RS63205B1 - 18f obeleženo jedinjenje za dijagnostiku karcinoma prostate i njegova upotreba - Google Patents

18f obeleženo jedinjenje za dijagnostiku karcinoma prostate i njegova upotreba

Info

Publication number
RS63205B1
RS63205B1 RS20220436A RSP20220436A RS63205B1 RS 63205 B1 RS63205 B1 RS 63205B1 RS 20220436 A RS20220436 A RS 20220436A RS P20220436 A RSP20220436 A RS P20220436A RS 63205 B1 RS63205 B1 RS 63205B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
added
dissolved
minutes
nmr
Prior art date
Application number
RS20220436A
Other languages
English (en)
Inventor
Dae Yoon Chi
Byoung Se Lee
So Young Chu
Min Hwan Kim
Woon Jung Jung
Hyeon Jin Jeong
Kyo Chul Lee
Yong Jin Lee
Ji Ae Park
Mi Hyun Kim
Ran Ji Yoo
Sang Moo Lim
Original Assignee
Futurechem Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Futurechem Co Ltd filed Critical Futurechem Co Ltd
Priority claimed from PCT/KR2018/006869 external-priority patent/WO2018236115A1/ko
Publication of RS63205B1 publication Critical patent/RS63205B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0402—Organic compounds carboxylic acid carriers, fatty acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/04—1,2,3-Triazoles; Hydrogenated 1,2,3-triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/085—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier conjugated systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/041—Heterocyclic compounds
    • A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
    • A61K51/0453—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0474—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0497—Organic compounds conjugates with a carrier being an organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Magnetic Resonance Imaging Apparatus (AREA)
  • Nuclear Medicine (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

Opis
STANJE TEHNIKE
1. Oblast pronalaska
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje obeleženo sa<18>F u dijagnostikovanju kancera prostate i na njegovu primenu.
2. Opis srodnog stanja tehnike
[0002] Među kancerima koji se javljaju kod muškaraca, kancer prostate je vodeći uzročnik smrti u Sjedinjenim Državama, peti u Koreji i drugi u svetu. Kancer prostate se najčešće razvija kod ljudi starijih od 50 godina, ali broj pacijenata značajno raste sa starošću. Najčešće ima sporu progresiju, ali kada se razvije do malignih metastaza, izuzetno ga je teško lečiti. Metastaziranje najčešće počinje od limfnih nodusa, karličnih kostiju, kičmenog stuba i bešike oko kancera prostate i postepeno se širi kroz telo.
[0003] Test na prostata-specifičan antigen (PSA test) i digitalno ispitivanje rektuma se danas primarno koriste za dijagnostikovanje kancera prostate i, takođe se koriste transrektalni ultrazvučni pregled, CT, MRI i imidžing skeniranje celokupnog koštanog sistema u telu (WBBS). Za dijagnostikovanje kancera prostate takođe se izvode i biopsije. Međutim, u većini slučajeva je dijagnostička tačnost niska i otežano je rano dijagnostikovanje bolesti. Sem toga, teško je odrediti metastaze i teško je postaviti razliku između benignih bolesti, kao što su hiperplazija prostate i prostatitis.
[0004] PET (pozitron emisiona tomografija) je imidžing postupak namenjen ljudima, koji koristi molekularne probe koje ciljaju metabolizam ili protein specifičan za određenu bolest. Ovaj postupak ima prednosti za rano dijagnostikovanje, ispitivanje lečenja i potvrdu metastaziranja/rekurencije putem posmatranja biohemijskih promena u ranom stadijumu bolesti, korišćenjem radioizotopa sa kratkim polu-životom.
[0005] [<18>F] FDG je reprezentativni PET radiofarmaceutik koji se koristi za dijagnostikovanje kancera zbog toga što može da osmatra uvećan metabolizam glukoze kancerskih ćelija. Jedan primer takve tehnike je izložen u Patentnoj Referenci 1 ispod. Ipak, u slučaju kancera prostate, unos [<18>F] FDG nije visok tako da ga je teško koristiti u dijagnostikovanju kancera prostate. Sem toga, jedinjenja, kao što su [<18>F] fluoroholin, [<11>C] acetat i [<18>F] FACBC imaju primenu u dijagnostikovanju kancera prostate. Međutim, kada se ona koriste, tačnost dijagnostikovanja nije velika i teško je zapaziti metastaze kancera prostate malih veličina.
[0006] Membranski antigen specifičan za prostatu (PSMA) je protein koji se specifično prekomerno ekspresuje u kanceru prostate i, poznato je da se za njega veoma selektivno vezuje dipeptidno jedinjenje na bazi ureje, glutaminska kiselina-urea-lizin (GUL). Razvijeno je nekoliko jedinjenja obeleženih sa radioizotopima na bazi GUL kao dijagnostička sredstva specifična za kancer prostate.
[0007] Među njima,<18>F-DCFPyL je<18>F izotop-obeleženi GUL-jedinjenje i ispitano je kao jedno od najboljih PET obeleživača za dijagnozu kancera prostate. Navedeni<18>F-DCFPyL ima svojstva relativno niske lipofilnosti u poređenju sa prethodno razvijenim jedinjenjem (<18>F-DCFBzL), tako da ima nisko svojstvo ne-specifičnog vezivanja in vivo i brzog uklanjanja preko bubrega.
[0008] Nedavno, jedinjenje nazvano<18>F-YC88 je dalje razvijeno. To je jedinjenje koje ima svojstvo niže lipofilnosti u odnosu na<18>F-DCFPyL jedinjenje, što se karakteriše daljim smanjivanjem ne-specifičnog vezivanja i brzo se uklanja. Međutim, ovo jedinjenje ima problem da je vezujuća sila za PSMA protein smanjena za oko 10 puta u poređenju sa<18>F-DCFPyL, kao i da signal kancera prostate značajno opada tokom vremena.
[OBAVEŠTENJE O PRETHODNOM STANJU TEHNIKE]
[0009] Korejska Patentna Publikacija br. 10-2016-0085769, Korejska Patentna Publikacija br.10-2011-0038725
KRATKO IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA
[0010] Predmet ovog pronalaska je obezbeđivanje<18>F-obeleženog jedinjenja kojim se može osigurati tačno dijagnostikovanje kancera prostate, kao i njegova primena.
[0011] Predmet ovog pronalaska nije ograničen onim, koji je naveden prethodno. Predmet ovog pronalaska biće jasniji iz Opisa koji sledi i, biće realizovan načinima opisanim u Patentnim zahtevima i njihovim kombinacijama.
[0012] Jedinjenje prema ostvarenju ovog pronalaska je predstavljeno sledećom formulom 1:
[Formula 1]
[0013] U formuli 1, Y je -CH2-; Z je -CH2- (CH2-O-CH2) n-CH2-, pri čemu je n ceo broj od 0 do 2; R je vodonik, (piridin-4-il)metil, ili 4-piridinil; i F može biti<18>F ili<19>F.
[0014] F je poželjno<18>F.
[0015] Jedinjenje prema drugom ostvarenju ovog pronalaska je predstavljeno sledećom formulom 11:
[0016] U formuli 11, Y je -(CH2)-; i R je vodonik, (piridin-4-il)metil, ili 4-piridinil.
[0017] Farmaceutska kompozicija za primenu u lečenju ili dijagnostikovanju kancera prostate prema drugom ostvarenju ovog pronalaska, sadrži jedinjenje formule 1 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0018] Radiofarmaceutik za primenu u imidžing dijagnostikovanju kancera prostate prema drugom ostvarenju ovog pronalaska, uključuje jedinjenje formule 1 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0019] Imidžing dijagnoza može uključiti imidžing magnetne rezonance (MRI) ili pozitron emisionu tomografiju (PET).
PREDNOST EFEKTA
[0020] Prema ostvarenju ovog pronalaska, jedinjenje formule 1 za koje se vezuje<18>F ima visoku hidrofilnost, odlična in vivo farmakokinetička svojstva i nisko ne-specifično vezivanje, tako da se za kratko vreme mogu dobiti jasni imidžing rezultati pozitron emisione tomografije (PET).
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0021]
Slike 1A i 1B su dijagrami koji ilustruju rezultate Radio-TLC, prema koraku izrade jedinjenja [<18>F] 1-6.
Slika 2 je dijagram koji ilustruje rezultate HPLC razdvajanja prema koraku izrade jedinjenja [<18>F] 1-6.
Slika 3 je dijagram koji ilustruje rezultate MicroPET/CT kancera prostate kod miša.
Slike 4A do 4C su grafici koji ilustruju odnos unosa u mišić, jetru i slezinu u poređenju sa tumorom.
Slike 5A i 5B su grafici koji ilustruju biodistribuciju po organima u toku vremena.
OPIS POŽELJNIH OSTVARENJA
[0022] Prethodni predmeti, drugi predmeti, karakteristike i prednosti ovog pronalaska se lako shvataju kroz sledeće poželjne primere, koji su povezani sa pridodatim crtežima.
[0023] Ovde i u nastavku, jedinjenje predstavljeno formulom 1 ovog pronalaska je detaljno opisano.
[0024] Ovaj pronalazak uključuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom 1:
[0025] U formuli 1,
Y je -CH2-;
Z je -CH2-(CH2-O-CH2)n-CH2-, gde je n ceo broj od 0 do 2;
R je vodonik, (piridin-4-il)metil, ili 4-piridinil; i
F može biti<18>F ili<19>F.
[0026] Preciznije,
F može biti<18>F.
[0027] Ligandi formule 1 ovog pronalaska mogu se dodatno vezati za PSMA proteine putem lipofilnih veza jer mogu biti strukturno vezani za aromatične aril grupe. Sem toga, triazol grupa u bočnom lancu za koji je<18>F vezan, može povećati polarnost jedinjenja za smanjivanje ne-specifičnog vezivanja in vivo.
[0028] Ovakvo jedinjenje koje je obeleženo sa fluorom-18 ovog pronalaska, može imati odličan kapacitet vezivanja za PSMA proteine i, istovremeno, odlična farmakokinetska svojstva.
[0029] Ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju za lečenje ili dijagnostikovanje kancera prostate, koja sadrži jedinjenje formule 1 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kao aktivan sastojak.
[0030] Ovaj pronalazak, isto tako, obezbeđuje dijagnostički radiofarmak za primenu subjektu kome je potrebno terapeutsko praćenje ili imidžing dijagnostikovanje kancera prostate. Ovakav radiofarmak za imidžing dijagnostikovanje može uključiti jedinjenje formule 1 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kao aktivan sastojak. Ovde, imidžing dijagnostikovanje obuhvata imidžing magnetne rezonance (MRI) ili pozitron emisionu tomografiju (PET), a poželjno, može se sprovesti korišćenjem pozitron emisione tomografije (PET).
[0031] U jedinjenju, koje je prethodno opisano, radioligandi se ubacuju u tkiva kancera prostate koja ekspresuju PSMA i mogu da se pomere i u druge organe, tako da se PET imidžing rezultati mogu jasno dobiti i i kratkom vremenu.
[0032] Ovde i u nastavku, jedinjenje predstavljeno formulom 11 ovog pronalaska je detaljno opisano.
[0033] Ovaj pronalazak uključuje jedinjenje predstavljeno sledećom formulom 11:
[Formula 11]
[0034] U formuli 11,
Y je -(CH2)-; i
R je vodonik, (piridin-4-il)metil, ili 4-piridinil.
Primer 1. Izrada N-propazil aminskih derivata
[0035] Šematski proces reakcija ovog pronalaska je prikazan u reakcionoj formuli 1, u nastavku.
[Reakciona formula 1]
Korak 1 Korak 2 Korak 3
Primer 1-1. Izrada jedinjenja 3 (korak 1)
[0036] 4-Aminopiridin (2, 9.0g, 96mmol) se rastvori u dihlorometanu (400mL), u šta se doda (Boc)2O (25.0g, 110mmol) na 0°C. U to se polako doda trietilamin (20.0mL, 140mmol) i zatim, meša se na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. U to se doda voda i organsko jedinjenje se ekstrahuje korišćenjem dihlorometana tri puta. Sakupljeni organski rastvarač se osuši preko anhidrovanog natrijum sulfata, ukoncentriše pod sniženim pritiskom i prečisti pomoću hromatografije na koloni (7% metanol/dihlorometan). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 3 u vidu bele čvrste materije (18.0g, 97%).
[0037]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.53 (s, 9H), 7.29 (brs, 1H), 7.34 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 2H), 8.44 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 28.2, 81.6, 112.3, 145.8, 150.4, 152.0; MS (ESI) m/z 193 [M-H]-
Primer 1-2. Izrada jedinjenja 4 (korak 2)
[0038] Jedinjenje 3 (18.0g, 93mmol), sintetisano prethodno u koraku 1, rastvori se u dimetilformamidu (DMF, 400mL), u šta se doda natrijum hidrid (7.4g, 900mmol) na 0°C. U to se polako doda propazil bromid i zatim, meša se na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. U sve to se doda metanol (50ml) na 0°C, a zatim se meša u toku 30 minuta. U to se doda voda i organsko jedinjenje se ekstrahuje korišćenjem etil acetata, tri puta. Sakupljeni organski rastvarač se tri puta ispere sa vodenim rastvorom amonijum hlorida, osuši preko anhidrovanog natrijum sulfata, ukoncentriše pod sniženim pritiskom i prečisti pomoću hromatografije na koloni (5% metanol/dihlorometan). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 4 u vidu čvrste materije svetlo žute boje (13.4g, 62%).
[0039]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ1.53 (s, 9H), 2.31 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.54 (m, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ28.1, 38.5, 72.4, 79.1, 82.7, 118.0, 149.2, 150.2, 152.6; MS (ESI) m/z 233 [M+H]<+>
Primer 1-3. Izrada jedinjenja 5 (korak 3)
[0040] Dioksan (75mL) koji sadrži 4N HCl se doda jedinjenju 4 (13.0g, 56mmol), sintetisanom u prethodnom koraku 2 i zatim, meša se na sobnoj temperaturi u toku 6 sati. U to se doda 2N vodeni rastvor natrijum hidroksida (500ml) i organsko jedinjenje se ekstrahuje korišćenjem dihlorometana tri puta. Sakupljeni organski rastvarač je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, ukoncentrisan pod sniženim pritiskom i prečišćen pomoću hromatografije na koloni (60% etil acetat/dihlorometan, NH silika gel). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 5 u vidu čvrste materije svetlo žute boje (6.8g, 92%).
[0041]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.27 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 3.97 (dd, J = 6.0, 2.4 Hz, 2H), 4.66 (brs, 1H), 6.53 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 2H), 8.26 (dd, J = 4.4, 1.6Hz, 2H) ;
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 32.4, 72.0, 79.4, 108.1, 150.1, 152.3; MS (ESI) m/z 133 [M+H]<+>
Primer 2. Izrada jedinjenja 8 (N-propazil, N-(piridin-4-il metil)amin)
[0042] 4-Piridinkarboksialdehid (7, 0.5mL, 4.7mmol) se rastvori u dihlorometanu (10mL), u šta se doda propazil amin (0.31mL, 5.6mmol). U to se polako doda natrijum triacetoksiborohidrid (1.5g, 7.05mmol), zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. U to se doda voda i organsko jedinjenje se ekstrahuje korišćenjem dihlorometana tri puta. Sakupljeni organski rastvarač je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata, ukoncentrisan pod sniženim pritiskom i prečišćen pomoću hromatografije na koloni (2% metanol/dihlorometan). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 8 u vidu tečnosti svetlo crvene boje (315mg, 46%).
[0043]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.28 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.93 (s, 2H), 4.24 (brs, 1H), 7.32 (dd, J = 5.2, 0.8 Hz, 2H), 8.57 (dd, J = 5.2, 0.8 Hz, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 37.4, 50.8, 72.1, 81.3, 123.3, 148.8, 149.4; MS (ESI) m/z 147 [M+H]<+>
[0044] Šematski prikaz reakcionog procesa ovog pronalaska je dat u Reakcionoj formuli 2, u nastavku.
[Reakciona formula 2]
Primer 3. Izrada N-propazil amin-urea-GUL jedinjenja
[0045] Šematski prikaz reakcionog procesa ovog pronalaska je dat u Reakcionoj formuli 3, u nastavku.
[Reakciona formula 3]
(triphosgene – trifozgen, (pyridine-4-il)methyl – (piridin-4-il)metil, prim. prev.)
Primer 3-1. Izrada jedinjenja 10-1
[0046] Trifozgen (107mg, 0.36mmol) se rastvori u acetonitrilu (5.0mL), u šta se polako doda glutamat-urea-lizin (9, 500mg, 1.03mmol) rastvoren u acetonitrilu (10mL) na 0°C.
U to se doda trietilamin (0.50mL, 3.61mmol) i zatim, meša se u toku 30 minuta. U to se doda propazil amin (0.072mL, 1.13mmol) na 0°C. A, 15 minuta kasnije, smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 sata i zatim se ukoncentriše pod sniženim pritiskom. U to se doda voda i organsko jedinjenje se ekstrahuje tri puta korišćenjem etil acetata. Sakupljeni organski rastvarač se osuši preko anhidrovanog natrijum sulfata, ukoncentriše pod sniženim pritiskom i prečisti pomoću hromatografije na koloni (2% metanol/dihlorometan). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 10-1 u vidu bele čvrste materije (492mg, 84%).
[0047]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.25-1.30 (m, 2H), 1.44 (s, 18H), 1.48 (s, 9H), 1.51-1.60 (m, 3H), 1.67-1.76 (m, 1H), 1.80-1.90 (m, 1H), 2.05-2.13 (m, 1H), 2.18 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 2.29-2.40 (m, 2H), 3.06-3.12 (m, 1H), 3.30-3.36 (m, 1H), 3.95-4.06 (m, 2H), 4.08-4.14 (m, 1H), 4.36 (sext, J = 4.4 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.69 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.89 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 6.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H);
[0048]<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 23.4, 27.7, 27.8, 27.9, 28.0, 29.6, 29.7, 31.7, 32.1, 39.4, 53.3, 54.2, 70.5, 80.7, 81.4, 81.5, 83.1, 158.0, 158.2, 172.0, 172.3, 174.6; MS (ESI) m/z 569 [M+H]<+>
Primer 3-2. Izrada jedinjenja 10-2
[0049] Jedinjenje 10-2 je dobijeno na isti način kako je opisano u Primeru 3-1, u vidu čvrste materije svetlo žute boje (270mg, 66%), izuzev što se koristilo: trifozgen (64mg, 0.211mmol) rastvoren u acetonitrilu (3.0mL), glutamat-urea-lizin (9, 300mg, 0.62mmol) rastvoren u acetonitrilu (6mL), trietilamin (0.302mL, 2.17mmol) i jedinjenje 8 (100mg, 0.68mmol), sintetisano u Primeru 2.
[0050]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.22-1.30 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.45 (s, 18H), 1.48-1.54 (m, 2H), 1.59-1.64 (m, 1H), 1.71-1.77 (m, 1H), 1.79-1.88 (m, 2H), 2.03-2.09 (m, 1H), 2.27-2.32 (m, 1H), 2.35 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 3.24 (sept, J = 6.2 Hz, 2H), 4.07 (t, J = 2.4 Hz, 2H), 4.27-4.35 (m, 2H), 4.60 (dd, J = 20.4, 17.2 Hz, 2H), 4.92 (s, 1H), 5.24 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 8.60 (d, J = 4.8 Hz, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 22.3, 27.9, 28.0, 28.1, 28.4, 29.4, 31.6, 32.4, 36.8, 40.7, 49.6, 53.0, 53.3, 73.4, 78.8, 80.5, 81.7, 82.0, 122.3, 147.0, 150.2, 157.0, 157.7, 172.3, 172.4, 172.5; MS (ESI) m/z 660 [M+H]<+>
Primer 3-3. Izrada jedinjenja 10-3
[0051] Jedinjenje 5 (200mg, 1.51mmol), sintetisano u Primeru 1-3 se rastvori u acetonitrilu (5.0 mL), u šta se polako doda 4-nitrofenil hloroformijat (305mg, 1.51mmol) rastvoren u acetonitrilu (5.0 mL) na 0°C. U to se doda trietil amin (0.50mL, 3.61mmol) i zatim, meša se u toku 30 minuta. Polako se u to doda na 0°C glutamat-urea-lizin (9, 886mg, 1.82mmol) rastvoren u acetonitrilu (10mL) i, zatim se, takođe u to doda diizopropilamin (0.324mL, 1.82mmol). 15 minuta kasnije, smeša se meša na 100°C u toku 12 sati. Posle hlađenja smeše do sobne temperature, u to se doda voda i organsko jedinjenje se ekstrahuje korišćenjem etil acetata tri puta. Sakupljeni organski rastvarač se osuši preko anhidrovanog natrijum sulfata, ukoncentriše se pod sniženim pritiskom i prečisti pomoću hromatografije na koloni (5% metanol/dihlorometan). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 10-3 u vidu bezbojne tečnosti (836mg, 86%).
[0052]<1>H NM(400 MHz, CDCl3) δ 1.27-1.37 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.45 (s, 18H), 1.50-1.55 (m, 2H), 1.59-1.65 (m, 1H), 1.72-1.88 (m, 2H), 2.01-2.10 (m, 1H), 2.27-2.34 (m, 1H), 2.35 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 2.16 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 4.25-4.34 (m, 2H), 4.50 (ddd, J = 25.2, 18.0, 2.4 Hz, 2H), 5.21 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.50 (s, 1H), 7.32 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 2H), 8.59 (d, J = 6.4 Hz, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 22.4, 27.9, 28.0, 28.1, 28.3, 29.4, 31.6, 32.4, 38.2, 40.7, 52.9, 53.3, 72.9, 79.3, 80.5, 81.6, 82.0, 119.5, 149.6, 151.2, 155.3, 157.1, 172.3, 172.4, 172.5; MS (ESI) m/z 646 [M+H]<+>
[0053] Šematski prikaz reakcionog procesa ovog pronalaska je dat u Reakcionoj formuli 4, u nastavku.
[Reakciona formula 4]
Primer 4. Uklanjanje zaštitne grupe sa jedinjenja 10
[0054] Šematski prikaz reakcionog procesa ovog pronalaska je dat u Reakcionoj formuli 5, u nastavku.
[Reakciona formula 5]
((pyridine-4-yl)methyl – (piridin-4-il)metil, pyridinyl – piridinil, prim. prev.)
Primer 4-1. Izrada jedinjenja 11-1
[0055] Jedinjenje 10-1 (450mg, 0.79mmol), sintetisano u Primeru 3-1, rastvori se u 60% trifluorosirćetnoj kiselini/dihlorometanu (2mL), zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 4 sata. Reaktanti se ukoncentrišu pod sniženim pritiskom i prečiste pomoću tečne hromatografije visokih performansi (HPLC). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 11-1 u vidu bele čvrste materije (280mg, 88%).
[0056]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.24-1.29 (m, 2H), 1.32-1.39 (m, 2H), 1.46-1.55 (m, 1H), 1.60-1.67 (m, 1H), 1.68-1.77 (m, 1H), 1.84-1.92 (m, 1H), 2.24 (td, J = 7.8, 2.6 Hz, 2H), 2.96 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 3.01 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 3.77 (dd, J = 5.6, 2.4, 2H), 4.05 (sext, J = 7.6 Hz, 2H), 5.98 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 6.13 (t, J = 5.6, 1H), 6.31 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 12.43 (brs, 3H);
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 21.4, 25.6, 27.8, 28.5, 29.3, 29.9, 38.7, 52.0, 52.6, 70.5, 80.4, 118.2, 158.3, 159.2, 175.6, 176.4; MS (ESI) m/z 399 [M-H]-
Primer 4-2. Izrada jedinjenja 11-2
[0057] Jedinjenje 10-2 (460mg, 0.70mmol), sintetisano u Primeru 3-2, rastvori se u 60% trifluorosirćetnoj kiselini/dihlorometanu (2mL), zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 4 sata. Reaktanti se ukoncentrišu pod sniženim pritiskom i prečiste pomoću tečne hromatografije visokih performansi (HPLC). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 11-2 u vidu bele čvrste materije (289mg, 84%).
[0058]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.10-1.18 (m, 2H), 1.29-1.36 (m, 2H), 1.44-1.52 (m, 1H), 1.56-1.63 (m, 1H), 1.71-1.80 (m, 1H), 1.91-1.99 (m, 1H), 2.28 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.56 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 3.03 (td, J = 6.6, 2.0 Hz, 2H), 3.89 (dd, J = 8.6, 5.0 Hz, 1H), 3.98 (dd, J = 8.6, 5.0 Hz, 1H), 4.06 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.72 (s, 2H), 7.78 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 8.55 (d, J = 4.8 Hz, 2H) ;
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 22.3, 27.3, 28.7, 30.6, 31.3, 37.7, 40.2, 50.9, 53.9, 54.3, 74.0, 78.6, 124.8, 140.9, 158.7, 158.8, 159.2, 160.3, 178.0, 178.6; MS (ESI) m/z 492 [M+H]<+>
Primer 4-3. Izrada jedinjenja 11-3
[0059] Jedinjenje 10-3 (650mg, 1.01mmol), sintetisano u Primeru 3-3 rastvori se u 60% trifluorosirćetnoj kiselini/dihlorometanu (3mL), zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 4 sata. Reaktanti se ukoncentrišu pod sniženim pritiskom i prečiste pomoću tečne hromatografije visokih performansi (HPLC). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 11-3 u vidu bele čvrste materije (390mg, 81%).
[0060]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.21-1.26 (m, 2H), 1.38-1.43 (m, 2H), 1.46-1.53 (m, 1H), 1.58-1.67 (m, 1H), 1.69-1.74 (m, 1H), 1.84-1.93 (m, 1H), 2.22 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.61 (t, J = 0.8 Hz, 1H), 3.12 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.92 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 4.45 (s, 2H), 7.44 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 8.27 (d, J = 4.0 Hz, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, D2O) 522.4, 27.1, 27.7, 30.5, 31.2, 37.9, 40.6, 53.6, 54.1, 74.8, 76.5, 114.5, 140.7, 156.1, 156.2, 159.0, 177.7, 177.9, 178.4; MS (ESI) m/z 478 [M+H]<+>
Primer 5. Izrada fluor-triazol-urea-GUL jedinjenja pomoću klik hemijskog postupka
[0061] Šematski prikaz reakcionog procesa ovog pronalaska je dat u Reakcionoj formuli 6, u nastavku.
[Reakciona formula 6]
((pyridine-4-yl)methyl – (piridin-4-il)metil, pyridinyl – piridinil, prim. prev.)
Primer 5-1. Izrada jedinjenja 1-1
[0062] 2-Fluoroetil toluensulfonat (FCH2CH2OTs, 82mg, 0.38mmol) se rastvori u dimetilformamidu (0.2mL), u šta se doda natrijum azid (73mg, 1.13 mmol) i zatim, meša se na 60°C u toku 12 sati da bi se sintetisao fluoroetilazid (12-1). Reakcioni rastvor se filtrira i ispere sa etanolom (0.3mL). U filtrat se doda vodeni rastvor (0.5mL) u kom je rasvoreno jedinjenje 11-1 (30mg, 0.075mmol), sintetisano u Primeru 4-1. Deo po deo, u to se dodaju vodeni CuSO4·5H2O rastvor (0.5M, 0.046mL, 0.023mmol) i vodeni natrijum askorbatni rastvor (0.5M, 0.076mL, 0.038mmol), a zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakciona smeša se filtrira i ispere sa vodom. Onda se filtrat razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje 1-1 u vidu bele čvrste materije (7 mg, 19%).
[0063]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.17-1.28 (m, 2H), 1.30-1.37 (m, 2H), 1.50-1.59 (m, 1H), 1.64-1.72 (m, 1H), 1.77-1.87 (m, 1H), 1.98-2.05 (m, 1H), 2.36 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.96 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.03 (dd, J = 8.4, 4.8 Hz, 1H), 4.11 (dd, J = 8.8, 5.6 Hz, 1H), 4.24 (s, 2H), 4.56-4.57 (m, 1H), 4.65-4.68 (m, 2H), 4.75 (t, J = 4.6 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H);
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 22.0, 26.1, 28.5, 29.9, 30.4, 34.9, 39.4, 50.7 (d, J = 19 Hz), 52.5, 53.1, 81.9 (d, J = 168 Hz), 124.0, 146.2, 159.5, 160.2, 176.2, 177.1, 177.2; MS (ESI) m/z 488 [M-H]-
Primer 5-2. Izrada jedinjenja 1-2
[0064] 2-Fluoroetil toluensulfonat (FCH2CH2OTs, 89mg, 0.41mmol) se rastvori u dimetilformamidu (0.2mL), a u to se doda natrijum azid (79mg, 1.22mmol), zatim se meša na 60°C u toku 12 sati da bi se sintetisao fluoroetilazid (12-1). Reakcioni rastvor se filtrira i ispere sa etanolom (0.3mL). Vodeni rastvor (0.5mL) u kome je rastvoreno jedinjenje 11-2 (40mg, 0.081mmol), sintetisano u Primeru 4-2, doda se filtratu. U to se, korak po korak, dodaju vodeni rastvor CuSO4·5H2O (0.5M, 0.049mL, 0.024mmol) i vodeni rastvor natrijum askorbata (0.5M, 0.081mL, 0.041mmol), zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakciona smeša se filtrira i ispere sa vodom. Onda se filtrat razdvoji pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje 1-2 u vidu bele čvrste materije (33mg, 70%).
[0065]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.21-1.34 (m, 2H), 1.41-1.50 (m, 2H), 1.59-1.68 (m, 1H), 1.71-1.80 (m, 1H), 1.86-1.96 (m, 1H), 2.08-2.16 (m, 1H), 2.45 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.16 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 4.09 (dd, J = 8.4, 5.2 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 8.8, 5.6 Hz, 1H), 4.63-4.70 (m, 6H), 4.84 (s, 2H), 7.72 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.93 (s, 1H), 8.60 (dd, J = 6.8, 1.2 Hz, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 22.1, 26.0, 28.5, 29.9, 30.4, 40.0, 42.6, 50.5, 50.6 (d, J = 19 Hz), 81.9 (d, J = 168 Hz), 124.6, 124.7, 140.6, 143.5, 159.0, 159.2, 160.6, 176.1, 177.0, 177.1; MS (ESI) m/z 581 [M+H]<+>
Primer 5-3. Izrada jedinjenja 1-3
[0066] 2-Fluoroetil toluensulfonat (FCH2CH2OTs, 91mg, 0.42mmol) se rastvori u DMF (0.2mL), u šta se doda NaN (82mg, 1.26 mmol), zatim se meša na 60°C u toku 12 sati da bi se sintetisao fluoroetilazid (12-1). Reakcioni rastvor se filtrira i ispira sa etanolom (0.3mL). Vodeni rastvor (0.5mL) u kom je rastvoreno jedinjenje 11-3 (40mg, 0.084 mmol), sintetisano u Primeru 4-3, se doda u filtrat. U to se, korak po korak, dodaju vodeni CuSO4·5H2O rastvor (0.5M, 0.050mL, 0.025mmol) i vodeni rastvor natrijum askorbata (0.5M, 0.084mL, 0.042mmol), zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakciona smeša se filtrira i ispere sa vodom. Onda se filtrat razdvoji pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje 1-3 u vidu bele čvrste materije (27mg, 57%) .
[0067]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.15-1.24 (m, 2H), 1.36-1.43 (m, 2H), 1.49-1.58 (m, 1H), 1.63-1.72 (m, 1H), 1.75-1.84 (m, 1H), 1.96-2.05 (m, 1H), 2.34 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.15 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 4.01 (dd, J = 8.8, 5.2 Hz, 1H), 4.10 (dd, J = 9.0, 5.0 Hz, 1H), 4.55-4.61 (m, 3H), 4.73 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.92 (s, 1H), 8.27 (d, J = 7.6 Hz, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 22.2, 26.1, 27.5, 29.9, 30.4, 40.4, 43.2, 50.7 (d, J = 19 Hz), 52.4, 53.0, 81.9 (d, J = 168 Hz), 114.4, 124.7, 140.7, 142.3, 156.4, 156.8, 159.2, 176.1, 176.9, 177.1; MS (ESI) m/z 567 [M+H]<+>
Primer 5-4. Izrada jedinjenja 1-4
[0068] Rastvor, pripremljen rastvaranjem jedinjenja 11-1 (40mg, 0.10mmol), sintetisanog u Primeru 4-1 u vodi (0.5mL) doda se u etanol (0.5mL) u kom je rastvoren 1-azido-2-(2-fluoroetoksi)etan (12-2, 16mg, 0.12mmol). U to se, korak po korak, dodaju vodeni CuSO4·5H2O rastvor (0.5M, 0.060mL, 0.030mmol) i vodeni rastvor natrijum askorbata (0.5M, 0.100mL, 0.050mmol), a zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakciona smeša se filtrira i ispere sa vodom. Zatim se filtrat razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje 1-4 u vidu bele čvrste materije (20mg, 38%).
[0069]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.14-1.22 (m, 2H), 1.24-1.32 (m, 2H), 1.45-1.54 (m, 1H), 1.59-1.66 (m, 1H), 1.72-1.82 (m, 1H), 1.93-2.02 (m, 1H), 2.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.91 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.51 (td, J = 4.0, 0.8 Hz, 1H), 3.58 (td, J = 4.0, 0.8 Hz, 1H), 3.81 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.98 (dd, J = 8.8, 4.8 Hz, 1H), 4.06 (dd, J = 9.2, 5.2 Hz, 1H), 4.20 (s, 2H), 4.28 (td, J = 4.0, 0.8 Hz, 1H), 4.39 (td, J = 4.0, 0.8 Hz, 1H), 4.45 (t, J = 4.68 Hz, 2H), 7.78 (s, 1H);
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 22.0, 26.0, 28.4, 29.9, 30.4, 34.7, 39.4, 50.3, 52.4, 53.0, 68.6, 69.7 (d, J = 18 Hz), 83.1 (d, J = 162 Hz), 124.3, 145.8, 159.2, 160.1, 176.1, 177.0, 177.1; MS (ESI) m/z 534 [M+H]<+>
Primer 5-5. Izrada jedinjenja 1-5
[0070] Rastvor, pripremljen rastvaranjem jedinjenja 11-2 (40mg, 0.081mmol), sintetisanog u Primeru 4-2 u vodi (0.5mL), doda se u etanol (0.5mL) u kom je rastvoren 1-azido-2-(2-fluoroetoksi)etan (12-2, 13mg, 0.097mmol). U to se, korak po korak, dodaju vodeni CuSO4·5H2O rastvor (0.5M, 0.049mL, 0.024mmol) i vodeni rastvor natrijum askorbata (0.5M, 0.081mL, 0.041mmol), a zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakciona smeša se filtrira i ispere sa vodom. Zatim se filtrat razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje 1-5 u vidu bele čvrste materije (37mg, 72%).
[0071]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.16-1.23 (m, 2H), 1.33-1.40 (m, 2H), 1.52-1.60 (m, 1H), 1.63-1.70 (m, 1H), 1.81-1.88 (m, 1H), 2.00-2.07 (m, 1H), 2.38 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.07 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.57 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 3.65 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 3.83 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 4.02 (dd, J = 8.4, 5.2 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 9.0, 5.0 Hz, 1H), 4.34 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 4.45-4.49 (m, 3H), 4.59 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 7.69 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.86 (s, 1H), 8.55 (d, J = 6.8 Hz, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 22.2, 26.2, 28.6, 29.9, 30.5, 40.1, 42.7, 49.9, 50.6, 52.5, 53.2, 68.7, 69.7 (d, J = 19 Hz), 83.2 (d, J = 163 Hz), 124.7, 124.9, 140.7, 143.5, 159.1, 159.2, 160.7, 176.1, 177.0, 177.1; MS (ESI) m/z 625 [M+H]<+>
Primer 5-6. Izrada jedinjenja 1-6
[0072] Rastvor, pripremljen rastvaranjem jedinjenja 11-3 (40mg, 0.084mmol) sintetisanog u Primeru 4-3 u vodi (0.5mL), doda se u etanol (0.5mL) u kom je rastvoren 1-azido-2-(2-fluoroetoksi)etan (12-2, 13mg, 0.10 mmol). U to se, korak po korak, dodaju vodeni CuSO4·5H2O rastvor (0.5M, 0.050mL, 0.025mmol) i vodeni rastvor natrijum askorbata (0.5M, 0.084mL, 0.042mmol), a zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakciona smeša se filtrira i ispere sa vodom. Zatim se filtrat razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje 1-6 u vidu bele čvrste materije (38mg, 75%).
[0073]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.20-1.28 (m, 2H), 1.40-1.47 (m, 2H), 1.54-1.62 (m, 1H), 1.66-1.74 (m, 1H), 1.77-1.86 (m, 1H), 1.98-2.08 (m, 1H), 2.36 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.17 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.52 (t, J = 3.8 Hz, 1H), 3.60 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 3.83 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 4.05 (dd, J = 8.8, 4.8 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 9.2, 5.2 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 3.8 Hz, 1H), 4.48 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 5.06 (s, 2H), 7.48 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.90 (s, 1H), 8.28 (d, J = 7.6 Hz, 2H) ;
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 22.3, 26.2, 27.6, 29.9, 30.5, 40.5, 43.3, 50.0, 52.5, 53.1, 68.7, 69.7 (d, J = 19 Hz), 83.1 (d, J = 163 Hz), 114.4, 124.7, 140.7, 142.1, 156.4, 156.8, 159.2, 176.1, 176.9, 177.1; MS (ESI) m/z 611 [M+H]<+>
Primer 5-7. Izrada jedinjenja 1-7
[0074] Rastvor, pripremljen rastvaranjem jedinjenja 11-1 (40mg, 0.10mmol) sintetisanog u Primeru 4-1 u vodi (0.5mL) se doda etanolu (0.5mL) u kom je rastvoren 1-azido-2-(2-(2-fluoroetoksi)etoksi)etan (12-3, 21mg, 0.12mmol). U to se, korak po korak, dodaju vodeni CuSO4·5H2O rastvor (0.5M, 0.060mL, 0.030mmol) i vodeni rastvor natrijum askorbata (0.5M, 0.100mL, 0.050mmol), a zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakciona smeša se filtrira i ispere sa vodom. Zatim se filtrat razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje 1-3 u vidu bele čvrste materije (50mg, 77%).
[0075]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.16-1.26 (m, 2H), 1.28-1.36 (m, 2H), 1.49-1.58 (m, 1H), 1.63-1.71 (m, 1H), 1.76-1.85 (m, 1H), 1.97-2.06 (m, 1H), 2.35 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.94 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.49-3.50 (m, 5H), 3.57 (td, J = 4.0, 1.2 Hz, 1H), 3.81 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 4.02 (dd, J = 8.8, 4.8 Hz, 1H), 4.10 (dd, J = 9.0, 5.4 Hz, 1H), 4.24 (s, 2H), 4.34 (td, J = 4.4, 1.2 Hz, 1H), 4.45-4.49 (m, 3H), 7.84 (s, 1H);
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 22.0, 26.1, 28.4, 29.9, 30.4, 34.6, 39.4, 50.5, 52.4, 53.0, 68.4, 69.3, 69.4, 69.7 (d, J = 19 Hz), 83.1 (d, J = 163 Hz), 124.5, 145.5, 159.2, 160.1, 176.2, 177.0, 177.1; MS (ESI) m/z 578 [M+H]<+>
Primer 5-8. Izrada jedinjenja 1-8
[0076] Rastvor, pripremljen rastvaranjem jedinjenja 11-2 (40mg, 0.081mmol), sintetisanog u Primeru 4-2, u vodi (0.5mL) se doda etanolu (0.5mL) u kom je rastvoren 1azido-2-(2-(2-fluoroetoksi)etoksi)etan (12-3, 17mg, 0.097 mmol). U to se, korak po korak, dodaju vodeni CuSO4·5H2O rastvor (0.5M, 0.049mL, 0.024mmol) i vodeni rastvor natrijum askorbata (0.5M, 0.081mL, 0.041mmol), a zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakciona smeša se filtrira i ispere sa vodom. Zatim se filtrat razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje 1-8 u vidu bele čvrste materije (47mg, 87%).
[0077]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.13-1.25 (m, 2H), 1.36 (quint, J = 7.0Hz, 2H), 1.50-1.60 (m, 1H), 1.63-1.72 (m, 1H), 1.79-1.88 (m, 1H), 2.00-2.09 (m, 1H), 2.38 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.07 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.52 (s, 4H), 3.54 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 3.62 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 3.80 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 4.02 (dd, J = 8.6, 5.4 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 9.0, 5.0 Hz, 1H), 4.38 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 4.46-4.51 (m, 3H), 4.58 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 7.70 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.88 (s, 1H), 8.55 (d, J = 6.8 Hz, 2H);
<13>C NMR (100MHz, D2O) δ 22.2, 26.2, 28.6, 30.0, 30.5, 40.1, 42.7, 50.0, 50.6, 52.5, 53.2, 68.6, 69.4, 69.5, 69.7 (d, J = 19Hz), 83.3 (d, J = 162Hz), 124.7, 124.9, 140.8, 143.5, 159.1, 159.2, 160.7, 176.1, 177.0, 177.1; MS (ESI) m/z 669 [M+H]<+>
Primer 5-9. Izrada jedinjenja 1-9
[0078] Rastvor, pripremljen rastvaranjem jedinjenja 11-3 (40mg, 0.084mmol) sintetisanog u Primeru 4-3 u vodi (0.5mL) se doda u etanol (0.5mL) u kom je rastvoren 1-azido-2-(2-(2-fluoroetoksi)etoksi)etan (12-3, 18mg, 0.10mmol). U to se, korak po korak, dodaju vodeni rastvor CuSO4·5H2O (0.5M, 0.050mL, 0.025mmol) i vodeni rastvor natrijum askorbata (0.5M, 0.084mL, 0.042mmol), a zatim se meša na sobnoj temperaturi u toku 1 sata. Reakciona smeša se filtrira i ispira sa vodom. Onda, filtrat se razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje 1-9 u vidu bele čvrste materije (30mg, 55%).
[0079]<1>H NMR (400 MHz, D2O) δ 1.15-1.22 (m, 2H), 1.35-1.40 (m, 2H), 1.47-1.56 (m, 1H), 1.61-1.68 (m, 1H), 1.72-1.81 (m, 1H), 1.93-2.03 (m, 1H), 2.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.12 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.43 (s, 4H), 3.46 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 3.54 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 3.75 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.99 (dd, J = 8.8, 5.2 Hz, 1H), 4.07 (dd, J = 9.2, 5.2 Hz, 1H), 4.30 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 4.41-4.44 (m, 3H), 5.00 (s, 2H), 7.43 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.87 (s, 1H), 8.24 (d, J = 7.2 Hz, 2H);
<13>C NMR (100 MHz, D2O) δ 22.2, 26.1, 27.5, 29.9, 30.4, 40.4, 43.2, 50.0, 52.4, 53.0, 68.6, 69.3, 69.4, 69.7 (d, J = 18 Hz), 83.1 (d, J = 162 Hz), 114.3, 124.6, 140.6, 142.0, 156.3, 156.8, 159.2, 176.1, 176.9, 177.1; MS (ESI) m/z 655 [M+H]<+>
Primer 6. Sinteza<125>I-MIP1095 jedinjenja
[0080] Šematski prikaz reakcionog procesa ovog pronalaska je dat u Reakcionoj formuli 7, u nastavku.
[Reakciona formula 7]
(Triphosgene – trifozgen, dioxane – dioksan, prim. prev.)
Primer 6-1. Izrada jedinjenja 13 (korak 1)
[0081] Trifozgen (21mg, 0.071mmol) se rastvori u dihlorometanu (5mL), u šta se na 0°C polako doda 4-jodoanilin (45mg, 0.205mmol) rastvoren u dihlorometanu (5mL). U to se doda trietilamin (0.57mL, 0.410mmol) i zatim, meša se u toku 30 minuta. U to se, na 0°C, polako doda glutamat-urea-lizin (9, 100mg, 0.205mmol) rastvoren u dihlorometanu (10mL). Takođe, tu se doda i trietilamin (0.57mL, 0.410mmol).15 minuta kasnije, smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku 5 sati. Smeša se ukoncentriše pod sniženim pritiskom i prečisti pomoću hromatografije na koloni (2% metanol/dihlorometan). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 13 u vidu bele tečnosti (66mg, 44%).
[0082]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.20-1.27 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.40 (s, 9H), 1.44 (s, 9H), 1.47-1.57 (m, 2H), 1.71-1.81 (m, 2H), 1.83-1.91 (m, 1H), 2.03-2.11 (m, 1H), 2.37 (sext, J = 8.2Hz, 2H), 3.01-3.07 (m, 1H), 3.51-3.56 (m, 1H), 3.97-4.01 (m, 1H), 4.26-4.32 (m, 1H), 5.75 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.31 (q, J = 3.4 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.90 (s, 1H);
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 24.5, 27.1, 27.8, 27.9, 28.0, 29.6, 31.7, 32.0, 39.1, 53.8, 54.9, 81.0, 81.8, 83.6, 83.7, 120.2, 137.5, 140.2, 155.6, 158.5, 171.8, 172.0, 175.3; MS (ESI) m/z 733 [M+H]<+>
Primer 6-2. Izrada jedinjenja 14 (korak 2)
[0083] Jedinjenje 13 (50mg, 0.068mmol), sintetisano u prethodnom koraku 1, rastvori se u 1,4-dioksanu (1.0mL), u šta se, korak po korak, dodaju heksametilditin (0.043mL, 0.206mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorid (4.8mg, 0.005mmol) i zatim, meša se na 110°C u toku 1.5 sati. Nakon hlađenja smeše do sobne temperature, u to se dodaje vodeni rastvor kalijum fluorida (50mL) i organsko jedinjenje se tri puta ekstrahuje korišćenjem etil acetata. Sakupljeni organski rastvarač se osuši preko anhidrovanog natrijum sulfata, ukoncentriše pod sniženim pritiskom i prečisti pomoću hromatografije na koloni (trietilamin:etil acetat:n-heksan, 1:40:59). Kao rezultat, dobija se jedinjenje 14 u vidu čvrste materije bele boje (28mg, 53%).
[0084]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.25 (s, 9H), 1.22-1.29 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.41 (s, 9H), 1.43 (s, 9H), 1.48-1.59 (m, 2H), 1.72-1.78 (m, 1H), 1.81-1.91 (m, 1H), 2.05-2.13 (m, 2H), 2.34-2.43 (m, 2H), 3.04-3.09 (m, 1H), 3.51-3.55 (m, 1H), 4.04 (pent, J = 4.9 Hz, 1H), 4.33 (sext, J = 4.5 Hz, 1H), 5.73 (d, J = 6.8 Hz 1H), 6.23 (br s, 1H), 6.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.73 (s, 1H);
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ-9.5, 24.2, 27.4, 27.8, 27.9, 28.0, 29.7, 31.8, 32.1, 39.1, 53.7, 54.7, 80.9, 81.7, 83.5, 118.4, 133.6, 136.2, 140.4, 155.9, 158.3, 171.9, 172.2, 175.1; MS (ESI) m/z 771 [M+2H]<+>
Primer 7. Izrada<18>F-obeleženog jedinjenja ([<18>F]1)
[0085] U reakcionoj formuli 8 u nastavku, prikazana je šema procesa reakcija ovog pronalaska.
[Reakciona formula 8]
((pyridine-4-yl)methyl – (piridin-4-il)metil, pyridinyl – piridinil, ascorbate – askorbat, prim. prev.)
Primer 7-1. Izrada [<18>F]1-1 jedinjenja
[0086] Destilovana voda (3mL) se sipa u Chromafix®(HCO3), što prolazi kroz [<18>F] fluoridni vodeni rastvor (508 mCi), zatim se u to sipa etanol (1mL). Krytofix222-Kalijum metansulfonat (10mg) se rastvori u etanolu (1mL), kroz koji je prošao Chromafix® i, rastvarač se uklanja uduvavanjem azota u rastvor na 100°C. Rastvori se 2-azidoetil 4-toluensulfonat 15-1 (1.2mg) u t-butanolu (500µL), što se stavlja u reakcioni sud koji sadrži [<18>F]fluorid, zatim sledi reakcija na 100°C u toku 10 minuta (izrada [<18>F] 12-1). Reakciona smeša se ohladi do sobne temperature. Zatim se 150 µL (137mCi) reakcione smeše stavlja u drugi reakcioni sud, pa se redom dodaju: etanol (150µL), vodeni rastvor koji sadrži u njemu rastvoreno jedinjenje 11-1 (1mg) (100µL), 0.5M CuSO4(5µL) i 0.5M natrijum askorbat (10µL), posle čega sledi reakcija na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<18>F] 1-1 (55.3mCi).
[0087] HPLC uslovi: kolona, XTerra MS C18 (250 mm x 10 mm); mobilna faza, 5-30% acetonitril/voda (0.1% TFA), 70 minuta; brzina protoka, 4 mL/min.; UV, 230 mm; Retenciono vreme, 15-20 minuta.
Primer 7-2. Izrada [<18>F] 1-2 jedinjenja
[0088] 150µL (122mCi) t-butanola koji sadrži u sebi rastvoreno [<18>F]12-1 proizvedeno u Primeru 7-1, stavi se u drugi reakcioni sud u koji se sledećim redosledom dodaju: etanol (150µL), vodeni rastvor koji sadrži u njemu rastvoreno jedinjenje 11-2 (1.5mg) (100µL), 0.5M CuSO4(5µL) i 0.5M natrijum askorbat (10µL), zatim sledi reakcija na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<18>F]1-2 (39mCi).
[0089] HPLC uslovi: Kolona, XTerra MS C18 (250mm x 10mm); Mobilna faza, 5-30% acetonitril/voda (0.1% TFA) 50 minuta; Brzina protoka, 4mL/min.; UV, 230mm; Retenciono vreme, 17-20 minuta.
Primer 7-3. Izrada [<18>F] 1-3 jedinjenja
[0090] 200 µL (120mCi) t-butanola koji u sebi sadrži rastvoreno [<18>F]12-1 proizvedeno u Primeru 7-1 se stavi u drugi reakcioni sud, u to se sledećim redosledom dodaju: etanol (150µL), vodeni rastvor koji sadrži u njemu rastvoreno jedinjenje 11-3 (1.5mg) (100µL), 0.5M CuSO4(5µL) i 0.5M natrijum askorbat (10µL), zatim sledi reakcija na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<18>F]1-3 (19.9 mCi).
[0091] HPLC uslovi: Kolona, XTerra MS C18 (250mm x 10mm); Mobilna faza, 5-30% acetonitril/voda (0.1% TFA), 90 minuta; Brzina protoka, 4mL/min.; UV, 230mm; Retenciono vreme, 14-16 minuta.
Primer 7-4. Izrada [<18>F]1-4 jedinjenja
[0092] Destilovana voda (3mL) se sipa u Chromafix® (HCO3), koji prolazi kroz [<18>F] fluoridni vodeni rastvor (493 mCi), zatim se u to ulije etanol (1mL). Krytofix222-kalijum metansulfonat (10mg) se rastvori u etanolu (1mL), kroz šta je prošao Chromafix® i, rastvarač se uklanja uduvavanjem azota u rastvor na 100°C. Rastvori se 2-(2-azidoetoksi)etil metansulfonat 15-2 (2.2mg) u t-butanolu (500µL), što se stavi u reakcioni sud koji sadrži [<18>F]fluorid, a zatim, sledi reakcija na 100°C u toku 10 minuta (izrada [<18>F]12-2). Reakciona smeša se ohladi do sobne temperature. Onda, 150 µL (81.3mCi) reakcione smeše se stavlja u drugi reakcioni sud, u koji se dodaju, sledećim redosledom: etanol (150µL), vodeni rastvor koji sadrži u njemu rastvoreno jedinjenje 11-1 (2mg) (100mL), 0.5M CuSO4(5µL) i 0.5M natrijum askorbat (10µL), posle čega sledi reakcija na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<18>F]1-4 (16.8 mCi).
[0093] HPLC uslovi: Kolona, XTerra MS C18 (250mm x 10mm); Mobilna faza, 5-30% acetonitril/voda (0.1% TFA), 70 minuta; Brzina protoka, 4mL/min.; UV, 254mm; Retenciono vreme, 26-29 minuta.
Primer 7-5. Izrada [<18>F]1-5 jedinjenja
[0094] 150 µL (88.4 mCi) t-butanola koji u sebi sadrži rastvoreno [<18>F]12-2, proizvedeno u Primeru 7-4 se stavi u drugi reakcioni sud, i u to se, sledećim redosledom dodaju: jedinjenje 11-2 (1.5mg) rastvoreno u destilovanoj vodi (100µL), 0.5M CuSO4(5µL) i 0.5M natrijum askorbat (10µL), a zatim sledi reakcija na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<18>F]1-5 (26.5 mCi).
[0095] HPLC uslovi: Kolona, XTerra MS C18 (250mm x 10mm); Mobilna faza, 5-30% acetonitril/voda (0.1% TFA), 50 minuta; Brzina protoka, 4mL/min.; UV, 254mm; Retenciono vreme, 29 minuta.
Primer 7-6. Izrada [<18>F]1-6 jedinjenja
[0096] 100 µL (88.0 mCi) t-butanola koji u sebi sadrži rastvoren [<18>F]12-2 proizveden u Primeru 7-4, stavlja se u drugi reakcioni sud, gde se sledećim redosledom dodaju: jedinjenje 11-3 (2mg) rastvoreno u destilovanoj vodi (100µL), 0.5M CuSO4(5µL) i 0.5M natrijum askorbat (10µL), zatim nastupa reakcija na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<18>F]1-6 (16.1 mCi).
[0097] Slike 1A, 1B i 2 su grafici koji ilustruju rezultate razdvajanja pomoću radio-TLC i HPLC u skladu sa korakom u izradi jedinjenja [<18>F]1-6.
[0098] HPLC uslovi: Kolona, XTerra MS C18 (250mm x 10mm); Mobilna faza, 5-30% acetonitril/voda (0.1% TFA), 50 minuta; Brzina protoka, 4mL/min.; UV, 254mm; Retenciono vreme, 27 minuta.
Primer 7-7. Izrada [<18>F] 1-7 jedinjenja
[0099] Destilovana voda (3mL) se ulije na Chromafix®(HCO3-), što se propušta kroz vodeni rastvor [<18>F] fluorida (574 mCi), pa se zatim u to doda etanol (1mL). Krytofix222-kalijum metansulfonat (10mg) se rastvori u etanolu (1mL), kroz šta se propusti Chromafix® i, ukloni se rastvarač uduvavanjem azota u rastvor na 100°C. Rastvori se 2-(2-(2-azidoetoksi)etoksi)etil metansulfonat 15-3 (2.7mg) u t-butanolu (500µL), što se stavi u reakcioni sud koji sadrži [<18>F]fluorid, a zatim sledi reakcija na 100°C u toku 10 minuta (izrada [<18>F]12-3). Kada se rakcija završi, rastvarač se uklanja pažljivo uduvavajući azotni gas u rastvor na 100°C i zatim, reakciona smeša se rastvori u etanolu (300µL). 100 µL (87mCi) etanolnog rastvora koji u sebi sadrži rastvoren [<18>F] 12-3 se stavi u drugi reakcioni sud, u šta se sledećim redosledom dodaju: destilovana voda koja sadrži u sebi rastvoreno jedinjenje 11-1 (2mg) (100µL), 0.5M CuSO4(5µL) i 0.5M natrijum askorbat (10µL), sledi reakcija na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<18>F]1-7 (31.2mCi).
[0100] HPLC uslovi: Kolona, XTerra MS C18 (250 mm x 10 mm); Mobilna faza, 5-30% acetonitril/voda (0.1% TFA), 50 minuta; Brzina protoka, 4mL/min.; UV, 254mm; Retenciono vreme, 29 minuta.
Primer 7-8. Izrada [<18>F]1-8 jedinjenja
[0101] 100 µL (87 mCi) etanolnog rastvora (100µL) koji sadrži u sebi rastvoren [<18>F]12-3 proizveden u Primeru 7-7 se stavi u drugi reakcioni sud, u šta se dodaje, sledećim redosledom: jedinjenje 11-2 (1.5 mg) rastvoreno u destilovanoj vodi (100µL), 0.5M CuSO4(5µL) i 0.5M natrijum askorbat (10µL) i zatim, sledi reakcija na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<18>F]1-8 (26.5mCi).
[0102] HPLC uslovi: Kolona, XTerra MS C18 (250mm x 10mm); Mobilna faza, 5-30% acetonitril/voda (0.1% TFA), 50 minuta; Brzina protoka, 4mL/min.; UV, 254mm; Retenciono vreme, 27 minuta.
Primer 7-9. Izrada [<18>F]1-9 jedinjenja
[0103] 100 µL (89 mCi) etanolnog rastvora (100µL) koji sadrži u sebi rastvoren [<18>F]12-3 proizveden u Primeru 7-7 se stavi u drugi reakcioni sud, u šta se dodaje, sledećim redosledom: jedinjenje 11-3 (2mg) rastvoreno u destilovanoj vodi (100µL), 0.5M CuSO4(5µL) i 0.5M natrijum askorbat (10µL) i zatim, sledi reakcija na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<18>F]1-9 (18.9mCi).
[0104] HPLC uslovi: Kolona, XTerra MS C18 (250mm x 10mm); Mobilna faza, 5-30% acetonitril/voda (0.1% TFA), 50 minuta; Brzina protoka, 4mL/min.; UV, 254mm; Retenciono vreme, 27.5 minuta.
Komparativan Primer 1. Izrada [<125>I]15 ([<125>I]MIP-1095) jedinjenja
[0105] Jedinjenje 14 (0.1mg) koje je sintetisano u Primeru 6-2 se rastvori u etanolu (250µL), što se doda u vodeni rastvor natrijum [<125>I]jodida (4.6mCi, 50µL), a zatim se meša. U to se dodaju 1N HCl vodeni rastvor (100µL) i 3% H2O2i, sledi mešanje na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta. 0.1M natrijum thiosulfatnog vodenog rastvora (200µL) i destilovane vode (18mL) se doda u reakcionu smešu, što se propušta kroz C-18 Sep-Pak, što prati ulivanje destilovane vode (20mL). Acetonitril (2.0mL) se ulije u C-18 Sep-Pak, zatim se acetonitril uklanja uduvavanjem azota u rastvor. U to se dodaju dihlorometan (0.2mL) i trifluorosirćetna kiselina (0.8mL), sledi mešanje na sobnoj temperaturi u toku 20 minuta. Reakcioni rastvarač se uklanja uduvavanjem azota u rastvor. U reakcionu smešu se doda destilovana voda (2mL), što se filtrira i razdvaja pomoću HPLC. Kao rezultat, dobija se jedinjenje [<125>I]15 (1.1mCi, 24%).
[0106] HPLC uslovi: Kolona, XTerra MS C18 (250mm x 10mm); Mobilna faza, 30% acetonitril/voda (0.1% TFA); Brzina protoka, 5mL/min; UV, 254mm; Retenciono vreme, 10.4 minuta.
[0107] Šematski proces reakcija je prikazan u reakcionoj formuli 9, u nastavku.
[Reakciona formula 9]
Referentni Primer 1. Priprema materijala
[0108] Ćelijska linija humanog kancera prostate (22RV1), koja je ovde korišćena je nabavljena od American Type Culture Collection (ATCC). Ćelijske linije humanog kancera prostate PC3 PIP (PSMA<+>) i PC3 flu (PSMA-) je obezbedio Dr. Martin G. Pomper (Johns Hopkins Medical School, Baltimore, MD). Ćelijske linije humanog kancera prostate su držane u RPMI1640 medijumu, obogaćenom sa 10% fetalnim goveđim serumom (FBS) i 1% antibiotik/antifungistik sredstvom. U kulture PC3 PIP (PSMA<+>) i PC3 flu (PSMA-) ćelijskih linija, dodatno je dodat puromicin u koncentraciji od 2 µg/mL.
[0109] Kao test životinje su korišćeni mužjaci golih miševa, stari 6 nedelja (Narabio, Seoul, Korea).
Eksperimentalan Primer 1. Merenje kapaciteta vezivanja
[0110] Da bi se potvrdio kapacitet vezivanja<18>F-obeleženog jedinjenja, dobijenog u Primeru 7 i [<125>I]15, dobijenog u Komparativnom primeru 1 ovog pronalaska, za ćelijsku liniju kancera prostate, izveden je sledeći eksperiment.
[0111] Kao puferski rastvor, korišćen je RPMI1640 obogaćen sa 1% BSA (goveđi serum albumin).
[0112] [<125>I]15 (0.1nM) se doda u sud koji sadrži 22RV1 ćelije (5X10<4>), u šta se dodaju jedinjenja od [<18>F]1-1 do [<18>F]1-9 u 9 koncentracija (1.00X10<-4>to 1.00X10<-12>M), a zatim se meša na 37°C u toku 2 sata. Kada se mešanje završi, sud se ispere tri puta sa 2 mL PBS rastvora, a zatim se meri zaostala radioaktivnost i koncentracija 50% inhibicije (postupak nelinearne regresije) pomoću gama-brojača (2480 WIZARD2 Gamma Counter PerkinElmer Co., MA) i GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., CA).
[0113] Tabela 1 je tabela u kojoj su prikazani rezultati merenja.
[0114] Kao rezultat, kako je prikazano u Tabeli 1, IC50vrednost [<18>F] 1-6 (Primer 7-6), u kom je piridin direktno vezan za urea funkcionalnu grupu, bio je najbolji (5.08), IC50vrednost [<18>F] 1-3 (Primer 7-3) bez piridina bio je gori više od 70 puta, a IC50vrednost [<18>F]1-9 (Primer 7-9), u kom je metilpiridin vezan, bio je gori više od 40 puta. Prema tome, potvrđeno je da piridin u ([<18>F]1-6 (Primer 7-6) formira visoko lipofilnu vezu sa PSMA proteinom.
[0115] Upoređeni su Primer 7-4 sa Primerom 7-6. Kao rezultat, potvrđeno je da što je duža udaljenost između triazol grupe i<18>F izotopa, bolja je IC50vrednost.
[0116] Prema tome, nađeno je da je [<18>F]1-6 (Primer 7-6), u kom je piridin direktno vezan za ureju i ima trietilensku glikol grupu između<18>F izotopa i triazol grupe, najjače vezan za PSMA protein.
[0117] IC50vrednost [<18>F]DCFPyL (Komparativni primer 1) je bila 30.71. Prema tome, potvrđeno je da [<18>F] 1-6 (Primer 7-6) ovog pronalaska ima oko 6 puta veći kapacitet vezivanja.
[Tabela 1]
Eksperimentalan Primer 2. Merenje ćelijske internalizacije
[0118] Da bi se potvrdile karakteristike ćelijske internalizacije<18>F-obeleženog jedinjenja, dobijenog u Primeru 7 i [<125>I]15, dobijenog u Komparativnom primeru 1 ovog pronalaska u ćelijskoj liniji kancera prostate, izveden je sledeći eksperiment.
[0119] 3.7 MBq (100µCi) Primera 7-3, Primera 7-6 i Komparativnog primera 1 se dodaju u PC-3 PIP (1X10<6>/1mL), pa se svaki po dva puta ispere sa 2 mL PBS rastvora posle 30, 60 i 120 minuta. Onda se razdvajaju membranski protein i citoplazmatski protein primenom Mem-PER Plus reagensa za ekstrakciju membranskog proteina i NEPER reagensa za jedarnu i citoplazmatsku ekstrakciju (ThermoFisher Scientific). Brzina internalizacije (%) je potvrđena dobijanjem odnosa radioaktivnosti citoplazmatskog proteina u odnosu na ukupnu radioaktivnost.
[0120] Tabela 2 prikazuje brzinu ćelijske internalizacije.
[0121] Kao rezultat, kako je prikazano u Tabeli 2, potvrđeno je da su tri jedinjenja dobro internalizovana u ćelijama kancera prostate bez bilo kakve značajne razlike i da je internalizacija skoro u potpunosti završena u okviru prvih 30 minuta i da se ne menja tokom vremena.
[Tabela 2]
Eksperimentalan Primer 3. Merenje MicroPET/CT na miševima, kojima su transplantirane ćelijske linije kancera prostate
[0122] Da bi se potvrdila svojstva vezivanja<18>F-obeleženog jedinjenja, dobijenog u Primeru 7 i [<125>I]15, dobijenog u Komparativnom primeru 1 ovog pronalaska za antitelo specifično za prostatu na ćelijskoj membrani, izveden je sledeći eksperiment.
[0123] Tumorski model je pripremljen subkutanim injektovanjem PSMA<+>PC-3 PIP ćelija (ćelijska linija humanog kancera prostate) u zadnju nogu sa desne strane golog miša i subkutanim injektovanjem PSMA<->PC-3 flu ćelija u zadnju nogu sa leve strane golog miša, kao kontrola. Sem toga, svaki od Primer 7-3 i Primer 7-6 je intravenski injektovan od 5.5 do 7.4 MBq (200µL) i, dobijeni su PET/CT imidžing rezultati, primenom malih životinjskih nanoScan PET/CT (Mediso, Budapest, Hungary) tokom 60 minuta. Dobijeni PET/CT imidžing rezultati su kvantitativno analizirani korišćenjem Interview™ FUSION softvera (Mediso). Komparativan primer 1 je korišćen kao kontrolno jedinjenje.
[0124] Slika 3 je dijagram koji ilustruje rezultate MicroPET/CT mišijeg kancera prostate. Slike 4A do 4C su grafici koji ilustruju odnos unosa mišića, jetre i slezine u poređenju sa tumorom.
[0125] Kako je prikazano na Slici 3, potvrđeno je da se Primer 7-3, Primer 7-6 i Komparativni primer 1 brzo izlučuju preko bubrega i bešike, kao i da se selektivno vezuju za PSMA<+>PC-3 PIP tumore. Kako je prikazano na Slikama 4A do 4C, potvrđeno je da je Primer 7-3 ispoljio relativno veće odnose unosa tumor/mišić (odnos tumor prema mišiću) i tumor/jetra (odnos tumor prema jetri) u odnosu na Primer 7-6 i Komparativni primer 1.
Eksperimentalan Primer 4. Test biodistribucije sa modelom kancera prostate na mišu
[0126] Da bi se potvrdila biodistribucija<18>F-obeleženog jedinjenja, dobijenog u Primeru 7 i [<125>I]15, dobijenog u Komparativnom primeru 1 ovog pronalaska, u mišijem modelu kancera prostate, izveden je sledeći eksperiment.
[0127] Tumorski model je pripremljen subkutanim injektovanjem PSMA<+>PC-3 PIP ćelija (ćelijska linija humanog kancera prostate) u zadnju nogu sa desne strane golog miša (starog 6 nedelja, 20-25g) i subkutanim injektovanjem PSMA<->PC-3 flu ćelija u zadnju nogu sa leve strane golog miša, kao kontrola. Sintetisana jedinjenja iz Primera 7-3 i Primera 7-6 injektuju se u venu repa miševa, u dozi od 3.7 MBq (100µCi). Svaki organ (krv, mišić, masno tkivo, srce, pluća, jetra, slezina, želudac, crevo, bubreg, koštano tkivo i tumor) je ekstrahovan za 30 minuta, 1 čas, 2 časa i 4 časa kasnije i, pomoću gamabrojača je izmerena radioaktivnost u svakom od njih.
[0128] Tabela 3 i Tabela 4 prikazuju stepen radioaktivnosti jedinjenja iz Primera 7-3 i Primera 7-6 u svakom organu. Slike 5A i 5B su grafici koji ilustruju biodistribuciju po organima u toku vremena.
[0129] Kao rezultat, kako je prikazano u Tabelama 3 i 4 i na Slikama 5A i 5B, brzina ulaska u tumor (%ID/g) je bila veća za više od 10%, 30 minuta nakon injektovanja jedinjenja iz Primera 7-3 i 7-6. Sem toga, potvrđeno je da jedinjenje iz Primera 7-3 ima veću brzinu ulaska u PSMA<->tumorsko tkivo (PC-3 flu) u poređenju sa PSMA<+>tumorom (PC-3 PIP) i superiornu brzinu ulaska u normalno tkivo u poređenju sa tumorskim.
[Tabela 3]
[Tabela 4]

Claims (6)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje predstavljeno sledećom formulom 1: [Formula 1]
    u formuli 1, Y je -CH2-; Z je -CH2-(CH2-O-CH2)n-CH2-, gde je n ceo broj od 0 do 2; R je vodonik, (piridin-4-il)metil, ili 4-piridinil; i F je<18>F ili<19>F.
  2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu F je<18>F.
  3. 3. Jedinjenje predstavljeno sledećom formulom 11:
    u formuli 11, Y je -(CH2)-; i R je vodonik, (piridin-4-il)metil, ili 4-piridinil.
  4. 4. Farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju ili dijagnostici kancera prostate koja sadrži jedinjenje prema zahtevu 1 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kao aktivni sastojak.
  5. 5. Radiofarmaceutsko sredstvo za upotrebu u slikovnoj dijagnostici kancera prostate koje sadrži jedinjenje prema zahtevu 1 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kao aktivan sastojak.
  6. 6. Radiofarmaceutsko sredstvo za upotrebu prema zahtevu 5, pri čemu slikovna dijagnostika obuhvata magnetno rezonantni imidžing (MRI) ili pozitronsku emisionu tomografiju (PET).
RS20220436A 2017-06-19 2018-06-18 18f obeleženo jedinjenje za dijagnostiku karcinoma prostate i njegova upotreba RS63205B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20170077570 2017-06-19
EP18820848.2A EP3643707B1 (en) 2017-06-19 2018-06-18 18f-labelled compound for prostate cancer diagnosis, and use thereof
PCT/KR2018/006869 WO2018236115A1 (ko) 2017-06-19 2018-06-18 전립선암 진단을 위한 18f-표지된 화합물 및 그의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS63205B1 true RS63205B1 (sr) 2022-06-30

Family

ID=65008286

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220436A RS63205B1 (sr) 2017-06-19 2018-06-18 18f obeleženo jedinjenje za dijagnostiku karcinoma prostate i njegova upotreba

Country Status (21)

Country Link
US (1) US10870629B2 (sr)
EP (1) EP3643707B1 (sr)
JP (1) JP6913968B2 (sr)
KR (1) KR102015355B1 (sr)
CN (1) CN110770212B (sr)
AU (1) AU2018288907B2 (sr)
CA (1) CA3067696C (sr)
CL (1) CL2019003727A1 (sr)
DK (1) DK3643707T3 (sr)
EA (1) EA037781B1 (sr)
ES (1) ES2912392T3 (sr)
HR (1) HRP20220557T1 (sr)
LT (1) LT3643707T (sr)
MX (1) MX388833B (sr)
MY (1) MY195426A (sr)
PH (1) PH12019502665A1 (sr)
PL (1) PL3643707T3 (sr)
PT (1) PT3643707T (sr)
RS (1) RS63205B1 (sr)
SG (1) SG11201911602RA (sr)
SI (1) SI3643707T1 (sr)

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2318366T (pt) * 2008-08-01 2017-08-02 Univ Johns Hopkins Agentes de ligação a psma e suas utilizações
AU2012294639B2 (en) * 2011-08-05 2017-10-26 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled prostate specific membrane antigen inhibitors
WO2013028664A1 (en) * 2011-08-22 2013-02-28 Siemens Medical Solutions Usa, Inc. Psma imaging agents
JP2014051442A (ja) * 2012-09-05 2014-03-20 Kyoto Univ 前立腺がんを診断可能な核医学イメージングプローブ
EP3939972A1 (en) 2013-01-14 2022-01-19 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. Triazine based radiopharmaceuticals and radioimaging agents
IL235650B (en) 2013-11-13 2019-10-31 Ge Healthcare Ltd Dual play tape
KR20150113801A (ko) * 2014-03-31 2015-10-08 한미약품 주식회사 Tak1 저해 활성을 갖는 피라진 접합고리 유도체
FR3023290B1 (fr) * 2014-07-04 2016-08-19 Pf Medicament Derives de flavaglines
WO2017027870A1 (en) * 2015-08-13 2017-02-16 The Johns Hopkins University Triazole conjugated ureas, thioureas, carbamates, and "reversed" carbamates for psma-targeted imaging agents and uses thereof
CN109843338B (zh) * 2016-06-28 2022-12-13 康奈尔大学 含有psma抑制剂的18f标记的三唑

Also Published As

Publication number Publication date
JP2020524175A (ja) 2020-08-13
US20200207724A1 (en) 2020-07-02
SI3643707T1 (sl) 2022-06-30
EP3643707B1 (en) 2022-02-23
AU2018288907A1 (en) 2020-01-23
EP3643707A1 (en) 2020-04-29
MY195426A (en) 2023-01-20
CA3067696C (en) 2022-05-03
KR20180138169A (ko) 2018-12-28
CL2019003727A1 (es) 2020-07-03
PL3643707T3 (pl) 2023-06-12
BR112019027183A2 (pt) 2020-06-30
CA3067696A1 (en) 2018-12-27
US10870629B2 (en) 2020-12-22
MX2019015616A (es) 2020-02-26
AU2018288907B2 (en) 2020-05-07
HRP20220557T1 (hr) 2022-06-10
PH12019502665A1 (en) 2020-10-26
CN110770212A (zh) 2020-02-07
ES2912392T3 (es) 2022-05-25
EA037781B1 (ru) 2021-05-20
SG11201911602RA (en) 2020-01-30
CN110770212B (zh) 2022-11-22
KR102015355B1 (ko) 2019-10-23
DK3643707T3 (da) 2022-05-09
MX388833B (es) 2025-03-12
EA202090071A1 (ru) 2020-04-16
EP3643707A4 (en) 2021-06-09
JP6913968B2 (ja) 2021-08-04
LT3643707T (lt) 2022-05-25
PT3643707T (pt) 2022-05-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10201625B2 (en) Radiolabelled octreotate analogues as PET tracers
JP2021513979A (ja) エバンスブルー誘導体の化学結合体ならびに前立腺癌を標的とするための放射線療法および造影剤としてのその使用
BR112020011727A2 (pt) ligantes de psma para imageamento e endorradioterapia
AU2018363807B2 (en) A double-labeled probe for molecular imaging and use thereof
WO2001077102A1 (en) Macrocyclic chelants for metallopharmaceuticals
JP2008516894A (ja) 診断化合物
JP7646637B2 (ja) 画像化及び治療用組成物
JP7421232B2 (ja) フッ化ケイ素アクセプタ置換放射性医薬品とその前駆体
CA3205844A1 (en) Ligands and their use
Mogadam et al. Preparation and assessment of a new radiotracer technetium-99m-6-hydrazinonicotinic acid-tyrosine as a targeting agent in tumor detecting through single photon emission tomography
RS63205B1 (sr) 18f obeleženo jedinjenje za dijagnostiku karcinoma prostate i njegova upotreba
US20240327464A1 (en) Peptide ligand targeting carbonic anhydrase ix, peptide construct comprising same, and uses thereof
WO2023145967A1 (ja) 核医学検査用プローブ
JP2020524175A5 (sr)
CN121226334A (zh) 前列腺特异性膜抗原小分子抑制剂及其放射性核素配合物的制备及应用
CN121930218A (zh) 前列腺特异性膜抗原小分子抑制剂及其放射性核素配合物的制备及应用
Balla Click chemistry mediated cell uptake–towards triggered Auger therapy
BR112019027183B1 (pt) Composição farmacêutica para tratar ou diagnosticar câncer de próstata, radiofármaco para diagnóstico por imageamento de câncer de próstata
Shen Synthesis of metal-containing biomolecule conjugates for potential use in 99mTc molecular imaging
Alberto et al. YUNJUN SHEN