RS64127B1 - Kompozicije bakterijskih spora za industrijske upotrebe - Google Patents

Kompozicije bakterijskih spora za industrijske upotrebe

Info

Publication number
RS64127B1
RS64127B1 RS20230277A RSP20230277A RS64127B1 RS 64127 B1 RS64127 B1 RS 64127B1 RS 20230277 A RS20230277 A RS 20230277A RS P20230277 A RSP20230277 A RS P20230277A RS 64127 B1 RS64127 B1 RS 64127B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
bacillus
plant
germination
amino acid
spore
Prior art date
Application number
RS20230277A
Other languages
English (en)
Inventor
Tommie Eugene Hashman
Michael Matheny
Original Assignee
Envera Lic Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Envera Lic Llc filed Critical Envera Lic Llc
Priority claimed from PCT/US2015/043979 external-priority patent/WO2016022779A1/en
Publication of RS64127B1 publication Critical patent/RS64127B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/28—Streptomyces
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
    • A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
    • B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
    • B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
    • B09C1/105—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes using fungi or plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F11/00—Treatment of sludge; Devices therefor
    • C02F11/02—Biological treatment
    • C02F11/04—Anaerobic treatment; Production of methane by such processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C02F3/348—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used characterised by the way or the form in which the microorganisms are added or dosed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K8/00—Compositions for drilling of boreholes or wells; Compositions for treating boreholes or wells, e.g. for completion or for remedial operations
    • C09K8/58—Compositions for enhanced recovery methods for obtaining hydrocarbons, i.e. for improving the mobility of the oil, e.g. displacing fluids
    • C09K8/582—Compositions for enhanced recovery methods for obtaining hydrocarbons, i.e. for improving the mobility of the oil, e.g. displacing fluids characterised by the use of bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/20—Organic compounds containing oxygen
    • C11D3/22—Carbohydrates or derivatives thereof
    • C11D3/221—Mono, di- or trisaccharides or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/26—Organic compounds containing nitrogen
    • C11D3/33—Amino carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/381—Microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
    • C12P5/02—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons acyclic
    • C12P5/023—Methane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
    • A61K2035/115—Probiotics
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C2101/00—In situ
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
    • Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/30—Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W10/00—Technologies for wastewater treatment
    • Y02W10/20—Sludge processing
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W30/00—Technologies for solid waste management
    • Y02W30/40—Bio-organic fraction processing; Production of fertilisers from the organic fraction of waste or refuse

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)

Description

Opis
UNAKRSNA POVEZANOST SA SRODNIM PRIJAVAMA
[0001] Ova prijava zahteva pravo prvenstva od privremene SAD prijave ser. br. 62/033,825 podnete 6. avgusta 2014; SAD prijave ser. br. 14/819,577 podnete 6. avgusta 2015; i SAD prijave ser. br.14/819,583 podnete 6. avgusta 2015.
OBLAST PRONALASKA
[0002] Ovaj pronalazak se uopšteno odnosi na kompozicije bakterijskih spora za industrijske upotrebe kao što su poljoprivreda, sanacija životne sredine, kompostiranje, proizvodnja metana, sredstva za čišćenje, rekuperacija ulja i direktna ishrana mikrobima.
OSNOV PRONALASKA
[0003] Bakterijske vrste koje formiraju spore imaju širok spektar industrijskih primena, uključujući upotrebu u poljoprivredi, sanaciji životne sredine, kompostiranju, proizvodnji metana, rekuperaciji ulja i sredstvima za čišćenje. U zavisnosti od konkretne bakterijske vrste koja se koristi, kompozicije koje sadrže bakterije mogu da budu pogodne za upotrebu u oblasti poljoprivrede, hortikulture, ekologije, probiotika, vodenih sistema, industrije i sanitacije, između ostalog. Nekoliko vrsta bakterija koje formiraju spore su korisne u mnogim industrijama. Na primer, Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis i Bacillus pumilus se koriste kao poljoprivredni fungicidi, i u tretmanu otpadnih voda, proizvodima za čišćenje i direktnoj ishrani mikrobima.
[0004] Što se tiče poljoprivrednih primena, upotreba bakterija koje formiraju spore za poboljšanje zdravlja biljaka je dobro poznata u tehnici. Na primer, Zhang et al. (2009, Plant J 58: 568-577) objavljuje da bakterija Bacillus subtilis GB03 koja podstiče rast biljaka povećava usvajanje gvožđa i fotosintetski kapacitet kod biljaka. Xie et al. (2009, Plant Signaling and Behavior 4(10): 948-953) objavljuje da isparljive materije koje proizvodi ovaj isti soj Bacillus subtilis povećavaju rast biljaka i broj semena. Han et al. (2014, Frontiers in Plant Science 5(525): 1-8) izveštava da su biljke bele deteline uzgajane u zemljištu inokulisanom bakterijom Bacillus subtilis GB03 bile značajno veće od neinokulisanih kontrola u pogledu visine izdanaka, dužine korena, biomase biljke, površine listova i sadržaja hlorofila. Seme, ili drugi biljni materijal za razmnožavanje takođe može da bude obložen sporama takvih bakterija, tako da kada se jednom poseje ili zasadi, može da se uspostavi poboljšano okruženje koje podržava klijanje semena, ostvaruje stimulaciju rasta biljaka ili biološku zaštitu semena i rezultujuće biljke. Na primer, simbiotske bakterije kao što su one iz rodova Rhizobium i Bradyrhizobium, koje omogućavaju fiksaciju azota u mahunarkama, mogu da se koriste za inokulaciju mahunarki da bi se pomoglo formiranju nodula. Inokulacija može da se postigne premazivanjem semena, zaprašivanjem semena ili useva na farmi ili stavljanjem inokulata u brazdu u vreme sadnje.
[0005] Bakterije koje formiraju spore takođe mogu da se koriste u postupcima remedijacije životne sredine kao što je bioremedijacija. Bioremedijacija uključuje upotrebu mikroorganizama za pretvaranje hemijskih jedinjenja u bezopasna ili manje štetna hemijska jedinjenja. Tehnologije bioremedijacije uopšteno imaju niže troškove od konkurentskih fizičkih tehnologija i mogu da se prilagode širem spektru problema kontaminacije i varijacija u uslovima na terenu. Videti US 2002/0090697.
[0006] Kontaminirani medijumi mogu da se tretiraju bakterijama da bi se podstakla biorazgradnja organskih zagađivača u vodi, zemljištu i industrijskom otpadu. Na primer, Lupton et al. (SAD pat. br.5,062,956) razmatra postupak za uklanjanje rastvorljivog Cr(VI) korišćenjem anaerobnih bakterija za redukciju Cr(VI) u Cr(III) i imobilizaciju Cr(III) kao nerastvornog hidroksida koji se taloži kao čvrsta supstanca. Lupton et al. takođe opisuje tretman vodenih ostataka koji sadrže nepoželjne količine Cr(VI) u kontinuiranom bioreaktoru. Turick et al. (SAD pat. br. 5,681,739) opisuje postupak za smanjenje koncentracije Cr(VI) u tečnom vodenom ostatku koji obuhvata korake obezbeđivanja bakterija koje redukuju Cr(Vi), mešanja tečnog vodenog ostatka sa hranljivim medijumom (npr. melasa, sirćetna kiselina, aminokiseline, kazaminokiseline, urea) i dovođenje u kontakt smeše sa anaerobnim bakterijama da bi se poboljšala redukcija Cr(VI) u Cr(III). Ovaj postupak može da se koristi za bioremedijaciju zemljišta i/ili podzemne vode kontaminirane heksavalentnim hromom.
[0007] Jedna poteškoća povezana sa upotrebom takvih bakterija je da, budući da one moraju da budu u svom vegetativnom stanju da bi ostvarile takve koristi, teško je formulisati vrste Bacillusa i druge bakterije koje formiraju spore u njihovom vegetativnom obliku, tako da imaju adekvatan rok trajanja. Pored toga, vrste Bacillusa u svom vegetativnom obliku možda neće moći da prežive oštre uslove potrebne za industrijsku upotrebu, kao što su uslovi kojima se seme ili drugi biljni materijali za razmnožavanje podvrgavaju pre nego što nastupe uslovi pogodni za klijanje semena. Nasuprot tome, formulacije takvih vrsta u obliku spora su mnogo pogodnije za komercijalnu i praktičnu upotrebu. Na primer, kao što primećuju Cartman et al. (2008, Applied and Environmental Microbiology, avgust, str. 5254-5258) "[b]akterijske spore su posebno pogodne za upotrebu kao živi mikrobiološki proizvodi jer su metabolički uspavane i veoma otporne na stres iz okoline. Ova suštinska svojstva su veoma poželjna iz komercijalne perspektive i znače da proizvodi na bazi spora imaju dug vek trajanja i zadržavaju svoju vijabilnost tokom distribucije i skladištenja."
[0008] Upotreba određenih jedinjenja, posebno određenih L-aminokiselina, za stimulisanje klijanja spora Bacillusa je prijavljena u literaturi. Na primer, Foerster et al. (1996, Journal of Bacteriology 91(3): 1168-1177) otkriva da će dodavanje L-alanina suspenzijama spora u vodenim rastvorima izazvati klijanje brojnih vrsta Bacillusa. WO 2014/193746, prijava podneta pre ove prijave, ali objavljena posle datuma prioriteta ove prijave, opisuje kompozicije koje sadrže jedan ili više mikroorganizama i jedan ili više agenasa koji izazivaju klijanje. Opisani su različiti agensi koji izazivaju klijanje, uključujući određene aminokiseline. WO 02/00035 opisuje hranu za vodene životinje koja uključuje odabrane probiotike kao spore u hrani i sadrži sredstvo za njihovo aktiviranje i klijanje kada se daju životinjama kao hrana ili dodaju vodi u rezervoarima ili ribnjacima. WO 2014/106776 opisuje kompoziciju za povećanje prinosa biljaka, koja sadrži najmanje dve komponente, od kojih prva sadrži smešu koja uključuje hitozan, glukozamin i aminokiseline, a druga komponenta sadrži biološku kontrolu. Međutim, jedan od izazova u korišćenju kombinacija bakterijskih spora i jedinjenja koja izazivaju klijanje u industrijskoj upotrebi je održavanje spora u neaktivnom obliku u prisustvu jedinjenja koje izaziva klijanje do trenutka kada je klijanje spora potrebno. Na primer, biljni materijal za razmnožavanje, kao što je seme tretirano kompozicijom bakterijskih spora može da bude izloženo periodu skladištenja od nekoliko meseci pre sadnje. Stoga postoji potreba za formulacijama bakterijskih spora koje mogu da stimulišu brzo klijanje bakterijskih spora pod povoljnim uslovima, ali koje takođe sprečavaju prerano klijanje spora dok klijanje spora ne bude potrebno.
[0009] Pored toga, bakterije za poljoprivrednu ili industrijsku upotrebu mogu da budu izložene nizu uslova okoline, kao što su nizak pH u zemljištu, visoke koncentracije soli (npr. NaCl) i visoke koncentracije metala (npr. bakar i aluminijum), koji su nepovoljni za klijanje bakterijskih spora. Stoga postoji potreba za razvojem formulacija bakterijskih spora koje mogu da klijaju pod ovim nepovoljnim uslovima.
IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA
[0010] U jednom aspektu, ovaj pronalazak je usmeren na biljni materijal za razmnožavanje obložen kompozicijom koja sadrži bakterijsku sporu i jedinjenje koje izaziva klijanje kao što je opisano u zahtevima. Spora i jedinjenje koje izaziva klijanje se održavaju u neaktivnom obliku tako da jedinjenje koje izaziva klijanje neće izazvati klijanje spore sve dok se kompozicija ne podvrgne aktivacionom okruženju. Kompozicija može dalje da sadrži supstancu koja sprečava interakciju bakterijske spore i jedinjenja koje izaziva klijanje sve dok se kompozicija ne podvrgne aktivacionom okruženju. U određenim primerima izvođenja, supstanca je izabrana iz grupe koja se sastoji od surfaktanta, sredstva za sekvestraciju, plastifikatora, koloranta, boje, sredstva za posvetljavanje, emulgatora, sredstva za tečenje, koalescentnog sredstva, sredstva protiv pene, zgušnjivača, voska, baktericida, punioca, polimera, sredstva za vlaženje i sredstva protiv smrzavanja. Kompozicija sadrži jedinstvenu smešu bakterijske spore i jedinjenja koje izaziva klijanje, pri čemu se bakterijska spora i jedinjenje koje izaziva klijanje održavaju u neposrednoj blizini dok ne dođu u okruženje pogodno za klijanje.
[0011] U određenim primerima izvođenja, biljni materijal za razmnožavanje je odabran iz grupe koja se sastoji od cveta, semena, korena, ploda, krtole, lukovice, rizoma, izdanka, klice, semena, lista, ponika i rasada. U posebnom primeru izvođenja, biljni materijal za razmnožavanje je seme. Biljni materijal za razmnožavanje može da se presadi nakon klijanja ili nakon nicanja iz zemlje.
[0012] U određenim primerima izvođenja gore pomenutih biljnih materijala za razmnožavanje, bakterijske spore se biraju iz grupe koja se sastoji od Bacillus agri, Bacillus aizawai, Bacillus albolactis, Bacillus altitudinis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus butanolivorans, Bacillus cereus, Bacillus coagulans, Bacillus endoparasiticus, Bacillus endorhythmos, Bacillus firmus, Bacillus kurstaki, Bacillus lacticola, Bacillus lactimorbus, Bacillus lactis, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus medusa, Bacillus metiens, Bacillus mojavensis, Bacillus mycoides, Bacillus natto, Bacillus nigrificans, Bacillus popillae, Bacillus pumilus, Bacillus siamensis, Bacillus simplex, Bacillus sphaericus, Bacillus spp., Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus unifagellatus, Clostridium thermocellum, Clostridium ljungdahlii, Clostridium acetobutylicum, Clostridium beijerinckii, Clostridium butyricum, Pasteuria penetrans, Pasteuria thornei, Pasteuria nishizawae i vrsta roda Streptomyces.
[0013] Jedinjenje koje izaziva klijanje je odabrano iz grupe koja se sastoji od L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina. U posebnim primerima izvođenja, bakterijska spora je izabrana iz grupe koja se sastoji od B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. firmus, B. licheniformis, B. megaterium i B. pumilus; i jedinjenje koje izaziva klijanje je odabrano iz grupe koja se sastoji od L-alanina, L-valina i L-asparagina. Kompozicija može dalje da sadrži polimer za oblaganje semena. U određenim primerima izvođenja, kompozicija dalje sadrži supstancu izabranu iz grupe koja se sastoji od surfaktanta, sredstva za sekvestraciju, plastifikatora, koloranta, boje, sredstva za posvetljavanje, emulgatora, sredstva za tečenje, koalescentnog sredstva, sredstva protiv pene, zgušnjivača, voska, baktericida, punioca, polimera, sredstva za vlaženje i sredstva protiv smrzavanja.
[0014] U drugom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na postupak, kako je definisano u patentnim zahtevima, za poboljšanje rasta ili prinosa biljnog materijala za razmnožavanje koji obuhvata oblaganje biljnog materijala za razmnožavanje kompozicijom koja sadrži bakterijsku sporu i jedinjenje koje izaziva klijanje, pri čemu je rast ili prinos biljnog materijala za razmnožavanje poboljšan u odnosu na rast ili prinos odgovarajućeg biljnog materijala za razmnožavanje koji nije obložen pomenutom kompozicijom. Spora i jedinjenje koje izaziva klijanje se održavaju u neaktivnom obliku tako da jedinjenje koje izaziva klijanje neće izazvati klijanje spora sve dok se kompozicija ne podvrgne aktivacionom okruženju. U nekim primerima izvođenja, kompozicija dalje sadrži supstancu koja sprečava interakciju bakterijske spore i jedinjenja koje izaziva klijanje sve dok se kompozicija ne podvrgne aktivacionom okruženju. U nekim primerima izvođenja, supstanca je izabrana iz grupe koja se sastoji od surfaktanta, sredstva za sekvestraciju, plastifikatora, koloranta, boje, sredstva za posvetljavanje, emulgatora, sredstva za tečenje, koalescentnog sredstva, sredstva protiv pene, zgušnjivača, voska, baktericida, punioca, polimera, sredstva za vlaženje i sredstva protiv smrzavanja.
[0015] U gore pomenutim postupcima, kompozicija sadrži jedinstvenu smešu bakterijske spore i jedinjenja koje izaziva klijanje, pri čemu se bakterijska spora i jedinjenje koje izaziva klijanje održavaju u neposrednoj blizini dok ne stignu u okruženje pogodno za klijanje. U nekim primerima izvođenja, biljni materijal za razmnožavanje se bira iz grupe koja se sastoji od cveta, semena, korena, ploda, krtole, lukovice, rizoma, izdanka, klice, semena, lista, ponika i rasada. U posebnim primerima izvođenja, biljni materijal za razmnožavanje je seme. U nekim primerima izvođenja, postupci dalje obuhvataju presađivanje biljnog materijala za razmnožavanje nakon klijanja ili nakon nicanja iz zemlje.
[0016] U određenim primerima izvođenja, bakterijske spore koje se koriste u gore pomenutim postupcima su izabrane iz grupe koja se sastoji od Bacillus agri, Bacillus aizawai, Bacillus albolactis, Bacillus altitudinis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus butanolivorans, Bacillus cereus, Bacillus coagulans, Bacillus endoparasiticus, Bacillus endorhythmos, Bacillus firmus, Bacillus kurstaki, Bacillus lacticola, Bacillus lactimorbus, Bacillus lactis, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus medusa, Bacillus metiens, Bacillus mojavensis, Bacillus mycoides, Bacillus natto, Bacillus nigrificans, Bacillus popillae, Bacillus pumilus, Bacillus siamensis, Bacillus simplex, Bacillus sphaericus, Bacillus spp., Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus unifagellatus, Clostridium thermocellum, Clostridium ljungdahlii, Clostridium acetobutylicum, Clostridium beijerinckii, Clostridium butyricum, Pasteuria penetrans, Pasteuria thornei, Pasteuria nishizawae i vrsta Streptomyces.
[0017] U gore pomenutim postupcima, jedinjenje koje izaziva klijanje je izabrano iz grupe koja se sastoji od L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina. U nekim primerima izvođenja, bakterijska spora je izabrana iz grupe koja se sastoji od B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. firmus, B. licheniformis, B. megaterium i B. pumilus; i jedinjenje koje izaziva klijanje je odabrano iz grupe koja se sastoji od L-alanina, L-valina i L-asparagina. Kompozicija koja se koristi u gore pomenutim postupcima može dalje da sadrži polimer za oblaganje semena. U posebnom primeru izvođenja, kompozicija sadrži jednog ili više članova grupe koja se sastoji od surfaktanta, sredstva za sekvestraciju, plastifikatora, koloranta, boje, sredstva za posvetljavanje, emulgatora, sredstva za tečenje, koalescentnog sredstva, sredstva protiv pene, zgušnjivača, voska, baktericida, punioca, polimera, sredstva za vlaženje i sredstva protiv smrzavanja.
[0018] U određenim primerima izvođenja gore pomenutih postupaka, biljka ili deo biljke je biljni materijal za razmnožavanje. U određenim primerima izvođenja, biljka ili deo biljke je seme. U određenim primerima izvođenja, biljka ili deo biljke je izabran iz grupe koja se sastoji od cveta, semena, korena, ploda, krtole, lukovice, rizoma, izdanka, klice, semena, lista, ponika i rasada. U određenim primerima izvođenja, postupak obuhvata tretiranje biljke ili dela biljke kompozicijom nakon klijanja ili nakon nicanja iz zemlje. U određenim primerima izvođenja, postupak obuhvata tretiranje biljke ili dela biljke kompozicijom pre klijanja ili pre nicanja iz zemlje.
[0019] U određenim primerima izvođenja, bakterijska spora je izabrana iz grupe koja se sastoji od Bacillus agri, Bacillus aizawai, Bacillus albolactis, Bacillus altitudinis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus butanolivorans, Bacillus cereus, Bacillus coagulans, Bacillus endoparasiticus, Bacillus endorhythmos, Bacillus firmus, Bacillus kurstaki, Bacillus lacticola, Bacillus lactimorbus, Bacillus lactis, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus medusa, Bacillus metiens, Bacillus mojavensis, Bacillus mycoides, Bacillus natto, Bacillus nigrificans, Bacillus popillae, Bacillus pumilus, Bacillus siamensis, Bacillus simplex, Bacillus sphaericus, Bacillus spp., Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus unifagellatus, Clostridium thermocellum, Clostridium ljungdahlii, Clostridium acetobutylicum, Clostridium beijerinckii, Clostridium butyricum, Pasteuria penetrans, Pasteuria thornei, Pasteuria nishizawae i vrsta Streptomyces.
[0020] Jedinjenje koje izaziva klijanje je izabrano iz grupe koja se sastoji od fruktoze, glukoze, kalijuma, L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina.
[0021] U određenim primerima izvođenja, bakterijska spora je izabrana iz grupe koja se sastoji od B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. firmus, B. licheniformis, B. megaterium i B. pumilus; i jedinjenje koje izaziva klijanje je odabrano iz grupe koja se sastoji od L-alanina, L-valina i L-asparagina. U određenim primerima izvođenja, kompozicija dalje sadrži polimer za oblaganje semena. U određenim primerima izvođenja, kompozicija dalje sadrži jednog ili više članova grupe koja se sastoji od surfaktanta, sredstva za sekvestraciju, plastifikatora, koloranta, boje, sredstva za posvetljavanje, emulgatora, sredstva za tečenje, koalescentnog sredstva, sredstva protiv pene, zgušnjivača, voska, baktericida, punioca, polimera, sredstva za vlaženje i sredstva protiv smrzavanja.
[0022] U drugom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na neterapeutski postupak za hranjenje životinje u sistemu akvakulture, koji obuhvata davanje životinjske hrane koja sadrži kompoziciju koja sadrži bakterijsku sporu i jedinjenje koje izaziva klijanje životinji u sistemu akvakulture.
[0023] U određenim primerima izvođenja gore navedenih postupaka, životinja je izabrana iz grupe koja se sastoji od ribe, škampa ili mekušaca. U određenim primerima izvođenja, sistem akvakulture sadrži patogen izabran iz grupe koja se sastoji od vrste Vibrio, vrste Aeromonas i vrste Flavobacterium. U određenim primerima izvođenja, rast životinje je povećan u odnosu na životinju u sistemu akvakulture koja nije tretirana ovom kompozicijom. U određenim primerima izvođenja, kompozicija je u obliku granula, briketa, peleta, tableta ili kapsula.
[0024] U još jednom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na neterapeutski postupak za hranjenje životinje koji obuhvata davanje životinji kompozicije koja sadrži bakterijsku sporu i jedinjenje koje izaziva klijanje. U određenim primerima izvođenja, životinja je izabrana iz grupe koja se sastoji od živine, preživara, teladi, svinja, zečeva, konja, rakova, mekušaca, riba i kućnih ljubimaca.
[0025] U gore pomenutim postupcima, kompozicija sadrži jedinstvenu smešu bakterijske spore i jedinjenja koje izaziva klijanje, pri čemu se bakterijska spora i jedinjenje koje izaziva klijanje održavaju u neposrednoj blizini dok ne dođu u okruženje pogodno za klijanje.
[0026] U određenim primerima izvođenja bilo kog od gore navedenih postupaka, bakterijska spora je izabrana iz grupe koja se sastoji od Bacillus agri, Bacillus aizawai, Bacillus albolactis, Bacillus altitudinis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus butanolivorans, Bacillus cereus, Bacillus coagulans, Bacillus endoparasiticus, Bacillus endorhythmos, Bacillus firmus, Bacillus kurstaki, Bacillus lacticola, Bacillus lactimorbus, Bacillus lactis, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus medusa, Bacillus metiens, Bacillus mojavensis Bacillus mycoides, Bacillus natto, Bacillus nigrificans, Bacillus popillae, Bacillus pumilus, Bacillus siamensis, Bacillus simplex, Bacillus sphaericus, Bacillus spp., Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus unifagellatus, Clostridium thermocellum, Clostridium ljungdahlii, Clostridium acetobutylicum, Clostridium beijerinckii, Clostridium butyricum, Pasteuria penetrans, Pasteuria thornei, Pasteuria nishizawae i vrsta Streptomyces.
[0027] Jedinjenje koje izaziva klijanje je izabrano iz grupe koja se sastoji od fruktoze, glukoze, kalijuma, L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina.
[0028] U određenim primerima izvođenja bilo kog od gore navedenih postupaka, bakterijska spora je izabrana iz grupe koja se sastoji od B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. firmus, B. licheniformis, B. megaterium i B. pumilus; i jedinjenje koje izaziva klijanje je odabrano iz grupe koja se sastoji od L-alanina, L-valina i L-asparagina.
[0029] U određenim primerima izvođenja bilo kog od gore navedenih postupaka, kompozicija je u obliku suvog praha.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0030] U jednom aspektu, smeše pronalaska su sačinjene od bakterijske spore i L-aminokiseline, pri čemu kompozicija sadrži suvu jedinstvenu smešu bakterijske spore i L-aminokiseline, pri čemu se L-aminokiselina adsorbuje na bakterijsku sporu, ili je bakterijska spora apsorbuje, a L-aminokiselina je izabrana između L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina. Korišćena bakterijska vrsta može da bude bilo koja vrsta koja formira spore i tipično je ona koja pokazuje poželjnu probiotičku aktivnost kod ljudi ili životinja. Međutim mogu da se upotrebe i bakterijske vrste koje imaju druge industrijske primene uključujući one korisne u poljoprivredi, sanaciji životne sredine, kompostiranju ili proizvodnji metana, sredstvima za čišćenje i slično. Na primer, zbog njihove sposobnosti da sintetišu više enzima, kao i zbog njihove ekološke prihvatljivosti, vrste Bacillusa se koriste u mnoštvu komercijalnih primena. U zavisnosti od određene bakterijske vrste koja se koristi, kompozicije bakterija mogu da budu pogodne za upotrebu u oblasti poljoprivrede, hortikulture, ekologije, probiotika, vodenih sistema, industrije i sanitacije, između ostalog. Konkretna kompozicija koja se koristi za bilo koju posebnu jedinstvenu smešu spora/jedinjenje koje izaziva klijanje zavisiće od upotrebe za koju je takva smeša namenjena.
[0031] U određenim primerima izvođenja, ovaj pronalazak je usmeren na biljku ili deo biljke obložen kompozicijom koja sadrži: (a) bakterijsku sporu; i (b) jedinjenje koje izaziva klijanje koje je L-aminokiselina, pri čemu kompozicija sadrži suvu jedinstvenu smešu bakterijske spore i L-aminokiseline, pri čemu se L-aminokiselina adsorbuje na bakterijsku sporu, ili je bakterijska spora apsorbuje, i L-aminokiselina je odabrana između L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina. Bakterijske spore obuhvataju vrste koje poboljšavaju rast biljke, obično ili delujući kao pesticid (na primer, fungicid, nematocid ili insekticid); ili poboljšanjem uslova za rast životne sredine oko materijala za razmnožavanje, (na primer, povećanjem količine dostupnih hranljivih materija, kao što je azot). Jedinjenje koje izaziva klijanje pomaže u brzoj transformaciji bakterije iz spore u vegetativno stanje, omogućavajući tako bakteriji da brže poboljša rast biljke.
[0032] Delovi biljaka uključuju, ali nisu ograničeni na, lišće, stabljike, korenje, cvetove, pupoljke, plodove, seme, krtole, lukovice i rizome.
[0033] U određenim primerima izvođenja, biljka ili deo biljke je biljni materijal za razmnožavanje. Kako se ovde koristi, termin "biljni materijal za razmnožavanje" treba da obuhvati sve generativne delove biljke kao što su seme i vegetativni biljni materijal kao što su reznice i krtole (npr. krompir), koji se mogu koristiti za razmnožavanje biljke. To uključuje seme, korenje, plodove, krtole, lukovice, rizome, izdanke, klice, ponike i rasad, odnosno mlade biljke koje se presađuju nakon klijanja ili nakon nicanja iz zemlje. Ovaj rasad takođe može da bude zaštićen pre rasađivanja potpunim ili delimičnim tretmanom potapanjem ili polivanjem. Poželjno, biljni materijal za razmnožavanje je seme.
[0034] Biljke koje su posebno korisne u ovom pronalasku obuhvataju monokotiledone i dikotiledone biljke uključujući, ali ne ograničavajući se na stočnu hranu ili krmne mahunarke, ukrasne biljke, useve za ishranu, drveće ili žbunje odabrano od Acer spp., Allium spp., Amaranthus spp., Ananas comosus, Apium graveolens, Arachis spp., Asparagus officinalis, Beta vulgaris, Brassica spp. (npr. Brassica napus, Brassica rapa ssp. [kanola, uljana repica, repa]), Camellia sinensis, Canna indica, Cannabis saliva, Capsicum spp., Castanea spp., Cichorium endivia, Citrullus lanatus, Citrus spp., Cocos spp., Coffea spp., Coriandrum sativum, Corylus spp., Crataegus spp., Cucurbita spp., Cucumis spp., Daucus carota, Fagus spp., Ficus carica, Fragaria spp., Ginkgo biloba, Glycine spp. (npr. Glycine max, Soja hispida ili Soja max), Gossypium hirsutum, Helianthus spp. (npr. Helianthus annuus), Hibiscus spp., Hordeum spp. (npr. Hordeum vulgare), Ipomoea batatas, Juglans spp., Lactuca sativa, Linum usitatissimum, Litchi chinensis, Lotus spp., Luffa acutangula, Lupinus spp., Lycopersicon spp. (npr. Lycopersicon esculentum, Lycopersicon lycopersicum, Lycopersicon pyriforme), Malus spp., Medicago sativa, Mentha spp., Miscanthus sinensis, Morus nigra, Musa spp., Nicotiana spp., Olea spp., Oryza spp. (npr. Oryza sativa, Oryza latifolia), Panicum miliaceum, Panicum virgatum, Passiflora edulis, Petroselinum crispum, Phaseolus spp., Pinus spp., Pistacia vera, Pisum spp., Poa spp., Populus spp., Prunus spp., Pyrus communis, Quercus spp., Raphanus sativus, Rheum rhabarbarum, Ribes spp., Ricinus communis, Rubus spp., Saccharum spp., Salix sp., Sambucus spp., Secale cereale, Sesamum spp., Sinapis sp., Solanum spp. (npr. Solanum tuberosum, Solanum integrifolium ili Solanum lycopersicum), Sorghum bicolor, Sorghum halepense, Spinacia spp., Tamarindus indica, The-obroma cacao, Trifolium spp., Triticosecale rimpaui, Triticum spp. (npr. Triticum aestivum, Triticum durum, Triticum turgidum, Triticum hybernum, Triticum macha, Triticum sativum ili Triticum vulgare), Vaccinium spp., Vicia spp., Vigna spp., Viola odorata, Vitis spp. i Zea mays. Posebno su poželjni pirinač, uljana repica, kanola, soja, kukuruz, pamuk, šećerna trska, lucerka, sirak i pšenica.
[0035] Bakterija korišćena u kompoziciji ovog pronalaska uključuje bilo koju bakteriju koja formira spore sa industrijskom upotrebom, kao što je poboljšanje rasta biljaka, sanacija životne sredine, tretman otpadnih voda ili upotreba u sistemima akvakulture. Na primer, poboljšanje rasta biljaka može da bude u obliku stavljanja dodatnih resursa na raspolaganje rastućoj biljci, kao što je povećanje dostupnosti azota, na primer, obezbeđeno bakterijom koja kolonizuje koren (kao što je rizobakterijum) ili obezbeđivanje materijala za podsticanje rasta biljaka kao što su aminokiseline, organske kiseline ili hormoni. Alternativno, bakterija može da obezbedi biljci (npr. biljnom materijalu za razmnožavanje) zaštitu od štetnih efekata biljnih patogenih gljiva ili bakterija i/ili životinja iz tla, kao što su one koje pripadaju kolu Nematoda ili Aschelminthes. Zaštita od biljnih parazitskih nematoda i parazitskih mikroorganizama može se odvija hitinolitičkim, proteolitičkim, kolagenolitičkim ili drugim aktivnostima koje su štetne za ove životinje iz tla i/ili štetne za mikrobne populacije. Bakterije koje pokazuju ova nematicidna, fungicidna i baktericidna svojstva mogu da uključuju, ali nisu ograničene na vrste koje obuhvataju članove koji formiraju spore iz kola Firmicutes i članove koji formiraju spore iz kola Actinobacteria kao što je navedeno u Berdžejevom (Bergey) priručniku sistematske bakteriologije, drugo izdanje (2009). Ilustrativne vrste uključuju Bacillus alcalophilus, Bacillus altitudinis, Bacillus alvei, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus aneurinolyticus, Bacillus anthracis, Bacillus aquaemaris, Bacillus atrophaeus, Bacillus boronophilus,Bacillus brevis, Bacillus caldolyyicus, Bacillus centrosporus, Bacillus cereus, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus flavothermus, Bacillus fusiformis, Bacillus globigii, Bacillus infernus, Bacillus larvae, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus mesentericus, Bacillus mojavensis, Bacillus mucilaginosus, Bacillus mycoides, Bacillus natto, Bacillus pantothenicus, Bacillus popilliae, Bacillus polymyxa, Bacillus pseudoanthracis, Bacillus pumilus, Bacillus schlegelii, Bacillus simplex, Bacillus sphaericus, Bacillus sporothermodurans, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, Bacillus thermoglucosidasius, Bacillus thuringiensis, Bacillus vulgatis, Bacillus weihenstephanensis, Clostridium thermocellum, Clostridium ljungdahlii, Clostridium acetobutylicum, Clostridium beijerinckii i Clostridium butyricum. Poželjne vrste uključuju Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus cereus, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus laterosporus, Bacillus lentus,Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus polymyxa, Bacillus pumilus, Bacillus simplex, Bacillus sphaericus, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Clostridium butyricum, Pasteuria penetrans, Pasteuria thornei, Pasteuria nishizawae i vrste Streptomyces.
[0036] Posebno poželjne bakterijske vrste uključuju B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. licheniformis, B. megaterium i B. pumilus.
[0037] Poželjna jedinjenja koja izazivaju klijanje uključuju L-alanin, L-valin i L-asparagin. Najpoželjnije, takvo jedinjenje koje izaziva klijanje je L-alanin.
[0038] U određenim primerima izvođenja, dodatna jedinjenja koja izazivaju klijanje, pored L-aminokiselina, mogu takođe da se koriste za optimizaciju klijanja i odgovora u vidu rasta bakterijskih spora. Na primer, u određenim primerima izvođenja, kompozicije sadrže najmanje jednu L-aminokiselinu i dodatno jedinjenje koje izaziva klijanje izabrano iz grupe koja se sastoji od fruktoze, glukoze i jona kalijuma.
[0039] Posebno poželjne kombinacije Bacillus/jedinjenje koje izaziva klijanje uključuju L-alanin Bacillus subtilis, L-alanin Bacillus licheniformis, L-alanin Bacillus pumilus, L-alanin Bacillus amyloliquefaciens, L-alanin Bacillus coagulans, L-alanin Bacillus cereus, L-alanin Bacillus clausii, L-alanin Clostridium butyricum L-valin Bacillus subtilis, L-valin Bacillus licheniformis, L-valin Bacillus pumilus, L-valin Bacillus amyloliquefaciens, L-valin Bacillus coagulans, L-valin Bacillus cereus, L-valin Bacillus clausii, L-valin Clostridium butyricum L-alanin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus subtilis, L-alanin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus licheniformis, L-alanin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus pumilus, L-alanin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus amyloliquefaciens, L-alanin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus coagulans, L-alanin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus cereus, L-alanin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus clausii, L-alanin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Clostridium butyricum L-asparagin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus subtilis, L-asparagin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus licheniformis, L-asparagin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus pumilus, L-asparagin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus amyloliquefaciens, L-asparagin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus coagulans, L-asparagin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus cereus, L-asparagin glukoza+fruktoza+joni kalijuma (GFK) Bacillus clausii, L-asparagin glukoza fruktoza +joni kalijuma (GFK) Clostridium butyricum L-alanin inozin Bacillus subtilis, L-alanin inozin Bacillus licheniformis, L-alanin inozin Bacillus pumilus, L-alanin inozin Bacillus amyloliquefaciens, L-alanin inozin Bacillus coagulans, L-alanin inozin Bacillus cereus, L-alanin inozin Bacillus clausii, L-alanin inosine Clostridium butyricum L-prolin glukoza Bacillus megaterium, L-prolin Bacillus megaterium, L-laktat Clostridium butyricum.
[0040] Jedinjenje koje izaziva klijanje je prisutno u količini dovoljnoj da izazove klijanje korišćenih bakterijskih spora. Iako se ovo može lako odrediti za bilo koju konkretnu smešu bakterijska spora/jedinjenje koje izaziva klijanje rutinskim eksperimentisanjem, takva jedinjenja koja izazivaju klijanje se tipično formulišu, pre sušenja, u koncentracijama od 0.0001 mg/mL do 170 mg/mL. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja koja izazivaju klijanje se formulišu, pre sušenja, u koncentracijama od 0.0003 mg/mL do 170 mg/mL, 0.0003 mg/mL do 30 mg/mL, 0.001 mg/mL do 100 mg/mL ili 0.001 mg /mL do 10 mg/mL. U poželjnom primeru izvođenja, jedinjenje koje izaziva klijanje se formuliše, pre sušenja, u koncentracijama od 0.001 mg/mL do 1 mg/mL.
[0041] Da bi se dodatno poboljšalo klijanje, poželjno je da se spora izloži šoku. Spore mogu da se izlože šoku različitim standardnim postupcima, kao što su osmotski šok, toplotni šok, šok pritiska, uskraćivanje hranljivih materija i/ili izlaganje određenim kiselinama. Toplotni šok uključuje zagrevanje spora tokom dovoljnog vremenskog perioda na temperaturi dovoljnoj da izazove proizvodnju proteina toplotnog šoka. Postupci za izlaganje šoku bakterijskih spora su poznati u tehnici. Na primer, Atluri et al. (2006, Journal of Bacteriology 188(1): 28-36) opisuje jedan takav tretman toplotnog šoka za Bacillus subtilis.
[0042] Kompozicije korišćene u ovom pronalasku sadrže (a) bakterijsku sporu i (b) jedinjenje koje izaziva klijanje koje je L-aminokiselina, pri čemu kompozicija sadrži suvu jedinstvenu smešu bakterijske spore i L-aminokiseline i pri čemu se L-aminokiselina adsorbuje na bakterijsku sporu, ili je bakterijska spora apsorbuje, a L-aminokiselina je izabrana između L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina; i odlikuju se time što se takva spora i jedinjenje koje izaziva klijanje održavaju u neaktivnom obliku tako da jedinjenje koje izaziva klijanje neće izazvati klijanje spore sve dok se takva kompozicija ne podvrgne aktivacionom okruženju. Takve kompozicije su korisne za proizvodnju obložene biljke ili biljnog dela (npr. biljnog materijala za razmnožavanje) ovog pronalaska, kao i za druge ovde opisane upotrebe, kao što su sanacija životne sredine, tretman otpadnih voda, prevencija ili lečenje bolesti, rekuperacija ulja ili upotreba u sistemima akvakulture.
[0043] Kako se ovde koristi, termin "aktivaciona sredina" odnosi se na okruženje koje dozvoljava jedinjenju koje izaziva klijanje i spori da interaguju, tako da se spora indukuje da uđe u vegetativno stanje. Takva aktivaciona sredina može da uključuje dodavanje vode (putem kiše, vlage u zemljištu ili vode koja se dodaje u obloženi materijal za razmnožavanje biljaka pre sadnje), ili može da zahteva kombinaciju faktora kao što su temperatura, vlaga, pH ili salinitet.
[0044] Shodno tome, takve kompozicije sadrže suve smeše spore i jedinjenja koje izaziva klijanje. Dodatni materijali koji mogu da se koriste u kompoziciji za sprečavanje interakcije spora i jedinjenja koje izaziva klijanje uključuju, ali nisu ograničeni na, surfaktante, sredstva za sekvestraciju, plastifikatore, kolorante i boje, sredstva za posvetljavanje, emulgatore, sredstva za tečenje, koalescentna sredstva, sredstva protiv pene, zgušnjivače, voskove, punioce, polimere, sredstva za vlaženje i sredstva protiv smrzavanja.
[0045] U ovom pronalasku, spora i jedinjenje koje izaziva klijanje, odnosno L-aminokiselina, su u jedinstvenoj smeši jedno sa drugim.
[0046] Kako se ovde koristi, izraz "jedinstvena smeša" se odnosi na smešu u kojoj se spore i jedinjenja koja izazivaju klijanje održavaju u neposrednoj blizini dok ne dospeju u okruženje pogodno za klijanje, tj. aktivacionu sredinu.
[0047] Ovakva jedinstvena smeša može da se dobije primenom postupaka kao što su sušenje raspršivanjem, sušenje zamrzavanjem, sušenje na vazduhu ili sušenje u bubnju. U poželjnom primeru izvođenja, jedinstvena smeša se proizvodi sušenjem raspršivanjem ili sušenjem zamrzavanjem. Kada se formiraju takve jedinstvene smeše, važno je da se spora i jedinjenje koje izaziva klijanje ne mešaju zajedno u uslovima koji bi omogućili jedinjenju koje izaziva klijanje da izazove klijanje spora, jer bi to moglo da izazove prerano klijanje sa štetnim uticajem na vek skladištenja smeše. Ovo se može izbeći upotrebom odvojenih tokova u uređaju za sušenje raspršivanjem, bilo korišćenjem dve mlaznice ili jedne mlaznice koja dozvoljava istovremeno prskanje dve odvojene struje; ili sušenjem zamrzavanjem u uslovima (na primer na temperaturama) koji ne pogoduju klijanju. Prevremeno klijanje se takođe može izbeći uvođenjem mase spora u rastvor koji sadrži jedinjenje koje izaziva klijanje neposredno pre sušenja.
[0048] U poželjnom primeru izvođenja, jedinjenje koje izaziva klijanje se adsorbuje na bakterijsku sporu, ili ga bakterijska spora apsorbuje u jedinstvenoj smeši. U sledećem primeru izvođenja, bakterijska spora i jedinjenje koje izaziva klijanje su fino dispergovani u jedinstvenoj smeši. U još jednom primeru izvođenja, bakterijska spora i jedinjenje koje izaziva klijanje su mikroskopski dispergovani u jedinstvenoj smeši, tako da pojedinačne čestice koje se u suštini sastoje od bakterijskih spora i pojedinačne čestice koje se u suštini sastoje od jedinjenja koja izazivaju klijanje nisu vidljive golim okom.
[0049] U jednom primeru izvođenja jedinstvena smeša se priprema kombinovanjem bakterijske spore i jedinjenja koje izaziva klijanje u rastvoru pre sušenja. Poželjno je da se bakterijska spora i jedinjenje koje izaziva klijanje kombinuju u rastvoru neposredno pre sušenja.
[0050] Bez želje za vezivanjem za bilo kakvu teoriju, veruje se da formiranje jedinstvene smeše postavlja jedinjenje koje izaziva klijanje u položaj u neposrednoj blizini gde može preferencijalno da se veže za inicijatorska mesta za klijanje spore kada smeša dostigne odgovarajuće okruženje za klijanje. Takav položaj u neposrednoj blizini dozvoljava jedinjenju koje izaziva klijanje da nadmaši u kompeticiji jedinjenja koja ometaju klijanje (kao što su D-aminokiseline) koja mogu biti prisutna, što za rezultat ima klijanje većeg procenta spora. Zbog toga što bakterije, kada uđu u vegetativnu fazu pokazuju logaritamski rast, tako povećan procenat može brzo da dovede do povećanja od nekoliko log u formiranju kulture.
[0051] Takve kompozicije mogu dalje da sadrže dodatne komponente, uključujući ko-agense koji izazivaju klijanje, hranljive materije i pomoćna sredstva za formulaciju, pod uslovom da takvi aditivi ne izazivaju preranu interakciju spore i jedinjenja koje izaziva klijanje.
[0052] Biljka ili deo biljke (npr. biljni materijal za razmnožavanje) koji se oblaže prema pronalasku može da potiče od bilo koje biljne vrste koja može imati koristi od prisustva inokulanta ili mikroba koji podstiče rast biljaka ili pesticidnih mikroba.
[0053] Biljka ili deo biljke (npr. biljni materijal za razmnožavanje) mogu da budu obloženi bakterijom i jedinjenjem koje izaziva klijanje na bilo koji konvencionalni način koji se obično koristi za oblaganje biljnog materijala (npr. semena ili drugog klijavog materijala), pod uslovom da takav način ne utiče negativno na vijabilnost spora i da takav način ne dovodi do toga da jedinjenje koje izaziva klijanje prerano prevede bakteriju u njeno vegetativno stanje. Konvencionalni načini koji mogu da se primene uključuju tretman prskanjem, tretman nakapavanjem, tretman namakanjem, tretman premazivanjem, tretman oblaganjem filmom, tretman oblaganja peleta, i slično. Postupci oblaganja semena su poznati u tehnici i opisani su, na primer, u SAD pat. br.7,989,391 i SAD pat. br.5,849,320.
[0054] U određenom primeru izvođenja, biljka ili deo biljke (npr. seme) se oblaže kompozicijom pre klijanja ili pre nicanja iz medijuma za rast u koji je zasađen (npr. zemljište). U drugim primerima izvođenja, biljka ili deo biljke se oblažu kompozicijom nakon klijanja ili posle nicanja iz medijuma za rast u kome je zasađen (npr. zemljište), na primer, prskanjem kompozicije na biljku koja raste u polju ili stakleniku.
[0055] Prilikom nanošenja takvog premaza, važno je da se spora i jedinjenje koje izaziva klijanje ne mešaju zajedno u uslovima koji bi omogućili jedinjenju koje izaziva klijanje da izazove klijanje spore, jer bi to moglo da izazove prerano klijanje sa štetnim uticajem na vek skladištenja smeše. Jedan od načina na koji se ovo može izbeći je korišćenje odvojenih tokova u uređaju za sušenje raspršivanjem, bilo korišćenjem dve mlaznice ili jedne mlaznice koja dozvoljava istovremeno prskanje dve odvojene struje; ili sušenjem zamrzavanjem u uslovima (na primer na temperaturama) koji ne pogoduju klijanju.
[0056] Pored biološki aktivnih sastojaka, kompozicije za oblaganje semena mogu da uključuju mnoge materijale i aditive koji su ili deo formulacija aktivnog sastojka ili doprinose kvalitetima rukovanja premazom semena ili njegovoj funkcionalnosti i trajnosti na semenu. Primer aditiva za oblaganje je polimer za oblaganje koji vezuje aktivne sastojke za seme. Polimeri za oblaganje semena mogu da obuhvataju, na primer, ali nisu ograničeni na, proteine, polisaharide, poliestre, poliuretane, polimere pripremljene od nezasićenih monomera i njihove kombinacije.
[0057] Drugi aditivi koji doprinose kvalitetu rukovanja premazom semena ili njegovoj funkcionalnosti i trajnosti na semenu uključuju, ali nisu ograničeni na surfaktante, sredstva za sekvestraciju, plastifikatore, kolorante i boje, sredstva za posvetljavanje, emulgatore, sredstva za tečenje, koalescentna sredstva, sredstva protiv pene, zgušnjivače, voskove, baktericide, punioce, polimere, sredstva za vlaženje i sredstva protiv smrzavanja. Priroda i delovanje takvih aditiva su dobro poznati stručnjacima u oblasti formulisanja. Aditivi ne bi trebalo da ometaju delovanje bakterije.
[0058] Veziva koja su korisna u ovom pronalasku poželjno sadrže adhezivni polimer koji može da bude prirodan ili sintetički i bez fitotoksičnog dejstva na seme koje se oblaže. Vezivo može da se izabere između polivinil acetata; kopolimera polivinil acetata; kopolimera etilen vinil acetata (EVA); polivinil alkohola; kopolimera polivinil alkohola; celuloza, uključujući etilceluloze, metilceluloze, hidroksimetilceluloze, hidroksipropilceluloze i karboksimetilceluloze; polivinilpirolidona; polisaharida, uključujući skrob, modifikovani skrob, dekstrine, maltodekstrine, alginate i hitozane; masti; ulja; proteina, uključujući želatin i zeine; arapske gume; šelaka; viniliden hlorida i kopolimera viniliden hlorida; kalcijum lignosulfonata; akrilnih kopolimera; polivinilakrilata; polietilen oksida; akrilamidnih polimera i kopolimera; polihidroksietil akrilata, metilakrilamidnih monomera; i polihloroprena.
[0059] Količina veziva u premazu može da varira, ali će biti u opsegu od oko 0.01 do oko 25% težine semena, poželjnije od oko 0.05 do oko 15%, a još poželjnije od oko 0.1 % do oko 10%.
[0060] Premaz materijala za razmnožavanje može opciono da sadrži punilac. Punilac može da bude apsorbent ili inertni punilac, kao što je poznato u tehnici, i može da uključuje drvno brašno, gline, aktivni ugalj, šećere, dijatomejsku zemlju, brašna žitarica, finozrnate neorganske čvrste materije, kalcijum karbonat i slično. Gline i neorganske čvrste materije, koje se mogu koristiti, uključuju kalcijum bentonit, kaolin, porculansku glinu, talk, perlit, liskun, vermikulit, silicijum dioksid, kvarcni prah, montmorilonit i njihove smeše. Šećeri, koji mogu da budu korisni, uključuju dekstrin i maltodekstrin. Brašna žitarica uključuju pšenično brašno, ovseno brašno i ječmeno brašno.
[0061] Punilac je odabran tako da obezbedi odgovarajuću mikroklimu za seme, na primer, punilac se koristi za povećanje opterećenja aktivnih sastojaka i za podešavanje kontrolisanog oslobađanja aktivnih sastojaka. Punilac može da pomogne u proizvodnji ili postupku premazivanja semena. Količina punioca može da varira, ali generalno težina komponenti punioca će biti u opsegu od oko 0.05 do oko 75% težine semena, poželjnije oko 0.1 do oko 50%, i još poželjnije oko 0.5% do 15%.
[0062] Opciono, u formulaciji premaza može da se koristi plastifikator. Plastifikatori se obično koriste da bi film koji je formiran od sloja premaza bio fleksibilniji, da bi se poboljšala adhezija i mogućnost rasprostiranja, i da bi se poboljšala brzina obrade. Poboljšana fleksibilnost filma je važna kako bi se smanjilo odlamanje, lomljenje ili ljuštenje tokom postupaka skladištenja, rukovanja ili setve. Mogu se koristiti mnogi plastifikatori, međutim, korisni plastifikatori uključuju polietilen glikol, glicerol, butilbenzilftalat, glikol benzoate i srodna jedinjenja. Opseg plastifikatora u sloju premaza biće u opsegu od oko 0.1 do oko 20 težinskih%.
[0063] Tretirano seme može takođe da bude obloženo dodatnom prevlakom u vidu filma da bi se zaštitila prevlaka od aktivnih komponenti. Takve dodatne prevlake su poznate u tehnici i mogu da se primene korišćenjem konvencionalnih tehnika prevlačenja u fluidizovanom sloju i prevlačenja filmom u bubnju.
[0064] Pronalazak se takođe odnosi na postupak za poboljšanje osobine biljke ili dela biljke (npr. biljnog materijala za razmnožavanje) koja se odnosi na prinos koji obuhvata oblaganje biljke kompozicijom koja sadrži: a) bakterijsku sporu; i b) jedinjenje koje izaziva klijanje, pri čemu je osobina biljke koja se odnosi na prinos poboljšana u odnosu na osobinu koja se odnosi na prinos odgovarajuće biljke koja nije obložena pomenutom kompozicijom.
[0065] Kako se ovde koristi, izraz "osobina koja se odnosi na prinos" odnosi se na bilo koju osobinu koja može da doprinese povećanom prinosu biljke. Osobine koje se odnose na prinos koje mogu da se poboljšaju postupcima prema ovom pronalasku uključuju, ali nisu ograničene na, ukupnu klijavost semena, brzinu klijanja semena (npr. broj dana potrebnih za klijanje semena), biomasu biljke, otpornost na bolesti, otpornost na insekte, otpornost na sušu, otpornost na toplotu, otpornost na hladnoću, otpornost na salinitet, otpornost na teške metale, ukupan prinos, prinos semena, vreme cvetanja (npr. rano vreme cvetanja), rast korena, ranu bujnost, biljnu biomasu, veličinu biljke, ukupnu suvu težinu biljke, suvu nadzemnu težinu, svežu nadzemnu težinu, površinu lista, zapreminu stabljike, visinu biljke, prečnik rozete, dužinu lista, dužinu korena, masu korena, broj izdanaka i broj listova.
[0066] U posebnim primerima izvođenja, osobina koja se odnosi na prinos je izabrana iz grupe koja se sastoji od ukupnog prinosa, ukupne klijavosti semena, brzine klijanja semena, biljne biomase, otpornosti na insekte, ranog vremena cvetanja i otpornosti na sušu.
[0067] Kako se ovde koristi, izraz "ukupna klijavost semena" odnosi se na procenat semena koje klija posle sadnje.
[0068] Kako se ovde koristi, termin "biomasa" se odnosi na ukupnu težinu biljke. U okviru definicije biomase, može se napraviti razlika između biomase jednog ili više delova biljke, što može da uključuje bilo šta ili više od sledećeg: nadzemne delove, uključujući, ali bez ograničenja, biomasu izdanaka, biomasu semena, biomasu lišća; nadzemne delove za berbu uključujući, ali bez ograničenja, biomasu izdanaka, biomasu semena, biomasu lišća; delove ispod zemlje, uključujući, ali bez ograničenja, biomasu korena, krtole, lukovice; delove ispod zemlje za berbu, uključujući, ali bez ograničenja, biomasu korena, krtole, lukovice; delove za berbu delimično ispod zemlje uključujući, ali bez ograničenja, repu i druga hipokotilna područja biljke, rizome, stolone ili puzeće rizome; vegetativnu biomasu uključujući, ali bez ograničenja, biomasu korena, biomasu izdanaka; reproduktivne organe; i propagule uključujući, ali bez ograničenja, seme.
[0069] Kako se ovde koristi, termin "rano vreme cvetanja" odnosi se na biljku koja počinje da cveta ranije od kontrolne biljke. Dakle, ovaj termin se odnosi na biljke koje pokazuju raniji početak cvetanja. Vreme cvetanja biljaka može da se proceni brojanjem dana ("vreme do cvetanja") između setve i pojave prve cvasti. "Vreme cvetanja" biljke može da se odredi, na primer, korišćenjem postupka kao što je opisano u WO07/093444.
[0070] Kako se ovde koristi, termin "uslovi suše" odnosi se na bilo koji stres koji dovodi do nedostatka vode u biljkama, nedostatka dostupnosti vode za biljke, nedostatka potencijala za upijanje vode u biljkama ili smanjenja u vodosnabdevanje biljaka. Konkretno, "suša" se odnosi na nedostatak padavina koji je rezultat kratkotrajnog ili dugotrajnog vremenskog obrasca. Stručnjak u ovoj oblasti može lako da odredi uslove suše. Na primer, Palmerov indeks ozbiljnosti suše (PDSI), koji je mera vlažnosti zemljišta, indeks vlažnosti useva (CMI) i Z indeks mogu da se koriste za određivanje uslova suše.
[0071] Osobine koje se odnose na prinos mogu da se poboljšaju korišćenjem postupaka ovog pronalaska. Na primer, u nekim primerima izvođenja, bilo koja od ovde opisanih osobina koje se odnose na prinos može da bude povećana za najmanje oko 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 ili 1000% u biljci (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju je primenjena kompozicija ovog pronalaska, u odnosu na kontrolni biljni materijal za razmnožavanje na koji kompozicija pronalaska nije primenjena.
[0072] Na primer, u nekim primerima izvođenja, ukupna klijavost semena može da bude povećana za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% u biljnom materijalu za razmnožavanje (npr. semenu) na koji je primenjena kompozicija pronalaska u odnosu na kontrolni biljni materijal za razmnožavanje (npr. seme) na koji nije primenjena kompozicija pronalaska. Bilo koja od ovih vrednosti se može koristiti za definisanje opsega za povećanje ukupne klijavosti semena. Na primer, u nekim primerima izvođenja, klijavost semena može da bude povećana za 5-10%, 5-20% ili 5-50%. U drugom primeru izvođenja, broj dana potrebnih za klijanje semena može da se smanji za 1 dan u biljnom materijalu za razmnožavanje (npr. semenu) na koji je primenjena kompozicija pronalaska, u poređenju sa kontrolnim biljnim materijalom za razmnožavanje (npr. seme) na koji nije primenjena kompozicija prema pronalasku. U jednom primeru izvođenja, broj dana potrebnih za klijanje semena može da se smanji za 0.5 dana, 1 dan, 1.5 dana, 2 dana, 3 dana, 4 dana, 5 dana, 6 dana, 7 dana, 8 dana, 9 dana, 10 dana ili 14 dana u biljnom materijalu za razmnožavanje (npr. semenu) na koji je primenjena kompozicija prema pronalasku voda, u poređenju sa kontrolnim biljnim materijalom za razmnožavanje (npr. seme) na koji nije primenjena kompozicija prema pronalasku. Bilo koja od ovih vrednosti može da se koristi za definisanje opsega za smanjenje broja dana potrebnih za klijanje semena. Na primer, broj dana potrebnih za klijanje semena može da se smanji za 1-2 dana, 1-5 dana ili 2-5 dana.
[0073] U drugom primeru izvođenja, biljna biomasa može da bude povećana za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% u biljci (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju je primenjena kompozicija pronalaska, u poređenju sa kontrolnom biljkom (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju kompozicija pronalaska nije primenjena. Bilo koja od ovih vrednosti može da se koristi za definisanje opsega povećanja biljne biomase. Na primer, u nekim primerima izvođenja, biljna biomasa se povećava za 5-10%, 5-20% ili 5-50%.
[0074] U nekim primerima izvođenja, otpornost na insekte može da bude poboljšana za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% u biljci (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju je primenjena kompozicija pronalaska, u poređenju sa kontrolnom biljkom (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju kompozicija pronalaska nije primenjena. Na primer, u nekim primerima izvođenja, otpornost na insekte je povećana za 5-10%, 5-20% ili 5-30%.
[0075] Otpornost na insekte, otpornost na bolesti i otpornost na stres iz okoline (npr. otpornost na sušu) mogu da se mere merenjem bilo koje osobine koja se odnosi na prinos opisane ovde pod uslovima biotičkog ili abiotičkog stresa. Na primer, otpornost na sušu može da se odredi merenjem procenta klijavosti, brzine klijanja, biljne biomase, prinosa ili prinosa semena u uslovima suše. Otpornost ne insekte, otpornost na bolesti ili otpornost na stres iz okoline može da se kvantifikuje merenjem osobine koja se odnosi na prinos pod odgovarajućim uslovima. Na primer, utvrdilo bi se da biljka (npr. biljni materijal za razmnožavanje) tretirana kompozicijom pronalaska koja je pokazala povećanje prinosa od 10% u odnosu na biljni materijal za razmnožavanje koji nije tretiran kompozicijom pokazuje povećanje od 10% u otpornost na sušu. Kao drugi primer, utvrdilo bi se da biljka (npr. biljni materijal za razmnožavanje) tretirana kompozicijom pronalaska koja je pokazala povećanje od 10% u brzini olistavanja, u poređenju sa biljkom (npr. biljnim materijalom za razmnožavanje) koja nije tretirana kompozicijom pokazuje povećanje otpornosti na insekte za 10%. Biljka sa povećanom brzinom olistavanja je otpornija na napade insekata.
[0076] U nekim primerima izvođenja, otpornost na bolesti ili otpornost na biljojede može da bude povećana za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% u biljci (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju je primenjena kompozicija pronalaska u odnosu na kontrolnu biljku (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju nije primenjena kompozicija pronalaska. U nekim primerima izvođenja, otpornost na sušu može da bude povećana za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% u biljci (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju je primenjena kompozicija pronalaska u odnosu na kontrolnu biljku (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju kompozicija pronalaska nije primenjena. Bilo koja od ovih vrednosti može da se koristi za definisanje opsega za povećanje otpornosti na bolesti ili otpornosti na biljojede. Na primer, u nekim primerima izvođenja, povećanje otpornosti na bolesti ili otpornosti na biljojede je 5-10%, 5-20% ili 5-30%.
[0077] U nekim primerima izvođenja, otpornost na toplotu ili hladnoću može da se poveća za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% u biljci (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju je primenjena kompozicija pronalaska u odnosu na kontrolnu biljku (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju nije primenjena kompozicija pronalaska. Bilo koja od ovih vrednosti može da se koristi za definisanje opsega za povećanje otpornosti na toplotu ili hladnoću. Na primer, u nekim primerima izvođenja, povećanje otpornosti na toplotu ili hladnoću je 5-10%, 5-20% ili 5-30%.
[0078] U nekim primerima izvođenja, otpornost na salinitet ili otpornost na teške metale može da bude povećana za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% u biljci (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju je primenjena kompozicija pronalaska u odnosu na kontrolnu biljku (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju kompozicija pronalaska nije primenjena. Otpornost na salinitet ili otpornost na teške metale može da se odrediti korišćenjem standardnih postupaka u struci. Na primer, salinitet može da se odredi merenjem razmene katjona, na primer, kalcijumskog u natrijumski. Bilo koja od ovih vrednosti može se koristiti za definisanje opsega za povećanje otpornosti na salinitet ili otpornosti na teške metale. Na primer, u nekim primerima izvođenja, povećanje otpornosti na salinitet ili otpornosti na teške metale može da bude 5-10%, 5-20% ili 5-30%.
[0079] U nekim primerima izvođenja, ukupan prinos može da se poveća za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% u biljci (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju je primenjena kompozicija pronalaska u odnosu na kontrolnu biljku (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju kompozicija pronalaska nije primenjena. Bilo koja od ovih vrednosti može da se koristi za definisanje opsega za povećanje ukupnog prinosa. Na primer, u nekim primerima izvođenja, ukupan prinos je povećan za 1-5%, 1-10% ili 1-15%.
[0080] U nekim primerima izvođenja, rast korena, rana bujnost, veličina biljke, ukupna suva težina biljke, suva nadzemna težina, sveža nadzemna težina, površina lista, zapremina stabljike, visina biljke, prečnik rozete, dužina lista, dužina korena, masa korena, broj izdanaka ili broj listova mogu da se povećaju za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% u biljci (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju je primenjena kompozicija pronalaska u odnosu na kontrolnu biljku (npr. biljni materijal za razmnožavanje) na koju kompozicija pronalaska nije primenjena. Bilo koja od ovih vrednosti može da se koristi za definisanje opsega za povećanje rasta korena, rane bujnosti, veličine biljke, ukupne suvu težinu biljke, suve nadzemne težine, sveže nadzemne težine, površine lista, zapremine stabljike, visine biljke, prečnika rozete, dužine lista, dužine korena, mase korena, broja izdanaka ili broja listova. Na primer, u nekim primerima izvođenja, rast korena, rana bujnost, veličina biljke, ukupna suva težina biljke, suva nadzemna težina, sveža nadzemna težina, površina lista, zapremina stabljike, visina biljke, prečnik rozete, dužina lista, dužina korena, masa korena, broj izdanaka ili broj listova mogu da se povećaju za 1-5%, 5-10% ili 5-20%.
[0081] Uopšteno, "poboljšana osobina koja se odnosi na prinos" ili "povećanje osobine koja se odnosi na prinos" odnosi se na nivo osobine u ispitivanoj biljci (npr. biljnog materijala za razmnožavanje) koji je veći od standardne greške testa koji se koristi za procenu nivoa osobine, a poželjno je najmanje dva, a poželjnije tri, četiri, pet ili deset puta veći od nivoa osobine u kontrolnom uzorku (npr. uzorak biljnog materijala za razmnožavanje koji nije je bio u kontaktu sa kompozicijom pronalaska) i poželjno, prosečnog nivoa ekspresije osobine u nekoliko kontrolnih uzoraka.
[0082] Predviđeno je da vrednosti i opsezi uključeni i/ili intermedijarni u opsezima koji su ovde navedeni takođe budu obuhvaćeni obimom ovog otkrića. Predviđeno je da opsezi koji imaju vrednosti navedene ovde kao gornju ili donju granicu takođe budu obuhvaćeni obimom ovog otkrića.
[0083] Pronalazak takođe opisuje postupak za ishranu životinje u sistemu akvakulture, koji obuhvata davanje hrane za životinje koja sadrži bilo koju od gore navedenih kompozicija, koje sadrže bakterijsku sporu i jedinjenje koje izaziva klijanje, životinji u sistemu akvakulture. U određenim primerima izvođenja, životinja je izabrana iz grupe koja se sastoji od riba, škampa ili mekušaca. U određenim primerima izvođenja, rast (npr. telesna težina) životinje u sistemu akvakulture je povećan u odnosu na kontrolnu životinju kojoj se daje hrana za životinje koja ne sadrži kompoziciju. U određenim primerima izvođenja, životinja je inficirana sa najmanje jednim od patogena navedenih u tabeli 1A ispod.
[0084] Na primer, u nekim primerima izvođenja, telesna težina može da bude povećana za najmanje oko 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ili 100% kod životinje kojoj je davana hrana za životinje koja sadrži kompoziciju pronalaska u odnosu na kontrolnu životinju kojoj nije davana hrana za životinje koja sadrži kompoziciju prema pronalasku. Bilo koja od ovih vrednosti može da se koristiti za definisanje opsega povećanja telesne težine. Na primer, u nekim primerima izvođenja, telesna težina može da bude povećana za 5-10%, 5-20% ili 5-50%.
[0085] U određenim primerima izvođenja gore pomenutih postupaka, bakterijska spora je izabrana iz grupe koja se sastoji od Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis i Bacillus pumilis.
[0086] U drugom aspektu pronalazak se odnosi na neterapeutski postupak za ishranu životinje koji obuhvata davanje životinji kompozicije koja sadrži bakterijsku sporu i jedinjenje koje izaziva klijanje, kao što je ovde opisano. U određenim primerima izvođenja, hrana za životinje može da se daje životinji u kombinaciji sa drugim sastojcima hrane za životinje. Životinja može da bude bilo koja životinja od interesa. U određenim primerima izvođenja, životinja je životinja izabrana iz grupe koja se sastoji od živine, preživara, teladi, svinja, zečeva, konja, riba i kućnih ljubimaca. Kompozicije se mogu davati u dozi od najmanje 10<3>, 10<4>, 10<5>, 10<6>, 10<7>, 10<8>ili 10<9>jedinica koje formiraju kolonije (CFU) bakterija po gramu hrane. Kompozicije se takođe mogu davati životinji dodavanjem kompozicije u vodu za piće za životinju, prskanjem kompozicije na životinje ili primenom putem paste, gela ili bolusa.
[0087] Pronalazak se takođe odnosi na postupak za pripremu silaže koji obuhvata nanošenje kompozicije koja sadrži bakterijsku sporu i L-aminokiselinu na silažu, pri čemu kompozicija sadrži suvu jedinstvenu smešu bakterijske spore i L-aminokiseline, i gde se L-aminokiselina adsorbuje na bakterijsku sporu, ili je bakterijska spora apsorbuje, i L-aminokiselina je izabrana između L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina.
[0088] Silaža je vrsta hrane za životinje proizvedena fermentacijom biljne biomase kao što je trava, seno, žitarice ili kukuruz u silosima ili drugim zatvorenim kontejnerima. Prilikom obrade poljoprivrednih sirovina za proizvodnju silaže, biljna biomasa, kao što su trava ili kukuruz se meša sa bakterijama mlečne kiseline da bi se formirala silaža. Proizvodnja silaže je dobro poznat postupak za povećanje stabilnosti hrane za životinje i za poboljšanje svojstava sirovina. Za proizvodnju silaže, kao sirovine su pogodni kukuruz i trava, proso, žitarice sa ili bez zrna i mahunarke. Za proizvodnju silaže često se koriste pomoćna sredstva za silažiranje, takozvani silažni starteri, koji sadrže i hemijske aditive i mikrobne aditive. Mikrobni aditivi se takođe mogu dodati u silažu, na primer, da inhibiraju rast kontaminirajućih organizama, da smanje mikotoksine ili da smanje emisiju metana kod preživara. Postupci za pripremu silaže koja sadrži mikrobne aditive su poznati u tehnici i opisani su, na primer, u US 2011/0142991.
[0089] U određenim primerima izvođenja, silaža sadrži najmanje oko 1x10<3>, 1x10<4>, 1x10<5>, 1x10<6>, 1x10<7>, 1x10<8>ili 1x10<9>CFU bakterija po gramu silaže. Bilo koja od ovih vrednosti se može koristiti za definisanje opsega koncentracije bakterijskog soja u silaži. Na primer, u nekim primerima izvođenja, silaža sadrži najmanje oko 1x10<5>-1x10<7>CFU, 5x10<5>-5x10<6>CFU ili 1x10<6>-5x10<6>CFU bakterijskog soja po gramu silaže.
PRIMERI
[0090] Sledeći primeri su dati da ilustruju principe pronalaska.
[0091] U sledećim primerima, termini "GOSD" (Sušenje raspršivanjem optimizovano za klijanje) i "GO+" odnose se na kompozicije u kojima je optimizator klijanja (L-alanin osim ako nije drugačije naznačeno) osušen raspršivanjem sa određenom naznačenom vrstom Bacillusa. Spore vrste Bacillusa su osušene raspršivanjem tako što je L-alanin unet u masu spora neposredno pre sušenja raspršivanjem kao rastvor koji sadrži .044 grama alanina po mililitru destilovane vode.
[0092] Termin "GO-" se odnosi na kompozicije u kojima je vrsta Bacillusa sušena raspršivanjem na sličan način, bez prisustva jedinjenja koje izaziva klijanje.
[0093] Dalje, sledeći postupak je korišćen za određivanje klijanja spora u primerima, osim ako nije drugačije naznačeno. Kada se spore stave u hranljive rastvore i počnu da klijaju, oslobađaju dipikolinsku kiselinu i jone što dovodi do zatamnjenja. Ovaj indikator klijanja dovodi do smanjenja optičke ekstinkcije vidljive svetlosti u suspenziji spora. Brzina klijanja je stoga određena izračunavanjem proporcije faze tamnih/svetlih spora i praćenjem smanjenja optičke gustine na 600 nm (O.D. 600) suspenzije spora koje klijaju pod spektrofotometrom koji radi u oblasti UV-vidljive svetlosti. Ovaj odnos je zatim pretvoren u procenat klijanja.
Primer 1: Povećana klijavost B. subtilis ENV 923 u jedinstvenoj smeši sa L-alaninom
[0094] Da bi se uporedila brzina klijanja spora jedinstvenih smeša ovog pronalaska sa onom kod spora koje se uobičajeno koriste u odsustvu agensa koji izaziva klijanje, sprovedeni su sledeći tretmani:
A. Formiranje jedinstvene smeše: Spore B. subtilis ENV 923 su osušene raspršivanjem tako što je L-alanin unesen u masu spora neposredno pre sušenja raspršivanjem kao rastvor koji sadrži .044 grama alanina po mililitru destilovane vode. Proizvedena jedinstvena smeša je podstaknuta na klijanje naknadnim uvođenjem u rastvor koji se sastoji od .01 M fosfatnog pufera u destilovanoj vodi sa rezultujućim pH 7.
B. Uobičajeno mešanje spora sa agensom koji izaziva klijanje: Spore B. subtilis ENV 923 su osušene raspršivanjem i zatim unete u rastvor koji se sastoji od .01 M fosfatnog pufera u destilovanoj vodi sa rezultujućim pH 7. Takve spore su podstaknute na klijanje unošenjem u rastvor koji se sastoji od .01 M fosfatnog pufera u destilovanoj vodi sa rezultujućim pH 7; sa .0001 grama alanina po mililitru rastvora.
C. Klijanje samih spora: Spore B. subtilis ENV 923 su osušene raspršivanjem i zatim unete u rastvor koji se sastoji od .01 M fosfatnog pufera u destilovanoj vodi sa rezultujućim pH 7.
[0095] Urađena su dva ponavljanja svakog takvog tretmana. Tabela 1B u nastavku prikazuje prosečne rezultate takvih tretmana koji utiču na klijanje B. subtilis ENV 923 mereno procentualnim padom optičke gustine. Pad optičke gustine ukazuje na napredovanje klijanja. Optička gustina (OD) je merena na talasnoj dužini od 600 nm pomoću spektrofotometra vidljivog opsega Jenway Model 6320D. Iskorišćeni L-alanin je bio čistoće od 99% i poreklom je iz Alfa Aeser; Heysham, Lancashire, Ujedinjeno Kraljevstvo.
Tabela 1B. Procentualno sniženje u odnosu na početni nivo OD (600nm) tokom vremena.
[0096] Gore navedeni rezultati pokazuju da spore koje su formulisane u jedinstvenu smešu sa jedinjenjem koje izaziva klijanje postupcima kao što je sušenje raspršivanjem klijaju brže nego spore koje se konvencionalno mešaju sa istim agensom koji izaziva klijanje. Tako će materijal za razmnožavanje biljaka obložen kompozicijom ovog pronalaska brže i efikasnije steći prednosti povezane sa određenom bakterijom kojom su obložene, jer će takva bakterija biti prisutna u znatno većim količinama.
Primer 2: Povećano klijanje Bacillus subtilis soja ENV923 tretiranog sa GOSD.
[0097] Spore Bacillus subtilis su tretirane sa GOSD (Sušenje raspršivanjem optimizovano za klijanje) pomoću sušenja raspršivanjem spora u prisustvu rastvora L-alanina, pa su nivoi klijanja određeni očitavanjem optičkih gustina (OD).
0.01 M Kalijum fosfatni pufer, pH 7
[0098] 0.01M Kalijum fosfatni pufer je pripremljen upotrebom rastvora 1M K2HPO4(87.09g rastvoreno u 0.5L destilovane vode) i 1M KH2PO4(68.045g rastvoreno u 0.5L destilovane vode). Kombinovanjem 61.5ml 1M K2HPO4sa 38.5ml 1M KH2PO4i razblaživanjem do 1000 ml destilovanom vodom napravljen je 0.1M kalijum fosfatni pufer na pH 7.0. Daljim razblaživanjem 0.1M kalijum fosfatnog pufera destilovanom vodom u odnosu 1:10, dobijen je 0.01M kalijum fosfatni pufer, pH 7.0. Pufer je sterilisan autoklaviranjem na 121°C šezdeset (60) minuta.
[0099] Suspenzije spora Bacillus subtilis su pripremljene u koncentraciji 1.7 x 10<8>cfu/ml u 0.01 M kalijum fosfatnom puferu, pH 7.0, inkubirane u prethodno zagrejanom vodenom kupatilu na 37°C, i ocenjivan je procenat klijanja u 5-minutnim intervalima tokom perioda od 45 minuta.
Tabela 2.
Primer 3: Povećano klijanje Bacillus licheniformis soja ENV100 tretiranog sa GOSD.
[0100] Spore Bacillus licheniformis su tretirane sa GOSD sušenjem raspršivanjem spora u prisustvu .044 grama L-alanina po mL destilovane vode kao što je opisano u primeru 1. Nivoi klijanja su određeni očitavanjem optičke gustine (OD), kao što je gore opisano, upotrebom 0.01 M kalijum fosfatnog pufera, pH 7.0 za pripremu suspenzije spora.
[0101] Suspenzije spora Bacillus licheniformis su pripremljene u koncentraciji od 1.29 x 10<8>cfu/ml u 0.01 M kalijum fosfatnom puferu, pH 7.0, inkubirane u prethodno zagrejanom vodenom kupatilu na 37°C, i procenjen je procenat klijanja u intervalima od pet (5) minuta tokom perioda od četrdeset pet (45) minuta.
Tabela 3.
Primer 4: Povećano klijanje pri različitim nivoima pH kod Bacillus subtilis soja ENV923 tretiranog sa GOSD.
[0102] Spore Bacillus subtilis soja ENV923 GO+ i GO- su pripremljene kao što je gore opisano i resuspendovane u 0.01 M kalijum fosfatnom puferu pri različitim nivoima pH. Merenja OD600su izvedena kao što je gore opisano.
0.01M Kalijum fosfatni puferi na pH 3.0-7.0
[0103] 0.01M Kalijum fosfatni pufer, pH 7.0 je pripremljen kao što je opisano u primeru 1.
• Za pripremu 0.01M kalijum fosfatnih pufera sa pH u opsegu od 3.0 do 6.0 kao osnovni pufer upotrebljen je 0.1M kalijum fosfatni pufer, pH 6.0 napravljen mešanjem rastvora 13.2 ml 1M K2HPO4i 86.8 ml 1M KH2PO4(opisano u primeru 1) i dopunjavanjem zapremine do 1 L destilovanom vodom.
• Za dobijanje 0.01 M kalijum fosfatnih pufera sa pH 5.0 do pH 3.0, 0.1M kalijum fosfatni pufer, pH 6.0 je razblažen destilovanom vodom, pH pufera je snižen do pH 5.0, pH 4.0 i pH 3.0 upotrebom 1M H2PO4i finalna zapremina je dopunjena destilovanom vodom uz održavanje odnosa 0.1 M pufera prema destilovanoj vodi od 1: 10.
[0104] Pripremljeni puferi su skladišteni na 4°C i pre svakog eksperimenta pH pufera je ponovo podešen upotrebom 1 M NaOH ili 1 M H2PO4.
Tabela 4. Rezultati klijanja sa GOSD (GO+) i bez GOSD (GO-) pri različitim nivoima pH, tabela prikazuje procenat klijanja meren u 5-minutnim intervalima.
Primer 5: Povećano klijanje Bacillus subtilis soja ENV923 tretiranog sa GOSD. Reakcija klijanja spora pod uticajem različitih nivoa temperature. Tabela prikazuje procenat klijanja meren u 10-minutnim intervalima.
[0105] Spore Bacillus subtilis soja ENV 923 GOSD i kontrolne spore su pripremljene kao što je gore opisano. Klijanje spora je ispitano merenjem optičke gustine (OD) kao što je gore opisano. Suspenzije spora za merenje OD600su pripremljene i ohlađene do 4°C u 0.01 M kalijum fosfatnom puferu, pH 7.0 (Fosfatni pufer, pH 7.0 preparat) u koncentraciji od 1.7 x 10<8>cfu/ml. Za svaku suspenziju spora pripremljene su 3 epruvete za kultivaciju napunjene do 3 ml zapremine. Nakon mućkanja i merenja početne OD600, epruvete su inkubirane u vodenim kupatilima prethodno zagrejanom na 25°C, 30°C i 37°C tokom 120 min. U intervalima od 10 minuta epruvete su mućkane i izvršena su merenja OD600.
Tabela 5. Procenat klijanja Bacillus subtilis sa GO- i GO+ na 37°C, 30°C i 25°C
Primer 6: Procenat klijanja Bacillus licheniformis sa i bez GOSD u prisustvu rastvora NaCl različite molarnosti.
Medijum:
[0106] Medijum je bio razblaženi tripton soja bujon (mTSB)(BD, 211822). Medijum je pripremljen suspendovanjem 50 mg praha tripton soja bujona u 1 L vode uz zagrevanje i mućkanje do potpunog rastvaranja. Zatim je alikvotiran u boce i autoklaviran 30 minuta na 121°C. Na osnovu sadržaja praha koji je naveo proizvođač, medijum mTSB je po litru sadržao:
Proizvod pankreasne digestije kazeina: 28.3 mg
Proizvod papainske digestije soje: 5.0 mg
Dekstroza: 4.2 mg
Natrijum hlorid: 8.3 mg
Dikalijum fosfat: 4.2 mg
[0107] Natrijum hlorid (Amresco X190) je dodat za indukovanje osmotskog stresa gde je potrebno, tako da su finalne koncentracije bile 0.5 M ili 1.5 M (29.22 g/L, odnosno 87.66 g/L) pre nego što je medijum zagrejan i autoklaviran.
Suspenzije spora:
[0108] Prahovi spora Bacillus licheniformis soja ENV 100 tretirani ili netretirani sa GOSD su suspendovani u sterilnoj vodi sa 0.1% Octosol SLS (FT-SLS-246DRUM, Tiarco Chemical, Dalton, GA) u sterilnoj posudi blendera. Spore su suspendovane mešanjem u intervalima od 5 sekundi ukupno najmanje 15 sekundi ili dok se spore nisu vizuelno potpuno suspendovale. Ovo je urađeno tako da finalna koncentracija u posudi blendera bude 1x10<10>cfu/ml. Od ove suspenzije spora, 250 µl je preneto u epruvete koje sadrže 4.75 ml mTSB da bi se dobila finalna koncentracija od 5x10<8>cfu/ml. Ove koncentracije su određene optimizacijom izvedenom na svakoj seriji spora kako bi se dobila početna OD600 od približno 0.6.
OD test klijanja:
[0109] Epruvete koje sadrže suspendovane spore su odmah vorteksovane, izmerene na OD600 za nulti vremenski trenutak, i inkubirane u vodenom kupatilu na 37°C. U odgovarajućim vremenskim intervalima, vreme je zabeleženo, epruvete su uzimane, vorteksovane, izmerene na OD600 i vraćane u vodeno kupatilo.
[0110] Procenat smanjenja OD600 određen je oduzimanjem izmerene vrednosti od nultog vremenskog trenutka, zatim deljenjem sa nultim vremenskim trenutkom i množenjem sa 100%. Prethodno je dokumentovano da potpuno klijanje odgovara procentu sniženja OD600 od 60%. Stoga je procenat klijanja određen množenjem procenta sniženja OD600 sa 1.67.
Tabela 6. % Klijanja spora Bacillus licheniformis tokom jednog časa sa GOSD (GO+) i bez (GO-) u prisustvu 0, .5 molarnog i 1.5 molarnog rastvora NaCl.
Primer 7: Procenat klijanja Bacillus licheniformis sa i bez GOSD u prisustvu različitih milionitih delova (part per million - ppm) rastvora bakra.
Medijum:
[0111] Medijum mTSB je pripremljen kao iznad, ali uz dodatak NaCl do finalne koncentracije od 50 mM da bi se dobio osmotski uravnotežen medijum. Štok rastvor od 1x10<5>ppm bakar (II) nitrat hemi(pentahidrata) (Alfa Aesar 12523) napravljen je suspendovanjem 2 g u 20 ml vode i filtriranjem kroz filter od 0.22 µm. Ovo je dodato alikvotima mTSB da bi se dobile finalne koncentracije od 0, 50, 100 i 200 ppm.
Suspenzije spora:
[0112] Prahovi spora Bacillus licheniformis soja ENV100 tretiranih ili netretiranih sa GOSD su suspendovani u sterilnoj vodi sa 0.1% Octosol SLS (FT-SLS-246DRUM, Tiarco Chemical, Dalton, GA) u sterilnoj posudi blendera. Spore su suspendovane mešanjem u intervalima od 5 sekundi, ukupno najmanje 15 sekundi, ili dok se spore nisu vizuelno potpuno suspendovale. Ovo je urađeno tako da finalna koncentracija u posudi blendera bude 2x10<9>cfu/ml. Od ove suspenzije spora, 250 µl je preneto u epruvete koje sadrže 4.75 ml mTSB da bi se dobila finalna koncentracija od 1x10<8>cfu/ml. Ove koncentracije su određene optimizacijom izvedenom na svakoj seriji spora kako bi se dobila početna OD600 od približno 0.6.
OD test klijanja: Izveden je i izračunat kako je navedeno u primeru 6.
[0113]
Tabela 7. Procenat klijanja spora Bacillus licheniformis tokom jednog časa sa GOSD (GO+) i bez (GO-) u prisustvu rastvora bakarnih jona od 0, 50 ppm, 100 ppm i 200 ppm.
Primer 8: Procenat klijanja Bacillus licheniformis sa i bez GOSD u prisustvu rastvora sa različitim milionitim delovima aluminijuma.
Medijum:
[0114] Medijum mTSB je pripremljen kao gore, ali uz dodatak NaCl do finalne koncentracije od 50 mM da bi se dobio osmotski uravnotežen medijum. Štok rastvor Al<3+>od 1000 ppm napravljen je suspendovanjem 0.62 g Al2(SO4)3*14 H2O (Alfa Aesar 12362) u 50 ml vode i profiltriran kroz filter od 0.22 µm. Ovo je dodato alikvotima mTSB da bi se dobile finalne koncentracije od 0, 0.25, 0.50 i 1.0 ppm. pH medijuma je zatim snižen do pH 4.5 dodavanjem HCl da bi se omogućilo potpuno izdvajanje jona Al<3+>.
Suspenzije spora:
[0115] Prahovi spora Bacillus licheniformis soja ENV100 tretirani ili netretirani sa GOSD su suspendovani u sterilnoj vodi sa 0.1% Octosol SLS (FT-SLS-246DRUM, Tiarco Chemical, Dalton, GA) u sterilnoj posudi blendera. Spore su suspendovane mešanjem u intervalima od 5 sekundi, ukupno najmanje 15 sekundi, ili dok se spore nisu vizuelno potpuno suspendovale. Ovo je urađeno tako da finalna koncentracija u posudi blendera bude 1x10<10>cfu/ml. Od ove suspenzije spora, 250 µl je preneto u epruvete koje sadrže 4.75 ml mTSB da bi se dobila finalna koncentracija od 5x10<8>cfu/ml. Ove koncentracije su određene optimizacijom izvedenom na svakoj seriji spora kako bi se dobila početna OD600 od približno 0.6.
OD test klijanja: Izveden je i izračunat kako je navedeno u primeru 6.
[0116]
Tabela 8. Procenat klijanja spora Bacillus licheniformis tokom jednog časa sa GOSD (GO+) i bez (GO-) u prisustvu rastvora jona aluminijuma od 0, 0.25 ppm, 0.50 ppm i 1.0 ppm.
Primer 9: Procenat klijanja Bacillus licheniformis sa i bez GOSD u prisustvu različitih milimolarnih rastvora žučnih soli.
Medijum:
[0117] Medijum mTSB je pripremljen kao gore, ali uz dodatak NaCl do finalne koncentracije od 50 mM da bi se dobio osmotski uravnotežen medijum. Štok rastvor žučnih soli od 80 mM bile je napravljen suspendovanjem 2.5 g natrijum taurodeoksiholata (Sigma T0875), 1.1 g natrijum glikodeoksiholata (Sigma G9910) i 0.346 g natrijum deoksiholata (Sigma D5670) u 100 ml vode, i zatim profiltriran kroz filter od 0.22 µm. Ovo je dodato alikvotima mTSB da bi se dobile finalne koncentracije od 0, 4, 6 i 8 mM.
Suspenzije spora:
[0118] Prahovi spora Bacillus licheniformis soja ENV100 tretirani ili netretirani sa GOSD su suspendovani u sterilnoj vodi sa 0.1% Octosol SLS (FT-SLS-246DRUM, Tiarco Chemical, Dalton, GA) u sterilnoj posudi blendera. Spore su suspendovane mešanjem u intervalima od 5 sekundi, ukupno najmanje 15 sekundi, ili dok se spore nisu vizuelno potpuno suspendovale. Ovo je urađeno tako da finalna koncentracija u posudi blendera bude 1x10<10>cfu/ml. Od ove suspenzije spora, 250 µl je preneto u epruvete koje sadrže 4.75 ml mTSB da bi se dobila finalna koncentracija od 5x10<8>cfu/ml. Ove koncentracije su određene optimizacijom izvedenom na svakoj seriji spora kako bi se dobila početna OD600 od približno 0.6.
OD test klijanja:
[0119] Izveden je i izračunat kao gore.
Tabela 9. Procenat klijanja spora Bacillus licheniformis tokom jednog časa sa GOSD (GO+) i bez (GO-) u prisustvu rastvora žučnih soli od 0, 4 mM, 6 mM i 8 mM ppm.
Primer 10: Prosečan rast tri replikata Bacillus licheniformis sa ili bez GOSD u definisanom kalijum fosfatnom medijumu i 2% glukoze.
[0120] Spore Bacillus licheniformis soja ENV 431 GO+ su tretirane sa GOSD (procedura je prethodno opisana). Kao kontrola su upotrebljene GO- spore iz iste kulture koje su osušene raspršivanjem bez upotrebe GOSD. Test rasta je izveden u medijumu sa minimumom soli kome je dodato 2% glukoze.
Medijum
[0121] Medijum je pripremljen rastvaranjem (NH4)2SO4(1.26 g/L), MgCl2(0.81 g/L), CaCl2(0.15 g/L), NaCl (0.05 g/L) u destilovanoj vodi i dodavanjem 1ml/L 1000x smeše sa mineralima u tragovima (MnSO4(0.85 g/50 ml), ZnSO4(0.15 g/50 ml), FeSO4x7H2O (0.15 g/50 ml), tiamino-hidrohlorid (0.05 g/50 ml). Pripremljeni rastvor je sipan u boce (90 ml/boci) i autoklaviran na 121°C tokom 40 min. Pre inokulacije u medijum je dodato 4 ml filtriranjem sterilisanog rastvora 25x kalijum fosfata (K2HPO4(3.44 g/50 ml), KH2PO4(2.81 g/50 ml)) i 2 ml 50x (100 g/200 ml) glukoze do finalne koncentracije od 2%.
Rast ćelija Bacillus licheniformis
[0122] Količina spora upotrebljena za inokulaciju određena je upotrebom brojanja GO- i GO+ praha spora. Pripremljene su koncentrovane (1000x) suspenzije spora Bacillus licheniformis soja ENV 431 mešanjem spora u sterilnim posudama blendera upotrebom sterilne vode i dodate u boce sa medijumom do koncentracija navedenih u tabeli ispod kao 0 h. Brojne vrednosti za početne kulture su dobijene pravljenjem razblaženja izmešanih suspenzija spora i brojanjem kolonija na pločama. Pripremljene su 3 boce za svaki uzorak spora.
[0123] Boce su inkubirane na 30°C, 150 o/min i kulture su rasle 48 h. Uzeti su uzorci i izbrojane kolonije na pločama na 24 h i 48 h.
Tabela 10. Prosečan rast za tri replikata Bacillus licheniformis sa GOSD (GO+) ili bez GOSD (GO-) u minimalnom kalijum fosfatnom medijumu i 2% glukoze. Podaci su prikazani u cfu/ml.
Primer 11: Rast Bacillus licheniformis tokom dvodnevnog perioda; poređenje tretmana sa ili bez GOSD u prisustvu različitih koncentracija NaCl.
Medijum:
[0124] Medijum mTSB je pripremljen kao iznad, ali sa natrijum hloridom (Amresco X190) koji je dodat da bi se indukovao osmotski stres, gde je potrebno, tako da su finalne koncentracije bile 0, 0.5, 1.0, ili 1.5 M (0, 29.22, 58.44, odnosno 87.66 g/L). Medijumi su zagrevani, alikvotirani u boce i autoklavirani.
[0125] Hranljivi medijum za brojanje kolonija (Plate Count Agar - PCA) (BD 247910) je pripremljen prema uputstvu proizvođača: 23.5 g praha je suspendovano u 1 L vode, dovedeno do ključanja uz često mućkanje, alikvotirano u staklene posude i autoklavirano. Posude sa medijumima su hlađene u vodenom kupatilu na 45°C do upotrebe. Proizvođač praha navodi sledeći sadržaj PCA po litru:
Proizvod pankreasne digestije kazeina: 5.0 g
Ekstrakt kvasca: 2.5 g
Dekstroza: 1.0 g
Agar: 15.0 g
Suspenzije spora:
[0126] Prahovi spora Bacillus licheniformis soja ENV100 tretirani ili netretirani sa GOSD su suspendovani u sterilnoj vodi sa 0.1% Octosol SLS (FT-SLS-246DRUM, Tiarco Chemical, Dalton, GA) u sterilnoj posudi blendera. Spore su suspendovane mešanjem u intervalima od 5 sekundi ukupno najmanje 15 sekundi ili dok se spore nisu vizuelno potpuno suspendovale, a zatim su napravljena serijska razblaženja u sterilnoj vodi. Ovo je urađeno tako da finalna koncentracija u bocama za kulturu bude 1x10<2>cfu/ml.
Kvantifikacija:
[0127] Boce su inkubirane na 37°C uz mućkanje na 150 o/min tokom 28 časova ("1 dan") ili 50 časova ("2 dana"). Alikvoti iz svake boce su serijski razblaženi u Petrijeve šolje sa PCA ohlađenim na <45°C sipanim po površini, izmešani vrtložnim pokretima, i ostavljeni da očvrsnu. Ploče su okrenute naopako i inkubirane 24 časa na 37°C. Izbrojane su kolonije i koncentracije su izračunate na osnovu razblaženja. Približno 10 µl uzorka iz svake boce je zasejano šaranjem na PCA ploče za ispitivanje čistoće.
Tabela 11. Rast Bacillus licheniformis tretiranog sa GOSD (GO+) kada je izložen osmotskom stresu izazvanom slanim rastvorom.
Primer 12: Aktivnost proteaze Bacillus subtilis soja ENV 923.
[0128] Za test aktivnosti proteaze upotrebljene su spore Bacillus subtilis soja ENV 923 koje su tretirane sa GOSD (GO+) kao što je ranije opisano, kao i netretirane (GO-).
Medijum
[0129] Hemijski definisani slani medijum (CDSM) je korišćen za propagaciju ćelija u testu proteaze. Medijum je pripremljen rastvaranjem komponenata osnovnog rastvora (g/L): (NH4)SO4, 1.26g; L-glutaminska kiselina, 1.18 g; MgCl2, 0.81; CaCl2, 0.155 i 85% L-mlečna kiselina (0.530 ml/L) u destilovanoj vodi i dodavanjem 1ml/L 1000x smeše minerala u tragovima (g/50ml). Boce sa osnovnim rastvorom (48ml/boci) su autoklavirane 40 min. Pre inokulacije je dodato 2 ml posebno pripremljenog filtracijom sterilisanog 25x puferskog rastvora sa glukozom (g/50ml): MOPS, 11.6; KH2PO4, 0.6; glukoza, 4.5.
Rast ćelija Bacillus subtilis ENV923
[0130] Količina spora upotrebljenih za inokulaciju određena je upotrebom brojanja GO- i GO+ praha spora. Koncentrovane (1000x) suspenzije spora Bacillus subtilis soja ENV923 su pripremljene mešanjem spora u sterilnim posudama blendera upotrebom sterilnog 0.01 M kalijum fosfatnog pufera, pH 7.0 i dodate u boce u koncentraciji od oko 1 x 10<4>cfu/ml. Brojne vrednosti za početne kulture su potvrđene pravljenjem razblaženja izmešanih suspenzija spora i brojanjem kolonija na pločama. Pripremljene su 3 boce za svaki uzorak spora.
[0131] Boce su inkubirane 30°C, 150 o/min, i uzorci su uzimani na 48 h.
Test aktivnosti proteaze
[0132] Test aktivnosti proteaze je sproveden na ćelijskim supernatantima upotrebom kazeina kao supstrata i Folin & Ciocalateu-ovog fenolnog reagensa koji reaguje sa tirozinom i olakšava razvoj plave boje. Jedinica aktivnosti proteaze je definisana kao količina enzima koja oslobađa 1 µg tirozina u jednom minutu. Količina tirozina u epruvetama je određena merenjem OD650u spektrofotometru Jenway 7305 i izračunavanjem oslobođenog tirozina korišćenjem standardne krive.
Reagensi
Reagens 1: 0.05 M kalijum fosfatni pufer, pH 7.0
[0133] 0.1 M Kalijum fosfatni pufer, pH 7.0 (pripremljen kao što je opisano u primeru 1) razblažen je destilovanom vodom u odnosu 1: 1 da bi se dobio 0.05 M kalijum fosfatni pufer, pH 7.0.
Reagens 2: 0.65% rastvor kazeina
[0134] 0.65 g kazeina je rastvoreno u 80 ml 0.05 M kalijum fosfatnog pufera, pH 7.0, zagrevano da bi kazein prešao u rastvor, a finalna zapremina je dopunjena do 100 ml sa 0.05 M kalijum fosfatnog pufera, pH 7.0.
Reagens 3: 15% trihlorosirćetna kiselina (TCA)
[0135] 15 g TCA je rastvoreno u destilovanoj vodi i finalna zapremina je dopunjena do 100 ml.
Reagens 4: 20% Na2CO3
[0136] 20 g Na2CO3je rastvoreno u destilovanoj vodi i finalna zapremina je dopunjena do 100 ml.
Test proteaze
[0137]
• 10 ml kulture je centrifugirano i supernatant je filtriran kroz filter od 0.2 µm u sterilne epruvete.
• 3 ml filtriranog supernatanta je pomešano sa 3 ml 0.65% rastvora kazeina i stavljeno u vodeno kupatilo 1 h na 37°C.
• Reakcija je zaustavljena dodavanjem 6 ml 15% TCA i uzorci su centrifugirani 5 min.
• 0.5 ml svakog uzorka je pomešano sa 1 ml 20% Na2CO3, nakon čega je dodato 0.5 ml Folin & Ciolcallieu-ovog fenolnog reagensa i inkubirano 20 min na sobnoj temperaturi da bi se omogućio razvoj plave boje.
• U svaki uzorak dodato je 3 ml destilovane vode i nakon mešanja izmerena je OD650.
• Da bi se izračunala aktivnost proteaze, pripremljena je standardna kriva za tirozin pravljenjem serije razblaženja tirozina rastvorenog u destilovanoj vodi, njihovim tretiranjem pod istim uslovima kao za uzorke kulture, i merenjem OD650.
Tabela 12. Proizvodnja proteaze Bacillus subtilis tretiranog sa GOSD (GO+) u odnosu na kontrolu (GO-)
Primer 13: Klijanje Streptomyces viridochromogenes u prisustvu jedinjenja koja izazivaju klijanje
[0138] Spore Streptomyces viridochromogenes su sakupljene sa ploča sipanjem 10 ml TX pufera (0.05 M Tris-HCl pufera, pH 7.3 sa 0.001% Tween 80) i uklanjanjem spora sterilnim pamučnim brisom. Suspenzije spora sa ploča su sipane u sterilne epruvete od 50 ml. Kada su dobijene suspenzije spora svih uzoraka, izveden je toplotni šok stavljanjem epruveta sa suspenzijama spora u toplotni blok, omogućavajući da temperatura dostigne 55°C, i održavajući temperaturu na 55°C tokom 10 min. Posle toplotnog šoka suspenzije spora su ohlađene u ledenoj vodi 5 min i centrifugirane 30 min. Supernatant je odliven, spore ponovo suspendovane u 25 ml 0.02 M kalijum fosfatnog pufera, pH 7.0 na 4°C i centrifugirane 15 min. Nakon odlivanja supernatanta, spore su ponovo suspendovane u 20 ml 0.02 M kalijum fosfatnog pufera, pH 7.0 i snažno izmešane da bi se dobila suspenzija spora koja je korišćena u eksperimentu.
[0139] Uzorci su pripremljeni mešanjem 1.5 ml 2x smeše agensa koji izaziva klijanje sa 1.5 ml suspenzije spora. Sve smeše agensa koji izaziva klijanje pripremljene su u destilovanoj vodi kao rastvori od 2x50 ml. Kalcijum hlorid je pripremljen kao rastvor 100x (0.4 g/10 ml) i 20 µl je dodato u 10 ml 2x smeše agensa koji izaziva klijanje. Finalne koncentracije jedinjenja koja izazivaju klijanje bile su sledeće: 0.89 mg/ml L-alanina; 1.17 mg/ml L-valina, 13.2 mg/ml L-asparagina; 2.25 mg/ml glukoze; i 2.25 mg/ml fruktoze. Nakon merenja početnog OD600, uzorci su prebačeni u vodeno kupatilo na 30°C i OD600 je meren u intervalima od 15 minuta tokom 90 minuta da bi se odredile brzine klijanja
Tabela 13. ENV 151 (Streptomyces viridochromogenes) % smanjenja optičke gustine
Primer 14: Poređenje brzine klijanja jedinstvenih smeša i konvencionalnih smeša bakterijskih spora i jedinjenja koja izazivaju klijanje
[0140] Da bi se uporedila brzina klijanja spora jedinstvenih smeša sa brzinom klijanja spora koje su konvencionalno pomešane sa agensom koji izaziva klijanje, izvode se sledeći tretmani:
A. Obrazovanje jedinstvene smeše: Spore B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. brevis, B. cereus, B. coagulans, B. firmus, B. laterosporus, B. licheniformis, B. megaterium, B. mycoides, B. popilliae, B. polymyxa, B. pumilus, B. thuringiensis, Pasteuria penetrans, Pasteuria thornei, Pasteuria nishizawae, Streptomyces viridochromogenes, Streptomyces griseoviridis, Streptomyces lydicus, Streptomyces plicatus, Streptomyces sindeneusis, Streptomyces rochei, Streptomyces alni, Streptomyces viridis, Streptomyces thermovulgaris, Streptomyces griseus, Streptomyces acidiscabies, Steptomyces aureofaciens, Streptomyces galbus, Streptomyces microflavus i Streptomyces aureofacien su osušene sa L-alaninom, L-valinom, L-prolinom, L-leucinom, L-cisteinom, L-treoninom, L-glutaminom, L-asparaginom ili L-fenilalaninom koji su uvedeni u masu spora neposredno pre sušenja kao rastvor koji sadrži .044 grama aminokiseline po mililitru destilovane vode. Klijanje dobijene jedinstvene smeše se izaziva naknadnim uvođenjem u rastvor koji se sastoji od .01 M fosfatnog pufera u destilovanoj vodi sa rezultujućim pH 7.
B. Konvencionalno mešanje spora sa agensom koji izaziva klijanje: Spore B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. brevis, B. cereus, B. coagulans, B. firmus, B. laterosporus, B. licheniformis, B. megaterium, B. mycoides, B. popilliae, B. polymyxa, B. pumilus, B. thuringiensis, Pasteuria penetrans, Pasteuria thornei, Pasteuria nishizawae, Streptomyces viridochromogenes, Streptomyces griseoviridis, Streptomyces lydicus, Streptomyces plicatus, Streptomyces sindeneusis, Streptomyces rochei, Streptomyces alni, Streptomyces viridis, Streptomyces thermovulgaris, Streptomyces griseus, Streptomyces acidiscabies, Steptomyces aureofaciens, Streptomyces galbus, Streptomyces microflavus i Streptomyces aureofacien su hidrirane i osušene. Kod takvih spora klijanje je izazvano uvođenjem u rastvor koji se sastoji od .01 M fosfatnog pufera u destilovanoj vodi sa rezultujućim pH 7 i .0001 grama L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina ili L-fenilalanina po mililitru rastvora.
C. Klijanje samih spora: Spore B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. brevis, B. cereus, B. coagulans, B. firmus, B. laterosporus, B. licheniformis, B. megaterium, B. mycoides, B. popilliae, B. polymyxa, B. pumilus, B.thuringiensis, Pasteuria penetrans, Pasteuria thornei, Pasteuria nishizawae, Streptomyces viridochromogenes, Streptomyces griseoviridis, Streptomyces lydicus, Streptomyces plicatus, Streptomyces sindeneusis, Streptomyces rochei, Streptomyces alni, Streptomyces viridis, Streptomyces thermovulgaris, Streptomyces griseus, Streptomyces acidiscabies, Steptomyces aureofaciens, Streptomyces galbus, Streptomyces microflavus i Streptomyces aureofacien su hidrirane i osušene. Spore su zatim uvedene u rastvor koji se sastoji od .01 M fosfatnog pufera u destilovanoj vodi sa rezultujućim pH 7.
[0141] Klijanje spora koje nastaju pri svakom takvom tretmanu meri se procentualnim padom optičke gustine ili određivanjem broja proklijalih spora pod mikroskopom. Utvrđeno je da kompozicije koje predstavljaju jedinstvene smeše klijaju brže od njihovog odgovarajućeg konvencionalno mešanog ekvivalenta.
Primer 15: Tretman listova kukuruza, korena šargarepe i krtola krompira smešama spora Bacillus licheniformis i jedinjenja koje izaziva klijanje
[0142] Da bi se pripremile smeše spora Bacillus licheniformis i jedinjenja koje izaziva klijanje, rastvor 0.044 g L-alanina po ml destilovane vode je uveden u masu spora Bacillus licheniformis i smeša je odmah osušena raspršivanjem. Dobijeni prah osušen raspršivanjem koji sadrži jedinstvenu smešu spora Bacillusa i L-alanina se naziva "GO+" u tretmanima u nastavku. Spore Bacillusa su takođe osušene raspršivanjem bez dodatka L-alanina za upotrebu kao kontrola. Spore Bacillusa osušene raspršivanjem bez dodatka L-alanina su opisane kao "GO-" u tretmanima u nastavku.
[0143] Pre resuspendovanja spora Bacillus licheniformis osušenih raspršivanjem, određen je broj bakterija u GO+ i GO- formulacijama da bi se prilagodile razlike u koncentraciji spora kao što je prikazano u tabeli 14 ispod.
Tabela 14. Broj bakterija u GO+ i GO- formulacijama spora B. licheniformis
[0144] Spore osušene raspršivanjem su suspendovane u 0.01 M kalijum fosfatnom puferu na pH 7.0 koji je ohlađen na 4°C pre dodavanja spora. Kao što je prikazano u tabeli 14, formulacije GO+ i GO- osušene raspršivanjem su dodate puferu u koncentraciji od 0.018 g/ml, odnosno 0.009 g/ml, da bi se prilagodile razlike u koncentraciji spora u svakoj formulaciji.
[0145] Listovi kukuruza (Zea mays) su dobijeni od biljaka koje rastu u polju. Svaki list je isečen na delove od približno 2.5 cm. Korenovi šargarepe (Daucus carota) i krtole krompira (Solanum tuberosum) isečeni su na delove uz ostavljanje spoljašnje kore. Uzorci biljaka stavljeni su na vlažni filter papir u Petrijevu šolju, po jedan biljni uzorak po Petrijevoj šolji. Približno 150 µl suspenzije spora je dodato svakom biljnom uzorku. Za uzorke šargarepe i krompira suspenzija spora je naneta na površinu kore, odnosno spoljašnju površinu korena ili krtole. Petrijeve šolje koje sadrže uzorke biljaka su pokrivene i inkubirane na 37 °C. Uzorci za broj ćelija u 0. minutu su uzeti iz epruveta sa suspenzijom spora. Naknadni uzorci su uzimani iz tretiranih delova lista u svakom vremenskom trenutku (15 min., 30 min. i 60 min.) i posmatrani pod fazno-kontrastnim mikroskopom. Broj fazno svetlih i fazno tamnih spora dobijeni su slikanjem nekoliko posmatranih polja i brojanjem tamnih i svetlih ćelija. Nivo klijavosti spora je određen na osnovu broja fazno svetlih (koje nisu proklijale) i fazno tamnih (proklijalih) spora pod fazno-kontrastnim mikroskopom.
[0146] Kao što je prikazano u tabeli 15 ispod, procenat proklijalih spora na listovima kukuruza tretiranim formulacijama koje sadrže L-alanin (GO+) bio je mnogo veći nego kod formulacija bez L-alanina (GO-). Na primer, 94% GO+ spora je klijalo za 30 min., dok je manje od 20% GO- spora klijalo čak i posle 60 min. Slični rezultati uočeni su i kod korenova šargarepe (tabela 16) i krtola krompira (tabela 17). Ovi rezultati ukazuju na to da je dodavanje L-alanina formulacijama osušenim raspršivanjem rezultovalo bržim klijanjem spora na površini biljaka.
Primer 16: Procena klijanja, rasta biljaka i prinosa za seme kukuruza obloženo kompozicijom koja sadrži bakterijske spore i jedinjenje koje izaziva klijanje
[0147] Seme kukuruza je obloženo kompozicijama koje sadrže različite kombinacije bakterijskih spora i jedinjenja koja izazivaju klijanje navedenih u primeru 14. Oblaganje semena se vrši na uobičajene načine, kao što su oni opisani u SAD pat. br. 7,989,391 i SAD pat. br. 5,849,320. Procenjuju se sledeći tretmani:
A. Seme obloženo jedinstvenom smešom bakterijskih spora i jedinjenja koje izaziva klijanje
B. Seme obloženo konvencionalnom smešom bakterijskih spora i jedinjenja koje izaziva klijanje
C. Seme obloženo samo sporama bakterija
D. Neobloženo seme
[0148] Brzine klijanja semena se mere u ogledima u staklenicima i na poljima merenjem nicanja ponika svakog dana, počevši od prvog dana kada biljke izniknu i nastavljajući tri nedelje nakon prvog datuma nicanja. Prinos se meri tako što se zreli klipovi uberu i suše tri dana u pećnici na 37°C. Klipovi se zatim mlate, a seme se sakuplja i broji. Ukupna težina semena se takođe meri vaganjem semena sakupljenog sa svake biljke.
Primer 17: Efekat probiotika Bacillus kod pilića zaraženih sa Eimeria maxima i Clostridium perfringens
[0149] 28-dnevna baterija testova je obavljena na pilićima Cobb 500 (Gallus gallus domesticus) da bi se utvrdio efekat obogaćivanja hrane probiotičkim agensom Bacillus ili standardnog antibiotskog tretmana (Bacitracin) na piliće inficirane sa Eimeria maxima (uzročnikom kokcidioze kod živine) i Clostridium prefringens (uzročnik nekrotičnog enteritisa). Probiotik Bacillus je sadržao jednak odnos Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis i Bacillus pumilis. Probiotik Bacillus GO+ pripremljen je sušenjem raspršivanjem spora vrste Bacillus sa L-alaninom. L-alanin je unesen u masu spora neposredno pre sušenja raspršivanjem kao rastvor koji sadrži .044 grama alanina po mililitru destilovane vode kao što je gore opisano. Probiotik Bacillus GO- je formiran sušenjem raspršivanjem spora vrste Bacillus bez dodatka L-alanina, kao što je gore opisano. Studija je uključila osam replikativnih kaveza za svaku tretmansku grupu sa osam pilića u kavezu (64 ptice po tretmanskoj grupi). Procenjene su sledeće tretmanske grupe. Tretmanske grupe 2-5 bile su inficirane sa Eimeria maxima i Clostridium prefringens (inficirani). Tretmanska grupa 1 nije bila inficirana sa Eimeria maxima ili Clostridium prefringens da bi služila kao neinficirana negativna kontrola.
1) Bez aditiva za hranu, bez infekcije (neinficirana negativna kontrola)
2) Bez aditiva za hranu, inficirani (inficirana negativna kontrola)
3) Probiotik Bacillus GO-, 2 x 10<6>cfu/g hrane, inficirani
4) Probiotik Bacillus GO+, 2 x 10<6>cfu/g hrane, inficirani
5) Antibiotik Bacitracin, 50 g/toni hrane, inficirani (pozitivna kontrola)
[0150] Pilići su hranjeni tretiranom ili netretiranom hranom počevši od 0. dana. Ptice u tretmanskim grupama 2-5 su 14. dana izložene stresu infekcijom Eimeria maxima praćenom infekcijom sa Clostridium perfringens, uzročnikom nekrotičnog enteritisa. Kod ptica je procenjena konverzija hrane, povećanje telesne težine, skor lezija i procenat mortaliteta 28. dana. Konverzija hrane je izračunata kao odnos kg hrane potrebnog za proizvodnju kg telesne težine od 0. do 28. dana. Na primer, konverzija hrane od 1.6 znači da je za proizvodnju 1 kg telesne težine bilo potrebno 1.6 kg hrane. Povećanje telesne težine je mereno kao povećanje telesne težine od 0. do 28. dana. Skor lezija je zasnovan na vizuelnom posmatranju lezija, pri čemu je 0 normalno, a 3 najteža lezija. Oba probiotika Bacillus, i GO- i GO+ su smanjila procenat mortaliteta u odnosu na inficiranu negativnu kontrolu (tretmanska grupa 2). Videti tabelu 18. Procenat mortaliteta je bio niži kod pilića tretiranih GO+ probiotičkim tretmanom u poređenju sa onima tretiranim Bacitracinom, ali razlika nije bila statistički značajna. Grupe tretirane GO+ probiotikom, kao i antibiotikom su pokazale značajan porast povećanja telesne težine u odnosu na inficiranu negativnu kontrolu. Ovi rezultati pokazuju da je tretman hrane za piliće GO+ probioticima postigao iste ili bolje rezultate u poređenju sa standardnim antibiotskim tretmanom tokom izlaganja infekciji patogenom.
Tabela 18. Konverzija hrane, povećanje telesne težine, skor lezija i procenat mortaliteta kod pilića zaraženih sa Eimeria maxima i Clostridium perfringens (tretmanske grupe 2-5) ili u neinficiranoj negativnoj kontroli (tretmanska grupa 1). Tretmanske grupe su opisane gore. Slova iza vrednosti predstavljaju statistički značajne razlike među tretmanskim grupama.
Primer 18: Efekat probiotika na školjke zaražene vrstama Vibrio
[0151] U mrestilištu školjki na Floridi u kome je došlo do odumiranja larvi je procenjen uzrok odumiranja izolovanjem i kvantifikacijom bakterijskog opterećenja u mrestilištu. Utvrđeno je da vrste Vibrio čine 100% broja aeroba (4x10<4>cfu/ml) pronađenog u izvornoj vodi, i pribl. 50% broja aeroba (2x10<4>cfu/ml) u mrestilištu. Od ove velike populacije Vibrio, pronađene su dve dominantne morfologije kolonija na različitim medijumima i poslate na identifikaciju. Uočena dva dominantna soja Vibrio bila su Vibrio chagasii i Vibrio coralliilyticus, od kojih se pokazalo da je drugi virulentan za školjke.
[0152] Merenje zona isključenja rasta Vibrio za pojedinačne sojeve Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis i Bacillus pumilus i ograničenje formiranja biofilma ukazuje na to da je utvrđeno da ovi sojevi Bacillusa imaju umerenu do dobru aktivnost protiv većine ispitivanih sojeva Vibrio. Ovi rezultati pokazuju da su sojevi Bacillusa nadmašili sojeve Vibrio vrsta izolovanih iz mrestilišta u formiranju biofilma i da su imali direktan efekat na biofilmove koje formira Vibrio.
[0153] Rezervoari sa larvama školjki inficirani sojevima Vibrio tretirani su probiotičkom smešom od 4 soja koja sadrži jednake udele dva soja Bacillus licheniformis, jednog soja Bacillus subtilis i jednog soja Bacillus pumilis. Sojevi Bacillusa su formulisani sušenjem raspršivanjem kao GO+ (sa L-alaninom) ili GO- (bez L-alanina) kao što je gore opisano. Probiotici su dodavani u rezervoare suspendovanjem formulacije osušene raspršivanjem u 1 litru vode, a zatim dodavanjem suspenzije neposredno u rezervoar nakon dnevne promene vode u dozi od 5x10<5>cfu/ml. Larve školjki su prosejane na mrežastim filterima različitih veličina (150, 200, 250 ili 300 µm) na početku perioda tretmana i 12 dana nakon početka dnevnog tretmana. Dvanaestog dana, broj živih larvi školjki pronađenih na svakoj veličini mreže je zabeležen u odnosu na početni broj larvi. Videti tabelu 19. Dok se odvijalo odumiranje školjki, rezervoar koji nije tretiran je imao stopu preživljavanja od samo ~10%, dok je rezervoar tretiran sa GO- imao ~20% preživljavanja, a rezervoar tretiran sa GO+ ~40% preživljavanja. Pored toga, probiotički tretmani su povećali stopu rasta (više larvi je prikupljeno na krupnijim mrežama) pri čemu je u rezervoarima tretiranim sa GO+ zapažen najbrži rast.
Tabela 19. Procenat stopa preživljavanja larvi školjki različitih veličina nakon 12 dana tretmana probiotikom. Rezervoari za larve školjki su zaraženi sojevima Vibrio.
Primer 19: Određivanje biološke potrebe za kiseonikom (Biological Oxygen Demand -BOD) u zatvorenom sistemu za procenu formulacija Bacillus licheniformis u ekstraktima hrane za piliće sa žučnim solima.
[0154] Bakterijska potreba za kiseonikom (BOD) Bacillus licheniformis je merena u ekstraktima hrane za piliće sa dodatkom žučnih soli da bi se odredila sposobnost bakterija da rastu pod stresom izazvanim žučnim solima. Kao izvor energije korišćena je hrana za piliće u kombinaciji sa 4 mM žučnih soli (60% taurodeoksiholata, 30% glikodeoksiholata, 10% deoksiholata).
Medijum: Priprema ekstrakta hrane za piliće sa dodatkom žučnih soli
[0155] 42.44 g hrane za piliće (Chick Starter Grower) je izvagano u čaši, a zatim samleveno u prah upotrebom mlina za kafu. Zapremina je dopunjena do ukupno 1 litra toplom pijaćom vodom, i smeše su mešane na ploči za mešanje 60 minuta. Po 100 ml rastvora je raspoređeno u boce za mućkanje sa pregradama od 250 mL, uključujući 2 "boce za preliminarne testove" i autoklavirano.
Rastvor žučne soli (BSSS):
[0156]
1. 1.8 g taurodeoksiholata
2. 0.9 g glikodeoksiholata
3. 0.3 g deoksiholata
[0157] Svaka komponenta je mešana odvojeno u malim količinama pijaće vode dok se ne rastvori, a zatim su rastvori pomešani zajedno, dopunjeni do 30 mL i sterilisani filtracijom.
[0158] 1.0 N rastvor HCl je pripremljen i dodat u boce za preliminarne testove opisane iznad da bi se pH snizio na 2.25. Zabeležena je zapremina HCl koja je korišćena za snižavanje pH.
[0159] Posle tačno 90 minuta, pH je zabeležen (pH je porastao za to vreme). U svaku bocu je dodato 1.6 ml BSSS. Posle 15 minuta, pH je povećan na 7.5 korišćenjem 1.0 M NaOH. Zabeležena je zapremina korišćenog NaOH. Posle 15 minuta, pH je zabeležen (pH je opao tokom ovog vremenskog perioda). Određena je srednja vrednost rezultata i te količine su korišćene za tretiranje preostalih boca koje sadrže ekstrakt hrane za piliće.
Suspenzije spora:
[0160] Pripremljene su formulacije praha spora Bacillus licheniformis soja ENV100 napravljenog kao GO+ (osušen raspršivanjem sa L-alaninom kako je gore opisano) ili GO-(osušen raspršivanjem bez L-alanina kao što je gore opisano). Formulacije su suspendovane u sterilnoj vodi sa 0.1% Octosol SLS (FT-SLS-246DRUM, Tiarco Chemical, Dalton, GA) u sterilnoj posudi blendera. Spore su suspendovane mešanjem u intervalima od 5 sekundi tokom ukupno najmanje 15 sekundi ili dok spore nisu vizuelno potpuno suspendovane, nakon čega su napravljena serijska razblaženja u sterilnoj vodi. Ovo je izvedeno tako da je finalna koncentracija u BOD bocama bila 5x10<7>cfu/ml ili 5x10<3>cfu/ml.
BOD test:
[0161] Biološka potreba za kiseonikom (BOD) je merena instrumentima BODTRAKII (Hach 2952450) prema uputstvima proizvođača. 2 ml pripremljenog ekstrakta hrane za piliće koji sadrži žučne soli opisane gore je dodato u 98 ml vode u BOD bocama, autoklavirano i ostavljeno da se ohladi na sobnu temperaturu. BODTRAKII instrumenti i boce su preinkubirani na 37°C pre inokulacije. Boce su inokulisane kao što je gore opisano, i odmah zatvorene prema uputstvima proizvođača, i inkubirane na 37°C. Nakon što je test završen, podaci su preuzeti sa instrumenta i približno 10 µl kulture je zasejano šaranjem na PCA ploče za ispitivanje čistoće.
[0162] Kao što je prikazano u tabeli 20, GO+ formulacija spora Bacillus licheniformis omogućila je rast u uslovima stresa izazvanog žučnim solima i rezultovala povećanim metabolizmom (merenim biološkom potrebom za kiseonikom) u odnosu na kontrolni tretman. Ovi podaci pokazuju da GO+ formulacija poboljšava rast Bacillus licheniformis u uslovima stresa izazvanog žučnim solima.
Tabela 20. Merenje biološke potrebe za kiseonikom (BOD) izražene kao količina iskorišćenog kiseonika (mg/L) u kulturama Bacillus licheniformis koje sadrže ekstrakt hrane za piliće i žučne soli.

Claims (11)

Patentni zahtevi
1. Biljka ili deo biljke obložen kompozicijom koja sadrži:
a) bakterijsku sporu; i
b) L-aminokiselinu,
naznačeni time, što kompozicija sadrži suvu jedinstvenu smešu bakterijske spore i L-aminokiseline, i pri čemu se L-aminokiselina adsorbuje na bakterijsku sporu, ili je bakterijska spora apsorbuje, i L-aminokiselina je odabrana od L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina.
2. Biljka ili deo biljke prema patentnom zahtevu 1, naznačeni time, što su biljka ili deo biljke izabrani iz grupe koja se sastoji od cveta, semena, korena, ploda, krtole, lukovice, rizoma, izdanka, klice, semena, lista, ponika i rasada.
3. Biljka ili deo biljke prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačeni time, što su biljka ili deo biljke seme.
4. Biljka ili deo biljke prema bilo kom prethodnom patentnom zahtevu, naznačeni time, što je bakterijska spora izabrana iz grupe koja se sastoji od Bacillus agri, Bacillus aizawai, Bacillus albolactis, Bacillus altitudinis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus butanolivorans, Bacillus cereus, Bacillus coagulans, Bacillus endoparasiticus, Bacillus endorhythmos, Bacillus firmus, Bacillus kurstaki, Bacillus lacticola, Bacillus lactimorbus, Bacillus lactis, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus medusa, Bacillus metiens, Bacillus mojavensis, Bacillus mycoides, Bacillus natto, Bacillus nigrificans, Bacillus popillae, Bacillus pumilus, Bacillus siamensis, Bacillus simplex, Bacillus sphaericus, Bacillus spp., Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus unifagellatus, Clostridium thermocellum, Clostridium ljungdahlii, Clostridium acetobutylicum, Clostridium beijerinckii, Clostridium butyricum, Pasteuria penetrans, Pasteuria thornei, Pasteuria nishizawae i vrsta roda Streptomyces.
5. Biljka ili deo biljke prema bilo kom prethodnom patentnom zahtevu, naznačeni time, što je bakterijska spora izabrana iz grupe koja se sastoji od B. subtilis, B. amyloliquefaciens, B. firmus, B. licheniformis, B. megaterium i B. pumilus; i L-aminokiselina je izabrana iz grupe koja se sastoji od L-alanina, L-valina i L-asparagina.
6. Biljka ili deo biljke prema patentnom zahtevu 3, naznačeni time, što kompozicija dodatno sadrži polimer koji oblaže seme.
7. Postupak za poboljšanje osobine koja se odnosi na prinos kod biljke ili dela biljke koji obuhvata tretiranje biljke ili dela biljke kompozicijom koja sadrži:
a) bakterijsku sporu; i
b) L-aminokiselinu,
naznačen time, što kompozicija sadrži suvu jedinstvenu smešu bakterijske spore i L-aminokiseline, i pri čemu se L-aminokiselina adsorbuje na bakterijsku sporu, ili je bakterijska spora apsorbuje, i L-aminokiselina je odabrana od L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina, i pri čemu je osobina koja se odnosi na prinos kod biljke ili dela biljke poboljšana u odnosu na osobinu koja se odnosi na prinos kod odgovarajuće biljke ili dela biljke koji nisu obloženi navedenom kompozicijom.
8. Postupak prema patentnom zahtevu 7, naznačen time, što su biljka ili deo biljke izabrani iz grupe koja se sastoji od cveta, semena, korena, ploda, krtole, lukovice, rizoma, izdanka, klice, semena, lista, ponika i rasada.
9. Neterapeutski postupak za ishranu životinje koji obuhvata davanje životinji kompozicije koja sadrži bakterijsku sporu i L-aminokiselinu, naznačen time, što kompozicija sadrži suvu jedinstvenu smešu bakterijske spore i L-aminokiseline, i pri čemu se L-aminokiselina adsorbuje na bakterijsku sporu, ili je bakterijska spora apsorbuje, i L-aminokiselina je odabrana od L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina.
10. Postupak za pripremu silaže koji obuhvata nanošenje kompozicije koja sadrži bakterijsku sporu i L-aminokiselinu na silažu, naznačen time, što kompozicija sadrži suvu jedinstvenu smešu bakterijske spore i L-aminokiseline, i pri čemu se L-aminokiselina adsorbuje na bakterijsku sporu, ili je bakterijska spora apsorbuje, i L-aminokiselina je odabrana od L-alanina, L-valina, L-prolina, L-leucina, L-cisteina, L-treonina, L-glutamina, L-asparagina i L-fenilalanina.
11. Biljka ili deo biljke prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, ili postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 7 do 10, naznačen time, što je kompozicija u obliku suvog praha.
Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20230277A 2014-08-06 2015-08-06 Kompozicije bakterijskih spora za industrijske upotrebe RS64127B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462033825P 2014-08-06 2014-08-06
EP15830591.2A EP3177149B1 (en) 2014-08-06 2015-08-06 Bacterial spore compositions for industrial uses
PCT/US2015/043979 WO2016022779A1 (en) 2014-08-06 2015-08-06 Bacterial spore compositions for industrial uses

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64127B1 true RS64127B1 (sr) 2023-05-31

Family

ID=55266407

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230277A RS64127B1 (sr) 2014-08-06 2015-08-06 Kompozicije bakterijskih spora za industrijske upotrebe

Country Status (21)

Country Link
US (3) US9932543B2 (sr)
EP (1) EP3177149B1 (sr)
JP (1) JP6793633B2 (sr)
CN (2) CN106793782A (sr)
AR (2) AR101462A1 (sr)
AU (2) AU2015300988B2 (sr)
BR (1) BR112017002324A2 (sr)
CA (1) CA2957222A1 (sr)
CY (1) CY1126015T1 (sr)
DK (1) DK3177149T3 (sr)
ES (1) ES2942990T3 (sr)
FI (1) FI3177149T3 (sr)
HR (1) HRP20230358T1 (sr)
HU (1) HUE061767T2 (sr)
LT (1) LT3177149T (sr)
PL (1) PL3177149T3 (sr)
PT (1) PT3177149T (sr)
RS (1) RS64127B1 (sr)
SI (1) SI3177149T1 (sr)
SM (1) SMT202300116T1 (sr)
TW (1) TWI708560B (sr)

Families Citing this family (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10766799B2 (en) * 2014-05-23 2020-09-08 Nch Corporation Method for improving quality of aquaculture pond water using a nutrient germinant composition and spore incubation method
US20180029945A1 (en) * 2015-01-29 2018-02-01 José Luis Miranda Valencia Solid Granulated Fertilizer Formulated with Mineral Clays, Siderophore Chelating Agents, Secondary Nutrients and Micronutrients
PY1639434A (es) 2015-06-25 2018-08-01 Ascus Biosciences Inc Procedimientos, aparatos y sistemas para el analisis de cepas de microorganismos provinientes de comunidades complejas y heterogenas. prediccion e identificacion de relaciones..//.
US10851399B2 (en) 2015-06-25 2020-12-01 Native Microbials, Inc. Methods, apparatuses, and systems for microorganism strain analysis of complex heterogeneous communities, predicting and identifying functional relationships and interactions thereof, and selecting and synthesizing microbial ensembles based thereon
US9938558B2 (en) 2015-06-25 2018-04-10 Ascus Biosciences, Inc. Methods, apparatuses, and systems for analyzing microorganism strains from complex heterogeneous communities, predicting and identifying functional relationships and interactions thereof, and selecting and synthesizing microbial ensembles based thereon
WO2017044953A1 (en) 2015-09-10 2017-03-16 Locus Solutions, Llc Enhanced microbial production of biosurfactants and other products, and uses thereof
MX392304B (es) 2016-01-07 2025-03-24 Native Microbials Inc Métodos para mejorar la producción de leche mediante la administración de consorcios microbianos.
WO2017157773A1 (en) * 2016-03-14 2017-09-21 Henkel Ag & Co. Kgaa Process for controlling malodors using inactivated bacterial spores capable of inhibiting or preventing the production of malodor
AU2017240064B8 (en) 2016-03-31 2021-11-11 Gojo Industries, Inc. Antimicrobial peptide stimulating sanitizing composition
EP3436041B1 (en) 2016-03-31 2023-05-24 Gojo Industries, Inc. Sanitizer composition with probiotic/prebiotic active ingredient
WO2017173240A1 (en) 2016-03-31 2017-10-05 Gojo Industries, Inc. Antimicrobial peptide stimulating cleansing composition
US12097226B2 (en) 2016-04-05 2024-09-24 Nch Corporation System and method for using a single-serve nutrient spore composition for small scale farm applications
CA3019732A1 (en) 2016-04-05 2017-10-12 Nch Corporation Nutrient rich germinant composition and spore incubation method
US10897922B2 (en) 2016-04-05 2021-01-26 Nch Corporation Composition and method for germinative compounds in probiotic food and beverage products for human consumption
WO2018049182A2 (en) 2016-09-08 2018-03-15 Locus Solutions, Llc Distributed systems for the efficient production and use of microbe-based compositions
JP2020500860A (ja) 2016-11-23 2020-01-16 ゴジョ・インダストリーズ・インコーポレイテッド プロバイオティック／プレバイオティックな有効成分を含む消毒薬組成物
CA3048246A1 (en) 2016-12-28 2018-07-05 Ascus Biosciences, Inc. Methods, apparatuses, and systems for analyzing complete microorganism strains in complex heterogeneous communities, determining functional relationships and interactions thereof, and identifying and synthesizing bioreactive modificators based thereon
AU2017388535A1 (en) 2016-12-28 2019-07-25 Native Microbials, Inc. Methods, apparatuses, and systems for microorganism strain analysis of complex heterogeneous communities with tracer analytics, determination of functional relationships and interactions thereof, and synthesis of microbial ensembles including dosed microbial ensembles and inoculative microbial ensembles
AU2018211904B2 (en) * 2017-01-26 2024-06-06 Bayer Cropscience Lp Method of promoting bacillus spore germination
UY37708A (es) 2017-04-28 2018-10-31 Ascus Biosciences Inc Métodos para complementar dietas con alto consumo de granos y/o alto valor energético en rumiantes, mediante la administración de un bioensamble sintético de microbios, o cepas purificadas de los mismos
WO2019022998A1 (en) * 2017-07-26 2019-01-31 Locus Oil Ip Company, Llc TWO-STAGE PROCESS FOR ENHANCED MICROBIAL RECOVERY OF OIL
WO2019023034A2 (en) 2017-07-27 2019-01-31 Locus Agriculture Ip Company, Llc EFFICIENT PRODUCTION OF PICHIA YEASTS AND USE THEREOF TO IMPROVE PLANT AND ANIMAL HEALTH
MX2020007105A (es) * 2017-10-04 2020-09-03 NCH Life Sciences LLC Formulaciones de espora de nutriente y usos de las mismas.
US10793483B2 (en) * 2017-10-24 2020-10-06 Dari-Tech, Inc. Method and system for compounding fertilizer from manure without nutrient emission
US10919815B2 (en) * 2017-10-24 2021-02-16 Dari-Tech, Inc. Method and system for compounding fertilizer from manure without nutrient emission
CN107858307A (zh) * 2017-11-29 2018-03-30 深圳地天国际生物工程科技有限公司 一种芽孢菌粉及其制备方法
WO2019147799A1 (en) 2018-01-24 2019-08-01 Omnigen Research, Llc Bacillus combination for administration to animals
CA3092472A1 (en) * 2018-03-02 2019-09-06 Evonik Operations Gmbh In vitro method for detecting intestinal barrier failure in animals
CR20200600A (es) 2018-05-08 2021-06-25 Locus Agriculture Ip Co Llc Productos a base de microbio para mejorar la raíz de la planta y la salud inmune
CN110965974A (zh) * 2018-09-29 2020-04-07 中国石油天然气股份有限公司 聚合物驱后油藏原位激活微生物改质驱油的方法
CA3122457A1 (en) 2018-12-14 2020-06-18 Evonik Operations Gmbh In vitro method for detecting avian intestinal dysbiosis
KR101994049B1 (ko) * 2018-12-23 2019-06-27 양승창 방사성물질 제거를 위한 생물학적 미생물처리제
WO2020173963A1 (en) * 2019-02-25 2020-09-03 Servophil AG Deposition reduction
BR112021020162A2 (pt) * 2019-04-10 2022-05-10 Native Microbials Inc Métodos e sistemas para estabilização e preservação de micróbios
KR20220000398A (ko) 2019-04-12 2022-01-03 로커스 아이피 컴퍼니 엘엘씨 향상된 탄소 격리 및 가축 생산 온실 가스 배출 감소를 위한 목초지 처리
EP3965580A4 (en) 2019-04-22 2023-06-07 Locus Agriculture IP Company, LLC Methods for enhancing root strength and safety of turf grass
CN110396482B (zh) * 2019-04-30 2021-02-19 江苏好润生物产业集团股份有限公司 一种拮抗菌解淀粉芽孢杆菌x8菌株及其应用
WO2021033190A1 (en) * 2019-08-22 2021-02-25 Ifat Hammer Goods protection insert and uses thereof
MX2022004545A (es) * 2019-10-17 2022-05-10 Dsm Ip Assets Bv Composiciones de pienso animal y usos de las mismas.
CN110651891B (zh) * 2019-11-05 2023-03-31 大连民族大学 一种用于提高大菱鲆生长性能、免疫性能及其营养品质的益生菌制剂
KR102239389B1 (ko) * 2019-11-19 2021-04-12 대한민국 고추 가뭄 스트레스 저감 미생물 바실러스 부타놀리보란스 kj40 및 이의 용도
CN111202096A (zh) * 2020-01-14 2020-05-29 河南农贝得农业科技有限公司 一种用于防治农作物病毒病的微生物菌剂及其制备方法
WO2021159068A1 (en) 2020-02-06 2021-08-12 Nch Corportion Composition and method of using germinative compounds in probiotics for inflammation reduction in humans
WO2021209942A1 (en) * 2020-04-15 2021-10-21 New Life Biosciences Llc Microbial treatment for water systems and soil remediation
US20210276060A1 (en) * 2020-03-06 2021-09-09 New Life Biosciences Llc Soil remediation through beneficial microbes
JP7323881B2 (ja) * 2020-03-09 2023-08-09 独立行政法人エネルギー・金属鉱物資源機構 炭化水素回収方法及び炭化水素回収システム
EP3878980A1 (en) * 2020-03-12 2021-09-15 Waterford Institute Of Technology An isolated bacillus altitudinis strain and its use as a probiotic
CN111334265A (zh) * 2020-04-13 2020-06-26 西南石油大学 一种粘土矿物纳米水凝胶封堵剂及水基钻井液
CN111620745B (zh) * 2020-05-09 2021-08-24 大连理工大学 一种利用生物菌剂降解农业废弃物生产生物有机肥的方法
KR102858162B1 (ko) * 2020-09-25 2025-09-09 씨제이제일제당 (주) 은행잎을 포함하는 항콕시듐용 조성물 및 이의 용도
IL302272A (en) * 2020-10-21 2023-06-01 Andes Ag Inc Compositions and methods for producing bicarbonate and minerals
WO2022094214A1 (en) * 2020-10-30 2022-05-05 Agrofresh Inc. Treatment and system for cannabis plant species applications with ethylene inhibitors
CN112355034B (zh) * 2020-11-17 2021-08-06 同济大学 基于水热钙离子调配的有机固体废弃物无害化预处理方法
US20220340464A1 (en) * 2021-04-26 2022-10-27 Nch Corporation System and Method of Increasing Methane Production in Anaerobic Digesters
CN113412913B (zh) * 2021-07-01 2023-01-10 四川川娃子食品有限公司 一种即食豆瓣酱及其制备方法
KR102730874B1 (ko) * 2021-08-18 2024-11-18 주식회사 대호 가축용 사료 코팅제 및 그 제조방법
CA3230569A1 (en) * 2021-09-02 2023-03-09 Sean Farmer Methods for producing reduced carbon footprint biofuels
CN113929221B (zh) * 2021-11-22 2023-07-14 宁波大学 一种用于处理水产养殖尾水的微生物复合菌群
CN114375635A (zh) * 2022-01-27 2022-04-22 西安建筑科技大学 菌肥基质在旱区露天煤矿排土场植被恢复中的应用
JP7777764B2 (ja) * 2022-04-01 2025-12-01 正男 碇 微生物を用いた衣類害虫忌避剤
CN114631505B (zh) * 2022-04-01 2022-11-25 山东省海洋科学研究院(青岛国家海洋科学研究中心) 一年两茬日本对虾苗种标粗方法
US20240114876A1 (en) * 2022-09-30 2024-04-11 Church & Dwight Co., Inc. Compositions and methods to reduce mastitis in dairy animals
CN116064335B (zh) * 2023-02-20 2024-10-15 新疆农业科学院微生物应用研究所(中国新疆—亚美尼亚生物工程研究开发中心) 一种解硫胺素芽孢杆菌及其应用
EP4680013A1 (en) * 2023-03-16 2026-01-21 Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. Brevibacillus fermentate extracts for cleaning and malodor control and use thereof
CN116790422B (zh) 2023-05-17 2024-10-22 湖南省蔬菜研究所 一株暹罗芽孢杆菌及其应用
WO2025081162A1 (en) * 2023-10-13 2025-04-17 Ranger Holding Llc Compositions and methods for germinating wild-type or super-dormant bacillus strains
CN118546822B (zh) * 2024-05-16 2025-02-07 烟台大学 一株具有抑制灾害水母螅状体无性生殖的副蕈状芽孢杆菌及其应用

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5062956A (en) 1988-04-04 1991-11-05 Allied-Signal Inc. Bioremediation of chromium (VI) contaminated aqueous systems by sulfate reducing bacteria
WO1995025163A1 (en) 1994-03-15 1995-09-21 Philom Bios Inc. Methods for the production of fungal spores and compositions thereof
US5681739A (en) 1995-05-25 1997-10-28 Lockheed Idaho Technologies Company Method for in situ or ex situ bioremediation of hexavalent chromium contaminated soils and/or groundwater
WO1999005310A1 (en) * 1997-07-28 1999-02-04 Minnesota Mining And Manufacturing Company Spore germination media
US6849256B1 (en) * 1999-11-08 2005-02-01 Ganeden Biotech Incorporated Inhibition of pathogens by probiotic bacteria
JP2001162297A (ja) * 1999-12-09 2001-06-19 Mitsui Eng & Shipbuild Co Ltd 有機性廃水の処理方法および処理装置
JP2001286884A (ja) * 2000-04-04 2001-10-16 Mitsui Eng & Shipbuild Co Ltd 有機性廃水の処理装置および処理方法
JP3824312B2 (ja) * 2000-05-02 2006-09-20 ビオフェルミン製薬株式会社 噴霧乾燥による菌体乾燥物
JP3363438B2 (ja) * 2000-05-02 2003-01-08 ビオフェルミン製薬株式会社 噴霧乾燥による菌体乾燥物
MXPA02012825A (es) * 2000-06-23 2004-07-30 Acuabiotec Llc Complejo bioactivo alimenticio, metodo para preparar producto complejo bioactivo alimenticio y metodo para controlar la enfermedad.
US6620611B2 (en) 2001-01-06 2003-09-16 Geovation Technologies, Inc. Solid-chemical composition for sustained release of organic substrates and complex inorganic phosphates for bioremediation
US7429477B2 (en) 2001-02-02 2008-09-30 Johnson Thomas D Controlling plant pathogens with bacterial/fungal antagonist combinations
US7358072B2 (en) * 2004-10-15 2008-04-15 Zuchem, Inc Fermentative production of mannitol
US9393274B2 (en) * 2005-03-14 2016-07-19 Ectotec Pty Ltd Control of sucking lice
JP2006280263A (ja) * 2005-03-31 2006-10-19 Snow Brand Milk Prod Co Ltd ビフィズス菌菌体粉末
JP2008188510A (ja) * 2007-02-02 2008-08-21 Matsushita Electric Ind Co Ltd 浄化方法
AU2009234015A1 (en) * 2008-04-07 2009-10-15 Bayer Intellectual Property Gmbh Stable aqueous spore-containing formulation
BRPI0918148A2 (pt) 2008-09-10 2015-10-06 Bayer Cropscience Lp semente geneticamente modificada, combinada com bactérias formadoras de esporos e opcionais agentes de controles de insetos
DK2379704T3 (da) 2008-12-19 2013-03-25 Chr Hansen As Et galderesistent bacillus-præparat der udskiller essentielle aminosyrer på et højt niveau
BRPI0923022A2 (pt) 2008-12-19 2015-08-04 Chr Hansen As Composição de bacilos resistentes a bile
AR075492A1 (es) * 2008-12-19 2011-04-06 Pasteuria Bioscience Inc Materiales y metodos para controlar nematodos con esporas de pasteuria en cobertura de semillas
US8445226B2 (en) * 2010-02-01 2013-05-21 Microbios, Inc. Process and composition for the manufacture of a microbial-based product
JP5501053B2 (ja) * 2010-03-25 2014-05-21 株式会社サカタのタネ 減圧工程を必須とする有効微生物コーティング種子の製造方法
PE20141468A1 (es) 2010-12-21 2014-11-05 Bayer Cropscience Lp Mutantes tipo papel de lija de bacillus y metodos de uso de los mismo para mejorar el crecimiento vegetal, promover la salud de plantas y controlar enfermedades y plagas
JP5706713B2 (ja) * 2011-02-24 2015-04-22 一般財団法人電力中央研究所 油ガス田からの残留原油回収方法
WO2012135499A1 (en) * 2011-03-31 2012-10-04 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic sports nutrition compositions
WO2012171914A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent
CN102515927B (zh) * 2011-09-21 2013-09-11 周法永 一种药效型微生物肥料及其制备方法和应用
US20140295482A1 (en) 2011-11-02 2014-10-02 Texas Tech University System Media Compositions for Promoting Bacterial and Fungal Growth
JP5996231B2 (ja) * 2012-03-28 2016-09-21 一般財団法人電力中央研究所 新規嫌気性セルロース分解菌及びこれを用いたセルロース分解処理方法
CN102986737B (zh) * 2012-05-30 2014-08-27 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 线虫卵寄生真菌和孢子萌发促进剂的复配制剂和应用
WO2014003069A1 (ja) * 2012-06-29 2014-01-03 株式会社カネカ 甲殻類用飼料
JP2014068578A (ja) * 2012-09-28 2014-04-21 Kanema :Kk 魚飼育水槽用具
US20140179521A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Agrinos AS COMPOSITIONS INCORPORATING HYTd
BR112015030011A2 (pt) * 2013-05-31 2017-07-25 Univ Cornell composições e métodos para intensificar a germinação

Also Published As

Publication number Publication date
AU2019275569B2 (en) 2020-04-09
BR112017002324A2 (en) 2018-01-16
PT3177149T (pt) 2023-04-17
LT3177149T (lt) 2023-05-25
DK3177149T3 (da) 2023-04-17
HUE061767T2 (hu) 2023-08-28
AU2015300988A1 (en) 2017-02-23
AU2015300988B2 (en) 2019-10-03
EP3177149B1 (en) 2023-01-25
CN106793782A (zh) 2017-05-31
US20190300824A1 (en) 2019-10-03
NZ728748A (en) 2024-07-26
EP3177149A4 (en) 2017-12-20
TWI708560B (zh) 2020-11-01
HRP20230358T1 (hr) 2023-06-09
US9932543B2 (en) 2018-04-03
US20160037781A1 (en) 2016-02-11
AR101462A1 (es) 2016-12-21
AU2019275569A1 (en) 2020-01-16
CA2957222A1 (en) 2016-02-11
EP3177149A1 (en) 2017-06-14
FI3177149T3 (fi) 2023-04-24
SI3177149T1 (sl) 2023-07-31
PL3177149T3 (pl) 2023-05-08
CY1126015T1 (el) 2026-02-25
ES2942990T3 (es) 2023-06-08
AR118540A2 (es) 2021-10-20
JP2017534245A (ja) 2017-11-24
JP6793633B2 (ja) 2020-12-02
CN117643310A (zh) 2024-03-05
US20160040119A1 (en) 2016-02-11
TW201613472A (en) 2016-04-16
SMT202300116T1 (it) 2023-05-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS64127B1 (sr) Kompozicije bakterijskih spora za industrijske upotrebe
US11071302B2 (en) Means and methods for plant yield enhancement
US20250280822A1 (en) Methods and Compositions for Controlling Corn Rootworm
WO2016022779A1 (en) Bacterial spore compositions for industrial uses
RU2634386C2 (ru) Штамм microbacterium, композиции и способы для борьбы с фузариозом
JP6243347B2 (ja) 植物成長促進微生物およびその使用
CA2950287C (en) Materials and methods for controlling nematodes with pasteuria spores in seed coatings
CA2984075C (en) Microbial compositions and methods for bioprotection
AU2019275655A1 (en) Microbial compositions and methods
US20210321622A1 (en) Methods and compositions for improving soybean yield
CN111148827A (zh) 促进植物生长的微生物、组合物和用途
KR20150050578A (ko) 식물의 비생물적 스트레스 저항성을 증가시키는 방법
Topolovec-Pintarić et al. Enhanced growth of cabbage and red beet by Trichoderma viride
WO2015130911A1 (en) Dried fungal spore germinative compound mixtures
US20220167625A1 (en) Novel plant growth promoting microbial compositions
RU2689530C2 (ru) Новая бактерия рода bacillus и ее применение
CN118591295A (zh) 用于宿主植物的基于微藻的生物保护组合物和方法
TWI775848B (zh) 害蟲防治的方法
KR100616408B1 (ko) 라이조푸스 올리고스포러스을 포함하는 잔디생장촉진제 및이를 이용한 잔디 생장 촉진 방법
Harrison Domesticating Lebeckia ambigua: solving the rhizobia issues.