RS64143B1 - Postupak za proizvodnju šećera iz ugljenohidratnih materijala - Google Patents

Postupak za proizvodnju šećera iz ugljenohidratnih materijala

Info

Publication number
RS64143B1
RS64143B1 RS20230300A RSP20230300A RS64143B1 RS 64143 B1 RS64143 B1 RS 64143B1 RS 20230300 A RS20230300 A RS 20230300A RS P20230300 A RSP20230300 A RS P20230300A RS 64143 B1 RS64143 B1 RS 64143B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
carbohydrate material
oxygen
saccharification
enzyme
fermentation
Prior art date
Application number
RS20230300A
Other languages
English (en)
Inventor
Bertus Noordam
Herman Jan Pel
Original Assignee
Versalis Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Versalis Spa filed Critical Versalis Spa
Publication of RS64143B1 publication Critical patent/RS64143B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
    • C12P7/08—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate
    • C12P7/10—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate substrate containing cellulosic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/02—Monosaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01021—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01037—Xylan 1,4-beta-xylosidase (3.2.1.37)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01091—Cellulose 1,4-beta-cellobiosidase (3.2.1.91)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P2201/00—Pretreatment of cellulosic or lignocellulosic material for subsequent enzymatic treatment or hydrolysis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

Opis
Oblast pronalaska
[0001] Patentna prijave se odnosi na postupak za pripremu proizvoda u vidu šećera enzimskom hidrolizom iz ugljenohidratnog materijala i na postupak za pripremu fermentacionih proizvoda fermentacijom šećera.
Osnov pronalaska
[0002] Lignocelulozni materijal je primarno sačinjen od celuloze, hemiceluloze i lignina, i obezbeđuje atraktivnu platformu za generisanje izvora energije koji su alternativa fosilnim gorivima. Materijal je dostupan u velikim količinama i može da se konvertuje u vredne proizvode, npr. šećere ili biogoriva, kao što je bioetanol.
[0003] Proizvodnja fermentacionih proizvoda iz lignoceluloznog materijala poznata je u stanju tehnike i u principu uključuje korake prethodnog tretmana, hidrolize, fermentacije, i opciono, izdvajanja fermentacionih proizvoda.
[0004] Obično se proizvodi u vidu šećera konvertuju u vredne fermentacione proizvode kao što je etanol, pomoću mikroorganizama kao što je kvasac. Fermentacija se odvija u odvojenom, poželjno anaerobnom koraku postupka, bilo u istoj, bilo u različitoj posudi.
[0005] Generalno, troškovi proizvodnje enzima su glavni cenovni faktor u ukupnom postupku fermentacije proizvoda iz lignoceluloznog materijala. Do sada je smanjenje troškova proizvodnje enzima postizano primenom enzimslih proizvoda iz jednog ili iz višestrukih mikrobijalnih izvora (videti WO 2008/008793) sa širom i/ili višom (specifičnom) hidrolitičkom aktivnošću. Ovo dovodi do niže potrebe za enzimom, brže konverzije i/ili višeg prinosa konverzije i time do nižih ukupnih troškova proizvodnje i/ili više (specifične) hidrolitičke aktivnosti. Ovo dovodi do niže potrebe za enzimom, bržih stopa konverzije i/ili viših prinosa konverzije i time do nižih ukupnih troškova proizvodnje.
[0006] Nakon optimizacije enzima, optimizacija dizajna postupka je krucijalni alat za smanjenje ukupnih troškova proizvodnje proizvoda u vidu šećera i fermentacionih proizvoda. Na primer, gubitak šećera usled proizvoda degradacije šećera povećava se sa smanjenjem prinosa. Pošto proizvodi degradacije šećera mogu da inhibiraju fermentaciju, dizajn postupka je potrebno optimizovati tako da se smanji količina ovih proizvoda degradacije šećera.
[0007] WO2014/191267 opisuje postupak za hidrolizu biomase koja sadrži celulozu, a koji obuhvata korak prethodnog tretmana za biomasu koja sadrži celulozu i korak saharifikacije u kome se prethodno tretirana biomasa koja sadrži celulozu konvertuje u glukozu, pri čemu se u koraku saharifikacije celulaze dodaju u prethodno tretiranu biomasu koja sadrži celulozu, pri čemu celulaze sadrže beta-glukozidazu i drugu celulazu, pri čemu se dodaje manje od 10 mg celulaze (po proteinu) na gram celuloze prisutne u biomasi koja sadrži celulozu (po suvoj materiji), i pri čemu količina beta-glukozidaze iznosi najmanje 4 tež.% celulaza (po proteinu).
[0008] Iz razloga ekonomičnosti, poželjno je, dakle, da se uključe nove i inovativne konfiguracije postupka čiji je cilj smanjenje ukupnih troškova proizvodnje u postupku koji uključuje prethodni tretman, hidrolizu i fermentaciju ugljenohidratnog materijala.
Kratak opis pronalaska
[0009] Cilj patentne prijave je da se obezbedi poboljšani postupak za pripremu proizvoda u vidu šećera i/ili fermentacionih proizvoda iz ugljenohidratnog materijala. Postupak je poboljšan time što se koriste specifični uslovi hidrolize.
Detaljan opis
[0010] U celoj predmetnoj specifikaciji i pratećim patentnim zahtevima, reči "sadrže" i "uključuju" i varijacije kao što su "sadrži", "koji sadrži", "uključuje" i "uključujući" treba da se tumače inkluzivno. Odnosno, ove reči imaju za cilj da prenesu moguće uključivanje drugih elemenata ili celih brojeva koji nisu posebno navedeni, kada kontekst to dozvoljava. Jednina imenica se ovde koristi tako da upućuju na jedno ili više od jednog (tj. na jedno ili najmanje jedno) iz kategorije koju označava imenica. Na primer, "element" može da označava jedan element ili više od jednog elementa.
[0011] Pronalazak se odnosi na postupak za pripremu proizvoda u vidu šećera iz ugljenohidratnog materijala, koji obuhvata korake (a) prethodnog tretmana ugljenohidratnog materijala, (b) likvefakacije prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 60°C do 65°C u trajanju od 1 do 20 sati kako bi se proizveo utečnjeni ugljenohidratni materijal, (c) saharifikacije utečnjenog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C u trajanju od 1 do 120 sati kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera pri čemu se tokom saharifikacije dodaje kiseonik, i (d) opciono, izdvajanja proizvoda u vidu šećera. Izrazi "proizvod u vidu šećera", "jedan ili više šećera" ili "šećer" se ovde koriste naizmenično. Alternativno, termin "hidrolizovani ugljenohidratni materijal" može da se koristi umesto ovih termina.
[0012] Poželjno, pronalazak se odnosi na postupak za pripremu proizvoda u vidu šećera od ugljenohidratnog materijala, koji obuhvata korake (a) prethodnog tretmana ugljenohidratnog materijala u prvom reaktoru, (b) likvefakcije prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturu od 60°C do 65°C tokom 1 do 20 sati kako bi se proizveo tečni ugljenohidratni materijal u drugom reaktoru, (c) saharifikacije tečnog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C tokom 1 do 120 sati, kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera, pri čemu se kiseonik dodaje tokom saharifikacije, u trećem reaktoru, i (d) opciono, izdvajanja proizvoda u vidu šećera. "Reaktor", kako se ovde koristi, može takođe da označava više od jednog reaktora. Dakle, "prvi reaktor" takođe može da označava niz prvih reaktora.
[0013] Pronalazak se dalje odnosi na postupak za pripremu fermentacionih proizvoda od ugljenohidratnog materijala, koji obuhvata korake (a) prethodnog tretmana ugljenohidratnog materijala, (b) likvefakcije prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 60°C. °C do 65°C u trajanju od 1 do 20 sati kako bi se proizveo tečni ugljenohidratni materijal, (c) saharifikacija tečnog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C u trajanju od 1 do 120 sati kako bi se proizveo šećer proizvod, pri čemu se kiseonik dodaje tokom saharifikacije, (d) fermentacija proizvoda od šećera kako bi se dobio fermentacioni proizvod, i (e) opciono, izdvajanje fermentacionih proizvoda.
[0014] Ovde je takođe opisan postupak za pripremu fermentacionih proizvoda od ugljenohidratnog materijala, koji obuhvata korake (a) prethodnog tretmana ugljenohidratnog materijala u prvom reaktoru, (b) likvefakcije prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperatura od 60°C do 65°C tokom 1 do 20 sati kako bi se proizveo tečni ugljenohidratni materijal u drugom reaktoru, (c) saharifikacija tečnog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C tokom 1 do 120 sati kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera, pri čemu se kiseonik dodaje tokom saharifikacije, u trećem reaktoru, (d) fermentacija proizvoda od šećera kako bi se proizveo fermentacioni proizvod u četvrtom reaktoru i (e) opciono, izdvajanje fermentacionih proizvoda.
[0015] U jednom primeru izvođenja postupaka prema pronalasku - utečnjeni ugljenohidratni materijal se saharifikuje bez dodavanja kiseonika posle koraka b i pre koraka c. Drugim rečima, ovde je opisan i postupak za pripremu proizvoda u vidu šećera od ugljenih hidrata, koji obuhvata korake (a) prethodnog tretmana ugljenohidratnog materijala, (b) likvefakcije prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 60°C. °C do 65°C u trajanju od 1 do 20 sati kako bi se proizveo tečni ugljenohidratni materijal, (c) saharifikacija tečnog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom bez dodavanja kiseonika kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera, (d) saharifikacija tečnog ugljenohidratnog materijala enzimom kompozicije na temperaturi od 50°C do 60°C tokom 1 do 120 sati uz dodavanje kiseonika kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera, i (e) opciono, izdvajanje proizvoda šećera iz koraka c i/ili koraka d. Ovde je takođe opisan postupak za pripremu fermentacionih proizvoda od ugljenih hidrata, koji obuhvata korake (a) prethodnog tretmana ugljenohidratnog materijala, (b) likvefakcije prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 60°C do 65°C. °C u trajanju od 1 do 20 sati kako bi se proizveo tečni ugljenohidratni materijal, (c) saharifikacija tečnog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom bez dodavanja kiseonika kako bi se dobio proizvod šećera, (d) saharifikacija tečnog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C tokom 1 do 120 sati sa dodatkom kiseonika kako bi se dobio proizvod šećera, (e) fermentacija proizvoda šećera iz koraka c i/ili koraka d kako bi se dobio fermentacioni proizvod; i (e) opciono, izdvajanje fermentacionih proizvoda.
[0016] U jednom primeru, utečnjeni ugljenohidratni materijal se saharifikuje bez dodavanja kiseonika na temperaturi od 50°C do 60°C tokom 1 do 120 sati. U drugom primeru, tečni ugljenohidratni materijal se saharifikuje bez dodavanja kiseonika na temperaturi od 52°C do 58°C tokom 10 do 60 sati.
[0017] U jednom primeru izvođenja, likvefakcija prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom se vrši na temperaturi od 61°C do 65°C. U jednom primeru izvođenja, likvefakcija prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom se vrši na temperaturi od 62°C do 65°C.
[0018] Prema pronalasku, likvefakcija prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom se vrši u trajanju od 1 do 20 sati.
[0019] Prema pronalasku, utečnjeni ugljenohidratni materijal se saharifikuje enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C tokom 1 do 120 sati, uz dodavanje kiseonika. U jednom primeru izvođenja, tečni ugljenohidratni materijal se saharifikuje enzimskom kompozicijom na temperaturi od 51°C do 59°C, uz dodavanje kiseonika. U jednom primeru izvođenja, tečni ugljenohidratni materijal se saharifikuje enzimskom kompozicijom na temperaturi od 52°C do 58°C, uz dodavanje kiseonika. U jednom primeru izvođenja, tečni ugljenohidratni materijal se saharifikuje enzimskom kompozicijom na temperaturi od 53°C do 57°C, uz dodavanje kiseonika.
[0020] U jednom primeru izvođenja, likvefakcija se vrši u reaktoru. U jednom primeru izvođenja, likvefakcija se takođe može obaviti u dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset ili i više reaktora. Dakle, izraz "reaktor" nije ograničen na jedan reaktor, već može da označava više reaktora.
[0021] U procesima koji su ovde opisani, prethodno obrađeni ugljenohidratni materijal se dodaje u reaktor u kome se odvija likvefakcija. Ovo može da se uradi grupno, napajano ili kontinuirano. U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija se dodaje u reaktor u kome se odvija likvefakcija. Ovo može da se uradi grupno, napajano ili kontinuirano. Kompozicija enzima može da bude vodena kompozicija. U jednom primeru izvođenja, tečni ugljenohidratni materijal i/ili delimično tečni ugljenohidratni materijal se reciklira nazad u reaktor u kome se odvija likvefakcija. U jednom primeru izvođenja, tečni ugljenohidratni materijal i/ili delimično tečni ugljenohidratni materijal se hladi pre dodavanja u reaktor u kome se odvija likvefakcija. U jednom primeru izvođenja, tečni ugljenohidratni materijal i/ili delimično tečni ugljenohidratni materijal se podvrgavaju razdvajanju čvrsta/tečnost pre dodavanja u reaktor u kome se odvija tečnost. U jednom primeru izvođenja, razdvajanje čvrsta supstanca/tečnost se vrši pre koraka hlađenja. U jednom primeru izvođenja, hladi se samo tečna frakcija dobijena nakon razdvajanja čvrsta supstanca/tečnost. U jednom primeru izvođenja i tečna i čvrsta frakcija se dodaju u reaktor u kome se odvija likvefakcija.
[0022] U jednom primeru, saharifikacija bez dodavanja kiseonika se vrši u reaktoru. Na primer, saharifikacija takođe može da se obavlja u dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset ili i više reaktora. Dakle, izraz "reaktor" nije ograničen na jedan reaktor, već može da označava više reaktora.
[0023] U jednom primeru izvođenja saharifikacija sa dodavanjem kiseonika se vrši u reaktoru. U jednom primeru izvođenja, saharifikacija se takođe može da se vrši u dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset ili i više reaktora. Dakle, izraz "reaktor" nije ograničen na jedan reaktor, već može da označava više reaktora.
[0024] U jednom primeru izvođenja, likvefakcija i saharifikacija se vrše u različitim reaktorima. U jednom primeru izvođenja, saharifikacija bez dodavanja kiseonika i saharifikacija sa dodavanjem kiseonika se vrše u različitim reaktorima.
[0025] Ovde je takođe opisan postupak za pripremu proizvoda u vidu šećera od ugljenohidratnog materijala, koji obuhvata korake (a) prethodnog tretmana ugljenohidratnog materijala u prvom reaktoru, (b) likvefakcije prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 60°C do 65°C u trajanju od 1 do 20 sati kako bi se proizveo utečnjeni ugljenohidratni materijal u drugom reaktoru, (c) saharifikacija tečnog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom bez dodavanja kiseonika kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera u trećem reaktoru, (d) saharifikacije tečnog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C u trajanju od 1 do 120 sati uz dodavanje kiseonika kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera u četvrtom reaktoru, i (e) opciono, izdvajanja proizvoda u vidu šećera iz koraka c i/ili koraka d. Ovde je takođe opisan postupak za pripremu fermentacionih proizvoda od ugljenohidratnog materijala, koji obuhvata korake (a) prethodnog tretmana ugljenohidratnog materijala u prvom reaktoru, (b) likvefakcije prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 60°C do 65°C u trajanju od 1 do 20 sati kako bi se proizveo tečni ugljenohidratni materijal u drugom reaktoru, (c) saharifikacija tečnog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom bez dodavanja kiseonika kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera u trećem reaktoru, (d) saharifikacija utečnjenog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C u trajanju od 1 do 120 sati uz dodavanje kiseonika kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera u četvrtom reaktoru, (e) fermentacije proizvoda u vidu šećera iz koraka c i/ ili koraka d za proizvodnju fermentacionih proizvoda u petom reaktoru, i (e) opciono, izdvajanja fermentacionih proizvoda.
[0026] U jednom primeru izvođenja prethodni tretman se obavlja u reaktoru zapremine od 30 – 200 m<3>, poželjno od 100 – 150 m<3>. U slučaju da se više reaktora koristi u prethodnom tretmanu prema postupcima, kako je ovde opisano, oni mogu da imaju istu zapreminu, ali takođe mogu da imaju različitu zapreminu.
[0027] U jednom primeru izvođenja reaktor za prethodni tretman koji se koristi u postupcima, kako je ovde opisano, ima odnos visine i prečnika od 3:1 do 12:1.
[0028] U jednom primeru izvođenja, likvefakcija se vrši u reaktoru zapremine od 10-500 m<3>, poželjno od 50-350 m<3>. U slučaju da se više reaktora koristi u likvefakciji, oni mogu da imaju istu zapreminu, ali mogu da imaju i različite zapremine.
[0029] U jednom primeru izvođenja, reaktor u kome se vrši likvefakcija ima odnos visine i prečnika od 0,1:1 do 10:1.
[0030] U jednom primeru izvođenja saharifikacija bez dodavanja kiseonika se vrši u reaktoru koji ima zapreminu od 10 - 5000 m3, poželjno od 50 - 5000 m3. U slučaju da se više reaktora koristi u saharifikaciji bez dodavanja kiseonika, oni mogu da imaju istu zapreminu, ali mogu da imaju i različite zapremine.
[0031] U jednom primeru izvođenja, reaktor u kome se vrši saharifikacija bez dodavanja kiseonika ima odnos visine prema prečniku od 0,1:1 do 10:1.
[0032] U jednom primeru izvođenja saharifikacija sa dodatkom kiseonika se vrši u reaktoru zapremine od 10 – 5000 m3, poželjno od 50 – 5000 m<3>. U slučaju da se više reaktora koristi u saharifikaciji sa dodatkom kiseonika, oni mogu imati istu zapreminu, ali mogu da imaju i različite zapremine.
[0033] U jednom primeru izvođenja, reaktor u kome se vrši saharifikacija sa dodavanjem kiseonika ima odnos visine prema prečniku od 0,1:1 do 10:1.
[0034] Prema pronalasku kiseonik se dodaje u tečni ugljenohidratni materijal tokom saharifikacije. U primeru, kiseonik se dodaje tokom najmanje jednog dela saharifikacije. Kiseonik se može dodavati kontinuirano ili diskontinuirano tokom saharifikacije. U jednom primeru kiseonik se dodaje jedan ili više puta tokom procesa za pripremu proizvoda u vidu šećera od ugljenih hidrata kao što je ovde opisano. Kiseonik se dodaje u reaktore koji se koriste u saharifikaciji uz dodavanje kiseonika.
[0035] Kiseonik se može dodati u nekoliko oblika. Na primer, kiseonik se može dodati kao gas kiseonika, gas obogaćen kiseonikom, kao što je vazduh obogaćen kiseonikom, ili vazduh. Kiseonik se takođe može dodati putem in situ generisanja kiseonika.
[0036] Primeri kako dodati kiseonik obuhvataju, ali nisu ograničeni na, dodavanje kiseonika pomoću prskanja, duvanja, elektrolize, hemijskog dodavanja kiseonika, punjenja reaktora koji se koristi u saharifikaciji sa vrha (uranjanje tečnog hidrolizata u reaktor i posledično uvođenje kiseonika u hidrolizat) i dodavanje kiseonika u gornji prostor reaktora. Kada se kiseonik doda u gornji prostor reaktora, može se obezbediti dovoljno kiseonika neophodnog za reakciju hidrolize. Generalno, količina kiseonika koja se dodaje u reaktor može se kontrolisati i/ili menjati. Ograničenje isporučenog kiseonika je moguće dodavanjem samo kiseonika tokom dela vremena hidrolize u reaktoru. Druga opcija je dodavanje kiseonika u niskoj koncentraciji, na primer korišćenjem mešavine vazduha i recikliranog vazduha (vazduh koji izlazi iz reaktora) ili „razređivanjem“ vazduha inertnim gasom. Povećanje količine dodatog kiseonika može se postići dodavanjem kiseonika tokom dužih perioda hidrolize, dodavanjem kiseonika u višoj koncentraciji ili dodavanjem više vazduha. Drugi način za kontrolu koncentracije kiseonika je dodavanje potrošača kiseonika i/ili generatora kiseonika. Kiseonik se može uvesti u tečni ugljenohidratni materijal prisutan u reaktoru. Takođe se može uvesti u prednji prostor reaktora. Kiseonik se može uduvati u tečni ugljenohidratni materijal prisutan u reaktoru. Takođe se može uduvati u prednji prostor reaktora.
[0037] U jednom primeru izvođenja kiseonik se dodaje u reaktor koji se koristi u saharifikaciji pre i/ili tokom i/ili posle dodavanja tečnog ugljenohidratnog materijala u reaktor. Kiseonik se može uvesti zajedno sa tečnim ugljenim hidratima koji ulazi u reaktor. Kiseonik se može uvesti u tok materijala koji će ući u reaktor ili sa delom sadržaja reaktora koji prolazi kroz spoljnu petlju reaktora. Poželjno, kiseonik se dodaje kada je tečni ugljenohidratni materijal prisutan u reaktoru.
[0038] U jednom primeru izvođenja kiseonik se dodaje tokom saharifikacije kako bi se rastvoreni kiseonik održao na 11% do 80% nivoa zasićenja. U jednom primeru izvođenja kiseonik se dodaje tokom saharifikacije kako bi se rastvoreni kiseonik održao na 20% do 60% nivoa zasićenja.
[0039] U jednom primeru izvođenja, enzimske kompozicije koje se koriste za likvefakciju i saharifikaciju su iste. U drugom primeru izvođenja, enzimske kompozicije koje se koriste za likvefakciju i saharifikaciju su različite. U poželjnom primeru izvođenja, enzimske kompozicije koje se koriste za saharifikaciju bez dodavanja kiseonika i saharifikaciju sa dodavanjem kiseonika su iste.
[0040] U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija koja se koristi za likvefakciju i/ili saharifikaciju je iz gljive, poželjno iz filamentozne gljive. U jednom primeru izvođenja enzimi u enzimskoj kompoziciji su dobijeni iz gljive, poželjno iz filamentozne gljive. U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija sadrži enzim gljive, poželjno enzim filamentozne gljive. "Filamentozne gljive" obuhvataju sve filamentozne oblike podrazdela Eumycota i Oomycota (definisano prema Hawksworth et al., In, Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi, 8th edition, 1995, CAB International, University Press, Cambridge, UK). Filamentozne gljive uključuju, ali nisu ograničene na Acremonium, Agaricus, Aspergillus, Aureobasidium, Beauvaria, Cephalosporium, Ceriporiopsis, Chaetomium paecilomyces, Chrysosporium, Claviceps, Cochiobolus, Coprinus, Cryptococcus, Cyathus, Emericella, Endothia, Endothia mucor, Filibasidium, Fusarium, Geosmithia, Gilocladium, Humicola, Magnaporthe, Mucor, Myceliophthora, Myrothecium, Neocallimastix, Neurospora, Paecilomyces, Penicillium, Piromyces, Panerochaete, Pleurotus, Podospora, Pyricularia, Rasamsonia, Rhizomucor, Rhizopus, Scylatidium, Schizophyllum, Stagonospora, Talaromyces, Thermoascus, Thermomyces, Thielavia, Tolypocladium, Trametes pleurotus, Trichoderma i Trichophyton. U poželjnom primeru izvođenja gljiva je Rasamsonia, pri čemu je Rasamsonia emersonii najpoželjnija. Dakle, postupci kao što su ovde opisani se pogodno primenjuju u kombinaciji sa enzimima dobijenim iz mikroorganizma roda Rasamsonia ili enzimi koji se koriste u postupcima kao što su ovde opisani, sadrže enzim roda Rasamsonia.
[0041] Nekoliko sojeva filamentoznih gljiva lako je dostupno javnosti u brojnim zbirkama kultura, kao što su American Type Culture Collection (ATCC), Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM), Centraalbureau Voor Schimmelcultures (CBS) i Agricultural Research Service Patent Culture Collection, Northern Regional Research Center (NRRL).
[0042] Poželjno je da se procesi kao što su ovde opisani izvode sa termostabilnim enzimima. "Termostabilni" enzim kako se ovde koristi znači da enzim ima temperaturni maksimum od 50°C ili više, 60°C ili više, 70°C ili više, 75°C ili više, 80°C ili više, ili čak 85° C ili više. Oni na primer mogu biti izolovani od termofilnih mikroorganizama ili mogu biti dizajnirani od strane stručnjaka i veštački sintetizovani. U jednom primeru izvođenja, polinukleotidi koji kodiraju termostabilne enzime mogu biti izolovani ili dobijeni iz termofilnih ili termotolerantnih filamentoznih gljiva ili izolovani iz netermofilnih ili netermotolerantnih gljiva, ali je utvrđeno da su termostabilni. Pod "termofilnom gljivom" se podrazumeva gljiva koja raste na temperaturi od 50°C ili više. Pod "temotolerantnom" gljivom se podrazumeva gljiva koja raste na temperaturi od 45°C ili više, sa maksimumom blizu 50°C.
[0043] Pogodne termofilne ili termotolerantne gljivične ćelije mogu biti ćelije Humicola, Rhizomucor, Myceliophthora, Rasamsonia, Talaromyces, Thermomyces, Thermoascus ili Thielavia, poželjno ćelije Rasamsonia. Poželjne termofilne ili termotolerantne gljive su Humicola grisea var. thermoidea, Humicola lanuginosa, Myceliophthora thermophila, Papulaspora thermophilia, Rasamsonia byssochlamydoides, Rasamsonia emersonii, Rasamsonia argillacea, Rasamsonia eburnean, Rasamsonia brevistipitata, Rasamsonia cylindrospora, Rhizomucor pusillus, Rhizomucor miehei, Talaromyces bacillisporus, Talaromyces leycettanus, Talaromyces thermophilus, Thermomyces lenuginosus, Thermoascus crustaceus, Thermoascus thermophilus Thermoascus aurantiacus i Thielavia terrestris.
[0044] Rasamsonia je novi rod koji obuhvata termofilne ili termotolerantne vrste Talaromyces i Geosmithia. na osnovu fenotipskih, fizioloških i molekularnih podataka, vrste Talaromyces emersonii, Talaromyces byssochlamydoides, Talaromyces eburneus, Geosmithia argillacea i Geosmithia cylindrospora su prebačene u novi rod Rasamsonia, Talaromyces emersonii, Penicillium geosmithia emersonii i Rasamsonia emersonii se ovde naizmenično koriste.
[0045] U procesima koji su ovde opisani koriste se kompozicije enzima. U jednom primeru izvođenja kompozicije su stabilne. "Stabilne kompozicije enzima" kako se ovde koristi znači da kompozicije enzima zadržavaju aktivnost nakon 30 sati reakcionog vremena hidrolize, poželjno najmanje 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% njegove početne aktivnosti nakon 30 sati reakcije hidrolize. U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija zadržava aktivnost posle 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500 sati reakcionog vremena hidrolize.
[0046] Enzimi se mogu dobiti fermentacijom pogodnog supstrata sa odgovarajućim mikroorganizmom, npr. Rasamsonia emersonii ili Aspergillus niger, pri čemu enzime proizvodi mikroorganizam. Mikroorganizam se može promeniti da bi poboljšao ili napravio enzime. Na primer, mikroorganizam može da bude mutiran klasičnim postupcima poboljšanja soja ili tehnikama rekombinantne DNK. Prema tome, mikroorganizmi pomenuti ovde mogu da se koriste kao takvi za proizvodnju enzima ili mogu biti izmenjeni kako bi se povećala proizvodnja ili kako bi se proizveli izmenjeni enzimi koji mogu uključivati heterologne enzime, npr. celulaze, dakle enzimi koje taj mikroorganizam prvobitno ne proizvodi. Poželjno, za proizvodnju enzima se koristi gljiva, poželjnije filamentozna gljiva. Poželjno je da se koristi termofilni ili termotolerantni mikroorganizam. Opciono, koristi se supstrat koji indukuje ekspresiju enzima od strane mikroorganizma koji proizvodi enzim.
[0047] Enzimi se koriste za pretvaranje ugljenih hidrata u tečnost i/ili saharifikacija ugljenih hidrata (oslobađanje šećera iz ugljenih hidrata koji sadrže polisaharide). Glavni polisaharidi su celuloze (glukani) i hemiceluloze (ksilani, heteroksilani i ksiloglukani). Pored toga, neke hemiceluloze mogu biti prisutne kao glukomanani, na primer u lignoceluloznom materijalu dobijenom od drveta. Enzimska hidroliza ovih polisaharida do rastvorljivih šećera, uključujući i monomere i multimere, na primer glukozu, celobiozu, ksilozu, arabinozu, galaktozu, fruktozu, manozu, ramnozu, ribozu, galakturonsku kiselinu, glukuronsku kiselinu i druge pentoheksoze, nastaje pod dejstvom pentoheksoza. različitih enzima koji deluju zajedno. Proizvod u vidu šećera sadrži rastvorljive šećere, uključujući i monomere i multimere. U jednom primeru izvođenja, proizvod u vidu šećera sadrži glukozu, galaktozu i arabinozu. Primeri drugih šećera su celobioza, ksiloza, arabinoza, galaktoza, fruktoza, manoza, ramnoza, riboza, galakturonska kiselina, glukoronska kiselina i druge heksoze i pentoze. Proizvod u vidu šećera se može koristiti kao takav ili može da bude dalje obrađen, na primer, regenerisan i/ili prečišćen.
[0048] Pored toga, pektini i druge pektinske supstance kao što su arabinani mogu činiti znatan deo suve mase tipičnih ćelijskih zidova iz nedrvenastog biljnog tkiva (otprilike četvrt do polovine suve mase mogu biti pektini). Štaviše, ugljenohidratni materijal može da sadrži lignin.
[0049] Enzimi koji se mogu koristiti u procesima koji su ovde opisani su detaljnije opisani u nastavku.
[0050] Litičke polisaharidne monooksigenaze, endoglukanaze (EG) i egzocelobiohidrolaze (CBH) katalizuju hidrolizu nerastvorljive celuloze do proizvoda kao što su celooligosaharidi (celobioza kao glavni proizvod), dok b-glukozidaze i b-glukozidaze (BG) konvertuju glavne ozozidaze (BG) celotrioza, do glukoze.
[0051] Ksilanaze zajedno sa drugim pomoćnim enzimima, na primer a-L arabinofuranozidazama, feruloil i acetilksilan esterazama, glukuronidazama i b-ksilozidazama katalizuju hidrolizu hemiceluloze.
[0052] Kompozicija enzima za upotrebu u procesima kako je ovde opisano može da sadrži najmanje dve aktivnosti, iako će tipično kompozicija sadržati više od dve aktivnosti, na primer, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet ili čak više aktivnosti. Tipično, enzimska kompozicija za upotrebu u procesima kako je ovde opisano sadrži najmanje dve celulaze. Najmanje dve celulaze mogu da sadrže iste ili različite aktivnosti. Kompozicija enzima za upotrebu u procesima kako je ovde opisano može takođe da sadrži najmanje jedan enzim osim celulaze. Poželjno, najmanje jedan drugi enzim ima pomoćnu aktivnost enzima, tj. dodatnu aktivnost koja direktno ili indirektno dovodi do razgradnje lignoceluloze. Primeri takvih pomoćnih aktivnosti su pomenuti ovde i uključuju, ali nisu ograničeni, na hemicelulaze.
[0053] Kompozicija enzima za upotrebu u procesima kako je ovde opisano najmanje sadrži litičku polisaharid monooksigenazu (LPMO), endoglukanazu (EG), celobiohidrolazu (CBH), ksilanazu, beta-ksilozidazu (BKS) i beta -glukozidaza (BG). Kompozicija enzima može da sadrži više od jedne enzimske aktivnosti po klasi aktivnosti. Na primer, kompozicija može da sadrži dve endoglukanaze, na primer endoglukanazu koja ima aktivnost endo 1,3(1,4)-b glukanaze i endoglukanazu koja ima aktivnost endo-b-1,4-glukanaze.
[0054] Kompozicija za upotrebu u procesima kao što su ovde opisani može da bude izvedena iz gljive, kao što je filamentozna gljiva, kao što je Rasamsonia, kao što je Rasamsonia emersonii. U jednom primeru izvođenja, najmanje jedan od enzima može da bude izveden iz Rasamsonia emersonii. U jednom primeru izvođenja, litička polisaharid monooksigenaza i/ili beta-ksilozidaza su izvedeni iz Rasamsonia emersonii. Ako je potrebno, enzim se može dopuniti dodatnim enzimima iz drugih izvora. Takvi dodatni enzimi mogu biti izvedeni iz klasičnih izvora i/ili proizvedeni od genetski modifikovanih organizama.
[0055] Pored toga, enzimi u enzimskim kompozicijama za upotrebu u procesima koji su ovde opisani mogu biti u stanju da rade pri niskom pH. Za potrebe ovog pronalaska, nizak pH označava pH od 5,5 ili niži, 5 ili niži, 4,9 ili niži, 4,8 ili niži, 4,7 ili niži, 4,6 ili niži, 4,5 ili niži, 4,4 ili niži, 4,3 ili niži, 4,2 ili niže, 4,1 ili manje, 4,0 ili manje 3,9 ili manje, 3,8 ili manje, 3,7 ili manje, 3,6 ili manje, 3,5 ili manje.
[0056] Kompozicija enzima za upotrebu u procesima kako je ovde opisano može da sadrži celulazu i/ili hemicelulazu i/ili pektinazu iz Rasamsonia-e. Oni takođe mogu da sadrže celulazu i/ili hemicelulazu i/ili pektinazu iz izvora koji nije Rasamsonia. Mogu se koristiti zajedno sa jednim ili više enzima Rasamsonia ili se mogu koristiti bez prisutnosti dodatnih enzima Rasamsonia.
[0057] Enzimska kompozicija za upotrebu u postupcima kako su ovde opisani sadrži litičku polisaharid monooksigenazu, endoglukanazu, celobiohidrolazu I (CBHI), celobiohidrolazu II (CBHII), beta-glukozidazu, endoksilanazu (EKS) i beta ksilozidazu.
[0058] Enzimska kompozicija za upotrebu u postupcima kako su ovde opisani može da sadrži jedan tip aktivnosti celulaze i/ili aktivnosti hemicelulaze i/ili aktivnosti pektinaze obezbeđene kompozicijom kao što je ovde opisana, i drugi tip aktivnosti celulaze i/ili aktivnosti hemicelulaze i/ili aktivnost pektinaze koju obezbeđuje dodatna celulaza/hemicelulaza/pektinaza.
[0059] U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija koja se koristi u saharifikaciji je ceo fermentacioni bujon filamentozne gljive, pri čemu navedeni bujon sadrži celobiohidrolazu, beta glukozidazu, ksilanazu, beta-ksilozidazu i litičku monosaharid oksigenazu. Ovi enzimi su ovde detaljnije opisani.
[0060] U jednom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži endoglukanazu. U jednom primeru izvođenja, endoglukanaza sadrži GH5 endoglukanazu i/ili GH7 endoglukanazu. U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija koja se koristi u likvefakciji je ceo fermentacioni bujon filamentozne gljive, pri čemu navedeni bujon sadrži endoglukanazu. U jednom primeru izvođenja, količina endoglukanaze u enzimskoj kompoziciji koja se koristi za likvefakciju je od 50 - 1000 μg/gram suve materije u prethodno obrađenom ugljenohidratnom materijalu. Endoglukanaze su ovde detaljnije opisane. U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija koja se koristi za likvefakciju sadrži više endoglukanaze od kompozicije enzima koja se koristi za saharifikaciju.
[0061] Kako se ovde koristi, celulaza je bilo koji polipeptid koji je sposoban da razgradi ili modifikuje celulozu. Polipeptid koji je sposoban da razgradi celulozu je onaj peptid koji je sposoban da katalizuje proces razlaganja celuloze na manje jedinice, bilo delimično, na primer u celodekstrine, ili potpuno, u monomere glukoze. Celulaza kao što je ovde opisana može da dovede do nastanka mešovite populacije celodekstrina i monomera glukoze. Takva degradacija će se obično odvijati reakcijom hidrolize.
[0062] Kako se ovde koristi, hemicelulaza je bilo koji polipeptid koji je sposoban da razgradi ili modifikuje hemicelulozu. To znači da hemicelulaza može da bude sposobna da razgradi ili modifikuje jedan ili više od ksilana, glukuronoksilana, arabinoksilana, glukomanana i ksiloglukana. Polipeptid koji je sposoban da razgradi hemicelulozu je onaj koji je sposoban da katalizuje proces razlaganja hemiceluloze na manje polisaharide, bilo delimično, na primer na oligosaharide, ili potpuno, u monomere šećera, na primer heksozu ili monomere šećera pentoze. Hemicelulaza kao što je ovde opisana može da dovede do nastanka mešovite populacije oligosaharida i monomera šećera. Takva degradacija će se obično odvijati reakcijom hidrolize.
[0063] Kako se ovde koristi, pektinaza je bilo koji polipeptid koji je sposoban da razgradi ili modifikuje pektin. Polipeptid koji je sposoban da razgradi pektin je onaj peptid koji je sposoban da katalizuje proces razlaganja pektina na manje jedinice, bilo delimično, na primer u oligosaharide, ili potpuno, u monomere šećera. Pektinaza kao što je ovde opisana može da dovede do nastanka mešovite populacije oligosaharda i monomera šećera. Takva degradacija će se obično odvijati reakcijom hidrolize.
[0064] Shodno tome, enzimska kompozicija za upotrebu u procesima kako je ovde opisano može da sadrži jedan ili više od sledećih enzima, litičku polisaharidnu monooksigenazu (npr. GH61), celobiohidrolazu, endo-b-1,4-glukanazu, beta-glukozidazu i b-(1,3)(1,4) glukanaza. Kompozicija za upotrebu u procesima kako je ovde opisano može takođe da sadrži jednu ili više hemicelulaza, na primer, endoksilanazu, b-ksilozidazu, a-L arabionofuranozidazu, a-D-glukuronidazu, acetil ksilan esterazu, feruloil esterazu , kumaroil esteraza, a-galaktozidaza, bgalaktozidaza, b-mananaza i/ili b mannosidaza. Kompozicija za upotrebu u procesima kako je ovde opisano može takođe da sadrži jednu ili više pektinaza, na primer, endopoligalakturonazu, pektin-metil esterazu, endogalaktanazu, beta-galaktozidazu, pektin-acetil esterazu, endo-pektin liaza, pektat lijaza, alfa-ramnozidaza, egzo-galakturonaza, ekspoligalakturonat liaza, ramnogalakturonat hidrolaza, ramnogalakturonan lijaza, ramnogalakturonan acetil esteraza, ramnogalakturonaza, ramnogalakturonaza i ramnogalakturonaza/hidrogalaktuloza Pored toga, jedan ili više od sledećih enzima, amilaza, proteaza, lipaza, ligninaza, heksoziltransferaza, glukuronidaza, ekspansin, celulozom indukovani protein ili protein koji integriše celulozu ili sličan protein mogu biti prisutni u kompoziciji za upotrebu u procesima koji su ovde opisani (oni se gore pominju kao pomoćne aktivnosti).
[0065] Kako se ovde koristi, litičke polisaharidne monooksigenaze su enzimi koje je CAZi nedavno klasifikovao u familiju AA9 (familija pomoćnih aktivnosti 9) ili familiju AA10
1
(familija pomoćnih aktivnosti 10). Dakle, postoje AA9 litičke polisaharid monooksigenaze i AA10 litičke polisaharid monooksigenaze. Litičke polisaharidne monooksigenaze su u stanju da otvore kristalnu strukturu glukana i pojačaju dejstvo celulaza na supstrate lignoceluloze. Oni su enzimi koji imaju celulolitičku aktivnost. Litičke polisaharidne monooksigenaze takođe mogu uticati na celooligosaharide. Prema najnovijoj literaturi, (videti Isaksen et al., Journal of Biological Chemistry, vol.289, br.5, str.2632 2642), proteini pod nazivom GH61 (familija glikozid hidrolaze 61 ili se ponekad nazivaju EGIV) su litičke polisaharidne monooksigenaze . GH61 je prvobitno klasifikovan kao endoglukanaza na osnovu merenja veoma slabe aktivnosti endo 1,4-b-d-glukanaze kod jednog člana porodice, ali ga je CAZi nedavno reklasifikovao u porodicu AA9. CBM33 (familija 33 modul za vezivanje ugljenih hidrata) je takođe litička polisaharid monooksigenaza (videti Isaksen et al, Journal of Biological Chemistri, vol. 289, br. 5, str. 2632-2642). CAZi je nedavno reklasifikovao CBM33 u porodicu AA10.
[0066] U jednom primeru izvođenja, litička polisaharid monooksigenaza sadrži AA9 litičku polisaharid monooksigenazu. To znači da je najmanje jedna litička polisaharid monooksigenaza u enzimskoj kompoziciji AA9 litička polisaharid monooksigenaza. U jednom primeru izvođenja, sve litičke polisaharid monooksigenaze u enzimskoj kompoziciji su AA9 litičke polisaharid monooksigenaze.
[0067] U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija sadrži litičku polisaharid monooksigenazu iz Thermoascus, kao što je Thermoascus aurantiacus, kao što je ona opisana u WO 2005/074656 kao SEQ ID NO:2 i SEQ ID NO:1 u WO2014/130812 i u WO 2010/065830; ili iz Thielavia, kao što je Thielavia terrestris, kao što je ona opisana u WO 2005/074647 kao SEQ ID NO: 8 ili SEQ ID NO:4 u WO2014/130812 i u WO 2008/148131, i WO 2011/035027; ili iz Aspergillus, kao što je Aspergillus fumigatus, kao što je ona opisana u WO 2010/138754 as SEQ ID NO:2 ili SEQ ID NO: 3 in WO2014/130812; ili from Penicillium, kao što je Penicillium emersonii, kao što je ona prikazana u SEQ ID NO:2 u WO 2011/041397 ili SEQ ID NO:2 u WO2014/130812. Druge litičke polisaharid monooksigenaze uključuju, ali nisu ograničene na, Trichoderma reesei (videti WO 2007/089290), Myceliophthora thermophila (videti WO 2009/085935, WO 2009/085859, WO 2009/085864, WO 2009/085868), Penicillium pinophilum (videti WO 2011/005867), Thermoascus sp. (videti WO 2011/039319), i Thermoascus crustaceous (videti WO 2011/041504). Drugi celulolitički enzimi koji mogu da budu sadržani u enzimskoj kompoziciji su opisani u WO 98/13465, WO 98/015619, WO 98/015633, WO 99/06574, WO 99/10481, WO 99/025847, WO 99/031255, WO 2002/101078, WO 2003/027306, WO 2003/052054, WO 2003/052055, WO 2003/052056, WO 2003/052057, WO 2003/052118, WO 2004/016760, WO 2004/043980, WO 2004/048592, WO 2005/001065, WO 2005/028636, WO 2005/093050, WO 2005/093073, WO 2006/074005, WO 2006/117432, WO 2007/071818, WO 2007/071820, WO 2008/008070, WO 2008/008793, US 5,457,046, US 5,648,263 i US 5,686,593, da navedemo samo nekoliko. U poželjnom primeru izvođenja, litička polisaharid monooksigenaza je iz roda Rasamsonia, npr. Rasamsonia emersonii (videti WO 2012/000892).
[0068] Kako se ovde koristi, endoglukanaze su enzimi koji su u stanju da katalizuju endohidrolizu 1,4-β-D-glukozidnih veza u celulozi, liheninu ili β-D-glukanima iz žitarica. One spadaju u EC 3.2.1.4 i takođe mogu da budu u stanju da hidrolizuju 1,4-veze u β-D glukanima koji sadrže i 1,3-veze. Endoglukanaze mogu da se označavaju i kao celulaze, avicelaze, β-1,4-endoglukan hidrolaze, β-1,4-glukanaze, karboksimetil celulaze, celudekstrinaze, endo-1,4-β-D-glukanaze, endo-1,4-β-D-glukanohidrolaze ili endo-1,4-β glukanaze.
[0069] U jednom primeru izvođenja, endoglukanaza sadrži GH5 endoglukanazu i/ili GH7 endoglukanazu. To znači da je najmanje jedna od endoglukanaza u enzimskoj kompoziciji GH5 endoglukanaza ili GH7 endoglukanaza. U slučaju da u enzimskoj kompoziciji ima više endoglukanaza, ove endoglukanaze mogu biti GH5 endoglukanaze, GH7 endoglukanaze ili kombinacija GH5 endoglukanaza i GH7 endoglukanaza. U poželjnom izvođenju endoglukanaza sadrži GH5 endoglukanazu.
[0070] U jednom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži endoglukanazu iz Trichoderma, kao što je Trichoderma reesei; iz Humicola, kao što je soj Humicola insolens; iz Aspergillus, kao što je Aspergillus aculeatus ili Aspergillus kawachii; iz Erwinia, kao što je Erwinia carotovara; iz Fusarium, kao što je Fusarium oxysporum; iz Thielavia, kao što je Thielavia terrestris; iz Humicola, kao što je Humicola grisea var. thermoidea ili Humicola insolens; iz Melanocarpus, kao što je Melanocarpus albomyces; iz Neurospora, kao što je Neurospora crassa; iz Myceliophthora, kao što je Myceliophthora thermophila; iz Cladorrhinum, kao što je Cladorrhinum foecundissimum; i/ili iz Chrysosporium, kao što je soj Chrysosporium lucknowense. U poželjnom primeru izvođenja endoglukanaza je iz Rasamsonia, kao što je soj Rasamsonia emersonii (videti WO 01/70998). U jednom primeru izvođenja može da se koristi čak i bakterijska endoglukanaza uključujući, ali ne ograničeno na, Acidothermus celulolyticus endoglukanazu (videti WO 91/05039; WO 93/15186; US 5,275,944; WO 96/02551; US 5,536,655, WO 00/70031, WO 05/093050); Thermobifida fusca endoglukanazu III (videti WO 05/093050); i Thermobifida fusca endoglukanazu V (videti WO 05/093050).
[0071] Kako se ovde koristi, beta-ksilozidaze (EC 3.2.1.37) su polipeptidi koji su sposobni da katalizuju hidrolizu 1,4-b-D-ksilana, da uklone uzastopne ostatke D-ksiloze sa neredukujućih krajeva. Beta-ksilozidaze takođe mogu da hidrolizuju ksilobiozu. Beta-ksilozidaza se takođe može nazvati ksilan 1,4-b-ksilozidaza, 1,4-b-D-ksilan ksilohidrolaza, egzo-1,4-b ksilozidaza ili ksilobiaza.
[0072] U jednom primeru izvođenja, beta-ksilozidaza sadrži GH3 beta-ksilozidazu. To znači da je najmanje jedna od beta-ksilozidaza u sastavu enzima GH3 beta-ksilozidaza. U jednom aspektu, sve beta-ksilozidaze u enzimskom sastavu su GH3 beta-ksilozidaze.
[0073] U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija sadrži beta-ksilozidazu iz Neurospora crassa, Aspergillus fumigatus ili Trichoderma reesei. U poželjnom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži beta-ksilozidazu iz Rasamsonia, kao što je Rasamsonia emersonii (videti WO 2014/118360).
[0074] Kako se ovde koristi, endoksilanaza (EC 3.2.1.8) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje endohidrolizu 1,4-β-D-ksilozidne veze u ksilanima. Ovaj enzim može da se označava i kao endo-1,4-β-ksilanaza ili 1,4-β-D-ksilan ksilanohidrolaza. Alternativa je EC 3.2.1.136, glukuronoarabinoksilan endoksilanaza, enzim koji je u stanju da hidrolizuje 1,4 ksilozidne veze u glukuronoarabinoksilanima.
[0075] U jednom primeru izvođenja endoksilanaza sadrži GH10 ksilanazu. Ovo znači da je najmanje jedna od endoksilanaza u enzimskoj kompoziciji GH10 ksilanaza. U jednom primeru izvođenja sve endoksilanaze u enzimskoj kompoziciji su GH10 ksilanaze.
[0076] U jednom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži endoksilanazu iz Aspergillus aculeatus (videti WO 94/21785), Aspergillus fumigatus (videti WO 2006/078256), Penicillium pinophilum (videti WO 2011/041405), Penicillium sp. (videti WO 2010/126772), Thielavia terrestris NRRL 8126 (videti WO 2009/079210), Talaromyces leycettanus, Thermobifida fusca ili Trichophaea saccata GH10 (videti WO 2011/057083). U poželjnom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži endoksilanazu iz Rasamsonia, kao što je Rasamsonia emersonii (videti WO 02/24926).
[0077] Kako se ovde koristi, beta-glukozidaza (EC 3.2.1.21) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje hidrolizu terminalnih, neredukujućih ostataka β-D-glukoze uz oslobađanje β-D-glukoze. Ovakav polipeptid može da ima široku specifičnost za β-D-glukozide i može takođe da hidrolizuje jedno ili više od sledećeg: β-D-galaktozid, α-L-arabinozid, β-D ksilozid ili β-D-fukozid. ovaj enzim može da se označava i kao amigdalaza, β-D-glukozid glukohidrolaza, celobiaza ili gentobiaza.
[0078] U jednom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži beta-glukozidazu iz Aspergillus, kao što je Aspergillus oryzae, kao što je ona prikazana u WO 02/095014 ili fuzioni protein koji ima beta-glukozidaznu aktivnost prikazanu u WO 2008/057637, ili Aspergillus fumigatus, kao što je ona prikazana kao SEQ ID NO:2 u WO 2005/047499 ili SEQ ID NO:5 u WO 2014/130812 ili varijanta beta-glukozidaze iz Aspergillus fumigatus, kao što je ona prikazana u WO 2012/044915, kao što je ona sa sledećim supstitucijama: F100D, S283G, N456E, F512Y (koristi se SEQ ID NO: 5 u WO 2014/130812 za obeležavanje), ili Aspergillus aculeatus, Aspergillus niger ili Aspergillus kawachi. U drugom primeru izvođenja beta glukozidaza se dobija iz Penicillium, kao što je Penicillium brasilianum prikazan kao SEQ ID NO:2 u WO 2007/019442, ili iz Trichoderma, kao što je Trichoderma reesei, kao što su one opisane u US 6,022,725, US 6,982,159, US 7,045,332, US 7,005,289, US 2006/0258554 US 2004/0102619. U jednom primeru izvođenja, može da se koristi čak i bakterijska beta-glukosidaza. U drugom primeru izvođenja, beta-glukozidaza je dobijena iz Thielavia terrestris (WO 2011/035029) ili Trichophaea saccata (WO 2007/019442). U poželjnom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži beta-glukozidazu iz Rasamsonia, kao što je Rasamsonia emersonii (videti WO 2012/000886).
[0079] Kako se ovde koristi, a celobiohidrolaza (EC 3.2.1.91) je bilo koji polipeptid which is capable of catalyzing the hydrolysis of 1,4-β-D-glucosidic veze in celulose ili celotetraose, releasing celobiose from the ends of the chains. Ovaj enzim može da se označava i kao celulase 1,4-β-celobiozidaza, 1,4-β-celobiohidrolaza, 1,4-β-D-glukan celobiohidrolaza, avicelaza, egzo-1,4-β-D-glukanaza, egzocelobiohidrolaza ili egzoglukanaza.
[0080] U jednom primeru izvođenja, enzimska kompozicija sadrži celobiohidrolazu I iz Aspergillus, kao što je Aspergillus fumigatus, kao što je Cel7A CBH I prikazana u SEQ ID NO:6 u WO 2011/057140 ili SEQ ID NO:6 u WO 2014/130812; iz Trichoderma, kao što je Trichoderma reesei; iz Chaetomium, kao što je Chaetomium thermophilum; iz Talaromyces, kao što je Talaromyces leycettanus ili iz Penicillium, kao što je Penicillium emersonii. U poželjnom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži celobiohidrolazu I iz Rasamsonia, kao što je Rasamsonia emersonii (videti WO 2010/122141).
[0081] U jednom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži celobiohidrolazu II iz Aspergillus, kao što je Aspergillus fumigatus, kao što je onaj iz SEQ ID NO:7 u WO 2014/130812 ili iz Trichoderma, kao što je Trichoderma reesei, ili iz Talaromyces, kao što je Talaromyces leycettanus, ili iz Thielavia, kao što je Thielavia terrestris, kao što je celobiohidrolase II CEL6A iz Thielavia terrestris. U poželjnom primeru izvođenja enzimska kompozicija sadrži celobiohidrolazu II iz Rasamsonia, kao što je Rasamsonia emersonii (videti WO 2011/098580).
[0082] U jednom primeru izvođenja enzimska kompozicija takođe sadrži jedan ili više enzima koji se pominju u nastavku teksta.
[0083] Kako se ovde koristi, a β-(1,3)(1,4)-glukanaza (EC 3.2.1.73) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje hidrolizu 1,4-β-D-glukozidne veze in β-D-glukanima koji sadrže 1,3- i 1,4-veze. Ovaj polipeptid može da deluje na lihenin i β-D-glukane iz žitarica, ali ne na β-D-glukane koji sadrže samo 1,3- ili 1,4-veze. Ovaj enzim može da se označava i kao liheninaza, 1,3-1,4-β-D-glukan 4-glukanohidrolaza, β-glukanaza, endo-β-1,3-1,4 glukanaza, lihenaza ili β-glukanaza mešanih veza. Alternativa za ovaj tip enzima je EC 3.2.1.6, koji je
1
opisan kao endo-1,3(4)-betaglukanaza. Ovaj tip enzima hidrolizuje 1,3- ili 1,4 veze u beta-D-glukanazi kada je glukozni ostatak čija je redukujuća grupa uključena u vezu koja se hidrolizuje i sam supstituisan na C-3. Alternativna imena uključuju endo-1,3 beta-glukanazu, laminarinazu, 1,3-(1,3;1,4)-beta-D-glukan 3 (4) glukanohidrolazu. Supstrati uključuju laminarin, lihenin i beta-D-glukane iz žitarica.
[0084] Kako se ovde koristi, α-L-arabinofuranozidaza (EC 3.2.1.55) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da deluje na α-L-arabinofuranozide, α-L-arabinane koji sadrže (1,2) i/ili (1,3)-i/ili (1,5)-veze, arabinoksilans i arabinogalaktans. Ovaj enzim može da se označaa i kao α-N-arabinofuranosidaza, arabinofuranosidaza ili arabinosidaza. Examples of arabinofuranosidaza koje mogu da budu sadržane u enzimskoj kompoziciji uključuju, ali nisu ograničene na not limited to, arabinofuranozidazas iz Aspergillus niger, Humicola insolens DSM 1800 (videti WO 2006/114094 i WO 2009/073383) i M. giganteus (videti WO 2006/114094).
[0085] Kako se ovde koristi, α-D-glukuronidaza (EC 3.2.1.139) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje reakciju sledećeg oblika: alfa-D-glucuronoside H(2)O = an alcohol D-glucuronate. Ovaj enzim može da se označaa i kao alfa-glucuronidase ili alfaglucosiduronaza. These enzymes may also hidrolyse 4-O-methylated glucoronic acid, which can also be present as a substituent in ksilans. An alternative is EC 3.2.1.131: ksilan alfa-1,2-glucuronozidaza, which catalyses the hidrolysis of alfa-1,2-(4-O-methyl)glucuronosyl links. Examples of alfa-glucuronidases that may be comprised in enzimska kompozicija include, ali ne ograničeno na, alfa-glucuronidases iz Aspergillus clavatus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, Aspergillus terreus, Humicola insolens (videti WO 2010/014706), Penicillium aurantiogriseum (videti WO 2009/068565) i Trichoderma reesei.
[0086] Kako se ovde koristi, acetil ksilan esteraza (EC 3.1.1.72) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje deacetilaciju ksilana i ksilo-oligosaharida. Ovakav polipeptid može da katalizuje hidrolizu acetil grupa iz polimernog ksilana, acetilovane ksiloze, acetilovane glukoze, alfa-naftil acetata ili p-nitrofenil acetata, ali, uobičajeno, ne iz triacetilglicerola. Ovakav polipeptid uobičajeno ne deluje na acetilovani manan ili pektin. Primeri acetilksilan esteraza koje mogu da budu sadržane u enzimskoj kompoziciji uključuju, ali nisu ograničeni na, acetilksilan esteraze iz Aspergillus aculeatus (videti WO 2010/108918), Chaetomium globosum, Chaetomium gracile, Humicola insolens DSM 1800 (videti WO 2009/073709), Hypocrea jecorina (videti WO 2005/001036), Myceliophtera thermophila (videti WO 2010/014880), Neurospora crassa, Phaeosphaeria nodorum i Thielavia terrestris NRRL 8126 (videti WO 2009/042846). U poželjnom primeru izvođenja, enzimska kompozicija sadrži acetil ksilan esterazu iz Rasamsonia, kao što je Rasamsonia emersonii (videti WO 2010/000888)
[0087] Kako se ovde koristi, a feruloyl esterase (EC 3.1.1.73) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje a reaction of the form: feruloyl-saccharide H2O = ferulate saccharide. The saccharide may be, for example, an oligosaccharide ili a polisaccharide. It may typically catalyse the hidrolysis of the 4-hydroxy-3-methoxycinnamoyl (feruloyl) group from an esterified šećer, which is usually arabinose in ’natural’ substrates. p-nitrophenol acetate i methyl ferulate are typically poorer substrates. Ovaj enzim može da se označaa i kao cinnamoyl ester hidrolase, ferulic acid esterase ili hidroxycinnamoyl esterase. It may also be referred to as a hemicelulase accessory enzyme, since it may help ksilanazas i pektinazas to break down plant cell wall hemicelulose i pektin. Examples of feruloyl esterases (ferulic acid esterases) that may be comprised in enzimska kompozicija include, ali ne ograničeno na, feruloyl esterases form Humicola insolens DSM 1800 (videti WO 2009/076122), Neosartorya fischeri, Neurospora crassa, Penicillium aurantiogriseum (videti WO 2009/127729), i Thielavia terrestris (videti WO 2010/053838 i WO 2010/065448).
[0088] Kako se ovde koristi, a coumaroyl esterase (EC 3.1.1.73) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje a reaction of the form: coumaroyl-saccharide H(2)O = coumarate saccharide. The saccharide may be, for example, an oligosaccharide ili a polisaccharide. Ovaj enzim može da se označaa i kao trans-4-coumaroyl esterase, trans-p-coumaroyl esterase, p coumaroyl esterase ili p-coumaric acid esterase. This enzyme also falls within EC 3.1.1.73 so may also be referred to as a feruloyl esterase.
[0089] Kako se ovde koristi, α-galaktozidaza (EC 3.2.1.22) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje hidrolizu terminalnog, neredukujućeg ostatka α-D-galaktoze u α-D galaktozidima, uključujući galaktozne oligosaharide, galaktomanane, galaktane i arabinogalaktane. Ovakav polipeptid može takođe da bude u stanju da hidrolizuje α-D-fukozide. Ovaj enzim može da se označava i kao melibiaza.
[0090] Kako se ovde koristi, β-galaktozidaza (EC 3.2.1.23) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje hidrolizu terminalnih neredukujućih ostataka β-D-galaktoze u β-D galaktozidima. Ovakav polipeptid može takođe da bude u stanju da hidrolizuje α-L-arabinozide. Ovaj enzim može da se označaa i kao egzo-(1->4)-β-D-galaktanaza ili laktaza.
[0091] Kako se ovde koristi, β-mananaza (EC 3.2.1.78) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje nasumičnu hidrolizu 1,4-β-D-manozidnih veza u mananima, galaktomananima i glukomananima. Ovaj enzim može da se označava i kao manan endo 1,4-β-manozidaza ili endo-1,4-mananaza.
[0092] Kako se ovde koristi, β-manozidaza (EC 3.2.1.25) je bilo koji peptid koji je u stanju da katalizuje hidrolizu terminalnih, neredukujućih β-D-manoznih ostataka u β-D manozidima. Ovaj enzim može da se označava i kao mananaza ili manaza.
[0093] Kako se ovde koristi, endo-poligalakturonaza (EC 3.2.1.15) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje the random hidrolysis of 1,4-α-D-galaktosiduronic veze in pektat i other galakturonans. Ovaj enzim može da se označava i kao poligalakturonaza pektin depolimerase, pektinaza, endopoligalakturonaza, pectolase, pektin hidrolase, pektin poligalakturonaza, poli-α-1,4-galakturonide glycanohidrolase, endogalakturonaza; endo-D galakturonaza ili poli(1,4-α-D-galakturonide) glycanohidrolase.
[0094] Kako se ovde koristi, a pektin methyl esterase (EC 3.1.1.11) is any enzyme koji je u stanju da katalizuje the reaction: pektin n H2O = n metanol pektat. The enzyme may also be known as pektinesterase, pektin demethoxylase, pektin methoxylase, pektin methylesterase, pectase, pektinoesterase ili pektin pectylhidrolase.
[0095] Kako se ovde koristi, endo-galaktanaza (EC 3.2.1.89) is any enzyme capable of catalysing the endohidrolysis of 1,4-β-D-galaktosidic veze in arabinogalaktans. The enzyme may also be known as arabinogalaktan endo-1,4-β-galaktozidaza, endo-1,4-β-galaktanaza, galaktanaza, arabinogalaktanaza ili arabinogalaktan 4-β-D-galaktanohidrolase.
[0096] Kako se ovde koristi, pektin acetil esteraza esterase is defined herein as any enzyme which has an acetyl esterase activity which catalyses the deacetylation of the acetyl groups at the hidroxyl groups of GalUA residues of pektin.
[0097] Kako se ovde koristi, an endo-pektin liaza (EC 4.2.2.10) is any enzyme capable of catalysing the eliminative cleavage of (1 →4)-α-D-galakturonan methyl ester to give oligosaharidi with 4-deoksi-6-O-methyl-α-D-galakt-4-enuronosyl groups at their non reducing ends. The enzyme may also be known as pektin liaza, pektin trans-eliminaza; endo pektin liaza, polimethylgalakturonic transeliminaza, pektin methyltranseliminaza, pectoliaza, PL, PNL ili PMGL ili (1 →4)-6-O-methyl-α-D-galakturonan liaza.
[0098] Kako se ovde koristi, pektat liaza (EC 4.2.2.2) je bilo koji enzim koji je u stanju da katalizuje eliminatornu degradaciju (1 →4)-α-D-galakturonana kako bi se dobili oligosaharidi sa 4-deoksi-α-D galakt-4-enuronozil grupama na svojim neredukujućim krajevima. Enzim može da bude i poznata poligalakturonska transeliminaza, pectic acid transeliminaza,
1
poligalakturonate liaza, endopektin methyltranseliminaza, pektat transeliminaza, endogalakturonate transeliminaza, pectic acid liaza, pectic liaza, α-1,4-D-endopoligalakturonic acid liaza, PGA liaza, PPase-N, endo-α-1,4-poligalakturonic acid liaza, poligalakturonic acid liaza, pektin trans-eliminaza, poligalakturonic acid trans-eliminaza ili (1 →4)-α-D-galakturonan liaza.
[0099] Kako se ovde koristi, alfa ramnozidaza (EC 3.2.1.40) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje hidrolizu of terminal non-reducing α-L-rhamnose residues in α-L rhamnozide ili alternatively in rhamnogalakturonan. This enzyme may also be known as α-L rhamnozidaza T, α-L-rhamnozidaza N ili α-L-rhamnoside rhamnohidrolaza.
[0100] Kako se ovde koristi, egzo-galakturonaza (EC 3.2.1.82) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da hidrolizuje pektinsku kiselinu sa neredukujućeg kraja, uz oslobađanje digalakturonata. Enzim je poznat i kao egzo-poli-α-galakturonozidaza, egzopoligalakturonozidaza ili egzopoligalakturanozidaza.
[0101] Kako se ovde koristi, egzo-galakturonaza (EC 3.2.1.67) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje: (1,4-α-D-galakturonid)n+ H2O = (1,4-α-D-galakturonid)n-1+ D-galakturonat. Enzim je poznat i kao galakturan 1,4-α-galakturonidaza, egzopoligalakturonaza, poli(galakturonat) hidrolaza, egzo-D-galakturonaza, egzo-D-galakturonanaza, egzopoli-D galakturonaza ili poli(1,4-α-D-galakturonid) galakturonohidrolaza.
[0102] Kako se ovde koristi, egzopoligalakturonat liaza (EC 4.2.2.9) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje eliminacionu degradaciju 4-(4-deoksi-α-D-galakt-4-enuronozil)-D-galakturonata sa redukujućeg kraja pektata, tj. deesterifikovanog pektina. Ovaj enzim je poznat i kao pektat disaharid-liaza, pektat egzo-liaza, transeliminaza egzopektinske kiseline, egzopektat liaza, trans-eliminaza egzopoligalakturonske kiseline, PATE, egzo-PATE, egzo-PGL ili disaharid liaza (1 →4)-α-D galakturonan redukujućeg kraja.
[0103] Kako se ovde koristi, ramnogalakturonan hidrolaza je bilo koji polipeptid koji je u stanju da hidrolizuje vezu između galaktosiluronske kiseline i ramnopiranozila na endo način u strogo naizmeničnim ramnogalakturonan strukturama, koje se sastoje od disaharid [(1,2-alfa-L-ramnoil-(1,4)-alfa-galaktosiluronske kiseline].
[0104] Kako se ovde koristi, ramnogalakturonan liaza je bilo koji polipeptid koji je u stanju da degraduje α-L-Rhap-(1 →4)-α-D-GalpA veze na endo način u ramnogalakturonanu putem beta-eliminacije.
[0105] Kako se ovde koristi, ramnogalakturonan acetil esteraza je bilo koji polipeptid koji katalizuje deacetilaciju osnovnog lanca naizmeničnih ostataka ramnoze galakturonske kiseline u ramnogalakturonanu.
[0106] Kako se ovde koristi, ramnogalakturonan galakturonohidrolaza je bilo koji polipeptid koji je u stanju da hydrolyzing galakturonsku kiselinu sa neredukujućeg kraja strogo acid from the non-reducing end of strictly alternating rhamnogalakturonan structures in an egzofashion.
[0107] Kako se ovde koristi, ksilogalakturonaza je bilo koji polipeptid which acts on ksilogalakturonan by cleaving the β-ksilose substituted galakturonic acid backbone in an endo-manner. This enzyme may also be known as ksilogalakturonan hidrolaza.
[0108] Kako se ovde koristi, an α-L-arabinofuranozidaza (EC 3.2.1.55) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da deluje na α-L-arabinofuranozide, α-L-arabinans containing (1,2) i/ili (1,3)-i/ili (1,5)-veze, arabinoksilans i arabinogalaktans. Ovaj enzim može da se označaa i kao α-N-arabinofuranozidaza, arabinofuranozidaza ili arabinozidaza.
[0109] Kako se ovde koristi, endo-arabinanaza (EC 3.2.1.99) je bilo koji polipeptid koji je u stanju da katalizuje endohidrolizu 1,5-α-arabinofuranozidne veze u 1,5-arabinanima. Enzim je poznat i kao endo-arabinaza, arabinan endo-1,5-α-L-arabinozidaza, endo-1,5-α-L
1
arabinanaza, endo-α-1,5-arabanaza; endo-arabanaza ili 1,5-α-L-arabinan 1,5-α-L arabinanohidrolaza.
[0110] "Proteaza" includes enzymes that hydrolyze peptide bonds (peptidases), as well as enzymes that hydrolyze bonds between peptides i other moieties, kao što je sugars (glycopeptidases). Many proteases are characterized under EC 3.4 i are suitable for use in the processes as described herein. Some specific types of proteases include, cysteine proteases uključujući pepsin, papain i serine proteases uključujući chymotrypsins, carboxypeptidases i metalloendopeptidases.
[0111] "Lipase" includes enzymes that hydrolyze lipids, fatty acids, i acylglycerides, uključujući phospoglycerides, lipoproteins, diacylglycerols, i the like. In plants, lipids are used as structural components to limit water loss i pathogen infection. These lipids include waxes derived from fatty acids, as well as cutin i suberin.
[0112] "Ligninaza" includes enzymes that can hydrolyze ili break down the structure of lignin polimers. Enzymes that can break down lignin include lignin peroxidases, manganese peroxidases, laccases i feruloyl esterases, i other enzymes described in the art known to depolimerize ili otherwise break lignin polimers. Also included are enzymes capable of hydrolyzing bonds formed between hemicelulosic sugars (notably arabinose) i lignin. Ligninazas include ali ne ograničeno na the following group of enzymes: lignin peroxidases (EC 1.11.1.14), manganese peroxidases (EC 1.11.1.13), laccases (EC 1.10.3.2) i feruloyl esterases (EC 3.1.1.73).
[0113] "Heksoziltransferaza" (2.4.1-) uključuje enzime koji su u stanju da katalizuju reakciju transferaze, ali koji mogu da kataklizuju i reakciju hidrolize, na primer celuloze i/ili proizvoda degradacije celuloze. An example of a heksoziltransferaze koja može da se koristi je β-glukanoziltransferaza. Ovaj enzim može da katalizuje degradaciju (1,3)(1,4)glukana i/ili celuloze i/ili degradacionog proizvoda celuloze.
[0114] "Glukuronidaza" uključuje enzime koji katalizuju hidrolizu glukuronozida, na primer b-glukuronozida kako bi se dobio alkohol. Mnoge glukuronidaze su okarakterisane i mogu biti pogodne za upotrebu, na primer b-glukuronidaza (EC 3.2.1.31), hijalurono glukuronidaza (EC 3.2.1.36), glukuronozil-disulfoglukozamin glukuronidaza (3.2.1.56), glikuronidaza.2.1.56. 1.128) ili a-D-glukuronidaza (EC 3.2.1.139).
[0115] Ekspanzini su uključeni u labavljenje strukture ćelijskog zida tokom rasta biljnih ćelija. Predloženo je da ekspanzini poremete vodoničnu vezu između celuloze i drugih polisaharida ćelijskog zida bez hidrolitičke aktivnosti. Smatra se da na ovaj način omogućavaju klizanje celuloznih vlakana i povećanje ćelijskog zida. Svollenin, protein sličan ekspanzinu, sadrži N-terminalni domen porodice 1 modula za vezivanje ugljenih hidrata (CBD) i C-terminalni domen sličan ekspanzinu. Kao što je ovde opisano, protein sličan ekspanzinu ili protein sličan nabubrelu može da sadrži jedan ili oba takva domena i/ili može da poremeti strukturu ćelijskih zidova (kao što je narušavanje strukture celuloze), opciono bez stvaranja detektabilnih količina redukujućih šećera.
[0116] Protein izazvan celulozom, na primer polipeptidni proizvod cip1 ili cip2 gena ili sličnih gena (videti Foreman et al., J. Biol. Chem. 278(34), 31988-31997, 2003), protein koji integriše celulozu/celulozom , na primer polipeptidni proizvod cipA ili cipC gena, ili skela ili protein sličan skele. Skele i proteini koji integrišu celulozu su multifunkcionalne integracione podjedinice koje mogu da organizuju celulolitičke podjedinice u multienzimski kompleks. Ovo se postiže interakcijom dve komplementarne klase domena, tj. kohezionog domena na skeli i domena dokerina na svakoj enzimskoj jedinici. Podjedinica skele takođe nosi modul za vezivanje celuloze (CBM) koji posreduje vezivanje celulozoma za njegov supstrat. Protein koji integriše skelu ili celulozu može da sadrži jedan ili oba takva domena.
1
[0117] atalaza; izraz "katalaza" označava vodonik-peroksid: vodonik-peroksid oksidoreduktazu (EC 1.11.1.6 ili EC 1.11.1.21) koja katalizuje konverziju dva vodonikperoksida u kiseonik i dve vode. Aktivnost katalaze se može odrediti praćenjem razgradnje vodonik peroksida na 240 nm na osnovu sledeće reakcije: 2HzOz → 2H2O Oz. Reakcija se izvodi u 50 mM fosfata pH 7,0 na 25°C sa 10,3 mM supstrata (H2O2) i približno 100 jedinica enzima po ml. Apsorpcija se prati spektrofotometrijski u roku od 16-24 sekunde, što bi trebalo da odgovara smanjenju apsorpcije sa 0,45 na 0,4. Jedna jedinica aktivnosti katalaze se može izraziti kao jedan mikromol H2O2 razgrađenog u minuti na pH 7,0 i 25°C.
[0118] Termin "amilaza" kako se ovde koristi označava enzime koji hidrolizuju alfa-1,4 glukozidne veze u skrobu, i u amilozi i u amilopektinu, kao što je alfa-amilaza (EC 3.2.1.1), beta-amilaza (EC 3.2.1.2), glukan 1,4-alfaglukozidaza (EC 3.2.1.3), glukan 1,4 alfamaltotetraohidrolaza (EC 3.2.1.60), glukan 1,4-alfa-maltoheksaozidaza (EC 3.2.1.98), glukan 1,4-alfa-hidrolaza maltotriaza (EC 3.2.1.116) i glukan 1,4-alfa-maltohidrolaza (EC 3.2.1.133), i enzimi koji hidrolizuju alfa-1,6-glukozidne veze, koji su tačke grananja u amilopektinu, kao što je pululanaza (EC 3.2.1.41 ) i granična dekstinaza (EC 3.2.1.142).
[0119] Kompozicija za upotrebu u procesima kako je ovde opisano može da bude sastavljena od enzima (1) komercijalnih dobavljača; (2) klonirani geni koji eksprimiraju enzime; (3) bujon (kao što je onaj koji je rezultat rasta mikrobnog soja u medijumu, gde sojevi luče proteine i enzime u medijum; (4) ćelijski lizati sojeva uzgajanih kao u (3); i/ili (5) biljka materijal koji eksprimira enzime Različiti enzimi u kompoziciji prema pronalasku mogu se dobiti iz različitih izvora.
[0120] Enzimi se mogu proizvesti bilo egzogeno u mikroorganizmima, kvascima, gljivama, bakterijama ili biljkama, zatim izolovati i dodati, na primer, lignoceluloznom materijalu. Alternativno, enzim se može proizvesti u fermentaciji koja koristi (prethodno obrađeni) lignocelulozni materijal (kao što je kukuruzna peć ili pšenična slama) da obezbedi ishranu organizmu koji proizvodi enzim(e). Na ovaj način, biljke koje proizvode enzime mogu same da služe kao lignocelulozni materijal i da se dodaju u lignocelulozni materijal.
[0121] U upotrebama i procesima opisanim ovde, komponente gore opisanih kompozicija mogu biti obezbeđene istovremeno (tj. kao jedna kompozicija per se) ili odvojeno ili uzastopno.
[0122] U jednom aspektu, enzimska kompozicija je cela fermentaciona supa gljive, poželjno cela fermentaciona supa filamentozne gljive, poželjnije cela fermentaciona supa od Rasamsonia. Celokupna fermentaciona supa se može pripremiti od fermentacije nerekombinantnih i/ili rekombinantnih filamentoznih gljiva. U jednom aspektu, filamentozna gljiva je rekombinantna filamentozna gljiva koja sadrži jedan ili više gena koji mogu biti homologni ili heterologni filamentoznoj gljivi. U jednom aspektu, filamentozna gljiva je rekombinantna filamentozna gljiva koja sadrži jedan ili više gena koji mogu biti homologni ili heterologni filamentoznoj gljivici pri čemu jedan ili više gena kodiraju enzime koji mogu razgraditi celulozni supstrat. Cela fermentaciona bujon može da sadrži bilo koji od polipeptida opisanih gore ili bilo koju njihovu kombinaciju.
[0123] Poželjno, enzimska kompozicija je cela fermentaciona supa u kojoj su ćelije ubijene. Cela fermentaciona bujon može da sadrži organsku(e) kiselinu(e) (koje se koriste za ubijanje ćelija), ubijene ćelije i/ili ćelijske ostatke i medijum za kulturu.
[0124] Uopšteno, filamentozne gljive se kultivišu u medijumu za ćelijsku kulturu pogodnom za proizvodnju enzima sposobnih da hidrolizuju celulozni supstrat. Kultivacija se odvija u pogodnom hranljivom medijumu koji sadrži izvore ugljenika i azota i neorganske soli, primenom postupaka poznatih u tehnici. Pogodni medijumi za kulturu, temperaturni opseg i drugi uslovi pogodni za rast i proizvodnju celulaze i/ili hemicelulaze i/ili pektinaze su poznati u tehnici. Celokupni fermentacioni bujon se može pripremiti uzgajanjem filamentoznih gljiva
1
u stacionarnu fazu i održavanjem filamentoznih gljiva pod ograničenim uslovima ugljenika tokom vremenskog perioda koji je dovoljan za ekspresiju jedne ili više celulaza i/ili hemicelulaza i/ili pektinaza. Kada se enzimi, kao što su celulaze i/ili hemicelulaze i/ili pektinaze, luče od strane filamentoznih gljiva u medijum za fermentaciju, može se koristiti ceo bujon za fermentaciju. Cela fermentaciona bujon ovog pronalaska može da sadrži filamentozne gljive. U nekim realizacijama, ceo bujon od fermentacije sadrži nefrakcionisani sadržaj fermentacionih materijala dobijenih na kraju fermentacije. Tipično, ceo fermentacioni bujon se sastoji od istrošenog medijuma za kulturu i ostataka ćelija prisutnih nakon što se filamentozne gljive uzgajaju do zasićenja, inkubiraju pod uslovima koji ograničavaju ugljenik kako bi se omogućila sinteza proteina (posebno, ekspresija celulaza i/ili hemicelulaza i/ili pektinaza). U nekim realizacijama, ceo bujon za fermentaciju sadrži istrošeni medijum za ćelijsku kulturu, ekstracelularne enzime i filamentozne gljive. U nekim realizacijama, filamentozne gljive prisutne u celom fermentacionom bujonu mogu biti lizirane, permeabilizovane ili ubijene korišćenjem metoda poznatih u tehnici kako bi se proizvela cela fermentaciona supa koja je uništena ćelijama. U jednom aspektu, cela fermentaciona juha je cela fermentaciona juha uništena ćelija, pri čemu se cela fermentaciona supa koja sadrži ćelije filamentoznih gljiva lizira ili ubija. U nekim realizacijama, ćelije se ubijaju lizom filamentoznih gljivica hemijskim i/ili pH tretmanom kako bi se stvorila cela supa koja je ubijena ćelijama fermentacije filamentoznih gljiva. U nekim realizacijama, ćelije se ubijaju lizom filamentoznih gljiva hemijskim i/ili pH tretmanom i podešavanjem pH mešavine fermentacije uništene ćelijama na odgovarajući pH. U jednom aspektu, ceo bujon za fermentaciju sadrži prvu komponentu organske kiseline koja sadrži najmanje jednu organsku kiselinu od 1-5 ugljenika i/ili njenu so i drugu komponentu organske kiseline koja sadrži najmanje 6 ili više ugljeničnih organskih kiselina i/ili soli od toga. U jednom aspektu, prva komponenta organske kiseline je sirćetna kiselina, mravlja kiselina, propionska kiselina, njena so ili bilo koja njihova kombinacija, a druga komponenta organske kiseline je benzojeva kiselina, cikloheksankarboksilna kiselina, 4-metilvalerinska kiselina, fenilsirćetna kiselina, so ili bilo koju njihovu kombinaciju.
[0125] Termin "cela fermentaciona bujon" kako se ovde koristi odnosi se na preparat proizveden ćelijskom fermentacijom koji ne podleže nikakvom obnavljanju i/ili prečišćavanju ili je to minimalno. Na primer, cele fermentacione bujone se proizvode kada se mikrobne kulture uzgajaju do zasićenja, inkubiraju u uslovima koji ograničavaju ugljenik kako bi se omogućila sinteza proteina (npr. ekspresija enzima od strane ćelija domaćina) i izlučivanje u medijum ćelijske kulture. Tipično, ceo bujon za fermentaciju je nefrakcionisan i sadrži istrošeni medijum za ćelijsku kulturu, ekstracelularne enzime i mikrobne, poželjno neodržive ćelije.
[0126] Ako je potrebno, ceo fermentacioni bujon se može frakcionisati i može se koristiti jedan ili više frakcionisanih sadržaja. Na primer, ubijene ćelije i/ili ćelijski ostaci mogu da se uklone iz cele fermentacione bujone kako bi se dobila kompozicija koja ne sadrži ove komponente.
[0127] Cela fermentaciona bujon može dalje da sadrži konzervans i/ili antimikrobno sredstvo. Takvi konzervansi i/ili agensi su poznati u tehnici.
[0128] Cela fermentaciona bujon kao što je ovde opisano je tipično tečnost, ali može da sadrži nerastvorljive komponente, kao što su ubijene ćelije, ćelijski ostaci, komponente medija za kulturu i/ili nerastvorljive enzime. U nekim realizacijama, nerastvorljive komponente mogu da se uklone kako bi se dobila pročišćena cela fermentaciona supa.
[0129] U jednom aspektu, ceo bujon od fermentacije može da bude dopunjen sa jednom ili više enzimskih aktivnosti koje nisu eksprimirane endogeno, ili eksprimirane na relativno niskom nivou pomoću filamentoznih gljiva, kako bi se poboljšala degradacija celuloznog
1
supstrata, na primer, do fermentabilni šećeri kao što su glukoza ili ksiloza. Dodatni enzim(i) se može dodati kao dodatak celom fermentacionom bujonu i enzimi mogu biti komponenta odvojene cele fermentacione bujone, ili mogu biti prečišćeni, ili minimalno obnovljeni i/ili prečišćeni.
[0130] U jednom aspektu, ceo bujon za fermentaciju sadrži ceo fermentacioni bujon fermentacije rekombinantne filamentne gljive koja prekomerno ekspresuje jedan ili više enzima kako bi se poboljšala degradacija celuloznog supstrata. Alternativno, ceo bujon za fermentaciju može da sadrži mešavinu cele fermentacione bujone fermentacije nerekombinantne filamentne gljive i rekombinantne filamentne gljive koja prekomerno eksprimuje jedan ili više enzima kako bi se poboljšala degradacija celuloznog supstrata. U jednom aspektu, ceo bujon za fermentaciju sadrži ceo bujon za fermentaciju fermentacije filamentoznih gljivica koje prekomerno eksprimiraju beta-glukozidazu ili endoglukanazu. Alternativno, ceo bujon za fermentaciju za upotrebu u ovim metodama i reaktivnim kompozicijama može sadržati mešavinu cele fermentacione bujone fermentacije nerekombinantne filamentne gljive i cele fermentacione bujone fermentacije rekombinantne filamentne gljive koja prekomerno eksprimira beta -glukozidaza ili endoglukanaza.
[0131] Carbohydrate material kako se ovde koristi includes any starch i/ili sucrose i/ili celulose containing material. Preferably, carbohydrate material kako se ovde koristi includes lignocelulosic i/ili hemicelulosic material. Most preferably, carbohydrate material kako se ovde koristi is lignocelulosic material. Ugljenohidratni materijal pogodan za upotrebu u postupcima kao što su ove opisani uključuje biomasu, nmpr. devičansku biomasu i/ili nedevičansku biomasu, kao što je poljoprivredna biomasa, komercijalne organske materije agricultural biomass, commercial organics, construction i demolition debris, municipal solid waste, waste paper i yard waste. Uobičajene forme biomase uključuju drveće, žbunje i trave, pšenicu, raž, ječam, slamu, šećernu trsku, slamu šećerne trske ključuju drveće, žbunje i travu, pšenicu, raž, zob, pšeničnu slamu, šećernu trsku, slamu od šećerne trske, bagasu šećerne trske, travu, miskantus, energetsku trsku, manioku, melasu, ječam, kukuruz, kukuruznu pećnicu, kukuruzna vlakna, kukuruzne ljuske , klipovi kukuruza, stabljike repice, stabljike soje, slatki sirak, zrno kukuruza uključujući vlakna iz zrna, destilatori osušenih zrna (DDGS), proizvodi i nusproizvodi od mlevenja žitarica kao što su kukuruz, pšenica i ječam (uključujući mokro mlevenje i suvo mlevenje ) koji se često nazivaju „mekinje ili vlakna“, kao i komunalni čvrsti otpad, otpadni papir i otpad iz dvorišta. Biomasa takođe može da bude, ali nije ograničena na, zeljasti materijal, poljoprivredni ostaci, ostaci šumarstva, komunalni čvrsti otpad, otpadni papir i ostaci iz fabrike celuloze i papira. „Poljoprivredna biomasa“ obuhvata granje, žbunje, trske, kukuruz i kukuruzne ljuske, energetske useve, šume, voće, cveće, žitarice, travu, zeljaste useve, lišće, koru, iglice, trupce, korenje, mladice, kratkorotacione drvenaste useve, žbunje , menjač trave, drveća, povrća, kore voća, vinove loze, šećerne repe, pulpe šećerne repe, žitarica, ljuske ovsa i tvrdog i mekog drveta (ne uključujući šume sa štetnim materijalima). Pored toga, poljoprivredna biomasa uključuje organske otpadne materijale koji nastaju u poljoprivrednim procesima uključujući poljoprivredne i šumarske aktivnosti, posebno uključujući šumski drveni otpad. Poljoprivredna biomasa može da bude bilo koja od gore navedenih pojedinačno ili u bilo kojoj kombinaciji ili mešavini istih.
[0132] Prema pronalasku, ugljenohidratni materijal je prethodno tretiran pre tečenja. Metode prethodnog tretmana su poznate u tehnici i uključuju, ali nisu ograničene na, toplotnu, mehaničku, hemijsku modifikaciju, biološku modifikaciju i bilo koju njihovu kombinaciju. Predtretman se tipično izvodi kako bi se poboljšala dostupnost materijala ugljenih hidrata za enzimsku hidrolizu i/ili hidrolizu hemiceluloze i/ili rastvorila hemicelulozu i/ili celulozu i/ili lignin u materijalu ugljenih hidrata. U jednom primeru izvođenja, predtretman obuhvata
2
tretiranje ugljenih hidrata sa parnom eksplozijom, tretman toplom vodom ili tretman sa razblaženom kiselinom ili razblaženom bazom. Primeri metoda prethodnog tretmana uključuju, ali nisu ograničeni na, tretman parom (npr. tretman na 100-260°C, pri pritisku od 7-45 bara, pri neutralnom pH, tokom 1-10 minuta), tretman razblaženom kiselinom (npr. tretman). sa 0,1 - 5% H2SO4 i/ili SOz i/ili HNOs i/ili HCl, u prisustvu ili odsustvu pare, na 120-200°C, pod pritiskom od 2-15 bara, pri kiselom pH, za 2-30 minuta), organosolv tretman (npr. tretman sa 1 - 1,5% H2SO4 u prisustvu organskog rastvarača i pare, na 160-200°C, pod pritiskom od 7-30 bara, pri kiselom pH, 30-60 minuta), kreč tretman (npr. tretman sa 0,1 - 2% NaOH/Ca(OH)2 u prisustvu vode/pare na 60-160°C, pod pritiskom od 1-10 bara, pri alkalnom pH, tokom 60-4800 minuta), ARP tretman (npr. tretman sa 5 - 15% NH3, na 150 180°C, pri pritisku od 9-17 bara, pri alkalnom pH, tokom 10-90 minuta), AFEKS tretman (npr. tretman sa > 15% NH3, na 60-140°C, pri pritisku od 8-20 bara, pri alkalnom pH, 5-30 minuta). U jednom primeru izvođenja, predtretman se vrši u odsustvu kiseonika.
[0133] Ugljikohidratni materijal se može oprati. U jednom primeru izvođenja, ugljenohidratni materijal se može oprati nakon prethodnog tretmana. Korak ispiranja se može koristiti za uklanjanje jedinjenja rastvorljivih u vodi koja mogu delovati kao inhibitori za korak fermentacije i/ili hidrolize. Korak pranja može se izvesti na način poznat stručnjaku. Pored pranja, postoje i druge metode detoksikacije. Ugljenohidratni materijal se takođe može detoksikovati bilo kojom (ili bilo kojom kombinacijom) ovih metoda koje uključuju, ali nisu ograničene na, razdvajanje čvrste/tečne materije, vakuumsko isparavanje, ekstrakciju, adsorpciju, neutralizaciju, preoblikovanje, dodavanje redukcionih agenasa, dodavanje sredstava za detoksikaciju. enzimi kao što su lakaze ili peroksidaze, dodavanje mikroorganizama sposobnih za detoksikaciju hidrolizata.
[0134] Kompozicija enzima koja se koristi u procesu kao što je ovde opisano može izuzetno efikasno da hidrolizuje ugljenohidratni materijal, na primer kukuruznu slamu, pšeničnu slamu, slamu od trske i/ili bagasu šećerne trske, koji se zatim može dalje pretvoriti u proizvod, kao što je etanol, biogas , butanol, plastika, organska kiselina, rastvarač, dodatak hrani za životinje, farmaceutski proizvod, vitamin, amino kiselina, enzim ili hemijska sirovina. Pored toga, intermedijarni proizvodi iz procesa koji sledi nakon hidrolize, na primer mlečna kiselina kao intermedijer u proizvodnji biogasa, mogu se koristiti kao gradivni blok za druge materijale.
[0135] U jednom aspektu količina dodatog enzima (ovde se takođe naziva doza enzima ili opterećenje enzima) je niska. U jednom aspektu, količina enzima je 0,1 - 10 mg proteina/g suve materije. Protein se meri prema TCA-biuret analizi kao što je ovde opisano.
[0136] U jednom primeru izvođenja, likvefakcija se izvodi korišćenjem prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala koji ima težinu suve materije od 15 do 25% (težinski).
[0137] U jednom aspektu, fermentacija se vrši u reaktoru. U jednom primeru izvođenja, fermentacija se takođe može obaviti u dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset ili čak više reaktora. Dakle, izraz "reaktor" nije ograničen na jedan reaktor, već može da označava više reaktora.
[0138] U jednom primeru izvođenja, fermentacija se vrši u reaktoru zapremine 1 – 5000 m3. U slučaju da se više reaktora koristi u fermentaciji procesa kao što je ovde opisano, oni mogu imati istu zapreminu, ali takođe mogu imati različitu zapreminu.
[0139] U jednom primeru izvođenja, reaktor u kome se vrši fermentacija ima odnos visine i prečnika od 2:1 do 8:1.
[0140] U jednom primeru izvođenja, fermentaciju obavlja mikroorganizam koji proizvodi alkohol kako bi se proizveo alkohol. Fermentacija mikroorganizmom koji proizvodi alkohol kako bi se proizveo alkohol može se obaviti u istom reaktoru u kome se vrši hidroliza.
Poželjno je da se fermentacija mikroorganizmom koji proizvodi alkohol radi proizvodnje alkohola izvodi u posebnom reaktoru.
[0141] U jednom primeru izvođenja fermentaciju obavlja kvasac. U jednom primeru izvođenja mikroorganizam koji proizvodi alkohol je kvasac. U jednom primeru izvođenja mikroorganizam koji proizvodi alkohol je u stanju da fermentiše najmanje C5 šećer i najmanje C6 šečer. U jednom primeru izvođenja fermentacija se obavlja sa kvascem koji je u stanju da konvertuje najmanje jedan C5 šećer. U jednom primeru izvođenja proizvod u vidu šećera, kako je ovde opisan, sadrži glukozu, galaktozu i arabinozu. U jednom primeru izvođenja proizvod u vidu šećera, kako je ovde opisan, sadrži sirćetnu kiselinu, poželjno 0.3% (tež./tež.) ili više. U jednom primeru izvođenja, proizvod u vidu šećera, kako je ovde opisan, sadrži glicerol. U jednom primeru izvođenja, proizvod u vidu šećera, kako je ovde opisan, sadrži sirćetnu kiselinu, glicerol i C6 šećer i/ili C5 šećer. U jednom primeru izvođenja mikroorganizam koji se koristi za fermentaciju fermentiše sirćetnu kiselinu, glicerol i C6 šećer i/ili C5 šećer do fermentacionog proizvoda. U jednom primeru izvođenja, kvasac koji se koristi za fermentaciju fermentiše sirćetnu kiselinu, glicerol i C6 šećer i/ili C5 šećer do etanola. U jednom primeru izvođenja, proizvod u vidu šećera, kako je ovde opisan, sadrži Mn<2+>.
[0142] U daljem aspektu, patentna prijava uključuje postupak kao što je ovde opisan, u kome se mikroorganizam koristi za fermentaciju izvora ugljenika koji sadrži šećer(e), npr. glukozu, L-arabinozu, galaktozu i/ili ksilozu. Izvor ugljenika može da uključuje ugljenohidratni oligomer ili polimer koji sadrži jedinice L-arabinoze, galaktoze, ksiloze ili glukoze, kao što su, npr. lignoceluloza, ksilani, celuloza, skrob, arabinan i slično. U cilju oslobađanja jedinica ksiloze ili glukoze iz ovih ugljenih hidrata, pogodne karbohidraze (kao što su ksilanaze, glukanaze, amilaze i slično) mogu da se dodaju u fermentacioni medijum ili mogu da budu proizvedene od strane modifikovane ćelije-domaćina. U ovom drugom slučaju, modifikovana ćelija-domaćin može da bude izmenjena genteskim inženjeringom tako da proizvodi i sekretuje ove karbohidraze. Dodatna prednost upotrebe oligomernih ili polimernih izvora glukoze je to što ona omogućava da se tokom fermentacije održavaju niske(niže) koncentracije slobodne glukoze, npr. tako što se koriste količine karbohidraza koje ograničavaju brzinu. Ovo će, sa svoje strane, sprečiti represiju sistema koji su neophodni za metabolizam i transport neglukoznih šećera kao što je ksiloza. U jednom primeru izvođenja, modifikovana ćelija-domaćin fermentiše i L-arabinozu (opciono ksilozu) i glukozu, poželjno istovremeno, u kom slučaju se poželjno koristi modifikovana ćelija-domaćin koja je neosetljiva na represiju glukoze, kako bi bio sprečen diauksični rast. Osim izvora L-arabinoze, opciono ksiloze (i glukoze) kao izvora ugljenika, fermentacioni medijum će dodatno sadržati pogodni sastojak koji je neophodan za rast modifikovane ćelije-domaćina.
[0143] Proces fermentacije može da bude aerobni ili anaerobni proces fermentacije. Proces anaerobne fermentacije je ovde definisan kao proces fermentacije koji se odvija u odsustvu kiseonika ili u kome se kiseonik praktično ne troši, poželjno, troši se manje od 5, 2,5 ili 1 mmol/L/h, poželjnije 0 mmol/L/h. (tj. potrošnja kiseonika se ne može detektovati), a pri čemu organski molekuli služe i kao donori elektrona i kao akceptori elektrona. U nedostatku kiseonika, NADH proizveden u glikolizi i formiranju biomase, ne može da se oksiduje oksidativnom fosforilacijom. Da bi rešili ovaj problem, mnogi mikroorganizmi koriste piruvat ili jedan od njegovih derivata kao akceptor elektrona i vodonika i na taj način regenerišu NAD+. Dakle, u poželjnom procesu anaerobne fermentacije piruvat se koristi kao elektron (i akceptor vodonika) i redukuje se do proizvoda fermentacije kao što su etanol, mlečna kiselina, 3-hidroksi-propionska kiselina, akrilna kiselina, sirćetna kiselina, ćilibarna kiselina, limunska kiselina, jabučna kiselina, fumarna kiselina, aminokiselina, 1,3-propan-diol, etilen, glicerol, butanol, β-laktamski antibiotik i cefalosporin. U poželjnom primeru izvođenja, proces fermentacije je anaeroban. Anaeroban proces je povoljan, jer je jeftiniji od aerobnih procesa: potrebno je manje specijalizovane opreme. Štaviše, očekuje se da će anaerobni procesi dati veći prinos proizvoda od aerobnih procesa. U aerobnim uslovima, obično je prinos biomase veći nego u anaerobnim uslovima. Kao posledica toga, obično u aerobnim uslovima, očekivani prinos proizvoda je niži nego u anaerobnim uslovima.
[0144] U drugom primeru izvođenja, postupak fermentacije je u uslovima ograničenog kiseonika. Poželjnije, proces fermentacije je aeroban i pod uslovima ograničenog kiseonika. Proces fermentacije ograničen kiseonikom je proces u kome je potrošnja kiseonika ograničena prenosom kiseonika iz gasa u tečnost. Stepen ograničenja kiseonika je određen količinom i sastavom ulaznog toka gasa, kao i stvarnim svojstvima mešanja/prenosa mase korišćene opreme za fermentaciju. Poželjno, u procesu pod uslovima ograničenim kiseonikom, brzina potrošnje kiseonika je najmanje 5,5, poželjnije najmanje 6 i još poželjnije najmanje 7 mmol/L/h. U jednom rešenju, fermentacija je anaerobna.
[0145] Postupak fermentacije se poželjno izvodi na temperaturi optimalnoj za mikroorganizam koji se koristi. Tako, za većinu kvasaca ili gljivičnih ćelija, postupak fermentacije se izvodi na temperaturi koja je manja od 42°C, poželjno 38°C ili niža. Za ćelije domaćina kvasca ili filamentoznih gljiva, postupak fermentacije se poželjno izvodi na temperaturi koja je niža od 35, 33, 30 ili 28°C i na temperaturi koja je viša od 20, 22 ili 25°C. U jednom primeru izvođenja fermentacija se izvodi između 25°C i 35°C.
[0146] U jednom primeru izvođenja, fermentacije se sprovode sa fermentišućim mikroorganizmom. U jednom primeru izvođenja prema pronalasku, alkoholne (npr. etanolne) fermentacije C5 šećera se sprovode sa C5 fermentišućim mikroorganizmom. U jednom primeru izvođenja prema pronalasku, alkoholne (npr. etanolne) fermentacije C6 šećera se sprovode sa C5 fermentišućim mikroorganizmom ili komercijalnim C6 fermentišućim mikroorganizmom. Komercijalno dostupni kvasci pogodni za proizvodnju etanola uključuju, ali nisu ograničeni na, BIOFERM<™>AFT i XR (NABC-North American Bioproducts Corporation, GA, SAD), ETANOL RED<™>kvasac (Fermentis/Lesaffre, SAD), FALI<™>(Fleischmann’s Yeast, SAD), FERMIOL<™>(DSM Specialties), GERT STRAND<™>(Gert Strand AB, Švedska), i SUPERSTART<™>i THERMOSACC<™>sveži kavasac (Etanol Technology, WI, SAD).
[0147] U jednom primeru izvođenja, mikrooranizam koji proizvodi alkohol je mikroorganizam koji je u stanju da fermentiše najmanje jedan C5 šećer. Poželjno, takođe je u stanju da fermentiše najmanje jedan C6 šećer. U jednom primeru izvođenja, patentna prijava opisuje postupak za pripremu etanola iz lignoceluloznog materijala, koji obuhvata korake (a) izvođenja postupka za pripremu proizvoda u vidu šečera iz lignoceluloznog materijala kao što je opisano prethodno u tekstu, (b) fermentacije proizvoda u vidu šećera kako bi se proizveo etanol; i (c) opciono, izdvajanja etanola. Fermentacija može da se obavlja pomoću kvasca koji je u stanju da fermentiše najmanje jedan C5 šećer.
[0148] Mikroorganizam koji se koristi u fermentaciji može da bude prokariotski ili eukariotski organizam. Mikroorganizam koji se koristi može da bude mikroorganizam izmenjen genetičkim inženjeringom. Primeri pogodnih mikroorganizama su kvasci, na primer Saccharomyces, npr. Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces pastorianus ili Saccharomyces uvarum, Hansenula, Issatchenkia, npr. Issatchenkia orientalis, Pichia, npr. Pichia stipites ili Pichia pastoris, Kluyveromyces, npr. Kluyveromyces fagilis, Candida, npr. Candida pseudotropicalis ili Candida acidothermophilum, Pachysolen, npr. Pachysolen tannophilus ili bakterije, na primer Lactobacillus, npr. Lactobacillus lactis, Geobacillus, Zymomonas, npr. Zymomonas mobilis, Clostridium, npr. Clostridium phytofermentans, Escherichia, npr. E. coli, Klebsiella, npr. Klebsiella oxytoca. U jednom primeru izvođenja, mikroorganizam koji je u stanju da fermetiše najmanje jedan C5 šećer je kvasac. U jednom
2
primeru izvođenja, kvasac pripada rodu Saccharomyces, poželjno vrsti Saccharomyces cerevisiae. Kvasac, npr. Saccharomyces cerevisiae, koji se koristi u postupku kao što je ovde opisan, u stanju je da konvertuje heksozne (C6) šećere i pentozne (C5) šećere. Kvasac, npr. Saccharomyces cerevisiae, koji se koristi u postupku kao što je ovde opisan može anaerobno da fermetniše najmanje jedan C6 šećer i najmanje jedan C5 šećer. U jednom primeru izvođenja, kvasac kao što je ovde opisan je u stanju da, osim glukoze, anaerobno koristi L-arabinozu i ksilozu. U jednom primeru izvođenja, kvasac je u stanju da konvertuje L-arabinozu u L-ribulozu i/ili ksilulozu 5-fosfat i/ili u željeni fermentacioni proizvod, na primer do etanola. Organizmi, na primer sojevi Saccharomyces cerevisiae, koji su u stanju da proizvode etanol od L-arabinoze mogu da se proizvode tako što se modifikuje kvasacdomaćin time što se uvedu araA (L-arabinozo izomeraza), araB (L-ribuloglioksalat) i araD (L-ribuloza-5-P4-epimeraza) geni iz pogodnog izvora. Ovi geni mogu da se uvedu u ćelijudomaćina tako da ona postane sposobna da koristi arabinozu. Ovaj pristup je naveden i opisan u WO2003/095627. araA, araB i araD geni iz Lactobacillus plantarum mogu da se koriste i prikazani su u WO2008/041840. araA gen iz Bacillus subtilis i araB i araD geni iz Escherichia coli mogu da se koriste i prikazani su u EP1499708. U drugom primeru izvođenja, araA, araB i araD geni mogu da se izvedu iz najmanje jednog od rodova Clavibacter, Arthrobacter i/ili Gramella, naročito jedne od vrsta Clavibacter michiganensis, Arthrobacter aurescens i/ili Gramella forsetii, kao što je prikazano u WO 2009011591. U jednom primeru izvođenja, kvasac takođe može da sadrži jednu ili više kopija gena za ksilozo izomerazu i/ili jednu ili više kopija ksilozo reduktaze i/ili ksilitol dehidrogenaze.
[0149] Kvasac može da sadrži jednu ili više genetskih modifikacija koje bi mu omogućile da fermentira ksilozu. Primeri genetskih modifikacija su uvođenje jednog ili više xylA-gena, XYL1 gena i XYL2 gena i/ili XKS1-gena; delecija gena za reduktazu aldoze (GRE3); prekomerna ekspresija PPP gena TAL1, TKL1, RPE1 i RKI1 kako bi se omogućilo povećanje fluksa kroz petozofosfatni put u ćeliji. Primeri kvasca koji je izmenjen genetskim inženjeringom su opisani u EP1468093 i/ili WO2006/009434.
[0150] Primer pogodnog komercijalnog kvasca je RN1016 koji predstavlja soj kvasca Saccharomyces cerevisiae iz DSM, Holandija, koji fermentiše ksilozu i glukozu.
[0151] U jednom aspektu, proces fermentacije za proizvodnju etanola je anaeroban. Anaerobno je prethodno definisano u tekstu. U drugom aspektu, proces fermentacije za proizvodnju etanola je aeroban. U drugom aspektu, proces fermentacije za proizvodnju etanola je u uslovima ograničenim kiseonikom, npr. aerobni i pod uslovima sa ograničenim kiseonikom. Uslovi ograničeni kiseonikom su već ranije definisani.
[0152] Alternativno, u vezi sa prethodno opisanim postupcima fermentacije, mogu se koristiti najmanje dve različite ćelije, što znači da je ovaj proces proces kofermentacije. Svi primeri izvođenja postupka fermentacije kao što je opisano prethodno u tekstu, takođe su i primeri izvođenja ovog procesa kofermentacije: identitet proizvoda, identitet izvora L-arabinoze i izvora ksiloze, uslovi fermentacije (aerobni ili anaerobni uslovi, uslovi sa ograničenim kiseonikom, temperatura na kojoj se odvija postupak, produktivnost etanola, prinos etanola).
[0153] Fermentacioni proizvodi koji mogu da se proizvedu postupcima prema pronalasku mogu da budu bilo koja supstanca dobijena fermentacijom. Oni uključuju, ali nisu ograničeni na, alkohol (kao što je arabinitol, butanol, etanol, glicerol, metanol, 1,3-propandiol, sorbitol i ksilitol); organsku kiselinu (kao što je sirćetna kiselina, acetonska kiselina, adipinska kiselina, askorbinska kiselina, akrilna kiselina, limunska kiselina, 2,5-diketo-D-glukonska kiselina, mravlja kiselina, fumarna kiselina, glukarna kiselina, glukonska kiselina, glukuronska kiselina, glutarna kiselina, 3-hidroksipropionska kiselina, itakonska kiselina, mlečna kiselina, maleinska kiselina, jabučna kiselina, malonska kiselina, oksalna kiselina, oksalosirćetna kiselina, propionska kiselina, ćilibarna kiselina i ksilonska kiselina); ketone (kao što je aceton); aminokiseline (kao što su asparaginska kiselina, glutaminska kiselina, glicin, lizin, serin, triptofan i treonin); alkane (kao što su pentan, heksan, heptan, oktan, nonan, dekan, undekan i dodekan), cikloalkane (kao što su ciklopentan, cikloheksan, cikloheptan i ciklooktan), alkene (kao što su penten, heksen, hepten i okten); i gasove (kao što su metan, vodonik (H2), ugljen-dioksid (CO2) i ugljen-monoksid (CO)). Fermentacioni proizvod takođe može da bude protein, vitamin, farmaceutik, dodatak hrani za životinje, specijalna hemikalija, hemijska sirovina, plastika, rastvarač, etilen, enzim, kao što je proteaza, celulaza, amilaza, glukanaza, laktaza, lipaza, liaza, oksidoreduktaza, transferaza ili ksilanaza. U poželjnom primeru izvođenja, u postupcima fermentacije kako je ovde opisano priprema se alkohol. U poželjnom primeru izvođenja, u procesima fermentacije kako je ovde opisano priprema se etanol.
[0154] Procesi kako su ovde opisani mogu da obuhvataju izdvajanje svih vrsta proizvoda napravljenih tokom procesa uključujući fermentacione proizvode kao što je etanol. Fermentacioni proizvod može da se odvoji od fermentacionog bujona na način koji je stručnjaku poznat. Primeri tehnika za dobijanje uključuju, ali nisu ograničeni na, hromatografiju, elektroforetske procedure, diferencijalnu rastvorljivost, destilaciju ili ekstrakciju. Za svaki fermentacioni proizvod stručnjak će tako moći da izabere odgovarajuću tehniku razdvajanja. Na primer, etanol može da se izdvoji iz bujona za fermentaciju kvasca destilacijom, na primer destilacijom vodenom parom/vakuum destilacijom na konvencionalni način.
[0155] U jednom primeru izvođenja postupci kao što su ovde opisani takođe proizvode energiju, toplotu, elektricitet i/ili paru.
PRIMERI
Primer 1
Efekat temperature likvefakcije i saharifikacije na proizvodnju glukoze
[0156] Efekat temperature tokom likvefakcije i saharifikacije lignoceluloznog materijala je prikazan u ovom Primeru.
[0157] Eksperimenti su rađeni u reaktorima sa mešanjem, sa kontrolom pH i temperature, radne zapremine od 1 l. Svaki eksperiment je izveden sa 2,5 mg proteina/gramu suve materije lignoceluloznog materijala prethodno tretiranog koktelom celulaze iz Rasamsonia emersonii plus 0,2 mg proteina/g suve materije lignoceluloznog materijala prethodno tretiranog betaglukozidazom iz Rasamsonia emersonii.
[0158] Koncentracija proteina je određena korišćenjem Biuret metode. Uzorci su razblaženi na osnovu težine pomoću vode i centrifugirani 5 minuta na >14000xg. Razblaženja goveđeg serumskog albumina (BSA) (0,5, 1, 2, 5, 10 i 15 mg/ml) su napravljena da bi se generisala kalibraciona kriva. Od svakog razblaženog uzorka proteina (BSA i koktela), 200 μl supernatanta je prebačeno u reakcionu epruvetu od 1,5 ml. Dodato je 800 μl BioQuant Biuret reagensa i dobro promešano. Iz istog razblaženog uzorka proteina, 500 μl je dodato u reakcionu epruvetu koja sadrži filter od 10 KD. 200 μl efluenta je prebačeno u reakcionu epruvetu od 1,5 ml, dodato je 800 μl BioQuant Biuret reagensa i dobro promešano. Zatim su sve smeše (razređeni uzorci proteina pre i posle 10KD filtracije pomešani sa BioQuant reagensom) inkubirane na sobnoj temperaturi najmanje 30 minuta. Apsorbanca smeša je merena na 546 nm pri čemu je uzorak vode korišćen kao blank merenje. Razblaženja koktela koji su dala vrednost apsorbance na 546 nm unutar opsega kalibracione linije korišćena su za izračunavanje ukupne koncentracije proteina u uzorcima preko BSA kalibracione linije.
2
[0159] Koktel celulaze iz Rasamsonia emersonii proizveden je prema metodama opisanim u WO2011/000949. U eksperimentima je korišćena beta-glukozidaza iz Rasamsonia emersonii kao što je opisano u WO2012/000890. Dodavanje enzima je urađeno na početku likvefakcije.
[0160] Kukuruzna stočna hrana (aCS) prethodno tretirana kiselinom, napravljena je inkubacijom kukuruza 6,7 minuta na 186°C. Pre termičke obrade, kukuruzna stočna hrana je impregniran sa H2SO4tokom 10 minuta da bi se pH podesio na 2,3 tokom prethodnog tretmana. Količina glukana u prethodno tretiranom lignoceluloznom materijalu je merena prema metodi koju su opisali Carvalho de Souza et al. (Carbohydrate Polimers, 95 (013) 657-663).). Reakcije hidrolize su izvedene sa kukuruznom stočnom hranom koja je prethodno tretirana kiselinom (aCS) u konačnoj koncentraciji od 17% (tež./tež.) suve materije. Rastvor sirovine je pripremljen razblaživanjem koncentrovanog rastvora sirovine vodom. Nakon toga, pH je podešen na pH 4,5 pomoću 10% (tež./tež.) rastvora NH4OH.
[0161] Prvo, prethodno obrađeni lignocelulozni materijal je podvrgnut likvefakciji tokom 6 sati. Tokom ovog perioda, gornji prostor reaktora je ispran azotom. Zatim je tečni lignocelulozni materijal podvrgnut saharifikaciji tokom 114 sati, dok je gornji prostor reaktora ispran vazduhom brzinom od 0,1 l/min. Tokom saharifikacije, nivo rastvorenog kiseonika (DO) u reakcionoj smeši je održavan na 20% nivoa zasićenosti kiseonikom tako što je podešavana brzina mešanja. Eksperimenti su sprovedeni sa temperaturama likvefakcije i saharifikacije kao što je prikazano u Tabeli 1.
[0162] Nakon saharifikacije, uzorci su uzimani za analizu. Uzorci su ohlađeni na ledu, centrifugirani 10 minuta na 3220xg i po 50 μl svakog supernatanta je razblaženo u 1450 μl vode stepena čistoće I. Razblaženi supernatant je zatim filtriran filterom od 0.45 μm i sadržaj šećera u filtratima je analiziran kao što je opisano u nastavku teksta.
[0163] Koncentracije šećera u razblaženim uzorcima su merene HPLC tehnikom uz pomoć Aminex HPX-87P, prema NREL tehničkom izveštaju NREL/TP-510 42623. Rezultati su prikazani u Tabeli 1.
[0164] Podaci pokazuju da su najviši nivoi glukoze dobijeni kada je temperatura likvefakcije od 60°C do 65°C, a temperatura saharifikacije od 50°C do 60°C.
Primer 2
Efekat temperature likvefakcije i saharifikacije na proizvodnju glukoze
[0165] Eksperiment je urađen kao što je opisano u Primeru 1, s tim da je nivo glukoze meren na uzorcima koji su uzimani nakon 54.5 sati. Rezultati su prikazani u Tabeli 2.
[0166] Podaci pokazuju da su najviši nivoi glukoze dobijeni kada je temperatura likvefakcije od 60°C do 65°C, a temperatura saharifikacije od 50°C do 60°C.
Primer 3
Efekat temperature likvefakcije i saharifikacije na proizvodnju glukoze
[0167] Eksperiment je urađen kao što je opisano u Primeru 1, s tim da je svaki eksperiment izveden sa koktelom celulaze Ctec2 (mešavina enzima SAE0020 kompanije Novozymes) koji je nabavljen od kompanije Sigma-Aldrich. Ctec2 je enzimski koktel iz Trichoderma reesei koji sadrži celulaze, ß-glukozidaze i hemicelulazu. Osim toga, u ovom eksperimentu nivo rastvorenog kiseonika (DO) u reakcionoj smeši tokom saharifikacije održavan je na oko 40% zasićenosti kiseonikom. Pored toga, u ovom eksperimentu rastvor sirovine je pripremljen razblaživanjem koncentrovanog rastvora sirovine vodom. Nakon toga, pH je podešen na pH
2
5,0 pomoću 10% (tež./tež.) rastvora NH4OH. Temperature likvefakcije i saharifikacije koje su korišćene, kao i rezultati, prikazani su u Tabeli 3.
[0168] Podaci pokazuju da su najviši nivoi glukoze sa koktelom celulaza iz Trichoderma reesei dobijeni kada je temperatura likvefakcije od 60°C do 65°C, a temperatura saharifikacije od 50°C do 60°C.
Tabela 1: Proizvodnja glukoze na različitim temperaturama likvefakcije i saharifikacije, nakon 120 sati.
Tabela 2: Proizvodnja glukoze na različitim temperaturama likvefakcije i saharifikacije, nakon 54.5 sati.
Tabela 3: Proizvodnja glukoze na različitim temperaturama likvefakcije i saharifikacije, nakon 120 sati.
2

Claims (16)

Patentni zahtevi
1. Postupak za pripremu proizvoda u vidu šećera, od ugljenohidratnog materijala, koji obuhvata sledeće korake:
a) prethodni tretman ugljenohidratnog materijala,
b) likvefakciju prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 60°C do 65°C u trajanju od 1 do 20 sati kako bi se proizveo utečnjeni ugljenohidratni materijal,
c) saharifikaciju utečnjenog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C u trajanju od 1 do 120 sati kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera, pri čemu se tokom saharifikacije dodaje kiseonik, i
d) opciono, izdvajanje proizvoda u vidu šećera.
2. Postupak za pripremu fermentacionog proizvoda, od ugljenohidratnog materijala, koji obuhvata sledeće korake:
a) prethodni tretman ugljenohidratnog materijala,
b) likvefakciju prethodno tretiranog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 60°C do 65°C u trajanju od 1 do 20 sati kako bi se proizveo utečnjeni ugljenohidratni materijal,
c) saharifikaciju utečnjenog ugljenohidratnog materijala enzimskom kompozicijom na temperaturi od 50°C do 60°C u trajanju od 1 do 120 sati kako bi se proizveo proizvod u vidu šećera, pri čemu se tokom saharifikacije dodaje kiseonik,
d) fermentaciju proizvoda u vidu šećera kako bi se proizveo fermentacioni proizvod; i e) opciono, izdvajanje fermentacionog proizvoda.
3. Postupak prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačen time što se posle koraka b i pre koraka c, utečnjeni ugljenohidratni materijal saharifikuje bez dodavanja kiseonika.
4. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, naznačen time što enzimska kompozicija sadrži endoglukanazu.
5. Postupak prema patentnom zahtevu 4, naznačen time što endoglukanaza sadrži GH5 endoglukanazu i/ili GH7 endoglukanazu.
6. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačen time što su enzimske kompozicije koje se koriste za likvefakciju i saharifikaciju iste.
7. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačen time što su enzimske kompozicije koje se koriste za likvefakciju i saharifikaciju različite.
8. Postupak prema patentnom zahtevu 7, naznačen time što enzimska kompozicija koja se koristi za likvefakciju sadrži više endoglukanaze nego enzimska kompozicija koja se koristi za saharifikaciju.
9. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, naznačen time što je enzimska kompozicija koja se koristi u saharifikaciji ceo fermentacioni bujon filamentozne gljive, pri čemu navedeni bujon sadrži celobiohidrolazu, beta-glukozidazu, ksilanazu, beta-ksilozidazu i litičku monosaharid oksigenazu.
2
10. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, naznačen time što se likvefakcija obavlja na prethodno tretiranom ugljenohidratnom materijalu sa težinom suve materije od 15 do 25% (tež./tež.).
11. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 2 do 10, naznačen time što se fermentacija obavlja pomoću kvasca koji je u stanju da konvertuje najmanje jedan C5 šećer.
12. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, naznačen time što se likvefakcija i fermentacija obavljaju u različitim reaktorima.
13. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12, naznačen time što korak c obuhvata temperature od 52°C do 58°C.
14. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 3 do 13, naznačen time što se utečnjeni ugljenohidratni materijal saharifikuje bez dodavanja kiseonika na temperaturi od 55°C do 65°C tokom 1 do 120 sati.
15. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, naznačen time što se prethodni tretman obavlja u odsustvu kiseonika.
16. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 15, naznačen time što se kiseonik dodaje tokom saharifikacije kako bi se rastvoreni kiseonik održavao na 11% do 80% nivoa saturacije.
Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20230300A 2018-05-30 2019-05-29 Postupak za proizvodnju šećera iz ugljenohidratnih materijala RS64143B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP18175158 2018-05-30
EP19164364 2019-03-21
PCT/EP2019/063917 WO2019229108A1 (en) 2018-05-30 2019-05-29 Process for producing sugars from carbohydrate materials
EP19728618.0A EP3802843B1 (en) 2018-05-30 2019-05-29 Process for producing sugars from carbohydrate materials

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64143B1 true RS64143B1 (sr) 2023-05-31

Family

ID=66770445

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230300A RS64143B1 (sr) 2018-05-30 2019-05-29 Postupak za proizvodnju šećera iz ugljenohidratnih materijala

Country Status (14)

Country Link
EP (1) EP3802843B1 (sr)
CN (1) CN112204151B (sr)
BR (1) BR112020024109B1 (sr)
CA (1) CA3099202A1 (sr)
DK (1) DK3802843T3 (sr)
ES (1) ES2944736T3 (sr)
FI (1) FI3802843T3 (sr)
HR (1) HRP20230442T1 (sr)
HU (1) HUE061611T2 (sr)
LT (1) LT3802843T (sr)
PL (1) PL3802843T3 (sr)
RS (1) RS64143B1 (sr)
SI (1) SI3802843T1 (sr)
WO (1) WO2019229108A1 (sr)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4015641A1 (en) * 2020-12-16 2022-06-22 Clariant Produkte (Deutschland) GmbH Process for the production of a filamentous fungus whole broth enzyme composition with low biomass formation and high protein yield
EP4015640A1 (en) * 2020-12-16 2022-06-22 Clariant Produkte (Deutschland) GmbH Process for the production of a filamentous fungus whole broth enzyme composition with low viscosity
EP4015642A1 (en) * 2020-12-16 2022-06-22 Clariant Produkte (Deutschland) GmbH Process for the production of a filamentous fungus whole broth enzyme composition with low biomass formation and high protein yield

Family Cites Families (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5648263A (en) 1988-03-24 1997-07-15 Novo Nordisk A/S Methods for reducing the harshness of a cotton-containing fabric
US5110735A (en) 1989-09-26 1992-05-05 Midwest Research Institute Thermostable purified endoglucanase from thermophilic bacterium acidothermus cellulolyticus
US5275944A (en) 1989-09-26 1994-01-04 Midwest Research Institute Thermostable purified endoglucanas from acidothermus cellulolyticus ATCC 43068
US5536655A (en) 1989-09-26 1996-07-16 Midwest Research Institute Gene coding for the E1 endoglucanase
DK115890D0 (da) 1990-05-09 1990-05-09 Novo Nordisk As Enzym
ES2322032T3 (es) 1990-12-10 2009-06-16 Genencor Int Sacrificacion mejorada de celulosa por clonacion y amplificacion del gen de beta-glucosidasa de trichoderma reesei.
ATE258224T1 (de) 1993-03-10 2004-02-15 Novozymes As Enzyme mit xylanaseaktivität aus aspergillus aculeatus
US20030044956A1 (en) 1995-08-23 2003-03-06 Short Jay M. Enzymes having carboxymethyl cellulase activity and methods of use thereof
US6451063B1 (en) 1996-09-25 2002-09-17 Genencor International, Inc. Cellulase for use in industrial processes
US6017870A (en) 1996-10-09 2000-01-25 Genencor International, Inc. Purified cellulase and method of producing
US7883872B2 (en) 1996-10-10 2011-02-08 Dyadic International (Usa), Inc. Construction of highly efficient cellulase compositions for enzymatic hydrolysis of cellulose
US5811381A (en) 1996-10-10 1998-09-22 Mark A. Emalfarb Cellulase compositions and methods of use
NZ502444A (en) 1997-07-31 2001-11-30 Dsm N Polypeptides with cellobiohydrolase activity (CBH A and CBH B) from Aspergillus
US5871550A (en) 1997-08-26 1999-02-16 Genencor International, Inc. Mutant Thermonospora spp. cellulase
JP2001523464A (ja) 1997-11-19 2001-11-27 ジェネンコア インターナショナル インコーポレーテッド 放線菌類により産生されるセルラーゼとその産生方法
NZ505295A (en) 1997-12-16 2002-12-20 Genencor Int A method of identifying cellulase gene sequences using conserved amino acid sequence fragments from known cellulase enzymes to provide primer nucleotide sequences
EP1179051A4 (en) 1999-05-19 2003-04-23 Midwest Research Inst ENDOGLUCANASE E1 VARIANTS: Y245G, Y82R AND W42R
WO2001070998A1 (en) 2000-03-20 2001-09-27 Dsm N.V. Talaromyces emersonii beta-glucanases
US7514110B1 (en) 2000-09-21 2009-04-07 Basf Aktiengesellschaft Talaromyces xylanases
EP1395653A2 (en) 2001-05-18 2004-03-10 Novozymes A/S Polypeptides having cellobiase activity and polynucleotides encoding same
US6982159B2 (en) 2001-09-21 2006-01-03 Genencor International, Inc. Trichoderma β-glucosidase
US7049125B2 (en) 2001-12-18 2006-05-23 Genencor International, Inc. EGVIII endoglucanase and nucleic acids encoding the same
US7045331B2 (en) 2001-12-18 2006-05-16 Genencor International, Inc. EGVII endoglucanase and nucleic acids encoding the same
US7056721B2 (en) 2001-12-18 2006-06-06 Genencor International, Inc. EGVI endoglucanase and nucleic acids encoding the same
US7045332B2 (en) 2001-12-18 2006-05-16 Genencor International, Inc. BGL4 β-glucosidase and nucleic acids encoding the same
US7005289B2 (en) 2001-12-18 2006-02-28 Genencor International, Inc. BGL5 β-glucosidase and nucleic acids encoding the same
DE60325457D1 (de) 2002-01-23 2009-02-05 Royal Nedalco B V Fermentation von pentosezuckern
SE0202090D0 (sv) 2002-05-08 2002-07-04 Forskarpatent I Syd Ab A modifierd yeast consuming L-arabinose
DK2305801T3 (en) 2002-08-16 2017-10-09 Danisco Us Inc Hitherto UNKNOWN HYPOCREA JECORINA-CBH1 CELLULASES
AU2003291395A1 (en) 2002-11-07 2004-06-03 Genencor International, Inc. Bgl6 beta-glucosidase and nucleic acids encoding the same
US7407788B2 (en) 2002-11-21 2008-08-05 Danisco A/S, Genencor Division BGL7 beta-glucosidase and nucleic acids encoding the same
CN1898381B (zh) 2003-03-21 2013-07-17 金克克国际有限公司 Cbh1同源物和cbh1纤维素酶变体
EP2385104A1 (en) 2003-04-01 2011-11-09 Danisco US Inc. Variant Scytalidium thermophilium CBH1
EP1627049B1 (en) 2003-05-29 2010-02-17 Genencor International, Inc. Novel trichoderma genes
DK1682656T3 (da) 2003-10-28 2013-11-18 Novozymes Inc Polypeptider med beta-glucosidaseaktivitet og polynukleotider, der koder for dem
ES2469840T3 (es) 2004-01-30 2014-06-20 Novozymes Inc. Polip�ptidos con actividad de mejora celulol�tica y polinucle�tidos que los codifican
CN103667215A (zh) 2004-02-06 2014-03-26 诺维信股份有限公司 具有增强分解纤维素活性的多肽和编码所述多肽的多核苷酸
WO2006078256A2 (en) 2004-02-12 2006-07-27 Novozymes, Inc. Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
US8097445B2 (en) 2004-03-25 2012-01-17 Danisco Us Inc. Exo-endo cellulase fusion protein
CN1930294A (zh) 2004-03-25 2007-03-14 金克克国际有限公司 纤维素酶融合蛋白和编码该纤维素酶融合蛋白的异源纤维素酶融合构建物
ES2607891T3 (es) 2004-07-16 2017-04-04 Dsm Ip Assets B.V. Ingeniería metabólica de células eucariotas que fermentan xilosa
DK2292747T3 (en) 2004-12-30 2017-04-24 Danisco Us Inc CBH2 CELLULASE VARIETIES OF HYPOCREA JECORINA
AR053066A1 (es) 2005-04-26 2007-04-18 Novozymes As Arabinofuranosidasas
WO2006117432A1 (en) 2005-04-29 2006-11-09 Ab Enzymes Oy Improved cellulases
US8097772B2 (en) 2005-08-04 2012-01-17 Novozymes, Inc. Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
KR20080069980A (ko) 2005-09-30 2008-07-29 노보자임스 인코포레이티드 셀룰로오스성 물질의 분해 또는 전환을 증진하는 방법
FI120045B (fi) 2005-12-22 2009-06-15 Roal Oy Selluloosamateriaalin käsittely ja siinä käyttökelpoiset entsyymit
DK1969123T3 (en) 2005-12-22 2017-08-28 Ab Enzymes Oy Hitherto UNKNOWN ENZYMS
US8304212B2 (en) 2006-07-10 2012-11-06 Dyadic International, Inc. Methods and compositions for degradation of lignocellulosic material
CN101516906B (zh) 2006-07-21 2013-11-06 诺维信股份有限公司 提高具有生物学活性之多肽的分泌的方法
EA016303B1 (ru) 2006-10-02 2012-04-30 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Метаболическая инженерия сбраживающих арабинозу дрожжевых клеток
WO2008148131A1 (en) 2007-05-31 2008-12-04 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
EP2171038A2 (en) 2007-07-19 2010-04-07 Royal Nedalco B.V. Novel arabinose-fermenting eukaryotic cells
WO2009042846A1 (en) 2007-09-28 2009-04-02 Novozymes A/S Polypeptides having acetylxylan esterase activity and polynucleotides encoding same
DK2215224T3 (da) 2007-11-27 2014-01-27 Novozymes As Polypeptider med alfa-glucuronidaseaktivitet og polynukleotider, der koder for dem
CA2707017A1 (en) 2007-11-30 2009-06-11 Novozymes A/S Polypeptides having arabinofuranosidase activity and polynucleotides encoding same
EP2220219A2 (en) 2007-12-05 2010-08-25 Novozymes A/S Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
WO2009073709A1 (en) 2007-12-06 2009-06-11 Novozymes A/S Polypeptides having acetylxylan esterase activity and polynucleotides encoding same
US8034995B2 (en) 2007-12-07 2011-10-11 Novozymes A/S Polypeptides having feruloyl esterase activity and polynucleotides encoding same
NZ598403A (en) 2007-12-19 2012-07-27 Novozymes As Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
CA2709485A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
BRPI0822090A2 (pt) 2007-12-19 2017-05-23 Novozymes As polipeptídeo isolado, polinucleotídeo isolado, construção de ácido nucléico, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir o polipeptídeo, para produzir um mutante de uma célula precursora, de inibir a expressão de um polipeptídeo, para produzir uma proteína, para degradar ou converter um material celulósico, para a produção de um produto de fermentação, para fermentar um material celulósico, planta transgênica, parte vegetal ou célula vegetal, molécula de rna inibidora de duplo filamento
US20100306881A1 (en) 2007-12-19 2010-12-02 Novozymes A/S Polypeptides having Cellulolytic Enhancing Activity and Polynucleotides Encoding Same
WO2009127729A1 (en) 2008-04-17 2009-10-22 Novozymes A/S Polypeptides having ferulic acid esterase activity and polynucleotides encoding same
ES2331505B2 (es) 2008-07-04 2010-09-20 Universidad Politecnica De Valencia Preparacion de carbamatos con catalizadores solidos.
DK2310497T3 (da) 2008-07-29 2016-07-25 Novozymes As Polypeptider med alfa-glucuronidaseaktivitet og polynukleotider, der koder for dem
CA2732099A1 (en) 2008-07-31 2010-02-04 Novozymes A/S Polypeptides having acetylxylan esterase activity and polynucleotides encoding same
US8058513B2 (en) 2008-11-10 2011-11-15 Novozymes, Inc. Polypeptides having feruloyl esterase activity and polynucleotides encoding same
CA2745608A1 (en) 2008-12-04 2010-06-10 Novozymes, Inc. Polypeptides having feruloyl esterase activity and polynucleotides encoding same
US7771983B2 (en) 2008-12-04 2010-08-10 Novozymos, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
WO2010108918A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Novozymes A/S Polypeptides having acetyl xylan esterase activity and polynucleotides encoding same
CA2758396C (en) 2009-04-24 2018-06-12 Dsm Ip Assets B.V. Carbohydrate degrading polypeptide and uses thereof
CN102482680B (zh) 2009-04-30 2014-09-10 诺维信股份有限公司 具有木聚糖酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
CA2763031A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material
BR112012000078A2 (pt) * 2009-07-03 2017-03-01 Dsm Ip Assets Bv cepas de talaromyces e composições de enzima.
US8143021B2 (en) 2009-07-07 2012-03-27 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
WO2011035027A2 (en) 2009-09-17 2011-03-24 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
WO2011035029A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Novozymes, Inc. Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
CA2775347A1 (en) 2009-09-29 2011-04-07 Novozymes A/S Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
DK2483295T3 (en) 2009-09-29 2016-02-22 Novozymes Inc Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding them
CN102695720B (zh) 2009-09-30 2018-02-16 诺维信股份有限公司 具有纤维素分解增强活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸
US8586829B2 (en) 2009-09-30 2013-11-19 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
EP2496694B1 (en) 2009-11-06 2017-04-19 Novozymes, Inc. Compositions for saccharification of cellulosic material
WO2011057083A1 (en) 2009-11-06 2011-05-12 Novozymes, Inc. Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
US9133448B2 (en) 2010-02-11 2015-09-15 Dsm Ip Assets B.V. Polypeptide having cellobiohydrolase activity and uses thereof
DK2588603T3 (en) 2010-06-29 2017-07-03 Dsm Ip Assets Bv POLYPEPTIDE THAT HAS OR CONTRIBUTES TO CARBOHYDRATE MATERIAL DEGRADING ACTIVITIES AND APPLICATIONS THEREOF
WO2012000886A1 (en) 2010-06-29 2012-01-05 Dsm Ip Assets B.V. Polypeptide having beta-glucosidase activity and uses thereof
ES2672125T3 (es) * 2010-06-29 2018-06-12 Dsm Ip Assets B.V. Polipéptido que tiene actividad beta-glucosidasa y usos del mismo
AU2014246633B2 (en) * 2010-06-29 2017-06-01 Versalis S.P.A. Polypeptide having or assisting in carbohydrate material degrading activity and uses thereof
ES2563209T3 (es) 2010-10-01 2016-03-11 Novozymes, Inc. Variantes de beta-glucosidasa y polinucleótidos que codifican las mismas
CN103429749B (zh) * 2010-12-10 2016-12-14 诺维信公司 用于从含木素纤维素材料产生发酵产物的方法
MY169386A (en) * 2012-11-09 2019-03-26 Dsm Ip Assets Bv Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
PL3686280T3 (pl) 2013-02-04 2022-09-19 Dsm Ip Assets B.V. Polipeptyd degradujący węglowodany i jego zastosowania
DK2959004T3 (da) 2013-02-21 2021-03-01 Novozymes As Fremgangsmåder til forsukring og fermentering af et celluloseholdigt materiale
WO2014191267A1 (en) * 2013-05-28 2014-12-04 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material
ITMI20132069A1 (it) * 2013-12-11 2015-06-12 Versalis Spa Procedimento per la produzione di zuccheri da biomassa
JP2017514460A (ja) * 2014-04-30 2017-06-08 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． リグノセルロース系材料の酵素加水分解および糖類発酵のための方法
WO2016169892A1 (en) * 2015-04-20 2016-10-27 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars

Also Published As

Publication number Publication date
CA3099202A1 (en) 2019-12-05
WO2019229108A1 (en) 2019-12-05
FI3802843T3 (fi) 2023-05-08
DK3802843T3 (da) 2023-05-01
EP3802843A1 (en) 2021-04-14
BR112020024109B1 (pt) 2023-12-26
ES2944736T3 (es) 2023-06-23
CN112204151A (zh) 2021-01-08
HRP20230442T1 (hr) 2023-07-21
CN112204151B (zh) 2024-06-11
HUE061611T2 (hu) 2023-07-28
BR112020024109A2 (pt) 2021-02-17
EP3802843B1 (en) 2023-03-29
PL3802843T3 (pl) 2023-06-05
LT3802843T (lt) 2023-04-25
SI3802843T1 (sl) 2023-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240271110A1 (en) Enzyme composition
US20200347422A1 (en) Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
EP3802843B1 (en) Process for producing sugars from carbohydrate materials
US11499142B2 (en) Enzyme composition
US12157906B2 (en) Process for producing a fermentation broth
EP3695001B1 (en) Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
WO2020058248A1 (en) Process for enzymatic hydrolysis of carbohydrate material and fermentation of sugars
RU2851491C2 (ru) Способ получения продукта сахара и продукта ферментации
WO2019086370A1 (en) Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
CA3043966C (en) Enzyme composition
WO2016207146A1 (en) Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
WO2016207144A1 (en) Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
US20240182938A1 (en) Process for the preparation of a sugar product and a fermentation product
WO2020058253A1 (en) Process for enzymatic hydrolysis of carbohydrate material and fermentation of sugars
WO2020058249A1 (en) Process for enzymatic hydrolysis of carbohydrate material and fermentation of sugars
WO2019219804A1 (en) Process for producing a polypeptide
BR112019009796B1 (pt) Composição de enzimas