RS61935B1 - Jedinjenja korisna za inhibiciju ror-gama-t - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja korisna za inhibiciju orfan receptora gama-t (RORγt) povezanog sa receptorom retinoinske kiseline, na farmaceutske kompozicije i na postupke za lečenje bolesti povezanih sa aktivnošću RORγ.

[0002] Orfan receptori (RORi) povezani sa receptorom retinoinske kiseline su članovi superfamilije nuklearnih receptora (NR) koji su identifikovani kao važni patološki regulatori u mnogim bolestima. ROR podfamilija se sastoji od RORα, RORβ i RORγ. RORγ geni miševa i ljudi generišu dva izooblika, γ1 i γ2, od kojih se ovaj drugi obično označava kao γt.

Signalizacija RORγt, često u odgovoru na signalizaciju IL-23/IL-23 receptora, je potrebna za diferencijaciju prirodnih CD4+ T-ćelija u podgrupu T-ćelija označenih Th17, koje se razlikuju od klasičnih Th1 i Th2 ćelija i podržavaju njihovo održavanje. Th17 ćelije produkuju interleukin-17A (IL-17) i IL-17F. Pored toga, Th17 ćelije produkuju brojne druge faktore za koje se zna da izazivaju inflamatorne odgovore, uključujući faktor nekroze tumora-alfa (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), GM-CSF, CXCL1 i CCL20. NK ćelije i urođene limfoidne ćelije kao što je inducer limfoidnog tkiva (LTi) sličan ćelijama koje ekspresuju IL-23 receptor i RORγt, produkuju IL-17 kao odgovor na stimulaciju i IL-23. Postoje značajni dokazi da su IL-23-odzivni, RORγt i ćelije koje ekspresuju IL-17 povezani sa autoimunim bolestima (AI), inflamatornim bolestima i kancerom. Prema tome, ciljana inhibicija RORγt može da bude važna za smanjenje patogeneza ovih bolesti.

[0003] AI bolesti su hronična stanja za koje trenutno ne postoji lek. Tretman AI bolesti obično obuhvata pokušaj kontrole toka bolesti i smanjenja simptoma primenom anti-inflamatornih lekova, analgetika ili imunosupresanata. Nažalost, korišćenje anti-inflamatornih lekova i analgetika je ponekad neefikasno a upotreba imunosupresanata često dovodi do razarajućih dugotrajnih neželjenih efekata. Najznačajniji neželjeni efekti imunosupresanata su povećani rizik od infekcije i veći rizik od kancera.

[0004] Identifikovani su prirodni i sintetički ligandi RORγt. Inhibitori male molekule protiv RORγt su objavljeni u literaturi za AI. Videti WO 2015/017335 i WO 2014/179564.

WO2015/101928 i WO2017/044410 dalje otkrivaju jedinjenja korisna za inhibiciju RORgama-t. Međutim, rasprostranjenost AI bolesti, zajedno sa neefikasnošću ili razarajućim neželjenim efektima savremenih tretmana, zahteva da pacijentima bude dostupan veći izbor tretmana. Usmeravanje na RORγt može da predstavlja prednost u odnosu na savremene terapije maksimiziranjem terapeutske koristi ciljajući na patogene imune ćelije uz minimiziranje rizika od supresije odbrane domaćina.

[0005] Ovaj pronalazak obezbeđuje nova jedinjenja koja su RORγt inhibitori. Ovakva nova jedinjenja mogu da zadovolje potrebu za potentnim, efektivnim tretmanom uveitisa, multiple skleroze, reumatoidnog artritisa, bolesti graft protiv domaćina, Kronove bolesti, drugih inflamatornih bolesti creva, kancera, psorijaze i seronegativnih spondilartropatija, kao što su aksijalni spondiloartritis, ankilozni spondilitis i psorijatični artritis.

[0006] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja Formule:

pri čemu

X je nezavisno -N- ili -CH-;

R<1>i R<2>su oba CH3;

ili R<1>i R<2>mogu da budu uzeti zajedno da formiraju tročlani karbociklični prsten;

R<3>je -CN ili -CF3;

ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0007] Ovo otkriće takođe obuhvata postupak za tretman psorijaze kod pacijenta, uključujući primenu jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na pacijentu kome je to potrebno. Dalje, ovo otkriće obuhvata postupak za tretman seronegativnih spondilartropatija kod pacijenta, uključujući primenu jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na pacijentu kome je to potrebno. U ovom ostvarenju, seronegativne spondilartropatije su aksijalni spondiloartritis, ankilozni spondilitis ili psorijatični artritis.

[0008] Ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje iz pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. U narednom ostvarenju, kompozicija dalje uključuje jedno ili više drugih terapeutskih agenasa. U daljem ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju za treteman psorijaze koja uključuje jedinjenje iz pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. U čak još jednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju za treteman seronegativnih spondiloartropatija, koja uključuje jedinjenje iz pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. U ovom ostvarenju, seronegativne spondiloartropatije su aksijalni spondiloartritis, ankilozni spondilitis ili psorijatični artritis.

[0009] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji, preciznije, za tretman psorijaze. Čak još dalje, obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u tretmanu psorijaze. U daljem ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja iz pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za proizvodnju medikamenta za tretman psorijaze.

[0010] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji, preciznije za tretman seronegativnih spondiloartropatija. Čak dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u tretmanu seronegatinvih spondiloartropatija. U narednom ostvarenju, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja iz pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za proizvodnju medikamenta za tretman seronegativnih spondiloartropatija. U ovm ostvarenjima, seronegativne spondiloartropatije su aksijalni spondiloartritis, ankilozni spondilitis ili psorijatični artritis.

[0011] Ovaj pronalazak takođe obuhvata međuproizvode i procese korisne za sintezu jedinjenja iz ovog pronalaska.

[0012] Naziv "lečenje" (ili "tretman" ili "tretiranje") kako se ovde koristi se odnosi na obuzdavanje, usporavanje, zaustavljanje ili preobražaj progresije ili ozbiljnosti postojećih simptoma, stanja ili poremećaja.

[0013] Naziv "spondiloartropatije" se odnosi na brojne hronične bolesti zglobova koje generalno obuhvataju kičmene pršljenove i oblasti gde se ligamenti i tetive spajju sa kostima. Spondilartropatije se ponekad takođe nazivaju spondiloartropatije ili spondiloartritis.

[0014] Naziv "seronegativni" se odnosi na bolest koja je negativna na reumatoidni faktor.

[0015] Jedinjenje iz ovog pronalaska može da reaguje da formira farmaceutski prihvatljive soli. Farmaceutski prihvatljive soli i uobičajena metodologija za njihovu izradu su dobro poznati u tehnici. Videti, na primer, P. Stahl i saradnici Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, 2nd Revised Edition (Wiley-VCH, 2011); S.M. Berge i saradnici, "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol.66, No.1, January 1977.

[0016] Stručnjak sa iskustvom će da shvati da se jedinjenje iz pronalaska, kako je pokazano u (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, sastoji od jezgra koje sadrži najmanje dva asimetrična centra, kako je niže predstavljeno sa *: ;;; ;;; Mada ovaj pronalazak razmatra sve pojedinačne enantiomere kao i smeše enantiomera ovih jedinjenja, uključujući racemate, preferirana jedinjenja pronalaska su niže predstavljena sa (II): ; ;; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. ;[0017] Stručnjak sa iskustvom će takođe shvatiti da će Cahn-Ingold-Prelog (R) ili (S) oznake za sve asimetrične centre da variraju u zavisnosti od modela supstitucije određenog jedinjenja. Pojedinačni enantiomeri ili diastereomeri mogu da se izrade počevši od asimetričnih reagenasa ili stereoselektivnim ili stereospecifičnim tehnikama sinteze. Alternativno, pojedinačni enantiomeri ili diastereomeri mogu da se izdvoje iz smeša asimetričnom hromatografijom ili standardnim tehnikama kristalizacije u bilo kojoj odgovarajućoj tački pri sintezi jedinjenja iz pronalaska. Pojedinačni enantiomeri jedinjenja iz pronalaska su preferirano ostvarenje pronalaska. ;[0018] Jedinjenje iz ovog pronalaska je preferirano formulisano u obliku farmaceutskih kompozicija za primenu različitim načinima. Ovakve farmaceutske kompozicije i procesi za njihovu izradu su dobro poznati u tehnici. Videti, na primer, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro i saradnici, eds., 22nd ed., Pharmaceutical Press, 2012). Još je više preferirana farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenje formule, ;;; ;;; pri čemu ;;X je nezavisno -N- ili -CH-; ;R<1>i R<2>su oba CH3; ;ili R<1>i R<2>mogu da budu uzeti zajedno da formiraju tročlani karbociklični prsten; ;R<3>je -CN ili -CF3; ;ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili razblaživača. ;;[0019] Preferirano ostvarenje jedinjenja iz ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja sledeće formule, ;;; ;;; X je nezavisno -N- ili -CH-; ;R<1>i R<2>su oba CH3; ;ili R<1>i R<2>mogu da budu uzeti zajedno da formiraju tročlani karbociklični prsten; ;R<3>je -CN ili -CF3; ;ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. ;[0020] Naredno preferirano ostvarenje jedinjenja iz ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja sledeće formule, ;;; ;;; X je nezavisno -N- ili -CH-; ;R<1>i R<2>su oba CH3; ;ili R<1>i R<2>mogu da budu uzeti zajedno da formiraju tročlani karbociklični prsten; ;R<3>je -CN ili -CF3; ;ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. ;[0021] Preferirano ostvarenje jedinjenja iz ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja sledeće formule, ;;; ;;; R<1>i R<2>su oba CH3; ;ili R<1>i R<2>mogu da budu uzeti zajedno da formiraju tročlani karbociklični prsten; ;ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. ;;[0022] Naredno preferirano ostvarenje jedinjenja iz ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja naredne formule, ;;; ;;; ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. ;[0023] Naredno preferirano ostvarenje jedinjenja iz ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja naredne formule, ;;; ; ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. ;[0024] Naredno preferirano ostvarenje jedinjenja iz ovog pronalaska se odnosi na jedinjenja naredne formule, ;;; ;;; ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. ;[0025] Posebno preferirano ostvarenje iz ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje, N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-5’,5’-dimetil-1-{(1R)-1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’,5’-dihidrospiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-2’-karboksamid ;;; ;;; ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. ;[0026] Još jedno posebno preferirano ostvarenje iz ovog pronalaska se odnosi na jedinjenje, N-{[5-(etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-1"-{(1R)-1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-2’-karboksamid ;;; ; ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. ;[0027] Jedinjenja iz ovog pronalaska su generalno efektivna u širokom opsegu doza. Na primer, dnevno doziranje je u rasponu od približno 1 mg do 1 g. U nekim slučajevima, vrednosti doze ispod donje granice prethodno pomenutog opsega mogu da budu više nego adekvatne, dok u drugim slučajevima mogu da se koriste čak veće doze uz održavanje prihvatljivog profila korist/rizik, pa stoga prethodno dat opseg doze ne treba da ograniči okvir pronalsaka na bilo koji način. Razumljivo je da će lekar u svetlu relevantnih okolnosti da odredi količinu jedinjenja koja se primenjuje u određenom slučaju, uključujući stanje koje se tretira, izabrani način primene, određeno jedinjenje koje(a) se primenjuje, godine starosti, težinu i odgovor pojedinačnog pacijenta i ozbiljnosti simptoma pacijenta. ;[0028] Jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njihove soli, mogu da se izrade različitim procedurama poznatim u tehnici, od kojih su neke ilustrovane u niže datim Šemama, Izradama i Primerima. Specifične faze sinteze za svaki od opisanih puteva mogu da se kombinuju na različite načine, ili u konjukciji sa fazama iz različitih šema, da se izrade jedinjenja ili soli iz ovog pronalaska. Produkti svake faze u niže datim šemama mogu da se izdvoje uobičajenim postupcima dobro poznatim u tehnici, uključujući ekstrakciju, evaporaciju, precipitaciju, hromatografiju, filtraciju, trituraciju i kristalizaciju. U niže datim Šemama, ukoliko nije drugačije navedeno, svi supstituenti su kako je prethodno definisano. Reagensi i početni materijali su lako raspoloživi stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici. ;[0029] Pored toga, neki međuproizvodi opisani u niže datim šemama mogu da sadrže jednu ili više zaštitnih grupa za azot i kiseonik. Različite zaštitne grupe mogu da budu iste ili različite u svakoj situaciji u zavisnosti od određenih uslova reakcije i određenih transformacija koje se vrše. Uslovi zaštite i deprotekcije su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom i opisani su u literaturi (videti na primer "Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis", Fourth Edition, by Peter G.M. Wuts and Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc.2007). ;[0030] Da bi bile jasnije, u narednim šemama su neki stereohemijski centri ostavljeni nespecificirani a neki supstituenti su eliminisani i ne treba da ograniče objašnjenje šema na bilo koji način. Pojedinačni enantiomeri ili diastereomeri mogu da se izrade počevši od asimetričnih reagenasa ili stereoselektivnim ili stereospecifičnim tehnikama sinteze. ;Alternativno, pojedinačni enantiomeri ili racemati mogu da se izoluju iz smeše standardnom asimetričnom hromatografijom ili tehnikama kristalizacije u bilo kojoj pogodnoj tački u toku sinteze jedinjenja iz pronalaska, postupcima kao što su tehnike selektivne kristalizacije ili asimetrična hromatografija (videti na primer, J. Jacques i saradnici, "Enantiomers, Racemates, ;;;1 ;and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981 i E.L. Eliel and S.H. Wilen," Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-Interscience, 1994). ;[0031] Neki međuproizvodi ili jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da imaju jedan ili više asimetričnih centara. Ovaj pronalazak razmatra sve pojedinačne enantiomere ili diastereomere kao i smeše enantiomera i diastereomera navedenih jedinjenja, uključujući racemate. ;Preferirano je da jedinjenja iz ovog pronalaska koja sadrže bar jedan asimetrični centar egzistiraju kao pojedinačni enantiomer ili diastereomer. Pojedinačni enantiomer ili diastereomer može da se izradi startujući sa asimetričnim reagensima ili tehnikama stereoselektivne ili stereospecifične sinteze. Alternativno, pojedinačni enantiomer ili diastereomer može da se izoluje iz smeše standardnom asimetričnom hromatografijom ili tehnikama kristalizacije. Stručnjak sa iskustvom će da razume da u nekim okolnostima eluacije, redosled enantiomera ili diastereomera može da bude različit zbog različitih hromatografskih kolona i mobilnih faza. "izomer 1" i "izomer 2" se odnose na jedinjenja koja pri asimetričnoj hromatografiji eluiraju prvo ili drugo, tim redom a ukoliko je asimetrična hromatografija započeta u ranoj fazi sinteze, ista oznaka se primenjuje na naredne međuproizvode i primere. ;[0032] Neke skraćenice su definisane na sledeći način: "ACN" se odnosi na acetonitril; ;"AUC" se odnosi na oblast ispod krive; "BPR" se odnosi na regulator povratnog pritiska; "BSA" se odnosi na albumin seruma govečeta; "DBA" se odnosi na rezređene verzije smeđih non-agouti; "DCC" se odnosi na 1,3-dicikloheksilkarbodiimid; "DCM" se odnosi na dihlormetan; "de" se odnosi na diastereometrični višak; "DFT" se odnosi na funkcionalnu teoriju gustine; "DIC" se odnosi na diizopropilkarbodiimid; "DIPEA" se odnosi na diizopropiletilamin, N-etil-N-izopropil-propan-2-amin, ili N,N-diizopropiletilamin; "DMAP" se odnosi na 4-dimetilaminopiridin; "DMEM" se odnosi na Dulbekov modifikovani Eagle-ov medijum; "DMF" se odnosi na dimetilformamid; "DMSO" se odnosi na dimetilsulfoksid; "DNA" se odnosi na deoksiribonukleinsku kiselinu; "DPBS" se odnosi na Dulbekov pufer fosfatnih soli; "EDCl" se odnosi na 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid; "EC50" se odnosi na efektivnu koncentraciju za polovinu maksimalnog odgovora; "ee" se odnosi na enantiomerni višak; "ELISA" se odnosi na enzimski vezanu imuno probu; "EtOAc" se odnosi na etil acetat; "EtOH" se odnosi na etanol ili etil alkohol; " Et2O" se odnosi na etil etar; "Ex" se odnosi na primer; "FBS" se odnosi na serum fetusa govečeta; "G" se odnosi na gravitacionu silu; "GAL" se odnosi na beta-galaktozidaza DNK vezujući domen; "GPI" se odnosi na glukoza-6-fosfat izomerazu; "HBTU" se odnosi na (2-(1H-benzotriazol-1-il)1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafiuorofosfat); "HEC" se odnosi na hidroksi etil celulozu; "HEK" se odnosi na bubreg humanog embriona; "HEPES" se odnosi na 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonsku kiselinu; "HOAt" se odnosi na 1-hidroksi-7-azobenzotriazol; "HOBt" se odnosi na 1-hidroksilbenzotriazol hidrat; "IC50" se odnosi na koncentraciju sredstva koja produkuje 50% maksimalnog inhibitornog odgovora mogućeg za to sredstvo; "IL" se odnosi na interleukin; "hromatografija jonske izmene" se odnosi na prečišćavanje korišćenjem IZOLUTE® Flash SCX-2 hromatografije jonske izmene uz eluiranje sa 2 M NH3u MeOH; "IPA" se odnosi na izopropil alkohol ili izopropanol; "IPAm" se odnosi na izopropilamin; "Kd" se odnosi na konstantu disocijacije; "Ki" se odnosi na konstantu inhibicije; "min" se odnosi na minut ili minute; "MEM" se odnosi na minimalni esencijalni medijum; "MeOH" se odnosi na metanol ili metil alkohol; "MS" se odnosi na masenu spektrometriju; "MTBE" se odnosi na metil t-butil etar; "NBS" se odnosi na N-bromosukcinimid; "PBMC" se odnosi na mononuklearne ćelije periferne krvi; "PBS" se odnosi na pufer fosfatnih soli, "PEM" se odnosi na fotoelastični modulator; "Prep" se odnosi na izradu; "RAR se odnosi na receptor retinoinske kiseline; "RPMI" se odnosi na Roswell Park Memorial Institute; "RT" se odnosi na sobnu temperaturu; "Rt" se odnosi na vreme zadržavanja; "SCX" se odnosi na izmenu jakog katjona; "SFC" se odnosi na superkritičnu tečnu hromatografiju; "T3P®" se odnosi na rastvor 1-propan fosfanoatnog anhidrida, rastvor 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosforinan-2,4,6-trioksida ili PPACA; "TEA" se odnosi na trietilamin; "THF" se odnosi na tetrahidrofuran; "VCD" se odnosi na vibracioni cirkularni dihroizam i "XRD": se odnosi na difrakciju X-zraka praška. ;[0033] U niže datim šemama, ukoliko nije drugačije navedeno, svi supstituenti su kako je prethodno definisano. Reagensi i početni materijali su lako raspoloživi stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici. Ostali mogu da se izrade standardnim tehnikama organske i heterociklične hemije, koje su analogne sa sintezama poznatih strukturno-sličnih jedinjenja i procedurama opisanim u Izradama i Primerima koji slede, uključujući bilo koje nove procedure. ;Šema 1 ;;; ;;; [0034] U šemi 1, PG je odgovarajuća zaštitna grupa amina. Zaštitne grupe amina su dobro poznate i prihvaćene u tehnici i mogu da uključe karbamate i amide. Sstučnjak sa iskustvom u tehnici će da prepozna alternativne reagense i procedure za uvođenje i uklanjanje navedenih zaštitnih grupa. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će da prepozna da postoje različiti postupci za izradu supstituisanih hidroksietil tiofena. Na primer, jedinjenje (I) može da se izradi od supstituisanog 2-(3-tienil)acetata sa supstituisanim epoksidom u prisustvu jake baze kao što su sec-butillitijum ili n-butillitijum, na temperaturi kao što je -78 do -60 °C, a nakona toga otvaranjem prstena Luisovom kiselinom kao što je bor trifluorid dietil eterat. U Fazi 1, supstituisani hidroksietil tiofen (1) i zaštićeni ili nezaštićeni 4-keto piperidin (2) mogu da se kombinuju u prisustvu kiseline kao što je trifluorosirćetna kiselina da se dobije spirotienilpirano piperidin (3). U slučaju kada je zaštitna grupa, PG, uklonjena u toku faze 1, amin u jedinjenju (3) može da se zaštiti koristeći standardnu zaštitnu grupu amina kao što je terc-butiloksikarbonil. U Fazi 2, jedinjenje (3) može da bude halogenizovano; na primer, jedinjenje (3) može da se brominuje sa NBS i katalizatorom kao što je dimetilamino piridin da se dobije jedinjenje (4). ;[0035] U Fazi 3, jedinjenje (4) može da reaguje sa ugljen monoksidom i aminom (5) u prisustvu organometalnog liganda, kao što je 4,5-bis-(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten i katalizatora, kao što je paladijum(II) acetat i baze, kao što je DIPEA, da se dobije jedinjenje ;;;1 ;(6). Stručnjak sa iskustvom će znati da postoje alternativni ligandi i katalizatori. Alternativno, u fazi 3, bromid jedinjenja (4) može da se konvertuje u karboksilnu kiselinu i udvoji sa aminom (5) pod standardnim uslovima udvajanja. Udvajanje karboksilne kiseline sa aminom (5) može da se izvede u prisustvu odgovarajućeg reagensa za udvajanje, kao što je T3P® i odgovarajuće amin baze, kao što je DIPEA. U alternativne reagense udvajanja spadaju HOBt, HBTU i HOAt i karbodiimidi, kao što su DCC, DIC, EDCI. U alternativne baze spadaju trimetilamin i TEA. Stručnjak sa iskustvom će prepoznati da postoje brojni drugi postupci i reagensi za formiranje amida nastalih reakcijom karboksilnih kiselina i amina. Za pojačavanje reakcija mogu da se koriste aditivi kao što je DMAP. Alternativno, jedinjenje (5) može da se aciluje upotrebom supstituisanog acil hlorida jedinjenja karboksilne kiseline u prisustvu baze, kao što su TEA ili piridin. ;[0036] U fazi 4, jedinjenje (6) može da se deprotektuje pod odgovarajućim uslovima poznatim u tehnici. Na primer, terc-butiloksikarbonil zaštitna grupa može da se ukloni sa HCl. Slobodni amin može da se alkiluje sa odgovoarajuće supstituisanim metil pirimidinom (7), gde su halogen kao što je Br ili sulfonat odlazeća grupa, u prisustvu organske baze kao što je DIPEA ili neorganske baze kao što je kalijum karbonat, da se dobije jedinjenje Formule (I). ;[0037] Farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja iz pronalaska, kao što je hidrohloridna so, može da se formira, na primer, reakcijom odgovarajuće slobodne baze jedinjenja iz pronalaska, odgovarajuće farmaceutski prihvatljive kiseline, kao što je hlorovodonična kiselina, u pogodnom rastvaraču kao što je dietil etar pod standardnim uslovima dobro poznatim u tehnici. Pored toga, formiranje ovakvih soli može da se vrši istovremeno nakon uklanjanja zaštitne grupe azota. Formiranje ovakvih soli je dobro poznato i prihvaćeno u tehnici. Videti, na primer, Gould, P.L., "Salt selection for basic drugs," International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); Bastin, R.J. i saradnici "Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities," Organic Process Research and Development, 4: 427-435 (2000); i Berge, S.M. i saradnici, "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19, (1977). ;[0038] Jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njihove soli, mogu da se izrade različitim procedurama poznatim u tehnici, od kojih su neke ilustrovane u niže datim Izradama i Primerima. Specifične faze sinteze za svaki opisani način mogu da se kombinuju na različite načine da se izrade jedinjenja iz pronalaska ili njihove soli. Produkti svake niže date faze mogu da se obnove uobičajenim postupcima dobro poznatim u tehnici, uključujući ekstrakciju, evaporaciju, precipitaciju, hromatografiju, filtraciju, trituraciju i kristalizaciju. ;Reagensi i početni materijali su lako raspoložvi stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici. ;[0039] Naredne izrade i primeri dalje ilustruju pronalazak i predstavljaju tipične sinteze jedinjenja iz ovog pronalaska. ;;Izrade i Primeri ;;Izrada 1 ;;1-(Tiofen-3-ilmetil)ciklopropanol ;;[0040] ;;; ;;; [0041] Titanijum(IV) izopropoksid (25 mL, 84.4 mmol) a nakon toga etilmagnezijum bromid u Et2O (3.0 mol/L, 55 mL, 170 mmol) se u kapima dodaju u rastvor etil 2-(3-tienil)acetata (10 g, 58.74 mmol) u THF (100 mL) ohlađenom u ledenom kupatilu na 0 °C. Reaktivna smeša se meša 5 sati na 0 °C, nakon toga se reaktivna smeša neutrališe sa ledom. Reaktivna smeša se filtrira kroz diatomejsku zemlju i ispere sa DCM. Vodena faza se ekstrahuje sa DCM (2x), organski ekstrakti se kombinuju, suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju do sušenja. Prečiste se flash hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa gradijentom EtOAc/izo-heksan (0:100 do 30:70) da se dobije naslovljeni produkt (7.34 g, 77%). Maseni spektar (m/z): 155 (M+H). ;;Izrada 2 ;;2-Metil-1-(Tiofen-3 -il)propan-2-ol ;;[0042] ;;;1 ; ;;; [0043] Kompleks lantan trihlorid litijum hlorid u THF (0.6 mol/L, 60 mL, 38.412 mmol) se doda u rastvor metil 2-(3-tienil)acetata (6 g, 38.41 mmol) u THF (60 mL). Smeša se meša 40 minuta, nakon toga se u kapima doda metilmagnezijum bromid u Et2O (3.0 mol/L, 38 mL, 115.24 mmol) i zagreva 1 sat pod refluksom. Ohladi se na 0 °C i neutrališe dodavanjem 1/1 smeše ledeno hladne vode i slanog rastvora (100 mL). Smeša se ekstrahuje sa DCM (3x100 mL), organski ekstrakti se kombinuju, filtriraju kroz kartridž za razdvajanje faze i koncentruju do sušenja da se dobije naslovljeno jedinjenje (5.07 g, 84%) kao žuta tečnost. Maseni spektar (m/z): 139 (M-OH). ;;Izrada 3 ;;5,5-Dimetilspiro[4H-tieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin] ;;[0044] ;;; ;;; [0045] Bor trifluorid dietil eterat (1.51 mL, 5.60 mmol) se na 0 °C doda u rastvor terc-butil 4-oksopiperidin-1-karboksilata (2.23 g, 11.2 mmol) i 2-metil-1-(Tiofen-3-il)propan-2-ola (1.75 g, 11.2 mmol) u toluenu (20 mL). Meša se 1 sat na 0 °C nakon toga 18 sati na temperaturi sredine. Reakcija se zagreva 1 sat na 50 °C, nakon toga ohladi na temperaturu sredine i koncentruje do sušenja. Ostatak se rastvori u minimalnoj količini MeOH. Sirovi materijal se nanese na SCX kolonu, ispere sa MeOH, produkt eluira sa 2 N amonijak/MeOH, a nakon toga koncentruje do sušenja. Sirovi materijal se prečisti reverzno faznom hromatografijom da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.54 g, 16%). Maseni spektar (m/z): 238 (M+H). ;;Izrada 4 ;;;1 ;5,5-Ciklopropilspiro[4H-tieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin ;;[0046] ;;; ;;; [0047] Bor trifluorid dietil eterat (4.6 mL, 17 mmol) se na 0 °C doda u rastvor terc-butil 4-oksopiperidin-1-karboksilata (2.23 g, 11.2 mmol) i 1-(Tiofen-3-ilmetil)ciklopropanola (5.2 g, 34 mmol) u toluenu (52 mL). Meša se 1 sat na 0 °C, 1 sat na temperaturi sredine i 1 sat na 50 °C. Na 50 °C se doda HCl (4 M rastvor u dioksanu, 2.1 mL, 8.4 mmol), meša 1 sat na 50 °C, nakon toga ohladi na temperaturu sredine i koncentruje do sušenja. Ostatak se rastvori u minimalnoj količini MeOH. Sirovi materijal se nanese na SCX kolonu, ispere sa MeOH, produkt eluira sa 2 N amonijak/MeOH, nakon toga koncentruje do sušenja da se dobije naslovljeno jedinjenje (6.10 g, 70%). Maseni spektar (m/z): 236 (M+H). ;;Izrada 5 ;;terc-Butil [5,1’-ciklopropan][spiro[4,5-dihidrotieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin]-1-karboksilat ;;[0048] ;;; ;;; [0049] 5,1’-ciklopropan][spiro[4,5-dihidrotieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin (5.81g, 22.23 mmol) se rastvori u DCM (45 mL), ohladi na 0 °C, nakon toga se doda trimetilamin (15.5 mL, 111.2 mmol) a nakon toga di-terc-butil dikarbonat (7.35 g, 33.35 mmol). Reakcija se zagreje ;;;1 ;na temperaturu sredine i meša 18 sati. Neutrališe sa vodom, slojevi razdvoje i isperu sa DCM. Organski slojevi se kombinuju, isperu sa slanim rastvorom, propuste kroz separator faza i koncentruju do sušenja. Prečisti hromatografijom na silika gelu sa 0-15% EtOAc u heksanima da se dobije naslovljeno jedinjenje (4.00 g, 51%) kao bledo žuto ulje. Maseni spektar (m/z): 358 (M+Na). ;;Izrada 6 ;;terc-Butil 5,5-dimetilspiro[4H-tieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin]-1’-karboksilat ;;[0050] ;;; ;;; [0051] 5,5-dimetilspiro[4H-tieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin] (0.54g, 1.79 mmol) se rastvori u DCM (10 mL), ohladi na 0 °C, nakon toga se doda trimetilamin (0.50 mL, 3.58 mmol) a nakon toga di-terc-butil dikarbonat (0.48 g, 2.15 mmol). Reakcija se zagreje na temperaturu sredine i meša 18 sati. Neutrališe sa vodom, slojevi se razdvoje i isperu sa DCM. Organski slojevi se kombinuju, isperu sa 1 N rastvorom HCl a nakon toga sa slanim rastvorom. ;Materijal se propusti kroz separator faza i koncentruje do sušenja da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.34 g, 53%) kao bledo žuto ulje. Maseni spektar (m/z): 238 (M-BOC+H) ;;Izrada 7 ;;terc-Butil 2-bromo-5,5-ciklopropil-spiro[4H-tieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin]-1’-karboksilat ;;[0052] ;;;1 ; ;;; [0053] Rastvor terc-butil [5,1’-ciklopropan][spiro[4,5-dihidrotieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin]-1-karboksilata (1.2 g, 3.4 mmol) u ACN (24 mL) se ohladi na 0 °C, dodaju se DMAP (0.042 g, 0.34 mmol) i NBS (1.0 g, 5.8 mmol) i meša 1 sat. Zagreje se na temperaturu sredine, meša 30 minuta, nakon toga se u reaktivnu smešu doda smeša MTBE/izo-heksan (1:2, 45 mL) i meša 30 minuta. Čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem. Filtrat se koncentruje do sušenja da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.55 g, 77%) kao žuto ulje. Maseni spektar (m/z): (79Br/81Br) 436/438 (M+Na). ;;Izrada 8 ;;terc-Butil 2-bromo-5,5-dimetil-spiro[4H-tieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin]-1’-karboksilat ;;[0054] ;;; ;;; [0055] Rastvor terc-butil 5,5-dimetilspiro[4H-tieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin]-1’-karboksilata (0.34 g, 0.95 mmol) u ACN (3.4 mL) se ohladi na 0 °C, dodaju se DMAP (0.012 g, 0.095 mmol) i NBS (0.19 g, 1.05 mmol) i meša 1 sat. Zagreje se na temperaturu sredine i koncentruje do sušenja. Ostatak se rastvori u DCM, ispere sa zasićenim vodenim rastvorom Na2SO3, organski sloj filtrira kroz separator faza i filtrat koncentruje do sušenja da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.41 g, 78%) kao braon ulje. Maseni spektar (m/z): (<79>Br/<81>Br) 316/318 (M-BOC). ;;;1 ;Izrada 9 ;;5-(Etilsulfanil)piridin-2-karbonitril ;;[0056] ;;; ;;; [0057] 5-Bromopiridin-2-karbonitril (49.42 g, 270.1 mmol) i kalijum karbonat (113.5 g, 821.2 mmol) se rastvore u 1-metil-2-pirolidinonu (280 mL) i u porcijama se u toku 30 minuta dodaje etantiol (26.4 mL, 356 mmol) tako da temperatura ostaje ispod 50 °C. Reakcija se ohladi na sobnu temperaturu i meša u toku noći. Razblaži sa EtOAc (1200 mL) i vodom (2200 mL). Organski sloj se sakupi i ispere sa slanim rastvorom (3x300 mL), organski sloj se suši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (44.87 g, 100%) kao beličasta čvrsta supstanca. ;<1>H NMR (400.13 MHz, d6-DMSO) δ 8.63 (s, 1H), 7.93 (s, 2H), 3.17 (q, J=7.3, 2H), 1.29 (t, J=7.3, 3H). ;;Izrada 10 ;;5-(Etilsulfonil)piridin-2-karbonitril ;;[0058] ;;; ;;; [0059] 5-(etilsulfanil)piridin-2-karbonitril (44.36 g, 270.1 mmol) se rastvori u anhidrovanom ;;;2 ;DCM (540 mL) i ohladi na -20 °C. Doda se 3-hlorperoksibenzoeva kiselina (130 g, 565.0 mmol) u porcijama od 10-12 grama u toku 1 sat, održavajući unutrašnju temperaturu između 0 °C i -10 °C. Reaktivna smeša se meša u hladnom kupatilu i ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu u toku noći. Ispere sa 1 N rastvorom NaOH (1 L), vodom, 1 N rastvorom NaOH (2x500 mL) i slanim rastvorom. Organski sloj se suši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (49.52 g, 93%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400.13 MHz, d6-DMSO) δ 9.20 (d, J=1.9, 1H), 8.56 (dd, J=2.0, 8.1, 1H), 8.36 (d, J=8.1, 1H), 3.52 (q, J=7.3, 2H), 1.16 (t, J=7.5, 3H). ;;Izrada 11 ;;1-[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metanamin hidrohlorid ;;[0060] ;;; ;;; [0061] 5-(etilsulfonil)piridin-2-karbonitril (49.52 g, 252.4 mmol) se podeli u tri porcije po 16.5 g. U Parr bocu zapremine 2250 mL se u atmosferi N2doda 10% Pd/C (1.65 g, 15.5 mmol) i ovlaži sa MeOH (750 mL). Doda se 5-(etilsulfonil)piridin-2-karbonitril (16.5 g, 84.09 mmol) rastvoren u MeOH (750 mL). Doda se HCl (6 N vodeni rastvor, 17.1 ml, 102.6 mmol). Boca se zatvori, prečisti sa N2, prečisti sa H2i na sobnoj temperaturi podvrgne pritisku vodonika od 68.9 kPa u toku 3 sata. Prečisti sa N2i nakon toga smeša filtrira. Postupak se ponovi sa preostalim porcijama 5-(etilsulfonil)piridin-2-karbonitrila. Svi filtrati se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (59.61 g, 99%) kao bež čvrsta supstanca. Maseni spektar (m/z): 201 (M+H-HCl). ;;Izrada 12 ;;1-[2-(Trifluorometil)pirimidin-5-il]etanol ;;[0062] ; ;;; [0063] 2-(Trifluorometil)pirimidin-5-karbaldehid (11.31 mmol, 1.992 g) se rastvori u THF (56.56 mL), ohladi na 0 °C i polako se dodaje metilmagnezijum bromid (3 M u Et2O) (33.94 mmol, 11.31 mL). Reakcija se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu i meša 2.5 sata. Reakcija se neutrališe sa 1 N rastvorom HCl. Doda se EtOAc i ispere sa 1 N rastvorom HCl. Organske supstance se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.66 g, 76.5%). Maseni spektar (m/z): 193.0 (M+H). ;;Izrada 13 ;;5-(1-Bromoetil)-2-(trifluorometil)pirimidin ;;[0064] ;;; ;;; [0065] 1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etanol (1.663 g, 8.655 mmol) i trifenilfosfin (3.405 g, 12.98 mmol) se rastvore u DCM (86.55 mL) i doda se NBS (12.98 mmol, 2.311 g) na sobnoj temperaturi. Nakon 3 sata, reakcija se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa 10% EtOAc/heksani da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.641 g, 74.34%).<1>H NMR (400.13 MHz, d6-DMSO) δ 9.26 (s, 2H), 5.63 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 2.09 (d, J= 7.0 Hz, 3H). ;;Izrada 14 ;terc-Butil 2’-({[5-(etilsulfonil)piridin-2-il]metil}karbamoil)-5’,5’-dimetil-4’,5’-dihidro-1H-spiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-1-karboksilat ;;[0066] ;;; ;;; [0067] terc-Butil 2-bromo-5,5-dimetil-spiro[4H-tieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin]-1’-karboksilat (0.41 g, 0.74 mmol), (5-etilsulfonil-2-piridil)metanamin;hidrohlorid (0.26 g, 1.11 mmol) i DIPEA (0.39 mL, 2.21 mmol) se dodaju u toluen (4.9 mL) a nakon toga se dodaju paladijum(II) acetat (8.3 mg, 0.036 mmol) i 4,5-bis-(difenilfosfino)-9,9-dimetil-ksanten (0.043 g, 0.074 mmol). Reakcija se degasira i ponovo napuni sa CO (60psi), nakon toga zagreva na 90 °C u toku noći. Ohladi se na temperaturu sredine. Filtrira kroz ploču diatomejske zemlje, ispere sa DCM (2x20 mL) i rastvarači koncentruju da se dobije braon pena. Prečisti se flash hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa DCM/MeOH (100:0 do 95:5) da se dobije naslovljeni produkt (0.29 g, 52%). Maseni spektar (m/z): 586 (M+Na). ;;Izrada 15 ;;terc-Butil 2’-({[5-(etilsulfonil)piridin-2-il]metil}karbamoil)-1"H,4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-1"-karboksilat ;;[0068] ;;;2 ; ;;; [0069] terc-Butil 2-bromo-5,5-ciklopropil-spiro[4H-tieno[2,3-c]piran-7,4’-piperidin]-1’-karboksilat (2.38 g, 4.19 mmol), (5-etilsulfonil-2-piridil)metanamin;hidrohlorid (1.49 g, 6.29 mmol) i DIPEA (2.21 mL, 12.6 mmol) se dodaju u toluen (29 mL) a nakon toga se dodaju paladijum(II) acetat (48 mg, 0.21 mmol) i 4,5-bis-(difenilfosfino)-9,9-dimetil-ksanten (0.25 g, 0.42 mmol). Reakcija se degasira i ponovo napuni sa CO (60 psi), nakon toga zagreva na 90 °C u toku noći. Ohladi se na temperaturu sredine. Filtrira kroz celite ploču, ispere sa DCM (2x20 mL) i rastvarači koncentruju da se dobije braon pena. Prečisti se flash hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa DCM/MeOH (100:0 to 95:5) da se dobije naslovljeni produkt (1.29 g, 49%) kao žutomrka čvrsta supstanca. Maseni spektar (m/z): 584 (M+Na). ;Naredno jedinjenje se u suštini izrađuje po postupku za Izradu 15 ;;Tabela 1 ;; ;;; Izrada 17 ;;N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-5’,5’-dimetil-4’,5’-dihidrospiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-2’-karboksamid ; ;;; [0071] HCl u 1,4-dioksanu (4 mol/L, 0.74 mL, 2.95 mmol) se doda u rastvor terc-butil 2’-({[5-(etilsulfonil)piridin-2-il]metil}karbamoil)-5’,5’-dimetil-4’,5’-dihidro-1H-spiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-1-karboksilata (0.291 g, 0.38 mmol) u MeOH (10 mL) i zagreva 1 sat na 50 °C. Koncentruje se do sušenja, nanese na SCX kolonu jonskih izmenjivača, ispere sa MeOH i eluira sa 2 N amonijak/MeOH da se dobije naslovljeni produkt (0.188 g, 38%). Maseni spektar (m/z): 464 (M+H). ;;Izrada 18 ;;N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-2’-karboksamid hidrohlorid ;;[0072] ;;; ;;; [0073] HCl u 1,4-dioksanu (4 mol/L, 0.86 mL, 3.43 mmol) se doda u rastvor terc-butil 2’- ;;;2 ;({[5-(etilsulfonil)piridin-2-il]metil}karbamoil)-1"H,4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-1"-karboksilata (0.43g, 0.68 mmol) u MeOH (5 mL) i zagreva 30 minuta na 50 °C. Koncentruje se do sušenja da se dobije naslovljeni produkt (0.34 g, 100%). Maseni spektar (m/z): 462 (M+H-HCl) ;Naredno jedinjenje se u suštini izrađuje po postupku za Izradu 18 ;;Tabela 2 ;; ;;; Primer 1 ;;N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-5’,5’-dimetil-1-{1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’,5’-dihidrospiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-2’-karboksamid ;;[0074] ;;; ;;; [0075] N-{[5-(etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-5’,5’-dimetil-4’,5’-dihidrospiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-2’-karboksamid (0.19 g, 0.28 mmol) se u mikrotalasnoj posudi rastvori u acetonitrilu (10 mL) i doda se N,N-diizopropiletil-amin (0.64 mL, 3.69 mmol) a nakon toga 5- ;;;2 ;(1-bromoetil)-2-(trifluorometil)pirimidin (0.24 g, 0.96 mmol). Posuda se zatvori i zagreva 1 sat na 60 °C, a nakon toga ohladi na temperaturu sredine i koncentruje do sušenja. Ostatak se rastvori u DCM, ispere sa vodom, filtrira kroz separator faza i organski sloj koncentruje do sušenja. Ostatak se prečisti flash hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa DCM/MeOH (100:0 do 95:5). Prečisti se reverzno faznom hromatograifjom da se dobije naslovljeni produkt (0.14 g, 49%). Maseni spektar (m/z): 638 (M+H). ;;Primer 2 ;;N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-1"-{1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-2’-karboksamid ;;[0076] ;;; ;;; [0077] N-{[5-(etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-2’-karboksamid hidrohlorid (0.34 g, 0.69 mmol) se u mikrotalasnoj posudi rastvori u acetonitrilu (5 mL) i doda se N,N-diizopropiletilamin (0.72 mL, 4.12 mmol) a nakon toga 5-(1-bromoetil)-2-(trifluorometil)pirimidin (0.22 g, 0.86 mmol). Posuda se zatvori i zagreva 1 sat na 60 °C, nakon toga ohladi na temperaturu sredine i koncentruje do sušenja. Ostatak se rastvori u MeOH, nanese na SCX kolonu, ispere sa MeOH, nakon toga eluira sa 2 N rastvorom amonijaka u MeOH. Sloj amonijaka se koncentruje do sušenja i prečisti flash hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa DCM/MeOH (100:0 do 95:5) da se dobije naslovljeni produkt (0.37 g, 86%). Maseni spektar (m/z): 636 (M+H). ;Naredno jedinjenje se u suštini izrađuje po postupku za Primer 2 ;;;2 ;Tabela 3 ;; ;;; Primer 4 ;;N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-5’,5’-dimetil-1-{(1S)-1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’,5’-dihidrospiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-2’-karboksamid ;;[0078] ;;; ;;; Primer 5 ;;N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-5’,5’-dimetil-1-{(1R)-1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’,5’-dihidrospiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-2’-karboksamid ;;[0079] ;;;2 ; ;;; [0080] N-{[5-(etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-5’,5’-dimetil-1-{1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’,5’-dihidrospiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-2’-karboksamid (138 mg, 0.217 mmol) se solubilizuje u MeOH (10.5 mL). Izomeri se razdvoje asimetričnom hromatografijom pomoću HPLC [Chiralpak IA kolona (30 x 250 mm) sa 50% ACN : 50% IPA (sa 0.2% IPAm) pri 68 mL/min, UV detekcija na 225 nm (prati se na 250 nm)]. ;Analitički uslovi: 45% IPA (0.2% IPAm) u ACN 5.0 mL/min, Chiralpak kolona [IA (4.6 x 150 mm)] detekcija na 204 nm. Čiste frakcije se kombinuju, koncentruju do sušenja i liofiliziraju da se dobiju bledo žuta čvrsta supstanca, Primer 4, (47 mg, 34% prinos, de>99%, Rt=2.01 minuta), maseni spektar (m/z): 638 (M+H). Primer 5, (45 mg, 32% prinos, de>99%, Rt=2. 97 minuta), maseni spektar (m/z): 638 (M+H). ;Apsolutna konfiguracija ovih materijala se odredi preko VCD. VCD-spektrometar = ChirallR-X sa DualPEM; 4.0 mg/100 µL, rezolucija = 4 cm<-1>; PEM = 1400 cm<-1>; 72000 skeniranja, 24 sata; BaF2ćelija, dužina puta = 100 µm. Polja sile korišćena u MolMec izračunavanjima = MMF94S, MMFF, SYBYL. Metodologija i bazna podešavanja za DFT izračunavanja = SCRF-B3LYP/6-31G(d), SCRF-B3PW91/6-31G(d). Nivo pouzdanosti = 99%. ;;Primer 6 ;;N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-1"-{(1S)-1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-2’-karboksamid ;;[0081] ;;;2 ; ;;; Primer 7 ;;N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-1"-{(1R)-1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-2’-karboksamid ;;[0082] ;;; ;;; [0083] N-{[5-(etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-1"-{1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil}-4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-2’-karboksamid (369 mg, 0.581 mmol) se solubilizuje u MeOH (22 mL) i rastvor filtrira. Izomeri se razdvoje asimetričnom hromatografijom pomoću HPLC [Chiralpak IC kolona (30 x 250 mm) sa 50% ACN : 50% IPA (sa 0.2% IPAm) pri 130 mL/min, injektovanje 2.0 mL svakih 9.7 min, UV detekcija na 225 nm]. Analitički uslovi: 45% IPA (0.2% IPAm) u ACN 5.0 mL/min, Chiralpak kolona [IA (4.6 x 150 mm)] detekcija na 204 nm. Čiste frakcije se kombinuju, koncentruju do sušenja i liofiliziraju da se dobiju bledo žuta čvrsta supstanca. Primer 6, (146 mg, 39% prinos, de>99%, Rt=1.61 minuta), maseni spektar (m/z): 636 (M+H). Primer 7, (143 mg, 37 % prinos, de>98%, Rt=2.02 minuta), maseni spektar (m/z): 636 (M+H). ;Apsolutna konfiguracija ovih materijala se odredi preko VCD. VCD-spektrometar = ChirallR-X sa DualPEM; 4.0 mg/100 µL, rezolucija = 4 cm<-1>; PEM = 1400 cm<-1>; 72000 skeniranja, 24 sata; BaF2ćelija, dužina puta = 100 µm. Polja sile korišćena u MolMec izračunavanjima = MMF94S, MMFF, SYBYL. Metodologija i bazna podešavanja za DFT izračunavanja = SCRF-B3LYP/6-31G(d), SCRF-B3PW91/6-31G(d). Nivo pouzdanosti = 99%. ;[0084] Naredna jedinjenja se prečiste u suštini po postupku za Primere 6 i 7 koristeći asimetričnu HPLC. ;;Tabela 4 ;; ;;; Biološka ispitivanja ;;Inhibitori vezivanja RORa, b i g ;;[0085] His-obeleženi humani RAR-povezani orfan receptor alfa (hRORa), humani RAR-povezani orfan receptor beta (hRORb) i humani RAR- povezani orfan receptor gama (hRORg) su korišćeni za ispitivanje receptor-ligand kompeticiju vezivanja da se odrede Ki vrednosti. Niže su date uobičajene procedure. ;[0086] Ispitivanja kompeticije vezivanja receptora se izvode u puferu sastavljenom od DPBS (1 L) (Hyclone #SH30028.03), 2.2g BSA frakcije v (Roche #9048-46-8), 100 mL glicerola (Fischer #56-81-5) i 40 mL DMSO (kvalitet reagensa). Na kraju se u udubljenima nalazi 20 µg/mL aprotinina i 20 µg/mL leupeptina i 10 µM Pefabloc. Uobičajeno, ispitivanja vezivanja ;;;1 ;receptora uključuju radio-obeležene ligande, kao što je 7 nM [<3>H]-25-hidroksiholesterol za alfa vezivanje, 20 nM [<3>H]-3-[[4-[[3-(2,6-dihlorfenil)-5-izopropil-izoksazol-4-il]metoksi]-N,2-dimetil-anilino]metil]benzoeva kiselina za beta vezivanje i 6 nM [<3>H]-25-hidroksiholesterol za gama vezivanje i 0.5 µg RORa receptora, 0.03 µg RORb receptora, ili 0.13 µg RORg receptora po udubljenju. Ispitivanja se obično izvode u formatu sa 96 udubljenja. Jedinjenja za test kompeticije se dodaju u različitim koncentracijama u rasponu od približno 0.4 nM do 25 µM. Ne-specifično vezivanje se određuje u prisustvu 250 nM 25-hidroksiholesterola za RORa i RORg vezivanje, 250 nM 3-[[4-[[3-(2,6-dihlorfenil)-5-izopropil-izoksazol-4-il]metoksi]-N,2-dimetil- anilino]metil]benzoeve kiseline za RORb vezivanje. Rastvori uzorka, obeleživača i receptora se kombinuju u ploči za ispitivanje sa 96 udubljenja (Costar 3632) i inkubiraju u toku noći na sobnoj temperaturi, a nakon toga se u svaku reakciju doda 25 µl perlica (Amersham YSi (2-5 mikrona) bakar His-obeležene Spa perlice, #RPNQ0096) do finalne koncentracije perlica od 1 mg/udubljenje. Ploče se mešaju 30 minuta na orbitalnom šejkeru na sobnoj temperaturi. Nakon 4 sata inkubacije, ploče se očitavaju u Wallac MICROBETA® brojaču. ;[0087] Rezultati se koriste za izračunavanjeu procenjene IC50koristeći četvoroparametarsku logaritamsku krivu. Kd [<3>H]-25-hidroksiholesterola za RORa i RORg i [<3>H]-3-[[4-[[3-(2,6-dihlorfenil)-5-izopropil-izoksazol-4-il]metoksi]-N,2-dimetil-anilino]metil]benzoeve kiseline za RORb vezivanje, je određeno saturacionim vezivanjem. IC50vrednosti za jedinjenja su konvertovane u Ki koristeći Cheng-Prushoff jednačinu. ;[0088] Rezultati narednih primernih jedinjenja su pokazani u niže datoj Tabeli 5. ;;Tabela 5 ;; ;;; [0089] Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja iz Tabele 5 selektivna za RORg u odnosu na RORa i RORb. ;;;2 ;Ispitivanje HEK293 RORg GAL4 receptor-reporter ;;[0090] Kao indikator inverzne aktivnosti agonista, RAR-povezani orfan receptor gama (RORg) receptor-reporter ispitivanje (RORg-GAL4/pGL4.31) se izvodi u HEK293 ćelijama. HEK293 ćelije su ko-transfektovane pomoću Fugene™ reagensa. Plazmid reporter koji sadrži GAL4 domen vezivanja i minimalni adenovirusni promotor uzvodno od luciferaze gena svica su ko-transfektovani sa plazmidom u kome se konstitutivno ekspresuje domen humanog vezujućeg RORg liganda spojenog sa domenom vezivanja GAL4 DNK vezivanja kvasca. Ćelije se prenesu u T150 cm<2>boce u MEM medijumu bez FBS. Nakon 18 sati inkubacije, prenete ćelije se tripsinizuju, prenesu u mikrotitarne ploče sa 96 udubljenja u 3:1 DMEM-F12 medijumu koji sadrži 10% FBS, inkubiraju 4 sata a nakon toga izlože različitim koncentracijama test jedinjenja u rasponu od približno 0.05 nM do 10 µM. Nakon 18 sati inkubacije sa jedinjenjima, ćelije se liziraju a aktivnost luciferaze se kvantifikuje koristeći standardne tehnike. Rezultati se nanesu na četiriparametarsku logaritamsku krivu da se odrede IC50vrednosti. ;[0091] Rezultati narednih ispitivanih jedinjenja su pokazani u niže datoj Tabeli 6. ;;Tabela 6 ;;; ;;; [0092] Ovi rezultati pokazuju da su jedinjenja iz Tabele 6 inverzni agonisti za humani RORg receptor. ;;ELISA PBMC IL-17 sekrecije i test održivosti TiterGlo ćelija ;;[0093] PBMC’e se izoluju iz tankog sloja koaguluma ukupne krvi prvo kombinovanjem svežih omotača koaguluma sa istim zapreminama puferovanih fosfatnih soli. Trideset pet mL rastvora PBS/omotač koaguluma se nakon toga pažljivo nanese na 15 mL Ficoll u koničnim kivetama zapremine 50 mL. Nakon 30 minuta centrifugiranja pri 500xg (uz sporo ubrzavanje i usporavanje) gornji sloj plazme se odbaci a sloj ćelija duž Ficoll sloja se sakupi i spoji. Svaka kiveta od 250 mL se do vrha napuni sa RPMI-1640 medijumom na sobnoj temperaturi. Kivete se centrifugiraju 10 minuta pri 500xG (uz sporo ubrzavanje i usporavanje), medijum se ukloni aspiracijom i faza ispiranja se ponovi. Ćelije se resuspenduju u ledeno hladnom Recovery Cell Culture Freezing medijumu proizvođača Life Technologies (kataloški broj 12648-010) na ledu. Koncentracija ćelija se podesi na 66.7 miliona ćelija/mL. Ćelija se polako zamrzavaju uz -1 °C/minut u posudama sa 100 miliona ćelija i čuvaju u tečnom azotu. ;;Stimulacija sekrecije IL-17 i dodavanje jedinjenja ;;[0094] PBMC se izvuku iz otopine resuspendovanjem sa 1 mL kompletnog medijuma (RPMI-1640 koji sadrži 30 mM HEPES, 100 jedinica/mL penicilina, 100 µg/mL streptomicina, 3.25 mM L-glutamina, 0.2 µM beta-merkaptoetanola i 10% FBS) a zatim sa u kapima doda 2 mL, 4 mL, 8 mL i 16 mL kompletnog medijuma uz blago kovitlanje. Ćelije se istalože u toku 5 minuta i peleta ćelija se resuspenduje u kompletnom medijumu. Gomilice ćelija se razbiju propuštanjem rastvora ćelija kroz špric sa iglom od 23 godža i filter ćelija promera 40 µM. Sto hiljada ćelija po udubljenju se doda u polistirenske ploče za tretiranje kulture tkiva sa 384 udubljenja ravnog dna u ukupnoj količini od 30 µL. Koktel za stimulaciju koji sadrži antihumano CD3 antitelo, anti-humano CD28 antitelo, IL-23 i jedinjenja pripremljena u potpunom medijumu se istovremeno dodaju u ćelije u ukupnoj zapremini od 30 µL. Finalna koncentracija dodatnog stimulansa je 160 ng/mL, 500 ng/mL i 5 ng/mL za anti-CD3 antitelo, anti-CD28 antitelo i IL-23 tim redom i 0.3% za DMSO. Ploče se zatvore sa AERASEAL® filmom za zatvaranje i inkubiraju 48 sati na 37 °C, 95% vlage i 5% CO2. ;[0095] Nakon perioda inkubacije, ploče se centrifugiraju pet minuta pri 200xg. Supernatanti se razblaže 1:1 sa jednakom zapreminom 1% BSA/PBS i testiraju na IL-17 sa humanim IL-17 ELISA kitom proizvođača R&D sistem (kataloški broj D317E) u skladu sa protokolom dobijenim uz kit sa jednim izuzetkom – kolorimetrijski substrat OPD (o-fenilendiamin dihidrohlorid, Sigma Cat #P6912) je korišćen umesto substrata dobijenog u kitu. Apsorpcija na 492 nm je merena na Envision multi-label čitaču ploča. A492 vrednosti su konvertovane u koncentraciju IL-17 na bazi IL-17 standardne krive kako je niže pokazano: ;pg/mL IL-17 = EC50<*>[[(Top-Bottom)/(A492-Bottom)]-1](1/-Hill). IC50za inhibiciju sekrecije IL-17 je izračunata na osnovu konvertovanih vrednosti koristeći standardnu četiriparametarsku krivu sa maksimalnom inhibicijom određenom iz prosečnih vrednosti

4

udubljenja bez dodatih stimulansa i bez jedinjenja i minimuma inhibicije dobijenih iz prosečnih vrednosti udubljenja samo sa stimulansima a bez jedinjenja.

[0096] Jednake zapremine Cell TITERGLO® reagensa za test održivosti ćelija (Promega Cat# G7573) se dodaju u preostale ćelije u pločama a nakon petnaest minuta inkubacije uz blago mućkanje na sobnoj temperaturi, meri se luminiscencija na Envision multi-label čitaču ploča. Procenat mrtvih ćelija se izračunava uzimanjem 100% aktivnosti (mrtve ćelije) kao jedinice nulte luminiscencije i minimum aktivnosti (maksimalni broj živih ćelija) kao jedinice prosečne luminiscencije u udubljenjima koja sadrže samo stimulans bez dodatog jedinjenja. IC50se izračunavaju preko standardne četiriparametarske krive.

[0097] Rezultati narednih jedinjenja su pokazani u niže datoj Tabeli 7.

Tabela 7

[0098] Ovi rezultati pokazuju da jedinjenja iz Tabele 7 inhibiraju anti-CD3/anti-CD28/IL-23 stimulisanu sekreciju IL-17 u PBMC bez merivog citotoksičnog efekta

Claims (8)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule

   naznačeno time što X je nezavisno -N- ili -CH-; R<1>i R<2>su oba CH3; ili R<1>i R<2>mogu da budu uzeti zajedno da formiraju tročlani karbociklični prsten; R<3>je -CN ili -CF3; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to N-{[5-(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-5’,5’-dimetil-1-{(1R)-1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5-il]etil} -4’,5’-dihidrospiro[piperidin-4,7’-tieno[2,3-c]piran]-2’-karboksamid

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
3. 3. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to N-{[5(Etilsulfonil)piridin-2-il]metil}-1"-{(1R)-1-[2-(trifluorometil)pirimidin-5- il]etil}-4’H-dispiro[ciklopropan-1,5’-tieno[2,3-c]piran-7’,4"-piperidin]-2’-karboksamid:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
4. 4. Farmaceutska kompozicija naznačena time što uključuje jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-3, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga.
5. 5. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji.
6. 6. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu psorijaze.
7. 7. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu seronegativnih spondiloartropatija.
8. 8. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 7 u tretmanu aksijalnog spondiloartritisa, anksiloznog spondilitisa ili psorijatičnog artritisa. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5