RS62041B1 - Antagonisti cgrp receptora - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na neka nova jedinjenja kao antagoniste receptora kalcitonin gen povezanog peptida (CGRP), na farmaceutske kompozicije koje uključuju jedinjenja, na jedinjenja za upotrebu u prevenciji ili lečenju nekih fizioloških poremećaja kao što je migrena i na međuproizvode i procese korisne u sintezi jedinjenja.

[0002] Ovaj pronalazak je iz oblasti prevencije i tretmana migrene i drugih neuroloških bolesti i poremećaja za koje se smatra da je posrednik CGRP (videti na primer, S. Benemei, i saradnici, Current Opinion in Pharmacology, 9, 9-14 (2009)). Migrena je iscrpljujuća bolest od koje pate milioni ljudi širom sveta. Mogućnosti tretmana migrene uključuju triptane, kao što su sumatriptan i zolmitriptan. Nažalost, savremena odobrena sredstva dostupna pacijentu ne omogućavaju uvek efikasan tretman, a ova sredstva mogu da budu povezana sa različitim neželjenim efektima kao što su vrtoglavica, parestezija i nelagodnost u grudima. Pored toga, triptani dovede do nekih kardiovaskularnih problema zbog kojih postaju kontraindikovani kod pacijenata koji boluju od potvrđene kardiovaskularne bolesti ili nekontrolisane hipertenzije (videti T.W. Ho, i saradnici, The Lancet, 372, 2115-2123 (2008)). Prema tome, postoji značajna nezadovoljena potreba za prevenciju i tretman migrene. Antagonisti CGRP receptora treba da obezbede efikasniji tretman za ili prevenciju nekih neuroloških bolesti, kao što je migrena.

[0003] United States Patent broj 6,680,387 otkriva neke 5-benzil- ili 5-benziliden-tiazolidin-2,4-dione za tretman dijabetes melitusa tip II, ateroskleroze, hiperholesterolemije i hiperlipidemije. WO 2012/129013 A1 otkriva piperidinon karboksamid spirohidantoin derivate koji su antagonisti CGRP receptora.

[0004] Ovaj pronalazak obezbeđuje neka nova jedinjenja koja su antagonisti DGRP receptora. Osim toga, ovaj pronalazak obezbeđuje neka nova jedinjenja koja su antagonisti CGRP receptora i imaju potencijal za poboljšani profil neželjenih dejstava u tretmanu ili prevenciji migrene.

[0005] U skladu sa tim, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule II:

gde

Y je CH ili N;

Z je CH ili N;

pod uslovom da kada je Y = CH, Z je N i kada je Y = N, Z je CH;

X je CH ili N; i

R je C1-C3 alkil, C3-C5 cikloalkil, ili CN,

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenje Formule I:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0006] Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule I ili Formule II, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji. Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje Formule I ili Formule II, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu migrene. Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule I ili Formule II, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u prevenciji migrene. Osim toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule I ili Formule II, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u antagonizovanju CGRP receptora kod pacijenta. Čak šta više, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja Formule I ili Formule II, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, za proizvodnju medikamenta za tretman migrene ili za prevenciju migrene.

[0007] Pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje Formule I ili Formule II, ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. Pronalazak dalje obezbeđuje proces za izradu farmaceutske kompozicije, uključujući mešanje jedinjenja Formule I ili Formule II, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. Ovaj pronalazak takođe obuhvata nove međuproizvode i procese za sintezu jedinjenja Formule I i Formule II..

[0008] Kako se ovde koristi, naziv "C1-C3 alkil" se odnosi na metil, etil, propil i izopropil grupu.

[0009] Kako se ovde koristi, naziv "C3-C5 cikloalkil" se odnosi na ciklopropil, ciklobutil i ciklopentil grupu.

[0010] Kako se ovde koristi, nazivi "lečenje", "tretman" ili "lečiti" uključuju obuzdavanje, usporavanje, zaustavljanje ili preobražaj progresije ili ozbiljnosti postojećih simptoma ili poremećaja.

[0011] Kako se ovde koristi, naziv "prevencija" ili "sprečavanje" se odnosi na zaštitu pacijenta koji je podložan nekoj bolesti ili poremećaju, kao što je migrena, ali kod koga trenutno ne postoje simptomi bolesti ili poremećaja, kao što su simptomi migrene.

[0012] Kako se ovde koristi, naziv "pacijent" se odnosi na sisare, posebno na ljude.

[0013] Kako se ovde koristi, naziv "efektivna količina" se odnosi na količinu ili dozu jedinjenja iz pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koja, nakon primene jedne ili više doza na pacijentu, obezbeđuje željeni efekat kod pacijenta kod koga postoji dijagnoza ili tretman.

[0014] Ordinirajući dijagnostičar, kao stručnjak sa iskustvom u praksi, može lako da odredi efektivnu količinu koristeći poznate tehnike i razmatranjem rezultata dobijenih pod analognim okolnostima. U određivanju efektivne količne za pacijenta, ordinirajući dijagnostičar razmatra brojne faktore, uključujući ali bez ograničenja na: vrstu pacijenta, njegovu veličinu, godine i opšte zdravstveno stanje; postojeće specifične bolesti ili poremećaje; stepen zahvaćenosti ili težine bolesti ili premećaja; odgovor pojedinačnog pacijenta; primenu određenog jedinjenja; način primene; karakteristike bioraspoloživosti primenjenog preparata; izabrani režim doziranja; upotrebu pridružene medikacije; i druge relevantne okolnosti.

[0015] Jedinjenja iz ovog pronalaska su generalno efikasna u velikom opsegu doza. Na primer, doziranje po danu je normalno u opsegu od pribliižno 0.01 to približno 20 mg/kg telesne težine. U nekim slučajevima, vrednosti doze ispod donje granice prethodno navedenog opsega mogu da budu više nego adekvatne, dok u drugim slučajevima mogu da se primene čak veće doze uz prihvatljive neželjene efekte, pa stoga prethodni opseg doza ne treba da ograniči okvir pronalaska na bilo koji način.

[0016] Jedinjenja iz ovog pronalaska su preferirano formulisana kao farmaceutske kompozicije za primenu bilo kojim načinom koji omogućava bioraspoloživost jedinjenja, uključujući oralni i transdermalni način. Najpoželjnije, ovakve kompozicije su za oralnu primenu. Ovakve farmaceutske kompozicije i procesi za njihovu izradu su dobro poznati u tehnici. (Videti, na primer, Remington: The Science and Practice of Pharmacy; D.B. Troy, Editor, 21st Edition, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006).

[0017] Jedinjenja Formule I i Formule II, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, su posebno korisna za upotrebu u postupcima prevencije i tretmana iz pronalaska, ali neke grupe, supstituenti i konfiguracije imaju prednost. Niže dati paragrafi opisuju ovakve preferirane grupe, supstituente i konfiguracije. Mada ovaj pronalazak razmatra sve pojedinačne enantiomere i diastereomere, kao i smeše enantiomera ovih jedinjenja, uključujući racemate, posebno su preferirana jedinjenja sa apsolutnom konfiguracijom kako je niže dato. Jasno je da su ove preference primenljive i na nova jedinjenja iz pronalaska i na terapeutsku i profilaktičku upotrebu pronalaska.

[0018] Jedinjenja Formule III:

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli su preferirana.

[0019] Jedinjenja Formule IV:

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli su dalje preferirana. Pored toga, prednost imaju jedinjenja ili soli Formula I, II, III i IV u kojima je X = CH. Dalje imaju prednost jedinjenja ili soli Formula I, II, III i IV u kojima je Y = CH a Z je N. Jedinjenja ili soli Formula I, II, III i IV u kojima je R C1-C3 alkil grupa su dalje preferirana a posebno su preferirana jedinjenja u kojima je R metil grupa.

[0020] Naredna jedinjenja su posebno preferirana:

i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

[0021] Naredno jedinjenje je posebno preferirano:

i njegove farmaceutski prihvatljive soli, posebno je preferirana odgovarajuća slobodna baza a posebno je preferiran kristalni anhidrat odgovarajuće slobodne baze koji se karakteriše bitnim pikom u spektru difrakcije X-zraka pri uglu difrakcije 2-teta od 13.4°, u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 14.4°, 18.1°, 19.4°, 20.9°, 21.2°, 21.5° i 26.5°, uz toleranciju za uglove difrakcije od 0.2 stepena.

[0022] Posebno preferirano jedinjenje je N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid metansulfonat. Posebno je preferiran kristalni N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid metansulfonat koji se karakteriše bitnim pikom u spektru difrakcije X-zraka pri uglu difrakcije 2-teta od 18.8° u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 23.2°, 24.7° i 15.2°; uz toleranciju za uglove difrakcije od 0.2 stepena.

[0023] Pored toga, neki međuproizvodi opisani u narednim izaradama mogu da sadrže jednu ili više zaštitnih grupa azota. Jasno je da po proceni stručnjaka sa iskustvom u tehnici, zaštitne grupe mogu da se razlikuju u zavisnosti od uslova određene reakcije i određenih transformacija koje se izvode. Uslovi zaštite i deprotekcije su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom i opisani su u literaturi (videti na primer "Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis", Fourth Edition, by Peter G.M. Wuts and Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc.2007).

[0024] Stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici može da odvoji ili razdvoji pojedinačne izomere, enantiomere i diastereomere u bilo kojoj pogodnoj tački procesa sinteze jedinjenja iz pronalaska, postupcima kao što su tehnike selektivne kristalizacije ili asimetrična hromatografija (videti, na primer, J. Jacques i saradnici, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981 i E.L. Eliel and S.H. Wilen," Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-Interscience, 1994).

[0025] Farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja iz pronalaska, kao što je hidrohloridna so, može da se formira, na primer, reakcijom odgovarajuće slobodne baze jedinjenja iz pronalaska, odgovarajuće farmaceutski prihvatljive kiseline, kao što je hlorovodonična kiselina u pogodnom rastvaraču, kao što je dietil etar pod standardnim uslovima dobro poznatim u tehnici. Pored toga, formiranje ovakvih soli može da se izvede neposredno nakon deprotekcije zaštitne grupe azota. Formiranje ovakvih soli je dobro poznato i prihvaćeno u tehnici. Videti, na primer, Gould, P.L., "Salt selection for basic drugs," International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); Bastin, R.J. i saradnici "Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities," Organic Process Research and Development, 4: 427-435 (2000); i Berge, S.M. i saradnici, "Pharmaceutical Salts,"Journal of Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19, (1977).

[0026] Neke skraćenice su definisane na sledeći način: "ACN" se odnosi na acetonitril;

"BOP" se odnosi na (benaotriazol-1-iloksi)tris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat; "c-Bu" se odnosi na ciklobutil; "c-Pr" se odnosi na ciklopropil; "DCM" se odnosi na DCM ili metilen hlorid; "DMEA" se odnosi na N.N-dimetiletilamin; "DIPEA" se odnosi na N,N-diizopropiletilamin; "DMF" se odnosi na N,N-dimetilformamid; "DMSO" se odnosi na dimetilsulfoksid; "EDCl" se odnosi na 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid; "Et" se odnosi na etil; "Et2O" se odnosi na dietil etar; "EtOAc" se odnosi na etil acetat; "EtOH" se odnosi na etanol; "HOAT" se odnosi na 1-hidroksi-7-azabenzotriazol; "HATU" se odnosi na N-[(dimetilamino)-1H-1,2,3-triazolo-[4,5-b]piridin-1-ilmetilen]-N-metilmetanaminijum heksafluorofosfat N-oksid; "HPLC" se odnosi na visoko efikasnu tečnu hromatografiju;

"HOBt" se odnosi na hidroksibenzotriazol; "h" se odnosi na sat ili sate; "HTRF" se odnosi na homogenu vremenski razloženu fluorescentna tehnologija; "IC50" se odnosi na koncentraciju sredstva koja produkuje 50% maksimalnog inhibitornog odgovora mogućeg za to sredstvo; "i-Pr" se odnosi na izopropil; "kPa" se odnosi na kilopaskal ili kilopaskale; "kV" se odnosi na kilovolte; "LAH" se odnosi na litijum aluminijum hidrid; "LC-ES/MS" se odnosi na tečnu hromatografiju elektrosprej masenu spektrometriju; "LDA" se odnosi na litijum diizopropilamid; "mA" se odnosi na miliamp ili milliampere; "min" se odnosi na minut ili minute; "Me" se odnosi na metil; "MeOH" se odnosi na metanol ili metil alkohol; "MTBE" se odnosi na metil-terc-butil etar; "n-BuLi" se odnosi na n-butillitijum; "psi" se odnosi na funte po kvadratnom inču; "opm" se odnosi na obrtaje po minutu; "RT" se odnosi na sobnu temperaturu; "SEM" se odnosi na standardnu grešku srednje vrednosti; "SFC" se odnosi na superkritičnu tečnu hromatografiju; "T3P" se odnosi na rastvor 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosforinan-2,4,6-trioksid; "t-BuOH" se odnosi na terc-butanol; "TEA" se odnosi na trietilamin; "THF" se odnosi na tetrahidrofuran; "tR" se odnosi na vreme zadržavanja; "U/mL" se odnosi na jedinice po mililitru.

[0027] Stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici će da razume da se svaki od naziva "mesilat" i "metansulfonska kiselina" odnosi na jedinjenje sledeće strukture:

[0028] Jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njihove soli, mogu da se izrade različitim procedurama poznatim stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici, od kojih su neke ilustrovane u niže datim Šemama, Izradama i Primerima. Stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici prepoznaje da specifične faze sinteze za svaki od opisanih puteva mogu da se kombinuju na različite načine, ili u konjukciji sa fazama iz različitih šema, za izradu jedinjenja iz pronalaska ili njihovih soli. Produkti svake faze u niže datim šemama mogu da se povrate uobičajenim postupcima dobro poznatim u tehnici, uključujući ekstrakciju, evaporaciju, precipitaciju, hromatografiju, filtraciju, trituraciju i kristalizaciju. U niže datim šemama, svi supstituenti, ukoliko nije drugačije navedeno, su kako je prethodno definisano. Reagensi i početni materijali su lako raspoloživi stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici. Niže date šeme, izrade, primeri i analize dalje ilustruju pronalazak.

Šema 1

[0029] U Šemi 1, faza A, približno 1.1 ekvivalent dimetil 2-metilpropandioata se kombinuje sa približno 1 equivalentom metil 4-{(1S)-1-[(metilsulfonil)oksi]etil}benzoata u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je DMF, u inertnoj atmosferi, kao što je azot. Rastvor se ohladi na približno 0°C i približno 1.3 ekvivalenata pogodne neorganske baze, koja je relativno rastvorljiva u polarnim organskim rastvaračima, kao što je Cs2CO3, se uz mešanje dodaje na približno 0°C u toku 1 h. Reakcija se nakon toga postepeno zagreje na RT i produkt se izdvoji i prečisti koristeći standardne tehnike dobro poznate u praksi, kao što su postupci ekstrakcije a zatim hromatografijom. Na primer, reaktivna smeša se tretira sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što je DCM i zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata uz mešanje. Slojevi se razdvoje, vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM i organski slojevi se kombinuju, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt faze A. Sirovi produkt može nakon toga da se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa smešom pogodnih organskih rastvarača, kao što je heksani/etil acetat, da se dobije prečišćeni dimetil {(1R)-1-[4-(metoksikarbonil)fenil]etil}(metil)propandioat faze A.

[0030] U Šemi 1, faza B, dimetil {(1R)-1-[4-(metoksikarbonil)fenil]etil}(metil)propandioat se kombinuje sa pogodnim organskim rastvaračem za vlaženje kao što je dimetilsulfoksid:voda (približno 43 mL:1 mL) u atmosferi azota na RT i uz mešanje se doda približno 1.3 ekvivalenata natrijum hlorida. Reakcija se nakon toga zagreva na približno 190 °C u toku približno 50 min i reakcija se nakon toga održava približno 3.5 h na približno 190 °C.

Reakcija se nakon toga ohladi na RT i produkt se izdvoji i prečisti koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografije. Na primer, reakcija se razblaži sa vodom i ekstrahuje sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što je dietil etar. Kombinovani organski ekstrakti se nakon toga isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt faze B. Ovaj sirovi produkt može nakon toga da se prečisti flash hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa smešom pogodnih organskih rastvarača, kao što je heksani/etil acetat, da se dobije prečišćeni metil 4-[(2S)-4-metoksi-3-metil-4-oksobutan-2-il]benzoat kao smeša diastereomera.

[0031] U Šemi 1, faza C, rastvor od približno 1.1 ekvivalenta pogodne organske baze u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je litijum diizopropilamid (LDA) u heksanu, se ohladi na približno -75°C u inertnoj atmosferi, kao što je azot. Rastvor metil 4-[(2S)-4-metoksi-3-metil-4-oksobutan-2-il]benzoata izrađen u fazi B u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran, se u u toku približno 40 min u kapima dodaje u rastvor LDA. Reaktivna smeša se nakon toga meša približno 75 min na približno -75°C. U reaktivnu smešu se u toku približno 12 min u kapima doda rastvor od približno 1.5 ekvivalenta bromoacetonitrila u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je THF. Reaktivna smeša se nakon toga ostavi da se polako zagreje na RT i meša približno 12 h. Produkt se nakon toga izdvoji i prečisti koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografije. Na primer, reakcija se neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum

1

hlorida i reakcija se ekstrahuje sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što je etil acetat. Kombinovani organski ekstrakti se nakon toga isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt faze C. Sirovi produkt se nakon toga prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa smešom pogodnih organskih rastvarača, kao što je heksani/etil acetat, da se dobije metil 4-[(2R)-3-(cijanometil)-4-metoksi-3-metil-4-oksobutan-2-il]benzoat kao smeša diastereomera.

[0032] U Šemi 1, faza D, čist metil 4-[(2R)-3-(cijanometil)-4-metoksi-3-metil-4-oksobutan-2-il]benzoat izrađen u fazi C se ohladi u kupatilu led/voda i u kapima u toku približno 20 min tretira sa približno 10 ekvivalenata koncentrovane sumporne kiseline. Hladno kupatilo se nakon toga ukloni i reakcija se meša približno 3 h na RT. Reaktivna smeša se nakon toga ohladi u kupatilu led/voda, neutrališe sa ledenom vodom i sirovi međuproizvod amid se izdvoji koristeći standardne tehnike ekstrakcije. Na primer, neutralisana reakcija se ekstrahuje sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što je DCM, kombinovani organski ekstrakti se isperu sa vodom, suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi međuproizvod amid. Sirovi međuproizvod se nakon toga rastvori u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran i vodi, tretira sa približno 2.5 ekvivalenta neorganske baze, kao što je natrijum karbonat i zagreva približno 5 h na približno 50 °C. Reaktivna smeša se nakon toga ohladi u kupatilu led/voda, zakiseli do približno pH ~2 sa 5 N vodenim rastvorom HCl i ekstrahuje sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što je etil acetat. Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt faze D. Sirovi produkt može nakon toga da se prečisti standardnim tehnikama dobro poznatim u praksi, kao što je flash hromatografija na silika gelu, uz eluiranje sa pogodnim organskim eluentom, kao što je heksani/etil acetat, da se dobije prečišćeni produkt faze D, metil 4-((1R)-1-[(3S)- 3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoat, kao glavni diastereomer.

[0033] U Šemi 1, faza E, približno 3 ekvivalenta pogodne baze, kao što je litijum hidroksid monohidrat se doda u rastvor metil 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoata u smeši pogodnog organskog rastvarača, kao što je tetrahidrofuran i vode. Reaktivna smeša se nakon toga meša približno 16 h na približno RT i nakon toga zakiseli do približno pH ~2 sa pogodnom kiselinom, kao što je 1 N vodeni rastvor HCl. Organski rastvarač može nakon toga da se ukloni pod vakuumom i čvrsta supstanca sakupi filtriranjem i suši pod vakuumom na približno 45 °C da se dobije produkt faze E, 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoeva kiselina, koja može da se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.

[0034] U Šemi 1, faza F, produkt faze E, 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoeva kiselina se udvoji sa 1-(2,6-dimetilpiridin-4-il)metamin dihidrohloridom koristeći standardne postupke sintetičke amidacije dobro poznate u tehnici. Na primer, produkt faze E može da se kombinuje sa približno 1.2 ekvivalenta 1-(2,6-dimetilpiridin-4-il)metamin dihidrohlorida (Šema 3, faza B), približno 1.2 ekvivalenta EDCl i približno 1.2 ekvivalenta HOBt u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je N,N-dimetilformamid.

Približno 4 ekvivalenta pogodne ne-nukleofilne organske baze, kao što je trietilamin se nakon toga doda uz mešanje na RT. Reaktivna smeša se nakon toga meša približno 16 h i produkt može nakon toga da se izdvoji i prečisti koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografije. Na primer, tada može u reaktivnu smešu da se doda voda koja se nakon toga ekstrahuje sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što je DCM. Organski ekstrakti se kombinuju, suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt faze F. Sirovi produkt može nakon toga da se prečisti flash hromatografijom na silika gelu sa pogodnim eluentom, kao što je DCM/metanol gradijent, da se dobije prečišćeni produkt faze F, N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid.

[0035] Alternativno, u Šemi 1, faza F, produkt faze E može da se kombinuje sa približno 1.05 ekvivalenata 1-(2,6- dimetilpiridin-4-il)metamin dihidrohlorida (Šema 3, faza B) u pogodnom organskom rastvaraču kao što je DMF. Reaktivna smeša može da se tretira sa približno 6 ekvivalenata DIPEA, nakon toga sa sredstvom za udvajanje kao što je BOP, uz mešanje 1-2 h na približno RT i produkt može da se izdvoji koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografije. Na primer, u reaktivnu smešu tada može da se doda voda koja se nakon toga zakiseli do pH -7do -8 sa pogodnom kiselinom, kao što je 5 N HCl i ekstrahuje sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što je MTBE. Organski ekstrakti se kombinuju, suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju, koncentruju pod sniženim pritiskom a sirovi produkt može da se prečisti hromatografijom na silika gelu sa pogodnim eluentom, kao što je gradijent metanol/etil acetat u heksanima, da se dobije prečišćeni produkt faze F, N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid.

Šema 2

[0036] U Šemi 2, faza A, asimetrična arilacija izopropil (E)-but-2-enoata može da se izvede pod uslovima udvajanja koristeći katalizator tranzicionog metala kao što je rodijum sa visokom enantioselektivnošću. Rodijum katališe produkciju izo-propil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoata. Na primer, približno 1.05-1.1 ekvivalenta 4-bromofenil borne kiseline može da se tretira sa približno 0.01 ekvivalenta rodijum katalizatora, preciznije, bis(norbornadien)rodijum(I) tetrafluoroborata, a zatim se doda odgovarajući asimetrični ligand kao što je 0.01-0.015 ekvivalenata (R)-(+)-2,2’-bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftila, približno 1 equivalent TEA i približno 1 ekvivalent izopropil (E)-but-2-enoata u smeši odgovarajućih rastvarača kao što su vlažni 1,4-dioksan ili THF i vode (približno 8:1).

Dobijena reaktivna smeša može da se zagreva približno 18 h na približno 40 °C. Produkt može nakon toga da se izdvoji i prečisti koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografije. Na primer, reaktivna smeša može da se razblaži sa vodom i ekstrahuje sa odgovarajućim nepolarnim organskim rastvaračem kao što su MTBE ili DCM. Organski ekstrakti mogu da se kombinuju, suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt faze A. Sirovi

1

produkt može nakon toga da se prečisti flash hromatografijom na silika gelu sa pogodnim eluentom, kao što je gradijent heksani/EtOAc, da se dobije prečišćeni produkt faze A, izopropil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoat u velikom enantiomernom višku.

[0037] U Šemi 2, faza B, hidroliza produkta iz Šeme 2, faza A, može da se izvede pod uslovima saponifikacije dobro poznatim u tehnici. Na primer, (3S)-3-(4-bromofenil)butanoatna kiselina može da se rastvori u odgovarajućem alkoholnom rastvaraču kao što je MeOH i tretira sa vodenim rastvorom mineralne baze kao što je NaOH u višku. Nakon približno 1 h zagrevanja, produkt može nakon toga da se izdvoji i prečisti koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što su postupci ekstrakcije, trituracije i evaporacije. Na primer, reaktivna smeša može da se ekstrahuje sa odgovarajućim organskim rastvaračem kao što je DCM i dobijeni izdvojeni vodeni sloj može da se tretira sa mineralnom kiselinom u višku, kao što je conc. HCl do pH ~ 4. Zakiseljeni vodeni sloj može zatim da se ekstrahuje sa odgovarajućim organskim rastvaračem kao što je DCM. Organski ekstrakti mogu da se kombinuju, suše preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt faze B. Sirovi produkt može da se triturira sa nepolarnim organskim rastvaračem kao što su heptani, dobijeni precipitati mogu da se izdvoje filtriranjem i filtrat može da se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije produkt faze B, (3S)-3-(4-bromofenil)butanoatna kiselina, u veoma velikom enantiomernom višku.

[0038] U Šemi 2, faza C, esterifikacija Produkta iz Šeme 2, faza B, može da se izvede različitim postupcima kiselo/bazne esterifikacije dobro poznatim u tehnici, ili direktnom esterifikacijom sa diazometanom. Na primer, (3S)-3-(4-bromofenil)butanoatna kiselina rastvorena u odgovarajućem alkoholnom rastvaraču kao što je MeOH može da se tretira sa mineralnom kiselinom u višku, kao što je conc. H2SO4. Dobijena smeša može da se zagreva približno 2 h i produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se koncentruje pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak može da se podeli između vode i pogodnog organskog rastvarača kao što je MTBE. Organski ekstrakti mogu da se kombinuju, isperu sa vodom, suše preko anhidrovanog magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt faze C, metil (3S)- 3-(4-bromofenil)butanoat, pogodan za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.

[0039] U Šemi 2, faza D, alkilacija Produkta iz Šeme 2, faza C, može da se postigne koristeći različite uslove alkilacije dobro poznate u literaturi. Na primer, metilacija metil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoata može da se izvede tretmanom sa približno 1.5-1.75 ekvivalenata nenukleofilne baze kao što je n-butillitijum rastvoren u odgovarajućem rastvaraču kao što je anhidrovani THF, na niskoj temperaturi a zatim neutralizacijom dobijenog anjona sa približno 1.5-1.6 ekvivalenata metil jodida. Produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se podeli između vode i odgovarajućeg organskog rastvarača kao što je MTBE. Kombinovani organski ekstrakti mogu po redu da se isperu sa vodom, zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt faze D, (3S, 2R/S)-metil 3-(4- bromofenil)-2-metilbutanoat, kao smeša diastereomera pogodna za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.

[0040] U Šemi 2, faza E, produkt iz Šeme 2, faza D, (3S, 2R/S)-metil 3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoat kao smeša diastereomera, može da se tretira sa približno 1 ekvivalentom jake organske baze kao što je n-butillitijum, u odgovarajućem organskom rastvaraču kao što je anhidrovani THF, na niskoj temperaturi. Dobijena smeša može zatim da se tretira sa rastvorom približno 0.9 ekvivalenata terc-butil 2-bromoacetata. Produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se podeli između vode i odgovarajućeg organskog rastvarača kao što je MTBE a kombinovani organski ekstrakti mogu po redu da se isperu sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Organski ekstrakti mogu da se suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt faze E, 4-(terc-butil) 1-metil (S/R)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinat, kao smeša diastereomera pogodna za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.

[0041] U Šemi 2, faza F, smeša diastereomernih estara iz Produkta Šeme 2, faza E, može da se hidrolizuje pod uslovima dobro poznatim u stanju tehnike. Na primer, 4-(terc-butil) 1-metil (S/R)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinat može da se rastvori u odgovarajućem organskom rastvaraču kao što je DCM i tretira sa viškom ili organskom kiselinom kao što je TFA. Dobijena smeša može da se meša približno 18 h na RT i produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se po redu ispere sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl, organski ekstrakti mogu da se suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt faze F, (3S/R,4R)-4-(4-bromofenil)-3-(metoksi- karbonil)-3-metilpentanoatna kiselina, kao smeša diastereomera pogodna za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.

[0042] U Šemi 2, faza G, smeša diastomera iz Šeme 2, faza F, (3S/R,4R)-4-(4-bromofenil)- 3-(metoksikarbonil)-3-metilpentanoatna kiselina, može da se rastvori u odgovarajućem

1

polarnom organskom rastvaraču kao što je anhidrovani DMF i po redu tretira sa nenukleofilnom bazom kao što je približno 3 ekvivalenta TEA ili DIPEA, približno 1.2 ekvivalenta reagensa za udvajanje amida kao što je HATU i u višku rastvorom metanolnog amonijuma. Dobijena smeša može da se meša približno 2-12 h na RT i produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se podeli između vode i odgovarajućeg organskog rastvarača kao što je DCM, slojevi mogu da se razdvoje a kombinovani organski ekstrakti se po redu isperu sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Ekstrakti mogu nakon toga da se suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt faze G, metil (2S/R)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoat, kao smeša diastereomera pogodna za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.

[0043] U Šemi 2, faza H, smeša diastereomernog produkta iz Šeme 2, faza G može da se ciklizuje zagrevanjem u prisustvu ne-nukleofilne baze a nakon toga razdvajanjem diastereomera pod uslovima asimetrične hromatografije. Na primer, metil (2S/R)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoat može da se rastvori u smeši THF/voda (približno 1:1), tretira sa približno 2.5 ekvivalenata ne-neukleofilne baze kao što je natrijum karbonat i dobijena smeša može da se zagreva približno 2 h na približno 60 °C. Produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što je ekstrakcija, a nakon toga razdvajanjem diastereomera pod uslovima asimetrične hromatografije. Na primer, reaktivna smeša se ekstrahuje sa EtOAc, kombinovani organski ekstrakti se suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirova smeša diastereomera. Diastereomeri mogu da se razdvoje asimetričnom SFC tehnologijom, koristeći izokratični sistem rastvarača EtOH koji sadrži malu količinu ne-nukleofilnog amina, kao što je N,N-dietilmetilamin/CO2(približno 1:9) da se dobiju razdvojeni produkti faze H, (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion i (3R)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion.

[0044] U Šemi 2, faza I, produkt faze H može da se karboniluje amidacijom in situ pod uslovima dobro opisanim u tehnici. Na primer, (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metilpirolidin-2,5-dion, približno 1.2 equivalenta (2,6-dimetil-4-piridil)metanamindihidrohlorida (Šema 3, faza B), približno 0.033 ekvivalenta tranziciono metalnog reagensa kao što je paladijum(II) acetat, približno 0.064 ekvivalenta pogodnog ligand reagensa kao što je 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten i približno 3.5 ekvivalenta ne-nukleofilne baze kao što je DIPEA može da se suspenduje u ne-polarnom organskom rastvaraču kao što je toluen u

1

zatvorenoj reaktivnoj posudi pod pritiskom od približno 60 psi u atmosferi ugljen monoksida. Dobijena smeša može da se zagreva približno 12-18 h na 100 °C, nakon toga ohladi na RT, filtrira preko ploče diatomejske zemlje i koncentruje pod sniženim pritiskom. Produkt može zatim da se izdvoji koristeći tehnike dobro poznate u praksi, kao što su precipitacija i filtracija. Na primer, sirovi ostatak dobijen nakon uparavanja rastvarača može da se razblaži sa vodom i odgovarajućim organskim rastvaračem kao što je DCM (1:1 smeša) i dobijena čvrsta supstanca može da se sakupi filtriranjem i triturira sa dietil etrom da se dobije produkt faze I, N-[(2,6- dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid.

Šema 3

[0045] U Šemi 3, faza A, približno 1.0-1.2 ekvivalenta Zn(CN)2može da se doda u rastvor 4-bromo-2,6-dimetilpiridina u pogodnom polarnom organskom rastvaraču kao što je DMF koji sadrži približno 5-10 mol% pogodnog kompleksa tranzicionog metalnog katalizatora/ligand, kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0). Nakon približno 5-18 h zagrevanja, reaktivna smeša može da se ohladi na RT i produkt može da se izdvoji i prečisti koristeći standardne tehnike dobro poznate u praksi, kao što su postupci ekstrakcije a nakon toga uparavanje rastvarača ili hromatografija. Na primer, reaktivna smeša se tretira sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što je EtOAc i vodenim rastvorom NH4OH uz mešanje. Slojevi se razdvoje, vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc i organski slojevi se kombinuju, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt faze A. Sirovi produkt može nakon toga da se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa smešom pogodnih organskih rastvarača, kao što je heksani/etil acetat, da se dobije produkt, 4-cijano-2,6-dimetilpiridin, faze A. Alternativno, sirova reaktivna smeša može da se razblaži sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što je MTBE, a nakona toga baznim vodenim rastvorom (pH ~10), kao što je 30% NH4OH, slojevi se razdvoje, vodena faza se dodatno ekstrahuje sa MTBE a kombinovani organski ekstrakti se isperu sa 10% NH4OH,

1

suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt faze A, 4-cijano-2,6-dimetilpiridin, pogodan za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.

[0046] U Šemi 3, faza B, produkt 4-cijano-2,6-dimetilpiridin faze A može da se redukuje različitim posutpcima dobro poznatim u tehnici, kao što je hemijska redukcija hidrida sa redukcionim sredstvom kao što su LiBH4ili NaBH4ili hidrogenacijom sa tranzicionim metalom kao što je Pd(OH)2ili Pd na ugljeniku. Pored toga, hidrogenacija može da se izvede u prisustvu mineralne kiseline u vodi ili u pogodnom organskom rastvaraču, kao što su THF ili DMF, da se dobije redukovani produkt kao HCl so. Na primer, 4-cijano-2,6-dimetilpiridin, produkt faze A, se rastvori u pogodnom organskom rastvaraču kao što su MeOH ili EtOH, u prisustvu HCl u višku ili u vodi ili u 1,4-dioksanu i rastvor se tretira sa 5-10% Pd/C u višku. Reaktivna smeša se podvrgne hidrogenaciji pod pritiskom od približno 60 psi na RT u toku noći. Smeša se filtrira i filtrat se koncentruje da se dobije sirovi produkt faze B. Dalja precipitacija produkta faze B može da se postigne posutpcima dobro poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici, kao što su trituracija, kristalizacija, ili rekristalizacija. Na primer, sirovi produkt faze B može da se tretira sa ključalom smešom EtOH/EtOAc do rastvaranja; nakon hlađenja uz kristalizaciju i sakupljanja produkta filtriranjem može da se dobije 1-(2,6-dimetilpiridin-4-il)metamin dihidrohlorid faze B. Alternativno, sirovi produkt može da se suspenduje u smeši MeOH/MTBE, uz sakupljanje dobijene čvrste supstance filtriranjem, 1-(2,6-dimetilpiridin-4-il)metamin dihidrohlorida, produkta faze B.

Šema 4

R = Et, i-Pr, c-Pr, c-Bu, c-pentil

[0047] Šema 4 opisuje izradu 2-supstituisanih-6-metil-piridilmetanamina. U Šemi 4, faza A, stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici može da razume konverziju 2-hlorpiridina u 2-alkilpiridin koristeći Grignardov, alkillitijum, alkilboronat ili alkilcink reagens. Na primer, tretmanom približno 3.0-3.6 ekvivalenata 2-hlor-6-metil-izonikotinonitrila (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 20(2), 576-580; 2010) sa približno 1.0-1.5 ekvivalenata odgovarajuće supstituisanog Grignardovog, alkilboronat ili alkilcink reagensa u pogodnom

1

polarnom rastvaraču, kao što su NMP ili 1,4-dioksan, ili u dvofaznoj smeši pogodnog organskog rastvarača kao što su toluen, benzen ili DMF koji sadrži vodu, u prisustvu približno 0.1-0.2 ekvivalenta tranzicionog metalnog katalizatora, na primer gvožđe (III) acetoacetata (R=Et), Pd(OAc)2u prisustvu pogodnog fosfin liganda kao što su tricikloheksilfosfin tetrafluoroborat, ili [1,1’-bis(difenilfosfino)-ferocen]dihlorpaladijum(II) (R= i-Pr, c-Pr, c-Bu, c-pentil) od približno sobne temperature do približno 120 °C, dobija se sirovi 2-alkil produkt iz Šeme 4, faza A, koji može da se izdvoji i prečisti pod uslovima dobro poznatim u tehnici, kao što su ekstrakcija i hromatografija. Na primer, reakcija se razblaži sa vodom i filtrira preko ploče diatomejske zemlje i filtrat se ekstrahuje sa odgovarajućim organskim rastvaračem kao što su EtOAc ili DCM. Organski ekstrakt se suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje pod sniženim pritiskom i prečisti flash hromatografijom na silika gelu pomoću heksana ili heptan/EtOAc, da se dobije traženi 2-alkil-6-metil-4-piridinkarbonitril, produkt iz Šeme 4, faza A. Karbonitril radikal može da se redukuje u metilamin pod brojnim uslovima dobro prihvatćenim u tehnici. Na primer, traženi 2-alkil-6-metil-4-piridinkarbonitril, približno 1 ekvivalent produkta iz Šeme 4, faza A, može da se tretira sa Raney niklom u višku u atmosferi vodonika na 20-60 psi u smeši pogodnih polarnih rastvarača, kao što je NH3u MeOH. Reaktivna smeša može da se filtrira, koncentruje i dobijeni ostatak po redu triturira sa odgovarajućom smešom organskih rastvarača, kao što su toluen, ACN, MeOH/toluen i ACN/toluen, a nakon toga filtracijom, da se dobije odgovarajuće supstituisani (2-metil-6-metil-4-piridil)metanamin kao dihidrohloridna so. Alternativno, dobijeni sirovi produkt može da se izdvoji i prečisti pod uslovima dobro poznatim u tehnici, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografije, da se dobije odgovarajuće supstituisani (2-metil-6-metil-4-piridil)metanamin kao slobodna baza.

Šema 5

f

faza C

faza E

1

[0048] Šema 5 opisuje izradu 6-(aminometil)-4-metil-piridin-2-karbonitril dihidrohlorida. U Šemi 5, faza A, redukcija etil 2-piridin-karboksilata može da se izvede u širokoj lepezi postupaka dobro opisanih u tehnici. Na primer, približno 1 ekvivalent etil 6-hlor-4-metilpiridin-2-karboksilata (Y=CH, Z=N) se tretira sa približno 1.7 ekvivalenata natrijum borhidrida u EtOH na RT da se dobije (6-hlor-4-metil-2-piridil)metanol, produkt iz Šeme 5, faza A (Y=CH, Z=N), pogodan za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja. Halogenaciju u alkil halid, stručnjak sa uobičajenim iskustvom može da izvrši pod različitim uslovima halogenacije. Na primer, približno 1 ekvivalent produkta iz Šeme 5, faza A, (6-hlor-4-metil-2-piridil)metanol (Y=CH, Z=N) se tretira sa približno 2 ekvivalenta tionil hlorida u pogodnom organskom rastvaraču kao što je DCM u CHCl3od približno RT do refluksa i evaporacijom rastvarača može da se dobije traženi 2-hlor-6-(hlormetil)-4-metilpiridin, produkt iz Šeme 5, faza B (Y=CH, Z=N), pogodan za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja. Produkt iz Šeme 5, faza B, 2-hlor-6-(hlormetil)-4-metil-piridin (Y=CH, Z=N), može da se tretira sa različitim zaštićenim aminima pogodnim da izdrže dodatnu funkcionalizaciju. Na primer, približno 1 ekvivalent kalijum ftalimida može da se tretira sa 2-hlor-6-(hlormetil)-4-metil-piridinom, produktom iz Šeme 5, faza B (Y=CH, Z=N), u pogodnom polarnom rastvaraču kao što je DMF. Daljim razblaživanjem sa vodom može da se dobije čvrsti produkt iz Šeme 5, faza C (Y=CH, Z=N), 2-[(6-hlor-4-metil-2-piridil)metil]izoindolin-1,3-dion, koji može da se izdvoji postupcima dobro poznatim u tehnici, kao što je filtracija. Hloro radikal 2-[(6-hlor4-metil-2-piridil)metil]izoindolin-1,3-diona, produkt iz Šeme 5, faza C (Y=CH, Z=N), može da se izmesti sa različitim nukleofilima kako je dobro opisano u literaturi, kao što su SNAR reakcija ili procesi posredstvom tranzicionog metala. Na primer, približno 1 ekvivalent produkta iz Šeme 5, faza C (Y=CH, Z=N), 2-[(6-hlor-4-metil-2-piridil)metil]izoindolin-1,3-dion, može da se tretira sa približno 0.75 ekvivalenata cink cijanida u prisustvu približno 0.05 ekvivalenata [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]paladijum(II) dihlorida i približno 0.25 ekvivalenata elementarnog cinka u pogodnom polarnom organskom rastvaraču kao što su DMF ili DMSO uz zagrevanje od 100-140 °C. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će znati da produkt ove transformacija može da se izdvoji i prečisti standardnim tehnikama dobro poznatim u praksi, kao što su ekstrakcija i hromatografija. Na primer, ohlađena reaktivna smeša može da se razblaži sa vodom i ekstrahuje sa pogodnim rastvaračem kao što su DCM ili EtOAc, po redu ispere sa NH4OH i zasićenim vodenim rastvorom NaCl i organski ekstrakt može da se suši preko Na2SO4ili MgSO4. Dobijeni sirovi produkt može da se podvrgne flash hromatografiji na silika gelu uz eluiranje sa smešom pogodnih organskih rastvarača, kao što je heksani/etil

2

acetat, da se dobije produkt, 6-[(1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil]-4-metil-piridin-2-karbonitril, iz Šeme 5, faza D (Y=CH, Z=N). Uklanjanje zaštitne grupe amina može da izvrši stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici. Na primer, treatmanom približno 1 ekvivalenta 6-[(1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil]-4-metil-piridin-2-karbonitrila, produkta iz Šeme 5, faza D (Y=CH, Z=N), sa približno 2 ekvivalenta hidrazin hidrata u pogodnom polarnom organskom rastvaraču kao što je EtOH pod refluksom, može nakon uparavanja rastvarača da se dobije sirovi deprotektovani amin. Dalje izdvajanje i prečišćavanje sirovog amina može da se izvede standardnim tehnikama dobro poznatim u praksi, kao što je selektivna izmena katjona i izrada soli. Na primer, sirovi amin može da se propusti kroz SCX kolonu, uz eluiranje sa smešom NH3/MeOH; frakcije metanolnog amonijaka mogu da se upare, dobijeni ostatak ponovo rastvori u MeOH i dobijeni rastvor tretira sa 2-10 ekvivalenata HCl u pogodnom organskom rastvaraču, kao što su Et2O ili 1,4-dioksan, da se nakon izdvajanja filtracijom dobije čvrsti 6-(aminometil)-4-metil-piridin-2-karbonitril dihidrohlorid. Sinteza jedinjenja gde su Y=N i Z=CH može da se izvede analognim postupcima.

Šema 6

[0049] Šema 6 opisuje sintezu 5-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]piridin-2-karboksilne kiseline. U Šemi 2, faza A, 1-(6-bromopiridin-3-il)etanon može da se stereoselektivno redukuje hidrogenacijom u prisustvu više katalizatora tranzicionih metala. Na primer, približno 1 equivalent 1-(6-bromopiridin-3-il)etanona u pogodnom polarnom rastvaraču, kao što je EtOH:2-propanol (približno 1.2 mL:1 mL) se tretira sa približno 0.00075 ekvivalenata hlor{(R)-(+)-2,2’-bis[di(3,5-ksilil)fosfino]-1,1’-binaftil}[(2R)-(-)-1-(4-metoksifenil)-1-(4-metoksifenil-kC)-3-metil-1,2-butandiamin]rutenijuma(II) [(R)-RUCY™-XylBINAP] i približno 0.0075 ekvivalenata KO<t>Bu u odgovarajuće zatvorenoj i hidrogenacijom ispražnjenoj posudi. Nakon toga se u sistem uvede vodonik i meša približno 6 h na približno RT. Sirovi produkt se izdvoji i prečisti koristeći standardne tehnike dobro poznate u praksi, kao što su filtracija, uklanjanje rastvarača i hromatografija. Na primer, reaktivna smeša se filtrira i upari pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt faze A. Sirovi produkt može nakon toga da se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa smešom pogodnih organskih rastvarača, kao što je DCM/MTBE, da se dobije (1S)-1-(6-bromopiridin-3-il)etanol iz Šeme 6, faza A.

[0050] U Šemi 6, faza B, produkt iz Šeme 6, faza A, (1S)-1-(6-bromopiridin-3-il)etanol, se rastvori u pogodnom organskom rastvaraču kao što je DCM i tretira sa približno 1.3 ekvivalenta pogodne organske, ne-nukleofilne baze kao što je TEA na približno 0 °C.

Približno 1.2 ekvivalenta reagensa pogodnog za sulfonilaciju, kao što je metansulfonil hlorid, se doda i produkt se izdvoji i prečisti koristeći standardne tehnike dobro poznate u praksi, kao što je ekstrakcija. Na primer, reaktivna smeša se tretira sa vodom i slojevi se razdvoje; vodeni sloj se dva puta ekstrahuje sa DCM, organski slojevi se kombinuju, isperu sa zasićenim vodenim NaHCO3, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije (1S)-1-(6-bromopiridin-3-il)etil metansulfonat iz Šeme 6, faza B, koji može da se koristi u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja.

[0051] Šema 6, faze C-H, se izvode pod uslovima analognim sa prethodno opisanim u Šemi 1, faze A-F, da se dobije tražena 5-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]piridin-2-karboksilna kiselina.

Šema 7

[0052] Šema 7 opisuje izradu sukcinimid karboksamid jedinjenja, pri čemu odgovarajuća karboksilna kiselina može da se udvoji sa odgovarajućim piridilaminom ili piridilamin dihidrohloridom pod različitim uslovima udvajanja amida dobro poznatim u tehnici. Na primer, reakcija udvajanja amida može da se izvede analogno sa reakcijom opisanom u Šemi 1, faza F, ili može da se izvede sa takvim sredstvima za udvajanje kao što su HOBt, HOAT, HATU ili T3P, između mnogih drugi dobro opisanih u literaturi. Alternativno, udvajanje amida može da se izvrši na karboksilnom estru (R<1>= CH3) pod različitim uslovima dobro poznatim u tehnici, uključujući, ali bez ograničenja na, zagrevanje smeše od odgovarajućeg karboksilnog estra i odgovarajućeg piridilamina ili piridilamin soli (na primer, dihidrohlorida) na temperaturi približno 150-170 °C u zatvorenoj posudi u pogodnom nepolarnom organskom rastvaraču kao što su toluen ili ksilen.

Izrade i Primeri

[0053] Naredne Izrade i Primeri dalje ilustruju pronalazak i predstavljaju tipične sinteze jedinjenja iz pronalaska. Reagensi i početni materijali su lako raspoloživi ili stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici može lako da ih sintetiše. Treba da se razume da su Izrade i Primeri dati kao način ilustracije i da stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici može da izvrši različite modifikacije.

[0054] R- ili S- konfiguracija jedinjenja iz pronalaska može da se odredi standardnim tehnikama kao što su analize X-zracima i korelacija sa vremenom zadržavanja asimetrične HPLC.

[0055] LC-ES/MS se izvodi na AGILENT® HP1100 sistemu tečne hromatografije. Merenja elektrosprej masene spektrometrije (dobijene u pozitivnom i/ili negativnom modu) se izvode na Mass Selective Detector četvorokanalnom masenom spektrometru povezanim sa HP1100 HPLC. LC-MS uslovi (nizak pH): kolona: PHENOMENEX® GEMINI® NX C182.1 x 50 mm 3.0 µm, gradijent: 5-100% B u 3 min, nakon toga 100% B u toku 0.75 min temperatura kolone: 50 °C /-10 °C; brzina protoka: 1.2 mL/min; Rastvarač A: dejonizovana voda sa 0.1% HCOOH; Rastvarač B: ACN sa 0.1% mravlje kiseline; talasna dužina 214 nm. Alternativni LC-MS uslovi (visok pH): kolona: XTERRA® MS C18 kolone 2.1x50 mm, 3.5 µm; gradijent: 5% rastvarača A u toku 0.25 min, gradijent od 5% do 100% rastvarača B u 3 min i 100% rastvarača B za 0.5 min ili 10% do 100% rastvarača B u 3 min i 100% rastvarača B u

2

toku 0.75 min; temperatura kolone: 50 °C /-10 °C; brzina protoka: 1.2 mL/min; Rastvarač A: 10 mM NH4HCO3pH 9; Rastvarač B: ACN; talasna dužina: 214 nm.

[0056] Preparativna reverzno fazna hromatografija se izvodi na AGILENT® 1200 LC-ES/MS opremljenoj sa Mass Selective Detector masenim spektrometrom i LEAP® auto sakupljačem uzorka/sakupljačem frakcija. Postupci visokog pH se izvode na 75 x 30 mm PHENOMENEX® GEMINI®-NX koloni veličine čestica 5 µ sa graničnikom 10 x 20 mm. Brzina protoka je 85 mL/min. Eluent je 10 mM amonijum bikarbonata (pH 10) u acetonitrilu.

[0057] NMR spektar se dobija na Bruker VIII HD 400 MHz NMR spektrometru, dobijen kao CDCl3ili (CD3)2SO rastvor izraženo u ppm, koristeći rezidualni rastvarač [CDCl3, 7.26 ppm; (CD3)2SO, 2.05 ppm] kao referentni standard. Kada su zabeleženi multiplicirani pikovi, mogu da se koriste sledeće skraćenice: s (singlet), d (dablet), t (triplet), q (kvartet), m (multiplet), brs (široki singlet), dd (dvostruki dableti), dt (dvostruki tripleti). Konstante udvajanja (J), kada su zabeležene, zabeležene su u hercima (Hz).

Izrada 1

Dimetil {(1R)-1-[4-(metoksikarbonil)fenil]etil}(metil)propandioat

[0058]

[0059] Šema 1, faza A: u izmešani rastvor dimetil 2-metilpropandioata (12.2 g, 82.9 mmol) i metil 4-{(1S)-1-[(metilsulfonil)oksi]etil}benzoata (21.8 g, 75.4 mmol) u DMF (150 mL) u atmosferi azota se na 0 °C doda Cs2CO3(32.2 g, 98.0 mmol). Reaktivna smeša se potpuno prečisti sa azotom, meša 1 h na 0 °C i postepeno zagreje na temperaturu sredine. Dodaju se DCM i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se dva puta ekstrahuje sa DCM. Organski slojevi se kombinuju, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije žuto ulje. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani/etil acetat (gradijent od 49:1 do 7:3).

Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (22.62 g, 93%). LC-ES/MS (m/z): 309.0 (M+H).<1>H NMR (CDCl3) δ 1.37 (s, 3H), 1.39 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.74 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 7.25-7.30 (m, 2H), 7.91-7.96 (m, 2H).

Izrada 2

Metil 4-[(2S)-4-metoksi-3-metil-4-oksobutan-2-il]benzoat

[0060]

[0061] Šema 1, faza B: u izmešani rastvor dimetil {(1R)-1-[4-(metoksikarbonil)fenil]etil} (metil)propandioata (22.6 g, 73.7 mmol) u smeši dimetilsulfoksid (200 mL)/voda (4.67 mL) u atmosferi azota se na RT doda NaCl (5.58 g, 95.4 mmol). Reaktivna boca se stavi u uljano kupatilo i zagreva na 190 °C u toku 50 min i dobijena reakcija se održava 3.5 h na 190 °C, za koje vreme TLC (30% EtOAc / Heksan) pokazuje da početnog materijala više nema. Nakon hlađenja na RT, reakcija se razblaži sa vodom (400 mL) i ekstrahuje sa Et2O (3 x 150 mL). Ekstrakt se ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije braon ulje. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani/etil acetat (gradijent od 19:1 do 4:1). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (13.35 g, 72%) kao smeša diastereomera. LC-ES/MS (m/z): 251.0 (M+H).

Izrada 3

Metil 4-[(2R)-3-(cijanometil)-4-metoksi-3-metil-4-oksobutan-2-il]benzoat

[0062]

2

[0063] Šema 1, faza C: rastvor LDA [sveže izrađen od diizopropil amina (11.3 mL, 80.4 mmol) i n-butillitijuma (2.5 M rastvor u heksanu, 32.2 mL, 80.4 mmol)] se ohladi na -75 °C u atmosferi azota. U toku 40 min se u LDA rastvor u kapima dodaje rastvor metil 4-[(2S)- 4-metoksi-3-metil-4-oksobutan-2-il]benzoata (18.3 g, 73.1 mmol) u THF (50 mL). Reaktivna smeša se ostavi 75 min na -75 °C nakon čega se u toku 12 minuta u kapima dodaje rastvor bromoacetonitrila (7.87 mL, 110 mmol)/THF (20 mL). Reaktivna smeša se ostavi da se polako zagreje na RT i meša u toku noći. Nakon neutralisanja sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl, reakcija se ekstrahuje sa EtOAc (3 x 100 mL). Ekstrakt se ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije tamno ulje. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani/etil acetat (gradijent od 19:1 do 3:2). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (12.08 g, 57%) kao smeša diastereomera. LC-ES/MS (m/z): 307.0 (M+NH4<+>).

Izrada 4

Metil 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoat (glavni diastereomer) i metil 4-{(1R)-1-[(3R)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoat (sporedni diastereomer)

[0064]

Glavni diastereomerSporedni diastereomer

[0065] Šema 1, faza D: čist metil 4-[(2R)-3-(cijanometil)-4-metoksi-3-metil-4-oksobutan-2-il]benzoat (33.4 g, 115 mmol) se ohladi u kupatilu led/voda i u kapima tretira sa

2

koncentrovanom H2SO4(66.8 mL, 1180 mmol) u periodu od 20 min. Hladno kupatilo se ukloni i reakcija se meša 3 h na RT. Reaktivna smeša se nakon toga ohladi u kupatilu led/voda, neutrališe sa ledenom vodom (400 mL) i ekstrahuje sa DCM (2 x 250 mL). Ekstrakt se ispere sa vodom, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi međuproizvod amid kao žuta pena. Sirovi međuproizvod se rastvori u THF (200 mL) i vodi (200 mL), tretira sa Na2CO3(30.7 g, 289 mmol) i zagreva 5 h na 50 °C. Nakon hlađenja u kupatilu led/voda, reaktivna smeša se zakiseli do pH ~2 sa 5 N vodenim rastvorom HCl i ekstrahuje sa EtOAc (2 x 150 mL). Ekstrakt se ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije žuta pena. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani/etil acetat (gradijent od 9:1 do 1:1). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije glavni diastereomer kao prvi eluirajući materijal, metil 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoat, (17.23 g, 54%) i sporedni diastereomer kao drugi eluirajući materijal, metil 4-{(1R)-1-[(3R)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoat, (5.01 g, 16%). Glavni izomer:<1>H NMR (CDCl3): δ 1.23 (s, 3H), 1.35 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 2.22 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 3.01 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 3.24 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 7.24-7.29 (m, 2H), 7.86 (br s, 1H), 7.97-8.02 (m, 2H).

Sporedni izomer:<1>H NMR (CDCl3): δ 1.38 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.44 (s, 3H), 2.35 (d, J= 18.5 Hz, 1H), 2.83 (d, J= 18.5 Hz, 1H), 3.33 (q, J= 7.2 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 7.25-7.30 (m, 2H), 7.46 (br s, 1H), 7.92-7.97 (m, 2H).

Izrada 5

4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoeva kiselina

[0066]

[0067] Šema 1, faza E: litijum hidroksid monohidrat (3.16 g, 75.3 mmol) se doda u rastvor metil 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoata (6.91 g, 25.1 mmol)

2

rastvorenog u THF (84 mL) i vodi (36 mL). Nakon 16 h mešanja na RT, reaktivna smeša se zakiseli do pH ~2 sa 1 N vodenim rastvorom HCl a THF se ukloni pod vakuumom. Dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i suši u vakuumskoj pećnici na 45 °C da se dobije naslovljeno jedinjenje (5.96 g, 91%).<1>H NMR (DMSO-d6): δ 1.06 (s, 3H), 1.22 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 2.16 (d, J= 18.2 Hz, 1H), 3.02 (d, J= 18.2 Hz, 1H), 3.12 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 7.39-7.45 (m, 2H), 7.84-7.89 (m, 2H), 11.22 (s, 1H), 12.85 (br s, 1H).

Izrada 6

izopropil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoat

[0068]

[0069] Šema 2, faza A: u deoksigenisani rastvor (4-bromofenil)borne kiseline (110 g, 547.73 mmol) u 1,4-dioksanu (750 mL) se u atmosferi N2doda bis(norbornadien)rodijum(I) tetrafluoroborat (2 g, 5.13 mmol) a nakon toga (R)-(+)-2,2’-bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftil (4.5 g, 7.2 mmol). Smeša se ostavi 1 h na sobnoj temperaturi pre dodavanja H2O (100 mL), TEA (70 mL, 502 mmol) i izopropil (E)-but-2-enoata (65 g, 507.14 mmol). Dobijeni crveni rastvor se zagreva 18 h na 40 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom do polovine zapremine i razblaži sa 500 mL MTBE. Organski rastvor se ispere sa 500 mL vode, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani/EtOAc (gradijent od 1:0 do 9:1). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (144 g, 94.6%, 94.5% ee). Glavni enantiomer tR= 2.20 min; sporedni enantiomer tR= 2.69 min (Chiral SFC Lux Amylose-2, 5% MeOH/CO2, 5 mL/min, 225 nm).<1>H NMR (DMSO-d6) δ 1.05 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.10 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.19 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 2.48-2.59 (m, 2H), 3.08-3.19 (m, 1H), 4.74-4.84 (m, 1H), 7.20-7.24 (m, 2H), 7.44-7.48 (m, 2H).

2

Izrada 7

(3S)-3-(4-bromofenil)butanoatna kiselina

[0070]

[0071] Šema 2, faza B: u rastvor izopropil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoata (1042 g, 3471.0 mmol) u MeOH (8 L) se uz mešanje na RT doda 5 M vodeni rastvor NaOH (2 L). Reakcija se zagreva 40 min na 50 °C u atmosferi N2. Nakon hlađenja na 30 °C, reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom a ostatak se razblaži sa 2 L vode. Dobijena vodena smeša se jedanput ekstrahuje sa DCM (~2 L). Vodeni sloj se tretira sa ~1 kg leda i zakiseli do pH ~4 sa koncentrovanom HCl (1 L) postepenim dodavanjem u toku 20 min. Mutni vodeni sloj se nakon toga ekstrahuje sa DCM (~4 L). Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom do bistrog žutomrkog ulja koje očvrsne u beličastu čvrstu supstancu. U čvrstu supstancu se doda heptan (~ 4 L) i dobijena smeša se zagreva 2 h na 45 °C nakon čega čvrsta supstanca precipitira. Čvrste susptance se sakupe filtriranjem i isperu sa heptanom (200-250 mL). Filtrat se nakon toga koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (771 g, 91.4%, 99% ee). LC-ES/MS (m/z): 241.0 (M-H). Glavni enantiomer tR= 2.35 min; sporedni enantiomer tR= 2.82 min (Chiral SFC Lux Amylose-2, 5% MeOH/CO2, 5 mL/min, 225 nm).<1>H NMR (DMSO-d6) δ 1.19 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 2.48-2.52 (m, 2H), 3.07-3.17 (m, 1H), 7.20-7.25 (m, 2H), 7.44-7.49 (m, 2H), 12.08 (s, 1H). [α]D<25>+25.0 ° (c = 1, MeOH).

Izrada 8

metil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoat

[0072]

2

[0073] Šema 2, faza C: koncentrovana H2SO4(45 mL, 802 mmol) se doda u rastvor (3S)-3-(4-bromofenil)butanoatne kiseline (450 g, 1851.1 mmol) u MeOH (4.5 L). Smeša se zagreva 2h na 65 °C, ohladi na RT i koncentruje pod sniženim pritiskom do suvog ostatka. Čvrsta supstanca se razblaži sa MTBE (2.5 L) i H2O (2.5 L) i dobijena smeša se ekstrahuje sa MTBE (2 x 2.5 L). Kombinovani ekstrakti se isperu sa H2O (2.5 L), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao svetlo žuto ulje (469.8 g, kvantitativni prinos) koje može da se koristi bez daljeg prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z): 274.0 (M+NH4<+>).<1>H NMR (CDCl3) δ 1.27 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 2.50-2.62 (m, 2H), 3.20-3.30 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 7.07-7.12 (m, 2H), 7.39-7.43 (m, 2H).

Izrada 9

(3S, 2R)-metil 3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoat i (3S, 2S)-metil 3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoat

[0074]

Glavni diastereomerSporedni diastereomer

[0075] Šema 2, faza D: 2.5 M rastvor n-BuLi u heksanima (1250 mL) se u kapima na -40 °C u toku 30 min dodaje u rastvor DIPEA (444 mL, 3150 mmol) u anhidrovanom THF (2.3 L). Nakon 30 min, u toku 40 min se dodaje rastvor metil (3S)-3-(4- bromofenil)butanoata (468.90 g, 1750.7 mmol) u anhidrovanom THF (3.3 L) i reaktivna smeša se ostavi 40 min na -40 °C. CH3I (176 mL, 2798 mmol) se dodaje u toku 30 min i smeša se meša 15 min na -40 °C.

Reaktivna smeša se polako neutrališe sa MeOH (283 mL) na -40 °C a nakon toga sa H2O (2.5 L) i smeša se ostavi da se zagreje na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa H2O (2.5 L) i dobijeni slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se dodatno ekstrahuje sa MTBE (7.5 L) i kombinovani organski ekstrakti se po redu isperu sa H2O (3 L) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (2.5 L). Organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša diastereomera (7:3) kao svetlo braon ulje (489 g, 93%) koje može da se koristi bez daljeg prečišćavanja. Glavni diastereomer tR= 1.29 min; sporedni diastereomer tR= 1.32 min (XBRIDGE® C18 kolona, 3.5 m, 2.1 x 50 mm, 1.2 mL/min, 50 °C, 10-95% 10 mM NH4CO3(pH 10) u ACN). LC-ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 288.0, 290.0 (M+NH4<+>).

Izrada 10

4-(terc-butil) 1-metil (S)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinat i 4-(terc-butil) 1-metil(R)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinat

[0076]

Glavni diastereomerSporedni diastereomer

[0077] Šema 2, faza E: 2.5 M rastvor n-BuLi u heksanima (1150 mL, 2900 mmol) se u toku 20 min na -40 °C dodaje u rastvor DIPEA (410 mL, 2910 mmol) u anhidrovanom THF (3 L). Dobijena smeša se meša 30 min na -40 °C i u toku 1h se doda rastvor smeše diastereomera metil (2R/S,3S)-3-(4-bromofenil)-2-metil-butanoata (488.00 g, 1619.8 mmol) u anhidrovanom THF (3 L). Reaktivna smeša se ostavi 45 min na -40 °C i u toku 30min se dodaje rastvor tercbutil 2-bromoacetata (391 mL, 2596 mmol) u anhidrovanom THF (250 mL). Dobijena smeša se meša još 30 min na -40 °C. Doda se MeOH (250 mL) a nakon toga H2O (2.5 L) i dobijena smeša se ostavi da se zagreje na RT. Smeša se razblaži sa H2O (2.5 L) i dobijeni slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa MTBE (5 L) i organski ekstrakt se po redu ispere sa H2O (5 L), nakon toga sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (2.5 L), suši preko MgSO4,

1

filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša diastereomera kao gusto braon ulje (786 g, 87%) koje može da se koristi bez naknadnog prečišćavanja. Glavni diastereomer tR= 1.51 min; sporedni diastereomer tR= 1.53 min (XBRIDGE® C18 kolona, 3.5 m, 2.1 x 50 mm, 1.2 mL/min, 50 °C, 10-95% 10 mM NH4CO3(pH 10) u ACN). LC-ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 328.8, 330.8 (M-tBu+H).

Izrada 11

(3S,4R)-4-(4-bromofenil)-3-(metoksikarbonil)-3-metilpentanoatna kiselina i (3R,4R)-4-(4-bromofenil)-3-(metoksikarbonil)-3-metilpentanoatna kiselina

[0078]

Glavni diastereomerSporedni diastereomer

[0079] Šema 2: faza F: rastvor smeše diastereomera 4-(terc-butil) 1-metil (R/S)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinata (785 g, 1406 mmol) u DCM (6 L) se tretira sa TFA (1.06 L) i meša 18 h na RT. Reaktivna smeša se po redu ispere sa H2O (2 x 5 L) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (5 L). Organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša diastereomera (8:2) kao tamno braon guma (604 g, 91%) koja može da se koristi bez daljeg prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 329.0, 331.0 (M+H).

Izrada 12

metil (2S)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoat i metil (2R)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoat

[0080]

2

Glavni diastereomerSporedni diastereomer

[0081] Šema 2, faza G: u smešu diastereomera (3R/S,4R)-4-(4-bromofenil)-3-metoksikarbonil-3-metilpentanoatne kiseline (603g, 1282 mmol) i TEA (550 mL, 3870 mmol) u anhidrovanom DMF (4 L) se na 0 °C u toku 15min dodaje HATU (597 g, 1538.69 mmol). Reaktivna smeša se ostavi 2 h na sobnoj temperaturi. U toku 30 min se na 10 °C dodaje 7 M rastvor NH3/MeOH (1.83 L) i dobijena smeša se zagreje na RT i meša 1h. Reaktivna smeša se ohladi na 10°C i nakon toga polako razblaži sa DCM (5 L) a nakon toga sa H2O (5 L).

Dobijeni slojevi se razdvoje i vodeni sloj se dodatno ekstrahuje sa DCM (2.5L). Kombinovani ekstrakti se po redu isperu sa H2O (5L) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (5 L), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša diastereomera (8:2) kao tamna guma (520 g, 87%) koja može da se koristi bez daljeg prečišćavanja. Glavni diastereomer tR= 0.97 min; sporedni diastereomer tR= 0.99 min (XBRIDGE® C18 kolona, 3.5 m, 2.1 x 50 mm, 1.2 mL/min, 50 °C, 10-95% 10 mM NH4CO3(pH 10) u ACN). LC-ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br) 328.0/330.0 (M+H/M+H+2).

Izrada 13

(3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion i (3R)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion

[0082]

Glavni diastereomer Sporedni diastereomer

[0083] Šema 2, faza H: u smešu diastereomera metil (2R/S)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoata (519g, 1107 mmol) rastvorenog u THF (4.2 L) i H2O (4.2 L) se doda Na2CO3(293 g, 2764.46 mmol) i smeša se zagreva 2h na 60 °C. Reakcija se ohladi na RT i ekstrahuje sa EtOAc (2.5 L). Organski sloj se ispere sa H2O (3 L). Dobijeni vodeni ekstrakt se ekstrahuje sa EtOAc (5 L) i kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirova smeša dva diastereomera koja se razdvoje pomoću SFC [Kolona: AS-H, 150 x 50mm; 10% EtOH (0.2% DEMA), 340 g/min; BPR 150 bar; zapremina injektovanja: 4 ml; 220 nm]. (3R)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion: prvo eluirano jedinjenje (43.8g, 11%). LC-ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 313.0, 315.0 (M+H).<1>H NMR (CDCl3) δ 1.33 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.40 (s, 3H), 2.34 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 2.80 (, J= 18.4 Hz, 1H), 3.23 (q, J= 7.2 Hz, 1H), 7.07 (d, 2H), 7.40 (d, 2H), 7.54 (br-s, 1H). (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion: drugo eluirano jedinjenje (241.8 g, 55%). LC-ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 313.0, 315.0 (M+H).

<1>H NMR (CDCl3): 1.23 (s, 3H), 1.30 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 2.21 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 2.96 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 3.14 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 7.04-7.09 (m, 2H), 7.42-7.48 (m, 2H), 8.09 (br-s, 1H).

Izrada 14

2,6-Dimetilpiridin-4-karbonitril

[0084]

[0085] Šema 3, faza A: cink cijanid (3.82g, 31.9 mmol) se uz mešanje u atmosferi azota na RT doda u smešu 4-bromo-2,6-dimetilpiridina (5.09 g, 26.5 mmol) i DMF (40 mL). Azot se u mehurićima propušta 15 min kroz izmešanu suspenziju i doda se tetrakis(trifenilfosfin) paladijum(0) (1.54 g, 1.33 mmol). Nakon 5.5 h zagrevanja reaktivne smeše na 120 °C, smeša se ohladi na RT i razblaži sa EtOAc (150 mL). Čvrste supstance se uklone kroz filter papir i filter pogača se ispere sa EtOAc (50 mL). Kombinovani organski filtrat i ispirak se po redu isperu sa 15% vodenim rastvorom NH3(2 x 50 mL), vodom (50 mL) i zasićenim vodenim

4

rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije žuta čvrsta supstanca. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografija na silika gelu uz eluiranje sa smešom heksani/etil acetat (gradijent od 9:1 do 1:1). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.79 g, 77%).<1>H NMR (CDCl3): δ 2.61 (s, 6H), 7.21 (s, 2H).

Alternativni postupak za izradu 14

[0086] Šema 3, faza A: 4-bromo-2,6-dimetilpiridin (235.0 g, 1263.1 mmol) se rastvori u anhidrovanom DMF (250 mL) u boci okruglog dna sa tri grla opremljenoj sa mehaničkom mešalicom, refluksnim kondenzatorom i ulazom za N2i N2se u mehurićima propušta kroz rastvor u toku 20 min. Deo rastvora (~150 mL) se pomoću kanile prenese u levak za dodavanje u atmosferi N2. U reaktivnu smešu se dodaju cink cijanid (150.0 g, 1277.4 mmol) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (15.0 g, 13.0 mmol) i smeša poprska sa mehurićima N2u toku 15 min. Reaktivna smeša se zagreva na 90 °C. U kapima se u toku 30 min dodaje rastvor 4-bromo-2,6-dimetilpiridina u DMF i zagrevanje nastavi u toku noći. Smeša se ohladi na RT, doda se MTBE (~2 L), a nakon toga voda (1.5 L) i 30% vodeni rastvor rastvor NH4OH (800 mL); a dobijena smeša se meša 30 min na RT. Slojevi se razdvoje, vodeni sloj se ekstrahuje jedanput sa MTBE (~2 L); organske faze se kombinuju, isperu jedanput sa 10% vodenim rastvorom NH4OH (2 L), suše preko Na2SO4, filtriraju i filtrat se upari pod sniženim pritiskom da se dobije sirovo naslovljeno jedinjenje (153 g, 91.7 % prinos) kao bledo žuta čvrsta supstanca, koja je kontaminirana sa ~ 10% trifenilfosfin sporednog produkta, koji je pogodan za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.<1>H NMR (CDCl3): δ 2.61 (s, 6H), 7.21 (s, 2H).

Izrada 15

1-(2,6-Dimetilpiridin-4-il)metamin dihidrohlorid

[0087]

[0088] Šema 3, faza B: rastvor 2,6-dimetilpiridin-4-karbonitrila (2.26 g, 16.7 mmol) u EtOH (40 mL) se doda u suspenziju 10% Pd na ugljeniku (405 mg), EtOH (10 mL) i koncentrovanog vodenog rastvora HCl (6.9 mL). Reaktivna posuda se isprazni, napuni sa azotom i uvede se H2(55 psi), uz mešanje sledeće reaktivne smeše 16 h na RT. Reaktivna smeša se filtrira kroz diatomejsku zemlju. Filter pogača se ispere sa MeOH i kombinovani filtrat se koncentruje da se dobije žuta čvrsta supstanca. Sirovi materijal se triturira sa ključalim 30% EtOH/EtOAc, ohladi na RT i sakupi filtriranjem da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.64 g, 75%). LC-ES/MS (m/z): 137.0 (M+H).

Alternativni postupak za izradu 15

[0089] Šema 3, faza B: naredni postupak može da se izvede u dve serije i dve serije se kombinuju po završetku reakcije hidrogenacije: 2,6-Dimetilpiridin-4-karbonitril (77.39 g, 527.0 mmol) se doda u Parr autoklav zapremine 2 L, opremljen sa mehaničkom mešalicom, u kome se nalazi smeša 10% Pd/C (45.8 g) u MeOH (800 mL) i 4M rastvor HCl u dioksanu (500 mL). Autoklav se zatvori, dobijena smeša se temeljno prečisti sa N2a nakon toga sa H2i podvrgne pritisku H2od 60 psi uz mešanje na RT u toku noći. Reaktivna smeša se filtrira i filtrat se upari pod sniženim pritiskom. U dobijeni ostatak se doda MeOH (~ 250 mL) i meša 15 h i polako se dodaje MTBE (2.5 L). Smeša se meša 1h na RT, filtrira i čvrste supstance se isperu sa MTBE (1 L). Čvrste supstance se suše pod vakuumom na RT u toku noći da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bledo žuta čvrsta supstanca (217.0 g, 91.6% prinos, kombinacija dva izviđenja), pogodna za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z): 137.2 (M+H), 92.5% čistoće, sa prisutnih 7.5% nečistoća trifenilfosfina (1.57 min, m/z: 263.0).

Izrada 16

6-ciklopropil-4-metil-piridin-2-karbonitril

[0091] Šema 4, faza A: ciklopropilborna kiselina (1.98g, 21.9 mmol) se uz mešanje u atmosferi azota na RT doda u smešu 6-hlor-4-metil-piridin-2-karbonitrila (US 20140256734 A1, 2.15 g, 13.7 mmol,), K3PO4(5.98g, 27.3 mmol), toluena (40mL) i vode (2 mL). Azot se u mehurićima propušta kroz izmešanu suspenziju u toku 10 min i dodaju se paladijum(II) acetat (0.313 g, 1.37 mmol) i tricikloheksilfosfonijum tetrafluoroborat (1.02g, 2.73 mmol). Nakon 15.5 h zagrevanja reaktivne smeše u atmosferi azota na 110 °C, smeša se ohladi na RT i razblaži sa EtOAc (50 mL). Čvrste supstance se uklone filtriranjem kroz diatomejsku zemlju i filter pogača se ispere sa EtOAc (20 mL). Kombinovani organski filtrat i ispirak se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije ulje boje ćilibara. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa smešom heksani/etil acetat (gradijent od 50:1 do 2:1). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.52 g, 70% prinos). LC-ES/MS (m/z): 159.0 (M+H).

Izrada 17

(6-ciklopropil-4-metil-2-piridil)metanamin dihidrohlorid

[0092]

[0093] Šema 4, faza B: izradi se od 6-ciklopropil-4-metil-piridin-2-karbonitrila (1.52g, 9.63mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 15 da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.86 g, 82% prinos). LC-ES/MS (m/z): 163.0 (M+H).

Izrada 18

2-ciklopropil-6-metil-piridin-4-karbonitril AG2-E14219-088

[0094]

[0095] Šema 4, faza A: izradi se od 2-hlor-6-metil-piridin-4-karbonitrila (J. Med. Chem., 59(1), 313-327, 2016, 2.0 g, 12.7 mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 16 da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.66 g, 82% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.05-1.06 (m, 4H) 2.03-2.09 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 7.11 (s, 1H), 7.14 (s, 1H).

Izrada 19

(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)metanamin dihidrohlorid 3344731, AG2-E14219-090

[0096]

[0097] Šema 4, faza B: izradi se od 2-ciklopropil-6-metil-piridin-4-karbonitrila (2.52g, 15.9mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 15 da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.57 g, 95% prinos). LC-ES/MS (m/z): 163.0 (M+H).

Izrada 20

metil 2-izopropil-6-metil-piridin-4-karboksilat

[0098]

[0099] 2M rastvor izopropil magnezijum hlorida u THF (7.53 mL, 15.1 mmol) se u kapima u toku 8 minuta uz mešanje u atmosferi azota doda u smešu metil 2-hlor-6-metil-piridin-4-karboksilata (1.92g, 10.0 mmol), MnCl2(0.065g, 0.502 mmol) i THF (25 mL) u kupatilu led/voda. Nakon 4 sata mešanja u hladnom kupatilu, reakcija se neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl i ekstrahuje sa EtOAc (2 x 50 mL). Kombinovani ekstrakt se ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ulje boje ćilibara. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu uz eluiranje sa smešom heksani/etil acetat (gradijent od 50:1 do 2:1). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.683 g, 35% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.34 (d, J = 6.9 Hz, 6H) 2.63 (s, 3H), 3.12-3.19 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 7.54 (s, 1H), 7.56 (s, 1H).

Izrada 21

2-[(2-izopropil-6-metil-4-piridil)metil]izoindolin-1,3-dion

[0100]

[0101] Natrijum borhidrid (0.231g, 6.01 mmol) se na RT doda u rastvor metil 2-izopropil-6-metil-piridin-4-karboksilata (0.683g, 3.53 mmol) u EtOH (15 mL). Nakon mešanja u toku noći, rastvarač se ukloni pod sniženim pritiskom, preostalo ulje razblaži sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl i ekstrahuje sa EtOAc (2 x 50 mL). Kombinovani ekstrakt se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije 652mg sirovog (2-izopropil-6-metil-4-piridil)metanola kao čvrsta supstanca boje ćilibara. Sirovi alkohol se rastvori u DCM (20 mL) i tretira sa tionil hloridom (0.514 mL, 7.02 mmol). Nakon 4 sata mešanja na RT, reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom; rastvori u toluenu i ponovo koncentruje (2x). Sirovi alkil hlorid se rastvori u DMF (10 mL) i doda se kalijum ftalimid (1.32g, 7.02 mmol). Suspenzija se meša 3.5 sata na RT i razblaži sa vodom (100 mL). Dobijena suspenzija se meša jedan sat na RT i čvrsta supstanca sakupi filtriranjem. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa smešom DCM/etil acetat (gradijent od 50:1 do 4:1). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.332 g, 32% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.29 (d, J= 6.9 Hz, 6H), 2.51 (s, 3H), 3.06-3.08 (m, 1H), 4.80 (s, 2H), 6.96 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 7.76-7.79 (m, 2H), 7.89-7.92 (m, 2H).

Izrada 22

(2-izopropil-6-metil-4-piridil)metanamin AG2-E14044-027

[0102]

[0103] Hidrazin monohidrat (0.70 mL, 1.41 mmol) se na RT doda u suspenziju 2-[(2-izopropil-6-metil-4-piridil)metil]izoindolin-1,3-diona (0.332 g, 1.13 mmol) i EtOH (10 mL). Nakon refluksovanja u toku 1.5 sat, reaktivna smeša se ohladi na RT i čvrste supstance se uklone filtriranjem kroz filter papir. Filter pogača se ispere sa EtOH (10 mL) i kombinovani filtrat/ispirak se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.179 g, 96% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.31 (d, J= 6.8 Hz, 6H), 1.56-1.63 (br-s, 2H), 2.54 (s, 3H), 3.02-3.09 (m, 1H), 3.86 (s, 2H), 6.95 (s, 2H).

Izrada 23

(1S)-1-(6-bromopiridin-3-il)etanol

[0104]

4

[0105] Šema 6, faza A: rastvor hlor{(R)-(+)-2,2’-bis[di(3,5-ksilil)fosfino]-1,1’-binaftil}[(2R)-(-)-1-(4-metoksifenil)-1-(4-metoksifenil-kC)-3-metil-1,2-butandiamin]rutenijuma(II) (103 mg, 0.087 mmol) i KO<t>Bu (1.0 M rastvor u t-BuOH, 0.88 mL, 0.88 mmol) u anhidrovanom 2-propanolu (15 mL) se u atmosferi azota doda u rastvor 1-(6-bromopiridin-3-il)etanona (23.5 g, 117.0 mmol) u smeši anhidrovani EtOH (100 mL)/anhidrovani 2-propanol (85 mL) u Parr autoklavu zapremine 600 mL u atmosferi azota. Autoklav se zatvori, isprazni, podvrgne pritisku vodonika od 207 kPa i meša približno 6 h na RT. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije čvrsti ostatak i suši pod vakuumom u toku noći. Ostatak se prečisti flash hromatografijom preko silika gela, uz eluiranje sa smešom DCM/MTBE (gradijent od 9:1 do 3:1) da se dobije naslovljeno jedinjenje (23.7 g, 94% prinos). LC-ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 202.0/204.0 (M+H). Asimetrična HPLC ukazuje 99.3% ee; tR= 6.32 min [254 nm; LC Kolona: CHIRALCEL® OD-H 4.6 x 150 mm; 5.0 µL injektiranja; 10% 2-propanol u heptanu (sadrži 0.2% DMEA); Temperatura kolone: 25 °C; Brzina protoka: 1.0 mL/min].

Izrada 24

(1S)-1-(6-bromopiridin-3-il)etil metansulfonat

[0106]

[0107] Šema 6, faza B: u izmešani rastvor (1S)-1-(6-bromopiridin-3-il)etanola (3.00 g, 14.8 mmol) i TEA (2.69 mL, 19.3 mmol) u DCM (30 mL) se na 0 °C doda metansulfonil hlorid (1.38 mL, 17.8 mmol). Nakon 2 h na 0 °C, dodaju se voda i DCM i slojevi se razdvoje.

Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM. Organski slojevi se kombinuju i isperu po redu sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i zasićenim NaCl, suše preko Na2SO4; filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (4.13 g, 99% prinos). LC-ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 280.0/282.0 (M+H).<1>H NMR (CDCl3) δ 1.74 (d, J=6.6 Hz, 3H), 2.93 (s, 3H), 5.76 (q, J=6.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.62 (dd, J=2.5, 8.3 Hz, 1H), 8.41 (d, J=2.5 Hz, 1H).

Izrada 25

dimetil 2-[(1R)-1-(6-bromo-3-piridil)etil]-2-metil-propandioat

[0108]

[0109] Šema 6, faza C: izradi se od (1S)-1-(6-bromopiridin-3-il)etil metansulfonata (17.9 g, 63.9 mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 1 da se dobije naslovljeno jedinjenje (18.9 g, 89% prinos). %).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.39 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.40 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.68-3.71 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 7.42 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.48 (dd, J= 2.5, 8.3 Hz, 1H), 8.25 (d, J= 2.4 Hz, 1H).

Izrada 26

metil (3S)-3-(6-bromo-3-piridil)-2-metil-butanoat

[0110]

[0111] Šema 6, faza D: izradi se od dimetil 2-[(1R)-1-(6-bromo-3-piridil)etil]-2-metilpropandioata (18.9 g, 57.2 mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 2 da se dobije naslovljeno jedinjenje (12.5 g, 80% prinos) kao smeša diastereomera. LC-ES/MS (m/z): 271.9 (M+H).

Izrada 27

metil (3R)-3-(6-bromo-3-piridil)-2-(cijanometil)-2-metil-butanoat

[0112]

[0113] Šema 6, faza E: izradi se od metil (3S)-3-(6-bromo-3-piridil)-2-metilbutanoata (12.5 g, 46.1 mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 3 da se dobije naslovljeno jedinjenje (7.66 g, 53 % prinos) kao smeša diastereomera.<1>H NMR (CDCl3): δ 1.36-1.41 (m, 6H) 2.36-2.45 (m, 1H), 2.65-2.73 (m, 1H), 3.17-3.24 (m, 1H), 3.74-3.76 (s, 3H), 7.35-7.39 (m, 1H), 7.47 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 8.20 (d, J= 2.2 Hz, 1H).

Izrada 28

(3S)-3-[(1R)-1-(6-bromo-3-piridil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion (glavni diastereomer) i (3R)-3-[(1R)-1-(6-bromo-3-piridil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion (sporedni diastereomer)

[0114]

Glavni diastereomerSporedni diastereomer

[0115] Šema 6, faza F: izradi se od metil (3R)-3-(6-bromo-3-piridil)-2-(cijanometil)-2-metilbutanoata (7.66 g, 24.6 mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 4 da se dobije 6.57g diastereomerne smeše. Diastereomeri se razdvoje na Chiralpak AD koloni (8x35 cm, 100%

4

EtOH) da se dobije sporedni diastereomer kao prvi eluirajući materijal, (3R)-3-[(1R)-1-(6-bromo-3-piridil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion, (0.74 g, 10%) i glavni diastereomer kao drugi eluirajući materijal, (3S)-3-[(1R)-1-(6-bromo-3-piridil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion, (5.21 g, 71%).

Glavni izomer:<1>H NMR (CDCl3): δ 1.27 (s, 3H), 1.36 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 2.28 (d, J= 18.2 Hz, 1H), 2.93 (d, J= 18.3 Hz, 1H), 3.22 (q, J= 7.2 Hz, 1H), 7.41 (dd, J= 2.6, 8.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.87-7.89 (br-s, 1H), 8.26 (d, J= 2.4 Hz, 1H).

Sporedni izomer:<1>H NMR (CDCl3): δ 1.39 (d, J= 7.3 Hz, 3H), 1.44 (s, 3H), 2.46 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 2.76 (d, J= 18.5 Hz, 1H), 3.25 (q, J= 7.3 Hz, 1H), 7.43-7.50 (m, 2H), 7.98-8.00 (br-s, 1H), 8.25 (d, J= 2.4 Hz, 1H).

Izrada 29

metil 5-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]piridin-2-karboksilat

[0116]

[0117] Šema 6, faza G: Šema 3, faza B: paladijum(II) acetat (115 mg, 0.49 mmol), 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen (340 mg, 0.6 mmol), (3R)-3-[(1R)-1-(6-bromopiridin-3-il)etil]-3-metil-1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1,3-dihidro-2H-pirolo[2,3-b]piridin-2-on (1.5 g, 5.07 mmol), anhidrovani MeOH (25 mL), anhidrovani ACN (40 mL) i TEA (1.8 mL, 13 mmol) se kombinuju u Parr autoklavu zapremine 300 mL sa mehaničkom mešalicom. Autoklav se zatvori, prečisti sa CO, podvrgne pritisku CO od 100 psi i zagreva na 85 °C uz mešanje.

Nakon 1 h, reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu u toku noći i filtrira. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije čvrsti ostatak. Ostatak se suspenduje u EtOAc (200 mL) i ponovo filtrira. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije narandžasti ostatak. Narandžasti ostatak se prečisti flash hromatografijom preko silika gela, uz eluiranje sa gradijentom 5-60% EtOAc u DCM u toku 35 min, da se nakon uparavanja rastvarača iz željenih frakcija dobije naslovljeno jedinjenje (1.34 g, 95% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.27 (s, 3H) 1.41 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 2.29 (d, J= 18.3 Hz, 1H), 2.98 (d, J=18.3 Hz, 1H), 3.34 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 4.04 (s, 3H), 7.71 (dd, J= 2.2, 8.1 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.18-8.29 (br- s, 1H), 8.64 (d, J= 1.9 Hz, 1H).

Izrada 30

[0118]

[0119] Šema 6, faza H: čvrsti LiOH hidrat (3.16 g, 75.3 mmol) se doda u rastvor metil 4-[(1R)-1-[(3S)-3- metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzoata (6.9 g, 25.1 mmol) rastvorenog u smeši THF (28 mL) i vode (12 mL). Dobijena smeša se meša na RT u toku noći, pH se podesi na ~ 3 sa 1N vodenim rastvorom HCl i rastvarači se uklone pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se suši u vakuumskoj pećnici na 45 °C u toku noći da se dobije naslovljeno jedinjenje (5.96 g, 91% prinos) pogodno za dalju upotrebu bez dodatnog prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z): 260.0 (M-H).

Izrada 31

(6-hlor-4-metil-2-piridil)metanol

[0120]

[0121] Šema 5, faza (Y=CH, Z=N): natrijum borhidrid (905 mg, 23.4 mmol) se u jednoj porciji doda u rastvor etil 6-hlor-4-metilpiridin-2-karboksilata (2.81 g, 13.8 mmol) rastvorenog u EtOH (25 m L). Reaktivna smeša se meša 18 h na RT i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se razblaži sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl i ekstrahuje dva puta sa EtOAc, organski ekstrakti se suše preko Na2SO4, filtriraju i

4

koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje pogodno za upotrebu bez dodatnog prečišćavanja. LC-ES/MS (m/z<35>Cl /<37>Cl): 158.0/160.0 (M+H).

Izrada 32

2-hlor-6-(hlormetil)-4-metil-piridin

[0122]

[0123] Šema 5, faza B (Y=CH, Z=N): u rastvor (6-hlor-4-metil-2-piridil)metanola (2.3 g, 13.8 mmol) u DCM (25 mL) se u atmosferi azota doda tionil hlorid (2 mL, 27.5 mmol). Reaktivna smeša se meša 4.5 h na RT, koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak rekonstituiše u toluenu i ponovo još dva puta koncentruje pod sniženim pritiskom, anakon toga suši u vakuumskoj pećnici na 45 °C u toku noći, da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.36 g, 97% prinos) kao svetlo ulje boje ćilibara.<1>H NMR (CDCl3): δ 2.37 (s, 3H), 4.59 (s, 2H), 7.11 (s, 1H), 7.24 (s, 1H).

Izrada 33

2-[(6-hlor-4-metil-2-piridil)metil]izoindolin-1,3-dion

[0124]

[0125] Šema 5, faza C (Y=CH, Z=N): kalijum ftalimid (2.98 g, 15.8 mmol) se u struji azota na RT doda u rastvor 2-hlor-6-(hlormetil)-4-metil-piridina (2.36 g, 13.1 mmol) u DMF (25

4

mL). Mešanje se nastavi 3.5 h i doda se nova količina kalijum ftalimida (523 mg, 2.8 mmol) uz nastavak mešanja na RT u toku 72 h. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (150 mL) i smeša se meša 30 min. Dobijeni beli precipitat se sakupi filtriranjem pod vakuumom i čvrste supstance se suše u vakuumskoj pećnici na 35 °C u toku noći da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (3.6 g, 96% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 2.29 (s, 3H), 4.94 (s, 2H), 6.92 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 7.73-7.79 (m, 2H), 7.88-7.93 (m, 2H).

Izrada 34

6-[(1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil]-4-metil-piridin-2-karbonitril

[0126]

[0127] Šema 5, faza D (Y=CH, Z=N): azot se u mehurićima propušta kroz suspenziju 2-[(6-hlor-4-metil-2-piridil)metil]izoindolin-1,3-diona (1.3 g, 4.6 mmol), cink cijanida (0.23 mL, 3.5 mmol), [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]paladijum(II) dihlorida (174 mg, 0.23 mmol) i elementarnog cinka (76 mg, 1.2 mmol) u DMF u toku 10 min. Reaktivna smeša se zagreva 5.5 h u uljanom kupatilu na 120 °C. Smeša se ohladi na RT, razblaži sa EtOAc (100 mL) i filtrira kroz filter papir da se uklone sve nerastvorena čestice. Filtrat se po redu ispere sa 15% vodenim rastvorom NH4OH, vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl; organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa 10-60% EtOAc u heksanima u toku 35 min da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje (1.04 g, 80.5% prinos) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (CDCl3): δ 2.39 (s, 3H), 5.00 (s, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.74-7.80 (m, 2H), 7.88-7.94 (m, 2H).

Izrada 35

6-(aminometil)-4-metil-piridin-2-karbonitril dihidrohlorid

4

[0129] Šema 5, faza E (Y=CH, Z=N): hidrazin hidrat (371 µL, 7.5 mmol) se doda u suspenziju 6-[(1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil]-4-metil-piridin-2-karbonitrila (1.04 g, 3.7 mmol) u EtOH (20 mL) i dobijena smeša se zagreva 1.5 h pod refluksom. Reaktivna smeša se ohladi, filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se rastvori u MeOH (~ 25 mL) i nanese na SCX kolonu (10 g), uz eluiranje sa 1:1 MeOH:DCM (30 mL), MeOH (20 mL) i smešom 2M NH3/MeOH (50 mL). Frakcije metanolnog amonijaka se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije svetlo žuto ulje koje se rastvori u THF (15 mL) i tretira sa 4N rastvorom HCl u 1,4-dioksanu (2.5 mL). Smeša se meša 15 min na RT i dobijene čvrste supstance se sakupe filtriranjem pod vakuumom. Kristalna filter pogača se suši u vakuumskoj pećnici na 45 °C u toku noći da se dobije naslovljeno jedinjenje (541 mg, 66% prinos) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6): δ 2.41 (s, 3H), 4.22 (q, J=5.6 Hz, 2H), 7.70 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 8.55 (br s, 2H).

Izrada 36

(2-hlor-6-metilpiridin-4-il)metanol

[0130]

[0131] Šema 5, faza (Y=N, CH): izradi se od metil 2-hlor-6-metilpiridin-4-karboksilata (2.4g, 12.5 mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 31 da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.0 g, 97% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 2.54 (s, 3H), 4.71 (s, 2H), 7.07 (s, 1H), 7.16 (s, 1H).

4

Izrada 37

2-hlor-4-(hlormetil)-6-metilpiridin

[0132]

[0133] Šema 5, faza B (Y=N, CH): izradi se od (2-hlor-6-metilpiridin-4-il)metanola (1.97 g, 12.1 mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 32 da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.28 g, 99.5% prinos).<1>H NMR (DMSO-d6): δ 2.45 (s, 3H), 4.74 (s, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.37 (s, 1H).

Izrada 38

2-[(2-hlor-6-metil-4-piridil)metil]izoindolin-1,3-dion

[0134]

[0135] Šema 5, faza C (Y=N, CH): izradi se od 2-hlor-4-(hlormetil)-6-metilpiridina (2.28 g, 12 mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 33 da se dobije naslovljeno jedinjenje (3.67 g, 98.7% prinos).<1>H NMR (DMSO-d6): δ 2.41 (s, 3H), 4.77 (s, 2H), 7.21 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.85-7.94 (m, 4H).

Izrada 39

4-[(1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil]-6-metil-piridin-2-karbonitril

[0136]

4

[0137] Šema 5, faza D (Y=N, CH): izradi se od 2-[(2-hlor-6-metil-4-piridil)metil]izoindolin-1,3-diona (3.66 g, 11.9 mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 34 da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.7 g, 51.5% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 2.58 (s, 3H), 4.84 (s, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.75-7.81 (m, 2H), 7.88-7.93 (m, 2H).

Izrada 40

4-(aminometil)-6-metilpiridin-2-karbonitril

[0138]

[0139] Šema 5, faza E (Y=N, CH): izradi se od 4-[(1,3-dioksoizoindolin-2-il)metil]-6-metilpiridin-2-karbonitrila (1.69 g, 6.1mmol) u osnovi po postupku opisanom za Izradu 35 da se dobije naslovljeno jedinjenje (379 mg, 41% prinos).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.47 (br-s, 2H), 2.59 (s, 3H), 3.94 (s, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.53 (s, 1H).

Izrada 41

2-etil-6-metilpiridin-4-karbonitril

[0140]

[0141] Šema 4, faza A: etilmagnezijum bromid (18 ml, 17.7 mmol) se u porcijama uz mešanje u atmosferi azota na RT doda u smešu 2-hlor-6-metilizonikotinonitrila (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 20(2), 576-580; 2010) (10.0 g, 63.7 mmol), 1- metil-2-pirolidinona (10 ml), THF (10 mL) i gvožđe(III) acetoacetata (521 mg, 1.47 mmol).

Reaktivna smeša se koncentruje da se ukloni najveći deo THF i neutrališe sa vodom. Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi se po redu isperu sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa 15% heksani/etil acetat. Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.53 g, 37% prinos). LC-ES/MS (m/z): 147.2 (M+H).

Izrada 42

1-(2-etil-6-metilpiridin-4-il)metanamin dihidrohlorid

[0142]

[0143] Šema 4, faza B: rastvor 2-etil-6-metilpiridin-4-karbonitrila (0.37 g, 2.5 mmol) u 2M rastvoru NH3(2 mol/1) u MeOH (12.5 mL) se doda u suspenziju Raney nikla (0.5 g) u 2M rastvoru NH3u MeOH (12.5 mL). Reaktivna posuda se prečisti sa azotom i uvede se H2(60 psi), uz mućkanje sledeće reaktivne smeše na 40 °C u toku 15 minuta. Reaktivna smeša se ponovo podvrgne pritisku H2(60 psi) i nastavlja da se mućka još 4 h. Reaktivna smeša se filtrira. Sirovi materijal se razblaži sa 3N rastvorom HCl u MeOH u višku i koncentruje da se dobije zeleno ulje. Sirovo ulje se triturira i po redu koncentruje u sledećim rastvaračima: toluen, acetonitril, metanol/toluen i acetonitril/toluen, da se nakon uklanjanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje kao zelena čvrsta supstanca (0.56 g, 94% prinos). LC-ES/MS (m/z): 151.0 (M+H).

1

Izrada 43

2-ciklobutil-6-metil-piridin-4-karbonitril

[0144]

[0145] Šema 4, faza A: ciklobutilcink bromid (0.5M rastvor u THF, 3.28 mmol) se u kapima doda u degasirani rastvor 2-hlor-6-metil-piridin-4-karbonitrila (250 mg, 1.64 mmol,) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijuma(II) (122 mg, 0.164 mmol) u 1,4-dioksanu.

Zagreva se 1 h na 80°C a nakon toga ohladi na RT. Doda se voda (5mL) i brzo meša u toku 5 minuta. Čvrste supstance se uklone filtriranjem kroz diatomejsku zemlju. Ispere se sa EtOAc i slojevi razdvoje. Organski sloj se ispere sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Suši se preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa gradijentom 10-30% EtOAc u heptanu, da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje (232 mg, 82%),. LC-ES/MS (m/z): 173.0 (M+H).

Izrada 44

(2-ciklobutil-6-metil-4-piridil)metanamin dihidrohlorid

[0146]

2

[0147] Šema 4, faza B: Naslovljeno jedinjenje se u osnovi izrađuje po postupku opisanom za Izradu 42, koristeći 2-ciklobutil-6-metil-piridin-4-karbonitril. LC-ES/MS (m/z): 177.0 (M+H).

Izrada 45

2-ciklopentil-6-metil-piridin-4-karbonitril

[0148]

[0149] Šema 4, faza A: naslovljeno jedinjenje se u osnovi izrađuje po postupku opisanom za Izradu 43, koristeći ciklopentilcink bromid.<1>H NMR (CDCl3): δ 1.62-1.78 (m, 4H), 1.78-1.89 (m, 2H), 2.00-2.14 (m, 2H), 2.57 (s, 3H), 3.09-3.25 (m, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.19 (s, 1H).

Izrada 46

(2-ciklopentil-6-metil-4-piridil)metanamin dihidrohlorid

[0150]

[0151] Šema 4, faza B: Naslovljeno jedinjenje se u osnovi izrađuje po postupku opisanom za Izradu 42, koristeći 2-ciklopentil-6-metil-piridin-4-karbonitril. LC-ES/MS (m/z): 191.0 (M+H).

Primer 1: prva procedura

N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid

[0152]

[0153] Šema 1, faza F: u rastvor 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoeve kiseline (1.20 g, 4.59 mmol), 1-(2,6-dimetilpiridin-4-il)metamin dihidrohlorida (1.15 g, 5.51 mmol), EDCl (1.08 g, 5.51 mmol), HOBt (768 mg, 5.51 mmol) i DMF (25 mL) se doda TEA (2.59 mL, 18.4 mmol). Nakon 16 h mešanja na RT, doda se voda i smeša ekstrahuje sa DCM (2 x 75 mL). Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ulje koje se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa DCM/MeOH (gradijent od 1:0 do 9:1) da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje (1.56 g, 89% prinos). LC-ES/MS (m/z): 380.2 (M+H). [α]D<20>= -38.08 ° (c = 1.0, MeOH).

Primer 1: druga procedura

[0154] U suspenziju 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoeve kiseline (9.3 g, 36.0 mmol) i 1-(2,6-dimetilpiridin-4-il)metamin dihidrohlorida (7.8 g, 37.0 mmol) u anhidrovanom DMF (100 mL) se doda DIPEA (2.25 mL, 210 mmol) a nakon toga se u malim porcijama u toku 10 min dodaje BOP (17.5 g, 39 mmol). Dobijena smeša se meša 80 min na RT, sipa u 1500 mL ledene vode i energično meša. pH se podesi na -7-8 sa 5.0 N rastvorom HCl i smeša ostavi da se meša na RT u toku noći, ekstrahuje sa MTBE, organska faza se ispere sa vodom, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod vakuumom, prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa 10% metanol/etil acetat u heksanima (gradijent od 3:5 do 1:0), a frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i upare pod vakuumom. Dobijeni

4

ostatak se 1.5 dan suspenduje u vodi (150 mL) i tako dobijena čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (9.8 g, 73% prinos) kao fino beli prašak. LC-ES/MS (m/z): 380.2 (M+H).

Primer 1: treća procedura

[0155] Šema 2, faza I: smeša (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-diona (120 g, 401.1 mmol), (2,6-dimetil-4-piridil)metanamin dihidrohlorida (100 g, 481.3 mmol), paladijum(II) acetata (2.97g, 13.24 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksantena (14.85 g, 25.67 mmol), DIPEA (181 g, 1404 mmol) i toluena (1.2 L) se kombinuje u čeličnoj reaktivnoj postudi, prečisti sa N2, zatvori u atmosferi ugljen monoksida na 60 psi (401.1 mmol) i zagreva 18h na 100 °C. Reaktivna smeša se ohladi na RT i prečisti četiri puta sa N2. Doda se malo MeOH i DCM i smeša se filtrira kroz ploču diatomejske zemlje. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije tamno braon ulje. Dodaju se DCM (1.5 L) i H2O (1.5 L) i dobijena braon čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i trituira sa Et2O da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (124.8 g, 92% prinos). LC-ES/MS (m/z): 380.2 (M+H).

Difrakcija X-zraka praška (XRPD)

[0156] XRD uzorci kristalnih čvrstih supstanci su dobijen na Bruker D4 Endeavor difraktometru X/zraka praška, opremljenim sa izvorom CuKa source (λ = 1.54060 Å) i Vantec detektorom, koji radi na 35 kV i 50 mA. Uzorak se skenira između 4 i 40° u 2θ, sa veličinom faze od 0.0087° u 2θ i brzinom skeniranja od 0.5 secondi/faza i sa 0.6 mm divergencije, 5.28mm fiksnim anti-skaterom i 9.5 mm proreza detektora. Suvi prašak se stavi na kvarcni držač uzorka a glatka površina se dobija pomoću staklene ljuspice. U tehnici kristalografije je dobro poznato da, za bilo koji dati kristalni oblik, relativni intenziteti pikova difrakcije mogu da variraju zbog preferirane orijentacije koja je rezultat faktora kao što su morfologija i karakteristike kristala. Kada su prisutni efekti preferirane orijentacije, intenziteti pika su izmenjeni, ali su pozicije karakterističnog pika polimorfa nepromenjene. Videti, na primer, The United States Pharmacopeia #38, National Formulary #35 Chapter <941> Characterization crystalline and partially crystalline solids by X-ray powder diffraction (XRPD), Official May 1, 2015. Osim toga, u tehnici kristalografije je takođe dobro poznato da za bilo koji dati kristalni oblik pozicije ugaonog pika mogu blago da variraju. Na primer, pozicije pika mogu da se menjaju zbog promena u temperaturi ili vlažnosti na kojima se uzorak analizira, pomeranja uzorka ili prisustva ili nedostatka unutrašnjeg standarda. U ovom slučaju, promene pozicije pika od ± 0.2 u 2θ ove potencijalne varijacije su uzete u obzir bez ometanja jasne identifikacije navedenog kristalnog oblika. Potvrda kristalnog oblika može da se izvrši na osnovu bilo koje jedinstvene kombinacije različitih pikova (u jedinicama ° 2θ), obično najistaknutijih ikova. Uzorci difrakcije kristalnog oblika, dobijeni na sobnoj temperaturi i pri relativnoj vlažnosti, su podešeni na bazi NIST 675 standardnih pikova za 8.85 i 26.77 stepeni 2θ.

Kristalni oblik Primera 1

N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid (kristalni anhidrat)

[0157] Jedinjenje primera 1, N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid, može da se kristališe kao anhidrat slobodne baze rastvaranjem N-[(2,6-dimetilpiridin-4- il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamida (150 mg, 0.40 mmol) u 3 mL 1:1 metanol: voda na 70 °C da se dobije skoro bistar rastvor. Smeša se ohladi na RT i meša, pri čemu nakon 2 h može da se uoči gusta bela žitka masa čvrstih čestica. Čvrste supstance se izdvoje filtriranjem i suše 2h pod vakuumom na 70 °C da se dobije traženi kristalni anhidrat naslovljenog jedinjenja (126 mg, 84% prinos).

[0158] Prema tome, izrađeni uzorak N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamida (kristalni anhidrat) se karakteriše XRPD profilom koristeći CuKa zračenje time što ima pikove difrakcije (2θ vrednosti) kako je opisano u niže datoj Tabeli 1. Preciznije, uzorak sadrži pik na 13.4° u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 14.4°, 18.1°, 19.4°, 20.9°, 21.2°, 21.5° i 26.5° sa tolerancijom za uglove difrakcije od 0.2 stepena.

Tabela 1: pikovi difrakcije X-zraka praška oblika kristalnog anhidrata Primera 1

Primer 1A: prva procedura

Kristalni N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-((1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid metansulfonat

[0159]

[0160] N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid metansulfonat (509 mg, 1.34 mmol) se suspenduje u 5 mL acetona pri 1000 opm/60 °C. Doda se metansulfonska kiselina (105 µL, 1.6 mmol) i smeša se meša da se dobije bistar žuti rastvor sa malo gume na dnu bočice. Uzorak se suspenduje približno 10 min i malo gume se rastvori pre nego što smeša postane mutna a bela čvrsta supstanca se izdvoji precipitacijom iz rastvora. Zagrevanje se obustavi nakon 20 min mešanja i uzorak se meša pri 1000 opm uz hlađenje na RT. Dobijeni bela čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem pod vakuumom, ispere sa 500 µL acetona i suši 15 min na filter papiru u struji vazduha da se dobije naslovljeno jedinjenje (605 mg, 94.8% prinos) kao bela kristalna čvrsta supstanca.

Primer 1A: druga procedura

[0161] Rastvor N-[(2,6-dimetil-4-piridil)metil]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzamida (23.6 g, 62.2 mmol) u acetonu (500 mL) se zagreva 1h pod refluksom uz mešanje na 1000 opm. Doda se metansulfonska kiselina (4.5 mL, 69 mmol) i smeša se zagreva 1 h. Nakon hlađenja na RT, dobijeni precipitat se sakupi filtriranjem, ispere sa acetonom i suši pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasti prašak (28.3 g, 96% prinos). LC-ES/MS (m/z): 380.2 (M+H).<1>H NMR (DMSO): 1.07 (s, 3H), 1.22 (d, 3H), 2.15 (d, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.66 (s, 6H), 3.05 (d, 1H), 3.12 (q, 1H), 4.62 (d, 2H), 7.43 (d, 2H), 7.62 (s, 2H), 7.87 (d, 2H), 9.24 (bt, 1H), 11.24 (bs, 1H).

Asimetrična analiza: >99% de, tR= 2.32 min (asimetrična SFC OD-H kolona, 17% EtOH u 20 mM NH3/MeOH, 5 mL/min, 100 bara, 35 °C, 220 nm).

[0162] Uzorak kristalnog N-[(2,6-dimetilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3- il]etil}benzamid metansulfonata se karakteriše XRD profilom koristeći CuKa zračenje što ima pikove difrakcije (2θ vrednosti) kako je niže opisano u Tabeli 2 a posebno time što ima pikove na 18.8° u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja sadrži 23.2°, 24.7° i 15.2°; sa tolerancijom za uglove difrakcije od 0.2 stepena.

Tabela 2: pikovi difrakcije X-zraka praška za Primer 1A

Primer 2

N-[(4,6-dimetil-2-piridil)metil]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzamid

[0163]

[0164] Šema 7, faza (X=CH, Y=N, Z=CH, R=Me): izradi se od 1-(4,6-dimetilpiridin-2-il)metanamina (Aldrich, CAS# 76457-15-3, 30 mg, 0.21 mmol) i 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzoeve kiseline (45 mg, 0.17 mmol) u suštini po postupku opisanom u Primeru 1: prva procedura da se dobije naslovljeno jedinjenje (61 mg, 93% prinos). LC-ES/MS (m/z): 380.0 (M+H).

Primer 3

N-[(6-cijano-4-metil-2-piridil)metil]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzamid

[0165]

[0166] Šema 7, faza (X=CH, Y=N, Z=CH, R=CN): izradi se od 6-(aminometil)-4-metilpiridin-2-karbonitrila (35 mg, 0.23 mmol) i 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzoeve kiseline (50 mg, 0.191 mmol) u osnovi po postupku opisanom u Primeru 1: prva procedura da se dobije naslovljeno jedinjenje (36 mg, 48% prinos). LC- ES/MS (m/z): 391.0 (M+H).

Primer 4

N-[(2-cijano-6-metil-4-piridil)metil]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzamid

[0167]

[0168] Šema 7, faza (X=CH, YCH, Z=N, R=CN): izradi se od 4-(aminometil)-6-metil-piridin-2-karbonitrila (53 g, 0.289 mmol) i 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzoeve kiseline (50 mg, 0.19 mmol) u osnovi po postupku opisanom u Primeru 1: prva procedura da se dobije naslovljeno jedinjenje (52 g, 69% prinos). LC-ES/MS (m/z): 391.0 (M+H).

Primer 5

N-[(2-izopropil-6-metil-4-piridil)metil]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il] etil] benzamid

[0169]

[0170] Šema 7, faza (X=CH, Y=CH, Z=N, R=i-Pr): izradi se od (2-izopropil-6-metil-4-piridil)metanamina (42 mg, 0.23 mmol) i 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzoeve kiseline (50 mg, 0.19 mmol) u osnovi po postupku opisanom u Primeru 1: prva procedura da se dobije naslovljeno jedinjenje (60 mg, 77% prinos). LC-ES/MS (m/z): 408.2 (M+H).

Primer 6

N-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)metil]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il] etil]benzamid

[0171]

[0172] Šema 7, faza (X=CH, YCH, Z=N, R=c-Pr): izradi se od (2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)metanamin dihidrohlorida (54 mg, 0.23 mmol) i 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil]benzoeve kiseline (50 mg, 0.19 mmol) u suštini po postupku opisanom u

1

Primeru 1: prva procedura da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.068 g, 88% prinos). LC-ES/MS (m/z): 406.2 (M+H).

Primer 7

N-[(6-ciklopropil-4-metil-2-piridil)metil]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzamid

[0173]

[0174] Šema 7, faza (X=CH, Y=N, Z=CH, R=c-Pr): izradi se od (6-ciklopropil-4-metil-2-piridil)metanamin dihidrohlorida (54 mg, 0.23 mmol) i 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil]benzoeve kiseline (50 mg, 0.19 mmol) u suštini po postupku opisanom u Primeru 1: prva procedura da se dobije naslovljeno jedinjenje (64 g, 83% prinos). LC-ES/MS (m/z): 406.2 (M+H).

Primer 8

N-[(2,6-dimetil-4-piridil)metil]-5-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]piridin-2-karboksamid

[0175]

2

[0176] Šema 7, faza (X=N, Y=CH, Z=N, R=Me): metil 5-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil]piridin-2-karboksilat (110 mg, 0.39 mmol), (2,6-dimetilpiridin-4-il)metamin (Aurora Building Blocks, CAS # 324571-98-4, 83 mg, 0.59 mmol) i toluen (10 mL) se zagrevaju 2 dana na 150 °C i jedan dan na 165 °C. Reaktivna smeša se ohladi i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa DCM/MeOH (gradijent od 99:1 do 92:8). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (64 mg, 42% prinos). LC-ES/MS (m/z): 381.0 (M+H).

Primer 9

N-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)metil]-5-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il] etil]piridin-2-karboksamid

[0177]

[0178] Šema 7, faza (X= N, Y= CH, Z= N, R=c-Pr): metil 5-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]piridin-2-karboksilat (100 mg, 0.36 mmol), (2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)metanamin dihidrohlorid (126 mg, 0.54 mmol), trietilamin (0.15 mL, 1.07 mmol) i toluen (3 mL) se 1 sat zagrevaju mikrotalasima na 170 °C i 20 sati u uljanom kupatilu na 160 °C. Reaktivna smeša se ohladi i koncentruje. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa DCM/MeOH (gradijent od 99:1 do 92:8). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (34 mg, 23% prinos). LC-ES/MS (m/z): 407.0 (M+H).

Primer 10

N-[(2-etil-6-metilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzamid

[0180] Šema 7, faza (X=CH, Y=CH, Z=N, R=Et): u rastvor 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoeve kiseline (40 mg, 0.153 mmol) u DMF (0.76 mL) se na RT dodaju 1-(2-etil-6-metilpiridin-4-il)metanamin dihidrohlorid (51 mg, 0.23 mmol), DIPEA (0.15 mL, 0.92 mmol) i HATU (71 mg, 0.18 mmol). Nakon 17 h, reaktivna smeša se prečisti reverzno faznom hromatografijom (PHENOMENEX® GEMINI®-NX C18 kolona) uz eluiranje sa 10 mmol amonijum bikarbonata (pH ~10 sa 5% metanola) i ACN da se nakon uparavanja rastvarača dobije naslovljeno jedinjenje (43.0 mg, 71% prinos). LC/MS (m/z): 394.4 (M+H).

Primer 11

N-[(2-ciklobutil-6-metilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil} benzamid

[0181]

[0182] Šema 7, faza (X=CH, Y=CH, Z=N, R=c-Bu): izradi se od 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoeve kiseline (40 mg, 0.15 mmol) i (2-ciklobutil-6-metil-4-piridil)metanamin dihidrohlorida (57 mg, 0.23 mmol) u suštini po postupku opisanom u

4

Primeru 10 da se dobije naslovljeno jedinjenje (38 mg, 60% prinos). LC/MS (m/z): 420.2 (M+H).

Primer 12

N-[(2-ciklopentil-6-metilpiridin-4-il)metil]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il] etil}benzamid

[0183]

[0184] Šema 7, faza (X=CH, Y=CH, Z=N, R=c- pentil): izradi se od 4-{(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}benzoeve kiseline (40 mg, 0.15 mmol) i (2-ciklopentil-6-metil-4-piridil)metanamin dihidrohlorida (60 mg, 0.23 mmol) u suštini po postupku opisanom u Primeru 10 da se dobije naslovljeno jedinjenje (47.7 mg, 72% prinos). LC/MS (m/z): 434.2 (M+H).

Inhibicija produkcije cAMP pomoću antagonista CGRP receptora

[0185] hCGRP (humani kalcitonin gen-povezani peptid) receptor je funkcionalno udvojen sa u Gas proteinima. Stimulacija hCGRP dovodi do povećane sinteze intracelularnog cAMP i može da se blokira dodavanjem antagonista receptora. Količina cAMP prisutnih u ćelijama je na taj način odraz aktivnosti receptora koja može da se detektuje standardnom in vitro tehnologijom.

[0186] Ćelijska kultura: uzgajane SK-N-MC ćelije neuroblastoma (ATCC® HTB-10™) u kojima se endogeno pojavljuje hCGRP receptor se uzgajaju u Eagle’s Minimum esencijalnom medijumu (HYCLONE™) obogaćenom sa 10% seruma fetusa govečeta inaktiviranog toplotom (FBS; GIBCO®), ne-esencijalnim amino kiselinama (GIBCO®), 1 mM natrijum piruvijata, 2 mM L-glutamina, 100 U/mL penicilina i 10 µg/mL streptomicina do približno 70% popunjenosti. Nakon obezbeđivanja svežeg medijuma, ćelije se inkubiraju na 37 °C u toku noći. Na dan ispitivanja, ćelije se odvoje koristeći ACCUTASE® (MP Biomedicals), resuspenduju u puferu za analizu [Hank-ov balansirani rastvor soli/Dulbecco-ov pufer fosfatnih soli sa 100 mg/mL svakog od CaCl2i MgCl2izmešanih u odnosu 1:2, 3.3 mM 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonske kiseline, 0.03% albumina seruma govečeta i 0.5 mM 1-metil-3-izobutilksantina (kao inhibitor cAMP)] i zaseju po 3-5K/udubljenje u bele ploče sa 384 udubljenja obložena D-lizinom (BD Biosciences).

[0187] Inhibicija produkcije cAMP: za studije odgovora na dozu, jedinjenja se serijski razblaže 1:3 u dimetil sulfoksidu a nakon toga 1:10 u puferu za analizu. Humani CGRP (0.8 nM; Bachem) kao agonist specifičnog receptora za hCGRP se izmeša sa razblaženim jedinjenjem i doda u ćelije kao stimulant nadražaja u njihovoj koncentraciji od EC80.

[0188] Analize rezultata: količina intracelularnih cAMP se kvantifikuje HTRF tehnologijom (Cisbio) po uputstvu dobavljača. Ukratko, cAMP-d2 konjugat i anti-cAMP-kriptat konjugat u puferu za lizu se inkubiraju sa tretiranim ćelijama 90 min na RT. HTRF signal se trenutno detektuje pomoću ENVISION® čitača ploče (Perkin-Elmer) da se izračuna odnos fluorescencije na 665 do 620 nM. Sirovi rezultati se prevedu u količinu cAMP (pmol/udubljenje) koristeći standardnu krivu cAMP generisanu za svaki eksperiment.

Relativne EC50vrednosti su izračunate iz odnosa najveće vrednosti na krivoj odgovora na koncentraciju, koristeći četvoroparametarsku logaritamsku krivu dobijenu programom (ACTIVITYBASE® v5.3.1.22 ili GENEDATA SCREENER® v12.0.4) a Kb vrednosti su procenjene kao IC50vrednosti korigovane agonistom koristeći jednačinu:

Procenjene Kb vrednosti su izražene kao srednje vrednosti ± SEM, kao prosek dobijen od broja pokušaja (n).

[0189] Po proceduri koja je u osnovi kako je prethodno opisana, jedinjenja iz Primera 1-12 imaju Kb merenu za humane CGRP kako je pokazano u Tabeli 3. Ovo pokazuje da su jedinjenja iz Primera 1-12 antagonisti humanog CGRP receptora in vitro.

Tabela 3. Izmerene Kb za humani CGRP receptor in vitro

Studije CGRP (kalcitonin gen-povezani peptid) ne-humanih primata

[0190] Kapsaicin koji indukuje protok krvi u koži (DBF) može da se koristi kao ciljani angažovani biomarker za ispitivanje aktivnosti CGRP receptora kod nehumanih primata (NHPs). Postupci su adaptirani iz prethodno objavljenih procedura [Hershey i saradnici, Regulatory Peptides, Volume 127, Issue 1-3, pp.71-77, 2005].

[0191] Populacija u studiji: studije životinja mogu da se izvedu po protokolima odobrenim od strane Covance Institutional Animal Care i Use Committee. Cinomolgus NHPi mogu da se koriste s obzirom na blisku homologiju između NHP i humanog CGRP receptora. Populacija u studiji može da uključi zdrave, bez kontakta sa CGRP antagonistom cinomolgus NHP mužjake težine ~3-4 kg.

[0192] Cinomolgus NHPi su uključeni u studiju na bazi prethodnih odgovora na kapsaicin. NHPi koji su ispoljavali ≥50% povećanje protoka krvi u odnosu na početne vrednosti sa 2 mg (20 µL/prsten) topičnog tretmana kapsaicinom (u proseku 3 O-prstena) u odnosu na početnu vrednost u odgovoru na kapsaicin u proveravanoj ruci i stabilnu psihologiju u toku perioda praćenja su uključeni u studiju sa jedinjenjem iz Primera 1. NHPi su korišćeni u ukrštenom postupku u kome su svi NHPi primili sve doze nakon perioda čišćenja od dve nedelje.

Ukupno n = 10 NHPa po grupi.

[0193] Primena doze. Svaki od NHPa je primio vehikulum, 0/33 i 30 mg/kg antagonista iz Primera 1 primenjenog oralno (10% akacije m/v / 0.05% antipenećeg sredstva 1510-US v/v / u prečišćenoj vodi) 90 min pre primene kapsaicina u eksperimentu snimanja laser doplerom (LDI).

[0194] Farmakodinamičko uzorkovanje. Životinjama se pre svakog nadražaja kapsaicinom ne daje hrana u toku noći. Na dan eksperimenta, NHPi se anesteziraju sa 1% izoflurana približno 30 minuta pre snimanja. NHPi se smeste u tihu sobu sa kontrolisanom temperaturom da leže na toploj maloj hirurškoj podlozi i obrijana ruka se stavi na zagrejanu ploču ispod glave lasera. Tri O-prstena od neoprena (veličine = 8 mm ID) se nameste na podlakticu NHP, na rastojanju približno 1 cm. U toku 30 minuta stabilizirajućeg perioda, urade se preliminarni snimci da se potvrdi korektan položaj O-prstena. Kada se osnovna temperatura (približno 37 °C) stabilizuje, uradi se osnovni snimak. Nakon završenih osnovnih snimaka, 20 µl rastvora kapsaicina (50 mg kapsaicina u rastvoru 170 µl EtOH, 80 µl TWEEN® 20, 250 µl prečišćene H2O) se nanese na svaki O-prsten. Snimanje se nastavi svakih 5 minuta još 25 minuta (85, 90, 95, 100, 105, 110, 115 i 120 min nakon tretmana sa jedinjenjem antagonistom CGRP receptora).

[0195] Analiza i statistika: LDI ponovljeni snimci su analizirani pomoću Moor softvera v.5.2 (Moor Instruments, Wilmington, DE) analizom signala iz regiona od interesa a Microsoft Excel radni listovi se koriste za uprosečavanje signala iz regiona od interesa za datu tačku vremena. Promene u DBF su izražene kao promena procenta od početnog DBF. Rezultati analize su uneti u Graphpad PRISM® 4.0 za izradu grafika a ponovljena merenja u SAS® 9.1 modelu mešovitog efekta se koriste za statističke analize. Rezultati su izraženi kao prosek /-SD.

[0196] Korišćenjem mešovitog modela efekta sa ponovljenim merenjem (autoregresivna korelacija preko AR1 procesa) i višestruko prilagođavanje stope lažnih otkrića, u poređenju sa vehikulumom jedinjenja iz Primera 1 za 3 i 30 mg/kg, dobija se statistički značajno smanjenje u povećanju protoka krivi nakon nadražaja kapsaicinom sa prosečnom inhibicijom u grupi od 27.4% (p < 0.003) i 40.6% (p < 0.00001) tim redom.

Claims (18)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule:

   naznačeno time što Y je CH ili N; Z je CH ili N; pod uslovom da kada je Y = CH, Z je N a kada je Y = N, Z je CH; X je CH ili N; i R je C1-C3 alkil, C3-C5 cikloalkil, ili CN grupa, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je X = CH grupa.
3. 3. Jedinjenje ili so u skladu ili sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 2, naznačeno time što je Y = CH i Z je N.
4. 4. Jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što je R = C1-C3 alkil grupa.
5. 5. Jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 4, naznačeno time što ima formulu:
6. 6. Jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time što ima formulu:
7. 7. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to jedinjenje:
8. 8. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 7, naznačeno time što je to jedinjenje:
9. 9. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačeno time što je to jedinjenje:
10. 10. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 9, naznačeno time što je to:
11. 11. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 10, naznačeno time što je to kristalni anhidrat koji se karakteriše bitnim pikom u spektru difrakcije X-zraka pri uglu difrakcije 2-teta od 13.4°, u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 14.4°, 18.1°, 19.4°, 20.9°, 21.2°, 21.5° i 26.5°, sa tolerancijom za uglove difrakcije od 0.2 mereno sa CuK-alfa izvorom.
12. 12. So u skladu sa patentnim zahtevom 9, naznačena time što je to:
13. 13. So u skladu sa patentnim zahtevom 12, naznačena time što je to kristal koji se karakteriše bitnim pikom u spektru difrakcije X-zraka pri uglu difrakcije 2-teta od 18.8°, u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 23.2°, 24.7 i 15.2°, sa tolerancijom za uglove difrakcije od 0.2 mereno sa CuK-alfa izvorom.
14. 14. Jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji.
15. 15. Jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu migrene.
16. 16. Jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, naznačeno time što je za upotrebu u prevenciji migrene.
17. 17. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje jedinjenje ili so u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13 i jednan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. 1
18. 18. Proces za izradu farmaceutske kompozicije, naznačen time što uključuje mešanje jedinjenja ili soli u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13 sa jednim ili više farmaceutski privatljivih nosača, razblaživača ili podloga. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 2