RS62950B1 - Aerosolni sprej koji sadrži vijabilne bakterijske vrste - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak je usmeren na aerosolni sprej koji sadrži jednu ili više vijabilnih bakterijskih vrsta i jedan ili više isparljivih siloksana pogodnih za primenu navedene jedne ili više vijabilnih bakterijskih vrsta na površinu ili u okruženje.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Aerosolni sprejevi su veoma korisni u primeni različitih agenasa na površinu ili u okruženje, i bio bi zanimljiv način formulisanja živih bakterijskih vrsta. US 2012/328586 podučava o Lactobacillus u spreju koji se može pumpati. Međutim, generalno, aerosolni sprejevi sadrže vodenu komponentu, koja nije kompatibilna sa formulacijom živih bakterijskih vrsta. Posebno, prisustvo vode uobičajeno takođe zahteva prisustvo konzervansa za sprečavanje rasta štetnih patogena i za kontrolu mikrobiološkog rasta. Konzervansi su štetni za opstanak koformulisanih mikroorganizama. Štaviše, čak i ograničene količine koformulisane vode dovoljne su da aktiviraju dormantne bakterije, čime se značajno smanjuje vreme skladištenja takvih kompozicija. Prema tome, tipični aerosolni sprejevi nisu pogodni za formulaciju živih bakterijskih vrsta, i cilj predmetnog pronalaska je bio da se obezbedi aerosolna kompozicija koja rešava ove probleme formulisanja i sticanje dugotrajnog skladištenja živih bakterijskih vrsta.

[0003] Zbog toga, iznenađujuće je pronađeno da su aerosolni sprejevi koji sadrže najmanje jedan isparljivi siloksan veoma korisni za navedenu svrhu.

[0004] Silikonski fluidi i siloksani posebno, često se upotrebljavaju u sprejevima koji sadrže proizvode za zaštitu useva, repelente, toaletnu kozmetiku i druge proizvode za ličnu negu. Najčešće upotrebljavani silikonski fluidi su dimetikoni, ciklometikoni i feniltrimetikoni. Inkorporisani u proizvod, ovi silikonski fluidi su veoma pogodna noseća ulja sa velikim brojem prednosti kao što su poboljšano klizanje, redukcija lepljivosti i davanje omekšavanja. Uprkos maloj solubilnosti i viskoznosti ciklometikona, smatra se da su ovi silikonski fluidi posebno korisni kada su formulisani u aerosolnim sprejevima, pošto imaju tendenciju da obezbede prethodno pomenute prednosti bez doprinosa zauljenosti ili zamašćivnju. Štaviše, poznato je da ciklometikon ima relativno visoku isparljivost i da ne blokira preterano antiperspirant aktivni sastojak u dezodoransima. Konačno, ciklometikoni su odlični agensi za dispergovanje i razmazivanje, uglavnom su boje bele vode, slabog mirisa, isparljivi su, i rezistentni na hemijsku i oksidativnu degradaciju.

[0005] Bez obzira na njihovu široku upotrebu u aerosolnim sprejevima, za ove silikonske fluide generalno se smatra da imaju antimikrobne efekte protiv velikog broja (aerobnih) bakterija, i stoga nisu dodatno istraženi za formulisanje bakterija. Uprkos tome, sada smo iznenađujuće pronašli da se silikonski fluidi i posebno isparljivi siloksani kao što su ciklometikoni mogu upotrebljavati za dugotrajno skladištenje (dormantnih mlečnokiselinskih) bakterija u aerosolnim sprejevima. Pronađeno je da na takve dormantne bakterije ne utiču isparljivi siloksani i stoga ostaju stabilne tokom skladištenja. Posle raspršivanja dormantne bakterije postaju aktivne usled kontakta sa vodom ili parom, i do tog vremena, koformulisani isparljivi siloksani su isparili i više ne utiču na preživljavanje aktiviranih bakterija.

SAŽETAK PRONALASKA

[0006] U prvom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej kao što je definisano u patentnom zahtevu 1.

[0007] U specifičnom primeru izvođenja predmetnog pronalaska, navedeni jedan ili više siloksana odabrani su sa liste koja sadrži linearne siloksane kao što su dimetikoni, dimetikonoli, feniltrimetikoni i njihovi derivati; ili ciklične siloksane, kao što su ciklometikoni i njihovi derivati; posebno ciklične siloksane, kao što su ciklometikoni i njihovi derivati.

[0008] Pomenuti propelant (pod pritiskom) je posebno odabran sa liste koja sadrži likvefikovani gas, posebno jedan ili više ugljovodonika kao što su metan, etan, propan, izopropan, butan, n-butan, pentan i n-pentan; alternativno, propelant može biti trajni komprimovani i/ili solubilni gas kao što je azot, ugljen-dioksid, komprimovani vazduh ili azotni oksid gas.

[0009] U još jednom primeru izvođenja, aerosolni sprej iz predmetnog pronalaska može dodatno sadržati agens protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije. Navedeni agensi protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije su posebno odabrani sa liste neorganskih polimera kao što su gelovi organogline koji sadrže bentonit ili hektorit; i/ili ispareni silicijum-dioksid kao što je aerosil.

[0010] U sledećem posebnom primeru izvođenja, aerosolni sprej iz predmetnog pronalaska može dodatno sadržati jedan ili više emolijenasa, agenasa za suspendovanje, ovlaživača, antioksidanasa, humektanasa, emulgatora, agenasa za modifikaciju viskoznosti, parfema i/ili drugih ekscipijenasa.

[0011] U specifičnom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej; pri čemu njegov sadržaj sadrži ili se sastoji od najmanje 50% propelanta, 1-20% siloksana, 1-20% mlečnokiselinskih bakterija i 0,1-10% agensa protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije.

[0012] U još jednom dodatnom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej pri čemu njegov sadržaj sadrži ili se sastoji od najmanje 75% propelanta, 5-10% ciklometikona, 1-10% mlečnokiselinskih bakterija i 0,1-5% benton gela. Alternativno, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej koji sadrži ili se sastoji od najmanje 75% propelanta, 5-10% ciklometikona, 1-10% mlečnokiselinskih bakterija i 0,1-5% aerosila.

[0013] U specifičnom primeru izvođenja, aerosolni sprej u skladu sa predmetnim pronalaskom suštinski je bez vode i konzervanasa.

[0014] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje upotrebu aerosolnog spreja u skladu sa predmetnim pronalaskom za primenu navedene jedne ili više vijabilnih bakterijskih vrsta; specifično navedenih vijabilnih probiotskih bakterijskih sojeva na površinu ili u okruženje.

[0015] U specifičnom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej kao što je ovde definisano za upotrebu u obnavljanju i/ili održavanju zdrave mikrobiote kože. Predmetni pronalazak stoga takođe obezbeđuje upotrebu aerosolnog spreja u skladu sa trenutnim pronalaskom za obnavljanje i/ili održavanje zdrave mikrobiote kože.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0016] Sada se sa specifičnim pozivanjem na slike, naglašava da su samo prikazani detalji putem primera i u svrhu ilustrativne diskusije o različitim primerima izvođenja predmetnog pronalaska. Oni su predstavljeni u cilju obezbeđivanja onoga što se veruje da je najkorisniji i najlakši opis principa i konceptualnih aspekata pronalaska. S tim u vezi, ne pokušava se da se prikažu strukturni detalji pronalaska detaljnije nego što je neophodno za fundamentalno razumevanje pronalaska. Opis uzet sa crtežima pokazuje onima sa iskustvom u struci kako se nekoliko oblika pronalaska mogu primeniti u praksi.

Sl. 1: Stabilnost samokultivisanih (neosušenih) Lac 4 i Lac 7 naspram komercijalnog zamrzavanjem osušenog soja LGG, suspendovanih (1/10 m/m%) u silikonskom ulju CF 1406-OH tokom perioda od 1 godine. Ova slika jasno pokazuje da je sušenje zamrzavanjem probiotika i njihovo suspendovanje u mešavini anhidrovanog silikona idealan način za sprečavanje brzog pada vijabilnosti vijabilnih bakterija. Suspendovanje zamrzavanjem osušenih bakterija u mešavini silikona koja sadrži dimetikon i dimetikonol obezbeđuje dugotrajno skladištenje ove Lactobacillus vrste.

Sl. 2: Stabilnost samokultivisanih (neosušenih) Lac 4 i Lac 7 naspram komercijalnog zamrzavanjem osušenog soja LGG, suspendovanih (1/10 m/m%) u silikonskom ulju CF 6570-DM tokom perioda od 1 godine. Ova slika jasno pokazuje da je sušenje zamrzavanjem probiotika i njihovo suspendovanje u mešavini anhidrovanog silikona idealan način za sprečavanje brzog pada vijabilnosti vijabilnih bakterija. Suspendovanje zamrzavanjem osušenih bakterija u mešavini silikona koja sadrži dimetikon, disiloksan i ciklopentasiloksan obezbeđuje dugotrajno skladištenje ove Lactobacillus vrste.

Sl. 3: Krive preživljavanja suspendovanih zamrzavanjem osušenih L. plantarum u različitim formulacijama (F1-F8), dok je skladišten u kanistru pod pritiskom sa ugljovodoničnim propelantom na sobnoj temperaturi (20 °C). Posle malog inicijalnog pada vijabilnosti tokom prvog meseca, vijabilnost ostaje prilično konstantna tokom narednih meseci, što dokazuje da je skladištenje u kanistru pod pritiskom pogodan postupak za dugotrajno preživljavanje probiotika.

Sl. 4: Šestomesečna stabilnost zamrzavanjem osušenih L. plantarum u različitim formulacijama naspram istih formulacija koje su skladištene u kanistrima pod pritiskom. Posle 6 meseci skladištenja, postoji statistički značajna razlika u preživljavanju za formulacije skladištene sa propelantom u kanistru pod pritiskom, u odnosu na formulacije koje su skladištene bez propelanta. Preživljavanje je bilo bolje za svih 8 testiranih formulacija, što dokazuje da je suspendovanje zamrzavanjem osušenih bakterija u silikonskom ulju, koje su skladištene sa propelantom bolji postupak za dugotrajnu stabilnost od jednostavnog suspendovanja zamrzavanjem osušenih bakterija u silikonskom ulju.

Sl. 5: Stabilnost zamrzavanjem osušenih LAC_15 u različitim silikonima i mešavinama silikona posle 3 meseca. Iako su uočene male razlike, većina je ocenjena kao beznačajna. Čini se da postoji trend gde mešavina različitih silikonskih ulja obezbeđuje bolju stabilnost od jedne ili dve uljne komponente. Ovo može ukazivati na to da niža koncentracija različitih silikonskih ulja poništava negativan uticaj viših koncentracija pojedinačnih silikonskih komponenti.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0017] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "aerosolni sprej" je zamišljen da bude tip sistema za izdavanje koji stvara aerosolnu maglu. Ovo se upotrebljava sa konzervom ili bocom koja sadrži mešavinu iz predmetnog pronalaska i propelant pod pritiskom. Kada je ventil kontejnera otvoren, mešavina se izbacuje iz kanistra kroz ventile i pojavljuje se kao aerosol ili magla. Kako se mala količina propelanta širi kako bi izbacila mešavinu, velika količina propelanta ostaje unutar konzerve da bi se održao konstantan pritisak. Izvan konzerve, propelant brzo isparava.

[0018] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "mešavina" je sistem sastavljen od dve ili više različitih supstanci koje su pomešane ali nisu hemijski kombinovane, kao što je kombinacija isparljivih siloksana i dormantnih bakterijskih vrsta. U takvoj mešavini, zadržavaju se individualni identiteti komponenti i mešaju se u obliku suspenzija.

[0019] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "dormantan" je zamišljen da bude stanje živih/vijabilnih bakterija u kome su rast, razvoj, reprodukcija,... privremeno zaustavljeni. One su u metabolički dormantnom stanju u kome su metabolički procesi usporeni do te mere da više ne proizvode značajne količine metabolita. Mnoge bakterijske vrste mogu preživeti nepovoljne uslove kao što su niske temperature formiranjem (endo)spora, cista, konidija ili stanja redukovane metaboličke aktivnosti bez specijalizovanih ćelijskih struktura. Kada dožive "normalne" uslove, dormantne bakterije se mogu ponovo aktivirati, na primer pošto dođu u kontakt sa vodom ili naiđu na određenu temperaturu ili vibracije. U kontekstu predmetnog pronalaska, bakterije se mogu dovesti u dormantno stanje upotrebom tehnika poznatih u struci kao što su sušenje zamrzavanjem, sušenje raspršivanjem, sušenje u vakuumu, sušenje fluidnim slojem, krio sušenje azotom,... Poželjno, bakterije iz predmetnog pronalaska su osušene zamrzavanjem.

[0020] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "isparljiv" upotrebljava se u odnosu na objavljene siloksane, da ukaže na to da oni imaju tendenciju da vaporizuju. Isparljivost je direktno povezana sa pritiskom pare supstance. Na datoj temperaturi, supstanca sa višim pritiskom pare vaporizuje lakše od supstance sa nižim pritiskom pare. Inače, supstance sa nižom toplotom vaporizacije (kJ/kg) ispariće brže na datoj temperaturi od onih sa većom toplotom vaporizacije. Termin je prvenstveno napisan da bude primenjen na tečnosti; međutim, može se upotrebljavati kako bi se opisao proces sublimacije koji je povezan sa čvrstim supstancama, kao što je suvi led (čvrsti ugljen-dioksid), koji može direktno da pređe iz čvrstog stanja u paru, bez da postane tečan. Pritisak pare supstance je pritisak pri kom je njena gasna faza u ravnoteži sa kondenzovanim fazama (tečnim ili čvrstim). To je mera sklonosti molekula i atoma da pobegnu iz tečnosti ili čvrste supstance. Što je veći pritisak pare tečnosti na datoj temperaturi, veća je isparljivost i niža je normalna tačka ključanja tečnosti. Poželjno, pritisak pare isparljivih siloksana iz predmetnog pronalaska je manji od 2500 kJ/kg na sobnoj temperaturi (25 °C), poželjnije manji od 1000, i čak poželjnije, manji od 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 kJ/kg.

[0021] Ciklometikoni su grupa metil siloksana, klasa tečnih silikona (ciklični polidimetilsiloksanski polimeri) koji poseduju karakteristike niske viskoznosti i visoke isparljivosti kao i to da su emolijensi za kožu i u određenim okolnostima korisni rastvarači za čišćenje. Za razliku od dimetikona, koji su linearni siloksani koji ne isparavaju brzo, ciklometikoni su ciklični: obe grupe se sastoje od polimera koji ima monomernu okosnicu od jednog silicijuma i dva atoma kiseonika povezana zajedno, ali umesto da imaju veoma dugu "linearnu" okosnicu okruženu serijom metil grupa (koji proizvode bistru, nereaktivnu, neisparljivu tečnost koja je u opsegu od tečne kao voda do guste kao karamela (taffy-thick)), ciklometikoni imaju kratke okosnice koje prave zatvorene ili skoro zatvorene prstenove ili "krugove" sa svojim metil grupama, dajući im mnoga ista svojstva dimetikona ali čineći ih mnogo isparljivijim. Prema tome u zavisnosti od željenog stepena isparavanja, može se odabrati isparljiviji siloksan kao što je ciklometikon, ili umesto toga siloksan koji je manje isparljiv kao što je dimetikon. Poželjni su, međutim, isparljiviji siloksani kao što je ciklometikon i njegovi derivati.

[0022] Silikoni se uobičajeno upotrebljavaju u industriji lične nege (i mnogim drugim) i percipiraju se, nakon kontakta sa kožom, kao glatki, baršunasti, nemasni i nelepljivi (Handbook of Cosmetic Science and Technology Fourth Edition 2014; New York CRC Press; 204 AD. Pg. 321-329). Imaju nisku površinsku energiju, otporni su na vlagu i temperaturu, biokompatibilni su, isparljivi i permeabilni, netoksični i neiritirajući. Silikoni su polimeri dobijeni od silicijuma (Si), ugljenika, kiseonika i vodonika i mogu biti linearni, ciklični ili organofunkcionalni. Najčešći silikon (dimetikon) ima okosnicu od neorganskog Si-oksida sa organskim (2x metil) visećim grupama na Si. Silikonski polimer ima opseg od 2 do nekoliko hiljada monomera i ima viskoznost koja može biti u opsegu od 0,65 cSt (heksametildisiloksan) do 1 milion cSt cp. Visoko viskozne tečnosti mogu da formiraju zaštitni film, dok nisko viskozne tečnosti mogu da se emulguju i imaju bolju solubilnost sa drugim sastojcima. Organske grupe se mogu modifikovati tako da obezbede površinski aktivna svojstva. Si-o veze se veoma slobodno kreću (Si-o ima 0,2 kcal/mol; c-c ima 3,3 kcal/mol energiju rotacije), imaju jaku energiju vezivanja (Si-o ima 117 kcal/mol; c-c ima 85 kcal/mol jačinu veze) i ravne su i duge (Si-o ima ugao od 130 °C, dužinu od 0,163 nm; c-c veza ima ugao od 112° i dužinu od 0,154 nm). Sve ovo čini veoma fleksibilnu i jaku okosnicu. Polidimetilsiloksan (PDMS) takođe ima veoma nisku površinsku tenziju od 20 mM/m u poređenju sa etanolom (50 mM/m) i vodom (72 mM/m).<2>Ovo je uzrok potpunog pokrivanja površine i odličnog agensa za razmazivanje, i oba su korisna svojstva u formulaciji aerosola. Silikoni manje molekulske težine imaju visoku isparljivost, ne ostavljaju ostatke i obezbeđuju lagani osećaj na koži. Usled njihovog niskog toplotnog isparavanja (po gramu) ne treba im mnogo toplote sa kože kako bi isparili i posledično se ne osećaju kao hladni u poređenju sa proizvodima na bazi vode ili etanola (videti tabelu 1).

Tabela 1. Toplota vaporizacije nekih isparljivih fluida koji se upotrebljavaju u

kozmetici

[0023] PDMS polimeri pokazuju visoku permeabilnost za gasove, što je povezano sa solubilnošću i koeficijentom difuzije (videti tabelu 2).

Tabela 2. Podaci o permeabilnosti nekih isparljivih fluida koji se upotrebljavaju u

kozmetici

[0024] Ova visoka stopa difuzije gasa uzrokuje da koža može da "diše" i opisuje se kao neokluzivna. Ciklični silikoni (ciklometikon, D4-D5-D6) su veoma dobri rastvarači, koji ne ostavljaju mrlje, bezbojni su, bez mirisa i imaju visoku isparljivost. Najčešće se upotrebljavaju u antiperspirantnim proizvodima kao vehikulum za isporuku aktivnih sastojaka. Ne osećaju se kao hladni na koži usled njihove niske toplote vaporizacije i imaju prijatan osećaj na koži i predstavljaju izbor medijuma za suspendovanje za aerosolne kanistere pod pritiskom. Oni takođe mogu sprečiti stvaranje aglomerata na ventilima zbog lubrikantnih svojstava silikona. Drugi medijumi za suspendovanje koji se uobičajeno upotrebljavaju u antiperspirantima su etanol, voda i mineralna ulja.

[0025] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "siloksani" je zamišljen da to budu molekuli koji sadrže funkcionalne grupe sa Si-O-Si vezom. Roditeljski siloksani uključuju oligomerne i polimerne hibride sa formulama H(OSiH2)nOH i (OSiH2)n. Siloksani takođe uključuju razgranata jedinjenja, čije je definišuće svojstvo da je svaki par silicijumskih centara odvojen jednim atomom kiseonika. Funkcionalna grupa siloksana formira okosnicu silikona. Pogodni isparljivi siloksani u kontekstu predmetnog pronalaska mogu biti odabrani sa liste koja sadrži linearne siloksane kao što su dimetikoni, dimetikonoli, feniltrimetikoni i njihovi derivati; ili ciklične siloksane, kao što su ciklometikoni i njihovi derivati; posebno ciklične siloksane, kao što su ciklometikoni i njihovi derivati.

[0026] Pronalazači su pronašli da je stavljanjem aerosolnih konzervi pod pritisak, postignuta čak i poboljšana stabilnost u odnosu na kompozicije bez pritiska. Prema tome, u sledećem posebnom primeru izvođenja, aerosolni sprej iz predmetnog pronalaska može dodatno sadržati propelant.

[0027] U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "propelant" je zamišljen da bude gas pod pritiskom koji se upotrebljava za stvaranje kretanja tečnosti ili praha. Posebno, to su jednostavno tečnosti (ili gasovi) koji lako mogu vaporizovati. Hladni gasovi propelanti se mogu upotrebljavati za punjenje sistema za izdavanje pod pritiskom, kao što su aerosolni sprejevi, kako bi se materijal progurao kroz mlaznicu. U konzervama aerosolnog spreja, propelant je uobičajeno gas pod pritiskom u ravnoteži sa svojom tečnošću ili prahom (pri pritisku njegove zasićene pare). Kako deo gasa izlazi kako bi izbacio tovar, više tečnosti isparava, održavajući ujednačen pritisak. Pogodan propelant koristan u kontekstu predmetnog pronalaska može se odabrati sa liste koja sadrži likvefikovani gas, posebno jedan ili više ugljovodonika kao što su metan, etan, propan, izopropan, butan, n-butan, pentan i n-pentan; ili trajni komprimovani i/ili solubilni gas kao što je azot, ugljen-dioksid, komprimovani vazduh ili azotni oksid gas. Drugi likvefikovani gasovi koji se mogu upotrebljavati u kontekstu predmetnog pronalaska su DME (dimetiletar) i HFC (hidrofluorougljenici) kao što su 1,1,1,2-tetrafluoretan i 1,1-difluoretan.

[0028] U još jednom dodatnom primeru izvođenja, aerosolni sprej iz predmetnog pronalaska može dodatno sadržati agens protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije.

[0029] U kontekstu predmetnog pronalaska termin "agens protiv sedimentacije" je zamišljen da to budu supstance koje sprečavaju čestice u suspenziji da se talože iz fluida u koji su uvučene i da se zaustave na barijeri, kao što je dno aerosolne konzerve. Dobar agens protiv sedimentacije imaće svojstva formiranja porozne, voluminozne i lako resuspendabilne suspenzije, neophodne za homogenu dozu. U kontekstu predmetnog pronalaska termin "agens protiv aglomeracije" je zamišljen da to budu supstance koje sprečavaju zgrušavanje ili aglomeraciju komponenti. Pogodni agensi protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije u kontekstu predmetnog pronalaska mogu se odabrati sa liste koja sadrži neorganske polimere kao što su gelovi organogline koji sadrže bentonit ili hektorit; i/ili ispareni silicijum-dioksid kao što je aerosil®. Aerosil® se može hemijski modifikovati kako bi se dobila bolja 3D strukturna mreža u odabranom siloksanskom nosaču. Aerosili su tipično hidrofilni ispareni silicijum-dioksidi (SiO2). Posebno pogodni za ovaj pronalazak su hidrofobni silicijumdioksidi, uobičajeno silicijum-dioksidi koji su naknadno tretirani hidrofobnim supstancama kao što su, ali ne ograničavajući se na: dimetildihlorislan, polidimetililoksan, organosilan, heksadecilsilan, oktametilciklotetrasiloksan, metakrilsilan, silikonsko ulje, aminosilan i njihove derivate.

[0030] U sledećem posebnom primeru izvođenja, aerosolni sprej iz predmetnog pronalaska može sadržati bilo koje dodatne supstance koje mogu biti korisne u kontekstu predmetnog pronalaska. Takve dodatne supstance uključuju, ali nisu ograničene na jedan ili više emolijenasa, ovlaživača, antioksidanasa, humektanasa, agenasa za suspendovanje,

1

emulgatora, agenasa za modifikaciju viskoznosti, agenasa za modifikaciju polariteta, parfema, elektrolita, agenasa za modifikaciju boje i drugih ekscipijenasa. Pogodni antioksidansi mogu biti, ali nisu ograničeni na: BHT, BHA, propil galat, askorbinsku kiselinu i natrijummetabisulfit. Pogodni agensi za modifikaciju viskoznosti mogu biti, ali nisu ograničeni na, različite koloide, silikonske smole, propilenglikol, organogelove, aerosile,...

[0031] Pogodna dopunska komponenta u aerosolnim sprejevima iz predmetnog pronalaska je na primer Tegosoft®, tj. polipropilen glikol butil etar ili ppg-14-butiletar. Tegosoft® je lako kozmetičko ulje sa veoma dobrim svojstvima razmazivanja koje se često upotrebljava kao emolijens u proizvodima za negu kože kao što su kreme, losioni, ulja za kupanje,... Takođe ima odlična svojstva suspendovanja aktivnih sastojaka u aerosolnim formulacijama. PPG-butil etar sastojci u kozmetičkim formulacijama poboljšavaju izgled suve ili oštećene kože smanjujući ljuspanje i obnavljajući gipkost.

[0032] Kad god se u kontekstu predmetnog pronalaska pominju procenti, oni su zamišljeni da su tež./tež. procenti prema ukupnim kompozicijama. Na primer, 80% propelanta je zamišljeno da je 80 g propelanta prisutno u ukupnoj težini kompozicije od 100 g.

[0033] U specifičnom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej čiji sadržaj sadrži ili se sastoji od najmanje 50% propelanta, 1-20% siloksana, 1-20% mlečnokiselinskih bakterija, 0,1-5% agensa protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije i 0-5% drugih aditiva. Poželjno, aerosolni sprejevi iz predmetnog pronalaska sadrže od 1-20% mlečnokiselinskih bakterija; posebno od 1-10%; još posebnije oko 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% ili 1% mlečnokiselinskih bakterija.

[0034] Štaviše, aerosolni sprejevi iz predmetnog pronalaska poželjno sadrže malu količinu agensa protiv sedimentacije, kao što je manje od 5%, manje od 4%, manje od 3%, manje od 2%, manje od 1% ili čak bez agensa protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije ukoliko je izvodljivo.

[0035] U specifičnom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej čiji sadržaj sadrži ili se sastoji od najmanje 75% propelanta, 5-10% siloksana, 1-10% mlečnokiselinskih bakterija i 0-5% agensa protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije.

[0036] U sledećem specifičnom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej čiji sadržaj sadrži ili se sastoji od najmanje 80% propelanta, 1-8% siloksana, 1-8% mlečnokiselinskih bakterija i 0-4% agensa protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije.

[0037] U sledećem specifičnom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej čiji sadržaj sadrži ili se sastoji od najmanje 90% propelanta, 1-4% siloksana, 1-4% mlečnokiselinskih bakterija i 0-2% agensa protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije.

[0038] U specifičnom primeru izvođenja kompozicija definisanih ovde prethodno, agens protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije je odabran od benton gela i aerosila®.

[0039] U još jednom dodatnom primeru izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej čiji sadržaj sadrži ili se sastoji od najmanje 75% propelanta, 5-10% ciklometikona, 1-10% mlečnokiselinskih bakterija i 0-5% benton gela. Alternativno, predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej čiji sadržaj sadrži ili se sastoji od najmanje 75% propelanta, 5-10% ciklometikona, 1-10% mlečnokiselinskih bakterija i 0-5% aerosila.

[0040] Očigledno, u formulaciji dormantnih bakterija poželjno se izbegavaju štetni proizvodi kao što su konzervansi i aktivirajuće supstance kao što je voda kako bi se osiguralo dugotrajno skladištenje kompozicije. Prema tome, u specifičnom primeru izvođenja, aerosolni sprej u skladu sa predmetnim pronalaskom je suštinski bez vode i konzervanasa. Termin "suštinski bez" je zamišljen da bude manje od 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, poželjno manje od 1%. Kada se upotrebljava aerosolni sprej sa više kompartmenata, kompartment koji sadrži bakterije je poželjno suštinski bez vode i konzervanasa.

[0041] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje upotrebu aerosolnog spreja u skladu sa predmetnim pronalaskom za primenu navedene jedne ili više živih bakterijskih vrsta na površinu ili u okruženje. U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "površina" treba tumačiti u njegovom najširem smislu, tj. može uključivati površine predmeta, međutim, može uključivati i kožu ljudi ili životinja. Prema tome aerosolni sprejevi iz predmetnog pronalaska mogu takođe biti topikalni aerosolni sprejevi, pri čemu je termin "topikalni" zamišljen da bude lokalna isporuka na specifičnoj lokaciji tela, posebno primena na određeno mesto na ili u telu. Posebno, uključuje primenu na mukusne membrane putem aerosola.

[0042] U specifičnom primeru izvođenja predmetni pronalazak obezbeđuje aerosolni sprej kao što je ovde definisano za upotrebu u obnavljanju i/ili održavanju zdrave mikrobiote kože. Predmetni pronalazak stoga takođe obezbeđuje upotrebu aerosolnog spreja u skladu sa trenutnim pronalaskom za obnavljanje i/ili održavanje zdrave mikrobiote kože.

PRIMERI

UVOD U PRIMERE

[0043] Atletsko stopalo i druge dermalne mikotičke infekcije trenutno se leče antimikoticima kao što je mikonazol koji ometa sintezu ergosterola. Dobro poznati komercijalni proizvod koji sadrži mikonazol je daktarin® sprej, poželjan zbog svoje lakoće upotrebe. I antibiotici i antimikotici znaju rastući trend rezistencije. Prema tome alternativni tretmani, kao što je upotreba probiotika za topikalne bolesti, bili bi blagotvorni za pacijente. Većina probiotika ima blagotvoran efekat na domaćina (čoveka) sprečavajući invaziju i kolonizaciju patogena. Neki probiotici, kao što su Lactobacillus vrste, mogu da se bore protiv ovih patogena izlučivanjem organskih kiselina, vodonik peroksida i antimikrobioloških peptida u okruženje. Uobičajene gljivične infekcije kože kao što je tinea pedis uzrokovane su različitim vrstama kao što su Trichophyton, Epidermophyton, Microsporum i Candida. Ova studija istražuje da li je aerosol (kanister pod pritiskom) pogodna formulacija za prezervaciju i dugotrajnu stabilnost probiotika.

[0044] Kao što je već dokazano, probiotici imaju mnogo bolju dugotrajnu stabilnost kada se pravilno osuše za razliku od neosušenih bakterija (Morgan et al., 2006 - Preservation of micro-organisms by drying; pregledni članak – Journal of microbiological Methods 66 (2006) 183- 193). Proces sušenja dovodi probiotike u metabolički neaktivno (tj. dormantno) stanje. Aktivnost preostale vode (Aw) praha, kao i uslovi skladištenja (temperatura, kiseonik, svetlost) će uglavnom odrediti stabilnost praha.

PRIMER 1: Stabilnost probiotskih bakterija u silikonima

[0045] U ovom primeru, ispitali smo dugotrajnu stabilnost vijabilnih probiotskih bakterija u različitim mešavinama silikona/siloksana.

Materijal i postupci

Studija stabilnosti

[0046] U ovoj studiji stabilnosti upotrebljena su tri soja:

- Samokultivisani L. pentosus (tj. lac4 ili Lp)

- Samokultivisani LGG (tj. lac7 ili LGG)

- Kupljen zamrzavanjem osušeni LGG (Dupont® LR-32)

[0047] Dva različita suspenziona medijuma na bazi silikona za očuvanje bakterija testirana su na sobnoj temperaturi (+/- 20 °C):

1

• Silikoni:

[0048]

◦ Kozmetički fluid 1406-OH (dimetikonol i dimetikon) - Chemsil®

◦ Kozmetički fluid 6570-DM (disiloksan, ciklopentasiloksan i dimetikon) - Chemsil®

[0049] Uzorci su dobijeni na unapred definisanim vremenskim tačkama:

• T0 = pre suspenzije u suspenzionom medijumu

• T1 = 1 dan posle suspenzije

• T2 = 1 nedelja posle suspenzije

• T3 = 2 nedelje posle suspenzije

• T4 = 1 mesec posle suspenzije

• T5 = 2 meseca posle suspenzije

• T6 = 6 meseci posle suspenzije

• T7 = 12 meseci posle suspenzije

[0050] Svi upotrebljeni materijali sterilisani su pre upotrebe pomoću autoklaviranja. Sve upotrebljene komponente, sastojci,... po mogućnosti su autoklavirani, i na drugi način filtrirani u sterilnim uslovima pre suspendovanja bakterija.

Određivanje T0 CFU

[0051] Lac 4 i Lac 7 su kultivisani u tečnom MRS (de MAN, Rogosa & Sharpe-Carl Roth) medijumu (37 °C) do potpunog rasta. Medijum je centrifugiran tokom 10 minuta na 2780 G. Supernatant je odložen i bakterijski pelet je dalje upotrebljen.

[0052] Izmereno je 100 mg i razblaženo sa fiziološkom vodom (0,85% NaCl) kako bi se dobila ukupna zapremina od 10 ml. Od tri soja (lac 4, lac 7 i LGG), napravljena su serijska razblaženja (10-struka serijska razblaženja) i brojanje ploča je obavljeno u skladu sa postupkom razmazivanja (spread plating method) (izvedeno iz postupaka farmakopeje 2.6.12 i 2.6.13. (Evropska farmakopeja 8.0). Merenja su ponovljena u triplikatu. Rezultati su izraženi kao cfu/gram praha.

Suspenzija bakterija u suspenzionom medijumu

[0053] Sa dobijenim bakterijskim masama, napravljeno je homogeno 1/10 razblaženje (m/m %) sa različitim anhidrovanim suspenzionim medijumima na bazi silikona. Izmeren je 1 gram navedene suspenzije u falcon tubi i zapečaćen u aluminijumsku kesu (RH = 20%). Svaki uzorak je sadržao 100 mg bakterija u svrhe dodatnog testiranja. Aluminijumske kese su otvarane u određenim vremenskim intervalima radi testiranja vijabilnosti.

Testiranje posle vremena skladištenja

[0054] Zapečaćene kese su otvarane u određenim vremenskim tačkama radi testiranja stabilnosti. Falcon tuba koja sadrži 1 gram anhidrovane supstance dodatno je obrađena dodavanjem 1 grama mešavine emulgatora (koja se sastoji od polisorbata 80 i sorbitanseskvioleata) i 8 grama fiziološke vode. Ovo je formiralo emulziju preko koje su bakterije mogle da dođu u kontakt sa vodom i reaktiviraju se. Dodatna priprema uzoraka i brojanje ploča su se desili kao što je prethodno opisano i izvedeno je iz postupka farmakopeje (8.0) 2.6.12: Mikrobiološko ispitivanje nesterilnih proizvoda: testovi brojanja mikroba i 2.6.13: Mikrobiološko ispitivanje nesterilnih proizvoda: test za specificirane mikroorganizme.

Rezultati i diskusija

[0055] Stabilnost zamrzavanjem osušenog praha bila je daleko superiornija, kao što se očekivalo, u poređenju sa onom od sojeva koji nisu zamrzavanjem osušeni. Posle samo 1 meseca, i bez obzira na vrstu mešavine silikona koja je upotrebljena (Sl. 1: CF1406; Sl. 2: CF6570), u proseku dolazi do 3 log redukcije dok nema značajne detektabilne redukcije za zamrzavanjem osušen soj (Sl. 1 i 2). Ovim je dokazano da je važno početi sa formulisanjem sa pravilno zamrzavanjem osušenim (ili drugim postupkom sušenja) prahom kako bi se osigurala stabilna formulacija vijabilnih mikroorganizama tokom vremena. Stabilan osušeni probiotski prah je lakši za rukovanje u svrhe dodatnog formulisanja.

[0056] Rezultati stabilnosti za mešavine silikona (Sl. 1 i 2) ukazuju na to da su one pogodne kao medijum za suspendovanje. Iako postoji u proseku 1 log redukcije posle 1 godine stabilnosti za anhidrovani silikonski medijum, ovo ostavlja dovoljno vijabilnih mikroorganizama kako bi se primenili topikalno i izvršili blagotvoran efekat na kožu.

1

[0057] Ovim je dokazano da je radom sa pravilno zamrzavanjem osušenim prahom, suspendovanim u anhidrovanom silikonskom medijumu, moguće dobiti suspenziju sa stabilnim probioticima.

PRIMER 2: Stabilnost probiotskih bakterija u aerosolnoj formulaciji pod pritiskom

[0058] U ovom primeru, ispitali smo dugotrajnu stabilnost vijabilnih probiotskih bakterija formulisanih u aerosolnoj kompoziciji pod pritiskom.

Materijal i postupci

[0059] Zamrzavanjem osušeni soj L. plantarum (THT®-zamrzavanjem osušen sa maltodekstrinom) prosejan je kako bi se dobila frakcija praha sa veličinom čestica < 50 mikrona, kako bi se olakšao prolaz kroz ventil i mlaznicu i sprečila blokada. Bakterije su suspendovane u Mirasil CM5® (dekametilciklopentasiloksan), isparljivom ciklometikonu i/ili Tegosoft PBE® (propoksilovani alkohol -ppg 14 butiletar), oba deluju kao medijum za suspendovanje. Komponenta organogline, benton gel vs5 PC V® (ciklopentasiloksan, disteardimonijum hektorit i propilen karbonat), upotrebljen je kao agens protiv sedimentacije i protiv aglomeracije.

[0060] Pripremljeno je ukupno 8 formulacija (koncentrata) u različitim koncentracijama (videti tabelu 3), pre punjenja sa propelantom u aerosol kanistre.

Tabela 3. Kompozicije različitih formulacija: Koncentrat je napunjen u kanistre (20%) posle čega je dodato 80% propelanta, čime je koncentrat razblažen 5-struko

1

[0061] Kanistri su procenjeni na vijabilnost bakterija kao i na karakteristike raspršivanja i svojstva ostataka i sedimentacije suspendovanog praha. Previše sedimentacije može rezultovati zgrušavanjem i posledično neuspehom oslobađanja proizvoda ili može dovesti do čestih blokada mlaznica. Kanistri su napunjeni sa 20% formulacije i 80% propelanta. Upotrebljeni propelant je mešavina TNG (propan/butan/izobutan - 29/69/2) i butana (55/45). Pod pritiskom (± 2-4 bara), prisutan je kao likvefikovani propelant.

[0062] Referentne frakcije (1 gram) različitih formulacija čuvane su u zapečaćenim aluminijumskim kesama na sobnoj temperaturi (T = 20 °C) za određivanje CFU. CFU dobijene iz aerosolnih kanistera, takođe uskladištenih na sobnoj temperaturi (20 °C), upoređene su sa referencama kako bi se procenio efekat punjenja i skladištenja. Određivanje bakterijskog opterećenja praha urađeno je neposredno pre pripreme formulacije i punjenja

1

kanistera, što je rezultovalo sa 5, 9,0E+11 CFU/g bakterijskog praha kao početne koncentracije. Dodatno uzorkovanje se dogodilo posle 1, 2, 3, 4, 6 i 12 meseci skladištenja. Rezultati su izračunati kao CFU/g bakterijskog praha.

[0063] Određivanje CFU formulacija izvedeno je dodavanjem 1 grama mešavine emulgatora (70% tween 80/30% span 83) i 8 grama fiziološke vode, mućkanih dok se ne rastvore, nakon čega je usledilo 10-struko serijsko razblaženje. Presvlačenje ploča izvedeno je u skladu sa "Kopakabana postupkom" (razmazivanje sa staklenim perlama) nakon čega je usledilo brojanje CFU posle 3 dana inkubacije na 37 °C. Svi upotrebljeni materijali i tečnosti sterilisani su autoklaviranjem.

[0064] Određivanje CFU u aerosolnim kanistrima izvedeno je raspršivanjem 5 grama iz kanistra i čekanjem (± 1 sat) dok sav propelant nije ispario. Kao posledica toga 1 gram formulacije je ostao u primaocu. Dodatna priprema uzorka izvedena je kao što je prethodno opisano.

[0065] Svi uzorci su testirani u 3 biološka ponavljanja (3 uzorka) i 3 tehnička ponavljanja (brojanja ploča) vrednosti pre nego što su prosek i devijacija izračunati sledećom formulom:

[0066] Dodatni set kanistera sa svakom formulacijom držan je neotvoren na 20 °C, ispražnjen (posle mućkanja) posle 6 meseci i procenjen je za karakteristike raspršivanja i ostatak u kanistru posle pražnjenja.

Rezultati i diskusija

[0067] Krive preživljavanja L. plantarum u napunjenim kanistrima pokazuju prosečno 1 log smanjenje posle 1 meseca stabilnosti skladištenja (Sl.3). Ovo ukazuje na mali pad vijabilnosti odmah posle ili tokom punjenja kanistera. Postoje neka moguća objašnjenja za ovaj fenomen. Gas propelant se pre punjenja drži pod parcijalnim pritiskom (± 4 bara). Pod blagim nadpritiskom, tečnost se puni u kanister gde se meša sa predmetnom formulacijom, stoga prisutne bakterije doživljavaju šok usled pritiska. Drugo objašnjenje može biti da se tokom upotrebe kanistra, otvaranjem mlaznice ventila, formiranje aerosola sparuje sa velikim silama smicanja kako bi se bakterijski prah izbacio iz kanistra. Poslednje objašnjenje bi moglo biti da endotermna reakcija sparena sa isparavanjem propelanta uzrokuje nagli pad temperature

1

preostale formulacije. Sva tri stresa (šok usled pritiska, sile smicanja i temperaturni šok) su dobro opisana u literaturi kao štetna za bakterije, utičući na vijabilnost.

[0068] S druge strane, u vremenskom okviru između 1 meseca i 4 meseca posle punjenja, vijabilnost u napunjenim kanistrima ostaje prilično interesantno konstantna, sa maksimalnim padom od 0,5-1 log u vijabilnosti. U vremenskom okviru između 4 i 6 meseci stabilnosti, vijabilnost se smanjila sa još nekoliko loga za neke formulacije. Pad vijabilnosti od početka do kraja (6 meseci) bio je 1 log redukcija za F3, 2 log redukcija za F4 i F5, 3 log redukcija za F8, F1 i F7; i 5 log redukcija za F6 i F2 kanister. Ovi podaci ukazuju na to da se stabilnost od 4 meseca može garantovati za sve formulacije pod pritiskom, i da se u zavisnosti od željenog vremena stabilnosti, može odabrati pogodna formulacija koja garantuje stabilnost u periodu od 6 meseci i duže. Iz ovih rezultata (Sl.4) jasno je da uključivanje formulacija u kanister pod pritiskom sa ugljovodoničnim propelantom ima pozitivan efekat na vijabilnost L. plantarum u formulaciji. Ovo ukazuje na stabilizaciju formulacije posle neizbežnog inicijalnog gubitka vijabilnosti tokom prvog meseca skladištenja. Hipoteza je da mešavina ugljovodoničnih propelanata, stvara okruženje bez vode i kiseonika, podržavajući preživljavanje zamrzavanjem osušenih Lactobacillus vrsta. Neke studije u literaturi opisuju poboljšano preživljavanje Lactobacillus bakterija kada se skladište pod inertnim gasovima kao što su azot i ugljen-dioksid ili kada se skladište pod vakuumom. Međutim, još uvek nisu publikovani izveštaji o preživljavanju pod ugljovodoničnim gasovima/tečnostima u medijumima na bazi siloksana.

[0069] Vijabilnost L. plantarum posle skladištenja bila je najveća u Formulaciji 3 (25% probiotika), pored toga, Formulacija 4 (20% probiotika) je takođe pokazala dobru vijabilnost. Očigledno, formulacije sa visokom koncentracijom bakterija (F3, F4) imaju dobru stabilnost, čak i ukoliko su korigovane za procente inicijalnog punjenja. Ovo se može pripisati uzajamnom efektu zaštite od teških uslova spoljašnjeg medijuma. Kada se procenjuje efekat benton gela u kanistrima pod pritiskom (F5 naspram F1 i F2 - u rastućim koncentracijama 0 -5 - 25%), pokazala se neznatna razlika u log redukciji između F5 (2,2 [1,9-2,9] LOG) i F1 (2,8 [2,6-3,1]log) i veća razlika sa F2 (5,5 [5,3-5,9]log). Dakle, može se zaključiti da formulacije poželjno ne sadrže ili sadrže samo malu količinu agenasa protiv sedimentacije kao što je benton gel.

[0070] Vijabilnost u F1 (50 μm) je značajno (2-log) viša od F6 (30 μm), što ukazuje na to da je manja veličina čestica lošija za preživljavanje. Manja veličina čestice rezultuje većom površinom, stoga negativniji uticaji iz okruženja (formulacija) mogu štetiti bakterijama.

1

Dakle, formulacije iz predmetnog pronalaska poželjno imaju veličinu čestica veću od 30 mikrona.

[0071] Dodavanje propoksilovanog ppg-14-butiletra (ulju sličan, isparljiv agens za negu kože i emolijens), kao što je Tegosoft® (F7 i F8) nije imalo negativan efekat na stabilnost u napunjenim kanistrima (Sl. 3). Dakle, može se zaključiti da se takve komponente mogu dodavati bez štetnih efekata, ali na primer za poboljšanje aerosolnog formiranja i pomoć pri potpunom pražnjenju aerosola.

[0072] Slika 4 pokazuje poređenje različitih formulacija kao takvih ili pod pritiskom u napunjenim kanistrima. Ovi podaci jasno pokazuju da stavljanje formulacija pod pritisak značajno povećava vijabilnost bakterija za sve formulacije tokom vremena od 6 meseci.

[0073] U ovom eksperimentu je dokazano da je formulacija zamrzavanjem osušenih bakterija suspendovanih u isparljivim silikonima, držanim pod pritiskom upotrebom ugljovodoničnog propelanta pogodan sistem za isporuku za dugotrajnu prezervaciju probiotika na sobnoj temperaturi. Posle izbacivanja spreja iz kanistra, isparljive komponente (propelant i silikoni) će ispariti, ostavljajući zamrzavanjem osušene bakterije na koži ili površini na koju su raspršene. Na ovom mestu primene, formulacija će doći u kontakt sa kožom i okruženjem. Higroskopski probiotski prah će apsorbovati vodu iz okoline i bakterije će postati metabolički aktivne, moći će da izvrše svoju blagotvornu funkciju.

PRIMER 3: Stabilnost probiotskih bakterija u različitim silikonima i mešavinama silikona

[0074] Cilj ovog primera je bio da se dobije platforma za skrining na kojoj je procenjen uticaj različitih silikona i mešavina silikona na vijabilnost zamrzavanjem osušenih L. plantarum. Poređenja su napravljena za ciklične naspram linearnih molekula silikona. Takođe, dužina lanca (# molekula siloksana ~ viskoznost) je uzeta u poređenje pošto manji molekuli mogu više da penetriraju u ćeliju, remeteći metaboličke procese koji su ponovo aktivni. Konačno, procenjena je hipoteza da mešavina silikona može poništiti negativne efekte različitih pojedinačnih silikona, osim ukoliko negativni efekti nisu kumulativni. Ove opsežne uporedne studije stabilnosti omogućavaju nam da formulišemo stabilniju aerosolnu formulaciju koja sadrži zamrzavanjem osušene Lactobacillus vrste, suspendovane u silikonskim uljima za topikalnu upotrebu.

2

[0075] Za ovaj eksperiment, zamrzavanjem osušeni L. plantarum prah suspendovan je 1/25 (m/m %) u različitim silikonima ili mešavinama silikona (videti tabelu 4), koje se uobičajeno upotrebljavaju u antiperspirantima.

Tabela 4. Različite kompozicije silikona u kojima je zamrzavanjem osušeni L. plantarum suspendovan 1/25 (m/m %)

[0076] Silikon CF 6570 više viskoznosti upotrebljen je kao referentni silikon pošto je ova mešavina prethodno upotrebljena u studiji stabilnosti iz primera 1. Različite frakcije od 1 grama su izmerene u falcon tubama i skladištene u laminiranim aluminijumskim kesama (Daklapack®- PET/ALU/NY/LDPE) kako bi se zaštitile od svetlosti, kiseonika i relativne vlažnosti i skladištene su na sobnoj temperaturi (20 °C). Određivanje T0 praha izvedeno je pre pravljenja suspenzija i rezultiralo je (5,85 ± 0,71) E+11 CFU/gram. Dodatno uzorkovanje izvedeno je posle 1 nedelje, 2 nedelje, 1, 3 i 6 meseci. Tokom uzorkovanja, uzete su 3 falcon tube istog uzorka i ploče su prebrojane u triplikatu kao što je opisano u 2.1. Blanko uzorci (referenca) su skladišteni kao prah od 100 mg (nesuspendovan).

Rezultati i diskusija

[0077] Sa sl. 5 je jasno da je za sve formulacije postignuta visoka stabilnost (10<9>log CFU/g) kompozicija tokom vremena skladištenja od 3 meseca, pri čemu su neke postigle nešto bolje rezultate od drugih kao što je referentni prah, F11 i u manjoj meri F10. Razlike su bile premale da bi se doneli čvrsti zaključci o efektu cikličnih silikona naspram linearnih silikona i dužini lanca siloksana; što može ukazivati na to da ovi aspekti nisu visoko relevantni da bi siloksan bio koristan u predmetnom pronalasku.

[0078] Pojedinačne silikonske komponente su pokazane na levoj strani sl. 5, i kompeksnije mešavine (3-5 komponenti) su na desnoj strani. Generalno, mešavine silikona na desnoj strani sl. 5, pokazuju bolje preživljavanje u poređenju sa pojedinačnim silikonima na levoj strani, što ukazuje na to da mešavina različitih komponenti (delimično) poništava neke negativne efekte uočene za jednokomponentne silikone.

[0079] Tegosoft ® (ppg-14 butiletar) je biodegradabilan i umereno isparljiv propilen glikol nbutil etar koji se uobičajeno nalazi u antiperspirantima. Nema negativan uticaj na stabilnost zamrzavanjem osušenih bakterija u aerosolnom kanistru pod pritiskom u poređenju sa ciklopentasiloksanom (Sl. 3-4). Čini se da čak može imati zaštitni efekat na preživljavanje zamrzavanjem osušenih bakterija jednom kad se pomeša sa drugim silikonima. (Sl. 5 - F11 i F13). Ovo pored njegovih dobrih karakteristika suspendovanja i raspršivanja i niskog ostatka u kanistru ukazuje na to da bi dodatak polipropilen glikol etara mogao biti vredan dopunski sastojak u formulisanju probiotskog aerosola.

Claims (11)

Patentni zahtevi

1. Aerosolni sprej naznačen time što sadrži 1-20 tež. % jednog ili više vijabilnih dormantnih sojeva mlečnokiselinskih bakterija, jedan ili više isparljivih siloksana i likvefikovani gas propelant pod pritiskom,

pri čemu navedeni bakterijski sojevi i navedeni isparljivi siloksani formiraju mešavinu u obliku suspenzije.

2. Aerosolni sprej u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-2, naznačen time što su navedeni jedan ili više isparljivih siloksana odabrani sa liste koja sadrži linearne siloksane kao što su dimetikoni, dimetikonoli, feniltrimetikoni i njihovi derivati; ili ciklične siloksane, kao što su ciklometikoni i njihovi derivati; posebno ciklične siloksane, kao što su ciklometikoni i njihovi derivati.

3. Aerosolni sprej u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-3, naznačen time što navedeni likvefikovani gas propelant sadrži jedan ili više ugljovodonika kao što su metan, etan, propan, izopropan, butan, n-butan, pentan i n-pentan.

4. Aerosolni sprej u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-4, naznačen time što navedeni sprej dodatno sadrži agens protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije.

5. Aerosolni sprej u skladu sa patentnim zahtevom 5, naznačen time što je navedeni agens protiv sedimentacije i/ili protiv aglomeracije odabran sa liste neorganskih polimera kao što su gelovi organogline koji sadrže bentonit ili hektorit; i/ili ispareni silicijum-dioksid kao što je aerosil.

6. Aerosolni sprej u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-6, naznačen time što navedeni sprej dodatno sadrži jedan ili više emolijenasa, agenasa za suspendovanje, ovlaživača, antioksidanasa, humektanasa, emulgatora, agenasa za modifikaciju viskoznosti, parfema, ili drugih ekscipijenasa.

7. Aerosolni sprej u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-7, naznačen time što se njegov sadržaj sastoji od najmanje 50 tež. % propelanta, 1-20 tež. % siloksana, 1-20 tež. % mlečnokiselinskih bakterija, 0,1-5 tež. % agenasa protiv sedimentacije i/ili protiv

2

aglomeracije i 0-5 tež. % drugih ekscipijenasa kao što je navedeno u patentnom zahtevu 8.

8. Aerosolni sprej u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-8, naznačen time što se njegov sadržaj sastoji od najmanje 75 tež. % propelanta, 5-10 tež. % ciklometikona, 1-10 tež. % mlečnokiselinskih bakterija i 0,1-5 tež. % benton gela.

9. Aerosolni sprej u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-9, naznačen time što se njegov sadržaj sastoji od najmanje 75 tež. % propelanta, 5-10 tež. % ciklometikona, 1-10 tež. % mlečnokiselinskih bakterija i 0,1-5 tež. % aerosila.

10. Upotreba aerosolnog spreja u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-10 za primenu navedenog jednog ili više vijabilnih probiotskih bakterijskih sojeva na površinu ili u okruženje.

11. Aerosolni sprej u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-10 za upotrebu u obnavljanju i/ili održavanju zdrave mikrobiote kože.