RS62079B1 - Upotreba probiotika u lečenju i/ili prevenciji atopijskog dermatitisa - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na probiotsku kompoziciju i upotrebu navedene kompozicije u lečenju i/ili prevenciji atopijskog dermatitisa. Samim tim, ovaj pronalazak se može smatrati uključenim u polje medicine, posebno u oblast lečenja kožnih bolesti.

NAJNOVIJA DOSTIGNUĆA

[0002] Atopijski dermatitis (AD) je pruritična, upalna bolest kože hroničnog toka, koju karakteriše razvoj lezija ekcema sa karakterističnim obrascem distribucije koji pogađa pacijente sa kožnom hiperreaktivnošću na različite faktore okoline koji su bezopasni za neatopične pacijente. Atopični pacijenti često imaju ličnu ili porodičnu istoriju astme ili alergijskog rinitisa ili AD i imaju povišene nivoe IgE u serumu. Atopijski dermatitis najčešće pogađa decu, ali se može nastaviti i/ili se može pojaviti u adolescenciji ili odraslom dobu.

[0003] Prevalenca AD je između 4 i 20% populacije. Postoje velike razlike između ruralnog ili urbanog okruženja, a incidencija je veća u ovom drugom. Incidencija AD se verovatno povećava iz sledećih razloga: zapadnjački način života, povećana starost majki, zagađenje, pušenje majki i smanjeno dojenje. Četrdeset pet posto (45%) dece razvije AD u prvih šest meseci života, a 85% u prvih pet godina. Kada bolest počne kod dece mlađe od dve godine, 20% ima trajne simptome u uzrastu od sedam godina.

[0004] Iako se atopijski dermatitis klinički manifestuje kao ekcem, kako u akutnom, tako i u hroničnom stanju, ova bolest ima veliku varijabilnost u: 1) opsegu kliničkih manifestacija; 2) genetskoj osnovi istih i 3) patogenetskim mehanizmima u osnovi kliničkih manifestacija.

[0005] Jedna od najrasprostranjenijih hipoteza koja objašnjava poreklo atopijskog dermatitisa pretpostavlja da je to jedna od niza manifestacija, koja u ovom slučaju utiče na kožu, sistemskog procesa koji uključuje druge organe i sisteme ljudskog tela, što dovodi do niza simptoma kao što su astma, alergija na hranu i alergijski rinitis, između ostalih. Zapravo, visok procenat pacijenata sa ovim bolestima ima povišene nivoe IgE i eozinofila u perifernoj krvi, iako su i poreklo i kliničke implikacije nejasni.

[0006] Što se tiče patofizioloških mehanizama, veruje se da imuni odgovor igra glavnu ulogu u njegovom poreklu. U stvari, noviji podaci impliciraju kožne dendritične ćelije (ćelije koje prezentuju antigen) i regulaciju upalno-imunih signala posredovanih Th2 limfocitima u poreklu AD. Podaci ukazuju da se patofiziološko poreklo AD može pronaći u ovim imunološkim mehanizmima, uključujući kožne dendritične ćelije koje prezentuju antigen i imunološku regulaciju i upalne signale posredovane Th2 limfocitima. Ono što trenutno nije poznato je izvor stimulusa koji pokreće imunološku kaskadu koja se javlja kod AD.

[0007] Bolest ima širok spektar kliničkih manifestacija, od manjih oblika poput ekcema ruku do ozbiljnijih oblika poput eritrodermijskog osipa. Nema specifičnih promena patološkog ili laboratorijskog tipa, stoga je dijagnoza AD klinička, a standardna dijagnoza prati kriterijume Hanifin-Rajka (Hanifin JM, et al. Acta Derm Venereol 1980;92:44-7)

[0008] Kliničke karakteristike AD variraju u zavisnosti od dobi i uključene su u dijagnostičke kriterije; uključuju svrab, lezije ekcema i lezije od češanja.

[0009] Svrab: jedan od najvažnijih i doslednih nalaza atopije. Atopijski pruritus je intenzivan i obično uzrokuje izbijanje. Svrab uzrokuje da se pacijenti povrede češanjem. Iako uzrok pruritusa nije u potpunosti shvaćen, čini se da je to posledica oslobađanja medijatora upale i citokina.

[0010] Ekcem: lezije ekcema mogu biti akutne i hronične. Akutne povrede karakterišu makule, papule i eritematozni, vezikularni, eksudativni i vrlo pruritični plakovi. Ponavljano češanje i ogrebotine dovode do hroničnih povreda, koje su okarakterisane zadebljanjem kože koje je praćeno lihenifikacijom i očiglednim prisustvom suvih vlaknastih papula.

[0011] Lihenifikacija: uočavaju se karakteristične lihenificirane kožne lezije, koje se sastoje od nedovoljno definisanih plakova sa zadebljanjem kože na kojoj se vide označeni nabori i linije kože

[0012] Prurigo: male papule sa diskretnim plikom i vidnim ranama koje su posledica snažnog češanja.

[0013] Eksfolijativni dermatitis: slučajevi opsežne atopije mogu se klinički pojaviti poput generalizovanog eksfolijativnog dermatitisa, uključenog u diferencijalnu dijagnozu eritrodermija.

[0014] Pored utvrđivanja dijagnoze, mora da se proceni ili kvantifikuje ozbiljnost. U tu svrhu razvijene su razne metode i kriterijumi za procenu ozbiljnosti i praćenje odgovora na terapiju, u kliničkim studijama i opservacionim istraživanjima, pa čak i u kliničkoj praksi, kada je cilj predstaviti napredak pacijenta preciznije od opisa koji se dobija subjektivnom percepcijom pacijenta, negovatelja ili lekara. U tom pogledu, najvalidnija i najčešće korišćena metoda je takozvani SCORAD indeks (bodovanje atopijskog dermatitisa) koji je razvila grupa Evropska radna grupa za atopijski dermatitis 1993. godine (European Task Force on Atopic Dermatitis. Severity scoring of atopic dermatitis: the SCORAD index. Dermatology 1993; 186:23-31). Pokazao se kao najbolja metoda za procenu ozbiljnosti atopijskog dermatitisa u uporednim studijama, a ujedno je i najviše dokumentovan u pogledu valjanosti, ponovljivosti, osetljivosti i prihvatljivosti. SCORAD je sistem bodovanja koji uzima u obzir opseg i intenzitet pet vrsta osnovnih AD lezija (eritema, edema/papule, curenje/stvaranje kraste, ekskorijacija i lihenifikacija) i simptomi (svrab i gubitak sna).

[0015] Postoje neke razlike u pogledu vrednosti indeksa SCORAD koje definišu različite stepene ozbiljnosti. Neke španske grupe smatraju da blagi, umereni ili teški simptomi odgovaraju rezultatima SCORAD indeksa <25, 25 do 40 ili >40, tim redom, dok drugi autori, na osnovu korelacije sa laboratorijskim testovima, koriste rezultate <20, 20 do 40 ili >40, tim redom za definisanje blagih, umerenih i teških simptoma.

[0016] Postoji konsenzus o lečenju AD, čiji je cilj prvenstveno prevencija svraba i uklanjanje upalne lezije; i, drugo, sprečavanje vraćanja (Muñoz F.2002. JANO, 1432: 52-7; Boguniewitcz M, Schmid-Grendelmeier P i Leung DYM.2006. J Allergy Clin Inmunol, 118: 40-3). Da bi se sprečili svrab i češanje, prepisuju se antihistaminici H1, iako efikasnost nije jasno dokazana. Primarna svrha lečenja ekcema je kontrola upalne lezije, koja pomaže i u kontroli svraba. Zbog toga se koriste topikalni kortikosteroidi različite jačine, u zavisnosti od težine povrede i stanja pacijenta. Oni sa očigledno boljim rezultatima su tradicionalni antihistaminici H1 koji uzrokuju sedaciju (hidroksizin, klemastin, dekshlorfeniramin) i antihistaminici H1 nove generacije (deksfenfluramin, loratadin, cetirizin i derivati), koji su manje sedativni, ali ponekad pokazuju rezultate koji se statistički ne razlikuju od placeba (Boguniewitcz M, et al.2006. Citirano ad supra).

[0017] Neželjeni efekti topikalnih kortikosteroida uslovljavaju ograničenja upotrebe. Najčešće su neželjene reakcije na mestu primene. Ako se primenjuju periokularno, obično se pojavljuju: atrofija kože, petehije, atrofične strije, hipertrihoza, depigmentacija, telangiektazija, folikulitis i glaukom. Ređe su zabeleženi i ozbiljniji sistemski neželjeni efekti, poput suzbijanja hipotalamusno-hipofizno-nadbubrežne osovine, zastoja u rastu ili kušingoida.

[0018] Nedostatak reakcije nekih pacijenata na kortikosteroide i njihovi štetni efekti pokrenuli su razvoj novih lekova za lečenje upale. Među najbolje proučenim su topikalni kalcineurinski inhibitori (takrolimus i pimekrolimus) Leung, DYM and Bleder, T. 2003, Lancet, 361: 151-60; Muñoz, F. 2002, JANO, 1432: 52-7). Međutim, i dalje postoje sumnje u sigurnost ovih lekova u dugotrajnim lečenjima. Zapravo, prospekt proizvoda koji sadrže takrolimus ili pimekrolimus za topikalno lečenje atopijskog dermatitisa ukazuje na to da se smeju koristiti samo kod dece starije od dve godine za koju se upotreba topikalnih kortikosteroida ne preporučuje ili je prethodno bila neuspešna.

[0019] Upotreba probiotika za lečenje AD proučava se poslednjih godina u ograničenom broju pilot-studija, a rezultati se razlikuju u zavisnosti od korišćenog probiotika i starosti pacijenata u ispitivanju (Soo-Pk Kim, et al. 2014. Ann Allergy Asthma Immunol. 113: 217e226; Gerasimov, SV et al. 2010. Am J Clin Dermatol, 11:351e361; Farid, R. et al.

2011. Iran J Pediatr. 21:225e230). Najnovija istraživanja, uključujući meta-analizu iz prethodnih publikacija, pokazuju povoljan učinak upotrebe probiotika u određenim okolnostima vezanim za starost, soj bakterija ili kombinaciju probiotika i korišćene doze ((Farid, R. et al 2011 cited ad supra; Van del Aa LB, et al. 2010. Clin Exp Allergy.

40:795e804; Boyle, RJ et al. 2008. Cochrane Database Syst Rev, 4: CD006135: Lee, J. et al. 2008. J Allegy Clin Immunol. 121:116). Probiotici koji se najviše proučavaju u lečenju atopijskog dermatitisa i sprečavanju novih pojava bolesti pripadaju rodovima Bifidobacterium i Lactobacillus, jer se čini da oni daju bolje rezultate (Lee, J. et al. 2008. Citirano ad supra).

[0020] Poznata je medicinska potreba da se razviju kvalitetni tretmani koji su sigurni i efikasni za dugoročno lečenje AD jer atopijski dermatitis utiče na značajan deo populacije i ima značajan uticaj na kvalitet života, na koje mogu da utiču medicinske komplikacije itd. Topikalni kortikosteroidi se smatraju vrlo efikasnim lečenjem, ali podrazumevaju visok rizik od neželjenih efekata. Uključivanje novih alternativa uz topikalne kortikosteroide (poput kalcineurinskih inhibitora) zadovoljava ovu potrebu, iako rizik od neželjenih efekata kod ovih novih lekova tek treba da se utvrdi. Stoga, dosadašnje stanje pokazuje da postoji potreba za razvojem novih kompozicija koje će biti korisne u lečenju AD, koje se pokazuju efikasnim i nemaju tipične nuspojave lekova koji su bili u upotrebi do danas.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0021] Autori ovog pronalaska otkrili su da davanje probiotske kompozicije koja modifikuje crevnu mikrobiotu pojedincu koji pati od atopijskog dermatitisa, zajedno sa uobičajenim lečenjem, iznenađujuće omogućava remisiju i/ili poboljšanje evolucije izbijanja atopijskog dermatitisa kod pojedinca. Kao što je prikazano u primerima koji prate ovaj opis, kada se probiotska kompozicija (koji sadrži mikroorganizme rodova Bifidobacterium i Lactobacillus) primenjivala zajedno sa uobičajenom hroničnom terapijom pacijenata sa pojavom atopijskog dermatitisa, zabeleženo je poboljšanje indeksa SCORAD od 82,36% dok je poboljšanje ovog indeksa kod slučajeva lečenih uobičajenom hroničnom terapijom, ali bez probiotske kompozicije, bilo 28,4%, što su klinički i statistički značajne razlike. Štaviše, poboljšanje nastalo usled probiotske kompozicije dogodilo se od prvog meseca unosa, a razlike u kasnijim analizama tokom 2 i 3 meseca lečenja su se zadržale ili povećale. Pored toga, još jedna prednost lečenja AD probiotskom kompozicijom pronalaska je ta što je upotreba kortikosteroida kod pacijenata u grupi koja je lečena navedenom probiotskom kompozicijom bila niža nego u grupi koja je primala placebo.

[0022] Pored ovog blagotvornog učinka na napredovanje bolesti kod pacijenata sa pojavom atopijskog dermatitisa, primećeno je i da su u tri meseca nakon prekida terapije prethodno pomenutom probiotskom kompozicijom, osobe koje su primale navedenu kompoziciju imale manje izbijanja i duže vremenske intervale bez bolesti od onih pacijenata koji nisu primali terapiju.

[0023] Time je dokazana korisnost ovde opisane probiotske kompozicije u lečenju i/ili prevenciji atopijskog dermatitisa.

[0024] Pronalazači su razvili niz inventivnih aspekata koji će biti detaljno opisani u nastavku.

Kompozicija probiotske kompozicije pronalaska i njena upotreba u lečenju atopijskog dermatitisa (AD).

[0025] U jednom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na probiotsku kompoziciju koja sadrži mikroorganizam Bifidobacterium animalis subs. lactis (u daljem tekstu B. lactis), Bifidobacterium longum i Lactobacillus casei.

[0026] U ovom pronalasku pojam „probiotska kompozicija“ se odnosi na kompoziciju koja sadrži najmanje jedan mikroorganizam koji, kada se proguta, ostvaruje interakciju sa metabolizmom osobe i proizvodi blagotvorno dejstvo. U ovom pronalasku, probiotska kompozicija sadrži mikroorganizme B. lactis, B. longum i L. casei, u daljem tekstu, „probiotska kompozicija pronalaska“.

[0027] B. lactis je bakterija koja se obično koristi kao probiotik, a nalazi se uglavnom u jogurtu i drugim mlečnim proizvodima, uključujući formule za novorođenčad. Naučna klasifikacija za B. lactis je: Carstvo: Bakterija Tip: Firmicutes Klasa: Actinobacteria, Red: Bifidobacteria, Porodica: Bifidobacteriaceae, Rod: Bifidobacterium, Vrsta: Bifidobacterium animalis subsp. lactis.

[0028] L. casei je bakterija koja se obično koristi kao probiotik, a nalazi se uglavnom u jogurtu i drugim mlečnim proizvodima, uključujući formule za novorođenčad. Naučna klasifikacija za L. casei je: Carstvo: Bakterija Tip: Firmicutes Klasa: Bacili Red: Lactobacillales, Porodica: Lactobac illaceae, Rod: Lactobacillus, Vrsta: Lactobacillus casei.

[0029] Pored toga, B. longum je gram negativna, katalaza negativna bakterija, zaobljenog oblika, koja se nalazi u gastrointestinalnom traktu, gde proizvodi mlečnu kiselinu. Naučna klasifikacija za B. longum je: Carstvo: Bakterija Tip: Firmicutes Klasa: Actinobacteria, Red: Bifidobacteria, Porodica: Bifidobacteriaceae, Rod: Bifidobacterium, Vrsta: Bifidobacterium longum.

[0030] U posebnom rešenju, probiotska kompozicija pronalaska sadrži B. lactis CECT 8145 (i/ili od nje izvedene sojeve), B. longum CECT 7347 (i/ili od nje izvedene sojeve) i/ili L. casei CECT 9104 (i/ili od nje izvedene sojeve).

[0031] Soj B. lactis CECT 8145 izolovan je iz izmeta zdravog deteta koje se doji uzrasta ispod tri (3) meseca. Ovaj soj je deponovan 14. maja 2012. godine u skladu sa Budimpeštanskim ugovorom u Španskoj kolekciji tipskih kultura kao Međunarodna depozitarna uprava (sa sedištem u zgradi 3 CUE, Parc Científic Universitat de Valencia, C/ Catedrático Agustín Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia) ŠPANIJA). Dodeljeni broj depozita je CECT 8145.

[0032] Soj L. casei CECT 9104 izolovan je iz izmeta zdravog deteta koje se doji uzrasta ispod tri (3) meseca. Ovaj soj je deponovan 25. februara 2016. godine u skladu sa Budimpeštanskim ugovorom u Španskoj kolekciji tipskih kultura kao Međunarodna depozitarna uprava (sa sedištem u zgradi 3 CUE, Parc Científic Universitat de Valencia, C/ Catedrático Agustín Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia) ŠPANIJA). Dodeljeni broj depozita je CECT 9104.

[0033] Soj B. longum CECT 7347 izolovan je iz izmeta zdravog deteta koje se doji uzrasta ispod tri (3) meseca i deponovan je 20. decembra 2007. godine u skladu sa Budimpeštanskim ugovorom u Španskoj kolekciji tipskih kultura kao Međunarodna depozitarna uprava (sa sedištem u zgradi 3 CUE , Parc Científic Universitat de Valencia, C/ Catedrático Agustín Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia) ŠPANIJA). Dodeljeni broj depozita je CECT 7347.

[0034] Ovaj pronalazak takođe razmatra mikroorganizme ili bakterije izvedene iz mikroorganizama B. lactis, B. longum i L. casei (ili njihovi odgovarajući sojevi B. lactis CECT 8145, L. casei CECT 9104 i B. longum CECT 7347) i oni mogu biti deo probiotske kompozicije pronalaska jer zadržavaju sposobnost smanjenja i/ili poboljšavanja evolucije atopijskog dermatitisa kod osoba koje pate od ove patologije. Primeri sojeva ili mikroorganizama izvedenih iz sojeva sadržanih u probiotskoj kompoziciji pronalaska mogu da budu mutirani i genetski modifikovani organizmi koji pokazuju varijacije u svom genomu u odnosu na genom sojeva pronalaska, ali koji ne utiču na sposobnost sojeva da smanje i/ili poboljšaju evoluciju atopijskog dermatitisa kod osoba. Sojevi izvedeni iz B. lactis, B. longum i L. casei (ili iz sojeva B. lactis CECT 8145, L. casei CECT 9104 i B. longum CECT 7347) mogu se prirodno ili namerno proizvesti mutagenezom, kao što je poznato u delatnosti, kao što je, na primer, ali ne ograničavajući se na to, rast roditeljskog soja u prisustvu mutagenih agenasa ili stresora ili genetskim inženjeringom usmerenim na modifikaciju, brisanje i/ili umetanje specifičnih gena. Prema tome, kao što je gore naznačeno, ovaj pronalazak takođe uključuje genetski modifikovane organizme izvedene iz B. lactis, B. longum i L. casei (ili iz sojeva B. lactis CECT 8145, L. casei CECT 9104 i B. longum CECT 7347), koji zadržavaju sposobnost smanjenja i/ili poboljšanja evolucije atopijskog dermatitisa kod pojedinca i samim tim se koristiti u lečenju atopijskog dermatitisa. Primer testa za proveru da li organizam ima sposobnost smanjenja i/ili poboljšanja evolucije atopijskog dermatitisa kod osoba opisan je u pratećim primerima navedenim ovde.

[0035] Pored toga, ovaj pronalazak takođe razmatra ćelijske komponente, metabolite i molekule koje luče B. lactis, B. longum i L. casei ili njihovi odgovarajući sojevi B. lactis CECT 8145, L. casei CECT 9104 i/ili B. longum CECT 7347, kao i kompozicije koje sadrže navedene komponente, bilo da su u pitanju ćelije, metaboliti ili lučeni molekuli i samim tim se upotrebljavaju u lečenju i/ili prevenciji atopijskog dermatitisa. Ćelijske komponente bakterija mogu da uključuju komponente ćelijskog zida (kao što su, ali ne ograničavajući se na njih, peptidoglikan), nukleinske kiseline, membranske komponente i drugo, poput proteina, lipida i ugljenih hidrata i njihove kombinacije (kao što su lipoproteini, glikolipidi ili glikoproteini). Metaboliti uključuju bilo koji molekul proizveden ili modifikovan od strane bakterije usled metaboličke aktivnosti tokom rasta, njegove upotrebe u tehnološkim procesima ili tokom skladištenja proizvoda (probiotska kompozicija pronalaska). Primeri ovih metabolita uključuju, ali nisu ograničeni na, organske i anorganske kiseline, proteine, peptide, aminokiseline, enzime, lipide, ugljene hidrate, lipoproteine, glikolipide, glikoproteine, vitamine, soli, minerale i nukleinske kiseline. Lučeni molekuli uključuju bilo koji molekul koji bakterija luči ili ispušta ka spolja tokom rasta, njegove upotrebe u tehnološkim procesima (na primer, prerada hrane ili lekovi) ili tokom skladištenja proizvoda (probiotska kompozicija pronalaska). Primeri ovih molekula uključuju, ali nisu ograničeni na, organske i anorganske kiseline, proteine, peptide, aminokiseline, enzime, lipide, ugljene hidrate, lipoproteine, glikolipide, glikoproteine, vitamine, soli, minerale i nukleinske kiseline.

[0036] Prema razumevanju stručnjaka u oblasti, probiotska kompozicija pronalaska može da se formulište za farmaceutsku primenu, tj. kao sastavni deo faramaceutskih proizvoda koji se daju subjektu (na primjer oralno, topikalno, itd.), i/ili za davanje hrane, tj. kao sastavni deo hrane koju subjekat konzumira u ishrani. U ovom pronalasku, navedena kompozicija je namenjena za umanjivanje, smanjivanje, lečenje i/ili prevenciju atopijskog dermatitisa. Prema tome, u određenom rešenju, probiotska kompozicija pronalaska je farmaceutska kompozicija i/ili nutritivna kompozicija.

[0037] Farmaceutska kompozicija je skup komponenti ili jedinjenja koji formiraju najmanje mikroorganizmi B. lactis, L. casei i B. longum, posebno sojevi B. lactis CECT 8145 i/ili L. casei CECT 9104 i/ili B. longum CECT 7347 (ili iz njih izvedeni sojevi) u bilo kojoj koncentraciji i koji naknadno mogu da sadrže jednu ili više komponenti ili jedinjenja koji mogu da imaju bilo koju biološku, farmakološku i/ili veterinarsku aktivnost koja, nakon davanja subjektu, može dodatno da poveća, pojača i/ili unapredi aktivnost sojeva uključenih u probiotsku kompoziciju pronalaska. Kao što bi razumeo neko ko je stručan u datoj oblasti, dodatne komponente ili jedinjenja moraju da budu kompatibilni sa sojevima probiotske kompozicije pronalaska. U kontekstu ovog pronalaska, pojam „farmaceutska kompozicija“ takođe uključuje veterinarske kompozicije.

[0038] Primeri korisnih komponenata ili jedinjenja koji se upotrebljavaju u lečenju atopijskog dermatitisa i koji mogu da budu deo farmaceutske kompozicije uključuju, ali nisu ograničeni na, tradicionalne antihistaminike H1 (npr. hidroksizin, klemastin i dekshlorfeniramin), nedavno razvijeni antihistaminici H1 (npr. deksfenfluramin, loratadin, cetirizin i derivati) i kalcineurinski inhibitori (npr. takrolimus i pimekrolimus).

[0039] U posebnom rešenju, farmaceutska kompozicija dodatno sadrži farmaceutski prihvatljivi nosač i/ili ekscipijens.

[0040] Pojam „ekscipijens“ se odnosi na supstancu koja olakšava apsorpciju komponenti ili jedinjenja probiotske kompozicije pronalaska, tačnije, sojeva pronalaska ili stabilizuje komponente ili jedinjenja i/ili pomaže u pripremi farmaceutske kompozicije po pitanju konzistencije ili ukusa kako bi bio prijatniji. Dakle, ekscipijensi mogu da imaju ulogu, po primeru, ali ne ograničavajući se na to, da vežu komponente (na primer, skrob, šećer ili celulozu), zaslađuju, boje i štite aktivni sastojak (na primer, da ga izoluju od vazduha i/ili vlage), pune pilule, kapsule ili bilo koju drugu prezentacionu ili dezintegrišuću ulogu kako bi se olakšalo rastvaranje komponenata, bez isključivanja drugih ekscipijenasa koji nisu navedeni u ovom poglavlju. Zbog toga je pojam „ekscipijens“ definisan kao materijal, uključen u galenske oblike, koji se dodaje aktivnim sastojcima ili njihovim spojevima kako bi se omogućila priprema i stabilnost, izmenila organoleptička svojstva i/ili utvrdila fizičkohemijska svojstva farmaceutske kompozicije i njene bioraspoloživosti. „Farmaceutski prihvatljiv“ ekscipijens mora da omogući aktivnost komponenti ili jedinjenja farmaceutske kompozicije, tj. mora da bude kompatibilan sa sojevima pronalaska.

[0041] „Galenski oblik“ ili „farmaceutski oblik“ je konfiguracija kojoj se aktivni sastojci i ekscipijensi prilagođavaju kako bi dali farmaceutsku kompoziciju ili lek. Određuje se kombinacijom oblika u kom proizvođač predstavlja farmaceutsku kompoziciju i oblika u kom se primenjuje.

[0042] „Sredstvo“ ili „nosač“ je poželjno inertna supstanca. Uloga nosača je da olakša ugradnju drugih komponenti ili jedinjenja, omogući bolje doziranje i/ili primenu i/ili da pruži konzistenciju i oblik farmaceutskoj kompoziciji. Prema tome, nosač je supstanca koja se koristi u leku za razblaživanje bilo koje komponente ili jedinjenja farmaceutske kompozicije ovog pronalaska do date zapremine ili težine; ili da čak i bez razblaživanja ovih komponenata ili jedinjenja može da omogući bolje doziranje i primenu i/ili da pruži konzistenciju i oblik leku. Kada je oblik tečan, farmaceutski prihvatljivi nosač je rastvarač. Nosač može da bude prirodan ili neprirodan. Primeri farmaceutski prihvatljivih nosača uključuju, bez ograničenja, vodu, otopine soli, alkohol, biljna ulja, polietilen glikoli, želatin, laktozu, skrob, amilozu, magnezijum stearat, talk, surfaktante, silicijumsku kiselinu, viskozni parafin, parfemsko ulje, monogliceride i digliceride masnih kiselina, estere masnih kiselina, petroetrale, hidroksimetilcelulozu, polivinilpirolidon i slično.

[0043] Pored toga, ekscipijens i nosač moraju da budu farmakološki prihvatljivi, tj. ekscipijens i nosač moraju da budu dozvoljeni i procenjeni kako ne bi naneli štetu pacijentu kojem se daju. Uz to, nosač i/ili sredstvo mogu da budu prirodni, tj. da se događaju prirodno ili neprirodno, tj. mogu ili ne mkoraju da se dogode u prirodi ili ne, ali ako se javljaju u prirodi, ne nalaze se prirodno u kombinacijama sa sojevima pronalaska.

[0044] U svakom slučaju oblik farmaceutske kompozicije će se prilagoditi tipu korišćene administracije. Prema tome, kompozicija se može predstaviti u obliku rastvora ili bilo kom drugom obliku koji je klinički dozvoljen za administraciju i u količini koja je terapijski efikasna. Farmaceutska kompozicija može da se formuliše u tvrde, polutvrde ili tečne preparate, kao što su tablete, kapsule, praškovi, granule, rastvori, čepići, gelovi ili mikrosfere. U posebnom rešenju, farmaceutska kompozicija je formulisana za primenu u tečnom obliku ili čvrstom obliku.

[0045] U drugom određenom rešenju, čvrsta formulacija je izabrana iz grupe koja se sastoji od tableta, pastila, slatkiša, žvakaćih tableta, žvakaće gume, kapsula, skrobnih kapsula, praškova, granula, obloženih čestica ili obloženih tableta, tableta, pilula, pastila, gastrorezistentnih tableta i kapsula i disperzibilnih traka i/ili filmova.

[0046] U još jednom određenom rešenju, tečna formulacija je izabrana iz grupe koja se sastoji od oralnih rastvora, suspenzija, emulzija i sirupa.

[0047] Isto tako, poznati su različiti sistemi koji se mogu koristiti za primenu produženog oslobađanja probiotske kompozicije pronalaska, uključujući, na primer, kapsulaciju u lipozome, mikrobalončiće, mikročestice ili mikrokapsule i slično. Odgovarajući oblici sa produženim oslobađanjem, kao i materijali i metode za njihovu pripremu dobro su poznati u ovoj oblasti. Prema tome, oblik probiotske kompozicije pronalaska koji može oralno da se primenjuje je u obliku sa produženim oslobađanjem koji dodatno sadrži najmanje jednu oblogu ili matricu. Obloga ili matrica sa produženim oslobađanjem uključuje, bez ograničenja, prirodne polusintetičke ili sintetičke polimere, netopive u vodi ili modifikovane, voskove, masti, masne alkohole, masne kiseline, prirodne, polusintetičke ili sintetičke plastifikatore ili kombinaciju dva ili više pomenutih sastojaka. Enteričke obloge se mogu nanositi uobičajenim postupcima koji su poznati stručnjacima.

[0048] Pored prethodno napisanog, ovaj pronalazak takođe uključuje mogućnost da se probiotska kompozicija pronalaska da subjektu zajedno sa drugim komponentama ili jedinjenjima, iako oni nisu deo probiotske kompozicije. Primeri takvih komponenata ili jedinjenja su pomenuti u prethodnim pasusima.

[0049] U slučaju da je probiotska kompozicija pronalaska formulisana kao nutritivna kompozicija, navedena nutritivna kompozicija može da bude hrana ili da bude ugrađena u hranu ili prehrambeni proizvod namenjen za konzumaciju od strane ljudi i životinja. Prema tome, u određenom rešenju, nutritivna kompozicija se bira između hrane (koja može da bude hrana za određene prehrambene svrhe ili medicinska hrana) i prehrambenog suplementa.

[0050] U ovom pronalasku, pojam „nutritivna kompozicija“ se odnosi na hranu koja bez obzira na to što daje hranjive sastojke subjektu koji je konzumira, blagotvorno utiče na jednu ili više telesnih funkcija, tako da subjektu pruža bolje zdravlje i dobrostanje. U ovom pronalasku, navedena nutritivna kompozicija je namenjena za olakšavanje, smanjenje, lečenje i/ili sprečavanje atopijskog dermatitisa.

[0051] Pojam „suplement“, sinonim pojma „dodatak ishrani“, „dodatak namirnicama“, ili „preparat“ odnosi se na proizvode ili preparate čija je svrha da dopune uobičajenu ishranu koja se sastoji od izvora koncentrovanih nutrijenata ili drugih supstanci sa nutritivnim ili fiziološkim uticajem na subjekta. U ovom pronalasku, „supstanca“ koja ima nutritivni ili fiziološki uticaj na pojedinca kada se dodatak ishrani proguta su mikroorganizmi B. lactis, L. casei i B. longum, posebno sojevi B. lactis CECT 8145 i/ili L. casei CECT 9104 i/ili B. longum CECT 7347, koji čine deo probiotske kompozicije pronalaska. Dodatak ishrani može da bude u jednom ili kombinovanom obliku i može da se stavi u promet u obliku doziranja, npr. u kapsulama, pilulama, tabletama ili drugim sličnim oblicima, kesicama sa praškom, tečnim ampulama i bočicama za doziranje kapi, kao i drugim sličnim oblicima, kao što su tečnosti i praškovi namenjeni da se uzmu kao jedna doza.

[0052] Postoji široki spektar hranljivih sastojaka i drugih elemenata koji mogu da budu prisutni u dodacima ishrani, uključujući, ali ne ograničavajući se na, vitamine, minerale, aminokiseline, esencijalne masne kiseline, vlakna, enzime, biljke i biljne ekstrakte. Pošto je njihova uloga da nadopune hranljive supstance u ishrani, ne smeju da se koriste kao zamena za uravnoteženu ishranu i unos ne sme da premaši dnevnu dozu koju preporučuje lekar ili nutricionista. Probiotska kompozicija može da bude i deo takozvane „hrane za posebne grupe“, npr. hrana koja ispunjava specifične nutritivne zahteve.

[0053] Primeri hrane koja može da sadrži probiotsku kompoziciju pronalaska (mikroorganizme B. lactis, L. casei i B. longum, a posebno sojeve B. lactis CECT 8145 i/ili L. casei CECT 9104 i/ili B. longum CECT 7347 (ili sojeve izvedene iz njih)) obuhvataju, ali nisu ograničeni na, stočnu hranu, mlečne proizvode, biljne proizvode, mesne prerađevine, grickalice, čokoladu, pića, hranu za bebe, žitarice, prženu hranu, industrijske pekarske proizvode i keks. Primeri mlečnih proizvoda uključuju, ali nisu ograničeni na, proizvode dobijene iz fermentisanog mleka (na primer, ali bez ograničenja na njih, jogurt ili sir) ili nefermentisanog mleka (na primer, ali ne ograničeno na njih, sladoled, puter, margarin ili surutka). Biljni proizvod je, na primer, ali nije ograničen na njih, žitarica u bilo kom obliku, fermentisana (na primer, ali bez ograničenja na njih, jogurt od soje ili ovseni jogurt) ili nefermentisana, kao i grickalica. Piće može da bude, ali nije ograničeno na, fermentisano mleko. U određenom rešenju, prehrambeni proizvod ili hrana se bira iz grupe koju čine voćni ili povrćni sokovi, sladoled, formula za novorođenčad, mleko, jogurt, sir, fermentisano mleko, mleko u prahu, žitarice, pekarski proizvodi, proizvodi na bazi mleka, mesne prerađevine i pića.

[0054] Pored toga, probiotska kompozicija pronalaska može da sadrži i druge mikroorganizme pored B. lactis, L. casei i B. longum, posebno sojeva B. lactis CECT 8145 i/ili L. casei CECT 9104 i/ili B. longum CECT 7347. Prema tome, u određenom rešenju, probiotska kompozicija pronalaska dodatno sadrži mikroorganizme izabrane iz grupe koja sadrži Lactobacillus sp., Streptococcus sp., Bifidobacterium sp., Saccharomyces sp., Kluyveromyces sp. i njihove kombinacije.

[0055] U drugom još određenijem rešenju, Lactobacillus sp. je L. rhamnosus, L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. kefir, L. parakefir, L. brevis, L. casei, L. plantarum, L. fermentum, L. paracasei, L. acidophilus, L. paraplantarum or L. reuteri; Streptococcus sp. je St. thermophilus; Bifidobacterium sp. je B. longum, B. breve, B. bifidum, B. catenulatum, B. adolescentis ili B. pseudocatenulatum; Saccharomyces je S. cerevisiae ili S. boulardii; ili Kluyveromyces sp. je K. lactis ili K. marxianus.

[0056] U još jednom posebnom rešenju, probiotska kompozicija pronalaska se daje subjektu putem ishrane.

[0057] Prema razumevanju stručnjaka, mikroorganizmi B. lactis, L. casei i B. longum, posebno sojevi B. lactis CECT 8145, L. casei CECT 9104 i/ili B. longum CECT 7347, moraju da budu prisutni u probiotskoj kompoziciji pronalaska u terapijsko efikasnoj količini, tako da mogu da izvrše svoj uticaj na olakšavanje, smanjivanje, lečenje i/ili prevenciju atopijskog dermatitisa.

[0058] U ovom pronalasku, „terapijsko efikasna količina“ je količina komponente ili jedinjenja farmaceutske kompozicije koja je dovoljna da proizvede željeni efekat kada se da subjektu. Navedena komponenta ili jedinjenje farmaceutske kompozicije se odnosi na mikroorganizme B. lactis, L. casei i B. longum, posebno sojeve B. lactis CECT 8145, L. casei CECT 9104 i/ili B. longum CECT 7347. Kao što stručnjaci u ovoj oblasti znaju, terapijski efikasna količina može da se razlikuje u zavisnosti od, na primer, starosti, težine, opšteg zdravlja, pola i ishrane subjekta, kao i od načina i vremena primene, brzine izlučivanja ili kombinacije lekova, između ostalih faktora.

[0059] Dakle, u određenom rešenju, ukupna koncentracija mikroorganizama B. lactis, L. casei i B. longum, posebno sojeva B. lactis CECT 8145 i/ili L. casei CECT 9104 i/ili B. longum CECT 7347 u kompoziciji je između 10<3>i 10<12>cfu, poželjno 10<9>cfu. U drugom posebnom rešenju, administrativna doza mikroorganizama B. lactis, L. casei i B. longum, posebno B. lactis CECT 8145, L. casei CECT 9104 i/ili B. longum CECT 7347 u kompoziciji je između 10<6>i 10<12>cfu/dnevno, poželjno 10<9>cfu/dnevno, a u drugom još određenijem rešenju, režim primene je najmanje jednom dnevno, u posebnim slučajevima dva puta dnevno, a u još posebnijim slučajevima tri puta dnevno, jednom uz svaki obrok (doručak, ručak i večera).

[0060] U drugom posebnom rešenju, koncentracija B. longum, posebno soja B. longum CECT 7347, u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama prisutnih u kompoziciji se bira kao jedna od sledećih vrednosti: 10%, 15 %, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% ili 80%. U drugom posebnom rešenju, koncentracija B. lactis, posebno soja B. lactis CECT 8145, u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama prisutnih u kompoziciji se bira kao jedna od sledećih vrednosti: 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% ili 80%. U drugom posebnom rešenju, koncentracija L. casei posebno soja L. casei CECT 9104, u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama prisutnih u kompoziciji se bira kao jedna od sledećih vrednosti: 10%, 15 %, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% ili 80%. Prema razumevanju stručnjaka, kompozicija pronalaska se sastoji od bilo koje kombinacije koncentracija svakog prethodno opisanog mikroorganizma.

[0061] U još jednom posebnom rešenju, koncentracija B. longum u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama prisutnih u kompoziciji je najmanje između 25% i 45%, poželjno najmanje 35%; koncentracija B. lactis u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama je najmanje između 25% i 45%, poželjno najmanje 35%; i/ili koncentracija L. casei u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama je između 20% i 40%, poželjno 30%.

[0062] Probiotska kompozicija pronalaska je koristan u lečenju i/ili prevenciji atopijskog dermatitisa kod pojedinca, a napredovanje atopijskog dermatitisa se poboljšava kada se obustavi unos ovde opisane probiotske kompozicije.

[0063] Dakle, drugi ovde opisani predmet se odnosi na ovde opisanu probiotsku kompoziciju kada se koristi kao lek.

[0064] Pojam „lek“, kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koju supstancu koja se koristi za prevenciju, dijagnozu, ublažavanje, tretiranje ili lečenje bolesti kod ljudi i životinja. U kontekstu ovog pronalaska, bolest je AD.

[0065] Drugi ovde opisani predmet se odnosi na probiotsku kompoziciju, kao što je prethodno opisano, u lečenju i/ili prevenciji AD kod pojedinaca koji pate od ove bolesti.

[0066] U ovom pronalasku, pojam „subjekat“ ima isto značenje kao i „pojedinac“ ili „osoba“, tako da pojmovi mogu da se koriste naizmenično. „Subjekat“ označava, pored pojedinca, bilo koju životinju koja pripada bilo kojoj vrsti. Primeri subjekata uključuju, ali nisu ograničeni na, životinje od komercijalnog interesa, kao što su ptice (kokoške, nojevi, pilići, guske, jarebice itd); zečevi, kunići, kućni ljubimci (psi, mačke itd); stada ovaca i koza (koze itd); svinje (veprovi, svinje itd); konjska stoka (konji, poniji itd); stoka (bikovi, krave, volovi itd); životinje za lov, kao što su jeleni, irvasi itd; i ljude. Međutim, u posebnom rešenju, subjekat se odnosi na sisara, a po mogućnosti sisar je prvenstveno ljudsko biće bilo koje rase, pola ili starosti.

[0067] U ovom pronalasku, pojam „prevencija“ označava sprečavanje pojavljivanja bolesti ili patološkog stanja kod pojedinca, posebno kada pojedinac ima predispozicije za patološko stanje, ali još nije izvršena dijagnoza. U ovom pronalasku, bolest ili patološko stanje označava pojavljivanje atopijskog dermatitisa. U ovom pronalasku, pojam „lečiti“ ili „lečenje“ obuhvata sprečavanje bolesti ili patološkog stanja, npr. zaustavljanje razvijanja; ublažavanje bolesti ili patološkog stanja, npr. izazivanje povlačenja bolesti ili patološkog stanja; i/ili stabilizovanje bolesti ili patološkog stanja kod pojedinca. U ovom pronalasku, bolest ili patološko stanje je atopijski dermatitis.

[0068] U ovom pronalasku, pojam „atopijski dermatitis“ (AD) se podrazumeva kao upalna dermatoza, pruritičnog, hroničnog toka koju karakteriše razvijanje lezija ekcema sa karakterističnim obrascem širenja koja pogađa pojedince sa kožnom hiperreaktivnošću na različite faktore okoline koji su bezopasni za neatopične osobe. Pošto je u pitanju hronični upalni proces, dolazi do izbijanja upalne prirode zbog ove velike hiperaktivnosti kože, što izaziva lezije u području kožnih nabora i u području rastezanja i prati obrazac akutnog ili subakutnog ekcema. Atopijska dermatoza može da se manifestuje u mnogim oblicima i na mnogim mestima pored manifestacije na koži.

Način lečenja i/ili prevencije upalnih bolesti kože

[0069] Još jedno razmatranje, pronalazak se odnosi na metod lečenja atopijskog dermatitisa kod subjekta, u daljem tekstu, metod lečenja pronalaska, koji se sastoji od davanja probiotske kompozicije opisane u ovom pronalasku pojedincu koji ima atopijski dermatitis.

[0070] Svi zasebni pojmovi, definicije i rešenja prethodnih inventivnih aspekata su primenjivi na metod lečenja pronalaska.

[0071] Putem opisa i zahteva, reč „sadržati“ i njene varijante ne podrazumevaju izuzimanje drugih tehničkih karakteristika, aditiva, komponenti ili koraka. Za stručnjake u ovoj oblasti, drugi predmeti, prednosti i karakteristike pronalaska će postati očigledni, delom iz opisa, a delom iz primene pronalaska u praksi. Sledeći primeri i slike su dati kao ilustracija i nisu predviđeni za ograničavanje opsega ovog pronalaska.

KRATAK OPIS SLIKA

[0072]

Slika 1 je dijagram koji prikazuje analizu glavnih komponenti mikrobioloških profila uzoraka stolice uzetih od pacijenata sa atopijskim dermatitisom (kvadratni simbol i crna boja) u poređenju sa zdravim pojedincima koji pripadaju enterotipu 1 (kružni simbol i tamnosiva boja), enetrotipu 2 (trouglasti simbol i siva boja) i enterotipu 3 (rombični simbol i svetlosiva boja).

Slika 2 je dijagram koji prikazuje analizu varijabilnosti uzoraka stolice uzetih od pacijenata sa dermatitisom u poređenju sa zdravom populacijom u svakom od enterotipova. Slika prikazuje statistički značaj nakon primene Vilkoksonovog testa.

Slika 3 je dijagram koji prikazuje analizu glavnih komponenti kod pacijenata sa dermatitisom ili koji su klasifikovani kao da pripadaju enterotipu 1 (kvadratni simbol i crna boja) u poređenju sa uzorcima zdrave populacije enterotipa 1 (kružni simbol i siva boja). Grupe koje su najzastupljenije u uzorcima koje se nalaze u gornjem desnom uglu slike prikazane su crnom bojom, a one koje su najmanje zastupljene su ovde prikazane sivom bojom. Što se tiče uzoraka koji se nalaze u donjem levom uglu, trend je suprotan: manje zastupljene su označene crnom bojom dok su najviše zastupljene označene sivom bojom.

Slika 4 je dijagram koji prikazuje analizu glavnih komponenti kod pacijenata sa dermatitisom ili koji su klasifikovani kao da pripadaju enterotipu 2 (kvadratni simbol i crna boja) u poređenju sa uzorcima zdrave populacije enterotipa 2 (kružni simbol i siva boja). Grupe koje su najzastupljenije u uzorcima koje se nalaze u gornjem desnom delu slike prikazane su crnom bojom, a one koje su najmanje zastupljene su ovde prikazane sivom bojom. Što se tiče uzoraka koji se nalaze u donjem levom uglu, trend je suprotan: manje zastupljene su označene crnom bojom, a najviše zastupljene su označene sivom bojom. Slika 5 je dijagram koji prikazuje analizu glavnih komponenti kod pacijenata sa dermatitisom ili koji su klasifikovani kao da pripadaju enterotipu 3 (kvadratni simbol i crna boja) u poređenju sa uzorcima zdrave populacije enterotipa 3 (kružni simbol i siva boja). Grupe koje su najzastupljenije u uzorcima koje se nalaze u gornjem desnom delu slike prikazane su crnom bojom, a one koje su najmanje zastupljene su ovde prikazane sivom bojom. Što se tiče uzoraka koji se nalaze u donjem levom uglu, trend je suprotan: manje zastupljene su označene crnom bojom, a najviše zastupljene su označene sivom bojom. Slika 6 prikazuje rezultate SCORAD indeksa mesec dana nakon početka lečenja sa probiotskom kompozicijom pronalaska ili placebom. Rezultati pokazuju apsolutnu vrednost SCORAD indeksa za svaku terapijsku grupu (slika 6A) i procenat smanjenja SCORAD indeksa tokom lečenja kod obe grupe (slika 6B). V3, pregled nakon 1 meseca. Grupa A, grupa koja je primala placebo; Grupa B, grupa koja je primala probiotsku kompoziciju.

Slika 7 pokazuje rezultate SCORAD indeksa dva meseca nakon početka lečenja sa probiotskom kompozicijom pronalaska ili placebom. Rezultati pokazuju apsolutnu vrednost SCORAD indeksa za svaku terapijsku grupu (slika 7A) i procenat smanjenja SCORAD indeksa tokom lečenja kod obe grupe (slika 7B). V5, pregled nakon 2 meseca.

Grupa A, grupa koja je primala placebo; Grupa B, grupa koja je primala probiotsku kompoziciju.

Slika 8 prikazuje rezultate SCORAD indeksa tri meseca (kraj perioda studije) nakon početka terapije probiotskom kompozicijom pronalaska ili placebom. Rezultati pokazuju apsolutnu vrednost SCORAD indeksa za svaku terapijsku grupu (slika 8A) i procenat smanjenja SCORAD indeksa kod obe grupe tokom perioda lečenja (slika 8B). V7, pregled nakon 3 meseca. Grupa A, grupa koja je primala placebo; Grupa B, grupa koja je primala probiotsku kompoziciju.

Slika 9 pokazuje procenat poboljšanja SCORAD indeksa tokom perioda studije koji je meren nakon jednog, dva i tri meseca (na kraju studije) od početka. Razlike između dve terapijske grupe su bile statistički značajne od prvog meseca, a te razlike su se povećale nakon dva i tri meseca od početka studije. Isprekidana linija prikazuje grupu koja je primala probiotsku kompoziciju; neisprekidana linija prikazuje grupu koja je primala placebo.

Slika 10 prikazuje trendove SCORAD indeksa tokom vremena, izmerenog nakon jednog, dva i tri meseca (na kraju studije) od početka. Razlike između dve terapijske grupe su statistički značajne. Isprekidana linija predstavlja grupu koja je primala probiotsku kompoziciju; neisprekidana linija prikazuje grupu koja je primala placebo.

Slika 11 pokazuje trend broja pacijenata koji pate od novih izbijanja atopijskog dermatitisa (slika 11A), ukupan broj pacijenata sa novim izbijanjima atopijskog dermatitisa (slika 11B) i procenat pacijenata koji nisu imali nova izbijanja (slika 11C); tokom tri meseca nakon obustavljanja intervencije lečenja placebom ili probiotskom kompozicijom pronalaska. Razlike između dve intervencione grupe su statistički značajne u proceni tri meseca nakon početka praćenja po pitanju tri analizirane promenljive. Crna linija: pacijenti koji su primili placebo; siva linija, pacijenti koji su primili probiotsku kompoziciju.

PRIMERI

[0073] Pronalazak će biti ilustrovan testovima koje su pronalazači izvršili, a koji prikazuju svojstva probiotske kompozicije pronalaska.

PRIMER 1: Određivanje bakterijske mikrobiote kod pacijenata sa AD

1.1. MATERIJAL I METODE

[0074] Na osnovu uzoraka stolice uzetih od 49 pacijenata sa dermatitisom, izvršena je ekstrakcija genetskog materijala (DNK) korišćenjem kombinacije mehaničkog i enzimskog poremećaja zidova i membrana ćelija kako bi se povećala količina ekstrakcije, a bez poremećaja prisustva bakterija sa ćelijskim zidom (gram pozitivne). Genetski materijal dobijen ekstrakcijom je izmeren u cilju procene kvaliteta i kvantiteta upotrebom tehnologije Nanodrop 2000 ThermoScientific za proveru odnosa 260/280 i 260/230 koji ukazuju na kvalitet ekstrakcije (prisustvo PCR inhibitora, pigmenta itd). Kasnije, nakon provere kvaliteta, sprovedene su masivne biblioteke za sekvenciranje koje su obuhvatale hipervarijabilnu regiju V3–V4 bakterijskog 16s rRNA gena (zasnovano na Klindworth A, et al. (2013) Nucleic Acids Res 41: e1) u skladu sa protokolom koji je opisala Illumina za analizu mikrobne kompozicije na osnovu zapisa 16s rRNA. Svaka biblioteka je kvantifikovana koristeći Quant-iT PicoGreen kompanije Invitrogen i ekvimoralno izmešana za naknadno sekvenciranje.

[0075] Uzorci su sekvencirani na platformi MiSeq u kombinaciji od 300 ciklusa uparenog kraja. Dobijene FASTQ datoteke su obrađene kako bi se osigurao visoki kvalitet analize sekvence. U tu svrhu je sprovedena kontrola kvaliteta koja se sastojala od sledećeg: 1. Spajanje krajeva u cilju rekontrukcije jedinstvenih sekvenci pomoću programa PEAR v0.9.6. (Zhang J, et al (2014) Bioinformatics 30 (5):614-20).

2. Eliminacija adaptera za sekvenciranje i beleženje početnih slojeva iz hipervarijabilnih regija V3 i V4 pomoću programa cutadapt verzije 1.9.1. (Martin M (2010) EMBnet.journal [S.L.], 17 (1): 10-12. ISSN 2226-6089.).

3. Eliminacija sekvenci lošeg kvaliteta koristeći FASTX-ToolKit verzije 0.91.

4. Eliminacija himera proizvedenih PCR-om koristeći program UCHIME (decembar 2015) (Edgar RC, et al (2011) Aug 15; 27 (16): 2194-200) i najnoviju bazu podataka o himerama.

[0076] Dobijeni uzorci su upoređeni sa bazom podataka o sekvencama za 16S rRNA (NCBI) koristeći lokalno poravnanje tipa BLAST (Altschul SF, et al (1990) J. Mol Biol.215: 403-410).

[0077] Svaka od sekvenci za koje je dobijen rezultat identiteta od devedeset pet procenata (95%) je proveren na različitim taksonomskim nivoima: razdeo, porodica, rod i vrsta.

[0078] Statistički paket R je korišćen za statistiku kako bi se izradili grafikoni za analizu glavnih komponenti (PCA).

[0079] Zanimljivo je napomenuti da postoje velike razlike u mikrobnim populacijama digestivnog trakta svakog pojedinca, epidemiološke studije sugerišu da mikrobiota skoro svih njih može da se klasifikuje kao pripadnik tri različite kategorije poznate pod imenom enterotipovi (Arumugam et al, (2011) Nature 473:174-180). Ova klasifikacija se zasniva na preovlađivanju u svakom od ova tri enterotipa sa pripadnicima rodova Bacteroides, Prevotella ili Ruminococcus. Enterotip 1 (ent1) podrazumeva da rod Bacteroides preovladava, enterotip 2 (ent2) ako rod Prevotella preovladava i enterotip 3 (ent3) kada rod Ruminococcus preovladava (Dave et al., (2012). Trans. Res.

160, 246-257).

II REZULTATI

[0080] Kao što je već pomenuto, mikrobna kompozicija je analizirana iz uzoraka stolice osoba koje pate od atopijskog dermatitisa i upoređen sa uzorcima stolice zdravih osoba.

[0081] Rezultati pokazuju, kao što može da se vidi na Slici 1, da su mikrobiološki profili uzoraka uzetih od pacijenata sa AD bliži zdravim osobama sa enterotipom 3 nego drugim zdravim osobama. Kao što je prikazano na prethodno pomenutoj Slici 1, pacijenti sa AD (četvrtasti, crni simbol) se grupišu sa zdravim osobama enterotipa 3 (rombični, svetlosivi simbol), ali sa većom rasutošću u slučaju AD pacijenata u odnosu na zdrave osobe enterotipa 3. Naspram tome, osobe iz zdrave populacije enterotipa 1 (kružni, tamnosivi simbol) ili enterotipa 2 (trouglasti, sivi simbol) grupišu se u gornjem delu, sa leve strane ka desnoj, kao i sa leve strane, vrh donjeg dela, tim redom. Takođe je primetno da uzorci koji se grupišu sa desne strane grafikona imaju veću količinu roda Bacteroides i manju količinu Prevotella i Faecalibacterium, dok uzorci koji se grupišu u gornjem delu grafikona na Slici 1 prikazuju jasno odsustvo roda Prevotella; samim tim, uzorci zdravih pacijenata enterotipa 2 (veća količina vrsta roda Prevotella ) nalaze se u donjem levom uglu i pokazuju povećanje roda Faecalibacterium i Ruminococcus. Ovi podaci nam omogućavaju da konstatujemo da je mikrobiom pacijenata sa AD bliži mikrobiomu zdravih osoba enterotipa 3, ali je drugačije kompozicije i mikrobne varijabilnosti.

[0082] Ova različita varijabilnost i mikrobska kompozicija među zdravim osobama enterotipa 3 i pacijenata sa AD je primetna sa detaljnijim prikazom kada se varijabilnost populacije bakterija analizira u uzorcima zdrave populacije (sa svakim od tri različita enterotipa) za uzorke pacijenata sa AD pomoću Šenonovog indeksa (slika 2). Kao što je prikazano na Slici 2, uopšteno pacijenti sa AD imaju veću varijabilnost u poređenju sa zdravim osobama, tako da imaju medijanu i interkvartilni raspon od 2,97 (od 2,84 do 3,06) za pacijente sa atopijskim dermatitisom i 1,99 (od 1,37 do 2,52); 2,14 (od 1,50 do 2,62) i 2,23 (od 1,91 do 2,57) za zdrave osobe enterotipa 1, 2 i 3, tim redosledom. Tačnije, pacijenti sa AD imaju značajno veću bakterijsku varijabilnost u odnosu na onu koja je prisutna u bilo kom od enterotipova zdravih osoba, jer u svim slučajevima p <0,0001 pri poređenju mikrobne varijabilnosti pacijenata sa AD sa varijabilnosti zdrave populacije različitih enterotipova.

[0083] Kako bi se odredille bakterije po kojima se razlikuje zdrava populacija od populacije sa atopijskim dermatitisom, nastavili smo na klasifikaciju pacijenata sa atopijskim dermatitisom na osnovu toga da li preovladava Bacteroides (ent1), Prevotella (ent2) ili Ruminococcus (ent3). Zatim smo ispitali da li postoje razlike između svakog zasebnog enterotipa zdrave populacije u odnosu na različite enterotipove osoba sa AD. Prvo, od ukupno 49 pacijenata sa AD, njih 25 je klasifikovano kao ent1; dva kao ent2; i 22 kao ent3. Slično tome, od 324 zdrava subjekta, njih 298 je klasifikovano kao ent1; 21 kao ent2; i pet kao ent3. Zatim je analizirana bakterijska varijabilnost u okviru svakog enterotipa, 1, 2 ili 3 među pacijentima sa AD u poređenju sa zdravim subjektima.

[0084] Slika 3 prikazuje bakterijsku varijabilnost među zdravim osobama naspram pacijenata sa AD, svi enterotipa 1. Kao što je prikazano na Slici 3, zdrave osobe imaju veću količinu Bacteroides u odnosu na pacijente sa AD, dok pacijenti sa AD pokazuju veću količinu roda Faecalibacterium, Bifidobacterium i posebno nisku količinu vrsta iz roda Alistipes.

[0085] Slika 4 pokazuje bakterijsku varijabilnost među zdravim subjektima naspram pacijenata sa AD, svi enterotipa 2. U ovom slučaju, nije moguće napraviti razliku, po pitanju roda bakterija, između pacijenata sa AD enterotipa 2 i zdravih osoba istog enterotipa. S druge strane, ova slika prikazuje nizak nivo pacijenata sa AD koji su klasifikovani kao enterotip 2.

[0086] Kao što je slučaj kod zdravih osoba i pacijenata sa AD enterotipa 1, kod pacijenata sa AD koji su klasifikovani kao enterotip 3 (slika 5) postoje značajne razlike između pacijenata sa AD u poređenju sa zdravim osobama. Kao što je prikazano na slici 5, pacijenti sa AD imaju manje vrsta koje pripadaju rodu Ruminococcus u odnosu na zdrave pacijente, kao i manju količinu vrsta koje pripadaju rodu Faecalibacterium.

[0087] Uzimajući u obzir sve prethodno prikazane rezultate, jasno je da je mikrobiota pacijenata sa AD drugačija po kompoziciji i varijabilnosti u poređenju sa mikrobiotom zdrave populacije. Rezultati takođe pokazuju da je bilo manje pacijenata sa AD koji pripadaju enterotipu 2, a pored toga i da pacijenti sa AD pokazuju povećanu mikrobsku varijabilnost, ali sa manje bakterija koje pripadaju vrstama važnih rodova u svakom enterotipu, posebno roda Bacteroides i Ruminococcus za enterotipove 1 i 3, tim redom.

PRIMER 2: Analiza efikasnosti probiotske kompozicije pronalaska u prevenciji i / ili lečenju atopijskog dermatitisa (AD).

I MATERIJALI I METODE

[0088] Da bi se procenila efikasnost probiotske kompozicije ovog pronalaska u smanjenju simptoma, zajedno sa upotrebom topikalnih kortikosteroida u lečenju atopijskog dermatitisa, randomizovana pilot klinička, dvostruko slepa, placebo kontrolisana studija je sprovedena nad grupom od 20 pacijenata koji pate od atopijskog dermatitisa starosti između 4–17 godina.

[0089] Da bi se to uradilo, pacijenti koji su se prijavili za studiju su bili oni sa dijagnozom atopijskog dermatitisa prema kriterijumima Hanifina i Rajke (Hanifin JM, et al Acta Derm Venereol 1980; 92:. 44-7) i ispunjavali su sve kriterijume za uključivanje i nijedan od kriterijuma za isključivanje koji su utvrđeni za studiju. Subjekti studije su takođe koristili, ili možda koristili topikalne kortikosteroide za lečenje pojava atopijskog dermatitisa, zajedno sa drugim aktivnim sastojcima koji su se koristili za uobičajeno lečenje, kao što su emolijenti, sistemski kortikosteroidi, antihistaminici i slično.

[0090] Svaki pacijent je dodeljen u grupu za lek ili placebo koristeći stratifikovanu 1:1 randomizaciju blokovima, uzimajući u obzir promenljive vrednosti: pol, starost, porodična anamneza prvog stepena srodstva atopije ili atopijskog dermatitisa i pojavu atopijskog dermatitisa pre četvrte godine starosti.

[0091] Probiotska kompozicija pronalaska sadrži Bifidobacterium lactis CECT 8145, Bifidobacterium longum CECT 7347 i Lactobacillus casei CECT 9104, formulisane na bazi šećera i maltodekstrin tapioke, koja sadrži 5x10<10>cfu/g.

[0092] Oblik i izgled primenjenog placeba su bili isti kao i kompozicije pronalaska, ali je sadržao samo maltodekstrin tapioke i šećer.

[0093] Režim doziranja probiotske kompozicije pronalaska ili placeba je bio jedna kapsula dnevno.

[0094] Za lečenje izbijanja atopijskog dermatitisa koje su mogli da dožive pacijenti prijavljeni za studiju, metilprednisolon aceponat je korišćen kao topikalni kortikosteroid, a trajanje takvog lečenja nije prelazilo dve nedelje. Deflazakort je prepisivan u slučaju da je bilo potrebno lečenje sistemskim kortikosteroidima. Dezloratadin je korišćen za lečenje svraba, a obično korišćeni antibiotici, kao što je fusidinska kiselina, korišćeni su za slučajeve zaraženog atopijskog dermatitisa.

[0095] Period lečenja je trajao dvanaest nedelja od regrutacije pacijenata pa do poslednjeg pregleda. Nakon pregleda po uključivanju u studiju (početni pregled) i dodele lečenja (grupa sa lekom ili placebom), predviđeno je sedam pregleda koji se obavljaju u 4, 8. i 12. nedelji nakon početka lečenja kompozicijom pronalaska ili placebom. Tokom ovih pregleda, procenjen je SCORAD indeks; a Dnevnik za sakupljanje podataka (DCL) je ažuriran u 2, 6. i 10. nedelji.

[0096] Svi lekovi koje bi pacijent uzimao tokom studije zabeleženi su u zdravstvenom kartonu pacijenta i u DCL-u uz navođenje doza, načina primene i trajanja terapije (datum početka i završetka), kao i prateće lekove. Pored toga, svaki pregled je zabeležen u DCL-u, kao i evidencija vraćenih kapsula. Tabela 1 prikazuje demografske i kliničke karakteristike pacijenata na početnom pregledu u svakoj terapijskoj grupi. Tabela 2 prikazuje vremenski tok studije.

Tabela 1. Demografske i kliničke karakteristike pacijenata u svakoj terapijskoj grupi na početnom pregledu.

Tabela 2. Protokol kliničke studije.

[0097] Sve statističke analize izvršene za dobijanje konačnih rezultata koji su prikazani u nastavku su sprovedene korišćenjem softvera SPSS 20.0.

[0098] Pored toga, studija je sprovedena u skladu sa Helsinškom deklaracijom, u skladu sa izmenama na kasnijim skupštinama održanim u svetu. Za sve učesnike je nabavljen zdravstveni karton i obrazac o informisanom pristanku (koji je potpisao pacijent i/ili njegov staratelj ili zakonski predstavnik) u skladu sa Helsinškom deklaracijom, a koji je odobrio Odbor za etiku i institucionalno istraživanje.

II REZULTATI

[0099] Prvo smo analizirali da li su uzorci uključeni u svaku studijsku grupu homogeni, tj. placebo grupa i grupa koja prima probiotsku kompoziciju pronalaska. Tabela 3 pokazuje da je ovaj zahtev ispunjen i da nisu pronađene razlike između bilo kojih varijabli analiziranih za svaku studijsku grupu.

Tabela 3. Homogenost dva uzorka. Statistika studije<a>

M

V Z

A

(

<a>

u

[0100] Kao što je već pomenuto, srednje vrednosti (srednja vrednost i medijana) i ± standardna devijacija (SD) izračunate su za globalne podatke na početku, nakon jednog, dva i tri meseca lečenja. Vrednosti koje su se odnosile na pacijenta na svakoj od ovih vremenskih tačaka upoređene su sa vrednostima dobijenim na početku studije pomoću Vilkoksonovog testa.

Učinak kompozicije pronalaska jedan mesec nakon početka terapije

[0101] Nakon jednog meseca terapije, analiziran je SCORAD indeks i upoređene su vrednosti između grupa, kao i sa vrednostima sa početka ispitivanja. Tabela 4 prikazuje promene u vrednostima apsolutnih brojeva i u obliku procenta.

Tabela 4. SCORAD indeks jedan mesec nakon početka lečenja probiotskom kompozicijom pronalaska ili placebom.

[0102] Kao što prikazuju rezultati u tabeli 4 i na slici 6, nakon mesec dana lečenja došlo je do značajnih razlika SCORAD indeksa za placebo grupu u poređenju sa grupom koja je primala probiotsku kompoziciju pronalaska. Slike 7 i 8 pokazuju promene SCORAD indeksa na pregledima izvršenim nakon dva meseca (slika 7) i tri meseca (slika 8) terapije u poređenju sa početnim vrednostima između grupe koja je primala probiotsku kompoziciju pronalaska i placebo grupe.

[0103] Slika 9 pokazuje da grupa koja je primala kompoziciju pronalaska ima niži SCORAD indeks izmeren nakon jedan, dva i tri meseca od početka ispitivanja u poređenju sa placebo grupom. Kao što se vidi na slici 9, razlike između dve terapijske grupe su statistički značajne već od prvog meseca terapije, a razlike se povećavaju 2 (v5) i 3 (V7) meseca nakon početka ispitivanja.

[0104] Slika 10 prikazuje trendove SCORAD indeksa izmerene jedan (V3), dva (V5) i tri (V7) meseca nakon početka studije. Razlike između grupe koja je primala kompoziciju pronalaska i placebo grupe su statistički značajne i pokazuju prednosti upotrebe kompozicije u lečenju pacijenata sa AD.

[0105] Što se tiče upotrebe topikalnih kortikosteroida u svakoj studijskoj grupi, nakon jednog meseca terapije nisu primećene nikakve statistički značajne razlike između dve terapijske grupe tokom promenljivih dana upotrebe topikalnih kortikosteroida (tabela 5) nakon poređenja obe terapijske grupe pomoću Vilkoksonovog testa uz statistički nivo značaja od pet procenata (5%). Suprotno tome, primećen je trend kada topikalni kortikosteroidi nisu korišćeni, koji je bio veći za grupu koja je primala probiotsku kompoziciju pronalaska u poređenju sa placebo grupom, posebno nakon 2 i 3 meseca studije. Treba napomenuti da nije dostigao statistički značaj prvenstveno zbog obima uzorka studije.

Tabela 5. Analiza topikalnih kortikosteroida koji su korišćeni u svakoj terapijskoj grupi mesec dana nakon početka studije. Varijable grupisanja korišćene za dobijanje prikazanih podataka je vrsta terapije, npr. probiotska kompozicija pronalaska ili placebo.

[0106] Nisu uočene statistički značajne razlike između dve terapijske grupe, tj. probiotske kompozicije pronalaska naspram placeba, prilikom analize varijable koja označava dane upotrebe antihistaminika tokom prvog meseca terapije (tabela 6). Ova varijabla je analizirana Vikoksonovim testom uz nivo statističkog značaja od pet procenata (5%) za svaku terapijsku grupu.

Tabela 6. Analiza histaminika korišćenih u svakoj terapijskoj grupi mesec dana nakon početka. Varijabla grupisanja koja je korišćena za dobijanje prikazanih podataka je vrsta terapije: probiotska kompozicija pronalaska naspram placeba.

[0107] Tabela 7 rezimira podatke efikasnosti probiotse kompozicije pronalaska u lečenju AD nakon jednog meseca primene, posebno po pitanju analiziranih varijabli: SCORAD indeks, upotreba topikalnih kortikosteroida i antihistaminika, u poređenju sa placebo grupom.

Tabela 7. SCORAD indeks, ukupan broj dana upotrebe kortikosteroida i ukupan broj dana upotrebe antihistaminika u grupi koja je primala probiotsku kompoziciju pronalaska naspram placebo grupe.

[0108] Izvršena je analiza višestruke linearne regresije u cilju procene nezavisnog efekta terapije probiotskom kompozicijom pronalaska u poređenju sa drugim varijablama koje mogu da utiču na SCORAD indeks. U ovoj analizi se SCORAD varijabla unosila kao zavisna varijabla. Pored varijable „vrsta terapije“, uključene su i sledeće varijable: „ukupan broj dana terapije antihistaminicima“, „ukupan broj dana terapije kortikosteroidima“ i „SCORAD na početku“ za kliničku studiju.

[0109] Mesec dana nakon terapije, jedina varijabla značajno povezana sa SCORAD indeksom je vrsta terapije. U skladu sa tim, grupa kojoj je dodeljena terapija probiotskom kompozicijom pronalaska je povezana sa apsolutnim smanjenjem SCORAD indeksa od 9,07 poena. Odnosno, od ukupnog uočenog smanjenja SCORAD indeksa u grupi koja je primala probiotsku kompoziciju pronalaska tokom prvog meseca, kompozicija pronalaska je odgovorna za šezdeset i šest procenata (66%) ove promene (9,07 od 13,69 poena SCORAD indeksa). Ni varijabla ukupnog broja dana terapije antihistaminicima niti ukupan broj dana terapije kortikosteroidima nije povezana sa SCORAD indeksom.

[0110] Pored toga, sistemska upotreba kortikosteroida je procenjena na isti način koji je opisan za upotrebu topikalnih kortikosteroida, kao unapred određena sekundarna varijabla. Rezultati dobijeni za sistemsku potrošnju kortikosteroida nisu pokazali značajne razlike povezane sa upotrebom ovih jedinjenja između dve terapijske grupe: kompozicija pronalaska naspram placeba.

[0111] Pacijenti uključeni u studiju su naveli da su patili od manjih nuspojava, kao što su nadimanje tokom prvih pet dana terapije: trideset procenata (30%) pacijenata koji su primali kompoziciju pronalaska naspram četrnaest procenata (14%) pacijenata u placebo grupi.

[0112] Kao zaključak, u ovom primeru rezultati pokazuju da primena probiotske kompozicije pronalaska za lečenje AD pruža prednosti po pitanju efikasnosti i tolerancije u poređenju sa rezultatima pacijenata lečenih placebom. Prema tome, analizirani parametri pokazuju značajno poboljšanje SCORAD indeksa kod pacijenata koji pate od AD i koji su lečeni probiotskom kompozicijom pronalaska naspram grupe pacijenata koja je primala placebo. Ovo poboljšanje može da se primeti od prvog meseca uzimanja probiotske kompozicije pronalaska, a poboljšanje se održava ili povećava u kasnijim analizama nakon 2 i 3 meseca terapije.

[0113] Uz to, po pitanju ukupnog broja dana tokom kojih su pacijenti u obe grupe morali da koriste topikalne kortikosteroide, iako je prosek malo viši u grupi koja je primala probiotsku kompoziciju pronalaska u poređenju sa placebo grupom (3,3% naspram 2,6%), ova razlika nije značajna. Suprotno tome, prilikom analize upotrebe na nivou subjekta ili unutar grupe (poređenje upotrebe kortikosteroida na početku i na kraju studije u okviru iste grupe), uočen je trend manje upotrebe steroida tokom vremena u grupi koja je uzimala probiotsku kompoziciju pronalaska (upotreba steroida je opala za pedeset pet procenata (55%) u poređenju sa placebo grupom (smanjenje od osam procenata (8%) tokom perioda pregleda tokom ispitivanja), koji u ovom slučaju dostiže statistički značaj.

PRIMER 3: Analiza efekta upotrebe probiotske kompozicije pronalaska u sprečavanju izbijanja AD.

[0114] Od dvadeset (20) pacijenata sa AD koji su uključeni u ispitivanje, u međuvremenu je izvršena analiza kod onih koji su dostigli SCORAD indeks od 6. Ova grupa pacijenata je podvrgnuta posebnom praćenju do završetka kompletnog tromesečnog perioda terapije. Deset (10) pacijenata je primilo placebo (slika 11, crna linija), a devet (9) pacijenata je primilo probiotik (slika 11, siva linija).

[0115] Slika 11 prikazuje rezultate praćenja broja izbijanja AD kod svih ovih pacijenata od trenutka završetka tromesečne terapije probiotikom do 12 nedelja nakon završetka terapije. Dakle, slika 11 pokazuje trend u broju pacijenata koji su patili od novih izbijanja AD (slika 11A), ukupnog broja pacijenata sa novim izbijanjima AD (slika 11B) i procenat pacijenata koji nisu imali nova izbijanja (slika 11C). Uzimajući u obzir sve pacijente koji su prethodno primali terapiju, slika 11 pokazuje da je broj izbijanja, broj pacijenata i procenat pacijenata koji su patili od novih izbijanja AD tokom perioda od 12 nedelja bez terapije veći među onima koji su prethodno primali placebo u odnosu na one koji su prethodno primali probiotik.

[0116] Dakle, u ovoj podgrupi pacijenata, oni koji su uzimali probiotsku kompoziciju pronalaska su pokazali nižu stopu ponovnog pojavljivanja i/ili pogoršanja u odnosu na grupu koja je primala placebo (1 od 10 (10%) naspram 5 od 9 (55%)), tim redom (slika 11B).

[0117] Razlike između dve intervencione grupe su statistički značajne tokom perioda procene u trajanju od tri meseca nakon početka praćenja, po pitanju tri analizirane varijable.

[0118] Podaci koji govore o efikasnosti probiotika po pitanju sprečavanja pojave novih izbijanja AD su sledeći: tokom tri meseca nakon prekida terapije prethodno pomenutom probiotskom kompozicijom, osobe koje su primale tu kompoziciju su imale manje izbijanja i samim tim duži period bez bolesti u odnosu na pacijente koji nisu primali terapiju.

[0119] Ovi rezultati pokazuju da je upotreba kompozicije pronalaska efikasna u sprečavanju novih izbijanja AD. Prema tome, tokom tri meseca nakon prekida terapije probiotskom kompozicijom pronalaska, osobe koje su primale navedenu kompoziciju su imale manje izbijanja bolesti i samim tim duži period bez bolesti u odnosu na pacijente koji su primali placebo.

Claims (15)

Patentni zahtevi

1. Probiotska kompozicija koja sadrži Bifidobacterium animalis subsp. lactis (B. lactis), Bifidobacterium longum i Lactobacillus casei.

2. Probiotska kompozicija u skladu sa zahtevom 1, naznačena time što B. lactis je B. lactis CECT 8145 i/ili B. longum je B. longum CECT 7347 i/ili L. casei je L. casei CECT 9104.

3. Probiotska kompozicija u skladu sa zahtevom 1 ili 2, naznačena time što probiotska kompozicija je farmaceutska kompozicija ili nutritivna kompozicija.

4. Probiotska kompozicija u skladu sa zahtevom 3, naznačena time što farmaceutska kompozicija sadrži farmaceutski prihvatljivi nosač i/ili ekscipijens.

5. Probiotska kompozicija u skladu sa zahtevom 3 ili 4, naznačena time što je farmaceutska kompozicija formulisana za primenu u tečnom obliku ili u čvrstom obliku.

6. Probiotska kompozicija u skladu sa zahtevom 5, naznačena time što je čvrsta formulacija izabrana iz grupe koja se sastoji od tableta, pastila, slatkiša, žvakaćih tableta, žvakaće gume, kapsula, skrobnih kapsula, praškova, granula, obloženih čestica ili obloženih tableta, tableta i gastro-rezistentnih tableta i kapsula, kao i disperzibilnih traka i/ili filmova.

7. Probiotska kompozicija u skladu sa zahtevom 5, naznačena time što je tečna formulacija izabrana iz grupe koja se sastoji od oralnih rastvora, suspenzija, emulzija i sirupa.

8. Probiotska kompozicija u skladu sa zahtevom 3, naznačena time što nutritivna kompozicija je hrana ili nutritivni suplement.

9. Probiotska kompozicija u skladu sa zahtevom 8, naznačena time što je hrana izabrana iz grupe koja se sastoji od voćnih sokova ili sokova od povrća, sladoleda, formule za novorođenčad, mleka, jogurta, sira, fermentisanog mleka, mleka u prahu, žitarica, pekarskih proizvoda, mlečnih proizvoda, proizvoda od mesa i pića.

10. Probiotska kompozicija u skladu sa bilo kojim zahtevom od 1 do 9, naznačena time što kompozicija dodatno sadrži mikroorganizam izabran iz grupe koja se sastoji od Lactobacillus sp., Streptococcus sp., Bifidobacterium sp., Saccharomyces sp., Kluyveromyces sp. i njihovih kombinacija.

11. Probiotska kompozicija u skladu sa bilo kojim od zahteva 1 do 10, naznačena time što je ukupna koncentracija mikroorganizma sojeva B. lactis, L. casei i B. longum u kompoziciji između 10<3>i 10<12>cfu, poželjno 10<9>cfu.

12. Probiotska kompozicija u skladu sa bilo kojim od zahteva 1 do 11, naznačena time što je koncentracija B. longum najmanje između 30% i 40% u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama prisutnih u kompoziciji; i/ili je koncentracija B. lactis najmanje između 30% i 40% u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama; i/ili je koncentracija L. casei najmanje između 25 i 35% u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama.

13. Probiotska kompozicija u skladu sa zahtevom 12, naznačena time što je koncentracija B. longum 35% u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama prisutnih u kompoziciji; koncentracija B. lactis je 35% u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama i/ili koncentracija L. casei je 30% u odnosu na ukupnu koncentraciju mikroorganizama.

14. Probiotska kompozicija u skladu sa bilo kojim od zahteva 1 do 13 za upotrebu kao lek.

15. Probiotska kompozicija u skladu sa bilo kojim od zahteva 1 do 13 za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji atopijskog dermatitisa.