RS61612B1 - 3-supstituisana 5-amino-6h-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion jedinjenja za lečenje i profilaksu virusne infekcije - Google Patents

3-supstituisana 5-amino-6h-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion jedinjenja za lečenje i profilaksu virusne infekcije

Info

Publication number
RS61612B1
RS61612B1 RS20210297A RSP20210297A RS61612B1 RS 61612 B1 RS61612 B1 RS 61612B1 RS 20210297 A RS20210297 A RS 20210297A RS P20210297 A RSP20210297 A RS P20210297A RS 61612 B1 RS61612 B1 RS 61612B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
amino
tetrahydrofuran
thiazolo
pyrimidine
dione
Prior art date
Application number
RS20210297A
Other languages
English (en)
Inventor
Dongdong Chen
Song Feng
Lu Gao
Chao Li
Baoxia Wang
Lisha Wang
Hongying Yun
Xiufang Zheng
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of RS61612B1 publication Critical patent/RS61612B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/24—Heterocyclic radicals containing oxygen or sulfur as ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

OPIS
Predmetni pronalazak se odnosi na nova 3-supstituisana 5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion jedinjenja, koja imaju agonističku aktivnost nalik toličnim receptorima i njihovim prolekovima, kao i na njihovu proizvodnju, farmaceutske preparate koji ih sadrže te na njihovu potencijalnu upotrebu u vidu lekova.
OBLAST PRONALASKA
Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I) i (Ia),
i njihove prolekove, formule (II) i (IIa),
pri čemu su R<1>do R<6>opisani u nastavku, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer.
Tolični receptori (TLR) otkrivaju širok opseg očuvanih molekulskih obrazaca povezanih sa patogenima (PAMP). Oni igraju važnu ulogu u otkrivanju invazivnih patogena i naknadnom pokretanju urođenog imunološkog odgovora. Kod čoveka postoji 10 poznatih članova porodice receptora TLR, koji su transmembranski proteini tipa I koji sadrže ekstracelularni domen bogat leucinom i citoplazmatski rep koji sadrži sačuvani domen zvonastog/interleukinskog (IL)-1 receptora (TIR). U okviru ove porodice, TLR3, TLR7, TLR8 i TLR9 se nalaze u endozomima. TLR7 se može aktivirati vezivanjem za specifični ligand malog molekula (tj. agonist TLR7) ili njegov nativni ligand (tj. jednolančana RNA, ssRNA). Nakon vezivanja ssRNA za TLR7, smatra se da receptor u svom dimerizovanom obliku prolazi strukturnu promenu koja dovodi do naknadnog regrutovanja adapterskih proteina u njegovom citoplazmatskom domenu, uključujući gen 88 primarnog odgovora mijeloidne diferencijacije (MyD88). Nakon pokretanja signalne kaskade receptora pomoću puta MyD88, aktiviraju se faktori citoplazmatske transkripcije poput regulatornog faktora interferona 7 (IRF-7) i nuklearnog faktora kapa B (NF-κB). Ti faktori transkripcije se tada translociraju u jezgro i pokreću transkripciju različitih gena, npr. IFN-α i drugih antivirusnih gena citokina. TLR7 se pretežno eksprimira na ćelijama plazmacitoida, a takođe i na B-ćelijama. Izmenjena responsivnost imunih ćelija može doprineti smanjenom urođenom imunološkom odgovoru tokom hroničnih virusnih infekcija. Agonistom indukovana aktivacija TLR7 može stoga predstavljati novi pristup u lečenju hroničnih virusnih infekcija. (D. J Connolly and L. AJ O’Neill, Current Opinion in Pharmacology 2012, 12:510-518, P. A. Roethle et al, J. Med. Chem. 2013, 56, 7324-7333).
Trenutna terapija hronične infekcije HBV-om zasniva se na dve različite vrste lekova: tradicionalnim antivirusnim analozima nukleozida/nukleotida i novijim pegilovanim IFN-α (PEG-IFN-α). Oralni analozi nukleozida/nukleotida deluju potiskivanjem replikacije HBV. Ovo je doživotno lečenje, tokom kojeg često dolazi do otpornosti na lekove. Kao alternativna opcija, koristi se pegilovani IFN-α (PEG-IFN-α) za lečenje nekih bolesnika sa hroničnom infekcijom HBV-om u okviru ograničenog trajanja terapije. Iako postiže serokonverziju u HBeAg barem kod malog procenta pacijenata sa HBV-om, neželjena dejstva ga čine slabo podnošljivim. Značajno je da je funkcionalno izlečenje definisano kao serokonverzija HBsAg veoma retko sa obe trenutne terapije. Stoga je hitno potrebna nova terapeutska opcija za lečenje pacijenata sa HBV-om radi funkcionalnog izlečenja. Lečenje oralnim agonistom TLR7 je rešenje koje obećava veću efikasnost i bolju podnošljivost. Pegilovani IFN-α (PEG-IFN-α) se trenutno koristi za lečenje hroničnog HBV-a, i predstavlja alternativu potencijalno doživotnom lečenju antivirusnim analozima nukleozida/nukleotida. Kod jedne grupe pacijenata sa hroničnim HBV-om, terapija sa PEG-IFN-α uspeva da izazove održivu imunološku kontrolu virusa nakon ograničenog trajanja terapije. Međutim, procenat pacijenata sa HBV-om koji postižu serokonverziju pri terapiji interferonom je nizak (do 27 % kod pacijenata pozitivnih na HBeAg) i lečenje se tipično slabo podnosi. Nadalje, funkcionalno izlečenje (definisano kao gubitak HBsAg i serokonverzija) je takođe vrlo retko i kod PEG-IFN-α i kod lečenja nukleozidima/nukleotidima. Uzevši u obzir ta ograničenja, postoji hitna potreba za poboljšanim terapeutskim opcijama za lečenje i indukovanje funkcionalnog izlečenja za hronični HBV. Lečenje oralnim agonistom TLR7 malih molekula je pristup koji obećava i ima potencijal za veću efikasnost i podnošljivost (T. Asselah et al, Clin Liver Dis 2007, 11, 839-849).
Zapravo, do sada se razmatrala upotreba u terapeutske svrhe nekoliko identifikovanih agonista TLR7. Do sada je odobren, od strane američke Uprave za hranu i lekove, imikvimod (ALDARA™) agonist TLR7 za topikalnu primenu u lečenju kožnih lezija izazvanih humanim papiloma virusom. TLR7/8 dvojni agonist rezikvimod (R-848) i agonist TLR7 852A su procenjivani za lečenje humanog genitalnog herpesa, odnosno metastatskog melanoma refraktornog na hemoterapiju. ANA773 je oralni agonist TLR7 prolek, razvijen za lečenje pacijenata sa hroničnom infekcijom virusom hepatitisa C (HCV) i hroničnom infekcijom hepatitisa B. GS-9620 je oralno dostupan agonist TLR7. Jedna studija faze Ib pokazala je da je lečenje sa GS-9620 bezbedno, dobro se podnosi i dovodi do indukcije iRNK zavisne od doze ISG15 kod pacijenata sa hroničnim hepatitisom B (E. J. Gane et al., Annu Meet Am Assoc Study Liver Dis (novembar 1-5, Washington, D.C.) 2013, Abst 946). Stoga postoji velika nezadovoljena klinička potreba za razvojem snažnih i bezbednih agonista TLR7 kao vida novog lečenja za HBV kojim bi se ponudilo više terapeutskih rešenja ili zamenilo postojeće delimično efikasno lečenje. WO2006/066080 objavljuje 5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion sa antivirusnom aktivnošću.
WO2009026292 objavljuje 5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion kao TLR7 agoniste. US5041426 objavljuje nukleozide i nukleotide tiazolo[4,5-d]pirimidinskih prstenastih sistema sa antivirusnom aktivnošću.
REZIME PRONALASKA
Predmetni pronalazak obezbeđuje niz novih 3-supstituisanih 5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dionskih jedinjenja, koja imaju aktivnost agonista toličnog receptora, i njihove prolekove. Pronalazak takođe obezbeđuje bioaktivnost takvih jedinjenja za indukovanje porasta nivoa SEAP aktiviranjem toličnih receptora, kao što je TLR7 receptor, metaboličku konverziju prolekova u matična jedinjenja u prisustvu humanih hepatocita, i terapeutsku ili profilaktičku primenu takvih jedinjenja i farmaceutskih preparata koji sadrže ta jedinjenja, i njihovih prolekova, za lečenje ili prevenciju zaraznih bolesti poput HBV ili HCV. Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja koja imaju bolju aktivnost. Pored toga, jedinjenja formule (I) i (Ia) takođe pokazuju dobru rastvorljivost i PK profil.
Predmetni pronalazak se odnosi na nova jedinjenja formule (I) i (Ia),
pri čemu
R<1>je hidroksi, C1-6alkil, haloC1-6alkil, C1-6alkilkarbonil-O-, C1-6alkil-S-, azido, cijano, C2-6alkenil, C1-6alkilsulfonil-NH-, (C1-6alkil)2N-, C1-6alkilkarbonil-NH- ili heterociklični amino;
R<2>je vodonik, C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil, C2-6alkenil, benzil i tiofenil;
R<3>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer; sa tim da su 5-amino-7-hidroksi-3-[3-hidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on; [2-(5-amino-7-hidroksi-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il] acetat; [4-acetoksi-5-(5-amino-7-hidroksi-2-oksotiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil acetat i njihovi dijastereomeri isključeni.
Predmetni pronalazak se takođe odnosi na prolekove formule (II) i (IIa),
pri čemu
R<4>je hidroksi, C1-6alkil, haloC1-6alkil, C1-6alkilkarbonil-O-, C1-6alkil-S-, azido, cijano, C2-6alkenil, C1-6alkilsulfonil-NH-, (C1-6alkil)2N-, C1-6alkilkarbonil-NH- ili heterociklični amino;
R<5>je vodonik, C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil, C2-6alkenil, benzil i tiofenil;
R<6>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer; sa tim da su 5-amino-3-[3-hidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on; [2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il] acetat; [4-acetoksi-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil acetat i njihovi dijastereomeri isključeni.
Pronalazak se takođe odnosi na njihovu proizvodnju, lekove na bazi jedinjenja prema pronalasku i njihovu proizvodnju, kao i na upotrebu jedinjenja formule (I) ili (Ia) ili njihovih prolekova, formule (II) ili (IIa), kao agonista TLR7. U skladu sa tim, jedinjenja formule (I) i (Ia) ili njihovi prolekovi, formule (II) i (IIa), korisni su za lečenje ili profilaksu HBV i/ili HCV infekcije sa agonizmom toličnih receptora.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni izrazi koji se ovde koriste imaju isto značenje koje je poznato stručnom licu u oblasti kojoj pripada ovaj pronalazak. Osim toga, navedene definicije u nastavku služe da ilustruju i definišu značenje i opseg različitih termina koji se koriste za opis pronalaska.
DEFINICIJE
Kako se ovde koristi, termin „C1−6alkil“ označava alkil grupu sa zasićenim, ravnim ili razgranatim nizom koji sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika, konkretno 1 do 4, na primer: metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, i slično. Konkretne „C1-6alkil“ grupe su metil, etil i n-propil.
Termini "halogen" i "halo" ovde se koriste ravnopravno, i odnose se na fluor, hlor, brom ili jod.
Termin „haloC1−6alkil“ se odnosi na alkil grupu, pri čemu je najmanje jedan od atoma vodonika alkil grupe zamenjen istim ili različitim atomom halogena, naročito atomom fluora. Primeri za haloC1-6alkil uključuju monofluoro-, difluoro- ili trifluoro-metil, -etil ili -propil, na primer 3,3,3-trifluoropropil, 2-fluoroetil, 2,2,2-trifluoroetil, fluorometil, difluorometil i trifluorometil.
Termin „heterociklični“ prsten označava sistem jednovalentnog zasićenog ili delimično nezasićenog mono- ili bicikličnog prstena koji sadrži od 3 do 10 atoma prstena, a sastoji se od 1 do 5 heteroatoma prstena odabranih od N, O i S, dok su preostali atomi prstena ugljenik. U konkretnim realizacijama, „heterociklični“ prsten je jednovalentni sistem zasićenog monocikličnog prstena koji ima od 4 do 7 atoma prstena, i sadrži 1, 2 ili 3 heteroatoma prstena izabrana od N, O i S, dok su preostali atomi prstena ugljenik. Primeri za monociklični zasićeni „heterociklični“ prsten su aziridinil, oksiranil, azetidinil, oksetanil, pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotienil, pirazolidinil, imidazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, tiazolidinil, piperidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperazinil, morfolinil, tiomorfolinil, 1,1-diokso-tiomorfolin-4-il, azepanil, diazepanil, homopiperazinil i oksazepanil. Primeri za biciklični zasićeni „heterociklični“ prsten su 8-aza-biciklo[3.2.1]oktil, hinuklidinil, 8-oksa-3-aza-biciklo[3.2.1]oktil, 9-aza-biciklo[3.3.1]nonil, 3-oksa-9-azabiciklo[3.3.1]nonil i 3-tia-9-aza-biciklo[3.3.1]nonil. Primeri za delimično nezasićeni „heterociklični“ prsten su dihidrofuril, imidazolinil, dihidro-oksazolil, tetrahidro-piridinil i dihidropiranil.
Termin „heterociklični amino“ označava amino grupu sa atomom azota na heterocikličnom prstenu.
Termin „C2-6alkenil“ označava alkenil grupu nezasićenog, linearnog ili razgranatog lanca koja sadrži 2 do 6, posebno 2 do 4 atoma ugljenika, na primer vinil, propenil, alil, butenil i slično. Konkretne „C2-6alkenil“ grupe su alil i vinil.
Termin „C2-6alkinil“ označava alkinil grupu nezasićenog, linearnog ili razgranatog lanca koja sadrži 2 do 6, posebno 2 do 4 atoma ugljenika, na primer etinil, 1-propinil, propargil, butinil i slično. Konkretne „C2-6alkinil“ grupe su etinil i 1-propinil.
Termin „C3-7cikloalkil“, samostalno ili u kombinaciji, se odnosi na zasićeni ugljenični prsten koji sadrži od 3 do 7 atoma ugljenika, posebno od 3 do 6 atoma ugljenika, na primer, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil i slično. Konkretna "C3-7cikloalkil" grupa je ciklopropil.
Termin „karbonil“, samostalno ili u kombinaciji, označava −C(O)− grupu.
Termin „C1-6alkilkarbonil“ se odnosi na grupu C1-6alkil−C(O)−, pri čemu je „C1-
6alkil“ kao što je prethodno definisan. Konkretna "C1-6alkilkarbonil" grupa je acetil.
Termin „enantiomer“ označava dva stereoizomera jedinjenja koja nisu međusobno identično preklopiva.
Termin „dijastereomer“ označava stereoizomer sa dva ili više hiralnih centara i čiji molekuli nisu zrcalne slike jedni drugih. Dijastereomeri imaju različita fizička svojstva, npr. tačke topljenja, tačke ključanja, spektralne osobine i reaktivnosti.
Termin „farmaceutski prihvatljive soli” označava soli koje nisu biološki ili na drugi način nepoželjne. Farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju kisele i bazne adicione soli.
Termin "farmaceutski prihvatljiva kisela adiciona so" označava one farmaceutski prihvatljive soli formirane sa neorganskim kiselinama, kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, ugljena kiselina, fosforna kiselina, i organskim kiselinama odabranim od alifatičnih, cikloalifatičnih, aromatičnih, aralifatičnih, heterocikličnih, karboksilnih i sulfonskih organskih kiselina, kao što su mravlja kiselina, sirćetna kiselina, propionska kiselina, glikolna kiselina, glukonska kiselina, mlečna kiselina, piruvinska kiselina, oksalna kiselina, jabučna kiselina, maleinska kiselina, malonska kiselina, ćilibarna kiselina, fumarna kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, asparaginska kiselina, askorbinska kiselina, glutaminska kiselina, antranilna kiselina, benzojeva kiselina, cimetna kiselina, bademova kiselina, embonska kiselina, fenilsirćetna kiselina, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, p-toluensulfonska kiselina i salicilna kiselina.
Termin „farmaceutski prihvatljiva bazna adiciona so” označava farmaceutski prihvatljive soli formirane sa organskom ili neorganskom bazom. Primeri za prihvatljive neorganske baze obuhvataju soli natrijuma, kalijuma, amonijaka, kalcijuma, magnezijuma, gvožđa, cinka, bakra, mangana i aluminijuma. Soli izvedene iz farmaceutski prihvatljivih organskih netoksičnih baza obuhvataju soli primarnih, sekundarnih i tercijarnih amina, supstituisanih amina, uključujući i supstituisane amine koji se nalaze u prirodi, cikličnih amina i baznih jonoizmenjivačkih smola, kao što su izopropilamin, trimetilamin, dietilamin, trietilamin, tripropilamin, etanolamin, 2-dietiaminoetanol, trimetamin, dicikloheksilamin, lizin, arginin, histidin, kafein, prokain, hidrabamin, holin, betain, etilendiamin, glukozamin, metilglukamin, teobromin, purini, piperazin, piperidin, N-etilpiperidin, piperidin i poliaminske smole.
Jedinjenja opšte formule (I) ili (Ia) i njihovi prolekovi koji sadrže jedan ili više hiralnih centara mogu biti prisutni kao racemati, dijastereomerne smeše ili optički aktivni pojedinačni izomeri. Racemati se mogu podeliti prema poznatim postupcima u enantiomere. Konkretno, dijastereomerne soli koje se mogu odvojiti putem kristalizacije formiraju se iz racemskih smeša reakcijom sa optički aktivnom kiselinom, kao što je npr. D- ili L-vinska kiselina, bademova kiselina, jabučna kiselina, mlečna kiselina ili kamforsulfonska kiselina.
Jedinjenja iz pronalaska mogu pokazivati fenomen tautomerizma. Iako crteži formule ne mogu izričito prikazati sve moguće tautomerne forme, treba znati da su namenjeni da predstavljaju bilo koji tautomerni oblik prikazanog jedinjenja i da se ne ograničavaju samo na određeni oblik jedinjenja prikazan crtežima formule. Na primer, za formulu (III) se podrazumeva da, bez obzira da li su supstituenti prikazani u njihovom enolu ili njihovom keto obliku, oni predstavljaju isto jedinjenje (kao što je prikazano u primeru dole).
Rxse odnosi na bilo koji mogući supstituent.
Neka jedinjenja iz pronalaska mogu postojati kao pojedinačni stereoizomeri (tj. u suštini bez drugih stereoizomera), racemata, i/ili smeše enantiomera i/ili dijastereomera. Svi takvi pojedinačni stereoizomeri, racemati i njihove smeše su predviđeni da budu u okviru predmetnog pronalaska. Poželjno je da se jedinjenja prema pronalasku koja su optički aktivna koriste u optički čistom obliku. Kao što to inače znaju stručna lica u ovoj oblasti, optički čisto jedinjenje koje ima jedan hiralni centar (tj. jedan asimetrični atom ugljenika) je ono koje se sastoji u osnovi od jednog od dva moguća enantiomera (tj. enantiomerno je čisto) i optički čisto jedinjenje koje ima više od jednog hiralnog centra je ono koje je i dijastereomerno i enantiomerno čisto. Poželjno je da se jedinjenja iz predmetnog pronalaska koriste u obliku koji je najmanje 90% optički čist, odnosno u obliku koji sadrži najmanje 90% pojedinačnog izomera (80% enantiomernog viška („e.e.“) ili dijastereomernog viška („d.e.“)), poželjnije najmanje 95% (90% e.e. ili d.e.), još poželjnije najmanje 97,5% (95% e.e. ili d.e.), a najpoželjnije najmanje 99% (98% e.e. ili d.e.). Pored toga, jedinjenja formule (I) i (Ia) i njihovi prolekovi, formule (II) i (IIa) i druga jedinjenja pronalaska su namenjena da pokrivaju solvatirane kao i nesolvatirane oblike identifikovanih struktura. Na primer, formula (I) ili (Ia) uključuje jedinjenja naznačene strukture hidriranom i nehidriranom obliku. Ostali primeri solvata obuhvataju strukture u kombinaciji s izopropanolom, etanolom, metanolom, DMSO, etil acetatom, sirćetnom kiselinom ili etanolaminom.
Termin "prolek" označava oblik ili derivat jedinjenja koji se metaboliše in vivo, npr. pomoću bioloških tečnosti ili enzima od strane ispitanika nakon primene, u farmakološki aktivni oblik jedinjenja kako bi se proizvelo željeno farmakološko dejstvo. Prolekovi su opisani npr. u „The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action” Richard B. Silverman, Academic Press, San Diego, 2004, Poglavlje 8 Prodrugs and Drug Delivery Systems, str. 497-558.
"Farmaceutski aktivni metabolit" označava farmakološki aktivni proizvod koji nastaje metabolizmom naznačenog jedinjenja ili njegove soli u organizmu. Nakon unosa u organizam, većina lekova su supstrati za hemijske reakcije koje mogu promeniti njihova fizička svojstva i biološka dejstva. Ove metaboličke konverzije, koje tipično utiču na polaritet jedinjenja iz pronalaska, menjaju način distribucije lekova u organizmu i njihovog izlučivanja. Međutim, u nekim slučajevima, metabolizam leka je potreban za terapeutsko dejstvo.
Izraz „terapeutski efikasna količina” označava količinu jedinjenja ili molekula predmetnog pronalaska koja, kada se primeni na ispitanika, (i) leči ili sprečava pojavu određene bolesti, stanja ili poremećaja, (ii) ublažava, poboljšava ili eliminiše jedan simptom ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja ili (iii) sprečava ili odlaže pojavu jednog ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja koji su ovde opisani. Terapeutski efikasna količina će varirati u zavisnosti od jedinjenja, stanja bolesti koja se leči, ozbiljnosti bolesti koja se leči, godina i opšteg zdravlja ispitanika, načina i oblika primene leka, procene ordinirajućeg lekara ili veterinara, kao i od drugih faktora.
Izraz "farmaceutski preparat" označava smešu ili rastvor koji sadrži terapeutski efikasnu količinu aktivnog farmaceutskog sastojka zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima koji se daju sisaru, npr. čoveku kome je to potrebno.
TLR7 AGONIST I PROLEK
Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I),
pri čemu
R<1>je hidroksi, C1-6alkil, haloC1-6alkil, C1-6alkilkarbonil-O-, C1-6alkil-S-, azido, cijano, C2-6alkenil, C1-6alkilsulfonil-NH-, (C1-6alkil)2N-, C1-6alkilkarbonil-NH- ili heterociklični amino;
R<2>je vodonik, C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil, C2-6alkenil, benzil i tiofenil;
R<3>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer;
1
sa tim da su 5-amino-7-hidroksi-3-[3-hidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on; [2-(5-amino-7-hidroksi-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il] acetat; [4-acetoksi-5-(5-amino-7-hidroksi-2-oksotiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil acetat i njihovi dijastereomeri isključeni.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (ii) jedinjenje formule (I), pri čemu
R<1>je hidroksi, metil, propil, fluoroizopropil, acetiloksi, metilsulfanil, azido, cijano, alil, 2-metilalil, metilsulfonilamino, dimetilamino, acetilamino, pirolidinil, morfolinil ili piperidinil;
R<2>je vodonik, metil, etil, propil, butil, ciklopropil, ciklopentil, vinil, alil, benzil, etinil, 1-propinil, metoksimetil ili tiofenil;
R<3>je vodonik, acetil ili izobutiril;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (iii) jedinjenje formule (Ia),
pri čemu
R<1>je hidroksi, C1-6alkil, haloC1-6alkil, C1-6alkilkarbonil-O-, C1-6alkil-S-, azido, cijano, C2-6alkenil, C1-6alkilsulfonil-NH-, (C1-6alkil)2N-, C1-6alkilkarbonil-NH- ili heterociklični amino;
R<2>je vodonik, C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil, C2-6alkenil, benzil ili tiofenil;
R<3>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer;
sa tim da su 5-amino-7-hidroksi-3-[3-hidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on; [2-(5-amino-7-hidroksi-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il] acetat; [4-acetoksi-5-(5-amino-7-hidroksi-2-oksotiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil acetat i njihovi dijastereomeri isključeni.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (iv) jedinjenje formule (Ia), pri čemu
R<1>je hidroksi, metil, propil, fluoroizopropil, acetiloksi, metilsulfanil, azido, cijano, alil, 2-metilalil, metilsulfonilamino, dimetilamino, acetilamino, pirolidinil, morfolinil ili piperidinil;
R<2>je vodonik, metil, etil, propil, butil, ciklopropil, ciklopentil, vinil, alil, benzil, etinil, 1-propinil, metoksimetil ili tiofenil;
R<3>je vodonik, acetil ili izobutiril;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (v) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu
R<1>je hidroksi, C1-6alkil, C1-6alkilkarbonil-O-, C1-6alkil-S-, azido ili C2-6alkenil;
R<2>je C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil, C2-6alkenil, benzil i tiofenil;
R<3>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (vi) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu
R<1>je hidroksi, metil, propil, acetiloksi, metilsulfanil, azido ili alil;
R<2>je metil, etil, propil, butil, ciklopropil, ciklopentil, vinil, alil, benzil, etinil, 1-propinil, metoksimetil ili tiofenil;
R<3>je vodonik, acetil ili izobutiril;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (vii) jedinjenje formule (I) ili (la), pri čemu R<1>je hidroksi, C1-6alkil, C1-6alkil-S-, azido ili C2-6alkenil.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (viii) jedinjenje formule (I) ili (la), pri čemu R<1>je hidroksi, metil, n-propil, metilsulfanil, azido ili alil.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (ix) jedinjenje formule (I) ili (la), pri čemu R<2>je C1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil ili C2-6alkenil.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (x) jedinjenje formule (I) ili (la), pri čemu R<2>je metil, etil, n-propil, ciklopropil, vinil, etinil ili 1-propinil.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xi) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu, R<3>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xii) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu, R<3>je vodonik ili izobutiril.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xiii) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu
R<1>je hidroksi, C1-6alkil, C1-6alkil-S-, azido ili C2-6alkenil;
R<2>je C1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil ili C2-6alkenil;
R<3>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xiv) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu
R<1>je hidroksi, metil, propil, metilsulfanil, azido ili alil;
R<2>je metil, etil, propil, ciklopropil, vinil, etinil ili 1-propinil;
R<3>je vodonik ili izobutiril;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xv) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu
R<1>je haloC1-6alkil, C1-6alkil-S-, cijano, C2-6alkenil, C1-6alkilsulfonil-NH-, (C1-
6alkil)2N-, C1-6alkilkarbonil-NH- ili heterociklični amino;
R<2>je vodonik;
R<3>je vodonik;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xvi) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu
R<1>je fluoroizopropil, metilsulfanil, cijano, 2-metilalil, metilsulfonilamino, dimetilamino, acetilamino, pirolidinil, morfolinil ili piperidinil;
R<2>je vodonik;
R<3>je vodonik;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xvii) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu R<1>je C1-6alkil-S- ili heterociklični amino.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xviii) jedinjenje formule (I) ili (Ia), pri čemu, R<1>je metilsulfanil ili pirolidinil.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na to da su (xix) konkretna
1
jedinjenja formule (I) ili (Ia) sledeća:
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetat;
[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil] acetat;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksietil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibut-3-enil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipentil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibutil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopentil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-2-fenil-etil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-3-metil-butil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopropil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
[[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]ciklopropil] acetat;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksiprop-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibut-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-[hidroksi(2-tienil)metil]tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-2-metoksi-etil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(1-hidroksipropil)-3-rnetilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6Htiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-azido-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksialil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-((2R,3R,5S)-3-azido-5-((S)-1-hidroksietil)tetrahidrofuran-2-il)tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7(3H,6H)-dion;
3-[(2R,3R,5S)-3-alil-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1R)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksibut-2-inil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(S)-ciklopropil(hidroksi)metil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksietil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
N-[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il]metansulfonamid;
N-[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il]acetamid;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-morfolino-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-(1-piperidil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-(dimetilamino)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-
1
(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-karbonitril;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-(1-fluor-1-metil-etil)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofiran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-(2-metilalil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
i [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil] 2-metilpropanoat;
ili njegova farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na to da su (xx) još konkretnija jedinjenja formule (I) ili (Ia) sledeća:
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibutil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopropil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksiprop-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibut-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(1-hidroksipropil)-3-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-azido-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksialil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
3-[(2R,3R,5S)-3-alil-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1R)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
1
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksibut-2-inil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(S)-ciklopropil(hidroksi)metil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksietil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion;
i [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil] 2-metilpropanoat;
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xxi) jedinjenje formule (II),
pri čemu
R<4>je hidroksi, C1-6alkil, haloC1-6alkil, C1-6alkilkarbonil-O-, C1-6alkil-S-, azido, cijano, C2-6alkenil, C1-6alkilsulfonil-NH-, (C1-6alkil)2N-, C1-6alkilkarbonil-NH- ili heterociklični amino;
R<5>je vodonik, C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil, C2-6alkenil, benzil i tiofenil;
R<6>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer;
sa tim da su 5-amino-3-[3-hidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on; [2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il] acetat; [4-acetoksi-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-
1
d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil acetat i njihovi dijastereomeri isključeni.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xxii) jedinjenje formule (II), pri čemu
R<4>je hidroksi, metil, propil, fluoroizopropil, acetiloksi, metilsulfanil, azido, cijano, alil, 2-metilalil, metilsulfonilamino, dimetilamino, acetilamino, pirolidinil, morfolinil ili piperidinil;
R<5>je vodonik, metil, etil, propil, butil, ciklopropil, ciklopentil, vinil, alil, benzil, etinil, 1-propinil, metoksimetil ili tiofenil;
R<6>je vodonik, acetil ili izobutiril;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xxiii) jedinjenje formule (IIa),
pri čemu
R<4>je hidroksi, C1-6alkil, haloC1-6alkil, C1-6alkilkarbonil-O-, C1-6alkil-S-, azido, cijano, C2-6alkenil, C1-6alkilsulfonil-NH-, (C1-6alkil)2N-, C1-6alkilkarbonil-NH- ili heterociklični amino;
R<5>je vodonik, C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil, C2-6alkenil, benzil i tiofenil;
R<6>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer;
sa tim da su 5-amino-3-[3-hidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on; [2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il] acetat; [4-acetoksi-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil acetat i njihovi dijastereomeri isključeni.
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xiv) jedinjenje formule (IIa), pri čemu
R<4>je hidroksi, metil, propil, fluoroizopropil, acetiloksi, metilsulfanil, azido, cijano,
1
alil, 2-metilalil, metilsulfonilamino, dimetilamino, acetilamino, pirolidinil, morfolinil ili piperidinil;
R<5>je vodonik, metil, etil, propil, butil, ciklopropil, ciklopentil, vinil, alil, benzil, etinil, 1-propinil, metoksimetil ili tiofenil;
R<6>je vodonik, acetil ili izobutiril;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xxv) jedinjenje formule (II) ili (IIa), pri čemu
R<4>je hidroksi, C1-6alkil, C1-6alkil-S-, azido ili C2-6alkenil;
R<5>je C1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil ili C2-6alkenil;
R<6>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xxvi) jedinjenje formule (II) ili (IIa), pri čemu
R<4>je hidroksi, metil, propil, metilsulfanil, azido ili alil;
R<5>je metil, etil, propil, ciklopropil, vinil, etinil ili 1-propinil;
R<6>je vodonik ili izobutiril;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xxvii) jedinjenje formule (II) ili (IIa), pri čemu
R<4>je hidroksi ili C1-6alkilkarbonil-O-;
R<5>je C1-6alkil ili C3-7cikloalkil;
R<6>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na (xxviii) jedinjenje formule (II) ili (IIa), pri čemu
R<4>je hidroksi ili acetiloksi;
R<5>je etil ili ciklopropil;
R<6>predstavlja vodonik ili acetil;
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer
Još jedna realizacija predmetnog pronalaska odnosi se na to da su (xxix) konkretna jedinjenja formule (II) ili (IIa) sledeća:
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on;
1
[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetat;
1-[(2S,4R,5S)-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]propil acetat;
[(S)-[(2S,4R,5S)-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-ciklopropil-metil]acetat;
i 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopropil(hidroksi)rnetil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on;
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
SINTEZA
Jedinjenja iz predmetnog pronalaska se mogu pripremati na bilo koji uobičajeni način. Pogodni postupci za sintezu ovih jedinjenja, kao i njihovih polaznih materijala, dati su u šemama u nastavku i u primerima. Svi supstituenti, naročito, R<1>do R<11>, su u skladu sa gore navedenim definicijama, osim ako nije drugačije naznačeno. Pored toga, i ako se eksplicitno drugačije ne tvrdi, sve reakcije, uslovi reakcija, skraćenice i simboli imaju značenja koja su dobro poznata stručnim licima iz oblasti organske hemije.
2
Šema 1
R<a>je R<2>ili R<5>; R<b>je acil, benzoil, terc-butil(dimetil)silil ili terc-butil(difenil)silil; R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>.
Tretman jedinjenja V ugljen-disulfidom i jodometanom u prisustvu odgovarajuće baze, kao što je NaH, daje metilsulfanil metanetioat 1a. Deoksilacija metilsulfanilmetanetioata 1a sa odgovarajućim reagensom, kao što je tri-n-butiltin hidrid, daje 1b. Deprotekcija 1b sa odgovarajućom kiselinom, kao što je sirćetna kiselina, daje diol 1c. Oksidacija 1c sa oksidansom, kao što je natrijum metaperiodat, daje aldehid 1d. Tretman aldehida 1d sa odgovarajućim nukleofilnim reagensom, poput Grinjarovog reagensa, daje alkohol VI. Zaštita alkohola VI sa odgovarajućim anhidridom kiseline ili kiselinskim hloridom, kao što je sirćetni hlorid ili benzoil anhidrid, daje estar VII. Tretman estra VII sa sirćetnom kiselinom i anhidridom sirćetne kiseline u prisustvu odgovarajuće kiseline, kao što je kondenzovana sumporna kiselina, daje estar VIII. Spajanjem estara VIII i IX u prisustvu odgovarajućeg agensa za eterifikaciju silicijuma, kao što su N,O-bis(trimetilsilil)aktamid, i Luisove kiseline, kao što je TMSOTf, daje intermedijar X. Deprotekcija intermedijara X sa odgovarajućim reagensom, kao što su K2CO3ili TBAF, a prečišćavanje preparativnom HPLC daje željena jedinjenja P1, P2 ili P3. Zaštita jedinjenja P1 sa odgovarajućim anhidridom kiseline ili kiselinskim hloridom, kao što je sirćetni hlorid ili anhidrid sirćetne kiseline, daje jedinjenje P3. Oksidacijom P2 sa odgovarajućim oksidansom, kao što je Des-Martinov perjodinan, dobija se keton XI. Redukcija ketona XI sa odgovarajućim reduktantom, kao što je terc-butoksialumin hidrid, daje alkohol XII. Tretman alkohola XII sa sulfonskim anhidridom ili sulfonil hloridom daje intermedijar XIII. Tretman intermedijara XIII sa odgovarajućim nukleofilnim reagensom, kao što je natrijum azid, daje jedinjenje XIV. Deprotekcija XIV sa odgovarajućom bazom, kao što je K2CO3ili odgovarajućim fluoridnim reagensom, kao što je TBAF i pročišćavanje sa preparativnom HPLC, daje jedinjenje P4.
Šema 2:
R<a>je R<2>ili R<5>; R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>.
Kiselina 28a se pretvara u acil hlorid 28b sa odgovarajućim reagensom, kao što je oksalil dihlorid. Acil-hlorid 28b se tretira sa odgovarajućim nukleofilnim reagensom, kao što je Grinjarov reagens, da bi se dobio keton XV. Redukcija ketona XV sa odgovarajućim reduktantom, kao što je L-selektrid, daje alkohol XVI. Zaštita XVI sa tercbutilhlorodifenilsilanom daje intermedijar XVII. Alkilacija XVII sa alkilirajućim reagensom, kao što je jodometan, u prisustvu odgovarajuće baze, kao što je litijum diizopropilamid, daje intermedijar XVIII. Deprotekcija XVIII sa odgovarajućim reagensom, kao što je TBAF, daje alkohol XIX. Zaštita alkohola XIX sa benzoil hloridom daje estar XX. Redukcija estra XX sa odgovarajućim reduktantom, kao što je diizobutil aluminijum hidrid, daje alkohol XXI.
Esterifikacija alkohola XXI sa sirćetnim hloridom ili anhidridom sirćetne kiseline daje XXII. Spajanjem XXII i IX u prisustvu odgovarajućeg agensa za eterifikaciju silicijuma, kao što su
2
N, O-bis(trimetilsilil)acetamid i Luisova kiselina, dobija se XXIII. Deprotekcija XXIII sa odgovarajućom bazom, kao što je K2CO3i pročišćavanje sa preparativnim HPLC daje jedinjenje P5.
Šema 3
R<c>je vodonik ili hidroksi; R<d>je trifluorometilsulfonil ili p-tolilsulfonil; R<e>je R<1>ili R<4>. Zaštita alkohola 25e sa benzoil hloridom daje intermedijar 32a. Deprotekcija 32a sa odgovarajućom kiselinom, kao što je hidrohlorid, u prisustvu odgovarajućeg rastvarača, kao što je metanol, daje intermedijar 32b. Tretman 32b sa sulfonskim anhidridom ili sulfonil hloridom daje intermedijar XXIV. Tretman XXIV nukleofilnim reagensom, kao što je natrijum azid i amin, daje intermedijar XXV. Spajanjem XXV i IX u prisustvu odgovarajućeg agensa za eterifikaciju silicijuma, kao što su N,O-bis(trimetilsilil)acetamid i Luisova kiselina, dobija se XXVI. Deprotekcija XXVI sa odgovarajućom bazom, kao što je K2CO3i pročišćavanje sa preparativnim HPLC daje jedinjenje XXVII.
Šema 4:
R<a>je R<2>ili R<5>; R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>.
Tretman XXIX sa odgovarajućim reagensom, kao što je O-fenil hlormetanetioat, u prisustvu odgovarajuće baze, kao što je DMAP, daje intermedijar XXX. Tretman intermedijera XXX organostanskim reagensom, kao što je alil(tri-n-butil)stanan, daje intermedijar XXXI. Deprotekcija XXXI sa odgovarajućom bazom, kao što je K2CO3i pročišćavanje sa preparativnim HPLC daje jedinjenje P6.
Ovaj pronalazak se takođe odnosi na metod za pripremu jedinjenja formule (I), (Ia), (II) ili (IIa) koji podrazumeva reakciju:
(a) reakcija jedinjenja formule (X),
sa baznim ili fluoridnim reagensom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<b>je acil, benzoil, tercbutil(dimetil)silil ili terc-butil(difenil)silil; R<c>je vodonik ili hidroksi;
2
(b) reakcija jedinjenja formule (P1),
sa anhidridom kiseline ili kiselinskim hloridom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<c>je vodonik ili hidroksi;
(c) reakcija jedinjenja formule (XIV),
sa baznim ili fluoridnim reagensom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<b>je acil, benzoil, tercbutil(difenil)silil; R<c>je vodonik ili hidroksi;
R<e>je R<1>ili R<4>;
(d) reakcija jedinjenja formule (XXIII),
sa bazom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>;
(e) reakcija jedinjenja formule (XXVI),
2
sa bazom, gde R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>;
(f) reakcija jedinjenja formule (XXXI),
sa bazom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>; ili
pri čemu su R<a>, R<b>, R<c>, Re, R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>i R<6>gore definisani.
U koraku (a), baza može biti na primer K2CO3, fluoridni reagens može biti na primer TBAF.
U koraku (b), anhidrid kiseline ili kiseli hlorid mogu biti, na primer, sirćetni hlorid ili anhidrid sirćetne kiseline.
U koraku (c), (d), (e) i (f) baza može biti, na primer K2CO3, fluoridni reagens može biti, na primer, TBAF.
Jedinjenje formule (I), (Ia), (II) i (IIa) kada je proizvedeno prema gore navedenom postupku, takođe je predmet ovog pronalaska.
FARMACEUTSKI PREPARATI I PRIMENA
Još jedna realizacija obezbeđuje farmaceutske preparate ili lekove, koji sadrže jedinjenja iz ovog pronalaska i terapeutski inertan nosač, razblaživač ili ekscipijens, kao i metode za korišćenje jedinjenja iz ovog pronalaska za pripremanje takvih preparata i lekova. U jednom primeru, jedinjenja formule (I) ili (Ia), ili njihovi prolekovi se mogu formulisati mešanjem na sobnoj temperaturi uz odgovarajuću pH vrednost, i sa željenim stepenom čistoće, sa fiziološki prihvatljivim nosačima, tj. nosačima koji su netoksični za primaoca u dozama i koncentracijama primenjenim u datom galenskom obliku. pH vrednost formulacije zavisi uglavnom od konkretne upotrebe i koncentracije jedinjenja, ali se poželjno nalazi u opsegu od oko 3 do oko 8. U jednom primeru, jedinjenje formule (I) ili (Ia), ili njegovi
2
prolekovi su formulisani u acetatnom puferu, na pH 5. U drugoj realizaciji, jedinjenja formule (I) ili (Ia) ili njegovi prolekovi su sterilni. Jedinjenje može da se čuva, na primer, kao čvrsti ili amorfni preparat, kao liofilizovana formulacija ili kao vodeni rastvor.
Preparati se formulišu, doziraju i primenjuju na način koji je u skladu sa dobrom medicinskom praksom. U ovom kontekstu se mogu razmatrati faktori kao što su konkretni poremećaj koji se leči, konkretni sisar koji se leči, kliničko stanje pojedinačnog pacijenta, uzrok poremećaja, mesto na koje se agens daje, metod davanja, raspored davanja i drugi faktori poznati lekarima. „Efikasna količina“ jedinjenja koje se primenjuje će zavisiti od takvih razmatranja, i to je minimalna količina neophodna za aktiviranje TLR7 receptora koja će dovesti do stvaranja INF-α i drugih citokina, koji se mogu koristiti, ali bez ograničenja, za lečenje ili prevenciju infekcije virusom hepatitisa B i/ili C.
U jednom primeru, farmaceutski efikasna količina jedinjenja iz ovog pronalaska, koja se daje parenteralno po dozama, biće u opsegu od oko 0,1 do 50 mg/kg, alternativno oko 0,1 do 30 mg/kg telesne težine pacijenta dnevno, sa tipičnim početnim opsegom upotrebljenog jedinjenja od 0,3 do 15 mg/kg/dan. U drugoj realizaciji, oralni oblici jedinične doze, kao što su tablete i kapsule, poželjno sadrže od oko 20 do oko 1000 mg jedinjenja iz ovog pronalaska.
Jedinjenja iz pronalaska mogu se primeniti na bilo koji pogodan način, uključujući oralnu, topikalnu (uključujući bukalnu i sublingvalnu), rektalnu, vaginalnu, transdermalnu, parenteralnu, supkutanu, intraperitonealnu, intrapulmonarnu, intradermalnu, intratekalnu i epiduralnu i intranazalnu, i, ako se želi lokalni tretman, intralezionu primenu. Parenteralne infuzije uključuju intramuskularnu, intravensku, intraarterijsku, intraperitonealnu ili supkutanu primenu.
Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se davati u svakom pogodnom obliku primene, npr. tablete, praškovi, kapsule, rastvori, disperzije, suspenzije, sirupi, sprejevi, supozitorije, gelovi, emulzije, flasteri itd. Takvi preparati mogu da sadrže komponente koje su uobičajene u farmaceutskim preparatima, npr. razblaživače, nosače, pH modifikatore, zaslađivače, balastne materije, i druge aktivne agense.
Tipična formulacija se priprema mešanjem jedinjenja iz predmetnog pronalaska i nosača ili ekscipijensa. Pogodni nosači i ekscipijensi su dobro poznati stručnim licima za ovu oblast, i opisani su npr. u Ansel, Howard C., et al., Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, Alfonso R., et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; and Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical
2
Excipients. Chicago, Pharmaceutical Press, 2005. Formulacije takođe mogu da sadrže jedan ili više pufera, stabilizatora, surfaktanasa, kvašljivaca, lubrikanasa, emulgatora, sredstava za suspendovanje, konzervanasa, antioksidanasa, sredstava za zamućenje, glidanasa, pomoćnih agenasa za obradu, boja, zaslađivača, mirisa, aroma, diluenata i drugih poznatih aditiva, kako bi se dobio lep izgled leka (tj. jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegovoge farmaceutskog preparata) ili kako bi se olakšala proizvodnja farmaceutskog proizvoda (tj. leka).
Primer odgovarajućeg oralnog doznog oblika predstavlja tableta koja sadrži oko 20 do 1000 mg jedinjenja iz ovog pronalaska u kombinaciji sa oko 30 do 90 mg anhidrovane laktoze, oko 5 do 40 mg natrijum kroskarmeloze, oko 5 do 30 mg polivinilpirolidona (PVP) K30, i oko 1 do 10 mg magnezijum stearata. Praškasti sastojci se prvo izmešaju, a zatim mešaju sa rastvorom PVP. Dobijeni preparat se može osušiti, granulisati, pomešati sa magnezijum stearatom i komprimovati u oblik tablete, pomoću konvencionalne opreme. Primer aerosolne formulacije može da se dobije rastvaranjem jedinjenja, na primer, 20 do 1000 mg ovog pronalaska u pogodnom puferskom rastvoru, npr. fosfatnom puferu, dodavanjem tonifikatora, npr. soli poput natrijum hlorida, ako je potrebno. Rastvor se može filtrirati, npr. pomoću filtera od 0,2 mikrona, da bi se uklonile nečistoće i zagađivači.
Jedna realizacija se, prema tome, odnosi na farmaceutski preparat koji sadrži jedinjenje formule (I) ili (Ia) ili njihove prolekove, formule (II) ili (IIa), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili enantiomere ili dijastereomere.
Još jedna realizacija se odnosi na farmaceutski preparat koji sadrži jedinjenje formule (I) ili (Ia) ili njihove prolekove, formule (II) ili (IIa), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili enantiomere, ili dijastereomere, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom.
Još jedna realizacija obuhvata farmaceutski preparat koji sadrži jedinjenje formule (I) ili (Ia) ili njihove prolekove, formule (II) ili (IIa), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili enantiomere, ili dijastereomere, za upotrebu u lečenju infekcije virusom hepatitisa B.
INDIKACIJE I METODI LEČENJA
Predmetni pronalazak obezbeđuje metode za lečenje ili prevenciju infekcije virusom hepatitisa B i/ili infekcije virusom hepatitisa C kod pacijenta kome je to potrebno.
Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje metode za uvođenje terapeutski efikasne količine jedinjenja formule (I) ili (Ia) ili njegovih prolekova, ili drugih jedinjenja ovog pronalaska u krvotok pacijenta u lečenju i/ili prevenciji infekcije virusom hepatitisa B i/ili C.
Metodi iz predmetnog pronalaska su posebno pogodni za ljudske pacijente.
2
Konkretno, metodi i doze iz predmetnog pronalaska mogu biti korisni, ali bez ograničenja, za pacijente zaražene virusom HBV i/ili HCV. Metodi i doze iz predmetnog pronalaska su takođe korisni za pacijente koji su podvrgnuti drugim antivirusnim tretmanima. Metodi prevencije iz predmetnog pronalaska su naročito korisna za pacijente kod kojih postoji rizik od virusne infekcije. U ove pacijente spadaju, bez ograničenja, zdravstveni radnici, npr. lekari, medicinske sestre, pružaoci zdravstvenih usluga; vojno osoblje; nastavnici; osobe koje se staraju o deci; pacijenti koji putuju ili žive u stranim podnebljima, posebno zemljama trećeg sveta, uključujući radnike socijalne pomoći, misionare i strane diplomate. Konačno, metodi i preparati se odnose i na lečenje refraktornih pacijenata ili pacijenata otpornih na lečenje poput otpornosti na inhibitore reverzne transkriptaze, inhibitore proteaze, itd.
KRATAK OPIS SLIKA
Slika 1: Primer 1-A aktivira mišji TLR7 u testu HEK-Blue-mTLR. Ćelije su inkubirane sa primerom 1-A i pozitivnom kontrolom GS-9620 u naznačenim koncentracijama tokom 20 sati. Aktivacija mišjeg TLR7 je izmerena pomoću Quanti-Blue testa.
Slika 2: In vitro indukcija citokina prema primeru 1-A u mišjem PBMC-u. Mišji PBMC je stimulisan primerom 1-A u naznačenim koncentracijama. Supernatanti su sakupljeni 24 sata posle tretmana, a nivoi citokina u supernatantima su procenjeni multipleks testom.
Slika 3: HBV DNK i HBsAg kod miševa zaraženih AAV-HBV tretiranih sa nosačima, niskom dozom primera 6-A od 30 mg/kg i visokom dozom primera 6-A sa 100 mg/kg. Lečenje je započelo nakon što su miševi bili inficirani pomoću AAV-HBV tokom 29 dana. Lečeni su 42 dana i DNK HBV i HBsAg u mišjem serumu izmereni su u naznačenim terminima pomoću RT-qPCR, odnosno HBsAg CLIA. Rezultati su predstavljeni kao srednja vrednost ± SEM. LLQ: donja granica kvantifikacije.
PRIMERI
Pronalazak će se bolje shvatiti kroz primere koji slede. Oni, međutim, ne treba da se tumače kao ograničenje obima pronalaska.
SKRAĆENICE ACN: acetonitril
DMAP: 4-dimetilaminopiridin
CDCl3: deuterisani hloroform
DCM: dihlorometan
DMF: dimetil formamid
EtOAc: etil acetat
FBS: fetalni goveđi serum
HPLC: tečna hromatografija visokih performansi
MS (ESI): masena spektroskopija (elektrosprej jonizacija)
BSA: N, O-bis(trimetilsilil)acetamid
NMR: nuklearna magnetna rezonanca
izm. izmereno
NaBH4: natrijum borohidrid
TBAF tetrabutilamonijum fluorid
EC50: Molarna koncentracija agonista, koja daje 50 % maksimalnog mogućeg odgovora na taj agonist.
TEA: trietilamin
TMSOTf: trimetilsilil trifluorometansulfonat
OPŠTI EKSPERIMENTALNI USLOVI
Intermedijeri i finalna jedinjenja su prečišćena fleš hromatografijom, upotrebom jednog od sledećih instrumenata: i) Biotage SP1 sistem i modul kertridža Quad 12/25, ii) ISCO instrument kombinovane fleš hromatografije. Robna marka silikagela i veličina pora: i) KP-SIL60 Å, veličina čestica: 40-60 μm; ii) CAS registarski br: Silikagel: 63231-67-4, veličina čestica: silika gel 47-60 mikrona; iii) ZCX kompanije „Qingdao Haiyang Chemical Co, Ltd“, pora: 200-300 ili 300-400.
Intermedijeri i finalna jedinjenja su prečišćeni preparativnim HPLC-om na koloni sa reversnim fazama, uz korištenje kolone X Bridge™ Perp C18(5 µm, OBD™ 30 x 100 mm) ili kolone SunFire™ Perp C18(5 µm, OBD™ 30 x 100 mm).
LC/MS spektri dobijeni su korišćenjem Waters UPLC-SQD masenog detektora. Standardni LC/MS uslovi su bili sledeći (vreme rada 3 minute):
Kiseli uslovi: A: 0,1 % mravlja kiselina i 1 % acetonitril u H2O; B: 0,1 % mravlja kiselina u acetonitrilu;
Bazni uslovi: A: 0,05% NH3·H2O u H2O; B: acetonitril.
Maseni spektri (MS): tipično se prikazuju samo joni koji ukazuju na osnovnu masu, i osim ako nije drugačije naznačeno, navedeni maseni jon je pozitivan maseni jon (M+H)<+>.
NMR spektri su dobijeni upotrebom Bruker Avance 400MHz.
Sve reakcije koje su uključivale reagense osetljive na vazduh, izvedene su u atmosferi argona. Reagensi su korišćeni kao što su dobijeni od komercijalnih dobavljača bez daljeg prečišćavanja, osim ako nije drugačije naznačeno.
1
PRIMERI PRIPREME
Primer 1
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Priprema O-[(3aR,5R,6S,6aR)-5-(2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-6-il] metilsulfanilmetantioata
Suspenziji NaH (60 % u mineralnom ulju, 4 g, 100 mmol) u THF (80 ml) je dodat rastvor diaceton-α-D-glukoze (10,5 g, 40 mmol) i imidazola (136 mg, 2 mmol) u THF (20 ml) kap po kap, uz zadržavanje unutrašnje temperature ispod 15 °C. Nastala smeša je mešana na 10 °C tokom 15 minuta. Prethodnoj smeši je dodat ugljen disulfid (14,8 g, 200 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakcionoj smeši je dodat jodometan (24,6 g, 200 mmol) i mešana je na sobnoj temperaturi još 2 sata, zatim je ugašena zasićenim rastvorom NH4Cl (70 ml) i dva puta ekstrahovana sa EtOAc (100 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 14,6 g O-[(3aR,5R,6R,6aR)-5-(2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-6-il] metilsulfanilmetantioata (jedinjenje 1a) u obliku bezbojnog ulja.
Jedinjenje 1a:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,89-5,97 (m, 2H), 4,65-4,73 (m, 1H), 4,29-4,39 (m, 2H), 4,04-4,17 (m, 2H), 2,61 (s, 3H), 1,56 (s, 3H), 1,44 (s, 3H), 1,35 (d, J = 4,02 Hz, 6H).
2
Priprema (3aR,5S,6aR)-5-(2,2-dimetil]-1,3-dioksolan-4-il)-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuran[2,3-d][1,3]dioksola
U rastvor O-[(3aR,5R,6S,6aR)-5-(2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-6-il]metilsulfanilmetantioata (jedinjenje 1a, 14 g, 40 mmol) u toluenu je dodat tri-n-butiltin hidrid (23,2 g, 80 mmol) i azodiizobutironitril (82 mg, 0,5 mmol), nastala smeša je zagrevana na 130 °C pod azotom tokom 3 sata. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 8,2 g (3aR,5S,6aR)-5-(2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksola (jedinjenje 1b) u obliku ulja.
Jedinjenje 1b:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,82 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,73-4,80 (m, 1H), 4,12 (m, 3H), 3,78-3,88 (m, 1H), 2,15-2,24 (m, 1H), 1,73-1,83 (m, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,43 (s, 3H), 1,36 (s, 3H), 1,32 (s, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 262.
Priprema (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]etan-1,2-diola
Rastvor (3aR,5S,6aR)-5-(2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il)-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksola (jedinjenje 1b, 10,0 g, 40,9 mmol) u 60 % HOAc u vodi (20 ml) je mešan na 40 °C tokom 16 sati. Reakciona smeša je podešena na pH 8~8,5 zasićenim rastvorom NaHCO3i ekstrahovana je pomoću EtOAc. Organski sloj je kombinovan i koncentrovan, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:2 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 5,2 g (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]etan-1,2-diola (jedinjenje 1c). MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 222.
Priprema (3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofurol[2,3-d][1,3]dioksol-5-karbaldehida
U rastvor (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]etan-1,2-diola (jedinjenje 1c, 18 g, 90 mmol) u MeOH (250 ml) ohlađenom u ledenom kupatilu je dodat natrijum metaperiodat (23,1 g, 108 mmol). Posle 12 sati mešanja na sobnoj temperaturi, rezultujuća suspenzija je filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:2 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 14 g (3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-karbaldehida (jedinjenje 1d). MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 190.
Priprema 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola
U rastvor (3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-karbaldehida (jedinjenje 1d, 296 mg, 2 mmol) u THF (20 ml) je dodat etil magnezijum bromid (2M u THF, 2 ml, 2 mmol) na -20 °C pod argonom. Nakon mešanja na -20 °C tokom 20 sati, reakcija je ugašena zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml) tri puta. Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom dajući sirovi proizvod 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ol (jedinjenje 1e), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 316.
4
Priprema [(3R,5S)-2-acetoksi-5-(1-acetoksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetata
U rastvor 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola (jedinjenje 1e, sirovo kako je gore pripremljeno) u smeši sirćetne kiseline (2 ml) i anhidrida sirćetne kiseline (2 ml) je dodat H2SO4(0,2 mmol). Posle 24 sata mešanja na sobnoj temperaturi, rastvor je razblažen EtOAc (40 ml) i podešen na pH 5,0 zasićenim rastvorom NaHCO3. Odvojeni organski sloj je opran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:3 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 510 mg [(3R,5S)-2-acetoksi-5-(1-acetoksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 1f). MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 316.
Priprema [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (CAS #: 30161-97-8, kat. br.: kao J92-094790, komercijalno dostupan od kompanije „J&K Scientific“, 276 mg, 1,5 mmol) u ACN (20 ml) je dodat BSA (913,5 mg, 4,5 mmol). Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 0,5 sati u atmosferi argona da bi nastao bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(3R,5S)-2-aktoksi-5-(1-aktoksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetat (jedinjenje 1f, 450 mg, 1,6 mmol) i TMSOTf (510 mg, 2,3 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja na 70 °C, rastvarač je uparen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvor NaHCO3(30 ml). Organski sloj je sakupljen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, sušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 412 mg sirovog proizvoda [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 1g), koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. MS izm. (ESI-) [(M-H-)]: 411.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U rastvor [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 1g, sirovo, 412 mg) u metanolu (25 ml) je dodat K2CO3(272 mg, 2 mmol). Posle 12 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je podešena na pH 8,2 dodavanjem HOAc (120 mg, 2 mmol) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 133,1 mg primera 1-A i 118,2 mg primera 1-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 1-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,93-6,00 (m, 1H), 4,91-4,94 (m, 1H), 4,15-4,25 (m, 1H), 3,44-3,53 (m, 1H), 2,49-2,61 (m, 1H), 1,89-1,96 (m, 1H), 1,41-1,61 (m, 2H), 1,01 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 327.
Primer 1-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,89-5,96 (m, 1H), 4,90-4,97 (m, 1H), 4,09-4,20 (m, 1H), 3,61-3,69 (m, 1H), 2,57-2,68 (m, 1H), 1,91-1,96 (m, 1H), 1,55-1,65 (m, 1H), 1,35-1,46 (m, 1H), 1,00 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 327.
Primer 2
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on
Priprema [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata
U suspenziju 5-amino-3H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-ona (CAS #: 848691-22-5, kat. br.: kao SY028954, komercijalno dostupan od kompanije „Shanghai Shaoyuan Co. Ltd.“, 326 mg, 2 mmol) u ACN (40 ml) je dodat BSA (1,2 g, 6 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim mešana na 70 °C tokom 1 sata u atmosferi argona da bi nastao bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(3R,5S)-2-acetoksi-5-(1-acetoksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetat (jedinjenje 1f, 432 mg, 1,5 mmol) i TMSOTf (666 mg, 3 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja uz mešanje, na 70 °C, rastvarač je uparen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvoria NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, sušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobio sirovi [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetat. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:1 EtOAc u petrol etru), da bi se dobilo 310 mg [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 2a).
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-ona
U rastvor [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 2a, 180 mg, 0,5 mmol) u metanolu (25 ml) dodat je K2CO3(136 mg, 1 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je podešena na pH 7,0 dodavanjem HOAc (120 mg, 2 mmol) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 9,5 mg primera 2-A i 2,8 mg primera 2-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 2-A:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 8,35 (s, 1H), 6,85 (s, 2H), 5,81-5,87 (m, 1H), 5,43-5,52 (m, 1H), 4,73-4,81 (m, 1H), 4,48-4,59 (m, 1H), 3,95-4,05 (m, 1H), 3,27-3,32 (m, 1H), 2,31-2,41 (m, 1H), 1,69-1,78 (m, 1H), 1,36-1,48 (m, 1H), 1,18-1,33 (m, 1H), 0,88 (t, J=7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 313.
Primer 2-B:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 8,35 (s, 1H), 6,84 (s, 2H), 5,79-5,88 (m, 1H), 5,37-5,54 (m, 1H), 4,77-4,86 (m, 1H), 4,52-4,62 (m, 1H), 3,87-4,01 (m, 1H), 3,30-3,34 (m, 1H), 2,39-2,49 (m, 1H), 1,86 (ddd, J=2,76, 6,21, 12,61 Hz, 1H), 1,49 (ddd, J=3,26, 7,47, 13,61 Hz, 1H), 1,14-1,28 (m, 1H), 0,86 (t, J=7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 313.
Primer 3
[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetat
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
Priprema 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propoksi-terc-butil-difenil-silana
U rastvor 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola (jedinjenje 1e, 2,02 g, 10 mmol) u DMF (30 ml) dodat je imidazol (6,5 g, 100 mmol) i terc-butilhlorodifenilsilan (8,22 g, 30 mmol) uz mešanje. Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je razblažen sa EtOAc (200 ml), ispran vodom, slanim rastvorom i osušen iznad Na2SO4. Organski sloj je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 3,6 g 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propoksi-terc-butil-difenil-silana (jedinjenje 3a).
Jedinjenje 3a:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,65-7,79 (m, 4H), 7,33-7,49 (m, 6H), 5,52-5,81 (m, 1H), 4,64-4,72 (m, 1H), 4,19-4,32 (m, 1H), 3,67-4,01 (m, 1H), 1,98-2,05 (m, 1H), 1,74-1,94 (m, 1H), 1,61 (s, 6H), 1,34-1,44 (m, 2H), 1,07 (d, J= 1,25 Hz, 9H), 0,72-0,83 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 458.
Priprema [(2R,3R,5S)-2-acetoksi-5-[1-[tercbutil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-3-il] acetata
U rastvor 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propoksi-terc-butil-difenil-silana (jedinjenje 3a, 3,6 g, 8,2 mmol) u DCM (30 ml) je dodata sirćetna kiselina (15 ml), anhidrid sirćetne kiseline (15 ml) i H2SO4(0,8 mmol). Posle 24 sata mešanja na sobnoj temperaturi, u reakcionu smešu je dodat TEA (5 ml). Dobijeni rastvor je razblažen sa DCM (30 ml). Odvojeni organski sloj je ispran sa zasićenim rastvorom NaHCO3, slanim rastvorom i osušen iznad MgSO4. Organski sloj je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:30 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 3,7 g [(2R,3R,5S)-2-acetoksi-5-[1-[terc-butil(difenil) silil]oksipropil]tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 3b). MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 502.
Priprema [(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-[1-[tercbutil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-3-il] acetata
U suspenziju 5-amino-3H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-ona (1,08 g, 6 mmol) u ACN (100 ml) dodat je BSA (3,6 g, 18 mmol). Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 1 sati u atmosferi argona da bi nastao bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(2R,3R,5S)-2-acetoksi-5-[1-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-3-il] acetat (jedinjenje 3b, 1,45 g, 3 mmol) i TMSOTf (2,0 g, 9 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja uz mešanje, na 70 °C, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc (50 ml) i zasićeni rastvor NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:1 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 1,04 g [(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2-okso-tiazol[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-[1-[tercbutil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 3c). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 593.
Priprema [(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetata
U rastvor [(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-[1-[tercbutil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-3-il] (jedinjenje 3c, 1,04 g, 1,8 mmol) u THE (20
4
ml) je dodat rastvor TBAF (1M u THF, 6 ml, 6 mmol) uz mešanje. Posle 4 sata mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je isprana zasićenim rastvorom NH4Cl, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:2 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 620 mg [(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2-okso-tiazola[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetata (primer 3), koji je dalje prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 112,8 mg primera 3-A i 99,8 mg primera 3-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 3-A:<1>HNMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8,22 (s, 1H), 6,04-6,07 (m, 1H), 5,74-5,80 (m, 1H), 4,12-4,19 (m, 1H), 3,50-3,57 (m, 1H), 2,76 (ddd, J = 7,40, 10,23, 13,49 Hz, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,04-2,10 (m, 1H), 1,54-1,63 (m, 1H), 1,42-1,52 (m, 1H), 1,02 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 355.
Primer 3-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8,22 (s, 1H), 5,99-6,07 (m, 1H), 5,70-5,81 (m, 1H), 4,06-4,18 (m, 1H), 3,61-3,71 (m, 1H), 2,77-2,90 (m, 1H), 2,11-2,16 (m, 1H), 2,09 (s, 3H), 1,57-1,68 (m, 1H), 1,34-1,46 (m, 1H), 1,01 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 355.
Primer 4
1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]propil acetat
U rastvor [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 2a, 150 mg, 0,4 mmol) u metanolu (25 ml) dodat je K2CO3(14 mg, 0,1 mmol). Posle 0,5 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakcija je podešena na pH 7,0 dodavanjem HOAc (12,6 mg, 0,2 mmol) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 17,5 mg primera 4-A i 8,5 mg primera 4-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 4-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8,20 (s, 1H), 5,98-6,08 (m, 1H), 4,93-5,01 (m, 2H), 4,31-4,42 (m, 1H), 2,56-2,70 (m, 1H), 2,03 (s, 3H), 1,87-1,95 (m, 1H), 1,54-1,78 (m, 2H), 0,93 (t, J = 7,53 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 355.
Primer 4-B:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 8,28-8,39 (m, 1H), 6,81-6,92 (br. s., 2H), 5,76-5,86 (m, 1H), 5,46-5,58 (br. s, 1H), 4,92-5,02 (m, 1H), 4,79-4,89 (m, 1H), 4,14-4,23 (m, 1H), 2,42-2,48 (m, 1H), 1,98 (s, 3H), 1,78-1,88 (m, 1H), 1,55-1,70 (m, 1H), 1,34-1,49 (m, 1H), 0,82 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 355.
Primer 5
[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetat
U rastvor 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (primer 1, 328 mg, 1 mmol) u DCM (15 ml) je dodat TEA (404 mg, 4 mmol) i anhidrid sirćetne kiseline (48 mg, 1 mmol) uz mešanje. Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je ugašen sirćetnom kiselinom (240 mg, 4 mmol), ispran slanim rastvorom, osušen iznad MgSO4i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 31,5 mg primera 5-A i 20,0 mg primera 5-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 5-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,96 (d, J = 2,51 Hz, 1H), 5,63-5,77 (m, 1H), 4,05-4,17 (m, 1H), 3,47-3,55 (m, 1H), 2,62-2,79 (m, 1H), 2,09 (s, 3H), 2,00-2,06 (m, 1H), 1,51-1,63 (m, 1H), 1,41-1,51 (m, 1H), 1,02 (t, J = 7,53 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 369.
Primer 5-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,95 (d, J = 2,51 Hz, 1H), 5,68-5,77 (m, 1H), 4,04-4,14 (m, 1H), 3,60-3,69 (m, 1H), 2,73-2,84 (m, 1H), 2,09 (s, 4H), 1,57-1,67 (m, 1H), 1,35-1,45 (m, 1H), 1,01 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 369.
Primer 6
[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil] acetat
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
4
Priprema [(2R)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-hidroksi-etil] 4-metilbenzensulfonata
U rastvor (1R)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]etan-1,2-diola (100 g, 490 mmol) u suvom piridinu (1000 ml) dodat je ptoluensulfonil hlorid (139 g, 735 mmol) na 0 °C. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 12 sati, dobijeni rastvor je ugašen vodom (100 ml) i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 do 1:3 EtOAc u petrol etru) radi dobijanja 130 g [(2R)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-hidroksi-etil] 4-metilbenzensulfonata (jedinjenje 6a) u obliku blago žućkastog ulja.
Jedinjenje 6a:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,82 (d, J = 8,00 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 8,00 Hz, 2H), 5,78 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,75 (t, J = 4,00 Hz, 1H), 4,20- 4,12 (m, 2H), 4,03-3,97 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,39 (d, J = 3,51 Hz, 1H), 2,08-2,15 (m, 1 H), 1,75-1,80 (m, 1 H), 1,51 (s, 3 H), 1,33 (s, 3 H).
Priprema (3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-5-[(2R)-oksiran-2-il]-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksola
U rastvor [(2R)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-hidroksi-etil] 4-metilbenzensulfonata (jedinjenje 6a, 100 g, 280 mmol) u anhidrovanom THF-u (1500 ml) ohlađenom na -70 °C dodat je kalijum bis(trimetilsilil)amid (340 ml, 340 mmol, 1 M u THF-u) u atmosferi N2. Nakon mešanja tokom 1 sata na -70 °C, reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor NH4Cl. Organski sloj je razdvojen, a vodena faza ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:3 EtOAc u petrol etru) radi dobijanja 40,5 g (3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-5-[(2R)-oksiran-2-il]-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksola (jedinjenje 6b) u obliku žućkastog ulja.
Jedinjenje 6b:<1>H NMR: (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,87 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,77 (t, J = 4,00, 1H), 4,20-4,28 (m, 1H), 3,14-3,20 (m, 1H), 2,83-2,88 (m, 1H), 2,63 (dd, J = 5,00, 2,80 Hz, 1H), 2,09 (dd, J = 12,00,4,00 Hz, 1H), 1,69-1,79 (m, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).
Priprema (1R)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola
U suspenziju CuI (19,3 g, 107 mmol) u suvom THF-u (2000 ml) u atmosferi N2dodat je metil magnezijum bromid (3 M u dietil etru, 537 ml, 1,61 mol) na -70 °C. Posle 1 sata mešanja na ovoj temperaturi, rastvor (3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-5-[(2R)-oksiran-2-il]-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksola (jedinjenje 6b, 100 g, 537mmol, rastvoreno u 200 ml anhidrovanog THF-a) u kapima je dodat u reakcionu smešu. Nakon dodatna 2 sata mešanja na -70 °C, reakciona smeša je sipana u zasićeni rastvor NH4Cl. Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:3 EtOAc u petrol etru) radi dobijanja 82 g (1R)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola (jedinjenje 6c) u obliku žućkaste čvrste supstance.
Jedinjenje 6c:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,83 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,81 -4,73 (m, 1H), 4,26-4,19 (m, 1H), 3,91-3,82 (m, 1H), 2,08-2,02 (m, 1H), 1,93 - 1,89 (m, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,49-1,39 (m, 2H), 1,34 (s, 3H), 1,02 (t, J = 7,53 Hz, 3H).
Priprema [(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil] 4-nitrobenzoata
4
U rastvor (1R)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola (jedinjenje 6c, 50 g, 245 mmol), trifenilfosfina (195 g, 743 mmol), 4-nitrobenzojeve kiseline (124 g, 743 mmol) u THF-u (1200 ml) uz mešanje je dodat dietil azodikarboksilat (130 g, 743 mmol) u kapima na 0 °C pod N2. Nakon mešanja na 18 °C tokom 10 sati, smeša je ugašena dodatkom zasićenog rastvora NaHCO3i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su spojeni, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:3 EtOAc u petrol etru) radi dobijanja 61 g [(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil] 4-nitrobenzoata (jedinjenje 6d) u obliku žućkaste čvrste supstance.
Jedinjenje 6d:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 8,34-8,22 (m, 4 H), 5,85 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 5,23-5,17 (m, 1H), 4,76 (t, J = 4,27 Hz, 1H), 4,48- 4,39 (m, 1H), 2,12 (dd, J = 13,30, 4,52 Hz, 1H), 1,88- 1,78 (m, 2H), 1,71-1,62 (m, 1H), 1,55 (s, 3 H), 1,34 (s, 3 H), 1,01 (t, J =7,40 Hz, 3 H).
Priprema (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola
U rastvor [(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil] 4-nitrobenzoata (jedinjenje 6d, 100 g, 285 mmol) u metanolu (1200 ml) dodat je K2CO3(78,7 g, 570 mmol). Nakon 10 minuta mešanja na sobnoj temperaturi, dobijena smeša je filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:8 EtOAc u petrol etru) radi dobijanja 54,7 g (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola (jedinjenje 6e) u obliku žućkaste čvrste supstance.
Jedinjenje 6e:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,81 (d, J = 3,64 Hz, 1H), 4,75 (t, J = 4,20 Hz, 1H), 4,18-4,11 (m, 1H), 3,49-3,40 (m, 1H), 2,07-2,00 (m, 2H), 1,84-1,75 (m, 1H), 1,59- 1,47 (m, 5H), 1,32 (s, 3H), 1,01 (t, J =7,40 Hz, 3H).
4
Priprema [(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil] acetata
U rastvor (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola (jedinjenje 6e,13,5 g, 67 mmol), TEA (81 g, 804 mmol), DMAP (1,6 g, 13 mmol) u anhidrovanom DCM (150 ml) uz mešanje je dodat anhidrid sirćetne kiseline (62 g, 603 mmol). Nakon mešanja na 22 °C tokom 10 sati, reakcija je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3. Organski sloj je razdvojen, a vodena faza ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:8 EtOAc u petrol etru) radi dobijanja 13 g [(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil] acetata (jedinjenje 6f) u obliku bezbojnog ulja.
Jedinjenje 6f:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,83 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,92 (dt, J = 7,97, 5,18 Hz, 1H), 4,74 (t, J = 4,00 Hz, 1H), 4,35- 4,27 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 2,08 -1,99 (m, 1H), 1,74- 1,56 (m, 3H), 1,53 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 0,95 (t, J = 7,40 Hz, 3H).
Priprema [(3R,5S)-2-acetoksi-5-[(1S)-1-acetoksipropil]tetrahidrofuran-3-il] acetata
U rastvor [(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil] acetata (jedinjenje 6f, 4,8 g, 20 mmol), sirćetne kiseline (12,2 g, 200 mmol) i anhidrida sirćetne kiseline (10,2 g, 100 mmol) u anhidrovanom DCM (100 ml) dodata je koncentrovana H2SO4(0,5 ml) na 0 °C. Nakon mešanja na 22 °C tokom 3 sata, reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO3. Organski sloj je razdvojen, a
4
vodena faza ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (eluiranje sa 1:8 EtOAc u petrol etru) radi dobijanja 2,3 g (3R,5S)-2-acetoksi-5-[(1S)-1-acetoksipropil]tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 6g) u obliku bezbojnog ulja.
Jedinjenje 6g:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 6,12 (s, 1H), 5,19 (d, J = 4,52 Hz, 1H), 4,83-4,91 (m, 1H), 4,34-4,44 (m, 1H), 2,09- 2,19 (m, 9H), 1,51-1,74 (m, 4H), 0,94 (t, J = 7,40 Hz, 3H).
Priprema (2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-acetoksipropil]-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (1,4 g, 7,5 mmol) u ACN (20 ml) dodat je BSA (7,7 g, 38 mmol). Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 0,5 sati u atmosferi argona da bi nastao bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(3R,5S)-2-acetoksi-5-[(1S)-1-acetoksipropil]tetrahidrofuran-3-il] acetat (jedinjenje 6g, 720 mg, 2,5 mmol) i TMSOTf (8,3 g, 38 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja uz mešanje, na 70 °C, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvoria NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela da bi se dobio 470 mg [(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-acetoksipropil]-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 6h) u obliku bele čvrste supstance. MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 411.
4
Priprema [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil] acetata
U rastvor [(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-acetoksipropil]-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 6h, 210 mg, 0,5 mmol) u metanolu (25 ml) je dodat K2CO3(136 mg, 1 mmol). Posle 10 min mešanja na sobnoj temperaturi, reakcija je podešena na pH 7,0 dodavanjem HOAc (120 mg, 2 mmol), koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 66,7 mg [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil] acetata (primer 6) u obliku bele čvrste supstance.
Primer 6:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,94 (d, J = 1,51 Hz, 1H), 5,00- 4,93 (m, 2H), 4,37- 4,30 (m, 1H), 2,63- 2,54 (m, 1H), 2,05 (s, 3 H), 1,91 - 1,83 (m, 1H), 1,74-1,58 (m, 2H), 0,93 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 369.
Primer 7
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksietil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1, korišćenjem metil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Primer 7 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 7-A i primer 7-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 7-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,91-5,97 (m, 1H), 4,91-4,96 (m, 1H), 4,07-4,13 (m, 1H), 3,86-3,95 (m, 1H), 2,58-2,68 (m, 1H), 1,92-2,01 (m, 1H), 1,17 (d, J
4
= 6,53 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 313.
Primer 7-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,97 (d, J = 2,76 Hz, 1H), 4,90-4,94 (m, 1H), 4,06-4,14 (m, 1H), 3,73-3,82 (m, 1H), 2,46-2,58 (m, 1H), 1,86-1,96 (m, 1H), 1,17 (d, J = 6,27 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 313.
Primer 8
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibut-3-enil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1 korišćenjem alil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Primer 8 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 8-A i primer 8-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 8-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,94-5,99 (m, 1H), 5,86-5,92 (m, 1H), 5,05-5,15 (m, 3H), 4,18-4,26 (m, 1H), 3,64 (m, 1H), 2,51-2,60 (m, 1H), 2,19-2,34 (m, 2H), 1,95 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 339.
Primer 8-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,83-5,99 (m, 2H), 4,96-5,21 (m, 3H), 4,17 (d, J = 5,02 Hz, 1H), 3,80 (d, J =3,76 Hz, 1H), 2,58-2,73 (m, 1H), 2,27-2,38 (m, 1H), 2,19 (td, J = 7,06, 14,24 Hz, 1H), 1,89-2,01 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 339.
Primer 9
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipentil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1, korišćenjem butil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Primer 9 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 9-A i primer 9-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 9-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,95 (d, J = 3,26 Hz, 1H), 4,95-5,01 (m, 1H), 4,16-4,22 (m, 1H), 3,51-3,60 (m, 1H), 2,49-2,58 (m, 1H), 1,90-2,00 (m, 1H), 1,44-1,55 (m, 3H), 1,20-1,40 (m, 3H), 0,87-0,98 (m, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 355.
Primer 9-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,90-5,95 (m, 1H), 4,93-4,99 (m, 1H), 4,12-4,20 (m, 1H), 3,69-3,77 (m, 1H), 2,59-2,67 (m, 1H), 1,90-1,98 (m, 1H), 1,49-1,60 (m, 2H), 1,29-1,44 (m, 4H), 0,91-0,97 (m, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 355.
Primer 10
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibutil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1 korišćenjem propil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Primer 10 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 10-A i primer 10-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 10-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,93-5,99 (m, 1H), 4,92-4,95 (m, 1H), 4,13-4,22 (m, 1H), 3,53-3,63 (m, 1H), 2,48-2,60 (m, 1H), 1,87-1,99 (m, 1H), 1,50-1,61 (m, 1H), 1,36-1,50 (m, 3H), 0,91-1,01 (m, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 341.
Primer 10-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,90-5,96 (m, 1H), 4,92-4,96 (m, 1H), 4,11-4,19 (m, 1H), 3,71-3,80 (m, 1H), 2,56-2,69 (m, 1H), 1,89-1,99 (m, 1H), 1,46-1,60 (m, 2H), 1,34-1,45 (m, 2H), 0,96 (t, J = 6,90 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 341.
1
Primer 11
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopentil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Priprema [(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-ciklopentil-metanola
U rastvor (3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-karbaldehida (4,0 g, 23,2 mmol) u THF (20 ml) je dodat ciklopentilmagnezijum bromid (1M u THF, 30 ml, 30 mmol) na -20 °C pod argonom. Nakon mešanja na -20 °C tokom 20 sati, reakcija je ugašena zasićenim rastvorom NH4Cl. Reakciona smeša je tri puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom dajući 1,2 g sirovog proizvoda [(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-ciklopentil-metanola (jedinjenje 11a) u obliku bezbojnog ulja, koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 243.
Priprema [[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-ciklopentil-metil] benzoata
U rastvor [(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-
2
ciklopentil-metanola (jedinjenje 11a, 1,2 g, 5,0 mmol), TEA (3,2 g, 31,2 mmol) i DMAP (100 mg) u DCM (50 ml) je polako dodat na 0 °C benzoil hlorid (1,4 g, 10,0 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 4 sata, a zatim ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3. Reakciona smeša je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (100 ml). Organski slojevi su kombinovani, isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:20 do1:5 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 1,4 g [[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-ciklopentil-metil] benzoata (jedinjenje 11b) u obliku bezbojnog ulja.
Priprema [ciklopentil-[(2S,4R)-4,5-diacetoksitetrahidrofuran-2-il]metil] benzoata
U rastvor [[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-ciklopentil-metil] benzoata (jedinjenje 11b, 800 mg, 2,3mmol) u smeši sirćetne kiseline (2 ml) i anhidrida sirćetne kiseline (2 ml) je dodat H2SO4(0,2 mmol). Posle 24 sata mešanja na sobnoj temperaturi, rastvor je razblažen sa EtOAc (40 ml) i podešen na pH 5,0 dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO3. Organski sloj je razdvojen, ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:3 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 480 mg [ciklopentil-[(2S,4R)-4,5-diacetoksitetrahidrofuran-2-il]metil] benzoata (jedinjenje 11c).
Priprema [[(2S)4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il) tetrahidrofuran-2-il]-ciklopentil-metil] benzoata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (370 mg, 2,0 mmol) u ACN (20 ml) dodat je BSA (2,1 g, 10 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim mešana na 70 °C tokom 0,5 sata u atmosferi argona da bi nastao bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [ciklopentil-[(2S,4R)-4,5-diacetoksitetrahidrofuran-2-il]metil] benzoat (jedinjenje 11c, 400 mg, 1,0 mmol) i TMSOTf (2,25 g, 10 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja uz mešanje, na 70 °C, rastvarač je uparen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvor NaHCO3(30 ml). Organski sloj je sakupljen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:1 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 160 mg [[(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]-ciklopentil-metil] benzoata (jedinjenje 11d).
Jedinjenje 11d:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,96-7,99 (m, 2H), 7,59-7,61 (m, 1H), 7,44-7,50 (m, 2H), 5,82-5,93 (m, 1H), 5,23-5,26 (m, 1H),4,45-4,52 (m, 1H), 3,73-3,76 (m, 1H), 2,81-2,85 (m, 1H), 2,41-2,43 (m, 1H), 2,09 (s, 3H), 1,31-1,89 (m, 8H).
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopentil(hidroksi)metil]-3-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U rastvor [[(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]-ciklopentil-metil] benzoata (jedinjenje 11d, 70 mg, 0,14 mmol) u metanolu (10 ml) je dodat K2CO3(136 mg, 1 mmol). Posle 12 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je podešena na pH 7,0 dodavanjem HOAc (120 mg, 2 mmol), koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 4,7 mg 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopentil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (primer 11) u obliku bele čvrste supstance.
Primer 11:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,91-5,93 (m, 1H), 4,94-4,98 (m, 2H), 4,31-4,36 (m, 1H), 2,56-2,61 (m, 1H), 2,00-2,06 (m, 2H), 1,31-1,72 (m, 8H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 369.
4
Primer 12
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-2-fenil-etil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1 korišćenjem benzil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Primer 12 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 12-A i primer 12-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 12-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 7,24-7,33 (m, 4H), 7,16-7,24 (m, 1H), 5,93-5,98 (m, 1H), 4,94-4,97 (m, 1H), 4,22 (dt, J = 4,02, 7,53 Hz, 1H), 3,76-3,84 (m, 1H), 2,74-2,90 (m, 2H), 2,60 (td, J = 7,53, 13,05 Hz, 1H), 1,97 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 389.
Primer 12-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 7,51-7,57 (m, 1H), 7,09-7,25 (m, 4H), 5,91-5,96 (m, 1H), 5,10-5,15 (m, 1H), 4,93-5,00 (m, 2H), 4,39-4,48 (m, 1H), 2,74-2,87 (m, 1H), 2,28-2,35 (m, 2H), 1,82-1,92 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 389.
Primer 13
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-3-metil-butil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1 korišćenjem izo-butil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Primer 13 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 13-A i primer 13-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 13-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,93-5,99 (m, 1H), 4,91-4,95 (m, 1H), 4,10-4,19 (m, 1H), 3,62-3,69 (m, 1H), 2,48-2,59 (m, 1H), 1,81-1,98 (m, 2H), 1,41-1,52 (m, 1H), 1,15-1,25 (m, 1H), 0,95 (t, J = 6,78 Hz, 6H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 355.
Primer 13-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,89-5,96 (m, 1H), 4,92-4,98 (m, 1H), 4,08-4,17 (m, 1H), 3,81-3,89 (m, 1H), 2,58-2,69 (m, 1H), 1,89-1,99 (m, 1H), 1,78-1,89 (m, 1H), 1,23-1,40 (m, 2H), 0,94 (dd, J = 6,65, 14,18 Hz, 6H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 355.
Primer 14
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopropil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Priprema [(3R,5S)-2-acetoksi-5-[acetoksi(ciklopropil)metil]tetrahidrofuran-3-il] acetata
Jedinjenje 14a je pripremljeno analogno [(3R,5S)-2-acetoksi-5-(1-acetoksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetatu (jedinjenje 1f), korišćenjem ciklopropil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida.
Priprema [(2R,3R,5S)-5-[acetoksi(ciklopropil)metil]-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il) tetrahidrofuran-3-il] acetata
Jedinjenje 14b je pripremljeno analogno [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetatu (jedinjenje 1g), korišćenjem [(3R,5S)-2-acetoksi-5-[acetoksi(ciklopropil)metil]tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 14a) umesto [(3R,5S)-2-acetoksi-5-(1-acetoksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 1f). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 441.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopropil(hidroksi)metil]-3-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1, korišćenjem [(2R,3R,5S)-5-[acetoksi(ciklopropil)metil]-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 14b) umesto [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 1g). Primer 14 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 14-A i primer 14-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 14-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,94-6,00 (m, 1H), 4,93-4,96 (m, 1H), 4,27-4,35 (m, 1H), 2,91-2,98 (m, 1H), 2,54-2,66 (m, 1H), 1,98-2,06 (m, 1H), 0,88-0,99 (m, 1H), 0,46-0,56 (m, 2H), 0,26-0,39 (m, 2H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 339.
Primer 14-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,93-5,96 (m, 1H), 4,92-5,00 (m, 1H), 4,30-4,38 (m, 1H), 3,09-3,16 (m, 1H), 2,68-2,79 (m, 1H), 1,94-2,05 (m, 1H), 0,81-0,92 (m, 1H), 0,49-0,58 (m, 2H), 0,35-0,43 (m, 1H), 0,25-0,33 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 339.
Primer 15
[[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]ciklopropil] acetat
U rastvor [(2R,3R,5S)-5-[acetoksi(ciklopropil)metil]-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 14b, sirovo, 220 mg, 0,5 mmol) u metanolu (25 ml) je dodat K2CO3(136 mg, 1 mmol). Posle 1 sata mešanja na sobnoj temperaturi, reakcija je podešena na pH 7,0 dodavanjem HOAc (120 mg, 2 mmol), koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 7,5 mg primera 15-A i 7,5 mg primera 15-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 15-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,94-5,98 (m, 1H), 4,83-4,87 (m, 1H), 4,39-4,47 (m, 2H), 2,62-2,70 (m, 1H), 1,92-2,07 (m, 4H), 1,03-1,12 (m, 1H), 0,60-0,66 (m, 1H), 0,38-0,55 (m, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 381.
Primer 15-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,89-5,96 (m, 1H), 4,94-4,99 (m, 1H), 4,60-4,67 (m, 1H), 4,37-4,45 (m, 1H), 2,75-2,88 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 1,90-2,00 (m, 1H), 0,98-1,08 (m, 1H), 0,58-0,66 (m, 1H), 0,46-0,53 (m, 1H), 0,36 (m, 2H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 381.
Primer 16
[(S)-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-ciklopropil-metil] acetat
Priprema [(2R,3R,5S)-5-[acetoksi(ciklopropil)metil]-2-(5-amino-2-oksotiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (16a)
Jedinjenje 16a je pripremljeno analogno [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetatu (jedinjenje 2a), korišćenjem [(3R,5S)-2-acetoksi-5-[acetoksi(ciklopropil)metil]tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 14a) umesto [(3R,5S)-2-acetoksi-5-(1-acetoksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 1f).
Priprema [(S)-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-ciklopropil-metil] acetata
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 4, korišćenjem [(2R,3R,5S)-5-[acetoksi(ciklopropil)metil]-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 16a) umesto [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2-oksotiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 2a). Primer 16 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 16-A i primer 16-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 16-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8,21 (s, 1H), 6,06 (d, J = 1,51 Hz, 1H), 4,93-4,98 (m, 1H), 4,38-4,52 (m, 2H), 2,64-2,76 (m, 1H), 2,02 (s, 3H), 1,96-2,00 (m, 1H), 1,02-1,12 (m, 1H), 0,59-0,67 (m, 1H), 0,49-0,55 (m, 1H), 0,36-0,48 (m, 2H). MS izm. (ESI-) [(M+H)<+>]: 367.
Primer 16-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8,18-8,25 (m, 1H), 5,98-6,07 (m, 1H), 4,96-5,03 (m, 1H), 4,64-4,72 (m, 1H), 4,40-4,51 (m, 1H), 2,80-2,91 (m, 1H), 2,03 (s, 3H), 1,94-2,00 (m, 1H), 0,96-1,09 (m, 1H), 0,58-0,68 (m, 1H), 0,44-0,55 (m, 1H), 0,27-0,41 (m, 2H). MS izm. [(M+H)<+>]: 367.
Primer 17
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopropil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 2, korišćenjem [(2R,3R,5S)-5-[acetoksi(ciklopropil)metil]-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 16a) umesto [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2-oksotiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 2a). Primer 17 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 17-A i primer 17-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 17-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8,22 (s, 1H), 6,07 (d, J = 3,01 Hz, 1H), 4,93-4,98 (m, 1H), 4,29-4,40 (m, 1H), 2,93-3,01 (m, 1H), 2,59-2,69 (m, 1H), 2,00-2,09 (m, 1H), 0,89-0,98 (m, 1H), 0,49-0,58 (m, 2H), 0,32-0,41 (m, 2H). MS izm. (ESI-) [(M+H)<+>]: 325.
Primer 17-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8,23 (s, 1H), 5,99-6,06 (m, 1H), 4,96-5,02 (m, 1H), 4,33-4,40 (m, 1H), 3,10-3,17 (m, 1H), 2,74-2,81 (m, 1H), 2,00-2,07 (m, 1H), 0,83-0,92 (m, 1H), 0,49-0,58 (m, 2H), 0,36-0,42 (m, 1H), 0,26-0,33 (m, 1H). MS izm.
[(M+H)<+>]: 325.
Primer 18
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksiprop-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1 korišćenjem etinil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Primer 18 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 18-A i primer 18-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 18-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 6,00 (d, J = 2,51 Hz, 1H), 4,90-4,98 (m, 1H), 4,35-4,42 (m, 1H), 4,22-4,33 (m, 1H), 2,56-2,63 (m, 1H), 1,97-2,11 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 323.
Primer 18-B:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,26-11,41 (br, s, 1H), 6,90-7,07 (br, s, 2H), 5,71-5,77 (m, 1H), 5,56-5,64 (m, 1H), 5,44-5,50 (m, 1H), 4,78-4,86 (m, 1H), 4,16-4,23 (m, 1H), 4,02-4,13 (m, 1H), 2,41-2,47 (m, 1H), 1,80-1,92 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 323.
Primer 19
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibut-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1 korišćenjem propinilmagnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Primer 19 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 19-A i primer 19-B u obliku bele
1
čvrste supstance.
Primer 19-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,97-6,03 (m, 1H), 4,92-4,97 (m, 1H), 4,32-4,37 (m, 1H), 4,22-4,29 (m, 1H), 2,57-2,66 (m, 1H), 1,99-2,07 (m, 1H), 1,84 (d, J = 2,26 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 337.
Primer 19-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,93-5,98 (m, 1H), 4,95-5,01 (m, 1H), 4,41-4,46 (m, 1H), 4,24-4,32 (m, 1H), 2,67-2,77 (m, 1H), 1,98-2,07 (m, 1H), 1,83 (d, J = 2,01 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 337.
Primer 20
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-[hidroksi(2-tienil)metil]tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1, korišćenjem 2-tienil litijuma umesto etil magnezijum bromida. Primer 20 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 20-A i primer 20-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 20-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 7,33-7,39 (m, 1H), 7,07-7,11 (m, 1H), 6,98-7,02 (m, 1H), 6,02-6,06 (m, 1H), 4,90-4,97 (m, 2H), 4,46-4,52 (m, 1H), 2,52-2,57 (m, 1H), 1,71-1,76 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 381.
Primer 20-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 7,30-7,34 (m, 1H), 7,02-7,05 (m, 1H), 6,98 (d, J = 5,02 Hz, 1H), 5,96 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 5,09-5,14 (m, 1H), 4,98-5,04 (m, 1H), 4,43-4,49 (m, 1H), 2,69-2,77 (m, 1H), 1,94-2,02 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 381.
2
Primer 21
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-2-metoksi-etil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
Priprema (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-metoksi-etanola
U rastvor [(2S)-2-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-hidroksi-etil]4-metilbenzensulfonata (jedinjenje 6a, 3,2 g, 8,9 mmol) u metanolu (50 ml) dodat je K2CO3(5,4g, 40 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 1,62 g (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-metoksi-etanola (jedinjenje 21b) u obliku bezbojnog ulja.
Jedinjenje 21b:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,76-5,83 (m, 1H), 4,67-4,77 (m, 1H), 4,15-4,25 (m, 1H), 3,90-4,00 (m, 1H), 3,46 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 3,31-3,42 (m, 4H), 2,57-2,68 (m, 1H), 2,01-2,10 (m, 1H), 1,78-1,90 (m, 1H), 1,49 (s, 3H), 1,31 (s, 3H).
Priprema 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-metoksi-etanona
U rastvor (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-metoksi-etanola (jedinjenje 21b, 1,62 g, 7,4 mmol) u DCM (50 ml) uz mešanje je dodat Des–Martinov perjodinan (4,7 g, 11 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:2 EtOAc u petrol etru) radi dobijanja 1,4 g 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-metoksi-etanona (jedinjenje 21c) u obliku bezbojnog ulja. MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]:
4
Priprema 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-metoksi-etanola
U mešani rastvor 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-metoksi-etanona (jedinjenje 21c, 1,4 g, 6,5 mmol) u metanolu (50 ml) je dodat natrijum borohidrid (494 mg, 13 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, dobijeni rastvor je ugašen zasićenim rastvorom NH4Cl i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je suspendovan pomoću EtOAc i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 1,24 g sirovog proizvoda 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-metoksi-etanola (jedinjenje 21d) u obliku bezbojnog ulja. MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 236.
Priprema [(2R,3R,5S)-2-acetoksi-5-(1-acetoksi-2-metoksi-etil)tetrahidrofuran-3-il] acetata
U rastvor 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-2-metoksi-etanola (jedinjenje 21d, 1.24 g, 5,7 mmol) u smešu sirćetne kiseline (4 ml) i anhidrida sirćetne kiseline (4 ml) je dodat H2SO4(0,3 mmol). Posle 24 sata mešanja na sobnoj temperaturi, rastvor je razblažen sa EtOAc (40 ml) i podešen na pH 8,0 dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO3. Organski sloj je razdvojen, ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:2 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 1,5 g [(2R,3R,5S)-2-acetoksi-5-(1-acetoksi-2-metoksi-etil)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 21e) u obliku bezbojnog ulja. MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 322.
Priprema [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksi-2-metoksi-etil)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (368 mg, 2,0 mmol) u ACN (20 ml) dodat je BSA (1,2 mg, 6,0 mmol). Reakciona smeša je mešana na 70 °C tokom 0,5 sati u atmosferi argona da bi nastao bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(2R,3R,5S)-2-acetoksi-5-(1-acetoksi-2-metoksi-etil)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 21e, 304 mg, 1,0 mmol) i TMSOTf (666 mg, 3,0 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja uz mešanje, na 70 °C, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvor NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, sušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 320 mg sirovog proizvoda [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksi-2-metoksi-etil)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 21f), koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 427.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-2-metoksietil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U rastvor [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksi-2-metoksi-etil)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 21f, pripremljeno gore) u metanolu (25 ml) je dodat K2CO3(272 mg, 2 mmol). Posle 12 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je podešena na pH 7-8 dodavanjem HOAc (240 mg, 4 mmol), koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 22,6 mg primera 21-A i 22,3 mg primera 21-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 21-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,92-5,98 (m, 1H), 4,92-4,95 (m, 1H), 4,29-4,37 (m, 1H), 3,72-3,79 (m, 1H), 3,42-3,51 (m, 2H), 3,38 (s, 3H), 2,56-2,68 (m, 1H), 1,91-2,01 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 343.
Primer 21-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,91-5,96 (m, 1H), 4,92-4,95 (m, 1H), 4,20-4,28 (m, 1H), 3,85-3,91 (m, 1H), 3,49-3,56 (m, 1H), 3,39-3,45 (m, 1H), 3,37 (s, 3H), 2,63-2,73 (m, 1H), 1,95-2,03 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 343.
Primer 22
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(1-hidroksipropil)-3-rnetilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
Priprema 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata
U rastvor [(2R,3R,5S)-5-(1-acetoksipropil)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-3-il] acetata (jedinjenje 1g, 7,0 g, 16,9 mmol) u metanolu (200 ml) je dodat K2CO3(1,18 g, 8,5 mmol). Posle 12 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je podešena na pH 6,0 dodavanjem HOAc (1,2 g, 17 mmol), koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:2 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 2,8 g 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata (jedinjenje 22a) u obliku žute čvrste supstance. MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 369.
Priprema 1-[(2S,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-okso-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata
U mešani rastvor 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata (jedinjenje 22a, 2,8 g, 7,6 mmol) u THF (100 ml) je dodat Des–Martinov perjodinan (4,8 g, 11,3 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 metanola u DCM) da bi se dobilo 2,8 g sirovog proizvoda 1-[(2S,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-okso-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata (jedinjenje 22b). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 367.
Priprema 1-[(2S,4S,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata
U mešani rastvor 1-[(2S,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-okso-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata (jedinjenje 22b, 2,8 g, 7,6 mmol) u THF (50 ml) je dodat litijum-tri-terc-butoksialuminum hidrid (1M u THF, 15 ml, 15 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je ugašen zasićenim rastvorom NH4Cl i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 metanola u DCM) da bi se dobilo 1,76 g sirovog proizvoda 1-[(2S,4S,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]propil acetata (jedinjenje 22c). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 369. (Pogledati Tetrahedron 1984, 40, 125-135).
Priprema 1-[(2S,4S,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]propil acetata
U mešani rastvor 1-[(2S,4S,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata (jedinjenje 22c, 1,76 g, 0,46 mmol) u DCM (30 ml) je dodat piridin (154 mg, 1,9 mmol) i trifluorometansulfonski anhidrid (197 mg, 0,7 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4. Organski sloj je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 420 mg 1-[(2S,4S,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]propil acetat (jedinjenje 22d). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 502.
Priprema 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata
U mešani rastvor 1-[(2S,4S,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]propil acetata (jedinjenje 22d, 420 mg, 0,83 mmol) u DMF (7 ml) je dodat natrijum tiometoksid (84 mg, 1,2 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je razređen sa EtOAc, isprana slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod od 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata (jedinjenje 22e), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 399.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(1-hidroksipropil)-3-metilsulfaniltetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U rastvor 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]propil acetata (jedinjenje 22e, 200 mg, 0,5 mmol) u metanolu (25 ml) je dodat K2CO3(272 mg, 2 mmol). Posle 12 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je podešena na pH 7,0 dodavanjem HOAc (120 mg, 2 mmol), koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 4,7 mg primera 22-A i 1,8 mg primera 22-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 22-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 6,09-6,16 (m, 1H), 4,09-4,16 (m, 1H), 3,97-4,06 (m, 1H), 3,47-3,57 (m, 1H), 2,61-2,72 (m, 1H), 2,13 (s, 3H), 1,95-2,06 (m, 1H), 1,41-1,61 (m, 2H), 1,01 (t, J = 7,2Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 357.
Primer 22-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 6,05-6,12 (m, 1H), 4,01-4,11 (m, 2H), 3,65-3,74 (m, 1H), 2,67-2,78 (m, 1H), 2,12 (s, 3H), 1,98-2,05 (m, 1H), 1,52-1,65 (m, 1H), 1,31-1,47 (m, 1H), 1,01 (t, J = 7,2Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 357.
Primer 23
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-azido-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 22 upotrebom natrijum azida umesto natrijum tiometoksida. Primer 23 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 23-A i primer 23-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 23-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,93-5,99 (m, 1H), 4,95-5,00 (m, 1H), 4,06-4,14 (m, 1H), 3,47-3,55 (m, 1H), 2,63-2,75 (m, 1H), 2,03-2,12 (m, 1H), 1,51-1,61 (m, 1H), 1,43-1,51 (m, 1H), 1,01 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 352.
Primer 23-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,92-5,97 (m, 1H), 4,94-4,98 (m, 1H), 4,02-4,10 (m, 1H), 3,62-3,68 (m, 1H), 2,72-2,80 (m, 1H), 2,06-2,15 (m, 1H), 1,53-1,68 (m, 1H), 1,33-1,45 (m, 1H), 1,00 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 352.
1
Primer 24
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksialil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 1 korišćenjem etilen magnezijum bromida umesto etil magnezijuma. Primer 24 je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobili primer 24-A i primer 24-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 24-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,96-6,01 (m, 1H), 5,86-5,96 (m, 1H), 5,33-5,43 (m, 1H), 5,16-5,22 (m, 1H), 4,91-4,95 (m, 1H), 4,16-4,23 (m, 1H), 4,09-4,16 (m, 1H), 2,53-2,63 (m, 1H), 1,87-1,95 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 357.
Primer 24-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,93-5,95 (m, 1H), 5,84-5,92 (m, 1H), 5,37 (td, J = 1,76, 17,32 Hz, 1H), 5,17-5,23 (m, 1H), 4,93-4,99 (m, 1H), 4,29 (br, s,, 1H), 4,22 (d, J = 4,52 Hz, 1H), 2,57-2,68 (m, 1H), 1,88-1,98 (m, 1H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 357.
Primer 25
5-amino-3-((2R,3R,5S)-3-azido-5-((S)-1-hidroksietil)tetrahidrofuran-2-il)tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7(3H,6H)-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
2
Priprema (2R,3S,5R)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]tetrahidrofuran-2,3,4-triola
U mešani rastvor D-arabinoze (50 g, 0,33mol) u DMF (500 ml) je dodat imidazol (45 g, 0,66 mol) i terc-butilhlorodifenilsilan (109 g, 0,4 mol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je razblažen sa EtOAc (2000 ml), ispran vodom, slanim rastvorom i osušen iznad Na2SO4. Organski sloj je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:11 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 33 g (2R,3S,5R)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]tetrahidrofuran-2,3,4-triol (jedinjenje 25a).
Jedinjenje 25a:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,66-7,75 (m, 4H), 7,38-7,52 (m, 6H), 5,44-5,50 (m, 1H), 4,30 (d, J = 1,76 Hz, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 3,93-4,00 (m, 1H), 3,84-3,89 (m, 1H), 3,74-3,78 (m, 1H), 1,02-1,09 (m, 9H).
Priprema (3aS,5R,6aS)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-6-ola
U mešani rastvor (2R,3S,5R)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]tetrahidrofuran-2,3,4-triola (jedinjenje 25a, 33 g, 85 mmol) u acetonu (250 ml) je dodat 2,2-dimetoksipropan (13,2 g, 127 mmol) i p-toluen sulfonska kiselina (1 g, 5,8 mmol). Posle 2 sata mešanja na 60 °C, dobijeni rastvor je podešen na pH 7,0 dodavanjem zasićenog rastvora NaHCO3i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:11 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 20 g (3aS,5R,6aS)-5-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-6-ola (jedinjenje 25b).
Jedinjenje 25b:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,66-7,71 (m, 4H), 7,41 (d, J = 7,78 Hz, 6H), 5,87-5,93 (m, 1H), 4,55-4,60 (m, 1H), 4,42-4,49 (m, 1H), 4,04-4,10 (m, 1H), 3,80-3,89 (m, 2H), 1,35 (s, 3H), 1,31 (s, 3H), 1,09 (s, 9H).
4
Priprema [(3aS,5R,6aS)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-6-il]oksi-fenoksi-metanetiona
U rastvor (3aS,5R,6aS)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-6-ola (jedinjenje 25b, 23 g, 50 mmol) u DCM (200 ml) je dodat O-fenil hlormetantioat (10,3 g, 60 mmol) i piridin (7,9 g, 100 mmol) u DCM. Posle mešanja preko noći na sobnoj temperaturi, dobijena smeša je isprana slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-30% EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 20 g [(3aS,5R,6aS)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-6-il]oksi-fenoksi-metanetiona (jedinjenje 25c). MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 582.
Priprema [(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]metoksi-terc-butil-difenil-silana
U rastvor [(3aS,5R,6aS)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2,2-dimetil-3a,5,6,6atetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-6-il]oksi-fenoksi-metanetiona (jedinjenje 25c, 17 g, 30 mmol) u toluenu (150 ml) je dodat tri(trimetilsilil)silan (16,4 g, 66 mmol) i azodiizobutironitril (98 mg, 0,6 mmol), smeša je zagrevana na 130 °C pod azotom tokom 3 sata. Nakon završetka reakcije, reakcija je koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 11 g [(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]metoksi-terc-butil-difenil-silana (jedinjenje 25d).
Jedinjenje 25d:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,70 (qd, J = 1,89, 5,87 Hz, 4H), 7,37-7,46 (m, 6H), 5,78-5,83 (m, 1H), 4,72-4,78 (m, 1H), 4,27-4,35 (m, 1H), 3,84 (d, J = 6,78 Hz, 2H), 2,25-2,33 (m, 1H), 2,13-2,19 (m, 1H), 1,35 (s, 3H), 1,30 (s, 3H), 1,08 (s, 9H).
Priprema [(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]metanola
U rastvor [(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]metoksi-terc-butil-difenil-silana (jedinjenje 25d, 11 g, 26,6 mmol) u THF (100 ml) je dodat rastvor TBAF (1M u THF, 6 ml, 6 mmol) uz mešanje. Posle 4 sata mešanja na sobnoj temperaturi, reakcioni rastvor je ispran zasićenim rastvorom NH4Cl, osušen iznad Na2SO4, koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:2 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 5,8 g [(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]metanola (jedinjenje 25e).
Jedinjenje 25e:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 5,81-5,89 (m, 1H), 4,75-4,83 (m, 1H), 4,32-4,41 (m, 1H), 3,81-3,91 (m, 1H), 3,60-3,70 (m, 1H), 2,21-2,28 (m, 1H), 1,97-2,09 (m, 1H), 1,57-1,59 (s, 6H).
Priprema (3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-karbaldehida
U mešani rastvor [(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]-metanola (jedinjenje 25e, 2 g, 11,5 mmol) u THF (20 ml) je dodat Des– Martinov perjodinan (7,2 g, 17,2 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:3 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 1,2 g (3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-karbaldehida (jedinjenje 25f). MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 190.
Priprema 1-[(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]etanola
U rastvor (3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-karbaldehida (jedinjenje 25f, 800 mg, 1 mmol) u THF (20 ml) je dodat metil magnezijum bromid (2M u THF, 0,7 ml, 1,4 mmol) na -20 °C pod argonom. Nakon mešanja na -20 °C tokom 20 sati, reakcija je ugašena zasićenim rastvorom NH4Cl, ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml) tri puta. Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 400 mg sirovog proizvoda 1-[(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]etanola (jedinjenje 25g), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 206.
Priprema 1-[(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]etil benzoata
U ohlađeni rastvor 1-[(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]etanola (jedinjenje 25g, 200 mg, 1,06 mmol) u DCM (8 ml), su dodati benzoil hlorid (178 mg, 1,28 mmol) i DMAP (259 mg, 2 mmol). Posle dodavanja, smeša je prirodno zagrejana na sobnu temperaturu, i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:3 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 170 mg 1-[(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il] etil benzoata (jedinjenje 25h).
Jedinjenje 25h:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 8,05 (s, 2H), 7,56-7,63 (m, 1H), 7,46 (s, 2H), 5,85 (d, J = 4,02 Hz, 1H), 5,38-5,52 (m, 1H), 4,73-4,83 (m, 1H), 4,13-4,25 (m, 1H), 2,22 (d, J = 4,77 Hz, 2H), 1,62 (s, 3H), 1,46 (d, J = 6,27 Hz, 3H), 1,34 (s, 3H).
Priprema 1-[(2S,4S)-4-hidroksi-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata
Rastvor 1-[(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-iljetil benzoata (jedinjenje 25h, 170 mg, 18 mmol) u rastvoru HCl (0,1N u MeOH, 3 ml) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je neutralisana amonijum hidroksidom i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je suspendovan u EtOAc а zatim filtriran, filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 148 mg sirovog proizvoda 1-[(2S,4S)-4-hidroksi-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata (jedinjenje 25i), koji je korišćen direktno u sledećem koraku. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 267.
Priprema 1-[(2S,4S)-5-metoksi-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata
U rastvor 1-[(2S,4S)-4-hidroksi-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata (jedinjenje 25i, 483 mg) i DMAP (885 mg, 7,3 mmol) u DCM (20 ml) je dodat trifluorometansulfonski anhidrid (665 mg, 2,36 mmol) na 0 °C. Posle 0,5 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakcija je ugašeno zasićenim rastvorom NaHCO3i ekstrahovana sa DCM tri puta. Organski slojevi su spojeni, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 740mg sirovog proizvoda od 1-[(2S,4S)-5-metoksi-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata (jedinjenje 25j) u obliku ulja, koje je korišćeno u sledećem koraku direktno bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 400.
Priprema 1-[(2S,4R)-4-azido-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata
U rastvor 1-[(2S,4S)-5-metoksi-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata (jedinjenje 25j, 400 mg, 1 mmol) u DMF (2 ml) je dodat natrijum azid (65 mg, 1,05 mmol) na sobnoj temperaturi i jedinjenje je mešano na sobnoj temperaturi 16 sati. Reakcija smeša je podeljena na EtOAc i H2O, organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc dva puta. Organski slojevi su kombinovani, isprani slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 600 mg sirovog proizvoda od 1-[(2S,4R)-4-azido-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata (jedinjenje 25k), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Priprema 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-azido-tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (186 mg, 1 mmol) u ACN (10 ml) dodat je BSA (630 mg, 3 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim mešana na 70 °C, u atmosferi argona, tokom 0,5 sati da bi se dobio bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, 1-[(2S,4R)-4-azido-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]etil benzoat (jedinjenje 25k, 300 mg, 1,0 mmol) i TMSOTf (1,15 g, 5 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja na 70 °C, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvor NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, sušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 600 mg sirovog proizvoda 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-azido-tetrahidrofuran-2-il]etil benzoata (jedinjenje 25I), koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 442.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-azido-5-(1-hidroksietil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U rastvor 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-azido-tetrahidrofuran-2-il] etil benzoata (jedinjenje 25I, 600 mg, sirovog) u MeOH (8 ml) je dodat K2CO3(187 mg, 1,4 mmol). Posle 5 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša koncentrovana pod vakuumom a ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 30 mg 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-azido-5-(1-hidroksietil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (primer 25) u obliku bele čvrste supstance.
Primer 25:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,26 (s, 1H), 6,96 (br, s,, 2H), 5,76 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 5,03 (dt, J = 7,4, 2,8 Hz, 1H), 4,71 (d, J =5,0 Hz, 1H), 3,80 (dt, J = 9,2, 6,1 Hz, 1H), 3,57-3,67 (m, 1H), 2,53-2,68 (m, 1H), 2,04 (ddd, J = 13,2, 6,0, 2,6 Hz, 1H), 1,05 (d, J = 6,3 Hz, 3H). MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 338.
Primer 26
3-[(2R,3R,5S)-3-alil-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
Priprema 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil benzoata
U mešani rastvor sirovog 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola (jedinjenje 1e, 8,08 g, 40,0 mmol) i piridina (16,1 ml, 200 mmol) u DCM dodavani su kap po kap benzoil hlorid (5,0 ml, 43,0 mmol) na 0 °C. Posle dodavanja, smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je isprana sa 1N hlorovodoničnom kiselinom, slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:3 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 6,86 g 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil
1
benzoata (jedinjenje 26a).
Priprema 1-[(2S,4R)-4,5-diacetoksitetrahidrofuran-2-il]propil benzoata
U mešani rastvor 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil benzoata (jedinjenje 26a, 6,73 g, 22,0 mmol) i anhidrida sirćetne kiseline (11 ml) u sirćetnoj kiselini (44 ml) i hloroformu (11 ml) je dodavana, kap po kap, koncentrovana sumporna kiselina (200 ul). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi preko noći, rezultirajuća smeša je razblažena sa EtOAc (100 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(100 ml) tri puta. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:20 do 1:10 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 5,1 g 1-[(2S,4R)-4,5-diacetoksitetrahidrofuran-2-il]propil benzoata (jedinjenje 26b) u obliku viskoznog ulja.
Priprema 1-[(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il) tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (2,82 g, 16,8 mmol) u ACN (100 ml) dodat je BSA (10,4 ml, 42 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim mešana na 70 °C, u atmosferi argona, tokom 0,5 sati da bi se dobio bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, 1-[(2S,4R)-4,5-diacetoksitetrahidrofuran-2-il]propil benzoat (jedinjenje 26b, 4,9 g, 14,0 mmol) i TMSOTf (4,7 ml, 2,3 21mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja uz mešanje, na 70 °C, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvoria NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml).
2
Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:200 metanola u DCM) da bi se dobilo 5,27 g sirovog proizvoda 1-[(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d] pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata (jedinjenje 26c) u obliku svetlo žute čvrste supstance. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 475.
Priprema 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata
U rastvor 1-[(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata (jedinjenje 26c, 4,98 g, 10,5 mmol) u metanolu (105 ml) je dodat K2CO3(1,38 g, 10,0 mmol). Posle 1 sata mešanja na sobnoj temperaturi, reakcija je podešena na pH 7,0 sa HOAc (1,2 g, 20,0 mmol), koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:200 metanolom u DCM) da bi se dobilo 4,5g od 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata (jedinjenje 26d) u obliku svetlo smeđe čvrste supstance. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 433.
Priprema 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-fenoksikarbotioioloksi-tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata
U rastvor 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata (jedinjenje 26d, 4,32 g, 10,0 mmol) u DCM (60 ml) je dodat DMAP (2,44 g, 20 mmol) i O-fenil hlormetanetioat (1,6 ml, 12,0 mmol) uz mešanje. Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 do 1:1 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 1,9 g 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-fenoksikarbotioioloksi-tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata (jedinjenje 26e). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 569.
Priprema 1-[(2S,4R,5R)-4-alil-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata
Smeša 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-fenoksikarbotioioloksi -tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata (jedinjenje 26e, 1,14 g, 2,0 mmol), 2,2’-azobisizobutironitrila (168 mg, 1 mmol) i alil(tributil)stanana (3,08 ml, 10 mmol) u bezvodnom toluenu (15 ml) je degazirano argonom, a zatim zagrevano uz mešanje na 80 °C tokom 4 sata. Dobijena smeša je mešana sa zasićenim vodenim rastvorom NH4F na sobnoj temperaturi tokom 2 sata i dva puta ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, koncentrovani pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:3 EtOAc u petrol eteru) da bi se dobilo 820 mg 1-[(2S,4R,5R)-4-alil-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata (jedinjenje 26f) kao smeđa čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 457.
Priprema 3-[(2R,3R,5S)-3-alil-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
4
U rastvor 1-[(2S,4R,5R)-4-alil-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]propil benzoata (jedinjenje 26f, 800 mg, 1,75 mmol) u metanolu (25 ml) je dodat K2CO3(483 mg, 3,5 mmol). Posle 12 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakcija je razblažena zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrahovana sa DCM. Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 200 mg 3-[(2R,3R,5S)-3-alil-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-5-amino-6H-tiazolo [4,5-d]pirimidin-2,7-diona (primer 26). 100 mg primera 26 je dalje odvojeno superkritičnom fluidnom hromatografijom (SFC) da bi se dobilo 32,0 mg primera 26-A i 30,8 mg primera 26-B u obliku bele čvrste supstance.
Primer 26:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,32 (br. s., 1H), 6,89 (br. s., 2H), 5,64-5,81 (m, 2H), 4,92-5,10 (m, 2H), 4,45-4,63 (m, 1H), 3,74-3,93 (m, 1H), 3,37-3,48 (m, 1H), 2,97-3,14 (m, 1H), 2,12-2,39 (m, 3H), 1,61-1,79 (m, 1H), 1,36-1,52 (m, 1H), 1,14-1,29 (m, 1H), 0,88 (q, J = 7,36 Hz, 3H)MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 353.
Primer 26-A:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,24 (br. s., 1H), 6,87 (br. s., 2H), 5,66-5,80 (m, 2H), 4,95-5,11 (m, 2H), 4,45 (d, J = 6,53 Hz, 1H), 3,82-3,93 (m, 1H), 3,39-3,49 (m, 1H), 2,95-3,06 (m, 1H), 2,14-2,30 (m, 3H), 1,66 (ddd, J = 4,89, 7,09, 12,11 Hz, 1H), 1,34-1,49 (m, 1H), 1,18-1,33 (m, 1H), 0,88 (t, J = 7,28 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 353.
Primer 26-B:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,28 (br. s., 1H), 6,87 (br. s., 2H), 5,65-5,79 (m, 2H), 4,92-5,10 (m, 2H), 4,57 (d, J = 4,77 Hz, 1H), 3,78 (q, J = 6,78 Hz, 1H), 3,39-3,50 (m, 1H), 3,03-3,15 (m, 1H), 2,35 (ddd, J = 5,77, 8,66, 12,42 Hz, 1H), 2,16 (t, J = 7,15 Hz, 2H), 1,73 (td,J = 7,34, 12,42 Hz, 1H), 1,42-1,55 (m, 1H), 1,14-1,28 (m, 1H), 0,87 (t, J = 7,28 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 353.
Primer 27
Primer 27-A i primer 27-B: 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion i 5-amino-3[(2R,3R,5S)-5-[(1R)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Rastvor iz primera 26-A (50 mg, 0,15 mmol) u metanolu je mešan sa PtO2(10 mg) u atmosferi vodonika tokom 4 sata na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je filtrirana da bi se uklonio PtO2. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 32,1 mg primera 27-A u obliku bele čvrste supstance.
Primer 27-A:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 10,86-11,27 (br. s, 1H), 6,81-7,00 (br. s, 2H), 5,64-5,72 (m, 1H), 4,41-4,49 (m, 1H), 3,82-3,91 (m, 1H), 2,81-2,95 (m, 1H), 2,16-2,30 (m, 1H), 1,57-1,69 (m, 1H), 1,34-1,50 (m, 4H), 1,22-1,34 (m, 4H), 0,79-0,94 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 355.
Primer 27-B pripremljen je analogno primeru 27-A, korišćenjem primera 26-B umesto primera 26-A.
Primer 27-B:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,18-11,47 (br. s., 1H), 6,79-7,02 (br. s., 2H), 5,61-5,75 (m, 1H), 4,57 (d, J = 4,27 Hz, 1H), 3,69-3,85 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 2,94-3,08 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 1,71 (m, 1H), 1,42-1,55 (m, 1H), 1,31-1,42 (m, 2H), 1,12-1,31 (m, 3H), 0,69-0,95 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 355.
Primer 28
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
Priprema (2S)-5-oksotetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline
U rastvor (S)-2-aminopentandiojske kiseline (100 g, 680 mmol) u H2O (500 ml) je dodat HCl (140 ml, 1,6 mol), a zatim NaNO2(70,4 g, 1,02 mol) u H2O (100 ml) na -5 °C - 0 °C i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 24 sata. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom ispod 50 °C. Ostatak je suspendovan u EtOAc (500 ml) i filtriran. Filtrat je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 56 g sirovog proizvoda (2S)-5-oksotetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline (jedinjenje 28a) u obliku žutog ulja, koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Priprema (2S)-5-oksotetrahidrofuran-2-karbonil hlorida
U rastvor (2S)-5-oksotetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline (jedinjenje 28a, 70 g, 539 mmol) i kap DMF u bezvodnom DCM (500 ml) je dodat oksalil dihlorid (137 g, 1,07 mol) kap po kap. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakcija je zatim koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 70 g sirovog proizvoda (2S)-5-oksotetrahidrofuran-2-karbonil hlorida (jedinjenje 28b), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Priprema (5S)-5-propanoiltetrahidrofuran-2-ona
U rastvor (25)-5-oksotetrahidrofuran-2-karbonil hlorida (jedinjenje 28b, 70 g, 473 mmol) u suvom THF (400 ml) je dodat etilmagnezijum bromid (173 ml, 520 mmol, 3M u THF) polako na -78 °C pod N2. Posle dodavanja, reakciona smeša je mešana još 2 sata na -78 °C. Smeša je zatim ugašena zasićenim rastvorom NH4Cl i dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (500 ml). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:7 do 1:3 EtOAc u petrol etru) dajući 35 g (5S)-5-propanoiltetrahidrofuran-2- ona (jedinjenje 28c) u obliku svetlog žutog ulja.
Priprema (5S)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-ona
U rastvor (5S)-5-propanoiltetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28c, 35 g, 246,5 mmol) je dodat L-selektrid (320 ml, 320 mmol, 1 M u THF) na -78 °C pod N2. Posle dodavanja, reakciona smeša je mešana 2 sata na -78 °C. Reakciona smeša je zatim ugašena sa 2N HCI (200 ml) i dva puta ekstrahovana sa EtOAc (400 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 ml), koncentrovani pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:7 do 1:3 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 20 g (5S)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28d) u obliku žutog ulja. (Pogledati Eur. J. Med. Chem.1997, 32, 617-623).
Priprema (5S)-5-[(1S)-1-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-2-ona i (5S)-5-[(1R)-1-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-2-ona
U rastvor (5S)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28d, 9 g, 62,5 mmol) u DMF (100 ml) su dodati terc-butilhlorodifenilsilan (42,8 g, 156 mmol) i imidazol (10,6 g, 156 mmol) pod N2. Posle 12 sati mešanja na 50 °C, smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (100 ml) i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:20 do 1:3 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 18 g (5S)-5-[1-[tercbutil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-2-ona. 10 g smeše je dalje prečišćeno i odvojeno pomoću SFC da bi se dobilo 5,6 g (5S)-5-[(1S)-1-[tercbutil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28e-S) i 2 g (5S)-5-[(1R)-1-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28e-R). (Pogledati Tetrahedron. 1997, 53, 6281-6294).
Jedinjenje 28e-S:<1>H NMR (CDCl3400 MHz) δ ppm: 7,73-7,69 (m, 4H), 7,46- 7,39 (m, 6H), 4,56 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 2,64-2,47 (m, 2H), 2,20-2,15 (m, 1H), 1,72-1,67 (m, 1H), 1,47-1,42 (m, 1H), 1,15-1,05 (m, 9H), 0,82-0,73 (t, 3H).
Jedinjenje 28e-R:<1>H NMR (CDCl3400 MHz) δ ppm: 7,72-7,69 (m, 4H), 7,48- 7,39 (m, 6H), 4,54 (m, 1H), 3,92 (m, 1H), 2,60-2,47 (m, 2H), 2,38-2,31 (m, 1H), 2,19-2,12 (m, 1H), 1,50-1,41 (m, 1H), 1,05 (s, 9H), 0,74-0,72 (t, 3H).
Priprema (3R,5S)-5-[(1S)-1-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]-3-metiltetrahidrofuran-2-ona
U rastvor (5S)-5-[(1S)-1-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28e-S, 3,0 g, 7,8 mmol) u THF (60 ml) na -78 °C je dodavan, kap po kap, litijum diizopropilamid (2M u THF, 5,9 ml, 11,8 mmol). Posle dodavanja, reakcija je mešana 1 sat na -78 °C. Smeši je dodat jodometan (5,5 g, 39 mmol) i smeša je mešana na -78 °C još 1 sat. Smeša je ugašena zasićenim rastvorom NH4Cl (40ml) i dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (100 ml). Organski slojevi su kombinovani, isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:20 do 1:10 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 2,7 g (3R,5S)-5-[(1S)-1-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28f) u obliku bezbojnog ulja. (Pogledati Tetrahedron.1997, 53, 6281-6294).
Priprema (3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-ona
U rastvor (3R,5S)-5-[(1S)-1-[terc-butil(difenil)silil]oksipropil]-3-metiltetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28f, 2,7 g, 6,8 mmol) u THF (10 ml) je dodat TBAF (1M u THF, 13,6 ml, 13,6 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 12 sati. Zatim je smeša koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:30 do 1:20 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 1,02 g (3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28g) u obliku bezbojnog ulja.
Priprema [(1S)-1-[(2S,4R)-4-metil-5-okso-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata
U rastvor (3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 28g, 1,0 g, 6,3 mmol), TEA (3,2 g, 31,2 mmol) i DMAP (100 mg) u DCM (50 ml), polako je dodat benzoil hlorid (1,8 g, 12,6 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na 25 °C tokom 4 sata, a zatim ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3, ekstrahovana sa EtOAc (100 ml) dva puta. Organski slojevi su kombinovani, isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:20 do 1:5 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 1,4 g [(1S)-1-[(2S,4R)-4-metil-5-okso-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28h) u obliku bezbojnog ulja.
Priprema [(1S)-1-[(2S,4R)-5-hidroksi-4-metil-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata
U rastvor [(1S)-1-[(2S,4R)-4-metil-5-okso-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28h, 1,3 g, 5,0 mmol) u THF (100 ml) dodan je, kap po kap, diizobutil aluminijum hidrid (11 ml, 11 mmol) na -78 °C i smeša je mešana na -78 °C tokom 2 sata. Smeša je ugašena zasićenim rastvorom NH4Cl (5 ml) i dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (100 ml). Organski slojevi su kombinovani, isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 1,2 g sirovog proizvoda od [(1S)]-1-[(2S,4R)-5-hidroksi-4-metil-tetrahidrofuran2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28i), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
1
Priprema [(1S)-1-[(2S,4R)-5-acetoksi-4-metil-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata
U rastvor [(1S)-1-[(2S,4R)-5-hidroksi-4-metil-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28i, sirovo, 1,2 g, 4,5 mmol) u piridin (60 ml) se doda anhidrid sirćetne kiseline (0,918 g, 9 mmol) i DMAP (200 mg) uz mešanje. Posle mešanja na 25 °C tokom 2 sata, smeša je ugašena zasićenim rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EtOAc (40 ml). Organski slojevi su kombinovani, isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:20 do 1:5 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 1,0 g [(1S)-1-[(2S,4R)-5-acetoksi-4-metil-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28j) u obliku bezbojnog ulja.
Priprema [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-metil-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28k-A) i [(1R)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-metiltetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28k-B)
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (872 mg, 4,7 mmol) u ACN (20 ml) dodat je BSA (913,5 mg, 4,5 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim mešana na 70 °C, u atmosferi argona, tokom 2 sata da bi se dobio bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(1S)-1-[(2S,4R)-5-acetoksi-4-metil-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoat (jedinjenje 28j, 294 mg, 0,95 mmol) i TMSOTf (1,44 g, 6,6 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati uz mešanje na 20 °C, rastvarač je uklonjen pod vakuumom.
2
Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvor NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen i odvojen preparativnom HPLC da bi se dobilo 9,7 mg [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-metil-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28k-A) i 8,4 mg [(1R)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-metil-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28k-B) u obliku bele čvrste supstance.
Jedinjenje 28k-A:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 7,97-8,05 (m, 2H), 7,55-7,62 (m, 1H), 7,41-7,48 (m, 2H), 5,77 (d, J = 4,14 Hz, 1H), 5,19 -5,27 (m, 1H), 4,35 (dt, J = 8,38, 6,48Hz, 1H), 3,16 (dd, J = 7,40, 4,27 Hz, 1H), 2,57 (dt, J = 12,33,8,77 Hz, 1 H), 1,67-1,87 (m, 3H), 1,16 (d, J = 7,28 Hz, 3H), 0,95 (t, J = 7,47 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 431.
Jedinjenje 28k-B:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8,03- 8,08 (m, 2H), 7,61-7,66 (m, 1H), 7,48 -7,55 (m, 2H), 6,41 (d, J = 7,65 Hz, 1H), 5,06 (td, J = 6,65, 4,27 Hz, 1H), 4,75 (d, J = 7,15 Hz, 1H), 2,72-2,84 (m, 1H), 2,25-2,42 (m, 1H), 1,97-2,06 (m, 1H), 1,75-1,85 (m, 2H), 0,97 (t, J = 7,40 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,90 Hz, 3 H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 431.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metiltetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U rastvor jedinjenja [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-metil-tetrahidrofuran-2-il]propil] benzoata (jedinjenje 28k-A, 120 mg, 0,27 mmol) u MeOH (2 ml) je dodat K2CO3(58 mg, 0,42 mmol). Posle 5 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je podešena na pH 7 sa mehurićima CO2i zatim koncentrovana pod vakuumom. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC da bi se dobilo 24 mg 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (primer 28) u obliku bele čvrste supstance.
Primer 28:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,81 (d, J = 7,03 Hz, 1 H), 4,03-4,18 (m, 1 H), 3,45-3,48 (m, 1 H), 3,05-3,11 (m, 1 H), 2,37-2,42 (m, 1 H), 1,80-1,85 (m, 1 H), 1,40 - 1,62 (m, 2 H), 1,11 (d, J = 6,78 Hz, 3 H), 1,00 (t, J = 7,40 Hz, 3 H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 327.
Primer 29
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksibut-2-inil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 28 korišćenjem 1-propinil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Nakon prečišćavanja preparativnom HPLC, 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksibut-2-inil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidina-2,7-dion (primer 29) se dobija u obliku bele čvrste supstance.
Primer 29:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,83-5,85 (m, 1H), 4,74-4,78 (m, 1H), 4,42-4,44 (m, 1H), 4,12-4,13 (m, 1H), 3,15-3,17 (m, 1H), 1,87-1,89(m, 1H), 1,83-1,84 (m, 3H), 1,10-1,12 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 337.
Primer 30
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(S)-ciklopropil(hidroksi)metil]-3-metiltetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 28 korišćenjem ciklopropil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Nakon prečišćavanja preparativnom HPLC, 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(S)-ciklopropil(hidroksi)metil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidina-2,7-dion (primer 30) se dobija u obliku bele čvrste supstance.
4
Primer 30:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,82 (d, J = 6,78 Hz, 1H), 4,20 (dt, J = 7,87, 5,22 Hz, 1H), 3,05 (d, J = 7,78 Hz, 1H), 2,92 (dd, J = 8,34, 4,58 Hz, 1H), 2,38-2,47 (m, 1H), 1,83 (dt, J = 12,39, 7,73 Hz, 1H), 1,10 (d,J = 6,90 Hz, 3 H), 0,87-0,98 (m, 1H), 0,46-0,52 (m, 2 H), 0,26-0,39 (m, 2 H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 339.
Primer 31
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksietil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 29 korišćenjem metil magnezijum bromida umesto etil magnezijum bromida. Nakon prečišćavanja preparativnom HPLC, 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksietil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidina-2,7-dion (primer 31) se dobija u obliku bele čvrste supstance.
Primer 31:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,81 (d, J = 6,52 Hz, 1H), 3,90-4,06 (m, 1H), 3,74-3,86 (m, 1H), 2,97-3,16 (m, 1H), 2,25-2,41 (m, 1H), 1,68-1,83 (m, 1H), 1,15 (d, J = 6,40 Hz, 3H,), 1,10 (d, J = 6,90 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 313.
Primer 32
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
Priprema [(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]metil benzoata
U ohlađeni rastvor sirovog [(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]metanola (jedinjenje 25e, 7,6 g, 43,6 mmol) i TEA (8,6 g, 109 mmol) u DCM se doda, kap po kap, benzoil hlorid (9,1 g, 65,5 mmol) na 0 °C uz mešanje. Posle dodavanja, smeša je prirodno zagrejana na sobnu temperaturu, i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je isprana sa 1N hlorovodoničnom kiselinom, slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-30% EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 5,8 g 1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil benzoata (jedinjenje 32a).
Jedinjenje 32a:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 8,06-8,16 (m, 2H), 7,54-7,62 (m, 1H), 7,42-7,52 (m, 2H), 5,88 (d, J = 3,76 Hz, 1H), 4,81 (d, J = 1,00 Hz, 1H), 4,51-4,65 (m, 2H), 4,46 (dd, J = 4,64, 10,16 Hz, 1H), 2,27-2,34 (m, 1H), 2,19 (s, 1H), 1,63 (s, 3H), 1,36 (s, 3H).
Priprema [(2S,4S)-4-hidroksi-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
U rastvor [(3aS,5S,6aS)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]metil benzoata (jedinjenje 32a, 5,1 g, 18 mmol) u MeOH (50 ml) je dodat H2SO4(0,5 ml) na sobnoj temperaturi. Posle 0,5 sati mešanja na temperaturi od 80 °C, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, neutralisana čvrstim NaHCO3i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc i dva puta ispran vodom. Odvojeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 4,1 g sirovog proizvoda [(2S,4S)-4-hidroksi-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 32b) u obliku ulja, koje je korišćeno u sledećem koraku direktno. MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 270.
Priprema [(2S,4S)-5-metoksi-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
U rastvor [(2S,4S)-4-hidroksi-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 32b, 4,1 g, 17 mmol), piridina (4,8 g, 60 mmol) i DMAP (300 mg, 2,5 mmol) u DCM (50 ml) je dodat trifluorometansulfonski anhidrid (8,5 g, 30 mmol) na -30 °C. Posle 2 sata mešanja na temperaturi od -30 °C- 0 °C, reakcija je ugašeno zasićenim rastvorom NaHCO3i ekstrahovana sa DCM tri puta. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani da bi se dobilo 6,6 g sirovog proizvoda [(2S,4S)-5-metoksi-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 32c) u obliku ulja, koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 385.
Priprema [(2S,4R)-5-metoksi-4-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
U rastvor [(2S,4S)-5-metoksi-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 32c, 400 mg, 1,04 mmol) u DMF (3 ml) je dodat pirolidin (142 mg, 2,0 mmol) na sobnoj temperaturi i jedinjenje je mešano na sobnoj temperaturi 16 sati. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc, organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 230 mg sirovog proizvoda [(2S,4R)-5-metoksi-4-pirolidin-1-il-tetrahidrofurana-2-il]metil benzoata (jedinjenje 32d) u obliku ulja, koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 306.
Priprema [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (138 mg, 0,75 mmol) u ACN (5 ml) dodat je BSA (535 mg, 2,6 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim mešana na 70 °C, u atmosferi argona, tokom 0,5 sati da bi se dobio bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(2S,4R)-5-metoksi-4-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoat (jedinjenje 32d, 230 mg, 0,75 mmol) i TMSOTf (832 mg, 3,75 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja uz mešanje, na 70 °C, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvoria NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, sušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 250 mg sirovog proizvoda [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 32e), u obliku žute čvrste supstance. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 458.
Priprema 5-amino-3-[(2S,4R,5R)-5-(hidroksimetil)-3-pirolidin-1-iltetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U rastvor jedinjenja [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 32e, 250 mg, 0,54 mmol) u MeOH (8 ml) je dodat K2CO3(138 mg, 1,0 mmol). Posle 5 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom a ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 10,0 mg 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (primer 32) u obliku bele čvrste supstance.
Primer 32:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 6,08 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,30-4,37 (m, 1H), 3,78-3,89 (m, 2H), 3,54-3,61 (m, 1H), 2,57-2,64 (m, 2H), 2,50-2,56 (m, 2H), 2,42-2,49 (m, 1H), 2,20-2,30 (m, 1H), 1,79 (m, 4H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 354.
Primer 33
N-[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il]metansulfonamid
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
Priprema [(2S,4R,5R)-4-azido-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
U rastvor [(2S,4S)-5-metoksi-4-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 32c, 1,1 g, 2,8 mmol) u DMF (5 ml) je dodat natrijum azid (372 mg, 5,7 mmol) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc, organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 1,1 g sirovog proizvoda [(2S,4R,5R)-4-azido-5-metoksi-tetrahidrofurana-2-il]metil benzoata (jedinjenje 33a) u obliku ulja, koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Priprema [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-azido-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (730 mg, 3,97 mmol) u ACN (15 ml) dodat je BSA (2,8 mg, 13,8 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim mešana na 70 °C, u atmosferi argona, tokom 0,5 sati da bi se dobio bistri rastvor. Nakon
1
hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(2S,4R,5R)-4-azido-5-metoksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoat (jedinjenje 33a, sirovo, 1,1 g, 3,97 mmol) i TMSOTf (4,4 g, 19,5 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja uz mešanje, na 70 °C, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvor NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, sušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 500 mg sirovog proizvoda [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-azido-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 33b) u obliku žute čvrste supstance. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 430.
Priprema [(2S,4R,5R)-4-amino-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
U rastvor jedinjenja [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-azido-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 33b, 200 mg, 0,466 mmol) i trifenilfosfina (364 mg, 1,39 mmol) u THF (10 ml) je dodata voda (0,5 ml) na sobnoj temperaturi. Posle 1 sata mešanja na 80 °C, reakcija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 80 mg sirovog proizvoda [(2S,4R,5R)-4-amino-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 33c), koje je korišćeno u narednom koraku direktno. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 404.
Priprema [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-(metansulfonamido)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
U rastvor jedinjenja [(2S,4R,5R)-4-amino-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 33c, sirovo, 80 mg, 0,198 mmol) u DCM (10 ml) i THF (2 ml) su dodati TEA (44 mg, 0,436 mmol) i metansulfonil
1 1
hlorid (27 mg 0,237 mmol) na 0 °C. Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je razblažena sa DCM, isprana vodom, slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 80 mg sirovog proizvoda [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-(metansulfonamido)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 33d), koje je korišćeno u sledećem koraku direktno. MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 480.
Priprema N-[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il]metansulfonamida
U rastvor [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-(metansulfonamido)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 33d, sirovo, 80 mg, 0.54 mmol) u MeOH (5 ml) je dodat K2CO3(80 mg, 0,6 mmol). Posle 5 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom a ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 8,0 mg N-[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il]metansulfonamida (primer 33) u obliku bele čvrste supstance.
Primer 33: 8 mg,<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,45-11,78 (br, s,, 1H), 7,82 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,99 (br. s., 2H), 5,79 (d, J =4,8 Hz, 1H), 4,68-4,84 (m, 2H), 4,15 (dt, J = 12,7, 6,3 Hz, 1H), 3,46 (m, 2H), 2,89 (s, 3H), 2,37-2,44 (m, 1H), 1,90-2,00 (m, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 378.
Primer 34
N-[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il]acetamid
1 2
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 33 korišćenjem acil hlorida umesto metilsulfonil hlorida. Nakon prečišćavanja preparativnom HPLC, N-[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il]acetamid (primer 34) se dobija u obliku bele čvrste supstance.
Primer 34:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 6,09 (dd, J = 9,0, 5,8 Hz, 1H), 5,08 (t, J =5,6Hz, 1H), 3,92-4,01 (m, 1H), 3,66 (dd, J = 11,4, 6,1 Hz, 1H), 3,50-3,53 (m, 1H), 3,10-3,23 (m, 2H), 1,56-1,61 (m, 1H), 1,23-1,38 (m, 1H), 0,93 (t, J = 7,3 Hz, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 342.
Primer 35
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-morfolino-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 32, korišćenjem morfolina umesto pirolidina. Nakon prečišćavanja preparativnom HPLC, 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-morpholino-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion (primer 35) se dobija u obliku bele čvrste supstance.
Primer 35:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 6,17 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,26 (tt, J = 7,5, 4,8 Hz, 1H), 3,88-3,97 (m, 1H), 3,65-3,75 (m, 6H), 2,52-2,64 (m, 4H), 2,37 (ddd, J = 13,2, 8,8, 7,4 Hz, 1H), 2,21 (ddd, J = 13,1, 7,8, 5,0 Hz, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 370.
Primer 36
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-(1-piperidil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
1
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 32 korišćenjem piperidina umesto pirolidina. Nakon prečišćavanja preparativnom HPLC, 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-(1-piperidil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion (primer 36) se dobija u obliku bele čvrste supstance.
Primer 36:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 6,16 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,28 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,01 (t, J = 4,8 Hz, 1H),, 3,74 (dd, J =3,6, 11,6 Hz, 1H), 3,63 (dd, J = 4,8, 12,0 Hz, 1H), 2,54-2,21 (m, 6H), 1,63-1,48 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 368.
Primer 37
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-(dimetilamino)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 32, korišćenjem dimetilamina umesto pirolidina. Nakon prečišćavanja preparativnom HPLC, 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-(dimetilamino)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion (primer 37) se dobija u obliku bele čvrste supstance.
Primer 37:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 6,08 (d, J = 6,52 Hz, 1H), 4,26-4,32 (m, 1H), 3,87-3,95 (m, 1H), 3,77 (dd, J = 11,92, 2,89 Hz, 1H), 3,57 (dd, J = 11,92, 3,64 Hz, 1H), 2,41 (ddd, J = 13,11, 8,47, 5,02 Hz, 1H), 2,27 (s, 6H), 2,19 (ddd, J = 12,89, 8,63, 7,59 Hz, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 328.
Primer 38
(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-karbonitril
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
1 4
Priprema [(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (4,42 g, 24,0 mmol) u ACN (20 ml) dodat je BSA (14,8 ml, 60,0 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim mešana na 70 °C, u atmosferi argona, tokom 0,5 sati da bi se dobio bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(2S,4R)-4,5-diacetoksitetrahidrofuran-2-
1
il]metil benzoat (CAS #: 4613-71-2, kat. br.: MD04725, komercijalno dostupan od kompanije „Carbosynth Limited“, 6,45 g, 20,0 mmol) i TMSOTf (5,5 ml, 30,0 mmol) su dodavani u nizu. Posle 14 sati zagrevanja uz mešanje, na 70 °C, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je podeljen na EtOAc i zasićeni rastvor NaHCO3(30 ml). Organski sloj je odvojen, a vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc (100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela da bi se dobilo 5,7 g [(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 38a) u obliku svetlo žute čvrste supstance.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 38b) i [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje
Smeša [(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 38a, 4,72 g, 10,6 mmol) i kalijum karbonata (1,46 g, 10,6 mmol) u metanolu (106 ml) je mešana na sobnoj temperaturi 3,5 sati. Reakcija je prekinuta dodavanjem sirćetne kiseline (1. 5 ml). Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se uklonio rastvarač, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-5% metanola u DCM) da bi se dobilo 1,0 g 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 38b) i 2,8 g [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 38c) u obliku blede čvrste supstance.
1
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-3-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U rastvor 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 38b, 3,8 g, 12,7 mmol) u DMF (30ml) je dodat imidazol (2,6 g, 38 mmol) i terc-butilhlorodimetilsilan (4,2 g, 28 mmol) uz mešanje. Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je razblažen sa EtOAc (200 ml), ispran vodom, slanim rastvorom i osušen iznad Na2SO4. Organski sloj je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:5 EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 3,3 g 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 38d).
Jedinjenje 38d:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 11,21 (s, 1H), 6,94 (br, s,, 2H), 5,70-5,80 (m, 1H), 5,44 (d, J =4,5 Hz, 1H), 4,79 (ddt, J = 6,6, 4,4, 2,2 Hz, 1H), 4,11-4,24 (m, 1H), 3,58-3,70 (m, 2H), 2,32 (ddd, J = 12,7, 9,4, 6,8 Hz, 1H), 1,80 (ddd, J = 12,7, 6,1, 2,0 Hz, 1H), 0,79-0,92 (s, 9H), 0 (s, 6H).
Priprema 5-amino-3-[(2R,5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-3-oksotetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U rastvor 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-3-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazol[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 38d, 3,3 g, 7,8 mmol) u THF (100 ml) je dodat Des–Martinov perjodinan (3,68 g, 8,76 mmol) uz mešanje. Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10
1
metanola u DCM) da bi se dobilo 2,4 g sirovog proizvoda 5-amino-3-[(2R,5S)-5-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-3-okso-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 38e). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 413.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3S,5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-3-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
U mešani rastvor 5-amino-3-[(2R,5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-3-oksotetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 38e, 1,0 g, 2,43 mmol) u THF (5 ml) je dodat rastvor litijum tri-terc-butoksialumin hidrida (1M u THF, 2,7 ml, 2,7 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je ugašen zasićenim rastvorom NH4Cl i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 1:10 EtOAc metanola u DCM) da bi se dobilo 750 mg sirovog proizvoda 5-amino-3-[(2R,3S,5S)-5-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 38f). (Pogledati Tetrahedron 1984, 40, 125-135).
Jedinjenje 38f:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 7,00 (br, s,, 2H), 6,08 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,53-4,65 (m, 1H), 3,91-3,99 (m, 1H), 3,82-3,89 (m, 1H), 3,70 (dd, J = 10,5, 4,3 Hz, 1H), 2,11 (t, J = 8,7 Hz, 2H), 0,84-0,86 (m, 9H), 0,84-0,88 (m, 10H), 0,84- 0,86 (m, 9H), 0,01 (d, J = 2,3 Hz, 6H).
Priprema [5-amino-3-[(2R,3S,5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-3-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]-2- okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]trifluorometansulfonata
1
U rastvor 5-amino-3-[(2R,3S,5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimethil]-3-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 38f, 100 mg, 0,24 mmol) u DCM (15 ml) je dodat DMAP (147 mg, 1,2 mmol) i trifluormetansulfonil hlorid (122 mg, 0,7 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4. Organski sloj je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 120 mg sirovog proizvoda [5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[[tercbutil(dimetil)silil]oksimetil]-3-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]-2-oksotiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il] trifluorometansulfonat (jedinjenje 38g), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 679.
Priprema (2R,3S,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]tetrahidrofuran-3-karbonitrila
U mešani rastvor [5-amino-3-[(2R,3S,5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-3-(trifluorometilsulfoniloksi)tetrahidrofuran-2-il]-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-7-il]trifluorometansulfonata (jedinjenje 38g, sirovo, 120 mg, 0,2 mmol) u DMF (2 ml) je dodat natrijum cijanid (100 mg, 2,3 mmol). Posle 2 sata mešanja na sobnoj temperaturi, dobijeni rastvor je razređen sa EtOAc, ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 100 mg sirovog proizvoda (2R,3S,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]tetrahidrofuran-3-karbonitrila (jedinjenje 38h), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 424.
1
Priprema (2R,3S,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-karbonitrila
U mešani rastvor (2R,3S,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]tetrahidrofuran-3-karbonitrila (jedinjenje 38h, sirovo, 100 mg) u THF (5 ml) je dodat rastvor TBAF (1M u THF, 6 ml, 6 mmol) na 0 °C. Posle 4 sata mešanja na sobnoj temperaturi, reakcioni rastvor je ispran zasićenim rastvorom NH4Cl, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 9 mg (2R,3S,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-karbonitrila (primer 38) u obliku bele čvrste supstance.
Primer 38:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,11-11,99 (br, s,, 1H), 7,10 (br, s,, 2H), 6,15 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,86 (br, s,, 1H), 4,33 (dt, J = 9,5, 4,7 Hz, 1H), 4,07-4,20 (m, 1H), 3,50 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 2,44-2,48 (m, 1H), 2,23-2,36 (m, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]:310.
Primer 39
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno primeru 38 upotrebom natrijum metilsulfida umesto natrijum cijanida. Nakon prečišćavanja preparativnom HPLC, 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion (primer 39) se dobija u obliku bele čvrste supstance.
Primer 39:<1>H NMR(400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,37-11,55 (br, s,, 1H), 6,91-7,10 (br, s,, 2H), 5,94 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,75 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 4,03-4,15 (m, 2H), 3,45-3,55
11
(m, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,92 (ddd, J = 12,8, 6,8, 4,8 Hz, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 331
Primer 40
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-(1-fluoro-1-metil-etil)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofiran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi:
Priprema (2S)-2-(hidroksimetil)-2H-furan-5-ona
U rastvor etil (Z)-3-[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioksolan-4-il]prop-2-enoata (CAS #: 91926-90-8, kat. br.: PB1131897, komercijalno dostupan od kompanije „Pharma Block (Nanjing) R&D Co., Ltd“, 4,0 g, 20,0 mmol) u metanolu je dodata katalitička količina koncentrovane sumporne kiseline (25 µL u 10% koncentrovane sumporne kiseline u metanolu). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-10 % metanol u DCM) da bi se dobilo 2,25 g (2S)-2-(hidroksimetil)-2H-furan-5-ona (jedinjenje 40b) u obliku viskoznog ulja.
Priprema (2S)-2-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2H-furan-5-ona
U rastvor 2,25 g (2S)-2-(hidroksimetil)-2H-furan-5-ona (jedinjenje 40b, 2,11 g, 16,0 mmol) i imidazola (1,63 g, 24,0 mmol) u DCM je dodat, kap po kap, tercbutil(hloro)difenilsilan (5,2 ml, 20,0 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Dobijena smeša je isprana slanim rastvorom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM. Organski slojevi su kombinovani, isprani sa 1N hlorovodoničnom kiselinom, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-30% EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 4,6 g (2S)-2-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-2H-furan-5-ona (jedinjenje 40c) u obliku bele čvrste supstance. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 353.
Priprema (5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]tetrahidrofuran-2-ona
Rastvor (2S)-2-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-2H-furan-5-ona (jedinjenje 40c, 2.8 g, 8,0 mmol) u EtOAc (40 ml) je mešan sa 10% paladijuma na ugljenu (280 mg), preko noći, u atmosferi vodonika. Dobijena smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 2,7 g (5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 40d) u obliku viskoznog ulja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 355.
Priprema (3S,5S)-5-[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-hidroksi-1-metiletil)tetrahidrofuran-2-ona
Ohlađenom rastvoru (5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 40d, 5,00 g, 14,0 mmol) u suvom tetrahidrofuranu (28 ml) je dodat rastvor litijum bis(trimetilsilil)azanida (1,3 M u THF, 11,8 ml, 15,4 mmol), kap po kap, na -78 °C pod argonom. Posle dodavanja, smeša je mešana 1 sat na -78 °C. Zatim se smeši, kap po kap, doda destilovani aceton (1,23 ml, 15,4 mmol) i dobijena smeša je mešana na -78 °C dodatna 2 sata. Reakcija je ugašena zasićenim rastvorom NH4Cl i ekstrahovana pomoću EtOAc (30 ml) tri puta. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-30% EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 5,7 g (3S,5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-hidroksi-1-metil-etil)tetrahidrofuran-2-on (jedinjenje 40e) u obliku svetlo žutog ulja. MS izm. (ESI<+>) [(M+NH4)<+>]: 430. (Za sintezu pogledajte: Tetrahedron 1997,53, 6281-6294).
Priprema (3R, 5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-fluoro-1-metiletil)tetrahidrofuran-2-ona
U rastvor dietilaminosumpor trifluorida (414 µL, 3,0 mmol) u DCM (10 ml) na -78 °C je dodat rastvor (3S,5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-hidroksi-1-metiletil)tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 40e, 1,03 g, 2,5 mmol) u DCM (10 ml) kap po kap. Dobijena smeša je zagrevana na sobnu temperaturu i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-20 % EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 820 mg (3R,5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-fluoro-1-metiletil)tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 40f) u obliku viskoznog ulja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 415.
Priprema [(3R,5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-fluoro-1-metiletil)tetrahidrofuran-2-il] acetata
U ohlađeni rastvor (3R,5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-fluoro-1-metiletil)tetrahidrofuran-2-ona (jedinjenje 40f, 820 mg, 1,92 mmol) u suvom DCM (10 ml) na -78
11
°C je dodat, kap po kap, diizobutil aluminijum hidrid (1,0 M u toluenu, 6,0 ml, 6,0 mmol). Dobijena smeša je mešana na -78 °C tokom 1 sata. Zatim se smeši dodao piridin (790 mg, 10 mmol), anhidrid sirćetne kiseline (0,93 ml, 10,0 mmol) i DMAP (732 mg, 6,0 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se polako zagreje na -20 °C i mešana je na -20 °C nekoliko sati dok reakcija nije završena. Dobijena smeša je ugašena slanim rastvorom i ekstrahirana sa EtOAc (30 ml) tri puta. Organski slojevi su spojeni, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-20% EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 360 mg [(3R,5S)-5-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-fluoro-1-metil-etil)tetrahidrofuran-2-il] acetata (jedinjenje 40g) u obliku viskoznog ulja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 459.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-fluoro-1-metil-etil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo [4,5-d]pirimidin-2,7-diona
Smeša 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (162 mg, 0,87 mmol) i bis(trimetilsilil)acetamida (527 mg, 2,61 mmol) je zagrevana uz mešanje na 75 °C pod argonom dok nije postala bistra. Smeša je ohlađena do sobne temperature. U prethodnu reakcionu smešu su dodati [(3R,5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-fluoro-1-metiletil)tetrahidrofuran-2-il] acetat (jedinjenje 40g, 280 mg, 1,02 mmol) i trimetilsililtrifluorometansulfonat (290 mg, 1,31 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 75 °C, pod argonom, tokom 3 sata. Zatim se dobijena smeša koncentrovana pod vakuumom da bi se uklonio rastvarač, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-5% metanolom u DCM) da bi se dobilo 225 mg 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[[tercbutil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-fluoro-1-metil-etil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 40h) u obliku smeđe čvrste supstance. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 583.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-(1-fluoro-1-metil-etil)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofiran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
Smeša 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[[terc-butil(difenil)silil]oksimetil]-3-(1-fluor-1-metiletil)tetrahidrofurana-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (jedinjenje 40h, 66 mg, 0,12 mmol) i NH4F (133 mg, 3,6 mmol) u metanolu je zagrevano pod refluksom 1,5 sati. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 10 mg 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-(1-fluoro-1-metil-etil)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (primer 40) u obliku bele čvrste supstance.
Primer 40:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,27-11,40 (br, s,, 1H), 6,90-7,08 (br, s,, 2H), 6,03-6,10 (m, 1H), 4,65-4,74 (m, 1H), 3,92-4,03 (m, 1H), 3,42-3,53 (m, 2H), 3,18-3,30 (m, 1H), 2,10-2,23 (m, 1H), 1,96-2,06 (m, 1H), 1,19-1,42 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 345.
Primer 41:
5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-(2-metilalil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi.
11
Priprema [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-fenoksikarbotioiloksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
Smeša [(2S,4R,5S)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 38c, 2,08 g, 5,0 mmol), O-fenil hlormetantioata (0,80 ml) i DMAP (1,22 g, 10,0 mmol) u DCM (50 ml) je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-30 % EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 2,20 g [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-fenoksikarbotioiloksi-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 41a) u obliku blede čvrste supstance. MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 539.
11
Priprema [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-(2-metilalil)-tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata
Smeša [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-fenoksikarbotioiloksi- tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 41a, 324 mg, 0,60 mmol), 2,2’-azobis(2-metilpropionitril) (50 mg, 0,30 mmol) i tributil(2-metilalil) stanana (0,70 ml, 3,0 mmol) u bezvodnom toluenu (10 ml) je degazirana argonom, a zatim zagrevana uz mešanje na 80 °C tokom 4 sata. Dobijena smeša je mešana sa zasićenim vodenim rastvorom NH4F na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, a zatim dva puta ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-30 % EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 190 mg [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-(2-metilalil)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 41b) u obliku smeđe čvrste supstance. MS izm. (ESI-) [(M-H)-]: 441.
Priprema 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-(2-metilalil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona
Rastvor [(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-(2-metilalil)tetrahidrofuran-2-il]metil benzoata (jedinjenje 41b, 180 mg, 0.41 mmol) u metanolu je mešan sa K2CO3(150 mg, 1,09 mmol) na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Reakcija je ugašena dodavanjem sirćetne kiseline i reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 41 mg 3-[(2R,3R,5S)-3-alil-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (primer
11
41) u obliku belog praha.
Primer 41:<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ ppm: 11,03-11,29 (m, 1H), 6,76-7,04 (m, 2H), 5,68 (d, J = 6,02 Hz, 1H), 4,62-4,70 (m, 3H), 3,96-4,10 (m, 1H), 3,47 (t, J = 5,27 Hz, 2H), 3,24-3,30 (m, 1H), 2,16-2,25 (m, 1H), 2,13 (d, J = 7,53 Hz, 2H), 1,67-1,76 (m, 1H), 1,62 (s, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 339.
Primer 42
[(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil]2-metilpropanoat
Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema sledećoj šemi.
Priprema [(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil]2-metilpropanoata
11
U ohlađeni rastvor (1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propan-1-ola (jedinjenje 6e, 505,6 mg, 2,5 mmol) u piridinu je dodat, kap po kap, izobutiril-hlorid (0,39 ml, 3,72 mmol) uz hlađenje ledenom vodenom kupkom. Posle dodavanja, smeša je zagrejana na sobnu temperaturu, i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim rastvorom NH4Cl. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-30% EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 470 mg [(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil]2-metilpropanoata (jedinjenje 42a).
Priprema [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-4,5-diacetoksitetrahidrofuran-2-il]propil]2-metilpropanoata
U mešani rastvor [(1S)-1-[(3aR,5S,6aR)-2,2-dimetil-3a,5,6,6a-tetrahidrofuro[2,3-d][1,3]dioksol-5-il]propil]2-metilpropanoata (jedinjenje 42a, 470 mg, 1,73 mmol), anhidrida sirćetne kiseline (0,81 ml, 8,64 mmol) i sirćetne kiseline (0,51 ml, 8,64 mmol) u DCM (10 ml) je dodata koncentrovana sumporna kiselina (18,4 µL, 0,17 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-20 % EtOAc u petrol etru) da bi se dobilo 105 mg [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-4,5-dijacetoksitetrahidrofuran-2-il]propil]2-metilpropanoata (jedinjenje 42b).
Priprema [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-tetrahidrofuran-2-il]propil] 2-metilpropanoata
U suspenziju 5-amino-3,6-dihidrotiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona (63 mg, 0,34 mmol) u ACN (5 ml) dodat je BSA (252 µl, 1,02 mmol). Dobijena reakciona smeša je zatim
11
mešana na 70 °C, u atmosferi argona, tokom 0,5 sati da bi se dobio bistri rastvor. Nakon hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-4,5-diacetoksitetrahidrofuran-2-il]propil] 2-metilpropanoat (jedinjenje 42b, 105 mg, 0,34 mmol) i TMSOTf (113 µL, 0,51 mmol) su dodavani u nizu. Nakon zagrevanja uz mešanje na 70 °C tokom 14 sati, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se uklonio rastvarač, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa 0-5% metanola u DCM) da bi se dobilo 75 mg od [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]propil]2-metilpropanoata (jedinjenje 42c) u obliku svetložute čvrste supstance.
Priprema [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil]2-metilpropanoata
Smeša [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-4-acetoksi-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)tetrahidrofuran-2-il]propil] 2-metilpropanoata (jedinjenje 42c, 70 mg, 0,16 mmol) i K2CO3(13,2 mg, 0,096 mmol) u metanolu (0,5 ml) i tetrahidrofuranu (2 ml) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je ugašena dodavanjem sirćetne kiseline (1 kap). Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da se uklone rastvarači, a ostatak je prečišćen preparativnom HPLC da bi se dobilo 18,2 mg [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil]2-metilpropanoata (primer 42) u obliku blede čvrste supstance.
Primer 42:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 5,89-5,95 (m, 1H), 4,93-5,01 (m, 2H), 4,29-4,38 (m, 1H), 2,51-2,63 (m, 2H), 1,83-1,93 (m, 1H), 1,58-1,76 (m, 2H), 1,15 (dd, J = 4,02, 7,03 Hz, 6H), 0,88-0,95 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 399.
Primer 43
Test za ćelije HEK293-Blue-hTLR-7:
Stabilna ćelijska linija HEK293-Blue-hTLR-7 kupljena je od kompanije „InvivoGen“ (kat. br: hkb-htlr7, San Diego, California, SAD). Ove ćelije su projektovana za ispitivanje stimulacije humanih receptora TLR7 praćenjem aktivacije NF-κB. Reporterski gen SEAP (sekretovana embrionalna alkalna fosfataza) stavljen je pod kontrolu IFN-β□minimalnog
12
promotera spojenog sa pet mesta vezivanja NF-κB i AP-1. SEAP je indukovan aktiviranjem NF-κB i AP-1 putem stimulacije HEK-Blue hTLR7 ćelija sa TLR7 ligandima. Tako je reporterska ekspresija regulisana NF-κB promoterom nakon stimulacije humanih TFL7 tokom 20 sati. Aktivnost reportera SEAP u supernatantu ćelijske kulture je utvrđena pomoću kompleta QUANTI-Blue™ (kat. br: rep-qb1, Invivogen, San Diego, Ca, SAD) na talasnoj dužini od 640 nm, medijuma za detekciju koji postaje ljubičast ili plav u prisustvu alkalne fosfataze.
HEK293-Blue-hTLR7 ćelije su inkubirane pri gustini od 250.000~450.000 ćelija/mF u zapremini od 180 µl na ploči sa 96 bunarčića u Dulbeko modifikaciji Iglovog medijuma (DMEM) koji sadrži 4,5 g/l glukoze, 50 U/ml penicilina, 50 mg/ml streptomicina, 100 mg/ml normocina, 2 mM L-glutamina, 10% (v/v) termički inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma, tokom 24 sata. Zatim su ćelije HEK293-Blue-hTLR-7 inkubirane sa dodatkom 20 µl ispitivanog jedinjenja u serijskom razblaživanju u prisustvu finalnog DMSO na 1%, i izvršena je inkubacija na 37 °C u CO2inkubatoru tokom 20 sati. Zatim je 20 µl supernatanta iz svakog bunarčića inkubirano 2 sata sa 180 µl rastvora supstrata Quanti-blue na 37 °C, i očitana je apsorbanca na 620~655 nm pomoću spektrofotometra. Signalni put koji TLR7 aktivacija vodi do nishodne aktivacije NF-κB je opšte prihvaćen, i zbog toga je slična analiza reportera takođe široko korišćena i za procenu agonista TLR7 (Tsuneyasu Kaisho and Takashi Tanaka, Trends in Immunology, Volume 29, Issue 7, July 2008, str. 329.sci; Hiroaki Hemmi et al., Nature Immunology 3, 196-200 (2002).
Aktivnost agonističkog TLR7 u testu HEK293-hTLR-7 za jedinjenja iz predmetnog pronalaska je navedena u tabeli 1. Primeri su testirani u gore navedenom testu i utvrđeno je da imaju EC50 od oko 10 µM do oko 90 µM.
Tabela 1: Aktivnost jedinjenja u testu HEK293-hTLR-7
Referentno jedinjenje objavljeno u patentu WO2006066080 (A1) kao jedinjenje 122 (u daljem tekstu ANA-122) je takođe testirano na aktivnost agonističnosti TLR7 u gore pomenutom testu HEK293-hTLR-7, utvrđeno je da EC50 ANA-122 iznosi 446 µM.
(ANA-122)
Primer 44
Metabolizam prolekova: formula (II) ili formula (IIa)
Obavljena je studija za procenu metaboličke konverzije prolekova, formule (II) ili formule (IIa), u jedinjenja formule (I) ili formule (Ia) predmetnog pronalaska. Prolekovi, formule (II) ili formule (IIa), se mogu u telu metabolizovati u aktivno jedinjenje formule (I) ili formule (Ia) i druga jedinjenja iz ovog pronalaska ako se daju kao prolekovi. Hepatociti se često koriste za procenu stepena metaboličke konverzije prolekova u telu životinje ili čoveka.
Obavljena je studija za procenu metaboličke konverzije prolekova, primer 2-A, primer 3-A, primer 4-A, primer 16-A i primer 17-A, u odgovarajuće aktivne oblike, primer 1-A i primer 14 -A, u prisustvu ljudskih hepatocita. U studiji je praćeno stvaranje aktivnih oblika, primeri 1-A i primer 14-A. Radi poređenja, takođe je procenjena metabolička konverzija famciklovira u penciklovir.
Suspenzija hepatocita
Kriokonzervisani medijum za oblaganje hepatocita (kat. br.: PY-HMD-01) je kupljen od kompanije „RILD Research Institute for Liver Diseases (Šangaj) Co. Ltd.“ Kriokonzervisani humani hepatocit (kat. br.: X008005, ser. br.:VRR) je kupljen od kompanije „In Vitro Technologies“ (Baltimor, MD).
Osnovna suspenzija hepatocita je pripremljena od kriokonzervisanih hepatocita u medijumu za oblaganje u koncentraciji 1,8 ×10<6>ćelija/ml.
Radni rastvori jedinjenja
Jedinjenja su rastvorena u DMSO da bi se dobili osnovni rastvori od 50 mM. 10 µl osnovnog rastvora je razblaženo u 5 ml medijuma za oblaganje da bi se dobilo 100 µM radnog rastvora.
Inkubacije
Reakcijske suspenzije su pripremljene u ploči ćelijske kulture sa 24 bunarčića mešanjem 200 µl suspenzije hepatocita (cino ili humane) i 200 µl radnog rastvora. Konačna inkubacija je sadržavala 0,9 ×10<6>ćelija/ml i 50 µM jedinjenja. Gore navedene smeše su inkubirane na 37 °C u vlažnoj atmosferi od 5% CO2, uz mućkanje od 150 o/min.
Priprema uzoraka za analizu
Posle 180 minuta inkubacije, 200 µl smeše za inkubaciju je prebačeno u epruvetu od 1,5 ml i ugašeno sa 400 µl zaustavnog rastvora (ledeno hladni acetonitril sa 0,2 µM Tolbutamida kao interni standard). Uzorci su centrifugirani na 12000 o/min tokom 10 minuta, a dobijeni supernatanti su podvrgnuti LC-MS/MS analizi.
Kalibracione krive su pripremljene na sledeći način. U 200 µl ćelijske suspenzije (gustina ćelija od 1,8 miliona ćelija/ml), je dodato 198 µl medijuma za oblaganje hepatocita i 2 µl odgovarajuće koncentracije jedinjenja u DMSO. Uzorci su potpuno promešani i 200 µl smeše je prebačeno u 400 µl zaustavnog rastvora (vidi gore). Standardni opseg krivih je od 1 µM do 25 µM.
12
Bioanaliza
Jedinjenja su kvantifikovana na API5500 LC-MC/MC instrumentu u ESI-pozitivnom MRM načinu. Rezultati konverzije proleka i stvaranja metabolita su sumirani u tabeli 2.
Tabela 2: Koncentracija metabolita stvorenih u humanim hepatocitima nakon 3-časovne inkubacije 50 µM prolekova.
U humanim hepatocitima, jedinjenja iz primera 2-A, primera 3-A, primera 4-A, primera 16-A i primera 17-A kao i famciklovir su metabolizovani dajući odgovarajuće aktivne metabolite iz primera 1-A, primer 14 -A i penciklovira.
Primer 45
TLR7 agonist primer 1-A aktivira mišji TLR7
Snaga TLR7 agonista primer 1-A koji aktivira mišji TLR7 je procenjena upotrebom stabilne ćelijske linije HEK293-Blue-mTLR7 dostupne kod kompanije „InvivoGen“ (kat. br.: Hkb-mtlr7, San Diego, California, SAD). Slično HEK293-Blue-hTLR7 kako je opisano u primeru 43, HEK293-Blue-mTLR7 je dizajniran za proučavanje stimulacije mišjeg TLR7 praćenjem aktivacije NF-κB. Reporterski gen SEAP je stavljen pod kontrolu IFN-β minimalnog promotera spojenog sa pet mesta vezivanja NF-κB i AP-1. Ekspresija SEAP-a indukovana je aktivacijom NF-κB i AP-1 nakon stimulacije mišjeg TLR7 ligandima TLR7. Ekspresija SEAP-a u supernatantu ćelijske kulture je određena upotrebom QUANTI-Blue™ kompleta (kat. br.: rep-qb1, Invivogen, San Diego, Ca, SAD), medijuma za detekciju koji u prisustvu alkalne fosfataze postaje ljubičasto/plav na talasnoj dužini od 655 nm.
Ćelije HEK293-Blue-mTLR7 inkubirane su pri gustini od 250.000~450.000 ćelija/ml u zapremini od 180 µl na ploči sa 96 bunarčića u Dulbekovom modifikovanom Iglovom medijumu (DMEM) koji sadrži 4,5 g/l glukoze, 50 J/ml penicilina, 50 mg/ml streptomicina, 100 mg/ml normocina, 2 mM L-glutamina, 10 % (V/V) termički inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma, tokom 24 h. Zatim su ćelije HEK293 inkubirane sa 20 µl ispitivanog jedinjenja u serijskom razblaženju u prisustvu finalnih 1% DMSO na 37 °C u inkubatoru sa CO2tokom 20 sati. 20 µl supernatanta iz svakog bunarčića je inkubirano 2 sata sa 180 µl rastvora supstrata Quanti-blue na 37 °C, i izmerena je apsorbanca na 655 nm uz pomoć spektrofotometra.
Kao što je prikazano na slici 1, primer 1-A aktivira mišji TLR7 na način koji zavisi od doze sa EC50 od 71,8 µM.
Primer 46
TLR7 agonist primer 1-A indukuje antivirusne citokine u mononuklearnim ćelijama periferne krvi miša (PBMC) in vitro
Da bi se demonstrirala aktivacija TLR7 na leukocitima jedinjenjem ovog pronalaska, mišji PBMC (dostupan od kompanije „ALLCells, LLC.“) su podvrgnuti stimulaciji iz primera 1-A. 70 miliona mišjih PBMC (soj C57bl/6) je zasejano u svaki bunarčić ploče sa 24 bunarčića u koncentraciji 2x10<6>/ml u 1,5 ml RPMI-1640 medijuma koji sadrži 10 % fetalnog goveđeg seruma. Posejane PBMC su inkubirane sa primerom 1-A u rasponu koncentracija od 2 do 10 µM tokom 24 sata. Prikupljeno je 50 µl medijuma ćelijske kulture i analizirano pomoću 36plex Procarta multipleks kompleta (ebioscience EPX360-26092-901, eBioscience), koji je merio nivoe 15 citokinskih analita, prema uputstvu proizvođača.
Kao što je prikazano na slici 2, utvrđeno je da su visoki nivoi IFNα, IP10, TNFα i IL-6 indukovani primerom 1-A na način koji zavisi od doze. Povećani nivoi ovih citokina u stimuliranom PBMC pokazuju da TLR7 agonist primera 1-A indukuje imunološku aktivaciju i ima potencijal za lečenje zaraznih bolesti.
Primer 47
Primer 4-A smanjuje HBV DNK i HBsAg u modelu AAV-HBV
Primer 4-A je procenjen na in vivo antivirusnu efikasnost upotrebom AAV-HBV mišjeg modela. Ovaj mišji model za HBV infekciju je generisan ubrizgavanjem C57BL/6 miševima rekombinantnog adeno-povezanog virusa (AAV) koji nosi replicirani genom HBV (virus hepatitisa B) (AAV-HBV). 2-3 nedelje posle infekcije, u serumu zaraženih miševa su otkriveni visoki nivoi HBV virusnih markera, kao što su HBV genomska DNK i HBsAg (HBV površinski antigen). Kod uporne HBV viremije i potpuno kompetentnog imunološkog sistema, model AAV-HBV je pogodan za ispitivanje in vivo efikasnosti primera 4-A.
Sprovedene su dve nezavisne studije in vivo za procenu antivirusne snage primera 4-A na 100 mg/kg, odnosno 300 mg/kg. Za svaku studiju, dostupno je bilo deset mužjaka miševa C57BL/6, starih 4-5 nedelja, bez specifičnih patogena, iz Šangajskog laboratorijskog
12
centra za životinje Kineske akademije nauka (Shanghai Laboratory Animal Center of Chinese Academy of Sciences, SLAC), koji su bili smešteni u ustanovu za negu životinja u posebno ventilisanim kavezima na kontrolisanoj temperaturi i svetlosti prema institucionalnim Smernicama za negu životinja. Zalihe AAV/HBV virusa su kupljene od Pekinškog instituta za molekularnu medicinu FivePlus (Beijing FivePlus Molecular Medicine Institute, Peking, Kina). C57BL/6 miševima je injektovano 200 μl rekombinantnog virusa, razblaženog u fiziološkom puferu, injekcijom u repnu venu. Miševima se izvadila krv 14 dana nakon injekcije kako bi se pratili nivoi HBsAg, HBeAg i HBV genomske DNK u serumu, i nasumično su grupisani na osnovu ovih nivoa HBV biomarkera. Zatim su grupisani miševi tretirani prema dizajnu studije kako je prikazano u tabeli 3.
Tabela 3. In vivo studija na modelu miša AAV-HBV
Miševi u grupama 1 i 3 su tretirani placebom (2 % Klucel LF, 0,1 % polisorbat 80 i 0,1% parabena u vodi); miševima u grupama 2 i 4 su oralno dozirani primeri 4-A po 100 mg/kg, odnosno 300 mg/kg, svaki drugi dan (QOD). Svi miševi su tretirani ukupno 6 nedelja. Uzorci seruma su sakupljani dva puta nedeljno zbog praćenja nivoa HBV biomarkera. HBsAg u serumu su izmereni pomoću CLIA kompleta (Autobio Diagnostics Co., Ltd, Zhengzhou, Kina) prema uputstvu proizvođača. Donja granica kvantifikacije (LLQ) za HBsAg je bila 0,1ng/ml. Razblaživanje seruma od 500 puta (za HBsAg) je korišćeno za dobijanje vrednosti u linearnom rasponu standardne krive. DNK HBV iz seruma ekstrahovana je pomoću kompleta MagNA Pure 96 DNK i Viral NA Small Volume Kit (Roche) prema uputstvu proizvođača. Uzorci DNK su analizirani pomoću kvantitativnog PCR (qPCR) u stvarnom vremenu pomoću HBV-specifičnog prajmera i kompleta sondi za specifično pojačavanje i detekciju regiona genoma od 128bp HBV od nukleotida 2969 do 3096. LLQ za HBV DNK je bio 20 kopija/µl.
Kao što je prikazano na slici 3, nakon 6-nedeljnog tretmana, primer 4-A sa 100 mg/kg je indukovao više od 2-log redukcije DNK HBV i više od 1,5-log redukcije HBsAg. U većoj dozi od 300 mg/kg, primer 4-A smanjuje HBV DNK za više od 3-log i HBsAg za 2,7-
12
log na kraju tretmana. Rezultati ove studije jasno pokazuju in vivo antivirusnu efikasnost primera 4-A i podvlače potencijal jedinjenja iz ovog pronalaska za razvijanje nove terapije za zarazne bolesti.
12

Claims (18)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule (I),
    pri čemu R<1>je hidroksi, C1-6alkil, C1-6alkilkarbonil-O-, C1-6alkil-S-, azido ili C2-6alkenil; R<2>je C1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil, C2-6alkenil, benzil i tiofenil; R<3>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
  2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu R<1>je hidroksi, C1-6alkil, C1-6alkil-S-, azido ili C2-6alkenil.
  3. 3. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva od 1 do 2, pri čemu, R<2>je C1-6alkil, C3- 7cikloalkil, C2-6alkinil ili C2-6alkenil.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 3,pri čemu, R<3>je vodonik ili C1- 6alkilkarbonil.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva od 1 do 4, pri čemu R<1>je haloC1-6alkil, C1-6alkil-S-, cijano, C2-6alkenil, C1-6alkilsulfonil-NH-, (C1- 6alkil)2N-, C1-6alkilkarbonil-NH- ili heterociklični amino; R<2>je vodonik; R<3>je vodonik; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
  6. 6. Jedinjenje prema zahtevu 5, pri čemu, R<1>je C1-6alkil-S- ili heterociklični amino.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 6 odabrano od sledećih: 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; [(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetata; [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil] acetata; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksietil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibut-3-enil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipentil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibutil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopentil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-2-fenil-etil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-3-metil-butil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopropil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; [[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]ciklopropil]-metil acetata; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksiprop-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibut-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-[hidroksi(2-tienil)metil]tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksi-2-metoksi-etil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(1-hidroksipropil)-3-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-azido-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksialil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-((2R,3R,5S)-3-azido-5-((S)-1-hidroksietil)tetrahidrofuran-2-il)tiazolo[4,5d]pirimidin-2,7(3H,6H)-diona; 3-[(2R,3R,5S)-3-alil-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1R)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksibut-2-inil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(S)-ciklopropil(hidroksi)metil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksietil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; N-[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il]metansulfonamida; N-[(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-il]acetamida; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-morfolino-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-(1-piperidil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-(dimetilamino)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; (2R,3R,5S)-2-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-3-karbonitrila; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-(1-fluoro-1-metil-etil)-5-(hidroksimetil)tetrahidrofiran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-(2-metilalil)tetrahidrofuran-2-il]-6H- 1 tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona i [(1S)-1-[(2S,4R,5S)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil]2-metilpropanoata; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 7 odabrano od sledećih: 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibutil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopropil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksiprop-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksibut-2-inil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(1-hidroksipropil)-3-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-azido-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksialil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 3-[(2R,3R,5S)-3-alil-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-5-amino-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1R)-1-hidroksipropil]-3-propil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksipropil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksibut-2-inil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(S)-ciklopropil(hidroksi)metil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[(1S)-1-hidroksietil]-3-metil-tetrahidrofuran-2-il]-6H- 1 1 tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-pirolidin-1-il-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-(hidroksimetil)-3-metilsulfanil-tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-diona; i [(1S)-1-[(2R,4R,5R)-5-(5-amino-2,7-diokso-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil]2-metilpropanoata; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kojem od zahteva 1 do 8, pri čemu jedinjenje je 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-6H-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion.
  10. 10. Jedinjenje formule (II),
    pri čemu R<4>je hidroksi, C1-6alkil, C1-6alkil-S-, azido ili C2-6alkenil; R<5>je C1-6alkil, C3-7cikloalkil, C2-6alkinil ili C2-6alkenil; R<6>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
  11. 11. Jedinjenje prema zahtevu 10, pri čemu R<4>je hidroksi ili C1-6alkilkarbonil-O-; R<5>je C1-6alkil ili C3-7cikloalkil; R<6>je vodonik ili C1-6alkilkarbonil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 10 do 11 odabrano od sledećih: 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-ona; [(2R,3R,5S)-2-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-5-(1- 1 2 hidroksipropil)tetrahidrofuran-3-il] acetata; 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]propil acetata; [(S)-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksitetrahidrofuran-2-il]-ciklopropil-metil] acetata; i 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-5-[ciklopropil(hidroksi)metil]-3-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]tiazo1o[4,5-d]pirimidin-2-ona; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 10 do 12, pri čemu je jedinjenje 5-amino-3-[(2R,3R,5S)-3-hidroksi-5-(1-hidroksipropil)tetrahidrofuran-2-il]-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-on.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 10 do 12, pri čemu je jedinjenje 1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-okso-tiazolo[4,5-d]pirimidin-3-il)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-il]propil acetat.
  15. 15. Postupak za pripremu jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1 do 14, koji sadrži sledeće korake: (a) reakcija jedinjenja formule (X),
    sa baznim ili fluoridnim reagensom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<b>je acil, benzoil, tercbutil(dimetil)silil ili terc-butil(difenil)silil; R<c>je vodonik ili hidroksi; (b) reakcija jedinjenja formule (P1), 1
    sa anhidridom kiseline ili kiselinskim hloridom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<c>je vodonik ili hidroksi; (c) reakcija jedinjenja formule (XIV),
    sa baznim ili fluoridnim reagensom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<b>je acil, benzoil ili tercbutil(difenil)silil; R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>; (d) reakcija jedinjenja formule (XXIII),
    sa bazom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>; (e) reakcija jedinjenja formule (XXVI), 1 4
    sa bazom, gde R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>; (f) reakcija jedinjenja formule (XXXI),
    sa bazom, gde R<a>je R<2>ili R<5>; R<c>je vodonik ili hidroksi; R<e>je R<1>ili R<4>; ili gde su R<a>, R<b>, R<d>, R<e>, R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>i R<6>definisani kao u bilo kom od zahteva 1 do 6, 10 i 11.
  16. 16. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljive soli, enantiomeri ili dijastereomeri prema bilo kom od zahteva 1 do 14, za upotrebu kao terapeutski aktivna supstanca.
  17. 17. Farmaceutski preparat koji sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 14, i terapeutski inertan nosač.
  18. 18. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljive soli, enantiomeri ili dijastereomeri prema bilo kom od zahteva 1 do 14 za upotrebu u lečenju ili profilaksi infekcije virusom hepatitisa B. 1
RS20210297A 2014-12-08 2015-12-03 3-supstituisana 5-amino-6h-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion jedinjenja za lečenje i profilaksu virusne infekcije RS61612B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2014093224 2014-12-08
CN2015086987 2015-08-14
PCT/EP2015/078439 WO2016091698A1 (en) 2014-12-08 2015-12-03 3-substituted 5-amino-6h-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2,7-dione compounds for the treatment and prophylaxis of virus infection
EP15804128.5A EP3230298B1 (en) 2014-12-08 2015-12-03 3-substituted 5-amino-6h-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2,7-dione compounds for the treatment and prophylaxis of virus infection

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61612B1 true RS61612B1 (sr) 2021-04-29

Family

ID=54771116

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210297A RS61612B1 (sr) 2014-12-08 2015-12-03 3-supstituisana 5-amino-6h-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2,7-dion jedinjenja za lečenje i profilaksu virusne infekcije

Country Status (30)

Country Link
US (4) US9441008B2 (sr)
EP (1) EP3230298B1 (sr)
JP (1) JP6817217B2 (sr)
KR (2) KR102557560B1 (sr)
CN (2) CN107445980B (sr)
AU (1) AU2015359692B2 (sr)
BR (1) BR112017011941B1 (sr)
CA (1) CA2963717C (sr)
CL (1) CL2017001426A1 (sr)
CR (1) CR20170237A (sr)
DK (1) DK3230298T3 (sr)
EA (1) EA038744B1 (sr)
ES (1) ES2864223T3 (sr)
HR (1) HRP20210454T1 (sr)
HU (1) HUE053704T2 (sr)
IL (1) IL251285B (sr)
LT (1) LT3230298T (sr)
MA (1) MA41134B1 (sr)
MX (1) MX379474B (sr)
MY (1) MY194002A (sr)
PE (1) PE20170679A1 (sr)
PH (1) PH12017501061B1 (sr)
PL (1) PL3230298T3 (sr)
PT (1) PT3230298T (sr)
RS (1) RS61612B1 (sr)
SG (1) SG11201704512PA (sr)
SI (1) SI3230298T1 (sr)
TW (1) TWI733656B (sr)
UA (1) UA124184C2 (sr)
WO (1) WO2016091698A1 (sr)

Families Citing this family (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201704512PA (en) * 2014-12-08 2017-07-28 Hoffmann La Roche 3-substituted 5-amino-6h-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2,7-dione compounds for the treatment and prophylaxis of virus infection
CA2979490C (en) 2015-03-16 2023-07-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Combined treatment with a tlr7 agonist and an hbv capsid assembly inhibitor
JP6806709B2 (ja) * 2015-05-12 2021-01-06 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ウイルス感染症の治療と予防のための新規置換アミノチアゾロピリミジンジオン
WO2017001307A1 (en) 2015-06-30 2017-01-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel substituted aminothiazolopyrimidinedione for the treatment and prophylaxis of virus infection
EP3368092B9 (en) 2015-10-29 2020-07-29 Novartis AG Antibody conjugates comprising toll-like receptor agonist
KR20230010826A (ko) 2016-10-14 2023-01-19 프리시젼 바이오사이언시스 인코포레이티드 B형 간염 바이러스 게놈 내의 인식 서열에 대해 특이적인 조작된 메가뉴클레아제
AU2018205995B2 (en) * 2017-01-06 2021-09-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Solid forms of [(1S)-1 -[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-oxo-thiazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl)-4-hydroxy-te trahydrofuran-2-yl]propyl] acetate
CA3048768A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of 3-substituted 5-amino-6h-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2,7-dione compounds
US12012421B2 (en) 2017-07-07 2024-06-18 Hoffmann-La Roche Inc. Solid forms of [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-oxo-thiazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl)-4-hydroxy-tetrahydrofuran-2-yl]propyl] acetate
US12012420B2 (en) 2017-11-21 2024-06-18 Hoffmann-La Roche, Inc. Solid forms of [(1S)-1-[(2S,4R,5R)-5-(5-amino-2-oxo-thiazolo[4,5-d]pyrimidin-3-yl)-4-hydroxy-tetrahydrofuran-2-yl]propyl] acetate
JP2021506827A (ja) 2017-12-15 2021-02-22 シルバーバック セラピューティックス インコーポレイテッド 肝炎の治療用の抗体コンストラクト−薬物コンジュゲート
EP3728283B1 (en) 2017-12-20 2023-11-22 Institute of Organic Chemistry and Biochemistry ASCR, V.V.I. 3'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
WO2019123339A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
JP7050165B2 (ja) 2018-02-26 2022-04-07 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｈｂｖ複製阻害剤としての置換ピロリジン化合物
US10870691B2 (en) 2018-04-05 2020-12-22 Gilead Sciences, Inc. Antibodies and fragments thereof that bind hepatitis B virus protein X
TWI818007B (zh) 2018-04-06 2023-10-11 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 2'3'-環二核苷酸
TWI833744B (zh) 2018-04-06 2024-03-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 3'3'-環二核苷酸
TW202005654A (zh) 2018-04-06 2020-02-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 ２，２，─環二核苷酸
US11142750B2 (en) 2018-04-12 2021-10-12 Precision Biosciences, Inc. Optimized engineered meganucleases having specificity for a recognition sequence in the Hepatitis B virus genome
US20190359645A1 (en) 2018-05-03 2019-11-28 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotides comprising carbocyclic nucleotide
CA3101364A1 (en) * 2018-05-25 2019-11-28 Primmune Therapeutics, Inc. Tlr7 agonists
CN112534055A (zh) 2018-07-13 2021-03-19 豪夫迈·罗氏有限公司 用于调节rtel1表达的寡核苷酸
WO2020028097A1 (en) 2018-08-01 2020-02-06 Gilead Sciences, Inc. Solid forms of (r)-11-(methoxymethyl)-12-(3-methoxypropoxy)-3,3-dimethyl-8-0x0-2,3,8,13b-tetrahydro-1h-pyrido[2,1-a]pyrrolo[1,2-c] phthalazine-7-c arboxylic acid
US11203591B2 (en) 2018-10-31 2021-12-21 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
WO2020092528A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds having hpk1 inhibitory activity
WO2020162705A1 (ko) 2019-02-08 2020-08-13 성균관대학교산학협력단 톨-유사 수용체 7 또는 8 작용자와 콜레스테롤의 결합체 및 그 용도
WO2020178770A1 (en) 2019-03-07 2020-09-10 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
EP3934757B1 (en) 2019-03-07 2023-02-22 Institute of Organic Chemistry and Biochemistry ASCR, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
WO2020178768A1 (en) 2019-03-07 2020-09-10 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide as sting modulator
TWI751516B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
TW202212339A (zh) 2019-04-17 2022-04-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
EP3972695A1 (en) 2019-05-23 2022-03-30 Gilead Sciences, Inc. Substituted exo-methylene-oxindoles which are hpk1/map4k1 inhibitors
KR20220035908A (ko) 2019-06-19 2022-03-22 실버백 테라퓨틱스, 인크. 항-메소텔린 항체 및 이의 면역접합체
US11339159B2 (en) * 2019-07-17 2022-05-24 Pfizer Inc. Toll-like receptor agonists
WO2021034804A1 (en) 2019-08-19 2021-02-25 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations of tenofovir alafenamide
DK4037708T3 (da) 2019-09-30 2024-09-30 Gilead Sciences Inc HBV-vacciner og fremgangsmåder til at behandle HBV
AU2020391487B2 (en) 2019-11-26 2026-04-23 Primmune Therapeutics, Inc. TLR7 agonists
DK4069729T3 (da) 2019-12-06 2025-04-07 Prec Biosciences Inc Optimerede, modificerede meganukleaser med specificitet for en genkendelsessekvens i hepatitis b-virusgenomet
MX2022007908A (es) 2019-12-24 2022-07-21 Hoffmann La Roche Combinacion farmaceutica de un oligonucleotido terapeutico que actua sobre hbv y un agonista de tlr7 para el tratamiento de hbv.
WO2021130195A1 (en) 2019-12-24 2021-07-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Method of treating virus infection using a tlr7 agonist
EP4081217A1 (en) 2019-12-24 2022-11-02 F. Hoffmann-La Roche AG Pharmaceutical combination of antiviral agents targeting hbv and/or an immune modulator for treatment of hbv
CA3170551A1 (en) 2020-03-02 2021-09-10 Yong Taik Lim Live-pathogen-mimetic nanoparticles based on pathogen cell wall skeleton, and production method thereof
WO2021188959A1 (en) 2020-03-20 2021-09-23 Gilead Sciences, Inc. Prodrugs of 4'-c-substituted-2-halo-2'-deoxyadenosine nucleosides and methods of making and using the same
US20230277525A1 (en) 2020-08-04 2023-09-07 Progeneer Inc Conjugate of functional drug and toll-like receptor 7 or 8 agonist of which active site is temporarily inactivated and use thereof
JP7690221B2 (ja) 2020-08-04 2025-06-10 プロジェニア インコーポレイテッド 動力学的に作用するアジュバントアンサンブル
US20230346924A1 (en) 2020-08-04 2023-11-02 Progeneer Inc. Mrna vaccine comprising adjuvant capable of kinetic control
TW202221122A (zh) 2020-08-05 2022-06-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 Ｂ型肝炎患者之寡核苷酸治療
US20240209080A1 (en) 2021-04-10 2024-06-27 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
CA3216459A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
WO2022241134A1 (en) 2021-05-13 2022-11-17 Gilead Sciences, Inc. COMBINATION OF A TLR8 MODULATING COMPOUND AND ANTI-HBV siRNA THERAPEUTICS
JP7651018B2 (ja) 2021-06-23 2025-03-25 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ジアシルグリセロールキナーゼ調節化合物
JP7686091B2 (ja) 2021-06-23 2025-05-30 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ジアシルグリセロールキナーゼ調節化合物
AU2022299051B2 (en) 2021-06-23 2025-03-13 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
MX2023014762A (es) 2021-06-23 2024-01-15 Gilead Sciences Inc Compuestos moduladores de diacilglicerol quinasa.
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
KR20240101580A9 (ko) 2021-11-11 2025-12-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 Hbv 치료를 위한 약학 조합물
WO2025032082A1 (en) * 2023-08-08 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of 3-substituted 5-amino-6h-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2,7-dione compounds
AR133955A1 (es) 2023-09-26 2025-11-19 Profoundbio Us Co Agentes de unión a ptk7, conjugados de éstos y métodos de uso de los mismos
WO2025149661A1 (en) 2024-01-10 2025-07-17 Genmab A/S Slitrk6 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
US20250381289A1 (en) 2024-02-29 2025-12-18 Genmab A/S Egfr and c-met bispecific binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025240242A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Gilead Sciences, Inc. Combination therapies with ribavirin
WO2025240244A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Gilead Sciences, Inc. Combination therapies comprising bulevirtide and lonafarnib for use in the treatment of hepatitis d virus infection
WO2025240243A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Gilead Sciences, Inc. Combination therapies with bulevirtide and an inhibitory nucleic acid targeting hepatitis b virus
WO2025240246A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Gilead Sciences, Inc. Combination therapies with ribavirin

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5476659A (en) 1982-11-09 1995-12-19 The Scripps Research Institute Cancerous B cell treatment using substituted nucleoside derivatives
US5166141A (en) 1983-11-01 1992-11-24 Scripps Clinic And Research Foundation Immunostimulating 7-deaza-7-oxa- and 7-deaza-7-oxo-analogs of 8-substituted-guanine-9-(1'-beta-D-aldoglycosidyl) derivatives and methods of treating test animals
US5041426A (en) * 1987-12-21 1991-08-20 Brigham Young University Immune system enhancing 3-β-d-ribofuranosylthiazolo[4,5-d]pyridimine nucleosides and nucleotides
BR9714349A (pt) 1996-10-16 2000-11-14 Icn Pharmaceuticals L-nucleosìdeos purina, seus análogos e utilizacões dos mesmos
EP1072607A3 (en) 1996-10-16 2001-09-12 ICN Pharmaceuticals, Inc. Purine L-nucleosides, analogs and uses therof
US20050004144A1 (en) 2003-04-14 2005-01-06 Regents Of The University Of California Combined use of IMPDH inhibitors with toll-like receptor agonists
JP2007504232A (ja) 2003-09-05 2007-03-01 アナディス ファーマシューティカルズ インク Ｃ型肝炎ウイルス感染治療用のｔｌｒ７リガンド及びそのプロドラッグの投与
CN101212968B (zh) * 2004-12-17 2011-11-16 安那迪斯药品股份有限公司 3,5-二取代的和3,5,7-三取代的-3H-噁唑并以及3H-噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-酮化合物及其前药
US7560544B2 (en) 2004-12-17 2009-07-14 Anadys Pharmaceuticals, Inc. 3,5-Disubsitituted and 3,5,7-trisubstituted-3H-oxazolo and 3H-thiazolo[4,5-d]pyrimidin-2-one compounds and prodrugs thereof
DE602006015700D1 (de) 2005-11-21 2010-09-02 Anadys Pharmaceuticals Inc Neues verfahren zur herstellung von 5-amino-3h-thiazoloä4,5-düpyrimidin-2-on
CL2007001427A1 (es) 2006-05-22 2008-05-16 Novartis Ag Sal de maleato de 5-amino-3-(2',3'-di-o-acetil-beta-d-ribofuranosil)-3h-tiazolo[4,5-d]pirimidin-2-ona; procedimiento de preparacion; composicion farmaceutica que comprende a dicho compuesto; y uso del compuesto para el tratamiento de una infeccion po
KR101461604B1 (ko) * 2006-06-22 2014-11-18 애나디스 파마슈티칼스, 인코포레이티드 5-아미노-3-(3''-데옥시-β-Ｄ-리보퓨라노실)-티아졸로［4,5-ｄ］파이리미딘-2,7-다이온의 프로드럭
WO2008011406A2 (en) 2006-07-18 2008-01-24 Anadys Pharmaceuticals, Inc. Carbonate and carbamate prodrugs of thiazolo [4,5-d] pyrimidines
BRPI0717741A2 (pt) 2006-10-17 2014-04-08 Anadys Pharmaceuticals Inc Compostos e respectivos método de preparação, método de redução de composto de sulfonil substituído, composição farmacêutica método de tratamento ou prevenção de doença
WO2009026292A1 (en) * 2007-08-20 2009-02-26 Anadys Pharmaceuticals, Inc. Dosing methods for treating disease
SG11201704512PA (en) * 2014-12-08 2017-07-28 Hoffmann La Roche 3-substituted 5-amino-6h-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2,7-dione compounds for the treatment and prophylaxis of virus infection
CA2979490C (en) 2015-03-16 2023-07-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Combined treatment with a tlr7 agonist and an hbv capsid assembly inhibitor
JP6806709B2 (ja) 2015-05-12 2021-01-06 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ウイルス感染症の治療と予防のための新規置換アミノチアゾロピリミジンジオン
WO2017001307A1 (en) 2015-06-30 2017-01-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel substituted aminothiazolopyrimidinedione for the treatment and prophylaxis of virus infection

Also Published As

Publication number Publication date
SI3230298T1 (sl) 2021-04-30
PH12017501061A1 (en) 2017-12-11
CN107445980B (zh) 2021-04-20
US10618929B2 (en) 2020-04-14
TW201629072A (zh) 2016-08-16
UA124184C2 (uk) 2021-08-04
LT3230298T (lt) 2021-04-12
MA41134A (fr) 2017-10-18
NZ730398A (en) 2023-12-22
EP3230298A1 (en) 2017-10-18
BR112017011941A2 (pt) 2017-12-26
IL251285A0 (en) 2017-05-29
AU2015359692A1 (en) 2017-04-06
US11180525B2 (en) 2021-11-23
WO2016091698A1 (en) 2016-06-16
CR20170237A (es) 2017-08-10
CN106164079A (zh) 2016-11-23
KR20230113824A (ko) 2023-08-01
JP2017537158A (ja) 2017-12-14
DK3230298T3 (da) 2021-03-22
MX379474B (es) 2025-03-10
US20160194350A1 (en) 2016-07-07
US20160326209A1 (en) 2016-11-10
PT3230298T (pt) 2021-03-15
US20190169222A1 (en) 2019-06-06
ES2864223T3 (es) 2021-10-13
CA2963717A1 (en) 2016-06-16
CL2017001426A1 (es) 2018-02-16
BR112017011941B1 (pt) 2023-02-28
US9441008B2 (en) 2016-09-13
EA038744B1 (ru) 2021-10-13
HRP20210454T1 (hr) 2021-04-30
SG11201704512PA (en) 2017-07-28
PE20170679A1 (es) 2017-05-22
PH12017501061B1 (en) 2017-12-11
US20200239514A1 (en) 2020-07-30
KR102557560B1 (ko) 2023-07-20
MA41134B1 (fr) 2021-03-31
EA201791011A1 (ru) 2017-10-31
JP6817217B2 (ja) 2021-01-20
IL251285B (en) 2021-10-31
PL3230298T3 (pl) 2021-06-14
MY194002A (en) 2022-11-07
HUE053704T2 (hu) 2021-07-28
CA2963717C (en) 2023-10-10
HK1245764A1 (zh) 2018-08-31
AU2015359692B2 (en) 2020-07-09
US10040815B2 (en) 2018-08-07
MX2017007044A (es) 2017-11-08
KR20170088869A (ko) 2017-08-02
EP3230298B1 (en) 2021-01-20
CN106164079B (zh) 2017-10-20
CN107445980A (zh) 2017-12-08
TWI733656B (zh) 2021-07-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11180525B2 (en) Process for making 3-substituted 5-amino-6H-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2, 7-dione compounds useful for the treatment of virus infection
US10000512B2 (en) Compounds for the treatment of infectious diseases
US10065973B2 (en) Substituted aminothiazolopyrimidinedione for the treatment and prophylaxis of virus infection
HK1245764B (zh) 3-取代的5-氨基-6h-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮化合物
HK1229793B (en) 3-substituted 5-amino-6h-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2,7-dione compounds for the treatment and prophylaxis of virus infection
HK1229793A1 (en) 3-substituted 5-amino-6h-thiazolo[4,5-d]pyrimidine-2,7-dione compounds for the treatment and prophylaxis of virus infection
HK1248711B (zh) 用於治疗和预防病毒感染的新的取代的氨基噻唑并嘧啶二酮