RS63563B1 - Farmaceutski sastav za anemiju - Google Patents

Description

Oblast pronalaska

Ovaj pronalazak odnosi se na farmaceutski sastav/formulaciju za upotrebu u lečenju anemije usled nedostatka gvožđa (IDA), anemije inflamacije (AOI) i neurodegenerativnih poremećaja. Preciznije rečeno, pronalazak se odnosi na farmaceutski sastav/formulaciju koja sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina (LF) i jednog ili više prirodnih gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Takođe, pronalazak omogućava različite formulacije i metode za njegovu pripremu.

Osnova pronalaska

Anemija se obično odnosi na stanje kod kojeg je izražena smanjena ukupna količina eritrocita ili hemoglobina u krvi. Anemija uzrokovana nedostatkom gvožđa poznata je kao stanje koje se naziva „anemija usled nedostatka gvožđa” (engl. Iron-deficiency anaemia – IDA). IDA se odnosi na stanje kada telo nema dovoljno gvožđa da proizvede adekvatnu količinu hemoglobina. U takvim uslovima, krv nije u stanju da prenosi dovoljno kiseonika do tkiva u celom telu i cirkulaciji. Ova anemija obično je uzrokovana gubitkom krvi, nedovoljnim unosom hrane i/ili lošom apsorpcijom gvožđa iz samih namirnica. Slučajevi ozbiljnog gubitka krvi mogu da obuhvate obilno krvarenje tokom menstruacije i porođaja, miome materice, čireve na želucu, kancer debelog creva, krvarenje urinarnog trakta, itd. Osim ovih stanja, do slabe apsorpcije gvožđa može doći i usled stanja kao što je Kronova bolest ili gastrički bajpas.

Veoma je uobičajeno da se IDA pojavi tokom trudnoće ili usled nedostatka apsorpcije gvožđa ili hormonskih promena. Razlog za nedostatak gvožđa može da se pripiše telesnim promenama do kojih dolazi tokom trudnoće kako bi se telo pripremilo na brigu o novorođenčetu. Takođe je neophodno znati da žene proizvode više krvi kada zatrudne. Dok prosečna žena u telu ima oko pet litara krvi kada nije trudna, sa približavanjem termina porođaja biće joj potrebno sedam do osam litara. Shodno tome, za stvaranje dodatnih krvnih zrnaca potrebno je dosta gvožđa, vitamina B12 i folata da bi se napravio sav potreban dodatni hemoglobin.

Nažalost, gvožđe se teško apsorbuje i teško formira hemoglobin. Zbog toga mnoge žene postaju anemične tokom trudnoće, pa su im potrebni suplementi gvožđa.

U jednom istraživanju je otkriveno da je IDA uticala na oko 1,48 milijardi ljudi 2015. godine. Procenjuje se da nedostatak gvožđa u ishrani uzrokuje približno polovinu svih slučajeva anemije u svetu. Najčešće su pogođene žene i mala deca. Anemija usled nedostatka gvožđa 2015. godine uslovila je oko 54.000 smrtnih slučajeva, što predstavlja pad u odnosu na 213.000 smrtnih slučajeva 1990. godine. Veća je verovatnoća da će odojčad i deca gojaznih žena razviti hronična zdravstvena stanja, kao što su astma i dijabetes. Pokazalo se da je hepcidin, regulator homeostaze gvožđa, prekomerno izražen kod gojaznosti i da korelira sa niskim statusom gvožđa kod gojaznih osoba. Gvožđe do fetusa stiže aktivnim transportom u placenti, a poznato je da je hepcidin jedan od regulatora ovog procesa. Osim toga, gojaznost dovodi do hronične prekomerne ekspresije hepcidina kao posledičnog efekta hroničnog zapaljenja niskog stepena.

Konkretno, gojaznost dovodi do povećanja nivoa interleukina (IL)-6 i IL-1, koji povećavaju nivo hepcidina. Slično tome, gojaznost majke povezana je sa smanjenim prenosom gvožđa do fetusa. To je uslovljeno uticajima hroničnog proinflamatornog okruženja i povećanog nivoa hepcidina.

Tokom trudnoće, hipoferemija i IDA predstavljaju faktor rizika po zdravlje majke i odojčeta. I u industrijalizovanim zemljama i u zemljama u razvoju, hipoferemija i IDA tokom trudnoće su veoma rasprostranjene usled povećane potrebe za gvožđem, povećane zapremine krvi i razvoja fetoplacentarne jedinice (videti, npr., Umbreit, Am. J. Hematol. 78:225-31 (2005); School, Am. J. Clin. Nutr.81: 1218-22 (2005)). Osim povećanog rizika za majku, anemija povezana sa trudnoćom dovodi do prevremenog porođaja, usporavanja rasta fetusa, niske porođajne težine i inferiornog zdravlja novorođenčadi.

Procenjuje se da je 41,8% trudnica širom sveta anemično, a pretpostavlja se da je najmanje polovina ovakve anemije posledica nedostatka gvožđa.

Shodno tome, postoji potreba za bezbednim i efikasnim terapijama za trudnice za borbu protiv nedostatka gvožđa, kao i za prevenciju ili lečenje hipoferemije i IDA. To je takođe neophodno da bi se smanjila stopa smrtnosti izazvana takvim nedostacima.

Uopšteno gledano, dnevna potreba ljudi za gvožđem iznosi -25 mg, od čega se skoro 80% koristi u procesu eritropoeze. Mali deo ove količine gvožđa obezbeđuje se apsorpcijom iz ishrane (~1–2 mg), dok se većina obezbeđuje recikliranjem gvožđa iz senescentnih eritrocita putem makrofaga u jetri, slezini i koštanoj srži. U skladu sa tim, cirkulišuća skupina gvožđa sadrži samo ~10% (~3 mg) dnevne potrebe za eritropoezom, zbog čega mora da se menja svaka 2– 3 sata. Recikliranje gvožđa prvenstveno se odvija pomoću retikulo-endotelnih makrofaga koji fagocitiraju senescentne eritrocite, a zatim izvoze gvožđe putem feroportina (FPN) nazad u cirkulišuću skupinu gvožđa vezanog za Tf. Višak gvožđa takođe se skladišti u hepatocitima. Hepcidin reguliše sistemski balans gvožđa indukovanjem degradacije feroportina da bi se inhibirala apsorpcija gvožđa iz duodenuma i oslobodilo gvožđe iz deponija makrofaga i hepatocita.

Prosečne potrebe za gvožđem tokom trudnoće su sledeće: bazalno gvožđe (280 mg), proširenje mase eritrocita (570 mg), prenos do fetusa (200– 350 mg), za placentu (50–150 mg), gubitak krvi pri porođaju (100–250 mg). Nakon oduzimanja gvožđa po osnovu amenoreje (240–480 mg), tokom trudnoće je potrebno dodatnih 500–600 mg ili 4–6 mg/dan apsorbovanog gvožđa. Budući da je apsorpcija manja od 10% (3–4% kod ishrane sa niskom bioraspoloživošću), najmanje 40–60 mg gvožđa treba da bude dostupno u ishrani za minimalnu apsorpciju od 4–6 mg. Imajući u vidu da ishrana sama po sebi ne može da ispuni ove zahteve, neophodno je boriti se protiv ove potrebe dodatnim suplementima gvožđa.

Homeostaza gvožđa je usko regulisana apsorpcijom, skladištenjem i prenosom gvožđa. Apsorpcija gvožđa odvija se u proksimalnom duodenumu, a u apikalnim mestima enterocita obuhvata redukciju jona gvožđa pomoću ferireduktaze (duodenalni citohrom B, DCYTB), apikalni unos i transćelijski promet pomoću dvovalentnog metalnog transportera 1 (DMT1), skladištenje u feritin i, na kraju, bazolateralni efluks pomoću transportera gvožđa feroportina. Feroportin, jedini poznati ćelijski izvoznik gvožđa iz tkiva u krv, nalazi se u svim tipovima ćelija koje učestvuju u izvozu gvožđa, uključujući enterocite, hepatocite, ćelije placente i makrofage koji recikliraju 20 mg gvožđa dnevno za eritropoezu iz liziranih eritrocita.

Još jedna važna komponenta sistemske homeostaze gvožđa jeste hepcidin, cirkulišući peptidni hormon koji sintetišu hepatociti u uslovima punjenja gvožđa i luči se u plazmi i urinu. Hepcidin reguliše ulazak gvožđa u plazmu preko feroportina. Vezivanje hepcidina sa feroportinom izaziva formiranje kompleksa hepcidin-feroportin, što dovodi do fosforilacije, internalizacije i degradacije feroportina u lizozomima. Shodno tome, izvoz gvožđa je otežan, a citosolno skladištenje gvožđa u feritinu je poboljšano. Čini se da poremećaji homeostaze gvožđa nastaju usled deregulacije hepcidina i/ili feroportina. Dobro je poznato da opterećenje gvožđem i interleukinom-6 (IL-6) povećavaju transkripciju gena hepcidina u hepatocitima.

Pacijenti sa hroničnim infekcijama, kao što su hronični inflamatorni poremećaji i karcinomi, obično imaju „anemiju hronične bolesti/inflamacije” (engl. anaemia of chronic disease/Inflammation – ACD/AOI). Zapaljenje povećava proizvodnju interleukina-6, te povećanje hepcidina posledično blokira oslobađanje gvožđa iz makrofaga, kao i crevnu apsorpciju gvožđa, što dovodi do deregulacije gvožđa sa hipoferemijom i anemijom povezanom sa inflamatornom bolešću. Osim toga, gojaznost takođe može da se smatra hroničnim inflamatornim stanjem koje može da izazove hiposideremiju. Kod pacijenata sa hroničnom bolešću bubrega (HBB) koji imaju i anemiju, anemija se uglavnom javlja kao posledica nedostatka eritropoetina (EPO, koji indirektno utiče na homeostazu gvožđa). Budući da funkcija bubrega (tj. izlučivanje) ima važnu ulogu u klirensu hepcidina, istovremeno, disfunkcija bubrega dovodi do smanjenog klirensa hepcidina, pa posledično skladištenje hepcidina dovodi do razvoja hiposideremične anemije.

Nivo hepcidina takođe se povećava zajedno sa HBB, bez obzira na inflamatorno stanje. Hemohromatozu može da karakteriše niska proizvodnja hepcidina, što povećava crevnu apsorpciju gvožđa i oslobađanje gvožđa od makrofaga, što neizbežno dovodi do progresivnog skladištenja gvožđa u tkivima. Kod hroničnih bolesti, visoka proizvodnja hepcidina inhibira oslobađanje gvožđa iz makrofaga i crevnu apsorpciju gvožđa, što za posledicu izaziva pojavu anemičnog stanja.

Postojeće metode lečenja i nedostaci:

Oralni suplementi gvožđa komercijalno su dostupni ili u doznim oblicima sa brzim oslobađanjem i/ili u doznim oblicima sa kontrolisanim oslobađanjem.

Dozni oblici suplementa gvožđa sa brzim oslobađanjem obično sadrže „brzo rastvorljivu” so gvožđa koja je znatno rastvorljivija u vodi i gastrointestinalnim tečnostima od drugih soli i metalnih oblika gvožđa. Primena doznih oblika suplementa gvožđa sa brzim oslobađanjem može da izazove preterano visoke maksimalne koncentracije gvožđa u krvi (C), odnosno Cmax, u kratkom vremenskom periodu (T) između primene i postizanja Cmax, odnosno, Tmax.

Shodno tome, formulacije suplemenata gvožđa za brzo oslobađanje mogu da izazovu neprijatna, štetna ili čak fatalna neželjena dejstva. Takva neželjena dejstva mogu da obuhvate iritaciju stomaka, zatvor i trovanje gvožđem.

Osim toga, apsorpcija suplemenata gvožđa iz gastrointestinalnog trakta se smanjuje u prisustvu dvovalentnih mineralnih suplemenata bez gvožđa, kao što su magnezijum i kalcijum. Iako se na tržište plasira širok spektar jedinjenja gvožđa za lečenje nedostatka gvožđa, rezultati ovih proizvoda, kao i profilaksa takvih stanja nedostatka gvožđa, pokazuju da je nivo preuzimanja gvožđa korišćenjem ovih jedinjenja često prilično nizak, što zahteva primenu relativno visokih doza jedinjenja. Primena visoke doze slabo apsorbovanih kompleksa gvožđa može da izazove siderozu crevnog zida i niz neželjenih dejstava, kao što su mučnina, povraćanje, zatvor, dijareja, nelagodnost u stomaku, nedostatak daha, gubitak težine, glavobolja, vrtoglavica, anoreksija, umor, taman urin, gorušica, tamnjenje zuba, tamna stolica i gusta stolica neprijatnog mirisa.

Dozni oblici suplemenata gvožđa sa kontrolisanim oslobađanjem napravljeni su u pokušaju da se smanje neželjena dejstva poput navedenih, koja se obično povezuju sa poznatim terapijama suplemenata gvožđa. Dozni oblici suplementa gvožđa sa kontrolisanim oslobađanjem obično koriste so gvožđa (II) koja je inkapsulirana ili pomešana sa matriksom za modifikovanje brzine otpuštanja, solju gvožđa (III), karbonil gvožđem ili drugim metalnim gvožđem prirodno slabe rastvorljivosti, kristalnim oksidom gvožđa, solju gvožđa ili karbonil kompleksima gvožđa sa proteinom koji modifikuje brzinu oslobađanja, aminokiselinom, organskom kiselinom, prirodnim polimerom, anjonskim agensom za formiranje kompleksa ili sintetičkim polimerom. Suplementi gvožđa koji su napravljeni da obezbede „trajnu isporuku” gvožđa povezani su sa neprijatnim ukusima i mirisima, mučninom, iritacijom stomaka i stvaranjem gasova.

Parenteralno gvožđe potrebno je onim osobama koje ne tolerišu oralni unos gvožđa ili kojima je potrebna brza korekcija anemije (teška anemija u poslednjem mesecu trudnoće), kao i osobama kod kojih oralna terapija nije uspela. Parenteralno gvožđe može da se primenjuje intramuskularno (IM) ili intravenozno (IV). Glavni nedostaci IM administracije su bol, prebojenost kože, mijalgija, artralgija i injekcijski apsces. Intravensko gvožđe može da se primeni kao infuzija ukupne doze; međutim, potreban je krajnji oprez jer može doći do anafilakse. Gvožđe dekstran i preparati polimaltoze gvožđa mogu da se koriste i IM i IV putem. Dva novija IV preparata – gvožđe saharoza i gvožđe glukonat – povezani su sa smanjenim neželjenim dejstvima. Međutim, to je skupa alternativa i nije nužno da je favorizuju svi pacijenti.

Nekoliko referenci otkriva da se nivoi hepcidina povećavaju kao odgovor na terapiju gvožđem, bez obzira na primenu oralnog suplementa gvožđa za dugotrajnu terapiju. Ovaj povećan nivo hepcidina direktno je povezan sa smanjenom apsorpcijom gvožđa u narednim dnevnim dozama gvožđa ili u dozama gvožđa dva puta dnevno. Standardna terapija, tj. oralna terapija gvožđem i transfuzija krvi imaju značajne nedostatke. Oralni unos gvožđa često se odlikuje ograničenom apsorpcijom, slabom podnošljivošću, neusklađenošću i neželjenim dejstvima.

Čak će i intravenska (IV) terapija suplementacijom gvožđa povećati nivoe hepcidina, što može negativno da utiče na dugoročnu mobilizaciju gvožđa. IV gvožđe može da podstakne citotoksičnost i povredu tkiva; pogoršanje oksidativnog stresa, a time i endotelnu disfunkciju, kao i zapaljenje i progresiju HBB i kardiovaskularnih bolesti. Zbog toga je neophodno regulisati nivo hepcidina koji bi održavao homeostazu gvožđa koja se nikako ne može postići oralnom ili IV administracijom suplemenata gvožđa.

Imajući u vidu pomenute nedostatke i neželjena dejstva u vezi sa konvencionalnim formulacijama dodataka gvožđa, poželjno je razviti formulaciju sa prirodnim sastojcima koja ne samo da će smanjiti neželjene efekte izazvane suplementima gvožđa, već će i održavati homeostazu gvožđa regulacijom hepcidina i time obezbediti prirodno lečenje anemije usled nedostatka gvožđa (ADI) i anemiju inflamacije (AOI). Osim toga, takođe je poželjno imati sastav/formulaciju koja treba da bude isplativa i povoljna za pacijente svih starosnih grupa.

Laktoferin (LF), takođe poznat i kao laktotransferin (LTF), je multifunkcionalni protein iz porodice transferina. LF je globularni glikoprotein sa molekulskom masom od oko 80 kDa koji je široko zastupljen u različitim sekretornim tečnostima, kao što su mleko, pljuvačka, suze i nazalni sekret. Takođe je prisutan u mleku ljudi i drugih sisara, u krvnoj plazmi i neutrofilima i jedan je od glavnih proteina gotovo svih egzokrinih sekreta sisara. LF može da se prečisti iz mleka ili da se proizvede rekombinantno. Ljudski kolostrum („prvo mleko”) ima najveću koncentraciju (7 g/l); potom ljudsko mleko (1 g/l) i konačno kravlje mleko (150 mg/l). LF je jedan od transferinskih proteina koji prenose gvožđe u ćelije i kontrolišu nivo slobodnog gvožđa u krvi i spoljašnjim sekretima. LF pripada urođenom imunološkom sistemu i pored svoje glavne biološke funkcije, i to u vidu vezivanja i transporta jona gvožđa. Takođe je poznato da ima antibakterijske, antivirusne, antiparazitske, katalitičke, antikancerogene i antialergijske funkcije i svojstva.

Pokazano je da LF smanjuje nivoe IL-6 i nezavisno smanjuje ekspresiju gena hepcidina. Takođe je pokazano da njegova antibakterijska svojstva smanjuju prekomernu ekspresiju makrofaga, što dovodi do smanjenog zapaljenja i povećane ekspresije feroportina. Štaviše, u poređenju sa oralnim suplementima gvožđa, primena LF takođe pokazuje da ne postoje ili postoje minimalna neželjena dejstva, kao što su iritacija gastrointestinalnog trakta, mučnina, povraćanje, zatvor, taman urin, tamna stolica, itd.

Laktoferin je prisutan ili u stanju bez gvožđa (tj. apo-tip) ili u stanju zasićenja gvožđem (tj. holo-tip), u zavisnosti od toga da li vezuje gvožđe, što zauzvrat određuje biološka svojstva laktoferina. Laktoferin apo tipa je prisutan u normalnom ljudskom mleku. Goveđi laktoferin je goveđe mleko ekstrahovano iz oblika osnovnog proteina koji ima niz biološki aktivnih komponenti za razvoj proteinske vrednosti.

Osim toga, gvožđe ima suštinsku ulogu u održavanju različitih bioloških funkcija u svim živim organizmima. Gvožđe utiče na sintezu i signalizaciju neurotransmitera dopamina, noradrenalina, adrenalina i 5-hidroksitriptamina, koji učestvuju u emocijama, pažnji, nagrađivanju, kretanji i raznim drugim funkcijama. Nov pristup u upravljanju neurodegenerativnim poremećajima može da se postigne homeostazom gvožđa. Sadašnje terapije uglavnom služe kao simptomatska terapija, ne radeći na glavnom uzroku takve neurodegenerativne bolesti, a to je disregulacija homeostaze gvožđa. Smanjenje nivoa IL-6 i smanjenje ekspresije gena za hepcidin dva su važna aspekta koja su odgovorna za kretanje gvožđa u ćelije i iz njih. Zbog toga postoji potreba da se razviju formulacije za održavanje homeostaze gvožđa regulacijom hepcidina i time obezbedi prirodno lečenje za neurodegenerativni poremećaj.

Nukleotidi su mali molekuli sastavljeni od tri dela – azotne baze, šećera i jednog ili više fosfata. Nukleotidi imaju mnoge uloge u ćelijama. Nukleotidi su prekursori za nukleinske kiseline. ATP, nukleotid, primarna je energetska valuta ćelije. Nukleotidi se takođe koriste kao regulatorni molekuli. Gvanozin je purinski nukleozid koji sadrži gvanin vezan za ribofuranozu, ribozni prsten preko β-N-glikozidne veze. Gvanozin se nakon fosforilacije pretvara u gvanozin monofosfat (GMP), gvanozin difosfat (GDP) i gvanozin trifosfat (GTP). Ove funkcionalne komponente imaju važnu ulogu u različitim biohemijskim procesima za sintezu nukleinskih kiselina i proteina, fotosintezu, kontrakciju mišića i intracelularnu transdukciju signala. Među njima, GMP – koji je poznat i kao 5'-gvanidilna kiselina ili gvanilna kiselina (konjugovani bazni gvanilat) – je nukleotid koji se koristi kao monomer u RNK. To je estar fosforne kiseline sa nukleozidom gvanozinom.

Sastoji se od fosfatne grupe, pentoznog šećera riboze i nukleobaze gvanina, zbog čega je ribonukleozid monofosfat. GMP se komercijalno proizvodi mikrobnom fermentacijom. GDP je nukleozid difosfat koji je estar pirofosforne kiseline sa nukleozidnim gvanozinom. GDP se sastoji od pirofosfatne grupe, pentoznog šećera riboze i nukleobaze gvanina. GTP je purin nukleozid trifosfat koji je jedan od važnih blokova potrebnih za sintezu RNK tokom transkripcije. Takođe ima ulogu izvora energije kao aktivatora supstrata u metaboličkim reakcijama i koristi se kao izvor energije za sintezu proteina i glukoneogenezu.

Studije su pokazale da nukleotidi gvanozina mogu da uslove:

a) Stabilno vezivanje sa hepcidinom, sprečavajući internalizaciju FPN indukovanu hepcidinom uz efikasan ćelijski efluks gvožđa.

b) Povećanu ekspresiju DMT1 i TFR1 (transferinskog receptora), što ukazuje na efikasnu distribuciju gvožđa i smanjen nivo feritina u enterocitu, čime se sprečava povećana apsorpcija gvožđa u ćelijama.

c) Stabilizacija feroportina sama po sebi dovodi do veće efikasnosti efluksa gvožđa.

Srodni prethodni dokumenti:

Patentna prijava WO 2011/019641 A2 otkriva nutritivne sastave i postupke za pravljenje i upotrebu nutritivnih sastava u kojima pomenuti nutritivni sastavi sadrže jedan ili više egzogenih nukleotida izabranih iz grupe koja se sastoji od 5'-adenozin monofosfata, 5'-gvanozin monofosfata, 5'-citozin monofosfata, 5'-uracil monofosfata, 5'-inozin monofosfata ili 5'-timin monofosfata. Nutritivni sastavi dalje sadrže najmanje jedan prebiotik, najmanje jedan probiotik, najmanje jedan sinbiotik, najmanje jednu amino-kiselinu, najmanje jedno riblje ulje; najmanje jedan fitonutrijent; najmanje jedan antioksidans; najmanje jedan transformišući faktor rasta-beta; ili laktoferin; ili njihove kombinacije. Navedeni nutritivni sastav može biti u obliku koji se može primeniti kao što su farmaceutske formulacije, nutritivne formulacije, dijetetski suplementi, funkcionalne namirnice, proizvodi za piće ili njihova kombinacija. Prehrambena kompozicija može obuhvatati egzogene nukleotide u količini koja se primenjuje u rasponu od oko 0,1 mg/dan do oko 5,0–6,0 g/dan, uključujući sve brojeve – cele ili delove.

Patentna prijava WO 2018/009647 A1 otkriva nutritivnu formulu u obliku praha ili tečnosti koja sadrži koncentrat proteina surutke obogaćen alfalaktalbuminom; mlečni protein obogaćen beta-kazeinom; blago hidrolizovani mlečni protein; osteopontin; laktoferin; triglicerid oleinske kiseline–palmitinske kiseline– oleinske kiseline, pri čemu se palmitinska kiselina nalazi na SN-2 poziciji glicerolne osnove triglicerida; laktozu, pri čemu je laktoza redukovana laktoza; lutein; dokozaheksansku kiselinu; arahidonsku kiselinu; galaktooligosaharide; i polidekstrozu. Nutritivna formula pomenutog pronalaska obezbeđuje pacijentu hranljive materije slične onima koje obezbeđuje ljudsko majčino mleko.

Patentna prijava US 2002/0022052 A1 u suštini otkriva sastave bez vode za transdermalnu ili transepitelnu isporuku koje sadrže najmanje jedan biološki aktivni agens i farmaceutski prihvatljiv nosač, pri čemu se biološki aktivni agens indukuje u kožu masažom i uključuje mnoštvo finih čvrstih čestica veličine manje od 2 mikrona koje su raspršene kroz pomenuti nosač. Osim toga, sastavi koji su obuhvaćeni navedenom prijavom nalaze se u obliku masti ili kreme.

Patentna prijava br. WO2007022537A2 otkriva metod lečenja bolesti ili stanja, kao što je anemija, davanjem hemotaktičkog modulatora sastava, pri čemu hemotaktički modulator može biti izabran iz grupe koju čine laktoferin ili cGMP. Sastav može da se primenjuje lokalno, oralno ili parenteralno u vidu gela za topikalnu primenu, rastvora ili tablete. Međutim, i dalje postoji potreba za formulacijom koja podržava nutritivne potrebe uz održavanje homeostaze gvožđa.

CN 1218 647 odnosi se na mleko u prahu za odojčad, koje se priprema od svežeg mleka osušenog raspršivanjem, neosoljene surutke u prahu, laktoze, biljnog ulja, kompozitnih vitamina, kompozitnih elemenata u tragovima, holina, karnitina, nukleotida i laktoferina.

CN 107549 612 odnosi se na nutritivnu formulu pirinčanog brašna koje može da poboljša imunitet beba starosti 6–12 meseci i otkriva nutritivnu formulu koja sadrži laktoferin i nukleotide.

Patentna prijava WO 2016/073132 odnosi se na nutritivne sastave za pedijatrijske pacijente koji sadrže prebiotik i laktoferin.

CN 106578134 odnosi se na mlečnu formulu za bebe u prahu za sprečavanje infektivne dijareje.

Iz navedene objave i identifikovanih prethodnih dokumenata, jasno je da iako postoje opcije lečenja poremećaja povezanih sa nedostatkom gvožđa, mnoge takve opcije povezane su sa neprijatnim ili štetnim neželjenim dejstvima. Zbog toga i dalje postoji potreba za nutritivnim ili dijetetskim suplementom gvožđa koji efikasno sprečava, stabilizuje, poništava i/ili leči poremećaje povezane sa nedostatkom gvožđa, uz ublažavanje svih štetnih neželjenih dejstava.

U skladu sa tim, postoji dalja potreba da se formuliše sastav/formulacija koja sadrži prirodne sastojke koji će smanjiti zalihe gvožđa koji vezuju feritin, povećati efluks gvožđa u sistemsku cirkulaciju, poboljšati stabilizaciju feroportina, smanjiti nivoe hepcidina i IL-6, smanjiti upalne puteve koji dalje utiču na hepcidin – Fpn balans, a koji će takođe delovati kao prirodno lečenje anemije usled nedostatka gvožđa (IDA) i anemije inflamacije (AOI), bez ikakvih neželjenih dejstava primene gvožđa zahvaljujući održavanju savršene homeostaze gvožđa uz regulaciju hepcidina.

Utvrđeno je da se to može postići primenom stabilnog sastava/formulacije koja sadrži kombinaciju laktoferina sa gvanozin nukleotidima ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

Sažetak pronalaska

Ovaj patentna prijava obezbeđuje farmaceutski sastav/formulaciju za upotrebu u lečenju anemije usled nedostatka gvožđa (IDA) inflamacije (AOI) i neurodegenerativnih poremećaja.

Farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska takođe može da se koristi u lečenju neurodegenerativnih poremećaja.

Kombinacija laktoferina iz ovog pronalaska može da osigura bezbedni farmaceutski sastav/formulaciju sa poboljšanim i/ili sinergetskim efektima u poređenju sa monoterapijom laktoferinom u lečenju ili prevenciji IDA ili AOI.

Ova prijava obezbeđuje farmaceutski sastav/formulaciju koja sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina i jednog ili više prirodnih gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

Ovaj pronalazak se u jednom aspektu odnosi na farmaceutski sastav koji sadrži kombinaciju:

a) laktoferina i

b) jednog ili više gvanozin nukleotida ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli, pri čemu se količina laktoferina kreće od 5% do 50% težine sastava, a količina gvanozin nukleotida od 1% do 5% težine sastava.

U poželjnom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutski sastav/formulaciju za upotrebu u postupku lečenja IDA i AOI, pri čemu pomenuti sastav/formulacija sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina, jednog ili više prirodnih gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima.

U daljem poželjnom aspektu, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska dodatno sadrži elementarno gvožđe, vitamin C (askorbinsku kiselinu), vitamin A (beta karoten), folnu kiselinu, folat, vitamin B ili njihovu kombinaciju.

U drugom aspektu ove prijave opisan je proces za pripremu sastava/formulacije. Proces pripreme sastava obuhvata:

(a) pojedinačno merenje svih sastojaka u zasebnim posudama,

(b) prosejavanje prethodno izmerenog laktoferina, gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, uz opciono zasebno dodavanje elementarnog gvožđa, vitamina C, vitamina A, folne kiseline, folata ili vitamina B, razblaživača i agensa za dezintegraciju,

(c) mešanje sastojaka iz koraka (b),

(d) opciono, priprema rastvora vezivnog agensa u zasebnoj posudi i njegovo dodavanje koraku (c), kao i prosejavanje granulisane vlažne mase da bi se dobile granule,

(e) sušenje dobijenih granulata do smanjenja nivoa suvoće (LOD) na između 3,0% do 5,0% težine/100 g,

(f) prosejavanje poluosušenih granula kroz odgovarajuće sito, i

(g) zasebno prosejavanje prethodno izmerenih lubrikanata i fluidifikanata kroz odgovarajuće sito i dodavanje koraku (f) da bi se dobio sastav/formulacija.

Proces dalje obuhvata pripremu zaptivnog oblagača i rastvora za enteričko oblaganje za enterički obložene tablete, rastvora za oblaganje filmom za filmom obložene tablete i punjenje i zaptivanje za dozne oblike kapsula.

Pronalazak je definisan patentnim zahtevima. Svaki predmet koji ne spada u obim patentnih zahteva naveden je samo u informativne svrhe.

Poželjno je da se sastav ovog pronalaska formuliše kao sastav za oralnu formulaciju i da bude napravljen u doznom obliku sa enteričnim omotačem.

Laktoferin se razlaže na nekoliko velikih fragmenata pomoću gastričnog digestivnog enzima, pepsina, ali u slučaju direktne intraduodenalne primene, može dopreti do creva i zadržati se nekoliko sati. Međutim, samo netaknuti prirodni laktoferin može dopreti do limfoidnog tkiva povezanog sa crevima (GALT) i ući u limfni sistem, što je neophodno za efikasnost proizvoda. Bioraspoloživost laktoferina je ograničena jer je laktoferin podložan digestivnim enzimima u gastrointestinalnom traktu. U tom pogledu, postoji velika potražnja za odgovarajućim sistemom za isporuku laktoferina koji bi trebalo da zaštiti laktoferin od varenja u želucu i olakša njegovu propustljivost kroz crevni epitel. Konkretno, u sastavu koji sadrži laktoferin, koji deluje na sluzokožu crevnog trakta i koji je veoma osetljiv na pepsin, tehnološki je smisleno da se sastav napravi u doznom obliku sa enteričnim omotačem. Shodno tome, da bi se dobila stabilna, bezbedna i efikasna formulacija laktoferina u kojoj se održavaju farmakološko dejstvo i efikasnost, poželjno je da se sastav napravi u doznom obliku sa enteričnim omotačem.

Kod odraslih osoba je oralno primenjen laktoferin sklon peptičnom varenju u želucu. Zbog toga je razvijena enterički obložena LF tableta za isporuku intaktnog molekula LF na receptor u crevima. Shodno tome, u takvoj formulaciji, molekuli LF zaštićeni su od proteolitičkog varenja u želucu jer je tableta obložena materijalom otpornim na kiseline, koji se lako rastvara u neutralnom pH stanju u crevima. Iz nekih studija takođe je poznato da LF obložen enteričkim slojem pospešuje gojaznost tipa visceralne masti u vezi sa metaboličkim sindromom.

Formulacije prema ovom pronalasku obložene su enteričkim obložnim materijalom koji se lako rastvara u crevima pod neutralnim pH uslovima i obezbeđuje željeno farmakološko dejstvo.

Kratak opis crteža

Sl. 1: Efekat probnog sastava/formulacije na nivo hemoglobina u poređenju sa kontrolom bolesti.

Sl. 2: Efekat probnog sastava/formulacije na nivo% hematokrita u poređenju sa kontrolom bolesti.

Sl. 3: Efekat probnog sastava/formulacije na nivo gvožđa u serumu u poređenju sa kontrolom bolesti.

Sl. 4: Efekat probnog sastava/formulacije na nivo feroportina u poređenju sa kontrolom bolesti.

Sl. 5: Efekat probnog sastava/formulacije na nivo feritina u poređenju sa kontrolom bolesti.

Sl. 6: Efekat probnog sastava/formulacije na nivo hepcidina u poređenju sa kontrolom bolesti.

Sl. 7: Efekat probnog sastava/formulacije na nivo IL-6 u poređenju sa kontrolom bolesti.

Detaljan opis pronalaska

Ovaj pronalazak usmeren je na farmaceutski sastav/formulaciju koja sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina i jednog ili više prirodnih gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za lečenje anemije usled nedostatka gvožđa (IDA) i anemije inflamacije (AOI). U tom pogledu, pronalazači su sproveli opsežna istraživanja zajedno sa pretkliničkim studijama i otkrili da kombinacija laktoferina i jednog ili više prirodnih gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ima sinergetski efekat na lečenje IDA i AOI.

Farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska takođe može da se koristi u lečenju neurodegenerativnih poremećaja.

Cilj ovog pronalaska jeste da se obezbedi farmaceutski sastav/formulacija obezbeđuje koja sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina i jednog ili više prirodnih gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

U jednom aspektu, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska može opciono da sadrži elementarno gvožđe, vitamin C, vitamin A, folnu kiselinu, folat, vitamin B ili njihovu kombinaciju.

Kombinacija laktoferina iz ovog pronalaska može da osigura bezbedni farmaceutski sastav/formulaciju laktoferina sa jednim ili više prirodnih gvanozin nukleotida ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli sa poboljšanim i/ili sinergetskim efektima u poređenju sa monoterapijom laktoferinom u lečenju ili prevenciji IDA ili AOI. U poželjnom aspektu, odnos laktoferina i prirodnog gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli nalazi se u opsegu 9,1–98,7: 1,3–90,9. U poželjnijem aspektu, odnos laktoferina i prirodnog gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli iznosi 90,91: 9,09.

Drugi cilj ovog pronalaska jeste da se obezbedi sinergetska kombinacija laktoferina zajedno sa prirodnim gvanozin nukleotidom ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju i, opciono, uključivanje aktivnih sastojaka izabranih iz elementarnog gvožđa, vitamina C, vitamina A, folne kiseline, folata, vitamina B ili njihove kombinacije.

Farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska pomaže da se poveća hemoglobin,% hematokrita (HCT%) i nivo gvožđa u serumu.

Farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska takođe pomaže da se smanji nivo feritina, hepcidina i IL-6 u serumu i poboljša stabilizacija feroportina.

Ovakva regulacija hepcidina dovodi do smanjenja zaliha gvožđa koje vezuje feritin, povećava efluks gvožđa u sistemsku cirkulaciju i poboljšava stabilizaciju feroportina.

Prema tome, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska pomaže u održavanju homeostaze gvožđa u stanju IDA i AOI bez ikakvih neželjenih efekata.

U jednom aspektu, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska sadrži laktoferin, pri čemu se količina laktoferina kreće od 5% do 50% težine sastava/formulacije. U jednom izvođenju, količina laktoferina kreće se od 10% do 50% težine sastava/formulacije. U drugom izvođenju, količina laktoferina kreće se od 20% do 50% težine sastava/formulacije, dok se u još jednom izvođenju količina laktoferina kreće se od 30% do 50% težine sastava/formulacije. U daljem izvođenju, količina laktoferina kreće se od 40% do 50% težine sastava/formulacije.

U drugom izvođenju, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska sadrži laktoferin, pri čemu se količina laktoferina u sastavu/formulaciji kreće od 25 mg do 750 mg po jediničnoj dozi.

Laktoferin (LF) je prisutan ili u stanju bez gvožđa (tj. apo-tip) ili sa delimično zasićenim gvožđem (tj. prirodno ili goveđe gvožđe) ili u stanju zasićenja gvožđem (tj. holo-tip), u zavisnosti od toga da li vezuje gvožđe, što zauzvrat određuje biološka svojstva laktoferina.

U poželjnom izvođenju, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska dalje sadrži najmanje jedan prirodni gvanozin nukleotid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu su prirodni gvanozin nukleotidi izabrani između GMP, GDP, GTP ili slično. Količina gvanozin nukleotida ili njihove farmaceutski prihvatljive soli koja može da se koristi u sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 1,0% do 5% težine sastava/formulacije.

U poželjnom izvođenju, količina gvanozin nukleotida ili njihove farmaceutski prihvatljive soli koja može da se koristi u sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 0,25 mg do 1000 mg po jediničnoj dozi. Farmaceutski prihvatljiva so pogodna za pronalazak može da se izabere između hidrohlorida, sulfata, fosfata, acetata, laktata, citrata, pantotenata, askorbata, sukcinata, maleata, fumarata, glukonata, soli magnezijuma, kalijuma, natrijuma, cinka, soli dietanolamina ili njihove kombinacije.

U poželjnom aspektu, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina, dinatrijum GMP i farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

U jednom izvođenju, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska opciono sadrži druge aktivne sastojke, kao što je gvožđe.

Farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska može da obuhvati gvožđe kao fiziološki prihvatljive razrede elementarnog gvožđa koje može da se koristi u sastavu jednog doznog oblika pronalaska i uključuje, bez ograničenja, elementarno gvožđe, jedinjenja gvožđa u obliku soli (rastvorljive, slabo rastvorljive ili nerastvorljive), heliranog gvožđa (naročito helirano u aminokiselinu), kompleksa gvožđa, nereaktivnog gvožđa, kao što je karbonil gvožđe i redukovano gvožđe, i njihove kombinacije.

Neograničavajući primeri pogodnih rastvorljivih soli gvožđa uključuju feri-hipofosfit, feri-albuminat, feri-hlorid, feri-citrat, feri-oksid-saharat, feriamonijum-citrat, fero-hlorid, fero-glukonat, gvožđe-jodid, gvožđe-sulfat, gvožđelaktat, fero-fumarat, hem, gvožđe-trisglicinat, gvožđe-bisglicinat, gvožđeaspartoglicinat, gvožđe-nitrat, gvožđe-hidroksid-saharat, gvožđe-sulfat, gvožđeglukonat, gvožđe-aspartat, gvožđe-sulfat-heptahidrat, gvožđe-fosfat, gvožđeaskorbat, gvožđe-format, gvožđe-acetat, gvožđe-malat, gvožđe-glutamat, feroglicin-sulfat, gvožđe-oksid-hidrat, rastvorljivo gvožđe-pirofosfat, gvožđehidroksid-saharat, gvožđe-mangan-saharat, gvožđe-subsulfat, fero-amonijumsulfat, gvožđe-amonijum-sulfat, gvožđe-seskvihlorid, feromangan-citrat, ferokvinincitrat, fero-natrijum-citrat, fero-natrijum-edetat, fero-format, fero-amonijum-oksalat, gvožđe-kalijum-oksalat, gvožđe-natrijum-oksalat, gvožđe-peptonat, feromanganpeptonat, druge farmaceutski prihvatljive soli gvožđa i njihove kombinacije.

Neograničavajući primeri pogodnih slaborastvorljivih soli gvožđa uključuju gvožđe-acetat, gvožđe-fluorid, gvožđe-fosfat, fero-pirofosfat, gvožđepirofosfat, saharovano gvožđe-karbonat, gvožđe-karbonatnu masu, gvožđesukcinat, gvožđe-citrat, gvožđe-tartarat, gvožđe-fumarat, fero-sukcinat, gvožđehidroksid, gvožđe-nitrat, gvožđe-karbonat, gvožđe-natrijum-pirofosfat, fero-tartarat, gvožđe-kalijum-tartarat, gvožđe-subkarbonat, gvožđe-glicerofosfat, gvožđesaharat, gvožđe-hidroksid-saharat, gvožđe-mangan-saharat, gvožđe-amonijumsulfat, druge farmaceutski prihvatljive soli gvožđa i njihove kombinacije.

Neograničavajući primeri pogodnih nerastvorljivih soli gvožđa uključuju gvožđe-natrijum-pirofosfat, gvožđe-karbonat, gvožđe-hidroksid, fero-oksid, gvožđe-oksihidroksid, gvožđe-oksalat, druge farmaceutski prihvatljive soli gvožđa i njihove kombinacije.

U specifičnom izvođenju, gvožđe može da bude uključeno u vidu gvožđa-bisglicinata ili drugog oblika soli. U drugom specifičnom izvođenju, gvožđe može da bude uključeno u vidu gvožđa-pirofosfata.

Količina elementarnog gvožđa koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 30% do 45% težine sastava/formulacije.

U poželjnom izvođenju, količina elementarnog gvožđa koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 30 mg do 500 mg po jediničnoj dozi.

U drugom poželjnom aspektu, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina, gvanozin nukleotida ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, elementarnog gvožđa i farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

Što je još poželjnije, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina, dinatrijum GMP, gvožđe-bisglicinata i farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata. U jednom izvođenju, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska opciono sadrži druge prirodne aktivne sastojke, kao što su vitamin C (askorbinska kiselina), vitamin A (beta karoten) i folna kiselina, folat, vitamin B (vitamin B12 / kobalamin) ili slično.

U poželjnom izvođenju, količina vitamina C koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 5% do 65% težine sastava/formulacije.

U poželjnom izvođenju, količina vitamina C koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 20 mg do 4000 mg po jediničnoj dozi.

U drugom poželjnom aspektu, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina, gvanozin nukleotida ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, vitamina i farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

Što je još poželjnije, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina, dinatrijum GMP, vitamina C i farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

U poželjnom izvođenju, količina vitamina A koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 0,5% do 3% težine sastava/formulacije.

U poželjnom izvođenju, količina vitamina A koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 450 mcg do 10.000 mcg po jediničnoj dozi.

U poželjnom izvođenju, količina folne kiseline ili folata koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 0,05% do 0,75% težine sastava/formulacije.

U poželjnom izvođenju, količina folne kiseline ili folata koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 6 mcg do 5000 mcg po jediničnoj dozi.

U drugom poželjnom aspektu, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina, gvanozin nukleotida ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, elementarnog gvožđa, folne kiseline i farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

Što je još poželjnije, farmaceutski sastav/formulacija ovog pronalaska sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina, dinatrijum GMP, gvožđe-bisglicinata, folne kiseline i farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

U poželjnom izvođenju, količina vitamina B (vitamin B12/ kobalamin) koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 1% do 5% težine sastava/formulacije.

U poželjnom izvođenju, količina vitamina B (vitamin B12/ kobalamin) koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 50 mcg do 5000 mcg po jediničnoj dozi. U drugom izvođenju, farmaceutski sastav/formulacija prema ovom pronalasku može biti formulisana za oralnu primenu. Za oralnu primenu, čvrste kompozicije mogu biti, na primer, u obliku tableta, kapsula, pilula, tvrdih kapsula napunjenih tečnošću ili čvrstim supstancama, mekih kapsula, prahova, granula, kesica, enterički obloženih tableta ili kapsula, tableta ili kapsula sa modifikovanim oslobađanjem, itd.

Farmaceutski sastav/formulacija može dalje da sadrži farmaceutski prihvatljive ekscipijense. Poželjni ekscipijensi se biraju iz: razblaživača, vezivnog agensa, agensa za dezintegraciju, lubrikanta, fluidifikanta, itd. i njihove kombinacije.

Razblaživači se biraju iz: mikrokristalne celuloze, laktoze (anhidrozne / monohidratne / sušene raspršivanjem), skroba, celuloznog praha, silicifikovane mikrokristalne celuloze, amonijum alginata, kalcijum-karbonata, kalcijum-laktata, dvobaznog kalcijum-fosfata (anhidroznog / dvobaznog dehidrata / tribaznog), kalcijum-silikata, kalcijum-sulfata, celuloznog acetata, kompresibilnog šećera, konditorskog šećera, kukuruznog skroba, preželatinizovanog skroba, dekstrata, dekstrina, dekstroze, eritritola, etilceluloze, fruktoze, fumarne kiseline, glicerilpalmitostearata, izomalta, kaolina, laktitola, magnezijum-karbonata, magnezijumoksida, maltodekstrina, maltoze, manitola, triglicerida srednjeg lanca, polidekstroze, polimetakrilata, simetikona, natrijum-alginata, natrijum-hlorida, sorbitola, sterilizabilnog kukuruza, saharoze, šećerne sfere, sulfobutiletar βciklodekstrina, talka, tragakanta, trehaloze, ksilitola ili slično. Količina razblaživača koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 5% do 45% težine sastava/formulacije.

Vezivni agens se bira iz: hipromeloze, skroba, akacije, agara, alginske kiseline, kalcijum-karbonata, kalcijum-laktata, karbomera, natrijumkarboksimetilceluloze, karagenana, celuloze acetat-ftalata, ceratonije, kitosana, kopovidona, kukuruznog skroba, preželatinizovanog skroba, ulja semenki pamuka, dekstrata, dekstrina, dekstroze, etilceluloze, želatina, gliceril-behenata, guar gume, hidrogenizovanog biljnog ulja tipa I, hidroksietil-celuloze, hidroksietilmetil celuloze, hidroksipropil-celuloze, inulina, laktoze, tečne glukoze, niskosupstituisane hipromeloze, magnezijum-aluminijum slikata, maltodekstrina, maltoze, metil-celuloze, mikrokristalne celuloze, pektina, poloksamera, polikarbofila, polidekstroze, polietilen-oksida, polimetakrilata, povidona, natrijumalginata, stearinske kiseline, saharoze, suncokretovog ulja, trikaprilina, polietilenglikol-sukinata vitamina E, zeina ili slično. Količina vezivnog agensa koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 1% do 7% težine sastava/formulacije.

Sredstvo za dezintegraciju se bira iz: natrijum-kroskarmeloze, krospovidona, karboksimetil-celuloze (natrijum/kalcijum), natrijum-skrob-glikolata, alginske kiseline, kalcijum-alginata, celuloze u prahu, kitosana, koloidnog silicijumdioksida, kukuruznog skroba, dokusat-natrijuma, glicina, guar gume, niskosupstituisane hidroksipropil-celuloze, magnezijum-aluminijum silikata, metilceluloze, mikrokristalne celuloze, polakrilin-kalijuma, povidona, natrijumalginata, preželatinizovanog skroba ili slično. Količina sredstva za dezintegraciju koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 1% do 25% težine sastava/formulacije.

Lubrikant se bira iz: magnezijum-stearata, cink-stearata, kalcijumstearata, glicerin-monostearata, gliceril-behenata, gliceril-palmitostearata, hidrogenizovanog ricinusovog ulja, hidrogenizovanog biljnog ulja tipa I, lakog mineralnog ulja, magnezijum-lauril-sulfata, triglicerida srednjeg lanca, mineralnog ulja, miristinske kiseline, palmitinske kiseline, poloksamera, polietilen-glikola, natrijum-benzoata, natrijum-hlorida, natrijum-lauril-sulfata, natrijum-stearilfumarata, stearinske kiseline, talka, kalijum-benzoata ili slično. Količina lubrikanta koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 0,5% do 5% težine sastava/formulacije.

Fluidifikant se bira iz: koloidnog silicijum-dioksida, talka, tribaznog kalcijumfosfata, celuloze u prahu, hidrofobnog koloidnog silicijum-dioksida, magnezijumoksida, magnezijum-silikata, magnezijum-trisilikata, silicijum-dioksida ili slično.

Količina fluidifikanta koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 0,5% do 5% težine sastava/formulacije.

Agens za oblaganje za sastav/formulaciju ovog pronalaska bira se iz: film oblagača, zaptivnog oblagača ili enteričkog oblagača. Količina agensa za oblaganje koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 1,0% do 15% težine sastava/formulacije.

Agens za zaptivanje bira se iz: InstaMoistSheild-a (hidroksipropil-metil celuloza, polietilen-glikol, talk, titanijum-dioksid, etil-celuloza), želatina, kopovidona, hidroksietil-celuloze, etil-celuloze, skroba, vanilina, hidroksipropil-celuloze, guar gume, maleinske kiseline, hipromeloze, polimetakrilata, metil-celuloze ili slično. Količina agensa za zaptivanje koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 1,0% do 3,0% težine sastava/formulacije.

Agens za enteričko oblaganje bira se iz: Instacoat EN HPMC P (hidroksipropil-metil celuloza ftalat, polietilen-glikol, titanijum-dioksid, oksid crvenog gvožđa), kopolimera metakrilata, šelaka, natrijum-alginata, acetiltributilcitrata, karbomera, celuloze acetat-ftalata, guar gume, hipromeloze acetatsukcinata, hipromeloze-ftalata, polimetakrilata, polivinil-acetat-ftalata, kalijumhlorida, glicerina, sureterika, tributil-citrata, trietil-citrata, trioleina, belog voska, zeina, celuloze acetat-ftalata sa etil-celulozom, kitosana, hidroksipropil-celuloze, polimetakrilata ili slično. Količina agensa za enteričko oblaganje koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 5,0% do 10,0% težine sastava/formulacije.

Film oblagač bira se iz: Instacoat Universal-a (hidroksipropil-metil celuloza, polietilen-glikol, talk, titanijum-dioksid), guar gume, hipromeloze, povidona, hidroksipropil-celuloze, acetata celuloze, polidekstroze, etil-celuloze, metilceluloze, želatina, glicerina, maltodekstrina, skroba ili slično. Količina film oblagača koja može da se koristi u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska kreće se od 2,0% do 3,0% težine sastava/formulacije.

Rastvarač se bira iz: vode, alkohola, izopropil-alkohola, propilen-glikola, bademovog ulja, benzil-alkohola, benzil-benzoata, butilen-glikola, ugljen-dioksida, ricinusovog ulja, kukuruznog ulja (kukuruz), ulja semenki pamuka, dibutil-ftalata, dietil-ftalata, dimetil-etra, albumina, dimetil-ftalata, dimetil-sulfoksida, dimetilacetamida, etil-acetata, etil-laktata, etil-oleata, glicerina, glikofurola, izopropilmiristata, izopropil-palmitata, lakog mineralnog ulja, triglicerida srednjeg lanca, metil-laktata, mineralnog ulja, monoetanolamina, oktilodekanola, maslinovog ulja, ulja kikirikija, polietilen-glikola, polioksil 35 ricinusovog ulja, propilen karbonata, pirolidona, ulja šafranike, susamovog ulja, sojinog ulja, suncokretovog ulja, triacetina, trikaprilina, trietanolamina, trietil-citrata, trioleina, rastvarača koji mogu da se mešaju sa vodom ili slično. Količina rastvarača u farmaceutskom sastavu/formulaciji ovog pronalaska koristi se u količini koja je dovoljna.

U poželjnom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutski sastav/formulaciju za upotrebu u lečenju IDA i AOI, pri čemu pomenuti sastav/formulacija sadrži sinergetsku kombinaciju laktoferina, prirodnog gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i, opciono, aktivne sastojke zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima.

U farmaceutskim oblicima za doziranje, prirodni gvanozin nukleotidi koji su korišćeni u ovom pronalasku mogu da se koriste u obliku njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, a mogu da se koriste i sami ili u odgovarajućoj kombinaciji, kao i u kombinaciji sa drugim farmaceutski aktivnim jedinjenjima.

Neki od primera sastava/formulacija ovog pronalaska opisani su u nastavku:

Sastav/Formulacija 1

Sastav/Formulacija 2

Sastav/Formulacija 3

Sastav/Formulacija 4

Sastav/Formulacija 5

Sastav/Formulacija 6

Sastav/Formulacija 7

Uopšten proces pripreme formulacija ovog pronalaska

Postupak izrade: -

(Odeljak za tablete – Enterički obložene)

Neobložena tableta koja se koristi kao jezgro za enterički obloženu formulaciju u ovom pronalasku može da se pripremi suvom ili vlažnom granulacijom.

Suva granulacija:

1. Precizno izmerite sve sastojke u zasebnim posudama.

2. Zasebno prosejte prethodno izmerene sastojke (kao što su aktivni sastojci, razblaživač, agens za dezintegraciju) kroz sito br.30.

3. Izmešajte sadržaj koraka 2 u blenderu na laganoj brzini.

4. Prosejte prethodno izmeren fluidifikant i lubrikant (kao što je magnezijum-stearat i koloidni silicijum-dioksid) kroz sito br. 40. Prebacite u blender i pokrenite ga.

5. Komprimujte mešavinu srednjom snagom pomoću okruglog bikonveksnog bušača u obliku slova B.

Vlažna granulacija:

1. Precizno izmerite sve sastojke u zasebnim posudama.

2. Zasebno prosejte prethodno izmerene sastojke (kao što su aktivni sastojci, razblaživač, agens za dezintegraciju) kroz sito br.40.

3. Pomešajte sadržaj koraka 2 u brzom mikser-granulatoru (RMG) sa radnim kolom male brzine.

4. Priprema rastvora vezivnog agensa: U zasebnoj posudi izmerite vezivni agens (kao što je polivinil-pirolidon K-30, HPMC 6 cps) i rastvorite ga u rastvaraču (kao što je izopropil alkohol, prečišćena voda) da biste dobili bistar rastvor.

5. Vezivanje: Dodajte rastvor vezivnog agensa u korak 3 u RMG pri maloj brzini radnog kola. Proverite konzistenciju i vezivanje. Ukoliko je potrebno, rastvarač će uticati na dodatno vlaženje.

6. Dobijenu granulisanu vlažnu masu prenesite u posudu i osušite u sušači sa fluidnom bazom na temperaturi od 50 °C ± 5 °C dok se LOD mešavine ne spusti na između 3,0% do 5,0% težine/100 g.

7. Prosejte poluosušene granule kroz sito br.14. Smanjite veličinu granula koje se zadržavaju na situ br.16 korišćenjem Multimill-a sa ekranom od 2,5 mm.

8. Na kraju prosejte osušene granule kroz sito br.16. Smanjite veličinu granula koje se zadržavaju na situ br.20 korišćenjem Multimill-a sa ekranom od 1,5 mm.

9. Na kraju prosejte ove granule kroz sito br.24.

10. Prosejte prethodno izmeren agens za dezintegraciju i fluidifikant kroz sito br.40 i pomešajte sa korakom 9.

11. Prosejte prethodno izmeren lubrikant (kao što je magnezijumstearat) kroz sito br.40 i pomešajte sa korakom 10.

12. Komprimujte mešavinu tableta srednjom kompresionom silom pomoću okruglog bušača u obliku slova D.

Priprema rastvora zaptivnog oblagača:

13. Stavite izmerenu količinu rastvarača (kao što je izopropil alkohol) u posudu za mešanje.

14. Korišćenjem mehaničkog mešača, promešajte rastvarač da bi se formirao vrtlog.

15. Dodajte potrebnu količinu agensa za zaptivanje (kao što je InstaMoistSheild) u centar vrtloga rastvarača laganim kontinuiranim mlazem, izbegavajući formiranje grudvica i održavanjem pojave vrtloga, a zatim dodajte potrebnu količinu rastvarača (metilen-dihlorid).

16. Kada dodate čitavu količinu agensa za zaptivanje, smanjite brzinu mešanja da biste eliminisali vrtlog. Nastavite sa mešanjem.

17. Filtrirajte rastvor kroz najlonsku tkaninu br. 100 i prikupite materijal u posude S.S.

18. Prenesite tablete u posudu za oblaganje i povežite peristaltičku pumpu u posudu sa rastvorom za oblaganje. Održavajte temperaturu površine premaza na 25 ± 2 °C, a vlažnost na 50 ± 5%. Oblaganje izvršite na maksimalnoj tački kotrljanja tablete prema sledećim parametrima:

19. Oblaganje vršite sve dok tableta ne dobije na težini približno 1,0% do 3,0%.

Priprema rastvora enteričkog oblagača:

20. Stavite izmerenu količinu rastvarača (kao što su prečišćena voda, izopropil alkohol, metilen-dihlorid) u posudu za mešanje.

21. Korišćenjem mehaničkog mešača promešajte rastvarač (kao što su prečišćena voda, izopropil-alkohol, metilen-dihlorid i glicerin) da bi se formirao vrtlog.

22. Dodajte potrebnu količinu agensa za enteričko oblaganje (kao što je Instacoat EN HPMC P ili mešavina metilakrilateko polimera, šelaka, natrijumalginata i talka) u centar vrtloga rastvarača sporim kontinuiranim mlazom, izbegavajući formiranje grudvica i održavanjem pojave vrtloga.

23. Nastavite da mešate 45 do 60 minuta.

24. Filtrirajte rastvor kroz sito od 0,5 mm i prikupite materijal u posude S.S.

25. Prenesite tablete u posudu za oblaganje i povežite peristaltičku pumpu u posudu sa rastvorom za oblaganje. Održavajte temperaturu površine premaza na 25 ± 2 °C, a vlažnost na 50 ± 5%. Oblaganje izvršite na maksimalnoj tački kotrljanja tablete prema sledećim parametrima:

26. Oblaganje vršite sve dok tableta ne dobije na težini približno 5,0% do 10,0%.

Postupak izrade:

(Odeljak za tablete – Obložene filmom)

1. Precizno izmerite sve sastojke u zasebnim posudama.

2. Zasebno prosejte prethodno izmerene sastojke (kao što su aktivni sastojci, razblaživač, agens za dezintegraciju, fluidifikant) kroz sito br.30.

3. Izmešajte sadržaj koraka 2 u blenderu na laganoj brzini.

4. Prosejte prethodno izmeren lubrikant (kao što je magnezijumstearat) kroz sito br.40. Prebacite u blender i pokrenite ga.

5. Komprimujte mešavinu srednjom snagom pomoću okruglog bikonveksnog bušača u obliku slova B.

Priprema rastvora film oblagača:

6. Stavite izmerenu količinu rastvarača (kao što je izopropil alkohol) u posudu za mešanje.

7. Korišćenjem mehaničkog mešača, promešajte rastvarač da bi se formirao vrtlog.

8. Dodajte potrebnu količinu film oblagača (kao što je Instacoat Universal) u centar vrtloga rastvarača laganim kontinuiranim mlazem, izbegavajući formiranje grudvica i održavanjem pojave vrtloga, mešajte pet minuta, a zatim dodajte rastvarač (metilen-dihlorid).

9. Kada dodate čitavu količinu film oblagača, smanjite brzinu mešanja da biste eliminisali vrtlog. Nastavite sa mešanjem.

10. Filtrirajte rastvor kroz najlonsku tkaninu br.100 i prikupite materijal u posude S.S.

11. Prenesite tablete u posudu za oblaganje i povežite peristaltičku pumpu u posudu sa rastvorom za oblaganje. Održavajte temperaturu površine premaza na 25 ± 2 °C, odnosno vlažnost na 50 ± 5%. Oblaganje izvršite na maksimalnoj tački kotrljanja tablete prema sledećim parametrima:

12. Oblaganje vršite sve dok tableta ne dobije na težini približno 2,0% do 3,0%.

Postupak izrade: (Odeljak za kapsule)

1. Precizno izmerite sve sastojke u zasebnim posudama.

2. Zasebno prosejte prethodno izmerene sastojke (kao što su aktivni sastojci, razblaživač, agens za dezintegraciju, fluidifikant) kroz sito br.30.

3. Izmešajte sadržaj koraka 2 u blenderu na laganoj brzini.

4. Prosejte prethodno izmeren lubrikant (kao što je magnezijumstearat) kroz sito br.40. Prebacite u blender i pokrenite ga.

5. Punjenje i zaptivanje mešavine pomoću školjki HPMC kapsula.

6. Prebacite napunjene kapsule u rezervoar mašine za poliranje i vizuelni pregled da biste uklonili ostatke praha koji se lepe sa školjki kapsula.

Primeri

Laktoferin je u svrhu eksperimenata nabavljen od kompanije Tatura Milk Industries Limited, 238-240 Hogan Street, Tatura 3616, Vic, Australija i njenog prodavca u Indiji, kompanije Vasta Biotech Pvt. Ltd., SVN House, 10 C.P. Ramaswamy Aiyar Road, Alwarpet, Chennai 600018, dok su gvanozin nukleotidi – dinatrijum GMP, GDP i GTP nabavljeni iz Kine od kompanije Cima Science Wuxi Cima Science Co. Ltd, 3# Building, No. 288 Shibawan Road Wuxi 214064 Jiangsu China.

Primer 1

Primer 2

Primer 3

Primer 4

Primer 5

Primer 6

Primer 7

Primer 8

Primer 9

Primer 10

Primer 11

Primer 12

Primer 13

Primer 14

Primer 15

Primer 16

Primer 17

Primer 18

Primer 19

Primer 20

Primer 21

Primer 22

Primer 23

Primer 24

Primer 25

Primer 26 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 1 na 40 °C, 75% RH

Primer 27 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 4 na 40 °C, 75% RH

Primer 28 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 5 na 40 °C, 75% RH

Primer 29 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 7 na 40 °C, 75% RH

Primer 30 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 9 na 40 °C, 75% RH

Primer 31 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 14 na 40 °C, 75% RH

Primer 32 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 17 na 40 °C, 75% RH

Primer 33 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 20 na 40 °C, 75% RH

Primer 34 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 22 na 40 °C, 75% RH

Primer 35 Podaci o stabilnosti i o rastvaranju primera 25 na 40 °C, 75% RH

Primer 36 Studija na životinjama

Skrining farmaceutskog sastava/formulacije koja sadrži kombinaciju laktoferina gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa ili bez opcionih sastojaka protiv anemije izazvane ishranom sa nedostatkom gvožđa (IDD) kod pacova. Za ovu studiju procenjeni su različiti parametri, kao što su nivo Hb, nivo hematokrita, nivo gvožđa u serumu, nivo feroportina, nivo feritina u serumu, nivo hepcidina i nivo IL-6. Sledeća ispitivanja su sprovedena uzimanjem referenci iz Wang X1, Liu S, Xu H, Yan V efekata rekombinantnog humanog laktoferina na poboljšanje statusa gvožđa IDA. Wei Sheng Yan Jiu.2012 Jan; 41(1): 13-7, 22 i Nora M. El-Sheikh zaštitnog efekta soje i timijana na anemiju usled nedostatka gvožđa kod pacova, Egipatski časopis za bolničku medicinu (Egyptian Journal of Hospital Medicine) (2008) Vol., 33: 510–520, koliko je dostupno.

72 mužjaka pacova Vistar (RatRattus) (6 po grupi) držano je u prostoriji za životinje u svetloj/mračnoj atmosferi u ciklusima od 12 sati, na temperaturi od 22 ± 3 °C i relativnom vlažnošću vazduha u opsegu 30–70%. Da bi se održali odgovarajući uslovi, temperatura i relativna vlažnost vazduha snimani su tri puta dnevno. Sve životinje su bile aklimatizovane najmanje pet dana. Životinje su držane u testnoj postavci najmanje 30 minuta tokom perioda aklimatizacije da bi se smanjila količina stresa. Životinje su merene na dan prijema i svakodnevno posmatrane u pogledu abnormalnosti, ukoliko ih je bilo. Takođe je vođena detaljna evidencija o aklimatizaciji. Pacovi su smeštani u grupe od po 6 po kavezu u čiste, sterilisane polipropilenske kaveze. Tokom kompletnog eksperimenta, životinje su dobijale standardnu sertifikovanu hranu za pelete za pacove (kompanije Keval sales corporation, Vadodara) i pijaću vodu tretiranu reverznom osmozom ad libitum. Izveštaji o analizi za mikrobiološko opterećenje i zagađivače u hrani i vodi i sadržaj hranljivih materija u hrani za životinje su takođe zadržani.

Da bi se procenila aktivnost protiv IDD indukovane anemije, sedamdeset dva (72) pacova su pregledana i podeljena u dvanaest grupa. Za uporednu analizu, grupe su podeljene na normalnu kontrolnu grupu (grupa 1), grupu za kontrolu bolesti (grupa 2), grupe za lečenje sa pojedinačnim komponentama (grupe 3 kao laktoferin, grupe 4 kao dinatrijum gvanozin monofosfat (GMP), grupe 5 kao gvanozin difosfat (GDP), grupe 6 kao gvanozin trifosfat (GTP) i grupe 7 kao vitamin C), test sastav/formulacija ovog pronalaska (grupa 8 kao kombinacija laktoferina dinatrijum GMP, grupa 9 kao kombinacija laktoferina GDP, grupa 10 kao kombinacija laktoferin GTP, grupa 11 kao kombinacija laktoferin dinatrijum GMP vitamin C) i referentni standardni lek (grupa 12). Tabela 1 daje detalje o različitim grupama i tretmanima sprovedenim u ispitivanju, gde su grupe G3 do G12 grupe za lečenje.

Tabela 1

Protokol lečenja:

Za indukciju modela anemije izazvane ishranom sa nedostatkom gvožđa:

Životinje u grupama br.2 do 12 koje su razmatrane dobile su IDD (3 mg Fe/kg ishrane) tokom perioda od 3 nedelje, dok su životinje u grupi br.1 primale normalnu ishranu sa peletima (35 mg Fe/kg ishrane).

Nakon 3 nedelje odgovarajuće dijetetske intervencije, nivo hemoglobina je određen kod svake životinje. Gledajući na nisko povećanje hemoglobina, nivoa% hematokrita (HCT%) i nivoa gvožđa u serumu, dalja intervencija u prehrani nastavljena je još dve (2) nedelje.

Nakon 5 nedelja (35 dana) odgovarajuće dijetetske intervencije, još jednom su analizirani nivo hemoglobina,% nivoa HCT i nivo gvožđa u serumu, a zatim je započet odgovarajući tretman lekovima uz kontinuiranu primenu ishrane sa nedostatkom gvožđa u svim grupama, kao što je navedeno iznad u Tabeli 1.

Nakon 9 nedelja odgovarajućeg lečenja (ukupno nakon 14 nedelja od početka studije – 98 dana), mereni su različiti biohemijski parametri da bi se procenio efekat odgovarajuće individualne i kombinovane terapije na model anemije usled nedostatka gvožđa (G3 do G12).

Zapažanja:

A. Klinička zapažanja (dnevna)

B. Smrtnost (dnevna)

C. Telesna težina (u početku, a zatim jednom nedeljno do kraja studije)

D. Posle 3 i 5 nedelja dodatka ishrani sa nedostatkom gvožđa

(i) Hematološki parametri (broj eritrocita, nivo Hb,% hematokrita, MCV, MCH i MCHC).

(ii) Nivo gvožđa u serumu.

E. Na kraju 14 nedelja studije

(i) Hematološki parametri (broj eritrocita, nivo Hb,% hematokrita, MCV, MCH i MCHC).

(ii) Biohemijski parametri (nivo gvožđa u serumu, nivo feroportina, nivo feritina u serumu, nivo hepcidina, nivo IL-6).

Statistička analiza: Urađena je jednosmerna ANOVA praćena Takijevim testom i p vrednost <0,05 se smatra statistički značajnom.

Rezultat:

Uticaj na telesnu težinu: Nisu primećene značajne promene u telesnoj težini tretirane i kontrolne grupe životinja u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom tokom perioda studije.

Posmatranje sa strane kaveza: Nisu primećene značajne promene u normalnoj kontrolnoj i tretiranoj grupi životinja u poređenju sa kontrolnom grupom bolesti tokom perioda studije.

Smrtnost: Tokom 21 dana, zabeležen je jedan smrtni slučaj u grupi 2; 35. dana – konstatovan je po jedan smrtni slučaj u grupama 2 i 6 i dva smrtna slučaja u grupi 12.

Hematologija: (Nakon 3 nedelje i 5 nedelja dijetetske intervencije i nakon 9 nedelja lečenja)

Nakon 3 i 5 nedelja: Nisu primećene značajne promene u hematološkim parametrima, kao što su broj eritrocita, MCV, MCH i MCHC u grupi za kontrolu bolesti (G2) i terapijskoj grupi (G3–G12) životinja u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom nakon primene ishrane sa nedostatkom gvožđa za 3, odnosno 5 nedelja.

Međutim, primećeno je značajno smanjenje nivoa Hb i% hematokrita u kontrolnoj grupi (G2) i u terapijskim grupama (G3–G12) životinja u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom nakon primene ishrane sa nedostatkom gvožđa tokom 5 nedelja, dok značajne promene u navedenim parametrima nisu primećene nakon primene ishrane sa nedostatkom gvožđa tokom 3 nedelje.

Nakon 9 nedelja lečenja: Nivo Hb i% hematokrita su povećani u svim terapijskim grupama (G3–G12) životinja u poređenju sa kontrolnom grupom (G2) nakon lečenja tokom 9 nedelja. Što je još važnije, značajno povećanje nivoa Hb i% hematokrita primećeno je kod G8–G11 (kombinacija laktoferina) i G12 u poređenju sa kontrolnom grupom (G2). (Pogledati Tabelu 2 i Sl.1–2)

Nije primećena značajna promena u drugim hematološkim parametrima (kao što je broj eritrocita, MCV, MCH i MCHC u svim terapijskim grupama životinja (G3–G12) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2) nakon lečenja tokom 9 nedelja).

Biohemija seruma:

Nivo gvožđa u serumu

Nakon 3 i 5 nedelja: Uočeno je značajno smanjenje nivoa gvožđa u serumu u kontrolnoj grupi (G2) i terapijskim grupama (G3–G12) u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom nakon primene ishrane sa nedostatkom gvožđa tokom 5 nedelja, dok nije primećena značajna promena u pomenutom parametru nakon primene ishrane sa nedostatkom gvožđa tokom 3 nedelje.

Nakon 9 nedelja lečenja: Nivo gvožđa u serumu povećan je u svim terapijskim grupama (G3–G12) životinja u poređenju sa kontrolnom grupom (G2) nakon lečenja tokom 9 nedelja. Što je još važnije, došlo je do značajnog povećanja nivoa gvožđa u serumu u grupama G8–G11 (kombinacija laktoferina) i G12 (FeSO4) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2). (Pogledati Tabelu 2 i Sl.3)

Tabela 2 – Promene hemoglobina, hematokrita i nivoa gvožđa u serumu

Biohemijski parametri seruma

Nakon 9 nedelja lečenja testirani su različiti biohemijski parametri u serumu, kao što su nivo hepcidina, nivo feroportina, nivo feritina u serumu i nivo IL-6 i dobijeni rezultati se razmatraju u nastavku:

Nivo feroportina

Nivo feroportina smanjen je u slučaju kontrolne grupe (G2) u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom (G1).

Došlo je do povećanja nivoa feroportina u slučaju svih terapijskih grupa (G3–G12) životinja u poređenju sa kontrolnom grupom bolesti (G2) nakon lečenja od 9 nedelja. Što je još važnije, došlo je do značajnog povećanja nivoa feroportina u grupama G8–G11 (kombinacija laktoferina) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2). Međutim, nije primećena značajna promena u nivou feroportina u grupi G12 (FeSO4) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2). (Pogledati Tabelu 3 i Sl.4)

Nivo feritina, hepcidina i IL-6 u serumu

Nivo hepcidina i IL-6 su značajno povećani u kontrolnoj grupi (G2) u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom (G1), dok je primećeno da je vrednost feritina neznatno povećana. Uočeno je smanjenje nivoa feritina, hepcidina i IL-6 u serumu u slučaju svih terapijskih grupa (G3-G12) životinja u poređenju sa kontrolnom grupom (G2) nakon lečenja od 9 nedelja. Što je još važnije, došlo je do značajnog smanjenja nivoa feritina, hepcidina i IL-6 u serumu u grupama G8–G11 (kombinacija laktoferina) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2). Međutim, nije primećena značajna promena u nivou feritina, hepcidina i IL-6 u serumu u grupi G12 (FeSO4) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2). (Pogledati Tabelu 3 i Sl.5–7) Tabela 3 – Promene nivoa feroportina, feritina, hepcidina i IL-6

Tumačenje i zaključci:

Patološke promene koje dovode do anemije hronične bolesti (ACD) posredovane su sa nekoliko međusobno povezanih faktora, uključujući interleukin-6 (IL-6), hepcidin i hipoferemiju kod ljudi. Zapaljenje povećava proizvodnju interleukina-6, te povećanje hepcidina posledično blokira oslobađanje gvožđa iz makrofaga, kao i crevnu apsorpciju gvožđa. Da bi se replicirali uslovi anemije kod eksperimentalnih životinja kako bi ličili na ljudsko patološko stanje anemije, prihvaćen model je IDD model.

U ovoj studiji, anemija je izazvana davanjem IDD (3 mg Fe/kg ishrane) grupama 2–12 u periodu od 5 nedelja, što je nastavljeno do 14. nedelje. Samo normalna kontrolna grupa (G1) je primala normalnu ishranu sa peletima (35 mg Fe/kg ishrane).

Nakon 5 nedelja primene IDD kod pacova, primećeno je da je došlo do značajnog smanjenja nivoa Hb,% HCT-a i gvožđa u serumu u slučaju kontrolne grupe i svih terapijskih grupa (G2 do G12) u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom (G1). To pokazuje da je model bolesti uspešno indukovao stanje anemije kod svih životinja.

Nakon 9 nedelja odgovarajućeg lečenja (ukupno nakon 14 nedelja od početka studije), različiti hematološki parametri (broj eritrocita, nivo Hb,% hematokrita, MCV, MCH i MCHC) i biohemijski parametri (nivo gvožđa, feroportina, feritina, hepcidina, IL-6 u serumu) su mereni da bi se procenio efekat odgovarajuće individualne i kombinovane terapije na model anemije usled nedostatka gvožđa.

Hematološki parametri

Nivo Hb i% hematokrita su povećani u svim terapijskim grupama (G3– G12) životinja u poređenju sa kontrolnom grupom (G2) nakon lečenja tokom 9 nedelja. Što je još važnije, treba uzeti u obzir da je došlo do značajnog povećanja (p < 0,001) nivoa Hb i% hematokrita u grupama G8–G11 (kombinacija laktoferina) i G12 u poređenju sa kontrolnom grupom (G2).

Nije primećena značajna promena u drugim hematološkim parametrima, kao što je broj eritrocita, MCV, MCH i MCHC u svim terapijskim grupama životinja (G3–G12) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2) nakon lečenja tokom 9 nedelja.

Biohemijski parametri

Nivo gvožđa u serumu povećan je u svim terapijskim grupama (G3– G12) životinja u poređenju sa kontrolnom grupom (G2) nakon lečenja tokom 9 nedelja. Što je još važnije, treba uzeti u obzir da je došlo do značajnog povećanja (p < 0,001) nivoa gvožđa u serumu u grupama G8–G11 (kombinacija laktoferina) i G12 (FeSO4) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2).

Došlo je do povećanja nivoa feroportina u slučaju svih terapijskih grupa (G3–G12) životinja u poređenju sa kontrolnom grupom bolesti (G2) nakon lečenja od 9 nedelja. Što je još važnije, treba razmotriti da je došlo do značajnog povećanja (p < 0,001) nivoa feroportina u grupama G8–G11 (kombinacija laktoferina) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2). Međutim, nije primećena značajna promena u nivou feroportina u grupi G12 (FeSO4) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2).

Nivo hepcidina i IL-6 su značajno povećani u kontrolnoj grupi (G2) u poređenju sa normalnom kontrolnom grupom (G1), dok je primećeno da je vrednost feritina neznatno povećana. Uočeno je smanjenje nivoa feritina, hepcidina i IL-6 u serumu u slučaju svih terapijskih grupa (G3-G12) životinja u poređenju sa kontrolnom grupom (G2) nakon lečenja od 9 nedelja. Što je još važnije, treba razmotriti da je došlo do značajnog smanjenja (p < 0,001) nivoa feritina, hepcidina i IL-6 u serumu u grupama G8–G11 (kombinacija laktoferina) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2). Međutim, nije primećena značajna promena u nivou feritina, hepcidina i IL-6 u serumu u grupi G12 (FeSO4) u poređenju sa kontrolnom grupom (G2).

Rezultati takođe ukazuju da upotreba kombinacije laktoferina (G8– G11) u efektivnoj dozi poboljšava model anemije usled nedostatka gvožđa kod pacova u većoj meri nego pojedinačna komponenta (G3–G7).

Shodno tome, među svim ovim terapijskim grupama (G3–G12), grupe G8–G11 (kombinacija laktoferina) pokazale su najveću efikasnost u lečenju modela anemije usled nedostatka gvožđa kod pacova, kao što je sumirano u Tabeli 2–3 u nastavku. To ukazuje da kombinacije laktoferina (G8–G11) imaju sinergetski efekat na pojedinačne komponente i da imaju važnu ulogu kod anemičnih pacova sa nedostatkom gvožđa.

Što se tiče smrtnosti: Nije zabeležen mortalitet ni u jednoj grupi životinja tokom lečenja od 9 nedelja (nakon 5 nedelja) u slučaju svih terapijskih grupa G3–G12.

Zaključak

Na osnovu eksperimentalne studije sprovedene na životinjama, može se zaključiti da su sve terapijske grupe (pojedinačni laktoferin i njegove kombinacije) bile efikasne u lečenju anemije u slučaju modela anemije izazvane ishranom sa nedostatkom gvožđa (RAT). Međutim, utvrđeno je da je nivo zaštite koji obezbeđuje kombinovana terapija ovog pronalaska (koja obuhvata laktoferin gvanozin nukleotid(e) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so) efikasniji i superiorniji u odnosu na individualni tretman. Rezultati pokazuju da kombinacije laktoferina (G8–G11) poboljšavaju status gvožđa slično kao i gvožđe-sulfat (standardni dodatak gvožđu) i da pružaju zaštitni efekat protiv anemije usled nedostatka gvožđa. Može se zaključiti da grupe G8–G11 (kombinacija laktoferina) pokazuju korekciju hepcidina i da markeri inflamacije indukuju nedostatak gvožđa u slučaju modela anemije izazvane ishranom sa nedostatkom gvožđa (RAT). Kombinovana terapija ovog pronalaska takođe je korisna u lečenju neurodegenerativnog poremećaja.

Claims (15)

PATENTNI ZAHTEVI

1. Farmaceutski sastav koji sadrži kombinaciju:

a) laktoferina i

b) jednog ili više gvanozin nukleotida ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli, pri čemu se količina laktoferina kreće od 5% do 50% težine sastava, a količina gvanozin nukleotida od 1% do 5% težine sastava.

2. Farmaceutski sastav prema 1. patentnom zahtevu, pri čemu se bira gvanozin nukleotid između gvanozin monofosfata (GMP), gvanozin difosfata (GDP), gvanozin trifosfata (GTP) ili njihove kombinacije.

3. Farmaceutski sastav prema 1. patentnom zahtevu, pri čemu se farmaceutski prihvatljiva so gvanozin nukleotida bira između hidrohlorida, sulfata, fosfata, acetata, laktata, citrata, pantotenata, askorbata, sukcinata, maleata, fumarata, glukonata, magnezijumove soli, kalijuma, natrijuma, cinka, soli dietanolamina i njihove kombinacije.

4. Farmaceutski sastav prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu sastav dalje sadrži elementarno gvožđe, vitamin C, vitamin A, folnu kiselinu, folat, vitamin B ili njihovu kombinaciju.

5. Farmaceutski sastav prema 4. patentnom zahtevu, pri čemu se količina elementarnog gvožđa kreće od 30% do 45% težine sastava.

6. Farmaceutski sastav prema 4. patentnom zahtevu, pri čemu se količina vitamina C kreće od 5% do 65% težine sastava.

7. Farmaceutski sastav prema 4. patentnom zahtevu, pri čemu se količina vitamina A kreće od 0,5% do 3% težine sastava.

8. Farmaceutski sastav prema 4. patentnom zahtevu, pri čemu se količina folne kiseline ili folata kreće od 0,05% do 0,75% težine sastava.

9. Farmaceutski sastav prema 4. patentnom zahtevu, pri čemu se količina vitamina B kreće od 1% do 5% težine sastava.

10. Farmaceutski sastav prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, koji dalje sadrži farmaceutski prihvatljive ekscipijente.

11. Farmaceutski sastav prema 10. patentnom zahtevu, pri čemu se farmaceutski prihvatljivi ekscipijenti biraju između razblaživača, vezivnog agensa, agensa za dezintegraciju, lubrikanta, fluidifikanta, agensa za oblaganje, rastvarača i njihove kombinacije.

12. Farmaceutski sastav prema 11. patentnom zahtevu, pri čemu se količina:

razblaživača kreće od 5% do 45% težine sastava,

vezivnog agensa kreće od 1% do 7% težine sastava,

agensa za dezintegraciju kreće od 1% do 25% težine sastava,

lubrikanta kreće od 0,5% do 5% težine sastava,

fluidifikanta kreće od 0,5% do 5% težine sastava,

agensa za oblaganje kreće od 1% do 15% težine sastava, a/i

količina rastvarača nalazi se u dovoljnoj meri.

13. Farmaceutski sastav prema 1. patentnom zahtevu, pri čemu je sastav u obliku tablete, kapsule, pilule, tvrde kapsule ispunjene tečnošću ili čvrstom materijom, meke kapsule, praha, granule, kesice, enterički obložene tablete ili kapsule, tablete ili kapsule sa modifikovanim oslobađanjem.

14. Postupak pripreme sastava prema 1. patentnom zahtevu obuhvata:

(a) pojedinačno merenje svih sastojaka u zasebnim posudama;

(b) prosejavanje prethodno izmerenog laktoferina, gvanozin nukleotida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i, opciono, zasebno dodavanje elementarnog gvožđa, vitamina C, vitamina A, folne kiseline, folata ili vitamina B, razblaživača i agensa za dezintegraciju;

(c) mešanje sastojaka iz koraka (b);

(d) opciono, priprema rastvora vezivnog agensa u zasebnoj posudi i dodavanje sastojaka koraku (c), kao i prosejavanje formirane granulisane vlažne mase da bi se dobile granule;

(e) sušenje dobijenih granulata do smanjenja nivoa suvoće (LOD) na između 3,0% do 5,0% težine/100 g;

(f) prosejavanje poluosušenih granula kroz odgovarajuće sito; i

(g) zasebno prosejavanje prethodno izmerenih lubrikanata i fluidifikanata kroz odgovarajuće sito i dodavanje sastojaka koraku (f) da bi se dobio sastav.

15. Farmaceutski sastav prema 1. patentnom zahtevu za upotrebu u postupku lečenja anemije usled nedostatka gvožđa (IDA), anemije inflamacije (AOI) i neurodegenerativnih poremećaja.