RS62865B1 - Novi t-ćelijski receptori i imunoterapija u kojoj se koriste - Google Patents

Novi t-ćelijski receptori i imunoterapija u kojoj se koriste

Info

Publication number
RS62865B1
RS62865B1 RS20220094A RSP20220094A RS62865B1 RS 62865 B1 RS62865 B1 RS 62865B1 RS 20220094 A RS20220094 A RS 20220094A RS P20220094 A RSP20220094 A RS P20220094A RS 62865 B1 RS62865 B1 RS 62865B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
seq
tcr
antigen
amino acid
cells
Prior art date
Application number
RS20220094A
Other languages
English (en)
Inventor
Leonie Alten
Sebastian Bunk
Dominik Maurer
Claudia Wagner
Original Assignee
Immatics Biotechnologies Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE102016123847.3A external-priority patent/DE102016123847B3/de
Application filed by Immatics Biotechnologies Gmbh filed Critical Immatics Biotechnologies Gmbh
Publication of RS62865B1 publication Critical patent/RS62865B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001186—MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/32—T-cell receptors [TCR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4267—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K40/4268—MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4267—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K40/4269—NY-ESO
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70514—CD4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pathology (AREA)

Description

POLJE PRONALASKA
Predmetni pronalazak odnosi se na konstrukte koji prepoznaju antigen protiv peptida MAGEA1-003 dobijenog iz tumor-asociranog antigena (TAA). Pronalazak naročito obezbeđuje nove molekule zasnovane na T-ćelijskom receptoru (TCR) koji su selektivni i specifični za TAA pronalaska. TCR pronalaska i fragmenti koji vezuju TAA izvedeni iz toga koriste se za dijagnostikovanje, lečenje i prevenciju malignih bolesti koje eksprimiraju TAA. Dalje su obezbeđeni nukleinske kiseline koje kodiraju konstrukte pronalaska koji prepoznaju antigen, vektori koji sadrže ove nukleinske kiseline, rekombinantne ćelije koje eksprimiraju konstrukte koji prepoznaju antigen i farmaceutske smeše koje sadrže jedinjenja pronalaska.
OPIS
Pronađeno je da su geni antigena melanoma (MAGE-A) eksprimirani u raznovrsnim tumorima različitog histološkog porekla. Proteini koje kodiraju MAGE geni su antigeni odbacivanja tumora koji mogu da indukuju specifične citotoksične T limfocite (CTL) koji imaju sposobnost da prepoznaju i ubiju maligne ćelije. Tako su MAGE geni i proteini poželjni cilj za razvoj novih lekova za borbu protiv raka pomoću imunoterapije. MAGE-A proteini predstavljaju potfamiliju karcinom-testis antigena koji su eksprimirani uglavnom, ali ne i isključivo, u germinativnoj liniji. Međutim, oni su takođe eksprimirani u brojnim humanim malignim tumorima gde su povezani sa, i mogu pokrenuti, malignitet. Ova specifična ekspresija MAGE antigena u tumorima a ne i u normalnom okolnom zdravom tkivu čini ovu familiju antigena veoma interesantnom za ciljani adoptivni transfer T ćelija. Ipak, do danas nije poznata nijedna zadovoljavajuća imunoterapija zbog nedostatka specifičnih i visoko avidnih antitela ili T-ćelijskih receptora koji ciljaju MAGE antigen.
Ciljevi imunoterapije bazirane na T ćelijama su peptidni epitopi dobijeni iz tumorasociranih ili tumor-specifičnih proteina, koje prezentuju molekuli glavnog kompleksa gena tkivne podudarnosti (MHC). Ovi tumor-asocirani antigeni (TAA) mogu biti peptidi dobijeni iz svih klasa proteina, kao što su enzimi, receptori, faktori transkripcije, itd. koji se eksprimiraju i, u poređenju sa neizmenjenim ćelijama istog porekla, obično ushodno regulišu u ćelijama datog tumora.
Specifični elementi ćelijskog imunskog odgovora su u stanju da selektivno prepoznaju i unište ćelije tumora. Izolacija T ćelija iz ćelijskih populacija koje infiltriraju tumor ili iz periferne krvi navodi na to da takve ćelije imaju značajnu ulogu u prirodnoj imunskoj odbrani protiv raka. U ovom odgovoru naročito važnu ulogu imaju CD8-pozitivne T ćelije, koje prepoznaju peptide koji nose molekule klase I glavnog kompleksa gena tkivne podudarnosti (MHC) koji obično imaju 8 do 10 aminokiselinskih ostataka i dobijeni su iz proteina ili defektnih proizvoda ribozoma (DRIP-ovi) koji se nalaze u citosolu. MHC molekuli ljudi se takođe nazivaju humani leukocitni antigeni (HLA).
Postoje dve klase MHC molekula, MHC klasa I i MHC klasa II. Komplekse peptida i MHC klase I prepoznaju CD8-pozitivne T ćelije koje nose odgovarajući T-ćelijski receptor (TCR), dok komplekse peptida i MHC molekula klase II prepoznaju CD4-pozitivne pomoćničke T ćelije koje nose odgovarajući TCR. Budući da obe vrste odgovora, CD8- i CD4-zavisan, zajednički i sinergistički doprinose antitumorskom efektu, identifikacija i karakterizacija tumor-asociranih antigena i odgovarajućih T-ćelijskih receptora važna je u razvoju imunoterapija za rak kao što su vakcine i ćelijske terapije.
U MHC klasa I-zavisnoj imunskoj reakciji, peptidi ne samo da moraju da budu sposobni da se vežu za određene MHC molekule klase I koje eksprimiraju tumorske ćelije, već njih takođe moraju da naknadno prepoznaju T ćelije koje nose specifične T-ćelijske receptore (TCR-ove). Stoga su TAA početna tačka za razvoj terapije zasnovane na T ćelijama uključujući, bez ograničavanja, tumorske vakcine i ćelijske terapije.
Približno 90 procenata T ćelija periferne krvi eksprimira TCR koji se sastoji od α polipeptida i β polipeptida. Pored α β T ćelija, pokazano je da mali procenat T ćelija (oko 5% ukupnih T ćelija) eksprimira TCR koji se sastoji od γ polipeptida i δ polipeptida. γδ T ćelije su najrasprostranjenije u crevnoj sluznici, u okviru populacije limfocita poznatih kao intraepitelijalni limfociti (IEL). Antigeni molekuli koji aktiviraju γδ T ćelije su još uvek prilično nepoznati. Ipak, γδ T ćelije nisu MHC restrikovane i čini se da su u stanju da prepoznaju čitave proteine umesto da im je potrebno da peptidi budu prezentovani od strane MHC molekula na antigen-prezentujućim ćelijama, iako neke prepoznaju MHC klasa IB molekule. Humane Vγ9/Vδ2 T ćelije koje čine glavnu populaciju γδ T ćelija u perifernoj krvi su jedinstvene po tome što one specifično i brzo odgovaraju na mali nepeptidni mikrobni metabolit HMB-PP, koji je prekursor izopentenil pirofosfata.
Svaki od lanaca antigenskog receptora T ćelije klona T ćelije sastoji se od jedinstvene kombinacije domena koji se nazivaju varijabilni (V), [diverziteta (D),] spojni (J) i konstantni (C). U svakom klonu T ćelije, kombinacija V, D i J domena i alfa i beta lanca ili i delta i gama lanca učestvuje u prepoznavanju antigena na način koji je jedinstveno karakterističan za taj klon T ćelije i definiše jedinstveno mesto za vezivanje, koje se takođe zove idiotip klona T ćelije. Za razliku od toga, C domen ne učestvuje u vezivanju antigena.
TCR je heterodimerni površinski ćelijski protein iz superfamilije imunoglobulina koji je povezan sa nepromenljivim proteinima CD3 kompleksa uključenim u posredovanje prenošenja signala. TCR-ovi postoje u αβ i γδ oblicima, koji su strukturno slični ali imaju prilično različite anatomske lokacije i verovatno i funkcije. Vanćelijski deo nativnog heterodimernog i αβTCR i γδTCR sastoji se od dva polipeptida, od kojih svaki ima membranski proksimalni konstantni domen i membranski distalni varijabilni domen. Svaki od konstantnih i varijabilnih domena sadrži disulfidnu vezu unutar lanca. Varijabilni domeni sadrže visoko polimorfne petlje analogne regionima koji određuju komplementarnost (CDR-ovi) antitela. Upotrebom TCR genske terapije prevazilaze se brojne trenutno postojeće prepreke. Ona omogućava opremanje sopstvenih T ćelija pacijenta željenim specifičnostima i stvaranje dovoljnog broja T ćelija u kratkom vremenskom periodu, pri čemu se izbegava njihovo iscrpljivanje. TCR će biti uvedeni u centralne memorijske T ćelije ili T ćelije sa karakteristikama matičnih ćelija, što može osigurati bolju postojanost i funkciju nakon prenosa. T ćelije projektovane s TCR će se dati infuzijom onkološkim pacijentima koji zbog hemioterapije ili zračenja imaju limfopeniju čime se omogućava efikasno graftovanje ali i inhibicija imunske supresije.
Iako je postignut napredak u razvoju lekova za lečenje raka koji ciljaju molekule, u ovoj stručnoj oblasti i dalje ostaje potreba da se razviju novi antitumorski lekovi koji specifično ciljaju molekule koji su visoko specifični za ćelije raka. Predmetni opis usmeren je na tu potrebu tako što obezbeđuje nove MAGEA1 TCR-ove, odgovarajuće rekombinantne TCR konstrukte, nukleinske kiseline, vektore i ćelije domaćine koji specifično vezuju TAA epitop(e) kako je izneto u ovom dokumentu; i metode upotrebe takvih molekula u lečenju raka. Termin TAA u kontekstu pronalaska odnosi se konkretno na sledeće željene proteine, naime MAGEA1 proteine, njihove fragmente, naročito antigene peptide koje prezentuje HLA, i poželjno povezane sa proliferativnim poremećajem. Antigeni peptid pronalaska je peptid MAGEA1-003 koji ima aminokiselinsku sekvencu navedenu u ID BR. SEKV: 133 u tabeli 2 u nastavku.
Pronalazak je iznet u priloženom skupu patentnih zahteva.
Konstrukti koji prepoznaju antigen
U prvom aspektu, pronalazak obezbeđuje konstrukt koji prepoznaje antigen koji se specifično i/ili selektivno vezuje za MAGEA1 antigeni peptid ID BR. SEKV: 133 kada HLA prezentuje navedeni antigen, naznačeno time što navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence regiona koji određuju komplementarnost (CDR-ovi) koje imaju aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 49, ID BR. SEKV: 50 odnosno ID BR. SEKV: 51, i CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 55, ID BR. SEKV: 56 odnosno ID BR. SEKV: 57, naznačeno time što navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen sadrži dotične CDR aminokiselinske sekvence sa ne više od jednom modifikovanom aminokiselinom, naznačeno time što je navedena modifikovana aminokiselina poželjno prva ili poslednja aminokiselina dotičnog CDR-a a modifikacija je konzervativna supstitucija, i naznačeno time što navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen selektivno ne vezuje nijedan od peptida ID BR. SEKV: 143 do 152 kada ih prezentuje HLA.
Dalje je opisan, ali nije deo pronalaska, konstrukt koji prepoznaje antigen koji sadrži najmanje jedan region koji određuje komplementarnost (CDR) 3 koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, ili poželjno 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od ID BR. SEKV 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39, 45, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111 i 117.
Dalje je opisan, ali nije deo pronalaska, konstrukt koji prepoznaje antigen koji se specifično vezuje za kompleks TAA peptid-HLA molekul, naznačen time što TAA peptid sadrži, ili se alternativno sastoji od, varijante TAA koja je najmanje 66%, poželjno najmanje 77%, a još poželjnije najmanje 88% homologna (poželjno najmanje 77% ili najmanje 88% identična) sa aminokiselinskom sekvencom TAA pronalaska, naznačen time što se navedena varijanta vezuje za HLA molekul klase I ili klase II i/ili indukuje T ćelije koje unakrsno reaguju sa navedenim peptidom, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, naznačen time što navedeni peptid nije osnovni polipeptid kompletne dužine.
Na način kako su korišćeni u ovom dokumentu, termini „identičan“ ili „procenat identičnosti“, kada se koriste bilo gde u ovom dokumentu u kontekstu dve ili više sekvenci nukleinskih kiselina ili proteina/polipeptida, odnose se na dve ili više sekvenci ili podsekvenci koje su iste ili imaju (ili najmanje imaju) određeni procenat aminokiselinskih ostataka ili nukleotida koji su isti (tj. imaju, ili najmanje imaju, oko 60% identičnosti, poželjno imaju, ili najmanje imaju, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93% ili 94% identičnosti, a još poželjnije imaju, ili najmanje imaju, oko 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ili veću identičnost u određenom regionu – poželjno u okviru sekvenci kompletne dužne – kada se uporede i poravnaju sa maksimalnom korespondencijom u okviru prozora poređenja ili označenog regiona) kada se meri primenom algoritama za poređenje sekvence, ili pomoću ručnog poravnanja i vizuelnog pregleda (vidite npr. veb lokaciju NCBI). U jednom naročitom otelotvorenju, na primer kada se poredi protein ili sekvenca nukleinskih kiselina konstrukta koji prepoznaje antigen pronalaska sa drugim proteinom/genom, procenat identičnosti može da se utvrdi pomoću Blast pretraga podržanih u bazi podataka Human Olfactory Data Explorer (npr. https://genome.weizmann.ac.il/cgibin/horde/blastHorde.pl); naročito za identitet aminokiseline, onih koje koriste BLASTP 2.2.28+ sa sledećim parametrima: matrica: BLOSUM62; penali za praznine: postojanje: 11, ekstenzija: 1; prag za susedne reči: 11; prozor za višestruke pogotke: 40.
U kontekstu predmetnog pronalaska, podrazumevaće se da će se za sva otelotvorenja za koje se navede da „sadrže“ određene karakteristike pronalaska, podrazumevati da uključuju u nekim poželjnijim otelotvorenjima ograničeniji opis „sastoji se od“ ili „esencijalno se sastoji od“ potpuno istih karakteristika predmetnog pronalaska.
Konstrukt koji prepoznaje antigen dalje sadrži sekvencu CDR1 i CDR2 domena. U okviru varijabilnog domena, CDR1 i CDR2 se nalaze u varijabilnom (V) regionu polipeptidnog lanca, a CDR3 sadrži neke V regione, sve regione diverziteta (D) i spojne (J) regione. CDR3 je najvarijabilniji i on je glavni CDR odgovoran za specifično i selektivno prepoznavanje antigena.
Nativni alfa-beta heterodimerni TCR-ovi imaju alfa lanac i beta lanac. Svaki lanac sadrži varijabilni, spojni i konstantni region, a beta lanac obično takođe sadrži kratki region diverziteta između varijabilnog i spojnog regiona, ali ovaj region diverziteta se često smatra delom spojnog regiona. Svaki varijabilni region sadrži tri CDR-a (regioni koji određuju komplementarnost) ugrađena u sekvencu okvira, od kojih je jedan hipervarijabilni region pod nazivom CDR3. Postoji nekoliko tipova varijabilnih regiona alfa lanca (Vα) i nekoliko tipova varijabilnih regiona beta lanca (Vβ) koji se razlikuju po okviru, CDR1 i CDR2 sekvencama i delimično definisanoj CDR3 sekvenci. Tipovi Vα se u IMGT nomenklaturi nazivaju jedinstvenim TRAV brojem, a tipovi Vβ se nazivaju jedinstvenim TRBV brojem. Za više informacija o imunoglobulinskom antitelu i TCR genima vidite međunarodni sistem international ImMunoGeneTics information system®, Lefranc M-P et al (Nucleic Acids Res.2015 Jan;43(Database issue):D413-22; i http://www.imgt.org/).
Stoga, u jednom dodatnom otelotvorenju, konstrukt pronalaska koji prepoznaje antigen sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence u kombinaciji prikazanoj u tabeli 1 u nastavku, koja prikazuje dotični varijabilni alel lanca zajedno sa CDR3 sekvencom. Poželjno, konstrukt pronalaska koji prepoznaje antigen sadrži dotične CDR1 do CDR3 ovde predstavljenog TCR varijabilnog regiona TCR R37P1C9 pronalaska (vidite tabelu 1 u nastavku i odeljak sa primerima).
Termin „specifičnost“ ili „antigenska specifičnost“ ili „specifičan za“ dati antigen, kako se koristi u ovom dokumentu znači da konstrukt koji prepoznaje antigen može specifično da se veže za navedeni antigen, poželjno TAA antigen, još poželjnije sa visokim aviditetom, kada je navedeni antigen prezentovan od strane HLA, poželjno HLA A2. Na primer, može se smatrati da TCR, kao konstrukt koji prepoznaje antigen, ima „antigensku specifičnost“ za TAA, ako T ćelije koje eksprimiraju TCR sekretuju najmanje 200 pg/ml ili više (npr. 250 pg/ml ili više, 300 pg/ml ili više, 400 pg/ml ili više, 500 pg/ml ili više, 600 pg/ml ili više, 700 pg/ml ili više, 1000 pg/ml ili više, 2.000 pg/ml ili više, 2.500 pg/ml ili više, 5.000 pg/ml ili više) interferona γ (IFN-γ) nakon kokultivisanja sa HLA A2-pozitivnim ciljnim ćelijama pulsiranim sa niskom koncentracijom TAA antigena, kao što su TAA epitopi i antigeni navedeni dalje u ovom dokumentu (npr. oko 10-11 mol/l, 10-10 mol/l, 10-9 mol/l, 10-8 mol/l, 10-7 mol/l, 10-6 mol/l, 10-5 mol/l). Alternativno, ili dodatno, može se smatrati da TCR ima „antigensku specifičnost“ za TAA, ako T ćelije koje eksprimiraju TCR sekretuju najmanje dva puta više IFN-γ od nivoa IFN-γ netransdukovane pozadine nakon kokultivisanja sa ciljnim ćelijama pulsiranim sa niskom koncentracijom TAA antigena. Takva „specifičnost“ kako je opisana iznad može, na primer, da se analizira pomoću ELISA testa.
U jednom alternativnom ili dodatnom otelotvorenju pronalaska, konstrukt koji prepoznaje antigen se selektivno vezuje za antigeni peptid dobijen od TAA; poželjno naznačeno time što je TAA antigeni peptid proteinski epitop ili peptid koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u ID BR. SEKV: 133, ili njena varijanta, naznačeno time što je varijanta delecija, adicija, insercija ili supstitucija aminokiseline, na ne više od tri, poželjno dve i najpoželjnije ne više od jednoj poziciji aminokiselina. U nekim otelotvorenjima, konstrukt pronalaska koji prepoznaje antigen selektivno vezuje bilo koji od modifikovanih MAGEA1-003 peptida navedenih u ID BR. SEKV: 132 do 142 i 154 do 162. Konstrukt pronalaska koji prepoznaje antigen selektivno ne vezuje bilo koji od peptida navedenih u ID BR. SEKV: 143 do 152.
Podrazumeva se da se termin „selektivnost“ ili „selektivno prepoznavanje/vezivanje“ odnosi na svojstvo konstrukta koji prepoznaje antigen, kao što je TCR ili antitelo, da selektivno prepozna ili se veže za poželjno samo jedan specifičan epitop i da poželjno ne pokazuje nikakvu ili suštinski nikakvu unakrsnu reaktivnost sa drugim epitopom. Poželjno, „selektivnost“ ili „selektivno prepoznavanje/vezivanje“ podrazumeva da konstrukt koji prepoznaje antigen (npr. TCR) selektivno prepoznaje ili se vezuje za poželjno samo jedan specifičan epitop i poželjno ne pokazuje nikakvu ili suštinski nikakvu unakrsnu reaktivnost sa drugim epitopom, naznačeno time što je navedeni epitop jedinstven za jedan protein, tako da konstrukt koji prepoznaje antigen ne pokazuje nikakvu ili suštinski nikakvu unakrsnu reaktivnost sa drugim epitopom i drugim proteinom.
Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa pronalaskom je poželjno izabran od antitela, ili njegovog derivata ili fragmenta, ili T-ćelijskog receptora (TCR), ili njegovog derivata ili fragmenta. Derivat ili fragment antitela ili TCR pronalaska će poželjno zadržati sposobnost vezivanja/prepoznavanja antigena izvornog molekula, a naročito njegovu specifičnost i/ili selektivnost kako je objašnjeno iznad. Takva funkcionalnost vezivanja može biti zadržana prisustvom CDR3 regiona kako je definisano u ovom dokumentu.
Inventivni TCR-ovi su sposobni da prepoznaju TAA antigene na MHC (glavni kompleks gena tkivne podudarnosti) klasa I-zavisan način. „MHC klasa I-zavisan način“, kako se koristi u ovom dokumentu, znači da TCR izaziva imunski odgovor nakon vezivanja za TAA antigene u kontekstu MHC molekula klase I. MHC molekul klase I može da bude bilo koji MHC molekul klase I poznat u stručnoj oblasti, npr. HLA-A molekuli. U poželjnom otelotvorenju pronalaska, MHC molekul klase I je HLA-A2 molekul.
Pronalazak obezbeđuje i jednolančani konstrukt koji prepoznaje antigen i dvolančane konstrukte koji prepoznaju antigen.
U jednom otelotvorenju, TCR alfa varijabilni domen ima najmanje jednu mutaciju u odnosu na TCR alfa domen TCR R37P1C9 prikazan u tabeli 1; i/ili TCR beta varijabilni domen ima najmanje jednu mutaciju u odnosu na TCR alfa domen TCR R37P1C9 prikazan u tabeli 1. U jednom otelotvorenju, TCR koji sadrži najmanje jednu mutaciju u TCR alfa varijabilnom domenu i/ili TCR beta varijabilnom domenu ima afinitet vezivanja za, i/ili poluživot vezivanja za, kompleks TAA peptid-HLA molekul, koji je najmanje dvostruk u poređenju sa TCR-om koji sadrži nemutirani TCR alfa domen i/ili nemutirani TCR beta varijabilni domen.
TCR alfa lanci predmetnog opisa mogu dalje sadržati TCR alfa transmembranski domen i/ili TCR alfa unutarćelijski domen. TCR beta lanci predmetnog opisa mogu dalje sadržati TCR beta transmembranski domen i/ili TCR beta unutarćelijski domen.
Pronalazak naročito obezbeđuje TCR kao konstrukt koji prepoznaje antigen, ili njegov fragment ili derivat. TCR je poželjno ljudski, što podrazumeva da je stvoren od ljudskog TCR lokusa i stoga sadrži humane TCR sekvence. Pored toga, TCR pronalaska se može okarakterisati po tome da je ljudskog porekla i da specifično prepoznaje TAA antigen pronalaska.
Drugo otelotvorenje pronalaska dodatno ili alternativno obezbeđuje konstrukt koji prepoznaje antigen opisan iznad koji indukuje imunski odgovor, poželjno naznačen time što se imunski odgovor karakteriše povećanjem nivoa interferona (IFN) γ.
TCR-ovi pronalaska mogu biti obezbeđeni kao jednolančani α ili β, ili γ i δ molekuli, ili alternativno kao dvolančani konstrukti koji sadrže i α i β lanac, ili γ i δ lanac.
Konstrukt pronalaska koji prepoznaje antigen može sadržati TCR α ili γ lanac; i/ili TCR β ili δ lanac; naznačeno time što TCR α ili γ lanac sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 49, ID BR. SEKV: 50 odnosno ID BR. SEKV: 51, i/ili naznačeno time što TCR β ili δ lanac sadrži CDR1,
1
CDR2 i CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 55, ID BR. SEKV: 56 odnosno ID BR. SEKV: 57.
Konstrukti koji prepoznaju antigen koji sadrže CDR1 do CDR3 regione ovde predstavljenih TCR lanaca TCR R37P1C9 (vidite tabelu 1), sadrže dotičnu CDR sekvencu pronalaska sa ne više od jednim modifikovanim aminokiselinskim ostatkom, naznačeno time što je modifikacija konzervativna supstitucija. Najpoželjnije je da jedan modifikovan aminokiselinski ostatak bude prvi ili poslednji aminokiselinski ostatak dotične CDR sekvence.
Ako je konstrukt pronalaska koji prepoznaje antigen sastavljen od najmanje dva lanca aminokiselina, kao što je dvolančani TCR, ili njegov antigen-vezujući fragment, konstrukt koji prepoznaje antigen može da sadrži u prvom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 51, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 57.
Opisani su, ali nisu deo pronalaska, konstrukti koji prepoznaju antigen sastavljeni od najmanje dva lanca aminokiselina, kao što je dvolančani TCR, ili njegov antigenvezujući fragment, koji u prvom polipeptidnom lancu sadrže aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 3, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 9; ili u prvom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 15, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 21; ili u prvom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 27, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 33; ili u prvom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 39, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 45; ili u prvom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 63, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 69; ili u prvom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 75, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 81; ili u prvom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 87, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 93; ili u prvom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 99, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 105; ili u prvom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 111, a u drugom polipeptidnom lancu aminokiselinsku sekvencu u skladu sa ID BR. SEKV: 117. U nekim otelotvorenjima, CDR3 dvolančanog TCR-a pronalaska može sadržati jednu konzervativnu supstituciju. Mutacije CDR3 sekvenci ID BR. SEKV 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39, 45, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111 i 117, kako su navedene iznad poželjno uključuju supstituciju, deleciju, adiciju ili inserciju ne više od tri, poželjno ne više od dva, a najpoželjnije ne više od jednog aminokiselinskog ostatka. U nekim otelotvorenjima, prvi polipeptidni lanac može biti α ili γ lanac TCR-a, a drugi polipeptidni lanac može biti β ili δ lanac TCR-a. Poželjna je kombinacija αβ ili γδ TCR.
TCR, ili njegov antigen-vezujući fragment, u nekim se otelotvorenjima sastoji od TCR α i TCR β lanca, ili γ i δ lanca. Takav dvolančani TCR u svakom lancu sadrži varijabilne regione, a svaki varijabilni region sadrži jednu CDR1, jednu CDR2 i jednu CDR3 sekvencu. TCR-ovi pronalaska sadrže sekvence CDR1 do CDR3 kako su sačinjene u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog lanca ID BR. SEKV: 52 odnosno ID BR. SEKV: 58 (R37P1C9). Opisani su, ali nisu deo pronalaska, TCR-ovi koji sadrže sekvence CDR1 do CDR3 kako su sačinjene u aminokiselinskoj sekvenci varijabilnog lanca ID BR. SEKV: 4 i ID BR. SEKV: 10 (R26P1A9), ili ID BR. SEKV: 16 i ID BR. SEKV: 22 (R26P2A6); ili ID BR. SEKV: 28 i ID BR. SEKV: 34 (R26P3H1) ili ID BR. SEKV: 40 i ID BR. SEKV: 46 (R35P3A4), ili ID BR. SEKV: 64 i ID BR. SEKV: 70 (R37P1H1), ili ID BR. SEKV: 76 i ID BR. SEKV: 82 (R42P3A9), ili ID BR. SEKV: 88 i ID BR. SEKV: 94 (R43P3F2), ili ID BR. SEKV: 100 i ID BR. SEKV: 106 (R43P3G5), ili ID BR. SEKV: 112 i ID BR. SEKV: 118 (R59P2E7).
Neka otelotvorenja pronalaska odnose se na TCR, ili njegov fragment, koji sadrži TCR α i TCR β lanac, naznačeno time što navedeni TCR sadrži sekvence varijabilnog regiona koje imaju najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, ili poželjno 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od α i β lanca u skladu sa ID BR. SEKV: 52, odnosno 58. Dalje je opisan TCR, ili njegov fragment, sastavljen od TCR α i TCR β lanca, naznačen time što navedeni TCR sadrži sekvence varijabilnog regiona koje imaju najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, ili poželjno 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od α i β lanca u skladu sa ID BR. SEKV: 4, odnosno 10, ili 16, odnosno 22; ili 28, odnosno 34, ili 40, odnosno 46, ili 64, odnosno 70, ili 76, odnosno 82, ili 88, odnosno 94, ili 100, odnosno 106, ili 112, odnosno 118.
Inventivni TCR-ovi mogu dalje sadržati konstantni region dobijen od bilo koje prikladne vrste, kao što je bilo koji sisar, npr. čovek, pacov, majmun, zec, magarac ili miš. U jednom otelotvorenju pronalaska, inventivni TCR-ovi dalje sadrže ljudski konstantni region. U nekim poželjnim otelotvorenjima, konstantni region TCR-a pronalaska može biti blago modifikovan, na primer, uvođenjem heterolognih sekvenci, poželjno mišjih sekvenci, što može povećati ekspresiju TCR i stabilnost.
Neka otelotvorenja pronalaska odnose se na TCR, ili njegov fragment, koji sadrži TCR α i TCR β lanac, naznačeno time što navedeni TCR sadrži konstantni region koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, ili poželjno 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od α i β lanca u skladu sa ID BR. SEKV: 5, odnosno 11, ili 17, odnosno 23; ili 29, odnosno 35; ili 41, odnosno 47; ili 53, odnosno 59; ili 65, odnosno 71; ili 77, odnosno 83; ili 89, odnosno 95; ili 101, odnosno 107; ili 113, odnosno 119.
Konstrukt koji prepoznaje antigen može u daljem otelotvorenju sadržati vezujući fragment TCR-a, a naznačeno time što navedeni vezujući fragment sadrži CDR1 do CDR3 koji imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 49, 50, 51 ili 55, 56, 57.
U daljim otelotvorenjima pronalaska konstrukt koji prepoznaje antigen kako je opisan na drugom mestu u ovom dokumentu je TCR, ili njegov fragment, sastavljen od najmanje jedne sekvence TCR α i jedne sekvence TCR β lanca, naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 49 do 51, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR.
1
SEKV: 55 do 57. Opisan je, ali nije deo pronalaska, TCR, ili njegov fragment, sastavljen od najmanje jedne sekvence TCR α i jedne sekvence TCR β lanca, naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 1 do 3, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 7 do 9; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 13 do 15, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 19 do 21; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 25 do 27, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 31 do 33; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 37 do 39, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 43 do 45; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 61 do 63, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 67 do 69; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 73 do 75, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 79 do 81; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 85 do 87, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 91 do 93; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 97 do 99, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 103 do 105; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 109 do 111, a navedena sekvenca TCR β lanca sadrži CDR1 do CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinske sekvence ID BR. SEKV: 115 do 117.
U daljim otelotvorenjima pronalaska konstrukt koji prepoznaje antigen kako je opisan ranije u ovom dokumentu je TCR, ili njegov fragment, sastavljen od najmanje jedne sekvence TCR α i jedne sekvence TCR β lanca, naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 52, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 58. Opisan je, ali nije deo pronalaska, TCR, ili njegov fragment, koji sadrži najmanje jednu sekvencu TCR α i jednu sekvencu TCR β lanca, naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 4, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 10; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 16, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 22; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 28, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 34; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 40, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 46; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 64, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 70; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 76, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 82; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 88, i naznačen time što
1
navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 94; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 100, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 106; ili naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 112, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 118.
U daljim otelotvorenjima pronalaska konstrukt koji prepoznaje antigen kako je opisan ranije u ovom dokumentu je TCR, ili njegov fragment, koji dalje sadrži konstantni region TCR-a koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od ID BR. SEKV: 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113 i 119, poželjno naznačen time što se TCR sastoji od najmanje jedne sekvence TCR α i jedne sekvence TCR β lanca, naznačen time što sekvenca TCR α lanca sadrži konstantni region koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od ID BR. SEKV: 5, 17, 29, 41, 53, 65, 77, 89, 101 i 113.
U daljim otelotvorenjima pronalazak obezbeđuje konstrukte koji prepoznaju antigen koji su TCR i sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 54, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 60.
Takođe su predstavljeni konstrukti koji prepoznaju antigen kako su opisani ranije u ovom dokumentu koji sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 6, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%,
1
80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 12. Dalje su predstavljeni TCR-ovi koji sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 18, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 24. Dalje su predstavljeni konstrukti koji prepoznaju antigen koji su TCR i sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 30, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 36. Dalje su predstavljeni konstrukti koji prepoznaju antigen koji su TCR i sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 42, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 48. Dalje su predstavljeni konstrukti koji prepoznaju antigen koji su TCR i sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 66, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 72. Dalje su predstavljeni konstrukti koji prepoznaju antigen koji su TCR i sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 78, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 84. Dalje su predstavljeni konstrukti koji prepoznaju antigen koji su TCR i sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 90, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 96. Dalje su predstavljeni konstrukti koji prepoznaju antigen koji su TCR i sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom
1
sekvencom ID BR. SEKV: 102, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 108. Dalje su predstavljeni konstrukti koji prepoznaju koji su TCR i sadrže prvi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 114, i drugi TCR lanac koji ima najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 100% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom ID BR. SEKV: 120.
Na način kako je korišćen u ovom dokumentu, termin „mišji“ ili „humani“ kada se govori o konstruktu koji prepoznaje antigen, ili TCR-u, ili bilo kojoj komponenti TCR-a opisanog u ovom dokumentu (npr. region koji određuje komplementarnost (CDR), varijabilni region, konstantni region, α lanac i/ili β lanac), označava TCR (ili njegovu komponentu) koji je dobijen od mišjeg odnosno ljudskog nerearanžiranog TCR lokusa.
U jednom otelotvorenju pronalaska, obezbeđen je himerni TCR, naznačen time što lanci TCR-a sadrže sekvence od više vrsta. Poželjno, TCR pronalaska može sadržati α lanac koji sadrži humani varijabilni region α lanca i, na primer, mišji konstantni region α lanca mišjeg TCR-a.
U jednom otelotvorenju, TCR pronalaska je humani TCR koji sadrži humane varijabilne regione u skladu sa gore navedenim otelotvorenjima i humane konstantne regione.
U nekim otelotvorenjima, konstrukt koji prepoznaje antigen je „murinizovan“ ili humanizovan. Ovi termini se koriste kada se u konstrukt pronalaska uvedu aminokiselinske sekvence stranih vrsta.
TCR pronalaska može biti obezbeđen kao jednolančani TCR (scTCR). scTCR može sadržati polipeptid varijabilnog regiona prvog TCR lanca (npr. alfa lanac) i polipeptid čitavog (kompletna dužina) drugog TCR lanca (npr. beta lanac) ili obrnuto. Pored toga, scTCR može opciono sadržati jedan ili više povezivača koji spajaju zajedno dva
1
ili više polipeptida. Povezivač može, na primer, biti peptid koji spaja zajedno dva pojedinačna lanca kako je opisano u ovom dokumentu. Takođe je obezbeđen takav scTCR pronalaska koji je fuziran na humani citokin, kao što su IL-2, IL-7 ili IL-15.
Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa pronalaskom može takođe biti obezbeđen u obliku multimernog kompleksa koji sadrži najmanje dva scTCR molekula, naznačen time što je svaki od navedenih scTCR molekula fuziran na najmanje jedno jedinjenje biotina, ili drugi međupovezujući molekul/povezivač, i naznačen time što su navedeni scTCR-ovi međusobno povezani interakcijom biotinstreptavidin kako bi se omogućilo obrazovanje navedenog multimernog kompleksa. Mogući su takođe slični pristupi stvaranja multimernog TCR-a poznati u stručnoj oblasti i oni su obuhvaćeni ovom objavom. Takođe su obezbeđeni multimerni kompleksi višeg reda koji sadrže više od dva scTCR-a pronalaska.
U svrhe predmetnog pronalaska, TCR je jedinjenje koje ima najmanje jedan TCR alfa ili gama i/ili TCR beta ili delta varijabilni domen. Uopšteno, oni sadrže i TCR alfa varijabilni domen i TCR beta varijabilni domen, alternativno i TCR gama varijabilni domen i TCR delta varijabilni domen. Oni mogu biti αβ/γδ heterodimeri ili mogu biti u jednolančanom formatu. Za upotrebu u adoptivnoj terapiji, αβ ili γδ heterodimerni TCR može, na primer, biti transficiran kao lanci kompletne dužine koji imaju i citoplazmatske i transmembranske domene. Po želji, može biti prisutna uvedena disulfidna veza između ostataka dotičnih konstantnih domena.
U poželjnom otelotvorenju, konstrukt koji prepoznaje antigen je humani TCR, ili njegov fragment ili derivat. Humani TCR, ili njegov fragment ili derivat je TCR koji sadrži više od 50% odgovarajuće sekvence humanog TCR-a. Poželjno, samo mali deo TCR sekvence je veštačkog porekla ili je dobijen od druge vrste. Ipak, poznato je da himerni TCR-ovi, npr. dobijeni od humanog izvora sa mišjim sekvencama u konstantnim domenima imaju prednosti. Stoga su naročito poželjni TCR-ovi u skladu sa predmetnim pronalaskom koji sadrže mišje sekvence u vanćelijskom delu njihovih konstantnih domena.
1
Tako, takođe je poželjno da inventivni konstrukt koji prepoznaje antigen bude sposoban da prepozna njegov antigen na način koji zavisi od humanog leukocitnog antigena (HLA), poželjno na HLA-A02-zavisan način. Termin „HLA-zavisan način“ u kontekstu predmetnog pronalaska znači da se konstrukt koji prepoznaje antigen vezuje za antigen samo u slučaju kada navedeni HLA prezentuje antigeni peptid.
Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa pronalaskom u jednom otelotvorenju poželjno indukuje imunski odgovor, poželjno naznačen time što se imunski odgovor karakteriše povećanjem nivoa interferona (IFN) γ.
Pronalazak takođe obezbeđuje polipeptid koji sadrži funkcionalni deo TCR R37P1C9 (ili njihovih funkcionalnih varijanti) opisanih u ovom dokumentu. Predstavljen je, ali nije deo pronalaska, polipeptid koji sadrži funkcionalni deo bilo kog od TCR-ova (ili njihovih funkcionalnih varijanti) opisanih u ovom dokumentu, na primer, bilo kog od TCR-ova izabranih od R26P1A9, R26P2A6, R26P3H1, R35P3A4, R37P1H1, R42P3A9, R43P3F2, R43P3G5 i R59P2E7, kako je navedeno u delu sa primerima i tabeli 1. Termin „polipeptid“ kako se koristi u ovom dokumentu obuhvata oligopeptide i odnosi se na jedan lanac aminokiselina povezanih pomoću jedne ili više peptidnih veza. U pogledu inventivnih polipeptida, funkcionalni deo može biti bilo koji deo koji sadrži susedne aminokiseline TCR-a (ili njegove funkcionalne varijante) čiji je deo, pod uslovom da se funkcionalni deo specifično vezuje za TAA antigen, poželjno kako je predstavljeno ovde u tabeli 2, i peptide MAGEA1-003_A1 do A9 (ID BR. SEKV: 134-142) i MAGEA1-003_T1 do T9 (ID BR. SEKV: 154-162). Termin „funkcionalni deo“ kada se koristi u vezi sa TCR (ili njegovom funkcionalnom varijantom) odnosi se na bilo koji deo ili fragment TCR-a (ili njegove funkcionalne varijante) pronalaska, pri čemu deo ili fragment zadržava biološku aktivnost TCR-a (ili njegove funkcionalne varijante) čiji je deo (izvorni TCR ili njegova izvorna funkcionalna varijanta). Funkcionalni delovi obuhvataju, na primer, one delove TCR-a (ili njegove funkcionalne varijante) koji zadržavaju sposobnost da se specifično vežu za TAA antigen (na HLA-zavisan način), ili da detektuju, leče ili sprečavaju rak u sličnoj meri, istoj meri ili većoj meri kao i izvorni TCR (ili njegova funkcionalna varijanta). U odnosu na izvorni TCR (ili njegovu funkcionalnu varijantu) funkcionalni deo može da sadrži,
2
na primer, oko 10%, 25%, 30%, 50%, 68%, 80%, 90%, 95% ili više varijabilnih sekvenci izvornog TCR-a (ili njegove funkcionalne varijante).
Funkcionalni deo može da sadrži dodatne aminokiseline na amino ili karboksi kraju dela, ili na oba kraja, pri čemu se dodatne aminokiseline ne nalaze u aminokiselinskoj sekvenci izvornog TCR-a ili njegove funkcionalne varijante. Poželjno, dodatne aminokiseline ne ometaju biološku funkciju funkcionalnog dela, npr. specifično vezivanje za TAA antigene; i/ili da ima sposobnost da detektuje rak, leči ili prevenira rak itd. Još poželjnije, dodatne aminokiseline poboljšavaju biološku aktivnost, u poređenju sa biološkom aktivnošću izvornog TCR-a ili njegove funkcionalne varijante.
Polipeptid može da sadrži funkcionalni deo bilo kog ili oba, i α i β, lanca TCR-a ili njegove funkcionalne varijante pronalaska, kao što je funkcionalni deo koji sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 varijabilnog(ih) regiona α lanca i/ili β lanca TCR R37P1C9 ili njegove funkcionalne varijante. U jednom otelotvorenju pronalaska, polipeptid može da sadrži funkcionalni deo koji sadrži aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 51 i 57 (CDR3 varijabilnih regiona TCR R37P1C9 pronalaska). U ovom pogledu, polipeptid može da sadrži aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 52 i/ili 58 (varijabilni regioni α ili β lanca TCR R37P1C9 pronalaska).
U nekim situacijama, konstrukt pronalaska može dalje da sadrži druge aminokiselinske sekvence, npr. aminokiselinsku sekvencu koja kodira imunoglobulin ili njegov deo, tada inventivni protein može da bude fuzioni protein. U tom pogledu, pronalazak takođe obezbeđuje fuzioni protein koji sadrži najmanje jedan od inventivnih polipeptida opisanih u ovom dokumentu zajedno sa najmanje jednim drugim polipeptidom. Drugi polipeptid može postojati kao zasebni polipeptid fuzionog proteina ili može postojati kao polipeptid koji je eksprimiran u okviru (u tandemu) sa jednim od inventivnih polipeptida opisanih u ovom dokumentu. Drugi polipeptid može uključivati bio koji peptidni ili proteinski molekul, ili njegov deo, uključujući, bez ograničenja, imunoglobulin, CD3, CD4, CD8, MHC molekul, CD1 molekul, npr. CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, itd.
Fuzioni protein može sadržati jednu ili više kopija inventivnog polipeptida i/ili jednu ili više kopija drugog polipeptida. Na primer, fuzioni protein može sadržati 1, 2, 3, 4, 5, ili više, kopija inventivnog polipeptida i/ili drugog polipeptida. Prikladni metodi stvaranja fuzionih proteina su poznati u stručnoj oblasti, i obuhvataju, na primer, rekombinantne metode. U nekim otelotvorenjima pronalaska, TCR-ovi (i njihovi funkcionalni delovi i funkcionalne varijante), polipeptidi i proteini pronalaska mogu biti eksprimirani kao jedan protein koji sadrži povezivački peptid koji povezuje α lanac i β lanac i povezuje γ lanac i δ lanac. U ovom pogledu, TCR-ovi (i njihove funkcionalne varijante i funkcionalni delovi), polipeptidi i proteini pronalaska sadrže aminokiselinske sekvence varijabilnih regiona TCR-a pronalaska i mogu dalje sadržati povezivački peptid. Povezivački peptid može povoljno olakšavati ekspresiju rekombinantnog TCR-a (uključujući njegove funkcionalne delove i funkcionalne varijante), polipeptida i/ili proteina u ćeliji domaćinu. Povezivački peptid može sadržati bilo koju prikladnu aminokiselinsku sekvencu. Povezivačke sekvence za jednolančane TCR konstrukte su dobro poznate u stručnoj oblasti. Takav jednolančani konstrukt može dalje sadržati jednu, ili dve, sekvence konstantnog domena. Nakon ekspresije konstrukta koji obuhvata povezivački peptid od strane ćelije domaćina, povezivački peptid može takođe da se razdvoji usled čega nastaju zasebni α i β lanci i zasebni γ i δ lanci.
TCR pronalaska može biti modifikovan kako bi se izbeglo pogrešno uparivanje TCR lanaca. Termin „pogrešno uparivanje“ će se odnositi na nepravilno uparivanje između TCR lanca TCR α/γ ili β/δ transgena pronalaska i endogenog TCR α/γ, odnosno β/δ lanca, i dovodi do razblažene ekspresije transgenskog TCRαβ/γδ heterodimera na površini ćelija, što smanjuje funkcionalni aviditet modifikovanih T ćelija. Poželjno, Q na položaju 44 u varijabilnom domenu TCR-a u skladu sa IMGT numeracijom se supstituiše drugom aminokiselinom u jednom ili oba lanca TCR-a pronalaska. Supstitucija je poželjno izabrana iz grupe koju čine R, D, E, K, I, W i V.
Kako je pomenuto ranije, funkcionalnost vezivanja TCR-a pronalaska može biti obezbeđena u okviru antitela. Na primer, CDR sekvence TCR-a pronalaska, moguće koje uključuju dodatna 3, 2 ili 1 N i/ili C terminalnih ostataka okvira, mogu direktno da se graftuju u varijabilnu sekvencu teškog/lakog lanca antitela. Termin „antitelo“ u njegovim raznim gramatičkim oblicima je korišćen u ovom dokumentu da označi molekule imunoglobulina i imunološki aktivne delove molekula imunoglobulina, tj. molekule koji sadrže mesto za vezivanje antigena ili paratop. Takvi molekuli se takođe nazivaju „antigen-vezujući fragmenti“ molekula imunoglobulina. Pronalazak dalje obezbeđuje antitelo, ili njegov antigen-vezujući deo koji se specifično vezuje za antigene opisane u ovom dokumentu. Antitelo može biti bilo koja vrsta imunoglobulina koja je poznata u stručnoj oblasti. Na primer, antitelo može biti bilo kog izotipa, npr. IgA, IgD, IgE, IgG, IgM, itd. Antitelo može biti monoklonalno ili poliklonalno. Antitelo može biti prirodno postojeće antitelo, npr. antitelo izolovano i/ili prečišćeno od sisara, npr. miša, zeca, koze, konja, kokoške, hrčka, čoveka itd. Alternativno, antitelo može biti genetičkim inženjeringom napravljeno antitelo, npr. humanizovano antitelo ili himerno antitelo. Antitelo može biti u monomernom ili polimernom obliku.
Termin „antitelo“ obuhvata, bez ograničavanja, genetički napravljene ili na drugi način modifikovane oblike imunoglobulina, kao što su intratela, himerna antitela, kompletno humana antitela, humanizovana antitela (npr. stvorena „CDR graftingom“), fragmenti antitela i heterokonjugatna antitela (npr. bispecifična antitela, dijatela, trijatela, tetratela itd.). Termin „antitelo“ obuhvata cis-dijatela i minitela. Tako, svako otelotvorenje navedeno u ovom dokumentu u pogledu „antitela“ ili „konstrukata sličnih antitelima“ je takođe zamišljeno kao otelotvorenja bispecifičnih antitela, dijatela, scFv fragmenata, konstrukata receptora himernog antitela (CAR), dijatela i/ili minitela, sem ako izričito nije navedeno drugačije. Termin „antitelo“ obuhvata polipeptid iz familije imunoglobulina ili polipeptid koji sadrži fragmente imunoglobulina koji je u stanju da nekovalentno, reverzibilno i na specifičan način veže odgovarajući antigen, poželjno TAA pronalaska, kako je predstavljeno u ovom dokumentu. Primer strukturne jedinice antitela sadrži tetramer. U nekim otelotvorenjima, antitelo kompletne dužine može da se sastoji od dva identična para polipeptidnih lanaca, pri čemu svaki par ima jedan „laki“ i jedan „težak“ lanac (povezane disulfidnom vezom). Struktura antitela i izotipovi dobro su poznati osobi stručnoj u predmetnoj oblasti (na primer, iz izdanja Janeway's Immunobiology, 9th edition, 2016).
2
Prepoznati geni imunoglobulina sisara uključuju kapa, lambda, alfa, gama, delta, epsilon i mu gene konstantnog regiona, kao i bezbroj gena varijabilnog regiona imunoglobulina (za više informacija o genima imunoglobulina vidite međunarodni sistem international Im-MunoGeneTics information system®, Lefranc M-P et al, Nucleic Acids Res. 2015 Jan;43(Database issue):D413-22; i http://www.imgt.org/). Za lance kompletne dužine, laki lanci su klasifikovani kao kapa ili lambda. Za lance kompletne dužine, teški lanci su klasifikovani kao gama, mu, alfa, delta ili epsilon, koji zauzvrat definišu klase imunoglobulina, IgG, IgM, IgA, IgD, odnosno IgE. N-kraj svakog lanca definiše varijabilni region od oko 100 do 110 ili više aminokiselina koje su primarno odgovorne za prepoznavanje antigena. Termini varijabilni laki lanac (VL) i varijabilni teški lanac (VH) odnose se na ove regione lakog, odnosno teškog lanca. Na način kako je korišćen u ovom pronalasku, termin „antitelo“ obuhvata sve varijacije antitela i njegovih fragmenata. Tako u obim ovog koncepta spadaju antitela kompletne dužine, himerna antitela, humanizovana antitela, jednolančana antitela (scFv), Fab, Fab’ i multimerne verzije ovih fragmenata (npr. F(ab')2) sa istom, suštinski istom ili sličnom specifičnošću vezivanja. U nekim otelotvorenjima, antitelo se specifično vezuje za peptid TAA pronalaska. Poželjni konstrukti koji prepoznaju antigen u skladu sa pronalaskom uključuju težak lanac antitela, poželjno njegov varijabilni domen, ili njegov antigen-vezujući fragment, i/ili laki lanac antitela, poželjno njegov varijabilni domen, ili njegov antigen-vezujući fragment. Slično tome, fragmenti varijabilnog regiona stabilizovani disulfidnom vezom (dsFv) mogu da se pripreme tehnologijom rekombinantne DNK; međutim, fragmenti antitela pronalaska nisu ograničeni na ove primere vrsta fragmenata antitela. Takođe, antitelo ili njegov antigen-vezujući deo, može da se modifikuje da sadrži oznaku za detekciju, kao što su, na primer, radioizotop, fluorofor (npr. fluorescein izotiocijanat (FITC), fikoeritrin (PE)), enzim (npr. alkalna fosfataza, peroksidaza iz rena) i čestice elemenata (npr. čestice zlata). U nekim okolnostima, TCR CDR3 sekvenca može biti blago modifikovana, ali poželjno za ne više od 3 aminokiselinska ostatka, poželjno samo dva i najpoželjnije samo jedna pozicija aminokiselina, u poređenju sa CDR3 sekvencama datim u ID BR. SEKV: 3, 9, 15, 21, 27, 33, 39, 45, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111 i 117. Poželjno, antitela sadrže CDR3, poželjno sve od CDR1 do CDR3 regiona u kombinaciji, kako je navedeno za TCR pronalaska u tabeli 1, u svakom slučaju nezavisno, opciono sa ne više od tri ili dve, poželjno jednom, supstitucijom(ama), insercijom(ama) i/ili delecijom(ama) aminokiselina u poređenju da ovim sekvencama.
Prikladni metodi stvaranja antitela su poznati u stručnoj oblasti. Na primer, standardni metodi hibridoma opisani su u, npr. radovima Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol, 5, 511-519 (1976), Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988), i C.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 8 Ed., Garland Publishing, New York, NY (2011)). Alternativno, u stručnoj oblasti su poznati drugi metodi, kao što su metodi EBV-hibridom (Haskard and Archer, J. Immunol. Methods, 74(2), 361-67 (1984), i Roder et al, Methods Enzymol, 121, 140-67 (1986)), i sistemi za ekspresiju zasnovani na bakteriofagnim vektorima (videti, npr., Huse et al., Science, 246, 1275-81 (1989)). Dalje, metodi proizvodnje antitela u nehumanim životinjama opisani su u npr. patentima registrovanim u SAD 5,545,806, 5,569,825 i 5,714,352, kao i publikaciji patentne aplikacije u SAD pod brojem 2002/0197266.
Neka otelotvorenja pronalaska takođe se odnose na TCR-ove, ili njihove funkcionalne fragmente i polipeptide, koji su solubilni TCR-ovi. Na način kako je korišćen u ovom dokumentu, termin „solubilni T-ćelijski receptor“ odnosi se na heterodimerne skraćene varijante nativnih TCR-ova, koji sadrži vanćelijske delove α lanca i β lanca TCR-a, na primer, povezane disulfidnom vezom, ali kojima nedostaju transmembranski i citosolni domeni nativnog proteina. Termini „sekvenca α lanca solubilnog T-ćelijskog receptora i sekvenca β lanca solubilnog T-ćelijskog receptora“ odnose se na sekvence α lanca i β lanca TCR-a kojima nedostaju transmembranski i citosolni domeni. Sekvenca (aminokiselina ili nukleinska kiselina) α lanca i β lanca solubilnog TCR-a može biti identična odgovarajućim sekvencama u nativnom TCR-u ili može sadržati varijantu sekvence α lanca i β lanca solubilnog TCR-a u poređenju sa odgovarajućim sekvencama nativnog TCR-a. Termin „solubilni T-ćelijski receptor“ na način kako je korišćen u ovom dokumentu, obuhvata solubilne TCR-ove sa varijantom ili bez varijante sekvenci α lanca i β lanca solubilnog TCR-a. Varijacije mogu biti u varijabilnim ili konstantnim regionima sekvenci α lanca i β lanca solubilnog TCR-a i mogu uključivati, bez ograničavanja, mutacije u vidu delecije, insercije, supstitucije aminokiseline, kao i promene sekvence nukleinskih kiselina koje ne
2
menjaju aminokiselinsku sekvencu. Solubilni TCR pronalaska u svakom slučaju zadržava funkcionalnost vezivanja svog izvornog molekula.
Gore navedeni problem je dalje rešen nukleinskom kiselinom koja kodira konstrukt pronalaska koji prepoznaje antigen, ili bilo koji od gore navedenih proteinskih ili polipeptidnih konstrukata. Nukleinska kiselina poželjno (a) ima lanac koji kodira konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa pronalaskom; (b) ima lanac komplementaran lancu pod (a); ili (c) ima lanac koji se pod strogim uslovima hibridizuje sa molekulom opisanim pod (a) ili (b). Osobi stručnoj u predmetnoj oblasti su poznati strogi uslovi, naročito iz rada Sambrook i sar. „Molekularno kloniranje“. Pored toga, nukleinska kiselina opciono ima dodatne sekvence koje su neophodne za eksprimiranje sekvence nukleinske kiseline koja odgovara tom proteinu, posebno za ekspresiju u sisarskoj/ljudskoj ćeliji. Korišćena nukleinska kiselina može biti sadržana u vektoru koji je pogodan za omogućavanje ekspresije sekvence nukleinske kiseline koja odgovara peptidu u ćeliji. Međutim, nukleinske kiseline se takođe mogu koristiti za transformaciju antigen-prezentujuće ćelije, koja ne mora biti ograničena na klasične antigen-prezentujuće ćelije kao što su dendritične ćelije, na takav način da one same proizvode odgovarajuće proteine na svojoj ćelijskoj površini.
U nekim otelotvorenjima, polipeptidi konstrukata koji prepoznaju antigen mogu da budu kodirani nukleinskim kiselinama i eksprimirani in vivo ili in vitro. Stoga je, u nekim otelotvorenjima, obezbeđena nukleinska kiselina koja kodira konstrukt koji prepoznaje antigen. U nekim otelotvorenjima, nukleinska kiselina kodira jedan deo ili monomer konstrukta pronalaska koji prepoznaje antigen (na primer jedan od dva lanca TCR-a pronalaska) i/ili druga nukleinska kiselina kodira drugi deo ili monomer konstrukta pronalaska koji prepoznaje antigen (na primer drugi od dva lanca TCR-a). U nekim otelotvorenjima, nukleinska kiselina kodira dva ili više polipeptidnih lanaca konstrukta koji prepoznaje antigen, na primer, najmanje 2 lanca TCR-a. Nukleinske kiseline koje kodiraju više lanaca konstrukta koji prepoznaje antigen mogu sadržati mesta cepanja nukleinske kiseline između najmanje dve sekvence lanaca, mogu da kodiraju mesto početka transkripcije ili translacije između sekvenci dva ili više lanaca,
2
i/ili mogu da kodiraju proteolitička ciljna mesta između dva ili više lanaca konstrukta koji prepoznaje antigen.
„Nukleinska kiselina“ na način kako je korišćena u ovom dokumentu obuhvata „polinukleotid“, „oligonukleotid“ i „molekul nukleinske kiseline“ i uopšteno podrazumeva polimer DNK ili RNK koji može biti jednolančani ili dvolančani, sintetizovan ili dobijen (npr. izolovan i/ili prečišćen) iz prirodnih izvora, koji može sadržati prirodne, neprirodne ili izmenjene nukleotide, i može sadržati prirodne, neprirodne ili izmenjene internukleotidne veze, kao što su fosforoamidatna veza ili fosforotioatna veza, umesto fosfodiestera koji se nalazi između nukleotida nemodifikovanog oligonukleotida.
Poželjno, nukleinske kiseline pronalaska su rekombinantne. Na način kako je korišćen u ovom dokumentu, termin „rekombinantni“ odnosi se na (i) molekule koji su napravljeni van živih ćelija spajanjem prirodnih ili sintetičkih segmenata nukleinskih kiselina u molekule nukleinskih kiselina koji mogu da se replikuju u živoj ćeliji, ili (ii) molekule koji nastaju replikacijom molekula opisanih pod (i) iznad. Za ovde navedene svrhe, replikacija može biti in vitro replikacija ili in vivo replikacija. Nukleinska kiselina može sadržati bilo koju nukleotidnu sekvencu koja kodira bilo koji od TCR-ova, polipeptida ili proteina, ili njihove funkcionalne delove ili funkcionalne varijante opisane u ovom dokumentu.
Pored toga, pronalazak obezbeđuje vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu u skladu sa pronalaskom kako je opisana iznad. Poželjno, vektor je vektor ekspresije ili rekombinantni vektor ekspresije. Termin „rekombinantni vektor ekspresije“ se u kontekstu predmetnog pronalaska odnosi na konstrukt nukleinske kiseline koji omogućava ekspresiju iRNK, proteina ili polipeptida u prikladnoj ćeliji domaćinu. Rekombinantni vektor ekspresije pronalaska može biti bilo koji prikladni rekombinantni vektor ekspresije i može se koristiti za transformaciju ili transfekciju bilo kog prikladnog domaćina. Prikladni vektori uključuju one koji su dizajnirani za propagaciju i ekspanziju ili za ekspresiju ili oba, kao što su plazmidi i virusi. Primeri životinjskih vektora ekspresije uključuju pEUK-Cl, pMAM i pMAMneo. Poželjno, rekombinantni vektor ekspresije je virusni vektor, npr. retrovirusni vektor.
2
Rekombinantni vektor ekspresije sadrži regulatorne sekvence, kao što su kodoni za iniciranje transkripcije i translacije i terminaciju, koji su specifični za vrstu ćelije domaćina (npr. bakterija, gljivica, biljka ili životinja) u koju se vektor može uvesti i u kojoj se može obaviti ekspresija nukleinske kiseline pronalaska. Pored toga, vektor pronalaska može uključivati jedan ili više markerskih gena koji omogućavaju izbor transformisanih ili transficiranih domaćina. Rekombinantni vektor ekspresije može sadržati nativni ili normativni promoter operabilno povezan sa nukleotidnom sekvencom koja kodira konstrukte pronalaska, ili sa nukleotidnom sekvencom koja je komplementarna sa ili koja se hibridizuje sa nukleotidnom sekvencom koja kodira konstrukte pronalaska. Izbori promotera uključuju npr. jake, slabe, inducibilne, tkivnospecifične i razvojno-specifične promotere. Promoter može biti nevirusni promoter ili virusni promoter. Inventivni rekombinantni vektori ekspresije mogu biti dizajnirani za prolaznu ekspresiju ili za stabilnu ekspresiju, ili za obe. Takođe, rekombinantni vektori ekspresije mogu biti napravljeni za konstitutivnu ekspresiju ili za inducibilnu ekspresiju.
Pronalazak se takođe odnosi na ćeliju domaćina koja sadrži konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa pronalaskom. Naročito, ćelija domaćin pronalaska sadrži nukleinsku kiselinu ili vektor kako su opisani ranije u tekstu. Ćelija domaćin može biti eukariotska ćelija, npr. biljka, životinja, gljiva ili alge, ili može biti prokariotska ćelija, npr. bakterija ili protozoa. Ćelija domaćin može biti kultivisana ćelija ili primarna ćelija, tj. izolovana direktno iz organizma, npr. čoveka. Ćelija domaćin može biti adherentna ćelija ili suspendovana ćelija, tj. ćelija koja raste u suspenziji. U svrhu proizvodnje rekombinantih TCR, polipeptida ili proteina, ćelija domaćin je poželjno ćelija sisara. Najpoželjnije, ćelija domaćin je ljudska ćelija. Iako ćelija domaćin može biti bilo kog tipa ćelije, može poticati od bilo koje vrste tkiva i može biti u bilo kojoj fazi razvoja, ćelija domaćin je poželjno leukocit periferne krvi (PBL) ili mononuklearna ćelija periferne krvi (PBMC). Još poželjnije, ćelija domaćin je T ćelija. T ćelija može biti bilo koja T ćelija, kao što je kultivisana T ćelija, npr. primarna T ćelija, ili T ćelija iz kultivisane T-ćelijske linije, npr. Jurkat, SupT1, itd., ili T ćelija dobijena od sisara, poželjno T ćelija ili prekursor T ćelije od humanog pacijenta. Ako se dobija od sisara, T ćelija se može uzeti od brojnih izvora, uključujući, bez ograničavanja, krv, kostnu srž, limfni čvor, timus ili druga tkiva ili tečnosti. T ćelije mogu takođe biti obogaćene
2
ili prečišćene. Poželjno, T ćelija je ljudska T ćelija. Još poželjnije, T ćelija je T ćelija izolovana iz čoveka. T ćelija može biti bilo koji tip T ćelije i može biti bilo koje faze razvoja, uključujući, bez ograničavanja, CD4-pozitivnu i/ili CD8-pozitivnu, CD4-pozitivne pomoćničke T ćelije, npr. Th1 i Th2 ćelije, CD8-pozitivne T ćelije (npr. citotoksične T ćelije), ćelije koje infiltriraju tumor (TIL), memorijske T ćelije, naivne T ćelije i slične. Poželjno, T ćelija je CD8-pozitivna T ćelija ili CD4-pozitivna T ćelija.
Poželjno, ćelija domaćin pronalaska je limfocit, poželjno T limfocit, kao što su CD4-pozitivna ili CD8-pozitivna T ćelija. Ćelija domaćin je dodatno poželjno tumorreaktivna T ćelija specifična za tumorske ćelije koje eksprimiraju TAA.
Cilj pronalaska je takođe rešen pomoću metoda proizvodnje TAA-specifičnog konstrukta koji prepoznaje antigen, ili ćelijske linije koja eksprimira TAA-specifičan konstrukt koji prepoznaje antigen, a koji se sastoji od
a. obezbeđivanja prikladne ćelije domaćina,
b. obezbeđivanja genetičkog konstrukta koji sadrži kodirajuću sekvencu koja kodira konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa ovde predstavljenim pronalaskom,
c. uvođenja navedenog genetičkog konstrukta u navedenu prikladnu ćeliju domaćina, i
d. eksprimiranja navedenog genetičkog konstrukta od strane navedene prikladne ćelije domaćina.
Metod može dalje da sadrži korak prezentacije navedenog konstrukta koji prepoznaje antigen na površini ćelije navedene prikladne ćelije domaćina.
U drugim poželjnim otelotvorenjima, genetički konstrukt je ekspresioni konstrukt koji sadrži promotersku sekvencu operabilno povezanu sa navedenom kodirajućom sekvencom.
Poželjno, navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen je sisarskog porekla, poželjno ljudskog porekla. Poželjna prikladna ćelija domaćin za upotrebu u metodu pronalaska
2
je sisarska ćelija, kao što je ljudska ćelija, naročito humani T limfocit. T ćelije za upotrebu u pronalasku su detaljno opisane ranije u tekstu.
Pronalazak takođe obuhvata otelotvorenja, naznačena time što je navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen modifikovani TCR, naznačen time što je navedena modifikacija dodavanje funkcionalnih domena, kao što su oznaka ili terapeutski aktivna supstanca. Pored toga, obuhvaćeni su TCR-ovi koji imaju alternativne domene, kao što su alternativni membranski sidreni domen umesto endogenog transmembranskog regiona.
Poželjno, sistem transfekcije za uvođenje genetičkog konstrukta u navedenu prikladnu ćeliju domaćina je retrovirusni vektorski sistem. Takvi sistemi su dobro poznati osobi stručnoj u predmetnoj oblasti.
Predmetni pronalazak u jednom otelotvorenju takođe obuhvata dodatni korak metoda u vidu izolovanja i prečišćavanja konstrukta koji prepoznaje antigen iz ćelije i, opciono, rekonstitucije translatovanih fragmenata konstrukta koji prepoznaje antigen u T ćeliju.
U alternativnom aspektu pronalaska obezbeđena je T ćelija koja je dobijena ili se može dobiti pomoću metoda za proizvodnju T-ćelijskog receptora (TCR) koja je specifična za tumorske ćelije i ima visok aviditet kako je opisano ranije u ovom dokumentu. Takva T ćelija zavisi od ćelije domaćina koja je korišćena u metodu pronalaska, na primer, humana ili nehumana T ćelija, poželjno humani TCR.
Termin „izolovan“ na način kako je korišćen ovde u kontekstu polipeptida, kao što je konstrukt koji prepoznaje antigen (primer čega može biti antitelo), odnosi se na polipeptid koji je prečišćen od proteina ili polipeptida ili drugih kontaminanata koji bi ometali njegovu terapeutsku, dijagnostičku, profilaktičku, istraživačku ili drugu upotrebu. Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa pronalaskom može biti rekombinantni, sintetički ili modifikovani (neprirodni) konstrukt koji vezuje antigen. Termin „izolovan“ na način kako je korišćen ovde u kontekstu nukleinske kiseline ili ćelija odnosi se na nukleinsku kiselinu ili ćelije koja(e) je(su) prečišćena(e) od DNK, RNK, proteina ili polipeptida ili drugih kontaminanata (kao što su druge ćelije) koji bi ometali njenu terapeutsku, dijagnostičku, profilaktičku, istraživačku ili drugu upotrebu, ili se odnosi na rekombinantnu, sintetičku ili modifikovanu (neprirodnu) nukleinsku kiselinu. U ovom kontekstu „rekombinantni“ protein/polipeptid ili nukleinska kiselina je ona koja je napravljena pomoću rekombinantnih tehnika. Metodi i tehnike za proizvodnju rekombinantnih nukleinskih kiselina i proteina dobro su poznati u predmetnoj oblasti.
Metodi lečenja i bolesti
Upućivanja na metode lečenja u narednim paragrafima ovog opisa treba tumačiti kao upućivanja na jedinjenja, farmaceutske smeše i lekove predmetnog pronalaska za korišćenje u metodu lečenja ljudskog (ili životinjskog) organizma pomoću terapije.
Jedan dalji aspekt predmetnog pronalaska odnosi se na ovde predstavljene konstrukte koji prepoznaju antigen, nukleinske kiseline, vektore, farmaceutske smeše i/ili ćeliju domaćina za upotrebu u medicini. Upotreba u medicini u jednom poželjnom otelotvorenju uključuje upotrebu u dijagnostikovanju, prevenciji i/ili lečenju tumorske bolesti, kao što je maligna ili benigna tumorska bolest. Tumorska bolest je, na primer, tumorska bolest koju karakteriše ekspresija TAA u malignim ili tumorskim ćelijama navedene tumorske bolesti.
U pogledu gore navedenih medicinskih primena konstrukata koji prepoznaju antigen i drugih materijala dobijenih od njih, koji se odnose na ili kodiraju isti, u skladu sa predmetnim pronalaskom, bolest koja treba da se leči i/ili dijagnostikuje može da bude bilo koji proliferativni poremećaj, poželjno koji karakteriše ekspresija TAA ili sekvence epitopa TAA pronalaska kao što su na primer bilo koji rak, uključujući bilo koji od sledećih: akutni limfocitni rak, akutna mijeloidna leukemija, alveolarni rabdomiosarkom, rak kosti, rak mozga, rak dojke, rak anusa, analnog kanala, ili anorektuma, rak oka, rak intrahepatičnih žučnih puteva, rak zglobova, rak vrata, žučne kese ili pleure, rak nosa, nosne duplje ili srednjeg uha, rak usne duplje, rak vagine, rak vulve, hronična limfocitna leukemija, hronična mijeloidna leukemija, rak kolona, rak jednjaka, rak grlića materice, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gliom, Hodžkinov limfom, rak hipofarinksa, rak bubrega, rak larinksa, rak jetre, rak pluća,
1
maligni mezoteliom, melanom, multipli mijelom, rak nazofarinksa, non-Hodžkinov limfom, rak orofarinksa, rak jajnika, rak penisa, rak pankreasa, peritoneuma, omentuma, i rak mezenterijuma, rak farinksa, rak prostate, rak rektuma, rak bubrega, rak kože, rak tankog creva, rak mekog tkiva, rak želuca, rak testisa, rak štitaste žlezde, rak materice, rak uretera i rak mokraćne bešike. Poželjni rak je rak grlića materice, orofarinksa, anusa, analnog kanala, anorektuma, vagine, vulve ili penisa. Naročito poželjan rak je TAA-pozitivan rak, uključujući poželjno, melanom, gastrointestinalni i rak želuca.
Konstrukti, proteini, TCR antitela, polipeptidi i nukleinske kiseline pronalaska su naročito za upotrebu u imunskoj terapiji, poželjno, adoptivnoj T-ćelijskoj terapiji. Primena jedinjenja pronalaska može, na primer, obuhvatati infuziju T ćelija pronalaska navedenom pacijentu. Poželjno, takve T ćelije su autologne T ćelije pacijenta i in vitro su transducirane sa nukleinskom kiselinom ili konstruktom koji prepoznaje antigen predmetnog pronalaska.
Inventivni konstrukti koji prepoznaju antigen, TCR-ovi, polipeptidi, proteini (uključujući njihove funkcionalne varijante), nukleinske kiseline, rekombinantni vektori ekspresije, ćelije domaćini (uključujući njihove populacije) i antitela (uključujući njihove antigen-vezujuće delove), koji se svi dalje u tekstu kolektivno nazivaju „inventivni TCR materijali“, mogu biti formulisani u smešu, kao što je farmaceutska smeša. U tom pogledu, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku smešu koja sadrži bilo koji od konstrukata koji prepoznaju antigen, TCR-ova, polipeptida, proteina, funkcionalnih delova, funkcionalnih varijanti, bilo koju nukleinsku kiselinu, bilo koji vektor ekspresije, bilo koju ćeliju domaćina (uključujući njihove populacije) i bilo koje antitelo (uključujući njihove antigen-vezujuće delove) opisane u ovom dokumentu, i farmaceutski prihvatljiv nosač, pomoćnu materiju i/ili stabilizator. Inventivne farmaceutske smeše koje sadrže bilo koji od inventivnih TCR materijala mogu sadržati više od jednog inventivnog TCR materijala, npr. polipeptid i nukleinsku kiselinu, ili dva ili više različita TCR-a (uključujući njihove funkcionalne delove i funkcionalne varijante). Alternativno, farmaceutska smeša može sadržati inventivni TCR materijal u kombinaciji sa drugim farmaceutski aktivnim agensom(ima) ili lekom(lekovima), kao što su hemioterapijski agensi, npr. asparaginaza, busulfan,
2
karboplatin, cisplatin, daunorubicin, doksorubicin, fluorouracil, gemcitabin, hidroksiurea, metotreksat, paklitaksel, rituksimab, vinblastin, vinkristin itd. Poželjno, nosač je farmaceutski prihvatljiv nosač. U pogledu farmaceutskih smeša, nosač može da bude bilo koji od onih koji se konvencionalno koriste za konkretni inventivni TCR materijal koji se razmatra. Takvi farmaceutski prihvatljivi nosači su dobro poznati osobama stručnim u predmetnoj oblasti i lako su dostupni javnosti. Poželjno je da farmaceutski prihvatljiv nosač nema štetna neželjena dejstva ili toksičnost u uslovima upotrebe.
Tako je takođe obezbeđena farmaceutska smeša koja sadrži bilo koji od ovde opisanih proizvoda pronalaska i TCR materijale pronalaska, naročito bilo koje proteine, nukleinske kiseline ili ćelije domaćine. U poželjnom otelotvorenju, farmaceutska smeša je za imunsku terapiju, poželjno adoptivnu ćelijsku terapiju.
Poželjno, inventivni TCR materijal se primenjuje pomoću injekcije, npr. intravenski. Kada je inventivni TCR materijal ćelija domaćin koja eksprimira inventivni TCR (ili njegovu funkcionalnu varijantu), farmaceutski prihvatljiv nosač za ćelije za injekciju može obuhvatati svaki izotoničan nosač kao što su, na primer, normalan fiziološki rastvor (oko 0,90% w/v NaCl-a u vodi, oko 300 mOsm/l NaCl-a u vodi, ili oko 9,0 g NaCl-a po litru vode), rastvor elektrolita NORMOSOL R (Abbott, Chicago, IL), PLASMA-LYTE A (Baxter, Deerfield, IL), oko 5% dekstroza u vodi ili Ringerov laktat. U jednom otelotvorenju, u farmaceutski prihvatljiv nosač se dodaje humani serumski albumin.
U svrhe pronalaska, količina ili doza (npr. broj ćelija kada je inventivni TCR materijal jedna ili više ćelija) inventivnog TCR materijala koja se primenjuje može biti dovoljna da ima efekat, npr. terapijski ili profilaktički odgovor, kod ispitanika ili životinje tokom razumnog vremenskog okvira. Na primer, doza inventivnog TCR materijala treba da bude dovoljna da se veže za tumorski antigen, ili da detektuje, leči ili prevenira rak u periodu od oko 2 časa ili duže, npr.12 do 24 ili više časova, od vremena primene. U određenim otelotvorenjima, vremenski period može biti i duži. Doza će biti utvrđena na osnovu efikasnosti konkretnog inventivnog TCR materijala i stanja životinje (npr. čoveka), kao i telesne težine životinje (npr. čoveka) koja treba da se leči.
Zamišljeno je da se inventivne farmaceutske smeše, konstrukti koji prepoznaju antigen, TCR-ovi (uključujući njihove funkcionalne varijante), polipeptidi, proteini, nukleinske kiseline, rekombinantni vektori ekspresije, ćelije domaćini, ili populacije ćelija mogu koristiti u metodama lečenja ili sprečavanja raka ili TAA-pozitivnog premaligniteta. Veruje se da se inventivni TCR-ovi (i njihove funkcionalne varijante) vezuju specifično za TAA pronalaska, tako da je TCR (ili srodni inventivni polipeptid ili protein i njihove funkcionalne varijante), kada ga eksprimira ćelija ili se eksprimira na ćeliji, kao što je T ćelija, u stanju da posreduje u imunskom odgovoru protiv ciljne ćelije koja eksprimira TAA pronalaska, poželjno prezentujući TAA peptide putem MHC i ili II na površini navedene ciljne ćelije. U tom pogledu, pronalazak obezbeđuje metod za lečenje ili preveniranje stanja, naročito raka, kod sisara, koji se sastoji od davanja sisaru bilo koje farmaceutske smeše, bilo kog konstrukta koji prepoznaje antigen, konkretno TCR-ova (i njegovih funkcionalnih varijanti), polipeptida, ili proteina opisanih u ovom dokumentu, bilo koje nukleinske kiseline ili rekombinantnog vektora ekspresije koji sadrže nukleotidnu sekvencu koja kodira bilo koji od TCR-ova (i njihove funkcionalne varijante), polipeptida, proteina opisanih u ovom dokumentu, ili bilo koje ćelije domaćina ili populacije ćelija koja sadrži nukleinsku kiselinu ili rekombinantni vektor koji kodira bilo koji od konstrukata pronalaska (i njihove funkcionalne varijante), polipeptide, ili proteine opisane u ovom dokumentu, u količini koja je efikasna za lečenje ili prevenciju stanja kod sisara, naznačeno time što je stanje poželjno rak, kao što je rak koji eksprimira TAA pronalaska.
Primeri farmaceutski prihvatljivih nosača ili razblaživača korisnih u predmetnom pronalasku uključuju stabilizatore kao što su SPGA, ugljeni hidrati (npr. sorbitol, manitol, skrob, sukroza, glukoza, dekstran), proteini kao što su albumin ili kazein, agensi koji sadrže protein kao što su goveđi serum ili obrano mleko i puferi (npr. fosfatni pufer).
Termini „lečiti“ ili „prevenirati“ kao i reči izvedene iz tih termina, na način kako se koriste u ovom dokumentu, ne podrazumevaju nužno 100% ili kompletno lečenje ili prevenciju. Radije, postoje različiti stepeni lečenja ili prevencije koje će osoba stručna u predmetnoj oblasti prepoznati kao da imaju potencijalnu korist ili terapijski efekat.
4
U tom pogledu, inventivni metodi mogu obezbediti bilo koju količinu bilo kog stepena lečenja ili prevencije stanja kod sisara. Pored toga, lečenje ili prevencija koje obezbeđuje inventivni metod može obuhvatati lečenje ili prevenciju jednog ili više stanja ili simptoma stanja, npr. raka, koji se leči ili prevenira. Na primer, lečenje ili prevencija mogu obuhvatati promovisanje regresije tumora. Takođe, za ovde navedene svrhe, „prevencija“ može obuhvatati odlaganje nastanka stanja ili simptoma ili njegovog stanja.
Predstavljen je metod za lečenje raka koji se sastoji od davanja TCR-a, nukleinske kiseline, ili ćelije domaćina predmetnog opisa u kombinaciji sa najmanje jednim hemioterapijskim agensom i/ili zračnom terapijom.
Dalje je predstavljen metod za detekciju TAA proteina, ili kompleksa MHC-a i TAA proteina (proteinski epitop TAA), u (biološkom) uzorku – kao što je uzorak uzet od ispitanika ili pacijenta – koji se sastoji od dovođenja u kontakt uzorka sa konstruktom koji prepoznaje antigen koji se specifično vezuje za navedeni TAA peptid, ili kompleks TAA peptid/MHC, i detekcije vezivanja između navedenog konstrukta koji prepoznaje antigen i navedenog TAA peptida, ili za kompleks TAA peptid/MHC. U nekim otelotvorenjima, konstrukt koji prepoznaje antigen je TCR ili antitelo, ili slični konstrukti, ili poželjno konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa ovde opisanim pronalaskom. U nekim otelotvorenjima, (biološki) uzorak je uzorak tumora ili raka (kao što su oni koji su opisani na drugom mestu u ovom dokumentu) na primer uzorak koji sadrži tumorske ili maligne ćelije.
Takođe je predstavljen metod za lečenje raka kod ispitanika kojem je potrebna terapija, koji se sastoji od:
a) izolovanja ćelije iz navedenog ispitanika;
b) transformisanja ćelije sa najmanje jednim vektorom koji kodira konstrukt koji prepoznaje antigen predmetnog pronalaska radi proizvodnje transformisane ćelije;
c) ekspandiranja transformisane ćelije kako bi se proizvelo mnoštvo transformisanih ćelija; i
d) davanja mnoštva transformisanih ćelija navedenom ispitaniku.
Takođe je predstavljen metod za lečenje raka kod ispitanika kojem je potrebna terapija, koji se sastoji od:
a) izolovanja ćelije iz zdravog donora;
b) transformisanja ćelije sa vektorom koji kodira konstrukt koji prepoznaje antigen predmetnog pronalaska radi proizvodnje transformisane ćelije;
c) ekspandiranja transformisane ćelije kako bi se proizvelo mnoštvo transformisanih ćelija; i
d) davanja mnoštva transformisanih ćelija navedenom ispitaniku.
Takođe je predstavljen in vitro metod za detekciju raka u biološkom uzorku koji se sastoji od:
a) dovođenja u kontakt biološkog uzorka sa konstruktom koji prepoznaje antigen predmetnog opisa;
b) detekcije vezivanja konstrukta koji prepoznaje antigen za biološki uzorak.
Takođe je predstavljen metod za detekciju prisustva stanja kod sisara. Metod se sastoji od (i) dovođenja u kontakt uzorka koji sadrži jednu ili više ćelija od sisara sa bilo kojim od inventivnih TCR-ova (i njegovih funkcionalnih varijanti), polipeptida, proteina, nukleinskih kiselina, rekombinantnih vektora ekspresije, ćelija domaćina, populacija ćelija, antitela, ili njihovih antigen-vezujućih delova, ili farmaceutskih smeša opisanih u ovom dokumentu, čime bi se obrazovao kompleks, i detekcije tog kompleksa, naznačeno time što je detekcija kompleksa indikativna za postojanje stanja kod sisara, naznačeno time što je stanje rak, kao što je malignitet koji eksprimira TAA.
U pogledu inventivnog metoda za detekciju stanja kod sisara, uzorak ćelija može biti uzorak koji sadrži cele ćelije, njihove lizate, ili frakciju lizata celih ćelija, npr. jedarnu ili citoplazmatsku frakciju, frakciju čitavog proteina ili frakciju nukleinskih kiselina.
U svrhu inventivnog metoda za detekciju, dovođenje u kontakt se obavlja in vitro u odnosu na sisara.
Takođe, detekcija kompleksa se može obaviti putem brojnih načina poznatih u stručnoj oblasti. Na primer, inventivni konstrukti koji prepoznaju antigen (i njihove funkcionalne varijante), polipeptidi, proteini, nukleinske kiseline, rekombinantni vektori ekspresije, ćelije domaćini, populacije ćelija ili antitela ili TCR-ovi, ili njihovi antigen-vezujući delovi, opisani u ovom dokumentu, mogu da se obeleže detektabilnom oznakom kao što je, na primer, radioizotop, fluorofor (npr. fluorescein izotiocijanat (FITC), fikoeritrin (PE)), enzim (npr. alkalna fosfataza, peroksidaza iz rena) i čestice elemenata (npr. čestice zlata).
U svrhe inventivnih metoda, naznačeno time što se daju ćelije domaćini ili populacije ćelija, ćelije mogu biti ćelije koje su alogene ili autologne ćelije sisara. Poželjno, ćelije su autologne ćelije sisara.
U pogledu gore navedenih medicinskih primena TCR materijala pronalaska, rak koji treba da se leči i/ili dijagnostikuje može da bude bilo koji rak, uključujući bilo koji od sledećih: akutni limfocitni rak, akutna mijeloidna leukemija, alveolarni rabdomiosarkom, rak kosti, rak mozga, rak dojke, rak anusa, analnog kanala, ili anorektuma, rak oka, rak intrahepatičnih žučnih puteva, rak zglobova, rak vrata, žučne kese ili pleure, rak nosa, nosne duplje ili srednjeg uha, rak usne duplje, rak vagine, rak vulve, hronična limfocitna leukemija, hronična mijeloidna leukemija, rak kolona, rak jednjaka, rak grlića materice, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gliom, Hodžkinov limfom, rak hipofarinksa, rak bubrega, rak larinksa, rak jetre, rak pluća, maligni mezoteliom, melanom, multipli mijelom, rak nazofarinksa, non-Hodžkinov limfom, rak orofarinksa, rak jajnika, rak penisa, rak pankreasa, peritoneuma, omentuma, i rak mezenterijuma, rak farinksa, rak prostate, rak rektuma, rak bubrega, rak kože, rak tankog creva, rak mekog tkiva, rak želuca, rak testisa, rak štitaste žlezde, rak materice, rak uretera i rak mokraćne bešike. Poželjni rak je rak grlića materice, orofarinksa, anusa, analnog kanala, anorektuma, vagine, vulve ili penisa. Naročito poželjan rak je TAA-pozitivan rak, kao što je rak kože, kao što je poželjno, melanom, gastrointestinalni ili rak želuca.
Uopšteno, pronalazak obezbeđuje konstrukte koji prepoznaju antigen, nukleinske kiseline, vektore, farmaceutske smeše i/ili ćelije domaćine kako su predstavljene predmetnim pronalaskom za upotrebu u lečenju tumora ili tumorske bolesti kod ispitanika. Poželjno, ispitanik je ispitanik kojem je potrebna takva terapija. Ispitanik je u poželjnim otelotvorenjima sisar, poželjno ljudski pacijent, koji boluje od tumora ili tumorske bolesti koja je TAA-pozitivna.
Predmetni pronalazak će sada biti dodatno opisan u sledećim primerima sa referencom na pripadajuće slike i sekvence, ali to neće biti ograničeno na ovde navedeno. Na slikama i sekvencama:
Slika 1: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P1A9 (ID BR. SEKV: 1-12) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 2: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P2A6 (ID BR. SEKV: 13-24) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 3: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P3H1 (ID BR. SEKV: 25-36) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR.
SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 4: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R35P3A4 (ID BR. SEKV: 37-48) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 5: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R37P1C9 (ID BR. SEKV: 49-60) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 6: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R37P1H1 (ID BR. SEKV: 61-72) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 7: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R42P3A9 (ID BR. SEKV: 73-84) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 8: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R43P3F2 (ID BR. SEKV: 85-96) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 9: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R43P3G5 (ID BR. SEKV: 97-108) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
4
Slika 10: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R59P2E7 (ID BR. SEKV: 109-120) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 134-142) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 11: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P1A9 (ID BR. SEKV: 1-12) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 12: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P2A6 (ID BR. SEKV: 13-24) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 13: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P3H1 (ID BR. SEKV: 25-36) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 14: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R35P3A4 (ID BR. SEKV: 37-48) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 15: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R37P1C9 (ID BR. SEKV: 49-60) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 16: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R37P1H1 (ID BR. SEKV: 61-72) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 17: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R42P3A9 (ID BR. SEKV: 73-84) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa
4
nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 18: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R43P3F2 (ID BR. SEKV: 85-96) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 19: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R43P3G5 (ID BR. SEKV: 97-108) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 20: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R59P2E7 (ID BR. SEKV: 109-120) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili homologni ali nepovezan peptid TMEM175-001 (ID BR. SEKV: 143), EPAS-001 (ID BR. SEKV: 144), PTRF-001 (ID BR. SEKV: 145), GALNTL4-001 (ID BR. SEKV: 146), PSME2-001 (ID BR. SEKV: 147), KIAA103-002 (ID BR. SEKV: 148), NSD1-001 (ID BR. SEKV: 149), TBC1D9-002 (ID BR. SEKV: 150), TMTC4-001 (ID BR. SEKV: 151) ili RASAL2-002 (ID BR. SEKV: 152) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0004) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0005) na desnoj Y osi.
Slika 21: Bojenje HLA-A*02/MAGEA1-003 tetramera, odnosno HLA-A*02/NYESO1-001 tetramera CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P2A6, odnosno R26P3H1. CD8+ T ćelije elektroporisane sa RNK 1G4 TCR-a koji se specifično vezuje za kompleks HLA-A*02/NYESO1-001 i lažne elektroporisane CD8+ T ćelije služile su kao kontrole.
Slika 22: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P1A9 (ID BR. SEKV: 1-12) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0006) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0007) na desnoj Y osi.
Slika 23: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P2A6 (ID BR. SEKV: 13-24) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim
4
ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0006) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0007) na desnoj Y osi.
Slika 24: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P3H1 (ID BR. SEKV: 25-36) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0006) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0007) na desnoj Y osi.
Slika 25: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R35P3A4 (ID BR. SEKV: 37-48) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0006) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0007) na desnoj Y osi.
Slika 26: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R37P1C9 (ID BR. SEKV: 49-60) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0006) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0007) na desnoj Y osi.
4
Slika 27: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R37P1H1 (ID BR. SEKV: 61-72) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od jednog donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole.
Slika 28: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R42P3A9 (ID BR. SEKV: 73-84) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od jednog donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole.
Slika 29: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R43P3F2 (ID BR. SEKV: 85-96) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0006) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0007) na desnoj Y osi.
Slika 30: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R43P3G5 (ID BR. SEKV: 97-108) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci
4
o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0006) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0007) na desnoj Y osi.
Slika 31: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R59P2E7 (ID BR. SEKV: 109-120) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) ili razne varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom treonina na položajima 1-9 ID BR. SEKV: 1 (ID BR. SEKV: 154-162) ili kontrolni peptid NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153). Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita donora. RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same ili nakon ko-inkubacije sa nenapunjenim ciljnim ćelijama služile su kao kontrole. Donor 1 (TCRA-0006) prikazan je na levoj Y osi, a donor 2 (TCRA-0007) na desnoj Y osi.
Slika 32: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR-ova R35P3A4 (ID BR. SEKV: 37-48), R37P1C9 (ID BR. SEKV: 49-60) i R43P3G5 (ID BR. SEKV: 97-108) nakon ko-inkubacije sa različitim tumorskim ćelijskim linijama. U266B1 i UACC-257 prezentuju cilj, KMM-1, NCI-H2023, L-1236, MCF-7 i A-375 ne prezentuju cilj. Kao kontrole služile su T2 ciljne ćelije napunjene sa MAGEA1-003 ili kontrolnim peptidom NYESO1-001 (ID BR. SEKV: 153) i RNK elektroporisane CD8+ T ćelije same.
Slika 33: Oslobađanje IFNγ iz T ćelija nakon lentivirusne transdukcije sa različitim konstruktima koji sadrže alfa i beta lanac TCR-ova R35P3A4 (ID BR. SEKV: 37-48; konstrukti R35D, R35G), R37P1C9 (ID BR. SEKV: 49-60; konstrukti R37D, R37G) i R43P3G5 (ID BR. SEKV: 97-108; konstrukti R43A, R43H) nakon koinkubacije sa različitim primarnim ćelijama i vrstama ćelija dobijenim od iPSC. Kao kontrole služile su U266B1 i UACC-257 i same T ćelije.
4
Slika 34: Oslobađanje IFNγ iz T ćelija nakon lentivirusne transdukcije sa različitim konstruktima koji sadrže alfa i beta lanac TCR R37P1C9 u cilju procene LV-R37D-posredovanog prepoznavanja endogeno obrađenog i prezentovanog MAGEA1-003. (A) T ćelije od tri zdrava donora, netransdukovane (NT) ili transdukovane sa LV-R37D ko-kultivisane su sa 3 različite tumorske ćelijske linije. Proizvodnja IFN-γ sa HLA-A*02+ tumorskim ćelijskim linijama koje endogeno eksprimiraju MAGEA1 (UACC257 i U266B1) ili nemaju površinski-prezentovan (KMM1). Označeni su E:T ciljevi. (B) Proizvodnja IFN-γ sa serijski razblaženim T2 ćelijama pulsiranim sa MAGEA1 peptidom. Ko-kulture su postavljene u E:T odnosu od 4:1 (60.000 T ćelija; 15.000 T2 ćelija). Srednja vrednost i standardna devijacija oslobađanja IFN-ɣ nakon 20 h iz tri replikata (donora) prikazane su kao dupla merenja pomoću ELISA testa.
Slika 35: Esej potentnosti koji procenjuje citolitičku aktivnost lentivirusno transdukovanih T ćelija koje eksprimiraju TCR R37P1C9 (konstrukt R37D) naspram MAGEA1+ tumorskih ćelija. Citotoksični odgovor LV-R37D-transdukovanih i netransdukovanih (NT) T ćelija izmeren naspram (A) U138MG MAGEA1+ tumorskih ćelija (HLA-A*02+), (B) U138MG MAGEA1- (HLA-A*02+) ili (C) U2-OS MAGEA1+ (HLA-A*02+) tumorskih ćelija. Eseji su izvršeni pri različitim E:T odnosima (A ili B) ili pri E:T odnosu od 10:1 (C) u 96-časovnom eseju citotoksičnosti zasnovanom na fluorescentnoj mikroskopiji. Rezultati su predstavljeni kao srednja vrednost ± SD 3 replikata. NT – netransdukovano. Za grafikone A i B, % ubijanja = (površina ispod
4
krive uzorka eksperimenta sa T ćelijama / površina ispod krive samo tumorskih ciljeva) * 100, gde se površina ispod krive izračunava iz merenja longitudinalnog rasta kako je prikazano na grafikonu C; vrednosti negativnog % ubijanja su postavljene na 0.
Slika 36: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P1A9 (tabela 1) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) u različitim koncentracijama punjenja peptidom od 10 µmol/l do 10 pmol/l. Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita zdrava donora.
Slika 37: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R26P2A6 (tabela 1) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) u različitim koncentracijama punjenja peptidom od 10 µmol/l do 10 pmol/l. Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita zdrava donora.
Slika 38: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R35P3A4 (tabela 1) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) u različitim koncentracijama punjenja peptidom od 10 µmol/l do 10 pmol/l.
Slika 39: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R37P1C9 (tabela 1) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) u različitim koncentracijama punjenja peptidom od 10 µmol/l do 10 pmol/l. Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita zdrava donora.
Slika 40: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R37P1H1 (tabela 1) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) u različitim koncentracijama punjenja peptidom od 10 µmol/l do 10 pmol/l.
Slika 41: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R42P3A9 (tabela 1) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) u različitim koncentracijama punjenja peptidom od 10 µmol/l do 10 pmol/l.
Slika 42: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R43P3F2 (tabela 1) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) u različitim koncentracijama punjenja peptidom od 10 µmol/l do 10 pmol/l. Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita zdrava donora.
Slika 43: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R43P3G5 (tabela 1) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) u različitim koncentracijama punjenja peptidom od 10 µmol/l do 10 pmol/l. Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita zdrava donora.
Slika 44: Oslobađanje IFNγ iz CD8+ T ćelija elektroporisanih sa alfa i beta lancem RNK TCR R59P2E7 (tabela 1) nakon ko-inkubacije sa T2 ciljnim ćelijama u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) u različitim koncentracijama punjenja peptidom od 10 µmol/l do 10 pmol/l. Podaci o oslobađanju IFNγ dobijeni su sa CD8+ T ćelijama dobijenim od dva različita zdrava donora.
Tabela 1: TCR sekvence pronalaska
1
2
4
1
2
Tabela 2: Peptidne sekvence pronalaska
4
PRIMERI
Deset MAGEA1-003-specifičnih TCR-ova (R26P1A9, R26P2A6, R26P3H1, R35P3A4, R37P1C9, R37P1H1, R42P3A9, R43P3F2, R43P3G5 i R59P2E7, vidite tabelu 1), pri čemu svaki kodira tumor-specifične TCR-alfa i TCR-beta lance, izolovano je i amplifikovano iz T ćelija zdravih donora. Ćelije od zdravih donora su stimulisane in vitro u skladu sa ranije opisanim metodom (Walter et al., 2003 J Immunol., Nov 15;171(10):4974-8) a ćelije specifične za cilj su sortirane po pojedinačnim ćelijama primenom HLA-A*02 multimera a zatim su korišćene za naknadnu izolaciju TCR-a. TCR sekvence su izolovane pomoću 5’ RACE primenom standardnih metoda kako je opisano u npr. Laboratorijskom priručniku za molekularno kloniranje, četvrto izdanje autora Green i Sambrook. Alfa i beta varijabilni regioni TCR-ova R26P1A9, R26P2A6, R26P3H1 R42P3A9, R43P3F2, R43P3G5, R59P2E735P3A4, R37P1C9 i R37P1H1 su sekvencirani te su pomoću sinteze gena stvoreni konstrukti ekspresije za dalju funkcionalnu karakterizaciju.
R26P1A9, R26P2A6, R26P3H1, R42P3A9, R43P3F2, R43P3G5 i R59P2E7 su dobijeni od HLA-A*02-negativnog donora (alo-reaktivna sredina), a R35P3A4, R37P1C9 i R37P1H1 su dobijeni od HLA-A*02-pozitivnog donora.
TCR-ovi od interesa su bili eksprimirani u humanim T ćelijama pomoću transdukcije, npr. pomoću iRNK elektroporacije ili lentivirusne transdukcije. Za lentivirusnu transdukciju, mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) su odmrznute i ostavljene preko noći a zatim su aktivirane primenom imobilisanih antitela. Aktivirane ćelije su transdukovane pomoću lentivirusnog vektora koji kodira MAGEA1-specifičan TCR i ekspandirane u prisustvu citokina. T ćelije su prikupljene i koncentrovane centrifugiranjem, a zatim su krioprezervirane.
T ćelije su procenjene u pogledu oslobađanja IFN-γ nakon ko-kultivacije sa različitim ciljnim ćelijama, kao što su T2 ćelije u koje su ubačeni različiti peptidi kao i tumorske ćelijske linije i primarne ćelije od zdravih tkiva. Podaci o aktivaciji T ćelija prikazani su u apsolutnim nivoima IFNγ ili tako što je oduzeta pozadinska aktivnost kako je navedeno u nastavku.
Efikasnost CD8+ T ćelija koje eksprimiraju TCR-ove R35P3A4, R37P1C9 i R43P3G5 bila je utvrđena npr. ispitivanjima aktivacije T ćelija (oslobađanje IFNγ) ili esejima ubijanja primenom različitih tumorskih ćelijskih linija kao ciljnih ćelija. Karakterizacija profila bezbednosti TCR-ova od interesa sprovedena je testiranjem potencijalne aktivacije T ćelija koje eksprimiraju TCR nakon ko-kultivacije sa izolovanim vrstama primarnih ćelija od zdravih tkiva i vrstama ćelija dobijenim od indukovane pluripotentne matične ćelije (iPSC) od HLA-A*02-pozitivnih donora (slika 33). Vrste ćelija izabrane su tako da pokriju kritične organe poput mozga, srca i jetre i različite vrste ćelija poput epitelijalnih, endotelijalnih i glatkomišićnih. Tumorske ćelijske linije analizirane su naporedno kao pozitivne i negativne kontrole.
Metod oduzimanja pozadine za oslobađanje IFNγ:
Srednja vrednostbg (TCRoi; co) = [srednja vrednost(TCRoi; co)-srednja vrednost(TCRoi; samo
efektorske)]-[srednja vrednost(lažne; co)-srednja vrednost(lažne; samo efektorske)]
Izračunata je odgovarajuća SDbg:
SDbg (TCRoi; co) = [SD(TCRoi; co)<2>+ SD(TCRoi; samo efektorske)<2>+ SD(lažne;co)<2>+ SD(lažne; samo
efektorske)<2>]^[1/2]
TCRoi = efektorske ćelije koje eksprimiraju TCR od interesa Lažne = efektorske ćelije bez egzogene ekspresije TCR
Co = efektorske ćelije ko-kultivisane sa ciljnim ćelijama Samo efektorske = efektorske ćelije koje nisu ko-kultivisane
Srednja vrednost(bg) = srednja vrednost oslobađanja IFNγ (oduzeta pozadina) SD(bg) = standardna devijacija (oduzeta pozadina)
Primer 1: T-ćelijski receptor R26P1A9
TCR R26P1A9 (ID BR. SEKV: 1-12) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 11). R26P1A9 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje re-eksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 1 i 22). TCR R26P1A9 zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti sekvence sa MAGEA1-003 (slika 11). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR R26P1A9 ima EC50 od 6 nmol/l (slika 36).
Primer 2: T-ćelijski receptor R26P2A6
TCR R26P2A6 (ID BR. SEKV: 13-24) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 12). R26P2A6 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje reeksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 2 i 23). TCR R26P2A6 zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti sekvence sa MAGEA1-003 (slika 12). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR R26P2A9 ima EC50 od 100 nmol/l (slika 37).
Primer 3: T-ćelijski receptor R26P3H1
TCR R26P3H1 (ID BR. SEKV: 25-36) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 13). R26P3H1 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje reeksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 3 i 24). Ovaj TCR zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti sekvence sa MAGEA1-003 (slika 13). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR ima EC50 od 16 nmol/l.
Primer 4: T-ćelijski receptor R35P3A4
TCR R35P3A4 (ID BR. SEKV: 37-48) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 14 iznad). R35P3A4 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje reeksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, odnosno vezanim HLA-A*02 tetramerima, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 4 i 25). Ovaj TCR zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti sekvence sa MAGEA1-003 (slika 14). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR ima EC50 od 16 nmol/l (slika 38) i afinitet od 29 µmol/l.
Za CD8+ T ćelije koje eksprimiraju TCR R35P3A4 nije zabeležena aktivacija nakon ko-kultivacije sa HLA-A*02-pozitivnim vrstama ćelija od zdravih tkiva (vidite sliku 33), dok je postojala aktivnost prema tumorskim ćelijskim linijama UACC-257 i U266B1 koje eksprimiraju HLA-A*02 i MAGEA1 kao izvorni gen za peptid MAGEA1-003 (slike 32 i 33). Korespondentni obrazac reaktivnosti je zabeležen sa CD8+ T ćelijama koje eksprimiraju NYESO1-specifičan kontrolni TCR 1G4, sa reaktivnošću prema HLA-A*02-pozitivnim tumorskim ćelijskim linijama koje eksprimiraju NYESO1 ali ne i prema navedenom panelu zdravih ćelija tkiva.
Aktivacija T ćelija nakon ko-kultivacije sa ćelijskim linijama koje eksprimiraju HLA-A*02 i MAGEA1 odražava prepoznavanje endogeno eksprimiranih i prezentovanih ciljnih pHLA (peptid prezentovan na humanom leukocitnom antigenu) od strane TCR-ova R35P3A4.
Primer 5: T-ćelijski receptor R37P1C9
TCR R37P1C9 (ID BR. SEKV: 49-60) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 15). R37P1C9 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje reeksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 5 i 26). Ovaj TCR zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti sekvence sa MAGEA1-003 (slika 15). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR ima EC50 od 13 nmol/l (slike 34B i 39) i afinitet od 8,7 µmol/l.
Re-ekspresija R37P1C9 u humanim primarnim CD8+ T ćelijama dovodi do selektivnog vezivanja HLA-A*02/MAGEA1-003 tetramera ali ne i HLA-A*02/NYESO1-001 tetramera (slika 21). Kao kontrola su korišćeni re-ekspresija NYESO1-001-specifičnog TCR 1G4 i lažna ekspresija.
Za CD8+ T ćelije koje eksprimiraju TCR R37P1C9 nije zabeležena aktivacija nakon ko-kultivacije sa HLA-A*02-pozitivnim vrstama ćelija od zdravih tkiva (vidite sliku 33), dok je postojala aktivnost prema tumorskim ćelijskim linijama UACC-257 i U266B1 koje eksprimiraju HLA-A*02 i MAGEA1 kao izvorni gen za peptid MAGEA1-003 (slike 32 i 33). Korespondentni obrazac reaktivnosti je zabeležen sa CD8+ T ćelijama koje eksprimiraju NYESO1-specifičan kontrolni TCR 1G4, sa reaktivnošću prema HLA-A*02-pozitivnim tumorskim ćelijskim linijama koje eksprimiraju NYESO1 ali ne i prema navedenom panelu zdravih ćelija tkiva.
Aktivacija T ćelija nakon ko-kultivacije sa ćelijskim linijama koje eksprimiraju HLA-A*02 i MAGEA1 odražava prepoznavanje endogeno eksprimiranih i prezentovanih ciljnih pHLA od strane TCR-ova R37P1C9, nezavisno od metoda dostavljanja gena npr. iRNK elektroporacija, lentivirusna transdukcija itd. (slike 32 i 34).
Primer 6: T-ćelijski receptor R37P1H1
TCR R37P1H1 (ID BR. SEKV: 61-72) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 16). R37P1H1 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje reeksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 6 i 27). Ovaj TCR zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti sekvence sa MAGEA1-003 (slika 16). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR ima EC50 od 26 nmol/l (slika 40).
Re-ekspresija R37P1H1 u humanim primarnim CD8+ T ćelijama dovodi do selektivnog vezivanja HLA-A*02/MAGEA1-003 tetramera ali ne i HLAA*02/NYESO1-001 tetramera (slika 21). Kao kontrola su korišćeni re-ekspresija NYESO1-001-specifičnog TCR 1G4 i lažna ekspresija.
Primer 7: T-ćelijski receptor R42P3A9
TCR R42P3A9 (ID BR. SEKV: 73-84) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 17). R42P3A9 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje reeksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 7 i 28). Ovaj TCR zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti sekvence sa MAGEA1-003 (slika 17). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR ima EC50 od 823 nmol/l (slika 41).
Primer 8: T-ćelijski receptor R43P3F2
TCR R42P3F2 (ID BR. SEKV: 85-96) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 18). R42P3F2 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje reeksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 8 i 29). Ovaj TCR zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti sekvence sa MAGEA1-003 (slika 18). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR ima EC50 od 1,7 nmol/l (slika 42).
Primer 9: T-ćelijski receptor R43P3G5
TCR R43P3G5 (ID BR. SEKV: 97-108) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 19). R43P3G5 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje reeksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 9 i 30). Ovaj TCR zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti
1
sekvence sa MAGEA1-003 (slika 19). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR ima EC50 od 6,6 nmol/l (slika 43) i afinitet od 38 µmol/l.
Re-ekspresija R43P3G5 u humanim primarnim CD8+ T ćelijama dovodi do selektivnog vezivanja HLA-A*02/MAGEA1-003 tetramera ali ne i HLA-A*02/NYESO1-001 tetramera (slika 21). Kao kontrola su korišćeni re-ekspresija NYESO1-001-specifičnog TCR 1G4 i lažna ekspresija.
Za CD8+ T ćelije koje eksprimiraju TCR R43P3G5 nije zabeležena aktivacija nakon ko-kultivacije sa HLA-A*02-pozitivnim vrstama ćelija od zdravih tkiva (vidite sliku 33), dok je postojala aktivnost prema tumorskim ćelijskim linijama UACC-257 i U266B1 koje eksprimiraju HLA-A*02 i MAGEA1 kao izvorni gen za peptid MAGEA1-003 (slike 32 i 33). Korespondentni obrazac reaktivnosti je zabeležen sa CD8+ T ćelijama koje eksprimiraju NYESO1-specifičan kontrolni TCR 1G4, sa reaktivnošću prema HLA-A*02-pozitivnim tumorskim ćelijskim linijama koje eksprimiraju NYESO1 ali ne i prema navedenom panelu zdravih ćelija tkiva. Aktivacija T ćelija nakon ko-kultivacije sa ćelijskim linijama koje eksprimiraju HLA-A*02 i MAGEA1 odražava prepoznavanje endogeno eksprimiranih i prezentovanih ciljnih pHLA od strane TCR-ova R43P3G5.
Primer 10: T-ćelijski receptor R59P2E7
TCR R59P2E7 (ID BR. SEKV: 109-120) je restrikovan prema HLA-A*02-prezentovanom MAGEA1-003 (ID BR. SEKV: 133) (vidite sliku 20). R59P2E7 specifično prepoznaje MAGEA1-003 kao humane primarne CD8+ T ćelije koje reeksprimiraju ovo TCR indukovano oslobađanje IFNγ nakon ko-inkubacije sa HLA-A*02+ ciljnim ćelijama, u koje je ubačen peptid MAGEA1-003 ili varijante MAGEA1-003 sa supstitucijom alanina i treonina (slike 10 i 31). Ovaj TCR zaista specifično prepoznaje MAGEA1-003, ali ne i različite peptide koji pokazuju visok stepen sličnosti sekvence sa MAGEA1-003 (slika 20). Peptid NYESO1-001 je korišćen kao negativna kontrola. TCR ima EC50 od 386 nmol/l (slika 44).
Re-ekspresija R59P2E7 u humanim primarnim CD8+ T ćelijama dovodi do selektivnog vezivanja HLA-A*02/MAGEA1-003 tetramera ali ne i HLA-A*02/NYESO1-001 tetramera (slika 21). Kao kontrola su korišćeni re-ekspresija NYESO1-001-specifičnog TCR 1G4 i lažna ekspresija.
2
4
1
2
4
1
2
4
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
11
11
11
11
11
11
11
12
12
12
12
12
12
12
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
14
14
14
14
14
14
14
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1

Claims (19)

Patentni zahtevi
1. Konstrukt koji prepoznaje antigen koji se specifično i/ili selektivno vezuje za MAGEA1 antigeni peptid ID BR. SEKV: 133 kada HLA prezentuje navedeni antigen, naznačeno time što navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence regiona koji određuju komplementarnost (CDR-ovi) koje imaju aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 49, ID BR. SEKV: 50 odnosno ID BR. SEKV: 51, i CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 55, ID BR. SEKV: 56 odnosno ID BR. SEKV: 57,
naznačeno time što navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen sadrži dotične CDR aminokiselinske sekvence sa ne više od jednom modifikovanom aminokiselinom, naznačeno time što je navedena modifikovana aminokiselina poželjno prva ili poslednja aminokiselina dotičnog CDR-a a modifikacija je konzervativna supstitucija, i naznačeno time što navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen selektivno ne vezuje nijedan od peptida ID BR. SEKV: 143 do 152.
2. Konstrukt koji prepoznaje antigen koji se specifično i/ili selektivno vezuje za MAGEA1 antigeni peptid ID BR. SEKV: 133 kada HLA prezentuje navedeni antigen, naznačeno time što je navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen T-ćelijski receptor (TCR) ili njegov fragment i sadrži CDR1 i CDR3 sekvence regiona koji određuju komplementarnost (CDR-ovi) koje imaju aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 49, odnosno ID BR. SEKV: 51, i CDR1 i CDR3 sekvence koje imaju aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 55 odnosno ID BR. SEKV: 57,
naznačeno time što navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen sadrži dotične CDR aminokiselinske sekvence sa ne više od jednom modifikovanom aminokiselinom, naznačeno time što je navedena modifikovana aminokiselina poželjno prva ili poslednja aminokiselina dotičnog CDR-a a modifikacija je konzervativna supstitucija, i naznačeno time što navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen selektivno ne vezuje nijedan od peptida ID BR. SEKV: 143 do 152.
3. Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa patentnim zahtevom 2, naznačen time što navedeni konstrukt koji prepoznaje antigen dalje sadrži CDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 50 i CDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 56.
4. Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačen time što je konstrukt koji prepoznaje antigen antitelo, ili njegov derivat ili fragment, ili αβ T-ćelijski receptor (TCR), ili njegov derivat ili fragment ili γδ TCR, ili njegov derivat ili fragment.
5. Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa patentnim zahtevom 4, naznačen time što je navedeno antitelo bispecifično antitelo.
6. Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa patentnim zahtevom 2 ili 4, naznačen time što je navedeni TCR jednolančani TCR (scTCR) i/ili solubilni TCR.
7. Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6, koji sadrži varijabilni region lanca TCR-a koji ima najmanje 90%, poželjno 95% identičnost sekvence sa aminokiselinskom sekvencom izabranom od ID BR. SEKV: 52 i 58.
8. Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 7, naznačen time što je konstrukt koji prepoznaje antigen TCR, ili njegov fragment, sastavljen od najmanje jedne sekvence TCR α i jedne sekvence TCR β lanca, naznačen time što navedena sekvenca TCR α lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 52, i naznačen time što navedena sekvenca TCR β lanca sadrži sekvencu varijabilnog regiona koja ima aminokiselinsku sekvencu ID BR. SEKV: 58.
1 1
9. Nukleinska kiselina koja kodira konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 8.
10. Vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu u skladu sa patentnim zahtevom 9.
11. Ćelija domaćin koja sadrži konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 8, ili nukleinsku kiselinu u skladu sa patentnim zahtevom 9, ili vektor u skladu sa patentnim zahtevom 10, opciono ćelija domaćin je limfocit, poželjno T limfocit ili progenitor T limfocita, još poželjnije CD4- ili CD8-pozitivna T ćelija.
12. Farmaceutska smeša koja sadrži konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 8, ili nukleinsku kiselinu u skladu sa patentnim zahtevom 9, ili vektor u skladu sa patentnim zahtevom 10, ili ćeliju domaćina u skladu sa patentnim zahtevom 11, i farmaceutski prihvatljiv nosač, stabilizator i/ili pomoćnu materiju.
13. Konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 8, ili nukleinska kiselina u skladu sa patentnim zahtevom 9, ili vektor u skladu sa patentnim zahtevom 10, ili ćelija domaćin u skladu sa patentnim zahtevom 11, ili farmaceutska smeša u skladu sa patentnim zahtevom 12, za upotrebu u medicini, opciono za upotrebu u dijagnostikovanju, prevenciji i/ili lečenju proliferativne bolesti.
14. Konstrukt koji prepoznaje antigen, nukleinska kiselina, vektor, ili ćelija domaćin, ili farmaceutska smeša, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 13, naznačeno time što je proliferativna bolest rak, kao što je nesitnoćelijski karcinom pluća, sitnoćelijski karcinom pluća, karcinom bubrežnih ćelija, rak mozga, rak želuca, kolorektalni karcinom, hepatocelularni karcinom, rak glave i vrata, rak pankreasa, rak prostate, leukemija, rak dojke, karcinom Merkelovih ćelija, melanom, rak jajnika, rak mokraćne bešike, rak materice, rak žučne kese i žučnih puteva, rak jednjaka, ili njihova kombinacija.
1 2
15. Konstrukt koji prepoznaje antigen, nukleinska kiselina, vektor, ili ćelija domaćin, ili farmaceutska smeša, za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 13 ili 14, naznačeno time što je konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 8, ili nukleinska kiselina u skladu sa patentnim zahtevom 9, ili vektor u skladu sa patentnim zahtevom 10, ili ćelija domaćin u skladu sa patentnim zahtevom 11, ili farmaceutska smeša u skladu sa patentnim zahtevom 12 imunoterapijsko jedinjenje.
16. Konstrukt koji prepoznaje antigen, nukleinska kiselina, vektor, ili ćelija domaćin, ili farmaceutska smeša, za upotrebu u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 13 do 15, naznačeno time što navedena upotreba obuhvata adoptivni transfer imunske ćelije pacijentu kojem je potrebna terapija, kao što je transfer heterolognih ili autolognih T ćelija.
17. Metod proizvodnje MAGEA1-specifičnog konstrukta koji prepoznaje antigen koji se sastoji od
a) obezbeđivanja prikladne ćelije domaćina,
b) obezbeđivanja genetičkog konstrukta koji sadrži kodirajuću sekvencu koja kodira konstrukt koji prepoznaje antigen u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 8,
c) uvođenja navedenog genetičkog konstrukta u navedenu prikladnu ćeliju domaćina,
d) eksprimiranja navedenog genetičkog konstrukta od strane navedene prikladne ćelije domaćina.
18. Metod u skladu sa patentnim zahtevom 17, koji se dalje sastoji od izolovanja i prečišćavanja konstrukta koji prepoznaje antigen iz prikladne ćelije domaćina i, opciono, rekonstitucije konstrukta koji prepoznaje antigen u T ćeliju.
19. In-vitro metod za detekciju raka u biološkom uzorku koji se sastoji od:
e) dovođenja u kontakt biološkog uzorka sa konstruktom koji prepoznaje antigen iz bilo kojih od patentnih zahteva 1 do 8, i
f) detekcije vezivanja konstrukta koji prepoznaje antigen za biološki uzorak.
1
RS20220094A 2016-12-08 2017-12-07 Novi t-ćelijski receptori i imunoterapija u kojoj se koriste RS62865B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662431588P 2016-12-08 2016-12-08
DE102016123847.3A DE102016123847B3 (de) 2016-12-08 2016-12-08 Neue T-Zellrezeptoren und deren Verwendung in Immuntherapie
EP17829609.1A EP3551221B1 (en) 2016-12-08 2017-12-07 Novel t cell receptors and immune therapy using the same
PCT/EP2017/081800 WO2018104438A1 (en) 2016-12-08 2017-12-07 Novel t cell receptors and immune therapy using the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62865B1 true RS62865B1 (sr) 2022-02-28

Family

ID=60990744

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220094A RS62865B1 (sr) 2016-12-08 2017-12-07 Novi t-ćelijski receptori i imunoterapija u kojoj se koriste

Country Status (24)

Country Link
US (3) US10702609B2 (sr)
EP (1) EP4032544A3 (sr)
JP (3) JP7016543B2 (sr)
KR (3) KR20220038511A (sr)
AU (1) AU2024227729A1 (sr)
CL (2) CL2019001535A1 (sr)
CO (1) CO2019006914A2 (sr)
CY (1) CY1124997T1 (sr)
DK (1) DK3551221T3 (sr)
ES (1) ES2916092T3 (sr)
HR (1) HRP20220131T8 (sr)
HU (1) HUE058957T2 (sr)
IL (1) IL267129A (sr)
LT (1) LT3551221T (sr)
MD (1) MD3551221T2 (sr)
MX (1) MX2022015821A (sr)
MY (1) MY192819A (sr)
NZ (1) NZ754365A (sr)
PH (1) PH12019501241A1 (sr)
PL (1) PL3551221T3 (sr)
PT (1) PT3551221T (sr)
RS (1) RS62865B1 (sr)
SI (1) SI3551221T1 (sr)
TW (1) TWI803910B (sr)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012104843A1 (en) 2011-02-06 2012-08-09 Yeda Research And Development Co.Ltd. At The Weizmann Institute Of Science Affinity maturated t cell receptors and use thereof
WO2016145578A1 (en) 2015-03-13 2016-09-22 Syz Cell Therapy Co. Methods of cancer treatment using activated t cells
GB201520570D0 (en) * 2015-11-23 2016-01-06 Immunocore Ltd & Adaptimmune Ltd Peptides
DE102016123847B3 (de) * 2016-12-08 2018-04-05 Immatics Biotechnologies Gmbh Neue T-Zellrezeptoren und deren Verwendung in Immuntherapie
PT3551221T (pt) * 2016-12-08 2022-01-18 Immatics Biotechnologies Gmbh Novos recetores de células t e imunoterapia empregando os mesmos
WO2019183924A1 (en) 2018-03-30 2019-10-03 Syz Cell Therapy Co. Improved multiple antigen specific cell therapy methods
WO2019196088A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 Syz Cell Therapy Co. Methods of obtaining tumor-specific t cell receptors
PH12021552979A1 (en) 2019-05-27 2023-10-09 Immatics Us Inc Viral vectors and their use in adoptive cellular therapy
IL295891A (en) 2020-02-24 2022-10-01 Immatics Us Inc Methods for propagating t cells for the treatment of cancer and related malignancies
US20220056411A1 (en) 2020-08-21 2022-02-24 Immatics US, Inc. Methods for isolating cd8+ selected t cells
DE102021100038A1 (de) 2020-12-31 2022-06-30 Immatics US, Inc. Modifizierte cd8-polypeptide, zusammensetzungen und verfahren zu deren verwendung
WO2022147029A2 (en) 2020-12-31 2022-07-07 Immatics US, Inc. Cd8 polypeptides, compositions, and methods of using thereof
TW202332765A (zh) 2021-09-20 2023-08-16 美商英麥提克斯股份有限公司 用於ｔ細胞療法之ｔ細胞群體的單核球耗盡
US20240390423A1 (en) * 2021-10-29 2024-11-28 Yafei Hou T cell receptor recognizing s37f mutation in ctnnb1 and its application
US20230142468A1 (en) 2021-11-08 2023-05-11 Immatics US, Inc. Methods for generating cell spheroids
CA3247927A1 (en) 2022-01-14 2023-07-20 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems and methods for programming T-lymphocyte phenotypes by targeted gene repression
WO2023137471A1 (en) 2022-01-14 2023-07-20 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for programming t cell phenotypes through targeted gene activation
EP4514834A1 (en) 2022-04-28 2025-03-05 Immatics US, Inc. Dominant negative tgfbeta receptor polypeptides, cd8 polypeptides, cells, compositions, and methods of using thereof
EP4514821A1 (en) 2022-04-28 2025-03-05 Immatics US, Inc. Il-12 polypeptides, il-15 polypeptides, il-18 polypeptides, cd8 polypeptides, compositions, and methods of using thereof
AU2023262596A1 (en) 2022-04-28 2024-12-05 Immatics US, Inc. Membrane-bound il-15, cd8 polypeptides, cells, compositions, and methods of using thereof
WO2023215825A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Immatics US, Inc. Methods for improving t cell efficacy
CN120239746A (zh) 2022-09-19 2025-07-01 图恩疗法股份有限公司 用于调节t细胞功能的组合物、系统和方法
WO2025029840A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for multiplexed activation and repression of t cell gene expression
WO2025029835A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating il-2 gene expression
WO2025096649A1 (en) 2023-11-01 2025-05-08 Immatics US, Inc. Membrane-bound il-15, cd8 polypeptides, cells, compositions, and methods of using thereof
CN117624340B (zh) * 2024-01-23 2024-04-30 北京臻知医学科技有限责任公司 识别人乙型肝炎病毒（hbv）抗原的t细胞受体（tcr）及其用途

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US20020150891A1 (en) 1994-09-19 2002-10-17 Leroy E. Hood Diagnostic and therapeutic compositions and methods which utilize the t cell receptor beta gene region
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US20020197266A1 (en) 2000-02-08 2002-12-26 Waldemar Debinski Immunotherapy using interleukin 13 receptor subunit alpha 2
CA2743669C (en) * 2008-11-24 2018-10-16 Helmholtz Zentrum Muenchen Deutsches Forschungszentrum Fuer Gesundheit Und Umwelt (Gmbh) High affinity t cell receptor and use thereof
PT2619223T (pt) 2010-09-21 2019-07-11 Us Health Recetores de células t anti-ssx-2 e materiais e métodos de utilização relacionados
EP3392270B1 (en) 2011-09-15 2020-08-26 The United States of America, as Represented by the Secretary Department of Health and Human Services T cell receptors recognizing hla-a1- or hla-cw7-restricted mage
US10377808B2 (en) 2013-01-29 2019-08-13 Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin (Mdc) Berlin-Buch High avidity antigen recognizing constructs
WO2014160030A2 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Health Research, Inc. Compositions and methods for use of recombinant t cell receptors for direct recognition of tumor antigen
CN105431524B (zh) 2013-06-10 2020-04-21 达娜-法勃肿瘤研究所公司 用于降低肿瘤细胞的免疫抑制的方法和组合物
US10202640B2 (en) * 2014-05-07 2019-02-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Single cell analysis of T cells using high-throughput multiplex amplification and deep sequencing
WO2016011210A2 (en) 2014-07-15 2016-01-21 Juno Therapeutics, Inc. Engineered cells for adoptive cell therapy
CN107002043A (zh) 2014-10-31 2017-08-01 贝勒医学院 靶向肿瘤而非t细胞的存活素特异性t细胞受体
US20220280564A1 (en) 2014-11-21 2022-09-08 Immatics US, Inc. Methods for expanding t cells for the treatment of cancer and related malignancies
CN105316362B (zh) 2015-08-19 2020-03-17 暨南大学 一种Dual-RMCE介导的TCR基因置换系统及其方法
AU2017205637B2 (en) 2016-01-06 2023-01-05 Health Research, Inc. Compositions and libraries comprising recombinant T-cell receptors and methods of using recombinant T-cell receptors
KR20180111870A (ko) 2016-02-25 2018-10-11 셀 메디카 스위처란트 아게 Pd-l1에 대한 결합 성분
GB201604492D0 (en) * 2016-03-16 2016-04-27 Immatics Biotechnologies Gmbh Transfected t-cells and t-cell receptors for use in immunotherapy against cancers
CN106749620B (zh) 2016-03-29 2020-09-25 广东香雪精准医疗技术有限公司 识别mage-a1抗原短肽的t细胞受体
WO2017180587A2 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
CN109715669B (zh) * 2016-06-17 2023-01-24 基因医疗免疫疗法股份有限公司 T细胞受体及其用途
DE102016123847B3 (de) * 2016-12-08 2018-04-05 Immatics Biotechnologies Gmbh Neue T-Zellrezeptoren und deren Verwendung in Immuntherapie
DE102016123893A1 (de) 2016-12-08 2018-06-14 Immatics Biotechnologies Gmbh T-Zellrezeptoren mit verbesserter Bindung
PT3551221T (pt) * 2016-12-08 2022-01-18 Immatics Biotechnologies Gmbh Novos recetores de células t e imunoterapia empregando os mesmos
US11702459B2 (en) 2017-03-07 2023-07-18 Universität Basel MR1 restricted T cell receptors for cancer immunotherapy
JP7037577B2 (ja) * 2017-03-15 2022-03-16 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター 高親和性ｍａｇｅ－ａ１特異的ｔｃｒ及びその使用
CR20240302A (es) 2017-09-29 2024-11-07 Us Health Receptores de células t que reconocen p53 mutado (divisional exp. 2020-0170)
KR102809909B1 (ko) * 2017-09-29 2025-05-22 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 P53 암-특이적 돌연변이에 대한 항원 특이성을 갖는 t 세포를 단리하는 방법
US11464800B2 (en) 2018-02-09 2022-10-11 Immatics US, Inc. Methods for manufacturing T cells
DE102018108612A1 (de) 2018-03-21 2019-09-26 Immatics US, Inc. Verfahren zur erhöhung der persistenz von adoptiv infundierten t-zellen
GB201804724D0 (en) 2018-03-23 2018-05-09 Univ Oslo Hf Method of diagnosing cceliac disease
CA3097399A1 (en) 2018-04-19 2019-10-24 The Board Of Regents, The University Of Texas System T cell receptors with mage-b2 specificity and uses thereof
EA202091977A1 (ru) 2018-05-28 2021-02-09 Драгонфлай Терапьютикс, Инк. Мультиспецифические связывающие белки, которые связывают cd33, nkg2d и cd16, и способы применения
EP3850005A1 (en) 2018-09-12 2021-07-21 Universität Basel Mr1 restricted t cell receptors for cancer immunotherapy
EA202191107A1 (ru) 2018-10-23 2021-09-17 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. T-клеточные рецепторы ny-eso-1 и способы их применения
GB201817821D0 (en) 2018-10-31 2018-12-19 Ospedale San Raffaele Srl TCR and peptides
CN114026116A (zh) 2019-02-20 2022-02-08 弗雷德哈钦森癌症研究中心 Ras新抗原特异性结合蛋白及其用途
KR102930963B1 (ko) 2019-03-01 2026-02-25 시애틀 프로젝트 코포레이션 T 세포 수용체의 선택
CN113795585B (zh) 2019-03-04 2026-03-06 大学健康网络 T细胞受体及其使用方法
MX2021010840A (es) 2019-03-08 2022-01-19 Obsidian Therapeutics Inc Composiciones de anhidrasa carbónica 2 (ca2) humana y métodos de regulación ajustable.
BR112021017703A8 (pt) 2019-03-11 2023-04-18 Hutchinson Fred Cancer Res Receptores de células t wt1 de alta avidez e usos dos mesmos
US20200297768A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 Immatics US, Inc. Cd28 t cell cultures, compositions, and methods of using thereof
US20200318068A1 (en) 2019-04-04 2020-10-08 Immatics US, Inc. Use of retinoic acid in t-cell manufacturing
WO2020227091A1 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Gigamune, Inc. Engineered cells expressing anti-tumor t cell receptors and methods of use thereof
PH12021552979A1 (en) 2019-05-27 2023-10-09 Immatics Us Inc Viral vectors and their use in adoptive cellular therapy
CN114303060A (zh) 2019-06-06 2022-04-08 伊玛提克斯生物技术有限公司 使用序列相似肽进行反向选择分选
US20210032370A1 (en) 2019-08-02 2021-02-04 Immatics Biotechnologies Gmbh Recruiting agent further binding an mhc molecule
US12480958B2 (en) 2019-08-13 2025-11-25 Immatics Biotechnologies Gmbh Method for the characterization of peptide:MHC binding polypeptides
DE102020111571A1 (de) 2020-03-11 2021-09-16 Immatics US, Inc. Wpre-mutantenkonstrukte, zusammensetzungen und zugehörige verfahren
US20220056411A1 (en) 2020-08-21 2022-02-24 Immatics US, Inc. Methods for isolating cd8+ selected t cells
US12234473B2 (en) 2020-12-31 2025-02-25 Immatics US, Inc. CD8 polypeptides, compositions, and methods of using thereof

Also Published As

Publication number Publication date
DK3551221T3 (da) 2022-01-24
MD3551221T2 (ro) 2022-04-30
US20190321478A1 (en) 2019-10-24
AU2024227729A1 (en) 2024-11-21
JP2020500523A (ja) 2020-01-16
TWI803910B (zh) 2023-06-01
US20240285779A1 (en) 2024-08-29
KR20220038511A (ko) 2022-03-28
US11998607B2 (en) 2024-06-04
LT3551221T (lt) 2022-02-10
KR20240007775A (ko) 2024-01-16
ES2916092T3 (es) 2022-06-28
US20200254106A1 (en) 2020-08-13
US10702609B2 (en) 2020-07-07
IL267129A (en) 2019-10-31
JP7016543B2 (ja) 2022-02-07
PH12019501241A1 (en) 2019-12-11
JP2022068152A (ja) 2022-05-09
JP2024153696A (ja) 2024-10-29
CL2021002997A1 (es) 2022-08-12
KR102375218B1 (ko) 2022-03-17
PT3551221T (pt) 2022-01-18
HRP20220131T1 (hr) 2022-04-15
PL3551221T3 (pl) 2022-02-28
CY1124997T1 (el) 2023-01-05
NZ754365A (en) 2022-02-25
CL2019001535A1 (es) 2019-10-11
MX2022015821A (es) 2023-01-24
EP4032544A3 (en) 2022-12-21
CO2019006914A2 (es) 2019-07-10
MY192819A (en) 2022-09-12
EP4032544A2 (en) 2022-07-27
HUE058957T2 (hu) 2022-10-28
TW202216753A (zh) 2022-05-01
HRP20220131T8 (hr) 2022-06-24
SI3551221T1 (sl) 2022-04-29
KR20210109657A (ko) 2021-09-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240285779A1 (en) Novel t cell receptors and immune therapy using the same
US11111286B2 (en) T cell receptors and immune therapy using the same against PRAME positive cancers
US20250154246A1 (en) Novel t cell receptors and immune therapy using the same
CA3045233C (en) Novel t cell receptors and immune therapy using the same
US10725044B2 (en) T cell receptors and immune therapy using the same
US20220098270A1 (en) T cell receptors and immune therapy using the same against prame positive cancers
RS62498B1 (sr) T-ćelijski receptori i imunoterapija u kojoj se koriste
HK40078003A (en) Novel t cell receptors and immune therapy using the same
HK40014640B (en) Novel t cell receptors and immune therapy using the same
HK40014640A (en) Novel t cell receptors and immune therapy using the same