RS62837B1 - Kombinacija koja sadrži palbociklib i 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3s)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7h-benzo[7]anulen-2-karboksilnu kiselinu i njena upotreba za lečenje kancera - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovde je data kombinacija palbocikliba i 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilne kiseline, farmaceutski sastav koji sadrži takvu kombinaciju, i terapeutske upotrebe takve kombinacije i farmaceutskog sastava, posebno za lečenje kancera.

[0002] Receptor estrogena a (ESR1) je izražen u većini tumora dojke, omogućavajući im da odgovore na mitogena dejstva estrogena.

[0003] 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen- 2-karboksilna kiselina, u daljem tekstu označena kao "jedinjenje (1)", je selektivni degradator estrogenskih receptora (SERD) koji ima potpuna svojstva antagonista estrogenskih receptora i ubrzava proteazomalnu degradaciju receptora estrogena. Ovo jedinjenje je obelodanjeno u patentnoj prijavi PCT/EP2017/053282, objavljeno kao WO 2017/140669.

[0004] Palbociklib, takođe poznat kao 6-acetil-8-ciklopentil-5-metil-2-[5-(1-piperazinil)piridin-2-ilamino]pirido[2,3-d]pirimidin-7(8H)-on, je inhibitor ciklin zavisne kinaze (CDK) 4 i 6. Palbociklib se prodaje pod trgovačkim imenom Ibrance<®>i indikovan je za lečenje lokalno uznapredovalog ili metastatskog karcinoma dojke, pozitivnog na hormonski receptor (HR), negativnog na receptor humanog epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), u kombinaciji sa inhibitorom aromataze, ili u kombinacija sa fulvestrantom kod žena koje su prethodno primale endokrinu terapiju. Kod žena pre ili u perimenopauzi, endokrinu terapiju treba kombinovati sa agonistom luteinizirajućeg hormona koji oslobađa hormon (LHRH).

[0005] CN 106924 210 A obelodanjuje upotrebu palbocikliba za lečenje raka dojke.

[0006] WO 2016/176666 A1 obelodanjuje kombinaciju palbocikliba sa SERD fulvestrantom za lečenje pacijenata sa ER+, HER2- uznapredovalim ili metastatskim rakom dojke koji su napredovali na prethodnoj endokrinoj terapiji.

[0007] Uvek postoji potreba za pronalaženjem novih antitumorskih tretmana. Sada se pokazalo da se kombinacija jedinjenja (1) sa palbociklibom dobro toleriše, pokazuje snažnu antitumorsku efikasnost i indukuje regresiju tumora, sa sinergističkim efektom u poređenju sa svakim aktivnim sastojkom sam.

[0008] Ovde je data kombinacija koja sadrži jedinjenje (1) i palbociklib.

[0009] U kombinaciji datoj ovde, jedinjenje (1) može postojati ne samo u obliku cviterjona (tj. globalno neutralnog molekula koji ima kiselinsku grupu i baznu grupu), već i u obliku adicionih soli sa kiselinama ili bazama. Takve adicione soli se mogu koristiti u gornjoj kombinaciji. Dakle, ovde je data kombinacija koja sadrži jedinjenje (1), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i palbociklib.

[0010] U jednom otelotvorenju, kombinacija jedinjenja (1), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa palbociklibom pokazuje terapeutsku sinergiju. Kombinacija pokazuje terapeutsku sinergiju ako je njen terapeutski efekat superiorniji u poređenju sa kumulativnim efektom bilo kog aktivnog sredstva same kombinacije.

[0011] U drugom otelotvorenju, jedinjenje (1), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i palbociklib se daju oralnim putem.

[0012] Ovaj tekst takođe opisuje kombinaciju jedinjenja (1), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i palbocikliba za njegovu upotrebu kao lek.

[0013] Ovde je takođe obezbeđen farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje (1), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i palbociklib, kao i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0014] Ekscipijensi su odabrani od uobičajenih ekscipijenata koji su poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Tačnije, ekscipijensi su odabrani od onih korisnih za oralnu primenu u bilo kom obliku (tečni rastvor, disperzija ili suspenzija, tablete, kapsule ili slično).

[0015] U drugom otelotvorenju, jedinjenje (1), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i palbociklib mogu se davati istovremeno, odvojeno ili raspoređeni tokom određenog vremenskog perioda (sekvencijalno davanje). Stoga, kombinacija koja je ovde data nije isključivo ograničena na onu koja se dobija fizičkim povezivanjem sastojaka u jednom farmaceutskom sastavu, već i na one koje omogućavaju odvojeno davanje, koja može biti istovremeno ili razmaknuto (ili „rasprostranjena“) tokom vremena.

[0016] Ovde je takođe obezbeđen farmaceutski komplet koji sadrži:

(i) prvi farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje (1), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens;

(ii) drugi farmaceutski sastav koji sadrži palbociklib i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens;

oba farmaceutska sastava (i) i (ii) koji se nalaze u odvojenim odeljcima i namenjene su da se primenjuju nezavisno, pri čemu je svako davanje u odnosu na drugu simultana, odvojena ili raspoređena (uzastopno) tokom vremena.

[0017] U iznad opisanim kombinacijama, farmaceutskim sastavima i farmaceutskom kompletu, jedinjenje (1) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i palbociklib su povoljno prisutni u efikasnim dozama, prilagođenim s obzirom na lečenu patologiju i stanje pacijenta kome se daje. Posebno za palbociklib, preporučena početna doza za lečenje raka za odrasle pacijente je 125 mg jednom dnevno tokom 21 dana, nakon čega sledi 7 dana pauze od terapije, zajedno sa prekidom doziranja i/ili smanjenjem doze na osnovu individualne bezbednosti i podnošljivosti.

[0018] Ovde je takođe obezbeđena kombinacija koja sadrži jedinjenje (1), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i palbociklib, kao i farmaceutski sastav i komplet kao što je iznad opisano, za upotrebu u lečenju kancera.

[0019] Ovde je takođe obezbeđeno jedinjenje (1) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju kancera istovremenom primenom sa palbociklibom.

[0020] Ovde je takođe obezbeđen palbociklib za upotrebu u lečenju kancera istovremenom primenom sa jedinjenjem (1) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli.

[0021] U drugom otelotvorenju, rak je rak koji zavisi od hormona.

[0022] U sledećem otelotvorenju, rak je rak zavisan od estrogenskog receptora, posebno rak je rak zavisni od estrogenskog receptora.

[0023] U još jednom otelotvorenju, rak je otporan na anti-hormonski tretman.

[0024] U još jednom otelotvorenju, rak je rak sa estrogenim receptorima divljeg tipa.

[0025] U sledećem otelotvorenju, rak je rak sa deregulisanom funkcijom estrogenskih receptora koji je povezan, ali nije ograničen na, barem jednu epigenetsku i genetsku promenu estrogenskih receptora, poput mutacije, pojačanja, varijante spajanja.

[0026] U još jednom otelotvorenju, rak je rak sa mutiranim receptorima estrogena.

[0027] U još jednom otelotvorenju, mutacije estrogenskih receptora mogu da uključuju, ali se ne ograničavaju na, nove ili poznate mutacije poput Leu536Arg, Tyr537Ser, Tyr537Asn, Asp538Gly.

[0028] U još jednom otelotvorenju, rak je rak osetljiv na estrogen.

[0029] U drugom otelotvorenju, rak je rak dojke, tačnije rak dojke pozitivan na estrogenski receptor (ERα pozitivan rak dojke), ili njegova metastaza, kao što je cerebralna metastaza.

[0030] Ovaj tekst takođe opisuje postupak lečenja iznad navedenih patoloških stanja, posebno raka dojke, koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja (1), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine palbociklib.

[0031] Ovaj tekst takođe opisuje postupak lečenja iznad navedenih patoloških stanja, posebno raka dojke, koji obuhvata davanje ispitaniku kome je to potrebno farmaceutskog sastava kao što je iznad opisano.

[0032] Ovaj tekst takođe opisuje postupak lečenja iznad navedenih patoloških stanja, posebno raka dojke, koji obuhvata davanje ispitaniku kome je to potrebno kombinacije kao što je iznad opisano.

[0033] Ovaj tekst takođe opisuje postupak lečenja iznad navedenih patoloških stanja, posebno karcinoma dojke, koji se sastoji od istovremenog davanja ispitaniku kome je to potrebno jedinjenje (1) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i palbocikliba.

[0034] Ovaj tekst takođe opisuje postupak lečenja iznad navedenih patoloških stanja, posebno karcinoma dojke, koji se sastoji od istovremenog davanja ispitaniku kome je to potrebno palbocikliba i jedinjenja (1) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0035] U iznad opisanim postupcima, ispitanik može biti čovek.

[0036] Ovaj tekst takođe opisuje kombinaciju koja sadrži jedinjenje (1), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i palbociklib za proizvodnju leka korisnog u lečenju iznad navedenih patoloških stanja, posebno raka dojke.

[0037] Ovaj tekst takođe opisuje upotrebu jedinjenja (1), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka korisnog u lečenju iznad navedenih patoloških stanja, posebno raka dojke, zajedničkom primenom sa palbociklibom.

[0038] Ovaj tekst takođe opisuje upotrebu palbocikliba u proizvodnji leka korisnog u lečenju iznad navedenih patoloških stanja, posebno raka dojke, zajedničkom primenom sa jedinjenjem (1) ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli.

[0039] Ovaj tekst takođe opisuje proizvodni artikal, pakovanje ili administrativnu jedinicu, koji se sastoji iz:

• materijala za pakovanje;

• iznad definisane kombinacije, farmaceutskog sastava ili farmaceutskog kompleta; i • etikete ili umetka pakovanja sadržan u pomenutom materijalu za pakovanje, koji ukazuje da se navedena kombinacija, farmaceutski sastav ili farmaceutski komplet daje pacijentu za lečenje raka.

[0040] Primeri u nastavku pokazuju kako se sintetiše jedinjenje (1) i farmakološki rezultati dobijeni sa jedinjenjem (1), palbociklibom i njihovom kombinacijom protiv ksenotransplantata ćelijske linije raka dojke kod miševa.

1 - Sinteza 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil) pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilne kiseline

[0041] Eksperimentalni protokol za sintezu 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo [7]anulen-2-karboksilna kiselina (jedinjenje (1)), opisano u patentnoj prijavi WO 2017/140669, je reprodukovano u nastavku, zajedno sa svojim analitičkim podacima. Sintetička šema za sintezu jedinjenja (1) nalazi se na Slici 1.

[0042] 1H NMR spektri su izvedeni na Bruker Avance DRX-400 spektrometru, sa hemijskim pomacima (δ u ppm) u rastvaraču dimetil sulfoksid-d6 (d6-DMSO) referentnim na 2,5 ppm na temperaturi od 303 K. Konstante spajanja (J) date su u hercima.

[0043] Tečna hromatografija/maseni spektri (LC/MS) su dobijeni na UPLC Acquity Waters instrumentu, detektoru rasejanja svetlosti Sedere i SKD Waters masenom spektrometru korišćenjem UV detekcije DAD 210 <I <400 nm i kolone Ackuiti UPLC CSH C181,7 µm, dimenzija 2,1×30 mm, mobilna faza H2O 0,1% HCO2H/CH3CN 0,1% HCO2H.

[0044] Koriste se sledeće skraćenice i empirijske formule:

AcOEt etil acetat

AlCl3aluminijum trihlorid

Cs2CO3cezijum karbonat

DCM dihlorometan

DMF N,N-dimetilformamid

DMSO dimetil sulfoksid

HCI hlorovodonik

K2CO3kalijum karbonat

LC/MS tečna hromatografija/masena spektrometrija

MeOH metanol

MgSO4magnezijum sulfat

NaHCO3natrijum bikarbonat

NaOH natrijum hidroksid

Pd(dppf)Cl21,1'bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II)

Ph3P ili P(Ph)3trifenilfosfin

Ph3P=O trifenilfosfin oksid

°C stepena Celzijusa

ml mililitar(i)

mmol milimol(ovi)

µmol mikromol(ovi)

µM mikromolarni

nM nanomolarni

ppm milionitih delova

Međujedinjenje (c). Terc-butil (3S)-3-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2il)fenoksi]pirolidin-1-karboksilat

[0045]

[0046] U rastvor koji je u komercijalnoj upotrebi 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) fenola (a) (82,7 g, 364,51 mmol) u THF (2 L) dodat je argon (R)-1-N-Boc-3-hidroksipirolidin (b) (84,43 g, 437,41 mmol), a zatim N,N,N',N'-tetrametilazodikarboksamid (99,1 g, 546,77 mmol). Bistra reakciona smeša je postala narandžasta i dodat je trifenilfosfin (143.41 g, 546.77 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 sata, u međuvremenu se formirao talog trifenilfosfin oksida (Ph3P=O). Reakciona smeša je sipana u vodu (1,5 L) i ekstrahovana etil acetatom (AcOEt) (3x1,5 L). Sakupljene organske faze su sušene preko magnezijum sulfata (MgSO4), filtrirane i koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Ostatak se preuzme u diizopropileter (1,5 L) i formirana čvrsta supstanca (Ph3P=O) se filtrira. Rastvarač je koncentrovan pod redukovanim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem smešom heptana sa AcOEt (90/10; v/v) kako bi dao 145 g (100%) terc-butil (3S)-3-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi]pirolidin-1-karboksilata (c) kao bezbojno ulje.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ ppm): 1.27 (s : 12H); 1.39 (s : 9H); 2.05 (m : 1H); 2.14 (m : 1H); 3.37 (3H); 3.55 (m : 1H); 5.05 (s : 1H); 6.94 (d, J = 8.4 Hz : 2H); 7.61 (d, J = 8.4 Hz : 2H)

Međujedinjenje (d). (3S)-3-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2il)fenoksi]pirolidin, hidrohlorid

[0047]

[0048] U rastvor (S)-terc-butil 3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)pirolidin-1-karboksilata (c) ( 80 g, 195,23 mmol) u MeOH (450 ml) dodaje se polako HCl 4N u dioksan (250 ml).

[0049] Posle 1,5 sati, reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom, a ostatak je stavljen u Et2O uz mešanje da bi se dobila čvrsta supstanca koja je zatim filtrirana i osušena pod vakuumom da bi se dobilo 61,8 g (95%) (3S)-3-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2il)fenoksi]pirolidin, hidrohlorid (d) kao beli prah.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ ppm): 1.28 (s : 12H); 2.10 (m : 1H); 2.21 (m : 1H); 3.31 (3H); 3.48 (m : 1H); 5.19 (m : 1H); 6.97 (d, J = 8.4 Hz : 2H); 7.63 (d, J = 8.4 Hz : 2H); 9.48 (s : 1H); 9.71 (s : 1H).

LC/MS (m/z, MH<+>): 290

Međujedinjenje (e). (3S)-1-(3-fluoropropil)-3-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi]pirolidin

[0050]

[0051] U suspenziju (S)-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)pirolidin hidrohlorida (d) (20 g, 61,42 mmol) u acetonitril (100 ml), dodat je K2CO3(21,22 g, 153,54 mmol) i 1-jodo-3-fluoropropan (12,15 g, 61,42 mmol), pod argonom. Reakciona smeša je mešana na 40°C tokom 24 sata. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je filtrirana i isprana acetonitrilom. Filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom, a ostatak je prenet u DCM, a nastala čvrsta supstanca je filtrirana i isprana DCM-om. Filtrat je koncentrovan da bi se dobilo 21,5 g (100%) (3S)-1-(3-fluoropropil)-3-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2 -il)fenoksi]pirolidin (e) kao žuta pena.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ ppm): 1.27 (s : 12H); 1.77 (m : 2H); 1.84 (m : 1H); 2.27 (m : 1H); 2.41 (m : 1H); 2.49 (2H); 2.62 (dd, J = 2.6 i 10.4Hz : 1H); 2.69 (m : 1H); 2.83 (dd, J = 6.2 i 10.4Hz : 1H); 4.47 (td, J = 6.2 i 47Hz : 2H) ; 4.99 (m : 1H); 6.77 (d , J = 8.4 Hz : 2H); 7.58 (d, J = 8.4 Hz : 2H).

LC/MS (m/z, MH<+>): 350

Međujedinjenje (B). 5-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-2-il 2,2-dimetilpropanoat

[0052]

[0053] Rastvoru 2-hidroksi-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-5-ona (A) (1,52 g, 13,73 mmol), u acetonu (60 ml), dodat je K2CO3(1,19 g, 8,63 mmol) i pivaloil hlorida (1,06 ml, 8,63 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem gradijentom heptana u AcOEt (100/0 do 85/15, v/v) dajući 1.55 g (69%) 5-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-2-il 2,2-dimetilpropanoat (B) u obliku bezbojnog ulja.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ ppm): 7.65 (d, 1H); 7.10-7.04 (m, 2H); 2.95 (t, 2H); 2.68 (t, 2H); 1.85-1.65 (m, 4H).

1

LC/MS (m/z, MH<+>): 261

Međujedinjenje (C). 9-(trifluorometansulfoniloksi)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-il 2,2-dimetilpropanoat

[0054]

[0055] U rastvor 5-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-2-il 2,2-dimetilpropanoata (B) (15 g, 57,62 mmol) u DCM (500 ml) je dodat u kapima pod argon piridin (7,28 ml, 86,43 mmol) i anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (19,58 ml, 115,24 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata i dodat je led (200 g). Faze su razdvojene, vodena faza je isprana sa DCM i sakupljene organske faze su osušene preko MgSO4, filtrirane i isparene pod redukovanim pritiskom da bi se dobilo 22 g (97%) 9-(trifluorometansulfoniloksi)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-il 2,2-dimetilpropanoata (C) kao bele čvrste supstance.

LC/MS (m/z, MH-): 391

Međujedinjenje (D). 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-il-2,2-dimetilpropanoat

[0056]

[0057] U rastvor 9-(trifluorometansulfoniloksi)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-il-2,2-dimetilpropanoata (C) (22 g, 56,07 mmol) i (3S)-1-(3-fluoropropil)-3-[4-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi]pirolidin (e) (20,56 g, 58,87 mmol) u dioksanu (420 ml) i vodi (120 ml) ) je dodat pod argon Pd(dppf)Cl2(2,75 g, 3,36 mmol) i Cs2CO3(36,57 g, 112,13 mmol). Reakciona smeša je mešana 1 sat na sobnoj temperaturi i podeljena je između vode i DCM. Vodena faza je isprana sa DCM, a prikupljene organske faze su sušene preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem sa gradijentom MeOH u DCM (0 do 5%; V/V) da se dobije 31 g (100 %) 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil) pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-il -2,2-dimetilpropanoat (D).

LC/MS (m/z, MH<+>): 466

Međujedinjenje (E). 9-(4-1[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-ol

[0058]

[0059] Rastvoru pod argonom 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3 -il-2,2-dimetilpropanoat (D) (24,8 g, 53,26 mmol) u MeOH (300 ml), dodat je NaOH 5M (23 ml, 115,00 mmol). Reakciona smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi. Zatim je pH podešen na 7 dodavanjem 6N vodenog rastvora HCl. MeOH je koncentrovan pod redukovanim pritiskom, zatim je dodat DCM. Organska faza je osušena preko MgSO4i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem gradijentom DCM/MeOH od 100/0 do 95/05 dajući 18,8 g (93%) 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-ol (E) kao bež čvrsta supstanca.

LC/MS (m/z, MH<+>): 382

Međujedinjenje (F). 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-il trifluorometansulfonat

[0060]

[0061] U rastvor 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-ol (E) (20,6 g, 54,00 mmol) u DCM (200 ml) i piridinu (6,55 ml, 81,00 mmol), ohlađenom na 5°C (ledeno kupatilo), dodat je kap po kap trifluorometansulfonski anhidrid (18,93 ml, 108,00 mmol) pod argonom, a reakciona temperatura je održavana na <15°C. Ledeno kupatilo je uklonjeno, a smeđa suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Dodati su led (200 g) i DCM (200 ml) i faze su odvojene. Organska faza je osušena preko MgSO4i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem gradijentom DCM/MeOH od 100/0 do 95/05 dajući 24,7 g (89,1%) 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-ol trifluorometansulfonat (F) kao braon ulje.

LC/MS (m/z, MH<+>): 514

Međujedinjenje (G). Metil 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilat

[0062]

[0063] U rastvor 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-il trifluorometansulfonatu (F) (10,1 g, 19,67 mmol) u DMF (66 ml) i MeOH (33 ml), dodaju se Pd(dppf)Cl2(909 mg, 1,18 mmol) i diizopropiletilamin (7,21 ml). Crna suspenzija je karbonilovana u autoklavu na 70°C pod 5 bara CO tokom 5 sata.

Reakciona smeša je filtrirana, a zatim je filtrat delimično koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je podeljen između AcOEt i vode. Organska faza je isprana vodom (2x 100 ml), osušena iznad MgSO4i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je

1

prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem gradijentom DCM/MeOH od 100/0 do 95/05 dajući 7,13 g (86%) metil 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilat (G) kao smeđa guma.

LC/MS (m/z, MH<+>): 424

Međujedinjenje (A1). 5-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-2-iltrifluorometansulfonat

[0064]

[0065] Komercijalno dostupnom rastvoru 2-hidroksi-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-5-ona (A) (18,5 g, 105 mmol) u DCM (185 ml) i lutidinu (13,35 ml, 113,505 mmol), ohlađen na 5°C pod argonom, dodat je kap po kap trifluorometansulfonski anhidrid (20,22 ml, 123,29 mmol), dok je temperatura održavana između 10 i 20°C. Reakciona smeša je mešana 1 sat na 5°C, a zatim na sobnoj temperaturi 1 sat.

[0066] Zatim se doda led (200 g) i suspenzija se raspodeli između vode i DCM. Organska faza je isprana vodenim rastvorom NaHCO3, osušena iznad MgSO4, profiltrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem gradijentom heptan/AcOEt od 100 do 90/10 da bi se dobilo 28,2 g (87%) 5-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-2-il trifluorometansulfonat (A1) kao narandžasto ulje. LC/MS (m/z, MH<+>): 309

Međujedinjenje (B1). Metil 5-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-2-karboksilat [0067]

[0068] Rastvoru 5-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-2-il trifluorometansulfonata (A1) (5,03 g, 16,32 mmol) u DMF (24 ml) i MeOH (12 ml), dodaju se Pd(dppf)Cl2(754 mg, 0,98 mmol) i diizopropiletilamin (6 ml). Crna suspenzija je karbonilovana u autoklavu na 70°C pod 5 bara CO tokom 2,5 sata. Reakciona smeša je filtrirana, zatim je filtrat delimično koncentrovan pod redukovanim pritiskom, a ostatak je podeljen između AcOEt i vode.

Organska faza je isprana vodom (2x 75 ml) i vodenom rastvorom 0,5 N HCl, osušena iznad MgSO4i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem gradijentom heptan/AcOEt od 100/0 do 90/10 da bi se dobilo 3,4 g (95%) metil 5-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-2-karboksilat (B1) u obliku bezbojnog ulja.

LC/MS (m/z, MH<+>): 219

Međujedinjenje (C1). Metil 9-(trifluorometansulfoniloksi)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilat

[0069]

[0070] U rastvor metil 5-okso-6,7,8,9-tetrahidro-5H-benzo[7]anulen-2-karboksilata (B1) (18,19 g, 83,34 mmol) u DCM (500 ml) i bezvodnom piridinu (11 ml, 130,56 mmol), ohlađenom na 5°C pod argonom, dodat je kap po kap trifluorometansulfonski anhidrid (30 ml, 176,54 mmol). Reakciona smeša, gusta suspenzija, mešana je na sobnoj temperaturi tokom 24 sata, zatim je dodat led i podeljen između vode i DCM. Organska faza je osušena preko MgSO4, profiltrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobilo 29 g (100%) metil 9-(trifluorometansulfoniloksi)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilata (C1) kao žuta guma.

LC/MS (m/z, MH<+>): 351

Međujedinjenje (G). Metil 9-(4-1[(3S)-l-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksilfenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilat

[0071]

1

[0072] U rastvor metil 9-(trifluorometansulfoniloksi)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilata (C1) (29 g, 82,9 mmol), (3S)-1-(3-fluoropropil)-3-[4-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi]pirolidin (e) (28,9 g, 82,9 mmol), u dioksanu (225 ml) dodati su Pd(dppf)Cl2pod argonom , kompleks sa DCM (3.73 g, 4.57 mmol) i Cs2CO31,5 M vodenim rastvorom (111.12 ml, 166.68 mmol). Reakciona smeša je mešana na 60°C tokom 1 sata.

[0073] Posle hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je sipana u smešu vode (500 ml) i AcOEt (400 ml). Organska faza je isprana slanim rastvorom, osušena iznad MgSO4, filtrirana na celitu i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem gradijentom DCM/MeOH od 100/0 do 95/05 dajući 23 g (65%) metil 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilat (G) kao smeđa guma.

LC/MS (m/z, MH<+>): 424

Međujedinjenje (H). Metil 8-bromo-9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilat hidrobromid

[0074]

[0075] U rastvor metil 9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil) -6,7-dihidro-5H-benzo[7] anulen-3-karboksilat (G) (13,93 g, 32,89 mmol), u DCM (150 ml), dodat je pod argon piridinijum tribromidom (15,78 g, 44,41 mmol). Reakciona smeša je mešana 1 sat na

1

sobnoj temperaturi. Dodata je voda (200 ml), organska faza je zatim osušena iznad MgSO4i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom eluiranjem gradijentom DCM/MeOH od 100/0 do 95/05 dajući 16,4 g (85%) metil 8-bromo-9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilat hidrobromid (H) kao žuti kolač.

LC/MS (m/z, MH<+>): 502

Međujedinjenje (I). 6-(2,4-dihloro-fenil)-5-{4-[1-(3-fluoro-propil)-pirolidin-3-iloksi]-fenil}-8,9-dihidro-7H-benzociklohepten-2-metil estar karboksilne kiseline.

[0076]

[0077] U rastvor metil 8-bromo-9-(4-{[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksi}fenil)-6,7-dihidro-5H-benzo[7]anulen-3-karboksilat hidrobromid (H) (150 mg, 298,56 µmol), u dioksanu (12 ml) i vodi (2 ml), dodat je 2,4-dihlorofenil-boronska kiselina (62,67 mg, 328,41 µmol), Cs2CO3( 204,48 mg, 626,97 µmol) i Pd(dppf)Cl2(14,63 mg, 17,91 µmol). Reakciona smeša je zagrevana na 90°C tokom 3 sata i podeljena između vode i AcOEt. Faze su odvojene i organska faza je isprana slanim rastvorom, osušena iznad MgSO4i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, eluiranjem smešom DCM, acetonitrila i MeOH (96/2/2; V/V/V) da se dobije 80 mg metil ester (47%) 6-(2,4-dihloro-fenil)-5-{4-[1-(3-fluoro-propil)-pirolidin-3-iloksi]-fenil}-8,9-dihidro-7H-benzociklohepten-2-metil estar karboksilne kiseline (I).

LC/MS (m/z, MH<+>): 568

Jedinjenje (1). 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilna kiselina

[0078]

1

[0079] U rastvor 6-(2,4-dihloro-fenil)-5-{4-[1-(3-fluoro-propil)-pirolidin-3-iloksi]-fenil}-8,9-dihidro-7H-metil estar benzociklohepten-2-karboksilne kiseline (I) (80 mg, 140,72 µmol) u MeOH (5 ml) dodat je rastvor NaOH (562,88 µl, 5 M) i reakciona smeša je zagrevana na 60°C tokom 5 sati i rastvarač uklanja pod redukovanim pritiskom. Ostatak se preuzme u vodu (10 ml) i dodaje se vodeni rastvor HCl (5 M) do pH 7. Kaša je ekstrahovana sa DCM, osušena iznad MgSO4i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni, eluiranjem smešom DCM, acetonitrila i MeOH (90/5/5; V/V/V) da se dobije 60 mg (77%) 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilna kiselina.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, δ ppm): 1.68 (m, 1 H); 1,79 (dm, J=25.3 Hz, 2 H); 2.07 do 2.23 (m, 5 H); 2.38 (m, 1 H); 2.46 (t, J=7.2 Hz, 2 H); 2.52 (m, 1 H); 2.62 (m, 1 H); 2.55 do 2.89 (m, 3 H); 4.47 (td, J=6.2 i 47.6 Hz, 2 H); 4.72 (m, 1 H); 6.63 (d, J=8.9 Hz, 2 H); 6.71 (m, 3 H); 7.18 (d, J=8.4 Hz, 1 H); 8.26 (dd, J=2.0 i 8.4 Hz, 1 H); 7.58 (d, J=2,0 Hz, 1 H); 7.63 (d, J=8.4 Hz, 1 H); 7.79 (s, 1 H); 12.3 (m, 1 H) LC/MS (m/z, MH+): 554

2 - Procena efikasnosti 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil) pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilne kiseline u kombinaciji sa palbociklibom protiv ksenotransplantata ćelijske linije potkožnog raka dojke kod ženki golih miševa

[0080] U ovom ispitivanju, antitumorska efikasnost 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9 -dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilne kiseline („jedinjenje (1)“), u kombinaciji sa inhibitorom ciklin-zavisne kinaze 4 (CDK4) palbociklibom, ispitivana je nakon 30 dana tretmana protiv potkožnog MCF7-Y537S ksenotransplantat ćelijske linije raka dojke kod ženki golih miševa.

1

[0081] Lečene grupe su uključivale jedinjenje (1) samo u dozi od 5 mg/kg, samo palbociklib u dozi od 100 mg/kg i kombinaciju jedinjenja (1) i palbocikliba u istoj dozi i režimu.

[0082] Jedinjenje (1) je oralno dozirano dva puta dnevno (BID), a palbociklib je oralno doziran jednom dnevno (QD) tokom 30 dana. Antitumorska efikasnost je procenjena merenjem zapremine tumora.

2-1: Eksperimentalna procedura

2-1-1: Životinje, ćelijska linija, jedinjenja

[0083] Ženke atimičnih golih miševa su dobijene od Harlana (Indijanapolis, IN, SAD).

Životinjama je bilo dozvoljeno da se aklimatiziraju najmanje četiri dana pre upisa u ispitivanje. Miševi su bili stari od 12 do 13 nedelja i težili su između 20,2 i 27,3 grama na početku tretmana. Ove životinje su smeštene pod uslovima navedenim u NIH Vodiču za negu i upotrebu laboratorijskih životinja u skladu sa Zakonom o dobrobiti laboratorijskih životinja USDA.

[0084] Roditeljske ćelije MCF7 su dobijene iz Američke kolekcije tipskih kultura (ATCC® HTB-22™). MCF7-Y537S (ESR1) su ćelije MCF7 koje eksprimiraju varijantu ER.Y537S koju je proizvela Sanofi Biology Discovery Group. Y537S mutacija je uvedena u konstrukt ESR1 (GenBank NM_000125.3) mutagenezom usmerenom na mesto (Toy W. i dr., Cancer Discovery, 2017, 7, 277-287). Konstrukt je transfektovan u MCF7 ćelije koje su odabrane za njihov rast u odsustvu estradiola. MCF-Y537S je mutacija ESR1 koja daje aktivnost nezavisnu od estrogena ERa (estrogen receptor alfa) i doprinosi endokrinoj rezistentnoj bolesti (Robinson D.R. i dr., Nat Genet., 2013, 45 (12), 1446-1451). Ćelije su uzgajane u Eagle-ovom minimalnom esencijalnom medijumu (EMEM) sa dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS), humanog insulina, u 5% CO2na 37°C. Ćelije su sakupljene u 0,25% Tripsin EDTA i isprane Dulbecco-ovim fosfatnim puferom (DPBS) i ponovo suspendovane u DPBS sa 50% matrigela (Becton Dickinson katalog br.356234, serija br.32277). Ćelije (20 × 10<6>ćelija/po mišu) su subkutano (SC) implantirane u desni bok ženki golih miševa.

[0085] Kada su ustanovljeni tumori MCF7-Y537S, tumori su rezervisani kao tumorske zalihe za implantaciju fragmenta. Tumori su serijski razmnožavani subkutanom transplantacijom fragmenta tkiva. Fragmentna tumorska tkiva su subkutano implantirana u desni bok ženki golih miševa. U ovom eksperimentu je dodeljeno 50 miševa.

1

[0086] Jedinjenje (1) i palbociklib (komercijalno dostupan, na tržištu pod trgovačkim imenom Ibrance®) su formulisani na sledeći način:

• Sredstvo za prenošenje A: 20% Labrasol® (isporučuje se iz Gattefosse SAS, Francuska);

• Sredstvo za prenošenje B: 5% dekstroza.

[0087] Jedinjenje (1) je pripremljeno u sredstvu za prenošenje A, zatim je dodat Solutol HS15 (kupljen od Sigme) do konačne koncentracije od 5%, a rastvor je ostavljen da se meša jedan sat do potpunog rastvaranja. Nakon toga je dodato sredstvo za prenošenje B. Konačni pH bio je 5,5.

Zapremina doze za primenu jedinjenja (1): 10 ml/kg oralnim putem.

Doze: 5 mg/kg (doziranje jedinjenja (1) u gornjoj zapremini).

[0088] Palbociklib je pripremljen u vozilu A, zatim je dodat Solutol HS15 do konačne koncentracije 5%, a rastvor je ostavljen da se meša jedan sat do potpunog rastvaranja. Nakon toga je dodato sredstvo za prenošenje B. Konačni pH bio je 5,5.

Zapremina doze: 10 ml/kg oralnim putem.

Doze: 100 mg/kg (doziranje palbocikliba u gornjoj zapremini).

2-1-2: Dizajn ispitivanja, krajnje tačke:

[0089] Životinje potrebne za eksperiment (plus ekstra) su spojene i implantirane sa tkivima fragmenta tumora MCF7-Y537S 0. dana. Dana 21. nakon implantacije, miševi su objedinjeni i nasumično raspoređeni u tretirane i kontrolne grupe (10 miševa po grupi), gde se srednja zapremina tumora za svaku grupu kretala od 202,5 do 211,5 mm<3>. Tretmani jedinjenjem (1) i palbociklibom započeti su 22. dana. Jedinjenje (1) je oralno davano u dozi od 5 mg/kg BID (u razmaku od najmanje 5 sati), a palbociklib je oralno davan u dozi od 100 mg/kg QD, tokom 30 dana. Telesna masa životinje je procenjivana dnevno.

[0090] Doze su izražene u mg/kg i na osnovu dnevne telesne mase po životinji. Životinje tretirane sredstvom za prenošenje su korišćene kao kontrole. Miševi su svakodnevno proveravani i zabeležene su neželjene kliničke reakcije. Pojedinačni miševi su svakodnevno mereni do kraja eksperimenta. Miševi bi bili eutanazirani kada bi se primetio morbiditet ili gubitak mase ≥20%. Tumori su mereni kaliperom dva puta nedeljno do konačnog žrtvovanja.

2

Kada veličina tumora dostigne približno 2000 mm<3>ili kada postoje problemi sa zdravljem životinja (40% površine tumora je ulcerisano), životinje bi bile eutanazirane i datum smrti je zabeležen. Zapremine čvrstog tumora su procenjene na osnovu dvodimenzionalnih merenja tumora i izračunate prema sledećoj jednačini:

Krajnje tačke toksičnosti:

[0091] Doza koja je dovela do gubitka telesne težine od 15% tokom 3 uzastopna dana za pojedinačnog miša, 20% gubitka telesne mase tokom 1 dana ili 10% ili više smrtnih slučajeva povezanih sa lekom, smatrala se preterano toksičnom dozom, osim ako pod određenim okolnostima gubitak telesne mase ili smrt životinja može se smatrati nevezanom za lekove. Primeri uključuju probleme rukovanja životinjama kao što je pogrešno mišljenje, problemi u vezi sa tumorskim modelom kao što je tumorom izazvana kaheksija koja dovodi do gubitka telesne mase koji se može primetiti u kontrolnim grupama ili grupama koje su tretirane sredstvom za prenošenje i prekomerne ulceracije tumora. Miševi koji imaju smrt koja nije povezana sa lekovima ili značajan gubitak telesne mase neće se smatrati toksičnim i biće isključeni iz statističke analize. Telesna masa životinje uključivala je masu tumora.

Krajnje tačke efikasnosti:

[0092] Primarne krajnje tačke efikasnosti uključuju promene zapremine tumora u odnosu na početnu vrednost sumirane odnosom medijana promena zapremine tumora u odnosu na početnu vrednost između tretirane i kontrolne grupe (DT/DC). Promene u zapremini tumora za svaku tretiranu (T) i kontrolnu (C) grupu se izračunavaju za svaku životinju svakog dana oduzimanjem zapremine tumora na dan prvog tretmana (dan ispitivanja) od zapremine tumora na navedeni dan posmatranja. Medijan ΔT je izračunat za tretiranu grupu, a medijan ΔC je izračunat za kontrolnu grupu. Odnos ΔT/ΔC se izračunava i izražava u procentima:

[0093] ΔT/ΔC ≤ 40% se smatra terapeutski aktivnim, ΔT/ΔC = 0% se smatra stazom tumora, a ΔT/ΔC < 0% se smatra regresijom tumora (veoma aktivno). ΔT/ΔC > 40% se smatra terapeutski neaktivnim.

[0094] Procenat regresije tumora je definisan kao % (procenat) smanjenja zapremine tumora u tretiranoj grupi na određeni dan posmatranja u poređenju sa njegovom zapreminom kada je studija započeta. U određenoj vremenskoj tački (t) i za svaku životinju, procenat regresije se izračunava korišćenjem sledeće formule:

[0095] Medijan procenat regresije za grupu u datom danu se zatim izračunava uzimanjem medijane pojedinačnih % regresijskih vrednosti izračunatih za svaku životinju u grupi. Dan izračunavanja je određen danom kada se izračunava ΔT/ΔC, osim ako regresija medijana procenta nije reprezentativna za aktivnost grupe. U ovom slučaju, dan je određen prvim danom kada je medijana procenta regresije maksimalna.

2-1-3: Statistička analiza

[0096] Dvosmerna Anova-Type analiza sa tretmanom faktora i danom (ponovljeno) je izvedena na promenama zapremine tumora u odnosu na početnu liniju. Nakon toga slede analize kontrasta sa Bonferroni-Holm korekcijom za višestrukost da bi se uporedile sve tretirane grupe sa kontrolnom grupom i da bi se uporedila kombinacija na svaki pojedinačni agens u dozi uključenoj u kombinaciju svakog dana od 27. do 51. dana.

[0097] Na slikama, medijani i srednja apsolutna devijacija (MAD) svake grupe su predstavljeni za svaki dan merenja.

[0098] U tabelama, medijani i normalizovani MAD (nMAD = 1,4826*MAD) svake grupe su prijavljeni za svaki dan merenja.

[0099] Promene zapremine tumora od početne vrednosti se izračunavaju za svaku životinju i svaki dan oduzimanjem zapremine tumora na dan prvog tretmana (21. dan) od zapremine tumora na navedeni dan posmatranja.

[0100] Sve statističke analize su obavljene korišćenjem softvera SAS verzija 9.2.

Verovatnoća manja od 5% (p<0,05) smatrana je značajnom.

2-2: Rezultati

[0101] Jedinjenje (1) u dozi od 5 mg/kg dva puta dnevno, palbociklib 100 mg/kg KD i kombinacija jedinjenja (1) i palbocikliba u dozama i režimu tokom 30 dana bili su dobro tolerisani u ovoj studiji koja pokazuje prosečnu promenu telesne težine u % po grupi na nadir (najmanji pad telesne mase u grupi) od -1,7% (22. dan), -2,0% (22. dan) i -6,4% (26. dan), respektivno (Tabela 1).

[0102] Jedinjenje (1) u dozi od 5 mg/kg BID tokom 30 dana imalo je minimalan efekat na rast tumora sa ΔT/ΔC vrednošću od 59% (p = 0,4113) 51. dana. Palbociklib u dozi od 100 mg/kg QD tokom 30 dana postigao je antitumorski efekat sa vrednošću ΔT/ΔC od 27% (p<0,0001) 51. dana. Kada se jedinjenje (1) u dozi od 5 mg/kg kombinuje sa palbociklibom od 100 mg/kg sa istim režimom doze kao BID za jedinjenje (1) i QD za palbociklib, kombinovani tretman je pokazao snažnu antitumorsku efikasnost sa vrednošću ΔT/ΔC manjom od 0 (p < 0,0001) i indukovana regresija tumora (srednja regresija tumora 32%) 51. dana. Statistička analiza je pokazala da je efekat kombinacije bio značajno drugačiji u poređenju sa jedinjenjem (1) samim ili samim palbociklibom 51. dana (p <0,0001). Detaljni rezultati su prikazani u Tabelama 1, 2 i 3 u nastavku, kao i na Slikama 2 i 3:

• Slika 2: Antitumorska aktivnost jedinjenja (1) u kombinaciji sa palbociklibom protiv potkožne ćelijske linije humanog raka dojke MCF7-Y537S ksenografta kod golih miševa: evolucija zapremine tumora. Krive predstavljaju medijane ili - MAD (srednja apsolutna devijacija) svakog dana za svaku grupu;

• Slika 3: Antitumorska aktivnost jedinjenja (1) u kombinaciji sa palbociklibom protiv potkožne ćelijske linije humanog raka dojke MCF7-Y537S ksenografta kod golih miševa: zapremina tumora se menja od početne vrednosti 51. dana. Tačke predstavljaju pojedinačne promene zapremine tumora u odnosu na početnu vrednost 51. dana, trake odgovaraju medijanima.

[0103] Iz ovog eksperimenta zaključujemo da je jedinjenje (1) u dozi od 5 mg/kg dva puta dnevno u kombinaciji sa CDK4 inhibitorom palbociklibom u dozi od 100 mg/kg jednom dnevno izazvalo značajnu antitumorsku efikasnost i regresiju tumora kod raka dojke kod ljudi MCF7-Y537S model ksenotransplantata ćelijske linije kod golih miševa koji je bio superiorniji od pojedinačnih sredstava.

2

Claims (14)

Patentni zahtevi

1. Kombinacija koja sadrži 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilna kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, i palbociklib.

2. Kombinacija prema patentnom zahtevu 1, koja pokazuje terapeutsku sinergiju.

3. Kombinacija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, za upotrebu u lečenju kancera.

4. Kombinacija prema patentnom zahtevu 3, gde je rak rak dojke.

5. Kombinacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde se oba jedinjenja daju odvojeno, istovremeno ili raspoređeni tokom vremena.

6. Farmaceutski sastav koji sadrži 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilnu kiselinu, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, i palbociklib, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

7. Farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 6, gde 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro -7H-benzo[7]anulen-2-karboksilna kiselina, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, i palbociklib se primenjuju istovremeno, odvojeno ili raspoređeni tokom određenog vremenskog perioda.

8. Farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 6 ili patentnom zahtevu 7, za upotrebu u lečenju kancera.

9. Farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 8, gde je rak rak dojke.

10. Jedinjenje 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen -2-karboksilne kiseline ili njena farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju kancera istovremenom primenom sa palbociklibom.

2

11. Jedinjenje za upotrebu u lečenju kancera prema patentnom zahtevu 10, koje se primenjuje istovremeno, odvojeno ili raspoređeno tokom vremena sa palbociklibom.

12. Palbociklib za upotrebu u lečenju kancera istovremenom primenom sa jedinjenjem 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]- 8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilne kiseline ili njena farmaceutski prihvatljiva so.

13. Palbociklib za upotrebu u lečenju kancera prema patentnom zahtevu 12, koji se primenjuje istovremeno, odvojeno ili u razmaku tokom vremena sa jedinjenjem 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilne kiseline ili njena farmaceutski prihvatljiva so.

14. Farmaceutski komplet sadrži:

(i) prvi farmaceutski sastav koji sadrži 6-(2,4-dihlorofenil)-5-[4-[(3S)-1-(3-fluoropropil)pirolidin-3-il]oksifenil]-8,9-dihidro-7H-benzo[7]anulen-2-karboksilnu kiselinu, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens;

(ii) drugi farmaceutski sastav koji sadrži palbociklib i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens;

oba farmaceutska sastava (i) i (ii) koji se nalaze u odvojenim odeljcima i namenjene su da se primenjuju nezavisno, pri čemu je svako davanje u odnosu na drugu simultana, odvojena ili raspoređena tokom vremena.