RS63620B1 - Postupci za lečenje disregulacije jedarnog faktora kapa-pojačivača lakog lanca aktiviranih b ćelija (nf-kb) kod domaćina kod koga postoji potreba za tim upotrebom kompozicija membrane ljuske jajeta - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu kompozicija membrane ljuske jajeta za aktiviranje nivoa jedarnog faktora kapa-pojačivača lakog lanca aktiviranih B ćelija ("NF-κB") u crevu domaćina kod koga postoji potreba za tim i postupke lečenja stanja povezanih sa do disregulacijom NF-κB.

STANJE TEHNIKE

[0002] Inflamacija igra ključnu ulogu u odbrani domaćina od infektivnih napadača i popravljanju tkiva nakon povrede. Međutim, kada se inflamacija ne reši na odgovarajući način, može imati značajne štetne efekte u telu. Dobro je prihvaćeno da hronična upala doprinosi patogenezi bezbrojnih bolesti. Ova vrsta upale obično dovodi do uništenja tkiva i/ili otkazivanja organa i može dovesti do simptoma koji mogu imati drastičan uticaj na kvalitet života obolelih.

[0003] Kada dođe do povrede tkiva fizičkim, hemijskim ili biološkim putem, fosfolipidi u ćelijskim membranama se prvo metabolišu u arašidonsku kiselinu, koja se dalje metaboliše u prostaglandine preko dobro poznatih enzima ciklooksigenaze (COX-1 i COX-2). Nastali prostaglandini prvenstveno proizvode dobro prepoznatljive spoljašnje efekte koji se vide na mestu povrede, uključujući edem (otok), eritem (crvenilo), lokalizovanu groznicu i bol. Istovremeno, lokalne ćelije i takođe imune ćelije kada stignu na mesto povrede oslobađaju proinflamatorne citokine, posebno interleukin 1 beta (IL-1β) i faktor nekroze tumora alfa (TNF-α). Ovi proinflamatorni citokini pojačavaju inflamatorni proces i kaskadu bola kroz mehanizme povratne sprege kao što je prikazano na sledećem dijagramu:

[0004] Tretmani za hronična inflamatorna stanja mogu ciljno delovati na bilo koji od brojnih enzima ili receptora unutar ove kaskade. Na primer, kortikosteroidi suprimiraju aktivnost fosfolipaze A2, usporavajući oslobađanje arašidonske kiseline iz konverzije fosfolipida unutar ćelijske membrane, i aspirin (acetilsalicilna kiselina), jedan od najpoznatijih nesteroidnih antiinflamatornih lekova (NSAID), neselektivno i nepovratno inhibira ciklooksigenazu-1 (COX-1), jedan od primarnih enzima u proizvodnji nishodnih prostaglandina. Međutim, nekoliko tretmana, ako ih ima, posebno su ciljno delovali na ulogu koju NF-κB igra u ovoj inflamatornoj kaskadi.

[0005] NF-κB je porodica proteinskih kompleksa koja se nalazi u citoplazmi skoro svih tipova životinjskih ćelija, a aktivnosti vezivanja DNK ove familije transkripcionih faktora su prvi put objavljene 1986. Jednom aktiviran i translociran u jezgro, NF-κB kontroliše transkripciju višestrukih gena uključenih u brzo reagovanje na negativne ili štetne spoljašnje ćelijske stimuluse kao što je prikazano na sledećem dijagramu:

[0006] Aktivni NF-κB je heterodimerni protein koji se sastoji od p50 monomera sa RelA monomerom (p50/RelA) ili od p52 monomera sa RelB monomerom (p52/RelB). Rel proteini (RelA & RelB) su visoko konzervirani (od vrste do vrste) DNK-vezujući domen poznat kao Rel homološki domen (RHD) koji takođe sadrži domene aktivacije transkripcije (TAD) koji im omogućavaju da aktiviraju ekspresiju ciljnog gena. Monomeri p50 i p52 su poznati kao NF-κB proteini i sastoje se uglavnom od ankirinskih ponovaka sa dva N-terminalna serinska ostatka. Oni takođe sadrže RHD domen, ali im nedostaju TAD koji se nalaze u Rel proteinima i stoga ne mogu da aktiviraju ekspresiju gena ni u njihovom monomernom obliku ni u homodimernom (p50/p50 ili p52/p52) obliku. Moraju biti spojeni sa Rel proteinom da bi se aktivirale DNK sekvence poznate pod zajedničkim nazivom KB mesta.

[0007] Pre aktivacije, p50/RelA heterodimer postoji u citoplazmi kao neaktivan kompleks u kome je vezan za inhibitor KB poznat kao IκBα, i p52/RelB heterodimer postoji kao neaktivni p100/RelB heterodimer u citoplazmi. Postoje dva dobro prihvaćena puta za aktivaciju NF-κB, kanonski ili klasični put i nekanonski ili alternativni put. U kanonskom putu, IκBα je serijski fosforilisan inhibitorom κB kinaze (IKK-α), ciljno delujući na IκBα za ubikvitinaciju i eventualno uništenje u proteazomu. U nekanonskom putu, p100 koji funkcioniše kao inhibitor κB (IκB), serijski je fosforilisan inhibitorom κB kinaze (IKK-I3) i delimično se razgrađuje do aktivnog proteina p52. Ove IκB kinaze (IKK-α & IKK-β) postoje u trimernom obliku u citoplazmi u onome što je poznato kao IKK kompleks. IKK su spojeni sa esencijalnim modulatorom regulatornog proteina skele NF-κB (NEMO) da bi se sprečilo kontinuirano aktiviranje NF-κB. U bilo kom putu (kanonskom ili nekanonskom), IKK kompleks se aktivira kada se signalni molekuli vezuju za receptore na površini ćelije. Bakterijski ili virusni antigeni, različiti citokini (npr. IL-1β, TNF-α, itd.), oksidativni stres, ultraljubičasto zračenje i slobodni radikali su samo neki od stimulusa za koje se zna da izazivaju aktivaciju jednog ili drugog od NF-κB puteva, bilo direktnim vezivanjem za ove receptore na površini ćelije ili izazivanjem formiranja drugih signalnih molekula koji se zatim vezuju za receptore.

[0008] NF-κB je prvobitno istražen zbog njegove kritične uloge u regulisanju imunološkog odgovora na infekciju. Međutim, u decenijama od njegovog otkrića, disregulacija NF-κB je povezana sa brojnim klasičnim inflamatornim bolestima kao što su sepsa, astma, reumatoidni artritis (RA) i inflamatorna bolest creva (IBD). Zanimljivo je da su brojne bolesti koje nisu očigledno inflamatorne prirode takođe povezane sa disregulacijom NF-KB, uključujući aterosklerozu, Alchajmerovu bolest, multiplu sklerozu, dijabetes i razne vrste kancera [0009] Generalno, disregulacija NF-κB uključena u patologiju bolesti je prekomerna aktivacija, neodgovarajuća aktivacija ili hronična aktivacija. U klasičnoj inflamatornoj bolesti kao što je astma, iritanti disajnih puteva koji su samo blago iritantni za normalne disajne puteve izazivaju ozbiljnu upalu u astmatičnim disajnim putevima (tj. preteranu aktivaciju). Kod inflamatornih bolesti creva kao što su Kronova bolest ili netolerancija na gluten, komponente ishrane osobe koje nisu iritantne za normalna creva, izazivaju akutnu upalu koja može dovesti do ozbiljnog oštećenja creva (tj. neodgovarajuće aktivacije). Ili, u slučaju reumatoidnog artritisa, telo obolelog od RA postaje senzibilizovano na fragmente degradirane hrskavice (tj. glikozaminoglikane, kolagen tipa II, itd.) što dovodi do autoimune reakcije na sopstvenu hrskavicu koja na kraju dovodi do dalje i teške degradacije hrskavice (tj. hronična aktivacija). Logično, za lečenje ovih bolesti trebalo bi da se deaktivira ili inhibira NF-κB na neki način kako bi se obnovila njegova pravilna regulacija.

[0010] Prijavioci su iznenađujuće otkrili da aktivacija NF-κB u crevima domaćina ima pozitivan efekat na mnoge bolesti i stanja, kao i na lečenje disregulacije NF-κB. Bez vezivanja za teoriju, prijavioci veruju da aktivacija NF-κB u crevima domaćina rezultira smanjenjem ili deaktivacijom NF-κB sistemski u domaćinu.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0011] Ovaj pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu kao što je definisana u zahtevima 1-3.

[0012] Otkriće opisuje postupak za aktiviranje NF-κB u crevima domaćina kome je to potrebno. Postupak obuhvata oralnu primenu efikasne količine kompozicije koja se esencijalno sastoji od membrane ljuske jajeta, i/ili izolata membrane ljuske jajeta i/ili hidrolizata membrane ljuske jajeta.

[0013] Otkriće takođe opisuje postupak za sistemsko smanjenje NF-κB kod domaćina kome je to potrebno. Postupak sadrži oralnu primenu efikasne količine kompozicije koja se esencijalno sastoji od membrane ljuske jajeta, i/ili izolata membrane ljuske jajeta i/ili hidrolizata membrane ljuske jajeta.

[0014] Domaćin kome je to potrebno može da pati od plućne bolesti ili stanja. Plućna bolest ili stanje se bira iz grupe koja se sastoji od astme, hronične opstruktivne plućne bolesti, bronhitisa, emfizema, cistične fibroze, plućnog edema, sarkoidoze, sindroma akutnog respiratornog distresa, pneumokonioze, plućne hipertenzija, hipersenzitivnog pneumonitisa i alergija.

[0015] Plućna bolest ili stanje je takođe odabrano iz grupe koja se sastoji od blage, periodične kongestije pluća; blagog, periodičnog kašlja; blagog, periodične zapuštenosti sinusa; periodičnog kijanja; ili blagog, periodičnog zapaljenja pluća.

[0016] Domaćin kome je to potrebno može pati od bolesti ili stanja koje pogađa mozak ili nervni sistem. Bolest ili stanje koje pogađa mozak ili nervni sistem bira se iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti, fibromialgije, privremenog ishemijskog napada, vaskulitisa, cerebralnog edema, multiple skleroze, Hantingtonove bolesti, amiotrofne lateralne skleroze, Parkinsonove bolesti, epilepsije i neurodegeneracije.

[0017] Bolest ili stanje koje pogađa mozak ili nervni sistem je takođe odabrano iz grupe koja se sastoji od periodične zaboravnosti; blagog, periodičnog peckanja nerva ili fantomske senzacije; ili blagih, periodičnih trzaja mišića.

[0018] Domaćin kome je to potrebno može takođe da pati od kardiovaskularne bolesti ili stanja. Kardiovaskularna bolest ili stanje je izabrano iz grupe koja se sastoji od ateroskleroze, kardiomiopatije, Marfanovog sindroma, perikarditisa, bolesti srčanih zalistaka, reumatske bolesti srca, bolesti perifernih arterija, venske tromboze, inflamatorne bolesti srca, hipertenzije, hiperlipidemije i hipertrigliceridemije.

[0019] Kardiovaskularna bolest ili stanje je takođe odabrano iz grupe koja se sastoji od blage vaskularne inflamacije; blago povišenog krvnog pritiska; blago povišenog holesterola; ili blago povišenih triglicerida.

[0020] U ovde opisanom postupku, domaćin kome je to potrebno je takođe domaćin koji pati od bolesti ili stanja gastrointestinalnog sistema. Bolest ili stanje gastrointestinalnog sistema je odabrano iz grupe koja se sastoji od Kronove bolesti, ulceroznog kolitisa, gastritisa, divertikulitisa, sindroma iritabilnog creva, celijakije, gastroezofagealne refluksne bolesti, dispepsije, peptičkog čira i čira na dvanaestopalačnom crevu.

[0021] Bolest ili stanje gastrointestinalnog sistema se takođe bira iz grupe koja se sastoji od blage, periodične dijareje; blagog, periodičnog zatvora; blagih, periodičnih grčeva ili bola u stomaku; blage inflamacije želudca; blage inflamacije creva; ili blage inflamacije debelog creva.

[0022] Domaćin kome je to potrebno može takođe da pati od kancera. Kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od leukemije, limfoma, kancera dojke, kancera mokraćne bešike, kancera debelog creva, kancera prostate, kancera pankreasa, kancera jajnika i kancera štitne žlezde.

[0023] Domaćin kome je to potrebno može takođe da pati od bolesti izabrane iz grupe koja se sastoji od nealkoholnog steatohepatitisa, hepatitisa, nefritisa, dermatitisa, konjuktivitisa i gingivitisa.

[0024] Ovde opisani postupak može dalje da sadrži ko-primenu anti-inflamatornog sredstva na navedenog domaćina.

[0025] Anti-inflamatorno sredstvo je izabrano iz grupe koja se sastoji od inhalacionog kortikosteroida; oralnog kortikosteroida; nesteroidnog anti-inflamatornog leka; omega-3 ili omega-6 polinezasićene masne kiseline; vrste Boswellia ili ekstrakta Boswellia; kurkume ili ekstrakta kurkume; kurkumina ili kurkuminoida; kore bele vrbe ili ekstrakta kore bele vrbe; proteolitičkih enzima; kolagena ili hidrolizata kolagena; ekstrakta borove kore; vitamina ili vitaminskog prekursora; i minerala.

KRATAK OPIS SLIKA

[0026]

Slika 1: Ova slika ilustruje in vitro NF-κB aktivnost fermentacije i enzimskih hidrolizata membrane ljuske jajeta u mononuklearnim ćelijama periferne krvi čoveka.

Slika 2: Ova slika ilustruje in vitro NF-κB aktivnost fermentacionih, enzimskih i hemijskih hidrolizata membrane ljuske jajeta u ćelijskoj liniji humanih THP-1 monocita.

Slika 3: Ova slika prikazuje primer merenja otoka skočnog zgloba od 9. do 17. dana kod artritisa izazvanog kolagenom kod naivne kontrole, kontrole artritisa, pacova lečenih metotreksatom i NEM.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0027] Ovo otkriće opisuje postupke za aktiviranje NF-κB u crevima domaćina kome je to potrebno. Ovo otkriće takođe opisuje postupke za sistemsku deaktivaciju NF-κB kod domaćina kome je to potrebno. Postupci sadrže oralnu primenu efikasne količine kompozicije koja se esencijalno sastoji od membrane ljuske jajeta, i/ili izolata membrane ljuske jajeta i/ili hidrolizata membrane ljuske jajeta.

[0028] Pod "aktivacijom" se podrazumeva da se endogeni NF-κB koji je prisutan u ćelijama domaćina aktivira, tj. pokreće se imunološkim odgovorom izazvanim u crevima domaćina kao odgovorom na sastav membrane ljuske jajeta. Kao rezultat navedene aktivacije, nivoi aktivnog NF-κB u crevima domaćina su povećani.

[0029] Pod "sistemskim deaktiviranjem" se podrazumeva da je količina aktivnog NF-κB smanjena u telu domaćina kome je to potrebno. „Telo“ obuhvata sve delove fizičkog tela domaćina. Telo uključuje ekstremitete, sisteme organa, mozak, kožu i skeletni sistem domaćina.

[0030] Pod "creva" podrazumeva se da se u celini uključi probavni kanal. Na primer, creva obuhvataju sve delove creva domaćina od pilorusa do anusa. Crevo takođe uključuje prednje, srednje i zadnje crevo domaćina. Ovo uključuje, na primer, želudac, debelo crevo i tanko crevo. U poželjnom primeru izvođenja, aktivacija NF-κB se dešava u tankom i debelom crevu.

[0031] Pod "domaćinom kome je to potrebno" podrazumeva se svaki domaćin koji može imati koristi od sistemske deaktivacije NF-κB. Domaćin je bilo koji sisar, vodozemac, gmizavac, riba ili ptica. Sisari uključuju, na primer, ljude, domaće životinje i životinje sa farmi. Domaće životinje uključuju, na primer, mačke i pse. Životinje sa farmi uključuju, na primer, krave, konje, svinje, kokoške i ovce. Vodozemci uključuju sve vodozemce uključujući, na primer, žabe, krastače, daždevnjake i tritone. U gmizavce spadaju svi gmizavci uključujući, na primer, zmije, guštere i kornjače. Ribe uključuju bilo koju ribu uključujući slanu i slatkovodnu ribu. Ptice uključuju bilo koju pticu.

[0032] Deaktivacija NF-κB se dešava u bilo kom delu tela domaćina. Na primer, deaktivacija NF-κB se dešava u plućima, mozgu, srcu ili crevima. U poželjnom primeru izvođenja, deaktivacija NF-κB se dešava sistemski u domaćinu.

[0033] Primeri „domaćina kome je to potrebno“ uključuje domaćina koji pati od plućne bolesti ili stanja, bolesti ili stanja koje pogađa mozak ili nervni sistem, kardiovaskularne bolesti ili stanja, bolesti ili stanja gastrointestinalnog sistema, kancera, drugih bolesti i stanja ili stanja u kojima je prisutna disregulacija NF-κB.

[0034] Plućna bolest ili stanje može biti bilo koja plućna bolest ili stanje. Na primer, plućna bolest ili stanje je izabrano iz grupe koja se sastoji od astme, hronične opstruktivne plućne bolesti, bronhitisa, emfizema, cistične fibroze, plućnog edema, sarkoidoze, sindroma akutnog respiratornog distresa, pneumokonioze, plućne hipertenzije i alergija. Dalje, plućna bolest ili stanje se takođe bira iz grupe koja se sastoji od blage, periodične kongestije pluća; blagog, periodičnog kašlja; blagog, periodičnog zapušenja sinusa; periodičnog kijanja; ili blagog, periodičnog zapaljenja pluća.

[0035] Bolest ili stanje koje pogađa mozak ili nervni sistem može biti bilo koja bolest ili stanje koje utiče na mozak ili nervni sistem. Na primer, bolest ili stanje koje pogađa mozak ili nervni sistem je izabrano iz grupe koja se sastojio od Alchajmerove bolesti, fibromialgije, privremenog ishemijskog napada, vaskulitisa, cerebralnog edema, multiple skleroze, Hantingtonove bolesti, amiotrofne lateralne skleroze, Parkinsonove bolesti, epilepsije i neurodegeneracije.

[0036] Bolest ili stanje koje pogađa mozak ili nervni sistem je takođe odabrano iz grupe koja se sastoji od periodične zaboravnosti; blagog, periodičnog peckanja nerva ili fantomske senzacije; ili blagih, periodičnih trzaja mišića.

[0037] Kardiovaskularna bolest ili stanje može biti bilo koja bolest ili stanje koje utiče na kardiovaskularni sistem. Na primer, kardiovaskularno oboljenje ili stanje je odabrano iz grupe koja se sastoji od ateroskleroze, kardiomiopatije, Marfanovog sindroma, perikarditisa, bolesti srčanih zalistaka, reumatske bolesti srca, bolesti perifernih arterija, venske tromboze, inflamatorne bolesti srca, hipertenzije, hiperlipidemije i hipertrigliceridemije. Kardiovaskularna bolest ili stanje je takođe odabrano iz grupe koja se sastoji od blage vaskularne inflamacije; blago povišenog krvnog pritiska; blago povišenog holesterola; ili blago povišenih triglicerida.

[0038] Bolest ili stanje gastrointestinalnog sistema može biti bilo koja bolest ili stanje koje utiče na gastrointestinalni sistem domaćina. Na primer, bolest ili stanje gastrointestinalnog sistema je odabrano iz grupe koja se sastoji od Kronove bolesti, ulceroznog kolitisa, gastritisa, divertikulitisa, sindroma iritabilnog creva, celijakije, gastroezofagealne refluksne bolesti, dispepsije, peptičkog čira i čira na dvanaestopalačnom crevu. Bolest ili stanje gastrointestinalnog sistema se takođe bira iz grupe koja se sastoji od blage, periodične dijareje; blagog, periodičnog zatvora; blagih, periodičnih grčeva ili bola u stomaku; blage inflamacije želudca; blage inflamacije creva; ili blage inflamacije debelog creva.

[0039] Kancer može biti bilo koji oblik kancera. Na primer, kancer je izabran iz grupe koja se sastoji od leukemije, limfoma, kancera dojke, kancera bešike, kancera debelog creva, kancera prostate, kancera pankreasa, kancera jajnika i kancera štitne žlezde.

[0040] Ostale bolesti uključuju sve bolesti koje bi mogle imati koristi od aktivacije NF-κB u crevima. Na primer, druge bolesti se biraju iz grupe koja se sastroji od nealkoholnog steatohepatitisa, hepatitisa, nefritisa, dermatitisa, konjuktivitisa i gingivitisa.

[0041] Bolesti i stanja u kojima je prisutna disregulacija NF-κB uključuju bilo koju bolest ili stanje u kome je jedan od faktora koji doprinose disregulaciji NF-κB. Na primer, ovo uključuje bolest ili stanje u kojem disregulacija NF-κB igra ulogu u etiologiji i/ili patologiji bolesti i odnosi se na bolesno stanje u kojem je NF-κB nenormalno aktiviran (ili prekomerno aktiviran, neodgovarajuće aktiviran ili hronično aktiviran) na ćelijskom nivou, bilo lokalno ili sistemski, i koji doprinosi razvoju i/ili progresiji bolesnog stanja direktno ili indirektno utičući na druge sisteme tela.

[0042] Pored toga, abnormalno aktivirani NF-κB se odnosi na domaćina koji ima ćelijske nivoe neinhibiranog ili aktivnog NF-κB koji su povišeni u poređenju sa odgovarajućim normalnim domaćinom iste vrste unutar istog tipa ćelije koji ima isti pol, težinu, visinu i/ili starost tretiranog domaćina. Ovaj efekat se obično javlja kroz naknadnu aktivaciju imunog sistema domaćina od strane NF-κB, što dovodi do abnormalnog hroničnog inflamatornog

1

odgovora. U slučaju astme, ova upala se javlja u plućima. U slučaju Alchajmerove bolesti, ova upala se javlja u moždanom tkivu. U slučaju artritisa, ova upala se javlja u tkivima zgloba (npr. tetiva, ligamenti, sinovija, zglobna hrskavica, itd.). U slučaju kardiovaskularnih bolesti, ova upala se javlja u srčanom tkivu ili zidovima krvnih sudova. U slučaju dijabetesa, ova upala se javlja u pankreasu. U slučaju inflamatorne bolesti creva (IBD), ova upala se javlja na različitim lokacijama u crevnom traktu u zavisnosti od specifičnog tipa IBD (npr. Kronova bolest, sindrom iritabilnog creva (IBS), ulcerozni kolitis, itd.). U slučaju multiple skleroze, ova upala se javlja u nervnom i mišićnom tkivu.

[0043] Domaćin kome je to potrebno može biti u "pre-bolesnom" stanju. Na primer, u stanju pre bolesti, disregulacija NF-κB može se javiti u najranijim fazama, ali nema ili nema dovoljno kliničkih simptoma bolesti koji bi mogli da daju dijagnozu takve bolesti, a subjekat bi se inače smatrao „zdravim“. Iako se subjekat smatra 'zdravim', on bi imao koristi od primene kompozicije koja je predmet ovog pronalaska i takav tretman bi čak mogao da spreči da subjekat dostigne bolesno stanje. Dakle, u jednom primeru izvođenja, domaćin kome je to potrebno je 'zdrav' domaćin.

Primena

[0044] Prema pronalasku, kompozicija kao što je definisana u zahtevu 1 oralno se primenjuje na domaćina kome je to potrebno. Oralna primena uključuje primenu preko usta u bilo kom pogodnom obliku. Na primer, pogodni oblici uključuju pilule, tablete, kapsule, prahove, gumene bonbone, pastile i eliksire. Kompozicija se takođe oralno primenjuje kao sastojak u hrani, dijetetskim suplementima ili farmaceutskim proizvodima.

[0045] Stručnjak u ovoj oblasti može da zamisli druge formate oralne isporuke i oni su namenjeni da budu obuhvaćeni obimom ovog pronalaska.

Efikasna količina

[0046] Pod "efikasnom količinom" se podrazumeva svaka količina koja efikasno aktivira NF-κB u crevima domaćina kome je to potrebno. Ova količina se određuje uzimajući u obzir telesnu težinu domaćina. U poželjnom primeru izvođenja, dnevna doza kompozicije koja se u suštini sastoji od membrane ljuske jajeta i/ili izolata membrane ljuske jajeta i/ili hidrolizata membrane ljuske jajeta je približno 500 mg dnevno za čoveka prosečne veličine (npr.132 lbs. ili 60 kg). Za manje domaćine kao što su psi ili mačke, dnevna doza kompozicije je 15 mg/kg (6,8 mg/lb.). Za veće domaćine kao što je konj, dnevna doza kompozicije je 5 mg/kg (2,3 mg/lb.).

[0047] Dnevna doza se primenjuje odjednom ili u 2 ili više manjih doza koje se dodaju približnoj dnevnoj dozi za domaćina. Na primer, doza od približno 500 mg dnevno može se uzeti kao približno 250 mg ujutru i 250 mg uveče. Formulacije sa produženim oslobađanjem su takođe razmatrane.

Kompozicije pronalaska

[0048] Kompozicije za upotrebu prema pronalasku se esencijalno sastoje od membrana ljuske jajeta i hidrolizata membrane ljuske jajeta prisutnih u prirodi.

[0049] Materijal za membranu ljuske jajeta se dobija postupcima koji poželjno uključuju korak odvajanja membrane ljuske jajeta od žumanca, belanaca i ljuske pre naknadne obrade i koraka izolacije. Membrana ljuske jajeta i hidrolizati membrane ljuske jajeta poželjno su bez bilo kakvih komponenti embriona ili njihovih tragova, na primer, životinjskog tkiva, krvi ili komponenti telesnih tečnosti, koje su štetne ili nepoželjne za razmatranu upotrebu proizvoda ili kombinacija proizvoda.

[0050] Tipično, izvor membrane ljuske jajeta će biti iz napuknutih kokošjih jaja, gde je membrana ljuske jajeta još uvek pričvršćena za ljusku jajeta. Membrana ljuske jajeta se može odvojiti od ljuske jajeta na bilo koji pogodan način. Poželjno je da se membrana ljuske jajeta odvoji od ljuske jajeta u odsustvu bilo koje neželjene supstance koja bi ostala u izvornom materijalu. Neželjene supstance će prvenstveno uključivati kalcijum karbonat iz preostale ljuske jajeta. Međutim, male količine ovog izvora kalcijuma mogu biti korisne u određenim primenama, na primer, dijetetskim suplementima.

[0051] Postupci za odvajanje membrane ljuske jajeta od ljuske jajeta mogu uključivati čisto mehanički način kao što je, na primer, valjanje i izvlačenje membrana od opranih ljuski nakon uklanjanja žumanceta i belanceta svežih ili nekuvanih jaja. Takođe se razmatraju mehanički postupci odvajanja membrana ljuske jajeta od kuvanih jaja.

[0052] Kombinacija mehaničkih i hemijskih sredstava za odvajanje membrane ljuske jajeta od ljuske jajeta takođe se može koristiti, kao što je mešanje grubo iseckanih ljuski jajeta koje sadrže prilepljene membrane u prisustvu razblažene kiseline dok se membrana ne odvoji od ljuske i odvoji oslobođene membrane od ljuski. SAD Pat. br. 3,194,732 za Neuhauser daje detaljniju diskusiju o postupcima odvajanja membrane ljuske jajeta od ljuske jajeta.

[0053] Postupak takođe poželjno uključuje sušenje odvojene membrane ljuske jajeta da bi se dobile ljuspice membrane ljuske jajeta različitih dimenzija i naknadno drobljenje ili mlevenje ljuskica membrane ljuske jajeta da bi se dobio prah membrane ljuske jajeta sa veličinom čestica između 50-500 mikrona. Uprašivanje se postiže standardnim postupcima drobljenja, mlevenja ili usitnjavanja za tretiranje ljuskica membrane ljuske jajeta koje sadrže oko 10% vlage ili manje. Određivanje veličine se vrši korišćenjem serije sita.

[0054] U poželjnom primeru izvođenja, membrana ljuske jajeta u prahu je podvrgnuta hemijskoj ili enzimskoj hidrolizi. Dobijena suspenzija tipično sadrži rastvorljivu frakciju koja sadrži pretežno proteine ili manje peptide i druge frakcije rastvorljive u vodi i nerastvorljivu frakciju koja sadrži pretežno proteine visoke molekularne težine i druge nerastvorljive frakcije. Hemijska hidroliza membrane ljuske jajeta može se postići korišćenjem mineralnih kiselina, organskih kiselina, mineralnih baza, organskih baza, metalnih katalizatora, aminokiselina, redukcionih agenasa, oksidacionih agenasa ili bilo koje druge hemikalije koja katalizuje hidrolizu ili na neki način rastvara materijal. Enzimska hidroliza membrane ljuske jajeta može se postići korišćenjem enzima iz biljnih ili životinjskih izvora ili iz mikroorganizama kao što su bakterije ili kvasci. Tipovi enzima koji se mogu koristiti u hidrolizi su: proteaze, kolagenaze, elastaze, hidrolaze, liaze, ligaze ili bilo koji drugi enzimi koji katalizuju hidrolizu ili na neki način rastvaraju materijal.

[0055] U sledećem primeru izvođenja, membrana ljuske jajeta u prahu se podvrgava fermentaciji sa živim inokulumom. Inokulum se sastoji od živih mikroorganizama kao što su bakterije, kvasci, gljive ili njihove kombinacije. Neki primeri vrsta mikroorganizama su: Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus stearothermophilus, Streptomyces griseus, Serratia marcescens, Rhizopus niveus, Rhizopus oryzae, Penicillium duponti, Aspergillus oryzae, Aspergillus niger, Aspergillus melleus, Aspergillus sojae, Aspergillus saitoi, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces fragilis, itd. Dobijena suspenzija tipično sadrži rastvorljivu frakciju koja sadrži pretežno proteine ili manje peptide i druge frakcije rastvorljive u vodi i nerastvorljivu frakciju koja sadrži pretežno proteine visoke molekulske težine i druge nerastvorljive frakcije. Poželjno je da se izolati i hidrolizati membrane jajeta pripremaju bez suštinske promene prirodnog materijala koji se nalazi u membrani ljuske jajeta.

[0056] Materijali koji se nalaze u membrani ljuske jajeta su prirodni, tj. nisu bitno izmenjeni kao rezultat postupaka koji se koriste za pripremu hidrolizata.

[0057] Terminologijom „prirodni materijal“, „materijal koji se javlja u prirodi“ ili „aktivni materijal koji se javlja u prirodi“, izveden iz membrane ljuske jajeta, podrazumeva se da materijal dobijen od membrane ljuske jajeta sadrži značajnu količinu najmanje jednog

1

sastojka ili komponente membrane ljuske jajeta koja je suštinski nepromenjena od netretirane ili neobrađene membrane ljuske jajeta, u smislu njene funkcije kao sastojka korisnog za terapeutske primene. Pod suštinski nepromenjenim podrazumeva se da izabrani ili željeni sastojak(i) ili komponenta(e) u suštini zadržava(ju) svoje/njihove fizičke karakteristike i da se značajno ne razgrađujeju, digestiraju ili cepaju. Međutim, druge komponente ili sastojci mogu biti izmenjeni u određenim izolatima ili hidrolizatima. Na primer, hidrolizati pripremljeni enzimskim tretmanom mogu dovesti do toga da se proteini koji se javljaju u prirodi barem delimično digestiraju. Poželjno, većina prirodnih sastojaka koji se nalaze u membrani ljuske jajeta su suštinski nepromenjeni i, poželjnije, suštinski svi sastojci koji se pojavljuju u prirodi su suštinski nepromenjeni. Iako fizičke karakteristike pojedinačnih komponenti membrane ljuske jajeta ostaju suštinski nepromenjene, ukupan sastav ili količine različitih komponenti mogu da se menjaju u zavisnosti od željenog sastava za određeni izolat ili hidrolizat.

[0058] Kompozicije mogu uključivati mehanički obrađenu membranu ljuske jajeta, kao što su ljuspice ili prah, i hidrolizate membrane ljuske jajeta. Hidrolizati membrane ljuske jajeta mogu biti u tečnom, polučvrstom ili čvrstom obliku, npr. delimično dehidrirani praškasti oblik koji sadrži različite količine tečnosti ili vlage.

[0059] Iako je ovaj pronalazak usmeren na membranu ljuske pilećeg jajeta (tj. Gallus gallus ili Gallus domesticus), stručnjak iz date oblasti tehnike bi mogao da zamisli upotrebu bilo koje druge membrane od ljuske jajeta kao što su patke, guske, nojevi, golubovi, prepelice, itd. Štaviše, u nekim primerima ova prijava je opisana u vezi sa postupkom enzimske hidrolize membrane ljuske jajeta i naknadne ekstrakcije i prečišćavanje prirodnih supstanci membrane ljuske jajeta. Stručnjak u ovoj oblasti lako može da utvrdi različite postupke za hidrolizu membrane ljuske jajeta. Namera je da takvi ekvivalenti budu obuhvaćeni obimom ovog pronalaska.

[0060] Otkriće takođe opisuje terapeutske kompozicije koje uključuju membranu ljuske jajeta u kombinaciji sa terapeutski prihvatljivim nosačem ili vehikulumom. Terapijski prihvatljiv nosač treba da bude bilo koji materijal koji ne ometa terapijski efekat(e) pronalaska, ali koji može poslužiti za oralnu isporuku terapeutske kompozicije. Ovo može uključivati tipične farmaceutske ekscipijense i/ili vezujuća sredstva kao što su kalcijum karbonat, mikrokristalna celuloza, silicijum dioksid, skrob, manitol, fruktoza, saharoza, sorbitol, limunska kiselina, alginat, kalcijum fosfat, želatin, glicerin, pektin, hipromeloza, magnezijum stearat, polietilenglikol, metil paraben, itd.

[0061] Kompozicija koja sadrži kako (a) membranu ljuske jajeta i hidrolizate membrane ljuske jajeta tako i (b) anti-inflamatorno sredstvo, je takođe obuhvaćena pronalaskom.

[0062] Pod "anti-inflamatornim sredstvom" podrazumeva se da uključuje bilo koje jedinjenje za koje je poznato da pruža anti-inflamatorni efekat kod domaćina. Na primer, antiinflamatorno sredstvo je izabrano iz grupe koja se sastoji od inhalacionog kortikosteroida; oralnog kortikosteroida; nesteroidnog anti-inflamatornog leka; omega-3 ili omega-6 polinezasićene masne kiseline; vrste Boswellia ili ektrakta Boswellia; kurkume ili ekstrakta kurkume; kurkumina ili kurkuminoida; kore bele vrbe ili ekstrakta kore bele vrbe; proteolitičkih enzima; kolagena ili hidrolizata kolagena; ekstrakta borove kore; vitamina ili vitaminskog prekursora; i minerala.

[0063] Kompozicija koja sadrži kako (a) membranu ljuske jajeta i hidrolizate membrane ljuske jajeta; tako i (b) probiotik, prebiotik i/ili njihovu kombinaciju je takođe razmatrana u okviru pronalaska. Kompozicija koja sadrži kako (a) membranu ljuske jajeta i hidrolizate membrane ljuske jajeta; tako i (b) digestivne enzime, L-glutamin ili vlakna je takođe razmatrana u okviru pronalaska. Takve kompozicije su korisne za poboljšanje zdravlja creva ili u lečenju bolesti ili stanja uključujući i crevne.

[0064] Kompozicija koja sadrži kako: (a) membranu ljuske jajeta i hidrolizate membrane ljuske jajeta; tako i (b) cimet, ili hrom pikolinat, ili Gymnema sylvestre, ili alfa lipoičnu kiselinu, ili ekstrakt belog pasulja takođe je razmatrana u okviru pronalaska. Takve kompozicije su korisne u kontroli glukoze u krvi.

[0065] Kompozicija koja sadrži kako: (a) membranu ljuske jajeta i hidrolizate membrane ljuske jajeta; tako i (b) niacin, ili omega-3 ili omega-6 polinezasićene masne kiseline, ili koenzim Q10 ili tokotrienol, takođe je razmatrana. Takve kompozicije su korisne u lečenju bolesti ili stanja uključujući kardiovaskularne bolesti ili stanja za poboljšanje kardiovaskularnog zdravlja.

[0066] Kompozicija koja sadrži kako: (a) membranu ljuske jajeta i hidrolizate membrane ljuske jajeta; tako i (b) Ginko biloba, ili vitamin D, takođe je razmatrana. Takve kompozicije su korisne za poboljšanje zdravlja mozga i lečenje bolesti ili stanja mozga i nervnog sistema.

[0067] Kompozicija koja sadrži kako: (a) membranu ljuske jajeta i hidrolizate membrane ljuske jajeta; tako i (b) antioksidanse uključujući na primer kvercitin, ekstrakt borove kore i ekstrakt zelenog čaja, takođe je razmatrana. Takve kompozicije su korisne za lečenje kancera, i/ili simptoma povezanih sa kancerom, i/ili obezbeđivanje imunološke podrške.

PRIMERI

[0068] Sledeći neograničavajući primeri su izvedeni da bi se ilustrovali različiti primeri

1

izvođenja pronalaska:

Primer 1: Priprema pahuljica i praha membrane ljuske jajeta

[0069] Sledeći primer je ilustrativan za pripremu pahuljica i praha od membrane ljuske jajeta. Ljuske pilećeg jajeta sa pričvršćenim membranama ljuske jajeta dobijene su u objektu za razbijanje jaja. Membrana ljuske jajeta je prvo odvojena od ljuske jajeta. Sakupljene su ljuspice ljuske jajeta i odmah osušene do sadržaja vlage manjeg od 10%. Uprašivanje osušenih pahuljica membrane ljuske jajeta je obavljeno standardnim postupcima mlevenja ili pulverizacije. Prašak je naknadno izmeren prosejavanjem pulverizovanog praha kroz seriju kalibrisanih sita da bi se dobio opseg veličine čestica od 50-500 mikrona.

Primer 2: Priprema hidrolizata membrane ljuske jajeta putem fermentacije

[0070] Sledeći primer je ilustrativan za pripremu hidrolizata membrane ljuske jajeta korišćenjem postupka fermentacije. Prah od membrane ljuske jajeta pripremljen kao u Primeru 1 stavljen je u vodeni rastvor koji sadrži inokulum koji se sastoji od bakterija i kvasca. Ova suspenzija je ostavljena da fermentiše oko 24 sata na sobnoj temperaturi (~25°C). Suspenzija je filtrirana da bi se uklonile sve čestice nesvarenog praha membrane ljuske jajeta. Fermentacioni hidrolizat (filtrirana tečnost) je čuvan u frižideru ili zamrznut kada se ne koristi odmah i označen je kao ESM-FH.

Primer 3: Priprema hidrolizata membrane ljuske jajeta putem enzimske hidrolize

[0071] Sledeći primer je ilustrativan za pripremu hidrolizata membrane ljuske jajeta korišćenjem enzimske digestije. Prašak od membrane ljuske jajeta pripremljen kao u Primeru 1 stavljen je u puferovani rastvor (pH ~9) koji sadrži prečišćenu alkalnu proteazu iz Bacillus licheniformis u odnosu 1:10 prema prahu membrane (tež./tež.). Ova suspenzija je ostavljena da se meša do 5 dana na ~55°C. Suspenzija je ostavljena da se ohladi i filtrirana da bi se uklonile sve čestice nedigestiranog praha membrane ljuske jajeta. Enzimski hidrolizat (filtrirana tečnost) je čuvan u frižideru ili zamrznut kada se ne koristi odmah i označen je kao ESM-EH.

Primer 4: Priprema hidrolizata membrane ljuske jajeta hemijskom hidrolizom

1

[0072] Sledeći primer je ilustrativan za pripremu hidrolizata membrane ljuske jajeta korišćenjem hemijske hidrolize. Prah od membrane ljuske jajeta pripremljen kao u Primeru 1 stavljen je u alkalni rastvor (pH -14) koji sadrži 3M natrijum hidroksida. Ova suspenzija je ostavljena da se meša oko 8 sati na ~55°C. Suspenzija je ostavljena da se ohladi i filtrirana da bi se uklonile sve čestice nedigestiranog praha membrane ljuske jajeta. Filtrirana tečnost je neutralizovana (pH ~7) sa 12M hlorovodoničnom kiselinom uz hlađenje da bi se apsorbovao višak toplote neutralizacije. Hemijski hidrolizat je čuvan u frižideru ili zamrznut kada se ne koristi odmah i označen je kao ESM-CH.

Primer 5: Priprema NEM<®>(ESM Technologies, Carthage, MO) brendiran proizvod od membrane ljuske jaja

[0073] Sledeći primer je ilustrativan za pripremu proizvoda membrane ljuske jajeta koji je kombinacija membrane ljuske jajeta, kao što je pripremljena u Primeru 1, i hidrolizata membrane ljuske jajeta, kao što je pripremljen u Primerima 2-4. Prah od membrane ljuske jajeta pripremljen kao u Primeru 1 stavljen je u trakasti blender sa omotačem. Tokom mešanja, hidrolizat membrane ljuske jajeta se pažljivo raspršuje na prah membrane ljuske jajeta. Omotač blendera se zagreva na najmanje 185°F i blagi vakuum se povlači na posudu da bi se olakšalo uklanjanje vlage. Kada nivo vlage dostigne manje od 10% po težini, osušeni prah se uklanja iz blendera i prolazi kroz mlin da bi se samlele grudvice koje su se mogle formirati.

Ovaj proizvod (NEM<®>) je uskladišten u ambijentalnim uslovima u dvostrukoj kartonskoj kutiji obloženoj polietilenom.

Primer 6: Određivanje in vitro NF-κB aktivnosti hidrolizata membrane ljuske jajeta u mononuklearnim ćelijama humane periferne krvi

[0074] Sledeći primer je ilustrativan za određivanje in vitro NF-κB aktivnosti hidrolizata membrane ljuske jajeta u mononuklearnim ćelijama humane periferne krvi (PBMC). PBMC su izolovani od zdravih dobrovoljaca i kultivisani na 3,2 x 10<6>ćelija/bunariću u medijumu kulture [RPMI-1640 medijum sa dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS), L-glutamina (2 mM), penicilina (100 U/mL) i streptomicina (100 mg/mL)]. Ćelije su postavljene u duplikatu. Hidrolizati membrane ljuske jajeta, kao što su pripremljeni u

1

Primerima 2 i 3, razblaženi su 1:1 sa fosfatnim puferom (PBS) filtriranim kroz 0,22 mikronski celulozni acetat disk da bi se sterilisali (npr. uklonile bakterije, kvasci i/ili plesni). Hidrolizati su zatim razblaženi (1:100; 1:1,000; 1:10,000) sa medijumom za kulturu. Svako razblaženje (60 µL) je dodato u bunarčić za kulturu i ćelije su inkubirane na 37°C, 5% CO2u trajanju od 4 sata. Poznati aktivator NF-κB, lipopolisaharid (LPS) (100 ng/mL), korišćen je kao pozitivna kontrola i poznati inhibitor NF-κB, vitamin C (askorbinska kiselina) (20 mM) (Bowie & O'Neill, 2000), korišćen je kao komparator inhibitornog efekta u ćelijama tretiranim sa LPS. Aktivnost je takođe upoređena sa netretiranim ćelijama. Ćelije su istaložene centrifugiranjem na 150 x g (1200 rpm) tokom 3 minuta i supernatant je odbačen. Ćelijski lizati su pripremljeni iz inkubiranih kultura mlevenjem kuglica. Lizati celih ćelija su analizirani na aktivnost NF-κB preko komercijalno dostupnog kompleta za enzimski imunosorbentni test (ELISA) (TransAM<®>NF-κB p65 ELISA test; Active Motif-Carlsbad, CA). Uzorci su analizirani u duplikatu i korigovani su za ukupan sadržaj proteina pomoću Bradfordove metode (Bio-Rad Laboratories - Hercules, CA). Relativna aktivnost NF-κB u PBMC za svaki procenjeni rastvor (netretirani, LPS, vitamin C, ESM-FH i ESM-EH) može se videti na Slici 1.

Primer 7: Određivanje in vitro NF-κB aktivnosti hidrolizata membrane ljuske jajeta u ćelijskoj liniji humanih monocita.

[0075] Sledeći primer je ilustrativan za određivanje in vitro NF-κB aktivnosti hidrolizata membrane ljuske jajeta u ćelijskoj liniji humanih monocita (THP-1). THP-1 ćelije su dobijene iz American Type Culture Collection (Manassas, VA) i kultivisane u 2,0 x 10<5>ćelija/bunariću u medijumu kulture [RPMI-1640 medijum sa dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS), 2-merkaptoetanola (0,05 mM) i 1% penicilina-streptomicina]. Ćelije su postavljene na ploči sa zapreminom od 350 µL po bunarčiću u duplikatu sa n=3 pojedinačne ploče. Hidrolizati membrane ljuske jajeta, kao što su pripremljeni u Primerima 2, 3 i 4, filtrirani su kroz polietersulfonski disk od 0,2 mikrona da bi se sterilisali (npr. uklonile bakterije, kvasci i/ili plesni). Hidrolizati su zatim razblaženi (1:1,000; 1:10,000) sa medijumom za kulturu. Bahovo razblaženje je dodato u bunarčić za kulturu i ćelije su inkubirane na 37°C, 5% CO2u trajanju od 4 sata. Poznati aktivator NF-κB, lipopolisaharid (LPS) (100 ng/mL), korišćen je kao pozitivna kontrola, a netretirane ćelije su korišćene kao negativna kontrola. Ćelije su istaložene centrifugiranjem na 150 x g (1200 rpm) tokom 3 minuta i supernatant je odbačen. Ćelijski lizati su pripremljeni iz inkubiranih kultura dodavanjem 45 µL pufera za kompletnu lizu (koji sadrži pufer za lizu, koktel inhibitora proteaze i ditiotreitol). Lizati celih ćelija su

1

analizirani na aktivnost NF-κB preko komercijalno dostupnog kompleta za enzimski imunosorbent test (ELISA) (TransAM<®>NF-κB p65 ELISA test; Active Motif - Carlsbad, CA). Uzorci su analizirani u duplikatu i korigovani su za ukupan sadržaj proteina pomoću Bradfordove metode (Bio-Rad Laboratories -Hercules, CA). Relativna aktivnost NF-κB u THP-1 ćelijama za svaki procenjivani rastvor (netretirani, LPS, ESM-FH, ESM-EH i ESM-CH) može se videti na Slici 2.

Uporedni primer 8: Efikasnost oralno primenjenog NEM<®>brenda membrane ljuske jajeta u životinjskom modelu reumatoidnog artritisa posredovanom preko NF-κB

[0076] Sledeći primer je ilustrativan za određivanje in vivo efikasnosti oralno primenjenog proizvoda membrane ljuske jajeta (trgovački naziv NEM<®>) u NE-κB-posredovanom životinjskom modelu reumatoidnog artritisa. Poznato je da se NF-KB aktivira kod humanog reumatoidnog artritisa (Simmonds & Foxvell, 2008; Brown, Claudio, & Siebenlist, 2008) i dobro je utvrđeno da igra ključnu ulogu u životinjskom modelu reumatoidnog artritisa izazvanog kolagenom (Han, Boyle, Manring, & Firestein, 1998; Seetharaman, Mora, Nabozny, Boothby, & Chen, 1999). Ženke Lewis pacova (10 po grupi, randomizirane prema telesnoj težini) (Charles River Laboratories, Inc. - Wilmington, MA) težine 115-139 grama dobile su NEM<®>(52 mg/kg telesne težine) ili vehikulum (0,5% metilceluloze u vodi) oralnom gavažom tokom 14 dana. Dodatna grupa je primila metotreksat (0,0075 mg/kg telesne težine) (Sigma-Aldrich - St. Louis, MO) kao komparator, počevši od 0. dana (bez prethodnog hranjenja). Nakon prethodnog hranjenja (dan 0), pacovi su anestezirani izofluranom i injektirani sa 400 µl Difco<™>Freundovog nepotpunog ađuvansa (Detroit, MI) koji sadrži 2 mg/mi svinjskog kolagena tipa II (Chondrek - Portland, OR) na 2 mesta u dnu repa (200 µl po mestu injekcije). Sedam dana kasnije, pacovi su primili dopunsku injekciju od 100 µl na jednom mestu u dnu repa. Grupa sa jedinim nosačem je prethodno bila podeljena na naivnu kontrolu (bez artritisa) i kontrolu artritisa (bez tretmana). Životinje su bile smeštene 3-4 u kavezu u standardnim laboratorijskim uslovima (67-76°F, 30-70% vlažnosti, 12-časovni ciklusi svetlost/mrak) sa slobodnim pristupom hrani i vodi. U danima istraživanja 917, merenja otoka skočnog zgloba nonijusom su napravljena pomoću Digitrix II Point mikrometra (Fowler - Newton, MA). Rezultati merenja otoka skočnog zgloba nonijusom od 9. do 17. dana kod artritisa izazvanog kolagenom kod naivne kontrole, kontrole artritisa, pacova tretiranih metotreksatom i pacova koji su tretirani NEM mogu se videti na Slici 3.

1

Primer 9: Efikasnost oralno primenjenog NEM<®>brenda membrane ljuske jajeta kod čoveka koji pati od inflamatorne bolesti creva

[0077] Sledeći primer je ilustrativan za efikasnost oralno primenjenog proizvoda membrane ljuske jajeta (trgovački naziv NEM<®>) u lečenju čoveka koji boluje od nekog oblika inflamatorne bolesti creva. Muškarac je patio od čestih jakih napada dijareje praćenih nadimanjem i bolnim grčevima. Ove epizode bi često trajale 3-4 dana, zahtevajući brojne odlaske u toalet svakog dana. Postojali bi periodi od 1-2 dana bez ovih teških simptoma, nakon čega bi usledila još jedna višednevna epizoda teške dijareje, nadimanja i grčeva. Subjektu je kasnije formalno dijagnostikovan ulcerozni kolitis putem biopsije uzete sa kolonoskopije. Subjekt nije mogao da leči ovo stanje propisanim lekovima zbog neželjenih efekata. Ekskluziona dijeta, u kojoj se masna hrana, pržena hrana i druga hrana sa visokim sadržajem ugljenih hidrata ili vlakana izbegavaju ili svode na minimum, pomogla je da se smanji ozbiljnost epizoda dijareje, ali je malo doprinela smanjenju učestalosti. Subjekat je počeo da uzima jednu kapsulu koja sadrži 500 mg NEM<®>kao što je pripremljena u Primeru 5 pre svakog obroka, dnevno. Posle otprilike 7-10 dana, težina i učestalost epizoda dijareje počele su da se smanjuju. Posle otprilike 2 meseca NEM<®>režima, subjekat bi doživeo samo 1 ili 2 epizode dijareje nedeljno, od kojih bi svaka trajala 1 ili 2 dana. Nakon dodavanja digestivnih enzima za rešavanje grčeva u stomaku i Lactobacillus acidophilus probiotika i L-glutamina kako bi se podržalo isceljenje creva prema režimu, subjekat je bio u mogućnosti da inkorporira više hrane koja je izbegavana u ekskluzionu ishranu, posebno meso i hleb. Prateći ovaj režim, subjekat bi generalno doživeo samo jednu epizodu dijareje koja bi zahtevala samo jedan odlazak u toalet. Nakon otprilike 6 meseci ovog režima, subjekt je mogao postepeno da smanji dozu na jednu dozu održavanja od jedne NEM<®>kapsule, digestivnih enzima, L-glutamina i probiotika, uz samo povremenu epizodu dijareje. Dvogodišnja kolonoskopija je potvrdila da se teška upala debelog creva povukla i da ispitanik više nije patio od ulceroznog kolitisa.

Uporedni primer 10: Efikasnost oralno primenjenog NEM<®>brenda membrane ljuske jajeta kod čoveka koji pati od kardiovaskularne bolesti

[0078] Sledeći primeri su ilustrativni za efikasnost oralno primenjenog proizvoda membrane ljuske jajeta (trgovački naziv NEM<®>) u lečenju čoveka koji boluje od kardiovaskularnih bolesti. Muškarac sa dugom istorijom kardiovaskularnih bolesti (hiperlipidemija,

2

hipertrigliceridemija, hipertenzija, ateroskleroza, itd.) imao je početni nelečeni lipidni panel od: ukupnog holesterola (TC) = 186 mg/dL, lipoproteina niske gustine (LDL) = 108 mg /dL, lipoproteina visoke gustine (HDL) = 42 mg/dL i triglicerida (TG) = 181 mg/dL. Subjekat nije bio u stanju da leči ovo stanje prepisanim lekovima za snižavanje lipida zbog neželjenih efekata, a ishrana i vežbanje nisu uspeli da adekvatno kontrolišu bolest. Subjekat je lečio svoju hipertenziju sa 100 mg/dan atenolola. Ovo je rezultiralo sistolnim/dijastolnim krvnim pritiskom u mirovanju (bp) od 146/84 mm Hg. Subjekat je takođe imao četiri srčana stenta za lečenje aterosklerotične stenoze (suženja) različitih srčanih krvnih sudova. Subjekat je konzumirao jednu kapsulu od 500 mg dnevno NEM<®>kako je pripremljena u Primeru 5 oko 12 meseci pre nego što se primeti efekat na rezultate lipidnog panela. Subjekat je nastavio NEM<®>režim za dodatnih približno 12 meseci (ukupno oko 2 godine). Rezultati lipidnog panela za praćenje bili su: TC = 138 mg/dL, LDL = 80 mg/dL, HDL = 41 mg/dL i TG = 84 mg/dL. Svi rezultati lipida su sada bili u granicama normale. Subjekat je takođe smatrao da je neophodno smanjiti dozu atenolola sa 100 mg/dan na 25 mg/dan. Čak i sa ovim smanjenjem lekova, subjekat je sada imao bp u mirovanju od 102/78 mm Hg.

[0079] Drugi muškarac sa nedavnom istorijom kardiovaskularnih bolesti (samo hiperlipidemija i hipertrigliceridemija) lečen je atorvastatinom u dozi od 10 mg/dan. Rezultati tretiranog lipidnog panela za ovaj subjekat su bili: TC = 207 mg/dL, LDL = 114 mg/dL, HDL = 47 mg/dL i TG = 247 mg/dL. Ovaj subjekat je imao nelečeni bp u mirovanju unutar normalnog opsega. Subjekt je konzumirao jednu kapsulu od 500 mg dnevno NEM<®>kako je pripremljena u Primeru 5 oko 2 godine. Rezultati lipidnog panela praćenja bili su: TC = 150 mg/dL, LDL = 81 mg/dL, HDL = 46 mg/dL i TG = 113 mg/dL. Svi rezultati lipida su sada bili u granicama normale.

Uporedni primer 11: Efikasnost oralno primenjenog NEM<®>brenda membrane ljuske jajeta kod čoveka koji pati od nekog oblika bolesti jetre

[0080] Sledeći primer je ilustrativan za efikasnost oralno primenjenog proizvoda membrane ljuske jajeta (trgovački naziv NEM<®>) u lečenju čoveka koji boluje od nekog oblika oboljenja jetre. Rutinskim zdravstvenim pregledom utvrđeno je da muškarac ima blago povišene enzime jetre. Početni rezultati panela za enzime jetre bili su: alanin transaminaza (ALT) = 81 i aspartat transaminaza (AST) = 41. Zbog gojaznosti ispitanika i nedostatka drugih istovremenih nalaza, ispitaniku je dijagnostikovan nealkoholni steatohepatitis, oblik bolesti jetre. Primarni tretman za ovo stanje je gubitak težine. Subjekt je konzumirao jednu kapsulu od 500 mg dnevno NEM<®>kako je pripremljena u Primeru 5 oko 2 godine. Rezultati panela za praćenje enzima jetre bili su: ALT = 40 i AST = 21. Enzimi jetre su sada bili u granicama normale.

Uporedni primeri 12: Efikasnost oralno primenjenog NEM<®>brenda membrane ljuske jajeta kod čoveka koji ima ukočenost i nelagodnost u zglobovima

[0081] Sledeći primer je ilustrativan za efikasnost oralno primenjenog proizvoda membrane ljuske jajeta (trgovački naziv NEM<®>) u lečenju čoveka koji nije bolestan koji ima ukočenost i nelagodnost u zglobovima. Muškarac je patio od nelagodnosti u zglobovima u oba ramena i oba kuka, kao i od ukočenosti zglobova i nelagodnosti u oba kolena. Subjektu nije dijagnostikovan artritis i čini se da se nelagodnost nije značajno pogoršala tokom mnogo godina kao što bi bio slučaj sa degenerativnim oboljenjem zglobova kao što je artritis. Subjekat bi osećao bolove u ramenima i kukovima dok bi ležao u krevetu, što bi mu poremetilo san. Ovaj obrazac poremećaja sna obično se javlja 1-2 puta nedeljno. Ispitanik je takođe imao poteškoća da dođe do klečećeg ili sedećeg položaja na podu i imao je velikih poteškoća da se vrati u stojeći položaj. Subjekat je konzumirao tri kapsule od 500 mg dnevno NEM<®>kako su pripremljene u Primeru 5 oko 4 nedelje. Subjekat se više nije budio iz sna zbog nelagodnosti u ramenima ili kukovima. Subjektova kolena su takođe bila mnogo manje ukočena sa vrlo malo nelagodnosti i subjekt je sada mogao bolje da dođe do klečećeg ili sedećeg položaja na podu i imao je mnogo manje poteškoća da se vrati u stojeći položaj.

Uporedni primer 13: Efikasnost oralno primenjenog NEM<®>brenda membrane ljuske jajeta kod čoveka koji pati od fibromialgije

[0082] Sledeći primer je ilustrativan za efikasnost oralno primenjenog proizvoda membrane ljuske jajeta (trgovački naziv NEM<®>) u lečenju čoveka koji boluje od fibromialgije. Žena sa 4-godišnjom istorijom fibromialgije patila je od bolova u zglobovima i vezivnom tkivu na brojnim mestima po celom telu i imala je ekstremni umor i lečena je meloksikamom (7,5 mg/dan ujutru), ibuprofenom (200 mg dva puta po dan - ujutro i podne), tramadolom (50 mg/dan pre spavanja) i amitriptilinom (20 mg/dan pre spavanja). Subjekat je konzumirao NEM<®>, 500 mg/dan pre dijagnoze fibromialgije. Subjekat je posebno iskusio pogoršanje simptoma zbog svakodnevnih aktivnosti koje uključuju stajanje ili hodanje tokom dužeg perioda (npr. čišćenje, pranje veša, kupovina itd.). Vremenom je fibromialgija zaista počela da ograničava sposobnost subjekta da obavlja svakodnevne aktivnosti. Čak i sa smanjenim nivoom aktivnosti, subjekat je otkrio potrebu da poveća dozu tramadola na 50 mg dva puta dnevno (bid), a ponekad čak i na 50 mg tri puta dnevno (tid) da bi kontrolisao bolne simptome. Zbog zabrinutosti zbog sve veće potrebe za opioidnim analgetikom tramadolom (sličnim narkoticima) i pečenja želuca od ibuprofena, subjekat je počeo da konzumira dodatnih 500 mg kapsule dnevno (tj.500 mg dva puta dnevno) NEM<®>kao što je pripremljena u Primeru 5 u razmaku od oko 4-5 sati tokom 3 nedelje. Subjekat je pronašao značajno olakšanje od bola i bolova i uspeo je da smanji dozu tramadola na prvobitnih 50 mg/dan i potpuno eliminiše ibuprofen.

2

Claims (3)

Patentni zahtevi

1. Kompozicija koja se esencijalno sastoji od membrane ljuske jajeta i hidrolizata membrane ljuske jajeta koji se javljaju u prirodi, za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja gastrointestinalnog sistema povezanog sa disregulacijom NF-κB kod humanog domaćina; pri čemu je navedena kompozicija za oralnu primenu u dnevnoj dozi od približno 500 mg, i pri čemu je bolest ili stanje gastrointestinalnog sistema inflamatorna bolest creva (IBD), poželjno izabrana iz grupe koja se sastoji od Kronove bolesti, ulceroznog kolitisa i sindroma iritabilnog creva.

2. Kompozicija za upotrebu prema zahtevu 1, naznačena time što navedena upotreba dalje sadrži primenu anti-inflamatornog sredstva na navedenog domaćina, poželjno pri čemu je anti-inflamatorno sredstvo izabrano iz jedne ili više grupa koje se sastoje od inhalacionog kortikosteroida; oralnog kortikosteroida; nesteroidnog anti-inflamatornog leka; omega-3 ili omega-6 polinezasićene masne kiseline; vrste Boswellia ili ekstrakta Boswellia; kurkume ili ekstrakta kurkume; kurkumina ili kurkuminoida; kore bele vrbe ili ekstrakta kore bele vrbe; proteolitičkih enzima; kolagena ili hidrolizata kolagena; ekstrakta kore bora; vitamina ili vitaminskog prekursora; i minerala.

3. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što navedena upotreba dalje sadrži primenu sredstva poznatog za poboljšanje zdravlja creva ili u lečenju bolesti ili stanja uključujući bolesti ili stanja creva, na navedenog domaćina, poželjno pri čemu je navedeno sredstvo izabrano iz grupe koja se sastoji od probiotika, prebiotika, digestivnih enzima, L-glutamina ili vlakana ili njihove kombinacije.