RS63503B1

RS63503B1 - Inhibitori rho kinaze

Info

Publication number: RS63503B1
Application number: RS20220776A
Authority: RS
Inventors: Masha Poyurovsky; Ji-In Kim; Kevin Liu; Alexandra Zanin-Zhorov
Original assignee: Kadmon Corporation Llc
Priority date: 2012-10-05
Filing date: 2013-10-07
Publication date: 2022-09-30
Also published as: US10696660B2; EP4116293A2; JP2019034949A; US20260200898A1; EP4116293A3; ES2924915T3; US20210147391A1; US10183931B2; CA2926478A1; US20190308953A1; HUE059305T2; SI2903618T1; EP2903618B1; PT2903618T; JP6703075B2; HRP20220913T1; EA201500362A1; CN113773308A; LT2903618T; CN113620933A

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Pronalazak se odnosi na inhibitore ROCK1 i/ili ROCK2. Takođe su obezbeđene metode inhibicije ROCK1 i/ili ROCK2 koje su korisne za lečenje bolesti.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Rho-povezana protein kinaza (ROCK) je ključni intraćelijski regulator dinamike citoskeleta i pokretljivosti ćelija. Rho-kinaza reguliše niz nizvodnih ciljeva RhoA kroz fosforilaciju, uključujući, na primer, laki lanac miozina, podjedinicu koja vezuje fosfatazu lakog lanca miozina i LIM-kinazu 2. Ovi supstrati regulišu organizaciju aktinskih filamenata i kontraktilnost. U ćelijama glatkih mišića Rho-kinaza posreduje senzibilizaciju kalcijuma i kontrakciju glatkih mišića. Inhibicija Rho-kinaze blokira kontrakciju mišića izazvanu sa 5-HT i agonistom fenilefrina. Kada se unese u ćelije ne-glatkih mišića, Rho kinaza indukuje formiranje stresnih vlakana i potrebna je za ćelijsku transformaciju posredovanu sa RhoA. Rho kinaza učestvuje u različitim ćelijskim procesima, uključujući, ali ne ograničavajući se na ćelijsku adheziju, ćelijsku pokretljivost i migraciju, kontrolu rasta, ćelijsku kontrakciju i citokinezu. Rho kinaza je takođe uključena u aktivaciju transportnog sistema razmene Na/H, formiranje stresnih vlakana, aktivaciju aducina i fiziološke procese kao što su vazokonstrikcija, stezanje glatkih mišića bronhija, proliferacija glatkih mišića krvnih sudova i endotelnih ćelija, agregacija trombocita i drugi.

[0003] Inhibicija aktivnosti Rho-kinaze na životinjskim modelima je pokazala brojne prednosti inhibicije Rho-kinaze za lečenje ljudskih bolesti. Ovo obuhvata modele kardiovaskularnih bolesti kao što su hipertenzija, ateroskleroza, restenoza, hipertrofija srca, očna hipertenzija, cerebralna ishemija, cerebralni vazospazam, erektilna disfunkcija penisa, poremećaji centralnog nervnog sistema kao što su degeneracija neurona i povreda kičmene moždine, te kod neoplazija. Pokazalo se da inhibicija aktivnosti Rho-kinaze inhibira rast tumorskih ćelija i metastaze, angiogenezu, arterijske trombotične poremećaje kao što su agregacija trombocita i agregacija leukocita, astma, regulacija intraokularnog pritiska i resorpcija kostiju. Inhibicija aktivnosti Rho-kinaze kod pacijenata ima koristi za kontrolu cerebralnih vazospazama i ishemije posle subarahnoidnog krvarenja, smanjenje intraokularnog pritiska, povećanje odliva očne vodice relaksacijom trabekularnog mrežastog tkiva, poboljšanje protoka krvi do optičkog nerva i zaštitu zdravih ganglijskih ćelija.

[0004] Kod sisara, Rho-kinaza se sastoji od dve izoforme, ROCK1 (ROCKβ; p160-ROCK) i ROCK2 (ROCKα). ROCK1 i ROCK2 su različito eksprimirani i regulisani u specifičnim tkivima. Na primer, ROCK1 je sveprisutno eksprimiran u relativno visokim nivoima, dok se ROCK2 prvenstveno eksprimira u srčanim mišićima i mozgu i skeletnim mišićima. Izoforme su takođe izražene u nekim tkivima i na način specifičan za fazu razvoja. ROCK1 je supstrat za cepanje kaspazom-3 tokom apoptoze, dok ROCK2 nije. Osnovni kalponin specifičan za glatke mišiće fosforiliše samo ROCK2.

[0005] Dokument WO 2008/054599 A2 se odnosi na inhibitore ROCK1 i ROCK2, koji mogu biti selektivni za ROCK2, i metode modulacije farmakokinetičkih i/ili farmakodinamičkih svojstava takvih jedinjenja.

[0006] S obzirom na stepen uključenih ćelijskih procesa i bolesti, poželjna su jedinjenja koja selektivno inhibiraju jednu rho kinazu, ili inhibiraju ROCK1 i ROCK2.

SUŠTINA PRONALASKA

[0007] Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje koje inhibira ROCK 2 za upotrebu u lečenju autoimunog poremećaja kod subjekta, pri čemu je autoimuni poremećaj psorijaza, atopijski dermatitis, ekcem ili bolest kalem protiv domaćina (GVHD), te pri čemu je jedinjenje koje inhibira ROCK2 jedinjenje sa formulom (XXXII):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

R<1>je izabran iz grupe koju čine -O-(CH2)y-CO2R<12>, -O-(CH2)y-C(=O)NR<13>R<14>, -O-(CH2)y-heteroaril, -O-(CH2)y-cikloalkil. -O-C(=O)-(CH2)y-NR<13>R<14>, -O-(CH2)z-NR<13>R<14>, -NH-C(=O)-(CH2)y-NR<13>R<14>, -NH-C(=O)-X-R<15>, -NH-(CH2)inR<13>R<14>;

R<12>je izabran iz grupe koju čine C1-C6alkil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan na jednom ili više atoma ugljenika sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana od halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R<13>i R<14>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<16>R<17>, aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<13>i R<14>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, C3-C7cikloalkil, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

X je izabran od kovalentne veze, O, NH, i C1-C6alkila;

R<15>je izabran iz grupe koju čine heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil,

ili R<15>je izabran od -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -CO2R<18>, -O-(CH2)x-CO2R<18>, i -C(=O)NR<16>R<17>;

R<16>i R<17>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<16>i R<17>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R<18>je izabran iz grupe koju čine H, aril, aralkil, heteroaril, C1-C6alkil, - (C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoroalkil;

x je izabran od 0 do 6;

y je izabran od 0 do 6;

z je izabran od 2 to 6;

svaki R<2>je nezavisno izabran iz grupe koju čine niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, i perfluoro niži alkil;

svaki R<3>je nezavisno izabran iz grupe koju čine niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, i perfluoro niži alkil;

n je izabran od 0 do 4; i

m je izabran od 0 do 3.

[0008] Dalje, otkrivena su jedinjenja koja imaju formule I-XXV, kao što je pomenuto u nastavku. U određenim aspektima, ovo otkriće obezbeđuje jedinjenje formule I:

pri čemu:

X je izabran od N ili C-R1;

Y je izabran od N ili C-R5;

Z je izabran od N ili C-R3;

R1je izabran iz grupe koju čine H, niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, perfluoro niži alkil, i (niži alkil)-O-(niži alkil);

R2je grupa koja ima formulu -A-R10;

A je izabran iz grupe koju čine kovalentna veza, aril, heteroaril, cikloalkil, i heterociklil; R10je izabran iz grupe koju čine H, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, perfluoro niži alkil, C1-C10alkil, C2-C10alkenil, i -(M)x-(CH1)y-R11;

M je izabran iz grupe koju čine N-R20, CR21R22, i C=O;

x je 0 ili 1;

R10je izabran od H i C1-5alkil;

R21i R22su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, halogen, i niži alkil, ili alternativno R21i R22mogu se uzeti zajedno sa atomom za koji su vezani tako da grade C3-6cikloalkil;

y je 0, 1, 2, 3, 4, 5, ili 6;

R11je izabran iz grupe koju čine H, C1-6alkil, opciono supstituisani C3-6cikloalkil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heteroaril, opciono supstituisani heterociklil, pri čemu se opcioni supstituenti izabrani iz grupe koju čine niži alkil, C1-6cikloalkil, okso, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, perfluoro niži alkil, i (niži alkil)-O-(niži alkil); alternativno R11je izabran iz grupe koju čine -NR13R14, -C(=O)NR13R14, i - C(=O)R12, i -CO2R12;

R<12>je izabran iz grupe koju čine C1-C10alkil, aril, heteroaril, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aralkil, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, okso, C1-C6alkil, C3-C6cikloalkil, C1-C6alkoksi, (C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), hidroksi, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R<13>i R<14>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C6cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, okso, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, (C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<13>i R<14>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, C3-C7cikloalkil, (C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), okso, hidroksi, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R3je izabran iz grupe koju čine H, niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, perfluoro niži alkil, i (niži alkil)-O-(niži alkil);

R5je izabran iz grupe koju čine H, niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, perfluoro niži alkil, i (niži alkil)-O-(niži alkil);

R6je izabran iz grupe koju čine H, niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, perfluoro niži alkil, i (niži alkil)-O-(niži alkil);

R7je izabran iz grupe koju čine H i niži alkil; i

R8je prsten heterocikličkog sistema prstena koji sadrži azot koji može da sadrži 0-2 dodatna heteroatoma u prstenu izabrana od N, O i S, i može biti nesupstituisan ili može biti supstituisan sa 1 do 3 supstituenta izabrana između halo, CN, okso, hidroksi, amino, niži alkil, perfluoro niži alkil, i niži alkoksi.

[0009] Ova medicinska upotreba može uključiti farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač i/ili razblaživače.

[0010] Ova medicinska upotreba može obuhvatati kompozicije koje sadrže suštinski čisto jedinjenje iz pronalaska i njegovu farmaceutski prihvatljivu so, stereoizomer ili hidrat, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent i/ili razblaživače.

[0011] Ovo otkriće obezbeđuje metod inhibicije rho-kinaze kod sisara. Ovo otkriće obezbeđuje metod lečenja pacijenta koji pati od bolesti koji se sastoji od davanja pacijentu kome je takav tretman potreban terapeutski efikasne količine jedinjenja sa Formulama I-XXV. U određenim aspektima, jedinjenja sa Formulama I-XXV inhibiraju ROCK2. U određenim aspektima, jedinjenja sa Formulama I-XXV selektivno inhibiraju ROCK2. Neograničavajuća oboljenja i stanja koja se leče prema ovom pronalasku obuhvataju kardiovaskularne bolesti kao što su hipertenzija, ateroskleroza, restenoza, srčana hipertrofija, očna hipertenzija, cerebralna ishemija, cerebralni vazospazam, erektilnu disfunkciju penisa, poremećaje centralnog nervnog sistema kao što je degeneracija neuronske moždine povrede, arterijske trombotičke poremećaje kao što su agregacija trombocita i agregacija leukocita, astmu, regulaciju intraokularnog pritiska i resorpciju kostiju. Kod neoplazija, inhibicija Rho-kinaze inhibira rast tumorskih ćelija i metastaze, te angiogenezu.

[0012] Ovaj pronalazak obezbeđuje metod lečenja autoimunog poremećaja kod subjekta, koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV. Autoimuni poremećaji obuhvataju, bez ograničenja, reumatoidni artritis (multipla skleroza), sistemski eritematozni lupus (SLE; lupus), psorijazu, Crohnovu bolest, atopijski dermatitis, ekcem, ili bolest kalema protiv domaćina (GVHD).

[0013] Ovo otkriće obezbeđuje metod lečenja kardiovaskularnog poremećaja kod subjekta koji obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV. Kardiovaskularni poremećaji obuhvataju, bez ograničenja, hipertenziju, aterosklerozu, restenozu, srčanu hipertrofiju, očnu hipertenziju, cerebralnu ishemiju, cerebralni vazospazam ili erektilnu disfunkciju.

[0014] Ovo otkriće obezbeđuje metod lečenja upale kod subjekta koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV. Inflamacija obuhvata, bez ograničenja, astmu, kardiovaskularno zapaljenje, inflamaciju bubrega ili arteriosklerozu.

[0015] Ovo otkriće obezbeđuje metod lečenja poremećaja centralnog nervnog sistema kod subjekta koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV. Poremećaji centralnog nervnog sistema obuhvataju, bez ograničenja, neuronsku degeneraciju ili povredu kičmene moždine, kao i Hantingtonovu bolest, Parkinsonovu bolest , Alchajmerovu bolest, amiotrofičnu lateralnu sklerozu (ALS) ili multiplu sklerozu.

[0016] Ovo otkriće obezbeđuje metod lečenja arterijskog trombotičkog poremećaja kod subjekta koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV. Neograničavajući primeri arterijskih trombotičnih poremećaja su agregacija trombocita ili agregacija leukocita.

[0017] Ovo otkriće obezbeđuje metod lečenja fibroznog poremećaja kod subjekta koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV. Neograničavajući primeri fibroznih poremećaja su fibroza jetre, fibroza pluća ili fibroza bubrega.

[0018] Ovo otkriće obezbeđuje metod za održavanje stabilnosti epitela koji obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV.

[0019] Ovo otkriće obezbeđuje metod lečenja glaukoma ili regulisanja intraokularnog pritiska kod subjekta koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV. Neograničavajući primeri glaukoma obuhvataju primarni glaukom otvorenog ugla, akutni glaukom zatvorenog ugla, pigmentni glaukom, kongenitalni glaukom, glaukom normalne napetosti ili sekundarni glaukom.

[0020] Ovo otkriće obezbeđuje metod lečenja neoplastične bolesti kod subjekta koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV. Neoplastične bolesti obuhvataju, bez ograničenja, limfom, karcinom, leukemiju, sarkom ili blastom, kao što je kancer skvamoznih ćelija, karcinom malih ćelija pluća, kancer hipofize, kancer jednjaka, astrocitom, sarkom mekog tkiva, karcinom ne-malih ćelija pluća, adenokarcinom pluća, skvamozni karcinom pluća, rak peritoneuma, hepatocelularni kancer, gastrointestinalni kancer, rak pankreasa, glioblastom, rak grlića materice, rak jajnika, rak jetre, rak mokraćne bešike, hepatom, rak dojke, rak debelog creva, kolorektalni kancer, karcinom endometrijuma ili materice, karcinom pljuvačne žlezde, rak bubrega, rak jetre, rak prostate, rak vulve, rak štitne žlezde, karcinom jetre, kancer mozga, kancer endometrijuma, rak testisa, holangiokarcinom, karcinom žučne kese, rak želuca, melanom ili rak glava i vrata.

[0021] otkriće takođe obezbeđuje metod lečenja metaboličkog sindroma, insulinske rezistencije, hiperinsulinemije, dijabetesa tipa 2 ili intolerancije na glukozu kod subjekta koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV.

[0022] Dalje, ovo otkriće obezbeđuje metod za lečenje osteoporoze ili podsticanje formiranja kosti kod subjekta koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV.

[0023] Ovo otkriće takođe obezbeđuje metod lečenja metaboličkog sindroma, insulinske rezistencije, hiperinsulinemije, dijabetesa tipa 2 ili intolerancije na glukozu kod subjekta koji se sastoji od davanja subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja sa formulama I-XXV.

[0024] Otkriveno je da rho kinaza reguliše TH17 i funkciju Treg, kao i proizvodnju IL-17 i IL-21 u ćelijama imunog sistema. Shodno tome, ovo otkriće obezbeđuje metod za regulisanje imunoloških odgovora korišćenjem inhibitora rho kinaze, obuhvatajući, bez ograničenja, jedinjenja sa formulama I-XXV, kao i jedinjenja sa formulama XXX-XXXVI.

KRATAK OPIS SLIKA

[0025]

Slika 1 prikazuje jedinjenja iz ovog pronalaska.

Slika 2 prikazuje jedinjenja iz ovog pronalaska

Slika 3 prikazuje jedinjenja iz ovog pronalaska

Slika 4 prikazuje jedinjenja iz ovog pronalaska

Slika 5 prikazuje krive odgovora na dozu za inhibiciju ROCK1 naspram ROCK2. Jedinjenja odgovaraju ovde pomenutim primerima, kao što sledi: K100-5, Pr.12; KD-25, SLx-2119; 3272, Pr.28; K100-04, Pr.14; K100-16, Pr.43; K100-21; Pr.38; K100-23 Pr.52; K100-24, Pr. 111; K100-25, Pr.56; K100-26, Pr.13; 3266, Pr.26.

Slika 6 upoređuje inhibiciju ROCK1 i ROCK2 između jedinjenja iz Primera 43, 48, i 118. Slika 7 prikazuje selektivni inhibitor ROCK2, KD025 (SLx 2119), inhibira sekreciju IL-17/IL-21 (A) i proliferaciju (B) u ljudskim CD4<+>T ćelijama in vitro.

Slika 8 prikazuje ROCK2 siRNK, ali ne ROCK1 siRNK, inhibira lučenje IL-17 i IL-21. Tabla A, levo: Anti-ROCKl siRNK je smanjila ekspresiju Rock1 za oko 75%. Anti-ROCK2 siRNK je smanjila ekspresiju Rock2 za oko 85%. Tabla A, desno: ROCK2 siRNK, ali ne ROCK1 siRNK, inhibirala je ekspresiju IL-17 i IL-21. Nije primećena inhibicija IFN-γ. Tabla B: ROCK2 siRNK, ali ne ROCK1 siRNK, inhibirala je fosforilaciju Stat3, IRF4, i RORyt. Tabla C: ROCK2 siRNK, ali ne ROCK1 siRNK, inhibirala je fosforilaciju MLC.

Slika 9 prikazuje da KD025 (SLx 2119) inhibira STAT3 fosforilaciju. (A) Predtretman T ćelija sa KD025 praćenom stimulacijom sa anti-CD3/CD28 antitelima. (B) Ćelijska kultura pod Th17-iskrivljenim uslovima tokom 5 dana, posle čega je usledio tretman sa KD025 tokom 3 sata. (C) CD4<+>T ćelije su aktivirane sa anti-CD3/CD28, TGF-β i IL-1β sa 0 µM, 2.5 µM, 5 µM, ili 10 µM KD025 tokom 48 sati.

Slika 10 prikazuje selektivni inhibitor ROCK2, KD025, inhibira proizvodnju IL-17, IL-21 i IFN-γ ex vivo u CD3/CD28 stimulisanim CD4<+>T ćelijama pacijenata sa RA. Tabla A: Kod pacijenata sa RA, KD025 inhibira TCR stimulaciju IL-17, i IL-21, kao i IFN-γ. Tabla B: Inhibicija proizvodnje IFN-γ je u korelaciji sa ocenom aktivnosti bolesti (DAS). Tabla C: Frekvencija T ćelija koje proizvode IL-17 i IFN-γ prikazana intraćelijskim bojenjem.

Slika 11 prikazuje da KD025 aktivira STAT5 fosforilaciju. Sveže prečišćene CD4<+>T ćelije su kultivisane 2 dana sa stimulativnim antitelima protiv CD3/CD28 (5 µg/ml), TGF-β (5 ng/ml), IL-1β (50 ng/ml), i pomenutim dozama selektivnog inhibitora ROCK2 KD025.

Slika 12 prikazuje ekspresiju Fokp3 u humanim CD4<+>T ćelijama tretiranim pomenutim dozama selektivnog inhibitora ROCK2 KD025.

Slika 13 prikazuje efekat inhibicije ROCK2 posredovane KD025 u Tregs na sekreciju IL-17 od strane CD4<+>CD25<->T ćelija.

Slika 14 pokazuje efekat KD025-posredovane inhibicije ROCK2 na TGF-β-indukovanu fosforilaciju STAT3, MLC, i SMAD2/3 u Tregs.

Slike 15A-C pokazuje efekat KD025-posredovane inhibicije ROCK2 na stimulaciju proizvodnje (A) IL-17, (B) IL-21, i (C) IFN-γ u izolovanim PBMC. Šest pacijenata je lečeno sa 120 mg/dan KD025 na dane 1 i 8-14, a dva pacijenta sa placebom. PBMC su izolovani 1. i 15. dana i ispitivani na proizvodnju IL-17 i IL-21 kao odgovora na stimulaciju anti-

1

CD3/CD28 antitelima. Pacijenti 2 i 7 su primili placebo.<∗>= placebo primenjen pacijentima 2 i 7. Tabele D-F pokazuju efekat povećanja doze KD025 na stimulaciju proizvodnje (D) IL-17, (E) IL-21, i (F) IFN-γ u izolovanim PBMC.

Slike 16A-C prikazuju sekvence varijabilnog regiona humanog teškog lanca, lambda lakog lanca i kapa lakog lanca anti-VEGFR2 antitela identifikovanih izlaganjem faga.

DETALJAN OPIS

[0026] Ovo otkriće se odnosi na jedinjenja koja imaju formulu I:

pri čemu:

X je izabran od N ili C-R1;

Y je izabran od N ili C-R5;

Z je izabran od N ili C-R3;

R2je grupa koja ima formulu -A-R10;

A je izabran iz grupe koju čine kovalentna veza, aril, heteroaril, cikloalkil, i heterociklil; R10je izabran iz grupe koju čine H, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, perfluoro niži alkil, C1-C10alkil, C2-C10alkenil, i -(M)x-(CH1)y-R11

M je izabran iz grupe koju čine N-R20, CR21R22, i C=O;

x je 0 ili 1;

R10je izabran od H i C1-5alkila;

y je 0, 1, 2 , 3, 4, 5, ili 6;

ili R<13>i R<14>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, C3-C7cikloalkil, (C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), okso, hidroksi, cijano i C1-C3perfluoroalkil;

R7je izabran iz grupe koju čine H i niži alkil; i

R8je prsten heterocikličkog sistema prstena koji sadrži azot koji može da sadrži 0-2 dodatna heteroatoma u prstenu izabrana od N, O i S, i može biti nesupstituisan ili može biti supstituisan sa 1 do 3 supstituenta izabrana iz niza koji čine halo, CN, okso, hidroksi, amino, niži alkil, perfluoro niži alkil, i niži alkoksi.

[0027] U određenim aspektima, sistem prstenova R8je zasićen, sadrži jednu ili više dvostrukih veza, ili je aromatičan. Sistem prstena koji sadrži R8je poželjno monociklični ili biciklični sistem prstena koji ima 4 do 10 atoma u prstenu. U određenim aspektima, R8je izabran od:

pri čemu R9je izabran od H, halogena i nižeg alkila.

[0028] U određenim aspektima, R2je supstituisana arilna grupa i poželjno je supstituisana fenilna grupa.

[0029] U određenim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu II, III ili IV:

pri čemu R2, R6, R7, X i Z su kao što je gore definisano za formulu I.

[0030] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu V ili VI:

pri čemu R6, R7, X, Z i R10su kao što je gore definisano za formulu I.

[0031] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu VII:

pri čemu R6, R7, X, Z, i R10su kao što je gore definisano za formulu I.

[0032] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu IX:

1

pri čemu R6, R7, X i Z su kao što je gore definisano za formulu I, i T je -(CH2)y-R11pri čemu su y i R11kao što je gore definisano za formulu I.

[0033] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu X:

pri čemu R6, R7, X i Z su kao što je gore definisano za formulu I, i R' je R13kao što je gore definisano za formulu I.

[0034] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XI:

pri čemu R6, R7, X i Z su kao što je gore definisano za formulu I, i T1je R12kao što je gore definisano za formulu I.

[0035] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XII:

[0036] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XIII:

pri čemu R6, R7, X i Z su kao što je gore definisano za formulu I, A je M kao što je gore definisano za formulu 1 i W je R12kao što je gore definisano za formulu I.

[0037] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XIV:

pri čemu X, Z i R<13>su kao što je gore definisano za formulu I.

[0038] U određenim aspektima, za svako od gore prikazanih jedinjenja, deo

može biti izabran iz heteroaromatične grupe tako da Y je N. U drugim aspektima, oba Y i X su N, i u još drugim aspektima X, Y i Z su svaki N. U poželjnim aspektima, ova heteroaromatična grupa se bira između bilo koje od sledećih grupa:

1

[0039] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XV:

pri čemu R6, R7, i R10su kao što je gore definisano za formulu I.

[0040] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XVI:

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

R<13>i R<14>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), heteroaril, C3-C7cikloalkil, tročlani do dvanaestočlani heterociklični ili aromatični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, okso, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, CN i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<13>i R<14>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, C3-C7cikloalkil, okso, -OH, -NH2, CN i C1-C3perfluoro alkil;

1

[0041] R<2>je izabran od H i halo;

svaki R<3>i R<4>je nezavisno izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, -CN, halo, -OH, -O-(C1-C6alkil), -O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -NR<31>R<32>, C1-C3perfluoro alkil, -O-(CH2)aNR<31>R<32>, -NR<31>-(CH2)aNR<33>R<34>, -NR<31>-(CH2)aOR<33>, aril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, i -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil);

R<31>i R<32>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, i -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil);

ili R<31>i R<32>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo i C1-C6alkil;

R<33>i R<34>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H i C1-C8alkil;

a je izabran od 0 do 6;

R<5>je izabran od H i C1-C6alkil;

R<6>je izabran iz grupe koju čine H, halo, i C1-C6alkil.

[0042] U jednoj realizaciji pronalaska R<13>je izabran iz grupe koju čine C1-C8alkil, C3-C7cikloalkil i tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten. U još jednoj realizaciji pronalaska R<13>je izabran iz grupe koju čine izopropil, cikloalkil, N-morfolino i 3-piridin. U jednoj realizaciji pronalaska R<14>je H. U jednoj realizaciji pronalaska R<1>je H. U drugoj realizaciji pronalaska R<1>je F. U jednoj realizaciji pronalaska R<3>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil i C1-C3perfluoro alkil. U još jednoj realizaciji pronalaska R<3>je izabran iz grupe koju čine H, CH3i CF3. U jednoj realizaciji pronalaska R<4>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C1-C3perfluoro alkil i tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten. U još jednoj realizaciji pronalaska R<4>je izabran iz grupe koju čine H, CH3, CF3, piperazinil i N-morfolino.

[0043] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XVII:

1

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

X je izabran iz grupe koju čine -NH-C(=O)-CHR<13>R<14>; -NH-C(=O)-(CH2)b-NR<13>R<14>; -C(=O)-NR<13>R<14>.

R<13>i R<14>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, okso, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, CN i C1-C3perfluoro alkil;

svaki R<3>i R<4>je nezavisno izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, -CN, halo, -OH, -O-(C1-C6alkil), -O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -NR<31>R<32>, C1-C3perfluoro alkil, -O-(CH2)aNR<31>R<32>, aril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo i C1-C6alkil;

a je izabran od 0 do 6;

b je izabran od 0 do 1.

[0044] U jednoj realizaciji pronalaska R<13>je tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten. U još jednoj realizaciji pronalaska R<13>je izabran iz grupe koju čine izopropil, cikloalkil, N-morfolino, 3-piridinil, tetrahidropiranil, piperidinil, i tetrahidrotiopiranil dioksid. U još jednoj realizaciji pronalaska R<13>je izabran iz grupe koju čine:

U jednoj realizaciji pronalaska R<14>je H. U jednoj realizaciji pronalaska R<3>i R<4>su svaki H.

1

[0045] U drugom aspektu, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XVIII:

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

svaki R<3>i R<4>je nezavisno izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, -CN, halo, -OH, -O-(C1-C6alkil), -O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -NR<31>R<32>, CF3, -O-(CH2)aNR<31>R<32>, aril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo i C1-C6alkil;

a je izabran od 0 do 6;

R<15>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, -CN, halo, -OH, -O-(C1-C6alkil), -O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -C(=O)-O-C(R)3<31>, CF3, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični ili aromatični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo i C1-C6alkil;

x je izabran od 1 do 3;

y je izabran od 0 do 3;

z je izabran od 0 do 3;

pri čemu y ili z su nezavisno izabrani i jedan od njih je barem 1.

[0046] U drugim aspektima, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XIX:

1

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

Y je izabran iz grupe koju čine S, CH2, i -CR<31>R<32>-R<2>je izabran od H i halo;

R<31>i R<32>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, halo, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, i -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil);

ili R<31>i R<32>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani cikloalkilni ili heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo i C1-C6alkil;

R<33>i R<34>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H i C1-C8alkil;

a je izabran od 0 do 6.

2

[0047] U jednom aspektu Y gradi tročlani cikloalkan. U drugom aspektu Y je fluoro.

[0048] U drugom aspektu, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XX:

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

R<13>i R<14>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), heteroaril, C3-C7cikloalkil, tročlani do dvanaestočlani heterociklični ili aromatični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma,

od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, okso, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, CN i C1-C3perfluoro alkil;

R<4>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, -CN, halo, -OH, -O-(C1-C6alkil), -O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -NR<31>R<32>, CF3, -O-(CH2)aNR<31>R<32>, aril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo i C1-C6alkil;

R<5>je izabran od H i C1-C6alkil.

[0049] U drugom aspektu, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XXI:

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

R<4>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, -CN, halo, -OH, -O-(C1-C6alkil), -O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -NR<31>R<32>, C1-C3perfluoro alkil, -O-(CH2)aNR<31>R<32>, aril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo i C1-C6alkil;

a je izabran od 0 do 6.

[0050] U drugom aspektu, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XXII:

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

R<3>je H;

a je izabran od 0 do 6.

[0051] U drugom aspektu, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XXIII:

2

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

x je izabran od 0 do 1;

R<2>je izabran iz grupe koju čine cikloheksilpiridin, 1H-pirazol, i piridin;

X je izabran od N ili CR<3>;

Y je izabran od N ili CR<3>;

Z je izabran od N ili CR<4>;

pri čemu barem jedan od X, Y, i Z je N;

R<4>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, -CN, halo, -OH, -O-(C1-C6alkil), -O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -NR<31>R<32>, CF3, -O-(CH2)aNR<31>R<32>, -NR<31>-(CH2)aNR<33>R<34>, -NR<31>-(CH2)aOR<33>, aril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, i -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil);

a je izabran od 0 do 6;

Q je izabran iz grupe NR<5>i O;

R<5>je izabran od H i C1-C6alkil.

[0052] U drugom aspektu, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XXIV:

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

R<12>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), amino, NR<31>R<32>, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tročlani do dvanaestočlani heterociklični ili aromatični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, okso, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, CN i C1-C3perfluoro alkil;

x je izabran od 0 do 2;

svaki R<3>i R<4>je nezavisno izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, -CN, halo, -OH, -O-(C1-C6alkil), -O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -NR<31>R<31>, CF3, -O-(CH1)aNR<31>R<31>, aril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo i C1-C6alkil;

R<31>i R<32>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, C3-C7cikloalkil i -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil);

a je izabran od 1 do 6.

2

[0053] U drugom aspektu, jedinjenja korisna prema ovom pronalasku obuhvataju ona koja imaju formulu XXV:

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili stereoizomer, pri čemu:

x je izabran od 0 do 3;

R<15>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, aril, heteroaril, heterociklični prsten, i C3-C7cikloalkil;

a je izabran od 1 do 6.

2

[0054] U drugim aspektima, jedinjenje koje inhibira ROCK2 može biti izabrano od ROCK2 jedinjenja otkrivenih u PCT/US2006/011271, podnetom 27. marta 2006. Prema tome, jedinjenje koje inhibira ROCK2 jedinjenje može imati formulu XXXI:

ili farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

R<1>je izabran iz grupe koju čine -O-(CH2)y-CO2R<12>, -O-(CH2)y-C(=O)NR<13>R<14>, -O-(CH2)y-heteroaril, -O-(CH2)y-cikloalkil, -O-C(=O)-(CH2)y-NR<13>R<14>, -O-(CH2)z-NR<13>R<14>, -NH-C(=O)-(CH2)y-NR<13>R<14>, -NH-C(=O)-X-R<15>, -NH-(CH2)y-NR<13>R<14>;

ili R<13>i R<14>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, C3-C7cikloalkil, okso, OH, NH2, CN i C1-C3perfluoro alkil;

X je izabran između kovalentne veze, O, NH, i C1-C6alkil;

R<15>je izabran iz grupe koju čine heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono

2

supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, OH, NH2, CN i C1-C3perfluoro alkil;

R<16>i R<17>nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C1-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, OH, NH2, CN i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<16>i R<17>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

x je izabran od 0 do 6;

y je izabran od 0 do 6;

z je izabran od 2 to 6;

R<4>je izabran od -(CH2)a-NR<43>R<44>, -Y-R<42>, -O-(CH2)a-CO2R<42>, -O-(CH2)a-C(=O)NR<43>R<44>, -O-(CH2)a-heteroaril, -O-(CH2)a-cikloalkil, -O-C(=O)-(CH2)a-NR<43>R<44>, -O-(CH2)c-NR<41>R<44>, -NH-C(=O)-(CH2)a-NR<43>R<44>, -NH-C(=O)-Y-R<45>, -NH-C(=O)-(CH2)a-NR<43>R<44>;

R<42>je izabran iz grupe koju čine C1-C6alkil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), - (C1-C6alkil)-NR<46>R<47>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<46>R<47>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), od kojih svaki može biti opciono supstituisan na jednom ili više atoma ugljenika sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana od halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R<43>i R<44>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C1-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<46>R<47>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<46>R<47>, aril,

2

aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<43>i R<44>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

Y je izabran između kovalentne veze, O, NH, i C1-C6alkil;

R<45>je izabran iz grupe koju čine H, aril, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<46>R<47>, -CO2R<48>, -O-(CH2)b-CO2R<48>, i -C(=O)NR<46>R<47>,

R<46>i R<47>nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C1-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<46>i R<47>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R<48>je izabran iz grupe koju čine H, aril, aralkil, heteroaril, C1-C6alkil, - (C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<46>R<47>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoroalkil;

a je izabran od 0 do 6;

b je izabran od 0 do 6;

c je izabran od 2 to 6;

R<5>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C6alkil, -(CH1)d-C(=O)-NR<53>R<54>, -C(=O)-(CH2)d-NR<53>R<54>, -C(=O)-X-R<55>, i -C(=O)-(CH2)d-NR<53>R<54>;

R<53>i R<54>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<56>R<57>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<56>R<57>, aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta

2

nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<53>i R<54>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, C3-C7cikloalkil, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R<55>je izabran iz grupe koju čine H, aril, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<56>R<57>, -CO2R<58>, -O-(CH2)e-CO2R<58>, i -C(=O)NR<56>R<57>,

R<56>i R<57>nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C1-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<56>i R<57>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R<58>je izabran iz grupe koju čine H, aril, aralkil, heteroaril, C1-C6alkil, - (C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<56>R<57>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoroalkil;

d je izabran od 0 do 6;

e je izabran od 0 do 6;

R<6>je izabran iz grupe koju čine H, C1-C6alkil, -(CH2)rC(=O)-NR<63>R<64>, -C(=O)-(CH2)r-NR<63>R<64>, -C(=O)-X-R<65>, i -C(=O)-(CH2)r-NR<63>R<64>;

R<63>i R<64>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<66>R<67>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<66>R<67>, aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<63>i R<64>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, C3-C7cikloalkil, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R<65>je izabran iz grupe koju čine H, aril, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<66>R<67>, -CO2R<68>, -O-(CH2)s-CO2R<68>, i -C(=O)NR<66>R<67>,

R<66>i R<67>nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C1-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<66>i R<67>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

R<68>je izabran iz grupe koju čine H, aril, aralkil, heteroaril, C1-C6alkil, - (C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<66>R<67>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoroalkil;

r je izabran od 0 do 6;

s je izabran od 0 do 6;

n je izabran od 0 do 4;

m je izabran od 0 do 3; i

p je izabran od 0 i 1.

[0055] U jednom aspektu Formule XXXI, R<4>i R<5>su nezavisno izabrani između H i C1-C6alkila. U drugoj realizaciji, R<4>i R<5>su H.

[0056] U jednoj realizaciji pronalaska, jedinjenje sa formulom XXXI ima formulu XXXII:

1

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu R<1>, R<2>, R<3>, n i m su kao za jedinjenje formule I.

[0057] U drugom aspektu, jedinjenje sa formulom XXXI ima formulu XXXIII:

[0058] U jednoj realizaciji pronalaska, jedinjenje sa formulom XXXI ima formulu XXXIV:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

X je izabran od kovalentne veze, O, NH, i C1-C6alkila;

2

n je izabran od 0 do 4; i

m je izabran od 0 do 3.

[0059] U jednoj realizaciji pronalaska, jedinjenje sa formulom XXXI ima formulu XXXIVa:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

R<13>i R<14>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<16>R<17>,aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<13>i R<14>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

ili R<16>i R<17>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil.

[0060] U jednoj realizaciji pronalaska, jedinjenje sa formulom XXXI ima formulu XXXV:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

R<12>je izabran iz grupe koju čine C1-C6alkil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(Ci-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan na jednom ili više atoma ugljenika sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana od halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil;

n je izabran od 0 do 4; i

m je izabran od 0 do 3.

[0061] U jednoj realizaciji pronalaska, jedinjenje sa formulom XXXI ima formulu XXXVa:

4

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

R<12>je izabran iz grupe koju čine C1-C6alkil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan na jednom ili više atoma ugljenika sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana od halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil.

[0062] U drugom aspektu, inhibitor rho kinaze ima formulu XXXVI:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

n je izabran od 0 do 4; i

m je izabran od 0 do 3.

[0063] U jednom aspektu, jedinjenje sa formulom XXXVI ima formulu XXXVIa:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu:

[0064] U jednoj realizaciji pronalaska, jedinjenje sa formulom XXXI je SLx-2119:

[0065] U daljim realizacijama pronalaska, inhibitor rho kinaze je izabran iz grupe koju čine: 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-(2-metoksietil)acetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-(piridin-3-il)acetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-1-(4-metilpiperazin-1-il)etanon, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-1-morfolinoetanon, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-metilacetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-((R)-pirolidin-3-il)acetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-((S)-pirolidin-3-il)acetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-((R)-tetrahidrofuran-3-il)acetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-1-(piperidin-1-il)etanon, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-tercbutilacetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-etilacetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-(cijanometil)acetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-ciklobutilacetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-isobutilacetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-(2,2,2-trifluoroetil)acetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-cikloheksilacetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-neopentilacetamid, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenoksi)-N-(prop-2-inil)acetamid, N-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenil)-4-metilpiperazin-1karboksamid, 3-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenil)-1,1-dimetilurea, N-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenil)-2-metoksiacetamid, metil 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenilamino)-2-oksoacetat, 1-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenil)-3-(2-(dimetilamino)etil)urea, N-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenil)-2-morfolinoacetamid, N-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenil)-3-(4-izopropilpiperazin-1-il)propanamid, i N-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)kinazolin-2-il)fenil)piperidin-4-karboksamid, N-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)-6-(2-metoksietoksi)kinazolin-2-il)fenil)butiramid.

[0066] U daljim aspektima, inhibitor rho kinaze je

ili

[0067] Termin "heteroatom" kako se ovde koristi označava atom bilo kog elementa osim ugljenika ili vodonika. Poželjni heteroatomi su azot, kiseonik i sumpor.

[0068] Termin "alkil" se odnosi na radikal zasićenih alifatičnih grupa, obuhvatajući alkilne grupe ravnog lanca i alkilne grupe razgranatog lanca. U poželjnim realizacijama, alkil ravnog ili razgranatog lanca ima 10 ili manje atoma ugljenika u svojoj kičmi (npr. C1-C10za ravan lanac, C3-C10za razgranati lanac). Slično, poželjni cikloalkili imaju od 3-10 atoma ugljenika u svojoj strukturi prstena, a poželjnije imaju 3 do 6 ugljenika u strukturi prstena.

[0069] Osim ako broj ugljenika nije drugačije naznačen, "niži alkil" kako se ovde koristi označava alkilnu grupu, kao što je gore definisano, ali koja ima od jednog do šest ugljenika, a poželjnije od jednog do četiri atoma ugljenika. Slično, "niži alkenil" i "niži alkinil" imaju slične dužine lanca (C2-C6). Poželjne alkilne grupe su niži alkili. U poželjnim realizacijama, supstituent koji je ovde označen kao alkil je niži alkil.

[0070] Termin "cikloalkil" se odnosi na zasićene, karbociklične grupe koje imaju od 3 do 7 ugljenika u prstenu. Poželjne cikloalkilne grupe obuhvataju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil.

[0071] Termin "aralkil", kako se ovde koristi, odnosi se na alkilnu grupu supstituisanu sa arilnom grupom (npr. aromatičnu ili heteroaromatičnu grupu).

[0072] Termini " alkenil" i "alkinil" se odnose na nezasićene alifatične grupe analogne po dužini i mogućoj supstituciji za alkile opisane iznad, ali koje sadrže najmanje jednu dvostruku ili trostruku vezu.

[0073] Termin "aril" kako se ovde koristi uključuje 5- i 6-člane jednoprstenaste aromatične grupe koje mogu uključivati od nula do četiri heteroatoma, na primer, benzen, piren, pirol, furan, tiofen, imidazol, oksazol, tiazol , triazol, pirazol, piridin, pirazin, piridazin i pirimidin. One arilne grupe koje imaju heteroatome u strukturi prstena mogu se takođe nazvati "aril heterocikli", "heteroaromati" ili "heteroaril". Aromatični prsten može biti supstituisan na jednoj ili više pozicija u prstenu sa supstituentima kao što je gore opisano, na primer, halogen, azid, alkil, aralkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, hidroksil, alkoksil, amino, nitro, sulfhidril, imino, amido, fosfonat, fosfinat, karbonil, karboksil, silil, etar, alkiltio, sulfonil, sulfonamido, ketone, aldehid, estar, heterociklil, aromatični ili heteroaromatični delovi, -CF3, i -CN. Termin "aril" takođe obuhvata policiklične sisteme prstenova koji imaju dva ili više cikličnih prstena u kojima su dva ili više ugljenika zajednički za dva susedna prstena (prstenovi su "fuzionisani prstenovi") pri čemu barem jedan od prstenova aromatičan, npr. ostali ciklični prstenovi mogu biti cikloalkili, cikloalkenili, arilne i/ili heterociklične grupe.

[0074] Termini "heterociklil" ili "heterociklična grupa" odnose se na 3- do 10-člane prstenaste strukture, poželjnije 5- ili 6-člane prstenove, čije strukture prstena obuhvataju jedan do četiri heteroatoma. Heterocikli mogu biti i policikli. Heterociklične grupe obuhvataju, na primer, tiofen, tiantren, furan, piran, izobenzofuran, hromen, ksanten, fenoksatiin, pirol, imidazol, pirazol, izotiazol, izoksazol, piridin, pirazin, pirimidin, piridazin, indolizin, izoindol, indol, indazol, purin, kinolizin, izokinolin, kinolin, ftalazin, naftiridin, kinoksalin, kinazolin, cinolin, pteridin, karbazol, karbolin, fenantridin, akridin, pirimidin, fenantrolin, fenazin, fenarsazin, fenotiazin, furazan, fenoksazin, pirolidin, oksolan, tiolan, oksazol, piperidin, piperazin, morfolin, laktone, laktame kao što su azetidinoni i pirolidinoni, sultami i sultoni. Heterociklični prsten može biti supstituisan na jednoj ili više pozicija sa takvim supstituentima kao što je gore opisano, kao na primer, halogen, alkil, aralkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, hidroksil, amino, nitro, sulfhidril, imino, amido, fosfonat, fosfinat, karbonil, karboksil, silil, etar, alkiltio, sulfonil, keton, aldehid, estar, heterociklil, aromatični ili heteroaromatični deo, -CF3, i -CN.

[0075] Termini "policiklil" ili "policiklična grupa" odnose se na dva ili više prstena (npr. cikloalkil, cikloalkenili, aril i/ili heterociklili) u kojima su dva ili više ugljenika zajednička za dva susedna prstena, npr. „fuzionisani prstenovi“. Prstenovi koji su spojeni preko nesusednih atoma nazivaju se „premošteni“ prstenovi. Svaki od prstenova policiklične grupe može biti supstituisan sa takvim supstituentima kao što je gore opisano, na primer, halogen, alkil, aralkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, hidroksil, amino, nitro, sulfhidril, imino, amido, fosfonat, karbonil fosfinat, , karboksil, silil, etar, alkiltio, sulfonil, keton, aldehid, estar, heterociklil, aromatični ili heteroaromatični deo, -CF3, i -CN.

4

[0076] Kako se ovde koristi, termin "nitro" označava -NO2. Termin "halogen" ili "halo" označava -F, -Cl, -Br ili -I. Termin "hidroksil" označava -OH.

[0077] Termini "amin" i "amino" odnose se i na nesupstituisane i na supstituisane amine, na primer, deo koji se može predstaviti opštom formulom:

ili

pri čemu R, R' i R" svaki nezavisno predstavljaju H, alkil, alkenil, alkinil, aralkil, aril, i heterociklične grupe, a najpoželjnije H ili niži alkil.

[0078] Termini "alkoksil" ili "alkoksi" kako se ovde koriste odnose se na alkilnu grupu, kao što je gore definisano, koja ima radikal kiseonika vezan za nju. Reprezentativne alkoksilne grupe obuhvataju metoksi, etoksi, propiloksi i terc-butoksi. Termin niži alkoksi se odnosi na alkoksi grupu koja ima od 1 do 6 atoma ugljenika.

[0079] Termin "okso" kako se ovde koristi odnosi se na atom kiseonika koji ima dvostruku vezu na drugi atom, posebno na ugljenik ili sumpor.

[0080] Kako se ovde koristi, definicija svakog termina, npr. alkil, m, n, R, itd., kada se pojavljuje više puta u bilo kojoj strukturi, treba da bude nezavisna od njegove definicije na drugom mestu u istoj strukturi.

[0081] Podrazumeva se da "supstituisan", "supstituisan" ili "supstituisan sa" uključuje implicitan uslov da je takva supstitucija u skladu sa dozvoljenom valentnošću supstituisanog atoma i supstituenta, i da supstitucija rezultira stabilnim jedinjenjem, npr. koje ne prolazi spontano kroz transformaciju kao što je preuređivanje, ciklizacija, eliminacija itd.

[0082] Kako se ovde koristi, smatra se da termin "supstituisan" obuhvata sve dozvoljene supstituente organskih jedinjenja. U širem aspektu, dozvoljeni supstituenti obuhvataju aciklične i ciklične, razgranate i nerazgranate, karbociklične i heterociklične, aromatične i nearomatične supstituente organskih jedinjenja. Ilustrativni supstituenti obuhvataju, na primer, one koji su gore opisani.

[0083] Određena jedinjenja ovog pronalaska mogu postojati u određenim geometrijskim ili stereoizomernim oblicima. Predmetni pronalazak razmatra sva takva jedinjenja, obuhvatajući cis- i trans-izomere, R- i S -enantiomere, dijastereomere, njihove racemske smeše i njihove druge smeše, koja spadaju u obim pronalaska. Dodatni asimetrični atomi ugljenika mogu biti prisutni u supstituentu kao što je alkilna grupa. Svi takvi izomeri, kao i njihove smeše, uključeni su u ovaj pronalazak.

[0084] Određene realizacije predmetnih jedinjenja mogu da sadrže osnovnu funkcionalnu grupu, kao što je amino ili alkilamino, i stoga su sposobne da formiraju farmaceutski prihvatljive soli sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama. Termin "farmaceutski prihvatljive soli" u ovom kontekstu se odnosi na relativno netoksične adicione soli neorganskih i organskih kiselina jedinjenja ovog pronalaska. Reprezentativne soli obuhvataju hidrohloridne, hidrobromidne, sulfatne, bisulfatne, fosfatne, nitratne, acetatne, stearatne, lauratne, benzoatne, laktatne, fosfatne, tozilatne, citratne, maleatne, fumaratne, sukcinatne, tartratne, i mezilatne soli. (videti, na primer, Berge i sar. "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. (1977) 66:1-19).

[0085] U drugim slučajevima, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da sadrže jednu ili više kiselih funkcionalnih grupa i stoga su sposobna da formiraju farmaceutski prihvatljive soli sa farmaceutski prihvatljivim bazama. Reprezentativne soli obuhvataju alkalne ili zemnoalkalne soli kao što su litijumove, natrijumove, kalijumove, kalcijumove i magnezijumove soli. Reprezentativni organski amini korisni za formiranje baznih adicionih soli obuhvataju etilamin, dietilamin, etilendiamin, etanolamin, dietanolamin i piperazin. (videti, na primer, Berge i sar., gore).

[0086] U jednom aspektu, ovo otkriće obezbeđuje jedinjenja Formule I koja su inhibitori Rhokinaze. Rho kinaza (ROCK), serin/treonin kinaza, služi kao ciljni protein za mali GTP-vezujući protein Rho, i važan je posrednik brojnih ćelijskih funkcija, obuhvatajući fokalne adhezije, pokretljivost, kontrakciju glatkih mišića i citokinezu. U glatkim mišićima, ROCK igra važnu ulogu u senzibilizaciji Ca<2+>i kontroli vaskularnog tonusa. Moduliše nivo fosforilacije lakog lanca miozina II miozina II, uglavnom kroz inhibiciju miozin fosfataze, i doprinosi senzibilizaciji Ca<2+>izazvanoj agonistom u kontrakciji glatkih mišića.

[0087] Rho kinaza se nalazi u dva oblika, ROCK 1 (ROCKβ; p160-ROCK) i ROCK 2 (ROCKα). U nekim aspektima, jedinjenje sa formulom I selektivno inhibira ROCK1. U nekim aspektima, jedinjenje sa formulom I selektivno inhibira ROCK2. U nekim aspektima, jedinjenje formule I je neselektivno u pogledu inhibicije ROCK1 i ROCK2.

[0088] Metode određivanja inhibicije kinaze su dobro poznate u stanju tehnike. Na primer, aktivnost kinaze enzima i inhibitorni kapacitet testiranog jedinjenja mogu se odrediti merenjem fosforilacije supstrata specifične za enzim. Mogu se koristiti komercijalni testovi i kompleti. Na primer, inhibicija kinaze se može odrediti korišćenjem IMAP<®>testa (od kompanije Molecular Devices). Ova metoda ispitivanja uključuje upotrebu fluorescentno obeleženog peptidnog supstrata. Fosforilacija obeleženog peptida pomoću kinaze od interesa promoviše vezivanje peptida za nanočesticu na bazi trovalentnog metala preko specifične interakcije visokog afiniteta između fosfo-grupe i trovalentnog metala. Blizina nanočestica dovodi do povećane polarizacije fluorescencije. Inhibicija kinaze inhibitorom kinaze sprečava fosforilaciju supstrata i na taj način ograničava vezivanje fluorescentno obeleženog supstrata za nanočesticu. Takav test može biti kompatibilan sa formatom testa sa mikro-bunarićima, omogućavajući istovremeno određivanje IC50za više jedinjenja.

[0089] U drugom aspektu sadašnjeg otkrića obezbeđen je metod lečenja pacijenta koji pati od bolesti koji se sastoji od davanja pacijentu kome je potrebno takvo lečenje terapeutski efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska. Termin "terapeutski efikasna količina" kako se ovde koristi označava onu količinu jedinjenja, materijala ili kompozicije koja sadrži jedinjenje iz ovog pronalaska koja je efikasna za proizvodnju nekog željenog terapeutskog efekta u najmanje pod-populaciji ćelija u životinji sa razumnim odnosom koristi/rizika primenljivom na bilo koji medicinski tretman, npr. razumni neželjeni efekti primenljivi na bilo koji medicinski tretman.

[0090] Jedinjenja prema pronalasku koja inhibiraju fosforilaciju posredovanu Rho-kinazom i/ili Rho-kinazom su korisna za lečenje pacijenata koji pate od kardiovaskularnih i nekardiovaskularnih bolesti koje obuhvataju funkciju Rho-kinaze, kao što su hipertenzija, plućna hipertenzija, ateroskleroza, restenoza, koronarna bolest srca, hipertrofija srca, očna hipertenzija, retinopatija, ishemijske bolesti, cerebralna ishemija, cerebralni vazospazam, erektilna disfunkcija penisa, poremećaj periferne cirkulacije, okluzivna bolest perifernih arterija, glaukom (npr. regulacija fibroidnog intraokularnog pritiska), fibroid pluća, fibroid jetre, fibroid

4

bubrega, hronična opstruktivna plućna bolest (COPD), respiratorni distres sindrom odraslih, poremećaji centralnog nervnog sistema kao što su neuronska degeneracija i povreda kičmene moždine. Dalje, inhibitori Rho-kinaze prema pronalasku mogu se koristiti za lečenje arterijskih trombotičkih poremećaja kao što su agregacija trombocita i agregacija leukocita i resorpcija kostiju.

[0091] U određenim aspektima, inhibitor Rho-kinaze prema pronalasku se koristi za lečenje zapaljenja, obuhvatajući, ali ne ograničavajući se na astmu, kardiovaskularno zapaljenje, zapaljenje bubrega i arteriosklerozu.

[0092] Inhibitori Rho-kinaze prema ovom pronalasku inhibiraju rast tumorskih ćelija i metastaze, i angiogenezu, a korisni su za lečenje neoplastičnih bolesti. Neoplastične bolesti obuhvataju svaki maligni rast ili tumor uzrokovan abnormalnom ili nekontrolisanom deobom ćelija, a mogu se proširiti na druge delove tela kroz limfni sistem ili krvotok. Neoplastična bolest uključuje, bez ograničenja, limfom (neoplazma limfnog tkiva koja je obično maligna), karcinom (bilo koji maligni tumor nastao iz epitelnog tkiva), leukemiju (maligna neoplazma krvotvornog tkiva; koju karakteriše abnormalna proliferacija leukocita), sarkom (obično maligni tumor koji nastaje iz vezivnog tkiva (kosti ili mišića itd.) i blastom (malignosti u prekursorskim ćelijama). Neograničavajući primeri obuhvataju kancer skvamoznih ćelija, karcinom malih ćelija pluća, kancer hipofize, kancer jednjaka, astrocitom, sarkom mekog tkiva , rak pluća ne malih ćelija, adenokarcinom pluća, skvamozni karcinom pluća, kancer peritoneuma, hepatocelularni kancer, gastrointestinalni kancer, kancer pankreasa, glioblastom, karcinom grlića materice, karcinom jajnika, karcinom jetre, rak mokraćne bešike, hepatom, karcinom dojke, karcinom debelog creva, kolorektalni karcinom, karcinom endometrijuma ili materice, karcinom pljuvačne žlezde, karcinom bubrega, karcinom jetre, karcinom prostate, karcinom vulve, karcinom štitaste žlezde, karcinom jetre, rak mozga, rak endometrijuma, rak testisa, holangiokarcinom, karcinom žučne kese, karcinom želuca, melanom i razne vrste kancera glave i vrata.

[0093] Prema jednom aspektu, ROCK inhibitori se koriste tako da utiču na gubitak težine i/ili ograničavanje povećanja telesne težine. U poželjnom izvođenju, ROCK inhibitor je ROCK2 selektivan. ROCK-2 inhibitori promovišu gubitak težine kod normalnih subjekata i ograničavaju povećanje telesne težine kod subjekata sklonih gojaznosti.

[0094] U jednom aspektu, ROCK inhibitor se koristi za smanjenje ili sprečavanje insulinske rezistencije ili vraćanje insulinske osetljivosti. Shodno tome, u jednom aspektu, jedinjenja iz ovog pronalaska se koriste za promovisanje ili obnavljanje insulin-zavisnog preuzimanja glukoze. U drugom aspektu, ROCK-inhibitor iz ovog pronalaska se koristi za unapređenje ili obnavljanje tolerancije glukoze. U drugom aspektu, ROCK inhibitor iz ovog pronalaska se koristi za lečenje metaboličkog sindroma. U drugom aspektu, ROCK-inhibitori prema ovom pronalasku se koriste za smanjenje ili prevenciju hiperinsulinemije. U jednom aspektu, ROCK inhibitor se koristi za lečenje dijabetesa (naročito dijabetesa tipa 2). ROCK inhibitori iz ovog pronalaska se takođe mogu koristiti za promovisanje ili obnavljanje insulinom posredovane relaksacije vaskularnih ćelija glatkih mišića (VSMC). U poželjnim realizacijama, ROCK inhibitor je ROCK2 selektivan..

[0095] U određenim aspektima, jedinjenja prema ovom pronalasku se koriste za lečenje poremećaja centralnog nervnog sistema. Takvi poremećaji mogu uključivati neuronsku degeneraciju ili fizičku povredu nervnog tkiva, obuhvatajući, bez ograničenja, Hantingtonovu bolest, Parkinsonovu bolest , Alchajmerovu bolest, amiotrofičnu lateralnu sklerozu (ALS) ili multiplu sklerozu. U određenim aspektima, jedinjenja iz ovog pronalaska imaju svojstva posebno korisna za lečenje takvih poremećaja, kao što je korisna distribucija tkiva u tkivima centralnog nervnog sistema i sposobnost da pređu krvno-moždanu barijeru.

[0096] Pronalazak obezbeđuje pan-ROCK inhibitore (tj. jedinjenja koja inhibiraju ROCK1 i ROCK1) kao i ROCK inhibitore koji su selektivni na izoforme. Kao što je gore diskutovano, u određenim realizacijama pronalaska, ROCK2-selektivni inhibitor može biti poželjniji. Na primer, jedna studija je primetila da je ROCK2 često prekomerno eksprimiran kod hepatocelularnog karcinoma u poređenju sa ne-timornom jetrom, dok je ROCK1 ekspresija nepromenjena. Drugi kanceri koji mogu imati koristi od lečenja selektivnim inhibitorom ROCK2 obuhvataju, ali nisu ograničeni na, rak debelog creva i rak mokraćne bešike. Nasuprot tome, primećeno je da su nivoi ekspresije ROCK1 viši kod tumora dojke. Bilo koji kancer može biti testiran da bi se utvrdilo da li postoji prekomerna ekspresija ROCK1 i/ili ROCK2 i tretiran u skladu sa tim. U određenim okolnostima, ROCK 1 i ROCK2 izoforme pokazuju sličnost u regulisanju određenih ciljeva nizvodno.

[0097] U drugom aspektu, farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu da sadrže terapeutski efikasnu količinu jednog ili više jedinjenja Formule I, formulisanih zajedno sa jednim ili više

4

farmaceutski prihvatljivih nosača (aditiva) i/ili razblaživača. Kao što je detaljno opisano u nastavku, farmaceutske kompozicije mogu biti specijalno formulisane za primenu u čvrstom ili tečnom obliku, obuhvatajući one prilagođene za sledeće: (1) oralnu primenu, na primer, drenčeve (vodeni ili nevodeni rastvori ili suspenzije), tablete npr. one namenjeni za bukalnu, sublingvalnu i sistemsku apsorpciju, boluse, praškove, granule, paste za primenu na jeziku; (2) parenteralnu primenu, na primer, subkutanom, intramuskularnom, intravenskom ili epiduralnom injekcijom kao, na primer, sterilnog rastvora ili suspenzije, ili formulacije sa produženim oslobađanjem; (3) lokalnu primenu, na primer, kao krema, mast ili flaster sa kontrolisanim oslobađanjem ili sprej koji se nanosi na kožu; (4) intravaginalno ili intrarektalno, na primer, kao pesar, krema ili pena; (5) sublingvalno; (6) okularno; (7) transdermalno; ili (8) nazalno.

[0098] Termin "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili oblike doziranja koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudskih bića i životinja sa toksičnošću, iritacijom, alergijskim odgovorom ili drugim problemima ili komplikacijama, srazmerno razumnom odnosu korist/rizik.

[0099] Fraza "farmaceutski prihvatljiv nosač" kako se ovde koristi označava farmaceutski prihvatljiv materijal, kompoziciju ili vehikulum, kao što je tečni ili čvrsti punilac, razblaživač, ekscipijens, pomoćno sredstvo za proizvodnju (npr. lubrikant, talk, magnezijum, kalcijum ili cink stearat, ili stearinska kiselina), ili materijal za kapsuliranje rastvarača, uključen u nošenje ili transport predmetnog jedinjenja iz jednog organa, ili dela tela, do drugog organa ili dela tela. Svaki nosač mora biti "prihvatljiv" u smislu da je kompatibilan sa ostalim sastojcima formulacije i da nije štetan za pacijenta. Neki primeri materijala koji mogu poslužiti kao farmaceutski prihvatljivi nosači obuhvataju: (1) šećere, kao što su laktoza, glukoza i saharoza; (2) skrobovi, kao što su kukuruzni skrob i krompirov skrob; (3) celuloza i njeni derivati, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celulozni acetat; (4) tragakant u prahu; (5) slad; (6) želatin; (7) talk; (8) ekscipijenti, kao što su kakao puter i voskovi supozitorija; (9) ulja, kao što su ulje od kikirikija, ulje semena pamuka, ulje šafranike, susamovo ulje, maslinovo ulje, kukuruzno ulje i sojino ulje; (10) glikoli, kao što je propilen glikol; (11) polioli, kao što su glicerin, sorbitol, manitol i polietilen glikol; (12) estri, kao što su etil oleat i etil laurat; (13) agar; (14) puferska sredstva, kao što su magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; (15) alginska kiselina; (16) voda bez pirogena; (17) izotonični fiziološki rastvor; (18) Ringerov

4

rastvor; (19) etil alkohol; (20) pH puferovani rastvori; (21) poliesteri, polikarbonati i/ili polianhidridi; i (22) druge netoksične kompatibilne supstance koje se koriste u farmaceutskim formulacijama..

[0100] Kao što je gore pomenuto, određene realizacije predmetnih jedinjenja mogu da sadrže osnovnu funkcionalnu grupu, kao što su amino ili alkilamino, i stoga su sposobne da formiraju farmaceutski prihvatljive soli sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama. Termin "farmaceutski prihvatljive soli" u ovom pogledu se odnosi na relativno netoksične adicione soli neorganskih i organskih kiselina jedinjenja ovog pronalaska. Ove soli se mogu pripremiti in situ u vehikulu za davanje ili procesu proizvodnje doznog oblika, ili odvojenom reakcijom prečišćenog jedinjenja pronalaska u obliku slobodne baze sa odgovarajućom organskom ili neorganskom kiselinom, i izolovanjem tako formirane soli tokom naknadnog prečišćavanja. Reprezentativne soli obuhvataju hidrobromidne, hidrohloridne, sulfatne, bisulfatne, fosfatne, nitratne, acetatne, valeratne, oleatne, palmitatne, stearatne, lauratne, benzoatne, laktatne, fosfatne, tozilatne, citratne, maleatne, fumaratne, sukcinatne, tartratne, naftilatne, mezilatne, glukoheptonatne, laktobionatne, i laurilsulfonatne soli. (videti, na primer, Berge i sar. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci.66:1-19).

[0101] Farmaceutski prihvatljive soli predmetnih jedinjenja obuhvataju konvencionalne netoksične soli ili kvaternarne amonijumove soli jedinjenja, npr. iz netoksičnih organskih ili neorganskih kiselina. Na primer, takve konvencionalne netoksične soli obuhvataju one izvedene iz neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, sulfaminska, fosforna i azotna; i soli pripremljene od organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, jantarna, glikolna, stearinska, mlečna, jabučna, vinska, limunska, askorbinska, palmitinska, maleinska, hidroksimaleinska, fenilsirćetna, glutaminska, benzojeva, salicilna, sulfanilna, 2-acetoksibenzojeva, fumarna, toluensulfonska, metansulfonska, etan disulfonska, oksalna i izotionska.

[0102] U drugim slučajevima, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da sadrže jednu ili više kiselih funkcionalnih grupa i stoga su sposobna da formiraju farmaceutski prihvatljive soli sa farmaceutski prihvatljivim bazama. Termin "farmaceutski prihvatljive soli" u ovim slučajevima se odnosi na relativno netoksične, neorganske i organske bazne adicione soli jedinjenja ovog pronalaska. Ove soli se takođe mogu pripremiti in situ u nosaču za davanje ili procesu proizvodnje doznog oblika, ili odvojenom reakcijom prečišćenog jedinjenja u

4

njegovom obliku slobodne kiseline sa odgovarajućom bazom, kao što je hidroksid, karbonat ili bikarbonat farmaceutski prihvatljivog metala. katjona, sa amonijakom, ili sa farmaceutski prihvatljivim organskim primarnim, sekundarnim ili tercijarnim aminom. Reprezentativne alkalne ili zemnoalkalne soli obuhvataju soli litijuma, natrijuma, kalijuma, kalcijuma, magnezijuma i aluminijuma. Reprezentativni organski amini korisni za formiranje baznih adicionih soli obuhvataju etilamin, dietilamin, etilendiamin, etanolamin, dietanolamin i piperazin. (videti, na primer, Berge i sar., gore).

[0103] Sredstva za vlaženje, emulgatori i lubrikanti, kao što su natrijum lauril sulfat i magnezijum stearat, kao i agensi za bojenje, agensi za oslobađanje, agensi za oblaganje, zaslađivači, arome i mirisi, konzervansi i antioksidansi takođe mogu biti prisutni u kompozicijama.

[0104] Primeri farmaceutski prihvatljivih antioksidanata obuhvataju: (1) antioksidante rastvorljive u vodi, kao što su askorbinska kiselina, cistein hidrohlorid, natrijum bisulfat, natrijum metabisulfit, natrijum sulfit i slično; (2) antioksidante rastvorljive u ulju, kao što su askorbil palmitat, butilovani hidroksianizol (BHT), lecitin, propil galat, alfa-tokoferol, i slično; i (3) agensi za helatiranje metala, kao što su limunska kiselina, etilendiamin tetrasirćetna kiselina (EDTA), sorbitol, vinska kiselina, fosforna kiselina i slično.

[0105] Formulacije mogu uključivati one pogodne za oralnu, nazalnu, lokalnu (obuhvatajući bukalnu i sublingvalnu), rektalnu, vaginalnu i/ili parenteralnu primenu. Formulacije mogu pogodno biti predstavljene u obliku jedinične doze i mogu se pripremiti bilo kojim metodama dobro poznatim u farmaciji. Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa materijalom nosača da bi se dobio jedan oblik doze variraće u zavisnosti od domaćina koji se leči, posebnog načina primene. Količina aktivnog sastojka koja se može kombinovati sa materijalom nosača da bi se dobio jedan oblik doze generalno će biti ona količina jedinjenja koja proizvodi terapeutski efekat. Generalno, od sto procenata, ova količina će se kretati od oko 0.1 procenata do oko devedeset devet procenata aktivnog sastojka, poželjno od oko 5 procenata do oko 70 procenata, najpoželjnije od oko 10 procenata do oko 30 procenata.

[0106] Formulacije mogu da sadrže ekscipijent izabran iz grupe koju čine ciklodekstrini, celuloze, lipozomi, agensi za formiranje micela, npr. žučne kiseline i polimerni nosači, npr.

4

poliestri i polianhidridi; i jedinjenje ovog pronalaska. Gore pomenuta formulacija može jedinjenje iz ovog pronalaska učiniti oralno biodostupnim.

[0107] Metode za pripremu ovih formulacija ili kompozicija obuhvataju korak dovođenja u vezu jedinjenja iz ovog pronalaska sa nosačem i, opciono, jednim ili više pomoćnih sastojaka. Uopšteno govoreći, formulacije se pripremaju ujednačenim i bliskim dovođenjem u vezu jedinjenja iz ovog pronalaska sa tečnim nosačima, ili fino usitnjenim čvrstim nosačima, ili oboje, a zatim, ako je potrebno, oblikovanjem proizvoda.

[0108] Formulacije pogodne za oralnu primenu mogu biti u obliku kapsula, kesica, pilula, tableta, pastila (koristeći aromatizovanu osnovu, obično saharozu i bagrem ili tragakant), praškova, granula ili kao rastvor ili suspenzija u vodenoj ili nevodenoj tečnosti, ili kao tečna emulzija ulje u vodi ili voda u ulju, ili kao eliksir ili sirup, ili kao pastile (koristeći inertnu bazu, kao što su želatin i glicerin, ili saharozu i bagrem) i/ili kao sredstva za ispiranje usta i slično, od kojih svaki sadrži unapred određenu količinu jedinjenja iz ovog pronalaska kao aktivni sastojak. Jedinjenje iz ovog pronalaska se takođe može primeniti kao bolus, tečnost ili pasta.

[0109] U čvrstim doznim oblicima za oralnu primenu (kapsule, tablete, pilule, dražeje, praškovi, granule, meke kapsule i slično), aktivni sastojak se meša sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, kao što su natrijum citrat ili dikalcijum fosfat i/ili bilo kojim od sledećeg: (1) punila ili ekstenderi, kao što su skrobovi, laktoza, saharoza, glukoza, manitol i/ili salicilna kiselina; (2) veziva, kao što su, na primer, karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivinil pirolidon, saharoza i/ili bagrem; (3) humektanti, kao što je glicerol; (4) agensi za dezintegraciju, kao što su agar-agar, kalcijum karbonat, krompirov skrob ili skrob tapioke, alginska kiselina, određeni silikati i natrijum karbonat; (5) agensi za usporavanje rastvora, kao što je parafin; (6) akceleratori apsorpcije, kao što su jedinjenja kvaternarnog amonijuma i surfaktanti, kao što su poloksamer i natrijum lauril sulfat; (7) agensi za vlaženje, kao što su, na primer, cetil alkohol, glicerol monostearat i nejonski surfaktanti; (8) apsorbenti, kao što su kaolin i bentonitna glina; (9) lubrikanti, kao što su talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat, cink stearat, natrijum stearat, stearinska kiselina i njihove smeše; (10) agensi za bojenje; i (11) agensi za kontrolisano oslobađanje kao što su krospovidon ili etil celuloza. U slučaju kapsula, tableta i pilula, farmaceutske kompozicije mogu takođe da sadrže puferske agense. Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu se takođe koristiti kao punioci u mekim

4

i tvrdim želatinskim kapsulama koristeći ekscipijente kao što su laktoza ili mlečni šećeri, kao i polietilen glikoli visoke molekularne težine i slično.

[0110] Tableta se može napraviti kompresijom ili oblikovanjem, opciono sa jednim ili više pomoćnih sastojaka. Kompresovane tablete se mogu pripremiti korišćenjem veziva (na primer, želatina ili hidroksipropilmetil celuloza), lubrikanta, inertnog razblaživača, konzervansa, dezintegranta (na primer, natrijum skrob glikolata ili umrežene natrijum karboksimetil celuloze), površinski aktivnog ili disperzionog sredstva. Oblikovane tablete se mogu napraviti oblikovanjem u odgovarajućoj mašini smeše praškastog jedinjenja navlaženog inertnim tečnim razblaživačem.

[0111] Tablete i drugi čvrsti oblici za doziranje farmaceutskih kompozicija, kao što su dražeje, kapsule, pilule i granule, mogu opciono biti urezane ili pripremljene sa premazima i ljuskama, kao što su enteričke prevlake i druge obloge dobro poznate u stanju tehnike za farmaceutske formulacije. Oni takođe mogu biti formulisani tako da obezbede sporo ili kontrolisano oslobađanje aktivnog sastojka u njima koristeći, na primer, hidroksipropilmetil celulozu u različitim proporcijama da bi se obezbedio željeni profil oslobađanja, druge polimerne matrice, lipozomi i/ili mikrosfere. Mogu se formulisati za brzo oslobađanje, na primer, liofilizovani. Mogu se sterilisati, na primer, filtracijom kroz filter koji zadržava bakterije, ili ugradnjom agenasa za sterilizaciju u obliku sterilnih čvrstih kompozicija koje se mogu rastvoriti u sterilnoj vodi ili nekom drugom sterilnom medijumu za injekcije neposredno pre upotrebe. Ove kompozicije mogu takođe opciono da sadrže sredstva za zamućenje i mogu biti sastava tako da oslobađaju samo aktivni sastojak ili sastojke, ili poželjno, u određenom delu gastrointestinalnog trakta, opciono, na odložen način. Primeri kompozicija za ugradnju koje se mogu koristiti obuhvataju polimerne supstance i voskove. Aktivni sastojak takođe može biti u mikrokapsuliranom obliku, ako je prikladno, sa jednim ili više od gore opisanih ekscipijenata.

[0112] Tečni oblici za doziranje za oralnu primenu jedinjenja iz pronalaska obuhvataju farmaceutski prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Pored aktivnog sastojka, tečni oblici za doziranje mogu da sadrže inertne razblaživače koji se obično koriste u tehnici, kao što su, na primer, voda ili drugi rastvarači, sredstva za rastvaranje i emulgatori, kao što su etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat , benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, ulja (posebno, semena pamuka, kikirikija, kukuruza, klica, maslinovog, ricinusovog i susamovog ulja), glicerol, tetrahidrofuril alkohol, polietilen glikole i estri masnih kiselina sorbitana, i njihove smeše.

[0113] Pored inertnih razblaživača, oralne kompozicije takođe mogu obuhvatati pomoćne supstance kao što su agensi za vlaženje, agensi za emulgovanje i suspendovanje, zaslađivači, arome, boje, mirisi i konzervansi.

[0114] Suspenzije, pored aktivnih jedinjenja, mogu da sadrže agense za suspendovanje kao što su, na primer, etoksilovani izostearil alkoholi, polioksietilen sorbitol i sorbitan estri, mikrokristalna celuloza, aluminijum metahidroksid, bentonit, agar-agar i tragakant, i njihove smeše.

[0115] Formulacije farmaceutskih kompozicija za rektalnu ili vaginalnu primenu mogu biti predstavljene kao supozitorije, koje se mogu pripremiti mešanjem jednog ili više jedinjenja pronalaska sa jednim ili više odgovarajućih neiritirajućih ekscipijenata ili nosača koji sadrže, na primer, kakao puter, polietilen glikol, vosak za supozitorije ili salicilat, i koji je čvrst na sobnoj temperaturi, ali tečan na telesnoj temperaturi i stoga će se istopiti u rektumu ili vaginalnoj šupljini i osloboditi aktivno jedinjenje.

[0116] Formulacije koje su pogodne za vaginalnu primenu takođe obuhvataju pesare, tampone, kreme, gelove, paste, pene ili formulacije u spreju koje sadrže takve nosače za koje je poznato da su prikladni.

[0117] Oblici za doziranje za topikalnu ili transdermalnu primenu jedinjenja iz ovog pronalaska obuhvataju prahove, sprejeve, masti, paste, kreme, losione, gelove, rastvore, flastere i inhalante. Aktivno jedinjenje se može mešati pod sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, i sa bilo kojim konzervansima, puferima ili potisnim gasovima koji mogu biti potrebni.

[0118] Masti, paste, kreme i gelovi mogu da sadrže, pored aktivnog jedinjenja iz ovog pronalaska, ekscipijente, kao što su životinjske i biljne masti, ulja, voskovi, parafini, skrob, tragakant, derivati celuloze, polietilen glikoli, silikoni, bentoniti, salicilna kiselina, talk i cink oksid, ili njihove smeše.

1

[0119] Praškovi i sprejevi mogu da sadrže, pored jedinjenja iz ovog pronalaska, ekscipijente kao što su laktoza, talk, salicilna kiselina, aluminijum hidroksid, kalcijum silikati i poliamidni prah, ili smeše ovih supstanci. Sprejevi mogu dodatno da sadrže uobičajene potisne gasove, kao što su hlorofluorougljovodonici i isparljivi nesupstituisani ugljovodonici, kao što su butan i propan.

[0120] Transdermalni flasteri imaju dodatnu prednost obezbeđivanja kontrolisane isporuke jedinjenja iz ovog pronalaska u telo. Takvi oblici za doziranje se mogu napraviti rastvaranjem ili dispergovanjem jedinjenja u odgovarajućem medijumu. Pojačivači apsorpcije se takođe mogu koristiti za povećanje protoka jedinjenja preko kože. Brzina takvog protoka se može kontrolisati bilo obezbeđivanjem membrane koja kontroliše brzinu ili dispergovanjem jedinjenja u polimernoj matrici ili gelu.

[0121] Takođe se razmatraju oftalmološke formulacije, masti za oči, praškovi, rastvori i slično.

[0122] Farmaceutske kompozicije pogodne za parenteralnu primenu mogu sadržavati jedno ili više jedinjenja iz pronalaska u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih sterilnih izotoničnih vodenih ili nevodenih rastvora, disperzija, suspenzija ili emulzija, ili sterilnih prahova koji se mogu rekonstituisati u sterilne u rastvore ili disperzije neposredno pre upotrebe, koji mogu da sadrže šećere, alkohole, antioksidante, pufere, bakteriostate, rastvorene supstance koje čine formulaciju izotoničnom sa krvlju primaoca ili sredstva za suspendovanje ili zgušnjavanje.

[0123] Primeri pogodnih vodenih i nevodenih nosača koji se mogu koristiti u farmaceutskim kompozicijama obuhvataju vodu, etanol, poliole (kao što su glicerol, propilen glikol, polietilen glikol i slično), i njihove pogodne smeše, biljna ulja, kao npr. maslinovo ulje i organske estre za injekcije, kao što je etil oleat. Odgovarajuća tečnost se može održati, na primer, upotrebom materijala za oblaganje, kao što je lecitin, održavanjem potrebne veličine čestica u slučaju disperzija i upotrebom surfaktanata.

[0124] Ove kompozicije mogu takođe da sadrže pomoćne supstance kao što su konzervansi, agensi za vlaženje, emulgatori i disperzioni agensi. Prevencija delovanja mikroorganizama na predmetna jedinjenja može se obezbediti uključivanjem različitih antibakterijskih i antifungalnih agenasa, na primer, parabena, hlorobutanola, fenol sorbinske kiseline i slično.

2

Takođe može biti poželjno da se u kompozicije uključe izotonični agensi, kao što su šećeri, natrijum hlorid i slično. Pored toga, produžena apsorpcija injekcionog farmaceutskog oblika može biti izazvana uključivanjem agenasa koji odlažu apsorpciju kao što su aluminijum monostearat i želatin.

[0125] U nekim slučajevima, da bi se produžio efekat leka, poželjno je usporiti apsorpciju leka iz subkutane ili intramuskularne injekcije. Ovo se može postići upotrebom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala koji ima slabu rastvorljivost u vodi. Brzina apsorpcije leka tada zavisi od brzine rastvaranja koja, zauzvrat, može zavisiti od veličine kristala i kristalnog oblika. Alternativno, odložena apsorpcija parenteralno primenjenog oblika leka se postiže rastvaranjem ili suspendovanjem leka u uljnom nosaču.

[0126] Injekcioni depo oblici se prave formiranjem matrica mikrokapsula predmetnih jedinjenja u biorazgradivim polimerima kao što je polilaktid-poliglikolid. U zavisnosti od odnosa leka prema polimeru i prirode određenog polimera koji se koristi, može se kontrolisati brzina oslobađanja leka. Primeri drugih biorazgradivih polimera obuhvataju poli(ortoestre) i poli(anhidride). Depo formulacije za injekcije se takođe pripremaju hvatanjem leka u lipozome ili mikroemulzije koje su kompatibilne sa telesnim tkivom.

[0127] Kada se jedinjenja iz ovog pronalaska daju kao farmaceutski proizvodi, ljudima i životinjama, ona se mogu davati sama po sebi ili kao farmaceutska kompozicija koja sadrži, na primer, 0.1 do 99% (poželjnije 10 do 30%) aktivnog sastojka u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.

[0128] Preparati se mogu davati oralno, parenteralno, lokalno ili rektalno. Oni su naravno dati u oblicima pogodnim za svaki put primene. Na primer, daju se u obliku tableta ili kapsula, putem injekcija, inhalacija, losiona za oči, masti, supozitorija itd. primenom injekcijom, infuzijom ili inhalacijom; lokalno korišćenjem losiona ili masti; i rektalno supozitorijama. Poželjne su oralne primene.

[0129] Fraze "parenteralna primena" i "primenjena parenteralno" kako se ovde koriste označavaju načine primene koji nisu enteralni i lokalni, obično injekcijom, i obuhvataju, bez ograničenja, intravenoznu, intramuskularnu, intraarterijsku, intratekalnu, intrakapsularnu, intraorbitalnu, intrakardijalnu, intradermalnu, intraperitonealnu, transtrahealnu, subkutanu, subkutikularnu, intraartikularnu, subkapsularnu, subarahnoidnu, intraspinalnu i intrasternalnu injekciju i infuziju.

[0130] Fraze „sistemska primena“, „primena sistemski“, „periferna primena“ i „primena periferno“ kako se ovde koriste znače davanje jedinjenja, leka ili drugog materijala osim direktno u centralni nervni sistem, tako da se ulazi u sistem pacijenta i na taj način podleže metabolizmu i drugim sličnim procesima, na primer, subkutana primena.

[0131] Ova jedinjenja se mogu davati ljudima i drugim životinjama za terapiju bilo kojim pogodnim putem davanja, obuhvatajući oralno, nazalno, kao na primer, sprejom, rektalno, intravaginalno, parenteralno, intracisternalno i lokalno, kao u prahu, mastima ili kapima, obuhvatajući bukalno i sublingvalno.

[0132] Bez obzira na odabrani način davanja, jedinjenja iz ovog pronalaska, koja se mogu koristiti u pogodnom hidratizovanom obliku, i/ili farmaceutske kompozicije, formulišu se u farmaceutski prihvatljive dozne oblike pomoću konvencionalnih metoda poznatih stručnjacima u ovoj oblasti.

[0133] Stvarni nivoi doze aktivnih sastojaka u farmaceutskim kompozicijama mogu da variraju tako da se dobije količina aktivnog sastojka koja je efikasna za postizanje željenog terapijskog odgovora za određenog pacijenta, kompoziciju i način primene, a da nije toksičan za pacijenta.

[0134] Odabrani nivo doze zavisiće od niza faktora obuhvatajući aktivnost određenog jedinjenja iz predmetnog pronalaska koje se koristi, ili njegovog estra, soli ili amida, načina primene, vremena primene, brzine lučenja ili metabolizma određenog jedinjenja koje se koristi, brzine i obima apsorpcije, trajanja tretmana, drugim lekova, jedinjenja i/ili materijala koji se koriste u kombinaciji sa određenim jedinjenjem koje se koristi, starosti, polu, težinu, stanju, opštem zdravlju i prethodnoj medicinskoj istoriji pacijenta koji se leči, i od sličnih faktora dobro poznatih u medicinskoj oblasti.

[0135] Lekar ili veterinar koji ima uobičajene veštine u ovoj oblasti može lako da odredi i prepiše efikasnu količinu potrebne farmaceutske kompozicije. Na primer, lekar ili veterinar bi mogao da započne sa dozama jedinjenja iz pronalaska koja se koriste u farmaceutskoj

4

kompoziciji na nivoima nižim od potrebnih da bi se postigao željeni terapeutski efekat i postepeno povećavao dozu dok se ne postigne željeni efekat.

[0136] Generalno, pogodna dnevna doza jedinjenja iz pronalaska biće ona količina jedinjenja koja je najniža doza koja je efikasna da proizvede terapeutski efekat. Takva efikasna doza će generalno zavisiti od gore opisanih faktora. Generalno, oralne, intravenske, intracerebroventrikularne i subkutane doze jedinjenja iz ovog pronalaska za pacijenta, kada se koriste za naznačene analgetičke efekte, biće u rasponu od oko 0.0001 do oko 100 mg po kilogramu telesne težine dnevno.

[0137] U određenim realizacijama, doza jedinjenja ili kompozicije se daje subjektu svaki dan, svaki drugi dan, svakih nekoliko dana, svaki treći dan, jednom nedeljno, dva puta nedeljno, tri puta nedeljno, ili jednom u dve nedelje. Ako se želi, efektivna dnevna doza aktivnog jedinjenja se može primeniti kao dve, tri, četiri, pet, šest ili više poddoza koje se primenjuju odvojeno u odgovarajućim intervalima tokom dana, opciono, u jediničnim doznim oblicima. U nekim realizacijama, doza ili doze jedinjenja ili kompozicije se primenjuju tokom 2 dana, 3 dana, 5 dana, 7 dana, 14 dana ili 21 dan. U određenim realizacijama, doza jedinjenja ili kompozicije se primenjuje tokom 1 meseca, 1.5 meseca, 2 meseca, 2.5 meseca, 3 meseca, 4 meseca, 5 meseci, 6 meseci ili više.

[0138] Gore opisani rasporedi administracije dati su samo u ilustrativne svrhe i ne treba ih smatrati ograničavajućim. Osoba sa uobičajenim iskustvom u tehnici će lako razumeti da su sve doze u okviru obima pronalaska.

[0139] Iako je moguće da se jedinjenje iz ovog pronalaska primenjuje samostalno, poželjno je da se jedinjenje primenjuje kao farmaceutska formulacija (kompozicija).

[0140] Pacijent koji prima ovaj tretman je svaka životinja kojoj je to potrebno, obuhvatajući primate, posebno ljude, i druge sisare kao što su kopitari, goveda, svinje i ovce; i živine i kućni ljubimci uopšte.

[0141] Jedinjenje iz pronalaska se može primenjivati kao takvo ili u smeši sa farmaceutski prihvatljivim nosačima i takođe se može primenjivati zajedno sa antimikrobnim agensima kao što su penicilini, cefalosporini, aminoglikozidi i glikopeptidi. Konjunktivna terapija, dakle, obuhvata sekvencijalnu, simultanu i odvojenu primenu aktivnog jedinjenja na način da terapeutski efekti prve primene ne nestanu u potpunosti kada se primeni sledeća doza.

[0142] Dodavanje aktivnog jedinjenja iz pronalaska u stočnu hranu se poželjno postiže pripremanjem odgovarajuće smeše za hranu koja sadrži aktivno jedinjenje u efektivnoj količini i uključivanjem premiksa u kompletan obrok.

[0143] Alternativno, intermedijarni koncentrat ili dodatak hrani koji sadrži aktivni sastojak može se umešati u hranu. Način na koji se takvi premiksovi hrane i kompletni obroci mogu pripremiti i davati opisani su u referentnim knjigama (kao što su "Applied Animal Nutrition", W.H. Freedman and CO., San Francisco, U.S.A., 1969 ili "Livestock Feeds and Feeding" O i B books, Corvallis, Ore., U.S.A., 1977).

[0144] Tehnologija mikroemulzifikacije se može koristiti za poboljšanje biodostupnosti lipofilnih (u vodi nerastvorljivih) farmaceutskih agenasa. Primeri obuhvataju trimetrin (Dordunoo, S. K., i sar., Drug Development and Industrial Pharmacy, 17(12), 1685-1713, 1991) i REV 5901 (Sheen, P. C., i sar., J Pharm Sci 80(7), 712-714, 1991). Između ostalog, mikroemulzifikacija obezbeđuje povećanu biodostupnost tako što se apsorpcija prvenstveno usmerava u limfni sistem umesto u cirkulatorni sistem, koji na taj način zaobilazi jetru i sprečava uništavanje jedinjenja u hepatobilijarnoj cirkulaciji.

[0145] U jednom aspektu formulacije sadrže micele formirane od jedinjenja iz ovog pronalaska i najmanje jednog amfifilnog nosača, u kome micele imaju prosečni prečnik manji od oko 100 nm. Poželjnije realizacije obezbeđuju micele prosečnog prečnika manjeg od oko 50 nm, a još poželjnije realizacije obezbeđuju micele prosečnog prečnika manjeg od oko 30 nm, ili čak manjeg od oko 20 nm.

[0146] Dok se razmatraju svi pogodni amfifilni nosači, trenutno poželjni nosači su generalno oni koji imaju status generalno priznatih kao bezbednih (GRAS), i koji mogu da rastvore jedinjenje iz ovog pronalaska i da ga mikroemulguju u kasnijoj fazi. kada rastvor dođe u kontakt sa složenom vodenom fazom (kao što je ona koja se nalazi u ljudskom gastrointestinalnom traktu). Obično, amfifilni sastojci koji zadovoljavaju ove zahteve imaju HLB vrednosti (hidrofilni prema lipofilnom balansu) od 2-20, a njihove strukture sadrže alifatične radikale pravog lanca u opsegu od C-6 do C-20. Primeri su polietilen-glikolizovani masni gliceridi i polietilen glikoli.

[0147] Posebno poželjni amfifilni nosači su zasićeni i mononezasićeni polietilenglikolizovani gliceridi masnih kiselina, kao što su oni dobijeni iz potpuno ili delimično hidrogenizovanih različitih biljnih ulja. Takva ulja mogu povoljno da se sadrže tri-. di- i mono-gliceride masnih kiselina i di- i mono-polietilenglikol estre odgovarajućih masnih kiselina, sa posebno poželjnim sastavom masnih kiselina koji obuhvata kaprinsku kiselinu 4-10, kaprinsku kiselinu 3-9, laurinsku kiselinu 40-50, miristinsku kiselinu 14-24, palmitinsku kiselinu 4-14 i stearinsku kiselinu 5-15%. Druga korisna klasa amfifilnih nosača obuhvata delimično esterifikovani sorbitan i/ili sorbitol, sa zasićenim ili mono-nezasićenim masnim kiselinama (SPAN-serija) ili odgovarajuće etoksilovane analoge (TVEEN-serija).

[0148] Komercijalno dostupni amfifilni nosači su posebno razmatrani, obuhvatajući Gelucireseriju, Labrafil, Labrasol ili Lauroglicol (sve proizvodi i distribuira Gattefosse Corporation, Saint Priest, Francuska), PEG-mono-oleat, PEG-dioleat, PEG-mono -laurat i dilaurat, lecitin, polisorbat 80 itd. (proizvode i distribuiraju brojne kompanije u SAD i širom sveta).

[0149] Hidrofilni polimeri pogodni za upotrebu u ovom pronalasku su oni koji su lako rastvorljivi u vodi, mogu biti kovalentno vezani za lipid koji formira vezikule i koji se tolerišu in vivo bez toksičnih efekata (tj. koji su biokompatibilni). Pogodni polimeri obuhvataju polietilen glikol (PEG), polimlečnu (takođe nazvanu polilaktid), poliglikolnu kiselinu (takođe nazvanu poliglikolid), kopolimer polimlečne i poliglikolne kiseline i polivinil alkohol. Poželjni polimeri su oni koji imaju molekulsku težinu od oko 100 ili 120 Daltona do oko 5.000 ili 10000 Daltona, a poželjnije od oko 300 Daltona do oko 5000 Daltona. U posebno poželjnom izvođenju, polimer je polietilenglikol koji ima molekulsku težinu od oko 100 do oko 5000 Daltona, a poželjnije ima molekulsku težinu od oko 300 do oko 5000 Daltona. U posebno poželjnom izvođenju, polimer je polietilenglikol od 750 Daltona (PEG( 750)). Polimeri korišćeni u ovom pronalasku imaju značajno manju molekulsku težinu, približno 100 Daltona, u poređenju sa velikom molekulskom težinom od 5000 Daltona ili većom koja se koristi u standardnim tehnikama pegilacije. Polimeri se takođe mogu definisati brojem monomera u njima; poželjna realizacija ovog pronalaska koristi polimere od najmanje oko tri monomera, takvi PEG polimeri koji se sastoje od tri monomera (približno 150 Daltona).

[0150] Drugi hidrofilni polimeri koji mogu biti pogodni za upotrebu u ovom pronalasku obuhvataju polivinilpirolidon, polimetoksazolin, polietiloksazolin, polihidroksipropil metakrilamid, polimetakrilamid, polidimetilakrilamid i derivatizovane celuloze kao što su hidroksimetilceluloza ili hidroksietilceluloza.

[0151] Formulacija može sadržati biokompatibilni polimer izabran iz grupe koju čine poliamidi, polikarbonati, polialkileni, polimeri akrilnih i metakrilnih estara, polivinil polimeri, poliglikolidi, polisiloksani, poliuretani i njihovi ko-polimeri, celuloze, polipropilen, polietileni, polistiren, polimeri mlečne kiseline i glikolne kiseline, polianhidridi, poli(orto)estri, poli(butinska kiselina), poli(valerinska kiselina), poli(laktid-ko-kaprolakton), polisaharidi, proteini, polihijaluronska kiselina policijanoakrilati, mešavine, smeše ili njihovi kopolimeri.

[0152] Karakteristike oslobađanja formulacije zavise od materijala za kapsuliranje, koncentracije inkapsuliranog leka i prisustva modifikatora oslobađanja. Na primer, oslobađanjem se može manipulisati tako da zavisi od pH vrednosti, na primer, korišćenjem pH osetljivog premaza koji se oslobađa samo pri niskom pH, kao u želucu, ili višem pH, kao u crevima. Može se koristiti enterička obloga da bi se sprečilo oslobađanje sve do prolaska kroz stomak. Mogu se koristiti višestruki premazi ili mešavine cijanamida inkapsuliranih u različitim materijalima da bi se dobilo početno oslobađanje u želucu, posle čega sledi kasnije oslobađanje u crevima. Oslobađanjem se takođe može manipulisati uključivanjem soli ili agenasa za formiranje pora, koji mogu povećati unos vode ili oslobađanje leka difuzijom iz kapsule. Ekscipijenti koji modifikuju rastvorljivost leka se takođe mogu koristiti za kontrolu brzine oslobađanja. Mogu takođe biti ugrađeni agensi koji pojačavaju degradaciju matriksa ili oslobađanje iz matriksa. Oni se mogu dodati leku, dodati kao zasebna faza (tj. kao čestice), ili se mogu zajedno rastvoriti u polimernoj fazi u zavisnosti od jedinjenja. U svim slučajevima količina treba da bude između 0.1 i trideset procenata (m/m polimera). Tipovi pojačivača razgradnje obuhvataju neorganske soli kao što su amonijum sulfat i amonijum hlorid, organske kiseline kao što su limunska kiselina, benzojeva kiselina i askorbinska kiselina, neorganske baze kao što su natrijum karbonat, kalijum karbonat, kalcijum karbonat, cink karbonat i cink hidroksid, i organske baze kao što su protamin sulfat, spermin, holin, etanolamin, dietanolamin i trietanolamin i surfaktante kao što su Tween<®>i Pluronic<®>. Sredstva za formiranje pora koja dodaju mikrostrukturu matricama (tj. jedinjenja rastvorljiva u vodi kao što su neorganske soli i šećeri) se dodaju kao čestice. Opseg treba da bude između jedan i trideset procenata (m/m polimera).

[0153] Upijanjem se takođe može manipulisati promenom vremena zadržavanja čestica u crevima. Ovo se može postići, na primer, oblaganjem čestice ili odabirom materijala za kapsuliranje mukoznog adhezivnog polimera. Primeri obuhvataju većinu polimera sa slobodnim karboksilnim grupama, kao što su hitozan, celuloze i posebno poliakrilati (kako se ovde koristi, poliakrilati se odnose na polimere obuhvatajući akrilatne grupe i modifikovane akrilatne grupe kao što su cijanoakrilati i metakrilati).

[0154] Gore opisani rasporedi administracije dati su samo u ilustrativne svrhe i ne treba ih smatrati ograničavajućim. Osoba sa uobičajenim iskustvom u tehnici će lako razumeti da su sve doze u okviru pronalaska.

[0155] Jedinjenja iz pronalaska se mogu pogodno davati sa drugim agensima pacijentima kojima je to potrebno. Kada se inhibitor rho-kinaze daje sa drugim agensom, inhibitor rhokinaze i drugi agens se mogu davati sekvencijalno ili istovremeno. Sekvencijalno znači da se jedan agens primenjuje neko vreme posle čega sledi primena drugog agensa, posle čega može biti praćena primenom prvog agensa. Kada se agensi primenjuju sekvencijalno, nivo ili jedan agens se možda neće održati na terapeutski efikasnom nivou kada se primenjuje drugi agens, i obrnuto. Istovremeno znači da se prvi i drugi agens primenjuju prema rasporedu koji održava oba agensa na suštinski terapeutski efektivnom nivou, iako se agensi ne primenjuju istovremeno. Svaki agens se može primeniti u jednoj ili višestrukim dozama, a doze se mogu primeniti po bilo kom rasporedu, obuhvatajući, bez ograničenja, dva puta dnevno, dnevno, nedeljno, svake dve nedelje i mesečno.

[0156] Pronalazak takođe uključuje adjunktivnu primenu. Adjunktivna primena znači da se drugi agens primenjuje pacijentu pored prvog agensa koji se već primenjuje za lečenje bolesti ili simptoma bolesti. U nekim realizacijama, adjunktivna primena obuhvata davanje drugog agensa pacijentu kod koga primena prvog agensa nije dovoljno lečila bolest ili simptom bolesti. U drugim realizacijama, adjunktivna primena uključuje davanje drugog agensa pacijentu čija je bolest efikasno lečena primenom prvog agensa, uz očekivanje da adjunktivna terapija poboljšava ishod lečenja. U nekim realizacijama, efekat primene prvog i drugog agensa je sinergistički. U nekim realizacijama, primena prvog i drugog agensa sprečava ili produžava vreme do relapsa, u poređenju sa primenom samo jednog od agenasa. U nekim realizacijama, primena prvog i drugog agensa omogućava smanjenu dozu i/ili učestalost primene prvog i drugog agensa.

[0157] U jednoj realizaciji pronalaska, inhibitor rho-kinaze iz pronalaska se primenjuje i antineoplastični agens se daje subjektu kom je to potrebno. U drugoj realizaciji, inhibitor rhokinaze pronalaska i inhibitor angiogeneze se daju subjektu kom je to potrebno. U drugom aspektu, inhibitor rho-kinaze pronalaska i antiinflamatorni agens se daju subjektu kom je to potrebno. U još jednom izvođenju, daju se inhibitor rho-kinaze iz pronalaska i imunosupresiv. Drugi agens može biti, mali molekul, antitelo ili njegov fragment koji se vezuje antigen, ili zračenje.

[0158] Antineoplastični agensi obuhvataju, bez ograničenja, citotoksične hemoterapeutske agense, ciljane male molekule i biološke molekule i zračenje. Jedinjenja i agensi koji se mogu primeniti za onkološki tretman, pored inhibitora rho kinaze iz pronalaska, obuhvataju sledeće: irinotekan, etopozid, kamptotecin, 5-fluorouracil, hidroksiureju, tamoksifen, paklitaksel, kapcitabin, karboplatin, cisplatin, cisplatin, daktomicin, gemcitabin, doksorubicin, danorubicin, ciklofosfamid i terapiju zračenjem, koja može biti eksterna (npr. terapija eksternim zračenjem (EBRT)) ili interna (npr. brahiterapija (BT)).

[0159] Ciljani mali molekuli i biološki molekuli obuhvataju, bez ograničenja, inhibitore komponenti puteva transdukcije signala, kao što su modulatori tirozin kinaza i inhibitori receptorskih tirozin kinaza, i agense koji se vezuju za tumor-specifične antigene. Primeri obuhvataju inhibitore receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), obuhvatajući gefitinib, erlotinib i cetuksimab, inhibitore HER2 (npr. trastuzumab, trastuzumab emtanzin (trastuzumab-DMl; T-DM1) i pertuzumab), anti-VEGF antitela i fragmente (npr. bevacizumab), antitela koja inhibiraju CD20 (npr. rituksimab, ibritumomab), anti-VEGFR antitela (npr. ramucirumab (IMC-1121B), IMC-1C11 i CDP791), anti-PDGFR antitela i imatinib. Inhibitori kinaze malih molekula mogu biti specifični za određenu tirozin kinazu ili mogu biti inhibitori dve ili više kinaza. Na primer, jedinjenje N-(3,4-dihloro-2-fluorofenil)-7-({ [(3aR,6aS)-2-metiloktahidrociklopenta[c] pirol-5-il]metil}oksi)-6-(metiloksi)kinazolin-4-amin (takođe poznat kao XL647, EXEL-7647 i KD-019) je in vitro inhibitor nekoliko receptorskih tirozin kinaza (RTK), obuhvatajući EGFR, EphB4, KDR (VEGFR), Flt4 (VEGFR3) i ErbB2, te je takođe inhibitor SRC kinaze, koja je uključena u puteve koji dovode do ne reagovanja tumora na određene TKI-ove. U aspektu, lečenje subjekta kome je potrebno obuhvata davanje inhibitora rho-kinaze Formule I davanje KD-019.

[0160] Dasatinib (BMS-354825; Bristol-Myers Squibb, New York) je još jedan oralno biodostupan, kompetitivni inhibitor Src na ATP mestu. Dasatinib takođe cilja na Bcr-Abl (odobren od FDA za upotrebu kod pacijenata sa hroničnom mijelogenom leukemijom (CML) ili akutnom limfoblastnom leukemijom sa pozitivnim filadelfijskim hromozomom (Ph+) (ALL)) kao i c-Kit, PDGFR, c-FMS, EphA2, i Src porodice kinaza. Dva druga oralna inhibitora tirozin kinaze Src i Bcr-Abl su bosutinib (SKI-606) i sarakatinib (AZD0530).

[0161] Prema pronalasku, inhibitori angiogeneze se mogu davati subjektu u kombinaciji sa jedinjenjima iz pronalaska. Inhibitori angiogeneze obuhvataju bilo koju supstancu koja inhibira rast novih krvnih sudova. Na primer, inhibitori angiogeneze obuhvataju antagoniste VEGF, P1GF i VEGF receptora, obuhvatajući ovde otkrivena antitela. Pod inhibitorom se podrazumeva inhibitor biološkog procesa ili inhibitor mete. U tom smislu, inhibitor angiogeneze je agens koji smanjuje angiogenezu. Inhibitor Rho-kinaze je agens, kao što je kompetitivni inhibitor vezivanja ATP-a, koji inhibira intrinzičnu aktivnost ili blokira interakciju Rho-kinaze. Pod antagonistom se podrazumeva supstanca koja smanjuje ili inhibira aktivnost ili funkciju u ćeliji koja je povezana sa metom. Na primer, VEGF antagonist smanjuje ili blokira funkciju u ćeliji koja je povezana sa VEGF. VEGF antagonist može delovati na VEGF, vezivanjem za VEGF i blokiranjem vezivanja za njegove receptore i/ili može delovati na drugu ćelijsku komponentu uključenu u VEGF-posredovanu transdukciju signala. Slično, VEGFR2 antagonist je agens koji smanjuje ili blokira transdukciju signala posredovanu VEGFR2 vezivanjem za VEGFR2 i blokiranjem vezivanja liganda ili interakcijom sa VEGFR2 supstratom, ili deluje na drugu ćelijsku komponentu da smanji ili blokira transdukciju signala posredovanu sa VEGFR2. Dakle, inhibitori angiogeneze obuhvataju nova anti-VEGFR2 antitela pomenuta ovde (Slika 11) i antagoniste VEGF, VEGFR1, VEGFR2, PDGF, PDGFR-β, neuropilina-1 (NRP1) i komplementa.

[0162] Primeri sredstava za vezivanje VEGF obuhvataju VEGF antitela i VEGF zamke (tj. domene za vezivanje liganda VEGF receptora. Generalno, VEGF zamka je protein koji sadrži VEGF vezujuće domene jednog ili više proteina VEGF receptora. VEGF-zamke obuhvataju, rastvorljivi VEGFR-1, rastvorljivi neuropilin 1 (NRP1), rastvorljivi VEGFR-3 (koji vezuje VEGF-C i VEGF-D) i aflibercept (Zaltrap; Eielea; VEGF Trap R1R2), koji se sastoji od

1

segmenata ekstracelularnih domena humanih vaskularnih receptora endotelnog faktora rasta VEGFR1 i VEGFR2 fuzionisanih sa konstantnim regionom (Fc) humanog IgG1. Conbercept (KH902) je fuzioni protein koji sadrži ekstracelularni domen 2 VEGFR-1 (Flt-1) i ekstracelularni domen 3, 4 VEGFR -2 (KDR) fuzionisan sa Fc delom humanog IgG1 Nekoliko VEGF zamki koje sadrže KDR i FLT-1 Ig slične domene u različitim kombinacijama otkriveno je u patentu US 8216 575. DARPins (akronim za dizajnirane proteine ponavljanja ankirina) su genetski modifikovani mimetički proteini antitela koji tipično pokazuju visoko specifično i visoko afinitetno vezivanje ciljnog proteina. DARPin<®>MP0112 je inhibitor vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF) i ušao je u klinička ispitivanja za lečenje vlažne makularne degeneracije i dijabetičkog makularnog edema.

[0163] Prema pronalasku, ekspresija VEGF može biti ciljana. Na primer, VEGF inhibitor PTC299 cilja na VEGF post-transkripciono tako što se selektivno vezuje za 5'- i 3'-netranslatirane regije (UTR) VEGF glasnika RNK (mRNK), čime se sprečava translacija VEGF-a. Pegaptanib (Macugen) je RNK aptamer usmeren protiv VEGF-165.

[0164] Faktor rasta placente (P1GF) je umešan u patološku angiogenezu. P1GF je strukturno povezan sa VEGF i takođe je ligand za VEGFR-1. Shodno tome, VEGF zamke koje sadrže ekstracelularni domen VEGFR1 (videti gore) su korisne za ciljanje P1GF.

[0165] PDGF se sastoji od četiri polipeptidna lanca koji formiraju homodimere PDGF-AA, BB, CC, i DD kao i heterodimer PDGF-AB. PDGF receptori (PDGFR) -α i -β posreduju u funkcijama. Konkretno, PDGFRα se vezuje za PDGF-AA, -BB, -AB, i -CC, dok PDGFRβ ima interakciju sa -BB i -DD. Neograničavajući primeri agenasa koji se vezuju za PDGF obuhvataju anti-PDGF antitela i PDGF zamke. Sredstva koja ciljaju PDGF obuhvataju Fovista<™>(E10030, Ophthotech), pegilirani aptamer koji cilja PDGF-B, i AX102 (Sennino i sar., 2007, Cancer Res.75(15):7359-67), oligonukleotidni aptamer koji vezuje PDGF-B.

[0166] Agensi koja ciljaju PDGF receptore obuhvataju ramucirumab (IMC-3G3, humani IgG1) anti-PDGFRa antitelo, krenolanib (CP-868596), selektivni inihibitor PDGFRα (IC50= 0.9 nM) i PDGFRβ (IC50=1.8 nM), i nilotinib (Tasigna<®>), inhibitor PDGFRα i PDGFRβ i druge tirozin kinaze.

2

[0167] Inhibitori angiogeneze obuhvataju intracelularne agense koji blokiraju transdukciju signala posredovanu sa, na primer, VEGF, PDGF, ligandima VEGF ili PDGF receptora, ili komplementom. Intracelularni agensi koji inhibiraju inhibitore angiogeneze obuhvataju sledeće, bez ograničenja. Sunitinib (Sutent; SU11248) je panspecifični inhibitor malih molekula VEGFR1-VEGFR3, PDGFRα i PDGFRβ, receptora faktora matičnih ćelija (cKIT), Flt-3, i receptora faktora 1 koji stimuliše kolonije (CSF-1R). Aksitinib (AG013736; Inlyta) je još jedan inhibitor tirozin kinaze malog molekula koji inhibira VEGFR-1-VEGFR-3, PDGFR, i cKIT. Cediranib (AZD2171) je inhibitor VEGFR-1-VEGFR-3, PDGFRβ, i cKIT. Sorafenib (Nexavar) je još jedan mali molekularni inhibitor nekoliko tirozin protein kinaza, koji uključuje VEGFR, PDGFR, i Raf kinaze. Pazopanib (Votrient; (GW786034) inhibira VEGFR-1, -2 i -3, cKIT i PDGFR. Foretinib (GSK1363089; XL880) inhibira VEGFR2 i MET. CP-547632 je snažan inhibitor kinaza VEGFR-2 i osnovnog faktora rasta fibroblasta (FGF). E-3810 ((6-(7-((1-aminociklopropil) metoksi)-6-metoksikinolin-4-iloksi)-N-metil-1-naftamid) inhibira VEGFR-1, -2, i -3 i FGFR-1 i -2 kinaze u nanomolarnom opsegu. Brivanib (BMS-582664) je VEGFR-2 koji takođe inhibira signalizaciju FGF receptora. CT-322 (Adnectin) je mali protein zasnovan na humanom fibronektinskom domenu i vezuje se za i inhibira aktivaciju VEGFR2. Vandetanib (Caprelas; Zactima; ZD6474) je inhibitor VEGFR2, EGFR, i RET tirozin kinaza. X-82 (Xcovery) je mali molekul indolinonskog inhibitora signalizacije preko faktora rasta VEGFR i PDGFR

[0168] Anti-inflamatorni i imunosupresivi obuhvataju steroidne lekove kao što su glukokortikoidi (npr. deksametazon), FK506 (takrolimus), ciklosporin, fingolimod, interferon, kao što je IPNβ ili IFNy, vezujućeg proteina faktora nekroze tumora-alfa (TNF-α) kao što su infliksimab (Remicade), etanercept (Enbrel), ili adalimumab (Humira), i mikofenolna kiselina.

[0169] U određenim realizacijama, ROCK inhibitori iz pronalaska se primenjuju zajedno sa agensima koji se koriste za lečenje metaboličkih poremećaja. Na primer, za lečenje gojaznosti, ROCK inhibitori se mogu kombinovati sa lekovima za mršavljenje kao što su fentermin, inhibitori adsorpcije masti (npr. Xenical), i sredstva za suzbijanje apetita, Postupci koji se koriste za pomoć pri gubitku težine uključuju, na primer, trake za stomak, premošćavanje stomaka ili spajanje. Za insulinsku rezistenciju ili metabolički sindrom ili hiperinsulinemiju, ROCK inhibitori pronalaska mogu se davati zajedno sa jedinjenjima koja snižavaju nivoe holesterola, na primer, sa jednim ili više lekova kao što su statini, fibrati ili nikotinska kiselina. Za visok krvni pritisak povezan sa takvim oboljenjima, ROCK inhibitori pronalaska mogu se davati zajedno sa, na primer, jednim ili više anti-hipertenzivnih lekova kao što su diuretici ili inhibitori enzima koji konvertuje angiotenzin (ACE). ROCK inhibitori iz pronalaska mogu se davati u programu lečenja koji uključuje promene u načinu života kao što su povećana fizička aktivnost, poboljšana ishrana i/ili prestanak pušenja. U određenim realizacijama, ROCK inhibitor je ROCK2 selektivan.

[0170] Th17 ćelije su nova podgrupa pomoćnih CD4<+>T ćelija koje luče IL-17, IL-21 i IL-22. Proinflamatorna aktivnost Th17 ćelija može biti korisna za domaćina tokom infekcije, ali nekontrolisana funkcija Th17 je povezana i aktivno uključena u nekoliko autoimunih patologija i razvoj akutne bolesti kalema protiv domaćina (GVHD), bolesti koju karakteriše selektivno oštećenje epitela ciljnih organa koje je posredovano zrelim T ćelijama prisutnim u matičnim ćelijama ili inokulumima koštane srži. Zaista, visoki nivoi IL-17 su otkriveni u serumima i biopsijama pacijenata sa reumatoidnim artritisom (RA) i sistemskim eritematoznim lupusom (SLE), što je u korelaciji sa destrukcijom sinovijalnog tkiva i aktivnošću bolesti. Patološka uloga IL-17 u artritičnim zglobovima povezana je sa njegovom stimulacijom proizvodnje proinflamatornih citokina i povećanim angažovanjem T ćelija i ćelija urođenog imuniteta. Štaviše, broj Th17 ćelija je značajno povećan u perifernoj krvi pacijenata sa RA, kao i povišene koncentracije IL-17 su primećene u supernatantima njihovih PBMC posle stimulacije sa anti-CD3/CD28 antitelima ex vivo. Pored toga, kod pacijenata sa multiplom sklerozom (MS), mijelin reaktivne Th17 ćelije su takođe obogaćene i proizvode velike količine IL-22 i IFN-y. Dalje, značajno veći broj IL-17<+>ćelija je otkriven u oblastima creva zahvaćenim bolešću u poređenju sa zdravim područjima istih subjekata sa Kronovom bolešću (CD).

[0171] Razvoj i funkcija Th17 ćelija zavisi od aktivacije specifičnih intracelularnih signalnih puteva. Nuklearni receptor tipa steroidnog receptora RORyt se selektivno eksprimira u Th17 ćelijama i čini se da je neophodan za proizvodnju IL-17. Primećeno je da je indukcija RORyt posredovana IL-6, IL-21 i IL-23 preko STAT3-zavisnog mehanizma. STAT3 se takođe direktno vezuje za IL-17 i IL-21 promotere. Pored RORyt i STAT3, regulatorni faktor interferona 4 (IRF4) je neophodan za diferencijaciju Th17 ćelija pošto IRF4 KO miševi nisu uspeli da pokrenu Th17 odgovor i bili su otporni na razvoj autoimunih odgovora. Nedavne studije su pokazale da fosforilacija IRF4 pomoću Rho-kinaze 2 (ROCK2) reguliše proizvodnju IL-17 i IL-21 i razvoj autoimunosti kod miševa.

4

[0172] Prema pronalasku, ciljanje Th17 (IL-17-sekretirajućih) ćelija inhibicijom rho-kinaze obezbeđuje metod za lečenje bolesti posredovanih Th17 ćelijama, posebno autoimunih poremećaja kao što su psorijaza, atopijski dermatitis, ekcem i GVHD kod ljudi. U aspektu, inhibitor Rho-kinaze je jedinjenje Formule I. U nekim realizacijama, inhibitor rho-kinaze inhibira ROCK1 i ROCK2. U nekim realizacijama, inhibitor rho-kinaze selektivno inhibira ROCK2. Selektivna inhibicija ROCK2 obezbeđuje lečenje bolesti posredovanih Th17 ćelijama i smanjuje ili sprečava toksičnosti povezane sa potpunom inhibicijom ROCK aktivnosti.

[0173] Regulatorne T ćelije (Treg-ovi) igraju ključnu ulogu u održavanju imunološke tolerancije na auto-antigene i inhibiciji autoimunih odgovora, ali, u isto vreme, sprečavaju efikasan imuni odgovor protiv tumorskih ćelija. Zaista, Treg-ovi izolovani iz periferne krvi pacijenata sa autoimunim oboljenjima, kao što su reumatoidni artritis (RA) i multipla skleroza (MS), pokazuju defekt u njihovoj sposobnosti da potisnu funkciju efektorskih T ćelija, dok povećana akumulacija Treg-ova korelira sa lošim prognoza kod mnogih karcinoma. Dakle, nivo Treg funkcije utiče na ravnotežu između efektivnog imuniteta i izbegavanja patološke autoreaktivnosti.

[0174] Razvoj i funkcija Treg-ova zavise od aktivacije specifičnih puteva transdukcije signala. TGF-β i IL-2 aktiviraju ekspresiju Foxp3 i STAT5 faktora transkripcije koji oba igraju suštinsku ulogu u kontroli funkcije supresije Treg. U drugu ruku, proinflamatorni citokini inhibiraju ekspresiju Foxp3 preko regulacije prema gore STAT3 fosforilacije. Prema pronalasku, farmakološka inhibicija ROCK2 (npr. sa selektivnim ROCK2 inhibitorima kao što je KD025, ROCK2-specifična siRNK posredovana inhibicija ROCK2), ali ne ROCK1, dovodi do smanjenja regulacije STAT3 fosforilacije, regulatornog faktora interferona 4 (IRF4) i nivoa proteina steroidnog receptorskog nuklearnog receptora RORyt u ljudskim T ćelijama. Dakle, ROCK2 signalni put može biti uključen u regulaciju Treg funkcije.

[0175] Sledeći primeri ilustruju pronalazak, ali ih ne treba tumačiti tako da ograničavaju obim pronalaska na bilo koji način.

PRIMERI

[0176] Skraćenice koje se koriste u sledećim primerima i pripremama obuhvataju:

AC2O sirćetni anhidrid

AcOH sirćetna kiselina

Bn Benzil

Celite<®>dijatomejska zemlja

DCM dihlorometan

DIEA di-izopropiletilamin

DMAP 4-dimetilamino piridin

DME 1,2-dimetoksiletane

DMF dimetilformamid

DMSO dimetil sulfoksid

EDC 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodimid hidrohlorid

EtOAc etil acetat

EtOH etil alkohol ili etanol

Et2O etil etar

Et3N trietilamin

g grami

HOBt 1-hidroksibenzotriazol

HPLC tečna hromatografija visokog pritiska

h sat(i)

MeCN acetonitril

min minute

MeOH metil alkohol ili metanol

mL mililitar

mmol milimol

MS masena spektrometrija

NMR nuklearna magnetna rezonanca

iPrOH izo-propanol

PyBOP<®>benzotriazol-1-il-oksitripirolidinofosfonijum

rt sobna temperatura

s singlet

t triplet

THF tetrahidrofuran

[0177] Masena spektrometrija je sprovedena pomoću: SinPep Co., 6905 Ct. Dublin, CA 94568, ili je snimljena na LC-MS: Waters 2695 modulu za razdvajanje sa Waters ZQ2000 jednostrukim kvadrapolnim MS detektorom. Osim ako nije pomenuto, sva masena spektrometrija je vođena u ESI režimu.<1>H NMR spektri su snimljeni na Varian 400 MHz mašini korišćenjem Mercury softvera. Do sada, sinteza sledećih primera jedinjenja iz ovog pronalaska nije eksplicitno opisana u takvom primeru, sinteza je onakva kako je ovde opisana uopšteno i odgovarajući početni materijal se može lako izabrati za sintezu jedinjenja iz primera.

Primer 1

2- Bromo-N-izopropilacetamid

[0178]

[0179] Rastvor izo-propil amina (5.0 g, 7.20 mL, 84.6 mmol) u 63 mL DCM je ohlađen na -10 °C. Ovome je dodat rastvor a-bromacetilbromida (8.53 g, 3.68 mL, 42.3 mmol) u 10.5 mL DCM. Reakciona smeša je mešana tokom 10 min. Izopropilamonijum hidrobromid je filtriran iz smeše i filtrat je zatim koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (5.30g, 70%).

Primer 2

N-izopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamid

[0180]

[0181] Smeša 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenola (0.50 g, 2.27 mmol), 2-bromo-N-izopropilacetamida (0.61 g, 3.41 mmol), i K2CO3(0.47 g, 3.41 mmol) u DMF (3 mL) mešana je na sobnoj temperaturi, posle čega je usledilo dodavanje ledene vode. Talog je filtriran i ispran vodom i osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.32 g, 44%).

Primer 3

terc-Butil 5-((2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0182]

[0183] Smeša 2,4-dihloropirimidina (1.99 g, 13.4 mmol), terc-butil 5-amino-1H-indazol-1-karboksilata (3.4 g, 14.7 mmol), DIEA (3 mL), i DMF (13 mL) mešana je na 65 °C tokom 7 h, koncentrovana u vakuumu, i titurisana sa Et2O. Talog je filtriran i ispran sa IPA i osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.83 g, 40%).

Primer 4

terc-Butil 5-((2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0184]

[0185] Smeša terc-butil 5-((2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (100 mg, 0.29 mmol), N-izopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (130 mg, 0.41 mmol), Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(20 mg, 0.02 mmol), i K2CO3(80 mg, 0.58 mmol) u dioksanu/vodi (10 i 2 mL) je zagrevana u mikrotalasnoj pećnici tokom 30 min. Reakcija je obrađena i prečišćena hromatografijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (176 mg, 35%).

Primer 5

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid HCl so [0186]

[0187] terc-Butil 5-((2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat je uzet u 4 M HCl u dioksanu i mešan na sobnoj temperaturi 2 h. Isparljive supstance su uklonjene u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao HCl so.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12.6 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 3.93 (m, 1H), 4.51 (s, 2H), 6.75 (d, J = 6 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.44-7.59 (m, 3H), 7.87-7.91 (m, 3H), 8.09 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.31 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 10.19 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 13.10 (s, 1H). MS (ES+) m/e 403 (M+H)<+>.

Primer 6

terc-butil 2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetat

[0188]

3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenol, terc-butil 2-bromoacetat

[0189] Smeša 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenola (4 g, 18.2 mmol), terc-butil 2-bromoacetata (5.7g, 27.3 mmol) i K2CO3(3.44g, 27.3 mmol) u CH3CN (100mL) mešana je na 70 °C preko noći. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i uklonjen da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni da bi se dobilo naslovno jedinjenje (4g, 67%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 7

N-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0190]

[0191] Smeša jedinjenja 2,4-dihloropirimidina (14.8 g, 0.1 mol), 1H-indazol-5-amina (14.6 g, 110 mmol) i Et3N (15 g, 150 mmol) u EtOH (200 mL) mešana je na 80 °C tokom 3 sata. Reakciona smeša je ohlađena i filtrirana. Filtrirani kolač je sakupljen i osušen da bi se dobilo jedinjenje 5 (15 g, 60%) kao čvrsta supstanca.

Primer 8

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0192]

[0193] U smešu N-(2-hloropirimidin-4-il)-lH-indazol-5-amina (7.35 g, 30 mmol), Boc2O (18.9 g, 90 mmol) u CH2Cl2(150mL) dodat je tokom 5 min DMAP (3.6 g, 30 mmol) na 0 °C. Posle 0.5 sata, reakcija je završena. Reakciona smeša je isprana sa vodom, osušena preko Na2SO4i uklonjena da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na gel koloni da bi se dobilo naslovno jedinjenje (6g, 67%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 9

terc-butil 5-((2-(3-(2-(terc-butoksi)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)(tercbutoksikarbonil)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0194]

[0195] Smeša terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (4g, 8.9 mmol), terc-butil 2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetata (3.3g, 10 mmol), KOAc (35g, 360 mmol), Pd(dppf)2Cl2(400mg) i Boc2O (3.9g, 18 mmol) u dioksanu/vodi (10/1, 100mL) mešana je na 100 °C tokom 3 dana. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i uklonjen da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na gel koloni da bi se dobilo naslovno jedinjenje (3g, 54%) kao čvrsta supstanca.

Primer 10

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)sirćetna kiselina

[0197] Smeša jedinjenja terc-butil 5-((2-(3-(2-(terc-butoksi)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)(terc-butoksikarbonil)amino)-1H-indazol-1-karboksilat (2 g) i CF3COOH (20 mL) u DCM (20 mL) mešana je na 25 °C tokom 2 sata. Rastvarač je uklonjen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.5g) kao žuta čvrsta supstanca.

Primer 11

(S)-terc-butil 3-(2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)acetamido)pirolidin-1-karboksilat

[0198]

[0199] Smeša 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)sirćetne kiseline (600 mg, 1.66 mmol), terc-butil estra 3-amino-pirolidin-1-karboksilne kiseline (300 mg, 1.62 mmol), HATU (760 mg, 2 mmol) i Et3N (250 mg, 2 mmol) u DMF (18 mL) mešana je na 25 °C preko noći. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen sa HPLC-om da bi se dobilo naslovno jedinjenje (300 mg, 50%) kao čvrsta supstanca.

Primer 12

(R)-2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-(pirolidin-3-il)acetamid HCl so

[0200]

1

[0201]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ1.84-1.96 (m, 1H), 2.07-2.19 (m, 1H), 3.07-3.38 (m, 4H), 4.40-4.42 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 7.36 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.90-7.94 (m, 2H), 8.14-8.29 (m, 2H), 8.66 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 9.39-9.80 (m, 3H), 11.87 (s, 1H). MS (ES+) m/e 430 (M+H)<+>.

Primer 13

[0202]

[0203] Smeša jedinjenja 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)sirćetne kiseline (500 mg, 1.39 mmol), NH4Cl (125mg, 2 mmol), HATU (720mg, 1.89 mmol) i Et3N (200 mg, 2 mmol) u DMF (15mL) mešana je na 25 °C preko noći. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen sa HPLC-om da bi se dobilo naslovno jedinjenje (60.1mg, 12%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ4.52 (s, 2H), 6.78 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.19 (dd, J = 9.6 i 1.6 Hz, 1H), 7.40-7.62 (m, 5H), 7.84-7.87 (m, 2H), 8.11 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.33 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 10.35 (s, 1H). MS (ES+) m/e 361 (M+H)<+>.

Primer 14

2-(3-(4-(1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)-1-(1,1-dioksidotiomorfolino)etanon TFA so

[0204]

2

[0205] Smeša jedinjenja 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)sirćetne kiseline (500 mg, 1.39 mmol), tiomorfolin 1,1-dioksida (375 mg, 2.2 mmol), HATU (720 mg, 1.89 mmol) i Et3N (200 mg, 2 mmol) u DMF (15 mL) mešana je na 25<o>C preko noći. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen sa preparativnom HPLC da bi se dobilo naslovno jedinjenje (54.6 mg, 10%) kao čvrsta supstanca. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ3.11 (b, 2H), 3.30 (b, 2H), 3.85 (b, 4H), 5.00 (s, 2H), 6.76 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.16 (dd, J = 8.0 i 2.4 Hz, 1H), 7.45 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.47-7.50 (m, 2H), 7.81 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.12 (b, 1H), 8.33 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 10.26 (s, 1H). MS (ES+) m/e 479 (M+H)+.

Primer 15

N-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)morfolin-4-karboksamid [0206]

[0207] U smešu trifosgena (600 mg, 2 mmol) u THF (10 mL) ukapan je rastvor 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilina (836 mg, 4 mmol) i Et3N (1.2 g, 12 mmol) u THF (10mL) tokom 10 min na 40 °C. Posle 0,5 h, morfolin (435mg, 5 mmol) je dodat u reakcionu smešu. Posle 15 min, reakciona smeša je ugašena sa zasićenim NH4Cl, ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na gel koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (530mg, 50%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 16

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(morfolin-4-karboksamido)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0208]

[0209] Smeša terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (300 mg, 0.7 mmol), N-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)morfolin-4-karboksamida (250 mg, 0.8 mmol), CsF (510 mg, 3 mmol), Pd(PPh3)4(120mg) i Boc2O (432 mg, 2 mmol) u dioksanu/vodi (10/1, 10mL) mešana je na 130 °C u mikrotalasnoj pećnici tokom 20 min. Kombinovana su tri lonca. Reakciona smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen sa kolonskom hromatografijom da bi se dobilo naslovno jedinjenje (360 mg).

Primer 17

N-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenil)morfolin-4-karboksamid HCl so [0210]

[0211] Smeša terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(morfolin-4-karboksamido)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (360 mg, sirov) u MeOH/HCl (4M, 20 mL) mešana je na 25 °C preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobilo naslovno jedinjenje (68 mg) kao HCl so.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ3.49 (s, 4H), 3.62 (s, 4H), 7.14 (b, 1H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.60-7.65 (m, 3H), 7.88 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.28 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.46 (b, 1H), 8.68 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 11.77 (s, 1H). MS (ES+) m/e 416 (M+H)<+>.

Primer 18

Metil 3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzoat

[0212]

4

[0213] Smeša N-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (3.7 g, 15 mmol), 3-metoksikarbonilfenilboronske kiseline (3.3 g, 18 mmol), K2CO3(4.14g, 30 mmol) i Pd(dppf)2Cl2(700 mg) u dioksanu/vodi (4/1, 75mL) mešana je na 100 °C tokom 16 sati.

Reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobilo naslovno jedinjenje (7 g, sirovo) koje je prebačeno direktno za reakciju u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

Primer 19

3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzojeva kiselina

[0214]

[0215] U smešu metil 3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzoata (7 g, sirov) u dioksanu (120 mL) dodat je NaOH (2M, 120 mL). Reakciona smeša je refluksovana tokom 1.5 h i zatim je ohlađena do sobne temperature i ekstrahovana sa EtOAc (100 mL). Vodena faza je odvojena i zakiseljena sa HCl (6M). Smeša je filtrirana i filterski kolač je sakupljen, osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.3 g, sirovo) koje se koristi direktno za sledeći korak reakcije.

Primer 20

3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)-N-(1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)benzamid TFA so

[0216]

[0217] Smeša 3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzojeve kiseline (400 mg, 1.2 mmol), 4-aminotetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida (300 mg, 1.4 mmol), HATU (720 mg, 1.89 mmol) i Et3N (200 mg, 2 mmol) u DMF (15mL) mešana je na 25 °C preko noći. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobio naslovljeno jedinjenje (81 mg, 20%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ2.19-2.24 (m, 2H), 2.31-2.33 (m, 2H), 3.12-3.15 (m, 2H), 3.34-3.38 (m, 2H), 4.23-4.28 (m, 1H), 6.93 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.58-7.76 (m, 3H), 8.12 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.24 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H). MS (ES+) m/e 463 (M+H)<+>.

Primer 21

terc-Butil 4-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzamido)piperidin-1-karboksilat

[0218]

[0219] Smeša 3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzojeve kiseline (400mg, 1.2 mmol), terc-butil estra 4-amino-piperidin-1-karboksilne kiseline (300 mg, 1.5 mmol), HATU (720 mg, 1.89 mmol) i Et3N (200 mg, 2 mmol) u DMF (15mL) mešana je na 25 °C preko noći. Reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen sa HPLC-om da bi se dobilo naslovno jedinjenje (200 mg, 30%) kao čvrsta supstanca.

Primer 22

3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)-N-(piperidin-4-il)benzamid HCl so [0220]

[0221] Smeša terc-butil 4-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzamido)piperidin-1-karboksilata (200 mg) u HCl u MeOH (5mL) mešana je na 25 °C tokom 3 h. Rastvarač je uklonjen da bi se dobio naslovno jedinjenje (150 mg) u vidu žute čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ1.79-1.87 (m, 2H), 1.98-2.01 (m, 2H), 3.01-3.04 (m, 2H), 3.32-3.36 (m, 2H), 3.64-3.69 (m, 1H), 7.10-7.15 (m, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 8 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.36 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 11.73 (s, 1H). MS (ES+) m/e 414 (M+H)<+>.

Primer 23

N-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0222]

[0223] U smešu jedinjenja 2,4-dihloro-5-metilpirimidina (5 g, 30.8 mmol) i 5-aminoindazola (4.1 g, 30.8 mmol) u bezvodnom etanolu (100 mL) dodat je Na2CO3(16 g, 154 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 80 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana u vakuumu praćena hromatografijom na koloni silika gela (eluirana sa DCM:MeOH = 50:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7 g, prinos 87%) kao braon čvrsta supstanca.

Primer 24

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0224]

[0225] U rastvor N-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (5 g, 19.3 mmol) u bezvodnom DCM (100 mL) dodat je Boc2O (12.6 g, 57.9 mmol), TEA (5.85 g, 57.9 mmol) i DMAP (1.17 g, 9.56 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa DCM. Organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4, i rastvarač je uklonjen u vakuumu čega je usledilo prečišćavanje kolonskom hromatografijom na silika gelu (eluiranje sa PE:EA = 10:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5 g, prinos 56%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 25

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(ciklopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0226]

[0227] U smešu jedinjenja terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (1.9 g, 4.14 mmol), jedinjenja N-ciklopropil-2-(3-(4,4,5,5 -tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (1.57 g, 4.97 mmol) i CsF (1.89 g, 12.42 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (5 mL) dodat je Pd(PPh3)4(239 mg, 0.21 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 100 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc, organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EA = 5:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.6 g, prinos 62%) kao žuta čvrsta supstanca.

Primer 26

2-(3-(4-(1H-indazol-5-il)amino)-5-metilpirimidin-2-il)fenoksi)-N-ciklopropilacetamid hidrohlorid

[0228]

[0229] U rastvor jedinjenja terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(ciklopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (500 mg, 0.81 mmol) u EtOAc (2 mL) dodat je HCl/EtOAc (10 mL) i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Formirani talog je filtriran i ispran sa EtOAc, osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (300 mg, prinos 89%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ0P.50-0.5 (m, 2H), 0.70-0.75 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.66-2.71 (m, 1H), 4.51 (s, 2H), 7.27 (dd, J = 8.4 i 2.4 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64-7.68 (m, 2H), 7.72 (s, 1H), 8.04 (s, 2H), 8.20 (s, 1H), 8.28 (s, 1H). MS (ES+) m/e 451 (M+H)<+>.

Primer 27

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-((1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-4-il)amino)-2-oksoetoksi)fenil)-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat [0230]

[0231] U smešu terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (1.4 g, 3.05 mmol), terc-butil 4-(2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamido)piperidin-1-karboksilata (1.68 g, 3.66 mmol) i CsF (1.39 g, 9.15 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (5 mL) dodat je Pd(PPh3)4(176 mg, 0.15 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 100 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc, organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EA = 1:1 ) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.1 g, prinos 47%) kao žuta čvrsta supstanca.

Primer 28

2-(3-(4-(1H-indazol-5-il)amino)-5-metilpirimidin-2-il)fenoksi)- N-(piperidin-4-il)acetamid hidrohlorid

[0232]

[0233] U rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-((1-(tercbutoksikarbonil)piperidin-4-il)amino)-2-oksoetoksi)fenil)-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (700 mg, 0.92 mmol) u EtOAc (2 mL) dodat je HCl/EtOAc (10 mL) i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijeni talog je filtriran i ispran sa EtOAc, osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (230 mg, prinos 54%) kao žuta čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ1.73-1.84 (m, 2H), 2.01-2.05 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 3.02-3.09 (m, 2H), 3.39-3.43 (m, 2H), 3.99-4.05 (m, 1H), 4.57 (s, 2H), 7.30 (dd, J = 8.4 i 2.4 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.67-7.74 (m, 4H), 8.05 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.24 (s, 1H). MS (ES+) m/e 494 (M+H)<+>.

Primer 29

terc-butil 2-(3-bromofenoksi)acetat

[0234]

[0235] U rastvor 3-bromofenola (5 g, 28.9 mmol) u MeCN (100 mL) dodat je t-butil bromoacetat (6.76 g, 34.7 mmol) i K2CO3(5.98 g, 43.3 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 80 °C preko noći pod azotom. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom i osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (PE: EA = 50:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7 g, prinos 84%) kao uljana tečnost.

Primer 30

2-(3-bromofenoksi)acetil hlorid

[0237] U rastvor terc-butil 2-(3-bromofenoksi)acetata (4.6 g, 16 mmol) u bezvodnom DCM (50 mL) dodata je TFA (18 g, 0.16 mol) i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle što je TLC pokazala da je reakcija završena, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila sirova kiselina. Kiselina je rastvorena u bezvodnom DCM (50 mL), u rastvor su dodati oksalil hlorid (2.44 g, 19.2 mmol) i DMF (0.2 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila bela čvrsta supstanca, koja je korišćena za sledeći korak reakcije bez daljeg prečišćavanja.

Primer 31

2-(3-bromofenoksi)-N-ciklopropilacetamid

[0238]

[0239] U rastvor 2-(3-bromofenoksi)acetil hlorida (2.3 g, 9.24 mmol) u bezvodnom DCM (30 mL) dodat je trietilamin (2.8 g, 27.7 mmol) i ciklopropilamin (632 mg, 11.1 mmol) na 0°C. Zatim je dobijena smeša mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je razblažena s vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EA = 5:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.95 g, prinos 78%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 32

N-ciklopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamid [0240]

1

[0241] U smešu 2-(3-bromofenoksi)-N-ciklopropilacetamida (1.95 g, 7.25 mmol), bis(pinakolato)diboron (2.76 g, 10.87 mmol) i KOAc (2.13 g, 21.7 mmol) u DMSO (20 mL) dodat je Pd(dppf)Cl2-DCM (265 mg, 0.36 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 100 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc, organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EA = 10:1 ) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.4 g, prinos 60%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 33

terc-butil 4-(2-(3-bromofenoksi)acetamido)piperidin-1-karboksilat

[0242]

[0243] U rastvor 2-(3-bromofenoksi)acetil hlorida (2.1 g, 8.43 mmol) u bezvodnom DCM (30 mL) dodat je trietilamin (2.56 g, 25.3 mmol) i 4-amino-1-Boc-piperidin (2.02 g, 10.1 mmol) na 0°C. Zatim je dobijena smeša mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je razblažena s vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EA = 5:1) da bi se dobilo naslovno jedinjenje (2.8 g, prinos 80%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 34

terc-butil 4-(2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamido)piperidin-1-karboksilat

[0244]

[0245] U smešu terc-butil 4-(2-(3-bromofenoksi)acetamido)piperidin-1-karboksilata(2.8 g, 6.79 mmol), bis(pinakolato)diboron (2.59 g, 10.2 mmol), i KOAc (1.99 g, 20.4 mmol) u DMSO (30 mL) dodat je Pd(dppf)Cl2-DCM (249 mg, 0.34 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na

2

100 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc, organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EA = 5:1 ) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.7 g, prinos 54%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 35

N-(2-hloropirimidin-4-il)-6-fluoro-1H-indazol-5-amin

[0246]

[0247] U smešu 2,4-dihloropirimidina (730 mg, 4.89 mmol) i 6-fluoro-5-aminoindazola (740 mg, 4.89 mmol) u bezvodnom etanolu (15 mL) dodat je Na2CO3(1.56 g, 14.7 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 80 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc, organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EA = 3:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (750 mg, prinos 58%) kao braon čvrsta supstanca.

Primer 36

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-6-fluoro-1H-indazol-1-karboksilat

[0248]

[0249] U rastvor N-(2-hloropirimidin-4-il)-6-fluoro-1H-indazol-5-amina (750 mg, 2.85 mmol) u bezvodnom DCM (10 mL) dodat je Boc2O (1.86 g, 8.55 mmol), TEA (864 mg, 8.55 mmol) i DMAP (173 mg, 1.42 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa DCM. Organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4, i rastvarač je uklonjen u vakuumu da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EA = 20:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (800 g, prinos 60%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 37

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-6-fluoro-1H-indazol-1-karboksilat

[0250]

[0251] U smešu terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-6-fluoro-1H-indazol-1-karboksilata (920 mg, 1.98 mmol) u 1,4-dioksanu (16 mL) i vode (4 mL) dodat je N-izopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamid (760 mg, 2.38 mmol), Pd(PPh3)4(115 mg, 0.1 mmol) i CsF (906 mg, 5.96 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 100 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc, organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EA = 3:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (600 mg, prinos 48%) kao žuta čvrsta supstanca.

Primer 38

2-(3-(4-((6-fluoro-1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid hidrohlorid

[0252]

[0253] U smešu terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-6-fluoro-1H-indazol-l-karboksilata (520 mg, 0.84

4

mmol) u EtOAc (2 mL) dodat je HCl/EtOAc (10 mL) i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijeni talog je filtriran i ispran sa EtOAc, osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, prinos 56%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ1.04 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 3.88-3.93 (m, 1H), 4.51 (s, 2H), 7.00 (b, 1H), 7.22 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 7.75-7.79 (m, 2H), 7.93 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.36 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 11.09 (s, 1H). MS (ES+) m/e 457 (M+H)<+>.

Primer 39

N-(2-hloro-5-metoksipirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0254]

[0255] U smešu 2,4-dihloro-5-metoksipirimidina (3.56 g, 0.02 mol) u EtOH (80 mL) dodat je 1H-indazol-5-amin (2.66 g, 0.02 mol), i zatim DIEA (7.8 g, 0.06 mol). Dobijena smeša je mešana na 45°C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Kolač je ispran sa MTBE i sakupljen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.4 g, prinos 81%) kao braon čvrsta supstanca.

Primer 40

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloro-5-metoksipirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0256]

[0257] U smešu N-(2-hloro-5-metoksipirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (4.2 g, 15.3 mmol) u DCM (50 mL) dodati su TEA (4.6 g,45.9 mmol), (BOC)2O (8.32 g, 38.2 mmol), i DMAP (0.2 g). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i koncentrovana posle čega je usledilo prečišćavanje hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (5.5 g, prinos 76%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.

Primer 41

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)-5-metoksipirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0258]

[0259] U rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloro-5-metoksipirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (1.5 g, 3.16 mmol) u rastvaračima (dioksan:voda = 10:1, 33 ml) dodati su N-izopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) fenoksi)acetamid (1.2 g, 3.79 mmol), (BOC)2O (1.38 g, 6.32 mmol), CsF (1.4 g, 9.48 mmol), i zatim Pd(PPh3)4(0.11 g, 0.095 mmol) pod N2. Dobijena smeša je mešana na 90°C tokom 24 sata. Smeša je prečišćena hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.98 g, prinos 49%) u vidu bele čvrste supstance.

Primer 42

2-(3-(4-(1H-indazol-5-il)amino)-5-hidroksipirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid [0260]

[0261] Smeša terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)-5-metoksipirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (1.2 g, 2 mmol) i piridin hidrohlorida (7.8 g) mešana je na 140°C tokom 1 sata. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu. Dodata je voda (20 mL) praćeno sa NH3.H2O da bi se podesio pH na 6-7. Smeša je filtrirana. Kolač je sakupljen i osušen da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.46 g, prinos 55%) kao siva čvrsta supstanca.

Primer 43

2-(3-(4-(1H-indazol-5-il)amino)-5-(2-(dimetilamino)etoksi)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid TFA so

[0262]

[0263] U smešu 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-5-hidroksipirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (450mg, 1.07 mmol) u THF (45 mL) dodati su 2-(dimetilamino) etanol (115 mg, 1.29 mmol), i zatim je dodat PPh3(563 mg, 2.15 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 0.5 h. Zatim je dodat DEAD (374 mg, 2.15 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na refluksu preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, a zatim je dodato 10 mL EtOAc i 10 mL vode. Dodata je TFA da se podesi pH= 4-5. Vodeni rastvor je koncentrovan i prečišćen pomoću Prep HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.1 g, prinos 10%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ1.07 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 2.94 (d, J = 4.0 Hz, 6H), 3.64-3.65 (m, 2H), 3.92-3.94 (m, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.52-4.53 (m, 2H), 7.02 (dd, J = 9.2 i 1.6 Hz, 1H), 7.37 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.60-7.89 (m, 5H), 8.12-8.19 (m, 3H), 8.90 (s, 1H), 9.60 (b, 1H). MS (ES+) m/e 490 (M+H)<+>.

Primer 44

N-(2,6-dihloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0264]

[0265] Rastvor 2,4,6-trihloropirimidina (3.67 g, 20 mmol), 1H-indazol-5-amina (2.66 g, 20 mmol) i TEA (3.03 g, 30 mmol) u EtOH (75 mL) je zagrevan na refluksu preko noći. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je rekristalizovan u MeOH da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.2 g, prinos 50%) kao čvrsta supstanca.

Primer 45

N-(2-hloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0266]

[0267] Rastvor N-(2,6-dihloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (4.2 g, 15 mmol), 1-metilpiperazina (2.0 g, 20 mmol) i TEA (3.03 g, 30 mmol) u MeOH (75 mL) je refluksovan preko noći. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je ponovo kristalizovan u DCM da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3 g, prinos 58%) kao čvrsta supstanca.

Primer 46

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0268]

[0269] U rastvor N-(2-hloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (1.5 g, 4.4 mmol) u DCM (20 mL) dodati su TEA (0.93 g, 9.2 mmol), (Boc)2O (3 g, 13.9 mmol) i DMAP (1.1 g, 9.2 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu (eluiranjem sa petrol etrom: etil acetatom = 50:1 - 10:1) da bi se dobilo naslovno jedinjenje (1.2 g, prinos 50%) kao čvrsta supstanca.

Primer 47

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0270]

[0271] Rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (0.600 g, 1.1 mmol), Pd(dppf)Cl2(50 mg), CsF (0.501 g, 3.3 mmol) i N-izopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (0.640 g, 2 mmol) u dioksanu/vodi (10:1, 10 mL) mešan je na 100°C preko noći. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (250 mg, prinos 32%).

Primer 48

2-(3-(4-(1H-indazol-5-il)amino)-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid TFA so

[0272]

[0273] Rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (250 mg, 0.36 mmol) u DCM (10 mL) i TFA (3.0 mL) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Smeša je koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (150 mg, prinos 70%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ1.02 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 2.79 (s, 3H), 3.04 (b, 2H), 3.20-3.27 (m, 2H), 3.47-3.50 (m, 2H), 3.85-3.93 (m, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.71-4.75 (m, 2H), 6.56 (s, 1H), 7.01 (dd, J = 8.4 i 2.4 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41-7.52 (m, 4H), 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.98 (s, 2H), 9.53 (s, 1H), 10.00 (s, 1H). MS (ES+) m/e 501 (M+H)<+>.

Primer 49

N-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-1H-indazol-5-amin

[0274]

[0275] Rastvor 2,4-dihloropirimidina (0.69 g, 4.6 mmol), 6-metil-1H-indazol-5-ilamin hidrohlorida (0.85 g, 4.6 mmol) i TEA (1.4 g, 13.8 mmol) u EtOH (16 mL) je zagrevan na refluksu preko noći. Isparljive supstance su uklonjene da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova (1.7 g), koje je korišćeno za sledeći korak reakcije bez prečišćavanja.

Primer 50

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-6-metil-1H-indazol-1-karboksilat

[0276]

[0277] U rastvor N-(2-hloropirimidin-4-il)-6-metil-1H-indazol-5-amina (1.7 g, sirov) u DCM (20 mL) dodati su TEA (0.93 g, 9.2 mmol), (BOC)2O (3 g, 13.9 mmol) i DMAP (1.1 g, 9.2 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranjem petrol etrom: etil acetatom = 50: 1 - 10:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.45 g, prinos 21.1% u 2 koraka) kao čvrsta supstanca.

Primer 51

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-6-metil-1H-indazol-1-karboksilat

[0278]

[0279] Rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-6-metil-1H-indazol-1-karboksilata (0.45 g, 1.67 mmol), Pd(dppf)Cl2(50 mg), Na2CO3(0.35 g, 3.34 mmol) i N-izopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (0.64 g, 2 mmol) u dioksanu/vodi (10:1, 10 mL) mešan je na 100°C preko noći. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (180 mg, prinos 17%).

Primer 52

N-izopropil-2-(3-(4-((6-metil-1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)acetamid TFA so

[0280]

[0281] U rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-6-metil-1H-indazol-1-karboksilata (180 mg, 0.29 mmol) u DCM (10 mL) dodata je TFA (1.5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i koncentrovana u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (170 mg, prinos 96%). MS (ES+) m/e 417 (M+H)<+>.

Primer 53

N-(2-hloropirimidin-4-il)-N-metil-1H-indazol-5-amin

[0282]

[0283] U rastvor 2,4-dihloropirimidina (1.0 g, 6.7 mmol) u EtOH (20 mL) dodat je (1H-Indazol-5-il)-metil-amin (1.0 g, 6.8 mmol) i TEA (2.02 g, 20 mmol). Dobijena smeša je refluksovana preko noći. Rastvarač je uklonjen da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova (2.5 g), koje je korišćeno za sledeći korak reakcije bez prečišćavanja.

1

Primer 54

terc-butil 5-((2-hloropirimidin-4-il)(metil)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0284]

[0285] U rastvor N-(2-hloropirimidin-4-il)-N-metil-1H-indazol-5-amina (2.5 g, sirov) u DCM (50 mL) dodati su TEA (2.0 g, 20 mmol), (BOC)2O (4.2 g, 19.2 mmol), i dodat je DMAP (1.0 g). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu i prečišćena hromatografijom na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.95 g, prinos 38.8% u 2 koraka) kao čvrsta supstanca.

Primer 55

terc-butil 5-((2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)(metil)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0286]

[0287] U rastvor terc-butil 5-((2-hloropirimidin-4-il)(metil)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (0.6 g, 1.67 mmol) u rastvaraču (dioksan:voda = 4:1, 20 mL) dodati su N-izopropil-2-[3-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioksaborolan-2-il)-fenoksi]-acetamid (0.6 g, 1.88 mmol), (BOC)2O (1.09 g, 5 mmol), K3PO4(1.06 g, 5 mmol), t-Bu3P (0.4 g, 2 mmol) i Pd2(dba)3(0.1 g) pod N2. Dobijena smeša je mešana na 100°C tokom 24 sata i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio sirovi materijal koji je izveden za sledeći korak reakcije bez daljeg prečišćavanja.

Primer 56

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)(metil)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid TFA so

[0288]

2

[0289] U terc-butil 5-((2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)(metil)amino)-1H-indazol-1-karboksilat kao gore dodata je HCl/MeOH (4M, 5mL) i smeša je mešana tokom 2 sata. Rastvarač je uklonjen u vakuumu i ostatak je prečišćen pomoću HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg) u vidu soli TFA.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ1.20 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 3.85 (s, 3H), 4.07-4.13 (m, 1H), 4.62 (s, 2H), 6.37-6.45 (m, 1H), 7.39 (dd, J = 10.4 i 2.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.86-7.89 (m, 2H), 7.91 (s, 1H), 8.05 (b, 1H), 8.18 (s, 1H). MS (ES+) m/e 417 (M+H)<+>.

Primer 57

2-hloro-N-(1H-pirazol-4-il)pirimidin-4-amin

[0290]

[0291] Smeša 2,4-dihloro-pirimidina (200 mg, 2.41 mmol), 1H-pirazol-4-ilamina (431 mg, 2.89 mmol), i TEA (730 mg, 7.23 mmol) u i-PrOH (8 mL) mešana je na 50° preko noći. Posle hlađenja, reakciona smeša je koncentrovana. Sirovi proizvod je korišćen direktno za sledeći korak bez prečišćavanja.

Primer 58

terc-butil 4-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-pirazol-1-karboksilat

[0292]

[0293] U smešu (2-hloro-pirimidin-4-il)-(1H-pirazol-4-il)-amina (470 mg, 2.41 mmol), TEA (730 mg, 7.23 mmol) i DMAP (607 mg, 4.82 mmol) u suvom DCM (15 mL), polako se dodaje Boc2O (1040 mg, 4.82 mmol). Reakciona smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 3 h, i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografijom na koloni na silika gelu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 0.5 mmol, 21 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 59

terc-butil 4-((2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-pirazol-1-karboksilat

[0294]

[0295] U smešu terc-butil estra4-[terc-butoksikarbonil-(2-hloro-pirimidin-4-il)-amino]-pirazol-1- karboksilne kiseline (118.5 mg, 0.3 mmol), N-izopropil-2-(3-(4, 4, 5, 5-tetrametil-1, 3, 2-dioksaborolan-2-il) fenoksi) acetamida (134 mg, 0.42 mmol), Na2CO3(64 mg, 0.6 mmol), i Boc2O(130 mg, 0.6 mmol) u EtOH (3 mL) i dodata je H2O (0.3 mL), Pd(dppf)2Cl2(21 mg, 0.03 mmol). Smeša je mešana na 130° pod zaštitom N2u mikrotalasnoj pećnici tokom 30 minuta. Posle hlađenja, smeša je koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću fleš kolonske hromatografije na silika gelu, i zatim prečišćen pomoću P-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, 0.066 mmol, 22 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 60

2-(3-(4-((1H-pirazol-4-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid TFA so [0296]

[0297] U rastvor terc-butil 4-((2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il) amino)-1H-pirazol-1-karboksilata (167 mg, 0.369 mmol) u DCM (20 mL) dodata je TFA (2 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 sati, i zatim koncentrovana da bi se

4

dobilo jedinjenje iz naslova (170 mg, 0.364 mmol, 98 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.20-8.18 (d, J=7.2Hz, 1H), 8.07 (s 2H), 7.80-7.78 (d, 2H), 7.64-7.60 (t, J=8.8Hz, 1H), 7.40-7.40 (dd, J=9.6, 2.4Hz, 1H), 6.91-6.89 (d, J=7.2Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.13-4.09 (m, 1H) 1.18-1.16(d, J=6.4Hz 6H). MS (ES+) m/e 353 (M+H)<+>.

Primer 61

5-((2-hloropirimidin-4-il)oksi)-1H-indazol

[0298]

[0299] Smeša 2,4-dihloro-pirimidina (184 mg, 1.232 mmol), 1H-indazol-5-ola (150 mg, 1.12 mmol), i TEA (340 mg, 3.36 mmol) u EtOH (5 mL) mešana je na 80° preko noći. Posle hlađenja, reakciona smeša je koncentrovana. Sirovi proizvod je korišćen direktno za sledeći korak bez prečišćavanja.

Primer 62

terc-butil 5-((2-hloropirimidin-4-il)oksi)-1H-indazol-1-karboksilat

[0300]

[0301] U mešanu smešu 5-((2-hloropirimidin-4-il)oksi)-1H-indazola (275 mg, 1.12 mmol), TEA (340 mg, 3.36 mmol) i DMAP (28 mg, 0.224 mmol) u suvom DCM (5 mL), polako se dodaje Boc2O (484 mg, 2.24 mmol). Reakciona smeša mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, i zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silika gelu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 0.57 mmol, 50 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 63

terc-butil 5-((2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)oksi)-1H-indazol-1-karboksilat

[0303] U smešu tetr-butil-5-((2-hloropirimidin-4-il) oksi)-1H-indazol-1-karboksilata (104 mg, 0.3 mmol), N-izopropil-2-(3-(4, 4, 5, 5-tetrametil-1, 3, 2-dioksaborolan-2-il) fenoksi) acetamida (134 mg, 0.42 mmol), t-Bu3P (61 mg, 0.3 mmol), K3PO4.3H2O (160 mg, 0.6 mmol), i Boc2O(130 mg, 0.6 mmol) u dioksanu (3 mL) i H2O (0.4 mL), dodat je Pd2(dba)3(27 mg, 0.03 mmol). Smeša je mešana na 80° pod zaštitom N2preko noći. Posle hlađenja, smeša je koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (58 mg, 0.115 mmol, 38 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 64

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)oksi)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid HCl so [0304]

[0305] Rastvor terc-butil 5-((2-(3-(2-(izopropilamino)-2-oksoetoksi) fenil) pirimidin-4-il) oksi)-1H-indazol-1-karboksilata (340 mg, 0.675 mmol) HCl (g)/EtOAc (40 mL) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 3 sata, i zatim koncentrovan da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (272 mg, 0.621 mmol, 92 % prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.87-8.85 (d, J=6.4Hz, 1H), 8.25 (s 1H), 7.78-7.71(m, 2H), 7.69-7.65(m, 2H),7.50-7.43 (m, 3H), 7.30-727 (dd, J=8.0, 2.4Hz, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.06-4.00 (m, 1H), 1.14-1.12(d, J=6.4Hz 6H). MS (ES+) m/e 404 (M+H)<+>.

Primer 65

2-(3-(4-(1H-indazol-5-il)amino )pirimidin-2-il)fenoksi)-1-(piperazin-1-il)etanon HCl so

[0306]

[0307] Naslovljeno jedinjenje je pripremljeno primenom u suštini iste procedure opisane za primer 12.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.24 (b, 4H), 3.82 (b, 4H), 5.00 (s, 2H), 6.93 (b, 1H), 7.33 (dd, J = 7.6 i 1.6 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.79 (b, 2H), 8.15 (s, 1H), 8.22 (d, J = 7.2 Hz, 2H). (ES+) m/e 430 (M+H)<+>.

Primer 66

2-(3-(4-amino-6-hloropirimidin- 2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0308]

Primer 67

2-(3-(6-amino-2-hloropirimidin-4-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0309]

[0310] U smešu 4-amino-2, 6-dihloropirimidina (1.016 g, 6.72 mmol), N-izopropil-2-(3 -(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (2.032 g, 6.37 mmol) i CsF (2.858 g, 18.803 mmol) u 1,4-dioksanu (31.2 mL) i H2O (6.3 mL) dodat je Pd(PPh3)4(0.362 g, 0.313 mmol). Dobijena smeša je mešana na 100 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EtOAc = 2:1) da bi se dobilo jedinjenje 2-(3-(4-amino-6-hloropirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid (670 mg, prinos 33%) kao beli prah i 2-(3-(6-amino-2-hloropirimidin-4-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid (460 mg, prinos 22 %) kao beli prah.

Primer 68

2-(3-(4-amino-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid [0311]

[0312] U rastvor jedinjenja 2-(3-(4-amino-6-hloropirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (0.97 g, 3.031 mmol) u n-BuOH (15 mL) dodat je 1-metilpiperazin (1.5 g, 15 mmol) i mešan na 120 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa EtOAc:MeOH = 20:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (460 mg, prinos 39 %) kao svetlo žuti prah.

Primer 69

2-(3-(6-amino-2-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid [0313]

[0314] U rastvor jedinjenja 2-(3-(6-amino-2-hloropirimidin-4-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (0.436 g, 1.363 mmol) u n-BuOH (10 mL) dodat je 1-metilpiperazin (0.682 g, 6.815 mmol) i mešan na 120 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa EtOAc:MeOH = 20:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.273 g, prinos 52%) kao svetlo žuti prah.

Primer 70

N-izopropil-2-(3-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(piridin-4-ilamino)pirimidin-2-il)fenoksi)acetamid

[0315]

[0316] U smešu jedinjenja 2-(3-(4-amino-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (460 mg, 1.199 mmol), 4-jodopiridina (319.5 mg, 1.559 mmol), Pd2(dba)3(109.8 mg, 0.12 mmol) i X-Phos (57 mg, 0.12 mmol) u bezvodnom 1,4-dioksanu (15 mL) dodat je Cs2CO3(1.17 g, 3.3 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 120 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je razblažena sa 1,4-dioksanom i filtrirana kroz podlogu od celita. Filtrat je koncentrovan i ostatak je ispran sa EtOAc i osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (173 mg, prinos 31.3 %) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.17 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 2.36 (s, 3H), 2.55 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.72 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 4.06-4.16 (m, 1H), 4.56 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 7.19 (dd, J = 8.0 i 2.4 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.98 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 5.6 Hz, 1H). m/e 462 (M+H)<+>.

Primer 71

N-izopropil-2-(3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(piridin-4-ilamino)pirimidin-4-il)fenoksi)acetamid

[0317]

[0318] U smešu jedinjenja 2-(3-(6-amino-2-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (493 mg, 1.286 mmol), 4-jodopiridina (290 mg, 1.415 mmol), Pd2(dba)3(117.8 mg, 0.129 mmol) i X-Phos (61.4 mg, 0.129 mmol) u bezvodnom 1,4-dioksanu (15 mL) dodat je Cs2CO3(1258 mg, 3.858 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 120 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je razblažena sa 1,4-dioksanom i filtrirana kroz podlogu od celita. Filtrat je koncentrovan i ostatak je ispran sa EtOAc i osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (184 mg, prinos 31.0 %) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.17 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 2.36 (s, 3H), 2.57 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.65 (b, 4H), 4.08-4.14 (m, 1H), 4.54 (s, 2H), 6.57 (s, 1H), 7.08 (dd, J = 8.0 i 2.4 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.69-7.73 (m, 3H), 8.31 (d, J = 6.4 Hz, 1H). m/e 462 (M+H)<+>.

Primer 72

terc-Butil 4-((3-bromofenoksi)metil)piperidin-1-karboksilat

[0319]

[0320] Rastvor terc-butil 4-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata (1.5 g, 7.0 mmol), 3-bromofenola (1.5 g, 7.0 mmol) i PPh3(2.7 g, 10.5 mmol) mešan u suvom THF (30 mL) mešan je na 0°C u atmosferi azota. Ovoj smeši je dodat DEAD (1.8 g, 10.5 mmol) kap po kap tokom perioda od 5 minuta, a reakcija je praćena sa TLC. Posle potpunog nestanka početnog materijala, rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (PE/EA, 9/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.4 g sirov) koje je korišćeno direktno bez daljeg prečišćavanja. m/e 372 (M+H)<+>.

Primer 73

terc-butil 4-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)metil)piperidin-1-karboksilat

[0321]

[0322] Rastvor terc-butil 4-((3-bromofenoksi)metil)piperidin-1-karboksilata (2.4 g, 6.5 mmol), Pin2B2(2.5 g, 9.7 mmol), Pd(dppf)Cl2(250 mg) i kalijum acetata (1.9 g, 19.4 mmol) u 50 mL dioksana je degaziran i ispran sa N2, zagrevan na 80 °C tokom 14 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (300 L), filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (EA:PE,1:10) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (600 mg, 22%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.38 (1H, m), 7.27(2H, m), 6.96 (1H, m), 3.82 (2H, d, J=6.0 Hz), 2.76 (1H, m), 1.73 (4H, m), 1.84 (4H, m).

Primer 74

1

terc-Butil 5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-((1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-4-il) metoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0323]

[0324] Smeša terc-butil 5-(terc-butoksikarbonil(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol- 1-karboksilata (642 mg, 1.44 mmol), terc-butil 4-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)metil) piperidin-1-karboksilata (600 mg, 1.44 mmol), KOAc (564 mg, 5.76 mmol), Boc2O (604 mg, 2.88 mmol) i Pd(dppf)Cl2(70 mg) u dioksanu/vodi (30mL/3 mL) je degazirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM, filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (PE/EA, 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (300 mg, sirovo) kao žuto ulje. m/e 701 (M+H)<+>.

Primer 75

N-(2-(3-(piperidin-4-ilmetoksi)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0325]

[0326] terc-Butil-5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-((1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-4-il) metoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat (250 mg, 0.36 mmol) je rastvoren u 30 mL HCl/Et2O (zasićeno). Smeša je mešana je na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen vodom, i ekstrahovan pomoću EA. Vodena faza je podešena na pH 11 korišćenjem zasićenog rastvora NaHCO3. Koncentrovana je i ostatak je dalje prečišćen sa preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (50 mg, 35%).<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.24 (2H, m), 8.04 (1H, s), 7.90 (2H, m), 7.56 (2H, m), 7.38 (1H, t, J =6.0 Hz), 7.04 (1H, dd, J =9.0 Hz, J =3.0 Hz), 6.65 (1H, d, J =6.0 Hz), 3.95 (2H, d, J =6.0 Hz), 3.42 (2H, d, J =3.0 Hz), 2.15 (2H, t, J =3.0 Hz), 2.12 (1H, m), 2.07 (2H, q, J =3.0 Hz), 1.69 (2H, q, J =3.0 Hz); m/e 401 (M+H)<+>.

1 1

Primer 76

terc-Butil 4-(3-bromofenoksi) piperidin-1-karboksilat

[0327]

[0328] Rastvor terc-butil 4-hidroksipiperidin-1-karboksilata (1.4 g, 7.0 mmol), 3-bromofenola (1.2 g, 7.0 mmol) i PPh3(2.7 g, 10.4 mmol) mešan je u suvom THF (35mL) na 0°C u atmosferi azota. Ovoj smeši je dodat DEAD (1.8 g, 10.4 mmol) kap po kap tokom perioda od 5 minuta, a reakcija je praćena sa TLC. Posle potpunog nestanka početnog materijala, rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (PE/EA, 9/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.3 g, 52%). m/e 357 (M+H)<+>.

Primer 77

terc-Butil-4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)piperidin-1-karboksilat

[0329]

[0330] Rastvor terc-butil 4-(3-bromofenoksi) piperidin-1-karboksilata (1.3 g, 3.5 mmol), Pin2B2(1.4 g, 5.3 mmol), Pd(dppf)Cl2(135 mg) i kalijum acetata (1.0 g, 10.6 mmol) u 20 mL dioksana je degasiran, ispran sa N2, i zagrevan na 80 °C tokom 14 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (200 mL), filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (EA:PE, 1:10) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (500 mg, 36%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.38 (1H, m), 7.32 (1H, m), 7.27(1H, m), 7.25 (1H, m), 7.38 (1H, m), 4.51 (1H, m), 3.69 (2H, m), 3.36 (2H, m), 1.88 (2H, m), 1.74 (2H, m), 1.34 (2H, m).

Primer 78

terc-Butil-5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-(1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-4-iloksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0331]

1 2

[0332] Smeša terc-butil 5-(terc-butoksikarbonil(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (221mg, 0.5 mmol), terc-butil 4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)piperidin-1-karboksilata (200 mg, 0.5 mmol), KOAc (196 mg, 2.0 mmol),BOC2O (210 mg, 1.0 mmol) i Pd(dppf)Cl2(40 mg) u dioksanu/vodi (30mL/3 mL) je degazirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM, filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (PE/EA, 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (180 mg, sirovo) kao žuto ulje. m/e 687(M+H)<+>.

Primer 79

N-(2-(3-(Piperidin-4-iloksi)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0333]

[0334] terc-Butil-5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-(1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-4-iloksi) fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat (170 mg, 0.25 mmol) je rastvoren u 30 mL HCl/Et2O (zasićeno). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa vodom, i ekstrahovan pomoću EA. Vodena faza je podešena na pH 11 korišćenjem zasićenog rastvora NaHCO3. Koncentrovana je i ostatak je dalje prečišćen sa preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (20 mg, 21%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.26 (1H, d, J =6.0 Hz), 8.18 (1H, s), 8.04 (1H, s), 7.96 (1H, s), 7.93 (1H, t, J =3.0 Hz), 7.56 (2H, m), 7.42 (1H, t, J =9.0 Hz), 7.14 (1H, dd, J =9.0 Hz, J =3.0 Hz), 6.87 (1H, d, J =6.0 Hz), 5.80 (1H, m), 3.38 (2H, m), 3.30 (2H, m), 2.16 (2H, m), 2.11 (2H, m); m/e 387 (M+H)<+>.

Primer 80

2-(3-Bromo-4-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamid

1

[0336] Rastvor 2-hloro-N-ciklopropilacetamida (1.7 g, 13.1 mmol), 3-bromo-4-fluorofenola (2.5 g, 13.1 mmol) i K2CO3(2.7 g, 19.6 mmol) u 20 mL acetona je zagrevan na 60 °C tokom 16 h. Smeša je filtrirana i koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA, 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.5 g, 66%) kao žuta čvrsta supstanca. m/e 289 (M+H)<+>.

Primer 81

N-Ciklopropil-2-(4-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamid

[0337]

[0338] Rastvor 2-(3-bromo-4-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamida (2.5 g, 8.7 mmol), Pin2B2(3.3 g, 13.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(330 mg) i kalijum acetata (2.6 g, 26.0 mmol) u 35 mL dioksana je degasiran i ispran sa N2, zagrevan na 80 °C tokom 14 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (200 mL), filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (EA:PE, 1:5) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (600 mg, 21%) kao žuta čvrsta supstanca. m/e 336 (M+H)<+>.

Primer 82

2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)-4-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamid [0339]

[0340] Smeša N-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (150 mg, 0.61 mmol), N-ciklopropil-2-(4-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (205

1 4

mg, 0.61 mmol), KOAc (240 mg, 2.45 mmol) i Pd(dppf)Cl2(60 mg) u dioksanu/vodi (20mL/3 mL) je degasirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM, filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (DCM/MeOH, 20/1) posle čega je usledilo dalje prečišćavanje sa preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (35 mg, 14%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.26 (1H, d, J = 6.0 Hz), 8.17 (1H, s), 8.03 (1H, s), 7.52 (3H, m), 7.13 (2H, m), 6.70 (1H, d, J=6.0 Hz), 4.53 (2H, s), 2.72 (1H, t, J =3.0 Hz), 0.75 (2H, t, J =3.0 Hz), 0.57 (2H, t, J =3.0 Hz); m/e 419 (M+H)<+>.

Primer 83

2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)-5-metilpirimidin-2-il)-4-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamid

[0341]

[0342] Smeša N-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (209 mg, 0.80 mmol), N-ciklopropil-2-(4-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (270 mg, 0.80 mmol), KOAc (316 mg, 3.22 mmol) i Pd(dppf)Cl2(60 mg) u dioksanu/vodi (20mL/3 mL) je degasirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM, filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (DCM/MeOH, 20/1) posle čega je usledilo dalje prečišćavanje sa preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (35 mg, 10%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.16 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.02 (1H, s), 7.70 (1H, dd, J =9.0 Hz, J=3.0 Hz), 7.54 (1H, d, J=9.0 Hz), 7.44 (1H, m), 7.10 (2H, m), 4.46 (2H, s), 2.69 (1H, m), 2.31 (3H, s), 0.73 (2H, t, J =3.0 Hz), 0.55 (2H, t, J=3.0 Hz); m/e 433 (M+H)<+>.

Primer 84

2-(3-Bromo-5-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamid

[0343]

1

[0344] Rastvor 2-hloro-N-ciklopropilacetamida (2.8 g, 20.9 mmol), 3-bromo-5-fluorofenola (4.0 g, 20.9 mmol) i K2CO3(4.3 g, 31.4 mmol) u 40 mL acetona je zagrevan na 60 °C tokom 16 h. Smeša je filtrirana i koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA, 3/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (4.3 g, 71%) kao žuta čvrsta supstanca. m/e 288 (M+H)<+>.

Primer 85

N-ciklopropil-2-(3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamid [0345]

[0346] Rastvor 2-(3-bromo-5-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamida (4.3 g, 14.9 mmol), Pin2B2(5.7 g, 22.4 mmol), Pd(dppf)Cl2(600 mg) i kalijum acetata (4.4 g, 44.8 mmol) u 50 mL dioksana je degasiran i ispran sa N2, zagrevan na 80 °C tokom 14 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (200 mL), filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (EA:PE, 1:5) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.2 g, 64%) kao žuta čvrsta supstanca. m/e 336 (M+H)<+>.

Primer 86

2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)-5-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamid [0347]

[0348] Smeša N-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (340 mg, 1.4 mmol), N-ciklopropil-2-(3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (650 mg, 1.9 mmol), CsF (835 mg, 5.5 mmol) i Pd(dppf)Cl2(200 mg) u dioksanu/vodi (20mL/3 mL) je degasirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM, filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom

1

(DCM/MeOH, 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80 mg, 14%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.26 (1H, d, J=6.0 Hz), 8.08 (1H, s), 8.06 (1H, s), 7.78(1H, s), 7.65 (1H, dd, J =9.0 Hz, J =3.0 Hz), 7.58 (2H, s), 6.89(1H, dt, J=9.0 Hz, J=3.0 Hz), 6.66 (1H, d, J=6.0 Hz), 4.58 (2H, s), 2.74 (1H, m), 0.76 (2H, t, J =3.0 Hz), 0.58 (2H, t, J =3.0 Hz); m/e 419 (M+H)<+>.

Primer 87

2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)-5-metilpirimidin-2-il)-5-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamid

[0349]

[0350] Smeša N-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (360 mg, 1.4 mmol), N-ciklopropil-2-(3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (650 mg, 1.9 mmol), CsF (835 mg, 5.5 mmol) i Pd(dppf)Cl2(200 mg) u dioksanu/vodi (20 mL/3 mL) je degasirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM, filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (DCM/MeOH, 20/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (60 mg, 10%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.14 (1H, s), 8.04 (2H, m), 7.70 (2H, m), 7.57 (2H, m), 6.81 (1H, dt, J =9.0 Hz, J =3.0 Hz), 4.51 (2H, s), 2.72 (1H, m), 2.29 (3H, s), 0.72 (2H, t, J =3.0 Hz), 0.57 (2H, t, J =3.0 Hz); m/e 433 (M+H)<+>.

Primer 88

terc-Butil 3-((3-bromofenoksi)metil)piperidin-1-karboksilat

[0351]

[0352] Rastvor terc-butil 3-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata (935 mg, 4.35 mmol), 3-bromofenola (753 mg, 4.35 mmol) i PPh3(1.71 mg, 6.53 mmol) je mešan u suvom THF (30 mL) na 0°C u atmosferi azota. Ovoj smeši je kap po kap dodat DEAD (1.14 g, 6.53 mmol)

1

tokom perioda od 5 min, a reakcija je praćena sa TLC. Posle potpunog nestanka polaznog materijala, smeša je sipana u EA (50 mL), isprana sa fiziološkim rastvorom (3 × 20 mL), osušena preko Na2SO4i filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (PE/EA, 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.8 g, sirovo). m/e 370 (M+H)<+>.

Primer 89

terc-Butil 3-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)metil) piperidin-1-karboksilat

[0353]

[0354] Rastvor terc-butil 3-((3-bromofenoksi)metil)piperidin-1-karboksilata (0.7 g, 1.9 mmol), Pin2B2(0.72 g, 2.8 mmol), Pd(dppf)Cl2(154 mg) i kalijum acetata (556 mg, 5.67 mmol) u dioksanu (50 mL) je degasiran i ispran sa N2, zagrevan na 80 °C tokom 14 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (100 mL), ispran fiziološkim rastvorom (3 × 30 mL), osušen preko Na2SO4i filtriran. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na kolon (EA:PE, 1:5) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.9 g, sirovo). m/e 418 (M+H)<+>.

Primer 90

terc-Butil-5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-((1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-3-il) metoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0355]

[0356] Smeša terc-butil 5-(terc-butoksikarbonil(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (240 mg, 0.54 mmol), terc-butil 3-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)metil) piperidin-1-karboksilata (270 mg, 0.65 mmol), CsF (788 mg, 5.4 mmol), Boc2O (353 mg, 1.62 mmol) i Pd(dppf)Cl2(88 mg) u dioksanu/vodi (20mL/2 mL) je degasirana

1

i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (100 mL), ispran fiziološkim rastvorom (30 mL × 3), osušen preko Na2SO4i filtriran. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (DCM:MeOH, 50:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.1 g) kao žuto ulje. m/e 701 (M+H)<+>.

Primer 91

N-(2-(3-(piperidin-3-ilmetoksi)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0357]

[0358] terc-Butil-5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-((1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-3-il) metoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat (100 mg, 0.14 mmol) je rastvoren u HFIP (3 mL), rastvor je mešan na 150 °C tokom 1 h sa M.W. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen sa preparativnom TLC (DCM:MeOH, 4:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (40 mg, 70 %).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.26 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.91-7.88 (m, 2H), 7.61-7.52 (m, 2H), 7.44 (t, J =8.0 Hz, 1H), 7.14-7.12 (m, 1H), 6.74 (d, J =6.4 Hz, 1H), 4.11-4.07 (m, 1H), 3.97-3.93 (m, 1H), 3.58-3.54 (m, 1H), 3.41-3.31 (m, 1H), 3.00-2.89 (m, 2H), 2.36-2.27 (m, 1H), 2.04-1.97 (m, 1H), 1.85-1.78 (m, 1H), 1.56-1.45 (m, 1H); m/e 401 (M+H)<+>.

Primer 92

terc-Butil 3-(3-bromofenoksi)pirolidin-1-karboksilat

[0359]

[0360] Rastvor terc-butil 3-hidroksipirolidin-1-karboksilata (1.0 g, 5.8 mmol), 3-bromofenola (1.08 g, 5.8 mmol) i PPh3(2.28 g, 8.7 mmol) u suvom THF (35 mL) mešana je na 0°C u atmosferi azota. Ovoj smeši je dodat DEAD (1.51 g, 8.7 mmol) kap po kap tokom perioda od 5 minuta, i reakcija je praćena sa TLC. Posle potpunog nestanka polaznog materijala, smeša je sipana u EA (50 mL), isprana sa fiziološkim rastvorom (20 mL × 3), osušena preko Na2SO4i

1

filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (PE/EA, 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.8 g , sirovo). m/e 342 (M+H)<+>.

Primer 93

terc-Butil 3-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)pirolidin-1-karboksilat

[0361]

[0362] Rastvor terc-butil 3-(3-bromofenoksi)pirolidin-1-karboksilata (0.8 g, 2.3 mmol), Pin2B2(1.91 g, 7.5 mmol), Pd(dppf)Cl2(408 mg) i kalijum acetata (1.47 g, 15 mmol) u dioksanu (50 mL) je degasiran i ispran sa N2, zagrevan na 80 °C tokom 14 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (100 mL), ispran sa fiziološkim rastvorom (3 × 30 mL), osušen preko Na2SO4i filtriran. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (EA:PE, 1:5) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuto ulje (450 mg, sirovo). m/e 390 (M+H)<+>.

Primer 94

terc-Butil-5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-(1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-3-iloksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0363]

[0364] Smeša terc-butil 5-(terc-butoksikarbonil(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (466 mg, 1.05 mmol), terc-butil 3-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)pirolidin-1-karboksilata (488 mg, 1.25 mmol), CsF (1.53 g, 10.5 mmol), Boc2O (687 mg, 3.15 mmol) i Pd(dppf)Cl2(172 mg) u dioksanu/vodi (30mL/3 mL) je degasirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (100 mL), ispran sa fiziološkim rastvorom (3 × 30 mL), osušen preko

11

Na2SO4i filtriran. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (PE/EA, 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (200 mg , 28.5 %). m/e 673 (M+H)<+>.

Primer 95

N-(2-(3-(pirolidin-3-iloksi)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0365]

[0366] terc-Butil-5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-(1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-3-iloksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat (135 mg, 0.25 mmol) je rastvoren u 2 mL koncentrovane HCl. Smeša je mešana tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi. Dodato je 10 mL vode i zatim je podešen na pH 9-10 sa 1N NaOH. Ekstrahovan sa EA (30 mL x 3), osušen preko Na2SO4i filtriran. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno preparativnom TLC (DCM/MeOH, 5/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (45 mg, 62.5 %).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.27 (d, J =6.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.98 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.90-7.86 (m, 1H), 7.59-7.53 (m, 2H), 7.44 (t, J =8.0 Hz, 1H), 7.11 (dd, J =2.0 Hz, J =2.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J =6.0 Hz, 1H), 5.28-5.26 (m, 1H), 3.62-3.31 (m, 4H), 2.40-2.25 (m, 2H); m/e 373 (M+H)<+>.

Primer 96

2-(5-Bromo-2-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamid

[0367]

[0368] Rastvor 2-hloro-N-ciklopropilacetamida (1.0 g, 7.5 mmol), 5-bromo-2-fluorofenola (1.44 g, 7.5 mmol) i K2CO3(1.55 g, 11.25 mmol) u 30 mL acetona je zagrevan na 60 °C tokom 16 h. Smeša je filtrirana i koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA, 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (1.2 g, 55.3 %). m/e 288 (M+H)<+>.

Primer 97

N-ciklopropil-2-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamid [0369]

[0370] Rastvor 2-(5-bromo-2-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamida (0.83 g, 2.88 mmol), Pin2B2(1.1 g, 4.33 mmol), Pd(dppf)Cl2(120 mg) i kalijum acetata (0.85 g, 8.64 mmol) u 35 mL dioksana je degasiran i ispran sa N2, zagrevan na 80 °C tokom 14 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (100 mL), ispran sa fiziološkim rastvorom (3 × 30 mL), osušen preko Na2SO4i filtriran. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni (PE/EA, 2/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u vidu ulja (600 mg, 21 %). m/e 336 (M+H)<+>.

Primer 98

2-(5-(4-(1H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)-2-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamid [0371]

[0372] Smeša N-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (147 mg, 0.6 mmol), N-ciklopropil-2-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (300 mg, 0.89 mmol), KOAc (235 mg, 2.4 mmol) i Pd(dppf)Cl2(70 mg) u dioksanu/vodi (20 mL/3 mL) je degasirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM (30 mL) i filtriran. Filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH, 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (35 mg, 14 %).<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.01 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 8.33 (d, J=5.6 Hz, 1H), 8.21-8.20 (m, 1H), 8.09-7.96 (m, 3H), 7.62-7.55 (m, 2H), 7.39-7.34 (m, 1H), 6.68 (d, J =6.0 Hz, 1H), 4.64 (s, 2H), 2.70-2.65 (m, 1H), 0.63-0.59 (m, 2H), 0.48-0.43(m, 2H); m/e 419 (M+H)<+>.

Primer 99

2-(5-(4-(1H-indazol-5-ilamino)-5-metilpirimidin-2-il)-2-fluorofenoksi)-N-ciklopropilacetamid

[0373]

[0374] Smeša N-(2-hloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (100 mg, 0.38 mmol), N-ciklopropil-2-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (130 mg, 0.38 mmol), KOAc (151 mg, 1.55 mmol) i Pd(dppf)Cl2(50 mg) u dioksanu/vodi (20mL/3 mL) je degasirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM (30 mL) i filtriran. Filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH, 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (10 mg, 2.9 %).<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.01 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.17 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.11-8.09 (m, 2H), 7.97-7.94 (m, 1H),7.85-7.82 (m, 1H), 7.71-7.68 (m, 1H), 7.59-7.56 (m, 1H), 7.31-7.26 (m, 1H), 4.58 (s, 2H), 2.68-2.63 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 0.66-0.58 (m, 2H), 0.47-0.43(m, 2H); m/e 433 (M+H)<+>.

Primer 100

N-(6-hloro-2-(pirolidin-1-il)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0375]

[0376] Smeša N-(2,6-dihloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (0.88 g, 3.17 mol), pirolidina (225 mg, 3.17 mmol) i DIPEA (818 mg, 6.34 mmol) u BuOH (30 mL) mešana je na 120°C tokom 12 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen sa preparativnom HPLC da bi se dobilo naslovno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (0.8 g, 80 %). m/e 315 (M+H)<+>.

Primer 101

11

terc-butil-5-(6-(3-(2-(ciklopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)-2-(pirolidin-1-il) pirimidin-4-ilamino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0377]

[0378] Smeša N-(6-hloro-2-(pirolidin-1-il)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (300 mg, 0.95 mmol), N-ciklopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (452 mg, 1.43 mmol), CsF (1.38 g, 1.55 mmol) i Pd(dppf)Cl2(150 mg) u dioksanu/vodi (30mL/3 mL) je degasirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM (50 mL) i filtriran. Filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni (DCM/MeOH, 10/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (90 mg, 16 %). m/e 570 (M+H)<+>.

Primer 102

2-(3-(6-(1H-indazol-5-ilamino)-2-(pirolidin-1-il)pirimidin-4-il)fenoksi)-N-ciklopropilacetamid

[0379]

[0380] terc-Butil 5-(6-(3-(2-(ciklopropilamino)-2-oksoetoksi)fenil)-2-(pirolidin-1-il) pirimidin-4-ilamino)-1H-indazol-1-karboksilat (90 mg, 0.16 mmol) je rastvoren u HFIP (2 mL), rastvor je mešan na 150 °C tokom 1 h sa M.W. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen preparativnom TLC (DCM:MeOH, 4:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (35 mg, 46.7 %).<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.92 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.19 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56-7.47 (m, 3H), 7.39 (t, J =8.0 Hz, 1H), 7.02 (dd, J =2.0 Hz, J =2.0 Hz, 1H), 6.47 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.63-3.60 (m, 4H), 2.73-2.66 (m, 1H), 1.95-1.98 (m, 4H), 0.66-0.61 (m, 2H), 0.51-0.47 (m, 2H); m/e 470 (M+H)<+>.

Primer 103

3-(3-bromofenil)-N-ciklopropilpropanamid

[0382] 3-(3-Bromofenil) propanska kiselina (3.0 g, 13.1 mmol) je dodata u rastvor SOCl2(10 ml) i mešana je 2 sata na 70°C. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2(20 ml), zatim je dodat u kapima u smešu ciklopropanamina (1.17g, 19.6 mmol) i trietilamina (4.0 g, 39.3 mmol) na 0 °C, zatim je reakciona smeša mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ugašena sa 1N HCl i organski sloj je ispran sa fiziološkim rastvorom, osušen, koncentrovan do ostatka. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije (PE/EA: 1/1 do 1/2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (2.8 g, 79 %).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.36 (m, 2H), 7.15 (m, 2H), 5.53 (s, 1H), 2.94 (t, 2H), 2.68 (s, 1H), 2.41 (t, 2H), 0.77(m, 2H), 0.44 (m, 2H). m/e 268 (M+H)<+>.

Primer 104

N-Ciklopropil-3-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)propanamid [0383]

[0384] PdCl2(dppf) (420 mg, 0.5 mmol) je dodat u smešu 3-(3-bromofenil)-N-ciklopropilpropanamida (2.8 g, 10.3 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (3.9 g, 15.5 mmol) i KOAc (2.5 g, 25.7 mmol) u dioksanu (80 ml). Smeša je mešana preko noći na 100 °C pod azotom. Reakciona smeša je zatim koncentrovana u vakuumu, a ostatak je prečišćen pomoću hromatografije (PE/EA: 5/1 do 1/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca (3.0 g, 92 %).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.60 - 7.67 (m, 2H), 7.27 - 7.33 (m, 2H), 5.47 (s, 1H), 2.92 - 2.97 (m, 2H), 2.41 (t, 2H), 2.04 (s, 1H), 1.34 (s, 12H), 0.70 - 0.72(m, 2H), 0.38- 0.40 (m, 2H); m/e 316 (M+H)<+>.

Primer 105

11

terc-Butil 5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-(3-(ciklopropilamino)-3-oksopropil)fenil) pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0385]

[0386] PdCl2(dppf) (165 mg, 0.21 mmol) je dodat u smešu N-ciklopropil-3-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)propanamida (380 mg, 1.2 mmol), Boc2O (650 mg, 3.0 mmol), CsF (600 mg, 4.0 mmol) i terc-butil 5-(terc-butoksikarbonil(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (446 mg, 1.0 mmol) u dioksanu/H2O (30 ml, 10/1) pod protokom N2. Smeša je mešana 24 h na 100 °C pod azotom. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EA( 60 ml) i isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena, koncentrovana u vakuumu, a ostatak je prečišćen hromatografijom (PE/EA: 5/1 do 1/5) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (240 mg) kao žuto ulje. m/e 599 (M+H)<+>.

Primer 106

3-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)fenil)-N-ciklopropilpropanamid

[0387]

[0388] terc-Butil-5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-(3-(ciklopropilamino)-3-oksopropil)fenil) pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat (220 mg, 0.367 mmol) je dodat u smešu zasićene HCl u etil etru (30 mL). Smeša je mešana 3 sata na sobnoj temperaturi. Zatim je smeša filtrirana i žuta čvrsta supstanca je dodata u HCl (5 ml), zatim je mešana 10 minuta i razblažena sa H2O (50 ml), filtrirana. Dobijeni beličasti kristali kao hidrohloridna so, dodati su u zasićeni NaHCO3(10 ml) i mešani tokom 2 h. Smeša je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana sa H2O (10 ml), osušena da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, 34%) u vidu beličaste čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, DMSO) δ13.00 (s, 1H) , 9.62(s, 1H) , 8.34 -8.32 (m, 3H) , 8.22

11

(m, 1H) , 8.06 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.40 (m, 3H), 6.66 (d, 1H), 2.90(m, 2H), 2.60 (m, 1H), 2.40 (m, 2H), 0.57 (m, 2H), 0.33 (m, 2H). m/e 399 (M+H)<+>.

Primer 107

2-(3-bromofeniltio)-N-ciklopropilacetamid

[0389]

[0390] Rastvor 2-hloro-N-ciklopropilacetamida (1.33 g, 10 mmol), 3-bromobenzenetiola (1.6 g, 8.5 mmol) i K2CO3(4.8 g, 35 mmol) u 30 mL acetona je zagrevan na 70 °C preko noći. Smeša je filtrirana i koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni (PE/EA, 1/1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.4 g, 96%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR δ (300 MHz, CDCl3) 7.39 (1H, m), 7.31 (1H, m), 7.14 (2H, m), 6.71 (1H, s), 3.58 (2H, s), 2.64-2.77 (1H, m), 0.73-0.84 (2H, m), 0.41 (2H, m); m/e 286 (M+H)<+>.

Primer 108

N-ciklopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)feniltio)acetamid [0391]

[0392] Rastvor 2-(3-bromofeniltio)-N-ciklopropilacetamida (2.43 g, 9.1 mmol), Pin2B2(3.5 g, 13.7 mmol), Pd(dppf)Cl2(730 mg) i kalijum acetata (2.67 g, 27.3 mmol) u 30 mL dioksana je degasiran i ispran sa N2, zagrevan na 95 °C tokom 12 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa EtOAc (200 mL), filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (EA:PE, 1:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.4 g, 82%) kao žuto ulje. m/e 286 (M+H)<+>.

Primer 109

terc-Butil 5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-(2-(ciklopropilamino)-2-oksoetiltio)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0393]

11

[0394] Smeša N-ciklopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)feniltio)acetamida (380 mg, 1.1 mmol), N-(2-hloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (246 mg, 1.0 mmol), CsF (730 mg, 5.0 mmol), Boc2O (650 mg, 3.0 mmol), i Pd(dppf)Cl2(1700 mg) u dioksanu/vodi (27mL/3 mL) je degasirana i isprana sa N2, zagrevana na 100 °C tokom 24 h. Smeša je koncentrovana da bi se dobio ostatak, koji je razblažen sa DCM, filtriran, koncentrovan i prečišćen hromatografijom (DCM/MeOH, 20/1) da bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova (200 mg) kao žuta čvrsta supstanca. m/e 617 (M+H)<+>.

Primer 110

2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)feniltio)-N-ciklopropilacetamid

[0395]

[0396] Smeša terc-butil 5-(terc-butoksikarbonil(2-(3-(2-(ciklopropilamino)-2-oksoetiltio)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (209 mg, 0.80 mmol) u konc. HCl (3 mL) mešana je 10 minuta, a zatim je dodat led. Reakciona smeša je podešena na pH 10 sa rastvorom NaHCO3i ekstrahovana sa CH2Cl2/MeOH(1/1, 20 ml). Filtrirana je i filtrat je koncentrovan da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom (DCM/MeOH, 20/1) posle čega je usledilo dalje prečišćavanje sa preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (25 mg, 18%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.36 (1H, m), 8.24 (1H, d, J=6 Hz), 8.14 (2H, m), 8.05 (1H, s), 7.56 (2H, s), 7.49 (1H, m), 7.41 (1H, d, J=6Hz), 6.63 (1H, d, J=6Hz), 3.60 (2H, s), 2.58 (1H, m), 0.61 (2H, m), 0.36 (2H, m); m/e 417 (M+H)<+>.

Primer 111

2-(3-(4-aminopirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0397]

11

[0398] Smeša 2-hloropirimidin-4-amina (0.50g, 3.8 mmol), N-izopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (1.46 g, 4.6 mmol), CsF (1.75 g, 11.4 mmol), i Pd(PPh3)4(0.2 g, 0.2 mmol) u smeši dioksana (8 mL) i H2O (2 mL) mešana je na 100 °C preko noći pod N2. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE:EtOAc = 1:1 ) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (400 mg, prinos 36%) kao bezbojno ulje.

Primer 112

N-izopropil-2-(3-(4-(piridin-4-ilamino)pirimidin-2-il)fenoksi)acetamid

[0399]

[0400] Smeša jedinjenja 2-(3-(4-aminopirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (300 mg, 1.1 mmol), 4-bromopiridina (258 mg, 1.3 mmol), Cs2CO3(1026 mg, 3.3 mmol), Pd2(dba)3(96 mg, 0.1 mmol), i X-Phos (51 mg, 0.1 mmol) u bezvodnom dioksanu (30 mL) mešana je na 120 °C preko noći pod N2.

[0401] Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je filtrirana, filtrat je koncentrovan, ostatak je ispran sa EtOAc a zatim je filtriran da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, prinos 52%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 10.09 (s, 1H), 8.47-7.92 (m, 8H), 7.45 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.12-6.82 (m, 2H), 4.52 (s, 2H), 3.99-3.92 (m, 1H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 6H); m/e 364 (M+H)<+>.

Primer 113

2-hloro-4-(4-(piridin-4-il)piperidin-1-il)pirimidin

[0402]

11

[0403] Smeša 2,4-dihloropirimidina (745 mg, 5 mmol), 1,2,3,4,5,6-heksahidro-[4,4'] bipiridinila (811 mg, 5 mmol), i TEA (758 mg, 7.5 mmol) u EtOH (15 mL) mešana je na refluksu preko noći. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je prečišćen pomoću kolonske hromatografije na silika gelu (eluiranje sa petrolej etrom: etil acetatom = 5:1 - 1:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (500 mg, prinos 36.4%) u vidu bele čvrste supstance.

Primer 114

N-izopropil-2-(3-(4-(4-(piridin-4-il)piperidin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)acetamid [0404]

[0405] Smeša 2-hloro-4-(4-(piridin-4-il)piperidin-1-il)pirimidina (500 mg, 1.82 mmol), Pd(dppf)2Cl2(50 mg), Na2CO3(579 mg, 5.46 mmol) i N-izopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (871 mg, 2.73 mmol) u dioksanu/vodi (10:1, 10 mL) mešana je na 100°C preko noći. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je prečišćen pomoću P-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (300 mg, prinos 35.2%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.80 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 8.23 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.83-7.81 (m, 2H), 7.59 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.37-7.20 (m, 2H), 5.54 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.62 (s, 2H), 4.52 (d, J = 14 Hz, 1H), 4.12-4.06 (m, 1H), 3.61-3.47 (m, 4H), 2.26-1.89 (m, 4H), 1.17 (d, J = 7.6 Hz, 6H); m/e 432 (M+H)<+>.

Primer 115

4,6-dihloro-2-jodopirimidin

[0406]

12

[0407] U rastvor jedinjenja 4,6-dihloropirimidin-2-amina (39 g, 237.82 mmol) u CH3CN (300 mL), dodat je CH2I2(1000 mL) zatim je dodat t-BuONO (129.3 g, 1.25 mol) i smeša je zagrevana do refluksa preko noći. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 g, prinos 46%) kao žuta čvrsta supstanca.

Primer 116

2-(3-(4,6-dihloropirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0408]

[0409] U smešu jedinjenja 4,6-dihloro-2-jodopirimidina (13.92 g, 50.64 mmol), N-izopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)acetamida (18 g, 56.39 mmol), Na2CO3(13.88 g, 130.96 ) u DME (150 mL) i vodi (50 mL), dodat je Pd(PPh3)4(5.04 g, 4.36 mmol) i smeša je zagrevana do refluksa preko noći pod N2. Zatim je reakciona smeša sipana u vodu (100 mL), ekstrahovana sa EtOAc (150 mL × 2) i organska faza je isprana sa fiziološkim rastvorom, osušena sa Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (9.05 g, prinos 52%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 117

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-hloropirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid [0410]

[0411] U rastvor jedinjenja 2-(3-(4,6-dihloropirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (5.7 g, 16.75 mmol) u iPrOH(110 mL), dodati su DIPEA (6.5 g, 48.82 mmol ) i 1H-indazol-5-amin (2.23 g, 17.25 mmol) i reakciona smeša je zagrevana do refluksa preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.22 g, prinos 44%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.05 (s, 1H), 9.90 (s, H), 8.09 (b, 2H), 7.95-7.89 (m, 3H), 7.59-7.41 (m, 3H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.00-3.94 (m, 1H), 1.08 (d, J = 6.4 Hz, 6H); m/e 437 (M+H)<+>.

Primer 118

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0412]

[0413] U mešani rastvor 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-hloropirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (300 mg, 0.687 mmol) u iprOH (20 mL), dodati su Et3N (3 mL), i piperazin (592 mg, 6.87 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana preko noći na 110 °C. Zatim je reakciona smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (114 mg, prinos 34%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.91 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.94-7.89 (m, 3H), 7.51-7.35 (m, 3H), 7.04 (dd, J = 8.0 i 2.0 Hz, 1H), 5.82 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.98-3.92 (m, 1H), 3.48 (b, 4H), 2.76 (b, 4H), 1.07 (d, J = 6.8 Hz, 6H); m/e 487 (M+H)<+>.

Primer 119

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-morfolinopirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid [0414]

[0415] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano korišćenjem iste procedure kao i za 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid (primer 118) (112 mg, prinos 34%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.93 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.95-7.91 (m, 3H), 7.49-7.38 (m, 3H), 7.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.84 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.94 (b, 1H), 3.69 (s, 4H), 3.52 (s, 4H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 6H); m/e 488 (M+H)<+>.

Primer 120

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0416]

[0417] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano korišćenjem iste procedure kao i za 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid (primer 118) (100 mg, prinos 65%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.94 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.97-7.91 (m, 3H), 7.53-7.05 (m, 4H), 5.75 (s, 1H), 4.53 (s, 2H), 4.02-3.62 (m, 5H), 2.64 (b, 2H), 2.50 (b, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.92 (b, 2H), 1.09 (d, J = 6.8 Hz, 6H); m/e 515 (M+H)<+>.

Primer 121

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(1,4-diazepan-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0418]

[0419] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano korišćenjem iste procedure kao i za 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid (primer 118) (110 mg, prinos 32%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.90 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.92-7.03 (m, 5H), 5.74 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.96-3.68 (m, 3H), 2.85 (b, 2H), 2.66 (b, 2H), 2.31 (b, 2H), 1.77 (b, 2H), 1.07 (d, J = 6.8 Hz, 6H); m/e 501 (M+H)<+>.

12

Primer 122

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(dimetilamino)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0420]

[0421] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano korišćenjem iste procedure kao i za 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid (primer 118) (101 mg, prinos 33%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.90 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.97-7.88 (m, 3H), 7.48 (s, 2H), 7.38 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.73 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.98-3.93 (m, 1H), 3.07 (s, 6H), 1.08 (d, J = 6.8Hz, 6H); m/e 446 (M+H)<+>.

Primer 123

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperidin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0422]

[0423] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano korišćenjem iste procedure kao i za 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid (primer 118) (110 mg, prinos 33%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.91 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.94-7.89 (m, 3H), 7.49-7.03 (m, 5H), 5.85 (s, 1H), 5.00 (s, 2H), 3.96-3.93 (m, 1H), 3.58 (b, 4H), 1.55 (b, 6H), 1.07 (d, J = 6.8 Hz, 6H); m/e 486 (M+H)<+>.

Primer 124

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-((2-metoksietil)(metil)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0424]

[0425] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano korišćenjem iste procedure kao i za 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid (primer 118) (110 mg, prinos 33%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.00 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.05-7.92 (m, 3H), 7.53 (s, 1H), 7.42 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.79 (s, 1H), 4.53 (s, 2H), 4.03-3.95 (m, 1H), 2.78 (b, 2H), 3.59-3.56 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.07 (s, 3H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 1H); m/e 490 (M+H)<+>.

Primer 125

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-((2-(dimetilamino)etil)(metil)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0426]

[0427] Jedinjenje iz naslova je sintetizovano korišćenjem iste procedure kao i za 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid (primer 118) (100 mg, prinos 29%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.91 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.96-7.86 (m, 3H), 7.49-7.03 (m, 4H), 5.71 (s, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.00-3.92 (m, 1H), 3.67 (b, 2H), 3.30 (b, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.15 (s, 6H), 1.07 (d, J = 6.8 Hz, 6H); m/e 503 (M+H)<+>.

Primer 126

2-(3-(4-hloro-6-(2-(dimetilamino)etoksi)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid [0428]

12

[0429] U rastvor jedinjenja 2-(3-(4,6-dihloropirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (1 g, 2.9 mmol) u toluenu (24 mL) dodati su NaOH (232 mg, 5.8 mmol) i 2-(dimetilamino)etanol (261 mg, 2.9 mmol). Dobijena smeša je mešana tokom 3 sata na 110 °C. Zatim je reakciona smeša razblažena sa vodom i ekstrahovana sa DCM. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak koji je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa DCM:MeOH = 100:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (550 mg, prinos 48%) kao čvrsta supstanca.

Primer 127

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(2-(dimetilamino)etoksi)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamid

[0430]

[0431] U rastvor jedinjenja 2-(3-(4-hloro-6-(2-(dimetilamino)etoksi)pirimidin-2-il)fenoksi)-N-izopropilacetamida (100 mg, 0.25 mmol) u EtOH (1 mL) dodati su 1H-indozal-5-amin (101.5 mg, 0.76 mmol) i TFA (0.25 mL). Dobijena smeša je zagrevana na 80 °C preko noći. Smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela i ponovo prečišćena pomoću preparativne TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg, prinos 16%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.05-7.96 (m, 4H), 7.54-7.49 (m, 2H), 7.40-7.08 (m, 2H), 5.94 (s, 1H), 4.55 (s, 4H), 4.14-4.06 (m, 1H), 2.79-2.76 (m, 2H), 2.33 (s, 6H), 1.16 (d, J = 6.8 Hz, 6H); m/e 490 (M+H)<+>.

Primer 128

3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil morfolin-4-karboksilat

[0432]

12

[0433] U smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenola (500 mg, 2.27 mmol), DMAP (277.3 mg) i Et3N (450.46 mg, 4.54, mmol) u DCM (10 ml) dodat je u kapima rastvor morfolin-4-karbonil hlorida (339.5 mg, 2.27 mmol) u DCM (10 ml) na 0 °C. U smešu je dodata voda i ekstrahovana sa DCM (40 mL × 2). Organska faza je osušena sa Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (600 mg, prinos 79%) koje je direktno korišćeno u sledećem koraku.

Primer 129

3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenil morfolin-4-karboksilat

[0434]

[0435] U mešani rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (100 mg, 0.2243 mmol) u EtOH (3 mL) i H2O (0.3 ml) dodati su Na2CO3(47.54 mg, 0.4485 mmol), (Boc)2O (93.29 mg,0.4485 mmol) i 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil morfolin-4-karboksilat (149.44 mg, 0.4485 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je degazirana propuštanjem azota kroz rastvor, dodat je Pd(PPh3)2Cl2(15.07 mg, 0.02243 mmol) i smeša je zagrevana pod mikrotalasnim zračenjem 20 minuta na 110 °C. Smeša je osušena i koncentrovana pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (DCM:MeOH=50:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50 mg, prinos 53%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.02 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 8.33-8.18 (m, 4H), 7.55-7.51 (m, 3H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.64 (b, 6H), 3.45 (b, 2H); m/e 417 (M+H)<+>.

Primer 130

3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil dimetilkarbamat

[0436]

12

[0437] U smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenola (500 mg, 2.23 mmol), DMAP (277.4mg) i Et3N (450.46 mg, 4.46, mmol) u DCM (15 mL) dodat je u kapima rastvor dimetilkarbamskog hlorida (238.6 mg, 2.23 mmol) u DCM (15 ml) na 0 °C i reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. U smešu je dodata voda i ekstrahovana sa DCM (40 mL × 2). Organska faza je osušena sa Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (500 mg, prinos 76%) koje je direktno korišćeno u sledećem koraku.

Primer 131

3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenil dimetilkarbamat

[0438]

[0439] U mešani rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (100 mg, 0.2243 mmol) u EtOH (3 mL) i H2O (0.3 ml) dodat je Na2CO3(47.54 mg, 0.4485 mmol), (Boc)2O (93.29 mg, 0.4485 mmol) i 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil dimetilkarbamat (130.58 mg, 0.4485 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je degazirana propuštanjem azota kroz rastvor, dodat je Pd(PPh3)2Cl2(15.07 mg, 0.02243 mmol) i smeša je zagrevana pod mikrotalasnim zračenjem 20 minuta na 110 °C. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (DCM:MeOH=50:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg, prinos 37%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.02 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 8.34-8.04 (m, 5H), 7.55-7.47 (m, 3H), 7.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.94 (s, 3H); m/e 375 (M+H)<+>.

Primer 132

3-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)metil)piridin

[0440]

12

[0441] U rastvor jedinjenja 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenola (1.5 g, 6.8 mmol) u DMF (20 mL) dodat je NaH (0.82 g, 20.4 mmol) u porcijama na 0 °C uz mešanje. Posle 30 minuta, dodato je jedinjenje 3-(hlorometil)piridin hidrohlorid (1.4 g, 8.9 mmol) u porcijama na 0 °C, a dobijena smeša je ostavljena da se zagreje na 20 °C i zatim je mešana tokom 1 sata. Ugašena je vodom, ekstrahovana sa EtOAc (100 mL × 3), a ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, koncentrovani pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa PE : EA = 10 : 1 do 2 : 1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, prinos 50%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 133

terc-butil 1H-indazol-5-il(2-(3-(piridin-3-ilmetoksi)fenil)pirimidin-4-il)karbamat [0442]

[0443] Smeša jedinjenja 3-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)metil)piridina (1 g, 3.2 mmol), jedinjenje terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat (670 mg, 1.5 mmol), K2CO3(414 mg, 3 mmol) i Pd(dppf)2Cl2(109 mg, 0.15 mmol) u dioksanu (20 mL) i H2O (5 mL) su zagrevani na 90 °C tokom 16 sati u atmosferi N2. Zatim je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa DCM : MeOH = 100 : 1 do 20 : 1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (370 mg, prinos 50%) kao svetlo crveno ulje.

Primer 134

terc-butil 1H-indazol-5-il(2-(3-(piridin-3-ilmetoksi)fenil)pirimidin-4-il)karbamat [0444]

12

[0445] (370 mg, 0.75 mmol) u DCM (5 mL) dodata je TFA (5 mL), i dobijeni rastvor je mešan na 20°C tokom 3 sata. Koncentrovan je i ostatak je rastvoren u DCM/MeOH (10:1, 100mL), ispran sa vodenim K2CO3i fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, koncentrovan i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela (eluiranje sa DCM : MeOH = 100 : 1 do 20 : 1) i rekristalizovan iz MeOH da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (110 mg, prinos 37%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.04 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.35 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.00-7.89 (m, 4H), 7.56-6.68 (m, 6H), 5.25 (s, 2H).

[0446] 13.02 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 8.33-8.18 (m, 4H), 7.55-7.51 (m, 3H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.64 (b, 6H), 3.45 (b, 2H); m/e 417 (M+H)<+>.

Primer 135

4-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)metil)piridin

[0447]

[0448] U rastvor jedinjenja 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenola (1.5 g, 6.8 mmol) u DMF (20 mL) dodat je NaH (0.82 g, 20.4 mmol) u porcijama na 0 °C uz mešanje. Posle 30 minuta, dodato je jedinjenje 4-(hlorometil)piridin (1.4 g, 8.9 mmol) u porcijama na 0 °C, i dobijena smeša je ostavljena da se zagreje na 20 °C i mešana je tokom 16 sati. Ugašena je vodom, ekstrahovana sa EtOAc (100 mL × 3), i ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, koncentrovani, a ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela (eluiranje sa PE: EA = 10: 1 do 2: 1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1 g, prinos 50%) kao bela čvrsta supstanca.

Primer 136

N-(2-(3-(piridin-4-ilmetoksi)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

1

[0450] Smeša jedinjenja 4-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)metil)piridina (139 mg, 0.44 mmol) (6 šarži), jedinjenje terc-butil 5-((tercbutoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat (100 mg, 0.22 mmol), Na2CO3(47 mg, 0.44 mmol), Boc2O (96 mg, 0.44 mmol) i Pd(PPh3)2Cl2(15.4 mg, 0.022 mmol) u EtOH (2 mL) i H2O (0.2 mL) je zagrevano u mikrotalasnom reaktoru na 110 °C tokom 20 minuta u atmosferi N2. Zatim je ohlađena, razblažena vodom, ekstrahovana sa DCM, ekstrakti su koncentrovani i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela (eluiranje sa DCM : MeOH = 100 : 1 do 20 : 1) i rekristalizovan iz MeOH da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (110 mg, prinos 23%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.51 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 8.25 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.05-7.94 (m, 3H), 7.57-7.16 (m, 6H), 6.65 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.26 (s, 2H) ); m/e 395 (M+H)<+>.

Primer 137

2-(3-(2-metoksietoksi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan

[0451]

[0452] U smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenola (800 mg, 3.636 mmol) u DCM (20 ml) dodati su KI (1.2 g, 7.273 mmol), K2CO3(1.307g 10.091 mmol) i 1-bromo-2-metoksietan (1.01 g, 7.273 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana preko noći na 80 °C. Smeša je ekstrahovana sa DCM (30 mL × 2) i organska faza je osušena sa Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (550 mg, prinos 50%).

1 1

Primer 138

N-(2-(3-(2-metoksietoksi)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0453]

[0454] mešani rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (100 mg, 0.2243 mmol) u EtOH (3 mL) i H2O (0.3 ml) dodat je Na2CO3(47.54 mg, 0.4485 mmol), (Boc)2O (93.29 mg, 0.4485 mmol) i 2-(3-(2-metoksietoksi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (124.76 mg, 0.4485 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je degazirana propuštanjem azota kroz rastvor, zatim je dodat Pd(PPh3)2Cl2(15.07 mg,0.02243 mmol) i smeša je zagrevana pod mikrotalasnim zračenjem tokom 20 minuta na 110 °C. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (DCM : MeOH=50:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (40 mg, prinos 49%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.01 (s, 1H), 9.61 (s, 1H), 8.32 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.01-7.91 (m, 3H), 7.55-7.36 (m, 3H), 7.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.16 (b, 2H), 3.68 (b, 2H); m/e 362 (M+H)<+>.

Primer 139

terc-butil 1H-indazol-5-il(2-(3-metoksifenil)pirimidin-4-il)karbamat

[0455]

[0456] U mešani rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (100 mg, 0.2243 mmol) u EtOH (3 mL) i H2O (0.3 ml) dodati su Na2CO3(47.54 mg, 0.4485 mmol), (Boc)2O (93.29 mg,0.4485 mmol) i (3-metoksifenil)boronska kiselina (68.17 mg, 0.4485 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je degazirana propuštanjem azota kroz rastvor, zatim je dodat Pd(PPh3)2Cl2(15.07 mg,0.02243 mmol) i smeša je zagrevana pod mikrotalasnim zračenjem tokom 20 minuta na 110 °C. Smeša

1 2

je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80 mg, prinos 85%).

Primer 140

N-(2-(3-metoksifenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0457]

[0458] U mešani rastvor terc-butil 1H-indazol-5-il(2-(3-metoksifenil)pirimidin-4-il)karbamata (1 g, 2.39 mmol) u DCM (20 mL) dodata je TFA (10 ml) na sobnoj temperaturi i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim je smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, prinos 26%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.05 (s, 1H), 10.02 (s, 1H), 8.32 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.89-7.42 (m, 3H), 7.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H); m/e 318 (M+H)<+>.

Primer 141

4-(2-(3-bromofenoksi)etil)morfolin

[0459]

[0460] U rastvor 3-bromofenola (7.8 g, 45.2 mmol) u DMF (120 mL) dodat je 4-(2-hloroetil)morfolin (8.54 g, 45.2 mmol), K2CO3(414 mg, 3 mmol) i KI (7.5 mg, 45.2 mmol), i dobijena smeša je zagrevana na 20 °C i mešana tokom 16 sati. Ugašena je sa vodom, ekstrahovana sa EtOAc (200 mL × 3), ekstrakti su isprani sa fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, koncentrovani, i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela (eluiranje sa DCM : MeOH = 100 : 1 do 20 : 1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova ( 7 g, prinos 54%) kao crvena tečnost.

Primer 142

4-(2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)etil)morfolin

1

[0462] Smeša jedinjenja 4-(2-(3-bromofenoksi)etil)morfolina (1.1 g, 3.8 mmol), BIPN (1.47 mg, 5.8 mmol), KOAc (0.83 mg, 8.5 mmol) i Pd(dppf)2Cl2(0.28 mg, 0.38 mmol) u dioksanu (15 mL) je zagrevana na 90 °C tokom 16 sati u atmosferi N2. Zatim je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela (eluiranje sa DCM : MeOH = 100 : 1 do 20 : 1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova ( 1 g, prinos 78%) kao svetlo crveno ulje.

Primer 143

terc-butil 1H-indazol-5-il(2-(3-(2-morfolinoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)karbamat [0463]

[0464] Smeša jedinjenja 4-(2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenoksi)etil)morfolina (1 g, 3.2 mmol), jedinjenja terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (670 mg, 1.5 mmol), K2CO3(414 mg, 3 mmol) i Pd(dppf)2Cl2(109 mg, 0.15 mmol) u dioksanu (20 mL) i H2O (5 mL) je zagrevana na 90 °C tokom 16 sati u atmosferi N2. Zatim je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela (eluiranje sa DCM: MeOH = 100: 1 do 20: 1) da bi se dobilo naslovno jedinjenje (380 mg, prinos 50%) kao svetlo crveno ulje.

Primer 144

N-(2-(3-(2-morfolinoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0465]

1 4

[0466] U rastvor jedinjenja terc-butil 1H-indazol-5-il(2-(3-(2-morfolinoetoksi)fenil)pirimidin-4-il)karbamata (380 mg, 0.75 mmol) u DCM (5 mL) dodata je TFA (5 mL), a dobijeni rastvor je mešan na 20 °C tokom 3 sata. Koncentrovan je i ostatak je rastvoren u DCM/MeOH (10:1, 100mL), ispran sa vodenim K2CO3i fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4, koncentrovan i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na koloni silika gela (eluiranje sa DCM: MeOH = 80: 1 do 15: 1) i rekristalizovan iz EtOAc i PE da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (120 mg, prinos 39%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.04 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 8.36 (m, 3H), 8.08 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.57-7.38 (m, 3H), 7.06 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.17 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.58 (s, 4H), 2.73 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.67 (s, 4H); m/e 417 (M+H)<+>.

Primer 145

terc-butil 5-((2-(3-acetilfenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0467]

[0468] Smeša terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (100 mg, 0.22 mmol), 3-acetilfenil)boronske kiseline (73.7 mg, 0.44 mmol), Na2CO3(47.6 mg, 0.44 mmol), (Boc)2O (98 mg, 0.44 mmol), Pd(PPh3)Cl2(16 mg, 0.022 mmol) u EtOH:H2O (3.3 mL,10:1) zagrevana je pod mikrotalasnim zračenjem tokom 20 minuta na 110°C. Posle reakcije, bila je uparena, dodati su EA i voda, odvojen je organski sloj, isprana sa zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, koncentrovana i prečišćena sa silika gelom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (64 mg, prinos 67%).

Primer 146

terc-butil 5-((2-(3-(1-aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0469]

1

[0470] U mešani rastvor terc-butil 5-((2-(3-acetilfenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (500 mg, 1.2 mmol), AcONH4(924 mg, 12 mmol) u MeOH (10 mL) dodat je NaBH3CN (91 mg, 1.44 mmol), smeša je mešana 6 sati na refluksu. Posle reakcije, bila je uparena, razblažena sa vodom, i filtrirana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (300 mg, sirovo).

Primer 147

N-(2-(3-(1-aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0471]

[0472] Rastvor terc-butil 5-((2-(3-(1-aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (300 mg, sirov) u HCl/MeOH (20 mL) mešan je na 40°C tokom 6 h. Posle reakcije, rastvor je uparen, zatim je dodata voda, podešen je pH na 9 sa zasićenim Na2CO3, filtriran da bi se dobio sirovi produkt, koji je prečišćen pomoću preparativne HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (100 mg) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.03 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.35 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 8.18 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.55-7.40 (m, 4H), 6.67 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.12-4.07 (m, 1H), 2.08 (b, 2H), 1.31 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/e 331 (M+H)<+>.

Primer 148

terc-butil 5-((2-(4-acetilfenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0473]

1

[0474] Smeša terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (1.5 g, sirov), (4-acetilfenil)boronske kiseline (1.12 g, 6.8 mmol), Na2CO3(721 mg, 6.8 mmol), (Boc)2O (1.48 g, 6.8 mmol), Pd(PPh3)Cl2(239 mg, 0.34 mmol) u EtOH:H2O (16.5 mL,10:1) zagrevana je pod mikrotalasnim zračenjem tokom 20 minuta na 110°C. Posle reakcije, smeša je uparena, dodati su EA i voda, odvojen je organski sloj, smeša je isprana sa zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, i koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.6 g, sirovo).

Primer 149

terc-butil 5-((2-(4-(1-aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat [0475]

[0476] U mešani rastvor terc-butil 5-((2-(4-acetilfenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (2.6 g, 6.1 mmol), AcONH4(4.7 g, 61 mmol) u MeOH (60 mL) dodat je NaBH3CN (461 mg, 7.32 mmol), smeša je mešana 10 h na refluksu. Posle reakcije, rastvarač je uparen, zatim je dodata voda, smeša je filtrirana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.1 g, sirovo).

Primer 150

N-(2-(4-(1-aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0477]

1

[0478] Rastvor terc-butil 5-((2-(4-(1-aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (2.1 g, sirov) u HCl/MeOH (60 mL) mešan je na 40 °C tokom 6 h. Posle reakcije, rastvarač je uparen, zatim je dodata voda, pH je podešen na 9 sa zasićenim Na2CO3, rastvor je filtriran da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prečišćen sa pre-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (113.5 mg) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.02 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.34-8.27 (m, 4H), 8.20 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.56 (s, 2H), 7.49 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.05-4.03 (m, 1H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 3H); m/e 331 (M+H)<+>.

Primer 151

2-(3-(2,2-dietoksietoksi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan

[0479]

[0480] U smešu jedinjenja 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenola (550 mg, 2.5 mmol), 2-bromo-1,1-dietoksietana (985 mg,5 mmol), Cs2CO3(2.43 g, 7.5 mmol) u DMF (25 mL) je dodat KI (106 mg, 1 mmol), zatim je smeša mešana preko noći na 110 °C. Posle reakcije, dodata je voda, zatim je ekstrahovana sa EA, isprana sa zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, koncentrovana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (360 mg, sirovo) kao svetlo žuto ulje.

Primer 152

terc-butil 5-((2-(3-(2,2-dietoksietoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0481]

1

[0482] Smeša 2-(3-(2,2-dietoksietoksi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (100 mg, sirov), terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (70 mg, 0.15 mmol), Na2CO3(65 mg, 0.6 mmol), (Boc)2O (130m g, 0.6 mmol), Pd(PPh3)Cl2(20 mg, 0.03 mmol) u EtOH:H2O (4.4 mL,10:1) je zagrevana pod mikrotalasnim zračenjem tokom 20 minuta na 110 °C. Posle reakcije, smeša je uparena, dodati su EA i voda, odvojen je organski sloj, isprana sa zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, koncentrovana i prečišćena sa preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (30 mg).

Primer 153

2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)acetaldehid

[0483]

[0484] U rastvor terc-butil 5-((2-(3-(2,2-dietoksietoksi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (510 mg, 0.98 mmol) u THF (20 mL) u kapima je dodato 3M HCl (10 mL), zatim je smeša mešana na refluksu tokom 7 h. Posle reakcije, rastvor je isparen, zatim je dodata voda, pH je podešen na 9 sa zasićenim Na2CO3, rastvor je filtriran da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (420 mg, sirovo).

Primer 154

N-(2-(3-(2-(izopropilamino)etoksi)fenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0485]

1

[0486] U mešani rastvor 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoksi)acetaldehida (420 mg, sirov), izopropilamina (245 mg, 4.16 mmol) u MeOH (15 mL) dodat je NaBH3CN (131 mg, 2.08 mmol), smeša je mešana 7 h na refluksu. Posle reakcije, je isparena i prečišćena sa preparativnom TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (90 mg) kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.02 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 8.34 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.94 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 7.57-7.38 (m, 3H), 7.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.106-4.079 (m, 1H), 2.91 (s, 2H), 2.80-2.77 (m, 1H), 1.61 (b, 1H), 1.00 (d, J = 6.4 Hz, 6H); m/e 389 (M+H)<+>.

Primer 155

N-(2,6-dihloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0487]

[0488] U mešani rastvor 2,4,6-trihloropirimidina (5.5 g, 30 mmol) u EtOH (100 mL) dodati su TEA (1.5 g, 45 mmol) i jedinjenje 1H-indazol-5-amin (3.99 g, 30 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je refluksovana preko noći. Posle uklanjanja rastvarača, ostatak je ponovo kristalizovan u MeOH da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca (3.4 g, prinos 40%).

Primer 156

terc-butil 4-(6-((1H-indazot-5-il)amino)-2-hloropirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat [0489]

[0490] U mešani rastvor N-(2,6-dihloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (1 g, 3.5 mmol) u EtOH (10 mL) dodat je TEA (1.4 g, 7 mmol), i jedinjenje terc-butil piperazin-1-karboksilat (0.67 g, 3.5 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je refluksovana preko noći. Posle reakcije, dodata je voda, odvojen je organski sloj i zasićeni slani rastvor, osušena je preko Na2SO4i

14

koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.2 g) koje je korišćeno direktno za sledeći korak reakcije bez daljeg prečišćavanja.

Primer 157

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(6-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0491]

[0492] U mešani rastvor terc-butil 4-(6-((1H-indazol-5-il)amino)-2-hloropirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat a(1.2 g, sirov) u DCM (10 mL) dodat je (Boc)2O (3 g, 14 mmol), TEA (1.4 g, 14 mmol) i DMAP (0.5 g, 3.5 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Posle reakcije, dodata je voda, odvojen organski sloj, ispran monohidratom limunske kiseline i zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (0.6 g).

Primer 158

terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(6-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-2-(3-metoksifenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilat

[0493]

[0494] Smeša terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(6-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-2-hloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (600 mg, 0.95 mmol), (3-metoksifenil)boronske kiseline (160 mg, 1.05 mmol), Na2CO3(201 mg, 1.9 mmol), Pd(dppf)Cl2(70 mg, 0.095 mmol) u dioksanu:H2O (6.6 mL,10:1) je zagrevana pod mikrotalasnim zračenjem tokom 20 min na 140 °C. Posle reakcije, je uparena, dodati su EA i voda, organski sloj je odvojen, isprana sa zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4, koncentrovana i prečišćena sa silika gelom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (250 mg, prinos 37.5%).

Primer 159

N-(2-(3-metoksifenil)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0495]

[0496] U rastvor terc-butil 5-((terc-butoksikarbonil)(6-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-2-(3-metoksifenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-karboksilata (250 mg) u DCM (5 mL) dodata je TFA (1 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. uparena je, zatim je dodata voda, pH je podešen na 9 sa zasićenim Na2CO3, filtrirana da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (115 mg, prinos 80%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.98 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.09 (s, 1H),8.00 (s, 1H), 7.53-7.37 (m, 6H), 7.03 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.73 (b, 4H), 3.39 (s, 1H), 2.71 (b, 4H); m/e 402 (M+H)<+>.

Primer 160

N-(2-hloro-6-(2-(dimetilamino)etoksi)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin

[0497]

[0498] U mešani rastvor N-(2,6-dihloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (2 g, 7 mmol) u EtOH (20 mL) dodat je TEA (2.8 g, 7 mmol), i 2-(dimetilamino)etanol (0.64 g, 7 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je refluksovana preko noći. Posle reakcije, dodata je voda, organski sloj je odvojen i ispran sa zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1.5 g). Ostatak je korišćen u sledećem koraku.

Primer 161

N-(6-(2-(dimetilamino)etoksi)-2-(3-metoksifenil)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amin [0499]

[0500] Smeša N-(2-hloro-6-(2-(dimetilamino)etoksi)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (1.5 g, 4.5 mmol), (3-metoksifenil)boronske kiseline (661 mg, 5 mmol), Na2CO3(954 mg, 9 mmol), Pd(dppf)Cl2(300 mg, 0.45 mmol) u dioksanu:H2O (22 mL,10:1) je zagrevana pod mikrotalasnim zračenjem tokom 30 min na 140 °C. Posle reakcije, smeša je uparena, dodata je EA i voda, odvojen je organski sloj, ispran zasićenim fiziološkim rastvorom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan i prečišćen sa preparativnom HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (125 mg).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.00 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.56-7.41 (m, 5H), 7.08-6.86 (m, 2H), 4.46-4.43 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 2.66-2.63 (m, 2H), 2.22 (s, 6H); m/e 405 (M+H)<+>.

Primer 162

[0501]

[0502] Sledeća jedinjenja su sintetizovana korišćenjem gore opisanih procedura:

14

Primer 181

Selektivnost jedinjenja ROCK1 i ROCK2

[0503] Krive odgovora na dozu za inhibiciju Rho-kinaze su izvedene iz Millipore imunobaziranog testa na ploči sa 96 bunarića (Millipore kataloški broj CSA001). Prečišćeni aktivni ROCK1 i ROCK2 su dobijeni od Invitrogena (kataloški brojevi ROCKI, PV3691 i ROCK2, PV3759). Komponente kompleta obuhvataju ploče za analizu, koje su prethodno obložene rekombinantnim MIPT1, koji sadrži Thr696 koji se specifično fosforilira. Inhibiciona aktivnost jedinjenja se meri u skladu sa protokolom proizvođača. Ukratko, padajuće koncentracije testiranih jedinjenja ili poznatog ROCK inhibitora Y-27963, od 50 uM do 0.003 uM dodate su u reakcioni pufer koji sadrži 5 mM MgCl2, i 10 mjedinica ROCK1 ili ROCK2 u testni pufer za razblaživanje. Ova smeša je prekrivena u ploču sa 96 bunarića i reakcija je pokrenuta

14

dodatkom 2.5 uM ATP. Test se nastavlja na 30°C tokom 30 minuta uz lagano mućkanje na 120 o/min. Test se završava ispiranjem ploče 3 puta sa Tris-puferisanim fiziološkim rastvorom i tween puferom za ispiranje. Anti-fosfo-MYPT1 (Thr696) antitelo je dodato u svaki bunarić da bi se detektovao fosforilovani supstrat i inkubirano 1 sat na sobnoj temperaturi posle čega je dodat HRP konjugovani anti-zečji sekundarni IgG 1 sat na sobnoj temperaturi. Posle ispiranja, test se razvija korišćenjem supstratnog reagensa i očitava se apsorpcija na 450 nm na uređaju Tecan Infinite M1000, odražavajući relativnu preostalu aktivnost fosforilacije ROCK.

[0504] Podaci koji pokazuju inhibiciju ROCK1 i ROCK2, i selektivnost određenih jedinjenja za inhibiciju ROCK2, predstavljeni su u Tabeli 1.

Krive odgovora na dozu za inhibiciju ROCK1 naspram ROCK2 prikazane su na slici 5.

Primer 182

Selektivnost jedinjenja ROCK1 i ROCK2

[0505] Krive odgovora na dozu za inhibiciju Rho-kinaze su dobijene iz Invitrogen Z'-LYTE<™>testnog kompleta za kinazu (Invitrogen kataloški broj PV3793). Prečišćeni aktivni ROCK1 i ROCK2 su dobijeni od Invitrogena (kataloški brojevi ROCK1, PV3691 i ROCK2, PV3759). Komponente kompleta obuhvataju peptid obeležen kumarinom i fluoresceinom na bazi lakog lanca miozina 2 (KKRPQRRYSNVF), vlasnički reagens za razvoj koji sadrži proteazu i vlasnički Stop pufer koji se koristi da se prekine razvojna reakcija. Inhibiciona aktivnost jedinjenja se meri u skladu sa protokolom proizvođača. Ukratko, padajuće koncentracije test jedinjenja ili poznatog ROCK inhibitora Y-27963, od 10 uM do 2.56 × 10<-5>uM dodaju se u

14

reakcioni pufer koji sadrži 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 5 mM EGTA, i 0.05% Brij-35 i ROCK1 na 0.18 ug/mL ili ROCK2 na 0.8 ug/mL u testnom puferu za razblaživanje. Ova smeša je premazana na belu ploču sa pola površine sa 96 bunarića i reakcija je pokrenuta dodatkom 5 uM ATP za ROCK1 ili 12 uM ATP za ROCK2. Test se nastavlja na sobnoj temperaturi 1 sat, posle čega sledi dodavanje razvojnog reagensa i dalja inkubacija tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Zatim se dodaje STOP reagens i reakcija i odmah se očitavaju signali emisije kumarina i fluoresceina na čitaču fluorescentnih ploča Tecan Infinite M1000 (ekscitacija: 400 nm; emisija 445 i 520 nm, respektivno). Upoređivanjem odnosa emisije testnih uzoraka sa kontrolnim uzorcima, izračunavaju se procentualne vrednosti fosforilacije i određuje se koncentracija inhibitora koji proizvodi 1/2 inhibicije aktivnosti kinaze (IC50) korišćenjem softvera Prism. Tabela 2 daje IC50koncentracije za jedinjenja iz gornjih primera. Nekoliko jedinjenja je takođe pokazalo aktivnost u preliminarnom testu koji je merio inhibiciju fosforilacije lakog lanca miozina (pMLC). Za jedinjenja označena sa ND, aktivnost nije mogla da se odredi u primenjenim uslovima iz testa.

14

Primer 183

ROCK2 selektivni inhibitor, KD025, inhibira sekreciju i proliferaciju IL-17/IL-21 u

humanim CD4<+>T ćelijama in vitro.

[0506] Aktivacija T ćelija u mirovanju, koja rezultira sekrecijom i proliferacijom citokina, uključuje dva različita signala iz ćelija koje predstavljaju antigen (APC), oponašane kostimulacijom kompleksa T ćelijskog receptora (TCR)/CD3 i CD28 receptora. Korišćenjem sveže prečišćenih CD4<+>humanih T ćelija i stimulativnih antitela protiv CD3 i CD28 za stimulisanje sekrecije IL-17 i IL-21 kao odgovora na aktivaciju TCR, nađeno je da tretman sa selektivnim inhibitorom ROCK2, KD025, značajno inhibira sekreciju IL-17 i IL-21 na način

14

koji zavisi od doze. Pod istim uslovima, inhibicija sekrecije IFN-γ bila je manje snažna i značajna samo pri visokoj dozi (10 µM) inhibitora (Slika. 7A). Slično, bilo kakva inhibicija sekrecije IL-2 primećena je samo pri najvišoj koncentraciji (10 µM) KD025. U skladu sa inhibitornim efektom na sekreciju citokina, tretman T ćelija sa KD025 smanjio je njihovu sposobnost proliferacije kao odgovor na TCR stimulaciju in vitro (slika 7B).

Primer 184

ROCK2 siRNK, ali ne ROCK1 siRNK inhibira sekreciju IL-17 i IL-21

[0507] Da bismo potvrdili ulogu ROCK2 u regulaciji sekrecije IL-17 i IL-21 u ljudskim T ćelijama, posebno smo utišali ROCK1 i ROCK2 ekspresiju interferencijom RNK. Specifična ROCK1 i ROCK2 mala interferirajuća RNK (siRNK) smanjila je nivoe ekspresije proteina za 72% i 84% respektivno. Utišavanje ROCK2, ali ne i ROCK1, značajno je smanjilo IL-17 i IL-21, sa minimalnim efektom na sekreciju IFN-γ u humanim T ćelijama (slika 8).

Primer 185

KD025 inhibira STAT3 fosforilaciju

[0508] STAT3 igra kritičnu ulogu u diferencijaciji Th17 putem regulacije ekspresije RORγt i direktnog vezivanja za IL-17 i IL-21 promotere. Pored toga, nedavne studije su pokazale da RhoA zavisna STAT3 stimulacija zahteva ROCK aktivnost i dovodi do aktivacije STAT3 fosforilacije na amino kiselini Y705. Koristeći dva različita eksperimentalna dizajna, pokazalo se da KD025 značajno smanjuje fosforilaciju STAT3. U jednom eksperimentu, T ćelije su prethodno tretirane sa KD025, a zatim stimulisane sa anti-CD3/CD28 antitelima. Pre Prethodni tretman sa KD025 je rezultirao smanjenom fosforilacijom STAT3 (slika 9A). U drugom eksperimentu, ćelije su kultivisane pod Th17-iskrivljenim uslovima tokom 5 dana, a zatim tretirane selektivnim inhibitorom ROCK2 tokom 3 sata. STAT3 fosforilacija je smanjena tretmanom sa ROCK2 inhibitorom (slika 9B). U odvojenom eksperimentu, potvrđena je smanjena fosforilacija STAT3, kao i IFR4 i RORγT (slika 9C).

Primer 186

KD025 smanjuje sekreciju IL-17, IL-21 i IFN-γ i smanjuje povećanu učestalost ćelija koje eksprimiraju IFN-γ i IL-17 u CD4<+>T ćelijama pacijenata sa RA

[0509] Reumatoidni artritis (RA) je hronična autoimuna inflamatorna bolest koja dovodi do uništenja arhitekture zgloba. Patogeni događaji koji su uključeni u razvoj RA nisu u potpunosti shvaćeni, iako je ključna uloga proinflamatornih citokina, kao što su TNF-α, IL-1β, IFN-β, IL-

14

6 i novijeg IL-17 u indukciji i održavanju patogeneze RA dobro dokumentovana. Štaviše, frekvencija Th17 ćelija u perifernoj krvi pacijenata sa RA značajno je povećana u poređenju sa zdravim kontrolama i korelira sa skorom aktivnosti bolesti (DAS).

[0510] CD4<+>T ćelije su prečišćene iz periferne krvi pacijenata sa RA u različitim stadijumima bolesti ili od zdravih kontrola i stimulisane korišćenjem anti-CD3/CD28 antitela u prisustvu KD025 ex vivo. U CD4<+>T ćelijama, selektivni inhibitor ROCK2 je značajno smanjio sekreciju IL-17, IL-21 i IFN-γ kao odgovor na TCR stimulaciju na STAT3 zavisan način (slika 10A). Za razliku od zdravih kontrola, stepen inhibicije sekrecije IFN-γ bio je uporediv sa nivoima inhibicije IL-17 i IL-21. Među pacijentima sa RA, inhibicija proizvodnje IFN-γ bila je u korelaciji sa skorom aktivnosti bolesti (DAS). (Slika.10B). Kultura CD4<+>T ćelija od 2 različita pacijenta sa RA u prisustvu KD025 značajno je smanjila frekvencije ćelija koje proizvode i IL-17 i IFN-γ, što je pokazano intracelularnim bojenjem (Slika 10C).

Primer 187

KD025 reguliše prema gore STAT-5 fosforilaciju

[0511] Prisustvo citokina IL-6, TGF-β, IL-1β, IL-23 i stimulacija antigenom CD4<+>T ćelija dovodi do indukcije sekrecije IL-17 i IL-21 i razvoja Th17 efektorske podgrupe. Istovremeno, inhibirani su razvoj i funkcija Tregs. Da bi se utvrdio efekat inhibicije ROCK2 na Tregs, sveže prečišćene humane CD4<+>T ćelije su aktivirane korišćenjem stimulativnih antitela protiv CD3/CD28 (5 µg/ml), TGF-β (5 ng/ml) i IL-1β (50 ng/ml) tokom 2 dana u prisustvu koncentracija od 0 µM, 0.5 µM, 1 µM, i 2.5 µM selektivnog inhibitora ROCK2 KD025. Western Blot analiza pokazuje da tretman sa KD025 značajno povećava fosforilaciju STAT5 na mestu Y694 na način koji zavisi od doze. (Slika. 11). Dakle, inhibicija ROCK2 reguliše fosforilaciju STAT3 dok je STAT5 fosforilacija povećana u humanim CD4<+>T ćelijama koje se aktiviraju pod Th17-iskrivljenim uslovima.

Primer 188

KD025 povećava udeo Foxp3<+>ćelija među CD4<+>T ćelijama

[0512] Foxp3 je faktor transkripcije specifičan za lozu za Tregs i ključan je za razvoj i inhibitornu funkciju ovih ćelija. STAT5 signalizacija pozitivno reguliše indukciju i stabilizaciju ekspresije Foxp3 u T ćelijama in vitro i in vivo. Tretman humanih CD4<+>T ćelija selektivnim ROCK2 inhibitorom KD025 značajno je povećao procenat Foxp3<+>ćelija posle 5 dana Th17 iskrivljene aktivacije in vitro. (Fig.12).

1

Primer 189

KD025 reguliše prema gore Treg inhibiciju IL-17 sekrecije u CD4<+>CD25<->T ćelijama [0513] Sveže prečišćeni CD4<+>CD25<+>humani Treg-ovi su tretirani sa KD025 tokom 3 sata, isprani, pomešani sa CD4<+>CD25<->efektorskim T ćelijama u odnosu 1:4 i 1:9 (Treg:Teff) i aktivirani korišćenjem stimulativnih antitela protiv CD3 i CD28 tokom 2 dana. KD025 posredovana ROCK2 inhibicija značajno je povećala sposobnost Tregs-ova da potisne sekreciju IL-17 u CD4<+>CD25<->efektorskim T ćelijama (slika.13).

Primer 190

KD025 inhibira TGF-β-indukovanu STAT3 i MLC fosforilaciju na SMAD2/3 nezavisan način

[0514] Selektivni inhibitor ROCK2 KD025 reguliše prema dole TGF-β-indukovanu STAT3 i MLC fosforilaciju na način zavisan od doze, ali fosforilacija SMAD2/3 ostaje netaknuta. (slika 14). TGF-β je uključen u razvoj i funkciju i Th17 i Treg podgrupa T ćelija. Međutim, kada su Treg-ovi regulisani u Smad2/3-zavisnom signalnom mehanizmu, TGF-β reguliše Th17 ćelije na Smad2/3 nezavisan način koji se smatra ne-kanonskom TGF-β-indukovanom signalizacijom. Štaviše, pokazano je da su ROCK proteini uključeni u Smad nezavisnu TGF-β signalizaciju u ćelijama kancera.

Primer 191

Tretman pacijenata sa KD025 inhibira ex vivo stimulaciju proizvodnje IL-17 i IL-21 u izolovanim PBMC.

[0515] Osam pacijenata je primalo 120 mg/dan KD025 ili placebo na dane 1 i 8-14 ispitivanja. Mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) su sakupljene na početku i na kraju ispitivanja i stimulisane postavljanjem na imobilizovana anti-CD3/CD28 antitela tokom 72 sata, a izmereni su nivoi IL-17, IL-21 i IFN-γ . Slika 15 pokazuje da visoki nivoi IL-17 i IL-21 mogu biti indukovani u PBMC izolovanim prvog dana od šest subjekata. Od tih šest subjekata, pet je primilo ROCK2-selektivni inhibitor KD025, dok je jedan primio placebo. Indukcija sekrecije IL-17 je značajno inhibirana u PBMC izolovanim od četiri od pet pacijenata lečenih sa KD025 (Slika 15B), a indukcija sekrecije IL-21 je značajno inhibirana u PBMC kod svih pet pacijenata lečenih sa KD025 (Fig.15A). Nije primećen efekat na IFN-γ.

1 1

[0516] Inhibicija indukcije citokina je zatim određena kod dvadeset dva pacijenta koji su primali 40 mg/dan, 120 mg/dan, 240 mg/dan ili 320 mg/dan KD025. Slika 15D-F prikazuje odnos doza-odgovor za sekreciju IL-21, IL-17, i IFN-γ, respektivno.

Primer 192

Anti-VEGFR2 antitela

[0517] Identifikovana su dva neutralizujuća antitela, Mab 101 i Mab 102, koja se vezuju za humani VEGFR2, blokiraju vezivanje liganda VEGFA za hVEGFR2 i inhibiraju fosforilaciju VEGFR2 i nizvodnu transdukciju signala stimulisanu sa VEGFA. Tabela 3 i slika 16 ukazuju na sekvence aminokiselina CDR-ova i varijabilne domene antitela. Kds za Mab 101 i Mab 102 su oko 6.6 mM i 1.7 nM, respektivno.

[0518] Teški lanac Mab 101 je rekonstruisan sa κ genima lakog lanca (κ-biblioteka) i λ genima lakog lanca (λ-biblioteka).20 jedinstvenih varijanti λ lakog lanca je pronađeno pomeranjem λbiblioteke protiv i humanog VEGFR2 i mišjeg VEGFR2. Pronađene su 22 jedinstvene varijante lakog lanca κ pomeranjem κ-biblioteke protiv humanog VEGFR2 i mišjeg VEGFR2. Tabela 4 pokazuje sekvence aminokiselina CDR-ova i varijabilne domene lakih lanaca. Kds od Mab-ova 105, 106, i 107 su poboljšani oko 10 puta (0.24 nM, 0.22 nM, i 0.12 nM, respektivno).

1 2

1

14

1

11

12

1

14

1

11

12

1

14

1

11

12

1

14

1

11

12

1

14

1

2

21

22

2

24

2

21

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje koje inhibira ROCK 2 za upotrebu u lečenju autoimunog poremećaja kod subjekta, pri čemu je autoimuni poremećaj psorijaza, atopijski dermatitis, ekcem ili bolest kalema protiv domaćina (GVHD), te pri čemu je jedinjenje koje inhibira ROCK2 jedinjenje sa formulom (XXXII):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: R<1>je izabran iz grupe koju čine -O-(CH2)y-CO2R<12>, -O-(CH2)y-C(=O)NR<13>R<14>, -O-(CH2)y-heteroaril, -O-(CH2)y-cikloalkil, -O-C(=O)-(CH2)y-NR<13>R<14>, -O-(CH2)z-NR<13>R<14>, -NH-C(=O)-(CH2)y-NR<13>R<14>, -NH-C(=O)-X-R<15>, -NH-(CH2)y-NR<13>R<14>; R<12>je izabran iz grupe koju čine C1-C6alkil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan na jednom ili više atoma ugljenika sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno izabrana od halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; R<13>i R<14>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<16>R<17>, aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; ili R<13>i R<14>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, C3-C7cikloalkil, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; 22 X je izabran između kovalentne veze, O, NH, i C1-C6alkila; R<15>je izabran iz grupe koju čine heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil, ili R<15>je izabran od -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -CO2R<18>, -O-(CH2)x-CO2R<18>, i -C(=O)NR<16>R<17>; R<16>i R<17>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; ili R<16>i R<17>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; R<18>je izabran iz grupe koju čine H, aril, aralkil, heteroaril, C1-C6alkil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoroalkil; x je izabran od 0 do 6; y je izabran od 0 do 6; z je izabran od 2 to 6; svaki R<2>je nezavisno izabran iz grupe koju čine niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, i perfluoro niži alkil; svaki R<3>je nezavisno izabran iz grupe koju čine niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, i perfluoro niži alkil; n je izabran od 0 do 4; i m je izabran od 0 do 3. 2. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, naznačeno time što jedinjenje koje inhibira ROCK2 je jedinjenje sa formulom
3. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, naznačeno time što jedinjenje koje inhibira ROCK2 je jedinjenje sa formulom XXXIV:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: R<13>i R<14>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<16>R<17>, aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; ili R<13>i R<14>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, C3-C7cikloalkil, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; R<16>i R<17>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; ili R<16>i R<17>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; svaki R<2>je nezavisno izabran iz grupe koju čine niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, i perfluoro niži alkil; svaki R<3>je nezavisno izabran iz grupe koju čine niži alkil, CN, halo, hidroksi, niži alkoksi, amino, i perfluoro niži alkil; n je izabran od 0 do 4; i m je izabran od 0 do 3.
4. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, naznačeno time što jedinjenje koje inhibira ROCK2 je jedinjenje sa formulom XXXIVa:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: R<13>i R<14>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), -(C1-C6alkil)-NR<16>R<17>, -(C1-C6alkil)-C(=O)NR<16>R<17>, aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C3-C7cikloalkil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; ili R<13>i R<14>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; R<16>i R<17>su nezavisno izabrani iz grupe koju čine H, C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil, -(C1-C6alkil)-O-(C1-C6alkil), aril, aralkil, heteroaril, C3-C7cikloalkil, tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji sadrži do 3 heteroatoma, od kojih svaki može 22 biti opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koja čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil; ili R<16>i R<17>mogu se uzeti zajedno da grade tro- do dvanaestočlani heterociklični prsten koji ima do 3 heteroatoma koji je opciono supstituisan sa od 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz niza koji čine halo, C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C1-C6alkoksi, okso, hidroksi, amino, cijano i C1-C3perfluoro alkil.