RS62434B1 - Antivirusni n4-hidroksicitidin derivati - Google Patents

Antivirusni n4-hidroksicitidin derivati

Info

Publication number
RS62434B1
RS62434B1 RS20211195A RSP20211195A RS62434B1 RS 62434 B1 RS62434 B1 RS 62434B1 RS 20211195 A RS20211195 A RS 20211195A RS P20211195 A RSP20211195 A RS P20211195A RS 62434 B1 RS62434 B1 RS 62434B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
alkyl
hydroxy
alkoxy
aryl
formyl
Prior art date
Application number
RS20211195A
Other languages
English (en)
Inventor
George R Painter
David B Guthrie
Gregory R Bluemling
Michael G Natchus
Original Assignee
Univ Emory
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=56151433&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS62434(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Univ Emory filed Critical Univ Emory
Publication of RS62434B1 publication Critical patent/RS62434B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/067—Pyrimidine radicals with ribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/073—Pyrimidine radicals with 2-deoxyribosyl as the saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/11—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids containing cyclic phosphate
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

OPIS
OBLAST
[0001] Ovo otkriće se odnosi na N4-hidroksicitidin nukleozidne derivate, jedinjenja i postupke koje se odnose na njih. U određenim rešenjima, otkriće se odnosi na lečenje i profilaksu virusnih infekcija.
POZADINA
[0002] Uzročnici za istočni, zapadni i venecuelanski konjski encefalitis (EEE, WEE i VEE, respektivno) i Čikungunia groznicu (CHIK) su virusi koji se prenose vektorski (porodica Togaviridae, rod Alphavirus) koji se mogu preneti na ljude putem uboda komaraca. Virusi konjskog encefalitisa su patogeni CDC kategorije B, a CHIK virus je kategorija C. Postoji značajna zabrinutost zbog upotrebe virulentnih sojeva VEE virusa, isporučenih putem aerosola, kao biooružja protiv boraca. Studije na životinjama su pokazale da infekcija virusom VEE ekspozicijom aerosola brzo dovodi do masovne infekcije mozga, sa visokim mortalitetom i morbiditetom. Pogledajte Ro i dr.., Patogeneza aerosolizovanevirusne infekcije istočnim konjskim encefalitisom kod zamoraca (Roy et al., Pathogenesis of aerosolized Eastern equine encephalitis virus infection in guinea pigs.). Virol J, 2009, 6:170.
[0003] Stuiver i dr..izveštaj utvrđio je da β-D-N (4) -bidrokicitidin (NHC) ima antipestivirusne i antihepacivirusne aktivnosti. Antimikrobni agents Chemother, 2003, 47 (1) :244-54. Konstantini i dr. izveštavaju o proceni efikasnosti 2'-C-Mec, 2'-F-2'-C-MEC i NHC kod Norvalk virusa. Pogledajte takođe Purohit i dr. J Med Chem, 2012, 55 (22) :9988-9997. Ivanov i dr., Zbirka čehoslovačkih hemijskih komunikacija (Ivanov et al., Collection of Czechoslovak Chemical Communications), 2006, 71 (7) :1099-1106. Fox et al., JACS, 1959, 81:178-87. Slična otkrića mogu se naći i u SAD 2003/087873, SAD 2014/235566, SAD 2009/105186, VO 2013/142525, EP 2 615 101, Bonak i dr..„Odnosi struktura-aktivnost i dizajn virusnih mutagena i primena na smrtonosne mutageneze“ (Bonnac et al., "Structure-Activity Relationships and Design of Viral Mutagens and Application to Lethal Mutagenesis") J. Med Chem 2013, 56 (23): 9403-9414 i Rejnar i dr.„Identifikacija novog inhibitora ribonukleozida replikacije virusa ebole“ Virusi (Reynard et al., "Identification of a New Ribonucleoside Inhibitor of Ebola Virus Replication" Viruses), 2015, 7 (12), 6233-6240.
REZIME
[0004] Ovo otkriće se odnosi na N4-hidroksicitidin i derivate, farmaceutska jedinjenja i koristi u vezi sa njima. U određenim rešenjima, otkriće se odnosi na farmaceutsku smešu koja sadrži jedinjenje sa formulom I,
ili farmaceutsku prihvatljivu so istih, kako je ovde definisano.
[0005] U određenim rešenjima, otkriće razmatra derivate jedinjenja koja su ovde obelodanjena kao što su ona koja sadrže jedan ili više istih ili različitih supstituenata.
[0006] U određenim rešenjima, otkriće razmatra farmaceutska jedinjenja koja sadrže farmaceutski prihvatljivu pomoćnu supstancu i jedinjenje obelodanjeno ovde. U određenim rešenjima, farmaceutska kompozicija je u obliku tablete, kapsule, pilule ili vodenog pufera, kao što je fiziološki ili fosfatni pufer.
[0007] U određenim rešenjima, farmaceutska kompozicija sadrži jedinjenje ovde obelodanjeno i propelant. U određenim rešenjima, propelant je aerosolizirajući propelant je komprimovani vazduh, etanol, azot, ugljen-dioksid, azotni oksid, fluoroalkani (HFAs), 1,1,1,2, -tetrafluoroetan, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropan ili njihove kombinacije.
[0008] U određenim rešenjima, otkriće razmatra posudu pod pritiskom koja sadrži jedinjenje ili farmaceutsku smešu kao što je ovde opisano. U određenim rešenjima, posuda je sprej sa ručnom pumpicom, inhalator, metar-dozirani inhalator, inhalator suvog praha, nebulizator, vibrirajući mrežni nebulizator, mlazni nebulizator ili nebulizator sa ultrazvučnim talasima.
[0009] U određenim rešenjima, otkriće se odnosi na postupke lečenja ili sprečavanja virusne infekcije koja obuhvata davanje efektivne količine jedinjenja ili farmaceutske smeše ovde otkrivene subjektu kome je potrebna.
[0010] U određenim rešenjima, virusna infekcija je alfavirus ili koronavirusi i flavivirus. U određenim rešenjima, virusna infekcija je ortomiksoviridae ili paramiksoviridae. U određenim rešenjima, virusna infekcija je izabrana od MERS koronavirusa, virusa istočnog konjskog encefalitisa, virusa zapadnog konjskog encefalitisa, virusa venecuelskog konjskog encefalitisa, virusa Rosa reke, Povassan virusa, virusa Barmah šuma i virusa Čikungunia.
[0011] U određenim rešenjima, jedinjenje ili farmaceutska kompozicija se primenjuje oralno, intravenozno ili kroz pluća.
KRATAK OPIS SLIKA
[0012]
Slika 1 ilustruje pripremu β-D-N-hidroksicitidina. a. TBSCl, DMAP, DIPEA, DCM; b. (2,4,6-IPR) pHSO2Cl, DIPEA, DMAP, DCM; c. NH2OH-HCl, DIPEA, DCM; d. F- izvor; e. aq NH2, ACOH, 50 °C.
Slika 2 ilustruje referentna jedinjenja.
Slika 3 ilustruje referentna jedinjenja.
Slika 4 prikazuje EIDD-01931 srednje koncentracije u plazmi i farmakokinetičke parametre od miševa doziranih sa EIDD-01931
Slika 5 prikazuje akumulaciju nukleozida EIDD-01931 u mišjim organima
Slika 6 prikazuje akumulaciju trifosfata EIDD-01931 u mišjim organima
Slika 7 pokazuje smanjenje oticanja stopala kod miševa tretiranih sa EIDD-01931 koje je izazvao CHIKV.
Slika 8 prikazuje smanjenje CHIKV RNK kopija od PCR kod miševa tretiranih sa EIDD-01931 koje je zazvao CHIKV.
DETALJAN OPIS
[0013] U određenim rešenjima, farmaceutski agens, koji može biti u obliku soli se primenjuje u postupcima ovde prikazanim koji je određen težinom. Ovo se odnosi na težinu navedenog jedinjenja. Ako je u obliku soli onda je težina molarni ekvivalent odgovarajuće soli.
[0014] „Subjekt“se odnosi na bilo koju životinju, poželjno ljudskog pacijenta, stoku ili domaćeg ljubimca.
[0015] Kao što se ovde koristi, termini „sprečavaju“ i „sprečavanje“ uključuju sprečavanje ponavljanja, širenja ili početka. Nije namenjeno da se sadašnje otkriće ograniči na potpunu prevenciju. U nekim rešenjima, početak je odložen ili je težina bolesti smanjena.
[0016] Kako se ovde koristi, termini „lečenje“ i „tretman“ nisu ograničeni na slučaj kada se subjekt (npr. pacijent) izleči i bolest se iskorenjuje. Umesto toga, rešenja ovog otkrića takođe razmatraju lečenje koje samo smanjuje simptome i/ili odgađa napredovanje bolesti.
[0017] Kao što se ovde koristi, termin „kombinacija sa“ kada se koristi za opisivanje primene sa dodatnim tretmanom znači da se sredstvo može primeniti pre, zajedno sa ili posle dodatnog tretmana ili njihove kombinacije.
[0018] Kao što se ovde koristi, „alkil“ označava neciklični ravni lanac ili razgranati, nezasićeni ili zasićeni ugljovodonik kao što su oni koji sadrže od 1 do 10 atoma ugljenika. „Viši alkil“ se odnosi na nezasićene ili zasićene ugljovodonika koji ima 6 ili više atoma ugljenika. A „C6-C16" se odnosi na alkil koji sadrži 6 do 16 atoma ugljenika. Isto tako „C6-C22" se odnosi na alkil koji sadrži 6 do 22 atoma ugljenika. Reprezentativni zasićeni alkili ravnog lanca uključuju metil, etil, n-propil, n-butil, n-pentil, n-heksil, n-septil, n-oktil i nnonil; dok zasićeni razgranati alkili uključuju izopropil, sec-butil, izobutil, tert-butil i izopentil. Nezasićeni alkili sadrže najmanje jednu dvostruku ili trostruku vezu između susednih atoma ugljenika (naziva „alkenil“ ili „alkinil“, respektivno). Reprezentativni ravni lanac i razgranati alkenili uključuju etilenil, propilenil, 1-butenil, 2-butenil, izobutilen, 1-pentenil, 2-pentenil, 3 - metil- 1-butenil, 2-metil-2-butenil i 2,3- dimetil-2-butenil; dok reprezentativni ravni lanac i razgranati alkilenil uključuju acetilenil, propil, 1-butil, 2 -butinil, 1-pentinil, 2-pentinil i 3- metil-1-butil.
[0019] Nearomatski mono ili policiklični alkili se ovde nazivaju „karbocikli“ ili „karbociklil“ grupe. Reprezentativni zasićeni karbocikli uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil; dok nezasićeni karbocikli uključuju ciklopentenil i cikloheksenil
[0020] „Heterokarbocikli“ ili heterokarbociklil“ grupe su karbocikli koji sadrže od 1 do 4 heteroatoma nezavisno odabranih iz azota, kiseonika i sumpora koji mogu biti zasićeni ili nezasićeni (ali ne i aromatski), monociklični ili policiklični, i pri čemu azot i sumporni heteroatomi mogu biti opciono oksidirani, a heteroatom azota može biti opciono kvaternizovan. Heterokarbocikli uključuju morfolinil, pirolidinonil, pirolidinil, piperidinil, hidantoinil, valerolaktamil, oksiranil, oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, tetrahidropiridinil, tetrahidroprimidinil, tetrahidrotiofilhidrohenil, tetrahidrotiofiranil, pirimidinil, tetrahidrotiofenil i tetrahidrotiopiranil.
[0021] Termin „aril“ se odnosi na aromatske homociklične (tj ugljovodonične) mono-, bi- ili triciklične grupe koje sadrže prsten poželjno imaju 6 do 12 članova kao što su fenil, naftil i bifenil. Fenil je poželjna arilna grupa. Termin „supstituisani aril“ odnosi se na arilne grupe supstituisane jednom ili više grupa, poželjno odabranih iz alkila, supstituisanog alkila, alkenil (opciono supstituisan), aril (opciono supstituisan), heterociklo (opciono zamenjen), halo, hidroksi, alkoksi (opcionalno zamenjen), ariloksi (opciono supstituisan), alkanojl (opciono zamenjen), aroil, (opciono zamenjen), alkilester (opciono zamenjen), arilester (opciono zamenjen), cijano, nitro, amino, supstituisani amino, amido, laktam, urea, uretan, sulfonil, gde opciono jedan ili više parova supstituenata zajedno sa atomima na koji su vezani formiraju prsten sa 3 do 7 članova.
[0022] Kao što se ovde koristi, „heteroaril“ ili „heteroaromatski“ odnosi se na aromatski heterokarbociklus koji ima 1 do 4 heteroatoma izabrane iz azota, kiseonika i sumpora i sadrži najmanje 1 atom ugljenika, uključujući i mono- i policiklične prstenaste sisteme. Policiklični prstenasti sistemi mogu, ali se ne zahteva da, sadrže jedan ili više nearomatičnih prstenova, sve dok je jedan od prstenova aromatičan. Reprezentativni heteroarili su furil, benzofuril, tiofenil, benzotiofenil, pirolil, indolil, izoindolil, azaindolil, piridil, kinolinil, izokinolinil, oksazolil, izooksazolil, benzoksazolil, pirazolil, imidazolil, benzimidazolil, tiazolil, benzotiazolil, izotiazolil, piridazinil, pirimidinil, pirazinil, triazinil, cinnolinil, ftalazinil, i kinazolinil. Pretpostavlja se da upotreba termina „heteroaril“ obuhvata N-alkilovane derivate kao što je 1-metilimidazol- 5-il supstituent.
[0023] Kao što se ovde koristi, „heterocikl“ ili „heterociklil“ se odnosi na mono- i policiklične prstenaste sisteme koji imaju 1 do 4 heteroatoma izabrane iz azota, kiseonika i sumpora i koji sadrže najmanje 1 atom ugljenika. Mono- i policiklični prstenasti sistemi mogu biti aromatski, nearomatski ili mešavine aromatskih i nearomatskih prstenova. Heterocikl obuhvata heterokarbocikle i heteroarile.
[0024] Alkiltio“ se odnosi na alkil grupu kako je gore definisana sa naznačenim brojem atoma ugljenika pričvršćenih preko sumpornog mosta. Primer alkiltija je metiltio, (tj. -S-CH3).
[0025] „Alkoksi“ se odnosi na alkil grupu kako je gore definisana sa naznačenim brojem atoma ugljenika koji su pričvršćeni preko mosta kiseonika. Primeri alkoksija uključuju, metoksi, etoksi, n-propoksi, i-propoksi, n-butoksi, s-butoksi, t-butoksi, npentoksii, i s-pentoksi. Preferirane alkoksi grupe su metoksi, etoksi, n-propoksi, i- propoksi, n-butoksi, s-butoksi, t-butoksi.
[0026] „Alkilamino“ odnosi alkil grupu kako je gore definisana sa naznačenim brojem atoma ugljenika vezanih preko amino mosta. Primer alkilamina je metilamino, (tj. -NH-CH3).
[0027] „Alkanoil“ se odnosi na alkil kako je gore definisano sa naznačenim brojem atoma ugljenika vezanih preko karbonilne veze (tj., - (C=O) alkil).
[0028] „Alkilsulfonil“ se odnosi na alkil kako je gore definisan sa naznačenim brojem atoma ugljenika vezanih preko sulfonilnog mosta (tj., -S (=O)2alkil) kao što je mesil, a „Arilsulfonil“ se odnosi na aril pričvršćen preko sulfonilnog mosta (tj., - S (=O)2aril).
[0029] „Alkilsulfamoil“ se odnosi na alkil kako je gore definisan sa naznačenim brojem atoma ugljenika vezanih preko sulfamoilnog mosta (tj., -NHS (=O)2alkil), a „Arilsulfamoil“ se odnosi na alkil pričvršćen preko sulfamoilnog mosta (tj., - NHS (=O)2aril).
[0030] „Alkilsulfinil“ se odnosi na alkil kako je gore definisan sa naznačenim brojem atoma ugljenika pričvršćenih preko sulfinil mosta (tj. -S (=O) alkil).
[0031] Termini „cikloalkil“ i „cikloalkenil“ odnose se na mono-, bi- ili tri homociklične prstenaste grupe od 3 do 15 atoma ugljenika koji su, respektivno, potpuno zasićeni i delimično nezasićeni. Termin „cikloalkenil“ obuhvata bi- i triciklične prstenaste sisteme koji nisu aromatski u celini, već sadrže aromatske porcije (npr fluoren, tetrahidronaptalen, anddihidroinden). Prstenovi višeprstenastih cikloalkilnih grupa mogu biti ili spojeni, premošćeni i/ili spojeni kroz jedan ili više spiro grupa. Termini „supstituisani cikloalkil“ i „supstituisani cikloalkenil“ odnose se, respektivno, na cikloalkil i cikloalkenil grupe supstituisane sa jednom ili više grupa, poželjno odabranih iz aril, supstituisanih aril, heterociklo, supstituisanih heterociklo, karbociklo, supstituisanih karbociklo, halo, hidroksi, alkoksi (opciono zamenjen), ariloksi (opciono zamenjen), alkilester (opciono zamenjen), arilester (opciono zamenjen), alkanoil (opciono supstituisan), aril (opciono zamenjen), cijano, nitro, amino, zamena amino, amido, laktam, urea, uretan i sulfonil.
[0032] Termini „halogen“ i „halo“ odnose se na fluor, hlor, brom, i jod.
[0033] Termin „supstituisan“ se odnosi na molekul pri čemu se najmanje jedan atom vodonika zameni supstituentom. Kada se zameni, jedna ili više grupa su „supstituenti“. Molekula se može umnožiti zamenom. U slučaju okso supstituenta zamenjuju se dva atoma vodonika. Primer supstituenti u ovom kontekstu mogu uključivati halogen, hidroksi, alkil, alkoksi, nitro, cijano, okso, karbociklil, karbocikloalkil, heterokarboksilal, heterokarbocikloalkil, aril, arilalkil, heteroarilalkil, -nraB, -nRAC (=O) Rb, -nRAC (=O) nRanRb, -nRAC (=O) ORB, - nRASO2Rb, -C (=O) Ra, -C (=O ) oRA, -C (=O) NraRB, -OC (=O) NraRB, -ora, -SRA, -Sora, - S (=O)2Ra, -OS (=O)2Ra i -S (=O)2oRA. Ra i Rb u ovom kontekstu mogu biti isti ili različiti i nezavisno vodonik, halogen hidroksil, alkil, alkoksi, alkil, amino, alkilamino, dialkilamino, karbociklil, karbocikloalkil, heterokarbociklil, heterokarbocikloalkil, aril, arilalkil, heteroarilalkil.
[0034] Termin „opciono zamenjen“, kako se ovde koristi, znači da je zamena opciona i stoga je moguće da određeni atom bude nezamenjen.
Jedinjenja
[0035] U određenim rešenjima, otkriće se odnosi na jedinjenje Formule I,
ili so, pri čemu
Q-R<7>je OH; W je O;
X je CH2, ChMe, CMe2, CHF, CF2ili CD2;
Y je N ili CR“;
Z je N ili CR“;
svaki R“ je nezavisno izabran iz H, D, F, Cl, Br, I, CH3, CD 3, CF3, alkil, acil, alkenil, alkinil, hidroksil, formil ili SCH3;
R<1>je
halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, esteril, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili
1
heterociklil, fosforamidil, pri čemu je R<1>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
Y<1>je O ili S;
Y<2>je OH, OR<12>, oalkil ili BH3-M<+>;
Y<3>je OH ili BH3-M<+>;
R<2>je vodonik, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<2>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<3>je vodonik, hidroksi, alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili, pri čemu je R<3>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<4>je vodonik, hidroksi, alkil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, lsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<4>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<5>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, pri čemu je R<5>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<6>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, etinil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociksifonil, karbociksifonil, il, aril ili heterociklil, pri čemu R<6>je opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<8>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, benziloksi, amino, amido, merkapto, formil, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, kilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<8>je opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<9>je vodonik, metil, etil, tercbutil, alkil, (C6-C16) alkil, (C6-C22) alkil, halogen, nitro, cijano-hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, cikloalkil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<9>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<10>je vodonik, alkil, razgranati alkil, cikloalkil, lipid, metil, etil, izopropil, ciklopentil, cikloheksil, butil, pentil, heksil, neopentil, benzil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<10>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<11>je vodonik, deuterijum, alkil, metil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, pri čemu je R<11>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<12>je vodonik, alkil, aril, fenil, 1-naftil, 2-naftil, aromatski, heteroaromatski, 4-supstituisani fenil, 4-fluorofenil, 4-hlorofenil, 4-bromofenil, naftil ili heterociklil, pri čemu je R<12>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<13>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<13>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<14>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkitio, alkilamino, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<14>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20;.>R<20>je deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil , karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<20>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<21>; R<21>je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metilamino, etilamino, acetilamin, N-metilkarbamoil, N-etilkarbamoil, N, N-dimetilkarbamoil, N, N- dietilkarbamoil, N-metil-N-etilkarbamoil, metiltio, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metil sulfamoil, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbociklil, aril ili heterociklil;
[0036] U određenim rešenjima, lipid je masni alkohol, masni amin ili masni tiol izveden iz esencijalnih i/ili neesencijalnih masnih kiselina.
[0037] U određenim rešenjima, lipid je nezasićen, polinezasićen, omega nezasićen ili omega polinezasićeni masni alkohol, masni amin ili masni tiol izveden iz esencijalnih i/ili neesencijalnih masnih kiselina.
[0038] U određenim rešenjima, lipid je masni alkohol, masni amin ili masni tiol izveden iz esencijalnih i neesencijalnih masnih kiselina koje imaju jednu ili više njegovih ugljeničnih jedinica zamenjene kiseonikom, azotom ili sumporom.
[0039] U određenim rešenjima, lipid je nezasićen, polinezasićen, omega nezasićen ili omega polinezasićeni masni alkohol, masni amin ili masni tiol izveden iz esencijalnih i/ili neesencijalnih masnih kiselina koje imaju jednu ili više njegovih ugljeničnih jedinica zamenjenih kiseonikom, azotom ili sumporom.
[0040] U određenim rešenjima, lipid je masni alkohol, masni amin ili masni tiol izveden iz esencijalnih i/ili neesencijalnih masnih kiselina koje se opciono zamenjuju.
[0041] U određenim rešenjima, lipid je nezasićen, polinezasićen, omega nezasićen ili omega polinezasićeni masni alkohol, masni amin ili masni tiol izveden iz esencijalnih i/ili neesencijalnih masnih kiselina koje je opciono supstituisano.
1
[0042] U određenim rešenjima, lipid je masni alkohol, masni amin ili masni tiol izveden iz esencijalnih i/ili neesencijalnih masnih kiselina koje imaju jednu ili više njegovih ugljeničnih jedinica supstituisanih kiseonikom, azotom ili sumporom koji je opciono zamenjen.
[0043] U određenim rešenjima, lipid je nezasićen, polinezasićen, omega nezasićen ili omega polinezasićeni masni alkohol, masni amin ili masni tiol izveden iz esencijalnih i/ili neesencijalnih masnih kiselina koje imaju jednu ili više njegovih ugljeničnih jedinica zamenjenih kiseonikom, azotom ili sumporom koji je takođe opciono zamenjen.
[0044] U određenim rešenjima, lipid je heksadeciloksipropil.
[0045] U određenim rešenjima, lipid je 2-aminoheksadeciloksipropil.
[0046] U određenim rešenjima, lipid je 2-aminoarahidil.
[0047] U određenim rešenjima, lipid je 2-benziloksiheksadeciloksipropil.
[0048] U određenim rešenjima, lipid je lauril, miristil, palmitil, stearil, arahidil, behenil ili lignoceril.
[0049] U određenim rešenjima, lipid je sfingolipid koji ima formulu:
pri čemu,
R<8>sfingolipida je vodonik, alkil, C (=O) R<12>, C (=O) OR<12>ili C (=O) NHR<12>;
R<9>sfingolipida je vodonik, fluor, OR<12>, OC (=O) R<12>, OC (=O) OR<12>ili OC (=O) R<10>sfingolipida je zasićeni ili nezasićeni alkil lanac veći od 6 i manji od 22 ugljenika opciono zamenjen jednim ili više halogena ili hidroksi ili strukturom sledeće formule:
n je 8 do 14 ili manje od ili jednako 8 do manje od ili jednako 14, o je 9 do 15 ili manje od ili jednako 9 do manje od ili jednako 15, ukupno ili m i n je 8 do 14 ili manje od ili jednako 8 do manje ili jednako 14, ukupno m i o je 9 do 15 ili manje od ili jednako 9 do manje ili jednako 15; ili
n je 4 do 10 ili manje od ili jednako 4 do manje od ili jednako 10, o je 5 do 11 ili manje od ili jednako 5 do manje od ili jednako 11, ukupno m i n je 4 do 10 ili manje od ili jednako 4 do manje od ili jednako 10, a ukupno m i o je 5 do 11 ili manje od ili jednako 5 do manje ili jednako 11; ili
1
n je 6 do 12 ili n je manji od ili jednak 6 do manje od ili jednak 12, ukupno m i n je 6 do 12 ili n je manji od ili jednak 6 do manje ili jednako 12;
R<11>sfingolipida je OR<12>, OC (=O) R<12>, OC (=O) OR<12>ili OC (=O) NHR<12>;
R<12>sfingolipida je vodonik, razgranati ili uski lanac C1-12alkil, C13-22alkil, cikloalkil ili aril izabran od benzila ili fenila, pri čemu je aril opciono zamenjen jednim ili više istim ili različitim R<13>; i R<13>od sfingolipid je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, dietilamino, dietilamino, dietilamino, lamino, N-metil-N-etilamin, acetilamin, N-metilkarbamoil, N-etilkarbamoil, N, N-dimetilkarbamoil, N, N-dietilkarbamoil, N-metil-N-etilkarbamoil, metiltil, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metilsulsulfonil, etoksikarbonil, N-metilsulfinil il, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbociklil, aril ili heterociklil.
[0050] U određenim rešenjima, R<12>sfingolipida je H, alkil, metil, etil, propil, n-butil, razgranati alkil, izopropil, 2-butil, 1-etilpropil,1-propilbutil, cikloalkil, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, benzil, fenil, monosupstituovan fenil, disupstituisan fenil, trisupstituisan fenil ili zasićenih ili nezasićenih C12-C19 dugolančani alkil.
[0051] U određenim rešenjima, sfingolipid ima formulu:
pri čemu,
1
R<8>sfingolipida je vodonik, hidroksi, fluor, OR<12>, OC (=O) R<12>, OC (=O) OR<12>ili OC (=O) NHR<12>;
R<9>sfingolipida je vodonik, hidroksi, fluor, OR<12>, OC (=O) R<12>, OC (=O) OR<12>ili OC (=O) NHR<12>;
R<10>sfingolipida je zasićeni ili nezasićeni alkilni lanac veći od 6 i manji od 22 ugljenika opciono zamenjen jednim ili više halogena ili strukturom sledeće formule:
n je 8 do 14 ili manje od ili jednako 8 do manje od ili jednako 14, ukupno ili m i n je 8 do 14 ili manje od ili jednako 8 do manje ili jednako 14;
R<12>sfingolipida je vodonik, razgranati ili uski lanac C1-12alkil, C13-22alkil, cikloalkil ili aril izabran od benzila ili fenila, pri čemu je aril opciono zamenjen jednim ili više istim ili različitim R<13>; i R<13>od sfingolipid je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, dietilamino, dietilamino, dietilamino, lamino, N-metil-N-etilamin, acetilamin, N-metilkarbamoil, N-etilkarbamoil, N, N-dimetilkarbamoil, N, N-dietilkarbamoil, N-metil-N-etilkarbamoil, metiltil, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metilsulsulfonil, etoksikarbonil, N-metilsulfinil il, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbocikl, aril ili heterociklil.
[0052] U određenim rešenjima, R<12>sfingolipida je H, alkil, metil, etil, propil, n-butil, razgranati alkil, izopropil, 2-butil, 1-etilpropil,1-propilbutil, cikloalkil, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, benzil, fenil, monosupstituovan fenil, disupstituisan fenil, trisupstituisan fenil ili zasićeni ili nezasićeni C12-C19dugolančani alkil.
[0053] Pogodni sfingolipidi uključuju, sfingozin, ceramid ili sfingomielin ili 2-aminoalkil opciono zamenjen jednim ili više supstituenata.
1
[0054] Ostali pogodni sfingolipidi uključuju, 2-aminooktadekan-3,5-diol; (2S,3S,5S) -2-aminooktadekan-3,5-diol; (2S,3R,5S) -2-aminooktadekan-3,5-diol; 2- (metilamin) oktadekan-3,5-diol; (2S,3R,5S) -2- (metilamin) oktad-cane-3,5-diol; 2- (dimetilamin) oktadekan-3,5-diol; (2R,3S,5S) -2- (dimetilamin) oktadekan-3,5-diol; 1- (pirolidin2-il) heksadekan-1,3-diol; (1S,3S) -1- ((S) -pirolidin-2-il) heksadekan-1,3-diol; 2-amino-11,11-difluorooktadekan-3,5-diol; (2S,3S,5S) -2-amino-11,11-difluorooktadekan-e-3,5-diol; 11,11-difluoro-2- (metilamino) oktadekan-3,5-diol; (2S,3S,5S) -11,11-difluoro-2- (metilamino) oktadekan-3,5-diol; N- ((2S,3S,5S) -3,5-dihidroksioktadekan-2-il) acetamid; N- ((2S,3S,5S) -3,5-dihidroksioktadekan-2-il) palmitamid; 1- (1-aminociklopropil) heksadekan-1,3-diol; (1S,3R) -1- (1-aminociklopropil) heksadekan-1,3-diol; (1S,3R) -1- (1-aminociklopropil) heksadekan-1,3-diol 3-diol; (1S,3S) -1- (1-aminociklopropil) heksadekan-1,3-diol; 2-amino-2-metiloktadekan-3,5-diol; (3S,5S) -2-amino-2-metiloktadekan-3,5 -diol; (3S,5R) -2-amino-2-metiloktadekan-3,5-diol; (3S,5S) -2-metil-2- (metilamino) oktadekan-3,5-diol; 2-amino-5-hidroksi-2-metiloktadekan-3-on; (Z) -2-amino-5-hidroksi-2-metiloktadekan-3-on oksim; (2S,3R,5R) -2-amino-6,6-difluorooktadekan-3,5-diol; (2S,3S,5R) -2-amino-6,6-difluorooktadekan-3,5-diol; (2S,3S,5S ) -2-amino-6,6-difluorooktadekan-3,5-diol; (2S,3R,5S) -2-amino-6,6-difluorooktadekan-3,5-diol; i (2S,3S,5S) -2-amino-18,18,18-trifluorooktadekan-3,5-diol; koji može biti opciono zamenjen jednim ili više supstituenata.
[0055] Q je O.
[0056] R<7>je vodonik.
[0057] U određenim rešenjima, R<1>je
[0058] U određenim rešenjima, R<8>je vodonik, hidroksi ili benziloksi.
[0059] U određenim rešenjima, R<9>je (C6-C16) alkil ili (C6-C22) alkil.
[0060] U određenim rešenjima, R<9>je tert-butil ili izobutil.
1
[0061] W je O;
[0062] U određenim rešenjima, R<1>je
[0063] U određenim rešenjima, R<8>je vodonik, hidroksi ili benziloksi.
[0064] U određenim rešenjima, R9 je (C6-C16) alkil ili (C6-C22) alkil.
[0065] U određenim rešenjima, R<10>je izopropil.
[0066] U određenim rešenjima, R<11>je metil.
[0067] U određenim rešenjima, R<12>je fenil.
[0068] U određenim rešenjima, R<13>je vodonik.
[0069] U određenim rešenjima, R<14>je vodonik.
[0070] U određenim rešenjima, R<2>je vodonik.
[0071] U određenim rešenjima, R<3>je hidroksi.
[0072] U određenim rešenjima, R<4>je vodonik, hidroksi, alkil, halogen ili fluor.
[0073] U određenim rešenjima, R<5>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, metil, etinil ili alenil.
1
[0074] U određenim rešenjima, R<6>je vodonik.
[0075] U određenim rešenjima, otkriće se odnosi na jedinjenje formule I ima formulu IA,
ili njihove soli,
X je CH2, CHMe, CMe2, CHF, CF2ili CD2;
Y je H, D, F, Cl, Br, I, CH3, CD3, CF3, alkil, acil, alkenil, alkinil, hidroksil, formil ili SCH3; R<1>je
2
amino, merkapto, formil, esteril, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, fosforamidil, pri čemu je R<1>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
Y<1>je O ili S;
Y<2>je OH, OR<12>, OAlkil ili BH3-M<+>;
Y<3>je OH ili BH3-M<+>;
R<4>je vodonik, hidroksi, alkil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, lsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<4>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<5>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<5>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<7>je vodonik;
R<8>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, benziloksi, amino, amido, merkapto, formil, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, kilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<8>je opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<9>je vodonik, metil, etil, tercbutil, alkil, (C6-C16) alkil, (C6-C22) alkil, halogen, nitro, cijano-hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, cikloalkil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<9>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<10>je vodonik, alkil, razgranati alkil, cikloalkil, lipidni metil, etil, izopropil, ciklopentil, cikloheksil, butil, pentil, heksil, neopentil, benzil, halogen, nitro, cijano-hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkilthal, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu R<10>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<11>je vodonik, deuterijum, alkil, metil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, pri čemu je R<11>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<12>je vodonik, alkil, aril, fenil, 1-naftil, 2-naftil, aromatski, heteroaromatski, 4-supstituisani fenil, 4-fluorofenil, 4-hlorofenil, 4-bromofenil, naftil ili heterociklil, pri čemu je R<12>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<13>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<13>je opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<14>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkitio, alkilamino, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<14>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20; R20>je deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil , karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<20>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<21>; i<21>je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metilamino, etilamino, acetilamin, N-metilkarbamoil, N-etilkarbamoil, N, N-dimetilkarbamoil, N, N- dietilkarbamoil, N-metil-N-etilkarbamoil, metiltio, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metil sulfamoil, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbociklil, aril ili heterociklil;
Lipida kao što je ovde opisano.
[0076] U određenim rešenjima, otkriće se odnosi na jedinjenje formule I ima formulu IE,
ili soli, pri čemu
Q-R<7>je OH;
2
W je O;
X je CH2, ChMe, CMe2, CHF, CF2ili CD2;
Y je N ili CR“;
Z je N ili CR“;
svaki R“ je nezavisno izabran od H, D, F, Cl, Br, I, CH3, CD3, CF3, alkil, acil, alkenil, alkinil, hidroksil, formil ili SCH3;
R<2>je vodonik, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril, azido ili heterociklil, pri čemu je R<2>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<3>je vodonik, hidroksi, alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril, ili pri čemu je R<3>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<4>je vodonik, hidroksi, alkil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, lsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<4>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<5>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, pri čemu je R<5>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<6>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, etinil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu R<6>je opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<15>je vodonik, - (C=O) Oalkil, - (C=O) alkil, - (C=O) nhalkil, - (C=O) N-dialkil, -(C=O) salkil, hidroksi, alkoksi, alkil, (C6-C16) alkil, (C6-C22) alkil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<15>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<15'>je vodonik, - (C=O) Oalkil, - (C=O) alkil, - (C=O) nhalkil, - (C=O) N-dialkil, -(C=O) salkil, hidroksi, alkoksi, alkil, (C6-C16) alkil, (C6-C22) alkil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je svaki R<15'>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<15>i R<15'>mogu formirati prsten koji je opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<20>je deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, ilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<20>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<21>; i
R<21>je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metilamino, metilamino, Metil-N-etilamin, acetilamin, N-metilkarbamoil, N- etilkarbamoil, N, N-dimetilkarbamoil, N, N-dietilkarbamoil, N-metil-N-etilkarbamoil, metiltil, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metilsulsulfonil, etoksikarbonil, N-metilsulfinil il, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbocikl, aril ili heterociklil.
[0077] U određenim rešenjima, otkriće se odnosi na jedinjenje Formule II,
2
ili soli, pri čemu
Q-R<7>je OH;
W je O;
X je CH2ili O;
Y e N ili CR“;
Z je N ili CR“;
svaki R“ je nezavisno izabran od H, D, F, Cl, Br, I, CH3, CD3, CF3, alkil, acil, alkenil, alkinil, hidroksil, formil ili SCH3;
R<1>je monofosfat, difosfat, trifosfat,
2
Y<1>je O ili S;
Y<2>je OH, OR<12>, oalkil ili BH3-M<+>;
2
Y<3>je OH ili BH3-M<+>;
R<2>je vodonik, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril, azido ili heterociklil, pri čemu je R<2>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<3>je vodonik, hidroksi, alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili, pri čemu je R<3>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<4>je vodonik, hidroksi, alkil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, lsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<4>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<5>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, pri čemu je R<5>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<6>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, etinil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociksifonil, karbociksifonil, il, aril ili heterociklil, pri čemu je R<6>je opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<8>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, benziloksi, amino, amido, merkapto, formil, kEBOKSI, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, kilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<8>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<9>je vodonik, metil, etil, terc-butil, alkil, (C6-C16) alkil, (C6-C22) alkil, halogen, nitro, cijano-
2
hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, cikloalkil, alkoksi, alkilCio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, pri čemu je R<9>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih, R<20>;
R<10>je vodonik, alkil, razgranati alkil, cikloalkil, lipidni metil, etil, izopropil, ciklopentil, cikloheksil, butil, pentil, heksil, neopentil, benzil, halogen, nitro, cijano-hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkilthal, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu R<10>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<11>je vodonik, deuterijum, alkil, metil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, pri čemu je R<11>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<12>je vodonik, alkil, aril, fenil, 1-naftil, 2-naftil, aromatski, heteroaromatski, 4-supstituisani fenil, 4-fluorofenil, 4-hlorofenil, 4-bromofenil, naftil ili heterociklil, pri čemu je R<12>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<13>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfinil, sulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<13>je opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<14>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karbamoil, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkilamino, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<14>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>;
R<20>je deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil) 2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, ilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<20>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<21>;
2
R<21>je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metilamino, metilamino, Metil-N-etilamin, acetilamin, N-metilkarbamoil, N- etilkarbamoil, N, N-dimetilkarbamoil, N, N-dietilkarbamoil, N-metil-N-etilkarbamoil, metiltil, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metilsulsulfonil, etoksikarbonil, N-metilsulfinil il, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbocikl, aril ili heterociklil; i
Lipida kao što je opisano ovde. U određenim rešenjima, svako navođenje višeg alkila, (C6-C16) alkil može biti zamenjeno sa (C6-C22) alkilom.
[0078] U određenim rešenjima, svako navođenje višeg alkila, (C6-C16) alkil ili (C6-C22) alkil može biti zamenjeno polietilen glikolom ili -CH2(CH2OCH2)nCH3, pri čemu je n 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11-20 ili 30-100.
Metode korišćenja
[0079] U određenim rešenjima, otkriće se odnosi na metode lečenja ili sprečavanja virusne infekcije koja obuhvata davanje efektivne količine jedinjenja koje je ovde objavljeno pacijentu kome je potrebna.
[0080] U određenim rešenjima virusna infekcija je ili je uzrokovana alfavirusom, flavivirusom ili koronavirusima ortomiksoviridae ili paramiksoviridae ili RSV, gripa, Povassan virus ili filoviridae ili ebola.
[0081] U određenim rešenjima, virusna infekcija je ili je uzrokovana, virusom odabranim od MERS koronavirusa, virusa istočnog konjskog encefalitisa, virusa zapadnog konjskog encefalitisa, virusa venecuelanskog konjskog encefalitisa, virusa Rosa reke, virusa Barmah šuma, Povassan virus i Čikungunia virus.
[0082] U određenim rešenjima jedinjenje se primenjuje inhalacijom kroz pluća.
[0083] U nekim rešenjima,bolesnik je u riziku od, pokazuje simptome, ili je dijagnostikovan virusom influence A, uključujući podtip H1N1, H3N2, H7N9 ili H5N1, virus gripa B, virus gripa C, rotavirus A, rotavirus B, rotavirus C, rotavirus D, rotavirus E, humani koronavirus, SARS koronavirus, Mers koronavirus, ljudski adenovirus vrste (HADV-1 do 55), humani papiloma virus (HPV) Tipovi 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 i 59, parvovirus B19, molluscum contagiosum virus, JC virus (JCV), BK virus, Merkel ćelijski poliomavirus, Coksackie virus, norovirus, virus rubeole, limfocitni horiomeningitis virus (LCMV), Virus denga, chikungunia, virus istočnog konjskog encefalitisa (EEEV), virus zapadnog konjskog encefalitisa (VEEV), virus venecuelanskog konjskog encefalitisa (VEEV), virus Rosa reke, virus šume Barmah, virus žute groznice, virus boginja, virus zauški, respiratorni sincicijski virus, virus goveđe kuge, Kalifornijski encefalitis virus, hantavirus, virus besnila, virus ebole, marburg virus, herpes simpleks virus-1 (HSV-1), herpes simpleks virus-2 (HSV-2), varičela zoster virus (VZV), Epstein-Barrov virus (EBV), citomegalovirus (CMV), herpes limfotropni virus, rozeolovirus ili Kaposijev sarkom povezani herpesvirus, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E ili virus humane imunodeficijencije (HIV), Ljudski T-limfotropni virus Tip I (HTLV-1), Prijatelj slezine fokus formiranje virusa (SFV) ili Ksenotropski MULV povezan Virus (XMRV).
[0084] U određenim rešenjima, subjektu se dijagnostikuje virus influence A uključujući podtipove H1N1, H3N2, H7N9, H5N1 (niska patogenost) i H5N1 (visoka patogenost) virus gripa B, virus gripa C, rotavirus A, rotavirus B, rotavirus C, rotavirus D, rotavirus E, SARS koronavirus, MERS-COV, ljudski adenovirusni tipovi (HADV-1 do 55 ), humani papiloma virus (HPV) Tipovi 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 i 59, parvovirus B19, molluscum contagiosum virus, JC virus (JCV), BK virus, Merkel ćelijski poliomavirus, koksaki virus, norovirus, rubeola virus, limfocitični horiomeningitis virus (LCMV), virus žute groznice, virus boginja, virus zauški, respiratorni sincicijski virus, virusi parainfluence 1 i 3, virus kobilice, chikungunia, istočni konjski encefalitis virus (EEEV), virus venecuelanskog konjskog encefalitisa (VEEV), virus zapadnog konjskog encefalitisa (VEEV), virus kalifornijskog encefalitisa, virus japanskog encefalitisa, virus groznice Rift Valley ( RVFV), hantavirus, serotipovi virusa denga 1, 2, 3 i 4, virus Zapadnog Nila, Tacaribe virus, Junin, virus besnila, virus ebole, virus marburg, adenovirus, herpes simpleks virus-1 (HSV-1), herpes simplek virus-2 (HSV-2), varičela zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV), citomegalovirus (CMV), herpes limfotropni virus, rozeolovirus ili Kaposijev sarkoma povezani herpesvirus, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E ili virus humane imunodeficijencije (HIV).
1
[0085] U određenim rešenjima subjektu se dijagnostikuje gastroenteritis, akutna respiratorna bolest, teški akutni respiratorni sindrom, sindrom post-virusnog umora, virusne hemoragične groznice, sindrom stečene imunodeficijencije ili hepatitis.
[0086] Jedinjenja i farmaceutske smeše koje su ovde otkrivene smatraju se primenjivim u kombinaciji sa drugim antivirusnim sredstvom(-ima) kao što su abakavir, aciklovir, aciklovir, adefovir, amantadin, amprenavir, ampligen, arbidol, atazanavir, atripla, boceprevir, cidofovir, combivir, dakvir asvir, darunavir, dasabuvir, delavirdin, didanozin, dokosanol, edoksudin, efavirenz, emtricitabin, enfuvirtid, entekavir, famciklovir, fomivirsen, fosamprenavir, foskarnet, ifonet, ganciklovir, ibacitabin, imunovir, doksuridin, imikvimod, indinavir, inozin, interferon tip III, interferon tip II, interferon tip I, lamivudin, ledipasvir, lopinavir, lovirid, maraviroc, moroksidin, metisazon, nelfinavir, nevirapin, nekavir, ombitasvir, oseltamivir, paritaprevir, peginterferon alfa-2a, penciklovir, peramivir, plekonaril, llotoksin, raltegravir, ribavirin, rimantadin, ritonavir, piramidin, sakvinavir, simeprevir, sofosbuvir, stavudin, telaprevir, telbivudin, tenofovir, tenofovir dizoproksil, tipranavir, trifluridin, trizivir, tromantadin, truvada, valaciklovir, valganciklovir, vikrivirok, vidarabin, viramidin zalcitabin, zanamivir ili zidovudin i njihove kombinacije.
Formulacije
[0087] Farmaceutske jedinjenja ovde otkrivenа mogu biti u obliku farmaceutski prihvatljivih soli, kao što je generalno opisano u nastavku. Neki preferirani, primeri pogodnih farmaceutski prihvatljivih organskih i/ili neorganskih kiselina su hlorovodonična kiselina, hidrobromna kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, sirćetna kiselina i limunska kiselina, kao i druge farmaceutski prihvatljive kiseline poznate same po sebi (za koje se upućuje u referencama u daljem tekstu).
[0088] Kada jedinjenja otkrića sadrže kiselinsku grupu kao i osnovnu grupu, jedinjenja otkrića mogu takođe formirati unutrašnje soli, a takva jedinjenja su u okviru otkrića. Kada jedinjenje sadrži hidrogen-donirajući heteroatom (npr. NH), smatra se da soli obuhvataju izomere formirane prenosom pomenutog atoma vodonika u osnovnu grupu ili atom unutar molekula.
2
[0089] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja uključuju kiselinski dodatak i njihove bazne soli. Odgovarajuće soli dodavanjem kiseline su formirane od kiselina koje formiraju netoksične soli. Primeri uključuju acetat, adipat, aspartat, benzoat, besilat, bikarbonat/karbonat, bisulfat/sulfat, borat, kamsilat, citrat, ciklamat, edisilat, esilat, format, fumarat, gluceptat, glukonat, glukuronat, heksafluorofosfat, hibenzat, hidrohlorid/hlorid, hidrobromid/bromid, hidrojodid/jodid, isetionat, laktat, malat, maleat, malonat, mesilat, mesilat, naftilat, 2-napsilat, nikotinat, nitrat, orotat, oksalat, palmitat, pamoat, fosfat/vodonik fosfat/dihidrogen fosfat, piroglutamat, saharat, stearat, sukcinat, tanat, tartarat, tosilat, trifluoroacetat i ksinofoate soli. Odgovarajuće bazne soli se formiraju iz baza koje formiraju netoksične soli. Primeri uključuju aluminijum, arginin, benzathin, kalcijum, holin, dietilamin, diolamin, glicin, lizin, magnezijum, meglumin, olamin, kalijum, natrijum, trometamin i cinkove soli. Hemisoli kiselina i baza se takođe mogu formirati, na primer, soli hemisulfata i hemicalcijuma. Za pregled odgovarajućih soli, pogledajte Priručnik farmaceutskih soli: Svojstva, Izbor i upotreba od strane Stal i Vermut (Vilei-VCH, 2002) (Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002).).
[0090] Jedinjenja opisana ovde mogu se primenjivati u obliku prolekova. Prolek može da obuhvati kovalentno vezan nosač koji oslobađa aktivni roditeljski lek kada se primenjuje subjektu sisara. Prolekovi se mogu pripremiti modifikovanjem funkcionalnih grupa prisutnih u jedinjenjima na takav način da se modifikacije cepaju, bilo u rutinskoj manipulaciji ili in vivo, do matičnih jedinjenja. Prolekovi uključuju, na primer, jedinjenja u kojima je hidroksilna grupa vezana za bilo koju grupu koja se, kada se primenjuje subjektu sisara, cepa da bi se formirala slobodna hidroksilna grupa. Primeri prolekova uključuju, acetat, formate i benzoatne derivate alkoholnih funkcionalnih grupa u jedinjenjima. Metode strukturiranja jedinjenja kao prolekova mogu se naći u knjizi Testa i Majer, Hidroliza u metabolizmu lekova i prolekova, Vajli (2006). Tipični prolekovi formiraju aktivni metabolit transformacijom proleka hidrolitičkim enzimima, hidrolizom amida, laktamima, peptidima, estrima karboksilne kiseline, epoksidima ili cepanjem estera neorganskih kiselina.
[0091] Farmaceutske jedinjenja za upotrebu u ovom otkrivanju obično obuhvaćaju efikasnu količinu jedinjenja i odgovarajući farmaceutski prihvatljiv nosač. Preparati se mogu pripremiti na način poznat po sebi, koji obično podrazumeva mešanje najmanje jednog jedinjenja prema otkriću sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, i, po želji, u kombinaciji sa drugim farmaceutskim aktivnim jedinjenjima, kada je to potrebno pod aseptičkim uslovima. Referenca se ponovo odnosi na SAD Pat. Br. 6,372,778, SAD Pat. Br.
6,369,086, SAD Pat. Br. 6.369.087 i SAD Pat. Broj 6.372.733 i dalje reference gore pomenute, kao i na standardne priručnike, kao što je najnovije izdanje Remington farmaceutskih nauka.
[0092] Generalno, za farmaceutsku upotrebu, jedinjenja mogu biti formulisana kao farmaceutski preparat koji sadrži najmanje jedno jedinjenje i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijent i/ili pomoćna sredstva, i opciono jedno ili više dopunskih farmaceutski aktivnih jedinjenja.
[0093] Farmaceutski preparati otkrića su poželjno u jediničnom doznom obliku i mogu se prikladno upakovati, na primer u kutiji, blisteru, bočici, bočici, vrećici, ampuli ili u bilo kom drugom pogodnom držaču za jednu ili više doza ili kontejner (koji se može pravilno označiti); opciono sa jednim ili više listića koji sadrže informacije o proizvodu i/ili uputstva za upotrebu. Generalno, takve jedinične doze će sadržati između 1 i 1000 mg, i obično između 5 i 500 mg, najmanje jednog jedinjenja otkrća, npr. oko 10, 25, 50, 100, 200, 300 ili 400 mg po jediničnoj dozi.
[0094] Jedinjenja se mogu primenjivati različitim putevima uključujući oralne, kularne, rektalne, transdermalne, subkutane, intravenske, intramuskularne ili intranazalne puteve, u zavisnosti uglavnom od specifičnog preparata koji se koristi. Jedinjenje će se generalno primenjivati u „efektivnoj količini“, kojom se podrazumeva bilo koja količina jedinjenja koja je, po odgovarajućoj primeni, dovoljna da se postigne željeni terapeutski ili profilaktički efekat kod subjekta na kome se primenjuje. Obično, u zavisnosti od stanja koje treba sprečiti ili lečiti i načina primene, takva efikasna količina će obično biti između 0,01 do 1000 mg po kilogramu telesne težine pacijenta dnevno, češće između 0,1 i 500 mg, kao što je između 1 i 250 mg, na primer oko 5, 10, 20, 50, 100, 150, 200 ili 250 mg, po kilogramu telesne težine pacijenta dnevno, koja se može primeniti kao jedna dnevna doza, podeljena na jednu ili više dnevnih doza. Količina(e) koja(e) se primenjuje(u), put primene i dalji režim lečenja može odrediti lekar, u zavisnosti od faktora kao što su starost, pol i opšte stanje pacijenta i priroda i težina bolesti/simptoma koji se leče. Referenca se ponovo odnosi na SAD Pat. Br. 6,372,778, SAD Pat. Br. 6,369,086, SAD Pat. Br. 6.369.087 i SAD Pat. Broj 6.372.733 i dalje reference gore pomenute, kao i na standardne priručnike, kao što je najnovije izdanje Remington farmaceutskih nauka.
4
[0095] U zavisnosti od načina predstavljanja, ovde opisana jedinjenja mogu biti formulisana na različite načine. Formulacije koje sadrže jedan ili više jedinjenja mogu se pripremiti u različitim farmaceutskim oblicima, kao što su granule, tablete, kapsule, supozitorije, prah, formulacije kontrolisanog oslobađanja, suspenzije, emulzije, kreme, gelovi, masti, masti, losioni ili aerosoli. Poželjno, ove formulacije se koriste u čvrstim doznim oblicima pogodnim za jednostavnu i poželjno oralnu, primenu preciznih doza. Čvrsti dozni oblici za oralnu primenu uključuju, tablete, meke ili tvrde želatinske ili ne-želatinske kapsule i kaplete. Međutim mogu se koristiti i tečni oblici doziranja, kao što su rastvori, sirupi, suspenzija, smeše, itd. U drugom izvođenju, formulacija se primenjuje lokalno. Pogodne tematske formulacije uključuju, losione, masti, kreme i gelove. U poželjnom izvođenju, aktuelna formulacija je gel. U drugom izvođenju, formulacija se primenjuje intranazalno.
[0096] Formulacije koje sadrže jedan ili više ovde opisanih jedinjenja mogu biti pripremljeni pomoću farmaceutski prihvatljivog nosača sastavljenog od materijala koji se smatraju sigurnim i efikasnim i mogu se davati pojedincu bez izazivanja neželjenih bioloških neželjenih efekata ili neželjenih interakcija. Nosač su sve komponente prisutne u farmaceutskoj formulaciji osim aktivnog sastojka ili sastojaka. Kao što se ovde obično koristi „nosač“ uključuje, ali nije ograničen na razblaživače, veziva, maziva, dezintegratori, punila, pH modifikujuća sredstva, konzervansi, antioksidansi, pojačivači rastvorljivosti i jedinjenja za oblaganje.
[0097] Nosač takođe obuhvata sve komponente sastava premaza koji mogu uključivati plastifikatore, pigmente, boе, sredstva za stabilizaciju i glidante. Odloženo oslobađanje, produženo oslobađanje i/ili formulacije za doziranje pulsnog oslobađanja mogu se pripremiti kako je opisano u standardnim referencama kao što su „Farmaceutske tablete za doziranje“, eds. Liberman et. al. (Njujork, Marsel Deker, Inc., 1989), „Remington - Nauka i praksa apoteke“, 20. izd., Lipinkot Vilijams & Vilkins, Baltimor, MD, 2000 i „Farmaceutski oblici doziranja i sistemi isporuke lekova“, 6. izdanje, Ansel i dr., (mediji, PA: ((New York, Marcel Dekker, Inc., 1989), "Remington - The science and practice of pharmacy", 20th ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2000, and "Pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems", 6th Edition, Ansel et al., (Media, PA:) Vilijams i Vilkins, (Williams and Wilkins) 1995). Ove reference pružaju informacije o nosačima, materijalima, opremi i procesu pripreme tableta i kapsula i odloženog oslobađanja doznih oblika tableta, kapsula i granula.
[0098] Primeri odgovarajućih materijala za oblaganje uključuju, celulozne polimere kao što su celulozni acetat ftalat, hidroksipropil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, hidroksipropil metilceluloza ftalat i hidroksipropil metilceluloza acetat sukcinat; polivinil acetat ftalat, polimeri akrilne kiseline i kopolimeri i metakrilne smole koje su komercijalno dostupne pod trgovačkim imenom EUDRAGIT® (Roth Pharma, Vesterštat, Nemačka), zein, šelak i polisaharidi.
[0099] Pored toga, materijal za oblaganje može da sadrži konvencionalne nosače kao što su plastifikatori, pigmenti, boje, glidanti, stabilizacioni agensi, formirači pora i surfaktanti.
[0100] Opcione farmaceutski prihvatljive pomoćne supstance prisutne u tabletama koje sadrže lek, perle, granule ili čestice uključuju razblaživače, veziva, maziva, dezintegrante, boje, stabilizatore i surfaktante. Razblaživači, zvani i „punila“, obično su neophodni da se poveća najveći deo čvrstog oblika doziranja, tako da je praktična veličina obezbeđena za kompresiju tableta ili formiranje perli i granula. Pogodni razblaživači uključuju dikalcijum fosfat dihidrat, kalcijum sulfat, laktozu, saharozu, manitol, sorbitol, celulozu, mikrokristalnu celulozu, kaolin, natrijum hlorid, suvi skrob, hidrolizovani skrob, preželatinizovani skrob, silikon dioksid, titanijum oksid, magnezijum silikat i šećer u prahu.
[0101] Veziva se koriste za davanje kohezivnih kvaliteta čvrstoj formulaciji doziranja i na taj način obezbeđuju da tableta ili perla ili granula ostane netaknuta nakon formiranja doznih oblika. Pogodni vezivni materijali uključuju, skrob, preželatinizovani skrob, želatin, šećere (uključujući saharozu, glukozu, dekstrozu, laktozu i sorbitol), polietilen glikol, voskovi, prirodne i sintetičke gume kao što su akacija, tragakant, natrijum alginat, celuloza, uključujući hidroksipropilmetilcelulozu, hidroksipropilceluloza, etilceluloza i veegum i sintetički polimeri kao što su akrilna kiselina i kopolimeri metakrilne kiseline, kopolimeri metakrilne kiseline, kopolimeri metil metakrilata, aminoalkil metakrilat kopolimeri, poliakrilna kiselina/polimetakrilna kiselina i polivinilpirolidon.
[0102] Maziva se koriste za olakšavanje proizvodnje tableta. Primeri odgovarajućih maziva uključuju magnezijum stearat, kalcijum stearat, stearinska kiselina, glicerol behenat, polietilen glikol, talk i mineralno ulje.
[0103] Dezintegranti se koriste za olakšavanje dezintegracije oblika doziranja ili „raspada“ nakon primene i generalno uključuju, skrob, natrijum skrob glikolat, natrijum karboksimetil skrob, natrijum karboksimetilcelulozu, hidroksipropil celulozu, preželatinizovani skrob, glina, celuloza, alginin, desni ili unakrsno povezani polimeri, kao što su umreženi PVP (Poliplasdon XL iz GAF Chemical Corp).
[0104] Stabilizatori se koriste za inhibiciju ili usporavanje reakcija raspadanja lekova koje uključuju, na primer, oksidativne reakcije.
[0105] Surfaktanti mogu biti anjonski, katjonski, amfoterni ili nejonski površinski aktivni agensi. Pogodni anjonski surfaktanti uključuju one koji sadrže karboksilat, sulfonat i sulfatne jone. Primeri anjonskih surfaktanata uključuju natrijum, kalijum, amonijum dugolančanih alkil sulfonata i alkil aril sulfonate kao što su natrijum dodecil benzen sulfonat; dialkil natrijum sulfosukcinati, kao što su natrijum dodecil benzen sulfonat; dialkil natrijum sulfosukcinati, kao što su natrijum bis- (2-etiletilbenzen sulfonat; dialkil natrijum sulfol) -sulfosukcinat; i alkil sulfati kao što je natrijum lauril sulfat. Katjonski surfaktanti uključuju, kvaterna amonijumska jedinjenja kao što su benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid, cetrimonijum bromid, stearil dimetilbenzil amonijum hlorid, polioksietilen i kokosovi amin. Primeri nejonskih surfaktanata uključuju etilen glikol monostearat, propilen glikol miristat, gliceril monostearat, gliceril stearat, poligliceril-4-oleat, sorbitan acilat, saharoza acilat, PEG-150 laurat, PEG-400 monolaurat, polioksietilen monolaurat, polisorbati, polioksietilen oktilfenileter, PEG1000 cetil eter, polioksietilen tridecil eter, polipropilen glikol butil eter, Poloksamer® 401, stearoil monoizopropanolamid i polioksietilen hidrogenizovani lojev amid. Primeri amfoternih surfaktanata uključuju natrijum N-dodecil-.beta. -alanin, natrijum N-lauril-.beta.-iminodipropionat, miristoamfoacetat, lauril betain i lauril sulfobetain.
[0106] Po želji, tablete, perle, granule ili čestice mogu takođe sadržati manju količinu netoksičnih pomoćnih supstanci kao što su sredstva za vlaženje ili emulgaciju, boje, pH puferski agensi ili konzervansi.
[0107] Koncentracija jedinjenja na nosilac i/ili druge supstance može da varira od oko 0,5 do oko 100 vt.% (masni procenat). Za oralnu upotrebu, farmaceutska formulacija će generalno sadržati od oko 5 do oko 100% po težini aktivnog materijala. Za druge namene, farmaceutska formulacija će generalno imati od oko 0,5 do oko 50 wt.% aktivnog materijala.
[0108] Ovde opisana jedinjenja mogu biti formulacija za modifikovano ili kontrolisano oslobađanje. Primeri kontrolisanih oblika doziranja oslobađanja uključuju oblike doziranja produženog oslobađanja, oblike doziranja odloženog oslobađanja, oblike doziranja pulsatilnog oslobađanja i njihove kombinacije.
[0109] Formulacije proširenog oslobađanja se generalno pripremaju kao difuzija ili osmotski sistemi, na primer, kako je opisano u „Remington - Nauka i praksa apoteke“ (20. izd., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD,, 2000). Difuzijski sistem se obično sastoji od dve vrste uređaja, rezervoara i matrice, a dobro je poznat i opisan u umetnosti. Matrični uređaji se generalno pripremaju komprimovanjem leka sa sporo rastvorljivim polimernim nosačem u obliku tableta. Tri glavne vrste materijala koji se koriste u pripremi matricnih uređaja su nerastvorljiva plastika, hidrofilni polimeri i masna jedinjenja. Plastične matrice uključuju, metil akrilat-metil metakrilat, polivinil hlorid i polietilen. Hidrofilni polimeri uključuju, celuloznе polimerе kao što su metil i etil celuloza, hidroksialkilceluloze, kao što su hidroksipropil-celuloza, hidroksipropilmetilceluloza, natrijum karboksimetilceluloza i Karbopol® 934, polietilenski oksidi i njihove mešavine. Masna jedinjenja uključuju, razne voskove kao što su karnauba vosak i gliceril tristearat i vosak tipa supstance uključujući hidrogenizovano ricinusovo ulje ili hidrogenizovano biljno ulje ili njihove mešavine.
[0110] U određenim poželjnim rešenjima, plastični materijal je farmaceutski prihvatljiv akrilni polimer, uključujući akrilne kiseline i kopolimera metakrilne kiseline, metil metakrilat, metil metakrilat kopolimera, etoksietil metakrilata, cijanoetil metakrilat, aminoalkil metakrilat kopolimer, poli(akrilna kiselina), poli (metakrilna kiselina), metakrilna kiselina alkilamin kopolimer poli (metil metakrilat), poli(metakrilna kiselina) (anhidrid), polimetakrilat, poliakrilamid, poli(anhidrid metakrilne kiseline) i kopolimeri glicidil metakrilata.
[0111] U određenim poželjnim rešenjima, akrilni polimer se sastoji od jednog ili više amonio metakrilata kopolimera. Amonio metakrilat kopolimeri su dobro poznati u umetnosti i opisani su u NF XVII kao potpuno polimerizovani kopolimeri akrilnih i metakrilnih kiselina estera sa niskim sadržajem kvaternih amonijumskih grupa.
[0112] U jednom poželjnom rešenju, akrilni polimer je lak akrilne smole kao što je onaj koji je komercijalno dostupan od Rohm Pharma pod poslovnim imenom Eudragit®. U daljim poželjnim rešenjima, akrilni polimer sadrži mešavinu dva laka akrilne smole komercijalno dostupnih od Rohm Pharma pod poslovnim imenima Eudragit® RL30D i Eudragit® RS30D, respektivno. Eudragit® RL30D i Eudragit® RS30D su kopolimeri akrilnih i metakrilnih estera sa niskim sadržajem kvartarnih amonijumskih grupa, molarni odnos amonijumskih grupa sa preostalim neutralnm (met)akrilnih estera je 1:20 u Eudragit® RL30D i 1:40 u Eudragit® RS30D. Srednja molekulska težina je oko 150.000. Edragit® S-100 i Eudragit® L-100 su takođe poželjni. Kodne oznake RL (visoka propustljivost) i RS (niska propustljivost) odnose se na svojstva propustljivosti ovih agensa. Eudragit® RL/RS smeše su nerastvorne u vodi i u digestivnim tečnostima. Međutim, multičestični sistemi formirani da ukluče iste nadimaju se i propustljivi su u vodenim rastvorima i digestivnim tečnostima.
[0113] Polimeri opisani iznad kao što je Eudragit® RL/RS mogu se mešati zajedno u bilo kom željenom odnosu kako bi se konačno dobila formulacija održivog oslobađanja koja ima poželjan profil rastvaranja. Poželjni multičesticni sistemi sa održivim oslobađanjem mogu se dobiti, na primer, od 100% Eudragit® RL, 50% Eudragit® RL i 50% Eudragit® RS i 10% Eudragit® RL i 90% Eudragit® RS. Profesionalci u struci će prepoznati da se mogu koristiti i drugi akrilni polimeri, kao što je, na primer, Eudragit® L.
[0114] Alternativno, formulacije produženog oslobađanja mogu se pripremiti pomoću osmotskih sistema ili primenom polupropustljivog premaza za dozni oblik. U drugom slučaju, željeni profil oslobađanja lijeka može se postići kombinovanjem nisko propustljivih i visoko propustljivih materijala za oblaganje u odgovarajućoj proporciji.
[0115] Uređaji sa različitim mehanizmima oslobađanja lekova opisani gore mogu se kombinovati u konačnom doznom obliku koji sadrži pojedinačne ili više jedinica. Primeri višestrukih jedinica uključuju višeslojne tablete i kapsule koje sadrže tablete, perle ili granule.
Neposredni deo oslobađanja može se dodati u sistem produženog oslobađanja pomoću bilo primenom sloja neposrednog oslobađanja na vrhu produženog oslobađanja jezgra pomoću procesa prevlake ili kompresije ili u sistemu više jedinica kao što je kapsula koja sadrži perle za produženo i neposredno oslobađanje .
[0116] Tablete s produženim oslobađanjem koje sadrže hidrofilne polimere pripremaju se tehnikama poznatim u strucii kao što su direktna kompresija, vlažna granulacija ili suva granulacija. Njihove formulacije obično uključuju polimere, razblaživače, veziva i maziva kao i aktivni farmaceutski sastojak. Uobičajeni razblaživači uključuju inertne supstance u prahu kao što su skrob, praškasta celuloza, naročito kristalna i mikrokristalna celuloza, šećeri kao što su fruktoza, manitol i saharoza, žitno brašno i slične praškaste jestive supstance. Tipični razblaživači uključuju, na primer, različite vrste skroba, laktoze, manitola, kaolina, kalcijum fosfata ili sulfata, neorganske soli kao što su natrijum hlorid i šećer u prahu. Takođe su korisni derivati celuloze u prahu. Tipična veziva za tablete uključuju supstance kao što su skrob, želatin i šećeri kao što su laktoza, fruktoza i glukoza. Takođe se mogu koristiti prirodne i sintetičke gume, uključujući akaciju, alginate, metilcelulozu i polivinilpirolidon. Polietilen glikol, hidrofilni polimeri, etilceluloza i voskovi takođe mogu poslužiti kao veziva. Mazivo je neophodno u formulaciji tableta kako bi se sprečilo oštečenje tableta tokom umočivanja u boji. Mazivo je odabrano iz takvih klizavih čvrstih materija kao talk, magnezijum i kalcijum stearat, stearinska kiselina i hidrogenizovana biljna ulja.
[0117] Tablete s produženim otpuštanjem koje sadrže voštane materijale se generalno pripremaju korišćenjem metoda poznatih u struci kao što su metoda direktne mešavine, metoda zgušnjavanja i metoda vodene disperzije. U metodi stvrdnjavanja, lek se pomeša sa materijalom od voska i zgušnjava se prskanjemili se zgušnjava i pregleduje i obrađuje.
[0118] Formulacije odloženog oslobađanja nastaju premazivanjem čvrstog doznog oblika polimernim filmom, koji je nerastvorljiv u kiseloj sredini želuca i rastvorljiv u neutralnom okruženju tankog creva.
[0119] Jedinice za doziranje odloženog oslobađanja mogu se pripremiti, na primer, premazivanjem leka ili jedinjenja koje sadrži lek sa odabranim materijalom za oblaganje. Sastav koji sadrži lek može biti, na primer, tableta za ugradnju u kapsuli, tableta za upotrebu kao unutrašnje jezgro u obliku doziranja „obložene jezgra“ ili mnoštvo lekova koji sadrže
4
perle, čestice ili granule, za uključivanje u tableti ili kapsuli. Preferirani materijali za oblaganje uključuju bioerodibilne, postepeno hidrolizabilne, postepeno rastvorljive u vodi i/ili enzimski razgradive polimere i mogu biti konvencionalni „enterički“ polimeri. Enterični polimeri, kao što će biti cenjeni od strane onih koji su vešti u struci, postaju rastvorljivi u višem pH okruženju donjeg gastrointestinalnog trakta ili polako erodiraju dok dozni oblik prolazi kroz gastrointestinalni trakt, dok se enzimski razgradivi polimeri degradiraju bakterijskim enzimima prisutnim u donji gastrointestinalni trakt, posebno u debelom crevu. Pogodni materijali za oblaganje za efekat odloženog oslobađanja uključuju celulozne polimere kao što su hidroksipropil celuloza, hidroksietil celuloza, hidroksimetil celuloza, hidroksipropil metil celuloza, hidroksipropil metil celuloza acetat sukcinat, hidroksipropilmetil celuloza ftalat, metilceluloza, etil celuloza, celuloza acetat, celuloza acetat ftalat, celuloza acetat trimellitat i karboksimetilceluloza natrijum; akrilne kiseline polimeri i kopolimeri, poželjno formirana od akrilne kiseline, metakrilne kiseline, metil akrilata, etil akrilata, metil metakrilata i/ili etil metakrilata i drugih metakrilne smole koje su komercijalno dostupne pod tradename Eudragit® (Rohm Pharma; Vesterstadt, Nemačka), uključujući Eudragit® L30D-55 i L100-55 (rastvorljiv pri pH 5.5 i iznad), Eudragit® L-100 (rastvorljiv pri pH 6.0 i iznad), Eudragit® S (rastvorljiv pri pH 7.0 i više, kao rezultat viši stepen esterifikacija) i Eudragits® NE, RL i RS (u vodi nerastvorljivi polimeri koji imaju različite stepene propustljivosti i proširivosti); vinil polimeri i kopolimeri kao što su polivinil pirolidon, vinilacetat, vinilacetat kopolimer krotonske kiseline i etilen-vinil acetat kopolimer; enzimski razgradivi polimeri kao što su azo polimeri, pektin, hitozan, amiloza i guar guma; zein i šelak. Takođe se mogu koristiti kombinacije različitih materijala za oblaganje. Takođe se mogu primeniti višeslojni premazi koji koriste različite polimere.
[0120] Preferirane težine premaza za pojedine materijale za oblaganje mogu lako odrediti oni koji su obučeni u veštini procenjivanjem pojedinačnih profila oslobađanja za tablete, perle i granule pripremljene sa različitim količinama različitih materijala za oblaganje. To je kombinacija materijala, metoda i oblika primene koja proizvode željene karakteristike oslobađanja, što se može odrediti samo iz kliničkih studija.
[0121] Sastav premaza može uključivati konvencionalne aditive, kao što su plastifikatori, pigmenti, boje, sredstva za stabilizaciju, glidanti itd. Plastifikator je normalno prisutan da se smanji krhkost premaza i generalno će predstavljati oko 10 wt.% do 50 wt.% u odnosu na suvu težinu polimera. Primeri tipičnih plastifikatora uključuju polietilen glikol, propilen glikol, triacetin, dimetil ftalat, dimetil ftalat, dibutil ftalat, dibutil sebakat, trietil citrat, tributil citrat, trietil acetil citrat, ricinusovo ulje i acetilovani monogliceridi. Stabilizirajuće sredstvo se poželjno koristi za stabilizaciju čestica u disperziji. Tipični stabilizacioni agensi su nejonski emulgatori kao što su sorbitanski estri, polisorbati i polivinilpirolidon. Glidanti se preporučuju da se smanje efekti lepljenja tokom formiranja i sušenja premaza i generalno će predstavljati oko 25 wt.% do 100 wt.% težine polimera u rastvoru za oblaganje. Jedan efikasan glidant je talk. Takođe se mogu koristiti i drugi glidanti kao što su magnezijum stearat i glicerol monostearati. Mogu se koristiti i pigmenti kao što je titanijum dioksid. Male količine sredstva protiv stvaranja pene, kao što je silikon (npr simetikon), takođe može da se doda u sastav premaza.
[0122] Formulacija može da obezbedi pulsatilvnu isporuku jednog ili više jedinjenja. Pod „pulsatilnim“ podrazumeva se da se mnoštvo doza lekova oslobađa u izdvojenim periodičnim vremenskim intervalima. Generalno, nakon gutanja doznog oblika, oslobađanje početne doze je bitno neposredno, tj. prvo oslobađanje leka „puls“ se javlja u roku od oko jednog sata od unošenja. Ovaj početni puls sledi prvi vremenski interval (vreme zaostajanja) tokom kojeg se iz doznog oblika oslobađa vrlo malo ili nimalo leka, nakon čega se zatim oslobađa druga doza. Slično tome, drugi skoro bez oslobađanja lekova interval između drugog i trećeg impulsa oslobađanja leka može biti dizajniran. Trajanje vremenskog intervala skoro bez oslobađanja lekova će varirati u zavisnosti od dizajna oblika doziranja npr, profil dva puta dnevno doziranje, profil za doziranje tri puta dnevno itd za oblike doziranja koji pružaju dva puta dnevno profil doze, skoro oslobađanje leka interval ima trajanje od oko 3 sati do 14 sati između prve i druge doze. Za oblike doziranja koji pružaju tri puta dnevno profil, skoro oslobađanje lekova interval ima trajanje od oko 2 sata do 8 sati između svake od tri doze.
[0123] U jednom rešenju, profil pulsatilnog oslobađanja se postiže sa doznim oblicima koji su zatvoreni i poželjno zapečaćene kapsule u kojima se nalaze najmanje dve „jedinice za doziranje“ koje sadrže lek pri čemu svaka doza jedinica unutar kapsule daje drugačiji profil oslobađanja leka. Kontrola jedinice za doziranje odloženog oslobađanja se postiže kontrolisanim otpuštanjem polimerne prevlake na jedinici za doziranje ili ugradnjom aktivnog agensa u matrici kontrolisanog oslobađanja polimera. Svaka edinica za doziranje može da sadrži komprimovani ili oblikovane tablete, pri čemu svaka tableta u kapsuli daje drugačiji profil oslobađanja leka. Za oblike doziranja koje imitiraju profil doziranja dva puta dnevno, prva tableta oslobađa lek značajno odmah nakon gutanja oblika doziranja, dok druga tableta oslobađa lek oko 3 sata do manje od 14 sati nakon gutanja doznog oblika. Za oblike doziranja koji imitiraju profil doziranja tri puta dnevno, prva tableta oslobađa lek značajno odmah nakon gutanja doznog oblika, druga tableta oslobađa lek oko 3 sata do manje od 10 sati nakon gutanja doznog oblika, a treća tableta oslobađa lek na najmanje 5 sati do približno 18 sati nakon gutanja oblika doziranja. Moguće je da oblik doziranja sadrži više od tri tablete. Dok oblik doziranja obično ne sadrži više od tri tablete, oblici doziranja koji sadrže više od tri tablete mogu se koristiti.
[0124] Alternativno, svaka doza jedinice u kapsuli može obuhvaćati mnoštvo lekova koji sadrže perle, granule ili čestice. Kao što je poznato u struci, „perle“ koje sadrže lekove odnose se na perle napravljene od leka i jednog ili više pomoćnih sredstava ili polimera. Perle koje sadrže lekove mogu se proizvesti nanošenjem leka na inertnu podršku, npr. inertne šećerne perle obložene lekom ili stvaranjem „jezgra“ koji sadrži i lek i jedno ili više pomoćnih sredstava. Kao što je takođe poznato, „granule“ i „čestice“ sadrže čestice leka koje mogu ili ne moraju uključivati jedno ili više dodatnih pomoćnih pomoćnih sredstava ili polimera. Za razliku od perli koje sadrže lekove, granule i čestice ne sadrže inertnu podršku. Granule generalno sačinjavaju čestice leka i zahtevaju dalju obradu. Generalno, čestice su manje od granula i nisu dalje obrađene. Iako se perle, granule i čestice mogu formulisati da obezbede trenutno oslobađanje, perle i granule generalno obezbeđuju odloženo oslobađanje.
[0125] U jednom rešenju, jedinjenje je formulisano za lokalnu primenu. Odgovarajući topikalni oblici doziranja uključuju losione, kreme, masti i gelove. „Gel“ je polučvrsti sistem koji sadrži disperziju aktivnog agensa, tj. jedinjenja, u tečnom vehikulumu koji se smatra polučvrstim dejstvom sredstva za zgušnjavanje ili polimernog materijala rastvorenog ili suspendovanog u tečnom vehikulumu. Tečnost može uključivati lipofilnu komponentu, vodenu komponentu ili oboje. Neke emulzije mogu biti gelovi ili na drugi način uključuju gel komponentu. Neki gelovi, međutim, nisu emulzije jer ne sadrže homogeniziranu mešavinu nemešivih komponenti. Metode za pripremu losiona, kreme, masti i gelova su dobro poznate u struci.
[0126] Opisano jedinjenje može se primeniti adjunktivno sa drugim aktivnim jedinjenjima. Ova jedinjenja su analgetici, antiinflamatorni lekovi, antipiretici, antidepresivi, antiepileptici, antihistaminici, antiigrainski lekovi, antimuskarinici, anksioltiki, sedativi,
4
hipnotici, antipsihotici, bronhodilatatori, lekovi protiv astme, kardiovaskularni lekovi, kortikosteroidi, dopaminergici, elektroliti , gastro-crevni lekovi, relaksanti mišića, nutritivni agensi, vitamini, parasimpatomimetici, stimulansi, anorektici i anti-narkoleptici. „Adjunktivna primena“ kako se ovde koristi, znači jedinjenje se može primeniti u istom doznom obliku ili u odvojenim doznim oblicima sa jednim ili više drugih aktivnih sredstava.
[0127] Specifični primeri jedinjenja koja se mogu dodatno primenjivati sa jedinjenjima uključuju, aceklofenak, acetaminofen, adomeksetin, almotriptan, alprazolam, amantadin, amcinonid, aminociklopropan, amitriptilin, amolodipin, amoksapin, amfetamin, aripiprazol, aspirin, atomoksetin in azasetron, azatadin , beklometazon, benaktizin, benoksaprofen, bermoprofen, betametazon, bikifadin, bromokriptin, budesonid, buprenorfin, bupropion, buspiron, butorfanol, butriptilin, kofein, karbamazepin, karisoprob, karisoprob, hlordiazepoksid, hlorpromazin, holin salicilat, citalopram, klomipramin, klonazepam, klonidin, klonitazen, klorazepat, klotiazepam, kloksazolam, klozapin, kodein, kortikosteron, kortizon, ciklobenzaprin, ciproheptadin, demeksiptilin, desipramin, desomorfin, deksametazon, dekanabinol, dekstroamfetamin sulfat, dekstromoramid, dekstropropoksifen, dezocin, diazepam, dibenzepin, diklofenak natrijum, diflunisal, dihidrokodein, dihidroergotamin, dihidromorfin, dimetakrin, divalproks, dizatriptan, dolasetron, donepezil, dotiepin, doksepin, duloksetin, ergotamin, escitalopram, estazolam,, etodolak, femoksetin, fenamati, fenoprofen, fentanil, fludiazepam, fluoksetin, flufenazin, flurazepam, flurbiprofen, flutazolam, fluvoksamin, frovatriptan, gabapentin, galantamin, gepirone, ginko bilboa, granisetron, haloperidol, huperzin A, hidrokodon, hidrokortizon, hidromorfon, hidroksizin, ibuprofen, imipramin, indiplon, indometacin, indoprofen, iprindol, ipsapiron, ketaserin, ketoprofen, ketorolak, lesopitron, levodopa, lipaza, lofepramin, lorazepam, loksapin, maprotilin, mazindol, mefenaminska kiselina, melatonin, melitracen, memantin, meperidin, meprobamat, mesalamin, metalamin metakbalon, metadon, metadon, metamfetamin, metokarbamol, metildopa, metilfenidat, metilsalicilat, metisergid (e), metoklopramid, mianserin, mifepriston, milnacipran, minaprin, mirtazapin, moklobemid, modafinil (antinarkoleptik), molindon, morfin, morfin hidrohlorid, nabumeton, nadolol, naproksen, naratriptan, nefazodon, neurontin, nomifensin, nortriptilin, olanzapin, olsalazin, ondansetron, opipramol, orfenadrin, oksaflozane, oksaprazin, oksazepam, oksitriptan, oksikodon, oksimorfon, pankrelipaza, parekoksib, paroksetin, pemolin, pentazocin, pepsin, perfenazin, acetin, fendimetrazin, fenmetrazin, fenilbutazon, fenitoin, fosfatidilserin, pimozida, pirlindol, piroksikam, pizotifen, pizotilin, pramipeksol, prednizolon, prednizon, pregabalin, propanolol, propizepin, propoksifen, protriptilin, kvazepam, kinupramin, reboksitin, rezerpin, risperidon, ritanserin, rivastigmin, rizatriptan, rofekoksib, ropinirol, rotigotin, salsalat, sertralin, sibutramin, sildenafil, sulfasalazin, sulindac, sumatriptan, takrin, temazepam, tetrabenozin, tiazidi, tioridazin, tiotifen, tiaprid, tiasipiron, tizanidin, tofenacin, toloksaton, topiramat, ol, trazodon, triazolam, trifluoperazin, trimetobenzamid, trimipramin, tropisetron, valdekoksib, valproična kiselina, venlafaksin, viloksazin, vitamin E, zimeldin, ziprasidon, zolmitriptan, zolpidem, zopiklon i izomeri, soli i njihove kombinacije.
[0128] Dodatni aktivni agens(i) može/mogu se formulisati za trenutno oslobađanje, kontrolisano oslobađanje ili njihove kombinacije.
PRIMERI
Primer 1. Sinteza N4-hidroksitidin ili 1- (3,4-dihidroksi-5- (hidroksimetil) tetrahidrofuran-2-il) -4- (hidroksiamino) pirimidin-2-on (EIDD-01931)
[0129] Zaštita uridina persililacijom prati aktivacija 4-pozicije nukleobaze ometanom arilsulfonilnom grupom (Vidi sliku 1). Premeštanje ove grupe sa hidroksilaminom instalira N-4-hidroksi grupu. Globalna dezaštita koristeći jedan od bilo kog broja dostupnih izvora fluorida daje željeni proizvod.
[0130] Jedinjenje se može napraviti u jednom koraku od citidina zagrevanjem u pH-prilagođenom rastvoru hidroksilamina. Uprkos tome što je kraća, ova ruta teži da daje niže prinose i zahteva prečišćavanje reverzno-faznom hromatografijom fleš kolone, ograničavajući njegovu upotrebu na proizvodnju manjih količina.
Primer 2. Opšte metode: Sve hemijske reakcije vršene su u staklenim posudama sušenim u pećnici pod atmosferom azota, osim gde je navedeno drugačije. Hemikalije i rastvarači su stepena reagensa i kupljeni od komercijalnih dobavljača (obično Aldrich, Fisher, Acros, Carbosynth Limited i Oakwood Chemica) i koriste se u nabavljenom obliku, osim gde je drugačije navedeno. Konkretno, EIDD-1910, EIDD-1993 i EIDD-2003 su kupljeni od Carbosynth Limited. Rastvarači koji se koriste za reakcije (tetrahidrofuran, metanol, acetonitril, dihlorometan, toluen, piridin, dimetilformamid) bili su ≥ 99,9% anhidrirani u svim slučajevima. Sve reakcije su praćene tankoslojnom hromatografijom (TLC) do završetka,
4
osim ako nije drugačije naznačeno. TLC analiza je izvršena na silika gelu, koristeći osvetljenje sa UV lampom (254 nm) ili bojenjem sa KMnO4i grejanjem. Ručna hromatografija fleš kolone izvedena je sa 40-60 mikrona (60 Å veličina čestica) RediSep Rfsilikagela, kupljenog od Teledyne Isco, kao stabilne faze. Automatizovana stepenasta hromatografija fleš kolone izvedena je na Teledyne Isco CombiFlash Companion; normalne fazne separacije su izvršene sa prethodno upakovanim RediSep Rfsilikagelom kao stabilnom fazom, a reverzne faze separacije su izvršene sa prethodno upakovanim RediSep RfC18High Performance Gold stabilnom fazom. Trifosfatna prečišćavanja su vršena korišćenjem jonoizmenjivačke hromatografije, sa DEAE (dietilaminoetil) Sephadex A-25 kao stabilnom fazom i vodenim TEAB (trietilamonijum bikarbonatom) kao mobilnom fazom.
<1>H NMR spektri su mereni na instrumentu Varian 400 MHz i obrađeni pomoću softvera MestReNova , verzija 9.0.1. Hemijske pomene su merene u odnosu na odgovarajući vrh rastvarača: CDCl3(δ 7.27), DMSO-d6(δ 2.50), CD3OD (δ 3.31), D2O (δ 4.79). Sledeće skraćenice su korišćene za opisivanje spojnice: s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, p = pentet, m = multiplet, br = širok.<13>C NMR spektri su mereni na instrumentu Varian na 100 MHz sa hemijskim promenama u odnosu na odgovarajući vrh rastvarača: CDCl3(δ 77.0), DMSO-d6(δ 39,5), CD3OD (δ 49,0).<19>F spektra su mereni na instrumentu Varian na 376 MHz, a<31>P spektri su izmereni na instrumentu Varian na 162 MHz. Hemijske promene<19>F spektra<31>P spektra i<13>C spektra (samo u D2O) su kalibrisane softverom MestReNova koristeći apsolutnu referentnu funkciju odgovarajućem<1>H NMR spektru u istom rastvaraču.
[0131] Nominalna (niska rezolucija) tečna hromatografija/masena spektrometrija je izvedena pomoću Agilent 1200 serije LC (UV apsorpcijski detektor na 254 nm), koristeći Zorbax Eclipse KSDB C184.6k50 mm, 3,5 mikrona kolona,eluirajući sa smešom MeOH/voda (tipično 95/5 izokratski) i Agilent 6120 LCMS četvoropolni instrument. Masenu spektrometriju visoke rezolucije izvršio je Centar za masenu spektrometriju Univerziteta Emori sa termo LTQ-FTMS koristeći bilo APCI ili ESI.
Primer 3.
[0132]
4
[0133] S1: 2 L 3-vratna boca opremljena gornjom mešalicom i ulazom azota napunjena je uridinom (25 g, 102 mmol) i 1 L dihlorometana. Dobijeni rastvor je ohlađen na 0 °C i 4-DMAP (1,251 g, 10,24 mmol) i imidazol (27,9 g, 409 mmol) su dodani redom. TbScl (61,7 g, 409 mmol) je dodat tokom 10 minuta, a dobijena smeša je zagrevana do temperature okoline i mešana 18 sati. Voda (300 mL) je dodata u reakcijsku smešu i mešana na rt za 2 h, slojevi su odvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan dodatnim dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi su oprani slanom vodom (1 x 300 ml), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrisani pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo 75 g bistrog bezbojnog ulja. Prečišćavanje fleš hromatografijom (5 do 20% gradijenta EtOAc u heksanima) da se dobije S1 (45 g, 75%) kao bistro, bezbojno ulje, koje se učvrstilo kada se osušilo u vakuumu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,09 (i, 1H), 8,02 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5.67 (dd, J = 8,1, 2,2 Hz, 1H), 4,07 (q, J = 3,8, 3,3 Hz, 1H), 3.98 (dd, J = 11,7, 1,7 Hz, 1H), 3,75 ( dd, J = 11.7, 1,1 Hz, 1H), 0,94 (s, 9H), 0,90 (s, 9H), 0,88 (s, 9H), 0,13 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,07 (s, 3H), 0,07 (s, 3H), 0,06 (s, 3H).
[0134] S2: Boca od 1 L okruglog dna je napunjena sa S1 (28 g, 47,7 mmol) i dihlorometanom (700 mL). Rastvor je ohlađen na 0 °C pomoću ledenog kupatila; 4-DMAP (0,583 g, 4,77 mmol) i N, N-diizopropiletilamin (41,7 ml, 239 mmol) su dodani redom.2,4,6-triizopropilbenzen-1-sulfonil hlorid (28,9 g, 95 mmol) je polako dodat u bocu, a nakon završenog dodavanja boca je zagrejana do temperature okoline i mešano je 18 sati. Tamno narandžasti rastvor je ohlađen na 0 °C sa ledenom kupkom i N, N-diizopropiletilamin (24,66 g, 191 mmol) je dodat preko šprica, zatim čvrsti hidroksilamin hidrohlorid (13,26 g, 191 mmol) sve odjednom. Smeša se zagreje na sobnu temperaturu i meša 3 sata. Reakcija je ugašena vodom (200 ml) i dobijeni slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (200 ml), a kombinovani organski proizvodi su oprani slanom vodom, osušeni preko natrijum sulfata i koncentrisani pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo tamno narandžasto ulje. Prečišćavanje fleš hromatografijom (15 do 50% gradijenta EtOAc u heksanima) da se dobije S2 (19,8 g, 69% preko 2 koraka) kao ulje koje se učvrstilo do
4
polučvrstog stanja nakon sušenja u vakuumu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,15 (i, 1H), 6,31 (i, 1H), 5,91 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,56 (dd, J = 8,2, 2,0 Hz, 1H), 4,07 (m, 2H), 4,02 (m, 1H), 3,91 (dd, J=11,6, 2,4 Hz, 1H), 3,73 (dd, J=11,6, 2,4 Hz, 1H), 0,95 (s, 9 H), 0,92 (s, 9H), 0,89 (s, 9H), 0,12 (s, 6H), 0,098 (s, 3H), 0,083 (s, 3H), 0,063 (s, 3H), 0,057 (s, 3H); LRMS m/z 602,3 [M+H]<+>.
[0135] EIDD-1931: 50 ml boca okruglog dna je napunjena sa S2 (23,3 g, 38,7 mmol) i THF (50 mL). Trietilamin trihidrofluorid (6,30 ml, 38,7 mmol) je dodat odjednom, a smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 18 sati. Smeša je koncentrisana pod smanjenim pritiskom, a ostatak je rastvoren u minimalnoj količini MeOH i ovaj rastvor se polako dodaje u Erlenmajersku bocu koja sadrži brzo mešani dihlorometan (500 ml) da se taloži proizvod; smeša se meša na rt tokom 15 minuta. Triturirana čvrsta supstanca je sakupljena vakuumskom filtracijom i oprana dihlorometanom, zatim etrom. Čvrsta supstanca je sušena u vakuumu da bi se dobilo naslovno jedinjenje (7,10 g, 71%) kao bela čvrsta supstanca.:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,16 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,86 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,59 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,19 - 4,04 (m, 2H), 3,93 (q, J = 3,3 Hz, 1H), 3,77 (dd, J = 12,2, 2,9 Hz, 1H), 3,68 (dd, J = 12.1, 2.9 Hz, 1H);<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,95 (s, 1H), 9,46 (s, 1H), 7,02 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,71 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 5.54 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,23 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,98 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 3,95 (q, J = 5,9 Hz, 1H), 3,89 (td, J = 4,9 Hz, 3,0 Hz, 1H), 3,75 (q, J = 3,4 Hz, 1H), 3,50 (kdd, J = 11,9 Hz, 5,2 Hz, 3,5 Hz, 2H);<13>C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 150,0, 143,9, 130,5, 98,89, 87,1, 85,0, 72,8, 70,8, 61,8. LRMS m/z 260.1 [M+H]<+>.
Referentni Primer 4.
[0136]
4
[0137] EIDD-2050: Rastvor EIDD-1931 (124 mg, 0,478 mmol) u anhidrovanom piridinu (5 mL) je ohlađen na -20 °C i tretiran kap po kap sa nonanoil hloridom (95 mL, 0,528 mmol) tokom perioda od 5 min. Smeša se meša na 0°C tokom 15 h, a zatim se gasi metanolom (2 mL). Nakon 20 min na rt smeša je koncentrisana na suvoću, a zatim prečišćena fleš hromatografijom (1 u 5% gradijent MeOH u DCM). Dobijena prečišćena čvrsta supstanca je isparila zajedno sa metilen hloridom (3 x 10 mL), a zatim je osušena pod visokim vakuumom za 40 h da se dobije naslovno jedinjenje (82 mg, 43%) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,88 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,19 - 4,08 (m, 1H), 3,97 (q, J = 3,1 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 12,80 (dd, J = 12,80 (dd, J = 12,80 (dd, J = 12,00) 2, 2,9 Hz, 1H), 3,70 (dd, J = 12,2, 3,3 Hz, 1H), 2,49 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,67 (p, J = 7,4 Hz, 2H), 1,37 - 1,24 (m, 9H), 0,93 - 0,84 (m, 3H);<13>C NMR (101 MHz, CD3OD) δ 171,4, 149,7, 149,4, 139,4, 4,6, 9597, 88,5, 84,9, 73,7, 70,2, 61,1, 31,8, 31,6, 28,9, 28, 9, 28,8, 24,6, 22,3, 13,0; LRMS m/z 400,2 [M+H]<+>.
Referentni Primer 5.
[0138]
[0139] EIDD-2051: U mešani rastvor EIDD-1931 (0,194 g, 0,75 mmol) u piridinu (4,8 mL) na 0 °C pod azotom dodat je heptil hloroformat (0,15 mL, 0.825 mmol) kap po kap špricem. Smeša je mešana na 0 °C tokom 4 h, a zatim koncentrisana rotacionim isparavanjem. Smeša je uzeta u DCM sa padom MeOH, a automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 0 do 15% gradijent MeOH u DCM) dala je naslovno jedinjenje (0,126 g, 42%) u obliku praškaste bele čvrste smeše . NMR analiza pokazuje 9:1 mešavinu rotamera (većina signala u blizini nukleobaze je udvostručena ili su pojedinačni ali prošireni):<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, samo glavni rotamer) δ 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,86 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,23 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 4,13 (q, J = 5,1 Hz, 1H), 4,10 (q, J = 4,0 Hz, 1H), 3,96 (q, J = 3,4 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 12,2, 2,8 Hz, 1H), 3,69 (dd, J = 12,2 Hz, 3,2 Hz, 1H),
4
1,77-1,65 (m, 2H), 1,45-1,25 (m, 8H), 0,90 (t, J = 6,9 Hz, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD, samo glavni rotamer) δ 153.3, 149,0, 148,7, 133,9, 94,9, 88,0, 84,0, 84,2, 73,1, 69,5, 68,0, 60,5, 30,9, 28,0, 27,7, 24,7, 21,6, 12,4; HRMS kalcd za C17H28N3O8[M+H]<+>: 402.18709, pronađeno: 402,18774.
Referentni Primer 6.
[0140]
[0141] S3: U mešani rastvor S1 (2,20 g, 3,75 mmol) u DCM (37 mL) na 0 °C pod azotom, dodaje se redom 4-DMAP (0,460 g, 3,75 mmol), trietilamin (0,78 mL, 5,62 mmol) i,4,6-triizopropilbenzen-1-sulfonil hlorid (1,70 g, 5,62 mmol) i 2,4,6-triizopropilbenzen-1-sulfonil hlorid (1,70 g, 5,62 mmol). Smeša se zagreje na sobnu temperaturu i meša 16 h. Smeša je ponovo ohlađena do 0 °C, a trietilamin (2,60 mL, 18.75 mmol) je dodat preko špricaa, zatim O-metilhidroksiamin hidrohlorid (1,56 g, 18,75 mmol) odjednom. Smeša se zagreje do rt i meša 3 h, zatim ugasi dodavanjem vode. Organski sloj je uklonjen, a organski sloj je opran slanom vodom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa DCM (2 x 25 mL), pa su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem. Sirovina je prečišćena fleš hromatografijom (10 do 20% gradijenta EtOAc u heksanima) da bi se dao S3 (1,72 g, 74%) kao bela pena. Svi NMR vrhovi su bili široki, verovatno zbog N-Ome rotamera. Spektar nije bio dekonvolovan. LRMS m/z 617.3 [M+H]<+>.
[0142] EIDD-2052: U mešani rastvor S3 (0.300 g, 0.487 mmol) u MeOH (5 mL) na 0 °C pod azotom, dodat je 1,25 M HCl rastvor u MeOH (2,3 mL, 2,92 mmol) kap po kap preko šprica. Smeša se meša na rt za 24 h. Trietilamin (0.70 mL, 5.05 mmol) je dodat, a smeša se meša za 2 h Smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem i fleš hromatografijom (5 do 20% gradijent iProh u EtOAc) dao naslovno jedinjenje (85 mg, 64%) kao belu čvrstu smešu:<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,19 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,82 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 5,55 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,15-4,07 (m, 2H), 3,92 (q, J = 3,5 Hz, 1H), 3,76 (dd, J = 12,76 (dd, J = 12,76 (dd, J = 12,76 (dd, J = 12,76 (dd, J = 12,76 (dd 2 Hz, 2,9 Hz, 1H), 3,76 (i, 3H) , 3,67 (dd, J = 12,1 Hz, 3,4 Hz, 1H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 151,4, 146,2, 133,0, 98,6, 89,8, 86,1, 74,7, 71,7, 62,7, 61,9, 25,2; LRMS m/z 274,1 [M+H]<+>.
Referentni Primer 7.
[0143]
[0144] S4: Boca okruglog dna je napunjena sa 2'-metiluridinom (0,850 g, 3,29 mmol), imidazolom (0,896 g, 13,17 mmol) i DCM (6,5 ml), a smeša se ohladi na 0 °C pod azotom uz mešanje. Trimetilsilil triflat (2,24 mL, 12,34 mmol) je dodat kap po kap špricem preko 15 min. Smeša se zagreje do rt i meša preko noći. Posle mešanja tokom 16 h, smeša se razblaži sa DCM (200 ml) i sipa u ledeno hladnu vodu (100 mL). Organski sloj je uklonjen, a vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (1 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su oprani ledeno hladnim rastvorom (1 x 100 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem kako bi se dalo 1,8 g sirovine. Materijal je uzet u heksanima, a automatizovana fleš hromatografija (40 g kolone, gradijent od 5 do 20% EtOAc u heksanima) dao je S4 (1,50 g, 96%) bele pahuljaste čvrste supstance:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,27 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,92 (i, 1H), 5,92 (s, 1H), 5,64 (dd, J = 8,2 Hz, 2,3 Hz, 1H), 4,05-3,95 (m, 2H), 3,83 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 3,73 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 1,21 (s, 3H), 0,20 (s, 9H) ), 0,18 (i, 9H), 0,17 (i, 9H); LRMS m/z 475,2 [M+H]<+>.
[0145] S5: U mešani rastvor S4 (1,50 g, 3,16 mmol) i 4-DMAP (0,039 g, 0,316 mmol) u DCM (20 mL) na 0 °C pod azotom , dodat je N, N-diizopropiletilamin (2,75 mL, 15,80 mmol) preko šprica, zatim čvrsta supstanca 2,4,6-triizopropilfonzen-sulfon1-il hlorid (1,91 g, 6,32 mmol) sve u jednom. Mešana smeša je zagrejana do rt. Nakon 16 h mešanja na rt, smeša se ohladi na 0 °C i ispere ledeno hladnim sat. vod. rastvorom NaHCO3 (3x 25 mL),
1
osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrisan rotacionim isparavanjem da bi se dobilo 4,2 g sirovog braon ulja. Sirovo ulje je uzeto u heksanima, a automatizovana fleš hromatografija (80 g kolona, 1 do 10% gradijent EtOAc u heksanima) dao je željeni proizvod sulfonil aktivacije (~1,57 g, ~2,12 mmol), uglavnom pročišćen LCMS (pretpostavljeni identitet potvrđen od strane<1>H NMR). Cela smeša je odmah odvedena na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja ili analize.
[0146] U mešani rastvor sveže pripremljenog materijala opisanog gore (~1,57 g, ~2,12 mmol) u MeCN (21 mL) na 0 °C pod azotom, dodat je trietilamin (0,89 mL, 6,35 mmol) preko šprica zatim O-metilhidroksilamin hidrohlorid (0,531 g, 6,35 mmol) kao čvrsta supstanca sve odjednom. Smeša se zagreje do rt i meša preko noći. Nakon 16 h mešanja, smeša se sipa u sat. vod.. rastvor NaHCO3(50 mL) i ekstrahovana je sa DCM (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija na CombiFlash (kolona 80 g, 5 do 15% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S5 (0,571 g, 36% preko 2 koraka) kao jasno viskozno ulje, prisutno kao odnos 9:1 tautomera od strane NMR:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, samo glavni tautomer) δ 8,01 (br s, 1H), 7,59 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,88 (i, 1H), 5,54 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,03-3,93 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,82 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,71 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 1,20 (i, 3H), 0,23-0,15 (m, 27H); LRMS m/z 504,2 [M+H]<+>.
[0147] EIDD-2054: Boca okruglog dna je napunjena sa S5 (0,510 g, 1,01 mmol) i smeša se meša štapićem pod azotom na rt. Rastvor konc. HCl, 1% v/v u MeOH (10 mL, 1.20 mmol HCl) je dodat preko šprica i smeša se meša na rt za 30 min. Čvrsti Na2CO3(1 g) je dodat odjednom, a smeša se meša na rt 30 min. Dodat je celit, a smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem da bi se sirovina imobilisala u čvrstu. Automatizovana fleš hromatografija (12 g kolona, 0 do 10% gradijent MeOH u DCM) dala je naslovno jedinjenje (0,265 g, 91%) kao belu praškastu čvrstu supstancu:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,36 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,89 (i, 1H), 5,54 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,95 (dd, J = 12,5 Hz, 2,2 Hz, 1H), 3,86 (dt, J = 9,2 Hz, 2,4 Hz, 1H), 3,86 (dt, J = 9,2 Hz, 2,4 Hz, 1H), 3,86 (dt, J = 9,2 Hz, 2,4 Hz, 1H), 82-3,72 (m, 2H), 3,78 (i, 3H), 1,17 (i, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 151,3, 146,2, 132,8, 98,2, 92,6, 83,4, 79,8, 73,8, 61,9, 60,7, 20,3; LRMS m/z 288,1 [M+H]<+>.
2
Referentni Primer 8.
[0148]
[0149] S6: U mešani rastvor S4 (1,67 g, 3,52 mmol) i 4-DMAP (0,043 g, 0,352 mmol) u DCM (25 mL) na 0 °C pod azotom, dodat je N, N-diizopropiletilamin (3,06 mL, 17,59 mmol) preko šprica, zatim čvrstim 2,4,6-triizopropilfonzen-sulfon1-il hlorid (1,92 g, 6,33 mmol) sve u jednom. Mešana smeša je zagrejana do rt. Nakon 16 h mešanja na rt, smeša se ohladi na 0 °C i ispere ledeno hladnim zasić. vod. rastvorom NaHCO3 (3 x 25 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrisan rotacionim isparavanjem da se dobije 4,1 g sirovine kao braon ulja. Sirovina je uzeta u heksanima, a automatizovana fleš hromatografija (80 g kolona, 1 do 10% gradijent EtOAc u heksanima) dala je željeni proizvod sulfonil aktivacije (~1,81 g, ~2,44 mmol), uglavnom čist LCMS (pretpostavljeni identitet potvrđen od strane<1>H NMR). Cela mešavine odmah je otišla na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
[0150] U mešani rastvor sveže pripremljenog materijala opisanog gore (~1,81 g, ~2,44 mmol) u MeCN (25 mL) na 0 °C pod azotom, dodat je trietilamin (1,02 mL, 7,33 mmol) preko šprica zatim hidroksilamin hidrohlorid (0.509 g, 7,33 mmol) kao čvrsta supstanca sve odjednom. Smeša se zagreje do rt i meša 2 h Smeša se sipa u zasić.vod.rast.. NaHCO3(50 mL) i ekstrahovana je sa DCM (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, gradijent od 5 do 35% EtOAc u heksanima) dala je S6 (0.931 g, 54% preko 2 koraka) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca, prisutna kao odnos 7:1 tautomera od strane NMR<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, samo glavni tautomer) δ 9,99 (s, 1 H), 9,57 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,72 (i, 1H), 5,45 (dd, J = 8,2 Hz, 2,1 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,85-3,75 (m, 2H), 3,66 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 3,85-3,75 (m, 2H), 3,66 (d, J =, J = 12,0 Hz, 1H), 1,13 (i, 3H), 0,15 (s, 9H), 0,14 (s, 9H), 0,12 (s, 9H); LRMS m/z 490,0 [M+H]<+>.
[0151] EIDD-2053: Boca okruglog dna je napunjena sa S6 (0,200 g, 0,408 mmol) i smeša se meša štapićem pod azotom na rt. Rastvo konc. HCl, 1% v/v u MeOH (6 mL, 0,72 mmol HCl) je dodata preko šprica i smeša se meša na rt za 30 min. Čvrsti Na2CO3(0,75 g) je dodat odjednom, a smeša je mešana na rt 30 min. Dodat je celit, a smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem da bi se siroviana imobilisal na čvrstom. Automatizovana fleš hromatografija (4 g kolona, gradijent od 5 do 25% MeOH u DCM) dala je naslovno jedinjenje (0,110 g, 99%) kao belu praškastu čvrstu smešu:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,30 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,90 (i, 1H), 5,56 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,95 (dd, J = 12,5 Hz, 2,1 Hz, 1H), 3,86 (dt, J = 9,2 Hz, 2,7 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,75 ( dd, J = 12,5 Hz, 3,0 Hz, 1H), 1,18 (i, 3H);<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 151,6, 147,3, 131,8, 98,9, 91,7, 81,9, 79,5, 73,3, 60,4, 49,5, 19,6; LRMS m/z 274,1 [M+H]<+>.
Referentni Primer 10.
[0152]
[0153] EIDD-2080: Boca okruglog dna je napunjena sa 2'-deoksi-2'-fluoro-2'-metilcitidinom (120 mg, 0.463 mmol) i 2 N vodenim rastvorom hidroksilamina prilagođenim pH = 5 (1,1 mL, 2,2 mmol), a smeša je zagrevana na 50 °C. Nakon 16 h smeša je uparena na suvo i zatim pročišćena fleš hromatografijom (19 mm x 170 mm zapremina kolone, 10% MeOH u DCM). Dobijena guma je isparila zajedno sa DCM (3 x 4 mL) da bi se dobila bela čvrsta supstanca koja je dalje sušena pod visokim vakuumom na 40 °C za 24 h da bi se dobilo naslovno jedinjenje (94 mg, 74%) kao beli prah:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,23 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,07 (d, J = 19,8 Hz, 1H), 5,60 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,04 - 3,95 (m, 1H), 3,91 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 3,77 (dd, J = 8,3 Hz), 3,77 (dd, J = 3 Hz), 3,77 (dd, J = 3 Hz), 3,77 (dd 12,5, 2,3 Hz, 1H), 1,36 (d, J = 22,2 Hz, 3H);<13>C NMR (101 MHz, CD3OD) δ 150,0, 144,6, 129,9, 101,4, 99,6, 98,0, 88,7 (d, J = 46,5 Hz), 81,5, 71,5 (d, J = 18,1 Hz), 58,9, 15,5 (d, J = 25,8 Hz); HRMS kalcd, za C<H FN O>
10 15 3 5[M+H]<+>: 276,09903, pronađeno: 276,09910.
4
Referentni Primer 11.
[0154]
[0155] EIDD-2085: Pripremljen je ~2 N rastvor hidroksilamin hidrohlorida (3,33 g, 48,0 mmol) u vodi (24 mL), i podešen na pH = 5 sa malom količinom vod. NaOH (10% v/v). Zatvorena cev pod pritiskom je napunjena ovim rastvorom i 2'-fluoro-2'deoksitidin (0,736 g, 3,00 mmol), boca je zapečaćena i zagrejana uz mešanje na 55 °C tokom 16 časova.Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, prebaci u bocu okruglog dna i koncentriše rotacionim isparavanjem. Sirovi materijal je suspendovan u MeOH i imobilisan na celitu. Automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 5 do 25% gradijent MeOH u DCM) dala je naslovno jedinjenje (0,365 g, 47%) kao beličastu čvrstu supstancu. NMR analiza je pokazala da je jedinjenje ~ 90% čisto po težini, a ostatak je okludiran DCM i MeOH. Uzorak (103 mg) je rastvoren u vodi, zamrznut u suvom ledenom kupatilu i liofilizovan da bi se dobio 91 mg naslovnog jedinjenja, bez rastvarača. Ovaj prečišćeni materijal korišćen je za sva biološka ispitivanja:<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,00 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,91 (dd, J = 21,0 Hz, 2,0 Hz, 1H), 5,71 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,19 (ddd, J = 53,1 Hz, 5,0 Hz, 2,0 Hz, 1H), 4,36 (ddd, J = 20,0 Hz, 8,2 Hz, 5,0 Hz , 1H), 4,08-4,02 (br m, 1H), 3,95 (dd, J = 12,9 Hz, 2,5 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 12,9 Hz, 4,6 Hz, 1H);<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 150,8, 146,7 J , 132,5,98,4,93,1 (d, = 183,1 Hz), 89,0 (d, J = 35,9 Hz), 82,1, 68,3 (d, J = 16,5 Hz), 60,2 Hz;<19>F NMR (376 MHz, D2O) δ -200,51 (dt, J = 53,1 Hz, 20,4 Hz); HRMS kalcd. za C9H13FN3O5[M+ H]<+>: 262,08338, pronađeno: 262,08332.
Primer 13.
[0156]
[0157] S8: U mešanu suspenziju citidina (0,972 g, 4,00 mmol) u suvom acetonu (50,0 mL) je kap po kap dodata katalitička količina H2SO4(0,13 ml, 2,439 mmol). Dobijena reakcija se meša na rt preko noći. Nakon filtracije, dobijena bela čvrsta supstanca je preraspodeljena u MeOH uz malo zagrevanja, zatim se ponovo ispari da bi se dobila bela čvrsta supstanca kao forma sulfatne soli željenog produkta (> 95% prinosa), koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,23 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 5,86 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,90 (dd, J1= 6,2 Hz, J2= 2,3 Hz, 1H), 4,82 (dd, J1= 6,1 Hz, J2= 2,7 Hz, 1H), 4,35 (q, J = 3,4 Hz, 1H), 3,80 (dd, J1= 12,1 Hz, J2= 3,2 Hz, 1H), 3,71 (dd, J1= 12,1 Hz, J2= 4,1 Hz, 1H), 1,54 (i, 3H), 1,35 (i, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 161,33, 148,49, 147,34, 114,86, 95,58, 94,22, 89,56, 86,59, 82,34, 62,85, 27,42, 25,41; HRMS za kalciranje. C12H18O5N3[ M+H]<+>: 284,12410, pronađeno: 284,12424.
[0158] S9: U suspenziju S8 (0.566 g, 2.00 mmol) u THF (20.0 ml) se kap po kap doda 1 M rastvor t-butilmagnezijum hlorida u THF (3.00 mL, 3.00 mmol) preko šprica na 0 °C pod argonom, a dobijena smeša se meša na istoj temperaturi tokom 1 sata. Rastvor S7 (1,33 g, 3,00 mmol) u THF (20 mL) je dodat na 0 °C, na kome je smeša ostavljena da se zagreje do rt i meša još 27 sati. Reakcija je pažljivo ugašena dodavanjem zasić vod. rast. NH4Cl na 0 °C. Dobijena smeša je filtrirana kroz celitsku podlogu, a podloga je oprana MeOH. Filtrat je koncentrisana rotacionim isparavanjem da bi se dobila braon čvrsta supstanca, koja je prečišćena fleš hromatografijom (5% MeOH u DCM) da bi se dobio polučisti proizvod. Smeša je dalje prečišćena automatizovanom fleš hromagrafijom (40 g kolone, 0 do 25% gradijenta MeOH u DCM) da bi se dobio S9 (0,744 g, 67% u 2 koraka) kao bela čvrsta supstanca prisutna kao mešavina dva dijastereomera u odnosu 1:2 na osnovu integracije<31>PNMR:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, diastereomerna mešavina) δ 7,61 (m, 1H), 7,34 (t, J= 7,9 Hz, 2H), 7,27 - 7,09 (m, 3H), 5,93 - 5,69 (m, 2H), 4,95 (p, J = 6,3 Hz, 1H), 4,90 (dd, J = 6,3 Hz, 1H), 4,90 (dd, J = 6,3 Hz), 4,90 (dd, J = 4 Hz, 2,2 Hz, 1H), 4,84 - 4,71 (m, 1H), 4,46 -4,20 (m, 3H ), 3,88 (p, J = 7,8 Hz, 1H), 2,15 (i, 1H), 1,53 (i, 3H), 1,32 (m, 6H), 1,21 (m, 6 H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD, oba dijastereomera) δ 210,06, 174,62, 174,57, 174,41, 174,35, 167,89, 157,81, 152,18, 152,11, 144,64, 144,38, 130,82, 130,78, 130,77, 126,24, 126,22, 126 ,17, 126,16, 121,48, 121,45, 121,43, 121,40, 115,18, 115,18, 96,18, 95,96, 87,13, 87,05, 86,96, 86,88, 86,23, 82,48, 82,47, 70,14, 68,02, 51,81, 51,67, 49,64, 49,43, 49,21, 49,00, 48,79, 48,57, 48,36, 30,68, 27,46, 27,43, 25,51, 25,46, 22,00, 21,98, 21,90, 20,56, 20,49, 20,30;<31>P NMR (162 MHz, CD3OD) δ 3,68, 3,45; HRMS kalcd. za C24<H>33<O>9<N>4NaP [M+Na]<+>: 575,18774, pronađeno: 575,18824.
[0159] S10: Rastvor S9 (0,289 g, 0,502 mmol) u 80% akv. HCOOH (12,40 mL) se meša na rt za 3,5 sati. Reakcija je koncentrisana rotacionim isparavanjem i ko-isparila sa MeOH (3 x 10 mL). Sirovi proizvod S9 (0,257 g, kvant.) dobijen je kao braon staklasta čvrsta supstanca koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, diastereomerna mešavina) δ 8,16 (s, 1H), 7,79 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,50 - 7,08 (m, 5H), 6,03 - 5,68 (m, 2H), 4,96 (septet, J= 8 Hz, 1H), 4,55 - 4,24 (m, 2H), 4,23 - 4,08 (m, 2H), 4, 08 - 3,99 (m, 1H), 3,97 - 3,82 (m, 1H), 1,43 - 1,26 (m, 4H), 1,26 -1,10 (m, 6H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD, oba dijastereomera) δ 174,65, 174,61, 174,38, 174,33, 166,90, 157,46, 152,15, 152,08, 142,73, 130,89, 130,88, 130,85, 130,85, 126,28, 126,26, 121,42, 121,40, 121,37, 121,36, 96,19, 92,05, 91,97, 83,49, 83,42, 75,90, 75,84, 70,70, 70,64, 70,18, 67,14, 67,18, 51,88, 51,87, 51,71, 51,70, 49,64, 49,43, 49,21, 49,00, 48,79, 48,57, 48,36, 21,98, 21,91, 21,89, 21,80, 20,61, 20,55, 20,30;<31>P NMR (162 MHz, CD3OD) δ 3,91, 3,76; HRMS kalcd, za C21H30O9N4P [M+H]<+>: 513,17449, pronađeno: 513,17413.
[0160] EIDD-2088: U rastvor S10 (0,257 g, 0.502 mmol) u THF (5 mL) je dodat 2 N hidroksilamin na pH 6 (6,27 ml, 12,54 mmol), a nastala smeša se meša na 37 °C tokom 1,5 dana. Reaktivna smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem Dobijena žuta čvrsta supstanca je ponovo rastvorena u MeOH i imobilisana na silika gel, koji je bio napunjen na silika poklopcu. Elucija sa 10% MeOH u CH2Cl2kroz silika poklopac daje svetlo braon tečnost nakon rotacionog isparavanja frakcija koje sadrže proizvod. Automatizovana fleš hromatografija (12 g kolona, 2,5 do 15% gradijent MeOH u DCM) obezbedila je naslovno jedinjenje (0,155 mg, 59%) kao beličastu penu:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, diastereomerna mešavina) δ 7,89 (d, J = 8,0 Hz, 0,3H), 7,80 (d, J = 8,1 Hz, 0,65H), 7,48 - 7,31 (m, 2H), 7,31 - 7,13 (m, 3H), 6,02 - 5,79 (m, 2H), 4,97 (hept, J= 8 Hz, 1H), 4,55 - 4,08 (m, 6H), 3,90 (m, 1H), 1,44 - 1,26 (m, 4H), 1,22 (m, 6H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD, oba dijastereomera) δ 174,72, 174,68, 174,36, 174,30, 155,25, 152,10, 152,03, 148,74, 148,68, 142,130,92, 130,87, 126,33, 6,32, 121,43, 121,39, 91,71, 91,63, 91,58, 84,08, 84,02, 83,95, 75,48, 75,41, 70,71, 70,67, 70,20, 67,03, 51,90, 51,73, 51,71, 49,64, 49,43, 49,21, 49,00, 48,79, 48,57, 48,36, 21,98, 21,92, 21,89, 21,79, 20,59, 20,53, 20,31,<31>P NMR (162 MHz, CD3OD) δ 3,98, 3,81; HRMS calcd. za C21H30O10N4P [M+H]<+>: 529,16941, pronađeno: 529,16900.
Referentni Primer 15.
[0161]
[0162] EIDD-2103: Pripremljen je ~2 N rastvor hidroksilamin hidrohlorida (1,11 g, 16,0 mmol) u vodi (8 mL) i podešen na pH = 5 sa malom količinom vod. NaOH (10% v/v). Zatvorena cev pod pritiskom je napunjena ovim rastvorom i 5-fluorocitidinom (0,261 g, 1,00 mmol), boca je zapečaćena i zagrejana uz mešanje na 55 °C tokom 16 h. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, prebaci u bocu okruglog dna i koncentriše rotacionim isparavanjem. Sirovi materijal je suspendovan u MeOH i imobilisan na Celitu. Automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 0 do 20% gradijent MeOH u DCM) dala je 600 mg polučiste ružičaste čvrste supstance. Ova čvrsta supstanca je rastvorena u 2 mL vode, a automatizovana hromatografija reverzne faze (43 g kolona, 5 do 100% gradijent MeOH u vodi) dala je željeni proizvod bez organskih i neorganskih nečistoća. Supstanca je rastvorena u vodi, zamrznuta u suvom ledenom/acetonskom kupatilu i liofilizovana da obezbedi naslovno jedinjenje (0,066 g, 0,238 mmol, 24% prinos) kao bela flokulentna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,31 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 5,87 (dd, J= 5,5 Hz, 1,8 Hz, 1H), 4,26 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,19 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,07 (q, J = 3,8 Hz), 4,07 (q, J = 3,8 Hz, 1H), 3,85 (dd, J = 12,8 Hz , 3,1 Hz, 1H), 3,77 (dd, J = 12,7 Hz, 4,2 Hz, 1H);<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 150,0, 139,7, 137,4, 115,6 (d, J= 36,1 Hz), 88,0, 84,2, 72,8, 69,8, 61,0;<19>F NMR (376 MHz, D2O) δ -164,70 (d, J= 7,6 Hz ); HRMS kalcd, za C9H13FN3O6[M+H]<+>: 278,07829, pronađeno: 278,07848.
Referentni Primer 16.
[0163]
[0164] 86, S11: U mešani rastvor S2 (0,903 g, 1,50 mmol) u DCM (15 mL) pod azotom na rt je dodat heptil izocijanat (0,266 mL, 1,65 mmol) kap po kap preko šprica preko 2 minuta. Reakcija je mešana na rt za 6 h, zatim koncentrisana rotacionim isparavanjem da bi se dobio sirovi ostatak. Automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 5 do 25% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S11 (0,930 g, 83%) kao pahuljasta svetlo ružičasta čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,26 (br s, 1H), 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,29 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 5,90 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,57 (dd, J = 8,2 Hz, 2,3 Hz, 1H), 4,10-4,4,00 (m, 3H), 3,93 (dd, J= 11,6 Hz, 2, 3 Hz, 1H), 3,74 (d, J= 11,6 Hz, 1H), 3,28 (q, J = 6,7 Hz, 1H), 1,62-1,52 (m, 2H), 1,40-1,25 (m, 8H), 0,96 (s, 9H), 0,91 (i, 9H), 0,91-0,86 (m, 3H), 89 (i, 9H), 0,13 (i, 6H), 0,10 (s, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,05 (s, 6H).
[0165] EIDD-2107: U mešani rastvor S11 (0,910 g, 1,22 mmol) u mešavini THF (18 mL) i DMF (6 mL) na 0 °C pod azotom, dodata je sirćetna kiselina (0,350 ml, 6,12 mmol) zatim čvrsti tetraetilamonijum fluorid (0,877 g, 5,88 mmol) odjednom. Smeša se zagreje do rt i meša 20 časa, smeša je zatim koncentrisana rotacionim isparavanjem da se dobije sirova smeša kao ulje. Ulje je uzeto u DCM, a automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 1 do 10% gradijent MeOH u DCM) dala je 300 mg pahuljaste bele čvrste supstance, koja se sastoji od željenog proizvoda i tetraetilamonijum acetata. Smeša je uzeta u MeOH i imobilisana na celitu. Druga automatizovana fleš hromatografija (12 g kolona, 1 do 10% gradijent MeOH u DCM) dala je naslovno jedinjenje (0,228 g, 47% prinos) kao belu praškastu čvrstu smešu. NMR analiza je pokazala odnos signala 5:1, najverovatnije rotamera o jednoj od veza karbamata (većina signala povezanih sa nukleobazom je udvostručena ili pojedinačna ali proširena)<: 1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, samo glavni rotamer) δ 10,30 (s, 1H), 7,38 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6,85 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 5,75 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 5,69 (dd, J = 8,4 Hz, 2,2 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,10-5,00 (m, 2H), 3,99 (q, J = 5,6 Hz, 1H), 3,94 (q, J = 4,7 Hz, 1H), 3,83-3,76 (m, 1H), 3,63-3,46 (m, 2H), 3,04 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 1,46-3,46 (m, 2H), 3,04 (q, J= 6,5 Hz, 1H), 1,46H -1,36 (m, 2H), 1,32-1,19 (m, 8H), 0,86 (t, J= 7,0 Hz, 3H);<13>C NMR ( 100 MHz, CD3OD, samo glavni rotamer vrhovi) δ 157,5, 150,8, 149,3, 135,3, 97,5, 89,9, 86,1, 75,0, 71,5, 64,7, 62,5, 41,9, 32,9, 30,8, 30,1, 27,7, 23,6, 14,4; HRMS kalcd, za C17H29N4O7[M+H]<+>: 401,20308, pronađeno: 401,20319.
Primer 17.
[0166]
[0167] S12: Rastvor S8 u anhidrovanom DMF (56 mL) tretiran je sa 1,1-dimetoksi-N,N-dimetilmetanamin (9,4 mL, 70,6 mmol). Posle 18 h na rt, reakciona smeša je koncentrisana na suvho i sirova bela čvrsta supstanca triturirana etrom (3 x 100 mL). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod visokim vakuumom za 12 h da bi se dobio S12 (4,52 g, 95%) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,67 (i, 1H), 7,99 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,14 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 5,87 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 4,92 (dd, J = 6,3, 2,4 Hz, 1H), 4,84 (dd, J = 6,3 Hz, 1H), 4,84 (dd, J = 6,3 Hz, 1H), 4,84 (dd, J = 6,3 J = 6,3, 3,5 Hz, 1H), 4,25 (q, J.=4,7, 1H), 3,81 (dd, J= 11,9, 3,6 Hz, 1H), 3,73 (dd, J= 11,9, 4,6 Hz, 1H), 3,22 (i, 3H), 3,14 (s, 3H), 1,55 (i, 3H), 1,34 (i, 3H).
[0168] S13: Suspenzija 3-heksadeciloksipropan-1-ol (1,58 g, 5,26 mmol) i DIPEA (0,92 mL, 5,26 mmol) u bezvodnom acetonitril (25 mL) tretirana je kap po kap tokom perioda od 10 min sa 3- ((hloro (diizopropilamino) fosfino) oksi) -propanenitril (1,2 mL, 5,26 mmol). Posle 18 h na rt, smeša je ugašena sa zasič.vod. NaHCO3(15 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovane organske faze bile su koncentrisane rotacionim isparavanjem, a fleš hromatografija (zapremina kolone 25 mm x 140 mm, 10 do 20% gradijent EtOAc u heksanima) obezbeđivala je S13 (1,40 g, 53%) kao belu čvrstu supstancu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3,89 - 3,54 (m, 6H), 3,49 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,39 (t, J= 6,7 Hz, 2H), 2,64 (t, J= 6,6 Hz, 2H), 1,87 (p, J= 6,3 Hz, 2H), 1,57 (p, J = 6,3 Hz, 2H), 1,57 (p, J= 6,3 Hz, 2H), 1,57 (p, J= 6,3 Hz, 2, J = 6,3 Hz, 2H), 1,25 (i, 26H), 1,18 (dd, J=6,8, 3,5 Hz, 12H), 0,87 (t, J= 6,6 Hz, 3H);<31>P NMR (162 MHz, CDCl3) δ 147,40.
[0169] S14: Rastvor S12 (800 mg, 2,36 mmol) i S13 (2,15 g, 4,29 mmol) u anhidrovanom THF (20 mL) tretiran je kapljicom rastvorom tetrazola (19 mL 0,45 M rastvora u acetonitrilu, 8,59 mmol). Nakon 19 h na rt, smeša je tretirana kap po kap nonan rastvorom tert-butil hidroperoksida (1,9 mL rastvora 5,5 M, 10,73 mmol) i mešanje nastavilo za dodatnih 1 h. Višak tert-butil hidroperoksida je ugašen zasićenim rastvorom natrijum tiosulfata (50 mL), smeša se meša 45 min, a zatim se ekstrahuje etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovane organske faze koncentrisane su rotacionim isparavanjem, a fleš hromatografija (zapremina kolone od 25 mm x 180 mm, 0 do 5% gradijent MeOH u DCM) dala je S14 (1,2 g, 80%) kao pena, mešavina dijastereomera:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, diastereomerna mešavina) δ 7,38 (d, J = 7,6 Hz, 1H, diastereomer a), 7,37 (d, J = 7,6, 1H, diastereomer b), 5,78 (d, J= 7,3 Hz, 1H), 5,54 (d, J= 5,6, 1H, diastereomer a), 5,53 (D, J.= 5,6, 1H, diastereomer b), 5,14 (ddd, J= 6,5, 3,1, 1,4 Hz, 1H), 4,93 (dt, J= 7,0, 3,6 Hz, 1H), 4,34 (td, J= 7,4, 6,8, 4,8 Hz, 3H), 4,28 - 4,08 (m, 4H), 3,48 (t, J= 6,1, 2H), 3,38 (t, J= 6,8, 2H), 2,78 (t, J.= 6,5 Hz, 2H, diastereomer a), 2,75 (t, J= 6,5 Hz, 2H diastereomer b), 1,93 (m, 2H), 1,55 (i, 5H), 1,34 (i, 3H), 1,25 (s, 26H), 0,87 (t, J= 6,8, 3H);<13>C NMR (101 MHz, CDCl3, diastereomerna mešavina) δ 166,26, 155,40, 144,20, 144,16, 116, 62, 116,59, 113,93, 97,45, 97,38, 95,74, 95,69, 86,73, 86,64, 86,54, 84,90, 84,80, 81,87, 81,66, 71,23, 67,84, 67,79,
1
67,69, 67,64, 66,25, 66,22, 66,03, 65,97, 62,08, 62,03, 31,90, 30,51, 30,50, 30,44, 30,43, 29,68, 29,67, 29,64, 29,61, 29,61, 29,52, 29,34, 27,06, 27,04, 26,13, 25,23, 25,21, 22,67, 19,57, 19,50, 14,12;<31>P NMR (162 MHz, CDCl3, diastereomerna mešavina) δ -1,75, -1,83; LRMS m/z 699,4 [M+H]<+>.
[0170] S15: Rastvor S14 (310 mg, 0,44 mmol) u THF (4 mL) tretiran je 2M vodenim rastvorom hidroksilamina na pH 5 (1,1 mL, 2,2 mmol) uz mešanje na 50 °C. Dodatni hidroksilamin i produženo vreme reakcije nisu povećali konverziju iznad 50%. Nakon hlađenja do rt, smeša je podeljena između etil acetata (100 mL) i slane vode (10 mL). Organska faza je koncentrisana, a fleš hromatografija sirove smeše (zapremina kolone 19 mm x 170 mm, 1 do 5% gradijent MeOH u DCM) dala S15 (70 mg, 22%) kao pena, u 1:1 mešavini dijastereomera:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,94 (i, 1H), 6,60 (d, J = 8,1, 1H, diastereomer a), 6,58 (d, J = 8,1, 1H, diastereomer b), 5,67 (d, J = 8,1, 1H, dijastereomer a), 5,65 (D, J = 8,1, 1H, dijastereomer b), 5,59 (d, J = 2,1 Hz, 1H, diastereomer a), 5,55 (d, J = 2,1 Hz, 1H, diastereomer b), 4 ,98 (m, 1H), 4,84 (m, 1H), 4,35 - 4,10 (m, 6H), 3,48 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 3,38 (t, J = 6,7, 2H), 2,76 (m, 2H), 1,94 (m, 2H), 1,59 - 1,49 (m, 5H), 1,34 (i, 3H), 1,24 (i, 26H), 0,87 (t, J = 6,7 Hz, 3H);<31>P NMR (162 MHz, CDCl3, diastereomerna mešavina) δ -1,57, -1,64. LRMS m/z 715.3 [M+H]<+>.
[0171] EIDD-2108: Rastvor S15 (62 mg, 0,087 mmol) u metanolu (4 mL) tretiran je katalitičkom količinom para-toluensulfonske kiseline (3,3 mg, 0,017 mmol). Nakon 16 h mešanja na rt, smeša je tretirana zasićenim vodenim rastvorom amonijum hidroksida (1,5 mL) i ostavljena da se meša za dodatnih 4 h na rt. Smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem, a dobijeni ostatak je triturisan sa 5% acetonitrilom u metanolu (2 x 15 mL). Dobijena bela čvrsta supstanca je prečišćena fleš hromatografijom (11 mm x 45 mm, zapremina kolone, 25% MeOH u DCM, 2,5% v/v sat. aq. NH4OH) da daju naslovno jedinjenje (25 mg, 46%) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,21 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,95 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 5,67 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,22 - 4,16 (m, 2H), 4,07 -3,98 (m, 3H), 3,94 (q, J= 6,3 Hz, 2H), 3,52 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,41 (t, J= 6,6 Hz, 2H), 1,87 (p, J= 6,3 Hz, 2H), 1,53 (q, J= 6,9 Hz, 2H), 1,28 (s, 28H), 0,92 - 0,85 (m, 3H);<13>C NMR (101 MHz, CD3OD) δ 150,45, 144,99, 130,77, 98,13, 87,51, 87,51, 3,39, 83,30, 72,98, 70,72, 70,55, 66,89, 64,80, 62,51, 62,46, 31,66, 30,71, 30,63, 29, 38, 29,35, 29,24, 29,07,25,87, 22,33, 13,07;<31>P NMR (162 MHz, CD3OD) δ 0,34; HRMS kalcd. za C28H51N3O10P [M-H] -: 620,33175; pronađeno, 620,33205.
2
Primer 19.
[0172]
[0173] S18: U suspenziju 2'-deoksi-2',2'-difluorocitidin (0,526 g, 1,998 mmol) u THF (13,32 ml) na 0 °C pod azotom, je kap po kap dodat preko šprica 1M THF rastvor tbutilmagnezijum hlorida (4,00 mmol, 4,00 mmol), a dobijena smeša se meša na istoj temperaturi u trajanju od 30 min. Rastvor S7 (1,770 g, 4,00 mmol) u THF (13,32 mL) na 0 °C je dodat kap po kap preko šprica, smeša je ostavljena da se zagreje do rt i meša još 24 sati. Reakcija je ohlađena na 0 °C i pažljivo ugašena sa zasić. vod.. NH4Cl. Smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem, a dobijena čvrsta supstanca je ponovo rastvorena u MeOH i filtrirana kroz čep Celita, ispirajući poklopac sa MeOH. Filtrat je koncentrisan rotacionim isparavanjem, a automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 0 do 15% gradijent MeOH u DCM) dala je S18 (0,620 g, 58%) kao braon penu, kao diastereomernu smešu.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, diastereomerna mešavina) δ 7,60 (dd, J= 26,1 Hz, 7,4 Hz, 1H), 7,43 - 7,30 (m, 2H), 7,31 - 7,12 (m, 3H), 6,26 (q, J = 7,7 Hz, 1H), 5,92 (dd, J = 21,2 Hz, 7,2 Hz, 1H), 4,97 (m, 1H), 4,60 - 4,30 (m, 2H), 4,29 - 4,15 (m, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 1,33 (t, J = 8,0 Hz, 3H), 1,22 (m, 6H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD, diastereomerna mešavina) δ 174,61, 174,57, 174,35, 174,30, 167,18, 154,18, 42, 152,15, 152,08, 142,62, 142,52, 139,86, 130,84, 130,20, 126,30, 124,17, 121,49, 121 ,44, 80,45, 70,18, 69,95, 66,90, 65,69, 51,88, 51,72, 21,97, 21,94, 21,91, 21,89, 21,85, 21,25, 21,19, 20,52, 20,45, 20,34, 20,26, 15,44;<19>F NMR (376 MHz, CD3OD) δ -118,20 (dd, J= 238,6, 73,5 Hz,), -120,20 (d, J = 237,0 Hz);<31>P NMR (162 MHz, CD3OD) δ 3,81, 3,74; HRMS kalcd. za C21H28O8N4F2P [M+H]<+>: 533,16073, pronađeno: 533,16038.
[0174] EIDD-2091: U suspenziju S18 (0,266 g, 0,500 mmol) u THF (5 mL) je dodat 2 N aq. Hidroksilamin rastvor pri pH 6 (6,3 ml, 12,49 mmol), a dobijena smeša se meša na 37 °C tokom 1,5 dana. Reakcija (nepotpuna od strane TLC) je podeljena između EtOAc i H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 15 mL). Kombinovani organski slojevi su oprani sa H2O i slanom vodom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (24 g kolona, 0 do 10% gradijent MeOH u DCM) obezbedila je naslovno jedinjenje (34 mg, 12%) kao belu čvrstu supstancu, u mešavini dijastereomera.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, diastereomerna mešavina) δ 7,36 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,28 - 7,12 (m, 3H), 6,78 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 6,09 (q, J = 8 Hz, 1H), 5,55 (dd, J= 19,8 Hz, 8,3 Hz, 8,3 Hz), 5,55 (dd, J= 19,8 Hz, 8,3 Hz, 8,3 Hz z, 1H), 4,97 (sept, J= 6,3 Hz, 1H), 4,63 - 4,27 (m, 3H), 4,20 (m, 1H), 4,10 - 3,96 (m, 1H), 3,95 - 3,76 (m, 1H), 1,33 (t, J= 7,8 Hz, 3stereH), 1,22 (m, 6H); 13 C NMR (100 MHz, CD 3 OD, diasteH);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD, diasteH) omerna mešavina) δ 174,58, 174,54, 174,36, 174,31, 152,14, 152,07, 150,98, 145,48, 131,51, 131,34, 130 ,83, 126,26, 121,39, 121,37, 121,34, 121,32, 99,77, 85,24, 84,60, 80,02, 79,93, 79,88, 79,78, 71,52, 71,30, 71,05, 70,83, 70,18, 65,78, 65,72, 65,49, 65,44, 51,79, 51,66, 49,64, 49,43, 49,21, 49,00, 48,79, 48,57, 48,36, 21,97,21,89,20,54,20,48,20,39,20,31;<19>F NMR (376 MHz, CD3OD ) δ -118,04 (dd, J= 240,8, 22,2 Hz), -119,47 (d, J = 242,6 Hz);<31>P NMR (162 MHz, CD3OD) δ 3,76, 3,69; HRMS kalcd, za C21H27O8N4F2NaP [M+Na]<+>: 571,13759, pronađeno: 571,13708.
Referentni Primer 22.
[0175]
[0176] S21: Boca okruglog dna je napunjena sa 1-β-D-arabinofuranosiluracilom (4,88 g, 20,0 mmol) i dihlorometanom (40 mL). Dobijena smeša je ohlađena na 0 °C i 4-DMAP (0,244 g, 2,00 mmol) i imidazol (5,45 g, 80,0 mmol) su dodati odjednom. TBSC1 (12,06 g, 80,0 mmol) je dodat sve odjednom kao čvrsta supstanca, smeša se zagreje do temperature okoline i meša 16 sati. U reakcijsku smešu je dodata voda (100 ml), slojevi su odvojeni, a
4
vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su oprani slanom vodom (1 x 100 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem da bi se dobilo ~12 g sirove smeše.<1>H NMR i LCMS analiza pokazala je odnos 3:1 bis-sililiranih na persililovane proizvode. Sirovina je ponovo rastvorena u dihlorometanu (40 mL), a imidazol (2,04 g, 30,0 mmol) i 4-DMAP (0,122 g, 1,00 mmol) su dodati odjednom. TBS triflat (6,89 mL, 30,0 mmol) je dodat kap po kap preko šprica, a smeša se meša 16 sati na temperaturi okoline. U reakcijsku smešu je dodata voda (100 ml), slojevi su odvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su oprani slanom vodom (1 x 100 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem da bi se dobilo ~25 g sirovine. Automatizovana fleš hromatografija (330 g kolona, 5 do 60% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S21 (2,90 g, 25%) kao bistro bezbojno ulje:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,93 (br s, 1H), 7,51 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,15 (d, J= 3,2 Hz, 1H), 5,67 (dd, J= 8,2 Hz, 2,8 Hz, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,12 (dd, J = 3,2 Hz, 1,3 Hz, 1H), 3,97 (dd, J= 8,6 Hz , 5,8 Hz, 1H), 3,82 (dd, J= 9,8 Hz, 5,7 Hz, 1H), 3,74 (dd, J= 9,7 Hz, 8,6 Hz, 1H), 0,92 (s, 9H), 0,91 (i, 9H), 0,84 (s, 9H), 0,13 (s, 3H), 0,12 (s, 3H), 0,12 (s i, 9H), 0,12 (s, 3H), 0,09 (i, 3H), 0,08 (i, 3H), 0,07 (i, 3H), -0,06 (i, 3H); LRMS m/z 587,3 [M+H]<+>, 609,3 [m+na]<+>.
[0177] S22: U mešani rastvor S21 (2,90 g, 4,94 mmol) i 4-DMAP (0,060 g, 0,49 mmol) u dihlorometanu (50 mL) na 0 °C pod azotom dodat je N, N-diizopropiletilamin (4,30 mL, 24,70 mmol) preko šprica, zatim čvrste 2,4,6-triizopropilbenzene-1-sulfonil hlorid (2,99 g, 9,88 mmol) u jednom delu. Smeša se zagreje do temperature okoline i meša za 4 h, zatim se hladi do 0 °C. Smeša se ispere ledeno hladnim zasićenim NaHCO3 (3 x 50 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrisan rotacionim isparavanjem. Sirovo ulje je uzeto u dihlorometanu, a automatizovana fleš hromatografija (80 g kolona, 1 do 10% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S22 (3,30 g, 78%) kao bistro bezbojno ulje:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,92 (d, J= 7,3 Hz, 1H), 7,20 (s, 2H), 6,10 (d, J= 3,0 Hz, 1H), 6,05 (d, J= 7,3 Hz, 1H), 4,33-4,23 (m, 3H), 4,14 (s, 1H), 4,01 (dd, J= 8,8 Hz, 6,2 Hz, 1H), 3,80 (dd, J= 9,6 Hz, 6,2 Hz, 1H), 3,70 (t, J= 9,3 Hz, 1H), 2,90 (p, J= 7,0 Hz, 1H), 1,32-1,22 (m, 21H), 0,91 (s, 9H), 0,89 (s, 9H), 0,72 (s, 9H), 0,10 (s, 6H), 08 (i, 3H), 0,07 (i, 3H), -0,03 (i, 3H), -0,34 (i, 3H).
[0178] S23: U mešani rastvor S22 (3,30 g, 3,87 mmol) u acetonitril (40 mL) pod azotom na 0 °C, dodat je trietilamin (1,08 mL, 7,73 mmol) preko šprica, zatim čvrsti hidroksilamin hidrohlorid (0,537 g, 7,73 mmol) u jednoj porciji. Smeša se zagreje do temperature okoline i meša 16 h. Smeša je ponovo ohlađena do 0 °C i zasić. vod. NahCo3(80 mL) je dodat. Smeša se ekstrahuje dihlorometanom (3 x 80 mL), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem. Sirovina je bila podvrgnuta automatizovanoj fleš hromatografiji (80 g kolone, 5 do 20% gradijenta EtOAc u dihlorometanu) da bi se dobio polučisti materijal. Druga automatizovana fleš hromatografija (80 g kolona, 5 do 50% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S23 (1,17 g, 50%) kao belu pahuljastu čvrstu supstancu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,20 (br s, 1H), 6,90 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 6,42 (s, 1H), 6,12 (d, J= 3,4 Hz, 1H), 5,51 (dd, J= 8,3 Hz, 1,8 Hz, 1H), 4,15 (br m, 1H), 4,07 (dd, J= 3,4 Hz, 1,4 Hz, 1H), 3,91 (dd, J.= 8,2 Hz, 6,4 Hz, 1H), 3,80 (dd, J= 9,8 Hz, 5,6 Hz, 1H), 3,74 (dd, J= 9,8 Hz, 8,6 Hz, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,90 (s, 9H), 0,86 (s, 9H), 0,12 (s, 3H), 11 (i, 3H), 0,08 (i, 3H), 0,07 (i, 6H), -0,02 (i, 3H); LRMS m/z 602,3 [M+H]<+>.
[0179] EIDD-02200: U mešani rastvor S23 (0,602 g, 1,00 mmol) u THF (8 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, dodat je trietilamin trihidrofluorid (0,163 mL, 1,00 mmol) kap po kap preko šprica. Smeša se meša na temperaturi okoline tokom 4 dana. Celit je dodat reakcionoj smeši, a rotaciono isparavanje imobilisalo je sirovinu na celit. Automatizovana fleš hromatografija (24 g kolona, 5 do 25% gradijent MeOH u dihlorometanu) dala je 600 mg polučistog proizvoda. Smeša je uzeta u vodi, a automatizovana reversno-fazna fleš hromatografija (43 g kolona, 0 do 15% gradijent acetonitrila u vodi) dala je željeni proizvod bez nečistoća. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, zamrznuta u suvom ledenom/acetonskom kupatilu i liofilizovana da obezbedi naslovno jedinjenje (0,164 g, 63% prinos) kao bela flokulentna čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,13 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 6,07 (d, J= 4,4 Hz, 1H), 5,51 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,10 (dd, J = 4,5 Hz, 1,3 Hz, 1H), 4,03 (t, J = 3,4 Hz, 1H), 3,87-3,72 (m, 3H);<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,08 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 6,09 (d, J= 5,6 Hz, 1H), 5,67 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,33 (t, J= 5,4 Hz, 1H), 4,06 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 3,89-3,3,86 (m, 2H), 3,76 (dd, J= 13,1 Hz, 6,1 Hz, 1H);<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 150,9, 146,8, 132,8, 97,0, 84,1, 82,1, 3575,8, 74,8, 60,4; LRMS m/z 260,1 [M+H]<+>.
Primer 23.
[0180]
[0181] S24: U mešanu suspenziju EIDD-1931 (1,25 g, 4,82 mmol) u suvom acetonu (60 mL) pod azotom na sobnoj temperaturi dodat je konc. H2SO4(0,05 mL, 0,964 mmol), a smeša se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Kiselina je neutralizovana dodavanjem trietilamina (0,27 mL, 1,93 mmol), a smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (80 g kolona, 0 do 10% gradijent metanola u dihlorometanu) dala je S24 (0,831 g, 58%) kao belu čvrstu supstancu:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,03 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 5,81 (d, J= 3,2 Hz, 1H), 5,58 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,86 (dd, J= 6,5 Hz, 3,2 Hz, 1H), 4,79 (dd, J= 6,4 Hz, 3,6 Hz, 1H), 4,10 (q, J.=4,0 Hz, 1H), 3,75 (dd, J= 11,9 Hz, 3,7 Hz, 1H), 3,70 (dd, J= 12,0 Hz, 4,5 Hz, 1H), 1,54 (i, 3H), 1,35 (i, 3H).
[0182] S25: U mešanu suspenziju S24 (0,831 g, 2,78 mmol) u dihlorometanu (14 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, dodat je trietilamin (0,58 ml, 4,16 mmol) i 4-DMAP (3,4 mg, 0,028 mmol), a smeša se meša na sobnoj temperaturi 15 min. Rastvor 4,4'-dimetoksitritil hlorida (0,988 g, 2,92 mmol) u dihlorometanu (14 mL) je dodat kap po kap, a smeša se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se ispere sa slanom vodom (1 x 30 mL), osuši preko Na2SO4, filtrira i koncentriše rotacionim isparavanjem. Fleš hromatografija (9:1 Heksan:EtOAc, 2,5% v/v Et3N) daje S25 (1,39 g, 83%) kao žutu penu:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,35-7,20 (m, 10H), 7,01 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 6,85-6,80 (m, 4H), 5,80 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,52 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,84 (dd, J = 6,4 Hz, 3,0 Hz, 1H), 4,77 (dd, J = 6,4 Hz, 3,6 Hz, 1H), 4,10 (q, J = 4,0 Hz, 1H), 3,73 (dd, J = 11,9 Hz, 3,6 Hz, 1H), 3,68 (dd, J = 12,0 Hz, 4,6 Hz, 1H), 1,53 (i, 3H), 1,34 (i, 3H).
[0183] S27: U mešani rastvor S26 (0,523 g, 2,56 mmol) i N,N-diizopropiletilamin (0,46 mL, 2,64 mmol) u acetonitril (5 mL) na 0 °C pod azotom, dodat je S25 (0,300 g, 0,499 mmol). Dobijena smeša se zagreje na sobnu temperaturu i meša 22 h, zatim razblažena sa EtOAc (50 mL), ispere rastvorom rastvorom (2 x 50 mL), osuši preko Na2SO4i koncentrisana rotacionim isparavanjem. Sirovi ostatak je odveden direktno na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
[0184] EIDD-2207: Cela sirovina S27 pripremljena u prethodnom koraku pomešana je sa 80% v/v ak. mravljom kiselinom (10 mL), a smeša se meša na sobnoj temperaturi 20 sati. Smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem, a automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 0 do 15% gradijent metanola u dihlorometanu) dala je naslovno jedinjenje (0,104 g, 48% u 2 koraka) kao žutu penu, u ~ 1:1 diastereomernoj smeši sa fosforom:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, diastereomerna mešavina) δ 7,41-7,35 (m, 1H), 7,26-7,18 (m, 2H), 7,12 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,75 (d, J= 8,3 Hz, 0,5 x 1H), 6,69 (d, J= 8,3 Hz, 0,5 x 1H), 5,79 (d, J= 4,8 Hz, 0,5 x 1H), 5,75 (d, J= 4,8 Hz, 0,5 x 1H), 5,54-5,42 (m, 2H), 5,46 (d, J= 8,2 Hz, 0,5 x 1H), 5,32 (d, J= 8,2 Hz, 0,5 x 1H), 4,56-4,25 (m, 2H), 4,13-4,02 (m, 3H);<31>P NMR (162 MHz, CD3OD, diastereomerna mešavina) δ -9,13, -9,33; HRMS calcd. za C16H18N3O9PNa [M+Na]<+>: 450,06729; pronađeno: 450,06777.
Referentni Primer 24.
[0185]
[0186] EIDD-2216: Pripremljen je ~5 N rastvor hidroksilamin hidrohlorida (4,71 g, 67,8 mmol) u vodi (13,5 mL) i podešen na pH = 6 sa malom količinom vod. NaOH (10% v/v). Zatvorena cev pod pritiskom je napunjena ovim rastvorom i [1',2',3',4',5'-<13>C5] citidin (0,661 g, 2,26 mmol),boca je zapečaćena i zagreva uz mešanje na 37 °C tokom 16 sati rotacionim isparavanjem. Sirovi materijal je uzet u vodi, a automatizovana obrnuta faza fleš hromatografija (240 g C18 kolona, 0 do 100% gradijent acetonitrila u vodi) uklonila je rasute nečistoće da bi se dobilo 1,4 g mokre čvrste supstance. Ova čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, a druga automatizovana hromatografija reverzne faze (240 g C18 kolona, 0 do 100% gradijent acetonitrila u vodi) uklonila je više nečistoća da bi se dobilo 400 mg polučistog materijala. Materijal je rastvoren u MeOH i imobilisan na celitu. Automatizovana fleš hromatografija (24 g kolona, 5 do 25% gradijent MeOH u dihlorometanu) dala je ~200 mg skoro čistog proizvoda. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, a konačna automatizovana hromatografija reverzne faze (48 g C18 kolona, 0 do 100% gradijent acetonitrila u vodi) dala je željeni proizvod bez organskih i neorganskih nečistoća. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, zamrznuta u suvom ledenom/acetonskom kupatilu i liofilizovana da obezbedi naslovno jedinjenje (0,119 g, 20%) kao bledo ljubičasta flokulentna čvrsta supstanca, ~ 95% čista NMR/LCMS analizom:<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,03 (dd, J= 8,2 Hz, 2,2 Hz, 1H), 5,82 (ddd, J = 167,5 Hz, 5,3 Hz, 2,9 Hz, 1H), 5,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,47-4,30 (br m, 1H), 4,23-4,03 (br m, 1H), 4,00-3,80 (br m, 2H), 3,65-3,50 (br m, 1H);<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 151,3, 146,6, 131,3, 98,7, 87,9 (dd, J= 43,1 Hz, 4,0 Hz), 84,0 (dd, J= 41,5 Hz, 38,0 Hz), 72,5 (dd, J= 43,3 Hz, 37,8 Hz), 67,8 (td, J = 37,8 Hz), 67,8 (td, J = 37,89 Hz, 3,9 Hz), 61,1 (d, J= 41,5 Hz); LRMS m/z 265,1 [M+H]<+>.
Referentni Primer 25.
[0187]
[0188] S28: Zaptivljiva cev pod pritiskom napunjena je uridinom (1,00 g, 4,09 mmol), K2CO3(0,679 g, 4,91 mmol) i deuterijum oksidom (8,2 mL). Smeša je očišćena azotom u trajanju od 15 minuta, cev je zapečaćena, a sadržaj se zagreva mešanjem na 95 °C tokom 16 h. Smeša se ohladi do rt, cev je nezapečaćena, a smeša je prebačena u bocu sa okruglim dnom i koncentrisana rotacionim isparavanjem. Dobijena sirovina je koisparavana sa MeOH (x 3) da bi se uklonila voda. NMR analiza je pokazala > 95% uključivanje deuterijuma na 5-poziciji na nukleobazu. Svetlo braon čvrsta supstanca S28 (1,00 g, 100%) korišćena je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,76 (i, 1H), 5,88 (d, J= 4,2 Hz, 1H), 4,17-4,12 (m, 2H), 4,00-3,96 (m, 1H), 3,84 (dd, J= 12,3 Hz, 2,8 Hz, 1H), 3,72 (dd, J= 12,3 Hz, 3,5 Hz, 1H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 185,6, 177,4, 160,4, 141,1, 91,8, 85,8, 75,9, 71,2, 62,4.
[0189] S29: Boca okruglog dna je napunjena sa S28 (1,00 g, 4,09 mmol) i dihlorometanom (8 mL) pod azotom. Dobijena smeša je ohlađena na 0 °C i 4-DMAP (0,050 g, 0,408 mmol) i imidazol (1,11 g, 16,3 mmol) su dodani odjednom. TbScl (2,15 g, 14,3 mmol) je dodat sve odjednom kao čvrsta, smeša se zagreje do temperature okoline i meša 16 sati. U reakcijsku smešu je dodata voda (25 mL), slojevi su odvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi su oprani slanom vodom (1 x 25 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 0 do 35% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S29 (2,52 g, 84%) kao beličastu penu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,08 (br s, 1H), 8,03 (i, 1H), 5,89 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,12-4,06 (m, 3H), 3,99 (dd, J = 11,5 Hz, 1,8 Hz, 1H), 3,76 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 0,96 (i, 9H), 0,92 (s, 9H), 0,90 (s, 9H), 0,14 (s, 3H), 0,13 (s, 3H) ), 0,10 (i, 3H), 0,09 (i, 3H), 0,08 (i, 3H), 0,07 (i, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163,7, 150,3, 140,3, 89,0, 84,3, 76,1, 70,5, 61,6, 26,0 (3C), 25,8 (3C) C), 25,7 (3C), 18,4, 18,3, 17,9, -4,2, -4,6, - 4,8, -4,9, -5,4, -5,6; HRMS kalcd. za C27H54DN2NaO6Si [m+na]<+>: 610,32446, pronađeno: 610,32482.
[0190] S30: U mešani rastvor S29 (0,840 g, 1,43 mmol) u acetonitril (14,3 mL) na 0 °C pod azotom, dodat su redom p-toluensulfonil hlorid (0,545 g, 2,86 mmol), 4-DMAP (0,175 g, 1,43 mmol) i trietilamin (0,80 mmol, 5,71 mmol) mol). Smeša se meša na 0 °C za 2,5 h, pri čemu je hidroksilamin hidrohlorid (0,993 g, 14,3 mmol) dodat sve odjednom kao čvrsta smeša.. Smeša se zagreva na 50 °C u trajanju od 3 dana, zatim ohlađena do rt. Reakciona smeša se razblaži sa EtOAc (100 mL), zatim ispere vodom (2 x 100 mL) i slanom vodom (1 x 100 ml), osuši preko Na2SO4, filtrira i koncentrisana rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 5 do 35% gradijent EtOAc u heksanima) proizvela je mešavinu polaznog materijala i željenog proizvoda. Druga automatizovana fleš hromatografija (24 g kolona, 10 do 40% gradijent EtOAc u heksanima), dala je S30 (0,332 g, 39%) kao beličastu penu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (br s, 1H), 5,92 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,10-4,05 (m, 2H), 4,04-4,00 (m, 1H), 3,91 (dd, J = 11,6 Hz, 2,4 Hz, 1H), 3,73 (dd, J= 11,6 Hz, 2,4 Hz, 1H), 3,73 (dd, J= 11,6 Hz, 1H), 3,73 (dd, J = 11,6 Hz, 1,8 Hz, 1H), 0,95 (s, 9H), 0,92 (s, 9H), 0,89 (s, 9H), 0,12 (s, 6H) ), 0,10 (s, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,06 (s, 3H), 0,05 (s, 3H).
[0191] EIDD-2261: Boca okruglog dna je napunjena sa S30 (0,332 g, 0,551 mmol), tetrametilamonijum fluorida (0,196 g, 2,64 mmol), THF (8,25 mL) i DMF (2,75 mL) pod azotom na 0 °C. Smeša se zagreva na 45 °C i zagreva uz mešanje 4 dana, zatim koncentrisana rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 0 do 20% gradijent MeOH u DCM) dala je naslovno jedinjenje (0,106 g, 74%) kao belu čvrstu smešu. Konačna NMR analiza pokazala je > 95% uključivanje deuterijuma na 5-poziciji nukleobaze:<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 7,16 (s, 1H), 5,85 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,14 (t, J= 5,5 Hz, 1H), 4,10 (dd, J= 5,6 Hz, 3,8 Hz, 1H), 3,93 (q, J= 3,4 Hz, 1H), 3,77 (dd, J= 12,2 Hz, 2,9 Hz, 1H), 3,68 (dd, J= 12,2 Hz, 3,4 Hz, 1H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 151,8, 146,3, 132,1, 89,7, 86,1, 74,6, 71,8, 62,8; HRMS kalciran. za C9H13DN3O6[M+H]<+>: 261,09399, pronađeno: 261,09371.
Referentni Primer 26.
[0192]
[0193] S31: Boca okruglog dna je napunjena sa S8 (3,13 g, 11,0 mmol) i dihlorometanom (75 mL) pod azotom na sobnoj temperaturi. U ovu smešu je dodat redom piridinijum dikromat (8,28 g, 22,0 mmol), sirćetni anhidrid (10,4 mL, 110 mmol) i t-butanol (21,1 ml, 220 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša se meša 22 sata na sobnoj temperaturi, a zatim ispere vodom (1 x 75 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje dihlorometanom (2 x 75 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani rastvorima (1 x 100 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrisani rotacionim isparavanjem. Dobijeni ostatak je preuzet u EtOAc i filtriran kroz poklopac od Celita, a zatim ispran sa EtOAc. Filtrat je koncentrisan rotacionim isparavanjem, a automatizovana fleš hromatografija (120 g kolona, 40 do 80% gradijent
1
EtOAc u heksanima) dala je S31 (3,10 g, 72%) kao beličastu penu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (br s, 1H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,76 (dd, J = 8,0 Hz, 2,3 Hz, 1H), 5,59 (i, 1H), 5,27 (dd, J = 6,0 Hz, 1,8 Hz, 1H), 5,19 (dd, J= 6,0 Hz, 1,8 Hz, 1H), 5,19 (dd, J = 6,0 Hz, 1H), (d, J= 6,0 Hz, 1H), 4,62 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 1,56 (i, 3H), 1,48 (i, 9H), 1,39 (i, 3H).
[0194] S32: U mešani rastvor S31 (2,61 g, 7,37 mmol) u eTOD (75 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom, dodat je naBd4(1,234 g, 29,5 mmol) u jednoj porciji. Smeša se meša na sobnoj temperaturi 1 sat, zagreva do 55 °C 6 sati, zatim preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša se ohladi na 0 °C, a višak reagenta je ugašen sa ACOD. Smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem da bi se dobio sirovi S32 (2,57 g) koji je dat direktno na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
[0195] S33: U mešanu suspenziju sirovog S32 (2,00 g nečistog materijala, ~5.74 mmol) u dihlorometanu (70 mL) na 0 °C, dodat je čvrsti imidazol (1,90 g, 27,9 mmol) i 4-DMAP (0.171 g, 1,40 mmol). Dodat je čvrst t-butildimetilsilil hlorid (2,11 g, 14,0 mmol), a smeša se zagreva na sobnu temperaturu i meša 4 dana. Smeša se redom ispere sa vodom i slanom vodom (1 x 70 mL svaka), osuši preko Na2SO4, filtrira i koncentrra rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (120 g kolona, 0 do 35% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S33 (1,42 g, 66% u 2 koraka) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,30 (br s, 1H), 7,72 (m, 1H), 5,99 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,69 (dd, J = 8,2 Hz, 2,3 Hz, 1H), 4,77 (dd, J= 6,1 Hz, 2,9 Hz, 1H), 4,69 (dd, J= 6,2 Hz, 2,8 Hz, 1H), 4,33 (d, J= 3,0 Hz, 1H), 1,60 (i, 3H), 1,37 (s, 3H), 0,91 (i, 9H), 0,11 (s, 3), 0,10 (s, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 162,7, 149,9, 140,5, 114,1, 102,1, 91,9, 86,5, 85,5, 85,54, 80,3, 27,4, 25,9 (3C), 25,4, 18,4, -5,4, -5,5; HRMS kalcd. za C18H29D2N2O6Si [M+H]<+>: 401,20714, pronađeno: 401,20663.
[0196] S34: U mešani rastvor S33 (1,42 g, 3,55 mmol) u acetonitril (35 mL) na 0 °C pod azotom dodaje se redom p-toluensulfonil hlorid (1,35 g, 7,09 mmol), 4-DMAP (0,433 g, 3,55 mmol) i trietilamin (9,88 mmol, 70,9 mmol l). Dobijena smeša se meša na 0 °C u trajanju od 2,5 sata. Dodat je hidroksilamin hidrohlorid (2,46 g, 35,5 mmol), a smeša se zagreva uz mešanje na 50 °C tokom 2 dana. Smeša je ponovo ohlađena na rt i razblaženа sa EtOAc (100 mL), zatim isprana vodom (2 x 50 mL) i slanom vodom (1 x 50 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrisana rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (120 g kolona, 1 do 3,5% gradijent metanola u dihlorometanu) dala je S34
2
(0,416 g, 28%) kao beličastu čvrstu smešu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (br s, 1H), 7,00 (m, 1H), 5,97 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 5,58 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,77 (dd, J= 6,2 Hz, 3,2 Hz, 1H), 4,68 (dd, J= 6,3 Hz, 1H), 4,68 (dd, J = 6,3 Hz, 1H), 4,68 (dd, J= 6,3 Hz Hz, 3,2 Hz, 1H), 4,22 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 1,59 (i, 3H), 1,36 (i, 3H), 0,92 (i, 9H), 0,11 (i, 3H), 0,10 (s, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 149,0, 145,4, 131,4, 114,1, 98,3, 90,8, 85,5, 84,5, 80,2, 27,4, 25,9 (3C), 25,5, 18,4, -5,4, -5,5; HRMS kalcd. za C18H29D2N3O6S1[M+H]<+>: 416,21804, pronađeno: 416,21827.
[0197] S35: U mešani rastvor S34 (0,416 g, 1,00 mmol) u THF (5 mL) na 0 °C pod azotom, dodat je 1,0 M THF rastvor TBAF (1,50 ml, 1,5 mmol), a dobijena smeša se drži na 0 °C 24 sata. Reakciona smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem, a automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 0 do 8% gradijent metanola u dihlorometanu) je dala S35 (0,257 g, 85%) kao belu čvrstu supstancu:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,02 (m, 1H), 5,81 (d, J= 3,2 Hz, 1H), 5,58 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,86 (dd, J= 6,4 Hz, 3,2 Hz, 1H), 4,79 (dd, J= 6,5 Hz, 3,6 Hz, 1H), 4,09 (d, J= 3,7 Hz, 1H), 1,54 (i, 3H) , 1,34 (i, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 151,3, 146,2, 133,4, 115,2, 99,4, 92,9, 87,2, 84,9, 82,1, 27,6, 25,6; HRMS kalcd. za C12H16D2N3O6[M+H]<+>: 302,13157, pronađeno: 302,13130.
[0198] EIDD-2345: U mešani rastvor S35 (0,140 g, 0,465 mmol) u metanolu (8,4 mL) i vode (0,93 mL) na sobnoj temperaturi, dodat je Dovex 50VKS8 vodonik oblik (0,30 g), a smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 24 sata. Reakciona smeša je filtrirana, a filtrat je koncentrisana rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (40 g kolona, 5 do 20% gradijent metanola u dihlorometanu) dala je naslovno jedinjenje (0,050 g, 41%) kao beličastu čvrstu smešu:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,17 (m, 1H), 5,86 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,60 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,15 (t, J= 5,5 Hz, 1H), 4,11 (dd, J= 5,6 Hz, 3,5 Hz, 1H), 3,94 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,94 (d, J= 5,6 Hz, 3,5 Hz, 1H), 3,94 (d, J = 5,6, J=3,8 Hz, 1H);<13>C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 151,8, 146,3, 132,2, 99,3, 89,7, 86,0, 74,6,71,7, HRMS kalcd. za C9H10D2N3O6[M+H]<+>: 260,08571, pronađeno: 260,08578.
Referentni Primer 27.
[0199]
[0200] S36: U mešani rastvor S2 (0,090 g, 0,150 mmol) u DCM (1,5 mL) pod azotom na rt. je dodat heksadecil izocijanat (0,051 mL, 0,165 mmol) kap po kap preko šprica preko 2 minuta. Reakcija je mešana na rt za 4 h, zatim koncentrisana rotacionim isparavanjem da bi se dobio sirovi ostatak. Automatizovana fleš hromatografija (12 g kolona, 0 do 20% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S36 (0,120 g, 92%) kao beličastu penu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,27 (br s, 1H), 7,51 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,29 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 5,90 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,57 (dd, J = 8,2 Hz, 2,2 Hz, 1H), 4,09-4,02 (m, 3H), 3,93 (dd, J = 11,7 Hz, 2, 2 Hz, 1H), 3,73 (dd, J = 11,6 Hz, 1,6 Hz, 1H), 3,27 (q, J = 6,6 Hz, 2H), 1,56 (m, 2H), 1,26 (br s, 28H), 0,95 (i, 9H), 0,91 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,89 (m, 3H), 0,13 (i, 3H), 0,12 (i, 3H), 0,09 (i, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,05 (s, 3H), 0,04 (s, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 154,6, 147,9, 146,9, 134,0, 96,0, 91,2, 87,9, 85,1, 75,5, 71,7, 62,5, 41,2, 31,9, 29,73, 29,70, 29,69 (2C, slučajna izohronija), 29,67, 29,65 (2C, slučajna izohronija), 29,5,, 29,4, 29,3, 26,8, 26,0 (3C), 25,8 (3C), 25,7 (3C), 22,7, 18,4, 18,1, 17,9, 14,1, -4,4, -4,6, -4,7, -4,8, -5,5, -5,6; HRMS kalcd. za C44H89N4O7Si3[M+H]<+>: 869,60336, pronađeno: 869,60408.
[0201] EIDD-2356: U mešani rastvor S36 (0,120 g, 0,138 mmol) u THF (2,75 mL) pod azotom na 0 °C, dodat je 1M rastvor TBAF u THF (0,483 mL, 0,483 mmol). Rastvor se meša na 0 °C tokom 5 sati, zatim koncentrisana rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (12 g kolona, 0 do 10% gradijent MeOH u dihlorometanu) dala je naslovno jedinjenje (0,055 g, 76%) kao beličasta čvrsta smeša.:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3sa padom CD3OD) δ 7,26 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,62 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,55 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,14-4,06 (m, 2H), 3,96-3,92 (m, 1H), 3,82-3,92 (m, 1H), 3,82-3,9276 (m, 1H), 3,65 (m, 1H, zaklonjen od Meoh-d4), 3,15 (t, 7,0 Hz, 2H), 1,56 (m, 2H), 1,30-1,11 (br s, 28H), 0,79 (t, J = 6,9 Hz, 3H); HRMS kalcd. za C26H47N4O7[M+H]<+>: 527,34393, pronađeno: 527,34396.
Referentni Primer 28.
4
[0203] S37: U mešani rastvor S2 (0,090 g, 0,150 mmol) u DCM (1,5 mL) pod azotom na rt. je dodat oktadecil izocijanat (0,057 mL, 0,165 mmol) kap po kap preko šprica preko 2 minuta. Reakcija je mešana na rt za 6 h, zatim koncentrisana rotacionim isparavanjem da bi se dobio sirovi ostatak. Automatizovana fleš hromatografija (12 g kolona, 0 do 20% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S37 (0,128 g, 95%) kao beličastu penu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,27 (br s, 1H), 7,51 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 6,29 (t, J= 5,8 Hz, 1H), 5,90 (d, J= 4,4 Hz, 1H), 5,57 (dd, J= 8,2 Hz, 2,2 Hz, 1H), 4,10-4,4,00 (m, 3H), 3,93 (dd, J= 11,6 Hz, 2, 1 Hz, 1H), 3,73 (dd, J= 11,7 Hz, 1,5 Hz, 1H), 3,28 (q, J= 6,6 Hz, 2H), 1,55 (m, 2H), 1,26 (br s, 30H), 0,95 (i, 9H), 0,91 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,89 (i, 9m, 3H), 0,13 (i, 3H), 0,12 (i, 3H), 0,09 (i, 3H), 0,08 (i, 3H), 0,05 (s, 3H), 0,04 (s, 3H);<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 154,6, 147,9, 146,9, 134,0, 96,0, 91,2, 87,9, 85,1, 75,5, 71,7, 62,5, 41,2, 31,9, 29,73, 29,70 (5C, slučajna izohronija), 29,67, 29,66 (2C, slučajna izohronija), 29,60, 29,5,, 29,3, 26,8, 26,0 (3C), 25,8 (3C), 25,7 (3C), 22,7, 18,4, 18,1, 17,9, 14,1, -4,4, -4,6, -4,7, -4,8, -5,5, -5,6; HRMS kalcd. za C46H93N4O7Si3[M+H]<+>: 897,63466, pronađeno: 897,63589.
[0204] EIDD-2357: U mešani rastvor S37 (0,128 g, 0,143 mmol) u THF (2,85 mL) pod azotom na 0 °C, dodat je 1M rastvora TBAF u THF (0,499 mL, 0,499 mmol). Rastvor se meša na 0 °C tokom 5 sati, zatim koncentrisan rotacionim isparavanjem. Automatizovana fleš hromatografija (12 g kolona, 0 do 10% gradijent MeOH u dihlorometanu) dala je naslovno jedinjenje (0,059 g, 74%) kao beličastu čvrstu smešu:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10,70 (br s, 1H), 7,47 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6,56 (t, J= 6,2 Hz, 1H), 5,76 (s, 1H), 5,60 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,32-4,20 (br m, 2H), 4,12-4,20 (br m, 2H), 4,12-4,20 (br m, 2H), 4,12-4,20 (br m, 2H), 4,12-( br m, 2H), 3,90 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 1,56 (m, 2H), 1,26 (br s, 30H), 0,89 (t, J= 7,0 Hz, 3H); HRMS kalcd. za C28H51N4O7[M+H]<+>: 555,37523, pronađeno: 555,37531.
Referentni Primer 29.
[0205]
[0206] S38: U dobro izmešan trifosgen (0,297 g, 1,00 mmol) i natrijum bikarbonata (0,370 g, 4,40 mmol) u acetonitril (5 mL) na -15 °C, dodat je mešani rastvor metilamina (2,0 M u THF, 0,600 ml, 1,20 mmol) i trietilamin (0,488 mL, 3,50 mmol) kap po kap preko šprica. Smeša se zagreje do temperature okoline i meša 6 sati. Pripremljen je rastvor S2 (0,662 g, 1,10 mmol) i 4-DMAP (0,024 g, 0,200 mmol) u acetonitril (5 mL) i DCM (5 mL), a ovo je dodato kap po kap u reakcijsku smešu preko šprica. Cela smeša se meša na temperaturi okoline za 16 h, razblažena sa dihlorometanom (50 mL), oprana sa zasić. vod. NaHCO3i slanom vodom (1 x 25 mL svaki), osuši preko Na2SO4, filtrira i koncentriše rotacionim isparavanjem. Sirova je uzeta u dihlorometanu, a automatizovana fleš hromatografija (kolona od 24 g, 5 do 35% gradijent EtOAc u heksanima) dala je S38 (0,340 g, 52%) kao belu voštanu čvrstu smešu. NMR analiza je pokazala odnos ~ 8:1 rotamera:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, glavni rotamer) δ 10,53 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,30 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6,83 (q, J = 4,9 Hz, 1H), 5,80 (d, J= 6,5 Hz, 1H), 5,67 (dd, J= 8,3 Hz, 2,2 Hz, 1H), 4,18 (dd, J= 6,4 Hz, 4,3 Hz, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,92 (m, 1H), 3,82 (dd, J= 11,6 Hz, 4,0 Hz, 1H), 3,70 (dd, J= 11,5 Hz, 2,9 Hz, 1H), 2,64 (d, J= 4,7 Hz, 3H), 0,91 (s, 9H), 0,89 (s, 9H), 0,83 (s, 9H), 0,10 (s, 6H), 0,09 (s, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,02 (i, 3H), -0,03 (i, 3H).
[0207] EIDD-2422: U mešani rastvor S38 (0,330 g, 0,500 mmol) u THF (3,75 mL) i DMF (1,25 mL) na 0 °C, dodata je sirćetna kiselina (0,143 mL, 2,50 mmol) zatim tetraetilamonijum fluorid (0,359 g, 2,40 mmol) sve odjednom. Smeša se zagreje do temperature okoline i meša 24 sata. Smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem, a sirova je uzeta u dihlorometanu. Automatizovana fleš hromatografija (12 g kolona, 1 do 25% gradijent MeOH u dihlorometanu) dala je 80 mg polučistog materijala. Ovaj materijal je uzet u vodi, a automatizovana obrnuta faza fleš hromatografija (30 g kolona, 0 do 100% gradijent acetonitrila u vodi) dala je željeni proizvod bez nečistoća. Čvrsta je rastvorena u vodi, zamrznuta u suvom ledenu/acetonu kupatilu i liofilizovana da obezbedi naslovno jedinjenje (0,057 g, 36% prinos) kao bela flokulentna čvrsta smeša.. NMR analiza je pokazala13:1 odnos signala u D2O i odnos 8:1 u MeoH-d4, što ukazuje na rastvarač-zavisne rotamerske odnose jednog čistog jedinjenja:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, glavni rotamer) δ 7,45 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 5,86 (d, J= 5,1 Hz, 1H), 5,69 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,16-4,08 (m, 2H), 3,96 (q, J = 3,2 Hz, 1H), 3,79 (dd), 3,79 (dd, J= 3,2 Hz, 1H), 3,79 (dd, J= 12,2 Hz, 2,8 Hz, 1H), 3,69 (dd, J= 12,2 Hz, 3,3 Hz, 1H), 2,79 (i, 3H);<1>H NMR (400 MHz, D2O, glavni rotamer) δ 7,27 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 5,84 (d, J= 5,4 Hz, 1H), 5,80 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,28 (t, J= 5,2 Hz, 1H), 4,17 (t , J= 5,2 Hz, 1H), 4,05 (q, J= 4,2 Hz, 1H), 3,82 (dd, J= 12,8 Hz, 3,1 Hz, 1H), 3,73 (dd, J= 12,8 Hz, 4,6 Hz, 1H), 2,76 (s, 3H);<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 6, 150,2, 148,8, 134,0, 97,1, 88,4, 84,1, 73,1, 69,7, 61 ,0, 26,9; LRMS m/z 315,1 [M-H]-.
Referentni Primer 30.
[0208]
[0209] S39: U snažno mešani rastvor S2 (1,10 g, 1,82 mmol) u piridin (12 mL) pod azotom na 0 °C, dodat je dimetilkarbamil hlorid (0,184 mL, 2,00 mmol) po kap preko šprica tokom 5 minuta. Smeša se meša na 0 °C 4 sata, zatim zagreva do temperature okoline i meša još 16 sati. Dodat je metanol (2 mL), smeša se meša dodatnih 15 minuta na sobnoj temperaturi, zatim koncentriše rotacionim isparavanjem. Sirova je uzeta u dihlorometanu, a automatizovana fleš hromatografija (kolona od 40 g, 5 do 50% gradijent EtOAc u heksanima) obezbedila je S39 (1,16 g, 95%) kao puhastu belu čvrstu supstancu. NMR analiza pokazala je ~ 10:1 odnos rotamera:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, glavni rotamer) δ 10,76 (d, J=2,2 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,80 (d, J= 6,3 Hz, 1H), 5,70 (dd, J= 8,2 Hz, 2,2 Hz, 1H), 4,20 (dd, J= 8,2 Hz, 1H), 4,20 (dd, J = 8,2 Hz, J, 1H), 4,20 (dd, = 6,3 Hz, 4,6 Hz, 1H), 4,05 (dd, J= 4,3 Hz, 2,3 Hz, 1H), 3,92 (q, J= 3,1 Hz, 1H), 3,83 (dd,J = 11,5 Hz, 4,0 Hz, 1H), 3,70 (dd, J= 11,5 Hz, 2,8 Hz, 1H), 2,96 (br s, 3H), 2,96 (br s, 3H), 2,83 (br s, 3H), 0,91 (i, 9H), 0,89 (i, 9H), 0,83 (s, 9H), 0,10 (s, 6H), 0,09 (s, 3H), 0,08 (i, 3H), 0,02 (i, 3H), -0,01 (i, 3H).
[0210] EIDD-2423: U mešani rastvor S39 (1,16 g, 1,72 mmol) u THF (12,9 mL) i DMF (4,3 mL) na 0 °C, dodata je sirćetna kiselina (0,493 mL, 8,62 mmol) zatim tetraetilamonijum fluorid (1,24 g, 8,27 mmol) sve odjednom. Smeša se zagreje do temperature okoline i meša 16 sati. Smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem, a sirova je uzeta u dihlorometanu. Automatizovana fleš hromatografija (80 g kolona, 1 do 15% gradijent MeOH u dihlorometanu) dala je 400 mg polučistog materijala. Ovaj materijal je uzet u vodi, a automatizovana reversno-fazna fleš hromatografija (100 g kolona, 0 do 100% gradijent acetonitrila u vodi) dala je željeni proizvod bez nečistoća. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi, zamrznuta u suvom ledenom/acetonskom kupatilu i liofilizovana da obezbedi naslovno jedinjenje (0,200 g, 35% prinos) kao belu flokulentnu čvrstu smešu.. NMR analiza je pokazala odnos signala 9:1 u D2O i odnos 5:1 u MeoH-d4, što ukazuje na rastvaračzavisne rotamerske odnose jednog čistog jedinjenja:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, glavni rotamer) δ 7,46 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 5,85 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 5,72 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,18-4,11 (m, 2H), 3,97 (q, J= 3,5 Hz, 1H), 3,80 (dn), 3,80 (d, J= 12,1 Hz, 2,8 Hz, 1H), 3,70 (dd, J= 12,2 Hz, 3,2 Hz, 1H), 3,05 (br s, 3H), 2,98 (br s, 3H);<1>H NMR (400 MHz, D2O, glavni rotamer) � 7,27 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 5,84 (d, J= 5,4 Hz, 1H), 5,80 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 4,28 (t, J.= 5,4 Hz, 1H), 4,17 (d, J= 5,2 Hz, 1H), 4,05 (q, J= 4,3 Hz, 1H), 3,82 (dd, J= 12,7 Hz, 3,2 Hz, 1H), 3,73 (dd, J= 12,7 Hz, 4,5 Hz, 1H), 2,99 (s br, 3H), 2,91 (br s, 3H);<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 156,2, 150,1, 149,4, 133,9, 97,2, 88,3, 84,1, 73,0, 69,7, 61,0, 36,5, 35,7; LRMS m/z 329,0 [M-H]-.
Primer 31.
[0211]
[0212] S40: Rastvor S25 (0,50 g, 0,83 mmol) u bezvodnom dihlorometanu (5 mL) u boci okruglog dna je ohlađen na 0 °C ledenom kupkom pod azotom i tretiran piridinom (0,14 mL, 1,66 mmol) i DMAP (10 mg, 0,083 mmol), zatim kapljično dodat heptil hloroformata (0,165 mL, 0,914 mmol). Smeša se zagreje na sobnu temperaturu i meša 2 časa.Nakon završetka reakcije, reakciona smeša se razblaži sa dihlorometanom (25 mL) i ispere sa 5% vodene hlorovodonične kiseline (25 mL) i vodenog natrijum bikarbonata (25 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrisan rotacionim isparavanjem da bi se dobio S40.
Sirovi proizvod je odveden direktno na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
[0213] EIDD-2474: Ceo sirovi S40 pripremljen kao gore je mešan sa mravljom kiselinom (10 mL) na sobnoj temperaturi tokom 12 čas.Rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem, a sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom fleš kolone koristeći metanol i dihlorometan da se dobije naslovno jedinjenje (0.140 g, 42% preko dva koraka) kao bezbojna čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,05 (s, 1H), 9,61 (s, 1H), 6,85 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 5,75 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 5,57 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 5,42 (d, J= 5,8 Hz, 1z, 1H), 5,42 (d, J= 5,8 Hz, 1z, 1z H), 5,30 (d, J= 5,0 Hz, 1 V), 4,31 (dd, J= 11,7 Hz, 3,2 Hz, 1H), 4,20 (dd, J= 11,8 Hz, 5,4 Hz, 1H), 4,14-4,08 (m, 1H), 4,02 (q, J= 5,7 Hz, 1H), 3,97-3,90 (m, 2H), 3,10 (m, 1H), 1,61-1,18 (m, 10H), 0,90-0,86 (m, 3H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 154,9, 149,9, 143,6, 130,3, 99,2, 87,9, 81,0, 72,1, 70,4, 68,2, 67,8, 45,9, 31,6, 28,5, 25,6, 22,5, 14,4; LRMS m/z 402,1 [M+H]<+>.
Referentni Primer 32.
[0214]
[0215] S41: Rastvor S25 (0,40 g, 0,66 mmol) u bezvodnom dihlorometanu (5 mL) u 50 mL boci okruglog dna se ohladi na 0 °C sa ledenom kupkom pod azotom i tretira piridinom (0,10 mL, 1,33 mmol) i DMAP (0,080 g, 0,66 mmol), zatim dodavanjem heptil izocianata (0,16 mL, 0,99 mmol) i meša na 40° C za 12 h. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša se razblaži sa dihlorometanom (25 mL) i ispere 5% vodenom hlorovodoničnom kiselinom (25 mL) i vodenim natrijum bikarbonatom (25 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrisan rotacionim isparavanjem kako bi se dobio sirovi S41. Sirovi proizvod je odveden direktno na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
[0216] EIDD-2475: Ceo sirovi S41 pripremljen kao što je gore opisano je mešan sa mravljom kiselinom (10 mL) na sobnoj temperaturi za 12 čas.Rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem, a sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom fleš kolone koristeći metanol i dihlorometan da se dobije naslovno jedinjenje (0,150 g, 56% preko 2 koraka) kao bezbojna čvrsta smeša.:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,98 (s, 1H), 9,53 (s, 1H), 7,26 (t, J= 5,5 Hz, 1H), 6,83 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 5,71 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 5,52 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 5,52 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 4,19-3,77 (m, 5H), 2,94 (q, J.= 6,2 Hz, 2H), 1,48-1,10 (m, 10H), 0,83 (t, J= 6,6 Hz, 3H);<13>C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 156,3, 150,0, 143,7, 130,4, 99,1, 87,4, 81,9, 72,1, 70,6, 64,2, 31,7, 31,7, 29,9, 28,9, 26,6, 22,5, 14,4; LRMS m/z 401,1 [M+H]<+>.
Primer 33.
[0217]
[0218] S42: Rastvor S25 (0,25 g, 0,41 mmol) u bezvodnom dihlorometanu (5 mL) u 50 ml okruglog dna bočice se ohladi na 0 °C sa ledenom kupkom pod azotom i tretiran piridinom (0,068 mL, 0,83 mmol) i DMAP (0,073 g, 0,41 mmol), zatim dodavanjem nonanoil hlorida (0,082 mL, 0,45 mmol) i meša na 40 °C tokom 12 h Nakon završetka reakcije, reakciona smeša se razblaži sa dihlorometanom (15 mL) i ispere sa 5% vodene hlorovodonične kiseline (20 mL) i vodenim natrijum bikarbonatom (20 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrisan rotacionim isparavanjem kako bi se dobio sirovi S42.
Sirovi proizvod je odveden direktno na sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
[0219] EIDD-2476: Sva sirova S42 kao što je gore pripremljeno je mešana sa mravljom kiselinom (5 mL) na sobnoj temperaturi tokom 12 čas.Rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem, a sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom fleš kolone koristeći metanol i dihlorometan da se dobije naslov jedinjenje (0,080 g, 54% preko 2 koraka) kao bezbojna čvrsta smeša.:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,99 (s, 1H), 9,54 (s, 1H), 6,81 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 5,69 (d, J= 5,6 Hz, 1H) (dd, J = 8,2 Hz, 1,8 Hz, 1H), 5,35 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 5,22 (d, J= 5,1 Hz, 1H), 4,25-4,02 (m, 2H), 4,03-3,78 (m, 3H), 2,35-2,20 (m, 2H), 1,58-1,42 (m, 2H), 1,22 (m, 10H), 0,83 (t, J= 3,3 Hz, 3H);<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 173,2, 149,9, 143,7, 0,3, 99,2, 88,0, 81,1, 72,3, 70,4, 64,3, 33,8, 31,7, 29,1, 29,0, 28,9, 24,9, 22,5, 14,4; LRMS m/z 400,2 [M+H]<+>.
Referentni Primer 34.
[0220]
[0221] S43: U mešani rastvor S8 (5,87 g, 20,7 mmol) u piridinu (20 mL) na 0 °C pod azotom, dodat je dietil fosforohloridat (2,99 mL, 20,7 mmol) po kap preko šprica. Smeša se
1
meša na 0 °C 30 minuta, zatim zagreva do temperature okoline i meša dodatnih 30 minuta. Meoh (20 mL) je dodat, smeša se zagreje do temperature okoline i meša 15 minuta. Smeša je koncentrisana rotacionim isparavanjem i preuzeta u dihlorometanu. Automatizovana fleš hromatografija (120 g kolona, 1 do 10% gradijent MeOH u dihlorometanu) dala je S43 (4,25 g, 49%) kao beličastu pahuljastu čvrstu smešu:<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6) δ 9,28 (br s, 1H), 8,39 (br s, 1H), 7,95 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 6,04 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 5,80 (d, J= 1,7 Hz, 1H), 5,07 (dd, J= 6,4 Hz, 1,7 Hz, 1H), 4,79 (dd, J, = 6,4 Hz, 3,7 Hz, 1H), 4,30-4,24 (m, 1H), 4,21-4,07 (m, 2H), 4,01 (dk, J= 8,2 Hz, 7,1 Hz, 4H), 1,49 (s, 3H), 1,29 (s, 3H), 1,22 (tk, J= 7,0 Hz, 0,8 Hz, 6H);<31>P NMR (162 MHz, CDCl3) δ - 1,21; LRMS m/z 420,1 [M+H]<+>.
[0222] S44: Pripremljen je ~5 N rastvor hidroksilamin hidrohlorida (12,7 g, 182 mmol) u vodi (36,4 ml zapremine rastvora) i podešen na pH = 6 sa malom količinom aq. NaOH (10% w/w). Sa ovim rastvorom napunjena je cev pod pritiskom, S43 (3,82 g, 9,11 mmol) i THF (18 mL), bočica je zapečaćena, a smeša se zagreva uz mešanje na 37 °C tokom 5 dana. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, prebačena u bocu okruglog dna i koncentrisana rotacionim isparavanjem Sirovi materijal je preuzet u metanolu i imobilisan na celitu. Automatizovana fleš hromatografija (80 g kolona, 0 do 10% gradijent MeOH u dihlorometanu) dala je S44 (2,28 g, 58%) kao pahuljasta bela čvrsta smeša.:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,58 (br s, 1H), 7,72 (br s, 1H), 6,68 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,69 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,63 (dd, J = 7,8 Hz, 1,1 Hz, 1H), 4,93 (dd, J = 6,8 Hz, 1H), 4,93 (dd, J = 6,8 Hz, 1H), 4,93 (dd, J = 6,8 Hz, 1H) 4 Hz, 2,4 Hz, 1H), 4,85 (dd, J = 6,5 Hz, 3,6 Hz, 1H), 4,30-4,20 (m, 3H), 4,20-4,10 (m, 5H), 1,57 (i, 3H), 1,35 (i, 3H), 1,35 (tdd, J = 7,0 Hz, 4,1 Hz, 1,0 Hz, 6H);<31>P NMR (162 MHz, CDCl3) δ -1,09; LRMS m/z 436,1 [M+H]<+>.
[0223] EIDD-2503: Rastvor S44 (0,25 g, 0,57 mmol) se meša sa mravljom kiselinom (5 mL) na sobnoj temperaturi za 12 h pod azotom. Nakon završetka reakcije rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem, a sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom fleš kolone koristeći metanol i dihlorometan da bi se dobilo naslovno jedinjenje (0,180 g, 79%) kao bezbojna čvrsta smeša.:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,00 (i, 1H), 9,57 (s, 1H), 6,83 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,71 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,54 (dd, J = 8,2 Hz, 2,0 Hz, 1H), 5,38 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 5,24 (d, J, = 4,7 Hz, 1H), 4,16-3,86 (m, 8H), 1,30-1,15 (m, 5H).<13>C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 149,9, 143,7, 130,3, 110,0, 99,1, 87,8, 82,0, 72,1, 70,2, 67,2, 63,9, 16,4;<31>P NMR (162 MHz, DMSO-d6) δ - 1,12; LRMS m/z 396,1 [M+H]<+>.
2
Primer 36.
Protokoli testa
(1) Testovi skeniranja za DENV, JV, POVV, VNV, IFV, PTV, RVFV, CHIKV, EEEV, VEEV, TCRV, PCV, JUNV, MPRLV
[0224] Test smanjenja primarnog citopatskog efekta (CPE). Izvršeni su testovi inhibicije sa četiri koncentracije CPE. Pripremljeni su monolajari konfluentne ili blizu konfluentne kulture ćelija u 96-bunarskim mikropločama za jednokratnu upotrebu. Ćelije se održavaju u MEM ili DMEM dopunjen sa FBS kao što je potrebno za svaku ćelijsku liniju. Za antivirusne testove koristi se isti medijum ali sa FBS smanjenim na 2% ili manje i dopunjen sa 50 mg/ml gentamicina. Testno jedinjenje se priprema na četiri log10konačnih koncentracija, obično 0,1, 1,0, 10 i 100 mg/ml ili mM. Kontrola virusa i ćelijski kontrolni bunari su na svakoj mikroploči. Paralelno, poznati aktivni lek se testira kao pozitivan kontrolni lek koristeći istu metodu kao što se primenjuje za testna jedinjenja. Pozitivna kontrola se testira sa svakim probnim pokretom. Test se postavlja tako što se prvo uklanja medij za rast sa 96-bunarskih ploča ćelija. Zatim se ispitno jedinjenje nanosi u volumenu od 0,1 ml u bunare pri koncentraciji 2X. Virus, normalno na <10050% infektivnih doza ćelijske kulture (CCID50) u volumenu od 0,1 ml, se stavlja u one bunare određene za virusnu infekciju. Srednji bez virusa se nalazi u bunarima za kontrolu toksičnosti i ćelijske kontrolne bunare. Virusni kontrolni bunari se tretiraju slično virusu. Ploče se inkubiraju na 37 °C sa 5% CO2dok se maksimalni CPE posmatraju u bunarima za kontrolu virusa. Ploče se zatim boje 0,011% neutralnom crvenom bojom približno dva sata na 37 °C u inkubatoru od 5% CO2. Neutralni crveni medijum se uklanja potpunom aspiracijom, a ćelije se mogu ispirati 1Ks fosfatnim puferskim rastvorom (PBS) kako bi se uklonila preostala boja. PBS je potpuno uklonjen i ugrađeno neutralno crveno se rastvara sa 50% Sorensenovim citratnim puferom/ 50% etanolom (pH 4,2) najmanje 30 minuta. Neutralna crvena boja prodire u žive ćelije, dakle, što je intenzivnija crvena boja, veći je broj održivih ćelija prisutnih u bunarima. Sadržaj boje u svakom bunaru određuje se pomoću spektrofotometra od 96-bunara na talasnoj dužini od 540 nm. Sadržaj boje u svakom setu bunara se pretvara u procenat boje prisutne u netretiranim kontrolnim bunarima koristeći Microsoft Excel računarsku tabelu. 50% efikasne (EC50, virus-inhibitorne) koncentracije i 50% citotoksične (CC50, ćelijske inhibitorne) koncentracije se zatim izračunavaju linearnom regresijom analizom. Kvocijent CC50podeljen sa EC50daje vrednost indeksa selektivnosti (SI).
[0225] Sekundarni CPE/smanjenje prinosa virusa (VIR) test. Ovaj test podrazumeva sličnu metodologiju onome što je opisano u prethodnim paragrafima koristeći 96-bunarske mikroploče ćelija. Razlike su navedene u ovom odeljku. Osam polu-logio koncentracija inhibitora testirano je na antivirusnu aktivnost i citotoksičnost. Nakon što dođe do dovoljne replikacije virusa, uzorak supernatanta se uzima iz svakog inficiranog bunara (tri replikatna bunara su udružena) i uzima za VIR deo ovog testa, ako je potrebno. Alternativno, može se pripremiti posebna ploča i ploča se može zamrznuti za VIR test. Nakon što se odredi maksimalna CPE, održive ploče su obojene neutralnom crvenom bojom. Sadržaj inkorporirane boje je određen kao što je gore opisano. Podaci dobijeni iz ovog dela testa su neutralni crveni EC50, CC50i SI vrednosti. Posmatrana gore navedena aktivna jedinjenja se dalje procenjuju VIR temom. VIR test je direktno određivanje koliko test jedinjenje inhibira replikaciju virusa. Virus koji je repliciran u prisustvu test jedinjenja se titrira i upoređuje sa virusom iz netretiranih, inficiranih kontrola. Titracija združenih virusnih uzoraka (prikupljenih kao što je gore opisano) vrši se razređivanjem krajnjih tačaka. Ovo se postiže titriranjem log10razređivanja virusa korišćenjem 3 ili 4 mikrovila po razređivanju na svežim monolaierima ćelija razređivanjem krajnjih tačaka. Bunari se boduju zbog prisustva ili odsustva virusa nakon posmatranja različitih CPE (merena uzimanjem neutralne crvene). Ucrtavanje log10koncentracije inhibitora naspram log10virusa proizvedenog u svakoj koncentraciji omogućava izračunavanje 90% (jedan log10) efektivnu koncentraciju linearnom regresijom. Podela EC90od strane CC50dobijenog u delu 1 testa daje SI vrednost za ovaj test.
Primer 37.
(2) Skrining testovi za virus Lassa groznice (LASV)
[0226] Primarni test virusa Lassa groznice. Pripremljeni su konfluentni ili bliskokonfluentni mono-slojevi ćelijske kulture u tablicama za jednokratnu upotrebu ćelija kulture. Ćelije se održavaju u DMEM dopunjenim sa 10% FBS. Za antivirusne testove koristi se isti medijum ali sa FBS smanjenim na 2% ili manje i dopunjen sa 1% penicilina/streptomicinom. Testno jedinjenje se priprema na četiri log10finalne koncentracije, obično 0,1, 1.0, 10 i 100 mg/ml ili mM. Kontrola virusa i kontrola ćelija će se izvoditi paralelno sa svakim testiranim
4
jedinjenjem. Dalje, poznati aktivni lek se testira kao pozitivan kontrolni lek koristeći istu eksperimentalnu postavku kao što je opisano za kontrolu virusa i ćelija. Pozitivna kontrola se testira sa svakom probom. Test se podešava tako što se prvo uklanja medij rasta sa 12 bunara ploča ćelija i infekcijom ćelija sa 0,01 MOI LASV soja Josiah. Ćelije će biti inkubirane za 90 min: 500 ml inokulum/m12 dobro, na 37 °C, 5% CO2 sa konstantnim laganim njihanjem. Inokulumi će biti uklonjeni i ćelije će biti oprane 2Ks u medijumu. Zatim se ispitno jedinjenje nanosi u 1 ml ukupne zapremine medija. Supernatant kulture tkiva (TCS) će biti prikupljen u odgovarajućim vremenima. TCS će se zatim koristiti za određivanje inhibitornog efekta jedinjenja na replikaciju virusa. Virus koji je repliciran u prisustvu testnog jedinjenja se titrira i upoređuje sa virusom iz netretiranih, inficiranih kontrola. Za titraciju TCS, serijska desetostruka razređivanja biće pripremljena i korišćena da se zaraze sveži monol-slojevi ćelija. Ćelije će biti prekrivene sa 1% agaroze pomešane 1:1 sa 2Ks MEM dopunjene sa 10% FBS i 1% penecilina, a broj plakova određen. Ucrtavanje log10koncentracije inhibitora naspram log10virusa proizvedenog u svakoj koncentraciji omogućava izračunavanje 90% (jedan log10) efektivne koncentracije linearnom regresijom.
[0227] Sekundarni test virusa Lassa groznice. Sekundarni test podrazumeva sličnu metodologiju onoj koja je opisana u prethodnim paragrafima koristeći 12-bunarske ploče ćelija. Razlike su navedene u ovom odeljku. Ćelije su zaražene kao što je gore opisano, ali ovaj put prekrivene 1% agarozom razblaženom 1:1 sa 2Ks MEM i dopunjenom sa 2% FBS i 1% penicilina/streptomicina i dopunjenom odgovarajućom koncentracijom leka. Ćelije će biti inkubirane na 37oC sa 5% CO2 za 6 dana. Prekrivač se zatim uklanja i ploče obojene 0,05% kristalnom ljubičastom u 10% puferovanom formalinu približno dvadeset minuta na sobnoj temperaturi. Ploče se zatim operu, osuše i izbrojie. Broj plakova je u svakom skupu razređivanja jedinjenja se pretvara u procenat u odnosu na netretiranu kontrolu virusa. 50% efektivne (EC50, virus-inhibitorne) koncentracije se zatim izračunavaju linearnom regresijom analizom.
Primer 38.
(3) Skrining testovi za virus ebole (EBOV) i Nipah virus (NIV)
[0228] Primarni ebola/Nipah virus test. Izvršeni su testovi smanjenja plaka sa četiri koncentracije. Pripremljeni su konfluentni ili blisko-konfluentni mono-slojevi ćelijske kulture u tablicama za jednokratnu upotrebu ćelija kulture. Ćelije se održavaju u DMEM dopunjenim sa 10% FBS. Za antivirusne testove koristi se isti medijum ali sa FBS smanjenim na 2% ili manje i dopunjenim sa 1% penicilina/streptomicina. Testno jedinjenje se priprema na četiri log10finalnih koncentracija, obično 0,1, 1.0, 10 i 100 mg/ml ili mM. Kontrola virusa i kontrola ćelija će se izvoditi paralelno sa svakim testiranim jedinjenjem. Dalje, poznati aktivni lek se testira kao pozitivan kontrolni lek koristeći isteksperimentalnu postavku kao što je opisano za kontrolu virusa i ćelija. Pozitivna kontrola se testira sa svakim probnim pokretom. Tema se postavlja tako što se prvo uklanja medij za rast sa 12-bunara ploča ćelija. Zatim se ispitno jedinjenje nanosi u volumenu od 0,1 ml u bunare pri koncentraciji 2x. Virus, obično na približno 200 jedinica za formiranje plaka u volumenu od 0,1 ml, stavlja se u one bunare određene za virusnu infekciju. Medijum lišen virusa se nalazi u bunarima za kontrolu toksičnosti i ćelijske kontrolne bunare. Virusni kontrolni bunari se tretiraju slično virusu. Ploče se inkubiraju na 37 °C sa 5% CO2u trajanju od jednog sata. Inokulumi virusnihjedinjenja će biti uklonjeni, ćelije oprane i prekrivene sa 1,6% tragakantom razblaženim 1:1 sa 2Ks MEM-om i dopunjene sa 2KS% FBS i 1% penicilin/streptomicinom i dopunjene odgovarajućom koncentracijom leka. Ćelije će biti inkubirane na 37 °C sa 5% CO2u trajanju od 10 dana. Prekrivač se zatim uklanja i ploče obojene 0,05% kristalnom ljubičastom u 10% puferovanom formalinu približno dvadeset minuta na sobnoj temperaturi. Ploče se zatim operu, osuše i broje ploče. Broj plakova je u svakom skupu rastvora jedinjenja se pretvara u procenat u odnosu na netretiranu kontrolu virusa. 50% efektivne (EC50, virus-inhibitorne) koncentracije se zatim izračunavaju linearnom regresijom analizom.
[0229] Sekundarna ebola/NiPah virus test sa VIR komponentom. Sekundarni test podrazumeva sličnu metodologiju onome što je opisano u prethodnim paragrafima koristeći 12-bunarske ploče ćelija. Razlike su primećene u ovom odeljku. Osam polu-logio koncentracija inhibitora testirano je za antivirusnu aktivnost. Jedan pozitivan kontrolni lek se testira po seriji procenjenog jedinjenja. Za ovaj test, ćelije su zaražene virusom. Ćelije su zaražene kao što je gore opisano, ali ovaj put inkubiraju sa DMEM dopunjen sa 2% FBS i 1% penicilin/streptomicin i dopunjena odgovarajućom koncentracijom leka. Ćelije će biti inkubirane 10 dana na 37 °C sa 5% CO2, dnevno posmatrano pod mikroskopom za broj zelenih fluorescentnih ćelija. Alikvoti supernatanta iz zaraženih ćelija će se uzimati svakodnevno i tri replicirana bunara se udružuju. Objedinjeni supernatanti se zatim koriste za određivanje jedinjenja inhibitornog efekta na replikaciju virusa. Virus koji je repliciran u prisustvu test jedinjenja se titrira i upoređuje sa virusom iz netretiranih, inficiranih kontrola.
Za titraciju združenih virusnih uzoraka pripremiće se serijska desetostruka razređivanja i koristiti za zarazu svežih monol-slojeva ćelija. Ćelije su prekrivene tragakantom i određen broj plaketa. Ucrtavanje log10koncentracije inhibitora naspram log10virusa proizvedenog u svakoj koncentraciji omogućava izračunavanje 90% (jedan log10) efektivnu koncentraciju linearnom regresijom.
Primer 39.
Citoprotection test: na anti-dengue virus
[0230] Ćelijski preparat-BHK21 ćelije (sirijski zlatni hrčak bubrežne ćelije, ATCC katalog # CCL-I 0), Vero ćelije (afričke zelene ćelije bubrega majmuna, ATCC katalog# CCL-81) ili Huh-7 ćelije (karcinom humanog hepatocita) su prolazili u DMEM dopunjen sa 10% FBS, 2 mm L-glutamin,100 U/ml penicilina i 100 mg/ml streptomicin u T-75 bočicama pre upotrebe u antivirusnom testu. Na dan koji je prethodio testu, ćelije su podeljene 1:2 da bi se uverile da su u eksponencijalnoj fazi rasta u vreme infekcije. Ukupna ćelijska i održivost kvantifikacija izvršena je korišćenjem isključenja hemocitometra i Tripan Blue boje. Ćelijska održivost je veća od 95% za ćelije koje se koriste u testu. Ćelije su resuspendovane na 3 h 10<3>(5 x 10<5>za Vero ćelije i Huh-7 ćelije) ćelije po bunaru u medijumu kulture tkiva i dodane mikrotitarskim pločama sa ravnim dnom u zapremini od 100 ml. Ploče su inkubirane na 37 °C/ 5% C02preko noći kako bi se omogućilo pridržavanje ćelija. Primećeno je da su monoslojevi približno 70% konfluentni.
[0231] Priprema virusa Dengue tipa 2 Nova Gvineja C soj je dobijen iz ATCC (katalog# VR-1584) i uzgajan je u LLC-MK2 (Rezus majmun bubrežnih ćelija; katalog #CCL -7.1) ćelija za proizvodnju zaliha bazena virusa. Alikvot virusa koji je pretiteran u ćelijama BHK21 uklonjen je iz zamrzivača (-80 °C) i dozvoljeno da se polako odmrzne na sobnu temperaturu u biološkom sigurnosnom ormaru. Virus je resuspendovan i razblažen u testnom medijumu (DMEM dopunjen sa 2% toplotno inaktiviranim FBS, 2 mm L-glutamina, 100 U/ml penicilina i 100 mg/ml streptomicina) tako da je količina virusa dodata svakom bunaru u zapremini od 100 ml bila količina određena da prinosi 85 do 95% ćelijsko ubijanje na 6 dana posle infekcije.
[0232] Format ploče Svaka ploča sadrži ćelijske kontrolne bunare (samo ćelije), bunare kontrole virusa (ćelije plus virus), trostruki toksičnost lekova bunara po jedinjenju (ćelije plus lek samo), kao i trostruke eksperimentalne bunare (lek plus ćelije plus virus).
[0233] Efikasnost i toksičnost XTT nakon inkubacije na 37 °C u inkubatoru 5% CO2, test ploče su obojene tetrazolijumskom bojom XTT (2,3-bis (2-metoksi-4-nitro-5-sulfofenil) -5- [(fenilamino) karbonil] -2H-tetrazolijum hidroksid). XTT-tetrazolium je metabolisan mitohondrijalnim enzimima metabolički aktivnih ćelija do rastvorljivog formazan produkta, omogućavajući brzu kvantitativnu analizu inhibicije virusom indukovanog ćelijskog ubijanja antivirusnim test supstancama. XTT rastvor je pripremljen dnevno kao zaliha 1 mg/ml u RPMI 1640. Fenazin metosulfat (PMS) rastvor je pripremljen na 0,15 mg/ml u PBS i čuva u mraku na -20 °C. XTT/PMS zalihe su pripremljene neposredno pre upotrebe dodavanjem 40 ml PMS po ml XTT rastvora. Pedeset mikrolitara XTT/PMS je dodato u svaku bušotinu ploče i ploča je reinkubirana 4 sata na 37 °C. Ploče su zapečaćene lepljivom zaptivajućom pločom i potresene nežno ili obrnute nekoliko puta da se meša rastvorljivi formazan proizvod i ploča je čitana spektrofotometrijski na 450/650 nm sa Molekularni uređajima Vmax čitača ploča.
[0234] Analiza podataka -sirovi podaci su prikupljeni iz Softmax Pro 4.6 softvera i uvezeni u Microsoft Excel tabelu za analizu. Smanjenje procenta virusnog citopatskog efekta u odnosu na netretirane kontrole virusa izračunato je za svako jedinjenje. Vrednost kontrole ćelija procenata je izračunata za svako jedinjenje upoređujući lekovima tretirane neinficirane ćelije sa neinficiranim ćelijama samo u mediju.
Primer 40.
Anti-RSV Citoprotection test:
[0235] Priprema ćelije-HEP2 ćelije (humane epitelne ćelije, TCC katalog# CCL-23) su prolazili u DMEM dopunjen sa 10% FBS, 2 mm L-glutamin, 100 U/ml penicilina, 100 mg/ml streptomicin 1 mM natrijum piruvat i 0,1 mm NEAA, T-75 bočice pre upotrebe u antivirusnom testu. Na dan koji je prethodio testu, ćelije su podeljene 1:2 da bi se uverile da su u eksponencijalnoj fazi rasta u vreme infekcije. Ukupna ćelijska i održivost kvantifikacija izvršena je korišćenjem isključenja hemocitometra i Tripan Blue boje. Ćelijska održivost je veća od 95% za ćelije koje se koriste u testu. Ćelije su resuspendovane na 1 x 10<4>ćelije po bunaru u medijumu kulture tkiva i dodate mikrotiterskim pločama sa ravnim dnom u zapremini od 100 ml. Ploče su inkubirane na 37 °C/ 5% CO2preko noći kako bi se omogućila podrška ćelija. Priprema virusa -RSV soj Long i RSV soj 9320 dobijeni su iz ATCC (katalog# VR-26 i katalog #VR -955, respektivno) i uzgajani su u HEP2 ćelijama za proizvodnju zaliha bazena virusa. Izabrani alikvot virusa je uklonjen iz zamrzivača (-80 °C) i dozvoljeno da se polako otopi na sobnu temperaturu u biološkom sigurnosnom ormaru. Virus je resuspendovan i razblažen u test medijumu (DMem dopunjen sa 2% toplote inaktiviranim FBS, 2 mm L-glutamin, 100 U/ml penicilina, 100 mg/ml streptomicin, 1 mM natrijum piruvat i 0,1 mm NEAA) tako da je količina virusa dodata svakom bunaru u zapremini od 100 ml bila količina određena da da prinos od 85 do 95% ćelija izumrlih na 6 dana nakon infekcije. Efikasnost i toksičnost XTT-ploče su obojene i analizirane kao što je prethodno opisano za test denga citoprotekcije.
Primer 41.
Antivirusni test citoprotekcije na grip:
[0236] Priprema ćelija -lažne ćelije (pseće ćelije bubrega, ATCC katalog# CCL-34) je prošla kroz DMEM dopunjenih sa 10% FBS, 2 mm L-glutamina, 100 U/ml penicilina, 100 mg/ml streptomicina 1 mM natrijum piruvata i 0,1 mm NEAA, T-75 bočice pre upotrebe u antivirusnom testu. Na dan koji je prethodio testu, ćelije su podeljene 1:2 da se proveri da su u eksponencijalnoj fazi rasta u vreme infekcije. Ukupna ćelijska i održivost kvantifikacija izvršena je korišćenjem isključenja hemocitometra i Tripan Blue boje. Ćelijska održivost je veća od 95% za ćelije koje se koriste u testu. Ćelije su resuspendovane na 1 x 10<4>ćelije po bunaru u medijumu kulture tkiva i dodate mikrotitarskim pločama ravnog dna u zapremini od 100 µL. Ploče su inkubirane na 37 °C/ 5% CO2preko noći kako bi se omogućilo pridržavanje ćelija.
[0237] Preparacija virusa-Gripa A/PR/8/34 (A TCC #VR -95), A/CA/05/09 (CDC), A/NY/18/09 (CDC) i A/NWS/33 (ATCC #VR -219) sojevi su dobijeni iz ATCC ili iz Centra za kontrolu bolesti i uzgajani su u MDCK ćelijama za proizvodnju zaliha virusa bazena. Izabrani alikvot virusa je uklonjen iz zamrzivača (-80 °C) i dozvoljeno da se polako otopi na sobnu temperaturu u biološkom sigurnosnom ormaru. Virus je resuspendovan i razblažen u test medijum (DMEM dopunjen sa 0,5% BSA, 2 mm L-glutamin, 100 U/ml penicilina, 100 µg/ml streptomicin, 1 mM natrijum piruvat, 0,1 mm NEAA i 1 mg/ml TPCK-tretirani tripsin) tako da je količina virusa dodata svakom bunaru u zapremini od 100 mL bila određena količina da da prinos od 85 do 95% ćelija izumrlih na 4 dana nakon infekcije. Efikasnost i toksičnost XTT-ploče su obojene i analizirane kao što je prethodno opisano za test denga citoprotekcije.
Primer 42.
Anti-hepatitis C virus test:
[0238] Cell Culture -Reporter ćelija linija HUH-LUC/Neo-et je dobijen od dr Ralfa Bartenschlagera (Odeljenje za molekularnu virologiju, higijenski institut, Univerzitet u Hajdelbergu, Nemačka) od strane iQuest BioSCIences kroz određeni ugovor o licenciranju. Ova ćelijska linija ima uporno repliciranje I389Luc-Ubi-neo/NS3-3'/et replikon koji sadrži svitak luciferaze gene-ubikuitin-neomicin foshotransferaze fuzije proteina i EMCV IRES pogon NS3-5B HCV kodiranje sekvence koje sadrže ET tkiva kulture adaptivne mutacije (E1202G, Tl208G 1 i K1846T). Zaliha kultura Huh-Luc/Neo-et je proširena kulturom u DMEM dopunjen I 0% FCS, 2mm glutamin, penicilin (100 mU/ml) /streptomicinom (100 mg/ml) i I Ks neesencijalne aminokiseline plus 1 mg/ml G418. Ćelije su podeljene 1:4 i kultivirane za dva prolaza u istom mediju plus 250 mg/mL G418. Ćelije su tretirane tripsinom a njihov broj uvećan bojenjem tripan plavim i zasejane u ploče kulture tkiva 96 i na gustini kulture ćelija 7,5 x 10<3>ćelije po bunaru i inkubirane na 37 °C 5% CO2tokom 24 sata. Nakon 24 sata inkubacije, mediji je uklonjen i zamenjen sa istim medijima minus theG418 plus trostruka test jedinjenja. Šest bunara u svakoj ploči dobilo je samo medije kao kontrolu bez tretmana. Ćelije su inkubirane dodatnih 72 sata na 37 °C 5% CO2tada je anti-HCV aktivnost izmerena luciferazom krajnjom tačkom. Duplikatne ploče su tretirane i inkubirane paralelno radi procene ćelijske toksičnosti pomoću XTT bojenja.
[0239] Ćelijska održivosti- Monolaiers ćelijske kulture iz tretiranih ćelija su obojene tetrazolijumskom bojom XTT kako bi se procenila ćelijska održivost Huh-Luc/Neo-et reporter ćelijske linije u prisustvu jedinjenja.
[0240] Merenje replikacije virusa-HCV iz sistema za test replikona izmereno je aktivnošću luciferaze koristeći britelit plus luminescencijski reporter genski komplet prema uputstvima proizvođača (Perkin Elmer, Šelton, CT). Ukratko, jedna bočica britelita plus liofilizovanog supstrata je rastvorena u 10 ml bafera za rekonstituciju britelita i nežno pomešana inverzijom. Nakon 5 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi, britelit plus reagens je dodat na 96 bunara ploče na 100 µL po bunaru. Ploče su zapečaćene lepljivim filmom i inkubirane na sobnoj temperaturi oko 10 minuta da bi se ćelije lizale. Sadržaj bunara prebačen je na belu ploču od 96-bunara i luminiscencija je izmerena u roku od 15 minuta koristeći Vallac 1450Microbeta Triluk tečnost scintilacionog brojača. Podaci su uvezeni u prilagođenu tabelu Microsoft Ekcel 2007 za određivanje koncentracije 50% inhibicije virusa (EC50).
Primer 43.
Anti-Parainfluenzca-3 Citoprotection test:
[0241] Priprema ćelije- HEP2 ćelije (humane epitelne ćelije, ATCC katalog# CCL-23) su prolazili u DMEM dopunjen sa 10% FBS, 2 mm L-glutamin, 100 U/ml penicilina, 100 µg/ml streptomicin 1 mM natrijum piruvat i 0,1 mm NEAA, T-75 bočice pre upotrebe u antivirusnom testu. Na dan koji je prethodio testu, ćelije su podeljene 1:2 za osiguranje da su u eksponencijalnoj fazi rasta u vreme infekcije. Ukupna ćelijska i održivost kvantifikacija izvršena je korišćenjem isključenja hemocitometra i Tripan Blue boje. Ćelijska održivost je veća od 95% za ćelije koje se koriste u testu. Ćelije su resuspendovane na 1 x 10<4>ćelije po bunaru u medijumu kulture tkiva i dodate ravnim dnom mikrotiterskim pločama u zapremini od 100 ml. Ploče su inkubirane na 37 °C/ 5% CO2preko noći kako bi se omogućilo pridržavanje ćelija.
[0242] Priprema virusa - Parainfluence virus tipa 3 SF4 soj je dobijen iz ATCC (katalog# VR-281) i uzgajan je u HEP2 ćelijama za proizvodnju zaliha bazena virusa. Izabrani alikvot virusa je uklonjen iz zamrzivača (-80 °C) i dozvoljeno da se polako otopi na sobnu temperaturu u biološkom sigurnosnom ormaru. Virus je resuspendovan i razblažen u medijum za test (DMEM dopunjen 2% toplotno inaktiviranim FBS, 2 mm L-glutaminom, 100 U/ml penicilina i 100 µg/ml streptomicina) tako da je količina virusa dodata svakom bunaru u zapremini od 100 ml bila količina određena da prinosi 85 do 95% ćelijsko ubijanje na 6 dana posle infekcije.
1
[0243] Format ploče - Svaka ploča sadrži ćelijske kontrole bunara (samo ćelije), kontrola virusa bunara (ćelije plus virus), trostruki lek toksičnost bunara po jedinjenju ( samo ćelije plus lek), kao i trostruki eksperimentalni bunari (lek plus ćelije plus virus). Efikasnost i toksičnost XTT nakon inkubacije na 37 °C u inkubatoru 5% CO2, test ploče su obojene tetrazolijumskom bojom XTT (2,3-bis (2-metoksi-4-nitro-5-sulfofenil) -5- [(fenilamino) karbonil] -2H-tetrazol hidroksid). XTT tetrazolium je metabolisan mitohondrijalnim enzimima metabolički aktivnih ćelija do rastvorljivog formazan produkta, omogućavajući brzu kvantitativnu analizu inhibicije virusom indukovanih ćelija ubijanje antivirusnih test supstanci. XTT rastvor je pripremljen dnevno kao zaliha 1mg/ml u RPMI1640. Fenazin metosulfat (PMS) rastvor je pripremljen na 0,15 mg/ml u PBS i čuva u mraku na - 20 °C. XTT/PMS Stock je pripremljen neposredno pre upotrebe dodavanjem 40 µL PMS po ml XTT rastvora. Pedeset mikrolitara XTT/PMS je dodato u svaku bušotinu ploče i ploča je reinkubirana 4 sata na 3 7 °C. Ploče su zapečaćene lepljivom zaptivajućom pločom i potresene nežno ili obrnute nekoliko puta da bi se mešao rastvorljivi fomlazan proizvod i ploča je čitana spektrofotometrijski na 450/650 nm sa Molekularni uređaji čitača.Vmax ploča
[0244] Analiza podataka - sirovi podaci su prikupljeni iz Softmax Pro 4.6 softvera i uvezeni u Microsoft Ekcel tabelu za analizu. Smanjenje procenta virusnog citopatskog efekta u odnosu na netretirane kontrole virusa izračunato je za svako jedinjenje. Vrednost kontrole ćelija procenata je izračunata za svako jedinjenje upoređujući lekovima tretirane neinficirane ćelije sa neinficiranim ćelijama samo u mediju.
Primer 44.
Test inhibicije polimeraze gripe:
[0245] Preparati virusa - Prečišćeni virus gripa A/PR/8/34 (1 ml) dobijen je iz Advanced Biotehnologije, Inc. (Kolumbija, MD), odmrznuti i ispušteni u pet alikvota za skladištenje na -80 °C do upotrebe. Na dan postavljanja testa, 20 µL od 2,5% Triton N-101 je dodato 180 mL prečišćenog virusa. Poremećeni virus je razblažen 1:2 u rastvoru koji sadrži 0,25% Triton i PBS. Poremećaj je obezbedio izvor gripa ribonukleoproteina (RNP) koji sadrži RNK polimerazu i šablon RNK zavisnu RNK. Uzorci su čuvani na ledu do upotrebe u testu.
2
[0246] Reakcija polimeraze - Svaka reakcija polimeraze od 50 mL sadržavala je sledeće: 5 mL poremećenog RNP, 100 mm Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 5 mM MgCl2.1 mM ditiotreitol, 0,25% Triton N-101, 5 µCi od [α-<32>P] GTP, 100 µM ATP, po 50 µM (CTP, UTP), 1 mm GTP i 200 mM adenil (3'-5') gvanozin. Za testiranje inhibitora, reakcije su sadržale inhibitor i isto je urađeno za reakcije koje sadrže pozitivnu kontrolu (2'-deoksi-2'-fluoroguanozin-5'-trifosfat). Ostale kontrole su uključivale RNP reakcijsku mešavinu i RNP I% DMSO. Reakciona smeša bez apG prajmera i NTP inkubirana je na 30 °C 20 minuta. Kada su ApG i NTP dodani u reakcijsku smešu, uzorci su inkubirani na 30 °C tokom 1 sat, a zatim odmah nakon čega sledi prenos reakcije na filterske ploče od staklenih vlakana i naknadno padavina sa 10% triklorosirćetne kiseline (TCA). Ploča je zatim isprana pet puta sa 5% TCA nakon čega sledi jedno pranje sa 95% etanola. Kada se filter osuši, ugrađivanje [α-<32>P] GTP je izmereno pomoću tečnog scintilacionog brojača (Micro beta).
[0247] Format ploče - Svaki test ploča sadrži tri uzorka tri jedinjenja (6 koncentracije) pored trostrukih uzoraka RNP reakcijske smeše (RNP sama), RNP 1% DMSO i reakcijske mešavine sama (bez RNP).
[0248] Analiza podataka - Sirovi podaci prikupljeni su iz Micro Beta scintilacionog brojača. Ugrađivanje radioaktivnog GTP-a je u direktno j vezisa nivoima aktivnosti polimeraze. 'Vrednosti inhibicije procenata“ dobijene su deljenjem srednje vrednosti svakog ispitnog jedinjenja pomoću RNP 1% DMSO kontrole. Sredina dobijena pri svakoj koncentraciji 2DFGTP upoređena je sa kontrolom reakcije RNP . Podaci su zatim uvezeni u Microsoft Ekcel tabelu za izračunavanje vrednosti IC50linearnom regresijom analizom.
Primer 45.
Test inhibicije polimeraze HCV:
[0249] Aktivnost jedinjenja za inhibiciju HCV polimeraze je procenjena korišćenjem prethodno opisanih metoda (Lam eta!. 2010. Antimikrobni agensi i hemoterapija 54 (8) :3187-3196). HCV NS5B polimeraze testovi su vršeni u 20 mL zapremine u 96 dobro reakcionih ploča. Svaka reakcija sadrži 40 ng/ml prečišćeni rekombinantni NS5BΔ22 genotipe-lb polimeraze, 20 ng/ml HCV genotip-lb besplatan IRES šablon, 1 mM svakog od četiri prirodna ribonukleotida, 1 U/ml Optizim RNAse inhibitor (Promega, Medison, VI), 1 mm MgCl2, 0.75 mM MnCl2i 2 mM ditiotreitol (DTT) u 50 mM HEPES bafer (pH 7.5). Reakcijske smeše su sastavljene na ledu u dva koraka. Korak 1 se sastojao od kombinovanja svih reakcionih komponenti osim prirodnih nukleotida i označenih UTP u reakcionoj smeši polimeraze. Deset mikrolitara (10 mL) smeše polimeraze je ispušteno u pojedinačne bunare 96 i reakcijske ploče na ledu. Reakcijske smeše polimeraze polimeraze bez NS5B polimeraze su bile uključene kao bez kontrola enzima. Serijska halflogaritamska razređenja testnih i kontrolnih jedinjenja, 2'-O-metil-CTP i 2'-O-metil-GTP (Trilink, San Dijego, CA), pripremljeni su u vodi i 5 ml serijskih razređenih jedinjenja ili samo vode (bez kontrole jedinjenja) su dodani u bunare koji sadrže smešu polimeraze. Pet mikrolitara nukleotidne mešavine (prirodni nukleotidi i označeni UTP) je zatim dodato bunarima reakcijske ploče i ploča je inkubirana na 27 °C u trajanju od 30 minuta. Reakcije su ugašene dodatkom 80mL stop rastvora (12,5 mM EDTA, 2.25 M NaCl i 225 mM natrijum citrata) i RNK proizvodi su primenjeni na Hibond-N+ membranu (GE Healthcare, Piscatavai, N.J) pod vakuumskim pritiskom pomoću tačke blot aparata. Membrana je uklonjena iz aparata dot blot i oprana četiri puta sa 4Ks SSC (0,6 M NaCl i 60 mM natrijum citrat), a zatim isprati jednom vodom i jednom sa 100% etanolom. Membrana je vazduh osušena i izložena fosfoimaging ekranu i slika snimljena pomoću Tajfun 8600 fosfo imager. Nakon snimanja slike, membrana je postavljena u Mikro beta kasetu zajedno sa scintilacionom tečnošću i CPM u svakoj reakciji je računao na Micro beta 1450. CPM podaci su uvezeni u prilagođenu Ekcel tabelu za određivanje jedinjenja IC50s.
Primer 46.
NS5B RNA-zavisni uslovi reakcije RNK polimeraze
[0250] Jedinjenja su testirani za inhibiciju NS5B-Δ21 iz HCV GT-1b Con-1. Reakcije su uključene prečišćeni rekombinantni enzim, 1 U/ml negativnog lanca HCV IRES RNK šablon i 1mm NTP supstrata uključujući ili [<32>P] -CTP ili [<32>P] -UTP. Teške ploče su inkubirane na 27 °C 1 sat pre gašenja. [<32>P] inkorporiranje u makromolekularni proizvod procenjeno je vezivanjem filtera.
Primer 47.
Test inhibicije polimeraze Humane DNK:
4
[0251] Ljudska DNK polimeraza alfa (katalog# 1075), beta (katalog# 1077) i gama (katalog# 1076) su kupljeni od ChimerX (Madison, VI). Inhibicija aktivnosti beta i gama DNK polimeraze je testirana u mikrotiterskim pločama u reakcijskoj mešavini 50 ul koja sadrži 50 mM Tris-HCl (pH 8.7), KCl (10 mM za beta i 100mm za gama), 10 mM MgCl2, 0.4 mg/ml BSA, 1 mm DTT, 15% glicerol, 0.05 mM DCTP, DTP i p, 10 uCI [<32>P] -alfaDGTP (800 CI/mmol), 20 ug aktiviran teleta timus DNK i test jedinjenje u naznačenim koncentracijama. Alfa DNK polimerazna reakciona smeša je bila sledeća u zapremini od 50 ul po uzorku: 20mm Tris-HCl (pH 8), 5 mM magnezijum acetat, 0,3 mg/mL BSA, 1 mm DTT, 0.1 mM spermin, 0.05 mM DCTP, DTTP i DaTP, 10 UCI [<32>P] -alfa-DGTP (800 Ci/mmol), 20 ug aktiviran tele timus DNK i test jedinjenje u naznačenim koncentracijama. Za svaki test, enzimskim reakcijama je dozvoljeno da se nastavi 30 minuta na 37 °C nakon čega sledi prenos na filterske ploče od staklenih vlakana i naknadne padavine sa 10% triklorosirćetne kiseline (TCA). Ploča je zatim oprana sa 5% TCA nakon čega sledi jedno pranje sa 95% etanolom. Kada se filter osuši, ugrađivanje radioaktivnosti je mereno pomoću tečnog scintilacionog brojača (Microbeta).
Primer 48.
HIV inficirani PBMC test:
[0252] Sveže humane mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMCs) dobijene su iz komercijalnog izvora (Biological Specialty) i utvrđeno je da budu seronegativne za HIV i HBV. U zavisnosti od zapremine primljene krvi donora, leukoforezovane krvne ćelije su nekoliko puta oprane sa PBS. Nakon pranja, leukoforezovana krv je razblažena 1:1 sa Dulbeckovim fosfatnim puferom (PBS) i slojevito preko 15mL gradijenta gustine Ficoll-Hypaque u 50ml konusnoj epruveti za centrifugu. Ove cevi su centrifugirane za 30 min na 600g. Vezani PBMCS su nežno aspirirani iz dobijenog interfejsa i oprani tri puta sa PBS. Nakon završnog pranja, broj ćelije je određen isključenjem Tripan Blue boje i ćelije su ponovo suspendovane na 1 x 10^6 ćelija/ml u RPMI 1640 sa 15% fetalnog goveđeg seruma (FBS), 2 mmol/L L-glutamina, 2 UG/ml PHA-P, 100 U/ml penicilina i 100 UG/ml streptomicina i ostavi da inkubira 48-72 sata na 37 °C. Posle inkubacije, PBMCs su centrifugirani i resuspendovan u medijumu kulture tkiva. Kulture su održavane do upotrebe od strane poluobima kulture promena sa svežim IL-2 koji sadrži medijum kulture tkiva svaka 3 dana. Testovi su inicirani sa PBMCs u 72 sati nakon PHA-P stimulacije.
[0253] Da bi se smanjili efekti usled varijabilnosti donora, PBMC-ovi zaposleni u testu bili su mešavina ćelija izvedenih od 3 donatora. Neposredno pre upotrebe, ciljne ćelije su resuspendovane u medijumu kulture svežeg tkiva na 1 x 10^6 ćelija/ml i obložene u unutrašnjim bunarima mikrotitarske ploče od 96-bunara okruglog dna na 50 UL/dobro. Zatim, 100 ul 2Ks koncentracija medijuma koji sadrži jedinjenje-prebačeno je na 96-bunarsku ploču koja sadrži ćelije u 50 ul medija. AZT je bio korišćen kao interni standard za test.
[0254] Nakon dodavanja testa jedinjenja u bunare, dodato je 50 ul unapred određenog razređivanja HIV virusa (pripremljenog od 4Ks konačne željene koncentracije u bunaru) i dobro se meša. Za infekciju, 50-150 TCID50svakog virusa je dodato po bunaru (konačni MOI približno 0.002). PBMC-ovi su bili izloženi u triplikatu virusu i kultivirani u prisustvu ili odsustvu ispitnog materijala pri različitim koncentracijama kao što je gore opisano u mikrotitornim pločama 96 bušotina. Nakon 7 dana u kulturi, replikacija HIV-1 kvantifikovana je u supernatantu tkivne kulture merenjem aktivnosti reverzne transkriptaze (rt). Bunari sa ćelijama i virusom su služili samo kao kontrole virusa. Odvojene ploče su identično pripremljene bez virusa za studije citotoksičnosti lekova.
[0255] Reverzna transkriptaza aktivnost testa - Aktivnost obrnute transkriptaze merena je u supernatantima bez ćelija korišćenjem standardnog testa polimerizacije radioaktivne inkorporacije. Tritirani timidin trifosfat (TTP; Nju England Nuclear) je kupljen na 1 CI/ml i 1 ul je korišćen po enzimskoj reakciji. Rastvor RADT je pripremljen mešanjem 0.5mg/mL poli Rai 1.7 U/ml oligo dT u destilovanoj vodi i čuva se na -20 °C. rt reakcija bafer je pripremljen sveže dnevno i sastoji se od 125 ul od 1 mol/l EGTA, 125 ul od dH2O, 125 ul od 20% Triton Ks-100, 50 ul od 1 mol/l Tris (pH 7.4), 50 ul od 1 mol/L DTT i 40 ul od 1 mol/L MgCl2. Za svaku reakciju, mešani su 1 ul TTP, 4 ul dH2O, 2,5 ul RADT i 2,5 ul reakcionog bafera. Deset mikrolitara ove reakcijske smeše stavljeno je u okruglo dno mikrotitarske ploče i dodato je 15 ul supernatanta koji sadrži virus i mešano. Ploča je inkubirana na 37 °C u vlažnom inkubatoru 90 minuta. Nakon inkubacije, 10 ul zapremine reakcije uočeno je na DEAE filter mat u odgovarajućem formatu ploče, opran 5 puta (5 minuta svaki) u 5% natrijum fosfatnom puferu, 2 puta (1 minut svaki) u destilovanoj vodi, 2 puta (1 minut svaki) u 70% etanolu, a zatim se osušio vazduh. Osušeni filtermat je postavljen u plastičnu rukav i 4 mL Opti-Fluor O je dodato u cev. količina udružene radioaktivnosti je određena koristeći Vallac 1450 Microbeta Triluk tečnost scintilacija brojač.
Primer 49.
HBV:
[0256] HepG2.2.15 ćelije (100mL) u RPMI1640 medijumu sa 10% fetalnog goveđeg seruma je dodat u sve bunarske ploče vel 96 na gustini od 1 x 10<4>ćelija po bunaru i ploča je inkubirana na 37 °C u okruženju od 5% CO2tokom 24 sata. Nakon inkubacije, šest desetostrukih serijskih rastvora ispitnog jedinjenja pripremljenog u RPMI1640 medijumu sa 10% fetalnog goveđeg seruma dodato je u pojedinačne bunarske ploče u trioplikatu. Šest bunara u ploči dobilo je samo medij kao virus samo kontrolu. Ploča je inkubirana 6 dana na 37 °C u okruženju od 5% CO2. Kulturni medijum je promenjen 3. dana sa medijumom koji sadrži naznačenu koncentraciju svakog jedinjenja. Stotinu mikrolitara supernatanta prikupljeno je iz svakog bunara za analizu virusne DNK pomoću KPCR a citotoksičnost je procenjena XTT bojenjem monolajera ćelijske kulture šestog dana.
[0257] Deset mikrolitra supernatant ćelijske kulture prikupljenih šestog dana je razblažen u KPCR razblaživanje bafera (40mg/ml striže losos sperma DNK) i kuvano 15 minuta. PCR u kvantitativno realnom vremenu je izveden u 386 i pločama korišćenjem Applied Biosistems 7900HT Secection Detection System i podržava SDS 2.4 softver. Pet mikrolitara (5 mL) kuvane DNK za svaki uzorak i serijska 10-struka razblaživanja kvantitativnog DNK standarda su podvrgnuti realnom vremenu Q-PCR koristeći Platinum kvantitativni PCR Supermik-UDG (Invitrogen) i specifični DNK oligonukleotidni prajmeri (IDT, Coralville, ID) HBV-AD38-KF1 (5'-CCGTCT GCCT TCT CAT CTG-3' ), HBV-AD38-KR1 (5'-AGT CCA AGA GTI CTC TTA TRY AAG ACC TT-3') i HBV-AD38-KP1 (5'-FAM CCG TGT GCA /ZEN/CTT CGC TTC ACC TCT GC3'BHK1) pri konačnoj koncentraciji od 0,2 mm za svaki prajmer u ukupnoj zapremini reakcije od 15 mL. Broj kopije HBV DNK u svakom uzorku interpoliran je iz standardne krive softverom SDS.24 i podaci su uvezeni u Excel tabelu za analizu.
[0258] 50% citotoksična koncentracija za ispitne materijale izvedena je merenjem redukcije tetrazolijumske boje XTT u obrađenim pločama kulture tkiva. XTT se metaboliše pomoću mitohondrijalnog enzima NADPH oksidaze do rastvorljivog formazana produkta u metabolički aktivnim ćelijama. XTT rastvor je pripremljen dnevno kao zaliha mg/ml u PBS. Fenazin metosulfat (PMS) Stock rastvor je pripremljen na 0,15 mg/ml u PBS i čuva u mraku na -20 °C. XTT/PMS rastvor je pripremljen neposredno pre upotrebe dodavanjem 40 ml PMS po 1 ml XTT rastvora. Pedeset mikrolitara XTT/PMS je dodato u svaku bušotinu ploče i ploča inkubirana 2-4 sata na 37 °C. Inkubacija od 2-4 sata empirijski je određena da je u opsegu linearnog odgovora za smanjenje XTT boje sa naznačenim brojevima ćelija za svaki test. Lepljive ploče zaptivači su korišćene umesto poklopaca, zapečaćena ploča je obrnuta nekoliko puta da se meša rastvorljivi formazan proizvod i ploča je pročitana na 450 nm (referentna talasna dužina 650 nm) sa molekularnim uređajima SpectraMak Plus 384 spektrofotometrom. Podaci su prikupljeni softverom Softmax 4.6 i 10 uvezeni u Ekcel tabelu za analizu.
Primer 50.
Denga RNA-zavisni uslovi reakcije RNK polimeraze
[0259] RNK test polimeraze je izvršen na 30 °C korišćenjem 100ml reakcione mešavine u 1.5ml epruveti. Konačni uslovi reakcije bili su 50mm Hepes (pH 7,0), 2mm DTT, IMM MnCl2, 10mm KCl, 100nm UTR-poli A (samozarenje prajmer), 10mm UTP, 26nm rDRP enzim. Reakciona mešavina sa različitim jedinjenjima (inhibitorima) inkubirana je na 30 °C tokom 1 sata. Da bi se procenila količina pirofosfata generisanog tokom reakcije polimeraze, 30ml reakcijske mešavine polimeraze je pomešano sa mešavinom reakcije luciferaze par-enzimske reakcije (70ml). Konačni uslovi reakcije reakcije luciferaze bili su 5mm MgCl2, 50mm Tris-HCl (pH 7.5), 150mm NaCl, 200Mu ATP sulfurilaza, 5mm APS, 10nm Luciferaza, 100mm D-luciferin. Bele ploče koje sadrže uzorke reakcije (100ml) odmah su prenesene na luminometar Veritas (Turner Biosistems, CA) za detekciju svetlosnog signala.
Primer 51.
Postupak za ćelijsku inkubaciju i analizu
[0260] Huh-7 ćelije su zasejane na 0,5k10^6 ćelija/dobro u 1 mL kompletnih medija u 12 dobro tkiva kulture tretiranih ploča. Dozvoljeno da se ćelije drže preko noći na 37°/ 5% CO2. Zaliha rastvora od 40 mM ispitnog proizvoda pripremljena je u 100% DMSO. Iz zalihe rastvora od 40 mM pripremljeno je 20 mM rastvora ispitnog proizvoda u 25 ml kompletnog DMEM medija. Za tretiranje jedinjenja, medij je aspiriran iz bunara i 1 mL rastvora 20 mM je dodat u kompletnim DMEM medijima u odgovarajuće bunare. Pripremljena je i zasebna ploča ćelija sa „ne“ dodatkom jedinjenja. Ploče su inkubirane na 37°/ 5% CO2za sledeće vremenske tačke: 1, 3, 6 i 24 staa. Nakon inkubacije u željenim vremenskim tačkama, ćelije su oprane 2Ks sa 1 mL DPBS. Ćelije su ekstrahovane dodavanjem 500 ml 70% metanol/ 30% vode šiljcima sa unutrašnjim standardom svakom dobro tretiranom ispitnim proizvodom. Neobrađena prazna ploča je ekstrahovana sa 500 ul 70% metanol/ 30% vode po bunaru. Uzorci su centrifugirani na 16.000 o/min u trajanju od 10 minuta na 4 °C. Uzorci su analizirani LC-MS/MS pomoću ABSCIEX 5500 KTrapp LC-MS/MS sistema sa kolonom Hipercarb (PGC).
Primer 52:
Postupak za farmakokinetički eksperiment glodara
[0261] DBA-1J miševi (6-8 nedelja stari, ženski) su aklimatirani ≥ 2 dana nakon prijema. Miševi su težili dan pre doziranja za izračunavanje zapremine doziranja. Miševi su dozirani oralnim gavage sa lekom na 30 mg/kg, 100 mg/kg & 300 mg/kg. Miševi su uzorkovani u 8 vremenskih tačaka: 0,5, 1, 2, 3, 4, 8 i 24 sata (3 miševa po vremenskoj tački za test lek). Miševi su eutanazovani i njihovi organi su sakupljeni (vidi dole). U cilju prikupljanja krvi, eutanazovani miševi sa CO2u odgovarajućoj vremenskoj tački navedenoj gore. Krv je dobijena srčanom punkcijom (0,3 ml) u svakoj vremenskoj tački. Nakon prikupljanja krvi, organi su uklonjeni iz miševa (vidi dole). Krv je obrađena invertiranjem Liheparinske cevi krvlju nežno 2 ili 3 puta da se dobro meša. Cevi su zatim stavljene u stalak u ledenoj vodi dok nisu mogli centrifugirati (≤ 1 sat). Čim je bio moguće, krv je centrifugirana na ~ 2000 x g za 10 min u frižidnoj centrifugi da bi se dobila plazma. Zatim, koristeći pipetu od 200 mL, plazma je prebačena u oznaku 1,5 ml Eppendorfove cevi u ledenoj vodi. Plazma je zatim zamrznuta u zamrzivaču ili na suvom ledu. Uzorci su uskladišteni na -80 °C pre analize. Organi su prikupljeni od eutanazovanih miševa. Organi (pluća, jetra, bubreg, slezina i srce) su uklonjeni, postavljeni u cev i odmah zamrznuti u tečnom azotu. Cevi su zatim prebačene na suvi led. Uzorci su sačuvani u bočicama kriogenih tkiva. Uzorci su analizirani LC-MS/MS pomoću ABSCIEKS 5500 KTrapp LC-MS/MS sistema sa kolonom Hipercarb (PGC).
Farmakokinetički parametri:
[0262]
Tmaknakon oralnog doziranja je 0,25 - 0.5h
• Cmakssa 3.0, 7.7 i 11.7 ng/ml posle PO doziranja sa 30, 100 i 300 mg/kg;
• Bioraspoloživost (naspram I.P. isporuke) je 65% na 30 mg/kg i 39 -46% pri 100 i 300 mg/kg PO doziranja;
• EIDD-1931 plazma T1/2je 2.2 h posle IV doziranja i 4.1-4.7 sati nakon PO doziranja
• Posle 300 mg/kg P.O. doze, 24 časni nivoi plazme su ~0.4 mM; ~ 0.1 mM nakon 100 mg/kg doze
Primer 53:
Protokol za mišji model infekcije Čikungunja
[0263] C57BL-6J miševi su injektirani sa100 pfus CHIK virusom u podnožju. Testne grupe su se sastojale od jedinstvene i netretirane grupe, zaražene i netretirane grupe, zaražene grupe koja prima visoku dozu 35 mg/kg i.p. od EIDD01931 i zaražene grupe koja prima nisku dozu od 25 mg/kg i.p. od EIDD-01931. Dve test grupe koje primaju EIDD01931 dobila jedinjenje 12 sati pre izazova, a zatim dnevno za 7 dana. Nožni jatučići su procenjeni za zapaljenje (debljina šape) dnevno tokom 7 dana. CHIK virus indukovan artritis (histologija) je procenjen u zglobovima koristeći PCR nakon 7 dana.
Primer 54:
1
N (4) -hidroksicitidin za profilaksu i lečenje alfavirusnih infekcija
[0264] Testiranje aktivnosti u modelima infekcije Vero ćelija citopatskog efekta (CPE) pokazalo je da ribonukleozidni analog N (4) -hidroksicitidin (EIDD-01931) ima aktivnost protiv Rosa reke, EEE, VEE, VEE i CHIK virusa sa EC50 vrednostima od 2,45 mM, 1,08 mM, 1,36 mM, 1,00 mm i 1,28 mm, respektivno. Profil citotoksičnosti jedinjenja je prihvatljiv, sa indeksima selektivnosti u rasponu od niskog od 8 u CEM ćelijama do visokih 232 u Huh7 (jetri) ćelijama.
Primer 55:
[0265] S obzirom da se visoki titri VEE virusa mogu razviti u mozgu u roku od nekoliko sati od ekspozicije aerosola, poželjno je antivirusno sredstvo direktnog delovanja ako je u stanju da brzo postigne terapijske nivoe leka u mozgu. Pilot farmakokinetička studija sprovedena je kod muških SD pacova doziranih oralnim gavažom sa 5 i 50 mg/kg EIDD-01931, da bi se utvrdili farmakokinetički parametri i profil distribucije tkiva jedinjenja u ključne organske sisteme, uključujući mozak. EIDD-01931 je oralno dostupan i doza proporcionalna sa izračunatom bioraspoloživosti (%F) od 28%. Uzorci organa (mozak, pluća, slezina, bubreg i jetra) prikupljeni su u 2,5 i 24-časovne post-doze iz grupe doza 50 mg/kg. EIDD-01931 je dobro raspoređena u sva tkiva testirana; posebno napomena, lako se distribuira u moždano tkivo na terapijskim nivoima leka, na osnovu procena iz ćelijskih podataka. Jednom u mozgu, EIDD-01931 je brzo metabolisan u svoj aktivni 5'-trifosfat oblik da bi se nivo mozga 526 i 135 ng/g u 2,5 i 24 sati, respektivno. Čak i nakon 24 sata nivoa EIDD-01931 i njegovog 5'-trifosfata u mozgu su značajni, što ukazuje na to da oralno doziranje jednom dnevno može biti adekvatno za lečenje.
[0266] Alternativno, isporuka lekova aerosolom (nazalni sprej) primenom može odmah postići terapeutske nivoe leka u nosnoj sluzokoži i mozgu. EIDD-01931 ima prihvatljiv toksikološki profil nakon 6 dana q.d. intraperitonealnih (IP) injekcija kod miševa, sa NOEL (NO Effect Level) da bude 33 mg/kg; gubitak težine je primećen pri najvišoj dozi testiranoj (100 mg/kg), koji je obrnut na prestanak doziranja.
Primer 56:
1 1
[0267] Nekoliko derivata EIDD-01931 pokazalo je antivirusnu aktivnost u skriningu protiv različitih virusa. Podaci o aktivnostima prikazani su u tabelama ispod.
1 2
1
14
1
1
Primer 57: Jedinjenja skenirana u testu CHIKV CPE [0268]
1
Primer 58:
Jedinjenja skenirana u testu CHIKV CPE
[0269]
Primer 59:
1
Jedinjenja skenirana u CHIKV CPE testu
[0270]
1
Primer 60:
[0271]
Primer 61:
11
Primer 62:
[0273]
11

Claims (15)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Farmaceutska smeša koja sadrži farmaceutski prihvatljivu ekscipijent i jedinjenje sa Formulom I
    ili njihove soli, pri čemu Q-R<7>je OH, W je O; X je CH2, ChMe, CMe2, CHF, CF2ili CD2; Y je N ili CR“; Z je N ili CR“; svaki R“ je nezavisno izabran iz H, D, F, Cl, Br, I, CH3,CD3,CF3, alkil, acil, alkenil, alkinil, hidroksil, formil ili SCH3; R<1>je
    halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, esteril, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, fosforamidil, pri čemu je R<1>opciono sa jednim ili više isti ili različit, R<20>; Y<1>je O ili S; Y<2>je OH, OR<12>, oalkil ili BH3-M<+>; 11 R<2>je vodonik, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril, azido ili heterociklil, gde je 25 u R<2>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<3>je vodonik, hidroksi, alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili, pri čemu je R<3>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<4>je vodonik, hidroksi, alkil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<4>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<5>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu R<5>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<6>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, etinil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociksifonil, karbociksifonil il, aril ili heterociklil, pri čemu je R<6>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<8>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, benziloksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<8>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<9>je vodonik, metil, etil, tert-butil, alkil, (C6-C16)alkil, (C6-C22)alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, cikloalkil, alkoksi, alkiltio, 11 alkilamino, (l)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<9>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<10>je vodonik, alkil, razgranati alkil, cikloalkil, lipid, metil, etil, izopropil, ciklopentil, cikloheksil, butil, pentil, heksil, neopentil, benzil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, pri čemu je R<10>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<11>je vodonik, deuterijum, alkil, metil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<11>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<12>je vodonik, alkil, aril, fenil, 1-naftil, 2-naftil, aromatski, heteroaromatski, 4-supstituisani fenil, 4fluorofenil, 4-hlorofenil, 4-bromofenil, naftil ili heterociklil, pri čemu je R<12>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<13>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkililsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<13>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<14>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil,pri čemu je R<14>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<20>je deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbo cikil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<20>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<21>; i R<21>je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, 11 N-metil-N-etilamino, acetilamino, N-metilkarbamoil, N-etilkarbamoil, N, N-dimetil karbamoil, N, N-dietilkarbamoil, N-metil-N-etilkarbamoil,, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metilsulfamoil, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbociklil, aril ili heterociklil.
  2. 2. Farmaceutska smeša patentnog zahteva 1, pri čemu je R<1>
    R<8>je vodonik, hidroksi ili benziloksi i R<9>je (C6-C22) alkil.
  3. 3. Farmaceutska smeša patentnog zahteva 1, pri čemu jedinjenje je izopropil (((3,4-dihidroksi-5- (4- (hidroksiamino) -2-oksopirimidin-1 (2H)il)tetrahidrofuran-2-il) metoksi) (fenoksi)fosforil) alaninat.
  4. 4. Farmaceutska smeša patentnog zahteva 1 pri čemu jedinjenje formule I ima Formulu IE,
    ili soli, pri čemu Q-R<7>je OH, W je O; 11 X je CH2, CHMe, CMe2, CHF, CF2ili CD2; je N ili CR“; Z je N ili CR“; svaki R“ je nezavisno izabran od H, D, F, Cl, Br, I, CH3, CD3, CF3, alkil, acil, alkenil, alkinil, hidroksil, formil ili SCH3; R<2>je vodonik, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril, azido ili heterociklil, pri čemu je R<2>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<3>je vodonik, hidroksi, alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterocikli, pri čemu je R<3>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<4>je vodonik, hidroksi, alkil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<4>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<5>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil , arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<5>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<6>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, etinil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, 11 alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<6>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<15>je vodonik, - (C=O)Oalkil, - (C=O)alkil, - (C=O)NHalkil, - (C=O)N-dialkil, -(C=O)Salkil, hidroksi, alkoksi, alkil, (C6-C16)alkil, (C6-C22)alkil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio , alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<15>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<15'>je vodonik, - (C=O) Oalkil, - (C=O) alkil, - (C=O) nhalkil, - (C=O) N-dialkil, -(C=O) salkil, hidroksi, alkoksi, alkil, (C6-C16) alkil, (C6-C22) alkil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbocikl, aril ili heterociklil, pri čemu je svaki R<15'>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<15>i R<15'>mogu da formiraju prsten koji je opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<20>je deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<20>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<21>; i R<21>je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, N-metilin-n-etilamino, acetilamino,N-metilkarbamoil, N-etilkarbamoil, N, N-dimetilkarbamoil, N, N-dietilkarbamoil, N-metil-N-etilkarbamoil, metiltio, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metilsulfamoil, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsul30famoil, N, N-dietilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbociklil, aril ili heterociklil.
  5. 5. Farmaceutska smeša koja sadrži farmaceutski prihvatljivu ekscipijent i jedinjenje koje ima Formulu II, 12
    Formula II ili sol, pri čemu Q-R<7>je OH, W je O; X je CH2ili O; Y je N ili CR“; Z je N ili CR“; svaki R“ je nezavisno izabran od H, D, F, Cl, Br, I, CH3, CD3, CF3, alkil, acil, alkenil, alkinil, hidroksil, formil ili SCH3; R<1>je monofosfat, difosfat, trifosfat,
    Y<1>je O ili S; Y<2>je OH, OR<12>, OAlkil ili BH3-M<+>; Y<3>je OH ili BH3-M<+>; R<2>je vodonik, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril, azido ili heterociklil, pri čemu je R<2>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<3>je vodonik, hidroksi, alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<3>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<4>je vodonik, hidroksi, alkil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<4>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<5>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil , arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<5>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<6>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, etinil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<6>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<8>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, benziloksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<8>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; 12 R<9>je vodonik, metil, etil, tert-butil, alkil, (C6-C16)alkil, (C6-C22)alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, cikloalkil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkyl)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<9>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<10>je vodonik, alkil, razgranati alkil, cikloalkil, lipid, metil, etil, izopropil, ciklopentil, cikloheksil, butil, pentil, heksil, neopentil, benzil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<10>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<11>je vodonik, deuterijum, alkil, metil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<11>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<12>je vodonik, alkil, aril, fenil, 1-naftil, 2-naftil, aromatski, heteroaromatski, 4-supstituisani fenil, 4-fluorofenil, 4-hlorofenil, 4-bromofenil, naftil ili heterociklil, pri čemu je R<12>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<13>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<13>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<14>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<14>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<20>je deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<20>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih i R<21>i R<21>je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metil, acetoksi, metil, metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, N-metil-N-etilamino, acetilamino, N-metilkarbamoil, N-etilkarbamoil, N, N-dimetilkarbamoil, N, N-dietilkarbamoil, N-metil-N-etilkarbamoil, metiltio, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metilsulfamoil, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbociklil, aril ili heterociklil; Lipid je C6-22alkil, alkoksi, polietilen glikol ili aril supstituiran alkilnom grupom.
  6. 6. Farmaceutska smeša patentnog zahteva 1 ili 5, dalje sadrži propelant.
  7. 7. Farmaceutska smeša patentnog zahteva 6, pri čemu je propelant komprimovani vazduh, etanol, azot, ugljen-dioksid, azotni oksid, hidrofluoroalkani (HFA), 1,1,1,2, -tetrafluoroetan, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropan ili njihove kombinacije.
  8. 8. Posuda pod pritiskom koja sadrži farmaceutsku smešu patentnog zahteva 1 ili 5.
  9. 9. Posuda patentnog zahteva 8 koji je sprej sa ručnom pumpom, inhalator, metardozirani inhalator, inhalator suvog praha, nebulizator, nebulizator sa vibrirajućom mrežom, mlazni nebulizator ili nebulizator sa ultrazvučnim talasima.
  10. 10. Farmaceutska smeša kao što se tvrdi u zahtevu 1 ili 5 za upotrebu u lečenju ili prevenciji virusne infekcije, na primer gde je virusna infekcija alfavirus ili MERS koronavirusi ili gde je virus izabran od MERS koronavirusa, virusa istočnog konjskog encefalitisa, virusa zapadnog konjskog encefalitisa, virus venecuelanskog konjskog encefalitisa, Chikungunia virus i Ros River virus.
  11. 11. Farmaceutska smeša za upotrebu kako se tvrdi u patentnom zahtevu 10, pri čemu se kompozicija primenjuje kroz pluća.
  12. 12. Jedinjenje sa strukturom:
    za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcija izazvanih virusom istočnog konjskog encefalitisa, virusom zapadnog konjskog encefalitisa, virusom venecuelanskog konjskog encefalitisa, Chikungunia virus, Ross River virusne infekcije, filoviridae virus, Ebola virusne infekcije, pri čemu se jedinjenje primenjuje kroz pluća , intravenozno, intraperitonealno, intramuskularno, subkutano, transdermalno ili rektalno.
  13. 13. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje ima strukturu prema Formuli IA
    ili soli, pri čemu R<7>je H, X je CH2, CHMe, CMe2, CHF, CF2ili CD2; Y je nezavisno izabran od H, D, F, Cl, Br, I, CH3, CD3, CF3, alkil, acil, alkenil, alkinil, hidroksil, formil ili SCH3; R<1>je 12
    , amino, merkapto, formil, esteril, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, fosforamidil, pri čemu je R<1>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih, R<20>, 12 Y<1>je O ili S; Y<2>je OH, OR<12>, OAlkil ili BH3-M<+>; Y<3>je OH ili BH3-M<+>; R<4>je vodonik, hidroksi, alkil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<4>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<5>je vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, alkenil, alkinil, etinil, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hidroksimetil, alenil, halogen, nitro, cijano, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil , arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<5>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<8>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, benziloksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilino, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<8>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<9>je vodonik, metil, etil, tert-butil, alkil, (C6-C16) alkil, (C6-C22) alkil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, cikloalkil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<9>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<10>je vodonik, alkil, razgranati alkil, cikloalkil, lipid, metil, etil, izopropil, ciklopentil, cikloheksil, butil, pentil, heksil, neopentil, benzil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<10>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; 12 R<11>je vodonik, deuterijum, alkil, metil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<11>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<12>je vodonik, alkil, aril, fenil, 1-naftil, 2-naftil, aromatski, heteroaromatski, 4-supstituisani fenil, 4-fluorofenil, 4-hlorofenil, 4-bromofenil, naftil ili heterociklil, pri čemu je R<12>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<13>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkililsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<13>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<14>je vodonik, deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, lipid, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkililsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril ili heterociklil, pri čemu je R<14>opciono zamenjen sa jednim ili više istih ili različitih R<20>; R<20>je deuterijum, alkil, alkenil, alkinil, halogen, nitro, cijano, hidroksi, amino, amido, merkapto, formil, karboksi, karbamoil, azido, alkoksi, alkiltio, alkilamino, (alkil)2amino, alkilsulfinil, alkilsulfonil, arilsulfonil, karbociklil, aril, ili heterociklil, pri čemu je R<20>opciono zamenjen jednim ili više istih ili različitih R<21>i R<21>je halogen, nitro, cijano, hidroksi, trifluorometoksi, trifluorometil, amino, formil, karboksi, karbamoil, merkapto, sulfamoil, metil, etil, metoksi, etoksi, acetil, acetoksi, metilamino, etilamino, dimetilamino, dietilamino, N-metil-N-etilamino, acetilamino, N-metilkarbamoil, N-etilkarbamoil, N, N-dimetilkarbamoil, N, N-dietilkarbamoil, N-metil-N-etilcarbamoil metiltio, etiltio, metilsulfinil, etilsulfinil, mesil, etilsulfonil, metoksikarbonil, etoksikarbonil, N-metilsulfamoil, N-etilsulfamoil, N, N-dimetilsulfamoil, N, N-dietilsulfamoil, N-metil-N-etilsulfamoil, karbociklil, aril ili heterociklil.
  14. 14. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je R<4>vodonik, hidroksi, alkil, halogen ili fluoro. 12
  15. 15. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je R<5>vodonik, hidroksi, alkoksi, alkil, metil, etinil, ili alenil. 1
RS20211195A 2014-12-26 2015-12-16 Antivirusni n4-hidroksicitidin derivati RS62434B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462096915P 2014-12-26 2014-12-26
US201562201140P 2015-08-05 2015-08-05
PCT/US2015/066144 WO2016106050A1 (en) 2014-12-26 2015-12-16 N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
EP15874145.4A EP3236972B1 (en) 2014-12-26 2015-12-16 Anti-viral n4-hydroxycytidine derivatives

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62434B1 true RS62434B1 (sr) 2021-11-30

Family

ID=56151433

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20211195A RS62434B1 (sr) 2014-12-26 2015-12-16 Antivirusni n4-hidroksicitidin derivati

Country Status (23)

Country Link
US (3) US20190022116A1 (sr)
EP (2) EP3939985B1 (sr)
JP (4) JP7381190B2 (sr)
KR (2) KR20170123308A (sr)
CN (2) CN107427529A (sr)
AU (3) AU2015370004B2 (sr)
BR (1) BR112017013858A2 (sr)
CA (1) CA2972259A1 (sr)
CY (1) CY1124663T1 (sr)
DK (1) DK3236972T3 (sr)
EA (1) EA201791460A1 (sr)
ES (1) ES2892123T3 (sr)
HR (1) HRP20211456T1 (sr)
HU (1) HUE056470T2 (sr)
IL (3) IL296496B2 (sr)
LT (1) LT3236972T (sr)
PL (1) PL3236972T3 (sr)
PT (1) PT3236972T (sr)
RS (1) RS62434B1 (sr)
SG (2) SG10202105371YA (sr)
SI (1) SI3236972T1 (sr)
SM (1) SMT202100592T1 (sr)
WO (1) WO2016106050A1 (sr)

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK3236972T3 (en) 2014-12-26 2021-10-04 Univ Emory Antivirale N4-hydroxycytidin-derivativer
KR102350647B1 (ko) 2016-09-02 2022-01-14 다이서나 파마수이티컬, 인크. 4'-포스페이트 유사체 및 이를 포함하는 올리고뉴클레오타이드
JP7016170B2 (ja) * 2016-12-16 2022-02-04 国立大学法人東海国立大学機構 ヌクレオシド誘導体及びその利用
CA3080896A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Yamasa Corporation Nucleoside derivative and use thereof
GB201720279D0 (en) 2017-12-05 2018-01-17 Nucana Biomed Ltd Anticancer compounds
JP6804790B1 (ja) * 2017-12-07 2020-12-23 エモリー ユニバーシティー Ｎ４−ヒドロキシシチジンおよび誘導体ならびにそれらに関連する抗ウイルス用途
CN108586294A (zh) * 2018-05-29 2018-09-28 王若锴 一种脲类衍生物及其在防治炎症中的应用
KR102783030B1 (ko) * 2019-02-01 2025-03-18 재단법인 경기도경제과학진흥원 중동호흡기증후군 치료 또는 예방용 약학 조성물
CN112390838A (zh) * 2019-08-14 2021-02-23 斯微(上海)生物科技有限公司 一种改性核苷及其合成方法
WO2021159044A1 (en) * 2020-02-07 2021-08-12 Emory University N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
CN111548384B (zh) * 2020-03-29 2021-04-27 常州安蒂卫生物科技有限公司 用于抗病毒治疗的被取代的n4-羟基胞苷衍生物及其前药
EP4125989A4 (en) * 2020-04-03 2024-05-29 Selva Therapeutics, Inc. VIRAL ENTRY INHIBITORS AND RNA POLYMERASE INHIBITORS
US11642372B2 (en) 2020-05-01 2023-05-09 Tygrus, LLC Therapeutic material with low pH and low toxicity active against at least one pathogen for addressing patients with respiratory illnesses
US12042514B2 (en) 2020-05-01 2024-07-23 Tygrus, LLC Therapeutic material with low pH and low toxicity active against at least one pathogen for addressing patients with respiratory illnesses
US11826382B2 (en) 2020-05-01 2023-11-28 Tygrus, LLC Therapeutic material with low pH and low toxicity active against at least one pathogen for addressing patients with respiratory illnesses
MX2023001002A (es) * 2020-07-24 2023-03-01 Univ California Farmacos antivirales, composiciones farmaceuticas, y metodos.
US11702440B2 (en) * 2020-12-10 2023-07-18 Optimus Drugs Private Limited Pharmaceutical polymorphs of Molnupiravir
CN114621229B (zh) * 2020-12-11 2024-07-02 嘉兴金派特生物科技有限公司 治疗或预防猫传染性腹膜炎的化合物或组合物
CN112279877B (zh) * 2020-12-15 2021-08-06 南京颐媛生物医学研究院有限公司 一种核苷磷酸酯及其合成方法
WO2022133205A1 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Synthesis of antiviral nucleosides
CN112608357B (zh) * 2020-12-21 2022-12-09 杭州科巢生物科技有限公司 一种抗病毒药物Molnupiravir的制备方法
CN112939981B (zh) * 2021-01-19 2022-08-26 嘉兴金派特生物科技有限公司 核苷化合物、药学上可接受的盐、组合物及其应用
WO2022159787A1 (en) * 2021-01-22 2022-07-28 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Compounds for the treatment of a disease or disorder, methods for identifying said compounds
EP4319763A4 (en) * 2021-04-09 2025-06-11 Emory University MODIFIED NUCLEOSIDES AND NUCLEOTIDE ANALOGUES AS ANTIVIRAL AGENT FOR CORONAVIRUS AND OTHER VIRUSES
US11407779B1 (en) 2021-04-23 2022-08-09 Divi's Laboratories Ltd. Process for the preparation of molnupiravir
US20240239832A1 (en) * 2021-05-06 2024-07-18 Council Of Scientific And Industrial Research A process for the preparation of n4-hydroxycytidine and its derivatives
WO2022251663A2 (en) * 2021-05-27 2022-12-01 Emory University Novel universal anti-rna virus agents
CN117642410A (zh) * 2021-06-18 2024-03-01 苏州春海生物医药有限公司 N4-羟基胞苷的酯衍生物及其用途
CN113321694A (zh) * 2021-06-22 2021-08-31 药康众拓(江苏)医药科技有限公司 N4-羟基胞苷衍生物及其制备方法和用途
CN113735929A (zh) * 2021-07-21 2021-12-03 海化生命(厦门)科技有限公司 一种抗冠状病毒的化合物及其制备方法与应用
WO2023012329A1 (en) 2021-08-06 2023-02-09 Intervet International B.V. Method of treating veterinary viral diseases
CN115960148B (zh) * 2021-08-27 2023-12-12 南京知和医药科技有限公司 一种新型的胞苷衍生物及其药物组合物和用途
CN113980074A (zh) * 2021-10-21 2022-01-28 苏州立新制药有限公司 N4-羟基胞苷的晶型a与制备方法和用途
TW202333706A (zh) 2021-11-01 2023-09-01 德商埃慕尼克股份公司 Ｎ—羥基胞磷膽鹼（ｃｉｔｉｃｏｌｉｎｅ）化合物的醫藥用途
AR127653A1 (es) * 2021-11-12 2024-02-14 Suzhou Spring Sea Bio Pharmaceuticals Co Ltd Derivados de ésteres de n⁴-hidroxicitidina y su uso
US11541071B1 (en) 2021-12-16 2023-01-03 Ascletis BioScience Co., Ltd Nucleoside derivatives and methods of use thereof
CN116496334A (zh) * 2022-01-25 2023-07-28 上海和誉生物医药科技有限公司 一种抗病毒抑制剂及其在药学上的应用
CN116554249B (zh) * 2022-01-28 2025-03-18 北京恩泰伟医药科技有限公司 抗病毒化合物及其用途
TW202348228A (zh) 2022-02-24 2023-12-16 德商艾斯巴赫生物有限公司 病毒組合療法
KR102917091B1 (ko) * 2022-03-02 2026-01-23 유재혁 몰누피라비르의 국소 투여용 수의학적 조성물 및 그 이용
WO2023167488A1 (ko) * 2022-03-02 2023-09-07 유재혁 몰누피라비르의 국소 투여용 수의학적 조성물 및 그 이용
CN116731087A (zh) * 2022-03-03 2023-09-12 上海科胜药物研发有限公司 一种莫那比拉韦及其中间体的制备方法
KR20230130898A (ko) * 2022-03-04 2023-09-12 동아대학교 산학협력단 N4-이소부티릴옥시시티딘 모방체 합성과 이의 항바이러스 용도를 포함하는 바이러스 감염 치료용 조성물
CN114573651A (zh) * 2022-03-11 2022-06-03 山东大学 一种n4-羟基胞苷脂质前药及其制备方法与应用
TW202400134A (zh) 2022-03-15 2024-01-01 美商羅米醫療公司 用於治療疾病之化合物及方法
CN114805458B (zh) * 2022-03-31 2023-09-08 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 类核苷广谱抗病毒药物的脂肪酸前药及其制备方法和用途
CN117586330A (zh) * 2022-08-12 2024-02-23 南京知和医药科技有限公司 一种新型核苷衍生物及其药物组合物和用途
WO2024123207A1 (ru) * 2022-12-08 2024-06-13 федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации 5'-о-(3-фенилпропионил)-n4-гидроксицитидин и его применение
WO2024123206A1 (ru) * 2022-12-08 2024-06-13 федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ получения 5',-о-(3-фенилпропионил)-n4-гидроксицитидина

Family Cites Families (283)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1325797A (en) 1970-09-24 1973-08-08 Upjohn Co Medicines comprising cytidine derivatives
GB1386334A (en) 1972-09-22 1975-03-05 Kohjin Co 2,2-cyclocytidine derivatives
DE2456547A1 (de) 1973-11-29 1975-08-14 Kohjin Co N hoch 4 -substituierte 2,2'-cyclocytidin-verbindungen
US4096324A (en) 1975-07-07 1978-06-20 The Upjohn Company Cytidine nucleoside compound
US5470838A (en) 1987-10-28 1995-11-28 Pro-Neuron, Inc. Method of delivering exogenous uridine or cytidine using acylated uridine or cytidine
US5736531A (en) 1987-10-28 1998-04-07 Pro-Neuron, Inc. Compositions of chemotherapeutic agent or antiviral agent with acylated pyrimidine nucleosides
US5968914A (en) * 1987-10-28 1999-10-19 Pro-Neuron, Inc. Treatment of chemotherapeutic agent and antiviral agent toxicity with acylated pyrimidine nucleosides
KR920701230A (ko) 1989-06-05 1992-08-11 원본미기재 엑소뉴클레아제-내성 올리고뉴클레오티드 및 그 제조방법
WO1992009705A1 (en) 1990-11-23 1992-06-11 Gilead Sciences, Inc. Triplex-forming oligomers containing modified bases
RU2085557C1 (ru) * 1991-09-30 1997-07-27 Санкио Компани Лимитед Производные нуклеозидов пиримидина или их фармацевтически приемлемые соли и способ их получения
AU3222793A (en) 1991-11-26 1993-06-28 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US6057305A (en) 1992-08-05 2000-05-02 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Antiretroviral enantiomeric nucleotide analogs
IS2334B (is) 1992-09-08 2008-02-15 Vertex Pharmaceuticals Inc., (A Massachusetts Corporation) Aspartyl próteasi hemjari af nýjum flokki súlfonamíða
AU6632094A (en) 1993-04-19 1994-11-08 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5349947A (en) * 1993-07-15 1994-09-27 Newhouse Michael T Dry powder inhaler and process that explosively discharges a dose of powder and gas from a soft plastic pillow
EP0719274A1 (en) 1993-09-17 1996-07-03 Gilead Sciences, Inc. Method for dosing therapeutic compounds
AU691527B2 (en) 1993-09-17 1998-05-21 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
BR9607098B8 (pt) 1995-02-27 2014-11-18 Gilead Sciences Inc Composto e composição farmacêutica.
US6043358A (en) 1995-11-01 2000-03-28 Merck & Co., Inc. Hexahydro-5-imino-1,4-heteroazepine derivatives as inhibitors of nitric oxide synthases
CA2268756A1 (en) 1996-10-21 1998-04-30 Gilead Sciences, Inc. Piperidine compounds
GB9718913D0 (en) 1997-09-05 1997-11-12 Glaxo Group Ltd Substituted oxindole derivatives
US6086376A (en) * 1998-01-30 2000-07-11 Rtp Pharma Inc. Dry aerosol suspension of phospholipid-stabilized drug microparticles in a hydrofluoroalkane propellant
FR2776289B1 (fr) 1998-03-20 2001-02-02 Oreal Composition de teinture d'oxydation contenant un coupleur cationique, procedes de teinture, nouveaux coupleurs cationiques
US6369087B1 (en) 1999-08-26 2002-04-09 Robert R. Whittle Alkoxy substituted benzimidazole compounds, pharmaceutical preparations containing the same, and methods of using the same
KR20080021797A (ko) 2000-05-26 2008-03-07 이데닉스(케이만)리미티드 플라비바이러스 및 페스티바이러스의 치료방법 및 조성물
US20030008841A1 (en) 2000-08-30 2003-01-09 Rene Devos Anti-HCV nucleoside derivatives
KR20090089922A (ko) 2000-10-18 2009-08-24 파마셋 인코포레이티드 바이러스 감염 및 비정상적인 세포 증식의 치료를 위한 변형된 뉴클레오시드
CA2743451A1 (en) 2000-10-18 2002-04-25 Pharmasset, Inc. Modified nucleosides for the treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation
NZ575481A (en) 2000-10-18 2010-10-29 Pharmasset Inc Simultaneous quantification of nucleic acids in diseased cells
PT1390378E (pt) 2001-04-30 2009-07-23 Trommsdorff Arzneimittel Ésteres de uridina farmaceuticamente activos
GB0114286D0 (en) 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
US7049303B2 (en) 2001-11-07 2006-05-23 Medical Research Council Inhibition of viruses
AU2003231765B9 (en) 2002-04-26 2010-01-28 Gilead Sciences, Inc. Cellular accumulation of phosphonate analogs of HIV protease inhibitor compounds and the compounds as such
US20050239054A1 (en) 2002-04-26 2005-10-27 Arimilli Murty N Method and compositions for identifying anti-HIV therapeutic compounds
GB0215293D0 (en) 2002-07-03 2002-08-14 Rega Foundation Viral inhibitors
CA2492554A1 (en) 2002-07-15 2004-01-22 Gilead Sciences, Inc. Combination therapies with l-fmau for the treatment of hepatitis b virus infection
EP1950563A3 (en) 2002-09-11 2008-08-06 Michio Ishibashi Method for screening for a substance for promoting regeneration of macrophages
US20040194155A1 (en) 2002-10-01 2004-09-30 Gilead Sciences, Inc. HBV mutations associated with reduced susceptibility to adefovir
US20040157804A1 (en) 2002-10-16 2004-08-12 Gilead Sciences, Inc. Pre-organized tricyclic integrase inhibitor compounds
US20040171860A1 (en) * 2002-11-12 2004-09-02 Hong Zhao Novel acylating reagents
TWI332507B (en) 2002-11-19 2010-11-01 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
WO2004050613A2 (en) 2002-12-02 2004-06-17 Gilead Sciences, Inc. 2-substituted-3-propenamide derivatives and methods of using the same
MXPA05007016A (es) 2003-01-14 2005-09-12 Gilead Sciences Inc Composiciones y metodos para terapia antiviral de combinacion.
WO2004100960A2 (en) 2003-04-25 2004-11-25 Gilead Sciences, Inc. Anti-inflammatory phosphonate compounds
EP2359833A1 (en) 2003-04-25 2011-08-24 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonate analogs
CN101410120A (zh) 2003-04-25 2009-04-15 吉里德科学公司 抗炎的膦酸酯化合物
WO2005002626A2 (en) 2003-04-25 2005-01-13 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic phosphonate compounds
US7273716B2 (en) 2003-04-25 2007-09-25 Gilead Sciences, Inc. Methods and compositions for identifying therapeutic compounds with GS-7340 ester hydrolase
WO2004096287A2 (en) 2003-04-25 2004-11-11 Gilead Sciences, Inc. Inosine monophosphate dehydrogenase inhibitory phosphonate compounds
AU2004260789B2 (en) 2003-07-30 2011-06-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleobase phosphonate analogs for antiviral treatment
US20070185007A1 (en) 2003-09-19 2007-08-09 Haolun Jin Aza-quinolinol phosphonate integrase inhibitor compounds
RU2264409C2 (ru) 2003-10-01 2005-11-20 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ГНЦ ВБ "Вектор") 2`-амино-2`-дезоксинуклеозиды - ингибиторы репродукции вирусов кори и марбург
US20070160554A1 (en) 2003-11-03 2007-07-12 Cognis Ip Management Gmbh Acyl ribonucleosides and acyl deoxyribonucleosides, compositions of, and methods of making same
WO2005063751A1 (en) 2003-12-22 2005-07-14 Gilead Sciences, Inc. 4’-substituted carbovir-and abacavir-derivatives as well as related compounds with hiv and hcv antiviral activity
NZ595000A (en) 2003-12-22 2013-03-28 Gilead Sciences Inc Imidazo[4,5-c]pyridine derivative for treating viral infections
US7553825B2 (en) 2003-12-30 2009-06-30 Gilead Sciences, Inc. Anti-proliferative compounds, compositions, and methods of use thereof
MXPA06007906A (es) 2004-01-12 2007-02-14 Gilead Sciences Inc Compuestos antivirales de fosfonato de pirimidilo y metodos de uso.
EP1732569B1 (en) 2004-01-21 2009-10-14 Gilead Sciences, Inc. Use of adefovir or tenofovir for inhibiting mmtv-like viruses involved in breast cancer and primary biliary cirrhosis
EP1742642B1 (en) 2004-04-14 2008-10-15 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate analogs of hiv integrase inhibitor compounds
UA93354C2 (ru) 2004-07-09 2011-02-10 Гилиад Сайенсиз, Инк. Местный противовирусный препарат
RS51974B (sr) 2004-07-16 2012-02-29 Gilead Sciences Inc. Antivirusna jedinjenja
ME03423B (me) 2004-07-27 2020-01-20 Gilead Sciences Inc Fosfonatni analozi jedinjenja hiv inhibitora
BRPI0513811A (pt) 2004-07-27 2008-07-15 Gilead Sciences Inc imidazo [4,5-d] pirimidinas, seus usos e processos de preparação
DE102004051804A1 (de) * 2004-10-21 2006-04-27 Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin (Mdc) Beta-L-N4-Hydroxycytosin-Desoxynucleoside und ihre Verwendung als pharmazeutische Mittel zur Prophylaxe oder Therapie von viralen Erkrankungen
AU2005299284A1 (en) 2004-10-26 2006-05-04 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate derivatives of mycophenolic acid
NZ556624A (en) 2004-12-21 2010-06-25 Gilead Sciences Inc 5-((3-(2,4-trifluoromethyphenyl)isoxazol-5-yl)methyl)-2-(2-fluorophenyl)-5H-imidazo[4,5-c]pyridine and method of antiviral treatment
WO2006091905A1 (en) 2005-02-25 2006-08-31 Gilead Sciences, Inc. Bicyclo (3.1.0) hexane derivatives as antiviral compounds
TW200716632A (en) 2005-05-16 2007-05-01 Gilead Sciences Inc Integrase inhibitor compounds
WO2006133353A2 (en) 2005-06-08 2006-12-14 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods of facilitating neural cell survival using non-peptide and peptide bdnf neurotrophin mimetics
TW200738742A (en) 2005-07-14 2007-10-16 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
TWI389908B (zh) 2005-07-14 2013-03-21 Gilead Sciences Inc 抗病毒化合物類
WO2007014174A2 (en) 2005-07-25 2007-02-01 Gilead Sciences, Inc. Drug-resistant mutants of hepatitis c virus
CA2616314A1 (en) 2005-07-27 2007-02-01 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonate conjugates for inhibition of hiv
MX2008002165A (es) 2005-08-16 2008-04-29 Irm Llc Compuestos y composiciones como inhibidores de la proteina cinasa.
WO2007039413A2 (en) 2005-09-22 2007-04-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Selective o-acylation of nucleosides
JP4676536B2 (ja) 2005-12-30 2011-04-27 ギリアド サイエンシズ， インコーポレイテッド Ｈｉｖインテグラーゼ阻害剤の薬物動態の改善方法
WO2007126812A2 (en) 2006-03-29 2007-11-08 Gilead Sciences, Inc. Process for preparation of hiv protease inhibitors
WO2008003149A2 (en) 2006-07-06 2008-01-10 Gilead Sciences , Inc. Substituted pteridines for the treatment and prevention of viral infections
DE602007004220D1 (de) 2006-07-07 2010-02-25 Leuven K U Res & Dev Neue pyridazinverbindung und ihre verwendung
SG183007A1 (en) 2006-07-07 2012-08-30 Gilead Sciences Inc Modulators of pharmacokinetic properties of therapeutics
EP2038290B1 (en) 2006-07-07 2013-09-04 Gilead Sciences, Inc. Modulators of toll-like receptor 7
WO2008005542A2 (en) 2006-07-07 2008-01-10 Gilead Sciences, Inc., Antiviral phosphinate compounds
WO2008009077A2 (en) 2006-07-20 2008-01-24 Gilead Sciences, Inc. 4,6-dl- and 2,4,6-trisubstituted quinazoline derivatives and pharmaceutical compositions useful for treating viral infections
US8338435B2 (en) 2006-07-20 2012-12-25 Gilead Sciences, Inc. Substituted pyrido(3,2-D) pyrimidines and pharmaceutical compositions for treating viral infections
US9259426B2 (en) 2006-07-20 2016-02-16 Gilead Sciences, Inc. 4,6-di- and 2,4,6-trisubstituted quinazoline derivatives useful for treating viral infections
WO2008009079A2 (en) 2006-07-20 2008-01-24 Gilead Sciences, Inc. Substituted pteridines useful for the treatment and prevention of viral infections
JP5599611B2 (ja) 2006-07-21 2014-10-01 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 抗ウイルスプロテアーゼインヒビター
NZ573888A (en) 2006-07-21 2012-02-24 Gilead Sciences Inc Aza-peptide protease inhibitors
US20080070910A1 (en) 2006-07-24 2008-03-20 Desai Manoj C Therapeutic compounds and methods
JP2009544710A (ja) 2006-07-24 2009-12-17 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｈｉｖ逆転写酵素インヒビター
EP2068912A2 (en) 2006-09-27 2009-06-17 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Compositions of tlr ligands and antivirals
US8263612B2 (en) 2006-12-14 2012-09-11 Gilead Sciences, Inc. Viral inhibitors
WO2008077650A1 (en) 2006-12-26 2008-07-03 Gilead Sciences, Inc. Pyrido(3,2-d)pyrimidines useful for treating viral infections
WO2008077649A1 (en) 2006-12-26 2008-07-03 Gilead Sciences, Inc. Pyrido(3,2-d)pyrimidines useful for treating viral infectons
TW200840584A (en) 2006-12-26 2008-10-16 Gilead Sciences Inc Pyrido(3,2-d)pyrimidines useful for treating viral infections
WO2008100447A2 (en) 2007-02-09 2008-08-21 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside analogs for antiviral treatment
PL3150586T3 (pl) 2007-02-23 2020-06-01 Gilead Sciences, Inc. Modulatory farmakokinetycznych właściwości środków terapeutycznych
WO2008119659A2 (en) 2007-03-29 2008-10-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical composition and process
AP2009005073A0 (en) 2007-06-29 2009-12-31 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
CA2691444C (en) 2007-06-29 2016-06-14 Gilead Sciences, Inc. Purine derivatives and their use as modulators of toll-like receptor 7
CN101784532B (zh) 2007-06-29 2014-10-22 韩国化学研究院 Hiv逆转录酶抑制剂
WO2009006199A1 (en) 2007-06-29 2009-01-08 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compositions and the use thereof
NZ582096A (en) 2007-06-29 2012-05-25 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds that inhibit hepatitis c virus (hcv)
AR067184A1 (es) 2007-06-29 2009-09-30 Gilead Sciences Inc Uso de 6-(3-cloro-2-fluorbencil)-1-[(2s)-1-hidroxi-3-metilbutan-2-il]-7-metoxi-4-oxo-1,4-dihidroquinolina-3-carboxilico. composicion farmaceutica
WO2009005690A2 (en) 2007-06-29 2009-01-08 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
KR20100041798A (ko) 2007-06-29 2010-04-22 한국화학연구원 신규 ｈｉｖ 역전사효소 억제제
UA99466C2 (en) 2007-07-06 2012-08-27 Гилиад Сайенсиз, Инк. Crystalline pyridazine compound
UA99308C2 (ru) * 2007-09-26 2012-08-10 Маунт Синай Скул Оф Медсин Аналог азацитидина и его применение
WO2009058800A2 (en) 2007-10-29 2009-05-07 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of nucleosides
JP2011508740A (ja) * 2007-12-27 2011-03-17 エピファニー バイオサイエンシズ， インク． 抗ウイルス化合物
PT2231628E (pt) 2008-01-04 2015-12-29 Gilead Sciences Inc Inibidores de citocromo p450
TWI444384B (zh) 2008-02-20 2014-07-11 Gilead Sciences Inc 核苷酸類似物及其在治療惡性腫瘤上的用途
ES2398684T3 (es) 2008-04-23 2013-03-21 Gilead Sciences, Inc. Análogos de carbanucleósido para el tratamiento antiviral
WO2009143011A1 (en) * 2008-05-20 2009-11-26 Novartis Ag Antiviral compositions, methods of making and using such compositions, and systems for pulmonary delivery of such compositions
US8536187B2 (en) 2008-07-03 2013-09-17 Gilead Sciences, Inc. 2,4,6-trisubstituted pyrido(3,2-d)pyrimidines useful for treating viral infections
UA103329C2 (ru) 2008-07-08 2013-10-10 Гилиад Сайенсиз, Инк. Соли соединений-ингибиторов вич
AU2009273844A1 (en) 2008-07-25 2010-01-28 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
ES2467108T3 (es) 2008-12-09 2014-06-11 Gilead Sciences, Inc. Moduladores de receptores tipo toll
KR20110114582A (ko) 2008-12-19 2011-10-19 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Ｈｃｖ ｎｓ３ 프로테아제 억제제
AR074758A1 (es) 2008-12-22 2011-02-09 Gilead Sciences Inc Compuestos macrociclicos antivirales
NZ594370A (en) 2009-02-10 2014-01-31 Gilead Sciences Inc Carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
PT3309157T (pt) 2009-05-13 2019-12-02 Gilead Pharmasset Llc Compostos antivirais
TWI598358B (zh) 2009-05-20 2017-09-11 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
AR077125A1 (es) 2009-06-23 2011-08-03 Gilead Sciences Inc Combinaciones farmaceuticas utiles para tratar el vhc
AR077139A1 (es) 2009-06-23 2011-08-03 Gilead Sciences Inc Composiciones farmaceuticas utiles para tratar el vch
US20100324059A1 (en) 2009-06-23 2010-12-23 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical compositions useful for treating hcv
WO2011005842A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 Gilead Sciences, Inc. Anti-rsv compounds
WO2011011303A1 (en) 2009-07-21 2011-01-27 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of flaviviridae viruses
ES2559437T3 (es) 2009-09-09 2016-02-12 Gilead Sciences, Inc. Inhibidores de virus de la familia Flaviviridae
NO2477987T3 (sr) 2009-09-14 2018-06-09
US7973013B2 (en) 2009-09-21 2011-07-05 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
PE20120995A1 (es) 2009-09-21 2012-08-01 Gilead Sciences Inc Analogos de carba-nucleosidos sustituidos con 2'-fluoro para tratamiento antiviral
US8962652B2 (en) 2009-10-22 2015-02-24 Gilead Sciences, Inc. Derivatives of purine or deazapurine useful for the treatment of (inter alia) viral infections
WO2011079016A1 (en) 2009-12-22 2011-06-30 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating hbv and hcv infection
CA2785563C (en) 2010-01-15 2019-05-14 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of flaviviridae viruses
AP3576A (en) 2010-01-15 2016-02-08 Gilead Sciences Inc Inhibitors of flaviviridae viruses
DK2528930T3 (da) 2010-01-28 2013-11-11 Hoffmann La Roche 4'-azido-nukleosider som anti-hcv-forbindelser
US20110223131A1 (en) 2010-02-24 2011-09-15 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
US20130005678A1 (en) * 2010-03-30 2013-01-03 Clavis Pharma Asa Methods and Compositions for Treating or Ameliorating Cancer Using Gemcitabine-5'-Elaidate
EP2569285A1 (en) 2010-05-10 2013-03-20 Gilead Sciences, Inc. Bifunctional quinoline derivatives
US8367829B2 (en) 2010-05-10 2013-02-05 Gilead Sciences, Inc. Bi-functional pyrazolopyridine compounds
EP2571882A1 (en) 2010-05-21 2013-03-27 Gilead Sciences, Inc. Heterocyclic flaviviridae virus inhibitors
TW201201815A (en) 2010-05-28 2012-01-16 Gilead Sciences Inc 1'-substituted-carba-nucleoside prodrugs for antiviral treatment
TW201210597A (en) 2010-06-09 2012-03-16 Gilead Sciences Inc Inhibitors of hepatitis C virus
US20110306541A1 (en) 2010-06-10 2011-12-15 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating hcv
EP2579871B1 (en) 2010-06-11 2015-08-26 Gilead Sciences, Inc. Topical antiviral formulations for prevention of transmission of hsv-2
AU2011266705A1 (en) * 2010-06-16 2012-11-29 Clavis Pharma Asa Anti-human equilibrative nucleoside transporter 1 (hENT1) antibodies and methods of use thereof
MA34392B1 (fr) 2010-06-24 2013-07-03 Gilead Sciences Inc Pyrimidines en tant qu'agents antiviraux
AP2013006706A0 (en) 2010-07-02 2013-02-28 Gilead Sciences Inc Napht-2-ylacetic acid derivatives to treat AIDS
KR20130124291A (ko) 2010-07-02 2013-11-13 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Ｈｉｖ 항바이러스 화합물로서의 2-퀴놀리닐-아세트산 유도체
KR101995598B1 (ko) 2010-07-19 2019-07-02 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 부분입체 이성질성으로 순수한 포스포라미데이트 전구약물의 제조 방법
BR122020020745B8 (pt) 2010-07-22 2023-10-31 Gilead Sciences Inc Composto antiviral para o tratamento de infecções por paramyxoviridae e composição farmacêutica que o compreende
CN102351931B (zh) * 2010-09-07 2014-01-22 河南省科学院高新技术研究中心 嘧啶核苷衍生物、合成方法及其在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用
TW201305185A (zh) 2010-09-13 2013-02-01 吉李德科學股份有限公司 用於抗病毒治療之２’－氟取代之碳－核苷類似物
PE20171624A1 (es) 2010-09-20 2017-11-02 Gilead Sciences Inc Analogos de carba-nucleosidos sustituidos con 2'-fluoro para tratamiento antiviral
SI2640719T1 (sl) 2010-11-17 2017-07-31 Gilead Pharmasset Llc Antivirusne spojine
SG10201509521WA (en) 2010-11-19 2015-12-30 Gilead Sciences Inc Therapeutic compositions comprising rilpivirine hcl and tenofovir disoproxil fumarate
UY33775A (es) 2010-12-10 2012-07-31 Gilead Sciences Inc Inhibidores macrocíclicos de virus flaviviridae, composiciones farmacéuticas que los comprenden y sus usos
AU2011349844B2 (en) 2010-12-20 2017-06-01 Gilead Sciences, Inc. Combinations for treating HCV
WO2012088156A1 (en) 2010-12-21 2012-06-28 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of cytochrome p450
US20130280212A1 (en) 2010-12-21 2013-10-24 Gilead Sciences, Inc Inhibitors of cytochrome p450
US20130274254A1 (en) 2010-12-21 2013-10-17 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of cytochrome p450 (cyp3a4)
JP2014511859A (ja) 2011-04-04 2014-05-19 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｈｉｖインテグラーゼ阻害剤の調製のためのプロセス
JP2014510139A (ja) 2011-04-04 2014-04-24 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 固体形態のｈｉｖ阻害剤
EA201391264A1 (ru) 2011-04-13 2014-03-31 Джилид Сайэнс, Инк. 1'-замещенные пиримидиновые n-нуклеозидные аналоги для противовирусного лечения
BR112013027096A2 (pt) 2011-04-21 2016-12-27 Gilead Sciences Inc compostos de benzotiazol e seu uso farmacêutico
JP2014513123A (ja) 2011-05-02 2014-05-29 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 無定形固体の塩
EP2729448B1 (en) 2011-07-06 2015-09-09 Gilead Sciences, Inc. Compounds for the treatment of hiv
CN103687869A (zh) 2011-07-06 2014-03-26 吉利德科学股份有限公司 Hcv基因型3复制子
EP2729490A1 (en) 2011-07-06 2014-05-14 Gilead Sciences, Inc. Hcv genotype 4 replicons
AU2012280959B2 (en) 2011-07-13 2015-08-06 Gilead Sciences, Inc. Thiophen-2-carboxylic acid derivatives useful as inhibitors of Flaviviridae viruses
HRP20161696T4 (hr) 2011-08-16 2023-10-13 Gilead Sciences, Inc. Tenofovir alafenamid hemifumarat
PL2709613T5 (pl) 2011-09-16 2020-12-14 Gilead Pharmasset Llc Metody leczenia hcv
CA2853495A1 (en) 2011-10-31 2013-05-10 Gilead Pharmasset Llc Methods and compositions for treating hepatitis c virus
JP6082749B2 (ja) 2011-11-16 2017-02-15 ギリアド ファーマセット エルエルシー 抗ウイルス化合物としての縮合イミダゾリルイミダゾール
EP3777867A1 (en) 2011-11-29 2021-02-17 Gilead Pharmasset LLC Composition and methods for treating hepatitis c virus
WO2013090840A1 (en) 2011-12-15 2013-06-20 Gilead Sciences, Inc. 2 -amino- pyrido [3, 2 -d] pyrimidine derivatives as hcv inhibitors
WO2013090929A1 (en) 2011-12-15 2013-06-20 Gilead Sciences, Inc. Amino quinoline derivatives inhibitors of hcv
EP2793891A1 (en) 2011-12-20 2014-10-29 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical compositions and methods for treating gastrointestinal infections and disorders
CA2858096C (en) 2011-12-22 2020-06-23 Gilead Sciences, Inc. Pyrazolo[1,5-a]pyrimidines as antiviral agents
AU2013235220C1 (en) * 2011-12-22 2019-03-28 Janssen Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
UA117095C2 (uk) 2011-12-22 2018-06-25 Аліос Біофарма, Інк. Нуклеозидна сполука або її фармацевтично прийнятна сіль
US9284323B2 (en) 2012-01-04 2016-03-15 Gilead Sciences, Inc. Naphthalene acetic acid derivatives against HIV infection
WO2013103724A1 (en) 2012-01-04 2013-07-11 Gilead Sciences, Inc. 2- (tert - butoxy) -2- (7 -methylquinolin- 6 - yl) acetic acid derivatives for treating aids
JP2015503624A (ja) 2012-01-12 2015-02-02 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 医薬組成物およびその調製方法
KR20140119177A (ko) 2012-02-03 2014-10-08 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한 테노포비르 알라페나미드 헤미푸마레이트 및 코비시스타트를 포함하는 조합 요법
AU2012327170A1 (en) 2012-02-03 2013-08-22 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds
CN106749272B (zh) 2012-03-13 2019-08-30 吉利德科学公司 用于抗病毒治疗的2’-取代的卡巴-核苷类似物
CN106986869A (zh) 2012-04-17 2017-07-28 吉利德科学公司 用于抗病毒治疗的化合物和方法
ES2571479T3 (es) 2012-04-20 2016-05-25 Gilead Sciences Inc Derivados del ácido benzotiazol-6-il acético y su uso para tratar una infección por VIH
US9079887B2 (en) 2012-05-16 2015-07-14 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
US20130309196A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
PT2859009T (pt) 2012-06-08 2018-01-18 Gilead Sciences Inc Inibidores macrocíclicos dos vírus flaviviridae
AR091279A1 (es) 2012-06-08 2015-01-21 Gilead Sciences Inc Inhibidores macrociclicos de virus flaviviridae
EA026235B1 (ru) 2012-06-08 2017-03-31 Джилид Сайэнс, Инк. Макроциклические ингибиторы вирусов flaviviridae
UA119315C2 (uk) 2012-07-03 2019-06-10 Гіліад Фармассет Елелсі Інгібітори вірусу гепатиту с
US8841340B2 (en) 2012-08-17 2014-09-23 Gilead Sciences, Inc. Solid forms of an antiviral compound
WO2014055618A1 (en) 2012-10-03 2014-04-10 Gilead Sciences, Inc. Solid state forms of hiv inhibitor: hemi-succinate of (2s)-2-tert-butoxy-2-(4-(2,3-dihydropyrano[4,3,2-de]quinolin-7-yl)-2-methylquinolin-3-yl)acetic acid)
CN104755995B (zh) 2012-10-26 2017-10-24 皇家飞利浦有限公司 具有透明操作模式的自动立体显示设备
BR112015009636A8 (pt) 2012-10-29 2018-04-17 Cocrystal Pharma Inc composto, métodos para o tratamento de um hospedeiro infectado, métodos para a prevenção de uma infecção, métodos para a redução da atividade biológica de uma infecção e uso de um composto
EP3348576A1 (en) 2012-10-30 2018-07-18 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic and diagnostic methods related to lysyl oxidase-like 2 (loxl2)
CA2890277A1 (en) 2012-11-07 2014-05-15 Gilead Sciences, Inc. Hcv genotype 6 replicons
EP2935304A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
GEP201706757B (en) 2012-12-21 2017-10-25 Alios Biopharma Inc Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US9233974B2 (en) 2012-12-21 2016-01-12 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
EA030003B1 (ru) 2012-12-21 2018-06-29 Джилид Сайэнс, Инк. Полициклическое карбамоилпиридоновое соединение и его фармацевтическое применение для лечения вич-инфекции
CA2897268C (en) 2013-01-09 2018-12-04 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds for the treatment of viral infections
CA2896244C (en) 2013-01-09 2017-07-04 Gilead Sciences, Inc. 5-membered heteroaryls and their use as antiviral agents
TW201443037A (zh) 2013-01-09 2014-11-16 Gilead Sciences Inc 治療用化合物
WO2014124430A1 (en) 2013-02-11 2014-08-14 Emory University Nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
TWI694071B (zh) 2013-03-01 2020-05-21 美商基利科學股份有限公司 治療反轉錄病毒科(Retroviridae)病毒感染之治療性化合物
US9617310B2 (en) 2013-03-15 2017-04-11 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of hepatitis C virus
US20140273023A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Saladax Biomedical Inc. Gemcitabine immunoassay
EP2981542B1 (en) 2013-04-01 2021-09-15 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
AU2014250762A1 (en) 2013-04-12 2015-10-29 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Highly active nucleoside derivative for the treatment of HCV
EP2996695B1 (en) 2013-05-16 2022-04-13 Riboscience LLC 4'-fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives
HK1224229A1 (zh) 2013-06-26 2017-08-18 Alios Biopharma, Inc. 取代的核苷，核苷酸及其类似物
WO2015023893A1 (en) 2013-08-16 2015-02-19 Gilead Sciences, Inc. Hcv genotype 4d replicons
SI3043803T1 (sl) 2013-09-11 2022-09-30 Emory University Nukleotidne in nukleozidne sestave in njihova uporaba
EP3055319A4 (en) 2013-10-11 2018-01-10 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
UA119050C2 (uk) 2013-11-11 2019-04-25 Ґілеад Саєнсиз, Інк. ПІРОЛО[1.2-f][1.2.4]ТРИАЗИНИ, ЯКІ ВИКОРИСТОВУЮТЬСЯ ДЛЯ ЛІКУВАННЯ РЕСПІРАТОРНО-СИНЦИТІАЛЬНИХ ВІРУСНИХ ІНФЕКЦІЙ
US20150150897A1 (en) 2013-12-02 2015-06-04 Gilead Pharmasset Llc Methods of treating hepatitis c virus infection in subjects with cirrhosis
WO2015100144A1 (en) 2013-12-23 2015-07-02 Gilead Sciences, Inc. Crystalline forms of a macrocyclic hcv ns3 inhibiting tripeptide
TW201609785A (zh) 2013-12-23 2016-03-16 吉李德製藥公司 固體型之抗病毒化合物
TWI660965B (zh) 2014-01-15 2019-06-01 美商基利科學股份有限公司 泰諾福韋之固體形式
EP3094323A4 (en) 2014-01-17 2017-10-11 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Methods and compositions for modulating hormone levels
US9463194B2 (en) 2014-02-05 2016-10-11 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating patients co-infected with HIV and tuberculosis
WO2015130964A1 (en) 2014-02-28 2015-09-03 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds
WO2015130966A1 (en) 2014-02-28 2015-09-03 Gilead Sciences, Inc. Antiviral agents
WO2015179448A1 (en) 2014-05-21 2015-11-26 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds
NZ726343A (en) 2014-06-12 2018-04-27 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
EP3154960A1 (en) 2014-06-13 2017-04-19 Gilead Sciences, Inc. Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
KR20170012558A (ko) 2014-06-13 2017-02-02 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 포스파티딜이노시톨 3-키나제 억제제
WO2015191745A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Gilead Sciences, Inc. Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
CA2952018A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Gilead Sciences, Inc. Quinazolinone derivatives as phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
HK1231477A1 (zh) 2014-06-13 2017-12-22 吉利德科学公司 磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂
TW201613936A (en) 2014-06-20 2016-04-16 Gilead Sciences Inc Crystalline forms of(2R,5S,13aR)-8-hydroxy-7,9-dioxo-n-(2,4,6-trifluorobenzyl)-2,3,4,5,7,9,13,13a-octahydro-2,5-methanopyrido[1',2':4,5]pyrazino[2,1-b][1,3]oxazepine-10-carboxamide
LT3160476T (lt) 2014-06-24 2021-04-12 Janssen Biopharma, Inc. Pakeistieji nukleozidai, nukleotidai ir jų analogai, skirti naudoti virusinių infekcijų gydyme
TN2016000566A1 (en) 2014-06-24 2018-04-04 Alios Biopharma Inc Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
CN105288635A (zh) 2014-06-26 2016-02-03 昆明积大制药股份有限公司 一种含有阿糖胞苷5’-0-氨基酸酯的药物组合物
PT3166607T (pt) 2014-07-11 2022-12-07 Gilead Sciences Inc Moduladores de receptores de tipo toll para o tratamento do vih
TWI678369B (zh) 2014-07-28 2019-12-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療呼吸道合胞病毒感染之噻吩並［３,２-ｄ］嘧啶、呋喃並［３,２-ｄ］嘧啶及吡咯並［３,２-ｄ］嘧啶化合物類
TWI673283B (zh) 2014-08-21 2019-10-01 美商基利科學股份有限公司 ２’－氯胺基嘧啶酮及嘧啶二酮核苷類
PT3186239T (pt) 2014-08-29 2019-01-10 Gilead Sciences Inc Agentes antirretrovirais
WO2016036759A1 (en) 2014-09-04 2016-03-10 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating or preventing hiv in patients using a combination of tenofovir alafenamide and dolutegravir
EP3034499A1 (en) 2014-12-17 2016-06-22 Gilead Sciences, Inc. Novel FXR (NR1H4) modulating compounds
TWI695003B (zh) 2014-12-23 2020-06-01 美商基利科學股份有限公司 多環胺甲醯基吡啶酮化合物及其醫藥用途
TWI699355B (zh) 2014-12-24 2020-07-21 美商基利科學股份有限公司 喹唑啉化合物
BR112017013440A2 (pt) 2014-12-24 2018-01-09 Gilead Sciences, Inc. compostos de isoquinolina para o tratamento de hiv
ES2735087T3 (es) 2014-12-24 2019-12-16 Gilead Sciences Inc Compuestos de pirimidina fusionados para el tratamiento de VIH
DK3236972T3 (en) 2014-12-26 2021-10-04 Univ Emory Antivirale N4-hydroxycytidin-derivativer
WO2016134054A1 (en) 2015-02-18 2016-08-25 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
WO2016141092A1 (en) 2015-03-04 2016-09-09 Gilead Sciences, Inc. Toll-like receptor modulating 4,6-diamino-pyrido[3,2-d]pyrimidine compounds
JP6402259B2 (ja) 2015-04-02 2018-10-10 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 多環式カルバモイルピリドン化合物およびそれらの薬学的使用
WO2016168349A1 (en) 2015-04-14 2016-10-20 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating hepatitis b virus
BR112017024331A2 (pt) 2015-05-15 2018-07-24 Gilead Sciences, Inc. composto, composição farmacêutica, método de tratamento de um humano, métodos para inibir a atividade de uma proteína ido1, o crescimento ou a proliferação de células cancerosas, e a imunossupressão em um paciente, e de tratamento de uma doença, e, uso de um composto
EP4606784A3 (en) 2015-06-17 2025-11-05 Gilead Sciences, Inc. Co-crystals, salts and solid forms of tenofovir alafenamide
PT3316868T (pt) 2015-06-30 2020-04-21 Gilead Sciences Inc Formulações farmacêuticas compreendendo tenofovir e emtricitabina
CA2921336A1 (en) 2015-06-30 2016-12-30 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations
EA201890454A1 (ru) 2015-08-06 2018-07-31 Чимерикс, Инк. Пирролопиримидиновые нуклеозиды и их аналоги, которые можно использовать в качестве противовирусных средств
WO2017035230A1 (en) 2015-08-26 2017-03-02 Gilead Sciences, Inc. Deuterated toll-like receptor modulators
WO2017040896A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
WO2017040895A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Abbvie Inc. Anti-viral compounds
HK1257270A1 (zh) 2015-09-15 2019-10-18 Gilead Sciences, Inc. 用於治疗hiv的toll样受体(tlr)调节剂
SI3349758T1 (sl) 2015-09-16 2022-08-31 Gilead Sciences, Inc. Postopki za zdravljenje okužb z virusom arenaviridae
WO2017059120A1 (en) 2015-09-30 2017-04-06 Gilead Sciences, Inc. Compounds and combinations for the treatment of hiv
EP3355875B1 (en) 2015-10-01 2021-09-29 Gilead Sciences, Inc. Combination of a btk inhibitor and a checkpoint inhibitor for treating cancers
SG11201802983TA (en) 2015-11-09 2018-05-30 Gilead Sciences Inc Therapeutic compositions for treatment of human immunodeficiency virus
UA125819C2 (uk) 2015-12-15 2022-06-15 Гіліад Сайєнсіз, Інк. ВИДІЛЕНЕ МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО, ЩО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З gp120 ВІРУСУ ІМУНОДЕФІЦИТУ ЛЮДИНИ
WO2017106710A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Emory University Nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
EP3394044A1 (en) 2015-12-17 2018-10-31 Gilead Sciences, Inc. Tank-binding kinase inhibitor compounds
WO2017156380A1 (en) 2016-03-10 2017-09-14 Emory University N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
US11963972B2 (en) 2016-03-23 2024-04-23 Emory University Antiviral agents and nucleoside analogs for treatment of Zika virus
PT3377637T (pt) 2016-04-08 2020-06-17 Krystal Biotech Inc Composições para uso em métodos para o tratamento de ferimentos, transtornos e doenças da pele
WO2017184668A1 (en) 2016-04-20 2017-10-26 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating flaviviridae virus infections
WO2017184670A2 (en) 2016-04-22 2017-10-26 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating zika virus infections
CN109414508A (zh) 2016-05-27 2019-03-01 吉利德科学公司 使用ns5a、ns5b或ns3抑制剂治疗乙型肝炎病毒感染的方法
BR102017010009A2 (pt) 2016-05-27 2017-12-12 Gilead Sciences, Inc. Compounds for the treatment of hepatitis b virus infection
EP3471738A4 (en) 2016-06-20 2020-01-01 Merck Sharp & Dohme Corp. CYCLIC PHOSPHONATE-SUBSTITUTED NUCLEOSIDE DERIVATIVES AND METHOD FOR USE THEREOF FOR TREATING VIRUS DISEASES
WO2017223268A1 (en) 2016-06-22 2017-12-28 Yale University COMPOSITIONS AND METHODS OF RESENSITIZING CELLS TO BROMODOMAIN AND EXTRATERMINAL DOMAIN PROTEIN INHIBITORS (BETi)
JP6804790B1 (ja) * 2017-12-07 2020-12-23 エモリー ユニバーシティー Ｎ４−ヒドロキシシチジンおよび誘導体ならびにそれらに関連する抗ウイルス用途
EP3762372A4 (en) 2018-03-07 2021-12-08 Emory University THERAPEUTIC 4'-HALOGENIC NUCLEOTIDE AND NUCLEOSIDE COMPOSITIONS AND USES IN RELATION THEREOF
WO2021159044A1 (en) * 2020-02-07 2021-08-12 Emory University N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto

Also Published As

Publication number Publication date
AU2023270335B2 (en) 2025-09-11
US20210060050A1 (en) 2021-03-04
JP7381190B2 (ja) 2023-11-15
IL279663B (en) 2022-10-01
SI3236972T1 (sl) 2021-12-31
SG10202105371YA (en) 2021-07-29
AU2021203840A1 (en) 2021-07-08
JP2023153865A (ja) 2023-10-18
HRP20211456T1 (hr) 2021-12-24
CN107427529A (zh) 2017-12-01
JP2018500354A (ja) 2018-01-11
HUE056470T2 (hu) 2022-02-28
IL252997A0 (en) 2017-08-31
KR20170123308A (ko) 2017-11-07
CY1124663T1 (el) 2022-07-22
IL296496B1 (en) 2024-06-01
IL279663B2 (en) 2023-02-01
WO2016106050A1 (en) 2016-06-30
CA2972259A1 (en) 2016-06-30
AU2021203840C1 (en) 2024-01-25
BR112017013858A2 (pt) 2018-02-27
PT3236972T (pt) 2021-09-24
US20230293566A1 (en) 2023-09-21
KR20230130175A (ko) 2023-09-11
EP3236972A1 (en) 2017-11-01
IL279663A (en) 2021-03-01
SMT202100592T1 (it) 2021-11-12
IL296496A (en) 2022-11-01
SG11201705069YA (en) 2017-07-28
LT3236972T (lt) 2021-11-10
EA201791460A1 (ru) 2017-12-29
AU2015370004B2 (en) 2021-03-11
EP3939985B1 (en) 2024-05-08
US12551497B2 (en) 2026-02-17
AU2023270335A1 (en) 2023-12-14
AU2021203840B2 (en) 2023-08-24
IL252997B (en) 2021-01-31
CN118286245A (zh) 2024-07-05
PL3236972T3 (pl) 2022-03-07
EP3236972A4 (en) 2019-01-23
US11628181B2 (en) 2023-04-18
IL296496B2 (en) 2024-10-01
EP3939985A1 (en) 2022-01-19
ES2892123T3 (es) 2022-02-02
US20190022116A1 (en) 2019-01-24
EP3236972B1 (en) 2021-07-28
AU2015370004A1 (en) 2017-07-13
JP2022058363A (ja) 2022-04-12
JP2025098020A (ja) 2025-07-01
DK3236972T3 (en) 2021-10-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12551497B2 (en) N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
US10874683B2 (en) N4-hydroxycytidine and derivatives and anti-viral uses related thereto
JP7305205B2 (ja) Ｎ４－ヒドロキシシチジンおよび誘導体ならびにそれらに関連する抗ウイルス用途
HK40062633B (en) Pharmaceutical compositions comprising n4-hydroxycytidine derivatives for the treatment or prevention of influenza or coronavirus infections
HK40062633A (en) Pharmaceutical compositions comprising n4-hydroxycytidine derivatives for the treatment or prevention of influenza or coronavirus infections
BR122022008542B1 (pt) Uso de um composto e composição farmacêutica o compreendendo
EA045500B1 (ru) Противовирусное применение производных n4-гидроксицитидина
BR112020010581B1 (pt) Composição farmacêutica