RS61543B1 - Postupci lečenja korišćenjem mobilizatora matične ćelije i imunosupresivnih agenasa - Google Patents

Postupci lečenja korišćenjem mobilizatora matične ćelije i imunosupresivnih agenasa

Info

Publication number
RS61543B1
RS61543B1 RS20210285A RSP20210285A RS61543B1 RS 61543 B1 RS61543 B1 RS 61543B1 RS 20210285 A RS20210285 A RS 20210285A RS P20210285 A RSP20210285 A RS P20210285A RS 61543 B1 RS61543 B1 RS 61543B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
days
once
tacrolimus
amd3100
transplantation
Prior art date
Application number
RS20210285A
Other languages
English (en)
Inventor
Zhaoli Sun
George Melville Williams
Original Assignee
Medregen Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Medregen Llc filed Critical Medregen Llc
Publication of RS61543B1 publication Critical patent/RS61543B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj se pronalazak odnosi na oblast transplantacije organa.
OBLAST PRONALASKA
[0002] Kao se dramatično poboljšali rani ishodi transplantacije organa kod ljudi, fokus istraživanja je pomeren prema rešavnaju preostalih problema povezanih sa hroničnom imunosupresijom. Inhibitori kalcineurina ostaju glavno uporište imunosupresije u transplantaciji organa, ali se povezuju sa važnim neželjenim dejstvima kao što su infekcije, dijabetes, hipertenzija, nefrotoksičnost i malignitet koji mogu uticati na kvalitet života i stope opstanka. Krajnji cilj transplantacije organa je da se postigne klinička tolerancija koja je definisana kao stabilna normalna funkcija transplantiranog organa u odsustvu imunosupresije. Muramatsu et al. (J. Orthopaedic Res, 2010, 28(4):457-61) su procenili upotrebu zračenja celog tela, faktora stimulacije kolonije granulocita i Tacrolimus (FK-506) posle alotransplantacije celog ekstremiteta na pacovu.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0003] Ovaj pronalazak se zasniva, delimično, na otkriću da je isporuku mobilizatora matične ćelije u kombinaciji imunosupresivnog agensa moguće koristiti za lečenje primaoca transplantiranog organa. Kao što je ovde opisano, režim lečenja promoviše opstanak alografta i indukuje prihvaćenost alografta u dugom periodu. Režim lečenja je moguće primeniti na bilo koji tip transplantata organa uključujući jetru, bubreg, kožu, srce, pluća, creva, i pankreas. Režim lečenja je moguće primeniti i na transplantaciju kompozitnog tkiva. Kompozitno tkivo može biti šaka, lice, ili drugi anatomski deo. U specifičnim izvođenjima, režim lečenja moguće je koristiti za povredu jetre toksinima kao tšto je acetaminofen ili fulminent hepatitis. S tim u skladu, ovaj pronalazak obezbeđuje pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu u postupku za lečenje primaoca transplantiranog organa da bi se pospešio opstanak alografta i indukovala prihvatljivost alografta, pri čemu se pleriksafor (AMD3100) i Tacrolimus isporuče primaocu u terapijski delotvornoj količini.
[0004] Ovaj pronalazak obezbeđuje pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu u postupku za lečenje primaoca kompozitnog tkiva da bi se pospešio opstanak alografta i indukovala prihvatljivost alografta, pri čemu se pleriksafor (AMD3100) i Tacrolimus isporuče primaocu u terapijski delotvornoj količini.
[0005] Transplantirani organ je moguće izabrati iz grupe koja obuhvata jetru, bubreg, kožu, srce, pluća, creva, i pankreas. U specifičnom izvođenju, taj organ je jetra. U nekom drugom izvođenju, taj organ je bubreg. U nekom još drugačijem izvođenju, taj transplantirani organ je koža. U izvesnim izvođenjima Takrolimus je isporučen pacijentu u maloj količini doze.
[0006] Ovaj pronalazak još obezbeđuje isporuku terapijski delotvorne količine AMD3100 koja mobiliše CD34<+>i/ili CD133<+>matične ćelije i malu dozu takrolimusa za upotrebu u postupku lečenja primaoca tansplantiranog organa.
KRATAK OPIS SLIKA
[0007]
SL. 1 predstavlja eksperimentalni protokol korišćen za malu transplantraciju jetre. SL. 2 pokazuje procenat CD34<+>, c-Kit<+>, Thy-1<+>i Sca1<+>ćelije u perifernoj krvi u AMD lečenih životinja u poređenju sa kontrolnim životinjama posle transplantracije jetre. SL. 3 prikazuje PCR analizu mRNK ekspresije SDF-1, SCF, c-Met, kao i Foxp3 u AMD plus malu dozu FK-506 grupe u poređenju sa drugim grupama 7 dana posle delimične transplantacije jetre (PLT).
SL. 4 pokazuje rezultate brzine bojenja hematoksilinom i eozinom (H&E) male DA jetre transplantirane u GFP Luis (Lewis) primaoca, 7. dan posle PLT.
SL. 5 predstavlja rezultate preživljavanja malog alografta jetre i kože na modelu akutnog odbijanja transplantata (DA na Luis (Lewis) pacovima). SL.6 pokazuje snimanje zelenog fluorescentnog proteina 3 meseca posle transplantacije jetre.
SL. 7 pokazuje SDF ekspresiju u malom transplantatu jetre posle tansplantacije (DA u Luisove (Lewis) pacove).
SL. 8 predstavlja rezultate imunohistohemijskog bojenja usmerene na detektovanje CD133<+>matičnih ćelija u alograftima jetre i slezinama i to 3 i 7 dana posle transplantacije.
SL. 9 predstavlja rezultate imunohistohemijskog bojenja usmerene na detektovanje CD133<+>i c-Met<+>ćelije u jetri
alografti 7 dana posle transplantacije.
SL. 10 pokazuje rezultate imunofluorescentnog bojenja usmerene na detektovanje fenotipa c-Met<+>ćelija primaoca u alograftima jetre 7 dana posle transplantacije.
SL. 11 pokazuje rezultate imunofluorescentnog bojenja iz eksperimenata koji detektuju Foxp3 ekspresiju u alograftima jetre i slezina 7 dana posle transplantacije. SL. 12 predstavlja eksperimentalni protokol korišćen za transplantraciju cele jetre. SL. 13 predstavlja rezultate preživljavanja alografta cele jetre na modelu akutnog odbijanja transplantata (DA na Luis (Lewis) pacovima).
SL. 14 pokazuje da je apsolutan broj c-Kit<+>, CD133<+>ili linije negativne (Lin-) i Thy1<+>c-Kit<+>CD133<+>trostrukopozitivnih ćelija u perifernoj krvi značajno povećan kod životinja lečenih sa AMD u poređenju sa životinjama lečenim slanim rastvorom ili G-CSF. SL. 15 pokazuje da je lečenje sa AMD3100 i Takrolimus indukuje dugoročno prihvatanje alografta bubrega.
SL. 16 pokazuje da kombinacija AMD3100 i Takrolimusa promoviše repopulaciju alografta bubrega pomoću ćelija izvedenih iz primaoca.
SL. 17 pokazuje rezultate opstanka ksenografa
kože kod miša u pacovu. SL.18 predstavlja
podatke GFP ekspresije iz eksperimenata
transplantata kože.
SL. 19 pokazuje repopulaciju alografta kože od strane primaoca 36 dana posle transplantacije.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0008] Jasno je da ovaj pronalazak nije ograničen na specifične postupke i komponente, itd., opisane ovde, jer ovim mogu da budu različiti. Takođe treba razumeti da se ovde korišćena terminologija koristi u svrhu opisivanja samo specifičnih izvođenja, i nije predviđena da ograniči obim ovog pronalaska. Treba napomenuti, da kako je ovde korišćeno i u priloženim patentnim zahtvima, pojedinačni oblici jednine "a," "an'', i "the" obuhvataju referentne množine osim ako kontekst to jasno ne nameće drugačije. Dakle, na primer, upućivanje na "protein" je upućivanje na jedan ili više proteina, i uključuje njegove ekvivalente poznate stručnjacima u ovoj oblasti i tako dalje.
[0009] Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni pojmovi korišćeni vode imaju isto značenje kako to obično razume prosečan stručnjak u ovoj oblasti u koju ovaj pronalazak spada. Opisani su specifični postupci, uređaji i materijali, iako sve metode i materijali slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani mogu biti korišćeni u praksi ili testirani za ovaj pronalazak.
[0010] Pored toga je dato i značenje izvesnih pojmova i fraza korišćenih u ovom spisu, primera, i priloženih patentih zahteva. Ove definicije nisu predviđene da budu ograničavajuće po prirodi i da služe da bi se obezbedilo jasno razumevanje izvesnih varijantnih rešenja ovog pronalaska.
[0011] Ovaj pronalazak se zasniva, delimično, na otkriću da je isporuku mobilizatora matične ćelije u kombinaciji imunosupresivnog agensa moguće koristiti za lečenje primaoca transplantiranog organa. Kao što je ovde opisano, režim lečenja promoviše opstanak alografta i indukuje prihvaćenost alografta u dugom periodu. Režim lečenja je moguće primeniti na bilo koji tip transplantata organa uključujući jetru, bubreg, kožu, srce, pluća, creva, i pankreas. Režim lečenja je moguće primeniti i na transplantaciju kompozitnog tkiva. Kompozitno tkivo može biti šaka, lice, ili drugi anatomski deo. U specifičnim izvođenjima, režim lečenja moguće je koristiti za povredu jetre toksinima kao tšto je acetaminofen ili fulminent hepatitis. Iako veliki deo ovog opisa jeste napravljen u kontekstu transplantacije organa, treba prepoznati da su režimi lečenja široko primenjeni, kao što je navedeno gore u tekstu, i ne treba ih tumačiti kao ograničenje u pogledu transplantacije organa.
[0012] Ovaj pronalazak obuhvata novu strategiju da se mobilišu matične ćelije primaoca što bi moglo da pospeši oporavak i obnovu odbijanja alografta posle transplantacije i da na kraj i sam alograft postane primalac. Ovo omogućava minimalnu imunosupresiju i brzo odvikavanje. Za pacijente, ovo se prevodi u poboljšani opstanak i eliminaciju komplikacija povezanih sa imunosupresijom, kao što su infekcije i malignitet.
[0013] Kod hroničnog prihvatanja pacovskog modela alogenog transplantata jetre, pronalazači su pokazali da donori cele ili delimične jetre su potpuno zamenjeni pomoću ćelija izvedneih iz primaoca u periodu od 1 godine, i 3 meseca, prema opisanom redosledu. Pronalazači su još pokazali da hepatociti izvedeni iz primaoca nastaju kao rezultat iz trasdiferencijacije ćelije ne fuzije ćelije, i da ove ćelije izvedene iz primaoca potiču iz koštane srži. Ovi podaci nagoveštavaju da himerna jetra postaje sve više kao primalac, i samim tim, prenosi toleranciju.
[0014] Kao što je opisano ovde, na modelu akutnog odbijanja transplantacije jetre pacova, ovi pronalazači su još pokazali da lečenje primaoca transplantata jetre sa mobilizatorom matične ćelije i imunosupresivnim agensom olakštava bržu repopulaciju alografta jetre sa ćelijama izvedenim iz primaoca posle transplantacije i idnukuje dugoročno prihvatanje alografta jetre bez neželjenih efekata.
[0015] Ovi pronalazači su takođe ispitali uvođenje prihvaćenosti alografta bubrega, i pokazali su ovde da lečenje sa kombinacijom mobilizatora matične ćelije i imunosupresivnim agensom sprečava akutno odbijanje i uključuje dugoročno prihvatanje alografta. Kao što je opisano u Primerima, transplantati bubrega iz pacova dark agouti (DA) u Luis (Lewis) pacove su transplantirani i pacovi primaoci su lečeni sa mobilizatorom matične ćelije (mozobil: AMD3100) i/ili malom dozom imunosupresanta (Tacrolimus, FK-506). U svakom slučaju, ovaj pronalazak pokazuje da je mobilizatore matične ćelije i imunosupresivne agense moguće je koristiti za indukovanje prihvaćenosti (toleranciju) alografta bubrega i izbegavanje hronične imunosupresije kod transplantacije organa.
[0016] Ovaj pronalazak je takođe koristan za transplantaciju kože. Prema Američkom udruženju za opekotine (American Burn Association), postoji približno 500.000 opekotinama povređenih godišnje u Sjedinjenim Državama, sa grubo 40.000 kojima je neoophodna hospitalizacija. Orgill et al., 360 N. ENGL. J. MED. 893-901 (2009). Opcija lečenja koja je pomogla da se smanji smrtnost tokom poslednjih deset godina je neodložna ekscizija opečene kože sa zamenskom transplantiranom kožom. Videti Wang et al., 28 J. BURN CARE RES.182-86 (2007); Nakazawa et al., 106 NIPPON GEKA GAKKAI ZASSHI 745-49 (2005); i Desai et al., 211 ANN. SURG.753-59 (1990). Idealni materijal za transplantiranje je autologna koža, uzeta sa neopečenog regiona kože tog istog pacijenta. Pribavljanje zdrave autologne kože, međutim, je ograničeno na pacijente koji pretrpe ozbiljne opekotine, čak i kada se koriste tehnike ekspanzije, kao što je "postavljanje hirurške mrežice,". Videti Lari et al., 27 BURNS 61-66 (2001); i Vandeput et al., 21 BURNS 364-70 (1995). Alogena koža se smatra zlatnim standardom za privremene transplantate. Orgill et al., 360 N. ENGL. J. MED.893-901 (2009).
[0017] Mogućnost korišćenja alogene kože i imunosupresije se koristi klinički i eksperimentalno. Veća povreda opekotinom je po sebi imunosupresivna; bez obzira na to, izuzetna antigenost kože neizbežno daje kao rezultat odbacivanje alografta. Kao u drugim alotransplantatima, bilo je pokušaja da se produži prihvaćenost alografta pomoću farmakološki indukovane imunosupresije.
[0018] Agensi koji se najčešće koriste su ciklosporin i ciklosporin A. Black et al. su prijavili upotrebu ciklosporinom indukovan dugoročni opstanak alografta još 1987. 8 J. BURN CARE REHABIL. 531-35 (1987). Ovaj eksperimentalni rad na modelima pacova je dodatno procenjen ranih 1990-tih. Cetinkale et al., 19 BURNS 262-64 (1993). Zanimljivo zapažanje u ovoj poslednjoj studiji je bilo da je imunosupresivni efekat povrede opekotinom brzo obrnut posle rane ekscizije i transplantiranja. Ovo naglašava potrebu za dodatnom imunosupresijom ako treba pokušati da se rana od opekotine pokrila samo alograftom.
[0019] Ishod pokušaja da se imunosuzbiju pacijenti sa velikim opekotinama i alograftima je u selini razočaravajući. Iako postoje povremeni izveštaji o produženom opstanku oni su i češće iskustvo pokazuje da se pacijenti podvrgavaju sepsi po mogućstvu u vezi sa imunosupresijom.
[0020] Prema tome, ovaj pronalazak još obuhvata postupke da se mobilizuju matične ćelije primaoca što bi moglo da pospeši oporavak i obnovu odbijanja kožnih alografta posle transplantacije i da na kraj i sam alograft postane primalac. Ovo će omogućiti minimalnu imunosupresiju i brzo odvikavanje. Za pacijente sa opekotinama, ovo bi se prevelo u poboljšani oporavak i eliminaciju komplikacija povezanih sa imunosupresijom, kao što su infekcije. Alograft kože može da pronađe novu ulogu kao trajna koža kod pacijenta sa opekotinama.
[0021] Kao što je još ovde pokazano, režim lečenja iz ovog pronalaska regrutuje regulatorne T ćelije na mesto transplantata organa. Zbog toga što su regulatorne T ćelije uključene u kontrolisanje autoimunih bolesti uključuje, ali se ne ograničava na, dijabetes tipa 1, eksperimentalni autoimuni encefalomijelitis, i upalnu bolest creva, mobilizacija matičnih ćelija (npr., sa kombinacijom AMD3100 i takrolimus) mogu imati šire kliničke primene pre nego transplantacija.
I. Definicije
[0022]
"Agens" se odnosi na sve materijale koje je moguće koristiti kao ili u farmaceutskim supstancama, ili to mogu biti jedinjenja kao što su mala sintetička ili prirodno izvedena organska jedinjenja, nukleinske kiseline, polipeptidi, antitela, fragmenti, izoforme, varijante, ili drugi materijali koje je moguće koristiti nezavisno za tu namenu, sve u skladu sa ovim pronalaskom.
"Antagonist" se odnosi na agens koji smanjuje (npr., zaustavlja ili ometa i suzbija) najmanje jednu bioaktivnost proteina. Antagonist može da bude jedinjenje koje ometa i suzbija ili smanjuje interakciju između proteina i nekog drugog molekula, npr., ciljni peptid ili supstrat enzima. Antagonist može da bude i jedinjenje koje smanjuje ekspresiju gena ili koje smanjuje količinu eksprimovanog prisutnog proteina.
"Hematopoeza" se odnosi na visoko dirigovan proces razvoja ćelije krvi i homeostazu. Prenatalno, hematopoeza nastaje u ovojnici embriona, zatim u jetri, i na kraju u koštanoj srži. Kod normalnih odraslih osoba nastaje u koštanoj srži i limfnim tkivima. Sve ćelije krvi se razvijaju iz pluripotentnih matičnih ćelija. Pluripotentne ćelije se diferenciraju u matične ćelije koje se posvećuju trima, dvema ili jednoj putanji hematopoezne diferencijacije. Nijedna od ovih matičnih ćelija nije morfološki distinktivna, međutim.
Pojmovi "matične ćelije" i "hematopoezne matične ćelije" se koriste ravnopravno ovde. Matične ćelije se razlikuju od drugih tipova ćelije u dve važne karakteristike. Prvo, matične ćelije su nespecijalizovane ćelije koje su sposobne da se obnavljaju tokom deobe ćelije, posle dugih perioda neaktivnost. Drugo, pri izvesnim fiziološkimi ili eksperimentalnim uslovima, matične ćelije je moguće indukovati da bi postale ćelije specifične za neko tkivo ili organ sa specijalnim funkcijama. Kod nekih organa, kao što su sistem za varenje kod čoveka, matične ćelije se redovno dele da bi popravile i zamenile istrošena ili oštećena tkiva. U drugim organima, međutim, kao što je pankreas i srce, matične ćelije se dele samo pod specijalnim uslovima.
Pojam "matične ćelije" može da se odnosi na multipotentne matične ćeije koje mogu da se diferenciraju u sve ćelije krvi uključujući eritrocite, leukocite i trombocite. Na primer, "hematopoezne matične ćelije" ili "stematične ćelije" kao što je korišćeno u ovom pronalasku se nalaze ne samo u koštanoj srži nego i u ćelijama izvedenim iz krvi pupčanka.
Mobilizator "mobilizator matične ćelije," "mobilizator hematopoeznih matičnih ćelija ili progetor" ili "mobilišu," (ravnopravno je korišćeno), kao št je opisano ovde, se odnosi na bilo koji tip jedknjenja bilo da je mali organski molekul, sintetički ili prirodno izvedene, ili polipeptid, kao što je faktor rasta ili faktor raasta ili faktor koji stimuliš ekolonijj ili aktivni fragment ili njegov imitat, nukleinska kiselina, ugljenohidrata, antitelo, ili u svaki drugi agens koji deluje da povećava migraciju matičnih ćelija iz koštane srži u perifernu krv. Mobilizator matične ćelije može povećati broj hematopoeznih matičnih čelija ili hematopoezne / prkursor ćelije u perifernoj krvi, time se omogućava dostupniji izvor matičnih ćelija za upotrbu za transplantacfiju. U specifičnim izvođenjima, mobilizator matične ćeljie se odnosi na bilo koji agens koji mobiliše CD34<+>i/ili CD133<+>matične čelije.
"Pacijent," "subjekat," "domaćin," ili "primalac transplantrata" kog treba lečiti ovimpostupcima se odnosi na bilo humanu ili nehumanu životinju, kao što su primati, sisari, i kičmenjaci.
"Mali molekul" se odnosi na supstancu koja ima molekularnu težinu od manje od 3 oko kilodaltona (kDa), manje od oko 1,5 kilodaltona, ili manje od oko 1 kilodaltona. Mali molekuli mogu biti nukleinske kiseline, peptidi, polipeptidi, peptidomimetici, karbohidrati, lipidi ili bilo drugi organski ili neorganski (koji obuhvataju ugljenik) ili neorganske molekule. "Mali organski molekul" je organsko jedinjenej (ili kompleksirano organsko jedinjenje sa neorganskim jedinjenjem (npr., netal) koje ima molekularnu težinu manje od 3 kilodaltona, manje od oko 1,5 kilodaltona, ili manje od oko 1 kDa. Kako je ovde korišćeno, pojmovi "lečenje," "tretiranje" "lečiti" i slično se odnosi na dobijanje željenog farmakološkog i/ili fiziološkog efekta. Pojmovi se takođe koriste u kontekstu isporuke "terapijski delotvorne količine" agensa, npr., mobilizatora matične ćelije i/ili imunosupresivnog agensa. Dejstvo može biti profilaktičko u smislu potpunog ili delimičnog sprečavanja specifičnog ishoda, bolesti ili njenog simptoma i/ili može biti terapijsko u smilsu delimičnog ili potpunog leka za bolest i/ili neželjeno dejstvo koje se može pripisati toj bolesti.
"Lečenje," kako je ovde korišćeno, se odnosi na bilo koje lečenje ili bolest kod subjekta, posebno kod ljudskog bića, i obuhvata:
(a) sprečavanje nastanka bolesti kod subjekta koja može biti predisponirana bolesti ali nije još uvek dijagnostikovana kao takva; (b) inhibiranje bolesti, t.j., zaustavljanje njenog razvoja; i (c) ublažavanje bolesti, npr., prouzrokovanje regresije bolesti, npr., da bi se potpuno ili delimično uklonili simptomi bolesti. U specifičnim izvođenjima, pojam se koristi u kontekstu lečenja primalaca transplantiranog organa. Preciznije, lečenje primaoca transplantiranog organa uključuje (a) postizanje kliničke tolerancije; (b) promovisanje popravke i oporavka odbijanja alografta; (c) repopulaciju alografta sa ćelijama izvedenim iz primaoca; (d) indukovanje dugoročnog prihvatanja alografta bez neželjenih dejstava; (e) smanjenje ili eliminisanje komplikacija povezanih sa imunosupresijom kao što su infekcije.
II. Mobilizatori matične ćelije
[0023] Ovaj se pronalazak odnosi na lečenje primalaca transplantiranog organa sa mobilizatorom matične ćelije AMD3100 u kombinaciji sa imunosupresivnim agensom Tacrolimus.
[0024] U specifičnim izvođenjima, mobilizator matične ćelije obuhvata CXCR4 antagonist i CXCR4 antagonist je AMD3100. AMD3100 (1,1’-[1,4-fenilenbis(metilen)]bis-1,4,8,11-tetraazaciklo-tetradekan) je simetrični bi-ciklam, prototip nepeptidni antagonist CXCR4 receptora hemokina. Videti U.S. patente br. 6,835,731 i br. 6,825,351. Pojam "AMD" ili "AMD3100" se koristi ravnopravno sa Plerixafor, rINN, USAN, JM3100, i njegov trgovački naziv, Mozobil™.
[0025] Ovaj opis takođe razmatra korišćenje mimetika AMD3100. Mutacione supstitucije na 16 pozicija smeštenih na TM-III, -IV, -V, -VI, i -VII oblažu glavni džep vezivanja liganda tog CXCR4 receptora je identifikovao tri ostatka: Asp171 (AspIV:20), Asp262 (AspVI:23), i Glu288 (GluVII:06) kao glavne tačke interakcije za AMD3100.
Molekularno modelovanje nagoveštava da jedan prsten ciklama AMD3100 reaguje međusobno sa Asp171 in TM-IV, pri čemu je drugi prsten u sendviču između grupa karboksilne kiseline od Asp262 i Glu288 iz TM-VI i -VII, prema opisanom redosledu. U jednoj studiji, utvrđeno je da je uvođenje samo Glu na poziciji VII:06 i uklanjanje neutrališućeg Lys ostatka na poziciji VII:02 dalo kao rezultat 1000-struko povećanje afiniteta za AMD3100 za i do 10-struko u odnosu na afinitet u CXCR4. Dakle, mimetici, kao što je na primer, peptid ili nepeptidni antagonisti sa poboljšanom oralnom biodostupnošću mogu biti projektovani da efikasno i selektivno blokiraju CXCR4 receptor.
III. Imunosupresivni agensi
[0026] Pojam "imunosupresivni agens" se odnosi na agens koji inhibira, usporava ili reverzira aktivnost imunog sistema. Imunosupresivni agensi deluju potiskivanjem funkcije imunih ćelija koje odgovaraju (uključujući, na primer, T ćelije), direktno (npr., delovanjem na imunu ćeliju) ili indirektno (delovanjem na druge posredne ćelije). Imunosupresivni agensi mogu biti dati subjektu da bi se sprečilo da imuni sistem subjekta montira odgovor imunog sistema posle transplantata organa ili za lečenje bolesti koja je prouzrokovana previše aktivnim imunim sistemom.
[0027] Neki imunosupresivni agensi koji zaustavljaju funkciju imunokompetentnih ćelija
1
se koriste da zaustave imunološko odbijanje (odbijanje transplantata) koje prati takve transplantacije, jer je imunološko odbijanje prouzrokovano alotransplantracijom uglavnom zbog ćelijske nezrelosti.
[0028] Imunosupresivan agens je takrolimus Tacrolimus (takođe FK-506 ili Fujimycin) je imunosupresivni lek koji se uglavnom koristi posle transplanta alogenog organa da bi smanjio aktivnost imunog sistema pacijenta i da bi smanjio rizik od odbijanja organa. Smanjuje kod T ćelija proizvodnju interleukin-2 (IL-2). Takođe se koristi za topikalno dobijanje za lečenje ozbiljnog atočičnog dermatitisa (ekcema), ozbiljnog refraktornog uveitisa posle transplantata koštane srži, i stanja kože poznatog kao vitiligo. To je makrolidni lakton sa 23 članova koji je otkriven još 1984. iz fermentacionog bujona uzorka japanske soli koji je sadržao bakterije Streptomyces tsukubaensis. Lek se prodaje pod trgovačkim nazivom Prograf® daje se dvaput dnevno, Advagraf® formulacija sa zadržanim otpuštanjem omogućava doziranje jednom dnevno, i Protopic® topikalna formulacija.
IV. Farmaceutske supstance i isporuka pacijentu
[0029] Ovaj pronalazak razmatra upotrebu delotvorne količine AMD3100 i Takrolimusa. Kako je ovde korišćeno, pojam "efektivan," označava odgovarajući da se ispuni željeni, očekivani, ili nameravani rezultat. Preciznije, "delotvorna količina" ili "terapijski delotvorna količina" se koristi ravnopravno i odnosi se na količinu AMD3100 i Takrolimusa, možda u još detaljnijoj kombinaciji sa još jednim terapijskim agensom, neophodnim da obezbedi željeno "lečenje" (definisano ovde) ili terapijsko dejstvo, npr., količina je delotvorna da spreči, ublaži, leči ili poboljša simptome bolesti ili produži opstanak subjekta koji se leči. U specifičnim izvođenjima, farmaceutske supstance iz ovog pronalaska se isporučuju pacijentu u terapijski delotvornoj količini za lečenje pacijenata sa transplantiranim organom. Kao što će razumeti prosečan stručnjak u ovoj oblasti, tačna količina koja je neophodna će se razlikovati od subjekta do subjekta, zavisno od starosti, opšteg stanja subjekta, ozbiljnosti stanja koje se leči, specifičnog jedinjenja i/ili supstance koja se isporučuje pacijentu, i sličnog. Odgovarajuća "terapijski delotvornu količinu" u svakom pojedinačnom slučaju može odrediti prosečan stručnjak u ovoj oblasti upućivanjem u odgovarajuće tekstove i literaturu i/ili korišćenjem rutinskog eksperimentisanja.
[0030] Farmaceutske supstance iz ovog pronalaska su u biološki kompatibilnom obliku pogodnom za isporuku in vivo za subjekte. Farmaceutske supstance mogu još da obuhvate farmaceutski prihvatljiv nosač. Pojam "farmaceutski prihvatljivo" znači odobreno od strane regulatorne agencije Savezne ili državne vlade ili na spisku u SAD Farmakopeji (U.S. Pharmacopeia) ili durgim generalno priznatim farmakopejama za upotrebu na životinjama, i preciznije na ljudima. Pojam "nosač" se odnosi na razblaživač, adjuvans, ekscipijens, ili pomoćno farmaceutsko sredstvo sa kojim se AMD3100 i/ili Tacrolimus isporučuje pacijentu. Takvi farmaceutski nosači mogu biti sterilne tečnosti, kao što je voda i uja, uključujući petrolej, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, uključujući ali ne i ograničeno na kikiriki ulje, sojino ulje, mineralno ulje, susamovo ulje i slična. Voda može biti nosač kada se farmaceutska supstanca isporučuje oralno. Fiziološki rastvor i vodena dekstroza mogu biti nosači kada se farmaceutska supstanca isporuči pacijentu intravenozno. Fiziološki rastvori i vodena dekstroza i rastvori glicerola moguće je koristiti kao tečne nosače za rastvore koji se ubrizgavaju. Pogodni farmaceutski ekscipijensi obuhvataju skrob, glukozu, laktozu, saharozu, želatin, slad, pirinač, brašno, kredu, silika gel, natrijum stearat, glicerol monostearat, talk, natrijum hlorid, osušeno obrano mleko, glicerol, propilen, glikol, vodu, etanol i slično. Farmaceutska supstanca, po želji, može takođe da sadrži manje količine agensa za ovlaživanje ili emulzifikovanje, ili pH puferske agense. [0031] Farmaceutske supstance iz ovog pronalaska mogu imati oblik rastvora, suspenzija, emulzija, tableta, pilula, kapsula, prahova, formulacija sa zadržanim otpuštanjem i slične. Supstancu je moguće formulisati kao supozitoriju, sa tradicionalnim vezivačima i nosačima kao što su trigliceridi. Oralna formulacija može uključiti standardne nosače kao farmaceutske klase manitola, laktoze, skroba, magnezijum stearata, natrijum saharina, celuloze, magnezijum karbonata, itd. U specifičnom izvođenju, farmaceutska supstanca obuhvata delotvornu količinu AMD3100 i/ili Takrolimusa zajedno sa pogodnom količinom farmaceutski prihvatljivog nosača da bi se obezbedio oblik propisne isporuke pacijentu. Formulacija treba da odgovara režimu isporuke pacijentu.
[0032] Farmaceutske supstance iz ovog pronalaska mogu biti isporučene bilo kojom specifičnom rutom isporuke uključujući, ali bez ograničenja na oralna, parenteralna, potkožna, intramuskularna, intravenozna, intrartikularna, intrabronhijalna, intraabdominalna, intrakapsularna, intrakartilagina, intrakavitarna, intracelijalna, intracelebelarna, intracerebroventrikularna, intrakolonalna, intracervikalna, intragastrična, intrahepatična, intramiokardna, intraostealna, intraoseona, intrapelvična, intraperikardijalna, intraperitonealna, intrapleuralna, intraprostatična, intrapulmonarna, intrarektalna, intrarenalna, intraretinalna, intraspinalna, intrasinovijalna, u grudni koš, intrauterina, intravezikalna, bolusna, vaginalna, rektalna, bukalna, sublingvalna, intranazalna, jontoforezna sredstva, ili transdermalna sredstva. Najpogodnije rute su oralna isporuka ili injekcija. Kod izvesnih izvođenja, poželjna je potkožna injekcija.
[0033] Generalno, farmaceutske supstance koje obuhvataju AMD3100 i/ili Takrolimus opisan ovde moguće je koristiti sam (t.j., AMD3100 isporučen sa Takrolimusom) ili u skladu sa drugim terapijskim agensima pri odgovarajućim dozama definisanim rutinskim testiranjem da bi se dobila optimalna efikasnost uz minimizovanje svake potencijalne toksičnosti. Režim doziranja koji koristi farmaceutsku supstancu iz ovog pronalaska moguće je izabrati u skladu sa raznoraznim činiocima uključujući tip, vrste, starost, težinu, pol, medicinsko stanje koje treba leiti, rutu isporuke; funkciju bubrega i jetre pacijenta, i specifičnu farmaceutsku supstancu koja je korišćena. Prosečan lekar može lako da odredi i prepiše delotvornu količinu farmaceutske supstance (i potencijalno druga sredstva uključujući terapijska sredstva) neophodna da se spreči, suprotstavi, ili zaustavi napredak tog stanja.
[0034] Optimalna preciznost za dostizanje kocentracija koje ima terapijski režim (npr., farmaceutske supstance koje obuhvataju AMD3100 i/ili Takrolimus u kombinaciji sa drugim terapijskim agensom) unutar opsega koja daju kao prinos maksimalnu efikasnost sa minimalnom toksičnošću može zahtevati režim zasnovan na kinetici dostupnosti farmaceutske supstance da jedno ili više ciljnih mesta. Raspodela, uravnoteženje, i eliminacija farmaceutske supstance može da se razmatra kada se određuje optimalna koncentracija za koncentraciju za režim terapije. Doze farmaceutske supstance opisane ovde moguće je podesiti kada su kombinovane da bi postigle željena dejstva. Sa druge strane, doze farmaceutskih supstanci i različiti terapijski agensi mogu biti nezavisno optimizovani i kominovani da bi postigle sinergijski rezultat pri čemu je patologija smanjena više nego što bi to bio slučaj da je bilo šta od tih korišćeno samostalno.
[0035] Specifično, toksičnost i terapijska efikasnost farmaceutske supstance opisana ovde može biti određena standardnim farmaceutskim postupcima u kulturama ćelije ili eksperimentalnim životinjama, npr., za određivanje LD50(doza smrtna za 50% populacije) i ED50(doza terapijski delotvora kod 50% populacije). Odnos doze između toksičnog i terapijskog dejstva je terapijski indeks i moguće ga je izraziti kao odnos LD50/ED50. Farmaceutske supstance koje ispoljavaju velike terapijske indekse imaju prednost osim kada je citotoksičnost supstance aktivnost ili terapijski ishod koji se želi. Iako farmaceutske supstance koje ispoljavaju toksična neželjena dejstva mogu biti korišćene, sistem isporuke može ciljati takve supstance na mesto zahvaćenog tkiva da bi
1
se svelo na minimum potencijalno oštećenje za neinficirane ćelije i, time, smanjila neželjena dejstva. Generalno, farmaceutske supstance iz ovog pronalaska moguće je isporučiti na način koji daje maskimalnu efikasnost i svodi toksičnost na minimum.
Podatke dobijene iz ogleda kulture ćelija i studija na životinjama moguće je opciono koristiti za formulisanje opsega doze za upotrebu kod ljudi. Doze takvih supstanci su preporučljivo unutar opsega koncentracija koje cirkulišu koje uključuju ED50 sa malom ili bez ikakve toksičnosti. Doza može varirati unutar ovog opsega zavisno od oblika doze korišćenog i korišćene rute isporuke leka. Za bilo koju supstancu korišenu u datim postupcima iz ovog pronalaska, terapijski delotvorna doza može biti procenjena na početku iz ogleda kulture ćelija. Dozu je moguće formulisati na modelima životinja da bi se dostigla koncentracija u plazmi krvotoka u opsegu koji uključuje IC50 (koncentracija supstance koja se testira koja postiže polumaksimalnu inhibiciju simptoma) kao što je određeno u kulturi ćelije. Takvu informaciju je moguće koristiti da bi se precizno odredile korisne doze kod ljudi. Nivoe plazme je moguće izmeriti, na primer, visokim tečnom hromatografijom visoke performanse.
[0037] Pored toga, isporuka pacijentu doze ovih supstanci iz ovog pronalaska može biti optimizovana korićenjem sistema farmakokinetičkog/farmakodinamičkog modelovanja. Na primer, jedan ili više režima doze moguće je izabrati i farmakokinetički/farmakodinamički model je moguće koristiti da bi se odredio farmakokinetički/farmakodinamički profil jednog ili više režima doziranja. Dalje, jedan od režima doziranja za isporuku je moguće izabrati da bi se postigao željeni farmakokinetički/farmakodinamički odgovor na osnovu specifičnog farmakokinetičkog/farmakodinamičkog profila. Videti WO 00/67776.
[0038] Više farmaceutskih supstanci može biti isporučeno u pojedinačnoj dnevnoj dozi, ili ukupna dnevna doza može biti isporučena u podeljeni dozama dva, tri ili četiri puta dnevno. U slučaju oralne isporuke, dnevna doza supstanci može biti varirana tokom širokog opsega od oko 0,1 ng do oko 1.000 mg po pacijentu, na dan. Opseg može specifičnije biti od oko 0,001 ng/kg do 10 mg/kg telesne težine na dan, oko 0,1-100 µg, oko 1,0-50 µg ili oko 1,0-20 mg na dan za odrasle (na oko 60 kg).
[0039] U slučaju oralne isporuke, dnevna doza supstanci može biti varirana tokom širokog opsega od oko 0,1 ng do oko 1000 mg po pacijentu, na dan. Za oralnu isporuku, supstance mogu biti obezbeđene u obliku tableta koje sadrže od oko 0,1 ng do oko 1000 mg supstance ili 0,1, 0,2, 0,5, 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 800, 900, ili 1000 miligrama te supstance za simptomatsko podešavanje doze pacijentu kog treba lečiti. Delotvorna količina farmaceutske supstance je redovno isporučena na nivou doze od oko 0,1 ng/kg do oko 20 mg/kg telesne težine na dan. U jednom izvođenju, opseg je od oko 0,2 ng/kg do oko 10 mg/kg telesne težine na dan. U jednom drugom izvođenju, opseg je od oko 0,5 ng/kg do oko 10 mg/kg telesne težine na dan. Farmaceutske supstance je moguće isporučiti u režimu od oko 1 do oko 10 puta dnevno.
[0040] U slučaju injekcija, obično je zgodno dati intravenoznom rutom u količini od oko 0,0001µg- 30 mg, oko 0,01 µg-20 mg ili oko 0,01-10 mg na dan odraslima (na oko 60 kg). U slučaju drugih životinja, i doza izračunata za 60 kg može biti isporučena isto tako.
[0041] Doze farmaceutske supstance iz ovog pronalaska mogu opciono da uključe 0,0001 µg o 1.000 mg/kg/po isporuci pacijentu, ili 0,001 µg do 100,0 mg/kg/po isporuci pacijentu, od 0,01 µg do 10 mg/kg/po isporuci pacijentu, od 0,1 µg do 10 mg/kg/po isporuci pacijentu, uključujući, ali ne i ograničeno na, 0.1, 0.2, 0,3, 0.4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53,54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73,74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 i/ili 100-500 mg/kg/po isporuci pacijentu ili bilo koji opseg, vrednost ili frakcija navvedenih, ili da bi se postigla koncentracija u serumu od 0,1, 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5, 2,9, 3,0, 3,5, 3,9, 4,0, 4,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10, 10,5, 10,9, 11, 11,5, 11,9, 20, 12,5, 12,9, 13,0, 13,5, 13,9, 14,0, 14,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10, 10,5, 10,9, 11, 11,5, 11,9, 12, 12,5, 12,9, 13,0, 13,5, 13,9, 14, 14,5, 15, 15,5, 15,9, 16, 16,5, 16,9, 17, 17,5, 17,9, 18, 18,5, 18,9, 19, 19,5, 19,9, 20, 20,5, 20,9, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 96, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, i/ili 5000 µg/ml koncentracije u serumu po jednoj ili više isporuka ili bilo koji opseg, verdnost ili frakcija,
[0042] Kao neograničavajući primer, lečenje subjekata moguće je izvesti kao jednokratno ili periodično doziranje supstance iz ovog pronalaska 0,1 ng do 100 mg/kg kao što je 0,0001, 0,001, 0,01, 0,10,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100 mg/kg, na dan, barem jednog dana 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36,
1
37, 38, 39, or 40, ili alternativno ili dodatno, barem jednom nedeljno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, ili 52, ili alternativno ili dodatno, barem jednom 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ili 20 godina, ili bilo koja njihova kombinacija, korišćenjem pojedinačne infuzije ili ponovljenih doza.
[0043] Specifično, farmaceutske supstance iz ovog pronalaska moguće je isporučiti barem jednom nedeljno u periodu od nekoliko nedelja. U jednom izvođenju, farmaceutske supstance se isporučuju jednom nedeljno tokom nekoliko nedelja do nekoliko meseci. U jednom drugom izvođenju, farmaceutske supstance se isporučuju jednom nedeljno tokom četiri do osam nedelja. U još jednom drugom izvođenju, farmaceutske supstance se isporučuju jednom nedeljno tokom četiri nedelje.
[0044] Preciznije, farmaceutske supstance moguće je isporučiti barem jednom dnevno tokom oko 2 dana, barem jednom dnevno tokom oko 3 dana, barem jednom dnevno tokom oko 4 dana, barem jednom dnevno tokom oko 5 dana, barem jednom dnevno tokom oko 6 dana, barem jednom dnevno tokom oko 7 dana, barem jednom dnevno tokom oko 8 dana, barem jednom dnevno tokom oko 9 dana, barem jednom dnevno tokom oko 10 dana, barem jednom dnevno tokom oko 11 dana, barem jednom dnevno tokom oko 12 dana, barem jednom dnevno tokom oko 13 dana, barem jednom dnevno tokom oko 14 dana, barem jednom dnevno tokom oko 15 dana, barem jednom dnevno tokom oko 16 dana, barem jednom dnevno tokom oko 17 dana, barem jednom dnevno tokom oko 18 dana, barem jednom dnevno tokom oko 19 dana, barem jednom dnevno tokom oko 20 dana, barem jednom dnevno tokom oko 21 dana, barem jednom dnevno tokom oko 22 dana, barem jednom dnevno tokom oko 23 dana, barem jednom dnevno tokom oko 24 dana, barem jednom dnevno tokom oko 25 dana, barem jednom dnevno tokom oko 26 dana, barem jednom dnevno tokom oko 27 dana, barem jednom dnevno tokom oko 28 dana, barem jednom dnevno tokom oko 29 dana, barem jednom dnevno tokom oko 30 dana, ili barem jednom dnevno tokom oko 31 dan.
[0045] Alternativno, farmaceutske supstance moguće je isporučiti pacijentu otprilike jednom svakog dana, otprilike jednom svakog dana, dana, otprilike jednom svaka 2 dana, otprilike jednom svaka 3 dana, otprilike jednom svaka 4 dana, otprilike jednom svakih 5 dana, otprilike jednom svakih 6 dana, otprilike jednom svakih 7 dana, otprilike jednom svakih 8 dana, otprilike jednom svakih 9 dana, otprilike jednom svakih 10 dana, otprilike jednom svakih 11 dana, otprilike jednom svakih 12 dana, otprilike jednom svakih 13 dana,
1
otprilike jednom svakih 14 dana, otprilike jednom svakih 15 dana, otprilike jednom svakih 16 dana, otprilike jednom svakih 17 dana, otprilike jednom svakih 18 dana, otprilike jednom svakih 19 dana, otprilike jednom svakih 20 dana, otprilike jednom svakih 21 dana, otprilike jednom svakih 22 dana, otprilike jednom svakih 23 dana, otprilike jednom svakih 24 dana, otprilike jednom svakih 25 dana, otprilike jednom svakih 26 dana, otprilike jednom svakih 27 dana, otprilike jednom svakih 28 dana, otprilike jednom svakih 29 dana, otprilike jednom svakih 30 dana, otprilike jednom svakih 31 dana.
[0046] Farmaceutske supstance iz ovog pronalaska moguće je alternativno isporučiti otprilike jednom svake nedelje, otprilike jednom svake 2 nedelje, otprilike jednom svake 3 nedelje, otprilike jednom svake 4 nedelje, otprilike jednom svakih 5 nedelja, otprilike jednom svakih 6 nedelja, otprilike jednom svakih 7 nedelja, otprilike jednom svakih 8 nedelja, otprilike jednom svakih 9 nedelja, otprilike jednom svakih 10 nedelja, otprilike jednom svakih 11 nedelja, otprilike jednom svakih 12 nedelja, otprilike jednom svakih 13 nedelja, otprilike jednom svakih 14 nedelja, otprilike jednom svakih 15 nedelja, otprilike jednom svakih 16 nedelja, otprilike jednom svakih 17 nedelja, otprilike jednom svakih 18 nedelja, otprilike jednom svakih 19 nedelja, otprilike jednom svakih 20 nedelja.
[0047] Alternativno, farmaceutske supstance iz ovog pronalaska moguće je isporučiti otprilike jednom svakog meseca, otprilike jednom svaka 2 meseca, otprilike jednom svaka 3 meseca, otprilike jednom svaka 4 meseca, otprilike jednom svakih 5 meseci, otprilike jednom svakih 6 meseci, otprilike jednom svakih 7 meseci, otprilike jednom svakih 8 meseci, otprilike jednom svakih 9 meseci, otprilike jednom svakih 10 meseci, otprilike jednom svakih 11 meseci, otprilike jednom svakih 12 meseci.
[0048] Alternativno, farmaceutske supstance mogu biti isporučene barem jednom nedeljno tokom oko 2 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 3 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 4 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 5 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 6 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 7 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 8 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 9 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 10 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 11 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 12 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 13 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 14 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 15 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 16 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 17 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 18 nedelja, barem jednom nedeljeno tokom oko 19 nedelja, ili barem jednom nedeljeno tokom oko 20 nedelja.
1
[0049] Alternativno farmaceutske supstance moguće je isporučiti barem jednom nedeljeno tokom oko 1 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 2 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 3 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 4 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 5 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 6 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 7 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 8 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 9 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 10 mesec, barem jednom nedeljeno tokom oko 11 meseci, ili barem jednom nedeljno tokom oko 12 meseci.
[0050] Farmaceutske supstance iz ovog pronalaska moguće je isporučiti istovremeno ili u sledu istim ili drugačijim rutama isporuke. Farmaceutske supstance moguće je još kombinovati sa jednim ili više dodatnih terapijskih agenasa. Određivanje identiteta i količine farmaceutskih supstanci za upotrebu u postupcima iz ovog pronalaska mogu lako da odrede stručni lekari korišćenjem standardnih tehnika poznatih u ovoj oblasti. U specifičnim izvođenjima, AMD3100 moguće je isporučiti u kombinaciji sa delotvornom količinom Takrolimusa. U drugim specifičnim izvođenjima, AMD3100 i Takrolimus je moguće isporučiti u kombinaciji sa delotvornom količinom drugog mobilizatora matične ćelije, drugog imunosupresivnog agensa, ili drugog terapijskog agensa.
[0051] U različitim izvođenjima, AMD3100 u kombinaciji sa Takrolimusom (i opciono još jednim mobilizatorom matične ćelije, još jedan imunosupresivni agens, ili drugi terapijski agens) moguće je isporučiti u otprilike isto vreme, manje od 1 minut razmaka, manje od 2 minuta razmaka, manje od 5 minuta razmaka, manje od 30 minuta razmaka, 1 sat razmaka, na oko 1 sat razmaka, na oko 1 do oko 2 sati razmaka, na otprilike 2 sata do otprilike 3 sata razmaka, na otprilike 3 sata do otprilike 4 sata razmaka, na otprilike 4 sata do otprilike 5 sati razmaka, na otprilike 5 sati do otprilike 6 sati razmaka, na otprilike 6 sati do otprilike 7 sati razmaka, na otprilike 7 sati do otprilike 8 sati razmaka, na otprilike 8 sati do otprilike 9 sati razmaka, na otprilike 9 sati do otprilike 10 sati razmaka, na otprilike 10 sati do otprilike 11 sati razmaka, na otprilike 11 sati do otprilike 12 sati razmaka, na otprilike 12 sati do 18 sati razmaka, 18 sati do 24 sati razmaka, 24 sati do 36 sati razmaka, 36 sati do 48 sati razmaka, 48 sati do 52 sata razmaka, 52 sata do 60 sati razmaka, 60 sati do 72 sata razmaka, 72 sata do 84 sata razmaka, 84 sata do 96 sati razmaka, ili 96 sati do 120 sati razmaka. U specifičnim izvođenjima, dve ili više terapija su isporučene u okviru iste posete pacijentu.
[0052] U izvesnim izvođenjima, AMD3100 u kombinaciji sa Takrolimusom (i opciono još jednim mobilizatorom matične ćelije, drugi imunosupresivni agens, ili još jedan terapijski
1
agnes) su ciklično isporučeni pacijentu. Ciklična terapija uključuje isporuku prve terapije (npr. mobilizatora matične ćelije) tokom izvesnog perioda vremena, posle isporuke druge terapije (npr., imunosupresivnog agensa) tokom izvesnog perioda vremena, opciono, posle čega sledi isporuka možda trećine terapije za period vremena i tako dalje, i ponavljanje ove isporuke u sledu, npr., ciklično, da bi se smanjio razvoj otpornosti na jednu od terapija, da bi se izbegla ili smanjila neželjena dejstva jedne od terapija, i/ili da bi se poboljšalo dejstvo terapija. U izvesnim izvođenjima, isporuka kombinovane terapije iz ovog pronalaska može biti ponovljena i isporuke je moguće odvojiti barem 1 dan, 2 dana, 3 dana, 5 dana, 10 dana, 15 dana, 30 dana, 45 dana, 2 meseca, 75 dana, 3 meseca, ili barem 6 meseci.
[0053] Dakle, u jednom varijantnom rešenju, AMD3100 je isporučen u kombinaciji sa Takrolimusom. U specifičnim izvođenjima, mobilizator matične ćelije AMD3100 i imunosupresivni agens Takrolimus je isporučen odvojeno tokom nekog perioda vremena posle transplantacije i/ili povrede. Na primer, režim lečenja za primaoca transplantata jetre može obuhvatiti sledeće: AMD3100
[0054] (1mg/kg) i Takrolimus (0,1 mg/kg) na dan 0, 1, 2, 3 i 7 (potkožna injekcija). Režim lečenja
može alternativno obuhvatiti sledeće: AMD (1mg/kg) i Takrolimus (0,1 mg/kg) na dan 0, 1, 2, 3, 7, 10 i 15 (potkožna injekcija).
[0055] Kao neograničavajući primer za transplantaciju bubrega, režim lečenja može da obuhvati AMD3100 (1 mg/kg) posle reperfuzije i dan 2, 4, 6, i 10 posle transplantacije, i Takrolimus (0,05 mg/kg) posle reperfuzije i dan 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, i 10 posle transplantacije (potkožna injekcija). U izvođenjima koja obuhvataju transplantaciju kože, režim lečenja može obuhvatiti sledeće: AMD3100 (1 mg/kg) neposredno posle transplantacije i svaka dva dana posle toga, i Takrolimus (0,1 mg/kg) svakog dana posle transplantacije (potkožna injekcija).
[0056] Bez dodatnog obrazlaganja veruje sa stručnjak u ovoj oblasti, korišćenjem prethodnog opisa, može da koristi ovaj pronalazak u punoj meri. Primeri u nastavku su samo ilustrativni, i nisu ograničavajući za ostatak opisa ni na koji način.
PRIMERI
[0057] Primeri u nastavku su izneti da bi se prosečnom stručnjaku u ovoj oblasti dao potpuno objašnjenje i opis kako da jedinjenja, supstance, artikli, uređaji, i/ili postupci
1
opisani i za koje se ovde traži zaštita patentom prave i procenjuju, i predviđeni su da budu prosto ilustrativni i nisu predviđeni da ograniče obim onoga što pronalazači posmatraju kao svoj pronalazak. Nastojalo se da se postigne preciznost u pogledu brojeva (npr., količina, temperature, itd.) ali ovde treba uzeti u obzir i neke greške i odstupanja. Osim ako nije drugačije navdeno, delovi su delovi prema težini, temperatura je u stepenima Celzijusove skale ili je tremeratura okoline, i pritisak je na ili blizu vrednosti atmosferskog pritiska. Postoje brojne varijacije i kombinacije reakcionih uslova, npr., koncentracije komponenata, željeni rastvarači, mešavine rastvarača, temperature, pritisci i drugi opsezi reakcije i stanja koja je moguće koristiti da bi se optimizovala čistoća proizvoda i dobjeni prinos iz opisanog procesa. Jedino razumno i rutinsko eksperimentisanje će biti zahtevani da se optimizuju takvi uslovi postupka.
Primer 1: Uvođenje prihvatanja alografta jetre mobilizovanjem matičih ćelija koštane srži
Materijali i postupci
[0058] Sojevi pacova i nega. DA (RT1Aa) pacovi su kupljeni od kompanije Harlan ague-Douli (Harlan ague-Dawley) (Indianapolis, IN) i korišćeni u starosnom dobu od 8-12 nedelja. Zeleni fluorescentni protein (GFP) transgenski Luis (Lewis) (RT11) soj pacova je dobijen od Nacionalnih instituta zdravlja koji finansira Centar za resurse i istraživanja pacova Univerzitet iz Misurija, Kolumbija, MO (National Institutes of Health, Rat Resource and Research Center (RRRC), University of Missouri, Columbia, MO). Životinje su održavane u specifičnom objektu bez patogena Džon Hopkins medicinskih institucija (Johns Hopkins Medical Institutions). Životinje su negovane u skladu sa NIH vodičima i pod protokolom koji je odobrio komitet za brigu o životinjama Univerziteta Džon Hopkins (Johns Hopkins University Animal Care Committee).
[0059] Transplantacija jetre. Ortotopična transplantacija jetre (OLT) je izvedena pod izofluran (Abbott laboratories, North Chicago, IL) inhalacionom anestezijom prema postupku modifikovanom u odnosu na prethodno opisan. Mala transplantacija jetre se sastojala od uklanjanja levog bočnog režnja, levog dela srednjeg režnja, i prednjih i zadnjih kaudatnih režnjeva. Ovo je smanjilo masu jetre za oko 50%. Jetre su isprane na licu mesta sa 10ml hladnog slanog rastvora preko portalne vene, objašnjen i uronjeno u hladan slani rastvor. Jetre domaćina je eksizirana ligacijom i podelom desne adrenalne i lumbarne
2
vene. Hepatična arterija je ligovana i podeljena. Žučni kanal je nauliran umetanjem cevčice dužine 2 mm (spoljni prečnika, 1,2 mm) preko holedoktomije i zaštićeno sa obodnim 8-0 svilenih kopči. Unutrašnja vena kava i portalna vena su unakrsno stegom pričvršćene sa spajalicama za mikrokapilare. Suprahepatična vena kava je povučena nadole korišćenjem pamučne trake provučene oko jetre domaćina i unakrsno pričvršćena stegama sa Statinski kleštima za bebe. Krvni sudovi su podeljeni i jetra je uklonjena. Suprahepatična vena kava donora je vena java anastomozirana od kraja do kraja sa suprahepatičnom venom kava domaćina sa tečnim 8-0 prolenom. Portalna vena i infra hepatična vena kava su anastomozirana korišćenjem prethodno opisane tehnike manžetne. Uobičajeni žučni kanal donora je kanuliran sa malom cevčicom koja se nalazi u leđnom kanalu domaćina i vezana je na mesto. Hepatična arterija nije rekonstruisana.
[0060] Eksperimentalne grupe i lečenje životinja. Transplantirani pacovi su podeljeni u četiri grupe: (1) kontrolna grupa (lečena sa istom zapreminom slanog rastvora); (2) mala doza imunosupresanta (FK-506, 0. 1 mg/kg/dan); (3) mobilizator matične ćelije (AMD3100, 1 mg/kg/dan); i (4) kombinacija male doze FK-506 i AMD3100. AMD3100 i/ili FK-506 su ubrizgani potkožno neposredno posle reperfuzije i 1, 2, 3 i 7 dana posle transplantacije jetre (SL. 1). Neke od životinja su žrtvovane 3, 7 i 10 dana posle transplantacije i tkiva jetre, slezine i periferna krv je prikupljena.
[0061] Protočna citometrija. Pojedinačne suspenzije ćelije (5x105) monocita periferne krvi su analizirane za CD34, CXCR4, c-Kit, Thy-1, i Sca-1 eksprimovanje. Nespecifično vezivanje antitela je blokirano sa serumom koze i pacova (Sigma) u trajanju od 30 minuta.
[0062] Histološke studije. Histološke promene u segmentima tkiva jetre su procenjene pomoću H&E bojenja. GFP pozitivne ćelije izvedene iz primaoca u segmentima tkiva jetre su analizirane konfokalnom fluorescentnom mikroskopijom.
[0063] RT-PCR Analiza. mRNK eksprimovanje CD34, CDCR4, SDF-1, SCF, c-Kit, c-Met i Foxp3 u jetrama i slezinama je analizirano korišćenjem RT-PCR.
Rezultati
[0064] AMD terapija značajno povećava populacije matične ćelije u perifernoj krvi posle transplantacije. SL. 2 pokazuje da je procenat CD34<+>, c-Kit<+>, Thy-1+ i Sca1<+>ćelija u perifernoj krvi bio znatno povišen kod životinja lečenih sa AMD u poređenju sa kontrolnim životinjama posle transplantracije jetre.
[0065] Kombinacija AMD i male doze FK-506 je povećala ne samo ekspresiju faktora matične ćelije već i Foxp3 (T regulatorni marker) u alograftima jetre i slezinama. PCR analiza pokazuje mRNK ekspresiju SDF- 1, SCF, c-Met, kao i Foxp3 su bile značajno povećane u AMD plus grupa sa malom dozom FK-506 u poređenju sa drugim grupama 7 dana posle transplantacije (SL.3).
[0066] Kombinacija AMD i male doze FK-506 povećava ćelije izvedene iz primaoca i infiltraciju smanjenom upalom u alograftima jetre 7 dana posle transplantacije (A Combination of AMD and Low Dose FK-506 Increases Recipient Derived Cells and Reduced Inflammatory Infiltration in Liver Allografts on Day 7 After Transplantation.). H&E bojenje pokazuje da jeza kod akutnog odbijanja alografta jetre 7 dana posle transplantacije, teška mononuklearna ćelijska infiltracija je bila unapred postavljena u proširenim portalnim područjima uz prekid arhitekture jetre. Obrazac ćelijske infiltracije je bio sličan za AMD ili malom dozom FK-506 lečene grupe, ali je broj infiltrirajućih ćelija bio manji (SL.4 gornja i srednja panela). Nasuprot tome, bilo je mnogo manje upalnih ćelija u portalnim područjima u AMD plus malom dozom FK-506 lečenoj grupi. Interesantno, bilo je mnogo više iz primalaca izvedenih GFP pozitivnih ćelija se pojavilo u parenhimi alografta jetre u AMD plus malom dozom FK-506 lečenoj grupi u poređenju sa AMD ili FK-506 sama grupa 7 dana posle transplantacije (SL. 4, donja panela). Ovi rezultati nagoveštavaju da lečenje kombinacijom AMD i male doze FK ne samo da smanjuje akutno odbijanje, već i pospešuje repopulaciju alografta jetre od strane primalaca.
[0067] Mobilisanje matičnih ćelija kod primalaca sa malom dozom imunosupresije indukuje dugoročno prihvatanje alografta jetre i produžava opstanak alografta kože od istog donora. U kontrolnoj grupi, alografti kože su odbijeni u roku od 12 dana posle transplantacije. Lečenje sa AMD ili malom dozom FK-506 nije značajno produžilo opstanak primaoca iako jedan od pet primalaca lečenih sa FK-506 opstaje tokom duže od 1 meseca. Interesantno, lečenje kombinacijom AMD i male doze FK-506 je indukovalo dugoročno prihvatanje alografta (toleranciju) bez neželjenih dejstava. Kod ovih životinja prihvaćenost jetre, alografta kože od istog donora može da opstane tokom duže od jednog meseca posle transplantacije.
Zaključak
[0068] Mobilizacija matičnih ćelija koštane srži primaoca pomoću AMD pospešuje prihvaćenost alografta jetre i kombinaciju AMD i mala doza imunosupresanta indukuje dugoročno prihvatanje alografta bez neželjenih dejstava. Agensi za mobilizaciju matične ćelije koštane srži mogu biti korišćeni za indukovanje tolerancije transplantanta organa.
Dopunski detaljni podaci
[0069] Ovi pronalazači su pretpostavili da će mobilizacija matičnih ćelija koštane srži primaoca olakšati brzu repopulaciju alografta jetre na modelu akutnog odbijanja i smanjiti ili eliminisati potrebu za imunosupresijom. Da bi se testirala ova hipoteza, izvedeni su transplantati jetre iz dark aguti (crni) (DA) pacova u Luis (Lewis) pacove, t.j. model odbijanja. Pacovi primaoci su lečeni sa hematopoeznom mobilizatoru matične ćelije (pleriksafor) i/ili malom dozom imunosupresanta (takrolimus). Transplantirani pacovi su podeljeni u četiri grupe: 1) kontrolna grupa je lečena slanim rastvorom), 2) lečenje sa malom dozom imunosupresanta (takrolimus, 0,1mg/kg/dan), 3) mobilizator matične ćelije (pleriksafor (AMD3100), 1mg/kg/dan) samo, ili 4) kombinacija takrolimusa male doze i pleriksafora.
[0070] Kod pacova sa malom transplantacijom jetre, pleriksafor i/ili takrolimus su ubrizgani potkožno neposredno posle reperfuzije i dana 1, 2, 3 i 7 posle transplantacije. Za transplantaciju cele jetre kod pacova, pleriksafor i/ili takrolimus su ubrizgani potkožno neposredno posle reperfuzije i to 1, 2, 3, 7, 10. i 15. dana posle transplantacije. Životinje iz svake grupe su žrtvovane 3, 7 i 10 dana posle transplantacije i tkiva jetre, slezine i periferna krv je prikupljena.
[0071] Delotvorna mobilizacija primaoca BMD matičih ćelija sa malom dozom IS i Pleriksafor indukuje dugoročno prihvatanje malog alografta jetre i produžava opstanak alografta kože od istog donora. SL.2 pokazuje da je procenat CD34<+>, c-Kit<+>, Thy-1<+>i Sca1<+>ćelija u perifernoj krvi bio značajno povećan kod životinja lečenih pleriksaforom u poređenju sa kontrolnim životinjama posle transplantacije jetre. U kontrolnoj grupi, kao prethodno, alografti jetre su svi odbijeni u roku od dvanaest dana posle transplantacije. Lečenje sa pleriksaforom ili malom dozom takrolimusa samo nije značajno produžilo opstanak primaoca (iako jedan od pet primalaca lečenih samo sa malom dozom takrolimusa je preživelo tokom duže od 4 meseca). Interesantno, lečenje kombinacija pleriksafora i male doze tkrolimusa je indukovalo dugoročno (>6 meseci) prihvatanje alografta bez očiglednih neželjenih dejstava (SL. 5A). Kod ovih životinja, naknadni alograft kože od istog soja donora je opstao tokom duže od jednog meseca posle transplantacije (SL. 5B) dok su alografti kože Braun-Norvej (Brown- Norway) (BN) pacova (treća strana) bili odbijeni tokom 6 dana nagoveštavali za donora specifično nereagovanje na terapiju.
2
[0072] Kombinacija Pleriksafora i male doze Takrolimusa povećava ćelije izvedene iz primaoca i smanjuje infiltrat upalom u alograftima sedmog (7) dana posle transplantacije jetre. H&E bojenje pokazuje da kod alografta jetre u kontrolnoj grupi koji prolaze akutno odbijanje sedam dana posle transplantacije, teška mononuklearna ćelijska infiltracija jeste bila prisutna u proširenim portalnim područjima uz prekid arhitekture jetre. Obrazac ćelijske infiltracije je bio sličan kod životinja lečenih pleriksaforom i malom dozom takrolimusa, ali je broj infiltrirajućih ćelija bio manji (SL.4, gornji i srednji paneli). Nasuprot tome, postojalo je manje upalnih ćelija u portalnim područjima životinja lečenih i pleriksaforom i takrolimusom. Interesantno, bilo je mnogo više iz primalaca izvedenih GFP pozitivnih ćelija u parenhimi alografta jetre životinja koje su dobile oba leka u poređenju sa pojedinačnom terapijom lekom 7 dana posle transplantacije (SL.4, donja panela).
[0073] Tri meseca posle transplantacije, SL. 6A pokazuje regeneraciju žučnog kanala i veliki broj hepatocita male veličine u područjima centralne vene. GFP fluorescentno snimanje celog organa je izmereno korišćenje Xenogen (Ksenogen) sistema. Kako je prikazano na SL.6B, donor DA jetre nema GFP ekspresiju,kao što se očekivalo. Međutim, transplantirani graft jetre donora pokazuje viši stepen fluorescencije tri meseca posle tansplantata kod primaoca GFP Luis (Lewis) grafta koji je lečen sa pleriksaforom i takrolimusom. Fluorescentna mikroskopija je potvrdila ova otkrića (SL.6C). Ovi rezultati nagoveštavaju da lečenje kombinacijom pleriksafora i takrolimusa ne samo da je smanjilo akutno odbijanje, već je i pospešilo repopulaciju alografta jetre mobilisanim matičnim ćelijama primaoca.
[0074] Lečenje sa pleriksaforom i takrolimusom povećava ekspresiju činilaca matične ćelije kao i Foxp3 bojenje (marker regulatornih T ćelija) u alograftima jetre i slezina. PCR analiza je pokazala da je mRNK eksprimovanje SDF- 1, SCF, c-Met, CD133 kao i Foxp3 bilo značajno povećano kod dvostruko lečene grupe u poređenju sa svim drugim grupama na dan 7 posle transplantacije (SL.3). Interesanto, IFN- γ (citokin Th1), IL-17 (citokin Thl7) kao i IL-6 (promoter razvoja za Th17) su bili značajno smanjeni u dvostruko lečenoj grupi, iako TGF- β (koji je potreban i za iTreg i Th17 razvoj) su ostali isti.
[0075] SDF-1 protein ekspresije je bio dalje određen pomoću vestern blot analize. SL. 7 pokazuje da su nivoi SDF-1 u alograftima jetre oporavljeni iz životinja u grupi čija je terapija obuhvatala pleriksafor plus takrolimus bili značajno viši u poređenju sa drugim grupama, posebno 7 dana posle transplantacije.
[0076] Imunohistohemijsko (IHC) bojenje je pokazalo da je broj CD133<+>ćelija u segmentima tkiva jetre i slezine iz grupe sa dvostrukom terapijom bio značajno povećan 3 i 7 dana posle transplantacije (SL.8). Takođe, broj c-Met<+>ćelija je bio takođe povećan u dvostruko lečenoj grupi. Interesantno, obrasci bojenja CD133 i c-Met u segmentima tkiva jetre su bili slični nagoveštavaju da ovi markeri mogu da boje veliki broj istih ćelija (SL. 9).
[0077] Broj primalaca (GFP<+>)-izvedenih c-Met pozitivnih (crvenih) ćelija je određen imunofluorescentnim bojenjem je bio značajno viši u segmentima tkiva iz jetre i slezina u dvostrukolečenoj grupi u poređenju sa kontrolnim životinjama posle transplantacije (DA u GFP transgenski Luis (Lewis)) (SL.10). Imunofluorescentno bojenje je takođe pokazalo da je broj Foxp3 pozitivnih ćelija bio značajno viši u segmentima tkiva iz alografta jetre i slezina u dvostruko lečenoj grupi (SL.11).
[0078] Ovi rezultati nagoveštavaju da lečenje sa pleriksaforom i takrolimusom (mala doza) olakšava mobilizaciju matične ćelije i migraciju na alografte jetre preko povećane ekspresije SDF-1, i može takođe da promoviše diferencijaciju Foxp3<+>regulatornih T ćelija. Veoma je verovatno da ovaj pronalazak (aktivacija regulatornih T ćelija preko mobilišućih matičnih ćelija koštane srži) može biti korišćen i za transplantaciju drugih organa, kao što je bubreg, pankreas, srce, pluća, šake i lica.
[0079] Kombinacija pleriksafor i lečenje malom dozom Takrolimusa indukuje prihvatanje alografta cele jetre. Za transplantaciju cele jetre kod pacova, pleriksafor i/ili takrolimus su ubrizgani potkožno neposredno posle reperfuzije i to 1, 2, 3, 7, 10. i 15. dana posle transplantacije (SL. 12). SL. 13 pokazuje da su u kontrolnoj grupi, svi alografti kože bili odbijeni u roku od dvanaest dana posle transplantacije. Lečenje samo sa pleriksaforom ili malom dozom takrolimusa nije značajno produžilo opstanak primaoca. Interesantno, lečenje kombinacija pleriksafora i male doze tkrolimusa je indukovalo dugoročno (>4 meseca) prihvatanje alografta bez očiglednih neželjenih dejstava.
Primer 2: Uvođenje prihvatanja alografta bubrega sa materijalima i postupcima za mobilizovanje matičih ćelija koštane srži
[0080] Sojevi pacova i nega. DA (RT1A<a>) pacovi su kupljeni od kompanije Harlan ague-Douli (Harlan ague-Dawley) (Indianapolis, IN) i korišćeni u starosnom dobu od 8-12 nedelja. Zeleni fluorescentni protein (GFP) transgenski Luis (Lewis) (RT11) soj pacova je dobijen od Nacionalnih instituta zdravlja koji finansira Centar za resurse i istraživanja pacova Univerzitet iz Misurija, Kolumbija, MO (National Institutes of Health, Rat Resource and Research Center (RRRC), University of Missouri, Columbia, MO). Životinje su
2
održavane u specifičnom objektu bez patogena Džon Hopkins medicinskih institucija (Johns Hopkins Medical Institutions). Životinje su negovane u skladu sa NIH vodičima i pod protokolom koji je odobrio komitet za brigu o životinjama Univerziteta Džon Hopkins (Johns Hopkins University Animal Care Committee).
[0081] Ortotopična transplatacija bubrega. Ortotopična transplantacija bubrega na pacovima je izvedena pod izofluranom (Abbott laboratories, North Chicago, IL) inhalacionom anestezijom prema tehnici koju je opisao Daniller (1968). Specifično, proučavan je model kutnog odbijanja kod pacova na modelu DA na Luis (Lewis). Ukratko, bubrezi davaoca dobijeni iz muških DA pacova su isprani sa 10 ml hladnog slanog rastvora i skladišteni na 4°C dok je primaoca trebalo pripremiti. Ukupan vremenski period ishemijske hladnoće nije bio duži od 40 minuta. Mužjacima primaocima vrste Luis (Lewis) je izvršena transplantacija posle leve nativne nefrektomije. Ukupna renalna arterija donora, vena i uretra su anastomozirane na renalnu arteriju, venu i uretru primaoca. Anastomoza je završena korišćenjem 10-0 svilenih kopči. Desni prirodni bubreg je uklonjen pre zatvaranja abdomena.
[0082] Eksperimentalne grupe i lečenje životinja. Transplantirani pacovi su podeljeni u četiri grupe uključujući kontrolnu grupu (lečeni su istom zapreminom slanog rastvora), malom dozom imunosupresanta (FK-506, 0,05mg/kg/dan), mobilizatorom matične ćelije (AMD3100, 1mg/kg/dan) i kombinacijom male doze FK-506 i AMD3100. AMD3100 su ubrizgani potkožno neposredno posle reperfuzije (dan 0) i dan 2, 4 i 6 posle transplantacije bubrega. FK-506 su ubrizgani potkožno neposredno posle reperfuzije (dan 0) i dan 1, 2, 3, 4, 5, 6 i 7 posle transplantacije bubrega. Lečenja su ponovljena u kombinovano lečenoj grupi 1,2 i 3 meseca posle transplantacije. Neke od životinja su žrtvovane 7 i 30 dana posle transplantacije i tkiva bubrega, slezine i periferna krv je prikupljeni.
[0083] Protočna citometrija. Suspenzije pojedinačne ćelije (5x105) monocita periferne krvi su analizirane na negativnu liniju CD34, CD133, Thy1, i c-Kit ekspresiju. Nespecifično vezivanje antitela je blokirano sa serumom koze i pacova (Sigma) u trajanju od 30 minuta.
[0084] Histološke studije. Histološke promene u segmentima tkiva bubrega su procenjene pomoću H&E bojenja. GFP pozitivne ćelije izvedene iz primaoca u segmentima tkiva bubrega su analizirane fluorescentnom mikroskopijom.
[0085] Analiza Xenogen (Ksenogen) snimanja uživo prikazuje slike alografta bubrega. Ekspresija zelenog fluorescentnog proteina (GFP) u alograftima bubrega su analizirane Ksenogen (Xenogen) prikazom slike uživo.
2
Rezultati
[0086] AMD i FK lečenje malom dozom značajno povećava populacije matične ćelije u perifernoj krvi. Ćelije periferne krvi su izolovane iz životinja 3 sata posle injekcije sa AMD i/ili FK. Potpun broj krvnih zrnaca (CBC) je izmeren i markeri matične ćelije su kvanitifikovani protočnom citometrijom. Apsoulutni broj matičnih ćelija je izračunat kao WBC (-hilj./µL) X % matičnih ćelija. SL.14 pokazuje da je apsolutan broj c-Kit<+>, CD133<+>ili linije negativne (Lin-) i Thy1<+>c-Kit<+>CD133<+>trostrukopozitivnih ćelija u perifernoj krvi značajno povećan kod životinja lečenih sa AMD u poređenju sa životinjama lečenim slanim rastvorom ili G-CSF. Neočekivano, mala doza FK (0,1mg/kg) a ne velika doza FK terapije značajno povećava c-Kit<+>i CD133<+>ćelija u perifernoj krvi. Interesantno, povišenje Lin- i Thy1<+>c- Kit<+>CD133<+>ćelija je bilo dramatičnije kod životinja lečenih sa kombinacijom AMD i male doze FK-506. Ovi rezultati nagoveštavaju sinergijsku ulogu AMD i mala doza FK-506 u mobilizaciji matičnih ćelija koštane srži.
[0087] Mobilisanje matičnih ćelija primalaca sa AMD i mala doza FK-506 indukuje dugoročno prihvatanje alografta bubrega. U kontrolnoj grupi (SL. U kontrolnoj grupi, (SL.
15) alografti kože su odbijeni u roku od 10 dana posle transplantacije. AMD ili mala doza FK (0,05mg/kg) lečenja nije produžilo opstanak primaoca. Interesantno, lečenje kombinacijom AMD i male doze FK-506 (0,05mg/kg) je indukovalo dugoročno prihvatanje alografta bez neželjenih dejstava. Svi primaoci (100%) lečeni sa AMD i malom dozom FK su preživeli tokom duže od tri meseca.
[0088] Kombinacija AMD i male doze FK-506 promoviše repopulaciju alografta bubrega pomoću ćelija izvedenih iz primaoca. Bubrezi iz DA pacova su transplantirani u GFP Luis (Lewis) primaoce. GFP fluorescentno snimanje celog organa je izmereno korišćenje Xenogen (Ksenogen) sistema. Kako je prikazano na SL. 16, donor DA bubrega nema GFP ekspresiju,kao što se očekivalo. Međutim, transplantirani graft bubrega donora je pokazao viši stepen fluorescencije 1 mesec posle tansplantata kod primaoca transgenskog GFP Luis (Lewis) grafta koji je lečenoj sa AMD i takrolimusom (0,1mg/kg). Iako upalne ćelije primaoce mogu biti razlog ove pojave, utvrđeno je da su se iz primaoca izvedene GFP pozitivne ćelije pojavile u cevčicama alografta i cevčica samih epitelnih ćelija su bile GFP pozitivne. Ovi rezultati nagoveštavaju da matične ćelije izvedene iz primaoca mogu da pomognu da se regenerišu kanalići i kombinacija AMD i male doze FK za lečenje ne samo da smanjuje akutno odbijanje, već i pospešuje repopulaciju alografta bubrega od strane primalaca.
2
Zaključak
[0089] Mobilizacija matičnih ćelija koštane srži primaoca pomoću AMD pospešuje prihvaćenost alografta bubrega i kombinaciju AMD i mala doza Takrolimusa indukuje dugoročno prihvatanje alografta bubrega bez neželjenih dejstava. Agensi za mobilizaciju matične ćelije koštane srži mogu biti korišćeni za indukovanje tolerancije transplantanta bubrega.
Primer 3: Uvođenje prihvatanja alografta kože malom dozom imunosupresije i mobilizovanjem matičih ćelija koštane srži
[0090] Alogena koža ima glavnu ulogu u akutnoj nezi opekotina tokom više od 100 godina, i predstavlja zlatni standard za privremene zamene za kožu. Glavna prepreka za produženu upotrebu je njena imunogenost.
[0091] Na osnovu ovde opisanih podataka, još se pretpostavlja da će mobilizacija matičnih ćelija koštane srži primaoca olakšati repopulaciju alografta kože sa ćelijama izvedenim iz primaoca i smanjiti ili eliminisati potrebu za imunosupresijom u ovoj populaciji pacijenata pri čemu infekcija igra veću ulogu u mortalitetu. Da bi se testirala ova hipoteza, transplantati kože su izvedeni sa DA pacova na Luis (Lewis) pacove, i pacovi primaoci su lečeni sa mobilizatorom matične ćelije (mozobil: AMD3100) i/ili malom dozom imunosupresanta (Tacrolimus, FK-506).
Materijali i postupci
[0092] Sojevi pacova i nega. DA (RT1Aa) pacovi i C57/B6 miševi su kupljeni od kompanije Harlan ague-Douli (Harlan ague-Dawley) (Indianapolis, IN) i korišćeni u starosnom dobu od 8-12 nedelja. Zeleni fluorescentni protein (GFP) transgenski Luis (Lewis) (RT11) soj pacova je dobijen od Nacionalnih instituta zdravlja koji finansira Centar za resurse i istraživanja pacova Univerzitet iz Misurija, Kolumbija, MO (National Institutes of Health, Rat Resource and Research Center (RRRC), University of Missouri, Columbia, MO). Životinje su održavane u specifičnom objektu bez patogena Džon Hopkins medicinskih institucija (Johns Hopkins Medical Institutions). Životinje su negovane u skladu sa NIH vodičima i pod protokolom koji je odobrio komitet za brigu o životinjama Univerziteta Džon Hopkins (Johns Hopkins University Animal Care Committee).
2
[0093] Transplantacija kože. DA pacovi ili C57/B6 miševi su korišćeni kao donori kože i GFP transgenski Luis (Lewis) pacovi su korišćeni kao primaoci. Ležište grafta (2,5X3 cm) je pripremljeno na leđima pacova primaoca; posebna nega je posvećena očuvanju sloja kožepanniculus camosus. Graft veličine 2,5x3cm2, je pripremljen iz unutrašnjosti tela donora, je transplantiran sa prekinutim šavovima od 5-0 svile. Kalem je pokriven sa zaštitnom trakom i prva kontrola je sprovedena 2 dana posle transplantacije kože i posle doga je praćeno kontrolnom na dnevnoj bazi. Odbijanje je definisano kao dan kada je transplantat kože razvio crveno-braon boju i tvrdu konzistenciju.
[0094] Eksperimentalno lečenje grupa i životinja. Transplantirani pacovi su podeljeni u četiri grupe uključujući kontrolnu grupu (lečeni su istom zapreminom slanog rastvora), malom dozom imunosupresanta (FK-506, 0,1mg/kg/dan), mobilizatorom matične ćelije (AMDS 100, 1mg/kg/dan) i kombinacijom male doze FK-506 i AMD3100. AMD3100 su ubrizgane potkožno neposredno posle transplantacije i svaka dva dana posle transplantacije kože. FK506 su ubrizgani potkožno svakog dana posle transplantacije.
[0095] Biopsije. U izabranim vremenskim periodima, 2,0-mm biopsije probijanjem pune debljine su uzeti za histološku procenu zamrznutih uzoraka i uzoraka u formalinu i analizu Ksenogen (Xenogen) prikazom slike uživo za GFP eksprimovanje.
Rezultati
[0096] Mobilisanje matičnih ćelija kod primalaca sa AMD i malom dozom FK-506 indukuje dugoročno prihvatanje alografta kože i produžava opstanak ksenografta kože. U kontrolnoj grupi (Tabela 1), alografti kože su odbačeni u roku od 7 dana posle transplantacije. Terapija uz pomoć AMD ili male doze FK (0,1mg/kg) nije značajno produžila opstanak alografta. Interesantno, lečenje kombinacijom AMD i male doze FK-506 (0,1mg/kg) je indukovalo dugoročno prihvatanje alografta kože bez neželjenog dejstva. Svi alografti kože kod primaoca lečenih sa AMD i malom dozom FK su preživeli tokom duže od jednog meseca. Takođe, AMD ili mala doza FK lečenja nije produžilo opstanak ksenografta. Međutim, kombinacija AMD i male doze FK je značajno produžila preživljavanje ksenografta (Tabela 1 i SL.1).
2
Tabela 1. Preživljavanje
transplantata na koži
[0097] Kombinacija AMD i male doze FK-506 promoviše revovulaciju graftova kože putem ćelija izvedenih iz primaoca. GFP fluorescentno snimanje biopsija kože je izmereno korišćenjem Xenogen (Ksenogen) sistema. Kako je prikazano na SL.18A, koža GFP primaoca eksprimuje jaku fluorescenciju, i koža donora DA ili C57/b6 nema nikakvo GFP eksprimovanje, kako je očekivano. Međutim, transplantirani graft kože donora pokazuje viši stepen fluorescencije 7 dana posle tansplantata primaocu transgenskog GFP Luis (Lewis) grafta koji je lečen sa AMD i takrolimusom (0,1mg/kg). Interesantno, stepen fluorescencije na alograftima kože je viši u poređenju sa ksenograftima. Visok nivo fluorescencije ostaje kod alografta kože 28 dana posle transplantacije (SL.18B). SL.19 pokazuje novoregenerisanu kožu sa belom dlakom koja ukazuje na repopulaciju alografta kože putem primaoca. Ovi rezultati nagoveštavaju da matične ćelije izvedene iz primaoca mogu da repopulišu alograft kože i da lečenje kombinacijom AMD i male doze FK ne samo da smanjuje akutno odbijanje, već i pospešuje repopulaciju alografta kože od strane primalaca.
Zaključak
[0098] Mobilizacija matičnih ćelija koštane srži primaoca pomoću AMD i malom dozom Takrolimusa pospešuje prihvaćenost alografta kože i kombinaciju AMD i mala doza Takrolimusa produžava opstanak ksenografta kože bez neželjenih dejstava. Alografti kože mogu biti repopuolisani putem ćelija izvedenih iz primaoca. Agensi za mobilizaciju matične ćelije koštane srži mogu biti korišćeni za indukovanje tolerancije transplantanta na koži.

Claims (8)

Patentni zahtevi
1. Pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu u postupku lečenja primaoca transplantiranog organa da bi se pospešio opstanak alografta i indukovala prihvaćenost alografta,
pri čemu se pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus isporuče primaocu u terapijski delotvornoj količini.
2. Pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je organ izabran iz grupe koja obuhvata jetru, bubreg, kožu, srce, pluća, creva, i pankreas.
3. Pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je taj organ jetra.
4. Pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je taj organ bubreg.
5. Pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je taj organ koža.
6. Pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu u postupku za lečenje primaoca kompozitnog tkiva da bi se pospešio opstanak alografta i indukovala prihvatljivost alografta, pri čemu se pleriksafor (AMD3100) i Tacrolimus isporuče primaocu u terapijski delotvornoj količini.
7. Pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu se taj pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus isporuče pacijentu jednom svaka dva dana.
8. Pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu se taj pleriksafor (AMD3100) i Takrolimus isporuče pacijentu jednom svakog meseca.
RS20210285A 2009-12-11 2010-12-10 Postupci lečenja korišćenjem mobilizatora matične ćelije i imunosupresivnih agenasa RS61543B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28560209P 2009-12-11 2009-12-11
US31618010P 2010-03-22 2010-03-22
PCT/US2010/059877 WO2011072216A2 (en) 2009-12-11 2010-12-10 Treatment methods utilizing stem cell mobilizers and immunosuppressive agents
EP10836746.7A EP2509619B1 (en) 2009-12-11 2010-12-10 Treatment methods utilizing stem cell mobilizers and immunosuppressive agents

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61543B1 true RS61543B1 (sr) 2021-04-29

Family

ID=44146200

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210285A RS61543B1 (sr) 2009-12-11 2010-12-10 Postupci lečenja korišćenjem mobilizatora matične ćelije i imunosupresivnih agenasa

Country Status (13)

Country Link
EP (2) EP2509619B1 (sr)
CY (1) CY1124082T1 (sr)
DK (1) DK2509619T3 (sr)
ES (1) ES2855428T3 (sr)
HR (1) HRP20210334T1 (sr)
HU (1) HUE053293T2 (sr)
LT (1) LT2509619T (sr)
PL (1) PL2509619T3 (sr)
PT (1) PT2509619T (sr)
RS (1) RS61543B1 (sr)
SI (1) SI2509619T1 (sr)
SM (1) SMT202100127T1 (sr)
WO (1) WO2011072216A2 (sr)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012078746A2 (en) * 2010-12-07 2012-06-14 The Johns Hopkins University Compositions and methods for mobilizing stem cells
EP2946008A4 (en) * 2013-01-15 2016-07-20 Ohio State Innovation Foundation PROCESS FOR MOBILIZING HEMATOPOETIC STEM CELLS
CN105658217B (zh) * 2013-04-29 2021-03-19 约翰霍普金斯大学 经由自体干细胞动员的创伤愈合
CN114599359A (zh) * 2019-10-25 2022-06-07 社会福祉法人三星生命公益财团 用于提高干细胞的治疗效果的包含免疫抑制剂的组合物以及使用所述组合物提高干细胞的治疗效果的方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2124800T3 (es) * 1993-01-08 1999-02-16 Hoechst Ag Empleo de leflunomida para la inhibicion de interleuquina 1 beta.
US6811773B1 (en) 1993-12-22 2004-11-02 Human Genome Sciences, Inc. Human monocyte colony inhibitory factor (M-CIF) polypeptides
WO2000067776A1 (en) 1999-05-11 2000-11-16 Ortho-Mcneil Pharmaceuticals, Inc. Pharmacokinetic and pharmacodynamic modeling of erythropoietin administration
MXPA02012067A (es) * 2000-06-05 2004-08-19 Univ Columbia Identificacion y uso de celulas endoteliales precursoras derivadas de medula osea par mejorar la funcion del miocardio despues de dano isquemico.
DE60137435D1 (de) 2000-09-15 2009-03-05 Anormed Inc Chemokin rezeptor bindenden heterozyklische verbindungen
JP4431389B2 (ja) 2001-09-12 2010-03-10 アノーメッド インコーポレイティド 鏡像異性的に純粋なアミノ置換縮合二環式環の合成
WO2005039595A1 (ja) * 2003-10-23 2005-05-06 Chugai Pharmaceutical Co., Ltd. シクロホスファミドを有効成分とする末梢循環障害改善又は治療剤
EP1790639B1 (en) * 2004-08-27 2014-03-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Spirocyclic compounds and their use as cxcr4-antagonists
US8440199B2 (en) * 2007-12-12 2013-05-14 Imperial Innovations Limited Methods for mobilizing mesenchymal stem cells in a patient
WO2009094456A2 (en) * 2008-01-22 2009-07-30 Johns Hopkins University Use of high-dose, post-transplantation oxazaphosphorine drugs for reduction of transplant rejection

Also Published As

Publication number Publication date
DK2509619T3 (da) 2021-03-08
CY1124082T1 (el) 2022-05-27
WO2011072216A9 (en) 2011-10-13
LT2509619T (lt) 2021-04-12
EP2509619A4 (en) 2013-08-21
WO2011072216A2 (en) 2011-06-16
EP3808368B1 (en) 2026-03-04
EP2509619A2 (en) 2012-10-17
EP3808368A2 (en) 2021-04-21
HUE053293T2 (hu) 2021-06-28
PT2509619T (pt) 2021-03-11
HRP20210334T1 (hr) 2021-04-02
PL2509619T3 (pl) 2021-06-14
SMT202100127T1 (it) 2021-05-07
SI2509619T1 (sl) 2021-04-30
EP3808368A3 (en) 2021-07-21
EP2509619B1 (en) 2020-12-09
ES2855428T3 (es) 2021-09-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220184043A1 (en) Methods of treating inflammatory bowel disease with amd3100 and tacrolimus
US12048687B2 (en) Methods of recruiting SDF-producing macrophages
JP2010518004A (ja) 幹細胞ホーミングの増強および臓器機能障害または臓器不全の治療
US20120309683A1 (en) USE OF PITUITARY ADENYLATE CYCLASE-ACTIVATING POLYPEPTIDE (PACAP) AND PACAP ANALOGS AS ADJUNCTIVE TREATMENTS WITH INHIBITORS OF CALCINEURIN OR INHIBITORS OF THE MAMMALIAN TARGET OF RAPAMYCIN (mTOR) COMPLEXES
Andreone et al. Reinfusion of highly purified CD133+ bone marrow-derived stem/progenitor cells in patients with end-stage liver disease: A phase I clinical trial
RS61543B1 (sr) Postupci lečenja korišćenjem mobilizatora matične ćelije i imunosupresivnih agenasa
US20130338183A1 (en) Compositions and methods for mobilizing stem cells
US10086070B2 (en) Combined therapy of alpha-1-antitrypsin and temporal T-cell depletion for preventing graft rejection
ABOU RAYIA et al. The outcomes of bone marrow stromal cell therapy in schistosomal hepatic fibrosis: an experimental study
EP4351618A2 (en) Trem-2/dap-12 inhibitors for treating lung disease and injury and combinations thereof
KR20180026538A (ko) 조직 부상의 치료에 유용한 약학 조성물
Hasanova Azerbaijan State Advanced Training Institute for Doctors named after A. Aliyev, Baku, Azerbaijan USE OF STEM CELLS IN ACUTE PANCREATITIS
CN119161419A (zh) 治疗糖尿病的胰岛干细胞组合物及其制备方法
Lange et al. Treatment of Ischemia/Reperfusion Injury of the Kidney with Mesenchymal Stromal Cells