RS64151B1 - Antioksidativna kompozicija koja sadrži polidatin i acetilcistein - Google Patents

Description

Opis

Oblast pronalaska

[0001] Ovaj opis se odnosi na kompoziciju posebno pogodnu za suzbijanje oksidativnog oštećenja kod subjekta.

Stanje tehnike

[0002] Sastav vazduha u atmosferi uključuje 21% kiseonika (O2) po zapremini, gasa neophodnog za život. Osamdeset ili više procenata O2se koristi za proces aerobnog disanja koji omogućava efikasnu proizvodnju energije u mitohondrijama ćelija, u obliku adenozin 5'-trifosfata (ATP).

[0003] Enzimi koriste neke molekule O2za katalizu esencijalnih reakcija, koje uključuju sintezu hormona adrenalina i neurotransmitera dopamina, kao i hidroksilaciju ostataka aminokiselina tokom formiranja kolagena, neophodnog za formiranje vezivnog tkiva. Aktivnost enzima iz porodice citokroma P450 takođe koristi O2za metabolizam ksenobiotika, kao što su, na primer, lekovi, industrijske hemikalije i toksini, pretvarajući ova jedinjenja u manje štetne proizvode koji se izbacuju iz ljudskog tela.

[0004] Kiseonik je, međutim, iako fundamentalan za metabolizam, potencijalno toksičan i mutageni gas, a ljudsko telo je razvilo širok spektar antioksidativnih odbrambenih mehanizama koji pomažu da se ostvari neka vrsta zaštite od štetnih efekata. Pored antioksidanata koje sintetiše ljudsko telo („endogeni antioksidansi“), ljudska ishrana može da bude obogaćena antioksidansima, uglavnom dobijenim iz proizvoda biljnog porekla. Neki biljni antioksidansi igraju suštinsku ulogu (npr. vitamin E i vitamin C). Drugi nisu neophodni, ali su ipak korisni za ljudsko zdravlje (npr. karotenoidi i flavonoidi).

[0005] Poslednjih godina, upotreba antioksidanata u ishrani ili konzumiranja u više koncentrisanom obliku kao aditiva i suplemenata bila je predmet brojnih in vitro studija i eksperimenata kako na životinjama tako i na ljudima.

[0006] Glutation, na primer, je endogeni molekul antioksidansa sposoban da izvrši važnu aktivnost u suprotstavljanju fiziološkom procesu starenja. Glutation je prisutan u prirodi u svim organizmima, bilo da su jednoćelijski ili višećelijski. Njegova posebna hemijska struktura čini ovaj molekul posebno efikasnim i) za suzbijanje štetnog dejstva slobodnih radikala koji nastaju kao prirodni nusproizvod normalnog metabolizma kiseonika i ii) za regulisanje ćelijskih funkcija, kao što su, na primer, sinteza i popravka DNK, sinteza proteina, i aktivacija i regulacija enzima važnih za ćelijski metabolizam organizama.

[0007] Glutation je takođe od suštinskog značaja u procesima detoksikacije ćelija, jer može da obavlja dvostruku funkciju: i) podržavanje enzima odgovornih za ovu akciju i ii) vezanje toksina, pretvarajući ih u jedinjenja koja se lako eliminišu kroz žuč i/ili urin.

[0008] Jedan od poznatih pristupa za sprečavanje ili lečenje oksidativnog stresa, na primer, poredovan reaktivnim vrstama kiseonika (ROS), može se bazirati na upotrebi antioksidansa, kao što je glutation, kako bi se stabilizovali ili deaktivirali slobodni radikali pre nego što mogu da oštete zdrave ćelije.

[0009] Biodostupnost glutationa kod ljudi je, međutim, generalno ograničena jer ga enzimski sistemi digestivnog sistema, krvi i jetre brzo razgrađuju čak i kada se nalazi u hrani u kombinaciji sa drugim antioksidantnim jedinjenjima. Dodaci ishrani bazirani na glutationu prolaze kroz iste procese razgradnje i takođe zadržavaju veliki deo gastrične, krvne i jetrene barijere; u stvari, samo mali deo je u stanju da dospe u krvotok da bi pokazao blagotvorno dejstvo na telo.

[0010] Dalje, nivoi glutationa se fiziološki smanjuju sa napredovanjem starenja, sa posledičnim povećanjem procesa ćelijskog starenja.

[0011] Takođe postoje egzogeni faktori koji mogu da odrede njegovo smanjenje, kao što su uslovi životne sredine (radijacija, smog i zagađenje); neodgovarajući način života (pušenje cigareta, zloupotreba alkohola); gojaznost (višak masne hrane, što može da poveća nivo oksidativnog stresa).

[0012] Zbog prethodno navedenih faktora, primena nutritivnih kompozicija, uključujući, na primer, glutation kao antioksidans, nije uvek dokazana kao efikasna u borbi protiv oksidativnog oštećenja.

Suština pronalaska

[0013] Cilj ovog opisa se sastoji u obezbeđivanju kompozicije sa visokim antioksidativnim kapacitetom i sposobnom da prevaziđe nedostatke koji su gore navedeni. Opisana kompozicija izaziva neočekivano povećanje nivoa vitamina A, E i C u plazmi i smanjenje nivoa neopterina (markera upale).

[0014] Prema pronalasku, prethodno navedeni cilj je postignut zahvaljujući predmetu koji je posebno pomenut u zahtevima u daljem tekstu, koji čine sastavni deo ovog opisa.

[0015] Jedna realizacija ovog opisa obezbeđuje antioksidativnu kompoziciju koja sadrži aktivni agens, aktivni agens koji sadrži polidatin i acetilcistein.

[0016] U jednom ili više izvođenja, aktivni princip obuhvata glutamin, glicin, alanin, α -ketoglutarnu kiselinu i selen (SE).

[0017] U jednom ili više izvođenja, aktivni agens kompozicije obuhvata polidatin i acetilcistein, u kombinaciji sa α -ketoglutarnom kiselinom, glutaminom, glicinom, alaninom i selenom (Se).

[0018] Glutamin i α -ketoglutarna kiselina takođe mogu da budu sadržani u aktivnom principu u obliku glutamin α -ketoglutarata (glutamin akg). U jednom ili više izvođenja, aktivni agens kompozicije obuhvata polidatin i acetilcistein, u kombinaciji sa glutamin α -ketoglutaratom, glicinom, alaninom i selenom (Se).

[0019] Kompozicija koja je ovde opisana može dalje da sadrži minerale, aditive i aromatične supstance. Dodatna realizacija ovog otkrića obezbeđuje postupak za lečenje oksidativnog stresa kod subjekta, postupak koji obuhvata odabir kompozicije koja sadrži aktivni agens koji sadrži polidatin u kombinaciji sa acetilcisteinom i glutaminom, glicinom, alaninom, α -ketoglutarnom kiselinom i selenom, i primenu kompozicije subjektu.

[0020] Otkriće takođe obezbeđuje postupak za lečenje najmanje jedne bolesti usled nedostatka vitamina, pri čemu postupak obuhvata primenu, terapeutski efikasne količine opisane, kompozicije subjektu. Bolesti nastale usled nedostatka vitamina mogu da budu odabrne od niktalopije, ataksije, cistične fibroze, Kronove bolesti, makularne degeneracije i senilnog gubitka sluha.

[0021] U jednom ili više izvođenja, ovde opisane kompozicije takođe mogu da nadju primenu u medicini. Kompozicije koje su predmet ovog opisa pokazale su se efikasnim u prevenciji i/ili lečenju inflamatornog stanja, i za lečenje bolesti nedostatka vitamina kao što su niktalopija, ataksija, cistična fibroza, Kronova bolest, makularna degeneracija i senilni gubitak sluha.

Detaljan opis pronalaska

[0022] U opisu koji sledi, dati su brojni specifični detalji kako bi obezbedili temeljno razumevanje realizacija. Realizacije se mogu primeniti u praksi bez jednog ili više specifičnih detalja, ili sa drugim metodama, komponentama, materijalima, itd. U drugim slučajevima, dobro poznate strukture, materijali ili operacije nisu prikazane ili opisane detaljno kako bi se izbegle nejasnoće određenih aspekata realizacija.

[0023] Referenca u okviru ovog otkrića na "jednu realiyaciju " ili " izvođenje " ukazuje na to da je određeni aspekt, struktura ili karakteristika opisana u vezi sa realizacijom uključena u najmanje jednu realizaciju. Prema tome, oblici izraza "u jednom aspektu" ili "u jednoj realizaciji" u različitim tačkama u ovom opisu ne moraju nužno da se odnose na istu realizaciju. Dodatno, određeni aspekti, strukture ili karakteristike mogu da se kombinuju na bilo koji pogodan način u jednoj ili više realizacija.

[0024] Naslovi dati u ovom opisu su samo radi pogodnosti i ne tumače obim ili predmet realizacija.

[0025] Jedna realizacija ovog opisa obezbeđuje kompoziciju koja sadrži aktivni agens, pri čemu pomenuti aktivni agens obuhvata polidatin i acetilcistein.

[0026] Težinski odnos između polidatina i acetilcisteina može da bude između 0,10 i 0,50, poželjno između 0,15 i 0,30.

[0027] Aktivni princip kompozicije dodatno sadrži glutamin, glicin, alanin, α -ketoglutarnu kiselinu i selen (SE).

[0028] U narednom izvođenju, glutamin i α -ketoglutarna kiselina mogu da budu sastavni deo aktivnog principa u obliku glutamin α -ketoglutarata. U ovom slučaju, aktivni princip sadrži u kombinaciji sa polidatinom i acetilcistein glutamin α -ketoglutaratom, glicin, alanin i selen.

[0029] Kompozicije predmetne prijave imaju visok antioksidativni kapacitet i mogu da se koriste u prevenciji i/ili lečenju bolesti oksidativnog stresa kao što je, na primer, akutno ili hronično inflamatorno stanje. Kompozicije takođe mogu da budu namenjene za upotrebu u lečenju bolesti izazvanih nedostatkom vitamina, na primer, izabranih iz grupe koju čine niktalopija, ataksija, cistična fibroza, Kronova bolest, makularna degeneracija i senilni gubitak sluha.

[0030] Polidatin (takođe poznat kao piceid) prisutan u aktivnom agensu ovde opisanih kompozicija je prirodni molekul sa antioksidativnim delovanjem koji se može ekstrahovati, na primer, iz korena biljke, Poligonum cuspidatum, poreklom iz severoistočne Azije.

[0031] Polidatin je u stanju da stupi u interakciju sa epigenomom aktiviranjem sinteze sirtuina, proteina koji – zauzvrat – pokreću niz pozitivnih reakcija u rasponu od popravke DNK, aktivacije enzima faze II (antioksidansa) i aktivacije glutationperoksidaze (GPKS) i glutation-S-transferaze (GST).

[0032] Pronalazači ove prijave su pokazali iznenađujući efekat koji imaju kompozicije u kojima je polidatin prisutan u aktivnom principu u kombinaciji sa acetilcisteinom i glutaminom, glicinom, alaninom, α - ketoglutarnom kiselinom i selenom (Se). U jednom ili više izvođenja, glutamin i α -ketoglutarna kiselina mogu biti sadržani u aktivnom principu u obliku glutamin α -ketoglutarata.

[0033] Ove kompozicije su posebno efikasne kada su različite komponente prisutne u količinama navedenim u nastavku.

[0034] Polidatin može biti prisutan u količini manjoj od 15% (težina/težina) aktivnog agensa, poželjno između 3% i 15% (težina/težina), poželjnije jednaka 5% (težina/težina) aktivnog agensa.

[0035] Acetilcistein može biti prisutan u količini između 25% i 35% (težina/težina), poželjno između 28% i 32% (težina/težina) aktivnog sredstva.

[0036] Odnos težine između polidatina i acetilcisteina može biti između 0,10 i 0,50, poželjno između 0,15 i 0,30.

[0037] Glutamin, kada je prisutan u aktivnom sastojku, može biti sadržan u količini između 10% i 20% (težina/težina), poželjno između 12% i 18% (težina/težina) aktivnog agensa.

[0038] α -ketoglutarna kiselina može biti sadržana u količini između 10% i 20% (težina/težina), poželjno između 12% i 18% (težina/težina) aktivnog agensa.

[0039] Količina glicina može biti između 10% i 18% (težina/težina), poželjno između 12% i 16% (težina/težina) aktivnog agensa.

[0040] Alanin može biti prisutan u količini između 10% i 25% (težina/težina), poželjno između 15% i 20% (težina/težina) aktivnog agensa.

[0041] Količina selena sadržana u kompoziciji može biti između 0,01% i 0,03% (težina/težina) aktivnog agensa.

[0042] Kada aktivni princip sadrži glutamin α -ketoglutarat (kao dodatak ili kao alternativu glutaminu i α -ketoglutarnoj kiselini), ova so može sa bude prisutna u kompoziciji u količini između 20% i 40% (težina/težina ), poželjno između 25% i 35% (težina/težina) aktivnog sredstva.

[0043] Opisane kompozicije mogu da sadrže najmanje jednu dodatnu komponentu izabranu između vitamina, minerala, aditiva i aromatičnih supstanci.

[0044] U jednom ili više izvođenja, kompozicije koje su predmet ovog opisa mogu se primenjivati kao oralni dodatak ishrani.

[0045] Pronalazači su pokazali da kompozicije koje su predmet ove prijave dozvoljavaju značajno ubrzanje ćelijskog metabolizma istovremeno povećavajući redukovane vrste i smanjujući oksidovane vrste, kako u plazmi tako i u eritrocitima. Dodatno, još iznenađujući efekat je primećen na sintezu vitamina C, E i A i na smanjenu sintezu neopterina (markera upale), što će biti vidljivo u nastavku.

PRIMERI

[0046] Tabela 1 predstavlja neograničavajuće ilustrativne primere kompozicija (A, B, C) u skladu sa realizacijama ovog opisa.

Tabela 1

[0047] Kompozicije se mogu pripremiti na sledeći način. Komponente (kupljene od kompanije Solim6 S.r.l., Cavriago, Reggio Emilia, Italija), koje su prethodno odabrane i izvagane, ubacuju se u nizu u pažljivo dezinfikovan mikser sa lopaticama (A091). Posebno, glutamin akg, nacetilcistein, alanin, glicin, polidatin i natrijum selenit su temeljno mešani najmanje 10 minuta. Shodno tome, mešanje je prekinuto i smeša praćena kako bi se potvrdilo dobijanje savršeno homogenog proizvoda. Mešanje se može nastaviti još 10 minuta. Kada je mešanje završeno, cela šarža je sipana u jednu ili više polietilenskih kesa za jednokratnu upotrebu, u količinama ne većim od 10 kg po vreći. Uzet je uzorak proizvoda i podvrgnut je organoleptičkoj kontroli za izgled/oblik, boju, miris i mikrobiološku kontrolu ukupnog broja bakterija (TBC), gljivica i plesni. Proizvod je prenet u namensku oblast (zona 34) gde ostaje do dobijanja izveštaja analiza. Nizvodno od pozitivnih rezultata sprovedenih analiza, smeša je podvrgnuta kapsulaciji uređajem (A029) za automatsku kapsulaciju pri maksimalnoj brzini 4 (jednako 20.000 cps/h), brzinom od 350 mg aktivnih jedinjenja po želatinskoj kapsuli (nulti format/veličina, 90 mg) za ukupnu težinu od 440 mg svaka. Na kraju obrade, proizvod se prenosi u prostor namenjen pakovanju (zona 12) za faze blisterovanja i pakovanja u kartonske kutije.

[0048] Tabela 2 prikazuje dve različite kompozicije koje su bile predmet kliničkih ispitivanja.

[0049] Kompozicija nazvana "HOPE A" obuhvata aktivni agens koji sadrži polidatin, N-acetilcistein, glutamin α -ketoglutarat, glicin, alanin i selen.

[0050] Kompozicija nazvana "HOPE B" razlikuje se od kompozicije "HOPE A" po tome što ne sadrži polidatin.

Tabela 2

Materijali i metode

[0051] Odabrano je ukupno 30 zdravih, asimptomatskih dobrovoljaca oba pola starosti između 45 i 75 godina. Svi subjekti odabrani za studiju potpisali su informirani pristanak. Subjekti koji su ispunili sledeće kriterijume isključenja nisu učestvovali u studiji:

• Trudnice;

• Ispitanici koji su redovno uzimali lekove koji inhibiraju metabolizam homocisteina (metotreksat, antiepileptici, itd.);

• Nosioci patologije;

• Subjekti podvrgnuti terapijama hemoterapije.

[0052] Učesnici studije su podeljeni u dve grupe: A i B, svaka grupa se sastojala od 15 dobrovoljaca.

[0053] Svakom učesniku, nakon medicinskog pregleda da bi se procenila njihova podobnost, uzeti su uzorci krvi, urina i pljuvačke.

[0054] Subjekti grupe A (koju čine 7 muškaraca i 8 žena, prosečne starosti: 59 ± 12 godina) dobili su HOPE A kompoziciju u obliku 140 kapsula. Kapsule su uzimane dnevno u dozi od 2 kapsule dnevno, na pun stomak (posle obroka).

[0055] Subjekti grupe B (koju čine 7 muškaraca i 8 žena, prosečne starosti: 60 ± 10 godina) dobijaju HOPE B kompoziciju u obliku 140 kapsula. Kapsule su uzimane dnevno u dozi od 2 kapsule dnevno, na pun stomak (posle obroka).

[0056] Posle prvih 8 nedelja, na kraju eksperimenta, uzet je drugi uzorak krvi, zajedno sa sakupljanjem urina i pljuvačke. Učesnici su nastavili da uzimaju lekove koje su im prepisali lekari, a dobili su instrukcije da prijave sva patološka stanja koja su se javila tokom probnog perioda, lekove koji su uzimani u tu svrhu i svaku promenu načina života, a posebno promene navika u ishrani.

[0057] U biološkim uzorcima (krv, urin i pljuvačka) uzetim od svakog od 30 dobrovoljaca, analizirani su sledeći parametri pri osnovnom uzorkovanju (vreme 0, t0) i posle 8 nedelja (t1): cistein, homocistein, cisteinilglicin, i glutation u oksidovanim i redukovanim oblicima, u plazmi, eritrocitima i pljuvački. U krvi su procenjeni nivoi vitamina C, vitamina E i vitamina A. U urinu, neopterin je kvantifikovan kao inflamatorni marker. U serumu su procenjene transaminaze (ALT, AST, GGT), ukupni holesterol, HDL, LDL, trigliceridi, reaktivni protein C (PCR) i glikemija.

Postupci analize

1) Određivanje nivoa neopterina u urinu HPLC-om

[0058] Analiza je sprovedena u Laboratoriji za kliničku biohemiju Instituta za kliničku fiziologiju CNR-a u Milanu. Doziranje neopterina u urinu, normalizovano za kreatinin u urinu analiziran u istom uzorku pomoću dva detektora u nizu, izvedeno je HPLC metodom: uzorak urina nakon što je razblažen mobilnom fazom, ubrizgan je u izokratski HPLC sistem sa reverznom faznom kolonom, i UV detektorom (za doze kreatinina) i spektrofluorimetrijskim detektorom (za doze neopterina); hromatografski pikovi kreatinina i neopterina su integrisani namenskim softverom i njihova koncentracija je određena pomoću kalibracionih krivih.

2) Određivanje nivoa glavnih cirkulišućih tiola u plazmi i eritrocitima

[0059] Analiza je sprovedena u Laboratoriji za kliničku biohemiju Instituta za kliničku fiziologiju CNR-a u Milanu.

[0060] Ukupni i redukovani aminotioli su mereni u eritrocitima i plazmi prema metodi koja je prethodno validirana i opisana u Dellanoce, C.; Cozzi, L.; Zuddas, S.; Pratali, L.; Accinni, R. Determination of different forms of aminothiols in red blood cells without washing erythrocytes. Biom. Chrom. 28(3): 327-331; 2014.

[0061] Ukratko, korišćeni su tris-(2 karboksietil)-fosfin hidrohlorid (TCEP) i 4-fluor-7-sulfamoilbenzofurazan (ABD-F), respektivno, kao redukujući i derivatizujući agensi; redukovani aminotioli su određeni mešanjem eritrocita i plazme sa 10% trihlorsirćetnom kiselinom (1:1 v/v).

10 µL 0,4 M NaOH, 70 µL 1 M boratnog pufera sa pH 11 koji sadrži 4 mM EDTA, 30 µL 1 M boratnog pufera sa pH 9,5 koji sadrži 4 mM EDTA i 10 µL 10 g.L-1 ABD-F u boratnom puferu (1M pH 9,5, koji sadrži 4 mM EDTA) dodati su u 100 µL svakog dobijenog supernatanta. Uzorci su inkubirani na 4°C tokom 90 min, a zatim je 10 µL injektirano u HPLC sistem radi analize.

[0062] Razdvajanje tiola se dešava na sobnoj temperaturi izokratskom tečnom hromatografijom visokih performansi na a Discovery C-18 koloni (250 × 4,6 mm u prečniku, Supelco, Sigma-Aldrich), eluirano sa 0,1 g rastvora, L-1 acetatnog pufera, pH 4,0: metanol, 81:19 (v/v), sa protokom od 1 mL min<-1>. Intenzitet fluorescencije je meren uz ekscitaciju na 390 nm i emisiju na 510 nm, korišćenjem Jasco fluorescentnog spektrofotometra. Uzorci su mereni standardnom kalibracionom krivom.

3) Određivanje nivoa vitamina A, vitamina E, vitamina C u serumu pomoću HPLC-a [0063] Analiza je izvedena u Laboratoriji za kliničku biohemiju Instituta za kliničku fiziologiju CNR u Milanu, korišćenjem komercijalnih kompleta (Chromsystem) sa evropskim sertifikatom.

REZULTATI

[0064] Biohemijski parametri, nakon dnevnog unosa kompozicija HOPE A i HOPE B tokom 8 nedelja, prikazani su u niže datim tabelama 3 i 4, gde su navedene prosečne vrednosti (sa standardnim devijacijama) i procentualna varijacija prosečnih nivoa vrednosti (Δ%) pronađenih na bazi uzorkovanja (t0) ili pre početka ispitivanja i posle 2 meseca lečenja (t1).

Tabela 3

[0065] Tabela 4 u u tekstu niže pokazuje vrednosti vitamina A, E, C i neopterina kod dve grupe subjekata. Takođe u ovom slučaju, date su prosečne vrednosti (sa standardnim devijacijama) i procentualna varijacija prosečnih nivoa vrednosti (Δ%) pronađenih pri bazalnom uzorkovanju (t0) ili pre početka eksperimenta, i nakon 2 meseca lečenja (t1).

Tabela 4

[0066] Biohemijski podaci dobijeni u ovoj studiji pokazuju značajne varijacije oksidovanih i redukovanih vrsta tiola u plazmi i eritrocitima nakon integracije hrane sa kompozicijama HOPE A i HOPE B, pokazujući ubrzanje metabolizma i intra- i ekstra-celularne antioksidativne aktivnosti.

[0067] Primena kompozicije HOPE A dovodi do značajnog povećanja nivoa eritrocitnog glutationa (GSH) (jednako 43,7%; p=10<-4>) uz istovremeno smanjenje oksidovanog glutationa (jednako od 49%; p=10<-5>). Primena kompozicije HOPE B dovodi do značajnog povećanja nivoa GSH u eritrocitima u poređenju sa vremenom t0 (p=10<-8>), ali nižeg (jednako od 32,25%) u poređenju sa povećanjem dobijenim kod ispitanika koji su uzimali kompoziciju HOPE A.

[0068] Primena HOPE A kompozicije takođe određuje značajno povećanje redukovanog CysGly u eritrocitima i u plazmi, koje je znatno veće od onog uočenog nakon primene kompozicije HOPE B (bez polidatina). Dovoljno je reći da procenat povećanja redukovanog CysGly u plazmi iznosi 26,5% nakon primene kompozicije HOPE B, dok se udvostručuje (52,4%) kod ispitanika koji su unosili kompoziciju HOPE A. Iznenađujuće, procenat povećanja redukovanog CysGly plazmi iznosi 11% nakon primene kompozicije HOPE B, dok se utrostručio (39%) kod subjekata koji su unosili kompoziciju HOPE A.

[0069] Još jedan definitivno neočekivano otkriće se odnosi na procenu markera upale, neopterina, koji se smanjuje za 9% kod subjekata koji su uneli kompoziciju HOPE B i za 31% kod subjekata koji su uzimali kompoziciju koja sadrži polidatin (HOPE A).

[0070] Pronalazači ove prijave su takođe neočekivano primetili široko pojačan efekat nakon unosa kompozicije HOPE A na sintezu vitamina A, C i E.

[0071] Ovaj rezultat je od fundamentalnog značaja s obzirom na antioksidativni efekat koji vitamini A, C, E ispoljavaju u telu.

[0072] Primena kompozicije koja uključuje polidatin je rezultirala povećanjem nivoa vitamina C za 47%, nivoa vitamina E za 61% i nivoa vitamina A za 42%.

[0073] Upoređujući ovaj efekat sa onim dobijenim nakon primene kompozicije HOPE B, bez polidatina, moguće je primetiti da kompozicija HOPE A izaziva povećanje vitamina C koje je više od četiri puta veće od onog izazvanog primenom kompozicije HOPE B (47% prema 11%); 3,8 puta veće povećanje vitamina E od onog izazvanog primenom kompozicije HOPE B (61% naspram 16%); i povećanje vitamina A tri puta veće od onog izazvanog primenom kompozicije HOPE B (42% naspram 14%).

[0074] Ovi rezultati sugerišu da glutation sintetisan iz svojih prekursora može (preko enzima dehidroaskorbat reduktaze) da regeneriše askorbinsku kiselinu (vitamin C) iz dehidroaskorbinske kiseline (DHA), koja bi inače bila ireverzibilno konvertovana u 2,3 diketogulonsku kiselinu, sa naknadnim sniženjem nivoa vitamina C. Sniženje nivoa dehidroaskorbinske kiseline glutationom predstavlja veoma aktivan način koji omogućava skoro potpunu regeneraciju vitamina C. Sa druge strane, vitamin C je u stanju da transformiše alfa tokoferoksilni radikal u originalni oblik alfa tokoferola ili u vitamin E, neutrališući i istovremeno eliminišući karotenoidne radikale, koji mogu da imaju prooksidativni efekat ukoliko se ne uklone iz vitamina C.

[0075] Dalje, budući da vitamin E štiti od oksidacije i betakaroten i vitamin A, koji se nalaze u cirkulišućim ćelijama i lipoproteinima, sledi povećanje nivoa vitamina A, koje se primećuje nakon unosa kompozicije HOPE A.

[0076] Opisana komparativna analiza je, prema tome, pokazala da aktivnost koju ostvaruje kompozicija koja sadrži polidatin, u kombinaciji sa prekursorskim amino kiselinama glutationa i molekula pro-glutationa, kao što je selen (Se) izaziva (u poređenju sa kompozicijom koja sadrži iste aminokiseline ali bez polidatina) veće povećanje redukovanih vrsta tiola u plazmi i eritrocitima i, prema tome, samog glutationa; veće smanjenje oksidovanih vrsta tiola u plazmi i eritrocitima osim oksidovanog glutationa; jasno superiorna opšta antioksidativna aktivnost; značajno veći porast nivoa vitamina A, E i C u plazmi; i više od tri puta veće smanjenje neopterina, markera upale.

[0077] Kompozicija koja sadrži polidatin, u kombinaciji sa najmanje jednom od naznačenih aminokiselina, je stoga u stanju da se značajno suprotstavi oštećenju izazvanom oksidativnim stresom. Svojom antioksidativnom vrednošću, polidatin obezbeđuje ekvivalentnu redukciju ćelijama i može da ispolji svoju antioksidativnu aktivnost kako direktno sa OH grupom u C4, tako i indirektno aktiviranjem sirtuina koji, zauzvrat, pored aktiviranja enzima faze II (antioksidansa) , povećava aktivnost dve važne porodice enzima koji uključuju GSH: glutation-S-transferaze (GST) i glutation peroksidaze (GPX).

[0078] Glutation-S-transferaze (GST) su porodica izoenzima za detoksikaciju koji katalizuju konjugaciju različitih toksičnih molekula sa glutationom, čineći ih manje reaktivnim i lakše ih eliminišu iz tela. Ova vrsta konjugacije je omogućena zato što GSH sadrži redukovani atom sumpora SH u aminokiselini cisteinu koji se lako aktivira tako da postane moćan nukleofil sposoban da veže niz različitih molekula, kao što su elektrofilni ksenobiotici. Ovi molekuli, povezani sa GSH, postaju rastvorni i mogu se eliminisati. Dalje, GSH uprkos tome što se sastoji od tri uobičajene aminokiseline (glutaminske kiseline, cisteina i glicina) razlikuje se od normalnih peptida zbog posebne veze između glutaminske kiseline i cisteina; u stvari, glutaminska kiselina nije povezana sa cisteinom na uobičajen način, sa karboksilom u alfa položahz, već je povezana sa drugim karboksilom koji se nalazi na dnu bočnog lanca - u gama položaju - i to čini GSH u potpunosti prepoznatljivim molekulom i nije napadnut uobičajenim peptidazama.

[0079] Glutation-S-transferaze stoga koriste GSH molekule za obavljanje svog dragocenog "zadatka" detoksikacije i ovom prilikom kompozicija HOPE A deluje u sinergiji sa aktivnošću GST sintetizujući nove molekule, takođe zahvaljujući aminokiselinama, prekursore glutationa.

[0080] Neočekivani rezultati primećeni nakon primene kompozicije koja sadrži polidatin mogu da budu rezultat uspostavljanja pozitivne biohemije između detoksikacijskog dejstva i obnovljene sinteze glutationa usled aktivnosti polidatina zajedno sa aminokiselinama prekursora sâmog glutationa.

[0081] Ako se aktivnost detoksikacije GSH sprovodi pomoću GST, antioksidativno dejstvo je zadatak GPKS, enzima koji pripada klasi oksidoreduktaza.

[0082] Postoji nekoliko izoenzima kodiranih različitim genima, koji se razlikuju po ćelijskoj lokalizaciji i specifičnosti supstrata. Glutation peroksidaza 1 (GPx1) je najzastupljenija verzija, prisutna u citoplazmi skoro svih tkiva sisara, koja ima vodonik peroksid kao svoj preferentni supstrat. Glutation peroksidaza 4 (GPx4) ima veliku sklonost prema lipidnim hidroperoksidima; eksprimirana je u skoro svakoj ćeliji sisara, iako na mnogo nižim nivoima. U svim slučajevima, GPX koristi GSH kao supstrat, a oksidacijom do disulfida (GSSG), peroksidi i peroksi kiseline se redukuju u vodu i alkohole. Glutation reduktaza ima zadatak da vrati GSSG u njegov redukovani oblik (GSH), koji se zatim ponovo oksiduje pomoću GPX-a da bi se dobilo antioksidativno stanje neophodno za postizanje ćelijske homeostaze.

[0083] Rezultati eksperimentalnih testova su pokazali iznenađujući efekat različitih komponenti aktivne komponente kompozicije, koja je predmet ovog opisa, na oksidativni stres, upalu i sintezu vitamina.

[0084] Proizvodnja kompozicije nije ograničena na ove primere, već može imati varijante, koje ne prelaze granice dole navedenih zahteva.

Claims (11)

Patentni zahtevi

1. Antioksidativna kompozicija za povećanje nivoa vitamina i smanjenje oksidativnog oštećenja kod subjekta, kompozicija koja sadrži aktivno sredstvo, gde navedeno aktivno sredstvo obuhvata polidatin, acetilcistein, α-ketoglutarnu kiselinu, glutamin, glicin, alanin i selen.

2. Antioksidativna kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time, što je polidatin prisutan u količini manjoj od 15% (težina/težina), poželjno između 3% i 15% (težina/težina) aktivnog agensa.

3. Antioksidativna kompozicija prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, naznačena time, što je acetilcistein prisutan u količini između 25% i 35% (težina/težina), poželjno između 28% i 32% (težina/težina) aktivnog agensa.

4. Antioksidativna kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time, što je težinski odnos između polidatina i acetilcisteina između 0,10 i 0,50, poželjno između 0,15 i 0,30.

5. Antioksidativna kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time, što je glutamin prisutan u količini od 10% do 20% (težina/težina), poželjno između 13% i 18% (težina/težina) aktivnog sredstva.

6. Antioksidativna kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time, što je α -ketoglutarna kiselina prisutna u količini od 10% do 20% (težina/težina), poželjno između 13% i 18% (težina/težina) aktivnog agensa.

7. Antioksidativna kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time, što je glicin prisutan u količini između 10% i 18% (težina/težina), poželjno između 12% i 16% (težina/težina) aktivnog agensa.

8. Antioksidativna kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, za upotrebu u medicini.

9. Antioksidativna kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju akutnog ili hroničnog inflamatornog stanja.

10. Antioksidativna kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju bolesti nastale usled nedostatka vitamina izabrane iz grupe koju čine niktalopija, ataksija, cistična fibroza, Kronova bolest, makularna degeneracija i senilni gubitak sluha.

11. Kompozicija prema jednom od zahteva 1 do 7 za upotrebu za smanjenje oksidativnog oštećenja i povećanje nivoa vitamina kod subjekta.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5