RS62128B1 - Triploidne biljke lubenice sa žbunastim oblikom rasta - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na oblast oplemenjivanja biljaka i unapređenja biljaka. Obezbeđene su nove hibridne biljke lubenice i seme iz koga se takve biljke mogu uzgajati, a koje su „žbunaste“ (bush – eng.) po obliku rasta (sadrže recesivni „bush gen“, označen kao „b“) i triploidne su (2n = 3x = 33) po svom hromozomskom sastavu. Kada se ove triploidne hibridne biljke oprašuju normalnim diploidnim (2n = 2x = 22) polenom (dostupnim iz oprašivača), ove biljke daju besemeni triploidni plod visokog kvaliteta. Kao triploidna hibridna biljka sa žbunastim oblikom rasta, koja ima kratku najdužu lozu (jednaku ili manju od 150 cm, poželjnije jednaku ili manju od 140 cm, naročito jednaku ili manju od 100 cm) i kratku dužinu internodija, ova biljka se može uzgajati u većoj gustini u polju u poređenju sa tradicionalnim ne-žbunastim triploidnim hibridima lubenica, što dovodi do većeg prinosa ploda po hektaru u poređenju sa triploidnim hibridima sa normalnim oblikom rasta (imaju prosek najduže vreže iznad 200 ili iznad 300 cm). Prosečan prečnik triploidne žbunaste biljke prema pronalasku je jednak ili manje 300 cm, poželjno 280 cm, posebno jednak ili manje 200 cm, dok su druge karakteristike, poput veličine lista i veličine ploda, slične onima kod normalnog tipa rasta triploidnih biljaka lubenice. Takođe su date inbridovane diploidne žbunaste biljke lubenice (bb) i inbridovane tetraploidne (2n = 4x = 44) žbunaste biljke lubenice (bbbb), koje su upotrebljene kao muški i ženski roditelj, respektivno, u cilju proizvodnje triploidnih žbunastih hibrida biljaka lubenice (bbb) prema ovom pronalasku. Dodatno su obezbeđeni triploidni besemeni plodovi, dostupni iz triploidnih žbunastih biljaka prema ovom pronalasku, kao i semena iz kojih se mogu uzgajati triploidne žbunaste hibridne biljke. Dalje su dati postupci za kultivaciju triploidnih žbunastih hibrida.

OSNOVA PRONALASKA

[0002] Besemena lubenica (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum. And Nak) se proizvodi upotrebom polena iz diploidnih muških roditeljskih biljaka za oplodnju cvetova tetraploidnih ženskih roditeljskih biljaka. Oprašivanje tetraploidnih cvetova diploidnim polenom dovodi do nastajanja hibridnih F1 semena koja su triploidna (Kihara, 1951, Proceedings of American Society for Horticultural Science 58: 217-230; Eigsti 1971, Hort Science 6: 1-2). Triploidne hibridne biljke uzgajane iz ovih F1 semena nisu samooplodne jer proizvode sterilni polen usled neravnoteže hromozoma (Fehr, 1987). Triploidne hibride, stoga, treba oprašiti diploidnim oprašivačem da bi se proizveli plodovi lubenice.

[0003] Triploidne biljke su, dakle, združeno sađene sa biljkama za oprašivanje za proizvodnju plodova. “Besemeni” plod proizveden nakon oprašivanja na triploidnoj hibridnoj biljci nije zaista bez semena, ali često sadrži nešto nerazvijenog, malog, bledog semena koje je jestivo.

[0004] Za optimalni skup plodova potreban je dovoljno održiv polen. Biljke se uglavnom sade u odnosu od 1 oprašivača na svake 2-4 triploidne biljke. Triploidne biljke i oprašivači se sade ili u zasebne redove (npr. 1 red oprašivača i 2-4 reda triploida), ili se združeno sade u redove (npr. sadnja 1 biljke oprašivača između 2 do 3 triploidne biljke u isti red) ili se združeno sade u uskim redovima između redova triploida (videti US 2006/0168701 Tabela 2). Plodovi proizvedeni na biljkama oprašivača poželjno imaju drugačiju šaru kore od ploda na triploidnim hibridima, tako da se mogu lako razlikovati.

[0005] Neki problemi ostaju sa proizvodnjom besemene lubenice, kao što je proizvodnja tetraploidne matične linije (udvajanje hromozoma kroz kolhicinski tretman na sadnicama), pronalaženje kompatibilnosti između diploidnog oprašivača i tetraploidnih matičnih biljaka i triploidna semena često imaju deblju semensku ovojnicu koja smanjuje njihovu snagu i klijanje. Kvalitet i ujednačenost plodova takođe su često problem, kao i visoki troškovi proizvodnje triploidnih semena zbog gore navedenih zahteva.

[0006] Izrada stabilne, tetraploidne inbridovane matične linije sa željenim svojstvom (svojstvima) ne napreduje linearno, kao što nije jednostavno odabiranje dobrog diploida i udvajanje hromozoma, upotrebnom na primer kolhicinskog tretmana. Nakon što se dobiju neke ćelije sa udvojenim hromozomima i biljka se regeneriše, niz generacija samooprašivanja (inbridovanje) je potreban da bi se stabilizovao (popravio) tetraploid i eliminisale neželjene hromozomske aberacije.

[0007] Kompaktne (ili patuljaste) diploidne biljke za oprašivanje koje imaju kraće loze i/ili kraće internodije često se koriste za indukovanje besemenih plodova na normalnim (ne patuljastim) hibridnim triploidnim ženskim roditeljima i/ili za proizvodnju ploda koji sadrži seme na samoj biljci za oprašivanje. Na primer, sorta Side Kick (Harris Morin) upotrebljava se kao oprašivač za normalne hibridne triploide (besemene) i/ili oprašivač za proizvodnju ploda (semenog). Side Kick je diploidni oprašivač koji sadrži recesivni alel hmbn (US 7,314,979 B2) u homozigotnom obliku, što dovodi do više grananja (višestruko grananje), a samim tim i do "kompaktnijih" diploidnih biljaka za oprašivanje. Takođe diploidni plodovi oprašivača homozigotnih hmbn hmbn biljaka su manji od normalnih plodova (1,6 kg u poređenju sa 8,98 kg normalnih diploida). S druge strane, triploidni besemeni plod koji se proizvodi kada se normalni hibridni triploidni opraši oprašivačem, kao što je Side Kick, su veliki, besemeni plodovi od 13-21 funti (5,8 - 9,5 kg). HMBN kompaktni tip (hmbn hmbn) nije tako kompaktan kao poznati diploidni patuljasti mutanti (dw-1 dw-1, kao što je sorta Bush Jubilee ili dw-2 dw-2, kao što je sorta J86), ali je kompaktniji od standardnih diploidnih tipova (npr. Allsweet), videti Tabelu 1 u US 7,314,979 i Tabelu 1 u US 8,034,999. HMBN kompaktni tip (hmbn hmbn) ima mnogo više sekundarnih grana (prosečno 44,9) od normalnog diploida (prosečno 14,7) ili od poznatog patuljastog diploida (prosečno 19,3 i 7,3), dok je dužina internodija duža (prosečno 4,4 cm) od poznatih patuljastih diploida (prosečno 3,4 i 4,1 cm), ali kraća nego kod normalnog tipa diploida (prosečno 7,2 cm).

[0008] US 7,164,059 opisuje diploidni oprašivač kratke vreže i njegovu upotrebu za oprašivanje normalnog oblika rasta (normalnog tipa rasta) triploidnih hibrida. Oprašivač kratke vreže je opisan da ima prosečnu dužinu internodija manju od 3 inča (manje od 7,6 cm) i/ili prečnik biljke manji od 1,8 metara. Korišćenjem oprašivača kratke vreže u kombinaciji sa normalnim oblicima triploida navodi se da se 33% do 50% više triploida po hektaru može zasaditi (oko 2000 triploida po hektaru, plus 400 do 1200 diploidnih oprašivača po hektaru; ovo je oko 4942 triploida po hektaru, plus 988 do 2965 diploidnih oprašivača po hektaru).

[0009] US 7,115,800 opisuje proizvodnju besemenog ploda lubenice prosečne težine manje od 5,4 kg (3,6 do 4,0 kg). Triploidne biljke lubenice se proizvode pomoću „malih“ inbridovanih tetraploidnih i „malih“ inbridovanih diploidnih roditeljskih linija, pri čemu se „mala“ odnosi na veličinu ploda, a ne na veličinu biljke. Triploidne hibridne biljke, koje proizvode sitne plodove, imaju normalan tip rasta, sa dužinom vreže od 320 cm ili iznad i dužinom internodija od 8 cm ili više.

[0010] US 2008/0005814 i US 2008163388 opisuju razvoj tetraploidne biljke lubenice, koja je pogodna kao ženski roditelj u triploidnoj hibridnoj proizvodnji sa malim besemenim plodom. Tetraploidna biljka ima normalni vegetativni oblik rasta. Kada se opraši diploidnim oprašivačem, sitno voće (1,5 do 2,5 kg) se proizvodi. US2008/0244764 opisuje tetraploidnu liniju lubenica normalnog tipa rasta razvijenu od diploidnog Calsweet-a.

[0011] US 2006/0168701 i US 2003/0172414 opisuju diploidne oprašivače („Super Pollenizers“) upotrebljene za oprašivanje triploidnih biljaka, čime indukuju skup plodova triploidnog besemenog ploda. Oprašivač ima male listove 5 do 12 puta manje od površine tipičnog diploidnog oprašivača kao što je Sangria) i može se gajiti u neposrednoj blizini normalnog tipa triploidnog hibrida. Oprašivač je jako razgranat (čipkasta loza ili otvorena loza) i smanjuje prostor, hranljive sastojke i svetlost koji su potrebni, ostavljajući više prostora, hranljivih sastojaka i svetlosti za triploidne hibridne biljke. Prema patentnoj prijavi, 25% do 33% više besemenih lubenica proizvede se po hektaru koristeći ovaj oprašivač.

[0012] US 6,355,865 B1 opisuje biljku za oprašivanje koja ima najmanje dve karakteristike odabrane između (a) istaknutog fenotipa ploda, (b) velikog broja muških cvetova, (c) nastavka cvetanja, (d) ranog cvetanja i/ili e) modifikovane morfologije oblika rasta biljke, imajući vitkiju lozu. Kako je diploidni oprašivač vitkiji i proizvodi više cvetova, može se saditi u odnosu 1:3 do 1:5 (oprašivač:triploidni hibrid), a ne u uobičajenom odnosu 1:2.

[0013] Pored hmbn (višestruko grananje) gore opisane mutacije takođe četiri druga gena su opisana koja dovode do patuljasto/kompaktnog oblika biljke u diploidnim lubenicama kada je mutirani alel prisutan u homozigotnom obliku. Oni su nazvani dw-1, dw-1<s>(alel do dw-1), dw-2 i dw-3 (Guner and Wehner 2004, Hort Science 39 (6): 1175-1182). Neki od ovih mutanata korišćeni su za razvoj patuljastih ili diploidnih oprašivača kratke vreže, kao što je Bush Jubilee.

[0014] Međutim, do sada nije bilo moguće proizvesti triploidne žbunaste hibridne biljke, koje su sposobne da proizvode besemene plodove visokog kvaliteta.

[0015] Cilj pronalaska je da obezbedi triploidne hibride koji imaju žbunasti oblik rasta i proizvode besemeni plod visokog kvaliteta. Takođe su dati postupci za proizvodnju takvih triploidnih hibridnih biljaka i/ili triploidnih plodova.

[0016] Žbunaste triploidne biljke zauzimaju manje prostora u polju i mogu se uzgajati u neposrednoj blizini jedne od druge i/ili oprašivača u poređenju sa normalnim tipom triploida, kao što su Boston F1 ili Fashion F1. Najmanje 1,5 puta, 1,7 puta, 2 puta, 2,5 puta ili čak 3 puta više žbunastih triploidnih biljaka može se uzgajati po hektaru u poređenju sa ne-žbunastim (normalni oblik rasta) triploidnim hibridima lubenice, poput Bostona F1 ili Fashion F1. Kako žbunje triploidnih biljaka ima smanjeni prečnik biljke, ali bez uticaja na veličinu lista ili veličinu ploda, veći prinosi triploidnog ploda po hektaru se mogu postići. Korišćenjem triploidnih žbunastih hibrida prema pronalasku najmanje oko 1,25 puta, poželjno najmanje oko 1,5 puta više plodova po hektaru se proizvede u poređenju sa normalnim tipom triploidnih hibrida.

[0017] U jednom primeru izvođenja takođe je dat postupak za kultivaciju žbunastih triploidnih biljaka lubenice u komercijalnoj proizvodnji besemenog ploda.

[0018] Takođe semena iz kojih se mogu uzgajati triploidne žbunaste biljke su ovde obuhvaćena, kao i delovi biljaka, razmnožavanje in vitro, kulture ćelija ili tkiva, ubrani plodovi, itd.

[0019] U sledećem primeru izvođenja tetraploidne žbunaste biljke i semena od kojih se takve tetraploidne žbunaste biljke mogu uzgajati su date ovde, kao i delovi biljaka (ćelije, polen, antere, semeni zameci, cvetovi, itd.) i in vitro razmnožavanje takvih biljaka.

OPŠTA DEFINICIJA

[0020] Glagol „sadržati“ i njegove konjugacije upotrebljavaju se u svom neograničavajućem smislu da označe da su uključeni predmeti koji slede reč, ali nisu izuzeti predmeti koji nisu posebno pomenuti. Dodatno, upućivanje na element neodređenog člana „a“ ili „an“ ne isključuje mogućnost da je prisutno više elemenata, osim ako kontekst jasno zahteva da postoji jedan i samo jedan od elemenata. Stoga neodređeni član „a“ ili „an“ obično znači „najmanje jedan“, npr.

„biljka“ se odnosi i na nekoliko ćelijskih biljaka itd. Slično tome, „plod“ ili „biljka“ takođe se odnosi na mnoštvo plodova i biljaka.

[0021] Kako se ovde koristi, izraz "biljka" uključuje celu biljku ili bilo koji njen deo ili derivate, poželjno sa istim genetskim sastavom kao i biljka od koje je dobijena, kao što su biljni organi (npr. ubrani ili neubrani plodovi, listovi, cvetovi, antere, itd.), biljne ćelije, biljni protoplasti, kulture biljnih ćelijskih tkiva iz kojih se mogu obnoviti cele biljke, biljni kalusi, nakupine biljnih ćelija, biljni rasadi, sadnice, biljne ćelije koje su netaknute u biljkama, biljno kloniranje ili mikrorazmnožavanje, ili delovi biljaka, kao što su rezane biljke, embrioni, polen, antere, semeni zameci, plodovi (npr. ubrana tkiva ili organi), cvetovi, listovi, semena, klonski razmnožavane biljke, korenje, stabljike, vrhovi korena, kalemovi (plemke i/ili podloge) i slično. Takođe, bilo koja razvojna faza je uključena, kao što su sadnice, seče pre ili posle ukorenjavanja itd.

[0022] Kako se ovde upotrebljava, izraz "sorta" ili "kultivar" označava biljno grupisanje unutar jednog botaničkog taksona najnižeg poznatog ranga, koje se može definisati izrazom karakteristika koje proističu iz datog genotipa ili kombinacije genotipa.

[0023] Izraz "alel(i)" označava bilo koji od jednog ili više alternativnih oblika gena na određenom mestu, svi od ovih alela odnose na jednu osobinu ili karakteristiku na određenom lokusu. U diploidnoj ćeliji organizma, aleli datog gena nalaze se na određenom mestu ili lokusu (množina - lokusima) na hromozomu. Jedan alel je prisutan na svakom hromozomskom paru homologih hromozoma. Diploidna biljna vrsta može sadržati veliki broj različitih alela na određenom lokusu. To mogu biti identični aleli gena (homozigotni) ili dva različita alela (heterozigotni).

[0024] Izraz "lokus" (množina - lokusi) označava određeno mesto ili mesta ili položaj na hromozomu gde se na primer nalazi gen ili genetički marker.

[0025] "Diploidna biljka" odnosi se na biljku, vegetativni biljni deo (delove) ili seme iz kojeg se može uzgajati diploidna biljka, koja ima dva kompleta hromozoma, ovde označena kao 2n.

[0026] "Triploidna biljka" odnosi se na biljku, vegetativni biljni deo (delove) ili seme iz kojeg se može uzgajati triploidna biljka, koja ima tri kompletna hromozoma, ovde označena kao 3n.

[0027] "Tetraploidna biljka" odnosi se na biljku, vegetativni biljni deo (delove) ili seme iz kojeg se može uzgajati tetraploidna biljka, koja ima četiri kompleta hromozoma, ovde označena kao 4n.

[0028] "Biljka za oprašivanje" ili "oprašivač" odnosi se na (inbridovanu ili hibridnu) diploidnu biljku ili njene delove (npr. to je polen ili plemka), pogodan kao oprašivač za indukovanje skupa plodova na triploidnim biljkama. Biljka za oprašivanje je, prema tome, sposobna da dovede do skupa dobrih plodova (i dobrog prinosa triploidnog ploda) triploidnih biljaka, proizvodnjom odgovarajuće količine polena u odgovarajuće vreme i za odgovarajući vremenski period.

[0029] "Muški roditelj" odnosi se na biljku za oprašivanje koja se upotrebljava kao muški roditelj za indukovanje skupa plodova i proizvodnju semena na tetraploidnom ženskom roditelju, što rezultira F1 hibridnim triploidnim semenima. Oba, muški roditelj i ženski roditelj su inbridni tako da je svaki roditelj gotovo homozigotan i stabilan. „Ženski roditelj“ ili „tetraploidni roditelj“ odnosi se na biljku koja je oprašena polenom muškog roditelja, što dovodi do proizvodnje plodova koji sadrže triploidna semena. Ženski roditelj je inbridni tako da je gotovo homozigotan i stabilan.

[0030] "Hibridna triploidna biljka" ili "F1 triploid" je triploidna biljka uzgajana iz hibridnog, triploidnog semena dobijenog unakrsnom oplodnjom muškog diploidnog roditelja sa ženskim tetraploidnim roditeljem.

[0031] "Besemeni plod" je triploidni plod koje ne sadrži zrela semena. Plod može sadržati jedan ili više malih, jestivih, belih semenih zametaka.

[0032] "Združena sadnja" se odnosi na kombinaciju dve ili više vrsta semena i/ili rasada posejanih ili presađenih na isto polje, posebno posejanih i/ili presađenih oprašivača na isto polje kao i triploidne hibridne biljke (za proizvodnju besemenog ploda na triploidnim biljkama i proizvodnja diploidnog ploda na biljkama za oprašivanje). Na primer, oprašivač može biti zasađen u odvojene redove ili združeno zasađen sa triploidnim biljkama u istom redu (npr. na brdima unutar svakog reda). Oprašivači se takođe mogu saditi između redova triploida. Takođe semena oprašivača i triploidnih hibrida mogu se mešati pre setve, što rezultira nasumičnom setvom. Rasadi triploidnih hibridnih biljaka i/ili biljaka za oprašivanje takođe mogu sadržati podloge druge biljke. Pogodne podloge su poznate u struci. Biljke lubenice sa različitim podlogama nazivaju se „kalemljenim“.

[0033] „Sadnja“ ili „zasađen“ odnosi se na setvu (direktna setva) ili presađivanje sadnica (biljaka) u polje mašinski ili ručno.

[0034] "Vegetativno razmnožavanje" odnosi se na razmnožavanje biljaka iz vegetativnog tkiva, npr. in vitro razmnožavanja ili postupci kalemljenja (upotrebom plemki). In vitro razmnožavanje uključuje in vitro kulturu ćelija ili tkiva i regeneraciju cele biljke iz in vitro kulture. Kalemljenje podrazumeva razmnožavanje izvorne biljke kalemljenjem na podlogu. Klonovi (tj. genetički identično vegetativno razmnožavanje) izvorne biljke mogu se na taj način stvoriti bilo in vitro kulturom ili kalemljenjem.

[0035] "Recesivni" se odnosi na alel koji eksprimira svoj fenotip kada u genomu nije prisutan funkcionalni dominantni alel u genomu. Recesivni bush alel (b) prema pronalasku, kako se javlja u (i koji se može dobiti od) ovde datim NCIMB pristupnim brojevima, rezultira žbunastim oblikom rasta kada je prisutan u dve kopije u diploidnoj biljci (bb), u četiri kopije u tetraploidnoj biljci (bbbb) ili u tri kopije u triploidnoj biljci (bbb), pri čemu funkcionalni dominantni Bush alel (B) nije prisutan u ovim biljkama. B-alel je stoga u osnovi divlji tip, nemutirani alel, koji se nalazi u biljkama kojima nedostaje mutirani b-alel.

[0036] „Žbunasti tip“ ili „žbunasti tip rasta“ ili „žbunasti oblik rasta“ ili „oblik žbuna“ odnosi se na nasledni (genetski određeni bush alelom) vegetativni oblik rasta biljne linije ili sorte u zrelosti koja ima prosek dužina internodija od oko 7 cm ili manje (ali najmanje oko 4,7 cm, poželjno najmanje oko 5,0 cm) i prosečnu dužinu najduže vreže od oko 150 cm ili manje, oko 140 cm ili manje, oko 130 cm ili manje, poželjno oko 100 cm ili manje (ali najmanje oko 70 cm). Takođe, prosečna veličina lista se ne smanjuje bush alelom i iznosi najmanje oko 11 cm dužine i/ili 15 cm širine ili više. „Ne-žbunasti“ tip rasta je bilo koji drugi tip (koji ima B alel), kao što su normalni triploidni tipovi rasta (npr. Fashion F1 ili Boston F1) koji daju prosečne najduže vreže znatno veće od 100 cm, na primer, uglavnom veće od 200 cm ili veće od 300 cm (videti takođe primere).

[0037] „Dužina najduže vreže“ ili „prosečna dužina najduže vreže“ odnosi se na prosečnu dužinu najduže vreže više biljaka iz linije lubenice ili sorte, kada su one potpuno uzgajane (u zrelosti). Najduža vreža ovde se takođe može označiti kao stabljika (prema tome, "stabljika" i "najduža vreža" se ovde koriste naizmenično).

[0038] „Prečnik biljke“ odnosi se na prosečni prečnik više biljaka iz linije ili sorte lubenice kada su potpuno uzgojene, odnosno na prečnik od vrha najduže vreže na jednoj strani biljke do vrha najduže vreže na drugoj strani biljke.

[0039] "Dužina internodija" odnosi se na prosečnu dužinu internodija na vreži više biljaka određene linije ili sorte.

[0040] "Broj internodija" se odnosi na prosečan broj internodija na vreži, npr. na najdužoj vreži.

[0041] „Povratno ukrštanje“ je postupak kojim se hibridno potomstvo, na primer F1 hibrid, više puta povratno ukršta sa jednim od roditelja hibrida. Povratno ukrštanje se može koristiti za uvođenje jednog ili nekoliko konverzija pojedinačnog lokusa iz jednog prethodnika u drugi.

[0042] U ovom dokumentu "prosečno" i "srednja vrednost" se koriste naizmenično i odnose se na aritmetičku sredinu.

[0043] „Konverzija pojedinačnog gena“ ili „konvertovani pojedinačni gen“ odnosi se na biljke razvijene povratnim ukrštanjem, pri čemu se suštinski zadržavaju sve željene morfološke i fiziološke karakteristike biljke (npr. inbred) uz dodatno prenošenje jednog gena u biljku putem ukrštanja ili genetskog inženjeringa.

[0044] „Prinos“ označava ukupnu težinu svih plodova lubenice ubranih po hektaru određene linije ili sorte.

[0045] „Tržišni prinos“ označava ukupnu težinu svih tržišnih plodova lubenice, posebno triploidnog besemenog ploda od najmanje 2,5 kg, ubranog po hektaru određene linije ili sorte, odnosno ploda pogodnog za prodaju za svežu potrošnju, dobrog ukusa (bez negativnih senzornih osobina), najmanje 10% briksa i osobina boje mesa i bez nedostataka poput šupljeg srca.

[0046] „Test alelizma“ odnosi se na genetički test kojim se može testirati da li su dva fenotipa viđena u dve biljke određena istim genom ili različitim genima. Na primer, ako se homozigotna diploidna žbunasta biljka (bb) ukrsti sa drugom biljkom lubenice koja je homozigotna za drugi recesivni gen, na drugom lokusu (npr. alel hmbn koji određuje višestruko grananje), biljka F1 neće imati žbunasti tip rasta i neće imati fenotip sa višestrukim grananjem, a generacija F2 će se razdvojiti na dva fenotipa (žbun i višestruko grananje) nezavisno, u odnosu 9:3:3:1, odnosno 9 (ne-žbun/ne-višestruko grananje) : 3 (žbun/ne-višestruko grananje) : 3 (ne-žbun/višestruko grananje) : 1 (žbun/višestruko grananje).

DETALJAN OPIS

[0047] U jednom aspektu pronalaska je data biljna vrsta Citrullus lanatus (seme), pri čemu je navedena biljka triploidna i ima žbunasti tip rasta (kako je ovde definisano). Biljka sadrži tri kopije recesivnog alela označenog kao bush, pri čemu je reprezentativni uzorak semena koji sadrži pomenuti alel deponovan pod pristupnim brojevima NCIMB 41907 (i/ili NCIMB 41905 i NCIMB 41906). Ploidija se lako može odrediti brojanjem hromozoma ili protočnom citometrijom ili drugim poznatim postupcima (Sari et al. 1999, Scientia Horticulturae 82: 265 -277).

[0048] Triploidni žbunasti hibrid ima, zbog prisustva recesivnog alela bush "b" (i odsustva dominantnog B alela), dužinu najduže vreže koja nije duža od 150 cm, po mogućnosti ne duža od 140 cm, poželjnije ne duže od 100 cm, pri čemu je prosečni prečnik biljke oko 300 cm ili manje, 280 cm ili manje, ili 200 cm ili manje, i prosečna dužina internodija na najdužoj vreži od oko 7 cm ili manje, ali najmanje oko 4,7 cm, poželjno najmanje oko 5,0, 5,5, 6,0, 6,5 ili 7,0 cm. Obuhvaćene su posebno biljke prosečne dužine internodija od 6,0 cm ili 7,0 cm ili od 6,0 do 7,0 cm. Recesivni bush alel ne utiče na veličinu lista, tako da biljka prema pronalasku sadrži listove slične (prosečne) veličine kao što je pronađeno kod normalnog rasta triploidnih hibrida (kao što je Boston F1), tj. najmanje oko 11, 12, 13, 14 ili 15 cm dužine i/ili najmanje oko 15 cm širine, obuhvatajući prosečne dužine listova od najmanje oko 11, 12, 13, 14, 15, 16 ili 17 cm i/ili prosečne širine listova najmanje oko 15, 16, 17, 18 ili 19 cm. U jednom primeru izvođenja, proizvod prosečne dužine lista pomnožen sa prosečnom širinom lista je poželjno najmanje oko 140 ili 150, kao što je najmanje oko 160, 170, 180, 190 ili 200, ili čak najmanje oko 225, 250, 300 ili više.

[0049] U jednom primeru izvođenja, odnos dužine (prosečno) najduže vreže i (prosečnog) broja internodija na najdužoj vreži je 7 ili manje. U sledećem aspektu, triploidni žbunasti hibrid nema više od (u proseku) 15 internodija na najdužoj vreži. Naročito je broj internodija na najdužoj vreži oko 50% od broja pronađenih u Bostonu F1 ili Fashion F1.

[0050] Takođe (prosečni) prečnik stabljike, izmeren u sredini najduže vreže, veći je nego kod normalnih triploidnih hibrida kao što je Boston F1, npr. prosečni prečnik stabljike je najmanje oko 8 mm, poželjno najmanje oko 9 mm a može biti čak i oko 10 mm, 11 mm ili 12 mm. Prosečni prečnik stabljike triploidnog žbunastog hibrida prema pronalasku je prema tome poželjno najmanje 1,2 puta, 1,3 puta, 1,4 puta 1,5 puta ili 1,6 puta veći od prosečnog prečnika stabljike ne-žbunastog (normalan tip rasta) triploidnog hibrida, koji sadrži B alel.

[0051] Recesivni bush alel se može preneti u bilo koju drugu biljku lubenice, npr. ukrštanjem sa biljkama uzgajanim iz deponovanih semena ili regeneracijom biljaka iz tkiva ili ćelijskih kultura biljaka za koje je seme deponovano i ukrštanjem sa takvim regenerisanim biljkama, ili identifikovanjem diploidnih biljaka lubenica koje sadrže bush alel (npr. biljke koje možda ne pokazuju žbunasti tip rasta, jer sadrže i B alel). Druge biljke lubenice u koje se b alel može preneti su, na primer, biljke kojima nedostaje recesivni b alel. Tako se za prenošenje bush alela, biljka lubenice koja sadrži bush alel ukršta sa drugom biljkom lubenice, npr. kojoj nedostaje b alel, a F1 se izdvaja za proizvodnju F2 ili dalje generacije. F2 ili dalje generacije potomaka koji sadrže bush alel u homozigotnom obliku u diploidima (ili u tri ili četiri kopije u triploidima ili tetraploidima) pokazaće žbunasti oblik rasta i stoga se lako mogu identifikovati.

[0052] Da bi se testiralo da li neka druga biljka lubenice ima bush alel ili ne, može se uraditi test alelizma.

[0053] Za određivanje i/ili odabiranje biljne linije koje imaju karakteristike žbunastog rasta, kao što je gore opisano (na primer, pri prenošenju bush alela u druge biljke lubenice kojima nedostaje recesivni bush alel), podrazumeva se da se nekoliko biljaka linije uzgaja na jednoj ili više lokacija pod istim uslovima životne sredine, uključujući odgovarajuće kontrolne sorte ili linije, a merenja se vrše na većem broju biljaka linije (najmanje 3, poželjno najmanje 5 ili 10 ili više biljaka) kako bi se mogla izračunati srednju vrednost.

[0054] Prisustvo tri kopije bush alela ne utiče na karakteristike ploda (odsustvo B alela), tako da se unošenjem bush alela u genetičke pozadine koje imaju različite karakteristike ploda mogu dobiti triploidni hibridi bilo koje veličine ploda, bilo kog oblika ploda, boje i uzorka kore ploda. Bush alel se, na primer, može povratno ukrstiti u različitim genetičkim podlogama korišćenjem semena deponovanog ovde kao izvor bush alela, kao što je opisano na drugom mestu u ovom dokumentu. Alternativno, geni koji određuju različite karakteristike ploda mogu se povratno ukrstiti sa biljkama koje sadrže žbunasti tip rasta. Prema tome, prosečna masa ploda triploidnog hibrida koji ispoljava žbunasti tip rasta može biti najmanje oko 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ili 14 kg. U sledećem primeru izvođenja, prosečna masa ploda triploidnog hibrida koji ispoljava

1

žbunasti tip rasta može biti manja od 5 kg, npr. 4, 3, 2, 1,5 ili 1 kg. Za proizvodnju hibridnih triploida sa tako malim plodovima može se, na primer, uvesti bush alel u sorte poput Liliput, Extazy ili Fantazy (Hazera) ili Valdoria F1, Vanessa F1, Pixie F1 ili Bonny F1 (Nunhems) ili, obrnuto, geni koji određuju male veličine ploda mogu se povratno ukrstiti sa ovde deponovanim biljkama koje imaju žbunasti tip rasta.

[0055] Isto tako, bilo koje druge karakteristike ploda mogu se kombinovati sa žbunastim tipom rasta prilikom uzgoja. Kao što je pomenuto, na primer oblik ploda (npr. izduženi, ovalni, nalik bloku, sferni ili okrugli), površina ploda (brazda, glatka), boja mesa (grimizno crvena, koralno crvena, narandžasta, losos, žuta, kanarinko žuta ili bela), boja kore (npr. svetlo zelena; tamno zelena; zeleno-prugaste sa uskim, srednjim ili širokim prugama; sive vrste; sa ili bez mrlja; zlatno-žuta), debljina kore, žilavost kore, uzorak kore (npr. prugasti, ne-prugasti, umreženi), briks (ukupne rastvorljive čvrste materije), struktura mesa/čvrstoća mesa, veći sadržaj likopena i/ili vitamina, različiti odnosi šećera i kiselina, vrlo dobar ukus voća itd. mogu se modifikovati uzgojem. Videti Guner and Wehner 2004, Hort Science 39(6): 1175-1182, posebno na stranicama 1180-1181 koji opisuju gene za karakteristike ploda. Opšte važni ciljevi uzgoja su rana zrelost, visok prinos plodova, visok unutrašnji kvalitet plodova (dobra jednolična boja, visok šećer, odgovarajući odnos šećera i kiseline, dobar ukus, visok sadržaj vitamina i likopena, čvrsta tekstura mesa, tekstura nevlaknastog mesa, odsustvo defekata kao što su šuplje srce, nekroza kore, trulež na kraju cveta ili ukrštanje i dobre karakteristike kore i otpornost na pucanje).

[0056] U jednom primeru izvođenja, plodovi poželjno takođe nemaju „krhku koru“ i/ili „eksplozivnu koru“ kako je opisano u WO03/075641 na strani 13 i 14, tj. plodovi se ne lome pod pritiskom u opsegu od 90 do 140 g/mm<2>.

[0057] Bush alel se može uvesti u druge biljke lubenice kojima nedostaje bush alel, koristeći poznate postupke uzgoja. Poznati postupci oplemenjivanja mogu se koristiti samostalno ili u kombinaciji, kao što su (ali ne ograničavajući se na) ponavljajuća selekcija, rodoslovno oplemenjivanje, uzgoj povratnim ukrštanjem, inbridovani razvoj, hibridno testiranje, uzgoj uz pomoć markera itd. Zatim se bira potomstvo koje zadržava žbunasti oblik rasta, koje se fenotipski može lako identifikovati. Dakle, selekcija potomstva sa žbunastim oblikom rasta može se obaviti fenotipskim odabirom karakteristika žbunastog oblika rasta i odbacivanjem biljaka koje nemaju žbunasti oblik rasta, npr. koje imaju duže glavne vreže, duže internodije i manje lišće u poređenju do žbunastim biljkom prema pronalasku.

[0058] Dakle, u jednom aspektu je data biljka vrste Citrullus lanatus, pri čemu je navedena biljka triploidna i ima žbunasti oblik rasta, a sastoji se od tri kopije recesivnog alela označenog kao bush, pri čemu se bush alel može dobiti (može se dobiti) ukrštanjem biljke lubenice čija su semena deponovana pod pristupnim brojem NCIMB41906 ili NCIMB41905, ili potomstva bilo koje od ovih biljaka (npr. dobijeno samooplodnjom i/ili ukrštanjem i koje zadržava bush alel i/ili žbunasti oblik rasta), sa drugom biljkom lubenice.

[0059] U jednom aspektu, triploidna biljka koja ima žbunasti tip rasta dobija se ukrštanjem biljke diploidne žbunaste lubenice sa biljkom tetraploidne žbunaste lubenice, pri čemu se bush alel dobija (može se dobiti) ukrštanjem biljke diploidne žbunaste lubenice sa biljkom tetraploidne žbunaste lubenice, pri čemu se bush alel dobija (može dobiti) ukrštanjem biljke lubenice čija su semena deponovana pod pristupnim brojem NCIMB41906 ili NCIMB41905, ili potomstva bilo koje od ovih biljaka (npr. dobijeno samooprašivanjem i/ili ukrštanjem i gde potomstvo zadržava bush alel i/ili žbunasti oblik rasta), sa drugom biljkom lubenice.

[0060] U jednom aspektu je data biljka vrste Citrullus lanatus, pri čemu je navedena biljka triploidna i ima žbunasti oblik rasta, i sadrži tri kopije recesivnog alela označenog kao bush, pri čemu se biljka može dobiti vegetativnim razmnožavanjem biljnih ćelija ili biljnog tkiva biljke lubenice čija su semena deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 41907.

[0061] Kako je b alel recesivan, žbunasti oblik rasta se primećuje samo ako nije prisutan dominantan B alel. Pri prenosu b alela iz diploidnog semena deponovanog ovde (npr. NCIMB 41906 ili njegovo potomstvo) u drugu biljku lubenice koja ne sadrži recesivni b alel, F1 će biti heterozigotan i neće imati žbunasti oblik rasta i uzgajivač prvo treba da podvrgava samooplodnji F1, kako bi identifikovao biljke koje sadrže žbunasti oblik. Slično tome, prilikom prenošenja b alela iz tetraploidne biljke lubenice (bbbb), kao što je uzgojena iz semena NCIMB41905 ili njegovog potomstva, u drugu tetraploidnu biljku lubenice koja ne sadrži recesivni b alel, F1 će biti heterozigotan i neće pokazivati žbunasti oblik rasta i opet fenotip žbuna videće se samo u F2 generaciji. Diploidna žbunasta biljka takođe se može obnoviti iz haploidnih ćelija tetraploidne žbunaste biljke (npr. kultura polena ili antera i regeneracija biljke), a izvedena diploidna žbunasta biljka se zatim može koristiti u daljem uzgoju i stvaranju biljaka lubenice koje imaju žbunasti oblik rasta. Ovo se može nazvati haploidnom tetraploidnom biljkom koja ima žbunasti oblik rasta. Takve biljke su ovde obuhvaćene.

[0062] Alternativno, mogu se razviti molekularni markeri koji su povezani sa b alelom, a zatim se može izvršiti odabir žbunastog oblika rasta izborom biljaka koje imaju povezane molekularne markere. Povezani markeri mogu se razviti pomoću niza tehnika, kao što je grupna segregatna analiza, i niza markera, poput AFLP markera, RFLP markera, SNP markera, mini-ili mikrosatelitskih markera itd. Za razvoj markera segregatnu populaciju treba generisati na primer ukrštanjem biljke koja ima žbunasti rast (npr. diploidni bb) sa biljkom koja ima normalan tip rasta (npr. diploidna BB) i razvojem odvojene populacije od nje (npr. populacija F2 ili F3 ili populacija nastala povratnim ukrštanjem). Tada se mogu identifikovati markeri koji su blisko udruženi (povezani) sa žbunastim oblikom rasta i bush alelom, tj. ko-segregira sa b alelom. Videti na primer Wolukau et al. (HortScience February 2009 vol. 44 no. 1 32-34) upotreba analize grupnih uzoraka (Bulk Segregant Analysis-eng<.)>u dinji za identifikaciju markera povezanih sa genom za rezistenciju. Molekularni marker je DNK sekvenca ili polimorfizam jednog nukleotida (SNP) koji se nalazi na hromozomu blizu alela b (npr. unutar genetske udaljenosti od 5 cM ili manje) i koji se razlikuje od DNK sekvence ili SNP koji se nalaze u blizini alela B. Prema tome, u jednom primeru izvođenja b alel se može uvesti u druge biljke lubenice kojima nedostaje b alel metodama uzgajanja uz pomoć markera, koristeći molekularni marker usko povezan sa b alelom.

[0063] Za proizvodnju besemenog ploda, triploidni žbunasti hibrid prema pronalasku može da se združeno sadi sa odgovarajućim diploidnim oprašivačem, kao što je na primer Jenni F1 (Nunhems) ili Polimax F1 (Nunhems) ili drugim oprašivačima, kao što su SP-1, SP-2, SP-3, SP-4 ili SP-5 (Syngenta) ili Sidekick. Plod se zatim bere iz triploidnih biljaka prema pronalasku. Kako triploidne biljke imaju manji prečnik biljke, veća gustina setve ili sadnje je moguća u poređenju sa normalnim tipom rasta triploida (kao što su biljke sa glavnom dužinom vreže iznad 200, 250 ili 300 cm). Time se takođe postiže veći prinos triploidnog ploda po hektaru.

[0064] U jednom primeru izvođenja dat je postupak za proizvodnju triploidnih besemenih plodova, koji sadrži:

a) združena sadnja triploidnih hibridnih žbunastih biljaka i diploidnih biljaka za oprašivanje, pri čemu su triploidne biljke gustine koja je najmanje 1,5 puta veća od gustine sadnje triploidne hibridne biljke normalnog tipa rasta,

b) omogućavanje oprašivanja ženskih cvetova na triploidnim žbunastim biljkama i

c) berba plodova sa triploidnih hibridnih žbunastih biljaka.

[0065] Gustina triploidnih žbunastih biljaka u koraku a) zavisi od toga da li se biljke gaje u stakleniku ili na otvorenom polju ili da li su triploidi kalemljeni na podloge ili ne. Prema tome, gustina triploidnih žbunastih biljaka u stakleniku je poželjno najmanje oko 7500 biljaka po hektaru (kalemljeni triploidi) ili 15000 biljaka po hektaru (ne-kalemljeni triploidi). Gustina triploidnih žbunastih biljaka na otvorenom polju je poželjno najmanje oko 6000, 7000 ili 8000 biljaka po hektaru (kalemljeni triploidi) ili najmanje oko 12000, 13000, 14000 ili 15000 biljaka po hektaru (nekalemljeni triploidi).

[0066] Prinos triploidnog ploda u koraku c) je najmanje 1,25 puta veći od prinosa triploidnog ploda normalnog tipa rasta, kao što su Boston F1 ili Fashion F1. Tako se na otvorenom polju (nekalemljeno) bere najmanje oko 75 tona triploidnih besemenih plodova (koji sadrže tri kopije b alela) po hektaru u koraku c), poželjno čak i najmanje oko 80, 85 ili 90 tona po hektaru. Prema tome, u jednom primeru izvođenja postupak sadrži korak d) berbu najmanje 75 tona triploidnih

1

plodova po hektaru. Zatim se mogu sortirati, pakovati u kontejnere itd. Kontejneri koji sadrže ili se sastoje od triploidnih plodova, poželjno tržišni plodovi, koji sadrže b alel, takođe su u primeru izvođenja pronalaska.

[0067] Takođe je ovde su data semena iz kojih mogu da se uzgajaju triploidne hibridne biljke koje imaju žbunasti tip rasta. Dakle, u jednom primeru izvođenju dato je seme lubenice iz kojeg se može uzgajati triploidna žbunasta biljka kako je gore opisano. Seme sadrži tri kopije b alela. U jednom primeru izvođenja reprezentativni uzorak semena je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41907. U jednom primeru izvođenja zrela semena su mala, sadrže prosečnu veličinu semena jednake ili manje od 5 mm dužine. Paketi (vreće, kontejneri, itd.) koji sadrže mnoštvo takvih semena, su ovde obuhvaćeni.

[0068] Takođe su ovde obuhvaćene sadnice, plemke i podloge, kao i ćelije i tkiva, i ćelijske kulture i kulture tkiva, i vegetativno razmnožavanje triploidnih hibridnih biljaka koje imaju žbunasti tip rasta. Tako cele biljke dobijene iz sadnica, plemki i podloga, kao i ćelije i tkiva, ćelijske kulture i kulture tkiva i vegetativno razmnožavanje triploidnih hibridnih biljaka zadržavaju žbunasti tip rasta prema pronalasku kada se regenerišu u biljku i gaje pod istim uslovima životne sredine koji su dati ovde.

[0069] Slično tome, besemeni triploidni plodovi (bbb) ubrani iz triploidne žbunaste biljke su prema pronalasku ovde obuhvaćeni. Plodovi se mogu ubrati za svežu potrošnju ili za preradu. Posude koje sadrže ili se sastoje od više takvih plodova su dalje primer izvođenja pronalaska. Poželjno je da kontejneri sadrže tržišne plodove.

[0070] Triploidna hibridna biljka koja ima žbunasti tip rasta (bbb) je F1 - hibrid proizveden iz ukrštanja između diploidne inbridovane muške roditeljske linije koja ima žbunasti oblik rasta i tetraploidne inbridovane roditeljske linije koja ima žbunasti oblik rasta (videti Sliku 1). Dakle, za proizvodnju semena triploidnih hibridnih biljaka koje imaju žbunasti tip rasta (bbb) može se ili vegetativno razmnožavati triploidna hibridna biljka, ili alternativno, mogu se proizvesti roditeljske linije inbridovanog žbunastog diploida (bb) i inbridovanog žbunastog tetraploida (bbbb). Stručnjak iz oblasti tehnike može tako, da uvede različite karakteristike (kao što su različite veličine plodova itd.) u triploidni žbunasti hibrid tako što će prvo generisati muške i ženske roditelje koji imaju različite karakteristike, ali koje zadržavaju žbunasti tip rasta kako je ovde opisano.

[0071] Vegetativno razmnoženi triploidni hibrid koji ima žbunasti tip rasta je takođe primer izvođenja pronalaska. U jednom aspektu, biljka lubenice ima bush alel kakav se nalazi u semenima deponovanim pod NCIMB41907, NCIMB41906 ili NCIMB41905. U jednom aspektu, vegetativno razmnoženi hibrid je dobijen (može se dobiti) iz biljnog tkiva NCIMB 41907.

[0072] Kao što je gore pomenuto, b alel se može preneti iz ovde obezbeđenih depozita semena u druge biljke lubenice i na taj način se mogu stvoriti drugi inbridovani diploidi žbuna i/ili drugi inbridovani žbunasti tetraploidi. U jednom primeru izvođenja data je inbridovana biljka žbunastog diploida i/ili inbridovana biljka žbunastog tetraploida koja sadrži b alel kako je pronađeno u semenima deponovanim pod pristupnim brojevima NCIMB 41905, NCIMB 41906 i/ili NCIMB 41907.

[0073] Kada se govori o biljci diploidne ili tetraploidne lubenice koja ima žbunasti oblik rasta, podrazumeva se da se poziva na iste karakteristike žbunastog tipa rasta, kao što je gore opisano za triploidni žbunasti hibrid, tj. na diploidne ili tetraploidne žbunaste biljke, zbog prisustva recesivnog bush alela "b" u dve ili četiri kopije (i odsustvo dominantnog B alela), dužina najduže vreže ne veća od 150 cm, 140 cm ili 100 cm, pri čemu je prosečni prečnik biljke oko 300 cm, 280 cm ili 200 cm ili manji i prosečna dužina internodija na najdužoj vreži od oko 7 cm ili manje, ali najmanje oko 4,7 cm, poželjno najmanje oko 5,0, 5,5, 6,0 ili 6,5 cm. Recesivni bush alel ne utiče na veličinu lista, tako da biljka prema pronalasku sadrži listove slične veličine kakvi se nalaze u diploidima normalnog rasta (kao što je sorta Milady) ili tetraploidima normalnog rasta, tj. najmanje oko 11 cm dužine i/ili najmanje oko 15 cm širine, obuhvatajući dužine listova od najmanje oko 11, 12, 13, 14, 15, 16 ili 17 cm i/ili širine listova od najmanje oko 15, 16, 17, 18 ili 19 cm. Slično tome, odnos dužine (prosečno) najduže vreže i (prosečnog) broja internodija na najdužoj vreži je 7 ili manje. U drugom aspektu, diploidni žbun ili tetraploidni žbun nema najviše (u proseku) 25, 21 ili 15 internodija na najdužoj vreži. Takođe (prosečni) prečnik stabljike, izmeren u sredini najduže vreže, je u jednom aspektu veći nego kod diploida ili tetraploida normalnog rasta, npr. prečnik stabljike je najmanje oko 8 mm, poželjno najmanje oko 9 mm, a može biti i najmanje oko 10 mm, 11 mm ili 12 mm. Prosečni prečnik stabljike diploidne ili tetraploidne žbunaste biljke prema pronalasku je, prema tome, poželjno najmanje 1,2 puta, 1,3 puta, 1,4 puta 1,5 puta ili 1,6 puta od prosečnog prečnika stabljike ne-žbunaste diploidne ili tetraploidne grane i sadrži B alel. Karakteristike ploda (npr. prosečna veličina ploda, težina, itd.) se u jednom primeru izvođenja ne razlikuju u odnosu na diploide ili tetraploide normalnog rasta.

[0074] Diploidna žbunasta inbridovana linija može da se izvede, gde je bush alel (b) izvodljiv, npr. iz deponovanog semena napravljenog pod pristupnim brojem NCIMB 41906 ili od njegovog potomstva, npr. potomstvo dobijeno samooplodnjom i/ili ukrštanjem NCIMB41906 sa drugom biljkom lubenice. To se na primer, može učiniti uzgajanjem sa NCIMB 41906, ili njegovim potomstvom, i selekcijom generacija potomaka za žbunasti tip rasta, uz odbacivanje biljaka koje nemaju žbunasti tip rasta. Bush alel takođe može biti izveden iz drugih biljaka ili biljnih delova koji sadrže bush alel, npr. polen ili plodnici žbunaste tetraploidne biljke, poput semena deponovanih pod NCIMB 41905.

1

[0075] Alternativno, nove inbridovane diploidne žbunaste linije mogu se napraviti identifikovanjem diploidnih sorti ili linija koje mogu sadržati bush alel, iako možda nemaju žbunasti tip rasta (zbog prisustva dominantnog B alela). Na primer, mogu se koristiti diploidi za koje se sumnja da možda sadrže b alel. Test alelizma se može uraditi da bi se utvrdilo da li je prisutan recesivni bush alel. Poželjno je da se samooprašujući diploid tokom jedne ili više generacija, a diploid koji je homozigotan za bush alel se identifikuje izborom izdanaka biljaka koje imaju žbunasti tip rasta kako je utvrđeno bush alelom u homozigotnom obliku. Sorte koje bi mogle biti prikladne su Garden Baby, Bush Charleston Gray i Bush Sugar Baby ili Sugar Bush.

[0076] Može se napraviti inbridovana tetraploidna žbunasta linija u kojoj bush alel može da potiče, npr. iz deponovanog semena pod pristupnim brojem NCIMB 41905 ili NCIMB 41906, ili iz potomstva bilo kog od ovih. To se, na primer, može uraditi uzgajanjem sa NCIMB 41905 i/ili NCIMB 41906, ili njihovog potomstva i selekcijom generacija potomstva za žbunasti tip rasta, uz odbacivanje biljaka koje nemaju žbunasti tip rasta. Kada se koriste NCIMB 41906, ili njegovo potomstvo , tehnike udvajanja hromozoma mogu se koristiti za generisanje tetraploida, nakon čega sledi odabir žbunastog oblika rasta u tetraploidima i u potomstvu tetraploida dobijenom auto-selekcijom tetraploida i stabilizacijom žbunastog oblika rasta u daljim generacijama.

[0077] Alternativno, nove inbridovane linije žbunastog tetraploida mogu se napraviti počev od novih diploidnih žbunastih biljaka, kao što je gore opisano, i inbridingom navedenih biljaka tokom nekoliko generacija, uz selekciju žbunastog tipa rasta kako je ovde definisano i udvaja hromozom odabrane inbridovane žbunaste diploidne linije za stvaranje žbunaste tetraploidne linije. Zatim se tetraploidna linija dalje generiše nekoliko generacija, odabirajući žbunasti tip rasta kako je ovde opisano.

[0078] U jednom aspektu, pronalazak takođe daje biljku (ili seme) vrste Citrullus lanatus, gde je navedena biljka tetraploidna i ima žbunasti oblik rasta. Žbunasti oblik rasta nastaje zbog prisustva b alela, tako da je data tetraploidna biljka koja ima žbunasti tip rasta i sadrži četiri kopije recesivnog alela označenog kao bush, pri čemu je reprezentativni uzorak semena koji sadrži navedeni b alel deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41905. Takođe su ovde obuhvaćeni bilo koji biljni delovi i potomstvo tetraploidne žbunaste biljke, kao što je vegetativno razmnožavanje, razmnožavanje semenom (npr. samooplodnja) i takođe in vitro kulture ćelija ili tkiva, kao i polen, plodnici, itd. Prema tome, u jednom primeru izvođenja, tetraploidna žbunasta biljka, ili seme iz kojeg biljka može da se uzgaja, ili tkivo ili delovi biljke (polen, antere, semeni zameci) sadrže b alel kao što je pronađeno u NCIMB 41905.

[0079] Dakle, u jednom aspektu je data biljka vrste Citrullus lanatus, pri čemu je navedena biljka tetraploidna i ima žbunasti oblik rasta, sadrži četiri kopije recesivnog alela označenog kao bush, pri čemu je bush alel dostupan (može se dobiti) ukrštanjem biljke lubenice čija su semena

1

deponovana pod pristupnim brojem NCIMB41906 ili NCIMB41905 ili potomstva bilo koje od ovih biljaka (npr. dobijenih samooprašivanjem i/ili ukrštanjem) sa drugom biljkom lubenice.

[0080] U drugom aspektu je data biljka vrste Citrullus lanatus, pri čemu je navedena biljka tetraploidna i ima žbunasti oblik rasta, a sadrži četiri kopije recesivnog alela označenog kao bush, pri čemu je biljka dobijena samooprašivanjem tetraploidne biljke čiji je reprezentativni uzorak semena deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41905.

[0081] Vegetativno razmnožena tetraploidna biljka lubenice koja ima žbunasti oblik rasta je takođe u primeru izvođenja pronalaska. U jednom aspektu, biljka lubenice ima bush alel kakav se nalazi u semenima deponovanim pod NCIMB41907, NCIMB41906 ili NCIMB41905. U jednom aspektu, vegetativno razmnožena biljka lubenice dobijena je iz (može se dobiti) biljnih ćelija ili biljnog tkiva NCIMB 41905.

[0082] U jednom aspektu je data biljka vrste Citrullus lanatus, pri čemu je navedena biljka tetraploidna i ima žbunasti oblik rasta, a sadrži četiri kopije recesivnog alela označenog kao bush, u kome se biljka dobija (može se dobiti) vegetativnim razmnožavanjem biljnih ćelija ili tkiva biljke lubenice od kojih su semena deponovana pod pristupnim brojem NCIMB41905.

[0083] U još jednom primeru izvođenju tetraploidna žbunasta biljka sadrži b alel identifikovan iz drugih diploidnih izvora kako je gore opisano ili pronađeno u semenima deponovanim pod pristupnim brojem NCIMB 41906.

[0084] Obezbeđen je postupak za generisanje inbridovane tetraploidne biljke koja ima žbunasti tip rasta, koja obuhvata korake:

a) obezbeđivanje diploidne biljke koja sadrži b alel,

b) samooprašivanje pomenute diploidne biljke tokom nekoliko generacija da bi se stvorila inbridovana linija žbunastog tipa rasta,

c) udvajanje hromozoma pomenute inbridovane linije da bi se stvorila tetraploidna linija, d) samooprašivanje tetraploidne linije tokom nekoliko generacija.

[0085] Dakle, u koraku a) diploidna biljka može biti biljka izvedena iz semena deponovanog pod NCIMB 41906 ili njegovog potomstva, ili može biti diploidna biljka u koju je ukrštanjem i selekcijom prenesen b alel iz deponovanog semena NCIMB 41906 žbunastog tipa rasta. Diploid može biti i nova diploidna biljka u kojoj je identifikovan b alel, npr. korišćenjem testa alelizma i/ili identifikovanjem diploida koji može obuhvatati b alel, samooprašivanje, navedene biljke tokom jedne ili više generacija i fenotipskim odabirom potomstva koje ima žbunasti tip rasta. Alternativno, diploid može biti haploidna biljka nastala iz semena deponovanog pod NCIMB 41905.

1

[0086] Takođe je data upotreba žbunaste tetraploidne biljke prema pronalasku kao muškog ili ženskog roditelja, pri čemu je žbunasta tetraploidna biljka ukrštena sa drugom biljkom lubenice ili joj je dozvoljeno da se samoopraši kako bi proizvela potomstvo. U jednom primeru izvođenja žbunasta tetraploidna biljka ispoljava žbunasti tip rasta, zbog prisustva četiri kopije b alela, pri čemu se žbunasta biljka (i/ili b alel) može dobiti iz semena deponovanih pod NCIMB 41905, ili njegovog potomstva.

[0087] Dalje je data upotreba žbunaste tetraploidne biljke kao ženskog roditelja, posebno kao ženskog roditelja u hibridnoj triploidnoj proizvodnji semena lubenice (tj. proizvodnja semena F1). Tako se u jednom aspektu ženski cvetovi žbunaste tetraploidne biljke oprašuju (ili se dozvoljava da se opraše) polenom druge biljke lubenice. Druga biljka lubenice može biti bilo koja biljka lubenice, npr. diploidna ili tetraploidna biljka lubenice. U određenom primeru izvođenja, druga biljka lubenice je diploidna biljka, poželjno diploidna biljka koja ispoljava žbunasti tip rasta. Diploidna biljka lubenice koja ispoljava žbunasti tip rasta može biti bilo koja žbunasta diploidna biljka kako je gore opisano, ili biljka koja se može dobiti iz semena deponovanog pod NCIMB 41906 ili od njegovog potomstva.

[0088] Ovde je takođe opisan postupak za proizvodnju triploidnih hibridnih semena lubenice, pri čemu triploidne biljke uzgajane iz takvih semena imaju žbunasti oblik rasta, a pomenuti postupak sadrži:

(a) obezbeđivanje diploidne biljke lubenice koja ima žbunasti oblik rasta i tetraploidne biljke koja ima žbunasti oblik rasta,

(b) dozvoljavanje oprašivanja tučkova cvetova žbunaste tetraploidne biljke polenom žbunaste diploidne biljke, i

(c) berbu semena proizvedenog u plodovima žbunaste tetraploidne biljke, i opciono (d) sušenje ubranog semena.

Po želji se osušena i ubrana F1 semena pakuju. Takođe se mogu tretirati pre pakovanja. Prema tome, pakovanje ili kontejneri koji sadrže ili se sastoje od semena dobijenih gornjim postupkom su ovde primer izvođenja.

[0089] Ovaj postupak je takođe prikazan na Slici 1. Žbunasta tetraploidna biljka i žbunasta diploidna biljka mogu se dobiti kako je ovde opisano na drugom mestu. Mogu se združeno sade kako bi se omogućilo oprašivanje. U koraku a), seme ili sadnice obe biljke se, dakle, sade i gaje u neposrednoj blizini. Ako diploidno žbunje i tetraploidno žbunje ne cvetaju istovremeno, biljka koja kasnije cveta može se ranije posaditi ili posejati, tako da cvetanje otprilike bude u isto vreme. Kako i diploidne biljke i tetraploidne biljke imaju žbunasti oblik rasta, više biljaka po hektaru može se posejati ili zasaditi u poređenju sa triploidnom hibridnom proizvodnjom semena

1

koja uključuje tetraploide normalnog rasta. Oprašivanje može biti ručno ili insektima (npr. pčele) u izolovanim blokovima. Da bi se osiguralo oprašivanje tetraploidnih ženskih cvetova polenom muškog diploida, mogu se koristiti različiti postupci, kao što su ručno sakupljanje muških cvetova i ručno oprašivanje ženskih cvetova, praćeno pokrivanjem oprašenog cveta. Alternativno, svi muški cvetovi koji se razvijaju na tetraploidnim biljkama mogu se ukloniti kako bi se osiguralo oprašivanje tučkova cvetova na žbunastim tetraploidnim biljkama diploidnim polenom žbunastih diploidnih biljaka. Kada plodovi na tetraploidnim biljkama sazru, beru se i sakupljaju se triploidna F1 hibridna semena (koja su rezultat unakrsnog oprašivanja). Zatim se mogu sortirati (npr. po veličini), osušiti, opciono tretirati i upakovati za prodaju. U jednom primeru izvođenja, ženski roditelj žbunastog tetraploida (i/ili b alel) se može dobiti iz semena deponovanog pod NCIMB 41905 ili njegovog potomstva ili njegovim vegetativnim razmnožavanjem. U još jednom primeru izvođenju, žbunasti diploidni muški roditelj (i/ili b alel) se može dobiti iz semena deponovanog pod NCIMB 41906 ili njegovog potomstva ili njegovim vegetativnim razmnožavanjem.

[0090] Daje se, takođe, seme dobijeno gornjim postupkom, odnosno seme F1-hibrida koje, kada se gaji, daje triploidne biljke koje imaju žbunasti oblik rasta. Takvo seme se može pakovati u vreće, kontejnere i slično.

[0091] U jednom primeru izvođenja seme F1 je seme WH3451, reprezentativni uzorak semena deponovan je pod pristupnim brojem NCIMB 41907. U drugom primeru izvođenja žbunasti triploidni hibrid (i/ili b alel) se može dobiti od semena deponovanih pod NCIMB 41907 ili njegovog potomstva ili njegovim vegetativnim razmnožavanjem.

[0092] Žbunasta tetraploidna biljka korišćena u gornjem postupku sadrži četiri kopije bush alela (bbbb) u svom genomu i ima sledeće karakteristike: dužina najduže vreže ne veća od 150 cm, poželjno ne veća od 140 cm, 135 cm, ili ne više od 100 cm, prosečna dužina internodija na najdužoj vreži od 7 cm ili manje, ali najmanje 4,5 cm, i daje listove najmanje 11 cm duge i/ili najmanje 15 cm široke.

[0093] Takođe je dat postupak za proizvodnju semena žbunaste tetraploidne lubenice, koji obuhvata: a) uzgajanje biljke žbunaste tetraploidne lubenice prema ovom pronalasku, b) omogućavanje samooprašivanja navedene biljke tetraploidne lubenice, c) dobijanje ploda od biljke iz koraka b) i d) izdvajanje tetraploidnog semena iz pomenutog ploda. Poželjno je da postupak dalje uključuje pranje i sušenje pomenutog semena. U jednom aspektu biljka tetraploidne lubenice iz koraka a) je biljka koja ispoljava žbunasti tip rasta kako je ovde opisano. Biljka može u jednom izvođenju da sadrži bush alel koji se može dobiti iz semena deponovanog pod pristupnim brojevima NCIMB 41905, NCIMB 41906 ili NCIMB 41907. Biljka iz koraka a) može se dobiti iz biljke ili iz dela biljke, uzgajanog iz deponovanog NCIMB 41905.

1

[0094] Kao što je takođe gore opisano, ovo je primer davanja postupka za proizvodnju besemenog ploda triploidne lubenice, pomenuti postupak obuhvata:

1. obezbeđivanje biljke lubenice triploidnog hibrida (F1) koja ispoljava žbunasti oblik rasta,

2. združena sadnja navedene triploidne hibridne biljke sa diploidnim biljkama oprašivača, 3. berbu besemenih plodova lubenice proizvedenih na triploidnim biljkama iz (a).

[0095] Triploidna hibridna biljka iz koraka 1 poželjno nije kalemljena na drugu podlogu. Poželjno je da se postupak sprovodi na otvorenom polju.

[0096] Diploidni oprašivač u koraku b) može biti bilo koji diploidni oprašivač, kao što je oprašivač normalnog tipa rasta (ne-žbunasti), mogu se koristiti komercijalni oprašivači kao što su Jenny ili Polimay ili super-oprašivači (SP-1, SP -2, SP-3, SP-4, SP-5), Sidekick, Escort-4, Companion ili drugi. Po želji, oprašivač može biti oprašivač sa dvostrukom namenom kako je opisano u WO2012/069539 A1. Diploidni oprašivač treba da proizvede dovoljno polena u pravo vreme tokom dana i tokom odgovarajućeg vremenskog perioda da bi inicirao skup plodova u triploidnim hibridima. Biljke oprašivača mogu biti hibridni diploidi (F1 diploidi) ili otvoreno oprašeni (OP) oprašivači.

[0097] U ovom postupku najmanje 1,5 puta, poželjno najmanje 2 puta, 2,5 puta ili 3 puta više žbunastih triploidnih biljaka može se uzgajati po hektaru nego kada se koristi triploidna hibridna biljka koja sadrži normalni (ne-žbunasti) oblik rasta, kao na primer Boston F1,. Po hektaru se proizvede najmanje 15%, poželjno najmanje 20%, 30%, 40% ili 50% više tržišnih plodova triploida, nego kada se koristi triploidna hibridna biljka koja sadrži normalni oblik rasta, kao što je Boston F1. Ukupan prinos besemenih plodova ubran na hibridnim triploidnim žbunastim biljkama je poželjno najmanje oko 75 tona po hektaru (t/ha), poželjno najmanje 80 t/ha, još poželjnije najmanje 90 t/ha.

[0098] Združena sadnja na jednom polju može se obaviti setvom ili presađivanjem oprašivača i triploida. Mogu se koristiti različiti postupci združene sadnje, koji su poznati u tehnici, i mogu se koristiti različiti odnosi oprašivača:triploidni hibrid. Jedan red biljaka oprašivača može, na primer, biti prisutan najmanje svaka 2, najmanje svaka 3 ili najmanje svaka 4 reda triploida, ali mogu se koristiti i druge metode združene sadnje.

[0099] Oprašivanje obično obavljaju pčele, a košnice se mogu obezbediti na poljima, osim ako je prirodno prisutno dovoljno divljih pčela. Oprašivanje se takođe može izvršiti ručno ili mehanički. Berba u zrelosti može se vršiti ručno ili mehanički.

[0100] Ubrani triploidni plodovi mogu se pakovati sveže za tržište ili za preradu. Ovde su obuhvaćeni plodovi koji sadrže tri b alela koja se mogu dobiti gore navedenim postupkom. Ovi

2

plodovi se mogu razlikovati od plodova normalnih triploidnih hibrida po tome što imaju sposobnost da proizvode biljke koje imaju žbunasti tip rasta prema pronalasku, odnosno imaju genetske odrednice odgovorne za žbunasti tip rasta (alel b). Ako se molekularni markeri povezani sa b alelom razvijaju kako je gore opisano, analizom markera mogu se lako razlikovati takvi plodovi. Alternativno, ćelije ili tkiva iz takvih plodova (ili iz drugih delova biljke iz kojih su ubrani) mogu se vegetativno uzgajati i prerađivati u cele biljke, gde obnovljene biljke imaju žbunasti oblik rasta. Tako su u jednom primeru izvođenja dati ubrani triploidni plodovi (bbb), kao što su pakovani celi plodovi ili delovi plodova i/ili prerađeni plodovi ili delovi plodova.

[0101] U drugom aspektu pronalaska data je ćelijska kultura ili kultura tkiva obnovljivih ćelija biljke koja ima žbunasti oblik rasta ili sadrži bush alel, sve kako je gore opisano. Kultura ćelija ili kultura tkiva obuhvata ćelije ili protoplaste ili biljno tkivo iz biljnog dela biljke koji sadrži bush alel (kao što je žbunasti tetraploid, žbunasti diploid ili žbunasta triploidna biljka, sve kako je ovde opisano) odabrane iz grupe koju čine od: embriona, meristema, kotiledona, polena, listova, antera, korena, vrhova korena, tučkova, cvetova, semena, stabljike. Biljni deo može biti izabran iz plemke, ploda, polena, semenog zametka, stabljike, kotiledona, listova, ćelijskih embriona, meristema, antera, korena, vrhova korena, tučkova, cvetova, semena. Takođe je data biljka lubenice regenerisana iz takve ćelijske kulture ili kulture tkiva, pri čemu regenerisana biljka (ili njeni izdanci, na primer dobijeni nakon samooprašivanja) ispoljava žbunasti oblik rasta. Prema tome, ovde su obuhvaćene vegetativno razmnožene biljke lubenice dobijene iz biljnog tkiva semena ili biljaka uzgajanih od semena deponovanih pod NCIMB 41907, NCIMB 41906 ili NCIMB 41905.

[0102] Podrazumeva se da je takođe cilj pronalaska da obezbedi seme iz kojeg mogu da se gaje ovde opisane diploidne, triploidne ili tetraploidne biljke. Takođe su ovde obuhvaćene sadnice, plemke i podloge, kao i ćelije i tkiva biljaka žbunastih diploidnih, triploidnih ili tetraploidnih biljaka. Takvi biljni delovi sadrže genetske odrednice za proizvodnju žbunastih biljaka prema pronalasku. Tako cele biljke dobijene iz sadnica, plemki i podloga, kao i iz ćelija i tkiva žbunastih triploidnih ili tetraploidnih biljaka, zadržavaju sve fiziološke i morfološke karakteristike biljaka žbunastih triploidnih ili tetraploidnih biljaka prema pronalasku kada se gaje u istim uslovima životne sredine.

[0103] Takođe su ovde dati izdanci bilo koje biljke prema pronalasku, kao što je seme dobijeno ukrštanjem biljke koja sadrži ovde opisani bush alel (i koji nema B alel) sa drugom biljkom lubenice i/ili samooprašivanjem biljke prema pronalasku za proizvodnju semena F1 i izdanaka dalje generacije (F2, F3, itd.). Prisustvo žbunastog alela u izdancima može se utvrditi žbunastim tipom rasta (npr. u inbridovanim linijama) i/ili analizom markera.

[0104] U jednom primeru izvođenja data je biljka tetraploidne lubenice (i seme iz koga se takva biljka može uzgajati) koja ima žbunasti oblik rasta, pri čemu je reprezentativan uzorak semena koji sadrži genetske elemente za navedeni oblik žbunastog rasta (tj. sadrži b alel u četiri kopije i koji ne sadrži B alel), pri čemu je reprezentativni uzorak semena deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41905.

[0105] U jednom primeru izvođenja data je triploidna biljka lubenice (i seme iz koga se takva biljka može uzgajati) koja ima žbunasti oblik rasta, pri čemu je reprezentativan uzorak semena koji sadrži genetske elemente za navedeni žbunasti oblik rasta (tj. sadrži b alel u tri kopije i koji ne sadrži B alel), pri čemu je reprezentativni uzorak semena deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41907.

[0106] U jednom primeru izvođenja data je diploidna biljka lubenice (i seme iz koga se takva biljka može uzgajati) koja ima žbunasti oblik rasta, pri čemu je reprezentativan uzorak semena koji sadrži genetske elemente za navedeni žbunasti oblik rasta (tj. sadrži b alel u dve kopije i koji ne sadrži B alel), pri čemu je reprezentativni uzorak semena deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41906.

[0107] Dato je seme lubenice koje sadrži recesivni alel označen kao "bush", pri čemu je reprezentativni uzorak semena koji sadrži pomenuti alel "bush" deponovan pod pristupnim brojevima NCIMB 41905, NCIMB 41906 i NCIMB 41907. U jednom primeru izvođenja semena imaju rodoslov koji uključuje urođenu liniju WHAAOX ili inbridovanu liniju WHAAPD kao jednu od roditeljskih linija. Takođe je data biljka lubenice proizvedena uzgojem pomenutog semena. Takođe su dati polen i semeni zameci biljke proizvedene gajenjem pomenutog semena.

[0108] Biljke lubenice dobijene (izvedene) ili koje se mogu dobiti (izvesti) od biljaka prema pronalasku (npr. od biljaka koje sadrže žbunasti oblik rasta i/ili sadrže genetske odrednice, b alel, koji daje žbunasti oblik rasta) uključuju biljke dobijene postupcima oplemenjivanja, kao što su samooprašivanje, ukrštanje, povratno ukrštanje, ponovljena selekcija, dvostruka haploidna proizvodnja, selekcija potpomognuta markerima, klonske reprodukcije, transformanti itd., pri čemu izvedene biljke sadrže žbunasti oblik rasta i/ili genetske odrednice (b alel) koje daju žbunasti oblik rasta (kada nema B alela) prema pronalasku.

[0109] U jednom aspektu je data biljka lubenice, čiji je reprezentativni broj semena deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41905, NCIMB 41906 i NCIMB 41907 ili potomstvo bilo koje takve biljke, na primer dobijeno ukrštanjem i/ili samooprašivanjem. U jednom aspektu dato je seme lubenice, od kojih je reprezentativni broj semena deponovan pod pristupnim brojevima NCIMB 41905, NCIMB 41906 i NCIMB 41907.

[0110] Takođe su dati polen, semeni zametak, ćelije, tkiva, vegetativno razmnožavanje dobijeno od ovih biljaka ili od njihovih potomaka. U jednom aspektu potomstvo zadržava bush alel i žbunasti oblik rasta biljaka čije je seme deponovano pod NCIMB 41905, NCIMB 41906 i NCIMB 41907.

[0111] Takođe je dat plod biljke lubenice, pri čemu se plod proizvodi samooprašivanjem biljke. Takođe je dat triploidni besemeni plod, pri čemu se plod dobija oprašivanjem biljke uzgajane iz biljke lubenice, čiji je reprezentativni broj semena deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41907.

[0112] Takođe, triploidno hibridno seme dobijeno ukrštanjem diploidne biljke lubenice, čiji je reprezentativni broj semena deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41906, sa tetraploidnom biljkom lubenice, čiji je reprezentativni broj semena deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 41905.

[0113] Takođe je dat postupak za proizvodnju triploidnog besemenog ploda lubenice, koji obuhvata združenu sadnju semena žbunaste triploidne biljke lubenice, čije je reprezentativno seme deponovano pod pristupnim brojem NCIMB 41907 ili drugog žbunastog triploida prema pronalasku, sa diploidnom biljkom za oprašivanje, omogućavajući oprašivanje pomenutih biljaka triploidne lubenice polenom pomenute biljke diploidnog oprašivača da bi se na triploidnoj biljci dobili triploidni besemeni plodovi.

[0114] Takođe je ovde opisan postupak za proizvodnju triploidne sorte lubenice koja ima žbunasti tip rasta, pomenuti postupak obuhvata: a) obezbeđivanje diploidne žbunaste inbridne linije lubenice, b) obezbeđivanje tetraploidne žbunaste inbridne linije lubenice i c) ukrštanje diploidne i tetraploidne žbunaste linije i sakupljanje triploidnih semena sa pomenutog hibrida. U jednom aspektu, diploidna žbunasta inbridovana linija lubenice je biljka čije je reprezentativno seme deponovano pod pristupnim brojem NCIMB41906, ili njegovo potomstvo, ili njegovo vegetativno razmnožavanje. U drugom aspektu, tetraploidna žbunasta inbridovana linija lubenice je biljka čije je reprezentativno seme deponovano pod pristupnim brojem NCIMB41905, ili njegovo potomstvo, ili njegovo vegetativno razmnožavanje.

OBJAŠNJENJE SLIKA

Slika 1

[0115] Šematski dijagram postupaka i biljaka/plodova prema pronalasku. Žbunasta muška (bb) i žbunasta ženska (bbbb) biljka ukrštaju se da bi proizvele seme žbunastog triploidnog hibrida (bbb). Ova F1 semena mogu da se združeno seju (u nizu ili između redova) sa bilo kojim diploidnim oprašivačem da bi se proizvelo triploidni besemeni plod na biljkama žbunastih triploidnih hibrida.

[0116] Sledeći neograničavajući primeri opisuju proizvodnju žbunastih triploidnih hibrida prema pronalasku. Ako u primerima nije drugačije navedeno, koriste se postupci za konvencionalno

2

uzgajanje lubenica, kao što su npr. opisani u Maynard 2001, Watermelons - Characteristics, Production and Marketing, ASHS Press; Mohr H.C. Watermelon Breeding in Mark J. Bassett (editor) 1986 Breeding Vegetable Crops, AVI Publishing Company.

INFORMACIJE O DEPONOVANJU

[0117] Podnosilac zahteva je deponovao hibrid WH34511. decembra 2011. godine u NCIMB pod pristupnim brojem NCIMB 41907. Kompanija Nunhems B.V. je 1. decembra 2011. godine seme WHAAPD i WHAAOX deponovala u NCIMB pod pristupnim brojevima NCIMB 41905 i NCIMB 41906, redom. Pristup deponovanom materijalu će biti dostupan tokom čekanja odobrenja ove prijave osobama za koje je poverenik za patente i žigove utvrdio da imaju pravo na njih na zahtev.

[0118] Predmet 37 C.F.R. § 1.808(b), sva ograničenja koja je deponent nametnuo na dostupnost javnosti jednog ili više deponovanih materijala biće neopozivo uklonjena dodeljivanjem patenta omogućavanjem pristupa deponovanom materijalu od najmanje 2500 semena sa NCIMB Ltd., Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen AB21 9YA, UK. Deponovani materijal će se zadržati u periodu od 30 godina, ili 5 godina nakon najnovijeg zahteva, ili za izvršni vek trajanja patenta koji god da je duži i biće zamenjen ako u tom periodu ikada postane neodrživ. Podnosilac zahteva se ne odriče prava dodeljenih ovim patentom na ovu prijavu ili Zakonom o zaštiti biljnih sorti (7 USC 2321 i dalje).

PRIMERI

Primer 1: Stvaranje žbunastih triploidnih hibrida (bbb)

[0119] Primećeno je da diploidna lubenica gajena u bašti ima zanimljiv tip rasta. Polazeći od ovog zapažanja, razvijen je program uzgajanja kako bi se utvrdila naslednost ovog tipa rasta i kako bi se fiksirao tip rasta, kako bi se mogli generisati triploidni hibridi koji imaju ovaj tip rasta. Utvrđeno je da se tip rasta nasleđuje kao recesivno svojstvo i nazvan je „bush alel“ (b). Utvrđeno je da je odgovoran za dužinu vreže, bez uticaja na veličinu lista ili ploda.

[0120] Da bi se generisao žbunasti triploidni hibrid, prvo je generisana inbridovana muška roditeljska žbunasta diploidna linija i inbridovana ženska roditeljska žbunasta tetraploidna linija (videti Sliku 1).

[0121] Generisanje inbridovanog žbunastog muškog roditelja izvršeno je odabirom diploida sa posmatranim tipom rasta, sprovođenjem brojnih ukrštanja sa pomenutim diploidnim i zaštićenim linijama i inbridingom izvedene žbunaste diploidne linije tokom devet generacija da bi se fiksirale žbunaste karakteristike u diploidnoj liniji.

[0122] Generisanje inbridovane žbunaste ženske linije tetraploida izvedeno je odabirom diploidne lubenice sa posmatranim tipom rasta, sprovođenjem brojnih ukrštanja sa pomenutim diploidnim i zaštićenim linijama i generisanjem inbridovane žbunaste diploidne linije samooprašivanjem izvedene linije tokom više od devet generacija da bi dobili jedinstvenu (samooprašujuću) žbunastu diploidnu liniju. Stvorena inbridovana žbunasta diploidna linija je zatim tretirana kolhicinom radi udvajanja hromozoma. Nakon tretmana kolhicinom, izabrana je tetraploidna linija i linija je samooprašivana tokom nekoliko generacija da bi se fiksirale žbunaste karakteristike u tetraploidnoj liniji. U svakoj generaciji semena proveren je porast nivoa ploidije tetraploidne linije primenom protočne citometrije.

[0123] Inbridovani ženski žbunasti tetraploid (bbbb), označen WHAAPD, i inbridovani muški žbunasti diploid (bb), označen WHAAOX, unakrsno su oprašeni da bi se dobili plodovi sa triploidnim semenom (bbb), označenim WH3451. Seme triploidnog hibrida WH3451 ubrano je iz plodova i deponovano od strane kompanije Nunhems B.V. 1. decembra 2011. u NICMB pod pristupnim brojem NCIMB 41907. Semena WHAAPD i WHAAOX kompanija Nunhems B.V. je deponovala 1. decembra 2011. u NICMB pod pristupnim brojevima NCIMB 41905, odnosno NCIMB 41906.

[0124] Fiziološke i morfološke karakteristike žbunastog triploidnog hibrida WH3451 analizirane su u primerima dole.

Primer 2 - Poređenje žbunastih triploidnih hibrida WH3451 sa hibridima iz stanja tehnike

2.1 - Materijali i postupci

[0125] Terensko ispitivanje je sprovedeno u Italiji (Sant'Agata Bolognese-BO). Seme je posejano 7.4.2010. i presađeno u polje 20.5.2010. (100 cm unutar reda, 250 cm između redova). Parcela je sadržala 10 biljaka po liniji.

[0126] Nivo ploidije je određen protočnom citometrijom.

[0127] Srednje vrednosti su određene za sledeće karakteristike:

-Dužina i širina lista izmerena je za 1 list od 3 biljke po liniji.

-Broj cvetova sa prašnicima izbrojan je za 3 biljke po liniji na datum cvetanja. Izračunat je srednji broj za 3 biljke.

-Srednji prečnik stabljike izmeren je u sredini glavne stabljike za 3 biljke i izračunata je srednja vrednost.

-Zrelost: broj dana od cvetanja do zrenja određen je beleženjem datuma kada je 50% biljaka na parceli pokazalo najmanje 1 ženski cvet, a zatim kada je 50% biljaka na parceli imalo plodove spremne za berbu

2

-Stabljika: prosečan broj internodija: prosečan broj internodija na najdužoj vreži izmeren na 3 biljke po liniji

-Stabljika: prosečna dužina internodija (cm): izmerena prosečna dužina internodija (cm) na najdužoj vreži na 3 biljke po liniji

-Stabljika: prosečna dužina najduže vreže (cm): prosečna dužina najduže vreže (cm) mereno za 3 biljke po liniji

-Prosečna masa ploda (kg):srednja težina 3 ploda po liniji nasumično ubranih sa 3 biljke u zrelosti

-Prosečna dužina ploda (cm): srednja dužina 3 ploda

-Prosečan prečnik ploda na srednjem delu (cm): srednja vrednost prečnika 3 ploda

-Plod: debljina kore (cm) na kraju cveta i debljina kore na boku ploda izmerene su za 3 ploda. Debljina kore meri se od spoljne ivice ploda do granice između belog mezokarpa i obojenog endokarpa.

-Plodovi: stepeni Briksa: vrednost je srednja vrednost 1 očitavanja za 3 ploda, sakupljena između sredine i kore ploda; izraženo u stepenima Briksa (°) pomoću prenosnog refraktometra K71901 Mod. RLC ATC 0-18% (OPTECH).

-Dužina (mm) i širina (mm) semena za setvu su srednja vrednost mernja za 5 semena

-boja: procenjena pomoću mini karte boja Kraljevskog društva za hortikulturu (http://www.rhs.org.uk/Plants/RHS-Publications/ RHS-color-charts)

2.1 – Rezultati

[0128]

Tabela 1

2

2

[0129] Žbunasti muški (bb) i ženski (bbbb) roditelji imaju u osnovi iste karakteristike žbunastog tipa rasta kao što je naznačeno za triploidni hibrid WH3451 u Tabeli 1 gore.

Primer 3 – Smanjenje razmaka za triploidne žbunaste hibride

[0130] Kako su žbunasti triploidni hibridi male biljke, ali bez smanjenja veličine ploda i prinosa ploda po hektaru i bez smanjenja veličine lista (tj. fotosintetskog tkiva), ove biljke se mogu koristiti za uzgoj najmanje oko 1,5 puta, po mogućnosti na najmanje oko 2 puta ili 2,5 puta, po

2

mogućnosti čak oko 3 puta više triploidnih biljaka po hektaru u poređenju sa normalnim tipom rasta triploidnih hibrida, kao što su Fashion F1 i Boston F1, povećavajući time prinos ploda po hektaru. Prema tome, prinos triploidnog ploda po hektaru može se značajno povećati korišćenjem žbunastih triploidnih biljaka prema pronalasku, tj. prinos plodova iz žbunastih triploidnih biljaka može biti najmanje oko 1,25 puta ili najmanje oko 1,5 puta veći od prinosa proizvodnje normalnog tipa triploida u polju.

[0131] Sledeća Tabela 2 prikazuje broj biljaka po hektaru za triploidne sorte normalnog tipa rasta Fashion F1 i Boston F1 u poređenju sa žbunastim triploidnim biljkama prema pronalasku, kao što je WH3451:

[0132] Prinosi plodova za Fashion F1 i Boston F1 iznose oko 60 tona/hektar (t/ha) na otvorenom polju u poređenju sa oko 75-90 t/ha za žbunasti triploidni hibrid.

Primer 3

[0133] U 2012. godini utvrđen je vegetativni tip rasta muškog (bb) i ženskog (bbbb) žbunastog roditelja, čiji su rezultati prikazani u Tabeli 3.

Tabela 3

2

Claims (19)

Patentni zahtevi

1. Biljka vrste Citrullus lanatus, gde je navedena biljka triploidna i ima žbunasti oblik rasta, i sadrži tri kopije recesivnog alela označenog kao bush, pri čemu se navedeni bush alel može dobiti ukrštanjem biljke lubenice čije je seme deponovano pod pristupnim brojem NCIMB41906 ili NCIMB41905, sa drugom biljkom lubenice.

2. Biljka prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je biljka F1 hibrid proizveden ukrštanjem između diploidne inbridovane muške roditeljske linije koja ima žbunasti oblik rasta i tetraploidne inbridovane roditeljske linije koja ima žbunasti oblik rasta.

3. Biljka prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu biljka ima dužinu najduže vreže koja nije veća od 100 cm.

4. Biljka prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu navedena biljka nema više od 15 internodija na najdužoj vreži.

5. Biljka prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu navedena biljka ima prosečnu dužinu internodije na najdužoj vreži od 7 cm ili manje, ali najmanje 4,7 cm.

6. Biljka prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu odnos dužine najduže vreže prema broju internodija na najdužoj vreži iznosi 7 ili manje.

7. Biljka prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu navedena biljka ima prečnik stabljike od najmanje 8 mm.

8. Biljka prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu navedena biljka sadrži listove dugačke najmanje 10 cm i široke najmanje 15 cm.

9. Biljka prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu navedena biljka daje plodove sa prosečnom masom ploda od najmanje 5 kg nakon oprašivanja diploidnim polenom.

10. Seme iz kojeg se biljka prema patentnim zahtevima od 1 do 9 može gajiti.

11. Biljka ili seme vrste Citrullus lanatus pri čemu je navedena biljka tetraploidna i ima žbunasti oblik rasta, i sadrži četiri kopije recesivnog alela označenog kao bush, pri čemu se navedeni bush alel može dobiti ukrštanjem biljke lubenice, čije je seme deponovano pod pristupnim brojem NCIMB41906 ili NCIMB41905, sa drugom biljkom lubenice.

12. Kultura tkiva regenerabilnih ćelija biljke iz bilo kog od prethodnih patentnih zahteva.

13. Kultura tkiva prema patentnom zahtevu 12, koja sadrži ćelije ili protoplaste ili biljno tkivo iz biljnog dela odabranog iz grupe koja se sastoji od: embriona, meristema, kotiledona, polena, semenih zametaka, listova, antera, korenova, vrhova korena, tučkova, cvetova, semena, stabljike.

14. Biljni deo biljke prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, pri čemu je navedeni deo odabran od plemke, ploda, polena, semenog zametka, stabljike, kotiledona, lista, ćelijskih embriona, meristema, antera, korena, vrhova korena, tučkova, cvetova, semena.

15. Biljka lubenice regenerisana iz kulture tkiva prema patentnom zahtevu 12 ili 13, pri čemu je regenerisana biljka triploid ili tetraploid i ispoljava žbunasti oblik rasta.

16. Biljka prema patentnom zahtevu 11, pri čemu navedena tetraploidna biljka ima sledeće karakteristike: dužinu najduže vreže ne veću od 100 cm, prosečnu dužinu internodija na najdužoj vreži od 7 cm ili manje, ali najmanje 4,7 cm i daje listove dužine najmanje 10 cm i širine najmanje 15 cm.

17. Postupak za proizvodnju besemenog triploidnog ploda lubenice, pri čemu navedeni postupak obuhvata:

a) obezbeđivanje triploidne hibridne biljke lubenice koja ispoljava žbunasti oblik rasta prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 10;

b) združenu sadnju navedenih triploidnih hibridnih biljaka sa diploidnim biljkama za oprašivanje,

c) berbu besemenih plodova lubenice proizvedenih na triploidnim biljkama iz (a).

18. Postupak prema patentnom zahtevu 17, gde se po hektaru gaji najmanje 1,5 puta više žbunastih triploidnih biljaka nego kada se koristi triploidna hibridna biljka koja ispoljava normalni oblik rasta, kao što je Boston F1.

19. Postupak prema patentnom zahtevu 17 ili 18, pri čemu se po hektaru proizvede najmanje 15% više triploidnih plodova nego kada se koristi triploidna hibridna biljka koja ispoljava normalni oblik rasta, kao što je Boston F1.

1