RS63397B1 - Derivati n-piridinil acetamida kao inhibitori signalnog puta wnt - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja. Preciznije, pronalazak se odnosi na jedinjenja korisna kao inhibitori signalnog puta Wnt. Konkretno, pronalaskom su obuhvaćeni inhibitori porkupina (Porcupine – eng., Porcn). Pored toga, u pronalasku se razmatraju postupci za pripremu jedinjenja, i jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja u kojima se koriste ta jedinjenja.

[0002] Jedinjenja pronalaska stoga mogu da se koriste u lečenju stanja posredovanih signalnim putem Wnt, na primer bolesti posredovanih sekretornim Wnt ligandom koje mogu da se leče inhibicijom porkupina; lečenju kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma, i leukemije; ili poboljšanju efikasnosti antikancerskog tretmana.

OSNOV PRONALASKA

[0003] Geni Wnt kodiraju veliku i visoko konzervisanu familiju sekretornih faktora rasta. Tokom normalnog razvoja, transkripcija gena familije Wnt je strogo regulisana i vremenski i prostorno. Do danas je otkriveno 19 Wnt proteina kod ljudi. Svi Wnt proteini su glikoproteini bogati cisteinom od 38 do 43 kDa. Wnt proteini imaju niz uloga tokom razvoja, upravljajući sudbinom ćelija, migracijom, proliferacijom i smrću. To uključuje formiranje osovine tela kod zebrice i afričke žabe, razvoj krila i očiju kod drozofile i razvoj mozga kod miševa (Parr, et al. (1994) Curr. Opinion Genetics & Devel. 4:523-528, McMahon AP, Bradley A (1990) Cell 62: 1073-1085). Smatra se da je uloga Wnt proteina kod odraslih povezana sa održavanjem homeostaze tkiva sa aberantnom signalizacijom koja je uključena u različite vrste kancera.

[0004] Wnt-posredovana signalizacija odvija se putem vezivanja Wnt liganda za proteine frizzled (Fzd), receptore sa sedam transmembranskih domena. Ovi receptori sadrže N-terminalni cisteinom bogati domen (CRD) koji služi kao domen za vezivanje Wnt. Vezivanje je stabilizovano proteinima 5 i 6 povezanim sa receptorom lipoproteina niske gustine (Lrp5 i Lrp6) (He, et al. (2004) Dev Apr;131 (8):1663-77). Poznato je da vezivanje Wnt za receptore Fizzled aktivira najmanje tri različita signalna puta uključujući "kanonski" put β-katenina, "nekanonski" put planarne ćelijske polarnosti (PCP) i kalcijumski put. Wnt signalizacija je dalje regulisana alternativnim receptorima, uključujući Ror2, sekretornim antagonistima, kao WIF-1 (Hsieh, et al. (1999) Nature Apr 1;398(6726):431-6) i alternativnim Wnt receptorima, kao Dickkopf (DKK) (Niehrs C (2006) Oncogene Dec 4;25(57):7469-81).

[0005] Kada je neaktivan, β-katenin se brzo pretvara u konglomerat nekoliko proteina poznatih kao "destruktivni kompleks". Kompleks se sastoji od proteina aksina (Axin – eng.), proteina adenomatozne polipoze debelog creva (APC), kazein kinaze (CK)-1a i kinaze glikogen-sintaze (GSK)-3β (Hamada, et al. (1999) Science 12; 283(5408):1739-42). U ovom stanju, β-katenin je fosforilisan na serinu-treoninu na amino-kraju što vodi ubikvitinaciji (Behrens, et al. (1998) Science 280: 596-599). U kanonskom putu aktivacije Wnt, Wnt-vezani Fzd vezuje i aktivira citoplazmatski protein Dishevelled (Dvl) (Chen, et al. (2003) Science 301:1391-94). Wnt-vezani Lrp5 i Lrp6 direktno se vezuju za citoplazmatski aksin, inhibirajući njegovu funkciju stabilizatora destruktivnog kompleksa (Zeng, et al. (2008) Dev. 135, 367-375). Ova povezivanja dovode do destabilizacije destruktivnog kompleksa i nakupljanju β-katenina u citosolu. Stabilizacija i nakupljanje β-katenina dovodi do njegovog premeštanja u jedro gde stvara kompleks sa transkripcionim faktorima grupe visoke pokretljivosti familije T-ćelijskih faktora/limfoidnih pojačavajućih faktora (TCF/LEF) i podstiče transkripciju ciljnih gena kao što su ciklin D1, p21 i cMyc.

[0006] Onkogene mutacije u genu za β-katenin CTNNb1 utiču isključivo na specifični serin i treonin i okolne ostatke vitalne za ciljanu degradaciju posredstvom APC (Hart, et al. (1999) Curr. Biol. 9:207-210). Ova interakcija je posebno očigledna kod kolorektalnog kancera, gde su kod većine tumora prisutne mutacije APC, a povećani udeo preostalih ispoljava mutacije CTNNb1 (Iwao, et al. (1998) Cancer Res March 1, 199858; 1021).

[0007] Mnoge nedavne studije su istraživale jedinjenja usmerena na β-katenin ili druge nishodne proteine signalnog puta Wnt. Nedavna istraživanja sugerišu da je moduliranje interakcije Wnt sa receptorom za Wnt na površini ćelije efikasno u smanjenju onkogenosti ćelije. Ovo je pokazano u sistemima sa tumorogenošću koju pokreće prekomerna ekspresija liganda Wnt (Liu, et al. (2013) PNAS 10;110(50):20224-9) i tamo gde ekspresiju Wnt pokreće aktivacija nishodnog puta (Vincan et al., Differentiation 2005; 73: 142-153). Vincan i saradnici su transfektovali nefunkcionalni receptor Frd7 u ćelijsku liniju SK-CO-1 sa homozigotnom APC mutacijom koja pokreće aktivaciju signalnog puta Wnt. Ove ćelije su pokazale izmenjenu morfologiju i smanjenu efikasnost formiranja tumora u poređenju sa ishodnim ćelijama u modelu ksenografta. Ovi podaci sugerišu da modulacija signalizacije posredovane ligandom Wnt može da ima blagotvoran efekat čak i kod maligniteta sa mutacijom nishodnog signalnog puta Wnt.

[0008] Opisani pronalazak odnosi se na inhibiciju Wnt-posredovane signalizacije. Ovo uključuje parakrinu signalizaciju u tkivima koja okružuju tumore i autokrinu i parakrinu signalizaciju u ćelijama kancera.

[0009] Proteini Wnt podležu post-translacionoj modifikaciji, za koju je u nekoliko mutacionih eksperimenata pokazano da je od vitalnog značaja za efikasan transport i sekreciju proteina (Tang, et al. (2012) Dev. Biol 364, 32-41, Takada, R. et al (2006) Dev. Cell 11, 791-801). Palmitoilacija proteina Wnt odvija se na nekoliko konzervativnih aminokiselina (C77, S209) i obavlja je porkupin, O-acetiltransferaza, u endoplazmatičnom retikulumu. Pokazano je da su mutacije u porkupinu uzrok razvojnih poremećaja, uključujući fokalnu dermalnu hipoplaziju, zbog poremećene signalizacije puta Wnt (Grzeschik, et al. (2007) Nat. Genet, 39 pp.833-835). Zavisnost signalizacije posredovane Wnt ligandom od porkupina i skup dokaza koji povezuju signalni put Wnt sa kancerom, doveli su do identifikovanja porkupina kao potencijalnog anti-kancerskog ciljnog molekula.

[0010] US 2014/0038922 opisuje jedinjenja koja inhibiraju signalni put Wnt i upotrebu ovih jedinjenja u lečenju bolesti povezanih sa Wnt signalizacijom. Slično tome, WO 2012/003189 i WO 2010/101849 opisuju jedinjenja i postupke za modulaciju signalnog puta Wnt.

[0011] Cilj ovog pronalaska je obezbeđivanje alternativnih ili poboljšanih modulatora Wnt signalizacije. Na primer, cilj ovog pronalaska je obezbeđivanje alternativnih ili poboljšanih inhibitora Wnt signalizacije, opciono inhibitora porkupina.

[0012] Dalje, cilj određenih primera izvođenja ovog pronalaska je obezbeđivanje novih jedinjenja za upotrebu: kod bolesti posredovanih Wnt, kao što su bolesti posredovane sekretornim Wnt ligandom koje mogu da se leče inhibicijom porkupina; u lečenju kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma i leukemije; ili za poboljšanje efikasnosti lečenja kancera.

[0013] Cilj određenih primera izvođenja ovog pronalaska je obezbeđivanje novih tretmana protiv kancera. Konkretno, cilj određenih primera izvođenja ovog pronalaska je obezbeđivanje jedinjenja koja imaju aktivnost uporedivu sa postojećim tretmanima, idealno, oni bi trebalo da imaju bolju aktivnost. Određeni primeri izvođenja pronalaska takođe imaju za cilj obezbeđivanje poboljšane rastvorljivosti u poređenju sa jedinjenjima stanja tehnike i postojećim terapijama. Posebno je poželjno da određena jedinjenja pronalaska obezbede bolju aktivnost i bolju rastvorljivost u odnosu na poznata jedinjenja.

[0014] Cilj određenih primera izvođenja ovog pronalaska je obezbeđivanje jedinjenja koja ispoljavaju sniženu citotoksičnost u odnosu na jedinjenja stanja tehnike i postojeće terapije.

[0015] Još jedan cilj određenih primera izvođenja ovog pronalaska je obezbeđivanje jedinjenja koja imaju pogodan farmakokinetički profil i odgovarajuće trajanje delovanja nakon primene doze. Sledeći cilj određenih primera izvođenja ovog pronalaska je obezbeđivanje jedinjenja u kojima metabolizovani fragmenti ili fragmenti leka nakon apsorpcije imaju status GRAS (Generally Regarded As Safe - generalno se smatraju bezbednim).

[0016] Određeni primeri izvođenja ovog pronalaska ispunjavaju neke ili sve od gore navedenih ciljeva.

KRATAK REZIME OTKRIĆA

[0017] Pronalazak je izložen u priloženom skupu patentnih zahteva.

[0018] U skladu sa prvim aspektom, obezbeđeno je jedinjenje

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0019] Jedinjenje prema pronalasku može da bude odabrano iz grupe koja se sastoji od:

[0020] Jedinjenje prema pronalasku može takođe da bude odabrano iz grupe koja se sastoji od:

�

[0021] Jedinjenje prema pronalasku može takođe da bude odabrano iz grupe koja se sastoji od:

[0022] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje prema predmetnom pronalasku za upotrebu kao lek.

1

[0023] Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja sadrži jedinjenje prema predmetnom pronalasku i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0024] U jednom primeru izvođenja, farmaceutska kompozicija može da bude kombinovani proizvod koji sadrži dodatni farmaceutski aktivni agens. Dodatni farmaceutski aktivni agens može da bude anti-tumorski agens kao što je opisano ispod u tekstu.

[0025] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da budu korisna u modulaciji Wnt signalizacije. Opciono, Wnt signalizacija je modulisana inhibicijom porkupina (Porcn). Modulacija Wnt signalizacije može da uključuje inhibiciju parakrine signalizacije u tkivima koja okružuju tumore i autokrine i parakrine signalizacije u ćelijama kancera.

[0026] Jedinjenje prema pronalasku može da bude za upotrebu u lečenju stanja koje može da se leči inhibicijom Porcn, pri čemu je stanje odabrano od: kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma i leukemije.

[0027] Inhibicija Porcn je relevantna za lečenje mnogih različitih bolesti udruženih sa povećanom Wnt signalizacijom. U primerim izvođenja, stanje koje može da se leči modulacijom Wnt signalizacije ili inhibicijom Porcn može da bude odabrano od: kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma i leukemije. Specifični kanceri, sarkomi, melanomi, kanceri kože, hematološki tumori, limfom, karcinom i leukemija koji mogu da se leče modulacijom Wnt signalizacije ili inhibicijom Porcn mogu da budu odabrani od: karcinoma skvamoznih ćelija jednjaka, kancera želuca, glioblastoma, astrocitoma; retinoblastoma, osteosarkoma, hondosarkoma, Juingovog sarkoma, rabdomiosarkoma, Vilmsovog tumora, karcinoma bazalnih ćelija, nesitnoćelijskog kancera pluća, tumora mozga, hormon-refraktornog kancera prostate, kancera prostate, metastatskog kancera dojke, kancera dojke, metastatskog kancera pankreasa, kancera pankreasa, kolorektalnog kancera, kancera grlića materice, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i kancera glave i vrata.

[0028] Inhibicija Porcn je takođe relevantna za lečenje stanja koje može da se leči inhibicijom sekrecije Wnt liganda odabranog od: fibroze kože, idiopatske plućne fibroze, intersticijalne fibroze bubrega, fibroze jetre, proteinurije, odbacivanja transplantata bubrega, osteoartritisa, Parkinsonove bolesti, cistoidnog makularnog edema, cistoidnog makularnog edema udruženog sa uveitisom, retinopatije, dijabetičke retinopatije i retinopatije prematuriteta.

[0029] Pronalazak obuhvata postupke za lečenje gore navedenih stanja i obuhvata jedinjenja prema pronalasku za upotrebu u postupku za lečenje gore navedenih stanja.

[0030] U jednom aspektu pronalaska, jedinjenje prema pronalasku može da bude za upotrebu u lečenju stanja odabranog od: kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma i leukemije. Specifični kancer, sarkom, melanom, kancer kože, hematološki tumori, limfom, karcinom i leukemija koji mogu da se leče jedinjenjem prema pronalasku mogu da budu odabrani od: karcinoma skvamoznih ćelija jednjaka, kancera želuca, glioblastoma, astrocitoma; retinoblastoma, osteosarkoma, hondosarkoma, Juingovog sarkoma, rabdomiosarkoma, Vilmsovog tumora, karcinoma bazalnih ćelija, nesitnoćelijskog kancera pluća, tumora mozga, hormon-refraktornog kancera prostate, kancera prostate, metastatskog kancera dojke, kancera dojke, metastatskog kancera pankreasa, kancera pankreasa, kolorektalnog kancera, kancera grlića materice, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i kancera glave i vrata.

[0031] Jedinjenje prema pronalasku takođe može da bude za upotrebu u lečenju stanja odabranog od: fibroze kože, idiopatske plućne fibroze, intersticijalne fibroze bubrega, fibroze jetre, proteinurije, odbacivanja transplantata bubrega, osteoartritisa, Parkinsonove bolesti, cistoidnog makularnog edema, cistoidnog makularnog edema udruženog sa uveitisom, retinopatije, dijabetičke retinopatije i retinopatije prematuriteta.

[0032] U jednom aspektu otkrića (i nije deo pronalaska) obezbeđen je postupak za lečenje stanja koje je modulisano Wnt signalizacijom, pri čemu postupak obuhvata davanje terapijske količine jedinjenja prema pronalasku pacijentu kome je to potrebno. U jenom primeru izvođenja otkrića (i nije deo pronalaska) obezbeđen je postupak za lečenje stanja koje je modulisano posredstvom Porcn.

[0033] Postupak za lečenje može da bude postupak za lečenje a stanja koje može da se leči modulacijom Wnt signalizacije ili Porcn. Ova stanja su opisana iznad u tekstu u vezi sa stanjima koja mogu da se leče inhibicijom Porcn.

[0034] U jednom aspektu otkrića (i nije deo pronalaska) obezbeđen je postupak za lečenje stanja odabranog od: kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma i leukemije, pri čemu postupak obuhvata davanje terapijske količine jedinjenja prema pronalasku pacijentu kome je to potrebno. Specifični kancer, sarkom, melanom, kancer kože, hematološki tumori, limfom, karcinom i leukemija koji mogu da se leče postupkom za lečenje mogu da budu odabrani od: karcinoma skvamoznih ćelija jednjaka, kancera želuca, glioblastoma, astrocitoma; retinoblastoma, osteosarkoma, hondosarkoma, Juingovog sarkoma, rabdomiosarkoma, Vilmsovog tumora, karcinoma bazalnih ćelija, nesitnoćelijskog kancera pluća, tumora mozga, hormon-refraktornog kancera prostate, kancera prostate, metastatskog kancera dojke, kancera dojke, metastatskog kancera pankreasa, kancera pankreasa, kolorektalnog kancera, kancera grlića materice, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i kancera glave i vrata.

[0035] Postupak za lečenje takođe može da bude lečenje stanja odabranog od: fibroze kože, idiopatske plućne fibroze, intersticijalne fibroze bubrega, fibroze jetre, proteinurije, odbacivanja transplantata bubrega, osteoartritisa, Parkinsonove bolesti, cistoidnog makularnog edema,

1

cistoidnog makularnog edema udruženog sa uveitisom, retinopatije, dijabetičke retinopatije i retinopatije prematuriteta.

[0036] Aberantna Wnt signalizacija može da bude udružena sa stanjem odabranim od sledećeg: nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC); hronična limfocitna leukemija (CLL); kancer želuca; karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (HNSCC); kolorektalni kancer; kancer jajnika; karcinom bazalnih ćelija (BCC); kancer dojke; kancer bešike; mezoteliom, kolorektalni kancer; kancer prostate; nesitnoćelijski kancer pluća; kancer pluća; osteosarkom; prekomerna ekspresija Frz je udružena sa kancerima kao što su kancer prostate; kolorektalni kancer; kancer jajnika; kancer želuca; prekomerna ekspresija komponenata signalnog puta Wnt kao što je dishevelled; kancer prostate; kancer dojke; mezoteliom; kancer grlića materice; prekomerna ekspresija Frat-1; kancer pankreasa; kancer jednjaka; kancer grlića materice; kancer dojke i kancer želuca; gubitak funkcije (LOF) aksina; hepatocelularni kancer; meduloblastom; kancer želuca; kolorektalni kancer; intestinalni karcinoid; kancer jajnika; pulmonalni adenokarcinom; kancer endometrijuma; hepatocelularni kancer; hepatoblastom; meduloblastom; kancer pankreasa; kancer štitne žlezde; kancer prostate; melanom; pilomatrikom; Vilmsov tumor; pankreatoblastomi; liposarkomi; juvenilni nazofaringealni angiofibromi; dezmoidni kancer; sinovijalni sarkom; melanom; leukemija; multipli mijelom; tumori mozga, kao što su gliomi, astrocitomi, meningiomi, švanomi, tumori hipofize, primitivni neuroektodermalni tumori (PNET), meduloblastomi, kraniofaringiomi, tumori pinealne regije, i nekancerozne neurofibromatoze.

[0037] Inhibicija Wnt signalizacije antagonistima Wnt predmetnog pronalaska može da ima terapijsko dejstvo u lečenju poremećaja koji nastaju nefunkcionalnom hematopoezom, kao što su leukemije i različiti kanceri povezani sa krvlju, kao što su akutne, hronične, limfoidne i mijelogene leukemije, mijelodisplastični sindrom i mijeloproliferativni poremećaji. Ovo uključuje mijelom, limfom (npr., Hočkinov i ne-Hočkinov) hroničnu i neprogresivnu anemiju, progresivne i simptomatske deficijencije krvnih ćelija, policitemiju veru, esencijalnu ili primarnu trombocitemiju, idiopatsku mijelofibrozu, hroničnu mijelomonocitnu leukemiju (CMML), limfom mantle ćelija, kutani T-ćelijski limfom i Waldenstromovu makroglobulinemiju.

[0038] Ostali poremećaji povezani sa aberantnom Wnt signalizacijom uključuju, ali nisu ograničeni na osteoporozu, osteoartritis, policističnu bolest bubrega, dijabetes, šizofreniju, vaskularnu bolest, srčanu bolest, neonkogene proliferativne bolesti i neurodegenerativne bolesti, kao što je Alchajmerova bolest.

[0039] Aberantna Wnt signalizacija može da bude udružena sa kancerom odabranim od: kancera mozga; pluća; debelog creva; epidermoidnog kancera; kancera skvamoznih ćelija; bešike; želuca; pankreasa; dojke; glave i vrata; renalnog kancera; kancera bubrega; jetre; jajnika; prostate;

1

materice; jednjaka; testisa; ginekološkog kancera; kancera štitne žlezde; melanoma; akutne mijeloidne leukemije; hronične mijelogene leukemije; MCL Kapošijevog sarkoma.

[0040] Aberantna Wnt signalizacija može da bude udružena sa inflamatornom bolešću odabranom od: multiple skleroze; reumatoidnog artritisa; sistemskog lupusa; inflamatorne bolesti creva; osteoartritisa; Alchajmerove bolesti.

DETALJNI OPIS

[0041] Ispod u tekstu date su definicije pojmova korišćenih u ovoj prijavi. Bilo koji pojam koji ovde nije definisan ima normalno značenje kakvo bi podrazumevao stručnjak u ovoj oblasti.

[0042] Pojam "halo" se odnosi na jedan od halogena 17. grupe periodnog sistema elemenata. Posebno, pojam se odnosi na fluor, hlor, brom i jod. Poželjno, pojam se odnosi na fluor ili hlor.

[0043] Pojam "C1-4alkil" se odnosi na linearni ili granati ugljovodonični lanac koji sadrži 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika, na primer metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, sek-butil, terc-butil, npentil i n-heksil. Slično tome, alkilen grupe mogu da budu linearne ili granate i mogu da imaju dva mesta vezivanja za ostatak molekula. Dalje, alkilen grupa može, na primer, da odgovara jednoj od alkil grupa navedenih u ovom paragrafu. Alkil i alkilen grupe mogu da budu nesupstituisane ili supstituisane jednim ili većim brojem supstituenata. Mogući supstituenti su opisani ispod u tekstu. Supstituenti za alkil grupu mogu da budu halogen, npr. fluor, hlor, brom i jod, OH, C1-6alkoksi.

[0044] Pojam "C1-4alkoksi" se odnosi na alkil grupu koja je vezana za molekul preko kiseonika. Ovo uključuje fragmente u kojima alkilni deo može da bude linearan ili granat i može da sadrži 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika, na primer metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, sek-butil, tercbutil, n-pentil i n-heksil. Prema tome, alkoksi grupa može da bude metoksi, etoksi, n-propoksi, izo-propoksi, n-butoksi, sek-butoksi, terc-butoksi, n-pentoksi i n-heksoksi. Alkilni deo alkoksi grupe može da bude nesupstituisan ili supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata. Mogući supstituenti su opisani ispod u tekstu. Supstituenti za alkil grupu mogu da budu halogen, npr. fluor, hlor, brom i jod, OH, C1-6alkoksi.

[0045] Pojam "C1-4haloalkil" se odnosi na ugljovodonični lanac supstituisan najmanje jednim halogenim atomom nezavisno odabranim pri svakom pojavljivanju, na primer fluor, hlor, brom i jod. Halogeni atom može da bude prisutan na bilo kom položaju u ugljovodoničnom lancu. Na primer, C1-6haloalkil može da se odnosi na hlorometil, flourometil, trifluorometil, hloroetil npr.

1-hlorometil i 2-hloroetil, trihloroetil npr. 1,2,2-trihloroetil, 2,2,2-trihloroetil, fluoroetil npr. 1-fluorometil i 2-fluoroetil, trifluoroetil npr. 1,2,2-trifluoroetil i 2,2,2-trifluoroetil, hloropropil, trihloropropil, fluoropropil, trifluoropropil.

1

[0046] Pojam "C2-6alkenil" se odnosi na granati ili linearni ugljovodonični lanac koji sadrži najmanje jednu dvostruku vezu i ima 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika. Dvostruka veza/veze mogu da budu prisutne u vidu E ili Z izomera. Dvostruka veza može da bude na bilo kojoj mogućoj poziciji u ugljovodoničnom lancu. Na primer, "C2-6alkenil" može da bude etenil, propenil, butenil, butadienil, pentenil, pentadienil, heksenil i heksadienil.

[0047] Pojam "C2-6alkinil" se odnosi na granati ili linearni ugljovodonični lanac koji sadrži najmanje jednu trostruku vezu i ima 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika. Trostruka veza može da bude na bilo kojoj mogućoj poziciji u ugljovodoničnom lancu. Na primer, "C2-6alkinil" može da bude etinil, propinil, butinil, pentinil i heksinil.

[0048] Pojam "C1-6heteroalkil" se odnosi na granati ili linearni ugljovodonični lanac koji sadrži 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 atoma ugljenika i najmanje jedan heteroatom odabran od N, O i S postavljen između bilo kojih ugljenika u lancu ili na kraju lanca. Na primer, ugljovodonični lanac može da sadrži jedan ili dva heteroatoma. C1-6heteroalkil može da bude vezan za ostatak molekula preko ugljenika ili heteroatoma. Na primer, "C1-6heteroalkil" može da bude C1-6N-alkil, C1-6N,N-alkil, ili C1-6O-alkil.

[0049] Pojam "karbociklični" se odnosi na zasićeni ili nezasićeni prstenasti sistem koji sadrži ugljenik. "Karbociklični" sistem može da bude monociklični ili fuzionisani policiklični prstenasti sistem, na primer, biciklik ili triciklik. "Karbociklični" fragment može da sadrži od 3 do 14 atoma ugljenika, na primer, 3 do 8 atoma ugljenika u monocikličnom sistemu i 7 do 14 atoma ugljenika u policikličnom sistemu. "Karbociklični" obuhvata cikloalkil fragmente, cikloalkenil fragmente, arilne prstenaste sisteme i fuzionisane prstenaste sisteme koji uključuju aromatični deo.

[0050] Pojam "heterociklični" se odnosi na zasićeni ili nezasićeni prstenasti sistem koji sadrži najmanje jedan heteroatom odabran od N, O ili S. "Heterociklični" sistem može da sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma, na primer 1 ili 2. "Heterociklični" sistem može da bude monociklični ili fuzionisani policiklični prstenasti sistem, na primer, biciklik ili triciklik. "Heterociklični" fragment može da sadrži od 3 do 14 atoma ugljenika, na primer, 3 do 8 atoma ugljenika u monocikličnom sistemu i 7 do 14 atoma ugljenika u policikličnom sistemu. "Heterociklični" obuhvata heterocikloalkil fragmente, heterocikloalkenil fragmente i heteroaromatične fragmente. Na primer, heterociklična grupa može da bude: oksiran, aziridin, azetidin, oksetan, tetrahidrofuran, pirolidin, imidazolidin, sukcinimid, pirazolidin, oksazolidin, izoksazolidin, tiazolidin, izotiazolidin, piperidin, morfolin, tiomorfolin, piperazin i tetrahidropiran.

[0051] Pojam "C3-6cikloalkil" se odnosi na zasićeni ugljovodonični prstenasti sistem koji sadrži 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 atoma ugljenika. Na primer, "C3-6cikloalkil" može da bude ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil i ciklooktil.

1

[0052] Pojam "C3-6cikloalkenil" se odnosi na nezasićeni ugljovodonični prstenasti sistem koji sadrži 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 atoma ugljenika koji nije aromatičan. Prsten može da sadrži više od jedne dvostruke veze pod uslovom da prstenasti sistem nije aromatičan. Na primer, "C3-6cikloalkil" može da bude ciklopropenil, ciklobutenil, ciklopentenil, ciklopentadienil, cikloheksenil, cikloheksadienil, cikloheptenil, cikloheptadien, ciklooktenil i cikloatadienil.

[0053] Pojam "C3-6heterocikloalkil" se odnosi na zasićeni ugljovodonični prstenasti sistem koji sadrži 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 atoma ugljenika i najmanje jedan heteroatom u prstenu odabran od N, O i S. Na primer mogu da postoje 1, 2 ili 3 heteroatoma, opciono 1 ili 2. "C3-6heterocikloalkil" može da bude vezan za ostatak molekula preko bilo kog atoma ugljenika ili heteroatoma. "C3-6heterocikloalkil" može da ima jednu ili više, npr. jednu ili dve, veze sa ostatkom molekula: ove veze mogu da budu ostvarene preko bilo kog od atoma prstena. Na primer, "C3-6heterocikloalkil" može da bude oksiran, aziridin, azetidin, oksetan, tetrahidrofuran, pirolidin, imidazolidin, sukcinimid, pirazolidin, oksazolidin, izoksazolidin, tiazolidin, izotiazolidin, piperidin, morfolin, tiomorfolin, piperazin i tetrahidropiran.

[0054] Pojam "C3-6heterocikloalkenil" se odnosi na nezasićeni ugljovodonični prstenasti sistem, koji nije aromatičan, koji sadrži 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 atoma ugljenika i najmanje jedan heteroatom u prstenu odabran od N, O i S. Na primer mogu da postoje 1, 2 ili 3 heteroatoma, opciono 1 ili 2. "C3-6heterocikloalkenil" može da bude vezan za ostatak molekula preko bilo kog atoma ugljenika ili heteroatoma. "C3-6heterocikloalkenil" može da ima jednu ili više, npr. jednu ili dve, veze sa ostatkom molekula: ove veze mogu da budu ostvarene preko bilo kog od atoma prstena. Na primer, "C3-6heterocikloalkil" može da bude tetrahidropiridin, dihidropiran, dihidrofuran, pirolin.

[0055] Pojam "aromatični" kada se primenjuje na supstituent kao celinu označava jedan prsten ili policiklični prstenasti sistem sa 4n 2 elektrona u konjugovanom π sistemu u prstenu ili prstenastom sistemu, pri čemu su svi atomi koji učestvuju u konjugovanom π sistemu u istoj ravni.

[0056] Pojam "aril" se odnosi na aromatični ugljovodonični prstenasti sistem. Prstenasti sistem ima 4n 2 elektrona u konjugovanom π sistemu u prstenu, pri čemu su svi atomi koji učestvuju u konjugovanom π sistemu u istoj ravni. Na primer, "aril" može da bude fenil i naftil. I sam arilni sistem može da bude supstituisan drugim grupama.

[0057] Pojam "heteroaril" se odnosi na aromatični ugljovodonični prstenasti sistem sa najmanje jednim heteroatomom u pojedinačnom prstenu ili u fuzionisanom prstenastom sistemu, odabranim od O, N i S. Prsten ili prstenasti sistem ima 4n 2 elektrona u konjugovanom π sistemu, pri čemu su svi atomi koji učestvuju u konjugovanom π sistemu u istoj ravni. Na primer, "heteroaril" može da bude imidazol, tien, furan, tiantren, pirol, benzimidazol, pirazol, pyrazine, piridin, pirimidin i indol.

1

[0058] Pojam "alkaril" se odnosi na aril grupu, kao što je gore definisano, vezanu za C1-4alkil, pri čemu C1-4alkil grupa obezbeđuje vezu sa ostatkom molekula.

[0059] Pojam "alkheteroaril" se odnosi na heteroaril grupu, kao što je gore definisano, vezanu za C1-4alkil, pri čemu alkil grupa obezbeđuje vezu sa ostatkom molekula.

[0060] Pojam "halogen" ovde uključuje pozivanje na F, Cl, Br i I. Halogen može da bude Cl. Halogen može da bude F.

[0061] Veza koja se završava sa predstavlja da je veza spojena sa drugim atomom koji nije prikazan u strukturi. Veza koja se završava u cikličnoj strukturi, a ne završava se na atomu prstenaste strukture predstavlja da veza može da bude spojena sa bilo kojim od atoma u prstenastoj strukturi, gde valenca to dopušta.

[0062] Kada je fragment supstituisan, on može da bude supstituisan na bilo kojoj tački fragmenta gde je to hemijski moguće i dosledno zahtevima atomske valence. Fragment može da bude supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata, npr.1, 2, 3 ili 4 supstituenta; opciono postoje 1 ili 2 supstituenta na grupi. Kada postoje dva ili više supstituenata, supstituenti mogu da budu isti ili različiti. Supstituent(i) mogu da budu odabrani od: OH, NHR, amidino, guanidino, hidroksiguanidino, formamidino, izotioureido, ureido, merkapto, C(O)H, acil, aciloksi, karboksi, sulfo, sulfamoil, karbamoil, cijano, azo, nitro, halo, C1-6alkil, C1-6alkoksi, C1-6haloalkil, C3-8cikloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, aril, heteroaril ili alkaril. Kada je grupa koja treba da bude supstituisana alkil grupa, supstituent može da bude =O. R može da bude odabran od H, C1-6alkil, C3-8cikloalkil, fenil, benzil ili fenetil grupe, npr. R je H ili C1-3alkil. Kada je fragment supstituisan sa dva ili više supstituenata i dva supstituenta su susedna, susedni supstituenti mogu da obrazuju C4-8prsten zajedno sa atomima fragmenta na kome su supstituenti supstituisani, pri čemu je C4-8prsten zasićeni ili nezasićeni ugljovodonični prsten sa 4, 5, 6, 7, ili 8 atoma ugljenika ili zasićeni ili nezasićeni ugljovodonični prsten sa 4, 5, 6, 7, ili 8 atoma ugljenika i 1, 2 ili 3 heteroatoma.

[0063] Supstituenti su prisutni samo na pozicijama gde je to hemijski moguće, stručnjak u oblasti će moći da odluči (bilo eksperimentalno ili teorijski), bez preteranog napora, koje supstitucije su hemijski moguće, a koje nisu.

[0064] Orto, meta i para supstitucija su dobro poznati pojmovi u struci. Kako bi se izbegla nedoumica, "orto" supstitucija predstavlja obrazac supstitucije u kome susedni ugljenici imaju supstituent, bilo da je to prosta grupa, na primer fluoro grupa u primeru ispod, ili drugi delovi

molekula, kao što je označeno vezom koja se završava

2

[0065] "Meta" supstitucija predstavlja obrazac supstitucije u kome su dva supstituenta na ugljenicima međusobno razdvojenim jednim ugljenikom, tj., sa jednim atomom ugljenika između supstituisanih ugljenika. Drugim rečima, postoji supstituent na drugom atomu od atoma sa drugim supstituentom. Na primer, grupe ispod su meta supstituisane.

[0066] "Para" supstitucija predstavlja obrazac supstitucije u kome su dva supstituenta na ugljenicima međusobno razdvojenim sa dva ugljenika, tj., sa dva atoma ugljenika između supstituisanih ugljenika. Drugim rečima, postoji supstituent na trećem atomu od atoma sa drugim supstituentom. Na primer, grupe ispod su para supstituisane.

[0067] Pod "acil" podrazumeva se organski radikal nastao, na primer, od organske kiseline uklanjanjem hidroksil grupe, npr. radikal formule R-C(O)-, u kojoj R može da bude odabran od H, C1-6alkil, C3-8cikloalkil, fenil, benzil ili fenetil grupe, npr., R je H ili C1-3alkil. U jednom primeru izvođenja acil je alkil-karbonil. Primeri acil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, formil, acetil, propionil i butiril. Konkretna acil grupa je acetil.

[0068] U celom opisu, otkrivanje jedinjenja takođe obuhvata njegove farmaceutski prihvatljive soli, solvate i stereoizomere. Tamo gde jedinjenje ima stereocentar, i (R) i (S) stereoizomeri su obuhvaćeni pronalaskom, kao što su i smeše stereoizomera ili racemska smeša obuhvaćene ovom prijavom. Tamo gde jedinjenje prema pronalasku ima dva ili više stereocentara, obuhvaćena je svaka kombinacija (R) i (S) stereoizomera. Kombinacija (R) i (S) stereoizomera može da rezultuje dijastereomernom smešom ili pojedinačnim dijastereoizomerom. Jedinjenja pronalaska mogu da budu prisutna kao pojedinačni stereoizomer ili mogu da budu mešavine stereoizomera, na primer racemske smeše i druge enantiomerne smeše, i dijasteroemerne smeše. Tamo gde je smeša mešavina enantiomera, enantiomerni višak može da bude bilo koji od onih opisanih gore. Kada je jedinjenje jedan stereoizomer, jedinjenja mogu i dalje da sadrže druge dijasteroizomere ili enantiomere kao nečistoće. Stoga jedan stereoizomer ne mora nužno imati enantiomerni višak (e.e.) ili dijastereomerni višak (d.e.) od 100%, ali može imati e.e. ili d.e. od oko najmanje 85%.

[0069] Pronalazak obuhvata farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja pronalaska. One mogu da uključuju kisele adicione i bazne soli jedinjenja. One mogu da budu kisele adicione i bazne soli jedinjenja. Pored toga, pronalazak razmatra solvate jedinjenja. Oni mogu da budu hidrati ili drugi solvatisani oblici jedinjenja.

[0070] Pogodne kisele adicione soli se formiraju od kiselina koje formiraju netoksične soli. Primeri obuhvataju acetat, aspartat, benzoat, bezilat, bikarbonat/karbonat, bisulfat/sulfat, borat, kamzilat, citrat, edizilat, ezilat, format, fumarat, gluceptat, glukonat, glukuronat, heksafluorofosfat, hibenzat, hidrohlorid/hlorid, hidrobromid/bromid, hidrojodid/jodid, izetionat, laktat, malat, maleat, malonat, mezilat, metilsulfat, naftilat, 1,5-naftalendisulfonat, 2-napsilat, nikotinat, nitrat, orotat, oksalat, palmitat, pamoat, fosfat/hidrogen fosfat/dihidrogen fosfat, saharat, stearat, sukcinat, tartarat, tozilat i trifluoracetatne soli.

[0071] Pogodne bazne soli se formiraju od baza koje formiraju netoksične soli. Primeri uključuju soli aluminijuma, arginina, benzatina, kalcijuma, holina, dietilamina, diolamina, glicina, lizina, magnezijuma, meglumina, olamina, kalijuma, natrijuma, trometamina i cinka. Mogu se formirati i hemisoli kiselina i baza, na primer, hemisulfatne i hemikalcijumove soli. Za pregled odgovarajućih soli, videti "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).

[0072] Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I) mogu da se pripreme pomoću jednog ili više od tri postupka:

(i) reakcijom jedinjenje prema pronalasku sa željenom kiselinom ili bazom;

(ii) uklanjanjem zaštitne grupe, koja je nestabilna u odnosu na kiselinu ili bazu, sa odgovarajućeg prekursora jedinjenja prema pronalasku ili otvaranjem prstena odgovarajućeg cikličnog prekursora, na primer, laktona ili laktama, korišćenjem željene kiseline ili baze; ili

(iii) pretvaranjem jedne soli jedinjenje prema pronalasku u drugu reakcijom sa odgovarajućom kiselinom ili bazom ili pomoću odgovarajuće jonoizmenjivačke kolone.

[0073] Sve tri reakcije se obično izvode u rastvoru. Dobijena so može da se istaloži i sakupi filtracijom ili može da bude regenerisana isparavanjem rastvarača. Stepen jonizacije u rezultujućoj soli može da varira od potpuno jonizovane do skoro nejonizovane.

[0074] Jedinjenja pronalaska mogu da postoje i u nesolvatisanom i u solvatisanom obliku. Pojam 'solvat' se ovde koristi da opiše molekulski kompleks koji sadrži jedinjenje prema pronalasku i stehiometrijsku količinu jednog ili više farmaceutski prihvatljivih molekula rastvarača, na primer, etanola. Pojam 'hidrat' se koristi kada je navedeni rastvarač voda.

[0075] Obimom pronalaska obuhvaćeni su kompleksi kao što su klatrati, inkluzivni kompleksi lekdomaćin pri čemu su, za razliku od gore pomenutih solvata, lek i domaćin prisutni u stehiometrijskim ili nestehiometrijskim količinama. Uključeni su i kompleksi leka koji sadrže dve ili više organskih i/ili neorganskih komponenti koje mogu da budu u stehiometrijskim ili nestehiometrijskim količinama. Dobijeni kompleksi mogu da budu jonizovani, delimično jonizovani ili nejonizovani. Za pregled ovakvih kompleksa, videti J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288 by Haleblian (August 1975).

[0076] U daljem tekstu svako pozivanje na jedinjenja bilo koje formule uključuje pozivanje na njihove soli, solvate i komplekse i na solvate i komplekse njihovih soli.

[0077] Jedinjenja pronalaska uključuju jedinjenja brojnih formula kao što je ovde definisano, uključujući sve polimorfe i njihove kristalne oblike, njihove prolekove i izomere (uključujući optičke, geometrijske i tautomerne izomere), kao što je u daljem tekstu definisano i izotopski obeležena jedinjenja pronalaska.

[0078] Ovaj pronalazak takođe uključuje sva farmaceutski prihvatljiva izotopski obeležena jedinjenja pronalaska u kojima je jedan ili više atoma zamenjeno atomima koji imaju isti atomski broj, ali atomsku masu ili maseni broj koji se razlikuju od atomske mase ili masenog broja koji su najzastupljeniji u prirodi.

[0079] Primeri izotopa pogodnih za uključivanje u jedinjenja pronalaska uključuju izotope vodonika, kao što su<2>H i<3>H, ugljenika, kao što su<11>C,<13>C i<14>C, hlora, kao što je<36>Cl, fluora, kao što je<18>F, joda, kao što su<123>I i<125>I, azota, kao što su<13>N i<15>N, kiseonika, kao što su<15>O,<17>O i<18>O, fosfora, kao što je<32>P, i sumpora, kao što je<35>S.

[0080] Određena izotopski obeležena jedinjenja, na primer, ona koja sadrže radioaktivni izotop, korisna su u studijama raspodele leka i/ili supstrata u tkivu. Radioaktivni izotopi tricijum, tj.,<3>H, i ugljenik-14, tj.,<14>C, su posebno korisni za ovu svrhu s obzirom na njihovu lakoću ugradnje i spremna sredstva za detekciju.

[0081] Supstitucija težim izotopima kao što je deuterijum, tj.,<2>H, može da pruži određene terapijske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećanog poluživota in vivo ili smanjenih zahteva za dozom, i stoga može da bude poželjna u nekim okolnostima.

[0082] Pre prečišćavanja, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da postoje kao smeša enantiomera u zavisnosti od sintetičkog postupka koji se koristi. Enantiomeri mogu da se razdvoje konvencionalnim tehnikama poznatim u struci. Stoga pronalazak obuhvata pojedinačne enantiomere, kao i njihove smeše.

2

[0083] Za neke od koraka postupka dobijanja jedinjenja pronalaska može da bude neophodno da se potencijalne reaktivne funkcionalne grupe, za koje nije poželjno da reaguju, zaštite, uz naknadno otcepljivanje pomenutih zaštitnih grupa. U tom slučaju može da se koristi bilo koji kompatibilni zaštitni radikal. Konkretno, mogu da se koriste postupci protekcije i deprotekcije kao što su oni koje je opisao T.W. GREENE (Protective Groups in Organic Synthesis, A. Wiley-Interscience Publication, 1981) ili P. J. Kocienski (Protecting groups, Georg Thieme Verlag, 1994). Sve gore navedene reakcije i pripreme novih polaznih materijala korišćene u prethodnim postupcima su konvencionalne, i odgovarajući reagensi i reakcioni uslovi za njihovo izvođenje ili pripremu, kao i postupci za izolovanje željenih proizvoda, biće dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti uz osvrt na merodavne literaturne primere i primere i pripreme date u ovom dokumentu.

[0084] Takođe, jedinjenja ovog pronalaska, kao i intermedijeri za njihovu pripremu, mogu da se prečiste prema različitim dobro poznatim postupcima, kao što je, na primer, kristalizacija ili hromatografija.

[0085] Jedno ili više jedinjenja pronalaska može da bude kombinovano sa jednim ili više farmaceutskih agenasa, na primer, antivirusnih agenasa, hemoterapeutika, antikancerskih agenasa, pojačivača imuniteta, imunosupresiva, antitumorskih vakcina, antivirusnih vakcina, citokinske terapije, ili inhibitora tirozin kinaze, za lečenje stanja modulisanih inhibicijom Porcn, na primer kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma, leukemije, poremećaja centralnog nervnog sistema, zapaljenja i imunoloških bolesti.

[0086] Postupak lečenja ili jedinjenje za upotrebu u lečenju kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma, leukemije, poremećaja centralnog nervnog sistema, zapaljenja i imunoloških bolesti, kako je ovde definisano, može da se primenjuje kao jedina terapija ili da bude kombinovana terapija sa dodatnim aktivnim agensom.

[0087] Postupak lečenja ili jedinjenje za upotrebu u lečenju kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma, leukemije i poremećaja centralnog nervnog sistema može da uključuje, pored jedinjenja prema pronalasku, konvencionalnu hirurgiju ili radioterapiju ili hemoterapiju. Takva hemoterapija može da uključuje jednu ili više od sledećih kategorija antitumorskih agenasa:

(i) antiproliferativni/antineoplastični lekovi i njihove kombinacije, kao što su agensi za alkilovanje (na primer cis-platin, oksaliplatin, karboplatin, ciklofosfamid, azotni iperit, uracil iperit, bendamustin, melfalan, hlorambucil, hlormetin, busulfan, temozolamid, nitrozouree, ifosamid, melfalan, pipobroman, trietilen-melamin, trietilentiofoporamin, karmustin, lomustin, stroptozocin i dakarbazin); antimetaboliti (na primer gemcitabin i antifolati kao što su fluoropirimidini kao 5-fluorouracil i tegafur, raltitreksed, metotreksat, pemetreksed, citozin arabinozid, floksuridin, citarabin, 6-merkaptopurin, 6-tioguanin, fludarabin fosfat, pentostatin, i gemcitabin i hidroksiurea); antibiotici (na primer antraciklini kao adriamicin, bleomicin, doksorubicin, daunomicin, epirubicin, idarubicin, mitomicin-C, daktinomicin i mitramicin); antimitotički agensi (na primer vinka alkaloidi kao vinkristin, vinblastin, vindesin i vinorelbin i taksoidi kao taksol i taksoter i inhibitori polokinaze); inhibitori proteazoma, na primer karfilzomib i bortezomib; terapija interferonom; i inhibitori topoizomeraze (na primer epipodofilotoksini kao etopozid i tenipozid, amsakrin, topotekan, mitoksantron i kamptotecin); bleomcin, daktinomicin, daunorubicin, doksorubicin, epirubicin, idarubicin, ara-C, paklitaksel (Taxol™), nabpaklitaksel, docetaksel, mitramicin, deoksiko-formicin, mitomicin-C, L-asparaginaza, interferoni (posebno IFN-a), etopozid i tenipozid;

(ii) citostatici kao što su antiestrogeni (na primer tamoksifen, fulvestrant, toremifen, raloksifen, droloksifen i jodoksifen), antiandrogeni (na primer bikalutamid, flutamid, nilutamid i ciproteron acetat), antagonisti LHRH ili agonisti LHRH (na primer goserelin, leuprorelin i buserelin), progestogeni (na primer megestrol acetat), inhibitori aromataze (na primer kao anastrozol, letrozol, vorazol i egzemestan) i inhibitori 5α-reduktaze kao što je finasterid; i navelben, CPT-II, anastrazol, letrazol, kapecitabin, reloksafme, ciklofosfamid, ifosamid i droloksafin;

(iii) antiinvazivni agensi, na primer dasatinib i bosutinib (SKI-606), i inhibitori metaloproteinaze, inhibitori receptorske funkcije urokinaznog aktivatora plazminogena ili antitela na heparanazu;

(iv) inhibitori funkcije faktora rasta: na primer takvi inhibitori uključuju antitela protiv faktora rasta i antitela protiv receptora faktora rasta, na primer anti-erbB2 antitelo trastuzumab [Herceptin™], anti-EGFR antitelo panitumumab, anti-erbB1 antitelo cetuksimab, inhibitore tirozin kinaze, na primer inhibitore familije epidermalnih faktora rasta (na primer tirozin kinazni inhibitori familije EGFR kao što su gefitinib, erlotinib, 6-akrilamido-N-(3-hloro-4-fluorofenil)-7-(3-morfolinopropoksi)-hinazolin-4-amin (CI 1033), tirozin kinazni inhibitori erbB2 kao što je lapatinib) i antitela na kostimulatorne molekule kao što su CTLA-4, 4-IBB i PD-I, ili antitela na citokine (IL-I0, TGF-beta); inhibitore familije faktora rasta hepatocita; inhibitore familije faktora rasta insulina; modulatore proteinskih regulatora ćelijske apoptoze (na primer inhibitori Bcl-2); inhibitore familije faktora rasta koji potiču iz trombocita, kao što je imatinib i/ili nilotinib (AMN107); inhibitore serin/treonin kinaza (na primer inhibitori Ras/Raf signalizacije kao što su

2

inhibitori farnezil transferaze, na primer sorafenib, tipifarnib i lonafarnib), inhibitore ćelijske signalizacije putem MEK i/ili AKT kinaza, inhibitore c-kit, inhibitore abl kinaze, inhibitore PI3 kinaze, inhibitore Plt3 kinaze, inhibitore CSF-1R kinaze, IGF receptor, inhibitore kinaze; inhibitore aurora kinaze i inhibitore kinaze zavisne od ciklina kao što su inhibitori CDK2 i/ili CDK4; i CCR2, CCR4 ili CCR6 modulator;

(v) antiangiogeni agensi kao što su oni koji inhibiraju efekte faktora rasta vaskularnog endotela, [na primer antitelo na faktor rasta vaskularnih endotelnih ćelija bevacizumab (Avastin™); talidomid; lenalidomid; i na primer, inhibitor tirozin kinaznog receptora VEGF kao što su vandetanib, vatalanib, sunitinib, aksitinib i pazopanib;

(vi) pristupi genske terapije, uključujući na primer pristupe za zamenu aberantnih gena kao što su aberantni p53 ili aberantni BRCA1 ili BRCA2;

(vii) imunoterapijski pristupi, uključujući, na primer, terapiju antitelima kao što su alemtuzumab, rituksimab, ibritumomab tiuksetan (Zevalin<®>) i ofatumumab; interferone kao što je interferon α; interleukine kao što je IL-2 (aldesleukin); inhibitore interleukina, na primer inhibitore IRAK4; vakcine protiv kancera uključujući profilaktičke i terapijske vakcine, kao što su HPV vakcine, na primer Gardasil, Cervarix, Oncophage i Sipuleucel-T (Provenge); gp100; vakcine na bazi dendritskih ćelija (kao što je Ad.p53 DC); i modulatore receptora sličnih toll-u, na primer, agoniste TLR-7 ili TLR-9; i

(viii) citotoksički agensi, na primer fludaribin (fludara), kladribin, pentostatin (Nipent™);

(ix) steroidi kao kortikosteroidi, uključujući glukokortikoide i mineralokortikoide, na primer aklometazon, aklometazon dipropionat, aldosteron, amcinonid, beklometazon, beklometazon dipropionat, betametazon, betametazon dipropionat, betametazon natrijum fosfat, betametazon valerat, budesonid, klobetazon, klobetazon butirat, klobetazol propionat, kloprednol, kortizon, kortizon acetat, kortivazol, deoksikorton, desonid, dezoksimetazon, deksametazon, deksametazon natrijum fosfat, deksametazon izonikotinat, difluorokortolon, fluklorolon, flumetazon, flunizolid, fluocinolon, fluocinolon acetonid, fluocinonid, fluokortin butil, fluorokortizon, fluorokortolon, fluokortolon kaproat, fluokortolon pivalat, fluorometolon, flupredniden, flupredniden acetat, flurandrenolon, flutikazon, flutikazon propionat, halcinonid, hidrokortizon, hidrokortizon acetat, hidrokortizon butirat, hidrokortizon aceponat, hidrokortizon buteprat, hidrokortizon valerat, ikometazon, ikometazon enbutat, meprednizon, metilprednizolon, mometazon parametazon, mometazon furoat monohidrat, prednikarbat, prednizolon, prednizon,

2

tiksokortol, tiksokortol pivalat, triamcinolon, triamcinolon acetonid, triamcinolon alkohol i njihovi odgovarajući farmaceutski prihvatljivi derivati. Može da se koristi kombinacija steroida, na primer kombinacija dva ili više steroida navedenih u ovom paragrafu;

(x) ciljane terapije, na primer, inhibitori PI3Kd, na primer idelalizib i perifozin; modulatori PD-1, PD-L1, PD-L2 i CTL4-A, antitela i vakcine; inhibitori IDO (kao što je indoksimod); anti-PD-1 monoklonska antitela (kao što su MK-3475 i nivolumab); anti-PDL1 monoklonska antitela (kao što su MEDI-4736 i RG-7446); anti-PDL2 monoklonska antitela; i anti-CTLA-4 antitela (kao što je ipilimumab);

(xi) antivirusna sredstva kao što su nukleotidni inhibitori reverzne transkriptaze (na primer, zidovudin, didanozin, zalcitabin, stavudin, lamivudin, abakavir, adefovir diprovoksil, lobukavir, BCH-10652, emitricitabin, beta-L-FD4 (nazvan i 3' -dikleoksi-5-fluoro-citidin), (-)-beta-D-2,6-diamino-purin dioksolan, i lodenazin), nenukleozidni inhibitori reverzne transkriptaze (na primer, nevirapin, delaviradin, efavirenz, PNU-142721, AG-1549, MKC-442 (1-etoksi-metil)-5-(1-metiletil)-6-(fenilmetil)-(2,4(1H,3H)pirimidinon), i (+)-alanolid A i B) i inhibitori proteaze (na primer, sakvinavir, ritonavir, indinavir, nelfinavir, amprenavir, lasinavir, DMP-450, BMS-2322623, ABT-378 i AG-1549);

(xii) himerni antigenski receptori, antikancerske vakcine i inhibitori arginaze.

[0088] Postupak lečenja ili jedinjenje za upotrebu u lečenju inflamatornih i imunoloških bolesti mogu da uključuju, pored jedinjenja prema pronalasku, i dodatne aktivne agense. Dodatni aktivni agensi mogu da budu jedan ili više aktivnih agenasa koji se koriste za lečenje stanja koje se leči jedinjenjem prema pronalasku i dodatni aktivni agens. Dodatni aktivni agensi mogu da uključuju jedan ili više od sledećih aktivnih agenasa: -

(i) steroidi kao kortikosteroidi, uključujući glukokortikoide i mineralokortikoide, na primer aklometazon, aklometazon dipropionat, aldosteron, amcinonid, beklometazon, beklometazon dipropionat, betametazon, betametazon dipropionat, betametazon natrijum fosfat, betametazon valerat, budesonid, klobetazon, klobetazon butirat, klobetazol propionat, kloprednol, kortizon, kortizon acetat, kortivazol, deoksikorton, desonid, dezoksimetazon, deksametazon, deksametazon natrijum fosfat, deksametazon izonikotinat, difluorokortolon, fluklorolon, flumetazon, flunizolid, fluocinolon, fluocinolon acetonid, fluocinonid, fluokortin butil, fluorokortizon, fluorokortolon, fluokortolon kaproat, fluokortolon pivalat, fluorometolon, flupredniden, flupredniden acetat, flurandrenolon, flutikazon, flutikazon propionat, halcinonid, hidrokortizon, hidrokortizon acetat,

2

hidrokortizon butirat, hidrokortizon aceponat, hidrokortizon buteprat, hidrokortizon valerat, ikometazon, ikometazon enbutat, meprednizon, metilprednizolon, mometazon parametazon, mometazon furoat monohidrat, prednikarbat, prednizolon, prednizon, tiksokortol, tiksokortol pivalat, triamcinolon, triamcinolon acetonid, triamcinolon alkohol i njihovi odgovarajući farmaceutski prihvatljivi derivati. Može da se koristi kombinacija steroida, na primer kombinacija dva ili više steroida navedenih u ovom paragrafu;

(ii) TNF inhibitori, na primer etanercept; monoklonska antitela (npr. infliksimab (Remicade), adalimumab (Humira), certolizumab pegol (Cimzia), golimumab (Simponi)); fuzioni proteini (npr. etanercept (Enbrel)); i agonisti 5-HT2A(npr. 2,5-dimetoksi-4-jodoamfetamin, TCB-2, dietilamid lizerginske kiseline (LSD), dimetilazetidid lizerginske kiseline);

(iii) antiinflamatorni lekovi, na primer, nesteroidni antiinflamatorni lekovi;

(iv) inhibitori dihidrofolat reduktaze/antifolati, na primer metotreksat, trimetoprim, brodimoprim, tetroksoprim, iklaprim, pemetreksed, ralitreksed i pralatreksat; i

(v) imunosupresivi, na primer ciklosporini, takrolimus, sirolimus pimekrolimus, inhibitori angiotenzina II (npr. Valsartan, Telmisartan, Losartan, Irbesatan, Azilsartan, Olmesartan, Kandesartan, Eprosartan) i ACE inhibitori npr. agensi koji sadrže sulfhidril (npr. Kaptopril, Zofenopril), agensi koji sadrže dikarboksilat (npr. Enalapril, Ramipril, Kvinapril, Perindopril, Lisinopril, Benazepril, Imidapril, Zofenopril, Trandolapril), agensi koji sadrže fosfat (npr., Fosinopril), kazokinini, laktokinini i laktotripeptidi.

[0089] Ovakvo kombinovano lečenje može da se postigne istovremenim, uzastopnim ili odvojenim doziranjem pojedinačnih komponenti tretmana. Takvi kombinovani proizvodi koriste jedinjenja ovog pronalaska u terapijski efikasnom opsegu doziranja, koji je ovde ranije opisan, i drugi farmaceutski aktivni agens u okviru njegovog odobrenog opsega doziranja.

[0090] Jedinjenja pronalaska mogu da postoje u jednom kristalnom obliku ili u smeši kristalnih oblika ili mogu da budu amorfna. Dakle, jedinjenja pronalaska namenjena za farmaceutsku upotrebu mogu da budu primenjena kao kristalni ili amorfni proizvodi. Mogu da se dobiju, na primer, kao čvrsti čepovi, prahovi, ili filmovi postupcima kao što su precipitacija, kristalizacija, sušenje zamrzavanjem, ili sušenje raspršivanjem, ili sušenje isparavanjem. Mikrotalasno ili radiofrekventno sušenje može da se koristi za ovu svrhu.

[0091] Za gore pomenuta jedinjenja pronalaska, primenjena doza će, naravno, varirati u zavisnosti od korišćenog jedinjenja, načina primene, željenog tretmana i indikovanog poremećaja. Na primer,

2

ako se jedinjenje prema pronalasku primenjuje oralno, onda dnevna doza jedinjenje prema pronalasku može da bude u rasponu od 0.01 mikrograma po kilogramu telesne težine (µg/kg) do 100 miligrama po kilogramu telesne težine (mg/kg).

[0092] Jedinjenje prema pronalasku, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, može da se koristi samostalno, ali će se generalno primenjivati u obliku farmaceutske kompozicije u kojoj su jedinjenja pronalaska, ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, udruženi sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem. Konvencionalne procedure za odabir i pripremu odgovarajućih farmaceutskih formulacija opisane su u, na primer, "Pharmaceuticals -The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988.

[0093] U zavisnosti od načina davanja jedinjenja pronalaska, farmaceutska kompozicija koja se koristi za primenu jedinjenja pronalaska će poželjno sadržati od 0.05 do 99 tež.% (težinski procenat) jedinjenja pronalaska, poželjnije od 0.05 do 80 tež.% jedinjenja pronalaska, još poželjnije od 0.10 do 70 tež.% jedinjenja pronalaska, i čak još poželjnije od 0.10 do 50 tež.% jedinjenja pronalaska, gde su svi težinski procenti zasnovani na ukupnoj kompoziciji.

[0094] Farmaceutske kompozicije mogu da se primene lokalno (npr. na kožu) u obliku, npr., krema, gelova, losiona, rastvora, suspenzija, ili sistemski, npr. oralnom primenom u obliku tableta, kapsula, sirupa, praha ili granula; ili parenteralnom primenom u obliku sterilnog rastvora, suspenzije ili emulzije za injekcije (uključujući intravensku, subkutanu, intramuskularnu, intravaskularnu injekciju ili infuziju); rektalnom primenom u obliku supozitorija; ili inhalacijom u obliku aerosola.

[0095] Za oralnu primenu jedinjenja pronalaska mogu da budu pomešana sa adjuvansom ili nosačem, na primer, laktozom, saharozom, sorbitolom, manitolom; skrobom, na primer, krompirovim skrobom, kukuruznim skrobom ili amilopektinom; derivatom celuloze; vezivnim agensom, na primer, želatinom ili polivinilpirolidonom; i/ili lubrikantom, na primer, magnezijum stearatom, kalcijum stearatom, polietilen glikolom, voskom, parafinom, i slično, a zatim komprimovana u tablete. Ako su potrebne obložene tablete, jezgra, pripremljena kao što je gore opisano, mogu da budu obložena koncentrovanim rastvorom šećera koji može da sadrži, na primer, gumu arabiku, želatin, talk i titanijum dioksid. Alternativno, tableta može da bude obložena odgovarajućim polimerom rastvorenim u lako isparljivom organskom rastvaraču.

[0096] Za pripremu mekih želatinskih kapsula, jedinjenja pronalaska mogu da budu pomešana sa, na primer, biljnim uljem ili polietilen glikolom. Tvrde želatinske kapsule mogu da sadrže granule jedinjenja korišćenjem bilo kojih gore pomenutih ekscipijenasa za tablete. Takođe, tečne ili polučvrste formulacije jedinjenje prema pronalasku mogu da budu punjene u tvrde želatinske kapsule. Tečni preparati za oralnu primenu mogu da budu u obliku sirupa ili suspenzija, na primer,

2

rastvori koji sadrže jedinjenje prema pronalasku, dok ostatak preparata čine šećer i smeša etanola, vode, glicerola i propilen glikola. Opciono, takvi tečni preparati mogu da sadrže sredstva za bojenje, arome, zaslađivače (kao što je saharin), konzervanse i/ili karboksimetilcelulozu kao zgušnjivač ili druge ekscipijense poznate stručnjacima u ovoj oblasti.

[0097] Za intravensku (parenteralnu) primenu jedinjenja pronalaska mogu da budu primenjena kao sterilni vodeni ili uljni rastvor.

[0098] Veličina doze jedinjenja pronalaska za terapijske svrhe će prirodno varirati u zavisnosti od prirode i težine stanja, starosti i pola životinje ili pacijenta i načina primene, prema dobro poznatim principima medicine.

[0099] Očekuje se da će se nivoi doziranja, učestalost primene doza i trajanje tretmana jedinjenja pronalaska razlikovati u zavisnosti od formulacije i kliničke indikacije, starosti i komorbidnih zdravstvenih stanja pacijenta. Očekuje se da standardno trajanje tretmana jedinjenjima pronalaska varira između jednog i sedam dana za većinu kliničkih indikacija. Može da bude neophodno produžiti trajanje lečenja preko sedam dana u slučajevima ponavljajućih infekcija ili infekcija povezanih sa tkivima ili implantiranim materijalima kod kojih postoji slabo snabdevanje krvlju, uključujući kosti/zglobove, respiratorni trakt, endokard i zubna tkiva.

[0100] U opisu i patentnim zahtevima ove specifikacije, reči "obuhvataju" i "sadrže" i njihove varijacije znače "uključujući, ali ne ograničavajući se na", i nisu namenjene da (i ne) isključuju druge fragmente, aditive, komponente, cele brojeve ili korake. U opisu i patentnim zahtevima ove specifikacije, jednina obuhvata množinu osim ako kontekst ne zahteva drugačije. Konkretno, kada se koristi jednina, specifikaciju treba tumačiti kao da razmatra množinu, kao i jedninu, osim ako kontekst ne zahteva drugačije.

[0101] Svojstva, celi brojevi, karakteristike, jedinjenja, hemijski fragmenti ili grupe opisani u vezi sa određenim aspektom, primerom izvođenja ili primerom pronalaska treba da se razumeju kao primenljivi na bilo koji drugi aspekt, primer izvođenja ili primer koji je ovde opisan, osim ako su inkompatibilani sa njim. Sva svojstva otkrivena u ovoj specifikaciji (uključujući sve prateće patentne zahteve, apstrakt i crteže), i/ili svi koraci bilo kog postupka ili procesa koji su tako otkriveni, mogu da se kombinuju u bilo kojoj kombinaciji, osim kombinacija u kojima su bar neka od takvih svojstava i/ili koraka međusobno isključiva. Pronalazak nije ograničen na detalje bilo kog prethodnog primera izvođenja. Pronalazak obuhvata bilo koje novo svojstvo, ili bilo koju novu kombinaciju svojstava otkrivenih u ovoj specifikaciji (uključujući bilo koji od priloženih patentnih zahteva, apstrakt i crteže), ili na bilo koji novi korak, ili bilo koju novu kombinaciju koraka bilo kog postupka ili procesa koji je tako otkriven.

[0102] Pažnja čitaoca je usmerena na sve radove i dokumente koji su podneti istovremeno sa ili pre ove specifikacije u vezi sa ovom prijavom i koji su otvoreni za javni uvid sa ovom specifikacijom.

PRIMERI I SINTEZA

[0103] Rastvarači, reagensi i polazni materijali su nabavljeni od komercijalnih prodavaca i korišćeni onako kako su primljeni, ako nije drugačije opisano. Sve reakcije su izvedene na sobnoj temperaturi osim ako nije drugačije navedeno. Potvrde identiteta i čistoće jedinjenja izvedene su pomoću LCMS UV upotrebom Waters Acquity SQ Detector 2 (ACQ-SQD2# LCA081). Talasna dužina detektora diodnog niza bila je 254 nM i MS je bio u režimu pozitivnog i negativnog elektrospreja (m/z: 150-800). Alikvot od 2 µL je sukcesivno ubrizgan u zaštitnu kolonu (filteri 0.2 µm x 2 mm) i UPLC kolonu (C18, 50 x 2.1 mm, < 2 µm), pri temperaturi održavanoj na 40°C. Uzorci su eluirani pri brzini protoka od 0.6 mL/min sa sistemom mobilne faze sačinjenim od A (0.1% (zapr./zapr.) mravlje kiseline u vodi) i B (0.1% (zapr./zapr.) mravlje kiseline u acetonitrilu) prema gradijentima navedenim u Tabeli 1 ispod. Vremena zadržavanja RT su prikazana u minutima.

Tabela 1

1

[0104] Za karakterizaciju finalnih jedinjenja korišćena je i NMR. NMR spektri su dobijeni pomoću Bruker AVIII 400 Nanobay sa BBFO probom od 5 mm. Opciono, merene su Rf vrednosti jedinjenja na pločama za tankoslojnu hromatografiju na silicijum dioksidu (TLC).

[0105] Prečišćavanje jedinjenja je izvedeno fleš hromatografijom na koloni silicijum dioksida ili preparativnom LCMS. Prečišćavanje pomoću LCMS je izvedeno korišćenjem masenog detektora Waters 3100 u režimu pozitivnog i negativnog elektrospreja (m/z: 150-800) detektorom Waters 2489 UV/Vis. Uzorci su eluirani pri protoku od 20 mL/min na koloni XBridge™ prep C185 µM OBD 19x100 mm sa sistemom mobilne faze sačinjenim od A (0.1% (zapr./zapr.) mravlje kiseline u vodi) i B (0.1% (zapr./zapr.) mravlje kiseline u acetonitrilu) prema gradijentu prikazanom u Tabeli 2 ispod.

Tabela 2

[0106] Hemijski nazivi u ovom dokumentu generisani su upotrebom programa Dotmatics Scientific Software za konverziju elementalne strukture u naziv. Polazni materijali su nabavljeni iz komercijalnih izvora ili sintetisani prema procedurama iz literature.

[0107] Jedinjenja prema pronalasku mogu da budu sintetisana po analogiji sa sledećim reakcionim putevima:

Opšta šema 1

[0108] Jedinjenja prema pronalasku mogu da budu pripremljena po analogiji sa sledećim putem

Biaril alfa-hloroacetamid: Sinteza A

[0109]

2

Intermedijer 1: 4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirolo[2,3-b]piridin

[0110]

4-Bromo-7-azaindol (247 mg, 1.25 mmol) i natrijum karbonat (352 mg, 3.32 mmol) su rastvoreni u smeši etil acetata (8 mL) i vode (2 mL). Azot je produvavan kroz rastvor 10 minuta, nakon čega su dodati (2-metil-4-piridinil)boronska kiselina (235 mg, 1.72 mmol) i kompleks [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]Paladijum(II) hlorida s dihlorometanom (102.38 mg, 0.13 mmol). Reakcija je zagrevana mikrotalasnim zračenjem na 100 °C tokom 2 časa. LCMS je pokazala nepotpunu reakciju. Dodato je još 30 mg katalizatora i 100 mg boronske kiseline i reakcija je zagrevana na 100 °C tokom 30 minuta. Reakcija je filtrirana kroz čep od celita ispiranjem pomoću EtOAc. Smeša je razblažena zasićenim rastvorom NH4Cl, slojevi su razdvojeni i vodena faza je dva puta ekstrahovana pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni nad Na2SO4i redukovani u vakuumu. Sirovi materijal je nanet na SCX kasetu od 10 g i eluiran pomoću MeOH, a zatim 1M NH3u MeOH. Amonijumski sloj je redukovan u vakuumu da bi se dobio 4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirolo[2,3-b]piridin (280 mg, 1.34 mmol, 106.74% prinosa) kao čvrsta supstanca braon boje.

[0111] MS Postupak 2: RT: 0.79 min, ES<+>m/z 210.1 [M+H]<+>

[0112]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 10.39-10.50 (bs, 1H), 8.96-8.71 (1H, d, J=5.1Hz, 1H), 8.44-8.47 (d, J=4.9Hz, 1H), 7.43-7.55 (m, 3H), 7.21-7.25 (1H, d, J=4.9Hz, 1H), 6.71-6.74 (d, J=3.2Hz, 1H), 2.79 (s, 3H)

Biaril alfa-hloroacetamid: Sinteza A - Korak 1

Intermedijer 2: 5-pirazin-2-ilpiridin-2-amin:

[0113]

[0114] Bočica za obradu mikrotalasima sa štapićem za mešanje napunjena je pinakol estrom 2-aminopiridin-5-boronske kiseline (0.95 g, 4.3 mmol), jodopirazinom (777 mg, 3.77 mmol), natrijum karbonatom (1.20 g, 11.32 mmol), toluenom (5mL), vodom (5mL), etanolom (5mL) i degasirana 10 minuta. Zatim je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (436 mg, 0.38 mmol) i hermetički zatvorena bočica je zatim zračena na 100°C tokom 1 časa. Analiza je pokazala da je reakcija završena, pa je reakciona smeša koncentrovana do suva, zatim je ostatak suspendovan u DCM, a nakon toga je dodat 1M vodeni rastvor HCl. Faze su razdvojene i vodena faza je alkalizovana dodatkom 10% vodenog rastvora NaOH do pH-12. Vodeni sloj je re-ekstrahovan sa EtOAc nekoliko puta, osušen nad natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan. Rezultujuća čvrsta supstanca je triturisana dietil etrom, a zatim filtrirana čime je dobijen 5-pirazin-2-ilpiridin-2-amin (355 mg, 1.65 mmol, 43.702% prinosa) kao ružičasti prah.

[0115] MS Postupak 2: RT 0.45 min, ES<+>m/z 172.9 [M+H]<+>

[0116]<1>H NMR (400MHz, DMSO) δ/ppm: 9.08 (s, 1H), 8.71-8.73 (d, J=1.9Hz, 1H), 8.58-8.6 (m, 1H), 8.45-8.47 (d, J=2.5Hz, 1H), 8.10-8.14 (dd, J=8.7, 2.5Hz, 1H), 6.54-6.57 (d, J=8.7Hz, 1H), 6.41-6.47 (bs, 2H)

Biaril alfa-hloroacetamid: Sinteza A - Korak 2

Intermedijer 3: 2-hloro-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid

[0117]

[0118] U ružičastu suspenziju 5-pirazin-2-ilpiridin-2-amina (355 mg, 2.06 mmol), THF (1.5 mL) i N,N-diizopropiletilamina (0.72 mL, 4.12 mmol) ukapan je hloroacetil hlorid (0.16 mL, 2.06 mmol) na sobnoj temperaturi. Suspenzija je postala crna i oslobođena je velika količina egzotermne energije. Analiza nakon 30 minuta je pokazala da je reakcije završena. Reakcija je razblažena metanolom, a zatim koncentrovana. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (12 g SiO2, 30-100% EtOAc u heptanu, zatim 0-20% MeOH u EtOAc) čime je dobijena

4

čvrsta supstanca prljavo bele/braon boje 2-hloro-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (194 mg, 0.78 mmol, 37.84% prinosa).

[0119] MS Postupak 2: RT 1.10 min, ES<+>m/z 249 [M+H]<+>

[0120]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 8.96-8.99 (d, J=1.5Hz, 1H), 8.91-8.93 (m, 1H), 8.85-8.89 (bs, 1H), 8.58-8.61 (m, 1H), 8.48-8.50 (d, J=2.5Hz, 1H), 8.27-8.35 (m, 2H), 4.17 (s, 2H)

Primer 1: 2-[4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid

[0121]

[0122] U rastvor 4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirolo[2,3-b]piridina (230 mg, 1.1 mmol) u DMF (6 mL) na 0 °C dodat je natrijum hidrid, (60% dispergovan u mineralnom ulju) (61 mg, 1.54 mmol). Reakcija je mešana na 0°C tokom 1 časa, nakon čega je u jednoj porciji dodat 2-hloro-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (475 mg, 1.91 mmol). Reakcija je zagrevana do sobne temperature i ostavljena da se meša preko noći. LCMS je pokazala da reakcija nije završena. Reakcija je ponovo ohlađena do 0°C, i dodat je NaH (50 mg). Nakon mešanja tokom 1 časa, dodat je hloroacetamid (75 mg) i reakcija je zagrevana do sobne temperature i mešana tokom vikenda. Reakcija je razblažena vodom i vodena faza je ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni nad Na2SO4i redukovani u vakuumu. Sirovi materijal je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (40 g SiO20 do 100% EtOAc u heptanu, praćeno sa 0 do 10% MeOH u EtOAc), međutim materijal i dalje nije bio čist.

[0123] Polu-čist materijal je suv nanesen na siliku i ponovo prečišćen fleš hromatografijom na koloni (12 g SiO2, 50% do 100% EtOAc u heptanu, praćeno sa 0 do 5% MeOH u EtOAc) kako bi se dobio 2-[4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (58 mg, 0.14 mmol, 12.52% prinosa) kao čvrsta žuto-mrka supstanca.

[0124] MS Postupak 1: RT: 2.43min, ES<+>m/z 422.1 [M+H]<+>

[0125]<1>H NMR (400MHz, DMSO) δ/ppm: 12.27 (s, 1H), 9.31-9.33 (d, J=1.5Hz, 1H), 9.14-9.16 (d, J=1.9Hz, 1H), 8.72-8.74 (m, 1H), 8.61-8.65 (m, 2H), 8.51-8.55 (dd, J=8.7, 2.6Hz, 1H), 8.35-8.37 (d, J=4.9Hz, 1H), 8.12-8.17 (d, J=8.7Hz, 1H), 7.73-7.76 (d, J=3.7Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.587.61 (d, J=5.0Hz, 1H), 7.34-7.37 (d, J=5.0Hz, 1H), 6.75-6.77 (d, J=3.5Hz, 1H), 5.35 (s, 2H), 2.61 (s, 3H).

Primer 2

[0126] Sledeće jedinjenje je pripremljeno po analogiji sa Opštom šemom 1 zamenom 4-bromo-7-azaindola sa odgovarajućim 5,6-fuzionisanim bromo-heteroarilom.

Opšta šema 2

[0127] Dodatna jedinjenja pronalaska mogla bi da se pripreme po analogiji sa sledećim putem

Intermedijer 4: 2-(4-hloropirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid

[0129] 6-Hloro-7-deazapurin (139 mg, 0.91 mmol) je rastvoren u DMF (2.5 mL) i rastvor je ohlađen do 0 °C. Dodat je NaH (60% dispergovan u mineralnom ulju) (54.3 mg, 1.36 mmol) i reakcija je mešana na 0 °C 45 minuta. Reakcija je zagrevana do sobne temperature i ostavljena da se meša 15 minuta, nakon čega je reakcija ponovo ohlađena do 0 °C i dodat je 2-hloro-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (337 mg, 1.36 mmol). Reakcija je zagrevana do sobne temperature i ostavljena da se meša 16 časova. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Reakcija je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni nad Na2SO4i redukovani u vakuumu. Proizvod je nanet na siliku i prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 12 g, 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 do 10% MeOH u EtOAc) kako bi se dobio proizvod 2-(4-hloropirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (240 mg, 0.60 mmol, 66% prinosa) kao čvrsta žuto-mrka supstanca.

[0130] MS Postupak 2: RT 3.11 min, ES<+>m/z 366 [M+H]<+>

[0131]<1>H NMR (400MHz, d<6>-DMSO) δ/ppm: 11.3 (s, 1H), 9.32 (d, 1H, J = 1.6 Hz), 9.14 (dd, 1H, J = 2.5, 0.8 Hz), 8.71 (dd, 1H, J = 2.5, 1.6 Hz), 8.64 (dd, 1H, J = 2.5 Hz), 8.52 (dd, 1H, J = 8.8, 2.5 Hz), 8.11 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.96 (s, 1H), 7.81 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 6.71 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 5.34 (s, 2H).

Primer 3: 2-[4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid

[0132]

[0133] U bočici za obradu mikrotalasima od 2.0-5.0 mL, 2-(4-hloropirolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (110 mg, 0.27 mmol) i natrijum karbonat (58 mg, 0,55 mmol) su suspendovani u 1,4-dioksanu (2.5 mL) i vodi (0.5 mL). Azot je produvavan kroz rastvor 10 minuta, nakon čega su dodati (2-metil-4-piridinil)boronska kiselina (49 mg, 0.36 mmol) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (32 mg, 0.02 mmol). Bočica je zatvorena i reakcija je zagrevana mikrotalasnim zračenjem na 120 °C tokom 1 časa. Zapaženo je da je reakcija završena pomoću LCMS. Reakcija je razblažena zasićenim NaHCO3i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni nad Na2SO4i redukovani u vakuumu. Proizvod je suv nanesen na siliku i prečišćen fleš hromatografijom na koloni kako bi se dobio 2-[4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-d]pirimidin-7-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (29 mg, 0.07 mmol, 25% prinosa) kao siva čvrsta supstanca.

[0134] MS Postupak 1: RT 2.30 min, ES<+>m/z 423 [M+H]<+>

[0135]<1>H NMR (400MHz, d<6>-DMSO) δ/ppm: 11.3 (s, 1H), 9.32 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 9.15 (dd, 1H, J = 2.4, 0.6 Hz), 8.93 (s, 1H), 8.73 (dd, 1H, J = 2.5, 1.5 Hz), 8.69 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 8.64 (d, 1H, J = 2.5 Hz), 8.53 (dd, 1H, J = 8.8, 2.5 Hz), 8.13 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.00 (bs, 1H), 7.94 (dd, 1H, J = 5.2, 1.5 Hz), 7.85 (d, 1H, J = 3.8 Hz), 7.08 (s, 1H, J = 3.8 Hz), 5.38 (s, 2H), 2.64 (s, 3H).

Primer 4

[0136] Sledeća jedinjenja su pripremljena po analogiji sa Opštom šemom 2 zamenom 6-hloro-7-deazapurina sa odgovarajućim 5,6-fuzionisanim hloro heteroarilom i (2-metil-4-piridinil)boronske kiseline sa odgovarajućom heteroaril boronskom kiselinom.

4

Opšta šema 3

[0137] Dodatna jedinjenja pronalaska mogla bi da se pripreme po analogiji sa sledećim putem

Intermedijer 5: N-(6-bromo-3-piridil)-2-hloro-acetamid

[0138]

[0139] 5-amino-2-bromopiridin (1.44 g, 8.32 mmol) i DIPEA (2.23 mL, 12.5 mmol) su rastvoreni u DMF (40 mL). Ukapan je hloroacetil hlorid (0,7 mL, 8.74 mmol) i reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 16 časova. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Reakcija je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni nad Na2SO4i redukovani u vakuumu. Sirovi proizvod je nanet na siliku i prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 80 g, 0 do 100% EtOAc u heptanu) da bi se dobio N-(6-bromo-3-piridil)-2-hloro-acetamid (1.52 g, 6.09 mmol, 73% prinosa) kao žuta čvrsta supstanca.

[0140] MS Postupak 2: RT 1.25 min, ES<+>m/z 250 [M+H]<+>

[0141]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 8.45 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 8.40 (bs, 1H), 8.05 (dd, 1H, J = 8.6, 2.8 Hz), 7.48 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 4.22 (s, 2H).

Intermedijer 6: N-(6-bromo-3-piridil)-2-[4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]acetamid

[0142]

[0143] 4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirolo[2,3-b]piridin (163 mg, 0.78 mmol) je rastvoren u DMF (5 mL) i ohlađen do 0 °C. Dodat je NaH (60% dispergovan u mineralnom ulju) (38 mg, 0.93 mmol) i reakcija je mešana na 0 °C 45 minuta. Reakcija je zagrevana do sobne temperature i mešana 15 minuta, nakon čega je reakcija ohlađena do 0 °C i dodat je N-(6-bromo-3-piridil)-2-hloroacetamid (243 mg, 0.97 mmol). Reakcija je zagrevana do sobne temperature i ostavljena da se meša 16 časova. LCMS je pokazala da je preostala mala količina polaznog materijala, ali da je željeni proizvod većinom formiran. Reakcija je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su redukovani u vakuumu. Sirovi proizvod je nanet na siliku i prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 12 g, 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 do 10% MeOH u EtOAc) kako bi se dobio N-(6-bromo-3-piridil)-2-[4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]acetamid (230 mg, 0.54 mmol, 70% prinosa).

[0144] MS Postupak 2: RT 1.13 min, ES<+>m/z 423 [M+H]<+>

[0145]<1>H NMR (400MHz, d<6>-DMSO) δ/ppm:10.83 (s, 1H), 8.63-8.61 (m, 2H), 8.35 (d, 1H, J = 5.0 Hz), 7.98 (dd, 1H, J = 8.7, 2.8 Hz), 7.72 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 7.52 (bs, 1H), 7.62 (dd, 1H, J = 8.7, 0.4 Hz), 7.58 (dd, 1H, J = 5.0, 1.5 Hz), 7.35 (d, 1H, J = 4.9 Hz), 6.75 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 5.26 (s, 2H), 2.60 (s, 3H).

Primer 5: 2-[4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]-N-(6-pirazin-2-il-3-piridil)acetamid

[0146]

[0147] U bočici za obradu mikrotalasima od 2.0-5.0 mL, N-(6-bromo-3-piridil)-2-[4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]acetamid (75 mg, 0.18 mmol) i (tributilstanil)pirazin (78 mg, 0.21 mmol) su rastvoreni u DMF (2.5 mL). Azot je produvavan kroz rastvor 10 minuta, nakon čega je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (21 mg, 0.02 mmol), bočica je zatvorena i reakciona smeša je zagrevana mikrotalasnim zračenjem na 120 °C 7 časova. LCMS je pokazala formiranje željenog proizvoda sa malom količinom preostalog polaznog materijala. Reakcija je razblažena zas. rastvorom NaHCO3i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su redukovani u vakuumu. Sirovi proizvod je nanet na siliku i prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 12 g, 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 do 10% MeOH u EtOAc) kako bi se dobio 2-[4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]-N-(6-pirazin-2-il-3-piridil)acetamid (7.0 mg, 0.02 mmol, 10% prinosa) kao bela čvrsta supstanca.

[0148] MS Postupak 1: RT 2.36 min, ES<+>m/z 422 [M+H]<+>

[0149]<1>H NMR (400MHz, d<6>-DMSO) δ/ppm: 10.94 (s, 1H), 9.49 (d, 1H, J = 1.4 Hz), 8.93 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 8.71 (dd, 1H, J = 2.4, 1.5 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.5 Hz), 8.63 (d, 1H, J = 5.1 Hz), 8.37 (d, 1H, J = 5.1 Hz), 8.34 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 8.25 (dd, 1H, J = 8.6, 2.5 Hz), 7.76 (d, 1H, J = 3.7 Hz), 7.66 (bs, 1H), 7.59 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 4.9 Hz), 6.77 (d, 1H, J = 3.7 Hz), 5.32 (s, 2H), 2.60 (s, 3H).

Primer 6

[0150] Sledeća jedinjenja su pripremljena po analogiji sa Opštom šemom 3 upotrebom odgovarajućeg 5,6-fuzionisanog hloro heteroarila i heteroaril boronske kiseline.

4

Opšta šema 4

[0151]

Intermedijer 7: 4-hloro-1-tetrahidropiran-2-il-pirazolo[3,4-d]pirimidin

[0152]

[0153] 4-hloro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin (678 mg, 4.39 mmol) i monohidrat p-toluensolfonske kiseline (16 mg, 0.09 mmol) su suspendovani u etil acetatu (25 mL), dodat je 3,4-dihidro-2H-piran i reakciona smeša je zagrevana pod refluksom 3 časa. Kada je sva suspendovana čvrsta supstanca prešla u rastvor, rastvarač je uklonjen u vakuumu i sirovi proizvod je nanet na siliku. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 12 g, 0 do 100% EtOAc u heptanu) da bi se dobio 4-hloro-1-tetrahidropiran-2-il-pirazolo[3,4-d]pirimidin (840 mg, 3.52 mmol, 80% prinosa) kao ružičasta čvrsta supstanca.

[0154]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 8.80 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 6.05 (dd, 1H, J = 10.4, 2.5 Hz), 4.15-4.10 (m, 1H), 3.85-3.77 (m, 1H), 2.68-2.57 (m, 1H), 2.21-2.12 (m, 1H), 2.03-1.95 (m, 1H), 1.95-1.77 (m, 2H), 1.69-1.63 (m, 1H).

Intermedijer 8: 4-(2-metil-4-piridil)-1-tetrahidropiran-2-il-pirazolo[3,4-d]pirimidin

[0155]

4

[0156] U bočici za obradu mikrotalasima od 10-20 mL, 4-hloro-1-tetrahidropiran-2-ilpirazolo[3,4-d]pirimidin (153 mg, 0.64 mmol) i natrijum karbonat (135 mg, 1.28 mmol) su suspendovani u 1,4-dioksaneu (4 mL) i vodi (1 mL). Azot je produvavan kroz rastvor 5 minuta, nakon čega su dodati (2-metil-4-piridinil)boronska kiselina (105 mg, 0.77 mmol) i [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum (II). CH2Cl2(52 mg, 0.06 mmol), bočica je zatvorena i reakcija je zagrevana pod mikrotalasnim zračenjem na 120 °C 1 čas. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Reakcija je ugašena dodavanjem zas. NaHCO3i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su redukovani u vakuumu i naneti na siliku. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 12g, 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 do 5% MeOH u EtOAc) da bi se dobio 4-(2-metil-4-piridil)-1-tetrahidropiran-2-ilpirazolo[3,4-d]pirimidin (130 mg, 0.44 mmol, 69% prinosa) kao narandžasto ulje.

[0157] MS Postupak 2: RT 1.16 min, ES<+>m/z 296 [M+H]<+>

[0158]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 9.16 (s, 1H), 8.78 (dd, 1H, J = 5.2, 0.6 Hz), 8.43 (s, 1H), 7.92 (bs, 1H), 7.81 (ddd, 1H, J = 5.2, 1.7, 0.6 Hz), 6.17 (dd, 1H, J = 10.4, 2.6 Hz), 4.20-4.14 (m, 1H), 3.90-3.82 (m, 1H), 2.74 (s, 3H), 2.72-2.63 (m, 1H), 2.24-2.15 (m, 1H), 2.07-2.00 (m, 1H), 1.87-1.65 (m, 3H).

Intermedijer 9: 4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin

[0159]

[0160] 4-(2-metil-4-piridil)-1-tetrahidropiran-2-il-pirazolo[3,4-d]pirimidin (320 mg, 1.08 mmol) je suspendovan u rastvoru 4M HCI u 1,4-dioksanu (10 mL, 40 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 16 časova. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Reakcija je ugašena

4

dodavanjem zas. NaHCO3i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su redukovani u vakuumu i naneti na siliku. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 12 g, 0 do 100% EtOAc u heptanu) kako bi se dobio 4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin (55 mg, 0.26 mmol, 24% prinosa) kao žuta čvrsta supstanca.

[0161] MS Postupak 2: RT 0.74 min, ES<+>m/z 210 [M+H]<+>

[0162]<1>H NMR (400MHz, d<6>-DMSO) δ/ppm: 14.35 (bs, 1H), 9,13 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.72 (d, 1H, J = 5.3 Hz), 8.10 (bs, 1H), 8.04 (d, 1H, J = 5.3), 2.66 (s, 3H).

Primer 7: 2-[4-(2-metil-4-piridil)pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid

[0163]

[0164] 4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin (122 mg, 0.58 mmol) je rastvoren u DMF (5 mL) i ohlađen do 0 °C. Dodat je NaH (60% dispergovan u mineralnom ulju) (28 mg, 0.69 mmol) i reakcija je mešana na 0 °C 45 minuta. Reakcija je zagrevana do sobne temperature i ostavljena da se meša 15 minuta. Reakcija je ohlađena do 0 °C i dodat je 2-hloro-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (186 mg, 0.75 mmol). Reakcija je zagrevana do sobne temperature i mešana 3 dana. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Reakcija je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su redukovani u vakuumu i naneti na siliku. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 25 g, 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 do 10% MeOH u EtOAc) da bi se dobio 2-[4-(2-metil-4-piridil)pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (15 mg, 0.04 mmol, 6% prinosa) kao bela čvrsta supstanca.

[0165] MS Postupak 2: RT 1.08 min, ES<+>m/z 424 [M+H]<+>

[0166]<1>H NMR (400MHz, d<6>-DMSO) δ/ppm: 11.4 (s, 1H), 9.32 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 9.18 (s, 1H), 9.15 (d, 1H, J = 2.6 Hz), 8.94 (s, 1H), 8.75-8.72 (m, 2H), 8.64 (d, 1H, J = 2.5 Hz), 8.53 (dd, 1H, J = 8.8, 2.5 Hz), 8.12 (s, 1H), 8.11 (d, 1H, J = 5.8 Hz), 8.08 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 5.58 (s, 2H), 2.67 (s, 3H).

Primer 8

4

[0167] Sledeća jedinjenja su pripremljena po analogiji sa Opštom šemom 4 upotrebom odgovarajućeg 5,6-fuzionisanog hloro heteroarila i heteroarila boronske kiseline.

Opšta šema 5

[0168] Dodatna jedinjenja pronalaska bi mogla da budu pripremljena po analogiji sa sledećim putem

4

Intermedijer 9: 4-hloropirolo[2,3-b]piridin-1-il)-triizopropilsilan

[0169]

[0170] 4-Hloro-1H-pirolo[2,3-b]piridin (1.05 g, 6.88 mmol) je rastvoren u THF (50 mL) i ohlađen do 0 °C. Dodat je NaH (60% dispergovan u mineralnom ulju) (1.5 g, 10.3 mmol) i reakcija je mešana na 0 °C 1 čas. Dodat je triizopropilsilil hlorid (2.38 g, 12.4 mmol) i reakcija je zagrevana

4

pod refluksom preko noći. TLC (8:2 heptan/EtOAc) je pokazala da je polazni materijal utrošen (Rf 0.4) i formiranje mrlje novog proizvoda (0.9). Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su redukovani u vakuumu i naneti na siliku. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 40 g, 0 do 20% EtOAc u heptanu) kako bi se dobio (4-hloropirolo[2,3-b]piridin-1-il)-triizopropilsilan (2.1 g, 6.88 mmol, 100% prinosa).

[0171]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 8.21 (d, 1H, J = 5.4 Hz, 7.39 (d, 1H, J = 3.5 Hz), 7.12 (d, 1H, J = 5.4 Hz), 6.74 (dd, 1H, J = 3.5 Hz), 1.93 (hept, 3H, J = 7.2 Hz), 1.19 (d, 18H, J = 7.2 Hz).

Intermedijer 10: (4-hloro-5-fluoro-pirolo[2,3-b]piridin-1-il)-triizopropilsilan:

[0172]

[0173] 4-hloropirolo[2,3-b]piridin-1-il)- triizopropilsilan (290 mg, 0.94 mmol) je rastvoren u THF (8 mL) i ohlađen do -78 °C. Ukapan je rastvor s-BuLi i reakcija je mešana na -78 °C 30 minuta. Dodat je rastvor N-fluorobenzensulfonimida (830 mg, 2.63 mmol) u THF (3 mL) i reakcija je mešana na -78 °C tokom 1 časa. LCMS nije omogućila donošenje zaključka, budući da ni polazni materijal, ni proizvod nisu mogli da budu zapaženi. Reakcija je ugašena na -78 °C dodavanjem zas. rastvora NH4Cl rastvor i zatim polako zagrejana do sobne temperature. Reakciona smeša je ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc i kombinovani organski ekstrakti su osušeni nad Na2SO4i redukovani u vakuumu. Sirovi proizvod je nanet na siliku i proizvod prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 12 g, 0 do 20% EtOAc u heptanu) kako bi se dobio (4-hloro-5-fluoro-pirolo[2,3-b]piridin-1-il)-triizopropilsilan (180 mg, 0.55 mmol, 59% prinosa) kao bela čvrsta supstanca.

[0174]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 8.18 (d, 1H, J = 2.0 Hz), 7.41 (d, 1H, J = 3.5 Hz), 6.68 (d, 1H, J = 3.5 Hz), 1.86 (hept, 3H, J = 7.6 Hz), 1.14 (d, 18H, J = 7.6 Hz).

Intermedijer 11: [5-fluoro-4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il-triizopropilsilan

[0175]

[0176] U bočici za obradu mikrotalasima od 2.0-5.0 mL, (4-hloro-5-fluoro-pirolo[2,3-b]piridin-1-il)-triizopropilsilan (180 mg, 0.55 mmol) i trobazni kalijum fosfat (233 mg, 1.10 mmol) su suspendovani u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (1 mL). Azot je produvavan kroz rastvor 10 minuta, nakon čega su dodati 2-metilpiridin-4-boronska kiselina (180 mg, 1.31 mmol), tricikloheksilfosfin (15 mg, 0.06 mmol) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum (0) (34 mg, 0.04 mmol). Bočica je zatvorena i reakcija je zagrevana mikrotalasnim zračenjem na 120 °C tokom 1 časa. LCMS je pokazala da je reakcija završena. Reakcija je razblažena zas. NaHCO3i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su redukovani u vakuumu i naneti na siliku. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (12 g, 0 do 50% EtOAc u heptanu) da bi se dobio [5-fluoro-4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il-triizopropilsilan (136 mg, 0.35 mmol, 64% prinosa) kao bezbojno ulje.

[0177] MS Postupak 2: RT 2.48 min, ES<+>m/z 384 [M+H]<+>

[0178]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 8.66 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 8.24 (d, 1H, J = 2.9 Hz), 7.50 (bs, 1H), 7.44-7.41 (m, 2H), 6.59 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 2.68 (s, 3H), 1.87 (hept, 3H, J = 7.7 Hz), 1.16 (d, 18H, J = 7.7 Hz).

Intermedijer 12: 5-fluoro-4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirolo[2,3-b]piridin

[0179]

[0180] [5-fluoro-4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il-triizopropilsilan (136 mg, 0,35 mmol) je rastvoren u THF (3.5 mL) i dodat je 1M rastvor tetrabutilamonijum fluorida u THF (0.43 mL, 0.43 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 časa, nakon čega je zapaženo da je reakcija završena pomoću LCMS. Reakcija je razblažena vodom i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni nad Na2SO4i redukovani u vakuumu da bi se

1

dobio 5-fluoro-4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirolo[2,3-b]piridin (80 mg, 0.35 mmol, 80% prinosa) kao žuta čvrsta supstanca.

[0181] MS Postupak 2: RT 0.90 min, ES<+>m/z 228 [M+H]<+>

[0182]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 9.41 (bs, 1H), 8.69 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 8.32 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 7.50 (bs, 1H), 7.47 (dd, 1H, J = 3.5, 2.5 Hz), 7.44 (d, 1H, J = 3.1 Hz), 6.56 (dd, 1H, J = 3.5, 2.0 Hz), 2.69 (s, 3H).

Primer 9: 2-[5-fluoro-4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid

[0183]

[0184] 5-fluoro-4-(2-metil-4-piridil)-1H-pirolo[2,3-b]piridin (80 mg, 0.35 mmol) je rastvoren u DMF (4 mL) i ohlađen do 0 °C. Dodat je NaH (60% dispergovan u mineralnom ulju) (17 mg, 0.42 mmol) i reakcija je mešana na 0 °C 45 minuta, nakon čega je reakcija zagrevana do sobne temperature i mešana 15 minuta. Reakcija je ohlađena do 0 °C i dodat je 2-hloro-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (114 mg, 0.46 mmol). Reakcija je zagrevana do sobne temperature i ostavljena da se meša 16 časova. LCMS je pokazala malu količinu preostalog polaznog materijala, kao i formiranje željenog proizvoda. Reakcija je ugašena dodavanjem vode i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su redukovani u vakuumu i naneti na siliku. Proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (kolona 12 g, 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0-10% MeOH u EtOAc). Prečišćeni proizvod je zatim prečišćen preparativnom HPLC kako bi se dobio prečišćeni proizvod 2-[5-fluoro-4-(2-metil-4-piridil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (10 mg, 0.03 mmol, 6% prinosa).

[0185] MS Postupak 1: RT 2.58 min, ES<+>m/z 440 [M+H]<+>

[0186]<1>H NMR (400MHz, d<6>-DMSO) δ/ppm: 11.28 (s, 1H), 9.32 (d, 1H, J = 1.5 Hz), 9.15 (dd, 1H, J = 2.5, 0.7 Hz), 8.73 (dd, 1H, J = 2.5, 1.5 Hz), 8.66 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 8.64 (d, 1H, J = 2.5 Hz), 8.53 (dd, 1H, J = 8.8, 2.5 Hz), 8.38 (d, 1H, J = 2.9 Hz), 8.14 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.79 (d, 1H,

2

J = 3.5 Hz), 7.56 (s, 1H), 7.49 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 6.56 (d, 1H, J = 3.5 Hz), 5.34 (s, 2H), 2,60 (s, 3H).

Primer 10

[0187] Sledeće jedinjenje je pripremljeno po analogiji sa Opštom šemom 5 upotrebom odgovarajućeg 5,6-fuzionisanog hloro heteroarila.

Opšta šema 6

[0188] Dodatna jedinjenja pronalaska bi mogla da budu pripremljena po analogiji sa sledećim putem

Intermedijer 13: 2-(4-hloropirolo[2,3-b]piridin-1-il)-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid

[0189]

[0190] 2-hloro-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (708 mg, 2.85 mmol) i kalijum karbonat (1132 mg, 8.19 mmol) su dodati u rastvor 4-hloro-1H-pirolo[2,3-b]piridina (250 mg, 1.64 mmol) u DMF (70 mL), reakciona smeša je zagrevana do 60°C preko noći. LCMS analiza je pokazala formiranje željenog proizvoda. Reakciona smeša je koncentrovana do suva, dobijeni ostatak je rastvoren u DCM i dodat je natrijum bikarbonat. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrahovana pomoću DCM. Kombinovani organski slojevi su oprani slanim rastvorom, osušeni nad natrijum sulfatom i rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (40 g SiO2, 0-10% MeOH u DCM), slične frakcije su kombinovane i rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-(4-hloropirolo[2,3-b]piridin-1-il)-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (350 mg,0.96 mmol, 59% prinosa) kao čvrsta supstanca krem boje.

[0191] MS Postupak 1: RT 3.52 min, ES<+>m/z 365.1 / 367.0 [M+H]<+>

[0192]<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ/ppm: 9.00-9.02 (d, J=1.5Hz, 1H), 8.90-8.93 (m, 1H), 8.64-8.67 (m, 1H), 8.55-8.57 (d, J=2.4Hz, 1H), 8.30-8.39 (m, 3H), 7.40-7.43 (d, J=3.6Hz, 1H), 7.23-7.25 (d, J=5.3Hz, 1H), 6.74-6.76 (d, J=3.6Hz, 1H), 5.23 (s, 2H).

Primer 11: 2-[4-(1-piperidil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid

[0193]

[0194] Trietilamin (0.19 mL, 1.37 mmol) i piperidin (0.14 mL, 1.37 mmol) su dodati u rastvor 2-(4-hloropirolo[2,3-b]piridin-1-il)-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamida (100 mg, 0.27 mmol) u NMP (2 mL). Reakcija je podvrgnuta mikrotalasnom zračenju na 180°C tokom 4 časa. LCMS analiza je pokazala da je reakcija formirala željeni proizvod. Dodati su slani rastvor i DCM u

4

reakcionu smešu, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovana pomoću DCM (x3), kombinovani organski slojevi su osušeni nad natrijum sulfatom i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0-10% MeOH u DCM), slične frakcije su kombinovane i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je rastvoren u DMSO:MeCN:H2O (8:1:1) i prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC (eluiranje pomoću H2O i MeCN sa 0.1% mravlje kiseline). Slične frakcije su kombinovane i propuštene kroz kasetu SCX, kaseta je eluirana pomoću MeOH i zatim NH3/MeOH. Frakcije NH3/MeOH su kombinovane i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom kako bi se dobio 2-[4-(1-piperidil)pirolo[2,3-b]piridin-1-il]-N-(5-pirazin-2-il-2-piridil)acetamid (3 mg, 0.0073 mmol, 2.6% prinosa) kao bezbojna čvrsta supstanca.

[0195] MS Postupak 1: RT 2.81 min, ES<+>m/z 414.1[M+H]<+>

[0196]<1>H NMR (400MHz, D6-DMSO) δ/ppm: 11.13 (bs, 1H), 9.30-9.32 (d, J=1.5Hz, 1H), 9.12-9.14 (m, 1H), 8.71-8.74 (m, 1H), 8.63-8.64 (d, J=2.6Hz, 1H), 8.50-8.54 (dd, J=2.6, 8.9Hz, 1H), 8.11-8.16 (d, J=8.7Hz, 1H), 7.91-7.94 (d, J=5.5Hz, 1H), 7.33-7.35 (d, J=3.5Hz, 1H), 6.48-6.50 (d, J=3.7Hz, 1H), 6.44-6.47 (d, J=5.5Hz, 1H), 5.19 (s, 2H), 3.40-3.46 (m, 4H), 1.62-1.71 (m, 6H).

Primer 12

[0197] Sledeća jedinjenja su pripremljena upotrebom postupka opisanog u opštoj šemi 6, zamenom piperidina odgovarajućim zasićenim aminom.

Dualni ćelijski β-kateninski reporterski test

[0198] Mišje L ćelije transfektovane da konstitutivno proizvode biološki aktivan mišji Wnt-3a, označene kao ćelije L-Wnt, nabavljene su iz Američke kolekcije tipova kultura, ATCC, Manassas, VA (ATCC). Ove ćelije su gajene u DMEM obogaćenom sa 10% FCS (Gibco/Invitrogen, Carlsbad, CA), 1% geneticina i 1% natrijum piruvata (Sigma) na 37°C sa 5% CO2. Ćelije su zasejane u ploče sa 96 bunarčića i tretirane serijskim razblaženjima jedinjenja razblaženog do koncentracije od 0.1% DMSO. Posle 24 časa, ćelijski supernatanti su preneti u ploče sa 96 bunarčića prethodno zasejane reporterskim ćelijama Leading Light<®>Wnt, stabilno transfektovanim genom za luciferazu pod kontrolom responsivnih elemenata Wnt signalnog puta. Nakon dodatna 24 časa, ćelije su tretirane luciferaznim test-sistemom One-glo (Promega, Madison, WI) i luminiscentni signal je očitan pomoću čitača Envision. IC50jedinjenja se određuje kao koncentracija koja snižava indukovani signal luciferaze do 50% od DMSO kontrole.

[0199] Rezultati in vitro bioloških testova za neka jedinjenja pronalaska dati su u tabeli ispod. Tabela pokazuje grupu za svako jedinjenje na osnovu vrednosti IC50 svakog jedinjenja kao "+", "++" i "+++". Kategorija "+" se odnosi na jedinjenja sa IC50 od >5 nM. Kategorija "++" se odnosi na jedinjenja sa IC50 od 1 nM do 5 nM. Kategorija "+++" se odnosi na jedinjenja sa IC50 od <1 nM.

[0200] Specifične vrednosti IC50za izbor jedinjenja pronalaska date su ispod.

Imunoprecipitacija za ocenu specifičnosti

[0201] Ćelije L-Wnt mogu da se ocene tretmanom sa alkanil-palmitatom i nekoliko koncentracija jedinjenja. Nakon 24 časa ćelijski lizati mogu da se operu u PBS (SOURCE) i sakupe u ledeno hladnom puferu za lizu (LYSIS BUFFER). Magnetne perle Dynabeads (SOURCE) mogu da budu inkubirane sa anti-wnt-3a antitelom (Abcam) 20 minuta i inkubirane sa lizatima jedan čas. Perle mogu da se izdvoje magnetom i nevezana frakcija se zadržava. Uzorci mogu da se obrade "klik" hemijom, upotrebom proteinskog puferskog kompleta Click-iT<®>(Life technologies), prema priloženom protokolu, za konjugaciju biotina sa alkanil palmitatom. Eluati mogu da budu razdvojeni od uzoraka magnetom i dobijeni uzorci kuvani 20 minuta da bi se konjugati odvojili. Perle mogu da se uklone i eluati i nevezana frakcija mogu da se analiziraju elektroforezom na poliakrilamidnom gelu, prebace na membranu i oboje na biotin upotrebom streptavidinperoksidaze rena i za ukupni Wnt pomoću specifičnog antitela.

Test ćelijske smrti

[0202] Ćelije u medijumu za rast (DMEM, 10% FCS) mogu da se tretiraju serijskim razblaženjem jedinjenja razblaženog do 0.1% DMSO tokom 72 časa. Broj vijabilnih ćelija meren je njihovom sposobnošću da redukuju rezazurin u rezorufin koji je detektovan emitovanjem fluorescencije na 590 nm.

Test formiranja fokusa

[0203] Ćelije Capan-2 mogu da se zaseju u ploče sa 6 bunarčića u standardnom medijumu za rast i tretiraju serijskim razblaženja jedinjenja. Medijum za ćelije je menjan na svaka četiri dana sa dodatim sveži jedinjenjem. Nakon desetodnevnog rasta, ćelije mogu da se fiksiraju na metanolu i tretiraju bojom kristal violet za vizuelizaciju. Oblast pokrivena kolonijama ćelija detektovana je pomoću Operetta i analizirana upotrebom programa Columbus.

Claims (13)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje odabrano od:

   �

   �

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje odabrano od

   4
3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je jedinjenje
4. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2, pri čemu je jedinjenje
5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva za upotrebu kao lek.
6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnim zahteva 1 do 4 za upotrebu u lečenju stanja odabranog od: fibroze kože, idiopatske plućne fibroze, intersticijalne fibroze bubrega, fibroze jetre, proteinurije, odbacivanja transplantata bubrega, osteoartritisa, Parkinsonove bolesti, cistoidnog makularnog edema, cistoidnog makularnog edema udruženog sa uveitisom, retinopatije, dijabetičke retinopatije i retinopatije prematuriteta.
7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnim zahteva 1 do 4 za upotrebu u lečenju stanja odabranog od: kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma i leukemije.
8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od patentnim zahteva 1 do 4 za upotrebu u lečenju stanja odabranog od: karcinoma skvamoznih ćelija jednjaka, kancera želuca, glioblastoma, astrocitoma; retinoblastoma, osteosarkoma, hondosarkoma, Juingovog sarkoma, rabdomiosarkoma, Vilmsovog tumora, karcinoma bazalnih ćelija, nesitnoćelijskog kancera pluća, tumora mozga, hormonrefraktornog kancera prostate, kancera prostate, metastatskog kancera dojke, kancera dojke, metastatskog kancera pankreasa, kancera pankreasa, kolorektalnog kancera, kancera grlića materice, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i kancera glave i vrata.
9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od patentnim zahteva 1 do 4, pri čemu je jedinjenje za upotrebu u modulaciji Wnt signalizacije, gde je stanje koje može da se leči modulacijom Wnt signalizacije odabrano od osteoporoze, osteoartritisa, policistične bolesti bubrega, dijabetesa, šizofrenije, vaskularne bolesti, srčane bolesti, neonkogenih proliferativnih bolesti i neurodegenerativnih bolesti, pri čemu je opciono neurodegenerativna bolest Alchajmerova bolest.
10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnim zahteva 1 do 4, pri čemu je jedinjenje za upotrebu u lečenju stanja koje je modulisano pomoću Porcn, pri čemu je stanje odabrano od: kancera, sarkoma, melanoma, kancera kože, hematoloških tumora, limfoma, karcinoma i leukemije.
11. 11. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 9 ili patentnom zahtevu 10, pri čemu je stanje odabrano od: karcinoma skvamoznih ćelija jednjaka, kancera želuca, glioblastoma, astrocitoma; retinoblastoma, osteosarkoma, hondosarkoma, Juingovog sarkoma, rabdomiosarkoma, Vilmsovog tumora, karcinoma bazalnih ćelija, nesitnoćelijskog kancera pluća, tumora mozga, hormonrefraktornog kancera prostate, kancera prostate, metastatskog kancera dojke, kancera dojke, metastatskog kancera pankreasa, kancera pankreasa, kolorektalnog kancera, kancera grlića materice, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i kancera glave i vrata ili gde je stanje odabrano od: fibroze kože, idiopatske plućne fibroze, intersticijalne fibroze bubrega, fibroze jetre, proteinurije, odbacivanja transplantata bubrega, osteoartritisa, Parkinsonove bolesti, cistoidnog makularnog edema, cistoidnog makularnog edema udruženog sa uveitisom, retinopatije, dijabetičke retinopatije i retinopatije prematuriteta.
12. 12. Farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
13. 13. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 12, gde je farmaceutska kompozicija kombinovani proizvod koji sadrži dodatni farmaceutski aktivni agens. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5