RS61767B1 - 4'-fluor-nukleozidi, 4'-fluor-nukleotidi i njihovi analozi za lečenje hcv - Google Patents

4'-fluor-nukleozidi, 4'-fluor-nukleotidi i njihovi analozi za lečenje hcv

Info

Publication number
RS61767B1
RS61767B1 RS20210536A RSP20210536A RS61767B1 RS 61767 B1 RS61767 B1 RS 61767B1 RS 20210536 A RS20210536 A RS 20210536A RS P20210536 A RSP20210536 A RS P20210536A RS 61767 B1 RS61767 B1 RS 61767B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
optionally substituted
compound
6alkyl
hydrogen
mmol
Prior art date
Application number
RS20210536A
Other languages
English (en)
Inventor
Leonid Beigelman
Guangyi Wang
David Bernard Smith
Original Assignee
Janssen Biopharma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Biopharma Inc filed Critical Janssen Biopharma Inc
Publication of RS61767B1 publication Critical patent/RS61767B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/213—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids containing cyclic phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/173—Purine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/207—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids the phosphoric or polyphosphoric acids being esterified by a further hydroxylic compound, e.g. flavine adenine dinucleotide or nicotinamide-adenine dinucleotide

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
REFERENCA ZA SPISAK SEKVENCI
[0001] Predmetna prijava se podnosi zajedno sa spiskom sekvenci u elektronskom formatu. Spisak sekvenci je dat kao datoteka pod nazivom SEQLISTING_065.TXT, kreirana 19. decembra 2013. veličine 1 Kb.
OSNOVA
Oblast
[0002] Predmetna prijava se odnosi na oblast hemije, biohemije i medicine. Preciznije, ovde su otkriveni analozi nukleotida, farmaceutske kompozicije koje uključuju jedan ili više analoga nukleotida i postupci za njihovu sintezu. Ovde su takođe otkriveni postupci za lečenje bolesti i/ili stanja nukleotidnim analogom, samostalno ili u kombinovanoj terapiji sa jednim ili više drugih agensa.
[0003] US2005009737 se odnosi na modifikovane fluorovane analoge nukleozida. WO2008121634 se odnosi na nukleozidne fosforamidatne prolekove. WO2009152095 se odnosi na nukleozidne ciklične fosfate. WO2012088155 se odnosi na ciklične nukleotidne ANALOGE. WO2014209979 se odnosi na supstituisane nukleozide, nukleotide i njihove analoge. WO2014186637 se odnosi na 4'-fluor-2'-metil supstituisane derivate nukleozida. WO2014099941 se odnosi na 4'-fluor nukleozide za lečenje HCV. WO2013092481A12',4'-difluor-2'-metil supstituisani derivati nukleozida kao inhibitori RNK replikacije HCV.
Opis
[0004] Analozi nukleozida su klasa jedinjenja za koju se pokazalo da vrši antivirusnu i antikancerogenu aktivnost in vitro i in vivo, te su stoga predmet opsežnog istraživanja radi lečenja virusnih infekcija. Analozi nukleozida su obično terapeutski neaktivna jedinjenja koja se putem domaćina ili virusnih enzima preobražavaju u odgovarajuće antimetabolite, koji, zauzvrat, mogu da inhibiraju polimeraze uključene u virusnu ili ćelijsku proliferaciju. Aktivacija se odvija putem različitih mehanizama, poput adicije jedne ili više fosfatnih grupa i drugih metaboličkih procesa, ili u kombinaciji sa njima.
SAŽETAK
[0005] Prema prvom aspektu,
obezbeđeno je jedinjenje Formule (I), kako je definisano u priloženom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Prema drugom aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija, kako je definisana u priloženom zahtevu 28, koja sadrži delotvornu količinu jedinjenja Formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ekscipijens, ili njihovu kombinaciju. Prema trećem aspektu, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u ublažavanju ili lečenju HCV infekcije, kako je definisano u priloženom zahtevu 29. Prema četvrtom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u inhibiciji aktivnosti NS5B polimeraze virusa hepatitisa C, kako je definisano u priloženom zahtevu 30. Prema petom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u inhibiciji replikacije virusa hepatitisa C, kako je definisano u priloženom zahtevu 31.
[0006] Ovde je takođe otkriven postupak za ublažavanje i/ili lečenje infekcije virusom hepatitisa C (HCV), koji obuhvata primenu na ispitaniku za koga je otkriveno da boluje od HCV infekcije delotvorne količine jednog ili više jedinjenja Formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedno ili više jedinjenja Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Ovde je takođe opisano korišćenje jednog ili više jedinjenja Formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji leka za ublažavanje i/ili lečenje HCV infekcije. Ovde je takođe opisano jedno ili više jedinjenja Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedno ili više jedinjenja Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, koji mogu da se koriste za ublažavanje i/ili lečenje HCV infekcije.
[0007] Ovde je takođe otkriven postupak za ublažavanje i/ili lečenje HCV infekcije koji obuhvata dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljive soli jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, ili sa farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedno ili više ovde opisanih jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. Ovde je takođe opisano korišćenje jednog ili više ovde opisanih jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli jednog ili više ovde opisanih jedinjenja u proizvodnji leka za ublažavanje i/ili lečenje HCV infekcije, što može da obuhvati dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom navedenog (ili navedenih) jedinjenja. Ovde je takođe opisano jedno ili više ovde opisanih jedinjenja ili farmaceutski prihvatljiva so jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedno ili više ovde opisanih jedinjenja ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, koji mogu da se koriste za upotrebu u ublažavanju i/ili lečenju HCV infekcije putem dovođenja u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom navedenog (ili navedenih) jedinjenja.
[0008] Ovde je takođe otkriven postupak za inhibiciju replikacije virusa hepatitisa C koji može da obuhvati dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom jednog ili više ovde opisanih jedinjenja ili farmaceutske soli jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, ili farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedno ili više ovde opisanih jedinjenja ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. Ovde je takođe opisano korišćenje jednog ili više ovde opisanih jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, u proizvodnji leka za inhibiciju replikacije virusa hepatitisa C, što može da obuhvati dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom navedenog (ili navedenih) jedinjenja. Ovde je takođe opisano jedno ili više ovde opisanih jedinjenja ili farmaceutski prihvatljiva so jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedno ili više ovde opisanih jedinjenja ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, koji mogu da se koriste za upotrebu u inhibiciji replikacije virusa hepatitisa C putem dovođenja u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom navedenog (ili navedenih) jedinjenja.
[0009] Ovde je takođe otkriven postupak za ublažavanje i/ili lečenje HCV infekcije koji može da obuhvata primenu na ispitaniku, za koga je otkriveno da boluje od HCV infekcije, delotvorne količine ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (na primer, jedno ili više jedinjenja formule (I) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa agensom izabranim od interferona, ribavirina, inhibitora proteaze HCV, inhibitora polimeraze HCV, inhibitora NS5A, drugog antivirusnog jedinjenja, jedinjenja formule (AA), jedinjenja formule (BB) i jedinjenja formule (CC) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo čega od prethodno navedenog. Ovde je takođe otkriven postupak za ublažavanje i/ili lečenje HCV infekcije koji može da obuhvata dovođenje u kontakt ćelije inficirane HCV infekcijom sa delotvornom količinom jedinjenja koje je ovde opisano ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (na primer, jedno ili više jedinjenja formule (I) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli) ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje, u kombinaciji sa agensom izabranim od interferona, ribavirina, inhibitora proteaze HCV, inhibitora polimeraze HCV, inhibitora NS5A, drugog antivirusnog jedinjenja, jedinjenja formule (AA), jedinjenja formule (BB) i jedinjenja formule (CC), ili farmaceutski prihvatljive soli bilo čega od prethodno navedenog. Ovde je takođe otkriven postupak za inhibiciju replikacije virusa hepatitisa C koji može da obuhvata primenu na ispitaniku za koga je otkriveno da boluje od HCV infekcije delotvorne količine ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (na primer, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so) ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa agensom izabranim od interferona, ribavirina, inhibitora proteaze HCV, inhibitora polimeraze HCV, inhibitora NS5A, drugog antivirusnog jedinjenja, jedinjenja formule (AA), jedinjenja formule (BB) i jedinjenja formule (CC) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo čega od prethodno navedenog. Ovaj agens može biti jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, izabrani od jedinjenja 1001-1016, 2001-2012, 3001-3014, 4001-4012, 5001-5012, 6001-6078, 7000-7027 i 8000-8016, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedno ili više prethodno navedenih jedinjenja ili farmaceutski prihvatljivu so prethodnog. Postupak može da obuhvata primenu drugog agensa izabranog od interferona, ribavirina, inhibitora proteaze HCV, inhibitora polimeraze HCV, inhibitora NS5A, drugog antivirusnog jedinjenja, jedinjenja formule (AA), jedinjenja formule (BB) i jedinjenja formule (CC) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo čega od prethodno navedenog.
KRATAK OPIS SLIKA
[0010]
Slika 1 prikazuje primer inhibitora proteaze HCV.
Slika 2 prikazuje primer nukleozidnih inhibitora polimeraze HCV.
Slika 3 prikazuje primer nenukleozidnih inhibitora polimeraze HCV.
Slika 4 prikazuje primer inhibitora NS5A.
Slika 5 prikazuje primer drugih antivirusnih agensa.
Slika 6 prikazuje primer jedinjenja formule (CC) i njegove alfa-tiotrifosfate, pri čemu su formula (CC) i alfa-tiotrifosfati opisani ovde.
Slika 7 prikazuje primer jedinjenja formule (AA), pri čemu je formula (AA) opisana ovde.
Slika 8 prikazuje primer jedinjenja formule (BB), pri čemu je formula (BB) opisana ovde.
Slika 9 prikazuje primer jedinjenja formule (I), pri čemu je formula (I) opisana ovde. Slika 10 prikazuje gelove iz ispitivanja inkorporacije nekoliko jedinjenja sa uracilskom bazom od strane humane polimeraze mitohondrijske RNK.
Slika 11 prikazuje gelove iz ispitivanja inkorporacije nekoliko jedinjenja sa guaninskom bazom od strane humane polimeraze mitohondrijske RNK.
Slike 12A-D pokazuju rezultate testova inhibicije sinteze mitohondrijskog proteina.
DETALJAN OPIS
Definicije
[0011] Ako nije drugačije definisano, svi ovde korišćeni tehnički i naučni termini imaju isto značenje kako to uobičajeno podrazumevaju stručnjaci sa uobičajenim znanjem u oblasti. U slučaju da postoji više definicija za ovde dati termin, definicije iz ovog odeljka imaju prednost, ako nije drugačije naglašeno.
[0012] Kako se ovde koristi, bilo koja „R“ grupa kao što je, bez ograničenja, R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5A>, R<5B>, R<6A>, R<6B>, R<6C>, R<6D>, R<6E>, R<6F>, R<6G>, R<6H>, R<7A>, R<7B>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>, R<12>, R<13>, R<14>, R<15>, R<16>, R<17>, R<18>, R<A1>, R<A2>, R<A3>i R<A4>, predstavlja supstituent koji može da se veže za naznačeni atom. R grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana. Ako su dve „R“ grupe opisane da su „zajedno“ R grupe i atomi za koje su vezane mogu da grade cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril ili heterocikl. Na primer, bez ograničenja, ako je za R<a>i R<b>iz NR<a>R<b>naznačeno da
znači da su međusobno kovalentno vezane da grade prsten:
Pored toga, ako su dve „R“ grupe opisane da su „zajedno“ sa atomima za koje su vezane da grade prsten kao alternativu, R grupe nisu ograničene na prethodno definisane promenljive ili supstituente.
[0013] Kada god je grupa opisana kao „opciono supstituisana“, ta grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana sa jednim ili više od naznačenih supstituenata. Slično tome, kada je grupa opisana kao „nesupstituisana ili supstituisana“, ako je supstituisana, supstituenti mogu biti izabrani od jednog ili više naznačenih supstituenata. Ako nisu naznačeni supstituenti, znači da naznačena „opciono supstituisana“ ili „supstituisana“ grupa može biti supstituisana sa jednom ili više grupa pojedinačno i nezavisno izabranih od alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), heteroaril(alkil), (heterociklil)alkil, hidroksi, alkoksi, acil, cijano, halogen, tiokarbonil, O-karbamil, N-karbamil, O-tiokarbamil, N-tiokarbamil, C-amido, N-amido, S-sulfonamido, N-sulfonamido, C-karboksi, O-karboksi, izocijanato, tiocijanato, izotiocijanato, nitro, silil, sulfenil, sulfinil, sulfonil, haloalkil, haloalkoksi, trihalometansulfonil, trihalometansulfonamido, amino, monosupstituisane amino grupe i disupstituisane amino grupe.
[0014] Kako se ovde koristi, „Ca do Cb“, gde su „a“ i „b“ celi brojevi, odnosi se na broj atoma ugljenika u alkil, alkenil ili alkinil grupi, ili na broj atoma ugljenika u prstenu cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril ili heterociklil grupe. To jest, alkil, alkenil, alkinil, prsten cikloalkila, prsten cikloalkenila, prsten arila, prsten heteroarila ili prsten heterociklila može da sadrži od „a“ do „b“, uključujući granične vrednosti, atoma ugljenika. Tako, na primer, „C1do C4alkil“ grupa odnosi se na sve alkil grupe koje imaju od 1 do 4 ugljenika, to jest, CH3-, CH3CH2-, CH3CH2CH2-, (CH3)2CH-, CH3CH2CH2CH2-, CH3CH2CH(CH3)- i (CH3)3C-. Ako „a“ i „b“ nisu naznačeni u pogledu alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil cikloalkenil, aril, heteroaril ili heterociklil grupe, treba pretpostaviti da se koristi najveći raspon opisan u ovim definicijama.
[0015] Kako se ovde koristi, „alkil“ se odnosi na ravni ili razgranati niz ugljovodonika koji sadrži potpuno zasićenu (bez dvostruke ili trostruke veze) ugljovodoničnu grupu. Alkil grupa može imati 1 do 20 atoma ugljenika (gde god se pojavi u ovom tekstu, numerički raspon poput „1 do 20“ odnosi se na svaki celi broj u datom rasponu; npr. „1 do 20 atoma ugljenika“ znači da alkil grupa može da se sastoji od 1 atoma ugljenika, 2 atoma ugljenika, 3 atoma ugljenika, itd. sve do, i uključujući 20 atoma ugljenika, mada predmetna definicija takođe pokriva pojavu termina „alkil“ kada nije naznačen numerički raspon). Alkil grupa može takođe biti alkil srednje veličine, koji ima 1 do 10 atoma ugljenika. Alkil grupa može takođe biti niži alkil, koji ima 1 do 6 atoma ugljenika. Alkil grupa jedinjenja može da se označi kao „C1-C4alkil“ ili sličnim oznakama. Samo u vidu primera, alkil“ pokazuje da ima jedan do četiri atoma ugljenika u alkil nizu, tj. alkil niz je izabran od metil, etil, propil, izopropil, n-butil, izobutil, sek-butil i t-butil. Tipične alkil grupe uključuju, ali ni na koji način nisu ograničene na, metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, tercijarni butil, pentil i heksil. Alkil grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana.
[0016] Kako se ovde koristi, „alkenil“ se odnosi na alkil grupu koja u ravnom ili razgranatom nizu ugljovodonika sadrži jednu ili više dvostrukih veza. Alkenil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana.
[0017] Kako se ovde koristi, „alkinil“ se odnosi na alkil grupu koja u ravnom ili razgranatom nizu ugljovodonika sadrži jednu ili više trostrukih veza. Alkinil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana.
[0018] Kako se ovde koristi, „cikloalkil“ se odnosi na potpuno zasićeni (bez dvostrukih ili trostrukih veza) mono- ili multiciklični sistem ugljovodoničnih prstenova. Kada se sastoji od dva ili više prstenova, prstenovi se mogu spojiti kondenzovanjem. Cikloalkil grupe mogu da sadrže 3 do 10 atoma u prstenovima ili 3 do 8 atoma u prstenovima. Cikloalkil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana. Tipične cikloalkil grupe uključuju, ali ni na koji način nisu ograničene na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil i ciklooktil.
[0019] Kako se ovde koristi, „cikloalkenil“ se odnosi na sistem mono- ili multicikličnih ugljovodoničnih prstenova koji sadrži jednu ili više dvostrukih veza u najmanje jednom prstenu; mada, ako postoji više od jedne, dvostruke veze ne mogu da grade potpuno delokalizovani sistem pi elektrona kroz sve prstenove (inače bi grupa bila „aril“, kako je ovde definisano). Kada se sastoji od dva ili više prstenova, prstenovi se mogu povezati kondenzovanjem. Cikloalkenil može da sadrži 3 do 10 atoma u prstenovima ili 3 do 8 atoma u prstenovima. Cikloalkenil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana.
[0020] Kako se ovde koristi, „aril“ se odnosi na karbociklični (samo ugljenik) monociklični ili multiciklični aromatični sistem prstenova (uključujući sisteme kondenzovanih prstenova u kojima dva karbociklična prstena dele hemijsku vezu) koji ima potpuno delokalizovani sistem pi elektrona kroz sve prstenove. Broj atoma ugljenika u aril grupi može da varira. Na primer, aril grupa može biti C6-C14aril grupa, C6-C10aril grupa ili C6aril grupa. Primeri aril grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, benzen, naftalen i azulen. Aril grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana.
[0021] Kako se ovde koristi, „heteroaril“ se odnosi na monociklični, biciklični i triciklični aromatični sistem prstenova (sistem prstenova sa potpuno delokalizovanim sistemom pi elektrona) koji sadrži jedan ili više heteroatoma (na primer, 1 do 5 heteroatoma), to jest, elemenata osim ugljenika, uključujući, bez ograničenja, azot, kiseonik i sumpor. Broj atoma u prstenu heteroaril grupe može da varira. Na primer, heteroaril grupa može da sadrži 4 do 14 atoma u prstenu, 5 do 10 atoma u prstenu ili 5 do 6 atoma u prstenu. Nadalje, termin „heteroaril“ uključuje sisteme kondenzovanih prstenova u kojima dva prstena, recimo najmanje jedan aril prsten i najmanje jedan heteroaril prsten, ili najmanje dva heteroaril prstena, dele najmanje jednu hemijsku vezu. Primeri za heteroaril prsten uključuju, ali nisu ograničeni na, furan, furazan, tiofen, benzotiofen, ftalazin, pirol, oksazol, benzoksazol, 1,2,3-oksadiazol, 1,2,4-oksadiazol, tiazol, 1,2,3-tiadiazol, 1,2,4-tiadiazol, benzotiazol, imidazol, benzimidazol, indol, indazol, pirazol, benzopirazol, izoksazol, benzoizoksazol, izotiazol, triazol, benzotriazol, tiadiazol, tetrazol, piridin, piridazin, pirimidin, pirazin, purin, pteridin, hinolin, izohinolin, hinazolin, hinoksalin, cinolin i triazin. Heteroaril grupa može biti supstituisana ili nesupstituisana.
[0022] Kako se ovde koristi, „heterociklil“ ili „heteroaliciklil“ odnosi se na tro-, četvoro-, peto-, šesto, sedmo-, osmo-, deveto-, deseto-, do 18-člani monociklični, biciklični i triciklični sistem prstenova, pri čemu atomi ugljenika čine navedeni sistem prstenova zajedno sa od 1 do 5 heteroatoma. Heterocikl može opciono da sadrži jednu ili više nezasićenih veza, ali postavljenih tako da se potpuno delokalizovani sistem pi elektrona ne javlja u svim prstenovima. Heteroatom je element koji nije ugljenik, uključujući, bez ograničenja, kiseonik, sumpor i azot. Heterocikl može dalje da sadrži jednu ili više karbonil ili tiokarbonil funkcionalnih grupa, kako bi definicija uključivala okso sisteme i tio sisteme kao što su laktami, laktoni, ciklični imidi, ciklični tioimidi i ciklični karbamati. Kada se sastoji od dva ili više prstenova, prstenovi se mogu spojiti kondenzovanjem. Pored toga, svi azoti u heteroalicikličnoj grupi mogu biti kvaternizovani. Heterociklil ili heteroaliciklične grupe mogu biti nesupstituisane ili supstituisane. Primeri takvih „heterociklil“ ili „heteroaliciklil“ grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, 1,3-dioksin, 1,3-dioksan, 1,4-dioksan, 1,2-dioksolan, 1,3-dioksolan, 1,4dioksolan, 1,3-oksatian, 1,4-oksatiin, 1,3-oksatiolan, 1,3-ditiol, 1,3-ditiolan, 1,4-oksatian, tetrahidro-1,4-tiazin, 2H-1,2-oksazin, maleimid, sukcinimid, barbiturnu kiselinu, tiobarbiturnu kiselinu, dioksopiperazin, hidantoin, dihidrouracil, trioksan, heksahidro-1,3,5-triazin, imidazolin, imidazolidin, izoksazolin, izoksazolidin, oksazolin, oksazolidin, oksazolidinon, tiazolin, tiazolidin, morfolin, oksiran, piperidin N-oksid, piperidin, piperazin, pirolidin, pirolidon, pirolidion, 4-piperidon, pirazolin, pirazolidin, 2-oksopirolidin, tetrahidropiran, 4H-piran, tetrahidrotiopiran, tiamorfolin, tiamorfolin sulfoksid, tiamorfolin sulfon i njihove benzo kondenzovane analoge (npr. benzimidazolidinon, tetrahidrohinolin i 3,4-metilendioksifenl).
[0023] Kako se ovde koriste, „aralkil“ i „aril(alkil)“ odnose se na aril grupu vezanu, kao supstituent, preko niže alkilen grupe. Niža alkilen i aril grupa aril(alkil) može biti supstituisana ili nesupstituisana. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na benzil, 2-fenilalkil, 3-fenilalkil i naftilalkil.
[0024] Kako se ovde koriste, „heteroaralkil“ i „heteroaril(alkil)“ odnose se na heteroaril grupu vezanu, kao supstituent, preko niže alkilen grupe. Niža alkilen i heteroaril grupa heteroaralkila može biti supstituisana ili nesupstituisana. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na 2-tienilalkil, 3-tienilalkil, furilalkil, tienilalkil, pirolilalkil, piridilalkil, izoksazolilalkil, imidazolilalkil, i njihove benzo kondenzovane analoge.
[0025] „(Heteroaliciklil)alkil“ i „(heterociklil)alkil“ odnose se na heterocikličnu ili heteroalicikliličnu grupu vezanu, kao supstituent, preko niže alkilen grupe. Niži alkilen i heterociklil (heteroaliciklil)alkila mogu biti supstituisani ili nesupstituisani. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na tetrahidro-2H-piran-4-il)metil, (piperidin-4-il)etil, (piperidin-4-il)propil, (tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)metil i (1,3-tiazinan-4-il)metil.
[0026] „Niže alkilen grupe“ su -CH2- vezujuće grupe sa ravnim nizom koji grade veze za povezivanje molekulskih fragmenata putem njihovih terminalnih atoma ugljenika. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na metilen (-CH2-), etilen (-CH2CH2-), propilen (-CH2CH2CH2-) i butilen (-CH2CH2CH2CH2-). Niža alkilen grupa može da se supstituiše zamenom jednog ili više vodonika niže alkilen grupe supstituentima navedenim pod definicijom za „supstituisani“.
[0027] Kako se ovde koristi, „alkoksi“ se odnosi na formulu -OR, pri čemu je R alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili
1
(heterociklil)alkil kako je ovde definisano. Neograničavajući spisak alkoksi su metoksi, etoksi, n-propoksi, 1-metiletoksi (izopropoksi), n-butoksi, izo-butoksi, sek-butoksi, terc-butoksi, fenoksi i benzoksi. Alkoksi može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0028] Kako se ovde koristi, „acil“ se odnosi na vodonik, alkil, alkenil, alkinil ili aril koji su vezani, kao supstituenti, preko karbonilne grupe. Primeri uključuju formil, acetil, propanoil, benzoil i akril. Acil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0029] Kako se ovde koristi, „hidroksialkil“ se odnosi na alkil grupu u kojoj je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno hidroksi grupom. Primeri hidroksialkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, 2-hidroksietil, 3-hidroksipropil, 2-hidroksipropil i 2,2-dihidroksietil. Hidroksialkil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0030] Kako se ovde koristi, „haloalkil“ se odnosi na alkil grupu u kojoj je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno halogenom (npr. monohaloalkil, dihaloalkil i trihaloalkil). Takve grupe uključuju, ali nisu ograničene na, hlormetil, fluormetil, difluormetil, trifluormetil, 1-hlor-2-fluormetil i 2-fluorizobutil. Haloalkil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0031] Kako se ovde koristi, „haloalkoksi“ se odnosi na -O-alkil grupu u kojoj je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno halogenom (npr. monohaloalkoksi, dihaloalkoksi i trihaloalkoksi). Takve grupe uključuju, ali nisu ograničene na, hlormetoksi, fluormetoksi, difluormetoksi, trifluormetoksi, 1-hlor-2-fluormetoksi i 2-fluorizobutoksi. Haloalkoksi može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0032] „Sulfenil“ grupa se odnosi na „-SR“ grupu u kojoj R može biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil. Sulfenil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0033] „Sulfinil“ grupa se odnosi na „-S (= O)-R“ grupu u kojoj R može biti isti kao što je definisano za sulfenil. Sulfinil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0034] „Sulfonil“ grupa se odnosi na „SO2R“ grupu u kojoj R može biti isti kao što je definisano za sulfenil. Sulfonil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0035] „O-karboksi“ grupa se odnosi na „RC(=O)O-“ grupu u kojoj R može biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil, kako je ovde definisano. O-karboksi može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0036] Termini „estar“ i „C-karboksi“ se odnose na „-C(=O)OR“ grupu u kojoj R može biti isti kao što je definisano za O-karboksi. Estar i C-karboksi mogu biti supstituisani ili nesupstituisani.
[0037] „Tiokarbonil“ grupa se odnosi na „-C(=S)R“ grupu u kojoj R može biti isti kao što je definisano za O-karboksi. Tiokarbonil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0038] „Trihalometansulfonil“ grupa se odnosi na „X3CSO2-“ grupu, pri čemu je svaki X halogen.
[0039] „Trihalometansulfonamido“ grupa se odnosi na „X3CS(O)2N(RA)-“ grupu pri čemu je svaki X halogen, i RAje vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil.
[0040] Termin „amino“, kako se ovde koristi, odnosi se na -NH2grupu.
[0041] Kako se ovde koristi, termin „hidroksi“ odnosi se na -OH grupu.
[0042] „Cijano“ grupa se odnosi na „-CN“ grupu.
[0043] Termin „azido“, kako se ovde koristi, odnosi se na -N3grupu.
[0044] „Izocijanato“ grupa se odnosi na „-NCO“ grupu.
[0045] „Tiocijanato“ grupa se odnosi na „-CNS“ grupu.
[0046] „Izotiocijanato“ grupa se odnosi na „-NCS“ grupu.
[0047] „Merkapto“ grupa se odnosi na „-SH“ grupu.
[0048] „Karbonil“ grupa se odnosi na C=O grupu.
[0049] „S-sulfonamido“ grupa se odnosi na „-SO2N(RARB)“ grupu u kojoj RAi RBmogu nezavisno biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil. S-sulfonamido može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0050] „N-sulfonamido“ grupa se odnosi na „RSO2N(RA)-“ grupu u kojoj R i RAmogu nezavisno biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil. N-sulfonamido može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0051] „O-karbamil“ grupa se odnosi na „-OC(=O)N(RARB)“ grupu u kojoj RAi RBmogu nezavisno biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril (alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil. O-karbamil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0052] „N-karbamil“ grupa se odnosi na „ROC(=O)N(RA)-“ grupu u kojoj R i RAmogu nezavisno biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil. N-karbamil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0053] „O-tiokarbamil“ grupa se odnosi na „-OC(=S)-N(RARB)“ grupu u kojoj RAi RBmogu nezavisno biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril (alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil. O-tiokarbamil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0054] „N-tiokarbamil“ grupa se odnosi na „ROC(=S)N(RA)-“ grupu u kojoj R i RAmogu nezavisno biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil. N-tiokarbamil može biti supstituisan ili nesupstituisan.
1
[0055] „C-amido“ grupa se odnosi na „-C(=O)N(RARB)“ grupu u kojoj RAi RBmogu nezavisno biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil. C-amido može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0056] „N-amido“ grupa se odnosi na „RC(=O)N(RA)-“ grupu u kojoj R i RAmogu nezavisno biti vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, cikloalkenil, aril, heteroaril, heterociklil, aril(alkil), (heteroaril)alkil ili (heterociklil)alkil. N-amido može biti supstituisan ili nesupstituisan.
[0057] Termin „atom halogena“ ili „halogen“, kako se ovde koristi, znači bilo koji od radiostabilnih atoma iz 7. kolone periodnog sistema elemenata, poput fluora, hlora, broma i joda.
[0058] Ako broj supstituenata nije naveden (npr. haloalkil), može biti prisutan jedan ili više supstituenata. Na primer, „haloalkil“ može da uključuje jedan ili više istih ili različitih halogena. Kao drugi primer, alkoksifenil“ može da uključuje jednu ili više istih ili različitih alkoksi grupa koje sadrže jedan, dva ili tri atoma.
[0059] Kako se ovde koriste, skraćenice za bilo koje zaštitne grupe, aminokiseline i druga jedinjenja su, osim ako nije drugačije naznačeno, u skladu sa njihovom uobičajenom upotrebom, priznate skraćenice ili IUPAC-IUB Komisije za biohemijsku nomenklaturu (vidite Biochem.11:942-944 (1972)).
[0060] Termin „nukleozid“ se ovde koristi u svom uobičajenom značenju koje je poznato stručnjacima , i odnosi se na jedinjenje sastavljeno od opciono supstituisanog ostatka pentoze ili modifikovanog ostatka pentoze povezanog sa heterocikličnom bazom ili njenim tautomerom putem N-glikozidne veze, recimo povezanog putem pozicije 9 purinske baze ili pozicije 1 pirimidinske baze. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, ribonukleozid koji sadrži ostatak riboze i dezoksiribonukleozid koji sadrži ostatak dezoksiriboze. Modifikovani ostatak pentoze je ostatak pentoze u kojem je atom kiseonika zamenjen ugljenikom i/ili je ugljenik zamenjen atomom sumpora ili kiseonika. „Nukleozid“ je monomer koji može imati supstituisanu bazu i/ili ostatak šećera. Pored toga, nukleozid može biti inkorporisan u veće DNK i/ili RNK polimere i oligomere. U nekim slučajevima, nukleozid može biti lek koji je nukleozidni analog.
[0061] Termin „nukleotid“ se ovde koristi u svom uobičajenom značenju koje je poznato stručnjacima, i odnosi se na nukleozid koji ima fosfatni estar vezan za ostatak pentoze, na primer, na 5'-poziciji.
[0062] Kako se ovde koristi, termin „heterociklična baza“ odnosi se na opciono supstituisani heterociklil koji sadrži azot, koji se može vezati za opciono supstituisani ostatak pentoze ili modifikovani ostatak pentoze. U nekim otelotvorenjima, heterociklična baza se može izabrati od opciono supstituisane purinske baze, opciono supstituisane pirimidinske baze i opciono supstituisane triazolske baze (na primer, 1,2,4-triazol). Termin „purinska baza“ se ovde koristi u svom uobičajenom značenju koje je poznato stručnjacima, i uključuje njene tautomere. Slično tome, termin „pirimidinska baza“ se ovde koristi u svom uobičajenom značenju koje je poznato stručnjacima, i uključuje njene tautomere. Neograničavajući spisak opciono supstituisanih purinskih baza uključuje purin, adenin, guanin, hipoksantin, ksantin, aloksantin, 7-alkilguanin (npr. 7-metilguanin), teobromin, kafein, urinsku kiselinu i izoguanin. Primeri pirimidinskih baza uključuju, ali nisu ograničeni na, citozin, timin, uracil, 5,6-dihidrouracil i 5-alkilcitozin (npr. 5-metilcitozin). Primer opciono supstituisane triazolske baze je 1,2,4-triazol-3-karboksamid. Ostali neograničavajući primeri heterocikličnih baza uključuju diaminopurin, 8-okso-N<6>-alkiladenin (npr. 8-okso-N<6>-metiladenin), 7-deazaksantin, 7-deazaguanin, 7-deazaadenin, N<4>,N<4>-etanocitozin, N<6>,N<6>-etano-2,6-diaminopurin, 5-halouracil (npr. 5-fluorouracil i 5-bromouracil), pseudoizocitozin, izocitozin, izoguanin i druge heterociklične baze opisane u U.S. patentima br. 5,432,272 i 7,125,855. U nekim otelotvorenjima, heterociklična baza može biti opciono supstituisana amino ili enolskim zaštitnim grupama.
[0063] Termin „-N-vezana aminokiselina“ se odnosi na aminokiselinu koja je povezana sa naznačenim ostatkom putem amino grupe glavnog niza ili monosupstituisane amino grupe. Kada je aminokiselina vezana kao -N-vezana aminokiselina, jedan od vodonika koji je deo glavnog niza amino ili monosupstituisane amino grupe nije prisutan, i aminokiselina je vezana preko azota. N-vezane aminokiseline mogu biti supstituisane ili nesupstituisane.
[0064] Termin „-N-vezani estarski derivat aminokiseline“ odnosi se na aminokiselinu u kojoj je grupa karboksilne kiseline glavnog niza pretvorena u estarsku grupu. U nekim otelotvorenjima, estarska grupa ima formulu izabranu od alkil-O-C(=O)-, cikloalkil-O-C(=O)-, aril-O-C(=O)- i aril(alkil)-O-C(=O)-. Neograničavajući spisak estarskih grupa uključuje supstituisane i nesupstituisane verzije sledećeg: metil-O-C(=O)-, etil-O-C(=O)-, n-propil-O-
1
C(=O)-, izopropil-O-C(=O)-, n-butil-O-C(=O)-, izobutil-O-C(=O)-, terc-butil-O-C(=O)-, neopentil-O-C(=O)-, ciklopropil-O-C(=O)-, ciklobutil-O-C(=O)-, ciklopentil-O-C(=O)-, cikloheksil-O-C(=O)-, fenil-O-C(=O)-, benzil-O-C(=O)- i naftil-O-C(=O)-. N-povezani estarski derivati aminokiselina mogu biti supstituisani i nesupstituisani.
[0065] Termin „-O-vezana aminokiselina“ odnosi se na aminokiselinu koja je vezana za naznačeni ostatak preko hidroksi iz grupe karboksilne kiseline iz njenog glavnog niza. Kada je aminokiselina vezana za -O-vezanu aminokiselinu, vodonik koji je deo hidroksi iz grupe karboksilne kiseline iz njenog glavnog niza nije prisutan, i aminokiselina je povezana preko kiseonika. O-vezane aminokiseline mogu biti supstituisane ili nesupstituisane.
[0066] Kako se ovde koristi, termin „aminokiselina“ se odnosi na bilo koju aminokiselinu (i standardne i nestandardne aminokiseline), uključujući, ali ne ograničavajući se na αaminokiseline, β-aminokiseline, γ-aminokiseline i δ-aminokiseline. Primeri za pogodne aminokiseline uključuju, ali nisu ograničeni na, alanin, asparagin, aspartat, cistein, glutamat, glutamin, glicin, prolin, serin, tirozin, arginin, histidin, izoleucin, leucin, lizin, metionin, fenilalanin, treonin, triptofan i valin. Dodatni primeri pogodnih aminokiselina uključuju, ali nisu ograničeni na, ornitin, hipuzin, 2-aminoizobuternu kiselinu, dehidroalanin, gama aminobuternu kiselinu, citrulin, beta alanin, alfa etil glicin, alfa propil glicin i norleucin.
[0067] Termini „fosforotioat“ i „fosfotioat“ se odnose na jedinjenje opšte formule
njegove protonovane oblike (na primer,
) i njegove tautomere (kao što su
1
[0068] Kako se ovde koristi, termin „fosfat“ se koristi u svom uobičajenom značenju koje je poznato stručnjacima, i uključuje njegove protonovane oblike (na primer,
). Kako se ovde koriste, termini „monofosfat“, „difosfat“ i „trifosfat“ se koriste u svom uobičajenom značenju koje je poznato stručnjacima, i uključuju protonovane oblike.
[0069] Termini „zaštitna grupa“ i „zaštitne grupe“, kako se ovde koriste, odnose se na bilo koji atom ili grupu atoma koji se dodaju molekulu kako bi se sprečilo da postojeće grupe u molekulu pretrpe neželjene hemijske reakcije. Primeri ostataka zaštitnih grupa su opisani u T. W. Greene i P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. Ed. John Wiley & Sons, 1999, i u J.F.W. McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry Plenum Press, 1973. Ostatak zaštitne grupe se može izabrati na takav način da budu stabilni na određene reakcione uslove i lako se uklanjaju u pogodnoj fazi koristeći metodologiju poznatu u struci. Neograničavajući spisak zaštitnih grupa uključuje benzil; supstituisani benzil; alkilkarbonile i alkoksikarbonile (npr. t-butoksikarbonil (BOC), acetil ili izobutiril); arilalkilkarbonile i arilalkoksikarbonile (npr. benziloksikarbonil); supstituisani metil etar (npr. metoksimetil etar); supstituisani etil etar; supstituisani benzil etar; tetrahidropiranil etar; silile (npr. trimetilsilil, trietilsilil, triizopropilsilil, t-butildimetilsilil, tri-izo-propilsililoksimetil, [2-(trimetilsilil)etoksi]metil ili tbutildifenilsilil); estre (npr. benzoatni estar); karbonate (npr. metoksimetil karbonat); sulfonate (npr. tozilat ili mezilat); aciklični ketal (npr. dimetil acetal); ciklične ketale (npr.1,3-dioksan, 1,3-dioksolani i oni koji su ovde opisani); aciklični acetal; ciklični acetal (npr. oni koji su ovde opisani); aciklični hemiacetal; ciklični hemiacetal; ciklične ditioketale (npr.1,3-ditian ili 1,3-ditiolan); ortoestre (npr. oni koji su ovde opisani) i triarilmetil grupe (npr. tritil; monometoksitritil (MMTr); 4,4'-dimetoksitritil (DMTr); 4,4',4"-trimetoksitritil (TMTr); i oni koji su ovde opisani).
1
[0070] Termin „farmaceutski prihvatljiva so“ odnosi se na so jedinjenja koja ne izaziva značajnu iritaciju u organizmu u kome se primenjuje, i ne ukida biološku aktivnost i svojstva jedinjenja. U nekim otelotvorenjima, so je kisela adiciona so jedinjenja. Farmaceutske soli mogu da se dobiju reakcijom jedinjenja sa neorganskim kiselinama, kao što je halogenovodonična kiselina (npr. hlorovodonična kiselina ili bromovodonična kiselina), sumporna kiselina, azotna kiselina i fosforna kiselina. Farmaceutske soli se takođe mogu dobiti reakcijom jedinjenja sa organskom kiselinom kao što su alifatične ili aromatične karboksilne ili sulfonske kiseline, na primer, mravlja, sirćetna, mlečna, jabučna, vinska, askorbinska, nikotinska, metansulfonska, etansulfonska, p-toluensulfonska, salicilna ili naftalensulfonska kiselina. Farmaceutske soli se takođe mogu dobiti reakcijom jedinjenja sa bazom da bi se stvorila so kao što je amonijumova so, so alkalnog metala, kao što je natrijumova ili kalijumova so, so zemnoalkalnog metala, kao što je kalcijumova ili magnezijumova so, so organskih baza kao što su dicikloheksilamin, N-metil-D-glukamin, tris(hidroksimetil)metilamin, C1-C7alkilamin, cikloheksilamin, trietanolamin, etilendiamin, i soli sa aminokiselinama kao što su arginin i lizin.
[0071] Termine i fraze koje se koriste u ovoj prijavi, kao i njihove varijacije, naročito u priloženim zahtevima, osim ako nije izričito drugačije naznačeno, treba tumačiti kao otvorene, a ne ograničavajuće. Kao primeri za prethodno, termin „uključujući“ treba razumeti da znači „uključujući, bez ograničenja“, „uključujući ali se ne ograničavajući na“ ili slično; termin „sadrži“, kako se ovde koristi, sinonim je sa „uključuje“, „obuhvata“ ili „okarakterisan sa“ i inkluzivan je ili otvoren, i ne isključuje dodatne, nenavedene elemente ili korake postupka; termin „ima“ treba tumačiti kao „ima najmanje“; termin „uključuje“ treba tumačiti kao „uključuje ali nije ograničen na“; termin „primer“ se koristi da se pruže primeri predmeta razmatranja, ne kao njihov iscrpni ili ograničavajući spisak; a upotreba termina poput „preferirano“, „poželjno“ ili „željeno“ i reči sa sličnim značenjem, ne treba da se tumači kao naznaka da su određena svojstva kritična, ključna ili čak značajna za strukturu ili funkciju, već samo treba da ukaže na alternativna ili dodatna svojstva koja mogu, ali ne moraju, da se koriste u konkretnom otelotvorenju. Pored toga, termin „sadrži“ treba tumačiti kao sinonim fraza „ima najmanje“ ili „uključuje najmanje“. Kada se koristi u kontekstu postupka, termin „sadrži“ znači da postupak uključuje barem navedene korake, ali može da uključuje i dodatne korake. Kada se koristi u kontekstu jedinjenja, kompozicije ili sredstva, termin „sadrži“ znači da jedinjenje, kompozicija ili sredstvo uključuje barem navedena svojstva ili komponente, ali može da uključuje dodatna svojstva ili komponente. Isto tako, grupu stavki povezanih veznikom „i“ ne
1
treba razumeti kao zahtev da svaka od tih stavki bude prisutna u grupi, već treba razumeti kao „i/ili“ osim ako izričito nije navedeno drugačije. Slično tome, grupu stavki povezanih veznikom „ili“ ne treba razumeti kao zahtev za međusobnom isključivošću u toj grupi, već treba razumeti kao „i/ili“ osim ako izričito nije navedeno drugačije.
[0072] Što se tiče upotrebe suštinski bilo kojih termina za množinu i/ili jedninu u ovom tekstu, stručnjaci za oblast mogu prevesti množinu u jedninu i/ili jedninu u množinu u skladu sa kontekstom i/ili primenom. Različite permutacije za jedninu/množinu mogu ovde biti izričito date radi jasnoće. Odrednice za jedninu ne isključuju množinu. Jedan procesor ili druga jedinica može da ostvari funkcije nekoliko stavki navedenih u zahtevima. Sama činjenica da su određene mere navedene u međusobno različitim povezanim zahtevima ne ukazuje na to da kombinacija ovih mera ne može pogodno da se koristi. Bilo koji referentni znaci u patentnim zahtevima ne treba da se tumače kao ograničavanje opsega.
[0073] Podrazumeva se da, u bilo kom ovde opisanom jedinjenju koje ima jedan ili više hiralnih centara, ako apsolutna stereohemija nije izričito naznačena, onda svaki centar može nezavisno imati R-konfiguraciju ili S-konfiguraciju ili njihovu smešu. Prema tome, ovde obezbeđena jedinjenja mogu biti enantiomerno čista, enantiomerno obogaćena, racemska smeša, dijastereomerno čista, dijastereomerno obogaćena, ili stereoizomerna smeša. Pored toga, jasno je da, u svakom ovde opisanom jedinjenju koje ima jednu ili više dvostrukih veza koje stvaraju geometrijske izomere koji mogu da se definišu kao E ili Z, svaka dvostruka veza može nezavisno biti E ili Z ili njihova smeša.
[0074] Isto tako, jasno je da, u svakom opisanom jedinjenju, predviđeno je da budu uključeni svi tautomerni oblici. Na primer, predviđeno je da budu uključeni svi tautomeri fosfatne ili fosforotioatne grupe. Primeri tautomera fosforotioata uključuju sledeće:
1
Nadalje, predviđeno je da budu uključeni svi tautomeri heterocikličnih baza koje su poznate u struci, uključujući tautomere prirodnih i neprirodnih purinskih baza i pirimidinskih baza.
[0075] Jasno je da, kada ovde otkrivena jedinjenja imaju nepopunjene valence, onda valence treba popuniti vodonikom ili njegovim izotopima, npr. vodonik-1 (protijum) i vodonik-2 (deuterijum).
[0076] Jasno je da ovde opisana jedinjenja mogu izotopski da se obeleže. Supstitucija izotopima, kao što je deuterijum, može da pruži određene terapeutske prednosti usled veće metaboličke stabilnosti, kao što je, na primer, produženi in vivo poluživot ili smanjeni dozni zahtevi. Svaki hemijski element kako je prikazan u strukturi jedinjenja može da uključuje bilo koji izotop navedenog elementa. Na primer, u strukturi jedinjenja atom vodonika može biti izričito otkriven ili se podrazumeva da je prisutan u jedinjenju. Na bilo kojoj poziciji jedinjenja na kojoj može biti prisutan atom vodonika, atom vodonika može biti bilo koji izotop vodonika, uključujući, ali ne ograničavajući se na, vodonik-1 (protijum) i vodonik-2 (deuterijum). Tako, upućivanje na jedinjenje u ovom tekstu obuhvata sve potencijalne izotopske oblike, osim ako kontekst izričito ne nalaže drugačije.
[0077] Podrazumeva se da ovde opisani postupci i kombinacije uključuju kristalne oblike (poznati i kao polimorfi, koji uključuju različite rasporede pakovanja kristala iste kompozicije elemenata jedinjenja), amorfne faze, soli, solvate i hidrate. U nekim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja postoje u solvatisanim oblicima sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima, kao što je voda, etanol i slično. U drugim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja postoje u nesolvatisanom obliku. Solvati sadrže stehiometrijske ili nestehiometrijske količine rastvarača, i mogu nastati tokom procesa kristalizacije sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima, kao što je voda, etanol, ili slično. Hidrati nastaju kada je rastvarač voda, ili nastaju alkoholati kada je rastvarač alkohol. Pored toga, jedinjenja obezbeđena u ovom tekstu mogu da postoje u nesolvatisanom, kao i solvatisanom obliku. Uopšteno, u svrhu ovde obezbeđenih jedinjenja i postupaka, smatra se da su solvatisani oblici ekvivalentni nesolvatisanim oblicima.
[0078] Kada je obezbeđen raspon vrednosti, podrazumeva se da su gornja i donja granica, kao i svaka međuvrednost između gornje i donje granice, obuhvaćeni otelotvorenjima.
Jedinjenja
2
[0079] Neka ovde otkrivena otelotvorenja se odnose na jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:
e izabere od opciono supstituisanog
i opciono supstituisanog
R<1>može da se izabere od opciono supstituisanog C1-6alkil, opciono supstituisanog C2-6alkenil, opciono supstituisanog C2-6alkinil i opciono supstituisanog C3-6cikloalkil; svaki -------- je odsutan i R<p>je odsutan; R<2>može biti halo, N3, -OR<7A>ili -N(R<7B>R<7C>); R<3>može biti -OH ili -OC(=O)R<8>; ili R<2>i R<3>svaki može biti atom kiseonika koji su povezani karbonil grupom; i R<4>može biti vodonik ili
R<5A>, može da se izabere od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline, opciono supstituisanog estra N-vezane aminokiseline,
R<5B>može da se izabere od O-, OH, -O-opciono supstituisanog arila, -O-opciono supstituisanog heteroarila, -O-opciono supstituisanog heterociklila, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline, opciono supstituisanog estra N-vezane aminokiseline,
R<6B>i R<6C>mogu nezavisno da se izaberu od vodonika, nesupstituisanog C1-6alkil, nesupstituisanog C3-6alkenil, nesupstituisanog C3-6alkinil i nesupstituisanog C3-6cikloalkil; R<7A>može biti vodonik ili -C(=O)R<12>; R<7B>i R<7C>mogu nezavisno biti vodonik ili opciono supstituisani C1-6alkil; R<8>i R<12>mogu nezavisno biti opciono supstituisani C1-6alkil ili opciono supstituisani C3-6cikloalkil; R<9>, R<10>i R<11>mogu biti nezavisno odsutni ili vodonik; R<8A>, R<9A>, R<11A>, R<12A>, R<8B>, R<9B>, R<11B>i R<12B>mogu biti nezavisno izabrani od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkil i opciono supstituisanog arila; R<10A>, R<10B>, R<13A>i R<13B>mogu biti nezavisno izabrani od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkil, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog -O-C1-24alkil, opciono supstituisanog -O-aril, opciono supstituisanog -O-heteroaril i opciono supstituisanog -O-monocikličnog heterociklila; R<14A>, R<14B>, R<15A>i R<15B>mogu biti nezavisno izabrani od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkil i opciono supstituisanog arila; n može biti 0 ili 1; p i q mogu nezavisno biti 1 ili 2; s i t mogu nezavisno biti 3, 4 ili 5; Z<1>, Z<1A>i Z<1B>mogu nezavisno biti O (kiseonik) ili S (sumpor); i pod uslovom da, kada je R<4>
je R<5B>O-, OH,
opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili opciono supstituisani estar N-vezane aminokiseline, ili farmaceutski prihvatljiva so prethodnog.
[0080] Supstituenti vezani za 2'-ugljenik mogu da variraju. U nekim otelotvorenjima, R<2>može biti halo. Na primer, R<2>može biti fluor ili hlor. U drugim otelotvorenjima, R<2>može biti N3. U nekim otelotvorenjima, R<2>može biti -OH. U drugim otelotvorenjima, R<2>može biti OR<7A>, pri čemu R<7A>može biti -C(=O)R<12>, i R<12>može biti opciono supstituisani C1-6alkil. Pogodne alkil grupe uključuju, ali nisu ograničene na opciono supstituisane varijante sledećeg: metil, etil, npropil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, pentil (sa razgranatim i ravnim nizom) i heksil (sa razgranatim i ravnim nizom). U još nekim otelotvorenjima, R<2>može biti OR<7A>, pri čemu R<7A>može biti -C(=O)R<12>, i R<12>može biti opciono supstituisani C3-6cikloalkil. Pogodne cikloalkil grupe uključuju, ali nisu ograničene na opciono supstituisane varijante sledećeg: ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil. U jednom otelotvorenju, R<2>može biti -N(R<7B>R<7C>), pri čemu R<7B>i R<7C>mogu biti nezavisno vodonik ili opciono supstituisani C1-6alkil. U nekim otelotvorenjima, R<7B>i R<7C>mogu oba biti vodonik, tako da R<2>može biti -NH2. U drugim otelotvorenjima, najmanje jedan od R<7B>i R<7C>može biti opciono supstituisani C1-6alkil. U nekim otelotvorenjima, R<7B>i R<7C>mogu oba biti opciono supstituisani C1-6alkil. U nekim otelotvorenjima, R<7B>i R<7C>mogu biti isti. U drugim otelotvorenjima, R<7B>i R<7C>mogu biti različiti.
[0081] Različiti supstituenti mogu biti vezani za 3'-ugljenik prstena pentoze. U nekim otelotvorenjima, R<3>može biti -OH. U drugim otelotvorenjima, R<3>može biti -OC(=O)R<8>, pri čemu R<8>može biti opciono supstituisani C1-6alkil poput onih koji su ovde opisani. U još nekim otelotvorenjima, R<3>može biti -OC(=O)R<8>, pri čemu R<8>može biti opciono supstituisani C3-
6cikloalkil. Primeri pogodnih opciono supstituisanih C3-6cikloalkil grupa su opisani ovde.
[0082] U nekim otelotvorenjima, R<2>i R<3>mogu svaki biti atom kiseonika i atomi kiseonika mogu biti povezani karbonil grupom. U drugim otelotvorenjima, R<2>i R<3>mogu oba biti -OH. U drugim otelotvorenjima, R<2>može biti halo, i R<3>može biti -OH. U još daljim otelotvorenjima, R<2>može biti halo, i R<3>može biti -OC(=O)R<8>.
[0083] U nekim otelotvorenjima, R<1>može biti opciono supstituisani C1-6alkil. U nekim otelotvorenjima, R<1>može biti nesupstituisani C1-6alkil. Na primer, R<1>može biti nesupstituisani metil, nesupstituisani etil, nesupstituisani n-propil, nesupstituisani izopropil, nesupstituisani nbutil, nesupstituisani izobutil, nesupstituisani terc-butil, nesupstituisani pentil (sa razgranatim ili ravnim nizom) ili nesupstituisani heksil (sa razgranatim ili ravnim nizom). U nekim otelotvorenjima, R<1>može biti supstituisani C1-6alkil. Ovde su opisane pogodne supstitucije.
2
Na primer, R<1>može biti halo supstituisani C1-6alkil (poput -CF3ili -CH2CH2F). U drugim otelotvorenjima, R<1>može biti opciono supstituisani C2-6alkenil. Pogodne alkenil grupe uključuju, ali nisu ograničene na opciono supstituisane varijante sledećeg: etenil, n-propenil, izopropenil, n-butenil, izobutenil, terc-butenil, pentenil (sa razgranatim i ravnim nizom), heksenil (sa razgranatim i ravnim nizom), vinil i alenil. U još daljim otelotvorenjima, R<1>može biti opciono supstituisani C2-6alkinil. U još daljim otelotvorenjima, R<1>može biti opciono supstituisani C3-6cikloalkil, poput onih koji su ovde opisani.
[0084] ------ su oba odsutna, i stoga se može smatrati da formula (I) ima strukturu:
jima, R<4>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<4>može biti
U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti monofosfat. U drugim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti tiomonofosfat. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti difosfat. U drugim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti alfa-tiodifosfat. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti trifosfat. U drugim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti alfa-tiotrifosfat. U nekim otelotvorenjima, R<4>može biti
R<5A>, može biti O<->ili OH; i R<5B>može biti O<->ili OH. U drugim otelotvorenjima, R<4>može biti
; R<5B>može biti
i n može biti 0. U još nekim otelotvorenjima, R<4>može biti
; R<5B>može biti
i n može biti 1. Supstituenti vezani za fosfor mogu da se razlikuju. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti fosforoamidat. U drugim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti tiofosforoamidat. U još nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti fosforbisamidat. U još nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može biti tiofosforbisamidat.
[0085] U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti opciono supstituisana N-vezana aminokiselina. Pogodne su različite aminokiseline, uključujući ovde opisane. Primeri za pogodne aminokiseline uključuju, ali nisu ograničeni na, alanin, asparagin, aspartat, cistein, glutamat, glutamin, glicin, prolin, serin, tirozin, arginin, histidin, izoleucin, leucin, lizin, metionin, fenilalanin, treonin, triptofan i valin. U drugim otelotvorenjima, R<5A>može biti estar opciono supstituisane N-vezane aminokiseline. Primeri za estre N-vezanih aminokiselina uključuju, ali nisu ograničeni na estre bilo koje od sledećih aminokiselina: alanina, asparagina, aspartata, cisteina, glutamata, glutamina, glicina, prolina, serina, tirozina, arginina, histidina, izoleucina, leucina, lizina, metionina, fenilalanina, treonina, triptofana i valina. Dodatni primeri za estre N-vezanih aminokiselina uključuju, ali nisu ograničeni na estar bilo koje od sledećih aminokiselina: alfa-etil glicina, alfa-propil glicina i beta-alanina. U nekim otelotvorenjima, estar N-vezane aminokiseline može biti C1-6alkil estar, na primer, izopropil estar alanina. U drugim otelotvorenjima, estar N-vezane aminokiseline može biti C3-6cikloalkil estar, kao što je cikloheksil estar alanina.
[0086] U nekim otelotvorenjima, R<5A>može imati strukturu
2
pri čemu R<13>može biti izabran od vodonika, opciono supstituisanog C1-6-alkila, opciono supstituisanog C3-6cikloalkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog aril(C1-
6alkila) i opciono supstituisanog haloalkila; R<14>može biti izabran od vodonika, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C1-6haloalkila, opciono supstituisanog C3-
6cikloalkila, opciono supstituisanog C6arila, opciono supstituisanog C10arila i opciono supstituisanog aril(C1-6alkila); i R<15>može biti vodonik ili opciono supstituisani C1-4-alkil; ili R<14>i R<15>mogu zajedno da grade opciono supstituisani C3-6cikloalkil.
[0087] Kada je R<14>supstituisan, R<14>može biti supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih od N-amido, merkapto, alkiltio, opciono supstituisanog arila, hidroksi, opciono supstituisanog heteroarila, O-karboksi i amino. U nekim otelotvorenjima, R<14>može biti nesupstituisani C1-6-alkil, kao što su oni ovde opisani. U nekim otelotvorenjima, R<14>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<14>može biti metil. U nekim otelotvorenjima, R<13>može biti opciono supstituisani C1-6alkil. Primeri za opciono supstituisani C1-6-alkil uključuju opciono supstituisane varijante sledećeg: metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, tercbutil, pentil (sa razgranatim i ravnim nizom) i heksil (sa razgranatim i ravnim nizom). U nekim otelotvorenjima, R<13>može biti metil ili izopropil. U nekim otelotvorenjima, R<13>može biti etil ili neopentil. U drugim otelotvorenjima, R<13>može biti opciono supstituisani C3-6cikloalkil. Primeri za opciono supstituisani C3-6cikloalkil uključuju opciono supstituisane varijante sledećeg: ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil. U nekim otelotvorenjima, R<13>može biti opciono supstituisani cikloheksil. U još nekim otelotvorenjima, R<13>može biti opciono supstituisani aril, kao što su fenil i naftil. U još nekim otelotvorenjima, R<13>može biti opciono supstituisani aril(C1-6alkil). U nekim otelotvorenjima, R<13>može biti opciono supstituisani benzil. U nekim otelotvorenjima, R<13>može biti opciono supstituisani C1-6haloalkil, na primer, CF3. U nekim otelotvorenjima, R<15>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<15>može biti opciono supstituisani C1-4alkil, kao što je metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil ili terc-butil. U nekim otelotvorenjima, R<15>može biti metil. U nekim otelotvorenjima, R<14>i R<15>mogu zajedno da grade opciono supstituisani C3-6cikloalkil. Primeri za opciono supstituisani C3-6cikloalkil uključuju opciono supstituisane varijante sledećeg: ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil. Zavisno od grupa koje su odabrane za R<14>i R<15>, ugljenik za koji su R<14>i R<15>vezani može biti hiralni centar. U jednom otelotvorenju, ugljenik za koji su R<14>i R<15>vezani može biti (R)-hiralni centar. U drugim otelotvorenjima, ugljenik za koji su R<14>i R<15>vezani može biti (S)-hiralni centar.
2
[0088] Primeri za pogodne
grupe uključuju sledeće:
[0089] U nekim otelotvorenjima, R<5B>može biti -O-opciono supstituisani aril. Na primer, R<5B>može biti -O-opciono supstituisani fenil. Kada je fenil supstituisan, prsten može biti supstituisan 1, 2, 3, ili više od 3 puta. Pogodne monosupstituisane fenil grupe uključuju ortosupstituisani fenil, meta-supstituisani fenil i para-supstituisani fenil. U drugim otelotvorenjima,
2
R<5B>može biti -O-nesupstituisani aril. Alternativno, R<5B>može biti -O-opciono supstituisani naftil. U drugim otelotvorenjima, R<5B>može biti -O-opciono supstituisani heteroaril. Na primer, R<5B>može biti -O-opciono supstituisani hinolinil. U još daljim otelotvorenjima, R<5B>može biti -O-opciono supstituisani heterociklil.
[0090] U nekim otelotvorenjima, R<5B>je opciono supstituisana N-vezana aminokiselina, kao što su one opisane za R<5A>. U drugim otelotvorenjima, R<5B>je estar opciono supstituisane N-vezane aminokiseline, na primer, oni opisani ovde. U nekim otelotvorenjima, R<5B>može imati strukturu
pri čemu R<16>može biti izabran od vodonika, opciono supstituisanog C1-6-alkila, opciono supstituisanog C3-6cikloalkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog aril(C1-
6alkila) i opciono supstituisanog haloalkila; R<17>može biti izabran od vodonika, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C1-6haloalkila, opciono supstituisanog C3-
6cikloalkila, opciono supstituisanog C6arila, opciono supstituisanog C10arila i opciono supstituisanog aril(C1-6alkila); i R<18>može biti vodonik ili opciono supstituisani C1-4-alkil; ili R<17>i R<18>mogu zajedno da grade opciono supstituisani C3-6cikloalkil.
[0091] Kada je R<17>supstituisan, R<17>može biti supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih od N-amido, merkapto, alkiltio, opciono supstituisanog arila, hidroksi, opciono supstituisanog heteroarila, O-karboksi i amino. U nekim otelotvorenjima, R<17>može biti nesupstituisani C1-6-alkil, kao što su oni ovde opisani. U nekim otelotvorenjima, R<17>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<17>može biti metil. U nekim otelotvorenjima, R<16>može biti opciono supstituisani C1-6alkil. Primeri za opciono supstituisani C1-6-alkil uključuju opciono supstituisane varijante sledećeg: metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, tercbutil, pentil (sa razgranatim i ravnim nizom) i heksil (sa razgranatim i ravnim nizom). U nekim otelotvorenjima, R<16>može biti metil ili izopropil. U nekim otelotvorenjima, R<16>može biti etil ili neopentil. U drugim otelotvorenjima, R<16>može biti opciono supstituisani C3-6cikloalkil. Primeri za opciono supstituisani C3-6cikloalkil uključuju opciono supstituisane varijante sledećeg: ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil. U nekim otelotvorenjima, R<16>može biti opciono supstituisani cikloheksil. U još nekim otelotvorenjima, R<16>može biti opciono supstituisani aril, kao što su fenil i naftil. U još nekim otelotvorenjima, R<16>može biti opciono supstituisani aril(C1-6alkil). U nekim otelotvorenjima, R<16>može biti opciono supstituisani
2
benzil. U nekim otelotvorenjima, R<16>može biti opciono supstituisani C1-6haloalkil, na primer, CF3. U nekim otelotvorenjima, R<18>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<18>može biti opciono supstituisani C1-4-alkil, kao što je metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil ili terc-butil. U nekim otelotvorenjima, R<18>može biti metil. U nekim otelotvorenjima, R<17>i R<18>mogu zajedno da grade opciono supstituisani C3-6cikloalkil. Primeri za opciono supstituisani C3-6cikloalkil uključuju opciono supstituisane varijante sledećeg: ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil. Zavisno od grupa koje su odabrane za R<17>i R<18>, ugljenik za koji su R<17>i R<18>vezani može biti hiralni centar. U jednom otelotvorenju, ugljenik za koji su R<17>i R<18>vezani može biti (R)-hiralni centar. U drugim otelotvorenjima, ugljenik za koji su R<17>i R<18>vezani može biti (S)-hiralni centar.
[0092] Primeri za pogodne
grupe uključuju sledeće:
2
[0093] U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili estar opciono supstituisane N-vezane aminokiseline, i R<5B>može biti -O-opciono supstituisani aril. U drugim otelotvorenjima, R<5A>može biti opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili estar opciono supstituisane N-vezane aminokiseline i R<5B>može biti -O-opciono supstituisani heteroaril. U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili estar opciono supstituisane N-vezane aminokiseline i R<5A>može biti opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili estar opciono supstituisane N-vezane aminokiseline.
[0094] U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti
Kada je R<5A>
R<8A>i R<9A>mogu biti nezavisno izabrani od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkila i opciono supstituisanog arila; i R<10A>može biti izabran od vodonika, opciono supstituisanog C1-
24alkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog -O-C1-24alkila, opciono supstituisanog -O-arila, opciono supstituisanog -O-heteroarila i opciono supstituisanog -O-monocikličnog heterociklila. U nekim otelotvorenjima, R<8A>i R<9A>mogu biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, najmanje jedan od R<8A>i R<9A>može biti opciono supstituisani C1-24alkil ili opciono supstituisani aril. U nekim otelotvorenjima, R<10A>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<10A>može biti opciono supstituisani C1-24alkil. U nekim otelotvorenjima, R<10A>može biti nesupstituisani C1-4alkil. U još nekim otelotvorenjima, R<10A>može biti opciono supstituisani aril. U još daljim otelotvorenjima, R<10A>može biti -OC1-24alkil, opciono supstituisani -O-aril, opciono supstituisani -O-heteroaril ili opciono supstituisani -O-monociklični heterociklil. U nekim otelotvorenjima, R<10A>može biti nesupstituisani -OC1-4alkil.
[0095] U nekim otelotvorenjima, R<5B>može biti
Kada je R<5B>
R<8B>i R<9B>mogu biti nezavisno izabrani od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkila i opciono supstituisanog arila; i R<10B>može biti izabran od vodonika, opciono supstituisanog C1-
24alkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog -O-C1-24alkila, opciono supstituisanog -O-arila, opciono supstituisanog -O-heteroarila i opciono supstituisanog -O-monocikličnog heterociklila. U nekim otelotvorenjima, R<8B>i R<9B>mogu biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, najmanje jedan od R<8B>i R<9B>može biti opciono supstituisani C1-24alkil ili opciono supstituisani aril. U nekim otelotvorenjima, R<10B>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<10B>može biti opciono supstituisani C1-24alkil. U nekim otelotvorenjima, R<10B>može biti nesupstituisani C1-4alkil. U još nekim otelotvorenjima, R<10B>može biti opciono supstituisani aril. U još daljim otelotvorenjima, R<10B>može biti -OC1-24alkil, opciono supstituisani -O-aril, opciono supstituisani -O-heteroaril ili opciono supstituisani -O-monociklični heterociklil. U nekim otelotvorenjima, R<10B>može biti nesupstituisani -O-C1-
4alkil. U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti
i R<5B>može biti
1
[0096] U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti
pri čemu R<11A>i R<12A>mogu biti nezavisno izabrani od vodonika, opciono supstituisanog C1-
24alkila i opciono supstituisanog arila; R<13A>može biti nezavisno izabran od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog -O-C1-24alkila, opciono supstituisanog -O-arila, opciono supstituisanog -O-heteroarila i opciono supstituisanog -O-monocikličnog heterociklila; i Z<1A>može nezavisno biti O (kiseonik) ili S (sumpor). U nekim otelotvorenjima, R<11A>i R<12A>mogu biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, najmanje jedan od R<11A>i R<12A>može biti opciono supstituisani C1-24alkil ili opciono supstituisani aril. U nekim otelotvorenjima, R<13A>može biti opciono supstituisani C1-24alkil. U nekim otelotvorenjima, R<13A>može biti nesupstituisani C1-4alkil. U drugim otelotvorenjima, R<13A>može biti opciono supstituisani aril. U još nekim otelotvorenjima, R<13A>može biti opciono supstituisani -O-C1-24alkil, opciono supstituisani -O-aril, opciono supstituisani -O-heteroaril ili opciono supstituisani -O-monociklični heterociklil. U nekim otelotvorenjima, R<13A>može biti nesupstituisani -O-C1-4alkil. U nekim otelotvorenjima, Z<1A>može biti O (kiseonik). U drugim otelotvorenjima, Z<1A>može biti ili S (sumpor).
[0097] U nekim otelotvorenjima, R<5B>može biti
pri čemu R<11B>i R<12B>mogu biti nezavisno izabrani od vodonika, opciono supstituisanog C1-
24alkila i opciono supstituisanog arila; R<13B>može biti nezavisno izabran od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog -O-C1-24alkila, opciono supstituisanog -O-arila, opciono supstituisanog -O-heteroarila i opciono supstituisanog -O-monocikličnog heterociklila; i Z<1B>može nezavisno biti O (kiseonik) ili S (sumpor). U nekim otelotvorenjima, R<11B>i R<12B>mogu biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, najmanje jedan od R<11B>i R<12B>može biti opciono supstituisani C1-24alkil ili opciono supstituisani aril. U nekim otelotvorenjima, R<13B>može biti opciono supstituisani C1-24alkil. U nekim otelotvorenjima, R<13B>može biti nesupstituisani C1-4alkil. U drugim otelotvorenjima, R<13B>može biti opciono supstituisani aril. U još nekim otelotvorenjima, R<13B>može biti opciono supstituisani -O-C1-24alkil, opciono supstituisani -O-aril, opciono supstituisani -O-heteroaril
2
ili opciono supstituisani -O-monociklični heterociklil. U nekim otelotvorenjima, R<13B>može biti nesupstituisani -O-C1-4alkil. U nekim otelotvorenjima, Z<1B>može biti O (kiseonik). U drugim otelotvorenjima, Z<1B>može biti ili S (sumpor). U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti
[0098] U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti
U nekim otelotvorenjima, R<14A>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<14A>može biti opciono supstituisani C1-24alkil. U još nekim otelotvorenjima, R<14A>može biti opciono supstituisani aril. U nekim otelotvorenjima, R<14A>može biti C1-6alkil, na primer, metil, etil, npropil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, pentil (sa razgranatim i ravnim nizom) i heksil (sa razgranatim i ravnim nizom). U nekim otelotvorenjima, p može biti 1. U drugim otelotvorenjima, p može biti 2.
[0099] U nekim otelotvorenjima, R<5B>može biti
U nekim otelotvorenjima, R<14B>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<14B>može biti opciono supstituisani C1-24alkil. U još nekim otelotvorenjima, R<14B>može biti opciono supstituisani aril. U nekim otelotvorenjima, R<14B>može biti C1-6alkil, na primer, metil, etil, npropil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, pentil (sa razgranatim i ravnim nizom) i heksil (sa razgranatim i ravnim nizom). U nekim otelotvorenjima, q može biti 1. U drugim otelotvorenjima, q može biti 2. U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti
i R<5B>može biti
renjima, R<5A>može biti
U nekim otelotvorenjima, R<15A>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<15A>može biti opciono supstituisani C1-24alkil. U još nekim otelotvorenjima, R<15A>može biti opciono supstituisani aril, na primer, opciono supstituisani fenil. U nekim otelotvorenjima, R<15A>može biti opciono supstituisani C1-6alkil. U nekim otelotvorenjima, R<15A>može biti nesupstituisani C1-6alkil. U nekim otelotvorenjima, s može biti 3. U drugim otelotvorenjima, s može biti 4. U još nekim otelotvorenjima, s može biti 5.
[0101] U nekim otelotvorenjima, R<5B>može biti
U nekim otelotvorenjima, R<15B>može biti vodonik. U drugim otelotvorenjima, R<15B>može biti opciono supstituisani C1-24alkil. U još nekim otelotvorenjima, R<15B>može biti opciono supstituisani aril, na primer, opciono supstituisani fenil. U nekim otelotvorenjima, R<15B>može biti opciono supstituisani C1-6alkil. U nekim otelotvorenjima, R<15B>može biti nesupstituisani C1-6alkil. U nekim otelotvorenjima, t može biti 3. U drugim otelotvorenjima, t može biti 4. U još nekim otelotvorenjima, t može biti 5. U nekim otelotvorenjima, R<5A>može biti
[0102] U nekim otelotvorenjima, R<5A>i/ili R<5B>može biti izopropil oksikarbonil oksimetoksi (POC) grupa. U nekim otelotvorenjima, R<5A>i/ili R<5B>može biti pivaloil oksimetoksi (POM) grupa. U nekim otelotvorenjima, R<5A>i R<5B>mogu oba biti izopropil oksikarbonil oksimetoksi
4
(POC) grupa i grade bis(izopropil oksikarbonil oksimetoksi) (bis(POC)) prolek. U drugim otelotvorenjima, R<5A>i R<5B>mogu oba biti pivaloil oksimetoksi (POM) grupa i grade bis(pivaloil oksimetoksi) (bis(POM)) prolek. U još nekim otelotvorenjima, R<5A>i R<5B>mogu oba biti S-aciltioetil (SATE)-O- grupa i grade SATE estarski prolek. U nekim otelotvorenjima, R<5A>i R<5B>mogu biti isti. U drugim otelotvorenjima, R<5A>i R<5B>mogu biti različiti.
[0103] Nukleobaza može da se razlikuje. U nekim otelotvorenjima, B<1>može biti guanin. U nekim otelotvorenjima, B<1>može biti opciono supstituisani
U drugim otelotvorenjima, B<1>može biti opciono supstituisani
pri čemu R<6B>može biti izabran od vodonika, nesupstituisanog C1-6alkila, nesupstituisanog C3-
6alkenila, nesupstituisanog C3-6alkinila i nesupstituisanog C3-6cikloalkila. U nekim otelotvorenjima, B<1>može biti nesupstituisan
U nekim otelotvorenjima, R<6B>može biti nesupstituisani C1-6alkil. Na primer, R<6B>može biti metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, pentil (sa razgranatim ili ravnim nizom) ili heksil (sa razgranatim ili ravnim nizom). U nekim otelotvorenjima, R<6B>može biti nesupstituisani C3-6alkenil. U drugim otelotvorenjima, R<6B>može biti nesupstituisani C3-
6alkinil. U još nekim otelotvorenjima, R<6B>može biti nesupstituisani C3-6cikloalkil, na primer, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil.
[0104] U nekim otelotvorenjima, B<1>može biti opciono supstituisani
pri čemu R<6C>može biti izabran od vodonika, nesupstituisanog C1-6alkila, nesupstituisanog C3-
6alkenila, nesupstituisanog C3-6alkinila i nesupstituisanog C3-6cikloalkila. U nekim otelotvorenjima, B<1>može biti nesupstituisan
U nekim otelotvorenjima, R<6C>može biti vodonik. U nekim otelotvorenjima, R<6C>može biti nesupstituisani C1-6alkil. Na primer, R<6C>može biti metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, pentil (sa razgranatim ili ravnim nizom) ili heksil (sa razgranatim ili ravnim nizom). U nekim otelotvorenjima, R<6C>može biti etil. U nekim otelotvorenjima, R<6C>može biti nesupstituisani C3-6alkenil. U drugim otelotvorenjima, R<6C>može biti nesupstituisani C3-
6alkinil. U drugim otelotvorenjima, R<6C>može biti nesupstituisani C3-6cikloalkil, na primer, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil.
[0105] U nekim otelotvorenjima, Z<1>može biti O (kiseonik). U drugim otelotvorenjima, Z<1>može biti S (sumpor).
[0106] U nekim otelotvorenjima, R<2>nije halo. U nekim otelotvorenjima, R<2>nije fluor. U nekim otelotvorenjima, R<5B>nije -O-opciono supstituisani aril. U nekim otelotvorenjima, R<5B>nije -O-nesupstituisani aril. U nekim otelotvorenjima, R<5A>nije N-alanin izopropil estar. U nekim otelotvorenjima, R<1>nije opciono supstituisani C1-6alkil. Na primer, R<1>nije nesupstituisani C1-
6alkil, kao što je metil. U nekim otelotvorenjima; R<3>je OH ili -OC(=O)R<8>; R<2>je F; a R<1>je metil, etil ili etenil; onda R<4>ne može da se izabere od H i
pri čemu R<5B>je -O-nesupstituisani aril; R<5A>je
i Z<1>je kiseonik. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) nije jedinjenje u WO 2013/092481 (podnet 17. decembra 2012.).
[0107] Primeri struktura jedinjenja formule (I) uključuju sledeće:
ili farmaceutski prihvatljivu so prethodno navedenog. U nekim otelotvorenjima ovog paragrafa, R<3>može biti OH. U nekim otelotvorenjima ovog paragrafa, R<6C>može biti nesupstituisani C1-
6alkil, kao što je CH2CH3. U nekim otelotvorenjima ovog paragrafa, R<4>može biti H. U drugim otelotvorenjima ovog paragrafa, R<4>može biti fosforoamidatna grupa. U još nekim otelotvorenjima ovog paragrafa, R<4>može biti fosfatna grupa (kao što je mono-, di- ili trifosfat). U još daljim otelotvorenjima ovog paragrafa, R<4>može biti tiofosforoamidatna grupa. U nekim otelotvorenjima ovog paragrafa, R<4>može biti tiofosfatna grupa (kao što je alfa-tiomono-, alfatiodi- ili alfa-tiotrifosfat). U nekim otelotvorenjima ovog paragrafa, R<p1>može biti -O-etil, -O-izopropil ili -O-izobutil.
[0108] Primeri jedinjenja formule (I) uključuju sledeće:
ili farmaceutski prihvatljivu so prethodno navedenog.
[0109] Dalji primeri jedinjenja formule (I) uključuju sledeće:
ili farmaceutski prihvatljivu so prethodno navedenog.
[0110] Dalji primeri jedinjenja formule (I) uključuju sledeće:
ili farmaceutski prihvatljivu so prethodno navedenog.
[0111] Kao što je ovde opisano, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so može imati R<4>koji je
4
R<5A>koji je opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili estar opciono supstituisane N-vezane aminokiseline; i R<5B>koji je -O-opciono supstituisani aril, -O-opciono supstituisani heteroaril, -O-opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili estar opciono supstituisane N-vezane aminokiseline. Neutralizacijom naelektrisanja na fosfatu ili tiofosfatu, prodiranje u ćelijsku membranu može da se olakša usled povećane lipofilnosti jedinjenja. Nakon što su apsorbovane i preuzete u ćeliju, grupe povezane sa fosforom mogu lako da se uklone pomoću esteraza, proteaza i/ili drugih enzima. U nekim otelotvorenjima, grupe vezane za fosfor mogu da se uklone jednostavnom hidrolizom. Unutar ćelije, tako oslobođeni fosfat tada može da se metaboliše pomoću ćelijskih enzima u difosfat ili aktivni trifosfat. Slično tome, tiofosfat može da se metaboliše u alfa-tiodifosfat ili alfatiotrifosfat. Nadalje, u nekim otelotvorenjima, promena supstituenata na ovde opisanom jedinjenju, kao što je jedinjenje formule (I), može pomoći u održavanju efikasnosti takvog jedinjenja putem smanjenja neželjenih dejstava, poput izomerizacije.
[0112] U nekim otelotvorenjima, fosforilacija tio-monofosfata jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli može biti stereoselektivna. Na primer, tio-monofosfat jedinjenja formule (I) može biti fosforilovan radi dobijanja jedinjenja alfa-tiodifosfata i/ili alfatiotrifosfata koje može da se obogati (R) ili (S) dijastereomerom u odnosu na atom 5'-O-fosfora. Na primer, jedna od (R) i (S) konfiguracije u odnosu na atom 5'-O-fosfora jedinjenja alfatiodifosfata i/ili alfa-tiotrifosfata može biti prisutna u količini od > 50%, ≥ 75%, ≥ 90%, ≥ 95% ili ≥ 99% u poređenju sa količinom druge (R) ili (S) konfiguracije u odnosu na atom 5'-O-fosfora. U nekim otelotvorenjima, fosforilacija jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli može dovesti do stvaranja jedinjenja koje ima (R)-konfiguraciju na atomu 5'-O-fosfora. U nekim otelotvorenjima, fosforilacija jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli može dovesti do stvaranja jedinjenja koje ima (S)-konfiguraciju na atomu 5'-O-fosfora.
[0113] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da deluju kao terminator lanca replikacije HCV. Na primer, jedinjenja formule (I) mogu da sadrže ostatak na poziciji 2'-ugljenika tako da, kada je jedinjenje inkorporisano u lanac RNK HCV, nije uočena dalja pojava elongacije. Na primer, jedinjenje formule (I) može da sadrži modifikaciju 2'-ugljenika, pri čemu je R<1>nevodonična grupa izabrana od opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-
6alkinila i opciono supstituisanog C3-6cikloalkila.
[0114] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu imati povećanu metaboličku stabilnost i/ili stabilnost u plazmi. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu biti otporniji na hidrolizu i/ili otporniji na enzimske transformacije. Na primer, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu imati povećanu metaboličku stabilnost, povećanu stabilnost u plazmi, mogu biti otporniji na hidrolizu i/ili mogu biti otporniji na enzimske transformacije u poređenju sa jedinjenjem koje je identično po strukturi, osim što ima vodonik na mestu fluora na 4'-poziciji. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu imati poboljšana svojstva. Neograničavajući spisak primera svojstava uključuje, ali nije ograničen na, produženi biološki poluživot, povećanu bioraspoloživost, povećanu potentnost, produženi odgovor in vivo, povećane intervale doziranja, smanjene dozne količine, smanjenu citotoksičnost, smanjenje potrebnih količina za lečenje bolesti, smanjenje virusnog opterećenja, smanjenje vremena do serokonverzije (tj. postaje nemoguće detektovati virus u serumu pacijenta), povećani produženi virusni odgovor, smanjenje morbiditeta ili mortaliteta u kliničkim ishodima, povećanu usklađenost ispitanika, smanjenje stanja jetre (kao što je fibroza jetre, ciroza jetre i/ili kancer jetre) i kompatibilnost sa drugim lekovima. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu imati biološki poluživot veći od 24 sata. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu imati biološki poluživot veći nego jedinjenje koje je identično po strukturi, osim što ima vodonik na mestu fluora na 4'-poziciji. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu imati potentniju antivirusnu aktivnost (na primer, niži EC50u testu replikona HCV) u poređenju sa trenutnim standardom nege. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ne inhibiraju u značajnoj meri mitohondrijsku funkciju mitohondrijske RNK polimeraze. Na primer, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so su inkorporisani u humanu mitohondrijsku RNK polimerazu manje od 10% u poređenju sa prirodnim 5'-trifosfatnim nukleotidom sa istim B<1>.
[0115] Pored toga, u nekim otelotvorenjima, prisustvo tiofosforoamidata, fosforoamidata, tiofosforbisamidata ili fosforbisamidata u jedinjenju formule (I) može povećati stabilnost jedinjenja putem inhibicije njegove razgradnje. Takođe, u nekim otelotvorenjima, prisustvo tiofosforoamidata, fosforoamidata, tiofosforbisamidata ili fosforbisamidata može učiniti jedinjenje otpornijim na cepanje in vivo i pružiti produženu, dužu delotvornost. U nekim otelotvorenjima, tiofosforoamidat, fosforoamidat, tiofosforbisamidat ili fosforbisamidat mogu da olakšaju prodiranje jedinjenja formule (I) u ćelijsku membranu tako što će učiniti jedinjenje lipofilnijim. U nekim otelotvorenjima, tiofosforoamidat, fosforoamidat, tiofosforbisamidat ili fosforbisamidat može imati poboljšanu oralnu bioraspoloživost, poboljšanu stabilnost u vodi i/ili smanjeni rizik od toksičnosti povezane sa nusproizvodom. U nekim otelotvorenjima, u svrhe poređenja, jedinjenje formule (I) može da se poredi sa jedinjenjem koje je identično po strukturi, osim što ima vodonik na mestu fluora na 4'-poziciji.
Sinteza
[0116] Jedinjenja formule (I) i ona koja su ovde opisana mogu da se pripreme na različite načine. Opšti postupci sinteze jedinjenja formule (I) i neki primeri polaznih supstanci koje se koriste za sintezu jedinjenja formule (I) prikazani su u Šemi 1 i 2, i opisani ovde. Ovde opisani postupci su isključivo ilustrativni, i nije predviđeno da ni na koji način ograničavaju opseg zahteva, niti ih treba tako tumačiti. Stručnjaci će umeti da prepoznaju modifikacije otkrivenih sinteza, i da smisle alternativne postupke na osnovu otkrića u ovom tekstu; sve takve modifikacije i alternativni postupci su u opsegu patentnih zahteva.
[0117] Jedinjenja formule (I) mogu da se pripreme koristeći različite postupke poznate stručnjacima. Primeri postupaka su prikazani u Šemama 1 i 2. Pogodni prekursori koji sadrže fosfor mogu biti komercijalno nabavljeni ili pripremljeni sintetičkim postupcima koji su poznati stručnjacima. Primeri opštih struktura prekursora koji sadrže fosfor prikazani su u Šemama 1 i 2, i uključuju fosforohloridate i tiofosforohloridate. Pogodni fosforohloridati i tiofosforohloridati su komercijalno dostupni i/ili mogu sintetički da se pripreme.
4
[0118] Jedan postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) prikazan je u Šemi 1. U Šemi 1, R<1a>, R<2a>, R<3a>i B<1a>mogu biti isti kao R<1>, R<2>, R<3>i B<1>kako je ovde opisano za formulu (I). U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) može da se dobije od jedinjenja formule (A) i jedinjenja formule (B) ili jedinjenja formule (A) i jedinjenja formule (C) koristeći organometalni reagens, kao što je Grinjarov reagens. Pogodni Grinjarovi reagensi su poznati stručnjacima i uključuju, ali nisu ograničeni na, alkilmagnezijum hloride i alkilmagnezijum bromide. U drugim otelotvorenjima, odgovarajuća baza može da se koristi da se formira jedinjenje formule (I). Primeri za pogodne baze uključuju, ali nisu ograničeni na, aminsku bazu, kao što je alkilamin (uključujući mono-, di- i trialkilamine (npr. trietilamin)), opciono supstituisane piridine (npr. kolidin) i opciono supstituisane imidazole (npr. N-metilimidazol)).
[0119] Kada jedinjenja formule (I) imaju Z<1>koji je sumpor, sumpor se može dodati na različite načine. U nekim otelotvorenjima, sumpor može biti deo prekursora koji sadrži fosfor, na primer,
Alternativno, jedan od kiseonika koji je vezan za fosfor može se zameniti sumporom koristeći reagens za sumporizaciju. Pogodni agensi za sumporizaciju su poznati stručnjacima, i uključuju, ali nisu ograničeni na, elementalni sumpor, Losonov reagens, ciklooktasumpor, 3H-1,2-benzoditiol-3-on-1,1-dioksid (Bokažov reagens), 3-((N,N-dimetilaminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazol-5-tion (DDTT) i bis(3-trietoksisilil)propil-tetrasulfid (TEST).
[0120] Prekursor koji sadrži fosfor može da se kupluje sa nukleozidom, na primer, jedinjenjem formule (A). Nakon kuplovanja prekursora koji sadrži fosfor, bilo koja odlazeća grupa može da se otcepi u pogodnim uslovima, kao što je hidroliza. U Šemi 2, R<1a>, R<2a>, R<3a>i B<1a>mogu biti isti kao R<1>, R<2>, R<3>i B<1>kako je ovde opisano za formulu (I). Dalje grupe koje sadrže fosfor mogu da se dodaju koristeći postupke koji su poznati stručnjacima, na primer, koristeći pirofosfat. Po želji, jedna ili više baza može da se koristi prilikom dodavanja svake grupe koja sadrži fosfor. Ovde su opisani primeri pogodnih baza.
[0121] Kao što je ovde opisano, u nekim otelotvorenjima, R<2>i R<3>svaki mogu biti atom kiseonika, pri čemu su atomi kiseonika povezani karbonilnim grupama. -O-C(=O)-O-grupa može da se formira koristeći postupke koji su poznati stručnjacima. Na primer, jedinjenje formule (I), pri čemu su R<2>i R<3>oba hidroksi grupe, može da se tretira 1,1'-karbonildiimidazolom (CDI).
[0122] U nekim otelotvorenjima, R<2>i/ili R<3>može biti -OC(=O)R<12>odnosno -OC(=O)R<8>. -OC(=O)R<12>i -OC(=O)R<8>grupe mogu da se formiraju na 2'- i 3'-pozicijama koristeći različite postupke koji su poznati stručnjacima. Kao primer, jedinjenje formule (I) u kome su R<2>i R<3>oba hidroksi grupe može da se tretira alkil anhidridom (npr. sirćetni anhidrid i propionski anhidrid) ili kiselim alkil hloridom (npr. acetilhlorid). Katalizator može po želji da se koristi da se olakša reakcija. Primer pogodnog katalizatora je 4-dimetilaminopiridin (DMAP). Alternativno, -OC(=O)R<12>i -OC(=O)R<8>grupe mogu da se formiraju na 2'- i 3'-pozicijama putem reakcije alkilne kiseline (npr. sirćetne kiseline i propionske kiseline) u prisustvu karbodiimida ili reagensa za kuplovanje. Primeri za karbodiimid uključuju, ali nisu ograničeni na, N,N'-
4
dicikloheksilkarbodiimid (DCC), N,N'-diizopropilkarbodiimid (DIC) i 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid (EDC).
[0123] Da bi se smanjilo stvaranje sporednih proizvoda, jedna ili više grupa koje su vezane za prsten pentoze može se zaštititi sa jednom ili više pogodnih zaštitnih grupa. Na primer, ako R<2>i/ili R<3>predstavlja/predstavljaju hidroksi grupu, hidroksi grupa može da se zaštiti pogodnim zaštitnim grupama, kao što su triarilmetil i/ili silil grupe. Primeri triarilmetil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, tritil, monometoksitritil (MMTr), 4,4'-dimetoksitritil (DMTr), 4,4',4"-trimetoksitritil (TMTr), 4,4',4"-tris- (benzoiloksi) tritil (TBTr), 4,4',4"-tris (4,5-dihlorftalimido) tritil (CPTr), 4,4',4"-tris (levuliniloksi) tritil (TLTr), p-anisil-1-naftilfenilmetil, di-o-anisil-1-naftilmetil, p-tolildifeilmetil, 3-(imidazolilmetil)-4,4'-dimetoksitritil, 9-fenilksanten-9-il (Piksil), 9-(p-metoksifenil) ksanten-9-il (Moks), 4-deciloksitritil, 4-heksadeciloksitritil, 4,4'-dioktadeciltritil, 9-(4-oktadeciloksifenil) ksanten-9-il, 1,1'-bis-(4-metoksifenil)-1'-pirenilmetil, 4,4',4"-tris-(terc-butilfenil) metil (TTTr) i 4,4'-di-3,5-heksadienoksitritil. Primeri pogodnih silil grupa su opisani ovde, i uključuju trimetilsilil (TMS), terc-butildimetilsilil (TBDMS), triizopropilsilil (TIPS), terc-butildifenilsilil (TBDPS), tri-izo-propilsililoksimetil i [2-(trimetilsilil)etoksi]metil. Alternativno, R<2>i/ili R<3>može biti zaštićen jednom ahiralnom ili hiralnom zaštitnom grupom, na primer, formiranjem ortoestra, cikličnog acetala ili cikličnog ketala. Pogodni ortoestri uključuju metoksimetilen acetal, etoksimetilen acetal, 2-oksaciklopentiliden ortoestar, dimetoksimetilen ortoestar, 1-metoksietiliden ortoestar, 1-etoksietiliden ortoestar, metiliden ortoestar, ftalid ortoestar 1,2-dimetoksietiliden ortoestar i alfa-metoksibenziliden ortoestar; pogodni ciklični acetali uključuju metilen acetal, etiliden acetal, t-butilmetiliden acetal, 3-(benziloksi)propil acetal, benziliden acetal, 3,4-dimetoksibenziliden acetal i p-acetoksibenziliden acetal; i pogodni ciklični ketali uključuju 1-t-butiletiliden ketal, 1-feniletiliden ketal, izopropiliden ketal, ciklopentiliden ketal, cikloheksiliden ketal, cikloheptiliden ketal i 1-(4-metoksifenil)etiliden ketal.
Farmaceutske kompozicije
[0124] Neka ovde opisana otelotvorenja se odnose na farmaceutsku kompoziciju koja uključuje delotvornu količinu jednog ili više ovde opisanih jedinjenja (npr. jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so) i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ekscipijens ili njihovu kombinaciju. U nekim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija može da uključuje jedan dijastereomer jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (na primer, jedan dijastereomer je prisutan u farmaceutskoj kompoziciji u koncentraciji
4
većoj od 99% u poređenju sa ukupnom koncentracijom ostalih dijastereomera). U drugim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija može da uključuje smešu dijastereomera jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Na primer, farmaceutska kompozicija može da uključuje koncentraciju jednog dijastereomera od > 50%, ≥ 60%, ≥ 70%, ≥ 80%, ≥ 90%, ≥ 95%, ili ≥ 98% u poređenju sa ukupnom koncentracijom ostalih dijastereomera. U nekim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija uključuje smešu 1:1 dva dijastereomera jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0125] Termin „farmaceutska kompozicija“ odnosi se na smešu jednog ili više ovde otkrivenih jedinjenja sa drugim hemijskim komponentama, kao što su razblaživači ili nosači. Farmaceutska kompozicija olakšava primenu jedinjenja u organizmu. Farmaceutske kompozicije takođe mogu da se dobiju reakcijom jedinjenja sa neorganskim ili organskim kiselinama, kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, ptoluensulfonska kiselina i salicilna kiselina. Farmaceutske kompozicije će uopšteno biti prilagođene specifičnom predviđenom načinu primene. Farmaceutska kompozicija je pogodna za humane i/ili veterinarske primene.
[0126] Termin „fiziološki prihvatljiv“ definiše nosač, razblaživač ili ekscipijens koji ne ukida biološku aktivnost ili svojstva jedinjenja.
[0127] Kako se ovde koristi, „nosač“ se odnosi na jedinjenje koje olakšava inkorporaciju jedinjenja u ćelije ili tkiva. Na primer, bez ograničenja, dimetil sulfoksid (DMSO) je uobičajeno korišćeni nosač koji olakšava unos mnogih organskih jedinjenja u ćelije ili tkiva ispitanika.
[0128] Kako se ovde koristi, „razblaživač“ se odnosi na sastojak farmaceutske kompozicije kome nedostaje farmakološka aktivnost, ali može biti farmakološki neophodan ili poželjan. Na primer, razblaživač može da se koristi da se poveća masa potentnog leka čija masa je premala za proizvodnju i/ili primenu. To može biti i tečnost za rastvaranje leka koja se primenjuje injekcijom, gutanjem ili udisanjem. Uobičajeni oblik razblaživača je puferovani vodeni rastvor kao što je, bez ograničenja, fiziološki rastvor puferovan fosfatom koji imitira kompoziciju ljudske krvi.
4
[0129] Kako se ovde koristi, „ekscipijens“ se odnosi na inertnu supstancu koja se dodaje farmaceutskoj kompoziciji da bi se kompoziciji obezbedili, bez ograničenja, masa, konzistentnost, stabilnost, sposobnost vezivanja, sposobnost dezintegracije, itd. „Razblaživač“ je vrsta ekscipijensa.
[0130] Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu da se primenjuju na ljudskom pacijentu kao takve, ili u farmaceutskim kompozicijama u kojima su pomešane sa drugim aktivnim sastojcima, kao u kombinovanoj terapiji, ili nosačima, razblaživačima, ekscipijensima ili njihovom kombinacijom. Ispravna formulacija zavisi od izabranog načina primene. Tehnike formulisanja i primene ovde opisanih jedinjenja poznate su stručnjacima.
[0131] Ovde otkrivene farmaceutske kompozicije mogu da se proizvode na način koji je i sam poznat, npr. putem konvencionalnog mešanja, rastvaranja, granulacije, pravljenja dražeja, pravljenja praha, emulgovanja, enkapsulacije, hvatanja ili pravljenja tableta. Uz to, aktivni sastojci su sadržani u količini koja je delotvorna za postizanje željene svrhe. Mnoga jedinjenja koja se koriste u ovde otkrivenim farmaceutskim kombinacijama mogu se obezbediti kao soli sa farmaceutski kompatibilnim kontrajonima.
[0132] U struci postoji više tehnika primene jedinjenja uključujući, ali ne ograničavajući se na, oralnu, rektalnu, topikalnu primenu, aerosol, injekciju i parenteralnu primenu, uključujući intramuskularne, supkutane, intravenske, intramedularne injekcije, intratekalne, direktne intraventrikularne, intraperitonealne, intranazalne i intraokularne injekcije.
[0133] Jedinjenje takođe može da se pripremi na lokalni, a ne na sistemski način, na primer, putem injekcije jedinjenja direktno u inficiranu oblast, često u vidu depo injekcije ili formulacije sa produženim otpuštanjem. Nadalje, jedinjenje može da se primeni u ciljanom sistemu za isporuku leka, na primer, u lipozomu premazanom antitelom specifičnim za tkivo. Lipozomi će ciljati organe, i oni će ih selektivno preuzimati.
[0134] Kompozicije mogu, po želji, da se prezentuju u pakovanju ili sredstvu za doziranje koje može da sadrži jedan ili više jediničnih doznih oblika koji sadrže aktivni sastojak. Pakovanje može, na primer, da sadrži metalnu ili plastičnu foliju, poput blister pakovanja. Pakovanje ili sredstvo za doziranje može biti praćeno uputstvom za primenu. Pakovanje ili dozator mogu takođe biti praćeni obaveštenjem povezanim sa ambalažom u obliku koji propisuje državna
4
agencija koja reguliše proizvodnju, upotrebu ili prodaju farmaceutskih proizvoda, pri čemu obaveštenje pokazuje odobrenje agencije oblika leka za ljudsku ili veterinarsku primenu. Takvo obaveštenje, na primer, može biti etiketa odobrenja od strane Uprave za hranu i lekove Sjedinjenih Američkih Država za lekove na recept ili uložak za odobreni proizvod. Kompozicije koje mogu da uključuju ovde opisano jedinjenje formulisano u kompatibilnom farmaceutskom nosaču mogu takođe da se pripreme, stave u odgovarajuću ambalažu i obeleže za lečenje naznačenog stanja.
Postupci za upotrebu
[0135] Ovde je takođe otkriven postupak za lečenje i/ili ublažavanje bolesti ili stanja koji može da obuhvata primenu na ispitaniku delotvorne količine jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, kao što je jedinjenje formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Ovde je takođe otkriven postupak za lečenje i/ili ublažavanje bolesti ili stanja koji može da obuhvata primenu na ispitaniku, za koga je otkriveno da boluje od bolesti ili stanja, delotvorne količine jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, kao što je jedinjenje formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0136] Ovde je takođe otkriven postupak za ublažavanje ili lečenje infekcije HCV koji može da obuhvata primenu na ispitaniku, za koga je otkriveno da boluje od infekcije HCV, delotvorne količine jednog ili više ovde opisanih jedinjenja (na primer, jedinjenja formule (I)) ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedno ili više ovde opisanih jedinjenja ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. Ovde je takođe opisano korišćenje jednog ili više ovde opisanih jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli ovde opisanog jedinjenja u proizvodnji leka za ublažavanje i/ili lečenje infekcije HCV, što može da uključuje primenu na ispitaniku, za koga je otkriveno da boluje od infekcije HCV, delotvorne količine jednog ili više ovde opisanih jedinjenja. Ovde je takođe opisano jedno ili više ovde opisanih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljiva so ovde opisanog jedinjenja, koji mogu da se upotrebe za ublažavanje i/ili lečenje infekcije HCV putem primene na ispitaniku, za koga je otkriveno da boluje od infekcije HCV, delotvorne količine jednog ili više ovde opisanih jedinjenja.
[0137] Ovde su takođe otkriveni postupci za ublažavanje i/ili lečenje infekcije HCV koji mogu da uključuju dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom
4
količinom jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, ili farmaceutske soli ovde opisanog jedinjenja, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedno ili više ovde opisanih jedinjenja ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. Ovde je takođe opisano korišćenje jednog ili više ovde opisanih jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli ovde opisanog jedinjenja u proizvodnji leka za ublažavanje i/ili lečenje infekcije HCV, što može da uključuje dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom navedenih jedinjenja. Ovde je takođe opisano jedno ili više ovde opisanih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljiva so ovde opisanog jedinjenja, koji mogu da se upotrebe za ublažavanje i/ili lečenje infekcije HCV putem dovođenja u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom navedenih jedinjenja.
[0138] Ovde su takođe otkriveni postupci za inhibiciju replikacije virusa hepatitisa C koji mogu da obuhvataju dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom jednog ili više ovde opisanih jedinjenja, ili farmaceutski prihvatljive soli ovde opisanog jedinjenja, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedno ili više ovde opisanih jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Ovde je takođe opisano korišćenje jednog ili više ovde opisanih jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli ovde opisanog jedinjenja, u proizvodnji leka za inhibiciju replikacije virusa hepatitisa C, što može da uključuje dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom navedenog jedinjenja. Ovde je takođe opisano ovde opisano jedinjenje, ili farmaceutski prihvatljiva so ovde opisanih jedinjenja, koji mogu da se upotrebe za inhibiciju replikacije virusa hepatitisa C putem dovođenja u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom navedenog jedinjenja.
[0139] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje može biti jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu je R<4>vodonik. U drugim otelotvorenjima, jedinjenje može biti jedinjenje formule (I), pri čemu je jedinjenje formule (I) mono, di ili trifosfat, ili farmaceutski prihvatljiva so prethodno navedenog. U još nekim otelotvorenjima, jedinjenje može biti jedinjenje formule (I), pri čemu je jedinjenje formule (I) tiomonofosfat, alfatiodifosfat ili alfa-tiotrifosfat, ili farmaceutski prihvatljiva so prethodno navedenog. U još daljim otelotvorenjima, jedinjenje može biti jedinjenje formule (I), pri čemu je jedinjenje formule (I) fosforoamidat ili fosforbisamidat, ili farmaceutski prihvatljiva so prethodno navedenog. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje može biti jedinjenje formule (I), pri čemu je jedinjenje formule (I) tiofosforoamidat ili tiofosforobisamidat, ili farmaceutski prihvatljiva so prethodno navedenog. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koji mogu da se koriste za ublažavanje i/ili lečenje virusne infekcije (na primer, infekcije HCV) i/ili inhibiciju replikacije virusa (kao što je virus HCV) mogu biti bilo koje od otelotvorenja obezbeđenih u bilo kom od otelotvorenja opisanih u bilo kom paragrafu počevši od prvog paragrafa pod podnaslovom „Jedinjenja“ do paragrafa koji počinje sa „Dalji primeri jedinjenja formule (I) uključuju sledeće:
[0140] HCV je virus omotača pozitivnog lanca RNK u familiji Flaviviridae. Postoje različiti nestrukturni proteini HCV-a, kao što su NS2, NS3, NS4, NS4A, NS4B, NS5A i NS5B. Veruje se daje NS5B RNK zavisna polimeraza RNK koja je uključena u replikaciju RNK HCV.
[0141] Ovde je opisan postupak za inhibiciju aktivnosti NS5B polimeraze koji može da uključuje dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Ovde je takođe opisan postupak za inhibiciju aktivnosti NS5B polimeraze koji može da obuhvata primenu na ispitaniku, koji je inficiran virusom hepatitisa C, delotvorne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da inhibiraju RNK zavisnu polimerazu RNK, te tako inhibiraju replikaciju RNK HCV. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da inhibiraju polimerazu HCV (na primer, polimerazu NS5B).
[0142] Ovde je opisan postupak za lečenje stanja izabranog od fibroze jetre, ciroze jetre i kancera jetre, kod ispitanika koji boluje od jednog ili više prethodno pomenutih stanja jetre, a koji može da obuhvata primenu na ispitaniku delotvorne količine ovde opisanog jedinjenja ili farmaceutske kompozicije (na primer, jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli), pri čemu je stanje jetre uzrokovano infekcijom HCV. Ovde je takođe opisan postupak za povećanje funkcije jetre kod ispitanika sa infekcijom HCV koji može da obuhvata primenu na ispitaniku delotvorne količine ovde opisanog jedinjenja ili farmaceutske kompozicije (na primer, jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli). Takođe se razmatra postupak za smanjenje ili uklanjanje daljeg oštećenja jetre izazvanog
1
virusom kod ispitanika sa infekcijom HCV putem primene na ispitaniku delotvorne količine ovde opisanog jedinjenja ili farmaceutske kompozicije (na primer, jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli). Ovaj postupak može da obuhvata usporavanje ili zaustavljanje progresije bolesti jetre. Tok bolesti može da se preokrene, i razmatra se staza ili poboljšanje funkcije jetre. U nekim otelotvorenjima, fibroza jetre, ciroza jetre i/ili kancer jetre mogu da se leče; funkcija jetre može da se poboljša; oštećenje jetre izazvano virusom može da se umanji ili eliminiše; progresija bolesti jetre može da se uspori ili zaustavi; tok bolesti jetre može da se preokrene i/ili funkcija jetre može da se poboljša ili održava dovođenjem u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom ovde opisanog jedinjenja (na primer, jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli).
[0143] Postoje različiti genotipovi HCV, i različite podvrste u okviru svakog genotipa. Na primer, trenutno je poznato da ima jedanaest (numerisani od 1 do 11) glavnih genotipova HCV, mada su drugi klasifikovali genotipove kao 6 glavnih genotipa. Svaki od ovih genotipova dalje je podeljen na podvrste (1a-1c; 2a-2c; 3a-3b; 4a-4e; 5a; 6a; 7a- 7b; 8a-8b; 9a; 10a; i 11a). U nekim otelotvorenjima, delotvorna količina jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži delotvornu količinu jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, mogu biti delotvorni za lečenje najmanje jednog genotipa HCV. U nekim otelotvorenjima, ovde opisano jedinjenje (na primer, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so) može biti delotvorno za lečenje svih 11 genotipova HCV. U nekim otelotvorenjima, ovde opisano jedinjenje (na primer, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so) može biti delotvorno za lečenje 3 ili više, 5 ili više, 7 ili više, ili 9 ili više genotipova HCV. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu biti delotvorniji protiv većeg broja genotipova HCV nego uobičajena nega. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu biti delotvorniji protiv određenog genotipa HCV nego uobičajena nega (poput genotipa 1, 2, 3, 4, 5 i/ili 6).
[0144] Stručnjacima su poznati različiti pokazatelji za utvrđivanje delotvornosti postupka za lečenje infekcije HCV. Primeri za pogodne pokazatelje uključuju, ali nisu ograničeni na, smanjenje virusnog opterećenja, smanjenje virusne replikacije, kraće vreme do serokonverzije (virus ne može da se detektuje u serumu pacijenta), porast stope održanog virusnog odgovora na terapiju, smanjenje morbiditeta ili mortaliteta u kliničkim ishodima, smanjenje brzine opadanja funkcije jetre; zastoj u funkciji jetre; poboljšanje funkcije jetre; smanjenje jednog ili
2
više markera disfunkcije jetre, uključujući alanin transaminazu, aspartat transaminazu, ukupni bilirubin, konjugovani bilirubin, gama glutamil transpeptidazu i/ili druge pokazatelje odgovora na bolest. Slično tome, uspešna terapija delotvornom količinom ovde opisanog jedinjenja ili farmaceutske kompozicije (na primer, jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli) može da smanji pojavu kancera jetre kod ispitanika inficiranih HCV-om.
[0145] U nekim otelotvorenjima, delotvorna količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli je količina koja je delotvorna za smanjenje virusnih titara HCV na nivoe koji se ne mogu detektovati, na primer, na oko 100 do oko 500, na oko 50 do oko 100, na oko 10 do oko 50, ili na oko 15 do oko 25 međunarodnih jedinica/ml seruma. U nekim otelotvorenjima, delotvorna količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli je količina koja je delotvorna za smanjenje virusnog opterećenja HCV u poređenju sa virusnim opterećenjem HCV pre primene jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Na primer, pri čemu se virusno opterećenje HCV meri pre primene jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i ponovo nakon okončanja režima lečenja jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju (na primer, 1 mesec nakon okončanja). U nekim otelotvorenjima, delotvorna količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli može biti količina koja je delotvorna za smanjenje virusnog opterećenja HCV na manje od 25 međunarodnih jedinica/ml seruma. U nekim otelotvorenjima, delotvorna količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli je količina koja je delotvorna za postizanje smanjenja virusnog titra HCV u serumu ispitanika u rasponu smanjenja od oko 1,5-log do oko 2,5-log, oko 3-log do oko 4-log smanjenja ili više od oko 5-log smanjenja u poređenju sa virusnim opterećenjem pre primene jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Na primer, virusno opterećenje HCV može da se izmeri pre primene jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i ponovo nakon okončanja režima lečenja jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju (na primer, 1 mesec nakon okončanja).
[0146] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu dovesti do najmanje 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100-strukog ili većeg smanjenja replikacije virusa hepatitisa C u odnosu na nivoe kod ispitanika pre lečenja, kako je utvrđeno nakon okončanja režima lečenja (na primer, 1 mesec nakon okončanja). U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu dovesti do smanjenja replikacije virusa hepatitisa C u odnosu na nivoe pre lečenja u rasponu od oko 2 do oko 5 puta, oko 10 do oko 20 puta, oko 15 do oko 40 puta, ili oko 50 do oko 100 puta. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu dovesti do smanjenja replikacije virusa hepatitisa C u rasponu od 1 do 1,5 log, 1,5 log do 2 log, 2 log do 2,5 log, 2,5 do 3 log, 3 log do 3,5 log ili 3,5 do 4 log većeg smanjenja replikacije virusa hepatitisa C u poređenju sa smanjenjem replikacije virusa hepatitisa C koje je ostvareno pomoću pegilovanog interferona u kombinaciji sa ribavirinom, primenjenim u skladu sa standardnom negom, ili se može ostvariti isto smanjenje kao terapija standardnom negom u kraćem vremenskom periodu, na primer, za jedan mesec, dva meseca ili tri meseca, u poređenju sa smanjenjem koje je ostvareno nakon šest meseci terapije standardnom negom ribavirinom i pegilovanim interferonom.
[0147] U nekim otelotvorenjima, delotvorna količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli je količina koja je delotvorna za postizanje produženog virusnog odgovora, na primer, RNK HCV koja ne može da se detektuje, ili suštinski ne može da se detektuje (npr. manje od oko 500, manje od oko 200, manje od oko 100, manje od oko 25 ili manje od oko 15 međunarodnih jedinica po milimetru seruma) može se naći u serumu ispitanika u vremenskom periodu od najmanje oko jednog meseca, najmanje oko dva meseca, najmanje oko tri meseca, najmanje oko četiri meseca, najmanje oko pet meseci ili najmanje oko šest meseci nakon prekida terapije.
[0148] U nekim otelotvorenjima, delotvorna količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli može da smanji nivo markera fibroze jetre za najmanje oko 10%, najmanje oko 20%, najmanje oko 25%, najmanje oko 30%, najmanje oko 35%, najmanje oko 40%, najmanje oko 45%, najmanje oko 50%, najmanje oko 55%, najmanje oko 60%, najmanje oko 65%, najmanje oko 70%, najmanje oko 75% ili najmanje oko 80%, ili više, u poređenju sa nivoom markera kod nelečenog ispitanika ili kod ispitanika lečenog placebom. Postupci merenja serumskih markera su poznati stručnjacima, i uključuju imunološki zasnovane postupke, npr. test sa imunosorbentom vezanim za enzim (ELISA), radioimunološki testovi i slično, koristeći antitelo specifično za dati serumski marker. Neograničavajući spisak primera markera uključuje merenje nivoa serumske alanin aminotransferaze (ALT), aspartat aminotransferaze (AST), alkalne fosfataze (ALP), gama-glutamil transpeptidaze (GGT) i ukupnog bilirubina (TBIL) koristeći poznate postupke. Uopšteno, ALT nivo manji od oko 45 IU/l (međunarodne jedinice/l), AST u rasponu od 10-34 i.j./l, ALP u rasponu od 44-147 i.j./l, GGT u rasponu od 0-51 i.j./l, TBIL u rasponu od 0,3-1,9 mg/dl, smatraju se normalnim. U
4
nekim otelotvorenjima, delotvorna količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli može biti količina koja je delotvorna za smanjenje nivoa ALT, AST, ALP, GGT i/ili TBIL na ono što se smatra normalnim nivoom.
[0149] Ispitanici kojima je klinički dijagnostikovana infekcija HCV uključuju „naivne“ ispitanike (npr. ispitanici koji nisu prethodno lečeni od HCV, naročito oni koji nisu prethodno dobijali terapiju na bazi 1FN-alfa i/ili na bazi ribavirina) i pojedince kod kojih nije uspelo prethodno lečenje za HCV (ispitanici sa „neuspelim lečenjem“). Ispitanici sa neuspelim lečenjem uključuju „ispitanike bez odgovora“ (tj. ispitanike kod kojih titar HCV nije bio značajno ili dovoljno smanjen prethodnim lečenjem za HCV (≤ 0,5 log i.j./ml), na primer, prethodnom IFN-alfa monoterapijom, prethodnom kombinovanom terapijom IFN-alfa i ribavirinom, ili prethodnom kombinovanom terapijom pegilovanim IFN-alfa i ribavirinom); i „ispitanike sa recidivom“ (tj. ispitanike koji su prethodno lečeni od HCV, na primer, koji su dobijali prethodnu IFN-alfa monoterapiju, prethodnu kombinovanu terapiju IFN-alfa i ribavirinom, ili prethodnu kombinovanu terapiju pegilovanim IFN-alfa i ribavirinom, čiji se HCV titar smanjio, pa zatim povećao).
[0150] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene na ispitaniku sa neuspelim lečenjem koji boluje od HCV. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene na ispitaniku bez odgovora koji boluje od HCV. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene na ispitaniku sa recidivom koji boluje od HCV.
[0151] Nakon određenog vremenskog perioda, infektivni agensi mogu da razviju otpornost na jedan ili više terapeutskih agensa. Termin „rezistencija“, kako se ovde koristi, odnosi se na soj virusa koji pokazuje odloženi, umanjeni i/ili nepostojeći odgovor na terapeutske agense. Na primer, nakon lečenja antivirusnim agensom, virusno opterećenje ispitanika inficiranog rezistentnim virusom može biti smanjeno u manjem stepenu u poređenju sa smanjenjem virusnog opterećenja koje pokazuje ispitanik inficiran nerezistentnim sojem. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primenjuju na ispitaniku inficiranom sojem HCV koji je rezistentan na jedan ili više različitih anti-HCV agensa (na primer, agens koji se koristi u uobičajenoj standardnoj nezi). U nekim otelotvorenjima, razvoj rezistentnih sojeva HCV je odložen kada se ispitanik leči jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutsko prihvatljivom solju u poređenju sa razvojem sojeva HCV rezistentnih na druge HCV lekove (kao što je agens koji se koristi u uobičajenoj standardnoj nezi).
[0152] U nekim otelotvorenjima, delotvorna količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli može se primeniti na ispitaniku kod koga postoje kontraindikacije za druge anti-HCV lekove. Na primer, primena pegilovanog interferona alfa u kombinaciji sa ribavirinom je kontraindikovana kod ispitanika sa hemoglobinopatijama (npr. talasemija major, anemija srpastih ćelija) i drugih ispitanika pod rizikom od hematoloških neželjenih dejstava trenutne terapije. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se daju ispitaniku koji je hipersenzitivan na interferon i/ili ribavirin.
[0153] Neki ispitanici koji se leče od HCV doživljavaju ponovni skok virusnog opterećenja. Termin „ponovni skok virusnog opterećenja“, kako se ovde koristi, odnosi se na održano ≥0,5 log i.j./ml povećanje virusnog opterećenja iznad najniže tačke pre kraja lečenja, kada je najniža tačka smanjenje ≥0,5 log i.j./ml od početne vrednosti. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene na ispitaniku koji je doživeo ponovni skok virusnog opterećenja, ili mogu da spreče takav ponovni skok virusnog opterećenja kada se koriste za lečenje ispitanika.
[0154] Standardna nega za lečenje HCV je povezana sa nekoliko neželjenih dejstava (neželjenih događaja). U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da smanje broj i/ili težinu neželjenih dejstava koja mogu da se uoče kod pacijenata sa HCV koji se leče ribavirinom i pegilovanim interferonom u skladu sa standardnom negom. Primeri neželjenih dejstava uključuju, ali nisu ograničeni na groznicu, malaksalost, tahikardiju, trnce, glavobolju, artralgije, mijalgije, zamor, apatiju, gubitak apetita, mučninu, povraćanje, kognitivne promene, astmu, pospanost, nedostatak inicijative, iritabilnost, zbunjenost, depresiju, tešku depresiju, samoubilačke ideje, anemiju, mali broj leukocita i gubitak kose. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu se dati ispitaniku koji je prekinuo terapiju za HCV zbog jednog ili više neželjenih događaja ili neželjenih dejstava povezanih sa jednim ili više HCV agensa (na primer, agens koji se koristi u uobičajenoj standardnoj nezi).
[0155] Tabela 1 daje neka otelotvorenja procentualnog poboljšanja ostvarenog koristeći jedinjenje formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u poređenju sa standardnom negom. Primeri uključuju sledeće: u nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so dovode do procenta ispitanika bez odgovora koji je 10% manji nego procenat ispitanika bez odgovora koji dobijaju standardnu negu; u nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so dovode do broja neželjenih dejstava koji je u rasponu od oko 10% do oko 30% manji nego kada se poredi sa brojem neželjenih dejstava koja doživeo ispitanik koji dobija standardnu negu; i, u nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so dovode do težine neželjenog dejstva (kao što je neko od ovde opisanih) koja je 25% manja nego kada se poredi sa težinom istog neželjenog dejstva koje je doživeo ispitanik koji dobija standardnu negu. Postupci kvantifikacije težine neželjenih dejstava su poznati stručnjacima za oblast.
Tabela 1
[0156] Kako se ovde koristi, „ispitanik“ se odnosi na životinju koja je predmet lečenja, posmatranja ili eksperimenta. „Životinja“ uključuje hladnokrvne i toplokrvne kičmenjake i beskičmenjake, kao što su ribe, školjke, reptili, i naročito sisari. „Sisari“ uključuju, bez ograničenja, miševe, pacove, zečeve, zamorčiće, pse, mačke, ovce, koze, konje, primate, kao što su majmuni, šimpanze i čovekoliki majmuni, i naročito ljude. U nekim otelotvorenjima, ispitanik je čovek.
[0157] Kako se ovde koriste, termini „lečiti“, „lečenje“, „terapeutski“ ili „terapija“ ne znače nužno potpuno izlečenje ili nestanak bolesti ili stanja. Svako ublažavanje bilo kojih neželjenih znakova ili simptoma bolesti ili stanja u bilo kojoj meri može se smatrati lečenjem i/ili terapijom. Nadalje, lečenje može da uključuje postupke koji mogu da pogoršaju pacijentov ukupni osećaj zdravlja ili izgled.
[0158] Termini „terapeutski delotvorna količina“ i „delotvorna količina“ se koriste da označe količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog agensa koja izaziva naznačeni medicinski ili biološki odgovor. Na primer, delotvorna količina jedinjenja može biti količina koja je potrebna za sprečavanje, ublažavanje ili poboljšanje simptoma bolesti ili produženje preživljavanja ispitanika koji se leči. Ovaj odgovor može da se javi u tkivu, sistemu, životinji ili čoveku, i uključuje ublažavanje znakova ili simptoma bolesti koja se leči. Određivanje delotvorne doze je u granicama mogućnosti stručnjaka, uzimajući u obzir ovde dato otkriće. Delotvorna količina ovde otkrivenih jedinjenja koja je potrebna za dozu će zavisiti od načina primene, vrste životinje koja se leči, uključujući čoveka, i fizičkih karakteristika specifične životinje o kojoj se radi. Doza može da se prilagodi radi postizanja željenog dejstva, ali će zavisiti od faktora kao što su težina, ishrana, prateći lekovi i drugi faktori koje će stručnjaci prepoznati.
[0159] Kao što će biti jasno stručnjaku, korisna in vivo doza koja se primenjuje i konkretni režim primene će se razlikovati u zavisnosti od starosti, težine, težine bolesti i vrste sisara koji se leči, konkretnih jedinjenja koja se koriste i specifične upotrebe za koju se ova jedinjenja koriste. Određivanje efikasnih doznih nivoa, to jest doznih nivoa neophodnih da se ostvari željeni rezultat, može da izvrši stručnjak koristeći rutinske postupke, na primer, klinička ispitivanja na ljudima i in vitro studije.
[0160] Doziranje može da varira u velikom rasponu, zavisno od željenog dejstva i terapeutskih indikacija. Alternativno, doze mogu da se zasnivaju i izračunavaju po površinskoj oblasti pacijenta, kako će biti jasno stručnjacima. Iako se tačna doza utvrđuje na bazi pojedinačnog leka, u većini slučajeva mogu se načiniti određene generalizacije u pogledu doze. Dnevni dozni režim za odraslog ljudskog pacijenta može biti, na primer, oralna doza od 0,01 mg do 3000 mg svakog aktivnog sastojka, poželjno od 1 mg do 700 mg, npr. 5 do 200 mg. Doza može biti pojedinačna, ili niz od dve ili više doza datih tokom jednog ili više dana, u skladu sa potrebama ispitanika. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja će se primenjivati u određenom periodu za neprekidnu terapiju, na primer, tokom nedelju dana ili više, ili mesecima ili godinama. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primenjuju ređe u poređenju sa učestalošću primene agensa u okviru standardne nege. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primenjuju jednom dnevno. Na primer, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primenjuju jednom dnevno na ispitaniku koji boluje od infekcije HCV. U nekim otelotvorenjima, ukupno trajanje režima lečenja jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju može biti kraće u poređenju sa ukupnim trajanjem režima lečenja standardnom negom.
[0161] U slučajevima kada su doze jedinjenja za ljude utvrđene za barem neko stanje, mogu se koristiti te iste doze ili doze koje su od oko 0,1% do 500%, poželjnije od oko 25% do 250% utvrđene doze za ljude. Kada nije utvrđena doza za ljude, kao što će biti slučaj sa novootkrivenim farmaceutskim kompozicijama, odgovarajuća doza za ljude može da se izvede iz ED50ili ID50vrednosti ili drugih prikladnih vrednosti koje su dobijene iz in vitro ili in vivo studija, kako je kvalifikovano studijama toksičnosti i studijama delotvornosti kod životinja.
[0162] U slučajevima primene farmaceutski prihvatljive soli, doze mogu da se izračunavaju kao slobodna baza. Kao što će biti jasno stručnjacima, u određenim situacijama može biti neophodno da se ovde otkrivena jedinjenja primene u količinama koje premašuju, ili čak u velikoj meri premašuju, prethodno navedeni poželjni dozni opseg, kako bi se delotvorno i agresivno lečile naročito agresivne bolesti ili infekcije.
[0163] Količina i interval doziranja mogu da se prilagode pojedincu kako bi se dobili nivoi aktivnog ostatka u plazmi koji su dovoljni da se održi modulišuće dejstvo ili minimalna delotvorna koncentracija (MEC). MEC će se razlikovati za svako jedinjenje, ali može da se proceni iz in vitro podataka. Doze neophodne za postizanje MEC će zavisiti od pojedinačnih karakteristika i načina primene. Međutim, HPLC testovi ili biološki testovi mogu da se koriste za određivanje koncentracije u plazmi. Intervali doziranja mogu takođe da se odrede pomoću vrednosti MEC. Kompozicije treba primenjivati koristeći režim koji održava nivoe u plazmi iznad MEC tokom 10-90% vremena, poželjno između 30-90%, a najpoželjnije između 50-90%. U slučajevima lokalne primene ili selektivnog unosa, delotvorna lokalna koncentracija leka ne mora da bude povezana sa koncentracijom u plazmi.
[0164] Treba napomenuti da bi nadležni lekar znao kako i kada da prekine, obustavi ili prilagodi primenu usled toksičnosti ili disfunkcije organa. Suprotno tome, nadležni lekar će takođe znati da prilagodi lečenje na više nivoe ako klinički odgovor nije prikladan (izuzimajući toksičnost). Veličina primenjene doze u lečenju poremećaja od interesa će varirati u zavisnosti od težine stanja koje se leči i od načina primene. Težina stanja može, na primer, da se proceni, delimično, putem standardnih postupaka za prognostičku procenu. Nadalje, doza, a možda i učestalost doze, će se takođe menjati u skladu sa starošću, telesnom težinom i odgovorom pojedinačnog pacijenta. Program koji je uporediv sa prethodno razmotrenim može da se koristi u veterinarskoj medicini.
[0165] Ovde otkrivena jedinjenja mogu da se ispitaju na delotvornost i toksičnost koristeći poznate postupke. Na primer, toksikologija određenog jedinjenja ili podskupa jedinjenja koja dele određene hemijske ostatke može da se odredi utvrđivanjem in vitro toksičnosti za ćelijsku liniju, kao što je ćelijska linija sisara, a poželjno čoveka. Rezultati takvih studija često predviđaju toksičnost kod životinja, kao što su sisari, ili specifičnije, ljudi. Alternativno, toksičnost određenih jedinjenja na životinjskom modelu, kao što su miševi, pacovi , zečevi ili majmuni, može da se odredi poznatim postupcima. Delotvornost određenog jedinjenja može da se utvrdi koristeći nekoliko prepoznatih postupaka, kao što su in vitro postupci, životinjski modeli ili klinička ispitivanja na ljudima. Prilikom odabira modela za utvrđivanje delotvornosti, stručnjak može da se vodi tekućom praksom kako bi odabrao odgovarajući model, dozu, način primene i/ili režim.
Kombinovane terapije
[0166] U nekim otelotvorenjima, ovde otkrivena jedinjenja, kao što su jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih agensa. Primeri dodatnih agensa koji mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju ili sa farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so uključuju, ali nisu ograničeni na, agense koji se trenutno koriste u uobičajenoj standardnoj nezi za lečenje HCV, inhibitore HCV proteaze, inhibitore HCV polimeraze, inhibitore NS5A, druga antivirusna jedinjenja, jedinjenja formule (AA) (uključujući farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutske kompozicije koje mogu da sadrže jedinjenje formule (AA) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so), jedinjenja formule (BB) (uključujući farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutske kompozicije koje mogu da sadrže jedinjenje formule (BB) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so), jedinjenja formule (CC) (uključujući farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutske kompozicije koje mogu da sadrže jedinjenje formule (CC) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so) i/ili njihove kombinacije. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste sa jednim, dva, tri ili više dodatnih agensa koji su ovde opisani. Neograničavajući spisak primera kombinacija jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so dat je u Tabelama A, B, C, D i E.
1
[0167] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste u kombinaciji sa agensima koji se trenutno koriste u uobičajenoj terapiji standardne nege. Na primer, za lečenje HCV može da se koristi ovde otkriveno jedinjenje u kombinaciji sa pegilovanim interferonom-alfa-2a (robna marka PEGASYS®) i ribavirinom, pegilovanim interferonom-alfa-2b (robna marka PEG-INTRON®) i ribavirinom, pegilovanim interferonom-alfa-2a, pegilovanim interferonom-alpha-2b ili ribavirinom.
[0168] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste umesto agensa koji se trenutno koristi u uobičajenoj standardnoj nezi. Na primer, za lečenje HCV, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste umesto ribavirina.
[0169] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so mogu da se koriste u kombinaciji sa interferonom, kao što je pegilovani interferon. Primeri odgovarajućih interferona uključuju, ali nisu ograničeni na, pegilovani interferon-alfa-2a (robna marka PEGASYS®), pegilovani interferon-alfa-2b (robna marka PEG-INTRON®), interferon alfakon-1 (robna marka INFERGEN®), pegilovani interferon lambda i/ili njihovu kombinaciju.
[0170] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste u kombinaciji sa inhibitorom HCV proteaze. Neograničavajući spisak primera inhibitora HCV proteaze uključuje sledeće: VX-950 (TELAPREVIR®), MK-5172, ABT-450, BILN-2061, BI-201335, BMS-650032, SCH 503034 (BOCEPREVIR®), GS-9256, GS-9451, IDX-320, ACH-1625, ACH-2684, TMC-435, ITMN-191 (DANOPREVIR®) i/ili njihovu kombinaciju. Dodatni inhibitori HCV proteaze pogodni za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, ili farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu
2
farmaceutski prihvatljivu so, uključuju VP-19744, PSI-879, VCH-759/VX-759, HCV-371, IDX-375, GL-60667, JTK-109, PSI-6130, R1479, R-1626, R-7182, MK-0608, INX-8014, INX-8018, A-848837, A-837093, BILB-1941, VCH-916, VCH-716, GSK-71185, GSK-625433, XTL-2125, i one otkrivene u PCT publikaciji br. WO 2012/142085, koja obuhvata otkriće inhibitora HCV proteaze, inhibitora HCV polimeraze i inhibitora NS5A. Neograničavajući spisak primera inhibitora HCV proteaze uključuje jedinjenja numerisana 1001-1016 na Slici 1.
[0171] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste u kombinaciji sa inhibitorom HCV polimeraze. U nekim otelotvorenjima, inhibitor HCV polimeraze može biti nukleozidni inhibitor. U drugim otelotvorenjima, inhibitor HCV polimeraze može biti nenukleozidni inhibitor. Primeri odgovarajućih nukleozidnih inhibitora uključuju, ali nisu ograničeni na, RG7128, PSI-7851, PSI-7977, INX-189, PSI-352938, PSI-661, 4'-azidouridin (uključujući poznate prolekove 4'-azidouridina), GS-6620, IDX-184 i TMC649128 i/ili njihove kombinacije. Neograničavajući spisak primera nukleozidnih inhibitora uključuje jedinjenja numerisana 2001-2012 na Slici 2. Primeri odgovarajućih nenukleozidnih inhibitora uključuju, ali nisu ograničeni na, ABT-333, ANA-598, VX-222, HCV-796, BI-207127, GS-9190, PF-00868554 (FILIBUVIR®), VX-497 i/ili njihove kombinacije. Neograničavajući spisak primera nenukleozidnih inhibitora uključuje jedinjenja numerisana 3001-3014 na Slici 3. Dalji inhibitori HCV polimeraze pogodni za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, ili farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, uključuju VX-500, VX-813, VBY-376, TMC-435350, EZ-058, EZ-063, GS-9132, ACH-1095, IDX-136, IDX-316, ITMN-8356, ITMN-8347, ITMN-8096, ITMN-7587, VX-985 i one koji su otkriveni u PCT publikaciji br. WO 2012/142085.
[0172] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste u kombinaciji sa inhibitorom NS5A. Primeri inhibitora NS5A uključuju BMS-790052, PPI-461, ACH-2928, GS-5885, BMS-824393 i/ili njihove kombinacije. Neograničavajući spisak primera inhibitora NS5A uključuje jedinjenja numerisana 4001-4012 na Slici 4. Dodatni inhibitori NS5A pogodni za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjem formule (I) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, ili farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, uključuju A-832, PPI-1301 i one koji su otkriveni u PCT publikaciji br. WO 2012/142085.
[0173] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste u kombinaciji sa drugim antivirusnim jedinjenjima. Primeri drugih antivirusnih jedinjenja uključuju, ali nisu ograničeni na, Debio-025, MIR-122, ciklosporin A i/ili njihove kombinacije. Neograničavajući spisak primera drugih antivirusnih jedinjenja uključuje jedinjenja numerisana 5001-5012 na Slici 5.
[0174] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem formule (AA) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, ili farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedinjenje formule (AA) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, (vidite U.S. publikaciju br.
2013/0164261, objavljenu 27. juna 2013.):
pri čemu: B<AA1>može biti opciono supstituisana heterociklična baza ili opciono supstituisana heterociklična baza sa zaštićenom amino grupom; R<AA1>može biti izabran od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline i estra opciono supstituisane N-vezane aminokiseline; R<AA2>može biti odsutan ili izabran od vodonika, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog heterociklila i
pri čemu R<AA6>, R<AA7>i R<AA8>mogu nezavisno biti odsutni ili vodonik, i n<AA>može biti 0 ili 1; pod uslovom da kada R<AA1>predstavlja O<->ili OH, onda je R<AA2>odsutan, vodonik ili
4
R<AA3>može da se izabere od vodonika, halogena, -OR<AA9>i -OC(=O)R<AA10>; R<AA4>može da se izabere od halogena, -OR<AA11>i -OC(=O)R<AA12>; ili R<AA3>i R<AA4>mogu oba biti atom kiseonika koji su povezani karbonilnom grupom; R<AA5>može da se izabere od opciono supstituisanog C2-
6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila i opciono supstituisanog C3-6cikloalkila; ili R<AA4>i R<AA5>zajedno mogu da grade -(C1-6alkil)-O-ili-O-(C1-
6alkil)-; R<AA9>i R<AA11>mogu nezavisno biti vodonik ili opciono supstituisani C1-6alkil; i R<AA10>i R<AA12>mogu nezavisno biti opciono supstituisani C1-6alkil ili opciono supstituisani C3-
6cikloalkil. Neograničavajući spisak primera jedinjenja formule (AA) uključuje jedinjenja numerisana 7000-7027 na Slici 7.
[0175] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem formule (BB) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, ili farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedinjenje formule (BB) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, (vidite U.S. publikaciju br.
2012/0165286, objavljenu 28. juna 2012.):
pri čemu B<BB1>može biti opciono supstituisana heterociklična baza ili opciono supstituisana heterociklična baza sa zaštićenom amino grupom; X<BB>može biti O (kiseonik) ili S (sumpor); R<BB1>može biti izabran od -Z<BB>-R<BB9>, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline i estarskog derivata opciono supstituisane N-vezane aminokiseline; Z<BB>može biti izabran od O (kiseonika), S (sumpora) i N(R<BB10>); R<BB2>i R<BB3>mogu biti nezavisno izabrani od vodonika, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila, opciono supstituisanog C1-6haloalkila i opciono supstituisanog aril(C1-6alkila); ili R<BB2>i R<BB3>mogu zajedno da grade grupu izabranu od opciono supstituisanog C3-6cikloalkila, opciono supstituisanog C3-6cikloalkenila, opciono supstituisanog C3-6arila i opciono supstituisanog C3-6heteroarila; R<BB4>može biti izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila i opciono supstituisanog alenila; R<BB5>može biti vodonik ili opciono supstituisani C1-6alkil; R<BB6>može biti izabran od vodonika, halogena, azido, amino, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<BB11>i -OC(=O)R<BB12>; R<BB7>može biti izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<BB13>i-OC(=O)R<BB14>; R<BB8>može biti izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<BB15>i -OC(=O)R<BB16>; R<BB9>može biti izabran od opciono supstituisanog alkila, opciono supstituisanog alkenila, opciono supstituisanog alkinila, opciono supstituisanog cikloalkila, opciono supstituisanog cikloalkenila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog heterociklila, opciono supstituisanog aril(C1-6alkila), opciono supstituisanog heteroaril(C1-6alkila) i opciono supstituisanog heterociklil(C1-6alkila); R<BB10>može biti izabran od vodonika, opciono supstituisanog alkila, opciono supstituisanog alkenila, opciono supstituisanog alkinila, opciono supstituisanog cikloalkila, opciono supstituisanog cikloalkenila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog heterociklila, opciono supstituisanog aril(C1-6alkila), opciono supstituisanog heteroaril(C1-6alkila) i opciono supstituisanog heterociklil(C1-6alkila); R<BB11>, R<BB13>i R<BB15>mogu nezavisno biti vodonik ili opciono supstituisani C1-6alkil; i R<BB12>, R<BB14>i R<BB16>mogu nezavisno biti opciono supstituisani C1-6alkil ili opciono supstituisani C3-6cikloalkil. U nekim otelotvorenjima, najmanje jedan od R<BB2>i R<BB3>nije vodonik. Neograničavajući spisak primera jedinjenja formule (BB) uključuje jedinjenja numerisana 8000-8016 na Slici 8.
[0176] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem formule (CC) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, ili farmaceutskom kompozicijom koja sadrži jedinjenje formule (CC) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, (vidite U.S. publikaciju br.
2012/0071434, objavljenu 22. marta 2012.):
pri čemu B<CC1>može biti opciono supstituisana heterociklična baza ili opciono supstituisana heterociklična baza sa zaštićenom amino grupom; R<CC1>može biti izabran od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline i estarskog derivata opciono supstituisane N-vezane aminokiseline; R<CC2>može biti izabran od opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog heterociklila i
pri čemu R<CC19>, R<CC20>i R<CC21>mogu nezavisno biti odsutni ili vodonik, i n<CC>može biti 0 ili 1; pod uslovom da, kada je R<CC1>O<->ili OH, R<CC2>je onda
R<CC3a>i R<CC3b>mogu biti nezavisno izabrani od vodonika, deuterijuma, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila, opciono supstituisanog C1-6haloalkila i aril(C1-6alkila); ili R<CC3a>i R<CC3b>mogu zajedno da grade opciono supstituisani C3-6cikloalkil; R<CC4>može biti izabran od vodonika, azido, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila i opciono supstituisanog C2-
6alkinila; R<CC5>može biti izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<CC10>i -OC(=O)<CC11>; R<CC6>može biti izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<CC12>i-OC(=O)R<CC13>; R<CC7>može biti izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<CC14>i -OC(=O)R<CC15>; ili R<CC6>i R<CC7>mogu oba biti atomi kiseonika i povezani karbonilnom grupom; R<CC8>može biti izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<CC16>i -OC(=O)R<CC17>; R<CC9>može biti izabran od vodonika, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-
6alkila i -OR<CC18>; R<CC10>, R<CC12>, R<CC14>, R<CC16>i R<CC18>mogu nezavisno biti izabrani od vodonika i opciono supstituisanog C1-6alkila; i R<CC11>, R<CC13>, R<CC15>i R<CC17>mogu nezavisno biti izabrani od opciono supstituisanog C1-6alkila i opciono supstituisanog C3-6cikloalkila. U nekim otelotvorenjima, kada su R<CC3a>, R<CC3b>, R<CC4>, R<CC5>, R<CC7>, R<CC8>i R<CC9>svi vodonik, R<CC6>onda nije azido. U nekim otelotvorenjima, R<CC2>ne može biti
kada je R<CC3a>vodonik, R<CC3b>je vodonik, R<CC4>je H, R<CC5>je OH ili H, R<CC6>je vodonik, OH, ili - OC(=O)CH3, R<CC7>je vodonik, OH, OCH3ili -OC(=O)CH3, R<CC8>je vodonik, OH ili OCH3, R<CC9>je H i B<CC1>je opciono supstituisani adenin, opciono supstituisani guanin, opciono supstituisani uracil ili opciono supstituisani hipoksantin. U nekim otelotvorenjima, R<CC2>ne može biti
Neograničavajući spisak primera jedinjenja formule (CC) uključuje jedinjenja numerisana 6000-6078 na Slici 6.
[0177] Ovde je opisan postupak za ublažavanje ili lečenje HCV infekcije koji može da obuhvata dovođenje u kontakt ćelije inficirane HCV infekcijom sa delotvornom količinom jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više agensa izabranih od interferona, ribavirina, inhibitora HCV proteaze, inhibitora HCV polimeraze, inhibitora NS5A, antivirusnog jedinjenja, jedinjenja formule (AA), jedinjenja formule (BB) i jedinjenja formule (CC), ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od prethodno navedenih jedinjenja.
[0178] Ovde je opisan postupak za ublažavanje ili lečenje HCV infekcije koji može da obuhvata primenu na ispitaniku koji boluje od HCV infekcije delotvorne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više agensa izabranih od interferona, ribavirina, inhibitor HCVa proteaze, inhibitora HCV polimeraze, inhibitora NS5A, antivirusnog jedinjenja, jedinjenja formule (AA), jedinjenja formule (BB) i jedinjenja formule (CC) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od prethodno navedenih jedinjenja.
[0179] Ovde je opisan postupak za inhibiciju replikacije virusa hepatitisa C koji može da obuhvata dovođenje u kontakt ćelije inficirane virusom hepatitisa C sa delotvornom količinom jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više agensa izabranih od interferona, ribavirina, inhibitora HCV proteaze, inhibitora HCV polimeraze, inhibitora NS5A, antivirusnog jedinjenja, jedinjenja formule (AA), jedinjenja formule (BB) i jedinjenja formule (CC) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od prethodno navedenih jedinjenja.
[0180] Ovde je opisan postupak za inhibiciju replikacije virusa hepatitisa C koji može da obuhvata primenu na ispitaniku inficiranom virusom hepatitisa C delotvorne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više agensa izabranih od interferona, ribavirina, inhibitora proteaze HCV, inhibitora polimeraze HCV, inhibitora NS5A, antivirusnog jedinjenja, jedinjenja formule (AA), jedinjenja formule (BB) i jedinjenja formule (CC), ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od prethodno navedenih jedinjenja.
[0181] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene zajedno sa jednim ili više agensa u jednoj farmaceutskoj kompoziciji. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primenjuju sa jednim ili više dodatnih agensa u vidu dve ili više odvojenih farmaceutskih kompozicija. Na primer, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primenjuju u jednoj farmaceutskoj kompoziciji, a najmanje jedan od dodatnih agensa može da se primeni u drugoj farmaceutskoj kompoziciji. Ako postoji najmanje dva dodatna agensa, jedan ili više dodatnih agensa može biti u prvoj farmaceutskoj kompoziciji koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, a najmanje jedan od drugih dodatnih agensa može biti u drugoj farmaceutskoj kompoziciji.
[0182] Dozne količine i raspored doziranja prilikom korišćenja jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i jednog ili više dodatnih agensa, poznati su stručnjacima. Na primer, kada se daje uobičajena terapija standardne nege koristeći dozne količine i raspored doziranja poznate u struci, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, mogu da se primene kao dodatak toj terapiji ili umesto jednog od agensa kombinovane terapije, koristeći delotvorne količine i dozne protokole koji su ovde opisani.
[0183] Redosled primene jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa jednim ili više dodatnih agensa može da se razlikuje. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene pre svih ostalih agensa. U drugim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene pre najmanje jednog dodatnog agensa. U još nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene istovremeno sa jednim ili više dodatnih agensa. U još daljim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene nakon primene najmanje jednog dodatnog agensa. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se primene nakon primene svih ostalih dodatnih agensa.
[0184] U nekim otelotvorenjima, kombinacija jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih agensa na Slikama 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli i prolekove) može dovesti do zbirnog dejstva. U nekim otelotvorenjima, kombinacija jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih agensa na Slikama 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli i prolekove) može dovesti do sinergijskog dejstva. U nekim otelotvorenjima, kombinacija jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih agensa na Slikama 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli i prolekove) može dovesti do snažnog sinergijskog dejstva. U nekim otelotvorenjima, kombinacija jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih agensa na Slikama 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli i prolekove) nije antagonistička.
[0185] Kako se ovde koristi, termin „antagonističko“ znači da je aktivnost kombinacije jedinjenja manja u odnosu na zbir aktivnosti jedinjenja u kombinaciji kada se aktivnost svakog jedinjenja pojedinačno određuje (tj. kao pojedinačno jedinjenje). Kako se ovde koristi, termin „sinergijsko dejstvo“ znači da je aktivnost kombinacije jedinjenja veća od zbira pojedinačnih aktivnosti jedinjenja u kombinaciji kada se aktivnost svakog jedinjenja određuje pojedinačno. Kako se ovde koristi, termin „zbirno dejstvo“ znači da je aktivnost kombinacije jedinjenja približno jednaka zbiru pojedinačnih aktivnosti jedinjenja u kombinaciji kada se aktivnost svakog jedinjenja određuje pojedinačno.
[0186] Potencijalna prednost korišćenja jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih agensa na Slikama 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) može biti smanjenje potrebne količine jednog ili više jedinjenja sa Slike 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) koja je delotvorna za lečenje ovde prikazane bolesti (na primer, HCV), u poređenju sa količinom koja je potrebna za postizanje istog terapeutskog rezultata kada se jedno ili više jedinjenja sa Slike 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) primenjuje bez jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Na primer, količina jedinjenja na Slikama 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) može biti manja u poređenju sa količinom jedinjenja na Slikama 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) koja je potrebna za postizanje istog smanjenja virusnog opterećenja kada se primenjuje kao monoterapija. Još jedna potencijalna prednost korišćenja jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih agensa na Slikama 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) je ta što korišćenje dva ili više jedinjenja koja imaju različiti mehanizam delovanja može da stvori veću barijeru razvoju rezistentnih sojeva virusa u poređenju sa barijerom kada se jedinjenje primenjuje kao monoterapija.
[0187] Dodatne prednosti korišćenja jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih agensa sa Slike 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli) mogu uključivati malu ili nepostojeću unakrsnu rezistenciju između jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i jednog ili više dodatnih agensa sa Slike 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli); različite puteve za eliminaciju jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i jednog ili više dodatnih agensa sa Slike 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli); malo ili nepostojeće preklapanje toksičnosti između jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i jednog ili više dodatnih agensa sa Slike 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli); malo ili nepostojeće značajno dejstvo na citohrom P450; malu ili nepostojeću farmakokinetičku interakciju između jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i jednog ili više dodatnih agensa sa Slike 1-8 (uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli); veći procenat ispitanika koji postižu produženi virusni odgovor u odnosu na slučaj kada se jedinjenje primenjuje kao monoterapija i/ili smanjenje trajanja lečenja za postizanje produženog virusnog odgovora u odnosu na slučaj kada se jedinjenje primenjuje kao monoterapija.
[0188] Neograničavajući spisak primera kombinacije jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje sa jednim ili više dodatnih agensa date su u Tabelama A, B, C, D i E. Svako numerisano jedinjenje X i Y u Tabelama A, B, C, D i E ima odgovarajući naziv i/ili strukturu datu na Slikama 1-8. Numerisana jedinjenja u Tabelama A, B, C, D i E uključuju farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja i farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. Na primer, 1001 uključuje jedinjenje kojem odgovara 1001, njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje 1001
1
i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Kombinacije prikazane u Tabelama A, B, C, D i E su naznačene formulom X:Y koja predstavlja kombinaciju jedinjenja X sa jedinjenjem Y. Na primer, kombinacija označena kao 1001:9004 u Tabeli A predstavlja kombinaciju jedinjenja 1001 sa jedinjenjem 9004, uključujući farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja 1001 i/ili 9004 i farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje 1001 i 9004 (uključujući farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja 1001 i/ili jedinjenja 9004). Dakle, kombinacija označena kao 1001:9004 u Tabeli A predstavlja kombinaciju telaprevira (jedinjenje 1001, kao što je prikazano na Slici 1) i
(jedinjenja 9004, kao što je prikazano na Slici 9), uključujući farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja 1001 i/ili 9004 i farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje 1001 i 9004 (uključujući farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja 1001 i/ili 9004). Svaka od kombinacija datih u Tabelama A, B, C, D i E može da se koristi sa jednim, dva, tri ili više dodatnih agensa koji su ovde opisani. U nekim otelotvorenjima koja su ovde opisana, kombinacija agensa može da se koristi za lečenje, ublažavanje i/ili inhibiciju virusa i/ili virusne infekcije, pri čemu virus može biti HCV i virusna infekcija može biti HCV virusna infekcija.
Tabela A: Primeri kombinacija jedinjenja X sa jedinjenjem Y.
2
4
1
2
X 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
4
X 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1
1
Tabela
2
4 X 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
X 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
11
11
11
11
11
11
11 X 5 5 5 5 5 5 5 5 Tabela X
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
9
12
12
12
12
12
12
12
1
11
12
1
14
1
1
1
1 7
8 9 0 1 2 3 4 5 6 7
1
14
14
14
14
14
14
14
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
Tabela D: Primeri kombinacija jedinjenja X sa jedinjenjem Y. Tabela E: Primeri kombinacija jedinjenja X sa jedinjenjem Y.
1
1
2
21
22
2
24
2
2
2
2
2
21 PRIMERI
[0189] Dodatna otelotvorenja su detaljnije otkrivena u sledećim primerima koji ni na koji način ne predstavljaju ograničenje opsega zahteva.
REFERENTNI PRIMER 1
2'-C-METIL-4'-FLUORURIDIN 1
[0190]
[0191] U suspenziju 1-1 (20 g, 77,5 mmol), PPh3(30 g, 114,5 mmol), imidazola (10 g, 147 mmol) i piridina (90 ml) u anhidrovanom THF-u (300 ml) uz mešanje je dodat rastvor I2(25 g, 98,4 mmol) u THF-u (100 ml) ukapavanjem na 0°C. Smeša je zagrejana na sobnu temperaturu (RT) i mešana na RT tokom 10 h. Reakcija je prekinuta sa MeOH (100 ml). Rastvarač je uklonjen i ostatak je ponovo rastvoren u smeši etil acetata (EA) i THF-a (2 l, 10:1). Organska faza je isprana vodenim zasićenim Na2S2O3i vodena faza je ekstrahovana smešom EA i THF-a (2 l, 10:1). Organski sloj je kombinovan i koncentrovan, dajući ostatak koji je prečišćen na koloni silika gela (0-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 1-2 (22,5 g, 78,9%) kao bele čvrste supstance.<1>H NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11.42 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.82 (s, 1H), 5.63 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.50 (s, 1H), 5.23 (s, 1H), 3.77-3.79 (m, 1H), 3.40-3.62 (m, 3H), 0.97 (s, 3H).
[0192] U rastvor 1-2 (24,3 g, 66,03 mmol) u anhidrovanom MeOH (240 ml) uz mešanje je dodat NaOMe (10,69 g, 198,09 mmol) na RT u atmosferi N2. Smeša je zagrevana uz refluks tokom 3 h. Rastvarač je uklonjen, i ostatak je ponovo rastvoren u anhidrovanom piridinu (200 ml). U smešu je dodat Ac2O (84,9 g, 833,3 mmol) na 0°C. Smeša je zagrejana na 60°C i mešana tokom 10 h. Rastvarač je uklonjen, i ostatak je razblažen DCM-om, ispran zasićenim NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen na koloni silika gela (10-50% EA u PE) radi dobijanja 1-3 (15 g, 70,1%) kao bele čvrste supstance.<1>H NMR: (CDCl3, 400 MHz) δ 8.82 (s, 1H), 7.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.77 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.58 (d, J = 2.8Hz, 1H), 2.07 (d, J = 5.2Hz, 6H), 1.45 (s, 3H).
[0193] U ledeno hladni rastvor 1-3 (15 g, 46,29 mmol) u anhidrovanom DCM-u (300 ml) dodat je AgF (29,39 g, 231,4 mmol). U rastvor je u kapima dodat I2(23,51 g, 92,58 mmol) u anhidrovanom DCM-u (1,0 l). Reakciona smeša je mešana na RT tokom 5 h. Reakcija je prekinuta zasićenim Na2S2O3i NaHCO3i ekstrahovana DCM-om. Organski sloj je odvojen, osušen i uparen do suva. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (10-30% EA u PE) radi dobijanja 1-4 (9,5 g, 43,6%) kao bele čvrste supstance.<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ 7.52 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.80 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 5.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.58 (s, 1H), 3.54 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.17 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.58 (s, 3H).
[0194] U rastvor 1-4 (7,0 g, 14,89 mmol) u anhidrovanom DMF-u (400 ml) dodati su NaOBz (21,44 g, 148,9 mmol) i 15-kruna-5 (32,75 g, 148,9 mmol). Reakciona smeša je mešana na 130°C tokom 6 h. Rastvarač je uklonjen, razblažen dodatkom EA i ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je uparen i prečišćen na koloni silika gela (10-30% EA u PE) radi dobijanja 1-5 (2,8 g, 40,5%).<1>H NMR: (CDCl3, 400 MHz) δ 8.84 (s, 1H), 8.04-8.06 (m, 2H), 7.59 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.44-7.47 (m, 2H), 7.21-7.26 (m, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.85 (d, J = 18 Hz, 1H), 5.67 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.59-4.72 (m, 2H), 2.14 (s, 6H), 1.64 (d, J = 6.0 Hz, 3H). ESI-MS: m/z 444.9 [M-F+H]<+>.
[0195] Smeša 1-5 (4,0 g; 8,6 mmol) i tečnog amonijaka je držana preko noći na RT u posudi od nerđajućeg čelika za visoki pritisak. Amonijak je zatim uparen, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (kolona od 50 g) sa smešom rastvarača CH2Cl2/MeOH (gradijent 4-12%) radi dobijanja jedinjenja 1 kao bezbojne pene (2,0 g; prinos 84%). ESI-MS: m/z 275,1 [M-H]-.
REFERENTNI PRIMER 2
JEDINJENJE 2
[0196]
[0197] U rastvor 1 (1,2 g; 4,3 mmol) u dioksanu (30 ml) dodati su p-toluensulfonska kiselina monohidrat (820 mg; 1 ekv.) i trimetil ortoformat (14 ml; 30 ekv.). Smeša je mešana preko noći na RT. Smeša je zatim neutralisana metanolnim amonijakom, i rastvarač je uparen. Prečišćavanje na koloni silika gela sa sistemom rastvarača CH2Cl2-MeOH (gradijent 4-10%) dalo je 2-1 (1,18 g, 87%).
[0198] U ledeno hladni rastvor 2-1 (0,91 g; 2,9 mmol) u anhidrovanom THF-u (20 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (2,1 ml; 2 M u THF-u). Smeša je mešana na 0°C tokom 20 minuta. U kapima je dodat rastvor fosforohloridatnog reagensa (2,2 g; 2,5 ekv.) u THF-u (2 ml). Smeša je mešana preko noći na RT. Reakcija je ugašena zasićenim vod. rastvorom NH4Cl i mešana na RT tokom 10 minuta. Smeša je zatim razblažena dodatkom vode i CH2Cl2, i dva sloja su odvojena. Organski sloj je ispran vodom, delimično zasićenim vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli, i osušen iznad Na2SO4. Upareni ostatak je prečišćen na koloni silika gela sa sistemom rastvarača CH2Cl2-iPrOH (gradijent 4-10%) radi dobijanja Rp/Sp-smeše 2-2 (1,59 g; 93%).
[0199] Smeša 2-2 (1,45 g; 2,45 mmol) i 80% vod. HCOOH (7 ml) mešana je na RT tokom 1,5 h. Rastvarač je uparen, i uparen zajedno sa toluenom. Dobijeni ostatak je rastvoren u MeOH, tretiran sa Et3N (3 kapi) i rastvarač je uparen. Prečišćavanje na koloni silika gela sa sistemom rastvarača CH2Cl2-MeOH (gradijent 4-10%) dalo je Rp/Sp-smešu jedinjenja 2 (950 mg; 70%).<31>P-NMR (DMSO-d6): δ 3.52, 3.47. MS: m/z = 544 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 3
21
JEDINJENJE 3
[0200]
[0201] U ledeno hladni rastvor 3-1 (80 mg; 015 mmol) u anhidrovanom THF-u (2 ml) dodat je izopropil magnezijum hlorid (0,22 ml; 2 M u THF-u). Smeša je mešana na 0°C tokom 20 minuta. U kapima je dodat rastvor fosforohloridatnog reagensa (0,16 g; 0,45 mmol) u THF-u (0,5 ml). Smeša je mešana preko noći na RT. Reakcija je ugašena zasićenim vod. rastvorom NH4Cl i mešana na RT tokom 10 minuta. Smeša je razblažena dodatkom vode i CH2Cl2, i dva sloja su odvojena. Organski sloj je ispran vodom, delimično zasićenim vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli, i osušen iznad Na2SO4. Upareni ostatak je prečišćen na koloni silika gela sa sistemom rastvarača CH2Cl2-MeOH (gradijent 2-10%) radi dobijanja Rp/Sp-smeše 3-2 (102 mg; 80%).
[0202] Smeša 3-2 (100 mg; 0,12 mmol) u EtOH (3 ml) i 10% Pd/C (10 mg) mešana je u atmosferi H2tokom 1,5 h. Smeša je filtrirana kroz sloj celita, uparena i prečišćena na koloni silika gela sa sistemom rastvarača CH2Cl2-MeOH (gradijent 4-10%) radi dobijanja Rp/Spsmeše jedinjenja 3 (52 mg, 74%).<31>P-NMR (DMSO-d6): δ 3.51, 3.48. MS: m/z = 584 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 4
JEDINJENJA 4 i 6
[0203]
[0204] Suvo jedinjenje 1 (14 mg, 0,05 mmol) je rastvoreno u smeši PO(OMe)3(0,750 ml) i piridina (0,5 ml). Smeša je uparena pod vakuumom tokom 15 minuta na temperaturi kupatila od 42°C, a zatim ohlađena na RT. Dodat je N-metilimidazol (0,009 ml, 0,11 mmol), a zatim POCl3(0,009 ml, 0,1 mmol). Smeša je držana na RT tokom 45 minuta. Dodati su tributilamin (0,065 ml, 0,3 mmol) i N-tetrabutil amonijum so pirofosfata (100 mg). Dodato je oko 1 ml suvog DMF-a radi dobijanja homogenog rastvora. Nakon 1 h, reakcija je prekinuta pomoću 2M amonijum acetatnog pufera (1 ml, pH = 7,5), razblažena vodom (10 ml) i naneta na kolonu HiLoad 16/10 sa Q Sepharose High Performance. Odvajanje je izvedeno sa linearnim gradijentom NaCl od 0 do 1N u 50 mM TRIS-puferu (pH 7,5). Frakcije eluirane sa 60% pufera B sadržale su jedinjenje 4 , a one sa 80% pufera B sadržale su jedinjenje 6. Odgovarajuće frakcije su koncentrovane, a ostatak je prečišćen pomoću RP HPLC na Synergy Hydro-RP koloni od 4 mikrona (Phenominex). Za eluciju je korišćen linearni gradijent metanola od 0 do 30% u 50 mM trietilamonijum acetatnom puferu (pH 7,5). Odgovarajuće frakcije su kombinovane, koncentrovane i liofilizovane 3 puta radi uklanjanja viška pufera. Jedinjenje 4:<31>P-NMR (D2O): -3.76 (s); MS: m/z 355.3 [M-H]-. Jedinjenje 6:<31>P-NMR (D20): -9.28(d, 1H, Pα), -12.31(d, 1H, Pγ), -22.95(t, 1H, Pβ); MS: m/z 515.0 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 5
JEDINJENJE 5
[0205]
21
[0206] Jedinjenje 5 je sintetisano kako je opisano za 2 na skali od 0,1 mmol i sa neopentil estrom fosforohloridatnog reagensa. Prinos je bio 36 mg (63%).<31>P-NMR (CDCl3): δ 2.57 (s), 2.43 (s). MS: 572.6 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 6
JEDINJENJE 7
[0207]
[0208] Suvo jedinjenje 1 (14 mg, 0,05 mmol) rastvoreno je u smeši PO(OMe)3(0,750 ml) i piridina (0,5 ml). Smeša je uparena pod vakuumom tokom 15 minuta na temperaturi kupatila od 42°C, a zatim ohlađena na RT. Dodat je N-metilimidazol (0,009 ml, 0,11 mmol), a zatim PSCl3(0,01 ml, 0,1 mmol). Smeša je držana na RT tokom 1 h. Dodati su tributilamin (0,065 ml, 0,3 mmol) i N-tetrabutil amonijum so pirofosfata (200 mg). Dodato je oko 1 ml suvog DMF-a radi dobijanja homogenog rastvora. Nakon 2 h, reakcija je prekinuta dodatkom 2M amonijum acetatnog pufera (1 ml, pH = 7,5), razblažena vodom (10 ml) i naneta na kolonu HiLoad 16/10 sa Q Sepharose High Performance. Odvajanje je izvedeno pomoću linearnog gradijenta NaCl od 0 do 1N u 50 mM TRIS-puferu (pH 7,5). Frakcije eluirane sa 80% pufera B sadržale su 7 (jedinjenja 7a i 7b). Odgovarajuće frakcije su koncentrovane, a ostatak je prečišćen pomoću RP HPLC na Synergy Hydro-RP koloni od 4 mikrona (Phenominex). Za eluciju je korišćen linearni gradijent metanola od 0 do 20% u 50 mM trietilamonijum acetatnom puferu (pH 7,5). Sakupljena su dva pika. Odgovarajuće frakcije su kombinovane, koncentrovane i liofilizovane 3 puta radi uklanjanja viška pufera. Pik 1 (polarniji):<31>P-NMR (D2O): 42.68(d, 1H, Pα), -9.05(d, 1H, Pγ), -22.95(t, 1H, Pβ); MS 530.90 [M-1]-. Pik 2 (manje polaran):<31>P-NMR (D2O): 42.78(d, 1H, Pα), - 10.12(bs, 1H, Pγ), -23.94(t, 1H, Pβ); i MS 530.90 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 7
21
JEDINJENJE 23
[0209]
[0210] U suspenziju 23-1 (20,0 g, 81,3 mmol), imidazola (15,9 g, 234,0 mmol), PPh3(53,5 g, 203,3 mmol) i piridina (90 ml) u anhidrovanom THF-u (100 ml) uz mešanje je u kapima dodat rastvor I2(41,3 g, 162,6 mmol) u THF-u (150 ml) na 0°C. Smeša je polako zagrevana na RT i mešana tokom 14 h. Reakcija je prekinuta zas. vod. Na2S2O3(150 ml) i ekstrahovana pomoću THF/EA (1/1) (100 ml x 3). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prekristalisan iz EtOH radi dobijanja čistog 23-2 (23 g, 79%) kao bele čvrste supstance.
[0211] U rastvor 23-2 (23 g, 65 mmol) u anhidrovanom MeOH (200 ml) uz mešanje je dodat NaOCH3(10,5 g, 195 mmol) u MeOH (50 ml) na RT. Smeša je mešana na 60°C tokom 3 h i ugašena suvim ledom. Čvrsta supstanca je istaložena i uklonjena filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 10%) radi dobijanja 23-3 (13,1 g, 92,5%) kao bele penaste čvrste supstance.
[0212] U rastvor 23-3 (12,0 g, 53 mmol) u anhidrovanom CH3CN uz mešanje je dodat TEA•3HF (8,5 g, 53 mmol) i NIS (10,2 g, 63,6 mmol) na 0°C. Smeša je mešana tokom 30 minuta i polako zagrevana na RT. Smeša je mešana još 30 minuta. Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom i isprana DCM-om radi dobijanja 23-4 (14 g, 73%) kao žute čvrste supstance. ESI-MS: m/z 373.0 [M+H]<+>.
21
[0213] U rastvor 23-4 (12,0 g, 32 mmol) i DMAP (1,2 g, 9,6 mmol) u piridinu (100 ml) uz mešanje je dodat Bz2O (21,7 g, 96 mmol) na RT. Smeša je mešana na 50°C tokom 16 h. Dobijeni rastvor je ugašen vodom i koncentrovan do suva pod niskim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen na koloni silika gela (50% EA u PE) radi dobijanja 23-5 (15 g, 81%) kao bele čvrste supstance. ESI-TOF-MS: m/z 581,0 [M+H]<+>.
[0214] Tetrabutil amonijum hidroksid (288 ml kao 54-56% vodeni rastvor, 576 mmol) prilagođen je na pH∼4 dodavanjem TFA (48 ml). Dobijeni rastvor je tretiran rastvorom 23-5 (14 g, 24 mmol) u DCM-u (200 ml). m-Hlorperbenzojeva kiselina (30 g, 60-70%, 120 mmol) je u porcijama dodata uz žustro mešanje, i smeša je mešana preko noći. Organski sloj je odvojen i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Dobijeni rastvor je osušen iznad magnezijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni radi dobijanja 23-6 (7,5 g, 68%)
[0215] Jedinjenje 23-6 (5,0 g, 10,6 mmol) tretirano je pomoću 7N NH3•MeOH (100 ml), i smeša je mešana tokom 5 h. Smeša je zatim koncentrovana do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je ispran DCM-om, i čvrsta supstanca je filtrirana radi dobijanja 23-7 (2,1 g, 75%) kao bele pene. ESI-MS: m/z 263.0 [M+H]<+>.
[0216] U rastvor 23-7 (2,1 g, 8,0 mmol) u piridinu u kapima je dodat TIDPSCl (2,5 g, 8,0 mmol) na 0°C i mešan tokom 12 h na RT. Rastvor je ugašen vodom i koncentrovan do suva na niskom pritisku. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni (EA u PE od 10% do 50%) radi dobijanja čistog 23-8 (1,6 g, 40%) kao bele pene.
[0217] Rastvor 23-8 (1,5 g, 3,0 mmol) i IBX (1,69 g, 6,0 mmol)u anhidrovanom CH3CN (10 ml) mešan je na 80°C tokom 3 h. Smeša je ohlađena na RT i filtrirana. Filtrat je koncentrovan do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EA u PE od 2% do 50%) radi dobijanja čistog 23-9 (1,2 g, 80%) kao bele pene. ESI-MS: m/z 503.0 [M+H]<+>
[0218] Jedinjenje 23-9 (500 mg, 1 mmol) rastvoreno je u suvom THF-u (8 ml). Etinil magnezijum bromid (8 ml 0,5 M rastvora u cikloheksanu) je dodat na RT. Nakon 30 minuta dodato je još etinil magnezijum bromida (8 ml). Smeša je ostavljena tokom 30 minuta, a zatim ugašena zas. rastvorom amonijum hlorida. Proizvod je ekstrahovan pomoću EA. Organski
21
ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu u EA kako bi se uklonila tamna boja. Žuto jedinjenje je rastvoreno u THF-u (3 ml) i tretirano TBAF-om (1 ml, 2 M rastvor u THF-u) tokom 30 minuta. Rastvarač je uparen, a ostatak je podvrgnut hromatografiji na silika gelu na patroni Biotage (25g). Za izokratsko eluiranje je korišćen EA zasićen vodom. Svaka frakcija je analizirana pomoću TLC u DCM-MeOH (9: 1 V/V). Koncentrovane su samo frakcije koje sadrže izomer sa velikim Rf radi dobijanja čistog jedinjenja 23 (110 mg). MS: 285.1 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 8
JEDINJENJE 22
[0219]
[0220] Jedinjenje 23 (57 mg, 0,2 mmol) je rastvoreno u CH3CN (2 ml) koji sadrži N-metilimidazol (40 ul). Dodat je fosforohloridat (207 mg, 0,6 mmol) i smeša je držana preko noći na 40°C. Smeša je raspodeljena između vode i EA. Organski sloj je odvojen, ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen i uparen. Proizvod je izolovan hromatografijom na silika gelu sa gradijentom metanola u DCM-u od 0% do 15%. Dobijeno je jedinjenje 22 (46 mg, 39%). MS: m/z 593.9 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 9
JEDINJENJE 51
[0221]
21
[0222] U rastvor trietilamonijum bis(izopropil oksikarbonil oksimetil)fosfata (0,74 mmol) u THF-u dodat je 51-1 (0,16 gg; 0,49 mmol). Smeša je uparena i dehidrirana uparavanjem sa piridinom pa sa toluenom. Ostatak je rastvoren u anhidrovanom THF-u i ohlađen u ledenom kupatilu. Dodat je diizopropil etil amin (0,34 ml), praćen BOP-Cl (250 mg) i 3-nitro-1,2,4-triazolom (112 mg) u THF-u (5 ml). Smeša je mešana na 0°C tokom 90 minuta, razblažena sa EtOAc, isprana zas. vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli, i osušena (Na2SO4). Ostatak je prečišćen na koloni silika gela sa 3-10% i-PrOH u DCM-u radi dobijanja 51-2 (0,2 g, 64%).
[0223] Rastvor 51-2 (0,20 g; 0,31 mmol) u 80% vod. HCOOH je mešan na RT tokom 2 h i zatim koncentrovan. Ostatak je uparen sa toluenom, a zatim sa MeOH koji sadrži malu količinu Et3N (2 kapi). Nakon prečišćavanja na silika gelu (kolona od 10 g) sa CH2Cl2/MeOH (gradijent 4-10%) usledilo je prečišćavanje pomoću RP-HPLC u 5 ciklusa na koloni Synergi Hydro RP 250 x 30 mm (Phenomenex P/N 00G-4375-U0-AX) koristeći H2O i ACN, oba sa 50 mM TEAA. Gradijent je bio 25-75% ACN tokom 20 minuta pri 24 ml/min, detekcija 254 nM. Jedinjenje je eluirano na 16,0 minuta, i čiste frakcije su objedinjene i liofilizovane. TEAA je uklonjen rastvaranjem jedinjenja u DMSO (2 ml) i upotrebom iste kolone i istog gradijenta, koristeći samo H2O i ACN. Čiste frakcije su objedinjene i liofilizovane radi dobijanja jedinjenja 51 (18 mg). MS: m/z = 1197 [2M+1]<+>.
PRIMER 10
JEDINJENJE 8
[0224]
22
[0225] Jedinjenje 8-1 (5,0 g, 8,5 mmol) i 2-amino-6-hlorpurin (3,0 g, 17,7 mmol) koncentrovani su zajedno sa anhidrovanim toluenom 3 puta. U suspenziju prethodnih smeša u anhidrovanom MeCN (50 ml) uz mešanje je dodat DBU (7,5 g, 49 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 15 minuta, a zatim je u kapima dodat TMSOTf (15 g, 67,6 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 15 minuta. Smeša je zagrevana na 70°C preko noći. Smeša je ohlađena na RT i razblažena sa EA (100 ml). Rastvor je ispran zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA: od 15/1 do 3/1) radi dobijanja 8-2 (2,5 g, 46,3%) kao bele pene.
[0226] U rastvor 8-2 (10 g, 15,7 mmol), AgNO3(8,0 g, 47 mmol) i kolidina (10 ml) u anhidrovanom DCM-u (20 ml) u malim porcijama je dodat MMTrCl (14,5 g, 47 mmol) pod atmosferom N2. Smeša je mešana na RT preko noći. Smeša je filtrirana, i filtrat je ispran zas. vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/ME = 20/1 do 8/1) radi dobijanja 8-3 (10 g, 70%) kao žute čvrste supstance.
[0227] U rastvor 3-hidroksi-propionitrila (3,51 g, 49,4 mmol) u anhidrovanom THF-u (100 ml) dodat je NaH (2,8 g, 70 mmol) na 0°C, i smeša je mešana na RT tokom 30 minuta. Dodat je rastvor 8-3 (8,5 g, 9,35 mmol) u anhidrovanom THF-u (100 ml) na 0°C, i smeša je mešana na RT preko noći. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EA (100 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 100/1 do 20/1) radi dobijanja 8-4 (4,5 g, 83%) kao bele čvrste supstance.
[0228] Jedinjenje 8-4 (1,5 g, 2,6 mmol) koncentrovano je zajedno sa anhidrovanim piridinom 3 puta. U ledeno hladni rastvor 8-4 u anhidrovanom piridinu (30 ml) dodat je TsCl (1,086 g, 5,7 mmol), i smeša je mešana na 0°C tokom 1 h. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EA (80 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 100/1 do 15/1) radi dobijanja 8-5 (1,4 g, 73%) kao bele čvrste supstance.
[0229] U rastvor 8-5 (4,22 g, 5,7 mmol) u acetonu (60 ml) dodat je NaI (3,45 g, 23 mmol), i smeša je zagrevana uz refluks preko noći. Reakcija je prekinuta zas. vod. Na2S2O3i ekstrahovana pomoću EA (100 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 100/1 do 15/1) radi dobijanja 8-6 (4 g, 73%) kao bele čvrste supstance.
[0230] U rastvor 8-6 (4,0 g, 5,8 mmol) u anhidrovanom THF-u (60 ml) dodat je DBU (3,67 g, 24 mmol), i smeša je mešana na 60°C preko noći. Smeša je razblažena dodatkom EA (80 ml), i rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 100/1 do 20/1) radi dobijanja 8-7 (2 g, 61%) kao bele čvrste supstance.
[0231] U ledeno hladni rastvor 8-7 (500 mg, 0,89 mmol) u anhidrovanom DCM-u (20 ml) dodat je AgF (618 mg, 4,9 mmol) i rastvor I2(500 mg, 1,97 mmol) u anhidrovanom DCM-u (20 ml). Smeša je mešana na RT tokom 3 h. Reakcija je prekinuta zas. Na2S2O3i vodenim NaHCO3i smeša je ekstrahovana DCM-om (50 ml). Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan radi dobijanja sirovog 8-8 (250 mg) kao žute čvrste supstance.
[0232] U rastvor sirovog 8-8 (900 mg, 1,28 mmol) u anhidrovanom DCM-u (50 ml) dodat je DMAP (1,0 g, 8,2 mmol) i BzCl (795 mg, 5,66 mmol). Smeša je mešana na RT preko noći. Smeša je isprana zas. vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-TLC (DCM/MeOH = 15:1) radi dobijanja 8-9 (300 mg, 26%) kao bele čvrste supstance.
[0233] U rastvor sirovog 8-9 (750 mg, 0,82 mmol) u anhidrovanom HMPA (20 ml) dodat je NaOBz (1,2 g, 8,3 mmol) i 15-kruna-5 (1,8 g, 8,3 mmol). Smeša je mešana na 60°C tokom 2 dana. Smeša je razblažena dodatkom EA i rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-TLC (PE/EA = 1:1) radi dobijanja sirovog 8-10 (550 mg, 73%) kao bele čvrste supstance.
[0234] Sirovo jedinjenje 8-10 (550 mg, 0,6 mmol) rastvoreno je u NH3/MeOH (7N, 50 ml). Smeša je mešana na RT preko noći. Smeša je koncentrovana, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH od 100/1 do 20/1) radi dobijanja 8-11 (62 mg, 17%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 598.0 [M+H]<+>
[0235] Rastvor 8-11 (12 mg) u 80% mravljoj kiselini (0,5 ml) ostavljen je na RT tokom 3,5 h, a zatim koncentrovan. Ostatak je uparen zajedno sa MeOH/toluenom 4 puta u bočici, i trituriran sa EtOAc na 40°C. Rastvor EtOAc je uklonjen pipetom. Korak trituracije je ponovljen nekoliko puta, i preostala čvrsta supstanca je rastvorena u MeOH. Rastvor je koncentrovan i osušen radi dobijanja jedinjenja 8 kao beličaste čvrste supstance (4,7 mg). ESI-MS: m/z 326.6 [M+H]<+>.
PRIMER 11
22
JEDINJENJA 34 i 35
[0236]
[0237] U suspenziju 8-1 (50 g, 84,8 mmol) i 2-amino-6-hlorpurina (28,6 g, 169,2 mmol) u anhidrovanom MeCN (500 ml) uz mešanje je dodat DBU (77,8 g, 508 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta, i TMSOTf (150,5 g, 678 mmol) je u kapima dodat na 0°C.
Smeša je mešana na RT tokom 20 minuta do nastanka bistrog rastvora. Smeša je mešana na 90-110°C preko noći. Smeša je ohlađena na RT i razblažena sa EA. Rastvor je ispran zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i zatim koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA = 2/1) radi dobijanja 34-1 (30 g, 55,5%) kao bele čvrste supstance.
[0238] U rastvor 34-1 (30 g, 47,1 mmol) u anhidrovanom DCM-u (300 ml) dodat je kolidin (30 ml), AgNO3(24 g, 141,4 mmol) i MMTrCl (43,6 g, 141,4 mmol). Smeša je mešana na RT preko noći. Smeša je filtrirana, i filtrat je ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA= 4/1) radi dobijanja 34-2 (35 g, 82%) kao bele čvrste supstance.
[0239] U rastvor 34-2 (35 g, 38,5 mmol) u anhidrovanom EtOH (150 ml) uz mešanje je dodat rastvor EtONa u EtOH (2N, 150 ml). Smeša je mešana na RT preko noći, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (200 ml), i rastvor je ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 100/2) radi dobijanja 34-3 (19 g, 81%) kao bele čvrste supstance.
[0240] Jedinjenje 34-3 (19 g, 31,3 mmol) koncentrovano je zajedno sa anhidrovanim piridinom 3 puta. U ledeno hladni rastvor 34-3 u anhidrovanom piridinu (120 ml) dodat je rastvor TsCl (6,6 g, 34,6 mmol) u piridinu (40 ml) u kapima na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 16 h. Smeša je ugašena vodom, i reakciona smeša je koncentrovana. Ostatak je ponovno rastvoren u EA (200 ml). Rastvor je ispran zas. vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i filtriran, i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 100/1) radi dobijanja 34-4 (16 g, 67%) kao žute čvrste supstance.
[0241] U rastvor 34-4 (15 g, 19,7 mmol) u acetonu (100 ml) dodat je NaI (30 g, 197 mmol). Smeša je zagrevana uz refluks preko noći, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 100/1) radi dobijanja 34-5 (9 g, 63,7%) kao bele čvrste supstance.
22
[0242] U rastvor 34-5 (8 g, 11,2 mmol) u anhidrovanom THF-u (60 ml) dodat je DBU (5,12 g, 33,5 mmol), i smeša je zagrevana na 60°C preko noći. Smeša je razblažena dodavanjem EA, i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i filtriran, i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/aceton = 4/1) radi dobijanja 34-6 (5,7 g, 86%) kao bele čvrste supstance.<1>H-NMR (CD3OH, 400MHz) δ = 8.18 (s, 1H), 7.17-7.33 (m, 12H), 6.80 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.98 (s, 1H), 5.40 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.87 (m, 5H), 3.75 (s, 3H), 2.69 (s, 1H), 1.05 (s, 3H).
[0243] U ledeno hladni rastvor 34-6 (4,44 g, 7,5 mmol) u anhidrovanom MeCN (45 ml) dodat je TEA•3HF (1,23 g, 7,6 mmol) i NIS (2,16 g, 9,5 mmol). Smeša je mešana na RT tokom 2-3 h. Reakcija je prekinuta zas. Na2SO3i rastvorom NaHCO3. Smeša je ekstrahovana pomoću EA (3 x 100 ml). Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4; i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/aceton = 100/2) radi dobijanja 34-7 (4,4 g, 79,8%) kao bele čvrste supstance.
[0244] U rastvor 34-7 (5,36 g, 7,3 mmol) u anhidrovanom DCM-u (50 ml) dodat je DMAP (3,6 g, 29,8 mmol) i BzCl (3,1 g, 22,1 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT preko noći. Smeša je isprana zas. vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je koncentrovan, a ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA= 5/1) radi dobijanja34-8 (5,6 g, 81,3%) kao bele čvrste supstance.
[0245] U rastvor 34-8 (5,0 g, 5,3 mmol) u anhidrovanom DMF-u (150 ml) dodat je NaOBz (7,64 g, 53 mmol) i 15-kruna-5 (14 g, 68 mmol). Smeša je mešana na 90-100°C tokom 48 h. Smeša je razblažena dodatkom EA, i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je koncentrovan, a ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA = 5/1) radi dobijanja 34-9 (3,9 g, 78,5%) kao bele čvrste supstance.
[0246] Jedinjenje 34-9 u NH3u MeOH (7 N, 60 ml) mešano je na RT tokom 18 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/aceton = 50/1) radi dobijanja 34-10 (500 mg, 74,7%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 626,3 [M+H]<+>.
[0247] U rastvor 34-10 (350 mg, 0,56 mmol) u anhidrovanom piridinu (4 ml) dodat je imidazol (50 mg, 0,72 mmol) i TBSCl (108 mg, 0,72 mmol) na 0 do 5°C, i mešan na RT tokom 15 h.
22
Reakcija je prekinuta apsolutnim EtOH (0,5 ml). Rastvor je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (150 ml) i ispran vodom, zas. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i upareni pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (10-30% EA u heksanu) radi dobijanja 34-11 (338 mg, 81,8%) kao bele čvrste supstance.
[0248] U rastvor jedinjenja 34-11(328 mg, 0,44 mmol), AgNO3(226 mg, 1,33 mmol) i kolidina (0,59 ml, 4,84 mmol) u anhidrovanom DCM-u (4 ml) dodat je MMTrCl (410 mg, 1,33 mmol) u atmosferi N2. Smeša je mešana na RT preko noći u atmosferi N2i praćena putem TLC do okončanja. Smeša je filtrirana kroz prethodno upakovani filter od celita, i filtrat je ispran vodom, 50% vodenim rastvorom limunske kiseline i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (EA u heksanu od 0% do 30%) radi dobijanja 34-12 (337 mg).
[0249] U rastvor 34-12 (337 mg, 0,33 mmol) u anhidrovanom THF-u (4 ml) dodat je 1,0 M rastvor TBAF (0,66 ml, 0,66 mmol) na 0 do 5°C. Reakcija je polako zagrevana na RT i mešana tokom 1 h. Smeša je ugašena silika gelom i filtrirana. Rastvarači su upareni radi dobijanja sirovog proizvoda koji je prečišćen na koloni silika gela (EA u heksanu od 0% do 50%) radi dobijanja 34-13 (188 mg).
[0250] U rastvor 34-13 (180 mg, 0,16 mmol) u anhidrovanom CH3CN (2,5 ml) uz mešanje je dodat N-metilimidazol (132 µl, 1,6 mmol) na 0-5 °C (ledeno/vodeno kupatilo) praćen rastvorom fenil (cikloheksanoksi-L-alaninil) fosforohloridata (207 mg, 0,6 mmol, rastvoren u 2ml CH3CN). Rastvor je mešan na RT tokom 2,5 h, i smeša je razblažena dodatkom EA, a zatim je dodata voda (15 ml). Rastvor je ispran pomoću H2O, 50% vodenog rastvora limunske kiseline i zasićenog vodenog rastvora soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog MgSO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom radi dobijanja ostatka koji je prečišćen na silika gelu sa 0 do 40% EA/heksan radi dobijanja 34-14 (75,8 mg) i 34-15 (108 mg) kao izomera sa sporijom elucijom.
[0251] Jedinjenje 34-14 (76 mg, 0,063 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom CH3CN (0,5 ml), i 4 N HCl u dioksanu (47 µl) dodata je na 0 do 5°C (ledeno/vodeno kupatilo). Smeša je mešana na RT tokom 40 minuta i dodat je anhidrovani EtOH (200 µl). Rastvarači su upareni na RT, i
22
upareni zajedno sa toluenom 3 puta. Ostatak je rastvoren u 50% CH3CN/ H2O, prečišćen reversno faznom HPLC (C18) koristeći acetonitril i vodu, i liofilizovan radi dobijanja jedinjenja 34 (26,6 mg). ESI-LCMS: m/z = 663.3 [M+H]<+>.
[0252] Jedinjenje 34-15 (108 mg, 0,089 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom CH3CN (0,7 ml), i 4 N HCl u dioksanu (67 µl) dodata je na 0 do 5 °C (ledeno/vodeno kupatilo). Smeša je mešana na RT tokom 60 minuta i dodat je anhidrovani EtOH (200 µl). Rastvarači su upareni na RT, i upareni zajedno sa toluenom 3 puta. Ostatak je rastvoren u 50% CH3CN/ H2O, prečišćen reversno faznom HPLC (C18) koristeći acetonitril i vodu, i liofilizovan radi dobijanja jedinjenja 35 (40,3 mg). ESI-LCMS: m/z = 663.2 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 12
JEDINJENJE 25
[0253]
[0254] U rastvor 25-1 (260 mg, 1 mmol), PPh3(780 mg, 3 mmol) i piridina (0,5 ml) u anhidrovanom THF-u (8 ml) dodat je I2(504 mg, 2 mmol) na RT, i smeša je mešana na RT tokom 12 h. Smeša je razblažena dodatkom EtOAc i isprana 1 M rastvorom HCl. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 25-2 (190 mg, 85%) kao bele čvrste supstance.
[0255] U rastvor 25-2 (190 mg, 0,52 mmol) u THF-u (4 ml) dodat je DBU (760 mg, 5 mmol) na RT, i smeša je zagrevana na 50°C preko noći. Smeša je razblažena dodatkom EtOAc i isprana vodom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim
22
pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (30% EA u PE) radi dobijanja 25-3 (75 mg, 52%) kao bele čvrste supstance.
[0256] U rastvor 25-3 (200 mg, 0,82 mmol) u MeCN (anhidrovan, 4 ml) dodat je NIS (337 mg, 1,5 mmol) i TEA•3HF (213 mg, 1,25 mmol) na RT, i smeša je mešana na RT tokom 7 h. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom Na2SO3i zas. vod. rastvorom NaHCO3. Smeša je ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 25-4 (300 mg, 62%) kao bele čvrste supstance.
[0257] U rastvor 25-4 (194 mg, 0,5 mmol) u piridinu (5 ml) dodat je BzCl (92 mg, 0,55 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 5 h, i reakcija je prekinuta vodom. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 25-5 (397 mg, 81%) kao bele čvrste supstance.
[0258] U rastvor 25-5 (1,05 g, 2,13 mmol) u DCM-u (12 ml) dodata je smeša TFA (0,5 ml) i Bu4NOH (1 ml), praćena dodatkom m-CPBA (1.3 g, 6 mmol) na RT. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Smeša je isprana zas. rastvorom Na2SO3i vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (30% EA u PE) radi dobijanja 25-6 (450 mg, 63%) kao bele čvrste supstance.
[0259] Jedinjenje 25-6 (250 mg, 0,65 mmol) rastvoreno je u NH3/MeOH (5 ml). Smeša je mešana na RT tokom 5 h, i zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja jedinjenja 25 (120 mg, 66%) kao belog praha. ESI-MS: m/z 279.0 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 13
JEDINJENJE 31
[0260]
22
[0261] U rastvor jedinjenja 25 (100 mg, 0,36 mmol) u anhidrovanom THF-u (3,0 ml) uz mešanje je dodat N-metilimidazol (236 µl, 2,87 mmol) na 0°C (suvi led/acetonsko kupatilo) praćen rastvorom fosforohloridata (329 mg, 1,08 mmol, rastvoren u 2 ml THF-a). Rastvor je mešan na 0°C tokom 1 h, reakciona temperatura je podignuta do 10°C tokom sledećeg 1 h, i rastvor je ostavljen na 10°C sledeća 4 h. Smeša je ohlađena na 0 do 5°C, razblažena dodatkom EA, i dodata je voda (15 ml). Rastvor je ispran pomoću H2O, 50% vodenog rastvora limunske kiseline i zasićenog vodenog rastvora soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog MgSO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom radi dobijanja ostatka koji je rastvoren u 25% CH3CN/ H2O. Ostatak je prečišćen reversno faznom HPLC (C18) koristeći acetonitril i vodu, nakon čega sledi liofilizacija radi dobijanja smeše dva izomera jedinjenja 31 (17.5 mg). MS: m/z 546.05 [M-H]-.
REFERENTNI PRIMER 14
JEDINJENJE 27
[0262]
[0263] U rastvor jedinjenja 25 (139 mg, 0,5 mmol) u piridinu (5 ml) dodat je BzCl (92 mg, 0,55 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 5 h, razblažena dodatkom EtOAc i isprana 1 N rastvorom HCl. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 27-1 (274 mg, 79%) kao bele čvrste supstance.
2
[0264] U rastvor 27-1 (490 mg, 1 mmol), DMAP (244 mg, 2 mmol) i TEA (205 mg, 2,1 mmol) u MeCN (10 ml) dodat je TPSCl (604 mg, 2 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 2 h, a zatim je vod. NH4OH dodat na RT. Smeša je mešana tokom 0,5 h, razblažena dodatkom EtOAc i isprana zas. vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (30% EA u PE) radi dobijanja 27-2 (250 mg, 41%) kao bele čvrste supstance.
[0265] Jedinjenje 27-2 (250 mg, 0,51 mmol) rastvoreno je u NH3/MeOH (15 ml). Smeša je mešana na RT tokom 5 h, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% DCM u DCM-u) radi dobijanja jedinjenja 27 (95 mg, 66%) kao belog praha. ESI-MS: m/z 278.1 [M+H]<+>.
PRIMER 15
JEDINJENJE 29
[0266]
[0267] U rastvor jedinjenja 29-1 (30 g, 0,08 mol) u anhidrovanom THF-u (300 ml) u kapima je dodat rastvor litijum tri-terc-butoksialuminohidrida (120 ml, 0,12 mol) na -78°C u atmosferi N2. Smeša je mešana na -20°C tokom 1 h. Reakcija je prekinuta zas. vod. NH4Cl i zatim filtrirana. Filtrat je ekstrahovan pomoću EA (3 x 300 ml). Organski sloj je osušen iznad
2 1
anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (10% EA u PE) radi dobijanja 29-2 (26 g, 86%) kao bezbojnog ulja.
[0268] U mešani rastvor PPh3(37,7 g, 0,144 mol) u DCM-u (100 ml) dodato je jedinjenje 29-2 (27 g, 0,072 mol) na -20°C u atmosferi N2. Nakon što je smeša mešana na RT tokom 15 minuta, dodat je CBr4(42 g, 0,129 mol) uz održavanje temperature reakcije između -25 i -20°C u atmosferi N2. Smeša je zatim mešana na temperaturi nižoj od -17°C tokom 20 minuta. U rastvor je dodat silika gel, i rastvor je zatim prečišćen separacijom na fleš silika gel koloni radi dobijanja sirovog uljastog proizvoda. Sirova supstanca je prečišćena na koloni silika gela (EA u PE od 2% do 20%) radi dobijanja 29-3 (α-izomer, 17 g, 55%) kao bezbojnog ulja.
[0269] Smeša 6-Cl-guanina (11,6 g, 68,8 mmol) i t-BuOK (8,2 g, 73 mmol) u t-BuOH (200 ml) i MeCN (150 ml) mešana je na 35°C tokom 30 minuta, i zatim je dodat 29-3 (10 g, 22,9 mmol) u MeCN 100 ml) na RT. Smeša je zagrevana na 50°C preko noći. Reakcija je ugašena rastvorom NH4Cl (5 g) u vodi (40 ml) i smeša je filtrirana. Filtrat je uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 29-4 (6 g, 42%) kao žute čvrste supstance.
[0270] U rastvor 29-4 (12,5 g, 23,8 mol) u DCM-u (50 ml) dodat je AgNO3(8,1 g, 47,6 mmol), kolidin (5,77 g, 47,6 mmol) i MMTrCl (11 g, 35,7 mmol). Smeša je mešana na RT preko noći. Reakcija je ugašena pomoću MeOH (5 ml), filtrirana i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja intermedijera (16 g, 86%) kao žute čvrste supstance. U rastvor HOCH2CH2CN (4,7 g, 66 mmol) u THF-u (200 ml) dodat je NaH (3,7 g, 92 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 30 minuta. Dodat je rastvor intermedijera (10,5 g, 13 mmol) u THF-u (50 ml), i reakciona smeša je mešana na RT tokom 12 h. Reakcija je prekinuta dodatkom MeOH (2 ml), razblažena pomoću EA (100 ml), i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 29-5 (5,8 g, 77%) kao žute čvrste supstance.
[0271] U rastvor PPh3(7,0 g, 26,6 mmol) u anhidrovanom piridinu (100 ml) dodat je I2(6,3 g, 24,9 mmol) i mešan na RT tokom 30 minuta. Smeša je tretirana rastvorom 29-5 (9,5 g, 16,6 mmol) u piridinu (40 ml). Smeša je mešana na RT preko noći. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom Na2S2O3i smeša je ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je ispran zasićenim
2 2
vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (30% EA u PE) radi dobijanja 29-6 (7 g, 66%) kao žute čvrste supstance.
[0272] U rastvor 29-6 (7,5 g, 11 mmol) u suvom THF-u (50 ml) dodat je DBU (5,4 g, 33 mmol), i smeša je zagrevana uz refluks tokom 4 h. Smeša je razblažena pomoću EA (3 x 100 ml), i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (30% EA u PE) radi dobijanja 29-7 (4,0 g, 67%) kao bele čvrste supstance.
[0273] U ledeno hladni rastvor 29-7 (3,0 g, 5,4 mmol) u anhidrovanom MeCN (20 ml) dodat je TEA•3HF (0,65 g, 4,1 mmol) i NIS (1,53 g, 6,78 mmol) na RT, i reakciona smeša je mešana na RT tokom 2 h. Smeša je razblažena dodatkom EA (50 ml) i isprana zas. rastvorom Na2S2O3i vod. NaHCO3. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi odvajanja dva izomera (oko 1:1). NOE je pokazao da je polarni izomer bio 29-8 (0,6 g, 16%) kao bela čvrsta supstanca.
[0274] U rastvor 29-8 (0,7 g, 1 mmol) u suvom piridinu (10 ml) dodat je BzCl (147 mg, 1,05 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 3 h. Smeša je zatim razblažena sa EA i isprana zas. vod. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 29-9 (0,65 g, 81%) kao bele čvrste supstance.
[0275] U rastvor 29-9 (0,65 g, 0,8 mmol) u suvom DMF-u (40 ml) dodat je NaOBz (1,15 g, 8 mmol) i 15-kruna-5 (1,77 g, 8 mmol). Smeša je mešana na 100°C tokom 48 h. Rastvarač je uparen pod niskim pritiskom, a ostatak je rastvoren u EA (30 ml), i ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 29-10 (500 mg, 78%) kao bele čvrste supstance.
[0276] Jedinjenje 29-10 (400 mg, 0,5 mmol) u NH3/MeOH (7 N, 100 ml) mešano je na RT tokom 18 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen na koloni
2
silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 29-11 (220 mg, 63%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 590.3 [M+H]<+>.
[0277] Jedinjenje 29-11 (59 mg, 0,1 mmol) rastvoreno je u 50% TFA u metanolu (10 ml), i smeša je držana na RT tokom 2 h. Rastvarač je uparen, i uparen zajedno sa smešom metanol/toluen kako bi se uklonili tragovi kiseline. Ostatak je suspendovan u CH3CN (1 ml) i centrifugiran. Talog je ispran sa CH3CN (1 ml) i osušen. Jedinjenje 29 je dobijeno kao bezbojna čvrsta supstanca (21 mg, 65%. MS: m/z 316.2 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 16
JEDINJENJA 42 I 43
[0278]
[0279] Sveže pripremljeni EtONa u suvom EtOH (2 N, 150 ml) dodat je rastvoru 29-4 (13,67 g, 17,15 mmol) u EtOH (50 ml) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 1 h, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 42-1 (10 g, 98%) kao žute čvrste supstance.
[0280] U rastvor PPh3(2,73 g, 10,4 mol) u anhidrovanom piridinu (60 ml) dodat je I2(2,48 g, 9,76 mmol) na RT, i reakciona smeša je mešana na RT tokom 30 minuta. Dodat je rastvor 42-1 (3,9 g, 6,51 mmol) u piridinu (10 ml). Smeša je mešana na RT preko noći. Reakcija je
2 4
prekinuta zas. rastvorom Na2S2O3i vod. NaHCO3i zatim ekstrahovana pomoću EA (100 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (2% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 42-2 (3,0 g, 75%) kao žute čvrste supstance.
[0281] U rastvor 42-2 u suvom THF-u (300 ml) dodat je DBU (14,0 g, 91,8 mmol), i smeša je zagrevana uz refluks tokom 3 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (100 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 42-3 (0,6 g, 37,5%) kao bele čvrste supstance.
[0282] U ledeno hladni rastvor 42-3 (2,0 g, 3,44 mmol) u anhidrovanom MeCN (20 ml) dodat je NIS (0,975 g, 4,3 mmol) i TEA•3HF (0,82 g, 5,16 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 2 h. Reakcija je prekinuta zas. Na2SO3i vodenim rastvorom NaHCO3i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (50 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 42-4 (1,5 g, 60%) kao bele čvrste supstance.
[0283] U rastvor 42-4 (1 g, 1,37 mmol) u suvom piridinu (100 ml) dodat je BzCl (0,23 g, 1,65 mmol) na 0°C. Reakcija je mešana tokom 30 minuta i proverena putem LCMS. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u EA (50 ml). Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% EA u PE) radi dobijanja 42-5 (0,9 g, 78%) kao bele čvrste supstance.
[0284] U rastvor 42-5 (2 g, 2,4 mmol) u suvom DMF-u (40 ml) dodat je NaOBz (3,46 g, 24 mmol) i 15-kruna-5 (4,5 ml). Smeša je mešana na 95°C tokom 72 h. Smeša je zatim razblažena dodatkom EA (100 ml), i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad MgSO4i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (15% EA u PE) radi dobijanja 42-6 (1,5 g, 75%) kao bele čvrste supstance.
[0285] Jedinjenje 42-6 (1,35 g, 1,64 mmol) u NH3/MeOH (150 ml) mešano je na RT tokom 18 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela
2
(5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 42-7 (0,9 g, 90%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 618.3 [M+H]<+>.
[0286] U rastvor 42-7 (99 mg, 0,16 mmol) u DCM-u (1,0 ml) dodat je trietilamin (92,7 µl, 0,64 mmol) na RT. Smeša je ohlađena na 0 do 5°C (ledeno/vodeno kupatilo), i sveže pripremljeni i destilovani izopropil fosforodihloridat (36,6 µl, 0,2 mmol, pripremljen prema postupku Reddy et al. J. Org. Chem.2011, 76 (10), 3782-3790) dodat je u smešu. Smeša je mešana na 0 do 5°C (ledeno/vodeno kupatilo) tokom 15 minuta, nakon čega je dodat N-metilimidazol (26,3 µl, 0,32 mmol). Smeša je zatim mešana tokom 1 h na 0 do 5°C. TLC je pokazao odsustvo 42-7. Dodat je EA (100 ml), pa voda. Organski sloj je ispran pomoću H2O, zasićenog vodenog rastvora NH4Cl i zasićenog vodenog rastvora soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog MgSO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom dajući ostatak, koji je prečišćen na silika gelu sa 0 do 10% iPrOH/DCM, dajući smešu 42-a i 42-b (61,5 mg).
[0287] Smeša 42-a i 42-b (61,5 mg, 0,085 mmol) rastvorena je u anhidrovanom CH3CN (0,5 ml), i 4 N HCl u dioksanu (64 µl) dodata je na 0 do 5°C (ledeno/vodeno kupatilo). Smeša je mešana na RT tokom 40 minuta i dodat je anhidrovani EtOH (200 µl). Rastvarači su upareni na RT, i upareni zajedno sa toluenom 3 puta. Ostatak je rastvoren u 50% CH3CN/H2O, prečišćen reversno faznom HPLC (C18) koristeći acetonitril i vodu, a zatim liofilizovan radi dobijanja jedinjenja 42 (1,8 mg) i jedinjenja 43 (14,5 mg).
[0288] Jedinjenje 42:<1>H NMR (CD3OD-d4, 400 MHz) δ 8.0 (s, 1H), 6.69 (d, J = 16.0 Hz, 1H),5.9-5.6 (br s, 1H), 4.94-4.85 (m, 1H), 4.68-4.52 (m, 3H), 1.49-1.3 (m, 12H);<19>F NMR (CD3OD-d4) δ-122.8 (s), -160.06 (s);<31>P NMR (CD3OD-d4) δ-7.97 (s). ESI-LCMS: m/z = 450.1 [M+H]<+>; Jedinjenje 43:<1>H NMR (CD3OD-d4, 400 MHz) δ 7.96 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.69 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 6.28-6.1 (br s, 1H), 4.81-4.5 (m, 4H), 1.45-1.39 (m, 12H);<31>P NMR (CD3OD-d4) δ-5.84 (s). ESI-LCMS: m/z = 450.0 [M+H]<+>.
PRIMER 17
JEDINJENJA 32 I 33
[0289]
2
[0290] U rastvor 42-7 (0,47 g, 0,65 mol) u DCM-u (3 ml) dodat je AgNO3(0,22 g, 1,29 mmol), kolidin (0,15 g, 1,29 mmol) i MMTrCl (0,3 g, 0,974 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT preko noći. Smeša je filtrirana, i filtrat je ispran zas. vod. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela radi dobijanja 32-1 (0,55, 85%) kao bele čvrste supstance.
[0291] U rastvor 32-1 (0,5 g, 0,5 mmol) u suvom DMF-u (10 ml) dodat je NaOBz (0,72 g, 5 mmol) i 15-kruna-5 (0,9 ml). Smeša je mešana na 95°C tokom 72 h. Smeša je razblažena dodavanjem EA, i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad MgSO4i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (10% EA u PE) radi dobijanja 32-2 (0,3 g, 60%) kao bele čvrste supstance.
[0292] Jedinjenje 32-2 (0,3 g, 0,3 mmol) u NH3/MeOH (30 ml) mešano je na RT tokom 18 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 32-3 (145 mg, 56%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 890,5 [M+H]<+>.
2
[0293] U rastvor 32-3 (161 mg, 0,16 mmol) u anhidrovanom CH3CN (2,0 ml) uz mešanje je dodat N-metilimidazol (118 µl, 2,87 mmol) na 0 do 5 °C (ledeno/vodeno kupatilo) praćen rastvorom 32-4 (186 mg, 0,54 mmol, rastvoren u 2 ml CH3CN). Rastvor je mešan na 0 do 5°C tokom 4 h. Smeša je razblažena pomoću EA i dodata je voda (15 ml). Rastvor je ispran pomoću H2O, 50% vodenog rastvora limunske kiseline i zasićenog vodenog rastvora soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog MgSO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom dajući ostatak koji je prečišćen na silika gelu sa 0 do 40% EA/heksan radi dobijanja 32-5 (82,6 mg) kao izomera sa bržom elucijom i 32-6 (106 mg) kao izomera sa sporijom elucijom.
[0294] Jedinjenje 32-5 (82,6 mg, 0,07 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom CH3CN (0,5 ml), i 4 N HCl u dioksanu (35 µl) dodata je na 0 do 5°C. Smeša je mešana na RT tokom 1 h, i dodat je anhidrovani EtOH (100 µl). Rastvarači su upareni na RT, i upareni zajedno sa toluenom 3 puta. Ostatak je rastvoren u 50% CH3CN/H2O i prečišćen reversno faznom HPLC (C18) koristeći acetonitril i vodu, a zatim liofilizovan radi dobijanja jedinjenja 32 (19,4 mg).<1>H NMR (CD3OD-d4, 400 MHz) δ 7.9 (s, 1H), 7.32-7.28 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.2-7.12 (m, 3H), 6.43 (d, J= 17.6 Hz, 1H), 4.70-4.63 (m, 2H), 4.55-4.4 (m, 3H), 3.94-3.9 (m, 1H), 1.79-1.67 (m, 4H), 1.53-1.49 (m, 1H), 1.45-1.22 (m, 15H);<31>P NMR (CD3OD-d4) δ 4.06 (s); ESI-LCMS: m/z = 655.2 [M+H]<+>, 653.15 [M-H]-.
[0295] Jedinjenje 32-6 (100 mg, 0,083 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom CH3CN (0,5 ml), i 4 N HCl u dioksanu (50 µl) dodata je na 0 do 5°C. Praćenjem procedure za dobijanje jedinjenja 32, dobijeno je jedinjenje 33 (31,8 mg).<1>H NMR (CD3OD-d4, 400 MHz) δ 7.93 (s, 1H), 7.33-7.29 (m, 2H), 7.24-7.14 (m, 3H), 6.41 (d, J= 17.6 Hz, 1H), 4.70-4.60 (m, 2H), 4.54-4.49 (m, 2H), 4.44-4.39 (m, 1H), 3.92-3.89 (m, 1H), 1.77-1.66 (m, 4H), 1.54-1.24 (m, 16H);<31>P NMR (CD3OD-d4) δ 3.91 (s); ESI-LCMS: m/z = 655.2 [M+H]<+>, 653.1 [M-H]-.
PRIMER 18
JEDINJENJE 53
[0296]
2
[0297] Jedinjenje 53-1 (70 mg, 58%) pripremljeno je od 32-3 (90 mg; 0,1 mmol) i trietilamonijum bis(izopropil oksikarbonil oksimetil)fosfata (0,2 mmol) sa DIPEA (87 µl), BopCl (44 mg) i 3-nitro-1,2,4-triazola (29 mg) u THF-u (2 ml) prema postupku opisanom za jedinjenje 51-2. Prečišćavanje je obavljeno pomoću sistema rastvarača heksan/EtOAc, gradijent 20-80%.
[0298] Jedinjenje 53 (25 mg, 64%) pripremljeno je od 53-1 (70 mg) u acetonitrilu (0,6 ml) i 4 N HCl/dioksanu (50 µl) prema postupku opisanom za jedinjenje 51. MS: m/z = 658 [M+1]<+>.
PRIMER 19
JEDINJENJA 40 I 41
[0299]
2
��
[0300] U smešu prethodno siliranog 6-Cl-guanina (koristeći HMDS i (NH4)2SO4) (25,2 g, 150 mmol) u DCE (300 ml) dodat je 40-1 (50 g, 100 mmol) i TMSOTf (33,3 g, 150 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na 70°C tokom 16 h, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u EA i ispran zas. vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA = 2/1) radi dobijanja čistog 40-2 (45 g, 73%) kao bele čvrste supstance.
[0301] U rastvor 40-2 (45 g, 73,4 mmol) u EtOH (73 ml) dodat je EtONa (1N u EtOH, 360 ml). Smeša je mešana na RT tokom 16 h. Smeša je zatim koncentrovana radi dobijanja ostatka koji je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 10/1) radi dobijanja čistog 40-3 (19 g, 83%) kao bele čvrste supstance.
[0302] U rastvor 40-3 (19 g, 61,1 mmol) u piridinu (120 ml) u kapima je dodat TIPDSCl2(19,2 g, 61 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 16 h, i zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u EA i ispran zas. vod. NaHCO3. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 20/1) radi dobijanja čistog 40-4 (22 g, 65%) kao bele čvrste supstance.
[0303] U rastvor 40-4 (22 g, 39,8 mmol) u DMF/piridinu (5/1, 100 ml) dodat je TMSCl (12,9 g, 119 mmol) u kapima na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 1 h i zatim tretirana izobutiril hloridom (5,4 g, 50 mmol). Smeša je mešana na RT tokom 3 h i zatim ugašena pomoću NH4OH. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (200 ml). Rastvor je ispran zas. vod. NaHCO3, i organski sloj je zatim osušen i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 50/1) radi dobijanja čistog 40-5 (15 g, 60%) kao bele čvrste supstance.
[0304] U rastvor 40-5 (15 g, 24,1 mmol) u DCM-u (100 ml) dodat je PDC (13,5 g, 26 mmol) i Ac2O (9,8 g, 96 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 16 h. Reakcija je prekinuta zas. vod. NaHCO3i zatim ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u anhidrovanom THF-u (100 ml). U rastvor TMSCCH (12 g, 112 mmol) u THF-u (200 ml) dodat je n-BuLi (2,5 N, 44 ml) na -78°C. Smeša je mešana na -78°C tokom 15 minuta i na 0°C tokom 15 minuta. Smeša je tretirana rastvorom sirovog ketona u THF-u na -78°C i mešana na -30°C tokom 2 h. Reakcija je prekinuta zas. vod. NH4Cl i ekstrahovana pomoću EA. Kombinovani organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA= 10/1) radi dobijanja čistog 40-6 (3,1 g, 18%) kao bele čvrste supstance.
[0305] U rastvor 40-6 (7 g, 7,5 mmol) i piridina (1,4 g, 17 mmol) u DCM-u (35 ml) dodat je DAST (5,6 g, 35 mmol) na -78°C. Smeša je mešana na -78°C tokom 3 h. Reakcija je ugašena zas. vod. NaHCO3i zatim ekstrahovana pomoću EA. Kombinovani organski sloj je osušen iznad anhidrovanog, i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA= 10/1) radi dobijanja čistog 40-7 (3,1 g, 18%) kao bele čvrste supstance.
[0306] Jedinjenje 40-7 (4,1 g, 5,7 mmol) u zas. NH3/MeOH (100 ml) mešano je na RT tokom 16 h, i koncentrovano pod niskim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u anhidrovanom DCM-u (300 ml) i tretiran sa AgNO3(27,0 g, 160 mmol), kolidinom (22 ml) i MMTrCl (23,0 g, 75,9 mmol) u malim porcijama u atmosferi N2. Smeša je mešana na RT tokom 16 h. Smeša je filtrirana i filtrat je ispran zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA = 10/1) radi dobijanja čistog intermedijera. Intermedijer je rastvoren u rastvoru TBAF/THF (1N, 20 ml). Smeša je mešana na RT tokom 2 h i zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM/MeOH = 50/1) radi dobijanja čistog 40-8 (3,0 g, 86%) kao bele čvrste supstance.
[0307] U rastvor 40-8 (3,0 g, 4,9 mmol) u THF-u (50 ml) dodat je imidazol (840 mg, 12 mmol), PPh3(3,2 g, 12 mmol) i I2(2,4 g, 9,2 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 16 h. Reakcija je prekinuta pomoću zas. vod. Na2S2O3i zatim ekstrahovana pomoću EA. Kombinovani organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA= 2/1) radi dobijanja sirovog 40-9 (4,2 g, >100%, sadrži TPPO) kao bele čvrste supstance.
[0308] U rastvor sirovog 40-9 u anhidrovanom THF-u (30 ml) dodat je DBU (2,7 g, 18 mmol) i zagrevan na 80°C. Smeša je mešana tokom 1 h i proverena putem LCMS. Smeša je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i filtriran, i filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA= 2/1) radi dobijanja 40-10 (2,0 g, 69%) kao bele čvrste supstance.
[0309] U ledeno ohlađeni rastvor 40-10 (2,0 g, 3,38 mmol) u anhidrovanom MeCN (15 ml) dodat je NIS (777 mg, 3,5 mmol) i NEt3•3HF (536 g, 3,3 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 16 h i proverena pomoću LCMS. Nakon završetka, smeša je ugašena pomoću zas. Na2SO3i zas. rastvora NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (PE/EA = 10/1 do 3/1) radi dobijanja 40-11 (2,1 g, 84.0%) kao bele čvrste supstance.
[0310] U rastvor sirovog 40-11 (2,1 g, 2,85 mmol) u anhidrovanom DCM-u (100 ml) dodat je DMAP (490 mg, 4 mmol) i BzCl (580 mg, 4 mmol) na 0°C. Smeša je mešana preko noći i proverena pomoću LCMS. Reakcija je isprana zas. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (PE/EA = 8/1 do 3/1) radi dobijanja 40-12 (2,0 g, 83,4%) kao bele čvrste supstance.
24
[0311] U rastvor 40-12 (2,0 g, 2,4 mmol) u anhidrovanom DMF-u (60 ml) dodat je NaOBz (3,3 g, 23,0 mmol) i 15-kruna-5 (5,11 g, 23 mmol). Smeša je mešana na 110°C tokom 36 h. Reakcija je prekinuta vodom i smeša je ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE/EA= 5/1 do 3/1) radi dobijanja 40-13 (830 mg, 42,0%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 836,11 [M+H]<+>.
[0312] Rastvor 40-13 (831mg, 1,0 mmol) u anhidrovanom n-butilaminu (4 ml) mešan je na RT tokom 3 h u atmosferi N2. Reakcija je praćena pomoću TLC. Rastvarač je uparen pod vakuumom, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 0% do 10%) radi dobijanja sirovog proizvoda koji je ponovo prečišćen koristeći kolonu silika gela radi dobijanja 40-14 kao svetloružičaste čvrste supstance (563 mg).
[0313] U rastvor 40-14 (560 mg, 0,89 mmol) u anhidrovanom piridinu (5 ml) dodat je imidazol (78,6 mg, 1,16 mmol) i TBSCl (202 mg, 1,34 mmol) na 0 do 5°C. Smeša je mešana na RT tokom 15 h. Reakcija je prekinuta dodatkom apsolutnog EtOH (0,3 ml). Rastvor je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom, i 3 puta uparen zajedno sa toluenom. Ostatak je rastvoren u EA (150 ml) i ispran vodom, zas. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (0-20% EA u heksanu) radi dobijanja 40-15 (303 mg) kao bele čvrste supstance.
[0314] U rastvor 40-15 (303 mg, 0,41 mmol), AgNO3(208 mg, 1,23 mmol) i kolidina (0,55 ml, 4,51 mmol) u anhidrovanom DCM-u (4 ml) dodat je MMTrCl (378 mg, 1,3 mmol) u atmosferi N2. Smeša je mešana na RT preko noći u atmosferi N2i praćena pomoću TLC. Smeša je filtrirana kroz prethodno upakovani filter od celita, i filtrat je ispran vodom i 50% vodenim rastvorom limunske kiseline, i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (EA u heksanu od 0% do 30%) radi dobijanja 40-16 (374 mg, 90%).
[0315] U rastvor 40-16 (374 mg, 0,37 mmol) u anhidrovanom THF-u (4 ml) dodat je 1,0 M rastvor TBAF (0,74 ml, 0,74 mmol) na 0 do 5°C. Smeša je mešana na RT tokom 1 h. Smeša je ugašena silika gelom i filtrirana. Rastvarači su upareni radi dobijanja sirovog proizvoda koji je prečišćen na koloni silika gela (EA u heksanu od 0% do 50%) radi dobijanja 40-17 (265 mg).
[0316] U rastvor 40-17 (187,5 mg, 0,16 mmol) u anhidrovanom CH3CN (2,5 ml) uz mešanje je dodat N-metilimidazol (136 µl, 1,66 mmol) na 0-5°C (ledeno/vodeno kupatilo), a zatim fenil (cikloheksan oksi-L-alaninil) fosforohloridat (214 mg, 0,62 mmol, rastvoren u 0,5 ml CH3CN). Rastvor je mešan na RT tokom 3 h, a zatim razblažen dodatkom EA, nakon čega je dodata voda (15 ml). Rastvor je ispran pomoću H2O, 50% vodenog rastvora limunske kiseline i zasićenog vodenog rastvora soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog MgSO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom dajući ostatak, koji je prečišćen na silika gelu sa 0 do 40% EA/heksan radi dobijanja (pojedinačnih izomera) 40-18 (108 mg). Elucija druge frakcije dala je (pojedinačne izomere) 40-19 (120 mg) kao staklastu čvrstu supstancu.
[0317] Jedinjenje 40-18 (108 mg, 0,089 mmol) rastvoreno je u anhidrovanomCH3CN (0,5 ml), i 4N HCl u dioksanu (67 µl) dodata je na 0 do 5°C (ledeno/vodeno kupatilo). Smeša je mešana na RT tokom 40 minuta i dodat je anhidrovani EtOH (200 µl). Rastvarači su upareni na RT, i upareni zajedno sa toluenom 3 puta. Ostatak je rastvoren u 50% CH3CN/H2O i prečišćen reversno faznom HPLC (C18) koristeći acetonitril i vodu, a zatim liofilizovan radi dobijanja jedinjenja 40 (26,6 mg) kao bele pene.<1>H NMR (CD3ODd4, 400 MHz) δ 7.89 (s, 1H), 7.33-7.29 (m, 2H), 7.20-7.13 (m, 3H), 7.17 (m, 1H), 6.62 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.39 (t, J= 25.2 Hz, 1H), 4.75-4.42 (m, 6H), 3.92 (t, J= 8.8 Hz, 1H), 3.24 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 1.76-1.51 (m, 5H), 1.45-1.25 (m, 12H);<31>P NMR (CD3OD-d4) δ 4.04 (s); ESI-LCMS: m/z = 665.2 [M+H]<+>.
[0318] Jedinjenje 41 (44,4 mg, jedan izomer) dobijeno je prema proceduri opisanoj za jedinjenje 40 koristeći 40-19.<1>H NMR (CD3OD-d4, 400 MHz) δ 7.93 (s, 1H), ), 7.32 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.16 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.68-4.60 (m, 2H), 4.54-4.39 (m, 3H), 3.93-3.89 (m, 1H), 3.24 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 1.75-1.5 (m, 5H), 1.48-1.23 (m, 12H);<19>F NMR (CD3OD-d4) δ -122.95 (s), -155.84-155.99 (m);<31>P NMR (CD3OD-d4) δ 3.94 (s); ESI-LCMS: m/z = 665.15 [M+H]<+>.
PRIMER 20
JEDINJENJE 49
[0319]
24
[0320] U rastvor trietil amonijum bis(izopropil oksikarbonil oksimetil)fosfata (0,33 mmol, pripremljen od 110 mg bis(POC)fosfata i 46 µl Et3N) u THF-u dodat je 49-1 (91 mg, 0,11 mmol). Smeša je uparena i dehidrirana uparavanjem sa piridinom pa sa toluenom. Ostatak je rastvoren u anhidrovanom THF-u (1,5 ml) i ohlađen u ledenom kupatilu. Dodat je diizopropil etil amin (0,19 ml, 10 ekv.), a zatim BOP-Cl (0,14 g, 5 ekv.) i 3-nitro-1,2,4-triazol (63 mg, 5 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 90 minuta, razblažena dodatkom EtOAc (30 ml), isprana pomoću zas. vod. NaHCO3, zasićenog vodenog rastvora soli, i osušena (Na2SO4). Ostatak je prečišćen na silika gelu (kolona 10 g) sa sistemom rastvarača CH2Cl2/i-PrOH (gradijent 2-10%) radi dobijanja 49-2 (13 mg, 10%) i 49-3 (95 mg, 58%).
[0321] Rastvor 49-2 i 49-3 (13 mg, odnosno 95 mg) u 80% vod. HCOOH (3 ml) mešan je na RT tokom 3 h, i zatim uparen, i uparen sa toluenom. Ostatak je prečišćen na silika gelu (kolona 10 g) sa CH2Cl2/MeOH (gradijent 4-10%) radi dobijanja 49 sa prinosom (42 mg, 94%). MS: m/z=628 [M+1)<+>.
PRIMER 21
JEDINJENJE 52
24
[0323] Jedinjenje 52-2 (158 mg, 50%) pripremljeno je od 52-1 (0,21 g; 0,35 mmol) i trietilamonijum bis(izopropil oksikarbonil oksimetil)fosfata (0,54 mmol) sa DIPEA (0,18 ml), BopCl (178 mg) i 3-nitro-1,2,4-triazola (80 mg) u THF-u (4 ml).
[0324] Rastvor 52-2 (158 mg) u acetonitrilu (1 ml) i HCl (4 N/dioksan; 85 µl) mešan je na RT tokom 30 minuta. Reakcija je prekinuta pomoću MeOH i koncentrovana. Ostatak je prečišćen na silika gelu (kolona 10 g) sa CH2Cl2/i-PrOH (gradijent 3-10%) radi dobijanja jedinjenja 52 (85 mg, 76%). MS: m/z = 656 [M+1)<+>.
PRIMER 22
JEDINJENJE 11
[0325]
24
[0326] Smeša 11-1 (170 mg, 0,19 mmol) i metanolnog amonijaka (7 N; 3 ml) mešana je na RT tokom 8 h, koncentrovana i prečišćena na silika gelu (kolona 10 g) sa CH2Cl2/MeOH (gradijent 4-11%) radi dobijanja 11-2 (100 mg, 90%).
[0327] Jedinjenje 11-2 je dehidrirano uparavanjem sa piridinom, pa sa toluenom. U rastvor 11-2 (24 mg, 0,04 mmol) i N-metilimidazola (17 µl, 5 ekv.) u acetonitrilu (1 ml) dodat je fosforohloridat (50 mg, 3,5 ekv.) u 2 porcije u intervalima od 6 h. Smeša je mešana na RT tokom 1 dana i uparena. Prečišćavanje na silika gelu (kolona 10 g) sa CH2Cl2/MeOH (gradijent 4-12%) dalo je 11-3 (10 mg, 28%).
[0328] Rastvor 11-3 (9 mg, 0,01 mmol) u 80% mravljoj kiselini mešan je 3 h na RT. Smeša je uparena i prečišćena na silika gelu (kolona 10 g) sa CH2Cl2/MeOH (gradijent 5-15%) radi dobijanja jedinjenja 11 (3 mg, 50%). MS: m/z = 624 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 23
JEDINJENJE 14
[0329]
[0330] Smeša 14-1 (1,2 g, 4,3 mmol), PTSA monohidrata (0,82 g, 1 ekv.) i trimetil ortoformata (14 ml, 30 ekv.) u dioksanu (30 ml) mešana je preko noći na RT. Reakcija je neutralisana pomoću 7 N NH3/MeOH i bela čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom. Ostatak je rastvoren u THF-u (10 ml) i tretiran 80% vod. AcOH (5 ml). Smeša je držana na RT tokom 45 minuta i
24
zatim uparena. Ostatak je prečišćen na silika gelu (kolona 25 g) pomoću CH2Cl2/MeOH (gradijent 4-10%) radi dobijanja 14-2 (1,18 g, 87%).
[0331] Jedinjenje 14-3 (137 mg, 75%) pripremljeno je od 14-2 (93 mg, 0,29 mmol) i trietilamonijum bis(izopropil oksikarbonil oksimetil)fosfata (0,44 mmol) sa DIPEA (0,2 ml), BopCl (147 mg) i 3-nitro-1,2,4-triazolom (66 mg) u THF-u (3 ml). Prečišćavanje je obavljeno sa sistemom rastvarača CH2Cl2/i-PrOH (gradijent 3-10%).
[0332] Rastvor 14-3 (137 mg) u 80% vod. HCOOH mešan je na RT tokom 2 h i zatim koncentrovan. Ostatak je uparen sa toluenom, a zatim sa MeOH koji sadrži malu količinu Et3N (2 kapi). Prečišćavanje na silika gelu (kolona 25 g) sa CH2Cl2/MeOH (gradijent 4-10%) dalo je jedinjenje 14 (100 mg, 77%). MS: m/z = 1175 [2M-1]-.
PRIMER 24
JEDINJENJE 16
[0333]
24
[0334] Jedinjenje 16-1 (50 g, 86,0 mmol) i 6-Cl-guanin (16,1 g, 98,2 mmol) upareni su sa anhidrovanim toluenom 3 puta. U rastvor 10-1 u MeCN (200 ml) dodat je DBU (39,5 g, 258,0 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta, a zatim je u kapima dodat TMSOTf (95,5 g, 430,0 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta. Smeša je zagrevana na 70°C i mešana preko noći. Rastvor je ohlađen na RT i razblažen pomoću EA (100 ml). Rastvor je ispran zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (EA u PE od 10% do 40%) radi dobijanja 16-2 (48,0 g, prinos: 88,7%) kao žute pene. ESI-MS: m/z 628 [M+H]<+>.
[0335] U rastvor 16-2 (48,0 g, 76,4 mol), AgNO3(50,0 g, 294,1 mmol) i kolidina (40 ml) u anhidrovanom DCM-u (200 ml) dodat je MMTrCl (46,0 g, 149,2 mmol) u malim porcijama u atmosferi N2. Smeša je mešana na RT tokom 3 h u atmosferi N2. Reakcija je praćena pomoću TLC. Smeša je filtrirana i filtrat je ispran zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (EA u PE od 5% do 50%) radi dobijanja sirovog 16-3 (68 g, 98%). ESI-MS: m/z 900.1 [M+H]<+>.
[0336] Natrijum (8,7 g, 378,0 mmol) je rastvoren u suvom EtOH (100 ml) na 0°C i polako zagrevan na RT. Jedinjenje 16-3 (68,0 g, 75,6 mmol) tretirano je sveže pripremljenim rastvorom NaOEt i mešano preko noći na RT. Reakcija je praćena pomoću TLC, a smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Smeša je razblažena pomoću H2O (100 ml) i ekstrahovana pomoću EA (3 x 100 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 5%) radi dobijanja 16-4 (34,0 g, 75,2%) kao žute čvrste supstance. ESI-MS: m/z 598 [M+H]<+>.
[0337] Jedinjenje 16-4 (32,0 g, 53,5 mmol) upareno je sa anhidrovanim piridinom 3 puta. U ledeno hladni rastvor 16-4 u anhidrovanom piridinu (100 ml) u kapima je dodat TsCl (11,2 g, 58,9 mmol) u piridinu (50 ml) na 0°C. Smeša je mešana tokom 18 h na 0°C. Reakcija je proverena pomoću LCMS (oko 70% je bio željeni proizvod). Reakcija je prekinuta pomoću H2O, i rastvor je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (100 ml) i ispran zas. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen
2
pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 5%) radi dobijanja sirovog 16-5 (25,0 g, 62,2%) kao žute čvrste supstance. ESI-MS: m/z 752 [M+H]<+>.
[0338] U rastvor 16-5 (23,0 g, 30,6 mmol) u acetonu (150 ml) dodat je NaI (45,9 g, 306,0 mmol) i TBAI (2,0 g) i refluktovan preko noći. Reakcija je praćena putem LCMS. Nakon završetka reakcije, smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (100 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli i osušen iznad anhidrovanog Na2SO4. Organski rastvor je uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (DCM: MeOH=100:1 do 20:1) radi dobijanja sirovog proizvoda. U rastvor sirovog proizvoda u suvom THF-u (200 ml) dodat je DBU (14,0 g, 91,8 mmol) i zagrevan na 60°C. Smeša je mešana preko noći i proverena putem LCMS. Reakcija je prekinuta zas. NaHCO3i rastvor je ekstrahovan pomoću EA (100 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 5%) radi dobijanja 16-6 (12,0 g, 67,4%) kao žute čvrste supstance. ESI-MS: m/z 580 [M+H]<+>.
[0339] U ledeno hladni rastvor 16-6 (8,0 g, 13,8 mmol) u suvom MeCN (100 ml) dodat je NIS (3,9 g, 17,2 mmol) i TEA•3HF (3,3 g, 20,7 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 18 h i proverena putem LCMS. Nakon završetka reakcije, reakcija je prekinuta zas. Na2SO3i zas. rastvorom NaHCO3. Rastvor je ekstrahovan pomoću EA. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 10% do 50%) radi dobijanja 16-7(7,2 g, 72,0%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 726 [M+H]<+>.
[0340] U rastvor sirovog 16-7 (7,2 g, 9,9 mmol) u suvom DCM-u (100 ml) dodat je DMAP (3,6 g, 29,8 mmol) i BzCl (2,8 g, 19,8 mmol) na 0°C. Smeša je mešana preko noći i proverena pomoću LCMS. Smeša je isprana zas. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 10% do 30%) radi dobijanja 16-8 (8,0 g, 86,4%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 934 [M+H]<+>.
[0341] U rastvor 16-8 (7,5 g, 8,0 mmol) u suvom DMF-u (100 ml) dodat je NaOBz (11,5 g, 80,0 mmol) i 15-kruna-5 (15,6 ml). Smeša je mešana tokom 36 h na 90°C. Smeša je razblažena
2 1
pomoću H2O (100 ml) i ekstrahovana pomoću EA (3x150 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 10% do 30%) radi dobijanja sirovog 16-9 (6,0 g, 80,0%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 928 [M+H]<+>.
[0342] Jedinjenje 16-9 (4,0 g, 4,3 mmol) upareno je sa anhidrovanim toluenom 3 puta, i tretirano sa NH3/MeOH (50 ml, 4N) na RT. Smeša je mešana tokom 18 h na RT. Reakcija je praćena pomoću LCMS, i smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 30% do 50%) radi dobijanja 16-10 (1,9 g, 71,7%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 616 [M+H]<+>.
[0343] Jedinjenje 16-10 (300,0 mg, 0,49 mmol) upareno je sa anhidrovanim toluenom 3 puta, i rastvoreno je u MeCN (2 ml). Smeša je tretirana sa NMI (120,5 mg, 1,47 mmol) i fosforohloridatnim reagensom (338,1 mg, 0,98 mmol) u MeCN (1 ml) na 0°C. Smeša je mešana tokom 18 h na RT. Reakcija je praćena putem LCMS. Smeša je razblažena 10% rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 30% do 50%) radi dobijanja 16-11 (240 mg, 53,3%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 925 [M+H]<+>.
[0344] Jedinjenje 16-11 (240,0 mg, 0,26 mmol) tretirano je sa 80% AcOH (10 ml), i smeša je mešana tokom 18 h na RT. Reakcija je praćena putem LCMS. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 3%) radi dobijanja jedinjenja 16 (87,6 mg, 51,7%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 653 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 25
JEDINJENJE 30
[0345]
2 2
[0346] U rastvor jedinjenja 25 (60 mg, 0,22 mmol) u anhidrovanom THF-u (2,0 ml) uz mešanje je dodat N-metilimidazol (0,142 ml, 1,73 mmol) na 0°C (kupatilo suvi led/aceton) praćen rastvorom fenil (cikloheksanoksi-L-alaninil) fosforohloridata (235 mg, 0,68 mmol, rastvorenog u THF-u (2 ml). Dobijeni rastvor je mešan na 0°C tokom 1 h, i temperatura je podignuta do 10°C tokom sledećeg 1 h. Reakcija je ostavljena na 10°C tokom 3 h. Smeša je ohlađena na 0 do 5°C, razblažena pomoću EA, i dodata je voda (5 ml). Rastvor je ispran pomoću H2O i zasićenog vodenog rastvora soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom dajući ostatak, koji je rastvoren u 25% CH3CN/H2O. Jedinjenje je prečišćeno reversno faznom HPLC (C18) koristeći acetonitril i vodu, nakon čega je liofilizacijom dobijena bela pena. Proizvod je ponovo rastvoren u EtOAc, ispran 50% vodenim rastvorom limunske kiseline, osušen iznad anhidrovanog MgSO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom i liofilizovan radi dobijanja dva izomera (Rp/Sp) jedinjenja 30 (6,3 mg). MS: m/z 586.05 [M-H]-.
PRIMER 26
JEDINJENJE 17
[0347]
2
[0348] Jedinjenje 17-1 (50 g, 86,0 mmol) i 6-Cl-guanin (16,1 g, 98,2 mmol) upareni su sa anhidrovanim toluenom 3 puta. U rastvor 17-1 (50 g, 86,0 mmol) i 6-Cl-guanina (16,1 g, 98,2 mmol) u MeCN (200 ml) dodat je DBU (39,5 g, 258,0 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta, i TMSOTf (95,5 g, 430,0 mmol) je dodat u kapima na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta do uočavanja bistrog rastvora. Smeša je zagrevana na 70°C i mešana preko noći. Rastvor je ohlađen na RT i razblažen pomoću EA (100 ml). Rastvor je ispran zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (EA u PE od 10% do 40%) radi dobijanja 17-2 (48,0 g, 88,7%) kao žute pene. ESI-MS: m/z 628 [M+H]<+>.
[0349] U rastvor 17-2 (48,0 g, 76,4 mol), AgNO3(50,0 g, 294,1 mmol) i kolidina (40 ml) u anhidrovanom DCM-u (200 ml) dodat je MMTrCl (46,0 g, 149,2 mmol) u malim porcijama u atmosferi N2. Smeša je mešana na RT tokom 3 h u atmosferi N2. Završetak reakcije je utvrđen pomoću TLC. Nakon filtracije, filtrat je ispran zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (EA u PE od 5% do 50%) radi dobijanja sirovog 17-3 (68 g, 98%). ESI-MS: m/z 900.1 [M+H]<+>.
[0350] Natrijum (8,7 g, 378,0 mmol) je rastvoren u suvom EtOH (100 ml) na 0°C i polako zagrevan na RT. Jedinjenje 17-3 (68,0 g, 75,6 mmol) tretirano je sveže pripremljenim rastvorom NaOEt i mešano preko noći na RT. Završetak reakcije je utvrđen pomoću TLC i LCMS. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, razblažena pomoću H2O (100 ml) i ekstrahovana pomoću EA (3 x 100 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 5%) radi dobijanja 17-4 (34,0 g, 75,2%) kao žute čvrste supstance. ESI-MS: m/z 598 [M+H]<+>.
[0351] Jedinjenje 17-4 (32,0 g, 53,5 mmol) upareno je sa anhidrovanim piridinom 3 puta. U ledeno hladni rastvor 17-4 (32,0 g, 53,5 mmol) u anhidrovanom piridinu (100 ml) u kapima je dodat rastvor TsCl (11,2 g, 58,9 mmol) u piridinu (50 ml) na 0°C. Smeša je mešana tokom 18 h na 0°C. Reakcija je praćena putem LCMS i prekinuta pomoću H2O. Rastvor je koncentrovan pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u EA (100 ml) i ispran zas. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je
2 4
prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 5%) radi dobijanja sirovog 17-5 (25,0 g, 62,2%) kao žute čvrste supstance. ESI-MS: m/z 752 [M+H]<+>.
[0352] U rastvor 17-5 (23,0 g, 30,6 mmol) u acetonu (150 ml) dodat je NaI (45,9 g, 306,0 mmol) i TBAI (2,0 g), i smeša je refluktovana preko noći. Završetak reakcije je utvrđen pomoću LCMS. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u EA (100 ml). Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli i osušen iznad anhidrovanog Na2SO4. Organski rastvor je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (DCM: MeOH=100:1 do 20:1) radi dobijanja sirovog proizvoda. U rastvor sirovog proizvoda u suvom THF-u (200 ml) dodat je DBU (14,0 g, 91,8 mmol), i smeša je zagrevana na 60°C i mešana preko noći. Reakcija je praćena putem LCMS. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NaHCO3i rastvor je ekstrahovan pomoću EA (100 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 5%) radi dobijanja 17-6 (12,0 g, 67,4%) kao žute čvrste supstance. ESI-MS: m/z 580 [M+H]<+>.
[0353] U ledeno hladni rastvor 17-6 (8,0 g, 13,8 mmol) u anhidrovanom MeCN (100 ml) dodat je NIS (3,9 g, 17,2 mmol) i TEA•3HF (3,3 g, 20,7 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 18 h, i reakcija je proverena putem LCMS. Nakon završetka reakcije, reakcija je prekinuta zas. rastvorom Na2SO3i zas. rastvorom NaHCO3. Rastvor je ekstrahovan pomoću EA (3 x 100 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 10% do 50%) radi dobijanja 17-7 (7,2 g, 72,0%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 726 [M+H]<+>.
[0354] U rastvor 17-7 (7,2 g, 9,9 mmol) u suvom DCM-u (100 ml) dodat je DMAP (3,6 g, 29,8 mmol) i BzCl (2,8 g, 19,8 mmol) na 0°C. Smeša je mešana preko noći i proverena pomoću LCMS. Smeša je isprana zas. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 10% do 30%) radi dobijanja 17-8 (8,0 g, 86,4%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 934 [M+H]<+>.
[0355] U rastvor 17-8 (7,5 g, 8,0 mmol) u suvom DMF-u (100 ml) dodat je NaOBz (11,5 g, 80,0 mmol) i 15-kruna-5 (15,6 ml). Smeša je mešana tokom 36 h na 90°C. Smeša je razblažena pomoću H2O (100 ml) i ekstrahovana pomoću EA (3 x 150 ml). Organski sloj je osušen iznad
2
anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 10% do 30%) radi dobijanja sirovog 17-9 (6,0 g, 80,0%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 928 [M+H]<+>.
[0356] Jedinjenje 17-9 (4,0 g, 4,3 mmol) upareno je sa anhidrovanim toluenom 3 puta, i tretirano sa NH3/MeOH (50 ml, 4N) na RT. Smeša je mešana tokom 18 h na RT. Završetak reakcije je utvrđen pomoću LCMS. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 30% do 50%) radi dobijanja proizvoda 17-10 (1,9 g, 71,7%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 616 [M+H]<+>.
[0357] Jedinjenje 17-10 (300,0 mg, 0,49 mmol) je upareno sa anhidrovanim toluenom 3 puta, i rastvoreno je u MeCN (2 ml). Smeša je tretirana sa NMI (120,5 mg, 1,47 mmol) i fosforohloridatnim reagensom (326,3 mg, 0,98 mmol) u MeCN (1 ml) na 0°C. Smeša je mešana tokom 18 h na RT i praćena putem LCMS. Smeša je razblažena 10% rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 30 ml). Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EA u PE od 30% do 50%) radi dobijanja 17-11 (210 mg, 47,5%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 913.0 [M+H]<+>.
[0358] Jedinjenje 17-11 (210 mg, 0,26 mmol) tretirano je sa 80% AcOH (15 ml), i smeša je mešana tokom 18 h na RT. Završetak reakcije je utvrđen pomoću LCMS. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 3%) radi dobijanja jedinjenja 17 (71,8 mg, 48,7%) kao čvrste supstance. ESI-MS: m/z 641.3 [M+H]<+>.
PRIMER 27
JEDINJENJA 9, 12, 15, 26, 28, 38, 44, 46, 50, 63, 64, 69 i 76
[0359] Jedinjenja 9, 12, 15, 26, 28, 38, 44, 46, 50, 63, 64, 69 i 76 su pripremljena na način sličan postupku za pripremu jedinjenja 6. Nakon dodavanja POCl3, smeša je držana na RT tokom 20-40 minuta. Reakcija je kontrolisana pomoću LCMS i praćena putem pojave odgovarajućeg nukleozida 5'-monofosfata. Nakon završetka reakcije, dodata je tetrabutilamonijumova so pirofosfata (150 mg), pa DMF (0,5 ml) radi dobijanja homogenog rastvora. Nakon 1,5 h na temperaturi okoline, reakcija je razblažena vodom (10 ml). Trifosfat (eluiran na 75-80% B) je dobijen kako je opisano za jedinjenje 6.
2
<31>P NMR
2
[0360] Sledeća referentna jedinjenja takođe mogu da se pripreme koristeći postupak sličan postupku opisanom u primeru 27:
2
PRIMER 28
JEDINJENJE 10
[0361]
[0362] Jedinjenje 10-1 (5 g, 8,79 mmol) upareno je sa anhidrovanim piridinom. U ledeno hladni rastvor 10-1 u anhidrovanom piridinu (15 ml) dodat je TsCl (3,43 g, 17,58 mmol) i mešan tokom 1 h na 0°C. Reakcija je proverena putem LCMS i TLC. Reakcija je ugašena pomoću H2O i ekstrahovana pomoću EA. Organska faza je osušena iznad Na2SO4i uparena pod niskim pritiskom. Jedinjenje 10-2 (6,35 g, 100%) neposredno je korišćeno u sledećem koraku.
[0363] U rastvor 10-2 (31,77 g, 43,94 mmol) u acetonu (300 ml) dodat je NaI (65,86 g, 439,4 mmol) i zagrevan do refluksa preko noći. Reakcija je proverena pomoću LCMS. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom Na2S2O3i ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na
2
koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 6%) radi dobijanja 10-3 (11,5 g, 38%) kao bele čvrste supstance.
[0364] U rastvor 10-3 (11,5 g, 16,94 mmol) u suvom THF-u (120 ml) dodat je DBU (12,87 g, 84,68 mmol) i zagrevan na 60°C. Reakcija je mešana preko noći i proverena pomoću LCMS. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA. Organska faza je osušena iznad Na2SO4i uparena pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (MeOH u DCM-u od 1% do 5%) radi dobijanja 10-4 (5,5 g, 54%) kao bele čvrste supstance.
[0365] U ledeno hladni rastvor 10-4 (500 mg, 0,90 mmol) u suvom DCM-u (20 ml) dodat je AgF (618 mg, 4,9 mmol) i rastvor I2(500 mg, 1,97 mmol) u suvom DCM-u (20 ml). Reakcija je mešana tokom 3 h i proverena putem LCMS. Reakcija je ugašena zas. rastvorom Na2S2O3i zas. rastvorom NaHCO3i smeša je ekstrahovana pomoću DCM-a. Organski sloj je osušen pomoću anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom radi dobijanja sirovog 10-5 (420 mg, 66%).
[0366] U rastvor sirovog 10-5 (250 mg, 0,36 mmol) u suvom DCM-u (8 ml) dodat je DMAP (0,28 g, 2,33 mmol), TEA (145 mg, 1,44 mmol) i BzCl (230 mg, 1,62 mmol) u rastvoru DCM-a (2 ml). Reakcija je mešana preko noći i proverena putem LCMS. Smeša je isprana zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem prep-TLC radi dobijanja sirovog 10-6 (150 mg, 46%).
[0367] U rastvor sirovog 10-6 (650 mg, 0,72 mmol) u suvom HMPA (20 ml) dodat je NaOBz (1,03 g, 7,2 mmol) i 15-kruna-5 (1,59 g, 7,2 mmol). Reakcija je mešana 2 dana na 60°C. Smeša je razblažena pomoću H2O i ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem prep-TLC radi dobijanja 10-7 (210 mg, 32,4%). ESI-MS: m/z: 900,4 [M+H]<+>.
[0368] Smeša 10-7 (25 mg) i BuNH2(0,8 ml) mešana je preko noći na RT. Smeša je uparena i prečišćena na silika gelu (kolona 10 g) sa CH2Cl2/MeOH (gradijent 4-15%) radi dobijanja 10-8 (15 mg, 91%).
2
[0369] Smeša 10-8 (15 mg, 0,02 mmol) u ACN-u (0,25 ml) i 4 N HCL/dioksanu (19 ul) mešana je na RT tokom 45 minuta. Smeša je razblažena dodatkom MeOH i uparena. Sirovi ostatak je tretiran sa MeCN, i čvrsta supstanca je filtrirana dajući jedinjenje 10 (7 mg). MS: m/z = 314 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 29
JEDINJENJA 36 I 37
[0370]
[0371] U rastvor 36-1 (150 mg, 0,24 mmol) u DCM-u (2,0 ml) dodat je trietilamin (141 µl, 2,0 mmol) na RT. Smeša je ohlađena na 0 do 5°C (ledeno/vodeno kupatilo), i dodat je sveže pripremljeni i destilovani izopropil fosforodihloridat (45 µl, 0,26 mmol, pripremljen u skladu sa procedurom Reddy i sar. J. Org. Chem. 2011, 76 (10), 3782-3790). Smeša je mešana na 0 do 5°C (ledeno/vodeno kupatilo) tokom 15 minuta, i dodat je N-metilimidazol (40 µl, 0,49 mmol). Smeša je mešana tokom 1 h na 0 do 5°C. TLC je pokazao odsustvo polazne supstance 36-1. Dodat je EA (100 ml), pa voda. Organski sloj je ispran pomoću H2O, zas. vod. rastvora NH4Cl i zasićenog vodenog rastvora soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog MgSO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom dajući ostatak koji je prečišćen na silika gelu sa 0 do 10% iPrOH/DCM radi dobijanja 36-2a (16,9 mg, izomer sa bržom elucijom) i 36-2b (72,7 mg, izomer sa sporijom elucijom).
[0372] Jedinjenja 36-2a i 36-2b su deprotektovana koristeći ovde opisanu proceduru. Dobijeno je jedinjenje 36 (7,3 mg, pojedinačni izomeri 36-2a (16,5 mg, 0,0235 mmol)) i jedinjenje 37 (29,0 mg pojedinačni izomeri 36-2b (72,7 mg, 0,1 mmol)).
2 1
[0373] Jedinjenje 36:<1>H NMR (CD3OD-d4, 400 MHz) δ 7.94 (s, 1H), 6.32 (s, 1H), 6.00-5.9 (br s, 1H), 4.9-4.487 (m, 1H), 4.83-4.77 (m, 1H), 4.65-4.50 (m, 3H), 1.45-1.39 (s, 9H), 1.2 (s, 3H),;<19>F NMR (CD3OD-d4) δ -120.3 (s);<31>P NMR (CD3OD-d4) δ -5.19 (s); ESI-LCMS: m/z = 448.05 [M+H]<+>. Jedinjenje 37:<1>H NMR (CD3OD-d4, 400 MHz) δ 7.98 (s, 1H), 6.34 (s, 1H), 5.78-5.64 (br s, 1H), 4.95-4.48 (m, 2H), 4.62-4.52 (m, 3H), 1.48-1.42 (s, 9H), 1.1 (s, 3H),;<19>F NMR (CD3OD-d4) δ-121.3 (s);<31>P NMR (CD3OD-d4) δ-7.38 (s); ESI-LCMS: m/z = 448.05 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 30
JEDINJENJE 48
[0374]
[0375] U rastvor 48-1 (600 mg, 1,29 mmol) u anhidrovanom CH3CN (4 ml) dodat je DMAP (315 mg, 2,59 mmol), TEA (391 mg, 3,87 mmol) i TPSCl (782 mg, 2,58 mmol). Smeša je mešana tokom 3 h u atmosferi N2. Dodat je rastvor NH3u THF-u (2 ml) i mešan tokom 1 h. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NH4Cl i ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni radi dobijanja 48-2 (370 mg, 62%) kao bele penaste čvrste supstance.
[0376] Jedinjenje 48-2 (370 mg, 1,48 mmol) u metanolnom amonijaku je mešano na RT tokom 4 h. Rastvor je koncentrovan do suva radi dobijanja jedinjenja 48 (200 mg, 91%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 275.9 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 31
JEDINJENJA 18 I 19
[0377]
2 2
[0378] Dijastereomeri jedinjenja 2 su odvojeni pomoću RP-HPLC. Gradijent 10-43%ACN u H2O tokom 26 minuta na koloni Synergi Hydro RP 30 x 250 m čestice 4u (Phenomenex PN 00G-4375-U0-AX) eluirao je jedinjenje 19 (29,5 minuta) i jedinjenje 18 (30,1 minuta). Čiste frakcije su liofilizovane, dajući beli prah. Jedinjenje 19:<31>P-NMR (DMSO-d6) 3.448 ppm; MS: m/z: 544 [M-1]-; Jedinjenje 18:<31>P-NMR (DMSO-d6) 3.538 ppm; MS: m/z: 544 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 32
JEDINJENJA 20 I 21
[0379]
[0380] Dijastereomeri jedinjenja 3 su odvojeni pomoću RP-HPLC. Gradijent 25-52% ACN u H2O tokom 26 minuta na koloni Synergi Hydro RP 30x250 m čestice 4u (Phenomenex PN 00G-4375-U0-AX) eluirao je jedinjenje 21 (24,8 minuta) i jedinjenje 20 (25,3 minuta). Čiste frakcije su liofilizovane, dajući beli prah. Jedinjenje 21:<31>P-NMR (DMSO-d6) 3.492 ppm; MS: m/z: 584 [M-1]-. Jedinjenje 20:<31>P-NMR (DMSO-d6) 3.528 ppm; MS: m/z: 584 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 33
JEDINJENJE 13
[0381]
2
[0382] Jedinjenje 2-1 (32 mg, 0,1 mmol) rastvoreno je u suvom THF-u (3 ml) i dodat je 2 M rastvor izopropil magnezijum bromida u THF-u (0,1 ml) na 0°C. Reakcija je ostavljena tokom 1 h na RT i dodat je fenil(izopropil-L-alaninil) tiofosforohloridat (0,3 mmol). Smeša je ostavljena preko noći na RT. LSMS analiza je pokazala oko 20% neizreagovale polazne supstance. Dodata je ista količina Grinjarovog reagensa i tiofosforohloridata, i smeša je zagrevana na 37°C tokom 4 h. Reakcija je prekinuta pomoću NH4Cl. Proizvod je ekstrahovan pomoću EA, ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad Na2SO4i uparen. Dobijeno ulje je rastvoreno u 80% mravljoj kiselini (4 ml) i upareno za 1 h. Jedinjenje 13 je prečišćeno pomoću RP HPLC u gradijentu metanola u vodi od 30% do 95% na koloni Synergy 4u Hydro-RP (Phenominex), dajući bezbojnu čvrstu supstancu. Jedinjenje 13 (7 mg, prinos 12,5%). MS: m/z: 560.0 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 34
JEDINJENJE 39, bis-litijumova so
[0384] Jedinjenje 39-1 je sintetisano koristeći proceduru sličnu pripremi jedinjenja 2 koristeći alanin benzil estar hidrohlorid. LCMS: m/z 592 [M-1]-.
2 4
[0385] U rastvor 39-1 (1,1 g, 1,85 mmol) u dioksanu (15 ml) i vodi (3 ml) dodat je vodeni rastvor trietilamonijum acetata (2 M, 2 ml, 4 mmol), pa Pd-C (10%, 100 mg). Smeša je hidrogenovana (balon) tokom 2 h, i praćena pomoću HPLC. Katalizator je uklonjen filtracijom, i filtrat je koncentrovan do suva. Ostatak je suspendovan u 3% rastvoru litijum perhlorata u acetonu (25 ml). Čvrsta supstanca je izolovana filtracijom, isprana acetonom i osušena pod vakuumom dajući jedinjenje 39 (bis-litijumova so) (731 mg, 90%). LCMS: m/z 426 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 35
JEDINJENJE 55
[0386]
[0387] Jedinjenje 1 (40 mg, 0,14 mmol) i trietilamonijum bis(pivaloil oksimetil)fosfat (0,21 mmol, pripremljen od 80 mg bis(pivaloil oksimetil)fosfata i 30 µl Et3N) dehidrirani su uparavanjem sa piridinom, pa sa toluenom. Upareni ostatak je rastvoren u anhidrovanom THF-u (2 ml) i ohlađen u ledenom kupatilu. Dodati su diizopropiletil amin (73 µl, 3 ekv.), BopCl (71 mg, 2 ekv.) i 3-nitro-1,2,4-triazol (32 mg, 2 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 90 minuta. Smeša je zatim razblažena pomoću EtOAc, isprana zas. vod. NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli, i osušena (Na2SO4). Prečišćavanje na koloni silika gela sa sistemom rastvarača CH2Cl2/i-PrOH (gradijent 4-10%), pa RP-HPLC prečišćavanje (A: voda, B: MeCN) dalo je jedinjenje 55 (13 mg, 16%). MS: m/z = 1167 [2M-1].
REFERENTNI PRIMER 36
JEDINJENJE 45
[0388]
2
[0389] Jedinjenje 45-1 (15,0 g, 25,55 mmol) tretirano je sa 90% HOAc (150 ml) na RT. Smeša je mešana na 110°C tokom 12 h, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u DCM-u, i rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 45-2 (11,0 g, 88,9%) kao bele čvrste supstance.
[0390] Jedinjenje 45-2 (12,0 g, 24,79 mmol) tretirano je sa NH3u MeOH (200 ml, 7 M) na RT. Rastvor je mešan na RT tokom 12 h i zatim koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 45-3 (6,5 g, 95,0%) kao bele čvrste supstance.
[0391] U suspenziju 45-3 (4,3 g, 15,58 mmol), PPh3(8,16 g, 31,15 mmol), imidazola (2,11 g, 31,15 mmol) i piridina (15 ml) u anhidrovanom THF-u (45 ml) uz mešanje je ukapan rastvor I2(7,91 g, 31,15 mmol) u THF-u (100 ml) na 0°C. Smeša je polako zagrevana na RT i mešana preko noći. Smeša je ugašena pomoću MeOH (100 ml). Rastvarač je uklonjen pod niskim pritiskom, i ostatak je ponovo rastvoren u smeši EA i THF (0,2 l, 10:1). Organska faza je isprana zas. vod. rastvorom Na2S2O3(2x). Vodena faza je ekstrahovana smešom EA i THF (0,2 l, 10:1, 2x). Koncentrovana organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (0-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 45-4 (5,1 g, 85,0%) kao bele čvrste supstance.
[0392] Jedinjenje 45-4 (800 mg, 2,07 mmol) rastvoreno je u smeši DBU (4 ml) i THF (4 ml) na RT u atmosferi N2. Rastvor je mešan na RT tokom 1 h. Smeša je neutralisana pomoću HOAc i ekstrahovana pomoću smeše EA i THF (10:1, 40 ml). Organska faza je isprana zasićenim
2
vodenim rastvorom soli i osušena iznad anhidrovanog Na2SO4Koncentrovana organska faza je prečišćena hromatografijom na koloni (0-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 45-5 (240 mg, 44,9%) kao bele čvrste supstance.
[0393] U ledeno hladni rastvor 45-5 (1,20 g, 4,65 mmol) u anhidrovanom MeCN (12 ml) dodat je NIS (1,57 g, 6,97 mmol) i TEA•3HF (1,12 g, 6,97 mmol) u atmosferi N2. Smeša je mešana na RT tokom 5 h. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 100 ml). Organska faza je osušena iznad Na2SO4i uparena do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (0-5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 45-6 (0,91 g, 48,6%) kao bele čvrste supstance.
[0394] U rastvor 45-6 (1,2 g, 2,97 mmol) u anhidrovanom DCM-u (12 ml) na RT su uz mešanje redom dodati BzCl (0,83 g, 5,94 mmol), TEA (0,6 g, 5,94 mmol) i DMAP (0,72 g, 5,94 mmol). Smeša je mešana na RT tokom 12 h. Reakcija je prekinuta vodom i ekstrahovana pomoću EA (3 x 60 ml). Organska faza je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 45-7 (1,2 g, 66,2%) kao bele čvrste supstance.
[0395] Tetra-butil amonijum hidroksid (25,78 ml, 51,78 mmol) neutralisan je dodatkom TFA (4,3 ml) do pH=4, i rastvor je dodat u rastvor 45-7 (1,09 g, 2,14 mmol) u DCM-u (30 ml). m-CPBA (1,85 g, 10,74 mmol) dodat je u porcijama uz žustro mešanje, i smeša je mešana tokom 12 h. Smeša je razblažena pomoću EA (100 ml) i isprana zas. natrijum bikarbonatom. Organska faza je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (50% EA u PE) radi dobijanja 45-8 (350 mg, 41,1%) kao bele čvrste supstance.
[0396] Jedinjenje 45-8 (280 mg, 0,704 mmol) tretirano je pomoću NH3u MeOH (10 ml, 7 M) na RT. Smeša je mešana na RT tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja jedinjenja 45 (110 mg, 53,1%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 295.1 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 37
JEDINJENJE 54
[0397]
2
[0398] U ledeno hladni rastvor 54-1 (10 g, 42 mmol) u anhidrovanom MeCN (200 ml) dodat je TEA•3HF (10 g, 62,5 mmol) i NIS (28 g, 126 mmol). Smeša je mešana na RT tokom 1,5 h, i praćena pomoću LCMS. Nakon završetka reakcije, smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (15% MeCN u DCM) radi dobijanja 54-2 (12 g, 74%) kao žute čvrste supstance.
[0399] U rastvor 54-2 (22 g, 57 mmol) u anhidrovanom DCM-u (200 ml) dodat je DMAP (21 g, 171 mmol) i BzCl (17,6 g, 125 mol). Smeša je mešana tokom 5 h na RT i praćena pomoću LCMS. Rastvor je ispran zas. rastvorom NaHCO3, zasićenim vodenim rastvorom soli, i ekstrahovan pomoću EA. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 54-3 (30 g, 88%) kao bele pene.
[0400] U rastvor 54-3 (6,5 g, 11 mmol) u anhidrovanom DMF-u (270 ml) dodat je NaOBz (15,8 g, 110 mmol) i 15-kruna-5 (29 g, 132 mmol). Smeša je mešana na 95°C tokom 48 h. Talog je uklonjen filtracijom, i organski rastvarač je uklonjen pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (200 ml), i rastvor je ispran zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 54-4 (3 g sirovo, 46,1%) kao ulja.
2
[0401] Jedinjenje 54-4 (3 g, sirovo) tretirano je sa NH3u MeOH (120 ml, 7 M). Smeša je mešana tokom 3 h i praćena pomoću TLC. Rastvor je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (10% izopropanol u DCM-u) radi dobijanja 54-5 (1,0 g, 67%) kao bele čvrste supstance.<1>H-NMR (CD3OD, 400MHz) δ= 1.19(s, 3H), 3.76-3.82 (m, 2H), 4.02 (d, J= 19.8 Hz, 1H), 5.70 (d, J= 8.07 Hz, 1H), 6.27 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.07 Hz, 1H).
[0402] Jedinjenje 54-5 (100 mg, 0,36 mmol) upareno je sa toluenom 3 puta. U mešani rastvor 54-5 (100 mg, 0,36 mmol) u smeši MeCN (1,0 mL) i NMI (295 mg, 3,6 mmol) dodat je rastvor 54-C (255,6 mg, 0,72 mmol, priprema opisana u nastavku) u MeCN (0,5 m) na 0°C. Smeša je mešana na RT preko noći. Reakcija je prekinuta vodom i razblažena pomoću EA (20 ml). Organski sloj je ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4Organska faza je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% i-PrOH u DCM-u) radi dobijanja sirovog proizvoda. Proizvod je prečišćen pomoću prep-HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi dobijanja jedinjenja 54 (46,7 mg, 23,3%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 618 [M+Na]<+>.
[0403] U rastvor 54-A (2,0 g, 13,16 mmol) i naftalen-1-ola (1,89 g, 13,16 mmol) u anhidrovanom DCM-u (100 ml) uz mešanje je u kapima dodat rastvor TEA (1,33 g, 13,16 mmol) u DCM-u (20 ml) na -78°C. Nakon dodavanja, smeša je postepeno zagrevana na RT i mešana tokom 2 h. Rastvor je ohlađen na -78°C, i dodat je (S)-izopropil 2-aminopropanoat hidrohlorid (2,20 g, 13,16 mmol) u DCM-u (20 ml), pa je ukapan TEA (2,66 g, 26,29 mmol) u DCM-u (20 ml). Smeša je postepeno zagrejana na RT i mešana tokom 2 h. Organski rastvarač je uklonjen pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u metil butil etru. Talog je filtriran, i filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (anhidrovani DCM) radi dobijanja 54-C (1,0 g, 24,8%) kao bezbojnog ulja.
REFERENTNI PRIMER 38
JEDINJENJA 56 I 57
[0404]
2
[0405] U rastvor 54-5 (300 mg, 1,08 mmol) i NMI (892 mg, 10 mmol) u anhidrovanom MeCN (4 ml) u kapima je dodat rastvor 57-C (736 mg, 2,17 mmol, priprema opisana u nastavku) u anhidrovanom MeCN (1 ml) na 0°C. Smeša je mešana na RT preko noći. Reakcija je prekinuta vodom i razblažena pomoću EA (30 ml). Organski sloj je ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (iPrOH u DCM-u od 1% do 5%) radi dobijanja sirovog jedinjenja 56 (276 mg, sirovo). Sirovo jedinjenje 56 (96 mg) prečišćeno je pomoću prep-HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi dobijanja čistog jedinjenja 56 (46 mg, 47,9%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 560 [M - F]<+>.
[0406] U rastvor jedinjenja 56 (180 mg, 0,31 mmol) u anhidrovanom piridinu (6 ml) u kapima je dodat sirćetni anhidrid (158 mg, 1,54 mmol) na 0°C. Smeša je mešana na RT preko noći. Rastvor je ugašen vodom i koncentrovan na niskom pritisku. Ostatak je rastvoren u EA (10 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4. Organska faza je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (i-PrOH u DCM-u od 1% do 3%) radi dobijanja sirovog jedinjenja 57 (172 mg). Sirovo jedinjenje 57 je prečišćeno pomoću prep-HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi dobijanja čistog jedinjenja 57 (46 mg, 23,8%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 602.3 [M-F]<+>.
[0407] Jedinjenje 56-C (1,02 g, 23%, bezbojno ulje) pripremljeno je koristeći proceduru sličnu pripremi 54-C koristeći 54-A (2,00 g, 13,16 mmol) i 4-hlorfenol (1,68 g, 13,16 mmol).
REFERENTNI PRIMER 39
JEDINJENJE 61
2
[0409] Jedinjenje 25 (109 mg, 0,39 mmol) i trietilamonijum bis(izopropil oksikarbonil oksimetil)fosfat (0,6 mmol, pripremljen od 195 mg bis(izopropil oksikarbonil oksimetil)fosfata i 85 µl Et3N) dehidrirani su uparavanjem sa piridinom, pa sa toluenom. Ostatak je rastvoren u anhidrovanom THF-u (3 ml) i ohlađen u ledenom kupatilu. Dodati su diizopropiletil amin (0,2 ml, 3 ekv.), BopCl (190 mg, 2 ekv.) i 3-nitro-1,2,4-triazol (81 mg, 2 ekv.) i smeša je mešana na 0°C tokom 90 minuta. Smeša je razblažena pomoću EtOAc, isprana zas. vod. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli, i osušena (Na2SO4). Prečišćavanje na koloni silika gela sa CH2Cl2/i-PrOH (gradijent 4-10%) praćeno prečišćavanjem pomoću RP-HPLC (A: 0,1% HCOOH u vodi, B: 0,1% HCOOH u MeCN) dalo je jedinjenje 61 (28 mg, 12%).<1>H-NMR (CDCl3): δ 7.24 (d, 1H), 6.6 (br, 1H), 5.84 (d, 1H), 5.65-5.73 (m, 4H), 4.94 (m, 2H), 4.38 (m, 2H), 4.1 (b, 1H), 2.88 (d, 1H), 1.47 (d, 3H), 1.33 (m, 12H).
PRIMER 40
JEDINJENJE 74
[0410]
[0411] Suvi nukleozid (0,05 mmol) rastvoren je u smeši PO(OMe)3(0,7 ml) i piridina (0,3 ml). Smeša je uparena pod vakuumom tokom 15 minuta na 42°C, zatim ohlađena na RT. Dodat je N-metilimidazol (0,009 ml, 0,11 mmol), a zatim POCl3(0,009 ml, 0,11 mmol). Smeša je držana na RT tokom 20-40 minuta i praćena na nastanak jedinjenja 74 pomoću LCMS. Reakcija je prekinuta vodom i izolovana putem RP HPLC na koloni Synergy Hydro-RP od 4 mikrona (Phenominex). Za eluciju je korišćen linearni gradijent metanola od 0 do 30% u 50
2 1
mM trietilamonijum acetatnom puferu (pH 7,5). Odgovarajuće frakcije su kombinovane, koncentrovane i liofilizovane 3 puta radi uklanjanja viška pufera. MS: m/z 396.5 [M-1]-.
PRIMER 41
JEDINJENJE 68
[0412]
[0413] Nukleozid (140 mg, 0,42 mmol) rastvoren je u n-butilaminu (0,5 ml). Smeša je držana tokom 2 h na RT, i amin je zatim uparen. Ostatak je rastvoren u EtOAc i organski sloj je dva puta ispran sa 10% limunskom kiselinom, osušen iznad Na2SO4i uparen. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela u linearnom gradijentu metanola u DCM-u od 0% do 12% preko 10 zapremina kolona. Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane i tretirane sa 80% HCOOH tokom 1 h na RT. Smeša je uparena do suva i suspendovana u CH3CN. Talog je odvojen, ispran pomoću CH3CN (1 ml) i osušen radi dobijanja jedinjenja 68 (27 mg, 50%). MS: m/z 326.5 [M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 42
JEDINJENJE 62
[0414]
[0415] Jedinjenje 45 (30 mg, 0,1 mmol) rastvoreno je u smeši CH3CN (2 ml) i N-metilimidazola (200 ul). Dodat je fosforohloridat (100 mg, 0,3 mmol), i smeša je držana 5 dana na RT. Smeša je raspodeljena između vode i EA. Organski sloj je odvojen, ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen i uparen. Fosforoamidat je izolovan hromatografijom na silika gelu sa gradijentom metanola u DCM-u od 3% do 10%. Odgovarajuće frakcije su
2 2
koncentrovane i ponovo prečišćene pomoću RP HPLC na koloni Synergy Hydro-RP od 4 mikrona (Phenominex). Za eluciju je korišćen linearni gradijent metanola u DCM-u od 3% do 95% sa 0,1% mravlje kiseline. Jedinjenje 62 je dobijeno kao smeša Rp i Rs izomera (9 mg, 16%). MS: m/z 562.1[M-1]-.
REFERENTNI PRIMER 43
JEDINJENJE 72
[0416]
[0417] Jedinjenje 47 (30 mg, 0,1 mmol) rastvoreno je u smeši CH3CN (2 ml) i N-metilimidazola (200 ul). Dodat je fosforohloridat (100 mg, 0,3 mmol), i smeša je držana preko noći na 40°C. Temperatura je povećana na 65°C, i smeša je zagrevana tokom 1 h. Smeša je raspodeljena između vode i EA. Organski sloj je odvojen, ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen i uparen. Azido-fosforamidat je prečišćen pomoću RP HPLC na koloni Synergy Hydro-RP od 4 mikrona (Phenominex). Za eluciju je korišćen linearni gradijent metanola od 30% do 100% u 50 mM trietilamonijum acetatnom puferu (pH 7,5). Azido-fosforamidat (8 mg) je rastvoren u piridinu/Et3N (3 ml, 8:1 V/V) i ohlađen na 0°C. Gasoviti H2S je produvan kroz rastvor tokom 10 minuta, i reakcija je držana na RT tokom 1 h. Rastvarači su upareni, i ostatak izolovan pomoću RP HPLC. Odgovarajuće frakcije su kombinovane, koncentrovane i liofilizovane 3 puta radi uklanjanja viška pufera, radi dobijanja jedinjenja 72 (1,2 mg) kao smeše Rp i Rs izomera. MS: m/z 544.1 [M+1]<+>.
REFERENTNI PRIMER 44
JEDINJENJE 65
[0418]
2
[0419] U rastvor 65-1 (23,0 g, 39,5 mmol) u anhidrovanom toluenu (200 ml) u kapima je dodat DAST (31,9 g, 198 mmol) na -78°C, i rastvor je mešan na -78°C tokom 3 h. Smeša je ugašena zas. rastvorom NaHCO3, ekstrahovana pomoću EA (2 x 200 ml) i osušena iznad anhidrovanog Na2SO4Rastvor je koncentrovan do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (50% EA u PE) radi dobijanja 65-2 (16,5 g, 71%) kao žute pene.
[0420] Smeša 65-2 (16,0 g, 27,4 mmol) i NH4F (3,0 g, 82,2 mmol) u metanolu (100 ml) mešana je na 70°C tokom 12 h. Reakcija je ohlađena, i so je uklonjena filtracijom. Filtrat je koncentrovan do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (3% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 65-3 (5,1 g, 69,0%) kao bele pene.
[0421] U suspenziju 65-3 (4,1 g, 15,2 mmol), PPh3(8,0 g, 30,4 mmol), imidazola (2,1 g, 30,4 mmol) i piridina (18,2 ml) u anhidrovanom THF-u (40 ml) uz mešanje je u kapima dodat rastvor I2(5,8 g, 22,8 mmol) u THF-u (20 ml) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 12 h. Reakcija je prekinuta pomoću MeOH (100 ml), i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (4% MeOH u DCM-u) radi dobijanja čistog 65-4 (4,4 g, 77%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 381.1 [M+1]<+>.
[0422] U rastvor 65-4 (2,5 g, 0,7 mmol) u anhidrovanom THF-u (3 ml) uz mešanje je dodat DBU (2,1 g, 14 mmol) na RT, i smeša je mešana na RT tokom 1 h. Reakcija je prekinuta pomoću HOAc i razblažena 2-Me-tetrahidrofuranom. Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan do suva pod niskim
2 4
pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 65-5 (1,1 g, 68,9%) kao bele pene.
[0423] U rastvor 65-5 (800 mg, 3,17 mmol) u anhidrovanom CH3CN (10 ml) uz mešanje je dodat TEA•3HF (510 mg, 3,17 mmol) i NIS (785 mg, 3,49 mmol) na 0°C. Smeša je mešana tokom 30 minuta, postepeno zagrejana na RT i mešana tokom 1 h. Smeša je ugašena zas. rastvorom NaHCO3i rastvorom Na2S2O3i ekstrahovana pomoću EA (2 x 20 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela radi dobijanja čistog 65-6 (695 mg, 57,9%) kao žute čvrste supstance.
[0424] U rastvor 65-6 (650 mg, 1,63 mmol) u piridinu (3 ml) uz mešanje je dodat BzCl (507 mg, 3,59 mmol) na 0°C i mešan na RT tokom 12 h. Smeša je ugašena vodom i koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (EA 50% u PE) radi dobijanja 65-7 (550 mg, 67%) kao bele pene.
[0425] Tetrabutilamonijum hidroksid (9 ml kao 54-56% vodeni rastvor, 72 mmol) neutralisan je pomoću TFA do pH∼4 (1,5 ml), i smeša je dodata u rastvor 65-7 (375 mg, 0,75 mmol) u DCM-u (9 ml). m-Hlorperbenzojeva kiselina (924 mg, 60-70%, 3,75 mmol) je dodata u porcijama uz žustro mešanje, i smeša je mešana preko noći. Smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli, osušena iznad magnezijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (EA 50% u PE) radi dobijanja 65-8 (230 mg, 78,8%) kao bele pene. ESI-MS: m/z 393.1 [M+1]<+>.
[0426] Jedinjenje 65-8 (120 mg, 0,24 mmol) tretirano je sa 7N NH3•MeOH (20 ml) i mešano tokom 5 h. Smeša je koncentrovana do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (15% propan-2-ol u DCM-u) radi dobijanja jedinjenja 65 (53 mg, 60,2%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 288.8 [M+1]<+>.
REFERENTNI PRIMER 45
JEDINJENJE 70
[0427]
2
[0428] U rastvor 70-1 (3,0 g, 18,0 mmol) i POCl3(1,35 g, 9,0 mmol) u DCM-u (80 ml) u kapima je dodat TEA (3,6 g, 36,0 mmol) u DCM-u (20 ml) na 0°C. Smeša je mešana na 0°C tokom 2 h. Rastvor pentafluorfenola (1,65 g, 9,0 mmol) i TEA (0,9 g, 9,0 mmol) u DCM-u (20 ml) u kapima je dodat na 0°C i smeša je mešana na 0°C tokom 15 h. Nakon okončanja reakcije, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran pomoću TBME i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (20% EA u PE) radi dobijanja 70-2 (2,7 g, 62,7%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 491.1 [M+1)<+>.
[0429] U rastvor 1-((3aR,4R,6S,6aS)-6-fluor-6-(hidroksimetil)-2-metoksi-3ametiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioksol-4-il)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona (150 mg, 0,47 mmol) u anhidrovanom THF-u (2 ml) uz mešanje je u kapima dodat rastvor t-BuMgCl (0,46 ml, 1M u THF-u) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 40 minuta, i ponovo ohlađena na 0°C. Dodat je rastvor 70-2 (462 mg, 0,94 mmol), i smeša je mešana na RT tokom 4 h. Smeša je ugašena pomoću H2O, i ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (50% EA u PE) radi dobijanja 70-3 kao bele pene (230 mg, 78%).
[0430] Jedinjenje 70-3 (230 mg, 0,37 mmol) rastvoreno je u 80% vodenom rastvoru HCOOH (20 ml), i smeša je mešana na RT tokom 24 h. Rastvarač je uklonjen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela radi dobijanja sirovog proizvoda, koji je prečišćen pomoću RP HPLC (HCOOH sistem) radi dobijanja jedinjenja 70 kao smeše dva P-izomera (75 mg, 33%). ESI-TOF-MS: m/z 583.0 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 46
2
JEDINJENJE 75
[0431]
[0432] U rastvor 75-1 (120 g, 0,26 mol) u CH3CN (2,0 l) dodat je IBX (109 g, 0,39 mol) i refluktovan tokom 12 h. Reakcija je praćena pomoću TLC i LCMS. Nakon hlađenja na RT, smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom. Sirovi proizvod je neposredno korišćen u sledećem koraku.
[0433] Jedinjenje 75-2 (130 g, 0,26 mol) upareno je sa anhidrovanim toluenom tri puta radi uklanjanja H2O. U rastvor 75-2 u THF-u (300 ml) u kapima je dodat vinil magnezijum bromid (700 ml, 0,78 mol, IN u THF-u) tokom 30 minuta na -78°C. Smeša je mešana oko 1 h na RT. Nakon što je polazna supstanca potrošena, smeša je izlivena u zas. rastvor NH4Cl. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i filtriran. Rastvor je koncentrovan pod niskim pritiskom radi dobijanja sirovog proizvoda. U rastvor ovog sirovog proizvoda (170 g, 0,346 mol) u anhidrovanom CH2Cl2dodat je TEA (105 g, 1,04 mol)
2
i DMAP (84 g, 0,69 mol). Benzoil hlorid (146 g, 1,04 mol) je polako dodat na RT tokom 12 h. Smeša je razblažena pomoću CH2Cl2i zatim isprana zas. vod. rastvorom NaHCO3. Kombinovana vod. faza je ekstrahovana pomoću DCM-a (100 ml), i kombinovana organska faza je osušena pomoću Na2SO4Nakon filtracije, rastvor je uparen do suva pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni radi dobijanja 75-3 (107 g, 52%).
[0434] Uracil (44,8 g, 0,4 mol) (dva puta uparen sa toluenom) i NOBSA (81,4 g, 0,4 mol) rastvoreni su u CH3CN (500 ml). Smeša je refluktovana tokom 1,5 h i zatim polako ohlađena na RT. Smeša je tretirana sa 75-3 (59 g, 0,1 mol) i TMSOTf (155 g, 0,7 mol), i zatim zagrevana na 60-70°C tokom 12 h. Smeša je neutralisana zas. rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 1000 ml). Rastvor je osušen iznad anhidrovanog MgSO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela radi dobijanja čistog 75-4 (40 g, 69%) kao bele čvrste supstance.
[0435] U rastvor 75-4 (50 g, 0,086 mol) u DMF-u dodati su PMBCl (16 g, 0,1 mol) i K2CO3(17,8 g, 0,13 mol) na 0°C, i smeša je mešana na RT tokom 12 h. Smeša je ugašena vodom (100 ml) i ekstrahovana pomoću EA (3 x 200 ml). Organska faza je koncentrovana na niskom pritisku radi dobijanja sirovog 75-5 (65 g) koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0436] U rastvor sirovog 75-5 (65 g, 0,086 mol) u MeOH/DCM (4/1) (200 ml) dodat je NaOMe (16,8 g, 0,3 mol), i smeša je mešana na RT tokom 2,5 h. Reakcija je prekinuta suvim ledom, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (200 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je koncentrovan pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen koristeći kolonu silika gela koristeći 1% MeOH u CH2Cl2radi dobijanja 75-6 kao žute pene (25 g, 75%).
[0437] U rastvor 75-6 (25,5 g, 0,065 mol) u DMF-u polako je dodat NaH (10,5 g, 0,26 mol) na 0°C, i smeša je mešana tokom 30 minuta. Dodat je BnBr (36,3 g, 0,21 mol), i smeša je mešana na RT tokom 12 h. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NH4Cl (vod.) i zatim ekstrahovana pomoću EA (3 x 100 ml). Rastvor je osušen iznad anhidrovanog MgSO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela koristeći 10% EA u PE radi dobijanja 75-7 (20 g, 46%) kao bele čvrste supstance.
2
[0438] U rastvor 75-7 (20 g, 0,03 mol) i NMMO (7 g, 0,06 mol) u THF:H2O (5:1) (100 ml) dodat je OsO4(2,6 g, 0,01 mol) na RT, i smeša je mešana na RT tokom 24 h. Smeša je ugašena zas. rastvorom Na2S2O3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 100 ml). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli i osušen iznad anhidrovanog MgSO4. Rastvor je uparen pod niskim pritiskom radi dobijanja sirovog jedinjenja, koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0439] U rastvor sirovog diola (0,03 mol) u MeOH:H2O:THF (170 ml:30 ml:50 ml) dodat je NaIO4(9,6 g, 0,045 mol), i smeša je mešana na RT tokom 2 h. Nakon filtracije, filtrat je neposredno korišćen u sledećem koraku. Ovaj rastvor je tretiran sa NaBH4(1,8 g, 0,048 mol) na 0°C, i smeša je mešana na RT tokom 30 minuta. Smeša je ugašena pomoću MeOH i uparena pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (100 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Rastvor je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela koristeći 20% EA u EA radi dobijanja 75-8 (12 g, 61% u tri koraka).
[0440] U rastvor 75-8 (14 g, 21 mmol) i DMAP (5,1 g, 42 mmol) u DCM-u (100 ml) dodat je MsCl (3,1 g, 27 mmol) na 0°C, i smeša je mešana na RT tokom 40 minuta. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NaHCO3(vod.), i isprana rastvorom HCl (0,2 N). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog MgSO4i uparena pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela koristeći 5% EA u PE radi dobijanja mezilatnog proizvoda (14 g, 90%). MsO-proizvod (41 g, 55 mmol) tretiran je pomoću TBAF (1 N u THF-u, 500 ml), i smeša je mešana na 70-80°C tokom 3 dana. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u EA (200 ml). Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog MgSO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći 10% EA u PE radi dobijanja 75-9 (9,9 g, 27%).
[0441] U rastvor 75-9 (6,3 g, 9,45 mmol) u CH3CN:H2O (3:1, 36 ml:12 ml) dodat je CAN (15,5 g, 28,3 mmol), i smeša je mešana na RT preko noći. Smeša je ekstrahovana pomoću EA (3 x 50 ml). Rastvor je osušen iznad anhidrovanog MgSO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći 20% EA u PE radi dobijanja 75-10 (3,6 g, 71%) kao bele čvrste supstance.
[0442] U rastvor 75-10 (2,4 g, 4,4 mmol) u anhidrovanom DCM-u (10 ml) polako je dodat BCl3(1 N, 30 ml CH2Cl2) na -70°C, i smeša je mešana tokom 2 h na -70°C. Smeša je ugašena
2
sporim dodavanjem MeOH na -70°C, i smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći 50% EA u PE radi dobijanja 75-11 (1,2 g, 86%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 277,1 [M+H]<+>.
[0443] U rastvor PPh3(3,37 g, 12,8 mmol) u piridinu (15 ml) dodat je I2(3,06 g, 12 mmol) na 0°C, i smeša je mešana na RT tokom 30-40 minuta. Smeša je ohlađena na 0°C, a zatim tretirana sa 75-11 (2,2 g, 8 mmol) u Py. (5 ml). Smeša je mešana na RT u atmosferi N2tokom 12 h. Smeša je ugašena zas. rastvorom Na2S2O3(vod.) i ekstrahovana pomoću CH2Cl2(3 x 50 ml). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog MgSO4i zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći 1-2% MeOH u CH2Cl2radi dobijanja 75-12 (1,8 g, 58%) kao bele čvrste supstance.
[0444] U rastvor 75-12 (1,35 g, 3,5 mmol) u THF:CH3CN (10 ml:5 ml) dodat je DBU (1,06 g, 7 mmol), i smeša je mešana na 60-70°C tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u EA (20 ml). Rastvor je ispran 10% rastvorom HCl i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći 30% EA u PE radi dobijanja 75-13 (0,5 g, 55%).
[0445] U rastvor 75-13 (670 mg, 2,6 mmol) u CH3CN (6 ml) dodat je NIS (730 mg, 3,25 mmol) i 3HF•TEA (335 mg, 2,1 mmol) na 0°C, i smeša je mešana na RT tokom 2 h. Smeša je ugašena zas. rastvorom NaHCO3(vod.) i rastvorom Na2S2O3(vod.). Smeša je ekstrahovana pomoću EA (3 x 20 ml), osušena iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći 1-2% MeOH u CH2Cl2radi dobijanja 75-14 (1,2 g, 80%).
[0446] U rastvor 75-14 (1,0 g, 2,47 mmol), DMAP (0,75 g, 6,2 mmol) i TEA (0,75 g, 7,42 mmol) u DCM-u (10 ml) dodat je BzCl (1,15 g, 8,16 mmol) u DCM-u (1 ml) na 0°C, i smeša je mešana na RT tokom 12 h. Smeša je razblažena pomoću CH2Cl2(10 ml) i zatim isprana rastvorom HCl (0,1 N, 20 ml) i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći 20% EA u PE radi dobijanja 75-15 (850 mg, čistoća∼80%).
2
[0447] U rastvor 75-15 (600 mg, 1 mmol) u DMF-u (25 ml) dodat je BzONa (1,45 g, 10 mmol), 15-kruna-5 (2,2 g, 10 mmol), i smeša je mešana na 90-100°C tokom 24 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u EA (20 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog MgSO4i zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći 15% EA u PE radi dobijanja 75-16 (275 mg, 37%) kao svetložute pene.
[0448] Jedinjenje 75-16 (250 mg, 0,41 mmol) tretirano je sa NH3•MeOH (7 N, 5 ml), i smeša je mešana na RT tokom 15 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen putem prep-HPLC radi dobijanja jedinjenja 75 (33 mg, 25%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 295.1 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 47
JEDINJENJE 73
[0449]
2 1
[0450] U rastvor IBX (133,33 g, 476 mmol) u suvom CH3CN (2 l) dodat je 73-1 (100,0 g, 216 mol) na RT. Smeša je refluktovana i mešana tokom 12 h. Smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom radi dobijanja 73-2 kao žutog ulja (90,0 g, 90,4%).
[0451] Jedinjenje 73-2 (50,0 g, 108,70 mmol) dva puta je upareno sa anhidrovanim toluenom radi uklanjanja H2O. Etinil magnezijum bromid (800 ml, 400,0 mmol) u kapima je dodat u rastvor 73-2 u THF-u (500 ml) tokom 20 minuta na -78°C. Smeša je mešana oko 10 minuta na -78°C. Nakon što je polazna supstanca potrošena, kupatilo za hlađenje led-aceton je uklonjeno. Smeša je ugašena zas. rastvorom NH4Cl uz mešanje, i zatim zagrejana na RT. Smeša je ekstrahovana pomoću EA, filtrirana kroz celit i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli. Kombinovana organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod niskim pritiskom radi dobijanja sirovog 73-3 kao tamnožutog ulja (48,0 g, prinos: 90,8%).
[0452] Jedinjenje 73-3 (200,0 g, 411,52 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom CH2Cl2(2000 ml), a zatim su dodati DMAP (100,41 g, 823,05 mmol) i Et3N (124,94 g, 1,23 mol) na RT. Smeša je tretirana benzoil hloridom (173,46 g, 1,23 mol) na 0°C. Nakon mešanja tokom 12 h na RT, reakcija je prekinuta pomoću H2O. Kombinovana vod. faza je ekstrahovana pomoću DCM. Kombinovana organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i uparena do suva pod sniženim pritiskom radi dobijanja crnog ulja. Ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni koristeći 7%-20% EA u PE kao eluent radi dobijanja žutog ulja. Ostatak je trituriran sa CH3OH i filtriran. Filter pogača je koncentrovana pod vakuumom radi dobijanja 73-4 kao bele čvrste supstance (30,0 g, 36,4%).
[0453] Uracil (34,17 g, 305,08 mmol) je dva puta uparen sa anhidrovanim toluenom radi uklanjanja H2O. U suspenziju uracila u anhidrovanom MeCN (150 ml) uz mešanje je dodat N,O-BSA (123,86 g, 610,17 mmol) na RT. Smeša je refluktovana tokom 1,5 h, a zatim je ohlađena na RT. Dodato je jedinjenje 73-4 (90 g, 152,54 mmol, koje je dva puta upareno sa anhidrovanim toluenom radi uklanjanja H2O). Zatim je dodat TMSOTf (237,05 g, 1,07 mol) na RT. Smeša je zagrevana na 70°C, a zatim mešana preko noći i praćena pomoću LCMS. Smeša je ohlađena na RT i ugašena zas. rastvorom NaHCO3. Rastvor je ekstrahovan pomoću EA. Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i zatim koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen koristeći kolonu silika gela uz eluciju sa 10%-50% EA u PE radi dobijanja 73-5 kao bele čvrste supstance (45 g, 50,9%).
2 2
[0454] Jedinjenje 73-5 (50 g, 86,21 mmol) tretirano je sa NH3u MeOH (1 l) na RT, a zatim mešano tokom 48 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 73-6 (12,6 g, 54,55%) kao bele čvrste supstance.
[0455] U rastvor ciklopentanona (100 g, 1,189 mmol) i trimetil ortoformata (150 ml) u MeOH (600 ml) dodat je TsOH·H2O (1,13 g, 5,9 mmol), i smeša je mešana na RT tokom 30 minuta. Reakcija je ugašena pomoću NaOMe (0,32 g, 5,9 mmol) i H2O, i rastvor je ekstrahovan pomoću n-heksana. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i zatim koncentrovan pod niskim pritiskom. Ciklopentil dimetoksi acetal i 73-6 (20 g, 74,63 mmol) rastvoreni su u DCE (200 ml), a zatim tretirani sa TsOH•H2O (0,71 g, 3,73 mmol). Smeša je mešana na 50°C tokom 12 h, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (1-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 73-7 (15,4 g, 61.8%) kao bele čvrste supstance.
[0456] Jedinjenje 73-7 (20,0 g, 0,06 mol) upareno je sa anhidrovanim piridinom tri puta radi uklanjanja H2O. U ledeno hladni rastvor 73-7 u anhidrovanom piridinu (100 ml) dodat je TsCl (22,8 g, 0,12 mol) na 0°C, i smeša je mešana preko noći i praćena pomoću LCMS i TLC. Reakcija je prekinuta pomoću H2O i ekstrahovana pomoću EA. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog NaSO4i uparena pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (DCM: MeOH=100:1 do 15:1) radi dobijanja 78-8 (20,0 g, 69,0%) kao bele čvrste supstance.
[0457] U rastvor 73-8 (20,0 g, 0,04 mol) u acetonu (200 ml) dodat je NaI (31,0 g, 0,2 mol) i zagrevan uz refluks preko noći i praćen pomoću LCMS. Smeša je ugašena zas. rastvorom Na2S2O3i ekstrahovana pomoću EA. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4i uparena pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (DCM: MeOH=100:1 do 15:1) radi dobijanja 73-9 (15,0 g, 83,3%) kao bele čvrste supstance.
[0458] U 73-9 (30,0 g, 0,068 mol) u dioksanu (60 ml) u zaptivenoj epruveti dodat je CuBr (4,9 g, 0,034 mol), i-Pr2NH (13,6 g, 0,135 mol) i (CH2O)n(5,1 g, 0,17 mol) u atmosferi N2. Smeša je zagrevana uz refluks tokom 16 h. Smeša je razblažena pomoću EtOAc i isprana zas. rastvorom NH4Cl i zasićenim vodenim rastvorom soli. Rastvor je osušen iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na
2
koloni (DCM: MeOH=100:1 do 15:1) radi dobijanja 73-10 (10,0 g, 32,3%) kao bele čvrste supstance.
[0459] Jedinjenje 73-10 (10 g, 21,83 mmol) tretirano je sa HCOOH (80%) u H2O na RT. Rastvor je mešan na 60°C tokom 2 h i zatim koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (1%-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 73-11 (5,1 g, 58,55%) kao bele čvrste supstance.
[0460] Jedinjenje 73-11 (5 g, 12,79 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom MeOH (100 ml) i tretirano sa NaOMe (4,83 g, 89,5 mmol) na RT. Rastvor je mešan na 60°C tokom 36 h. Smeša je ugašena sa CO2a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 73-12 (2,3 g, 68,05%) kao žute čvrste supstance.<1>H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ = 7.29 (d, J= 8 Hz 1H), 6.10 (s, 1H), 5.71 (d, J = 8.0 Hz 1H), 5.18 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.79-4.84 (m, 1H), 4.61 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.39 (s, 1H), 3.45 (s, 1H).
[0461] U ledeno hladni rastvor 73-12 (1,5 g, 5,68 mmol) u anhidrovanom MeCN (15 ml) dodat je NIS (1,66 g, 7,39 mmol) i TEA• 3HF (0,73 g, 4,55 mmol) u atmosferi N2. Smeša je mešana na RT tokom 1 h. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NaHCO3i zas. rastvorom Na2SO3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 100 ml). Organska faza je osušena iznad Na2SO4i uparena do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (0-5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 73-13 (1,08 g, 46,2%) kao žute čvrste supstance.
[0462] U rastvor 73-13 (1 g, 2,44 mmol) u anhidrovanom DCM-u (10 ml) uz mešanje je dodat DMAP (0,60 g, 4,88 mmol) i Et3N (0,74 g, 7,32 mmol) na RT. Smeša je tretirana benzoil hloridom (0,79 g, 5,61 mmol) na 0°C, zatim mešana na RT tokom 3 h. Reakcija je prekinuta vodom i ekstrahovana pomoću EA (3 x 60 ml). Organska faza je koncentrovana pod niskim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 73-14 (0,9 g, 59,6%) kao bele čvrste supstance.
[0463] Bu4NOH (55% u H2O, 13,74 ml) tretiran je sa TFA (radi podešavanja na pH=3-4). Smeša je ohlađena na RT. U rastvor 73-14 (0,9 g, 1,46 mmol) u DCM-u (9 ml) dodat je m-CPBA (80%, 1,57 g, 7,28 mmol) na RT. Smeša je mešana na 25°C tokom 48 h. Smeša je isprana zas. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je propušten kroz anhidrovanu kolonu
2 4
Al2O3i rastvor je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (30% EA u PE) radi dobijanja 73-15 (0,26 g, 35,1%) kao žute čvrste supstance.
[0464] Jedinjenje 73-15 (0,25 g, 0,49 mmol) rastvoreno je u NH3/MeOH (5 ml, 7 M) i smeša je mešana na RT tokom 24 h u atmosferi N2. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom na RT, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 73-16 (100 g, 67,75%) kao bele čvrste supstance.<1>H-NMR (CD3OD, 400 MHz) δ = 7.83 (d, J = 8 Hz 1H), 6.29 (s, 1H), 5.67 (d, J = 6.0 Hz 1H), 5.12 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.99-5.01 (m, 1H), 4.38 (d, J = 19.6 Hz 1H), 3.74-3.81 (m, 2H), 3.35 (s, 1H).
[0465] Jedinjenje 73-16 (100 mg, 0,33 mmol) tri puta je upareno sa toluenom radi uklanjanja H2O. U rastvor 73-16 (100 mg, 0,33 mmol) u smeši MeCN (1,0 ml) i NMI (271 mg, 3,3 mmol) uz mešanje je dodat rastvor 73-C (216,5 mg, 0,66 mmol) u MeCN (0,5 ml) na 0°C. Smeša je mešana na RT preko noći, i reakcija je zatim prekinuta vodom. Smeša je razblažena pomoću EA (20 ml), i organski sloj je ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli i osušen iznad anhidrovanog Na2SO4Organska faza je koncentrovana pod niskim pritiskom ,i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% i-PrOH u DCM-u) radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću prep-HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi dobijanja jedinjenja 73 (35,6 mg, 19,0%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 592 [M+Na]<+>.
[0466] U rastvor 73-A (2,0 g, 13,16 mmol) i fenola (1,22 g, 13,16 mmol) u anhidrovanom DCM-u (100 ml) uz mešanje je ukapavanjem dodat rastvor TEA (1,33 g, 13,16 mmol) u DCM-u (20 ml) na -78°C. Smeša je postepeno zagrevana na RT i zatim mešana tokom 2 h. Rastvor je ponovo ohlađen na -78°C i dodat je (S)-izopropil 2-aminopropanoat hidrohlorid (2,20 g, 13,16 mmol) u DCM-u (20 ml), praćen ukapavanjem TEA (2,66 g, 26,29 mmol) u DCM-u (20 ml). Smeša je postepeno zagrevana na RT i zatim mešana tokom 2 h. Organski rastvarač je uklonjen pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u metil butil etru. Talog je filtriran, i filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (anhidrovani DCM) radi dobijanja 73-C (0,9 g, 22,3%) kao bezbojnog ulja.
PRIMER 48
JEDINJENJE 66
[0467]
2
[0468] Jedinjenje 66-2 (2648 g, 7,3 mol) rastvoreno je u anhidrovanom dihlormetanu (10 l), i rastvor je ohlađen na -40°C uz mešanje u atmosferi N2. Jedinjenje 66-1 (1 kg, 7,69 mol) rastvoreno je u anhidrovanom CH2Cl2(3 l) i dodato u rastvor 66-2 tokom 30 minuta na -40°C. Smeša je uz mešanje ostavljena da se zagreje na RT preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suva, i ostatak je suspendovan u TMBE (6 l). Suspenzija je filtrirana radi uklanjanja Ph3PO, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja sirovog 66-3 (1230 g, 78,6%).<1>H NMR (400 Hz) (CDCl3): δ 6.65 (dt, J = 7.6 Hz, 1H), 4.82 (dd, J = 14.8, 7.6 Hz, 1H), 4.20-4.10 (m, 3H), 3.59 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 1.86 (d, J= 1.2 Hz, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.26 (t, J= 6.8 Hz, 3H).
[0469] Sirovi 66-3 (1230 g, 5,74 mol) rastvoren je u acetonu (30 l) na 0-5 °C. Dodat je KMnO4(1107 g, 5,17 mol) u jednoj porciji. Nakon mešanja na 0-5°C tokom 5 h, reakcija je prekinuta zas. vod. natrijum sulfitom (20 l). Nakon 30 minuta, dobijena je bezbojna suspenzija. Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom i isprana sa EA (6 l). Filtrat je ekstrahovan sa EA (3 x 2 l). Kombinovani ekstrakti su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja belog čvrstog ostatka. Ostatak je rastvoren u EA, i PE je dodat radi
2
dobijanja taloga. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i prekristalisana 3 puta radi dobijanja 66-4 (770 g, 53,6%) kao bele čvrste supstance.
[0470] U rastvor 66-4 (770 g, 3,1 mol) u anhidrovanom DCM-u (5 l) i trietilaminu (1,1 l, 8,05 mol) na 0°C polako je uz mešanje dodat sulfuril hlorid (300 ml, 3,6 mmol). Smeša je mešana na RT tokom 2 h, razblažena dodatkom DCM-a (3 l) i isprana zas. vod. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela koristeći PE:EA = 1:0 do 10:1 kao eluent radi dobijanja 66-5 (490 g, 50,6%) kao ulja.
[0471] Tetraetilamonijum fluorid hidrat (650 g, 3,7 mol) dodat je u rastvor 66-5 (490 g, 1,6 mol) u anhidrovanom dioksanu (3 l), i smeša je zagrevana na 120°C tokom 16 h. Smeša je zatim ohlađena na temperature okoline. Dodat je 2,2-dimetoksipropan (3 l), praćen konc. vod. hlorovodoničnom kiselinom (200 ml). Smeša je mešana tokom 3 h na temperaturi okoline. Rastvarač je koncentrovan do 1⁄3 prvobitne zapremine, a zatim razblažen sa EA (3 l). Smeša je isprana hladnim zas. vod. rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom soli. Kombinovani vodeni sloj je povratno ekstrahovan sa EA (1 l). Kombinovani organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod niskim pritiskom radi dobijanja sirovog 66-6 (220 g, 70,8%).
[0472] Sirovi 66-6 (220 g, 0,89 mol) rastvoren je u etanolu (2 l) i konc. vod. HCl (60 ml). Rastvor je mešan na temperaturi okoline tokom 48 h, i zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom, a zatim uparen sa toluenom 3 puta radi dobijanja 66-7 kao bledožute čvrste supstance (110 g).
[0473] Jedinjenje 66-7 (110 g) rastvoreno je u anhidrovanom piridinu (1 l). Benzoil hlorid (200 ml, 1,67 mol) je polako dodat na 0-5°C. Smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 45 minuta. Reakcija je prekinuta dodatkom leda i MeOH, dajući talog. Nakon filtracije, filtrat je ispran pomoću MeOH radi dobijanja 66-8 (200 g, 61,2%) kao bele čvrste supstance.
[0474] U rastvor 66-8 (100 g, 269 mmol) u anhidrovanom THF-u (1000 ml) u kapima je dodat rastvor litijum tri-terc-butoksi aluminohidrida (400 ml, 1 M, 0,4 mol) na -78°C u atmosferi N2tokom 30 minuta. Rastvor je mešan na -20°C tokom 1 h, i TLC (PE: EA= 3:1) pokazuje da je reakcija završena. Smeša je ugašena dodatkom zas. NH4Cl i razblažena sa EA. Nakon
2
filtracije, filtrat je ekstrahovan pomoću EA. Kombinovani slojevi su osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE: EA=20:1) radi dobijanja 66-9 (100 g, 100%) kao bezbojnog ulja.
[0475] U rastvor PPh3(140 g, 382 mol) u CH2Cl2(1000 ml) uz mešanje je dodat 66-9 (100 g, 269 mmol) na -20°C u atmosferi N2. Nakon 15 minuta mešanja, ukapavanjem je dodat CBr4(177 g, 382 mol) uz održavanje temperature između -25 i -20°C u atmosferi N2. Smeša je mešana ispod -17°C tokom 20 minuta. Silika gel je dodat u smešu. Smeša je filtrirana kroz hladnog kolonu silika gela i isprana pomoću PE: EA (50:1 do 4:1). Kombinovani filtrati su koncentrovani pod sniženim pritiskom na RT radi dobijanja sirovog uljanog proizvoda. Ostatak je drugi put prečišćen na koloni silika gela (PE: EA=50:1 do 4:1) radi dobijanja 66-10 (αizomer, 64 g, prinos: 55%) kao bezbojnog ulja.
[0476] Smeša 6-hlor-guanina (55,8 g, 316,5 mol) i t-BuOK (39,5 g, 352,7 mmol) u t-BuOH (500 ml) i MeCN (280 ml) mešana je tokom 30 minuta. Jedinjenje 66-10 (48 g, 105,5 mmol) dodato je na RT, i smeša je zagrevana na 50°C i mešana preko noći. Reakcija je praćena pomoću TLC (PE:EA = 2:1). Smeša je ugašena čvrstim NH4Cl. Nakon mešanja tokom 1 h, smeša je filtrirana i isprana sa MeCN. Filtrat je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela radi dobijanja 66-11 (33 g, 57%).
[0477] U rastvor 66-11 (49 g, 93,1 mol) u CH2Cl2(200 ml) dodat je AgNO3(31,7 g, 186 mmol), kolidin (22,5 g, 186 mmol) i MMTrCl (43 g, 140 mmol) u malim porcijama u atmosferi N2na 0°C. Smeša je mešana na RT i praćena pomoću TLC (PE:EA=4:1). Nakon filtracije, organska faza je isprana vodenim NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE:ME= 20:1 do 1:1) radi dobijanja 66-12 (70 g, 94,2%).
[0478] Natrijum (10,1 g, 439 mmol) je rastvoren u suvom EtOH (600 ml) na 70°C, a zatim ohlađen na 0°C. U rastvor 66-12 (70 g, 87,7 mmol) dodat je sveže pripremljeni rastvor NaOEt u porcijama na 0°C, i smeša je mešana tokom 1 h na RT. Nakon što su TLC i LCMS pokazali da je reakcija završena, reakcija je prekinuta ugljen dioksidom. Smeša je uparena pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen koristeći hromatografiju na koloni silika gela (DCM: MeOH=100:1 do 20:1) radi dobijanja 66-13 (50 g, prinos 5%) kao žute čvrste supstance.
2
[0479] Smeša PPh3(35 g, 133,5 mol) i I2(31,75 g, 125 mmol) u anhidrovanom piridinu (600 ml) mešana je tokom 30 minuta, a zatim je dodat rastvor 66-13 (50 g, 83,3 mmol) u piridinu (100 ml) na 0°C. Smeša je mešana preko noći na RT i praćena putem TLC (DCM:MeOH=50:1). Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću DCM (3 x 50 ml). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog MgSO4i uparena pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen koristeći hromatografiju na koloni silika gela (DCM: MeOH=200:1 do 50:1) radi dobijanja 66-14 (50 g, 84,7%).
[0480] U rastvor 66-14 (37 g, 52,1 mmol) u suvom THF-u (400 ml) dodat je DBU (16 g, 105 mmol). Smeša je zagrevana do refluksa i mešana tokom 3 h. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4i upareni pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen koristeći hromatografiju na koloni silika gela (PE:EA=10:1 do 5:1) radi dobijanja 66-15 (25 g, 61,1%) kao bele čvrste supstance.
[0481] U ledeno ohlađeni rastvor 66-15 (26 g, 44,6 mmol) u suvom MeCN (300 ml) dodat je NIS (12,68 g, 56 mmol) i NEt3• 3HF (10,6 g, 67 mmol) na 0°C. Reakcija je mešana na RT tokom 2 h i praćena pomoću LCMS. Po završetku reakcije, reakcija je ugašena zas. rastvorom Na2SO3i zas. rastvorom NaHCO3, i ekstrahovana pomoću EA. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (PE: EA=8:1 do 1:1) radi dobijanja 66-16 (21 g, 64,4%) kao bele čvrste supstance.
[0482] U rastvor 66-16 (21 g, 28.8 mol) u CH2Cl2(150 ml) dodat je AgNO3(9,8 g, 59,6 mmol) i kolidin (7 g, 59,8 mmol) i MMTrCl (13,1 g, 42,5 mmol) u malim porcijama u atmosferi N2na 0°C. Smeša je mešana na RT, i reakcija je praćena pomoću TLC (PE:EA = 2:1). Nakon filtracije, rastvor je ispran zas. vod. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela radi dobijanja 66-17 (25 g, prinos 86,5%).
[0483] U rastvor 66-17 (22 g, 22 mmol) u suvom DMF-u (500 ml) dodat je NaOBz (31,9 g, 220 mmol) i 15-kruna-5 (48,4 g, 220 mmol), i smeša je mešana tokom 72 h na 95°C. Smeša je razblažena sa EA, isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom soli, i osušena iznad MgSO4.
2
Organski sloj je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen koristeći hromatografiju na koloni silika gela radi dobijanja 66-18 (15 g, 68,8%) kao bele čvrste supstance.
[0484] Jedinjenje 66-18 (15,2 g, 15,3 mmol) upareno je sa anhidrovanim toluenom 3 puta radi uklanjanja H2O. Jedinjenje je tretirano sa NH3u MeOH (7 N, 200 ml) na RT. Smeša je mešana tokom 18 h na RT, i reakcija je praćena pomoću LCMS. Ostatak je koncentrovan pod niskim pritiskom i prečišćen koristeći hromatografiju na koloni silika gela radi dobijanja 66-19 (11 g, 81%) kao bele čvrste supstance.
[0485] U rastvor 66-20 (14 g, 15,73 mmol) u anhidrovanom CH3CN (150 ml) uz mešanje je dodat N-metilimidazol (23,5 g, 283,9 mmol) na 0 do 5°C (ledeno/vodeno kupatilo) praćen rastvorom fenil(cikloheksanoksi-L-alaninil)fosforohloridata (16,33 g, 47,2 mmol, rastvoren u 50 ml CH3CN). Rastvor je mešan na 0 do 5°C tokom 12 h, a zatim razblažen dodatkom EA. Rastvor je ispran 50% vodenim rastvorom limunske kiseline i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog MgSO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen na silika gelu sa PE: EA=5:1 kao eluentom radi dobijanja 66-20 (17,62 g, 93,4%) kao bele čvrste supstance.
[0486] Jedinjenje 66-20 (17,62 g, 14,7 mmol) rastvoreno je u 80% AcOH (200 ml), i smeša je mešana preko noći na RT. Nakon uklanjanja rastvarača, ostatak je prečišćen na silika gelu koristeći PE:EA=2:1 za eluent radi dobijanja sirovog proizvoda koji je prečišćen pomoću reversno fazne HPLC koristeći acetonitril i vodu radi dobijanja jedinjenja 66 (5,25 g, prinos 66%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 655 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 49
JEDINJENJE 67
[0487]
2
[0488] U rastvor nukleozida (300 mg, 1,09 mmol) i protonskog sunđera (467 mg, 2,18 mmol) u anhidrovanom CH3CN (5 ml) na 0°C u atmosferi N2u kapima je dodat rastvor fosfor oksihlorida (330 mg, 2,18 mmol) u anhidrovanom CH3CN (1 ml). Smeša je mešana na 0°C tokom 30 minuta, i dodat je (S)-etil 2-aminopropanoat hidrohlorid (998 mg, 6,52 mmol) i trietilamin (1,5 ml, 10,87 mmol) na 0°C. Smeša je mešana preko noći na 30°C. Reakcija je prekinuta vodom i ekstrahovana pomoću EA (3 x 20 ml). Organski sloj je koncentrovan pod niskim pritiskom, a ostatak je prečišćen pomoću reversno fazne HPLC radi dobijanja jedinjenja 67 (20 mg, 3%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 535 [M-F]<+>.
REFERENTNI PRIMER 50
JEDINJENJE 59
[0489]
[0490] U rastvor natrijum hidrosulfida (4,26 g, 76,0 mmol) u EtOH (100 ml) u kapima je dodat t-butiril hlorid (76,2 mmol; 9,35 ml) na 0 °C, i smeša je mešana na RT tokom 1 h. Dodat je rastvor 2-(2-hloretoksi)etanola (57 mmol; 6,0 ml) i TEA (21 ml, 120 mmol), i smeša je zagrevana uz refluks tokom 60 h. Smeša je filtrirana i zatim koncentrovana do male zapremine.
2 1
Ostatak je rastvoren u EA, a zatim ispran zas. vod. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Izolovan je sirovi proizvod (10,0 g), i 5 grama je prečišćeno hromatografijom na koloni silika gela koristeći gradijent 0 do 100% EA u heksanu radi dobijanja 59-3 (4,5 g, 22 mmol) kao čistog bezbojnog ulja.<1>H-NMR (CDCl3): 3.70-3.74 (m, 2H), 3.5-3.65 (m, 4H), 3.1 (t, 2H), 1.25 (s, 9H).
[0491] Rastvor 59-3 (4,5 g; 21,8 mmol) i trietilamina (6,7 ml, 87,2 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml) u kapima je tokom 1 h uz mešanje dodavan u rastvor N,N-diizopropil fosforodihloridita (2,0 ml, 10,9 mmol) u THF-u (50 ml) u atmosferi argona na -78°C. Smeša je mešana na RT tokom 2 h, a zatim razblažena pomoću EA (200 ml). Smeša je isprana zas. vod. rastvorom NaCl i osušena iznad Na2SO4Nakon filtracije, filtrat je uparen pod sniženim pritiskom radi dobijanja bledožutog ulja. Prečišćavanje fleš hromatografijom na koloni koristeći gradijent EA (0-5%) u heksanu sa 5% trietilamina dalo je 59-4 (2,5 g, 4,25 mmol) kao čisto bezbojno ulje.<1>H-NMR (CDCl3): 3.70-3.82 (m, 4H), 3.57-3.65 (m, 10H), 3.1 (t, 4H), 1.25 (s, 18H), 1.17 (t, 12H);<31>P-NMR (CDCl3): 148.0 ppm.
[0492] Jedinjenje 59-5 (285 mg, 0,9 mmol) i DCI (175 mg, 1,5 mmol) dva puta su upareni sa ACN, pa rastvoreni u ACN (5 ml). Dodato je jedinjenje 59-4 (790 mg, 1,35 mmol) u ACN (4 ml), i reakcija je praćena pomoću TLC. Nakon 15 minuta, dodat je terc-butil hidroperoksid (0,5 ml 5,5 M rastvor u dekanu), i smeša je mešana 10 minuta. Smeša je razblažena dodatkom EA (25 ml), isprana zas. vod. rastvorom NaHCO3i zas. vod. rastvorom NaCl, osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana. Prečišćavanje fleš hromatografijom na koloni koristeći gradijent EA (0-100%) u heksanu dalo je 59-6 (0,17 g, 0,22 mmol) kao belu čvrstu supstancu. Jedinjenje 59-6 je rastvoreno u 80% vod. HCOOH (5 ml). Nakon 30 minuta na RT, rastvarač je uklonjen i dva puta uparen sa toluenom. Ostatak je rastvoren u metanolu (10 ml) i dodat je TEA (0,2 ml). Nakon 2 minuta na RT, rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Prečišćavanje fleš hromatografijom na koloni koristeći gradijent metanola (0-15%) u DCM-u dalo je jedinjenje 59 (90 mg).<1>H-NMR (CDCl3): 7.40 (d, 1H), 6.1 (s, 1H), 5.83 (d, 1H), 4.3 (t, 2H), 4.1-4.2 (m, 6H), 3.70-3.82 (m, 4H), 3.57-3.65 (m, 4H), 3.1 (t, 4H) 1.61 (s, 8H), 1.3 (s, 3H), 1.23 (s, 18H).<31>P-NMR (CDCl3): -1.55 ppm.
REFERENTNI PRIMER 51
2 2
JEDINJENJE 60
[0493]
[0494] Jedinjenje 60-1 (6,0 g, 31,6 mmol) pripremljeno je koristeći proceduru sličnu proceduri za pripremu 59-3 koristeći 4-hlorbutanol. Jedinjenje 60-1 je dobijeno kao čisto bezbojno ulje.<1>H-NMR (CDCl3): 3.67 (s, 2H), 2.86 (m, 2H), 1.65 (m, 4H), 1.25 (s, 9H).
[0495] Jedinjenje 60-2 (2,14 g, 4,0 mmol) pripremljeno je koristeći proceduru sličnu proceduri za pripremu 59-4. Jedinjenje 60-2 je dobijeno kao čisto bezbojno ulje.<1>H-NMR (CDCl3): 3.67 (m, 6H), 2.86 (t, 4H), 1.65 (m, 8H), 1.25 (s, 18H), 1.17 (t, 12H).<31>P-NMR (CDCl3): 143.7 ppm.
[0496] Jedinjenje 60-3 (0,23 g, 0,22 mmol) je pripremljeno koristeći proceduru sličnu proceduri za pripremu 59-6 koristeći 59-5 i 60-2. Jedinjenje 60-3 je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. Procedura sličnu proceduri za pripremu jedinjenja 59, 60-3 je korišćena za pripremu jedinjenja 60 (170 mg).<1>H-NMR (CDCl3): 7.40 (d, 1H), 6.1 (s, 1H), 5.83 (d, 1H), 4.3 (t, 2H), 4.1-4.2 (m, 6H), 2.8 (t, 4H), 1.78 (m, 4H), 1.69 (s, 8H), 1.3 (s, 3H), 1.23 (s, 18H).<31>P-NMR (CDCl3): -1.56 ppm.
REFERENTNI PRIMER 52
JEDINJENJE 58
[0497]
2
[0498] Jedinjenje 58-1 je pripremljeno prema proceduri koja je opisana u Lefebre et al. J. Med. Chem. (1995) 38:3941-3950, što opisuje pripremu 58-1.
[0499] Jedinjenje 58-2 (0,33 g, 0,5 mmol) je pripremljeno koristeći proceduru sličnu proceduri za pripremu 59-6 koristeći 59-5 i 58-1. Jedinjenje 58-2 je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. Procedura sličnu proceduri za pripremu jedinjenja 59, 58-2 je korišćena za pripremu jedinjenja 58 (130 mg).<1>H-NMR (CDCl3): 7.40 (d, 1H), 6.1 (s, 1H), 5.83 (d, 1H), 4.3 (t, 2H), 4.1-4.2 (m, 6H), 3.2 (t, 4H), 1.69 (s, 4H), 1.3 (s, 3H), 1.23 (s, 18H);<31>P-NMR (CDCl3): -2.4 ppm.
REFERENTNI PRIMER 53
JEDINJENJE 47
[0500]
2 4
[0501] Jedinjenje 47-1 (1,0 g, 3,53 mmol) upareno je sa anhidrovanim piridinom 3 puta radi uklanjanja H2O. U ledeno hladni rastvor 47-1 u anhidrovanom piridinu (9 ml) u kapima je dodat TsCl (808 mg, 4,24 mmol) u piridinu (3 ml) na 0°C, i smeša je mešana tokom 18 h na 0°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS, a zatim prekinuta pomoću H2O. Nakon koncentracije na niskom pritisku, ostatak je rastvoren u EA (50 ml). Rastvor je ispran zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i filtriran. Filtrat je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (1% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 47-2 (980 mg, 63%) kao bele čvrste supstance.
[0502] U rastvor 47-2 (980 mg, 2,24 mmol) u acetonu (10 ml) dodat je NaI (1,01 g, 6,73 mmol), i smeša je mešana uz refluks preko noći. Reakcija je praćena putem LCMS. Nakon završetka reakcije, smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EA (50 ml). Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli i osušen iznad anhidrovanog Na2SO4Rastvor je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (1% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 47-3 (700 mg, 79 %) kao čvrste supstance.
[0503] U rastvor 47-3 (700 mg, 1,78 mmol) u suvom THF-u (9 ml) dodat je DBU (817 mg, 5,34 mmol), i smeša je zagrevana na 60°C. Smeša je mešana preko noći i praćena putem LCMS.
2
Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 50 ml). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog Na2SO4i filtrirana. Filtrat je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (1% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 47-4 (250 mg, 53%) kao bele čvrste supstance.
[0504] U ledeno hladni rastvor 47-4 (250 mg, 0,94 mmol) u suvom MeCN (5ml) dodat je NEt3·3HF (151 mg, 0,94 mmol) i NIS (255 mg, 1,13 mmol). Smeša je mešana na RT tokom 3 h, i proverena pomoću LCMS. Reakcija je ugašena zas. rastvorom Na2S2O3i zas. rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 50 ml). Organski sloj je odvojen, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (2% aceton u DCM-u) radi dobijanja 47-5 (170 mg, 44%).
[0505] U rastvor 47-5 (270 mg, 0,65 mmol) u suvom DCM-u (4 ml) dodat je DMAP (158,6 mg, 1,3 mmol) i BzCl (137 mg, 0,98 mmol). Smeša je mešana tokom 4-5 h na RT i proverena pomoću LCMS. Smeša je razblažena pomoću CH2Cl2i isprana zas. rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 47-6 (290 mg, 86%) kao čvrste supstance.
[0506] U rastvor 47-6 (900 mg, 1,74 mmol) u suvom DMF-u (45 ml) dodat je NaOBz (2,5 g, 17,4 mmol) i 15-kruna-5 (4,5 g, 20,9 mmol). Smeša je mešana tokom 48 h na 90-100°C. Smeša je razblažena pomoću EA (100 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 47-7 (500 mg, 56%) kao čvrste supstance.
[0507] U rastvor 47-7 (500 mg, 0,98 mmol) u anhidrovanom CH3CN (5 ml) dodat je TPSCl (741 mg, 2,45 mmol), DMAP (299,6 mg, 2,45 mmol) i NEt3(248 mg, 2,45 mmol) na RT, i smeša je mešana preko noći. Smeša je zatim tretirana sa NH3u THF-u (5 ml) i zatim mešana još 30 minuta. Smeša je razblažena pomoću EA (100 ml). Rastvor je ispran sa 0,5% rastvora AcOH. Organski rastvarač je osušen iznad anhidrovanog MgSO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (2% acetona u DCM-u) radi dobijanja 47-8 (257 mg, 51,6%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 509 [M+H]<+>.
2
[0508] Jedinjenje 47-8 (80 mg, 0,16 mmol) rastvoreno je u n-butilaminu (3 ml). Smeša je držana preko noći na RT i uparena. Ostatak je prekristalisan iz metanola radi dobijanja jedinjenja 47 (30 mg). Matična tečnost je prečišćena putem RP HPLC na koloni Synergy Hydro-RP od 4 mikrona (Phenominex). Za eluciju je korišćen linearni gradijent metanola od 0 do 30% u 50 mM trietilamonijum acetatnom puferu (pH 7,5). Odgovarajuće frakcije su kombinovane, koncentrovane i liofilizovane 3 puta radi uklanjanja viška pufera radi dobijanja dodatnog jedinjenja 47 (13 mg). Jedinjenje 47 (ukupan prinos 43 mg, 73%). MS: m/z 299.7 [M-1]-.
PRIMER 54
JEDINJENJE 83
[0509]
[0510] U rastvor POCl3(2,0 g, 13 mmol) u anhidrovanom DCM-u (10 ml) uz mešanje je u kapima dodat 1-naftol (1,88 g, 13 mmol) na -70°C i TEA (1,31 g, 13 mmol) u DCM-u (3 ml) na -70°C. Smeša je postepeno zagrejana na RT i mešana tokom 1 h. Dobijen je sirovi 83-1.
[0511] U rastvor (S)-izopropil 2-aminopropanoat hidrohlorida (2,17 g, 13 mmol) u DCM-u (10 ml) uz mešanje je dodat sirovi 83-1 na -70°C. TEA (2,63 g, 26 mmol) uz mešanje je u kapima dodat u rastvor na -70°C. Smeša je postepeno zagrevana na RT i mešana tokom 2 h. Reakcija je praćena pomoću LCMS i prekinuta pomoću n-propilamina. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (PE:MTBE = 5:1∼1:1) radi dobijanja čistog 83-2 (1,6 g, 35%).
2
[0512] U rastvor 83-(A) (300 mg, 0,337 mmol) i NMI (276 mg, 3,37 mmol) u anhidrovanom CH3CN (4 ml) dodat je 83-2 (240 mg, 0,674 mol, u DCM-u (5 ml)) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 10 h. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću CH2Cl2(3 x 20 ml). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog MgSO4 i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen silika gelom (PE:EA = 5:1∼2:1) radi dobijanja 83-3 (380 mg, 93%).
[0513] Jedinjenje 83-3 (380 mg, 0,314 mmol) rastvoreno je u CH3COOH (80%, 8 ml) i mešano na 40-50°C tokom 2,5 h. Reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom (PE:EA = 1:1∼EA) radi dobijanja sirovog jedinjenja 83. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću prep-HPLC (neutralni sistem, NH4HCO3) radi dobijanja čistog jedinjenja 83 (70 mg, 80%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 665.1 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 55
JEDINJENJE 79
[0514]
[0515] Rastvor 79-1 (16,70 g, 0,363 mol) i TEA (36,66 g, 0,363 mol) u CH2Cl2(150 ml) u kapima je uz mešanje dodat u rastvor POCl3(55,65 g, 0,363 mol) u DCM-u (100 ml) tokom 25 minuta na -78°C. Nakon što je smeša mešana tokom 2 h na RT, trietilamin hidrohlorid je filtriran i ispran pomoću CH2Cl2(100 ml). Filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom, i ostatak je destilovan pod visokim vakuumom (∼10 mm Hg) sa frakcionim kolektorom. Proizvod je sakupljen između 45°C (temperatura destilacione glave) kao bezbojna tečnost (30,5 g, prinos 50%).<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.44 (dq, J=10.85, 7.17 Hz, 2 H), 1.44 - 1.57 (m, 3 H);<31>P-NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 6.75 (br. s., 1 P).
[0516] U suspenziju 83-A (93 mg, 0,15 mmol) u CH2Cl2(1 ml) uz mešanje je dodat TEA (61 mg, 0,15 mmol) na RT. Smeša je ohlađena na -20°C, a zatim je tretirana rastvorom 79-2 (35
2
mg, 0,21 mmol) ukapavanjem tokom 10 minuta. Smeša je mešana na ovoj temperaturi tokom 15 minuta, a zatim tretirana sa NMI (27 mg, 0,33 mmol). Smeša je mešana na -20°C, a zatim polako zagrevana na RT. Smeša je mešana preko noći. Smeša je suspendovana u EA (15 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml) i osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Rastvor je koncentrovan pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom (DCM: MeOH=100:1) radi dobijanja 79-3 (60 mg, prinos: 56%) kao čvrste supstance.
[0517] Rastvor 79-3 (60 mg, 0,085 mmol) u 80% vod. AcOH (2 ml) mešan je na RT tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela uz eluiranje sa DCM/MeOH = 50/1 i pomoću prep-HPLC radi dobijanja 79 (23 mg, 62%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 436.3 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 56
JEDINJENJE 80
[0518]
[0519] Jedinjenje 80-2 je pripremljeno koristeći sličnu proceduru kao za pripremu 79-2 koristeći rastvor izo-butanola (23,9 g, 322,98 mmol) i POCl3(49,5 g, 322,98 mmol). Jedinjenje 80-2 (26 g, prinos 42%) dobijeno je kao bezbojna tečnost.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.10 (dd, J=9.04, 6.39 Hz, 2 H), 2.09 (dq, J=13.24, 6.67, 6.67, 6.67, 6.67 Hz, 1 H), 1.01 (d, J=6.62 Hz, 6 H);<31>P-NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 7.06 (br. s., 1 P).
[0520] U suspenziju 83-A (310 mg, 0,5 mmol) u CH2Cl2(3 ml) uz mešanje je dodat TEA (202 mg, 2 mmol) na RT. Smeša je ohlađena na -20°C, a zatim je tretirana sa 80-2 (134 mg, 0,7 mmol). Smeša je mešana na ovoj temperaturi tokom 15 minuta i zatim tretirana sa NMI (90 mg, 1,1 mmol). Smeša je mešana na -20°C tokom 1 h, a zatim je polako zagrevana na RT preko noći. Smeša je suspendovana u EA (15 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml)
2
i osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Organska faza je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen na koloni silika gela (DCM: MeOH=100:1) radi dobijanja 80-3 (310 mg, prinos: 84%) kao čvrste supstance.
[0521] Rastvor 80-3 (310 mg, 0,43 mmol) u 80% vod. AcOH (4 ml) mešan je na RT tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela uz eluiranje pomoću DCM/MeOH = 50/1 i prep-HPLC radi dobijanja jedinjenja 80 (79 mg, 50%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 464.0 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 57
JEDINJENJE 81
[0522]
[0523] Jedinjenje 81-2 je pripremljeno koristeći sličnu proceduru kao za pripremu 79-2 koristeći rastvor izopropil alkohola (21 g, 350 mmol) i POCl3(53,6 g, 350 mmol). Jedinjenje 81-2 (40,5 g, prinos 65%) dobijeno je kao bezbojna tečnost.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.94 - 5.10 (m, 1 H), 1.48 (d, J=6.17 Hz, 6 H);<31>P- NMR (162 MHz, CDCl3) δ = 5.58 (br. s., 1 P).
[0524] Jedinjenje 81-3 je pripremljeno koristeći sličnu proceduru kao za pripremu 80-3 koristeći 81-2 (124 mg, 0,7 mmol) i 83-A (310 mg, 0,5 mmol). Jedinjenje 81-3 (300 mg, 83%) je dobijeno kao čvrsta supstanca.
[0525] Jedinjenje 81 je pripremljeno koristeći sličnu proceduru kao za pripremu 80 koristeći 81-3 (300 mg, 0,41 mmol) u 80% vod. AcOH (4 ml). Jedinjenje 81 (80 mg, 43%) dobijeno je kao bela čvrsta supstanca. ESI-MS: m/z 450.0 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 58
JEDINJENJE 82
[0526]
[0527] U ledeno hladni rastvor 82-1 (50 g, 204,9 mmol) u suvom Py (400 ml) u kapima je dodat TIPDSCl (70,78 g, 225,4 mmol). Smeša je mešana na RT tokom 16 h, i zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći 20% EA u PE za stvaranje 82-2 (111,5 g, 100%) kao bele čvrste supstance.
[0528] U rastvor 82-2 (50 g, 103 mmol) u anhidrovanom CH3CN (400 ml) dodat je IBX (43 g, 153 mmol) na RT. Smeša je refluktovana preko noći i praćena pomoću TLC (PE:EA=1:1).
1
Talog je uklonjen filtracijom, i filtrat je koncentrovan radi dobijanja sirovog 82-3 (50 g, 99%) kao bele čvrste supstance.
[0529] U rastvor trimetilsililacetilena (20 g, 200 mmol) u anhidrovanom THF-u (400 ml) u kapima je dodat n-BuLi (80 ml, 200 ml) na -78°C. Smeša je mešana na -78°C tokom 30 minuta, a zatim zagrejana na RT tokom 10 minuta. Jedinjenje 82-3 (30 g, 60 mmol) u THF-u (100 ml) ukapavanjem je dodato u smešu na -78°C. Smeša je mešana na -78°C tokom 1 h, i zatim polako zagrejana na RT. Smeša je mešana tokom 20 minuta, i reakcija je zatim prekinuta zas. rastvorom NH4Cl na -78°C. Smeša je razblažena pomoću EA. Organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (15% EA u PE) radi dobijanja 82-4 kao bele čvrste supstance (14 g, 50%).
[0530] Jedinjenje 82-4 (14 g, 24 mmol) rastvoreno je u anhidrovanom toluenu (100 ml) u atmosferi N2i ohlađeno na -78°C. DAST (19 g, 120 mmol) je dodat ukapavanjem na -78°C i mešanje je nastavljeno tokom 1,5 h. Smeša je razblažena pomoću EA i izlivena u zas. rastvor NaHCO3. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (20% EA u PE) radi dobijanja 82-5 kao bele čvrste supstance (12 g, 81%).
[0531] Smeša 82-5 (12 g, 20 mmol) i NH4F (11 g, 30 mmol) u MeOH (150 ml) refluktovana je tokom 2 h. Nakon hlađenja na RT, smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 82-6 (3,1 g, 58%) kao bele čvrste supstance.
[0532] U rastvor 82-6 (3,1 g, 11,6 mmol) u suvom Py (50 ml) dodat je imidazol (3,1 g, 46,4 mmol) i TBSC1 (5,2 g, 34,8 mmol). Smeša je mešana na 50-60°C tokom 3 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u EA (100 ml). Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (20% EA u PE) radi dobijanja 82-7 kao bele čvrste supstance (5 g, 86%).
2
[0533] U rastvor 82-7 (4,5 g, 9 mmol) u 1,4-dioksanu (45 ml) dodat je CuBr (643 mg, 4,5 mmol), dicikloheksilamin (3,3 g, 18 mmol) i paraformaldehid (675 mg, 22,5 mmol). Smeša je refluktovana tokom 24 h, a zatim je ohlađena na RT. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NH4Cl. Smeša je ekstrahovana pomoću EA (3 x 100 ml). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (15% EA u PE) radi dobijanja 82-8 kao bele čvrste supstance (2,0 g, 43%).
[0534] Smeša 82-8 (2 g, 4 mmol) i NH4F (2,2 g, 60 mmol) u MeOH (20 ml) refluktovana je preko noći. Nakon hlađenja na RT, smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 82-9 (946 mg, 83%) kao bele čvrste supstance.
[0535] U suspenziju 82-9 (946 mg, 3,33 mmol), PPh3(1,3 g, 5 mmol), imidazola (453 mg, 6,66 mmol) i piridina (3 ml) u anhidrovanom THF-u (12 ml) uz mešanje je dodat rastvor I2(1 g, 4,33 mmol) u THF-u (4 ml) ukapavanjem na 0°C. Smeša je zagrejana na RT i mešana tokom 16 h. Reakcija je prekinuta zas. vod. rastvorom Na2S2O3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 60 ml). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (2% MeOH u DCM-u do 5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 82-10 (2,1 g, sirovi) kao bele čvrste supstance.
[0536] U rastvor 82-10 (2,1 g, 5,3 mmol) u THF-u (15 ml) dodat je DBU (15 g, 100 mmol) i smeša je mešana tokom 30 minuta. Smeša je razblažena pomoću EA i neutralisana sirćetnom kiselinom. Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (1,5% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 82-11 kao bele čvrste supstance (800 mg, 90%).
[0537] U ledeno hladni rastvor 82-11 (800 mg, 3 mmol) u suvom MeCN (1,5 ml) dodat je NEt3• 3HF (484 mg, 3 mmol) i NIS (1,68 g, 7,5 mmol). Smeša je mešana na RT tokom 30 minuta, i reakcija je praćena pomoću LCMS. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom Na2S2O3i zas. rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 50 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (25% EA u PE) radi dobijanja 82-12 (850 mg, 68%) kao bele čvrste supstance.
[0538] U rastvor 82-12 (850 mg, 2 mmol) u suvom DCM-u (10 ml) dodat je DMAP (488 mg, 4 mmol) i BzCl (422 mg, 3 mol). Smeša je mešana tokom 4-5 h na RT, i reakcija je praćena pomoću LCMS. Smeša je razblažena dodatkom CH2Cl2(40 ml) i isprana zas. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i filtriran. Filtrat je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (20% EA u PE) radi dobijanja 82-13 (900 mg, 87%) kao bele pene.
[0539] Tetrabutilamonijum hidroksid (21 ml kao 54-56% vodeni rastvor, ~ 42 mmol, 24 ekv.) podešen je pomoću TFA do pH ~ 4 (~ 3,5 ml), i rastvor je tretiran rastvorom 82-13 (900 mg, 1,7 mmol) u DCM-u (21 ml). m-Hlorperbenzojeva kiselina (2,1 g, 60-70%, ~ 8,75 mmol, ~ 5 ekv.) u porcijama je dodata uz žustro mešanje, i smeša je mešana preko noći. Smeša je razblažena dodatkom CH2Cl2(30 ml) i isprana zasićenim rastvorom NaHCO3. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog magnezijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni u (40-70% EA u PE) radi dobijanja 82-14 kao ulja. Ostatak je prečišćen pomoću TLC (50% EA u PE) radi dobijanja čistog 82-14 (350 mg 50%).
[0540] Jedinjenje 82-14 (350 mg, 0,86 mg) tretirano je sa 7N NH3u MeOH (15 ml). Smeša je mešana tokom 2-3 h i praćena pomoću TLC. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (5% izopropanol u DCM-u) radi dobijanja 82-15 (250 mg, 96%) kao bele čvrste supstance.<1>H NMR (CD3OD, 400 M Hz) δ = 7.75 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.60-6.35 (m, 1H), 5.72 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.37-5.25 (m, 1H), 5.17-5.06 (m, 1H), 5.04-4.94 (m, 1H), 4.59-4.29 (m, 1H), 3.87-3.70 (m, 2H) .
[0541] U rastvor 82-16 (3,79 g, 18 mmol) i 82-17 (3 g, 18 mmol) u anhidrovanom DCM-u (60 ml) uz mešanje je u kapima dodat rastvor TEA (4 g, 39 mmol) u DCM-u (40 ml) na -78°C, i smeša je mešana tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u metil butil etru. Talog je uklonjen filtracijom, i filtrat je koncentrovan radi dobijanja sirovog proizvoda. Ostatak je prečišćen hromatografijom na suvoj koloni (anhidrovani DCM) radi dobijanja čistog 82-18 kao bezbojnog ulja (3 g, 54%).
[0542] Jedinjenje 82-15 (200 mg, 0,66 mmol) upareno je sa toluenom 3 puta radi uklanjanja H2O. Jedinjenje 82-15 je tretirano sa MeCN (1,5 ml) i NMI (541 mg, 6,6 mmol). Smeša je
4
mešana na RT, i zatim je dodat 82-18 (403 mg, 1,32 mmol) u MeCN (0,5 ml). Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% iPrOH u DCM-u) radi dobijanja sirovog proizvoda koji je prečišćen putem HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi dobijanja 82 (33 mg, 9%). ESI-LCMS: m/z 594 [M+Na]<+>.
PRIMER 59
JEDINJENJE 84
[0543]
[0544] U rastvor POCl3(2,0 g, 13 mmol) u anhidrovanom DCM-u (10 ml) uz mešanje je u kapima dodat 1-naftol (1,88 g, 13 mmol) na -70°C i TEA (1,31 g, 13 mmol) u DCM-u (3 ml) na -70°C. Smeša je postepeno zagrevana na RT, i mešana tokom 1 h. Dobijen je sirovi rastvor 84-1.
[0545] U rastvor (S)-izobutil 2-aminopropanoat hidrohlorida (2,35 g, 13 mmol) u DCM-u (20 ml) uz mešanje je dodat TEA (2,63 g, 26 mmol) i sirovi rastvor 84-1 na -70°C. Smeša je postepeno zagrevana na RT, i mešana tokom 2 h. Reakcija je praćena pomoću LCMS i prekinuta pomoću n-propilamina. Rastvarač je uparen pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom (PE:MTBE = 5:1~1:1) radi dobijanja čistog 84-2 (1,8 g, 37%).
[0546] U rastvor 83-A (300 mg, 0,337 mmol) i NMI (276 mg, 3,37 mmol) u anhidrovanom CH3CN (4 ml) dodat je 84-2 (249 mg, 0,674 mol, u DCM-u (5 ml)) na 0°C. Smeša je mešana na RT tokom 10 h. Reakcija je praćena pomoću LCMS, a zatim prekinuta sa H2O. Smeša je ekstrahovana pomoću CH2Cl2(3 x 20 ml). Organska faza je osušena iznad anhidrovanog MgSO4 i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći PE:EA = 5:1~2:1 kao eluent radi dobijanja 84-3 (360 mg, 87%).
[0547] Jedinjenje 84-3 (360 mg, 0,294 mmol) rastvoreno je u CH3COOH (80%, 8 ml) i mešano na 40-50°C tokom 2,5 h. Reakcija je praćena pomoću LCMS i zatim prekinuta pomoću MeOH. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom koristeći PE:EA = 1:1 kao eluent radi stvaranja sirovog jedinjenja 84. Proizvod je prečišćen pomoću prep-HPLC (neutralni sistem, NH4HCO3) radi dobijanja jedinjenja 84 (70 mg, 75%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 679.2 [M+H]<+>.
PRIMER 60
JEDINJENJE 85
[0548]
[0549] U rastvor POCl3(2,0 g, 13 mmol) u anhidrovanom DCM-u (10 ml) uz mešanje je dodat fenol (1,22 g, 13 mmol) na -70°C i TEA (1,31 g, 13 mmol) u DCM-u (3 ml) u kapima na -70°C. Smeša je postepeno zagrevana na RT i mešana tokom 1 h. Dobijen je sirovi rastvor 85-1.
[0550] Jedinjenje 85 je pripremljeno koristeći sličnu proceduru kao za pripremu jedinjenja 84 koristeći 85-2 (205 mg, 0,674 mol, u DCM-u (5 ml) dobijeno od (S)-izopropil 2-aminopropanoat hidrohlorida i 85-1) i 83-A (300 mg, 0,337 mmol). Jedinjenje 85 (50 mg, 74%) dobijeno je kao bela čvrsta supstanca. ESI-MS: m/z 615.2 [M+H]<+>.
PRIMER 61
JEDINJENJE 86
[0551]
[0552] Jedinjenje 86 je pripremljeno koristeći sličnu proceduru kao za pripremu jedinjenja 84 koristeći 86-2 (214 mg, 0,674 mol, u DCM-u (5 ml) dobijeno od (S)-izobutil 2-aminopropanoat hidrohlorida i 86-1) i 83-A (300 mg, 0,337 mmol). Jedinjenje 86 (70 mg, 87%) dobijeno je kao bela čvrsta supstanca. ESI-MS: m/z 629,2 [M+H]<+>.
PRIMER 62
JEDINJENJE 87
[0553]
[0554] Jedinjenje 87 je pripremljeno koristeći sličnu proceduru kao za pripremu jedinjenja 84 koristeći 87-2 (223 mg, 0,674 mol, DCM (5 ml) dobijeno od (S)-ciklopentil 2-aminopropanoat hidrohlorida i 87-1) i 83-A (300 mg, 0,337 mmol). Jedinjenje 87 (62 mg, 71%) dobijeno je kao bela čvrsta supstanca. ESI-MS: m/z 641.2 [M+H]<+>.
PRIMER 63
JEDINJENJE 88
[0555]
[0556] Jedinjenje 88 je pripremljeno koristeći sličnu proceduru kao za pripremu jedinjenja 84 koristeći 88-2 (223 mg, 0,674 mol, DCM (5 ml), dobijeno od (S)-3-pentil 2-aminopropanoat hidrohlorida i 88-1) i 83-A (300 mg, 0,337 mmol). Jedinjenje 88 (42 mg, 60%) dobijeno je kao bela čvrsta supstanca. ESI-MS: m/z 643,2 [M+H]<+>.
PRIMER 64
JEDINJENJE 89
[0557]
[0558] Mešani rastvor fosforil trihlorida (1,00 g, 6,58 mmol) i 5-hinolina (955 mg, 6,58 mmol) u anhidrovanom DCM-u (50 ml) tretiran je rastvorom TEA (665 mg, 6,58 mmol) u DCM-u (10 ml) na -78°C. Smeša je postepeno zagrevana na RT, i mešana tokom 2 h. Rastvor je ohlađen na -78°C i zatim tretiran sa (S)-neopentil 2-aminopropanoat hidrohloridom (1,28 g, 6,58 mmol). U kapima je dodat TEA (1,33 g, 13,16 mmol) na -78°C. Smeša je postepeno zagrevana na RT i mešana tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je rastvoren u metil butil etru. Talog je uklonjen filtracijom, i filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (čisti AcOEt) radi dobijanja 89-1 kao bezbojnog ulja (500 mg, 20%).
[0559] U rastvor 89-2 (300 mg, 0,337mmol) i NMI (276,6 mg, 3,37 mmol) u anhidrovanom CH3CN (0,9 mL) u kapima je dodat 89-1 (388 mg, 1,011 mmol) u CH3CN (0,3 ml) na 0°C. Smeša je mešana na RT preko noći. Reakcija je prekinuta vodom i ekstrahovana pomoću AcOEt. Organska faza je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (33% EA u PE) radi dobijanja 89-3 kao žutog praha (300 mg, 71,9%).
[0560] Jedinjenje 89-3 (300 mg, 0,243 mmol) rastvoreno je u 80% CH3COOH (3 ml), i smeša je mešana na 60°C tokom 2,5 h. Smeša je razdeljena između AcOEt i vode. Faza organskog sloja je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli, osušena iznad natrijum sulfata i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (50% EA u PE) radi dobijanja jedinjenja 89 kao žutog praha (81 mg, sirovi proizvod). Sirovi proizvod (81 mg) prečišćen je putem RP HPLC radi dobijanja jedinjenja 89 kao bele čvrste supstance. (28,7 mg, 17,1%). ESI-LCMS: m/z 694,1 [M+H]<+>.
PRIMER 65
JEDINJENJE 90
[0561]
[0562] Jedinjenje 90-1 je pripremljeno koristeći sličnu proceduru kao za pripremu jedinjenja 89-1 koristeći fosforil trihlorid (2,00 g, 13,16 mmol), 1-naftol (1,882 g, 13,16 mmol) i (S)-neopentil 2-aminopropanoat hidrohlorid (2,549 g, 13,16 mmol). Jedinjenje 90-1 (600 mg, 12%) dobijeno je kao bezbojno ulje.
[0563] Rastvor 90-2 (230 mg 0,26 mmol) i NMI (212 mg 2,60 mmol) u anhidrovanom CH3CN (1 ml) tretiran je rastvorom 90-1 (300 mg 0,78 mmol) u anhidrovanom CH3CN (0,5 ml) na RT. Smeša je mešana na RT preko noći. Reakcija je prekinuta vodom i ekstrahovana pomoću EA (3 x 20 ml). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (CH3OH u CH2Cl2od 1% do 5%) radi dobijanja 90-3 (300 mg, 93%) kao bele čvrste supstance.
[0564] Jedinjenje 90-3 (300 mg, 0,24 mmol) rastvoreno je u CH3COOH (80%, 5 ml). Smeša je mešana na 60°C tokom 2,5 h. Smeša je razblažena pomoću EA (30 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli. Organska faza je osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (CH3OH u CH2Cl2od 1% do 5%) radi dobijanja sirovog jedinjenja 90 (105 mg). Sirovi proizvod je prečišćen putem HPLC (0,1% NH4HCO3u vodi i CH3CN) radi dobijanja jedinjenja 90 (45 mg, 26%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 693.2 [M+H]<+>.
PRIMER 66
JEDINJENJE 91
[0565]
1
[0566] Rastvor 91-1 (2,00 g, 13,99 mmol) i 91-2 (2,00 g, 13,99 mmol) u anhidrovanom DCM-u (8 ml) uz mešanje je tretiran sa TEA (3,11 g, 30,8 mmol) u DCM-u (20 ml) u kapima na -78°C. Smeša je mešana tokom 2 h na -78°C, a zatim postepeno zagrejana na RT. Organski rastvarač je uklonjen pod niskim pritiskom, a ostatak je rastvoren u metil butil etru. Talog je uklonjen filtracijom, i filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (suvi DCM) radi dobijanja 91-3 kao bezbojnog ulja (1 g, 20,96%).
[0567] Jedinjenje 91-4 (260 mg, 0,29 mmol) upareno je sa toluenom 3 puta radi uklanjanja H2O. Osušeni 91-4 je tretiran sa MeCN (0,8 ml) i NMI (240 mg, 2.9 mmol), a zatim mešan 10 minuta. Smeša je tretirana rastvorom 91-3 (291 mg, 0,87 mmol) u MeCN (0,4 ml), a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (75% EA u PE) radi dobijanja 91-5 (300 mg, 86%) kao bele čvrste supstance.
[0568] Jedinjenje 91-5 (300 mg, 0,25 mmol) tretirano je sa CH3COOH (5 ml, 80%) i mešano na 50°C tokom 3 h. Smeša je razblažena pomoću EA. Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (67% EA u PE) radi dobijanja sirovog jedinjenja 91, koje je prečišćeno putem HPLC. Proizvod je osušen liofilizacijom radi dobijanja jedinjenja 91 (30 mg, 18,5%) kao bele čvrste supstance. ESI-LCMS: m/z 643 [M+H]<+>.
REFERENTNI PRIMER 67
JEDINJENJE 77
[0569]
11
[0570] U rastvor 1,1-dimetoksiciklopentana (19,3 g, 148,52 mmol) i 77-1 (10,0 g, 37,13 mmol) u DCE (100 ml) dodat je TsOH·H2O (0,7 g, 3,71 mmol). Smeša je mešana na 50°C tokom 12 h. Smeša je neutralisana sa Et3N, i koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (1-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 77-2 (8,7 g, 70.1%) kao bele čvrste supstance.
[0571] Jedinjenje 77-2 (20,0 g, 0,06 mol) upareno je sa anhidrovanim piridinom 3 puta radi uklanjanja H2O. U ledeno ohlađeni rastvor 77-2 u anhidrovanom piridinu (100 ml) dodat je TsCl (22,8 g, 0,12 mol) na 0°C, i smeša je mešana preko noći. Reakcija je praćena pomoću LCMS i TLC. Reakcija je prekinuta sa H2O, i smeša je ekstrahovana pomoću EA (3 x 200 ml). Rastvor je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (DCM: MeOH=100:1 do 15:1) radi dobijanja 77-3 (20,0 g, 69,0%) kao bele čvrste supstance.
[0572] U rastvor 77-3 (20,0 g, 0,04 mol) u acetonu (200 ml) dodat je NaI (31,0 g, 0,2 mol) i smeša je zagrevana uz refluks preko noći. Reakcija je praćena putem LCMS. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom Na2S2O3. Rastvor je ekstrahovan pomoću EA (3 x 200 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i uparen pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen
12
hromatografijom na koloni silika gela (DCM: MeOH=100:1 do 15:1) radi dobijanja 77-4 (15,0 g, 83,3%) kao bele čvrste supstance.
[0573] Jedinjenje 77-4 (13,4 g, 30,16 mmol) tretirano je sa HCOOH (80%) u H2O na RT. Rastvor je mešan na 60°C tokom 2 h. Smeša je koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (1%-10% MeOH u DCM-u) radi dobijanja 77-5 (9,1 g, 80,0%) kao bele čvrste supstance.
[0574] U rastvor 77-5 (5,0 g, 13,22 mmol) u anhidrovanom CH3CN/THF (50 ml, 1:1, V:V) dodat je DBU (6,0 g, 39,66 mmol) na RT. Rastvor je mešan na 50°C tokom 1,5 h. Reakcija je prekinuta pomoću HCOOH na 0°C, zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (50%-70% EA u PE) radi dobijanja 77-6 (3,3 g, 48,1%) kao bele čvrste supstance.
[0575] U ledeno hladni rastvor 77-6 (2,1 g, 8,39 mmol) u anhidrovanom MeCN (21 ml) dodat je NIS (2,4 g, 10,49 mmol) i TEA•31V (1,0 g, 6,29 mmol) u atmosferi N2. Smeša je mešana na RT tokom 1 h. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom NaHCO3i zas. rastvorom Na2SO3i ekstrahovana pomoću EA (3 x 100 ml). Organska faza je osušena iznad Na2SO4i uparena do suva pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (30%-50% EA u PE) radi dobijanja 77-7 (1,3 g, 39,3%) kao svetložute čvrste supstance.
[0576] U rastvor 77-7 (3,2 g, 8,08 mmol) u anhidrovanom DCM-u (32 ml) uz mešane je dodat DMAP (2,5 g, 20,20 mmol) i Et3N (2,5 g, 24,24 mmol) na RT. Smeša je tretirana sa BzCl (3,7 g, 26,66 mmol) na 0°C i zatim mešana na RT preko noći. Reakcija je prekinuta vodom i ekstrahovana pomoću EA (3 x 60 ml). Organska faza je koncentrovana pod niskim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (20%-30% EA u PE) radi dobijanja 77-8 (1,8 g, 31,6%) kao bele čvrste supstance.
[0577] Bu4NOH (8,0 g, 13,74 ml, 55% u H2O) podešen je na pH=3-4 pomoću TFA, a zatim ohlađen na RT. U rastvor 77-8 (600 mg, 0,85 mmol) u DCM-u (10 ml) dodat je rastvor Bu4NOH i m-CPBA (917 mg, 4,25 mmol, 80%) na RT. Smeša je mešana na 25°C tokom 48 h, a zatim isprana zas. rastvorom NaHCO3. Organski sloj je direktno propušten kroz baznu kolonu Al2O3, i rastvarač je koncentrovan pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (20%-30% EA u PE) radi dobijanja 77-9 (123 mg, 24,3%) kao bele čvrste supstance.
1
[0578] U rastvor 77-9 (300 mg, 0,50 mmol) u EA/heksanu (20 ml, 1:1, V:V) dodat je Lindlarov katalizator (200 mg) u atmosferi N2. Smeša je mešana u atmosferi H2(40 psi) na 2°C tokom 1,5 h. Suspenzija je filtrirana, i filtrat je tretiran Lindlarovim katalizatorom (200 mg) u atmosferi N2, i mešana je u atmosferi H2(40 psi) na 25°C tokom 1,5 h. Smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod niskim pritiskom radi dobijanja sirovog 77-10 (287 mg) kao bele čvrste supstance.
[0579] Jedinjenje 77-10 (287 mg, 0,48 mmol) rastvoreno je u NH3/MeOH (30 ml, 7 M). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 h u atmosferi N2a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem prep-HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi dobijanja 77-11 (50 mg, 34,7% u dva koraka) kao bele čvrste supstance.<1>H-NMR (CD3OD, 400 MHz) δ = 7.86 (d, J = 8.0 Hz 1H), 6.26 (s, 1H), 5.62-5.86 (m, 1H), 5.49 (d, J = 17.1 Hz, 1 H), 5.30 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 4.41 (d, J= 19.3 Hz, 1 H), 3.71-3.86 (m, 1H).
[0580] Jedinjenje 77-11 (113 mg, 0,39 mmol) upareno je sa toluenom 3 puta radi uklanjanja H2O. U rastvor 77-11 (113 mg, 0,39 mmol) u smeši MeCN (0,5 ml) i NMI (320 mg, 3,90 mmol) uz mešanje je dodat rastvor 73-C (256 mg, 0,66 mmol) u MeCN (0,5 ml) na 0°C. Smeša je mešana na RT preko noći, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% MeOH u DCM) radi dobijanja sirovog jedinjenja 77, koje je prečišćeno pomoću prep-HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi dobijanja jedinjenja 77 (45 mg, 20,1%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 538.2 [M-F]<+>ESI-MS: m/z 580.2 [M+Na]<+>.
REFERENTNI PRIMER 68
JEDINJENJE 78
[0581]
14
[0582] U rastvor 77-9 (300 mg, 0,50 mmol) u MeOH (30 ml) dodat je vlažni Pd/C (300 mg, 10%) u atmosferi N2. Smeša je mešana u atmosferi H2(1 atm) na 25°C tokom 1,5 h. Suspenzija je filtrirana, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom radi dobijanja sirovog 78-1 (307 mg) kao bele čvrste supstance.
[0583] Jedinjenje 78-1 (307 mg, 0,48 mmol) rastvoreno je u NH3/MeOH (30 ml, 7 M). Smeša je mešana na RT tokom 24 h u atmosferi N2zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen putem prep-HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi dobijanja 78-2 (30 mg, 21% u dva koraka) kao bele čvrste supstance.
[0584] Jedinjenje 78-2 (91 mg, 0,31 mmol) upareno je sa toluenom 3 puta radi uklanjanja H2O. U rastvor 78-2 (91 mg, 0,31 mmol) u smeši MeCN (0,5 ml) i NMI (254 mg, 3,90 mmol) uz mešanje je dodat rastvor 73-C (203 mg, 0,66 mmol) u MeCN (0,5 ml) na 0<0>C. Smeša je mešana na RT preko noći, a zatim koncentrovana pod niskim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (5% MeOH u DCM-u) do sirovog jedinjenja 78, koje je prečišćen pomoću prep-HPLC (0,1% HCOOH u vodi i MeCN) radi dobijanja jedinjenja 78 (30 mg, 17%) kao bele čvrste supstance. ESI-MS: m/z 540.1 [M-F]<+>.
1
REFERENTNI PRIMER 69
DODATNA JEDINJENJA FORMULE (I)
[0585] Prethodne sinteze su primer, i mogu se koristiti kao polazna tačka za pripremu velikog broja dodatnih jedinjenja. Primeri za jedinjenja formule (I) koja mogu da se pripreme na različite načine, uključujući sintetičke šeme koje su ovde prikazane i opisane, dati su u nastavku. Stručnjaci će umeti da prepoznaju modifikacije otkrivenih sinteza, i da smisle postupke na osnovu otkrića u ovom tekstu; sve takve modifikacije i alternativni postupci su u opsegu patentnih zahteva.
PRIMER 70
Test replikona HCV
Ćelije
[0586] Huh-7 ćelije koje sadrže samoreplikujući, subgenomski HCV replikon sa stabilnim reporterom luciferaze (LUC) uzgajane su u Dulbekovom modifikovanom Iglovom medijumu (DMEM) koji sadrži 2 mM L-glutamin sa dodatkom 10% toplotno inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma (FBS), 1% penicilin-streptomicina, 1% neesencijalnih aminokiselina i 0.5 mg/ml G418.
Određivanje anti-HCV aktivnosti
[0587] Određivanje 50% inhibitorske koncentracije (EC50) jedinjenja u ćelijama HCV replikona obavljena su putem sledeće procedure. Prvog dana, 5000 ćelija HCV replikona je zasejano po bunarčiću u ploči sa 96 bunarčića. Sledećeg dana, testirana jedinjenja su solubilizovana u 100% DMSO do 100x željene konačne testirane koncentracije. Svako jedinjenje je zatim serijski razblaženo (1:3) do 9 različitih koncentracija. Jedinjenja u 100% DMSO su redukovana do 10% DMSO razblaženjem 1:10 u medijumu za uzgajanje ćelija. Jedinjenja su razblažena do 10% DMSO medijumom za uzgajanje ćelija koji je korišćen za
1
doziranje ćelija HCV replikona u format sa 96 bunarčića. Konačna koncentracija DMSO je bila 1%. Ćelije HCV replikona su inkubirane na 37°C tokom 72 h. Nakon 72 h, ćelije su obrađene dok su ćelije još subkonfluentne. Jedinjenja koja smanjuju signal LUC su utvrđena pomoću Bright-Glo testa luciferaze (Promega, Madison, WI). % inhibicije je određen za svaku koncentraciju jedinjenja u odnosu na kontrolne ćelije (netretirani HCV replikon) radi izračunavanja EC50.
[0588] Jedinjenja formule (I) su aktivna na testu replikona. Antivirusna aktivnost primera jedinjenja je prikazana u Tabeli 2, gde „A“ označava EC50< 1 µM, „B“ označava EC50≥ 1 µM i < 10 µM, i „C“ označava EC50≥ 10 µM i < 100 µM.
Tabela 2* ;;; ;;;; 1 ;Jedinjenje br. EC50 ; ;;; 1 ;Jedinjenje br. EC50 ;;; ;;; PRIMER 71 ;;Analiza inhibicije NS5B ;[0589] Aktivnost enzima NS5B570-Con1 (Delta-21) izmerena je kao inkorporacija tritiranog NMP u RNK proizvode nerastvorne u kiselinama. Kao predložak je korišćena komplementarna IRES (cIRES) sekvenca RNK kojoj odgovara 377 nukleotida od 3'-kraja HCV (-) lanca RNK ;;;1 ;Con-1 soja, sa baznim sadržajem od 21% Ade, 23% Ura, 28% Cyt i 28% Gua. cIRES RNK je transkribovana in vitro koristeći komplet za transkripciju T7 (Ambion, Inc.) i prečišćena koristeći komplet Qiagen RNeasy maxi. Reakcije HCV polimeraze su sadržale 50 nM NS5B570-Con1, 50 nM cIRES RNA, oko 0,5 µCi tritiranog NTP, 1 µM konkurentskog hladnog NTP, 20 mM NaCl, 40 mM Tris-HCl (pH 8,0), 4 mM ditiotreitol i 4 mM MgCl2. Standardne reakcije su inkubirane tokom 2 h na 37°C u prisustvu rastućih koncentracija inhibitora. Na kraju reakcije, RNK je taložena sa 10% TCA, i proizvodi RNK nerastvorni u kiselinama su filtrirani na ploči sa 96 bunarčića sa molekulskim sitima. Nakon ispiranja ploče, dodata je scintilaciona tečnost i radio obeleženi proizvodi RNK su detektovani u skladu sa standardnim procedurama pomoću scintilacionog brojača Trilux Topcount. Koncentracija jedinjenja pri kojoj je brzina enzimske katalize redukovana za 50% (IC50) izračunata je unošenjem podataka u nelinearnu regresiju (sigmoidnu). Vrednosti IC50su dobijene od srednje vrednosti nekoliko nezavisnih eksperimenata i prikazane su u Tabeli 3. Jedinjenja formule (I) su pokazala aktivnost u ovom testu. Vrednost „A“ u tabeli ispod označava IC50od < 1 µM, vrednost „B“ označava IC50≥ 1 µM i < 10 µM, a vrednost „C“ označava vrednost IC50od ≥ 10 µM i < 100 µM. ;;Tabela 3*
2
Jedinjenje br. IC50
Pri čemu su jedinjenja 6, 12, 26, 38, 46, 50, 63, 64, 69 i 76 referentna jedinjenja
PRIMER 72
Procena inhibicije funkcije mitohondrija
[0590] Veruje se da disfunkcija mitohondrija povezana sa lekom ima ulogu u etiologiji različitih neželjenih simptoma koji se javljaju kod pacijenata lečenih antivirusnim nukleozidima/nukleotidima. Stoga je korisno ispitivanje jedinjenja na njihov potencijal da inhibiraju funkciju mitohondrija. Da bi se procenio potencijal analoga nukleotida/nukleozida da ometaju normalne funkcije mitohondrija i ispolje mitohondrijsku toksičnost, izmereno je sledeće: (1) sposobnost nukleotida da se in vitro inkorporišu od strane RNK polimeraze ljudske mitohondrije i (2) ćelijska inhibicija sinteze proteina kodiranog mitohondrijskom DNK (mtDNK), citohrom c oksidaze (COX-I), u odnosu na sukcinat dehidrogenaza podjednicu A (SDH-A) proteina mitohondrija kodiranu mitohondrijskom DNK (mtDNK) u HepG2 ćelijama. Kontrolna jedinjenja i jedinjenja formule (I) su ispitana u ovim testovima.
Biohemijski test
[0591] Arnold i sar. "Sensitivity of Mitochondrial Transcription and Resistance of RNA Polymerase II Dependent Nuclear Transcription to Antiviral Ribonucleosides" PLoS Pathog (2012) 8(11): e1003030. doi: 10.1371/journal.ppat.1003030.
Procena inkorporacije nukleotida od strane RNK polimeraze ljudske mitohondrije (HMRP)
DdRp test sa RNK polimerazom ljudske mitohondrije
21
[0592] DdRp test sa RNK polimerazom ljudske mitohondrije je obavljen u uslovima jednog obrta kada je koncentracija enzima veća od prajmera/šablona.<33>P-RNK/DNK prajmer/šablon je korišćen pri koncentraciji od 100 nM, zajedno sa 320 nM enzimom. Standardne reakcije u 10 µl su obavljene na 30°C tokom 1 minuta sa 100 µM svakog nukleotidnog 5'-trifosfata (NTP), 10 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 40 mM Tris, pH 7,5 i 1 mM DTT. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 20 µl boje za nanošenje formamida koja sadrži 50 mM EDTA. RNK proizvodi su razdvojeni elektroforezom na 22,5% TBE urea poliakrilamidnih gelova za sekvenciranje koji su skenirani pomoću TYPHOON PhosphorImager.
Rezultati
[0593] Kao što je prikazano na Slikama 10 i 11, pokazalo se da su odgovarajući prirodni nukleotidi dobri supstrati za inkorporaciju pomoću HMRP u svaki šablon. Šablon na Slici 10 je konstruisan tako da meri inkorporaciju analoga UTP. Prajmer/šablon: (SEQ ID NO: 1) UUUUGCCGCGCC i (SEQ ID NO: 2) GGGAATGCTAGGCGCGGC. U kontrolnim trakama sa vodom, u koje nisu dodati nukleotidi, nije uočena inkorporacija, na šta ukazuje nedostatak trake proizvoda. Kao što je prikazano na Slici 10, UTP i 3'-dezoksi-UTP bili su efikasni supstrati za inkorporaciju, na šta ukazuje istaknuta traka proizvoda. Potencijal za pogrešnu inkorporaciju je procenjen koristeći kontrolni nukleotid CTP. Kao što je prikazano na Slici 10, CTP je inkorporisan u manjoj meri u odnosu na UTP. Za razliku od UTP i 3'-dezoksi-UTP, jedinjenja formule (I) i 2'-Me-2'-F-UTP nisu bili efikasni supstrati za inkorporaciju putem HMRP, na šta ukazuje nedostatak trake proizvoda.
[0594] Lanac šablona prikazan na Slici 11 konstruisan je da meri inkorporaciju analoga GTP. Prajmer/šablon: (SEQ ID NO: 3) UUUUGCCGCGCC i (SEQ ID NO: 4) GGGAATGCACGGCGCGGC. U kontrolnim trakama sa vodom nije uočena inkorporacija, na šta ukazuje nedostatak trake proizvoda. Utvrđeno je da su GTP i 3'-dezoksi-GTP efikasni supstrati za inkorporaciju, na šta ukazuju značajne trake proizvoda. Potencijal za pogrešnu inkorporaciju je procenjen koristeći kontrolni nukleotid ATP. Kao što pokazuje nedostatak trake proizvoda na Slici 11, kontrolni ATP je bio loš supstrat za inkorporaciju. Testiran je nukleotidni analog 2'-Me-GTP (nukleotidni metabolit monofosfatnog proleka INX-0189/BMS-986094) i otkriveno je da je dobar supstrat za inkorporaciju putem HMRP, na šta ukazuje traka proizvoda. Testiran je nukleotidni analog 2'-Me-2'-F-GTP (nukleotidni metabolit monofosfatnog proleka GS-938) i takođe je otkriveno da ga HMRP inkorporiše. Nasuprot tome,
22
jedinjenja formule (I) nisu bila efikasni supstrati za inkorporaciju u lanac šablona od strane HMRP, na šta ukazuje nedostatak trake proizvoda na Slici 11.
Procena inhibicije sinteze proteina mitohondrija - test na bazi ćelija
Princip testa
[0595] Kompleti MitoBiogenesis™ za ELISA test u ćelijama (kat. br. MS643) dobijeni su od Mitosciences, OR, SAD. Komplet MitoBiogenesis™ za ELISA test u ćelijama je test dupliranja sa 96 bunarčića koji prikazuje odnos mtDNK i nDNK kodiranog mitohondrijskog proteina. Ćelije su zasejane na mikroploče sa 96 bunarčića, i nakon izlaganja jedinjenjima za nekoliko ćelijskih dupliranja, nivoi dva mitohondrijska proteina su istovremeno izmereni u svakom bunarčiću. Dva analizirana proteina su bili podjedinice različitih kompleksa oksidativnog enzima fosforilacije, pri čemu je jedan protein podjedinica I kompleksa IV (citohrom c oksidaza; COX I) koji je kodiran putem mtDNK, a drugi je podjedinica od 70 kDa kompleksa II (podjedinica A sukcinat dehidrogenaze; SDH A) koji je kodiran putem nDNK. Kompleks IV uključuje nekoliko proteina koji su kodirani putem mtDNK, dok su proteini kompleksa II u potpunosti kodirani putem nDNK. Da bi se kontrolisala gustina ćelija prisutnih na kraju perioda uzgajanja, broj ćelija je procenjen bojenjem Janus zelenom, i nivoi COX I/SDH A su normalizovani na konačnu ćelijsku gustinu.
Format testa sa pločom sa 96 bunarčića za HepG2 ćelije
[0596] Prvog dana, zasejano je 1000 HepG2 ćelija po bunarčiću u ploči sa 96 bunarčića. Sledećeg dana, jedinjenja koja se testiraju su solubilizovana u 100% DMSO do 100 x željene konačne testirane koncentracije. Svako jedinjenje je serijski razblaženo (1:3) do 9 različitih koncentracija. Jedinjenja u 100% DMSO su redukovana do 10% (V/V) DMSO razblaženjem 1:10 u medijumu za uzgajanje ćelija. Za doziranje ćelija u duplikatu, korišćen je alikvot od 10 µl jedinjenja razblaženih na 10% (V/V) DMSO pomoću medijuma za ćelijsko uzgajanje. Konačna koncentracija DMSO bila je 1% (V/V). Netretirane ćelije i bunarčići koji ne sadrže ćelije su uključeni na ploču kako bi služili kao kontrola. Ćelije su zatim inkubirane sa jedinjenjima, i posmatrane tokom 8 dana na 37°C i 5% CO2. Ploče su obrađene kako je opisano u nastavku u proceduri testiranja.
Format grupnog testiranja za HepG2 ćelije
2
[0597] Alternativna procedura za ćelijsko uzgajanje je korišćena za testiranje potencijala za posredovanje mitohondrijske toksičnosti u većim koncentracijama nego što se može ostvariti u formatu ploče sa 96 bunarčića. HepG2 ćelije su uzgajane u medijum/DMS samostalno ili u nizu koncentracija jedinjenja u sudovima od 15 cm<2>ili pločama sa 6 bunarčića sa inicijalnom gustinom zasejavanja ćelija od 5 x 10<6>, odnosno 5 x 10<4>ćelija/ml. Ćelije su zatim inkubirane i posmatrane tokom 8 dana na 37°C i 5% CO2. Nakon 8 dana, ćelije su sakupljene tripsinizacijom, prebrojane i zasejane na ploče sa 96 bunarčića sa gustinom od 25.000 ćelija/bunarčiću u 16 ponovljenih bunarčića. Ćelije su ostavljene da se zalepe preko noći, i ploče su zatim obrađene kako je opisano u nastavku u postupku testiranja.
Postupak testiranja
[0598] Ispitivanje je izvedeno prema uputstvu proizvođača. Ukratko, nakon završetka perioda uzgajanja, medijum za ćelijsko uzgajanje je pažljivo aspiriran iz bunarčića ploče i zamenjen sa 100 µl 4% rastvora (V/V) paraformaldehida u fiziološkom rastvoru puferovanom fosfatom (PBS, Electron Microscopy Sciences kat. br. 15713). Nakon 20 minuta inkubacije na RT, rastvor je uklonjen, i bunarčići su isprani 3 x sa 300 µl PBS-a. Nakon završnog ispiranja, PBS je uklonjen, i bunarčići su prekriveni sa 100 µL PBS-a. Ploče su zatim zaptivene i čuvane na 4°C do upotrebe. Da bi se obavio test, sloj PBS je uklonjen upijanjem na papirnom ubrusu, i 100 µl 0,5% (V/V) sirćetne kiseline je dodato u svaki bunarčić radi blokiranja aktivnosti endogene alkalne fosfataze. Nakon 5 minuta inkubacije na RT, rastvor sirćetne kiseline je uklonjen, i ćelije su jednom isprane sa 200 µl PBS-a. Zatim je u svaki bunarčić dodato 100 µl pufera za permeabilizaciju (0,1% (V/V) Triton X 100). Nakon 30 minuta inkubacije na RT, pufer za permeabilizaciju je uklonjen, i svaki bunarčić je blokiran sa 200 µl 2 x blokirajućeg rastvora tokom 2 h na RT.2 x blokirajući rastvor je zatim uklonjen, i 100 µl rastvora primarnog antitela koji sadrži anti COX I i anti SDH A antitela u 1 × blokirajućem rastvoru je dodato u svaki bunarčić. Ploče su zatim zaptivene i inkubirane preko noći na 4°C. Rastvor primarnog antitela/blokirajući rastvor je uklonjen, i ploča je isprana 3 x sa 250 µl 0,05% (V/V) Tween 20 u PBS-u. Zatim je dodato 100 µl rastvora sekundarnog antitela koji sadrži anti SDH A antitelo obeleženo alkalnom fosfatazom (AP) i anti COX I antitelo obeleženo peroksidazom rena (HRP), i inkubirano 1 h na RT. Ploča je zatim isprana 4 × sa 250 µl 0,05% (V/V) Tween 20 u PBS-u. Nakon upijanja ploče do suva, 100 µl reagensa za detekciju AP je dodato u svaki bunarčić, i ploča je inkubirana u mraku tokom 30 minuta na RT. Optička gustina svakog bunarčića je zatim izmerena na 405 nm. Reagens za detekciju AP je zatim uklonjen i zamenjen sa 100 µl reagensa za detekciju HRP, i ploča je inkubirana u mraku još 30 minuta na RT.
24
Optička gustina svakog bunarčića je zatim izmerena na 600 nm. Reagens za detekciju HRP je zatim uklonjen, i svaki bunarčić je onda obojen sa 50 µl 1 x Janus zelene boje tokom 5 minuta na RT. Nakon uklanjanja boje, ploče su isprane 5 × u ultračistoj vodi kako bi se uklonila preostale boja. Janus zelena boja je zatim solubilizovana dodatkom 100 µl 0,5 M HCl, i inkubirana tokom 10 minuta. Optička gustina svakog bunarčića je zatim izmerena na 595 nm.
Analiza podataka
[0599] Izračunat je prosek osnovnih merenja svih replikata svakog eksperimentalnog uslova i oduzet je od eksperimentalnih vrednosti istog uslova. Signali SDH A i COX I su zatim uneti kao odnos (COX I/SDH A) i normalizovani na intenzitet bojenja Janus zelenom, kako bi se korigovale razlike u ćelijskoj gustini.
Rezultati
[0600] Testirano je kontrolno jedinjenje d4T, i utvrđeno je da ne inhibira sintezu proteina mitohondrija u koncentracijama do 100 µM, kako je prikazano na Slikama 12A-D. Testirano je kontrolno jedinjenje ddC, i utvrđeno je da snažno inhibira sintezu proteina mitohondrija. Vidite Slike 12A-D. Kao što je prikazano na Slici 12A, nukleozid monofosfatni prolek INX-08189/BMS-986094 (koji isporučuje 2'-Me-GTP) ispitan je u testu, i utvrđeno je da snažno inhibira sintezu proteina mitohondrija. Nasuprot tome, testirana su jedinjenja formule (I) i otkriveno je da ne inhibiraju sintezu proteina mitohondrija u koncentracijama do 100 µM, kako je prikazano na Slikama 12B-D.
PRIMER 73
Kombinacija jedinjenja
Kombinovano ispitivanje
[0601] Dva ili više ispitivanih jedinjenja je testirano u kombinaciji koristeći HCV replikon HCV genotipa 1b koji se nalazi u Huh7 ćelijama sa stabilnim reporterom luciferaze (LUC). Ćelije su uzgajane u standardnim uslovima u Dulbekovom modifikovanom Iglovom medijumu (DMEM; Mediatech Inc, Herndon, VA) koji sadrži 10% toplotno inaktiviranog seruma goveđeg fetusa (FBS; Mediatech Inc, Herndon, VA) 2 mM L-glutamin i neesencijalne aminokiseline (JRH Biosciences). Ćelije HCV replikona su zasejane na ploču sa 96 bunarčića sa gustinom od 10<4>ćelija po bunarčiću u DMEM sa 10% FBS. Sledećeg dana, medijum za
2
uzgajanje je zamenjen sa DMEM koji ili ne sadrži nijedno jedinjenje kao kontrola, sadrži testirana jedinjenja serijski razblažena u prisustvu 2% FBS i 0,5% DMSO, ili kombinaciju jedinjenja 18 sa jednim ili više testiranih jedinjenja serijski razblaženih u prisustvu 2% FBS i 0,5% DMSO. Ćelije su inkubirane bez jedinjenja kao kontrola, sa testiranim jedinjenjima ili sa kombinacijom jedinjenja tokom 72 h. Neposredno dejstvo kombinacije testiranih jedinjenja je ispitano koristeći reporter na bazi luciferaze (LUC), kako je utvrđeno pomoću Bright-Glo testa luciferaze (Promega, Madison, WI). Krive odgovora na dozu su određene za pojedinačna jedinjenja i kombinacije sa fiksnim odnosom dva ili više testiranih jedinjenja.
[0602] Postupak koji je korišćen za procenu kombinovanog dejstva koristio je program koji se zove MacSynergy II. Dr. M. Prichard (University of Michigan) je ljubazno obezbedio softver MacSynergy II. Pričardov model omogućava trodimenzionalno ispitivanje interakcija leka i izračunavanje obima sinergije (jedinice: µM<2>%) nastale usled pokretanja testa replikona koristeći kombinaciju sa table dva ili više inhibitora. Obim sinergije (pozitivni obim) ili antagonizma (negativni obim) predstavlja relativnu količinu sinergije ili antagonizma po promeni u koncentracijama dva leka. Obimi sinergije i antagonizma su definisani na osnovu Blisovog modela nezavisnosti. U ovom modelu, obim sinergije manji od -25 ukazuje na antagonističke interakcije, obim u rasponu -25 - 25 ukazuje na zbirno ponašanje, obim u rasponu 25 - 100 ukazuje na sinergijsko ponašanje, a obim >100 ukazuje na snažno sinergijsko ponašanje. Određivanje in vitro zbirnog, sinergijskog ili snažno sinergijskog ponašanja za kombinacije jedinjenja može biti koristan u predviđanju terapeutskih koristi za primenu kombinacija jedinjenja in vivo na inficiranim pacijentima.
[0603] Rezultati obima sinergije za kombinacije su dati u Tabeli 4.
Tabela 4
2
[0604] Iako je prethodno navedeno detaljno opisano pomoću ilustracija i primera zarad jasnosti i razumevanja, stručnjaku će biti jasno da brojne i različite modifikacije mogu da se načine bez odstupanja od predmetnog otkrića. Stoga treba da bude jasno da su ovde otkriveni oblici isključivo ilustrativni, i ne treba da ograničavaju obim predmetnog otkrića, nego da pokriju sve modifikacije i alternative koje spadaju u okvir pronalaska, kako je definisano priloženim zahtevima.
2
2

Claims (32)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so sa strukturom:
    pri čemu: B<1>je izabran iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog
    i opciono supstituisanog
    R<1>je izabran iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila i opciono supstituisanog C3-6cikloalkila; svaki -------- je odsutan i R<p>je odsutan; R<2>je halo, N3, -OR<7A>ili -N(R<7B>R<7C>); R<3>je -OH ili -OC(=O)R<8>; ili svaki R<2>i R<3>predstavlja atom kiseonika koji su povezani karbonilnom grupom; R<4>je vodonik ili
    R<5A>je izabran iz grupe koja se sastoji od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline, opciono supstituisanog estra N-vezane aminokiseline, 2
    R<5B>je izabran iz grupe koja se sastoji od O-, OH, -O-opciono supstituisanog arila, -O-opciono supstituisanog heteroarila, -O-opciono supstituisanog heterociklila, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline, opciono supstituisanog estra N-vezane aminokiseline,
    R<6B>i R<6C>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, nesupstituisanog C1-6alkila, nesupstituisanog C3-6alkenila, nesupstituisanog C3-6alkinila i nesupstituisanog C3-6cikloalkila; R<7A>je vodonik ili -C(=O)R<12>; R<7B>i R<7C>su nezavisno vodonik ili opciono supstituisani C1-6alkil; R<8>i R<12>su nezavisno opciono supstituisani C1-6alkil ili opciono supstituisani C3- 6cikloalkil; R<9>, R<10>i R<11>su nezavisno odsutni ili vodonik; R<8A>, R<9A>, R<11A>, R<12A>, R<8B>, R<9B>, R<11B>i R<12B>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkila i opciono supstituisanog arila; R<10A>, R<10B>, R<13A>i R<13B>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog -O-C1-24alkila, opciono supstituisanog -O-arila, opciono supstituisanog -O-heteroarila i opciono supstituisanog -O-monocikličnog heterociklila; R<14A>, R<14B>, R<15A>i R<15B>su nezavisno izabrani iz grupe koja se sastoji od vodonika, opciono supstituisanog C1-24alkila i opciono supstituisanog arila; n je 0 ili 1; p i q su nezavisno 1 ili 2; s i t su nezavisno 3, 4 ili 5; Z<1>, Z<1A>i Z<1B>su nezavisno O ili S; i pod uslovom da kada je R<4> je R<5B>O-, OH, ili opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili opciono supstituisani estar N-vezane aminokiseline, ili farmaceutski prihvatljiva so prethodnog.
  2. 2. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, R<2>je halo.
  3. 3. Jedinjenje iz zahteva 2, pri čemu, R<2>je fluor.
  4. 4. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, R<2>je -OR<7A>.
  5. 5. Jedinjenje iz zahteva 4, pri čemu, R<7A>je vodonik.
  6. 6. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, R<2>je izabran iz grupe koja se sastoji od N3, -N(R<7B>R<7C>) i -NH2.
  7. 7. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-6, pri čemu, R<1>je opciono supstituisani C1-6alkil.
  8. 8. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-7, pri čemu, R<1>je nesupstituisani metil.
  9. 9. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-6, pri čemu, R<1>je izabran iz grupe koja se sastoji od opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila i opciono supstituisanog C3-6cikloalkila.
  10. 10. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-9, pri čemu, R<3>je -OH. 1
  11. 11. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-9, pri čemu, R<3>je -OC(=O)R<8>.
  12. 12. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-11, pri čemu, R<4>je vodonik.
  13. 13. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-11, pri čemu, R<4>je
  14. 14. Jedinjenje iz zahteva 13, pri čemu, R<5A>je opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili opciono supstituisani estar N-vezane aminokiseline; i R<5B>je opciono supstituisana N-vezana aminokiselina ili opciono supstituisani estar N-vezane aminokiseline; ili je R<5A>izabrano iz grupe koja se sastoji od alanin izopropil estra, alanin cikloheksil estra, alanin neopentil estra, valin izopropil estra, izoleucin izopropil estra, metionin izopropil estra i leucin izopropil estra; i R<5B>je izabran iz grupe koja se sastoji od alanin izopropil estra, alanin cikloheksil estra, alanin neopentil estra, valin izopropil estra, izoleucin izopropil estra, metionin izopropil estra i leucin izopropil estra; ili R<5A>ima strukturu
    pri čemu, R<13>je izabran iz grupe koja se sastoji od vodonika, opciono supstituisanog C1-6-alkila, opciono supstituisanog C3-6cikloalkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog aril(C1-6alkila) i opciono supstituisanog haloalkila; R<14>je izabran iz grupe koja se sastoji od vodonika, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C1-6haloalkila, opciono supstituisanog C3-6cikloalkila, opciono supstituisanog C6arila, opciono supstituisanog C10arila and i opciono supstituisanog aril(C1-6alkila); i R<15>je vodonik ili opciono supstituisani C1-4-alkil; ili R<14>i R<15>zajedno grade opciono supstituisani C3-6cikloalkil; i R<5B>ima strukturu
    pri čemu, R<16>je izabran iz grupe koja se sastoji od vodonika, opciono supstituisanog C1-6-alkila, opciono supstituisanog C3-6cikloalkila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog aril(C1-6alkila) i opciono supstituisanog haloalkila; R<17>je izabran iz grupe koja se sastoji od 2 vodonika, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C1-6haloalkila, opciono supstituisanog C3-6cikloalkila, opciono supstituisanog C6arila, opciono supstituisanog C10arila i opciono supstituisanog aril(C1-6alkila); i R<18>je vodonik ili opciono supstituisani C1- 4-alkil; ili R<17>i R<18>zajedno grade opciono supstituisani C3-6cikloalkil; poželjno R<14>, R<15>, R<17>i R<18>su nezavisno vodonik ili opciono supstituisani C1-6-alkil; poželjno R<13>je opciono supstituisani C1-6alkil ili opciono supstituisani C3-6cikloalkil.
  15. 15. Jedinjenje iz zahteva 14, pri čemu
  16. 16. Jedinjenje iz zahteva 13, pri čemu, R<5A>je
    i R<5B>je
    ili pri čemu, R<5A>je
  17. 17. Jedinjenje iz zahteva 13, pri čemu, R<5A>je opciono supstituisani estar N-vezane aminokiseline; i R<5B>je izabran iz grupe koja se sastoji od -O-opciono supstituisanog arila, -O-opciono supstituisanog heteroarila i -O-opciono supstituisanog heterociklila.
  18. 18. Jedinjenje iz zahteva 13, pri čemu, R<5A>je O<->ili OH; R<5B>je O-, OH ili
    i n je 0 ili 1.
  19. 19. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-18, pri čemu, Z<1>je O. 4
  20. 20. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-18, pri čemu, Z<1>je S.
  21. 21. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-20, pri čemu, B<1>je opciono supstituisani
  22. 22. Jedinjenje iz zahteva 1 izabrano iz grupe koja se sastoji od:
    ili farmaceutski prihvatljiva so prethodno navedenog.
  23. 23. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, jedinjenje je
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  24. 24. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, jedinjenje je
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  25. 25. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, jedinjenje je
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  26. 26. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, jedinjenje je
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  27. 27. Jedinjenje iz zahteva 1, pri čemu, jedinjenje je
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  28. 28. Farmaceutska kompozicija koja sadrži delotvornu količinu jedinjenja iz bilo kog od zahteva 1-27 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač, ekscipijens ili njihovu kombinaciju.
  29. 29. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-27 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u ublažavanju ili lečenju HCV infekcije.
  30. 30. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-27 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u inhibiciji aktivnosti NS5B polimeraze virusa hepatitisa C.
  31. 31. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-27 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u inhibiciji replikacije virusa hepatitisa C.
  32. 32. Jedinjenje za upotrebu iz bilo kog od zahteva 29-31, koja dalje obuhvata upotrebu jednog ili više agensa izabranih iz grupe koja se sastoji od interferona, ribavirina, inhibitora HCV proteaze, inhibitora HCV polimeraze, inhibitora NS5A, antivirusnog jedinjenja, jedinjenja formule (AA), jedinjenja formule (BB) i jedinjenja formule (CC) ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od prethodno navedenih jedinjenja, pri čemu: Formula (AA) ima strukturu:
    pri čemu: B<AA1>je opciono supstituisana heterociklična baza ili opciono supstituisana heterociklična baza sa zaštićenom amino grupom; R<AA1>je izabran od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline i opciono supstituisanog estra N-vezane aminokiseline; R<AA2>je odsutan ili je izabran od vodonika, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog heterociklila, i
    pri čemu, R<AA6>, R<AA7>i R<AA8>su nezavisno odsutni ili vodonik, i n<AA>je 0 ili 1; pod uslovom da, kada je R<AA1>O<->ili OH, onda je R<AA2>odsutan, vodonik ili
    R<AA3>je izabran od vodonika, halogena, -OR<AA9>i -OC(=O)R<AA10>; R<AA4>je izabran od halogena, -OR<AA11>i -OC(=O)R<AA12>; ili R<AA3>i R<AA4>su oba atom kiseonika koji su povezani karbonilnom grupom; R<AA5>je izabran od opciono supstituisanog C2-6alkila, opciono supstituisanog C2- 6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila i opciono supstituisanog C3-6cikloalkila; ili R<AA4>i R<AA5>zajedno grade -(C1-6alkil)-O- ili -O-(C1-6alkil)-; R<AA9>i R<AA11>su nezavisno vodonik ili opciono supstituisani C1-6alkil; i R<AA10>i R<AA12>su nezavisno opciono supstituisani C1-6alkil ili opciono supstituisani C3-6cikloalkil; Formula (BB) ima strukturu:
    pri čemu: B<BB1>je opciono supstituisana heterociklična baza ili opciono supstituisana heterociklična baza sa zaštićenom amino grupom; X<BB>je O (kiseonik) ili S (sumpor); R<BB1>je izabran od -Z<BB>-R<BB9>, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline i opciono supstituisanog estra N-vezane aminokiseline; Z<BB>je izabran od O (kiseonika), S (sumpora) i N(R<BB10>); R<BB2>i R<BB3>su nezavisno izabrani od vodonika, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila, opciono supstituisanog C1-6haloalkila i opciono supstituisanog aril(C1-6alkila); ili R<BB2>i R<BB3>zajedno grade grupu izabranu od opciono supstituisanog C3-6cikloalkila, opciono 4 supstituisanog C3-6cikloalkenila, opciono supstituisanog C3-6arila i opciono supstituisanog C3-6heteroarila; R<BB4>je izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila i opciono supstituisanog alenila; R<BB5>je vodonik ili opciono supstituisani C1-6alkil; R<BB6>je izabran od vodonika, halogena, azido, amino, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<BB11>i -OC(=O)R<BB12>; R<BB7>je izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<BB13>i -OC(=O)R<BB14>; R<BB8>je izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<BB15>i -OC(=O)R<BB16>; R<BB9>je izabran od opciono supstituisanog alkila, opciono supstituisanog alkenila, opciono supstituisanog alkinila, opciono supstituisanog cikloalkila, opciono supstituisanog cikloalkenila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog heterociklila, opciono supstituisanog aril(C1-6alkila), opciono supstituisanog heteroaril(C1-6alkila) i opciono supstituisanog heterociklil(C1- 6alkila); R<BB10>je izabran od vodonika, opciono supstituisanog alkila, opciono supstituisanog alkenila, opciono supstituisanog alkinila, opciono supstituisanog cikloalkila, opciono supstituisanog cikloalkenila, opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog heterociklila, opciono supstituisanog aril(C1-6alkila), opciono supstituisanog heteroaril(C1-6alkila) i opciono supstituisanog heterociklil(C1- 6alkila); R<BB11>, R<BB13>i R<BB15>su nezavisno vodonik ili opciono supstituisani C1-6alkil; i R<BB12>, R<BB14>i R<BB16>su nezavisno opciono supstituisani C1-6alkil ili opciono supstituisani C3-6cikloalkil; i Formula (CC) ima strukturu:
    pri čemu: 41 B<CC1>je opciono supstituisana heterociklična baza ili opciono supstituisana heterociklična baza sa zaštićenom amino grupom; R<CC1>je izabran od O-, OH, opciono supstituisane N-vezane aminokiseline i opciono supstituisanog estra N-vezane aminokiseline; R<CC2>je izabran od opciono supstituisanog arila, opciono supstituisanog heteroarila, opciono supstituisanog heterociklila, i
    pri čemu, R<CC19>, R<CC20>i R<CC21>su nezavisno odsutni ili vodonik, i n<CC>je 0 ili 1; pod uslovom da, kada je R<CC1>O<->ili OH, R<CC2>je onda
    R<CC3a>i R<CC3b>su nezavisno izabrani od vodonika, deuterijuma, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila, opciono supstituisanog C2-6alkinila, opciono supstituisanog C1-6haloalkila i aril(C1-6alkila); ili R<CC3a>i R<CC3b>zajedno grade opciono supstituisani C3-6cikloalkil; R<CC4>je izabran od vodonika, azido, opciono supstituisanog C1-6alkila, opciono supstituisanog C2-6alkenila i opciono supstituisanog C2-6alkinila; R<CC5>je izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<CC10>i -OC(=O)R<CC11>; R<CC6>je izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -ORCC<12>i -OC(=O)R<CC13>; R<CC7>je izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -OR<CC14>i -OC(=O)R<CC15>; ili su i R<CC6>i R<CC7>atomi kiseonika i povezani su karbonilnom grupom; R<CC8>je izabran od vodonika, halogena, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila, -ORCC<16>i -OC(=O)R<CC17>; R<CC9>je izabran od vodonika, azido, cijano, opciono supstituisanog C1-6alkila i -OR<CC18>; R<CC10>, R<CC12>, R<CC14>, R<CC16>i R<CC18>su nezavisno izabrani od vodonika i opciono supstituisanog C1-6alkila; i R<CC11>,R<CC13>, R<CC15>i R<CC17>su nezavisno izabrani od opciono supstituisanog C1-6alkila i opciono supstituisanog C3-6cikloalkila; 42 poželjno, jedan ili više agensa je izabrano iz grupe koja se sastoji od: ABT-450, GS-9256, GS-9451, IDX-320, ACH-1625, ACH-2684, PHX1766, PSI-661, GS-6620, TMC649128, NM283, BCX5191, IDX19368, IDX19370, ABT-333, BI-207127, ABT-072, MK-3281, TMC647055, BMS-791325, PPI-383, GS9669, PPI-461, ACH-2928, GS-5885, BMS-824393, ABT 267, ACH-3102, AZD-7295, IDX719, PPI-668, MK8742, GSK805, alisporivira, MIR-122, klemizola, ITX 5061, BIT225, NIM811, SCY-635, miravirsena, GS9620,
    4
    44
    �
    �
    �
    �
    �
    �
    �
    �
    ili farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od prethodno navedenih jedinjenja.
RS20210536A 2012-12-21 2013-12-19 4'-fluor-nukleozidi, 4'-fluor-nukleotidi i njihovi analozi za lečenje hcv RS61767B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261745466P 2012-12-21 2012-12-21
US201361890125P 2013-10-11 2013-10-11
PCT/US2013/076740 WO2014100505A1 (en) 2012-12-21 2013-12-19 Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
EP13864403.4A EP2935303B1 (en) 2012-12-21 2013-12-19 4'-fluoro-nucleosides, 4'-fluoro-nucleotides and analogs thereof for the treatment of hcv

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61767B1 true RS61767B1 (sr) 2021-05-31

Family

ID=50975302

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210536A RS61767B1 (sr) 2012-12-21 2013-12-19 4'-fluor-nukleozidi, 4'-fluor-nukleotidi i njihovi analozi za lečenje hcv

Country Status (31)

Country Link
US (12) US9243022B2 (sr)
EP (3) EP3421482A1 (sr)
JP (4) JP6284547B2 (sr)
KR (4) KR102532198B1 (sr)
CN (2) CN110684067A (sr)
AP (1) AP2015008533A0 (sr)
AU (3) AU2013361200A1 (sr)
BR (1) BR112015014457A2 (sr)
CA (1) CA2894542C (sr)
CL (2) CL2015001699A1 (sr)
CY (1) CY1124742T1 (sr)
DK (1) DK2935303T3 (sr)
EA (1) EA201590943A1 (sr)
EC (1) ECSP15031144A (sr)
ES (1) ES2865402T3 (sr)
GE (1) GEP201706757B (sr)
HR (1) HRP20210510T1 (sr)
HU (1) HUE053946T2 (sr)
IL (3) IL296551B2 (sr)
LT (1) LT2935303T (sr)
MX (1) MX2015007925A (sr)
PE (1) PE20151433A1 (sr)
PH (1) PH12015501423A1 (sr)
PL (1) PL2935303T3 (sr)
PT (1) PT2935303T (sr)
RS (1) RS61767B1 (sr)
SG (2) SG11201504554UA (sr)
SI (1) SI2935303T1 (sr)
SM (1) SMT202100259T1 (sr)
TW (2) TWI641615B (sr)
WO (1) WO2014100505A1 (sr)

Families Citing this family (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ599404A (en) 2009-09-21 2014-02-28 Gilead Sciences Inc Processes and intermediates for the preparation of 1’-substituted carba-nucleoside analogs
PT2595980E (pt) 2010-07-22 2014-11-27 Gilead Sciences Inc Métodos e compostos para tratar infeções pelo vírus da família paramyxoviridae
AU2011305652B2 (en) 2010-09-22 2016-10-20 Janssen Biopharma, Inc. Azido nucleosides and nucleotide analogs
US8772474B2 (en) 2010-12-22 2014-07-08 Alios Biopharma, Inc. Cyclic nucleotide analogs
EP2794630A4 (en) 2011-12-22 2015-04-01 Alios Biopharma Inc SUBSTITUTED PHOSPHORTHIOAT NUCLEOTIDE ANALOGUE
KR102072041B1 (ko) 2011-12-22 2020-01-31 앨리오스 바이오파마 인크. 치환된 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드 및 그의 유사체
NZ631601A (en) 2012-03-21 2016-06-24 Alios Biopharma Inc Solid forms of a thiophosphoramidate nucleotide prodrug
US9441007B2 (en) 2012-03-21 2016-09-13 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
USRE48171E1 (en) 2012-03-21 2020-08-25 Janssen Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
NZ630805A (en) 2012-03-22 2016-01-29 Alios Biopharma Inc Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
PT2861611T (pt) 2012-05-25 2016-10-11 Janssen Sciences Ireland Uc Nucleósidos de espirooxetano de uracilo
US9243022B2 (en) * 2012-12-21 2016-01-26 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
UA111305C2 (uk) 2012-12-21 2016-04-11 Пфайзер Інк. Конденсовані лактами арилу та гетероарилу
AU2013361193B2 (en) 2012-12-21 2018-05-24 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
EP2981542B1 (en) * 2013-04-01 2021-09-15 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
TW201532606A (zh) 2013-04-05 2015-09-01 Alios Biopharma Inc 使用化合物之組合治療ｃ型肝炎病毒感染
AU2014265293B2 (en) * 2013-05-16 2019-07-18 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives
US20180200280A1 (en) * 2013-05-16 2018-07-19 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication
AU2014302715B2 (en) 2013-06-26 2018-12-06 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
ES2952714T3 (es) 2013-06-26 2023-11-03 Janssen Pharmaceuticals Inc Nucleósidos sustituidos, nucleótidos y análogos de los mismos
US10320532B2 (en) * 2013-10-04 2019-06-11 Lg Electronics Inc. Method whereby terminal transmits ACK/NACK in wireless communication system, and device therefor
CN105829333A (zh) 2013-10-11 2016-08-03 艾丽奥斯生物制药有限公司 取代的核苷、核苷酸及其类似物
CR20160400A (es) 2014-02-06 2016-11-07 Riboscience Llc Derivados de nucleosido sustituidos con 4´-difluorometilo como inhibidores de la replicación de arn de la influenza
AP2016009605A0 (en) 2014-06-17 2016-12-31 Pfizer Substituted dihydroisoquinolinone compounds
US9603864B2 (en) 2014-06-24 2017-03-28 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
SG11201610597QA (en) 2014-06-24 2017-01-27 Alios Biopharma Inc Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
EA201692473A1 (ru) * 2014-06-24 2017-03-31 Элиос Биофарма, Инк. Способы получения замещенных нуклеотидных аналогов
CN107108681B (zh) 2014-10-28 2021-04-06 詹森生物制药有限公司 制备取代的核苷类似物的方法
TWI698444B (zh) 2014-10-29 2020-07-11 美商基利科學股份有限公司 製備核糖苷的方法
CN104478976A (zh) * 2014-11-12 2015-04-01 苏州明锐医药科技有限公司 索非布韦的制备方法
MA41441A (fr) * 2014-12-19 2017-12-12 Alios Biopharma Inc Nucléosides substitués, nucléotides et analogues de ceux-ci
MA41213A (fr) 2014-12-19 2017-10-24 Alios Biopharma Inc Nucléosides substitués, nucléotides et analogues de ceux-ci
WO2016106050A1 (en) 2014-12-26 2016-06-30 Emory University N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
WO2016134054A1 (en) * 2015-02-18 2016-08-25 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
FI3265102T3 (fi) 2015-03-06 2025-10-31 Atea Pharmaceuticals Inc Beta-d-2'-deoksi-2'-alfa-fluori-2'-beta-c-substituoituja-2-modifioituja-n6-substituoituja puriininukleotideja hcv-hoitoa varten
WO2016145103A1 (en) 2015-03-11 2016-09-15 Alios Biopharma, Inc. Aza-pyridone compounds and uses thereof
CN106146433B (zh) * 2015-03-26 2019-04-26 常州制药厂有限公司 一种索非布韦的中间体的制备方法
JP6743135B2 (ja) * 2015-09-02 2020-08-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ウィルス性テトラヒドロフラン誘導体
DK3349758T3 (da) 2015-09-16 2022-06-13 Gilead Sciences Inc Fremgangsmåder til behandling af arenaviridae-virusinfektioner
EP3433257B1 (en) 2016-03-24 2023-10-11 Novartis AG Alkynyl nucleoside analogs as inhibitors of human rhinovirus
JP7129703B2 (ja) * 2016-04-28 2022-09-02 エモリー ユニバーシティー アルキン含有ヌクレオチド及びヌクレオシド治療組成物並びにそれらに関連した使用
CN107337702B (zh) * 2016-04-29 2021-11-05 江苏豪森药业集团有限公司 结晶型hcv抑制剂及其制备方法和应用
CN109562113A (zh) 2016-05-10 2019-04-02 C4医药公司 用于靶蛋白降解的螺环降解决定子体
CN109562107A (zh) 2016-05-10 2019-04-02 C4医药公司 用于靶蛋白降解的杂环降解决定子体
WO2017197046A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. C3-carbon linked glutarimide degronimers for target protein degradation
CN121974842A (zh) 2016-05-10 2026-05-05 C4医药公司 用于靶蛋白降解的胺连接的c3-戊二酰亚胺降解决定子体
CN106083773B (zh) * 2016-05-31 2019-06-14 杭州惠诺医药科技有限公司 3,5-二苯甲酰基-2-去氧-2-氟-2-甲基-D-核糖-γ-内酯的制备方法
WO2018009623A1 (en) 2016-07-08 2018-01-11 Atea Pharmaceuticals, Inc. β-D-2'-DEOXY-2'-SUBSTITUTED-4'-SUBSTITUTED-2-SUBSTITUTED-N6-SUBSTITUTED-6-AMINOPURINE NUCLEOTIDES FOR THE TREATMENT OF PARAMYXOVIRUS AND ORTHOMYXOVIRUS INFECTIONS
WO2018013937A1 (en) 2016-07-14 2018-01-18 Atea Pharmaceuticals, Inc. Beta-d-2'-deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-beta-c-substituted-4'-fluoro-n6-substituted-6-amino-2-substituted purine nucleotides for the treatment of hepatitis c virus infection
WO2018017989A1 (en) * 2016-07-22 2018-01-25 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy regimen for treatment of selected hcv genotypes
JP2019524795A (ja) 2016-08-12 2019-09-05 ヤンセン バイオファーマ インク． 置換ヌクレオシド、ヌクレオチド、及びそのアナログ
PT3512863T (pt) 2016-09-07 2022-03-09 Atea Pharmaceuticals Inc Nucleótidos de purina 2'-substituídos-n6-substituídos para tratamento de vírus de rna
CN115477679A (zh) 2017-02-01 2022-12-16 阿堤亚制药公司 用于治疗丙型肝炎病毒的核苷酸半硫酸盐
CN110869028B (zh) 2017-03-14 2023-01-20 吉利德科学公司 治疗猫冠状病毒感染的方法
EP4219513A1 (en) 2017-05-01 2023-08-02 Gilead Sciences, Inc. Crystalline form of (s)-2-ethylbutyl 2-(((s)-(((2r,3s,4r,5r)-5-(4-aminopyrrolo[2,1-f] [1,2,4]triazin-7-yl)-5-cyano-3,4-dihydroxytetrahydrofuran2-yl)methoxy)(phenoxy) phosphoryl)amino)propanoate
EP4717317A3 (en) 2017-06-20 2026-06-03 C4 Therapeutics, Inc. N/o-linked degrons and degronimers for protein degradation
CN111093627B (zh) 2017-07-11 2024-03-08 吉利德科学公司 用于治疗病毒感染的包含rna聚合酶抑制剂和环糊精的组合物
EP3684374B1 (en) * 2017-09-21 2025-07-30 Riboscience LLC 4'-fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives as inhibitors of hcv rna replication
SG11202003126VA (en) 2017-10-04 2020-05-28 Avidity Biosciences Inc Nucleic acid-polypeptide compositions and uses thereof
RU2020116571A (ru) 2017-12-07 2021-11-22 Эмори Юниверсити N4-гидроксицитидин и производные и связанные с этим противовирусные применения
KR20260028884A (ko) * 2018-03-07 2026-03-04 에모리 유니버시티 4'-할로겐 함유 뉴클레오티드 및 뉴클레오시드 치료 조성물 및 이와 관련된 용도
CN112351799A (zh) 2018-04-10 2021-02-09 阿堤亚制药公司 具有硬化的hcv感染患者的治疗
WO2019237297A1 (en) * 2018-06-14 2019-12-19 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Processes for preparing compounds/intermediates useful in the treatment of viral infections
MX428883B (es) * 2019-04-22 2025-11-13 Ligand Pharm Inc Compuestos ciclicos de fosfato
WO2020247782A1 (en) * 2019-06-06 2020-12-10 Avidity Biosciences, Inc. Nucleic acid-polypeptide compositions and uses thereof
WO2021011692A1 (en) 2019-07-17 2021-01-21 Nucorion Pharmaceuticals, Inc. Cyclic deoxyribonucleotide compounds
WO2021140471A1 (en) * 2020-01-10 2021-07-15 Janssen Biopharma, Inc. Method for synthesis of 2'-alkyl- or 2'-alkenyl- or 2'-alkynyl-4'-fluoro-adenosine derivatives and intermediates thereof
KR20220132608A (ko) 2020-01-27 2022-09-30 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 SARS CoV-2 감염증을 치료하기 위한 방법
TWI775313B (zh) 2020-02-18 2022-08-21 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
TWI794742B (zh) 2020-02-18 2023-03-01 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
KR20250133471A (ko) 2020-02-18 2025-09-05 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 항바이러스 화합물
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
TWI785528B (zh) 2020-03-12 2022-12-01 美商基利科學股份有限公司 1’-氰基核苷之製備方法
JP7482250B2 (ja) 2020-04-06 2024-05-13 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド １’－シアノ置換カルバヌクレオシド類似体の吸入製剤
WO2021216431A1 (en) 2020-04-21 2021-10-28 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Benzyloxy phosph(on)ate compounds
EP4157272B1 (en) 2020-05-29 2025-07-02 Gilead Sciences, Inc. Remdesivir for the treatment of viral infections
IL299202A (en) 2020-06-24 2023-02-01 Gilead Sciences Inc 1'-cyano nucleoside analogs and uses thereof
JP7559223B2 (ja) 2020-08-24 2024-10-01 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド リン脂質化合物及びその使用
US11926645B2 (en) 2020-08-27 2024-03-12 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections
TWI925033B (zh) 2020-10-16 2026-05-11 美商基利科學股份有限公司 磷脂化合物及其用途
US12274700B1 (en) 2020-10-30 2025-04-15 Accencio LLC Methods of treating symptoms of coronavirus infection with RNA polymerase inhibitors
WO2022164941A1 (en) 2021-01-26 2022-08-04 Atea Pharmaceuticals, Inc. Advantageous morphic form of at-527 hemi-sulfate salt
AU2022256476B2 (en) 2021-04-16 2025-06-05 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing carbanucleosides using amides
CN113234102A (zh) * 2021-05-18 2021-08-10 宁波大学 一种三配位磷衍生物及中间体及制备方法
AU2022291927A1 (en) 2021-06-17 2024-01-04 Atea Pharmaceuticals, Inc. Advantageous anti-hcv combination therapy
CA3228162A1 (en) 2021-08-18 2023-02-23 Gilead Sciences, Inc. Phospholipid compounds and methods of making and using the same
KR20240154647A (ko) 2022-03-02 2024-10-25 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 바이러스성 감염 치료를 위한 화합물 및 방법
JP2025513500A (ja) 2022-04-20 2025-04-24 シャンハイ インスティテュート オブ マテリア メディカ、チャイニーズ アカデミー オブ サイエンシーズ 抗ウイルスヌクレオシド類似体並びにその医薬組成物及び使用
EP4547665A1 (en) 2022-06-30 2025-05-07 Gilead Sciences, Inc. Solid forms of a nucleoside analogue and uses thereof
US12357577B1 (en) 2024-02-02 2025-07-15 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations and uses thereof

Family Cites Families (210)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US112966A (en) * 1871-03-21 Improvement in hay and cotton-presses
US3817978A (en) 1971-06-16 1974-06-18 Syntex Inc 4-fluoro nucleosides and sugar intermediates, and methods of preparing
US3852267A (en) 1972-08-04 1974-12-03 Icn Pharmaceuticals Phosphoramidates of 3{40 ,5{40 -cyclic purine nucleotides
DE3239986A1 (de) 1982-10-28 1984-05-03 Robert Bosch Gmbh, 7000 Stuttgart Handwerkzeugmaschine mit einem kreisscheibenfoermigen werkzeug
US4713383A (en) 1984-10-01 1987-12-15 Ciba-Geigy Corporation Triazoloquinazoline compounds, and their methods of preparation, pharmaceutical compositions, and uses
US5712088A (en) 1987-11-18 1998-01-27 Chiron Corporation Methods for detecting Hepatitis C virus using polynucleotides specific for same
US6171782B1 (en) 1987-11-18 2001-01-09 Chiron Corporation Antibody compositions to HCV and uses thereof
US5714596A (en) 1987-11-18 1998-02-03 Chiron Corporation NANBV diagnostics: polynucleotides useful for screening for hepatitis C virus
US5698390A (en) 1987-11-18 1997-12-16 Chiron Corporation Hepatitis C immunoassays
US5679342A (en) 1987-11-18 1997-10-21 Chiron Corporation Hepatitis C virus infected cell systems
IN167775B (sr) 1988-06-24 1990-12-22 Hoechst India
US6027729A (en) 1989-04-20 2000-02-22 Chiron Corporation NANBV Diagnostics and vaccines
DE3932052A1 (de) 1989-09-26 1991-04-04 Basf Ag Oxazol- bzw. thiazolcarbonsaeureamide
MY106399A (en) 1990-07-24 1995-05-30 Pfizer Cephalosporins and homologeus, preparation and pharmaceutical composition
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
JP2889408B2 (ja) 1991-09-17 1999-05-10 富士写真フイルム株式会社 アゾメチン化合物及びこれを含有する熱転写色素供与材料
GB9202791D0 (en) 1992-02-11 1992-03-25 British Bio Technology Compounds
AU729657B2 (en) 1992-05-11 2001-02-08 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for inhibiting viral replication
DE4232852A1 (de) 1992-09-30 1994-03-31 Bayer Ag Imidazolinyl-pyridazine
ZA943999B (en) 1993-06-09 1995-02-03 Lonza Ag Quaternary ammonium and waterproofing/preservative compositions
WO1995008540A1 (en) 1993-09-22 1995-03-30 The Wellcome Foundation Limited Bis(amidinobenzimidazolyl)alkanes as antiviral agents
DE4341161A1 (de) 1993-12-02 1995-06-08 Michael Prof Dr Zeppezauer Membrangängiger Wirkstoff zur Störung der DNA-Biosynthese
JPH07242544A (ja) 1994-03-01 1995-09-19 Takeda Chem Ind Ltd 抗腫瘍剤
CZ293584B6 (cs) 1996-01-23 2004-06-16 Icn Pharmaceuticals Prostředek pro modulaci exprese lymfokinů
AU727177B2 (en) 1996-10-16 2000-12-07 Icn Pharmaceuticals, Inc. Purine L-nucleosides, analogs and uses thereof
SK284054B6 (sk) 1996-10-16 2004-08-03 Icn Pharmaceuticals, Inc. Substituované triazolové nukleozidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
EP1015469B2 (en) 1997-09-12 2015-11-18 Exiqon A/S Bi- and tri-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleoide analogues
EA200700564A1 (ru) 1998-02-25 2007-08-31 Эмори Юниверсити 2`-фторнуклеозиды
US20030203862A1 (en) 1998-03-26 2003-10-30 Miraglia Loren J. Antisense modulation of MDM2 expression
WO1999061583A2 (en) 1998-05-28 1999-12-02 Incara Pharmaceuticals Corp. Carbohydrate-based scaffold compounds, combinatorial libraries and methods for their construction
DE19855963A1 (de) 1998-12-04 2000-06-08 Herbert Schott Amphiphile Glycerylnucleotide, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
US6432975B1 (en) 1998-12-11 2002-08-13 Targacept, Inc. Pharmaceutical compositions and methods for use
ATE356824T1 (de) 1999-05-04 2007-04-15 Santaris Pharma As L-ribo-lna analoge
US6495677B1 (en) 2000-02-15 2002-12-17 Kanda S. Ramasamy Nucleoside compounds
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
PL359169A1 (en) 2000-05-26 2004-08-23 Idenix (Cayman) Limited Methods and compositions for treating flaviviruses and pestiviruses
US6815542B2 (en) 2000-06-16 2004-11-09 Ribapharm, Inc. Nucleoside compounds and uses thereof
UA72612C2 (en) 2000-07-06 2005-03-15 Pyrido[2.3-d]pyrimidine and pyrimido[4.5-d]pyrimidine nucleoside analogues, prodrugs and method for inhibiting growth of neoplastic cells
GB0019124D0 (en) 2000-08-03 2000-09-27 Pfizer Novel process
KR20090089922A (ko) 2000-10-18 2009-08-24 파마셋 인코포레이티드 바이러스 감염 및 비정상적인 세포 증식의 치료를 위한 변형된 뉴클레오시드
MXPA03006514A (es) * 2001-01-22 2004-12-02 Merck & Co Inc Derivados de nucleosidos como inhibidores de polimerasa de acido ribonucleico viral dependiente de acido ribonucleico.
US8481712B2 (en) 2001-01-22 2013-07-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
GB0114286D0 (en) 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
US6962991B2 (en) 2001-09-12 2005-11-08 Epoch Biosciences, Inc. Process for the synthesis of pyrazolopyrimidines
WO2003026675A1 (en) 2001-09-28 2003-04-03 Idenix (Cayman) Limited Methods and compositions for treating flaviviruses and pestiviruses using 4'-modified nucleoside
AU2002330154A1 (en) 2001-09-28 2003-04-07 Centre National De La Recherche Scientifique Methods and compositions for treating hepatitis c virus using 4'-modified nucleosides
WO2003039523A2 (en) 2001-11-05 2003-05-15 Exiqon A/S OLIGONUCLEOTIDES MODIFIED WITH NOVEL α-L-RNA ANALOGUES
AT411065B (de) 2001-12-27 2003-09-25 Dsm Fine Chem Austria Gmbh Verfahren zur herstellung von heterocyclischen (r)- und (s)-cyanhydrinen
US7323453B2 (en) 2002-02-13 2008-01-29 Merck & Co., Inc. Methods of inhibiting orthopoxvirus replication with nucleoside compounds
US20120041184A1 (en) 2002-02-20 2012-02-16 Leonid Beigelman RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS (HIV) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
WO2003073989A2 (en) 2002-02-28 2003-09-12 Biota, Inc. Nucleoside 5'-monophosphate mimics and their prodrugs
WO2003099840A1 (en) 2002-05-24 2003-12-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having modified nucleoside units
US20060234962A1 (en) 2002-06-27 2006-10-19 Olsen David B Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
AU2003247084B9 (en) 2002-06-28 2018-07-26 Centre National De La Recherche Scientifique Modified 2' and 3'-nucleoside prodrugs for treating flaviridae infections
US7608600B2 (en) 2002-06-28 2009-10-27 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Modified 2′ and 3′-nucleoside prodrugs for treating Flaviviridae infections
EP1556399A4 (en) 2002-07-16 2007-09-26 Merck & Co Inc Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent viral RNA polymerase
AU2003259735A1 (en) 2002-08-08 2004-02-25 Sirna Therapeutics, Inc. Small-mer compositions and methods of use
WO2004037159A2 (en) 2002-10-23 2004-05-06 Obetherapy Biotechnology Compounds, compositions and methods for modulating fat metabolism
US7393954B2 (en) 2002-12-12 2008-07-01 Reliable Biopharmaceutical Corporation Process for the production of pentostatin aglycone and pentostatin
WO2004080466A1 (en) 2003-03-07 2004-09-23 Ribapharm Inc. Cytidine analogs and methods of use
WO2004091499A2 (en) 2003-04-09 2004-10-28 Neose Technologies, Inc. Intracellular formation of peptide conjugates
RU2356896C2 (ru) 2003-04-16 2009-05-27 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Производные хиназолина
US20040259934A1 (en) 2003-05-01 2004-12-23 Olsen David B. Inhibiting Coronaviridae viral replication and treating Coronaviridae viral infection with nucleoside compounds
WO2005020884A2 (en) * 2003-05-14 2005-03-10 Idenix (Cayman) Limited Nucleosides for treatment of infection by corona viruses, toga viruses and picorna viruses
US20040229839A1 (en) 2003-05-14 2004-11-18 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Substituted nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
RU2358979C2 (ru) 2003-05-30 2009-06-20 Фармассет, Инк. Модифицированные фторированные аналоги нуклеозида
EP1644479A4 (en) 2003-06-16 2008-04-23 Mark W Grinstaff FUNCTIONAL SYNTHETIC MOLECULES AND MACROMOLECULES FOR GENERAL FEEDING
ATE478886T1 (de) 2003-07-25 2010-09-15 Idenix Pharmaceuticals Inc Purin nucleoside für die behandlung von durch flavividrae verursachten krankheiten, einschliesslich hepatitis c
WO2005021568A2 (en) 2003-08-27 2005-03-10 Biota, Inc. Novel tricyclic nucleosides or nucleotides as therapeutic agents
CA2542077A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 President And Fellows Of Harvard College Pyrovalerone analogs and therapeutic uses thereof
US20060040944A1 (en) 2004-06-23 2006-02-23 Gilles Gosselin 5-Aza-7-deazapurine derivatives for treating Flaviviridae
US20070265222A1 (en) 2004-06-24 2007-11-15 Maccoss Malcolm Nucleoside Aryl Phosphoramidates for the Treatment of Rna-Dependent Rna Viral Infection
WO2006063717A2 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Febit Biotech Gmbh Polymerase-independent analysis of the sequence of polynucleotides
AU2006222563A1 (en) 2005-03-08 2006-09-14 Biota Scientific Management Pty Ltd. Bicyclic nucleosides and nucleotides as therapeutic agents
US20100279974A1 (en) 2005-03-09 2010-11-04 Claire Pierra Nucleosides With Non-Natural Bases as Anti-Viral Agents
US7250416B2 (en) 2005-03-11 2007-07-31 Supergen, Inc. Azacytosine analogs and derivatives
EP2805719A1 (en) 2005-03-30 2014-11-26 Glaxosmithkline LLC Nicotinamide riboside and analogues thereof
WO2006116512A1 (en) 2005-04-26 2006-11-02 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois, Urbana, Il Nucleoside compounds and methods of use thereof
CN101287472B (zh) 2005-08-15 2011-10-12 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗病毒的4'-取代前核苷酸的氨基磷酸酯类化合物
CN101410407A (zh) 2006-04-03 2009-04-15 阿斯利康(瑞典)有限公司 取代腺嘌呤及其应用
GB0614947D0 (en) 2006-07-27 2006-09-06 Isis Innovation Epitope reduction therapy
HRP20110193T1 (hr) * 2006-10-10 2011-05-31 Medivir Ab Inhibitor hcv nukleozida
WO2008089439A2 (en) 2007-01-18 2008-07-24 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions for enhancing lifespan involving sirtuin-modulating compounds and chalcogenides
US20080207554A1 (en) 2007-01-31 2008-08-28 Alios Biopharma, Inc. 2-5A Analogs and their Methods of Use
JP2008214305A (ja) 2007-03-07 2008-09-18 Kotobuki Seiyaku Kk 置換アミン誘導体及びこれを有効成分とする医薬組成物
WO2008117047A1 (en) 2007-03-27 2008-10-02 Astrazeneca Ab Pyrazolo[3, 4-d]pyrimidine derivatives as antibacterial compounds
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
WO2008127613A1 (en) 2007-04-11 2008-10-23 Scynexis, Inc. New pharmaceutical compositions
EP1980568A1 (de) 2007-04-13 2008-10-15 Eberhard Karls Universität Tübingen Ethinylierte Heterodinucleosidphosphatanaloga, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
SI2014771T1 (sl) 2007-06-25 2015-04-30 Anadys Pharmaceuticals, Inc. Kontinuiran postopek encimske hidrolize
GB0712494D0 (en) 2007-06-27 2007-08-08 Isis Innovation Substrate reduction therapy
EP2019100A1 (en) 2007-07-19 2009-01-28 Santhera Pharmaceuticals (Schweiz) AG Substituted heteroarylpiperidine derivatives as melanocortin-4 receptor modulators
US20090076062A1 (en) 2007-09-13 2009-03-19 Juergen Klaus Maibaum Organic Compounds
GB0718575D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases
WO2009058800A2 (en) 2007-10-29 2009-05-07 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of nucleosides
US20090318380A1 (en) 2007-11-20 2009-12-24 Pharmasset, Inc. 2',4'-substituted nucleosides as antiviral agents
US8293720B2 (en) 2007-12-20 2012-10-23 Dogwood Pharmaceuticals, Inc. Substituted 4-{3-[6-amino-9-(3, 4-dihydroxy-tetrahydro-furan-2-yl)-9H-purin-2-yl]-prop-2-ynyl}-piperidine-1-carboxylic acid esters as A2AR agonists
WO2009086192A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Alios Biopharma, Inc. Biodegradable phosphate protected nucleotide derivatives and their use as cancer, anti viral and anti parasitic agents
US20090181921A1 (en) 2007-12-21 2009-07-16 Alios Biopharma Inc. 2-5a analogs and their methods of use
EP2252612B1 (en) 2008-02-22 2012-03-28 Irm Llc Heterocyclic compounds and compositions as c-kit and pdgfr kinase inhibitors
EP3042660A3 (en) 2008-04-15 2016-10-26 RFS Pharma, LLC. Nucleoside derivatives for treatment of caliciviridae infections, including norovirus infections
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
EP2313102A2 (en) 2008-07-03 2011-04-27 Biota Scientific Management Bycyclic nucleosides and nucleotides as therapeutic agents
GB0815968D0 (en) 2008-09-03 2008-10-08 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
US20110171192A1 (en) 2008-09-05 2011-07-14 Hiroshi Tomiyama Substituted amine derivative and medicinal composition comprising same as the active ingredient
TW201023858A (en) 2008-09-18 2010-07-01 Ortho Mcneil Janssen Pharm Synergistic combinations of a macrocyclic inhibitor of HCV and a nucleoside
CL2009002206A1 (es) 2008-12-23 2011-08-26 Gilead Pharmasset Llc Compuestos derivados de pirrolo -(2-3-d]-pirimidin-7(6h)-tetrahidrofuran-2-il fosfonamidato, composicion farmaceutica; y su uso en el tratamiento de enfermedades virales.
AR074897A1 (es) 2008-12-23 2011-02-23 Pharmasset Inc Fosforamidatos de nucleosidos
MX2011006890A (es) 2008-12-23 2011-07-20 Pharmasset Inc Analogos de nucleosidos.
GB0900914D0 (en) 2009-01-20 2009-03-04 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
WO2010088924A1 (en) 2009-02-06 2010-08-12 Telormedix Sa Pharmaceutical compositions comprising imidazoquinolin(amines) and derivatives thereof suitable for local administration
CA2751458C (en) 2009-02-06 2018-06-05 Rfs Pharma, Llc Purine nucleoside monophosphate prodrugs for treatment of cancer and viral infections
US20100240604A1 (en) 2009-03-20 2010-09-23 Alios Biopharma, Inc. Protected nucleotide analogs
WO2010108140A1 (en) 2009-03-20 2010-09-23 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleoside and nucleotide analogs
TWI576352B (zh) 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
EP2264169A1 (en) 2009-06-15 2010-12-22 Qiagen GmbH Modified siNA
US20100331397A1 (en) 2009-06-24 2010-12-30 Alios Biopharma, Inc. 2-5a analogs and their methods of use
US8927513B2 (en) 2009-07-07 2015-01-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5′ phosphate mimics
TW201111378A (en) 2009-09-11 2011-04-01 Bayer Schering Pharma Ag Substituted (heteroarylmethyl) thiohydantoins
RU2553656C2 (ru) * 2009-09-29 2015-06-20 ЯНССЕН ПРОДАКТС, Эл.Пи. Фосфорамидатные производные нуклеозидов
US20150018301A1 (en) 2009-11-06 2015-01-15 The Johns Hopkins University LRRK-2-Mediated Neuronal Toxicity
US20130137728A1 (en) 2010-03-24 2013-05-30 MUSC Foundation for Research and Development Compositions and Methods for the Treatment of Degenerative Diseases
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
US9725479B2 (en) 2010-04-22 2017-08-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5′-end derivatives
FR2960234B1 (fr) 2010-05-18 2013-11-01 Inst Francais Du Petrole Procede de dimerisation de l'ethylene en butene-1 utilisant une composition comprenant un complexe a base de titane et un ligand alcoxy fonctionnalise par un hetero-atome.
FR2960235B1 (fr) 2010-05-18 2013-11-01 Inst Francais Du Petrole Procede d'oligomerisation des olefines utilisant une composition comprenant un complexe organometallique contenant un ligand alcoxy fonctionnalise par un hetero-atome.
EA025311B1 (ru) 2010-07-19 2016-12-30 Гайлид Сайэнсиз, Инк. Способы получения диастереомерно чистых фосфорамидатных пролекарств
PT2595980E (pt) 2010-07-22 2014-11-27 Gilead Sciences Inc Métodos e compostos para tratar infeções pelo vírus da família paramyxoviridae
WO2012016713A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg Tumour targeting with polypeptides
WO2012025857A1 (en) 2010-08-23 2012-03-01 Hetero Research Foundation Cycloalkyl methoxybenzyl phenyl pyran derivatives as sodium dependent glucose co transporter (sglt2) inhibitors
TW201305185A (zh) 2010-09-13 2013-02-01 吉李德科學股份有限公司 用於抗病毒治療之２’－氟取代之碳－核苷類似物
US20120070411A1 (en) 2010-09-22 2012-03-22 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleotide analogs
WO2012040127A1 (en) 2010-09-22 2012-03-29 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleotide analogs
AU2011305652B2 (en) 2010-09-22 2016-10-20 Janssen Biopharma, Inc. Azido nucleosides and nucleotide analogs
WO2012041965A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Universidad Nacional De Quilmes Process for producing dialkylphosphotriesters of nucleosides by enzymatic transesterification and deprotection thereof for producing nucleoside monophosphates
US20120082795A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Ppg Industries Ohio, Inc. Method for using a primer comprising a self-emulsified polyester microgel
WO2012074547A2 (en) 2010-11-29 2012-06-07 New York University STEROID COMPOUNDS AS RORγt MODULATORS AND USES THEREOF
US8772474B2 (en) 2010-12-22 2014-07-08 Alios Biopharma, Inc. Cyclic nucleotide analogs
US9095599B2 (en) 2011-01-03 2015-08-04 Nanjing Molecular Research, Inc. O-(substituted benzyl) phosphoramidate compounds and therapeutic use
WO2012099630A1 (en) 2011-01-20 2012-07-26 University Of Rochester Compositions and methods for treating or preventing a retrovirus infection
CN103717222A (zh) 2011-02-24 2014-04-09 浙江大学 桥二硫二氧代哌嗪及其在治疗癌症方面的用途
EP2697241B1 (en) 2011-04-13 2019-06-12 Gilead Sciences, Inc. 1'-substituted pyrimidine n-nucleoside analogs for antiviral treatment
WO2012142085A1 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2012167133A2 (en) 2011-06-01 2012-12-06 The Regents Of The University Of California Inhibitors of anandamide transport and their therapeutic uses
FR2977586B1 (fr) 2011-07-08 2013-07-12 Rhodia Operations Procede de fabrication de composes comprenant des fonctions nitriles
DE102011108874A1 (de) 2011-07-28 2013-01-31 Hydac System Gmbh Steuervorrichtung
AU2012290089B2 (en) 2011-08-01 2016-09-29 Mbc Pharma, Inc. Vitamin B6 derivatives of nucleotides, acyclonucleotides and acyclonucleoside phosphonates
US8575119B2 (en) 2011-09-23 2013-11-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc. 2′-chloroacetylenyl substituted nucleoside derivatives
CN103102345B (zh) 2011-11-14 2015-06-03 广东东阳光药业有限公司 氨基喹唑啉类衍生物及其盐和使用方法
FR2982858B1 (fr) 2011-11-18 2013-11-29 Rhodia Operations Procede de fabrication de composes comprenant des fonctions nitriles
FR2984322B1 (fr) 2011-12-16 2013-12-20 Rhodia Operations Procede de fabrication de composes comprenant des fonctions nitriles
EA024297B1 (ru) * 2011-12-20 2016-09-30 Рибосайенс Ллк 2',4'-дифтор-2'-метилзамещенные нуклеозидные производные в качестве ингибиторов репликации рнк вируса гепатита с
EP2794630A4 (en) 2011-12-22 2015-04-01 Alios Biopharma Inc SUBSTITUTED PHOSPHORTHIOAT NUCLEOTIDE ANALOGUE
KR102072041B1 (ko) 2011-12-22 2020-01-31 앨리오스 바이오파마 인크. 치환된 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드 및 그의 유사체
WO2013138210A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Ning Xi Substituted cyclic compounds and methods of use
SI2827875T1 (sl) 2012-03-21 2019-04-30 Alios Biopharma, Inc. Substituirani nukleozidi, nukleotidi in njihovi analogi
US9441007B2 (en) 2012-03-21 2016-09-13 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
USRE48171E1 (en) 2012-03-21 2020-08-25 Janssen Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
NZ631601A (en) 2012-03-21 2016-06-24 Alios Biopharma Inc Solid forms of a thiophosphoramidate nucleotide prodrug
HK1203513A1 (en) 2012-03-21 2015-10-30 艾丽奥斯生物制药有限公司 Methods of preparing substituted nucleotide analogs
WO2013142159A1 (en) 2012-03-21 2013-09-26 Alios Biopharma, Inc. Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
NZ630805A (en) 2012-03-22 2016-01-29 Alios Biopharma Inc Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
US9809616B2 (en) 2012-10-29 2017-11-07 Emory University Pyrimidine nucleosides and their monophosphate prodrugs for the treatment of viral infections and cancer
MD20140134A2 (ro) 2012-05-22 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compuşi ai D-aminoacizilor pentru tratamentul bolilor hepatice
EP2676987A1 (en) 2012-06-21 2013-12-25 Universidad De Burgos Cross-linked aramid
EP2870169A1 (en) 2012-07-03 2015-05-13 Bristol-Myers Squibb Company Process for preparing diastereomerically enriched phosphoramidate derivatives of nucleoside compounds for treatment of viral infections
KR20150046259A (ko) 2012-08-23 2015-04-29 앨리오스 바이오파마 인크. 파라믹소바이러스 바이러스성 감염의 치료용 화합물
WO2014047117A1 (en) 2012-09-18 2014-03-27 Bristol-Myers Squibb Company Process for preparing phosphoramidate derivatives of nucleoside compounds for treatment of viral infections
WO2014048939A1 (en) 2012-09-26 2014-04-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Cyclic ether pyrazol-4-yl-heterocyclyl-carboxamide compounds and methods of use
MX362855B (es) 2012-09-26 2019-02-20 Merck Patent Gmbh Derivados de quinazolinona como inhidores poli (adp-ribosa) polimerasa (parp).
US9211300B2 (en) * 2012-12-19 2015-12-15 Idenix Pharmaceuticals Llc 4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
KR20150118106A (ko) 2012-12-20 2015-10-21 알데이라 테라퓨틱스, 아이엔씨. 페리-카르비놀
ME03000B (me) 2012-12-21 2018-10-20 Plexxikon Inc Jedinjenja i metode modulacije kinaze i povezane indikacije
UA111305C2 (uk) 2012-12-21 2016-04-11 Пфайзер Інк. Конденсовані лактами арилу та гетероарилу
US9243022B2 (en) 2012-12-21 2016-01-26 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US9604930B2 (en) 2012-12-21 2017-03-28 Epizyme, Inc. Tetrahydro- and dihydro-isoquinoline PRMT5 inhibitors and uses thereof
HUE035803T2 (en) 2012-12-21 2018-05-28 Sanofi Sa Dual GLP1 / GIP or trigonal GLP1 / GIP / glucagon agonists
NZ708175A (en) 2012-12-21 2020-06-26 Hoffmann La Roche Peptides as oxytocin agonists
CA2895808A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Quanticel Pharmaceuticals, Inc. Histone demethylase inhibitors
AU2013361193B2 (en) 2012-12-21 2018-05-24 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US9233974B2 (en) 2012-12-21 2016-01-12 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
FR3000065A1 (fr) 2012-12-21 2014-06-27 Univ Lille Ii Droit & Sante Composes bicycliques ayant une activite potentialisatrice de l'activite d'un antibiotique actif contre les mycobacteries-composition et produit pharmaceutiques comprenant de tels composes
LU92126B1 (fr) 2012-12-31 2014-07-01 Cesa Alliance Sa Composé pharmaceutique pour la prévention et le traitement d'un trouble ou d'une maladie de la mémoire, neurodégénérative ou neuronale
US20150065439A1 (en) 2013-02-28 2015-03-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions
ES2616508T3 (es) 2013-03-04 2017-06-13 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Derivados de 1H-pirazol sustituidos con halógeno como insecticidas
US20140309413A1 (en) 2013-03-11 2014-10-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of stereoselective synthesis of substituted nucleoside analogs
TW201532606A (zh) 2013-04-05 2015-09-01 Alios Biopharma Inc 使用化合物之組合治療ｃ型肝炎病毒感染
AU2014265293B2 (en) 2013-05-16 2019-07-18 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives
AU2014302715B2 (en) 2013-06-26 2018-12-06 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
ES2952714T3 (es) 2013-06-26 2023-11-03 Janssen Pharmaceuticals Inc Nucleósidos sustituidos, nucleótidos y análogos de los mismos
CA2921294C (en) 2013-08-21 2023-05-16 Alios Biopharma, Inc. Antiviral compounds
AU2014318837B2 (en) 2013-09-12 2019-05-30 Janssen Biopharma, Inc. Pyridazinone compounds and uses thereof
CN105764904B (zh) 2013-09-12 2020-02-11 詹森生物制药有限公司 氮杂-吡啶酮化合物及其用途
CN105829333A (zh) 2013-10-11 2016-08-03 艾丽奥斯生物制药有限公司 取代的核苷、核苷酸及其类似物
US9603864B2 (en) * 2014-06-24 2017-03-28 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
SG11201610597QA (en) 2014-06-24 2017-01-27 Alios Biopharma Inc Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
WO2016014398A1 (en) 2014-07-22 2016-01-28 Alios Biopharma, Inc. Methods for treating paramyxoviruses
MA40404A (fr) 2014-08-05 2017-06-14 Alios Biopharma Inc Polythérapie pour traiter un paramyxovirus
CN107108681B (zh) 2014-10-28 2021-04-06 詹森生物制药有限公司 制备取代的核苷类似物的方法
MA41213A (fr) 2014-12-19 2017-10-24 Alios Biopharma Inc Nucléosides substitués, nucléotides et analogues de ceux-ci
MA41614A (fr) 2015-02-25 2018-01-02 Alios Biopharma Inc Composés antiviraux
WO2016145103A1 (en) 2015-03-11 2016-09-15 Alios Biopharma, Inc. Aza-pyridone compounds and uses thereof
US10745427B2 (en) 2016-03-09 2020-08-18 Janssen Biopharma, Inc. Acyclic antivirals
WO2017156407A1 (en) 2016-03-10 2017-09-14 Alios Biopharma, Inc. Method of preparing aza-pyridone compounds
WO2017223231A1 (en) 2016-06-21 2017-12-28 Alios Biopharma, Inc. (s)-8-(benzhydryl )-6-isopropyl-3,5-dioxo- 5, 6,7,8,-tetrahydro-3h-pyrazino-[1,2-b]pyridazin-yl-isobutyrate antiviral agent for use in treating influenza
WO2018081449A1 (en) 2016-10-27 2018-05-03 Alios Biopharma, Inc. Methods for treating respiratory syncytial virus infection
WO2018222774A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Alios Biopharma, Inc. Methods for treating pneumoviruses
MX2021006992A (es) 2018-12-12 2021-11-17 Janssen Biopharma Inc Análogos de nucleósidos de ciclobutilo como antivirales.
BR112021010351A2 (pt) 2018-12-12 2021-08-31 Janssen Biopharma, Inc. Análogos de ciclopentil nucleosídeos como antivirais

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201504554UA (en) 2015-07-30
US9249174B2 (en) 2016-02-02
LT2935303T (lt) 2021-03-25
IL239324A0 (en) 2015-07-30
US10683320B2 (en) 2020-06-16
HUE053946T2 (hu) 2021-08-30
TW201429983A (zh) 2014-08-01
CN110684067A (zh) 2020-01-14
ES2865402T3 (es) 2021-10-15
US12173025B2 (en) 2024-12-24
KR20230069261A (ko) 2023-05-18
SG10201802325TA (en) 2018-04-27
DK2935303T3 (da) 2021-05-03
US20140179627A1 (en) 2014-06-26
EP2935303B1 (en) 2021-02-17
TWI641615B (zh) 2018-11-21
US20190085011A1 (en) 2019-03-21
JP2020063284A (ja) 2020-04-23
AU2020200499A1 (en) 2020-02-13
US10144755B2 (en) 2018-12-04
PH12015501423A1 (en) 2015-09-14
ECSP15031144A (es) 2015-11-30
KR20210141773A (ko) 2021-11-23
HRP20210510T1 (hr) 2021-05-14
KR102532198B1 (ko) 2023-05-11
KR20200120776A (ko) 2020-10-21
US20160024136A1 (en) 2016-01-28
US10793591B2 (en) 2020-10-06
PE20151433A1 (es) 2015-10-16
US20200079813A1 (en) 2020-03-12
IL296551B1 (en) 2023-12-01
EP2935303A1 (en) 2015-10-28
AU2018203337B2 (en) 2019-12-05
AU2020200499B2 (en) 2021-05-06
US20170037077A1 (en) 2017-02-09
CL2015001699A1 (es) 2015-10-30
JP2022180507A (ja) 2022-12-06
US11485753B2 (en) 2022-11-01
KR20150100806A (ko) 2015-09-02
IL296551A (en) 2022-11-01
KR102168621B1 (ko) 2020-10-22
BR112015014457A2 (pt) 2017-11-21
EP3421482A1 (en) 2019-01-02
US20230167151A1 (en) 2023-06-01
US10487104B2 (en) 2019-11-26
CN105073766A (zh) 2015-11-18
KR102788773B1 (ko) 2025-03-28
WO2014100505A1 (en) 2014-06-26
MX2015007925A (es) 2015-10-05
EA201590943A1 (ru) 2016-01-29
US10112966B2 (en) 2018-10-30
US20160016987A1 (en) 2016-01-21
EP2935303A4 (en) 2016-08-10
AP2015008533A0 (en) 2015-06-30
US20190031703A1 (en) 2019-01-31
TW201900182A (zh) 2019-01-01
JP2016505595A (ja) 2016-02-25
IL274901B (en) 2022-10-01
KR102327888B1 (ko) 2021-11-17
AU2013361200A1 (en) 2015-07-23
CA2894542A1 (en) 2014-06-26
PT2935303T (pt) 2021-04-30
US20160039858A1 (en) 2016-02-11
US20210139523A1 (en) 2021-05-13
US20140179910A1 (en) 2014-06-26
US9243022B2 (en) 2016-01-26
IL296551B2 (en) 2024-04-01
SI2935303T1 (sl) 2021-08-31
JP2018080178A (ja) 2018-05-24
CA2894542C (en) 2023-10-31
AU2018203337A1 (en) 2018-05-31
JP6284547B2 (ja) 2018-02-28
JP7196054B2 (ja) 2022-12-26
HK1216536A1 (en) 2016-11-18
US20170037075A1 (en) 2017-02-09
IL239324B (en) 2020-11-30
PL2935303T3 (pl) 2021-10-04
EP3912984A1 (en) 2021-11-24
CL2017001769A1 (es) 2018-02-16
JP6637023B2 (ja) 2020-01-29
IL274901B2 (en) 2023-02-01
SMT202100259T1 (it) 2021-07-12
GEP201706757B (en) 2017-10-25
CY1124742T1 (el) 2022-07-22
IL274901A (en) 2020-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12173025B2 (en) Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
HK40064928A (en) 4’-fluoro-nucleosides, 4’-fluoro-nucleotides and analogs thereof for the treatment of hcv
HK1216536B (en) 4&#39;-fluoro-nucleosides, 4&#39;-fluoro-nucleotides and analogs thereof for the treatment of hcv