RS64128B1 - Peptidi sa ciljanim delovanjem na mitohondrije - Google Patents

Peptidi sa ciljanim delovanjem na mitohondrije

Info

Publication number
RS64128B1
RS64128B1 RS20230287A RSP20230287A RS64128B1 RS 64128 B1 RS64128 B1 RS 64128B1 RS 20230287 A RS20230287 A RS 20230287A RS P20230287 A RSP20230287 A RS P20230287A RS 64128 B1 RS64128 B1 RS 64128B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
dmt
amino
oxadiazole
arg
imidazol
Prior art date
Application number
RS20230287A
Other languages
English (en)
Inventor
Guozhu Zheng
Mark J Bamberger
Inese Smukste
Original Assignee
Stealth Biotherapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Stealth Biotherapeutics Inc filed Critical Stealth Biotherapeutics Inc
Publication of RS64128B1 publication Critical patent/RS64128B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/021—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)n-C(=0)-, n being 5 or 6; for n > 6, classification in C07K5/06 - C07K5/10, according to the moiety having normal peptide bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C07K5/06095—Arg-amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Description

Opis
POVEZANE PATENTNE PRIJAVE
[0001] Ova prijava zahteva pravo prvenstva u odnosu na SAD privremenu patentnu prijavu br.
62/599,175, podnetu 15. decembra 2017.
OSNOV PRONALASKA
[0002] Peptidna jedinjenja koja koja ciljano deluju na mitohondrije pokazala su terapeutski potencijal za lečenje bolesti povezanih sa disfunkcijom mitohondrija. Zbog potencijalne terapeutske primene ovih jedinjenja, postoji potreba za razvojem novih jedinjenja sa poboljšanom efikasnošću i terapeutskim profilima.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0003] Predmetna patentna prijava obezbeđuje peptide koji ciljano deluju na mitohondrije. U nekim aspektima pronalaska, peptidi su korisni za lečenje i prevenciju ishemijsko-reperfuzionog oštećenja (npr. srčano ishemijsko-reperfuziono oštećenje) ili infarkta miokarda.
[0004] Tačnije, pronalazak obezbeđuje jedinjenja formule (I), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli
pri čemu
AA1je izabrano od
AA2je izabrano od
R<2a>je izabrano od
R<2b>je H ili Me;
R<3>i R<4>su nezavisno izabrani od H i (C1-C6)alkila;
R<5>i R<6>su nezavisno H, metil, etil, propil, ciklopropil ili ciklo butil; ili R<5>i R<6>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova;
R<7>je izabran od H, (C1-C6)alkila, cikloalkila i arila;
R<8>i R<9>su nezavisno izabrani od H, (C1-C6)alkila, cikloalkila i arila; ili R<8>i R<9>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova;
n je 1, 2 ili 3;
X je izabrano od
; i
* označava tačku vezivanja X za R<1>.
[0005] Drugi aspekt prema pronalasku je farmaceutska kompozicija, koja sadrži jedinjenje prema pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0006] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja ili prevencije ishemijsko-reperfuzione povrede, koja obuhvata primenu kod subjekta kome je to potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja prema pronalasku.
[0007] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja ili prevencije infarkta miokarda, koji obuhvata primenu efikasne količine jedinjenja prema pronalasku kod subjekta kome je to potrebno.
[0008] Pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja za upotrebu u postupcima lečenja ili prevencije ishemije zadnjih udova ili akutne ishemije udova, koji obuhvata primenu efikasne količine jedinjenja prema pronalasku kod subjekta kome je to potrebno.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0009]
Slika 1 prikazuje primere jedinjenja formule (I) u formi tabele.
Slika 2 je grafički prikaz veličine infarkta u odnosu na % površine pod rizikom (srednje vrednosti sa standardnom greškom srednje vrednosti (SEM)), prilikom upotrebe jedinjenja prema pronalasku.
Slika 3 je grafički prikaz površine belog nekrotičnog tkiva u odnosu na % površine pod rizikom, prilikom upotrebe jedinjenja prema pronalasku. Napomena: U analizi se koristi samo oblast belog nekrotičnog tkiva; srednje vrednosti sa SEM.
Slika 4 je grafički prikaz veličine infarkta (%),prilikom upotrebe jedinjenja prema pronalasku.
Slika 5 je grafički prikaz kreatinina u plazmi u odnosu na % zaštite, prilikom upotrebe jedinjenja prema pronalasku.
Slika 6 je grafički prikaz azot uree u krvi (BUN) u odnosu na % zaštite, prilikom upotrebe jedinjenja prema pronalasku.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0010] U nekim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so:
pri čemu
AA1je izabrano od
R<1>je izabran od
R<2b>je H ili Me;
R<3>i R<4>su nezavisno izabrani od H i (C1-C6)alkila;
R<5>i R<6>su nezavisno H, metil, etil, propil, ciklopropil ili ciklo butil; ili R<5>i R<6>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova;
R<7>je izabran od H, (C1-C6)alkila, cikloalkila i arila;
R<8>i R<9>su nezavisno izabrani od H, (C1-C6)alkila, cikloalkila i arila; ili R<8>i R<9>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova;
n je 1, 2 ili 3;
X je izabran od
i,
* označava tačku vezivanja X za R<1>.
[0011] U nekim primerima izvođenja, AA1je
U nekim primerima izvođenja, AA1je
.
U nekim primerima izvođenja, AA1je
[0012] U nekim primerima izvođenja, AA1je
. U nekim primerima izvođenja, AA1je
[0013] U nekim primerima izvođenja, AA2je
. U nekim primerima izvođenja, AA2je
[0014] U nekim primerima izvođenja, R1 je
U nekim primerima izvođenja, R1 je
.U nekim primerima izvođenja, R<1>je
U nekim primerima izvođenja, R<1>je
U nekim primerima izvođenja, R<1>je
U nekim primerima izvođenja, R<1>je
[0015] U nekim primerima izvođenja, R1 je
[0016] U nekim primerima izvođenja, R1 je
[0017] U nekim primerima izvođenja, R<2a>je
U nekim primerima izvođenja, R<2a>je
U nekim primerima izvođenja, R<2a>je
erima izvođenja, R<2a>je
[0020] U nekim primerima izvođenja, R<2a>je
1
[0022] U nekim primerima izvođenja, R<2b>je H. U nekim primerima izvođenja, R<2b>je metil.
[0023] U nekim primerima izvođenja, R<3>je H. U nekim primerima izvođenja, R<3>je (C1-C6)alkil. U nekim primerima izvođenja, R<3>je metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, i-butil ili tbutil. U nekim primerima izvođenja, R<3>je metil. U nekim primerima izvođenja, R<3>je etil.
[0024] U nekim primerima izvođenja, R<4>je H. U nekim primerima izvođenja, R<4>je (C1-C6)alkil. U nekim primerima izvođenja, R<4>je metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, i-butil, ili tbutil. U nekim primerima izvođenja, R<4>je metil. U nekim primerima izvođenja, R<4>je etil.
[0025] U nekim primerima izvođenja, R<3>i R<4>su isti. U nekim primerima izvođenja, R<3>i R<4>su različiti.
[0026] U nekim primerima izvođenja, R<5>je H. U nekim primerima izvođenja, R<5>je metil.
[0027] U nekim primerima izvođenja, R<6>je H. U nekim primerima izvođenja, R<6>je metil.
[0028] U nekim primerima izvođenja, R<5>i R<6>su isti. U nekim primerima izvođenja, R<5>i R<6>su različiti.
[0029] U nekim primerima izvođenja, R<5>i R<6>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova. U nekim primerima izvođenja, heterociklil je prsten sa 4-6 članova. U nekim primerima izvođenja, heterociklil je azetidinil, pirolidinil ili piperidinil.
[0030] U nekim primerima izvođenja, R<7>je H. U nekim primerima izvođenja, R<7>je (C1-C6)alkil. U nekim primerima izvođenja, R<7>je metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, i-butil, ili tbutil. U nekim primerima izvođenja, R<7>je metil.
[0031] U nekim primerima izvođenja, R<7>je cikloalkil. U nekim primerima izvođenja, R<7>je ciklopropil, ciklobutil, ciklopropil, ili cikloheksil. U nekim primerima izvođenja, R<7>je aril. U nekim primerima izvođenja, R<7>je fenil.
[0032] U nekim primerima izvođenja, R<8>je H. U nekim primerima izvođenja, R<8>je (C1-C6)alkil. U nekim primerima izvođenja, R<8>je metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, i-butil, ili tbutil. U nekim primerima izvođenja, R<8>je metil.
[0033] U nekim primerima izvođenja, R<8>je cikloalkil. U nekim primerima izvođenja, R<8>je ciklopropil, ciklobutil, ciklopropil, ili cikloheksil. U nekim primerima izvođenja, R<8>je aril. U nekim primerima izvođenja, R<8>je fenil.
[0034] U nekim primerima izvođenja, R<9>je cikloalkil. U nekim primerima izvođenja, R<9>je ciklopropil, ciklobutil, ciklopropil, ili cikloheksil. U nekim primerima izvođenja, R<9>je aril. U nekim primerima izvođenja, R<9>je fenil.
[0035] U nekim primerima izvođenja, R<8>i R<9>su isti. U nekim primerima izvođenja, R<8>i R<9>su različiti.
[0036] U nekim primerima izvođenja, R<8>i R<9>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova. U nekim primerima izvođenja, heterociklil je prsten sa 4-6 članova. U nekim primerima izvođenja, heterociklil je azetidinil, pirolidinil ili piperidinil.
[0037] U nekim primerima izvođenja, X je
U nekim primerima izvođenja, X je
U nekim primerima izvođenja, X je
đenja, X je
U nekim primerima izvođenja, X je
[0038] U nekim primerima izvođenja, n je 1. U nekim primerima izvođenja, n je 2. U nekim primerima izvođenja, n je 3.
[0039] U nekim primerima izvođenja, jedinjenje je izabrano od:
D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((R)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((S)-2',6'-diaminoheks-2'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((S)-5'-dimetilamino-1'-aminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((R)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-(2',3',4',5',6'-pentafluorobenzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-(4-terc-butilbenzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((R)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-(4-terc-butilbenzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-(4'-trifluorometilbenzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-(4'-cikloheksilbenzil))-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-fenetil))-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-cikloheptilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-biciklo[2,2,2]pentanilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-biciklo[2,2,2]oktanilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((1S)-(5-(1',5'-diaminopent-1'-il-3-adamant-1'-il)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((1R)-(5-(1',5'-diaminopent-1'-il-3-adamant-1'-il)-1,2,4-oksadiazola;
1
D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-fenil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-fenetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-ciklopentilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(a-(S)-histamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-t-metilhistamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(a-(S)-p-metilhistamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-cikloheptilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-biciklo[2,2,2]pentanilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-biciklo[2,2,2]oktanilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-adamantil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(a-(S)-histamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((S)-(2-(1H-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-((1S)-2-(piridin-4-il)-1-aminoetil-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Agb-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Agb-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Agb-DMT-(5-((S)-4'-dimetilamino-1'-aminobut-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Agb-DMT-(5-(2'-(S)-4-histamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
(N,N-diMe)-D-Agb-DMT-(5-(2'-(S)-4-histamin)-3-adamantil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Agb-DMT-(5-((S)-(2-(1H-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Agb-DMT-(5-((S)-(2-(1H-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminopropan-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3-adamantil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((R)-1',4'-diaminobut-1 '-il)-3 -adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((R)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3 -(biciklo[2.2.2]oktanilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-4'-dimetilamino-1'-aminobut-1'-il)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-5'-dimetilamino-1'-aminopent-1'-il)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-ciklopentilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-cikloheptilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-t-metilhistamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
1
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-t-metilhistamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(1H-indol-3-il)-1-aminoetil)-3 -(4-fenilbenzil))-1 ,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(1-metil-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(1H-indol-3-il)etil)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(1-metil-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-(O-Me)-DMT-(5-(α-histamin)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola;
D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-(O-Me)-DMT-(5-(α-(S)-t-metilhistamin)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola
(Karbamimidoil)-D-Dab-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
(Karbamimidoil)-D-Dab-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminobutan-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola;
(Karbamimidoil)-D-Dab-DMT-(5-(2'-(S)-4-histamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(5-(α-histamin))-3-benzil)-1,3,4-oksadiazola;
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-4-benzil)-1,3-oksazola;
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-5-benzil)-1,3-oksazola;
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-4-benzil)-1,3-tiazola;
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-5-benzil)-1,3-tiazola;
1
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-4-benzil)-furana;
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-5-benzil)-furana;
D-Arg-DMT-(1-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-fenoksi)-benzena;
D-Arg-DMT-(1-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-4-fenoksi)-benzena;
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-4-fenoksi)-piridina;
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-5-fenoksi)-piridina;
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-6-benzil)-piridin; i
D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-4-benzil)-pirimidin.
Sinteza peptida
[0040] Peptidna jedinjenja prema pronalasku mogu biti pripremljena postupkom sinteze peptida, kao što je konvencionalna sinteza peptida u tečnoj fazi ili sinteza peptida u čvrstoj fazi, ili sintezom peptida pomoću automatizovanog instrumenta za sintezu peptida (Kelley et al., Genetics Engineering Principles and Methods, Setlow, J. K. eds., Plenum Press NY. (1990) Vol.
12, pp.1 to 19; Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis (1989) W. H.; Houghten, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 82: p.5132). Tako proizvedeni peptid može biti sakupljen ili prečišćen rutinskom metodom, na primer, hromatografijom, kao što je hromatografija sa gel filtracijom, hromatografija na koloni sa jonoizmenjivačkom grupom, afinitetna hromatografija, reverznofazna hromatografija na koloni i HPLC, frakcionisanje amonijum sulfata, ultrafiltracija i imunoadsorpcija.
[0041] U sintezi peptida u čvrstoj fazi, peptidi se tipično sintetišu od strane karbonil grupe (C-terminus) do strane amino grupe (N-terminus) lanca aminokiselina. U nekim primerima izvođenja, amino-zaštićena amino kiselina je kovalentno vezana za čvrsti potporni materijal preko karboksilne grupe amino kiseline, obično preko estarske ili amido veze i opciono preko grupe za vezivanje. Amino grupa može da se skine sa zaštite i reaguje sa (tj., "spoji" sa) karbonil grupom druge amino-zaštićene amino kiseline korišćenjem reagensa za kuplovanje, čime daje dipeptid vezan za čvrsti nosač. Ovi koraci (tj. uklanjanje zaštite, kuplovanje) mogu da se ponove da bi se formirao željeni peptidni lanac. Kada je željeni peptidni lanac završen, peptid se može da se ovoji od čvrstog nosača.
[0042] U nekim primerima izvođenja, protektivne grupe na amino grupama amino kiselinskih ostataka uključuju 9-fluorenilmetiloksikarbonil grupu (Fmoc) i t-butiloksikarbonil (Boc). Fmoc grupa se uklanja sa amino terminusa bazom dok se Boc grupa uklanja kiselinom. U alternativnim
1
primerima izvođenja, amino-zaštitna grupa može da bude formil, akrilil (Acr), benzoil (Bz), acetil (Ac), trifluoroacetil, supstituisane ili nesupstituisane grupe aralkiloksikarbonil tipa, kao što su benziloksikarbonil (Z), p-hlorobenziloksikarbonil, p-bromobenziloksikarbonil, pnitrobenziloksikarbonil, p-metoksibenziloksikarbonil, benzhidriloksikarbonil, 2(pbifenilil)izopropiloksikarbonil, 2-(3,5-dimetoksifenil)izopropiloksikarbonil, pfenilazobenziloksikarbonil, trifenilfosfonoetiloksikarbonil ili 9-fluorenilmetiloksikarbonil grupa (Fmoc), supstituisane ili nesupstituisane grupe alkiloksikarbonil tipa, kao što su tercbutiloksikarbonil (BOC), terc-amiloksikarbonil, diizopropilmetiloksikarbonil, izopropiloksikarbonil, etiloksikarbonil, aliloksikarbonil, 2 metilsulfoniletiloksikarbonil ili 2,2,2-trihloroetiloksikarbonil grupa, grupe cikloalkiloksikarbonil tipa, kao što su ciklopentiloksikarbonil, cikloheksiloksikarbonil, adamantiloksikarbonil ili izoborniloksikarbonil grupa, i grupe koje sadrže hetero atom, kao što su benzensulfonil, p-toluensulfonil, mezitilensulfonil, metoksitrimetilfenilsulfonil, 2-nitrobenzensulfonil, 2-nitrobenzensulfenil, 4-nitrobenzensulfonil ili 4-nitrobenzensulfenil grupa.
[0043] Mnoge aminokiseline imaju reaktivne funkcionalne grupe u bočnom lancu. U nekim primerima izvođenja, takve funkcionalne grupe su zaštićene da bi se sprečilo da reaguju sa dolaznom amino kiselinom. Zaštitne grupe koje se koriste sa ovim funkcionalnim grupama moraju biti stabilne u uslovima sinteze peptida, ali mogu da se uklone pre, posle ili istovremeno sa odvajanjem peptida sa čvrste podloge.
[0044] U nekim primerima izvođenja, čvrsti materijal nosača koji se koristi u postupku sinteze peptida u čvrstoj fazi je nosač tipa gela kao što je polistiren, poliakrilamid ili polietilen glikol. Alternativno, materijali kao što su staklo sa porama, celulozna vlakna ili polistiren mogu biti funkcionalizovani na njihovoj površini da bi se obezbedila čvrsta podrška za sintezu peptidas.
[0045] Ovde opisani kuplujući reagensi koji mogu da se koriste za sintezu peptida na čvrstoj fazi su uobičajeno karbodiimidni reagensi. Primeri karbodiimidnih reagenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, N,N'-dicikloheksilkarbodiimid (DCC), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDC), N-cikloheksil-N'-izopropilkarbodiimid (CIC), N,N'diizopropilkarbodiimid (DIC), N-terc-butil-N'-metilkarbodiimid (BMC), N-terc-butil-N'-etilkarbodiimid (BEC), bis[[4-(2,2-dimetil-1,3-dioksolil)]-metil]karbodiimid (BDDC), i N,N-diciklopentilkarbodiimid. DCC je poželjni kuplujući reagens.
[0046] U nekim tipičnim primerima izvođenja, linearna jedinjenja 1 se sintetišu konvergentno, u skladu sa sintezom na čvrstoj fazi koja je predstavljena na Šemi 1.
[0047] Kao podsetnik, u šemama koje slede,
1
označava
ili
, pri čemu
predstavlja čvrstu podlogu ili, opciono, povezujuću grupu.
[0048] Na primer, jedinjenje predstavljeno na slici koja sledi može da se sintetiše na takav način, kao što je ilustrovano u šemi 2.
1
označava
pri čemu
predstavlja čvrstu podlogu ili, opciono, povezujuću grupu.
2
[0050] Jedinjenja prema pronalasku (1) takođe mogu da se sintetišu u skladu sa konvencionalnim putevima sinteze peptida u tečnoj fazi, npr., prema šemi 3.
[0051] Na primer, jedinjenje predstavljeno na slici koja sledi može da se sintetiše na takav način, kao što je ilustrovano u šemi 4.
Šema 4
Definicije
[0052] Nomenklatura koja se koristi za definisanje peptidnih jedinjenja koja su ovde opisana je ona koja se tipično koristi u tehnici gde se amino grupa na N-terminusu pojavljuje levo, a karboksilna grupa na C-terminusu desno.
[0053] Kako se ovde koristi, termin "aminokiselina" uključuje i prirodnu aminokiselinu i neprirodnu aminokiselinu. Izraz "amino kiselina", osim ako nije drugačije naznačeno, uključuje i izolovane molekule aminokiselina (tj. molekule koji uključuju i vodonik vezan za amino i hidroksil vezan za karbonil ugljenik) i ostatke aminokiselina (tj. molekule u kojima je bilo jedan ili oba vodonika vezana za amino ili hidroksil vezan za karbonil ugljenik su uklonjeni). Amino grupa može biti alfa-amino grupa, beta-amino grupa, itd. Na primer, izraz "amino kiselina alanin" može da se odnosi ili na izolovani alanin H-Ala-OH ili na bilo koji od alaninskih ostataka H-Ala -, -Ala-OH, ili -Ala-. Osim ako nije drugačije naznačeno, sve amino kiseline koje se nalaze u ovde opisanim jedinjenjima mogu biti u D ili L konfiguraciji. Amino kiselina koja je u D konfiguraciji može biti napisana tako da "D" prethodi skraćenici amino kiseline. Na primer, "D-Arg" predstavlja arginin u D konfiguraciji. Izraz "amino kiselina" uključuje njene soli, uključujući farmaceutski prihvatljive soli. Svaka amino kiselina može biti zaštićena ili nezaštićena. Zaštitne grupe mogu biti vezane za amino grupu (na primer alfa-amino grupu), karboksilnu grupu za kičmu ili bilo koju funkcionalnost bočnog lanca. Kao primer, fenilalanin zaštićen benziloksikarbonil grupom (Z) na alfa-amino grupi bi bio predstavljen kao Z-Phe-OH.
[0054] Sa izuzetkom N-terminalne aminokiseline, sve skraćenice amino kiselina (na primer, Phe) u ovom otkriću označavaju strukturu -NH-C(R)(R')-CO-, gde R i R' svaki je, nezavisno, vodonik ili bočni lanac amino kiseline (npr. R= benzil i R'=H za Phe). Shodno tome, fenilalanin je H-Phe-OH. Oznaka "OH" za ove aminokiseline ili za peptide (npr. Lis-Val-Leu-OH) ukazuje da je C-terminus slobodna kiselina. Oznaka "NH2" u, na primer, Phe-D-Arg-Phe-Lis-NH2označava da je C-terminus zaštićenog peptidnog fragmenta amidiran. Dalje, određeni R i R', odvojeno, ili u kombinaciji kao prstenasta struktura, mogu uključivati funkcionalne grupe koje zahtevaju zaštitu tokom sinteze tečne faze.
[0055] Tamo gde aminokiselina ima izomerne forme, L oblik amino kiseline je predstavljen osim ako nije drugačije eksplicitno naznačeno kao D oblik, na primer, D-Arg. Značajno je da su mnogi ostaci aminokiselina komercijalno dostupni u D- i L-obliku. Na primer, D-Arg je komercijalno dostupna D-amino kiselina.
[0056] Veliko slovo "D" korišćeno u vezi sa skraćenicom za aminokiselinski ostatak odnosi se na D-oblik aminokiselinskog ostatka.
[0057] Kako se ovde koristi, termin "peptid" se odnosi na dve ili više aminokiselina kovalentno povezanih najmanje jednom amidnom vezom (tj., vezom između amino grupe jedne amino kiseline i karboksilne grupe druge amino kiseline odabrane od aminokiseline peptidnog fragmenta). Izraz "peptid" uključuje njegove soli, uključujući farmaceutski prihvatljive soli.
[0058] Termin "DMT" se odnosi na 2,6-di(metil)tirozin (npr. 2,6-dimetil-L-tirozin; CAS 123715-02-6).
[0059] Termin "Nva" se odnosi na norvalin, a/k/a 2-aminopentanska kiselina (CAS 6600-40-4). Norvalin ima dva enantiomerna oblika, koji se mogu nazvati D- i L-norvalin. Dodatno, i na primer, naziv "d-(supstituent)-Nva" ili "5-(supstituent)-Nva" se odnosi na norvalin u kome naznačeni supstituent zamenjuje atom vodonika na d- ili 5-ugljeniku norvalina . Mogući su i drugi obrasci zamene, koji su imenovani na sličan način.
[0060] Termin "Agb" se odnosi na 2-amino-4-guanidino-buternu kiselinu (npr., 2-amino-4-guanidino-D-buternu kiselinu), homolog Arg.
[0061] Oblici jednine imenica se ovde koriste tako da upućuju na jedno ili više od jednog (tj., na najmanje jedno). Na primer, "element" označava jedan element ili više od jednog elementa.
[0062] Pronalazak takođe obezbeđuje soli jedinjenja prema pronalasku.
[0063] Izraz "farmaceutski prihvatljiva so" kako se ovde koristi uključuje soli izvedene iz neorganskih ili organskih kiselina uključujući, na primer, hlorovodoničnu, bromovodoničnu, sumpornu, azotnu, perhlornu, fosfornu, mravlju, sirćetnu, mlečnu, maleinsku, fumarnu, sukcinsku, vinska, glikolna, salicilna, limunska, metansulfonska, benzensulfonska, benzojeva,
2
malonska, trifluorosirćetna, trihlorsirćetna, naftalen-2-sulfonska i druge kiseline. Farmaceutski prihvatljivi oblici soli mogu uključivati oblike u kojima odnos molekula koji sadrže so nije 1:1. Na primer, so može da sadrži više od jednog molekula neorganske ili organske kiseline po molekulu baze, kao što su dva molekula hlorovodonične kiseline po molekulu jedinjenja. Kao još jedan primer, so može da sadrži manje od jednog molekula neorganske ili organske kiseline po molekulu baze, kao što su dva molekula jedinjenja po molekulu vinske kiseline.
[0064] Izrazi "nosač" i "farmaceutski prihvatljiv nosač" kako se ovde koriste odnose se na razblaživač, adjuvans, ekscipijens ili vehikulum sa kojim se jedinjenje primenjuje ili formuliše za primenu. Neograničavajući primeri takvih farmaceutski prihvatljivih nosača uključuju tečnosti, kao što su voda, fiziološki rastvor i ulja; i čvrste materije, kao što je guma bagrema, želatin, skrobna pasta, talk, keratin, koloidni silicijum dioksid, urea i slično. Pored toga, mogu se koristiti pomoćna sredstva, sredstva za stabilizaciju, zgušnjavanje, podmazivanje, arome i boje. Drugi primeri pogodnih farmaceutskih nosača su opisani u Remington's Pharmaceutical Sciences by E.W. Martin.
[0065] Kako se ovde koristi, "inhibirati" ili "inhibirati" znači smanjiti za objektivno merljivu količinu ili stepen u poređenju sa kontrolom. U jednom aspektu, inhibirajuća ili inhibirajuća sredstva smanjuju za najmanje statistički značajnu količinu u poređenju sa kontrolom. U jednom aspektu, inhibirajuća ili inhibirajuća sredstva smanjuju se za najmanje 5 procenata u poređenju sa kontrolom. U različitim pojedinačnim primerima izvođenja, sredstva inhibicije ili inhibicije smanjuju se za najmanje 10, 15, 20, 25, 30, 33, 40, 50, 60, 67, 70, 75, 80, 90, 95 ili 99 procenata u poređenju sa kontrolom.
[0066] Kako se ovde koristi, termini "lečenje" i "lečenje" odnose se na izvođenje intervencije koja rezultira (a) sprečavanjem pojave stanja ili bolesti kod subjekta koji može biti izložen riziku od razvoja ili predisponiran da ima to stanje. ili bolest, ali još uvek nije dijagnostikovana; (b) inhibiranje stanja ili bolesti, na primer, usporavanje ili zaustavljanje njegovog razvoja ili progresije; ili (c) ublažavanje ili poboljšanje stanja ili bolesti, npr. izazivanje regresije stanja ili bolesti. U jednom aspektu termini "lečenje" i "lečenje" odnose se na izvođenje intervencije koja rezultira (a) inhibiranjem stanja ili bolesti, npr. usporavanjem ili zaustavljanjem njegovog razvoja; ili (b) ublažavanje ili poboljšanje stanja ili bolesti, npr. izazivanje regresije stanja ili bolesti.
[0067] Kako se ovde koristi, "subjekat" se odnosi na živu životinju. U različitim primerima izvođenja, subjekt je sisar. U različitim primerima izvođenja, subjekt je sisar koji nije čovek, uključujući, bez ograničenja, miša, pacova, hrčka, zamorca, zeca, ovcu, kozu, mačku, psa, svinju, konja, kravu ili primata koji nije čovek. U nekim primerima izvođenja, subjekt je čovek.
[0068] Kako se ovde koristi, "davanje" ima svoje uobičajeno značenje i obuhvata primenu na bilo koji pogodan način primene, uključujući, bez ograničenja, intravensku, intramuskularnu, intraperitonealnu, subkutanu, direktnu injekciju, mukoznu, inhalaciju, oralnu i lokalnu.
[0069] Kako se ovde koristi, fraza "efikasna količina" se odnosi na bilo koju količinu koja je dovoljna za postizanje željenog biološkog efekta. "Terapeutski efikasna količina" je količina koja je dovoljna da se postigne željeni terapeutski efekat, na primer, za lečenje ishemijskereperfuzijske povrede.
[0070] Jedinjenja prema pronalasku i njihove soli mogu se kombinovati sa drugim terapeutskim agensima. Jedinjenja prema pronalasku i drugi terapeutski agensi mogu se davati istovremeno ili uzastopno. Kada se drugi terapeutski agensi daju istovremeno, oni se mogu primeniti u istim ili odvojenim formulacijama, ali se primenjuju uglavnom istovremeno. Ostali terapeutski agensi se daju uzastopno jedno sa drugim i sa jedinjenjima pronalaska, kada je primena drugih terapeutskih agenasa i jedinjenja prema pronalasku vremenski razdvojena. Vremenski razmak između primene ovih jedinjenja može biti pitanje minuta ili može biti duži.
Farmaceutske kompozicije, rute primene i doziranje
[0071] U nekim primerima izvođenja, pronalazak je usmeren na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje prema pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija sadrži veći broj jedinjenja prema pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0072] U nekim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija prema pronalasku dalje sadrži najmanje jedan dodatan farmaceutski aktivan agens koji nije jedinjenje prema pronalasku. Najmanje jedan dodatan farmaceutski aktivan agens može da bude agens koji je od koristi u lečenju ishemijsko-reperfuzionog oštećenja.
[0073] Farmaceutska kompozicija prema pronalasku može da se priprema kombinovanjem jednog ili više jedinjenja prema pronalasku sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i, opciono, jednim ili više dodatnih farmaceutski aktivnih agenasa.
[0074] Kao što je gore navedeno, "efikasna količina" se odnosi na bilo koju količinu koja je dovoljna za postizanje željenog biološkog efekta. U kombinaciji sa ovde navedenim učenjima, izborom između različitih aktivnih jedinjenja i faktora merenja kao što su potencija, relativna bioraspoloživost, telesna težina pacijenta, ozbiljnost neželjenih nuspojava i način primene, može se planirati efikasan profilaktički ili terapeutski režim lečenja koji ne izaziva značajnu neželjenu toksičnost, a ipak je efikasan u lečenju određenog subjekta. Efektivna količina za bilo koju posebnu primenu može da varira u zavisnosti od faktora kao što su bolest ili stanje koje se leči, određeno jedinjenje pronalaska koje se primenjuje, veličina subjekta ili ozbiljnost bolesti ili stanja. Stručnjak u ovoj oblasti može empirijski odrediti efikasnu količinu određenog jedinjenja
2
pronalaska i/ili drugog terapeutskog agensa bez potrebe za nepotrebnim eksperimentisanjem. Može se koristiti maksimalna doza, odnosno najveća bezbedna doza prema nekoj medicinskoj proceni. Višestruke doze dnevno se mogu razmatrati da bi se postigli odgovarajući sistemski nivoi jedinjenja. Odgovarajući sistemski nivoi se mogu odrediti, na primer, merenjem maksimuma ili trajnog nivoa leka u plazmi kod pacijenta. "Doza" i "doziranje" se ovde koriste naizmenično.
[0075] U određenim primerima izvođenja, intravenska primena jedinjenja može tipično da bude od 0,1 mg/kg/dan do 20 mg/kg/dan. U jednom aspektu, intravenska primena jedinjenja može tipično biti od 0,1 mg/kg/dan do 2 mg/kg/dan. U jednom aspektu, intravenska primena jedinjenja može tipično biti od 0,5 mg/kg/dan do 5 mg/kg/dan. U jednom aspektu, intravenska primena jedinjenja može tipično biti od 1 mg/kg/dan do 20 mg/kg/dan. U jednom aspektu, intravenska primena jedinjenja može tipično biti od 1 mg/kg/dan do 10 mg/kg/dan.
[0076] Generalno, dnevne oralne doze jedinjenja biće, za ljude, od oko 0,01 miligrama/kg dnevno do 1000 miligrama/kg dnevno. Očekuje se da će oralne doze u rasponu od 0,5 do 50 miligrama/kg, u jednoj ili više primena dnevno, dati terapeutske rezultate. Doziranje se može prilagoditi na odgovarajući način kako bi se postigli željeni nivoi leka, lokalni ili sistemski, u zavisnosti od načina primene. Na primer, očekuje se da će intravenska primena biti od jednog reda do nekoliko redova veličine niža dnevna doza. U slučaju da je odgovor kod subjekta nedovoljan pri takvim dozama, mogu se primeniti čak i veće doze (ili efektivne veće doze drugačijim, lokalizovanijim putem isporuke) u meri u kojoj to tolerancija pacijenta dozvoljava. Predviđeno je davanje više doza dnevno za postizanje odgovarajućih sistemskih nivoa jedinjenja.
[0077] Za bilo koje jedinjenje koje je ovde opisano, terapeutski efikasna količina može inicijalno da se odredi na osnovu životinjskih modela. Terapeutski efikasna doza takođe može da se odrediti iz podataka za ljude, za jedinjenja koja su testirana na ljudima i za jedinjenja za koja je poznato da pokazuju slične farmakološke aktivnosti, kao što su drugi srodni aktivni agensi. Za parenteralnu primenu mogu da budu potrebne veće doze. Primenjena doza može da se podesi na osnovu relativne bioraspoloživosti i potencije primenjenog jedinjenja. Podešavanje doze u cilju postizanja maksimalne efikasnosti na osnovu prethodno u tekstu opisanih postupaka i drugih postupaka koji su dobro poznati u tehnici je u okviru mogućnosti prosečnog stručnjaka u oblasti.
[0078] Formulacije pronalaska mogu se davati u farmaceutski prihvatljivim rastvorima, koji mogu rutinski da sadrže farmaceutski prihvatljive koncentracije soli, pufera, konzervansa, kompatibilnih nosača, adjuvansa, i opciono drugih terapeutskih sastojaka.
[0079] Za upotrebu u terapiji, efikasna količina jedinjenje se može primeniti na subjekta na bilo koji način koji isporučuje jedinjenje na željenu površinu. Davanje farmaceutske kompozicije može da se postigne na bilo koji način poznat stručnjaku. Putevi primene uključuju, ali nisu
2
ograničeni na, intravensku, intramuskularnu, intraperitonealnu, intravezikalnu (mokraćna bešika), oralnu, subkutanu, direktnu injekciju (na primer, u tumor ili apsces), mukoznu (npr. lokalno u oko), inhalaciju, tj. aktuelno.
[0080] Za intravenske i druge parenteralne puteve primene, jedinjenje pronalaska može biti formulisano kao liofilizovani preparat, kao liofilizovani preparat aktivnog jedinjenja interkalisanog ili inkapsuliranog lipozoma, kao lipidni kompleks u vodenoj suspenziji, ili kao kompleks soli. Liofilizovane formulacije se generalno rekonstituišu u odgovarajućem vodenom rastvoru, na primer, u sterilnoj vodi ili fiziološkom rastvoru, neposredno pre primene.
[0081] Za oralnu primenu, jedinjenja mogu lako da se formulišu kombinovanjem aktivnog(ih) jedinjenje(a) sa farmaceutski prihvatljivim nosačima koji su dobro poznati u tehnici. Takvi nosači omogućavaju da se jedinjenja pronalaska formulišu kao tablete, pilule, dražeje, kapsule, tečnosti, gelovi, sirupi, suspenzije i slično, za oralnu ingestiju od strane subjekta koji se leči. Farmaceutski preparati za oralnu upotrebu mogu da se dobijaju kao čvrsti ekscipijens, opciono mlevenjem dobijene smeše, preradom obradom smeše granula, nakon dodavanja odgovarajućih pomoćnih supstanci, po želji, kako bi se dobile tablete ili jezgra dražeja. Pogodni ekscipijensi su, posebno, punioci kao što su šećeri, uključujući laktozu, saharozu, manitol ili sorbitol; preparati celuloze kao što su, na primer, kukuruzni skrob, pšenični skrob, pirinčani skrob, krompirov skrob, želatin, tragakant gume, metil celuloza, hidroksipropilmetil-celuloza, natrijum karboksimetilceluloza, i/ili polivinilpirolidon (PVP). Po želji mogu da se dodaju sredstva za raspadanje, kao što je umreženi polivinil pirolidon, agar ili alginska kiselina, ili njihova so kao što je natrijum alginat. Opciono, oralne formulacije takođe mogu da se formulišu u fiziološkom rastvoru ili puferima, npr., EDTA za neutralizaciju unutrašnjih kiselih stanja, ili mogu da se primenjuju sasvim bez nosača.
[0082] Takođe se posebno razmatraju oralni dozni oblici gornje komponente ili komponenti. Komponenta ili komponente mogu biti hemijski modifikovane tako da oralna primena derivata bude efikasna. Generalno, razmatrana hemijska modifikacija je vezivanje najmanje jednog dela za sam molekul komponente, gde pomenuti deo dozvoljava (a) inhibiciju kisele hidrolize; i (b) unošenje u krvotok iz želuca ili creva. Takođe je poželjno povećanje ukupne stabilnosti komponente ili komponenti i povećanje vremena cirkulacije u telu. Primeri takvih grupa uključuju: polietilen glikol, kopolimere etilen glikola i propilen glikola, karboksimetil celulozu, dekstran, polivinil alkohol, polivinil pirolidon i poliprolin. Abuchovski i Davis, "Soluble Polimer-Enzime Adducts", In: Enzimes as Drugs, Hocenberg i Roberts, ur., Vilei-Interscience, Nev Iork, N.I., str. 367-383 (1981); Nevmark et al., J Appl Biochem 4:185-9 (1982). Drugi polimeri koji se mogu koristiti su poli-1,3-dioksolan i poli-1,3,6-tioksokan. Za farmaceutsku upotrebu, kao što je gore navedeno, polietilen glikol delovi su pogodni.
2
[0083] Za komponentu (ili derivat) mesto oslobađanja može biti stomak, tanko crevo (duodenum, jejunum ili ileum) ili debelo crevo. Stručnjak u ovoj oblasti tehnike ima dostupne formulacije koje se neće rastvoriti u želucu, ali će osloboditi materijal u duodenumu ili negde drugde u crevima. Poželjno, oslobađanje će izbeći štetne efekte okoline želuca, bilo zaštitom jedinjenja prema pronalasku (ili derivata) ili oslobađanjem biološki aktivnog materijala izvan okoline želuca, kao što je u crevima.
[0084] Da bi se obezbedila potpuna otpornost na želudac, presvlaka nepropusna do najmanje pH 5,0 je neophodna. Primeri češćih inertnih sastojaka koji se koriste kao enteričke obloge su celuloza acetat trimelitat (CAT), hidroksipropilmetilcelulozni ftalat (HPMCP), HPMCP 50, HPMCP 55, polivinil acetat ftalat (PVAP), Eudragit L30D, Akuateric, phthulose cellate ), Eudragit L, Eudragit S i šelak. Ovi premazi se mogu koristiti kao mešani filmovi.
[0085] Premaz ili mešavina obloga se takođe mogu koristiti na tabletama, koje nisu namenjene za zaštitu od stomaka. Ovo može uključivati prevlake od šećera ili obloge koje olakšavaju gutanje tablete. Kapsule se mogu sastojati od tvrde ljuske (kao što je želatin) za isporuku suvog terapeutskog sredstva (npr. prah); za tečne oblike može se koristiti mekana želatinska školjka. Materijal ljuske kesica može biti debeli skrob ili drugi jestivi papir. Za pilule, pastile, oblikovane tablete ili triturate tableta, mogu se koristiti tehnike vlažnog masiranja.
[0086] Terapeut se može uključiti u formulaciju kao fine multipartikule u obliku granula ili peleta veličine čestica oko 1 mm. Formulacija materijala za primenu u kapsulama takođe može biti u obliku praha, lagano kompresovanih čepova ili čak kao tablete. Terapeutski lek se može pripremiti kompresijom.
[0087] Boje i arome mogu biti uključene. Na primer, jedinjenje pronalaska (ili derivat) može biti formulisano (kao što je inkapsulacija lipozoma ili mikrosfere) i zatim dalje sadržano u jestivom proizvodu, kao što je rashlađeni napitak koji sadrži boje i arome.
[0088] Može se razblažiti ili povećati zapremina terapeutika sa inertnim materijalom. Ovi razblaživači mogu uključivati ugljene hidrate, posebno manitol, a-laktozu, anhidrovanu laktozu, celulozu, saharozu, modifikovane dekstrane i skrob. Određene neorganske soli se takođe mogu koristiti kao punioci uključujući kalcijum trifosfat, magnezijum karbonat i natrijum hlorid. Neki komercijalno dostupni razblaživači su Fast-Flo, Emdek, STA-Rk 1500, Emcompress i Avicell.
[0089] Dezintegranti mogu biti uključeni u formulaciju terapeutika u čvrsti dozni oblik. Materijali koji se koriste kao dezintegrati uključuju, ali nisu ograničeni na skrob, uključujući komercijalni dezintegrant na bazi skroba, Ekplotab. Mogu se koristiti natrijum skrob glikolat, amberlit, natrijum karboksimetilceluloza, ultramilopektin, natrijum alginat, želatin, kora pomoriže, kisela karboksimetil celuloza, prirodni sunđer i bentonit. Drugi oblik dezintegranata su nerastvorljive katjonske izmenjivačke smole. Gume u prahu se mogu koristiti kao
2
dezintegranti i kao veziva, a to mogu uključivati gume u prahu kao što su agar, karaia ili tragakant. Alginska kiselina i njena natrijumova so su takođe korisne kao dezintegranti.
[0090] Veziva se mogu koristiti za držanje terapeutskog agensa zajedno da formiraju tvrdu tabletu i uključuju materijale od prirodnih proizvoda kao što su bagrem, tragakant, skrob i želatin. Ostali uključuju metil celulozu (MC), etil celulozu (EC) i karboksimetil celulozu (CMC). Polivinil pirolidon (PVP) i hidroksipropilmetil celuloza (HPMC) mogu se koristiti u alkoholnim rastvorima za granulaciju terapeutika.
[0091] Sredstvo protiv trenja može biti uključeno u formulaciju terapeutika da bi se sprečilo lepljenje tokom procesa formulacije. Lubrikanti se mogu koristiti kao sloj između terapeutskog i zida kalupa, a oni mogu uključivati, ali nisu ograničeni na; stearinska kiselina uključujući njene magnezijumove i kalcijumove soli, politetrafluoroetilen (PTFE), tečni parafin, biljna ulja i voskove. Mogu se koristiti i rastvorljiva maziva kao što su natrijum lauril sulfat, magnezijum lauril sulfat, polietilen glikol različite molekulske težine, Carbovak 4000 i 6000.
[0092] Mogu se dodati sredstva za klizanje koja bi mogla da poboljšaju svojstva tečenja leka tokom formulacije i da pomognu pri preuređivanju tokom kompresije. Sredstva za klizanje mogu uključivati skrob, talk, pirogeni silicijum dioksid i hidratisani silikoaluminat.
[0093] Da bi se olakšalo rastvaranje terapeutika u vodenom okruženju, surfaktant se može dodati kao sredstvo za vlaženje. Surfaktanti mogu uključivati anjonske deterdžente kao što su natrijum lauril sulfat, dioktil natrijum sulfosukcinat i dioktil natrijum sulfonat. Katjonski deterdženti koji se mogu koristiti i mogu uključivati benzalkonijum hlorid i benzetonijum hlorid. Potencijalni nejonski deterdženti koji bi mogli biti uključeni u formulaciju kao surfaktanti uključuju lauromakrogol 400, polioksil 40 stearat, polioksietilen hidrogenizovano ricinusovo ulje 10, 50 i 60, glicerol monostearat, polisorbat 40, 60, 65 i 80 masti celuloza i karboksimetil celuloza. Ovi surfaktanti mogu biti prisutni u formulaciji jedinjenja prema pronalasku ili derivata bilo sami ili kao smeša u različitim odnosima.
[0094] Farmaceutski preparati koji se mogu koristiti oralno obuhvataju kapsule napravljene od želatina, kao i meke, zatvorene kapsule napravljene od želatina i plastifikatora, kao što su glicerol ili sorbitol. Kapsule za pričvršćivanje mogu sadržati aktivne sastojke u mešavini sa punilom kao što je laktoza, vezivima kao što su skrob, i/ili lubrikantima kao što su talk ili magnezijum stearat i, opciono, stabilizatori. U mekim kapsulama, aktivna jedinjenja mogu biti rastvorena ili suspendovana u odgovarajućim tečnostima, kao što su masna ulja, tečni parafin ili tečni polietilen glikoli. Pored toga, mogu se dodati stabilizatori. Takođe se mogu koristiti mikrosfere formulisane za oralnu primenu. Takve mikrosfere su dobro definisane u tehnici. Sve formulacije za oralnu primenu treba da budu u dozama pogodnim za takvu primenu.
[0095] Za bukalnu primenu, kompozicije mogu biti u obliku tableta ili pastila formulisanih na
2
konvencionalni način.
[0096] Za lokalnu primenu, jedinjenje može biti formulisano kao rastvori, gelovi, masti, kreme, suspenzije, itd., kao što je dobro poznato u tehnici. Sistemske formulacije obuhvataju one dizajnirane za davanje injekcijom, na primer, subkutanu, intravensku, intramuskularnu, intratekalnu ili intraperitonealnu injekciju, kao i one dizajnirane za transdermalnu, transmukozalnu oralnu ili plućnu primenu.
[0097] Za primenu inhalacijom, jedinjenja za upotrebu u skladu sa ovim pronalaskom mogu se prikladno isporučiti u obliku aerosol spreja iz pakovanja pod pritiskom ili nebulizatora, uz upotrebu odgovarajućeg potisnog gasa, npr. ili drugi odgovarajući gas. U slučaju aerosola pod pritiskom, jedinica doze se može odrediti obezbeđivanjem ventila za isporuku odmerene količine. Kapsule i kertridži, na primer, želatina za upotrebu u inhalatoru ili insuflatoru mogu biti formulisani tako da sadrže mešavinu praha jedinjenja i pogodne praškaste baze kao što je laktoza ili skrob.
[0098] Ovde je takođe razmatrana isporuka ovde prikazanih jedinjenja (ili njihovih soli) u pluća. Jedinjenje se isporučuje u pluća sisara dok se udiše i prelazi preko epitelne obloge pluća u krvotok. Drugi izveštaji o inhalacionim molekulima uključuju Adjei et al., Pharm Res 7:565-569 (1990); Adjei et al., Int J Pharmaceutics 63:135-144 (1990) (leuprolid acetat); Braquet et al., J Cardiovasc Pharmacol 13(suppl. 5):143-146 (1989) (endotelin-1); Hubbard et al., AnnalIntMed 3:206-212 (1989) (α1-antitripsin); Smith et al., 1989, J Clin Invest 84:1145-1146 (a-1-proteinase); Oswein et al., 1990, "Aerosolization of Proteins", Proceedings of Symposium on Respiratory Drug Delivery II, Keystone, Colorado, March, (rekombinantni humani hormon rasta); Debs et al., 1988, J Immunol 140:3482-3488 (interferon-gama i alfa faktor nekroze tumora) i Platz et al., U.S. Pat. No.5,284,656 (faktor stimulacije kolonije granulocita;) Postupak i kompozicija za isporuku lekova u pluća sa ciljem sistemskog delovanja su opisani u SAD pat. br. 5,451,569 objavljenom 19. septembra 1995. autora Wong et al.
[0099] Predviđeno je da se prilikom primene ovog pronalaska koristi širok spektar mehaničkih uređaja dizajniranih za isporuku terapeutskih proizvoda u pluća, uključujući, ali ne i ograničeno na nebulizatore, inhalatore sa odmerenom dozom i inhalatore za prašak, koji su svi poznati stručnjacima u oblasti.
[0100] Neki specifični primeri komercijalno dostupnih uređaja pogodnih za primenu ovog pronalaska su nebulizator Ultravent, proizvođača Mallinckrodt, Inc., St. Louis, Mo.; nebulizator Acorn II, proizvođača Marquest Medical Products, Englewood, Colo.; inhalator sa odmerenom dozom Ventolin, proizvođača Glaxo Inc., Research Triangle Park, Severna Karolina; i inhalator praha Spinhaler, proizvođača Fisons Corp., Bedford, Mass.
[0101] Svi takvi uređaji zahtevaju upotrebu formulacija pogodnih za otpuštanje jedinjenja prema pronalasku. Tipično, svaka formulacija je specifična za tip uređaja koji se koristi i može da uključuje upotrebu odgovarajućeg potisnog materijala, pored uobičajenih razblaživača, adjuvanasa i/ili nosača korisnih u terapiji. Takođe, razmatra se upotreba lipozoma, mikrokapsula ili mikrosfera, inkluzijskih komplekasa ili drugih tipova nosača. Hemijski modifikovano jedinjenje prema pronalasku se takođe može pripremiti u različitim formulacijama u zavisnosti od tipa hemijske modifikacije ili tipa uređaja koji se koristi.
[0102] Formulacije pogodne za upotrebu sa nebulizatorom, bilo mlaznim ili ultrazvučnim, obično će sadržati jedinjenje prema pronalasku (ili derivat) rastvoreno u vodi u koncentraciji od oko 0.1 do 25 mg biološki aktivnog jedinjenja prema pronalasku po mL rastvora. Formulacija takođe može da sadrži pufer i jednostavan šećer (npr. za stabilizaciju inhibitora i regulaciju osmotskog pritiska). Formulacija nebulizatora može takođe da sadrži surfaktant, kako bi se smanjila ili da sprečila površinski indukovana agregacija jedinjenja prema pronalasku do koje dolazi usled atomizacije rastvora prilikom formiranja aerosola.
[0103] Formulacije za upotrebu sa inhalatorom sa odmerenom dozom generalno će sadržati fino podeljen prah koji sadrži jedinjenje pronalaska (ili derivat) suspendovano u pogonskom gasu uz pomoć surfaktanta. Pogonski gas može biti bilo koji konvencionalni materijal koji se koristi za ovu svrhu, kao što je hlorofluorougljenik, hidrohlorofluorougljenik, hidrofluorougljenik ili ugljovodonik, uključujući trihlorofluorometan, dihlorodifluorometan, dihlorotetrafluoroetanol i 1,1,1,2-tetrafluoroetanol i njihovu kombinaciju. Pogodni surfaktanti uključuju sorbitan trioleat i sojin lecitin. Oleinska kiselina takođe može biti korisna kao surfaktant.
[0104] Formulacije za izdavanje iz uređaja za inhalaciju praha će sadržati fino usitnjeni suvi prah koji sadrži jedinjenje pronalaska (ili derivat) i mogu takođe uključivati sredstvo za povećanje zapremine, kao što je laktoza, sorbitol, saharoza ili manitol u količinama koje olakšavaju raspršivanje praha iz uređaja, na primer, 50 do 90% mase formulacije. Jedinjenje pronalaska (ili derivat) bi poželjno trebalo da bude pripremljeno u obliku čestica sa prosečnom veličinom čestica manjom od 10 mikrometara (µm), najpoželjnije 0,5 do 5 µm, za najefikasniju isporuku u duboka pluća.
[0105] Takođe se razmatra nazalna isporuka farmaceutske kompozicije ovog pronalaska. Nazalna isporuka omogućava prolaz farmaceutske kompozicije ovog pronalaska u krvotok direktno nakon primene terapeutskog proizvoda u nos, bez potrebe za depozicijom proizvoda u plućima. Formulacije za nazalnu isporuku uključuju one sa dekstranom ili ciklodekstranom.
[0106] Za nazalnu primenu, korisna naprava je mala, tvrda boca na koju je pričvršćen raspršivač sa odmerenom dozom. U jednom aspektu, odmerena doza se isporučuje uvlačenjem farmaceutske kompozicije rastvora ovog pronalaska u komoru definisane zapremine, koja komora ima otvor dimenzionisan za aerosolizaciju i formulaciju aerosola formiranjem spreja
1
kada se tečnost u komori kompresuje. Komora je komprimovana da bi se primenila farmaceutska kompozicija ovog pronalaska. U specifičnom izvođenju, komora je klipni raspored. Takvi uređaji su komercijalno dostupni.
[0107] Alternativno, koristi se plastična boca za ceđenje sa otvorom ili otvorom koji je dimenzionisan da aerosolizira formulaciju aerosola formiranjem spreja kada se stisne. Otvor se obično nalazi na vrhu bočice, a vrh je generalno sužen da bi se delimično uklopio u nazalne prolaze radi efikasnog davanja formulacije aerosola. Poželjno, nazalni inhalator će obezbediti odmerenu količinu formulacije aerosola, za primenu izmerene doze leka.
[0108] Jedinjenja, kada je poželjno da se isporučuju sistemski, mogu biti formulisana za parenteralnu primenu injekcijom, npr. bolusnom injekcijom ili kontinuiranom infuzijom. Formulacije za injekcije mogu biti predstavljene u obliku jedinične doze, na primer, u ampulama ili u kontejnerima za više doza, sa dodatkom konzervansa. Kompozicije mogu imati takve oblike kao što su suspenzije, rastvori ili emulzije u uljnim ili vodenim nosačima, i mogu sadržati sredstva za formulaciju kao što su agensi za suspendovanje, stabilizaciju i/ili disperziju.
[0109] Farmaceutske formulacije za parenteralnu primenu uključuju vodene rastvore aktivnih jedinjenja u obliku rastvorljivom u vodi. Dodatno, suspenzije aktivnih jedinjenja se mogu pripremiti kao odgovarajuće uljne suspenzije za injekcije. Pogodni lipofilni rastvarači ili nosači uključuju masna ulja kao što je susamovo ulje, ili sintetičke estre masnih kiselina, kao što su etil oleat ili trigliceridi, ili lipozomi. Vodene suspenzije za injekcije mogu da sadrže supstance koje povećavaju viskozitet suspenzije, kao što su natrijum karboksimetilceluloza, sorbitol ili dekstran. Opciono, suspenzija može takođe da sadrži odgovarajuće stabilizatore ili agense koji povećavaju rastvorljivost jedinjenja da bi se omogućilo pripremanje visoko koncentrovanih rastvora.
[0110] Alternativno, aktivna jedinjenja mogu biti u obliku praha za konstituisanje sa pogodnim vehikulumom, npr., sterilnom vodom bez pirogena, pre upotrebe.
[0111] Jedinjenja se takođe mogu formulisati u rektalnim ili vaginalnim kompozicijama kao što su supozitorije ili retencioni klistiri, na primer, koji sadrže konvencionalne baze za supozitorije kao što su kakao puter ili drugi gliceridi.
[0112] Pored gore opisanih formulacija, jedinjenje se takođe može formulisati kao depo preparat. Takve formulacije dugog dejstva mogu se formulisati sa pogodnim polimernim ili hidrofobnim materijalima (na primer kao emulzija u prihvatljivom ulju) ili smolama za izmene jona, ili kao slabo rastvorljivi derivati, na primer, kao slabo rastvorljiva so.
[0113] Farmaceutske kompozicije takođe mogu da sadrže pogodne nosače ili ekscipijente u čvrstoj ili gel fazi. Primeri takvih nosača ili ekscipijenata uključuju ali nisu ograničeni na kalcijum karbonat, kalcijum fosfat, razne šećere, skrobove, derivate celuloze, želatin i polimere kao što su polietilen glikoli.
2
[0114] Pogodni tečni ili čvrsti farmaceutski preparati su, na primer, vodeni ili fiziološki rastvori za inhalaciju, mikrokapsulirani, enkohleisani, obloženi mikroskopskim zlatnim česticama, sadržani u liposomima, raspršeni, aerosoli, peleti za implantaciju u kožu ili osušeni na oštrom predmetu da se zagrebe u kožu. Farmaceutske kompozicije takođe uključuju granule, praškove, tablete, obložene tablete, (mikro)kapsule, supozitorije, sirupe, emulzije, suspenzije, kreme, kapi ili preparate sa produženim oslobađanjem aktivnih jedinjenja, u čijem preparatu su ekscipijenti i aditivi i/ili pomoćna sredstva kao što su kao dezintegranti, veziva, sredstva za oblaganje, sredstva za bubrenje, lubrikanti, arome, zaslađivači ili solubilizatori se obično koriste kao što je gore opisano. Farmaceutske kompozicije su pogodne za upotrebu u različitim sistemima za isporuku lekova. Za kratak pregled metoda za isporuku lekova, videti Langer R, Science 249:1527-33 (1990).
[0115] Jedinjenje pronalaska i opciono drugi terapeutici mogu se davati per se (u čistom stanju) ili u obliku farmaceutski prihvatljive soli. Kada se koriste u medicini, soli treba da budu farmaceutski prihvatljive, ali nefarmaceutski prihvatljive soli mogu se prikladno koristiti za pripremu njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. Takve soli uključuju, ali nisu ograničene na, one pripremljene od sledećih kiselina: hlorovodonične, bromovodonične, sumporne, azotne, fosforne, maleinske, sirćetne, salicilne, p-toluen sulfonske, vinske, limunske, metan sulfonske, mravlja, malonske, jantarne , naftalen-2-sulfonska i benzen sulfonska. Takođe, takve soli se mogu pripremiti kao soli alkalnih metala ili zemnoalkalnih, kao što su natrijumove, kalijumove ili kalcijumove soli grupe karboksilne kiseline.
[0116] Pogodna puferska sredstva uključuju: sirćetnu kiselinu i so (1-2% v/v); limunska kiselina i so (1-3% v/v); borna kiselina i so (0,5-2,5% v/v); i fosforna kiselina i so (0,8-2% v/v). Pogodni konzervansi uključuju benzalkonijum hlorid (0,003-0,03% v/v); hlorobutanol (0,3-0,9% v/v); parabeni (0,01-0,25% v/v) i timerosal (0,004-0,02% v/v).
[0117] Farmaceutske kompozicije pronalaska sadrže efikasnu količinu jedinjenja kao što je ovde opisano i opciono terapeutske agense uključene u farmaceutski prihvatljiv nosač. Izraz "farmaceutski prihvatljiv nosač" označava jedan ili više kompatibilnih čvrstih ili tečnih punila, razblaživača ili supstanci za kapsuliranje koje su pogodne za davanje ljudima ili drugim kičmenjacima. Termin "nosač" označava organski ili neorganski sastojak, prirodan ili sintetički, sa kojim je aktivni sastojak kombinovan da bi se olakšala primena. Komponente farmaceutskih kompozicija takođe mogu da se mešaju sa jedinjenjima iz ovog pronalaska, i jedna sa drugom, na način da ne postoji interakcija koja bi značajno narušila željenu farmaceutsku efikasnost.
[0118] Terapeutski agens(i), uključujući specifično, ali ne ograničavajući se na jedinjenje pronalaska, može se obezbediti u česticama. Čestice kako se ovde koriste označavaju nanočestice ili mikročestice (ili u nekim slučajevima veće čestice) koje se mogu sastojati u celini ili delimično od jedinjenja prema pronalasku ili drugog terapeutskog sredstva(a) kao što je ovde opisano. Čestice mogu sadržati terapeutski agens(e) u jezgru okruženom omotačem, uključujući, ali ne ograničavajući se na, enterički omotač. Terapeutski agens(i) takođe mogu biti dispergovani u česticama. Terapeutski agens(i) takođe mogu biti adsorbovani u čestice. Čestice mogu biti bilo koje kinetike oslobađanja, uključujući oslobađanje nultog reda, oslobađanje prvog reda, oslobađanje drugog reda, odloženo oslobađanje, produženo oslobađanje, trenutno oslobađanje i bilo koju njihovu kombinaciju, itd. Čestica može uključivati, pored terapeutski agens(a), bilo koji od onih materijala koji se rutinski koriste u farmaciji i medicini, uključujući, ali ne ograničavajući se na, erodibilni, neerodibilni, biorazgradivi ili biorazgradivi materijali ili njihove kombinacije. Čestice mogu biti mikrokapsule koje sadrže jedinjenje pronalaska u rastvoru ili u polučvrstom stanju. Čestice mogu biti gotovo bilo kog oblika.
[0119] I ne-biorazgradivi i biorazgradivi polimerni materijali mogu se koristiti u proizvodnji čestica za isporuku terapeutskog(ih) agensa(a). Takvi polimeri mogu biti prirodni ili sintetički polimeri. Polimer se bira na osnovu vremenskog perioda tokom kojeg se želi oslobađanje. Bioadhezivni polimeri od posebnog interesa uključuju bioerodibilne hidrogelove opisane u Savhnei H S et al. (1993) Macromolecules 26:581-7, čija su učenja ovde inkorporirana. To uključuje polihijaluronske kiseline, kazein, želatin, glutin, polianhidride, poliakrilnu kiselinu, alginat, hitozan, poli(metil metakrilate), poli(etil metakrilate), poli(butilmetakrilat), poli(izobutil metakrilat), poli(akrilakrilat), poli(heksil) izodecil metakrilat), poli(lauril metakrilat), poli(fenil metakrilat), poli(metil akrilat), poli(izopropil akrilat), poli(izobutil akrilat) i poli(oktadecil akrilat).
[0120] Terapeutski agensi mogu biti sadržani u sistemima sa kontrolisanim oslobađanjem. Termin "kontrolisano oslobađanje" je namenjen da se odnosi na bilo koju formulaciju koja sadrži lek u kojoj se kontrolišu način i profil oslobađanja leka iz formulacije. Ovo se odnosi na formulacije sa trenutnim kao i sa ne-trenutačnim oslobađanjem, sa formulacijama sa netrenutnim oslobađanjem uključujući, ali ne ograničavajući se na formulacije sa produženim i odloženim oslobađanjem. Termin „odloženo oslobađanje“ (koji se takođe naziva „produženo oslobađanje“) se koristi u svom konvencionalnom smislu da se odnosi na formulaciju leka koja obezbeđuje postepeno oslobađanje leka tokom dužeg vremenskog perioda, i to poželjno, iako ne nužno , dovodi do suštinski konstantnog nivoa leka u krvi tokom dužeg vremenskog perioda. Termin "odloženo oslobađanje" se koristi u svom konvencionalnom smislu da se odnosi na formulaciju leka u kojoj postoji vremensko kašnjenje između primene formulacije i oslobađanja leka iz nje. „Odloženo oslobađanje“ može, ali ne mora da uključuje postepeno oslobađanje leka tokom dužeg vremenskog perioda, i stoga može, ali ne mora biti „odloženo oslobađanje“.
[0121] Upotreba implantata sa dugotrajnim produženim oslobađanjem može biti posebno
4
pogodna za lečenje hroničnih stanja. "Dugotrajno" oslobađanje, kako se ovde koristi, znači da je implantat konstruisan i uređen tako da isporučuje terapeutske nivoe aktivnog sastojka tokom najmanje 7 dana, a poželjno 30-60 dana. Implantati sa dugotrajnim produženim oslobađanjem su dobro poznati stručnjacima iz ove oblasti i uključuju neke od sistema za otpuštanje koji su opisani gore.
[0122] Neko sa uobičajenim veštinama u relevantnoj oblasti tehnike će razumeti da su druge pogodne modifikacije i adaptacije na kompozicije i metode opisane ovde lako očigledne iz opisa pronalaska koji je ovde sadržan u pogledu informacija poznatih običnom stručnjaku. , i može se napraviti bez odstupanja od obima pronalaska ili bilo koje njegove realizacije. Pošto smo sada detaljno opisali ovaj pronalazak, isti će biti jasnije shvaćen pozivanjem na sledeće primere, koji su ovde uključeni samo u svrhu ilustracije i nemaju nameru da ograničavaju pronalazak.
Postupci upotrebe
[0123] Ovaj pronalazak obezbeđuje tripeptidna jedinjenja koja nisu prirodna i koja su korisna za lečenje ili prevenciju ishemijsko-reperfuzionog oštećenja ili infarkta miokarda, ili povrede povezane sa infarktom miokarda.
[0124] Shodno tome, u nekim primerima izvođenja, pronalazak je usmeren na metod lečenja ili prevencije ishemijske-reperfuzione povrede, koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja formule (I), ovde opisanog, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. U određenim takvim primerima izvođenja, ishemijsko-reperfuziona povreda je srčana ishemija-reperfuzijska povreda. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje se primenjuje oralno, lokalno, sistemski, intravenozno, subkutano, intraperitonealno ili intramuskularno.
[0125] U drugim primerima izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje metod za lečenje ili prevenciju infarkta miokarda, koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Takve metode mogu sprečiti povredu srca nakon reperfuzije sprečavanjem inicijacije ili progresije infarkta. U nekim primerima izvođenja, jedinjenje se primenjuje oralno, lokalno, sistemski, intravenozno, subkutano, intraperitonealno ili intramuskularno
[0126] Ishemija je smanjenje ili smanjenje snabdevanja krvlju tkiva ili organa i ima mnogo različitih uzroka. Ishemija može biti lokalna, na primer, uzrokovana trombom ili embolijom, ili globalnija, na primer, usled niskog perfuzionog pritiska. Ishemijski događaj može dovesti do hipoksije (smanjenje kiseonika) i/ili anoksije (odsustvo kiseonika).
[0127] Ishemija u tkivu ili organu sisara je višestruko patološko stanje koje je uzrokovano deprivacijom kiseonika (hipoksija) i/ili deprivacijom glukoze (npr. supstrata). Nedostatak kiseonika i/ili glukoze u ćelijama tkiva ili organa dovodi do smanjenja ili potpunog gubitka kapaciteta za generisanje energije i posledičnog gubitka funkcije aktivnog transporta jona kroz ćelijske membrane. Deprivacija kiseonika i/ili glukoze takođe dovodi do patoloških promena u drugim ćelijskim membranama, uključujući prelaz permeabilnosti u mitohondrijalnim membranama. Pored toga, drugi molekuli, kao što su apoptotski proteini koji su normalno podeljeni u mitohondrije, mogu da iscure u citoplazmu i izazovu apoptotičku smrt ćelije. Duboka ishemija može dovesti do nekrotične smrti ćelija.
[0128] Ishemija ili hipoksija u određenom tkivu ili organu može biti uzrokovana gubitkom ili ozbiljnim smanjenjem dotoka krvi u tkivo ili organ. Gubitak ili ozbiljno smanjenje snabdevanja krvlju može, na primer, biti posledica tromboembolijskog moždanog udara, koronarne ateroskleroze ili periferne vaskularne bolesti. Tkivo zahvaćeno ishemijom ili hipoksijom je obično mišić, kao što su srčani, skeletni ili glatki mišići.
[0129] Organ pogođen ishemijom ili hipoksijom može biti bilo koji organ koji je podložan ishemiji ili hipoksiji. Na primer, ali ne kao ograničenje, ishemija ili hipoksija srčanog mišića je obično uzrokovana aterosklerotskim ili trombotičkim blokadama, koje dovode do smanjenja ili gubitka isporuke kiseonika u srčano tkivo putem dovoda srčane arterijske i kapilarne krvi. Takva srčana ishemija ili hipoksija može izazvati bol i nekrozu zahvaćenog srčanog mišića, i na kraju može dovesti do srčane insuficijencije.
[0130] Reperfuzija je obnavljanje protoka krvi u bilo koji organ ili tkivo u kome je protok krvi smanjen ili blokiran. Na primer, protok krvi se može vratiti u bilo koji organ ili tkivo zahvaćeno ishemijom. Obnavljanje krvotoka (reperfuzija) može se desiti bilo kojim metodom poznatim stručnjacima. Na primer, reperfuzija ishemijskog srčanog tkiva može nastati usled angioplastike, koronarne arterijske bajpas grafta ili upotrebe trombolitičkih lekova.
[0131] Povreda ishemije-reperfuzije je oštećenje ćelija ili tkiva uzrokovano kada se snabdevanje krvlju vrati u zahvaćeno područje nakon perioda ishemije. Nedostatak kiseonika i hranljivih materija tokom ishemije stvara stanje u kome obnavljanje cirkulacije dovodi do oštećenja tkiva. Kao primer, ali ne i kao ograničenje, oblici reperfuzionih povreda miokarda uključujući aritmije izazvane reperfuzijom, omamljivanje miokarda, mikrovaskularnu opstrukciju koja se manifestuje sporim koronarnim protokom krvi i smrtonosnu reperfuzionu povredu miokarda (tj. reperfuziona smrt te kardiomiodije). bili održivi na kraju indeksnog ishemijskog događaja). Studije su pokazale da smrtonosna reperfuziona povreda miokarda čini oko 50% konačne veličine infarkta miokarda.
[0132] U nekim primerima izvođenja, peptid se primenjuje oralno, intravenozno ili parenteralno.
[0133] U nekim primerima izvođenja, subjekt je čovek.
[0134] Neprirodno tripeptidno jedinjenje pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je acetatna, tartratna ili trifluoroacetatna so, može se davati subjektu za koga se sumnja ili već pati od ishemijske povrede u količini dovoljnoj da izlečiti ili bar delimično zaustaviti simptome bolesti, uključujući njene komplikacije i srednje patološke fenotipove u razvoju bolesti. Subjekti koji pate od ishemijske povrede mogu se identifikovati bilo kojim ili kombinacijom dijagnostičkih ili prognostičkih testova poznatih u tehnici. Na primer, ali ne i kao ograničenje, u nekim primerima izvođenja, ishemijska povreda se odnosi na ishemiju srca, ishemiju mozga, ishemiju bubrega, cerebralnu ishemiju, ishemiju creva, ishemiju jetre ili infarkt miokarda..
[0135] Kao primer, ali ne kao ograničenje, tipični simptomi srčane ishemije uključuju, ali nisu ograničeni na anginu (npr. bol u grudima i pritisak), kratak dah, palpitacije, slabost, vrtoglavicu, mučninu, znojenje, ubrzano otkucaji srca i umor.
[0136] U nekim primerima izvođenja, tretman subjekata kojima je dijagnostikovana srčana ishemija sa najmanje jednim peptidom koji je ovde otkriven, ublažava ili eliminiše jedan ili više od sledećih simptoma srčane ishemije: anginu (npr. bol u grudima i pritisak), kratak dah , palpitacije, slabost, vrtoglavica, mučnina, znojenje, ubrzan rad srca i umor.
[0137] Kao primer, ali ne kao ograničenje, tipični simptomi ishemije bubrega uključuju, ali nisu ograničeni na, uremiju (tj. visok nivo proteinskih nusproizvoda u krvi, kao što je, na primer, urea), akutne epizode dispneje (otežano ili teže disanje) uzrokovane iznenadnim nakupljanjem tečnosti u plućima, hipertenzija, bol u blizini bubrega, slabost, hipertenzija, mučnina, istorija bolova u nogama, korak koji odražava ugroženu cirkulaciju u nogama i modrice (zvuk ili šumovi koji se čuju stetoskopom) uzrokovani turbulentnim protokom krvi u arterijama mogu se otkriti u vratu (npr. udar na karotidnu arteriju), abdomenu (što može odražavati suženje bubrežne arterije) i preponama (bruh femoralne arterije).
[0138] U nekim primerima izvođenja, tretman subjekata sa dijagnozom bubrežne ishemije sa najmanje jednim peptidom koji je ovde otkriven, ublažava ili eliminiše jedan ili više od sledećih simptoma ishemije bubrega: uremija (tj. visoki nivoi nusproizvoda proteina u krvi, kao što je, na primer, urea), akutne epizode dispneje (otežano ili otežano disanje) uzrokovane iznenadnim nakupljanjem tečnosti u plućima, hipertenzija, bol u blizini bubrega, slabost, hipertenzija, mučnina, istorija bolova u nogama, korak koji odražava ugroženu cirkulaciju u nogama, a modrice (zvuk ili šum koji se čuje stetoskopom) uzrokovane turbulentnim protokom krvi u arterijama mogu se otkriti u vratu (npr., natezanje karotidne arterije), abdomenu (što može odražavati suženje bubrega arterija) i prepone (bruit femoralne arterije).
[0139] Kao primer, ali ne kao ograničenje, tipični simptomi cerebralne (ili moždane) ishemije uključuju, ali nisu ograničeni na, slepilo jednog oka, slabost jedne ruke ili noge, slabost jedne cele strane tela, vrtoglavica, vertigo, duplirana slika, slabost na obe strane tela, teškoće u govoru, nejasan govor i gubitak koordinacije.
[0140] U nekim primerima izvođenja, tretman subjekata sa dijagnozom cerebralne (ili moždane) ishemije sa najmanje jednim peptidom koji je ovde otkriven, poboljšava ili eliminiše jedan ili više od sledećih simptoma cerebralne (ili moždane) ishemije: slepilo na jedno oko, slabost u jednoj ruci ili nozi, slabost u celoj jednoj strani tela, vrtoglavica, vrtoglavica, dvostruki vid, slabost na obe strane tela, poteškoće u govoru, nejasan govor i gubitak koordinacije.
[0141] U drugom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na postupke lečenja ishemijske reperfuzijske povrede i/ili neželjenih efekata povezanih sa postojećim terapijskim sredstvima protiv ishemijske reperfuzijske povrede. U terapijskim primenama, kompozicija ili lek koji sadrži najmanje jedno jedinjenje pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao što je acetat, tartarat ili trifluoroacetat, se daje subjektu za koga se sumnja ili već pati od ishemijske reperfuzijske povrede u određenoj količini. dovoljno da izleči ili bar delimično zaustavi simptome bolesti, uključujući njene komplikacije i srednje patološke fenotipove u razvoju bolesti. Subjekti koji pate od ishemikreperfuzijske povrede mogu se identifikovati bilo kojim ili kombinacijom dijagnostičkih ili prognostičkih testova poznatih u tehnici. U nekim primerima izvođenja, ishemijsko-reperfuziona povreda je povezana sa ishemijom srca, ishemijom mozga, ishemijom bubrega, cerebralnom ishemijom, ishemijom creva i ishemijom jetre. U nekim primerima izvođenja, jedinjenja koja su ovde otkrivena su korisna u lečenju srčane ishemijereperfuzione povrede.
[0142] U nekim primerima izvođenja, ciklična peptidna jedinjenja koja su ovde prikazana su korisna za lečenje infarkta miokarda kod subjekta, kako bi se sprečilo oštećenje srca prilikom reperfuzije. U nekim primerima izvođenja, pronalazak se odnosi na postupke koronarne revaskularizacije koji obuhvataju primenu kod sisarskog subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja prema pronalasku, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i izvođenje postupka ugradnje implanta kod koronarnog arterijskog bajpasa (CABG) na subjektu.
[0143] U nekim primerima izvođenja, lečenje infarkta miokarda ovde prikazanim jedinjenjima smanjuje veličinu infarkta, povećava LVDP, povećava maksimalne brzine kontrakcije i relaksacije (±dP/dt).
[0144] U još nekim dodatnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje ili prevenciju ishemije zadnjeg ekstremiteta ili akutne ishemije ekstremiteta kod subjekta kome je to potrebno, a koji obuhvata primenu kod subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja prema pronalasku.
[0145] U bilo kojoj od prethodnih realizacija, jedinjenje prema pronalasku se može da se primenjuje oralno, topikalno, sistemski, intravenski, subkutano, intraperitonealno ili intramuskularno.
Profilaktički postupci
[0146] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje postupke za prevenciju ili odlaganje početka ishemijskog oštećenja ili simptoma ishemijskog oštećenja kod subjekta kod koga postoji rizik od ishemijskog oštećenja. U nekim primerima izvođenja, predmetna tehnologija obezbeđuje postupke za prevenciju ili smanjenje simptoma ishemijskog oštećenja kod subjekta kod koga postoji rizik od ishemijskog oštećenja.
[0147] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje postupke za prevenciju ili odlaganje početka ishemijsko-reperfuzionog oštećenja ili simptoma ishemijsko-reperfuzionog oštećenja kod subjekta kod koga postoji rizik od ishemijsko-reperfuzionog oštećenja. U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje postupke za prevenciju ili smanjenje simptoma ishemijsko-reperfuzionog oštećenja ili simptoma ishemijsko-reperfuzionog oštećenja kod subjekta kod koga postoji rizik od ishemijsko-reperfuzionog oštećenja.
[0148] U nekim primerima izvođenja, ishemijsko oštećenje ili ishemijsko-reperfuziono oštećenja ili simptomi ishemijsko-reperfuzionog oštećenja u vezi su sa srčanom ishemijom, moždanom ishemijom, bubrežnom ishemijom, intestinalnom ishemijom i hepatičnom ishemijom. U nekim primerima izvođenja, ishemijsko oštećenje je infarkt miokarda.
[0149] U nekim primerima izvođenja, ovde prikazana jedinjenja cikličnih peptida su korisna u lečenju i prevenciji srčanog ishemijsko-reperfuzionog oštećenja. U nekim primerima izvođenja, ovde prikazana jedinjenja su korisna u prevenciji srčanog ishemijsko-reperfuzionog oštećenja.
[0150] Subjekte kod kojih postoji rizik od ishemijskog oštećenja ili ishemijsko-reperfuzionog oštećenja moguće je identifikovati, npr. bilo kojim testom ili kombinacijom dijagnostičkih ili prognostičkih testova poznatih u stanju tehnike. U profilaktičkim primenama, farmaceutska kompozicija ili medikament sa jedinjenjem prema pronalasku, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, kao što je acetat, tartarat ili trifluoroacetatna so, primenjuju se kod subjekta koji je podložan, ili na drugi način u riziku od ishemijskog oštećenja ili ishemijskoreperfuzionog oštećenja u količini dovoljnoj da eliminiše, smanji rizik ili odloži početak bolesti, uključujući biohemijske, histološke i/ili bihejvioralne simptome bolesti, njene komplikacije i intermedijerne patološke fenotipove koji se pojavljuju tokom razvoja bolesti ili smanjuju simptomi i/ili komplikacije i srednji patološki fenotipovi koji se javljaju tokom razvoja bolesti. Primena profilaktičkog peptida može da se odvija pre nego što se ispolje simptomi karakteristični za bolest ili poremećaj, tako da bolest ili poremećaj budu sprečeni, odloženi u svom napredovanju, ili da bude smanjena ozbiljnost simptoma ili neželjenih efekata bolesti ili poremećaja.
[0151] Na primer, u nekim primerima izvođenja, subjekti mogu da budu u riziku od srčane ishemije ukoliko imaju bolest koronarne arterije (aterosklerozu, krvne ugruške ili spazam koronarne arterije).
[0152] Kao primer, ali ne kao ograničenje, u nekim primerima izvođenja, subjekti mogu biti izloženi riziku od bubrežne ishemije ako imaju povredu bubrega (npr. akutna povreda bubrega) i/ili povrede ili komplikacije od operacija u kojima su bubrezi lišeni normalnog protoka krvi tokom dužeg vremenskog perioda (npr. operacija srčanog bajpasa).
[0153] Kao primer, ali ne kao ograničenje, u nekim primerima izvođenja, subjekti mogu biti izloženi riziku od cerebralne ishemije ako imaju anemiju srpastih ćelija, komprimovane krvne sudove, ventrikularnu tahikardiju, nakupljanje plaka u arterijama, krvne ugruške, izuzetno nizak krvni pritisak kao posledica srčanog udara, moždanog udara ili urođenih srčanih mana.
[0154] Za terapeutske i/ili profilaktičke primene, kompozicija koja sadrži najmanje jedno ciklično peptidno jedinjenje opisano ovde, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao što je acetat, tartarat ili trifluoroacetatna so, daje se subjektu kome je to potrebno. U nekim primerima izvođenja, peptidna kompozicija se primenjuje jedan, dva, tri, četiri ili pet puta dnevno. U nekim primerima izvođenja, peptidna kompozicija se primenjuje više od pet puta dnevno. Dodatno ili alternativno, u nekim primerima izvođenja, peptidna kompozicija se primenjuje svaki dan, svaki drugi dan, svaki treći dan, svaki četvrti dan, svaki peti dan ili svaki šesti dan. U nekim primerima izvođenja, peptidna kompozicija se primenjuje nedeljno, dvonedeljno, tronedeljno ili mesečno. U nekim primerima izvođenja, peptidna kompozicija se primenjuje tokom perioda od jedne, dve, tri, četiri ili pet nedelja. U nekim primerima izvođenja, peptid se primenjuje šest nedelja ili više. U nekim primerima izvođenja, peptid se primenjuje dvanaest nedelja ili više. U nekim primerima izvođenja, peptid se primenjuje u periodu kraćem od jedne godine. U nekim primerima izvođenja, peptid se primenjuje u periodu dužem od jedne godine. U nekim primerima izvođenja, tretman sa najmanje jednim peptidom koji je ovde otkriven će sprečiti ili odložiti pojavu jednog ili više od sledećih simptoma ishemije srca: angina (npr. bol u grudima i pritisak), kratak dah, palpitacije, slabost, vrtoglavica, mučnina, znojenje, ubrzan rad srca i umor. U nekim primerima izvođenja, peptid se primenjuje tokom perioda od više od jedne godine U nekim primerima izvođenja, lečenje najmanje jednim peptidom koji je ovde prikazan sprečiće ili odložiti otpočinjanje jednog ili više sledećih simptoma srčane ishemije: angina (npr. bol u grudima i pritisak), kratak dah, palpitacije, slabost, vrtoglavica, mučnina, znojenje, ubrzan rad srca i umor.
[0155] U nekim primerima izvođenja, lečenje najmanje jednim peptidom koji je ovde otkriven će sprečiti ili odložiti pojavu jednog ili više od sledećih simptoma bubrežne ishemije: uremiju (tj. visok nivo proteinskih nusproizvoda u krvi, kao što je, na primer, urea), akutne epizode dispneje (otežano ili teže disanje) uzrokovane iznenadnim nakupljanjem tečnosti u plućima, hipertenzija, bol u blizini bubrega, slabost, hipertenzija, mučnina, istorija bolova u nogama, korak koji
4
odražava ugroženu cirkulaciju u nogama i modrice (zvuk ili šumovi koji se čuju stetoskopom) uzrokovani turbulentnim protokom krvi u arterijama mogu se otkriti u vratu (npr. udar na karotidnu arteriju), abdomenu (što može odražavati suženje bubrežne arterije) i preponama (bruh femoralne arterije).
[0156] U nekim primerima izvođenja, lečenje najmanje jednim peptidom koji je ovde otkriven će sprečiti ili odložiti pojavu jednog ili više od sledećih simptoma cerebralne (ili moždane) ishemije: slepilo jednog oka, slabos jedne ruke ili noge, slabost jedne cele strane tela , vrtoglavica, vertigo, duplirana slika, slabost na obe strane tela, teškoće u govoru, nejasan govor i gubitak koordinacije.
PRIMERI
Opšti postupci za sintezu peptidomimetika
[0157]
Šema 5
Opšti postupak za sintezu komponenti 1,2,4-oksadiazola
[0158]
Šema 6
a) HONH2; b) T3P/NaHCO3; c) TEA
Korak a: Sinteza N-hidroksiimidamida 9:
[0159] U rastvor nitrila 8 (1.0 mol) u EtOH (1.2 L) dodat je NH2OH (50% vodeni rastvor, 130 g, 2.0 mol), rastvor je zagrevan do refluksa i mešan 12 sati. Po okončanju, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u EtOH (350 mL) i ponovo koncentrovan pod sniženim pritiskom (ova procedura je ponovljena tri puta). Dobijena čvrsta sustanca je triturisana u heksanu (350 mL), filtrirana i oprana heksanom (100 mL), osušena kako bi dala željeni proizvod 9 u vidu bele čvrste supstance.
Korak b: Ciklizacija 1,2,4-oksadiazol heterocikla 11:
[0160] U rastvor zaštićene, enantiomerno čiste aminokiseline 10 (0.50 mol) i hidroksiimidamida 9 (0.55 mol, 1.1 ekviv.) u etil acetatu (2.30 L) dodat je NaHCO3(1.5 mol, 3.0 ekviv.). Smeša je mešana na 25 °C tokom 20 min, dodat je anhidrid propan fosfonske kiseline (T3P, 50% rastvor u etil acetatu, 1.5 mol, 3.0 ekviv.) i zatim je reakciona smeša zagrejana do 80 °C i mešana 4 sata (oko 60% konverzije jedinjenja 10 na osnovu HPLC). Zatim je dodato jedinjenje 9 (0.55 mol, 1.1 ekviv.) i reakciona smeša je mešana na 80 °C još 20 sati (about 10% jedinjenja 10 remained). Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, dodat je zasićeni vodeni NaHCOs (2.0 L), ekstrahovano etil acetatom (3X1.0 L), kombinovani organski slojevi su oprani fiziološkim rastvorom (1 L), osušeni preko anhidrovanog Na2SO4. Filtrirani i koncentrovani kako bi dali sirovi ostatak koji je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom (PE: EtOAc = 5: 1) kako bi dali jedinjenje 11.
Korak c: Deprotekcija u cilju proizvodnje finalnog 1,2,4-oksadiazola:
[0161] U rastvor jedinjenja 11 u ACN (0.4 mol) dodat je TEA (1.0 mol). Mešanje smeše mehaničkom mešalicom je održavano na 20~ 25 °C tokom 15 h. Reakciona smeša je razblažena sa vodom iz česme i MTBE. Odvojen, vodeni sloj je jedanput ekstrahovan sa MTBE. Oba MTBE sloja su kombinovana i zatim oprana sa NH4Cl i NH4Cl. Zatim je dodat anhidrovani Na2SO4i taj rastvor je mešan najmanje 2 h, zatim filtriran i opran sa MTBE kako bi dao 5.
Literatura:
[0162]
a) Moussebois, Claude; Heremans, Joseph F.; Merenyi, Robert; Rennerts, Walthere:
Synthesis of two new phenolic amino acids containing the 1,2,4-oxadiazole ring, Helvetica Chimica Acta Vol.60(1), 237-42, 1977;
b) Borg, Susanna; Estenne-Bouhtou, Genevieve; Luthman, Kristina; Csoeregh, Ingeborg; Hesselink, Willy; Hacksell, Uli: Synthesis of 1,2,4-Oxadiazole-, 1,3,4-Oxadiazole-, and 1,2,4-Triazole-Derived Dipeptidomimetics, Journal of Organic Chemistry, Vol.60(10), 3112-20, 1995;
Primer 1: Sinteza (S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-((tercbutoksikarbonil)amino)pentan-1-aminijum 4-metilbenzensulfonata (12a)
[0163]
korak a: NH2OH; korak b: T3P, NaHCO3; korak c: TEA; korak d: PTSA
1) Korak a: Sinteza N-hidroksi-2-fenilacetimidamida (9a)
[0164] Ista procedura kao što je opisana u opštoj proceduri za šemu 6 uz upotrebu 2-fenilacetonitrila (8a, 2 kg, 17.1 mol) kako bi se dobio rastvor intermedijernog N-hidroksi-2-fenilacetimidamida (9a) u IPAC (10.5 kg; KF = 1295) sa dobrim rezultatima (čistoća na osnovu HPLC, > 98.9 A%; Test = 22.2 w%, prinos = 91%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.90 (s, 1H), 7.28-7.18 (m, 5H), 5.40 (s, 2H), 3.25 (s, 2H) ppm. MS: (M+H)<+>: m/z = 151.1
4
2) Korak b: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil) (S)- dikarbamata (11a)
[0165] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu N2-(((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)-N6-(terc-butoksikarbonil)-L-lizina (10a, 4.31 kg, 9.2 mol) kako bi se dobio sirovi proizvod, (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil) (S)-dikarbamat (11a), rastvor u ACN (19.7 kg, test = 20%, hiralna HPLC čistoća = 99.12 A% , prinos = 73%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.78 (d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.61 (d, J= 6.3 Hz, 2H), 7.42 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 7.35-7.30 (m, 7H), 5.52 (br, 1H), 5.09-5.05 (m, 1H), 4.56-4.37 (m, 3H), 4.22 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.08 (s, 2H), 1.95-1.86 (m, 2H), 1.48-1.42 (m, 11H) ppm. MS: (M-100+H)<+>: m/z = 483.2.
3) Korak c: Sinteza terc-butil (S)-(5-Amino-5-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)-karbamata (5a)
[0166] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu jedinjenja (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil) (S)-dikarbamata (11a) kako bi se dobio rastvor sirovog terc-butil (S)-(5-amino-5-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)-karbamata (5) u MTBE (32.9 kg, test = 6.5%, prinos = 88%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 7.33-7.25 (m, 5H), 6.78 (br, 1H), 5.09-5.05 (m, 1H), 4.56-4.37 (m, 3H), 4.06 (s, 2H), 3.98 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 2.87-2.84 (m, 2H), 2.10 (s, 2H), 1.38-1.34 (m, 2H), 1.24 (s, 9H), 1.20-1.15 (m, 2H) ppm. MS: (M+H)<+>: m/z = 361.1.
4) Korak d: Sinteza (S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-((terc-butoksikarbonil)-amino)pentan-1-aminijum 4-metilbenzensulfonata (12a)
[0167] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu rastvora sirovog terc-butil (S)-(5-amino-5-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)-karbamata (5a) i PTSA (1.07 kg, 5.63 mol) kako bi se dobio (S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-((terc-butoksikarbonil)amino)pentan-1-aminijum 4-metilbenzensulfonat (12a) (2.7 kg, prinos = 85 %, čistoća na osnovu HPLC > 99%, ee > 99%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.74 (br, 3H), 7.48 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.37-7.26 (m, 5H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.77 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.82 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4,17 (s, 2H), 2.90-2.86 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.39-1.36 (m, 11H), 1.35-1.28 (m, 2H) ppm. MS: (M-172+H)<+>: m/z = 361.1.
Primer 2: Sinteza (S)-terc-butil (5-(3-([1,1 '-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentil)karbamata acetata (12b)
1) Korak a: Sinteza 2-([1,1'-bifenil]-4-il)-N'-hidroksiacetimidamida (9b)
[0169] Ista procedura kao što je opisana u opštoj proceduri za šemu 6 uz upotrebu 2-([1,1'-bifenil]-4-il)acetonitrila (8b, 3.00 g, 15.5 mmol) kako bi se dobio 2-([1,1'-bifenil]-4-il)-N'-hidroksiacetimidamid (9a) (2.4 g) sa prinosom od 68 %.<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ = 9.10 (br s, 1H), 7.67-7.54 (m, 4H), 7.49-7.41 (m, 2H), 7.41-7.30 (m, 3H), 5.76 ppm (br s, 2H).
2) Korak b: Sinteza (S)-terc-butil (2-(trimetilsilil)etil) (1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamata (11b)
[0170] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu (S)-6-((tercbutoksikarbonil)amino)-2-(((2-(trimetilsilil)etoksi)karbonil)amino)heksanske kiseline (10b, 391 mg, 1.0 mmol) kako bi se dobio sirovi proizvod, (S)-terc-butil (2-(trimetilsilil)etil) (1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamat (11b, 295 mg, 51%) u vidu bezbojne staklaste čvrste supstance.<1>H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 7.61-7.52 (m, 4H), 7.47-7.30 (m, 5H), 5.33-5.20 (m, 1H), 5.12-4.98 (m, 1H), 4.52 (br s, 1H), 4.21-4.12 (m, 2H), 4.10 (s, 2H), 3.16-3.00 (m, 2H), 2.02-1.77 (m, 2H), 1.54-1.33 (m, 4H), 1.43 (s, 9H), 1.02-0.92 (m, 2H), 0.02 ppm (s, 9H).
4
3) Korak c: Sinteza (S)-terc-butil (5-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentil)karbamat acetata (12b)
[0171] U rastvor (S)-terc-butil (2-(trimetilsilil)etil) (1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamata (11b, 290 mg, 0.508 mmol) u suvom THF (10 mL) (ohlađen u ledenom kupatilu), TBAF (1 M u THF, 0.76 mL, 0.762 mmol) je dodavan u kapima i reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 20 h. reakciona smeša je ohlađena u ledenom/vodenom kupatilu i dodatni TBAF (1 M u THF, 0.25 mL, 0.254 mmol) je dodavan u kapima. dobijena smeša je mešana na s.t. tokom 6 h i ugašena rastvorom AcOH (0.2 mL) u THF (30 mL) uz hlađenje u ledenom kupatilu. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom pomoću smeše MeOH i 0.1 % rastvora AcOH u vodi kao eluensa. Proizvod je izašao iz kolone sa 70 % MeOH kako bi se dobio željeni proizvod 12b (221 mg) sa prinosom od 88 %.<1>H NMR (CD3OD, 300 MHz): δ = 7.61-7.52 (m, 4H), 7.46-7.27 (m, 5H), 4.41-4.30 (m, 1H), 4.13 (s, 2H), 3.01 (t, 2H,<3>J(H,H)= 6.6 Hz), 1.98-1.83 (m, 2H), 1.54-1.27 (m, 4H), 1.41 ppm (s, 9H).
Primer 3: Sinteza (S)-terc-butil (5-amino-5-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamata (5c)
[0172]
Jedinjenje 5c
Šema 9
4
1) Korak a: Sinteza (Z)-2-(4-(terc-butil)fenil)-N'-hidroksiacetimidamida (9c)
[0173] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 2-(4-(terc-butil)fenil)acetonitrila (8c, 3.00 g, 17.3 mmol) kako bi se dobio (Z)-2-(4-(terc-butil)fenil)-N'-hidroksiacetimidamida (9c, 2.57 g) sa prinosom od 72 %.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ = 8.84 (s, 1H), 7.41 - 7.24 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 2H), 5.32 (m, 2H), 3.20 (s, 2H), 1.26 ppm (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (S)-(9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (1-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamata (11c)
[0174] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu (Z)-2-(4-(terc-butil)fenil)-N-hidroksiacetimidamida (9c, 2.57g, 12.5 mmol) i (S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-6-((terc-butoksikarbonil)amino)heksanske kiseline (10a, 5.86 g, 12.5 mmol) kako bi se dobio (S)-(9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (1-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamat (11c, 4.1 g) sa prinosom od 51 %.<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d): δ = 7.79-7.72 (m, 2H), 7.63-7.54 (m, 2H), 7.44 - 7.18 (m, 8H), 5.53-5.41 (m, 1H), 5.12 - 4.99 (m, 1H), 4.60-4.32 (m, 3H), 4.26-4.17 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.16-2.98 (m, 2H), 2.01 - 1.78 (m, 2H), 1.55-1.30 (m, 13H), 1.28 ppm (s, 9H).
3) Korak c: Sinteza (S)-terc-butil (5-amino-5-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamata (5c)
[0175] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu (S)-(9H-fluoren-9-il)metil tercbutil (1-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamata (11c, 4.1 g, 6.42 mmol) kako bi se dobio (S)-terc-butil (5-amino-5-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamat (5c, 1.66 g) sa prinosom od 62 %.<1>H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 7.37-7.31 (m, 2H), 7.27-7.22 (m, 2H), 4.60-4.45 (m, 1H), 4.18-4.07 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.16-3.02 (m, 2H), 1.96-1.42 (m, 8H), 1.43 (s, 9H), 1.30 ppm (s, 9H).
Primer 4: Sinteza (S)-terc-butil (5-amino-5-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamat acetata (12d)
[0176]
4
1) Korak a: Sinteza (Z)-N'-hidroksi-3-fenilpropanimidamida (9d)
[0177] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 3-fenilpropannitrila (8d, 2.00 g, 15.2 mmol) kako bi se dobio N-hidroksi-3-fenilpropanimidamid (9d, 1.9 g) sa prinosom od 76 %.<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ = 8.72 (br s, 1H), 7.30-7.13 (m, 5H), 5.41 (br s, 2H), 2.83-2.74 (m, 2H), 2.28-2.19 (m, 2H).
2) Korak b: Sinteza (S)-terc-butil (2-(trimetilsilil)etil) (1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamata (11d)
[0178] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu (Z)-N'-hidroksi-3-fenilpropanimidamida (9d, 391 mg, 1.0 mmol) kako bi se dobio (S)-terc-butil (2-(trimetilsilil)etil) (1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamat (10b, 328 mg) sa prinosom od 63 % u vidu bezbojnog lepljivog ulja.<1>H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ = 7.33-7.17 (m, 5H), 5.34-5.21 (m, 1H), 5.11-4.98 (m, 1H), 4.59-4.47 (m, 1H), 4.23-4.13 (m, 2H), 3.18-2.96 (m, 6H), 2.01-1.79 (m, 2H), 1.61-1.31 (m, 6H), 1.44 (s, 9H), 1.04-0.94 (m, 2H), 0.04 (s, 9H).
3) Korak c: Sinteza (S)-terc-butil (5-amino-5-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamat acetata (12d)
[0179] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu (S)-terc-butil (2-(trimetilsilil)etil) (1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamata (11d, 320 mg, 0.617 mmol) i TBAF (1 M u THF, 0.95 mL, 0.925 mmol) kako bi se dobio (S)-terc-butil (5-amino-5-(3-fenetil-
4
1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamat acetat (12d, 191 mg) sa prinosom od 71 %.<1>H NMR (CD3OD, 300 MHz): δ = 7.30-7.13 (m, 5H), 4.49-4.37 (m, 1H), 3.10-2.98 (m, 6H), 2.02-1.89 (m, 2H), 1.56-1.27 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).
Primer 5: Sinteza terc-butil (S)-(5-amino-5-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamata (5e)
[0180]
Jedinjenje 5e
Šema 11
1) Korak a: Sinteza cikloheksilmetil metansulfonata (14)
[0181] U rastvor cikloksehilmetanola (13, 43.79 mmol, 5.00 g, 1.0 eq.) u anhidrovanom DCM (80mL) dodati su metansulfonil hlorid (48.17 mmol, 5.51 g, 1.10 eq.) i trietilamin (6.9 mL) pod argonom na 0°C. reakciona smeša je mešana na 0°C 30 min, oprana sa H2O (3 × 40 mL), 1N HCl (2 × 30 mL) i fiziološkim rastvorom, osušena preko Na2SO4i koncentrovana pod sniženim pritiskom kako bi se dobio sirovi proizvod u vidu žutog ulja cikloheksilmetil metansulfonata (14, 12 g, 96%). proizvod korišćen dalje bez dodatnog prečišćavanja.
4
2) Korak b: Sinteza 2-cikloheksilacetonitrila (8e)
[0182] Smeša cikloheksilmetil metansulfonata (14, 30.16 mmol, 5.80 g, 1.00 eq.) i KCN (66.36 mmol, 4.32 g, 2.20 eq.) u DMF (30 mL) mešana je na 90°C 16 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je sipana u H2O (100 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa Et2O (3 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su oprani fiziološkim rastvorom (2 × 100 mL), osušeni preko Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod 2-cikloheksilacetonitril (8e, 4.13g, 111%) korišćen dalje bez dodatnog prečišćavanja.
3) Korak c: Sinteza (Z)-2-cikloheksil-N'-hidroksiacetimidamida (9e)
[0183] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 2-cikloheksilacetonitrila (8e, 4.10 g, 33.28 mmol) i hidroksilamin hidrohlorida (3.47 g, 49.92 mmol) kako bi dala proizvod (Z)-2-cikloheksil-N'-hidroksiacetimidamid (9e, 2.3 g, 44%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 6.89 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 2.00 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 1.80 - 1.59 (m, 5H), 1.60-1.48 (m, 1H), 1.31 - 1.08 (m, 3H), 1.01-0.88 (m, 2H).
4) Korak d: Sinteza terc-butil (2-trimetilsililetil) (6-((2-cikloheksilacetimidamido)oksi)-6-oksohexane-1,5-diil)(S)-dikarbamata (15a)
[0184] U rastvor jedinjenja 10b (101.2 g, 0.26 mmol, 1.5 eq) u DMF (300 mL) dodat je HOBT (23.49 g, 0.26 mol, 1.5 eq), EDC.HCl (28.31 g, 0.22 mol, 1.3 eq) i jedinjenje 9e (27.0 g, 0.17 mol) i zatim je mešan preko noći na rt. Po okončanju dodata je voda, ekstrahovano sa EA, oprano sa NaCl(aq), osušeno preko Na2SO4.Filtrirano i koncentrovan kako bi se dobila žuta tečnost (15a, 32.0 g, sirova) koja je korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja.
5) Korak e: Sinteza terc-butil (2-trimetilsililetil) (1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)(S)-dikarbamata (11e)
[0185] Rastvor jedinjenja 15a (32.0 g, sirovo) u piridinu (320 mL) refluksovan je preko noći. Po okončanju i hlađenju do sobne temperature dodata je voda (500 mL) ekstrahovano sa EA (300 mL*3), oprano sa NaCl(aq), osušeno preko Na2SO4.Filtrirano i koncentrovano kako bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobila žuta tečnost (11e, 18 g).
6) Korak f: Sinteza terc-butil (S)-(3-amino-3-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)propil)karbamata (5e)
[0186] Jedinjenje 11e (24 g, 46.99 mmol) je rastvoreno u THF (450 mL), dodat je TBAF (24.6g, 93.9 mol, 2 eq) i mešano na 35°C preko noći, Nakon što je LCMS pokazala okončanje, dodata je voda (500 mL) ekstrahovano sa EA (300 mL*3), oprano sa NaCl(aq), osušeno preko Na2SO4. Filtrirano i koncentrovano kako bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobila žuta tečnost u vidu smeše koja je prečišćena hiralnom HPLC kako bi se dobio čist proizvod 5e (11g, 100%, 98.6%ee).1H NMR (CDCl3, MHz 300): d= 4.55 (s(br), 1H); 4.15 (m, 1H); 3.12 (m, 2H); 2.61 (m, 2H); 1.90 (m, 6H); 1.75 (m, 4H); 1.55 (m, 2H); 1.45 (s, 9H); 1.30 (m, 4H). MS (M+1): 367.1.
Primer 6: Sinteza terc-butil (S)-5-(3-(adamantan-1-il)metil-l,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentilkarbamata (5f)
[0187]
1) Korak a: Sinteza 2-adamantan-1-il-N'-hidroksiacetimidamida (9f)
[0188] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 2-adamantan-1-ilacetonitrila (8f, 1.0 g, 5.705 mmol) kako bi se dobio 2-adamantan-1-il-N'-hidroksiacetimidamid (9f, 665 mg, 56%) u vidu belog praha.<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 1.98-1.93 (m, 3H), 1.87 (s, 2H), 1.77-1.61 (m, 12 H).
2) Korak b: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diildikarbamata (11f)
1
[0189] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 2-adamantan-1-il-N'-hidroksiacetimidamida (9f, 1.30 g, 6.27 mmol) kako bi dala 2.21 g (11f, 52%) (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (S)-1-(3-adamantan-1-ilmetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil) dikarbamata.<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.79 (d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.67 (t, J= 8.1 Hz, 2H), 7.34 (dt, J = 25.2, 7.3 Hz, 4H), 4.90 (dd, J= 8.7,6.2 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 10.2, 6.5 Hz, 1H), 4.31 (dd, J= 10.2, 7.3 Hz, 1H), 4.22 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.03 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.45 (s, 2H), 1.98-1.88 (m, 5H), 1.66-1.42 (m, 23 Hz).
3) Korak c: Sinteza terc-butil (S)-5-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentilkarbamata (5f)
[0190] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (S)-1-(3-adamantan-1-il-metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diildikarbamata (11f, 2.5 g, 3.90 mmol) kako bi se dobio terc-butil (S)-5-(3-adamantan-1-il-metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentilkarbamat (5f, 820 mg, 50%).<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.15 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 3.02 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 2.48 (s, 2H), 1.96-1.80 (m, 5H), 1.76-1.74 (m, 3H), 1.66-1.61 (m,10H), 1.51-1.34(m, 12H).
Primer 7: Sinteza terc-butil (S)-5-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentilkarbamata (5g)
[0191]
2
1) Korak a: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (1S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diildikarbamata (11g)
[0192] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu N'-hidroksiadamantane-1-carboksimidamida (9g, 1.0 g, 5.15 mmol) kako bi se dobio (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (1S)-1-(3-adamantan-1-il-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diildikarbamat (11g, 1.75 g, 62%) u vidu belog praha.<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.79 (d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.67 (dd, J= 16.3, 7.5 Hz, 2H), 7.41-7.35 (m, 2H), 7.30 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 4.93 (dd, J = 9.3, 5.5 Hz, 1H), 4.43 (dd, J= 10.4, 6.8 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.23 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.08 (dt, J = 7.9, 4.0 Hz, 2H), 2.05-1.97 (m, 10H), 1.85-1.74 (m, 7 H), 1.56-1.51 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza terc-butil (5S)-5-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentilkarbamata (5g)
[0193] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (1S)-1-(3-adamantan-1-il-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diildikarbamata (11g, 1.75 g, 2.86 mmol) kako bi se dobio željeni proizvod terc-butil (S)-5-(3-adamantan-1-il-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentilkarbamat u vidu bele pene (5g, 0.89 g, 80%).<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.15 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 3.06 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 2.02 (d, J= 2.8 Hz, 6H), 1.91-1.75 (m, 8H), 1.55-1.48 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
Primer 8: Sinteza terc-butil (S)-(3-amino-3-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)propil)karbamat (5h)
[0194]
Jedinjenje 5h
Šema 14
1) Korak a: Sinteza 2,5-dioksopirolidin-1-il (2-(trimetilsilil)etil) karbonata (18)
[0195] U rastvor jedinjenja 16 (22.2 mL, 0.156 mol, 1.0 eq) u CH3CN (780 mL) dodat je Et3N (65.7 mL, 0.468 mol, 3.0 eq) i jedinjenje 17 (60 g, 0.234 mmol, 1.5 eq) na sobnoj temperaturi i mešano preko noći. Nakon okončanja, koncentrovano je i dodat je EA (500 mL), oprano zasićenim NaHCO3(200 mL), NaCl (200 mL*3), osušeno preko Na2SO4. Filtrirano i koncentrovano kako bi se dobila žuta tečnost (18, 54.2 g, sirovo) koja je korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja.
2) Korak b: Sinteza (S)-4-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-(((2-(trimetilsilil)etoksi)-karbonil)amino)butanske kiseline (10c)
[0196] U rastvor jedinjenja 19a (25 g, 0.114 mol , 1.0 eq) u 1,4-dioksanu (180 mL) i H2O (180 mL) dodat je NaHCO3(23.2 g, 0.228 mol, 2.0 eq) i rastvor jedinjenja 2,5-dioksopirolidin-1-il (2-(trimetilsilil)etil) karbonata (18, 32.7 g, 0.12 mmol, 1.1 eq) u 1,4-dioksanu (100 mL) je dodavan u kapima na sobnoj temperaturi i mešan preko noći. Po okončanju, u ostatak je dodata voda (200 mL) i podešen pH = 3-4 sa 2N HC na 0°C, ekstrahovan sa DCM:MeOH=10:1 (100 mL*5), osušen preko Na2SO4. Filtriran i koncentrovan kako bi se dobila žuta tečnost (10c, 43.6 g, sirovo) koja je korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja. MS: (m-H)<+>: 361.1.
3) Korak c: Sinteza terc-butil (2-(trimetilsilil)etil) (4-okso-4-((2-fenilacetimidamido)oksi)butan-1,3-diil)(S)-dikarbamata (15b)
[0197] U rastvor jedinjenja 10c (43.6 g, sirovo, 0.12 mmol, 1.5 eq) u DMF (300 mL) dodat je HOBT (16.26 g, 0.18 mol, 1.5 eq), EDC.HCl (19.98 g, 0.156 mol, 1.3 eq) i jedinjenje 9a (12.04 g, 0.08 mol, 1 eq) i zatim je mešano preko noći na rt. Po okončanju je dodata voda (500 mL) ekstrahovano sa EA (300 mL*3), isprano sa NaCl(aq), osušeno preko Na2SO4. Filtrirano i koncentrovano kako bi se dobila žuta tečnost (15b, 53.3 g, sirovo) koja je korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja. MS: (m+H)<+>: 495.2.
4
4) Korak d: Sinteza terc-butil (2-(trimetilsilil)etil) (1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)propan-1,3-diil)(S)-dikarbamata (11h)
[0198] Rastvor jedinjenja 15b (53.3 g, sirovo) u piridinu (533 mL) je refluksovan preko noći. Po okončanju je ohlađeno do sobne temperature, dodata je voda (500 mL), ekstrahovano sa EA (300 mL*3), isprano sa NaCl(aq), osušeno preko Na2SO4.Filtrirano i koncentrovano kako bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobila žuta tečnost (11h, 23 g). MS: (m+H)<+>: 476.1.
5) Korak e: Sinteza terc-butil (S)-(3-amino-3-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)propil)karbamata (5h)
[0199] Jedinjenje 11h (22 g, 46.22 mmol) je rastvoreno u THF (440 mL) dodat je TBAF (24.2g, 92.4 mol, 2 eq) i mešano na 35°C preko noći, nakon što je LCMS pokazala okončanje, dodata je voda (500 mL), ekstrahovano sa EA (300 mL*3), isprano sa NaCl(aq), osušeno preko Na2SO4. Filtrirano i koncentrovano kako bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobila žuta tečnost (14 g) u vidu smeše koja je prečišćena hiralnom HPLC kako bi se dobio čist proizvod 5h (96%, 97%ee). 1H NMR (CDC13, MHz 300): d= 7.31 (m, 5H); 4.20 (m, 1H); 4.17 (s, 2H); 3.43 (m, 1H); 3.27 (m, 1H); 2.06 (m, 1H); 1.92 (m, 1H); 1.83 (s(br), 2H (NH)); 1.44 (s, 9H). MS (M+1): 333.2.
Primer 9: Sinteza terc-butil (S)-(4-amino-4-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)karbamata (5i)
[0200]
Jedinjenje 5i
Šema 15
1) Korak a: Sinteza 2,5-dioksopirolidin-1-il (2-(trimetilsilil)etil) karbonata (18)
[0201] Ista procedura kao što je opisana u šemi 14.
2) Korak b: Sinteza (S)-5-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-(((2-trimetilsililetoksi)-karbonil)amino)pentanske kiseline (10d)
[0202] Ista procedura kao što je opisana u šemi 14 uz upotrebu jedinjenje 19b (25 g, 0.108 mol) u 1,4-dioksanu (180 mL) i H2O (180 mL) dodat je NaHCO3(23.2 g, 0.228 mol, 2.0 eq) kako bi se dobio žuti tečni proizvod (10d). MS: (m-H)<+>: 376.1.
3) Korak c: Sinteza terc-butil (2-trimetilsililetil) (5-okso-5-((2-fenilacetimidamido)-oksi)pentan-1,4-diil)(S)-dikarbamata (15c)
[0203] Ista procedura kao što je opisana u šemi 14 uz upotrebu jedinjenje 10d (52.8 g, 0.14 mol) kako bi se dobila žuta tečnost (15c, 65.3 g). MS (M+H): 509.3.
4) Korak d: Sinteza terc-butil (2-trimetilsililetil) (1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1,4-diil)(S)-dikarbamata (11i)
[0204] Ista procedura kao što je opisana u šemi 14 uz upotrebu jedinjenje 15c kako bi se dobila žuta tečnost (11i, 23 g). MS: (m+H)<+>: 489.2.
5) Korak e: Sinteza terc-butil (S)-(4-amino-4-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)karbamata (5i)
[0205] Ista procedura kao što je opisana u šemi 14 uz upotrebu jedinjenje 11i (23 g, 46.87 mmol ) kako bi se dobila žuta tečnost (14 g) u vidu racemske smeše, koji je prečišćena hiralnim razdvajanjem kako bi se dobio čist proizvod 5i (98%, 97%ee).1H NMR (CDC13, MHz 300): d= 7.33 (m, 5H); 4.68 (s(br), 1H); 4.15 (m, 1H); 4.08 (s, 2H); 3.16 (m, 2H); 1.92 (m, 1H); 1.83 (m, 3H); 1.74 (m, 2H), 1.45 (s, 9H). MS (M+Na<+>): 369.2.
Primer 10: Sinteza (S)-4-((terc-butoksikarbonil)amino)-1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1-aminijum acetata (12j)
[0206]
1) Korak a: Sinteza cikloheksilmetil metansulfonata (14)
[0207] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11.
2) Korak b: Sinteza 2-cikloheksilacetonitrila (8e)
[0208] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11.
3) Korak c: Sinteza (Z)-2-cikloheksil-N'-hidroksiacetimidamida (9e)
[0209] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 2-cikloheksilacetonitrila (8e, 4.10 g, 33.28 mmol) i hidroksilamin hidrohlorida (3.47 g, 49.92 mmol) kako bi se dobio proizvod (Z)-2-cikloheksil-N'-hidroksiacetimidamid (9e, 2.3 g, 44%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 6.89 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 2.00 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 1.80 - 1.59 (m, 5H), 1.60-1.48 (m, 1H), 1.31 - 1.08 (m, 3H), 1.01-0.88 (m, 2H).
4) Korak d: Sinteza (9H-fluoren-9-il) metil terc-butil (1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1,4-diil)dikarbamata (11j)
[0210] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu (Z)-2-cikloheksil-N'-hidroksiacetimidamida (9e, 2.30 g, 14.72 mmol) i N2-(((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)-N6-(terc-butoksikarbonil)-L-lizina (10e, 6.08 g, 13.38 mmol) kako bi se dobio (9H-fluoren-9-il) metil terc-butil (1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1,4-diil)dikarbamat (11j, 1.57g, 20%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.79 (d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.67 (dd, J= 11.8, 7.6 Hz, 2H), 7.39 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 7.30 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 4.93 (dd, J = 9.2, 5.6 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 10.4, 6.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J= 10.5, 7.0 Hz, 1H), 4.22 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 3.08 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.56 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 2.00 - 1.93 (m, 1H), 1.92 - 1.82 (m, 1H), 1.80 - 1.72 (m, 1H), 1.72 - 1.51 (m, 7H), 1.43 (s, 9H), 1.22 - 1.12 (m, 3H), 1.05 - 0.93 (m, 2H).
5) Korak e: Sinteza (S)-4-((terc-butoksikarbonil)amino)-1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1-aminijum acetata (12j)
[0211] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu (9H-fluoren-9-il) metil terc-butil (1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1,4-diil)dikarbamata (11j, 1.50 g, 2.61 mmol) kako bi se dobio (S)-4-((terc-butoksikarbonil)amino)-1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1-aminijum acetat (12j, 750 mg, 81%) u vidu žutog viskoznog ulja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.22 (t, J= 5.3 Hz, 1H), 3.06 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.59 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.95 - 1.77 (m, 3H), 1.76 - 1.63 (m, 5H), 1.60 - 1.47 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.34 - 1.14 (m, 3H), 1.09 - 0.96 (m, 2H).
Primer 11: Sinteza terc-butil (S)-(4-amino-4-(3-(biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)karbamata (5k)
[0212]
Jedinjenje 5k
Šema 17
1) Korak a: Sinteza biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetanola (21)
[0213] Biciklo[2.2.2]oktan-1-karboksilna kiselina (20, 1.00 g; 6.5 mmol) je rastvorena u suvom THF (10 mL) na 0 °C. BH3(1M THF rastvor; 15 mL) je dodavan u kapima. Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena suvim MeOH (15 mL) i isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u suvom MeOH (50 mL) i uparen još tri puta. Dobijen je biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetanol (21, 930 mg, kvantitativno). Proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 3.14 (d, J= 6.1 Hz, 2H), 1.57 - 1.40 (višestruki pikovi, 7H), 1.36 - 1.23 (višestruki pikovi, 6H), 1.19 (t, J= 6.1 Hz, 1H).
2) Korak b: Sinteza biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil metansulfonata (22)
[0214] Biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetanol (21, 897 mg; 6.4 mmol) i DIPEA (1.75 mL; 10.0 mmol) su rastvoreni u suvom DCM (30 mL) na 0 °C. MsCl (0.70 mL; 9.0 mmol) je dodavan u kapima. Napredovanje reakcije je praćeno pomoću TLC. Nakon potpune konverzije (-4 h) reakciona smeša je podeljena na EtOAc (150 mL) i aq KHSO4(5%; 100 mL). Organska faza je isprana sa zas. aq NaHCO3(100 mL) i fiziološkim rastvorom (150 mL), osušena (MgSO4) i uparena pod sniženim pritiskom. Dobijen je biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil metansulfonat (22, 1.45 g, -100%) u vidu žućkastog ulja. Proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 3.74 (s, 2H), 2.91 (s, 3H), 1.60 - 1.43 (višestruki pikovi, 7H), 1.43 - 1.23 (višestruki pikovi, 6H).
Korak c: Sinteza 2-(biciklo[2.2.2]oktan-1-il)acetonitrila (8g)
[0215] Biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil metansulfonat (22, 1.40 g; 6.4 mmol), KCN (1.30 g; 20 mmol) i KI (830 mg; 5.0 mmol) su zagrevani u DMF (10 mL) i HMPA (3 mL) do 100 °C tokom ~6h. Napredovanje reakcije je praćeno pomoću GC-MS. Nakon potpune konverzije reakciona smeša je podeljena na EtOAc (150 mL) i vodu (200 mL). Organska faza je isprana vodom (4 × 100 mL) i fiziološkim rastvorom (100 mL), osušena (MgSO4) i uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u minimalnim količima DCM/heksana (1/4) i filtriran kroz sloj silika gela. Frakcije sa proizvodom su uparene pod sniženim pritiskom. Dobijen je 2-(biciklo[2.2.2]oktan-1-il)acetonitril (8g, 770 mg, 80%) u vidu bele čvrste supstance. Proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez dalje karakterizacije.
3) Korak d: Sinteza 2-(biciklo[2.2.2]oktan-1-il)-N'-hidroksiacetimidamida (9h)
[0216] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 2-(Biciklo[2.2.2]oktan-1-il)acetonitrila (8g, 770 mg; 5.16 mmol) kako bi se dobio 2-(biciklo[2.2.2]oktan-1-il)-N'-hidroksiacetimidamid (9h, 585 mg, 62%) u vidu bele čvrste supstance dobijen je nakon sušenja u vakuumu. LC-MS analiza je pokazala jedinstven pik sa [M+H]<+>= 183. Proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez dalje karakterizacije.
4) Korak e: Sinteza terc-butil (2-(trimetilsilil)etil)(1-(3-(biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1,4-diil)(S)-dikarbamata (11k)
[0217] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 2-(biciklo[2.2.2]oktan-1-il)-N'-hidroksiacetimidamida (9h, 585 mg; 3.2 mmol) i (S)-terc-butil (2-(trimetilsilil)etil) (1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamata (10d, 328 mg) kako bi se dobilo 740 mg (44%) terc-butil (2-(trimetilsilil)etil)(1-(3-(biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1,4-diil)(S)-dikarbamata (11k) u obliku amorfne čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 4.85 (dd, J = 8.8, 5.7 Hz, 1H), 4.12 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 3.03 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.40 (s, 2H), 1.97 - 1.68 (m, 2H), 1.61 - 1.30 (m, 24H), 0.96 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 0.00 (s, 9H).
5) Korak f: Sinteza terc-butil (S)-(4-amino-4-(3-(biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)karbamata (5k)
[0218] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu terc-butil (2-(trimetilsilil)etil)(1-(3-(biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1,4-diil)(S)-dikarbamata (11k, 740 mg; 1.42 mmol) kako bi se dobilo 520 mg (97 %) amorfnog proizvoda (5k). Proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez karakterizacije.
Primer 12: Sinteza terc-butil (S)-4-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutilkarbamata (5l)
[0219]
Jedinjenje 5l
[0220] Jedinjenje 5l je sintetisano istim procedurama opisanim u šemi 12 uz upotrebu 10d kako bi se dobio željeni proizvod (95%HPLC, 95%ee).
Primer 13: Sinteza terc-butil (S)-4-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutilkarbamata (5m)
[0221]
Jedinjenje 5m
Šema 18
1) Korak a: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (1S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butan-1,4-diildikarbamata (11m)
[0222] Ista procedura kao što je opisana u šemi 13 uz upotrebu 9g (1.0 g, 5.15 mmol) i 10e (2.11 g, 4.633 mmol) kako bi se dobilo 1.75 g (62%) 11m u vidu belog praha.<1>H-NMR (300 MHz,
1
metanol-d4) δ 7.79 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.67 (dd, J = 16.3, 7.5 Hz, 2H), 7.41-7.35 (m, 2H), 7.30 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 4.93 (dd, J = 9.3, 5.5 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 10.4, 6.8 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 4.23 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.08 (dt, J = 7.9, 4.0 Hz, 2H), 2.05-1.97 (m, 10H), 1.85-1.74 (m, 7 H), 1.56-1.51 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-4-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutilkarbamata (5m)
[0223] Ista procedura kao što je opisana u šemi 13 uz upotrebu 11m (1.75 g, 2.86 mmol ) kako bi se dobio proizvod 5m u vidu bele pene (0.89 g, 80%).<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.15 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 3.06 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 2.07 (s, 3H), 2.02 (d, J= 2.8 Hz, 6H), 1.91-1.75 (m, 8H), 1.55-1.48 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
Primer 14: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-N5,N5-dimetilpentan-1,5-diaminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12n)
[0224]
1) Korak a: Sinteza terc-butil (S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-(dimetilamino)pentilkarbamata (11n)
[0225] Ista procedura kao što je opisana u šemi 13 uz upotrebu 9g (330 mg, 1.70 mmol) i 10f (424 mg, 1.54 mmol) kako bi se dobio proizvod u vidu bezbojnog ulja (11n, 360 mg,
2
54%).<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ: 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.28 (s, 6H), 2.07 (br s, 3H), 2.01 (br s, 6H), 1.97 - 1.75 (m, 8H), 1.61 - 1.49 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.49 - 1.28 (m, 2H).
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-4-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutilkarbamata (12n)
[0226] U 11n (360 mg, 0.832 mmol) rastvoren u DCM (13 mL) i ohlađen do 0 °C, TFA (1.27 mL, 16.64 mmol) je dodat u kapima i rastvor je ostavljen da se meša na 0 °C tokom 5 h. Zatim je DCM uparen (na 0-5 °C) dajući proizvod 12n u vidu amorfne čvrste supstance 435 mg (99%).<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ: 4.82 (t, J= 7.0 Hz, 1H), 3.13 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 2.88 (s, 6H), 2.19 - 2.00 (m, 11H), 1.93 - 1.72 (m, 8H), 1.59 - 1.43 (m, 2H).
Primer 15: Sinteza terc-butil (R)-(5-amino-5-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamata (5o)
[0227]
Jedinjenje 5o
Šema 20
1) Korak a: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil (R)-(1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil)dikarbamata (11o)
[0228] Ista procedura kao što je opisana u šemi 7 uz upotrebu 9a (3.0 g; 20.0mmol) i 10f (7.0 g; 14.9 mmol) kako bi se dobilo 5.4 g (62%) proizvoda koji je dobijen u obliku amorfne čvrste supstance. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez karakterizacije.
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-4-(3-adamantan-1-il-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutilkarbamata (12n)
[0229] Ista procedura kao što je opisana u šemi 7 uz upotrebu 11o (5.4g; 9.3 mmol) kako bi se dobilo 2.54 g (62%) žućkastog ulja 5o.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.29 - 7.26 (m, 4H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 4.09 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 2.98 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.90 - 1.70 (m, 2H), 1.50 - 1.24 (m, 13H).
Primer 16: Sinteza terc-butil (S)-(5-amino-5-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil-1,1,2,2,3,3,4,4-d8)karbamata (5p)
[0230]
Jedinjenje 5p
Šema 21
1) Korak a: Sinteza bakar(II) bis(N6-(terc-butoksikarbonil)-L-lizinata-3,3,4,4,5,5,6,6-d8) (24)
[0231] Lizin(D8)·2HCl (23, 1.50 g, 7.87 mmol) je rastvoren u 2M NaHCO3(7.80 mL, 15.72 mmol, 1.32 g), u koji je dodat rastvor CuSO4·5H2O (0.982 g, 3.94 mmol) u H2O (7.8 mL) Dodat
4
je i dodatni NaHCO3(0.66 g, 7.89 mmol), a nakon toga i ditercbutildikarbonat (2.75 g, 12.59 mmol) rastvoren u 9.6 mL acetona. Smeša je mešana 24 sata. Metanol (3 mL) je dodat u rastvor i mešanje se nastavilo 14 sati. U reakcionu smešu je dodata H2O (3 mL) i proizvod je zatim filtriran, ispran sa H2O (6 × 3 mL) i osušen kako bi se dobilo 2.24 g (99% prinosa) Cu[lys(D8)<ε>(Boc)]2(24) u vidu bledo plave čvrste supstance.
2) Korak b: Sinteza N6-(terc-butoksikarbonil)-L-lizina-3,3,4,4,5,5,6,6-d8 (19c)
[0232] Kako bi se uklonio bakar iz 24, Cu-helat (2.19 g, 3.84 mmol) je suspendovan u H2O (80 mL). Nakon toga, 8-hinolinol (1.45 g, 9.98 mmol) je dodat, i smeša mešana 18 sati(formiranje bledo zelenog precipitata). Suspenzija je filtrirana, precipitati isprani sa H2O (3 × 25 mL) i filtrat ispran sa EtOAc (3 × 50 mL). Vodeni sloj je uparen kako bi dao 2.00 g (99% prinos) Lys(ε-Boc)(D8)-OH (19c) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ: 3.72 (s, 1H), 1.44 (s, 9H).
3) Korak c: Sinteza N6-(terc-butoksikarbonil)-L-lizin-3,3,4,4,5,5,6,6-d8 (10h)
[0233] NaHCO3(3.30 g, 39.3 mmol) je suspendovan u vodi (31 mL), zatim 19c (1.00 g, 3.93 mmol), THF (31 mL) i teocOnsu (1.43 g, 5.50 mmol) je dodat. Dvofazna smeša je ostavljena da se žustro mepa na s.t. tokom 20h. Zatim je reakciona smeša uparena iz THF i dodatna voda (50 mL) je dodata i reakciona smeša je isprana sa Et2O (2 × 20 mL). U vodeni sloj je dodata limunska kiselina do pH 3-4 i proizvod je ekstrahovan sa DCM (4×50 mL). Organski slojevi su kombinovani i osušeni na Na2SO4, filtrirani i upareni kako bi se dobio proizvod u vidu bezbojnog ulja (1.52, 97%).<1>H NMR (300 MHz, MeOD-d4) δ: 4.15 (t, J= 8.1 Hz, 2H), 4.09 (s, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.00 (t, J= 8.4 Hz, 2H), 0.05 (s, 9H).
4) Korak d: Sinteza terc-butil (2-trimetilsililetil) (1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentan-1,5-diil-2,2,3,3,4,4,5,5-d8)(S)-dikarbamata (11p)
[0234] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 10h (1.52 g, 3.81 mmol) i 9a (1.14 g, 7.62 mmol) kako bi se dobio proizvod 11p u vidu bezbojnog ulja (1.21 g, 62%).<1>H NMR (300 MHz, MeOD-d4) δ: 7.34 - 7.19 (m, 5H), 4.14 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 4.05 (s, 2H), 1.42 (s, 9H), 0.99 (t, J= 8.3 Hz, 2H), 0.04 (s, 9H).
5) Korak e: Sinteza terc-butil (S)-(5-amino-5-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil-1,1,2,2,3,3,4,4-d8)karbamata (5p)
[0235] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 11p (1.21 mg, 2.36 mmol) kako bi se dobio proizvod 5p u vidu žućkastog ulja (835 mg, 96%).<1>H NMR (300 MHz, MeOD-d4) δ: 7.33 - 7.20 (m, 5H), 4.10 (s, 1H), 4.06 (s, 2H), 1.42 (s, 9H).
Primer 17: Sinteza (S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12q)
[0236]
1) Korak a: Sinteza N<α>,N<τ>-bis(terc-butoksikarbonil)-L-histidine (10i)
[0237] U rastvor L-histidina (19d, 2.00 g, 12.9 mmol) u dioksanu (16 mL) i vodi (16 mL) je dodat NaOH (1.03 g, 25.8 mmol) na 0 °C i reakciona smeša je mešana 5 min, zatim je dodat Boc2O (7.03 g, 32.2 mmol) u porcijama. Reakciona smeša je mešana 4 h na sobnoj temperaturi, zatim je organski rastvarač uparen. Ostatak je ekstrahovan Et2O (2x). Vodeni sloj je pažljivo zakišeljen kalijum bisulfatom do pH 3 i zatim ekstrahovan sa EtOAc (3x). EtOAc ekstrakt je odvojen, osušen preko anh. Na2SO4, filtriran i uparen. 4.0 g (87%) N<α>,N<τ>-bis(tercbutoksikarbonil)-L-histidina (10i) je izolovano i korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-(3-fenil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etil)-1H-imidazol-1-karboksilat (11q)
[0238] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu jedinjenje 110i (1000 mg, 2.81 mmol) i 9i (383 mg, 2.81 mmol) kako bi se dobilo 884 mg (69%) 11q.
3) Korak c: Sinteza (S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12q)
[0239] U rastvor 11q (165 mg, 0.362 mmol) u DCM (6 mL) je dodat TFA (3 mL) na 0 °C. Nakon 5 min ledeno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana 30 min na sobnoj temperaturi. Isparljive materije su uparene, zatim je sirovi proizvod 12q uparen sa toluenom i uporebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.
Primer 18: Sinteza (S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12r)
[0240]
1) Korak a: Sinteza N<a>,N<t>-bis(terc-butoksikarbonil)-L-histidina (10i)
[0241] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 kako bi se dobio proizvod N<α>,N<τ>-bis(tercbutoksikarbonil)-L-histidina (10i).
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-4-(2-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-1-karboksilata (11r)
[0242] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 10i (1000 mg, 2.81 mmol) i 9a (422 mg, 2.81 mmol) kako bi se dobio terc-butil (S)-4-(2-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-1-karboksilat (11r, 615 mg, 46%).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ: 7.93 (s, 1H), 7.34-7.23 (m, 5H), 7.04 (s, 1H), 6.09 (d, J=8 Hz, 1H), 5.31 (d, J=8 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.17-3.11 (m, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.53 (s, 9H).
3) Korak c: Sinteza (S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12r)
[0243] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 11r (75 mg, 0.160 mmol) kako bi se dobio željeni proizvod without prečišćavanje.
Primer 19: Sinteza (S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12s)
[0244]
1) Korak a: Sinteza N<a>,N<t>-bis(terc-butoksikarbonil)-L-histidine (10i)
[0245] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 kako bi se dobio proizvod N<α>,N<τ>-bis(tercbutoksikarbonil)-L-histidin (10i).
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etil)-1H-imidazol-1-karboksilat (11s)
[0246] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 10i (960 mg, 2.70 mmol) i 9d (444 mg, 2.70 mmol) kako bi se dobio terc-butil (S)-4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etil)-1H-imidazol-1-karboksilat (11s, 600 mg, 46%).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ: 7.97 (s, 1H), 7.30-7.17 (m, 5H), 7.08 (s, 1H), 6.15 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.32 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.20-3.18 (m, 2H), 3.05-2.94 (m, 4H), 1.58 (s, 9H), 1.45 (s, 9H).
3) Korak c: Sinteza (S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12s)
[0247] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 11s (190 mg, 0.393 mmol) kako bi se dobio he željeni proizvod without prečišćavanje.
Primer 20: Sinteza (S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12t)
[0248]
1) Korak a: Sinteza N<a>,N<t>-bis(terc-butoksikarbonil)-L-histidine (10i)
[0249] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 kako bi se dobio proizvod N<α>,N<τ>-bis(tercbutoksikarbonil)-L-histidin (10i).
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-4-(2-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-1-karboksilat (11t)
[0250] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 10i (0.432 g, 1.217 mmol) i 9b (0.275 g, 1.217 mmol) kako bi se dobila žućkasta čvrsta supstanca (S)-4-(2-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-1-karboksilat (11t, 0.35 g).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.06 (s, 1H), 7.58-7.52 (m, 4H), 7.41-7.37 (m, 2H), 7.33-7.27 (m, 3H), 7.24 (s, 1H), 5.18-5.14 (m, 1H), 4.08 (s, 2H), 3.17 (dd, J= 14.8, 5.8 Hz, 1H), 3.07 (dd, J= 14.8, 8.7 Hz, 1H), 1.56 (s, 9H), 1.37 (s, 9H).
3) Korak c: Sinteza (S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12t)
[0251] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 11t (0.3 g, 0.55 mmol) kako bi se dobila žućkasta čvrsta supstanca (12t, 0.185 g).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.91 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.60-7.57 (m, 4H), 7.50-7.48 (m, 1H), 7.45-7.38 (m, 4H), 7.36-7.31 (m, 1H), 5.24 (t, J= 7.3 Hz, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.60 (d, J = 7.3 Hz, 2H).
Primer 21: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12u)
[0252]
Jedinjenje 12u
Šema 26
1) Korak a: Sinteza N<a>,N<t>-bis(terc-butoksikarbonil)-L-histidina (10i)
[0253] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 kako bi se dobio proizvod N<α>,N<τ>-bis(tercbutoksikarbonil)-L-histidina (10i).
2) Korak b: Sinteza terc-butil 4-((S)-2-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-1-karboksilata (11u)
[0254] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 10i (1.28 g; 3.6 mmol) i 9f (660 mg; 3.17 mmol) kako bi se dobilo 635 mg (38%) proizvoda 11u u vidu amorfne čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.88 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.26 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 3.24 - 3.01 (višestruki pikovi, 2H), 2.38 (s, 2H), 1.91 - 1.81 (bs, 3H), 1.66 - 1.56 (višestruki pikovi, 3H), 1.52 (višestruki pikovi, 12H), 1.49 - 1.42 (višestruki pikovi, 6H), 1.38 (s, 9H).
3) Korak c: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12u)
[0255] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 11u (635 mg; 1.49 mmol) kako bi se dobilo 835 mg (-100%) 12u u vidu amorfne čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8.94 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 5.27 (t, J= 7.4 Hz, 1H), 3.64 (višestruki pikovi, 2H), 2.56 (s, 2H), 1.98 (bs, 3H), 1.82- 1.72 (višestruki pikovi, 3H), 1.71 - 1.51 (višestruki pikovi, 9H).
Primer 22: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-l-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1Himidazol-4-il)etan-1-aminijum hlorida (12v)
[0256]
1
Jedinjenje 12v
Šema 27
1) Korak a: Sinteza N<α>-(terc-butoksikarbonil)- N<τ>-metil-L-histidina (10k)
[0257] U ohlađenu (-15 °C) i mešanu suspenziju 10j (1.00 g, 3.92 mmol) u suvom MeCN (20 mL) pod atmosferom argona, dodat je natrijum hidrid (60 % suspenzija u mineralnom ulju, 548 mg, 13.7 mmol) u porcijama. Nakon kompletnog dodavanja NaH, dobijena smeša je mešana na istoj temperaturi tokom 30 min. Zatim je metil-jodid (0.13 mL, 4.31 mmol) dodavan u kapima i reakciona smeša je mešana na -5 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je ugašena sa MeOH (15 mL) i uparena pod sniženim pritiskom na s.t.
[0258] Suvi petrolej etar (50 mL) je dodat u čvrsti ostatak i flask je zatvoren pomoću cevčice sa CaCl2, zbog toga što je sirova smeša ekstremno higroskopna. Smeša je mešana na s.t. tokom 10 min i petrolej etar je dekantovan. Zatim je dobijena bela amorfna čvrsta supstanca ekstrahovana hloroformom (3 × 50 mL) i kombinovane tečne faze su uparene kako bi se dobio sirovi 10k koji je upotrebljen za izvođenje reakcije u sledećem koraku.
2) Korak b: Sinteza terc-butil ((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etil)karbamata (11v)
[0259] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 10k iz prethodnog koraka i 9f (817 mg, 3.92 mmol) kako bi se dobio 11v (0.51 g, 29 %).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 7.30 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.40-6.31 (m, 1H), 5.32-5.21 (m, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.26-3.06 (m, 2H), 2.45 (s, 2H), 2.02-1.88 (m, 4H), 1.79-1.17 ppm (m, 20H).
2
3) Korak c: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etan-1-aminijum hlorid (12v)
[0260] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 11v (635 mg; 1.49 mmol) kako bi se dobio 12v (350 mg, 87 %).<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 8.65-8.48 (m, 1H), 7.35 (s, 1H), 5.16-5.09 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.54-3.42 (m, 2H), 2.54 (s, 2H), 2.01-1.91 (s, 3H), 1.84-1.51 (m, 12H).
Primer 23: Sinteza (S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1Himidazol-4-il)etan-1-aminijum hlorid (12w)
[0261]
Jedinjenje 12w
Šema 28
1) Korak a: Sinteza N<α>-(terc-butoksikarbonil)-N<τ>-metil-L-histidine (10k)
[0262] Ista procedura kao što je opisana u šemi 27.
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-(1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etil)karbamata (11w)
[0263] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 10k from previous korak i 9b (267 mg, 1.18 mmol) kako bi se dobio 11w (136 mg, 25 %).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 7.61-7.30 (m, 9H), 6.46-6.38 (m, 1H), 6.36-6.25 (m, 1H), 5.33-5.21 (m, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.26-3.05 (m, 2H), 1.53-1.28 ppm (m, 9H).
3) Korak c: Sinteza (S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etan-1-aminijum hlorid (12w)
[0264] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 11q (635 mg; 1.49 mmol) kako bi se dobio 12q (76 mg) in 65 % prinos as a white amorfna čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 8.56 (s, 1H), 7.64-7.54 (m, 4H), 7.49-7.24 (m, 6H), 5.14-5.06 (m, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.55-3.39 ppm (m, 2H).
Primer 24: Sinteza (S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etan-1-amina (5x)
[0265]
1) Korak a: Sinteza terc-butil (S)-(1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)karbamata (11x)
4
[0266] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 10l (788 mg, 2.59 mmol) i 9a (389 mg, 2.59 mmol) kako bi se dobilo žućkasto ulje proizvoda terc-butil (S)-(1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)karbamata (11x, 560 mg, 52%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.96 (s, 1H), 7.45 - 7.13 (m, 8H), 7.05 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.18 (s, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.40 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12x)
[0267] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 11x (560 mg, 1.34 mmol) kako bi se dobio željeni proizvod koji je upotrebljen za sledeću reakciju.
3) Korak c: Sinteza (S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etan-1-amina (5x)
[0268] Prethodni proizvod je rastvoren u DCM (20 mL), zatim je dodat 5% vodeni rastvor NaHCO3(20 mL) i nakon mešanja tokom 30 min organska faza sa proizvodom je odvojena, osušena preko anh. Na2SO4, filtrirana i uparena. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (SiO2, EtOAc (100%, Rf(PR) 0.3)) kako bi se dobio proizvod kao 305 mg ulja proizvoda (5x, 72%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.16 (s, 1H), 7.49 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.34 - 7.20 (m, 5H), 7.16 (dd, J = 11.3, 3.9 Hz, 1H), 7.07 (ddd, J = 7.1, 0.9, 0.5 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 4.48 (dd, J= 7.5, 5.3 Hz, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.29 (ddd, J= 21.9, 14.4, 6.2 Hz, 2H), 1.72 (s, 2H).
Primer 25: Sinteza (S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etan-1-aminijum hlorid (12y)
[0269]
Jedinjenje 12y
Šema 30
1) Korak a: Sinteza terc-butil (S)-(1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)karbamata (11y)
[0270] Ista procedura kao što je opisana u šemi 6 uz upotrebu 10l (1.086 g, 3.568 mmol) i 9b (0.807 g, 3.568 mmol) kako bi se dobio proizvod (S)-(1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)karbamata (11y, 0.905 g) u vidu smeđe čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.87 (s, 1H), 7.74 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.63 (m, 4H), 7.47 (m, 3H), 7.34 (dt, J = 17.2, 8.0 Hz, 4H), 7.10 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.95 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.00 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H), 3.29-3.22 (m, 2H), 1.31 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etan-1-aminijum hlorid (12y)
[0271] Ista procedura kao što je opisana u šemi 22 uz upotrebu 11y (0.68 g, 1.375 mmol) kako bi se dobio 0.55 g željenog proizvod 12y.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.58-7.50 (m, 4H), 7.43 (m, 2H), 7.38-7.31 (m, 3H), 7.26-7.24 (m, 2H), 7.14-7.09 (m, 2H), 6.99 (ddd, J= 8.0, 7.1, 0.9 Hz, 1H), 5.07 (t, J= 6.7 Hz, 1H), 4.10 (d, J= 3.0 Hz, 2H), 3.56 (d, J= 6.7 Hz, 2H).
Primer 26: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etan-1-amina (5z)
[0272]
Jedinjenje 5z
Šema 31
1) Korak a: Sinteza terc-butil (S)-1-(2-(adamantan-1-il)acetimidamidooksi)-3-(1H-indol-3-il)-1-oksopropan-2-ilkarbamata (15d)
[0273] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 10l (61.32 g, 0.20 mol) i 9f (35 g, 0.17 mmol) kako bi se dobila žuta čvrsta supstanca (15d, 40 g, 48%).
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etilkarbamata (11z)
[0274] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 15d (40g) kako bi se dobila bela čvrsta supstanca (11z, 15 g, 39%) koja je osušena i upotrebljena u sledećem koraku direktno.
3) Korak c: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etan-1-amina (5z)
[0275] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 11z (15g) kako bi se dobila žuta tečnost (5z, 5.5 g, 99.35% HPLC, 47%).<1>H NMR (CDCl3, 300 MHz): δ=8.10 (s(br), 1H), 7.60 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.18 (m, 2H), 7.04 (s, 1H), 4.56 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.33 (m, 1H), 2.49 (s, 2H), 1.50-2.10 (m, 15H).
Primer 27: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-7H-indol-3-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12aa)
[0276]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)etil)karbamata (11aa)
[0277] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 10l (500mg; 1.6mmol) i 9f (270 mg; 1.3mmol) kako bi se dobio 219 mg (34%) 11aa kao amorfna čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.37 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.13 (m, 1H), 7.01 (m, 1H), 6.66 (bs, 1H), 5.36 - 5.20 (m, 1H), 5.18 - 5.00 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.35 (m, 2H), 2.38 (s, 2H), 1.87 (bs, 3H), 1.61 (bd, J= 12.0 Hz, 3H), 1.55 - 1.40 (m, 9H), 1.36 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12aa)
[0278] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 11aa (219 mg; 0.45 mmol) kako bi se dobio 195 mg (-100%) 12aa kao amorfna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, metanold4) δ 7.37 (dt, J= 8.0, 0.9 Hz, 1H), 7.32 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.15 (ddd, J= 8.2, 7.1, 1.1 Hz, 1H), 7.05 - 6.98 (m, 2H), 5.06 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.55 (m, 2H), 2.42 (s, 2H), 1.88 (bs, 3H), 1.69 (bd, J= 12.1 Hz, 3H), 1.56 (bd, J= 11.3 Hz, 3H), 1.46 (m, 6H).
Primer 28: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(5-fluoro-1H-indol-3yl)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12ab)
[0279]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)karbamata (11ab)
[0280] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 10n (676mg; 2.1mmol) i 9f (625 mg; 3.0mmol) kako bi se dobilo 220 mg (21%) 11ab u obliku amorfne čvrste supstance. Proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez karakterizacije.
2) Korak b: Sinteza (S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12ab)
[0281] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 11ab (219 mg; 0.45 mmol) kako bi se dobilo 234 mg (-100%) 12ab koji je izdvojen kao amorfna čvrsta supstanca. Proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez karakterizacije.
Primer 29: Sinteza (S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-7H-indol-3-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12ac)
[0282]
Jedinjenje 12ac
Šema 34
1) Korak a: Sinteza terc-butil (S)-(1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)etil)karbamata (11ac)
[0283] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 10m (950 mg; 3.0 mmol) i 9b (700 mg; 3.1 mmol) kako bi se dobio 75 mg (49%) 11ad u obliku amorfne čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.75 - 7.63 (m, 4H), 7.62 - 7.53 (m, 2H), 7.53 -7.41 (m, 4H), 7.38 - 7.29 (ms, 2H), 7.23 - 7.11 (td, J = 7.2, 2.2 Hz 1H), 6.76 (bs, 1H), 5.48 (bs, 1H), 5.30 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.54 (m, 2H), 1.55 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)etan-1-aminijum 2,2,2-trifluoroacetata (12ac)
[0284] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 11ac (219 mg; 0.45 mmol) kako bi se dobio 605 mg (-79%) 12ac kao bela kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.55 (m, 2H), 7.50 (m, 2H), 7.41 (m, 2H), 7.34 - 7.27 (m, 3H), 7.24 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.16 (ddd, J = 8.2, 7.1, 1.1 Hz, 1H), 6.99 (ddd, J = 7.9, 7.1, 0.9 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.02 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.10 (d, J= 15.3 Hz, 1H), 4.05 (d, J= 15.3 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.51 (m, 2H).
Primer 30: Sinteza 4-((S)-2-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5 il)-2-ammonioetil)piridin-1-ium 2,2,2-trifluoroacetata (12ad)
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(piridin-4-il)etil)karbamata (11ad)
[0286] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 10o (0.384 g, 1.44 mmol) i 9f (0.3 g, 1.44 mmol) kako bi se dobio proizvod 11ad (220 mg, 45%).<1>H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.46 (d, J=5.5 Hz, 2H), 7.01 (d, J=5.5 Hz, 2H), 5.34 (s, 2H), 3.34-3.11 (m, 2H), 2.44 (s, 2H), 1.97-1.89 (m, 3H), 1.72-1.52 (m, 6H), 1.51-1.45 (m, 6H), 1.40 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza 4-((S)-2-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-ammonioetil)piridin-1-ijum 2,2,2-trifluoroacetata (12ad)
[0287] Ista procedura kao što je opisana u šemi 11 uz upotrebu 11ad (219 mg; 0.45 mmol) kako bi se dobilo 605 mg (-79%) 12ad u vidu bele kristalne čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.55 (m, 2H), 7.50 (m, 2H), 7.41 (m, 2H), 7.34 - 7.27 (m, 3H), 7.24 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.16 (ddd, J = 8.2, 7.1, 1.1 Hz, 1H), 6.99 (ddd, J = 7.9, 7.1, 0.9 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.02 (t, J= 6.6 Hz, 1H), 4.10 (d, J= 15.3 Hz, 1H), 4.05 (d, J= 15.3 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.51 (m, 2H).
Primer 31: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7a)
1
Jedinjenje 7a
Šema 36
1) Korak a: Sinteza benzil (S)-2-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-5-guanidinopentanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (3a)
[0289] U suspenziju DMT-OBn x HCl (2a, 45.0 g, 134 mmol) u MeCN (800 mL) dodat je NMM (32.7 mL, 298 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana dok nije postala transparentna. Zatim su Boc-D-Arg-OH x HCl (1a, 46.3 g, 149 mmol) i HOBt<∗>H2O (9.11 g, 59.5 mmol) dodati u reakcionu smešu i mešani 15 min. Na kraju je dodat EDC*HCl (38.5 g, 201 mmol) i smeša je mešana na 0 °C tokom 4 h. Zatim su dodati EtOAc (450 mL) i 1N HCl u fiziološkom rastvoru (300 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa 1N HCl u fiziološkom rastvoru (7x150 mL), NaHCO3/fiziološkom rastvoru (300 mL i dok pH vrednost vodenog sloja nije dostigla oko =6÷7), osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Dobijeno je 86.0 g (97%) Boc-D-Arg-DMT-OBn (3a) i upotrebljeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.33 - 7.18 (m, 5H), 6.43 (s, 2H), 5.06 (s, 2H) 4.71 (t, J=7.8Hz, 1H), 4.07 (t, J=6.7Hz,1H), 3.19 - 3.09 (m, 3H), 3.03-2.97 (m, 1H), 2.23 (s, 6H), 1.72 - 1.65 (m, 1H), 1.54 - 1.43 (m, 3H), 1.45 (s, 9H).
2
2) Korak b: Sinteza (S)-2-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-5-guanidinopentanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (4a)
[0290] U rastvor Boc-D-Arg-DM-Tyr-OBn (3a, 84.0 g, 142 mmol) u MeOH (1000 mL) dodat je Pd/C (10% tež./tež., 14.0 g). Vodonikom je pročišćena reakciona smeša na sobnoj temperaturi tokom 4h. Zatim je reakciona smeša filtrirana kroz filter papir i isprana sa MeOH (150 mL). Ratvarač je uklonjen uparavanjem. U vidu bele pene je dobijen proizvod 4a (74.0 g, 93%) i upotrebljen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.44 (s, 2H), 4.68 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 4.04 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 3.15 - 3.09 (m, 3H), 3.02 - 2.94 (m, 1H), 2.29 (s, 6H), 1.74 - 1.59 (m, 1H), 1.54 - 1.43 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((6R,9S,12S)-1-amino-12-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6a)
[0291] DMF (200 mL) je dodat u 4a (11.17 g, 24 mmol) i mešan na s.t. tokom 15 min. U dobijenu suspenziju je dodat 12a (10.65 g, 20 mmol) i mešan na s.t. tokom 20 min. Nakon što je dodat HOBt (612 mg, 4.00 mmol), suspenzija je ohlađena u ledenom kupatilu. EDC · HCl (5.38 g, 28 mmol) je dodat u jednoj porciji, i reakciona smeša je mešana uz hlađenje u ledenom kupatilu tokom 2.5 h i, zatim tokom 4.5 h na s.t. Skoro homogena reakciona smeša je ugašena sa EtOAc (1500 mL) i dobijeni rastvor je opran 10 puta fiziološkim rastvorom/aq. 0.5 M HCl (1:1; 400 mL). Tokom 6. i 9. ispiranja, u vodenoj fazi se formirao gel. Nakon dodavanja iPrOH (40 mL u svakom slučaju) i ponovljenog mućkanja, slojevi su se ponovo izbistrili. Nakon toga je organska faza oprana 6 puta fiziološkim rastvorom /zasićenim vodenim NaHCO3(9:1; 400 mL). Tokom 4. ispiranja, u vodenoj fazi se formirao gel. Nakon dodavanja iPrOH (40 mL) i ponovljenog mućkanja, slojevi su se lako razdvojili. Organska faza je isprana fiziološkim rastvorom (200 mL) i vodom (100 mL) i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Nakon ispiranja vodom nije primenjeno žustro mućkanje kako bi se izbegle teškoće prilikom razdvajanja faza. Kao rezultat je dobijeno 16.8 g sirovog proizvoda (6a, 97.0 % čistoće na osnovu HPLC, bela amorfna čvrsta supstanca).<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) ppm: δ = 7.33-7.16 (m, 5H), 6.38 (s, 2H), 5.18-5.07 (m, 1H), 4.64-4.55 (m, 1H), 4.10 - 3.92 (m, 3H), 3.18-2.77 (m, 6H), 2.20 (s, 6H), 1.97-1.76 (m, 2H), 1.75-1.14 (m, 8H), 1.43 (s, 9H), 1.41 (s, 9H).
4) Korak d: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7a)
[0292] 6a (16.8 g) je rastvoren u DCM (100 mL) i ohlađen do 0 °C, TFA (20 mL) je dodavan u kapima i rastvor je ostavljen da se meša na 0 °C 10 min, i zatim na rt 3 h (LC/MS ne pokazuje polazni materijal). Zatim je reakciona smeša uparena (na 0-5 °C) i dodatno iznova uparena iz DCM (100 mL, na 0-5 °C). Prečišćavanje fleš hromatografijom na reverznoj fazi (uložak C-18, 120G) izvedeno je na sirovom materijalu podeljenom u 4 dela. Zatim je sav rastvarač uparen na sniženom pritisku na <40 °C. Bela pena je rastvorena u izopropanolu (100 mL) i dodato je 5 mL HCl u izopropanolu (5-6M) na 0 °C i uparen pod sniženim pritiskom. Ovaj korak je ponovljen 3 puta. dodatno, dodato je 100 mL MeCN i suspenzija je još jednom uparena. Kao rezultat je dobijen beli prah 7a u vidu hidrohloridne soli.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.36 - 7.14 (m, 5H), 6.40 (s, 2H), 5.15 (dd, J= 8.5, 6.3 Hz, 1H), 4.68 (dd, J = 8.7, 7.5 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.97 (t, J= 6.3 Hz, 1H), 3.18 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.11 (dd, J = 14.2, 8.8 Hz, 1H), 2.95 - 2.84 (m, 3H), 2.22 (s, 6H), 2.02 - 1.59 (m, 6H), 1.57 - 1.28 (m, 4H). MS: EI-MS: m/z 608.4 [M+1].
Primer 32: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-(1,1'-bifenil-4-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7b)
[0293]
4
) Korak a: Sinteza terc-butil ((6R,9S,12S)-12-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-1-amino-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6b)
[0294] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (11.17 g, 24 mmol) i 12b (221 mg, 0.445 mmol) kako bi se dobio 6b (300 mg) u vidu acetatne soli sa prinosom od 78 %.<1>H NMR (CD3OD, 300 MHz): δ = 7.61-7.50 (m, 4H), 7.46-7.29 (m, 5H), 6.39 (s, 2H), 5.19-5.10 (m, 1H), 4.67-4.56 (m, 1H), 4.10 (s, 2H), 3.99-3.90 (m, 1H), 3.16-2.77 (m, 7H), 2.20 (s, 6H), 2.02-1.82 (m, 2H), 1.67-1.05 (m, 25H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (7b)
[0295] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6b (300 mg, 0.318 mmol) kako bi se dobila TFA so 7b (68 mg) sa prinosom od 21 % u vidu bledo žute staklaste čvrste supstance.<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ = 7.57-7.50 (m, 4H), 7.43-7.36 (m, 4H), 7.34-7.29 (m, 1H), 6.39 (s, 2H), 5.15 (dd, 1H, J = 6.3 Hz, J= 8.7 Hz), 4.69 (dd, 1H, J = 7.6 Hz, J = 8.7 Hz), 4.12 (s, 2H), 3.92 (t, 1H, J = 6.3 Hz), 3.14 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 3.07 (dd, 1H, J = 8.8 Hz, J = 14.1 Hz), 2.92-2.80 (m, 3H), 2.20 (s, 6H), 2.01-1.58 (m, 6H), 1.54-1.25 ppm (m, 4H). Molekulska formula: C37H49N9O4· 3TFA; Molekulska težina: 1025.93; Molekulska težina slobodne baze: 683.86. EI-MS: m/z 684.5 [M+1].
Primer 33: Sinteza (R)-2-amino-N((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7c)
[0296]
Jedinjenje 7c
Šema 38
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((6R,9S,12S)-1-amino-12-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6c)
[0297] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (2.0 g, 3.98 mmol) i 5c (1.66 g, 3.98 mmol) kako bi se dobio 6c (1.97 g) sa prinosom od 54 %, koji je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7c)
[0298] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6c (1.97 g, 2.13 mmol) kako bi se dobila HCl so 7c (590 mg) sa prinosom od 38 % u vidu bledo žute staklaste čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4): δ = 8.65-8.60 (m, 1H), 7.35-7.30 (m, 2H), 7.24-7.19 (m, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.19-5.11 (m, 1H), 4.73-4.66 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 4.08-3.93 (m, 3H), 3.21 - 3.05 (m, 3H), 2.94-2.84 (m, 3H), 2.21 (s, 6H), 2.03 - 1.31 (m, 10H), 1.28 ppm (s, 9H). EI-MS: m/z 664.6 [M+1].
Primer 34: Sinteza (R)-2-amino-N((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((R)-5-amino-1-(3-(4-(terc-butil)benzil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7d)
[0299]
Jedinjenje 7d
[0300] Jedinjenje 7d je izolovano prema šemi 38:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4): δ = 7.38 ppm (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 6.52 (s, 2H), 5.06 (m, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.02 (m, 2H), 3.95 (m, 1H), 3.20 (m, 3H), 2.95 (m, 3H), 2.34 (s, 6H), 1.50-1.90 (m, 8H), 1.33 (s, 9H), 1.10 (m, 2H). EI-MS: m/z 664.5 [M+1].
Primer 35: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7e)
[0301]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((6R,9S,12S)-1-amino-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-12-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6d)
[0302] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (201 mg, 0.400 mmol) i 12d (191 mg, 0.440 mmol) kako bi se dobio 6d (260 mg) sa prinosom od 74 %.<1>H NMR (CD3OD, 300 MHz): δ = 7.31-7.10 (m, 5H), 6.38 (s, 2H), 5.19-5.10 (m, 1H), 4.69-4.57 (m, 1H), 4.03-3.91 (m, 1H), 3.20-2.79 (m, 10H), 2.22 (s, 6H), 2.00-1.83 (m, 2H), 1.72-1.02 (m, 26H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7e)
[0303] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6d (234 mg, 0.265 mmol) kako bi se dobila TFA so 7e (140 mg) sa prinosom od 55 % u vidu bledo žute staklaste čvrste supstance.<1>H NMR (CD3OD, 400 MHz): δ = 7.29-7.14 (m, 5H), 6.37 (s, 2H), 5.15 (dd, 1H, J= 6.7 Hz, J= 8.4 Hz), 4.69 (dd, 1H, J= 7.3 Hz, J= 9.1 Hz), 3.93 (t, 1H, J = 6.3 Hz), 3.16 (t, 2H, J= 6.9 Hz), 3.11 (dd, 1H, J=9.3 Hz, J= 14.1 Hz), 3.07-3.01 (m, 4H), 2.93-2.86 (m, 3H), 2.22 (s, 6H), 2.06-1.61 (m, 6H), 1.57-1.27 ppm (m, 4H). Molekulska formula: C32H47N9O4· 3TFA; Molekulska težina: 963.86; Molekulska težina slobodne baze: 621.79. ELMS: m/z 622.5 [M+1].
Primer 36: Sinteza (R)-2-amino-N((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-cikloheksilmetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7f)
[0304]
Jedinjenje 7f
Šema 40
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((6R,9S,12S)-1-amino-12-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6e)
[0305] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (1.40 g; 2.80 mmol) i 5e (843mg; 2.3mmol) kako bi se dobio 6e 1.22 g (61%) u vidu bele pene.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.36 (s, 2H), 5.11 (m, 1H), 4.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 3.95 (m, 1H), 3.18 - 3.04 (m, 3H), 2.99 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.85 (dd, J = 14.1, 8.2 Hz, 1H), 2.56 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 2.20 (s, 6H), 1.97 - 1.84 (m, 5H), 1.78 - 1.59 (višestruki pikovi, 8H), 1.56 - 1.33 (m, 24H), 1.32 - 1.11 (m, 3H), 1.08 - 0.92 (m, 2H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7f)
[0306] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6e (8.28 g; 8.66 mmol) kako bi se dobila HCl so 7f 6.09 g (97%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (CD3OD): δ 6.37 (s, 2H), 5.13 (dd, J = 8.7, 6.3 Hz, 1H), 4.71 (t, J= 8.1 Hz, 1H), 3.97 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 3.20 - 3.06 (m, 3H), 2.96 - 2.84 (m, 3H), 2.57 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 2.23 (s, 6H), 2.02 - 1.87 (m, 2H), 1.84 - 1.59 (m, 10H), 1.55 - 1.31 (m, 4H), 1.32 - 1.13 (m, 3H), 1.01 (m, 2H). MS: ELMS: m/z 614.6 [M+1].
Primer 37: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopent-1-il), 7g)
[0307]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((6R,9S,12S)-12-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-1-amino-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6f)
[0308] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (959 mg, 1.91 mmol) i 5f (800 mg, 1.91 mmol) kako bi se dobio 6f u vidu bele pene (1.04 g, 63 %).<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 6.41 (s, 2H), 5.13 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.68 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 3.95 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 3.17-3.08 (m, 3H), 3.02 (t, J = 6.1Hz, 2H) 2.94-2.86 (m, 1H), 2.47 (s, 2H), 2.24 (s, 6H), 1.99-1.95 (m, 5H), 1.80-1.53 (m, 16H), 1.49-1.30 (m, 22H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (7g)
[0309] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6f (8.28 g; 8.66 mmol) kako bi se dobio 7g HCl salt 6.09 g (97%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (CD3OD): δ 6.37 (s, 2H), 5.13 (dd, J = 8.7, 6.3 Hz, 1H), 4.71 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.97 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 3.20 - 3.06 (m, 3H), 2.96 - 2.84 (m, 3H), 2.57 (d, J= 6.9 Hz, 2H), 2.23 (s, 6H), 2.02 - 1.87 (m, 2H), 1.84 - 1.59 (m, 10H), 1.55 - 1.31 (m, 4H), 1.32 - 1.13 (m, 3H), 1.01 (m, 2H). MS: ELMS: m/z 614.6 [M+1].
Primer 38: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopent-1-il), 7h)
[0310]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((6R,9S,12S)-12-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-1-amino-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6g)
[0311] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (950 mg, 1.89 mmol) i 5g (850 mg, 2.10 mmol) kako bi se dobio 6f u vidu bele čvrste supstance (1.15 g).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.38 (s, 2H), 5.16 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 4.62 (t, J= 8.1 Hz, 1H), 3.98 (t, J= 8.2 Hz, 1H), 3.19-3.07 (m, 3H), 3.06-2.96 (m, 2H), 2.92-2.82 (m, 1H), 2.23 (s, 6H), 2.11 -1.75 (m, 18H), 1.74 - 1.60 (m, 2H), 1.58-1.26 (m, 14H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (7g)
[0312] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6g (1.02 g, 1.19 mmol) kako bi se dobila TFA so 7g u vidu bele čvrste supstance (750 mg).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.39 (s, 2H), 5.17 (dd, J = 8.7, 6.3 Hz, 1H), 4.72 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 3.98 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 3.16 (dt, J = 14.5, 7.7 Hz, 3H), 2.98 - 2.86 (m, 3H), 2.24 (s, 6H), 2.07 (s, 3H), 2.04 - 1.89 (m,
1
8H), 1.89 - 1.64 (m, 9H), 1.56 - 1.28 (m, 4H). Molekulska formula: C34H53N9O4· 3HCl; MS: EI-MS: m/z 652.6 [M+1].
Primer 39: Sinteza (2R)-N-((2S)-1-(((1R)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((R)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-aminopent-1-il), 7i)
[0313]
Jedinjenje 7i
[0314] Jedinjenje 7i je izolovano prema prethodnoj šemi 42:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.43 (s, 2H), 5.20 (m, 1H), 4.73 (m, 1H), 3.97 (m, 1H), 3.18 (m, 3H), 2.95 (m, 3H), 2.27 (s, 6H), 1.30-2.10 (m, 25H). EI-MS: m/z 652.5 [M+1].
Primer 40: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-3-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)propil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il))-Nva-DMT-NH ((S)-3-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)prop-1-il), 7j)
[0315]
Jedinjenje 7j
Šema 43
2
1) Korak a: Sinteza (R)-5-(terc-butoksi)-4-((terc-butoksikarbonil)amino)-5-oksopentanskog (izobutil) anhidrida (26)
[0316] U rastvor kiseline 26 (6.0 g, 20.0 mmol) i trietilamina (2.2g , 22.0 mmol) u THF (30 mL ), na -5 °C pod atmosferom azota, dodavan je rastvor izobutil hloroformata (3.26g , 24 mmol) u THF (20 mL.) tokom perioda od 10 minuta. Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta i dobijena smeša je filtrirana i isprana sa THF (15 mL). Ovaj organski rastvor je upotrebljen za sledeći korak reakcije.
2) Korak b: Sinteza terc-butil (R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-5-hidroksipentanoata (27)
[0317] Filtrat iz koraka a je dodavan u kapima tokom 30 minuta u ledeni rastvor natrijum borohidrida (1.52 g, 40 mmol) u vodi (8.6 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata i zatim zakišeljena do pH 2 sa 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (3 × 50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su zatim isprani sa 1 M aq. natrijum bikarbonata (2 × 50 mL), fiziološkim rastvorom (50 mL), osušeni (anhidrovani magnezijum sulfat), filtriran, i koncentrovan in vacuo kako bi se dobio sirovi proizvod, koji je upotrebljen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja (4.5 g, 76%).
3) Korak c: Sinteza terc-butil (R)-5-bromo-2-((terc-butoksikarbonil)amino)pentanoata (28)
[0318] U suspenziju N-bromosukcinimida (2.67 g, 15 mmol) u DCM (40 mL) dodat je trifenilfosfin (3.70g, 14mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 5 minuta i zatim tretiran piridinom (474mg, 6mmol) i jedinjenjem 27 (1.45g, 5mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 16 sati. Rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom i dobijeno crno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni kako bi se dobilo Jedinjenje 28 u vidu bistrog ulja (1.50 g, 85 %).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.08 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 3.43 (m, 2H), 1.93 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.45 (s, 9H).
4) Korak d: Sinteza terc-butil (R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-5-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)pentanoata (30)
[0319] 2-nitro-1H-imidazol (29, 1.0 g, 9.1mmol) je rastvoren u DMF (15mL), dodat je Cs2CO3(3.0g, 9.1mmol) u jednoj porciji, mešano 30min, zatim je u kapima dodavan DMF rastvor (3mL) jedinjenja 28 (2.0g, 5.7mmol) na 0°C, dobijeni rastvor je mešan preko noći, razblažen sa EtOAc, ispran hladnom vodom, fiziološkim rastvorom, osušen na Na2SO4, prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 30 as u vidu bledo žute čvrste supstance (1.1g, 50%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.16 (s, 1H), 5.16 (m, 1H), 4.49 (m, 2H), 4.26 (m, 1H), 1.92 (m, 3H), 2.98 - 2.86 (m, 2H), 1.65 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.46 (s, 9H).
5) Korak e: Sinteza terc-butil (R)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)pentanoata (31)
[0320] Jedinjenje 30 (1.0g, 2.6mmol) je rastvoreno u EtOH (15 mL), dodat je Pd/C (200mg), mešano u atmosferi H2 tokom 5h, rastvor je filtriran kroz sloj celita, koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 31 u vidu gustog ulja (900mg, 98%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.14 (m, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.35 (s, 1H), 5.32 (br, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.63 (m, 2H), 1.52 (m, 4H), 1.61 (s, 9H), 1.59 (s, 9H).
6) Korak f: Sinteza (R)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanske kiseline (32)
[0321] Jedinjenje 31 (1.7g, 4.8mmol) u dioksanu (20 mL), 4N HCl rastvor u dioksanu (24mL) je dodavan u kapima, dobijeni rastvor je mešan 18h, precipitateje saupljen filtracijom, osušen u vakuumu kako bi se dobila čista ciljna supstanca kao beličasta čvrsta supstanca u vidu HCl soli (32, 800 mg, 61%).<1>H NMR (300 MHz, D2O) δ 6.71 (s, 2H), 3.87 (m, 1H), 3.80 (m, 2H),
4
1.84 (m, 4H). MS (M+1): 199.0.
7) Korak g: Sinteza (R)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)pentanske kiseline (1b)
[0322] Rastvor Boc2O (3.018 g, 13.83 mmol) u 15 mL THF dodat je u rastvor 32 (1.5 g, 5.532 mmol) i natrijum karbonata (2.345 g, 22.128 mmol) u 20 mL vode i 3 mL THF. Nakon mešanja preko noći reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana sa DCM. Vodeni sloj je zakišeljen sa 5% limunskom kiselinom i uparen. Prečišćavanje sirovog materijala reverznofaznom fleš hromatografijom dalo je 0.95 g avetatne soli željenog proizvoda u vidu bele čvrste supstance 1b.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.87 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 4.02-4.00 (m, 1H), 3.88 (h, J= 6.8 Hz, 2H), 1.84-1.66 (m, 4H), 1.44 (s, 9H).
8) Korak h: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)propil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)karbamata (34)
[0323] U Fmoc-DMT-OH (33, 1.29 g, 3 mmol, 1 eq), dodat je 5h (1.0 g, 3 mmol, 1 eq), HOBt (689 mg, 4.5 mmol, 1.5 eq) u suvom DMF (15 mL) EDC·HCl (1.43 g, 7.5 mmol, 2.5 eg), zatim je NMM (0.82 mL, 7.5 mmol, 2.5 eq) dodavan u kapima na 0°C. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na s.t tokom 20 sati. Zatim je DMF uparen i sirovi proizvod je ispran sa Et2O (3 × 5 mL). Proizvod je prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom (eluens: H2O (0.2% AcOH)/MeOH od 5% do 85% metanola) kako bi dao 34 u vidu bele pene (1.24g, 56%).<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.79 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.63 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.38 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.29-7.27 (m, 5H), 7.24-7.18 (m, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.25 dd, J = 9.6, 5.4 Hz, 1H), 4.30 (d, J= 6.5 Hz, 2H), 4.24 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 4.17 (t, J= 7.1 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.20-2.98 (m, 3H), 2.93-2.76 (m, 2H), 2.17 (s, 6H), 2.08-2.00 (m, 1H), 1.95-1.87 (m, 1H), 1.36 (s, 9H).
9) Korak i: Sinteza terc-butil ((S)-3-((S)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamido)-3-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)propil)karbamata (35)
[0324] Jedinjenje 34 (1.04 g, 1.2 mmol) je rastvoreno u smeši (10 mL) DMF i piperidina (8:2 po zapremini) i smeša je mešana na rt 1h. Rastvarači su uklonjeni pod vakuumom na rt. zatim je KHSO4aq. rastvor (5%) dodavan do pH 4 i ekstrahovan je sa EtOAc (4x 30 mL). Ekstrakt je osušen preko Na2SO4i uparen do suva. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom (eluens: H2O (0.2% AcOH)/MeOH od 5% do 85% metanola) kako bi dao 35 u vidu bele pene (339 mg, 54%).<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.31-7.22 (m, 5H), 6.38 (s,2H), 5.26 (dd, J = 9.2, 5.6 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.89-3.76 (m, 1H), 3.19-2.91 (m, 4H), 2.14 (s, 6H), 1.94-1.84 (m, 2H), 1.42 (s, 9H).
10) Korak j: Sinteza terc-butil ((8S,11S,14R)-17-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-8-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-1 1-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,10,13-triokso-3-oksa-5,9,12-triazaheptadekan-14-il)karbamata (6h)
[0325] U 35 (343 mg, 0.553 mmol), jedinjenje 5h (165 mg, 0.553 mmol), HOBT (120 mg, 0.754 mmol), EDC.HCl (290 mg, 1.51 mmol) u 6 mL DMF NMM (166 µL, 1.51 mmol) su dodavani u kapima na 0 °C i smeša je mešana na rt tokom 7 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom (eluens: H2O (0.2% AcOH)/MeOH od 5% do 85% metanola) kako bi dao 6h u vidu ulja (297 mg, 67%).<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.30-7.28 (m, 4H), 7.25-7.20 (m, 1H), 6.77 (d, J = 16.2 Hz, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 5.24 (dt, J = 9.6, 4.7 Hz, 1H), 4.78-4.70 (m, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.99-3.95 (m, 2H), 3.80-3.70 (m, 2H), 3.27-3.13 (m, 2H), 3.02-2.83 (m, 2H), 2.29-2.22 (m, 8H), 1.65-1.51 (m, 4H), 1.42-1.36 (m, 18H).
11) Korak k: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-3-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)propil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7j)
[0326] Jedinjenje 6h (290 mg, 0.361 mmol) je rastvoreno u DCM (4 mL) i ohlađeno do 0 °C, TFA (2.6 mL) je dodavano u kapima i rastvor je ostavljen da se meša na 0 °C tokom 10 min, i zatim na rt tokom 2 h (LC/MS ne pokazuje polazni materijal). Zatim je reakciona smeša uparena (na 0-5 °C) i dodatno ponovo uparena iz DCM (20 mL, na 0-5 °C). Prečišćavanje preparativnom HPLC obezbedilo je ciljno jedinjenje 7j u vidu 3 TFA soli (220 mg, 74%).<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.29 (d, J = 4.4 Hz, 4H), 7.24-7.20 (m, 1H), 6.84 (dd, J = 18.8 , 2.5 Hz, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.34 (dd, J = 9.6, 5.1 Hz, 1H), 4.57 (dd, J = 9.1, 6.9 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.96 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.86-3.80 (m, 2H), 3.13-2.99 (m, 3H), 2.92-2.87 (m, 8H), 1.84-1.64 (m, 4H). MS: ELMS: m/z 604.5 [M+1].
Primer 41: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-4-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-4-guanidinobutanamida (D-Agb-DMT-NH(-((S)-4-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)but-1-il), 7k)
[0327]
1) Korak a: Sinteza (R)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-guanidinobutanske kiseline (37)
[0328] U rastvor N<α>-((benziloksi)karbonil)-N<ω>,N<ω'>-bis(terc-butoksikarbonil)-nor-D-arginina (36, 4.00 g; 8.1 mmol) u hladnom (0°C) DCM (25 mL) dodata je u kapima trifluorosirćetna kiselina (12 mL). Rastvor je polako zagrevan do sobne temperature tokom 8 sati. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom; ostatak je suspendovan u benzenu i uparen ponovo. Dobijeno je 3.26 g (99%) staklaste čvrste supstance 37. Sirovi materijal je upotrebljen direktno u sledećem koraku.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.45 - 7.31 (višestruki pikovi, 4H), 7.21 (m, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.30 (dd, J= 9.8, 4.7 Hz, 1H), 3.33 (višestruki pikovi koji se preklapaju sa CD3OH, 2H), 2.23 (m, 1H), 1.94 (m, 1H).
2) Korak b: Sinteza benzil (S)-2-((R)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-4-guanidinobutanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (3b)
[0329] Jedinjenje 37 (2.86 g; 7.0 mmol), DMT-OBn (2a, 1.80 g; 6.0 mmol) i HOBT hidrat (766 mg; 5.0 mmol) su rastvoreni u suvom DMF (35 mL). Rastvor je ohlađen do 0°C i EDCI (3.07 g; 16.0 mmol) je dodat u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana 15 minuta i zatim je Nmetilmorfolin (1.65 mL; 15.0 mmol) dodavan u kapima. Reakcija je zagrevana do sobne temperature tokom 8 sati. U tom trenutku, LC-MS analiza je pokazala potpuno potrošene polazne materijale i formiranje željenog proizvoda. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom (120 g C18 Biotage kolona; mobilna faza 0.1% aq TFA/MeOH sa gradijentom 5% MeOH → 80% MeOH v/v). Dobijeno je 3.18 g (77%) u vidu bele pene, jedinjenja 3b.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.44 - 7.14 (m, 10H), 6.45 (s, 2H), 5.12 (s, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.73 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 8.4, 5.4 Hz, 1H), 3.23 - 3.05 (višestruki pikovi, 3H), 2.99 (dd, J = 14.3, 8.6 Hz, 1H), 2.23 (s, 6H), 1.96 (m, 1H), 1.77 (m, 1H).
3) Korak c: Sinteza (S)-2-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-4-guanidinobutanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (4b)
[0330] Jedinjenje 3b (3.16 g; 4.6 mmol), Boc2O (3.27 g; 15.0 mmol) i Pd/C (10%; 300 mg) su suspendovani u EtOH (120 mL). Reakciona smeša je mešana pod protokom vodonika ~4 h. Napredovanje reakcije je praćeno pomoću LC-MS. Nakon potpune konverzije, reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je resuspendovan u EtOH (~20 mL). Proizvod je kristalisao iz rastvora. Matična tečnost je uklonjena pomoću igle. Precipitat je osušen pod sniženim pritiskom. Dobijeno je 1.79 g (86%) bele čvrste supstance 4b . NMR je pokazala da proizvod sadrži nešto rezidualnog EtOH.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 6.48 (s, 2H), 4.72 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 4.16 (dd, J = 8.1, 5.7 Hz, 1H), 3.23 (dd, J = 14.4, 6.0 Hz, 1H), 3.12 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.02 (dd, J = 14.4, 10.0 Hz, 1H), 2.36 (s, 6H), 1.86 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.49 (s, 9H).
4) Korak d: Sinteza terc-butil ((SR,8S,11R)-1-amino-11-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-8-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-18,18-dimetil-6,9,16-triokso-17-oksa-2,7,15-triazanonadekan-5-il)karbamata (6i)
[0331] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4b (677 mg; 1.5 mmol) i 5i (500 mg; 1.44 mmol) kako bi se dobilo 642 mg (53%) bele pene 6i.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.24 (višestruki pikovi, 5H), 6.35 (s, 2H), 5.16 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.02 (višestruki pikovi, 3H), 3.21 - 2.88 (višestruki pikovi, 5H), 2.83 (dd, J = 14.3, 7.4 Hz, 1H), 2.16 (s, 6H), 1.97 - 1.62 (višestruki pikovi, 7H), 1.58 - 1.31 (višestruki pikovi, 20H).
5) Korak e: Sinteza (R)-2-amino-N-((2S,SR)-8-amino-5-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-1-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-3-oksooktan-2-il)-4-guanidinobutanamida (7k)
[0332] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6i (400 mg; 0.41 mmol) kako bi se dobilo 108 mg (36%) 7k u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.27 (višestruki pikovi, 4H), 7.20 (m, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.21 (dd, J = 9.5, 5.5 Hz, 1H), 4.62 (dd, J = 8.9, 7.4 Hz, 1H), 4.08 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.05 (m, 2H), 3.23 - 3.06 (ms, 3H), 2.96 - 2.88 (m, 3H), 2.20 (s, 6H), 2.07 - 1.85 (m, 4H), 1.84 - 1.61 (m, 2H). ). Molekulska formula: C29H41N9O4· 3HCl; Molekulska težina: 689.08; Molekulska težina slobodne baze: 579.71. EI-MS: m/z 580.5 [M+1].
Primer 42: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-4-amino-1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamid (D-(δ(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-4-amino-1-(3-cikloheksilmetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)but-1-il), 7l)
[0333]
1) Korak a: Sinteza benzil (S)-2-((R)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)pentanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (3c)
[0334] U smešu (R)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)pentanske kiseline (1b, 3.00 g, 10.1 mmol, napravljena prema šemi 43), benzil (5)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (2a, 3.63 g, 12.1 mmol), EDC (N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid) hidrohlorida (5.82 g, 30.3 mmol) i HOBt (1-hidroksibenzotriazol) (2.32 g, 15.2 mmol), dodat je suvi DMF (60 mL) i dobijena smeša je mešana na s.t. tokom 15 min. Zatim je dodat N-metil morfolin (3.3 mL, 30.3 mmol) i reakciona smeša je mešana na s.t. tokom 20 h. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i rezidualna smeša je razblažena sa EtOAc (800 mL) i zasićenim vodenim NaHCOs (100 mL) i mešana na s.t. tokom 20 min. Vodena faza je odvojena, a organska faza je oprana vodom (3 × 100 mL) i fiziološkim rastvorom (100 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je rastvoren u EtOH (200 mL) i u dobijeni rastvor je dodat 1 % rastvor AcOH u EtOH (50 mL) i nakon uklanjanja isparljivih materija sirovi proizvod je prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom pomoću smeše MeOH i 0.1 % rastvora AcOH u vodi kao eluensa. Proizvod je izašao iz kolone na 30-65 % MeOH kako bi se dobio 3c (3.8 g) sa prinosom od 59 %.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 7.37-7.14 (m, 5H), 6.79-6.72 (m, 2H), 6.42 (s, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.77-4.66 (m, 1H), 4.14-4.03 (m, 1H), 3.83-3.65 (m, 2H), 3.20-3.08 (m, 1H), 3.04-2.90 (m, 1H), 2.23 (s, 6H), 1.72-1.32 ppm (m, 13H).
2) Korak b: Sinteza (S)-2-((R)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)pentanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (4c)
[0335] U rastvor 3c (3.8 g, 5.94 mmol) u MeOH (150 mL) dodat je paladijum na aktivnom uglju (10 % wt, 190 mg). vodonik je barbotiran kroz suspenziju koja se mešala na s.t. tokom 1 h. Reakciona smeša je filtrirana kako bi se uklonili paladijum i aktivni ugalj i dobijeno bistri rastvor je uparen. Sirovi proizvod je prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom koristeći smešu MeOH i 0.1 % rastvora AcOH u vodi kao eluens. Proizvod je izašao iz kolone u 34 % MeOH kako bi se dobio 4c (2.60 g) sa prinosom od 80 %.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 6.83-6.75 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 4.65-4.55 (m, 1H), 4.07-3.98 (m, 1H), 3.81-3.69 (m, 2H), 3.19-3.08 (m, 1H), 2.97-2.85 (m, 1H), 2.29 (s, 6H), 1.72-1.36 ppm (m, 13H).
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((9S,12S,15R)-18-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-9-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-12-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,11,14-triokso-3-oksa-5,10,13-triazaoctadekan-15-il)karbamata (6j)
[0336] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4c (422 mg, 0.77 mmol) i 12j (380 mg, 0.92 mmol) kako bi se dobio 6j (0.342g, 53%).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ
1
6.83 - 6.76 (m, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.18 (dd, J= 9.1, 5.8 Hz, 1H), 4.71 - 4.61 (m, 1H), 4.01 - 3.95 (m, 1H), 3.84 - 3.69 (m, 2H), 3.19 - 3.10 (m, 1H), 3.09 - 3.01 (m, 2H), 2.92 - 2.82 (m, 1H), 2.58 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 2.30 (s, 1H), 2.23 (s, 6H), 2.05 - 1.85(m, 2H), 1.95 (s, 4H), 1.79 - 1.61 (m, 9H), 1.60 - 1.48 (m, 4H), 1.42 (s, 19H), 1.32 - 1.15 (m, 4H), 1.08 - 0.95 (m, 2H).
4) Korak d: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-4-amino-1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7l)
[0337] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6j (400 mg, 0.49 mmol) kako bi se dobio 7l (220 mg, 72%) u vidu bledo žute pene.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.88 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.38 (s, 2H), 5.21 (dd, J = 9.2, 6.0 Hz, 1H), 4.71 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 3.97 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 3.82 (dt, J = 14.1, 7.1 Hz, 2H), 3.17 - 3.08 (m, 1H), 3.00-2.86 (m, 3H), 2.60 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 2.24 (s, 6H), 2.12 - 2.01 (m, 1H), 2.00 - 1.90 (m, 1H), 1.83 - 1.56 (m, 12H), 1.33 - 1.15 (m, 3H), 1.10 - 0.96 (m, 2H). MS: ELMS: m/z 624.6 [M+1].
Primer 43: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-4-amino-1-(3-(biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-4-amino-1-(3-(biciklo[2.2.2]oktan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)but-1-il), 7m)
[0338]
Jedinjenje 7m
1 1
Šema 46
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((9S,12S,15R)-18-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-9-(3-(biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-12-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,11,14-triokso-3-oksa-5,10,13-triazaoctadekan-15-il)karbamata (6k)
[0339] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4c (783 mg; 1.60 mmol) i 5k (490 mg; 1.3 mmol) kako bi se dobio 6k 106 mg (10%) u vidu bele pene. LC-MS analiza je pokazala jedinstven pik sa [M+H]<+>= 850.5 Da. Proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez dalje karakterizacije.
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-4-amino-1-(3-(biciklo[2.2.2]oktan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7m)
[0340] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6k (100 mg; 0.12 mmol) kako bi se dobio 7m (28 mg, 31%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.86 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.19 (dd, J = 9.3, 5.7 Hz, 1H), 4.72 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.00 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 3.92 - 3.74 (m, 2H), 3.12 (dd, J = 14.2, 8.2 Hz, 1H), 3.02 - 2.84 (m, 3H), 2.45 (s, 2H), 2.23 (s, 6H), 2.11 - 1.88 m, 2H), 1.88 - 1.47 (m, 13H), 1.47 -1.37 (m, 6H). molekulska formula: C43H55N9O4· 2HCl; Molekulska težina: 834.89; Molekulska težina slobodne baze: 761.97. ELMS: m/z 762.7 [M+1].
Primer 44: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-l,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobut-1-il), 7n)
[0341]
1 2
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((9S,12S,15R)-9-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-18-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-12-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,11,14-triokso-3-oksa-5,10,13-triazaoctadekan-15-il)karbamata (6l)
[0342] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4c (5.0 g, 9.097 mmol) i 5l (4.05 g, 10.0 mmol) kako bi se dobio 6l (4.0 G) u vidu acetata koji je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7n)
[0343] Ista procedura kao što je opisana u šemi 37 uz upotrebu 6l (4.0 g, 4.273 mmol) kako bi se dobio 7n (2.3 g).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.88 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.39 (s, 2H), 5.22 (dd, J = 9.2, 5.6 Hz, 1H), 4.79 - 4.75 (m, 1H), 4.04 - 3.98 (m, 1H), 3.90 -3.77 (m, 2H), 3.14 (dd, J = 14.2, 8.2 Hz, 1H), 3.01 - 2.90 (m, 3H), 2.49 (s, 2H), 2.26 (s, 6H), 2.12 - 1.98 (m, 2H), 1.94 (s, 3H), 1.88 - 1.78 (m, 2H), 1.78 - 1.69 (m, 5H), 1.67 - 1.62 (m, 4H), 1.62-1.56 (m, 7H). ). MS: ELMS: m/z 676.7 [M+1].
Primer 45: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((R)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((R)-1-(3-
1
(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobut-1-il), 7o)
[0344]
Jedinjenje 7o
[0345] Jedinjenje 7o je izolovano prema šemi 47:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.89 (m, 1H), 6.82 (m, 1H), 6.52 (s, 2H), 5.02 (m, 1H), 4.66 (m, 1H), 3.97 (m, 1H), 3.85 (m, 2H), 3.24 (m, 1H), 3.80 (m, 3H), 2.30 (m, 2H), 2.26 (s, 6H), 1.10-1.90 (m, 23H). MS: ELMS: m/z 676.6 [M+1].
Primer 46: Sinteza (2R)-N-((2S)-1-(((1S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobut-1-il), 7p)
[0346]
1 4
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((9S,12S,15R)-9-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-18-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-12-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,11,14-triokso-3-oksa-5,10,13-triazaoctadekan-15-il)karbamata (6m)
[0347] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4c (1.24 g, 2.304 mmol) i 5m (1.0 g, 2.56 mmol) kako bi se dobio 6m u vidu bele pene (910 mg, 44%).<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 6.80-6.78 (m, 2H), 6.37 (s, 2H), 5.22- 5.16 (m, 1H), 4.68-4.61 (m, 1H), 4.01-3.96 (m, 1H), 3.82-3.71 (m, 2H), 3.09-3.02 (m, 2H), 2.90-2.83 (m, 1H), 2.23 (s, 6H), 2.07-2.03 (m, 14 H), 1.86-1.79 (m, 6H), 1.67-1.50 (m, 4H), 1.42 (s, 18H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-4-aminobutil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7p)
[0348] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6m (910 mg, 1.02 mmol) kako bi se dobio 7p (370 mg, 98%) u vidu belog praška.<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.88 (q, J = 2.3 Hz, 2H), 6.38 (s, 2H), 5.24 (dd, J= 9.1, 5.8 Hz, 1H), 4.70 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 4.06-3.97 (m, 1H), 3.14 (dd, J= 14.2, 8.5 Hz, 1H), 3.00- 2.87 (m, 3H), 2.25 (s, 6H), 2.09-1.98 (m, 11H), 1.88-1.59 (m, 12 H). MS: 661.85. ELMS: m/z 662.6 [M+1].
Primer 47: Sinteza (2R)-N-((2S)-1-(((1S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-(dimetilamino)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-dimetilaminopent-1-il), 7q)
[0349]
Jedinjenje 7q
1
Šema 49
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((2R)-1-(((2S)-1-(((1S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-(dimetilamino)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6n)
[0350] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4c (100 g, 0.182 mmol) i 5n (102 mg, 0.182 mmol) kako bi se dobio 6n (121 mg, 72%, sadrži 11% epimera) u vidu providne amorfne čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ: 6.84 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.37 (s, 2H), 5.18 (dd, J = 8.5, 6.3 Hz, 1H), 4.60 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.03 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.91 - 3.68 (m, 2H), 3.20 - 2.96 (m, 3H), 2.84 (s, 6H), 2.22 (s, 6H), 2.07 (br s, 3H), 2.03 - 1.90 (m, 11H), 1.89 - 1.46 (m, 14H), 1.42 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (2R)-N-((2S)-1-(((1S)-1-(3-(adamantan-1-il)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-(dimetilamino)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7q)
[0351] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6n (160 mg, 0.173 mmol) kako bi se dobio 7q (105 mg, 58%, čistoća na osnovu HPLC - 99.2% (210 nm)).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 6.86 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.39 (s, 2H), 5.16 (dd, J = 9.0, 6.0 Hz, 1H), 4.69 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.96 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.89 - 3.75 (m, 2H), 3.17 - 3.04 (m, 3H), 2.90 (dd, J = 8.9, 5.4 Hz, 1H), 2.87 (s, 6H), 2.23 (s, 6H), 2.10 - 1.26 (m, 25H). MS: ELMS: m/z 704.7 [M+1].
Primer 48: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7r)
[0352]
1
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-guanidino-1-oksopentan-2-il)karbamata (6o)
[0353] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (3.63 g; 7.80 mmol) i 5o (2.30g; 6.38mmol) kako bi se dobio 6o (4.18g, 78%) dobijen u vidu bele pene. HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečićavanja i bez karakterizacije.
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7r)
[0354] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6o (4.10 g; 4.86 mmol) kako bi se dobio 7r (1.56 g, 45%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.34 -7.12 (m, 5H), 6.47 (s, 2H), 5.02 (dd, J = 8.9, 5.6 Hz, 1H), 4.74 (dd, J = 9.9, 6.9 Hz, 1H), 4.01 (pretpostavljeni singlet, 2H), 3.92 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.18 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.13 (dd, J = 14.0, 9.8 Hz, 1H), 2.91 (dd, J = 14.0, 6.9 Hz, 1H), 2.87 - 2.81 (m, 2H), 2.29 (s, 6H), 1.91 - 1.61 (m, 4H), 1.62 - 1.44 (m, 4H), 1.08 (p, J = 8.0 Hz, 2H). MS: ELMS: m/z 608.3 [M+1].
Primer 49: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil-2,2,3,3,4,4,5,5-d8)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-
1
guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2,2,3,3,4,4,5,5-d8-pent-1-il), 7s)
[0355]
Jedinjenje 7s
Primer 50: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil-2,2,3,3,4,4,5,5-d8)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((R)-5-amino-1-(3-benzil 1,2,4-oksadiazol-5-il)-2,2,3,3,4,4,5,5-d8-pent-1-il), 7t)
[0356]
Jedinjenje 7t
Šema 51
1
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil-2,2,3,3,4,4,5,5-d8)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-guanidino-1-oksopentan-2-il)karbamata (6p) i terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil-2,2,3,3,4,4,5,5-d8)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-guanidino-1-oksopentan-2-il)karbamata (6q)
[0357] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (1213 mg, 2.61 mmol) i 5p (835 mg, 2.27 mmol) kako bi se dobili 6p i 6q u vidu bele pene (1.68 g, 87%, 32% epimer prema<1>H NMR, čistoća na osnovu HPLC 92%).<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ: 7.37 - 7.17 (m, 5H), 6.38 (s, 2H), 5.12 (s, 1H), 4.60 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 4.01 - 3.90 (m, 1H), 3.19 -3.05 (m, 3H), 2.95 - 2.77 (m, 1H), 2.20 (s, 6H), 1.76 - 1.24 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.41 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7s) i (R)-2-amino-N-((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil-2,2,3,3,4,4,5,5-d8)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7t)
[0358] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu smeše 6p i 6q (1.68 g, 1.97 mmol) kako bi se dobili 7s (500 mg):<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.36 - 7.13 (m, 5H), 6.39 (s, 2H), 5.13 (s, 1H), 4.68 (dd, J = 8.9, 7.4 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 3.94 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 3.16 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.09 (dd, J = 14.1, 9.0 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 14.1, 7.4 Hz, 1H), 2.21 (s, 6H), 1.86 - 1.66 (m, 2H), 1.56 - 1.36 (m, 2H). MS: EI-MS: m/z 616.4 [M+1]; i 7t (150 mg):<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.35 - 7.19 (m, 5H), 6.49 (s, 2H), 5.05 - 5.00 (m, 1H), 4.76 (dd, J = 9.8, 6.8 Hz, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.93 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.24 - 3.11 (m, 3H), 2.93 (dd, J =
1
14.0, 7.0 Hz, 1H), 2.31 (s, 6H), 1.91 - 1.72 (m, 2H), 1.61 - 1.47 (m, 2H). MS: EI-MS: m/z 616.4 [M+1].
Primer 51: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenil-1,2,4-oksadiazol-5-il)et-1-il), 7u)
[0359]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-guanidino-1-oksopentan-2-il)karbamata (6r)
[0360] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (112 mg, 0.241 mmol) i 5q (174 mg, 0.362 mmol) kako bi se dobio 6r (80 mg) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ: 8.81 (s, 1H), 8.05 (d, J=12 Hz, 2H), 7.60-7.49 (m, 3H), 7.39 (s, 1H), 6.37 (s, 2H), 5.65-5.61 (m, 1H), 4.58-4.53 (m, 1H), 4.05-3.98 (m, 1H), 3.59-3.33 (m, 2H), 3.26-3.10 (m, 3H), 2.93-2.86 (m, 1H), 2.23 (s, 6H), 1.72-1.37 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-
11
guanidinopentanamida (7u)
[0361] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu smeše 6q (80 mg, 0.086 mmol) kako bi se dobio 7u (57 mg) u vidu bele čvrste supstance (čistoća na osnovu HPLC > 99%)..<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ: 8.81 (s, 1H), 8.05 (d, J=11.6 Hz, 2H), 7.59-7.51 (m, 3H), 7.40 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 5.64-5.61 (m, 1H), 4.64-4.60 (m, 1H), 3.96-3.93 (m, 1H), 3.54-3.31 (m, 2H), 3.19-3.10 (m, 3H), 2.92-2.86 (m, 1H), 2.22 (s, 6H), 1.86-1.75 (m, 2H), 1.70-1.51 (m, 2H). ). MS: EI-MS: m/z 603.6 [M+1].
Primer 52: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7v)
[0362]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-guanidino-1-oksopentan-2-il)karbamata (6s)
[0363] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (50 mg, 0.107 mmol) i 12r (80 mg, 0.160 mmol) kako bi se dobio 6s (30 mg) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ: 8.74 (s, 1H), 7.34-7.21 (m, 6H), 6.38 (s, 2H), 5.54-5.48 (m, 1H), 4.514.46 (m, 1H), 4.07 (s, 2H), 4.08-3.98 (m, 2H), 3.41-3.26 (m, 1H), 3.24-3.11 (m, 3H), 2.88-2.81 (m, 1H), 2.19 (s, 6H), 1.73-1.30 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7v)
[0364] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu smeše 6r (30 mg, 0.032 mmol) kako bi se dobio 7v (17 mg) u vidu bele čvrste supstance (čistoća na osnovu HPLC > 99%).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ: 8.74 (s, 1H), 7.33-7.21 (m, 6H), 6.38 (s, 2H), 5.54-5.49 (m, 1H), 4.56-4.50 (m, 1H), 4.12 (s, 2H), 4.02-3.90 (m, 2H), 3.40-3.26 (m, 1H), 3.24-3.08 (m, 3H), 2.88-2.83 (m, 1H), 2.19 (s, 6H), 1.87-1.70 (m, 2H) 1.56-1.36 (m, 2H). MS: ELMS: m/z 617.8 [M+1].
Primer 53: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)et-1-il), 7w)
[0365]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-guanidino-1-oksopentan-2-il)karbamata (6t)
[0366] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4a (122 mg, 0.262 mmol) i 12s (200 mg, 0.393 mmol) kako bi se dobio 6t (120 mg) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ: 8.79 (s, 1H), 7.30-7.14 (m, 6H), 6.37 (s, 2H), 5.55-5.50 (m, 1H), 4.57-4.47 (m, 1H), 4.04-3.98 (m, 1H), 3.46-3.30 (m, 1H), 3.21-3.04 (m, 8H), 2.92-2.83 (m, 1H), 2.21 (s, 6H), 1.80-1.41 (m, 4H), 1.53 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-2-(1H-imidazol-4-il)-1-(3-fenetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (7w)
[0367] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu smeše 6s (110 mg, 0.115 mmol) kako bi se dobio 7w (70 mg) u vidu bele čvrste supstance (čistoća na osnovu HPLC > 98%).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ: 8.75 (s, 1H), 7.30-7.16 (m, 6H), 6.36 (s, 2H), 5.55-5.51 (m, 1H), 4.58-4.54 (m, 1H), 3.94-3.91 (m, 1H), 3.41-3.35 (m, 1H), 3.26-3.2.99 (m, 4H), 3.04 (s, 2H) 3.21-3.04 (m, 8H), 2.90-2.84 (m, 1H), 2.21 (s, 6H), 1.85-1.71 (m, 2H), 1.59-1.38 (m, 2H). ). MS: ELMS: m/z 631.7 [M+1].
Primer 54: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7x)
[0368]
Jedinjenje 7x
Šema 55
11
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)karbamata (39)
[0369] U smešu 12t (0.15 g, 0.393 mmol) i Boc-DMT-OH (38, 0.134 g, 0.432 mmol) u 10 mL DMF, dodat je EDCI·HCl (0.188 G, 0.982 mmol), a nakon toga i HOBt·H2O (0.108 g, 0.707 mmol). Nakon 10-15 min dodat je NMM (0.119 g, 1.179 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim su isparljive supstance uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je uparen sa vodenim rastvorom 5% limunske kiseline. Dobijeni ostatak je prečišćen reverznofaznom fleš hromatografijom kako bi se dobio željeni proizvod (39, 0.165 g).
2) Korak b: Sinteza (S)-N-((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamida (40)
[0370] U ohlađen rastvor 39 (0.165 g, 0.26 mmol) u DCM (20 mL) dodat je TFA (8 mL). Zatim je uklonjeno ledeno/vodeno kupatilo i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je koncentrovan iz toluena (2x). Dobijeni ostatak (40) je upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.71 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.59-7.56 (m, 4H), 7.44-7.40 (m, 2H), 7.36-7.31 (m, 3H), 7.18 (s, 1H), 6.38 (s, 2H), 5.59 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 4.12 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 3.91 (dd, J = 11.2, 5.0 Hz, 1H), 3.29-3.13 (m, 3H), 2.97 (dd, J = 14.0, 5.1 Hz, 1H), 2.16 (s, 6H).
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6u)
[0371] U smešu 1b (0.091 g, 0.254 mmol) i 40 (0.165 g, 0.254 mmol) u 15 mL DMF dodat je EDCI·HCl (0.122 g, 0.635 mmol), a nakon toga i HOBt·H2O (0.078 g, 0.508 mmol). Nakon 10-15 min dodat je NMM (0.098 g, 0.965 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dalje, isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je uparen sa 5% vodenog rastvora limunske kiseline. Dobijeni ostatak je ispran kroz reverzno-faznu fleš kolonu i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
4) Korak d: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7x)
[0372] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu smeše 6t (0.11 g, 0.125 mmol) kako bi se dobio 7x (52 mg) u vidu bele čvrste supstance. (čistoća na osnovu HPLC je 97.2% na 210 nm).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.72 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.54-7.52 (m, 4H), 7.40-7.26 (m, 6H), 6.84 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.35 (s, 2H), 5.50 (dd, J = 8.9, 5.8 Hz, 1H), 4.52 (dd, J = 9.2, 7.1 Hz, 1H), 4.10 (s, 2H), 3.90 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 3.79 (p, J = 7.3 Hz, 2H), 3.35 (dd, J = 15.4, 5.6 Hz, 1H), 3.25-3.22 (m, 1H), 3.02 (dd, J = 14.2, 9.2 Hz, 1H), 2.80 (dd, J = 14.1, 7.1 Hz, 1H), 2.16 (s, 6H), 1.79-1.56 (m, 4H). MS: ELMS: m/z 717.5 [M+1].
Primer 55: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7y)
[0373]
Jedinjenje 7y
Šema 56
11
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6v)
[0374] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 12u (795 mg, 2.18 mmol) i 4c (1.0 g, 1.82 mmol) kako bi se dobio 6v (1.1 g, 71%) u vidu bele pene.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ: 7.88 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.48 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.65 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.01 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.88 - 3.66 (m, 2H), 3.10 (dd, J = 14.2, 7.0 Hz, 1H), 2.85 (dd, J = 14.3, 8.2 Hz, 1H), 2.45 (s, 2H), 2.22 (s, 6H), 1.94 (s, 3H), 1.79 - 1.48 (m, 15H), 1.43 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7y)
[0375] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6u (1.1 g, 1.28 mmol) kako bi se dobio 7y (305 mg, 31%, HPLC 98.4% (210 nm)).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.86 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 6.88 (dd, J = 5.4, 2.5 Hz, 2H), 6.38 (s, 2H), 5.55 (dd, J = 8.7, 5.9 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.03 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.97 - 3.79 (m, 2H), 3.43 (qd, J = 15.4, 7.2 Hz, 2H), 3.11 (dd, J = 14.2, 8.7 Hz, 1H), 2.88 (dd, J = 14.2, 7.5 Hz, 1H), 2.49 (s, 2H), 2.23 (s, 6H), 1.95 (s, 3H), 1.87 - 1.53 (m, 16H). MS: ELMS: m/z 699.6 [M+1].
Primer 56: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7z)
[0376]
11
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6w)
[0377] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 12v (446 mg, 1.18 mmol) i 4c (649 mg, 1.18 mmol) kako bi se dobio 6w (0.4 g) sa prinosom od 39 %.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 7.49 (s, 1H), 6.86 - 6.75 (m, 3H), 6.36 (s, 2H), 5.45-5.36 (m, 1H), 4.73 - 4.62 (m, 1H), 4.64-4.52 (m, 2H), 4.04-3.96 (m, 1H), 3.83-3.71 (m, 2H), 3.66-3.55 (m, 3H), 2.90-2.77 (m, 2H), 2.45 (s, 2H), 2.22 (s, 6H), 1.98-1.89 (m, 3H), 1.79 - 1.28 ppm (m, 25H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7z)
[0378] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6v (400 mg, 0.458 mmol) kako bi se dobio 7z (75 mg) sa prinosom od 22 %.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.82-8.81 (m, 1H), 7.38-7.36 (m, 1H), 6.90-6.86 (m, 2H), 6.37 (s, 2H), 5.52-5.46 (m, 1H), 4.63-4.57 (m, 1H), 4.03-3.95 (m, 1H), 3.93-3.80 (m, 5H), 3.45-3.33 (m, 2H), 3.16-3.08 (m, 1H), 2.91-2.83 (m, 1H), 2.55-2.46 (m, 2H), 2.23 (s, 6H), 1.98-1.91 (m, 3H), 1.86-1.54 ppm (m, 16H). MS: ELMS: m/z 713.5 [M+1].
Primer 57: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-
11
3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)et-1-il), 7aa)
[0379]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-guanidino-1-oksopentan-2-il)karbamata (6x)
[0380] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 12x (64 mg, 0.20 mmol) i 4c (100 mg, 0.20 mmol) kako bi se dobio 6x (144 mg, 87%) u vidu žućkaste pene.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ: 7.40 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.32 - 7.13 (m, 7H), 7.06 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.94 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.44 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.64 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.06 -3.90 (m, 3H), 3.13 - 2.93 (m, 3H), 2.80 (dd, J = 14.2, 7.7 Hz, 1H), 2.15 (s, 6H), 1.71 - 1.31 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7aa)
[0381] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6x (144 mg, 0.174 mmol) kako bi
11
se dobio 7aa (82 mg, 53%) sa čistoćom na osnovu HPLC - 99.3%.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ: 7.40 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.33 - 7.13 (m, 6H), 7.07 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 6.95 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 6.99 - 6.91 (m, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.45 (dd, J = 8.2, 6.8 Hz, 1H), 4.71 (dd, J = 8.7, 7.6 Hz, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 3.90 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 3.40 - 3.33 (m, 1H), 3.29 - 3.22 (m, 1H), 3.15 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.92 (ddd, J = 21.5, 14.1, 8.2 Hz, 2H), 2.17 (s, 6H), 1.88 - 1.62 (m, 2H), 1.58 - 1.31 (m, 2H). MS: EI-MS: m/z 666.50 [M+1].
Primer 58: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)et-1-il), 7ab)
[0382]
Jedinjenje 7ab
Šema 59
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)karbamata (41)
11
[0383] Ista procedura kao što je opisana u šemi 55 uz upotrebu 12y (0.5 g, 1.16 mmol) i 38 (0.395 g, 1.276 mmol) kako bi se dobio 41 (0.584 g) u vidu smeđe čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.56 (m, 2H), 7.53-7.50 (m, 2H), 7.40 (q, J = 7.7 Hz, 3H), 7.34-7.28 (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 7.05 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.96-6.92 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.47 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 4.22 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.35 (s, 2H), 2.94 (dd, J = 14.1, 8.6 Hz, 1H), 2.74 (dd, J = 14.2, 7.2 Hz, 1H), 2.14 (s, 6H), 1.38 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (S)-N-((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamida (42)
[0384] Ista procedura kao što je opisana u šemi 55 uz upotrebu 41 (0.2 g, 0.292 mmol) kako bi se dobio 42 koji je upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanold4) δ 7.59-7.51 (m, 4H), 7.45-7.28 (m, 5H), 7.22-7.19 (m, 2H), 7.06 (ddd, J = 8.2, 7.1, 1.1 Hz, 1H), 6.94 (ddd, J = 7.9, 7.2, 0.9 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.34 (s, 2H), 5.56-5.50 (m, 1H), 4.05 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 3.88 (dd, J = 11.1, 5.1 Hz, 1H), 3.28-3.23 (m, 2H), 3.14 (dd, J = 13.9, 11.1 Hz, 1H), 2.96 (dd, J = 14.0, 5.2 Hz, 1H), 2.10 (s, 6H).
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6y)
[0385] Ista procedura kao što je opisana u šemi 55 uz upotrebu 42 (0.32 g, 0.368 mmol) i 1b (0.145 g, 0.405 mmol) kako bi se dobio 6y, koji je ispran kroz reverzno-faznu fleš kolonu i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja
4) Korak d: Sinteza (S)-N-((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamida (7ab)
[0386] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6y (0.1 g, 0.108 mmol) kako bi se dobio 7ab (35 mg) u vidu bele čvrste supstance. (čistoća na osnovu HPLC je 99.0% na 210 nm)<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.54-7.49 (m, 4H), 7.43-7.38 (m, 3H), 7.34-7.29 (m, 2H), 7.26-7.22 (m, 2H), 7.09-7.05 (m, 1H), 6.98-6.94 (m, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.87 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.35 (s, 2H), 5.46 (dd, J = 8.4, 6.7 Hz, 1H), 4.72 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 4.06 (s, 2H), 3.92-3.77 (m, 3H), 3.37 (dd, J = 14.4, 8.5 Hz, 1H), 3.30-3.26 (m, 1H), 2.99 (dd, J = 14.2, 8.8 Hz, 1H), 2.81 (dd, J = 14.1, 7.7 Hz, 1H), 2.16 (s, 6H), 1.78-1.54 (m, 4H). MS:
12
ELMS: m/z 766.5 [M+1].
Primer 59: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)et-1-il), 7ac)
[0387]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)karbamata (43)
[0388] Ista procedura kao što je opisana u šemi 55 uz upotrebu 12z (0.376 g, 1.0 mmol) i 38 (0.39 g, 1 mmol) kako bi se dobio 43 (0.51 g) i upotrebio u sledećem koraku.
2) Korak b: Sinteza (S)-N-((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamida (44)
[0389] Ista procedura kao što je opisana u šemi 55 uz upotrebu 43 (0.51 g, 0.76 mmol) kako bi se dobio 44 (0.75 g) koji je upotrebljen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6z)
[0390] Ista procedura kao što je opisana u šemi 55 uz upotrebu 44 (0.27 g, 0.4 mmol) i 1b (0.18 g, 0.5 mmol) kako bi se dobio 6z (128 mg) koji je ispran kroz reverzno-faznu fleš kolonu i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja
4) Korak d: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7ac)
[0391] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6z (0.120 g, 0.14 mmol) kako bi se dobio 7ac (24 mg) u vidu bele čvrste supstance. (čistoća na osnovu HPLC je 97.0% na 210 nm).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.47 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 14.4, 7.2 Hz, 1H), 6.99 (dd, J = 16.4, 7.2 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H),6.33 (s, 2H), 5.51 (dd, J = 8.8, 6.4 Hz, 1H), 4.76 (dd, J = 16.4, 8.8 Hz, 1H), 3.93-3.90 (m, 1H), 3.85-3.79 (m, 1H), 3.42-3.33 (m, 1H), 3.06-3.01 (m, 1H), 2.4 (s, 2H), 1.95 (s, 2H), 1.88-1.28 (višestruki pikovi, 22H). MS: EI-MS: m/z 748.6 [M+1].
Primer 60: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il) etil) amino)-3-(4-hidroksi -2, 6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)et-1-il), 7ad)
[0392]
Jedinjenje 7ad
Šema 61
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6aa)
[0393] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 12aa (188 mg; 0.44mmol) i 4c (181 mg; 0.37mmol) kako bi se dobio 6aa (115 mg, 36%) u vidu bele pene.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.36 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.02 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.90 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.82 (bs, 1H), 6.54 (m, 2H), 6.24 (s, 2H), 5.37 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.56 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 3.90 (bs, 1H), 3.68 - 3.51 (m, 5H), 3.40 - 3.21 (m, 2H), 2.96 (dd, J = 13.5, 8.2 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 14.2, 7.8 Hz, 1H), 2.29 (s, 2H), 2.08 (s, 6H), 1.78 (bs, 3H), 1.67 - 1.39 (m, 10H), 1.40 - 1.24 (m, 15H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7ad)
[0394] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6aa (115 mg; 0.13 mmol) kako bi se dobio 7ad (35 mg, 31%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.45 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.99 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.87 - 6.79 (m, 2H), 6.32 (s, 2H), 5.46 (dd, J = 8.7, 6.4 Hz, 1H), 4.76 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.94 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 3.84 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 14.4, 8.7 Hz, 1H), 3.31 (dd, 1H), 3.03 (dd, J = 14.0, 8.7 Hz, 1H), 2.85 (dd, J = 14.0, 7.6 Hz, 1H), 2.38 (m, 2H), 2.17 (s, 6H), 1.86 (bs, 3H), 1.81 - 1.49 (m, 10H), 1.42 (bs, 6H). MS: EI-MS: m/z 762.7 [M+1].
Primer 61: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2, 6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)et-1-il), 7ae)
12
Jedinjenje 7ae
Šema 62
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6ab)
[0396] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 12ab (203 mg; 0.40mmol) i 4c (188 mg; 0.32mmol) kako bi se dobio 6ab (164 mg, 53%) kao žućkasta pena.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.26 (dd, J = 8.9, 4.4 Hz, 1H), 7.17 (dt, J = 9.9, 2.9 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.91 - 6.76 (m, 3H), 6.69 (s, 2H), 5.49 (dd, J = 8.9, 6.6 Hz, 1H), 4.71 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.04 (m, 1H), 3.94 - 3.70 (m, 2H), 3.44 - 3.26 (m, 2H), 3.18 (dd, J = 13.8, 8.4 Hz, 1H), 2.96 (dd, J = 14.0, 7.2 Hz, 1H), 2.45 - 2.36 (m, 2H), 2.29 (s, 6H), 1.91 (bs, 3H), 1.78 - 1.36 (m, 34H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7ae)
[0397] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ab (164 mg; 0.17 mmol) kako bi se dobio 7ae (37 mg, 26%) kao žućkasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.23 (dd, J = 8.8, 4.3 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 9.8, 2.4 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.88 - 6.84 (m, 2H), 6.81 (td, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 6.31 (s, 2H), 5.45 (dd, J = 9.0, 6.4 Hz, 1H), 4.71 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.95 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 3.85 (m, 2H), 3.34 (dd, J = 14.4, 9.1 Hz, 1H), 3.26 (dd, J = 14.4, 6.3 Hz, 1H), 3.02 (dd, J = 14.1, 8.7 Hz, 1H), 2.85 (dd, J = 14.1, 7.6 Hz, 1H), 2.38 (m, 2H), 2.18 (s, 6H), 1.85 (bs, 3H), 1.81 - 1.57 (m, 7H), 1.53 (bd, J = 11.7 Hz, 3H), 1.40 (bs, 6H). MS: EI-MS: m/z 766.7 [M+1].
Primer 62: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)et-1-il), 7af)
[0398]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6ac)
[0399] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 12ac (311 mg; 0.60 mmol) i 4c (250 mg; 0.51 mmol) kako bi se dobio 6ac (130 mg, 39%) u vidu bele pene.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.50 - 7.38 (višestruki pikovi, 4H), 7.36 - 7.08 (višestruki pikovi, 7H), 7.01
12
(t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.86 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.69 (bs, 1H), 6.43 (m, 2H), 6.24 (s, 2H), 5.31 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 4.52 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 3.97 - 3.82 (m, 3H), 3.59 (bs, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.33 - 3.13 (m, 2H), 2.93 (dd, J = 14.0, 7.6 Hz, 1H), 2.68 (dd, J = 14.0, 7.9 Hz, 1H), 2.04 (s, 6H), 1.65 - 1.37 (m, 4H), 1.31 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7af)
[0400] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ac (130 mg; 0.15 mmol) kako bi se dobio 7af (47 mg, 37%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.53 - 7.45 (m, 4H), 7.39 (m, 3H), 7.29 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.23 (m, 3H), 7.10 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.95 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.84 (m, 2H), 6.77 (s, 1H), 6.33 (s, 2H), 5.40 (dd, J = 8.2, 6.6 Hz, 1H), 4.68 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 4.03 (m, 2H), 3.94 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 3.90 - 3.74 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.33 (dd, J = 14.4, 8.2 Hz, 1H), 3.25 (dd, 1H), 2.98 (dd, J = 14.2, 8.7 Hz, 1H), 2.80 (dd, J = 14.2, 7.7 Hz, 1H), 2.14 (s, 6H), 1.83 - 1.53 (m, 4H). MS: ELMS: m/z 780.6 [M+1].
Primer 63: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(piridin-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(piridin-4-il)et-1-il), 7ag)
[0401]
Jedinjenje 7ag
Šema 64
12
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(piridin-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-guanidino-1-oksopentan-2-il)karbamata (6ad)
[0402] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 12ad (0.482g, 0.85 mmol) i 4a (0.356 g, 0.71 mmol) kako bi se dobio 6ad (250 mg, 37%).<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8.40 (d, J=5.5 Hz, 2H), 7.29 (d, J=5.5 Hz, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.53 (t, 1H), 4.58 (t, 1H), 4.02-3.92 (m, 1H), 3.20-3.11 (m, 4H), 2.89-2.79 (m, 1H), 2.46 (s, 2H), 2.20 (s, 4H), 1.95 (s, 8H), 1.78-1.57 (m, 7H), 1.55-1.49 (m, 7H), 1.45 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(piridin-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-guanidinopentanamida (7ag)
[0403] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ad (120 mg) kako bi se dobio 7ag (55 mg).<1>H-NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.64 (s, 2H), 7.77 (s, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.63 (t, J=8.1 Hz, 1H), 4.57 (m, 1H), 3.88 (t, J=6.2 Hz, 1H), 3.58-3.48 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 1H), 3.16 (t, J=7.0 Hz, 2H), 3.11-3.03 (m, 1H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.49 (s, 2H), 2.20 (s, 6H), 1.94 (s, 3H), 1.84-1.67 (m, 5H), 1.66-1.57 (m, 3H), 1.56-1.52 (m, 6H), 1.51-1.38 (m, 2H). MS: EI-MS: m/z 686.6 [M+1].
Primer 64: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-4-guanidinobutanamida (D-Agb-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7ah)
[0404]
12
Jedinjenje 7ah
Šema 65
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((SR,8S,11S)-1-amino-11-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-8-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-19,19-dimetil-6,9,17-triokso-18-oksa-2,7,10,16-tetraazaikozan-5-il)karbamata (6ae)
[0405] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 12ae (360 mg; 1.0 mmol) i 4b (420 mg; 0.93 mmol) kako bi se dobio 6ae (360 mg, 45%) u vidu bele pene.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.39 - 7.18 (m, 5H), 6.42 (s, 2H), 5.19 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.09 (višestruki pikovi, 3H), 3.31 - 2.97 (višestruki pikovi, 5H), 2.88 (m, 1H), 2.24 (s, 6H), 2.03 - 1.85 (višestruki pikovi, 6H), 1.75 (m, 1H), 3.31 - 2.97 (višestruki pikovi, 22H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-4-guanidinobutanamida (7ah)
[0406] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ae (350 mg; 0.41 mmol) kako bi se dobio 7ah (165 mg, 57%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.27 (m, 4H), 7.20 (m, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.14 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.64 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.10 (m, 1H), 4.04 (m, 2H), 3.25 - 3.05 (m, 3H), 2.96 - 2.80 (m, 3H), 2.19 (s, 6H), 2.07 - 1.80 (m, 4H), 1.71 - 1.58 (m, 2H), 1.54 - 1.26 (m, 2H). MS: EI-MS: m/z 594.5 [M+1].
Primer 65: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-(cikloheksilmetil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7ai)
[0407]
12
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((10S,13S,16R)-19-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-10-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-13-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,12,15-triokso-3-oksa-5,11,14-triazanonadekan-16-il)karbamata (6af)
[0408] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 5e (799 mg, 2.18 mmol) i 4c (1.00 g, 1.82 mmol) kako bi se dobio 6af (0.63 g) sa prinosom od 39 %.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 6.84-6.71 (m, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.20-5.08 (m, 1H), 4.71-4.58 (m, 1H), 4.05-3.94 (m, 1H), 3.86-3.68 (m, 2H), 3.66-3.56 (m, 1H), 3.20-3.07 (m, 1H), 3.06-2.93 (m, 2H), 2.93-2.79 (m, 1H), 2.63-2.53 (m, 2H), 2.22 (s, 6H), 1.83-0.88 ppm (m, 38H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-(cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7ai)
[0409] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6af (0.63 g, 0.702 mmol) kako bi se dobio 7ai (258 mg) sa prinosom od 49 % .<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4): δ = 6.90-6.84 (m, 2H), 6.38 (s, 2H), 5.19-5.11 (m, 1H), 4.78-4.71 (m, 1H), 4.03 - 3.96 (m, 1H), 3.92-3.77 (m, 2H), 3.17-3.08 (m, 1H), 2.97-2.86 (m, 3H), 2.62-2.57 (m, 2H), 2.25 (s, 6H), 2.05-1.88 (m, 2H), 1.84-0.95 ppm (m, 20H). MS: ELMS: m/z 638.7 [M+1].
Primer 66: Sinteza (S)-N-((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-
12
imidazol-4-il)etil)-2-((R)-2-amino-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)acetamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamida (D-(α(1-karbamimidoilpiperidin-4-il))-Gly-DMT-NH((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7aj)
[0410]
1) Korak a: Sinteza (R)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-2-(1-(tercbutoksikarbonil)piperidin-4-il)sirćetne kiseline (46)
[0411] Natrijum bikarbonat (3.252 g, 38.71 mmol) je suspendovan u vodi (31 mL), zatim su dodati 45 (1 g, 3.871 mmol), THF (31 mL) i N-(benziloksikarboniloksi)sukcinimid (1.350, 5.419 mmol). Dvofazna smeša je ostavljena da se žustro meša na RT preko noći. zatim je dodata dodatna voda (31 mL) i reakciona smeša je isprana sa Et2O (3 × 57 mL). U vodeni sloj je dodat 5% rastvor limunske kiseline (85 mL) i proizvod je ekstrahovan sa DCM (4x85 mL). Organski
1
slojevi su kombinovani i osušeni preko Na2SO4, filtrirani i upareni. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom na koloni kako bi dao željeni proizvod (46, 0.866 g) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.38-7.27 (m, 5H), 5.10 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.15 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.09 (d, J = 13.3 Hz, 2H), 2.80-2.63 (m, 2H), 2.05-1.94 (m, 1H), 1.68-1.60 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.28 (pd, J= 12.8, 4.4 Hz, 2H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-2-(piperidin-4-il)sirćetne kiseline (47)
[0412] U ohlađeni rastvor 46 (0.866 g, 2.21 mmol) u DCM (50 mL) TFA (15 mL) je dodat. Zatim je ledeno/vodeno kupatilo uklonjeno i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je koncentrovan iz toluena (2x). Dobijeni sirovi materijal (47) je upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.38-7.28 (m, 5H), 5.14-5.07 (m, 2H), 4.22 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 3.40 (d, J = 14.5 Hz, 2H), 2.98 (qd, J = 13.2, 2.7 Hz, 2H), 2.21-2.12 (m, 1H), 1.93 (dd, J = 32.9, 14.5 Hz, 2H), 1.65-1.52 (m, 2H).
3) Korak c: Sinteza (R,E)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-2-(1-(N,N'-bis(tercbutoksikarbonil)karbamimidoil)piperidin-4-il)sirćetne kiseline (48)
[0413] U rastvor 47 (1.0 g, 2.46 mmol) u DMF (25 mL), dodati su N,N'-Di-Boc-1H-pirazol-1-karboksamidin (0.840 g, 2.71 mmol) i DIPEA (3.817 g, 29.53 mmol). Smeša je mešana preko noći. Zatim je dodat MeOH do potpunog rastvaranja precipitata i ostavljena da se meša 2 h. Koncentrovanje pod sniženim pritiskom je dalo ostatak koji je razblažen sa EtOAc i opran zasićenim NaHCOs i fiziološkim rastvorom. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen reverznofaznom fleš hromatografijom. 1.0 g željenog proizvod 48 je dobijen u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.38-7.26 (m, 5H), 5.09 (s, 2H), 4.16-4.09 (m, 3H), 3.01-2.91 (m, 2H), 2.15-2.06 (m, 1H), 1.72 (dd, J = 25.7, 14.0 Hz, 2H), 1.51-1.45 (m, 2H), 1.48 (s, 18H).
4) Korak d: Sinteza (R)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)sirćetne kiseline (49)
[0414] U ohlađeni rastvor 48 (1.0 g, 1.87 mmol) u DCM (50 mL) TFA (15 mL) je dodat. Zatim je ledeno/vodeno kupatilo uklonjeno i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4h. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je koncentrovan i prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom kako bi se dobio željeni proizvod (49, 0.5 g) u vidu bele
1 1
čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.39-7.27 (m, 5H), 5.10 (d, J = 1.7 Hz, 2H), 4.19 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 3.12-3.02 (m, 2H), 2.21-2.11 (m, 1H), 1.79 (dd, J = 25.0, 13.6 Hz, 2H), 1.50-1.37 (m, 2H).
5) Korak e: Sinteza terc-butil (S)-2-((R)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)acetamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (50)
[0415] U smešu 49 (0.2 g, 0.539 mmol) i H-DMT-OtBu (2b, 0.157 g, 0.593 mmol) u 20 mL DMF, dodat je EDCI·HCl (0.258 g, 1.347 mmol), a nakon toga i HOBt·H2O (0.165 g, 1.078 mmol). Nakon 10-15 min NMM (0.153 g, 1.509 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim su isparljive supstance uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je uparen sa 5% vodenog rastvora limunske kiseline. Dobijeni ostatak je prečišćen reverznofaznom fleš hromatografijom kako bi se dobio željeni proizvod (50, 0.17 g).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.37-7.27 (m, 5H), 6.45 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.73-4.67 (m, 1H), 4.08 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.83 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 3.09 (dd, J = 14.3, 6.8 Hz, 1H), 3.00-2.91 (m, 3H), 2.28 (s, 6H), 1.92-1.82 (m, 1H), 1.55-1.44 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.27-1.17 (m, 2H).
6) Korak f: Sinteza terc-butil (S)-2-((R)-2-amino-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)acetamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (51)
[0416] U rastvor 50 (0.170 G, 0.275 mmol) u MeOH (20 mL) dodat je Pd/C 10% tež./tež. (0.044 G, 0.041 mmol). Flask je ispran sa H2i smeša je mešana 2h na RT. Zatim je smeša filtrirana i isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak željenog proizvoda 51 je upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanold4) δ 6.46 (s, 2H), 4.77 (dd, J = 9.8, 7.0 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 15.1 Hz, 2H), 3.11 (dd, J = 14.3, 7.1 Hz, 1H), 3.01-2.92 (m, 3H), 2.34-2.26 (m, 1H), 2.30 (s, 6H), 1.85-1.73 (m, 1H), 1.55-1.50 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.32-1.19 (m, 2H).
7) Korak g: Sinteza (S)-2-((R)-2-amino-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)acetamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (52)
[0417] U ohlađeni rastvor 51 (0.12 g, 0.268 mmol) u DCM (15 mL) dodat je TFA (6 mL). Zatim je ledeno/vodeno kupatilo uklonjeno i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je koncentrovan iz toluena (2x). Dobijeni ostatak željenog proizvod 52 je upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.23-7.09 (m, 2H), 6.47 (s, 2H), 5.02 (dd, J = 11.2, 5.5 Hz, 1H),
1 2
3.90-3.81 (m, 2H), 3.23 (dd, J = 14.7, 5.5 Hz, 1H), 3.05-2.90 (m, 3H), 2.33-2.30 (m, 1H), 2.32 (s, 6H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.50 (d, J= 13.9 Hz, 1H), 1.30-1.11 (m, 4H).
8) Korak h: Sinteza (S)-2-((R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)acetamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (4d)
[0418] U rastvor 52 (0.174 G, 0.344 mmol) ohlađen u ledenom/vodenom kupatilu, u 10 mL puferskog rastvora (pH=8.5), dodavan je u kapima Boc2O (0.113 G, 0.516 mmol) rastvoren u 15 mL THF. Zatim je reakciona smeša mešana u ledenom/vodenom kupatilu 1h, i preko noći na rt. LCMS je pokazala izvesnu količinu SM, i dodato je još 10 mL puferskog rastvora (pH=8.5) i mešanje se nastavilo do potpune konverzije. Nakon toga je pH vrednost podešena na pH=4 pomoću 5% rastvora sirćetne kiseline, i uparen je. Prečišćavanje reverzno-faznom fleš hromatografijom dalo je 0.120 G željenog proizvod (4d).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.41 (s, 2H), 4.71 (dd, J = 10.3, 5.7 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.84-3.77 (m, 2H), 3.15 (dd, J = 14.4, 5.7 Hz, 1H), 3.00-2.87 (m, 3H), 2.32 (s, 6H), 1.93-1.84 (m, 1H), 1.55 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.34-1.12 (m, 3H).
9) Korak i: Sinteza terc-butil ((R)-2-(((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-1-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)-2-oksoetil)karbamata (6ag)
[0419] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 12t (0.047 g, 0.122 mmol) i 4d (0.061 g, 0.111 mmol) kako bi se dobio 6ag koji je ispran kroz reverzno-faznu fleš kolonu i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
10) Korak j: Sinteza (S)-N-((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)-2-((R)-2-amino-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)acetamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamida (7aj)
[0420] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ag (0.065 g, 0.074 mmol) kako bi se dobio 7aj (41 mg) u vidu bele čvrste supstance. (čistoća na osnovu HPLC je 97.5% na 210 nm)<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.77 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.57-7.53 (m, 4H), 7.43-7.30 (m, 6H), 6.40 (s, 2H), 5.55 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 4.66 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 4.13 (s, 2H), 3.94-3.87 (m, 2H), 3.79 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 3.41 (dd, J = 15.5, 5.7 Hz, 1H), 3.09-2.95 (m, 3H), 2.86 (dd, J = 14.2, 8.0 Hz, 1H), 2.21 (s, 6H), 2.02-1.92 (m, 1H), 1.57 (dd, J = 41.4, 13.1 Hz, 2H), 1.37-1.22 (m, 3H). MS: EI-MS: m/z 719.5 [M+1].
1
Primer 67: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-(O-metil)-DMT-NH((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7ak)
[0421]
1) Korak a: Sinteza benzil (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (53)
1 4
[0422] NaHCO3(5.61 g, 66.8 mmol) je suspendovan u vodi (53 mL) i dodat u benzil (S)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoat (2a) (2.00 g, 6.68 mmol). U dobijenu suspenziju u kapima je dodat rastvor Boc2O (2.18 g, 10.0 mmol) u THF (50 mL) i reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 24 h. Zatim, je dodata dodatna voda (50 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 × 150 mL). Kombinovane organske faze su isprane fiziološkim rastvorom (80 mL), osušene preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silicijumskoj koloni pomoću smeše PE i EtOAc (1:0 → 2:1) kao eluensa kako bi se dobio 53 (2.18 g) sa prinosom od 82 % kao bezbojna staklasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = δ 7.38-7.28 (m, 3H), 7.20-7.13 (m, 2H), 6.45 (s, 2H), 5.11-5.01 (m, 2H), 4.58-4.48 (m, 1H), 3.07-2.89 (m, 2H), 2.25 (s, 6H), 1.38 ppm (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza benzil (S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (54)
[0423] U smešu 53 (2.18 g, 5.46 mmol) i K2CO3(3.47 g, 32.8 mmol) u suvom DMF je dodat metil jodid (6.1 mL, 98.3 mmol) i dobijena suspenzija je mešana na s.t. tokom 24 h. U reakcionu smešu je dodat EtOAc (600 mL) i voda (100 mL) i dobijena smeša je mešana na s.t. tokom 15 min. Zatim, vodena faza je odvojena, a organska faza je oprana vodom (3 × 80 mL) i fiziološkim rastvorom (80 mL). Nakon sušenja preko anhidrovanog Na2SO4, isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silicijumskoj koloni (PE/EtOAc 1:0 → 20:3) kako bi se dobio 54 (1.8 g) u prinosu od 80 % kao amorfna čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 7.34-7.27 (m, 3H), 7.19-7.11 (m, 2H), 6.53 (s, 2H), 5.09-4.99 (m, 2H), 4.59-4.47 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.06-2.97 (m, 2H), 2.29 (s, 6H), 1.43-1.20 ppm (m, 9H).
3) Korak c: Sinteza benzil (S)-2-amino-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (2c)
[0424] U ohlađeni (vodeno kupatilo) rastvor 54 (1.65 g, 0.318 mmol) u suvom DCM (18 mL) u kapima je dodat TFA (6.0 mL) i reakciona smeša je mešana 4 h pri čemu je postepeno dostignuta r.t. Zatim su isparljive materije uklonjene pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišćen reverzno-faznom fleš hromatografijom pomoću smeše EtOH/MeCN (4:1) i 0.01 % aq. HCl kao eluensa. Proizvod je izašao sa kolone sa 28-36 % EtOH/MeCN (4:1) kako bi se dobio 2c (1.28 g) sa prinosom od 92 % u vidu bele amorfne čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.34-7.23 (m, 3H), 7.10-7.04 (m, 2H), 6.57 (s, 2H), 5.11 - 4.98 (m, 2H), 4.19-4.11 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.30-3.21 (m, 1H), 3.18-3.09 (m, 1H), 2.25 ppm (s, 2H).
1
4) Korak d: Sinteza benzil (S)-2-((R)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)pentanamido)-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (3e)
[0425] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 2c (647 mg, 1.85 mmol) i 1b (0.500 g, 1.68 mmol) kako bi se dobio 3e (0.57 g) sa prinosom od 52 %.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.36 - 7.13 (m, 5H), 6.82 - 6.74 (m, 2H), 6.53 (s, 2H), 5.06 (s, 2H), 4.77-4.67 (m, 1H), 4.15-4.04 (m, 1H), 3.83-3.64 (m, 5H), 3.23-2.94 (m, 2H), 2.28 (s, 6H), 1.75-1.06 (m, 13H).
5) Korak e: Sinteza (S)-2-((R)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)pentanamido)-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (4e)
[0426] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 3e (0.57 g, 0.872 mmol) kako bi se dobio 4e (0.42 g) sa prinosom od 74 %.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 6.83-6.77 (m, 2H), 6.51 (s, 2H), 4.64-4.55 (m, 1H), 4.06-3.97 (m, 1H), 3.81-3.63 (m, 5H), 3.21-3.11 (m, 1H), 2.99-2.87 (m, 1H), 2.34 (s, 6H), 1.76-1.12 ppm (m, 13H).
6) Korak f: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6ah)
[0427] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4d (100 mg, 0.199 mmol) i 12t (109 mg, 0.238 mmol) kako bi se dobio 6ah (87 mg).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.44 (s, 1H), 7.53 (dd, J = 8.1, 2.0 Hz, 3H), 7.42-7.30 (m, 5H), 7.19 (s, 1H), 6.75 (dd, J = 11.2, 2.3 Hz, 2H), 6.43 (s, 2H), 5.56 - 5.47 (m, 1H), 4.52 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.05-4.00 (m, 2H), 3.81 (s, 1H), 3.67 (s, 3H), 3.40-3.35 (m, 1H), 3.12-3.00 (m, 1H), 2.90 - 2.82 (m, 1H), 2.20 (s, 6H), 1.78 - 1.53 (m, 4H), 1.36 (s, 9H).
7) Korak g: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7ak)
[0428] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ah (87 mg, 0.105 mmol) kako bi se dobio 7ak (40 mg).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.75 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 3H), 7.45 - 7.28 (m, 5H), 6.84 (dd, J = 22.3, 2.4 Hz, 2H), 6.46 (s, 2H), 5.54 (dd, J = 8.9, 5.7 Hz, 1H), 4.51 (dd, J = 9.4, 6.7 Hz, 1H), 4.11 (s, 2H), 3.94 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 3.84 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.36 (dd, J = 15.6, 5.3 Hz, 1H), 3.28 - 3.22 (m, 1H), 3.08 (dd, J = 14.0, 9.6 Hz,
1
1H), 2.85 (dd, J = 14.1, 6.6 Hz, 1H), 2.22 (s, 6H), 1.89 - 1.59 (m, 4H). MS: ELMS: m/z 731.6 [M+1].
Primer 68: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-4-guanidinobutanamida (D-Agb-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7al)
[0429]
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-4-guanidino-1-oksobutan-2-il)karbamata (6ai)
[0430] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4b (300 mg; 0.66 mmol) i 12u (666 mg; 1.2 mmol) kako bi se dobio 6ai (340 mg, 57%) u vidu bele pene.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.85 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.39 (s, 2H), 5.51 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 8.2, 5.8 Hz, 1H), 3.36 - 3.02 (višestruki pikovi, 5H), 2.89 (dd, J = 14.2, 7.7 Hz, 1H), 2.48 (s, 2H), 2.23 (s, 6H), 2.03 - 1.87 (višestruki pikovi, 7H), 1.81 - 1.69 (višestruki pikovi, 4H), 1.69 - 1.59 (višestruki pikovi, 3H), 1.56 (bs, 6H), 1.47 (s, 9H).
1
) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-4-guanidinobutanamida (7al)
[0431] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ai (340 mg; 0.38 mmol) kako bi se dobio 7al (126 mg, 42%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.83 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.34 (s, 2H), 5.54 (dd, J = 8.7, 5.9 Hz, 1H), 4.58 (dd, J = 9.1, 7.3 Hz, 1H), 4.08 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 15.5, 5.7 Hz, 1H), 3.34 (dd, J = 15.3, 8.6 Hz, 1H), 3.25 - 3.05 (višestruki pikovi, 3H), 2.88 (dd, J = 14.1, 7.2 Hz, 1H), 2.47 (višestruki pikovi, 2H), 2.21 (s, 6H), 2.08 - 1.87 (višestruki pikovi, 5H), 1.72 (bd, J = 12.2 Hz, 3H), 1.61 (bd, J= 11.4 Hz, 3H), 1.54 (bs, 6H). MS: ELMS: m/z 661.6 [M+1].
Primer 69: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-(dimetilamino)-4-guanidinobutanamida (D-(N2,N2-dimetil)-Agb-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7am)
[0432]
Jedinjenje 7am
Šema 70
1
1) Korak a: Sinteza (R)-2-(dimetilamino)-4-guanidinobutanske kiseline (1c)
[0433] Nor-(D-)arginin triflat (55, 2.32g, 6.00 mmol) je dodat u mešani rastvor 8.2 g natrijum acetata u 2 L vode na rt i zatim je u reakcionu smešu brzo dodato 4.46 mL (59.8 mmol) 37% vodenog rastvora formaldehida (37%) i 3.78 g (60.2 mmol) natrijum cijanoborohidrida. Dobijena smeša je mešana preko noći i zatim koncentrovana do suva na 40<0>C, pod pritiskom. Dobijeni ostatak je osušen preko noći pod vakuumom kako bi se uklonio rezidualni formaldehid, i zatim je rastvoren u 40 mL vode i prečišćen hromatografijom na koloni sa jonoizmenjivačkom smolom. Amberlite IR-120 (28-35 mreža, H<+>forma) je upotrebljen i proizvod je eluiran pomoću H2O (700 mL), razblaženog NH3(0.5 N, 400 mL), i 3 N vodenog NH3(400 mL). Sakupljene frakcije su praćene pomoću TLC na pločama od silika gela pomoću 1:3 smeše CH3OH i conc. NH3. Vodeni rastvori koji sadrže proizvod su kombinovani i voda je uklonjena na 40<0>C. Ostatak je osušen na rt pod vakuumom, kako bi se dobilo 0.77 g (68%) proizvoda 1c.<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 3.27 (dd, J= 10.2, 3.4 Hz, 2H), 3.01 (dd, J= 8.1, 6.4 Hz, 1H), 2.44 (s, 6H), 1.99-1.80 (m, 2H).
2) Korak b: Sinteza terc-butil (S)-2-((R)-2-(dimetilamino)-4-guanidinobutanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (3f)
[0434] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 1c (0.68 g, 3.6 mmol) i 2b (0.79 g, 3 mmol) kako bi se dobio 3f (980 mg, 62%) kao bela pena.<1>H-NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 6.46 (s, 2H), 4.71-4.62 (m, 1H), 4.05-4.00 (m, 1H), 3.22-2.95 (m, 10H, signali koji se preklapaju), 2.29 (s, 6H), 1.35-1.26 (m, 11 H, signali koji se preklapaju).
1
3) Korak c: Sinteza (S)-2-((R)-2-(dimetilamino)-4-guanidinobutanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (4e)
[0435] 3f (900 mg, 2.07 mmol) je rastvoren u DCM (8 mL) i ohlađen do 0 °C. TFA (8 mL) je dodavan u kapima i rastvor je ostavljen da se meša na 0 °C 10 min, i zatim na rt tokom 2 h (LC/MS ne pokazuje polazni materijal). Zatim je reakciona smeša uparena (na 0-5 °C) i i dodatno ponovno uparena iz DCM (20 mL, na 0-5 °C) dajući 4f (1.0 g, 90%) u vidu amorfnog praška.
4) Korak d: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-(dimetilamino)-4-guanidinobutanamida (7am)
[0436] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4f (170 mg; 0.37 mmol) i 12u (388 mg; 0.70 mmol) kako bi se dobio 7am (24 mg, 8%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.87 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.33 (s, 2H), 5.51 (dd, J = 8.8, 5.8 Hz, 1H), 4.46 (dd, J = 10.0, 6.4 Hz, 1H), 4.07 (dd, J = 10.0, 4.0 Hz, 1H), 3.43 - 3.30 (višestruki pikovi, 2H), 3.18 - 2.95 (višestruki pikovi, 3H), 2.91 (višestruki pikovi, 7H), 2.48 (višestruki pikovi, 2H), 2.29 - 2.05 (višestruki pikovi, 8H), 1.93 (bs, 3H), 1.72 (d, J = 12.3 Hz, 3H), 1.61 (d, J = 11.6 Hz, 3H), 1.55 (bs, 6H). ). MS: EI-MS: m/z 689.7 [M+1].
Primer 70: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (D-(δ-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-(O-metil)-DMT-NH((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7an)
[0437]
Jedinjenje 7an
14
Šema 71
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)-1-oksopentan-2-il)karbamata (6aj)
[0438] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4e (210 mg, 0.321 mmol) i 12w (160 mg, 0.404 mmol) kako bi se dobio 6aj (250 mg) sa prinosom od 86 %.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 7.79 (s, 1H), 7.60-7.50 (m, 4H), 7.45-7.27 (m, 5H), 6.86 - 6.72 (m, 3H), 6.45 (s, 2H), 5.46-5.37 (m, 1H), 4.62-4.53 (m, 1H), 4.08 (s, 2H), 4.07-3.93 (m, 1H), 3.84-3.52 (m, 8H), 3.28-2.97 (m, 3H), 2.90-2.77 (m, 1H), 2.22 (s, 6H), 1.75-1.28 ppm (m, 13H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-metoksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-5-(2-amino-1H-imidazol-1-il)pentanamida (7an)
[0439] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6aj (250 mg, 0.276 mmol) kako bi se dobio 7an.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4): δ = 8.72 (s, 1H), 7.61 - 7.53 (m, 4H), 7.45 -7.29 (m, 5H), 7.27-7.23 (m, 1H), 6.88 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.46 (s, 2H), 5.54-5.47 (m, 1H), 4.52-4.45 (m, 1H), 4.16-4.06 (m, 2H), 3.99-3.92 (m, 1H), 3.90-3.78 (m, 5H), 3.73-3.68 (m, 3H), 3.30-3.19 (m, 2H), 3.14-3.05 (m, 1H), 2.92-2.82 (m, 1H), 2.21 (s, 6H), 1.92-1.54 ppm (m, 4H). MS: ELMS: m/z 745.6 [M+1].
Primer 71: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-4-guanidinobutanamida (D-Agb-DMT-NH((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)et-1-il), 7ao)
[0440]
Jedinjenje 7ao
Šema 72
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-4-guanidino-1-oksobutan-2-il)karbamata (6ak)
[0441] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4b (320 mg; 0.71 mmol) i 12x (287 mg; 0.9 mmol) kako bi se dobio 6ak (427 mg, 74%) u vidu žućkaste pene.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8.61 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.37 - 7.15 (višestruki pikovi, 6H), 7.09 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.97 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.47 (m, 1H), 4.69 (dd, J = 9.1, 7.2 Hz, 1H), 4.04 (višestruki pikovi, 2H), 3.99 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 3.41 - 3.22 (višestruki pikovi koji se preklapaju sa CHD2OD, 2H), 3.14 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.05 (dd, 1H), 2.88 (dd, 1H), 2.18 (s, 6H), 2.10 - 1.89 (višestruki pikovi, 5H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-4-guanidinobutanamida (7ao)
[0442] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ak (400 mg; 0.49 mmol) kako bi se dobio 7ao (111 mg, 31%) as yellowish čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.37 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.30 - 7.22 (višestruki pikovi, 3H), 7.19 (m, 1H), 7.14 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.04 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.92 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.32 (s, 2H), 5.43 (dd, J = 8.3, 6.9 Hz, 1H), 4.64 (dd, J = 8.8, 7.2 Hz, 1H), 4.07 - 3.91 (višestruki pikovi, 3H), 3.36 - 3.22 (višestruki pikovi, 2H), 3.13 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.01 (dd, J = 14.0, 9.1 Hz, 1H), 2.84 (dd, J = 14.0, 7.2 Hz, 1H), 2.14 (s, 6H), 2.08 - 1.82 (višestruki pikovi, 2H). MS: ELMS: m/z 652.5 [M+1].
Primer 72: Sinteza (S)-N-((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)-2-((R)-2-amino-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)acetamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamida (D-(α-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il))-Gly-DMT-NH((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)et-1-il), 7ap)
[0443]
1) Korak a: Sinteza (R)-2-amino-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)sirćetne kiseline (56)
14
[0444] U rastvor 49 (0.21 g, 0.566 mmol) u MeOH (20 mL) i Pd/C 10% tež./tež. (0.090 G, 0.085 mmol). Flask je ispran sa H2i smeša je mešana 2h na rt. Sirovi proizvod 56 je filtriran i isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom.
2) Korak b: Sinteza (R)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)sirćetne kiseline (1d)
[0445] U ohlađeni rastvor u ledenom/vodenom kupatilu dobijenog ostatka željenog proizvoda (56, 0.125 g, 0.528 mmol) u 10 mL puferskog rastvora (pH=8.5) dodavan je u kapima Boc2O (0.173 g, 0.792 mmol) rastvoren u 15 mL THF. Nakon toga reakciona smeša je mešana u ledenom/vodenom kupatilu 1h, i zatim preko noći na rt. LCMS pokazuje izvesnu količinu SM, i dodaje se drugih 10 mL puferskog rastvora (pH=8.5) i mešanje se nastavlja do potpune koncerzije. Dalje, pH je podešen na 4 rastvorom 5% sirčetne kiseline i upareno je. Prečišćavanje reverzno-faznom fleš hromatografijom dalo je 0.1 g željenog proizvoda 1d.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 3.96 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.88 (m, 2H), 3.02 (m, 2H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.42-1.29 (m, 2H).
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)karbamata (57)
[0446] Ista procedura kao što je opisana u šemi 55 uz upotrebu 12y (0.5 g, 1.16 mmol) i 38 (0.395 g, 1.276 mmol) kako bi se dobio 57 (0.584 g) u vidu smeđe čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.56 (m, 2H), 7.53-7.50 (m, 2H), 7.40 (q, J = 7.7 Hz, 3H), 7.34-7.28 (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 7.05 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.96-6.92 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.47 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 4.22 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.35 (s, 2H), 2.94 (dd, J = 14.1, 8.6 Hz, 1H), 2.74 (dd, J = 14.2, 7.2 Hz, 1H), 2.14 (s, 6H), 1.38 (s, 9H).
4) Korak d: Sinteza (S)-N-((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamida (58)
[0447] Ista procedura kao što je opisana u šemi 55 uz upotrebu 57 (0.2 g, 0.292 mmol) kako bi se dobio 58 (0.148 g). Dobijeni ostatak željenog proizvod je upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.59-7.51 (m, 4H), 7.45-7.28 (m, 5H), 7.22-7.19 (m, 2H), 7.06 (ddd, J = 8.2, 7.1, 1.1 Hz, 1H), 6.94 (ddd, J = 7.9, 7.2, 0.9 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.34 (s, 2H), 5.56-5.50 (m, 1H), 4.05 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 3.88 (dd, J = 11.1, 5.1 Hz, 1H), 3.28-3.23 (m, 2H), 3.14 (dd, J = 13.9, 11.1 Hz, 1H), 2.96 (dd, J = 14.0, 5.2 Hz, 1H), 2.10 (s, 6H).
5) Korak e: Sinteza terc-butil ((R)-2-(((S)-1-(((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-1-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)-2-oksoetil)karbamata (6al)
[0448] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 58 (0.148 g, 0.201 mmol) i 1d (0.066 g, 0.183 mmol) kako bi se dobio 6al (0.115 g).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.51 (m, 4H), 7.39 (m, 3H), 7.29 (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 7.05 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 6.93 (m, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.44 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 4.78-4.73 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.82-3.73 (m, 1H), 3.77 (d, J= 36.3 Hz, 2H), 3.39 (dd, J= 18.1, 7.3 Hz, 1H), 3.01 (dd, J= 13.7, 7.1 Hz, 1H), 2.95 - 2.66 (m, 5H), 2.27-2.21 (m, 1H), 2.16 (s, 6H), 1.80-1.70 (s, 1H), 1.54-1.45 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 1.22-1.10 (m, 2H).
6) Korak f: Sinteza (S)-N-((S)-1-(3-([1,1'-bifenil]-4-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)-2-((R)-2-amino-2-(1-karbamimidoilpiperidin-4-il)acetamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamida (7ap)
[0449] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6al (0.105 g, 0.113 mmol) kako bi se dobio 7ap (29 mg) u vidu bele čvrste supstance. (čistoća na osnovu HPLC je 97.7% na 210 nm).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.51-7.46 (m, 4H), 7.42-7.36 (m, 3H), 7.31-7.27 (m, 2H), 7.23 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.06 (t, J= 8.1 Hz, 1H), 6.98 - 6.90 (m, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.47-5.43 (m, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.86 (d, J = 13.7 Hz, 2H), 3.72 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.38 (dd, J = 14.4, 8.2 Hz, 1H), 3.00-2.91 (m, 3H), 2.81 (dd, J = 14.4, 8.7 Hz, 1H), 2.17 (s, 6H), 1.93-1.83 (m, 1H), 1.54 (d, J= 13.2 Hz, 1H), 1.44 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 1.30-1.18 (m, 3H). MS: EI-MS: m/z 768.6 [M+1].
Primer 73: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-4-guanidinobutanamida (D-Agb-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)et-1-il), 7aq)
[0450]
14
Jedinjenje 7aq
Šema 74
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-4-guanidino-1-oksobutan-2-il)karbamata (6am)
[0451] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4b (320 mg; 0.71 mmol) i 12z (339 mg; 0.9 mmol) kako bi se dobio 6am (148 mg, 26%) u vidu bele pene.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.50 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.01 (višestruki pikovi, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.53 (dd, J= 8.6, 6.7 Hz, 1H), 4.64 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 4.09 (dd, J= 7.5, 5.8 Hz, 1H), 3.49 - 3.28 (višestruki pikovi koji se preklapaju sa CD2HOD, 2H), 3.26 - 2.98 (višestruki pikovi, 3H), 2.88 (dd, J= 14.1, 7.5 Hz, 1H), 2.42 (višestruki pikovi, 2H), 2.20 (s, 6H), 2.05 (s, 3H), 2.07 - 1.89 (višestruki pikovi, 4H), 1.84 - 1.65 (višestruki pikovi, 4H), 1.65 - 1.53 (višestruki pikovi, 3H), 1.53 - 1.33 (višestruki pikovi, 15H).
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-indol-3-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-amino-4-guanidinobutanamida (7aq)
[0452] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6am (142 mg; 0.16 mmol) kako bi se dobio 7aq (30 mg, 23%) as a yellowish čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.46 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.04 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.01 - 6.91 (višestruki pikovi, 2H), 6.31 (s, 2H), 5.49 (dd, J = 8.9, 6.5 Hz, 1H), 4.70 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.01 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 3.37 (dd, J= 14.4, 9.0 Hz, 1H), 3.29 (dd, 1H), 3.12 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 3.05 (dd, J= 14.1, 9.0 Hz, 1H), 2.88 (dd, J = 14.0, 7.4 Hz, 1H), 2.38 (višestruki pikovi, 2H), 2.18 (s, 6H), 2.07 - 1.89 (višestruki pikovi, 2H), 1.86 (bs, 3H), 1.66 (bd, J= 11.7 Hz, 3H), 1.54 (bd, J = 12.3 Hz, 3H), 1.41 (bs, 6H). MS: ELMS: m/z 710.7 [M+1].
Primer 74: Sinteza (R)-2-amino-N-((R)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-
14
il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-D-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7ar)
[0453]
Jedinjenje 7ar
Šema 75
1) Korak a: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil ((R)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-((terc-butoksikarbonil)amino)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)karbamata (60)
[0454] (R)-Fmoc-DMT (59, 2.35g; 5.6mmol), 12a (2.40 g; 4.5mmol) i HOBT hidrat (0.92 g; 6.0 mmol) su rastvoreni u suvom DMF (25 mL), i zatim je N-metilmorfolin (300 µL; 2.3mmol) dodavan u kapima. Rastvor je ohlađen do 0 °C i EDCI (2.68g; 14.0 mmol) je dodat u jednoj porciji. Reakcija je zagrevana do sobne temperature tokom 4 sata. U ovoj tački LC-MS analiza je pokazala da su polazni materijali potpuno potrošeni i da je željeni proizvod formiran. Reakcija je podeljena na EtOAc (250 mL) i vodu (100 mL). Organska faza je razdvojena i isprano sa sat. aq NaHCOs (2 x 50 mL) i fiziološkim rastvorom (100 mL). Organska faza je osušeno preko
14
Na2SO4, filtrirana i uparena pod sniženim pritiskom.3.56 g (60, ~100%) je dobijeno u vidu bele pene. HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
2) Korak b: Sinteza terc-butil ((S)-5-((R)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamido)-5-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamata (61)
[0455] 60 (3.56 g; ~4.5mmol) je rastvoren u suvom DCM (35 mL). Piperidine (20 mL) je dodavan u kapima. Nakon 30 min LC-MS je pokazala potpunu konverziju. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom (mobilna faza heksani/EtOAc/MeOH sa gradijentom 1/1/0→0/1/0→0/10/1). 1.70g (66%) u vidu bele pene (61) je dobijeno. HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((6R,9R,12S)-1-amino-12-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6an)
[0456] 61 (1.00g; 1.81mmol), Boc-D-arginin (1a, 777mg; 2.5mmol) i HOBT hidrat (276mg; 1.8mmol) su rastvoreni u suvom DMF (10 mL). Rastvor je ohlađen do 0 °C i EDCI (959mg; 5.0 mmol) je dodat u jednoj porciji. Reakcija je zagrevana do sobne temperature tokom 4 sata. U ovoj tački LC-MS analiza je pokazala da su polazni materijali potpuno potrošeni i da je željeni proizvod formiran. Reakcija je podeljena na EtOAc (250 mL) i vodu (100 mL). Organska faza je odvojena i isprana sa sat. aq NaHCOs (4 x 50 mL) i fiziološkim rastvorom (100 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i uparena pod sniženim pritiskom. 1.40g (6an, 91%) je dobijeno u vidu bele pene. HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
4) Korak d: Sinteza (R)-2-amino-N-((R)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7ar)
[0457] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6an (1.40 g; 1.66 mmol) kako bi se dobio 7ar (675 mg, 57%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.34 - 7.19 (višestruki pikovi, 5H), 6.50 (s, 2H), 4.93 (dd, J= 9.3, 5.0 Hz, 1H), 4.62 (dd, J = 11.6, 4.8 Hz, 1H), 4.02 (apparent s, 2H), 3.99 (t, J= 6.2 Hz, 1H), 3.26 - 3.09 (višestruki pikovi, 3H), 2.90 (dd, J= 13.9, 4.8 Hz, 1H), 2.84 (m, 2H), 2.28 (s, 6H), 1.98 - 1.82 (višestruki pikovi, 2H),
14
1.81 - 1.45 (višestruki pikovi, 6H), 1.05 - 0.82 (višestruki pikovi, 2H). MS: ELMS: m/z 608.5 [M+1].
Primer 75: Sinteza (S)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (Arg-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7as)
[0458]
Jedinjenje 7as
Šema 76
1) Korak a: Sinteza benzil (S)-2-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-5-guanidinopentanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (3g)
[0459] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 1e (4.00 g; 12.2 mmol) i 2a (3.0 g; 10.0 mmol) kako bi se dobio 3g (5.6 g, 95%) bele pene. LC-MS, HPLC i NMR su pokazale dovoljno čist proizvod. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.31 (višestruki pikovi, 3H), 7.14 (m, 2H),
14
6.45 (s, 2H), 5.07 - 4.97 (višestruki pikovi, 2H), 4.70 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.23 -3.11 (višestruki pikovi, 3H), 3.01 (dd, J = 14.2, 7.7 Hz, 1H), 2.24 (s, 6H), 1.85 - 1.53 (višestruki pikovi, 4H), 1.47 (s, 9H).
2) Korak b: Sinteza (S)-2-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-5-guanidinopentanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (4g)
[0460] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 3g (5.6 g; 9.5 mmol) kako bi se dobilo 4g (4.6 g, 95%) dobijene bele čvrste supstance. LC-MS, NMR i HPLC pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.41 (s, 2H), 4.61 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 4.00 (t, J= 6.6 Hz, 1H), 3.19 - 3.06 (višestruki pikovi, 3H), 2.93 (dd, J= 14.3, 8.8 Hz, 1H), 2.26 (s, 6H), 1.71 - 1.46 (višestruki pikovi, 4H), 1.42 (s, 9H).
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((6S,9S,12S)-1-amino-12-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6ao)
[0461] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4g (700mg; 1.39mmol) i 12a (586 mg; 1.10 mmol) kako bi se dobio 6ao (750mg, 81%) bele pene. HPLC i LC-MS pokazale su čist materijal.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.30 - 7.15 (m, 5H), 6.33 (s, 2H), 5.07 (dd,J= 8.4, 6.4 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 9.6, 5.9 Hz, 1H), 4.08 - 3.99 (m, 3H), 3.14 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.03 (dd, J= 14.0, 10.0 Hz, 1H), 2.95 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 2.80 (dd, J= 14.0, 5.8 Hz, 1H), 2.13 (s, 6H), 1.79 - 1.49 (m, 10H), 1.43 (s, 9H), 1.39 (s, 9H).
4) Korak d: Sinteza (S)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7as)
[0462] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ao (740 mg; 0.87 mmol) kako bi se dobio 7as (300 mg, 45%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.35 - 7.12 (m, 5H), 6.34 (s, 2H), 5.04 (dd,J =8.6, 6.2 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 11.2, 4.7 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 4.02 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 3.97 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 3.23 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 3.11 (dd, J = 13.8, 11.3 Hz, 1H), 2.86 (m, 3H), 2.13 (s, 6H), 1.98 - 1.89 (m, 2H), 1.88 - 1.53 (m, 6H), 1.41 - 1.19 (m, 2H). MS: ELMS: m/z 608.3 [M+1].
Primer 76: Sinteza (S)-2-amino-N-((R)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-
1
il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (Arg-D-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7at)
[0463]
Jedinjenje 7at
Šema 77
1) Korak a: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil ((R)-1-(((S)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-((terc-butoksikarbonil)amino)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)karbamata (6ap)
[0464] Ista procedura kao što je opisana u šemi 76 i šemi 36 uz upotrebu 61 (300 mg, 0.544 mmol) i 1e (197 mg, 0.599 mmol) kako bi se dobio 6ap (400 mg) sa prinosom od 85 %.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ = 7.32-7.20 (m, 5H), 6.46 (s, 2H), 5.09-5.01 (m, 1H), 4.71-4.65 (m, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.98-3.91 (m, 1H), 3.16-3.06 (m, 3H), 3.00-2.94 (m, 2H), 2.94-2.86 (m, 1H), 2.28 (s, 6H), 1.88-1.29 (m, 26H), 1.18-1.05 ppm (m, 2H).
2) Korak b: Sinteza (R)-2-amino-N-((R)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7at)
[0465] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ap (400 mg, 0.461 mmol) kako bi se dobio 7at (80 mg) sa prinosom od 23 %. Čistoća na osnovu HPLC proizvoda je bila 97.4 %.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ = 7.33-7.20 (m, 5H), 6.49 (s, 2H), 5.07-5.01 (m, 1H),
1 1
4.80-4.74 (m, 1H), 4.08-3.99 (m, 2H), 3.96-3.91 (m, 1H), 3.23-3.11 (m, 3H), 2.97-2.83 (m, 3H), 2.31 (s, 6H), 1.90-1.44 (m, 8H), 1.16-1.05 ppm (m, 2H). MS: ELMS: m/z 608.5 [M+1].
Primer 77: Sinteza (R)-2-amino-N-((R)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-D-DMT-NH((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7au)
[0466]
Jedinjenje 7au
Šema 78
1) Korak a: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil ((R)-1-(((R)-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-5-((terc-butoksikarbonil)amino)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)karbamata (62)
[0467] Ista procedura kao što je opisana u šemi 76 uz upotrebu 59 (1.84g; 4.4mmol) i So (1.58 g; 4.4mmol) kako bi se dobio 62 (3.20g, ~96%) u vidu dobijene bele pene. HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez
1 2
daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
2) Korak b: Sinteza terc-butil ((R)-5-((R)-2-amino-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanamido)-5-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)karbamata (63)
[0468] Ista procedura kao što je opisana u šemi 77 uz upotrebu 62 (3.20 g; 4.2mmol) kako bi se dobio 63 (1.20 g, 52%) bele pene. HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((6R,9R,12R)-1-amino-12-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6aq)
[0469] Ista procedura kao što je opisana u šemi 77 uz upotrebu 63 (1.20g; 2.18mmol) i 1a (777 mg; 2.5mmol) kako bi se dobio 6aq (1.67 g, 91%) kao bela pena. HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
4) Korak d: Sinteza (R)-2-amino-N-((R)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7au)
[0470] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6aq (1.67 g; 1.98mmol) kako bi se dobio 7au (793 mg, 56%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.37 - 7.15 (višestruki pikovi, 5H), 6.36 (s, 2H), 5.04 (dd, J = 8.8, 6.2 Hz, 1H), 4.40 (dd, J= 11.2, 4.7 Hz, 1H), 4.09 (d, J= 15.4 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 3.99 (t, J= 6.3 Hz, 1H), 3.24 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.12 (dd, J= 13.8, 11.3 Hz, 1H), 2.93 - 2.80 (višestruki pikovi, 3H), 2.14 (s, 6H), 2.00 - 1.53 (višestruki pikovi, 8H), 1.43 - 1.17 (višestruki pikovi, 2H). MS: EI-MS: m/z 608.4 [M+1].
Primer 78: Sinteza (S)-2-amino-N-((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (Arg-DMT-NH((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7av)
[0471]
1
Jedinjenje 7av
Šema 79
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((6S,9S,12R)-1-amino-12-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6ar)
[0472] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4g (803mg; 1.60mmol) i 5o (477mg; 1.32mmol) kako bi se dobio 6ar (934 mg, 84%) u vidu bele pene. HPLC i LC-MS su pokazale dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.34 - 7.16 (m, 4H), 6.45 (s, 2H), 5.02 -4.90 (m, 1H), 4.59 (dd, J= 9.2, 6.5 Hz, 1H), 4.05 - 3.95 (m, 3H), 3.15 - 3.05 (m, 3H), 2.95 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.88 (dd, J= 13.9, 6.4 Hz, 1H), 2.25 (s, 6H), 1.81 - 1.42 (m, 6H), 1.40 (s, 9H), 1.37 (s, 9H), 1.16 - 0.92 (m, 2H).
2) Korak b: Sinteza (S)-2-amino-N-((S)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7av)
[0473] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ar (930 mg; 1.10 mmol) kako bi se dobio 7av (310 mg, 39%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.34 - 7.14 (m, 5H), 6.48 (s, 2H), 4.92 (dd, J= 9.6, 5.1 Hz, 1H), 4.61 (dd, J= 11.7, 4.8 Hz, 1H), 4.00 (s, 2H), 3.96 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 3.20 (dd, J = 13.7, 11.7 Hz, 1H), 3.13 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.88 (dd, J = 13.9, 4.8 Hz, 1H), 2.85 - 2.77 (m, 2H), 2.27 (s, 6H), 1.96 - 1.80 (m, 2H), 1.80 - 1.43 (m, 6H), 1.02 - 0.82 (m, 2H). MS: ELMS: m/z 608.3 [M+1].
1 4
Primer 79: Sinteza (S)-2-amino-N-((R)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (Arg-D-DMT-NH((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7aw)
[0474]
Jedinjenje 7aw
Šema 80
1) Korak a: Sinteza terc-butil ((6S,9R,12R)-1-amino-12-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6as)
[0475] Ista procedura kao što je opisana u šemi 77 uz upotrebu 63 (200 mg, 0.363 mmol) i 1e (131 mg, 0.399 mmol) kako bi se dobio 6as (210 mg) sa prinosom od 67 %.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 7.33-7.19 (m, 5H), 6.38 (s, 2H), 5.18-5.10 (m, 1H), 4.64-4.57 (m, 1H), 4.10-4.00 (m, 2H), 4.00-3.93 (m, 1H), 3.16-3.06 (m, 3H), 3.03-2.95 (m, 2H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.20 (s, 6H), 1.97-1.83 (m, 2H), 1.71-1.22 ppm (m, 26H).
2) Korak b: Sinteza (S)-2-amino-N-((R)-1-(((R)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7aw)
[0476] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6as (210 mg, 0.242 mmol) kako bi se dobio 7aw (154 mg) sa prinosom od 85 %. Čistoća proizvoda na osnovu HPLC bila je
1
96.3 %.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4): δ = 7.35-7.19 (m, 5H), 6.39 (s, 2H), 5.17-5.10 (m, 1H), 4.71-4.65 (m, 1H), 4.12-4.02 (m, 2H), 3.96-3.90 (m, 1H), 3.19-3.05 (m, 3H), 2.91-2.83 (m, 3H), 2.21 (s, 6H), 1.99-1.28 ppm (m, 10H). MS: ELMS: m/z 608.6 [M+1].
Primer 80: Sinteza (R)-2,5-diamino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)pentanamida (D-Org-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7ax)
[0477]
Jedinjenje 7ax
Šema 81
1) Korak a: Sinteza benzil (S)-2-((R)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-5-((tercbutoksikarbonil)amino)pentanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanoata (65)
[0478] (L)-DMT-OBn(HCl) (2a, 2.69g; 8.0mmol), N<α>-Z-N<δ>-Boc-D-ornitin (64, 602mg; 1.2mmol) i HOBT hidrat (1.23 g; 8.0mmol) su rastvoren u suvom DMF (25 mL). N-
1
metilmorfolin (880 µL; 8.0mmol) je dodavan u kapima. Rastvor je ohlađen do 0 °C i EDCl (3.64g; 19.0 mmol) je dodat u jednoj porciji. Reakcija je zagrevana do sobne temperature tokom 4 sata. U ovoj tački LC-MS analiza je pokazala da su polazni materijali potpuno potrošeni i da je željeni proizvod formiran. Reakcija je podeljena na EtOAc (350 mL) i aqHCl (1M; 100 mL). Organske faze su razdvojene i isprane sa aqHCl (1M; 100 mL), a zatim i sa sat. aq NaHCO3(2 × 150 mL) i fiziološkim rastvorom (100 mL). Organska faza je osušena preko Na2SO4, filtrirana i uparena pod sniženim pritiskom. Dobijeno je 5.3 g (-100%) jedinjenja 65 u vidu bele pene. HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
2) Korak b: Sinteza (S)-2-((R)-2-amino-5-((terc-butoksikarbonil)amino)pentanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (66)
[0479] 65 (5.3 g; 8.1mmol) i Pd/C (10%; 800 mg) su suspendovani u EtOH (120 mL). Reakciona smeša je mešana pod 7 bara vodonika ~4 h. Napredovanje reakcije je praćeno pomoću LC-MS. Nakon potpune konverzije, reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom. Dobijeno je 3.44 g (95%) bele čvrste supstance. LC-MS, NMR i HPLC pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije 66 je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 6.45 (s, 2H), 4.78 (dd, J = 10.8, 5.5 Hz, 1H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 3.25 (dd, J = 14.5, 5.6 Hz, 1H), 3.07 - 2.83 (m, 3H), 2.34 (s, 6H), 1.81 - 1.51 (višestruki pikovi, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.14 - 0.91 (višestruki pikovi, 2H).
3) Korak c: Sinteza (S)-2-((R)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-5-((tercbutoksikarbonil)amino)pentanamido)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)propanske kiseline (67)
[0480] 66 (3.40 g; 8.0 mmol) je suspendovan u THF (80 mL) i vodi (60 mL). Dodati su NaHCOs (2.52 g; 30 mmol) i Fmoc-OSu (3.44 g; 10.2 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16h. U ovoj tački LC-MS je pokazala potpunu konverziju. Reakcija je podeljena na EtOAc (350 mL) i aqHCl (1M; 100 mL). Organske faze su razdvojene i isprane sa aq HCl (1M; 100 mL) i fiziološkim rastvorom (100 mL). Organska faza je osušena preko MgSO4, filtrirana i uparena pod sniženim pritiskom. Dobijeno je 4.1g (79%) u vidu bele čvrste supstance (67). HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
4) Korak d: Sinteza (9H-fluoren-9-il)metil terc-butil ((10S,13S,16R)-10-(3-benzil-1,2,4-
1
oksadiazol-5-il)-13-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,12,15-triokso-3-oksa-5,11,14-triazanonadekan-16,19-diil)dikarbamata (68)
[0481] 67 (4.10g; 6.35mmol), 12a (3.25g; 6.1mmol) i HOBT hidrat (1.23 g; 8.0mmol) su rastvoreni u suvom DMF (25 mL). N-metilmorfolin (880 µL; 8.0 mmol) je dodavan u kapima. Rastvor je ohlađen do 0 °C i EDCI (3.64g; 19.0 mmol) je dodat u jednoj porciji. Reakcija je zagrevana do sobne temperature tokom 4 sata. U ovoj tački LC-MS analiza je pokazala da su polazni materijali potpuno potrošeni i da je željeni proizvod formiran. Reakcija je podeljena na EtOAc (350 mL) i aqHCl (1M; 100 mL). Organska faza je razdvojena i isprano sa aqHCl (1M; 100 mL) followed by sat. aq NaHCOs (4 x 150 mL) i fiziološkim rastvorom (100 mL). Organska faza je osušeno preko MgSO4, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom. Dobijeno je 5.90g (94%) bele pene 68. HPLC i LC-MS pokazale su dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
5) Korak e: Sinteza terc-butil ((10S,13S,16R)-16-amino-10-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-13-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,12,15-triokso-3-oksa-5,11,14-triazanonadekan-19-il)karbamata (69)
[0482] 68 (5.90 g; 5.97mmol) je rastvoren u suvom DCM (35 mL). Piperidin (20 mL) je dodavan u kapima. Nakon 30 min LC-MS je pokazala potpunu konverziju. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom (mobilna faza heksani/EtOAc/MeOH sa gradijentom 1/1/0→0/1/0→0/5/1). Dobijeno je 2.90 g (63%) amorfne čvrste supstance 69. HPLC i LC-MS su pokazale dovoljno čist materijal. Proizvod reakcije je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije.
6) Korak f: Sinteza (S)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7ax)
[0483] TFA (15 mL) je dodat u suspenziju 69 (1.00 g; 1.31 mmol) u suvom DCM (20 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0°C 6 h i zatim su isparljive supstance uklonjene pod sniženim pritiskom na 0 °C. Prečišćavanje je izvedeno reverzno-faznom fleš hromatografijom (120 g C18 Biotage kolona; mobilna faza 0.1% aq TFA/MeOH sa gradijentom 5% MeOH→ 80% MeOH v/v). Frakcije koje sadrže čist 7ax su koncentrovane i preostala staklasta čvrsta supstanca je rastvorena u minimalnoj količini MeOH i tretirana HCl/dietiletrom (2M; 5 mL). Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i tretman HCl/dietiletrom je ponovljen još dva puta. Ostatak je kristalisao iz MeCN (~7 mL). Matična tečnost je pažljivo uklonjena
1
centrifugiranjem. Nakon sušenja u vakuumu, izolovano je 534 mg (61%) 7ax u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.31- 7.27 (višestruki pikovi, 4H), 7.22 (m, 1H), 6.38 (s, 2H), 5.14 (dd, J = 8.8, 6.2 Hz, 1H), 4.66 (dd, J = 9.3, 7.1 Hz, 1H), 4.08 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 4.05 (d,J = 15.3 Hz, 1H), 3.98 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 3.10 (dd, J = 14.1, 9.4 Hz, 1H), 2.91 (m, 5H), 2.20 (s, 6H), 1.97 - 1.51 (m, 8H), 1.52 - 1.28 (m, 2H). MS: EI-MS: m/z 566.5 [M+1].
Primer 81: Sinteza (R)-4-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-guanidinobutanamida (D-(N-(2-formimidamido)-Dah-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-1-il), 7ay)
[0484]
1) Korak a: Sinteza benzil (S)-2-amino-3-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,6-dimetilfenil)propanoata (70)
[0485] U hladan (0 °C) rastvor DMT-OBn (2a, 4.00 g; 13.4 mmol) i imidazola (1.91 g; 28.0 mmol) u suvom DCM (150 mL) dodat je TBS-C1 (5.96 g; 39.5 mmol) u porcijama. Rastvor je ostavljen da se polako zagreva do sobne temperature tokom perioda od 6 sati. Zatim, reakciona smeša je razblažena sa DCM (100 mL) i oprana vodom (3 × 200 mL) i fiziološkim rastvorom
1
(100 mL). Organska faza je osušena preko anhidrovanog Na2SO4i uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u ~30 mL DCM/heksana (1/1) i filtriran kroz sloj silicijuma (elucija prvo sa heksanima, a zatim sa EtOAc). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeno je 5.50g (99%) viskoznog ulja 70.<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.23 - 7.11 (višestruki pikovi, 3H), 7.11 - 7.02 (m, 2H), 6.32 (s, 2H), 4.95 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 4.89 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.55 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 2.85 (dd, J= 14.1, 5.9 Hz, 1H), 2.67 (dd, J= 14.1, 9.0 Hz, 1H), 2.09 (s, 6H), 1.28 (bs, 2H), 0.80 (s, 9H), 0.00 (s, 6H).
2) Korak b: Sinteza benzil (10R,13S,E)-10-(((benziloksi)karbonil)amino)-6-((tercbutoksikarbonil)amino)-13-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,11-diokso-3-oksa-5,7,12-triazatetradek-5-en-14-oata (71)
[0486] 70 (5.50 g; 13.3 mmol), N<α>-(benziloksikarbonil)-N<ω>,N<ω'>-bis(terc-butoksikarbonil)-nor-D)-arginin (36, 10.88 g; 22.0 mmol) i HOBT hidrat (1.53 g; 10.0 mmol) su rastvoreni u suvom DMF (150 mL) na 0 °C. EDCI (6.71 g; 35 mmol) je dodat u jednoj porciji. Zatim je reakciona smeša mešana na 0 °C 20 min. N-metilmorfolin (3.85 mL, 35 mmol) je dodavan u porcijama. Rastvor je ostavljen da se polako zagreva do sobne temperature tokom perioda od 6 sati. Reakciona smeša jeje zatim podeljena na zatim partitioned between EtOAc (350 mL) i aq KHSO4(5%, 350 mL). Organske faze su razdvojene, oprane vodom (3 x 150 mL) i fiziološkim rastvorom (200 mL), osušene preko anhidrovanog MgSO4i uparene pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (hex/EtOAc sa gradijentom 5/1→2/1). Željeni proizvod elura se kao prva glavna frakcija, nakon koje sledi sporedni proizvod (struktura dodeljena na osnovu masene spektr. i NMR). Frakcije koje sadrže čist 71 su koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeno je 7.4 g (62%) bele pene.<1>H NMR (300 MHz, Metanold4) δ 7.40 - 7.12 (višestruki pikovi, 10H), 6.42 (s, 2H), 5.05 (višestruki pikovi, 4H), 4.73 (dd, J= 9.8, 7.4 Hz, 1H), 4.15 (dd, J= 8.8, 4.4 Hz, 1H), 3.36 - 3.18 (višestruki pikovi, 2H), 3.11 (dd, J = 14.3, 6.8 Hz, 1H), 2.97 (dd, J = 14.1, 9.2 Hz, 1H), 2.21 (s, 6H), 1.87 - 1.72 (m, 1H), 1.62 (m, 1H), 1.45 (višestruki pikovi, 18H), 0.94 (s, 9H), 0.12 (s, 6H).
3) Korak c: Sinteza (8R,11S,Z)-6-((terc-butoksikarbonil)amino)-8-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)-11-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,9-diokso-3-oksa-5,7,10-triazadodek-5-en-12-oinska kiselina (4h)
[0487] 71 (4.50 g; 5.1 mmol), NaHCO3(924 mg; 11 mmol), Pd na ugljeniku (10%; 500 mg) i Boc2O (2.20 g; 10 mmol) su suspendovani u EtOH (250 mL). Reakciona tikvica je isprana vodonikom i reakciona smeša je mešana pod protokom vodonika ~4h. Napredovanje reakcije je
1
praćeno pomoću LC-MS. Nakon potpune konverzije reakciona smeša je filtrirana kroz sloj celita i uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen na aq KHSO4(5%, 200 mL) i EtOAc (300 mL). Organska faza je isprana fiziološkim rastvorom, osušena preko anhidrovanog MgSO4, i uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom (heksani/EtOAc sa gradijentom 3/1→1/1). 4h eluira prvi (uglavnom sa heksanima/EtOAc = 2/1). Frakcije koje sadrže čist 4h su kombinovane i uparene pod sniženim pritiskom. Dobijeno je 1.53 g (39%) 4h u obliku bele pene.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 6.31 (s, 2H), 4.53 (dd, J= 9.9, 5.8 Hz, 1H), 4.47 (dd, J = 9.3, 4.2 Hz, 1H), 3.02 (dd, J = 14.4, 5.9 Hz, 1H), 2.97 - 2.88 (m, 1H), 2.83 (dd, J= 14.3, 10.0 Hz, 1H), 2.71 (m, 1H), 2.13 (s, 6H), 1.73 - 1.53 (m, 1H), 1.43 - 1.20 (višestruki pikovi, 28H), 0.81 (s, 9H), 0.00 (s, 6H).
4) Korak d: Sinteza amida N-(((S)-1-terc-butoksilkarbonilamino)-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pent-5-il) (8R,11S,Z)-6-((terc-butoksikarbonil)amino)-8-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)-11-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,9-diokso-3-oksa-5,7,10-triazadodek-5-en-12-oinske kiseline (6at)
[0488] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4h (680 mg; 0.85 mmol) i 12a (460 mg; 1.28 mmol) kako bi se dobio 6at (520 mg, 55%) u vidu beličaste pene.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.18 - 6.96 (višestruki pikovi, 5H), 6.25 (s, 2H), 4.97 (dd, J= 8.5, 6.5 Hz, 1H), 4.48 (dd, J= 8.7, 4.5 Hz, 1H), 4.38 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 3.87 (višestruki pikovi, 2H), 3.07 - 2.63 (višestruki pikovi, 6H), 2.02 (s, 6H), 1.78 - 1.57 (višestruki pikovi, 3H), 1.46 (m, 1H), 1.40 - 1.09 (višestruki pikovi, 40H), 0.81 (s, 9H), 0.01 (s, 3H), 0.00 (s, 3H).
5) Korak e: Sinteza (R)-4-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-guanidinobutanamida (7ay)
[0489] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6at (400 mg; 0.36 mmol) kako bi se dobio 7ay (129 mg, 51%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (CD3OD): δ 7.27 (višestruki pikovi, 4H), 7.21 (m, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.15 (dd, J = 8.6, 6.5 Hz, 1H), 4.49 (dd, J = 9.5, 6.5 Hz, 1H), 4.36 (dd, J = 7.4, 5.4 Hz, 1H), 4.05 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 3.10 (dd, J = 14.1, 9.6 Hz, 1H), 2.99 - 2.81 (višestruki pikovi, 5H), 2.17 (višestruki pikovi, 7H), 2.04 (m, 1H), 1.86 (višestruki pikovi, 2H), 1.72 - 1.54 (višestruki pikovi, 2H), 1.51 - 1.25 (višestruki pikovi, 2H). MS: EI-MS: m/z 594.5 [M+1].
Primer 82: Sinteza (R)-4-amino-N-((S)-1-(((S)-4-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-guanidinobutanamida (D-
1 1
(N-(2-formimidamido)-Dab-DMT-NH((S)-4-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)but-1-il), 7az)
[0490]
Jedinjenje 7az
Primer 83: Sinteza (R)-4-amino-N-((S)-1-(((R)-4-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-guanidinobutanamida (D-(N-(2-formimidamido)-Dah-DMT-NH((R)-4-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)but-1-il), 7ba)
[0491]
1) Korak a: Sinteza amida N-(((S)-1-terc-butoksilkarbonilamino)-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)but-4-il) (8R,11S,Z)-6-((terc-butoksikarbonil)amino)-8-(2-((terc-
1 2
butoksikarbonil)amino)etil)-11-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,9-diokso-3-oksa-5,7,10-triazadodek-5-en-12-oinske kiseline (6az) i amida N-(((R)-1-terc-butoksilkarbonilamino)-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)but-4-il) (8R,11S,Z)-6-((tercbutoksikarbonil)amino)-8-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)-11-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,9-diokso-3-oksa-5,7,10-triazadodek-5-en-12-oinske kiseline (6ba)
[0492] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4h (1.25 g; 1.63 mmol) i 5i (623 mg; 1.8 mmol) kako bi se dobio 6au i 6av (1.32 g, 74%) u vidu beličaste pene.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7.18 - 6.97 (višestruki pikovi, 5H), 6.25 (s, 2H), 5.00 (dd, J= 8.9, 5.9 Hz, 1H), 4.47 (dd, J= 8.7, 4.5 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.05 - 2.62 (višestruki pikovi, 6H), 2.03 (s, 6H), 1.79 - 1.56 (višestruki pikovi, 3H), 1.40 - 1.12 (višestruki pikovi, 39H), 0.81 (s, 9H), 0.01 (s, 3H), 0.00 (s, 3H).
2) Korak b: Sinteza (R)-4-amino-N-((S)-1-(((S)-4-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-guanidinobutanamida (7az) i (R)-4-amino-N-((S)-1-(((R)-4-amino-1-(3-benzil-1,2,4-oksadiazol-5-il)butil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-2-guanidinobutanamida (7ba)
[0493] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu smeše 6au i 6av (2.960 g; 2.70 mmol) kako bi se dobio 7az (990 mg, 53%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (CD3OD): δ 7.26 (višestruki pikovi, 4H), 7.20 (m, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.22 (dd, J= 9.3, 5.5 Hz, 1H), 4.51 -4.34 (višestruki pikovi, 2H), 4.06 (d, J= 15.4 Hz, 1H), 4.01 (d, J= 15.4 Hz, 1H), 3.11 (dd, J= 14.0, 9.6 Hz, 1H), 2.91 (višestruki pikovi, 5H), 2.17 (s, 6H), 2.13 - 1.99 (višestruki pikovi, 2H), 1.98 - 1.81 (višestruki pikovi, 2H), 1.71 (višestruki pikovi, 2H). MS: EI-MS: m/z 580.6 [M+1]. I 7ba (13 mg) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (CD3OD): δ 7.26 (višestruki pikovi, 5H), 6.49 (s, 2H), 5.07 (dd, J= 8.8, 5.6 Hz, 1H), 4.69-4.65 (višestruki pikovi, 2H), 4.29-4.26 (m, 1H), 4.03 (2H, s), 3.19-3.13 (m, 1H), 2.98-2.80 (višestruki pikovi, 5H), 2.24 (s, 6H), 2.20 - 1.90 (višestruki pikovi, 2H), 1.93-1.64 (višestruki pikovi, 2H), 1.40-1.32 (višestruki pikovi, 2H). MS: EI-MS: m/z 580.5 [M+1].
Primer 84: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-4-amino-2-guanidinobutanamida (D-(N-(2-formimidamido)-Dab-DMT-NH((S)-1-(3-(adamantan-1-il)metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7bb)
[0494]
1
1) Korak a: Sinteza amida N-((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etan-1-amin) (8R,11S,Z)-6-((terc-butoksikarbonil)amino)-8-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)-11-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,6-dimetilbenzil)-2,2-dimetil-4,9-diokso-3-oksa-5,7,10-triazadodek-5-en-12-oinske kiseline (6aw)
[0495] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 4h (467 mg; 0.61 mmol) i 12u (427 mg; 0.77 mmol) kako bi se dobio 6aw (172 mg, 26%) u vidu bele pene. LC-MS analiza je pokazala jedan pik sa [M+H]<+>= 1075.6 Da.6aw je upotrebljen u sledećem koraku bez dalje karakterizacije.
2) Korak b: Sinteza (R)-N-((S)-1-(((S)-1-(3-(adamantan-1-ilmetil)-1,2,4-oksadiazol-5-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-4-amino-2-guanidinobutanamida (7bb)
[0496] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6aw (2.960 g; 2.70 mmol) kako bi se dobio 7bb (36 mg, 39%) u vidu bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.84 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.35 (s, 2H), 5.55 (dd, J= 8.5, 6.1 Hz, 1H), 4.45 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.37 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.40 (dd, J = 15.4, 6.0 Hz, 1H), 3.33 (dd, 1H), 3.10 (dd, J= 14.1, 9.5 Hz, 1H), 3.01 - 2.81 (višestruki pikovi, 3H), 2.48 (višestruki pikovi, 2H), 2.19 (višestruki pikovi, 7H), 2.05 (m, 1H), 1.93 (bs, 3H), 1.72 (bd, J= 12.2 Hz, 3H), 1.61 (bd, J = 11.5 Hz, 3H), 1.54 (bs, 6H). MS: EI-MS: m/z 661.6 [M+1].
Primer 85: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-1-(5-benzil-1,3,4-oksadiazol-2-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-
1 4
guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-1-(5-benzil-1,3,4-oksadiazol-2-il)-2-(1H-imidazol-4-il)et-1-il), 7bc)
[0497]
1) Korak a: Sinteza terc-butil (S)-4-(2-(5-benzil-1,3,4-oksadiazol-2-il)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)-1H-imidazol-1-karboksilat (73)
[0498] U rastvor 10i (0.3 g, 0.957 mmol), 2-phentlacetilhydrazyde (72, 0.143 g, 0.957 mmol), i HATU (0.364 g, 0.957 mmol) u suvom THF (10 mL) 0.21 mL NMM (1.91 mmol) je dodat i reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Dalje, nakon potrošnje inicijalnog jedinjenja (provereno pomoću LC-MS) 0.228 g Burgess reagensa (2.39 mmol) je dodato u jednoj porciji. Zatim 2 mL vode je dodato i rastvarači su upareni. Sirovi proizvod je prečišćen reverznom fleš hromatografijom (eluens: voda/MeCN) kako bi se dobio 73 (0.4 g, 89%) u vidu amorfne čvrste supstance.<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 7.91 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.35-7.22 (m, 5H), 7.06 (s, 1H), 6.09 - 5.89 (m, 1H), 5.37 - 5.16 (m, 1H), 4.16 (s, 2H), 3.14 (d, J= 5.4 Hz, 2H), 2.00 (s, 2H), 1.60 (s, 9H), 1.42 (s, 9H).
1
2) Korak b: Sinteza (S)-1-(5-benzil-1,3,4-oksadiazol-2-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etan-1-amina (12ae)
[0499] U rastvor 73 (0.4 g, 0.85 mmol) u DCM (5 mL) na 0C je dodat TFA (1 mL) i reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je tokom 2 sata. Nakon uklanjanja rastvarača sirovi 12ae je izolovan kao 0.42 g TFA soli.
3) Korak c: Sinteza terc-butil ((R)-1-(((S)-1-(((S)-1-(5-benzil-1,3,4-oksadiazol-2-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)amino)-5-guanidino-1-oksopentan-2-il)karbamata (6ax)
[0500] U smešu 12ae (0.35 g, 0.7 mmol) i Boc-(D-)-Arg-DMT-OH (4a, 0.406 g, 0.7 mmol) u 10 mL DMF, dodavani su HOBt<∗>H2O (0.183 g, 1.2 mmol), EDC*HCl (0.384 g, 2.0 mmol) i NMM (0.55 mL, 5 mmol) tokom perioda od 5 min. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Zatim je razblažena sa 200 mL etil acetata, oprana vodom (7 puta, 50 mL) i osušena preko natrijum sulfata. Sirovi proizvod je prečišćen reverznom fleš hromatografijom kako bi se dobilo 0.43 g (prinos: 78%) 6ax. On je odmah upotrebljen u sledećem koraku.
4) Korak d: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-1-(5-benzil-1,3,4-oksadiazol-2-il)-2-(1H-imidazol-4-il)etil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7bc)
[0501] U ohlađeni rastvor 6ax (0.43 g) u DCM (10 mL) dodat je TFA (4 mL). Nakon toga je ulonjeno ledeno/vodeno kupatilo i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2h. Isparljive materije su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je koncentrovan iz toluena (2x). Prečišćavanje preparativnom HPLC dalo je 45 mg željenog proizvod 7bc. (čistoća na osnovu HPLC je 95.1% na 210 nm).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.74 (t, J = 1.5 Hz, 1H), 7.39 -7.16 (m, 6H), 6.39 (s, 2H), 5.55 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.48 (d, J= 12.1 Hz, 1H), 4.30-4.19 (m, 2H), 3.93 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 3.22-3.15 (m, 2H), 3.03 (dd, J = 14.0, 9.9 Hz, 1H), 2.84 (dd, J = 13.9, 6.5 Hz, 1H), 2.19 (s, 6H), 1.91-1.73 (m, 2H), 1.61-1.44 (m, 2H). ELMS: m/z 617.5 [M+1].
Primer 86: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-fenoksifenil)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-5-amino-1-(3-fenoksifenil)pent-1-il), 7bd)
[0502]
1
Jedinjenje 7bd
Šema 86
5) Korak a: Sinteza (S,E)-2-metil-N-(3-fenoksibenziliden)propan-2-sulfinamida (76a)
[0503] U rastvor jedinjenja 74a (19.8 g, 0.1 mol , 1.0 eq) u THF (200 mL), (S) tercbutansulfinamid (75, 12.1 g , 0.1mol , 1.0 eq), i izopropil titanat (68.4 g, 0.3 mol, 3.0 eq) su dodavani u kapima tokom 20 min u smešu. Zatim je smeša mešana preko noći. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, smeša je filtrirana i ekstrahovana sa EA 2 puta. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko natrijum sulfata, koncentrovan i prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (76a, 25 g, 83.3%).
6) Korak b: Sinteza (S)-2-metil-N-((S)-1-(3-fenoksifenil)pent-4-en-1-il)propan-2-sulfinamida (78a)
1
[0504] Jedinjenje 76a (15 g, 0.05 mol, 1.0 eq) je rastvoreno u THF (150 mL) i ohlađeno do -75°C. U smešu je dodavan 0.5 M 3-butenilmagnezijum bromid (77, 300 mL, 0.15 mol, 3.0 eq) u kapima tokom 20min pod atmosferom N2. Kada je dodavanje završeno, reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana pod atmosferom N2preko noći. Nakon što je LCMS pokazala okončanje, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim amonijum hloridom, smeša je filtrirana i ekstrahovana sa EA 2 puta. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko natrijum sulfata, koncentrovan i prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobio željeni proizvod (78a, smeša dijastereoizomera da udelom 56: 44, nemoguće razdvajanje na koloni, 14 g, 79%).
7) Korak c: Sinteza (S)-1-(3-fenoksifenil)pent-4-en-1-amina (79a)
[0505] Jedinjenje 78a (10.7 g, 0.03 mol) je rastvoren in 4 M hydrochloric kiselina isopropil alcohol rastvor (100 mL), i smeša je mešana na room temperature for 30min. Nakon što je LCMS pokazala okončanje, reakciona smeša je koncentrovan. ostatak je dodat DCM i adjust pH = 7-8 with saturated aqueous natrijum bikarbonat rastvor. Organski sloj je isprano fiziološkim rastvorom, osušeno preko natrijum sulfate, i koncentrovan kako bi se dobio željeni sirovi proizvod (79a, 7.8 g) koji se koristi u sledećem koraku direktno.
8) Korak d: Sinteza benzil (S)-(1-(3-fenoksifenil)pent-4-en-1-il)karbamata (80a)
[0506] U rastvor jedinjenja 79a (7.6 g, 0.03 mol, 1.0 eq) u THF (80 mL) je dodat NaHCO3(7.56 g, 0.09 mol, 3.0 eq) i ohlađen do 0 °C. Benzil karbonhloridat (6.1 g, 0.036 mol, 1.2 eq) je dodavan u smešu u kapima tokom 15min. Nakon što je dodavanje završeno, reakcija je držana na istoj temperaturi i mešana tokom 2h. Nakon što je LCMS pokazala okončanje, reakciona smeša je ugašena sa H2O i ekstrahovana sa DCM 2 puta. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko natrijum sulfata, koncentrovan i prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobio željeni proizvod (80a, 9.7 g, 82.8%).
9) Korak e: Sinteza benzil (S)-(5-hidroksi-1-(3-fenoksifenil)pentil)karbamata (81a)
[0507] U rastvor jedinjenja 80a (9.7 g, 0.025 mol, 1.0 eq) u THF (100 mL) je dodat 0.5 M 9-BBN (100 mL, 0.05 mol, 2.0 eq) i smeša je mešana na room temperature preko noći. LCMS indicated completion, reakciona smeša je ugašen sa H2O2i ekstrahovan sa DCM 2 puta. Organski sloj je isprano fiziološkim rastvorom, osušeno preko natrijum sulfate, koncentrovan i
1
prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobio željeni proizvod (81a, 7.6 g, 74.2%).
10) Korak f: Sinteza benzil (S)-(5-(1,3-dioksoisoindolin-2-il)-1-(3-fenoksifenil)pentil)karbamata (82a)
[0508] U rastvor jedinjenja 81a (7.3 g, 0.018 mol, 1.0 eq) u THF (80 mL) je dodat trifenilfosfin (7.08 g, 0.027 mol, 1.5 eq) i izoindolin-1,3-dion (3.17 g, 0.0216 mol, 1.2 eq). Smeša je ohlađena do -0<0>C i DIAD (5.45 g, 0.027 mol, 1.5 eq) je dodavan u kapima tokom 15min u smešu. Nakon što je dodavanje završeno, reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je 2h. Nakon što je LCMS pokazala okončanje, reakciona smeša je ugašena sa H2O i ekstrahovana sa DCM 2 puta. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko natrijum sulfata, koncentrovan i prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobio željeni proizvod (82a, 6.8 g, 65%).
11) Korak g: Sinteza benzil (S)-(5-amino-1-(3-fenoksifenil)pentil)karbamata (83a)
[0509] U rastvor jedinjenja 82a (6.4 g, 0.012 mol, 1.0 eq) u MeOH (80 mL) dodat je hidrazin hidrat (0.9 g, 0.018 mol, 1.5 eq). Reakciona smeša je zagrevana do refluksa tokom 2h. Nakon što je LCMS pokazala okončanje, reakciona smeša je koncentrovana. ostatak je rastvoren u DCM i filtriran, filtrat je koncentrovan kako bi se dobio željeni sirovi proizvod (83a, 5.8 g) koji se koristi u sledećem koraku direktno.
12) Korak h: Sinteza benzil terc-butil (1-(3-fenoksifenil)pentan-1,5-diil)(S)-dikarbamata (84a)
[0510] Ratvoru jedinjenja 83a (5.6 g, 0.014 mol, 1.0 eq) u DCM (60 mL) je dodat trietil amin (2.8 g, 0.028 mol, 2.0 eq) i ohlađen do 0<0>C. (Boc)2O (4.6 g, 0.021 mol, 1.5 eq) je dodavan u kapima tokom 15min to smeša. Nakon što je dodavanje završeno, reakcija je ostavljena da se zagreje do sobne temperature i mešana je 2h. Nakon što je LCMS pokazala okončanje, reakciona smeša je ugašena sa H2O i ekstrahovana sa DCM 2 puta. Organski sloj je ispran fiziološkim rastvorom, osušen preko natrijum sulfata, koncentrovan i prečišćen na silicijumskoj koloni kako bi se dobio željeni proizvod (84a, 4.8 g, 61.5%).
13) Korak i: Sinteza terc-butil (S)-(5-amino-5-(3-fenoksifenil)pentil)karbamata (5ae)
[0511] U rastvor jedinjenja 84a (4.0 g, 8 mmol) u MeOH (40 mL) je dodat Pd/C (2 g). Smeša je mešana pod atmosferom H2preko noći. Nakon što je LCMS pokazala okončanje, smeša je filtrirana, isprana sa MeOH, filtrat je koncentrovan i prečišćen na silicijumskoj koloni (2.8 g,
1
94.6%) i hiralnom separacijom pomoću Daicel, kako bi se dobio željeni proizvod 5ae (HPLC 98%, 98%ee).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.40 (m, 2H), 7.30 (m, 1H), 7.12 (m, 2H), 7.00 (m, 3H), 6.85 (m, 1H), 6.75 (br, 1H), 3.74 (m, 1H), 2.86 (m, 2H), 1.50 (m, 2H), 1.31 (s, 9H), 1.25 (m, 4H). MS (M+1) = 371.1.
14) Korak j: Sinteza terc-butil ((6R,9S,12S)-1-amino-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-12-(3-fenoksifenil)-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6ay)
[0512] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 5ae (0.200 g, 0.540 mmol) i 4a (0.271 g, 0.540 mmol) kako bi se dobio 6ay (0.200 g). Dobijeni ostatak je ispran kroz reverzno-faznu fleš kolonu i upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
15) Korak k: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-fenoksifenil)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7bd)
[0513] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6ay (0.200 G, 0.228 mmol) kako bi se dobio 7bd (83 mg) u vidu bele čvrste supstance. (čistoća na osnovu HPLC je 98.8% na 210 nm).<1>H NMR (400 MHz, metanold4) δ 7.37-7.321 (m, 2H), 7.25 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 7.13-7.09 (m, 1H), 7.04-7.02 (m, 1H), 6.97-6.93 (m, 3H), 6.79 (ddd, J= 8.2, 2.5, 1.0 Hz, 1H), 6.50 (s, 2H), 4.69 (dd, J= 10.2, 5.9 Hz, 1H), 4.65-4.61 (m, 1H), 3.87 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.21-3.12 (m, 3H), 2.92-2.82 (m, 3H), 2.32 (s, 6H), 1.88-1.73 (m, 2H), 1.59-1.50 (m, 6H), 1.07-0.97 (m, 2H). MS: EI-MS: m/z 618.6 [M+1].
Primer 87: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(4-fenoksifenil)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (D-Arg-DMT-NH((S)-5-amino-1-(4-fenoksifenil)pent-1-il), 7be)
[0514]
Jedinjenje 7be
1
Šema 87
1) Korak a: Sinteza (S,E)-2-metil-N-(4-fenoksibenziliden)propan-2-sulfinamida (76b)
[0515] Ista procedura kao što je opisana u šemi 86 uz upotrebu 74b (19.8 g, 0.1 mol , 1.0 eq) i (S) terc-butansulfinamida (75, 12.1 g , 0.1mol , 1.0 eq) kako bi se dobio željeni proizvod u vidu bele čvrste supstance (76b, 25 g, 83.3%).
2) Korak b: Sinteza (S)-2-metil-N-((S)-1-(4-fenoksifenil)pent-4-en-1-il)propan-2-sulfinamida (78b)
[0516] Ista procedura kao što je opisana u šemi 86 uz upotrebu 76b (15 g, 0.05 mol, 1.0 eq) i 0.5 M 3-butenilmagnezijum bromida (77, 300 mL, 0.15 mol, 3.0 eq) kako bi se dobio željeni proizvod (78b, 5 g, 28%, 96% de, dijasteroizomeri su mogli da se razdvoje na koloni).
3) Korak c: Sinteza (S)-1-(4-fenoksifenil)pent-4-en-1-amina (79b)
[0517] Ista procedura kao što je opisana u šemi 86 uz upotrebu 78b (10.7 g, 0.03 mol) kako bi se dobio željeni sirovi proizvod (79b, 7.8 g) koji se koristi u sledećem koraku direktno.
4) Korak d: Sinteza benzil (S)-(1-(4-fenoksifenil)pent-4-en-1-il)karbamata (80b)
1 1
[0518] Ista procedura kao što je opisana u šemi 86 uz upotrebu 79b (7.6 g, 0.03 mol, 1.0 eq) kako bi se dobio željeni proizvod (80b, 9.7 g, 82.8%).
5) Korak e: Sinteza benzil (S)-(5-hidroksi-1-(4-fenoksifenil)pentil)karbamata (81b)
[0519] Ista procedura kao što je opisana u šemi 86 uz upotrebu 80b (9.7 g, 0.025 mol, 1.0 eq) kako bi se dobio željeni proizvod (81b, 7.6 g, 74.2%).
6) Korak f: Sinteza benzil (S)-(5-(1,3-dioksoisoindolin-2-il)-1-(4-fenoksifenil)pentil)karbamata (82b)
[0520] Ista procedura kao što je opisana u šemi 86 uz upotrebu 81b (7.3 g, 0.018 mol, 1.0 eq) kako bi se dobio željeni proizvod (82b, 6.8 g, 65%).
7) Korak g: Sinteza benzil (S)-(5-amino-1-(4-fenoksifenil)pentil)karbamata (83b)
[0521] Ista procedura kao što je opisana u šemi 86 uz upotrebu 82b (6.4 g, 0.012 mol, 1.0 eq) kako bi se dobio željeni sirovi proizvod (83b, 5.8 g) koji se koristi u sledećem koraku direktno.
8) Korak h: Sinteza benzil terc-butil (1-(4-fenoksifenil)pentan-1,5-diil)(S)-dikarbamata (84b)
[0522] Ista procedura kao što je opisana u šemi 86 uz upotrebu 83b (5.6 g, 0.014 mol, 1.0 eq) kako bi se dobio željeni proizvod (84b, 4.8 g, 61.5%).
9) Korak i: Sinteza terc-butil (S)-(5-amino-5-(4-fenoksifenil)pentil)karbamata (5af)
[0523] Ista procedura kao što je opisana u šemi 86 uz upotrebu 84b (4.0 g, 8 mmol) kako bi se dobio željeni proizvod 5af (HPLC 99.5%, 98%ee).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.35 (m, 4H), 7.12 (m, 1H), 6.95 (m, 4H), 6.72 (br, 1H), 3.72 (m, 1H), 2.88 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.26 (m, 4H). MS (M+1) = 371.1.
10) Korak j: Sinteza terc-butil ((6R,9S,12S)-1-amino-9-(4-hidroksi-2,6-dimetilbenzil)-1-imino-20,20-dimetil-7,10,18-triokso-12-(3-fenoksifenil)-19-oksa-2,8,11,17-tetraazahenikozan-6-il)karbamata (6az)
[0524] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 5ae (0.200 G, 0.540 mmol) i 4a (0.271 G, 0.540 mmol) kako bi se dobio 6az (0.200 g). Dobijeni ostatak je temeljno ispran sa reverzno-fazne fleš kolone i korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
1 2
11) Korak k: Sinteza (R)-2-amino-N-((S)-1-(((S)-5-amino-1-(3-fenoksifenil)pentil)amino)-3-(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)-1-oksopropan-2-il)-5-guanidinopentanamida (7be)
[0525] Ista procedura kao što je opisana u šemi 36 uz upotrebu 6az (0.200 G, 0.228 mmol) kako bi se dobio 7be (90 mg) u vidu bele čvrste supstance. (čistoća na osnovu HPLC je 99.5% na 210 nm).<1>H NMR (400 MHz, Metanold4) δ 7.36-7.30 (m, 2H), 7.27-7.24 (m, 2H), 7.12-7.08 (m, 1H), 6.95-6.91 (m, 2H), 6.90-6.86 (m, 2H), 6.50 (s, 2H), 4.66 (td, J = 9.3, 8.3, 6.4 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.21-3.14 (m, 3H), 2.92-2.84 (m, 3H), 2.33 (s, 6H), 1.90-1.73 (m, 2H), 1.61-1.49 (m, 6H), 1.10-0.98 (m, 2H). MS: EI-MS: m/z 618.6 [M+1].
Primer 88: Postupci i procedure izmeštanja radioliganda
1) POSTUPCI I PROCEDURE IZMEŠTANJA RADIOLIGANDA
1.1 Pripremanje homogenata srca pacova
[0526] Aptuit je posvećen najvišim standardima kad je dobrobit životinja u pitanju i predmet je zakonodavstva prema italijanskom zakonodavnom dekretu br. 26/2014. Sve studije su sprovedene u skladu sa nacionalnim zakonima i sa odobrenjem koje izdaje Ministarstvo zdravlja Italije.
[0527] Alikvoti homogenata srca pacova su pripremljeni prema sledećoj proceduri. Srca 20 mužjaka Sprague Dawley pacova su secirana i brzo zamrznuta na -80°C. Na dan pripreme homogenata, srca su odmrznuta na 4°C. Grupe od po 2 srca u 2 zapremine ledenog pufera sa 20 mM HEPES, 1 mM EDTA, pH 7.4 su homogenizovane sa GentleMACS disocijatorom (Miltenyi Biotec) korišćenjem D02 protokola. Finalna suspenzija od 20 srca podeljena je u 4 alikvota sa dodatnim ledenim puferom do 200 mL za svaku epruvetu, homogenizovana sa Politronom i centrifugirana na 24 000 g tokom 40 minuta na 4°C (T21 Sorvall, Rotor SL0250T, 13 500 obrtaja u minuti). Za svaku epruvetu, supernatant je odbačen, a pelet resuspendovan sa 100 mL ledenog pufera, homogenizovan i centrifugiran. Ovaj korak je ponovljen dva puta. Finalni peleti su sakupljeni zajedno u jednu epruvetu sa 70 mL pufera. Posle homogenizacije suspenzija je podeljena na alikvote u bočice od 1.5 mL i čuvana na -80°C. Sadržaj proteina, meren Bradford (Bio-Rad) metodom koristeći BSA kao stiard, bio je 6.15 mg/mL. Svi eksperimenti vezivanja su izvedeni korišćenjem istog preparata homogenata srca pacova.
1.2 Jedinjenje plate preparation
[0528]
1
• serijska razblaženja od po 3 puta su manuelno izvedena u DMSO kako bi se generisale CRC sa 11 tačaka, pri koncentraciji koja je bila 300 puta veća u odnosu na finalnu koncentraciju (finalni opseg koncentracija za jedinjenja je bio 30µM do 0.51nM, osim ako nije naznačeno drugačije)
• iz ove ploče sa jedinjenjima, po 1 µL iz svakog bunarčića je prebačen u ploču sa 96 dubokih bunarčiča (test ploča)
• Nespecifično vezivanje (NSB) je definisano dodavanjem 1µL 9mM SBT-031(30µM finalno), a ukupno vezivanje (TB) je definisano dodavanjem 1µL DMSO.
1.3 Reagensi i puferski rastvori
[0529]<3>H D-Arg-DMT-Lys-Phe-NH2je dobijen od firme Moravek, kat. br. MT-1002819, lotovi 745-110-0241-A-20160502-DJI i 750-006-0237-A-20160909-DJI. Sastav pufera za test je bio: 20mM HEPES, pH7.1, 10mM KCl, 0.01% Pluronic F127 i koktel proteaznih inhibitora (Abeam, ab65621) 1:500. Sastav ledenog pufera za ispiranje je bio: 20mM HEPES, 10mMKCl, pH 7.1.
1.4<3>H D-Arg-DMT-Lys-Phe-NH2 filtracioni test vezivanja
[0530] Eksperimenti vezivanja sa izmeštanjem su izvedeni u ploči sa 96 dubokih bunarčića na sobnoj temperaturi sa konačnom zapreminom testa od 300µL/bunarčiću, prema sledećem protokolu:
1 4
• 150 µL<3>H D-Arg-DMT-Lys-Phe-NH2u puferu za test je dodato u ploču sa dubokim bunarčićima koji sadrže po 1µL jedinjenja rastvorenog u DMSO kako bi finalna koncentracija radioliganda u testu bila 6-8nM. Tačna koncentracija je određena brojanjem u tečnom scintilatoru (LSC)
• Vezivanje sa izmeštanjem je inicirano dodavanjem 150µL homogenata pacovskog srca u puferu za test kako bi se dobila finalna koncentracija testa od 16µg/mL, što odgovara 5 µg/bunarčiću
• Ploča je inkubirana u šejkeru na 23°C tokom 60min
• Reakcija je okončana brzom filtracijom kroz filter ploču Unifilter-96 GF/C koja je natopljena tokom jednog sata u rastvoru polietilenimina (PEI) 1% (w/v), a zatim kratko isprana sa oko 0.5mL ledenog test pufera uz pomoć instrumenta Cell Harvester (PerkinElmer)
• Filter ploča je isprana 3 puta sa oko 0.5mL ledenog pufera i zatim ostavljena da se suši oko jednog sata na 50°C
• 50µL reagensa Microscint-20 je dodato u svaki bunarčić i ploča je hermetički zatvorena sredstvom topseal A (PerkinElmer)
• Vezana radioaktivnost je merena pomoću čitača mikrotitar ploča TopCount ili Microbeta2
• Koncentracija radioliganda je određena na sledeći način: 50µL<3>H SBT-031 rastvora plus 3mL FilterCount (PerkinElmer) reagensa je pomešano u ukupnoj količini u tubi i očtano je na brojaču β-Counter TriCarb 2900
2) OBRADA I ANALIZA PODATAKA
[0531] Sirovi podaci u vezi da vezivanjem radioliganda sastojali su se od cpm vrednosti dobijenih sa čitača TopCount. Analiza podataka krive za jedininje je sprovedena koristeći procenat TB, izračunavanjem po sledećoj formuli:
Procenat TB = (uzorak/TB)*100
Uzorak cpm iz bunarčića sa test jedinjenjem
TB srednji cpm iz TB kontrolnih bunarčića
[0532] Procenjivanje fitovanjem krive i pIC50(negativni logaritam IC50) sprovedeno je pomoću programa GraphPad Prism. Poređenje statističkog fitovanja između modela sa jednim mestom i sa dva mesta je korišćeno da bi se odabrao poželjniji model (P<0.05). Kod oba modela je najniži deo krive podešen da bude veći od 0. U slučaju modela sa dva mesta frakcija mesta sa visokim
1
afinitetom je takođe zabeležena (visoki deo frakcije). Primenjena je opcija GraphPad programa za automatsku eliminaciju vrednosti koje odstupaju, integrisana sa manuelnim isključivanjem podataka za slučajeve očiglednih odstupanja uzoraka. Za svako jedinjenje je takođe sprovedeno fitovanje prosečne vrednosti uključujući sve eksperimentalne replikate.
[0533] Primenjeni su kriterijumi za prihvatljivost ploča na bazi Z' faktora (Zhang et al., 1999); samo ploče sa Z'>0.5 su uzimane u obzir za analizu podataka. Standardna farmakološka kontrola kvaliteta se zasnivala na neobeleženoj SBT-031 krivoj; njena vrednost za visoki afinitet morala je da ostane u opsegu pIC507.6±0.5 (pIC50od 7.1÷8.1, što odgovara IC50za 80nM÷8nM). Ako nijedna od krivih izmeštanja<3>H D-Arg-DMT-Lys-Phe-NH2nije zadovoljavala ovaj zahtev, ceo eksperiment je odbacivan.
3) ARHIVIRANJE
[0534] Originalni potpisani izveštaj, sve izmene ili odstupanja, neobrađeni podaci i povezana dokumentacija biće čuvani pod odgovornošću Centralnog arhiva Aptuit Verona u periodu od 2 godine nakon završetka studije. Nakon ovog perioda, sponzor će biti kontaktiran u cilju dobijanja daljih uputstava.
[0535] Elektronski podaci će biti zadržani; duplikati PDF elektronskih kopija konačnog izveštaja će se čuvati na dva odvojena i odgovarajuće označena CD/DVD nosača podataka (jedna kopija na svakom CD/DVD nosaču). Smatra se da su ove PDF datoteke izvan obima FDA 21 CFR, deo 11.
4) REZULTATI
[0536] Jedinjenja su testirana pomoću vezivanja izmeštanjem<3>H D-Arg-DMT-Lys-Phe-NH2. Referentna kriva izmeštanja D-Arg-DMT-Lis-Phe-NH2bila je prisutna u svakom eksperimentu. Rezultati afiniteta vezivanja jedinjenja dobijeni iz proseka normalizovanog procenta inhibicije prikazani su na slici 1.
5) LITERATURA
[0537] Zhang JH, Chung TD, Oldenburg KR: A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays. J Biomol Screen. (1999), 4: 67-73
Primer 89: Langendorf studija
Ishemijsko-reperfuziono oštećenje-Langendorf protokol za preparaciju srca (Letonski institut za organsku sintezu)
1
[0538] Studija infarkta se izvodi prema Langendorf tehnici kao što je prethodno opisano (Kuka J, Vilskersts R, Cirule H, Makrecka M, Pugovics O, Kalvinsh I, et al. The cardioprotective effect of mildronate is diminished after co-treatment with L-carnitine. J Cardiovasc Pharmacol Ther.
2012;17:215-222), sa nekim modifikacijama. Pacovi su anestezirani natrijum pentobarbitalom (60 mg/kg) i heparin se primenjuje intraperitonealno. Za studije infarkta, srca se perfunduju oksigenisanim (95% O2- 5% CO2) Krebs-Henseleit (KH) puferskim rastvorom (118 mmol/L NaCl, 4.7 mmol/L KCl, 1.24 mmol/L CaCl2, 1.64 mmol/ L MgCl2, 24.88 mmol/L NaHCO3, 1.18 mmol/L KH2PO4i 0.05 mmol/L EDTA; pH 7.3-7.5; 36.8-37.0°C) sa dodatkom 10 mM glukoze pri konstantnom perfuzionom pritisku od 60 mmHg. Balon napunjen mešavinom vode i etanola (1:1) povezan sa pretvaračem fiziološkog pritiska (ADInstruments) se ubacuje u levu komoru, a osnovni krajnji dijastolni pritisak se postavlja na 5-10 mmHg. Brzina otkucaja srca (HR), protok, razvijeni pritisak u levoj komori (LVDP), kontraktilnost (+dp/dt) se kontinuirano beleže pomoću PowerLab 8/35 sistema kompanije ADInstruments. Izolovana srca pacova su adaptirana 20 min, a leva prednja silazna koronarna arterija (LAD) je zatim okludirana na 30 min, nakon čega sledi 120 min reperfuzije. KH perfuzioni rastvor sa ili bez dodatog jedinjenja od interesa (nosač ili koncentracija od 1 µM) će se koristiti za sve vreme perfuzije izolovanog srca. Okluzija je potvrđena padom koronarnog protoka od ~ 40%. Veličina infarkta se određuje kao što je prethodno opisano (Kuka J, Vilskersts R, Cirule H, Makrecka M, Pugovics O, Kalvinsh I, Dambrova M, Liepinsh E. The cardioprotective effect of mildronate is diminished after cotreatment with L-carnitine. J Cardiovasc Pharmacol Ther. 2012 Jun;17(2):215-22. doi: 10.1177/1074248411419502.; Liepinsh E, Kuka J, Dambrova M. Troubleshooting digital macro photography for image acquisition and the analysis of biological samples. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013 Mar-Apr;67(2):98-106. doi: 10.1016/j.vascn.2012.11.001.). Ukratko, na kraju reperfuzije, LAD je ponovo okludiran, a srce je perfundovano sa 0.1% metilen plavog rastvorenog u KH puferskom rastvoru. Nakon toga, srca se preseku poprečno od vrha do osnove na 6 rezova (5 ako je srce manje) debljine 2 mm i inkubiraju u 1% trifenil-tetrazolijum hlorida u fosfatnom puferu (pH 7.4, 37°C) tokom 10 minuta da se boje održivo tkivo crveno i nekrotično tkivo belo. Planimetrijska analiza slika poprečnog preseka se vrši korišćenjem softvera Image-Pro Plus v6.3 kako bi se odredila površina pod rizikom (AR) i nekrotična površina (AN), pri čemu je svaka izražena kao procenat površine poprečnog preseka. Dobijene vrednosti se zatim koriste za izračunavanje veličine infarkta (IS) kao procenta površine pod rizikom, prema formuli:
Nekrotična površina se određuje kombinovanjem oblasti belog nekrotičnog i ružičastog tkiva. Dizajn studije
1
• 20 min. adaptacija 30 min. ishemija (LAD ligacija) 120 min. reperfuzija. Vehikulum ili 1 µM jedinjenja
• Koncentracija(e) ispitivane supstance može da se podesi. Sve promene će biti zabeležene u dokumentaciji studije i u konačnom izveštaju.
• Krajnje tačke: HR, protok, LVDP, ±dP/dt, veličina infarkta-nekrotična površina KONTR (vehikulum) do 4 jedinjenja (n=8 po tretmanu) testirana po setu
[0539] Protokol i broj jedinjenja koja se testiraju može da se modifikuje na osnovu eksperimentalnih rezultata i dogovora sa sponzorom. Sve izmene protokola dokumentuju se u dokumentaciji studije i u izmenama protokola.
1
�
� Primer 90: Pacovski model infarkta miokarda
[0540] Pacovski model infarkta miokarda sprovela je kompanija IPST Therapeutique Inc, Sherbrooke, Kvebek, Kanada. Životinje su randomizirane u smislu ravnomerne distribucije između tretiranih grupa na osnovu njihove telesne težine od strane direktora studije sa ciljem da se za svaki dan operacije rasporede životinje iz svake od tretiranih grupa (kada je to moguće).
1) Grupa simulacije tretmana: veličina grupe: n=2. Ruta administracije: nepoznato;
2) Grupa vehikuluma: veličina grupe: n=8. Ruta administracije: s.c.;
3) Grupa testiranih jedinjenja: veličina grupe: n=8. Ruta administracije: s.c.; Doza za lečenje: 2 X 2 mg/kg, 30 min pre ishemije i 5 min pre reperfuzije.
EKSPERIMENTALNE PROCEDURE
Dizajn studije
[0541]
1) Na dan operacije, pacov se anestezira mešavinom od 2 do 2.5% izoflurana USP (Abbot Laboratories, Montreal, Kanada) u kiseoniku, i stavlja na podlogu za grejanje da bi se održala telesna temperatura.
2) Životinja se intubira i odmah ventiliše pomoću respiratora za glodare sa pozitivnim pritiskom podešenim na ≈ 10mL/kg telesne težine sa frekvencijom od 65-70 udaraca/min.
3) Osnovni uzorak krvi (1 mL) uzima se iz jugularne vene u cilju kvantifikacije osnovnih biomarkera. Krv se sakuplja u litijum heparinskim mikro kontejnerima i centrifugira na 3000 o/min, na 4±2°C tokom 10 minuta. Plazma se deli u 2 uzorka jednake zapremine (približno 250 µL). Jedan alikvot se čuva na 4±2°C, a jedan na -20 ± 2°C, do analize biomarkera.
4) Torakotomija se izvodi kroz levi četvrti interkostalni prostor da bi se otkrilo srce.
5) 5-0 sofsilk šav se postavlja oko leve prednje descendentne (LAD) arterije, 2-3 mm ispod leve pretkomora.
6) Konac se nakratko uhvati da bi se potvrdila veličina i lokacija ishemije miokarda na osnovu promene boje i zatim se vezuje da bi se proizveo veliki anterolateralni infarkt miokarda (oko 50%).
7) 30 minuta nakon okluzije LAD, šav će biti uklonjen da bi se omogućila reperfuzija mišića. 8) Torakotomija se zatvara šavom 4-0 i daje se potkožna injekcija meloksikama (1 mg/kg) za lečenje postoperativnog bola.
9) Pre nego što se životinja vrati u kavez, krv se uzima drugi put kao što je urađeno pre ishemije
1 1
u cilju analize biomarkera 30 minuta nakon reperfuzije.
10) 24 sata nakon reperfuzije, životinja se ponovo anestezira (izofluran 2%). Uzorak krvi od 1 mL uzima se iz jugularne vene u cilju kvantifikacije biomarkera nakon 24h.
11) Srce se secira i montira u Langendorf aparat. Oksigenisanim Tirodovim rastvorom koji je zagrejan na 35 ± 2°C retrogradno se perfunduje srce pri pritisku od približno 70 mmHg i brzinom protoka od 10 mL/min.
12) Kanila sa balonom ispunjenim tečnošću povezana sa pretvaračem pritiska ubacuje se u levu komoru kroz plućnu venu i mitralni zalistak da bi se izmerio pritisak u levoj komori (LVP). PV-petlja se izvedodi kako bi se procenili parametri kontraktilnosti leve komore.
13) Srce se zatim perfunduje Evans plavom bojom da bi se procenila veličina infarkta miokarda. Nakon bojenja Evans plavim, srce se uklanja iz Langendorf aparata i potapa u hladni etanol (-50 °C). Srce se secira na poprečne preseke od približno 2 mm. Preseci se skeniraju kako bi se procenila rizična površina (AAR) pre nego što se inkubiraju u fosfatnom puferu koji sadrži 1% TTC tokom 30 minuta na 35 ± 2°C i zatim prenose u formalin 4% tokom 24 sata na 4±2°C . Preseci se ponovo skeniraju kako bi se izmerilo oštećeno područje.
IZRAČUNAVANJA
[0542]
Veličina infarkta % = (površina infarkta/površina pod rizikom)*100
KOMPJUTERSKI SISTEMI
[0543] Za prikupljanje podataka koristiće se umreženi lični računar koji koristi Microsoft Windows8, XP Professional ili Microsoft Windows Vista Business. Softver za analizu biće Microsoft Office Excel 2007 instaliran na umreženim ličnim računarima koji koriste Microsoft Windows8, XP Professional ili Vista.
Tabela 3: Veličina infarkta (%)
1 2
Primer 91: Model akutnog oštećenja bubrega (AKI) kod pacova
[0544] Model akutnog oštećenja bubrega (AKI) kod pacova je sprovela kompanija IPST Therapeutique Inc, Sherbrooke, Kvebek, Kanada. Životinje su randomizirane u smislu ravnomerne distribucije između tretiranih grupa na osnovu njihove telesne težine od strane direktora studije sa ciljem da se životinje iz svake grupe rasporede na svaki dan operacije. Pacovima je omogućen slobodan pristup hrani i vodi.
EKSPERIMENTALNE PROCEDURE
Indukcija ishemije-reperfuzije
[0545]
1. Pacovi se anesteziraju izofluranom USP (Abbot Laboratories, Montreal Canada) 2% u kiseoniku i stavljaju na zagrejanu podlogu da bi se održala telesna temperatura. EKG i saturacija kiseonikom se prate tokom celog hirurškog procesa. Telesna temperatura se prati pomoću termometarske sonde koja se uvodi u abdomen, veoma blizu bubrega.
2. Uzima se 1 mL krvi iz jugularne vene. Krv se sakuplja u epruvete sa litijum heparinom i centrifugira na 3000 rpm tokom 10 min. kako bi se dobila plazma. Plazma se deli na alikvote od 200 µL i čuva na -20°C do doziranja biomarkera.
3. Abdomen se dezinfikuje povidon jodom i radi se laparotomija.
4. Bubrezi se izlažu i stavlja se privremeni šav oko bubrežne arterije dva bubrega. Ishemija bubrega se vizuelno potvrđuje postepenom promenom boje bubrega od crvene do tamnoljubičaste u roku od nekoliko minuta od početka ishemije. Tokom ishemije, bubrezi se održavaju vlažnim i toplim pomoću toplotne lampe i sterilne gaze natopljene toplim (37°C) fiziološkim rastvorom. Temperatura se prati pomoću termometarske sonde uvedene u stomak, veoma blizu bubrega.
5. Nakon 30 minuta okluzije, šav se uklanja.
6. Rane na abdomenu se zatvaraju svilenim šavom 4-0, a životinja se vraća u kavez.
7. Dvadeset četiri sata nakon reperfuzije pacovi se ponovo anesteziraju. Krv se vadi još jednom na isti način kao i pre ishemije.
8. Šam se tretira pod istim uslovima kao i vehikulum, osim što se bubrezi ne podvrgavaju ishemijskim uslovima.
1
DETEKCIJA BIOMARKERA
[0546] Alikvot od 200 µL uzorka plazme uzima se pre ishemije i 24 sata nakon ishemije; oba se šalju u kliničku laboratoriju CHUS (Centre Hospitalier Universitaire de Sherbrooke, Kvebek, Kanada) u cilju detekcije nivoa kreatinina u plazmi (p.Cr) i azota uree u krvi (BUN).
KOMPJUTERSKI SISTEMI
[0547] Sledeće navedeno su validirani računarski sistemi koji se koriste tokom sprovođenja studije. Softver za analizu je Microsoft Office Excel 2007 instaliran na umreženim ličnim računarima koji koriste Microsoft Windows8, XP Professional ili Vista.
ANALIZA PODATAKA
[0548] Vrednosti su predstavljene kao srednja vrednost ± SEM (standardna greška srednje vrednosti) i predstavljene simbolom na grafiku. Ponovljeni neupareni Studentovi t-testovi su sprovedeno u programu Microsoft Excel 2007 na svim eksperimentalni podacima. Smatralo se da su razlike značajne kada je p ≤ 0.05.
[0549] Grupa vehikuluma je upoređena sa grupom simuliranog tretmana, dok je testirana kategorija poređena sa grupom vehikuluma.
[0550] Kreatitin u plazmi post-I/R (% srednje vrednosti za vehikulum) je izračunat prema sledećoj formuli:
[0551] Gde je:
pl. kr. = kreatinin u plazmi
Srednja Δ plazma kreatinina u grupi simulacije = Srednja v. (plazma kreatinin 24h postish. - plazma kreatinin pre-ish.) u grupi simuliranog tretmana
Srednja Δ plazma kreatinina u grupi vehikuluma = Srednja v. ((plazma kreatinin 24h post-ish. - plazma kreatinin pre-ish.)
- srednja Δ plazma kreatinina u grupi simuliranog tretmana) u grupi vehikuluma
[0552] BUN post-I/R (% srednje vrednosti za vehikulum) je izračunato pomoću sledeće formule:
1 4
[0553] Gde je:
BUN = Urea azot u krvi
Srednja Δ BUN u grupi simulacije = Srednja v. (BUN 24h post-ish. - BUN pre-ish.) u grupi simulacije
Srednja Δ BUN u grupi vehikuluma = Srednja v. ((BUN 24h post-ish. - BUN pre-ish.) - Srednja Δ BUN u grupi simulacije) u grupi vehikuluma
% zaštite je izračunat pomoću sledećih formula:
% zaštite (plazma kreatinin) = 100% - Δ plazma kreatinin post-I/R (% srednje v. vehikuluma)
% zaštite (BUN) = 100% - Δ BUN post-I/R (% srednje v. veh.)
Tabela 4. Plazma kreatinin, % zaštite
1
Tabela 5. BUN, % zaštite
Primer 92: AIR studija na permeabilizovanim srčanim vlaknima pacova
Funkcionalnost mitohondrija u in vitro modelu anoksije-reoksigenacije (A/R)
1) PRIPREMA PERMEABILIZOVANIH SRČANIH VLAKANA
[0554] Permeabilizovana srčana vlakna se pripremaju iz normoksičnog srca kao što je prethodno opisano (Kuka J, Vilskersts R, Cirule H, Makrecka M, Pugovics O, Kalvinsh I, Dambrova M, Liepinsh E. The cardioprotective effect of mildronate je diminished after co-treatment with L-carnitine. J Cardiovasc Pharmacol Ther. 2012 Jun;17(2):215-22. doi: 10.1177/1074248411419502) sa određenim modifikacijama. Snopovi vlakana se permeabilizuju pomoću 50 µg/mL saponina 0.5 mg/mL kolagenaze na 4°C u 1 mL pufera A (20 mM imidazol, 0.5 mM ditiotreitol, 20 mM taurin, 7.1 mM MgCl2, 50 mM MES, 5 mM ATP, 15 mM fosfokreatin, 2.6 mM CaK2EGTA, 7.4 mM K2EGTA, pH 7.0 na 0°C). Nakon inkubacije od 15 min vlakna su oprana tokom 15 min u 2 mL pufera B (20 mM imidazol, 0.5 mM ditiotreitol, 20 mM taurin, 1.6 mM MgCl2, 100 mM MES, 3 mM KH2PO4, 2.9 mM CaK2EGTA, 7 mM K2EGTA, pH 7.1 na 37°C) suplementiranog jedinjenjem (npr.100 nM) ili vehikulumom.
2) MERENJE RESPIRACIJE UZ ISTOVREMENU DETEKCIJU FLUKSA H2O2
[0555] Medijum za merenje respiracije: MiR05 -110 mM saharoze, 60 mM K-laktobionata, 0.5 mM EGTA, 3 mM MgCl2, 20 mM taurina, 10 mM KH2PO4, 20 mM HEPES, pH 7.1 na 30 °C, i 0.1% BSA pretežno bez masnih kiselina.
Protokol
[0556] Kako bi se indukovala maksimalna stopa respiracije u stanju anoksije, uzorak se stimuliše dodavanjem supstrata, sukcinata (10 mM) sa rotenonom (0.5 µM) i ADP (5 mM), i preparacija
1
se ostavlja tako da se potroši sav O2u respiratornoj komori (sa 10-20 min), čime se ulazi u stanje anoksije (Makrecka M, Svalbe B, Volska K, Sevostjanovs E, Liepins J, Grinberga S, Pugovics O, Liepinsh E, Dambrova M. Mildronate, the inhibitor of L-carnitine transport, induces brain mitochondrial uncoupling i protects against anoxia-reoksigenacija. Eur J Pharmacol. 2014 Jan 15;723:55-61. doi: 10.1016/j.ejphar.2013.12.006.). Nakon 30 min anoksije, O2se ponovo uvodi u komoru tako što se komora otvori da bi se postigla reoksigenacija. Nakon što koncentracija O2u komori dostigne početnu koncentraciju, komora se zatvara i fluks O2se prati tokom 10 min. H2O2fluks (ROS fluks) se meri istovremeno sa respirometrijom u O2k-fluorometru pomoću H2O2-senzitivne probe Ampliflu<™>Red (AmR) (Makrecka-Kuka M, Krumschnabel G, Gnaiger E. High-Resolution Respirometry for Simultaneous Measurement of Oxygen and Hydrogen Peroxide Fluxes in Permeabilized Cells, Tissue Homogenate i Isolated Mitochondria. Biomolecules. 2015 Jun 29;5(3):1319-38. doi: 10.3390/biom5031319). U komoru se dodaje 10 µM AmR, 1 U/mL peroksidaze rena (HRP) i 5 U/mL superoksid dismutaze (SOD). Proizvod reakcije između AmR i H2O2, koju katalizuje HRP, je fluorescentan, slično rezorufinu. Kalibracije se izvode tako što se H2O2ponovljeno dodaje u koracima od 0.1 µM. AmR može da se doda kako bi se osigurala merenja H2O2fluksa nakon reoksigenacije.
[0557] Testirano jedinjenje ili vehikulum se dodaje u osnovnom nivou (pre dodavanja permeabiliziranih vlakana).
Kratak opis studije:
[0558]
• Permeabilizovana srčana vlakna CII OXPHOS stanje 30 min. anoksija 10 min.
reoksigenacija, u prisustvu H2O2-senzitivne probe Ampliflu<™>Red
• Parametri: CII OXPHOS (normalna snabdevenost kiseonikom, nakon reoksigenacije), H2O2(ROS) fluks (normalna snabdevenost kiseonikom, nakon reoksigenacije), H2O2/O2odnos (normalna snabdevenost kiseonikom, nakon reoksigenacije)
• CTRL (vehikulum) 3-4 SBT jedinjenja pri koncentracijama od 100 nM (n=5-6) se testiraju u paraleli po setu. Broj jedinjenja testiranih u paraleli, kao i koncentracija(e) jedinjenja mogu da se prilagode i beleže se u dokumentaciji studije i u konačnom izveštaju.
[0559] Protokol može da se modifikuje na osnovu eksperimentalnih rezultata i dogovora sa sponzorom. Sve izmene protokola dokumentuju se u dokumentaciji studije i u izmenama protokola.
1
Tabela 6: Efekti jedinjenja na mitohondrijalnu funkciju nakon anoksije-reoksigenacije in vitro; stopa mitohondrijalne respiracije, stopa proizvodnje H2O2(ROS) i odnos H2O2/O fluksa. Rezultati predstvljaju srednju vrednost ± SEM.<∗>p<0.05 u poređenju sa kontrolnom grupom (Student t-test). # p<0.05 u poređenju sa merenjima odgovarajuće grupe u uslovima normalne snabdevenosti kiseonikom normoxia (upareni Student t-test).
1
1
1

Claims (17)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):
    , i
    R<1>je izabrano od
    R<2b>je H ili Me; R<3>i R<4>su nezavisno izabrani od H i (C1-C6)alkila; R<5>i R<6>su nezavisno H, metil, etil, propil, ciklopropil ili ciklo butil; ili R<5>i R<6>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova; R<7>je izabran od H, (C1-C6)alkila, cikloalkila i arila; R<8>i R<9>su nezavisno izabrani od H, (C1-C6)alkila, cikloalkila i arila; ili R<8>i R<9>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova; n je 1, 2 ili 3; X je izabrano od
    * označava tačku vezivanja X za R<1>.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je R<1>je izabrano od
    ili je izabrano od
    ili je izabrano od 1
    ili gde je R<1>
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, naznačeno time što je R<2a>izabrano od
  4. opciono, gde su R<8>i R<9>nezavisno izabrani od H i metila; ili gde R<8>i R<9>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova; opciono, gde je heterociklil azetidinil, pirolidinil ili piperidinil. 4. Jedinjenje prema prethodnom patentnom zahtevu, naznačeno time što je R<2a>je izabrano od
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačeno time što je AA2izabrano od
    pri čemu, opciono, R<7>je izabrano od H, metila, etila, izo-propila, ili n-propila.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačeno time što je AA1izabrano od
    ili, AA1je izabrano od
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačeno time što je R<2b>H ili Me. 1
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačeno time što je R<5>H ili Me.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačeno time što je R<6>H ili Me.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, naznačeno time što R<5>i R<6>zajedno sa N atomom za koji su vezani obrazuju heterociklil sa 4-6 članova; pri čemu, opciono, heterociklil je azetidinil, pirolidinil ili piperidinil.
  11. 11. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačeno time što je X izabrano od
    ili je X
    ili je X izabrano od
    1 ili je X je izabrano od
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačeno time što su R<3>i R<4>izabrani od H i (C1-C6)alkila; opciono, gde su R<3>i R<4>nezavisno metil ili etil; dodatno, opciono, gde su R<3>i R<4>metil ili gde su R<3>i R<4>etil.
  13. 13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje izabrano od D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((R)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-2',6'-diaminoheks-2'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-5'-dimetilamino-1'-aminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((R)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-(2',3',4',5',6'-pentafluorobenzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-(4-terc-butilbenzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((R)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-(4-terc-butilbenzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-(4'-trifluorometilbenzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-(4'-cikloheksilbenzil))-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-fenetil))-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-cikloheptilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-biciklo [2,2,2]pentanilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-biciklo[2,2,2]oktanilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((1S)-(5-(1',5'-diaminopent-1'-il-3-adamant-1'-il)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((1R)-(5-(1',5'-diaminopent-1'-il-3-adamant-1'-il)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-fenil)-1,2,4-oksadiazola; 1 D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-fenetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-ciklopentilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-t-metilhistamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-p-metilhistamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-cikloheptilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-biciklo[2,2,2]pentanilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-biciklo[2,2,2]oktanilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-adamantil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((S)-(2-(1H-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-((1S)-2-(piridin-4-il)-1-aminoetil-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Agb-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Agb-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Agb-DMT-(5-((S)-4'-dimetilamino-1'-aminobut-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Agb-DMT-(5-(2'-(S)-4-histamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; (N,N-diMe)-D-Agb-DMT-(5-(2'-(S)-4-histamin)-3-adamantil)-1,2,4-oksadiazola; D-Agb-DMT-(5-((S)-(2-(1H-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-Agb-DMT-(5-((S)-(2-(1H-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminopropan-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3-adamantil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((R)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((R)-1',4'-diaminobut-1'-il)-3-(biciklo[2.2.2]oktanilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5 -((S)-4'-dimetilamino-1'-aminobut-1'-il)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; 1 D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((S)-5'-dimetilamino-1'-aminopent-1'-il)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-ciklopentilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-cikloheptilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-t-metilhistamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-cikloheksilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-histamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-(α-(S)-t-metilhistamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(1H-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(1-metil-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(1H-indol-3-il)etil)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-DMT-(5-((1S)-(2-(1-metil-indol-3-il)-1-aminoetil)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-(O-Me)-DMT-(5-(α-histamin)-3-(4-fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola; D-(δ-2-amino-1H-imidazol-1-il)-Nva-(O-Me)-DMT-(5-(α-(S)-t-metilhistamin)-3-(4- 1 fenilbenzil))-1,2,4-oksadiazola (Karbamimidoil)-D-Dab-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; (Karbamimidoil)-D-Dab-DMT-(5-((S)-1',5'-diaminobutan-1'-il)-3-benzil)-1,2,4-oksadiazola; (Karbamimidoil)-D-Dab-DMT-(5-(2'-(S)-4-histamin)-3-adamantilmetil)-1,2,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(5-(α-histamin))-3-benzil)-1,3,4-oksadiazola; D-Arg-DMT-(2-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-4-benzil)-1,3-oksazola; D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-5-benzil)-1,3-oksazola; D-Arg-DMT-(2-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-4-benzil)-1,3-tiazola; D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-5-benzil)-1,3-tiazola; D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-4-benzil)-furana; D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-5-benzil)-furana; D-Arg-DMT-(1-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-3-fenoksi)-benzena; D-Arg-DMT-(1-((S)-1', 5'-diaminopent-1'-il)-4-fenoksi)-benzena; D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-4-fenoksi)-piridina; D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-5-fenoksi)-piridina; D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-6-benzil)-piridina; i D-Arg-DMT-(2-((S)-1',5'-diaminopent-1'-il)-4-benzil)-pirimidina.
  14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što jedinjenje ima sledeću strukturu:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  15. 15. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva za upotrebu u lečenju ili prevenciji ishemijsko-reperfuzionog oštećenja; gde je, opciono, ishemijsko-reperfuziono oštećenje srčano ishemijsko-reperfuziono oštećenje; i/ili za upotrebu u lečenju ili prevenciji infarkta miokarda; i/ili za upotrebu u lečenju ili prevenciji ishemije zadnjih ekstremiteta ili akutne ishemije ekstremiteta. 2
  16. 16. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 15, naznačeno time što se jedinjenje primenjuje oralno, topikalno, intravenski, potkožno, intraperitonealno, ili intramuskularno.
  17. 17. Farmaceutska kompozicija, koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14 i farmaceutski prihvatljiv nosač. 2 1
RS20230287A 2017-12-15 2018-12-14 Peptidi sa ciljanim delovanjem na mitohondrije RS64128B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762599175P 2017-12-15 2017-12-15
PCT/US2018/065755 WO2019118878A1 (en) 2017-12-15 2018-12-14 Mitochondria-targeting peptides
EP18888579.2A EP3723783B1 (en) 2017-12-15 2018-12-14 Mitochondria-targeting peptides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64128B1 true RS64128B1 (sr) 2023-05-31

Family

ID=66819527

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230287A RS64128B1 (sr) 2017-12-15 2018-12-14 Peptidi sa ciljanim delovanjem na mitohondrije

Country Status (18)

Country Link
EP (2) EP4218785A3 (sr)
JP (2) JP7335880B2 (sr)
KR (2) KR102714781B1 (sr)
CN (5) CN111954539B (sr)
AU (3) AU2018385690B2 (sr)
DK (1) DK3723783T3 (sr)
ES (1) ES2942631T3 (sr)
FI (1) FI3723783T3 (sr)
HR (1) HRP20230261T1 (sr)
HU (1) HUE061271T2 (sr)
IL (4) IL314515A (sr)
LT (1) LT3723783T (sr)
PL (1) PL3723783T3 (sr)
PT (1) PT3723783T (sr)
RS (1) RS64128B1 (sr)
SI (1) SI3723783T1 (sr)
SM (1) SMT202300119T1 (sr)
WO (1) WO2019118878A1 (sr)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2020316449B2 (en) 2019-07-24 2026-02-05 Stealth Biotherapeutics Inc. The peptidomimetic compound (R)-2-amino-N-((S)-L-(((S)-5-amino-L-(3-benzyl-1,2,4-oxadiazol-5-yl)pentyl)amino)-3-(4-hydroxy-2,6-dimethylphenyl)-l-oxopropan-2-yl)-5-guanidinopentanamide in the treatment of neurodegenerative diseases
CN121949079A (zh) 2019-10-04 2026-05-01 康德生物医疗有限公司 治疗线粒体异常疾病的伐替苯醌的醌、氢醌和萘醌类似物
CN111040014A (zh) * 2019-12-27 2020-04-21 苏州络森生物科技有限公司 一种chapso的制备方法
CN115996916B (zh) 2020-04-03 2025-09-23 康德生物医疗有限公司 用于预防和/或治疗包括弗里德赖希共济失调的线粒体疾病的组合物和方法
US20230227499A1 (en) * 2020-06-22 2023-07-20 Stealth Biotherapeutics Inc. Prodrugs of mitochondria-targeting oligopeptides
WO2021262710A1 (en) * 2020-06-22 2021-12-30 Stealth Biotherapeutics Corp. Prodrugs of mitochodria-targeting oligopeptides
CN112876502B (zh) * 2021-02-09 2022-01-11 上海嘉莱多生物技术有限责任公司 一种n-三甲基硅乙氧羰基-n-甲基-l/d-亮氨酸的制备方法
CN113372278A (zh) * 2021-06-09 2021-09-10 吉尔多肽生物制药(大连市)有限公司 一种Nα-叔丁氧羰基-Nim-对甲苯磺酰基-L-组氨酸的合成方法
CA3222132A1 (en) 2021-06-10 2022-12-15 Stealth Biotherapeutics Inc. Compounds, compositions and methods for the prevention and/or treatment of various mitochondrial diseases or disorders, including friedreich's ataxia
JP2025001049A (ja) * 2021-09-01 2025-01-08 積水メディカル株式会社 アルギニン誘導体
WO2023069549A1 (en) * 2021-10-20 2023-04-27 Stealth Biotherapeutics Inc. Methods and compositions comprising peptidomimitics for treating, preventing, inhibiting, ameliorating or delaying the onset of ophthalmic conditions
WO2023069255A1 (en) 2021-10-20 2023-04-27 Stealth Biotherapeutics Inc. Methods and compositions comprising peptidomimitics for treating, preventing, inhibiting, ameliorating or delaying the onset of ophthalmic conditions
EP4463175A1 (en) 2022-01-10 2024-11-20 Stealth BioTherapeutics Inc. Small molecule peptidomimetic for the treatment of tauopathies
EP4525840A4 (en) * 2022-05-18 2026-05-06 Stealth Biotherapeutics Inc Compositions and methods for the treatment of huntington's disease and htt proteinopathies
CN117137885A (zh) * 2023-08-29 2023-12-01 浙江大学 一种基于米屈肼衍生物的脂质纳米颗粒及其应用
KR102681736B1 (ko) 2023-10-05 2024-07-05 주식회사지온 치과용 어버트먼트 어셈블리
KR102693547B1 (ko) 2023-12-19 2024-08-09 주식회사 지온 치과용 어버트먼트 어셈블리

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3507486B2 (ja) 1991-03-15 2004-03-15 アムジエン・インコーポレーテツド 顆粒球コロニー刺激因子の肺内投与
US5451569A (en) 1994-04-19 1995-09-19 Hong Kong University Of Science And Technology R & D Corporation Limited Pulmonary drug delivery system
WO2011087758A1 (en) * 2009-12-22 2011-07-21 H. Lundbeck A/S Adamantyl amide derivatives and uses of same
EP3090754A1 (en) * 2009-12-31 2016-11-09 Stealth Peptides International, Inc. Methods for the prevention or treatment of vessel occlusion injury
EP3290433A1 (en) * 2010-05-03 2018-03-07 Stealth Peptides International, Inc. Aromatic-cationic peptides and uses of same
EP2590664B1 (en) * 2010-07-09 2019-03-27 Stealth Peptides International, Inc. Methods for the prevention or treatment of no-reflow following ischemia/reperfusion injury
CN106913860A (zh) 2011-09-29 2017-07-04 梅约医学教育与研究基金会 芳族阳离子肽和使用它们的方法
WO2014052647A2 (en) 2012-09-26 2014-04-03 President And Fellows Of Harvard College Proline-locked stapled peptides and uses thereof
WO2014210056A1 (en) * 2013-06-27 2014-12-31 Stealth Peptides International, Inc. Peptide therapeutics and methods for using same
EP3160984B1 (en) * 2014-06-25 2021-04-14 Flamma S.P.A. Process for preparing d-arginyl-2,6-dimethyl-l-tyrosyl-l-lysyl-l-phenylalaninamide

Also Published As

Publication number Publication date
JP2023162279A (ja) 2023-11-08
AU2025267434A1 (en) 2025-12-04
HUE061271T2 (hu) 2023-06-28
KR20240150524A (ko) 2024-10-15
JP2021506823A (ja) 2021-02-22
EP3723783A4 (en) 2021-09-22
HRP20230261T1 (hr) 2023-04-14
AU2018385690A1 (en) 2020-07-30
CN118725014A (zh) 2024-10-01
IL275298B1 (en) 2023-04-01
IL305687A (en) 2023-11-01
DK3723783T3 (da) 2023-03-20
WO2019118878A1 (en) 2019-06-20
IL305687B1 (en) 2024-08-01
CN111954539A (zh) 2020-11-17
PL3723783T3 (pl) 2023-06-26
LT3723783T (lt) 2023-03-27
SMT202300119T1 (it) 2023-05-12
ES2942631T3 (es) 2023-06-05
EP4218785A3 (en) 2023-08-09
KR102714781B1 (ko) 2024-10-07
AU2018385690B2 (en) 2023-07-27
IL314515A (en) 2024-09-01
IL275298A (en) 2020-07-30
CN118702766A (zh) 2024-09-27
IL305687B2 (en) 2024-12-01
CN118702767A (zh) 2024-09-27
AU2023204607A1 (en) 2023-08-03
AU2023204607B2 (en) 2025-09-04
CN117624286A (zh) 2024-03-01
PT3723783T (pt) 2023-04-18
IL300697B1 (en) 2023-11-01
EP3723783A1 (en) 2020-10-21
JP7335880B2 (ja) 2023-08-30
JP7576670B2 (ja) 2024-10-31
SI3723783T1 (sl) 2023-04-28
IL300697A (en) 2023-04-01
KR20200115493A (ko) 2020-10-07
EP3723783B1 (en) 2023-02-15
IL275298B2 (en) 2023-08-01
CN111954539B (zh) 2024-06-21
FI3723783T3 (fi) 2023-03-24
EP4218785A2 (en) 2023-08-02
CA3085772A1 (en) 2019-06-20
IL300697B2 (en) 2024-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7576670B2 (ja) ミトコンドリア標的化ペプチド
AU2019403856A1 (en) Mitochondria-targeting peptides
CA3085772C (en) Mitochondria-targeting peptides
US20240059734A1 (en) Mitochondria-targeting peptides
HK40097183A (en) Mitochondria-targeting peptides
HK40035078A (en) Mitochondria-targeting peptides
HK40035078B (en) Mitochondria-targeting peptides
HK40039982A (en) Mitochondria-targeting peptides
HK40039982B (zh) 线粒体靶向肽
HK40116853A (zh) 线粒体靶向肽
HK40107199A (zh) 线粒体靶向肽
WO2021262708A1 (en) Prodrugs of mitochodria-targeting oligopeptides