RS61613B1 - Kompozicije koje sadrže aminokiseline za upotrebu u prevenciji i lečenju bolesti jetre - Google Patents

Kompozicije koje sadrže aminokiseline za upotrebu u prevenciji i lečenju bolesti jetre

Info

Publication number
RS61613B1
RS61613B1 RS20210318A RSP20210318A RS61613B1 RS 61613 B1 RS61613 B1 RS 61613B1 RS 20210318 A RS20210318 A RS 20210318A RS P20210318 A RSP20210318 A RS P20210318A RS 61613 B1 RS61613 B1 RS 61613B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
composition
acid
use according
citric acid
liver disease
Prior art date
Application number
RS20210318A
Other languages
English (en)
Inventor
Paolo Luca Maria Giorgetti
Original Assignee
Professional Dietetics Int S R L
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Professional Dietetics Int S R L filed Critical Professional Dietetics Int S R L
Publication of RS61613B1 publication Critical patent/RS61613B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/194—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having two or more carboxyl groups, e.g. succinic, maleic or phthalic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4172—Imidazole-alkanecarboxylic acids, e.g. histidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4415—Pyridoxine, i.e. Vitamin B6
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A61K31/51—Thiamines, e.g. vitamin B1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Opis
Oblast pronalaska
[0001] Ovaj opis se generalno odnosi na kompozicije koje sadrže aminokiseline. Preciznije, opis se odnosi na kompozicije koje sadrže aminokiseline za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju bolesti jetre.
Pozadina
[0002] Bolesti jetre spadaju u najčešć e bolesti koje nastaju usled različitih nepovoljnih činilaca, kao što su, na primer, paraziti i virusi, lekovi, toksične supstance, alkoholizam i dim. Često su to hronične bolesti sa tendencijom pogoršanja kliničkih karakteristika. Hronične bolesti jetre karakteriše postepeno uništavanje parenhima jetre tokom vremena, sa inflamatornim odgovorima i nakupljanjem masti, sa fibrotičnim ošteć enjem i aktivacijom ć elijskih transformacija što dovodi do razvoja karcinoma u mnogim slučajevima. Dakle, bolesti jetre mogu uključivati steatozu, fibrozu, cirozu i hepatocelularni karcinom kao progresivne kliničke poremeć aje jetre. Ciroza je rezultat akutne i hronične bolesti jetre i karakteriše je zamena jetrenog tkiva fibroznim ožiljnim tkivom i regenerativnim čvorovima što dovodi do progresivnog gubitka funkcije jetre. Fibroza i nodularna regeneracija rezultiraju gubitkom normalne mikroskopske lobularne strukture jetre. Fibroza predstavlja rast ožiljnog tkiva koji je posledica, na primer, infekcije, upale, povrede, pa čak i zarastanja. Vremenom, fibrozno ožiljno tkivo polako zamenjuje normalno funkcionalno jetreno tkivo, što rezultira smanjenom količinom protoka krvi u jetri, što ostavlja jetru nepodobnom da u potpunosti obradi hranljive materije, hormone, lekove i otrove koji se nalaze u krvotoku. Najčešć i uzroci ciroze uključuju alkoholizam, virusne infekcije hepatitisom C, gutanje toksina i mnoge druge. Kao što je napred navedeno, epidemiološki najrelevantniji poremeć aj koji evoluira u cirozu i verovatno rak je poveć anje telesne masnoće i s tim povezano akumulacija jetrene masti. Ova akumulacija masti može biti posledica dva glavna klinička stanja: zloupotreba alkohola i gojaznost.
[0003] Prekomerna i hronična konzumacija alkohola može prouzrokovati alkoholnu bolest jetre (ALD), kao glavni globalni zdravstveni problem. Patološke karakteristike ALD razvijaju se tokom dugog perioda, uključujuć i steatozu jetre, steatohepatitis, cirozu do raka.
[0004] Etanolnoj patogenezi doprinosi više faktora. Rani događaji, poput ošteć enja mitohondrija, stvaranja reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) i akumulacije masti, čine se direktnim ishodom metabolizma etanola i zajedničke su karakteristike između ALD i bezalkoholne bolesti jetre ili NAFLD (videti dole) (Mantena et al.2008).
[0005] Ć elijski mehanizmi odbrane od štetnih efekata alkohola nisu dobro poznati. Predloženo je da autofagija, koja je važan degradativni ć elijski put koji vari ć elijske proteine i organele da bi dobio energiju ili eliminiše ošteć ene ć elijske strukture, igra ulogu u ALD-u, iako je razumevanje ovih mehanizama još uvek fragmentarno (Lin i sar. 2015). Čini se da autofagija igra kritične funkcije i u hepatocitima i u neparenhimskim ć elijama (tj. makrofazima i jetrnim mati čnim ć elijama), utiču ć i na osetljivost na insulin, akumulaciju lipida, hepatocelularne povrede i urođeni imunološki odgovor.
[0006] Nedavne studije na modelima miševa i ć elija pokazale su da akutno gutanje etanola aktivira autofagiju u jetri (Ding i sar. 2010; Ni i sar.2013; Lin i sar. 2013).
[0007] Nasuprot tome, čini se da hronična intoksikacija etanolom suzbija autofagiju jetre (Thomes et al.
2015; Cho et al. 2014). Pokazalo se da inhibicija autofagije pogoršava steatozu uzrokovanu etanolom i povredu jetre kod miševa (Ding i sar. 2010; Ni i sar.2013; Lin i sar. 2013).
[0008] Suprotno tome, čini se da farmakološka promocija autofagije ublažava steatozu jetre uzrokovanu etanolom i povredu jetre (Lin et al. 2013). Kao rezultat, autofagija se smatra zaštitnim mehanizmom protiv citotoksičnih efekata etanola i pojavljuje se kao cilj za razvoj terapijskih sredstava za ALD.
[0009] Kao što je prethodno navedeno, drugi glavni uzrok poremeć aja jetre je gojaznost, široko rasprostranjena u razvijenim zemljama, koja se epidemiološki poveć ava i u zemljama u razvoju, i uzrokuje takozvanu bezalkoholnu masnu bolest jetre ili NAFLD. Napredovanje ka steatohepatitisu, cirozi i hepatokarcinomu predstavlja sve već u pojavu širom sveta. Biohemijski i molekularni mehanizmi koji su uključeni u ovo stanje mogu se nadoknaditi onima koji su tipično opisani u ALD.
[0010] Buduć i da je izmenjeni metabolizam aminokiselina obeležje bolesti jetre, povezan i sa konzumacijom alkohola i sa razvojem gojaznosti, specifično okarakterisan smanjenim nivoom aminokiselina razgranatog lanca u cirkulaciji (BCAA) (Charlton, 2006), postoji sve već i interes razvoj novih terapijskih pristupa zasnovanih na suplementaciji aminokiselina kao terapiji oboljenja jetre.
Suština pronalaska
[0011] Ovaj pronalazak ima za cilj da obezbedi nove kompozicije na bazi aminokiselina efikasne u prevenciji i lečenje bolesti jetre.
[0012] Prema datom opisu, navedeni cilj je postignut zahvaljujuć i predmetu koji se posebno obrazla že u narednim patentnim zahtevima, koji se imaju smatrati sastavnim delom ovog pronalaska.
[0013] Ostvarenje iz ovog opisa opisuje kompoziciju za upotrebu u lečenju bolesti jetre kod sisara, kompoziciju koja sadrži aktivno sredstvo, navedeno aktivno sredstvo sadrži aminokiseline leucin, izoleucin, valin, treonin, lizin i karbonske kiseline kao što je limunska kiselina, jantarna kiselina, jabučna kiselina.
[0014] U jednom ili više ostvarenja, aktivni agens smeše dalje sadrži jednu ili više aminokiselina izabranih od grupa koje se sastoje od histidina, fenilalanina, metionina, triptofana, cisteina i tirozina.
[0015] U poželjnoj realizaciji, bolest jetre može se odabrati iz grupe koja se sastoji od alkoholne bolesti jetre (ADL), bezalkoholne bolesti jetre (NAFDL) lipodistrofije, hepatitisa, ciroze, hepatocelularnog karcinoma (HCC).
[0016] Dalja realizacija ovog pronalaska opisuje postupak lečenja oboljenja jetre kod sisara, postupak koji uključuje odabir kompozicije koja sadrži aktivno sredstvo, pri čemu navedeno aktivno sredstvo sadrži aminokiseline kao što je leucin, izoleucin, valin, treonin, lizin i karboksilne kiseline kao što su limunska kiselina, jantarna kiselina i jabučna kiselina, dajuć i preparat za lečenje bolesti jetre sisara.
Kratak opis slika
Pronalazakć e sada biti opisan samo kao primer, pozivaju ć i se na priložene slike, u kojima:
- Slika 1 prikazuje ekspresiju gena prikazanu kao nivoi mRNK u ć elijama HepG2 tretiranim razli čitim kompozicijama na bazi aminokiselina i etanolom (EtOH) tokom 9 dana (*P vrednost <0,05 i ** P <0,01 u odnosu na CTRLć elije).
- Slika 2 prikazuje nivo p62 proteina u ć elijama HepG2 tretiranim različitim kompozicijama na bazi aminokiselina i EtOH tokom 9 dana (*P vrednost <0,05 i ** P <0,01 u odnosu na CTRL ć elije; #P vrednost <0,05 u odnosu na EtOHć elije).
Detaljan opis poželjnih ostvarenja
[0018] U sledeć em opisu dati su brojni specifični detalji koji pružaju temeljno razumevanje oblika. Ova izvođenja se mogu praktikovati bez jednog ili više specifičnih detalja ili sa drugim metodama, komponentama, materijalima itd. U drugim slučajevima, dobro poznate strukture, materijali ili postupci nisu prikazani ili detaljno opisani kako bi se izbegli nejasnoće prilikom razumevanja.
[0019] Upuć ivanje u ovoj specifikaciji na "jedno ostvarenje" ili "ostvarenje" znači da je određeno svojstvo, struktura ili karakteristika opisani u vezi sa ostvarenjem uključeno u najmanje jedno ostvarenje. Prema tome, pojavljivanje izraza „u jednom ostvarenju“ ili „u jednom ostvarenju“ na raznim mestima u ovoj specifikaciji ne mora se nužno odnositi na isto ostvarenje. Dalje, određene karakteristike ili strukturemogu se kombinovati na bilo koji pogodan način u jednom ili više izvođenja. Naslovi dati ovde su samo radi preglednosti i ne ograničavaju obim ili značenje ostvarenja.
[0020] Alkoholna bolest jetre (ALD), kao i bezalkoholna bolest masne jetre (NAFLD) su glavni globalni zdravstveni problemi koje se karakteriše patološkim karakteristikama koje se razvijaju tokom dugog perioda, uključujuć i steatozu jetre, steatohepatitis, cirozu, pa sve do raka.
[0021] Rani događaji u patogenezi etanola, kao što su na primer ošteć enje mitohondrija, stvaranje reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) i akumulacija masti, zajedničke su karakteristike između ALD i NAFLD.
[0022] Pored toga, pokazalo se da je izmenjeni metabolizam aminokiselina karakteristika bolesti jetre, koju karakterišu niski nivoi aminokiselina razgranatog lanca u cirkulaciji (BCAA), a dodatak BCAA izgleda da je povezan sa smanjenim učestalim komplikacijama ciroze kada je propisana kao terapija (Charlton 2006).
[0023] Pronalazač ovog pronalaska je otkrio da dodavanjem specifičnih karboksilnih kiselina u kompoziciju koja sadrži kombinaciju leucina, izolevcina, valina, treonina i lizina, mo že se postić i visoka efikasnost u suzbijanju oboljenja jetre, kao što su na primer ALD i NAFLD.
[0024] Ovde je opisana kompozicija koja sadrži kao aktivno sredstvo aminokiseline kao što su leucin, izoleucin, valin, treonin, lizin u kombinaciji sa tri karboksilne kiseline, koje su supstrati ciklusa trikarboksilne kiseline, uključujuć i limunsku kiselinu, jantarnu kiselinu i jabučnu kiselinu u specifičnim količinama za šta je utvrđeno da obnavlja izmenjeni metabolizam aminokiselina indukovan etanolom i posledično sprečava autofagiju. Ciklus trikarboksilne kiseline (TCA ciklus), takođe nazvan Krebsov ciklus i ciklus limunske kiseline, koji se izvodi u matrici mitohondrija, druga je faza ć elijskog disanja, trostepeni proces kojim žive ć elije razgrađuju molekule organskog goriva u prisustvu kiseonika za sakupljanje energije potrebne za rast i podelu.
[0025] Kompozicije koje sadrže napred navedeni aktivni agens, kao i kompozicije koje sadrže napred navedeno aktivno sredstvo, uključujuć i i druge specifične aminokiseline (navedene u Tabeli 1 dole), su znatno efikasniji od sličnog aminokiselinskog sastava bez takvih specifičnih karboksilnih kiselina.
[0026] U jednom ili više ostvarenja, ovde je opisan težinski odnos između ukupne količine limunske kiseline, jantarne kiseline i jabučne kiseline i ukupne količine aminokiselina leucin, izoleucin, valin, treonin, lizin između 0,05 i 0,3, poželjno između 0,1 i 0,25.
[0027] U jednom ili više ostvarenja, aktivno sredstvo može dalje da sadrži jednu ili više aminokiselina izabranih iz grupe koja se sastoji od histidina, fenilalanina, metionina, triptofana, cisteina i tirozina.
[0028] U jednom ili više izvođenja, karboksilne kiseline sadržane u kompoziciji se sastoje od limunske kiseline, jantarne kiseline i jabučne kiseline.
[0029] U daljem rešenju, aktivno sredstvo ovde opisane kompozicije takođe može da uključuje asparaginsku kiselinu i/ili ornitin L-alfaketoglutarat (OKG).
[0030] Prema jednom ostvarenju, kompozicija sadrži aktivno sredstvo, aktivno sredstvo koje se sastoji od leucina, izolevcina, valina, treonina, lizina, histidina, fenilalanina, metionina, triptofana, cisteina i opciono tirozina, kao i limunske kiseline, jantarne kiseline i jabu čne kiseline, pri čemu su navedene aminokiseline jedine aminokiseline sadržane u kompoziciji. Limunska kiselina, jantarna kiselina i jabučna kiselina mogu biti jedine karboksilne kiseline sadržane u kompoziciji.
[0031] U daljem rešenju, kompozicija može sadržati aminokiseline kao što su izoleucin, leucin i valin u količini između 35 % i 65 % težine, poželjno između 42 % i 56 % težine, u odnosu na težinu aktivnog agensa.
[0032] U jednom ili više ostvarenja, težinski odnos između leucina i limunske kiseline je između 5 i 1, poželjno između 2,50 i 3,50.
[0033] U daljem rešenju, težina ili molarna količina limunske kiseline je već a od težine ili molarne količine svake jabučne kiseline i jantarne kiseline. Poželjno je da je težina ili molarna količina limunske kiseline već a od težine ili molarne ukupne količine jabučne kiseline i jantarne kiseline. U daljem rešenju, težinski odnos između limunske kiseline i zbira jabučne kiseline i jantarne kiseline je između 1,0 i 4,0, poželjno između 1,5 i 2,5. U poželjnom rešenju, težinski odnos između limunske kiseline: jabučne kiseline: jantarne kiseline je između 10 : 1 : 1 i 2 : 1, 5 : 1,5, poželjno između 7 : 1: 1 i 1,5 : 1: 1, još poželjnije između 5: 1: 1 i 3: 1: 1. U poželjnom rešenju težinski odnos između limunske kiseline: jabučne kiseline: jantarne kiseline je 4 : 1: 1.
[0034] Prema nekim realizacijama ovog pronalaska, poželjni molarni odnos izolevcin: leucin sastavljen je u rasponu 0,2-0,7, poželjno u rasponu 0,30-0,60 i/ili poželjni težinski odnos valin: leucin je sadržan u rasponu 0,2-0,70, poželjno u rasponu 0,30-0,65.
[0035] U daljem rešenju, molarni odnos treonin: leucin je u rasponu od 0,10-0,90, poželjno u rasponu 0,20-0,70 i/ili maseni odnos lizin: leucin je u rasponu od 0,20-1,00, poželjno u rasponu 0,40-0,90.
[0036] U poželjnom rešenju, odnos između ukupne molarne količine limunske kiseline, jabučne kiseline, jantarne kiseline i ukupne molarne količine metionina, fenilalanina, histidina i triptofana je već i od 1,35.
[0037] U jednoj ili više realizacija, težinski odnos između zbira limunske kiseline, jabučne kiseline, jantarne kiseline i zbira aminokiselina razgranatog lanca leucina, izoleucina, valina je izme đu 0,1 i 0,4, poželjno između 0,15 i 0,35 .
[0038] U daljem rešenju, ukupna težinska količina aminokiselina razgranatog lanca leucina, izolevcina, valina plus treonina i lizina već a je od ukupne težine tri karboksilne kiseline, kao što su limunska kiselina, jabučna kiselina i jantarna kiselina kiselina. Poželjno je da je težina količine pojedinačne karboksilne kiseline (limunska kiselina, jantarna kiselina ili jabučna kiselina) manja od težine količine svake od pojedinačnih aminokiselina kao što su leucin, izolevcin, valin, treonin i lizin.
[0039] U daljem rešenju, ukupna molarna količina lizina i treonina već a je od ukupne molarne količine tri karboksilne kiseline kao što su limunska kiselina, jantarna kiselina, jabučna kiselina. Poželjno je da je odnos između ukupne molarne količine tri karboksilne kiseline limunske kiseline, jantarne kiseline, jabučne kiseline i ukupne molarne količine lizina i treonina između 0,1 i 0,7, poželjno između 0,15 i 0,55.
[0040] U jednom ili više ostvarenja, ovde opisana kompozicija dalje sadrži vitamine, poželjno odabrane iz grupe vitamina B, kao što su vitamin B1 i/ili vitamin B6.
[0041] U daljem ostvarenju ovog pronalaska, kompozicije može sadržatii ugljene hidrate, aditive i/ili aromatične supstance.
[0042] U poželjnom rešenju, kompozicija je namenjena za prevenciju i/ili lečenje bolesti jetre odabrane od grupe koja se sastoji od bolesti masne jetre, lipodistrofije, hepatitisa, ciroze, hepatocelularnog karcinoma (HCC).
[0043] U jednom ili više ostvarenja, bolest jetre je bolest masne jetre. Bolest masne jetre mo že biti uzrokovana konzumacijom alkohola (alkoholna bolest masne jetre, ALD).
[0044] U jednom ili više izvođenja, bolest masne jetre je bezalkoholna bolest masne jetre (NFLD).
[0045] U jednom ili više izvođenja, bolest masne jetre može biti posledica lekova ili toksina, kao što je na primer amiodaron, metotreksat, diltiazem, visoko aktivna antiretrovirusna terapija, glukokortikoidi, tamoksifen, trovanje pečurkama.
[0046] Dalje, posebno kada se pripremaju kompozicije prema predmetnom pronalasku, i posebno kod pripreme aktivnog agensa, poželjno je izbegavati aminokiselinu arginin. Pored toga, dalje aminokiseline koje se ovde poželjno izbegavaju mogu biti serin, prolin, alanin. Takve aminokiseline mogu biti kontraproduktivne ili čak štetne u nekim koncentracijama ili stehiometrijskim odnosima unutar kompozicije.
[0047] Aminokiseline opisane u predmetnom pronalasku mogu se zameniti odgovarajuć im farmaceutski prihvatljivim derivatima, odnosno solima.
[0048] Kao što ć e se jasno pokazati u daljem tekstu, davanje kompozicija prema ovom pronalasku je posebno efikasno u prevenciji i/ili lečenju bolesti jetre.
[0049] U poželjnoj realizaciji, opisane kompozicije mogu se koristiti u lečenju alkoholne bolesti jetre (ALD).
[0050] Prema daljem rešenju, aminokiselinske smeše mogu sadržati farmaceutski prihvatljive ekscipijente, kao što su na primer proteini, vitamini, ugljeni hidrati, prirodni i ve štački zaslađivači i/ili aromatične supstance. U poželjnoj realizaciji, farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi mogu biti izabrani od proteina surutke, maltodekstrina, fruktoze, kalcijum-kazeinata, ribljeg ulja, sukraloze, estara saharoze, vitamina D3, vitamina grupe B.
[0051] Za oralnu upotrebu, kompozicije prema opisu mogu biti u obliku tableta, kapsula, granula, gela ili gelirajuć eg praha.
[0052] Dodatne specifikacije, u pogledu količina i odnosa između različitih aminokiselina predviđenih u kompozicijama, sadržane su u priloženim patentnim zahtevima, koji čine sastavni deo ovde opisanog stanja tehnike u vezi sa pronalaskom.
PRIMERI
[0053] Tabela 1 prikazuje dve različite kompozicije zasnovane na aminokiselinama, testirane in vitro na hepatocitima (HepG2 ć elije) i in vivo na pacovima koji koriste etanol, kao što je objašnjeno u nastavku.
[0054] Kompozicija nazvana "BCAAem" u nastavku sadrži aktivno sredstvo koje sadrži aminokiseline leucin, lizin, izolevcin, valin, treonin, cistein, histidin, fenilalanin, metionin, tirozin, triptofan.
[0055] Kompozicija nazvana "alfa 5m (α5m)" sadrži aktivno sredstvo koje sadrži iste aminokiseline plus limunsku kiselinu, jantarnu kiselinu i jabučnu kiselinu.
Tabela 1
[0056] Kompozicije iz gornje tabele 1 mogu se prvo pripremiti prosejavanjem svih komponenata sa 0,8 mesh. Da bi se dobila predmešavina, svaki sastojak (u količini manjoj od 10 % ukupne količine) stavlja se u polietilensku kesu zajedno sa delom L-lizina HCl tako da se dobije 10 % ukupne težine kompozicije. Kesa se zatim ručno muć ka 5 minuta. Prethodna smeša se zatim puni u mikser (Planetaria) zajedno sa ostatkom sastojaka i meša tokom 15 minuta pri 120 obrtaja u minuti da bi se dobio homogena finalna kompozicija.
METODI
Životinje i tretmani
[0057] Eksperimentalni protokol je odobren i sproveden u skladu sa Direktivom Saveta Evropske zajednice od 24. novembra 1986. (86/609/EEZ) i italijanskim Ministarstvom zdravlja, i usklađen je sa Nacionalnim smernicama za zaštitu životinja.
[0058] Za eksperimentalnu analizu opisanu u daljem tekstu korišć eni su muški pacovi Wistar (stari 3 meseca) iz reke Charles (Calco, Como, Italija).
[0059] Životinje su smeštene odvojeno u čiste polipropilenske kaveze i podeljene u šest grupa:
1) grupa hranjena parom (CTRL hranjena parom, n = 6) hranjena je kontrolnom te čnom ishranom, u kojoj je etanol (EtOH) zamenjen izokaloričnom maltozom dekstranom;
2) EtOH grupa (EtOH, n = 7) hranjena je Lieber-DeCarli tečnom hranom koja sadrži EtOH ad libitum [postepeno poveć avanje količine EtOH, dostizanje 36 % kalorijskog unosa nakon 1 nedelje, što odgovara konačnoj koncentraciji od 6,2 % (vol/vol)];
3) BCAAem grupa (BCAAem, n = 6) hranjena kontrolnom tečnom ishranom, u kojoj je EtOH zamenjen izokaloričnom maltozom dekstranom, i dopunjen aminokiselinskim sastavom razgranatog lanca („BCAAem“ u tabeli 1) koji je obezbedio 1,5 g/kg/dan BCAAem;
4) alfa 5 grupa (α5m, n = 6) hranjena kontrolnom tečnom ishranom, u kojoj je EtOH zamenjen izokaloričnom maltozom dekstranom, i dopunjen aminokiselinskim sastavom („α5m“ u tabeli 1) koji je davan 1,5 g/kg/dan;
5) EtOH plus BCAAem grupa (EtOH BCAAem, n = 7) hranjena Lieber-DeCarli tečnom hranom koja sadrži EtOH i BCAAem sastav ad libitum; i
6) EtOH plus α5m grupa (EtOH α5m, n = 7), hranjena Lieber-DeCarli tečnom ishranom koja sadrži EtOH i α5m sastav ad libitum.
Priprema uzorka
[0060] Jetra (n = 4 životinje/grupa) je izmerena, homogenizovana u hladnom metanolu: voda (v/v, 1:1) i ekstrahovana prema Want et al. (Want et al. 2013). Vakuumski osušeni uzorci suspendovani su u 120 ml/ 50 mg tkiva metanola: 1 mM TDFHA = 1:1 i centrifugirani na 16 000 g tokom 10 minuta na 4 °C. Dva ml surnatanta su direktno napunjena na UPLC-maseni spektrometar i analizirani kako je opisano u nastavku. Četiri tehničke replike za svaki uzorak pokrenute su pomoć u tri različita metoda.
Hromatografija i kvantifikacija aminokiselina u jetri
[0061] Standardne aminokiseline su kupljene od kompanije Sigma (Milano, Italija). Svaki osnovni rastvor aminokiselina pripremljen je u koncentraciji od 1 mg/ml u vodi, razblažen do krajnje koncentracije od 3 pmol/ml i direktno ubrizgan špricem brzinom od 10 ml/min u maseni spektrometar TripleTOF 5600+ (AB Sciek, Milano, Italija ). Dakle, potencijal uklanjanja štete (DP) i energija kontakta (CE) optimizovani su za svaku aminokiselinu.
[0062] Sledeć e su pripremljene tri smeše aminokiselina na osnovu vrednosti DP i CE: MIKS 1, koji sadrži treonin, asparagin, tirozin i serin, i analizirane sa DP: 30 V, CE: 15 V; MIKS 2, koji sadr ži glicin, alanin, leucin, izoleucin, valin, prolin, histidin, metionin, asparaginsku kiselinu, glutamin i fenilalanin, i analiziran sa DP: 40 V, CE: 15 V; i MIX 3, koji sadrži glutaminsku kiselinu, lizin, arginin i triptofan, i analiziran sa DP: 80 V, CE: 18 V.
[0063] Parametri izvora su bili: gas 1: 33 psi, gas 2: 58 psi, dimni gas: 25 psi, temperatura: 500 ° C i ISVF (IonSprai Voltage Floating): 5500 V.
[0064] Da bi se dobili kalibracione krive, tehnički četvorostruki primerci različitih količina (10, 33, 50, 100, 200, 400 pmol) tri smeše ubrizgani su u maseni spektrometar nakon odvajanja UPLC, koristeć i UPLC 1290 (Agilent Technologies Italija, Cernusco sul Naviglio, Milano, Italija) . Hromatografska kolona je iz Waters, Aquiti HSS T3 C18 2,1 x 100 mm, 1,7 mm, dok je pokretna faza bila A:1 mM TDFHA (tridekafluoroheptanska kiselina) u vodi; B: 1 mM TDFHA u acetonitrilu. Gradijent B od 12,5 % do 26,5 % za 4 min, prać en rampom od 26,5 do 92 % za 3,5 min koriš ć en je za odvajanje svih aminokiselina, sa protokom od 0,35 ml/min i temperaturom u koloni od 65 ° C kako je opisano (Le et al., 2014).
[0065] Autouzorak je podešen na 4 °C. Kalibracione krive su nacrtane korišć enjem hromatografskih područja vrhova i izmerene regresije (1/x za sva jedinjenja osim asparagina, tirozina, valina i glutaminske kiseline, koja su odgovarala 1/x<2>) pomo ć u MultiKuant verzije softvera 2.1 (SCIEKS). Kvantitativne vrednosti za svaku aminokiselinu (pmol) u uzorcima jetre pacova dobijene su povezivanjem hromatografskih područja vrhova sa onima dobijenim iz spoljašnjih kalibracionih standarda i normalizovanim na tkivo (mg).
Kultura i lečenjeć elija
[0066] Humane HCC HepG2 ć elije su kupljene od Američke zbirke tipičnih kultura (HB-8065; ATCC, Manassas, VA). Ć elije su rutinski kultivisane u medijumu RPMI-1640, dopunjenom sa 10 % fetalnog goveđeg seruma, penicilina (100 U/mL) i streptomicina (100 mg/mL), u sredini sa 5 % CO2na 37 °C. Dva miliona HepG2ć elija je zasejano po bočici od 75 cm<2>(Corning Inc., Corning, NY).
[0067] Šest sati nakon setve, dodato je 75 mM (0,34 %) EtOH i 1 % BCAAem ili α5m, samostalno ili u kombinaciji. Neobrađene ć elije su postavljene kao kontrolne. Svakih 24 sata, medijum je zamenjen i u kontrolnoj i u boci za obradu, sa svežim medijumom, sa ili bez EtOH i BCAAem, odnosno α5m. Četiri dana nakon setve, ć elije su tripsinizovane i posejane u nove bočice, sa 2 miliona održivih ć elija po bočici, sa dnevnim promenama medijuma, kao što je prethodno opisano (Pochareddi et al. 2012). Pet dana nakon postupka razdvajanja (ukupno 9 dana sa ili bez EtOH, BCAAem ili α5m, ili EtOH plus BCAAem ili α5m), ć elije su sakupljene kako je dole navedeno za različite testove.
Kvantitativna RT-PCR analiza
[0068] Kvantitativne RT-PCR reakcije izvedene su kako je opisano (Tedesco i sar. 2008) i pokrenute sa iQ SibrGreeni SuperMik (Bio-Rad; Segrate, Italija) na iCycler iQ sistemu za detekciju PCR u realnom vremenu (Bio- Rad).
[0069] Ukratko, RNK je izolovana iz tkiva upotrebom RNeasi® Tissue Mini Kit (Kiagen, Milan, Italija). cDNK je sintetizovana pomoć u iScriptTM cDNK Sinthesis Kit (Bio-Rad Laboratories, Segrate, Italija).
[0070] Prajmeri su dizajnirani pomoć u softvera Beacon Designer 2.6 kompanije Premier Biosoft International (sekvence su date u Tabeli 2 dole). Broj ciklusa kod kojeg su bili uo čljivi različiti transkripti (granični ciklus, CT) upoređen je sa brojem TBP-a, koji se naziva DCT. Relativni nivoi gena izraženi su kao 2- (DDCT), u kojima je DDCT jednako DCT pacova (ili tretiranih HepG2 ć elija) tretiranih sme šom EtOH- ili BCAAem- ili CAA - minus minus DCT kontrolnog pacova (ili neobrađenih HepG2ć elija).
Tabela 2
Western Blot analiza
[0071] Proteinski ekstrakti su dobijeni iz jetre pomoć u reagensa za ekstrakciju proteina T-PER sisara (Pierce, Thermo-Scientific, Rockford, USA), kako je opisao proizvođač, u prisustvu inhibitora koktela proteaze i fosfataze (Sigma Aldrich, Milano, Italija). Sadržaj proteina je meren analizom proteina u bicinhonininskoj kiselini (BCA, Pierce, Euroclone, Milano, Italija), i 50 mg proteina je podvrgnuto SDS-PAGE pod redukcionim uslovima. Odvojeni proteini su zatim elektroforetski preba čeni u nitroceluloznu membranu (Bio-Rad Laboratories, Segrate, Italija). Proteini od značaja su otkriveni sa specifičnim antitelima: anti-p62 i anti-α-aktinom (svi iz Cell Signaling, Euroclone, Milano, Italija), u razblaženju od 1: 1000. Imunobojenje je otkriveno korišć enjem anti-zečjeg ili anti-mišjeg imunoglobulina konjugovanog sa perenom rena tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Količina proteina je izmerena pomo ć u SuperSignal Substrata (Pierce, Euroclone, Milan, Italija) i kvantifikovana denzitometrijom pomoć u softverskog analizatora slika IMAGEJ.
Statistička analiza
[0072] Za sve podatke o ekspresiji gena korišć eni su dvostrani t testovi uparenih uzoraka za poređenje vrednosti između kontrolne i tretirane ć elije. Vrednost P < 0,05 smatrana je statistički značajnom.
REZULTATI
Kompozicija α 5m je efikasnija od BCAA kompozicije za obnavljanje biogeneze mitohondrija jetre i funkcije ošteć ene potrošnjom EtOH.
[0073] Procenjen je kapacitet BCAAem i α5m kompozicija da poboljšaju ošteć enu biogenezu i funkciju mitohondrija usled izloženosti EtOH. Da bi se ispitali molekularni mehanizmi koji su uključeni u efekte koji imaju BCAAem i α5m kompozicije, korišć en je in vitro model toksičnosti za hepatični EtOH.
[0074] U tom cilju, hepatične HepG2 ć elije su bile izložene dejstvu 75 mM EtOH, sa ili bez BCAAem α5m kompozicija, tokom 9 dana. Nivoi γ-koaktivatora receptora aktiviranog proliferatorom 1α(PGC-1α), nuklearni respiratorni faktor-1 (NRF-1), faktor transkripcije mitohondrijske DNK (Tfam) i cR c mRNK bili su nepromenjeni ili nešto niži u HepG2 ć elijama izloženim 75 mM EtOH tokom 9 dana, nego u neobrađenim kontrolnimć elijama (slika 1).
[0075] Međutim, primena BCAAem i α5m kompozicije tokom 9 dana poveć ala je nivo PGC-1 α i Tfam mRNK u odnosu na neobrađene i EtOH ć elije tretirane (slika 1).
[0076] Primetno, efikasnost α5m kompozicije za poboljšanje markera biogeneze mitohondrija jetre bila je statistički već a od one kod BCAAem.
Analiza autofagije
[0077] O autofagičnom fluksu može se zaključiti kombinovanjem nekoliko markera, uključujuć i nivoe proteina p62/SKSTM1 pored odnosa LC3II/LC3I, Beclin1 i Atg7, i 4EBP1 fosforilacije (Klionski et al., 2016). Pokazano je da je p62/SKSTM1 ugrađen u autofagosome i razgrađen u autolizomima. Otuda, smanjeni nivo proteina p62/SKSTM1 ukazuje na pove ć anu autofagiju (Klionski et al. 2016).
[0078] Kao što je prikazano na slici 2 trenutne primene, nivo p62 proteina bio je ni ži u ć elijama HepG2 izloženim 75 mM EtOH tokom 9 dana nego u neobrađenim kontrolnim ć elijama.
[0079] Međutim, nakon 9 dana primene BCAAem ili α5m kompozicija nivo p62 proteina je bio viši u odnosu na nivo p62 i neobrađenih ić elija tretiranih sa EtOH.
[0080] Takođe u ovom slučaju, efikasnost kompozicija α5m bila je statistički već a od efikasnosti BCAAem kompozicija.
Kvantifikacija aminokiselina jetre
[0081] Kao što je prethodno opisano, izmenjeni metabolizam aminokiselina - posebno niski nivoi BCAA u cirkulaciji - pokazalo se kao posebna karakteristika alkoholne bolesti jetre (Charlton, 2006).
[0082] Podaci dati u daljem tekstu odnose se na efekte kompozicija BCAAem ili α5m na metabolizam aminokiselina u jetri pacova koji hronično koriste EtOH.
[0083] U tom cilju, nivoi slobodnih aminokiselina su mereni hromatografskom analizom u tkivu jetre pacova koji su uzimali EtOH pojedinačno ili u kombinaciji sa testiranim kompozicijama.
[0084] Kao što je navedeno u tabeli 3, dodatak BCAAem i α5m kompozicija bio je neefikasan na nivou arginina, leucina i triptofana. Suprotno tome, potro šnja EtOH dovela je do smanjenja nivoa ovih aminokiselina u jetri.
[0085] Zanimljivo je da je primena BCAAem i α5m kompozicija kod pacova koji su konzumirali EtOH sprečila smanjenje arginina, leucina i triptofana.
[0086] Takođe, koncentracije izoleucina, serina, tirozina i valina bile su ni že u jetri miševa izloženih ishrani koja sadrži EtOH.
[0087] Iako dodatak BCAAem nije mogao da spreči njihov pad, dodatak α5m je, naprotiv, takođe bio efikasan u sprečavanju smanjenja izoleucina i valina izazvanog EtOH.
[0088] Koncentracije preostalih aminokiselina nisu se statistički razlikovale među grupama.
[0089] Ovi rezultati su u skladu sa specifičnom sposobnoš ć u α5m kompozicija u poređenju sa BCAAem kompozicijom u renormalizaciji nivoa BCAA u uzorcima jetre pacova koji su konzumirali EtOH.
�
[0090] Ukratko, rezultati in vitro i in vivo pokazuju da dodatak ishrani sastavom koji sadrži aktivno sredstvo, aktivno sredstvo koje sadrži kombinaciju leucina, izolevcina, valina, treonina, lizina, limunske kiseline, jantarne kiseline i jabučne kiseline je značajno efikasanije u sprečavanju ošteć enja mitohondrija hepatocita izloženih EtOH.
[0091] Ovaj efekat je takođe prać en smanjenjem autofagije (tj. pove ć anjem nivoa proteina p62) koja se poveć ava (tj. smanjenjem nivoa proteina p62) izlaganjem EtOH.
[0092] EtOH sam po sebi može pojačati autofagiju kako bi nadoknadio toksičnost EtOH i, posebno, ošteć enje mitohondrija koje je evidentno u hepatocitima izlo ženim alkoholu i u jetri životinja koje konzumiraju alkohol.
[0093] U stvari, autofagija je ć elijski mehanizam čiji je cilj eliminisanje nedostatka organela, uključuju ć i mitohondrije. Kada su hepatociti izloženi alkoholu i funkcija mitohondrija smanjena, poveć ana autofagija, kao što je takođe opisano u predmetnom pronalasku, korisna je za uklanjanje defektnih mitohondrija.
[0094] Ovde opisane aminokiselinske kompozicije, koje sadrže kombinaciju leucina, izolevcina, valina, treonina, lizina, sa limunskom kiselinom, jantarnom kiselinom i jabučnom kiselinom, sposobne su da spreče ošteć enje mitohondrija, tako da ta ć elija radi i da joj nije potrebna autofagija da bi odr žala svoju energetsku funkciju. Shodno tome, autofagija se smanjuje ( što pokazuje poveć ani nivo proteina p62, prikazan u predmetnom pronalasku).
[0095] Štaviše, i što je najvažnije, otkriveno je da su smeše vrlo efikasne u obnavljanju koncentracije slobodnog BCAA, arginina i triptofana u jetri pacova koji su konzumirali EtOH.
[0096] Preliminarni rezultati naročito ukazuju na to da su ovde opisane aminokiselinske kompozicije koje sadrže kombinaciju leucina, izolevcina, valina, treonina, lizina sa limunskom kiselinom, jantarnom kiselinom i jabučnom kiselinom takođe sposobne da smanje prečnik kapljica lipida u hepatocitima miševa izloženih 6 meseci ishrani sa visokim sadržajem masti (HFD, 60 % kalorija iz masti), u široko korišć enom mišjem modelu NAFLD. Sve u svemu, ovi rezultati snažno podržavaju ideju da su opisane aminokiselinske kompozicije aktivne u zavisnosti od alkohola toksičnosti jetre mogu biti pogodne u sprečavanju razvoja i pogoršanja NAFLD.
[0097] Iz prethodnog, jasno proizlazi kako su kompozicije prema predmetnom pronalasku korisne za prevenciju i/ili lečenje bolesti jetre širom sveta koje pogađaju veliki broj odrasle populacije, uz rastuć e javne troškove.
REFERENCE
[0098]
Charlton M. (2006) Branched-Chain Amino Acid Enriched Supplements as Therapy for Liver Disease. J Nutr 136: 295S-298S. Cho HI, Choi JW, Lee SM (2014) Impairment of autophagosomelysosome fusion contributes to chronic ethanol- induced liver injury. Alcohol 48:717-725.
Cooper GM and Hausman RE (2009) La cellula. Un approccio molecolare. Bioenergetica e metabolismo. Mitocondri, cloroplasti e perossisomi. Piccin 11: 432-468. Ding WX, Li M, Chen X, Ni HM, Lin CW, Gao W, Lu B, Stolz DB, Clemens DL, Yin XM (2010) Autophagy reduces acute ethanol-induced hepatotoxicity and steatosis in mice. Gastroenterology 139:1740-1752.
Jung CH, Ro S-H, Cao J, Otto NM, Kim D-H (2010) mTOR regulation of autophagy. FEBS Lett 584:1287-1295. Klionsky DJ et al (2016) Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (3rd edition). Autophagy 12:1-222. Lin CW, Zhang H, Li M, Xiong X, Chen X, Chen X, Dong XC, Yin XM (2013) Pharmacological promotion of autophagy alleviates steatosis and injury in alcoholic and non-alcoholic fatty liver conditions in mice. J Hepatol 58:993-999. Lin Wang, Bilon Khambu, Hao Zhang, Xiao-Ming Yin (2015) Autophagy in alcoholic liver disease, self-eating triggered by drinking. Clinics and research in hepatology and gastroenterology 39, S2-S6.
Le A, Ng A, Kwan T, Cusmano-Ozog K, Cowan TM. (2014) A rapid, sensitive method for quantitative analysis of underivatized amino acids by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 944: 166-174. Mantena SK, King AL, Andringa KK, Eccleston HB and Bailey SM (2008) Mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the pathogenesis of alcohol- and obesity-induced fatty liver diseases. Free Radical Biology and Medicine 44: 1259-1272.
Ni H-M, Du K, You M, Ding W-X (2013) Critical role of FoxO3a in alcohol-induced autophagy and hepatotoxicity. Am J Pathol 183:1815-1825. Pochareddy S, Edenberg HJ. (2012) Chronic alcohol exposure alters gene expression in HepG2 cells. Alcohol Clin Exp Res 36: 1021-1033.
Tedesco L, Valerio A, Cervino C, Cardile A, Pagano C, Vettor R, Pasquali R, Carruba MO, Marsicano G, Lutz B, Pagotto U, and Nisoli E. (2008) Cannabinoid type 1 receptor blockade promotes mitochondrial biogenesis through endothelial nitric oxide synthase expression in white adipocytes. Diabetes 57: 2028-2036. Thomes PG, Trambly CS, Fox HS, Tuma DJ, Donohue TM Jr (2015) Acute and chronic ethanol administration differentially modulate hepatic autophagy and transcription factor EB. Alcohol Clin Exp Res 39:2354-2363. https:// doi.org/10.1111/acer.12904.
Valerio A, D’Antona G, Nisoli E. (2011) Branched-chain amino acids, mitochondrial biogenesis, and healthspan: an evolutionary perspective. Aging 3: 464-478. Want EJ, Masson P, Michopoulos F, Wilson ID, Theodoridis G, Plumb RS, Shockcor J, Loftus N, Holmes E, Nicholson JK. (2013) Global metabolic profiling of animal and human tissues via UPLC-MS. Nat Protoc 8: 17-32.
�
�

Claims (14)

Patentni zahtevi
1. Kompozicija za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju bolesti jetre kod sisara, kompozicija obuhvatajući aktivni agens, navedeni aktivni agens obuhvatajući aminokiseline leucin, izoleucin, valin, treonin, lizin i karboksilne kiseline, limunsku kiselinu, jantarnu kiselinu i jabučnu kiselinu.
2. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je težinski odnos između ukupne količine limunske kiseline, jabučne kiseline, jantarne kiseline i ukupne količine leucina, izoleucina, valina, lizina, treonina između 0.05 i 0.3, poželjno između 0.1 i 0.25.
3. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je težinski odnos između ukupne količine limunske kiseline, jabučne kiseline, jantarne kiseline i ukupne količine leucina, izoleucina, valina između 0.1 i 0.4, poželjno između 0.15 i 0.35.
4. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je težinski odnos između limunske kiseline i zbira jabučne kiseline i jantarne kiseline između 1.0 i 4.0, poželjno između 1.5 i 2.5.
5. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je težinski odnos limunska kiselina : jabučna kiselina : jantarna kiselina između 10:1:1 i 2:1.5:1.5, poželjno između 7:1:1 i 1.5:1:1, poželjnije između 5:1:1 i 3:1:1.
6. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu navedeni aktivni agens dalje sadrži najmanje jednu aminokiselinu odabranu od grupe koja se sastoji od histidina, fenilalanina, metionina, triptofana, tirozina, cisteina.
7. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu navedeni aktivni agens dalje sadrži histidin, fenilalanin, metionin, triptofan, cistein i opciono tirozin.
8. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je odnos između ukupne molarne mase limunske kiseline, jabučne kiseline, jantarne kiseline i ukupne molarne mase metionina, fenilalanina, histidina i triptofana već i od 1.35.
9. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je odnos između ukupne molarne mase tri karboksilne kiseline limunske kiseline, jantarne kiseline, jabučne kiseline i ukupne molarne mase lizina i treonina između 0.10 i 0.70 , poželjno između 0.15 i 0.55.
10. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je težina ili molarna masa limunske kiseline već a od ukupne težine ili molarne mase jabučne kiseline i jantarne kiseline.
11. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je težinski odnos između leucina i limunske kiseline između 5 i 1, poželjno između 2.50 i 3.50.
12. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu kompozicija dalje sadrži jedan ili više vitamina, poželjno odabranih iz grupe vitamina B, poželjnije vitamina B1 i/ili vitamina B6.
13. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 12, pri čemu je bolest jetre odabrana iz grupe koja se sastoji od bolesti masne jetre, lipodistrofije, hepatitisa, ciroze, hepatocelularnog karcinoma (HCC).
14. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 13, pri čemu je bolest jetre odabrana od alkoholnih bolestii jetre (ALD) i nealkoholnih masnih bolesti jetre (NAFLD).
RS20210318A 2018-06-27 2019-04-02 Kompozicije koje sadrže aminokiseline za upotrebu u prevenciji i lečenju bolesti jetre RS61613B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT102018000006725A IT201800006725A1 (it) 2018-06-27 2018-06-27 Composizioni comprendenti aminoacidi per l'uso nella prevenzione e nel trattamento di malattie epatiche
EP19166892.0A EP3586837B1 (en) 2018-06-27 2019-04-02 Compositions comprising amino acids for use in the prevention and treatment of liver diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61613B1 true RS61613B1 (sr) 2021-04-29

Family

ID=63491976

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210318A RS61613B1 (sr) 2018-06-27 2019-04-02 Kompozicije koje sadrže aminokiseline za upotrebu u prevenciji i lečenju bolesti jetre

Country Status (23)

Country Link
US (1) US12239622B2 (sr)
EP (1) EP3586837B1 (sr)
JP (1) JP7347744B2 (sr)
KR (1) KR102769832B1 (sr)
CN (1) CN112334129B (sr)
AU (1) AU2019293293B2 (sr)
BR (1) BR112020026431A2 (sr)
CA (1) CA3104839A1 (sr)
CL (1) CL2020003209A1 (sr)
CY (1) CY1124030T1 (sr)
DK (1) DK3586837T3 (sr)
EA (1) EA202092749A1 (sr)
ES (1) ES2858355T3 (sr)
IT (1) IT201800006725A1 (sr)
LT (1) LT3586837T (sr)
MX (1) MX2020013471A (sr)
MY (1) MY201355A (sr)
PH (1) PH12020552254A1 (sr)
PL (1) PL3586837T3 (sr)
RS (1) RS61613B1 (sr)
SG (1) SG11202012297XA (sr)
WO (1) WO2020003013A1 (sr)
ZA (1) ZA202007834B (sr)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT201700087359A1 (it) 2017-07-28 2019-01-28 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per l'uso nel trattamento di malattie associate a disfunzione mitocondriale
IT201700087376A1 (it) 2017-07-28 2019-01-28 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per l'uso nel trattamento di malattie associate a disfunzione mitocondriale
IT201800006725A1 (it) 2018-06-27 2019-12-27 Composizioni comprendenti aminoacidi per l'uso nella prevenzione e nel trattamento di malattie epatiche
IT201900002109A1 (it) 2019-02-13 2020-08-13 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amminoacidi per l'uso nel trattamento di lesioni del sistema nervoso centrale
IT202000000454A1 (it) * 2020-01-13 2021-07-13 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per la prevenzione e il trattamento del cancro
IT202000000442A1 (it) 2020-01-13 2021-07-13 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per l'uso nella prevenzione e nel trattamento di effetti collaterali della chemioterapia
WO2022266480A1 (en) * 2021-06-17 2022-12-22 Axcella Health Inc. Methods of predicting liver fat content and uses thereof
IT202300009351A1 (it) * 2023-05-10 2024-11-10 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti acido ialuronico, aminoacidi e intermedi del ciclo di krebs utili per aumentare l'espressione genica della matrice extracellulare

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1032403B1 (en) * 1997-10-24 2012-05-02 John P. Blass Nutritional supplement for cerebral metabolic insufficiencies
DE10000577A1 (de) 2000-01-10 2001-07-26 Fumapharm Ag Muri Verwendung von Fumarsäurederivaten zur Behandlung mitochondrialer Krankheiten
ITTO20010804A1 (it) 2001-08-08 2003-02-08 Professional Dietetics Srl Composizioni a base di aminoacidi, idonee alla terapia per la cicatrizzazione e/o riparazione di ferite e lesioni, in particolare per l'appl
US6620850B2 (en) 2001-09-19 2003-09-16 University Of Florida Materials and methods for treatment of neurological disorders involving overactivation of glutamatergic ionotropic receptors
ITTO20030789A1 (it) 2003-10-07 2005-04-08 Professional Dietetics Srl Composizione a base di amino acidi per il trattamento
WO2007049818A1 (ja) * 2005-10-27 2007-05-03 Ajinomoto Co., Inc. 抗脂肪肝、抗肥満及び抗高脂血症用組成物
US7982066B2 (en) 2005-12-09 2011-07-19 Novalife, Inc. High protein supplement
JP2007161642A (ja) 2005-12-14 2007-06-28 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd アルコール性肝障害抑制剤
KR101919747B1 (ko) 2011-02-17 2018-11-20 각꼬호우진 구루메 다이가쿠 화학요법제의 항종양 활성 증강제
WO2012147901A1 (ja) 2011-04-28 2012-11-01 味の素株式会社 抗癌剤副作用改善用組成物
US20130084378A1 (en) * 2011-09-30 2013-04-04 Daesang Corporation Amino acid seasoning compositions comprising l-glutamic acid and l-lysine
US9198454B2 (en) 2012-03-08 2015-12-01 Nusirt Sciences, Inc. Compositions, methods, and kits for regulating energy metabolism
WO2013188874A1 (en) 2012-06-15 2013-12-19 Gencia Corporation Methods of mitigating side effects of radiation exposure and chemotherapy
CN102772407B (zh) 2012-08-01 2014-09-17 岳茂兴 一种促进神经损伤修复的药物组合物及其应用
US9597367B2 (en) * 2013-04-19 2017-03-21 Bioventures, Llc Methods for improving muscle and heart function
US10226441B2 (en) 2014-12-09 2019-03-12 Nihon Sizen Hakkoh Co., Ltd. Aging inhibitor
MX357998B (es) 2015-03-20 2018-07-11 Antonio Hernandez Miramontes Jorge Una mezcla de acidos carboxilicos, especificamente acido citrico, acido succinico, acido fumarico y acido malico para el tratamiento de pacientes con insuficiencia renal cronica, insuficiencia renal aguda, hepatopatias agudas o cronicas que cursen con hiperamonemia, enfermedades congenitas con alteraciones enzimaticas en el ciclo de la urea, asi como condiciones clínicas que cursen con balance nitrogenado negativo.
WO2016179657A1 (en) * 2015-05-11 2016-11-17 Newcastle Innovation Limited Amino acid supplementation
EP3294279B1 (en) * 2015-05-14 2020-01-01 Professional Dietetics S.p.A. Compositions comprising amino acids for use in the treatment of mucositides in neoplasia patients undergoing radiation therapy and/or chemotherapy
WO2017020121A1 (en) 2015-07-31 2017-02-09 Val-Chum, Limited Partnership Glycerol-3-phosphate phosphatase activators
RU2741637C2 (ru) 2015-11-27 2021-01-28 Даблгуд Аб Пищевая добавка и композиция для лечения метаболического синдрома
WO2018201024A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Axcella Health Inc. Amino acid compositions and their use for the treatment of traumatic brain injury
IT201700087376A1 (it) 2017-07-28 2019-01-28 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per l'uso nel trattamento di malattie associate a disfunzione mitocondriale
IT201700087359A1 (it) 2017-07-28 2019-01-28 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per l'uso nel trattamento di malattie associate a disfunzione mitocondriale
EP3691628A1 (en) 2017-10-02 2020-08-12 University of Florida Research Foundation, Incorporated Materials and methods for inhibiting tumor growth
IT201800006725A1 (it) 2018-06-27 2019-12-27 Composizioni comprendenti aminoacidi per l'uso nella prevenzione e nel trattamento di malattie epatiche
IT201900002109A1 (it) 2019-02-13 2020-08-13 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amminoacidi per l'uso nel trattamento di lesioni del sistema nervoso centrale
IT202000000454A1 (it) 2020-01-13 2021-07-13 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per la prevenzione e il trattamento del cancro
IT202000000442A1 (it) 2020-01-13 2021-07-13 Professional Dietetics Spa Composizioni comprendenti amino acidi per l'uso nella prevenzione e nel trattamento di effetti collaterali della chemioterapia
WO2022266480A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Axcella Health Inc. Methods of predicting liver fat content and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
LT3586837T (lt) 2021-05-10
US12239622B2 (en) 2025-03-04
CN112334129B (zh) 2025-01-03
NZ771034A (en) 2025-09-26
KR20210025611A (ko) 2021-03-09
KR102769832B1 (ko) 2025-02-17
MX2020013471A (es) 2021-02-18
PH12020552254A1 (en) 2021-08-16
ZA202007834B (en) 2021-10-27
DK3586837T3 (da) 2021-03-01
US20210260011A1 (en) 2021-08-26
CL2020003209A1 (es) 2021-06-04
MY201355A (en) 2024-02-20
EA202092749A1 (ru) 2021-06-23
CA3104839A1 (en) 2020-01-02
JP7347744B2 (ja) 2023-09-20
BR112020026431A2 (pt) 2021-03-30
CN112334129A (zh) 2021-02-05
EP3586837B1 (en) 2020-12-23
AU2019293293B2 (en) 2024-12-12
AU2019293293A1 (en) 2021-01-14
WO2020003013A1 (en) 2020-01-02
JP2021529731A (ja) 2021-11-04
SG11202012297XA (en) 2021-01-28
ES2858355T3 (es) 2021-09-30
IT201800006725A1 (it) 2019-12-27
EP3586837A1 (en) 2020-01-01
PL3586837T3 (pl) 2021-09-13
CY1124030T1 (el) 2022-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS61613B1 (sr) Kompozicije koje sadrže aminokiseline za upotrebu u prevenciji i lečenju bolesti jetre
Zamani-Garmsiri et al. Combination of metformin and genistein alleviates non-alcoholic fatty liver disease in high-fat diet-fed mice
Agca et al. Taurine ameliorates neuropathy via regulating NF-κB and Nrf2/HO-1 signaling cascades in diabetic rats
Luo et al. Kaempferol alleviates insulin resistance via hepatic IKK/NF-κB signal in type 2 diabetic rats
Norenberg Astrocytic-ammonia interactions in hepatic encephalopathy
Brzica et al. Oxalate: from the environment to kidney stones
Demiroren et al. Protective effects of L-carnitine, N-acetylcysteine and genistein in an experimental model of liver fibrosis
Shi et al. Acetaminophen aggravates fat accumulation in NAFLD by inhibiting autophagy via the AMPK/mTOR pathway
Suguro et al. Combinational applicaton of silybin and tangeretin attenuates the progression of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) in mice via modulating lipid metabolism
Zhang et al. Ginsenoside CK ameliorates hepatic lipid accumulation via activating the LKB1/AMPK pathway in vitro and in vivo
Abd Elwahab et al. A novel role of SIRT1/FGF-21 in taurine protection against cafeteria diet-induced steatohepatitis in rats
Wang et al. Aronia melanocarpa prevents alcohol‐induced chronic liver injury via regulation of Nrf2 signaling in C57BL/6 mice
Ahmad et al. Betaine attenuates pathology by stimulating lipid oxidation in liver and regulating phospholipid metabolism in brain of methionine‐choline–deficient rats
Kabil et al. Effect of ghrelin on chronic liver injury and fibrogenesis in male rats: possible role of nitric oxide
Pathak et al. Beneficial metabolic effects of dietary epigallocatechin gallate alone and in combination with exendin-4 in high fat diabetic mice
Han et al. (‐)‐Hydroxycitric acid nourishes protein synthesis via altering metabolic directions of amino acids in male rats
Yao et al. Corn peptides ameliorate nonalcoholic fatty liver disease by suppressing endoplasmic reticulum stress via the AMPKα/Sirt1 pathway in vivo and in vitro
Wang et al. Peptides from Antarctic krill (Euphausia superba) ameliorate acute liver injury in mice induced by carbon tetrachloride via activating the Nrf2/HO-1 pathway
Ramineedu et al. Thymoquinone mitigates obesity and diabetic parameters through regulation of major adipokines, key lipid metabolizing enzymes and AMPK/p-AMPK in diet-induced obese rats
Barakat et al. Effects of exendin-4 and selenium on the expression of GLP-1R, IRS-1, and preproinsulin in the pancreas of diabetic rats
Ye et al. Rose polyphenols exert antiobesity effect in high-fat–induced obese mice by regulating lipogenic gene expression
Pinto et al. Administration of aspartame potentiates pentylenetetrazole-and fluorothyl-induced seizures in mice
Wang et al. Effect of water caltrop (Trapa bispinosaRoxb.) pericarp extract on improving insulin resistance in STZ-induced diabetic mice
Miura et al. A novel amino acid mixture containing isoleucine, glycine, and cystine improves insulin sensitivity with restoring mitochondrial oxygen consumption in C2C12 myotubes
EA046528B1 (ru) Композиции, содержащие аминокислоты, для применения в предотвращении и лечении заболеваний печени