RS62793B1 - Heterobasidion annosum ekstrakt protiv kancera, kompozicije i njihova primena - Google Patents
Heterobasidion annosum ekstrakt protiv kancera, kompozicije i njihova primenaInfo
- Publication number
- RS62793B1 RS62793B1 RS20211576A RSP20211576A RS62793B1 RS 62793 B1 RS62793 B1 RS 62793B1 RS 20211576 A RS20211576 A RS 20211576A RS P20211576 A RSP20211576 A RS P20211576A RS 62793 B1 RS62793 B1 RS 62793B1
- Authority
- RS
- Serbia
- Prior art keywords
- extract
- heterobasidion annosum
- raw material
- heterobasidion
- annosum
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
Opis
[0001] Pronalazak je definisan u patentnim zahtevima 1-6 i obezbeđuje ekstrakt iz poliporne gljive, kompoziciju koja sadrži ovaj ekstrakt i njihovu primenu u oblastima medicine i farmacije.
[0002] Kolorektalni rak je postao jedan od najčešćih gastrointestinalnih maligniteta u Poljskoj. Incidencija ovog kancera je dramatično porasla od ranih 1990-ih. Hirurško lečenje praćeno terapijom zračenjem i/ili hemoterapijom trenutno se primenjuje kod pacijenata sa kolorektalnim kancerom. Međutim, komercijalno dostupni sintetički lekovi protiv kancera koji se koriste tokom hemoterapije nisu posebno ciljani. Oni pokazuju značajnu toksičnost i višestruke neželjene reakcije, jer njihova citostatska aktivnost utiče ne samo na ćelije kancera, već i na normalne ćelije. Pored toga, njihove visoke cene doprinose visokoj ceni terapije. Zbog toga postoji velika potražnja za efikasnim i manje toksičnim agensima protiv kancera koji su sačinjeni od prirodnih sastojaka koji bi uključivali manji finansijski teret zbog dostupnosti aktivne supstance.
[0003] Brojne studije sprovedene uglavnom u Japanu, Kini i SAD otkrivaju visoku terapijsku aktivnost ekstrakata i jedinjenja dobijenih iz polipornih gljiva. Oni pokazuju različitu farmakološku aktivnost potvrđenu eksperimentalnim istraživanjima.
[0004] Imajući u vidu gore navedeno, svrha pronalaska je bila da se razvije ekstrakt iz polipore gljive koji bi se mogao koristiti kao lek protiv kancera prirodnog porekla, koji ima efikasnu aktivnost protiv ćelija kancera i nisku citotoksičnost prema normalnim ćelijama i koji bi doprineo smanjenju upotrebe sintetičkih hemoterapijskih agenasa, čime se smanjuju troškovi terapije protiv kancera i njeni neželjeni efekti.
[0005] Ekstrakt iz Heterobasidion annosum (HA) je dobijen primenom procesa koji obuhvata sledeće faze:
a) pripremanje sirovog materijala pulverizacijom svežeg sporokarpa Heterobasidion annosum gljive do veličine čestica manje od 2 mm tako da njegova temperatura ne raste iznad 40°C;
b) ekstrakcija Heterobasidion annosum sipanjem metanola u odnosu 1:2 (sirov materijal : rastvarač, masa : zapremina (m:V)) na sirov materijal, mešanje dobijene smeše tokom perioda od 24 do 120 sati, dekantiranje metanola i dodavanje sveže porcije metanola u odnosu 1:2 (sirov materijal : rastvarač, m:V);
c) ponavljanje pomenutog postupka ekstrakcije najmanje 3 puta;
d) kombinovanje i filtriranje dobijenih ekstrakata kroz filter papir; i
e) evaporacija rastvarača da se dobije ekstrakt u obliku praška.
[0006] Ekstrakt Heterobasidion annosum se koristi kao lek, naročito kao lek protiv kancera. Ekstrakt se poželjno koristi za prevenciju i/ili lečenje kolorektalnog kancera. Prema pronalasku, Heterobasidion annosum ekstrakt se koristi u dozi od 1 do 10 mg/kg telesne težine.
[0007] Heterobasidion annosum ekstrakt se takođe koristi za izradu leka za prevenciju i/ili lečenje kolorektalnog kancera.
[0008] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži aktivni sastojak i pomoćno sredstvo u kojoj aktivni sastojak je Heterobasidion annosum ekstrakt a pomoćno sredstvo je nosač. Koncentracija ekstrakta u kompoziciji iz pronalaska je od 0.1 do 5 µg/mL.
[0009] Heterobasidion annosum je vrsta gljive široko rasprostranjena u čitavoj umerenoj zoni i, shodno tome, lako je dostupna i proces izrade njenog ekstrakta nije skup. Pored navedenog, Heterobasidion annosum ekstrakt ima snažna svojstva protiv kancera i u isto vreme ispoljava slabu citostatsku aktivnost prema normalnim ćelijama, kao što je ilustrovano na slikama 1-7.
Slika 1 ilustruje efekat ekstrakta Heterobasidion annosum gljive na vijabilnost ćelijske linije DLD-1 kancera.
Slika 2 ilustruje efekat ekstrakta Heterobasidion annosum gljive na biosintezu DNK u ćelijskoj liniji DLD-1 kancera.
Slika 3 ilustruje efekat ekstrakta Heterobasidion annosum gljive na vijabilnost CRL-1474 liniju ćelija fibroblasta.
Slika 4 ilustruje efekat ekstrakta Heterobasidion annosum gljive na biosintezu DNK CRL-1474 linije ćelija fibroblasta.
Slika 5 prikazuje rezultate testova mitohondrijalnog potencijala u kulturi DLD-1 linije ćelija.
Slika 6 prikazuje rezultate testova apoptoze u ćelijskoj liniji DLD-1 kolorektalnog kancera. Slika 7 prikazuje srednju vrednost zapremine tumora tokom vremena u kontrolnoj grupi (bez lečenja) i u grupama kojima je administriran Heterobasidion annosum ekstrakt ili 5-fluorouracil (5FU).
[0010] Pronalazak je ilustrovan sledećim primerima.
Primer I. Izrada ekstrakta iz Heterobasidion annosum
[0011] Svež sporokarp (gljive) prikupljen u Belovješkoj šumi (Bialowieza Forest) sa debala zaraženog borovog drveća je pulverizovan na veličinu čestica manju od 2 mm. Njegova temperatura je kontrolisana tokom pulverizacije, tako da nije rasla iznad 40°C.200 mL metanola je sipano preko 100 g sirovog materijala (odnos sporokarpa prema rastvaraču: 1:2; m:V). Ovo je stavljeno na megnetska mešalicu. Nakon mešanja tokom 24 sata, rastvarač je dekantovan i porcija od 200 mL svežeg metanola je dodata. Ekstrakcija je ponovljena 3 puta. Metanolni ekstrakti su kombinovani i filtrirani kroz filter papir. Rastvarač je evaporisan primenom vakuumskog evaporatora. Dobijeni suvi ekstrakt je u obliku krem obojenog praška.
Primer II. Izrada kompozicije koja sadrži ekstrakt iz Heterobasidion annosum
[0012] Odgovarajuće količine suvog ekstrakta (praška) pripremljene kao što je iznad opisano su odmerene i kombinovane sa dimetilsulfoksidom (DMSO) ili fiziološkim rastvorom puferovanim fosfatom (PBS), i kompozicije su pripremljene u kojima su koncentracije ekstrakta bile 0.1 µg/mL, 1 µg/mL i 5 µg/mL.
[0013] Ostali nosači korišćeni u kompozicijama koji sadrže Heterobasidion annosum ekstrakt su fiziološki rastvor ili izotonični rastvor glukoze.
Primer III. Biološki testovi
a) Testovi na ćelijskim kulturama
[0014] Heterobasidion annosum ekstrakt u obliku rastvora DMSO je korišćen u testovima na kulturama ćelija. Koncentracija ekstrakta je bila 0.1; 1 i 5 µg/mL.
[0015] Citotoksična svojstva ekstrakta su ispitana u ćelijskoj liniji DLD-1 kolorektalnog kancera. Testovi su sprovedeni primenom tri koncentracije (0,1; 1 i 5 µg/mL), odabrane kao rezultat višestrukih eseja zasnovanih na različitim koncentracijama. Citotoksičnost je procenjena primenom eseja redukcije tetrazolijum soli (MTT), i biosinteza DNK je procenjena primenom metode radioizotopa sa obeleženim timidinom. Eseji su sprovedeni nakon 24-časovne inkubacije ćelija sa ekstraktom iz navedene gljive. Rezultati su prikazali značajno smanjenje vijabilnosti ćelija kancera sa rastućim dozama primenjenog ekstrakta (Slika 1). Rezultati koji ilustruju ugradnju obeleženog timidina (biosinteza DNK) u ćelije kancera (Slika 2) su kompatibilni sa onim koji su dobijeni u MTT eseju i oni potvrđuju da je ekstrakt aktivan u testiranom opsegu. Dobijeni rezultati u testu CRL-1474 fibroblastne ćelijske linije (dva replikata nezavisnih testova) ukazuju na minimalno smanjenje fibroblastne vijabilnosti nakon 24-časovne inkubacije sa primenom ekstrakta u koncentraciji od 0.1 µg/mL, i preko 50% smanjenja u vijabilnosti sa primenom ekstrakta u koncentraciji od 1 µg/mL; međutim, kada se koristi ekstrakt u koncentraciji od 5 µg/mL, ćelijska vijabilnost se smanjuje za samo 20% u poređenju sa kontrolom (Slika 3). Ovi rezultati delimično odgovaraju podacima dobijenim u eseju biosinteze DNK koji je ukazivao na produženu replikaciju kod približno 100% ćelija (Slika 4).
[0016] Može se zaključiti na osnovu niske citotoksičnosti prema veoma čestim fiziološkim ćelijama (fibroblastima) da neželjene efekte koji su u vezi sa administracijom ekstrakta treba ograničiti.
[0017] Dodatno, sprovedeni su testovi mitohondrijalnog potencijala i apoptoze u kulturi ćelijske linije DLD-1. Test je sproveden primenom NucleoCounter® NC-3000™ fluorescentnog mikroskopa.
[0018] Mitouhondrijalni potencijal je procenjen primenom VB-48 boje. Populacija živih ćelija može se odrediti merenjem intenziteta fluorescencije boje. Kao što se može primetiti na grafikonu prikazanom na slici 5 u kome je horizontalna osa intenzitet fluorescencije od VB-48, a vertikalna osa je % ćelija, najviši procenat ćelija sa normalnom mitohondrijalnom polarizacijom je prisutan u kontrolnoj grupi (94.2%). 24 sata nakon dodavanja ekstrakta Heterobasidion annosum (HA) gljive ćelijama, primećen je povećan procenat ćelija sa depolarisanim membranama mitohondrija sa rastućim koncentracijama (17.9% pri 0.1 µg/mL HA koncentraciji i 42.6% pri 1 µg/mL HA koncentraciji).
[0019] Gore navedeni rezultati potvrđuju rezultate dobijene testovima apoptoze u ćelijskoj liniji DLD-1 kolorektalnog kancera. Rezultati testova apoptoze su ilustrovani na slici 6. Testovi su uključivali merenje intenziteta fluorescencije propidijum jodida (PI) koji ulazi u mrtve ćelije (vertikalna osa) i intenziteta fluorescencije VB-48 boje (horizontalna osa). Kao što je prikazano na slici 6, 96.3% ćelija koje nisu bile podvrgnute apoptozi i pribl. 3.3% apoptotičkih ćelija je pronađeno u kontrolnoj grupi. Nakon dodavanja HA ekstrakta u koncentracijama od 0.1 i 1 µg/mL, procenat ćelija podvrgnutih apoptozi se povećao nakon 24 sata: 93.6% i 53.8% ćelija koje nisu bile podvrgnute apoptozi i 4.4% i 32.9% apoptotičkih ćelija, redom.
[0020] Pored toga, vizuelizovane su promene u eksprimiranju proteina i intracelularna translokacija proteina u ćelijskoj liniji DLD-1 kolorektalnog kancera je procenjena putem testova korišćenjem BD Pathway 855 visokopropusnog fluorescentnog mikroskopa. Procenjeni su kaspaza-3 i protein p53. Uočeno je povećanje eksprimiranja kaspaze-3 sa povećanjem koncentracije ekstrakta (0.1; 1 i 5 µg/mL) i njenom translokacijom iz citoplazme u ćelijsko jezgro. U slučaju proteina p53, primećena je njegova translokacija u ćelijsko jezgro, što ukazuje da je aktivirana apoptoza.
b) Studija na životinjama.
[0021] In vivo test na miševima CBy.Cg-Fox1/cmdb soja sa implantiranim ćelijama kolorektalnog kancera je sproveden. Između 7. dana nakon što su ćelije kancera implantirane i 35. dana eksperimenta, miševima je dat ekstrakt u obliku PBS rastvora u dozi od 1 mg/kg telesne težine (intragastrična administracija). Ekstrakt se takođe može administrirati u obliku tableta ili kapsula ili intravenski.
[0022] Kao što se može videti na slici 7, niža tendencija ka tumorskom rastu se može primetiti u grupi miševa koji primaju ekstrakt Heterobasidion annosum (HA) gljive u poređenju sa kontrolnom grupom koja je primila samo nosač. Najniži rast tumora je zabeležen u grupi životinja koje su primile intraperitonealno 5-fluorouracil (5FU), konvencionalni hemoterapijski agens. Značajno, stanje miševa je bilo veoma dobro tokom eksperimenta. Nisu pronađeni simptomi koji bi ukazali na toksične efekte administriranog ekstrakta.
Claims (6)
1. Ekstrakt iz Heterobasidion annosum dobijen primenom procesa koji obuhvata sledeće faze: a) priprema sirovog materijala pulverizacijom svežeg sporokarpa Heterobasidion annosum gljive do veličine čestica manje od 2 mm i kontrolisanje da temperatura ne raste iznad 40°C tokom procesa;
b) ekstrakcija Heterobasidion annosum sipanjem metanola u odnosu 1:2 (sirov materijal: rastvarač, masa: zapremina (m:V)) na sirov materijal, mešanje dobijene smeše tokom perioda od 24 do 120 sati, dekantovanje metanola i dodavanje sveže porcije metanola u odnosu 1:2 (sirov materijal : rastvarač, m:V);
c) ponavljanje postupka ekstrakcije najmanje 3 puta;
d) kombinovanje i filtriranje dobijenih ekstrakata; i
e) evaporacija rastvarača da se dobije ekstrakt u obliku praška;
pri čemu tako dobijeni ekstrakt ima efekat protiv kancera.
2. Heterobasidion annosum ekstrakt iz patentnog zahteva 1 za primenu kao lek protiv kancera.
3. Heterobasidion annosum ekstrakt iz patentnog zahteva 1 za primenu prema patentnom zahtevu 2, naznačen time da se on koristi za prevenciju i/ili lečenje kolorektalnog kancera.
4. Heterobasidion annosum ekstrakt iz patentnog zahteva 1 za primenu prema patentnom zahtevu 3, naznačen time da se on koristi u dozi od 1 do 10 mg/kg telesne težine.
5. Farmaceutska kompozicija koja sadrži aktivni sastojak protiv kancera i pomoćno sredstvo, naznačena time da aktivni sastojak protiv kancera je Heterobasidion annosum ekstrakt iz patentnog zahteva 1 i pomoćno sredstvo je nosač.
6. Kompozicija prema patentnom zahtevu 5, naznačena time da ona sadrži ekstrakt u koncentraciji od 0.1 do 5 µg/mL.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL420267A PL238795B1 (pl) | 2017-01-20 | 2017-01-20 | Ekstrakt z grzyba poliporoidalnego, kompozycja zawierająca taki ekstrakt oraz jego zastosowanie |
| EP18711183.6A EP3570860B1 (en) | 2017-01-20 | 2018-01-19 | Anticancer heterobasidion annosum extract, compositions and uses thereof |
| PCT/PL2018/000007 WO2018135958A1 (en) | 2017-01-20 | 2018-01-19 | Extract from polypore fungus, composition comprising this extract and use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RS62793B1 true RS62793B1 (sr) | 2022-02-28 |
Family
ID=62909283
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RS20211576A RS62793B1 (sr) | 2017-01-20 | 2018-01-19 | Heterobasidion annosum ekstrakt protiv kancera, kompozicije i njihova primena |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3570860B1 (sr) |
| PL (1) | PL238795B1 (sr) |
| RS (1) | RS62793B1 (sr) |
| WO (1) | WO2018135958A1 (sr) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110982713B (zh) * | 2020-01-15 | 2020-07-17 | 青岛农业大学 | 一株南方异担子菌及其应用 |
| PL242259B1 (pl) * | 2020-05-19 | 2023-02-06 | Bakier Slawomir | Kompozycja oraz sposób otrzymywania kompozycji do zastosowania w leczeniu zgnilca złośliwego pszczół |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060045887A1 (en) * | 2004-08-25 | 2006-03-02 | Gavish-Galilee Bio Applications Ltd. | Mushroom extracts having anticancer activity |
| ES2882588T3 (es) * | 2015-03-31 | 2021-12-02 | Turtle Bear Holdings Llc | Actividad antiviral de setas medicinales y sus constituyentes activos |
-
2017
- 2017-01-20 PL PL420267A patent/PL238795B1/pl unknown
-
2018
- 2018-01-19 WO PCT/PL2018/000007 patent/WO2018135958A1/en not_active Ceased
- 2018-01-19 RS RS20211576A patent/RS62793B1/sr unknown
- 2018-01-19 EP EP18711183.6A patent/EP3570860B1/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL420267A1 (pl) | 2018-07-30 |
| EP3570860B1 (en) | 2021-10-13 |
| WO2018135958A1 (en) | 2018-07-26 |
| PL238795B1 (pl) | 2021-10-04 |
| EP3570860A1 (en) | 2019-11-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zeng et al. | Potentiation of in vivo anticancer efficacy of selenium nanoparticles by mushroom polysaccharides surface decoration | |
| Zhou et al. | Redox-triggered activation of nanocarriers for mitochondria-targeting cancer chemotherapy | |
| Wilson et al. | Nanoparticles based on albumin: preparation, characterization and the use for 5-flurouracil delivery | |
| Xu et al. | Acute and subacute toxicity studies on triptolide and triptolide-loaded polymeric micelles following intravenous administration in rodents | |
| Lv et al. | Folate-modified carboxymethyl chitosan-based drug delivery system for breast cancer specific combination therapy via regulating mitochondrial calcium concentration | |
| Bhanumathi et al. | Bioformulation of silver nanoparticles as berberine carrier cum anticancer agent against breast cancer | |
| Zhou et al. | Shape regulated anticancer activities and systematic toxicities of drug nanocrystals in vivo | |
| Park et al. | Targeting and synergistic action of an antifungal peptide in an antibiotic drug-delivery system | |
| Nie et al. | Self-healable and pH-responsive spermidine/ferrous ion complexed hydrogel Co-loaded with CA inhibitor and glucose oxidase for combined cancer immunotherapy through triple ferroptosis mechanism | |
| Pereverzeva et al. | Intravenous tolerance of a nanoparticle-based formulation of doxorubicin in healthy rats | |
| Patel et al. | Role of nanoparticle-conjugates and nanotheranostics in abrogating oxidative stress and ameliorating neuroinflammation | |
| Thomas et al. | Synergistic anticancer efficacy of bendamustine hydrochloride loaded bioactive hydroxyapatite nanoparticles: In-vitro, ex-vivo and in-vivo evaluation | |
| Behzad et al. | An overview of zinc oxide nanoparticles produced by plant extracts for anti-tuberculosis treatments | |
| You et al. | Enhanced cytotoxicity by a benzothiazole-containing cisplatin derivative in breast cancer cells | |
| Wang et al. | Coordination‐Driven Self‐Assembly of Biomedicine to Enhance Photodynamic Therapy by Inhibiting Proteasome and Bcl‐2 | |
| Yang et al. | Enhanced therapeutic efficacy of a novel self-micellizing nanoformulation-loading fisetin against acetaminophen-induced liver injury | |
| Mishra et al. | Development of epigallocatechin and ascorbic acid dual delivery transferosomes for managing Alzheimer’s disease: in vitro and in vivo studies | |
| Rajeshkumar et al. | Folate receptor-targeted Camptothecin-loaded PLGA-Glutenin nanoparticles for effective breast cancer treatment | |
| RS62793B1 (sr) | Heterobasidion annosum ekstrakt protiv kancera, kompozicije i njihova primena | |
| Sharma et al. | Biodegradable polymeric nanocomposite containing phloretin for enhanced oral bioavailability and improved myocardial ischaemic recovery | |
| Thomas et al. | Evaluation of albuminated curcumin as soluble drug form to control growth of cancer cells in vitro | |
| Li et al. | A mitochondria-targeted nanomedicine for myocardial ischemia/reperfusion injury with synergistic antioxidant and anti-inflammatory properties | |
| Tewari et al. | Cytoprotective effect of Centella asiatica is mediated through the modulation of mitochondrial voltage-dependent anion channel (VDAC) and scavenging of free radicals | |
| Tandon et al. | Vincristine loaded bioinspired vesicles: Preparation, characterization and in-vitro evaluation on U87-MG cells | |
| Kaymak et al. | Development of phytotherapeutic nanoformulation containing Gypsophila eriocalyx and its evaluation as a candidate formulation for osteoporosis treatment on human bone marrow stem cells |