RS62030B1 - Kompozicije oligonukleotidni helatni kompleks-polipeptid i postupci - Google Patents

Kompozicije oligonukleotidni helatni kompleks-polipeptid i postupci

Info

Publication number
RS62030B1
RS62030B1 RS20210674A RSP20210674A RS62030B1 RS 62030 B1 RS62030 B1 RS 62030B1 RS 20210674 A RS20210674 A RS 20210674A RS P20210674 A RSP20210674 A RS P20210674A RS 62030 B1 RS62030 B1 RS 62030B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
rep
chelate
antiviral
interferon
pegylated
Prior art date
Application number
RS20210674A
Other languages
English (en)
Inventor
Michel Bazinet
Andrew Vaillant
Original Assignee
Replicor Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=49581470&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS62030(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Replicor Inc filed Critical Replicor Inc
Publication of RS62030B1 publication Critical patent/RS62030B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/2292—Thymosin; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/215—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/217—IFN-gamma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

Opis
UPUĆIVANJE NA SRODNU PRIJAVU
[0001] Ova prijava zahteva prioriteta od američke privremene prijave sa serijskim brojem 61/695,035, podnete 30. avgusta 2012, i od američke privremene prijave sa serijskim brojem 61/648,711 podnete 18. maja 2012.
OBLAST TEHNIKE
[0002] Predmetni opis odnosi se na kompozicije koje sadrže oligonukleotidni (ON) helatni kompleks i jedan ili više različitih polipeptida ili pegilovanih polipeptida, postupke za pripremu kompozicije koja sadrži an ON helatni kompleks i jedan ili više različitih polipeptida ili pegilovanih polipeptida i postupke lečenja različitih bolesti sa navedenim kompozicijama.
STANJE TEHNIKE
[0003] Oligonukleotidni (ON) helatni kompleksi su dva ili više ON-a vezanih intermolekularno pomoću dvovalentnog ili viševalentnog metalnog katjona. ON helatni kompleksi neutrališu inherentna helaciona svojstva od ON-a, koja mogu doprineti sporednim efektima povezanim sa administracijom sa ovim jedinjenjima. Administracija ON helatnih kompleksa je nov postupak administracije ON subjektu gde su sporedni efekti povezani sa administracijom povezani sa neheliranim ON-a ublaženi. Ovi sporedni efekti mogu da uključe drhtavicu, groznicu i hladnoću sa intravenskom infuzijom ili induracijom, inflamaciju i bol na mestu ubrizgavanja sa subkutanom administracijom. Štaviše, pripremom ON-a kao heliranih kompleksa, njihovo farmakokinetičko ponašanje se može poboljšati, obezbeđujući povećanu terapijsku performansu sa sličnim doziranjem u poređenju sa neheliranim ON. Karakteristike i svojstva ON helatnih kompleksa su prethodno opisani u objavi međunarodne prijave br. WO 2012/021985 i objavi američke prijave br. 2012/0046348. ON-i kao soli su opisani u WO 2007/022642 za lečenje inflamatornih bolesti, u WO 2007/036016 za prevenciju i lečenje trombotičkih poremećaja, poremećaja povezanih sa holesterolom, dislipidemije, osteoporoze i efekata zmijskog otrova, i u WO 2006/042418 za njihovu primenu kao antivirusnih agenasa. PEG-modifikovani interferon alfa se razmatra za lečenje virusne infekcije u WO 2004/076474. WO03/037272 opisuje fiziološki aktivan konjugat koji uključuje timozin alfa 1 (TA1) peptid konjugovan sa materijalom koji povećava poluživot TA1 peptida u serumu pacijenta kada se konjugat administrira pacijentu. Muir i sar. (2010) Hepatology, tom. 52, br.3, str.0822-832 opisuje fazu 1b studije pegilovanog interferona lambda 1 sa ili bez ribavirina kod pacijenata sa hroničnom infekcijom virusom hepatitisa C genotipa 1.
[0004] ON helatni kompleksi pružaju poboljšani postupak administriranja ON-a sa smanjenim sporednim efektima bez uticaja na biohemijsku aktivnost ON kada se administrira u obliku jednostavne natrijumove soli.
[0005] ON helatni kompleksi koji sadrže ON koji deluje mehanizmom zavisnim od sekvence ili nezavisnim od sekvence mogu imati terapijski efekat u stanju bolesti koje možda ne pruža optimalni terapijski rezultat kod obolelog subjekta koji se leči ON helatnim kompleksom.
[0006] Shodno tome, postoji potreba u oblasti tehnike za obezbeđivanjem poboljšane nove kompozicije koja sadrži ON helatni kompleks kao u kombinaciji formulacije.
[0007] Antivirusni ON helatni kompleksi koji sadrže antivirusni ON koji deluje mehanizmima zavisnim od sekvence ili nezavisnim od sekvence mogu imati antivirusni efekat protiv različitih virusnih infekcija. Ovi antivirusni efekti možda neće pružiti optimalan terapijski rezultat kod subjekta sa postojećom virusnom infekcijom koji se podvrgava lečenju sa ON helatom. Dalji poboljšani terapijski rezultat može se postići istovremenom primenom antivirusnog ON helatnog kompleksa i imunoterapije zasnovane na polipeptidu sa poznatom antivirusnom aktivnošću.
[0008] Shodno tome, u oblasti tehnike postoji potreba da se obezbedi nova kompozicija koja sadrži antivirusni ON helatni kompleks i antivirusni polipeptid ili pegilovani polipeptid u kombinaciji. U idealnom slučaju antivirusni polipeptid bi takođe imao aktivnost protiv dotične virusne infekcije, bilo uticajem na isti ciljni/biohemijski put kao i dotični antivirusni ON helat bilo uticajem na ciljni/biohemijski put različit od onog na koji utiče antivirusni ON helatni kompleks.
REZIME
[0009] U skladu sa predmetnim opisom sada je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks i jedan ili više različitih polipeptida.
[0010] U skladu sa predmetnim opisom sada je obezbeđena antivirusna farmaceutska kompozicija koja sadrži antivirusni ON helatni kompleks i jedan ili više antivirusnih polipeptida ili pegilovanih polipeptida. Predmetni pronalazak je kako je definisano u patentnim zahtevima. Predmetni pronalazak posebno obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži antivirusni oligonukleotidni (ON) helatni kompleks, koji se sastoji od dva ili više antivirusnih ON-a povezanih intramolekularno dvovalentnim katjonom, pri čemu su dva ili više antivirusnih ON-a fosforotioirani, jednolančani polimeri nukleinske kiseline (NAPs) izabrani između SEQ ID NO (SEK ID BR): 18 ili SEQ ID NO: 11 i najmanje jednog antivirusnog polipeptida odabranog iz grupe koja se sastoji od pegilovanog interferona α-2a i sintetičkog timozina α1, i pri čemu je farmaceutska kompozicija formulisana za subkutanu administraciju ili za intravensku infuziju.
[0011] Na uvid javnosti je stavljen postupak lečenja bolesnog stanja koji uključuju korak administriranja farmaceutske kompozicije koja sadrži ON helatni kompleks i polipeptid subjektu kome je potrebno lečenje.
[0012] Na uvid javnosti je stavljen postupak lečenja bolesnog stanja koji uključuje korak administriranja istim ili različitim načinima administriranja odvojenih farmaceutskih kompozicija, prve kompozicije koja sadrži ON helatni kompleks i druge polipeptid subjektu kome je potrebno lečenje.
[0013] Na uvid javnosti je stavljen postupak lečenja virusne infekcije koji uključuje korak administriranja farmaceutske kompozicije koja sadrže antivirusni ON helat i antivusni polipeptid subjektu kome je potrebno lečenje.
[0014] Na uvid javnosti je stavljen postupak lečenja virusne infekcije koji uključuje korak administriranja istim ili različitim načinima administriranja odvojenih farmaceutskih kompozicija, jedne koja sadrže antivirusni ON helatni kompleks i druge antivirusni polipeptid subjektu kome je potrebno lečenje.
[0015] Na uvid javnosti je stavljen postupak lečenja virusne infekcije koji uključuje korak administriranja antivirusnog ON helatnog kompleksa i antivirusnog polipeptida bilo u istoj farmaceutskoj kompoziciji ili u različitoj farmaceutskoj kompoziciji koristeći isti ili različiti način administriranja.
[0016] Na uvid javnosti je stavljena primena farmaceutske kompozicije koja sadrži ON helatni kompleks i polipeptid za lečenje bolesti. Predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju u skladu sa predmetnim pronalaskom za primenu u terapiji.
[0017] Na uvid javnosti je stavljena primena farmaceutske kompozicije koja sadrži ON helatni kompleks i polipeptid u proizvodnji leka za lečenje bolesti.
[0018] Na uvid javnosti je stavljena primena prve farmaceutske kompozicije koje sadrži ON helatni kompleks i druge farmaceutske kompozicije koje sadrži polipeptid za lečenje bolesnog stanja, pri čemu je kompozicija formulisana za iste ili različite načine administriranja.
[0019] Na uvid javnosti je stavljena primena farmaceutske kompozicije koja sadrži antivirusni ON helat i antivirusni polipeptid za lečenje virusne infekcije. Predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži antivirusni oligonukleotidni (ON) helatni kompleks, koji se sastoji od dva ili više antivirusnih ON-a povezanih intermolekularno dvovalentnim katjonom, pri čemu su dva ili više antivirusnih ON-a fosforotioirani, jednolančani polimeri nukleinske kiseline (NAP) sa SEQ ID NO: 18, i najmanje jednog antivirusnog polipeptida odabranog iz grupe koja se sastoji od pegilovanog interferona α-2a i timozina α1, za primenu u postupku lečenja hepatitisa B.
[0020] Na uvid javnosti je stavljena primena farmaceutske kompozicije koja sadrži antivirusni ON helat i antivirusni polipeptid u proizvodnji leka za lečenje virusne infekcije.
[0021] Na uvid javnosti je stavljen primena farmaceutske kompozicije, jedne koja sadrži antivirusni ON helatni kompleks i druge antivirusni polipeptid, formulisane za administracija istim ili različitim načinima odvojeno, za lečenje virusne infekcije.
[0022] Na uvid javnosti je stavljena primena antivirusnog ON helatnog kompleksa i i antivirusnog polipeptida, formulisanih bilo u istoj farmaceutskoj kompoziciji ili u različitoj farmaceutskoj kompoziciji za iste ili različite načine administracije, za lečenje virusne infekcije.
[0023] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži oligonukleotidni (ON) helatni kompleks, koji se sastoji od dva ili više ON-a povezana intermolekularno dvovalentnim katjonom, i najmanje jednog polipeptida.
[0024] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži antivirusni ON helatni kompleks, koji se sastoji od dva ili više ON-a povezana intermolekularno dvovalentnim katjonom, i najmanje jednog polipeptida.
[0025] Antivirusni polipeptid može dalje biti pegilovan.
[0026] Dvovalentni katjon može biti zemnoalkalni metal sa 2+ naelektrisanjem.
[0027] Dvovalentni metalni katjon može biti prelazni metal sa 2+ naelektrisanjem.
[0028] Dvovalentni metalni katjon može biti metal lantanida sa 2+ naelektrisanjem.
[0029] Dvovalentni metalni katjon može biti postprelazni metal sa 2+ naelektrisanjem.
[0030] Dvovalentni metalni katjon može biti kalcijum.
[0031] Dvovalentni metalni katjon može biti magnezijum.
[0032] Dvovalentni metalni katjon može biti gvožđe (2+), mangan, bakar or cink.
[0033] Dvovalentni katjon se može sastojati od dva ili više različitih dvovalentnih metalnih katjona.
[0034] Dvovalentni katjon se može sastojati od kalcijuma i magnezijuma.
[0035] ON helatni kompleks može sadržati najmanje jedan dvolančani ON.
[0036] ON helatni kompleks može sadržati najmanje jedan ON sa najmanje jednom fosforotioat vezom.
[0037] ON helatni kompleks može sadržati najmanje jedan potpuno fosforotioirani ON.
[0038] ON helatni kompleks može sadržati najmanje jedan ON sa jednom 2' modifikovanom ribozom.
[0039] ON helatni kompleks može sadržati najmanje jedan ON koji je svaki riboza 2' O-metilovan.
[0040] ON helatni kompleks može sadržati najmanje jedan ON koji sadrži najmanje jedan 5'metilcitozin.
[0041] ON helatni kompleks može sadržati najmanje jedan ON u kojem svaki citozin je dalje 5'metilcitozin.
[0042] ON helatni kompleks može sadržati oligonukleotid odabran od SEQ ID Nos (SEK ID Brojevima): 1-6 i 10-18.
[0043] ON helatni kompleks može sadržati oligonukleotid odabran od SEQ ID NOs: 7-9.
[0044] Polipeptid može biti najmanje jedan od:
Timozin α1;
Bilo koji α-interferon ili njegov pegilovani derivat;
Bilo koji β-interferon ili njegov pegilovani derivat;
Bilo koji γ-interferon ili njegov pegilovani derivat;
Bilo koji λ-interferon ili njegov pegilovani derivat;
Interferon α-2a ili α-2b ili α-N3;
Interferon β-1a ili β-1b;
Interferon γ-1b;
Interferon λ1 ili λ2 ili λ3;
Pegilovani interferon α-2a ili α-2b ili λ1 ili λ2 ili λ3;
Myrcludex B;
Bilo koji antivirusni citokin ili njegov pegilovani derivat;
Timični protein A; i
Bilo koji polipeptid za koji se pokaže da ima antivirusnu aktivnost ili imunostimulatornu aktivnost. U tehničkim rešenjima polipeptid je pegilovani interferon alfa-2a ili sintetički timozin alfa 1.
[0045] U sledećem tehničkom rešenju, farmaceutska kompozicija je formulisana subkutanu administraciju.
[0046] Farmaceutska kompozicija može biti formulisana za intravensku infuziju.
[0047] Farmaceutska kompozicija može biti formulisana za najmanje jedan od sledećih načina administracije: intraokularno, oralna ingestija, enterično, intramuskularna injekcija, intraperitonealna injekcija, intratekalna injekcija, intratekalne infuzija, intratrahealna, intravenska injekcije i topikalno.
[0048] ON helatni kompleks može sadržati najmanje jedan ON koji sadrži SEQ ID NO: 2.
[0049] U sledećem tehničkom rešenju, ON helatni kompleks sadrži najmanje jedan ON koji sadrži SEQ ID NO: 11.
[0050] U sledećem tehničkom rešenju, ON helatni kompleks sadrži najmanje jedan ON koji sadrži SEQ ID NO: 18.
[0051] U sledećem tehničkom rešenju, farmaceutska kompozicija dalje sadrži jedan ili više od sledećih: entekavir, tenofovir dizoproksil fumarat, telbuvidin, adefovir dipivoksil, lamivudin, ribavirin, telaprevir, boceprevir, GS-7977, tegobuvir, zanamivir, oseltamivir, ganciklovikar, ganciklovikar, zidovudin, abakavir, lopinavir, ritonavir ili efavirenz.
[0052] U sledećem tehničkom rešenju, farmaceutska kompozicija dalje sadrži nosač.
[0053] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 3, i pegilovani interferon α-2a.
[0054] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 18, i pegilovani interferon α-2a.
[0055] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 11, i pegilovani interferon α-2a.
[0056] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 3, i timozin α1.
[0057] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 18, i timozin α1.
[0058] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 11, i timozin α1.
[0059] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 3, i interferon α-2b.
[0060] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 18, i interferon α-2b.
[0061] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 11, i interferon α-2b.
[0062] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 3, i pegilovani timozin α1.
[0063] Postoji farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 18, i pegilovani timozin α1.
[0064] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 11, i pegilovani timozin α1.
[0065] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 3, i pegilovani interferon α-2b.
[0066] Postoji farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 18, i pegilovani interferon α-2b.
[0067] Postoji farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 11, i pegilovani interferon α-2b.
[0068] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 3, i interferon λ1.
[0069] Postoji farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 18, i interferon λ1.
[0070] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 11, i interferon λ1.
[0071] Postoji farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 3, i pegilovani interferon λ1.
[0072] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 18, i pegilovani interferon λ1.
[0073] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 11, i pegilovani interferon λ1.
[0074] Obezbeđen je postupak za pripremu farmaceutske kompozicije kako je opisano ovde, postupak koji obuhvata:
a. rastvaranje najmanje jedne natrijumove soli oligonukleotida (ON) u farmaceutski prihvatljivom vodenom ekscipijensu;
b. postepeno dodavanje rastvora farmaceutski prihvatljive dvovalentne soli metala u rastvoreni ON tako da ON helatni kompleks ostane rastvorljiv;
c, rastvaranje jednog ili više antivirusnih polipetida u kompatibilnom, farmaceutski prihvatljivom vodenom ekscipijentu; i
d. postepeno mešanje rastvora antivirusnog polipeptida sa rastvorom ON helatnog kompleksa tako da je rastvorljivost navedenog ON helatnog kompleksa i antivirusnog polipeptida očuvana.
[0075] takođe je obezbeđen postupak za pripremu farmaceutske kompozicije kako je opisano ovde, pri čemu postupak obuhvata:
a. rastvaranje najmanje jedne natrijumove soli oligonukleotida (ON) u farmaceutski prihvatljivom vodenom ekscipijensu;
b. postepeno dodavanje najmanje jednog rastvora farmaceutski prihvatljive kalcijumove i / ili magnezijum soli u rastvoreni ON tako da ON helatni kompleks ostane rastvorljiv; c. rastvaranje jednog ili više antivirusnih polipeptida u kompatibilnom, farmaceutski prihvatljivom vodenom ekscipijentu; i
d. postepeno mešanje rastvora antivirusnog polipeptida sa rastvorom ON helatnog kompleksa tako da je rastvorljivost navedenog ON helatnog kompleksa i antivirusnog polipeptida očuvana.
[0076] U tehničkom rešenju, rastvor ON helatnog kompleksa i rastvor polipeptida se kombinuju neposredno pre administracije farmaceutske kompozicije.
[0077] U sledećem tehničkom rešenju, odnos dvovalentne soli metala dodate u ON je 0.1-50 mg po 100mg oligonukleotida.
[0078] U sledećem tehničkom rešenju, finalna ON koncentracija je 0.1-200mg/ml.
[0079] U sledećem tehničkom rešenju, dvovalentna so metala je najmanje jeDNK od hloridne soli, glukonatne soli, citratne soli, laktatne soli, soli malata, soli aspartata, soli fumarata, soli askorbata, soli benzoata, soli eritorbata, propionatne soli, sulfatne soli ili bikarbonatne soli.
[0080] U sledećem tehničkom rešenju, rastvor dvovalentne soli metala sadrži najmanje jedan kalcijum, magnezijum, gvožđe (2+), mangan, bakar ili cink.
[0081] Obezbeđen je komplet koji sadrži farmaceutsku kompoziciju kako je opisano ovde.
[0082] U tehničkom rešenju, ON helatni kompleks i najmanje jedan polipeptid su formulisani odvojeno.
[0083] U sledećem tehničkom rešenju, ON helatni kompleks i najmanje jedan polipeptid su formulisani za zajedničku administracija istim ili različitim načinima administracije.
KRATAK OPIS SLIKA NACRTA
[0084] Sada će biti načinjeno upućivanje na prateće slike nacrta:
Sl. 1 ilustruje uobičajena fizičkohemijska svojstva ON-a. A) Zajedničko razdvajanje REP 2006 i 21 mernog fosforotioatn ON sa definisanom sekvencom tečnom hromatografijom visokih performansi. B) Identifikacija vrsta u 21 mernom ON masnom spektroskopijom. C) Identifikacija vrsta u REP 2006 ON masnom spektroskopijom.
Sl. 2A ilustruje generalna hemijska svojstva ON-a koja nisu zavisna od ON sekvence. Bez obzira na sekvencu, bilo koji ON postoji kao polimer koji ima i hidrofobne i hidrofilne aktivnosti. Fosforotioacija (prikazana u hemijskoj strukturi na ovoj slici) služi da poveća hidrofobnost ON polimera ali ne utiče na hidrofilnost. Sl. 2B konceptualizuje prirodu ON helacije dvovalentnih i trovalentnih metalnih katjona. Metalni katjoni (predstavljeni sivim punim krugovima) povezuju intermolekularno hidrofilne površine ON polimera preko metalnih jonskih mostova (predstavljenih elipsama) između dva ili tri ne-premošćavajućih atoma kiseonika ili sumpora u fosfodiestarskim vezama.
Sl. 3 ilustruje model za ponašanje rastvora ON-a u prisustvu dvovalentnih ili viševalentnih metalnih katjona pri varirajućim koncentracijama ON i dvovalentnih metalnih katjona. A) Niske koncentracije dvovalentnog/trovalentnog metalnog katjona, niske ON koncentracije dale su dimere ili ON helatne komplekse niskog reda. B) Povećavajuće koncentracije dvovalentnog/trovalentnog metalnog katjona dale su kompletniju formaciju ON helatnog kompleksa u rastvoru. C) Dalje povećavajuće ON koncentracije u prisustvu dvovalentnih ili trovalentnih metala su sposobne da daju ON helatne komplekse višeg reda sa povećavajućim koncetracijama metala. Svi helatni kompleksi u (A) preko (C) su rastvorljivi u vodenom rastvoru zahvaljujući hidrofilnim površinama još uvek izloženim vodenoj sredini na taj način održavajući rastvorljivost. D) Pri dovoljnim koncentracijama ON i metala, sve hidrofilne površine su sada ograničene unutar ON helatnih kompleksa i, ostavljajući samo hidrofobne površine izložene vodenoj sredini. Ovo rezultuje taloženjem ON helatnog kompleksa.
Sl. 4 ilustruje efekat ponašanja rastvora fluorescentnog-ON helatnog kompleksa na fluorescentnu polarizaciju. Sa povećavajućom koncentracijom metala, veličina (i masa) formacije ON helatnog kompleksa se takođe povećava (videti sl. 3) i tako se sporije „pada“ u rastvoru. Ovo sporije „padanje“ kompleksa u rastvoru vodi povećanoj fluorescentnoj polarizaciji i povećanoj mP vrednosti.
Sl. 5 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 kalcijum helat/interferon α-2b primenom oligo metode kako je prikazano u primeru IV. Vrhu ON pune dužine (velika strelica) u hromatogramu prethode neznatni proizvodi nepotpune sinteze (male strelice) i tipično su ON-a sa sekvencama kojima nedostaje jedan ili više nukleotida u poređenju sa ON sekvencom pune dužine. Ovaj HPLC profil je tipičan za sve korišćene neprečišćene ON-e (REP 2055, REP 2057 i REP 2148).
Sl. 6 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2055 kalcijum helat/interferon α-2b iz HPLC vrha pri 16.70 min na sl. 5. Uočena masa primarnih vrsta je 12612.2 Da, identifikujući ga kao REP 2055 (očekivana m. masa = 12612.5).
Sl. 7 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 kalcijum helat/interferon α-2b primenom proteinske metode 1 (videti primer IV).
Sl. 8 ilustruje ESI-MS analiza sadržaja peptida u kompoziciji REP 2055 kalcijum helat/interferon α-2b iz HPLC vrha pri 11.03 min na sl. 7. Uočena masa vrha pri 19263 Da odgovara interferonu α-2b (očekivana m. masa = 19271 Da) a vrh pri 66560 Da odgovara humanom albuminu.
Sl. 9 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2057 kalcijum helat/interferon α-2b primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Kao na sl.5, neznatni proizvodi nepotpune sinteze prethode glavnom vrhu sekvence REP 2057 pune dužine.
Sl. 10 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2057 kalcijum helat/interferon α-2b iz HPLC vrha pri 15.46 min na sl. 9. Uočena masa primarnih vrsta je 13413.5 Da, identifikujući ga kao REP 2057 (očekivana m.masa = 13413.3).
Sl. 11 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2057 kalcijum helat/interferon α-2b primenom proteinske metode 1 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 12 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2057 kalcijum helat/interferon α-2b iz HPLC vrha pri 11.43 min na sl.11. Uočena masa vrha pri 19264 Da odgovara interferonu α-2b (očekivana m. masa = 19271 Da) a vrh pri 66618 Da odgovara humanom albuminu.
Sl. 13 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 kalcijum helat/interferon α-2b primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Ne vide se nepotpuni proizvodi sinteze.
Sl. 14 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2139 kalcijum helat/interferon α-2b iz HPLC vrha pri 19.11 na sl. 13. Uočena masa primarnih vrsta je 14095.3 Da, identifikujući ga kao REP 2139 (očekivana m. masa = 14094.6). Sl. 15 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 kalcijum helat/interferon α-2b primenom proteinske metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 16 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2139 kalcijum helat/interferon α-2b iz HPLC vrha pri 11.12min na sl. 15. Uočena masa vrha pri 19264 Da odgovara interferonu α-2b (očekivana m. masa. = 19271 Da) a vrha pri 66674 Da odgovara humanom albuminu.
Sl. 17 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2148 kalcijum helat/interferon α-2b primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Neznatni proizvodi nepotpune sinteze prethode glavnom vrhu sekvence REP 2148 pune dužine.
Sl. 18 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2148 kalcijum helat/interferon α-2b iz HPLC vrha pri 15.34 min na sl. 17. Uočena masa primarnih vrsta je 12891.6 Da, identifikujući ga kao REP 2148 (očekivana m. masa = 12893.6).
Sl. 19 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2148 kalcijum helat/interferon α-2b primenom proteinske metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 20 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2148 kalcijum helat/interferon α-2b iz HPLC vrha pri 8.44 min na sl. 19. Uočena masa vrha pri 19265 Da odgovara interferonu α-2b.
Sl. 21 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2006 kalcijum helat/timozin α1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Vrh eluiranja pri 6.31 min odgovara timozinu α1 (bela strelica) a vrh eluiranja pri 15.15 min odgovara REP 2006 pune dužine (crna strelica).
Sl. 22 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2006 kalcijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 15.15 min na sl.21. Uočena masa je ∼12650 - 13150 Da, identifikujući ga kao REP 2006 (očekivana m. masa. = 12612 - 13092Da). Sl. 23 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2006 kalcijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 6.31 min na sl. 21. Uočena masa primarnih vrsta je 3108 Da, identifikujući ga kao timozin α1 (očekivana m. masa = 3108 Da).
Sl. 24 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 kalcijum helat/timozin α1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Vrh eluiranja pri 6.12 min odgovara timozinu α1 (bela strelica) a vrh eluiranja pri 16.70 min odgovara REP 2055 pune dužine (crna strelica).
Sl. 25 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2055 kalcijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 16.70 min na sl. 24. Uočena masa primarnih vrsta je 12612.1 Da, identifikujući ga kao REP 2055 (očekivana m. masa. = 12612.5). Sl. 26 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2055 kalcijum helat/timozin α1 kompozicija iz HPLC vrha pri 6.12 min in Sl. 24. Uočena masa primarnih vrsta je 3107.6 Da, identifikujući ga kao timozin α1 (očekivana m. masa = 3108 Da).
Sl. 27 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2057 kalcijum helat/timozin α1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Vrh eluiranja pri 6.18 min odgovara timozinu α1 (bela strelica) a vrh eluiranja pri 15.47 min odgovara REP 2057 pune dužine (crna strelica).
Sl. 28 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2057 kalcijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 15.47 min na sl. 27. Uočena masa primarnih vrsta je 13413.5 Da, identifikujući ga kao REP 2057 (očekivana m. masa = 13413.3 Da). Sl. 29 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2057 kalcijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 6.18 min na sl. 27. Uočena masa primarnih vrsta je 3107.6 Da, identifikujući ga kao timozin α1 (očekivana m. masa = 3108 Da).
Sl. 30 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 kalcijum helat/timozin α1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Vrh eluiranja pri 6.13 min odgovara timozinu α1 (bela strelica) a vrh eluiranja pri 19.01 min odgovara REP 2139 pune dužine (crna strelica).
Sl. 31 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2139 kalcijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 19.01 min na sl. 30. Uočena masa primarnih vrsta je 14094.5 Da, identifikujući ga kao REP 2139 (očekivana m. masa = 14094.6). Sl. 32 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2139 kalcijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 6.13 min na sl. 30. Uočena masa primarnih vrsta je 3107.6 Da, identifikujući ga kao timozin α1 (očekivana m. masa = 3108 Da).
Sl. 33 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2148 kalcijum helat/timozin α1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Vrh eluiranja pri 6.28 min odgovara timozinu α1 (bela strelica) a vrh eluiranja pri 15.19 min odgovara REP 2148 pune dužine (crna strelica).
Sl. 34 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2148 kalcijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 15.19 min na sl. 33. Uočena masa primarnih vrsta je 12892 Da, identifikujući ga kao REP 2148 (očekivana m. masa = 12893 Da). Sl. 35 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2148 kalcijum helat/timozin α1 kompozicija iz HPLC vrha pri 6.28 min na sl. 33. Uočena masa primarnih vrsta je 3107.3 Da, identifikujući ga kao timozin α1 (očekivana m. masa = 3108 Da).
Sl. 36 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2006 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 37 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2006 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 14.59 min na sl. 36. Uočena masa primarnih vrsta je ∼12600 - 13200 Da, identifikujući ga kao REP 2006 (očekivana m. masa = 12612 - 13092 Da).
Sl. 38 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2006 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 39 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2006 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a kompozicija iz HPLC vrha pri 13.21 min na sl.38.
Sl. 40 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 41 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2055 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 16.71min na sl. 40. Uočena masa primarnih vrsta je 12612.4 Da, identifikujući ga kao REP 2055 (očekivana m. masa = 12612.5 Da).
Sl. 42 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 43 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2055 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 8.03 min na sl.42.
Sl. 44 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2057 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a a primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 45 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2057 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 15.45 min na sl. 44. Uočena masa primarnih vrsta je 13413.5 Da, identifikujući ga kao REP 2057 (očekivana m. masa = 13413.3 Da).
Sl. 46 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2057 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 47 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2057 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 8.04 min na sl.46.
Sl. 48 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 49 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2139 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 19.08 min na sl. 48. Uočena masa primarnih vrsta je 14095.3 Da, identifikujući ga kao REP 2139 (očekivana m. masa = 14094.6 Da).
Sl. 50 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 51 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2139 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 8.02 min na sl.50.
Sl. 52 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2148 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 53 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2148 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a kompozicija iz HPLC vrha pri 15.42 min na sl.
52. Uočena masa primarnih vrsta je 12891.5 Da, identifikujući ga kao REP 2148 (očekivana m. masa = 12893 Da).
Sl. 54 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2148 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 55 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2148 kalcijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 13.17 min na sl.54.
Sl. 56 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 kalcijum helat/ interferon λ1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 57 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2055 kalcijum helat/ interferon λ1 iz HPLC vrha pri 14.84 min na sl. 56. Uočena masa primarnih vrsta je 12610.6 Da, identifikujući ga kao REP 2055 (očekivana m. masa = 12612.5 Da).
Sl. 58 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 kalcijum helat/ interferon λ1 primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 59 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2055 kalcijum helat/ interferon λ1 iz HPLC vrha pri 10.68 min na sl.58. Glavni vrh je uočen pri 20139 Da, u skladu sa približnom molekulskom masom interferona λ1.
Sl. 60 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 kalcijum helat/ interferon λ1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 61 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2139 kalcijum helat/ interferon λ1 iz HPLC vrha pri 17.31 min na sl. 60. Uočena masa primarnih vrsta je 14095.3 Da, identifikujući ga kao REP 2139 (očekivana m. masa = 14094.6 Da).
Sl. 62 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 kalcijum helat/ interferon λ1 primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 63 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja proteina u kompoziciji REP 2139 kalcijum helat/interferon λ1 iz HPLC vrha pri 10.53 min na sl. 62. Glavni vrh je uočen pri 20139 Da, u skladu sa približnom molekulskom masom interferona λ1
Sl. 64 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2148 kalcijum helat/interferon λ1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 65 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2148 kalcijum helat/interferon λ1 iz HPLC vrha pri 15.47 min na sl. 64. Uočena masa primarnih vrsta je 12891.8 Da, identifikujući ga kao REP 2148 (očekivana m. masa = 12893 Da).
Sl. 66 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2148 kalcijum helat/interferon λ1 primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 67 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja proteina u kompoziciji REP 2148 kalcijum helat/ interferon λ1 iz HPLC vrha pri 10.51 min na sl.66. Glavni vrh je uočen pri 20139 Da, u skladu sa približnom molekulskom masom interferona λ1
Sl 68 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 magnezijum helat/timozin α1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Vrh eluiranja pri 5.86 min odgovara timozinu α1 (bela strelica) a vrh eluiranja pri 14.62 min odgovara REP 2055 pune dužine (crna strelica).
Sl. 69 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2055 magnezijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 14.62 min na sl. 68. Uočena masa primarnih vrsta je 12610.1 Da, identifikujući ga kao REP 2055 (očekivana m. masa. = 12612.5).
Sl. 70 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2055 magnezijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 5.82 min na sl. 68. Uočena masa primarnih vrsta je 3107.1 Da, identifikujući ga kao timozin α1 (očekivana m. masa = 3108 Da).
Sl 71 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 mešani kalcijum-magnezijum helat/timozin α1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Vrh eluiranja pri 6.02 min odgovara timozinu α1 (bela strelica) a vrh eluiranja pri 14.85 min odgovara REP 2055 pune dužine (crna strelica).
Sl. 72 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2055 mešani kalcijum-magnezijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 14.85 min na sl. 71. Uočena masa primarnih vrsta je 12609.7 Da, identifikujući ga kao REP 2055 (očekivana m. masa. = 12612.5).
Sl. 73 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2055 mešani kalcijum magnezijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 6.02 min na sl.71. Uočena masa primarnih vrsta je 3107.1 Da, identifikujući ga kao timozin α1 (očekivana m. masa = 3108 Da).
Sl. 74 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 75 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2055 magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 14.83 min na sl. 74. Uočena masa primarnih vrsta je 12610.2 Da, identifikujući ga kao REP 2055 (očekivana m. masa = 12612.5 Da).
Sl. 76 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 77 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2055 magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 13.44 min na sl.76.
Sl. 78 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 mešani kalcijum-magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Sl. 79 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2055 mešani kalcijum-magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 14.83 min na sl.
78. Uočena masa primarnih vrsta je 12609.8 Da, identifikujući ga kao REP 2055 (očekivana m. masa = 12612.5 Da).
Sl. 80 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2055 mešani kalcijum-magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 81 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2055 mešani kalcijum-magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 13.44 min na sl.
80.
Sl 82 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 magnezijum helat/timozin α1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Vrh eluiranja pri 5.84 min odgovara timozinu α1 (bela strelica) a vrh eluiranja pri 16.86 min odgovara REP 2139 pune dužine (crna strelica).
Sl. 83 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2139 magnezijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 16.86 min na sl. 82. Uočena masa primarnih vrsta je 14091.3 Da, identifikujući ga kao REP 2139 (očekivana m. masa = 14094.6 Da).
Sl. 84 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2139 magnezijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 5.84 min na sl. 82. Uočena masa primarnih vrsta je 3107.1 Da, identifikujući ga kao timozin α1 (očekivana m. masa = 3108 Da).
Sl 85 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 mešani kalcijum-magnezijum helat/timozin α1 primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Vrh eluiranja pri 5.84 min odgovara timozinu α1 (bela strelica) a vrh eluiranja pri 16.61 min odgovara REP 2139 pune dužine (crna strelica).
Sl. 86 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2139 mešani kalcijum-magnezijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 16.61 min na sl. 85. Uočena masa primarnih vrsta je 14091.1 Da, identifikujući ga kao REP 2139 (očekivana m. masa = 14094.6 Da).
Sl. 87 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2139 mešani kalcijum magnezijum helat/timozin α1 iz HPLC vrha pri 5.84 min na sl.85. Uočena masa primarnih vrsta je 3107.1 Da, identifikujući ga kao timozin α1 (očekivana m. masa = 3108 Da).
Sl. 88 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 89 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2139 magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 17.19 min na sl. 88. Uočena masa primarnih vrsta je 14091.5 Da, identifikujući ga kao REP 2139 (očekivana m. masa = 14094.6 Da).
Sl. 90 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 91 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2139 magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 13.38 min na sl.90.
Sl. 92 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 mešani kalcijum-magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom oligo metode opisane ovde (videti primer IV). Sl. 93 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja oligonukleotida u kompoziciji REP 2139 mešani kalcijum-magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 16.95 min na sl.
92. Uočena masa primarnih vrsta je 14091.4 Da, identifikujući ga kao REP 2139 (očekivana m. masa = 14094.6 Da).
Sl. 94 ilustruje HPLC razdvajanje kompozicije REP 2139 mešani kalcijum-magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a primenom proteinske metode 2 opisane ovde (videti primer IV).
Sl. 95 ilustruje ESI-MS analizu sadržaja peptida u kompoziciji REP 2139 mešani kalcijum-magnezijum helat/pegilovani interferon α-2a iz HPLC vrha pri 13.46 min na sl.
94.
DETALJAN OPIS
[0085] Kao što je opisano u objavi međunarodne prijave br. WO 2012/021995 i objavi američke prijave br, 2012/0046348, ON-i u vodenim rastvorima koji sadrže bilo koji jednostavan metalni katjon koji je dvovalentan (kao što je na primer ali nije ograničeno na, Ca2+, Mg2+ i Fe2+) ne postoje kao soli nego pre kao helirani kompleksi od ON-a. Ovi kompleksi su sačinjeni od ON dimera ili molekulskih organizacija višeg reda u kojima su ON povezani intermolekularno na njihovim fosfodiestarskim ili fosforotioatnim osnovnim lancima preko dvovalentnih metalnih jonskih mostova (videti sl. 2B). Pri specifičnim koncentracijama ON i metalnih katjona, ovi helirani kompleksi su stabilni i rastvorljivi u vodenom rastvoru i efikasno sekvestriraju dvovaletne katjone u ON helatnim kompleksima iz interakcije rastvora. Ova formacija helatnog kompleksa će se najverovatnije desiti sa jednostavnim metalnim katjonima sa 3+ naelektrisanjem ili većim (kao što je prikazano na sl. 2B). Tako ON-i funkcionišu kao helatori viševalentnih metalnih katjona i ne formiraju soli sa viševalentnim metalnim katjonima.
[0086] ON helatni kompleksi mogu da sadrže različite viševalentne metalne katjone uključujući kalcijum, magnezijum, kobalt, gvožđe, mangan, barijum, nikl, bakar, cink, kadmijum, živu i olovo. Dalje je pokazano da helacija ovih viševalentnih metalnih katjona rezultuje u formaciji ON helatnih kompleksa koji se sastoje od dva ili više ON povezanih preko metalnih katjona i javljaju se sa ON-ima dužine veće od 6 nukleotida, i u prisustvu ON-a sa ili fosfodiesterskim ili fosforotioatnim vezama. ON mogu opciono imati svaku vezu fosforotioiranu. Helacija se takođe dešava sa ON koji sadrže 2' modifikacije (kao što je 2' O metil) na ribozi ili koji sadrže modifikovane baze kao što je 5'metilcitozin ili 4-tiouracil. Ove 2' modifikacije mogu biti prisutne na jednoj ili više ili svim ribozama a modifikovane baze mogu biti prisutne na jednoj ili više baza ili biti univerzalno prisutne na svakoj bazi (tj. svi citozini su prisutni kao 5'metilcitozin). Pored toga, ON helatni kompleksi mogu da sadrže ON koji sadrže više modifikacija kao što su svaka veza fosforotioirana, svaka riboza 2' modifikovana i svaka baza modifikovana. ON modifikacije koje su kompatibilne sa formacijom ON helatnog kompleksa su dodatno definisane ispod. Štaviše, helacija metalnih katjona ne zavisi od sekvence prisutnih nukleotida, već se umesto toga oslanja na fiziočkohemijska svojstva zajednička svim ON-ima (videti sl.2A).
[0087] Iako se formiranje ON helatnih kompleksa može postići bilo kojim dvovalentnim metalnim katjonom, ON helatni kompleksi namenjeni za primenu kao lekovi bi poželjno trebalo da sadrže samo kalcijum i/ili magnezijum ali mogu takođe da sadrže gvožđe, mangan, bakar ili cink u tragovima i ne bi trebalo da uključuju kobalt, barijum, nikl, kadmijum, živu, olovo ili bilo koji drugi dvovalentni metal koji nije ovde naveden.
[0088] Značajno, formiranje ON helatnih kompleksa se ne javlja sa monovalentnim katjonima kao što su Na+, K+ ili NH4+ i prema tome malo je verovatno da će se dogoditi sa bilo kojim monovalentnim katjonom. Prema tome, termin "ON so" je tačnije ograničen samo na ON soli sa monovalentnim katjonima ili sa katjonima koji ne formiraju helatne komplekse sa ON-a.
[0089] Najmanje deo poznate prolazne interakcije ON-a sa komponentama proteina u krvi verovatno je posredovan interakcijom ON-a sa proteinima koji vezuju kalcijum kao što su albumin i proteini kaskade koagulacije zavisne od kalcijuma. Prema tome administracija ON-a kao heliranih kompleksa (koji značajno smanjuju ili eliminišu njihovu sklonost ka interakciji sa proteinima vezanim za kalcijum) mogu ublažiti ove interakcije proteina u krvi i rezultovati u manje sporednih efekata sa ON administracijom (kao što je prolazna antikoagulacija) i takođe mogu povećati frakciju ON doze koja dostiže ciljne organe (npr. jetru, pluća ili slezinu) u poređenju sa neheliranim ON-a.
[0090] Fluorescentna polarizacija je uobičajena metodologija korišćena za ispitivanje intermolekularnih interakcija. U ovoj tehnici, mamac (tj. bilo koji ON) je označen fluorescentnom oznakom (npr. FITC). U rastvoru, molekul mamca se slobodno kreće u rastvoru usled Brownian kretanja što rezultuje slabom polarizovanom emisijom fluorescencije kada je mamac podvrgnut ekscitaciji sa tačnom talasnom dužinom svetlosti. Sa ligandom dovoljne molekulske mase (bar iste veličine kao mamac), interakcija između mamca i liganda uvodi značajnu inhibiciju kretanja kompleksa u rastvoru. Kao rezultat ovog inhibiranog kretanja u rastvoru, emisija fluorescencije postaje značajno polarizovana nakon ekscitacije. Tako se ovom tehnikom, interakcije mogu meriti u rastvoru bez fizičkih ograničenja na bilo kom vezujućem partneru. Fluorescentna polarizacija je prikazana kao bezdimenzionalna mP, koja je direktno proporcionalna frakciji vezanih molekula mamca u reakciji. Na primer, ako bi veoma mala frakcija molekula mamca bila vezana određenim ligandom, bilo bi vrlo malo fluorescentne polarizacije i posledično male mP vrednosti. Na drugom kraju spektra, ako bi veliki deo molekula mamca bio vezan određenim ligandom (ili sa većom koncentracijom liganda), došlo bi do značajne fluorescentne polarizacije i posledično velikih mP vrednosti. Na ovaj način, izoterme vezivanja za određene interakcije mamac-ligand mogu biti generisane variranjem koncentracija liganda u prisustvu fiksne količine fluorescentno obeleženog mamca.
[0091] Ovde se koriste različiti fluorescentno obeleženi ON kako bi se ispitalo njihovo formiranje kompleksa u prisustvu viševalentnih metalnih katjona. Iako praćenje formiranja kompleksa fluorescentnom polarizacijom zahteva da ovi ON budu fluorescentno obeleženi, ova oznaka je pričvršćena na ON na 3' kraju tako da ne posreduje ni sa azotnom bazom ni sa fosfodiesterskim osnovnim lancem predmetnog ON. Štaviše fluorescentna oznaka je držana podalje od ON čvrstim 3 ugljeničnim veznikom kako bi se dodatno isključila bilo kakva smetnja normalnog ponašanja ON u rastvoru. Prema tome bilo koja formacija ON kompleksa koja se ovde primećuje primenom fluorescentne polarizacije sa fluorescentno obeleženim ON je tačan prikaz ponašanja rastvora neobeleženih ON (bilo da su u kompleksu ili ne).
[0092] Standard u oblasti tehnike jasno podučava praksi administracije ON-a subjektima kojima je potreban tretman sa ON natrijumovim solima. Ovo je predstavljeno administracijom brojnih ON-a u kliničkim ispitivanjima kao natrijumovih soli koje uključuju Fomivirisen (ISIS 2922), Mipomersen (ISIS 301012), Trecovirsen (GEM 91), Custirsen (OGX-011 / ISIS 112989), Genasense (G3139), Aprinocarsem (ISIS 3531 / LY 900003), PRO-51 (GSK 2402968) i ALN-RSV01 (Geary i sar., 2002, Clin. Pharmacokinetics, 41: 255-260; Yu i sar., 2009, Clin. Pharmacokinetics, 48: 39-50; Sereni i sar., 1999, J. Clin. Pharmacol., 39: 47-54; Chi i sar., 2005, J. Nat. Canc. Inst., 97: 1287-1296; Marshall i sar., 2004, Ann. Oncol., 15: 1274-1283; Grossman i sar., 2004, Neuro-Oncol, 6: 32-40; Goemans i sar., 2011 NEJM 364: 1513-1522). Ne postoje trenutno objavljeni podaci koji razmatraju formulaciju oligonukleotida za parenteralnu administraciju sa primenom kalcijuma, ili magnezijuma ili drugih dvovalentnih metala.
[0093] Mnogi od sporednih efekata povezanih sa administracijom natrijumovih soli ON-a mogu biti pripisani njihovim helacionim efektima. Antikoagulacija krvi putem ON-ima je najmanje delom uzrokovana helacijom kalcijuma iz seruma putem ON-a tako oštećujući kaskadu koagulacije zavisne od kalcijuma. Ova helacija kalcijuma u serumu i osnovna hipokalcemija u serumu koju može izazvati takođe je u skladu sa sporednim efektima primećenim sa administracijom ON-a putem IV administracije koja uključuje groznicu, drhtavicu, slabost i snižavanje arterijskog krvnog pritiska (potonje sa brzom IV infuzijom ili injekcijom). Reakcije na mestu injekcije primećene sa subkutanim injekcijama ON-a (induracija, inflamacija, osetljivost i bol) su barem delimično usled lokalne helacije kalcijuma i moguće drugih dvovalentnih ili viševalentnih katjona kao što je magnezijum na mestu injekcije sa ON-a. Pokazalo se da administracija ON-a kao heliranih kompleksa ublažava mnoge od ovih sporednih efekata.
[0094] Štaviše, pošto će se ON helatni kompleksi formirati sa dvovalentnim metalima u rastvoru sa bilo kojim ON, učenje o formiranju i kompatibilnosti različitih polipeptida i pegilovanih polipeptida u rastvoru sa bilo kojim ON helatnim kompleksom biće adekvatno demonstrirano bilo kojem stručnjaku u oblasti primenom degenerisanog ON REP 2006 i primerne oligonukleotidne sekvence [u primerima ispod (AG)20i (AC)20] sa različitim ON modifikacijama. Stabilno formiranje kompozicija koje sadrže gore navedene ON vrste kao helate sa različitim polipeptidima ili pegilovanim polipeptidima pokazaće da će bilo koji ON helatni kompleks (bez obzira na njegovu specifičnu funkcionalnost) formirati stabilni rastvor sa raznim polipeptidima ili pegilovanim polipeptidima koji bi bili poželjni u oblasti za lečenje indikacija specifične bolesti (npr. pegilirani interferoni za lečenje hepatitisa B ili hepatitisa C ili myrcludex B za lečenje hepatitisa B).
[0095] Termin oligonukleotid (ON) se odnosi na oligomer ili polimer ribonukleinske kiseline (RNK) i/ili deoksiribonukleinske kiseline (DNK). Ovaj termin uključuje ON koji se sastoje od modifikovanih nukleobaza (uključujući 5'metilcitozin i 4'tiouracil), šećera i kovalentnih internukleozidnih (osnovnog lanca) veza kao i ON koji imaju delove koji se ne javljaju u prirodi i koji funkcionišu slično. Takvi modifikovani ili supstituisani ON-i mogu biti poželjniji od nativnih oblika zbog poželjnih svojstava kao što su, na primer, smanjena imunoreaktivnost, poboljšani ćelijski unos, poboljšani afinitet za nukleinskokiselinsku metu i povećana stabilnost u prisustvu nukleaza. ON takođe mogu biti dvolančani.
[0096] ON u ovoj objavi mogu da uključe razne modifikacije, npr., stabilizirajuće modifikacije, i prema tome mogu da uključe najmanje jednu modifikaciju u fosfodiestarskoj vezi i/ili na šećeru, i/ili na bazi. Na primer, ON može da uključi, bez ograničenja, jednu ili više modifikacija, ili biti potpuno modifikovan tako da sadrži sve veze ili šećere ili baze sa prijavljenim modifikacijama, Modifikovane veze mogu da uključe fosforotioat veze, fosforoditioat veze, i/ili metilfosfonat veze. Dok su modifikovane veze korisne, ON mogu da uključe fosfodiestarske veze. Dodatne korisne modifikacije uključuju, bez ograničenja, modifikacije na 2'-poziciji šećera uključujući 2'-O-alkil modifikacije kao što su 2'-O-metil modifikacije, 2' O-metoksietil (2' MOE), 2'-amino modifikacije, 2'-halo modifikacije kao što su 2'-fluoro; aciklični nukleotidni analozi. Druge 2' modifikacije su takođe poznate u oblasti i mogu biti primenjene kao što su zaključane nukleinske kiseline. Naročito, ON ima modifikovane veze sasvim ili ima svaku vezu modifikovanu, npr., fosforotioat; ima 3'- i/ili 5'-kapu; uključuje terminalnu 3'-5' vezu; ON je ili uključuje konkatemer koji se sastoji od dve ili više ON sekvenci spojene veznikom(veznicima). Modifikacije baze mogu da uključe 5'metilaciju citozinske baze (5' metilcitozin ili u kontekstu nukleotida, 5' metilcitidin) i/ili 4'tioaciju uracilske baze (4'tiouracil ili u kontekstu nukleotida, 4'tiouridin). Različite hemijski kompatibilne modifikovane veze mogu se kombinovati gde su uslovi sinteze hemijski kompatibilni kao što je oligonukleotid sa fosforotioat vezama, 2' ribozna modifikacija (kao što je 2'O-metilacija) i modifikovana baza (kao što je 5'metilcitozin). ON se dalje može potpuno modifikovati sa svim ovim različitim modifikacijama (npr. svaka veza fosforotioirana, svaka riboza 2' O metil modifikovana i svaka citozinska koja ima dodatno 5’ metil modifikaciju (5’metilcitozin)).
[0097] ] U predmetnom opisu, termin "antivirusni ON" odnosi se na bilo koji ON koji zahvaljujući svojoj specifičnoj biohemijskoj aktivnosti (bilo zavisnoj od sekvence ili nezavisnoj od sekvence) ima sposobnost da direktno ili indirektno inhibira neke aspekte virusne replikacije ili da direktno ili indirektno poboljša sposobnost domaćina da očisti infekciju imunološkim ili drugim mehanizmima.
[0098] U predmetnoj objavi, terminin "ON helatni kompleks" odnosi se na kompleks dva ili više antivirusnih ON u rastvoru povezanih intermolekularno pomoću viševalentnog metalnog katjona.
[0099] U predmetnoj objavi, termin "antivirusni ON helatni kompleks" odnosi se na kompleks dva ili više antivirusnih ON u rastvoru povezanih intermolekularno pomoću viševalentnog metalnog katjona. Antivirusni ON helatni kompleks se može sastojati od jedne vrste antivirusnog ON ili dve ili više različitih vrsta antivirusnog ON koji može imati iste ile različit mehanizme delovanja (npr. dva ili više antisens ON-a, najmanje jedan antisens ON i najmanje jedan aptamer, najmanje jedan antisens ON i najmanje jedna siRNK).
[0100] U predmetnoj objavi, terminin "antivirusni polipeptid" odnosi se na polipeptid koji zahvaljujući svojoj specifičnoj biohemijskoj aktivnosti (bilo da je zavisna od sekvence ili nezavisna od sekvence) ima sposobnost da direktno ili indirektno inhibira neki aspekt replikacije virusa ili da direktno ili indirektno poboljša sposobnost domaćina da očisti infekcije imunološkim ili drugim mehanizmima. Polipeptid može biti prirodno izveden ili rekombinantan. Polipeptid može biti rekombinantno izveden iz dela polipeptida koji se javlja u prirodi. Polipeptid može biti pegilovan ili nepegilovan.
[0101] U predmetnoj objavi, U predmetnoj prijavi, termin "degenerisan ON" bi trebalo da označi jednolančani ON koji ima kolebanje (N) na svakoj poziciji, kao što je NNNNNNNNNN. Svaka baza je sintetisana kao kolebanje tako da ovaj ON u stvari postoji kao populacija različitih nasumično generisanih sekvenci iste dužine i fiziočkohemijskih svojstava. Na primer, za degenerisani ON dužine 40 baza, bilo koja posebna sekvenca u populaciji bi teorijski predstavljala samo 1/4<40>ili 8.3 X 10<-25>od ukupne frakcije. Pošto je 1 mol = 6.022X10<23>molekula, i činjenica je da bi 1 mol 40mernog ON težio približno 12-14 kg (u zavisnosti od sekvence i modifikacija koje su prisutne), bilo koji ON sa specifičnom sekvencom koja je prisutna efikasno ne postoji više od jednom u bilo kom preparatu. Tako bilo koja helatna formacija ili biološka aktivnost uočena u takvom preparatu mora biti usled nesekventno zavisnih (ili nezavisnih od sekvence) fizičkohemijskih svojstava ON-a pošto se ne može očekivati da bilo koji posebni ON definisane sekvence, koji je jedinstven u preparatu, doprinese bilo kojoj značajnoj aktivnosti izvedenoj iz njegove specifične nukleotidne sekvence.
[0102] Kao dodatna ilustracija ovog koncepta, primer I upoređuje karakterizaciju REP 2006 (40merni ON sa degenerisanom, potpuno fosforotioiranom sekvencom) sa 21mernim ON definisane sekvence (takođe potpuno fosforotioiranom) tečnom hromatografijom pod visokim pritiskom i masenom spektrometrijom i jasno pokazuje da će bilo koji ON sa sličnom veličinom i hemijskom modifikacijom (tj. fosforotioiracijom) imati veoma slična (ako ne identična) fizičkohemijska svojstva koja nisu pod uticajem sekvence prisutnih nukleotida (videti sl.1A-C).
[0103] U predmetnoj prijavi, termin "polimer nukleinske kiseline" ili NAP bi trebalo da identifikuje bilo koji jednolančani ON koji ne sadrži funkcionalnost specifičnu za sekvencu. Biohemijska aktivnost NAP nije zavisna od prepoznavanja Toll-sličnih receptora za ON, hibridizacije sa ciljnom nukleinskom kiselinom ili aptamerne interakcije koja zahteva specifičnu sekundarnu / tercijarnu ON strukturu izvedenu iz specifičnog redosleda prisutnih nukleotida. NAP mogu da uključe modifikacije baze i ili veze i ili šećera kao što je opisano iznad.
[0104] ON mogu da izvrše svoje terapijske efekte brojnim mehanizmima koji su ili zavisni od sekvence ili nezavisni od sekvence. Mehanizmi zavisni od sekvence su oni koji zahtevaju specifičnu sekvencu nukleinske kiseline za svoju aktivnost i gde je aktivnost smanjena pomoću jedne ili više izmena u prisutnoj nukleotidnoj sekvenci. Ova specifična sekvenca može obuhvatiti celu dužinu ON-a ili samo njegov deo (motiv sekvence). Primeri ON-a koji su zavisni od sekvence uključuju :
1. Antisens ON-i (bilo jednolančani ili dvolančani (npr .mala interferirajuća RNK (siRNK) ili mala RNK sa strukturom ukosnice (shRNK)) su komplementarni na specifičan deo informacione RNK (iRNK) od interesa i kada su uvedeni u ćeliju, oni usmeravaju degradaciju specifičnih iRNK pomoću RNKze H ili RNK-indukovanog utišavajućeg kompleksa (RNA-induced silencing complex - RISC).
2. Sterično blokirajući ON su jednolančani antisens ON koji su komplementarni na specifičan deo iRNK ali koji su dizajnirani da ne aktiviraju RNKzu H. Hibridizacija ovih ON za njihovu ciljnu iRNK rezultuje dvolančanim delom koji obezbeđuje sterično ometanje za proteine koji normalno deluju na iRNK. Takvi ON mogu biti korišćeni da blokiraju translaciju posebne iRNK ili da interferiraju sa post-transkripcionim splajsingom i sazrevanjem posebne iRNK. Takvi ON mogu biti dizajnirani da blokiraju aktivaciju RNKze H (s obtirom da ona nije inegralna za mehanizam dejstva ovih ON) pomoću 2' ribozne modifikacije u celini (kao što je 2' O metilacija).
3. Aptameri su ON koji usvajaju specifičnu trodimenzionalnu konformaciju sposobnu za specifičnu proteinsku interakciju i koji ne interaguju lako sa DNK ili RNK domaćina. Aptameri mogu takođe da uključuju spiegelmere, koji koriste L-nukleotide umesto D-nukleotida da bi dodelili visoku enzimsku stabilnost ON-u.
4. Imunostimulatorni ON koriste specifični 6merni motiv nukleinske kiseline (XXCGXX) kako bi stimulisali imunski odgovor kos sisara. Optimalni motiv varira od vrste do vrste ali je striktno zavisan od specifične sekvence usklađene sa XXCGXX motivom.
5. Mikro RNK (miRNK) se vezuju za i blokiraju funkciju molekula mikro RNK koji se javljaju u prirodi koji su uključeni u regulaciju različitih biohemijskih puteva.
[0105] Jedini prijavljeni primer ON nezavisnih od sekvence su fosforotioirani NAP, koji selektivno interaguju sa amfipatskim proteinskim strukturama na način koji zavisi od veličine (dužine) zahvaljujući njihovim fizičkohemijskim svojstvima kao amfipatskih polimera.
[0106] Nekoliko antivirusnih lekova zasnovanih na polipeptidu trenutno je odobreno za lečenje virusnih infekcija koje uključuju pegilovani interferon α-2a (za lečenje hepatitisa B (HBV) i hepatitisa C (HCV)), interferon α-2b (za lečenje HBV), timozin α1 (za lečenje HBV) i enfurtid (za lečenje HIV-1). Postoje drugi lekovi zasnovani na polipeptidu, uključujući miristilirani pres1 HBV fragment proteina površinskog antigena pre-s1 HBV (myrcludex B, Petersen i sar., 2008, Nature Biotech. 26: 335-341) za lečenje HBV i pegilovani interferon λ1 (Muir i sar., 2010 Hepatology 52: 822-832). Pored toga, poznato je i da interferon λ1, λ2 i λ3 imaju antivirusnu aktivnost (Friborg i sar., 2013 Antimicrobial Agents and Chemotherapy 57: 1312-1322). U slučaju pegilovanih ili nepegilovanih interferona i drugih poznatih imunomodulatora (npr. timozin α 1), ovi polipeptidi su aktivni u stimulisanju njihovih odgovarajućih biohemijskih puteva što vodi stimulaciji imunološkog odgovora na virusnu infekciju kod subjekta. Iako ovi polipeptidi mogu uspešno da stimulišu imunološki odgovor, samo mali deo pacijenata sa HBV ili HCV infekcije postižu potpunu kontrolu infekcije koristeći ove lekove na bazi polipeptida. Myrcludex B ima funkciju da blokira ulazak HBV u hepatocite, ali njegova terapijska korist se još uvek mora dokazati kod ljudskih pacijenata.
[0107] Pored ovih polipeptida, postoje i druge klase polipeptida sa poznatom antivirusnom aktivnošću koje mogu biti korisne u lečenju virusne infekcije u kombinaciji sa ON helatnim kompleksom. Takvi polipeptidi uključuju citokine kao što su TNF-α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, i interferon γ.
[0108] Postupci za pegilaciju terapijski aktivnih polipeptida i kompatibilnost pegilacije sa biohemijskom aktivnošću polipeptida dobro su poznati u oblasti i sastoje se od povezivanja niza polietilenglikola (PEG) sa dotičnim polipeptidom na specifičnim aminokiselinskim ostacima. Primarna funkcija pegilacije je da poveća cirkulišući životni vek polipeptida i da smanji njegovu imunogenost. Ove karakteristike poboljšavaju podnošljivost dotičnog polipeptida i smanjuju učestalost doziranja potrebnog za optimalni terapijski efekat. Dalje je u oblasti poznato da se vezivanje PEG ostataka za polipeptid može postići bez uticaja na specifičnu biohemijsku aktivnost dotičnog polipeptida. Takođe je poznato da pegilacija povećava rastvorljivost dotičnog polipeptida u vodi, poboljšavajući njegovu jednostavnost formulacije. Brojni primeri pegilovanih polipeptida poznati su u oblasti i uključuju: Mircera™ pegilovani oblik eritropoietina; Neulasta™, pegilovani oblik humanog faktora stimululacije granulocitne kolonije; Pegasys™ pegilovani oblik humanog interferona α-2a; Peg-intron™, pegilovani oblik humanog interferona a-2b; i pegilovani interferon λ1 (koji je trenutno u kliničkom razvoju). Prema tome, objava kompatibilnosti jednog pegilovanog polipeptida (tj. pegilovanog interferona a-2a) u kompoziciji sa ON helatnim kompleksom pruža opštu mogućnost kompatibilnosti bilo kog pegilovanog polipeptida sa ON helatnim kompleksom uopšte, a posebno za pegilovane verzije određenih nepegilovanih polipeptida koji su prisutni u ovoj objavi da su kompatibilni sa ON helatnim kompleksom (tj. timozin α1, interferon α-2b i interferon λ1).
[0109] Nekoliko antivirusnih lekova zasnovanih na ON su trenutno u razvoju za lečenje virusnih infekcija koji uključuju fosforotioirane NAP REP 9AC (REP 2055), REP 9AC’ (REP 2139) i REP 9ACm (REP 2148) za lečenje HBV; miravirsen za lečenje HCV (Janssen i sar., 2013, NEJM, 27. mart); i ALN-RSV01 za lečenje respiratornog sincicijskog virusa (RSV) (Zamora i sar., 2011, Am. J. Resp. Crit. Care Med., 183: 531-538). Svaki od ovih ON ima različiti mehanizam dejstva: NAP sprečavaju oslobađanje HBV površinskog antigenskog proteina u krvi (protein koji inhibira imunološku funkciju) kao što je opisano u primeru V, miravirsen (miRNK) blokira delovanje mikro RNK mir-122 za koju je poznato da igra ulogu u HCV replikaciji a ALN-RSV01 (siRNK) blokira sintezu RSV N nukleokapsidnog proteina, sprečavajući proizvodnju RSV viriona. Svi ovi ON lekovi su vrlo efikasni u izazivanju njihovih predviđenih efekata kod subjekata: REP 9AC / REP 9AC '/ REP 9ACm blokiraju unutarćelijski tranzit i sekreciju HBV subvirusnih čestica (SVP) što rezultira klirensom HBV površinskog antigena u krv koji zauzvrat izaziva smanjenje HBV virusa u krvi; miravirsen dobro deluje na inhibiciju mir-122 funkcije sa svojim uključivanjem u HCV replikaciju a ALN-RSV-01 dobro deluje da blokira proizvodnju RSV kapsidnog proteina. Međutim u svim slučajevima gde se ova jedinjenja zasnovana na ON administriraju parenteralno, povezana su sa sporednim efektima vezanim za administraciju kao što su groznica, jeza, drhtanje kada su administrirana intravenskom infuzijom ili bolom, inflamacijom ili induracijom na mestu injekcije, kada su administrirani subkutanom administracijom. Još važnije, iako svi ovi lekovi zasnovani na ON imaju svoje predviđene efekte na subjekte, ukupni terapijski ishod daleko je od onoga što bi bilo poželjno: samo deo pacijenata koji se leče ovim lekovima postiže značajan antivirusni odgovor ili potpunu kontrolu nad svojim infekcija tokom lečenja ili nakon ukidanja lečenja.
[0110] Stoga je poželjno pripremiti bilo koji od ovih antinirusnih lekova zasnovanih na ON kao ON helate (kako bi se minimalizovali njihovi sporedni efekti povezani sa administracijom i potencijalno poboljšali njihova farmakokinetička svojstva) i kombinovati ih sa jednim ili više antivirusnih polipeptida (kao što su pegilovani interferon α-2a , interferon α-2b ili timozin α1 ili pegilovani interferon λ1) u istoj formulaciji. Specifični antivirusni efekti jedinjenja zasnovanih na ON (kao helati), zajedno sa imunostimulacijskim antivirusnim efektima polipeptida mogli bi imati poboljšani blagotvorni efekat u izazivanju potpunijeg potenciranog antivirusnog odgovora kod subjekata i dovesti do toga da veći deo subjekata postigne potpunu kontrolu njihove infekcije u poređenju sa bilo kojim lekom koji se koristi odvojeno.
[0111] Može biti korisno lečiti određenu virusnu infekciju farmaceutskom kompozicijom koja sadrži najmanje jedan antivirusni ON helatni kompleks i najmanje jedan antivirusni polipeptid ili pegilovani polipeptid da bi se postigao poboljšani antivirusni odgovor kod subjekta.
[0112] Može biti korisno za lečenje određene virusne infekcije sa najmanje jednim antivirusnim ON helatnim kompleksom i antivirusnim polipeptid pri čemu se svako od ovih jedinjenja administrira odvojeno u različitim farmaceutskim kompozicijama, bilo istim putem administracije ili ne.
[0113] Da bi se pružio najbolji mogući antivirusni odgovor kod subjekta, možda će biti potrebno dodati kombinovanu terapija antivirusnog ON helata i antivirusnog polipeptida, bilo da se administrira u istim ili odvojenim farmaceutskim kompozicijama, treći ne-ON, nepolipeptidni lek. Takvi lekovi mogu biti (ali nisu ograničeni na): entekavir, tenofovir dizoproksil fumarat, telbuvidin, adefovir dipivoksil, lamivudin, ribavirin, telaprevir, boceprevir, GS-7977, tegobuvir, zanamivir, oseltamivir, ganciklovirvir, foskarnet, aciklovir, zidovudin, abacavir, lopinavir, ritonavir i/ili efavirenz. Takvi antivirusni lekovi mogu sprečiti replikaciju virusnog genoma i ili virusne mRNK kod mnogih virusa kao što su HCV, HBV, HIV, influenca, RSV, i citomegalovirus.
[0114] Moguće je da kombinacija specifičnih antivirusnih efekata antivirusnog ON helatnog kompleksa, u kombinaciji sa imunostimulacionim efektima antivirusnih polipeptida ili pegilovanih polipeptida i blokada replikacije virusne DNK/RNK sa ne-ON, nepolipeptidnim lekovima navedenim gore, može pružiti najbolji i najpotentniji terapijski odgovor kod subjekta sa virusnom infekcijom i dalje povećati šansu da će dotični subjekt postići trajnu kontrolu virusa koja se može održati nakon zaustavljanja lečenja.
[0115] ON helatni kompleks u formulaciji može biti izveden iz bilo kojeg ON sa antivirusnom aktivnošću, čiji primeri su obezbeđeni u tabeli 1.
Tabela 1
K
O
a
s s
s
s s
L
[0116] Polipeptid u formulaciji može da ima direktno antivirusnu aktivnost ili može da stimuliše antivirusnu aktivnost delovanje koje potiče od domaćina i može biti sledeće:
Timozin α1;
Bilo koji α-interferon ili njegov pegilovani derivat;
Bilo koji β-interferon ili njegov pegilovani derivat;
Bilo koji γ-interferon ili njegov pegilovani derivat;
Bilo koji λ-interferon ili njegov pegilovani derivat;
Interferon α-2a ili α-2b ili α-N3;
Interferon β-1 ili β-1 b;
Interferon γ-1b;
Interferon λ1 ili λ2 ili λ3;
Pegilovani interferon α-2a ili α-2b ili λ1 ili λ2 ili λ3;
Myrcludex B;
Bilo koji antivirusni citokin ili njegov pegilovani derivat;
Timični protein A; i/ili
Bilo koji polipeptid ili pegilovani polipeptid za koji je pokazano da ima antivirusnu aktivnost ili imunostimulatornu aktivnost.
[0117] Obezbeđena je ovde demonstracija da se brojni različiti ON helatni kompleksi mogu kombinovati sa različitim polipeptidnim ili pegilovanim polipeptidnim lekovima u jednoj farmaceutskoj kompoziciji koja ne utiče na strukturu bilo ON ili polipeptida.
[0118] Ove kompozicije se mogu koristiti za administraciju i ON helatnog kompleksa i polipeptidnog(ih) leka(ova) subjektu kome je potrebna takva terapija istovremeno i sa jednim načinom administracije kako je prikazano u primeru VI ispod).
[0119] Dalje, gornje kompozicije mogu sadržati fiziološki i/ili farmaceutski prihvatljive nosače, adjuvanse, transportere i/ili ekscipijense. Karakteristike nosača mogu zavisiti od puta administracije. Izraz "farmaceutski prihvatljiv nosač, transporter i/ili ekscipijens" odnosi se na nosač, adjuvans, transporter ili ekscipijens koji se može administrirati subjektu, ugraditi u kompoziciju opisanu ovde i koji ne uništava njegovu farmakološku aktivnost. Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvansi, transporteri i ekscipijensi koji se mogu koristiti u ovde opisanim farmaceutskim kompozicijama uključuju, ali nisu ograničeni na, sledeće: jonski izmenjivači, alimina, aluminijum stearat, lecitin, samo-emulgujući sistemi za isporuku lekova (selfemulsifying drug delivery systems - "SEDDS" ), surfaktanti koji se koriste u farmaceutskim doznim oblicima kao što su Tween ili druge slične polimerne matrice za isporuku, serumski proteini kao što su humani serumski albumini, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimične gliceridne smeše zasićenih biljnih masnih kiselina, voda, soli ili elektroliti kao što su protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidna silika, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloza, poliakrilat, voskovi, polietilen-polioksipropilen-blok polimeri, polietilen glikol, vunena mast, natrijum kaprat ili tetradecilmaltozid (TDM) ili drugi derivati TDM drugih alkilovanih saharida. Ciklodekstrini kao što su α-, β- i γ-cidodekstrin, ili hemijski modifikovani derivati kao što su hidroksialkilciklodekstrini, uključujući 2- i 3-hidroksipropil-β-ciklodekstrine, ili drugi rastvoreni derivati mogu se takođe koristiti da poboljšaju isporuku kompozicija predmetnog pronalaska.
[0120] Kompozicije opisane ovde mogu da sadrže druga terapijske agense kao što je opisano ispod, i mogu se formulisati, na primer, upotrebom uobičajenih čvrstih ili tečnih transportera ili razblaživača, kao i farmaceutskih aditiva tipa pogodnog načinu željene administracije (na primer, ekscipijensi, vezivna sredstva, konzervansi, stabilizatori, arome, itd.) u skladu sa tehnikama kao što su one koje su dobro poznate u oblasti farmaceutske formulacije.
[0121] Kompozicije opisane ovde mogu biti administrirane na bilo koji pogodan način, na primer, oralno, kao što je u obliku tableta, kapsula, granula ili praška; sublingvalno; bukalno; parenteralno, kao što je subkutano, intravenski, intramuskularno, intratekalno ili injekcijom ili infuzionim tehnikama (npr., kao sterilni injaktabilni vodeni ili nevodeni rastvori ili suspenzije); inhalacijom; topikalno, kao što je u bliku kreme ili masti; ili rektalno, kao što je u obliku supozitorija ili klistira; u doznim jediničnim formulacijama koje sadrže netoksične, farmaceutski prihvatljive transportere ili razblaživače. Predmetne kompozicije mogu, na primer, biti administrirane u obliku pogodnom za trenutno oslobađanje ili produženo oslobađanje. Trenutno oslobađanje ili produženo oslobađanje može se postići upotrebom odgovarajućih farmaceutskih kompozicija, ili, naročito u slučaju produženog oslobađanja, upotrebom uređaja kao što su subkutani implantati ili osmotske pumpe. Prema tome, gornje kompozicije se mogu prilagoditi za administraciju bilo kojim od sledećih puteva: intraokularno, oralnom ingestijom, sublingvalno, enterički, inhalaciono, subkutanom injekcijom, intramuskularnom injekcijom, intraperitonealnom injekcijom, intratekalnom injekcijom ili infuzijom, intratrahealno, intravenskom injekcijom ili infuzijom, ili topikalno.
[0122] Kompozicije za oralnu administraciju koje su uzete kao primer uključuju suspenzije koje mogu da sadrže, na primer, mikrokristalnu celulozu za davanje mase, alginsku kiselinu ili natrijum alginat kao agens za suspendovanje, metilcelulozu kao pojačivač viskoznosti, i zaslađivače ili agense za aromu kao što su oni poznati u oblasti; i tablete sa trenutnim oslobađanjem koje mogu da sadrže, na primer, mikrokristalnu celulozu, skrob, magnezijum stearat i/ili laktozu i/ili druge ekscipijense, vezivna sredstva, ekstendere, sredstva za raspadanje, razblaživače i lubrikante kao što oni poznati u oblasti koji ne ometaju stabilnost oligonukleotidnog helata. Predmetne kompozicije se takođe mogu isporučiti kroz usnu šupljinu sublingvalnom i/ili bukalnom administracijom. Oblikovane tablete, komprimovane tablete ili tablete osušene zamrzavanjem su oblici koji su uzete kao primer koji se mogu koristiti. Kompozicije koje su uzete kao primer obuhvataju one koje formulišu predmetne kompozicije sa brzorastvarajućim razblaživačima kao što su manitol, laktoza, saharoza i/ili ciklodekstrini. Takve formulacije takođe mogu da uključe ekscipijense visoke molekulske mase kao što su celuloze (avicel) ili polietilen glikoli (PEG). Takve formulacije mogu takođe da uključe ekscipijens za pomoć mukozalnoj adheziji kao što je hidroksi propil celuloza (HPC), hidroksi propil metil celuloza (HPMC), natrijum karboksi metil celuloza (SCMC), kopolimer anhidrida maleinske kiseline (npr. gantrez), i agensi za kontrolu oslobađanje kao što je poliakrilni kopolimer (npr. Carbopol 934). Lubrikanti, glidanti, arome, agensi za bojenje i stabilizatori se takođe mogu dodati zbog lakše izrade i primene.
[0123] Efikasnu količinu jedinjenja koje je ovde opisan može da odredi prosečan stručnjak u oblasti, i uključuje dozne količine koje su uzete kao primer za odraslog čoveka od oko 0.1 do 50 mg/kg telesne mase aktivnog jedinjenja dnevno, što može biti administrirano u jednoj dozi ili u obliku pojedinačnih podeljenih doza, kao što je 1 do 5 puta dnevno ili od 1 do 7 doza nedeljno. Razumeće se da nivo specifične doze i učestalost doze za svaki određeni subjekat može biti različit i zavisiće od različitih faktora uključujući aktivnost određenog jedinjenja koje se koristi, metaboličku stabilnost i dužinu delovanja tog jedinjenja, vrstu, starost, telesnu masu, opšte zdravstveno stanje, pol i ishranu subjekta, način i vreme administracije, brzinu izlučivanja i klirens, kombinaciju lekova, i težinu određenog stanja. Poželjni subjekti za lečenje uključuju životinje, najpoželjnije vrste sisara kao što su ljudi, i domaće životinje, kao što su psi, mačake.
[0124] Ovde je takođe obezbeđen primer korisne antivirusne aktivnosti antivirusnog oligonukleotidnog helatnog kompleksa i antivirusnog polipeptida kada se koriste u kombinaciji za lečenje ljudskih pacijenata sa virusnom infekcijom.
[0125] Predmetna objava će se lakše razumeti upućivanjem na sledeće primere.
PRIMER I
Karakterizacija degenerisanih ON
[0126] Sl. 1A detaljno opisuje razdvajanje pomoću HPLC (upotrebom hidrofobne kolone) dva ON preparata koji se istovremeno zajedno injektiraju u kolonu. Prvi od njih naziva se interni standard i predstavlja 21 merni fosforotioat ON sa specifično definisanom sekvencom, drugi je REP 2006 (40merni degenerirani fosforotioat ON). Obe ove vrste se odvajaju u različite definisane pikove samo na osnovu njihovih fiziočkohemijskih svojstava (tj. veličine i hidrofobnosti); sekvenca nukleotida prisutna u svakom od ovih ON nema značajan uticaj na njihova fizičkohemijska svojstva i stoga nema uticaj na njihovo razdvajanje. Kao takav, interni standard eluira sa kolone kao čvrsto definisan pik sa manjim vremenom zadržavanja u poređenju sa REP 2006, samo zbog razlike u veličini ova dva ON polimera. Imajte na umu da su obodi sa obe strane REP 2006 pika usled nefunkcionalnih sekvenci tipičnih za proizvodnju dužih ON. Uprkos heterogenoj prirodi sekvenci REP 2006, on se razlaže kao slično dobro definisan pik pomoću HPLC kao 21 merna specifična sekvenca što ilustruje zajednička fizičkohemijska svojstva svih vrsta u preparatu REP 2006, iako postoji veoma veliki broj različitih prisutnih sekvenci. Nakon HPLC razdvajanja REP 2006 i 21-mernih pikova, oni mogu biti podvrgnuti masenoj spektroskopiji (MS) da bi se identifikovale vrste prisutne unutar ovih definisanih pikova (sl. 1B i 1C).
[0127] Na Sl. 1B, 21mer je razložen na pojedinačne vrste sa MW (molekulska masa) od 7402.6 Da, konzistentno sa ovim PS-ON koji ima definisanu sekvencu. Međutim, MS analiza za REP 2006 (sl. 1C) otkriva ekstremno velik broj vrsta prisutnih vrsta čiji maseni opseg ima skoro savršenu normalnu distribuciju, konzistentno sa njegovom kompletno degenerisanom prirodom. Ovaj maseni opseg ide od C40 (najmanja vrsta) do A40 (najveća vrsta) i prevalenca ovih vrsta je ekstremno mala sa brojem vrsta koji raste (intenzitet pika) kako se njihova masa približava centru masenog opsega. Ovo je zbog toga što će rastući veći broj različitih sekvenci rezultovati sličnom masom. Činjenica da sve različite ON vrste prisutne u REP 2006 imaju isto vreme zadržavanja na hidrofobnoj koloni tokom HPLC razdvajanja jasno pokazuje da će svi ON iste veličine i sa istim hemijskim modifikacijama (tj. fosforotioiracijom) imati veoma slična (ako ne identična) fizičkohemijska svojstva i kao takvi, mogu se smatrati funkcionalno sličnim u bilo kojoj primeni ili svojstvu koje nije zavisno od sekvence nukleotida prisutnih u posebnom ON molekulu. Prema tome, bilo koja formacija ON helatnog kompleksa opažena sa bilo kojim posebnim degenerisanim ON (npr. REP 2003, REP 2004, videti Tabelu 2), ne može biti zavisna od sekvence prisutnih ON i mora zavisiti od sačuvanih fizičkohemijskih svojstava bilo kog ON.
PRIMER II
Formiranje helatnih kompleksa sa antivirusnim ON-a
[0128] REP 2031, REP 2055, REP 2057 i REP 2139 su polimeri nukleinske kiseline (NAP) sa antivirusnom aktivnošću širokog spektra protiv HIV-a, HSV-a, citomegalovirusa, LCMV-a, HCV-a i drugih virusa sa ovojnicom (Bernstein i sar., 2008, Antimicrobial Agents Chemother.
52: 2727-2733; Cardin i sar., 2009, Virology J. 6: 214; Vaillant i sar., 2006, Antimicrobial Agents Chemother., 50: 1393-1401; Guzman i sar., 2007, Antiviral Therapy, 12: 1147-1156; Lee i sar., Virology, 372: 107-117; Matsumura i sar., 2009, Gastroenterology 137: 673-681). Sva ova jedinjenja su 40merni potpuno fosforotioirani ON sa 5'-3' sekvencama C40u slučaju REP 2031 (SEQ ID NO:1), (AC)20u slučaju REP 2055 (SEQ ID NO: 2), (AG)20u slučaju REP 2057 (SEQ ID NO: 3) i (2'OMeA - 2'OMe, 5'MeC)20u slučaju REP 2139 (SEQ ID NO: 18). Dok su REP 2031, REP 2055 i REP 2057 su DNK ON-i, REP 2139 je RNK ON pri čemu su sve riboze 2' O metil modifikovane a svi citozini su 5' metilovani.
[0129] Stvaranje helatnih kompleksa sa ovim antivirusnim ON je ispitano sa fluorescentnom polarizacijom korišćenjem 3' FITC obeleženih derivata ovih jedinjenja. Tokom ON sinteze, svaki ON je konjugovan sa fluorescein izotiocijanatom (FITC) na 3' kraju pomoću krutog 3 ugljeničnog veznika korišćenjem dobro uspostavljenih reagenasa i protokola sinteze. Ovi ON su odvojeni od sinteze i ostavljeni kao amonijumove soli. Svaki od ovih ON je pripremljen kao 0.5 mM osnovni rastvor u 1 mM TRIS (pH 7.2). Ovi osnovni rastvori su korišćeni za pripremu 3nM fluorescentnih ON rastvora u FP puferu (10mM TRIS, 80mM NaCl, 1mM EDTA, 10mM βmerkaptoetanola i 0.1% Tween®-20). EDTA je bila prisutna za uklanjanje bilo kakvih dvovalentnih metala prisutnih u rastvoru pre FP merenja. Svaki od ovih puferskih rastvora je takođe sadržao 80 mM NaCl za procenu formiranja ON kompleksa u prisustvu molarnog viška monovalentnih katjona. Svakom fluorescentnom ON u rastvoru dodane su hloridne soli dvovalentnog (2+) metala ACS stepena (kao što je opisano u tabeli 2). Stvaranje dimera ili ON helatnih kompleksa višeg reda praćeno je povećanjem fluorescentne polarizacije (kvantifikovano bezdimenzionalnom jedinicom "mP") tako da je povećano formiranje ON helatnih kompleksa rezultovalo većim promenama u masi (videti sliku 3). Rezultujuće sporije kretanje ovih ON helatnih kompleksa u rastvoru dovodi do povećane polarizacije emitovane fluorescencije (videti sliku 4). Rezultati ovih eksperimenata su predstavljeni u tabeli 2.
Tabela 2
[0130] U svakom slučaju, primećena su značajna povećanja fluorescentne polarizacije kod svih fluorescentno obeleženih ON u prisustvu kalcijuma i magnezijuma, što ukazuje na formiranje ON helatnih kompleksa sa ovim dvovalentnim metalnim katjonima. Ovi rezultati pokazuju sledeće:
● REP 2006, REP 2031, REP 2055, REP 2057 i REP 2139 formiraju dimere i komplekse višeg reda u prisustvu katijuma magnezijuma i kalcijuma. Očekuje se da se ovi kompleksi formiraju sa svim ostalim viševalentnim katjonima metala i sa bilo kojim ON (kao što je prikazano sa degenerisanim NAP REP 2006). Formacija ovih ON kompleksa uključuje interakciju ovih ON sa ovim dvovalentnim metalnim katjonima.
● Formacija ON kompleksa ne može biti usled hibridizacije između azotnih baza preko tradicionalnih Votson-Krik interakcija jer se REP 2031, REP 2055, REP 2057 i REP 2139 ne mogu samohibridizovati u eksperimentalnim uslovima.
● Formacija ovih ON kompleksa je stabilna i rastvorljiva u vodenom rastvoru i pošto izgleda da ovi kompleksi uključuju predmetni dvovalentni metal kao deo kompleksa koji se formira, ovi ON kompleksi imaju efekat heliranja predmetnog dvovalentnog metala iz rastvora u kome je formiran kompleks ON.
PRIMER III
Priprema kompozicija koje sadrže ON helatne komplekse i polipeptide
[0131] Priprema kompozicija koje sadrže ON helatne komplekse i polipeptid preduzeta je upotrebom pet različitih antivirusnih ON i četiri antivirusna polipeptida. Korišćeni ON bili su NAP za koje je ranije pokazano da imaju antivirusnu aktivnost širokog spektra u virusima sa ovojnicom, uključujući HBV, HCV, influenza, RSV, Ebola, HSV-1 i HSV-2. Ovi ON su REP 2006 (40merni degenerisan fosforotioiran NAP), REP 2055 (SEQ ID NO: 2), REP 2057 (SEQ ID NO: 3), REP 2139 (SEQ ID NO: 18) i REP 2148 (SEQ ID NO: 11). Ovi NAP su pripremljeni u standardnim uslovima sinteze u čvrstoj fazi u protočnom reaktoru i dodatno se izvršila izmena soli da bi se zamenili amonijumovi kontra-joni sa natrijumovim kontra-jonima tokom prečišćavanja. Teorijske molekulske mase slobodnih kiselina ovih ON su (12612 - 13092), 12612, 13413 i 14094 i 12893 Da redom. Korišćeni antivirusni polipeptidi su bili interferon α-2b, timozin α1, pegilovani interferon α-2a, i interferon λ1 (IL-29), za koje se pokazalo da imaju antivirusnu aktivnost (Yang i sar., 2008, Antiviral Res., 77: 136-141; Fried i sar., 2002, N. Engl. J. Med., 347: 975-982; Friborg i sar., 2013, Antimicrob. Agents Chemother. 57: 1312-1322). Svi ON su sintetizovani u skladu sa važećim standardima u oblasti sinteze oligonukleotida u čvrstoj fazi i pripremljeni su kao natrijumove soli pogodne za in vivo administraciju korišćenjem prihvaćenih postupaka i liofilizovani do <10% sadržaja vode pre skladištenja. REP 2006, REP 2055, REP 2057 i REP 2148 su bili neprečišćeni preparati koji su sadržavali manje količine nekompletnih proizvoda sinteze koji se normalno javljaju tokom sinteze u čvrstoj fazi. REP 2139 je pripremljen kao preparat veće čistoće gde je odsutna većina proizvoda nepotpune sinteze. REP 2006, REP 2057 i REP 2139 su unapred pripremljeni kao rastvori u fiziološkom rastvoru i prilagođeni na 25mg/ml tokom formiranja helata. REP 2055 je takođe prethodno pripremljen kao rastvor u fiziološkom rastvoru ali je podešen na 12.5 mg/ml tokom pripreme helata. Timozin α1 je sintetički amino terminalni acilovani peptid od 28 aminokiselina molekulske mase 3108 Da i dobijen je u komercijalnom preparatu (Zadaxin™) i pripremljen kao 1.6 mg/ml rastvor u vodi za injekciju. Interferon α-2b je proizveden u E. coli rekobinantnim DNK tehnikama i ima molekulsku masu od 19271 Da. Interferon α-2b je dobijen u komercijalnom preparatu (Intron A™) i pripremljen kao 1X10<7>IU/ml rastvor u vodi za injekciju koji je takođe sadržao 1 mg/ml humanog serumskog albumina (koji ima molekulsku masu oko 66500 Da). Pegilovani interferon α-2a je kovalentni konjugat interferona α-2a i jednog razgranatog lanca bis-monometoksi polietilen glikola sa ukupnom približnom molekulskom masom od 60000 Da. Pegilovani interferon α-2a je dobijen u komercijalnom preparatu (Pegasys™) razređenom u vodi za injekcije koja sadrži tragove količine benzil alkohola u koncentraciji od 360 ug/ml. Prečišćeni rekombinantni interferon λ1 (IL-29) dobijen je kao rastvor bez nosača od 0.5 mg/ml u fosfatnom puferovanom vodenom rastvoru soli iz Ebiosciences (San Dijego, SAD) i ima molekulsku masu od ∼20 kDa kako je utvrđeno gel elektroforezom.
[0132] Kalcijum hlorid je dobijen kao 100 mg ml USP preparat CaCl2· 2H2O u vodi za injekcije (Lifeshield ™ od Hospira). Magnezijum sulfat je dobijen kao 500 mg/ml USP preparat MgSO2• 7H2O u vodi za injekcije (Baxter) i razblažen na 100 mg/ml u fiziološkom rastvoru. Za pripremu ON helatnih kompleksa koji sadrže kalcijum, magnezijum ili kalcijum i magnezijum, ovi rastvori metalne soli su postepeno dodavani u ON rastvor uz stalno mešanje dok se nije postigao željeni odnos metalne soli prema ON. Za kalcijum helatne komplekse, u rastvoru dobijen je odnos od 30mg kalcijum hlorida na 100mg ON, izuzev za REP 2148 kalcijum helatni kompleks, koji je sadržavao 20mg kalcijum hlorida na 100mg ON. Za magnezijum helatne komplekse, u rastvoru dobijen je odnos 30mg magnezijum sulfata na 100 mg ON. Za mešane kalcijum / magnezijum helatne komplekse, u rastvoru dobijen je odnos 15mg kalcijum hlorida i 15 mg magnezijum sulfata na 100mg ON. Pokazalo se da ova metodologija rezultuje stvaranjem ON helatnih kompleksa (kao što je opisano u objavi američke prijave br. 2012/0046348). Na kraju ove procedure, ON helatni kompleks je bio bistri homogeni rastvor vrlo bledo žućkaste boje.
[0133] Kompozicije ON helatni kompleks / polipeptidni ili pegilirani polipeptidni su pripremljene laganim mešanjem rastvora ON helatnog kompleksa sa rastvorom polipeptida ili pegilovanog polipeptida u odnosu 1: 1 do krajnje zapremine od 1 ml.
PRIMER IV
Karakterizacija kompozicija koje sadrže ON helatne komplekse i polipeptide.
[0134] Da bi se potvrdio identitet ON-a i polipeptida ili pegilovanih polipeptida sadržanih u kompozicijama pripremljenim u Primeru III, oni su bili podvrgnuti analizi tečnom hromatografijom visokih performansi (HPLC) zatim elektrosprej jonizacionoj masenoj spektrometriji (ESI-MS). Zbog širokih varijacija u masi i hemikalijama ON i polipeptidnih ili pegilovanih polipeptidnih vrsta prisutnih u ovim kompozicijama, tri različite HPLC metodologije su korišćene za analizu:
[0135] Korišćena instrumentacija je bila LTQ-Orbitrap Discovery koja je radila u LTQ režimu skeniranja sa negativnim jonima za oligo metodu i u Orbitrap režimu skeniranja za velike mase pri rezoluciji od 7500 sa pozitivnim jonima za obe proteinske metode. Skrećenice: ACN = acetonitril, TFA = trifluorosirćetna kiselina, HFIPA = heksafluoroizopropanol, DIEA = N,N-diizopropiletilamin.
[0136] Rezultati ovih analiza mogu se naći na sl. 5-95. Svi HPLC hromatogrami se crtaju na osnovu podataka o ukupnoj jonskoj struji (total ion current - TIC) gde su vremena zadržavanja pika praćena identifikacijama mase iz narednih ESI-MS (osim za slike 39, 43, 47, 51,55, 77, 81, 91 i 95 gde je ovo je sprečeno prisustvom konjugata polietilen glikola u pegilovanom interferonu α-2a). Za slučajeve kompozicija koje sadrže ON helatne komplekse i timozin α1, oligo metoda je bila dovoljna da se istovremeno analiziraju obe vrste. Za ostale kompozicije koje sadrže proteine velike molekulske mase, ON analiza i polipeptidna analiza su sprovedeni na istom uzorku ali korišćenjem različite HPLC metodologije (kao što je naznačeno na sl.5-95).
[0137] LC-MS analiza sadržaja ON svih kompozicija pokazala je da ON prisutni u ovim kompozicijama odgovaraju očekivanoj čistoći: manje količine nepotpunih proizvoda sinteze ON primećene su u HPLC analizama primenom oligo metode za REP 2055 (sl. 5, 24, 4056, 68, 71, 74 i 78), REP 2057 (sl. 9, 27 i 44) i REP 2148 (sl.17, 33, 52 i 64) ali su izostali u slučaju REP 2139 (sl. 13 , 30, 48, 60, 82, 85, 88 i 92). U svim slučajevima, ESI-MS od vodećih (primarnih) pikova ON-a korelirali su gotovo savršeno sa očekivanim molekulskim masama REP 2055, REP 2057, REP 2139 i REP 2148. Za REP 2006, ESI-MS od vodećeg pika proizveo je široko raspoređeni pik u opsegu od 12612 - 13092 Da, u skladu sa njegovom degenrativnom prirodom (sl. 22 i 37).
[0138] Za analizu kompozicije koja sadrži interferon α-2b, HPLC hromatogrami koji su izvedeni korišćenjem proteinske metode 1 pokazali su velike, slabo razložene pikove u skladu sa prisustvom više od jednog polipeptida u ovim kompozicijama (sl. 7, 11, 15 i 19) ali vodeći pik razložen u dve različite masene vrste koje koreliraju gotovo tačno sa očekivanom molekulskom masom interferona α-2b i humanog albumina (sl.8, 12, 16 i 20).
[0139] Za kompozicije koje sadrže timozin α1, HPLC hromatogrami dobijeni oligo metodom 1 uspeli su da uhvate drugi istaknuti pik u istom razdvajanju sa mnogo manjim vremenom zadržavanja od (primarnog) ON pika (sl.21, 24, 27, 30, 33 , 68, 71, 82 i 85) zbog relativno male molekulske mase ovog polipeptida. U svim slučajevima, ESI-MS ovog sekundarnog pika bio je u korelaciji gotovo tačno sa očekivanom molekularnom masom timozina α1 (sl.23, 26, 29, 32, 35, 70, 73, 84 i 87).
[0140] Za kompozicije koje sadrže pegilovani interferon α-2a, LC-MS analiza je u velikoj meri komplikovana prisustvom pegilovanog konjugata, koji generiše brojne jonske vrste što veoma otežava ispravnu dekonvoluciju masenog spektra za bilo koji pegilovani polipeptid. Međutim, korišćenjem proteinske metode 2, HPLC podaci iz kompozicija koje sadrže pegilovani interferon α-2a pokazali su slične istaknute pikove koji su u skladu sa vremenima zadržavanja očekivanim za pegilovani polipeptid (sl. 38, 42, 46, 50, 54, 76, 80, 90 i 94). ESI-MS analiza ovih pikova u svim slučajevima je pokazala sličnu grupu signala povezanih sa pegilacijom iz m/z 600-100- i 1500 - 3600 u skladu sa prisustvom pegilovanog proteina (sl.39, 43, 47, 51, 55, 77, 81, 91 i 95).
[0141] Deo svih kompozicija oligonukleotidni helat - polipeptid pripremljenih u primeru III takođe je podvrgnut određivanju kalcijuma i ili magnezijuma pomoću optičke emisione spektrometrije sa indukovano spregntom plazmom (inductively coupled plasma optical emission spectroscopy - ICP-OES). Određivanje kalcijuma i magnezijuma za svaku analiziranu kompoziciju predstavljeni su u tabeli 3.
Tabela 3
[0142] Rezultati iz primera III i IV pokazuju sledeće:
1. Kompozicije koje sadrže ON helatne komplekse koji sadrže kalcijum, magnezijum ili mešani kalcijum/magnezijum i polipeptide ili pegilovane polipeptide mogu se pripremiti koji su pogodni za parenteralnu administraciju.
2. Ni ON ni polipeptid ni pegilovani polipeptid u dotičnim kompozicijama nisu podložni bilo kakvoj detektibilnoj hemijskoj promeni, o čemu svedoči gotovo savršena korelacija između posmatrane i teorijske molekulske mase za REP 2055, REP 2057, REP 2139, REP 2148, interferon α-2b, timozin α1 i interferon λ1.
3. U slučaju kompozicija koje sadrže pegilovani interferon α-2a, ON se ne menjaju, a polipeptidne promene (ako bilo koja postoji) nisu mogle da se detektuju.
[0143] Iz ovih rezultata, takođe se može zaključiti sledeće:
1. REP 2006 je potpuno degenerisani ON i kao takav je prototipski model za fizičkohemijska svojstva zajednička svim ON. Kao takav, bilo koji ON koji se može formulisati kao helatni kompleks bio bi kompatibilan sa ovim polipeptidima ili pegilovanim polipeptidima u rastvoru.
2. REP 2006, REP 2055, REP 2057 i REP 2148 su DNK dok REP 2139 je RNK. Prema tome, bilo koja RNK ili DNK ili RNK/DNK hidrid ON može se koristiti u pripremi kompozicija koje sadrže ON helatne komplekse i polipeptide.
3. REP 2006, REP 2055 i REP 2057 imaju nemodifikovane riboze dok REP 2139 ima svaku ribozu 2' O metilovanu. Zbog toga, će bilo koja 2' ribozna modifikacija biti kompatibilna sa pripremom kompozicija koje sadrže ON helatne komplekse i polipeptide.
4. REP 2139 i REP 2148 svaki sadrže citozin dalje modifikovan kao 5'metilcitozin. Kao takvi, ON koji sadrže modifikovane baze mogu se koristiti u pripremi kompozicija koje sadrže ON helatne komplekse i polipeptide ili pegilovane polipeptide.
5. Kompozicije koje sadrže ON helatni kompleks i polipeptid ili pegilovani polipeptid će biti kompatibilne sa bilo kojim farmaceutski prihvatljivim dvovalentnim katjonom metala kao što su kalcijum i / ili magnezijum..
6. Četiri polipeptida korišćena u pripremi kompozicija obuhvataju široko različite strukture: timozin α1 je mali sintetički polipeptid, interferon α-2b i interferon λ1 su veliki rekombinantni polipeptidi a pegilovani interferon α-2a je veliki rekombinantni peptid sa velikim, složenim pegilovanim konjugatom. Prema tome, kompozicije koje sadrže ON helatne komplekse i polipeptide mogu se uspešno pripremiti koristeći širok spektar polipeptida od malih sintetičkih polipeptida do velikih rekombinantnih polipeptida sa složenim konjugatima kao što je polietilen glikol. Verovatno je jedino ograničenje da dotični polipeptid bude rastvorljiv u vodenim rastvorima. Pored toga, upotreba BSA kao proteina-nosača u Intronu A (korišćenom kao izvor interferona α -2b) nije ometala stabilnost kompozicija pripremljenih sa ovom polipeptidnom formulacijom.
7. Kao što je gore opisano, pegilacija je dobro poznata u oblasti da bi se poboljšala podnošljivost i farmakokinetičko ponašanje polipeptida i brojni pegilovani polipeptidi se trenutno primenjuju kao odobreni lekovi (videti gore). Prema tome, demonstracija da ovde opisane kompozicije mogu dobro tolerisati prisustvo pegilovanog peptida i korisnost kombinovanja ON helatnog kompleksa i pegilovanog peptida za poboljšani antivirusni odgovor i kod humanih pacijenata (videti primer VI dole) pruža jasne poduke bilo kom stručnjaku iz ove oblasti da bilo koji polipeptid ovde predviđen kao deo opisanih kompozicija može takođe biti prisutan kao pegilovani polipeptid. Na primer, timozin α1 može biti pegilovan, interferon α-2b može biti pegilovan (pegilovana verzija interferona α-2b, Peg-intron™ je trenutno odobreni lek), i interferon λ1 može biti pegilovan (pegilovana verzija interferona λ1 je trenutno u kliničkom razvoju kao antivirusni agens).
PRIMER V
NAP inhibiraju tranzit HBsAg iz ćelija.
[0144] Pokazano je da hepatitis B površinski antigen (HBsAg) blokira mnoge aspekte imunološkog odgovora na HBV infekciju (Cheng i sar., J. Hepatology 43: 465-471; Moucari i sar., Hepatology 49: 1151-1157; Vanlandschoot i sar., J. Gen. Virol. 83: 1281-1289; Woltman i sar., PloS One 6: e15324; Wu i sar., Hepatology 49: 1132-1140 i Xu i sar., Mol. Immunology 46: 2640-2646). Prema tome, uklanjanje cirkulišućeg HBsAg može biti kritični faktor u omogućavanju obnavljanja imunokompetencije kod pacijenata sa hroničnom infekcijom hepatitisom B. Efikasan postupak uklanjanja HBsAg u cirkulaciji je sprečavanje stvaranja i ili oslobađanja SVP iz zaraženih ćelija (SVP su glavni nosilac HBsAg u krvi). Morfogeneza i unutarćelijski tranzit SVP mogu se modelovati in vitro u BHK-21 ćelijama ekspresijom malog oblika HBsAg proteina (sHBsAg) koji je oblik posebno obogaćen SVP-ima. Ovaj sistem modela smatra se surogat modelom za morfogenezu i tranzit HBV SVP kod humanih pacijenata (Patient i sar., J. Virology 81: 3842-3851). Zahvaljujući kritičnoj ulozi serumskog HBsAg u omogućavanju hroničnosti HBV infekcije, sposobnost jedinjenja da blokiraju stvaranje SVP ili njihov unutarćelijski tranzit u ovom modelu demonstrira njihovu antivirusnu aktivnost protiv HBV.
[0145] Razna jedinjenja NAP-a su testirana u BHK-21 ćelijama koje eksprimiraju sHBsAg uključujući potpuno degenerisane fosforotioirane NAP REP 2006 i REP 2107 (2107 takođe ima sve riboze sa 2'O metilnom modifikacijom), nefosforotioirane, potpuno 2' O metilovane degenerisane NAP ( REP 2086) kao i NAP koji se sastoje od poli AC sekvence: REP 2055 (SEQ ID NO: 2) i REP 2148 (SEQ ID NO: 11). Ovi NAP su uvedeni u BHK-21 ćelije elektroporacijom istovremeno sa šablonskom RNK za ekspresiju sHBsAg korišćenjem elektroporacije. Aktivnost u BHK sistemu modela je procenjena vizualizacijom lokacije proteina HBsAg unutar BHK-21 ćelija imunofluorescentnom mikroskopijom. Ocenjeno je da su jedinjenja aktivna ako je HBsAg ograničen na perinuklearni prostor i sprečen da pređe na periferiju ćelije (sekrecija). Aktivnost različitih jedinjenja NAP-a sumirana je u tabeli 4 ispod.
Tabela 4
[0146] Rezultati sa tretmanom sa sHBsAg koji eksprimiraju BHK-21 ćelije sa REP 2006 i REP 2107 demonstrira sposobnost NAP da blokiraju tranzit sHBsAg na način nezavisan od sekvence. Nedostatak aktivnosti sa REP 2086 demonstrira da je ova aktivnost strogo zavisna od prisustva fosforotioacije. Štaviše, ova sposobnost je zadržana u prisustvu 2' ribozne modifikacije (u REP 2107) i modifikacije baze (5'metilcitozin u slučaju REP 2148). Pored toga, poznato je da su REP 2107, REP 2055 i REP 2139 potpuno lišeni bilo kakve imunostimulacione aktivnosti i bili su uporedivo aktivni u odnosu na REP 2006. Takođe definisana sekvenca poli AC (REP 2055 i REP 2148) bila je uporedivo aktivna sa degenerisanom sekvencom (REP 2006 i REP 2107)
[0147] Ovi rezultati pokazuju da u kontekstu degenerisane sekvence i sekvenci koje sadrže ponavljanja AC (a samim tim takođe CA) i drugih sekvenci koje takođe sadrže ponavljanja alternativnih purinskih/pirimidinskih nukleotida (kao što su TG i GT ili UG i GU) i koje sadrže 2' ribozne modifikacije ili modifikacije baze ili koje sadrže i 2' ribozne modifikacije i modifikacije baze (videti REP 2139 u primeru VI), očekuje se da fosforotioirani NAP mogu da blokiraju formiranje i unutarćelijski tranzit i sekreciju SVP iz zaraženih ćelija pri dužinama oligonukleotida od 20 - 120 nukleotida kao što je opisano u američkim patentima 8,008,269, 8,008,270 i 8,067,385.
PRIMER VI
Kombinovana terapija za lečenje hroničnog hepatitisa B kod ljudskih pacijenata
[0148] REP 2055 je jednostavna natrijumova so fosforotioiranog ON (SED ID NO: 2). REP 2139-Ca je kalcijum helatni kompleks fosforotioatnog oligonukleotida REP 2139 (SEQ ID NO: 18) pripremljen u normalnom fiziološkom rastvoru korišćenjem odnosa 30mg CaCl2za svakih 100mg prisutnog oligonukleotida. REP 2055 i REP 2139 su NAP a ova familija jedinjenja su antivirusna jedinjenja širokog spektra efikasna protiv virusa sa ovojnicom (Bernstein i sar., 2008, Antimicrobial Agents and Chemoterapy, 52: 2727-2733; Cardin i sar., 2009, Virology Journal, 6: 214; Guzman i sar., 2007, Antiviral Terapy, 12: 1147-1156; Lee i sar., 2008, Virology, 372: 107-117; Matsumura i sar., 2009, Gastroenterology, 137: 673-681; Vaillant i sar., 2006, Antimicrobial Agents and Chemoterapy, 50: 1393-1401 i američki patenti 8,008,269B, 8,008,270 i 8,067,385). Helatni kompleksi ne utiču na bioaktivnost NAP-a ili drugih ON vrsta i prema tome formulacija REP 2139 kao kalcijum helatnog kompleksa nema efekta na njegovu antivirusnu aktivnost. Jedina potrebna a NAP modifikacij za antivirusnu aktivnost je fosforotioacija svake veze u ON. Dodatne modifikacije uključujući 2' ribozne modifikacije (kao što je 2' O metilacija) i modifikacije baze (kao što su 5' metilcitozin i 4' tiouracil) negativno utiču na antivirusnu aktivnost NAP-a ali se mogu koristiti za optimizaciju podnošljivosti kod ljudi.
[0149] Pegilovani interferon α-2a prodaje se pod zaštitnim znakom Pegasys™ od strane Roche Inc. (Bazel, Švajcarska) i odobren je za lečenje hronične HBV infekcije. Timozin α1 prodaje se pod zaštitnim znakom Zadaxin™ od strane SciClone Pharmaceuticals (Foster Siti, Kalifornija, S.A.D.) a takođe je odobren za lečenje hronične HBV infekcije u mnogim azijskim zemljama.
[0150] Da bi ispitali da li bi antivirusni efekat lečenja sa NAP u kombinaciji sa imunoterapijom (stimulacija adaptivnog i urođenog imunog odgovora) mogao da poboljša antivirusni odgovor kod pacijenata sa hroničnom HBV infekcijom, pacijenti su bili podvrgnuti monoterapiji sa REP 2055 i kombinovanoj terapiji sa REP 2139-Ca i ili timozinom α1 (Zadaxin™ - datim kao subkutana injekcija od 1.6 mg dva puta nedeljno) ili pegilovanim interferonom α-2a (Pegasys™ -datim kao subkutana injekcija od 180µg jednom nedeljno) u njihov tekući režim sa NAP.
[0151] I REP 2055 i REP 2139-Ca, kada se koriste u monoterapiji podjednako su aktivni u blokiranju oslobađanja HBsAg što je terapijski mehanizam delovanja svih NAP protiv HBV infekcije uopšte. REP 2055 i REP 2139-Ca kada se daju u uporedivim režimima monoterapije, postižu klirens serumskog HBsAg pacijenata inficiranih sa HBV kod 7/8 i 9/12 pacijenata redom a klirens serumskog HBsAg je uporediv sa oba leka (videti tabelu 5). ), što pokazuje uporedivu antivirusnu aktivnost ovih NAP kada se daju kao natrijumove soli ili kao helatni kompleksi.
Tabela 5
REP 2055 i REP 2139-Ca efikasno i uporedivo čist serumski HBsAg kod pacijenata sa
REP 2055 i REP 2139-Ca efikasno i uporedivo čist serumski HBsAg kod pacijenata sa
[0152] Lečenje zasnovano na interferonu obično dovodi do toga da 25% pacijenata postigne kontrolu nad HBV infekcijom nakon prekida lečenja (serumska HBV DNK <500 kopija / ml; Mourcari i sar., 2009, Hepatology 49: 1151-1157) a za lečenje timozinom α1 se uglavnom smatra da ima uporediv efekat (Yang i sar., 2008 Antiviral Research 77: 136-141).
[0153] Monoterapija sa REP 2055 dovodi do postizanja kontrole HBV infekcije (serumska HBV DNK < 500 kopija / ml) nakon prekida lečenja kod 3/7 pacijenata (43%). Lečenje sa REP 2139-Ca, koji ima identičan efekat kao REP 2055 u klirensu serumskog HBsAg, kada se daje u monoterapiji) u kombinaciji sa ili timozinom α1 ili pegilovanim interferonom α-2a doveo je do uspostavljanja virološke kontrole kod 8/9 pacijenata (89% ) sa HBV infekcijom (videti tabelu 6).
Tabela 6
Postizanje održivog virološkog odgovora (SVR) sa NAP monoterapijom ili kombinovanom
Postizanje održivog virološkog odgovora (SVR) sa NAP monoterapijom ili kombinovanom
[0154] Ovi rezultati demonstriraju da kombinovani efekat antivirusnog ON helatnog kompleksa (u ovom primeru REP 2139-Ca) i antivirusnog polipeptida (u ovom primeru pegilovanog interferona α-2a ili timozina α1) može dovesti do poboljšanja kontrole van lečenja HBV infekcija kod ljudskih pacijenata i dalje demonstrira korisnost kombinovanog lečenja sa ON helatnim kompleksom i polipeptidom ili pegilovanim polipeptidom kod pacijenta sa virusnom infekcijom.
[0155] Kompozicije koje sadrže antivirusni ON helatni kompleks i antivirusni polipeptid bile bi poželjne jer bi poboljšale ukupni antivirusni odgovor kod pacijenata sa virusnom infekcijom (uključujući HBV infekciju) obezbeđujući istovremeno oba agensa (čija je korisnost stavljena na uvid javnosti u sadašnjem primeru).
[0156] Antivirusni ON helat u gore opisanoj kompoziciji može uključivati bilo koji antivirusni ON kao što je opisano gore a u slučaju HBV može posebno uključivati REP 2055 (SEQ ID NO: 2, REP 2139 (SEQ ID NO: 18), REP 2148 (SEQ ID NO: 11) ili bilo koje drugo NAP jedinjenje koje blokira prolazak HBsAg kao što je opisano gore.
[0157] Polipeptid u gore opisanoj kompoziciji sastavu može uključivati bilo koji antivirusni polipeptid ili pegilovani antivirusni polipeptid a u slučaju HBV može posebno uključivati interferon α-2b, pegilovani interferon α-2b, pegilovani interferon α-2a, timozin α1, interferon λ1 ili pegilovani interferon λ1.
[0158] Sličan blagotvorni efekat kod gore opisanih kombinovanih tretmana mogao bi se ostvariti ne samo kod HBV infekcija ali takođe i kod drugih virusnih infekcija kao što je hepatitis C, influenca, RSV, i drugi virusi koji mogu odgovoriti na efekat antivirusnog ON ili antivirusnog polipeptida ili pegilovanog polipeptida. Iako su NAP korišćeni u predmetnom primeru, takva poboljšanja u antivirusnim ishodima kod ljudskih pacijenata mogu se postići uz delovanje drugih antivirusnih ON mehanizmima zavisnim od sekvence formulisanim kao helatni kompleksi u kombinaciji sa antivirusnim polipeptidima ili pegilovanim polipeptidima. Ovi efekti bi takođe bili šire efikasni kod drugih virusnih infekcija sa pravom kombinacijom antivirusnog oligonukleotidnog helatnog kompleksa i antivirusnog polipeptida. Na primer, NAP su široko aktivni protiv mnogih drugih virusa sa ovojnicom kao što je hepatitis C, gripa, respiratorni sincicijski virusa i itomegalovirus i samim tim i NAP helatni kompleksi, u kombinaciji sa odgovarajućim antivirusnim polipeptidom (koji može biti timozin α1 ili pegilovani interferon α-2a ali takođe može biti drugi antivirusni polipeptid koji je pogodniji za određenu virusnu infekciju) očekuje se da proizvede mnogo bolji antivirusni odgovor kod zaraženog subjekta nego sa bilo kojim jedinjenjem u monoterapiji. U drugom slučaju, helatni kompleks miravirsena (SEQ ID NO: 7) mogao bi se kombinovati sa interferonom (pegilovanim ili ne) da bi se poboljšao antivirusni odgovor kod pacijenata sa infekcijom hepatitisom C.
[0159] Očekuje se takođe da se blagotvorni efekti demonstrirani sa NAP helatnim kompleksima i timozinom α1 ili pegilovanim interferonom α-2a javljaju sa ON helatnim kompleksima drugih klasa oligonukleotida kao što su antisens ili siRNK ili miRNK ili aptamerni ON razvijeni protiv određene virusne infekcije ili imunostimulacionih oligonukleotida. Prema tome, očekuje se da se postupak kombinovanja ON helatnog kompleksa izvedenog iz bilo koje od ovih ON klasa sa odgovarajućim antivirusnim polipeptidom terapijski primenjuje u širokom spektru virusnih infekcija koje su demonstrirale odgovore na antivirusni oligonukleotid (bilo kao natrijumovu so ili helatni kompleks) ili antivirusni polipeptid ili pegilovani polipeptid u monoterapiji.
[0160] S obzirom na primere iznad, sada bi se moglo predvideti da se dva ili više antivirusnih ON helatnih kompleksa (npr. koji sadrže NAP i antisens ON ili koji sadrže NAP i antivirusnu siRNK) mogu kombinovati sa jednim ili više antivirusnih polipeptida ili pegilovanih polipeptida (npr. pegilovani interferon α-2a i timozin α 1 ili timozin α 1 i pegilovani interferon λ1), bilo u istoj formulaciji ili u više formulacija koje se administriraju istim ili različitim načinima.
[0161] U primeru iznad, REP 2139-Ca je administriran intravenskom infuzijom a pegilovani interferon α-2a ili timozin α1 su administrirani subkutano. Na osnovu učenja iz gornjeg primera, stručnjak u oblasti sada će biti u stanju da lako predvidi da se ON helatni kompleks i polipeptid mogu davati istovremeno u istoj formulaciji (kao što su one stavljene na uvid javnosti u primerima 3 i 4 iznad) bilo subkutanom injekcijom ili intravenskom infuzijom i predviđa se da će imati isti blagotvorni efekat kao kada se bilo koji agens administrira odvojeno (bilo istim ili različitim načinima administracije).
[0162] Blagotvorni efekti kombinovanog lečenja kako je ovde opisano sa ON helatnim kompleksom i antivirusnim polipeptidom ili pegilovanim polipeptidom u antivirusnom okruženju kako je ovde opisano jasno predviđaju slične blagotvorne efekte kombinovanog lečenja sa ON helatima i polipeptidima ili pegilovanim polipeptidima u terapijskim okruženjima gde ovi agensi imaju određenu meru aktivnosti u monoterapiji. Na primer, antisens ON koji cilja gen uključen u kancer (koji prema tome ima antikancerogenu aktivnost), mogao bi se formulisati kao ON helatni kompleks kako je ovde opisano i dalje kombinovati sa imunoterapijskim agensom za koji je poznato da ima neku meru antikancerogene aktivnosti kada se normalno koristi u monoterapiji. Takva terapijska okruženja mogu uključivati kancer, multiplu sklerozu i Alchajmerovu bolest.
LISTA SEKVENCI
[0163]
<110> REPLICOR INC.
<120> KOMPOZICIJE OLIGONUKLEOTIDNI HELATNI KOMPLEKS-POLIPEPTID I POSTUPCI
<130> 05016051-37PCT
<150> US 61/695035
<151> 2012-08-30
<150> US 61/648711
<151> 2012-05-18
<160> 18
<170> FastSEQ za verziju Windows-a 4.0
<210> 1
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> REP 2031, potpuno fosforotioiran
<400> 1
cccccccccc cccccccccc cccccccccc cccccccccc 40
<210> 2
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> REP 2055, potpuno fosforotioiran
<400> 2
acacacacac acacacacac acacacacac acacacacac 40
<210> 3
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> REP 2057, potpuno fosforotioiran
<400> 3
agagagagag agagagagag agagagagag agagagagag 40
<210> 4
<211> 40
<212> RNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> potpuno fosforotioiran, potpuno 2' O metilriboza, svaki citozin 5' metilovan <400> 4
cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca 40
<210> 5
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> REP 2056, potpuno fosforotioiran
<400> 5
tctctctctc tctctctctc tctctctctc tctctctctc 40
<210> 6
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> REP 2133, potpuno fosforotioiran
<400> 6
tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 40
<211> 16
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> miRNK, LNK/DNK, potpuno fosforotioirana <220>
<221> razn_svojstvo
<222> 3, 6, 9, 12, 15
<223> LNK
<220>
<221> modifikovana_baza
<222> 12, 15
<223> m5c
<400> 7
ccattgtcac actcca 16
<210> 8
<211> 22
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> siRNK
<220>
<221> razn_svojstvo
<222> 20, 21
<223> deoksitimidin
<220>
<221> razn_svojstvo
<222> 1-18
<223> ribonukleotid
ggcuccuuag caaagucaag tt 22
<210> 9
<211> 21
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> siRNK
<220>
<221> razn_svojstvo
<222> 19, 20
<223> deoksitimidin
<220>
<221> razn_svojstvo
<222> 1-18
<223> ribonukleotid
<400> 9
cuugacuuug cuaagagcct t 21
<210> 10
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> potpun fosforotioat
<400> 10
cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca 40 <210> 11
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<223> REP 2148, potpun fosforotioat, C = 5' metilcitidin <400> 11
acacacacac acacacacac acacacacac acacacacac 40 <210> 12
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> potpun fosforotioat, C = 5' metilcitidin
<400> 12
cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca 40 <210> 13
<211> 40
<212> RNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> potpun fosforotioat, potpuno 2' O metil riboza <400> 13
acacacacac acacacacac acacacacac acacacacac 40 <210> 14
<211> 40
<212> RNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> potpun fosforotioat, potpuno 2' O metil riboza <400> 14
cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca 40 <210> 15
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> potpun fosforotioat
<400> 15
gagagagaga gagagagaga gagagagaga gagagagaga 40
<210> 16
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> potpun fosforotioat
<400> 16
ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct 40
<210> 17
<211> 40
<212> DNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> potpun fosforotioat
<400> 17
gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 40
<210> 18
<211> 40
<212> RNK
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> REP 2139, potpun fosforotioat, potpuno 2' O metil riboza, C = 5' metilcitidin <400> 18
acacacacac acacacacac acacacacac acacacacac 40

Claims (9)

Patentni zahtevi
1. Farmaceutska formulacija koja sadrži antivirusni oligonukleotidni (ON) helatni kompleks, koji se sastoji od dva ili više ON povezana intermolekularno dvovalentnim katjonom, pri čemu su dva ili više antivirusnih ON fosforotioirani, jednolančani polimeri nukleinske kiseline (NAP) odabrani od SEQ ID NO: 18 ili SEQ ID NO: 11, i najmanje jednog polipeptida odabranog iz grupe koja se sastoji od pegilovanog interferona α-2a i sintetičkog timozina α1,
i pri čemu je farmaceutska kompozicija formulisana za subkutanu administraciju ili za intravensku infuziju.
2. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 1, pri čemu navedeni dvovalentni metalni katjon je zemnoalkalni metal, prelazni metal, metal lantanida ili postprelazni metal sa 2+ naelektrisanjem.
3. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu navedeni dvovalentni metalni katjon je kalcijum, magnezijum, gvožđe (2+), mangan, bakar ili cink.
4. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, koja dalje sadrži jedan ili više od sledećih: entekavir, tenofovir dizoproksil fumarat, telbuvidin, adefovir dipivoksil, lamivudin, ribavirin, telaprevir, boceprevir, GS-7977, tegobuvir, zanamivir, oseltamivir, ganciklovir, foskarnet, aciklovir, zidovudin, abakavir, lopinavir, ritonavir ili efavirenz.
5. Farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, koja dalje sadrži nosač.
6. Farmaceutska kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 1 koja sadrži
a) ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 18, i pegilovanog interferona α-2a,
b) ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 11, i pegilovanog interferona α-2a,
c) ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 18, i sintetičkog timozina α1, ili
d) ON helatni kompleks koji sadrži oligonukleotid koji se sastoji od SEQ ID NO: 11, i sintetičkog timozina α1.
7. Farmaceutska kompozicija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6 za primenu u terapiji.
8. Farmaceutska kompozicija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6 za primenu u postupku lečenja virusne infekcije.
9. Farmaceutska kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 1, pri čemu su dva ili više antivirusna ON fosforotioirani, jednolančani polimeri nukleinske kiseline (NAP) sa SEQ ID NO: 18, a najmanje jedan polipeptid odabran iz grupe koja se sastoji od pegilovanog interferona α-2a i sintetičkog timozina α1, za primenu u postupku lečenja hepatitisa B.
RS20210674A 2012-05-18 2013-05-17 Kompozicije oligonukleotidni helatni kompleks-polipeptid i postupci RS62030B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261648711P 2012-05-18 2012-05-18
US201261695035P 2012-08-30 2012-08-30
EP13791618.5A EP2849798B1 (en) 2012-05-18 2013-05-17 Oligonucleotide chelate complex-polypeptide compositions and methods
PCT/CA2013/050379 WO2013170386A1 (en) 2012-05-18 2013-05-17 Oligonucleotide chelate complex-polypeptide compositions and methods

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62030B1 true RS62030B1 (sr) 2021-07-30

Family

ID=49581470

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210674A RS62030B1 (sr) 2012-05-18 2013-05-17 Kompozicije oligonukleotidni helatni kompleks-polipeptid i postupci

Country Status (34)

Country Link
US (1) US9492506B2 (sr)
EP (1) EP2849798B1 (sr)
JP (1) JP2015517504A (sr)
KR (1) KR102068109B1 (sr)
CN (1) CN104349793B (sr)
AU (1) AU2013262416B2 (sr)
BR (1) BR112014028654A2 (sr)
CA (1) CA2873529C (sr)
CL (1) CL2014003134A1 (sr)
CO (1) CO7131387A2 (sr)
CR (1) CR20140527A (sr)
CY (1) CY1124345T1 (sr)
DK (1) DK2849798T3 (sr)
DO (1) DOP2014000264A (sr)
EA (1) EA035967B1 (sr)
EC (1) ECSP14027694A (sr)
ES (1) ES2873844T3 (sr)
HR (1) HRP20210840T1 (sr)
HU (1) HUE054875T2 (sr)
IL (1) IL235548B (sr)
LT (1) LT2849798T (sr)
MX (1) MX346239B (sr)
MY (1) MY168778A (sr)
NZ (1) NZ703095A (sr)
PH (1) PH12014502551B1 (sr)
PL (1) PL2849798T3 (sr)
PT (1) PT2849798T (sr)
RS (1) RS62030B1 (sr)
SG (1) SG11201407599SA (sr)
SI (1) SI2849798T1 (sr)
SM (1) SMT202100319T1 (sr)
TW (1) TWI635864B (sr)
WO (1) WO2013170386A1 (sr)
ZA (1) ZA201408674B (sr)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7943591B2 (en) 2007-05-11 2011-05-17 Adynxx, Inc. Gene expression and pain
PT2846839T (pt) 2012-05-10 2019-05-29 Adynxx Inc Formulações para a administração de ingredientes ativos
SG11201501255PA (en) * 2012-08-30 2015-03-30 Replicor Inc Methods for the treatment of hepatitis b and hepatitis d infections
CN106659730A (zh) 2014-07-10 2017-05-10 里普利科股份有限公司 治疗b型肝炎和d型肝炎病毒感染的方法
RU2017108238A (ru) 2014-08-15 2018-09-17 Эйдинкс, Инк. Олигонуклеотиды-приманки для лечения боли
PE20211783A1 (es) * 2018-11-08 2021-09-08 Aligos Therapeutics Inc Polimeros oligonucleotidos que inhiben el transporte de antigenos y metodos
US11166976B2 (en) 2018-11-08 2021-11-09 Aligos Therapeutics, Inc. S-antigen transport inhibiting oligonucleotide polymers and methods
EP4728073A1 (en) * 2023-06-16 2026-04-22 Ractigen Therapeutics Oligonucleotide formulation

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2769114B2 (ja) * 1993-10-29 1998-06-25 サイクローン・ファーマシューティカルズ ミニマルｂ型肝炎感染症治療用医薬組成物
UA78726C2 (en) * 2001-11-01 2007-04-25 Sciclone Pharmaceuticals Inc Pharmaceutical composition of thymosin alpha 1 conjugated with polyethylene glycol, method for production, and method for treatment
BR0314236A (pt) * 2002-09-13 2005-08-09 Replicor Inc Formulação de oligonucleotìdeo, composição farmacêutica, kit, composto antiviral, preparação de oligonucleotìdeo e métodos para seleção de um oligonucleotìdeo antiviral para uso como um agente antiviral, para profilaxia ou tratamento de uma infecção viral em um paciente, para tratamento profilático de câncer causado por oncovìrus, para identificação de um composto que altera a ligação de um oligonucleotìdeo a pelo menos um componente viral, para purificação da ligação de oligonucleotìdeos a pelo menos um componente viral e para enriquecimento de oligonucleotìdeos a partir de um agrupamento de oligonucleotìdeos
CA2516552A1 (en) * 2003-02-26 2004-09-10 Intermune, Inc. Polyethylene glycol modified interferon compositions and methods of use thereof
JP2007509950A (ja) * 2003-10-27 2007-04-19 バーテックス　ファーマシューティカルズ　インコーポレイテッド Ｈｃｖ処置の組合せ剤
CA2584207A1 (en) * 2004-10-19 2006-04-27 Replicor, Inc. Antiviral oligonucleotides
WO2007022642A2 (en) * 2005-08-25 2007-03-01 Replicor Inc. Anti-inflammatory molecules and their uses
EP1928498A4 (en) * 2005-09-29 2009-11-11 Cell Biosciences Inc S METHOD FOR THE TREATMENT OF T-CELL DISORDERS WITH TISF
US20090215873A1 (en) 2005-09-29 2009-08-27 Andrew Vaillant Therapeutic Molecules and their Uses
GB0715383D0 (en) * 2007-08-08 2007-09-19 Asterion Ltd Interferon
WO2009065181A1 (en) * 2007-11-21 2009-05-28 Apollo Life Sciences Limited Nanostructures suitable for delivery of agents
NZ585784A (en) * 2007-12-13 2012-09-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc siRNAs for the treatment and prevention of respiratory syncytial virus (RSV) infection
CA2717792A1 (en) * 2008-03-07 2009-09-11 Santaris Pharma A/S Pharmaceutical compositions for treatment of microrna related diseases
KR101704988B1 (ko) * 2009-05-28 2017-02-08 큐알엔에이, 인크. 항바이러스 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 항바이러스 유전자 관련된 질환의 치료
BR112012008865A2 (pt) * 2009-10-16 2019-09-24 Glaxo Group Ltd inibidores de hbv anti-sentido.
BR112013003875B1 (pt) 2010-08-20 2021-10-05 Replicor Inc Composições farmacêuticas compreendendo complexo de quelato de oligonucleotídeo, formulação de oligonucleotídeo, e usos
SG11201501255PA (en) 2012-08-30 2015-03-30 Replicor Inc Methods for the treatment of hepatitis b and hepatitis d infections

Also Published As

Publication number Publication date
AU2013262416B2 (en) 2017-05-11
EA035967B1 (ru) 2020-09-07
HUE054875T2 (hu) 2021-10-28
HRP20210840T1 (hr) 2021-08-06
CA2873529A1 (en) 2013-11-21
KR20150013309A (ko) 2015-02-04
EP2849798B1 (en) 2021-04-07
DK2849798T3 (da) 2021-05-31
ZA201408674B (en) 2016-01-27
PH12014502551B1 (en) 2019-10-11
CN104349793B (zh) 2017-11-10
US20130309201A1 (en) 2013-11-21
MY168778A (en) 2018-12-04
IL235548A0 (en) 2015-01-29
MX2014014021A (es) 2015-02-10
LT2849798T (lt) 2021-08-10
TW201408308A (zh) 2014-03-01
CA2873529C (en) 2020-08-18
MX346239B (es) 2017-03-13
WO2013170386A1 (en) 2013-11-21
EP2849798A1 (en) 2015-03-25
TWI635864B (zh) 2018-09-21
SG11201407599SA (en) 2014-12-30
EA201401278A1 (ru) 2015-04-30
BR112014028654A2 (pt) 2017-10-10
CR20140527A (es) 2014-12-15
EP2849798A4 (en) 2016-03-09
CN104349793A (zh) 2015-02-11
IL235548B (en) 2019-07-31
JP2015517504A (ja) 2015-06-22
PL2849798T3 (pl) 2021-10-18
CY1124345T1 (el) 2022-07-22
ECSP14027694A (es) 2015-12-31
DOP2014000264A (es) 2015-01-31
US9492506B2 (en) 2016-11-15
PH12014502551A1 (en) 2015-01-21
SMT202100319T1 (it) 2021-09-14
CL2014003134A1 (es) 2015-02-13
ES2873844T3 (es) 2021-11-04
PT2849798T (pt) 2021-05-18
KR102068109B1 (ko) 2020-01-21
SI2849798T1 (sl) 2021-08-31
AU2013262416A1 (en) 2014-12-18
HK1204279A1 (en) 2015-11-13
CO7131387A2 (es) 2014-12-01
NZ703095A (en) 2016-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230210887A1 (en) Nucleic acid molecules for reduction of papd5 or papd7 mrna for treating hepatitis b infection
RS62030B1 (sr) Kompozicije oligonukleotidni helatni kompleks-polipeptid i postupci
US20190062749A1 (en) Sirna, pharmaceutical composition and conjugate which contain sirna, and uses thereof
TWI881004B (zh) 用於治療ｈｂｖ之靶向ｈｂｖ的治療性寡核苷酸及ｔｌｒ７促效劑之醫藥組合
CN113171371B (zh) 一种抑制乙型肝炎病毒基因表达的rna抑制剂及其应用
WO2012021985A1 (en) Oligonucleotide chelate complexes
RS59914B1 (sr) Metode sa oligonukleotidnim helatnim kompleksom
CN116367841A (zh) 用于治疗病毒性疾病的含有核苷的siRNA
TW202329987A (zh) 用於抑制乙型肝炎病毒（hbv）蛋白表達的組合物和方法
KR20240101580A (ko) Hbv 치료를 위한 약학 조합물
HK1204279B (en) Oligonucleotide chelate complex-polypeptide compositions and methods
RU2780021C2 (ru) Способы лечения инфекции гепатита в
WO2025087290A1 (zh) 一种药物组合物及其用途
CN119662639A (zh) 抑制乙型肝炎病毒基因表达的siRNA、其缀合物和药物组合物及用途
HK40106696A (zh) 治疗乙型肝炎感染的方法
CN114767704A (zh) 一种能够靶向乙型肝炎病毒的药物构造及药物组合物
HK40032229B (zh) 治疗乙型肝炎感染的方法
HK40032229A (en) Methods for treating hepatitis b infection
HK40004694B (zh) 用於减少papd5或papd7 mrna治疗乙型肝炎感染的核酸分子
HK40004694A (en) Nucleic acid molecules for reduction of papd5 or papd7 mrna for treating hepatitis b infection