RS61327B1 - Injekcione farmaceutske formulacije lefamulina - Google Patents

Description

Opis

Ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (I)

tj., 14-O-{[(1R,2R,4R)-4-amino-2-hidroksi-cikloheksilsulfanil]-acetil}-mutilin (dalje će biti označen kao "BC-3781"), kao i na njegove soli.

Pleuromutilin, jedinjenje formule

je antibiotik koji se javlja u prirodi, a proizvode ga npr., bazidiomicete Pleurotus mutilus i P. passeckerianus, videti npr., Merck Index, 12. izdanje, stavka 7694.

Razvijeni su brojni drugi pleuromutilini, koji imaju glavnu prstenastu strukturu pleuromutilina sa supstitucijom na primarnoj hidroksi grupi, npr., kao antimikrobna sredstva. Zahvaljujući njihovom izraženom antimikrobnom dejstvu, otkriveno je da je grupa derivata pleuromutilina, amino-hidroksi-supstituisani cikloheksilsulfanilacetilmutilini, kako su izloženi u: WO 2008/113089, od posebnog značaja. Kako je opisano u: WO2008/11308914-O-{[(4-amino-2-hidroksi-cikloheksil)-sulfanil]-acetil}-mutilini su posebno korisna jedinjenja zbog njihovog dejstva protiv Gram-pozitivnih i Gram-negativnih patogena, naročito u kontekstu respiratornog trakta i kože i infekcija struktura kože. Posebno je razvijen 14-O-{[(1R, 2R, 4R)-4-amino-2-hidroksi-cikloheksilsulfanil]-acetil}-mutilin (u nastavku označen kao "BC-3781" ili "lefamulin") za sistemsku primenu u lečenju teških infekcija kod ljudi. BC-3781 je inter alia opisan u: R. Novak, Are pleuromutilin antibiotics finally fit for human use?, Ann. N.Y. Acad. Sci.1241 (2011) 71-81 i: W. T. Prince et al, Phase II Clinical Study of BC-3781, a Pleuromutilin Antibiotic, in Treatment of Patients with Acute Bacterial Skin and Skin Structure Infections, Antimicrobial Agents and Chemotherapy Vol 57, No 5 (2013), 2087-2094. Kasnije publikacije ilustruju prvi dokaz koncepta da pleuromutilinski derivati leče ozbiljne infekcije kod ljudi preko sistemske primene. Lefamulin se može primeniti oralno i intravenski. Kada se jedinjenja intravenski primenjuju, često se zapaža intolerancija na mestu injektovanja. Često je još više izražena iritacija na mestu infuzije u slučajevima kada se jedinjenje oslobađa u vidu intravenske infuzije i, kreće se od blage, do srednje i teške kada su u pitanju ljudi. Lokalni efekti intolerancije obuhvataju bol, eritem i flebitis. U: S.H. Yalkowsky et al, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 87, No 7, 1998, 787 su opisani problemi koji se odnose na formulaciju povezanu sa intravenskim oslobađanjem leka i, navedeni su: hemoliza, precipitacija, flebitis i bol kao glavni sporedni efekti. Međutim, u ovim dokumentima prethodnih tehnika nema istaknutih formulacija ili razvoja formulacija uopšteno za pleuromutiline ili, naročito lefamulin.

U: G. Eichenbaum et al, Journal of Pharmacological and Toxicological Methods, 68, 2013, 394 su opisani postupci za ispitivanje i poboljšanje tolerantnosti prema intravenskim formulacijama na mestu injekcije pre prvih testiranja na čoveku jedinjenja sa niskom rastvorljivošću pri fiziološkom pH krvi, npr., pH 7.4. Istraživanja su bila usmerena na model jedinjenja JNJ-X, koje je cviterjonsko. BC-3781, međutim, nije ni cviterjon niti ima nisku rastvorljivost pri pH krvi.

WO 1999/30728 opisuje injekcione kompozicije koje sadrže dalfopristin/kvinupristin u vodenom rastvoru zajedno sa aditivom, namenjenim sprečavanju ili smanjivanju efekata intolerancije na mestu injekcije. Aditivi obuhvataju puferske rastvore. Ipak, pomenuti dokument se odnosi na kombinatorno primenjivanje dalfopristina/kvinupristina koji su dva posebna jedinjenja, koja se dosta razlikuju u strukturi i fiziološkim svojstvima u odnosu na pleuromutilinske derivate, npr., BC-3781. Sem toga, BC-3781 se primenjuje kao jedno jedinjenje za lečenje teških infekcija prouzrokovanih, između ostalog, visoko rezistentnim patogenima. Još dokumenata prethodnih tehnika opisuje razvoj formulacija i ispitivanja posebnih molekula koji se odnose na poboljšanje tolerantnosti na mestu infuzije. Kratak, ne-sveobuhvatan izbor ovakvih prethodnih tehnika je naveden u nastavku:

a) S. Gupta et al, Parenteral Formulation Development of Renin Inhibitor Abbott-72517, J. of Pharm. Sci. & Tech.48(2):86-91 (1994)

b) P. Simamora et al, "Studies in Phlebitis VIII: Evaluations of pH Solubilized Intravenous Dexverapamil Formula- tions", PDA J. of Pharm. Sci. & Tech.50(2):123-128 (1996) c) L. Willems et al, Itraconazole oral solution and intravenous formulations: a review of pharmacokinetics and pharmacodynamics, Journal of Clinical Pharmacy and Therapeutics, 2001,26, 159.

Svi molekuli, opisani u ovim drugim dokumentima prethodnih tehnika, veoma se razlikuju od derivata pleuromutilina po strukturi i fiziološkim svojstvima kada se uporede sa BC-3781. Zbog toga je zadatak da se razviju formulacije sa poboljšanom lokalnom tolerancijom za lefamulin bio potpuno drugačiji u odnosu na pristupe opisane u prethodnim tehnikama.

Ovaj zadatak je rešen predmetom patentnog zahteva 1. Poželjna ostvarenja su navedena u povezanim patentnim zahtevima.

Posebno, ovaj pronalazak se odnosi na injekcione formulacije koje sadrže BC-3781, naročito na one, koje su za intravensko primenjivanje.

BC-3781 i sinteza istog su izloženi u, na primer, WO 2008/113089.

Nađeno je da se injekcionim formulacijama koje sadrže BC-3781, a koje su puferovane do farmaceutski prihvatljive pH-vrednosti od 2 do 6, posebno pH vrednosti od 3 do 5.5, poželjno pH-vrednosti od otprilike 4 do 5, a naročito poželjno oko 5, izbegavaju ili barem smanjuju efekti intolerancije, naročito na mestu injekcije.

Sem toga, otkriva se da se pufer bira iz grupe koju čine citratni puferi, fosfatni puferi i njihove mešavine. Poželjan citratni pufer se priprema mešanjem limunske kiseline sa trinatrijum citratom.

Količina pufera, posebno citratnog pufera, u formulaciji se poželjno kreće u rasponu od 5 mM do 25 mM, poželjno 8 mM do 20 mM, posebno poželjno otprilike 10 mM do otprilike 20 mM.

U kliničkim formulacijama za ljude najpoželjnije se koristi 10 mM do 20 mM citratni pufer, posebno 10 mM citratni pufer.

Preostali sastojci injekcione formulacije kao i njihove količine, stručna lica mogu odabrati prema opštem poznavanju, koje je na raspolaganju.

Na primer, injekciona formulacija može biti na bazi normalnog fiziološkog rastvora, koji sadrži 0.9% (w/v) NaCl (u nastavku označen skraćenicom "NSS") ili na bazi rastvora dekstroze u vodi, kao što je 5% (w/v) (anhidrovana) dekstroza u vodi (u nastavku označen skraćenicom "D5W").

Poželjna kompozicija je na bazi NSS i sadrži citratni pufer 10 mM do 20 mM citratnog pufera, naročito je poželjan 10 mM citratni pufer.

Količina BC-3781 u formulaciji se može kretati u opsegu od 100 mg/250 ml do 300 mg/250 ml rastvora, poželjno otprilike 150 mg/250 ml rastvora, računato kao BC-3781 u obliku slobodne baze.

BC-3781 se može koristiti za izradu injekcionih formulacija prema ovom pronalasku u obliku farmaceutski prihvatljive soli, naročito kristalne soli.

Poželjni kristalni oblici soli BC-3781 su izloženi u npr., WO 2011/146954.

U jednom aspektu ovog pronalaska, u injekcionim formulacijama poželjno se koriste acetat i/ili L-laktat kao farmaceutski prihvatljive soli BC-3781, najpoželjnije, acetatna so.

U sledećem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje intravenske formulacije koje poboljšavaju lokalnu tolerantnost BC-3781 posle intravenskog primenjivanja, naročito posle intravenske infuzije.

Rastvorljivost BC-3781 acetata u različitim medijumima je sledeća:

Izražena problematična pitanja u vezi sa lokalnom podnošljivošću često su povezana sa nedovoljnom rastvorljivošću jedinjenja pri fiziološkom pH što, međutim, nije slučaj sa BC-3781. Druga pitanja koja dovode do problema lokalne tolerancije mogu biti povezana sa pitanjima stabilnosti jedinjenja pri fiziološkom pH (npr., pH 6.8 do 7.4), što - ponovo - nije slučaj sa BC-3781 zbog toga što je pri ovim rasponima pH zapažena odlična rastvorljivost.

pKa vrednost izmerena za BC-3781 je 9.41, što znači da je pri fiziološkom pH najveći deo jedinjenja u jonizovanom obliku.

Tako da je efekat poboljšane tolerantnosti BC-3781, kada se oslobađa u puferovanim formulacijama i koncepti formulacija koje su opisane u ovoj prijavi, potpuno iznenađenje.

U principu, puferski rastvor se priprema kao kombinacija slabe kiseline i njenih soli (natrijumovih soli, npr.) ili slabih baza i njihovih soli.

Poželjan pH opseg kod formulacija koje se primenjuju ljudima je od 3 do 5.5, poželjniji od 4 do 5, posebno poželjan oko 5. Drugi poželjni pH rasponi su od 4 do 6, poželjno od 5 do 6.

Sledeće kiseline (ili njihovi bazni konjugati) su primeri kiselina koje mogu činiti deo kompozicije sistema: limunska i fosforna kiselina. Ove kiseline se mogu kombinovati sa svojim baznim konjugatima, sa baznim konjugatom druge bazne kiseline ili sa natrijum hidroksidom.

Od ovih primera, oni koji su posebno korisni su limunska kiselina, fosforna kiselina i kombinacije obe i/ili njihovih baznih konjugata.

Dobijene mešavine proizvode puferovani rastvor.

Puferovana formulacija prema ovom pronalasku može sadržavati farmaceutski prihvatljiv vehikulum, poželjno odabran iz grupe koju čine: normalan fiziološki rastvor, rastvor 5% dekstroze i njihove smeše, najpoželjniji je normalan fiziološki rastvor.

Drugi farmaceutski prihvatljivi vehikulumi su, između ostalih, vodeni rastvori od 10% ili 40 % glukoze, 20% ksilitola, laktatni Ringerov rastvor (u nastavku takođe označen kao "LRS"), kao i njihove mešavine.

Završene formulacije BC-3781 (farmaceutski prihvatljiv vehikulum, puferi i BC-3781 so, eventualno sa adjuvasima) imaće farmaceutski prihvatljiv osmolalitet, npr., od 250 do 400 mosm/kg.

Prema ovom pronalasku, puferovani rastvori se mogu pripremiti prema poznatim postupcima koji se uobičajeno koriste, posebno dodavanjem natrijum hidroksida u prethodno određenu količinu kiseline kako se postiže željeni pH, koji se kreće od 2 do 6, a zatim dodavanjem vode do željene zapremine.

U jednom aspektu ovog pronalaska, puferovani rastvor BC-3781 se može napraviti rekonstituisanjem 100 mM do 1000 mM koncentrovanog rastvora pufera, poželjno 200 mM do 800 mM, najbolje 250 mM do 540 mM, u farmaceutski prihvatljivom intravenskom vehikulumu i dodavanjem BC-3781, poželjno u vidu farmaceutski prihvatljive soli, npr., acetatne soli (u nastavku skraćenica označena sa Ac) ili soli L-laktata (skraćeno kao La) ili, dodavanjem 1 mg/ml do 100 mg/ml, poželjno 5 mg/l do 50 mg/ml, najbolje 10 mg/ml do 15 mg/ml rastvora BC-3781 kao famaceutski prihvatljive soli, npr., soli acetata ili L-laktata, što proizvodi konačnu željenu koncentraciju BC-3781.

U drugom aspektu ovog pronalaska, svi sastojci formulacije npr., komponente pufera i BC-3781, poželjno u vidu farmaceutski prihvatljive soli, mogu direktno da se dodaju u farmaceutski prihvatljiv intravenski vehikulum.

U jednom aspektu ovog pronalaska, puferski sistemi obuhvataju citratni pufer i fosfatni pufer ili njihove mešavine, najpoželjnije citratni pufer sa pH opsegom između 3 do 6, poželjno pH 4 do 6, najbolje pH 5.

Puferski sistemi se mogu pripremiti rastvaranjem limunske kiseline, ili fosforne kiseline u vodi ili, poželjno, u farmaceutski prihvatljivom intravenskom vehikulumu i, podešavanjem pH sa bazom, poželjno bazom alkalnih metala, npr., KOH i NaOH, najbolje sa NaOH.

Alternativno, puferski sistem se može pripremiti rastvaranjem limunske kiseline, ili fosforne kiseline, sa odgovarajućim baznim konjugatom, npr. trinatrijum citratom ili natrijum dihidrogen fosfatom u vodi ili, poželjno, u farmaceutski prihvatljivom intravenskom vehikulumu. pH se eventualno može (precizno) podesiti na konačni željeni pH sa hlorovodoničnom kiselinom ili natrijum hidroksidom.

Opciono, osim sredstava za tonus, koja se poželjno biraju od naročito: glukoze, natrijum hlorida, glicerola, sorbitola, manitola, fruktoze ili dekstrana 40 i 70, u puferovanim formulacijama, farmaceutske kompozicije mogu sadržavati farmaceutski prihvatljiv adjuvans, ovaj adjuvans se bira od ko-rastvarača, stabilizatora, krioprotektivnih sredstava, desikanata, punjača. Bez namere bilo kakvog ograničavanja, ko-rastvarači i sredstva za solubilizaciju, poželjno se biraju od: polietilen glikola (npr., polietilen glikoli 300 i 400), propilen glikola, etanola i surfaktanata kao što su, na primer, polisorbat 80 ili polioksietilenovani derivati (kremofori); punjači i krioprotektivna sredstva se poželjno biraju od: jednostavnih šećera, na primer, glukoze, manitola, fruktoze ili sorbitola, disaharida, na primer, saharoze, laktoze, trehaloze ili maltoze; ili polimera rastvorljivih u vodi, na primer, dekstrana, karboksimetilceluloze, polivinilpirolidona ili želatina; Stabilizatori se, poželjno, biraju od antioksidanasa (npr., askorbinske kiseline, acetilcisteina, soli sumporne kiseline, monotioglicerola). Podloge, koje se koriste u parenteralnim formulacijama su opisane u: Y. Mehmood et al, Open Science Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2015, 3(3), 19-27, kao i: R. G. Strickley, Pharmaceutical Research, Vol 21, No 2, 201 - 230.

Doza BC-3781 za ljude u puferovanim formulacijama će biti između 10 mg i 1000 mg, poželjno između 15 mg i 500 mg, najbolje između 25 mg i 300 mg npr., 150 mg. Formulacija može eventualno da se primeni nekoliko puta na dan npr., BID, TID, u zavisnosti od zahteva tretmana. Zapremina koja će se primeniti može da bude promenljiva, od 10 ml do 1000 ml, poželjno 20 ml do 500 ml, najbolje između 20 ml do 300 ml npr., 250 ili 300 ml za odrasle.

U poželjnom ostvarenju formulacije prema ovom pronalasku, pufer je 10 mM do 20 mM citratni pufer, pH-vrednost formulacije je od 3 do 5.5, poželjno pH 5, koncentracija BC-3781 je između 0.2 do 3 mg/ml (računato kao slobodni bazni oblik) i, formulacija sadrži farmaceutski prihvatljiv vehikulum.

U sledećem poželjnom ostvarenju, pufer je 10 mM citratni pufer, pH-vrednost formulacije je od 3 do 5.5, poželjno pH 5, koncentracija BC-3781 je između 0.3 do 1.2 mg/ml (računato kao slobodni bazni oblik) i, formulacija sadrži farmaceutski prihvatljiv vehikulum.

U sledećem poželjnom ostvarenju, pufer je 10 mM citratni pufer, pH-vrednost formulacije je od 3 do 5.5, poželjno pH 5, koncentracija BC-3781 je između 0.3 do 0.6 mg/ml (računato kao slobodni bazni oblik) i, formulacija sadrži farmaceutski prihvatljiv vehikulum.

Podrazumeva se da prezentacioni kompleti za formulaciju, koja sadrži BC-3781 eventualno sa adjuvansima, takođe čine kontekst ovog pronalaska. Mogu biti odgovarajući prezentacioni kompleti ma kog oblika.

Na primer, pufer može biti u staklenom sudu, eventualno u vidu rastvora koncentrovanog pufera, koji će se potom razblaživati, poželjno u farmaceutski prihvatljivom intravenskom vehikulumu. Koncentrat pufera se može razblažiti u komercijalno dostupnim infuzionim kesama ili bocama napunjenim sa farmacutski prihvatljivim intravenskim vehikulumom do željenog molariteta. BC-3781 se dodaje u vidu koncentrovanog rastvora do željene koncentracije ili doze. Alternativno, puferski koncentrat se može koristiti za punjenje praznih infuzionih kesa (npr. EVA kese) kao razblažen sa farmaceutski prihvatljivim intravenskim vehikulumom do željenog molariteta i konačno, doda se BC-3781 u vidu rastvora ili jedinjenja u čvrstom stanju, u željenoj koncentraciji.

Sem toga, pufer može biti u vidu infuzione kese ili infuzione boce sa odabranim molaritetom, poželjno u farmaceutski prihvatljivom intravenskom vehikulumu, za rekonstituciju BC-3781, koji može biti dodat npr., u vidu rastvora u puferovane infuzione kese/boce.

Alternativno, BC-3781 može da se nalazi u vidu liofilizata ili koncentrovanog rastvora u staklenim ampulama radi daljeg razblaživanja u puferovanom vehikulumu, poželjno su oba na bazi farmaceutski prihvatljivog intravenskog vehikuluma.

Dalje, prikazana pakovanja mogu uključiti infuzione kese i boce, spremne za upotrebu, koje sadrže pufer, farmaceutski prihvatljiv intravenski vehikulum, eventualno adjuvans i BC-3781.

Sterilne formulacije ovog pronalaska npr., pogodne za inter alia primenu kod ljudi, mogu da se proizvedu poznatim postupcima, koji se uobičajeno koriste npr., sterilnom filtracijom, sterilnom filtracijom i punjenjem u aseptičnim uslovima, sterilizacijom grejanjem ili gama zračenjem. Postupak koji će se izabrati će zavisiti od stabilnosti jedinjenja ili rastvora kog treba sterilisati npr., poželjni postupci za sterilizaciju puferskih rastvora u farmaceutski prihvatljivom intravenskom vehikulumu bez BC-3781 su sterilna filtracija nakon koje sledi sterilizacija toplotom. Rastvori koji sadrže BC-3781 se poželjno sterilno filtriraju, posle čega sledi aseptično punjenje u odgovarajući kontejner npr., staklene ampule, staklene boce, infuzione kese.

U svim prethodno navedenim ostvarenjima, farmaceutski prihvatljiv vehikulum je poželjno NSS, LRS i/ili D5W, najpoželjnije NSS.

Sem toga, u svim prethodno navedenim ostvarenjima, BC-3781 se poželjno koristi u vidu farmaceutski prihvatljive soli, naročito acetata i/ili L-laktata, a posebno poželjno u vidu acetata.

Sledeći aspekt ovog pronalaska se odnosi na formulaciju prema ovom pronalasku, koja ima primenu u lečenju bolesti izazvanih mikrobima.

U poželjnom ostvarenju, formulacija se primenjuje preko intravenske aplikacije. Dalje, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutski izvedeni oblik, koji sadrži injekcionu formulaciju prema ovom pronalasku.

Sem toga, ovde je izložen postupak za lečenje bolesti prouzrokovanih mikrobima u kom se fomulacija prema ovom pronalasku primenjuje subjektu kome je to neophodno.

U postupku, formulacija se poželjno primenjuje putem intravenskog aplikovanja. Intarvensko aplikovanje obuhvata bolus, spori bolus i infuziju, kao vidove primenjivanja, uključujući kontinuiranu infuziju.

Korišćene su sleće skraćenice:

API aktivan farmaceutski sastojak

BID dva puta na dan

EP Evropska farmakopeja

g gram

JP Japanska farmakopeja

kg kilogram

1 litar

M molarni

mM milimolarni

min minut

ml mililitar

NF Nacionalni formular

q.s. quantum satis (koliko je dovoljno)

TID tri puta na dan

USP Farmakopeja USA

w/v težinski/zapreminski

Primeri:

Podloge, koje se koriste za proizvodnju kliničkih (za ljude) formulacija ili njihovih komponenti su stepena čistoće prema Farmakopeji, np., USP i/ili EP i/ili NF i/ili JP.

Primer 1: Izrada 14-O-{[(1R,2R, 4R)-4-amino-2-hidroksi-cikloheksilsulfanil]-acetil}-mutilin (BC-3781) formulacija, korišćenih za ispitivanje tolerantnosti u modelu dorzalne vene repa pacova.

a) Izrada/nabavka farmaceutskog vehikuluma

Izrada farmaceutskog vehikuluma NSS se zasniva na rastvaranju NaCl 0.9% (w/v). D5W je nabavljen od Fresenius Kabi.

b) Izrada puferskih rastvora

c) Konačna izrada formulacija

Ispitivano jedinjenje 14-O-{[(1R,2R, 4R)-4-amino-2-hidroksi-cikloheksilsulfanil]-acetil}-mutilin (BC-3781), koje je u vidu farmaceutski prihvatljive soli, npr., acetata ili L-laktata, rastvori se u puferskim rastvorima, NSS ili D5W tako da se postigne koncentracija od 6 mg/ml (računato kao oblik slobodne baze).

Na primer, izvagane su sledeće količine za:

Primer 2: Izrada formulacije korišćene u kliničkim ispitivanjima faze 1, radi istraživanja razlika u lokalnoj toleranciji – izrada 10 mM formulacija BC-3781 u citratnom puferu fiziološkog rastvora, formulacija BC-3781 u fiziološkom rastvoru i posebnih vehikuluma za lekove (koji će dalje biti označeni kao „placebo formulacije“ ili „placebo“)

a) Koncentrovani rastvor BC-3781 u fiziološkom rastvoru

Izrada BC-3781 rastvora se ostvaruje rastvaranjem BC-3781 acetata u vodi za injekcije i zatim, rastvaranjem NaCl. Posle sterilnog filtriranja, pod sterilinim uslovima rastvor se puni u ampule.

Kvantitativan izgled kompozicije BC-3781 u fiziološkom rastvoru

Druge poželjne kristalne soli BC-3781 su izložene u WO 2011/146954.

b) Koncentrovani rastvori u citratnom puferu

Rastvor citratnog pufera se priprema zasebno. U vodi za injekcije se rastvore limunska kiselina i trinatrijum citrat i zatim se pune u ampule.

Formula za seriju 250 mM koncentrovanog rastvora citratnog pufera

Koncentrovani rastvor citratnog pufera se puni u 10 ml-ske ampule pod sterlnim uslovima (npr., sterilna filtracija, autoklaviranje).

Kvalitativan i kvantitativan izgled kompozicije 250 mM citratnog pufera po ampuli

Alternativno, priprema se citratni pufer različitih molarnosti.

Formula za seriju 540 mM koncentrovanog rastvora citratnog pufera

Koncentrovani rastvor citratnog pufera se puni u 5 ml-ske ampule pod sterlnim uslovima (npr., sterilna filtracija, autoklaviranje).

Kvantitativan izgled kompozicije citratnog pufera po ampuli

c) Kliničke formulacije

U zavisnosti od potrebnog volumena i koncentracije BC-3781 rastvora za infuziju, sterilne kese se pune neophodnim količinama: i) koncentrovanog rastvora BC-3781 u fiziološkom rastvoru (izrada opisana u Primeru 2a), ii) koncentrovanog rastvora citratnog pufera (izrada opisana u Primeru 2b) i iii) komercijalno nabavljenog NSS.

Količine infuzionih komponenti, koje su korišćene u izradi kliničkih formulacija u kojima se koristi 250 mM koncentrovani citratni pufer za izradu formulacija BC-3781 u citratnom puferu, prikazane su u tabeli u nastavku.

Količine komponenti infuzata, koje su korišćene za pripremu kliničkih formulacija, a korišćenjem 540 mM koncentrovanog citratnog pufera u izradi formulacija BC-3781 u citratnom puferu, prikazane su u tabeli u nastavku. Osim toga, u tabeli su takođe navedene izrade referentne formulacije BC-3781 u normalnom fiziološkom rastvoru i placebo formulacije u normalnom fiziološkom rastvoru.

Komponente infuzata kliničkih formulacija se pune u komercijalno nabavljive sterilne, prazne infuzione kese, npr., 300 ml-ske ili 500 ml-ske EVA kese.

Alternativno, formulacija može, takođe, biti rekonstituisana dodavanjem potrebnih količina koncentrovanog rastvora BC-3781, predstavljenog u Primeru 2a) i koncentrovanog rastvora pufera, predstavljenog u Primeru 2b) u komercijalne infuzione kese prethodno napunjene normalnim fiziološkim rastvorom. Opciono, zapremina dodatog BC-3781 koncentrata i koncentrovanog rastvora citratnog pufera se povuče iz komercijalnih kesa sa normalnim fiziološkim rastvorom pre dodavanja.

Kliničke formulacije, opisane u gornjim tabelama, korišćene su za ispitivanje razlika u lokalnoj tolerantnosti formulacija BC-3781 u normalnom fiziološkom rastvoru i formulacija BC-3781 u normalnom fiziološkom rastvoru sa citratnim puferom. Formulacije u citratno puferovanom normalnom fiziološkom rastvoru su pokazale superiorniju lokalnu toleranciju u poređenju sa formulacijama u normalnom fiziološkom rastvoru.

Preciznije, istražene su dve različite, sledeće BC-3781 formulacije:

Ø 150 mg BC-3781 formulacija u normalnom fiziološkom rastvoru, u 270 ml infuzije tokom 1h

Ø 150 mg BC-3781 formulacija u citratno puferovanom normalnom fiziološkom rastvoru, u 270 ml infuzije tokom 1h

u randomizovanoj, duplo slepoj placebo kontrolisanoj kliničkoj fazi 1 istraživanja.

Primer 3:

Formulacija može, takođe, da se pripremi direktnim rastvaranjem BC-3781 soli, NaCl, limunske kiseline, trinatrijum citrata u vodi. Zatim se ova formulacija može puniti u odgovarajuće kontejnere, npr., infuzione kese, infuzione boce u aseptičnim uslovima. pH formulacije je oko 5 i može se podesiti bilo sa HCl, bilo sa NaOH da bude tačno 5.0, ukoliko je neophodno.

Serija formule spremne za korišćenje (RTU) u infuzionoj kesi

Primer 4:

Formulacija može, takođe, da se pripremi zasebnom pripremom koncentrovanog BC-3781 rastvora, napunjenog u ampule i kese sa citratno puferovanim normalnim fiziološkim rastvorom, koje ne sadrže lek.

Koncentrovani BC-3781 rastvor se proizvodi kako je opisano u Primeru 2, korak a). Puferski rastvor se zasebno pripremi, filtrira kroz 0.45 µm-ske kartridže radi zadržavanja bakterija i čestica i, puni u odgovarajuće kontejnere, npr., infuzione kese, infuzione boce. pH je oko 5.

Serija formule za kese sa citratno puferovanim fiziološkim rastvorom

Dobijeni kontejneri sa puferom se zatim sterilišu toplotom.

Na kraju, sadržaj koncentrata BC-3781 iz ampule se razblaži (rekonstituiše) u infuzionoj kesi sa citratnim puferom proizvodeći na taj način konačnu formulaciju. Dobijena formulacija BC-3781 odgovara 150 mg BC-3781 u 10 mM citratno puferovanom normalnom fiziološkom rastvoru sa vrednošću pH od oko 5.

Primer 5:

Izrada ampule koja sadrži BC-3781 sa koncentratom citratnog pufera za rekonstituisanje u komercijalno nabavljivim kesama sa normalnim fiziološkim rastvorom.

a) Izrada 150 mM rastvora citratnog pufera

Izrada puferskih 150 mM koncentrata je izvedena rastvaranjem odgovarajućih količina limunske kiseline monohidrata i trinatrijum citrat dihidrata u vodi. Dobijeni pH je bio oko 5.

b) Izrada koncentrovanog rastvora BC-3781 acetata u 150 mM citratnom puferu

150 mg slobodnog baznog ekvivalenta BC-3781 acetata se rastvori u 20 ml 150 mM citratnog pufera stvarajući koncentraciju od 7.5 mg/ml. Rastvor se može puniti u npr., staklene ampule.

Rekonstitucijom 20 ml gornjeg rastvora u npr., 250 ml fiziološkog rastvora komercijalne infuzione kese ili boce rezultiraće u 150 mg BC-3781 slobodne baze u otprilike 10 mM citratnom puferu sa pH vrednošću od oko 5.

Puferovane formulacije ovog pronalaska ispitane su in vivo u modelu repa pacova kao i u kliničkim studijama na čoveku. Detalji uslova ispitivanja i iznenađujući rezultati su prikazani u sledećim pasusima.

Opis modela repa pacova za ispitivanje lokalne tolerantnosti:

Razvijen je model tolerantnosti na infuziju BC-3781 u dorzalnu venu repa pacova radi istraživanja potencijalnih intravenskih kliničkih formulacija BC-3781. U eksperimentu su ženke Sprague Dawley (SD) pacova kateterizovane stalnim venskim kateterom (BD®, G21) i, izvršena je infuzija različitih formulacija BC-3781 u koncentracijama od 6 mg/ml sa fiksnom brzinom infuzije od 1 ml/min do konačne doze od 75 mg/kg. Plazma i urin su ispitivani na znake hemolize između 5 do 30 min. Lokalna tolerancija na položaju infuzije (vena repa) ispitivana je 24h po aplikaciji. Za analizu je korišćen razvijeni sistem bodovanja zajedno sa informacijom o hemolizi u plazmi i/ili urinu.

Ispitivane infuzione formulacije su rangirane prema njihovim rezultatima. Puferovani infuzioni rastvor BC-3781 pokazuje poboljšanu lokalnu tolerantnost i, kod puferovane formulacije sa pH ispod 7 nije zapažena hemoliza, a oba efekta su poređena sa referntnom formulacijom u fiziološkom rastvoru (NSS) i D5W.

Izvođenje testa i rezultati:

a) Model lokalne tolerantnosti

Za određivanje lokalne tolerantnosti intravenskih formulacija je razvijen model infuzije u venu repa pacova za ispitivanje formulacija BC-3781, pripremljenih prema Primeru 1. Korišćen je sistem bodovanja za ovo određivanje, radi opisivanja kliničkih znakova na položaju injekcije.

Vizuelni pregled dorzalne vene repa 24h posle infuzije je definisan kao vremenska tačka za očitavanje. Primenjeni su sledeći rezultati:

bez zapaženih abnormalnosti vene repa pacova posle 24h je rangirano sa 0 bodova, neznatne crvene tačkice (ehimoza) 1 bod, umerena pojava tačkica 2 boda, i daleko teže plavo-tamno crvene tačkice su računate kao 3 boda.

U slučaju smrtnog ishoda, računata su 3 boda.

Kao referentna formulacija, korišćen je BC-3781 rastvoren u NSS ili D5W (bez pufera), pripremljena prema Primeru 1. U cilju razdvajanja među formulacijama, infuzija NSS i D5W formulacija pod uslovima koji su prethodno opisani, dovela je do detektabilne hemolize i umerene lokalne iritacije infuzionog položaja. Sve formulacije su životinjama date kao slepi uzorci. Raspored formulacija je otkriven na kraju studije.

b) Sakupljanje krvi

Krv je uzimana iz sublingvalne vene 15 min nakon završetka infuzije, centrifugirana je na 2g na 4<O>C u toku 5 minuta. Sakupljena plazma je vizuelno pregledana na znake hemolize i čuvana posle toga na -20<O>C. Radi ispitivanja uticaja na farmakokinetike (PK) raznih formulacija, određene su i upoređene plazmatske koncentracije BC-3781.

c) Urin

Posle završetka infuzije, uklonjena je anestezija i životinje su čuvane u zasebnim kavezima na podlogama od bele tkanine tokom oporavka od anestezije. Kao znak hemolize je beleženo zapažanje blago crvenkastih kapi urina na tkanini.

d) Analiza podataka

Sumirani su rezultati iz modela lokalne tolerantnosti za svaku formulaciju i zatim podeljeni odgovarajućim brojem životinja (n=3-12). Sem toga, za rangiranje formulacija su uračunati i znaci hemolize u plazmi i urinu.

Rezultati u modelu repa pacova

a) Formulacije BC-3781 koje su testirane u modelu infuzije u venu repa pacova

Izrada formulacije

Izrada formulacija je opisana u Primeru 1. U aktivnim formulacijama, neophodna količina BC-3781, prisutnog bilo kao acetatna, bilo kao so L-laktata, rastvara se u odgovarajućim puferovanim rastvorima, NSS ili D5W kako je navedeno u gornjoj tabeli. Nakon rastvaranja u potpunosti, zahtevana razblaženja su odmah primenjena životinjama. Doza od 75 mg/kg BC 3781 se odnosi na sadržaj slobodne baze BC-3781.

b) Specifikacije i izvori životinja

c) Infuziona podešavanja

Kanila je postavljena u dorzalnu venu repa korišćenjem stalnog venskog katetera (BD insyte™, 24GA) posle grejanja repa pod grejnom lampom u toku 5 min. Posle postavljanja kanile, pacovi su anestezirani pomoću izoflurana u koncentraciji od 5% inicijalno i 3.5% za održavanje narkoze (pomoću maske). Putem špricne pumpe koja se programira, infunduju se različite formulacije BC-3781 u kanilu dorzalne vene repa pacova (1 ml/min, 6 mg/ml, oko 2 min). Kada je infuzija završena, kateter se ispira sa 0.1-0.2 ml fiziološkog rastvora. Kateter i špric se odbace, a spajajuća creva isperu sa etanolom i osuše kako bi mogla ponovo da se koriste. Veličina grupe za infuziona podešavanja je bila 3.

Rezultati ispitivanih formulacija u modelu repa pacova (rezultat lokalne tolerantnosti i hemoliza u plazmi i urinu)

Rezultati ispitivanja su potvrdili iznenađujuće efekte puferovanih rastvora BC-3781. Svi ispitani puferovani rastvori su ispoljili bolji rezultat tolerantnosti u poređenju sa ne-puferovanim referentnim formulacijama. Iznenađujuće, hemoliza nije zapažena kod puferovanih BC-3781 rastvora, dok ne-puferovani rastvori ili puferovani rastvori pri pH 7 dovode do hemolize koja se zapaža u plazmi i u urinu. Ovi iznenađujući efekti se ne mogu povezati sa ograničenom rastvorljivošću BC-3781 pri pH krvi, niti efekat može biti prouzrokovan ograničenom stabilnošću BC-3781 pri fiziološkom pH (oko pH 7).

Rezultati kliničke faze 1 ispitivanja

Poboljšana lokalna tolerancija na puferovane formulacije BC-3781 je takođe potvrđena i u kliničkoj fazi 1 ispitivanja, poređenjem formulacija BC-3781 u NSS (150 mg BC-3781 u 270 ml) i BC-3781 u citratno puferovanom fiziološkom rastvoru (150 mg BC-3781 u 270 ml), pripremljenim prema Primeru 2. Ispitivanje je bilo randomizovano, dvostruko slepo i placebo kontrolisano (korišćenjem normalnog fiziološkog rastvora kao placeba). Ukupno 60 zdravih subjekata je testirano, od toga 25 muških i 35 ženskih. Primarna završna tačka ispitivanja je bila umereni bol i eritem tokom prva 3 dana. Formulacije su primenjivane infuzijom tokom 1h i, iznenađujuće, pojava umerenog bola i/ili eritema u toku prva 3 dana je otprilike bila prepolovljena u slučajevima kada se lefamulin primenjivao u citratno puferovanom fiziološkom rastvoru. Na primer, od ukupnih 150 infuzija sa normalnim fiziološkim rastvorom u ruci 13 primaoca infuzije (8.7%) došlo je do umerenog bola dok je u ruci primaoca infuzije sa citratno puferovanim fiziološkim rastvorom samo 6 od 150 infuzija (4%) povezano sa umerenim bolom.

Claims (10)

1. Patentni zahtevi 1. Injekciona farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I)

   navedena formulacija je puferovana do farmaceutski prihvatljive pH vrednosti od 2 do 6, posebno pH vrednosti od 3 do 5.5, poželjno pH vrednosti od oko 4 do 5, posebno poželjno otprilike 5, pri čemu se pufer bira iz grupe koju čine citratni puferi i smeše citratnih pufera i fosfatnih pufera.
2. 2. Formulacija prema zahtevu 1, u kojoj je pufer citratni pufer, poželjno 10 do 20 mM citratni pufer, posebno poželjno 10 mM citratni pufer.
3. 3. Formulacija prema ma kom od prethodnih zahteva, pri čemu puferovana formulacija sadrži farmaceutski prihvatljiv vehikulum, poželjno odabran iz grupe koju čine normalni fiziološki rastvor, rastvor 5% dekstroze i njihove smeše.
4. 4. Formulacija prema ma kom od prethodnih zahteva, gde je pufer 10 mM do 20 mM citratni pufer, pH vrednost formulacije je od 3 do 5.5, poželjno pH 5, koncentracija jedinjenja formule (I) je između 0.2 do 3 mg/ml (računato kao oblik slobodne baze) i formulacija sadrži farmaceutski prihvatljiv vehikulum.
5. 5. Formulacija prema zahtevu 4, gde je pufer 10 mM citratni pufer, pH vrednost formulacije je od 3 do 5.5, poželjno pH 5, koncentracija jedinjenja formule (I) je između 0.3 do 1.2 mg/ml (računato kao oblik slobodne baze) i formulacija sadrži farmaceutski prihvatljiv vehikulum.
6. 6. Formulacija prema zahtevu 5, gde je pufer 10 mM citratni pufer, pH vrednost formulacije je od 3 do 5.5, poželjno pH 5, koncentracija jedinjenja formule (I) je između 0.3 do 0.6 mg/ml (računato kao oblik slobodne baze) i formulacija sadrži farmaceutski prihvatljiv vehikulum.
7. 7. Formulacija prema ma kom od prethodnih zahteva, u kojoj se jedinjenje formule (I) koristi kao farmaceutski prihvatljiva so, naročito kao acetat i/ili L-laktat, posebno poželjno kao acetat.
8. 8. Formulacija prema ma kom od prethodnih zahteva za upotrebu u lečenju bolesti prouzrokovanih mikrobima.
9. 9. Formulacija za upotrebu prema zahtevu 8, naznačena time, što se formulacija primenjuje putem intravenske aplikacije.
10. 10. Farmaceutski prezentacioni oblik, koji sadrži injekcionu formulaciju prema ma kom od zahteva 1 do 7. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5