RS61958B1 - Anti-cd28 humanizovana antitela formulisana za primenu na ljudima - Google Patents

Anti-cd28 humanizovana antitela formulisana za primenu na ljudima

Info

Publication number
RS61958B1
RS61958B1 RS20210451A RSP20210451A RS61958B1 RS 61958 B1 RS61958 B1 RS 61958B1 RS 20210451 A RS20210451 A RS 20210451A RS P20210451 A RSP20210451 A RS P20210451A RS 61958 B1 RS61958 B1 RS 61958B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
once
weeks
fab
antibody fragment
optional
Prior art date
Application number
RS20210451A
Other languages
English (en)
Inventor
Bernard Vanhove
Original Assignee
Ose Immunotherapeutics
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ose Immunotherapeutics filed Critical Ose Immunotherapeutics
Publication of RS61958B1 publication Critical patent/RS61958B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01035—Hyaluronoglucosaminidase (3.2.1.35), i.e. hyaluronidase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na oblast imunoterapije. Preciznije, ovaj pronalazak obezbeđuje nov i povoljan režim doziranja za fragment humanizovanog pegilovanog anti-CD28 Fab’ antitela prethodno opisan kao„ FR104 “(Poirier et al., 2012).
POZADINA I PRETHODNO STANJE TEHNIKE
[0002] CD28 je dominantni kostimulatorni molekul pozitivan na T ć elije. FR104 je humanizovani monovalentni fragment antitela protiv CD28 Fab’ koji pegilovan na kraju C-terminala te škog lanca (WO 2011/101791, US 8,785,604 B2). FR104 potiče od humanizacije mišjeg antitela nazvanog CD28.3. Ovo antitelo je odabrano na osnovu njegove moć ne antagonisti čke aktivnosti protiv vezivanja CD80 za CD28 u Fab' formatu (Vanhove i sar., 2003) i njegove inherentne nesposobnosti da indukuje antigensku nezavisnu aktivaciju T ć elija (proces koji se naziva superagonizam), zbog svog ciljnog epitopa koji le ži izvan C"D antigene petlje CD28, što se pokazalo obaveznim za superagonizam (Poirier et al., 2012a).
[0003] FR104 se vezuje za CD28 čoveka i nečoveka, ali ne za CD28 miša, pacova, zeca ili psa, i antagonizuje vezivanje CD28 za njegove koreceptore CD80/CD86. CD80/CD86 koreceptori ostaju slobodni u interakciji sa dominantnim negativnim kostimulatorima citotoksi čnog antigena T-limfocita 4 (CTLA-4) i programirani za ć elijsku smrt 1 liganda 1 (PDL-1), koji inhibiraju efektorske T ć elije i obavezni su prilikom supresivne funkcije regulatornih T ć elija. Mehanizam delovanja FR104 je, dakle, dvostruk: 1) na direktan način blokira CD28 posredovane signale u T ć elijama i 2), na indirektan način, promoviše CTLA-4 i PDL-1 posredovane signale. Ovaj mehanizam delovanja razlikuje se od postojeć ih terapija usmerenih na blokiranje kostimulacije T ć elija kao što su abatacept (Orencia®) ili belatacept (Nulojix®) koji vezuju CD80 i CD86 i blokiraju funkciju pozitivnih i negativnih molekula kostimulacije (blokiranjem pristupa CD28, CTLA-4 i PDL-1).
[0004] Zbog svoje monovalentne prirode, odsustva Fc domena i ciljanog epitopa koji le ži izvan ciljnog epitopa superagonističkih antitela (kao što je TGN1412), FR104 je antagonističko antitelo koje ne može da stimuliše humane T ć elije, čak i u prisustvu antitela protiv lekova (Poirier et al., 2012). Dostupni predklinički podaci pokazuju odsustvo svojstava agonista i superagonista na humanim T ć elijama in vitro i trans-vivo, kod humanizovanih miševa, kao i in vivo kod babuna, vrste u kojoj, kao i kod ljudi, T ć elije oslobađaju citokine nakon interakcije sa superagonističkim antitelima na CD28 (Poirier et al., 2014).
[0005] FR104 je ostao antagonist u svim ovim situacijama. Nije mogla da se primeti proliferacija ili sekrecija citokina, čak i ako je FR104 obložen, umrežen sa sekundarnim antitelima ili u prisustvu anti-CD3 antitela (Poirier et al., 2012). Suprotno tome, FR104 je zavisno od doze inhibirao proliferaciju T ć elija kada su humani PBMC stimulisani anti-CD3 antitelom. U ovim testovima, pozitivna kontrola superagonističkih antitela na CD28 dosledno indukuju proliferaciju humanih T ć elija i/ili oslobađanje citokina.
[0006] Zbog svoje selektivne imunosupresivne aktivnosti usmerene na efektorske T ć elije, FR104 se prvo istražuje za upotrebu u reumatoidnom artritisu i u transplantaciji (primaoci transplantata bubrega i bolest odbacivanja transplantata protiv domać ina [GVHD] nakon transplantacije mati čnih ć elija). Očekuje se direktna korist od FR104 za pacijente sa neregulisanim sopstvenim ili alogenim imunolo škim odgovorima, koji se sastoji u poboljšanoj efikasnosti imunosupresije T ć elija i u dugoročnoj kontroli patoloških odgovora T i B ć elija zbog očuvanja imunoloških regulatornih mehanizama. Za pacijente sa transplantacijom bubrega, ovo bi trebalo da smanji rane faze odbacivanja i pobolj ša dugoročne ishode. Pacijentima koji pate od umerenog do ozbiljnog GVHD-a nakon alogene transplantacije mati čnih ć elija hematopoeze, ovo bi trebalo da oslabi aloreaktivnost efektorskih T ć elija. Za pacijente koji pate od reumatoidnog artritisa, ovo bi trebalo da se pretvori u brzo pobolj šanje kliničkih simptoma i ređih kontraindikacija. Dostupne predkliničke procene uključuju demonstraciju efikasnosti u transplantaciji bubrega kod primata (Poirier et al., 2015) i kod GVHD kod humanizovanih mi ševa (Poirier et al., 2012) i primata (Kean et al., 2014), u eksperimentalnim modelima autoimunih encefalomielitisa (Haanstra et al, JI 2015), upale kože u modelu primata ljudske psorijaze (Poirier et al, JI 2015) (Poirier et al, Ekperimental Dermatol. 2015) i artritisa izazvanog kolagenom kod primata, model reumatoidnog artritisa (Vierboom) i sar., 2015).
[0007] Mehanički je pokazano da FR104 blokira aloreaktivnost na način zavisan od CTLA-4, što potvrđuje da teorijski mehanizam delovanja zaista deluje in vivo (Poirier et al., 2012).
[0008] FR104 je proizveden klasičnom rekombinantnom tehnologijom u ć elijama jajnika kineskog hrčka (CHO). To je humanizovani pegilirani Fab' fragment antitela koji se sastoji od (i) prvog proteina SEK ID BR: 1, koji je pegiliran na svom C-kraju, i (ii) drugog proteina SEK ID BR: 2. Posle prečišć avanja, hemijski je vezan za deo polietilen glikola (PEG) da bi produžio svoj poluživot u plazmi. C-kraj CH1 domena je projektovan da se prilagodi monopegilaciji. PEG ostatak je dvorazgranati 2x20 kDa povezan sa C-terminalnim cisteinom preko maleimidnog prstena. Svi procesi proizvodnje, pre čišć avanja i pakovanja izvode se pod GMP uslovima.
[0009] Poirier i saradnici (2012), pokazali su analizom plazmonske rezonance, da je konstanta disocijacije FR104 na CD28 oko 4.6nM. Proračun minimalno očekivanog nivoa biološkog efekta (MABEL) i odabir doze za prvo kliničko ispitivanje sa čovekom (FIH) sa FR104 zasnovani su na podacima koje su objavili Poirier et al. (2012).
[0010] Bas-Bernardet Le i sar. (2013) 11. svetski kongres o upali (objavljen na mreži na http: //static.spring- er.com/sgv/documents/1427011/application/pdf/IAIS Abstracts Natal 2013.pdf) otkriva predkliničku procenu FR104, antagonističko anti-CD28 monovalentno antitelo Fab, u modelu primata DTH sa kožnom upalom.
[0011] Poirier et al. (2015) Journal of Immunologi 196 (1) 274-283 otkriva procenu selektivnog CD28 antagonista kod neljudskih primata.
[0012] „Završni izveštaj o projektu: TRIAD, objavljen na mreži na http://cordis.europa.eu / docs / results /281/281493/finall-triad- report-ce-final-201504010-final.pdf otkriva obnavljanje tolerancije kod autoimune bolesti selektivnom manipulacijom CD28 kostimulatornog puta.
[0013] Haanstra i sar. (2015) Journal Of Immunologi, US 194 (4) 1454-1466, otkriva efekte selektivne blokade kostimulacije T-ć elija posredovanih CD28 kod rezus majmuna.
SUŠTINA PRONALASKA
[0014] Ovde je opisan fragment antitela anti CD28 Fab' koji se sastoji od heterodimera (i) prvog proteina SEK ID BR: 1, koji je pegiliran na njegovom C-kraju, i (ii) drugog proteina SEK ID BR: 2, za upotrebu u lečenju stanja podložnog poboljšanju ili sprečavanju inhibicijom imunološkog odgovora T ć elija, pri čemu je navedeno odbacivanje transplantiranog tkiva, hronična vaskularna alograft transplantacija, bolest transplantata protiv domać ina, T-limfocitima posredovana autoimuna bolest, ateroskleroza, inflamatorna bolest ili preosetljivost tipa IV, pri čemu se terapeutski efikasna količina navedenog fragmenta antitela anti CD28 Fab daje intravenozno čoveku kome je to potrebno i pri čemu terapeutski efikasna količina fragmenta antitela anti CD28 Fab' je između 0,05 i 1,5 mg/kg telesne težine po rasporedu doziranja jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom u tri nedelje, jednom u četiri nedelje, jednom u pet nedelja ili jednom u 6 nedelja, jednom u svakih 7 nedelja, jednom na 8 nedelja ili jednom na vi še od 8 nedelja.
[0015] Kao što je opisano u eksperimentalnom delu dole, podaci dobijeni prvim eksperimentima klini čkog ispitivanja bili su veoma iznenađujuć i i doveli su pronalazače do zaključka da je stvarna vrednost KDnajmanje 10 puta niža od vrednosti od 4,6 nM mereno in vitro.
[0016] Pronalazači su, nastavljajuć i svoja ispitivanja, pregledali model farmakokinetike/anga žovanja cilja (PK/TE) kako bi obuhvatili dobijene podatke o zasićenosti PK i receptora (RO). Na osnovu ovog revidiranog modela:
- Doziranjem od 0,05 mg/kg može se postić i srednji RO % > 80 % tokom 2-3 nedelje; i
- Doziranjem od 0,2 mg/kg može se postić i srednji RO % > 80 % tokom 4-5 nedelja.
[0017] Predmetno otkrić e se, prema tome, odnosi na upotrebu FR104 za lečenje bilo kog stanja podložnog poboljšanju ili sprečavanju inhibicijom imunološkog odgovora T ć elija, davanjem terapeutski efikasne količine FR104 čoveku kome je to potrebno, pri čemu terapeutski efektivna količina FR104 je između 0,05 i 1,5 mg/kg telesne težine pri rasporedu doziranja jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom u tri nedelje, jednom u četiri nedelje, jednom u pet nedelja ili jednom u 6 nedelja. Ove administracije se mogu obavljati tokom dužih perioda (od nekoliko meseci do nekoliko godina) ili zaustaviti nakon jedne ili nekoliko administracija. Takođe se mogu prekinuti nakon nekog vremena (nekoliko meseci ili godina) i obnoviti ako stanje pacijenta opravdava novi tretman.
[0018] Pronalazak se odnosi na fragment antitela anti CD28 Fab' koji se sastoji od heterodimera (i) prvog proteina SEK ID BR: 1, koji je pegiliran na svom C-kraju, i (ii) drugog proteina SEK ID BR: 2, za upotrebu u lečenju bilo kog stanja podložnog poboljšanju ili sprečavanju inhibicijom imunološkog odgovora T ć elije, pri čemu se terapeutski efikasna količina navedenog fragmenta antitela na CD28 Fab daje subjektu kada je terapeutski efikasna količina fragmenta antitela na CD28 Fab' između 0,05 i 1,5 mg/ kg telesne težine po rasporedu doziranja jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom u tri nedelje, jednom u četiri nedelje, jednom u pet nedelja ili jednom u 6 nedelja, jednom u 7 nedelja, jednom u 8 nedelja ili jednom u više od 8 nedelja. U nekim realizacijama terapeutski efikasna količina je između 0,05 i manje od 0,5 mg/kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom u tri nedelje, jednom u četiri nedelje, jednom u pet nedelja ili jednom na 6 nedelja. U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,2 mg/kg telesne težine koja se primenjuje po rasporedu doziranja jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom u tri nedelje, jednom u četiri nedelje ili jednom u pet nedelja. U nekim realizacijama, terapeutski efikasna koli čina je između 0,5 i 1,5 mg/kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja od jednom u najmanje četiri nedelje za 0,5 mg/kg jednom u najmanje 8 nedelja za 1 mg/kg i jednom u više od 8 nedelja za doze već e od 1 mg/kg. U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina fragmenta antitela anti CD28 Fab indukuje najmanje 80 % zasićenosti CD28 receptora tokom vremenskog perioda između dve primene navedenog fragmenta antitela anti CD28 Fab. U nekim realizacijama stanje podložno poboljšanju ili sprečavanju inhibiranja imunološkog odgovora T ć elija je transplantirana disfunkcija organa, tkiva ili ć elija, autoimuna bolest posredovana T limfocitima, ateroskleroza ili zapaljenska bolest kod navedenog subjekta. U nekim realizacijama, stanje podložno poboljšanju ili sprečavanju inhibicijom imunološkog odgovora T ć elija je odbacivanje transplantata bubrega, hronični vaskularni alograft, odbacivanje organa kod transplantacije , autoimuni encefalomielitis, psorijaza, reumatoidni artritis, multipla skleroza, Krohnova bolest, ulcerozni kolitis, ateroskleroza, dijabetes tipa 1 ili preosetljivost tipa IV. U nekim slučajevima, fragment antitela anti CD28 Fab’ daje se navedenom subjektu intravenozno, subkutano, intramuskularno ili lokalno putem intratekalne injekcije. Sledeć i aspekt ovog pronalaska je farmaceutska kompozicija za inhibiranje imunološkog odgovora Tć elija kod čoveka kome je to potrebno, koji sadrži FR104 u količini između 3 i 120 mg, poželjno manje od 35 mg po dozi, zajedno sa jednom ili više farmaceutski prihvatljivom pomoć nom supstancom. U nekim slučajevima, farmaceutska kompozicija sadrži između 3 i 14 mg navedenog fragmenta antitela anti-CD28 Fab. U nekim slučajevima, farmaceutska kompozicija je pogodna za intravensku, subkutanu, intramuskularnu, topikalnu ili intratekalnu primenu. U nekim slu čajevima, farmaceutska kompozicija sadrži rekombinantnu humanu hijaluronidazu.
[0019] Špric koji sadrži napred opisanu farmaceutsku kompoziciju je takođe deo ovog pronalaska. Špric se može prilagoditi za potkožnu upotrebu.
[0020] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na komplet delova koji sadrži mesečne doze FR104, pri čemu svaka doza sadrži količinu od 3 do 120 mg FR104.
LEGENDE ZA SLIKE
[0021]
Slika 1: Farmakokinetička studija FR104 i popunjenost receptora CD28. A. Vremenski tok koncentracije FR104 u serumu dobrovoljaca koji su primali različite koncentracije FR104, kako sledi: Grupa 1 (crni krug) dobila je 0,005 mg/kg, Grupa 2 (crni kvadrat) primila je 0,05 mg/kg, Grupa 3 (gore crni trougao) 0,2 mg/ kg i Grupa 4 (donji crni trougao) 0,5 mg/kg. B. Vremenski tok zasićenosti receptora kod svakog dobrovoljca u svakoj grupi koja prima FR104 (kao što je napred navedeno).
Slika 2: Predviđena popunjenost CD28 receptora u odnosu na uočenu. A. Procenat RO koji je prethodno predviđen tokom vremenskog perioda od 20 nedelja za svaku koncentraciju FR104 određenu in vitro izračunatim KD. B. Vremenski tok modifikovanog predviđenog procenta RO na osnovu preračunatog KDu poređenju sa posmatranim procentom RO.
Slika 3: Ekspresija receptora nakon infuzije FR104. U svakoj grupi koja je primala FR104, ekspresija CD28 u serumu dobrovoljaca analizirana je protočnom citometrijom tokom vremena. Grupa 1 (crni krug) primila je 0,005 mg/kg, Grupa 2 (crni kvadrat) primila je 0,05 mg/kg, Group3 (gornji trougao) primila je 0,2 mg/kg, a Grupa 4 (donji trougao) 0,5 mg/kg.
Slika 4: Merenje antitela na KLH (IgG). Procenat antitela na KLH prisutna u serumu dobrovoljaca 15 dana nakon prve infuzije u pet različitih grupa koje su primale: sa placebom, sa FR104 na 0,02 mg / kg, 0,2 mg / kg, 0,5 mg / kg ili na 1,5 mg / kg . Ovaj procenat predstavlja odnos između koncentracije antitela u serumu 1. dana (prva infuzija) i 15. dana.
Slika 5: Farmakokinetički i farmakodinamički podaci. A. Srednje koncentracije FR104 u serumu 6 SEM (polu log skala) od pre doziranja do kraja studije. Prikazane grupe za lečenje su: pojedinačne rastuć e doze (crni simboli), pojedinačne rastu ć e doze KLH imunizacija (prazni simboli), više uzlazne doze (MAD, osenčeni simboli). LLOK: Donja granica kvantifikacije. N = 3-5 ispitanika po grupi lečenja. B. Srednja zasićenost CD28 receptora 6 SEM u grupama lečenja FR104 naznačenim u A od predoze do kraja studije. N = 3-5 ispitanika po grupi lečenja. Procena zasićenosti receptora kod ispitanika kojima je doziran placebo rezultirala je pozadinskim signalom u rasponu od 0 do 5 %.
Slika 6: Analiza protočne citometrije nivoa ekspresije CD28, učestalosti sub-populacija T limfocita i frekvencije aktiviranih T-ć elija na stabilizovanim uzorcima cele krvi. Podpopulacije T- ć elija definisane su korišć enjem slede ć e strategije gatiranja u CD45 CD3 ć elijama: prirodni Treg (nTreg): CD25 CD127 niski CD4 ; aktivirano: CD69 ili CD25 ; memorijske T ć elije: CD45RO ; nezrele: CD45RO- CCR7 ; centralna memorija (CM): CD45RO CCR7 ; efektorska memorija (EM): CD45RO CCR7-; TEMRA: CD45RO- CCR7-. Simboli se odnose na grupe definisane na slici 1A, plus za udružene placebo subjekte (n = 12). Podaci su srednja vrednost 6 SEM.
Slika 7: Serumski IFN-g, TNF-a, IL-6, IL-8, IL-10 citokini u FR104 i primaoci placeba od predoze do kraja studije. Tačkasta traka: donja granica kvantifikacije. Podaci su srednja vrednost 6 SEM. SAD: pojedinačne rastuć e doze. SAD KLH, pojedinačno rastu ć i dozirani subjekti imunizovani sa KLH. LUD: više uzlaznih doza. Simboli se odnose na grupe definisane na slici 1A, plus za placebo ispitanici u SAD (n = 6), SAD KLH (n = 8) i MAD (n = 4) grupe. Za ostale procenjene citokine (IL 12p70 IL-1b, IL-2, IL-4) utvrđeno je da su negativni za sva uzorkovanja (nisu prikazana).
Slika 8: Ex-vivo stimulacija krvnih zrnaca SEB LPS u kulturama celokupne krvi (TruCulture®). A.
Uzorci krvi na početnoj liniji nisu stimulisani ili stimulisani SEB LPS i održavani 24 sata u kulturi. Zatim su ELITISA procenili citokine u plazmi. Tačke predstavljaju pojedinačne predmete. B. Merenje sekrecije IL-2 pomoć u SEB LPS stimulisanih uzoraka krvi uzetih u naznačenim vremenskim tačkama u pojedinačnim uzlaznim doznim grupama (sa ili bez KLH stimulacije) koje primaju FR104 na naznačenom nivou doze. U analizu su uključene samo kulture davalaca testiranih u ovoj studiji, koje pokazuju dovoljne odgovore na stimuluse na početku ( > 100 pg/ml): Placebo (n = 9), 0,02 mg/kg (n = 5), 0,20 mg/kg (n = 9), 0,50 mg/kg (n = 9) i 1,50 mg/kg (n = 3) Podaci su srednje IL-2 koncentracije normalizovane na T0 vremenske tačke, 6 SEM. *: p < 0,05; ****: p < 0,0001.
Slika 9: Nivoi anti-KLH IgG (ng/ml) tokom vremena prema grupi koja leči. Uzorci seruma su uzeti u naznačenim vremenskim tačkama i procenjeni anti-KLH ELISA. Podaci su srednja vrednost 6 SEM. Tačkasta linija: donja granica kvantifikacije.
Slika 10: Prać enje statusa EBV od pre doze do kraja studije. EBV virusno optere ć enje je procenjeno u krvi pomoć u PCR-a u naznačenim vremenskim tačkama. IgM antitela protiv EBV kapsidnog antigena (VCA) takođe su procenjena u serumu radi merenja imune reaktivacije anti-EBV. Podaci su srednja vrednost 6 SEM. LLOK: Donja granica kvantifikacije.
DETALJAN OPIS
[0022] U celom tekstu se koriste sledeć e definicije:
FR104
[0023] "FR104" označava fragment antitela anti CD28 Fab' koji se sastoji od heterodimera (i) prvog proteina sa SEK ID BR: 1, koji je pegiliran na njegovom C-kraju, i (ii) drugog proteina od SEK ID BR: 2. Prema određenom ostvarenju, FR104 je anti-CD28 Fab' fragment antitela koji se sastoji od heterodimera (i) prvog proteina SEK ID BR: 3, koji je pegiliran na svom C-kraju, i (ii) drugi protein sa SEK ID BR: 4. Na primer, bi-razgranati 2x20 kDa PEG može se povezati sa C-terminalnim cisteinom u CH1 domenu preko maleimidnog prstena.
Lečenje
[0024] Kako se ovde koristi, izrazi "lečiti" i "tretirati" odnose se na svako smanjenje ili poboljšanje progresije, težine i/ili trajanja bolesti. Na primer, kod patologije kao što je reumatoidni artritis, smanjenje jednog ili više njegovih simptoma smatra se lečenjem.
[0025] Ostale definicijeć e biti navedene u nastavku, kada je to potrebno.
[0026] Prvi aspekt ovog pronalaska je upotreba FR104, u lečenju bilo kog stanja podložnog poboljšanju ili sprečavanju inhibicijom imunološkog odgovora T ć elije, pri čemu je terapeutski efikasna količina navedenog fragmenta antitela anti CD28 Fab' se daje ljudskom subjektu kome je to potrebno i gde je terapeutski efikasna količina fragmenta antitela anti CD28 Fab' između 0,05 i 1,5 mg/kg telesne težine po rasporedu doziranja jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom na svake tri nedelje, jednom u četiri nedelje, jednom u pet nedelja, jednom u 6 nedelja, jednom u 7 nedelja, jednom u 8 nedelja, jednom u 9 nedelja ili jednom u više od 9 nedelja.
[0027] Postupak inhibiranja imunološkog odgovora T ć elija kod čoveka kome je to potrebno takođe je deo ovog pronalaska. Prema ovom metodu, subjektu se daje terapeutski efikasna količina FR104, pri čemu je navedena terapeutski efikasna količina između 0,05 i 1,5 mg/kg telesne težine, koja se primenjuje u režimu doziranja jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom u svake tri nedelje, jednom u četiri nedelje, jednom u pet nedelja, jednom u 6 nedelja, jednom u 7 nedelja, jednom u 8 nedelja, jednom u 9 nedelja ili jednom u više od 9 nedelja.
[0028] Kao što je napred navedeno, tretman prema predstavljenom pronalasku mo že se primenjivati tokom dužih vremenskih perioda (od nekoliko meseci do nekoliko godina) ili zaustaviti nakon jedne ili nekoliko primena, u zavisnosti od stanja pacijenta. Lečenje se takođe može prekinuti nakon nekog vremena (nekoliko meseci ili godina) i obnoviti ako stanje pacijenta opravdava dodatne primene FR104. Prema određenom ostvarenju pronalaska, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i manje od 0,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom u tri nedelje, jednom u svake četiri nedelje, jednom u pet nedelja ili jednom u 6 nedelja. U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom nedeljno, kao što je 0,1 - 0,45 mg / kg, 0,15 - 0,4 mg / kg, 0,2 - 0,35 mg / kg, 0,25 - 0,3 mg / kg, 0,05 - 0,4 mg / kg, 0,05 - 0,3 mg / kg, 0,1 - 0,4 mg / kg, 0,1 - 0,3 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,4 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,3 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,25 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutiski efikasna količina je između 0,05 i 0,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u dve nedelje, kao što je 0,1 - 0,45 mg / kg, 0,15 - 0,4 mg / kg, 0,2 - 0,35 mg / kg, 0,25 - 0,3 mg / kg, 0,05 - 0,4 mg / kg, 0,05 - 0,3 mg / kg, 0,1 - 0,4 mg / kg, 0,1 - 0,3 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,4 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,3 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,25 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u tri nedelje, kao što je 0,1 - 0,45 mg / kg, 0,15 - 0,4 mg / kg, 0,2 - 0,35 mg / kg, 0,25 - 0,3 mg / kg, 0,05 - 0,4 mg / kg, 0,05 - 0,3 mg / kg, 0,1 - 0,4 mg / kg, 0,1 - 0,3 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,4 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,3 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,25 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u četiri nedelje, kao što je 0,1 - 0,45 mg / kg, 0,15 - 0,4 mg / kg, 0,2 - 0,35 mg / kg, 0,25 - 0,3 mg / kg, 0,05 - 0,4 mg / kg, 0,05 - 0,3 mg / kg, 0,1 - 0,4 mg / kg, 0,1 - 0,3 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,4 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,3 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,25 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se po rasporedu doziranja jednom u pet nedelja, kao što je 0,1 - 0,45 mg / kg, 0,15 - 0,4 mg / kg, 0,2 - 0,35 mg / kg, 0,25 - 0,3 mg / kg, 0,05 - 0,4 mg / kg, 0,05 - 0,3 mg / kg, 0,1 - 0,4 mg / kg, 0,1 - 0,3 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,4 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,3 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,25 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u šest nedelja, kao što je 0,1 - 0,45 mg / kg, 0,15 - 0,4 mg / kg, 0,2 - 0,35 mg / kg, 0,25 - 0,3 mg / kg, 0,05 - 0,4 mg / kg, 0,05 - 0,3 mg / kg, 0,1 - 0,4 mg / kg, 0,1 - 0,3 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,4 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,3 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,25 mg / kg (opciono ± 10 %).
[0029] Prema još jednom određenom ostvarenju pronalaska, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,2 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom nedeljno, jednom u dve nedelje, jednom u tri nedelje, jednom u četiri nedelje ili jednom u pet nedelja. U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,2 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom nedeljno, kao što je 0,05 - 0,15 mg / kg, 0,1 - 0,2 mg / kg, 0,1 - 0,15 mg / kg, 0,05 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,15 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,2 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,2 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u dve nedelje, kao što je 0,05 - 0,15 mg / kg, 0,1 - 0,2 mg / kg, 0,1 - 0,15 mg / kg, 0,05 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,15 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,2 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,2 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u tri nedelje, kao što je 0,05 - 0,15 mg / kg, 0,1 - 0,2 mg / kg, 0,1 - 0,15 mg / kg, 0,05 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,15 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,2 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,2 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u četiri nedelje, kao što je 0,05 - 0,15 mg / kg, 0,1 - 0,2 mg / kg, 0,1 - 0,15 mg / kg, 0,05 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,15 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,2 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,05 i 0,2 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u pet nedelja, kao što je 0,05 - 0,15 mg / kg, 0,1 - 0,2 mg / kg, 0,1 - 0,15 mg / kg, 0,05 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,15 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 0,2 mg / kg (opciono ± 10 %).
[0030] Kada se daje količina između 0,5 i 1,5 mg/kg telesne težine, poželjno je smanjiti učestalost uzimanja lekova. Sa takvim dozama povoljno se propisuje davanje jedne doze mesečno ili čak ređe. Prema još jednom određenom ostvarenju pronalaska, terapeutski efikasna količina je između 0,5 i 1,5 mg/kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u tri nedelje, jednom u četiri nedelje, jednom u pet nedelja, jednom u 6 nedelja , jednom u 7 nedelja, jednom u 8 nedelja, jednom u 9 nedelja ili jednom u više od 9 nedelja. U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,5 i 1,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u četiri nedelje, kao što je 0,6 - 1,4 mg / kg, 0,7 - 1,3 mg / kg, 0,8 - 1,2 mg / kg, 0,9 - 1,1 mg / kg, 0,5 - 1,4 mg / kg, 0,5 - 1,3 mg / kg, 0,5 - 1,2 mg / kg,, 0,5 - 1,1 mg / kg, 0,5 - 1,0 mg / kg, 0,5 - 0,9 mg / kg, 0,5 - 0,8 mg / kg, 0,5 - 0,7 mg / kg, 0,5 - 0,6 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,6 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,7 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,8 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,9 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,0 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,2 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,3 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,4 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 1,5 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,5 i 1,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u pet nedelja, kao što je 0,6 - 1,4 mg / kg, 0,7 - 1,3 mg / kg, 0,8 - 1,2 mg / kg, 0,9 - 1,1 mg / kg, 0,5 - 1,4 mg / kg, 0,5 - 1,3 mg / kg, 0,5 - 1,2 mg / kg,, 0,5 -1,1 mg / kg, 0,5 - 1,0 mg / kg, 0,5 - 0,9 mg / kg, 0,5 - 0,8 mg / kg, 0,5 - 0,7 mg / kg, 0,5 - 0,6 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,6 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,7 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,8 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,9 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,0 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,2 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,3 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,4 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 1,5 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,5 i 1,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u šest nedelja, kao što je 0,6 - 1,4 mg / kg, 0,7 - 1,3 mg / kg, 0,8 - 1,2 mg / kg, 0,9 - 1,1 mg / kg, 0,5 - 1,4 mg / kg, 0,5 - 1,3 mg / kg, 0,5 - 1,2 mg / kg,, 0,5 -1,1 mg / kg, 0,5 - 1,0 mg / kg, 0,5 - 0,9 mg / kg, 0,5 - 0,8 mg / kg, 0,5 - 0,7 mg / kg, 0,5 - 0,6 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,6 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,7 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,8 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,9 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,0 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,2 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,3 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,4 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 1,5 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,5 i 1,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u sedam nedelja, kao što je 0,6 - 1,4 mg / kg, 0,7 - 1,3 mg / kg, 0,8 - 1,2 mg / kg, 0,9 - 1,1 mg / kg, 0,5 - 1,4 mg / kg, 0,5 - 1,3 mg / kg, 0,5 - 1,2 mg / kg,, 0,5 -1,1 mg / kg, 0,5 - 1,0 mg / kg, 0,5 - 0,9 mg / kg, 0,5 - 0,8 mg / kg, 0,5 - 0,7 mg / kg, 0,5 - 0,6 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,6 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,7 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,8 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,9 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,0 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,2 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,3 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,4 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 1,5 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,5 i 1,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u osam nedelja, kao što je 0,6 - 1,4 mg / kg, 0,7 - 1,3 mg / kg, 0,8 - 1,2 mg / kg, 0,9 - 1,1 mg / kg, 0,5 - 1,4 mg / kg, 0,5 - 1,3 mg / kg, 0,5 - 1,2 mg / kg,, 0,5 -1,1 mg / kg, 0,5 - 1,0 mg / kg, 0,5 - 0,9 mg / kg, 0,5 - 0,8 mg / kg, 0,5 - 0,7 mg / kg, 0,5 - 0,6 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,6 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,7 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,8 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,9 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,0 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,2 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,3 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,4 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 1,5 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,5 i 1,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u devet nedelja, kao što je 0,6 - 1,4 mg / kg, 0,7 - 1,3 mg / kg, 0,8 - 1,2 mg / kg, 0,9 - 1,1 mg / kg, 0,5 - 1,4 mg / kg, 0,5 - 1,3 mg / kg, 0,5 - 1,2 mg / kg,, 0,5 -1,1 mg / kg, 0,5 - 1,0 mg / kg, 0,5 - 0,9 mg / kg, 0,5 - 0,8 mg / kg, 0,5 - 0,7 mg / kg, 0,5 - 0,6 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,6 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,7 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,8 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,9 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,0 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,2 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,3 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,4 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 1,5 mg / kg (opciono ± 10 %). U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina je između 0,5 i 1,5 mg / kg telesne težine, primenjuje se u režimu doziranja jednom u više od devet nedelja, kao što je 0,6 - 1,4 mg / kg, 0,7 - 1,3 mg / kg, 0,8 - 1,2 mg / kg, 0,9 - 1,1 mg / kg, 0,5 - 1,4 mg / kg, 0,5 - 1,3 mg / kg, 0,5 - 1,2 mg / kg,, 0,5 - 1,1 mg / kg, 0,5 - 1,0 mg / kg, 0,5 - 0,9 mg / kg, 0,5 - 0,8 mg / kg, 0,5 - 0,7 mg / kg, 0,5 - 0,6 mg / kg, 0,5 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,6 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,7 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,8 mg / kg (opciono ± 10 %), 0,9 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,0 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,1 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,2 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,3 mg / kg (opciono ± 10 %), 1,4 mg / kg (opciono ± 10 %) ili 1,5 mg / kg (opciono ± 10 %).
[0031] Važno je napomenuti da su terapeutske doze predviđene iz in vitro podataka bile između 0,5 mg / kg i 8 mg/kg. Kao što je opisano u eksperimentalnom delu u nastavku, podaci dobijeni iz prvih eksperimenata studije I u čoveku faze I nisu u skladu sa modelom farmakokinetičkog/ciljnog angažovanja (PK/TE) izračunatim na osnovu podataka koji su bili dostupni pre početka ove prve studije u čoveku.
Podaci in vivo pokazali su da se efekat primeć uje kod doza od samo 0,05 mg/kg, što je bilo potpuno neočekivano. Ovo je navelo pronalazače da modifikuju model farmakokinetike/ciljne interakcije (PK/TE) i da preispitaju afinitet FR104 za humani CD28, sa KDvrednošć u od oko 0,3 nM umesto 4,6 nM. Kao rezultat, maksimalna doza koja je sada predviđena je 1,5 mg/kg, a doze od samo 0,05 mg/kg smatraju se terapeutski afektivnim.
[0032] U nekim realizacijama, doza FR104 ima poluživot kod ljudi između 120 i 240 sati, kao što je između 130 i 230 sati, između 140 i 220 sati ili između 150 i 210 sati.
[0033] U nekim realizacijama, nivoi IFNg TNFa i IL-8 u serumu nakon primene FR104 čoveku su ispod 5000 pg / ml, kao što je ispod 4000 pg / ml, ispod 3000 pg / ml, ispod 2000 pg / ml, ispod 1000 pg / ml, ispod 800 pg / ml, ispod 600 pg / ml, ispod 400 pg / ml ili ispod 200 pg / ml.
[0034] Režim doziranja prema predstavljenom pronalasku se, prema tome, drastično razlikuje od onoga što se očekivalo od podataka dostupnih pre dole otkrivene prve studije na čoveku. Ova promena režima doziranja ima nekoliko prednosti, kao što su smanjeni troškovi lečenja, smanjeni neželjeni efekti, smanjenje učestalosti primene i manje poteškoć a u formulisanju farmaceutskih kompozicija koje sadrže FR104 kao aktivni princip. Zaista, nije uvek moguć e ili pogodno davati velike koli čine terapijskog rastvora (> 2 ml) pacijentu, posebno potkožnim putem.
[0035] Trenutno se smatra da je zasićenost receptora od najmanje 80 % neophodno za postizanje terapeutski efikasnog tretmana sa FR104. Prema poželjnoj realizaciji ovog pronalaska, količina FR104 primenjena na subjekta indukuje najmanje 80 % zasićenosti CD28 receptora tokom vremenskog perioda između dve primene navedenog fragmenta antitela anti CD28 Fab. Već e doze primenjene u skladu sa ovim pronalaskom (tj. 0,5 do 1,5 mg/kg po primeni) mogle su se predvideti iz in vitro podataka koji su bili dostupni pre početka faze I studije otkrivene u nastavku. Međutim, da bi se opteretilo 80 % CD28 receptora, stručnjak bi primenio 0,5 mg/kg u učestalosti jednom u dve nedelje (videti Tabelu 2 dole), dok se ista doza može primenjivati jednom u 4 nedelje ili čak ređe prema ovom pronalasku. I dalje se pozivajuć i na Tabelu 2 dole, čini se da bi za upotrebu doza od 1 mg/kg bile potrebne mesečne primene, dok je u okviru ovog pronalaska dovoljna doza od 1 mg/kg na svakih 8 nedelja. Isto važi i za doze od 1,5 mg/kg, za koje se minimalna učestalost pomera od jednom na 5 nedelja do jednom na dva meseca ili vi še. Naravno, stručnjak ć e prilagoditi učestalost primene dozama koje se primenjuju, kako bi se postiglo najmanje 80 % zasićenosti CD28 receptora tokom vremenskog perioda između dve primene, bez davanja prekomerne doze. Što je već a primenjena jedinstvena doza, to je niža učestalost primene. Doze od 0,5 do 1 mg/kgć e se primenjivati, na primer, na frekvencijama od jednom mesečno do jednom u dva meseca, na primer.
[0036] Uslovi podložni poboljšanju ili sprečavanju inhibicijom imunološkog odgovora T ć elija tretmanom sa FR104 u skladu sa ovim pronalaskom su transplantacija disfunkcije organa, tkiva ili ć elije (uključuju ć i odbacivanje transplantata, posebno odbacivanje transplantata bubrega, hroni čna alograftska vaskulopatija i bolest odbacivanja transplantiranih organa), autoimune bolesti posredovane T-limfocitima, ateroskleroza, inflamatorne bolesti (uključujuć i inflamatorne bolesti creva poput ulceroznog kolitisa i Krohnove bolesti) i preosetljivost tipa IV. Među autoimunim bolestima koje se mogu lečiti prema predstavljenom pronalasku, posebno se mogu navesti autoimunski encefalomielitis, revmatoidni artritis, psorijaza, dijabetes tipa 1 i multipla skleroza. Sledeć e stanje je psorijati čni artritis. Druge autoimune bolesti mogu se lečiti prema ovom pronalasku; ovo je slučaj sa buloznim pemfigoidom, akutnim diseminiranim encefalomielitisom (ADEM), ankilozirajuć im spondilitisom, sindromom antifosfolipidnih antitela (APS), autoimunim oforitisom, celijakijom, gestacionim pemfigoidom, Godpastureovim sindromom, Gravesovom bolešć u, Guillain-Barre-ovim sindromom nazivaju se i akutna inflamatorna demijelinizirajuć a polineuropatija, akutni idiopatski poliradikuloneuritis, akutni idiopatski polineuritis i Landrijeva uzlazna paraliza), Hašimotova bolest, idiopatska trombocitopenična purpura, Kavasakijeva bolest, eritematozni lupus, sindrom štitne žlezde, mikroskopski pemfigus, Reiterov sindrom, Sjogrenov sindrom, Takajasuov arteritis, privremeni arteritis (poznat i kao „d žinovski arteritis“) i Vegenerova granulomatoza. Autoimunski uveitis i alopecija areata su dalje autoimune bolesti koje se mogu le čiti.
[0037] Kao što je već pomenuto, novi režim doziranja prema pronalasku je posebno koristan za olakšavanje administracije tretmana. Monoklonska antitela se obično daju intravenozno tokom dugih perioda lečenja do nekoliko godina. Subkutana primena lekova je ustaljena terapijska opcija za neke hronične bolesti kao što je dijabetes melitus i predstavlja novi način primene kod reumatoidnog artritisa (Weinblatt et al., 2013) (Melichar et al., 2014). Glavna prepreka za subkutani pristup u primeni monoklonskih antitela je ograničenje količine koja se daje. Gornja granica zapremine koja se može bezbolno ubrizgati je oko 2 ml. Već a količina injekcije može uzrokovati bol i nelagodnost kod pacijenta. Da bi se ograničila količina injektiranog rastvora pacijentu, mogu se pripremiti visoko koncentrovani rastvori monoklonskih antitela. Međutim, ovo nameć e posebne zahteve za formulaciju leka (Boven i sar., 2012).
[0038] Subkutana injekcija sa terapijskim dozama prethodno propisanim na osnovu podataka in vitro nije bila moguć a. Terapijske doze FR104 prema predstavljenom pronalasku mogu se uključiti u zapreminu koja je dovoljno mala (oko 2 ml) ukoliko se uzme u obzir ovaj način primene, na primer za lečenje stanja kao što su psorijaza ili reumatoidni artritis.
[0039] Prema posebnoj instanci pronalaska, terapeutski efikasna količina FR104 daje se subjektu kome je to potrebno subkutano, intramuskularno, lokalno ili putem intratekalne injekcije.
[0040] Difuzija antitela sa mesta injekcije može biti problem, posebno kada se antitelo daje subkutanom injekcijom. Veliki napredak povezan je sa uvođenjem hijaluronidaze. Molekuli hijaluronana predstavljaju važnu komponentu funkcionalne barijere koja sprečava širenje zapremine u ekstracelularni matriks. Buduć i da se hijaluronan neprestano obnavlja, prolazni poreme ć aj ne predstavlja ozbiljan funkcionalni problem. Rekombinantna humana hijaluronidaza zaobilazi probleme imunogenosti (Shpilberg i Jackisch, 2013). FDA je odobrila rekombinantnu humanu hijaluronidazu (rHuPH20; Hilenek®) kao pomoć no sredstvo za olakšavanje supkutane primene drugih sredstava. Prema posebnom slučaju ovog pronalaska, kompozicija koja se daje čoveku kome je to potrebno sadrži rekombinantnu humanu hijaluronidazu pored FR104.
[0041] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutsku kompoziciju za inhibiranje imunolo škog odgovora T ć elija kod čoveka kome je to potrebno, koji sadrži FR104 u količini između 3 i 120 mg, na primer između 3 i 100 mg, 3 i 80 mg, 3 i 60 mg ili 3 i 40 mg, poželjno manje od 35 mg, kao što je manje od 30 mg, manje od 25 mg, manje od 20 mg i na primer između 3 i 14 mg, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljive pomoć ne supstance. Farmaceutska kompozicija prema pronalasku treba da se koristi kao jedinstvena doza, koja se može davati subjektu kome je to potrebno, na učestalosti koju odredi lekar, ali ne više od jednom nedeljno. Na primer, farmaceutska kompozicija prema pronalasku je mesečna unitarna doza. U zavisnosti od tačne doze i kliničkog konteksta (težina i opšte stanje pacijenta, priroda bolesti, itd.), farmaceutska kompozicija prema pronalasku može se primenjivati jednom nedeljno ili jednom na 2, 3, 4, 5 ili 6 nedelja. Kada farmaceutska kompozicija prema pronalasku sadr ži 35 mg FR104 ili više, tj. između 35 mg i 120 mg FR104, kao što je između 35 i 60 mg, 35 i 80 mg 35 i 100 mg, 40 i 120 mg, 60 i 120 mg, 80 i 120 mg, ili 100 i 120 mg, poželjno je da se daje jednom u 3, 4, 5 ili 6 nedelja.
[0042] Farmaceutska kompozicija prema ovom pronalasku može se formulisati tako da je pogodna za intravensku, subkutanu, intramuskularnu, topikalnu ili intratekalnu primenu. Kao što je napred navedeno, farmaceutska kompozicija prema pronalasku može sadržati rekombinantnu humanu hijaluronidazu, posebno kada je formulisana za subkutano davanje.
[0043] Sledeć i predmet ovog pronalaska je komplet delova koji sadrži nekoliko doza FR104, na primer 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15 ili više doza, pri čemu svaka doza sadrži količinu od 3 do 120 mg FR104, na primer između 3 i 100 mg, 3 i 80 mg, 3 i 60 mg ili 3 i 40 mg, poželjno manje od 35 mg, kao što je manje od 30 mg, manje od 25 mg, manje od 20 mg i na primer između 3 i 14 mg. Ove doze se u kompletu mogu opisati kao nedeljne doze ili doze koje treba uzimati svake 2, 3, 4, 5 ili 6 nedelja. U određenom slučaju, to su mesečne doze.
[0044] Prema posebnom izvođenju napred opisanih farmaceutskih kompozicija i kompleta delova, farmaceutska kompozicija ili svaka doza prisutna u kompletu sadrži špric ili bilo koji drugi uređaj koji omoguć ava njegovu primenu intravenskim, potkožnim, intramuskularnim ili intratekalnim putem.
[0045] Ostale karakteristike pronalaska ć e takođe postati očigledne tokom opisa koji sledi nakon bioloških ispitivanja i prve studije na čoveku, koja su sprovedena u okviru pronalaska i koja mu pružaju neophodnu eksperimentalnu podršku, bez ograničavanja njenog obima.
PRIMERI
Primer 1: FR104 farmakokinetika, farmakodinamika i metabolizam proizvoda kod ljudi
[0046] Pre početka ove studije nisu bili dostupni podaci o farmakokinetici FR104, farmakodinamici i metabolizmu proizvoda kod ljudi.
[0047] Međutim, i da bi se odredio minimalni očekivani nivo biološkog efekta (MABEL), podaci o PK i PD u studijama cinomolga i babuna su objedinjeni, analizirani u populaciji PK/PD, kao i alometrijski skalirani za ljude. Podaci o PK i RO kod babuna i cinomolgnih majmuna bili su dosledni i stoga modelirani zajedno.
MABEL i procena nivoa kliničke doze
[0048] Minimalni predviđeni nivo biološkog efekta (MABEL) izabran je kao prvi nivo doze u prvom ispitivanju na ljudima FR104 (EMA 2007: Smernice o strategijama za identifikovanje i ubla žavanje rizika za klinička ispitivanja prva na ljudima sa ispitivani medicinski proizvodi, EMEA/CHMP/SVP/28367/07; FDA 2005: Smernice za industriju koja procenjuje maksimalnu sigurnu početnu dozu u početnim kliničkim ispitivanjima za terapiju kod odraslih zdravih dobrovoljaca).
[0049] Minimalni predviđeni nivo biološkog efekta (MABEL) se generalno procenjuje kao doza koja stvara približno od 10 do 20 % maksimalne farmakološke aktivnosti. Obično se procenjuje na osnovu in vitro podataka. In vivo podaci su koriš ć eni za FR104, s obzirom na vrlo jasan in vivo odgovor na dozu primenjenu kod babuna.
Razvoj modela
[0050] Da bi se simulirao procenat zasićenosti CD28 receptora tokom vremena za ljude kojima se daju različite doze FR104, svi PK i PD podaci do sada dobijeni u studijama cinomolga i babuna (Baboon: pojedinačna doza 0,1, 1, 10 i 20 mg/kg IV; majmuni Cinomolgus: 1, 2, 7 mg/kg pojedinačne doze IV; Cinomolgus: 20, 50, 100 mg/kg višestruke doze IV) analizirani su pomoć u populacionog pristupa.
[0051] Uzeti su u obzir sledeć i aspekti:
Mehanički farmakokinetički/ciljni angažman (PK/TE) koristi se za predviđanje efikasnog režima doziranja kod ljudi:
* Nedovoljno podataka o PK i RO pri niskim nivoima doza i niskim koncentracijama lekova da bi se omoguć ila pouzdana procena koncentracija lekova koje rezultiraju 10 % RO in vivo
* Dovoljno podataka o PK i RO za već e koncentracije lekova kako bi se omogu ć ilo ve ć e modeliranje i simulacija pouzdanosti.
[0052] Za procenu MABEL-a korišć ena je formula za izračunavanje maksimalne zasićenosti receptora na osnovu KDinterakcije mAb-cilj (Duff, 2006). Sledeć a formula je koriš ć ena za izračunavanje maksimalne zasićenosti receptora na osnovu KDinterakcije mAb-meta korišć ene za procenu MABEL (Duff, 2006).
[0053] Izračunati RO pri različitim nivoima doze prikazani su u donjoj tabeli:
Tabela 1: Procenjeni početni % CD 28 RO
[0054] Koriš ć ene su konzervativne in vitro vrednosti Kd (4,6 nM) i zapremina humane plazme (V1, 0,04 L / kg). Međutim, in vivo Kd može biti niži od in vitro Kd. Model ciljane dispozicije leka (TMDD) procenjen je na V1 = 0,045 L / kg za FR104 (videti dole).
[0055] Sledeć e glavne pretpostavke modela koriš ć ene su za ovu PK/TE TMDD analizu:
• Kvazi ravnotežna aproksimacija je pogodna za opis interakcije između FR104 i CD28
• Lečenje FR104 ne menja stopu sinteze i razgradnje CD28, niti rezultira iscrpljenjem CD28-eksprimiraju ć e ć elije, a vezivanje FR104 ne menja brzinu internalizacije CD28 (kdeg = kint)
Maksimalni signal protočne citometrije se nije promenio nakon infuzije FR104
1
Nije bilo pada perifernih limfocita ili CD4 T ć elija nakon doziranja FR104
• Nivoi CD28 receptora izračunati su na osnovu pruženih informacija i naknadno fiksirani (R0) u uklapanju modela
• Pretpostavljalo se da se CD28 eksprimira samo u CD3 CD4 T ć elijama, dok se ekspresija na ostalim tipovimać elija ne uzima u obzir
• Pretpostavljeno je da su ciljni parametri (Kd, Kdeg, R0) jednaki između babuna i cino majmuna.
• Individualna telesna težina životinja tretira se kao kovarijant za skaliranje parametara povezanih sa PK eksponentom od 0,75 (za CL i K) i 1 (za V1 i V2).
[0056] Teorijski proračun koncentracije CD28 receptora kod majmuna kada se normalizuje na zapreminu krvi zasnovan je na sledeć im podacima:
• U izveštajima o studijama, broj receptora po ć eliji na CD3 CD4 ć elijama se kre ć e od 20000 do 60000. • U ugradnji modela, koncentracija receptora je bila fiksirana na 0,4 nM
• Ostale koncentracije receptora (npr. 0,2 nM) su fiksne i to je obrnuto uticalo na procenu Kdeg, dok je imalo manji uticaj na ugradnju modela u određenom opsegu.
[0057] Sledeć a formula je koriš ć ena i rezultirala je ispravnim prilagođavanjem zauzetosti receptora (slika 2A):
Koncentracija antigena (nM)=(Broj receptora po ćeliji*gustina krvnih zrnaca*109)/6.023*1023) Projekcija FR104 RO u ljudima
[0058] Parametri povezani sa PK skalirani su od majmuna do čoveka primenom alometrijskog skaliranja (videti dole). Pretpostavljeno je da je eksponent jednak 1 za obim distribucije. Pretpostavljeno je da je eksponent jednak 0,75 za sistemski CL i distributivni CL (Q). Prosečna telesna težina od 70 kg za čoveka i 2,9 kg za cinomolgnog majmua je korišć ena na osnovu srednje telesne težine majmuna u studijama sa jednom i više doza.
• Pretpostavljalo se da su Kdeg i Kd (na koji utiču Kon i Koff) CD28 jednaki između ljudskih i životinjskih vrsta.
• Broj CD3 CD4 Tć elija (nakon normalizacije telesne težine) bio je uporediv između majmuna i ljudi • Pretpostavljeno je da je gustina receptora CD281,65 puta već a u poređenju sa cino/babunom.
[0059] Detaljnija simulacija pojedinačnih doza pokazuje sledeć e projektovane maksimalne profile zasićenosti receptora kod ljudi za različite doze FR104:
Tabela 2: Simulacija % zasićenosti CD28 kod ljudi nakon različitih pojedinačnih i.v. doze FR104 (0,005 do 8 mg/kg) nakon različitih perioda posmatranja (nedelje)
Zaključak
[0060] Korišć enjem pristupa modeliranja PK/TE, utvrđeno je da bi izabrana doza MABEL od 0,005 mg/kg trebala dovesti do 13 % zasićenosti CD-28 receptora kod ljudi kao što je prikazano na slici 2A.
Primer 2: Dizajn studije
2.1. Princip
[0061] Kao što je opisano u Primeru 1, doza izabrana kao MABEL je bila 5 mg/kg što odgovara približno 13 % zasićenosti CD28 receptora.
[0062] Odlučeno je da se izvode segmenti za poveć anje doze iz studije sa pojedinačnim primenama. Trajanje zasićenosti CD28 receptora na limfocitima T cirkulišuć e krvi nakon primene FR104 zavisi od doze. U toksikološkoj studiji na cinomolgnim majmunima, infekcija/limfomi su se uglavnom razvijali sa 100 % zasićenosti CD28 receptora na T limfocitima u cirkulaciji krvi najmanje 8/11 nedelja.
[0063] Da bi smanjio rizike, podnosilac zahteva je odlučio da prvo testira vrlo niske doze koje indukuju manje od 4 nedelje 100 % zasićenosti CD28 receptora (RO) na T limfocitima u krvi i maksimalno približno 50 % RO tokom 8 nedelja na osnovu modelirane PK/PD populacije nekliničkih podataka alometrijski prilagođenih za ljude (videti Tabelu 2).
[0064] Kao sigurnosna mera, doza od 0,5 mg/kg je izabrana za održavanje studije i izvođenje PK/PD i sigurnosne analize pre prelaska na višu, kao i ponovljene doze.
[0065] Prema ovoj simulaciji, sledeć e doze od 1 i 2 mg/kg trebale bi biti prilagođene kako bi bile u skladu sa pravilom od približno 50 % RO tokom 8 nedelja nakon doze. Opcionalna dodatna doza je možda testirana. Takođe bi se pridržavao pravila o približno 50 % RO tokom 8 nedelja nakon doze.
2.2 Materijali i metode
Testni proizvod, doza, način primene
[0066] FR104 je administriran intravenozno u svim nivoima doze infuzijom od 100 ml u najmanje 30 minuta, nakon razblaživanja do prave koncentracije u Ringerovom rastvoru laktata.
[0067] Šest doznih grupa je zakazano za Deo 1, Par A (6 pojedinačnih uzlaznih doza, od kojih su samo 4 konačno izvedeno), sa sledeć om skalom eskalacije na osnovu minimalnog očekivanog nivoa biološkog efekta (pristup MABEL): 0,005; 0,050; 0.200; 0.500; 1.0; 2,0 mg/kg (poslednja dva su otkazana nakon analize rezultata PK/PD dobijenih iz grupa 1-4).
[0068] Dve dozne grupe za Deo 1, Par B: 0,5 i 1,0 mg/kg su prvobitno zakazane i promenjene u 0,5 i 0,2 mg/kg, kao što je objašnjeno u nastavku.
Fizički opis ispitivanog leka
[0069] GMP FR104 je obezbeđen na mestu u bocicama od 5 ml koje se mogu izvuć i i sadrže 100 mg FR104 (20 mg/ml) u 4 % manitola 0,02 % Tween 80. Na mestu su napravljena odgovarajuć a razblaženja u Ringerovom rastvoru laktata.
[0070] Svi ispitivani proizvodi su pripremljeni u skladu sa dobrom proizvodnom praksom (GMP) kako zahteva trenutni GCP.
Ostali lekovi koji se daju u studiji
[0071] Odgovarajuć a injekcija placeba sadrži nosač (Ringerov rastvor laktata). Za doziranje placeba, administrirano je 100 ml nosača.
Farmakokinetički proračuni
[0072] Farmakokinetički proračuni su izvedeni upotrebom Phoenik WinNonlin 6.2 ili nosača (Pharsight Corporation, Palo Alto, CA, USA).
[0073] Sledeć i pojedinačni parametri PK, gde je to prikladno, određeni su za FR104 iz pojedinačnih profila vremena koncentracije u serumu, primenom nekompartmentarne metode:
Cmax: maksimalna primeć ena koncentracija u serumu
tmaxvreme pojave Cmax
AUCinfpovršine ispod krive koncentracije u serumu u odnosu na vremensku krivu od nula do beskonačnosti, izračunato iz AUC0-t+ (Ct/λz), gde je Ctposlednja primeć ena kvantifikovana koncentracija i λzpovršina konstante AUC0-28dterminalne brzine prvog reda ispod krive koncentracije leka u serumu tokom vremena tokom intervala doziranja (tj. 28 dana) izra čunato linearno-logaritamskim trapezoidnim pravilom
terminalni poluživot t1/2, izračunat iz (In 2)/λz
Racakumulacioni odnos, izračunat kao AUC0-28dDan 29/AUC0-28dDan 1 (samo 2. deo)
CL sistemski klirens izračunat kao doza i.v./ AUCinf
Vzzapremina raspodele izračunata kao CL/λz
Procenjeni su normalizovani parametri doze (Cmax/doza, Cavg/doza, AUC0-28d/doza).
[0074] Ostali PK parametri su izračunati kako se smatra odgovaraju ć im.
Farmakodinamika
zasićenost receptora CD28
[0075] Primarna PD promenljiva je klaster diferencijacije (CD) 28 RO tokom vremena, procenjen kao RO pomoć u FR104 u uzorcima krvi prikupljenim u svakoj vremenskoj tački tokom studije primenom odgovarajuć e potvrđene metode. Izračunati su odgovaraju ć i PD parametri.
Izazov za zaključani hemocijan
[0076] Samo za Deo 1, Par B.
[0077] Humana antitela KLH Abs u serumu su detektovani metodom imuno-sorbentnog testa povezanog enzimom (ELISA).
[0078] Uzorci krvi od 1,5 ml prikupljeni su venepunkcijom ili putem kanile u podlaktici u standardni na čin epruvete za serum.
Merenja antitela na KLH pomoć u ELISA
[0079] Analiza uzoraka serumskih studija izvedena je upotrebom komercijalnog kompleta "Humani anti-KLH IgG" katalog br. 700-140-KLG kompanije Alpha Diagnostic International. Donja i gornja granica kvantifikacije utvrđene su da budu 7,20 i 86,0 U/ml. Ovaj Elisa komplet zasnovan je na vezivanju humanih anti-KLH antitela u uzorcima za KLH antigen imobilisan na mikro prorezima, a antitela na KLH IgG se otkrivaju anti-humanim IgG-specifičnim antitelom konjugovanim sa enzimom HRP. Posle koraka ispiranja dodaje se hromogeni supstrat (TMB) da bi se prekinula reakcija i apsorbancija na 450 nm se zatim meri pomoć u ELISA čitača mikroposude.
Testovi krvi/seruma
[0080] Uzorci cele krvi su dobijeni od različitih davalaca i sakupljeni na epruvetama za prikupljanje krvi K2-EDTA ili K3-EDTA. Uzorci za određivanje zasićenosti FR104 PK i CD28 receptora dobijeni su iz krvi prikupljene u sledeć im vremenskim tačkama:
1. dan, predoza i na 0,5, 0,75, 1, 2, 4 i 8 sati nakon početka infuzije
2. dan, 24 sata nakon početka infuzije
3. dan, 48 sati nakon početka infuzije
5. dan, 96 sati nakon početka infuzije
8. dan, nedelju dana nakon početka infuzije
15. dan, 2 nedelje nakon početka infuzije
29. dan, 3 nedelje nakon početka infuzije
43. dan, 6 nedelja od početka infuzije samo za 0,5 mg/kg (grupa 4 grupe A)
57. dan, 8 nedelja nakon početka infuzije, ne sme se izvoditi ako je doza < 0,2 mg/kg
85. dan, 12 nedelja nakon početka infuzije, ne sme se izvoditi ako je doza < 0,2 mg/kg
113. dan, 16 nedelja nakon početka infuzije (kontrolna poseta grupi sa dozom ≥ 1 mg/kg)
1
Merenje koncentracije FR104-PEG ELISA-om
[0081] Molekul FR104 (anti-CD28.3 Fab) inkubiran je u pločicama obloženim CD28Fc. Povezani FR104 je zatim otkriven sa zečjim monoklonskim antitelom usmerenim na PEG (metoksi grupa), koje je otkriveno anti-zečjim poliklonskim antitelom obeleženim sa peroksidazom.
Reagensi i puferi
[0082]
- CD28- Ig (CD28 / Fc Chimera, R&D Sistems # 342-CD-200, rekonstituisan u 200 mg/mL u PBS), - Pufer za oblaganje: NaHCO30,05 M pH 9,2 (80 ml Na2CO30,05 M 920 ml NaHCO30,05 M, pH 9,2) - BSA (Sigma # A-7906)
- Tween 20 (Sigma # P7949)
- Uzorak
- Standardno: FR104 # CAA-1 (0,5 mg/ml)
- Monoklonsko antitelo zečji anti-PEG (metoksi grupa) (Epitomics # 2061-1, 0.97mg/ml)
- Poliklonska kozja peroksidaza obeležena nasuprot zeca (Jackson Immunoresearch #111-035-144, 0,8 mg/ml)
- Podloga: TMB (Sigma # T8665)
- H2SO4(VWR 20704.292)
[0083] Ploče su obložene CD28-Ig pri 1 mg/ml u karbonatnom puferu 0,05M pH 9,2 (50 ml/po otvoru) i inkubirane 2 sata na 37 °C ili preko noć i na 4 °C. Otvori su ispražnjeni i isprani 3 puta uzastopno sa 200 µL PBS-0,05 % Teeen-a. Dodato je 100 µL PBS Tveen 0,1 % BSA 1 % i pločice su inkubirane 1 h na 37 °C.
- Standard: FR104 # L27221/G1/2 (10,01 mg/ml) razblažen je za prvu tačku na 100 µg/ml i serijski razblažen sa faktorom 5 za 7 sledeć ih tačaka, u duplikatu. Serum (50 µl) je razblažen najmanje na 1/10 u PBS-0,1 % Tveen-u i inkubiran 1 h na 37 °C. Otvori su ispražnjeni i isprani 3 puta uzastopno sa 200 µL PBS-0,05 % Tween-a i razblaženi. Zatim je dodato 50 µl/po otvoru monoklonskog antitela zečijeg anti-PEG na 1/500 u PBS-0,1% Tween, prać eno inkubacijom 1 h na 4 °C. Otvori su ispražnjeni i isprani 3 puta uzastopno sa 200 µL PBS-0,05 % Tween-a. Dodata je kozja anti-zečja peroksidaza (anti-Rb PO) na 1/2000 u PBS-0,1 % Tveen-u (50mL / puits) i inkubirana 1 h na 4 ° C. (korak ispiranja) Dodan je TMB (50 ml / jamica) i inkubiran 10 minuta na sobnoj temperaturi u mraku. Dodan je stop pufer (50 µl/po otvoru H2S040,5 M). Merenje apsorbancije na 450 nm (ref. 630 nm) je zatim dobijeno primenom mikrotitarske plo če (Nunc Immunoplate, Nunc, # 442404). SoftMaxPro program je korišć en za analizu i određivanje koncentracije FR104 u uzorcima.
Merenje ekspresije receptora protočnom citometrijom
Utvrđivanje zasićenosti receptora:
[0084] Svaki uzorak krvi je podeljen na pola i pomešan ili ne sa antitelom FR104. Nakon lize crvenih krvnih zrnaca, vezivanje FR104 za CD28 ispitivano je protočnom citometrijom na limfocitima obojenim FITC konjugovanim anti-CD3 antitelom, koristeć i sukcesivno anti-PEG zečje monoklonsko antitelo i Alexa fluor konjugovano sekundarno antitelo zeca. Prema tome, srednji fluorescentni intenzitet (MFI) PEG bojenja je određen u oba otvora koji sadrže drugu polovinu zapremine krvi, od istog davaoca dopunjenog viškom antitela FR104. Zatim je izračunata zasićenost CD28 promovisanog FR104 za svakog davaoca krvi izvođenjem odnosa između MFI oba otvora (bez FR104 viška/sa viškom FR104).
Radni rastvor i puferi
[0085]
Tabela 3.
1 Tabela 4
Tabele 5-7
[0086] Test je izveden u tri primerka za test uzorke koji su tretirani ili ne sa zasić uju ć om dozom FR104 (5 µg/ml). Uzorci su podeljeni na pločice sa 96 otvora.
[0087] Izvedena je odgovaraju ć a zapremina rastvora FR104 od 50 µg/ml i nežno homogenizovana u epruveti tretiranoj EDT krvlju. 50 µl svakog uzorka ljudske celokupne krvi stavljeno je u 6 otvora ploče sa 96 V dna. U prvi set od tri otvora dodato je 5,5 µl FR104 (50 µg/ml u D-PBS) i 5,5 µl D-PBS u drugom setu od tri otvora. Posle nežne homogenizacije, pločice su inkubirane 15 minuta na sobnoj temperaturi (RT). Dodato je 150 µl/po otvoru rastvora za lizu crvenih krvnih zrnaca i zatim centrifugirano 1 min na 1200 g. Supernatant je odbačen i dodato je 150 µl/po otvoru rastvora za lizu crvenih krvnih zrnaca. Posle 5 minuta na sobnoj temperaturi, pločice su centrifugirane 1 minut na 1200 g (ponoviti 3 puta). Zatim se doda 150 µl FACS pufera i centrifugira. Dodato je 30 µl/po otvoru rastvora smeše FITC mišjeg anti-humanog CD3 IgG Igg-a/zečjeg anti-PEG IgG radnog rastvora i inkubirano 15 minuta u mraku na 4 °C. Ć elije su isprane FACS puferom i centrifugirane, korak ponovljen dva puta. Dodato je 30 µl/po otvoru Alexa fluora 405 kozijeg anti-zečjeg IgG radnog rastvora i inkubirano 15 minuta na 4 °C u mraku. Ć elije su isprane dva puta sa FACS puferom. Ć elije su zatim resuspendovane u 300 µl FACS pufera za FACS analizu.
1
2.3 Dizajn studije
[0088] Dizajn ove studije FR104 faze I je oprezan i u skladu je sa evropskim smernicama za klinička ispitivanja za primenu kod čoveka sa ispitivanim lekovima (EMEA/CHMP/SVP/28367/07).
[0089] Ova studija je prva u čoveku, faza I, randomizirana, dvostruko slepa, placebo kontrolisana, jednostruka studija koja vrednuje pojedinačne i više uzlazne intravenske doze FR104 kod zdravih ispitanika.
[0090] Do 71 zdravih muških i ženskih ispitanika odabrano je prema kriterijumima za uključivanje i isključivanje, tj. 57 ispitanika iz Dela 1 (SAD: 3 para od 36 [par A], 14, [par B] i 7 subjekata [opcionalni par C], respektivno). Predviđeno ukupno trajanje studije bilo je 9 meseci (36 nedelja).
[0091] Sve doze FR104 su davane intravenozno, polaganom infuzijom od najmanje 30 minuta. Primeć en je postepeni pristup u svim nivoima doze. Između svih nivoa doze primeć en je interval od najmanje 14 dana (od poslednje do prve primene). Pojedini subjekti istog dana doziranja dozirani su u razmaku od najmanje 60 minuta.
Izbor doze
[0092] Prva doza planirane studije "prvo u čoveku" zasnovana je na MABEL-u, kako je određeno PK/PD populacionim modelovanjem nekliničkih podataka alometrijski prilagođenih čoveku (videti napred Primer 1 za detalje). Odabrana doza je bila 5 µg/kg što odgovara procenjenih približno 13 % zasićenosti CD28 receptora (RO).
[0093] Segmenti za poveć anje doze u studiji su izvedeni sa jednom primenom. Da bi se smanjili rizici, zakazano je zadržavanje od približno 12 nedelja nakon nivoa doze od 1 mg/kg, tj. pre započinjanja nivoa doze koji bi trebalo da indukuju 100 % CD28 RO tokom perioda od 4 nedelje ili vi še (prema populacionom PK/PD modelovanju). Ovaj period od 4 nedelje smatran je dovoljno kratkim da kod čoveka bude malo verovatno da virusna reaktivacija generiše bilo kakvu patologiju. Držanje od 12 nedelja omoguć ilo je PK/ PD i procene bezbednosti pre prelaska na već e doze od 1,2 mg/kg koje su u početku bile predviđene.
[0094] Prema simulaciji, doze od 1 i 2 mg/kg trebale su da indukuju 84, odnosno 92 % RO tokom 4 nedelje i 18 i približno 50 % RO tokom 8 nedelja. Kao sigurnosna mera odabrana je doza od 0,5 mg/kg za održavanje studije i izvođenje PK/PD i sigurnosnih analiza pre prelaska na već e doze.
Deo 1 Deo pojedinačne rastuć e doze (SAD)
[0095] Subjekti su regrutovani na osnovu njihove medicinske istorije i zdravstvenog stanja kako je procenio glavni pronalazač (ili imenovani kopronalazač). Tokom svakog perioda lečenja, ispitanici su bili smešteni u studijskom centru od dana pre doziranja (1. dan) do 5.dana. Obroci su bili standardizovani tokom rezidencijalnog perioda. Za grupe 1 - 4 (0,005; 0,05; 0,2 i 0,5 mg/kg), ambulantne posete bile su planirane za dan 8, dan 15, dan 29 i dan 57. Za grupu 4 (0,5 mg/kg), dodatna ambulantna poseta bila je planirana za dan 43. Poslednju ambulantnu posetu pratila je naknadna poseta za dan 85 (12. nedelja). Grupama 5 i 6 trebalo je dozirati 1, a maksimalno 2 mg/kg FR104, ali rezultati dobijeni manjim dozama naveli su pronalazače da otkažu ove doze.
Par A.
[0096] Dvadeset dvoje ispitanika bilo je upisano u jednu od 4 grupe nivoa doze u Paru A. Sekvencijalne (nivo doze) grupe zdravih subjekata primale su sve već e doze FR104 davane IV.
[0097] U prve 2 grupe na nivou doze (Grupa 1 do 2), po 4 ispitanika su randomizirana na FR104 ili na placebo u omjeru 3:1, tako da su 3 ispitanika dobila FR104, a 1 ispitanik je dobio placebo.
[0098] Primenjen je pristup u raspoređenim dozama, tj. jednom doziranom doziran je sledio drugi subjekat 48h kasnije, a dva preostala subjekta iz grupe nivoa doze 48h nakon drugog subjekta (ukupno 5 dana):
Dan 1: n = 1
Dan 3: n = 1
Dan 5: n = 2
[0099] U grupama 3 i 4, po 7 ispitanika je randomizirano na FR104 ili placebo u omjeru 5: 2, tako da je 5 ispitanika dobilo FR104, a 2 ispitanika placebo. Randomizacija je obezbedila da je u prvoj grupi od 2 ispitanika 1 dobio FR104, a 1 placebo.
1
[0100] Primenjen je pristup u raspoređenim dozama, tj. dozirana su 2 ispitanika, prać ena sa 2 ispitanika 48h kasnije, a preostala 3 ispitanika iz grupe nivoa doze 48h nakon četvrtog ispitanika (ukupno 5 dana):
Dan 1: n = 2
Dan 3: n = 2
Dan 5: n = 3.
[0101] Isti protokol zakazan je za grupe 5 i 6 (7 ispitanika, svaki, sa nivoom doze od 1 mg/kg i 2 mg/kg), ali je otkazan nakon analize podataka za prve 4 grupe.
Par B.
[0102] Četrnaest ispitanika bilo je upisano u jednu od 2 grupe doza (7 u svakoj grupi) u paru B.
[0103] Ispitanici su randomizirani na FR104 ili na placebo u omjeru 5: 2, tako da je 5 ispitanika dobilo FR104 i 2 ispitanika su dobila placebo. Randomizacija je obezbedila da je u prvoj grupi od 2 ispitanika 1 dobio FR104, a 1 placebo.
[0104] Pored uobičajenih procena, ispitanici u ovom paru su na dan injekcije FR104 dobili izazov za zaključani limetini hemocijanin (KLH).
[0105] Primenjen je pristup u raspoređenom doziranju, tj. dozirana su dva ispitanika, zatim dva ispitanika 48h kasnije, a preostala tri ispitanika iz grupe nivoa doze 48h nakon četvrtog ispitanika (ukupno 5 dana):
Dan 1: n = 2
Dan 3: n = 2
Dan 5: n = 3
[0106] Početni dizajn je bio sledeć i: KLH izazov, pojedinačna doza.
Tabela 9: početni dizajn za SAD, uključujuć i izazov KLH
[0107] Ovaj dizajn je modifikovan kako bi se uzeli u obzir rezultati dobijeni u grupama 1-4: KLH izazova, pojedinačna doza.
1
Tabela 10: modifikovani dizajn za SAD, uključujuć i KLH izazov
Kriterijumi za uključivanje
[0108] Subjekti koji ispunjavaju sve sledeć e kriterijume mogu da učestvuju u ovoj studiji:
1. Muško ili žensko, starosti od 18 do 60 godina, uključujuć i ekstreme;
2. U dobrom zdravstvenom stanju [medicinski stabilno] što je utvrđeno na osnovu istorije bolesti, vitalnih znakova, kliničkih laboratorijskih ispitivanja i opšteg fizičkog pregleda obavljenog na skriningu;
Napomena: ponovni test se može izvršiti u slučaju da vrednost kliničkog laboratorijskog testa nije u granicama dometa koja ć e odrediti podobnost subjekta. Ponovno testiranje po željno je obaviti u neplaniranoj poseti. Rezultat ponovnog testa uzeć e se u obzir za ispunjavanje uslova. Ako je ponovno testiranje izvan normalnih referentnih opsega, subjekat se može uključiti samo ako pronalazač proceni da abnormalnosti nisu klinički značajne.
3. Elektrokardiogram (EKG) u granicama normale ili ne pokazuje klinički značajna odstupanja, kako je ocenio pronalazač;
Napomena: ponovni test se može izvršiti u slučaju da je vrednost EKG-a izvan opsega koja ć e odrediti podobnost subjekta.
4. Težak je najmanje 50 kg, a ne više od 100 kg i ima indeks telesne mase (BMI) u granicama normale: 18,0 ≤ BMI<30,0 kg/m<2>;
5. Negativan test urina za odabrane droge koje se zloupotrebljavaju tokom skrininga;
6. Negativni alkotest na skriningu;
7. Ženska osoba je postmenopauzalna ili hirurški sterilna (imala je histerektomiju, bilateralnu ooforektomiju ili ligaciju jajovoda);
8. Ženska osoba ima negativan test trudnoć e na skriningu;
9. Muškarci koji nisu vazektomizovani i imaju ženskog partnera u rodnoj dobi moraju se složiti sa upotrebom efikasne metode kontracepcije do 90 dana nakon poslednje primene ispitivanog leka;
10. Muški subjekt mora se složiti da ne donira spermu do 90 dana nakon poslednje primene ispitivanog leka;
11. Spremni da se pridržavaju zabrana i ograničenja navedenih u ovom protokolu;
12. Obrazac informisane saglasnosti (ICF) potpisan dobrovoljno pre nego što se izvrši bilo koji postupak u vezi sa studijom, ukazujuć i na to da ispitanik razume svrhu i postupke potrebne za studiju i da je voljan da učestvuje u studiji;
13. Ispitanici bi trebali biti pozitivni na EBV prema PCR;
14. Nepušač ili lagani pušač, tj. puši najviše 5 cigareta (ili 3 cigare ili 3 cigarilosa) dnevno, i sposobnost i spremnost da se uzdrži od pušenja tokom zatvaranja i ambulantnih poseta u centru za klinička istraživanja.
Samo za Deo 1, Par B:
15. Ispitanik nije podvrgnut KLH izazovu.
Primer 3: Početni rezultati dela studije o pojedinačnoj rastuć oj dozi (SAD)
[0109] Koncentracija FR104 je izmerena u krvi pacijenata pomoć u ELISA-e, a nivo zasi ćenosti receptora je meren protočnom citometrijom 0, 1, 2, 5, 8, 15 i 29 dana nakon pojedinačnih uzlaznih doza. Farmakokinetički rezultati su predstavljeni na slici 1 u ng/ml FR104 u plazmi i rezultati farmakodinamike kao procenat zauzetosti CD28 receptora na ciljnim CD<3+>Tć elijama. Slika 1A prikazuje koncentraciju FR104 nakon jednokratne i.v. FR104 injekcije od 0,005, 0,05, 0,2 i 0,5 mg/kg, primenjene tokom 30 minuta, vršne koncentracije u plazmi izmerene 2 sata nakon injekcija dostigle su 117 ± 11, 1012 ± 48, 4922 ± 853 i 11620 ± 1076 ng/ml, respektivno. Iz koncentracija u plazmi izmerenih tokom prvog meseca, pokazalo se da poluživot zavisi od doze sa vrednostima od 3,4 dana za dozu od 0,05 mg/kg, 5, 7 dana za dozu od 0,2
1
mg/kg i 7,9 dana za dozu od 0,5 mg/kg doza. Slika 1.B iznenađujuć e pokazuje da je zasićenost receptora dostigla 80 % nakon jedne i.v. injekcije od 0,005 mg/kg FR104 i 100 % nakon jednokratne i.v. injekcije 0,05 ili 0,2 mg/kg FR104, umesto oko 13 % RO za 0,005 mg/kg FR104, kako se očekivalo. CD28 receptor je postao potpuno nezasić en nakon 15 dana nakon i.v. injekcije od 0,005 mg/kg i 28, 56 i 84 dana nakon i.v. injekcije od 0,05, 0,2 i 0,5 mg/kg.
[0110] Slika 2 prikazuje različite procente RO kod različitih koncentracija FR104 prethodno utvrđenih sa rezultatima in vitro (slika 2A) u poređenju sa procenatom RO uočenim nakon kliničkog ispitivanja. Slika 2B upoređuje predviđeni RO % utvrđen sa modifikovanim FR104-ovim Kd nakon analize prvog para A kliničke studije sa posmatranim RO % izračunatim protočnom citometrijom kako je objašnjeno u materijalu i metodi. Ova slika pokazuje savršenu korelaciju između obe situacije, što potvrđuje da je Kd izmeren in vitro u Poirier et al, 2012 bio potcenjen za humanu upotrebu i da je konstanta disocijacije FR104 oko 0,3 nM, a ne 4,6 nM (10 puta niža). Ovi rezultati nisu bili predvidljivi, jer se RO % određen u modelu neljudskih primata vrlo dobro uklapao u predviđanja. Terapeutske doze FR104 izračunate 2012. godine za pretkliničke studije pokazale su dobru efikasnost i široko su objavljene ((Haanstra et al, JI 2015) (Poirier et al, JI 2015) (Poirier et al, Experimental Dermatol. 2015) (Vierboom et al, Clinical i experimental imunol 2015)).
[0111] Ekspresija CD28 na površini T ć elija je zatim analizirana tokom 1 meseca nakon infuzije FR104 protočnom citometrijom. Slika 3 prikazuje srednju vrednost fluorescencije pegilovanog FR104, što odražava prisustvo CD28 receptora na ć elijskoj površini. Rezultati pokazuju da je u 4 različite grupe dobrovoljaca koji su primali FR104, CD28 i dalje prisutan na površini T ć elija čak i nakon vezivanja FR104, podvlačeć i da FR104 ne indukuje internalizaciju receptora niti regulaciju dole.
[0112] KLH izazov je napravljen na FR104 infuziji jedne doze (0,02, 0,2, 0,5 i 1,5 mg/kg modifikovane koncentracije) da bi se testirao imuni odgovor na KLH antigen kod čoveka. Koncentracija antitela na KLH analizirana je ELISA upotrebom komercijalnog kompleta. Slika 4 predstavlja odgovor na antitela na KLH. Ovaj rezultat ukazuje na inhibiciju zavisnosti od doze FR104 anti-KLH odgovora u poređenju sa dobrovoljcima koji su primali placebo. Sa terapijske doze od 0,2 mg/kg, odgovor je smanjen. 100 % inhibicije je primeć eno kod dobrovoljaca koji su primali 0,5 mg/kg FR104. Nove terapeutske doze FR104 efikasne su od 0,02 mg/kg da inhibiraju imuni sistem.
Primer 4: Izveštaj studije „Prvi čovek“
METOD
Dizajn studije
[0113] Ova studija je prva u čoveku, faza I, randomizirana, dvostruko slepa, placebo kontrolisana, jednostruka studija koja vrednuje pojedinačne i više uzlazne intravenske doze FR104 kod zdravih ispitanika. Odobrio ga je Nezavisni etički komitet Zieken-huisnetverk Antverpen (broj protokola FR104-CT01; broj EudraCT 2015-000302-19; identifikator Clinical-Trials.gov: NCT02800811). Studija je sprovedena u SGS Life Science Services, Služba za kliničku farmakologiju Antverpen-Antverpen, Belgija, u skladu sa smernicama dobre kliničke prakse i principima Helsinške deklaracije.
Učesnici
[0114] Prihvatljivi muški i ženski subjekti dali su pismenu saglasnost i bili su dobrog zdravlja. Ključni kriterijumi za uključivanje bili su opšte dobro zdravlje, starosti 18-60 godina, ≥ 50 kg i ne više od 100 kg sa BMI od 18-30 kg/m<2>. Kriterijumi za izuzeć e bili su bilo koja značajna prošla medicinska istorija ili abnormalni laboratorijski testovi.
Intervencija
[0115] Ispitni lek je bio FR104 (isporučuje ga OSE Immunotherapeutics SA., Nantes, Francuska), dok je uporedni lek (odgovarajuć i placebo) Ringerov rastvor laktata. FR104 je isporučen u obliku rastvora od 5 ml koji sadrži FR104 od 100 mg (20 mg/ml) i čuvan na 2-8 °C (36-46 °F), zaštić en od svetlosti. Špriceve sa odgovarajuć im razblaživačima ili placebom pripremila je apoteka SGS i davala ih pronalazaču na dvostruko naslepo način.
[0116] Doze su u početku odabrane na osnovu populacionog PK/PD modeliranja podataka o nehumanim primatima (sa alometrijskom adaptacijom), a podaci o ljudima su kasnije uklju čeni nakon privremene analize. Početna doza (MABEL, 0,005 mg/kg) odgovarala je modeliranom CD28 RO pri Cmaxod približno 20 %.
[0117] Za nivo doze ≤ 0,05 mg/kg, FR104 se daje IV infuzijom od 10 ml u najmanje 30 minuta, nakon
2
razblaživanja do tačne koncentracije u Ringerovom rastvoru laktata. Za ostale nivoe doze, FR104 je primenjen IV infuzijom od 100 ml u najmanje 30 minuta, nakon razblaživanja do tačne koncentracije u Ringerovom rastvoru laktata.
Režimi lečenja
[0118] U 1. delu (SAD: 2 para od 22 [para A] i 28 [para B]) trebalo je da bude izabrano 50 ispitanika, a u 2. delu (MAD) 14 subjekata. Tokom svakog perioda lečenja, ispitanici su bili smešteni u istraživačkom centru od dana pre doziranja (dan -1) do dana 5. Primenjen je pristup u raspore đenim dozama, tj. dozirano je 1 ili 2 ispitanika (dan 1), a zatim 1 ili 2 ispitanici 48 h kasnije (dan 3), a preostali ispitanici grupe doze 48 h nakon četvrtog ispitanika. Ukupno trajanje studije bilo je 36 nedelja, uključujuć i 11 nedelja prać enja nakon poslednje ponovljene doze. Između svih nivoa doze primenjen je interval od najmanje 14 dana (od poslednje do prve primene). Pojedini subjekti istog dana doziranja dozirani su u razmaku od najmanje 60 minuta.
[0119] Deo 1: Deo pojedinačne rastuć e doze (SAD) - Dvadeset i dva ispitanika trebalo je da budu upisana u jednu od 4 grupe nivoa doze u Paru A: 0,005 mg/kg u Grupi 1, 0,050 mg/kg u Grupi 2, 0.200 mg/kg u grupi 3 i 0.500 mg/kg u grupi 4. U grupama 1 i 2, po 4 ispitanika su randomizirana na FR104 ili placebo u omjeru 3: 1, tako da su 3 ispitanika dobila FR104, a 1 ispitanik placebo. U grupi 3 do 4, po 7 ispitanika je randomizirano na FR104 ili placebo u omjeru 5: 2, tako da je 5 ispitanika dobilo FR104, a 2 ispitanika placebo. Randomizacija je osigurala da je u prvoj grupi od 2 ispitanika 1 dobio FR104, a 1 placebo. Unapred definisano zadržavanje od približno 12 nedelja napravljeno je nakon doziranja u grupi 4, za privremenu procenu PK, PD i bezbednosti na osnovu kojih su donete odluke o sledeć im nivoima doze. Dvadeset i osam ispitanika trebalo je da bude upisano u jednu od 4 grupe doza (7 u svakoj grupi) u paru B: 0.500 mg/kg u grupi 7, 0.200 mg/kg u grupi 8, 1.5 mg/kg u grupi 9, i 0,020 mg/kg u grupi 9 bis. Ispitanici su randomizirani ili na FR104 ili na placebo u omjeru 5: 2. Pored uobičajenih procena, ispitanici u ovom paru dobili su KLH izazov na dan injekcije FR104.
[0120] Deo 2: Deo višestruke rastu ć e doze (MAD) - Četrnaest ispitanika trebalo je da bude upisano u jednu od 2 grupe doza (7 u svakoj grupi) u Delu 2: 0,2 mg/kg u grupi 10 i 0,5 mg/kg. Grupa 11. Svaki ispitanik je primio 2 primene FR104 ili placeba odvojenih u intervalu od 28 dana.
Procena citokina
[0121] Uzorci krvi su sakupljani pre doze i postdoze u satima 1, 2, 4, 8, 24 (dan 2). Uzorci su takođe sakupljeni na dan 15, 43, 57, 85, 113. Citokini IFN-g, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10.
[0122] IL 12p70 I TNF-a dozirani su u serumu primenom validirane ECLIA metode kori šć enjem komercijalnog testa Pro inflamatorne table I V-plek testa (# K15049G iz Meso Scale Discoveri, Rockville, MA). MULTI-SPOT® ploče su prethodno presvučene antitelima za prihvatanje. Uzorci se napune u otvorima rastvorom koji sadrži detekciona antitela povezana sa elektro-hemiluminescentnim etiketama (MSD SULFO-TAGTM). Analiti u uzorku vezuju se za prihvatanje antitela imobilisanih na povr šini radne elektrode; regrutovanje antitela za otkrivanje od strane vezanog analita. Nakon dodavanja MSD pufera za o čitavanje, na elektrode pločica se primenjuje napon i dolazi do emisije svetlosti ako su se značajna antitela obeležena SULFO-TAGTM vezala za ploču. Instrument meri intenzitet emitovane svetlosti kako bi pružio kvantitativnu meru analita u uzorku.
PK analiza
[0123] Serijski uzorci krvi za procenu PK prikupljeni su u sledeć im vremenskim tačkama u odnosu na vreme početka infuzije: predoza i postdoza u sati 0,5, 0,75, 1, 2, 4, 8, 24 (dan 2), 48 (dan 3), dana 5, 8, 15, 29, 43, 57, 85, 113 ( > samo dozne grupe od 0,5 mg/kg). Koncentracije FR104 u serumu određivane su validiranom metodom koja uključuje kvantitativni test elektrohemiluminescentnog imunosorbenta (ECLIA) na MSD Sector Imager 6000 (MSD, Gaithersburg, MD, SAD). Farmakokinetičke proračune je izvršio SGS-LSS koristeć i Phoenik VinNonlin 6.2 ili noviji (Pharsight Corporation, Palo Alto, CA, USA). Donja i gornja granica kvantifikacije (LLOK i ULOK) za test su bile 100, odnosno 2000 ng/ml. Ukupna preciznost i tačnost kontrola kvaliteta i standarda bila je ≤ 20%, odnosno unutar 620 %. Izrađena je standardna kriva koja omoguć ava procenu koncentracija uzoraka interpolacijom iz ugrađene krive.
PD analiza
[0124] Uzorci krvi su sakupljani u istim tačkama kao i za PK analize za zasićenost CD28 receptora (RO), primenom delimično potvrđene metode koja uključuje citofluorimetriju. Svaki uzorak krvi koji se testira podeljen je na pola i jedan uzorak je pomešan sa viškom FR104. Nakon lize crvenih krvnih zrnaca, ispitivanje vezivanja FR104 za CD28 izvršeno je protočnom citometrijom na limfocitima obojenim FITC konjugovanim anti-CD3 antitelom, koristeć i sukcesivno anti-PEG zečje monoklonsko antitelo i Alexa fluor konjugovano sekundarno antitelo zeca. Tako je RO izračunat izvođenjem odnosa između MFI otvora bez viška FR104 i otvora sa viškom FR104. Osetljivost metode bila je 0,25 mg/ml FR104. Preciznost intradonatorskih replika kretala se između 1 % i 9 % (CV), a preciznost među donorima bila je između 16 % i 22 % (CV). Nivo ekspresije CD28 meren je MFI od FR104 u suvišnim uslovima.
[0125] Podpopulacije perifernih T limfocita i status aktivacije procenjeni su proto čnom citometrijom na stabilizovanoj celokupnoj krvi primenom TransFix/EDTA epruveta za sakupljanje krvi (Citomark, Buckingham, UK). Izmereni su CD45, CD3, CD28, CD45RO, CD4, CD8, CD25, CD127, CD69 i CCR7 markeri kako bi se definisale sledeć e podpopulacije: nezrele T ć elije, aktivirane T ć elije, T memorijske ć elije , T ć elije centralne memorije, T ć elije efektorske memorije i TEMRA, u odeljcima CD4 i CD8 . nTreg su takođe zabeleženi.
[0126] Sva ostala laboratorijska ispitivanja, uključujuć i EBV PCR i EBV IgG i IgM antitela, izvršila je laboratorija za kliničku biologiju istraživačkog centra, koristeć i standardne postupke.
[0127] Imunološka reakcija krvnih zrnaca je ispitivana ex-vivo. Uzorci krvi prikupljeni su venepunkturom ili putem kanile koja se uvodi na podlaktici u TruCulture® epruvete za prikupljanje krvi (Miriad RBM, Austin, Tx) koje sadrže stimuluse SEB LPS i u kontrolne epruvete, za svako vađenje krvi. Cevi su bile glavni deo injektiran na 37 °C tokom 24 sata pre nego što je plazma mehanički ekstrahovana i zamrznuta do analize citokina IL-2, IFNg i IL-8. Citokini su analizirani istom ELISA metodom koja je kori šć ena za procenu citokina u serumu.
Procena imunogenosti
[0128] Uzorci krvi za detekciju antitela na FR104 sakupljani su prilikom skrininga i prvog dana (predoza), dana 15, 29, 57, 85 i / ili 113. Titriranje anti-FR104 antitela u serumu je izvršeno korišć enjem validiranog elektrokemila/minescencija, premošć uju ć i test imunogenosti. Metoda je koristila kiseli tretman uzoraka seruma kako bi se omoguć ila disocijacija FR104/FR104-ADA, kada je potrebno, pra ć ena jednostepenim formatom premošćavanja pri čemu se anti-FR104 antitela (ADA) hvataju u rastvoru kombinacijom biotinilovanog i sulfo-TAG označenih oblika FR104. ECL naknadno otkriva složeno formiranje na MSD platformi. Osetljivost testa bila je 3,46 ng/ml (sa CV od 31 %), a srednja tolerancija na lek je bila 179 mg/ml (sa CV od 26 %).
KLH imunizacija
[0129] Uzorci krvi za detekciju antitela na KLH prikupljeni su tokom skrininga i 15., 29., 57., 85. i/ili 113. dana. Antitela na KLH dozirana su kvalifikovanom ELISA u serumu pomoć u komercijalnog kompleta „Human Anti-KLH IgG "(# 700-140-KLG od Alpha Diagnostic International, San Antonio, Tx).
Statističke metode
[0130] Veličina uzorka je određena za ovu studiju na osnovu presedana koji su postavile druge studije Faze 1 slične u dizajnu i nakon konsultacija sa Regulatornom agencijom za medicinu i zdravstvenu za štitu (UK), Paul Ehrlich Institute (Nemačka), Savezna agencija za lekove i zdravstvene proizvode (Belgija) i Evropska agencija za lekove (EMA). Veličina uzorka od 64 zdrava dobrovoljca smatrana je dovoljnom za ispunjavanje ciljeva protokola. Svi statistički proračuni izvedeni su pomoć u softvera SAS (verzija 9.2) za statistička izračunavanja i SAS u grafičke svrhe.
REZULTATI
Tok učesnika
[0131] Studija je sprovedena u 1 kliničkom centru od 27. marta 2015. do 19. februara 2016. Ukupan broj od 65 ispitanika podeljen je u 2 dela studije. U prvom delu, 37 ispitanika je primilo jednu IV dozu FR104 (u rasponu od 0,005 do 1,5 mg/kg), a 14 ispitanika je primilo jednu IV dozu placeba. U drugom delu, 10 ispitanika su primile dve doze FR104 (u rasponu od 0.200 do 0.500 mg/kg), a 4 osobe su primile dve IV doze placeba, odvojene u intervalu od 28 dana. Svi subjekti osim jednog (u Delu 1, Par A, Grupa 2) dobili su ispitivani lek prema planu (videti gore). Svi ispitanici su randomizirani i le čeni. Svi ispitanici su završili studiju i bili su uključeni u analizu bezbednosti. Jedan subjekat (Deo 1, Par A, Grupa 2) je isključen iz PK i PD analize zbog odstupanja protokola povezanog sa disfunkcijom infuzione pumpe. Zbog ove neta čne primene doze, jedan dodatni subjekat je bio uključen u Grupu 2. Jedan subjekt u Delu 2 nije primio drugu dozu FR104 0,500 mg/kg zbog primanja kontraindikovanih istovremenih lekova nakon tretmana koji nije povezan sa AE. Ispitanik je obavio sve posete prema protokolu. Subjekt nije isklju čen iz populacije PK i PD, ali su podaci uzeti nakon 29. dana izuzeti iz analize. Nije bilo ispitanika kojima je pronalaza č ili prijavilac prekršio predviđene norme.
Osnovni podaci
[0132] Demografske kategorije ispitanika prikazane su u tabeli 11. Bela boja kože je činila već inu ispitanika u svim grupama lečenja.
Starost, težina i BMI svih ispitanika spadali su u kriterijume za uključivanje definisane u protokolu.
Farmakokinetika
[0133] Niže doze FR104 pri 0,005, 0,020 i 0,050 mg/kg rezultirale su nedovoljno merljivim koncentracijama za pouzdanu procenu PK parametara. Slika 5A ilustruje podatke o koncentraciji FR104-vreme za preostale dozne grupe. U paru A (grupe 1-4, bez KLH imunizacije, FR1040,005 do 0,500 mg/kg doze), farmakokinetika FR104 bila je približno linearna od doze od 0,200 mg/kg sa t1/2u rasponu od 146 (0,200 mg/kg ) do 182 sata (0.500 mg/kg). U paru B (grupe 7-9bis, KLH imunizacija), kao i u paru A, farmakokinetika FR104 bila je približno linearna od doze od 0.200 mg/kg sa t1/2u rasponu od 150 (0.200 mg/kg) do 210 sati (1.500 mg/kg). Srednja vrednost FR104 Cmaxkretala se od 117 do 37700 ng/ml nakon doza 0,004-1,5 mg/kg, a AUCinfod 0,705 do 7,010 mg/ml nakon doza 0,2-1,5 mg/kg.
[0134] PK FR104 su takođe procenjeni nakon dve infuzije FR104 na 0.200 i 0.500 mg/kg u razmaku od 28 dana (Deo 2). Farmakokinetika je bila približno linearna sa t1/2u rasponu od 169 do 203 sata. Parametri PK bili su slični nakon FR104 0.200 mg/kg infuzije 1. i 29. dana. Akumulacija serumskih koncentracija primeć ena je nakon infuzije FR104 0.500 mg/kg, sa porastom od oko 20 % u AUC0-28di AUCinfza normalizaciju doze.
Farmakodinamika
[0135] Posle infuzije FR104, primeć en je CD28 RO zavisan od doze na T ć elijama u perifernoj krvi (slika 5B). CD28 receptori su zasić eni u prvoj tački uzorkovanja (0,5 sata) nakon infuzije FR104 u dozama od 0,020 mg/kg i višim. Na dan 29, RO je i dalje bio iznad 50 % nakon infuzije FR104 u dozi od 0.500 mg/kg i 1.500 mg/kg. CD28 RO se vratio na 50 % na način koji zavisi od doze, do 15. dana (0.020 mg/kg) do 85. dana (1.500 mg/kg). CD28 RO ostao je iznad 50 % kada su koncentracije FR104 u serumu bile malo iznad donje granice kvantifikacije ( < 100 ng/ml), a iznad 80 % kada su koncentracije FR104 u serumu bile iznad 200 ng/ml. To sugeriše da FR104 ima visok afinitet za svoj receptor in vivo i da čak i niske koncentracije
2
FR104 mogu biti farmakološki aktivne. Nakon infuzije druge doze od 0.200 mg/kg, receptori su ponovo postali zasić eni, što je rezultiralo zasi ć enjem iznad 50 % koje je trajalo više od 60 dana. Dve doze od 0.500 mg/kg u razmaku od 28 dana rezultirale su 100 % zasić enjem receptora duže od 60 dana.
[0136] Nije bilo značajne promene u ukupnom broju limfocita i podskupinama limfocita, uklju čujuć i naivne T ć elije, memorijske T ć elije i treg ć elije, uzrokovane FR104 u bilo kojoj dozi i bilo kom re žimu doziranja, a nivoi ovih podskupova nisu se značajno promenili u bilo kojoj grupi tokom studija. Ni nivo ekspresije CD28 podgrupa limfocita procenjen merenjem MFI takođe nije promenjen (slika 6).
[0137] Zahvaljujuć i oslobađanju citokina koje se prethodno desilo nakon primene kod čoveka superagonista ili dvovalentnog antagonista anti-CD28 mAb, potencijalno oslobađanje citokina je pažljivo prać eno. Nije opaženo povišenje citokina u serumu bilo kog dobrovoljca. Zabeleženi su samo pozadinski nivoi koji su smatrani neklinički relevantnim (slika 7e, slika 8A). Zahvaljujuć i ovoj varijabilnosti, test je pokazao značajnu inhibiciju inducibilne sinteze IL-2 tek nakon primene FR104 u dozama iznad 0,100 mg/ kg u vremenskim tačkama od 2 i 96 sati, ali ne i u drugim vremenskim tačkama (slika 8B). SEB LPS-indukovana sinteza INFg i IL-8, citokina koje takođe luče anti-T ć elije, nije modulisana tretmanom sa FR104 ni u jednoj grupi.
Kontrola antitela na KLH
[0138] Efekat FR104 na odgovor na izazov KLH procenjen je merenjem anti-KLH antitela. Stvaranje antitela na KLH značajno je odloženo i u manjoj meri sa porastom doza FR104. Nakon pojedinačne doze od 0,020 mg/kg, smanjenje proizvodnje anti-KLH antitela već je bilo vidljivo na dan 15 posle imunizacije protiv KLH, koja je dostigla prosek od 50 % placebo grupe 29. dana. Odgovor se održavao na tom nivou u poređenju sa placebo grupom do poslednjeg dana posmatranja (dan 85). Posle pojedina čne doze od 0.200 mg/kg, prosečno smanjenje proizvodnje anti-KLH antitela bilo je pribli žno 85 % 15. i 29. dana, a 70 % i 60 % 57. i 85. dana, u poređenju sa odgovorom placebo grupe. Posle pojedinačne doze od 0.500 mg/kg, prosečno smanjenje proizvodnje anti-KLH antitela je bilo > 90 % 15. i 29. dana, i pribli žno od 80 % i 75 % na 57. i 85. dan. Na najvišem nivou doze (FR104 1.500 mg/kg), stvaranje anti-KLH antitela je suštinski suzbijeno do 57. dana. Međutim, 85. i 113. dana zabeležen je određeni odgovor (približno 75 % smanjenje) (slika 9) .
Imunogenost
[0139] U Delu 1 Para A (bez KLH imunizacije), 0 (0 %), 2 (50 %), 3 (60,0 %) i 1 (20,0 %) ispitanika su prijavljeni kao pozitivni sa antitelima na FR104 (ADA) u poslednji uzorak (dan 85) nakon infuzije FR104 u količini od 0,005 mg/kg, 0,050 mg/kg, 0,200 mg/kg, odnosno 0,500 mg/kg. U Delu I Para B (KLH imunizacija) 1 (20 %), 3 (60,0 %), 4 (80,0 %) i 2 (40,0 %) ispitanika su imala antitela protiv FR104 na poslednjem uzorku nakon FR1040,020 mg/kg, 0,200 infuzija mg/kg, 0.500 mg/kg (dan 85) i 1.500 mg/kg (dan 113). U drugom delu (ponovljene doze), 3 ispitanika (60,0 %) su imala antitela protiv FR104 i nakon FR104 0,200 mg/kg i 0,500 mg/kg infuzije na poslednjem uzorku (dan 113). Najranija antitela na FR104 otkrivena su od 29. dana u Delu 1 (para A i B) i od 57. dana u Delu 2. Približno polovina ispitanika sa ADA (10/22) imala je relativno niske titre ( < 30). Oni nisu indukovali AE niti modifikovali oslobađanje citokina. S obzirom na to da su se antitela na FR104, kada su se pojavila, pojavila tek nakon nestanka FR104 u krvi kod svih ispitanika, osim kod jednog, ne može se doneti zaključak o njihovom potencijalnom uticaju na PK.
Sigurnost
[0140] Tokom studije nije došlo do smrtnih slučajeva ili SAE, osim kod jednog subjekta koji je prijavljen sa SAE nefrolitijazom za koju je pronalazač smatrao da nije povezana sa ispitivanim lekom nakon infuzije FR104 od 0.500 mg/kg i izazivanja KLH. Nijedan od ispitanika nije prekinuo ispitivanje leka ili studije zbog neželjenih događaja nastalih tokom lečenja (TEAE). Jedan subjekt iz Dela 2 nije primio drugu dozu FR104 0,500 mg/kg 29. dana zbog primanja kontraindikovanih lekova (ibuprofen, paracetamol i tramadol) za AE mijalgiju. Subjekt nije povučen iz studije i završio je sve studijske posete prema protokolu. Svi prijavljeni TEAE bili su blage ili umerene težine (Tabela 12). TEAE za koje je pronalazač smatrao da su najmanje moguć i povezani sa ispitivanim lekom prijavljeni su kod 5 od 10 ispitanika koji su prijavili TEAE nakon infuzije FR104 i ni kod jednog od ispitanika nakon infuzije placeba. Preferiranim terminom, naj češć e prijavljeni TEAE nakon infuzije FR104 bili su bolovi u leđima, glavobolja i povrać anje. Moguca stanja povezana sa lečenjem nakon infuzije FR104 bili su glavobolja, povrać anje, aftozni stomatitis, oralni herpes, suva usta, mučnina, nazofaringitis, umor, gingivitis, disgeuzija, dijareja, zamagljen vid i bolest slična gripu.
[0141] Nakon primene ispitivanog leka ni kod jednog dobrovoljca nisu primeć ene klini čki relevantne ili dosledne promene u srednjim vrednostima za laboratoriju, virologiju, vitalne znakove, zasić enje kiseonikom i EKG parametre.
[0142] Rezultati viralnog optereć enja EBV nakon polaznog stanja bili su negativni ili slabo pozitivni (osim za 1 ispitanika), a post-osnovni rezultati EBV kapsidnih IgM antitela bili su negativni ili dvosmisleni za sve subjekte u studiji (slika 10). EBV kapsidna i nuklearna antigena IgG antitela bila su pozitivna kod svih ispitanika (jer je pripadalo kriterijumima za uključivanje) i održavana su na osnovnom nivou tokom studije (podaci nisu prikazani). Jedan ispitanik koji je primao 2 IV doze placeba imao je pozitivan rezultat EBV virusnog optereć enja 15. dana sa virusnim optere ć enjem log 3,83 IU/m, vrednost koja bi se smatrala dovoljno visokom da bi bila klinički zabrinjavajuća u uslovima transplantacije, na primer. Sledeć i put 29. dana, test je bio negativan. Kasnije procene bile su negativne 43. dana, pozitivne sa virusnim optereć enjem od 2,7 log IU/ml 57. dana, negativne 85. dana i pozitivne 113. dana sa virusnim optereć enjem < 2,5 log IU/ml.
[0143] Tokom studije, KTcF interval > 450 ms i KTcF promena u odnosu na početnu liniju > 30 ms prijavljeni su kod 1 subjekta u Paru B nakon placebo infuzije i KLH izazova. U drugom delu, KTcF interval > 450 ms prijavljen je kod 1 ispitanika nakon infuzije FR104 0,200 mg/kg, promena KTcF u odnosu na početnu vrednost > 60 ms kod 1 ispitanika nakon FR1040,200 mg/kg i promena KTcF od početne linije > 30 ms je zabeležen kod 1 i 3 ispitanika nakon FR104 0.200 mg/kg, odnosno FR104 0.500 mg/kg infuzije. U Delu 1 (Par A i B) i Delu 2 nisu primeć eni klinički zabrinjavajući vitalni znaci, pulsna oksimetrija ili EKG abnormalnosti.
[0144] Tokom studije nisu zabeležene nikakve abnormalnosti fizičkog pregleda, osim za 2 ispitanika iz Para A i 3 ispitanika iz dela 2. Za ove subjekte, abnormalnost se smatrala klinički značajnom i posmatranje je bilo prijavljeno kao TEAE: nazofaringitis i konjunktivitis za subjekta u paru A i infekcije gornjih disajnih puteva, mijalgiju i giht, za subjekte iz dela 2.
2
DISKUSIJA
[0145] Ovo ispitivanje predstavlja prvu primenu na ljudima FR104, humanizovanog antagonista fragmentiranog pegilovanog Fab’antitela CD28. FR104 se dobro podnosio u svim dozama, a najčešć e AE koje su se pojavile u lečenju bile su glavobolje. Primena FR104 nije bila povezana sa sindromom oslobađanja citokina ili aktivacijom T ć elija. U prethodnim poku šajima ciljanja na CD28 koriš ć enjem anti-CD28 monoklonskih antitela (TGN1412, (Suntharalingam et al), FK734 (Shiao et al)) klinički razvoj je bio komplikovan indukovanim oslobađanjem citokina. Kako FR104 nije povezan sa takvim komplikacijama, ciljanje CD28 sa monovalentnim antagonističkim antitelima ostaje privlačna terapijska strategija za blokadu stimulacije.
[0146] Provera citokina u serumu kod čoveka pokazala je potpuno odsustvo agonističke ili superagonističke aktivnosti FR104 u bilo kojoj dozi, čak i nakon ponovljene primene doze. Pozadina ili blizu nivoa pozadine IFNg, TNFa i IL-8 kod nekih ispitanika zabeleženih na početku ili nakon primene FR104
2
(slika 7) daleko su ispod nivoa izmerenih nakon primene TGN1412, koji je dostigao maksimum od 5000 pg / ml za ova dva citokina ( Suntharalingam i sar.). Antitela protiv lekova (ADA) postala su o čigledna kod već ine ispitanika tek nakon eliminacije FR104 iz plazme. Zbog toga je te ško proceniti efekat ADA na parametre PK i PD, a posebno na citokine. Međutim, kod jednog subjekta (Deo 2, doza 0,2 mg/kg MAD) ADA je postala očigledna dok je CD28 RO još uvek bio merljiv. U ovoj temi takođe nije bilo oslobađanja citokina, što potvrđuje pretkliničko zapažanje da FR104 u prisustvu ADA nije rekapitulirao agonistička svojstva anti-CD28 antitela u njihovom IgG formatu. Treba napomenuti da je relativno visoka u čestalost imunogenosti za FR104 u sličnom opsegu u odnosu na ono što je prijavljeno za odobrenu biološku Cimziju® (Certolizumab Pegol), fragment pegiliranog Fab’ antitela i neka druga biolo ška sredstva kao što su Remicade i Humira; CIMZIA klinička farmakologija BLA 125160/0). FR104 nije promenio ukupan broj limfocita ili podskupove limfocita. Fenotip T ć elija takođe nije izmenjen. S obzirom na to da CD28 takođe može regulisati migraciju prajmiranih T ć elija u ciljno tkivo, ovi podaci zajedno sa odsustvom osloba đanja citokina i odsustvom aktivacije ciljnih T ć elija pojačavaju čisto antagonističku aktivnost FR104.
[0147] PK FR104 može se smatrati približno linearnim pri dozama ≥ 0.200 mg/kg. Samo su male varijacije u t1/2i u AUCinfi srodnim parametrima primeć ene između grupa (SAD i MAD) za istu dozu.
2
�
�
�
�
�

Claims (10)

Patentni zahtevi
1. Fragment antitela anti-CD28 Fab’ sadržavajući heterodimer (i) prvog proteina SEK ID BR: 1, koji je pegiliran na svom C-terminusu, i (ii) drugog proteina SEK ID BR: 2, za upotrebu u le čenju stanja podložnog poboljšanju ili sprečavanju inhibiranjem imunološkog odgovora T ć elija, navedeno stanje je odbacivanje transplantiranog tkiva, hronični vaskularni alograft, bolest odbacivanja grafta, autoimuna bolest posredovana T-limfocitima, ateroskleroza, zapaljenska bolest ili hipersenzitivnost tipa IV, pri čemu se terapeutski efikasna količina navedenog fragmenta antitela anti-CD28 Fab’ daje intravenski čoveku kome je to potrebno i pri čemu terapeutski efikasna količina fragmenta antitela anti-CD28 Fab’ je između 0.05 i 1.5 mg/kg telesne težine pri režimu doziranja jednom nedeljno, jednom u svake dve nedelje, jednom u svake tri nedelje, jednom u svake četiri nedelje, jednom u svakih pet nedelja ili jednom u svakih šest nedelja, jednom u svakih sedam nedelja, jednom u svakih osam nedelja ili jednom u vi še od osam nedelja.
2. Fragment antitela anti-CD28 Fab' prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je terapeutski efikasna količina između 0.05 i manje od 0.5 mg/kg telesne težine, administrirana u režimu doziranja jednom nedeljno, jednom u svake dve nedelje, jednom u svake tri nedelje, jednom u svake četiri nedelje, jednom u svakih pet nedelja ili jednom u svakih šest nedelja.
3. Fragment antitela anti-CD28 Fab' prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, pri čemu je terapeutski efikasna količina između 0.05 i 0.2 mg/kg telesne težine, administrirana u režimu doziranja jednom nedeljno, jednom u svake dve nedelje, jednom u svake tri nedelje, jednom u svake četiri nedelje ili jednom u svakih pet nedelja.
4. Fragment antitela anti-CD28 Fab' prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je terapeutski efikasna količina između 0.5 i 1.5 mg/kg telesne težine, administrirana u režimu doziranja jednom u najmanje četiri nedelje za 0.5 mg/kg do jednom u najmanje 8 nedelja za 1 mg/kg i jednom u više od 8 nedelja za doze već e od 1 mg/kg.
5. Fragment antitela anti-CD28 Fab' prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 4, pri čemu terapeutski efikasna količina fragmenta antitela anti-CD28 Fab' indukuje najmanje 80 % zasićenosti CD28 receptora tokom perioda vremena između dve primene navedenog fragmenta antitela anti-CD28 Fab'.
6. Fragment antitela anti-CD28 Fab’ prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je terapeutski efikasna količina 0.5 ± 10 % mg/kg telesne težine, administrirana u režimu doziranja jednom u svake dve nedelje.
7. Fragment antitela anti-CD28 Fab’ prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je terapeutski efikasna količina 0.5 mg/kg telesne težine, administrirana u režimu doziranja jednom u svake dve nedelje.
8. Fragment antitela anti-CD28 Fab’ prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je terapeutski efikasna količina 1.5 ± 10 % mg/kg telesne težine, administrirana u režimu doziranja jednom u svake četiri nedelje.
9. Fragment antitela anti-CD28 Fab’ prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je terapeutski efikasna količina 1.5 mg/kg telesne težine, administrirana u režimu doziranja jednom u svake četiri nedelje.
10. Fragment antitela anti-CD28 Fab’ prema patentnom zahtevu 1 za upotrebu prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je stanje odabrano iz grupe autoimunog encefalomielitisa, psorijaze, reumatoidnog artritisa, multipla skleroze, Kronove bolesti, ulceroznog kolitisa ili dijabetesa tipa
RS20210451A 2015-12-15 2016-12-15 Anti-cd28 humanizovana antitela formulisana za primenu na ljudima RS61958B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15200281 2015-12-15
EP16306537 2016-11-22
PCT/EP2016/081286 WO2017103003A1 (en) 2015-12-15 2016-12-15 Anti-cd28 humanized antibodies formulated for administration to humans
EP16822423.6A EP3390450B1 (en) 2015-12-15 2016-12-15 Anti-cd28 humanized antibodies formulated for administration to humans

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61958B1 true RS61958B1 (sr) 2021-07-30

Family

ID=57737702

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210451A RS61958B1 (sr) 2015-12-15 2016-12-15 Anti-cd28 humanizovana antitela formulisana za primenu na ljudima

Country Status (16)

Country Link
US (4) US20180215824A1 (sr)
EP (2) EP3390450B1 (sr)
JP (1) JP6923528B2 (sr)
KR (2) KR20240144440A (sr)
CN (1) CN108699148A (sr)
CY (1) CY1124141T1 (sr)
DK (1) DK3390450T3 (sr)
ES (1) ES2862395T3 (sr)
HR (1) HRP20210445T1 (sr)
HU (1) HUE053736T2 (sr)
LT (1) LT3390450T (sr)
PL (1) PL3390450T3 (sr)
RS (1) RS61958B1 (sr)
SI (1) SI3390450T1 (sr)
SM (1) SMT202100185T1 (sr)
WO (1) WO2017103003A1 (sr)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2536764B1 (en) * 2010-02-18 2018-07-04 OSE Immunotherapeutics Anti-cd28 humanized antibodies
CA3192204A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 Xencor, Inc. Anti-cd28 and/or anti-b7h3 compositions
JP2024531915A (ja) 2021-08-05 2024-09-03 ジーオー セラピューティクス，インコーポレイテッド 抗グリコｍｕｃ抗体およびその使用
CA3230934A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cmet antibodies and their uses
AU2022339819A1 (en) 2021-09-03 2024-04-11 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-lamp1 antibodies and their uses
CN119110809A (zh) 2022-02-23 2024-12-10 Xencor股份有限公司 抗CD28 x抗PSMA抗体
US20240059786A1 (en) * 2022-02-24 2024-02-22 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-trop2 antibodies
CA3267921A1 (en) 2022-10-06 2024-04-11 Bicara Therapeutics Inc. MULTISPECIFIC PROTEINS AND ASSOCIATED PROCESSES

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004032969A1 (en) * 2002-10-09 2004-04-22 Lorantis Limited Modulation of immune function
US7651855B2 (en) * 2003-04-17 2010-01-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regulatory T cells and their use in immunotherapy and suppression of autoimmune responses
CN100376599C (zh) * 2004-04-01 2008-03-26 北京安波特基因工程技术有限公司 基因工程重组抗cea抗cd3抗cd28线性单链三特异抗体
US20110097339A1 (en) * 2008-07-18 2011-04-28 Domantis Limited Compositions monovalent for CD28 binding and methods of use
EP2536764B1 (en) * 2010-02-18 2018-07-04 OSE Immunotherapeutics Anti-cd28 humanized antibodies
HUE065915T2 (hu) * 2011-03-11 2024-06-28 Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc Anti-CD40 antitestek és alkalmazásaik
KR101941004B1 (ko) * 2013-03-25 2019-01-23 주식회사 엘지화학 조절 t 세포로의 분화 유도 및 증식 촉진을 통한 면역 반응 억제용 약학 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
PL3390450T3 (pl) 2021-09-13
KR20240144440A (ko) 2024-10-02
SMT202100185T1 (it) 2021-05-07
US20250051446A1 (en) 2025-02-13
WO2017103003A1 (en) 2017-06-22
SI3390450T1 (sl) 2021-08-31
US20200115453A1 (en) 2020-04-16
CN108699148A (zh) 2018-10-23
DK3390450T3 (da) 2021-03-01
US20220411510A1 (en) 2022-12-29
EP3390450A1 (en) 2018-10-24
LT3390450T (lt) 2021-06-25
JP6923528B2 (ja) 2021-08-18
ES2862395T3 (es) 2021-10-07
KR20180087428A (ko) 2018-08-01
US20180215824A1 (en) 2018-08-02
CY1124141T1 (el) 2022-05-27
JP2018538309A (ja) 2018-12-27
HRP20210445T1 (hr) 2021-06-25
EP3390450B1 (en) 2021-01-20
EP3868785A1 (en) 2021-08-25
HUE053736T2 (hu) 2021-07-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250051446A1 (en) Anti-CD28 Humanized Antibodies Formulated for Administration to Humans
Kuhn et al. Therapeutic anti-CD3 monoclonal antibodies: from bench to bedside
ES2610327T3 (es) Régimen de dosificación de anticuerpos anti-CD4 para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias
JP6861301B2 (ja) 移植片拒絶の予防に使用するための抗ｃｄ４０抗体
Poirier et al. Antibody-mediated depletion of lymphocyte-activation gene-3 (LAG-3+)-activated T lymphocytes prevents delayed-type hypersensitivity in non-human primates
Li et al. Construction and characterization of a humanized anti‐human CD3 monoclonal antibody 12F6 with effective immunoregulation functions
KR20220035452A (ko) 면역조절 항체 및 이의 사용 방법
Murphy et al. Anaphylaxis caused by repetitive doses of a GITR agonist monoclonal antibody in mice
US20170002077A1 (en) Combination treatment for multiple sclerosis
CA3136888A1 (en) Methods of treating prostate cancer with an anti- psma/cd3 antibody
US20230181732A1 (en) Combinations of immunotherapies and uses thereof
US20250313631A1 (en) Treatment and prevention of cancer using vista antigen-binding molecules
CN113747945A (zh) 用抗psma/cd3抗体治疗肾癌的方法
CN112512578A (zh) 结合cd123和cd3的双特异性抗体的给药
US20240409653A1 (en) Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 in combination with anti pd-1 antibodies for treating cancers
HK40058111A (en) Anti-cd28 humanized antibodies formulated for administration to humans
HK1260979B (en) Anti-cd28 humanized antibodies formulated for administration to humans
HK1260979A1 (en) Anti-cd28 humanized antibodies formulated for administration to humans
Wouters et al. Redosing of anti-CD3 antibodies in NOD mice with new-onset diabetes does not alter the effect of a single treatment course
AU2024318231A1 (en) Treatment of atopic dermatitis