RS61723B1 - Imunogenične bordetella bronchiseptica kompozicije - Google Patents

Imunogenične bordetella bronchiseptica kompozicije

Info

Publication number
RS61723B1
RS61723B1 RS20210474A RSP20210474A RS61723B1 RS 61723 B1 RS61723 B1 RS 61723B1 RS 20210474 A RS20210474 A RS 20210474A RS P20210474 A RSP20210474 A RS P20210474A RS 61723 B1 RS61723 B1 RS 61723B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
canine
composition
immunogenic composition
use according
vaccine
Prior art date
Application number
RS20210474A
Other languages
English (en)
Inventor
Omar Yousif Abdelmagid
Joseph Michael Bricker
Shelly Lynn Shields
Jeffrey E Galvin
Original Assignee
Zoetis Services Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zoetis Services Llc filed Critical Zoetis Services Llc
Publication of RS61723B1 publication Critical patent/RS61723B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/099—Bordetella
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/098—Brucella
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/235—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bordetella (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K2039/10—Brucella; Bordetella, e.g. Bordetella pertussis; Not used, see subgroups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18611—Respirovirus, e.g. Bovine, human parainfluenza 1,3
    • C12N2760/18634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Opis
POLJE PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak je iz oblasti imunogeničnih i kompozicionih vakcina koje uključuju produkt Bordetella bronchiseptica bakterije u kombinaciji sa dodatno izolovanim Bordetella bronchiseptica p68 proteinom (pertaktin) za tretman ili prevenciju respiratornih bolesti kod pasa.
POREKLO PRONALASKA
[0002] Bordetella bronchiseptica je gram-negativna bakterija koja se razmnožava u respiratornom traktu pasa i izaziva traheobronihitis ili "odgajivački kašalj". Hawkins, E.C., Veterinary Internal Medicine (1995), pp.767-811. Bordetella bronchiseptica stvara uslove da psi budu podložni uticaju drugih respiratornih agenasa i često je prisutna zajedno sa njima. Do danas, raspoložive su brojne vakcine za tretman traheobronhitisa izazvanog Bordetella bronchiseptica, uključujući Nobivac®, Bronchi-Shield®, Bronchicine® CAe, Vanguard® B, Univac 2, Recombitek® KC2, Naramune™-2 i Kennel-Jec™ 2.
[0003] Međutim, većina postojećih komercijalnih vakcina zahteva složenu intranazalnu primenu kao i dodavanje adjuvansa, koji mogu da dovedu do štetnih neželjenih efekata, kao što su crvenilo i iritacija. Viera Scheibner i saradnici, Nexus Dec 2000 (Vol 8, No1).
Intranazalne vakcine su nepopularne u veterinarskoj praksi jer postoji rizik za veterinara da ga životinja povredi u toku primene vakcine. Podgrupe vakcina, kao što su one koje uključuju upotrebu p68 proteina Bordetella bronchiseptica (pertaktin), su istražene ali do danas nisu bile uključene ni u jednu komercijalnu vakcinu za pse, moguće zbog nedovoljne imunogeničnosti, reaktivnosti i/ili stabilnosti formulacije.
[0004] Bordetella bronchiseptica je značajan faktor u kompleksu infektivnih respiratornih bolesti pasa (CIRDC), koja je česta visoko zarazna bolest kod pasa koji se nalaze u pretrpanom smeštaju kao što su azili i odgajivačnice za boravak ili trening pasa. Smatra se da je patogeneza CIRDC povezana sa više faktora, uključujući nekoliko virusa i bakterija.
Infektivni agensi za koje se zna da su izazivači CIRDC uključuju, pored bakerije Bordetella bronchiseptica (Bemis i saradnici, Lab. Anim. Sci., 29:48-52, 1977), pseći respiratorni korona virus (CRCoV) (Erles i saradnici, Virology, 310(2):216-223, 2003), pseći influenca virus (CIV) (Crawford i saradnici, Science, 310(5747):482-485, 2005), pseći parainvluenca virus (CPIV) (Binn i saradnici, Exp. Biol. Med., 126:140-145, 1967), Mycoplasma cynos (Chalker i saradnici, Microbiology, 150:3491-3497, 2004) i pseći adenovirus serotip 2 (CAV-2) (Ditchfield i saradnici, Can. Vet. J., 3:238-247, 1962). WO2006/106424 opisuje vakcinu protiv odgajivačkog kašlja koja uključuje pertaktin p68 koji može da se kombinuje sa antigenom izdvojenim iz CDV, CAV-1, CAV-2, CPI, CCV, CPV ili leptospira.
US2004/0185062 (US 7,736,658) opisuje kombinovanu vakcinu koja uključuje pertaktin i antigen izdvojen iz CDV, CAV-1, CAV-2, CPI, CCV i/ili CPV. Do danas se nije pojavila sveobuhvatna kombinovana vakcina protiv svih, ili većine, prethodno pomenutih patogena.
[0005] U skladu sa tim, ostaje potreba za imunogeničnom kompozicijom sposobnom da se bezbedno parenteralno primeni na psima, koja obezbeđuje dugotrajnu imunološku zaštitu protiv Bordetella bronchiseptica bez štetnih neželjenih efekata ili uticaja na druge antigene u kombinovanoj vakcini ili dovodeći u rizik ordinirajućeg veterinara. Ovo otkriće ispunjava ove i druge slične potrebe.
KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA
[0006] U jednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje imunogeničnu kompoziciju za upotrebu u tretmanu ili prevenciji infekcije od psećih respiratornih patogena kod pasa, kompoziciju koja uključuje Bordetella bronchiseptica bakterin i dodati izolovani Bordetella bronchiseptica p68 protein, pri čemu je navedeni p68 prisutan u količini između 5 µg ±10% i 20 µg ±10%. U narednom aspektu otkrića, navedeni p68 antigen je rekombinantni protein. U narednom ostvarenju, navedena kompozicija dalje uključuje izolovani Bsp22 antigen.
[0007] Komponenta Bordetella bronchiseptica je bakterin. Navedena kompozicija ili ne sadrži adjuvans ili sadrži adjuvans.
[0008] Kako je ovde otkriveno, Bordetella bronchiseptica p68 protein (pertaktin antigen) je prisutan u količini između približno 1 µg i približno 30 µg. Još preciznije, u jednom ostvarenju navedeni pertaktin antigen je prisutan u količini između približno 5 µg i približno 20 mg. Čak još preciznije, navedeni pertaktin antigen je prisutan u količini između približno 7 µg i približno 15 µg, a čak još preciznije, približno 5 µg, 10 µg, 15 µg ili 20 µg. Naziv "približno" ima značenje koje je niže dato u definicijama. Preferirano, navedeni pertaktin antigen se izrađuje solubilizacijom pertaktin inkluzionih tela u urei i opciono prečišćavanjem hromatografijom na koloni. Navedeni pertaktin antigen je rastvorljiv i preferirano potpuno oslobođen od agregata.
[0009] Imunogenična kompozicija može da uključi više rekombinantnih p68 pertaktin antigena, pri čemu je navedena kompozicija u suštini bez p68 agregata. Još preciznije, navedeni različiti rekombinantni p68 pertaktin antigeni se izrađuju solubilizacijom pertaktin inkluzionih tela u urei i opciono, prečišćavanjem hromatografiom na koloni. Takođe su otkriveni postupci za izradu p68 pertaktin antigena solubilizacijom pertaktin inkluzionih tela u urei i opciono prečišćavanjem hromatografijom na koloni.
[0010] U narednom ostvarenju, navedena kompozicija je formulisana za parenteralnu primenu tako da ona dalje sadrži razblaživač ili podlogu za parenteralnu primenu na psu.
[0011] U narednom ostvarenju, navedena kompozicija dalje uključuje antigen iz psećeg respiratornog patogena izabranog iz grupe koja sadrži pseći parainfluenca virus (CPIV), pseći adenovirus-2 (CAV-2), pseći respiratorni korona virus (CRCoV) i pseći influenca virus (CIV). U još preciznijem ostvarenju, navedena kompozicija uključuje najmanje dva, tri ili četiri antigena od psećih respiratornih patogena.
[0012] U narednoj alternativi, ovde opisane imunogenične kompozicije ne uključuju nerespiratorne antigene. Prema tome, jedna alternativa obezbeđuje kompoziciju kako je ovde opisano uz uslov da ona ne uključuje ne-respiratorni antigen. Ne-respiratorni antigeni ne izazivaju respiratorne bolesti kod subjekta. Primeri ovakvih ne-respiratornih antigena uključuju ravia viruse, pseće parvoviruse, enteričke pseće korona viruse, Leptospira vrste i Borrelia burgdorferi.
[0013] U narednom ostvarenju, navedeni antigen je od psećeg respiratornog korona virusa (CRCoV). U narednom ostvarenju, navedeni antigen je od psećeg influenca virusa (CIV). U narednom ostvarenju, navedeni antigen je od psećeg parainfluenca virusa (CPIV). U narednom ostvarenju, navedeni antigen je od psećeg adenovirusa-2 (CAV-2). U narednom ostvarenju, navedeni antigen je od psećeg parainfluenca virusa (CPIV) i psećeg adenovirusa-2 (CAV-2).
[0014] U narednom ostvarenju, navedena kompozicija uključuje antigene od psećeg parainfluenca virusa (CPIV), psećeg adenovirusa-2 (CAV-2), psećeg respiratornog korona virusa (CRCoV) i psećeg influenca virusa (CIV).
[0015] Kompozicija izaziva imuni odgovor na Bordetella bronchiseptica i najmanje jedan od psećeg parainfluenca virusa (CPIV), psećeg adenovirusa-2 (CAV-2), psećeg respiratornog koronavirusa (CRCoV) i psećeg influenca virusa (CIV).
[0016] Naredni aspekt otkrića obezbeđuje imunogeničnu kompoziciju koja uključuje pseći respiratorni korona virus (CRCoV), Bordetella bronchiseptica bakterin, pseći influenca virus (CIV) i dodati izolovani Bordetella bronchiseptica p68 protein.
[0017] Ovaj pronalazak obezbeđuje imunogeničnu kompoziciju bilo kog od prethodno navedenih ostvarenja za upotrebu u tretmanu ili prevenciji infekcije od psećeg respiratornog patogena kod pasa. U narednom ostvarenju, navedena kompozicija sprečava infekciju od navedenog psećeg respiratornog patogena kod navedenog psa za period od 6 meseci ili duže. Isto tako, kompozicija sprečava infekciju od navedenog psećeg respiratornog patogena na navedenom psu za period od približno 1 godine.
[0018] U narednom ostvarenju, pseći respiratorni patogen je Bordetella bronchiseptica. U narednom ostvarenju, pseći respiratorni patogen dalje uključuje najmanje jedan, dva, tri ili četiri od: psećeg parainfluenca virusa (CPIV), psećeg adenovirusa-2 (CAV-2), psećeg respiratornog korona virusa (CRCoV) i psećeg influenca virusa (CIV).
[0019] Naredno ostvarenje ovog pronalaska obezbeđuje upotrebu imunogenične kompozicije bilo kog od prethodno datih ostvarenja za tretman ili prevenciju kompleksa psećih infektivnih respiratnih bolesti (CIRDC), pri čemu kompozicija tretira ili sprečava infekciju od više psećih respiratornih patogena. Naredno ostvarenje obezbeđuje upotrebu imunogenične kompozicije, kako je ovde opisano, za parenteralnu primenu na psu.
[0020] Ovde je takođe otkrivena proizvodnja medikamenta koji uključuje imunogeničnu kompoziciju za tretman ili prevenciju infekcije od psećeg respiratornog patogena kod pasa.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0021] U ovom otkriću se primenjuju niže date definicije. One zamenjuju bilo koje kontradiktorne definicije koje se ovde nalaze. Nedefinisane reči imaju značenja koja se uobičajeno koriste od strane stručnjaka sa iskustvom u tehnici. Osim toga, ukoliko u kontekstu nije drugačije zahtevano, nazivi u jednini treba da uključe množinu a nazivi u množini treba da uključe jedninu.
[0022] "Približno" ili "aproksimativno," kada se koriste u vezi sa merivim numeričkim promenljivim se odnose na navedenu vrednost promenljive i na sve vrednosti promenljive koje su u okviru eksperimentalne greške navedene vrednosti (na primer, u okviru 95% intervala pouzdanosti za prosek), ili u okviru 10 prosenata navedene vrednosti, koja god je veća. Ukoliko se "približno" koristi u vezi sa vremenskim intervalima u nedelji, "približno 3 nedelje" je 17 do 25 dana, a "približno 2 do približno 4 nedelje" je 10 do 40 dana.
[0023] "Adjuvans", kako se ovde koristi, se odnosi na bilo koju supstancu koja služi kao nespecifični stimulator imunog odgovora. Videti niže za dalji opis adjuvansa.
[0024] Naziv "životinja", kako se ovde koristi, uključuje bilo koju životinju koja je podložna infekciji sa Bordetella bronchiseptica i/ili kompleksom psećih respiratornih bolesti, uključujući sisare, i domaće i divlje. Preferirano, kako se ovde koristi, životinja se odnosi na pse ili ljude.
[0025] "Antitelo", kako se ovde koristi, je bilo koji polipeptid koji uključuje mesto vezivanja antigena nezavisno od izvora, načina stvaranja ili drugih karakteristika. Odnosi se na molekulu imunoglobulina ili njegove fragmente koji se specifično vezuju za antigen kao rezultat imunog odgovora na taj antigen. Imunoglobulini su proteini seruma sastavljeni od "lakih" i "teških" lanaca polipeptida koji imaju "konstantne" i "promenljive" regione i podeljeni su u klase (na primer, IgA, IgD, IgE, IgG i IgM) na osnovu kompozicije konstantnih regiona. Antitelo koje je "specifično" za dati antigen pokazuje da promenljivi regioni antitela prepoznaju i vezuju samo specifični antigen. Naziv uključuje, ali bez ograničenja na, poliklonalno antitelo, monoklonalno antitelo, monospecifično antitelo, polispecifično antitelo, humanizovano antitelo, tetramerno antitelo, tetravalentno antitelo, multispecifično antitelo, antitelo jednog lanca, domen-specifično antitelo, antitelo jednog domena, domen-deletirano antitelo, kondenzovani protein, ScFc kondenzovani protein, antitelo jednog lanca, himerično antitelo, sintetičko antitelo, rekombinantno antitelo, hibridno antitelo, mutirano antitelo i CDR-graftna antitela. Antitela mogu da budu intaktni imunoglobulini dobijeni iz prirodnih izvora ili iz rekombinantnih izvora ili mogu da budu imunoreaktivni delovi intaktnih imunoglobulina. "Antitelo" može da bude konvertovano u antigen-vezujući protein, koji uključuje, ali se ne ograničava samo na, fragmente antitela koji uključuju ali bez ograničenja na: Fab, F(((ab’)2, Fab’ fragment, Fv fragment, Fv (ScFv) fragment jednog lanca, Fd fragment, dAb fragment, diatela, CDR3 peptid, konstruisani FR3-CDR3-FR4 peptid, nanotelo, bivalentno nanotelo, mali modularni imunofarmaceutik (SMIPs), i mini telo i bilo koji od prethodno navedenih fragmenata i njihove hemijski i genetički izrađene pandane, kao i druge fragmente antitela koji zadržavaju antigen-vezujuću funkciju. Uobičajeno, ovakvi fragmenti treba da uključe antigen-vezujući domen. Kao što će stručnjaku sa iskustvom u tehnici biti jasno, bilo koja od ovih molekula može da se projektuje tako (na primer "germlined") da se smanji njihova imunogeničnost, poveća njihov afinitet, promeni njihova specifičnost ili za druge svrhe.
[0026] "Antigen" ili "imunogen", kako se ovde koristi, se odnosi na molekulu koja sadrži jedan ili više epitopa (ravan, konfomacioni ili oba) koji nakon izlaganja subjektu indukuje imuni odgovor koji je specifičan za taj antigen. Epitop je specifično mesto antigena koje se vezuje za receptor T-ćelije ili specifično antitelo i obično uključuje ostatke približno 3 amino kiseline do ostatke 20 amino kiselina. Naziv antigen se odnosi na podjedinicu antigeniantigeni odvojeno i izolovano od celog organizma sa kojim je antigen povezan u prirodi sve dok ne ubije, oslabi ili inaktivira bakterije, viruse, gljivice, parazite ili druge mikrobe. Naziv antigen se takođe odnosi na antitela kao što su anti-idiotip antitela ili njihove fragmente, i na sintetičke mimotope peptida koji mogu da oponašaju određeni antigen ili antigeničnu determinantu (epitop). Naziv antigen se takođe odnosi na oligonukleotid ili polinukleotid u kojima se ekspresuje antigen ili antigenična determinanta in vivo, kao što je u primeni DNK imunizacije.
[0027] "Antigeničnost", kako se ovde koristi, se odnosi na sposobnost proteina ili polipeptida da se imunospecifično veže sa antitelom nastalim protiv proteina ili polipeptida.
[0028] Naziv "Bordetella bronchiseptica" ili "B. bronchiseptica" se odnosi na: žive oslabljene bakterije Bordetella bronchiseptica, ekstrakt ubijene cele ćelije (bakterin) Bordetella bronchiseptica ili ćelijski ekstrakt bakterije Bordetella bronchiseptica.
[0029] "Pufer" označava hemijski sistem koji sprečava promenu u koncentraciji druge hemijske supstance. Sistemi donora i akceptora protona služe kao puferi, sprečavajući vidljive promene u koncentraciji jona vodonika (pH). Naredni primer pufera je rastvor koji sadrži smešu slabe kiseline i njene soli (konjugat baza), ili slabe baze i njene soli (konjugat kiseline).
[0030] "Pseći", kako se ovde koristi, obuhvata vrste koje se uobičajeno nazivaju psima, ali obuhvata i druge članove familije Canidae.
[0031] Naziv "ćelijska linija" ili "ćelija domaćin", kako se ovde koristi, označava prokariotičnu ili eukariotičnu ćeliju u kojoj virus može da se razmnožava ili održava.
[0032] Naziv "kultura", kako se ovde koristi, označava populaciju ćelija ili mikroorganizama koji rastu bez prisustva drugih vrsta ili tipova.
[0033] "Doza" se odnosi na vakcinu ili imunogeničnu kompoziciju datu subjektu. "Prva doza" ili "prajming doza" se odnosi na dozu takve kompozicije datu na dan 0. "Druga doza" ili "treća doza" ili "godišnja doza" se odnosi na količinu ovakve kompozicije datu nakon prve doze, koja može da bude ali nije obavezno, ista vakcina ili imunogenična kompozicija kao i prva doza.
[0034] "Epitop" je specifično mesto antigena koji se vezuje za receptor T-ćelije ili specifično antitelo i obično se sastoji od ostatka približno 3 amino kiseline ili ostataka približno 20 amino kiselina.
[0035] "Podloga", kako se ovde koristi, se odnosi na ne-reaktivnu komponentu nosača vakcine ili imunogenične kompozicije koja nije antigen. Preferirane podloge su one poznate u tehnici za parenteralne injekcije.
[0036] "Fragment" se odnosi na skraćeni deo proteina ili gena. "Funkcionalni fragment" i "biološki aktivni fragment" se odnosi na fragment koji zadržava biološke osobine proteina ili gena cele dužine.
[0037] "Homologija" ili "procenat homologije" se odnosi na procenat nukleotida ili ostataka amino kiseline u sekvenci kandidatu koji je identičan ili sličan sa ostacima u uporednoj sekvenci(ama) nakon poravnanja sekvenci i unošenja razlika, ukoliko je potrebno, da se postigne maksimalni procenat homologije sekvenci a takođe razmatrajući bilo koje konzervative supstitucije kao deo homologije sekvence.
[0038] "Homolozi" ili "vrste homologa" uključuju gene nađene u dve ili više različitih vrsta koji poseduju skoro potpuno homolognu sekvencu polinukleotida i imaju iste ili slične biološke funkcije i/ili osobine. Preferirane sekvence polinukleotida koje predstavljaju vrste homologa će hibridizovati pod umereno strogim uslovima, kako je ovde opisano u primerima, i imaju iste ili slične biološke aktivnosti i/ili osobine. U narednom aspektu, polinukleotidi koji predstavljaju vrste homologa će da dele više od približno 60% homologije sekvenci, više od približno 70% homologije sekvenci, više od približno 80% homologije sekvenci, više od približno 90% homologije sekvenci, više od približno 95% homologije sekvenci, više od približno 96% homologije sekvenci, više od približno 97% homologije sekvenci, više od približno 98% homologije sekvenci, ili više od približno 99% homologije sekvenci.
[0039] "Identičnost" ili "procenat identičnosti" se odnosi na procenat nukleotida ili amino kiselina u sekvenci kandidata koji je identičan sa ostacima u sekvenci komparatoru nakon poravnanja obe sekvence i unošenja razlika, ukoliko je potrebno, da se postigne maksimalni procenat identičnosti sekvence, a ne razmatraju se bilo kakve konzervativne supstitucije kao deo identičnosti sekvence.
[0040] "Imuni odgovor", kako se ovde koristi, u subjektu se odnosi na razvijanje humoralnog imunog odgovora, ćelijskog imunog odgovora ili humoralnog i ćelijskog imunog odgovora na antigen. "Humoralni imuni odgovor" se odnosi na onaj koji je bar delimično posredovan antitelima. "Ćelijski imuni odgovor" je onaj koji je posredovan T-limfocitima ili drugim ćelijama belih krvnih zrnaca ili oba i uključuje produkciju citokina, hemokina i sličnih molekula produkovanih aktiviranim T-ćelijama, ćelijama belih krvnih zrnaca ili oba. Imuni odgovori mogu da se odrede koristeći standardne imunoanalize i analize neutralizacije, koje su poznate u tehnici.
[0041] "Imunogeničnost", kako se ovde koristi, se odnosi na sposobnost proteina ili polipeptida da izazove imuni odgovor specifično usmeren protiv bakterije ili virusa koji izazivaju određenu bolest.
[0042] "Imunogenična kompozicija" je preparat koji sadrži imunogen, uključujući, na primer, protein, peptid, celu ćeliju, inaktivirani virus, podjedinicu ili oslabljeni virus ili polisaharid ili njihovu kombinaciju, primenjene da stimulišu humoralne ili ćelijske imune sisteme primaoca na jedan ili više antigena prisutnih u imunogeničnoj kompoziciji. "Imunizacija" je proces primene imunogenične kompozicije i stimulacije imunog ili imunogeničnog odgovora na antigen u domaćinu. Preferirani domaćini su sisari, kao što su psi. Preferirano, imunogenična kompozicija je vakcina.
[0043] "Imunološki zaštitna količina", kako se ovde koristi, je količina antigena efikasna da indukuje imunogenični odgovor u primaocu koji je dovoljan da spreči ili ublaži znake ili simptome bolesti, uključujući neželjene efekte po zdravlje ili njihove komplikacije. Mogu da se indukuju ili humoralni imunitet ili imunitet posredstvom ćelija ili oba. Imunogenični odgovor životinje na kompoziciju može da se proceni, na primer, indirektno merenjem titra antitela, ispitivanjem proliferacije limfocita, ili direktno praćenjem znakova i simptoma nakon nadražaja sa izvornim tipom soja. Zaštitni imunitet dobijen od kompozicije ili vakcine može da se proceni merenjem, na primer, smanjenjem nadražaja organizma, redukcijom kliničkih znakova kao što su mortalitet, morbiditet, temperatura i ukupno fizičko stanje, zdravlje i karakteristike subjekta. Imuni odgovor može da uključi, bez ograničenja, indukciju ćelijskog i/ili humoralnog imuniteta. Količina kompozicije ili vakcine koja je terapeutski efektivna može da varira u zavisnosti od određenog organizma koji se koristi ili stanja životinje koja se tretira ili vakciniše i može da je odredi veterinar.
[0044] "Intranazalna" primena, kako se ovde koristi, odnosi se na unošenje supstance, kao što je vakcina ili druga kompozicija, u organizam subjekta preko ili kroz nos i uključuje prenos supstance primarno kroz nosnu mukozu.
[0045] Naziv "izolovano" se odnosi na supstancu koja je ili u potpunosti u čistom obliku, na primer, više od približno 95% čistoće; ili je prečišćena ili obogaćena na neki način iz svoje prirodne sredine. Pozivanje na "izolovani pertaktin" ukazuje na pertaktin protein koji je izdvojen iz svoje prirodne sredine, na primer iz životinje/psa domaćina, u medijumu za rast ili prečišćen iz preparata cele ćelije Bordetella bronchiseptica i može nakon toga da se doda natrag u kompoziciju koja uključuje ekstrakt Bordetella bronchiseptica (na primer šiljak sa izolatima pertaktina). Naziv "izolovani" obuhvata imunogene koji su u rastvoru sa drugim sredstvima, razblaživačima, podlogama, adjuvansima, proteinima.
[0046] "Medicinsko sredstvo" se odnosi na bilo koje sredstvo koje je korisno u prevenciji, lečenju ili poboljšanju medicinskog stanja, ili prevenciji nekog fiziološkog stanja ili slučaja.
[0047] "Monoklonalno antitelo", kako se ovde koristi, odnosi se na antitela produkovana pojedinačnom linijom hibridoma ćelija, koji su svi usmereni ka jednom epitopu određenog antigena. Antigen korišćen za izradu monoklonalnog antitela može da se dobije kao izolovani protein patogena ili kao ceo patogen. "Hibridoma" je klonalna ćelijska linija koja se sastoji od hibrida ćelija formiranih kondenzacijom mijeloma ćelije i specifične antitelo-produkujuće ćelije. Generalno, monoklonalna antitela potiču od miševa. Međutim, monoklonalno antitelo se takođe odnosi na klonalnu populaciju antitela izrađenog protiv određenog epitopa antigena dobijenog tehnologijom ispoljavanja faga ili postupkom koji je ekvivalentan sa ispoljavanjem faga ili ćelija hibrida koje ne potiču od miševa.
[0048] "Oralna" ili "peroralna" primena, kako se ovde koristi, odnosi se na unošenje supstance, kao što je vakcina ili druga kompozicija, u telo primaoca kroz ili putem usta i uključuje gutanje ili transport kroz oralnu mukozu (na primer, sublingvalna ili bukalna apsorpcija) ili obe. Intratrahealno je takođe način oralne ili peroralne primene.
[0049] "Oronazalna" primena, kako se ovde koristi, odnosi se na unošenje supstance kao što su kompozicija ili vakcina, u organizam primaoca kroz ili putem nosa i usta, i sprovodi se, na primer, stavljanjem jedne ili više kapi u nos. Oronazalna primena uključuje procese transporta povezane sa oralnom i intranazalnom primenom.
[0050] "Parenteralna primena", kako se ovde koristi, odnosi se na unošenje supstance kao što su kompozicija ili vakcina, u organizam primaoca kroz ili putem rute koja ne uključuje digestivni trakt. Parenteralna primena obuhvata subkutanu, intramuskularnu, intraarterijalnu i intravenoznu primenu. U smislu ovog otkrića, parenteralna primena isključuje puteve primene
1
koji primarno uključuju prenos supstance kroz mukozno tkivo u ustima, nosu, traheji i plućima.
[0051] Naziv "patogen" ili "patoteni mikroorganizam", kako se ovde koristi, označava mikroorganizam, na primer, CPIV, CAV-2, CRCoV, Mycoplasma cynos, CIV, ili Bordetella bronchiseptica – koji je sposoban da indukuje ili izazove bolest, oboljenje ili nenormalno stanje kod životinje domaćina, preferirano respiratornu bolest kao što je CIRDC.
[0052] "Pertaktin", kako se ovde koristi, odnosi se na protein spoljašnje membrane Bordetella. Pertaktin je od B. bronchiseptica i to je "p68", i enkodiran je genom, prnA.
Pertaktin može da se izoluje u svom nativnom obliku iz Bordetella bronchiseptica, ili može da se izradi rekombinantno. Sekvence i primeri perktaktina su dati u U.S. Patentu broj 7,736,658. Ovde korišćeni antigen pertaktina uključuje lipidirane oblike proteina.
[0053] "Farmaceutski prihvatljiv" se odnosi na supstance koje su, u okviru razumne medicinske procene, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima subjekta bez neprikladne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora i slično, srazmerno prihvatljivom odnosu koristrizik, i koje su efikasne za namenjenu upotrebu
[0054] "Poliklonalno antitelo", kako se ovde koristi, odnosi se na smešu populacije antitela izrađenih protiv određenog patogena ili antigena. Generalno, populacija sadrži različite grupe antitela, a svaka grupa je usmerena ka određenom epitopu patogena ili antigena. Za izradu poliklonalnih antitela, ceo patogen ili izolovani antigen se inokulacijom ili infekcijom unosi u domaćina što izazove domaćina da stvara antitela protiv patogena ili antigena.
[0055] Naziv "polinukleotid", kako se ovde koristi, označava molekulu organskog polimera sastavljenu od monomera nukleotida kovalentno vezanih u lanac. DNK (deoksiribonukleinska kiselina) i RNK (ribonukleinska kiselina) su primeri polinukleotida sa karakterističnom biološkom funkcijom.
[0056] Naziv "polipeptid", kako se ovde koristi, označava molekulu organskog polimera sastavljenu od dve ili više amino kiselina vezanih u lanac.
[0057] "Prevencija infekcije", kako se ovde koristi, označava sprečavanje ili inhibiciju replikacije bakterija ili virusa koji izazivaju navedenu bolest, inhibiciju transmisije bakterija ili virusa, prevenciju bakterija ili virusa da zauzmu mesta u domaćinu ili ublažavanje simptoma bolesti izazvanih infekcijom. Tretman se smatra terapeutskim ukoliko dovodi do redukcije bakterijskog ili virusnog opterećenja.
[0058] "Zaštita", "protekcija", "zaštitni imunitet", i slično, kako se ovde koristi u vezi sa vakcinom ili drugom kompozicijom, označava da vakcina ili kompozicija sprečava ili smanjuje simptome bolesti izazvane organizmom iz koga potiče antigen(i) korišćen u vakcini ili kompoziciji. Nazivi "zaštita", "protekcija", ili slično, takođe označavaju da vakcina ili kompozicija mogu da se koriste za "lečenje" bolesti, ili jednog ili više simptoma bolesti koja već postoji u subjektu.
[0059] "Respiratorna" primena, kako se ovde koristi, odnosi se na unošenje supstnce kao što su vakcina ili druga kompozicija, u organizam primaoca kroz ili putem inhalacije nebulizirane (atomizirane) supstance. Pri raspiratornoj primeni, primarni mehanizam transporta uključuje apsorpciju atomizirane supstance kroz mukozu u traheji, bronhijama i plućima i po tome se razlikuje od intranazalne ili peroralne primene.
[0060] Nazivi "specifično vezivanje," "specifične veze," i slično, se definišu kao dve ili više molekula koje formiraju kompleks koji je meriv pod fiziološkim ili uslovima ispitivanja i koji je selektivan. Za antitelo ili drugi inhibitor se kaže da je "specifično vezan" za protein ukoliko, pod odgovarajuće izabranim uslovima, takvo vezivanje nije odmah nakon toga inhibirano, dok je u isto vreme ne-specifično vezivanje inhibirano. Specifično vezivanje se karakteriše velikim afinitetom i selektivno je za jedinjenje ili protein. Nespecifično vezivanje obično ima mali afinitet. Vezivanje u IgG antitelima, na primer, se generalno karakteriše sa afinitetom od najmanje približno 10<-7>M ili veće, kao što je najmanje približno 10<-8>M ili veće, ili najmanje približno 10<-9>M ili veće, ili najmanje približno 10<-10>ili veće, ili najmanje približno 10<-11>M ili veće, ili najmanje približno 10<-12>M ili veće. Naziv se takođe primenjuje u slučaju kada je, na primer, antigen-vezujući domen specifičan za određeni epitop do čega ne dolazi sa brojnim antigenima, pri čemu antitelo koje nosi antigen-vezujući domen generalno neće da veže druge antigene.
[0061] "Specifični imunogenični fragment", kako se ovde koristi, odnosi se na deo sekvence koji je prepoznatljiv za antitelo ili T ćelije specifične za tu sekvencu.
[0062] "Subjekt", kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koju životinju koja ima imuni sistem, što uključuje sisare kao što su psi.
[0063] "Potpuno identični", kako se ovde koristi, odnosi se na stepen identičnosti sekvence od najmanje približno 90%, najmanje približno 95%, najmanje približno 96%, najmanje približno 97%, najmanje približno 98%, ili najmanje približno 99%.
[0064] "Subjedinične vakcina" i "subjedinična kompozicija", kako se ovde koristi, se odnosi na tip vakcine ili kompozicije koja uključuje antigen ali ne sve antigene koji su dobijeni od ili koji su homologni sa antigenima patogena od interesa, kao što su virusi, bakterije, paraziti i gljivice. Ovakva kompozicija ili vakcina je skoro potpuno oslobođena intaktnih patogenih ćelija ili patogenih čestica ili lizata tih ćelija ili čestica. Prema tome, subjedinična vakcina ili subjedinična kompozicija može da se izradi od najmanje delimično prečišćenih ili skoro potpuno prečišćenih imunogeničnih polipeptida iz patogena ili njihovih analoga. Postupci za dobijanje antigena u subjediničnoj vakcini ili subjediničnoj kompoziciji uključuju standardne tehnike prečišćavanja, rekombinantne produkcije ili tehnike hemijskih sinteza. "Subjedinična vakcina" i "subjedinična kompozicija" se prema tome odnosi na vakcinu ili kompoziciju koja se sastoji od definisane antigenične komponente ili komponenti virusa, bakterija ili drugih imunogena.
[0065] "TCID50" se odnosi na "infektivnu dozu kulture tkiva" i definiše se kao ono razblaženje virusa potrebno da inficira 50% date količine inokuliranih ćelijskih kultura. Za izračunavanje TCID50, mogu da se koriste različiti postupci, uključujući Spearman-Karber postupak, koji se koristi u ovoj specifikaciji. Za opis Spearman-Karber postupka, videti B. W. Mahy & H. O. Kangro, Virology Methods Manual 25-46 (1996).
[0066] "Terapeutsko sredstvo", kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koju molekulu, jedinjenje, virus ili tretman, preferirano oslabljen ili umrtvljen virus ili subjedinicu ili jedinjenje, koje pomaže u tretmanu virusne, bakterijske, parazitne ili gljivične infekcije, bolesti ili stanja koje izazivaju.
[0067] "Terapeutski efektivna količina", kako se ovde koristi, odnosi se na količinu antigena ili vakcine ili kompozicije koja treba da indukuje imuni odgovor u subjektu (na primer, psu) koji je primio antigen ili vakcinu ili kompoziciju koja je adekvatna da spreči ili popravi znake ili simptome bolesti, uključujući njihova neželjena dejstva ili komplikacije, izazvane infekcijom sa patogenom kao što su virusi, bakterije, paraziti ili gljivice. Mogu da budu indukovani humoralni imunitet ili imunitet posredstvom ćelija ili oba, humoralni i imunitet posredstvom ćelija. Imunogeni odgovor životinje na antigen, vakcinu ili kompoziciju može da se proceni indirektno merenjem titra antitela, ispitivanjem proliferacije limfocita ili direktno praćenjem znakova i simptoma nakon nadražaja sa sojem izvornog tipa. Zaštitni imunitet dobijen vakcinom ili kompozicijom može da se proceni merenjem smanjenja nadražaja i/ili smanjenjem kliničkih znakova kao što su mortalitet, morbiditet, temperatura i ukupno fizičko stanje, zdravlje i osobine subjekta. Količina vakcine ili kompozicije koja je terapeutski efikasna može da varira u zavisnosti od određenog upotrebljenog imunogena ili stanja subjekta i može da je odredi stručnjak sa iskustvom u tehnici.
[0068] "Lečiti" ili "tretirati", kako se ovde koristi, odnosi se na preobražaj, poboljšanje, inhibiciju progresa ili prevenciju poremećaja, stanja ili bolesti na koje se ovakav naziv odnosi
1
ili na prevenciju jednog ili više simptoma ovakvog poremećaja, stanja ili bolesti.
[0069] "Tretman", kako se ovde koristi, odnosi se na čin "lečenja", kako je neposredno prethodno definisano.
[0070] "Vakcina" ili "kompoziciona vakcina," kako se ovde koristi, odnosi se na imunogeničnu kompoziciju izabranu od virusa ili bakterija, ili živih modifikovanih, oslabljenih ili umrtvljenih ili na subjediničnu vakcinu ili bilo koju kombinaciju prethodno navedenih. Primena vakcine na subjektu dovodi do imunog odgovora. Vakcina može da se unese direktno u subjekt poznatim načinom primene, uključujući parenteralno, peroralno i slično. Nazivi označavaju kompoziciju koja sprečava ili smanjuje infekciju ili koja sprečava ili smanjuje jedan ili više znakova ili simptoma infekcije. Zaštitni efekti kompozicione vakcine protiv patogena se normalno postižu indukovanjem imunog odgovora u subjektu. Generalno govoreći, ukidanje ili smanjenje incidenci od infekcije, popravljanje znakova ili simptoma ili ubrazanje eliminacije mikroorganizma iz inficiranih subjekata su indikativni zaštitni efekti kompozicione vakcine. Kompozicione vakcine koje su ovde otkrivene obezbeđuju zaštitne efekte protiv infekcija izazvanih patogenima psećih respiratornih bolesti.
[0071] "Veterinarski prihvatljiv", kako se ovde koristi, odnosi se na supstance koje su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima veterinarskih subjekata bez neželjene toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora i slično, u okviru prihvatljivog odnosa koristi prema riziku, i koje su efikasne za namenjenu upotrebu.
[0072] "Veterinarski prihvatljiv nosač", kako se ovde koristi, odnosi se na nosač koji ne ometa efikasnost biološke aktivnosti aktivnog sastojka i nije toksičan za veterinarski subjekt na kome se primenjuje.
Antigeni, imunogenične kompozicije i vakcine
[0073] Ovo otkriće se zasniva na neočekivanom pronalasku da uključivanje izolovanih pertaktin antigena u konjukciji sa preparatom Bordetella bronchiseptica bakterinom dovodi do značajno unapređene efikasnosti i bezbednosti. To jest, kada se primeni parenteralno na psu pre nadražaja bakterijom, kompozicija sprečava početak traheobronhitisa a ne dovodi do neželjenih efekata.
[0074] Kako je prethodno navedeno, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje imunogenične kompozicije koje su pogodne za primenu na psima za tretman protiv CIRDC. Pseći respiratorni korona virus (CRCoV) za upotrebu u ovom pronalasku može da se karakteriše kao koronavorus prisutan u respiratornom traktu kod pasa sa infektivnom respiratornom bolešću. CRCoV je filogenetski najpribližniji goveđem koronavirus (BCoV), humanom koronavirus (HCoV) soju OC43 i hemoglutinirajućem encefalomijelitis virusu (HEV); enterički pseći koronavirus (CCoV) je delimično povezan sa CRCoV. Reprezentativni primer CRCoV pogodan za upotrebu u ovom pronalasku uključuje soj identifikovan kao CRCoV soj 4182 (Erles i saradnici, Virus Res., 124:78-87, 2007).
[0075] Influenca virus antigeni mogu da budu bilo koji identifikovani soj influenca virusa, od bilo koje ptice ili sisara, uključujući influenca virus koji ima subtip H3 hemaglutinin i subtip N8 neuraminidazu, ili H3N8 subtip, najčešće se dovodi u vezu sa H3N8 virusom. Influenca može da potiče od sisara ili ptica, uključujući poreklo od svinja, konja ili pasa. U jednom ostvarenju se koristi pseći influenca antigen. Alternativno se koristi konjski influenca antigen ili se koristi soj koji ima subtip glikoproteina označenih kao H3 ili N8, ili se koristi soj koji ima oba subtipa H3 i N8 glikoproteine.
[0076] Influenca antigeni mogu da se izoluju od pasa, konja, svinja i živine, i domaćih i divljih. Životinje izabrane za uzimanje uzoraka treba da ispoljavaju akutne i/ili subakutne kliničke sindrome, što može da uključi blage do teške respiratorne simptome i groznicu. Životinje takođe treba da pokazuju znake anoreksije i letargije. Postupci izolovanja virusa su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici i uključuju: inokulaciju ćelijskih kultura sisara ili ptica, inokulaciju oplođenih jaja sa uzorcima nazalne ili farengijalne mukoze od kliničkih uzoraka, sakupljanje briseva iz nosne šupljine ili grla, ili uzimanjem tkiva kao što su slezina, pluća, krajnici i jetra i lavaže pluća. Citopatogeni efekat virusa može da se uoči u ćelijskoj kulturi. Alantoiska tečnost ili lizati ćelija mogu da se testiraju na sposobnost da aglutiniraju ćelije crvenih krvnih zrnaca ljudi, kokošaka, ćurki ili zamoraca, pretpostavljeni dokaz prisustva influenca virusa.
[0077] Reprezentativni primer soja psećeg influenca virusa (CIV) pogodnog za korišćenje u ovom pronalasku uključuje soj označen kao A/canine/lowa/9A1/B5/08/D12, koji je deponovan kao PTA-7694 29. juna 2006., u American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209. Reprezentativni soj CIV antigena je soj CIV virusa u komercijalnoj vakcini, Vanguard® CIV (Pfizer). Ovaj pronalazak takođe obuhvata vakcine koje sadrže soj označen kao konjski influenca soj A/Equine/2/Miami/1/63. Ovaj soj je deponovan u ATCC, sa pristupnim brojem VR 317. Drugi primeri influenca virusa su A/canine/lowa/13628/2005, A/Equine/Kentucky/1998, A/Equine/Kentucky/15/2002, A/Equine/Ohio/1/2003, A/Equine/Kentucky/1/1994, A/Equine/Massachusetts/213/2003,
1
A/Equine/Wisconsin/2003, A/Equine/NewYork/1999, i A/Equine/Newmarket/A2/1993. Drugi preferirani sojevi i/ili izolati CIV uključuju one koji su otkriveni u U.S. Patentu broj 7,959,929 (posebno sojevi i HA sekvence ovde identifikovane kao Jacksonville/2005, Miami/2005, FL/242/03 i Florida/43/04), 7,384,642, 7,572,620 i 7,468,187. Pored toga, CIV soj pogodan za upotrebu u ovom pronalasku uključuje Colorado CIV izolat kako su opisali Barrell i saradnici, J. Vet. Intern. Med., 24 (6), 1524-1527 (2010), koji ima pristupni broj ADW41784.
[0078] Pseći parainfluenca virus (CPIV) za upotrebu u ovom pronalasku može da se okarakteriše kao jedan od virusa za koji se zna da je uzročnik povezan sa odgajivačkim kašljem. Reprezentativni soj CPIV antigena je oslabljeni soj CPI virusa u komercijalnoj vakcini, Vanguard® Plus 5 (Pfizer). Drugi reprezentativni soj CPIV antigena je oslabljeni soj CPI virusa označen kao "NL-CPI-5" (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA).
[0079] Pseći adenovirus, tip 2 (CAV-2) za upotrebu u ovom pronalasku može da se okarakteriše kao jedan od virusa za koje se zna da je uzročnik povezan sa odgajivačkim kašljem. Reprezentativni soj CAV-2 antigena je oslabljeni soj CAV-2 virusa u komercijalnoj vakcini, Vanguard® Plus 5 (Pfizer). Reprezentativni soj CAV- 2 antigena je oslabljeni CAV-2 soj ozačen kao "Manhattan" soj (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA).
[0080] Mycoplasma cynos (M. cynos) za upotrebu u ovom pronalasku su opisali Chalker i saradnici, Microbiology, 150:3491-3497, 2004 i predstavlja jedinu vrstu mikoplazme koja se često povezuje sa respiratonim bolestima. Imunogenične kompozicije protiv M. cynos su opisane u US 2007/0098739.
[0081] Bordetella bronchiseptica komponenta za upotrebu u ovom pronalasku može da se okarakteriše kao bakterijski uzročnik povezan sa odgajivačkim kašljem. Imunogenične kompozicije iz ovog pronalaska uključuju Bordetella bronchiseptica bakterin. Pored toga, kompozicija preferirano takođe uključuje izolovani subjedinični antigen koji je Bordetella bronchiseptica p68 protein.
[0082] Bordetella bronchiseptica može da se izradi kao sonikat cele ćelije prečišćen hromatografijom na koloni kako je navedeno u Patentnoj prijavi broj FR2571618, podnetoj 12. oktobra 1984. Naredni reprezentativni primer Bordetella bronchiseptica je bakterijski ekstrakt Bronchicine™ CAe (Pfizer), koji je izrađen od antigenskog materijala ekstrahovanog od ćelija Bordetella bronchiseptica. Naredni primer Bordetella bronchiseptica je živi oslabljeni bronchiseptica soj B-C2 prisutan u Nobivac® i/ili živi bronchiseptica soj iz Intra-Trac®, Bronchi-Shield®, Naramune™, Recombitek®, Univac, i/ili Kennel-Jec™.
1
[0083] Pored toga, takođe je preferirano prisutna subjedinica (to jest, obogaćena), u kombinaciji sa Bordetella bronchiseptica komponentom. Reprezentativni primer subjedinice je izolovani pertaktin antigen, preferirano, Bordetella bronchiseptica p68 antigen, posebno rekombinantni Bordetella bronchiseptica p68 antigen koji se prepoznaje pomoću p68-specifičnog monoklonalnog antitela Bord 2-7 (opisano u US 7,736,658) i u jednom preferiranom ostvarenju ima sekvencu amino kiseline kako je navedeno u US 7,736,658 ili koji ima njen homolog.
[0084] Rekombinantni p68 pertaktin antigen je preferirano izrađen u rastvorljivom obliku, tako da je u toku izrade sačuvana ili obnovljena struktura slična izvornoj i uglavnom je oslobođena (manje od približno 80%, 90%, 95% ili čak 99%) od agregata. Alternativno, rekombinantni p68 pertaktin je solubilizovan sa ureom, preferirano približno sa 0.1 M, 0.5 M, 1 M, 2 M, 3 M ili 6 M rastvorom uree. Prema tome, p68 antigen može da bude prečišćen, na primer hromatografijom na koloni. Jedan ovakav proces solubilizacije su opisali Surinder i saradnici, J. Bioscience and Bioengineering, v. 99(4), pgs 303-310 (2005).
[0085] Ovde korišćeni pertaktin antigeni takođe uključuju lipidirane oblike. Primere izrade lipidiranih proteina su dali Erdile i saradnici, Infection and Immunity, (1993) v.61(1) p.81-90. Postupci koji su ovde otkriveni mogu da se koriste za izradu posttranslaciono modifikovanih pertaktin proteina koji sadrži vezani lipid radikal.
[0086] Osim toga, u narednom ostvarenju, imunogenična kompozicija sadrži Bordetella bronchiseptica bakterin i dodati izolovani Bordetella bronchiseptica p68 protein i još izolovani Bsp22 antigen. Bsp22 antigen može da se izradi kako su opisali Medhekar i saradnici, Molecular Microbiology (2009) 71(2), 492-504. "Bsp22" takođe uključuje lipidirane oblike antigena. Primere za izradu lipidiranih proteina su dali Erdile i saradnici, Infection and Immunity, (1993) v.61(1) p.81-90. Postupci koje su oni otkrili mogu da se koriste za izradu posttranslaciono modifikovanih Bsp22 proteina koji sadrže vezani lipid radikal.
[0087] Virusi obuhvaćeni ovim pronalaskom mogu da se razmnožavaju u ćelijama, ćelijskim linijama i ćelijama domaćina. Navedene ćelije, ćelijske linije ili ćelije domaćini mogu da budu, na primer, ali bez ograničenja na, ćelije sisara ili ćelije drugih vrsta, uključujući insekte i ćelije biljaka. Ćelije, ćelijske linije i ćelije domaćini u kojima mogu da se razmnožavaju virusi za upotrebu u ovom pronalasku su dobro poznate i pristupačne stručnjaku sa uobičajenimi iskustvom u tehnici.
[0088] Bakterije obuhvaćene ovim pronalaskom mogu da se uzgajaju i razmnožavaju u
1
različitim medijumima za kulturu poznatim stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici, uključujući i bujon (tečni) i agar (čvrsti; polu-čvrsti) medijum za uzgajanje. Neke bakterije mogu takođe da se uzgajaju i razmnožavaju u ćelijama sisara ili ćelijama drugih životinja.
[0089] Virusi i bakterije za upotrebu u ovom pronalasku mogu da budu oslabljeni ili inaktivirani pre upotrebe u imunogeničnoj kompoziciji ili vakcini. Postupci za slabljenje i inaktivaciju su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Postupci za slabljenje uključuju, ali bez ograničenja na, serijsko propuštanje ćelijske kulture na odgovarajućoj ćelijskoj liniji (virusi i neke bakterije), serijsko propuštanje u bujonu kulture (bakterije), ultravioletno zračenje (virusi i bakterije) i hemijske mutageneze (virusi i bakterije). Postupci za inaktivaciju virusa ili bakterija uključuju, ali bez ograničenja na, tretman sa formalinom, betapropriolaktonom (BPL) ili binarnim etileniminom (BEI), ili druge postupke poznate stručnjaku sa iskustvom u tehnici.
[0090] Inaktivacija formalinom može da se izvede mešanjem suspenzije koja sadrži mikroorganizam sa 37% formaldehidom do finalne koncentracije formaldehida od 0.5%. Smeša mikroorganizam-formaldehid se izmeša konstantnim mešanjem u toku približno 24 sata na sobnoj temperaturi. Smeša inaktiviranog mikroorganizma se nakon toga testira na preostale žive organizme ispitivanjem rasta na odgovarajućoj ćelijskoj liniji ili medijumu bujona.
[0091] Za neke antigene, inaktivacija sa BEI može da se izvrši mešanjem suspenzije koja sadrži mikroorganizam iz ovog pronalaska sa 0.1 M BEI (2-bromo-etilamin u 0.175 N NaOH) do finalne koncentracije BEI od 1 mM. Za druge antigene, finalna koncentracija BEI je 2 mM. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će znati da upotrebi odgovarajuću koncentraciju. Smeša virus-BEI se izmeša konstantnim mešanjem u toku približno 48 h na sobnoj temperaturi, a nakon toga se dodaje 1.0 M rastvor natrijum thiosulfata do finalne koncentracije od 0.1 mM. Mešanje se nastavi još dva sata. Smeša koja sadrži inaktivirani mikoorganizam se testira na preostali živi virus ispitivanjem rasta na pogodnoj ćelijskoj liniji ili u bujon medijumu.
[0092] Imunogenične kompozicije (i vakcine) obuhvaćene ovim pronalaskom mogu da uključe jedan ili više veterinarski prihvatljivih nosača. Kako se ovde koristi, "veterinarski prihvatljiv nosač" obuhvata bilo koji i sve rastvarače, disperzione medijume, sredstva za oblaganje, adjuvanse, sredstva za stabilizaciju, razblaživače, konzervanse, antibakterijska i antifungalna sredstva, izotonična sredstva, sredstva za odlaganje apsorpcije i slično.
Razblaživači mogu da uključe vodu, rastvore soli, dekstrozu, etanol, glicerol i slično.
Izotonična sredstva mogu da uključe natrijum hlorid, dekstrozu, manitol, sorbitol i laktozu,
1
između ostalih, poznatih stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Stabilizatori uključuju albumin, između ostalih, poznatih stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Konzervansi uključuju mertiolat, između ostalih, poznatih stručnjaku sa iskustvom u tehnici.
[0093] Adjuvans može da bude metabolišući, što se odnosi na adjuvanse koji sadrže komponente koje mogu da metabolišu ciljane vrste, kao što su adjuvansi na bazi biljnog ulja. Metabolišući adjuvans može da bude metabolišuće ulje. Metabolišuća ulja su masti i ulja koja se obično dobijaju iz biljaka i životinja i obično uglavnom sadrže smeše triacilglicerola, takođe poznate kao trigliceridi, ili neutralne masti. Ove nepolarne, u vodi nerastvorljive supstance, su triestri glicerola sa masnim kiselinama. Triacilgliceroli se razlikuju prema identitetu i položaju ostataka ili bočnih lanaca njihove tri masne kiseline.
[0094] Adjuvans takođe može da bude ne-metabolišući, što se odnosi na adjuvanse koji sadrže komponente koje organizam životinjskog subjekta na kome je primenjena emulzija ne može da metaboliše. Ne-metabolišuća ulja pogodna za upotrebu u kompozicijama iz ovog pronalaska uključuju alkane, alkene, alkine, i njihove odgovarajuće kiseline i alkhole, njihove etre i estre i njihove smeše. Preferirano, pojedinačna jedinjenja ulja su laka uljovodonična jedinjenja, to jest, takve komponente koje imaju 6 do 30 atoma ugljenika. Ulje može da se izradi sintetički ili prečisti iz produkata nafte. Preferirana ne-metabolišuća ulja za upotrebu u ovde opisanim kompozicijama uključuju, na primer, mineralno ulje, parafinsko ulje i cikloparafine. Naziv "mineralno ulje" se odnosi na ne-metabolišuće adjuvantno ulje koje je smeša tečnih uljgovodonika dobijenih destilacijom iz vazelina. Naziv je sinonim sa "tečnim parafinom", "tečnim vazelinom" i "belim mineralnim uljem." Naziv takođe treba da uključi "lako mineralno ulje," to jest, ulje koje se takođe dobija destilacijom vazelina ali koje ima nešto manju specifičnu težinu nego belo mineralno ulje. Mineralno ulje može da se dobije iz različitih komercijalnih izvora, na primer, J.T. Baker (Phillipsburg, PA), USB Corporation (Cleveland, OH). Lako mineralno ulje se na tržištu nalazi pod nazivom DRAKEOL®.
[0095] Ajuvansi uključuju Emulsigen adjuvans sistem (MVP Laboratories; Ralston, NE), RIBI adjuvans sistem (Ribi Inc.; Hamilton, MT), alum, aluminijum hidroksid gel, emulzije ulje-u-vodi, emulzije voda-u-ulju kao što su, na primer, Freund-ov komplet i nekompletirani adjuvansi, Block kopolimer (CytRx; Atlanta, GA), SAF-M (Chiron; Emeryville, CA), AMPHIGEN® adjuvans, saponin, Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc.; Cambridge, MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc.; Birmingham, AL) ili druge saponinske frakcije, monofosforil lipid A, Avridine lipid-amin adjuvans, toplotno-labilni enterotoksin iz E. coli (rekombinantni ili na drugi način), kolera toksin, muramil dipeptid, skvalen/pluronik blok
1
kopolimer/surfaktant (SP-ulje), sulfolipobeta-ciklodekstrin (SL-CD), lipozomi koji sadrže imunomodulator (na primer, CpG ili poli I:C), muramil dipeptid (MDP), iskomatriks (Quil A/fosfotidil holin), CpG/DEAE-dekstran/mineralno ulje (TXO), CpG, triterpenoidi (na primer, Quil A ili prečišćeni ili delimično prečišćeni preparati saponina), steroli (na primer, holesterol), imunomodulatorska sredstva (na primer, dimetil dioktadecil amonijum bromid -DDA), polimeri (na primer, poliakrilna kiselina kao što je CARBOPOL®) i Th2 stimulansi (na primer, glikolipidi kao što je Bay R1005®), i njihove kombinacije, između brojnih drugih adjuvanasa poznatih stručnjaku sa iskustvom u tehnici.
[0096] Primeri različitih kombinacija koje mogu da se koriste uključuju triterpenoid plus sterol (na primer, Quil A/holesterol, takođe poznat kao QAC), triterpenoid plus sterol, imunomodulatorno sredstvo, i polimer (na primer, Quil/holesterol/DDA/CARBOPOL®, takođe poznat kao QCDC), i triterpenoid plus sterol, imunomodulatorno sredstvo, polimer i Th2 stimulans (na primer, Quil A/holesterol/DDA/CARBOPOL®, i Bay R1005®, takođe poznat kao QCDCR).
[0097] Količine i koncentracije adjuvanasa i aditiva korisne u kontekstu ovog pronalaska, stručnjak sa iskustvom u tehnici može lako da odredi. Imunogenične kompozicije i vakcine mogu da uključe od približno 20 µg do približno 2000 µg adjuvansa. Alternativno, adjuvans je prisutan u količini od približno 100 µg do približno 1500 µg, ili od približno 250 µg do približno 1000 µg, ili od približno 350 µg do približno 750 µg. U narednoj alternativi, adjuvans je prisutan u količini od približno 500 µg /2 ml doze imunogenične kompozicije ili vakcine.
[0098] Imunogenične kompozicije i vakcine mogu takođe da uključe antibiotike. Ovakvi antibiotici uključuju antibiotike iz grupe aminoglikozida, karbapenema, cefalosporina, glikopeptida, makrolida, penicilina, polipeptida, hinolona, sulfonamida i tetraciklina.
Imunogenične kompozicije i vakcine mogu da uključe od približno 1 µg/ml do približno 60 µg/ml antibiotika. Alternativno, imunogenične kompozicije i vakcine mogu da uključe od približno 5 µg/ml do približno 55 µg/ml antibiotika, ili od približno 10 µg/ml do približno 50 µg/ml antibiotika, ili od približno 15 µg/ml do približno 45 µg/ml antibiotika, ili od približno 20 µg/ml do približno 40 µg/ml antibiotika, ili od približno 25 µg/ml do približno 35 µg/ml antibiotika. Osim toga, imunogenične kompozicije i vakcine mogu da uključe manje od približno 30 µg/ml antibiotika.
[0099] Imunogenične kompozicije (i vakcine) obuhvaćene ovim pronalaskom mogu da uključe jednu ili više molekula polinukleotida enkodiranih za virus ili bakteriju ili protein
2
virusa ili bakterije. DNK ili RNK molekule mogu da se koriste u imunogeničnim kompozicijama ili vakcinama. DNK ili RNK molekula može da se primeni bez drugih sredstava, ili može da se primeni zajedno sa sredstvom koje omogućava ćelijsko preuzimanje (na primer, lipozomi ili katjonski lipidi). Ukupna količna polinukleotida u imunogeničnoj kompoziciji ili vakcini je generalno između približno 0.1 µg/ml i približno 5.0 µg/ml ili od približno 1 µg/ml i približno 4.0 µg/ml, ili od približno 10 µg/ml približno 3.0 mg/ml, ili od približno 100 µg/ml i približno 2.0 mg/ml. Vakcine i procedure vakcinacije koje koriste nukleinske kiseline (DNK ili mRNK) su dobro opisane u tehnici, na primer, u U. S. Pat. No.
5,703,055, U.S. Pat. No.5,580,859, U.S. Pat. No.5,589,466.
[0100] Pored prethodno opisanih virusa ili bakterija, imunogenične kompozicije (i vakcine) obuhvaćene ovim pronalaskom mogu da uključe i druge dodatne antigene. Antigeni mogu da budu u obliku inaktiviranih celih ili delova izrađenih mikroorganizama, ili u obliku antigeničnih molekula dobijenih tehnikama genetskog inžinjeringa ili hemijskim sintezama. Drugi antigeni pogodni za upotrebu u skladu sa ovim pronalaskom uključuju antigene dobijene od patogenih virusa kao što je pseći virus kuge, pseći herpes virus, pseći influenca virus, rabies virus, patogenih bakterija kao što su Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona, Leptospira hardjobovis, Porphyromonas spp., Bacteriodes spp., Borrelia spp., Streptococcus spp., uključujući Streptococcus equi subvrste zooepidemicus, Ehrlichia spp., Mycoplasma spp., uključujući Mycoplasma cynos, i Microsporum canis. antigeni mogu takođe da se dobiju od patogenih gljivica kao što je Candida, protozoa kao što su Cryptosporidium parvum, Neospora caninum, Toxoplasma gondii, Eimeria spp., Babesia spp., Giardia spp., Leishmania spp., ili crva kao što su Taenia, Cuterebra, Echinococcus, i Paragonimus spp.
Oblici, doze, načini primene
[0101] Imunogenične kompozicije (i vakcine) obuhvaćene ovim pronalaskom mogu da se primene na životinjama da indukuju efikasan imuni odgovor protiv CIRDC. U skladu sa tim, ovaj pronalazak obezbeđuje postupke za stimulaciju efektivnog imunog odgovora primenom terapeutski efektivne količine ovde opisane imunogenične kompozicije ili vakcine na životinji.
[0102] Ovde opisane imunogenične kompozicije i vakcine mogu da se primene na životinji za vakcinisanje životinjskog subjekta protiv CIRDC. Imunogenične kompozicije i vakcine mogu da se primene na životinji za prevenciju ili lečenje CIRDC kod životinja. U skladu sa tim, ovde su opisani postupci vakcinacije životinje protiv CIRDC, i za prevenciju ili lečenje CIRDC, koji uključuju primenu terapeutski efektivne količine ovde opisane imunogenične kompozicije ili vakcine na životinji.
[0103] Imunogenične kompozicije (i vakcine) obuhvaćene ovim pronalaskom mogu da se izrade u različitim oblicima u zavisnosti od načina primene. Na primer, imunogenične kompozicije i vakcine mogu da se izrade u obliku sterilnih vodenih rastvora ili disperzija pogodnih za injekcionu upotrebu ili da se izrade u liofiliziranim oblicima koristeći tehnike sušenja zamrzavanjem. Liofilizirane imunogenične kompozicije i vakcine se obično čuvaju na približno 4°C, i mogu da se rekonstituišu u stabilni rastvor, na primer, rastvor soli ili HEPES, sa ili bez adjuvansa. Imunogenične kompozhicije i vakcine mogu takođe da se izrade u obliku suspenzija ili emulzija.
[0104] Imunogenične kompozicije (i vakcine) iz ovog pronalaska uključuju terapeutski efektivnu količinu jednog ili više od prethodno opisanih mikroorganizama. Prečišćeni virusi i/ili bakterije mogu da se koriste direktno u imunogeničnoj kompoziciji ili vakcini ili mogu da budu dalje oslabljeni ili inaktivirani. Uobičajeno, imunogenična kompozicija ili vakcina sadrži između približno 1x10<2>i približno 1x10<12>čestica virusa ili bakterija, ili između približno 1x10<3>i približno 1x10<11>čestica, ili između približno 1x10<4>i približno 1x10<10>čestica, ili između približno 1x10<5>i približno 1x10<9>čestica, ili između približno 1x10<6>i približno 1x10<8>čestica. Preciznu količinu mikroorganizma u imunogeničnoj kompoziciji ili vakcini efikasnoj da obezbedi zaštitni efekat može da odredi stručnjak sa iskustvom.
[0105] Imunogenične kompozicije i vakcine generalno uključuju veterinarski prihvatljiv nosač u zapremini od između približno 0.5 ml i približno 5 ml. U narednom ostvarenju, zapremina nosača je između približno 1 ml i približno 4 ml, ili između približno 2 ml i približno 3 ml. U narednom ostvarenju, zapremina nosača je približno 1 ml, ili je približno 2 ml, ili je približno 5 ml. Veterinarski prihvatljiv nosač pogodan za upotrebu u imunogeničnim kompozicijama i vakcinama može da bude bilo koji od nosača koji su ovde prethodno opisani.
[0106] Stručnjak sa iskustvom u tehnici može lako da odredi da li je potrebno da se virus ili bakterija oslabe ili inaktiviraju pre primene, ili virus ili bakterija mogu da se primene direktno na životinji bez dodatnog slabljenja. Količina mikroorganizma koja je terapeutski efektivna može da varira u zavisnosti od određenog mikroorganizma koji se koristi, stanja životinje i/ili stepena infekcije i može da je odredi stručnjak sa iskustvom.
[0107] Na životinjama može da se primeni jedna doza, ili alternativno mogu da se izvrše dve ili više inokulacija u intervalima od približno dve do približno deset nedelja. Može da bude potrebno pojačavanje režima, a režim doziranja može da se podesi kako bi se obezbedila optimalna imunizacija. Stručnjak sa iskustvom u tehnici može lako da odredi optimalni režim primene.
[0108] Imuogenične kompozicije i vakcine mogu da se primene direktno u krvotok, u mišić, u unutrašnji organ ili kroz kožu. Pogodni načini za parenteralnu primenu uključuju intravensku, intraarterijsku, intramuskularnu i subkutanu primenu. Pogodni uređaji za parenteralnu primenu uključuju injektore sa iglom (uključujući mikroiglu) i injektore bez igle.
[0109] Parenteralne formulacije su obično vodeni rastvori koji mogu da sadrže podloge kao što su soli, ugljeni hidrati, proteini i sredstva za puferovanje (preferirano do pH od približno 3 do približno 9, ili od približno 4 do približno 8, ili od približno 5 do približno 7.5, ili od približno 6 do približno 7.5, ili približno 7 do približno 7.5), ali, za neke aplikacije, mogu da budu odgovarajuće formulisani sterilni nevodeni rastvori ili kao suvi oblik za upotrebu u konjukciji sa odgovarajućim vehikulumom kao što su sterilna, apirogena voda ili fiziološki rastvor.
[0110] Izrada parenteralnih formulacija pod sterilnim uslovima, na primer, liofilizacijom, može lako da se izvede po standardnim farmaceutskim tehnikama dobro poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici.
[0111] Rastvorljivost materijala korišćenih u izradi parenteralnih rastvora može da se poveća upotrebom odgovarajućih tehnika formulisanja poznatih stručnjaku sa iskustvom u tehnici, kao što su inkorporiranje sredstava za pojačavanje rastvorljivosti, uključujući pufere, soli, surfaktante, lipozome, ciklodekstrine i slično.
[0112] Kompozicije za parenteralnu primenu mogu da se formulišu da budu za trenutno ili modifikovano oslobađanje. Formulacije sa modifikovanim oslobađanjem uključuju odloženo, kontinuirano, pulsirano, kontrolisano, ciljano i programirano oslobađanje. Prema tome, imunogenične kompozicije i vakcine mogu da budu formulisane kao čvrste, polu-čvrste ili tiksotropne tečnosti za primenu u oblikuk implantiranog depoa, obezbđujući modifikovano oslobađanje imunogeničnih kompozicija i vakcina.
[0113] Drugi načini primene imunogenične kompozicije ili vakcine uključuje oslobađanje injekcijom sa mikroiglom ili bez igle (na primer Powderject™, Bioject™, itd.).
[0114] U slučaju kada se koristi subkutana ili intramuskularna injekcija, preferirana je izotonična formulacija. Generalno, aditivi za izotoničnost mogu da uključe natrijum hlorid, dekstrozu, manitol, sorbitol i laktozu. U određenim slučajevima, koriste se izotonični rastvori
2
kao što su puferovane fosfatne soli. Formulacije mogu dalje da obuhvate stabilizatore kao što su želatin i albumin. U nekim ostvarenjima, u formulaciju se dodaje vazokonstriktivno sredstvo. Ovde opisani farmaceutski preparati su generalno obezbeđeni kao sterilni i apirogeni. Međutim, stručnjak sa iskustvom u tehnici dobro zna da formulacije za farmaceutsku upotrebu sadrže nosač a ti farmaceutski nosači su odobreni po propisima objavljenim od strane Ministarstva poljoprivrede Sjedinjenih Država ili odgovarajuće vladine agencije u drugim zemljama kao što su Kanada ili Meksiko, ili bilo koje druge evropske nacije, za bilo koju pseću vakcinu, polipeptidne (antigen) subjedinične imunogenične kompozicije i vakcine, rekombinantne vakcine sa virusnim vektorom i DNK vakcine. Prema tome, farmaceutski prihvatljiv nosač za komercijalnu produkciju imunogeničnih kompozicija ili vakcina je nosač koji je već odobren ili će da bude odobren od strane odgovarajuće vladine agencije u Sjedinjenim Američkim Državama ili drugoj zemlji. Imunogenične kompozicije i vakcine mogu dalje da budu izmešane sa adjuvansom koji je farmaceutski prihvatljiv. U nekim formulacijama imunogeničnih kompozicija i vakcina, imunogenična kompozicija ili vakcina je kombinovana sa drugim psećim imunogeničnim kompozicijama ili vakcinama da se dobije polivalentni produkt koji može da zaštiti pse od velikog broja različitih bolesti izazvanih drugim psećim patogenima.
Postupci detekcije i dijagnostike
[0115] Obim i priroda imunih odgovora indukovanih u životinji može da se proceni upotrebom različitih tehnika. Na primer, od inokuliranih životinja može da se uzme serum i testira na prisustvo ili odsustvo antitela specifičnih za imunogene. Detekcija reagujućih citotoksičnih T-limfocita (CTLs) u limfoidnim tkivima, indikativnih za indukciju ćelijskog imunog odgovora, može da se izvrši ispitivanjem proliferacije tih T ćelija. Relevantne tehnike su dobro opisane u tehnici.
Kitovi
[0116] Ukoliko može da bude poželjna primena imunogenične kompozicije ili vakcine u kombinaciji sa dodatnim kompozicijama ili jedinjenjima, na primer, u cilju lečenja određene bolesti ili stanja, imunogenična kompozicija ili vakcina može prikladno da bude uključena ili kombinovana u obliku kita pogodnog za primenu ili ko-primenu kompozicija.
[0117] Prema tome, kitovi mogu da sadrže jednu ili više odvojenih farmaceutskih kompozicija od kojih je najmanje jedna imunogenična kompozicija ili vakcina u skladu sa upotrebom iz ovog pronalaska, i sredstva za odvojeno čuvanje navedenih kompozicija, kao što su kontejner, podeljena boca ili podeljena blister folija. Primer ovakvog kita je špric sa iglom i slično. Kit za upotrebu zajedno sa ovim pronalaskom je posebno pogodan za primenu različitih doznih oblika, na primer, oralno ili parenteralno, za primenu odvojenih kompozicija u različitim intervalima doziranja ili za međusobnu titraciju odvojenih kompozicija. Kao pomoć za primenu kompozicije obuhvaćene ovim pronalaskom, kit obično sadrži uputstva za upotrebu.
[0118] Naredni kit može da sadrži jedan ili više reagenasa korisnih za otkrivanje inficirane životinje. Kit može da uključi reagense za ispitivanje uzorka na prisustvo celih mikroorganizama, polipeptida, epitopa ili sekvenci polinukleotida. Prisustvo virusa, bakterija, polipeptida ili sekvenci polinukleotida može da se odredi korišćenjem antitela, PCR, hibridizacijom i drugim postupcima detekcije poznatim stručnjaku sa iskustvom u praksi.
[0119] Naredni kit može da obezbedi reagense za detekciju antitela na određene epitope. Ovakvi reagensi su korisni za analizu uzorka na prisustvo antitela i dobro su poznati i raspoloživi stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Prisustvo antitela može da se odredi po standardnim postupcima detekcije poznatim stručnjaku sa iskustvom u praksi
[0120] Kitovi mogu da uključe štampana uputstva ili signaturu koja pokazuje da je kit koristan za detekciju inficiranih životinja.
Antitela
[0121] Antitela mogu da budu monoklonalna, poliklonalna ili rekombinantna. Antitela mogu da nastanu protiv imunogena ili njegovog dela. Na primer, sintetički peptid na bazi sekvence amino kiseline imunogena ili izrađen rekombinantno tehnikama kloniranja ili prirodni produkt gena i/ili njihovih delova, mogu da se izoluju i koriste kao imunogen. Imunogeni mogu da se koriste za stvaranje antitela standardnom tehnologijom stvaranja antitela dobro poznatom stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Fragmenti antitela mogu takođe da se izrade od antitela postupcima poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici i uključuju Fab, F((ab’)2i Fv fragmente.
[0122] U produkciji antitela, skrining za željeno antitelo može da se izvrši standardnim postupcima poznatim u tehnici imunologije. Generalno, ELIZA i Western blot tehnike su
2
preferirani tipovi imunoanaliza. Obe analize su dobro poznate stručnjaku sa iskustvom u praksi. U analizi mogu da se koriste i poliklonalna i monoklonalna antitela. Antitelo može da se veže za čvrstu supstrat podlogu, konjuguje sa detektabilnim delom, ili se oba vežu i konjuguju kako je dobro poznato u tehnici. Vezivanje antitela za čvrstu supstrat podlogu je takođe dobro poznato u tehnici. Detektabilni delovi koji su razmatrani za upotrebu u ovom pronalasku mogu da uključe, ali bez ograničenja na, fluorescentne, metalne, enzimatične i radioaktivne markere kao što su biotin, zlato, feritin, alkalna fosfataza, b-galaktozidaza, peroksidaza, ureaza, fluorescein, rodamin, tricijum,<14>C, i jodinaciju.
[0123] Ovaj pronalazak je dalje ilustrovan narednim primerima.
PRIMERI
Primer 1: imunogeničnost Bordetella bronchiseptica bakterijskog ekstrakta, subjedinične vakcine.
[0124] Trideset dva psa rase bigl stara približno 8 nedelja sa niskim titrom Bordetella bronchiseptica (mikro-aglutinirajuće antitelo (MAT) od ≤16) je uključeno u studiju. Štenci su po slučajnom uzorku podeljeni u dve grupe za tretman (T1 i T2) po 16 u svakoj. Jedno štene iz T2 je uklonjeno pre prve vakcinacije zbog preponske kile.
Tabela 1. Koncept studije
[0125] Psi su vakcinisani subkutano (SC) sa odgovarajućom vakcinom u dane 0 i 21, u skladu sa konceptom studije pokaze u Tabeli 1. Vakcine su primenjene na svakom psu u regionu desnog ramena za prvu vakcinaciju, a u regionu levog ramena za drugu vakcinaciju.
[0126] Na dan 42, psi iz svih tretiranih grupa su intranazalno nadraženi sa B. bronchiseptica
2
pomoću aerosolizacije u komorama od pleksiglasa u toku 30 minuta. Četiri psa, 2 iz T1 i 2 iz T2 su nadražena u isto vreme, izuzev jedne grupe koja je imala samo 3 životinje, dve iz T1 i jednu iz T2, zato što je jedna životinja ranije udaljena iz studije.
[0127] Primarna promena efikasnosti je bio kašalj. Sve druge promene (curenje iz nosa, suzenje očiju, kijanje, depresija, mučnina, disanje) se smatraju sekundarnim promenama. Klinička posmatranja znakova respiratorne bolesti, uključujući kašalj, su vršena dva puta dnevno ("periodi posmatranja"; pre podne i posle podne), u toku približno 30 minuta u svakoj prostoriji za svaku sesiju, od dana 42 sve do dana 70 (završetak studije). Za svaku životinju je izračunato da li životinja kašlje ili ne kašlje u toku dva uzastopna perioda posmatranja nakon nadražaja. Učestalost distribucije kašljanje/bez kašljanja za dva uzastopna perioda posmatranja je izračunata za svaki tretman. Kašljanje/bez kašljanja za dva uzastopna perioda posmatranja je analizirano preko Cohran-Armitage testa, podešavajući ga za sobne uslove jer nije bilo moguće da se analiziraju rezultati opštim linearnim mešovitim modelom. Učestalost distribucije nazalne bakterijske izolacije (+/-) je izračunata za svaki tretman i vremensku tačku. Takođe je za svaku životinju određeno da li je ili nije nikada imala izolovanu bakteriju nakon nadražaja.
[0128] Učestalost distribucije da li je životinja ikada imala izolovanu B. bronchiseptica nakon nadražaja je izračunata za svaki tretman i analizirana opštim linearnim mešovitim modelom, ukoliko je moguće. Trajanje curenja nosa nakon nadražaja je izračunato za svaku životinju i analizirano po opštem linearnom mešovitom modelu. Titri antitela su logaritamski prevedeni, i analizirani preko opšteg linearnog mešovitog modela za ponovljena merenja.
[0129] Rezultati: nije bilo zabeleženog bola ili groznice (≥39.5°C) kod bilo kog od pasa nakon vakcinacije. Zabeleženo je da su se neki psi u obe tretirane grupe češali u vreme vakcinacije. Mali otok na mestu uboda (2x2x1 cm) je zabeležen samo kod dva psa u T2 u toku 3-6 sati nakon prve vakcinacije. Rezultati pokazuju da je vakcina bila bezbedna i da su je psi dobro podneli.
[0130] Kod svih kontrolnih grupa koje su primile fiziološki rastvor se razvio kašalj, što ukazuje na adekvatan nadražaj. Prosek najmanjeg kvadrata (LS) za trajanje kašlja u kontrolnoj grupi je bio 20.3. Nasuprot tome, vakcina je značajno smanjila trajanje kašlja za prosek LS od 5.2 kod vakcinisanih uz p-vrednost <.0001. Pored toga, drugi respiratorni klinički znaci kao što su mučnina i disanje, su smanjeni u grupi vakcinisanih u poređenju sa kontronim grupama.
[0131] Rezultati bakterija izolovanih nakon nadražaja su pokazali da test vakcina značajno smanjuje trajanje curenja iz nosa nadraženog organizma u grupi vakcinisanih (LS prosek od
2
20.5) kada se uporedi sa fiziološkim kontrolama (LS prosek od 25.3) uz p-vrednost 0.0061. Rezultat ukazuje da je vakcina efikasna u smanjenju nivoa infekcije, što je potvrđeno smanjenjem trajanja curenja iz nosa kod vakcinisanih.
[0132] Odgovori antitela generisanih nakon vakcinacije (dani 21 i 42) u T2 grupi su slični sa T1, verovatno zbog prirode analize aglutinirajućih antitela a ne zbog nedostatka antigeničnosti. Na dan 70 je uočen (LS prosek 426) snažan anamnestički odgovor koji je indukovan kod većine vakcinisanih nakon nadražaja u poređenju sa fiziološkom kontrolom (LS prosek 13), što ukazuje na efikasnu imunizaciju.
[0133] Sve zajedno, rezultati iz ove studije jasno ukazuju da bakterijski ekstrakt Bordetella bronchiseptica, subjedinična vakcina pokazuje efikasnost smanjenjem trajanja kašlja i curenja nosa.
Primer 2: procena efikasnosti i bezbednosti injektabilne Bordetella bronchiseptica vakcine.
[0134] Pedeset pasa rase bigl, starih približno 8 nedelja, je uključeno u studiju. Psi su podeljeni u pet grupa sa po 10 u svakoj. Sve životinje su bile dobrog opšteg zdravlja i nisu primile ni jednu Bordetella vakcinaciju. Uzorci seruma uzeti pre ispitivanja su bili negativni na B. bronchiseptica, sa titrom <16 dobijenim mikro aglutinirajućim testom (MAT) pre prve vakcinacije. Pre prve vakcinacije (dan 0) je testom nazalnog brisa za izolovanje bakterija kod svih životinja utvrđeno da nemaju B. bronchiseptica.
2
Tabela 2. koncenpt studije
[0135] Životinje su vakcinisane sa odgovarajućom vakcinom na dane 0 i 21, u skladu sa konceptom studije pokazanim u Tabeli 2. Vakcine za grupe T01, T02, T03 i T04 su primenjene subkutano na svakom psu u region desnog ramena za prvu vakcinaciju a u region levog ramena za drugu vakcinaciju. Grupa T05 je primila jednu intranazalnu vakcinaciju komercijalno raspoloživom intranazalnom vakcinom na dan 0. Ova grupa je vakcinisana zadnja da se spreči širenje žive vakcine u prostorijama, a psi u ovoj grupi su smešteni posebno u odvojenu prostoriju da se spreči izloženost drugim grupama.
[0136] Na dan 42, psi iz svih tretiranih grupa su intranazalno nadraženi sa Bordetella bronchiseptica aerosolizacijom u Plexiglas komori u ukupnom trajanju od 30 minuta. Pet pasa iz svake grupe (po jedan iz svake tretirane grupe) je nadraženo u isto vreme.
[0137] Primarna promena efikasnosti je bio kašalj; izolovanje bakterija je bila druga promena. Klinička posmatranja znakova respiratorne bolesti, uključujući kašalj, su vršena dva puta dnevno ("periodi posmatranja"; pre podne i posle podne), u toku približno 30 minuta u svakoj prostoriji za svaku sesiju, od dana 42 sve do dana 62 i jedanput (pre podne) na dan 63 (završetak studije). Pre analize kašlja, procenat kašlja u periodima posmatranja je transformisan preko arcsin kvadratnog korena transformacije. Transformisani procenat perioda posmatranja i broj dana sa kašljem su analizirani opštim linearnim mešovitim modelom. Procenat perioda posmatranja nakon nadražaja u kojima su životinje kašljale i broj dana sa kašljem nakon nadražaja je izračunat za svaku životinju.
2
[0138] Rezultati: na mestu uboda su uočeni blagi do umereni otoci kod tretiranih pasa u grupi T02 i T04 (rezultati nisu pokazani). Ozbiljnost reakcija i broj uključenih pasa je povećan nakon druge vakcinacije. Blage reakcije na mestu uboda su uočene kod nekoliko pasa u tretiranoj grupi T03. Nisu uočeni merljivi otoci na mestu uboda u grupi sa fiziološkim rastvorom T01. Nije uočena klinička groznica (≥ 39.5°C), izuzev kod jednog psa u grupi T02 na dan 4 nakon vakcinacije. Nije zabeležen bol ni kod jednog vakcinisanog psa.
[0139] Nadražaj inokulacijom B. bronchiseptica je indukovala kašalj u svim nevakcinisanim kontrolnim grupama (53.3% i 14.7 dana kašlja), što pokazuje adekvatni nadražaj za test vakcina. Rezultati dobijeni za grupu T05 koja je primila komercijalnu intranazalnu vakcinu (pozitivna kontrola), pokazuju 4,6% uočenog kašlja do 2 dana nakon nadražaja, što pokazuje da je nivo nadražaja optimalan i nije preteran.
[0140] U ovoj studiji su procenjene tri test formulacije. T02 je imala 16.1% uočenog kašlja do 6 dana nakon nadražaja. T03 je imala 34,7% uočenog kašlja do 10.5 dana nakon nadražaja a T04 je imala 34,5% uočenog kašlja do 10.7 dana nakon nadražaja. U skladu sa tim, sve vakcinisane grupe su pokazale rezultate smanjenog kašlja kada se uporedi sa nevakcinisanim kontrolnim grupama. Grupa T02 vakcinisana sa B. bronchiseptica bakterijskim ekstraktom, sa dodatim pertaktinom i pojačana sa QCDC, pokazuje statistički značajno smanjenje u kriterijumu za ocenu kašlja. Prema tome, efikasnost formulacije testirane u T02 se pokazala delotvornom.
Primer 3. Bezbednost i efikasnost vakcina koje sadrže Bordetella bronchiseptica kod pasa.
[0141] Za studiju je izabrano pedeset (50) pasa podeljenih u 5 grupa za tretman. Životinje su fizički proveravane na dan -4 da se utvrdi da su spremne za studiju.
[0142] Uzorci krvi (približno 8 mL) za serologiju su sakupljeni u SST epruvete od svih životinja u dane studije -2, 21 i 28 pre svake vakcinacije. Uzorci krvi uzeti na dan -2 su korišćeni za potvrdu da životinje nemaju B. bronchiseptica. Nazalni brisevi su uzimani pre vakcinacije na dan 0 i testirani na prisustvo B. bronchiseptica. Temperature bubne opne su merene počevši od dana -4 da se utvrdi stanje pre vakcinacije.
[0143] Životinje su vakcinisane sa odgovarajućom vakcinom na dane 0, 21 i 28 u skladu sa konceptom studije pokazanim u Tabeli 3. Vakcine su primenjene subkutano na svakom psu u regionu desnog ramena za prvu vakcinaciju, a u regionu levog ramena za drugu vakcinaciju.
Tabela 3. koncept studije
[0144] Kod svih životinja su praćene reakcije na mestu injekcije nakon vakcinacije na dane 0, 21 i 28. Dnevno su posmatrane reakcije na injekciju nakon vakcinacije od dana 1 do 7 i 22-35. Temperature bubne opne su merene na dane 0 do 7 i 21 do 35.
[0145] Uzorci krvi (približno 6 mL) za serologiju su uzimani na dan 55, jedan dan pre nadražaja. Temperature bubne opne su merene na dane 54, 55 i 56 pre nadražaja. Nazalni brisevi su uzimani na dan 55, jedan dan pre nadražaja i testirani na prisustvo B. bronchiseptica. Životinje su posmatrane dva puta dnevno (pre podne i posle podne), približno 30 minuta u svakom pregledu na dane 54 i 55 a pre podne na dan 56 na kliničke znake respiratornih bolesti, kako bi se utvrdile početne vrednosti.
[0146] Bordetella bronchiseptica (soj za nadražaj) je korišćena za izradu ciljane nadražajne doze od 10<9>CFU/4 mL/pas. Na dan 56, psi iz svih tretiranih grupa su intranazalno nadraženi sa B. bronchiseptica aerosolizacijom u Plexiglas komori u toku ukupno 30 minuta za svaku nadražajnu grupu. Pet pasa iz iste grupe (po jedan iz svake tretirane grupe) su nadraženi u isto
1
vreme.
[0147] Temperatura bubne opne je beležena jedanput dnevno nakon nadražaja od dana 56 do 77. Klinička posmatranja su vršena dva puta dnevno (pre podne i posle podne), u toku približno 30 minuta u svakoj sobi pri svakoj sesiji, od dana 56 do dana 76 i jedanput (pre podne) na dan 77. Ukratko, kašalj, curenje nosa, kijanje, curenje iz očiju, mučnina i depresija su uočavani po sledećem sistemu ocenjivanja: Nema (0), Blago (1), Umereno (2), i Ozbiljno (3). Nazalni brisevi su uzimai u dane 59, 62, 66, 69, 74, 76 i 77, da se odredi smanjenje nadražajnih organizama.
[0148] Uzorci krvi (približno 6mL) za serologiju su sakupljeni na dan 77. Nazalni brisevi za izolovanje B. bronchiseptica su uzimani pomoću briseva i medijuma za transport.
[0149] Aglutinirajuća antitela za B. bronchiseptica su određena pomoću mikro aglutinirajućeg testa (MAT). Uzorci seruma od tretiranih grupa T04 i T05 za dane 0, 28, 55 i 77 su titrirani neutralizacijom seruma i IFA za CRCoV antitela, a za CIV sa HAI. Izolovanje B. bronchiseptica iz nazalnih briseva je izvršeno u skladu sa standardnom procedurom. Svaki uzorak je testiran kvalitativno na prisustvo ili odsustvo bakterija.
[0150] Rezultati. Potvrđeno je da pedeset (50) zdravih približno 8 nedelja starih štenaca bigla u izolovanoj kulturi nazalnog brisa nemaju B. bronchiseptica organizme na dan 0. Ispitivani uzorci seruma na aglutinirajuća antitela B. bronchiseptica pomoću MAT su potvrdila da su svi štenci osetljivi sa MAT titrima od ≤ 8 na dan -2.
[0151] Sve eksperimentalne vakcine ispitivane u ovoj studiji su produkovale blage otoke na mestu injekcije ili ih nije bilo nakon prve vakcinacije. Otoci na mestu injekcije su ograničeni za dan studije 0 za većinu vakcinisanih. Blagi otoci ili bez otoka na mestu injekcije su takođe zabeleženi nakon druge vakcinacije. Kada su uočeni, otoci na mestu injekcije su nestajali između 1 do 3 dana nakon druge vakcinacije. Svrab je zabeležen predominantno u petostruko kombinovanoj grupi (T04). Nije zabeležena klinička groznica nakon vakcinacije. Nisu zabeleženi otoci na mestu injekcije u grupi fiziološkog rastvora. Rezultati su potvrdili bezbednost vakcina.
[0152] Broj kolonije koji se javlja pre i nakon nadražajne inokulacije je potvrdio da je prosečno 1.45 x 10<8>CFU Bordetella po psu aerosolizovano u komori. Inokulacija nadražaja je indukovala kašalj kod svih kontrolnih pasa koji su primili fiziološki rastvor (T02) sa prosečnim procentom uočenog kašlja od 43.5% i 12.2 dana kašljanja. U tretiranoj grupi T05, vakcinisanoj samo sa četvorostrukim virusom (CRCoV/CIV/CPIV/CAV2) bez Bordetella antigena je kašalj razvijen slično kao kod kontrolne grupe sa fiziološkim rastvorom uz
2
prosečni procenat uočenog kašlja od 43.4% i 12.2 dana kašljanja. Ovi nalazi pokazuju da je nadražaj bio adekvatan i konzistentan za procenu test vakcina.
[0153] Psi u tretiranoj grupi T01, vakcinisani sa Bordetella vakcinom, su bili značajno zaštićeni od nadražaja (3.6 dana kašlja, p<0.0001) u poređenju sa kontrolnom grupom (12.2 dana kašlja). Ista vakcina je takođe značajno zaštitla pse u T03 kada je data u režimu intervala od 3 nedelje (5.8 dana kašljanja, p=0.0004). Smanjenje u rezultata kašljanja u ove dve grupe (T01 prema T03) nije značajno različito (p-vrednost=0.1883) što ukazuje da je nivo zaštite od vakcine date u intervalu 3 ili 4 nedelje sličan.
[0154] Psi u T04 koji su primili ne-pojačanu petostruku kombinovanu vakcinu su bili značajno (p=0.0016) zaštićeni od Bordetella nadražaja (6.6 dana kašlja) kada se uporedi sa kontrolama koje su primile fiziološki rastvor (12.2 dana kašlja), i kada se uporedi sa T05 koji su primili četvorostruku virusnu (CRCoV/CIV/CPIV/CAV2) kombinaciju (12.1 dana kašlja, p=0.0019) što pokazuje efikasnost Bordetella frakcije u kombinovanoj vakcini koja nema adjuvans.
[0155] Serološka procena virusnih frakcija u petostrukoj kombinovanoj vakcini je moguća samo za dve frakcije, CIV i CRCoV, za koje je potvrđeno da su psi seronegativni u studiji na dan -2. CIV HAI odgovor u grupi (T04) koja je primila četvorostruku vakcinu u studiji na dan 56 su bili numerički slični sa odgovorima u grupi (T05) koja je primila petostruku vakcinu i pokazuje nedostatak uticaja Bordetella frakcije na CIV antigen, CRCoV SN odgovori u studiji na dan 56 su numerički veći u grupi (T04) sa četvorostrukom vakcinom nego u grupi (T05) sa petostrukom vakcinom, što pokazuje mogućnost uticaja Bordetella na CRCoV frakciju.
Međutim, ovi nalazi nisu konačni jer ove vakcine nisu adjuvantne i formulacija nije optimizovana a nije izvršen test efikasnosti na CRCoV nadražaj.
[0156] Potvrđeno je da je monovalentna Bordetella vakcina bezbedna i efikasna. Efikasnost monovalnetne vakcine je pokazana kada je vakcina data u intervalima od 21 ili 28 dana.
Takođe je pokazano da je Bordetella frakcija efikasna kada se daje u petostrukoj neadjuvantnoj kombinovanoj vakcini.
Primer 4. Studija multivalentne serologije
[0157] Četrdeset pasa, starih približno 8 nedelja dobrog opšteg zdravlja, je prethodno provereno na Bordetella bronchiseptica mikro aglutinirajućim testom (MAT), i na pseći respiratorni korona virus (CRCoV) indirektnim fluorescentnim ispitivanjem antitela (IFA).
Takođe je koršćena neutralizacija seruma (SN) za procenu nivoa antitela. Na dan 0, svi psi su bili negativni na antitela za Bordetella bronchiseptica kako je potvrđeno pomoću MAT (≤16), i negativni za antitela na CRCoV kako je potvrđeno pomoću IFA (<40). Svi psi su takođe bili bez Bordetella bronchiseptica i CRCoV, kako je potvrđeno testom izolacije nazalnog brisa pre prve vakcinacije (dan 0).
[0158] Psi su podeljeni u 5 tretiranih grupa, u svakoj po 8 pasa i vakcinisani u skladu sa konceptom studije pokazanim u Tabeli 4. Vakcine su primenjene na svakom psu u region desnog ramena za prvu vakcinaciju i u region levog ramena za drugu vakcinaciju.
Tabela 4. Koncept studije
[0159] Nakon druge vakcinacije, grupe T04 i T05 su zbog komplikacija uklonjene iz studija. Kod pasa u preostalim grupama (T01, T02 i T03) su svakog dana nakon vakcinacije posmatrane reakcije i praćena je telesna (bubne opne) temperatura u toku 7 dana nakon svake vakcinacije. Uzorci krvi su uzeti od pasa na dane 0, 21, 42 i 56 za merenje odgovora antitela.
[0160] Uzorci seruma za dane 0, 21, 42 i 56 su testirani na aglutinirajuća antitela za Bordetella bronchiseptica MAT analizom. Uzorci seruma za iste dane su takođe titrirani za CRCoV antitela neutralizacijom seruma, za CIV sa HAI, a za CAV-2 i CPI antitela neutralizacijom seruma. Geometrijske sredine titara antitela su dobijene za svaku tretiranu grupu.
Rezultati:
[0161] Test vakcine u grupama T02 i T03 indukuju odgovore antitela kod svih (100%)
4
vakcinisanih pasa nakon druge doze, što ukazuje na aktivnu imunizaciju protiv virusnih antigena. Odgovor antitela je povećan nakon druge vakcinacije kod većine vakcinisanih pasa, što ukazuje na pojačani efekat druge vakcinacije. Važno je da se zabeleži da su odgovori antitela među virusnim frakcijama postignuti u prisustvu višestrukih virusnih i bakterijskih (B. bronchiseptica) antigena, što ukazuje na nedostatak imunološke interference. MAT serologija nije u korelaciji sa zaštitom protiv Bordetella, već je pre dragoceni način za proveru da se pogodne životinje uključe u studiju. Kao zaključak, na osnovu imunološkog odgovora vakcinisanih pasa, procenjuje se efikasnost virusnih antigena u petostrukoj multivalentnoj vakcini.
Primer 5. Studija trajanja imuniteta
A. Monovalentna:
[0162] Cilj ove studije je da pokaže trajanje imuniteta na Bordetella bronchiseptica ekstraktnu-subjediničnu vakcinu kod pasa starih 8 nedelja protiv virulentnog B. bronchiseptica nadražaja.
[0163] Sve životinje su dobrog opšteg zdravlja i nisu primile ni jednu Bordetella vakcinaciju. Životinje imaju niske (≤16) ili nemaju titre antitela za B. bronchiseptica kako je određeno pomoću testa mikro aglutinacije (MAT) pre prve vakcinacije. Sve životinje su takođe bez B. bronchiseptica, kako je potvrđeno testom bakterijske izolacije nazalnog brisa pre prve vakcinacije.
[0164] Psi su podeljeni u 2 tretirane grupe; jedna grupa je primila placebo vakcinu, a druga ekstrakt B. bronchiseptica obogaćen sa rekombinantnim antigenom. Antigen je pertaktin, Bsp22, ili oba. Životinje su vakcinisane dva puta, u razmaku od približno 3-4 nedelje. Nakon svake vakcinacije su praćene reakcije na mestu injekcije.
[0165] Približno 6-12 meseci nakon vakcinacije psi iz svih tretiranih grupa su nadraženi aerosolizacijom sa Bordetella bronchiseptica. Nadražajna doza i čistoća nadražajnog inokuluma su određeni pre i nakon nadražaja. Klinička posmatranja su izvršena do i nakon nadražaja.
[0166] Uzeti su nazalni brisevi za izolovanje B. bronchiseptica. Krv svake životinje je uzeta za serum. Aglutinirajuća antitela za B. bronchiseptica su određena pomoću MAT. Uzorci seruma su titrirani za odgovor pertaktin-specifičnog IgG antitela koristeći ELISA. Izolacija B.
bronchiseptica iz nazalnih briseva je izvršena u skladu sa standardnom procedurom. Kašalj, izolacija Bordetella (nakon nadražaja), i serološki odgovor nakon vakcinacije su kriterijumi koji se koriste u studiji za procenu efikasnosti vakcine.
B. Multivalentna;
[0167] Cilj ove studije je da pokaže trajanje imuniteta multivalentne respiratorne kombinovane vakcine kod pasa. Vakcina sadrži sledeće antigenske komponente: modofikovane žive CAV-2, modifikovane žive CPIV, inaktivirane CIV, inaktivirane CRCoV i Bordetella bronchiseptica ekstrakt obogaćen sa rekombinantnim antigenom, ili pertaktinom, Bsp22, ili oba.
[0168] Sve životinje su dobrog opšteg zdravlja i nisu primile bilo koju vakcinu za bilo koje patogene protiv kojih koncipirana vakcina treba da pruži zaštitu. Psi su podeljeni u višestruke skupove tretiranih grupa. Svaki skup se sastoji od dve tretirane grupe, kontrolne grupe koja prima placebo vakcinu i vakvcinisane grupe koja prima test vakcinu. Životinje su vakcinisane dva puta, u razmaku približno 2-4 nedelje. U toku svake vakcinacije životinje su praćene na reakcije na mestu injekcije.
[0169] Približno 6-12 meseci nakon vakcinacije, svaki skup od dve tretirane grupe (vakcinisane i kontrolne) je nadražen sa jednim od patogena protiv koga koncipirana vakcina treba da pruži zaštitu. Klinička posmatranja su vršena u toku i nakon nadražaja. Nazalni brisevi za izolaciju nadražajnog patogena su sakupljeni u toku perioda nakon nadražaja. Krv svake životinje je uzeta da se dobije serum koji je korišćen za naknadne analitičke analize. Klinički znaci respiratorne bolesti, smanjivanje patogena nakon nadražaja i serološki odgovori su korišćeni kao kriterijumi za procenu efikasnosti vakcine..

Claims (14)

Patentni zahtevi
1. Imunogenična kompozicija za upotrebu u tretmanu ili prevenciji infekcije od psećeg respiratornog patogena kod psa, naznačena time što kompozicija uključuje Bordetella bronchiseptica bakterin i dodati izolovani Bordetella bronchiseptica p68 protein, pri čemu je navedeni p68 prisutan u količini između 5 µg ±10% i 20 µg ±10%.
2. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačena time što je navedeni p68 prisutan u količini od 10 µg ±10%
3. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili 2, naznačena time što dalje uključuje veterinarski prihvatljiv nosač, u zapremini od između 1ml i 4ml.
4. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačena time što je navedeni p68 prisutan ukoličini od 7 µg ±10% do 15 µg ±10%
5. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 3, naznačena time što je navedena zapremina 2ml ±10%.
6. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 3, naznačena time što je navedena zapremina 1ml.
7. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što navedena kompozicija sprečava infekciju od navedenog psećeg respiratornog patogena kod navedenog psa u toku najmanje šest meseci.
8. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što navedena kompozicija dalje uključuje razblaživač ili podlogu za parenteralnu primenu na psu.
9. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što navedena kompozicija dalje uključuje izolovani Bsp22 antigen, opciono lipidiran.
10. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što navedena kompozicija dalje uključuje antigen od psećeg respiratornog patogena izabranog iz grupe koja sadrži: pseći parainfluenca virus (CPIV), pseći adenovirus-2 (CAV-2), pseći respiratorni koronavirus (CRCoV), Mycoplasma cynos (M. Cynos) i pseći influenca virus (CIV).
11. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 10, naznačena time što navedena kompozicija uključuje najmanje dva, tri ili četiri od antigena od psećih respiratornih patogena.
12. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 10, naznačena time što navedena kompozicija uključuje antigene od psećeg parainfluenca virusa (CPIV), psećeg adenovirusa-2 (CAV-2), psećeg respiratornog koronavirusa (CRCoV) i psećeg influenca virusa (CIV).
13. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 12, naznačena time što pseći respiratorni patogen dalje uključuje najmanje jedan, dva, tri ili četiri od: psećeg parainfluenca virusa (CPIV), psećeg adenovirusa-2 (CAV-2), psećeg respiratornog koronavirusa (CRCoV) i psećeg influenca virusa (CIV).
14. Imunogenična kompozicija za upotrebu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 13, naznačena time što je pseći respiratorni patogen kompleks psećih infektivnih respiratornih bolesti (CIRDC), pri čemu kompozicija tretira ili sprečava infekciju od veći ovih patogena.
Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20210474A 2011-02-04 2012-02-03 Imunogenične bordetella bronchiseptica kompozicije RS61723B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161439597P 2011-02-04 2011-02-04
PCT/IB2012/050512 WO2012104821A1 (en) 2011-02-04 2012-02-03 Immunogenic bordetella bronchiseptica compositions
EP12705438.5A EP2670432B1 (en) 2011-02-04 2012-02-03 Immunogenic bordetella bronchiseptica compositions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61723B1 true RS61723B1 (sr) 2021-05-31

Family

ID=45755432

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210474A RS61723B1 (sr) 2011-02-04 2012-02-03 Imunogenične bordetella bronchiseptica kompozicije

Country Status (27)

Country Link
US (1) US20130302369A1 (sr)
EP (2) EP3858381A1 (sr)
JP (1) JP5833145B2 (sr)
KR (1) KR101647180B1 (sr)
CN (2) CN107296955B (sr)
AU (2) AU2012213035A1 (sr)
BR (1) BR112013019675B8 (sr)
CA (1) CA2826060C (sr)
CL (1) CL2013002219A1 (sr)
CO (1) CO6791568A2 (sr)
CY (1) CY1124093T1 (sr)
DK (1) DK2670432T3 (sr)
ES (1) ES2869175T3 (sr)
HR (1) HRP20210575T1 (sr)
HU (1) HUE055669T2 (sr)
LT (1) LT2670432T (sr)
MX (1) MX347177B (sr)
PH (1) PH12013501598B1 (sr)
PL (1) PL2670432T3 (sr)
PT (1) PT2670432T (sr)
RS (1) RS61723B1 (sr)
RU (1) RU2554480C2 (sr)
SI (1) SI2670432T1 (sr)
SM (1) SMT202100233T1 (sr)
UA (2) UA110505C2 (sr)
WO (1) WO2012104821A1 (sr)
ZA (1) ZA201306615B (sr)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2750683T4 (da) 2011-10-03 2021-04-12 Croda Int Plc Nanopartikler, fremgangsmåde til fremstilling og anvendelse deraf som bærer for amfipatiske eller hydrofobe molekyler inden for medicin, herunder cancerbehandling, og i fødevarerelaterede forbindelser
EP2854847B1 (en) * 2012-05-31 2019-08-07 Zoetis Services LLC Vaccination with canine respiratory coronavirus for protection against b. bronchiseptica infections
UA130246C2 (uk) * 2013-09-19 2025-12-31 Зоетіс Сервісіз Ллс Ад'ювант на основі олії
EP4241853B1 (en) * 2013-11-26 2026-02-11 Zoetis Services LLC Compositions for induction of immune response
CN115317600A (zh) 2015-01-16 2022-11-11 硕腾服务有限责任公司 口蹄疫疫苗
CN115996949A (zh) * 2020-04-17 2023-04-21 硕腾服务有限责任公司 犬抗体变异体
EP3909971A1 (en) 2020-09-28 2021-11-17 Institute of Life Sciences (ILS) Whole cell livestock vaccine for respiratory diseases
WO2025170904A1 (en) * 2024-02-07 2025-08-14 Zoetis Services Llc Injectable vaccines against canine respiratory diseases

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2571618A1 (fr) 1984-10-12 1986-04-18 Virbac Ctre Rech Biolog Nouveau vaccin contre la tracheobronchite infectieuse canine et son procede de preparation
US5019388A (en) * 1986-10-14 1991-05-28 Norden Laboratories Inc. Bordetella bronchiseptica vaccine
US4888169A (en) * 1986-10-14 1989-12-19 Norden Laboratories, Inc. Bordetella Bronchiseptica vaccine
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
AU724743B2 (en) * 1996-05-31 2000-09-28 Genetics Institute, Llc IL-12 as an adjuvant for Bordetella Pertussis vaccines
DE69736709T2 (de) * 1996-07-02 2007-10-04 Sanofi Pasteur Ltd., Toronto Vielwertige dtp-polio-impfstoffe
DK1284993T3 (da) * 2000-05-25 2008-07-28 Pasteur Institut Polypeptider der indeholder polymorfier af repeat-regionerne i pertactin fra bordetella pertussis, bordetella parapertussis og bordetella bronchiseptica, anvendelse deraf i diagnostik og i immunogene præparater
GB0217434D0 (en) * 2002-07-27 2002-09-04 Royal Vetinary College Biological material
MXPA05008051A (es) * 2003-01-29 2005-09-21 Pfizer Prod Inc Vacunas caninas contra bordetella bronchiseptica.
US20050089533A1 (en) * 2003-01-29 2005-04-28 Joseph Frantz Canine vaccines against Bordetella bronchiseptica
GB0315323D0 (en) * 2003-07-01 2003-08-06 Royal Veterinary College Vaccine composition
EP1667712B1 (en) * 2003-10-02 2010-07-21 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. B. pertussis antigens and use thereof in vaccination
US7572620B2 (en) 2005-01-11 2009-08-11 Wisconsin Alumni Research Foundation H3 equine influenza A virus
WO2006106424A2 (en) * 2005-04-07 2006-10-12 Pharmacia & Upjohn Company Llc Formulations and process for production of bordetella bronchiseptica p68 antigen and vaccines
US7959929B2 (en) 2005-04-21 2011-06-14 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for respiratory disease control in canines
US7384642B2 (en) 2005-08-25 2008-06-10 Merial Limited Canine influenza vaccines
ME00485B (me) * 2005-10-07 2011-10-10 Zoetis Services Llc VAKCINE l METODE LIJEČENJA INFLUENCE KOD CANINA
US7468187B2 (en) * 2005-10-18 2008-12-23 Iowa State University Research Foundation, Inc. Canine influenza virus and related compositions and methods of use
EP1941033A2 (en) * 2005-10-20 2008-07-09 Wyeth a Corporation of the State of Delaware Compositions and methods for the treatment of canine influenza virus disease
US7682619B2 (en) * 2006-04-06 2010-03-23 Cornell Research Foundation, Inc. Canine influenza virus
US20090304735A1 (en) * 2006-05-19 2009-12-10 Gabrielle Therese Belz Immunogenic Compositions

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017203244B2 (en) 2019-05-09
PH12013501598B1 (en) 2018-08-17
CA2826060A1 (en) 2012-08-09
DK2670432T3 (da) 2021-04-19
ZA201306615B (en) 2015-04-29
CY1124093T1 (el) 2022-05-27
MX347177B (es) 2017-04-17
JP2014504635A (ja) 2014-02-24
BR112013019675B8 (pt) 2022-11-22
WO2012104821A1 (en) 2012-08-09
RU2554480C2 (ru) 2015-06-27
BR112013019675B1 (pt) 2021-06-22
UA110504C2 (ru) 2016-01-12
AU2012213035A1 (en) 2013-08-15
PH12013501598A1 (en) 2013-09-30
PT2670432T (pt) 2021-05-04
UA110505C2 (ru) 2016-01-12
SI2670432T1 (sl) 2021-08-31
PL2670432T3 (pl) 2021-10-11
NZ613759A (en) 2015-09-25
JP5833145B2 (ja) 2015-12-16
US20130302369A1 (en) 2013-11-14
KR101647180B1 (ko) 2016-08-09
ES2869175T3 (es) 2021-10-25
EP3858381A1 (en) 2021-08-04
SMT202100233T1 (it) 2021-05-07
MX2013009012A (es) 2013-12-06
EP2670432A1 (en) 2013-12-11
HUE055669T2 (hu) 2021-12-28
CN107296955B (zh) 2021-11-23
HK1245676A1 (zh) 2018-08-31
BR112013019675A2 (pt) 2017-01-31
EP2670432B1 (en) 2021-03-17
KR20130118975A (ko) 2013-10-30
HRP20210575T1 (hr) 2021-05-28
AU2017203244A1 (en) 2017-06-08
CN107296955A (zh) 2017-10-27
CN103561763A (zh) 2014-02-05
CO6791568A2 (es) 2013-11-14
CA2826060C (en) 2019-06-18
LT2670432T (lt) 2021-05-25
CL2013002219A1 (es) 2014-01-31
RU2013136151A (ru) 2015-03-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2017203244B2 (en) Immunogenic Bordetella bronchiseptica compositions
JP5833144B2 (ja) イヌ呼吸器病症候群のための組成物
AU2012213034A1 (en) Compositions for canine respiratory disease complex
CN104411330B (zh) 用犬呼吸道冠状病毒进行疫苗接种以针对支气管炎博德特菌感染进行保护
HK40055448A (en) Immunogenic bordetella bronchiseptica compositions
HK1190314A (en) Immunogenic bordetella bronchiseptica compositions
NZ613759B2 (en) Immunogenic bordetella bronchiseptica compositions
HK1245676B (zh) 免疫原性支气管炎博德特氏菌组合物
NZ613770B2 (en) Compositions for canine respiratory disease complex
HK1206265B (en) Vaccination with canine respiratory coronavirus for protection against b. bronchiseptica infections
HK1190638B (en) Compositions for canine respiratory disease complex