15 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo narandžasta čvrsta supstanca (81 mg, 34% prinos). LC-ES/MS (m/z) 830 [M+1].
Izrada 24
terc-butil 3-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat
[0104]
[0105] U mikrotalasnu reaktivnu posudu zapremine 20mL se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(hlormetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat (1.80 g, 2.89 mmol) i rastvor terc-butil 3,8-diazabiciklo [3.2.1]oktan-8-karboksilata (760 mg, 3.47 mmol) i DIPEA (1.01 mL, 5.78 mmol) u ACN (12 mL). Dobijena žuta suspenzija se zagreva u BIOTAGE® inicijalnom mikrotalasnom sintesajzeru 1 h na 110 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između 5% vodenog rastvora NaHCO3(150 mL) i DCM (50 mL). Organski sloj se izdvoji, vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 15-45% EtOAc u heksanu da se nakon uparavanja rastvarača
4
dobije naslovljeno jedinjenje kao svetlo žuta čvrsta supstanca (2.23 g, 97% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6): δ 1.38 (s, 9H), 1.95-1.60 (m, 8H), 2.16 (d, J= 10.0 Hz, 2H), 2.57 (d, J=10.0 Hz, 1H), 2.70 (br s, 4H), 2.92 (s, 4H), 3.51 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 4.08-3.96 (m, 2H), 7.35-7.26 (m, 2H), 7.45-7.35 (m, 2H), 7.58-7.45 (m, 2H), 7.79-7.72 (m, 1H), 7.92-7.79 (m, 3H), 10.00 (s, 1H), 11.41 (s, 1H),. LC-ES/MS (m/z) 799 [M+1].
Izrada 25
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-ilmetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorid
[0106]
[0107] U atmosferi N2, u 250 mL RBF koja sadrži rastvor terc-butil 3-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilata (2.23 g, 2.79 mmol) u DCM (45 mL), se u kapima uz mešanje doda 4 N rastvor hlorovodonične kiseline u dioksanu (7.0 mL, 28 mmol). Dobijena suspenzija se meša 12 h na rt, koncentruje pod vakuumom i ostatak se suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo žućkasta čvrsta supstanca koja se koristi u sledećoj fazi bez naknadnog prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z) 699 [M+1].
Izrada 26
4
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(metilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]benzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0108]
[0109] U scintilacionu bočicu zapremine 20 mL se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-ilmetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorid (1.04 g, 1.27 mmol), DCM (8 mL) i TEA (0.89 mL, 6.4 mmol). Dobijena suspenzija se mućka na rt dok se ne rastvore sve čvrste supstance. U kapima se uz mešanje doda rastvor metilaminoformil hlorida (144 mg, 1.46 mmol) u 2 mL DCM i mešanje se nastavi još 15 min. Reaktivna smeša se razblaži sa 5% vodenim rastvorom NaHCO3(150 mL) i DCM (50 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 50 mL). Organski ekstrakti se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa gradijentom 10-20% smeše 5% MeOH u 10 mM amonijum bikarbonata u ACN u toku 5 min i 20-80% smeše 5% MeOH u 10 mM amonijum bikarbonata u ACN u toku 15 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (53 mg, 68% prinos). Naslovljeno jedinjenje se izdvoji kao sporedna komponenta smeše kao žućkasto zelena čvrsta supstanca (177 mg, 17% prinos). Materijal se koristi u sledećoj fazi bez naknadnog prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z) 752 [M+1].
Izrada 27
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat
[0110]
[0111] Rastvor terc-butil 4-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilata (480 mg, 0.599 mmol) u DCM (5 mL) se meša na RT i pomoću šprica se doda 4 N rastvor HCl u dioksanu (4 mL, 16 mmol). Po završenom dodavanju, reakcija se meša 2 sata na RT, za koje vreme se formira precipitat. Dobijena smeša se koncentruje pod vakuumom u svetlo žutu čvrstu supstancu, nakon toga dalje suši 16 h pod visokim vakuumom na temperaturi sredine da se dobije 464 mg hidrohloridne soli međuproizvoda kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca se podeli između zasićenog natrijum bikarbonata i etil acetata. Slojevi se razdvoje i vodeni deo ispere sa dodatnom količinom etil acetata. Kombinovani organski ekstrakti se suše preko natrijum sulfata, dekantuju, nakon toga koncentruju pod vakuumom i suše pod vakuumom 16 h na 55 °C da se dobije naslovljeni produkt kao žuto-braon čvrsta supstanca (323 mg, 0.461 mmol, 77% prinos). LC-ES/MS (m/z) 701 [M+1].
Izrada 28
1
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-acetil-2,2-dimetil-piperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat
[0112]
[0113] Rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoata (226 mg, 0.322 mmol) u dihlormetanu (10 mL) se meša na RT i tretira sa acetil hloridom (46 µL, 0.645 mmol). U dobijenu smešu se polako dodaje zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL). Smeša se brzo meša 1h na r.t. i nakon toga razblaži sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (10 mL) i dihlormetanom (15 mL). Slojevi se razdvoje i organski sloj suši sa magnezijum sulfatom. Smeša se filtrira i filter pogača ispere sa dihlormetanom.
Dobijeni filtrat se suši pod vakuumom. Sirovi produkt se prečisti normalno faznom flesh hromatografijom, eluira sa 3:1 etil acetat/heksani pod izokratnim uslovima, a frakcije sakupe na 240 nM. Frakcije koje sadrže produkt se izdvoje i koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeni produkt kao svetlo žuta čvrsta supstanca (169 mg, 227 mmol, 71% prinos). LC-ES/MS (m/z) 741 [M-1].
Izrada 29
metil 4-(2,6-difluoro-4-(2-(3-(((1R,5S)-8-pentanoil-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)metil)benzamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-3-karboksamido)fenetil)benzoat
2
[0115] U rastvor metil 4-(4-(2-(3-(((1R,SS)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)metil)benzamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-3-karboksamido)-2,6-difluorofenetil)benzoat dihidrohlorida (200 mg, 0.24 mmol) i TEA (0.145 mL, 4.0 eq., 1.04 mmol) u 2.60 mL DCM, se pomoću šprica doda pentanoil hlorid rastvoren u 0.5 mL DCM (87 mg, 1.5 eq., 0.39 mmol). Dobijena smeša se meša 6 h na rt. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između vode (15 mL) i EtOAc (10 mL). Organski sloj se izdvoji, a vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom da se dobije željeni produkt kao svetlo žuta čvrsta supstanca (214 mg, 100% prinos). LC-ES/MS (m/z) 783 [M+1].
Izrada 30
metil 4-(4-(2-(3-(((1R,5S)-8-(dimetilglicil)-3,8-diazabiciklo[3 .2.1]oktan-3-il)metil)benzamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-3-karboksamido)-2,6-difluorofenetil)benzoat
[0116]
[0117] Rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-ilmetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat dihidrohlorida (200 mg, 0.2592 mmol), 2-(dimetilamino)sirćetne kiseline (40 mg, 0.39 mmol), trietilamina (4 equiv., 1.037 mmol), EDCl (74 mg, 1.5 equiv., 0.39 mmol) i 1-hidroksi-7-azobenzotriazola (53 mg, 1.5 equiv., 0.39 mmol) u DCM (2.6 mL) se meša na rt u toku noći. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između vode (15 mL) i EtOAc (10 mL). Organski sloj se izdvoji, a vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni (0-5% MeOH/DCM) da se dobije traženi produkt kao bledo žuta čvrsta supstanca (135 mg, 66% prinos). LC-ES/MS (m/z) 785 [M+1].
Izrada 31
metil 4-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat
[0118]
4
[0119] U rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorida (200 mg, 0.26 mmol) i TEA (0.146 mL, 1.03 mmol) u 3 mL DCM, u kapima se doda metil hloroformat (36 mg, 0.39 mmol) u 1 mL DCM. Dobijena smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se razblaži sa razblaži sa EtOAc i podeli sa vodom. Produkt se ekstrahuje sa EtOAc. Svi organski ekstrakti se kombinuju, isperu sa slanim rastvorom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 0-30% smeše EtOAc u heksanu, da se nakon uparavanja rastvarača dobije željeni produkt kao žutomrka pena (157 mg, 80% prinos). LC-ES/MS (m/z) 757 [M-1].
Izrada 32
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-dimetil-4-(metilsulfamoil)piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzo-tiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat
[0120]
[0121] U rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorida (201 mg, 0.26 mmol) i TEA (0.146 mL, 1.03 mmol) u 3 mL DCM, u kapima se doda N-metilsulfamoil hlorid (50 mg, 0.39 mmol) u 1 mL DCM. Dobijena smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se razblaži sa EtOAc i podeli sa vodom. Produkt se ekstrahuje sa EtOAc. Svi organski produkti se kombinuju, isperu sa slanim rastvorom, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 0-50% smeše EtOAc u heksanu, da se nakon uparavanja rastvarača dobije željeni produkt kao žutomrka pena (55 mg, 27% prinos). LC-ES/MS (m/z) 792 [M-1].
Izrada 33
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-[1-(metoksimetil)ciklopropankarbonil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0122]
[0123] Rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-ilmetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat dihidrohlorida (150 mg, 0.194 mmol), 1-(metoksimetil)ciklopropankarboksilne kiseline (30 mg, 0.233 mmol), trietilamina (4 equiv., 0.972 mmol), EDCl (56 mg, 1.5 equiv., 0.29 mmol) i 1-hidroksi-7-azobenzotriazola (39 mg, 1.5 equiv., 0.29 mmol) u DCM (2.6 mL) se meša na rt u toku noći. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između vode i EtOAc. Organski sloj se izdvoji, a vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni (0-100% EtOAc/heksani) da se dobije željeni produkt kao bela pena (128 mg, 81% prinos). LC-ES/MS (m/z) 810 [M-1].
Izrada 34
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-[2-(4-metilpiperazin-1-il)acetil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0124]
[0125] Rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-ilmetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat dihidrohlorida (200 mg, 0.26 mmol), 2-(4-metilpiperazin-1-il)sirćetne kiseline (62 mg, 0.39 mmol), Hunigove baze (0.17 g, 1.30 mmol) i HATU (127 mg, 0.32 mmol) u DMF (2.6 mL) se meša na rt u toku noći. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između vode i EtOAc. Organski sloj se izdvoji, a vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni (0-10% MeOH/DCM) da se dobije željeni produkt kao bela pena (220 mg, 100% prinos). LC-ES/MS (m/z) 840 [M+1].
Niže izrade 35 - 41 se u suštini izrađuju na način sličan za Izradu 29.
Izrada 35
[0126]
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(tetrahidropiran-4-ilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
Izrađen korišćenjem 4-izocijanatotetrahidropirana, 52% prinos, MS (m/z) 824 [M-1]
Izrada 36
[0127]
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(8-acetil-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat
Izrađen korišćenjem acetil hlorida, 83% prinos, MS (m/z) 741 [M+1]
Izrada 37
[0128]
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(2-metoksietilsulfonil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
Izrađen korišćenjem 2-metoksietansulfonil hlorida, 64% prinos, MS (m/z) 820 [M-1]
Izrada 38
[0129]
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(2-metoksietilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
Izrađen korišćenjem 1-izocijanat-2-metoksi-etana, 95% prinos, MS (m/z) 800 [M+1]
Izrada 39
[0130]
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(4-metoksibutilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
Izrađen korišćenjem 1-izocijanat-4-metoksi-butana, 90% prinos, MS (m/z) 827 [M-1]
Izrada 40
[0131]
1
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[bis(2-metoksietil)karbamoil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat
Izrađen korišćenjem N,N-bis(2-metoksietil)karbamoil hlorida, 54% prinos, MS (m/z) 857 [M-1]
[0132] Izrada 41
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(2-metilpropanoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
2
Izrađen korišćenjem 2-metilpropanoil hlorida, 100 % prinos, MS (m/z) 767 [M-1]
Izrada 42
terc-butil 4-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat
[0133]
[0134] U mikrotalasnu reaktivnu posudu zapremine 20mL se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(hlormetil)benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat (1.85 g, 2.97 mmol), terc-butil 3,3- dimetilpiperazin-1-karboksilat (0.91 g, 4.16 mmol) i DIPEA (2.07 mL, 11.9 mmol) u 15 mL ACN. Dobijena žuta suspenzija se zagreva u BIOTAGE® inicijalnom mikrotalasnom sintesajzeru 4 h na 110 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom i ostatak se podeli između 5% vodenog rastvora NaHCO3(150 mL) i DCM (50 mL). Organski sloj se izdvoji, a vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu, eluira sa gradijentom 0-100% smeše 9:1 DCM/aceton u heksanu, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca (1.63 g, 69% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.04 (s, 6H), 1.38 (s, 9H), 1.81-1.74 (m, 4H), 2.28 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 2.70 (br s, 4H), 2.91 (s, 4H), 3.13 (s, 2H), 3.26 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 7.31 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.44-7.39 (m, 2H), 7.55-7.46 (m, 2H), 7.75 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.87 (m, 3H), 9.99 (s, 1H), 11.49 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 801 [M+1].
Izrada 43
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorid
[0135]
[0136] Rastvor terc-butil 4-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilata (1.13 g, 1.41 mmol) u DCM (14.1 mL) se meša na RT i pomoću šprica se doda 4 N rastvor HCl u dioksanu (3.5 mL, 14.1 mmol). Po završenom dodavanju, reakcija se meša na RT u toku noći i koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom. Čvrsta supstanca se triturira sa smešom DCM/Et2O, dobijeni precipitat se sakupi filtriranjem pod vakuumom i filter pogača se suši u vakuumskoj pećnici na 50°C da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (0.93 g, 1.20 mmol, 85% prinos). LC-ES/MS (m/z) 701 [M+1].
Izrada 44
4
metil 4-[2-[4-[[2-(terc-butoksikarbonilamino)benzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat
[0137]
[0138] U bocu okruglog dna se sipa 2-(terc-butoksikarbonilamino)benzotiofen-3-karboksilna kiselina (2.60 g, 8.87 mmol), metil 4-[2-(4-amino-2,6-difluoro-fenil)etil]-benzoat (2.35 g, 8.07 mmol) i 30 mL CH2Cl2. Dobijena suspenzija se ohladi u kupatilu sa vodom i ledom i u kapima se doda DIPEA (5.63 mL, 32.3 mmol) da se dobije žuto-braon zamućeni rastvor. U malim porcijama se u toku 30 min na 0 °C doda čvrsti bis-(2-okso-3-oksazolidinil)fosfinat hlorid (2.57 g, 10.1 mmol). Reaktivna smeša se nakon toga zagreje na RT i meša 48 h. Dodaju se još čvrsta 2-(terc-butoksikarbonilamino)benzotiofen-3-karboksilna kiselina (1.3 g, 4.43 mmol) a nakon toga još DIPEA (2.8 mL) i čvrsti bis-(2-okso-3-oksazolidinil)fosfinat hlorid (1.3 g, 5.1 mmol) u malim porcijama u toku 5 min. Dobijena zamućena braon reaktivna smeša se meša 12 h na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa 40 mL metilen hlorida i nakon toga ispere sa 5% vodenim rastvorom limunske kiseline (150 mL) i slanim rastvorom (2 x 25 mL).
Organski sloj se izdvoji i suši preko anhidrovanog Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijena braon penaasta čvrsta supstanca se prečisti flesh hromatografijom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.2 g, 48% prinos). LC-ES/MS (m/z) 565 [M-1].
Izrada 45
metil 4-[2-[4-[(2-aminobenzotiofen-3-karbonil)amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat hidrohlorid
[0139]
[0140] U bocu okruglog dna se sipa metil 4-[2-[4-[[2-(terc-butoksikarbonilamino)-benzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat (2.2 g, 3.9 mmol) u 30 mL CH2Cl2. U kapima se doda 4N rastvor HCl u dioksanu (9.7 mL, 39 mmol). Dobijena smeša se ostavi da stoji 12 h na r.t.. Svetlo žuta suspenzija se koncentruje do sušenja pod vakuumom da se dobije 2.0 g (100%) naslovljenog jedinjenja. LC-ES/MS (m/z) 467 [M+1].
Izrada 46
metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(hlormetil)benzoil]amino]benzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat
[0141]
[0142] U bocu okruglog dna se sipa metil 4-[2-[4-[(2-aminobenzotiofen-3-karbonil)amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat hidrohlorid (2 g, 3.976 mmol) u 24 mL CH2Cl2. Dobijena suspenzija se ohladi na 0 °C u ledenom kupatilu. U kapima se doda piridin (0.804 mL, 9.940 mmol). U dobijenu žutu suspenziju se u kapima u toku 5 min dodaje rastvor 3-(hlormetil)-benzoil hlorida (0.622 mL, 4.374 mmol) u 6 mL CH2Cl2da se dobije tamno žuti rastvor koji se ostavi da se zagreje na r.t. u toku 1 h. Reaktivna smeša se razblaži sa 75mL 10% aq NaHCO3. Vodeni sloj se ispere sa CH2Cl2(2 x 25mL). Kombinovani organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se triturira koristeći 20 mL EtOH. Dobijena žitka masa se meša 30 min na r.t. i nakon toga filtrira da se dobije 2.2 g (89%) naslovljenog jedinjenja kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LC-ES/MS (m/z) 617 [M-1].
Izrada 47
metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]benzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat
[0143]
[0144] U mikrotalasnu bocu se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-(hlormetil)benzoil]amino]benzotiofen-3-car- bonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat (0.98 g, 1.6 mmol), N-(4-hidroksibutil)-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksamid; hidrohlorid (0.59 g, 2.2 mmol) i rastvor DIPEA (1.1 mL, 6.3 mmol) u 12 mL CH3CN. Reaktivna smeša se zagreva 4 h na 110 °C u mikrotalasnoj pećnici. Dobijeni žuti rastvor se ohladi na r.t. i koncentruje do sušenja pod vakuumom. Ostatak se podeli između 25 mL CH2Cl2i 75 mL 5% vodenog rastvora NaHCO3. Organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši preko anhidrovanog Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom.1.3 g (100%) naslovljenog jedinjenja se dobija kao žuta penasta čvrsta supstanca. LC-ES/MS (m/z) 812 [M+1].
Primer 1
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina
[0145]
[0146] U scintilacionu bočicu zapremine 30 mL se sipaju metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat (196 mg, 0.24 mmol), litijum hidroksid monohidrid (17.2 mg, 0.72 mmol), THF (4 mL), MeOH (2 mL) i H2O (2 mL). Dobijena suspenzija se meša 12 h na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa 4 mL H2O i koncentruje pod sniženim pritiskom do približno 1⁄2 zapremine. U kapima se doda vodeni 1 N rastvor HCl da se dobije gusta beličasta suspenzija koja se upari do sušenja pod vakuumom. Dobijeni ostatak se prečisti reverzno faznom hromatografijom preko C-18 silika gela, eluira sa gradijentom 0-100% smeše 5% NH4HCO3u H2O/ACN, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo žuta čvrsta supstanca (82.5mg, 41% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.05 (s, 6H) 1.37-1.42 (m, 4H), 1.74-1.85 (m, 4H), 2.25-2.30 (m, 2H), 2.64-2.76 (m, 4H), 2.91 (s, 4H), 2.96-3.02 (m, 2H), 3.12-3.15 (m, 2H), 3.17-3.25 (m, 2H), 3.35-3.40 (m, 2H), 3.51 (s, 2H), 4.36 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 6.36 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.45-7.55 (m, 4H), 7.74-7.79 (m, 1H), 7.84-7.87 (m, 4H), 10.01 (s, 1H), 11.45 (s, 1H), 12.82 (br s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 802 [M+1].
[0147] Čvrsta praškasta disperzija osušena raspršivanjem 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline se izradi kao amorfni produkt koji sadrži 30% dinatrijumovu so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline / 70% PVP-VA (Polivinilpirolidon-vinil acetat). Svi materijali su testirani hromatografijom na bazi jonskih izmenjivača i pokazali su da su konzistentni sa datom stehiometrijom. Hromatografija na bazi jonskih izmenjivača sa detekcijom evaporativnog rasipanja svetlosti (ELSD) se koristi da se kvantifikuje vrednost natrijuma u aktivnom farmaceutskom sastojku (API) 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7- tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline i formulaciji čvrste disperzije ovog aktivnog farmaceutskog sastojka. Hromatografija na bazi jonskih izmenjivača (HPLC) se izvodi po sledećim uslovima: ELSD: 60°C, količina: 2.0mL/minut, azot: 1.4L/min, Kolona Temp: 30°C, Kolona: PHENOMENEX® LUNA® 5µm SCX 100A (15cmx4.6mm, 5um), zapremina injektiranja: 50uL, mobilna faza A: 0.1M amonijum format pufer, pH 4.5, mobilna faza B: 100% ACN, vreme protoka: 4 minuta.
[0148] Promena odnosa dinatrijumove soli 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline, se izvodi stavljanjem 126 mg 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline, slobodne baze, u 5 mL acetona na 60°C uz mešanje na 1000 rpm, da se dobije žitka masa bele čvrste supstance. Doda se 18 mL natrijum hidroksida (2.17 ekvivalentata). Uzorak prelazi u žuto i mikroskopija polarizovanog svetla pokazuje semi-amorfnu čvrstu supstancu. Žuta čvrsta supstanca se izdvoji vakuumskom filtracijom, da se dobije pogača jarko žutog materijala. Obnovljeno je 102 mg. Difrakcija X-zraka praška (XRD) pokazuje čvrstu supstancu slabe kristalne rešetke.
[0149] Čvrsta supstanca dinatrijumove soli 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline, se formuliše kao 30% dinatrijum 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina / 70% PVP-VA. Promena odnosa disperzije čvrste supstance sušene raspršivanjem koja sadrži 30% leka 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksi-butilkarbamoil)-2,2-dimetilpiperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline se vrši unošenjem 1040.5 mg 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline, slobodne baze i 2426.7 mg PVP-VA u 50 mL metanola. Materijal mešanjem prelazi u belu žitku masu. U žitku masu se doda 0.519 mL 5N natrijum hidroksida (2.0 mol ekvivalentata) i sonikuje u kupatilu sve dok se ne formira bistar žuti rastvor. Rastvor se polako pumpa u sprej sušač sa strujom toplog azota što za rezultat ima da se sakupi praškasta čvrsta supstanca i dalje suši u vakuumskoj pećnici na 50°C pod vakuumom u toku noći do sušenja. Uslovi za sušenje raspršivanjem su sledeći:
[0150] Uočeno je mikroskopski da obnovljeni materijal osušen raspršivanjem nema dve različite refraktivne indicije čestica čiji je promer približno 2.5mm.
[0151] Uočene vrednosti natrijuma u aktivnom farmaceutskom sastojku i aktivnom farmacetskom sastojku formulacije čvrste disperzije su niže date:
Primer 2
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(3-hidroksipropil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina
[0152]
[0153] U rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorida (214.6 mg, 0.28 mmol), DIPEA (0.097 mL, 0.55 mmol) u DCM (4 mL) dodaju se 3-[(tercbutildimetilsilil)oksi]-1-propanal (55 mg, 0.28 mmol) i AcOH (25 mL). Dobijeni rastvor se ostavi da se meša 30 min na RT. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (0.12 g, 0.55 mmol) u jednoj porciji. Smeša se meša 12 h na RT, razblaži sa 10% vodenim rastvorom NaHCO3(75mL) i DCM (25mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Organski ekstrakti se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se rastvori u DCM (3 mL) i doda se 4 M rastvor HCl u 1,4-dioksanu. Dobijeni rastvor se meša 24 h na RT. Organski rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom da se dobije žuta čvrsta
1
supstanca. Materijal se rastvori u MeOH (2 mL) i doda se LiOH (0.36 g, 1.4 mmol). Dobijena smeša se meša 16 h na RT, razblaži sa H2O (4 mL) i koncentruje pod sniženim pritiskom do ca. 50% zapremine. Doda se vodeni 1 N rastvor HCl (5 mL) i smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa gradijentom 15-20% smeše 0.1% mravlja kiselina/CH3CN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 5 minuta, nakon toga gradijent 20-50% smeše 0.1% mravlja kiselina/CH3CN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 20 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao mono so mravlje kiseline (73 mg, 33% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6): δ 1.10 (s, 6H), 1.55 (quintet, J= 6.7 Hz, 2H), 1.85-1.69 (m, 4H), 2.41-2.09 (m, 8H), 2.81-2.61 (m, 4H), 2.91 (s, 4H), 3.65-3.36 (m, 4H), 7.29 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.57-7.36 (m, 4H), 7.75-7.72 (m, 1H), 7.94-7.80 (m, 3H), 8.15 (s, 1H), 11.1-9.1 (br, 3H). LC-ES/MS (m/z) 745 [M+1].
Primer 3
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[bis(2-metoksietil)sulfamoil]-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoeva kiselina
[0154]
[0155] Rastvor metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[bis(2-metoksietil)sulfamoil]-2,2-dimetil-piperazin-1-
2
il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoata (148.4 mg, 0.17 mmol) i LiOH (0.016 g, 0.66 mmol) u 2:1:1 smeši THF:MeOH:H2O (6 mL) se meša 12h na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa H2O (2 mL), koncentruje pod sniženim pritiskom to ~ 1/3 zapremine i doda se 1 N rastvor HCl (4 mL). Smeša se nakon toga koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa gradijentom 15-20% smeše 0.1% mravlja kiselina/CH3CN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 5 minuta, nakon toga gradijent 20-50% smeše 0.1% mravlja kiselina/CH3CN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 20 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca (99.0 mg, 67.8% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.13 (s, 6H), 1.87-1.70 (m, 4H), 2.44-2.36 (m, 2H), 2.76-2.64 (m, 4H), 3.02-2.91 (m, 8H), 3.24 (s, 6H), 3.36-3.31 (m, 4H), 3.44 (t, J= 5.8 Hz, 4H), 3.54-3.49 (br s, 2H), 7.30 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.59-7.39 (m, 4H), 7.75 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.90-7.81 (m, 3H), 10.01 (s, 1H), 11.47 (s, 1H), 12.83 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 883 [M+1].
Primer 4
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(3-karboksipropil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina
[0156]
[0157] Smeša metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-metoksi-4-okso-butil)-2,2-dimetilpiperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzo-tiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata (120.8 mg, 0.14 mmol) i LiOH (0.017 g, 0.71 mmol) u 2:1:1 smeši THF:MeOH:H2O (4 mL) se meša 12 h na RT. Dobijeni rastvor se razblaži sa H2O (2 mL) i nakon toga koncentruje to ~1/3 zapremine pod sniženim pritiskom. Doda se vodeni 1 N rastvor HCl (4 mL) i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C18 silika gelu, eluira sa gradijentom 15-20% smeše 0.1% mravlja kiselina/CH3CN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 5 minuta, nakon toga gradijent 20-50% smeše 0.1% mravlja kiselina/CH3CN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 20 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca (72.5 mg, 62.3% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.11 (s, 6H), 1.68-1.55 (m, 2H), 1.88-1.69 (m, 4H), 2.40-2.03 (m, 10H), 2.79-2.61 (m, 4H), 2.91 (s, 4H), 3.70-3.40 (m, 2H), 7.29 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.58-7.36 (m, 4H), 7.79-7.69 (m, 1H), 7.92-7.79 (m, 3H), 10.00 (br s, 1H), 11.45 (br s, 1H), 12.54 (br, 2H). LC-ES/MS (m/z) 773 [M+1].
Primer 5
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(3-metoksipropil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, so mravlje kiseline
[0158]
[0159] Smeša metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(3-metoksipropil)-2,2-dimetil-piperazin-
4
1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata (22.7 mg, 0.029 mmol) i Li-OH (7 mg, 0.3 mmol) u smeši 2:1:1 THF:MeOH:H2O (4 mL) se meša 16 h na RT. Dobijena smeša se razblaži sa H2O (3 mL) i koncentruje to ~1/2 zapremine pod sniženim pritiskom. Doda se vodeni 1 N rastvor HCl (5 mL) i rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa gradijentom 15-70% u toku 10 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca (16.2 mg, 68.3% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.11 (s, 6H), 1.68-1.55 (m, 2H), 1.88-1.69 (m, 4H), 2.43-2.07 (m, 6H), 2.79-2.62 (m, 4H), 2.91 (s, 4H), 3.20 (s, 3H), 3.62-3.23 (m,6H), 7.29 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.58-7.36 (m, 4H), 7.79-7.68 (m, 1H), 7.85 (d, J= 8.2 Hz, 3H), 8.14 (s, 1H), 10.00 (br s, 1H), 11.45 (br s, 1H), 13.14-12.45(br, 1H). LC-ES/MS (m/z) 759 [M+1].
Primer 6
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-aminoacetil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina
[0160]
[0161] Mikrotalasna reaktivna bočica zapremine 25 mL se napuni sa metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[2-(terc-butoksikarbonilamino)acetil]-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoatom (0.451 g, 0.53 mmol), THF (12 mL), MeOH (8 mL) i 1 N rastvorom LiOH u THF (2.5 mL, 2.5 mmol). Smeša se zagreva 30 min u mikrotalasnoj pećnici na 100 °C. U ovu smešu se doda 1 N vodeni rastvor HCl (2.5 mL) i dobijena smeša se meša u atmosferi azota da isparljive supstance ispare. Dobijeni masni ostatak se rastvori u EtOAc (25 mL), razblaži sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (10 mL) i slojevi se razdvoje. Organski sloj se suši preko MgSO4, filtrira i filter pogača ispere sa rastvaračem. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije sirovo naslovljeno jedinjenje (0.431 g) kao svetlo žuti prašak. U bocu okruglog dna se dodaju sirovo naslovljeno jedinjenje (0.422 g, 0.56 mmol), DCM (25 mL) i 4 N rastvor HCl u dioksanu (1.25 mL, 5 mmol). Smeša se razblaži sa THF (10 mL) i meša na RT u atmosferi azota 24 h, nakon toga 4 h na 50 °C. Tada se doda nova porcija 4 N rastvora HCl u dioksanu (1.25 mL, 5 mmol). Zagrevanje se nastavi 2 h i smeša se ohladi na RT. Dobijena žitka masa se razblaži sa heksanima (50 mL) i filtrira da se sakupi sirovi produkt (364 mg). Sirovi materijal se rastvori u smeši MeOH/DMSO i prečisti reverzno faznom HPLC na Waters XBRIDGE® 30 x 75 mm 5 µm C-18 OBD koloni, eluira sa gradijentom 27-50% smeše 10 mM vodeni rastvor amonijum bikarbonat/ACN u MeOH pri 85 mL/min u toku 6 min uz praćenje na 205 i 237 nm. Odgovarajuće frakcije se koncentruju do sušenja pod sniženim pritiskom i suše 18 h na 40 °C da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.16 g, 43% prinos).<1>H NMR (400.13 MHz, DMSO) δ 7.93 (s, 1H), 7.88-7.79 (m, 3H), 7.46 (t, J= 6.3 Hz, 1H), 7.42-7.36 (m, 3H), 7.31-7.28 (m, 2H), 4.00-3.97 (m, 30H, široko, izmenljivi protoni), 2.89-2.86 (m, 4H), 2.86-2.78 (m, 3H), 2.58-2.54 (m, 2H), 2.51-2.50 (m, 18H, DMSO), 2.44-2.41 (m, 3H), 1.76-1.72 (m, 4H), 1.06 (d, J = 12.3 Hz, 6H). LC-ES/MS (m/z) 744 [M+1].
Primer 7
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-metoksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina
[0162]
[0163] Rastvor metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-metoksibutilkarbamoil)-2,2-dimetilpiperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata (93 mg, 0.11 mmol) u 3:2:1 smeši THF:MeOH:voda (3 mL) se meša na RT i u jednoj porciji se doda LiOH (14 mg, 0.56 mmol). Dobijena reaktivna smeša se meša 6 sati na RT i koncentruje pod vakuumom. Dobijeni ostatak se prečisti reverzno faznom hromatografijom na PHENOMENEX® GEMINI-NX® C-18 koloni, eluira sa gradijentom 23-57% smeše 5% MeOH u 10mM vodenom rastvoru amonijum bikarbonata (pH ~ 10) i ACN u toku 7 min, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao svetlo žuta penasta čvrsta supstanca (83 mg, 91%).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.03 (s, 6H), 1.38-1.43 (m, 4H), 1.72-1.76 (m, 4H), 2.22-2.28 (m, 2H), 2.60-2.67 (m, 2H), 2.67-2.75 (m, 2H), 2.88 (s, 4H), 2.95-3.02 (m, 2H), 3.095 (s, 2H), 3.18 (s, 3H); 3.15-3.22 (m, 2H), 3.23-3.28 (m, 2H), 3.49 (s, 2H), 6.34 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.35-7.42 (m, 2H), 7.40-7.48 (m, 1H), ), 7.47-7.52 (m, 1H), 7.72-7.77 (m, 1H), 7.81-7.88 (m, 3H), 10.01 (br s, 1H), 11.49 (br s, 1H), 12.75 (br s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 816 [M+1].
Primer 8
4-[4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-karbamoilfenil)etil]-3,5-difluoro-fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-il]-4-okso-buterna kiselina
[0165] DIPEA (0.1 mL, 0.55 mmol) se doda u rastvor N-[4-[2-(4-karbamoilfenil)etil]-3,5-difluoro-fenil]-2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karboksamid dihidrohlorida (92.0 mg, 0.11 mmol) u DCM (4mL) a nakon toga se odjednom doda sav sukcinski anhidrid (160 mg, 1.65 mmol). Dobijeni rastvor se meša 20 min na RT, doda se još sukcinskog anhidrida (53.4 mg, 0.05 mmol) i dobijena smeša se meša dodatnih 20 min. Reaktivna smeša se neutrališe dodavanjem MeOH (0.5 mL), isparive supstance se uklone pod vakuumom i dobijeni žuti masni ostatak se prečisti reverzno faznom hromatografijom na PHENOMENEX® GEMINI-NX® C-18 koloni, eluira sa gradijentom 20-70% smeše 5% MeOH u 10mM vodenom rastvoru bikarbonata (pH ~ 10) i ACN u toku 6 min, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao svetlo žuta čvrsta supstanca (50.9 mg, 61% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.03 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.62-1.89 (m, 4H), 2.28 (m, 1H), 2.30 (m, 1H), 2.40-2.47 (m, 2H), 2.58-2.81 (br m, 4H), 2.88 (s, 4H), 3.27 (s, 2H), 3.30 (m, 2H, delimično preklapanje with residual voda peak), 3.38 (br s, 2H), 3.54 (s, 2H), 7.19-7.31 (m, 3H), 7.31-7.59 (m, 3H), 7.78 (d, J= 8.1 Hz, 3H), 7.92-7.85 (m, 2H), 8.36 (br s, 1H), 8.56 (br s, 1H), 9.99 (br s, 1H), 11.51 (br s, 1H), 11.93 (br s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 786 [M+1].
Primer 9
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[(2,2,4-trimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina so mravlje kiseline
[0166]
[0167] Rastvor metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[(2,2,4-trimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata (167 mg, 0.233 mmol) i litijum hidroksida (22 mg, 0.93 mmol) u 2:1:1 smeši THF:MeOH:H2O (6 mL) se meša 12 h na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (2 mL), koncentruje pod sniženim pritiskom do ~ 1/3 zapremine i doda se 1 N rastvor HCl (3 mL). Smeša se nakon toga koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa gradijentom 15-20% smeše 0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 5 minuta, nakon toga sa gradijentom 20-50% smeše 0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 20 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao žuta čvrsta supstanca (122 mg, 68% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6): δ 1.11 (s, 6H), 1.89-1.67 (m, 4H), 2.15 (s, 3H), 2.41-2.30 (m, 4H), 2.70 (m, 4H), 2.91 (s, 4H), 4.10-3.10 (br, 4H), 7.29 (m, 2H), 7.57-7.36 (m, 4H), 7.75 (m, 1H), 7.90-7.81 (m, 3H), 8.15 (s, 1H), 10.8-9.7 (br, 1H), 12.9-11.1(br, 1H). LC- ES/MS (m/z) 701 [M+1].
Primer 10
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-dimetil-4-(metilkarbamoil)piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina
[0169] U scintilacionu bočicu zapremine 20 mL se doda metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorid (145 mg, 0.187 mmol) i rastvor TEA (0.13 mL, 0.94 mmol) u DCM (2 mL). Dobijena suspenzija se meša dok se ne izbistri. U kapima se doda rastvor N-metilkarbamoil hlorida (21 mg, 0.22 mmol) u 1 mL DCM. Dobijeni rastvor se ostavi da se meša 15 min na rt. Reaktivna smeša se razblaži sa 5% vodenim rastvorom NaHCO3(75mL) i DCM (25mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Organski ekstrakti se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom.
Dobijeni sirovi materijal i litijum hidroksid (23 mg, 0.94 mmol) se suspenduju u 2:1:1 smeši THF:MeOH:H2O (4 mL) i mešaju 12 h na rt. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (3 mL), koncentruje pod sniženim pritiskom do ~ 1/3 zapremine i doda se 1 N rastvor HCl (4 mL). Smeša se nakon toga koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa gradijentom 10-15% smeše 0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 5 minuta, nakon toga sa gradijentom 15-50% smeše 0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 20 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo žuta čvrsta supstanca (108 mg, 77% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6): δ 1.06 (s, 6H), 1.88-1.65 (m, 4H), 2.27 (s, 2H), 2.55 (d, J= 4.3 Hz, 3H), 2.70 (m, 4H), 2.91 (s, 4H), 3.10 (s, 2H), 3.25-3.15 (m, 2H), 3.51 (s, 2H), 6.33 (m, 1H), 7.34-7.24 (m, 2H), 7.59-7.37 (m, 4H), 7.83-7.79 (m, 1H), 7.93-7.80 (m, 3H), 10.02 (br s, 1H), 11.46 (br s, 1H), 12.79 (br s, 1H). LCES/MS (m/z) 744 [M+1].
Primer 11
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-dimetil-4-(metilkarbamotionil)piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina
[0170]
[0171] U scintilacionu bočicu zapremine 20 mL se sipaju metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(2,2-dimetilpiperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat dihidrohlorid (165 mg, 0.212 mmol) i rastvor TEA (0.15 mL, 1.1 mmol) u DCM (3 mL). Dobijena suspenzija se meša dok se ne izbistri. Rastvor metil izotiocijanata (18 mg, 0.24 mmol) u 1 mL DCM se doda u kapima. Dobijeni rastvor se ostavi da se meša 15 min na rt. Reaktivna smeša se razblaži sa 5% vodenim rastvorom NaHCO3(75mL) i DCM (25mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 x 25 mL). Organski ekstrakti se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (25 mL), suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi materijal i litijum hidroksid (26 mg, 1.1 mmol) se suspenduju u 2:1:1 smeši THF:MeOH:H2O (4 mL) i mešaju 12 h na rt. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (3 mL), koncentruje pod sniženim pritiskom do ~ 1/3 zapremine i doda se 1 N rastvor HCl (4 mL). Smeša se nakon toga koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa gradijentom 15-20% smeše 0.1% mravlja
1
kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 5 minuta, nakon toga sa gradijentom 20-60% smeše 0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 20 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (73 mg, 45% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6): δ 1.06 (s, 6H), 1.89-1.68 (m, 4H), 2.34 (m, 2H), 2.77-2.61 (m, 4H), 2.99-2.82 (m, 7H), 3.52 (s, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.71 (br s, 2H), 7.35-7.22 (m, 2H), 7.53-7.35 (m, 3H), 7.68-7.53 (m, 2H), 7.80-7.68 (m, 1H), 7.94-7.80 (m, 3H), 10.02 (br s, 1H), 11.47 (br s, 1H), 12.79 (br s, 1H),. LC-ES/MS (m/z) 760 [M+1].
Primer 12
4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-karboksietilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina
[0172]
[0173] Rastvor metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-[(3-metoksi-3-oksopropil)karbamoil]-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata (80 mg, 0.097 mmol) i litijum hidroksida (12 mg, 0.49 mmol) u 2:1:1 smeši THF:MeOH:H2O (6 mL) se meša 12 h na rt. Reaktivna smeša se razblaži sa H2O (3 mL), koncentruje pod sniženim pritiskom do ~ 1/3 zapremine i doda se 1 N rastvor HCl (2 mL). Smeša se nakon toga koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa gradijentom 10-15% smeše
2
0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 1 minuta, nakon toga sa gradijentom 15-50% smeše 0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 20 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (53 mg, 68% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6): δ 1.05 (s, 6H), 1.88-1.66 (m, 4H), 2.31- 2.20 (m, 2H), 2.42-2.31 (m, 2H), 2.79-2.60 (m, 4H), 2.91 (s, 4H), 3.11 (m, 2H), 3.27-3.15 (m, 4H), 3.51 (s, 2H), 6.48 (m, 1H), 7.35-7.23 (m, 2H), 7.60-7.36 (m, 4H), 7.80-7.68 (m, 1H), 7.94-7.80 (m, 3H), 10.02 (br s, 1H), 11.46 (br s, 1H), 12.78-12.15 (br, 1H). LC-ES/MS (m/z) 802 [M+1].
Primer 13
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(metilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]benzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, so mravlje kiseline
[0174]
[0175] Rastvor metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(metilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]benzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoata (100 mg, 0.13 mmol) i litijum hidroksida
(15 mg, 0.63 mmol) u 2:1:1 smeši THF:MeOH:H2O (4 mL) se meša 12 h na rt. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (3 mL), koncentruje pod sniženim pritiskom do ~ 1/3 zapremine i doda se 1 N rastvor HCl (3 mL). Smeša se nakon toga koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na C-18 silika gelu, eluira sa 10% smeše 0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 5 minuta, nakon toga sa gradijentom 10-65% smeše 0.1% mravlja kiselina/ACN u 0.1% mravlja kiselina/H2O u toku 15 minuta, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo žućkasta čvrsta supstanca (67 mg, 67% prinos).<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6): δ 1.77-1.57 (m, 2H), 1.97-1.79 (m, 2H), 2.19 (d, J= 10.2 Hz, 2H), 2.52 (preklapanja sa rezidualnom dmso rezonancom, 2H), 2.56 (m, 3H), 2.94 (s, 4H), 3.53 (s, 2H), 4.13 (br s, 2H), 6.37 (m, 1H), 7.65-7.25 (m, 8H), 8.08-7.78 (m, 6H), 8.14 (s, 1H), 10.63 (s, 1H), 11.93 (s, 1H), 12.79 (br s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 738 [M+1].
Primer 14
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[(4-metoksikarbonil-2,2-dimetil-piperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina
[0176]
[0177] U scintilacionu bočicu zapremine 25 mL se sipaju metil 4-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat (152 mg, 0.20 mmol), litijum hidroksid (25 mg, 5 mmol), THF (1.5 mL), MeOH (1.0 mL) i H2O (0.5 mL) i dobijena
4
suspenzija se meša 8 h na RT. Reaktivna smeša se upari, rekonstituiše u DMSO (2 mL) i prečisti na Phenomenex Kinetex EVO C18 koloni koristeći gradijent eluacije (32-67% acetonitril/vodeni rastvor 10mM amonijum bikarbonat pH 10/5% MeOH). Eluent se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (124 mg, 83% prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LC-ES/MS (m/z) 746 [M+1].
Primer 15
4-[2-[4-[[2-[[3-[[2,2-dimetil-4-(metilsulfamoil)piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina
[0178]
[0179] U scintilacionu bočicu zapremine 25 mL se sipaju metil 4-[[3-[[3-[[3,5-difluoro-4-[2-(4-metoksikarbonilfenil)etil]fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-karboksilat (152 mg, 0.20 mmol), litijum hidroksid (25 mg, 5 mmol), THF (1.5 mL), MeOH (1.0 mL) i H2O (0.5 mL) i dobijena suspenzija se meša 8 h na RT. Reaktivna smeša se upari, rekonstituiše u DMSO (2 mL) i prečisti na Phenomenex Kinetex C18 koloni koristeći gradijent eluacije. (32-67% acetonitril/vodeni rastvor 10mM amonijum bikarbonat pH10/5% MeOH). Eluent se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (124 mg, 83% prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LC-ES/MS (m/z) 746 [M+1].
Primer 16
4-(2,6-difluoro-4-(2-(3-(((1R,5S)-8-pentanoil-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)metil)benzamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-3-karboksamido)fenetil)benzoeva kiselina
[0180]
[0181] U scintilacionu bočicu zapremine 60 mL se sipaju metil 4-(2,6-difluoro-4-(2-(3-(((1R,5S)-8-pentanoil-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)metil)benzamido)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b]tiofen-3-karboksamido)fenetil)benzoat (214 mg, 0.27 mmol), litijum hidroksid (33 mg, 6.0 eq., 1.37 mmol), THF (1.5 mL), MeOH (1.0 mL) i H2O (0.5 mL) i dobijena suspenzija se meša 12 h na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa H2O (5 mL) i koncentruje pod vakuumom do ~ 1⁄2 zapremine. pH dobijene smeše se podesi na ~ 5-6 sa 10 % vodenim rastvorom limunske kiseline i dobijena bezbojna suspenzija se podeli između 15 mL vode i 5 mL 4:1 smeše hlorform/izopropanol. Organski sloj se izdvoji, pH vodenog sloja se ponovo podesi na pH ~5 sa 10 % vodenim rastvorom limunske kiseline i smeša se dva puta ekstrahuje sa dodatnom količinom 4:1 smeše hlorform/izopropanol (2 x 15 mL). Organski slojevi se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (114 mg, 54% prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. LC-ES/MS (m/z) 769 [M+1]. Niže dati Primeri 17 – 27 se u suštini izrađuju na način sličan izradi za Primer 16.
Primer 17
[0182]
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(tetrahidropiran-4-ilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina 17% Prinos, MS m/z 812 [M+1]
Primer 18
[0183]
4-[2-[4-[[2-[[3-[(8-acetil-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoat 85% prinos, MS m/z 727 [M+1]
Primer 19
[0184]
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(2-metoksietilsulfonil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat 70% prinos, MS m/z 807 [M+1]
Primer 20
[0185]
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(2-metoksietilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat 28% prinos, MS m/z 786 [M+1]
Primer 21
[0186]
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(4-metoksibutilkarbamoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat 84% prinos, MS m/z 815 [M+1]
Primer 22
4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[bis(2-metoksietil)karbamoil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoat 23% prinos, MS m/z 844 [M+1]
Primer 23
[0188]
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-(2-metilpropanoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoat 62% prinos, MS m/z 755 [M+1]
Primer 24
[0189]
4-[2-[4-[[2-[[3-[[8-[2-(dimetilamino)acetil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoeva kiselina 73% prinos, MS m/z 770 [M+1]
Primer 25
[0190]
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-[1-(metoksimetil)ciklopropankarbonil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-
1
karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina 98% prinos MS m/z 797 [M+1]
Primer 26
[0191]
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[8-[2-(4-metilpiperazin-1-il)acetil]-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina 59% prinos, MS m/z 825 [M+1]
Primer 27
4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-acetil-2,2-dimetil-piperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina
[0192]
2
[0193] Mikrotalasna reaktivna bočica zapremine 25 mL se napuni sa metil 4-[2-[4-[[2-[[3-[(4-acetil-2,2-dimetil-piperazin-1-il)metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoatom (169 mg, 0.227 mmol), tetrahidrofuranom (12 mL, 148 mmol), metanolom (8 mL, 197 mmol) i 1M vodenim rastvorom litijum hidroksida (1.14 mL, 1.14 mmol). Bočica se zatvori i dobijena smeša se meša i zagreva 30 minuta mikrotalasnim zracima na 100 °C. Reaktivna smeša se nakon toga pažljivo tretira sa 1M vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (1.14 mL, 1.14 mmol), da se dobije reaktivna smeša pH ~ 4. Dobijena smeša se koncentruje do sušenja pod vakuumom i produkt se prečisti reverzno faznom hromatografijom sa niskim pH.<1>H NMR (400.1 MHz, DMSO-d6) δ 1.04 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.84-1.72 (m, 4H), 1.97 (bs, 3H), 2.29-2.27 (m, 1H), 2.37-2.33 (m, 1H), 2.75-2.65 (m, 4H), 2.91 (s, 4H), 3.25-3.3.24 (m, 2H), 3.38-3.34 (m, 2H), 3.54 (s, 2H), 7.29 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.45-7.37 (m, 2H), 7.51-7.46 (m, 1H), 7.55 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.76 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.91 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 11.49 (s, 1H), 12.84 (s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 729 [M+1].
Primer 28
4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]benzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina
[0194]
[0195] U rastvor metil 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetilpiperazin-1-il]metil]benzoil]amino]benzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]-etil]benzoata (0.20 g, 0.25 mmol) u 8 mL smeše rastvarača (THF/CH3OH/H2O u 2:1:1 odnosu), se doda LiOH (18 mg, 0.75 mmol). Dobijena smeša se ostavi da stoji 12 h na r.t.. Doda se nova količina LiOH (18 mg, 0.75 mmol). Smeša se ostavi da stoji 48 h na r.t. i razblaži sa 1mL 4N rastvorom HCl u dioksanu. Rastvarač se ukloni pod vakuumom. Sirovi produkt se prečisti flesh hromatografijom da se dobije 120 mg (57%) naslovljenog jedinjenja kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (399.80 MHz, DMSO-d6): d 1.06 (s, 6H), 1.31-1.48 (m, 4H), 2.34 (s, 2H), 2.87-2.97 (m, 4H), 3.07-3.09 (m, 2H), 3.09-3.18 (s, 2H), 3.18-3.28 (m,
2H), 3.38 (delimično preklapanje sa rezidualnim vodenim pikom, 1H), 3.54 (s, 2H), 4.38 (m, 2H), 6.33 (m, 2H), 7.25-7.71 (m, 8H), 7.73-8.08 (m, 6H), 10.64 (s, 1H), 11.99 (s, 1H), 12.8 (br s, 1H). LC-ES/MS (m/z) 798 [M+1].
Inhibicija NaPi-IIb in vitro
[0196] Inhibicija preuzimanja<33>P se meri u humanim i mišjim NaPi-IIb T-REX™-CHO stabilnim ćelijskim linijama. cDNK za NaPi-IIb su klonirane u plazmidu SLC34A2 pcDNK5/TO (humani) i SLC34A2 pcDNK5/TO (mišji) a stabilne ćelijske linije su generisane klonalnom izolacijom i za ljudske i za mišje, tim redom. Mišje i humane stabilne linije se održavaju u kontinuitetu u podlozi sa medijumom za rast (Dulbecco-ov modifikovani Eagle
4
medijum: hranljiva smeša F-12 (3:1), 10% toplotom inaktivirani FBS, 1% penicilin/streptomicin/FUNGIEZONE® (HYCLONE™), 20 mM HEPES, 250 µg/mL higromicin, 5 µg /mL blasticidin). Ćelije se sakupe iz T225 boca za ćelijske kulture (CORNING®) koristeći 0.25% tripsin i prenesu u CYTOSTAR-T™ scintilacione mikroploče sa 96 udubljenja (Amersham Systems) u količini od 40,000 ćelija/udubljenje u 100 µL medijuma za rast plus 100 ng/mL tetraciklina. Ploče sa ćelijama se inkubiraju u toku noći na 37 °C i 5% CO2. Narednog dana, jedinjenja se serijski razblaže koristeći jedan do tri razblaženja u 100% DMSO. Ploče sa ćelijama mogu da ostanu u inkubatoru sve do početka ispitivanja. Ploče sa ćelijama se uklone iz inkubatora i ukloni se medijum. Ćelije se isperu 3 puta sa 200 µL pufera za analizu (137 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 2.8 mM CaCl2, 1.2 mM MgSO4i 14 mM Tris-HCl pufer, pH ~ 7.5), uz uklanjanje pufera između ispiranja. Serijski razblažena jedinjenja u DMSO se dalje razblaže 50 puta u puferu za analizu i 50 µL se doda u CYTOSTAR-T™ ploču za analizu, a odmah zatim se doda 50 µL<33>P rastvora (PERKIN-ELMER®, Walton, MA; 0.05 µCi/50 µL). CYTOSTAR-T™ ploče za analizu se prekriju folijom da se zaštite od svetla i inkubiraju 60 min na RT. Nakon 60 min inkubacije, u ploče za anlizu se doda 100 µL rastvora za zaustavljanje (pufer za analizu 400 µM Phloretin) da se zaustavi preuzimanje<33>P. Odmah nakon dodavanja rastvora za zaustavljanje, ploče se očitavaju na Wallac MICROBETA® Trilux brojaču scintilacije tečnosti i luminometru uz 1 minut brojanja po udubljenju. Svaka ploča se procesuira odvojeno i vremenski se rasporede tako da ne bude odlaganja u brojanju nakon dodavanja rastvora za zaustavljanje. Procenat inhibicije za sve testirane koncentracije (finalne koncentracije analize 100-0.005 µM) se izračunava u odnosu na 1% DMSO (minimalni efekat) i efekat za 100 µM pune efikasnosti inhibitora NaPi-IIb (maksimalni efekat). IC50vrednosti se izračunavaju preko jednačine dobijene iz 4 parametarske logističke krive. Predstavljeni brojevi su izračunate geometrijske sredine sa standardnom devijacijom (SD) kada je n broj izvršenih analiza. Prema tome, Tabela 1 opisuje relativne IC50vrednosti za Primere 1-28 u odnosu na humani NaPi-IIb i mišji NaPi-IIb, tim redom.
Tabela 1. Relativne IC50 (rel IC50) vrednosti za Primere 1-28 u odnosu na in vitro rezultate za humani i mišji NaPi-IIb u T-REX™ Chinese Hamster Ovarian-stabilnim ćelijskim linijama.
Inhibicija NaPi-IIb in vivo
[0197] Za pripremu test uzorka i kontrolni vehikulum, za test uzorak se doda vehikulum, 20% hidroksipropil-betaciklodekstrin (HPBCD) u vodi. Ukoliko je potrebno, izvrši se sonikacija u ultrasoničnoj vodi da se smanje veličine čestica. Ukoliko je neophodno, koristi se politron da razbije bilo kakve vidljive čestice u rastvoru test uzorka. Doda se 1 N rastvor NaOH kao je navedeno u niže datoj Tabeli 2. pH kontrolnog vehikuluma se podesi na 8.0 do 8.5 sa 1 N rastvorom NaOH.
Tabela 2. Količina 1 N NaOH koja se doda za navedeno testirano jedinjenje.
[0198] Izrada radioaktivnog fosfata: pripremi se 16.25 mM rastvor Na2HPO4koristeći kao vehikulum 0.9% rastvor soli. Meša se sve dok se ne formira bistar rastvor. pH se podesi na približno 7.4. Filtrira se kroz sterilnu 0.2 µm polietarsulfonsku membranu. Za konačnu izradu rastvora za doziranje radioaktivnog fosfata, doda se 0.5 µM osnovnog H3<33>PO4po 1 mL Na2HPO4. Dobro se promeša a nakon toga se rastvor pre doziranja filtrira kroz sterilnu 0.2 µm polietarsulfonsku membranu. Sa brojačem scintilacije se meri radioaktivnost svakog uzorka. Ukoliko su DPMi između 100,000 i 150,000 nastavlja se sa doziranjem.
[0199] In-vivo protokol: mužjaci C57B16 miševa starosti približno 8-9 nedelja se dan pre studije 16 sati podvrgnu gladovanju. Podele se u grupe za tretman na osnovu telesne težine na dan studije. Miševima se oralno doziraju ili test jedinjenje, izrađeno kako je prethodno opisano, ili kontrolni vehikulum, u zapremini doze od 10 ml/kg. Petnaest minuta kasnije se oralnom gavažom primeni rastvor sa dozom radioaktivnog fosfata. Petnaest minuta kasnije, uzme se krv iz orbitalne vene. Pripremi se plazma i 50 µM EDTA plazme svakog miša se izmeša sa 10mL scintilacione tečnosti i scintilacionim brojanjem se odredi broj. Efekat test jedinjenja se određuje poređenjem brojeva u plazmi životinja tretiranih test jedinjenjem sa brojevima u plazmi životinja tretiranih kontronim vehikulumom [procenat inhibicije = (broj u plazmi životinja tretiranih test jedinjenjem / broj u plazmi životinja tretiranih vehikulumom) X 100]. Procenat inhibicije se meri 30 min nakon primene jedinjenja ili vehikuluma i 15 min nakon primene obeleženog fosfata. Procenat inhibicije za navedene Primere je pokazan u niže datoj Tabeli 3.
Tabela 3: In vivo rezultati za Primere jedinjenja 4, 6 i 8
[0200] Mogu da se koriste alternativni vehikulumi, na primer, poli-1-vinilpirolidon-ko-vinil acetat (PVP-VA), u različitim koncentracijama. Primer 1 može da se ispita u PVP-VA i za tu studiju se jedinjenje formuliše kako je opisno u izradi čvrste disperzije Primera 1, a nakon toga rastvaranjem u vodi i doziranjem oralnom gavažom. Kontrolni vehikulum je voda sa različitim koncentracijama PVP-VA, izjednačavajući ih sa nađenom koncentracijom u najvećoj dozi Primera 1, najmanjoj dozi Primera 1 i srednjoj dozi Primera 1. Nije uočen efekat promene PVP-VA na preuzimanje radioobeleženog fosfata nakon više studija i prema tome svi vehikulumi su uprosečeni za izračunavanje procenta inhibicije.
Tabela 4: In vivo rezultati za Primer 1 u PVP-VA formulaciji
[0201] Efekat test jedinjenja na pražnjenje želuca može da se ispita doziranjem jedinjenja i radioobeleženog fosfata na sličan način kako je korišćeno za ispitivanje sposobnosti jedinjenja da inhibira NaPi-IIb in vivo. Nakon uzimanja krvi miševima, miševi se žrtvuju i uzmu im se želuci. Uzeti želuci se digestiraju u 10 mL 1N NaOH u toku noći a oslobođeni radioobeleženi fosfat DPMa se određuje scintilacionim brojanjem. Efekat uticaja jedinjenja na brzinu pražnjenja želuca se određuje poređenjem dpms u želucu životinja tretiranih sa jedinjenjem sa dpms životinja tretiranih sa vehikulumom.
[0202] Jedinjenja iz pronalaska, na primer Primer 1, pokazuje dobre farmakološke osobine, kao što su potencija, distribucija in vivo, efikasnost in vivo i izuzetno mala toksičnost u prekliničkom ispitivanju. Na primer, Primer 1 pokazuje iznenađujuće dobru marginu inhibicije NaPi-IIb u odnosu na inhibiciju pražnjenja želuca in vivo. Pored toga, Primer 1 se generalno dobro toleriše kada se primeni in vivo na normalne pacove u periodu od četiri dana i pokazuje izuzetno malu toksičnost u ovom eksperimentu in vivo.

Claims (18)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule:
    naznačeno time što je Y kondenzovani cikloheksan prsten ili kondenzovani fenil prsten, pri čemu je A
    gde ukrštene linije pokazuju veze za tačku vezivanja za jezgro Formule II a isprekidane linije pokazuju veze za tačke vezivanja za R<2>, gde je R<2>izabran iz grupe koja se sastoji od -CH3, -(CH2)3OH, -(CH2)3OCH3, -(CH2)3CO2H, -COOCH3, -COCH3, -CO(CH2)3CH3, -COCH(CH3)2, -CO(CH2)2CO2H, -COCH2NH2, -COCH2N(CH3)2, -SO2N[(CH2)2OCH3]2, -SO2NHCH3, -SO2(CH2)2OCH3, -CONH(CH2)4OH, -CONH(CH2)4OCH3, -CONHCH3, -CONH(CH2)2CO2H, -CONH(CH2)2OCH3, -CON(CH2CH2OCH3)2, -CSNHCH3,
    gde isprekidane linije predstavljaju tačku vezivanja, pri čemu je R’ -CO2H ili -CONH2grupa, ili njegova farmaceutski prihvatljivu so.
  2. 2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je Y kondenzovani cikloheksan prsten, A je
    i R’ je -CO2H grupa, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  3. 3. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, koje ima formulu:
    naznačeno time što je R<2>izabran iz grupe koja se sastoji od -(CH2)3OH, -(CH2)3OCH3, -(CH2)3CO2H, -CONH(CH2)4OH, -COCH2NH2, -SO2N[(CH2)2OCH3]2, -CONH(CH2)4OCH3i 1 1 -CO(CH2)2CO2H, gde je R’ -CO2H ili -CONH2grupa, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  4. 4. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je R’ je -CO2H grupa, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  5. 5. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je to 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil- piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, koja može strukturno da se predstavi kao:
    ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
  6. 6. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 5, naznačeno time što je to dinatrijumova so 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-hidroksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil-piperazin- 1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeve kiseline.
  7. 7. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je to 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(3-hidroksipropil)-2,2-dimetil-piperazin- 1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, koja može strukturno da se predstavi kao: 1 2
    ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
  8. 8. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je to 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-[bis(2-metoksietil)sulfamoil]-2,2-dimetil-piperazin- 1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluorofenil]etil]benzoeva kiselina, koja može strukturno da se predstavi kao:
    ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
  9. 9. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je to 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(3-karboksipropil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina, 1 koja može strukturno da se predstavi kao:
    ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
  10. 10. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je to 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(3-metoksipropil)-2,2-dimetil-piperazin- 1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, koja može strukturno da se predstavi kao:
    ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
  11. 11. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je to 4-[2-[4-[[2-[[3-[[4-(2-aminoacetil)-2,2-dimetil-piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]- 1 4 4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]-2,6-difluoro-fenil]etil]benzoeva kiselina, koja može strukturno da se predstavi kao:
    ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
  12. 12. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je to 4-[2-[2,6-difluoro-4-[[2-[[3-[[4-(4-metoksibutilkarbamoil)-2,2-dimetil- piperazin-1-il]metil]benzoil]amino]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-3-karbonil]amino]fenil]etil]benzoeva kiselina, koja može strukturno da se predstavi kao:
    ili njena farmaceutski prihvatljiva so. 1
  13. 13. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je to 4-[4-[[3-[[3-[[4-[2-(4-karbamoilfenil)etil]-3,5-difluoro-fenil]karbamoil]-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiofen-2-il]karbamoil]fenil]metil]-3,3-dimetil-piperazin-1-il]-4-oksobutanoatna kiselina, koja može strukturno da se predstavi kao:
    ili njena farmaceutski prihvatljiva so.
  14. 14. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 13 i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili podlogu.
  15. 15. Formulacija čvrste disperzije, naznačena time što uključuje 30% jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 6 i 70% polivinilpirolidon-vinil acetat.
  16. 16. Jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 13, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji.
  17. 17. Jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 13, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu hiperfosfatemije.
  18. 18. Jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 13, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu hroničnog oboljenja bubrega ili kardiovaskularne bolesti povezane sa hroničnim oboljenjem bubrega. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 1
RS20201471A 2016-08-15 2017-08-08 Kondenzovani derivati tiofena korisni kao napi-iib inhibitori RS61165B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662375169P 2016-08-15 2016-08-15
PCT/US2017/045843 WO2018034883A1 (en) 2016-08-15 2017-08-08 Condensed thiophene derivatives useful as napi-iib inhibitors
EP17754914.4A EP3497091B1 (en) 2016-08-15 2017-08-08 Condensed thiophene derivatives useful as napi-iib inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61165B1 true RS61165B1 (sr) 2021-01-29

Family

ID=59677343

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201471A RS61165B1 (sr) 2016-08-15 2017-08-08 Kondenzovani derivati tiofena korisni kao napi-iib inhibitori

Country Status (23)

Country Link
US (1) US10934280B2 (sr)
EP (1) EP3497091B1 (sr)
JP (1) JP6653410B2 (sr)
KR (1) KR102266143B1 (sr)
CN (1) CN109563070B (sr)
AU (1) AU2017312783B2 (sr)
CA (1) CA3033628C (sr)
CY (1) CY1123576T1 (sr)
DK (1) DK3497091T3 (sr)
EA (1) EA037376B1 (sr)
ES (1) ES2830444T3 (sr)
HR (1) HRP20202025T1 (sr)
HU (1) HUE052351T2 (sr)
IL (1) IL264785B (sr)
LT (1) LT3497091T (sr)
MX (1) MX376202B (sr)
PL (1) PL3497091T3 (sr)
PT (1) PT3497091T (sr)
RS (1) RS61165B1 (sr)
SA (1) SA519401049B1 (sr)
SI (1) SI3497091T1 (sr)
WO (1) WO2018034883A1 (sr)
ZA (1) ZA201900305B (sr)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES3039345T3 (en) * 2018-11-19 2025-10-20 11949098 Canada Inc 4,5,6,7-tetrahydro-l-benzothiophene modulators of retinoic acid receptor related (rar) orphan nuclear receptors (rors)
EA202192414A1 (ru) * 2019-05-16 2022-03-02 Эли Лилли Энд Компани Соединения-ингибиторы натрий-водородного обменника 3
EP4185381A4 (en) * 2020-07-24 2024-08-21 Inipharm, Inc. Thiophene hsd17b13 inhibitors and uses thereof
AU2021377248B2 (en) 2020-11-13 2025-12-18 Inipharm, Inc. Dichlorophenol hsd17b13 inhibitors and uses thereof
AR126060A1 (es) 2021-06-08 2023-09-06 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Método para producir derivado de dihidropiridazin-3,5-diona
EP4353233A4 (en) 2021-06-08 2025-06-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha PREPARATION CONTAINING A DIHYDROPYRIDAZINE-3,5-DIONE DERIVATIVE
CN119212723A (zh) * 2022-05-11 2024-12-27 中外制药株式会社 用于治疗或预防囊性疾病的药物组合物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102869656B (zh) * 2010-04-28 2014-03-12 安斯泰来制药株式会社 四氢苯并噻吩化合物
KR101941048B1 (ko) * 2011-10-27 2019-01-22 아스텔라스세이야쿠 가부시키가이샤 아미노 알킬 치환 n-티에닐벤즈아미드 유도체
WO2014003153A1 (ja) * 2012-06-28 2014-01-03 協和発酵キリン株式会社 置換アミド化合物
CN105658635B (zh) * 2014-08-22 2019-03-08 江苏恒瑞医药股份有限公司 噻吩并环烷基或噻吩并杂环基类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN109563070B (zh) 2021-02-26
PT3497091T (pt) 2020-11-30
AU2017312783A1 (en) 2019-01-24
ZA201900305B (en) 2020-12-23
LT3497091T (lt) 2020-12-28
DK3497091T3 (da) 2020-10-19
MX2019001781A (es) 2019-07-04
PL3497091T3 (pl) 2021-02-08
CN109563070A (zh) 2019-04-02
CY1123576T1 (el) 2022-03-24
NZ750153A (en) 2021-01-29
US10934280B2 (en) 2021-03-02
SI3497091T1 (sl) 2020-11-30
BR112019000929A2 (pt) 2019-07-09
EP3497091A1 (en) 2019-06-19
ES2830444T3 (es) 2021-06-03
KR20190026895A (ko) 2019-03-13
CA3033628C (en) 2021-01-12
AU2017312783B2 (en) 2020-02-06
EP3497091B1 (en) 2020-10-07
EA037376B1 (ru) 2021-03-22
SA519401049B1 (ar) 2021-07-14
IL264785B (en) 2021-04-29
KR102266143B1 (ko) 2021-06-17
JP2019527734A (ja) 2019-10-03
US20200031813A1 (en) 2020-01-30
EA201990095A1 (ru) 2019-07-31
WO2018034883A1 (en) 2018-02-22
JP6653410B2 (ja) 2020-02-26
HRP20202025T1 (hr) 2021-02-19
CA3033628A1 (en) 2018-02-22
MX376202B (es) 2025-03-07
HUE052351T2 (hu) 2021-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS61165B1 (sr) Kondenzovani derivati tiofena korisni kao napi-iib inhibitori
CN108314663B (zh) 芴、蒽、呫吨、二苯并环庚酮和吖啶的衍生物及其用途
DE4035961A1 (de) Cyclische iminoderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung
WO2015180485A1 (zh) 具有神经保护作用的金刚烷胺硝酸酯化合物及其制备和医药应用
JP2019530678A (ja) Ｙａｐ１のｏｃｔ４との相互作用を標的とするｙａｐ１阻害剤
CN110143925B (zh) 乙内酰脲异羟肟酸类组蛋白去乙酰化酶6亚型选择性抑制剂及制备方法和应用
UA123109C2 (uk) Сполуки імідазолону як інгібітори нейтрофіл-еластази людини
HRP20040609A2 (en) Tetrahydrocarbozole derivatives as ligands for g-protein coupled receptors (gpcr)
ES2729490T3 (es) Derivados de isoindolina
HRP20000532A2 (en) Novel naphthyl-substituted and anilide-substituted sulfonamides
DE69521125T2 (de) IMIDAZO[1,2-a]INDENO[1,2-e]PYRAZIN-4-ONDERIVATE UND DIESE ENTHALTENDE PHARMAZEUTISCHE ZUBEREITUNGEN
SA99191012B1 (ar) مشتقات حمض فينيل أمينو ألكيل كربوكسيلي phenyl amino alkyl carboxylic وتركيبات طبية تشتمل عليها
CN106660992B (zh) 二甲基吡啶胺衍生物及其医药用途
HRP20010135A2 (en) Novel natural product derivatives
AU2011336217B2 (en) KAT II inhibitors
CN101374810A (zh) α7烟碱型乙酰胆碱受体的调节剂及其治疗用途
CN110551048A (zh) 一类sirt2抑制剂、其制备方法及用途
CA2888369A1 (en) 6-aminoindole derivatives as trp channel antagonists
WO2023114366A2 (en) Sulfonamide derivatives and their use as soluble epoxide hydrolase inhibitors
WO2023086432A1 (en) Prodrugs of neurosteroid analogs and uses thereof
NZ750153B2 (en) Condensed thiophene derivatives useful as napi-iib inhibitors
BR112019000929B1 (pt) Derivados de tiofeno condensados úteis como inibidores de napi-iib, usos dos mesmos, composições farmacêuticas, formulações de dispersão sólida
CN102746302B (zh) 1-取代-3-苄基-3,6-二氮杂双环[3,3,1]壬烷衍生物及制备方法
KR20220024051A (ko) 신규 아르기나제 억제제
JPH0136458B2 (sr)