RS62989B1 - Imunomodulatorni agensi - Google Patents

Imunomodulatorni agensi

Info

Publication number
RS62989B1
RS62989B1 RS20220223A RSP20220223A RS62989B1 RS 62989 B1 RS62989 B1 RS 62989B1 RS 20220223 A RS20220223 A RS 20220223A RS P20220223 A RSP20220223 A RS P20220223A RS 62989 B1 RS62989 B1 RS 62989B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
seq
cdr
fusion protein
domain
cells
Prior art date
Application number
RS20220223A
Other languages
English (en)
Inventor
Samuel D Waksal
Zhenping Zhu
Yan Wu
Stella A Martomo
Zhaojing Zhong
Dan Lu
Original Assignee
Kadmon Corporation Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kadmon Corporation Llc filed Critical Kadmon Corporation Llc
Publication of RS62989B1 publication Critical patent/RS62989B1/sr
Publication of RS62989B9 publication Critical patent/RS62989B9/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B17/00—Surgical instruments, devices or methods
    • A61B17/56—Surgical instruments or methods for treatment of bones or joints; Devices specially adapted therefor
    • A61B17/58—Surgical instruments or methods for treatment of bones or joints; Devices specially adapted therefor for osteosynthesis, e.g. bone plates, screws or setting implements
    • A61B17/68—Internal fixation devices, including fasteners and spinal fixators, even if a part thereof projects from the skin
    • A61B17/70—Spinal positioners or stabilisers, e.g. stabilisers comprising fluid filler in an implant
    • A61B17/7001—Screws or hooks combined with longitudinal elements which do not contact vertebrae
    • A61B17/7035—Screws or hooks, wherein a rod-clamping part and a bone-anchoring part can pivot relative to each other
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B17/00—Surgical instruments, devices or methods
    • A61B17/56—Surgical instruments or methods for treatment of bones or joints; Devices specially adapted therefor
    • A61B17/58—Surgical instruments or methods for treatment of bones or joints; Devices specially adapted therefor for osteosynthesis, e.g. bone plates, screws or setting implements
    • A61B17/68—Internal fixation devices, including fasteners and spinal fixators, even if a part thereof projects from the skin
    • A61B17/70—Spinal positioners or stabilisers, e.g. stabilisers comprising fluid filler in an implant
    • A61B17/7001—Screws or hooks combined with longitudinal elements which do not contact vertebrae
    • A61B17/7035—Screws or hooks, wherein a rod-clamping part and a bone-anchoring part can pivot relative to each other
    • A61B17/7037—Screws or hooks, wherein a rod-clamping part and a bone-anchoring part can pivot relative to each other wherein pivoting is blocked when the rod is clamped
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5443—IL-15
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak obezbeđuje proteine fuzije koji obuhvataju antitela koja se specifično vezuju na PD-L1, domen vezivanja IL 15 receptora i suši domen receptora alfa IL15, molekule nukleinske kiseline koji kodiraju isti, i njihove medicinske upotrebe. Agensi pospešuju funkciju T ćelije i NK ćelije da bi povećali ćelijom i citokinom posredovan imunitet za lečenje različitih poremećaja povezanih sa disfunkcijom imunog sistema uključujući kancere i infektivne bolesti.
UPUĆIVANJE NA SRODNE PRIJAVE
[0002] Ova prijava traži priznanje prava prvenstva za SAD Privremenu prijavu br. U.S.
61/927,907, podnetu 15. januara 2014.
OBLAST TEHNIKE
[0003] Programirana smrt 1 (PD-1) je član CD28 familije receptora koji obuhvataju CD28, CTLA-4, PD-1, ICOS, i BTLA (Freeman et al. (2000) J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. (2001) Nat Immunol 2:261-8). PD-1 je imunosupresivni receptor koji može da se indukuje i koji je uglavnom povišeno regulisan na aktiviranim T ćelijama i B ćelijama tokom napredovanja imunopatoloških stanja. PD-1 interakcija sa njegovim ligandom PD-L1 daje kao rezultat inhibiciju TCR i BCR posredovanu proliferaciju i proizvodnju citokinu i indukovanje apoptoze T ćelija specifičnih za antigen kroz prirodno negativno signaliziranje posredovano sa PD-1 negativnim signaliziranjem imunoreceptora inhibitornog motiva na bazi tirozina (ITIM) (Agata et al. (1996) Int. Immunol. 8:765, Unkeless and Jin. (1997) Curr. Opin. Immunol. 9:338-343, Okzaki et al.2001) Circulation 98:13866-71; Lipkin et al. (2002) Nat. Med.8:793-800). PD-L1 je glikoprotein na površini ćelije i glavni ligand za PD-1. PD-L1 je takođe moguće indukovati na limfoidnim tkivima i nelimfoidnim perifernim tkivima posle ćelijske aktivacije. PD-L1 je povišeno regulisan u raznoraznim zahvaćenim tipovima ćelije uključujući kancerne i stromalne ćelije pored imunih ćelija, i igra aktivnu ulogu u imunosupresiji tokom pogoršanja bolesti (Iwai et al (2002) PNAS 99:12293-7, Ohigashi et al. (2005) Clin Cancer Res 11:2947-53). PD-L1 povišena regulacija je povezana sa slabim kliničkim ishodima za razne kancere i virusnu infekciju (Hofmeyer et al. (2011) J. BioMed. Biotech. 2011:1-9, McDermott and Atkins. (2013) Cancer Med.2:662-73). Blokada PD-1 ili PD-L1 antitelom je doprinela infiltraciji CD8 T ćelije, CTL aktivnosti i povećano prisustvo Th1 citokina IFN-gama u prekliničkim i kliničkim postavkama (Zhou et al. (2010) J.
Immunol. 185:5082-92, Nomi et al. (2007) Clin Cancer Res.13:2152-7, Flies et al. (2011) Yale J. Bio. Med.48:409-21, Zitvogel and Kroemer. (2012) OncoImmunol. 1:1223-25). PD-L1 antitelo kao imunomodulacioni agens se pokazalo efikasnim kada je korišćeno kao monoterapija ili kombinovano sa antibioticima na drugim imunosupresivnim molekulima.
[0004] Međutim, imunomodulaciona intervencija na imunosupresivnim činiocima samo delimično razrešava probleme povezane sa oštećenim imunitetom kod kancera, infekcije, i drugih bolesti. I dalje je visoko poželjno koristiti bioterapijske agense da bi se direktno stimulisale i produžile imune ćelije efektora za podizanje oslabljenog prirodnog i adaptivnog imunog odgovora na delotvorniji nivo za kontrolu tumora i infekciju. Imunoterapijska upotreba citokina uključujući interleukine, tj. IL-2, IL-12, IL15, IL-21, i TNFα, GM-CSF, itd., se pokazala efikasnom do izvesne mere za lečenje kancera i infekcije, ali je klinički ishod često ograničen sistemskom citotoksičnošću povezanom sa visokim koncentracijama citokina u krvi što je potrebno da se dobije efikasnost i izbegne specifičnost cilja za pogođene ćelije i tkiva.
[0005] Među procenjenim citokinima, IL15 je prepoznat kao posvećen da se stimuliše efektor i centralna memorija CD8 T ćelija koje čine podskup za antigen specifičnih CD8 ćelija da bi se ispoljio antitumorski imunitet bez modulacionih dejstava na druge populacije T ćelije. Pored toga, za razliku od IL-2 koji aktivira Treg, IL15 pokazuje da ima kapacitet da spasi T ćelije od apoptoze indukovane pomoću Treg i drugih imunosupresivnih ćelija pored njegove sposobnosti da aktivira prirodne ubice (NK) ćelije i efektor i memoriju CD8 T ćelija (Van Belle et al. (2012) PLoS One 7:e45299, Obar and Lefrancois. (2010) J. Immunol.185:263-72, Pelletier and Girard. (2006) J Immunol 177:100-108, Elpek et al. (2010) PNAS 107:21647-21652).
[0006] IL15 je identifikovan kao yc citokin u 1994 na osnovu njegove sposobnosti da stimuliše proliferaciju mišje T linije ćelije CTLL-2 (Grabstein et al. (1994) Science 264:9658, Bamford et al. (1996) PNAS 93:2897-902). Humani IL15 deli približno 97% i 96% identičnost aminokiseline sa simijanima a IL15 sa makaki majmunima, prema opisanom redosledu. Humani i mišji IL15 imaju 73% homologiju i uporedivo su aktivni na mišjim ćelijama. IL15 je 12.5 KD protein (114 aminokiselina), izlučen pomoću DC, makrofaga i granularnim ćelijama kao 14-15 kDa glikoprotein, i takođe je element četiri α-heliksne skupine koja obuhvata citokine (Anderson et al. (1995) J Biol Chem.270:29862-9, Steel et al. (2012) Trends Pharmacol. Sci.33:35-41). IL15 uobičajeno formira kompleks sa IL15 receptorom alfa eksprimovanim na APCs pre vezivanja na jedinice funkcionalnog IL15 receptora beta i gama jedinice na T ćelije i NK ćelije. IL15 može biti prisutan u trans na responsivne ćelije eksprimovanjem CD122 i CD132 ćelija koje eksprimuju sam citokin vezan na oblik membrane od alfa lanca receptora (Dubois et al. (2002) Immunity 17:537-47). Suši domen receptora alfa IL15 (veličine 29.5KD) je ključna komponenta da bi se formirao kompleks sa IL15 pre propisnog sprezanja sa receptorom β i γ (Wei et al. (2001) J.
Immunol.167:277-82). IL15 i IL15Rα kompleks i protein fuzije suši domena IL15/IL15Rα su prijavljeni kao veoma snažni da stimulišu CD8 T ćelije i NK ćelije in vitro i in vivo u poređenju sa IL15 samim (Mortier et al. (2005) J Biol Chem.281:1612-19, Stoklasek ct al. (2006) J. Immunol.177:6072-80). IL15 takođe indukuje proliferaciju i diferencijaciju stimulisanih humanih B ćelija (Armitage et al. (1995) J Immunol. 154:483-90). Predloženo je da je IL15 uglavnom suprotstavljen aktivaciji indukovanoj ćelijskom smrti (AICD) delovanjem da se produži opstanak T limfocita (Marks-Konczalik et al. (2000) PNAS 97:11445-50). IL15 ima izuzetnu sposobnost da podrži održavanje NK ćelija i fenotip memorije i memoriju specifičnu za antigen CD8 T ćelija (Ma ct al. (2006) Annu Rev Immunol. 24:657-79). Dakle, među najaktivnijim citokinima u imunomodulaciju, IL15 ima jedinstven kapacitet da posreduje brojnim važnim varijantnim rešenjima imuniteta naspram raznovrsnih tipova tumora i virusne infekcije uključujući HIV, HBV, HCV, LCMV, itd. (Steel et al. (2012) Trends Pharmacol. Sci.33:35-41, Verbist and Klonowski, (2012) Cytokine. 59:467-478).
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0007] Ovaj pronalazak obezbeđuje proteine fuzije koji obuhvataju antitela koja se vezuju na PD-L1. U proteinima fuzije iz ovog pronalaska, antitela se vezuju na PD-L1 i blokiraju interakciju sa PD-1. Blokiranjem interakcije PD-L1 sa PD-1, takva antitela su korisna da bi se smanjila ili inhibirala imunosupresija.
[0008] Takođe su opisana antitela i vezujuće proteine koji se vezuju specifično na PD-L1 i najmanje još jedan drugi molekul. Primeri uključuju PD-L1 vezujuće proteine koji se vezuju na jedan ili više drugih liganda i/ili receptora, koji mogu da budu membranski vezani ili rastvorljivi.
[0009] Opisani su i molekuli, kao što su proteini fuzije koji vezuju PD-L1 koji, nezavisno od smanjena ili inhibiranja imunosupresije vezivanjem na PD-L1, takođe pospešuju jedan ili više imunih odgovora interakcijom sa drugim ligandima ili
[0010] U jednom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje protein fuzije koji obuhvata:
(i) prvi domen koji obuhvata antitelo na PD-L1, pri čemu to antitelo obuhvata
(a) teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO:121; teški lanac CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:123; teški lanac CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:125; laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:127; laki lanac CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:128; i laki lanac CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:129;
(b) teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO: 241, CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:
243, i CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO: 245; i laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:247, CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:249; ili
(c) teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO: 266, CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:
243, i CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO: 245; i laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:247, CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:249; i pri čemu se to antitelo veže na PD-L1 i blokira njegovu interakciju sa PD-1,
(ii) drugi domen koji se veže na IL-15 receptor ("IL-15R"), pri čemu drugi domen obuhvata IL-15 ili njegov fragment IL-15R vezivanja, i
(iii) suši domen receptora alfa IL-15.
[0011] U nekim izvođenjima, protein fuzije još obuhvata fleksibilni linker koji spaja suši domen od IL-15R alfa na IL-15 ili IL-15R vezivanja fragmenta, opciono pri čemu taj fleksibilni linker obuhvata 15-20 aminokiselina koje su pretežno serin i glicin. U još nekim izvođenjima, protein fuzije obuhvata SEQ ID NO:315, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:319, SEQ ID NO:321, SEQ ID NO:323, ili SEQ ID NO: 261.
[0012] U jednom izvođenju, antitelo na PD-L1 obuhvata teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO:121; teški lanac CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:123; teški lanac CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:125; laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:127; laki lanac CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:128; i laki lanac CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:129. U jednom drugom izvođenju, antitelo na PD-L1 obuhvata promenljivi domen teškog lanca koji je najmanje 85% identičan SEQ ID NO:126 i/ili promenljivom domenu lakog lanca koji je najmanje 85% identičan SEQ ID NO:130. U jednom drugom izvođenju, antitelo na PD-L1 obuhvata promenljivi domen teškog lanca koji ima sekvencu od SEQ ID NO:126 i/ili promenljivi domen lakog lanca koji ima sekvencu od SEQ ID NO:130. U još jednom izvođenju, antitelo na PD-L1 obuhvata laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:247, CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:249; i teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO:241, CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:243, i CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:245. U jednom drugom izvođenju, antitelo na PD-L1 obuhvata laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:247, CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:249; i teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO: 266, CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:243, i CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:245. U jednom drugom izvođenju, antitelo na PD-L1 obuhvata promenljivi domen teškog lanca koji je najmanje 85% identičan SEQ ID NO:246 i/ili promenljivom domenu lakog lanca koji je najmanje 85% identičan SEQ ID NO:250. U nekim izvođenjima, antitelo na PD-L1 obuhvata promenljivi domen teškog lanca koji ima sekvencu od SEQ. ID NO:246 ili SEQ ID NO:267 i promenljivi domen lakog lanca koji ima sekvencu od SEQ ID NO:250. U nekim izvođenjima, protein fuzije obuhvata SEQ ID NO:261.
[0013] U jednom drugom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje medicinsku upotrebu proteina fuzije iz ovog pronalaska za lečenje kancera. U još jednom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje molekul nukleinske kiseline koji obuhvata sekvencu nukleotida koja kodira protein fuzije iz ovog pronalaska.
[0014] Receptori. Kao što je ovde opisano, molekul se vezuje na PD-L1 na ciljne ćelije, i takođe stimuliše ćelijom posredovan imuni odgovor, na primer promovisanjem proliferacije T ćelija i/ili NK ćelija. Ovde opisan molekul stimuliše ćelije koje odgovaraju na interleukin ili interferon, kao što je, bez ograničavanja, IL2, IL7, IL15, i IL21. Ovde opisan molekul može da uključi sekvencu ili domen koji promoviše IL15 stimulaciju IL15 receptora (IL15R). Kako je ovde opisano, molekul koji promoviše IL15R stimulaciju može da bude deo IL15R alfa lanca koji obuhvata suši domen. Ovde opisan molekul može obezbediti suši domen od IL15R alfa lanca. Ovde opisan molekul može obezbediti kompleks od IL15 i suši domen od IL15R alfa lanca, koji može da bude kovalentan ili nekovalentan. Ovde opisani eksperimenti pokazuju da pojedinačni molekuli koji sadrže i PD-L1 vezujući domen koji blokira vezivanje ili PD-L1 na PD-1, i IL15R stimulišući domen, promovišu bolji odgovor imunog sistema nego zasebni molekuli uzeti zajedno. Preciznije, obezbeđivanje molekula koji obezbeđuje anti-PD-L1 domen antitela kao i hibridni domen koji obuhvata IL15 i suši domen lanca alfa IL15, su promovisali povećanu proliferaciju, otpuštanje Th1 citokina, i molekule povezane sa aktivnošću ubijanja NK i T ćelija, u poređenju sa obezbeđivanjem domena kod odvojenih molekula.
[0015] Opisano je i antitelo ili fragment koji se vezuje na PD-L1, koji obuhvata teški lanac CDR-1H koji ima sekvencu X1YX2MX3(SEQ ID NO:328) pri čemu X1jeste A, G, M, Q, S, Y, ili W, X2jeste A, L, M, Q, R, S, V, W, ili Y, i X3jeste A, F, L, M, S, T, V, ili Y, teški lanac CDR-2H koji ima SEQ ID NO:243, i teški lanac CDR-3H koji ima sekvencu od SEQ ID NO:245. Kao što je ovde opisano, teški lanac CDR-1H može imati sekvencu izabranu iz SEQ ID NO:241, SEQ ID NO:264, SEQ ID NO:266, SEQ ID NO:268, SEQ ID NO:270, SEQ ID NO:272, SEQ ID NO:274, SEQ ID NO:276, SEQ ID NO:278, SEQ ID NO:280, SEQ ID NO:282, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:288, SEQ ID NO:290, SEQ ID NO:292, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:296, SEQ ID NO:298, SEQ ID NO:300, SEQ ID NO:302, SEQ ID NO:304, SEQ ID NO:306, SEQ ID NO:308, SEQ ID NO:310, i SEQ ID NO:312. Kao što je ovde opisano, promenljivi domen teškog lanca može biti najmanje 80%, ili najmanje 85%, ili najmanje 90%, ili najmanje 95% identičan SEQ ID NO:246. Antitela mogu još da obuhvate promenljivi domen lakog lanca koji obuhvata CDR-1L koji ima SEQ ID NO:247, CDR-2L koji ima SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji ima SEQ ID NO:249.
[0016] Kao što je ovde opisano, promenljivi domen lakog lanca može biti najmanje 80%, ili najmanje 85%, ili najmanje 90%, ili najmanje 95% identičan SEQ ID NO:250. Opisano je i antitelo ili njegov fragment koje se vezuje na PD-L1, pri čemu laki lanac obuhvata CDR-1L koji ima SEQ ID NO:247, CDR-2L koji ima SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji ima SEQ ID NO:249.
[0017] Takođe su opisani konjugati antitela, na primer, i bez ograničenja, na agense koji se koriste za prikazivanje slike, terapijske agense, ili citotoksične agense.
[0018] Opisane su i supstance koje obuhvataju antitela i konjugate i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0019] Ovaj pronalazak obezbeđuje protein fuzije koji može da se veže na PDL1, koji takođe stimuliše odgovor imunog sistema posredovan pomoću, na primer, T ćelije ili NK ćelije. U ovom pronalasku protein fuzije uključuje deo koji se vezuje na IL15 receptor. Opisani su i proteini fuzije koji uključuju deo koji se vezuje na, npr. receptor interleukina ili receptor interferona. Kao što je ovde opisano, deo proteina fuzije koji se vezuje na PD-L1 jeste antitelo ili njegov PD-L1 vezujući fragment. Kao što je opisano ovde, IL15, čije vezivanje može da bude pospešeno prisustvom u proteinu fuzije suši domena alfa IL15R.
[0020] Opisan je i postupak inhibiranja interakcije PD1 sa PD-L1 kod nekog subjekta, koji obuhvata isporuku delotvorne količine nekog antitela ili ovde opisanog fragmenta. Opisan je i postupak inhibiranja imunosupresije posredovane pomoću PD-L1 što obuhvata isporuku delotvorne količine antitela ili fragmenta, ili protein fuzije ovde opisan.
[0021] Opisan je i postupak stimulisanja imunog odgovora protiv ćelije ili tkiva koja eksprimuje PD-L1, što obuhvata isporuku subjektu delotvorne količine antitela ili fragmenta, ili proteina fuzije kao što je opisano ovde u tekstu.
[0022] Na primer, ćelija ili tkivo koje eksprimuje PD-L1 jeste neoplastična ćelija ili inficirana ćelija.
KRATAK OPIS SLIKA
[0023]
Slika 1 prikazuje vezivanje na humani hPDL1-Fc (gornji levi panel), blokiranje hPDL1 na hPD1 (donji levi panel) vezivanje na mišji mPDL1-Fc (gornji desni panel), i blokiranje mPDL1 na hPD1 (donji desni panel) antitela tccR3λF8, tccR3κA11, tccR3λH4, tctR3κA8, sR3λD7, i R2κA6.
Slika 2 prikazuje vezivanje na humani hPDL1-Fc (gornji levi panel), blokiranje hPDL1 na hPD1 (donji levi panel) vezivanje na mišji mPDL1-Fc (gornji desni panel), i blokiranje mPDL1 na hPD1 (donji desni panel) antitela sR3λD7, tccR3κB7, tccR3κA4, tccR3λF8, tccR3λD7, tccR3λH4, i tccR3κD9.
Slika 3 prikazuje vezivanje na humani hPDL1-Fc (gornji levi panel), blokiranje hPDL1 na hPD1 (donji levi panel) vezivanje na mišji mPDL1-Fc (gornji desni panel), i blokiranje mPDL1 na hPD1 (donji desni panel) antitela tccR3κF8, tccR3κD9, tccR3λD7, tccR3λD7 sR3κF10, sR3λD7, i tccR3λF8.
Slika 4 prikazuje vezivanje na humani hPDL1-Fc (gornji levi panel), blokiranje hPDL1 na hPD1 (donji levi panel) vezivanje na mišji mPDL1-Fc (gornji desni panel), i blokiranje mPDL1 na hPD1 (donji desni panel) antitela P2κA6, sR3λD7, tccR3λD7, tccR3κB7, i tccR3κH4.
Slika 5 prikazuje vezivanje na PDLI-293 ćelije (gore) i MDS-MB-231 (dole) ćelije antitela sR3λD7, tctR3κA8, tccR3κA11, tccR3λD7, tccR3κD9, tccR3λF8, tccR3κF8, tccR3κF10, tccR3λH4, tccR3κB7, i tccR3κA4.
Slika 6 prikazuje anti-PD-L1 antitela koja se vezuju na (A) humane iz monocita izvedene dendritske ćelije, (B) humanu liniju ćelije kancera koja eksprimuje PD-L1 MDA-MB-231 ćelija, i (C) mišju liniju ćelije koja eksprimuje PD-L1 B16-F10.
Slika 7 pokazuje funkcionalnu aktivnost blokiranja od anti-PD-L1 antitela izmereno pomoću (A) povećanje u CD4 proliferaciju kada je aktivirana pomoću aCD3 i PD-L1Fc obložene perlice, (B) povećanje izlučivanja citokina u SEB-aktivnom humanom PBMC, i (C) povećanje CD4 proliferacije u mešovitoj limfocitnoj reakciji sa mo-DC.
Slika 8 pokazuje CD4 i CD8 aktivaciju kada su i anti-PDL1 antitelo i IL15 bili prisutni u (A) mešovitoj limfocitnoj reakciji sa mo-DC, i (B) CD8 stimulacija pomoću αCD3 i PD-L1Fc obložene perlice.
Slika 9 pokazuje anti-PD-L1-suši domen-IL15 (pod nazivom anti-PDL1-SD15) proteini fuzije zadržavaju vezivanje na PD-L1 kako je izmereno pomoću (A) čvrste faze ELISA, i (B) vezivanje na CD4 aktivirano pomoću obloženih aCD3 obloženih perlicama.
Slika 10 pokazuje PBMC kultivisane in vitro sa anti-PD-L1-SD15 fuzije proteina daje kao rezultat povećanje NK ćelijski broj (A), povećan CD8 ćelijski broj (B) i status aktivacije je izmeren kao % granzimB (C). Nikakvo dejstvo nije primećeno na CD4 ćelijama (D).
Slika 11 pokazuje funkciju anti-PD-L1-SD15 proteina fuzije da aktiviraju CD8 slično IL15 kada je dodat u in vitro CD8 stimulaciju u prisustvu aCD3 obloženih perlica (A). Međutim, u prisustvu aCD3 i PD-L1Fc obloženih perlica, anti-PD-L1-SD15 proteini fuzije mogu povećati CD8 proliferaciju za više od petostruko u poređenju sa IL15 (B). cD7-SD15neg je anti-PD-L1 cD7 sa nefunkcionalnim IL15 koji služi kao negativne kontrole.
Slika 12 pokazuje CD8 aktivaciju u prisustvu PD-L1Fc n a ćelije kod kojih postoji prisustvo antigena. Anti-PD-L1-SD15 protein fuzije cD7-SD15 je stimulisao CD8 pri značajno nižim koncentracijama kako je izmereno pomoću (A) procenat povećanja u granzimB pozitivnim CD8, i (B) je povećan u ukupnim izlučevinama citokina. Maksimalni nivoi CD8 aktivacije su takođe povećani u CD8 aktiviranim pomoću aCD3 i PD-L1Fc uz dodavanje cD7-SD15 kako je upoređeno prema IL15. (C) Podaci o CD8 proliferaciji u prisustvu i anti-PD-L1 antitela i nevezanog IL15 (tačkaste linije) je nadmašilo podatke o CD8 proliferaciji u prisustvu anti-PD-L1-SD15 proteina fuzije (prave linije).
Slika 13 obezbeđuje sekvence aminokiseline od VH(Sl.13A1-3) i VL(Sl.13B1-3) lance od anti-PD-L1 antitela. Za VHsekvence, regioni u kućištima označavaju CDR. Za CDR-1H, Chothia CDR su ispisani kurzivno, i Kabat CDRs su podvučeni. Za CDR-2H, Kabat CDRs su koekstenzivne sa sekvencama u kućištima, sa Chothia CDR ispisanim kurzivno. Za VLsekvence, regioni u kućištima označavaju Kabat/Chothia CDR.
Slika 14 pokazuje sekvence aminokiseline od SD15 (SEQ ID NO:261), i uključuje suši domen alfa IL15R i IL15, tccλD7HC-SD15 (SEQ ID NO:262) i LALA mutant od tccλD7HC-SD15 (SEQ ID NO:263), koja obuhvata supstitucije alanina za dva susedna leucina na pozicijama (Leu<234>i Leu<235>) u konstantnom regionu teškog lanca važnom za FcγRI.
Slika 15 pokazuje citotoksičnost anti-PD-L1-SD15 proteina fuzije (CD7SD15) u poređenju sa PD-L1 vezujućim delom samog molekula (cD7) i protein fuzije koji obuhvata vezujući domen specifičan za KLH i IL15 domen (KLHSD15). Humane CD8 T ćelije i ćelije tumora MAD-MB-231 su kokultivisane u IMDM suplementiranom sa 10% FBS tokom 7 dana.
Aktivnost ubijanja ćelija tumora je procenjena merenjem broja mrtvih ćelija tumora bojenih pomoću boje Viability, eFluor 780 u FACS.
Slika 16 pokazuje da je anti-PD-L1-SD15 protein fuzije produžio stopu preživljavanja miševa koji nose PD-L1 eksprimovane tumore. Balb/c miševi su bili intravenozno ubrizgani sa 2×10<5>mišjim CT26 ćelijama tumora debelog creva. Posle 24 sata, miševi su primili i.p. isporuku anti-PD-L1 antitela cD7 (ljubičasta linija:75 ug po dozi), anti-PD-L1-SD15 protein fuzije cD7-SD15 (zelena linija:75 ug po dozi, plava linija: 25 ug po dozi) ili sD7-SD15 (siva linija:75 ug po dozi, crvena linija: 25 ug po dozi) dvaput nedeljno u prvoj nedelji onda jednom nedeljno tokom preostalog toka lečenja. Miševi u kontrolnim grupama su primili jednaku količinu slanog ili normalnog IgG rastvora. Stopa opstanka je izmerena korišćenjem Kaplan-Majerovog (Kaplan-Meier) grafikona.
1
Slika 17 pokazuje vezivanje dva afinitetna zrela anti-PDL1 antitela na rastvorljivi humani PDL1, rastvorljivi mišji PDL1, i rastvorljivi pacovski PDL1, i nikakvo vezivanje na humani PDL2.
Slika 18 pokazuje blokiranje humanog PD1 na humani PDL1 (levi panel) i blokiranje mišjeg PD1 na mišji PDL1 (desni panel) pomoću dva afinitetno sazrela anti-PDL1 antitela, u poređenju sa njihovim roditeljskim tcc λD7 antitelom.
Slika 19 pokazuje dve afinitetne sazrele varijante anti-PD-L1 antitela tccλD7 imaju višu aktivnost vezivanja na PD-L1 eksprimovanje humane MDA-MB-231 ćelije tumora izmerena protočnom citometrijom.
Slika 20 pokazuje afinitetno sazrele varijante anti-PD-L1 antitela tccλD7 koje imaju povećanu jačinu da bi se pospešila proizvodnja Th1 citokina IL2 (gornji panel) i IFNγ (donji panel).
Slika 21 pokazuje vezivanje proteina fuzije opisanih ovde na PD-L1-eksprimovanje MDA-MB-231 ćelija tumora.
Slika 22 pokazuje stimulatornu aktivnost ovde opisanih proteina na humane ćelije megakarioblastične leukemije koje reaguju na IL15.
Slika 23 pokazuje hPD-L1 vezivanje (levi panel) i ligand blokirajuću (desni panel) aktivnost za ovde opisane proteine fuzije.
Slika 24 pokazuje rezultate ekskluzione hromatografije prema veličini za ovde opisane proteine fuzije.
Slika 25 pokazuje skram stabilnost za ovde opisane proteine fuzije.
DETALJAN OPIS
[0024] Interakcija PD-1 na imunim ćelijama sa PD-L1 inhibira proliferaciju i proizvodnju citokina pomoću imunih ćelija. PD-L1 je takođe moguće indukovati i povišeno regulisati u različitim tkivima, uključujući kancer. Zajedno, PD-1 i PD-L1 igra ulogu u imunosupresiji. Ovaj pronalazak obezbeđuje nove proteine fuzije koji obuhvataju antitela koja vezuju na PD-L1 i blok interakcije sa PD-1. U proteinima fuzije iz ovog pronalaska, antitela smanjuju ili inhibiraju imunosupresiju.
[0025] Nova ovde opisana antitela su prikazana u Tabeli 1 i priloženi spisak sekvenci, koje daju sekvence aminokiseline iz teškog i lakog lanca CDR (identifikovani prema sistemima identifikacije Kabat i Chothia), kao i potpuno promenljivi region teškog i lakog lanca. Prva dva CDR teškog lanca jesu identifikovani prema zajedničkim sistemima Kabat i Chothia, koji obezbeđuju distinktivne, ali lokacije koje se preklapaju za te CDR. Upoređivanje brojnih teških i lakih lanaca pokazuje značajnu sličnost među brojnim CDR sekvencama. Prema tome, očekivalo bi se da je veliki broj od CDR moguće pomešati i upariti između sekvenci.
[0026] Antitela mogu imati jednu ili više supstitucija, delecija, umetanja, i/ili dodavanja aminokiseline. Ovde opisana antitela mogu obuhvatiti jedan od gore pomenutih promenljivih domena teškog lanca i jedan od gore pomenutih promenljivih domena lakog lanca. PD-L1 antitela ili njihovi fragmenti vezivanja kako je ovde opisano mogu obuhvatiti jedan ili više CDR ili jedan ili više promenljivih domena sa sekvencom aminokiseline najmanje 85% najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 97%, najmanje 98%, ili najmanje 99%, identičnim sekvencama CDR i sekvencama promenljivog domena kako je prikazano u Tabeli 1.
[0027] "Identičnost" se odnosi na broj ili procenat identičnih pozicija koje dele dve sekvence aminokiseline ili dve sekvence nukleinske kiseline, uzimajući u obzir broj praznina, i dužinu svake praznine, koju treba uvesti za optimalno poravnanje te dve sekvence. "Pretežno identično" znači sekvencu aminokiseline koja se razlikuje samo prema konzervativnim supstitucijama aminokiseline, na primer. Supstitucijom jedne aminokiseline za drugu iz iste klase (npr. valin za glicin, arginin za lizin, itd.) ili pomoću jedne ili više nekonzervativnih supstitucija, delecija, ili interakcije smeštene na pozicijama sekvence aminokiseline koje ne oštećuju funkciju proteina. Supstitucije aminokiseline moguće je napraviti, u nekim slučajevima odabirom supstitucija koje se ne razlikuju po svom dejstvu u proizvodnji (a) strukturi peptidne okosnice u područje supstitucija, (b) promena ili hidrofobnost molekula uz ciljanu hidrofobnost molekula na ciljnom mestu; ili (c) dugme bočnog lanca. Na primer, ostaci koji se prirodno pojavljuju može da se podeli u tri grupe na osnovu svojstava bočnog suda strani propeptida; (1) hidrofobne aminokiseline, (norleucin, metionin, alanin, valin, leucin, i izioleucin); (2) neutralne hidrofilne aminokiseline (cistein, serin, i treonin); (3) kiselinske aminokiseline (asparaginska kiselina, aspartinska kiselina i glutamiacid); (4) osnovne aminokiseline (asparagin, glutaminska, histidin, lizin, i arginin); (5) aminokiseline koje utiču na orijentaciju kanala(glicin i prolin), i 6 aromatične aminokiseline (triptofan, tirozin, i mnoštvo fenilalanina). Supstitucije su napravljene unutar ovih grupa i mogu se posmatrati kao konzervativne supstitucije. Primeri supstitucija uključuju, bez ograničenja, sledeće supstitucije: valin za alanin, lizin za arginin, glutamin za asparagin, glutaminsku kiselinu za asparaginsku kiselinu, serin za cistein, asparagin za glutamin, asparaginsku kiselinu za glutaminsku kiselinu, prolin za izoleucin, izoleucin za leucin, arginin za lizin, leucin za metionin, izoleucine za leucin, arganin za lizin, leucin za metionnin, leucin za fenilalanin, glicin za prolin, treonin za serin, serin za treonin, tirozin za triptovan, fenilalanin za tirozin, i/ili leucin za valin.
[0028] Poželjno, sekvenca aminokiseline je najmanje 80%, ili najmanje 85%, ili najmanje 90%, ili najmanje 95% identična ovde opisanoj sekvenci aminokiseline. Postupci i računarski programi za određivanje sličnosti sekvence su javno dostupni, uključujući, ali ne i ograničeni na, GCG programski paket (Devereux et al., Nucleic Acids Research 12: 387, 1984), BLASTP, BLASTN, FASTA (Altschul et al., J. Mol. Biol.215:403 (1990), i ALIGN program (verzija 2.0). Poznati Smit-Votermanov (Smith Waterman) algoritam je takođe moguće koristiti da bi se odredila sličnost. BLAST program je javno dostupan iz NCBI i drugih izvora (BLAST Manual, Altschul, et al., NCBI NLM NIH, Bethesda, Md.20894; BLAST 2.0 na internet adresi http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/). Pri upoređivanju sekvenci, ovi postupci se koriste za različite supstitucije, brisanja, i druge modifikacije.
Konzervativne supstitucije obično uključuju supstitucije unutar sledećih grupa; glicin, alanin; valin, izoleucin, leucin; asparaginska kiselina, glutaminska kiselina, asparagin, glutamin; serin, treonin; lizin, arginin; i fenilalanin, tirozin.
[0029] Antitela opisana ovde takođe uključuju ona kod kojih su karakteristike vezivanja poboljšane direktnom mutacijom, postupcima afinitetnog sazrevanja, prikazu faga, ili mešanja lanca. Afinitet i specifičnost mogu biti modifikovani ili poboljšani mutiranjem regiona određivanja komplementarnosti (CDR) i traženjem mesta vezivanja antigena sa željenim karakteristikama. Regioni određivanja komplementarnosti (CDR) se mutiraju na raznorazne načine. Jedan način je da se randomizuju pojedinačni ostaci ili kombinacije ostataka tako da se u populaciji inače identičnih mesta vezivanja antigena, nađe svih dvadeset aminokiselina na specifičnim pozicijama. Alternativno, mutacije se indukuju iz nekog opsega ostataka regiona određivanja komplementarnosti (CDR) tehnikom potpuno nasumične mutageneze poput reakcije lančane polimerizacije koja je sklona greškama (engl. error-prone PCR) (videti, npr. Hawkins et al., J. Mol. Biol., 226: 889-896 (1992)). Na primer, vektori prikaza faza koji obuhvataju gene promenljivog regiona teškog i lakog lanca mogu da se popune u sojevima mutanta E. coli (videti, npr. Low et al., J. Mol. Biol., 250: 359-368 (1996)). Ovi postupci mutageneze su ilustrativni za brojne postupke poznate stručnjaku u ovoj oblasti.
1
[0030] Da bi se imunogenost svela na minimum, poželjna su antitela koja obuhvataju humane sekvence konstantnog domena. Antitela mogu biti ili mogu kombinovati članove bilo koje klase imunoglobulina, kao što je IgG, IgM, IgA, IgD, ili IgE, i njihove podklase. Klasa antitela može da se izabere da optimizuje funkcije efektora (npr. od komplementa zavisnu citotoksičnost (CDC) i od antitela zavisnu ćelijsku citotoksičnost (ADCC)) prirodnih antitela.
[0031] Opisana je i upotreba PD-L1 vezivanja fragmenata antitela. Fv je najmanji fragment koji obuhvata kompletan promenljivi domen teškog i lakog lanca, uključujući svih šest hiperpromenljivih petlji regiona određivanja komplementarnosti (CDRs). Nemajući konstantne domene, promenljivi domeni se nekovalentno pridružuju. Teški i laki lanci mogu biti spojeni u jedan lanac polipeptida ("jednolančani Fv" ili "scFv") korišćenjem linkera koji dozvoljava da se domeni VHi VLpridruže da bi se formiralo mesto vezivanja antigena.
[0032] Kao što je ovde opisano, linker može da bude (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3. Pošto scFv fragmenti nemaju konstantne domene celih antitela, oni su značajno manji od celih antitela. scFv fragmenti takođe nemaju normalne interakcije konstantnog domena teškog lanca sa drugim biološkim molekulima koje mogu biti nepoželjne.
[0033] Fragmenti antitela koje obuhvata VH, VL, i opciono CL, CH1, ili drugi konstantni domeni mogu takođe da se koriste. Monovalentni fragmenti antitela generisani razlaganjem papaina se pominju kao Fab i nemaju region zgloba teškog lanca. Fragmenti generisani razlaganjem pepsina se pominju kao F(ab')2, zadržavaju zglob teškog lanca i dvovalentni su. Takve fragmente je moguće i rekombinantno proizvesti. Brojni drugi korisni fragmenti antitela vezivanja antigena su poznati u ovoj oblasti, i uključuju, bez ograničavanja, diatela, triatela, antitela sa jednim domenom, i druge monovalentne i viševalentne oblike.
[0034] Takođe su opisani viševalentni antigen vezujući proteini, koji mogu biti u obliku, bez ograničenja, antitela njegovih antigen vezujućih fragmenata, i proteini koji obuhvataju sve ili deo antigen vezujućih delova antitela. Viševalentni antigen vezujući proteini mogu biti monospecifični, bispecifični, ili višespecifični. Pojam specifičnosti se odnosi na broj različitih tipova antigenskih determinanata na koje specifičan molekul može da se veže. Ako se molekul imunoglobulina veže na samo jedan tip antigenskog determinanta, molekul imunoglobulina je monospecifičan. Ako se molekul imunoglobulina veže na različite tipove antigenskih determinanta, taj molekul imunoglobulina je višespecifičan.
[0035] Ovde opisan protein PD-L1 vezivanja može imati proporcionalnost konstante (Kon) udruživanja leka sa receptora i najmanje oko 10<2>M<-1>s<-1>; najmanje oko 10<3>M<-1>s<-1>; najmanje oko 10<4>M<-1>s<-1>; najmanje oko 10<5>M<-1>s<-1>; ili najmanje oko 10<6>M<-1>s<-1>, kako je izmereno rezonancom površinskog plazmona.
[0036] Ovde opisan protein PD-L1 vezivanja može imati proporcionalnost konstante (Kon) udruživanja leka i receptora između 10<2>M<-1>s<-1>i 10<3>M<-1>s<-1>; između 10<3>M<-1>s<-1>i 10<4>M<-1>s<-1>; između 10<4>M<-1>s<-1>i 10<5>M<-1>s<-1>; ili između 10<5>M<-1>s<-1>i 10<6>M<-1>s<-1>, koliko je izmereno rezonancom površinskog plazmona.
[0037] Ovde opisan protein PD-L1 vezivanja može imati proporcionalnost konstante (Koff) razdruživanja leka sa receptora od najviše oko 10<-3>s<-1>; najviše oko 10<-4>s<-1>; najviše oko 10<-5>s<-1>; ili najviše oko 10<-6>s<-1>kako je izmereno rezonancom površinskog plazmona. Ovde opisan protein PD-L1 vezivanja može imati proporcionalnost konstante (Koff) razdruživanja leka sa receptora od 10<-3>s<-1>do 10<-4>s<-1>; od 10<-4>s<-1>do 10<-5>s<-1>; ili od 10<-5>s<-1>do 10<-6>s<-1>, kako je izmereno rezonancom površinskog plazmona.
[0038] Ovde opisan protein PD-L1 vezivanja može imati afinitetne interakcije pri ravnoteži konstante razdruživanja (KD) od najviše oko 10<-7>M; najviše oko 10<-8>M; najviše oko 10<-9>M; najviše oko 10<-10>M; najviše oko 10<-11>M; najviše oko 10<-12>M; ili najviše oko 10<-13>M. Ovde opisan protein vezivanja može imati afinitetnu konstantu razdruživanja (KD) na svoje ciljeve od 10<-7>M do 10<-8>M; od 10<-8>M do 10<-9>M; od 10<-9>M do 10<-10>M; od 10<-10>M do 10<-11>M; od 10<-11>M do 10<-12>M; ili od 10<-12>M do 10<-13>M.
[0039] Ovde opisan protein vezivanja može biti konjugat koji još obuhvata agens koji se koriste za prikazivanje slike, terapijski agens, ili citotoksični agens. Agens koji se koristi za prikazivanje slike može biti radio oznaka, enzim, fluorescentna oznaka, luminescentna oznaka, bioluminescentna oznaka, magnetna oznaka, ili biotin. Ta radio oznaka može biti:<3>H,<14>C,<35>S,<90>Y,<99>Tc,<111>In,<125>I,<131>I,<177>Lu, ili<153>Sm. Terapijski ili citotoksični agens može da bude anti-metabolit, ili agens alkilacije, antibiotik, ili faktor rasta, citokin, anti-
1
angiogenski agens, anti-mitotski agens, antraciklin, toksin, ili apoptozni agens. Kako se razmatra niže u tekstu, imunostimulatorni citokini su od specifičnog značaja.
[0040] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje proteine fuzije koji vezuju PD-L1 da bi inhibirali imunosupresiju, što takođe pospešuje odgovore imunog sistema interakcijom sa drugim ligandima ili receptorima. Kao što se ovde opisuje u primerima, takvi proteini fuzije kombinuju domen PD-L1 vezivanja antitela sa domenom koji stimuliše funkciju NK ili T ćelije. Takav stimulatorni domen se vezuje na i stimuliše receptor koji reaguje na interleukin IL15. Stimulatorni domen koji se ovde u primerima daje je hibridni domen koji obuhvata suši domen IL15R alfa lanca spojenog na IL15 pomoću linkera (npr. SEQ ID NO:261). Primer kompletnog molekula se iznosi pomoću SEQ ID NO:262. Skoro identičan molekul, modifikovan sa dve supstitucije aminokiseline u regionu između domena antitela i domena IL15R stimulacije, da bi se inhibirala proteoliza u ovom regionu, se izlaže pomoću SEQ ID NO:263. Kao što je ovde prikazano, molekul koji obuhvata domen PD-L1 vezivanja koji suzbija imunosupresiju, i drugi domen koji pospešuje odgovor imunog sistema, obezbeđuje povećanu aktivnost imunog sistema ćelije, u poređenju sa dva distinktivna molekula koji obezbeđuju funkcije odvojeno.
[0041] Deo PD-L1 vezivanja proteina fuzije je domen vezivanja antigena tog antitela.
Obezbeđuje se nekoliko novih promenljivih domena teškog i lakog lanca antitela i antitela koja ih uključuju. Prema ovom pronalasku, deo PD-L1 vezivanja je antitelo koje se vezuje na PD-L1 i blokira imunosupresiju. Ovde su takođe opisana anti-PD-Ll antitela i fragmenti, koji nisu ograničeni na ona nova ovde opisana antitela, kao i peptidi i proteini izvedeni iz PD1, prirodni ligand PD-L1.
[0042] Kako je ovde opisano, domen PD-L1 vezivanja je spojen na domen koji stimuliše aktivnost NK i T ćelije. Taj domen obuhvata IL15, i spojen je na njega pomoću fleksibilnog linkera, "suši" domen iz alfa lanca IL15 receptora. Suši domen se vezuje na IL15 sa visokim afinitetom i kompleks IL15 sa suši domenom je specifično aktivan za stimulisanje proliferaciju NK i T ćelije. Ono što je posebno značajno je da, kao što je prikazano u Primerima, lečenje sa agensom koji kombinuje domen PD-L1 vezivanja u istom molekulu kao što je stimulatorni IL15 domen je mnogo efektivnije od kombinovanog lečenja korišćenjem domena PD-L1 vezivanja i IL15 stimulatornog domena kao odvojene molekule.
1
[0043] Dakle, ovaj pronalazak razmatra proteine fuzije koji obuhvataju domen koji se vezuju na PD-L1 i blokiraju vezivanje na PD1, i domen koji stimuliše IL15R, dakle proliferaciju ćelija imunog sistema. Kao što je prikazano u primerima, IL15R stimulatorni domen obuhvata suši domen od IL15R alfa lanca spojen na IL15 pomoću fleksibilnog linkera sličnog onom koji je korišćen za, npr., jednolančane Fv molekule (tj., koji obuhvataju 15-20 aminokiseline koje su pretežno serin i glicin). U praksi, postoje drugi postupci koje je moguće koristiti, koji mogu biti poželjniji na primer za proizvodne postupke. Pored toga, stručnjak prepoznaje strukture domena, dakle modularne aspekte i druga svojstva opisanih hibridnih proteina. Na primer, spajanje linkerom suši domena na IL15 je korisno za eksprimovanje hibrida kao jednog polipeptida, ali može isto tako da bude zamenjeno drugim agensima, linkerima, ili poprečnim linkerima. Alternativno, visok afinitet od IL15 za deo koji sadrži suši od 1L15R alfa lanca pokazuje da suši domen i IL15 mogu da formiraju stabilan kompleks koji ne mora da bude kovalentan. Slično, kako protein koji se daje kao primer obuhvata ceo konstanti region antitela, drugi fragmenti vezivanja antigena od antitela PD-L1 vezivanja bi bili dovoljni.
[0044] Takođe je opisan domen PD-L1 vezivanja koji je povezan na IL15R stimulatorni domen, čiji IL15R stimulatorni domen obuhvata suši domen od IL15R alfa lanca ili njegovu varijantu i IL15 ili njegovu IL15 njegovu varijantu. Kao što je ovde opisano, varijante bi bile 80%, 85%, 87%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, ili 95% identične ovde opisanim sekvencama. Kao što je ovde opisano, suši domen od IL15R alfa lanca, i IL15 mogu da formiraju kovalentni kompleks. Kao što je ovde opisano, suši domen od IL15R alfa lanca i IL15 mogu da formiraju nekovalentni kompleks. Domen PD-L1 vezivanja može obuhvatiti jedan, dva, tri, četiri, pet, ili šest regiona određivanja komplementarnosti (CDR), ili promenljivi domen teškog i/ili lakog lanca njegovog antitela opisanog ovde, ili da budu njegov fragment vezivanja antigena, ili njegova varijanta, kao što je varijanta koja je 80%, 85%, 87%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, ili 95% identična, ili PD-L1 antitelo poznato u ovoj oblasti koje blokira vezivanje na PD-1 ili njegov fragment vezivanja antigena.
[0045] Jasno je da proteini fuzije koji obuhvataju anti-PD-L1 antitela iz ovog pronalaska, pri čemu korišćeni za sisara u svrhu profilakse ili lečenje, biće isporučeni pacijentu u obliku supstance koja dodatno obuhvata farmaceutski prihvatljiv nosač. Pogodni farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju, na primer, jedno ili više od vode, slanog rastvora, fosfatnog puferisnaog slanog rastvora, dekstroze, glicerola, saharoze, polisorbata, etanola i sličnog, kao
1
i njihove kombinacije. Farmaceutski prihvatljivi nosači mogu još da obuhvate manje količine pomoćnih supstanci kao što su sredstva za ovlaživanje ili emulzifikaciju, koja pospešuju vek na polici ili delotvornost antitela.
[0046] U medicinskim upotrebama ovog pronalaska, terapijski delotvorna količina proteina fuzije iz ovog pronalaska se isporučuje sisaru kom je potrebno. Pojam "isporučivanje" kako se ovde koristi znači isporučivanje proteina fuzije iz ovog pronalaska sisaru bilo kojim postupkom koji može dostići traženi rezultat. Oni mogu biti isporučeni, na primer, intravenozno ili intramuskularno. Iako su proteini fuzije koji se daju kao primer iz ovog pronalaska posebno korisni za isporuku ljudima, oni mogu biti isporučeni drugim sisarima isto tako. Pojam "sisar" kako je ovde korišćeno je predviđen da uključi, ali ne i da se ograniči na, ljude, laboratorijske životinje, kućne ljubimce, domaće životinje. "Terapijski delotvorna količina" znači količinu proteina fuzije iz ovog pronalaska koja, kada se isporuči sisaru, jeste delotvorna za proizvodnju željenog terapijskog dejstva, kao što je inhibiranje aktivnosti kinaze.
[0047] Proteini fuzije iz ovog pronalaska su korisni za inhibiranje tumora i drugih neoplastičnih bolesti, kao i za lečenje drugih patoloških stanja povezanih sa imunosupresijom. Tumori koje je moguće lečiti uključuju primarne tumore, metastazne tumore, i refraktorne tumore. Refraktorni tumori uključuju tumore koji ne uspevaju da odgovore ili su lučno otporni na lečenje sa samo hemoterapijskim agensima, samo antitelima, samo zračenjem ili njihovim kombinacijama. Refraktorni tumori obuhvataju i tumore koji izgleda da mogu da se suzbiju lečenjem takvim agensima, ili se obnove u periodu do pet godina, ponekad i do deset godina ili duže posle prekida lečenja. Antitela su delotvorna za lečenje vaskularizovanih tumora i tumora koji nisu vaskularizovani, ili nisu ipak u dovoljnoj meri vaskularizovani.
[0048] Primeri čvrstih tumora koji mogu s tim u skladu da se leče uključuju karcinom dojke, karcinom pluća, kolorektalni karcinom, pankreasni karcinom, gliom i limfom. Neki primeri takvih tumora uključuju epidermoidne tumore, skvamozne tumore, kao što su tumori glave i vrata, kolorektalni tumori, tumori prostate, tumori dojke, tumori pluća, uključujući sitnoćelijske i nesitnoćelijske tumore pluća, pankreasne tumore, tumore tiroidne žlezde, tumore jajnika, i tumore jetre. Drugi primeri uključuju Kapošijev sarkom, neoplazme centralnog nervnog sistmea (CNS), neuroblastome, kapilarne hemangioblastome,
1
meningiome i metastaze u mozgu, melanom, gastrointestinalne i renalne karcinome i serkome, rabdomiosarkome, glioblastom, poželjno glioblastom multiform, i leiomiosarkom. Primeri vaskularizovanih kancera kože za koje ovde opisani antagonisti jesu delotvorni uključuju karcinom skvamozne ćelije, karcinom bazalne ćelije i kancere kože koji mogu da budu lečeni suzbijanjem rasta malignih keratinocita, kao što su humani maligni ketinociti.
[0049] Primeri nesolidnih tumora uključuju leukemiju, multipli mijelom i limfome koji ne reaguju na citokine, kao što je IL15. Neki primeri leukemije uključuju akutnu mijelognu leukemiju (AML), hroničnu mijelognu leukemiju (CML), akutnu limfocitnu leukemiju (ALL), hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL), eritrocitnu leukemiju ili monocitnu leukemiju. Neki primeri limfoma uključuju Hodžkinov i ne-Hodžkinov limfom.
[0050] Ovde opisana PD-L1 antitela i hibridni proteini koji stimulišu imunu ćeliju se takođe koriste za lečenje virusnih infekcija. PD-1 eksprimovanje na T ćelijama se dovodi u vezu sa virusnim opterećenjem kod HIV i HCV inficiranih pacijenata i PD-1 eksprimovanje je identifikovano kao marker za iscrpljene virusno specifične CD8+ T ćelije. Na primer, PD-1<+>CD8<+>T ćelije pokazuju oštećene funkcije efektora i PD-1 povezanu iscrpljenost T ćelije što je moguće oporaviti blokiranjem interakcije PD-1/PD-L1. Ovo daje kao rezultat oporavak virusno specifičnog CD8+ T ćelijom posredovanog imuniteta, što ukazuje da je prekid PD-1 signaliziranja korišćenjem antagonističkog antitela oporavlja funkcije efektora T ćelije.
Imunoterapija zasnovana na blokadi PD-1/PD-L1 daje kao rezultat prekid tolerancije T ćelije ne samo na antigene tumora, već obezbeđuje i strategiju da reaktivira za viru specifične efektorske T ćelije i da eliminiše patogene u hroničnim virusnim infekcijama. Sa tim u skladu, antitela i hibridni proteini opisani ovde su korisni za lečenje hroničnih virusnih infekcija, uključujući, bez ograničenja, HCV i HIV, i virus limfocitnog horiomeningitisa (LCMV).
[0051] Proteini fuzije iz ovog pronalaska mogu pogodno biti isporučeni sa drugim agensima pacijentima kojima su potrebni. Na primer, protein fuzije iz ovog pronalaska može biti isporučen subjektu sa antineoplastičnim agensom, sa drugim inhibitorom angiogeneze ili sa antiinflamatornim agensom ili imunosupresantom.
[0052] Antineoplastični agensi uključuju citotoksične hemoterapijske agense, ciljane male molekule i biološke molekule, i zračenje. Neograničavajući primeri hemoterapijskih agenasa
1
uključuju cisplatin, dakarbazin (DTIC), daktinomicin, irinotekan, mehloretamin (azotni iperit), streptozocin, ciklofosfamid, karmustin (BCNU), lomustin (CCNU), doksorubicin (adriamicin), daunorubicin, prokarbazin, mitomicin, citarabin, etopozid, metotreksat, 5-fluorouracil, vinblastin, vinkristin, bleomicin, paklitaksel (taksol), docetaksel (taxotcrc), aldesleukin, asparaginaza, busulfan, karboplatin, kladribin, dakarbazin, floksuridin, fludarabin, hidroksiurea, ifosfamid, interferon alfa, leuprolid, megestrol, melfalan, merkaptopurin, plikamicin, mitotan, pegaspargaza, pentostatin, pipobroman, plikamicin, streptozocin, tamoksifen, tenipozid, testolakton, tioguanin, tiotep, uracil iperit (uramustin), vinorelbin, hlorambucil, taksol i njihove kombinacije.
[0053] Ciljani mali molekuli i biološki molekuli uključuju, bez ograničavanja, inhibitore komponenata putanja transdukcije signala, kao što su modulatori receptorskih tirozinskih kinaza, i agenasa koji se vezuju na antigene specifične za tumor. Neograničavajući primeri receptora faktora rasta uključenih u tumorigenezu su receptori za faktor rasta izveden iz trombocita (PDGFR), insulinu sličan faktor rasta (IGFR), faktor rasta nerva (NGFR), i faktor rasta fibroblasta (FGFR), i receptore familije receptora epidermalnog faktora rasta, uključujući EGFR (erbB1), HER2 (erbB2), erbB3, i erbB4.
[0054] EGFR antagonisti uključuju antitela koja se vezuju na EGFR ili na EGFR ligand, i inhibira vezivanje liganda i/ili aktivaciju receptora. Na primer, agens može da blokira formiranje dimera ili heterodimera receptora sa drugim članovima familije receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR). Ligandi za receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) uključuju, na primer, EGF, TGF-α amfiregulin, heparin vezujući epidermalni faktor rasta (HB-EGF) i betaregululin. Antagonist receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR) može da se veže eksterno na vanćelijski deo receptora epidermalnog faktora rasta, koji može ili ne može da inhibira vezivanje liganda, ili internona domen tirozinske kinaze. Antagonisti receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR) uključuju agense koji inhibiraju transdukciju signala zavisnu od receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), na primer, inhibiranjem funkcije komponente putanje transdukcije signala receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR). Primeri antagonista receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR) koji vezuju receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) uključuju, bez ograničavanja, biološke molekule, kao što su antitela (i njihove funkcionalne ekvivalente) specifične za receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR), i male molekule, kao što su sintetički inhibitori kinaze koji deluju direktno na domen citoplazme receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR).
2
[0055] Mali molekul i biološki inhibitori uključuju inhibitore receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), uključujući gefitinib, erlotinib, i cetuksimab, inhibitore HER2 (npr. trastuzumab, trastuzumab emtanzin (trastuzumab-DMl; T-DM1) i pertuzumab), anti-VEGF antitela i fragmente (npr. bevacizumab), antitela koja inhibiraju CD20 (npr. rituksimab, ibritumomab), anti-VEGFR antitela (npr. ramucirumab (IMC-1121B), IMC-1C11, i CDP791), anti-PDGFR antitela, i imatinib. Inhibitori malog molekula kinaze mogu da budu specifični za specifičnu kinazu tirozina ili da budu inhibitori dve ili više kinaza. Na primer, jedinjenje N-(3,4-dihloro-2-fluorofenil)-7-({[(3aR,6aS)-2-metiloktahidrociklopenta[c] pirol-5-il]metil}oksi)-6-(metiloksi)hinazolin-4-amina (poznato i kao XL647, EXEL-7647 i KD-019) jeste in vitro inhibitor nekoliko receptora tirozinskih kinaza (RTKs), uključujući receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR), EphB4, KDR (VEGFR), Flt4 (VEGFR3) i ErbB2, i isto tako jeste i inhibitor SRC kinaze, koji je uključen u putanje koje daju kao rezultat nereagovanje tumora na izvesne inhibitore tirozinskih knaza (TKI). Kao što je ovde opisano, lečenje subjekta kom je potrebno može obuhvatiti isporuku inhibitora ro-kinaze iz Formule I i isporuku KD-019.
[0056] Dasatinib (BMS-354825; Bristol-Myers Squibb, New York) je još jedan oralno biodostupan, konkurentni Src inhibitor mesta vezivanja adenozin trifosfata (ATP). Dasatanib takođe cilja Bcr-Abl (od strane Američke agencije za hranu i lekove (FDA) odobren za upotrebu za pacijente sa hroničnom mijelogenom leukemijom (CML) ili Filadelfija hromozom pozivitnom (Ph+) akutnom limfoblastičnom leukemijom (ALL)) kao i c-pribor, PDGFR, c-FMS, EphA2, i SFK. Dva druga inhibitora tirozinske kinaze od Src i Bcr-Abl su bosutinib (SKI-606) i saracatinib (AZD0530).
[0057] Ovde opisano PD-L1 antitelo ili konjugat moguće je koristiti u kombinaciji sa antivirusnim agensom za lečenje hronične virusne infekcije. Na primer, za HCV, sledeći agensi mogu da se koriste. Inhibitori proteaze hepatitis virusa C (HCV) uključuju, bez ograničenja boceprevir, telaprevir (VX-950), ITMN-191, SCH-900518, TMC-435, BI-201335, MK-7009, VX-500, VX-813, BMS790052, BMS650032, i VBY376. Inhibitori nestrukturnog proteina 4B (NS4B) hepatitis virusa C (HCV) uključuju, ali se ne ograničavaju na, klemizol, i druge inhibitore NS4B-RNK vezivanja, uključujući ali bez ograničenja na benzimidazol RBI (B-RBIs) i indazol RBI (I-RBI). Inhibitori nestrukturnog proteina 5A (NS5A) hepatitis virusa C (HCV) uključuju, ali se ne ograničavaju na, BMS-790052, A-689, A-831, EDP239, GS5885, i PP1461. Inhibitori hepatitis virusa C (HCV) polimeraze (NS5B) uključuju, ali se ne ograničavaju na analoge nukleozida (npr. valopicitabin, R1479, R1626, R7128), analozi nukleotida (npr. IDX184, PSI-7851, PSI-7977, i analozi nenukleozida (npr. filibuvir, HCV-796, VCH-759, VCH-916, ANA598, VCH-222 (VX-222), BI-207127, MK-3281, ABT-072, ABT-333, GS9190, BMS791325). Takođe, ribavirin ili analog ribavirina kao što je Taribavirin (viramidin; ICN 3142), Mizoribin, Merimepodib (VX-497), Mikofenolat mofetil, i Mikofenolat mogu da se koriste.
[0058] Protein fuzije iz ovog pronalaska moguće je isporučiti subjektu svakog dana, svakog drugog dana, svakih par dana, svakog trećeg dana, jednom nedeljno, dvaput nedeljno, triput nedeljno, ili jednom svake dve nedelje. Dve, tri ili četiri doze proteina fuzije iz ovog pronalaska moguće je isporučiti subjektu svakog dana, svakih par dana, svakog trećeg dana, jednom nedeljno ili jednom svake dve nedelje. Doze(e) proteina fuzije iz ovog pronalaska moguće je isporučiti tokom 2 dana, 3 dana, 5 dana, 7 dana, 14 dana, ili 21 dan. Doza proteina fuzije iz ovog pronalaska može da se isporuči i tokom 1 mesec, 1,5 meseca, 2 meseca, 2,5 meseca, 3 meseca, 4 meseca, 5 meseci, 6 meseci ili duže.
[0059] Postupci isporuke uključuju ali se ne ograničavaju na parenteralnu, intradermalnu, intravirusnu, intramuskularnu, intraperitonealnu, intravenoznu, potkožnu, intranazalnu, epiduralnu, oralnu, sublingvalnu, intranazalnu, intracerebralnu, intravaginalnu, tansdermalnu, transmukoznu, rektalnu, inhalacijom, ili topikalno, posebno u uši, nos, oči, ili kožu. Izbor režima isporuke pacijentu se kao diskreciono pravo prepušta odgovarajućem stručnjaku. U najvećem broju primera, isporuka pacijentu će dati kao rezultat otpuštanje jedinjenja u krvotok. Za lečenje bolesti oka, intravirusna isporuka bioloških agenasa se preporučuje.
[0060] Može biti poželjno da se jedinjenje isporuči lokalno. Ovo je moguće postići, na primer, i ne u smislu ograničavanja, lokalnom infuzijom, topikalnom primernom, injekcijom, pomoću katetera, ili pomoću implanta, pomenuti implant je porozan, neporozan, ili želatinasti materijal, uključujući membrane, kao što su silastične membrane, ili vlakna. U takvim slučajevima, isporuka može selektivno da cilja lokalno tkivo bez značajnijeg otpuštanja jedinjenja u krvotok.
[0061] Isporuka u pluća može da se koristi, npr. upotrebom inhalatora ili nebulizatora, i formulacije sa agensom za raspršivanje, ili preko perfuzije u fluorokarobnskom ili sintetičkom površinski aktivnom sredstvu za pluća. Ovde opisano jedinjenje moguće je formulisati kao supozitoriju, sa tradicionalnim vezivnim sredstvima i pomoćnim farmaceutskim sredstvima kao što su trigliceridi.
[0062] Ovde opisano jedinjenje je moguće isporučiti u mehuriću, posebno lipozomu (Videti Langer, 1990, Science 249:1527 - 1533; Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Bacterial infection, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp.353 - 365 (1989); Lopez Berestein, ibid., pp.317 - 327; videti generalno ibid.).
[0063] Ovde opisano jedinjenje je moguće isporučiti u sistemu sa kontrolisanim otpuštanjem (Videti, npr. Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol.2, pp.115 -138 (1984)). Moguće je koristiti i primere sistema sa kontrolisanim otpuštanjem se razmatraju u pregledu koji je dao Langer, 1990, Science 249:1527 - 1533. Kako je ovde opisano, pumpu je moguće koristiti (Videti Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref.
Biomed. Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574).
[0064] Kao što je ovde opisano, polimerni materijali mogu da se koriste (Videti Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev.
Macromol. Chem. 23:61; See also Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg.71:105).
[0065] U celoj ovoj prijavi, različite publikacije se navode kao reference. Primeri u nastavku bolje ilustruju ovaj pronalazak, ali ne treba ga tumačiti tako da ograniči obim ovog pronalaska na bilo koji način.
PRIMERI
Reakcije sa mešavinom limfocita:
[0066] CD14 pozitivni monociti su izolovani negativnom selekcijom iz cele krvi korišćenjem RosetteSep pribora za obogaćivanje monocita koji je uzet od čoveka (StemCell technologies).
2
Nezrele iz monocita izvedene dendritske ćelije (mo-DC) su generisane kultivacijom CD14 pozitivnih ćelija u IMDM suplementu sa 10% FBS sa 150ng/mL GM-CSF i 50ng/mL IL-4 tokom 6 do 7 dana. CD4 pozitivne ćelije su izolovane negativno iz cele krvi korišćenjem RosetteSep pribora za obogaćivanje CD4 koji je uzet od čoveka (StemCell technologies). Mo-DC i CD4 pozitivne ćelije od različitih donatora su zatim istovremeno kultivisane u odnosu 1 do 10 od mo-DC do CD4 ćelija prema opisanom redosledu. Da bi se procenila funkcija blokiranja anti-PDLl antitela, rastuća količina anti-PDLl antitela je dodata u početnu kokulturu. U nekim slučajevima, rastuća količina IL15 je takođe dodata na početku u kokulturu. Supernatanti su, 6 ili 7 dana, prikupljeni za merenje izlučenih IL-2 i IFNγ putem ELISA. Broj CD4 ćelija i eksprimovanje markera proliferacije, Ki67, su procenjeni protočnom citometrijom.
Aktivacija PBMC:
[0067] PBMC je izolovan iz cele krvi korišćenjem Histopaque-1077 (Sigma), kultivisanog u IMDM suplementiranog sa 10% FBS i aktiviranog bilo SEB (0,1 ug/mL), PHA (1ug/mL) ili anti-CD3 klona HiT3a (1 ug/mL, eBioscience) tokom 3 do 7 dana. Vezivanje bilo anti-PDLl antitela ili anti-PDL1-SD15 proteina fuzije su procenjeni u aktiviranom PBMC posle 3 dana putem protočne citometrije. Funkcionalna procena anti-PDLl antitela su urađene dodavanjem rastuće količine anti-PDLl antitela tokom PBMC aktivacije sa SEB. Supernatanti su, 2 ili 3 dana, prikupljeni za merenje IL-2 i IFNγ. U slučaju anti-PDL1-SD15 proteina fuzije, PBMC su kultivisane u prisustvu bilo anti-PDL1-SD15 ili anti-PDLl antitela, ili bez ikakvih aktivacija. Ćelije su prikupljene 6. dana, i protočnom citometrijom su procenjeni brojčani podaci u pogledu prisustva CD8 i granzimB, CD8 i perforina, i CD4 ćelija.
Aktivacija CD4 i CD8 ćelija:
[0068] CD4i CD8 pozitivne ćelije su izolovane negativno iz cele krvi korišćenjem RosetteSep pribora za obogaćivanje (StemCell technologies). CD4 ćelije su aktivirane bilo anti-CD3 ili anti-CD3 i PDL1Fc obloženim perlicama u IMDM, 10%FBS u prisustvu anti-PDL1 antitela. Supernatanti su prikupljeni 5. dana radi IFNγ meremka pomoću ELISA, i ćelije su procenjene u pogledu eksprikovanja markera Ki67 proliferacije korišćenjem protočne citometrije. CD8 ćelije su aktivirane anti-CD3 obloženim perlicama i bilo IL15 ili anti-PDL1-SD15 proteinima fuzije. U nekim slučajevima anti-CD3 i PDL1Fc je korišćen umesto anti-CD3 obloženih perlica. Supernatanti su, 6 ili 7 dana, prikupljeni za merenje izlučenih IFNγ i TNFα putem ELISA. Ćelije su prikupljene radi merenja CD8 aktivacije pomoću markera granzimB i perforin markera korišćenjem protočne citometrije.
Nomenklatura proteina antitelo-fuzija:
[0069] U eksperimentima sa anti-PD-Ll IL15 proteinima fuzije, kraći nazivi za proteine fuzije su označeni u legendama. Protein fuzije tcc1D7HC-SD15 se identifikuje na legendama slike kao cD7-SD15. Protein fuzije tcclF8HC-SD15 se identifikuje na legendama slike kao F8-SD15.
Specifična visokoafinitetna antitela na PD-L1 iz biblioteke prikaza faga
[0070] Anti-PD-Ll antitela sa visokim afinitetom su dobijena korišćenjem biblioteke prikaza faga. U jednom postupku, fag Fabs pojačani iz Dyax biblioteka su raspoređeni na tacne na bilo rekombinantni humani PDL1-Fc (PDL1 ECD i humani Fc protein fuzije, Q9NZQ7) ili mišji PDL1-Fc (Q9EP73) koji su imobilisani na imuno-epruvetama tokom tri ciklusa. ELISA pozitivni klonovi iz ciklusa (R2) i ciklus 3 (R3) su sekvencirani.
[0071] U nekom drugom postupku, fag Fabs pojačani iz Dyax biblioteka su raspoređeni na tacne na bilo rekombinantni humani PDL1-Fc (PDL1 ECD i humani Fc protein fuzije, Q9NZQ7) za prvi ciklus, i zatim su raspoređeni na tacne na aktivirane T ćelije za drugi ciklus. Za treći ciklus, bilo aktivirane T ćelije ili rekombinantni humani PDL1-Fc su korišćeni za raspoređivanje u tacne. Klonovi koji mogu da se vežu i na rastvorljiv PDL1-Fc i na ćelijski eksprimovan PDL1-Fc su sekvencirani. VHi VLsekvence promenljivog domena ovih antitela se daju na Sl.13 i redovima 1-26 Tabele 1.
[0072] Jedinstveni klonovi su pretvoreni u IgG za dalju karakterizaciju. Promenljivi domeni su umetnuti u Dyax vektor eksprimovanja pBh1. I divlji tip CH1-CH2 - CH3 domena i mutirani CH1-CH2-CH3 (L234A i L235A, se ovde takođe pominju kao LALA mutanti) su pripremljeni za IgG format.
2
2
[0073] Verifikovano je da ova antitela imaju specifično vezivanje na PD-L1 pomoću čvrste faze ELISA (Sl.1-4) i HEK-293 ćelije (Sl.5). Blokiranje PD-1:PD-L1 interakcija u prisustvu ovih antitela je određeno čvrstom fazom ELISA i pomoću 293-HEK ćelijama eksprimovanog PD-L1. Biacore je korišćen da izračuna konstantu afiniteta za svako antitelo.
2
2
[0074] Ova antitela su verifikovana i za vezivanje na nativne ćelije koje eksprimuju PD-L1 vezivanjem na nezrele iz monocita izvedene dendritske ćelije (Slika 6A), ljudske PD-L1 eksprimovane ćelije MDA-MB-231 linije kancera dojke (Slika 6B), mišje PD-L1 eksprimovane B16-F10 ćelije linije tumora (Slika 6C) kao i humane aktivirane CD4 i CD8 T ćelije.
Funkcionalno aktivna anti-PD-Ll antitela blokiraju PD-1 PD-L1 interakciju i povećavaju proliferaciju i aktivaciju T ćelije
[0075] Visokoafinitetno vezujuća anti-PD-Ll antitela su ocenjena za njihovu funkciju da se blokiraju PD-1 PD-L1 interakcije i poveća proliferacija T ćelije. Negativno prečišćene CD4 T ćelije su aktivirane in vitro sa bilo αCD3 ili αCD3 i PD-L1Fc obloženim perlicama u prisustvu anti-PD-Ll antitela. CD4 ćelije stimulisane sa αCD3 i PD-L1Fc obloženim perlicama su pokazale nižu proliferaciju i IFNγ kao i IL-2 izlučivanja u poređenju sa CD4 ćelijama stimulisanim samo sa αCD3 obloženim perlicama. Dodavanje funkcionalno aktivnih anti-PD-Ll antitela u CD4 kulture stimulisane sa αCD3 i PD-L1Fc obloženim perlicama povećava CD4 proliferaciju (izmerenu bilo ukupnim CD4 brojem ili procentom proliferacionog markera Ki67) (Slika 7A) u poređenju sa kulturama bez dodatog antitela. Dodavanje funkcionalno aktivnih blokirajućih anti-PD-Ll antitela u CD4 kulture sa αCD3 i PD-L1Fc obložene perlice takođe povećavaju izlučivanje citokina pomoću CD4 (izmereno pomoću ELISA akumuliranog IFNγ i IL-2 u tom supernatantu).
[0076] Kada su PBMC izolovane iz cele krvi stimulisane sa super antigenom stafilokoknog enterotoksina B (Staphylococcus Enterotoxin B (SEB)) u prisustvu anti-PD-Ll blokirajućih antitela, primećeno je povećanje izlučivanja citokina. Supernatanti iz PBMC (prethodno su zamrznuti) kultivisani sa SEB tokom 48 sati su prikupljeni, i IFNγ i IL-2 su izmereni ELISA tehnikom. Nije primećeno povećanje broja T ćelija, ali su primećena značajna povećanja u
2
pogledu nivoa IFNγ i IL-2 u kulturama nekoliko anti-PD-Ll antitela kada se uporede sa kontrolama u koja nisu dodata nikakva antitela (Slika 7B).
[0077] Pored toga, povećanje CD4 proliferacije i aktivacija je takođe primećeno u mešovitolimfocitnoj reakciji (MLR) CD4 T ćelija i mo-DC kultivisano u prisustvu anti-PD-Ll blokirajućih antitela Nekoliko anti-PD-Ll antitela je povećalo CD4 proliferaciju u MLR kada se uporedi sa kulturama gde nikakvo antitelo nije dodato (Slika 7C). Ova antitela su takođe povećala IFNγ i IL-2 izlučivanje kako je procenjeno ELISA tehnikom.
IL15 povećanja anti-PD-L1 antitela deluje na proliferaciju T ćelije i aktivaciju in vitro
[0078] MLR od CD4 T ćelija i mo-DC u prisustvu i anti-PD-Ll blokirajućih antitela i citokina IL15 je dalo kao rezultat značajno povećanje CD4 proliferacije (Slika 8A), IFNγ i IL-2 izlučivanjem kada se uporede sa kulturama CD4 i mo-DC sa samim anti-PD-L1 antitelima. IL15 je dodato u jednakim molarnim koncentracijama kao anti-PD-Ll antitela u ovim ogledima. Pri nižim koncentracijama anti-PD-Ll antitela i IL15 (0,5 nM, Slika 8A), primećeno je neko sinergijsko dejstvo na CD4 proliferaciju.
[0079] Negativno prečišćen CD8 iz cele krvi je stimulisan in vitro sa aCD3 i PD-L1Fc obloženim perlicama takođe odgovaraju na IL15 na od doze uslovljen način. Dodavanje IL15 u kulture CD8 sa αCD3 i PD-L1Fc obloženim perlicama i anti-PD-Ll antitela su dala kao rezultat velika povećanja CD8 proliferacije (Slika 8B).
Anti-PD-L1-IL5 protein fuzije cilja ćelije kod kojih postoji prisustvo IL15 na PD-L1 eksprimovanog antigena i povećava proliferaciju i aktivaciju odgovarajućih CD8 ćelija
[0080] Anti-PD-L1 antitelo i IL15 protein fuzije je konstruisan povezivanjem Fc domena antitela na suši domen IL15R i na sam IL15 molekul. Fuzija IL15Rα suši domena, IRD-11 ekson3, linker i IL15 (označeni "SD15") je obezbeđena kao SEQ ID NO:261. SD15 je okačen na c terminal teškog lanca uobičajenog IgG. Protein fuzije sa IL15Rα suši domenom, IRD-11 ekson3, linker i IL15 je okačen na c terminal teškog lanca od tccλD7 promenljivog domena i IgG1 CH1-CH2-CH3 promenljiv domen (SEQ ID NO:262). Konstrukt je takođe uključio K na S zameni na kraju IgG1 teškog lanca (1) da bi se svela na minimum mogućnost za "G-K" cepanje; (2) da bi se dodalo mesto kloniranja (BamHI) na vektor.
[0081] Laki lanac je onaj koji je od uobičajenog antitela. I laki lanac i fuzioni teški lanac sa ili bez LALA mutanta su umetnuti u Dyax pBh1 vektor za eksprimovanje.
[0082] Ovaj molekul fuzije je označen anti-PD-L1-suši domenom-IL15 ili anti-PD-L1-SD15. Drugačija verzija proteina fuzije pri čemu je IL15 povezan na Fc umesto na suši domen je takođe konstruisan, i kako ovaj protein fuzije nije imao IL15 funkcionalnu aktivnost mi smo koristili ovaj protein kao negativnu kontrolu u nekim ogledima (pod nazivom anti-PD-L1-SD15neg).
[0083] Nikakva značajna promena nije primećena kada je upoređeno vezivanje anti-PD-L1-SD15 proteina fuzije na anti-PD-Ll antitela u čvrstoj fazi PD-L1Fc vezivanja ELISA ogledom (Slika 9A). Primećene su neke promene u afinitetu vezivanja na aktivirane CD4 ćelije koje eksprimuju PD-L1 je primećeno kada je vezivanje anti-PD-L1-SD15 proteina upoređeno sa njihovim odgovarajućim originalnim anti-PD-L1 antitelima (Slika 9B). Anti-PD-L1-SD15 proteini imaju niži afinitet prema ćelijama koje eksprimuju PD-L1 kada se uporede sa njihovim odgovarajućim anti-PD-Ll antitelima; iako mogu biti razlike za vezivanje sekundarnog antitela na vezani anti-PD-L1-SD15 naspram vezanog anti-PD-Ll na površini ćelija.
[0084] Da bi se procenila funkcija IL15 anti-PD-Ll-SD15 proteina fuzije, PBMC izolovani iz cele krvi su kultivisani u prisustvu bili anti-PD-L1-SD15 proteina fuzije ili IL15. Nikakve druge stimulacije nisu dodate u te kulture. Anti-PD-L1-SD15 proteini fuzije su povećali broj NK ćelija (Sl.10A), povećana je CD8 proliferacija (Sl.10B) i aktivacija (je izmerena pomoću % granzimB pozitivne CD8, Sl.10C) slično kao IL15. Nisu primećena nikakva značajna povećanja u broju CD4 za sve kulture (Sl.10D).
[0085] Da bi se procenila anti-PD-L1-SD15 aktivnost na CD8, ovi proteini fuzije su dodati u CD8 kulture u prisustvu bilo αCD3 ili αCD3 i PDL1Fc obloženih perlica. Anti-PD-L1-SD15 je povećao CD8 proliferaciju značajno kada je PDL1Fc bio prisutan na ćelijama koje pokazuju prisustvo antigena, αCD3 i PDL1Fc obloženim perlicama u ovom slučaju (Slika 11A, nema PD-L1Fc naspram Slike 11B, sa PD-L1Fc na perlicama). Pored toga, značajno povećanje CD8 aktivacije je takođe primećeno. cD7-SD15 snižava efektivnu dozu potrebnu da bi se aktivirao CD8 kako je izmereno povećanjem % granzimB pozitivnih CD8 ćelija (Slika 12A) i IFNγ izlučivanje (Slika 12B) za oko desetostruko. cD7-SD15 takođe povećava
1
maksimalni nivo CD8 aktivacije kada je upoređen sa IL15 (Slika 12A i B). Kada je upoređen sa dodavanjem anti-PD-L1 antitela plus nevezani IL15, anti-PD-L1-SD15 protein fuzije je povećao CD8 proliferaciju na nivo više od kombinacije dodate odvojeno (Slika 12C). Ova svojstva anti-PD-Ll-SD15 proteina fuzije će biti korisna u postavljanje imunoterapije jer niže doze anti-PD-L1-SD15 proteina fuzije mogu biti korišćene da bi se postigao viši nivo CD8 aktivacije i proliferacije. Visok pojačan odgovor CD8 na anti-PD-L1-SD15 protein fuzije u slučajevima gde ćelije koje pokazuju prisustvo antigena eksprimuju PD-L1 će biti pogodno za postizanje selektivne CD8 aktivacije.
Citotoksičnost anti-PD-L1-IL15 proteina fuzije
[0086] Da bi se odredilo da li će anti-PD-L1-SD15 protein fuzije povećati IL15 indukovanu citotoksičnost CD8 T ćelije na PD-L1 eksprimovanje ćelija tumora, CD8 T ćelije su kokultivisane sa humanim PD-L1 koje eksprimuju MAD-MB-231 ćelije tumora u prisustvu anti-PD-L1-SD15 proteina fuzije ili anti-KLH-SD15, koji nema nikakvu aktivnost vezivanja na PD-L1 eksprimovane ćelije tumora, tokom 7 dana pre merenja smrti ćelije tumora.
Humane CD8 T ćelije i ćelije tumora su ko-kultivisane u IMDM suplementiranom sa 10% FBS tokom 7 dana. Aktivnost ubijanja ćelija tumora je procenjena merenjem broja mrtvih ćelija tumora bojenih pomoću boje Viability, eFluor 780 u FACS. CD8 T ćelijom posredovana citotoksičnost MDA-MB-231 je bila značajno pospešena anti-PD-L1-SD15 proteinom fuzije u poređenju sa tretiranjem sa anti-KLH-SD15 u kokulturi (Slika 15). Pored toga, PD-L1-SD15 protein fuzije cD7-SD15 je značajno povećao stopu preživljavanja miševa koji nose PD-L1 eksprimovane ćelije tumora na modelu tumora kod miševa koji su intravenski ubrizgani sa mišjim CT26 ćelijama tumora debelog creva u poređenju sa miševima lečenim sa pomoćnim farmaceutskim sredstvom ili PD-L1-SD15 proteinom fuzije sD7-SD15, koji nema aktivnost vezivanja na mišji PD-L1 (Slika 16). Ovi rezultati ukazuju da je ciljanje IL15 stimulisanih imunoloških efektorskih ćelija na PD-L1 mesta prekomerno eksprimovanog tumora pomoću bifunkcionalnog anti-PD-L1-SD15 proteina fuzije ima prednost da se pospeši antitumorski imunitet pri čemu se svode na minimum neželjena dejstva. Ovaj tip bifunkcionalnog proteina fuzije citokina antitelom ima potencijal kao novi imunomodularni lekovi da postigne veću efikasnost protiv tumora u kontroli napredovanja tumora.
Afinitetno sazrevanje
2
[0087] Varijante tccλD7 teškog lanca su proizvedene uvođenjem supstituticija aminokiseline na tri od pozicija metionina u CDR-1H i pregledanje za poboljšan afinitet. Specifičnije, biblioteka koja obuhvata oko 1 × 10<8>varijanti od CDRH1 od tccλD7 je generisana u kojoj su prva, druga i treća pozicija metionina istovremeno varirane. Biblioteka je raspoređena na tacne na rekombinantni humani PDL1-Fc (PDL1 ECD i humani Fc protein fuzije, Q9NZQ7) ili mišji PDL1-Fc (Q9EP73) koji su imobilisani na imuno-epruvetama tokom tri ciklusa. ELISA pozitivni klonovi iz ciklusa 3 i ciklusa 4 (R3) su sekvencirani. Jedinstveni klonovi su upoređeni konkurentnom ELISA. Tabela 4 pokazuje supstitucije aminokiseline primećene u 25 varijanti dobijenih iz pregledanja, sa SEQ ID NO: za afinitetno zrele CDR-1H sekvence i promenljive domene teškog lanca koji obuhvata CDR. Sekvence aminokiseline iz ovih varijanti se takođe daju u spisku sekvenci kako je navedeno u Tabeli 1.
[0088] Dve varijante, tccD7_#114 i tccD7_#102 (se takođe označavaju ovde kao tccD7_#1 i tccD7_#2) su pretvorene u IgG i takođe u IgG oblik koji obuhvata dve Leu-Ala supstitucije u regionu zgloba za smanjen ADCC, kako je opisano ovde na drugom mestu. Antitela su eksprimovana i prečišćena za dalju karakterizaciju. Poboljšano vezivanje na rastvorljivi PDL1 je prikazano na Sl.17 za dve afinitetno zrele varijante. Sl.18 pokazuje dve varijante blokiranog vezivanja humanog PD1 na humani PDL1 (levi panel) i blokirano vezivanje mišjeg PD1 na mišji PDL1 (desni panel). Varijante wlao su pokazale višu aktivnost vezivanja na MDA-MB-231 ćelije u poređenju sa roditeljskim (Sl.19).
[0089] Afinitet zrelih varijanti su testirani za njihovu sposobnost da se pospeši proizvodnja Th1 citokina IL2 i IFNγ. PBMC je izolovan iz cele krvi su stimulisani sa super antigenom stafilokoknim enterotoksinom (SEB, 0,1 ug/mL) u prisustvu anti-PD-L1 antitela.
Supernatanti iz PBMC kultivisani sa SEB tokom 7 dana su prikupljeni, i IFNγ i IL-2 su izmereni ELISA tehnikom. Značajna povećanja nivoa IFNγ i IL-2 su primećena u kulturama sa varijantama anti-PD-L1 antitela cD7#1 i #2 kada su upoređeni na cD7 (Sl.20).
[0090] Nekoliko varijanti proteina fuzije koje obuhvataju PD-L1 domen vezivanja, IL15R α suši domen i IL15 su konstruisane. Izvesni konstrukti uključuju linker između IL15R α suši domena i IL15 dela. U jednom konstruktu, 11 aminokiselina iz eksona 3 prisutnog u cterminalu IL15 receptora α suši domena su zamenjene sa "GS" linkerima različitih dužina. GS linkeri uključuju SGGSGGGGSGGGSGGGGS (SEQ ID NO:324; 18 aminokiselina), SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ (SEQ ID NO:314; 20 aminokiselina), SGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:316; 25 aminokiselina), SGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:318; 30 aminokiselina). SGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:320; 40
4
aminokiselina), i SGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG(SEQ ID NO:322; 50 aminokiselina) u konstruktima koji imaju SEQ ID NOS:325, 315, 317, 319, 321, i 323, prema opisanom redosledu.
[0091] Proteini fuzije su eksprimovani u HEK293 ćelijama, prelazno ili stabilno, i prečišćeni hromatografijom u koloni sa proteinom A prema uputstvima proizvođača. U izvesnim eksperimentima, da bi se stabilizovala veza između Ig konstantnih domena teškog i lakog lanca anti-PD-L1 dela molekula, C terminalni serin lakog lambda lanca je obrisan, što je ovde označeno sa "ds."
[0092] Proteini fuzije koji obuhvataju tccλD7 afinitet zrele varijante #102 sa suši domenom i IL15 (SEQ ID NO:325) su testirani za vezivanje na MDA-MB-231 pomoću protočne citometrije. Sve što je pokazano je poboljšalo vezivanje u poređenju sa proteinom fuzije koji obuhvata tccλD7 (Sl.21). Proteini fuzije obuhvataju tccλD7 afinitetom sazrelu varijantu #102 imaju takođe potvrđenu stimulatornu aktivnost na IL15 responsivne humane ćelije megakarioblastične leukemije. Ćelije su kultivisane sa anti-PD-L1-SD15 proteinima fuzije RPMI 1640 suplementirane sa 10% FBS i 20% podloge za pripremu 5637 ćelija humanog karcinoma bešike tokom 48 sati. Proliferacija ćelije je izmerena kao relativne svetlosne jedinice (RLU) pomoću CellTiter-Glo<®>svetlosnog ogleda održivosti ćelije (Sl.22).
[0093] Analiza hromatografijom putem isključivanja prema veličini je pokazala manje od 5% nagomilavanja (Sl. 24) i poboljšanu stabilnost seruma tog eksprimovanog proteina fuzije (Sl.
25).
4
4
4
4
4
4
4
1
2
4
1
2
4
1
2
4
1
2
4
1
2
4
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
11
11
11
11
11
11
11
��
12
12
12
12
12
12
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
14
14
14
14
14
14
14
1
11
12
�
��
1
1
1
1

Claims (13)

Patentni zahtevi
1. Protein fuzije obuhvata:
(i) prvi domen koji obuhvata antitelo na PD-L1, pri čemu to antitelo obuhvata
(a) teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO:121; teški lanac CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:123; teški lanac CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:125; laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:127; laki lanac CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:128; i laki lanac CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:129;
(b) teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO:241, CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:243, i CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:245; i laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:247, CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:249; ili
(c) teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO:266, CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:243, i CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:245; i laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:247, CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:249;
i pri čemu se to antitelo veže na PD-L1 i blokira njegovu interakciju sa PD-1,
(ii) drugi domen koji se veže na IL-15 receptor ("IL-15R"), pri čemu drugi domen obuhvata IL-15 ili njegov fragment IL-15R vezivanja, i
(iii) suši domen receptora alfa IL-15.
2. Protein fuzije iz patentnog zahteva 1, koji još obuhvata fleksibilni linker koji spaja suši domen od IL-15R alfa do IL-15 ili IL-15R vezivanja fragmenta, opciono pri čemu taj fleksibilni linker obuhvata 15-20 aminokiselina koje su pretežno serin i glicin.
3. Protein fuzije iz patentnog zahteva 2, pri čemu taj protein fuzije obuhvata SEQ ID NO:315, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:319, SEQ ID NO:321, SEQ ID NO:323, ili SEQ ID NO:261.
4. Protein fuzije iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu antitelo na PD-L1 obuhvata teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO:121; teški lanac CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:123; teški lanac CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:125; laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:127; laki lanac CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:128; i laki lanac CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:129.
5. Protein fuzije u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu antitelo na PD-L1 obuhvata promenljivi domen teškog lanca koji je najmanje 95% identičan SEQ ID NO:126 i/ili promenljivom domenu lakog lanca koji je najmanje 95% identičan SEQ ID NO:130.
6. Protein fuzije iz patentnog zahteva 5, pri čemu antitelo na PD-L1 obuhvata promenljivi domen teškog lanca koji ima sekvencu iz SEQ ID NO:126 i promenljivi domen lakog lanca koji ima sekvencu od SEQ ID NO:130.
7. Protein fuzije iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu to antitelo na PD L1 obuhvata laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:247, CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:249; i teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO: 241, CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO: 243, i CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:245.
8. Protein fuzije iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu to antitelo na PD L1 obuhvata laki lanac CDR-1L koji obuhvata SEQ ID NO:247, CDR-2L koji obuhvata SEQ ID NO:248, i CDR-3L koji obuhvata SEQ ID NO:249; i teški lanac CDR-1H koji obuhvata SEQ ID NO:266, CDR-2H koji obuhvata SEQ ID NO:243, i CDR-3H koji obuhvata SEQ ID NO:245.
9. Protein fuzije u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu antitelo na PD-L1 obuhvata promenljivi domen teškog lanca koji je najmanje 85% identičan SEQ ID NO:246 i/ili promenljivom domenu lakog lanca koji je najmanje 85% identičan SEQ ID NO:250.
10. Protein fuzije iz patentnog zahteva 9, pri čemu antitelo na PD-L1 obuhvata promenljivi domen teškog lanca koji ima sekvencu od SEQ ID NO:246 ili SEQ ID NO:267 i promenljivi domen lakog lanca koji ima sekvencu od SEQ ID NO:250.
11. Protein fuzije iz bilo kog od patentnih zahteva 4 ili 6 do 10, pri čemu taj protein fuzije obuhvata SEQ ID NO:261.
12. Protein fuzije iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 11 za upotrebu za lečenje kancera.
1
13. Molekul nukleinske kiseline koji obuhvata sekvencu nukleotida koja kodira protein fuzije prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11.
1 1
RS20220223A 2014-01-15 2015-01-15 Imunomodulatorni agensi RS62989B9 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461927907P 2014-01-15 2014-01-15
EP15736953.9A EP3094351B9 (en) 2014-01-15 2015-01-15 Immunomodulatory agents
PCT/US2015/011657 WO2015109124A2 (en) 2014-01-15 2015-01-15 Immunomodulatory agents

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RS62989B1 true RS62989B1 (sr) 2022-03-31
RS62989B9 RS62989B9 (sr) 2022-07-29

Family

ID=53543618

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220223A RS62989B9 (sr) 2014-01-15 2015-01-15 Imunomodulatorni agensi

Country Status (15)

Country Link
US (2) US10407502B2 (sr)
EP (2) EP4079321A1 (sr)
JP (5) JP2017509319A (sr)
CN (3) CN113603788B (sr)
CA (2) CA2936543C (sr)
DK (1) DK3094351T3 (sr)
ES (1) ES2908264T3 (sr)
HR (1) HRP20220214T1 (sr)
HU (1) HUE057917T2 (sr)
LT (1) LT3094351T (sr)
PL (1) PL3094351T3 (sr)
PT (1) PT3094351T (sr)
RS (1) RS62989B9 (sr)
SI (1) SI3094351T1 (sr)
WO (1) WO2015109124A2 (sr)

Families Citing this family (161)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101743249B (zh) 2007-05-11 2017-08-08 阿尔托生物科学有限公司 融合分子与il‑15变异体
EP3255060A1 (en) 2008-12-09 2017-12-13 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
EP3812387A1 (en) 2011-07-21 2021-04-28 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
PT3444271T (pt) 2013-08-08 2022-01-05 Inst Nat Sante Rech Med Modulocinas baseadas em il-15 e no domínio sushi de il-15ralfa
WO2015048312A1 (en) 2013-09-26 2015-04-02 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
PL3094351T3 (pl) * 2014-01-15 2022-06-27 Kadmon Corporation, Llc Środki immunomodulujące
PE20170255A1 (es) 2014-01-24 2017-03-22 Dana Farber Cancer Inst Inc Moleculas de anticuerpo que se unen a pd-1 y usos de las mismas
HUE045065T2 (hu) 2014-01-31 2019-12-30 Novartis Ag TIM-3 antitest molekulák és felhasználásaik
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
KR102442436B1 (ko) 2014-03-14 2022-09-15 노파르티스 아게 Lag-3에 대한 항체 분자 및 그의 용도
KR102762243B1 (ko) 2014-06-30 2025-02-05 알토 바이오사이언스 엘엘씨 Il-15-베이즈드 분자 및 이의 사용 방법
KR20170060042A (ko) 2014-09-13 2017-05-31 노파르티스 아게 Alk 억제제의 조합 요법
EP4245376A3 (en) 2014-10-14 2023-12-13 Novartis AG Antibody molecules to pd-l1 and uses thereof
CN108112254B (zh) 2015-03-13 2022-01-28 西托姆克斯治疗公司 抗-pdl1抗体、可活化的抗-pdl1抗体、及其使用方法
KR102608921B1 (ko) 2015-05-18 2023-12-01 스미토모 파마 온콜로지, 인크. 생체 이용률이 증가된 알보시딥 프로드러그
MA53355A (fr) 2015-05-29 2022-03-16 Agenus Inc Anticorps anti-ctla-4 et leurs procédés d'utilisation
HRP20211058T8 (hr) 2015-07-29 2021-11-26 Novartis Ag Kombinirane terapije koje sadrže molekule antitijela protiv lag-3
WO2017136562A2 (en) * 2016-02-02 2017-08-10 Kadmon Corporation, Llc Bispecific binding proteins for pd-l1 and kdr
US11414491B2 (en) 2016-05-18 2022-08-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Targeting PD-L1 on tumor cells
EP3464360B1 (en) 2016-05-27 2025-11-12 Agenus Inc. Anti-tim-3 antibodies and methods of use thereof
CN109715196A (zh) 2016-06-13 2019-05-03 转矩医疗股份有限公司 用于促进免疫细胞功能的组合物和方法
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
WO2018029474A2 (en) 2016-08-09 2018-02-15 Kymab Limited Anti-icos antibodies
RU2769282C2 (ru) 2016-06-20 2022-03-30 Кимаб Лимитед Анти-PD-L1 и IL-2 цитокины
US11858996B2 (en) 2016-08-09 2024-01-02 Kymab Limited Anti-ICOS antibodies
JP7066696B2 (ja) 2016-10-11 2022-05-13 アジェナス インコーポレイテッド 抗ｌａｇ－３抗体及びその使用方法
EP4613776A3 (en) 2016-10-21 2025-11-26 Altor BioScience Corporation Multimeric il-15-based molecules
EP3534947A1 (en) 2016-11-03 2019-09-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
DK3551660T5 (da) 2016-12-07 2024-09-02 Agenus Inc Anti-ctla-4-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse deraf
CN110300599B (zh) 2016-12-07 2024-07-02 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
CN110225770B (zh) 2016-12-14 2022-04-26 杨森生物科技公司 结合cd8a的纤连蛋白iii型结构域
EP3554535A4 (en) 2016-12-14 2020-10-21 Janssen Biotech, Inc. PD-L1 BINDING FIBRONECTIN TYPE III DOMAINS
EP3554561B1 (en) 2016-12-14 2023-06-28 Janssen Biotech, Inc. Cd137 binding fibronectin type iii domains
JP2020503883A (ja) 2017-01-13 2020-02-06 アジェナス インコーポレイテッド Ｎｙ−ｅｓｏ−１に結合するｔ細胞受容体およびその使用方法
AU2018224094B2 (en) 2017-02-24 2025-04-17 Macrogenics, Inc. Bispecific binding molecules that are capable of binding CD137 and tumor antigens, and uses thereof
US11629340B2 (en) 2017-03-03 2023-04-18 Obsidian Therapeutics, Inc. DHFR tunable protein regulation
CN107082812B (zh) * 2017-03-29 2018-11-13 上海科医联创生物科技有限公司 一种恢复衰竭性免疫细胞功能的融合蛋白及其应用
KR20240017409A (ko) 2017-04-13 2024-02-07 아게누스 인코포레이티드 항-cd137 항체 및 이의 사용 방법
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
LT3618863T (lt) 2017-05-01 2023-10-10 Agenus Inc. Anti-tigit antikūnai ir jų panaudojimo būdai
CN110914302A (zh) 2017-06-01 2020-03-24 赛托姆克斯治疗学股份有限公司 可活化抗pdl1抗体及其使用方法
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
GB201709808D0 (en) 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
CA3061874A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag Il-1beta binding antibodies for use in treating cancer
MY204117A (en) 2017-06-22 2024-08-08 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
EP3642240A1 (en) 2017-06-22 2020-04-29 Novartis AG Antibody molecules to cd73 and uses thereof
CA3066747A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Novartis Ag Dosage regimens for anti-tim-3 antibodies and uses thereof
JP2020527572A (ja) 2017-07-20 2020-09-10 ノバルティス アーゲー 抗ｌａｇ−３抗体の投薬量レジメンおよびその使用
CA3073055A1 (en) 2017-09-04 2019-03-07 Agenus Inc. T cell receptors that bind to mixed lineage leukemia (mll)-specific phosphopeptides and methods of use thereof
JP7196160B2 (ja) 2017-09-12 2022-12-26 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド Ｍｃｌ－１阻害剤アルボシジブを用いた、ｂｃｌ－２阻害剤に対して非感受性である癌の治療レジメン
WO2019081983A1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Novartis Ag CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE
WO2019096137A1 (zh) * 2017-11-14 2019-05-23 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司 包含免疫检查点抑制剂的融合物及其制备方法和应用
US20200371091A1 (en) 2017-11-30 2020-11-26 Novartis Ag Bcma-targeting chimeric antigen receptor, and uses thereof
EP3728314A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
GB201721338D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Kymab Ltd Anti-icos Antibodies
CU24545B1 (es) * 2017-12-29 2021-09-07 Ct Ingenieria Genetica Biotecnologia Péptido antagonista de la actividad de la interleucina-15
US12539308B2 (en) 2018-01-08 2026-02-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Immune-enhancing RNAs for combination with chimeric antigen receptor therapy
TW201938196A (zh) * 2018-01-18 2019-10-01 美商南特生物科學股份有限公司 融合蛋白擴展
AU2019215031C1 (en) 2018-01-31 2026-02-26 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
US20200399383A1 (en) 2018-02-13 2020-12-24 Novartis Ag Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
AU2019228381B2 (en) 2018-02-28 2021-12-16 Pfizer Inc. IL-15 variants and uses thereof
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
MA52363A (fr) 2018-04-26 2021-03-03 Agenus Inc Compositions peptidiques de liaison à une protéine de choc thermique (hsp) et leurs méthodes d'utilisation
TWI869346B (zh) 2018-05-30 2025-01-11 瑞士商諾華公司 Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法
WO2019232319A1 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Peloton Therapeutics, Inc. Compositions and methods for inhibiting cd73
WO2019232244A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
KR102870868B1 (ko) 2018-06-01 2025-10-15 노파르티스 아게 Bcma에 대한 결합 분자 및 이의 용도
BR122022012697B1 (pt) 2018-07-10 2023-04-04 Novartis Ag Usos de derivados de 3-(5-hidróxi-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6- diona, e kit
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
US20230053449A1 (en) 2018-10-31 2023-02-23 Novartis Ag Dc-sign antibody drug conjugates
US11034710B2 (en) 2018-12-04 2021-06-15 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. CDK9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
BR112021011224A2 (pt) 2018-12-11 2021-08-24 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Inibidores de alk5
KR20210106437A (ko) 2018-12-20 2021-08-30 노파르티스 아게 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체를 포함하는 투약 요법 및 약학적 조합물
US20220025036A1 (en) 2018-12-21 2022-01-27 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
KR20210107730A (ko) 2018-12-21 2021-09-01 노파르티스 아게 골수 형성이상 증후군의 치료 또는 예방에서의 il-1 베타 항체의 용도
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
JP2022514087A (ja) 2018-12-21 2022-02-09 ノバルティス アーゲー ＩＬ－１β結合抗体の使用
BR112021012066A2 (pt) 2018-12-21 2021-11-03 Onxeo Novas moléculas de ácido nucleico conjugadas e seus usos
KR20260008165A (ko) 2019-02-12 2026-01-15 스미토모 파마 아메리카, 인크. 헤테로시클릭 단백질 키나제 억제제를 포함하는 제제
WO2020165374A1 (en) * 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
CA3123519A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
CN113490528B (zh) 2019-02-15 2024-12-03 诺华股份有限公司 3-(1-氧代-5-(哌啶-4-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
WO2020191326A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Treatment of acute myeloid leukemia (aml) with venetoclax failure
KR20210141621A (ko) 2019-03-22 2021-11-23 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. Pkm2 조정제를 포함하는 조성물 및 그를 사용한 치료 방법
IL288210B2 (en) 2019-05-20 2026-03-01 Cytune Pharma Dosing regimens of IL-2/IL-15 beta-gamma receptor agonists for the treatment of cancer or infectious diseases
WO2020249757A1 (en) * 2019-06-14 2020-12-17 Philogen S.P.A Immunoconjugates comprising a single chain diabody and interleukin-15 or interleukin-15 and a sushi domain of interleukin-15 receptor alpha
EP3994132A1 (en) 2019-07-03 2022-05-11 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Tyrosine kinase non-receptor 1 (tnk1) inhibitors and uses thereof
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
JP2022544405A (ja) * 2019-08-15 2022-10-18 アイジーエム バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 免疫刺激性多量体型結合分子
WO2021031998A1 (en) * 2019-08-16 2021-02-25 Lan Keng Li Recombinant polypeptides and uses thereof
CN116574183A (zh) * 2019-08-22 2023-08-11 盛禾(中国)生物制药有限公司 多功能抗体、其制备及其用途
TW202122420A (zh) 2019-08-30 2021-06-16 美商艾吉納斯公司 抗ｃｄ９６抗體及其使用方法
CN114502590A (zh) 2019-09-18 2022-05-13 诺华股份有限公司 Entpd2抗体、组合疗法、以及使用这些抗体和组合疗法的方法
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
US11781138B2 (en) 2019-10-14 2023-10-10 Aro Biotherapeutics Company FN3 domain-siRNA conjugates and uses thereof
WO2021076543A1 (en) 2019-10-14 2021-04-22 Aro Biotherapeutics Company Epcam binding fibronectin type iii domains
CN119119240A (zh) 2019-10-14 2024-12-13 Aro生物疗法公司 结合cd71的纤维粘连蛋白iii型结构域
CN112679615B (zh) * 2019-10-17 2023-09-22 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 一种融合蛋白
BR112022007179A2 (pt) 2019-10-21 2022-08-23 Novartis Ag Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos
CN114786679A (zh) 2019-10-21 2022-07-22 诺华股份有限公司 具有维奈托克和tim-3抑制剂的组合疗法
US20230000864A1 (en) 2019-11-22 2023-01-05 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Solid dose pharmaceutical composition
KR20220104208A (ko) 2019-11-22 2022-07-26 세라밴스 바이오파마 알앤디 아이피, 엘엘씨 Alk5 억제제로서 치환된 1,5-나프티리딘 또는 퀴놀린
BR112022011902A2 (pt) 2019-12-20 2022-09-06 Novartis Ag Terapias de combinação
BR112022012310A2 (pt) 2020-01-17 2022-09-06 Novartis Ag Combinação compreendendo um inibidor de tim-3 e um agente hipometilante para uso no tratamento de síndrome mielodisplásica ou leucemia mielomonocítica crônica
WO2021152005A1 (en) 2020-01-28 2021-08-05 Universite De Strasbourg Antisense oligonucleotide targeting linc00518 for treating melanoma
TW202204339A (zh) 2020-03-31 2022-02-01 美商施萬生物製藥研發 Ip有限責任公司 經取代的嘧啶及使用方法
MX2021015024A (es) 2020-04-28 2022-01-18 Univ Rockefeller Anticuerpos anti-sars-cov-2 ampliamente neutralizantes y métodos de uso de los mismos.
EP4165041A1 (en) 2020-06-10 2023-04-19 Theravance Biopharma R&D IP, LLC Naphthyridine derivatives useful as alk5 inhibitors
TW202214857A (zh) 2020-06-19 2022-04-16 法商昂席歐公司 新型結合核酸分子及其用途
KR20230027056A (ko) 2020-06-23 2023-02-27 노파르티스 아게 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체를 포함하는 투약 요법
BR112022025632A2 (pt) * 2020-06-23 2023-01-17 Kadmon Corp Llc Anticorpos anti-pd-1 e proteínas de fusão
KR20230035576A (ko) 2020-07-07 2023-03-14 비온테크 에스이 Hpv 양성 암 치료용 rna
JP7819176B2 (ja) 2020-08-03 2026-02-24 ノバルティス アーゲー ヘテロアリール置換３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン誘導体及びその使用
EP4194468A4 (en) * 2020-08-07 2025-07-16 Bio Thera Solutions Ltd ANTI PD-L1 ANTIBODY AND ITS USE
CN112898436A (zh) * 2020-10-23 2021-06-04 广州医科大学附属肿瘤医院 一种具有靶向功能的鼠pd1和鼠il-15基因融合蛋白的表达及其应用
EP4232068A1 (en) 2020-10-26 2023-08-30 Cytune Pharma IL-2/IL-15RBetaGamma AGONIST FOR TREATING NON-MELANOMA SKIN CANCER
WO2022090203A1 (en) 2020-10-26 2022-05-05 Cytune Pharma IL-2/IL-15Rβү AGONIST FOR TREATING SQUAMOUS CELL CARCINOMA
CA3199095A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
EP4262871A4 (en) * 2020-12-18 2025-04-02 Bioardis LLC FAP-BINDING MOLECULES AND THEIR USES
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
US20240141060A1 (en) 2021-01-29 2024-05-02 Novartis Ag Dosage regimes for anti-cd73 and anti-entpd2 antibodies and uses thereof
TW202246357A (zh) * 2021-03-09 2022-12-01 加拿大商康爾義明生物製藥公司 雙功能同源二聚體抗PD-1及IL-15/IL-15Rα融合蛋白及其用途
US20240310266A1 (en) 2021-03-18 2024-09-19 Novartis Ag Biomarkers for cancer and methods of use thereof
TW202304506A (zh) 2021-03-25 2023-02-01 日商安斯泰來製藥公司 涉及抗claudin 18.2抗體的組合治療以治療癌症
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
TW202309022A (zh) 2021-04-13 2023-03-01 美商努法倫特公司 用於治療具egfr突變之癌症之胺基取代雜環
EP4323008A4 (en) 2021-04-14 2026-02-25 Aro Biotherapeutics Company FN3-ARNSI DOMAIN CONJUGATES AND THEIR USES
CA3214552A1 (en) 2021-04-14 2022-10-20 Russell C. Addis Cd71 binding fibronectin type iii domains
TW202313682A (zh) 2021-05-18 2023-04-01 英商凱麥博有限公司 抗icos抗體之用途
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
WO2022251359A1 (en) 2021-05-26 2022-12-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Bicyclic inhibitors of alk5 and methods of use
CA3220027A1 (en) * 2021-05-28 2022-12-01 Amato J. Giaccia Bispecific fc fusion proteins with spd-1 and il-15
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
CA3225254A1 (en) 2021-07-13 2023-01-19 BioNTech SE Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer
WO2023051926A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 BioNTech SE Treatment involving non-immunogenic rna for antigen vaccination and pd-1 axis binding antagonists
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023083439A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 BioNTech SE Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment
TWI857396B (zh) * 2021-11-18 2024-10-01 大陸商山東先聲生物製藥有限公司 Il-15突變體融合蛋白藥物組合物
CA3238965A1 (en) * 2021-12-01 2023-06-08 Kadmon Corporation, Llc B7-h4 antibodies and anti-b7-h4 antibody/il-15 fusion proteins
KR20240133795A (ko) 2021-12-16 2024-09-04 발레리오 테라퓨틱스 신규한 컨쥬게이티드 핵산 분자 및 이의 용도
EP4493189A1 (en) 2022-03-14 2025-01-22 Laekna Limited Combination treatment for cancer
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2023217067A1 (zh) * 2022-05-09 2023-11-16 上海先博生物科技有限公司 工程化免疫效应细胞及其与CBL-b抑制剂联用的应用
WO2023222854A1 (en) 2022-05-18 2023-11-23 Kymab Limited Uses of anti-icos antibodies
WO2024017362A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 上海先博生物科技有限公司 靶向gprc5d和/或bcma的嵌合抗原受体及其应用
CN120302979A (zh) 2022-12-01 2025-07-11 生物技术公司 针对CD40和CD137的多特异性抗体与抗PD1 Ab和化学治疗的组合治疗
JP2026501506A (ja) 2022-12-14 2026-01-16 アステラス・ファーマ・ヨーロッパ・ベスローデン・フェンノートシャップ Ｃｌｄｎ１８．２及びｃｄ３に結合する二重特異性結合剤並びに免疫チェックポイント阻害剤を含む併用療法
CN120813375A (zh) 2023-01-30 2025-10-17 凯玛布有限公司 抗体
EP4694894A1 (en) 2023-04-12 2026-02-18 Agenus Inc. Methods of treating cancer using an anti-ctla4 antibody and an enpp1 inhibitor
EP4450489A1 (en) 2023-04-18 2024-10-23 Synaffix B.V. Stable 4-isoxazoline conjugates
WO2024218164A1 (en) 2023-04-17 2024-10-24 Synaffix B.V. Stable 4-isoxazoline conjugates
EP4450093A1 (en) 2023-04-17 2024-10-23 Synaffix B.V. Cleavable immune cell engagers
WO2025056180A1 (en) 2023-09-15 2025-03-20 BioNTech SE Methods of treatment using agents binding to epcam and cd137 in combination with pd-1 axis binding antagonists
WO2025120866A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
TW202541837A (zh) 2023-12-08 2025-11-01 日商安斯泰來製藥公司 含有結合至cldn18.2和cd3之雙特異性結合劑和穩定或增加cldn18.2表現之藥劑之組合療法
WO2026033885A1 (en) 2024-08-08 2026-02-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
WO2025120867A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and anti-vegfr2 antibodies

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL354286A1 (en) 1999-08-23 2003-12-29 Dana-Farber Cancer Institutedana-Farber Cancer Institute Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
JP5004390B2 (ja) 1999-08-23 2012-08-22 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 新規ｂ７−４分子およびその用途
DK1234031T3 (en) 1999-11-30 2017-07-03 Mayo Foundation B7-H1, AN UNKNOWN IMMUNE REGULATORY MOLECULE
US6803192B1 (en) 1999-11-30 2004-10-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, a novel immunoregulatory molecule
AU2003281200A1 (en) 2002-07-03 2004-01-23 Tasuku Honjo Immunopotentiating compositions
EP3263581B2 (en) 2005-05-17 2025-07-09 University of Connecticut Compositions and methods for immunomodulation in an organism
PT1907424E (pt) 2005-07-01 2015-10-09 Squibb & Sons Llc Anticorpos monoclonais humanos para o ligando 1 de morte programada (pd-l1)
EP1777294A1 (en) * 2005-10-20 2007-04-25 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) IL-15Ralpha sushi domain as a selective and potent enhancer of IL-15 action through IL-15Rbeta/gamma, and hyperagonist (IL15Ralpha sushi -IL15) fusion proteins
KR101523391B1 (ko) * 2006-12-27 2015-05-27 에모리 유니버시티 감염 및 종양 치료를 위한 조성물 및 방법
BR122017025062B8 (pt) * 2007-06-18 2021-07-27 Merck Sharp & Dohme anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo para o receptor de morte programada humano pd-1, polinucleotídeo e composição compreendendo o referido anticorpo ou fragmento
EP2604279A1 (en) 2008-03-27 2013-06-19 ZymoGenetics, Inc. Compositions and methods for inhibiting PDGFRBETA and VEGF-A
EP3255060A1 (en) 2008-12-09 2017-12-13 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
ES2598005T3 (es) * 2009-08-14 2017-01-24 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Uso de IL-15 para aumentar la salida del timo y para tratar la linfopenia
CN102753574B (zh) * 2009-12-11 2015-05-20 西马生物医学计划公司 用于免疫治疗和抗肿瘤治疗的缀合物和组合物
US8507222B2 (en) * 2010-09-21 2013-08-13 Altor Bioscience Corporation Multimeric IL-15 soluble fusion molecules and methods of making and using same
EA201892619A1 (ru) * 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
EP2537933A1 (en) 2011-06-24 2012-12-26 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) An IL-15 and IL-15Ralpha sushi domain based immunocytokines
KR101764096B1 (ko) * 2011-11-28 2017-08-02 메르크 파텐트 게엠베하 항-ｐｄ-ｌ1 항체 및 그의 용도
KR20220084444A (ko) 2012-05-31 2022-06-21 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 Pd-l1에 결합하는 항원 결합 단백질
RS59756B1 (sr) * 2013-08-08 2020-02-28 Cytune Pharma Kombinovana farmaceutska kompozicija
PL3094351T3 (pl) * 2014-01-15 2022-06-27 Kadmon Corporation, Llc Środki immunomodulujące
US10865230B2 (en) * 2016-05-27 2020-12-15 Altor Bioscience, Llc Construction and characterization of multimeric IL-15-based molecules with CD3 binding domains

Also Published As

Publication number Publication date
EP3094351A4 (en) 2017-06-28
WO2015109124A2 (en) 2015-07-23
CN113637692A (zh) 2021-11-12
LT3094351T (lt) 2022-04-11
CA3193936A1 (en) 2015-07-23
HUE057917T2 (hu) 2022-06-28
EP3094351B1 (en) 2021-12-29
CN105263521B (zh) 2021-06-29
US20210022773A1 (en) 2021-01-28
CN105263521A (zh) 2016-01-20
PT3094351T (pt) 2022-02-22
JP6983918B2 (ja) 2021-12-17
DK3094351T3 (da) 2022-02-21
CA2936543A1 (en) 2015-07-23
CA2936543C (en) 2025-11-04
US20240059775A9 (en) 2024-02-22
JP2023099601A (ja) 2023-07-13
WO2015109124A3 (en) 2015-09-24
CN113603788B (zh) 2025-05-09
SI3094351T1 (sl) 2022-05-31
CN113603788A (zh) 2021-11-05
EP3094351B9 (en) 2022-04-13
ES2908264T3 (es) 2022-04-28
EP3094351A2 (en) 2016-11-23
PL3094351T3 (pl) 2022-06-27
JP2025172792A (ja) 2025-11-26
JP2020058389A (ja) 2020-04-16
HRP20220214T1 (hr) 2022-04-29
EP4079321A1 (en) 2022-10-26
RS62989B9 (sr) 2022-07-29
JP7279142B2 (ja) 2023-05-22
ES2908264T9 (es) 2022-07-21
JP2022019807A (ja) 2022-01-27
US20160340429A1 (en) 2016-11-24
US10407502B2 (en) 2019-09-10
JP2017509319A (ja) 2017-04-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7279142B2 (ja) 免疫調節剤
US20180244779A1 (en) Immunomodulatory agents
US20210047426A1 (en) Bi-Specific Monovalent Diabodies That are Capable of Binding CD123 and CD3, and Uses Thereof
JP2023145487A (ja) 抗ｔｉｍ－３抗体のための投与レジメンおよびその使用
EP3411068A2 (en) Bispecific binding proteins for pd-l1 and kdr
CN109160950B (zh) 人抗vegfr-2/kdr抗体
US20260048084A1 (en) Methods of administering natural killer cells comprising an anti-human epidermal growth factor receptor 2 (her2) chimeric antigen receptor (car)
CN115768467A (zh) 用于治疗癌症和感染的针对NKp46的抗体及其构建体
HK40078022A (en) Immunomodulatory agents
EP4388017A1 (en) Compositions and methods for anti-virus chimeric antigen receptor
HK1230957B (en) Immunomodulatory agents
JP2017531434A (ja) ヒト 抗ｖｅｇｆｒ−２／ｋｄｒ 抗体ｓ
HK40110611A (zh) 癌症的组合治疗中针对cd40和cd137的多特异性结合剂