RS64160B1

RS64160B1 - Kompozicije za čišćenje debelog creva i lečenje gastrointestinalnih poremećaja

Info

Publication number: RS64160B1
Application number: RS20230311A
Authority: RS
Inventors: Mark G Currie; Robert Solinga; Christopher Leitheiser
Original assignee: Ironwood Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2015-05-01
Filing date: 2016-04-29
Publication date: 2023-05-31
Also published as: DK3288578T3; MA41985A; MX2017013928A; MA41985B1; US10618938B2; EP4218789A3; EA201792401A1; US20180148476A1; CN108040482A; US20240199697A1; MX2022013283A; CA2984437C; EP3288578B1; KR102783759B1; EP3288578A1; PL3288578T3; CA2984437A1; HRP20230381T1; JP2018519254A; JP6930919B2

Description

OBLAST PRONALASKA

Ovaj pronalazak se odnosi na peptide, kompozicije i njihovu upotrebu u metodama za čišćenje debelog creva i u tretmanima poremećaja gastrointestinalnog trakta i drugih visceralnih organa.

STANJE TEHNIKE

Godišnje se u Sjedinjenim Državama izvodi oko 15 miliona kolonoskopija, koje sve zahtevaju adekvatnu pripremu kolona. Nepotpuna priprema creva je prijavljena u oko 20% kolonoskopija. Nepotpuna priprema creva može rezultirati manjim otkrivanjem adenoma, dužim vremenom procedura i kraćim intervalima između pregleda. Kao rezultat toga, postoji potreba za sigurnim, efikasnim i dobro podnošljivim pripremama kolona koje omogućavaju širokom krugu pacijenata da se pouzdano i efektivno podvrgnu kolonoskopijama kako bi se smanjio rizik od kolorektalnog karcinoma.

KRATAK OPIS PRONALASKA

Ovaj pronalazak karakterišu peptidi, farmaceutske kompozicije, metode za proizvodnju peptida i kompozicija koje se koriste u metodama za čišćenje debelog creva kao i za druge uslove i poremećaje definisane u priloženim patentnim zahtevima. U jednom izvođenju, peptidi se mogu koristiti za pripremu subjekata za tretman kolonoskopijom. U nekim izvođenjima, peptidi ili njihove farmaceutski prihvatljive soli se mogu koristiti za pripremu subjekata za operaciju, kao što je operacija creva. U drugim izvođenjima, peptidi se mogu koristiti za lečenje kolorektalnog karcinoma, Hereditarnog ne-poli-adenomatskog kolorektalnog karcinoma (HNPCC), odnosno Lynch sindroma, gastropareze (GP), polipa, bolova, opšteg abdominalnog bola, postoperativne ileusa, opijatima izazvane konstipacije, funkcionalne dispepsije, divertikuloznih oboljenja uključujući ali ne ograničavajući se na SUDD (simptomatska nekomplikovana divertikulozna bolest) i SCAD (segmentalni kolitis povezan sa divertikulozom), divertikuloze, dijareja-preovlađujućeg sindroma iritabilnog creva, bola povezanog sa sindromom iritabilnog creva (IBS), ulceroznog kolitisa, ulceroznog proktitisa, Kronove bolesti, inflamatorne bolesti creva (IBD), hronične ili akutne radijacijske protopatije, rektalnog bola, hronične proktalgije, proktalgije fugaks, analnog bola, hronične analne fisure, postoperativnog analnog bola, sindroma preaktivne bešike, stresne inkontinencije, intersticijskog cistitisa, sindroma bola bešike, kolorektalnog karcinoma, bola povezanog sa kancerom, opšteg karličnog bola, endometrioze, orhialgije, hroničnog prostatitisa, prostatodinije, vulvodinije, uretralnog sindroma, penilnog bola, perianalnog bola i drugih gastrointestinalnih i visceralnih poremećaja.

Jedan aspekt ovog iz pronalaska obezbeđuje peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu sol, gde peptid sadrži amino kiselinsku sekvencu:

(SEKV. ID BR.: 2) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 3) C12-BE BK Asn Ser Ser Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 4) C16-BE BK Asn Ser Ser Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 5) C12-BE BK Asn Ser Ser Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-COOH;

(SEKV. ID BR.: 6) C14-BE BK Asn Ser Ser Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-COOH;

(SEKV. ID BR.: 7) C16-BE BK Asn Ser Ser Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-COOH;

(SEKV. ID BR.: 8) H-Cys Ag Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Ag Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 9) H-Asn Asp Asp Ag Glu Leu Cys Val Asn Val Ala Ag Thr Gly Cys Leu-NH2;

(SEKV. ID BR.: 10) H-Asn Asp Asp Cys Glu Leu Ag Val Asn Val Ala Cys Thr Gly Ag Leu-NH2;

(SEKV. ID BR.: 11) C18-BE BK Asn Ser Ser Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-COOH;

(SEKV. ID BR.: 12) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 13) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 14) H-Ag Cys Glu Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 15) H-Ag Cys Glu (4-F)Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys-NH2; (SEKV. ID BR.: 16) H-Ag Cys Glu (4-F)Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 17) H-Ag Cys Glu (4-F)Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys (4-F)Phe-NH2;

(SEKV. ID BR.: 18) H-Cys Cys Glu Leu Ag Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Ag Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 19) H-Ag Cys Glu Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 20) H-Ag Cys Glu Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys (4-F)Phe-NH2; (SEKV. ID BR.: 21) H-Cys Cys Glu (4-F)Phe Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 22) H-Cys Cys Glu (4-F)Phe Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys (4-F)Phe-NH2;

(SEKV. ID BR.: 23) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys (4-F)Phe-NH2;

(SEKV. ID BR.: 24) H-(4-F)Phe Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys (4-F)Phe-NH2;

(SEKV. ID BR.: 25) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 26) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 27) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Phe Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 28) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys (4-F)Phe Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 29) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Leu-NH2; (SEKV. ID BR.: 30) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Cha-NH2; (SEKV. ID BR.: 31) H-Ag Cys Glu Cha Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 32) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys D-Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 33) H-Ag Pen Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Pen Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 34) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Leu Asn-NH2; (SEKV. ID BR.: 35) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr Asn-NH2; (SEKV. ID BR.: 36) H-Asp Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 37) H-Ile Asp Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 38) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn OH-Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 39) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn OH-Pro Ala Cys Thr Gly Cys-NH2; (SEKV. ID BR.: 40) H-Ag Cys Glu Leu Pen Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Pen Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 41) H-Ag Cys Glu Leu Pen Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Pen Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 42) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Nme-Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 43) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 44) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Cha Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 45) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Leu Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 46) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Sar Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 47) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 48) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Nme-Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 49) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Leu Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 50) H-Ag Cys Asp Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 51) H-Ag Cys Ser Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 52) H-Ag Cys Thr Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 53) H-Hag Cys Glu Leu Cys Hag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 54) H-Ag Cys Gin Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 55) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Leu Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 56) Pent-Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 57) H-Cys Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Ag-COOH; (SEKV. ID BR.: 58) Pent-Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 59) H-Hag Cys Glu Leu Cys Hag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 60) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 61) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 62) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 63) H-Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 64) H-Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 65) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 66) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 67) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 68) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 69) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 70) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 71) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 72) H- Cys Cys Glu Leu Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 73) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 74) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cth Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 75) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cth Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 76) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cth Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 77) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cth Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 78) 4-Mepip- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 79) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 80) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 81) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Phe Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 82) H- Ag Ag Glu Leu Ag Ag Asn Pro Ala Ag Thr Gly Ag Tyr-COOH; (SEKV. ID BR.: 83) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Ala Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 84) H- Asp Cys Glu Leu Cys Dpr Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 85) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Ser Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 86) H- Cth Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 87) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 88) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 89) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 90) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 91) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; ili (SEKV. ID BR.: 92) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys-COOH; gde je Ag alilglicin; BE je glutaminska kiselina, pri čemu bočni lanac karboksilne kiseline formira peptidnu vezu; BK je lizin, pri čemu bočni lanac amina formira peptidnu vezu; (4-F)Phe je 4-fluorfenilalanin; Cha je cikloheksilalanin; Pen je penicilamin; OH-Pro je Hidroksiprolin; Nme-Tyr je N-metiltirozin; Sar je sarkozin; Hag je alilglicin sa redukovanom dikarboksivezom; Cth je cistationin; 4-Mepip je l-metil-piperidin-4-karboksilna kiselina; Dpr je diaminopropionska kiselina; i gde Ac- označava acetilovani N-terminus; Pent- označava N-terminus pokriven pentenskom kiselinom; C12- označava N-terminus pokriven sa C12 alkil karboksilnom kiselinom; C14- označava N-terminus pokriven sa C14 alkil karboksilnom kiselinom; Cl6- označava N-terminus pokriven sa C16 alkil karboksilnom kiselinom; Cl8-označava N-terminus pokriven sa C18 alkil karboksilnom kiselinom; H- označava nemodifikovani N-terminus; -NH2označava amidirani C-terminus; a -COOH označava nemodifikovani C-terminus.

Drugi aspekt ovog pronalaska pruža farmaceutske kompozicije koje sadrže peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu sol, prema ovom pronalasku.

Treći aspekt ovog pronalaska pruža kompoziciju za čišćenje debelog creva koja se koristi u metodi čišćenja debelog creva subjekta u pripremi za kolonoskopski postupak, gde kompozicija sadrži farmaceutski prihvatljiv eksipiens, rastvarač ili nosač, i peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu sol, prema ovom pronalasku. U nekim izvođenjima, kompozicija je čvrsta, oralna kompozicija.

ýetvrti aspekt ovog pronalaska pruža metod proizvodnje peptida, prema ovom pronalasku, metod koji uključuje sakupljanje ćelija koje sadrže molekul nukleinske kiseline koja kodira polipeptid, uzgoj ćelija u uslovima u kojima se peptid eksprimira, i izolovanje eksprimiranog peptida.

Peti aspekt ovog pronalaska pruža metod proizvodnje peptida prema ovom pronalasku, metod koji uključuje hemijsku sintezu peptida i pročišćavanje sintetizovanog peptida.

Šesti aspekt ovog pronalaska pruža peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu sol prema ovom pronalasku, za upotrebu u metodi lečenja gastrointestinalnog ili visceralnog poremećaja kod subjekta.

Sedmi aspekt ovog pronalaska pruža peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu sol prema ovom pronalasku, za upotrebu u metodi lečenja poremećaja izabranog od kolorektalnog karcinoma, Hereditarnog ne-poli-adenomatskog kolorektalnog karcinoma (HNPCC), Lynch sindroma, gastropareze (GP), polipa, bolova, opšteg abdominalnog bola, postoperativne ileusa, opijatima izazvane konstipacije, funkcionalne dispepsije, divertikuloznih oboljenja uključujući ali ne ograničavajući se na SUDD (simptomatska nekomplikovana divertikulozna bolest) i SCAD (segmentalni kolitis povezan sa divertikulozom), divertikuloze, dijarejapreovlađujućeg sindroma iritabilnog creva, bola povezanog sa sindromom iritabilnog creva (IBS), ulceroznog kolitisa, ulceroznog proktitisa, Kronove bolesti, inflamatorne bolesti creva (IBD), hronične ili akutne radijacijske protopatije, rektalnog bola, hronične proktalgije, proktalgije fugaks, analnog bola, hronične analne fisure, postoperativnog analnog bola, sindroma preaktivne bešike, stresne inkontinencije, intersticijskog cistitisa, sindroma bola bešike, kolorektalnog karcinoma, bola povezanog sa kancerom, opšteg karličnog bola, endometrioze, orhialgije, hroničnog prostatitisa, prostatodinije, vulvodinije, uretralnog sindroma, penilnog bola, perianalnog bola i drugih gastrointestinalnih i visceralnih poremećaja.

Detalji jednog ili više izvođenja prema ovom pronalasku su navedeni u pratećem opisu.

KRATAK OPIS SLIKA

Slika 1 prikazuje rezultate aktivnosti i stabilnosti za reprezentativne peptide.

Slika 2 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE: 3-7.

Slika 3 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 8-10.

Slika 4 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 12-13 i 23-27.

Slika 5 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 28-34.

Slika 6 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 35-37, 39 i 44.

Slika 7 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 2 i 40-42.

Slika 8 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJ 43.

Slika 9 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 44-47.

Slika 10 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 45, 48 i 51-52.

Slika 11 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 12, 13, 27, 47 i 53.

Slika 12 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJ 47 sa originalnim testom, ponavljanjem originalnog testa i drugim odmeravanjem.

Slika 13 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 54-59.

Slika 14 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za analizu GC-C aktivnosti za SEKV. ID BROJEVE 60-64.

Slika 15 prikazuje rezultate in vivo testa na duodenalnoj petlji pacova za SEKV. ID BROJEVE 62 i 47.

Slika 16 prikazuje rezultate testa zapremine duodenalne petlje pacova za SEKV. ID BROJEVE 62 i 47.

Slika 17 prikazuje rezultate testa pokretljivosti creva miševa (mGIT) za SEKV. ID BROJEVE 2 i 47 u poređenju sa ST Core-om.

Slika 18 prikazuje rezultate in vivo testa ligirane petlje pacova za SEKV. ID BROJEVE 67 i 69.

Slika 19 prikazuje rezultate in vivo testa zapremine ligirane petlje pacova za SEKV. ID BROJEVE 67 i 69.

Slika 20 prikazuje rezultate in vitro testa intestinalnih fluida pacova (RIF) za SEKV. ID BROJEVE 2, 26, 43, 47 i 53.

Slika 21 prikazuje rezultate in vitro RTF testa za SEKV. ID BROJEVE 60-66.

Slika 22 prikazuje rezultate in vivo RIF testa za SEKV. ID BROJEVE 47, 62, 67 i 69.

Slika 23 prikazuje rezultate različitih testova izvedenih na reprezentativnim peptidima.

Slika 24 prikazuje rezultate akumulacije cGMP-a u T84 ćelijskom testu za SEKV. ID BROJEVE 14-22.

Slika 25 prikazuje rezultate testa pokretljivosti creva miševa za SEKV. ID BROJEVE 2, 7 i 11.

Slika 26 prikazuje rezultate testa pokretljivosti creva miševa za SEKV. ID BROJ 47.

Slika 27 prikazuje rezultate testa pokretljivosti creva miševa za SEKV. ID BROJEVE 62, 67 i 69.

Ove slike su obezbeđene da posluže kao primeri i nemaju nameru da ograničavaju obim ovog pronalaska.

DETALJAN OPIS

Guanilat ciklaza C (GC-C) je transmembranski receptor koji se nalazi na apikalnoj površini epitelnih ćelija u stomaku i crevima. Receptor ima ekstracelularnu ligandno vezujući domen, jednu transmembransku regiju i C-terminalni guanilil ciklazni domenu. Kada se ligand veže za ekstracelularni domen GC-C, intracelularna katalitički domen katalizuje proizvodnju cGMP-a iz GTP-a. In vivo, ovo povećanje intracelularnog cGMP-a pokreće kaskadu događaja koji dovode do povećane sekrecije hlorida i bikarbonata u intestinalni lumen, povećanja pH vrednosti lumena, smanjene apsorpcije natrijuma u lumenu, povećane sekrecije tečnosti i ubrzanja intestinalnog tranzita. cGMP, koji se sekretuje u oba smera iz epitela u mukozu i lumen, takođe je pokazao da umanjuje paljenje aferentnih C vlakana, što sugeriše potencijalni mehanizam za posmatrane analgetičke efekte GC-C agonista na visceralni bol.

Linaklotid, peptidni GC-C agonist koji se oralno primenjuje i trenutno je odobren u Sjedinjenim Državama za lečenje sindroma iritabilnog creva sa zatvorom (IBS-c) i hroničnog idiopatskog zatvora (CIC), ima brojne efekte na fiziologiju donjeg gastrointestinalnog trakta, uključujući: (1) smanjenje visceralnog bola, (2) smanjenje nadutosti i (3) povećanu gastrointestinalnu pokretljivost, što može dovesti do povećanja učestalosti stolice i poboljšanja konzistencije stolice. Oralno primenjen linaklotid deluje lokalno aktivirajući GC-C receptore na luminalnoj površini. Stoga, rezultati kliničkih ispitivanja linaklotida, kao i prekliničke studije koje su rađene s linaklotidom i srodnim peptidima, sugerišu da se GC-C peptidni agonisti mogu koristiti u terapijske svrhe. Peptidi opisani i zaštićeni ovde mogu se vezivati za i aktivirati GC-C receptor ili se mogu karakterisati kao GC-C peptidni agonisti.

Definicije

Kako se koristi u ovom dokumentu, C12 je C12 alkil karboksilna kiselina, C14 je C14 alkil karboksilna kiselina, C16 je C16 alkil karboksilna kiselina, C18 je C18 alkil karboksilna kiselina, (4-F)Phe je 4-fluorfenilalanin, Cth je cistationin, Ag je alilglicin, Hag je alilglicin sa redukovanom dikarba vezom, Pent je pentenska kiselina, Pen je penicilamin, Cha je cikloheksilalanin, Sar je sarkozin, OH-Pro je hidroksiprolin, Nme-Tyr je N-metil tirozin, 4-Mepip je 1-metil-piperidin-4-karboksilna kiselina, Dpr je diaminopropionska kiselina, BE je glutaminska kiselina kod koje bočni lanac karboksilne kiseline formira peptidnu vezu, a BK je lizin kod koga bočni lanac amina formira peptidnu vezu. Primer veze BE BK bio bi:

Dodatni primeri peptidnog vezivanja uključuju bez ograničenja:

I. Dikarba

II. Hag-Hag

X = CH, Y = CH X = CH2, Y = CH2X = CH2, Y = S X = S, Y = CH2X = CO, Y = NH drugi

X = Se, Y = Se X = CH2, Y = Se X = Se, Y = CH2X = CH2, Y = O X = O, Y = CH2X =NH, Y=CO VII. Ag-Ag (2,-10)

IX. Cth-C (2,-10)

X. C-Cth (2.-10)

X = CH, Y = CH

X = CH2, Y = CH2X = CH2, Y = S

X = S, Y = CH2drugi

X = Se, Y = Se

X = CH2, Y = Se

X = Se, Y = CH2

X = CH2, Y = O

x = O, Y = CH2

X = CO, Y = NH

X = NH, Y = CO

XII. Ag-Ag (5,-13)

XIII. Hag-Hag (5,-13)

X = CH, Y = CH X = CH2, Y = CH2X = CH2, Y = S X = S, Y = CH2drugi

X = Se, Y = Se X = CH2, Y = Se X = Se, Y = CH2X = CH2, Y = O X = O, Y = CH2

X = CO, Y = NH

X = NH, Y = CO

Peptidi

Peptidi i njihove farmaceutski prihvatljive soli iz ovog pronalaska su definisani u priloženim zahtevima.

Šire je otkriven, ali nije zahtevan, peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so korisna za metode opisane ovde, pri čemu peptid sadrži sekvencu aminokiselina:

Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Xaa7Xaa8Xaa9Xaa10Xaa11Xaa12Xaa13Xaa14Ala15Xaa16Xa17Gly18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV. ID BR.: 1), ili njihova farmaceutski prihvatljiva sol; gde je

Xaa1je BE ili je odsutan;

Xaa2je BK, Asn ili je odsutan;

Xaa3je Asn, Ser ili je odsutan;

Xaa4je Ser ili je odsutan;

Xaa5je Ser, Asn, lie, BE ili je odsutan;

Xaa6je Tyr, Asp, 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), BK ili je odsutan;

Xaa7je Cys, cistationin (Cth), alilglicin (Ag), Hag, ili Asp;

Xaa8je Cys, cistationin (Cth), penicilamin (Pen), ili alilglicin (Ag);

Xaa9je Glu, Asp, Ser, Thr, ili Gin;

Xaa10je Leu, cikloheksilalanin (Cha), Phe, ili 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe);

Xaa11je Cys, Ag, ili penicilamin (Pen);

Xaa12je Cys, alilglicin (Ag), Hag, Cth, Dpr, ili Val;

Xaa13je Asn ili Leu;

Xaa14je Pro, Val, sarkozin (Sar), Leu, ili Hidroksiprolin (OH-Pro);

Xaa16je Cys, Ag, Pen ili Cth;

Xaa17je Tyr, Thr, cikloheksilalanin (Cha), 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), Phe, Ser, ili Ala;

Xaa19je Cys, Ag ili Pen;

Xaa20je Tyr, Leu, 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), cikloheksilalanin (Cha), D-Tyr, N-Metil Tyr (Nme-Tyr) ili je odsutan;

Xaa21je odsutan ili Asn;

gde je najmanje jedan Xaa je BE, BK, (4-F)Phe, Cth, Ag, Hag, Pen, Cha, Sar, Dpr, ili OH-Pro; i

gde peptid sadrži kovalentnu vezu između Xaa7i Xaa12, Xaa8i Xaa16, i Xaa11i Xaa19.

U nekim slučajevima, N-terminus peptida je acetilovan ili modifikovan na N-terminusu da bi se obezbedila stabilnost peptida. U drugim slučajevima, N-terminus je pokriven pentenskom kiselinom, biotinom, 4-Mepip (1-metil-4-karboksilna kiselina), C12 alkil-karboksilnom kiselinom, C14 alkil-karboksilnom kiselinom, C16 alkil-karboksilnom kiselinom ili C18 alkilkarboksilnom kiselinom. U nekim slučajevima, C=C dvostruka veza pentenske kiseline može biti ciklizovana sa drugom C=C dvostrukom vezom da bi se formirala dikarba veza.

U nekim slučajevima, C-terminus peptida je amidiran ili modifikovan na C-terminusu da bi se obezbedila dodatna stabilnost peptida.

U još jednom slučaju, N-terminus peptida je acetilovan ili zatvoren, a C-kraj je amidiran.

U nekim slučajevima, dikarba veze (CH2-CH=CH-CH2) ili druge kovalentne veze opisane ovde između peptidnih ostataka mogu biti korisne u stabilizaciji peptida. Dikarba veza i druge kovalentne veze opisane ovde mogu u nekim slučajevima da obezbede veću stabilnost peptida od disulfidne veze. U nekim slučajevima, dikarba veze mogu biti redukovane (CH2-CH2-CH2-CH2).

U nekim slučajevima, poboljšana stabilnost peptida omogućava skladištenje na sobnoj temperaturi tokom dužeg vremenskog perioda.

U nekim slučajevima, Xaa7i Xaa12su oba Ag i prisutna je dikarba veza između Ag7i Ag12; Xaa7i Xaa12su oba Cys i prisutna je disulfidna veza između Cys7i Cys12; Xaa8i Xaa16su oba Cys i prisutna je disulfidna veza između Cys8i Cys16; Xaa11i Xaa19su oba Cys i prisutna je disulfidna veza između Cys11i Cys19; ili bilo koja kombinacija navedenih slučajeva.

U drugim slučajevima, Xaa7je Cth, Xaa12je Cys i veza postoji između Cth7i Cys12; Xaa8je Cth, Xaa16je Cys i veza postoji između Cth8i Cys16; ili bilo koja kombinacija navedenih slučajeva.

U nekim slučajevima, Xaa7je alilglicin ili Cys.

U nekim slučajevima, Xaa8je Cys ili cistationin.

U nekim slučajevima, Xaa9je Glu.

U nekim slučajevima, Xaa10je Leu.

U nekim slučajevima, Xaa12je Cys ili alilglicin.

U nekim slučajevima, Xaa14je Val ili Pro.

U nekim slučajevima, Xaa17je Tyr ili Thr.

U nekim slučajevima, Xaa20je Tyr ili je odsutan.

U nekim slučajevima, Xaa21je odsutan.

U nekim slučajevima, Xaa1 je odsutan; Xaa2je odsutan; Xaa3je odsutan; Xaa4je odsutan; Xaa5je odsutan; Xaa6je odsutan; Xaa7je Ag, Cys, ili Cth; Xaa8je Cys ili Cth; Xaa9je Glu; Xaa10je Leu; Xaa12je Ag ili Cys; Xaa14je Val ili Pro; Xaa17je Tyr ili Thr; i Xaa20je Tyr ili je odsutan.

U nekim slučajevima, Xaa14nije Pro.

U nekim slučajevima, Xaa17nije Phe.

U nekim slučajevima, obezbeđen je peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema ovom pronalasku, gde peptid obuhvata aminokiselinsku sekvencu:

(SEKV. ID BR.: 8) H-Cys Ag Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Ag Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 9) H-Asn Asp Asp Ag Glu Leu Cys Val Asn Val Ala Ag Thr Gly Cys Leu-NH2;

(SEKV. ID BR.: 10) H-Asn Asp Asp Cys Glu Leu Ag Val Asn Val Ala Cys Thr Gly Ag LeuNH2;

(SEKV. ID BR.: 12) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 13) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 18) H-Cys Cys Glu Leu Ag Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Ag Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 19) H-Ag Cys Glu Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 43) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 49) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Leu Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 50) H-Ag Cys Asp Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 51) H-Ag Cys Ser Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 52) H-Ag Cys Thr Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 53) H-Hag Cys Glu Leu Cys Hag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 54) H-Ag Cys Gin Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 55) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Leu Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 56) Pent-Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 57) H-Cys Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Ag-COOH;

(SEKV. ID BR.: 58) Pent-Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 59) H-Hag Cys Glu Leu Cys Hag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 60) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 61) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 62) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 63) H-Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 64) H-Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 65) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 66) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 67) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 68) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 69) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 70) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 71) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 72) H- Cys Cys Glu Leu Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 81) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Phe Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 82) H- Ag Ag Glu Leu Ag Ag Asn Pro Ala Ag Thr Gly Ag Tyr—COOH; (SEKV. ID BR.: 83) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Ala Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 84) H- Asp Cys Glu Leu Cys Dpr Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 85) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Ser Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 86) H- Cth Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 87) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 88) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 89) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 90) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 91) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; ili (SEKV. ID BR.: 92) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys-COOH, gde Ac- označava acetilovan N-terminus, Pent- označava N-terminus poklopljen sa pentenskom kiselinom, biotin- označava N-terminus poklopljen sa biotinom, 4-Mepip označava N-terminus poklopljen sa 4-Mepip (1-metil-piperidin-4-karboksilna kiselina), C12-označava N-terminus poklopljen sa C12 alkil-karboksilnom kiselinom, C14- označava N-terminus poklopljen sa C14 alkil-karboksilnom kiselinom, C16- označava N-terminus poklopljen sa C16 alkil-karboksilnom kiselinom, C18- označava N-terminus poklopljen sa C18 alkil-karboksilnom kiselinom, H- označava nemodifikovan N-terminus, -NH2označava amidovani C-terminus, a -COOH označava nemodifikovani C-terminus.

U daljim slučajevima, dikarba veza između dva Ag ostatka može biti ili cis ili trans izomer na dikarba vezi. Kako se koristi ovde, cis izomer dikarba veze ima oba atoma vodonika na istoj strani dvostruke C=C veze, a trans izomer dikarba veze ima atome vodonika na suprotnim stranama dvostruke C=C veze.

U nekim slučajevima, obezbeđen je peptid ili farmaceutski prihvatljiva sol istog, pri čemu peptid sadrži najviše 50, 40, 30 ili 20 aminokiselina. U daljim slučajevima, peptid sadrži najviše 19, 18, 17, 16, 15 ili 14 aminokiselina.

Takođe je otkriven, ali nije zaštićen zahtevom, peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol, gde se peptid sastoji od aminokiselinskog niza

Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Xaa7Xaa8Xaa9Xaa10Xaa11Xaa12Xaa13Xaa14Ala15Xaa16Xaa17Gly18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV. ID BR.: 1), ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol; pri čemu

Xaa1je BE ili je odsutan;

Xaa2je BK, Asn ili je odsutan;

Xaa3je Asn, Ser ili je odsutan;

Xaa4je Ser ili je odsutan;

Xaa5je Ser, Asn, Ile, BE ili je odsutan;

Xaa6je Tyr, Asp, 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), BK ili je odsutan;

Xaa7je Cys, cistationin (Cth), alilglicin (Ag), Hag, ili Asp;

Xaa8je Cys, cistationin (Cth), penicilamin (Pen), ili alilglicin (Ag);

Xaa9je Glu, Asp, Ser, Thr, ili Gin;

Xaa10je Leu, cikloheksilalanin (Cha), Phe, ili 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe);

Xaa11je Cys, Ag, ili penicilamin (Pen);

Xaa12je Cys, alilglicin (Ag), Hag, Cth, Dpr, ili Val;

Xaa13je Asn ili Leu;

Xaa14je Pro, Val, sarkozin (Sar), Leu, ili hidroksiprolin (OH-Pro);

Xaa16je Cys, Ag, Pen ili Cth;

Xaa17je Tyr, Thr, cikloheksilalanin (Cha), 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), Phe,

Ser, ili Ala;

Xaa19je Cys, Ag ili Pen;

Xaa20je Tyr, Leu, 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), cikloheksilalanin (Cha), D-Tyr,

N-Methyl Tyr (Nme-Tyr) ili je odsutan;

Xaa21je odsutan ili Asn;

gde najmanje jedan Xaa je BE, BK, (4-F)Phe, Cth, Ag, Hag, Pen, Cha, Sar, Dpr, ili

OH-Pro

i gde peptid sadrži kovalentnu vezu između Xaa7i Xaa12, Xaa8i Xaa16i Xaa11i Xaa19.

U nekim slučajevima, N-terminus peptida je acetilovan da bi se dobila dodatna stabilnost peptida. U drugim slučajevima, N-terminus je pokriven pentenskom kiselinom, biotinom, 4-Mepip (l-metil-piperidin-4-karboksilna kiselina), C12 alkil-karboksilnom kiselinom, C14 alkil-karboksilnom kiselinom, C16 alkil-karboksilnom kiselinom ili C18 alkil-karboksilnom kiselinom. U nekim slučajevima, dvostruka veza C=C pentenske kiseline može biti ciklizovana sa drugom dvostrukom vezom C=C kako bi se formirala dikarba veza.

U nekim slučajevima, C-terminus peptida je amidovan da bi se dobila dodatna stabilnost peptida.

U nekim slučajevima, Xaa7i Xaa12 su oba Ag i prisutna je dikarba veza između Ag7i Ag12; Xaa7i Xaa12su oba Cys i prisutna je disulfidna veza između Cys7i Cys12; Xaa8i Xaa16su oba Cys i prisutna je disulfidna veza između Cys8i Cys16; Xaa11i Xaa19su oba Cys, i prisutna je disulfidna veza između Cys11i Cys19; ili bilo koja kombinacija navedenog.

U nekim slučajevima, Xaa7je alilglicin ili Cys.

U nekim slučajevima, Xaa8je Cys ili cistationin.

U nekim slučajevima, Xaa9je Glu.

U nekim slučajevima, Xaa10je Leu.

U nekim slučajevima, Xaa12je Cys ili alilglicin.

U nekim slučajevima, Xaa14je Val ili Pro.

U nekim slučajevima, Xaa17je Tyr ili Thr.

U nekim slučajevima, Xaa20je Tyr ili je odsutan.

U nekim slučajevima, Xaa21je odsutan.

U nekim slučajevima, Xaa1je odsutan; Xaa2je odsutan; Xaa3je odsutan; Xaa4je odsutan; Xaa5je odsutan; Xaa6je odsutan; Xaa7je Ag, Cys, ili Cth; Xaa8je Cys ili Cth; Xaa9je Glu; Xaa10je Leu; Xaa12je Ag ili Cys; Xaa14je Val ili Pro; Xaa17je Tyr ili Thr; i Xaa20je Tyr ili je odsutan .

U nekim slučajevima, obezbeđen je peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol prema ovom pronalasku, gde se peptid sastoji od aminokiselinske sekvence:

(SEKV. ID BR.: 8) H-Cys Ag Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Ag Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 12) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 13) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 43) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 49) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Leu Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 50) H-Ag Cys Asp Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 51) H-Ag Cys Ser Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 52) H-Ag Cys Thr Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 53) H-Hag Cys Glu Leu Cys Hag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 54) H-Ag Cys Gin Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 55) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Leu Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 56) Pent-Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 57) H-Cys Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Ag-COOH; (SEKV. ID BR.: 58) Pent-Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 59) H-Hag Cys Glu Leu Cys Hag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 60) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 61) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 62) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 63) H-Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 64) H-Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 65) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 66) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 67) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 68) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 69) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 70) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 71) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 72) H- Cys Cys Glu Leu Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 79) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 80) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys-NH2; (SEKV. ID BR.: 81) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Phe Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 82) H- Ag Ag Glu Leu Ag Ag Asn Pro Ala Ag Thr Gly Ag Tyr-COOH; (SEKV. ID BR.: 83) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Ala Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 84) H- Asp Cys Glu Leu Cys Dpr Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 85) H- Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Ser Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 86) H- Cth Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 87) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 88) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 89) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 90) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 91) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; ili (SEKV. ID BR.: 92) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys-COOH. U drugom slučaju, otkriven je, ali ne i zahtevan peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol korisna za ovde opisane metode, gde peptid obuhvata ili se sastoji od aminokiselinske sekvence:

Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Xaa7Xaa8Xaa9Xaa19Cys11Xaa12Asn13Xaa14Ala15Cys16Xaa17Gly18Cys19Xaa20Xaa21(SEKV. ID BR.: 93), ili njihova farmaceutski prihvatljiva sol; gde je

Xaa1je BE ili je odsutan;

Xaa2je BK ili je odsutan;

Xaa3je Asn ili je odsutan;

Xaa4je Ser ili je odsutan;

Xaa5je Ser, Asn, Ile, ili je odsutan;

Xaa6je Tyr, Asp, 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), ili je odsutan;

Xaa7je Cys, cistationin (Cth), alilglicin (Ag), Hag, ili Asp;

Xaa8je Cys, cistationin (Cth), penicilamin (Pen), ili alilglicin (Ag);

Xaa9je Glu, Asp, Ser, Thr, ili Gin;

Xaa10je Leu, cikloheksilalanin (Cha), Phe, ili 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe);

Xaa12je Cys, alilglicin (Ag), Hag, ili Val;

Xaa14je Pro, Val, sarkozin (Sar), Leu, ili hidroksiprolin (OH-Pro);

Xaa17je Tyr, Thr, cikloheksilalanin (Cha), 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), Phe, ili

Ala;

N-Methyl Tyr (Nme-Tyr) ili je odsutan;

Xaa21je odsutan ili Asn;

gde najmanje jedan Xaa je BE, BK, (4-F)Phe, Cth, Ag, Hag, Pen, Cha, Sar, ili OH-Pro; i gde peptid sadrži kovalentnu vezu između Xaa7i Xaa12, Xaa8i Cys16i

Cys11i Cys19.

Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol može da sadrži ili da se sastoji od sekvence aminokiselina:

Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Cys11 Xaa12 Asn13 Xaa14 Ala15Cys16Xaa17Gly18Cys19Xaa20Xaa21(SEKV. ID BR.:93), ili njihova farmaceutski prihvatljiva sol; gde je

Xaa1je BE ili je odsutan;

Xaa2je BK ili je odsutan;

Xaa3je Asn ili je odsutan;

Xaa4je Ser ili je odsutan;

Xaa5je Ser, Asn, lie, ili je odsutan;

Xaa6je Tyr, Asp, 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), ili je odsutan;

Xaa7je Cys, cistationin (Cth), alilglicin (Ag), Hag, ili Asp;

Xaa8je Cys, cistationin (Cth), penicilamin (Pen), ili alilglicin (Ag);

Xaa9je Glu, Asp, Ser, Thr, ili Gin;

Xaa10je Leu, cikloheksilalanin (Cha), Phe, ili 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe);

Xaa12je Cys, alilglicin (Ag), Hag, ili Val;

Xaa14je Pro, Val, sarkozin (Sar), Leu, ili Hidroksiprolin (OH-Pro);

Xaa17je Tyr, Thr, cikloheksilalanin (Cha), 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe),

Phe, ili Ala;

Xaa20je Tyr, Leu, 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), cikloheksilalanin (Cha), DTyr, N-Methyl Tyr (Nme-Tyr) ili je odsutan;

Xaa21je odsutan ili Asn;

gde najmanje jedan Xaa je BE, BK, (4-F)Phe, Cth, Ag, Hag, Pen, Cha, Sar, ili OH-Pro; and gde je Xaa7i Xaa12su oba Ag i dikarba veza je prisutna između Ag7i Ag12;

Xaa7i Xaa12su oba Cys i disulfidna veza je prisutna između Cys7i Cys12;

Xaa8je Cys i disulfidna veza je prisutna između Cys8i Cys16;

Xaa7je Cth i veza je prisutna između Cth7i Cys12;

Xaa8je Cth i veza je prisutna između Cth8i Cys16;

disulfidna veza je prisutna između Cys11i Cys19; ili

bilo koja njihova kombinacija.

U nekim slučajevima, peptid je izolovan. U drugim slučajevima, peptid je prečišćen.

U nekim slučajevima, farmaceutski prihvatljiva sol peptida je obezbeđena.

U nekim slučajevima, farmaceutski prihvatljiva sol je hlorid, acetat, fosfat ili

sulfatna sol.

U nekim slučajevima, N-terminalni kraj peptida koji je ovde opisan je acetilovan ili zatvoren.

Ova modifikacija može da obezbedi poboljšanu stabilnost peptida. U drugim slučajevima, N-terminalni peptid je cisteinski ostatak koji je modifikovan u derivat imidazolidinona.

Peptidi koji su ovde otkriveni mogu se takođe koristiti za mogućnosti otkrivanja ili lečenje raka debelog creva. U slučaju upotrebe peptida u situacijama detekcije, linker je konjugovan na N-terminalni deo. Linker se zatim može konjugovati sa bojom, ili može biti konjugovan sa bojom pre vezivanja sa peptidom. Stručnjak u ovoj oblasti bi prepoznao da bi boja konjugovana sa peptidom bila korisna u detekciji interakcija vezivanja peptida.

Drugi primer uključuje konjugaciju peptida koji su ovde otkriveni sa toksinom putem linkera. Toksin konjugovan i obložen peptidom ili farmaceutski prihvatljivom soli kao što je ovde opisano bi bio koristan kao tretman raka debelog creva. Takva formulacija bi rezultirala sistemskom cirkulacijom za dugotrajan tretman. Stručnjak u ovoj oblasti bi prepoznao upotrebu peptida dugog dejstva ili njegove farmaceutski prihvatljive soli kao što je ovde opisano u lečenju raka debelog creva.

Proizvodnja peptida

Postupci za proizvodnju peptida ovog pronalaska su definisani u priloženim patentnim zahtevima.

U jednom slučaju, peptidi ili prekursorski peptidi opisani ovde mogu biti proizvedeni rekombinantno u bilo kom poznatom sistemu ekspresije proteina, uključujući, bez ograničenja, bakterije (na pr. E. coli ox Bacillus subtilis), ćelijske sisteme insekata (na pr. Drosophila Sf9 ćelijske sisteme), ćelijske sisteme kvasca (na pr., S. cerevisiae, S. saccharomyces) ili sisteme ekspresije filamentoznih gljivica, ili ekspresione sisteme životinjskih ćelija (na pr. ekspresioni sistemi ćelija sisara). Ako se peptid ili varijanta peptida proizvodi rekombinantno, na pr. pomoću E. coli, molekul nukleinske kiseline koji kodira peptid može takođe da kodira vodeću sekvencu koja dozvoljava izlučivanje zrelog peptida iz ćelije. Prema tome, sekvenca koja kodira peptid može uključiti pre sekvencu i pro sekvencu, na primer, od prirodnog bakterijskog peptida enterotoksina (ST) stabilnog na toplotu.

Izlučeni, zreli peptid se može prečistiti iz kultivacionog medijuma.

Sekvenca koja kodira peptid opisan ovde može da se ubaci u vektor sposoban da isporuči i održava molekul nukleinske kiseline u bakterijskoj ćeliji. Molekul DNK može biti umetnut u vektor koji se autonomno replicira (odgovarajući vektori uključuju, na primer, pGEM3Z i pcDNA3, i njihove derivate). Vektorska nukleinska kiselina može biti DNK bakterija ili bakteriofaga kao što je bakteriofag lambda ili M13 i njegovi derivati. Konstrukcija vektora koji sadrži nukleinsku kiselinu opisanu ovde može biti praćena transformacijom ćelije domaćina kao što je bakterija. Pogodni bakterijski domaćini uključuju, ali nisu ograničeni na, E. coli, B. subtilis, Pseudomonas i Salmonella. Genetski konstrukt takođe uključuje, pored kodirajućeg molekula nukleinske kiseline, elemente koji omogućavaju ekspresiju, kao što su promotor i regulatorne sekvence. Ekspresioni vektori mogu da sadrže sekvence kontrole transkripcije koje kontrolišu inicijaciju transkripcije, kao što su sekvence promotera, pojačivača, operatora i represora. Različite sekvence za kontrolu transkripcije su dobro poznate stručnjacima. Ekspresioni vektor takođe može uključiti translacionu regulatornu sekvencu (na pr. netranslatovanu 5' sekvencu, netranslatovanu 3' sekvencu, ili ulazno mesto internog ribozoma). Vektor može biti sposoban za autonomnu replikaciju ili može da se integriše u DNK domaćina da bi obezbedio stabilnost tokom proizvodnje peptida.

Sekvenca kodiranja proteina koja uključuje peptid opisan ovde takođe može biti fuzionisana sa nukleinskom kiselinom koja kodira tag afiniteta peptida, na primer, glutation S-transferazu (GST), maltoza E vezujući protein, protein A, FLAG tag, heksa-histidin, myc tag ili HA tag influence, kako bi se olakšalo prečišćavanje. Afinitetni tag ili reporter fuzije spaja okvir čitanja peptida od interesa sa okvirom čitanja gena koji kodira afinitetni tag tako da se generiše translaciona fuzija. Ekspresija fuzionog gena rezultira translacijom jednog peptida koji uključuje i peptid od interesa i tag afiniteta. U nekim slučajevima gde se koriste tag afiniteta, DNK sekvenca koja kodira mesto za prepoznavanje proteaze biće spojena između okvira čitanja za tag afiniteta i peptida od interesa.

Genetski konstrukti i metode pogodne za proizvodnju nezrelih i zrelih oblika peptida i varijanti koje su ovde opisane u drugim sistemima ekspresije proteina koji nisu bakterije, su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti i takođe se mogu koristiti za proizvodnju peptida u biološkom sistemu.

U nekim slučajevima, peptidi se mogu hemijski proizvesti. Peptidi se mogu sintetizovati brojnim različitim metodama uključujući sintezu u rastvoru i u čvrstoj fazi koristeći tradicionalnu BOC ili FMOC zaštitu. Na primer, peptid se može sintetizovati na 2-hlorotritilhloridu ili Vang smoli korišćenjem uzastopnih spajanja amino kiselina. Mogu se koristiti različite zaštitne grupe uključujući, bez ograničenja, sledeće zaštitne grupe: fluorenilmetiloksikarbonil ili terc-butiloksikarbonil (alfa-amino grupe, N-terminus); tritil ili terc-butil (tiol grupe Cys); terc-butil (J-karboksil glutaminske kiseline i hidroksilna grupa treonina, ako je prisutna); tritil (E-arnidna funkcija bočnog lanca asparagina i fenolna grupa tirozina, ako je prisutna); tritil ili /c/V-butildimetilsilil (hidroksi grupa serina, ako je prisutna) i fe/7-butiloksikarbonil (N-terminus pre naknadnih modifikacija bočnog lanca). Spajanje, uklanjanje zaštite i cepanje se može izvršiti različitim metodama. U nekim slučajevima, spajanje je izvršeno sa DIC i HOBt u prisustvu tercijarnog amina, i peptidu se može ukloniti zaštita i odvojiti od čvrstog nosača upotrebom koktela K (trifluorosirćetna kiselina 81%, fenol 5%, tioanizol 5%, 1 ,2-etanditiol 2,5%, voda 3%, dimetilsulfid 2%, amonijum jodid 1,5% m/m). Peptid se može izolovati različitim metodama. U jednom slučaju, nakon uklanjanja trifluorosirćetne kiseline i drugih isparljivih materija, peptid se može istaložiti korišćenjem organskog rastvarača. Disulfidne veze između Cys ostataka mogu se formirati različitim metodama. U jednom slučaju, disulfidne veze između Cys ostatka mogu se formirati korišćenjem dimetil sulfoksida (Tam et al. (1991) J. Am. Chem. Soc.113:6657-62) ili korišćenjem strategije oksidacije vazduha. Dobijeni peptid može da se prečisti različitim metodama uključujući, bez ograničenja, hromatografiju reverzne faze i liofilizuje.

Peptidi se mogu napraviti, izolovati ili koristiti ili u obliku slobodne baze ili kao njihove farmaceutski prihvatljive soli. Primeri soli uključuju, bez ograničenja, acetatne, hloridne, sulfatne i fosfatne soli peptida.

Kompozicije peptida i agonista GC-C receptora

Farmaceutske kompozicije iz ovog pronalaska su definisane u priloženim patentnim zahtevima.

Kompozicije su opisane gde se peptidi, sami ili u kombinaciji, mogu kombinovati sa bilo kojim farmaceutski prihvatljivim nosačem ili medijumom. U nekim slučajevima, peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol mogu se formulisati u farmaceutski prihvatljivu kompoziciju. U drugim slučajevima, peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol mogu se formulisati u ne-farmaceutski prihvatljivu kompoziciju. Peptidi se mogu kombinovati sa materijalima koji ne izazivaju neželjenu, alergijsku ili inače neželjenu reakciju kada se daju pacijentu. Nosači ili medijumi koji se koriste mogu uključivati rastvarače, disperzante, obloge, agense za podsticanje apsorpcije, agense za kontrolisano oslobađanje i jedan ili više inertnih ekscipijenata (koji uključuju skrobove, poliole, agense za granulaciju, mikrokristalnu celulozu (na pr. celfere, Celphere beads®), razblaživače, lubrikante, veziva, sredstva za dezintegraciju, i slično), itd. Ako se želi, tabletne doze izloženih kompozicija mogu biti obložene standardnim vodenim ili nevodenim tehnikama.

Primeri ekscipijenata za upotrebu kao farmaceutski prihvatljivi nosači i farmaceutski prihvatljivi inertni nosači i gore pomenuti dodatni sastojci uključuju, ali nisu ograničeni na veziva, sredstva za dezintegraciju, sredstva za podmazivanje, antimikrobna sredstva i sredstva za oblaganje.

Kako se ovde koristi, termin "vezivo" se odnosi na bilo koje farmaceutski prihvatljivo vezivo koje se može koristiti u praksi pronalaska. Primeri farmaceutski prihvatljivih veziva uključuju, bez ograničenja, skrob (na pr. kukuruzni skrob, krompirov skrob i preželatinizovani skrob (na pr. STARCH 1500® i STARCH 1500 LM®, koji prodaje Colorcon, Ltd.) i drugi skrobovi), maltodekstrin, želatin, prirodne i sintetičke gume kao što su bagremove, tragakant u prahu, guar guma, celuloza i njeni derivati (na pr. metilceluloza, hidroksietil celuloza, hidroksietil metilceluloza, hidroksipropil celuloza i hidroksipropil metilceluloza (hipromeloza), etil celuloza, celuloza acetat, kalcijum karboksimetilceluloza, natrijum karboksimetilceluloza, karboksimetilceluloza, celuloza u prahu, mikrofina celuloza, mikrokristalna celuloza (na pr. AVICEL, kao što je, AVICEL-PH-101, -103 i -105, prodaja od strane FMC Corporation, Marcus Hook, PA, SAD), polivin alkohol, polivin pirolidon (na pr. polivinil pirolidon K30), i njihove smeše.

Primeri veziva koji se mogu posebno koristiti u farmaceutskim kompozicijama uključuju polivinil alkohol, polivinilpirolidon (povidon), skrob, maltodekstrin ili celulozni etar (kao što su, na primer, metilceluloza, etilceluloza, karboksimetilceluloza, hidroksietil celuloza, hidroksietil metilceluloza, hidroksipropil celuloza i hidroksipropil metilceluloza).

Kako se ovde koristi, termin "punilac" se odnosi na bilo koji farmaceutski prihvatljiv punilac koji se može koristiti u praksi pronalaska. Primeri farmaceutski prihvatljivih punilaca obuhvataju, bez ograničenja, talk, kalcijum karbonat (na pr. granule ili prah), dvobazni kalcijum fosfat, trobazni kalcijum fosfat, kalcijum sulfat (na pr. granule ili prah), mikrokristalnu celulozu, (na pr. Avicel PH101 ili Celphere CP-305), mikrofina celuloza, celuloza u prahu, dekstrati, kaolin, manitol, silicijumska kiselina, sorbitol, skrob (na pr. Starch 1500), preželatinizovani skrob, laktoza, glukoza, fruktoza, galaktoza, trehaloza, saharoza, maltoza, izomalt, rafinoza, maltitol, melezitoza, stahioza, laktitol, palatinit, ksilitol, mioinozitol i njihove smeše.

Primeri farmaceutski prihvatljivih punilaca koji se mogu posebno koristiti za oblaganje peptida uključuju, bez ograničenja, talk, mikrokristalnu celulozu (na pr. Avicel PH101 ili Celphere CP-305), celulozu u prahu, dekstrate, kaolin, manitol, silicijumsku kiselinu, sorbitol, preželatinizovani skrob, laktozu, glukozu, fruktozu, galaktozu, trehalozu, saharozu, maltozu, izomalt, dvobazni kalcijum fosfat, rafinozu, maltitol, melezitozu, stahiozu, laktitol, palatinit, ksilitol, manitol, mioinozitol i njihove smeše.

Kako se ovde koristi, termin "aditivi" se odnosi na bilo koji farmaceutski prihvatljiv aditiv. Farmaceutski prihvatljivi aditivi uključuju, bez ograničenja, dezintegrante, aditive za dispergovanje, lubrikante, sredstva za klizanje, antioksidante, aditive za oblaganje, razblaživače, surfaktante, aditive za ukus, humektante, aditive za poboljšanje apsorpcije, aditive za kontrolisano oslobađanje, aditive protiv zgrušavanja, antimikrobne agense (na pr. konzervansi), boje, sredstva za sušenje, plastifikatore i boje. Kako se ovde koristi, "ekscipijent" je bilo koji farmaceutski prihvatljiv aditiv, punilac, vezivo ili agens.

Kompozicije takođe mogu opciono da sadrže druge terapeutske sastojke, agense protiv zgrušavanja, konzervanse, zaslađivače, bojekolorante, arome, sredstva za sušenje, plastifikatore, boje, sredstva za klizanje, anti-adherente, antistatičke agense, surfaktante (sredstva za vlaženje), antioksidante, sredstva za filmske premaze, i slično. Svaki takav opcioni sastojak mora biti kompatibilan sa ovde opisanim jedinjenjem da bi se osigurala stabilnost formulacije. Kompozicija može da sadrži druge aditive po potrebi, uključujući na primer laktozu, glukozu, fruktozu, galaktozu, trehalozu, saharozu, maltozu, rafinozu, maltitol, melezitozu, stahiozu, laktitol, palatinit, skrob, ksilitol, manitol, mioinozitol, itd. i njihove hidrate, i aminokiseline, na primer alanin, glicin i betain, i peptide i proteine, na primer albumen.

Kompozicije mogu uključivati, na primer, različite dodatne rastvarače, disperzante, obloge, aditive koji podstiču apsorpciju, aditive za kontrolisano oslobađanje i jedan ili više inertnih aditiva (koji uključuju, na primer, skrobove, poliole, aditive za granulaciju, mikrokristalnu celulozu, razblaživače, lubrikante, veziva, aditive za dezintegraciju i slično), itd. Ako se želi, tabletne doze opisanih kompozicija mogu biti obložene standardnim vodenim ili nevodenim tehnikama. Kompozicije takođe mogu uključivati, na primer, aditive protiv zgrušavanja, konzervanse, aditive za zaslađivanje, kolorante, arome, sredstva za sušenje, plastifikatore, boje i slično.

Pogodni dezintegranti uključuju, na primer, agar-agar, kalcijum karbonat, mikrokristalnu celulozu, kroskarmeloza natrijum, krospovidon, povidon, polakrilin kalijum, natrijum skrob glikolat, krompirov ili tapioka skrob, druge skrobove, pre-želatinizovani skrob, glinu, druge algine, celuloze, gume i njihove smeše.

Pogodni lubrikanti uključuju, na primer, kalcijum stearat, magnezijum stearat, mineralno ulje, lako mineralno ulje, glicerin, sorbitol, manitol, polietilen glikol, druge glikole, stearinsku kiselinu, natrijum lauril sulfat, talk, hidrogenizovano biljno ulje (na pr. kikirikijevo ulje, pamukovo ulje, suncokretovo ulje, susamovo ulje, maslinovo ulje, kukuruzno ulje i sojino ulje), cink stearat, etil oleat, etil laurat, agar, siloidni silika gel (AEROSIL 200, W.R. Grace Co., Baltimore, MD USA), koagulirani aerosol sintetičkog silicijum dioksida (Evonik Degussa Co., Plano, TX USA), pirogeni silicijum dioksid (CAB-O-SIL, Cabot Co., Boston, MA USA) i njihove smeše.

Pogodna sredstva za klizanje uključuju, na primer, leucin, koloidni silicijum dioksid, magnezijum trisilikat, celulozu u prahu, skrob, talk i tribazni kalcijum fosfat.

Pogodni aditivi protiv zgrušavanja uključuju, na primer, kalcijum silikat, magnezijum silikat, silicijum dioksid, koloidni silicijum dioksid, talk i njihove smeše.

Pogodni antimikrobni aditivi koji se mogu koristiti, na primer, kao konzervans za kompozicije peptida, uključuju, na primer, benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid, benzojevu kiselinu, benzil alkohol, butil paraben, cetilpiridinijum hlorid, krezol, hlorbutanol, dehidrosirćetnu kiselinu, etilparaben, metilparaben, fenol, feniletil alkohol, fenoksietanol, fenil-živa acetat, fenil-živa nitrat, kalijum sorbat, propilparaben, natrijum benzoat, natrijum dehidroacetat, natrijum propionat, sorbinsku kiselinu, timerszol, timo i njihove smeše.

Pogodni antioksidansi uključuju, na primer, BHA (butilovani hidroksianizol), BHT (butilovani hidroksitoluen), vitamin E, propil galat, askorbinsku kiselinu i njene soli ili estre, tokoferol i njegove estre, alfa-lipoičnu kiselinu i beta-karoten.

Pogodni aditivi za premazivanje obuhvataju, na primer, natrijum karboksimetil celulozu, celulozu acetat ftalat, etilcelulozu, želatin, farmaceutsku glazuru, hidroksipropil celulozu, hidroksipropil metilcelulozu, hidroksipropil metilcelulozni ftalat, metilcelulozu, metilcelulozu, polietilen glikol, polivinilacetat ftalat, šelak, saharozu, titanijum dioksid, karnauba vosak, mikrokristalni vosak i njihove smeše. Odgovarajući zaštitni premazi uključuju Aquacoat (na pr. Aquacoat Ethylcellulose Aquaeous Dispersion, 15% m/m, FMC Biopolimer, ECD-30), Eudragit (na pr. Eudragit E PO PE-EL, Roehm Pharma Polymers) i Opadry (na pr. Opadry, AMB disperzija, 20% m/m, Colorcon).

U određenim slučajevima, pogodni aditivi za kompoziciju peptida uključuju jedan ili više od saharoze, talka, magnezijum stearata, krospovidona ili BHA.

Ove kompozicije takođe mogu uključivati druge pomoćne materijale, agense i kategorije istih, uključujući, ali ne ograničavajući se na L-histidin, Pluronic®, Poloxamers (kao što su Lutrol® i Poloxamer 188), askorbinsku kiselinu, glutation, pojačivače propustljivosti (na pr. lipide, natrijum holat, acilkarnitin, salicilate, mešane žučne soli, micele masnih kiselina, helatore, masne kiseline, surfaktante, srednjelančane gliceride), inhibitore proteaze (na pr. sojin inhibitor tripsina, organske kiseline), agense za smanjenje pH i pojačivače apsorpcije koji su efikasni u promociji biodostupnosti (uključujući, ali ne ograničavajući se na one opisane u US 6086918 i US 5912014), materijale za žvakljive tablete (kao što su dekstroza, fruktoza, laktoza monohidrat, laktoza i aspartam, laktoza i celuloza, maltodekstrin, maltoza, manitol, mikrokristalna celuloza i guar guma, kristalni sorbitol); parenterale (kao što su manitol i povidon); plastifikatore (kao što su dibutil sebakat, plastifikatore za premaze, polivinilacetatftalat), prah lubrikante (kao što je gliceril behenat); meke želatinske kapsule (kao što je sorbitolov posebni rastvor); sfere za premazivanje (kao što su šećerne sfere); sferonizacijske agense (kao što su gliceril behenat i mikrokristalna celuloza); agense za suspenziju i geliranje (kao što su karagenan, gelan guma, manitol, mikrokristalna celuloza, povidon, natrijum skrobni glikolat, ksantan guma); zaslađivače (kao što su aspartam, aspartam i laktoza, dekstroza, fruktoza, med, maltodekstrin, maltoza, manitol, melasa, kristalni sorbitol, sorbitolov posebni rastvor, saharoza); agense za mokru granulaciju (kao što su kalcijum karbonat, anhidrovana laktoza, laktoza monohidrat, maltodekstrin, manitol, mikrokristalna celuloza, povidon, skrob), karamel, natrijum karboksimetilceluloza, krem ukusa višnje i ukus višnje, anhidrovana limunska kiselina, limunska kiselina, šećer u prahu; D&C crveno, broj 33, D&C žuto, broj 10 aluminijumsko jezero, dinatrijum edetat, etil-alkohol 15%, FD&C žuto, broj 6 aluminijumsko jezero, FD&C plavo broj1 aluminijumsko jezero, FD&C plavo br.1, FD&C plavo br.2 aluminijumsko jezero, FD&C zeleno, broj 3, FD&C crveno, broj 40, FD&C žuto, broj 6 aluminijumsko jezero, FD&C žuto, broj 6, FD&C žuto broj 10, glicerol palmitostearat, gliceril monostearat, indigo karmin, lecitin, manitol, metil i propil parabeni, monoamonijum glicirizatinat, prirodni i veštački ukus narandže, farmaceutski lak, poloksamer 188, polidekstroza, polisorbat 20, polisorbat 80, polividon, preželatinizovani kukuruzni skrob, preželatinizovani skrob, crveni gvožđe oksid, natrijum saharinat, natrijum karboksimetil eter, natrijum hlorid, natrijum citrat, natrijum fosfat, ukus jagode, sintetički crni gvožđe oksid, sintetički crveni gvožđe oksid, titan-dioksid i beli vosak.

U nekim slučajevima, dostupna je farmaceutska kompozicija koja uključuje peptid opisan u ovom tekstu i jedan ili više stabilizujućih agenasa odabranih između Mg<2+>, Ca<2+>, Zn<2+>, Mn<2+>, K<+>, Na<+>ili Al<3+>, kombinacije istih, i/ili sterički ometenog primarnog amina. U drugim slučajevima, agens je Mg<2+>, Ca<2+>ili Zn<2+>ili njihova kombinacija. U nekim slučajevima, katjon je dostupan, bez ograničenja, kao magnezijum acetat, magnezijum hlorid, magnezijum fosfat, magnezijum sulfat, kalcijum acetat, kalcijum hlorid, kalcijum fosfat, kalcijum sulfat, cink acetat, cink hlorid, cink fosfat, cink sulfat, mangan acetat, mangan hlorid, mangan fosfat, mangan sulfat, kalijum acetat, kalijum hlorid, kalijum fosfat, kalijum sulfat, natrijum acetat, natrijum hlorid, natrijum fosfat, natrijum sulfat, aluminijum acetat, aluminijum hlorid, aluminijum fosfat ili aluminijum sulfat. U drugim slučajevima, katjon je dostupan kao magnezijum hlorid, kalcijum hlorid, kalcijum fosfat, kalcijum sulfat, cink acetat, mangan hlorid, kalijum hlorid, natrijum hlorid ili aluminijum hlorid. U drugim slučajevima, katjon je dostupan kao kalcijum hlorid, magnezijum hlorid ili cink acetat.

U drugom slučaju, stabilizujući agens je sterički ometeni primarni amin. U daljem slučaju, sterički ometeni primarni amin je aminokiselina. U još jednom slučaju, aminokiselina je prirodno prisutna aminokiselina. U daljem slučaju, prirodno prisutna aminokiselina je odabrana iz grupe koja se sastoji od: histidina, fenilalanina, alanina, glutaminske kiseline, aspartinske kiseline, glutamina, leucina, metionina, asparagina, tirozina, treonina, izoleucina, triptofana, glicina i valina; dalje, prirodno prisutna aminokiselina je leucin, izoleucin, alanin ili metionin. U drugom slučaju, sterički ometeni primarni amin je ne-prirodno prisutna aminokiselina (na pr.1-aminocikloheksan karboksilna kiselina). U daljem slučaju, sterički ometeni primarni amin je cikloheksilamin, 2-metilbutilamin ili polimerni amin kao što je hitozan. U drugom slučaju, jedan ili više sterički ometenih primarnih amina se mogu koristiti u kompoziciji.

U nekim slučajevima, sterički ometeni primarni amin ima formulu:

gde R1, R2i R3su nezavisno odabrani od: H, C(O)OH, C1-C6alkil, C1-C6alkileter, C1-C6alkiltioeter, C1-C6alkil-karboksilna kiselina, C1-C6alkil-karboksilamid i alkilaril, pri čemu bilo koja grupa može biti jednostruko ili višestruko zamenjena sa halogenom ili aminom, pod uslovom da ne više od dve od R1, R2i R3su H. U drugom slučaju, ne više od jedne od R1, R2i R3je H.

U drugim slučajevima, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži farmaceutski prihvatljivi nosač, peptid, katjon izabran od Mg<2+>, Ca<2+>, Zn<2+>, Mn<2+>, K<+>, Na<+>ili Al<3+>, ili njihova smeša, i sterički ometeni primarni amin. U jednom slučaju, katjon je Mg<2+>, Ca<2+>ili Zn<2+>, ili njihova smeša. U daljem slučaju, farmaceutska kompozicija dodatno sadrži farmaceutski prihvatljivi vezivni agens i/ili farmaceutski prihvatljivi aditiv koji deluje kao sredstvo za klizanje, lubrikant ili aditiv koji deluje i kao sredstvo za klizanje i lubrikant i/ili neki antioksidans. U nekim slučajevima, farmaceutska kompozicija se primenjuje na nosač. U nekim slučajevima, nosač je punilo.

U nekim slučajevima, molarni odnos katjona:sterički ometenog primarnog amina:peptida u vodenom rastvoru koji se nanosi na nosač je 5-100:5-50:1. U nekim slučajevima, molarni odnos katjona:sterički ometenog primarnog amina može biti jednak ili veći od 2:1 (na pr. između 5:1 i 2:1). Dakle, u nekim slučajevima, molarni odnos katjona:sterički ometenog primarnog amina:peptida koji se nanosi na nosač je 100:50:1, 100:30:1, 80:40:1, 80:30:1, 80:20:1, 60:30:1, 60:20:1, 50:30:1, 50:20:1, 40:20:1, 20:20:1, 10:10:1, 10:5:1 ili 5:10:1. Kada je vezivni agens, na pr. metilceluloza, prisutan u rastvoru peptida GC-C agonista koji se nanosi na nosač, može biti prisutan u količini od 0,5% - 2,5% po težini (na pr.0,7%-l,7% ili 0,7% - 1% ili 1,5% ili 0,7%).

Utvrđeno je da je katjon izabran od Mg<2+>, Ca<2+>, Zn<2+>, Mn<2+>, K<+>, Na<+>i Al<3+>koristan za suzbijanje formiranja oksidacionog produkta polipeptida agonista GC-C receptora tokom skladištenja. Takođe je utvrđeno da je sterički ometeni primarni amin koristan za suzbijanje formiranja adukta formaldehid-imina ("formaldehid-iminski produkt") polipeptida agonista GC-C receptora tokom skladištenja. Stoga, formulacije polipeptida agonista GC-C receptora koje sadrže katjon izabran od Mg<2+>, Ca<2+>, Zn<2+>, Mn<2+>, K<+>, Na<+>ili Al<3+>- na primer, dvovalentni katjon izabran od Zn<2+>, Mg<2+>i Ca<2+>- i/ili sterički ometeni primarni amin, kao što je aminokiselina, imaju dovoljnu rok trajanja (što se meri hromatografskom čistoćom i/ili masenom spektrometrijom) za proizvodnju, skladištenje i distribuciju leka. Dalje, iako prisustvo samo sterički ometenog amina može povećati formiranje hidroliznog produkta polipeptida agonista GC-C receptora tokom skladištenja, kombinacija sterički ometenog primarnog amina i katjona, na pr. ali ne ograničeno na kombinaciju leucina i Ca<2+>, suzbija formiranje hidroliznog produkta polipeptida agonista GC-C receptora kao i oksidacionog produkta polipeptida agonista GC-C receptora tokom skladištenja, što dovodi do još veće ukupne stabilnosti, što se utvrđuje maseno/masenom analizom i/ili hromatografskom čistoćom.

U daljem slučaju, farmaceutska kompozicija dodatno sadrži farmaceutski prihvatljivi vezivni agens ili aditiv, i/ili farmaceutski prihvatljivo sredstvo za klizanje, lubrikant ili aditiv koji deluje i kao sredstvo za klizanje i kao lubrikant, i/ili antioksidans.

Prikladne farmaceutske kompozicije će uopšteno uključivati odgovarajuću količinu aktivne supstance zajedno sa farmaceutskim diluentom ili ekscipientom, kao što je sterilni vodeni rastvor, kako bi se dobile različite krajnje koncentracije, zavisno od namenjene upotrebe. Tehnike pripreme su opštepoznate u tehnici, kao što je objašnjeno u Remington's Pharmaceutical Sciences (18th Edition, Mack Publishing Company, 1995).

Za lečenje gastrointestinalnih poremećaja, peptidi opisani ovde se daju oralno ili rektalno, na primer kao tableta, kapsula, kesica koja sadrži unapred određenu količinu aktivnog sastojka, pelet, gel, pasta, sirup, bolus, elektuarij, kaša, prah, liofilizovani prah, granule, kao rastvor ili kao suspenzija u vodi ili nevodenoj tečnosti; kao emulzija ulje-u-vodi ili voda-u-ulju,tečna emulzija, putem liposomalne formulacije (videti, napr., EP 736299) ili u nekom drugom obliku. Oralno davana sredstva mogu da sadrže veziva, lubrikante, inertna punila, sredstva za lubrikaciju, površinski aktivne ili disperzne agense, arome i humektante. Oralno davane formulacije, kao što su tablete, mogu opciono biti obložene ili zarezane i mogu biti formulirane tako da pružaju produženo, odloženo ili kontrolisano oslobađanje aktivnog sastojka u njima. Peptidi se mogu paralelno davati s drugim agensima koji se koriste za tretiranje gastrointestinalnih poremećaja, uključujući, ali ne ograničavajući se na agense opisane ovde.

Prikladne farmaceutske kompozicije mogu sadržati jedan ili više drugih terapijskih agenasa. Takvi terapijski agensi uključuju, bez ograničenja, analgetske agense; anti-sekretorne agense, uključujući inhibitore proton pumpe, antagoniste kiselinske pumpe i antagoniste H2 receptora; inhibitore PDE5; inhibitore ODC; GABA-B antagoniste; sekvestrante žučnih kiselina; prokinetičke i promotilne agense; antidepresive; antibiotike; antiemetike; opioide i agense za zaštitu sluznice.

Metode lečenja

Kompozicije za upotrebu u metodama lečenja, peptidi i njihove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u metodama lečenja su definisani u priloženim patentnim zahtevima.

U različitim slučajevima, peptidi ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu biti korisni u metodama za tretmane čišćenja kolona ili u tretmanima gastrointestinalnih poremećaja. U nekim slučajevima, peptidi ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu biti korisne u metodi za čišćenje debelog creva pre kolonoskopije ili hirurškog zahvata. U daljim slučajevima, peptidi se mogu koristiti za pripremu pacijenata za kolonoskopski tretman. U nekim slučajevima, peptidi ili farmaceutski prihvatljive soli mogu biti korišćeni za pripremu pacijenata za hirurški zahvat, kao što je hirurgija creva. U drugim slučajevima, peptidi se mogu koristiti za tretiranje gastrointestinalnih poremećaja, visceralnih poremećaja, karcinoma kolona, naslednog nepolipoznog kolorektalnog karcinoma (HNPCC), tj. Linč-ovog sindroma, gastropareze (GP), polipa, bola, opšteg abdominalnog bola, postoperativnog ileusa, opstipacije indukovane opioidima, funkcionalne dispepsije, divertikularne bolesti, uključujući, ali ne ograničavajući se na SUDD (simptomatsku nekompliciranu divertikularnu bolest) i SCAD (segmentalni kolitis povezan sa divertikulozom), divertikulozu, sindrom iritabilnog creva sa dijarejom, bol povezan sa sindromom iritabilnog creva (IBS), ulcerativni kolitis, ulcerativni proktitis, Kronova bolest, upalna bolest creva (IBD), hronična ili akutna radijaciona protopatija, rektalni bol, hronična proktalgija, proktalgija fugaks, analni bol, hronična analna fisura, postoperativni analni bol, sindrom preaktivne bešike, stresna inkontinencija, intersticijski cistitis, bolni sindrom bešike, karcinom kolona, bol povezan sa kancerom, opšti bol karlice, endometrioza, orhialgija, hronični prostatitis, prostatodinija, vulvodinija, sindrom uretre, bol u penisu, perianalni bol i drugi gastrointestinalni i visceralni poremećaji. U nekim slučajevima se leče gastrointestinalni poremećaji. U jednom slučaju, gastrointestinalni poremećaj je karcinom debelog creva ili polipi. U drugom slučaju, gastrointestinalni poremećaj je nasledni ne-polipozni kolorektalni karcinom (HNPCC), odnosno Linčov sindrom. U drugom slučaju, gastrointestinalni poremećaj je bol u gastrointestinalnom traktu. U još jednom slučaju, gastrointestinalni poremećaj je visceralni ili abdominalni bol ili bol povezana sa kancerom. U drugom slučaju, gastrointestinalni poremećaj je rak rektuma. U drugom slučaju, gastrointestinalni poremećaj je funkcionalna dispepsija.

Izložena, ali ne zahtevana je metoda za čišćenje debelog creva subjekta u pripremi za proceduru kolonoskopije koja uključuje davanje subjektu efektivne doze kompozicije za čišćenje debelog creva, gde kompozicija za čišćenje debelog creva sadrži farmaceutski prihvatljivi ekscipijent, rastvarač ili nosač i peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu sol, gde peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol sadrži aminokiselinsku sekvencu:

Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Xaa7Xaa8Xaa9Xaa10Xaa11Xaa12Xaa13Xaa14Ala15Xaa16Xaa17Gly18Xaa19Xaa20Xaa21(SEKV. ID BR.: 1), ili njihovu farmaceutski prihvatljivu sol; gde

Xaa1je BE ili je odsutan;

Xaa2je BK, Asn ili je odsutan;

Xaa3je Asn, Ser ili je odsutan;

Xaa4je Ser ili je odsutan;

Xaa5je Ser, Asn, lie, BE ili je odsutan;

Xaa6je Tyr, Asp, 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), BK ili je odsutan;

Xaa7je Cys, cistationin (Cth), alilglicin (Ag), Hag, ili Asp;

Xaa8je Cys, cistationin (Cth), penicilamin (Pen), ili alilglicin (Ag);

Xaa9je Glu, Asp, Ser, Thr, ili Gin;

Xaa10je Leu, cikloheksilalanin (Cha), Phe, ili 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe);

Xaa11je Cys, Ag, ili penicilamin (Pen);

Xaa12je Cys, alilglicin (Ag), Hag, Cth, Dpr, ili Val;

Xaa13je Asn ili Leu;

Xaa14je Pro, Val, sarkozin (Sar), Leu, ili hidroksiprolin (OH-Pro);

Xaa16je Cys, Ag, Pen ili Cth;

Xaa19je Cys, Ag ili Pen;

Xaa20je Tyr, Leu, 4-fluorofenilalanin ((4-F)Phe), cikloheksilalanin (Cha), D-Tyr, N-Methyl Tyr (Nme-Tyr) ili je odsutan;

Xaa21je odsutan ili Asn;

gde najmanje jedan Xaa je BE, BK, (4-F)Phe, Cth, Ag, Hag, Pen, Cha, Sar, Dpr, ili OH-Pro i gde peptid sadrži kovalentnu vezu između Xaa7i Xaa12, Xaa8i Xaa16, i Xaa11i Xaa19.

U drugom slučaju, kompozicija za čišćenje debelog creva se koristi u metodi za čišćenje debelog creva subjekta u pripremi za postupak kolonoskopije, gde se kompozicija za čišćenje debelog creva sastoji od farmaceutski prihvatljivog ekscipienta, ratvarača ili nosača, i peptida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli iz ove invencije, gde peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEKV. ID BR.: 2) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 3) C12-BE BK Asn Ser Ser Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr- NH2;

(SEKV. ID BR.: 4) C16-BE BK Asn Ser Ser Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr- NH2;

(SEKV. ID BR.: 8) H-Cys Ag Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Ag Thr Gly Cys Tyr- NH2; (SEKV. ID BR.: 9) H-Asn Asp Asp Ag Glu Leu Cys Val Asn Val Ala Ag Thr Gly Cys Leu NH2;

(SEKV. ID BR.: 12) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys- NH2;

(SEKV. ID BR.: 13) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 14) H-Ag Cys Glu Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 15) H-Ag Cys Glu (4-F)Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys-NH2; (SEKV. ID BR.: 16) H-Ag Cys Glu (4-F)Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 17) H-Ag Cys Glu (4-F)Phe Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys (4-F)Phe NH2;

(SEKV. ID BR.: 43) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 49) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Leu Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 52) H-Ag Cys Thr Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 58) Pent-Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 87) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 88) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 89) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 90) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 91) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; ili (SEKV. ID BR.: 92) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys-COOH.

U jednom slučaju, peptidi i kompozicije opisane ovde mogu se koristiti za pripremu pacijenta pre kolonoskopije.

U nekim slučajevima, peptidi i farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde mogu se koristiti u metodi za čišćenje debelog creva u pripremi za kolonoskopski postupak. U nekim slučajevima, metoda za čišćenje debelog creva obuhvata davanje efektivne prve doze, kao što je između 5 Pg i 100 mg peptida ili farmaceutski prihvatljive soli. Sledećeg jutra se daje efektivna druga doza, kao što je između 5 Pg i 100 mg peptida ili farmaceutski prihvatljive soli kako bi se uglavnom očistio kolon. U drugim slučajevima, peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol se daju u jednoj dozi između 5 Pg i 200 mg.

Peptidi i farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde se mogu koristiti sami ili u kombinovanoj terapiji za lečenje, prevenciju ili smanjenje visceralnog bola koji je povezan sa gastrointestinalnim poremećajima, kancerom, opštim karličnim bolom, bolom u bešici, preaktivnom bešikom, endometriozom, orhialgijom, hroničnim prostatitisom, prostatodinijom, vulvodinijom, sindromom uretre, bolom u penisu i perianalnim bolom ili boli koja je povezana sa drugim poremećajima opisanim ovde.

Peptidi i farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde mogu se koristiti u kombinovanoj terapiji sa drugim agensima. Na primer, peptidi se mogu primenjivati sa analgetskim peptidom, stimulatorom rastvorljive guanilat ciklaze (sGC) ili jedinjenjem. Analgetski peptid ili jedinjenje mogu biti kovalentno vezani za peptid opisan ovde, ili se mogu primeniti kao zasebni agensi koji se daju zajedno ili sekvencijalno u kombinovanoj terapiji sa peptidom opisanim ovde. Peptidi i farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde se takođe mogu primenjivati u kombinaciji sa drugim agensima koji se koriste za lečenje GI poremećaja, uključujući antidepresive, agense za povećanje pokretljivosti ili prokinetičke agense, antiemetike, antibiotike, inhibitore protonske pumpe, blokatore kiselina (na pr. antagoniste H2 receptora histamina), antagoniste kiselih pumpi, PDE5 inhibitore, ODC inhibitore, GABA-B agoniste, sekvestrante žučnih kiselina, COX-2 inhibitore, NSAIDS, kortikosteroide, opioide, agoniste beta-3 adrenergičkih receptora, anti-holinergijske agense, uključujući ali ne ograničavajući se na antagoniste muskarinskih receptora, triciklične antidepresive i agense za zaštitu sluzokože.

U drugim slučajevima, terapijske kombinacije peptida uključuju Celekoksib, druge nesteroidne antiinflamatorne lekove (NSAID), uključujući Sulidac i izomere, i inhibitore fosfodiesteraze (PDE) i inhibitore ornitin dekarboksilaze (ODC) (na pr. d,ladifluorometilornitin DFMO) za kolonske polipe - sporadične i Linč sindrom; Mesalamin ili 5-aminosalicilnu kiselinu (5-ASA), ili steroide, budezonid za upalne bolesti creva (na pr. Kronova bolest i ulcerozni kolitis); opioidi, tramadol i tramadol izomere i analoge za hronični bol, uključujući bol uzrokovan rakom; ili Eluxalodin.

U nekim slučajevima, korisni analgetički agensi koji se mogu koristiti zajedno sa opisanim peptidima uključuju blokatore kalcijumskih kanala (na pr. zikonotid), antagoniste 5HT receptora (na pr.5HT3, 5HT4 i 5HT1 antagoniste), agoniste 5HT4 (na pr. tegaserod (Zelnorm®), mosaprid, metoklopramid, zakoprid, cisaprid, renzaprid, benzimidazolonske derivate kao što su BIMU 1 i BIMU 8 i lireksaprid), agoniste 5HT1 (na pr. sumatriptan i buspiron), agoniste opioidnih receptora (na pr. loperamid, fedotozin, enkefalin pentapeptid, morfijum, difeniloksilat, frakefamid, trimebutin i fentanil), agoniste CCK receptora (na pr. loksiglumid i deksloksiglumid), antagoniste NK1 receptora (na pr. aprepitant, vofopitant, ezlopitant, R-673 (Hoffmann-La Roche Ltd), SR-48968 i SR-14033 (Sanofi Synthelabo), CP-122,721 (Pfizer, Inc.), GW679769 (Glaxo Smith Kline) i TAK-637 (Takeda/Abbot)), antagoniste NK2 receptora (na pr. nepadutant, saredutant, GW597599 (Glaxo Smith Kline), SR-144190 (Sanofi-Synthelabo) i UK-290795 (Pfizer Inc)), antagoniste NK3 receptora (na pr. osanetant (SR-142801; Sanofi-Synthelabo), SR-241586 i talnetant), inhibitori preuzimanja norepinefrina i serotonina (NSRI) (na pr. milnacipran), agoniste vaniloidnih i kanabinoidnih receptora, sialorfin i sialorfin srodne peptide. Analgetički agensi iz različitih klasa opisani su u literaturi.

U nekim slučajevima, jedan ili više drugih terapijskih agenasa mogu se koristiti u kombinaciji sa opisanim peptidima. Takvi agensi uključuju antidepresive, promotilitetne ili prokinetičke agense, antiemetike, antibiotike, inhibitore protonske pumpe, blokatore kiseline (na pr. antagonisti histaminskih H2 receptora), antagoniste kiselinskih pumpi, inhibitore PDE5, inhibitore ODC, GABA-B agoniste, sekvestrante žučnih kiselina, opioide i agense koji štite sluzokožu.

Primeri antidepresiva uključuju, bez ograničenja, triciklične antidepresive poput amitriptilina (Elavil®), desipramina (Norpramin®), imipramina (Tofranil®), amoksapina (Asendin®), nortriptilina; selektivne inhibitore preuzimanja serotonina (SSRI) poput paroksetina (Paxil®), fluoksetina (Prozac®), sertralina (Zoloft®) i citaloprama (Celexa®); i druge kao što su doksepin (Sinequan®) i trazodon (Desyrel®).

Primeri promotilitetnih i prokinetičkih agenasa uključuju, bez ograničenja, itoprid, oktreotid, betanehol, metoklopramid (Reglan®), domperidon (Motilium®), eritromicin (i njegove derivate) i cisaprid (Propulsid®). Primer antiemetika uključuje, bez ograničenja, proklorperazin.

Primeri antibiotika koji se mogu koristiti uključuju one koji se mogu koristiti za lečenje infekcija Helicobacter pylori, poput amoksicilina, tetraciklina, metronidazola ili klaritromicina. Ostali antibiotici poput eritromicina i njegovih derivata takođe se mogu koristiti u kombinaciji sa ovde opisanim peptidima.

Primeri inhibitora protonske pumpe uključuju, bez ograničenja, omeprazol (Prilosec®), ezomeprazol (Nexium®), lansoprazol (Prevacid®), pantoprazol (Protonix®) i rabeprazol (Aciphex®). Primeri blokatora histaminskih H2 receptora uključuju, bez ograničenja, cimetidin, ranitidin, famotidin i nizatidin. Primeri antagonista kiselinskih pumpi uključuju, bez ograničenja, revaprazan, CS-526 (J. Pharmacol. Exp. Ther. (2007)

323:308-317), PF-03716556 (J. Pharmacol. Exp. Ther. (2009) 328(2):671-9), i YH1885 (Drug Metab. Dispos. (2001) 29(l):54-9).

Primeri PDE5 inhibitora su, bez ograničenja, avanafil, lodenafil, mirodenafil, sildenafil citrat, tadalafil, vardenafil i udenafil. GABA-B agonisti uključuju, bez ograničenja, baklofen i XP19986 (CAS registarski broj 847353-30-4). Primeri sekvestranta žučnih kiselina uključuju, bez ograničenja, GT102-279, holestiramin, kolesevelam, kolesevelam hidrohlorid, ursodeoksiholnu kiselinu, kolestipol, kolestilan, sevelamer, polidialilamin ukršten s epiklorhidrinom, dialkilaminoalkil derivate ukrštenog dekstrana i N-(cikloalkil)alkilamine. Primeri agenasa koji štite sluzokožu uključuju, bez ograničenja, sukralfat (Carafate), teprenon, polaprezinc, cetraheksat i bizmut-subsalicilat.

Kombinovana terapija može se postići primenom dva ili više aktivna agensa, na primer, peptida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde i drugog terapijskog peptida ili jedinjenja, pri čemu svaki od njih je formulisan i primenjen zasebno, ili primenom dva ili više aktivna agensa u jednoj formulaciji. Ostale kombinacije takođe su obuhvaćene kombinovanom terapijom. Na primer, dva aktivna agensa mogu biti formulisana zajedno i primenjena u kombinaciji sa posebnom formulacijom koja sadrži treći aktivni agens. Iako se dva ili više aktivnih agenasa u kombinovanoj terapiji mogu primenjivati istovremeno, to nije neophodno. Na primer, primena prvog aktivnog agensa (ili kombinacije aktivnih agensa) može prethoditi primeni drugog agensa (ili kombinaciji agensa) nakon nekoliko minuta, sati, dana ili nedelja. Dakle, dva ili više aktivnih agenasa mogu se primenjivati unutar nekoliko minuta jedan za drugim ili unutar 1, 2, 3, 6, 9, 12, 15, 18 ili 24 sata jedan za drugim ili unutar 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14 dana jedan za drugim ili unutar 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 nedelja jedan za drugim. U nekim slučajevima moguće su i duže pauze. Iako je u mnogim slučajevima poželjno da se dva ili više aktivnih agenasa koji se koriste u kombinovanoj terapiji nalaze u telu pacijenta u isto vreme, to nije neophodno.

Doziranje

Opseg doze za odrasle ljude može se generalno kretati od 5 Pg do 100 mg/dnevno oralno ili rektalno za peptid i farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde. Tablete, kapsule ili druge forme iz prezentacije u diskretnim jedinicama mogu sadržati količinu opisane supstance koja je efektivna u takvoj dozi ili kao višestruko od iste, na primer, jedinice koje sadrže 25 Pg do 2 mg ili oko 100 Pg do 1 mg. Tačna količina supstance koju propisuje lekar biće odgovornost prisutnog lekara. Međutim, doza koja se primenjuje zavisiće od brojnih faktora, uključujući starost i pol pacijenta, precizan poremećaj koji se leči i njegovu ozbiljnost.

U različitim slučajevima, jedinica doze se može primeniti sa hranom u bilo koje doba dana, bez hrane u bilo koje doba dana, sa hranom nakon noćnog posta (na primer, uz doručak), pred spavanje nakon lagane užine. U jednom konkretnom slučaju, jedinica doze se primenjuje pre ili nakon konzumiranja hrane (na primer, obroka). U drugom slučaju, jedinica doze se primenjuje otprilike 15 minuta do 1 sat pre konzumiranja hrane. U različitim slučajevima, jedinica doze se primenjuje jednom dnevno, dva puta dnevno, tri puta dnevno, četiri puta dnevno, pet puta dnevno ili šest puta dnevno. U određenim slučajevima, jedinica doze i dnevna doza su jednake.

U nekim slučajevima, kompozicija koja sadrži peptid opisan ovde je obezbeđen u podeljenoj dozi. Podeljena doza se primenjuje noć pre i na dan kolonoskopije. U drugim slučajevima, doza se obezbeđuje u jednoj dozi noć pre ili na dan kolonoskopije.

U kombinovanoj terapiji, tačna količina svakog od dva ili više aktivnih sastojaka u jedinici doze zavisiće od željene doze svakog sastojka. Stoga može biti korisno kreirati jedinicu doze koja će, kada se primenjuje prema određenom režimu doziranja (na primer, režimu doziranja koji određuje određeni broj jedinica i određeno vreme primene), isporučiti istu dozu svakog sastojka kao što bi se primenjivala ako bi se pacijent lečio samo jednim sastojkom. U drugim okolnostima, može biti poželjno kreirati jedinicu doze koja će isporučiti dozu jednog ili više sastojaka koja je manja od one koja bi se primenjivala ako bi se pacijent lečio samo jednim sastojkom. Na kraju, može biti poželjno kreirati jedinicu doze koja će isporučiti dozu jednog ili više sastojaka koja je veća od one koja bi se primenjivala ako bi se pacijent lečio samo jednim sastojkom.

Farmaceutska kompozicija može sadržati dodatne sastojke, uključujući, ali ne ograničavajući se na aktivne sastojke i pomoćne supstance opisane ovde. U određenim slučajevima, jedan ili više terapijskih agenasa jedinice doze može biti u formi produženog ili kontrolisanog oslobađanja, a dodatni terapijski agensi ne moraju biti u formi produženog oslobađanja. Na primer, peptid ili agonist opisan ovde može biti u formulaciji kontrolisanog oslobađanja ili produženog oslobađanja u istoj jedinici doze s drugim agensom koji može biti ili ne biti u formi kontrolisanog ili produženog oslobađanja. Stoga, u određenim slučajevima, može biti poželjno osigurati trenutno oslobađanje jednog ili više agensa opisanih ovde, i kontrolisano oslobađanje jednog ili više drugih agenasa.

Ova invencija je opisana s referencom na neka njihova izvođenja za primer. Međutim, lako će biti očigledno stručnjacima u ovoj oblasti da je moguće uobličiti invenciju u specifične oblike koji se razlikuju od onih koji su gore opisani u izvođenjima za primer. Izvođenja za primer su samo ilustrativna i ne bi trebalo ih smatrati ograničavajućim na bilo koji način. Opseg invencije je definisan priloženim zahtevima i njihovim ekvivalentima, a ne prethodnim opisom.

PRMERI

Primer 1: Akumulacija cGMP-a u T84 ćelijama za analizu GC-C aktivnosti

Za cGMP analizu, T84 ćelije u koncentraciji od 2,0 x 10<5>ćelija/mL su inkubirane tokom noći u pločama za kultivaciju sa 96 bunarčLća. Sutradan, T84 ćelije su oprane dva puta sa 200 µL DMEM 20 mM MES (pH 5) ili DMEM 50 mM natrijum bikarbonata (pH 8) ili DMEM bez dodataka za pH 7. Ovi puferski rastvori ne sadrže serum. Nakon drugog pranja, ćelije su inkubirane sa 180 µL 1 mM izobutilmetilksantina (IBMX) u svakom od pH 5, 7 ili 8 puferskog rastvora, u toku 10 minuta na 37°C, kako bi se inhibirala aktivnost fosfodiesteraze. Zatim su peptidi razblaženi u pH 5, 7 ili 8 puferskom rastvoru u 10x koncentraciji. Peptidni rastvor od 20 µL je razblažen u konačnom volumenu od 200 µL sa T84 ćelijama, što dovodi koncentraciju svakog peptida na 1x. Za svaki peptid je izvršena analiza krive sa 11 tačaka, sa konačnim koncentracijama peptida testiranim u svakom ispitivanju u nM: 10000, 3000, 1000, 300, 100, 30, 10, 3, 1, 0.3, 0.1.

Nije korišćena kontrolna grupa peptida da bi se odredili endogeni nivoi cGMP. Peptidi su inkubirani 30 minuta na 37°C. Nakon 30 minuta, supernatanti su uklonjeni i ćelije su lizirane sa 200 µL 0,1 M HCl. ûelije su lizirane u toku 30 minuta na ledu. Nakon 30 minuta, lizati su pipetirani i stavljeni u HPLC ploču sa 96 bunarčLća i centrifugirani na 10.000 x g u toku 10 minuta kako bi se uklonili svi ćelijski ostaci. Supernatanti od prethodnog centrifugiranja su uklonjeni i stavljani u novu HPLC ploču sa 96 bunarčLća. Uzorci su razblaženi sa jednakom količinom 1 M amonijum acetata (pH 7) da bi se neutralisali za bolju hromatografiju. 2x cGMP standardna kriva je pripremljena u 0,1 M HCl, a zatim razblažena sa jednakom količinom 1 M amonijum acetata, sa sledećim krajnjim koncentracijama u ng/mL: 1000, 500, 250, 125, 50, 25, 5, 2,5, 0,5. ST Core peptid (u daljem tekstu ST Core) ima aminokiselinsku sekvencu: Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr (SEKV: ID BR.94).

Koncentracije cGMP-a su određene iz svakog uzorka koristeći LC/MS uslove navedene u Tabeli 4 i izračunate su standardne krive. Vrednosti EC50 su izračunate iz krivih koncentracija-odgovora generisanih pomoću GraphPad Prism softvera. Rezultati za odabrane peptide mogu se naći u slikama 1-14, 23 i 24.

Tabela 1: LC/MS uslovi:

Primer 2: Analiza vezivanja GC-C

Sva vezivanja sa GC-C su izvršena u konačnom volumenu od 200 µl medijuma na pH 5, 7 ili 8. Medijum na pH 5 je pripremljen pomoću DMEM-a i 0.5% BSA i 20 mM 2-(N-morfolino)etansulfonske kiseline (MES). Medijum na pH 7 je pripremljen pomoću DMEM-a i 0.5% BSA. Medijum na pH 8 je pripremljen pomoću DMEM-a i 0.5% BSA sa 20 mM natrijum-bikarbonata.

T84 ćelije su korišćene u količini od 250.000 ćelija po reakciji. ûelije su uzgajane do konfluenacije u T-150 čašama koristeći DMEM-F12 50/50 medijum i 5 mM L-glutamin i 5% FBS. ûelije su skupljene pomoću DMEM-a i 0,5% BSA i prebrojane kako bi se odredila količina za dodavanje da bi se dobilo 250.000 ćelija po reakciji u konačnoj zapremini od 200 µL. Zatim su dodati 200.000 CPM po reakciji 1125-STp, hladni kompetitor peptida i zatim T84 ćelije da bi se započela reakcija. Uzorci su inkubirani na 37°C u toku 1 sata. Nakon 1 sata, ceo uzorak je dodata na GF-C ploče koje su prethodno blokirane i aspirirane. Zatim je svaki bunarčLć dobro opran dva puta sa 200 µL hladnog PBS-a. Donji deo filter ploče je uklonjen i ploča sa 96 bunarčLća je postavljena pod uglom od 50 stepeni da se osuši. Nakon sušenja, 100 µL scintilacionog fluida je dodato u svaki bunarčLć i lagano vorteksovano pre brojanja. Rezultati za odabrane peptide mogu se naći na slikama 1 i 23.

Primer 3: Inkubacije in vitro metabolizma crevnog fluida pacova (RIF)

Crevni fluid pacova (RIF) je dobijen dodavanjem PBS-a u ligirane jejunum petlje pacova u toku trideset minuta. Zatim je tečnost sakupljena, pomešana i čuvana na ledu pre centrifugiranja na 4°C. Supernatant je uklonjen i brzo zamrznut. Zatim je 60 Pmol (100 µg/mL)/l peptida dodato u crevni fluid pacova zajedno sa PBS-om i 0.5% BSA. Kontrolne inkubacije su izvršene u PBS-u. Zatim su uzeti uzorci od 50 µL u duplikatu iz svih uzoraka u vremenskim intervalima od 0, 10, 30 i 60 minuta i zaustavljeni sa 12% trihlorsirćetnom kiselinom koja sadrži unutrašnji standard.

Uzorci su centrifugirani i supernatant je uklonjen za analizu pomoću LC-MS metode korišćenjem izračunate tačne mase svakog peptida (ili predviđenih metabolita) za generisanje ekstrahovanih jonskih hromatograma. Relativni faktor odgovora (područje vrha analita/područje vrha internog standarda) za svaki uzorak je korišćen za konstrukciju procenta ostataka u odnosu na vreme=0. Rezultati za odabrane peptide mogu se naći na slikama 1, 20, 21 i 23.

Primer 4: In Vivo ligirana duodenalna petlja pacova

Prvo je pripremljeno 60 PM peptida u 200 PL PBS-a. Ovaj rastvor je injektiran u ligirane duodenalne petlje pacova, koje su bile dugačke oko 3-5 cm. Korišćene su tri životinje po peptidu po vremenskoj tački. Nakon 30 i 60 minuta, petlje su uklonjene, izmerene i izmerene. Zatim je tečni sadržaj sakupljen i smrznut u Ependorf tubama, a petlje su ponovo izmerene kako bi se utvrdila njihova prazna težina. Uzorci su potom odmrznuti i centrifugirani, a supernatant je uklonjen iz svakog uzorka. Zatim je iz svakog uzorka uzet uzorak od 50 ȝL i dodan u 12% trihlorsirćetnu kiselinu koja sadrži interni standard.

Analiza je izvršena pomoću LC-MS-a koristeći izračunatu tačnu masu svakog peptida (ili predviđenih metabolita) kako bi se generisali ekstraktovani jonski hromatogrami. Relativni faktor odziva (područje vrha analita/područje vrha internog standarda) za svaki uzorak korišćen je za izračunavanje procenta ostataka u odnosu na vreme = 0. Količina tečnosti koja se izlučila tokom inkubacije određena je formulom (izlučena tečnost = (punjena petlja -prazna petlja) / dužina). Ova formula je korišćena za izračunavanje koliko tečnosti je povučeno u petlje u svakom vremenskom trenutku. Rezultati za odabrane peptide mogu se naći u slikama 15, 16, 18, 19, 22 i 23.

Primer 5: Priprema dikarba peptida

Dikarba peptidi su napravljeni korišćenjem standardnih Fmoc-/Trt/Otbu zaštićenih amino kiselina. Dikarba peptidi su sintetisani na Protein Technologies Symphony X ®, pri čemu su amino kiseline rastvorene u dimetilformamidu (DMF) u koncentraciji od 0,5 M. Fmoc-Cys(Trt)-OH je rastvoren u rastvoru koji sadrži 0,5 M oksima pura u DMF-u. Potom je HCTU rastvoren u N-metil-2-pirolidonu (NMP) na koncentraciju od 0,5 M, dok je 1,0 M DIPEA u NMP takođe korišćena. DIC je rastvoren u NMP-u na koncentraciju od 0,5 M. Deprotekcija Fmoc-a izvršena je korišćenjem rastvora koji sadrži 20% piperidina u DMF-u.

Fmoc-Cys(Trt)-O-Wang smola (0,2 mmol, 0,29 mmol/g) je tretirana sa 20% piperidinom u DMF-u (3 x 6 mL, 3 min, 1 x 6 mL, 10 min). Dobijena smola je oprana DMF-om (6 x 10 mL, 30 s). U rastvoru koji sadrži Fmoc-Xaa-OH, HCTU i DIPEA u NMP-u, koji je prethodno izmešan u toku 30 sekundi, dodata je smola i smeša je ponovo agitovana u toku 30 minuta. Smola je filtrirana i oprana jednom sa DMF-om. U slučaju Fmoc-Cys(Trt)-OH, rastvor amino kiseline/oksima pura je pomešan sa DIC u NMP-u tokom 5 minuta, dodat je u smolu i agitovan je u toku 45 minuta. Smola je filtrirana i isprana jednom sa DMF-om. Dobijena smola je filtrirana i oprana sa DMF-om (6 x 10 mL). Materijal je bio podvrgnut prethodno navedenom protokolu i peptid je produžen na punu sekvencu. Da bi se smola osušila pre metateze, oprana je sa CH2Cl2 (3 x 10 mL) i heksanom (3 x 10 mL), a zatim osušena pod smanjenim pritiskom preko noći. Materijal je bio podvrgnut prethodno navedenom protokolu i peptid je produžen do makrociklizacije.

Da bi se izvršila metateza na peptidima, korišćen je sledeći postupak.500 mg (0,1 mmol) zaštićenog smolom vezanog peptida dodat je rastvor HGII u koncentraciji od 6 mg/mL u 5 mL smeše rastvarača 4:11,2-dihloroetan - 0,4 M LiCl u DMA. Dobijena suspenzija je zagrevana u mikrotalasnoj sa 200 W na 160°C u toku 5 minuta. Zatim se dobijena suspenzija ohladila, filtrirala i isprala dihlorometanom (3 x 10 mL) i NMP-om (3 x 10 mL). Mala količina je odvojena da se utvrdi da li je metateza potpuna. Smola je potopljena u rastvoru 10% DMSO u NMP-u (10 mL) preko noći kako bi se skupio višak katalizatora HGII.

Dobijena smola je isprana sa NMP-om (3 x 10 mL), tretirana sa 20% piperidina u DMF-u (3 x 15 mL, 10 min. Smola je isprana sa DMF (5 x 10 mL), CH2Cl2 (3 x 10 mL) i heksanom (3 x 10 mL), a potom sušena pod smanjenim pritiskom.

Za odvajanje peptida od smole, smola je tretirana sa rastvorom koji sadrži 90:5:5 TFA-TIPS-H2O (20 mL). Nakon 2 sata, smola je filtrirana i isprana sa TFA (3 mL) i koncentrovana za 50%. Dodato je hladni (-78 °C) etar u rastvor (50 mL), a dobijena smeša centrifugirana na 3500 obrtaja u minuti u toku 10 minuta. Etar je dekantovan, a čvrsti deo je podvrgnut još 2 puta dodatnom ispiranju i centrifugiranju sa hladnim (-78 °C) etrom. Dobijeni čvrsti deo je sušen pod smanjenim pritiskom, rastvoren u 1:1 H2O-ACN, zamrznut i liofiliziran.

Peptidi su prečišćeni na Waters Autopure ® sistemu koristeći 0,1% TFA u vodi i 0,1% TFA u acetonitrilu na Waters PST C18 RP koloni (250 x 30 mm, 10 P, 130 Å) pri brzini protoka od 40 mL/min. Korišćen je linearni gradijent sa 5-45% acetinitrila u toku 40 ili 60 minuta.

Frakcije koje sadrže željeni proizvod su udružene i oksidovane.

Za oksidaciju cisteinskih ostataka radi formiranja disulfidnih veza, korišćen je sledeći postupak. U rastvor od 100 mL 0,05 N NH4HCO3 (pH ~8) u 9:1 voda-acetonitril dodato je 5 mL DMSO. Nakon 72 sata, oksidacija je bila potpuna prema HPLC analizi, a materijal je nakon toga zakišeljen sa sirćetnom kiselinom, zamrznut i liofilizovan. Peptidi su prečišćeni na Waters Autopure sistemu koristeći 0,1% TFA u vodi i acetonitrilu na Waters PST C18 RP koloni (250 x 30 mm, 10 P, 130 Å) pri brzini protoka od 40 mL/min. Korišćen je linearni gradijent sa 5-40% acetonitrila u toku 60 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su bile sakupljene i liofilizovane.

Primer 6: Priprema peptida koji sadrže cistationin

Materijal je sintetisan na Protein Technologies Symphony X® sa aminokiselinama rastvorenim u DMF-u u koncentraciji 0,5 M. Fmoc-Cys(Trt)-OH je rastvoren u rastvoru koji sadrži 0,5 M oksima pura u DMF-u. HCTU je rastvoren u NMP-u do 0,5 M, a 1,0 M DIPEA u NMP-u e takođe korišćen. DIC je rastvoren u NMP-u do 0,5 M. Fmoc-deprotekcija je izvedena u rastvoru koji sadrži 20% piperidina u DMF-u.

Da bi se spojio peptid sa smolom, Rink amida smola (0,2 mmol, 0,24 mmol/g) je tretirana sa 20% piperidina u DMF-u (3 x 6 mL, 3 min, 1 x 6 mL, 10 min). Dobijena smola je isprana sa DMF-om (6 x 10 mL, 30 s). Rastvor koji sadrži Fmoc-Xaa-OH, HCTU i DIPEA u NMP koji je prethodno mešan 30 sekundi je dodat u smolu i mešan je tokom 30 minuta. Smola je filtrirana i isprana jednom sa NMP-om. Drugi rastvor koji sadrži Fmoc-Xaa-OH, HCTU i DIPEA u NMP, koji je prethodno mešan 30 sekundi, je dodat i smeša je mešana još 30 minuta. U slučaju Fmoc-Cys(Trt)-OH, rastvor amino kiseline/oksima pura je pomešan sa DIC-om u NMP-u u toku 5 minuta, dodat je u smolu i mešan je tokom 45 minuta. Smola je filtrirana i isprana jednom sa DMF-om. Dobijena smola je filtrirana i isprana sa DMF-om (6 x 10 mL). Materijal je podvrgnut navedenom postupku i peptid je produžen do makrociklizacije.

Da bi se spojila diaminokiselina, smola je tretirana sa 20% piperidina u DMF-u (3 x 6 mL, 3 min, 1 x 6 mL, 10 min). Dobijena smola je isprana sa DMF-om (6 x 10 mL, 30 s). Rastvor koji sadrži alloc-HCys((Fmoc-Ala-OH)-3-il)-all (227 mg, 0,4 mmol), PyAOP (209 mg, 0,4 mmol) i DIPEA (139 ȝl, 125 mg, 0,8 mmol) u 5 mL NMP-a je dodat u smolu. Nakon 90 minuta, smola je filtrirana i oprana sa DMF-om (6 x 10 mL). Peptid je zatim produžen pomoću gore pomenutog protokola.

Da bi se obavila deprotekcija Allyl-Alloc, smola (0,2 mmol) je suspendovana u 10 mL DMF-a, i rastvor koji sadrži Pd(PPh3)4 (300 mg, 0,26 mmol) u 10 mL CH2Cl2, je dodat praćeno sa 0,25 mL (2 mmol) fenilsilana. Dobijena smeša je mućkana u odsustvu svetla u toku 2 sata. Mala količina uzorka je izdvojena da bi se osigurala potpuna deprotekcija. Dobijena smola je filtrirana i oprana sa CH2Cl2 (3 x 10 mL) i DMF (3 x 10 mL). Smola je tretirana rastvorom koji sadrži 0,5% natrijum dietilditio-karbamata u DMF (10 mL, 4 x 15 min) i isprana sa DMF (3 x 10 mL).

Da bi se izvršila makrociklizacija, smola je tretirana sa rastvorom 20% piperidina u DMF-u (2 x 5 min, 1 x 10 min, 15 mL) i isprana sa DMF-om (6 x 15 mL). Rastvor koji sadrži 521 mg (1 mmol) PyAOP-a u 15 mL DMF-a dodat je u smolu i nakon 1 minuta dodato je 0,35 mL (2 mmol) DIPEA-e i mešano u toku 60 minuta. Mali uzorak je uzet radi analize. Dobijena smola je isprana sa DMF-om (3 x 15 mL) i vraćena na SymphonyX za završetak sinteze.

Da bi se peptid razdvojio od smole, smola je tretirana rastvorom koji sadrži 90:5:3:2 TFA-TIPS-DODT-H2O (20 mL). Nakon 2 sata, smola je filtrirana i oprana sa TFA-om (3 mL) i koncentrovana za 50%. Hladni (-78°C) etar je dodat u rastvor (50 mL) i dobijena smeša je centrifugirana na 3500 rpm tokom 10 minuta. Etar je dekantovan, a čvrsti ostatak je podvrgnut dodatnom pranju 2 puta i centrifugiran sa hladnim (-78°C) etrom. Dobijeni čvrsti materijal je sušen pod smanjenim pritiskom, rastvoren u smeši vode i acetonitrila u odnosu 1:1, smrznut i liofilizovan. Peptidi su zatim prečišćeni na Waters autopure sistemu upotrebom 0.1% TFA u vodi i 0.1% TFA u acetonitrilu na Waters PST C18 RP koloni (250 x 30 mm, 10 P, 130 Å) pri brzini protoka od 40 mL/minuta. Linearni gradijent je korišćen od 5-45% acetonitrila tokom 40 ili 60 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene i oksidovane.

Oksidacija je izvedena dodavanjem 5 mL DMSO-a u rastvor koji sadrži 100 mL 0,05 N NH4HCO3 (pH ~8) u 9:1 vodi-acetonitrilu. Nakon 72 sata, oksidacija je bila kompletna prema HPLC-u, a materijal je zakišeljen sirćetnom kiselinom, zamrznut i liofilizovan. Peptidi su prečišćeni na Waters Autopure® sistemu upotrebom 0,1% TFA u vodi i 0,1% TFA u acetonitrilu na Waters PST C18 RP koloni (250 x 30 mm, 10 P, 130 Å) pri brzini protoka od 40 mL/min. Linearni gradijent se koristio od 5-40% acetonitrila tokom 60 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su spojene i liofilizovane.

Primer 7. Proizvodnja peptida koji sadrže laktamsku vezu

Peptidi su sintetisani korišćenjem standardnih Fmoc-/Trt/Otbu zaštićenih amino kiselina. Materijal je sintetisan na Protein Technologies Symphony X® sa amino kiselinama rastvorenim u DMF-u pri koncentraciji od 0.5M. Fmoc-Cys(Trt)-OH je rastvoren u rastvoru koji sadrži 0.5 M oksima pura u DMF-u. HCTU je rastvoren u NMP-u do 0.5 M, a 1.0 M DIEA u NMP-u je takođe korišćen. DIC je rastvoren u NMP-u do 0.5 M. Fmoc-deprotekcija je izvršena korišćenjem rastvora koji sadrži 20% piperidina u DMF-u. Neobične amino kiseline su spojene manuelno, kako je opisano u nastavku.

Za inkorporaciju Fmoc-Dpr(ivDde)-OH, rastvor koji sadrži 533 mg (1,0 mmol) Fmoc-Dpr(ivDde)-OH, 521 mg (1,0 mmol) PyAOP i 348 µL (258 mg, 2,0 mmol) DIPEA u 6 mL DMF-a dodat je u deprotektovanu smolu (0,2 mmol). Nakon 90 minuta, smola je filtrirana i isprana sa DMF-om (3 x 10 mL), CH2Cl2 (3 x 10 mL) i ponovo sa DMF-om (3 x 10 mL). Smola je vraćena na sintetizator da bi se nastavio postupak sinteze.

Za inkorporaciju Fmoc-Asp(ODmab)-OH, rastvor koji sadrži 667 mg (1,0 mmol) Fmoc-Asp(ODmab)-OH, 521 mg (1,0 mmol) PyAOP i 348 ȝL (258 mg, 2,0 mmol) DIPEA u 6 mL DMF, dodat je u deprotektovanu smolu (0,2 mmol). Nakon 90 minuta, smeša je filtrirana i isprana sa DMF (3 x 10 mL), CH2Cl2 (3 x 10 mL) i opet sa DMF (3 x 10 mL). Smola je vraćena na sintetizator za konačnu deprotekciju.

U Boc zaštićeni N-terminal, smola je tretirana sa 218 mg (1,0 mmol) diterc-butil dikarbonata u 5 mL DMF-a. Nakon 4 sata, mali uzorak (~10 mg) je uklonjen i acetilovan sa 10 PL acetik anhidrida i 30 PL DIPEA u DMF-u da bi se proverila kompletnost reakcije. Dobijena smola je oprana sa DMF-om (5 x 10 mL) i tretirana sa 100 PL acetil-hlorida i 300 PL DIPEA u DMF-u u toku 50 minuta. Dobijena smola je isprana sa DMF-om (6 x 10 mL).

Da bi se uklonili ivDDE i Dmab, zaštićena smola je tretirana sa rastvorom koji sadrži 2% hidrazin monohidrata u DMF-u (5 x 5 mL, 5 minuta). Nakon toga, dobijena smola je isprana sa DMF-om (6 x 10 mL).

Da bi se formirao laktam, smola je tretirana sa 521 mg (1,0 mmol) PyAOP-a i sa 348 µL (258 mg, 2,0 mmol) DIPEA u 5 mL DMF-a. Dobijena smeša je zagrejana uz pomoć mikrotalasne pećnice (200 W) na 100 °C u toku 10 minuta. Dobijena smola je ohlađena, filtrirana i isprana sa DMF-om (6 x 10 mL) i CH2Cl2 (6 x 10 mL), a potom sušena pod smanjenim pritiskom.

Da bi se peptid razdvojio od smole, smola je tretirana sa rastvorom koji sadrži 90:5:3:2 TFA-TIPS-DODT-H2O (20 mL). Nakon 2 sata, smola je filtrirana i isprana sa TFA (3 mL) i koncentrovana za 50%. Hladan (-78°C) etar je dodat u rastvor (50 mL), a dobijena smeša je centrifugirana na 3500 rpm u toku 10 minuta. Etar je dekantovan, a čvrsti materijal je podvrgnut dodatnom pranju 2 puta/centrifugiranju sa hladnim (-78°C) etrom. Dobijeni čvrsti materijal je sušen pod smanjenim pritiskom, rastvoren u 1:1 H2O-ACN, zamrznut i liofilizovan.

Da bi se oksidovao peptid, sirovi peptid (280 mg) je rastvoren u vodi, a smeša je tretirana čvrstim NH4HCO3 da bi se pH podesio na vrednost > 7. Nakon toga, dodato je 20 mL acetonitrila, a zatim 10 mL DMSO-a. Nakon 24 sata, oksidacija se pokazala kao potpuna prema HPLC-u i materijal je zakišeljen na pH ~2 sa trifluorossirćetnom kiselinom, filtriran, zamrznut i liofilizovan.

Peptid je prečišćen na Waters Autopure® sistemu upotrebom 0,1% TFA u vodi i 0,1% TFA u acetonitrilu na Waters PST C18 RP koloni (250 x 30 mm, 5 P, 130 Å) pri brzini protoka od 40 mL/min. Korišćen je linearni gradijent od 5% 0,1% TFA u acetonitrilu do 25% 0,1% TFA u acetonitrilu tokom 40 minuta. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su sakupljene, zamrznute i liofilizovane. Materijal je podvrgnut drugom pasažu prečišćavanja.

Peptid je prečišćen na Waters Autopure® sistemu korišćenjem 0,1% TFA u vodi i 0,1% TFA u acetonitrilu na Waters PST C18 RP koloni (250 x 19 mm, 5 ȝ, 130 Å) pri protoku od 20 mL/min. Linearni gradijent od 15% 0,1% TFA u acetonitrilu do 25% 0,1% TFA u acetonitrilu tokom 60 minuta je korišćen. Frakcije koje sadrže željeni produkt su sakupljene, zamrznute i liofilizovane kako bi se dobilo bezbojna čvrsta supstanca.

Primer 8: Gastrointestinalni tranzit kod miševa

Cilj ispitivanja bio je da se testira efekat peptida agonista guanilat ciklaze C na in vivo gastrointestinalni tranzit kod miševa. Pokazano je da oralno primenjeni agonisti guanilat ciklaze C povećavaju procenat pređene udaljenosti kod miševa nakon primene obroka sa aktivnim ugljem.

Za ovaj test su ženke CD-I miševa (n=10 po grupi) težine 25-30 g bile su izgladnele preko noći i imale su slobodan pristup vodi. Aktivni ugalj (20g; 100 mesh; Sigma kataloški broj 242276) je bio suspendovan u 200 mL gumiarabika (100 mg/mL) i mešan najmanje jedan sat. Testirani peptidi su bili pripremljeni u 20 mM Tris pH 6.9 rastvaraču.

Testirani peptid i nosač su primenjeni u dozama od 200 PL putem oralne sonde. Sedam minuta nakon primene testiranog peptida, 200 PL suspenzije aktivnog uglja/gumiarabika je primenjeno putem oralne sonde. Nakon 15 minuta, miševi su žrtvovani uz pomoć CO2 predoziranja. Gastrointestinalni trakt je uklonjen od jednjaka do slepog creva. Ukupna dužina tankog creva je merena od pilorusnog spoja do ileocekalnog spoja. Udaljenost koju je aktivni ugalj prešao je merena od pilorusnog spoja do prednjeg kraja aktivnog uglja. Udaljenost pređena od strane aktivnog uglja (%) je izračunata kao (udaljenost pređena od strane aktivnog uglja/ukupna dužina tankog creva) x 100. Podaci su uneti u GraphPad Prism softver i analizirani uz pomoć ANOVA testa koristeći Bonferonijev test višestruke komparacije Grafovi podataka i ED50 su takođe određeni pomoću GraphPad Prism softverskog paketa. Rezultati za odabrane peptide mogu se pronaći na slikama 17, 25, 26 i 27.

DRUGI OBLICI IMPLEMENTACIJE

Gornja diskusija otkriva i opisuje samo primerne izvedbe ove invencije. Neko ko je stručnjak u ovoj oblasti će lako prepoznati iz te diskusije i pratećih crteža i patentnih zahteva, da se u tome mogu napraviti razne promene, modifikacije i varijacije, bez napuštanja obuhvata

invencije kako je definisano u sledećim patentnim zahtevima.

Claims

PATENTNI ZAHTEVI

1. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol, gde peptid se sastoji od aminokiselinske sekvence:

(SEKV. ID BR.: 2) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 3) C12-BE BK Asn Ser Ser Tyr Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 8) H-Cys Ag Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Ag Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 12) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 13) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Ala Gly Cys-NH2;

(SEKV. ID BR.: 43) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 44) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Cha Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 45) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Leu Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 46) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Sar Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 47) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 48) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Nme-Tyr(SEKV. ID BR.: 49) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Leu Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 50) H-Ag Cys Asp Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 51) H-Ag Cys Ser Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 52) H-Ag Cys Thr Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 53) H-Hag Cys Glu Leu Cys Hag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 54) H-Ag Cys Gin Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 55) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Leu Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 56) Pent-Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 57) H-Cys Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Ag-COOH; (SEKV. ID BR.: 58) Pent-Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 59) H-Hag Cys Glu Leu Cys Hag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 60) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 61) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 62) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 63) H-Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 64) H-Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 65) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 66) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 67) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 68) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 69) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 70) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 71) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 72) H- Cys Cys Glu Leu Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 87) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 88) H- Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 89) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 90) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 91) H- Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; ili (SEKV. ID BR.: 92) H- Cys Cys Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cth Tyr Gly Cys-COOH; gde Ag je alilglicin; BE je glutaminska kiselina, gde bočni lanac karboksilne kiseline formira peptidnu vezu; BK je lizin, gde bočni lanac amina formira peptidnu vezu; (4-F)Phe je 4-fluorofenilalanin; Cha je cikloheksilalanin; Pen je penicilamin; OH-Pro je Hidroksiprolin; Nme-Tyr je N-metil tirozin; Sar je sarkozin; Hag je alilglicin sa redukovanom dikarba vezom; Cth cistationin; 4-Mepip je l-metil-piperidin-4-karboksilna kiselina; Dpr je diaminopropionska kiselina; i gde Ac- označava acetiliran N-terminus; Pent- označava N-terminus koji je zatvoren sa pentenskom kiselinom; C12- označava N-terminus koji je zatvoren sa C12 alkil karboksilnom kiselinom; C14- označava N-terminus koji je zatvoren sa C14 alkil karboksilnom kiselinom; C16- označava N-terminus koji je zatvoren sa C16 alkil karboksilnom kiselinom; C18- označava N-terminus koji je zatvoren sa C18 alkil karboksilnom kiselinom; H- označava nepromenjeni N-terminus; -NH2označava amidiran C-terminus; a -COOH označava nepromenjeni C-terminus.

2. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol, prema zahtevu 1, gde peptid se sastoji od aminokiselinske sekvence:

(SEKV. ID BR.: 2) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2;

(SEKV. ID BR.: 26) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 43) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH;

(SEKV. ID BR.: 47) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 62) H-Ag Cys Glu Leu Cys Ag Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 64) H-Cth Cys Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 68) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys Tyr-NH2; (SEKV. ID BR.: 69) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; (SEKV. ID BR.: 70) H-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Val Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH; ili (SEKV. ID BR.: 71) Ac-Cys Cth Glu Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Tyr Gly Cys-COOH.

3. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol, prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, gde peptid se sastoji od jedne od navedenih aminokiselinskih sekvenci.

4. Farmaceutska kompozicija koja sadrži peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so prema bilo kom od zahteva 1-3, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, razblaživač ili nosač.

5. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 4, gde farmaceutska kompozicija je formulacija čvrste doze.

6. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 5, gde farmaceutska kompozicija je formulisana kao oralna formulacija čvrste doze.

7. Kompozicija za čišćenje debelog creva za upotrebu u postupku čišćenja debelog creva kod subjekta u pripremi za proceduru kolonoskopije, gde kompozicija sadrži farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, razblaživač ili nosač, i peptid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu sol prema bilo kom od zahteva 1-3.

8. Kompozicija za čišćenje debelog creva za upotrebu prema zahtevu 7, gde postupak sadrži:

a. oralno ili rektalno davanje subjektu efektivne prve doze kompozicije za čišćenje debelog creva; i

b. davanje subjektu efektivne druge doze kompozicije za čišćenje debelog creva da bi se suštinski očistilo debelo crevo subjekta.

9. Kompozicija za čišćenje debelog creva za upotrebu prema zahtevu 8, gde se efektivna druga doza primenjuje jutro nakon što je primenjena efektivna prva doza.

10. Postupak za proizvodnju peptida prema bilo kom od zahteva 1-3, koji obuhvata obezbeđivanje ćelije koja sadrži molekul nukleinske kiseline koji kodira peptid, kultivisanje ćelije pod uslovima u kojima je peptid eksprimiran, i izolovanje eksprimovanog peptida.

11. Postupak za proizvodnju peptida prema bilo kom od zahteva 1-3, koji sadrži hemijski sintetizovanje peptida i prečišćavanje sintetizovanog peptida.

12. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol prema bilo kom od zahteva 1-3, za upotrebu u postupku lečenja gastrointestinalnog ili visceralnog poremećaja kod subjekta.

13. Peptid ili njegova farmaceutski prihvatljiva sol prema bilo kom od zahteva 1-3, za upotrebu u postupku lečenja poremećaja koji obuhvataju kolorektalni kancer, nasledni nepolipozni kolorektalni kancer (HNPCC), Linčov sindrom, gastroparezis (GP), polipi, bol, opšti abdominalni bol, postoperativna ileus, opiodima izazvana konstipacija, funkcionalna dispepsija, divertikularna bolest, uključujući, ali ne ograničavajući se na SUDD (simptomatsku nekompliciranu divertikularnu bolest) i SCAD (segmentalni kolitis povezan sa divertikulozom), divertikuloza, dijareja-predominantni iritabilni sindrom creva, bol povezana sa iritabilnim sindromom creva (IBS), ulcerozni kolitis, ulcerozni proktitis, Kronova bolest, inflamatorna bolest creva (IBD), hronična ili akutna radijaciona protopatija, rektalna bol, hronična proktalgija, proktalgija fugaks, analna bol, hronična analna fisura, postoperativna analna bol, sindrom preaktivne mokraćne bešike, stresna inkontinencija, intersticijski cistitis, sindrom bola bešike, kolorektalni kancer, bol povezana sa kancerom, opšti bol u karlici, endometrioza, orhialgija, hronični prostatitis, prostatodinija, vulvodinija, uretralni sindrom, bol u penisu, perianalna bol i druge gastrointestinalne i visceralne poremećaje kod subjekta.

14. Peptid za upotrebu prema zahtevu 13, gde se postupak dalje sastoji od davanja subjektu farmaceutske kompozicije koja sadrži aktivni sastojak odabran između opioida, tramadola, agonista beta-3 adrenergičkog receptora, antiholinergičkih agenasa i tricikličnih antidepresiva.