RS64285B1

RS64285B1 - Jedinjenja naftiridinona korisna kao aktivatori t ćelija

Info

Publication number: RS64285B1
Application number: RS20230468A
Authority: RS
Inventors: Louis S Chupak; Min Ding; Robert G Gentles; Yazhong Huang; Scott W Martin; Ivar M Mcdonald; Stephen E Mercer; Richard E Olson; Upender Velaparthi; Michael Wichroski; Xiaofan Zheng
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2018-06-27
Filing date: 2019-06-26
Publication date: 2023-07-31
Also published as: SG11202012973RA; SMT202300170T1; US11866430B2; HUE062412T2; CA3104647A1; IL279730A; US20210277004A1; AU2019291792A1; MX2020013373A; WO2020006016A1; CN112585139B; JP2021528469A; KR102804324B1; SI3814347T1; IL279730B1; PL3814347T3; BR112020026568A2; DK3814347T3; IL279730B2; HRP20230627T1

Description

Napomena: Kompletan dokument koji obuhvata referentne tabele i listu sekvenci može se preuzeti sa EPO internet stranice

Opis

[0001] Predmetni pronalazak se generalno odnosi na jedinjenja naftiridinona koja aktiviraju T ćelije, potpomažu proliferaciju T ćelija, i/ili ispoljavaju aktivnost protiv tumora. Ovde su obezbeđena jedinjenja naftiridinona, kompozicije koje sadrže takva jedinjenja, i njihove primene. Pronalazak se dalje odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje prema pronalasku koje su korisne za lečenje proliferativnih bolesti, kao što su kancer, i virusne infekcije.

STANJE TEHNIKE PRONALASKA

[0002] Kanceri kod ljudi ispoljavaju brojne genetske i epigenetske izmene, koje generišu neoantigene koji imuni sistem može potencijalno prepoznati (Sjoblom i sarad. (2006) Science 314:268-74). Adaptivni imuni sistem, sačinjen od T i B limfocita, ima moćan antikancerski potencijal, sa širokim kapacitetom i izuzetnom specifičnošću da odgovori na različite tumorske antigene. Dalje, imuni sistem demonstrira značajnu fleksibilnost i memorijsku komponentu. Uspešno korišćenje svih ovih atributa adaptivnog imunog sistema bi učinilo imunoterapiju jedinstvenom među svim modalitetima za lečenje kancera. Međutim, iako je endogeni imuni odgovor na kancer primećen kod pretkliničkih modela i pacijenata, ovaj odgovor je neefikasan, a utvrđeni kanceri se posmatraju kao „sopstveni“ i imunološki sistem ih toleriše. Doprinoseći ovom stanju tolerancije, tumori mogu iskoristiti nekoliko različitih mehanizama za aktivno podrivanje antitumorskog imuniteta. Ovi mehanizmi uključuju disfunkcionalnu T ćelijsku signalizaciju (Mizoguchi i sarad., (1992) Science 258:1795-98), supresivne regulatorne ćelije (Facciabene i sarad., (2012) Cancer Res.72:2162-71), i kooptiranje endogenih „imunoloških kontrolnih tačaka“, koje služe za smanjenje intenziteta adaptivnih imunih odgovora i zaštitu normalnih tkiva od kolateralnog oštećenja, od strane tumora kako bi se izbeglo uništenje od strane imuniteta (Topalian i sarad., (2012) Curr. Opin. Immunol. 24:1-6; Mellman i sarad. (2011) Nature 480:480-489).

[0003] Diacilglicerol kinaze (DGK) su lipidne kinaze koje posreduju u konverziji diacilglicerola u fosfatidnu kiselinu čime se prekidaju funkcije T ćelija koje se propagiraju kroz TCR signalni put. Dakle, DGK služe kao intracelularne kontrolne tačke i očekuje se da će inhibicija DGK poboljšati signalne puteve T ćelija i aktivaciju T ćelija. Potkrepljujući dokazi uključuju nokaut modele miša bilo DGKα ili DGKζ koji pokazuju hiperreaktivni fenotip T ćelija i poboljšanu antitumorsko imunološku aktivnost (Riese M.J. i sarad., Journal of Biological Chemistry, (2011) 7: 5254-5265; Zha Y i sarad., Nature Immunology, (2006) 12:1343; Olenchock B.A. i sarad., (2006) 11: 1174-81). Štaviše, primećeno je da limfociti koji infiltriraju tumor izolovani iz pacijenata sa humanim karcinomom bubrežnih ćelija prekomerno eksprimiraju DGKα, što je dovelo do inhibicije funkcije T ćelija (Princ, P.U. i sarad., J Immunology (2012) 12:5990-6000). Dakle, DGKα i DGKζ se posmatraju kao mete za imunoterapiju kancera (Riese M.J. i sarad., Front Cell Dev Biol. (2016) 4: 108; Chen, S.S. i sarad., Front Cell Dev Biol. (2016) 4: 130; Avila-Flores, A. i sarad., Imunology i Cell Biology (2017) 95: 549-563; Noessner, E., Front Cell Dev Biol. (2017) 5: 16; Krishna, S., i sarad., Front Immunology (2013) 4:178; Jing, W. i sarad., Cancer Research (2017) 77: 5676-5686.

[0004] Dokumenti US 2005/266510 se odnosi na anergiju T ćelija koju preokreće aktivni Ras i reguliše diacilglicerol kinaza, a WO 2017/177037se odnosi na kompozicije koje sadrže ritanserin ili njegov analog za lečenje kancera, kao što su glioblastomi i melanomi i za inhibiciju diacilglicerol kinaze alfa.

[0005] Ostaje potreba za jedinjenjima korisnim kao inhibitori jedne ili obe DGKα i DGKζ. Dodatno, ostaje potreba za jedinjenjima korisnim kao inhibitori jedne od obe DGKα i DGKζ koja imaju selektivnost u odnosu na druge diacilglicerol kinaze, protein kinaze i/ili druge lipidne kinaze.

[0006] Shodno tome, sredstvo koje je bezbedno i efikasno u obnavljanju aktivacije T ćelija, snižavanju praga antigena, poboljšanju antitumorske funkcionalnosti i/ili prevazilaženju supresivnih efekata jedne ili više endogenih imunih kontrolnih tačaka, kao što su PD-1, LAG-3 i TGFβ, bio bi važan dodatak za lečenje pacijenata sa proliferativnim poremećajima, kao što su kancer, kao i virusne infekcije.

[0007] Podnosioci prijave su pronašli jedinjenja koja imaju dejstvo kao inhibitori jedne ili obe DGKα i DGKζ. Dalje, podnosioci prijave su pronašli jedinjenja koja imaju dejstvo kao inhibitori jedne ili obe DGKα i DGKζ i imaju selektivnost u odnosu na druge diacilglicerol kinaze, protein kinaze i/ili druge lipidne kinaze. Predviđeno je da ova jedinjenja budu korisna kao farmaceutski proizvodi sa željenom stabilnošću, bioraspoloživošću, terapijskim indeksom i vrednostima toksičnosti koje su važne za njihovu primenu kao leka.

SAŽETAK PRONALASKA

[0008] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja naftiridinona sa formulom (I), koja su korisna kao inhibitori DGKα, DGKζ, ili obe DGKα i DGKζ, uključujući njihove soli.

[0009] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje sa formulom (I) i/ili farmaceutski prihvatljivu so istog; i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0010] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje procese i intermedijere za izradu jedinjenja sa formulom (I) i/ili njihovih soli.

[0011] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) i/ili farmaceutski prihvatljivu so istog, za primenu u terapiji.

[0012] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, za primenu u lečenju proliferativnih poremećaja, kao što su kancer i virusne infekcije.

[0013] Jedinjenja sa formulom (I) i kompozicije koje sadrže jedinjenja sa formulom (I) mogu se primeniti u lečenju, prevenciji ili izlečenju virusnih infekcija i raznih proliferativnih poremećaja, kao što je kancer. Farmaceutske kompozicije koje sadrže ova jedinjenja su korisne u lečenju, prevenciji ili usporavanju progresije bolesti ili poremećaja u različitim terapijskim oblastima, kao što su virusne infekcije i kancer.

[0014] Ove i ostale karakteristike pronalaska će biti izložene u proširenom obliku kako se obelodanjivanje bude nastavljalo.

DETALJNI OPIS

[0015] Prvi aspekt predmetnog pronalaska obezbeđuje najmanje jedno jedinjenje sa formulom (I):

ili njegovu so, pri čemu:

R1je H, Cl, Br, -CN, C1-4alkil, C2-3alkenil, C1-3alkoksi, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3alkil), -C(O)NRaRa, -NRaRa, -NRaC(O)O(C1-4alkil), ili -NRaC(O)NRa(C1-4alkil);

svako Raje nezavisno H ili C1-2alkil;

R2je C1-6alkil, C1-4cijanoalkil, C1-4fluoroalkil, C2-4alkenil, -(CH2)1-3CH=CF2, C3-

5alkinil, -(CH2)1-4O(C1-3alkil), -(CH2)1-4O(CH2)1-3O(C1-3alkil), -(CH2)1-3C(O)(C1-3alkil), -(CH2)1-3C(O)O(C1-3alkil), -(CH2)1-3Rb, -(CH2)1-3ORb, ili -(CH2)1-3OCH2Rb;

Rbje C3-6cikloalkil ili dioksanil, svaki supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, -CN, -CH3, i -OCH3;

R3je H, F, Cl, Br, -CN, C1-3alkil, C1-3fluoroalkil, -NO2, -C(O)(C1-3alkil), -C(O)O(C1-

3alkil), ili -C(O)(C1-3fluoroalkil);

R4je:

(a) 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-2alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, i -OCH2CH=CH2; ili

(b) -CH2Ry, -C(CH3)2Ry, -CHRxRy, -CH2CH(OH)Rx, -CH(CH3)(CH2CH2OCH3), ili C3-6cikloalkil supstituisan sa fluorofenilom;

Rxje C1-6alkil, C1-3hidroksialkil, C1-2aminoalkil, C3-6cikloalkil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-3alkila, C1-2fluoroalkila, C1-

2alkoksi, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH;

Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, indolinil, naftalenil, oksoindolinil, piridinil, pirimidinil, ili fenil, svaki supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6alkila, C1-3fluoroalkila, C1-3alkoksi, C1-3fluoroalkoksi, OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3alkil), -NRaC(O)(C1-3alkil), -NRaC(O)O(C1-4alkil), -NRaC(O)Rd, -NRaC(O)NRaRd, i Rd; svako Rcje nezavisno H ili C1-2alkil; i

Rdje fenil supstituisan sa nula do 1 supstituentom odabranim od Cl, -CH3, i -OCH3.

[0016] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenje sa formulom (I) ili so istog je obezbeđeno pri čemu R1je H, Cl, Br, -CN, C1-3alkil, C2-3alkenil, C1-2alkoksi, -C(O)OH, -C(O)O(C1-2alkil), -C(O)NRaRa, -NRaRa, ili -NRaC(O)O(C1-4alkil); R2je C1-4alkil, C1-3cijanoalkil, C1-3fluoroalkil, C2-3alkenil, -CH2CH2CH=CF2, C3-4alkinil, -(CH2)1-3OCH3, -(CH2)1-3O(CH2)1-2OCH3, -(CH2)1-

3C(O)CH3, -(CH2)1-3C(O)O(C1-2alkil), -(CH2)1-2Rb, -(CH2)1-3ORb, ili -(CH2)1-3OCH2Rb; Rbje C3-

6cikloalkil ili dioksanil, svaki supstituisan sa nula do 1 supstituentom odabranim od F, -CN, -CH3, i -OCH3; R3je H, F, Cl, Br, -CN, C1-2alkil, C1-2fluoroalkil, -NO2, -C(O)O(C1-2alkil), ili -C(O)(C1-

2fluoroalkil); R4je: (a) 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, -CH3, -CF3, -OCH3, i -OCH2CH=CH2; ili (b) -CH2Ry, -C(CH3)2Ry, -CHRxRy, -CH2CH(OH)Rx, -CH(CH3)(CH2CH2OCH3), ili ciklopropil supstituisan sa fluorofenilom; Rxje C1-5alkil, C1-2hidroksialkil, C1-2aminoalkil, C3-6cikloalkil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-2alkila, -CHF2, -OCH3, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH; i Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, indolinil, naftalenil, oksoindolinil, piridinil, pirimidinil, ili fenil, svaki supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, C1-

2fluoroalkoksi, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NHS(O)2CH3, -NHC(O)(C1-2alkil), -NHC(O)O(C1-4alkil), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila; i Ra, Rc, i Rdsu definisani u prvom aspektu.

[0017] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R1je H, Cl, Br, -CN, C1-2alkil, -CH=CH2, -OCH3, -C(O)OH, -C(O)OCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, ili -NHC(O)OC(CH3)3; R2je -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH2CH2CH2CH3, -CH2CN, -CH2CH2CH2CN, -CH2CH2CF3, -CH2CH=CH2, -CH2CH2CH=CF2, -CH2C-CH, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2C(O)CH3, -CH2C(O)OCH2CH3, -CH2(ciklopropil), -CH2(metil izoksazolil), -CH2(metilfenil), -CH2(cijanofenil), -CH2(fluorofenil), -CH2(metoksifenil), -CH2CH2(dioksanil), -CH2(fenil), -CH2CH2(fenil), -CH2CH2(metoksifenil), -CH2CH2CH2O(fenil), -CH2CH2CH2OCH2(fenil), ili fenil; R3je H, F, Cl, Br, -CN, -CH3, -CF3, -NO2, -C(O)OCH2CH3, ili -C(O)CF3; R4je: (a) 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa 1 do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, -OH, -OCH3, i -OCH2CH=CH2; ili (b) -CH2Ry, -C(CH3)2Ry, -CHRxRy, -CH2CH(OH)Rx, -CH(CH3)(CH2CH2OCH3), ili ciklopropil supstituisan sa fluorofenilom; Rxje C1-2alkil, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -CH2C(CH3)3, -CH2OH, -CH2NH2, ciklopropil, ciklobutil, cikloheksil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, i -OCH3; i Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, etil indolil, indolinil, naftalenil, hidroksinaftalenil, oksoindolinil, piridinil, metoksipiridinil, pirimidinil, ili fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, -CH3, -C(CH3)3, -CHF2, -CF3, -OCH3, -OCF3, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NH2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)(CH2CH3), -NHC(O)CH3, -NHC(O)O(C(CH3)3), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila.

[0018] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R1je H, Cl, Br, -CN, C1-4alkil, C2-3alkenil, C1-3alkoksi, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3alkil), -C(O)NRaRa, -NRaRa, ili -NRaC(O)O(C1-4alkil); i R2, R3, R4, i Rasu definisani u prvom aspektu. U ovom tehničkom rešenju su uključena jedinjenja u kojima R1je H, Cl, Br, -CN, C1-3alkil, C2-

3alkenil, C1-2alkoksi, -C(O)OH, -C(O)O(C1-2alkil), -C(O)NRaRa, -NRaRa, ili -NRaC(O)O(C1-

4alkil). Takođe uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R1je H, Cl, Br, -CN, C1-

2alkil, -CH=CH2, -OCH3, -C(O)OH, -C(O)OCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, ili -NHC(O)OC(CH3)3.

[0019] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R1je H, Cl, Br, -CN, C1-4alkil, C2-3alkenil, C1-3alkoksi, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3alkil), -C(O)NRaRa, -NRaRa, ili -NRaC(O)O(C1-4alkil); svako Raje nezavisno H ili C1-2alkil; i R2, R3, i R4su definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R1je H, Cl, Br, -CN, C1-3alkil, C2-3alkenil, C1-2alkoksi, -C(O)OH, -C(O)O(C1-2alkil), -C(O)NRaRa, -NRaRa, ili -NRaC(O)O(C1-4alkil).

[0020] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R2je C1-5alkil, C1-4cijanoalkil, C1-3fluoroalkil, C2-4alkenil, -(CH2)2-3CH=CF2, C3-5alkinil, -(CH2)1-4O(C1-2alkil), -(CH2)1-4O(CH2)1-3O(C1-2alkil), -(CH2)1-3C(O)(C1-2alkil), -(CH2)1-

3C(O)O(C1-3alkil), -(CH2)1-3Rb, -(CH2)1-3ORb, ili -(CH2)1-3OCH2Rb; i R1, R3, R4, i Rbsu definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R2je C1-4alkil, C1-

3cijanoalkil, C1-3fluoroalkil, C2-3alkenil, -CH2CH2CH=CF2, C3-4alkinil, -(CH2)1-3OCH3, -(CH2)1-

3O(CH2)1-2OCH3, -(CH2)1-3C(O)CH3, -(CH2)1-3C(O)O(C1-2alkil), -(CH2)1-2Rb, -(CH2)1-3ORb, ili -(CH2)1-3OCH2Rb. Takođe uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R2je -CH3, CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH2CH2CH2CH3, -CH2CN, -CH2CH2CH2CN, -CH2CH2CF3, -CH2CH=CH2, -CH2CH2CH=CF2, -CH2C≡CH, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2C(O)CH3, -CH2C(O)OCH2CH3, -CH2(ciklopropil), ili -CH2CH2(dioksanil).

[0021] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R2je C1-5alkil, C1-4cijanoalkil, C1-3fluoroalkil, C2-4alkenil, -(CH2)2-3CH=CF2, C3-5alkinil, -(CH2)1-4O(C1-2alkil), -(CH2)1-4O(CH2)1-3O(C1-2alkil), -(CH2)1-3C(O)(C1-2alkil), ili -(CH2)1-

3C(O)O(C1-3alkil); i R1, R3, i R4su definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R2je C1-4alkil, C1-3cijanoalkil, C1-3fluoroalkil, C2-3alkenil, -CH2CH2CH=CF2, C3-4alkinil, -(CH2)1-3OCH3, -(CH2)1-3O(CH2)1-2OCH3, -(CH2)1-3C(O)CH3, ili -(CH2)1-3C(O)O(C1-2alkil). Takođe uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R2je -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH2CH2CH2CH3, -CH2CN, -CH2CH2CH2CN, -CH2CH2CF3, -CH2CH=CH2, -CH2CH2CH=CF2, -CH2C≡CH, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2C(O)CH3, ili -CH2C(O)OCH2CH3.

[0022] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R2je -(CH2)1-3Rb, -(CH2)1-3ORb, ili -(CH2)1-3OCH2Rb; i R1, R3, R4, i Rbsu definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R2je -(CH2)1-2Rb, -(CH2)1-3ORb, ili -(CH2)1-3OCH2Rb; i Rbje C3-6cikloalkil ili dioksanil, svaki supstituisan sa nula do 1 supstituentom odabranim od F, -CN, -CH3, i -OCH3. Takođe uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R2je -CH2(ciklopropil) ili -CH2CH2(dioksanil).

[0023] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R3je H, F, Cl, Br, -CN, C1-3alkil, C1-3fluoroalkil, -NO2, -C(O)O(C1-3alkil), -C(O)(C1-2alkil), ili -C(O)(C1-3fluoroalkil); i R1, R2, i R4su definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R3je H, F, Cl, Br, -CN, C1-2alkil, C1-2fluoroalkil, -NO2, -C(O)O(C1-

2alkil), ili -C(O)(C1-2fluoroalkil). Takođe uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R3je H, F, Cl, Br, -CN, -CH3, -CF3, -NO2, -C(O)OCH2CH3, ili -C(O)CF3.

[0024] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R4je 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-2alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, i -OCH2CH=CH2; i R1, R2, i R3su definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R4je 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, -CH3, -CF3, OCH3, i -OCH2CH=CH2. Takođe uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima R4je 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa 1 do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, -OH, -OCH3, i -OCH2CH=CH2.

[0025] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R4je -CH2Ry, -C(CH3)2Ry, -CHRxRy, -CH2CH(OH)Rx, -CH(CH3)(CH2CH2OCH3), ili C3-

6cikloalkil supstituisan sa fluorofenilom; i R1, R2, R3, Rx, i Rysu definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima Rxje C1-4alkil, C1-3hidroksialkil, C1-

2aminoalkil, C3-6cikloalkil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-3alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH; Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, indolinil, naftalenil, oksoindolinil, piridinil, pirimidinil, ili fenil, svaki supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4alkila, C1-3fluoroalkila, C1-3alkoksi, C1-3fluoroalkoksi, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3alkil), -NRaC(O)(C1-2alkil), -NRaC(O)O(C1-

2alkil), -NRaC(O)Rd, -NRaC(O)NRaRd, i Rd; i Ra, Rc, i Rdsu definisani u prvom aspektu. Takođe uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima Rxje C1-5alkil, C1-2hidroksialkil, C1-

2aminoalkil, C3-6cikloalkil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-2alkila, -CHF2, -OCH3, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH; i Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, indolinil, naftalenil, oksoindolinil, piridinil, pirimidinil, ili fenil, svaki supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4alkila, C1-

2fluoroalkila, C1-2alkoksi, C1-2fluoroalkoksi, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NHS(O)2CH3, -NHC(O)(C1-2alkil), -NHC(O)O(C1-4alkil), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila.

[0026] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R4je -CH2Ry, -C(CH3)2Ry, -CHRxRy, ili -CH2CH(OH)Rx; Rxje C1-2alkil, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -CH2C(CH3)3, -CH2OH, -CH2NH2, ciklopropil, ciklobutil, cikloheksil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, i -OCH3; i Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, etil indolil, indolinil, naftalenil, hidroksinaftalenil, oksoindolinil, piridinil, metoksipiridinil, pirimidinil, ili fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, -CH3, -C(CH3)3, -CHF2, -CF3, -OCH3, -OCF3, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NH2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)(CH2CH3), -NHC(O)CH3, NHC(O)O(C(CH3)3), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila; i R1, R2, i R3su definisani u prvom aspektu.

[0027] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R4je -CHRxRy; i R1, R2, R3, Rx, i Rysu definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima Rxje fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-2alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH. Takođe uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima Rxje fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-2alkila, -CHF2, -OCH3, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH; i Ryje fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, C1-2fluoroalkoksi, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NHS(O)2CH3, -NHC(O)(C1-2alkil), -NHC(O)O(C1-4alkil), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila. Ovo tehničko rešenje takođe uključuje jedinjenja u kojima Rxje fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, i -OCH3; i Ryje fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, -CH3, -C(CH3)3, -CHF2, -CF3, -OCH3, -OCF3, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NH2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)(CH2CH3), -NHC(O)CH3, -NHC(O)O(C(CH3)3), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila.

[0028] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R4je -CHRxRy; Rxje fenil supstituisan sa nula do 1 supstituentom odabranim od F i -OH; Ryje fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, -CH3, -C(CH3)3, -CHF2, -CF3, -OCH3, -OCF3, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NH2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)(CH2CH3), -NHC(O)CH3, -NHC(O)O(C(CH3)3), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila; i R1, R2, i R3su definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima Ryje fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, -OH, -CH3, i -OCH3.

[0029] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R4je -CHRxRyili -CH2CH(OH)Rx; i R1, R2, R3, Rx, i Rysu definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima Rxje C1-5alkil, C1-3hidroksialkil, C1-2aminoalkil, C3-6cikloalkil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-3alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH; Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, indolinil, naftalenil, oksoindolinil, piridinil, pirimidinil, ili fenil, svaki supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-3alkila, C1-3fluoroalkila, C1-3alkoksi, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3alkil), -NRaC(O)(C1-2alkil), -NRaC(O)O(C1-3alkil), -NRaC(O)Rd, -NRaC(O)NRaRd, i Rd; i Ra, Rc, i Rdsu definisani u prvom aspektu. Takođe uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima Rxje C1-5alkil, C1-2hidroksialkil, C1-2aminoalkil, C3-

6cikloalkil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, -OH, C1-

2alkila, -CHF2, -OCH3, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH; i Ryje F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4alkil, C1-2fluoroalkil, C1-2alkoksi, C1-2fluoroalkoksi, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NHS(O)2CH3, -NHC(O)(C1-2alkil), -NHC(O)O(C1-4alkil), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), ili fenil. Dodatno, uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima Rxje C1-2alkil, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -CH2C(CH3)3, -CH2OH, -CH2NH2, ciklopropil, ciklobutil, cikloheksil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, i -OCH3; i Ryje fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, -CH3, -C(CH3)3, -CHF2, -CF3, -OCH3, -OCF3, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NH2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)(CH2CH3), -NHC(O)CH3, -NHC(O)O(C(CH3)3), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila.

[0030] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu R4je -CH2Ryili -C(CH3)2Ry; i R1, R2, R3, i Rysu definisani u prvom aspektu. Uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja u kojima Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, indolinil, naftalenil, oksoindolinil, piridinil, pirimidinil, ili fenil, svaki supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, C1-

2fluoroalkoksi, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NHS(O)2CH3, -NHC(O)(C1-2alkil), -NHC(O)O(C1-4alkil), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila; i Rcje definisano u prvom aspektu. Takođe uključena su jedinjenja u kojima Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, etil indolil, indolinil, naftalenil, hidroksinaftalenil, oksoindolinil, piridinil, metoksipiridinil, pirimidinil, ili fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, -CH3, -C(CH3)3, -CHF2, -CF3, -OCH3, -OCF3, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NH2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)(CH2CH3), -NHC(O)CH3, -NHC(O)O(C(CH3)3), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila.

[0031] U jednom tehničkom rešenju obezbeđeno je jedinjenje sa formulom (I) ili so istog pri čemu navedeno jedinjenje je: etil 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karboksilat (1); 6-bromo-4-(4-(2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (2); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (3); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)[2-(prop-2-in-1-iloksi) fenil]metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (5); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)[2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil]metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (5-7); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (8-10); 8-{4-[(4-fluorofenil)(2-hi droksifenil)metil]piperazin-1 -il} -5-metil-6-okso-5,6-dihi dro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (11); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (12-14); 6-bromo-4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (15-17); 8-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (18-20); 6-bromo-4-[4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il]-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (21); 6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)etil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (22-24); 6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)propil] piperazin-1-il } -1-metil-2-okso-1, 2-dihi dro-1, 5 -naftiridin-3-karbonitril (25-27); 6-bromo-4-{4-[2-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (28-30); 6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (31); 8-{4-[1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (32-34); 6-bromo-4-{4-[ciklopropil(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (35); 8-{4-[2-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (36); 8-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil] piperazin-1-il }-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (37); 1-metil-4-{4-[(naftalen-1-il)metil] piperazin-1-il}-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (38); 6-hloro-4-{4-[(4-fluorofenil)[2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil]metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (39); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (40); 8-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (41); 8-(4-((2-hidroksifenil)(fenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (42); 8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-5-metil-7nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (43-45); 8-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il) piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (46); 8-(4-(2-hidroksi-1-feniletil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (47); 8-(4-(2-hidroksi-2-feniletil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (48); 8-(4-(ciklopropil(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (49-51); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (52); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (53); 6-bromo-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (54); 6-bromo-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (55); 6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (56-58); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-metoksi-6-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (59-61); terc-butil (8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-il)karbamat (62); 6-amino-4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (63); 6-bromo-4-(4-(2-(difluorometil) benzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (64); 6-bromo-4-(4-(2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (65); 6-bromo-4-(4-(2-hidroksi-4-metilbenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (66); 6-bromo-4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (67); 6-bromo-4-(4-(4-fluoro-2-metoksibenzil)piperazin-1 -il)-2-okso-1 -(prop-2-in-1 -il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (68); 6-bromo-4-(4-(2-hidroksi-4,6-dimetilbenzil) piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (69); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (70); 6-bromo-4-(4-((2-fluoro-4-metilfenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (71); 6-bromo-4-(4-((2,4-dimetilfenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (72); 6-bromo-4-(4-((2-hidroksifenil)(otolil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (73); 6-bromo-4-(4-((3-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (74-76); 6-bromo-4-(4-((2-hidroksifenil) (fenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (77-79); 6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (80-82); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-3-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (83-85); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-5-metilfenil)metil) piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (86); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-6-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (87); 5-((2-((4-(6-bromo-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)(4-fluorofenil)metil)-3-metilfenoksi)metil) nikotinonitril (88-90); 5-((2-((4-(6-bromo-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)(4-fluorofenil)metil)-5-fluorofenoksi)metil) nikotinonitril (91-93); 4-(4-((2-(aliloksi)-6-metilfenil)(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (94-96); 8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (97-99); 8-(4-((4-fluorofenil)(2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (100-102); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (103); 4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (104); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (105-107); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (113); 6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (114-116); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hi droksifenil)metil)piperazin-1 -il)-1 -(2-metoksi etil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (117); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (118); 8-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (119-121); 8-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (122); 8-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (123-125); 8-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (126-128); 8-(4-((4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil) piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (129-131); 8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro1,5-naftiridin-2-karbonitril (132-134); 8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (135-137); 8-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (138); 8-{4- [1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (139-141); 8-(4-(ciklopropil(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (142-144); 8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (145); 8-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il) piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (146); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (147); 8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (148-150); 5-(cijanometil)-8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil) piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (151); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-(cijanometil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (152); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-(cijanometil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (153); 6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (154); 6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-(1-(4-fluorofenil)propil)piperazin-1 -il)-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (155); 6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (156); 6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (157); 6-bromo-1-(ciklopropilmetil)-4-(4-((4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil)piperazin-1 -il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (158-160); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-(ciklopropilmetil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (161); 6-bromo-1-(ciklopropilmetil)-4-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (162-164); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1 - il)-3-nitro-1-(prop-2-in-1-il)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (165); 1-(2-(1,3-dioksan-2-il) etil)-4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (166); 1-alil-4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (176); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-butil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (177); 4-(4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-2-okso-1,5-naftiridin-1(2H)-il)butannitril (183); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1-(3,3,3-trifluoropropil)-1,5-naftiridin2(1H)-on (185); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-(4,4-difluorobut-3-en-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (186); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1-(4-oksopentil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (187); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-(3-(2-metoksietoksi)propil)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (189); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-(3-metoksipropil)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (190); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (191); 6-bromo-4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (192); 6-hloro-4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (193); 4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (194); 4-(4-(1-(2-(aliloksi)-4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (195); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (196); 6-hloro-4-(4-(2-hidroksibenzil) piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (198); 6-hloro-4-(4-(3-(etil(metil)amino)benzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (199); 4-(4-(7-(aliloksi)-5-fluoro-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (200); 6-hloro-4-(4-(5-fluoro-7-hidroksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il) piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (201); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-etil-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (202); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (204); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-metil-2-okso-6-vinil-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (208); 6-hloro-4-(4-(cikloheksil (fenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (209); 4-(4-(2-aminobenzil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (211); N-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil) metansulfonamid (212); N-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil)benzamid (213); 1-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil)-3-fenilurea (214); N-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil)acetamid (215); 6-hloro-4-(4-(indolin-7-ilmetil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (216); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (217); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (218); 6-hloro-4-(4-((2-hidroksifenil)(fenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (219); 6-hloro-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil) piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (220); 6-hloro-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (221); 6-hloro-4-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (222); 8-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (223); 3-bromo-4-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (224); 6-bromo-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (225); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (226); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-(2,2,2-trifluoroacetil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (227); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-3-(2,2,2-trifluoroacetil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (228); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (229); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-bromo-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (230); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-N,N,5-trimetil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksamid (231); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-1,6-dimetil-3-(trifluorometil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (232); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-hloro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (233); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-fluoro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (234); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril, TFA (235); 3-bromo-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (236); 6-bromo-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (237); 4-(4-([1,1'-bifenil]-2-ilmetil) piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril, TFA (238); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-bromo-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (239); metil 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilat (240); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilna kiselina (241); 4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-metil-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (242); 4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-etil-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (243); 4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-(2-metoksietil)-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on(244); 2-{4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-3-nitro-2-okso1,2-dihidro-1,5-naftiridin-1-il} acetonitril (245); etil 2-{4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-1-il}acetat (246); 4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-3-nitro-1-propil-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (248); 4-{4-[ciklopropil(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (250); 4-{4-[bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (251); 4-[4-(4-metoksibutan-2-il)piperazin-1-il]-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (252); 4-[4-(3,4-dihidro-2H-1-benzopiran-4-il)piperazin-1-il]-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (253); 4-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksipiridin-3-il)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (254); 4-{4-[(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metil]piperazin-1 -il} -1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (255); 4-{4-[(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metil] piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (256); 4-{4-[(2-bromo-6-hi droksifenil)metil] piperazin-1 -il} -6-hloro-1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (258); 6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-6-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (259); 8- {4- [2-(4-fluorofenil)propan-2-il]piperazin-1-il} -5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (260); 4-{4-[(4-terc-butil-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (261); 4-(4-{[2-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil] metil}piperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (262); 8-{4-[(4-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (263); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-6-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (264); 8-(4-{[2-hidroksi-4-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (265); 6-bromo-4-{4-[(4-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (266); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (267); 4-{4-[(3-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (268); 8-{4-[(4-hloro-2-hidroksifenil) metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (269); 6-bromo-4-(4-{[2-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (270); 6-bromo-4-{4-[(2-bromo-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (271); 6-hloro-4-{4-[(2-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (272); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (273); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-2-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (274); 4-{4-[(5-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (275); 4-{4-[(4-bromo-2-hidroksifenil) metil] piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiri din-3-karbonitril (276); 4-{4-[(5-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (277); 6-bromo-4-{4-[(3-hloro-2-hidroksifenil)metil] piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (278); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-4-metoksifenil) metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (279); 6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (280); 6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-3-metilfenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (281); 6-bromo-4-{4-[(5-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (282); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-5-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (283); terc-butil N-(2-{[4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il]metil}fenil)karbamat (284); 6-hloro-1-metil-2-okso-4-(4-{[2-(trifluorometoksi)fenil] metil} piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (285); 4-{4-[(3-bromo-2-hidroksifenil) metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (286); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (287); 6-hloro-4-{4-[(4-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (288); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (289); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-5 -metilfenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (290); 6-hloro-4-{4-[(3,5-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (291); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-6-metilfenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (292); 6-hloro-4-{4-[(3-hloro-2-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (293); 6-bromo-4-{4-[(2-fluoro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (294); 6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (295); 4-{4-[(5-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (296); 6-bromo-4-{4-[(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (297); 6-hloro-4-{4-[(3,5-difluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (298); 6-bromo-4-{4-[(2,3-dihidro-1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (299); 6-bromo-4-{4-[(2-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (300); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (301); 6-hloro-4-{4-[(3-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (302); 6-hloro-4-{4-[(1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (303); 6-bromo-4-{4-[(3-fluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (304); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-5-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (305); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-2-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (306); 6-hloro-4-{4-[(3,5-dihloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (307); 6-hloro-4-{4-[(4-fluorofenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (308); 6-bromo-4-{4-[(3-terc-butil-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (309); 6-hloro-4-{4-[(2,4-dihlorofenil) metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (310); 6-hloro-4-(4-{[2-hidroksi-4-(trifluorometil)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (311); 6-hloro-4-{4-[(5-fluoro-2-hi droksifenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (312); 6-hloro-4-(4-{[3-fluoro-5-(trifluorometil)fenil] metil } piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1, 2-dihi dro-1, 5-naftiridin-3-karb onitril (313); 6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-6-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (314); 6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-metilpropil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (315-316); 8-{4-[(2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (317); 6-hloro-4-{4-[(2,5-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (318); 6-hloro-4-{4-[(3,4-difluorofenil)metil]piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5 -naftiridin-3 -karbonitril (319); 6-bromo-4-{4-[(3,5-difluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (320); 6-hloro-4-{4-[(3-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (321); 6-hloro-4-{4-[(1H-indazol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (322); 6-hloro-4-{4-[(4-hloro-3-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (323); 6-hloro-4-{4-[(3-hloro-5-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (324); 8-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (325); 6-hloro-4-{4-[(4-hloro-3-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (326); 6-hloro-4-{4-[(3-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (327); 6-hloro-4- {4-[(3-hidroksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (328); 4-{4-[(3-fluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (329); 6-hloro-4-{4-[(2,3-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (330); 6-hloro-4-{4-[(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (331); 8-{4-[(4-hloro-3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (332); 6-bromo-4-{4-[(1H-indazol-7-il)metil] piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (333); 4-{4-[(1-etil-1H-indol-4-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (334); 6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-6-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (335); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksinaftalen-1-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (336); 4-{4-[(2-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (337); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-5-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (338); 6-hloro-4-{4-[(2-fluorofenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (339); 6-hloro-4-{4-[(5-cijano-2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (340); 6-hloro-4-{4-[(4-metoksifenil) metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (341); 8-{4-[1-(4-fluorofenil)ciklopropil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (342); 4-(4-benzilpiperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (343); 6-bromo-4-{4-[(2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (344); 6-hloro-4-{4-[(3-hloro-5-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (345); 6-hloro-1-metil-4-{4-[(2-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (346); 4- {4-[bis(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (347); 6-hloro-4-{4-[(4-fluoro-3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (348); 4-{4-[(2-hidroksifenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (349); 6-hloro-4-{4-[(2,4-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (350); 6-hloro-4-{4-[(3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (351); 4-{4-[(2-hidroksi-3-metoksifenil)metil]piperazin-1-il} -1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (352); 6-hloro-4-{4-[(3-hidroksi-4-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (353); 6-hloro-4-{4-[(3-hloro-4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (354); 6-hloro-4-(4-{[4-hidroksi-3-(trifluorometil)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (355); 6-hloro-4-{4-[(4-hidroksi-3-metilfenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (356); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (357); 6-hloro-4-[4-(difenilmetil) piperazin-1-il]-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (358); 4-{4-[(1H-1,3-benzodiazol-7-il)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (359); 4-{4-[(1H-1,3-benzodiazol-7-il)metil] piperazin-1-il}-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (360); 6-hloro-4-{4-[(4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (362); 8-{4-[(3-fluoro-4-hidroksifenil) metil]piperazin-1-il} -5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (363); 6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-5-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (364); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (365); 6-bromo-4-{4-[(3,5-dihloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (366); 6-bromo-4-{4-[(5-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (367); 6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-3-metoksifenil) metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (368); 6-hloro-4-(4-{[2-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3karbonitril (369); 6-hloro-4-{4-[(5-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (370); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-3-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (371); 6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (372); 6-bromo-4-{4-[(1H-indol-7-il)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (373); 6-bromo-1-metil-2-okso-4-{4-[(2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (374); 6-hloro-4-(4-{[3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (375); 6-hloro-1-metil-2-okso-4-{4-[(2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (376); 6-hloro-4- {4-[1-(4-fluorofenil)-3,3-dimetilbutil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (377-378); 6-hloro-4-{4-[(4-cijano-2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (379); 6-bromo-4-{4-[(3-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (380); 6-hloro-4-(4-{[2-hidroksi-4-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (381); 6-hloro-4-{4-[ciklobutil(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (382-383); 4-{4-[(3-terc-butil-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (384); 6-hloro-1-metil-4-{4-[(3-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (385); 6-hloro-1-metil-4-{4-[(4-metilfenil)metil] piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (386); 6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)etil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (387-388); 4-{4-[(3-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (389); 6-bromo-4-{4-[(2-hloro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (390); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-3-metilfenil)metil] piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (391); 8-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (392); 4-{4-[bis(4-hlorofenil)metil] piperazin-1-il}-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (393); 8-{4-[bis(4-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (394); 4-{4-[bis(4-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (395); 4-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksipiridin-3il)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (396); 4-{4-[(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (397); 4-{4-[1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (398); 8-{4-[(S)-(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1 -il} -5-metil-7 -nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (399); 8-{4-[(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metil] piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (400); 4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(pirimidin-2-il)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (401); 4-{4-[bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (402); 4-{4-[(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metil] piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (403); 5-metil-8-{4-[(naftalen-1-il)metil]piperazin-1-il}-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (404); 8-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (405-407); 5-metil-8-{4-[(4-metilfenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (408); 8-{4-[bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (409); 8-{4-[(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metil] piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (410); 8-{4-[(4-fluorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (411); 4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (412); 4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil) metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (413); 8-{4-[(S)-(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (414); 5-metil-8-{4-[(naftalen-1-il)metil]piperazin-1-il}-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (415); 8-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (416); 6-hloro-4-{4-[(4-hlorofenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (417); 8-{4-[(2-hidroksifenil)(fenil)metil]piperazin-1 -il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (418); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (419); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (420); 6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil) ci klopropil] pip erazin-1-il } -1-metil-2-okso-1, 2-dihi dro-1, 5-naftiridin-3-karbonitril (421); 6-hloro-4-{4-[(2,6-difluorofenil) metil]piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5 -naftiridin-3 -karbonitril (422); 6-hloro-4- {4-[(2-fluoro-4-metilfenil)metil] pip erazin-1-il } -1-metil-2-okso-1,2-dihi dro-1, 5 - naftiridin-3-karbonitril (423); 6-hloro-4-{4-[(4-cijano-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (424); 6-hloro-4- {4- [2-(4-fluorofenil)propan-2-il]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (425); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (426); 4-{4-[bis(4-fluorofenil)metil]piperazin-1 -il} -1,6-dimetil-1,2-dihidro-1,5-naftiri din-2-on (427); 6-bromo-4- {4-[(S)-(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (428); 6-bromo-4-{4-[(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (429); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)(fenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (430); 6-bromo-1-metil-4-{4-[(4-metilfenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (431); ili 8-{4-[bis(4-fluorofenil)metil] piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (432).

[0032] Ovaj pronalazak obuhvata sve kombinacije aspekata i/ili tehničkih rešenja pronalaska koji su ovde navedeni. Podrazumeva se da se bilo koje i sva tehnička rešenja predmetnog pronalaska mogu uzeti u sprezi sa bilo kojim drugim tehničkim rešenjem ili tehničkim rešenjima da bi se opisala dodatna tehnička rešenja. Takođe treba razumeti da svaki pojedinačni element tehničkih rešenja treba da se kombinuje sa bilo kojim i svim drugim elementima iz bilo kojeg tehničkog rešenja da bi se opisalo dodatno tehničko rešenje.

DEFINICIJE

[0033] Osobine i prednosti pronalaska mogu lakše da shvate stručnjaci sa uobičajenim iskustvom u oblasti nakon što pročitaju sledeći detaljan opis. Treba razumeti da određene karakteristike pronalaska koje su, iz razloga jasnoće, opisane gore i dole u kontekstu zasebnih tehničkih rešenja, takođe mogu da se kombinuju da bi se formiralo jedno tehničko rešenje. Nasuprot tome, različite karakteristike pronalaska koje su, iz razloga sažetosti, opisane u kontekstu jednog tehničkog rešenja, takođe mogu da se kombinuju tako da formiraju njihove podkombinacije. Tehnička rešenja identifikovana ovde kao primer ili kao poželjna su namenjena da budu ilustrativna, a ne ograničavajuća.

[0034] Sem ako nije ovde naznačeno drugačije, reference koje su u jednini mogu takođe da uključe množinu. Na primer, engleski neodređeni članovi "a" i "an" u originalnom tekstu na engleskom jeziku mogu da se odnose bilo na jedno, ili jedno ili više.

[0035] Kao što je ovde korišćeno, izraz "jedinjenja i/ili njihove soli' se odnosi na najmanje jedno jedinjenje, najmanje jednu so jedinjenja, ili njihovu kombinaciju. Na primer, jedinjenja sa formulom (I) i/ili njihove soli uključuju jedinjenje sa formulom (I); dva jedinjenja sa formulom (I); so jedinjenja sa formulom (I); jedinjenje sa formulom (I) i jedno ili više soli jedinjenja sa formulom (I); i dve ili više soli jedinjenja sa formulom (I).

[0036] Sem ako nije drugačije naznačeno, za svaki atom sa nezasićenim valencama se pretpostavlja da ima atome vodonika dovoljne da se zadovolje valence.

[0037] Definicije koje su ovde predstavljene imaju prednost nad definicijama predstavljenim u bilo kom patentu, prijavi patenta, i/ili ovde pomenutoj objavi prijave patenta.

[0038] U daljem tekstu su navedene definicije različitih pojmova koji su korišćeni da se opiše predmetni pronalazak. Ove definicije se primenjuju na pojmove kako se koriste kroz celu specifikaciju (sem ako nisu na drugi način ograničene u određenim slučajevima) bilo pojedinačno ili kao deo veće grupe.

[0039] U celoj specifikaciji, grupe i njihove supstituente može odabrati stručnjak iz oblasti da bi se obezbedili stabilni segmenti i jedinjenja.

[0040] U skladu sa konvencijom koja se koristi u tehnici,

se koristi u ovde prikazanim strukturnim formulama da opiše vezu koja je tačka vezivanja segmenta ili supstituenta za jezgro ili osnovnu strukturu.

[0041] Pojmovi "halo" i "halogen," kako se ovde koriste, se odnose na F, Cl, Br, i I.

[0042] Pojam "cijano" se odnosi na grupu -CN.

[0043] Pojam "amino" se odnosi na grupu -NH2.

[0044] Pojam "okso" se odnosi na grupu =O.

[0045] Pojam "alkil" kako se ovde koriste, se odnosi na i razgranate i ravnolančane zasićene alifatične ugljovodonične grupe koje sadrže, na primer, od 1 do 12 atoma ugljenika, od 1 do 6 atoma ugljenika, i od 1 do 4 atoma ugljenika. Primeri alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil (Me), etil (Et), propil (npr. n-propil i i-propil), butil (npr. n-butil, i-butil, sek-butil, i t-butil), i pentil (npr. n-pentil, izopentil, neopentil), n-heksil, 2-metilpentil, 2-etilbutil, 3-metilpentil, i 4-metilpentil. Kada se brojevi pojavljuju u indeksu nakon simbola "C", indeks definiše sa većom specifičnošću broj atoma ugljenika koje može određena grupa da sadrži. Na primer, "C1-4alkil" označava alkil grupe ravnog i razgranatog lanca sa jednim do četiri atoma ugljenika.

[0046] Pojam "fluoroalkil" kako se ovde koristi je namenjen da obuhvati i razgranate i ravnolančane zasićene alifatične ugljovodonične grupe supstituisane jednim ili više atoma fluora. Na primer, "C1-4fluoroalkil" treba da uključuje C1, C2, C3, i C4alkil grupe supstituisane sa jednim ili više atoma fluora. Reprezentativni primeri fluoroalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -CF3i -CH2CF3.

[0047] Pojam "cijanoalkil" uključuje i razgranate i ravnolančane zasićene alkil grupe supstituisane sa jednom ili više cijano grupa. Na primer, "cijanoalkil" uključuje -CH2CN, -CH2CH2CN, i C1-

4cijanoalkil.

[0048] Pojam "aminoalkil" uključuje i razgranate i ravnolančane zasićene alkil grupe supstituisane sa jednom ili više amino grupa. Na primer, "aminoalkil" uključuje -CH2NH2, -CH2CH2NH2, i C1-

4aminoalkil.

[0049] Pojam "hidroksialkil" uključuje i razgranate i ravnolančane zasićene alkil grupe supstituisane sa jednom ili više hidroksilnih grupa. Na primer, "hidroksialkil" uključuje -CH2OH, -CH2CH2OH, i C1-4hidroksialkil.

[0050] Pojam "alkenil" se odnosi na ugljovodonični radikal ravnog ili razgranatog lanca koji sadrži od 2 do 12 atoma ugljenika i najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik. Primeri takvih grupa uključuju etenil ili alil. Na primer, "C2-6alkenil" označava alkenil grupe ravnog i razgranatog lanca sa dva do šest atoma ugljenika.

[0051] Pojam "alkinil" se odnosi na ugljovodonični radikal ravnog ili razgranatog lanca koji sadrži od 2 do 12 atoma ugljenika i najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik. Primeri takvih grupa uključuju etinil. Na primer, "C2-6alkinil" označava alkinil grupe ravnog i razgranatog lanca sa dva do šest atoma ugljenika.

[0052] Pojam "cikloalkil," kako se ovde koristi, odnosi se na grupu izvedenu iz nearomatičnog monocikličnog ili policikličnog molekula ugljovodonika uklanjanjem jednog atoma vodonika sa zasićenog atoma ugljenika u prstenu. Reprezentativni primeri cikloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklopentil i cikloheksil. Kada se brojevi pojavljuju u indeksu iza simbola "C", indeks definiše preciznije broj atoma ugljenika koje određena cikloalkil grupa može da sadrži. Na primer, "C3-6cikloalkil" označava cikloalkil grupe sa tri do šest atoma ugljenika.

[0053] Pojam "alkoksi, kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu vezanu za osnovni molekularni segment preko atoma kiseonika, na primer, metoksi grupu (-OCH3). Na primer, "C1-

3alkoksi" označava alkoksi grupe sa jednim do tri atoma ugljenika.

[0054] Pojmovi "fluoroalkoksi" i "-O(fluoroalkil)" predstavljaju fluoroalkil grupu kao što je gore definisano vezanu preko kiseonične veze (-O-). Na primer, "C1-4fluoroalkoksi" treba da uključi C1, C2, C3, i C4fluoroalkoksi grupe.

[0055] Pojam "alkalenil" se odnosi na zasićeni ugljenični lanac sa dve tačke vezivanja za jezgro ili osnovnu strukturu. Alkalenil grupa ima strukturu -(CH2)n- u kojoj je n ceo broj 1 ili veći. Primeri alkalenil veza uključuju -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, i -(CH2)2-4-.

[0056] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi tako da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili oblike doziranja koji su, u okviru razumne medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacija, alergijskog odgovora ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno razumnom odnosu koristi/rizik.

[0057] Jedinjenja sa formulom (I) mogu da formiraju soli koje su takođe u okviru ovog pronalaska. Sem ako nije drugačije naznačeno, podrazumeva se da pozivanje na inventivno jedinjenje uključuje pozivanje na jednu ili više njegovih soli. Pojam "so(li)" označava kisele i/ili bazne soli formirane sa neorganskim i/ili organskim kiselinama i bazama. Dodatno, pojam "so(li) može da uključi cviterjone (unutrašnje soli), npr. kada jedinjenje formule (I) sadrži i bazni segment, kao što je amin ili piridinski ili imidazolni prsten, i kiseli segment, kao što je karboksilna kiselina. Farmaceutski prihvatljive (tj. netoksične, fiziološki prihvatljive) soli su poželjne, kao što su, na primer, prihvatljive soli metala i amina u kojima katjon ne doprinosi značajno toksičnosti ili biološkoj aktivnosti soli. Međutim, druge soli mogu biti korisne, npr. u koracima izolacije ili prečišćavanja koji se mogu koristiti tokom pripreme, pa su stoga razmatrane u okviru obima pronalaska. Soli jedinjenja formule (I) mogu se formirati, na primer, reakcijom jedinjenja formule (I) sa količinom kiseline ili baze, kao što je ekvivalentna količina, u medijumu kao što je onaj u kome se so taloži ili u vodenom medijumu nakon čega sledi liofilizacija.

[0058] Primeri adicionih soli sa kiselinama uključuju acetate (kao što su oni formirani sa sirćetnom kiselinom ili trihalosirćetnom kiselinom, na primer, trifluorosirćetnom kiselinom), adipate alginate, askorbate, aspartate, benzoate, benzensulfonate, bisulfate, borate, butirate, citrate, kamforate, kamforsulfonate, ciklopentanpropionate, diglukonate, dodecilsulfate, etansulfonate, fumarate, glukoheptanoate, glicerofosfate, hemisulfate, heptanoate, heksanoate, hidrohloride (formirane sa hlorovodoničnom kiselinom), hidrobromide (formirane sa bromovodonikom), hidrojodide, maleate (formirane maleinskom kiselinom), 2-hidroksietansulfonate, laktate, metansulfonate (formirane sa metansulfonskom kiselinom), 2-naftalensulfonate, nikotinate, nitrate, oksalate, pektinate, persulfate, 3-fenilpropionate, fosfate, pikrate, pivalate, propionate, salicilate, sukcinate, sulfate (kao što su oni koji nastaju sa sumpornom kiselinom), sulfonate (kao što su oni koji su ovde pomenuti), tartrate, tiocijanate, toluensulfonate kao što su tozilati, undekanoate i slično.

[0059] Primeri baznih soli uključuju soli amonijuma, soli alkalnih metala kao što su natrijumove, litijumove i kalijumove soli; soli zemnoalkalnih metala kao što su soli kalcijuma i magnezijuma; soli barijuma, cinka i aluminijuma; soli sa organskim bazama (na primer, organski amini) kao što su trialkilamini kao što su trietilamin, prokain, dibenzilamin, N-benzil-β-fenetilamin, 1-efenamin, N,N'-dibenziletilen-diamin, dehidroabietilamin, N-etilpiperidin, benzilamin, dicikloheksilamin ili slični farmaceutski prihvatljivi amini i soli sa amino kiselinama kao što su arginin, lizin i slično. Osnovne grupe koje sadrže azot mogu biti kvaternizovane agensima kao što su niži alkil halogenidi (npr., metil, etil, propil i butil hloridi, bromidi i jodidi), dialkil sulfati (npr., dimetil, dietil, dibutil i diamil sulfati), halogenidi dugog lanca (npr., decil, lauril, miristil i stearil hloridi, bromidi i jodidi), aralkil halogenidi (npr., benzil i fenetil bromidi) i drugi. Poželjne soli uključuju monohidrohloridne, hidrogensulfatne, metansulfonatne, fosfatne ili nitratne soli.

[0060] Jedinjenja sa formulom (I) mogu biti obezbeđena kao amorfne čvrste supstance ili kristalne čvrste supstance. Liofilizacija se može primeniti da bi se dobila jedinjenja sa formulom (I) kao čvrste supstance.

[0061] Pored toga, jedinjenja formule (I), nakon njihovog dobijanja, mogu se izolovati i prečistiti da bi se dobila kompozicija koja sadrži količinu po masi jednaku ili veću od 99% jedinjenja sa formulom (I) („suštinski čista“), koja se zatim koristi ili formuliše kako je ovde opisano. Takva "suštinski čista" jedinjenja formule (I) su takođe razmatrana ovde kao deo predmetnog pronalaska.

[0062] "Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura" su namenjeni da označe jedinjenje koje je dovoljno robusno da preživi izolaciju do korisnog stepena čistoće iz reakcione smeše i formulaciju u efikasan terapijski agens. Predmetni pronalazak je namenjen da oformi stabilna jedinjenja.

[0063] "Terapijski efikasna količina" je namenjena da uključi količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska samog ili količinu kombinacije jedinjenja za koja se traži zaštita, ili količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska u kombinaciji sa drugim aktivnim sastojcima efikasnu da deluje kao inhibitor DGKα i/ili DGKζ, ili efikasnu za lečenje ili prevenciju virusnih infekcija i proliferativnih poremećaja, kao što je kancer.

[0064] Kako se ovde koristi, "lečenje" ili "tretman" pokrivaju lečenje stanja bolesti kod sisara, posebno kod čoveka, i obuhvataju: (a) sprečavanje da se stanje bolesti javi kod sisara, posebno kada sisar ima predispoziciju za stanje bolesti, ali mu još nije dijagnostikovano da ga ima; (b) inhibiranje stanja bolesti, tj. zaustavljanje njegovog razvoja; i/ili (c) ublažavanje stanja bolesti, tj. izazivanje regresije stanja bolesti.

[0065] Namerava se da jedinjenja predmetnog pronalaska obuhvate sve izotope atoma koji se javljaju u predmetnim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve. Kao opšti primer i bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum (D) i tricijum (T). Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Izotopski obeležena jedinjenja pronalaska se generalno mogu pripremiti konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima u ovoj oblasti ili postupcima analognim onima koji su ovde opisani, korišćenjem odgovarajućeg izotopski obeleženog reagensa umesto neobeleženog reagensa koji se inače koristi.

[0066] Jedinjenja u skladu sa formulom (I) i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu se administrirati na bilo koji način pogodan za stanje koje se leči, što može zavisiti od potrebe za tretmanom specifičnim za mesto ili količine jedinjenja formule (I) koja treba da se isporuči.

[0067] U okviru ovog pronalaska je takođe obuhvaćena klasa farmaceutskih kompozicija koje sadrže jedinjenje formule (I) i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli; i jedan ili više netoksičnih, farmaceutski prihvatljivih nosača i/ili razblaživača i/ili adjuvansa (koji se ovde zajednički nazivaju "nosač" materijali) i, ako se želi, druge aktivne sastojke. Jedinjenja formule (I) se mogu administrirati bilo kojim pogodnim putem, poželjno u obliku farmaceutske kompozicije prilagođene takvom putu, i u dozi efikasnoj za predviđeno lečenje. Jedinjenja i kompozicije predmetnog pronalaska mogu se, na primer, administrirati oralno, mukozno ili parenteralno, uključujući intravaskularno, intravensko, intraperitonealno, supkutano, intramuskularno i intrasternalno u doznim jediničnim formulacijama koje sadrže konvencionalne farmaceutski prihvatljive nosače, adjuvanse i vehikulum. Na primer, farmaceutski nosač može da sadrži smešu manitola ili laktoze i mikrokristalne celuloze. Smeša može da sadrži dodatne komponente kao što je lubrikans, npr. magnezijum stearat i sredstvo za dezintegraciju kao što je krospovidon. Smeša nosača se može puniti u želatinsku kapsulu ili komprimovati kao tableta. Farmaceutska kompozicija se može administrirati kao oralni dozni oblik ili kao infuzija, na primer.

[0068] Za oralnu administraciju, farmaceutska kompozicija može biti u obliku, na primer, tablete, kapsule, tečne kapsule, suspenzije ili tečnosti. Farmaceutska kompozicija je poželjno napravljena u obliku dozne jedinice koja sadrži određenu količinu aktivnog sastojka. Na primer, farmaceutska kompozicija može biti obezbeđena kao tableta ili kapsula koja sadrži količinu aktivnog sastojka u opsegu od oko 0.1 do 1000 mg, poželjno od oko 0.25 do 250 mg, a poželjnije od oko 0.5 do 100 mg. Pogodna dnevna doza za čoveka ili drugog sisara može da varira u velikoj meri u zavisnosti od stanja pacijenta i drugih faktora, ali se može odrediti korišćenjem rutinskih metoda.

[0069] Bilo koja farmaceutska kompozicija koja se ovde razmatra može se, na primer, davati oralno putem bilo kog prihvatljivog i pogodnog oralnog preparata. Primeri oralnih preparata uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, tablete, pastile, lozenge, vodene i uljne suspenzije, disperzibilne praškove ili granule, emulzije, tvrde i meke kapsule, tečne kapsule, sirupe i eliksire. Farmaceutske kompozicije namenjene za oralnu administraciju mogu se pripremiti prema bilo kom postupku poznatom u tehnici za proizvodnju farmaceutskih kompozicija namenjenih za oralnu primenu. U cilju obezbeđivanja farmaceutski palatabilnih preparata, farmaceutska kompozicija u skladu sa pronalaskom može sadržati najmanje jedan agens izabran između zaslađivača, aroma, sredstava za bojenje, demulcenata, antioksidanasa i konzervanasa.

[0070] Tableta se može, na primer, pripremiti mešanjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne njegove farmaceutski prihvatljive soli sa najmanje jednim netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom pogodnim za proizvodnju tableta. Primeri ekscipijenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, inertne razblaživače, kao što su, na primer, kalcijum karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum fosfat i natrijum fosfat; sredstva za granulaciju i dezintegraciju, kao što su, na primer, mikrokristalna celuloza, natrijum kroskarmeloza, kukuruzni skrob i alginska kiselina; vezivna sredstva, kao što su, na primer, skrob, želatin, polivinil-pirolidon i akacija; i lubrikanse, kao što su, na primer, magnezijum stearat, stearinska kiselina i talk. Pored toga, tableta može biti neobložena ili obložena poznatim tehnikama kako bi se ili prikrio loš ukus leka neprijatnog ukusa, ili odložila dezintegracija i apsorpcija aktivnog sastojka u gastrointestinalnom traktu, čime bi se održali efekti aktivnog sastojka duži vremenski period. Primeri materijala za maskiranje ukusa rastvorljivih u vodi uključuju, ali nisu ograničeni na, hidroksipropil-metilcelulozu i hidroksipropilcelulozu. Primeri materijala za vremensko odlaganje uključuju, ali nisu ograničeni na, etil celulozu i celuloza acetat butirat.

[0071] Tvrde želatinske kapsule mogu se, na primer, pripremiti mešanjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne njegove soli sa najmanje jednim inertnim čvrstim razblaživačem, kao što je, na primer, kalcijum karbonat; kalcijum fosfat; i kaolin.

[0072] Meke želatinske kapsule mogu se, na primer, pripremiti mešanjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne njegove farmaceutski prihvatljive soli sa najmanje jednim nosačem rastvorljivim u vodi, kao što je, na primer, polietilen glikol; i najmanje jednim uljnim medijumom, kao što je, na primer, ulje od kikirikija, tečni parafin i maslinovo ulje.

[0073] Vodena suspenzija se može pripremiti, na primer, mešanjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne njegove farmaceutski prihvatljive soli sa najmanje jednim ekscipijensom pogodnim za proizvodnju vodene suspenzije. Primeri ekscipijenasa pogodnih za proizvodnju vodene suspenzije uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, sredstva za suspendovanje, kao što su, na primer, natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza, natrijum alginat, alginska kiselina, polivinil-pirolidon, guma tragakant i guma akacija; sredstva za dispergovanje ili vlaženje, kao što je, na primer, fosfatid koji se nalazi u prirodi, npr. lecitin; produkte kondenzacije alkilen oksida sa masnim kiselinama, kao što je, na primer, polioksietilen stearat; produkte kondenzacije etilen oksida sa alifatičnim alkoholima dugog lanca, kao što je, na primer, heptadekaetilen-oksicetanol; produkte kondenzacije etilen oksida sa delimičnim estrima dobijenim iz masnih kiselina i heksitola, kao što je, na primer, polioksietilen sorbitol monooleat; i produkte kondenzacije etilen oksida sa delimičnim estrima dobijenim iz masnih kiselina i heksitol anhidrida, kao što je, na primer, polietilen sorbitan monooleat. Vodena suspenzija takođe može da sadrži najmanje jedan konzervans, kao što je, na primer, etil i n-propil p-hidroksibenzoat; najmanje jedno sredstvo za bojenje; najmanje jednu aromu; i/ili najmanje jedan zaslađivač, uključujući ali bez ograničenja na, na primer, saharozu, saharin i aspartam.

[0074] Uljane suspenzije se mogu, na primer, pripremiti suspendovanjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne njegove farmaceutski prihvatljive soli bilo u biljnom ulju, kao što je, na primer, ulje arahisa; maslinovo ulje; susamovo ulje; i kokosovo ulje; ili u mineralnom ulju, kao što je, na primer, tečni parafin. Uljana suspenzija takođe može da sadrži najmanje jedno sredstvo za zgušnjavanje, kao što je, na primer, pčelinji vosak; tvrdi parafin; i cetil alkohol. Da bi se obezbedila palatabilna uljana suspenzija, u uljnu suspenziju se može dodati bar jedan od zaslađivača koji su već opisani u tekstu iznad, i/ili najmanje jedno sredstvo za poboljšanje ukusa. Uljana suspenzija može dalje da sadrži najmanje jedan konzervans, uključujući, ali ne ograničavajući se na, na primer, antioksidans, kao što je, na primer, butilovani hidroksianizol i alfa-tokoferol.

[0075] Disperzibilni praškovi i granule mogu se, na primer, pripremiti mešanjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne njegove farmaceutski prihvatljive soli sa najmanje jednim sredstvom za dispergovanje i/ili vlaženje; najmanje jednim agensom za suspendovanje; i/ili najmanje jednim konzervansom. Pogodna sredstva za dispergovanje, sredstva za vlaženje i sredstva za suspendovanje su kao što je već opisano. Primeri konzervansa uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, antioksidanse, npr. askorbinsku kiselinu. Pored toga, disperzibilni praškovi i granule takođe mogu da sadrže najmanje jedan ekscipijens, uključujući, ali ne ograničavajući se na, na primer, zaslađivače; arome; i sredstva za bojenje.

[0076] Emulzija najmanje jednog jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedne njegove farmaceutski prihvatljive soli može se, na primer, pripremiti kao emulzija ulje u vodi. Uljana faza emulzija koje sadrže jedinjenja formule (I) može biti načinjena od poznatih sastojaka na poznat način. Uljanu fazu mogu formirati, ali nije ograničeno na, na primer, biljno ulje, kao što je, na primer, maslinovo ulje i ulje arahisa; mineralno ulje, kao što je, na primer, tečni parafin; i njihove smeše. Dok faza može da sadrži samo emulgator, ona može da sadrži smešu najmanje jednog emulgatora sa masti ili uljem ili i sa masti i uljem. Pogodni agensi za emulgovanje uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, fosfatide koji se nalaze u prirodi, npr., lecitin iz soje; estre ili delimične estre dobijene od masnih kiselina i heksitol anhidrida, kao što je, na primer, sorbitan monooleat; i produkte kondenzacije parcijalnih estara sa etilen oksidom, kao što je, na primer, polioksietilen sorbitan monooleat. Poželjno, hidrofilni emulgator je uključen zajedno sa lipofilnim emulgatorom koji deluje kao stabilizator. Takođe je poželjno uključiti i ulje i mast. Zajedno, emulgator(i) sa ili bez stabilizatora sačinjavaju takozvani emulgujući vosak, a vosak zajedno sa uljem i masti čini takozvanu emulgujuću masnu bazu koja formira uljanu dispergovanu fazu kremaste formulacije. Emulzija takođe može da sadrži zaslađivač, aromu, konzervans i/ili antioksidans. Emulgatori i stabilizatori emulzije pogodni za upotrebu u formulaciji ovog pronalaska uključuju Tween 60, Span 80, cetostearil alkohol, miristil alkohol, gliceril monostearat, natrijum lauril sulfat, gliceril distearat zasebno ili sa voskom, ili druge materijale dobro poznate u struci.

[0077] Jedinjenja formule (I) i/ili najmanje jedna njihova farmaceutski prihvatljiva so mogu se, na primer, takođe davati intravenozno, supkutano i/ili intramuskularno putem bilo kog farmaceutski prihvatljivog i pogodnog injektabilnog oblika. Primeri injektabilnog oblika obuhvataju, ali nisu ograničeni na, na primer, sterilne vodene rastvore koji sadrže prihvatljive vehikulume i rastvarače, kao što su, na primer, voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida; sterilne mikroemulzije ulja u vodi; i vodene ili uljane suspenzije.

[0078] Formulacije za parenteralnu administraciju mogu biti u obliku vodenih ili nevodenih izotoničnih sterilnih injekcionih rastvora ili suspenzija. Ovi rastvori i suspenzije se mogu pripremiti od sterilnih praškova ili granula korišćenjem jednog ili više nosača ili razblaživača navedenih za upotrebu u formulacijama za oralnu administraciju ili korišćenjem drugih pogodnih sredstava za dispergovanje ili vlaženje i sredstava za suspendovanje. Jedinjenja se mogu rastvoriti u vodi, polietilen glikolu, propilen glikolu, etanolu, kukuruznom ulju, ulju semena pamuka, ulju od kikirikija, susamovom ulju, benzil alkoholu, natrijum hloridu, tragakant gumi i/ili raznim puferima. Drugi adjuvansi i načini administracije su dobro i široko poznati u farmaceutskoj struci. Aktivni sastojak se takođe može primeniti injekcijom kao kompozicija sa pogodnim nosačima uključujući fiziološki rastvor, dekstrozu ili vodu, ili sa ciklodekstrinom (tj. Captisol), solubilizacijom u korastvaraču (tj. propilen glikol) ili micelarnom solubilizacijom (tj. Tween 80).

[0079] Sterilni preparat za injekcije može takođe biti sterilni rastvor ili suspenzija za injekcije u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim vehikulumima i rastvaračima koji se mogu koristiti su voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Pored toga, sterilna, fiksna ulja se konvencionalno koriste kao rastvarač ili medijum za suspendovanje. U tu svrhu može se koristiti bilo koje blago fiksno ulje, uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Pored toga, masne kiseline kao što je oleinska kiselina nalaze primenu u pripremi injektabilnih preparata.

[0080] Sterilna mikroemulzija ulje u vodi za injekcije može se, na primer, pripremiti 1) rastvaranjem najmanje jednog jedinjenja formule (I) u uljnoj fazi, kao što je, na primer, smeša sojinog ulja i lecitina; 2) kombinovanjem uljane faze koja sadrži formulu (I) sa smešom vode i glicerola; i 3) obradom kombinacije da se formira mikroemulzija.

[0081] Sterilna vodena ili uljna suspenzija se može pripremiti u skladu sa postupcima koji su već poznati u tehnici. Na primer, sterilni vodeni rastvor ili suspenzija se može pripremiti sa netoksičnim parenteralno prihvatljivim razblaživačem ili rastvaračem, kao što je, na primer, 1,3butan diol; i sterilna uljana suspenzija se može pripremiti sa sterilnim netoksičnim prihvatljivim rastvaračem ili medijumom za suspendovanje, kao što su, na primer, sterilna fiksna ulja, npr. sintetički mono- ili digliceridi; i masne kiseline, kao što je, na primer, oleinska kiselina.

[0082] Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvansi i vehikulumi koji se mogu koristiti u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska obuhvataju, ali nisu ograničeni na, jonoizmenjivače, glinicu, aluminijum stearat, lecitin, samoemulgujuće sisteme za isporuku leka (SEDDS) kao što je d-alfa-tokoferol polietilenglikol 1000 sukcinat, surfaktante koji se koriste u farmaceutskim doznim oblicima kao što su Tween-ovi, polietoksilovano ricinusovo ulje kao što je CREMOPHOR surfaktant (BASF) ili druge slične polimerne matrice za isporuku, serumske proteine, kao što je humani serumski albumin, puferne supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimične gliceridne smeše zasićenih biljnih masnih kiselina, vode, soli ili elektrolita, kao što su protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidni silicijum dioksid, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilcelulozu, poliakrilate, voskove, polietilen-polioksipropilen blok polimere, polietilen glikol i lanolin. Ciklodekstrini kao što su alfa-, beta- i gama-ciklodekstrin, ili hemijski modifikovani derivati kao što su hidroksialkilciklodekstrini, uključujući 2- i 3-hidroksipropil-ciklodekstrine, ili druge solubilizovane derivate takođe mogu da se koriste za poboljšanje isporuke jedinjenja sa formulama koja su ovde opisana.

[0083] Farmaceutski aktivna jedinjenja ovog pronalaska se mogu obraditi u skladu sa konvencionalnim farmaceutskim postupcima da bi se proizveli medicinski agensi za primenu kod pacijenata, uključujući ljude i druge sisare. Farmaceutske kompozicije mogu biti podvrgnute konvencionalnim farmaceutskim operacijama kao što je sterilizacija i/ili mogu sadržati konvencionalne adjuvanse, kao što su konzervansi, stabilizatori, sredstva za vlaženje, emulgatori, puferi itd. Tablete i pilule se mogu dodatno pripremiti sa enteričkim oblogama. Takve kompozicije mogu takođe sadržati adjuvanse, kao što su sredstva za vlaženje, zaslađivanje, arome i mirise.

[0084] Količine jedinjenja koje se administriraju i režim doziranja za lečenje stanja bolesti jedinjenjima i/ili kompozicijama ovog pronalaska zavise od niza faktora, uključujući starost, masu, pol, zdravstveno stanje subjekta, tip bolesti, ozbiljnosti bolesti, put i učestalost administriranja i određeno jedinjenje koje se koristi. Dakle, režim doziranja može u velikoj meri varirati, ali se može rutinski odrediti korišćenjem standardnih metoda. Dnevna doza od oko 0.001 do 100 mg/kg telesne mase, poželjno između oko 0.0025 i oko 50 mg/kg telesne mase i najpoželjnije između oko 0.005 do 10 mg/kg telesne mase, može biti odgovarajuća. Dnevna doza se može administrirati u jednoj do četiri doze dnevno. Drugi rasporedi doziranja uključuju jednu dozu nedeljno i jednu dozu u dvodnevnom ciklusu.

[0085] Za terapijske svrhe, aktivna jedinjenja ovog pronalaska se obično kombinuju sa jednim ili više adjuvanasa odgovarajućih za naznačeni put primene. Ako se administriraju oralno, jedinjenja se mogu mešati sa laktozom, saharozom, skrobnim prahom, celuloznim estrima alkanskih kiselina, celuloznim alkil estrima, talkom, stearinskom kiselinom, magnezijum stearatom, magnezijum oksidom, natrijumovim i kalcijumovim solima fosforne i sumporne kiseline, želatinom, akacija gumom, natrijum alginatom, polivinilpirolidonom i/ili polivinil alkoholom, a zatim tabletirani ili inkapsulirani za pogodnu administraciju. Takve kapsule ili tablete mogu da sadrže formulaciju sa kontrolisanim oslobađanjem koja se može obezbediti u disperziji aktivnog jedinjenja u hidroksipropilmetil celulozi.

[0086] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I) i/ili najmanje jednu njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i opciono dodatni agens odabran od bilo kog farmaceutski prihvatljivog nosača, adjuvansa i vehikuluma. Alternativne kompozicije ovog pronalaska sadrže jedinjenje formule (I) opisano ovde i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili vehikulum.

KORISNOST

[0087] Jedinjenja sa formulom (I) su korisna za lečenje kancera.

[0088]U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kombinovani preparat jedinjenja formule (I), i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, njegovog stereoizomera ili njegovog tautomera, i dodatnog terapijskog agensa (agenasa) za istovremenu, odvojenu ili uzastopnu primenu u lečenju i/ili profilaksi višestrukih bolesti ili poremećaja povezanih sa inhibicijom DGK cilja u T ćelijama.

[0089] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje tehničko rešenje za lečenje pacijenta koji pati ili je podložan medicinskom stanju koje je u vezi sa inhibicijom DGK cilja u T ćelijama. Brojna medicinska stanja se mogu lečiti. Na primer, ovde opisana jedinjenja mogu da se koriste za lečenje ili prevenciju virusnih infekcija i proliferativnih bolesti kao što je kancer.

[0090] Jedinjenja za formulu (I) i farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I) su korisna u lečenju ili prevenciji bilo koje bolesti ili stanja koja su povezana sa inhibicijom DGK cilja u T ćelijama. To uključuje virusne i druge infekcije (npr., infekcije kože, GI infekcije, infekcije urinarnog trakta, genito-urinarne infekcije, sistemske infekcije) i proliferativne bolesti (npr., kancer). Jedinjenja formule (I) i farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I) mogu se davati životinjama, poželjno sisarima (npr., domaćim životinjama, mačkama, psima, miševima, pacovima), a poželjnije ljudima. Bilo koji metod ordiniranja se može koristiti za isporuku jedinjenja ili farmaceutske kompozicije pacijentu. U određenim tehničkim rešenjima, jedinjenje formule (I) ili farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedinjenje formule (I) se administrira oralno. U drugim tehničkim rešenjima, formula (I) ili farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedinjenje formule (I) se administrira parenteralno.

[0091] Jedinjenja formule (I) mogu inhibirati aktivnost diacilglicerol kinaze alfa i zeta (DGKα/ζ). Na primer, jedinjenja formule (I) se mogu koristiti za inhibiciju aktivnosti DGKα i DGKζ u ćeliji ili kod pojedinca kome je potrebna modulacija DGKα i DGKζ administriranjem inhibirajuće količine jedinjenja formule (I) ili njegove soli.

[0092] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutsku kompoziciju za upotrebu u lečenju bolesti koje su u vezi sa aktivnošću ili eksprimiranjem, uključujući abnormalnu aktivnost i/ili prekomerno eksprimiranje, DGKα i DGKζ kod pojedinca (npr., pacijenta) kome je potrebno takvo lečenje. Primeri bolesti mogu uključiti bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje je direktno ili indirektno u vezi sa eksprimiranjem ili aktivnošću DGKα i DGKζ enzima, kao što je prekomerno eksprimiranje ili abnormalna aktivnost. Bolest koja je u vezi sa DGKα i DGKζ takođe može uključiti bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje se može sprečiti, ublažiti ili izlečiti modulacijom aktivnosti enzima DGKα i DGKζ. Primeri bolesti koje su u vezi sa DGKα i DGKζ uključuju kancer i virusne infekcije kao što su HIV infekcija, hepatitis B i hepatitis C.

[0093] U jednom aspektu, jedinjenje(a) formule (I) se administrira uzastopno pre administriranja imunoonkološkog agensa. U drugom aspektu, jedinjenje(a) formule (I) se administrira istovremeno sa imunoonkološkim agensom. U još jednom aspektu, jedinjenje(a) formule (I) se administrira nakon administriranja imunoonkološkog agensa.

[0094] U drugom aspektu, jedinjenja formule (I) mogu biti zajedno formulisano sa imunoonkološkim agensom.

[0095] Imunoonkološki agensi uključuju, na primer, lek sa malim molekulima, antitelo ili drugi biološki ili mali molekul. Primeri bioloških imunoonkoloških agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, vakcine protiv kancera, antitela i citokine. U jednom aspektu, antitelo je monoklonsko antitelo. U drugom aspektu, monoklonsko antitelo je humanizovano ili humano.

[0096] U jednom aspektu, imunoonkološki agens je (i) agonist stimulatornog (uključujući kostimulatornog) receptora ili (ii) antagonist inhibitornog (uključujući ko-inhibitornog) signala na T ćelijama, od kojih oba rezultiraju pojačavanjem odgovora T ćelija specifičnih za antigen (često se nazivaju regulatorima imunoloških kontrolnih tačaka).

[0097] Neki od stimulativnih i inhibitornih molekula su članovi superfamilije imunoglobulina (IgSF). Jedna važna familija liganada vezanih za membranu koji se vezuju za kostimulativne ili koinhibitorne receptore je familija B7, koja uključuje B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2 ), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA) i B7-H6. Druga familija liganada vezanih za membranu koji se vezuju za kostimulativne ili koinhibitorne receptore je TNF familija molekula koji se vezuju za srodne članove familije TNF receptora, koji uključuju CD40 i CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, Limfotoksin α/TNFβ, TNFR2, TNFα, LTβR, limfotoksin α 1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR.

[0098] U jednom aspektu, T ćelijski odgovori mogu biti stimulisani kombinacijom jedinjenja sa sa formulom (I) i jednog ili više od (i) antagonista proteina koji inhibira aktivaciju T ćelija (npr., inhibitora imunoloških kontrolnih tačaka) poput CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, Galektin 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galektin-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1, i TIM-4, i (ii) agonista proteina koji stimuliše aktivaciju T ćelija poput B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 i CD28H.

[0099] Drugi agensi koji se mogu kombinovati sa jedinjenjima formule (I) za lečenje kancera uključuju antagoniste inhibitornih receptora na NK ćelijama ili agoniste aktivirajućih receptora na NK ćelijama. Na primer, jedinjenja formule (I) mogu da se kombinuju sa antagonistima KIR-a, kao što je lirilumab.

[0100] Ipak, drugi agensi za kombinovane terapije uključuju agense koji inhibiraju ili iscrpljuju makrofage ili monocite, uključujući ali ne ograničavajući se na CSF-1R antagoniste kao što su CSF-1R antagonistička antitela uključujući RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) ili FPA-008 (WO11/140249; WO13169264; WO14/036357).

[0101] U drugom aspektu, jedinjenja formule (I) se mogu koristiti sa jednim ili više agonističkih agenasa koji se vezuju za pozitivne kostimulatorne receptore, blokirajućih agenasa koji prigušuju signalizaciju preko inhibitornih receptora, antagonista i jednim ili više agenasa koji sistemski povećavaju učestalost antitumorskih T ćelija, agenasa koji prevazilaze različite imunosupresivne puteve unutar tumorskog mikrookruženja (npr. blokiraju inhibitorno angažovanje receptora (npr. interakcije PD-L1/PD-1), iscrpljuju ili inhibiraju Treg-ove (npr., korišćenjem anti-CD25 monoklonskog antitela (npr. daklizumaba) ili ex vivo osiromašenjem anti-CD25 perlica), inhibiraju metaboličke enzime kao što je IDO, ili čuvaju/sprečaju anergiju ili iscrpljenost T ćelija) i agenasa koji pokreću urođenu imunološku aktivaciju i/ili inflamaciju na mestima tumora.

[0102] U jednom aspektu, imunoonkološki agens je CTLA-4 antagonist, poput antagonističkog CTLA-4 antitela. Pogodna CTLA-4 antitela uključuju, na primer, YERVOY (ipilimumab) ili tremelimumab.

[0103] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je PD-1 antagonist, kao što je antagonističko PD-1 antitelo. Pogodna PD-1 antitela uključuju, na primer, OPDIVO (nivolumab), KEYTRUDA (pembrolizumab) ili MEDI-0680 (AMP-514; WO2012/145493). Imunoonkološki agens može takođe uključiti pidilizumab (CT-011), iako je njegova specifičnost za vezivanje PD-1 dovedena u pitanje. Drugi pristup za ciljanje PD-1 receptora je rekombinantni protein sastavljen od ekstracelularnog domena PD-L2 (B7-DC) koji je spojen sa Fc delom od IgG1, zvan AMP-224.

[0104] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je PD-L1 antagonist, kao što je antagonističko PD-L1 antitelo. Pogodna PD-L1 antitela uključuju, na primer, MPDL3280A (RG7446; WO2010/077634), durvalumab (MEDI4736), BMS-936559 (WO2007/005874), i MSB0010718C (WO2013/79174).

[0105] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je LAG-3 antagonist, kao što je antagonističko LAG-3 antitelo. Odgovarajuća LAG3 antitela uključuju, na primer, BMS-986016 (WO10/19570, WO14/08218), ili IMP-731 ili IMP-321 (WO08/132601, WO09/44273).

[0106] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je CD137 (4-1BB) agonist, kao što je agonističko antitelo CD137. Pogodna CD137 antitela uključuju, na primer, urelumab i PF-05082566 (WO12/32433).

[0107] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je GITR agonist, kao što je agonističko GITR antitelo. Pogodna GITR antitela uključuju, na primer, BMS-986153, BMS-986156, TRKS-518 (WO06/105021, WO09/009116) i MK-4166 (WO11/028683).

[0108] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je IDO antagonist. Pogodni IDO antagonisti uključuju, na primer, INCB-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), indoksimod, BMS-986205 ili NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237).

[0109] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je agonist OX40, kao što je agonističko antitelo OX40. Pogodna OX40 antitela uključuju, na primer, MEDI-6383 ili MEDI-6469.

[0110] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je antagonist OX40L, kao što je antagonističko OX40 antitelo. Odgovarajući OX40L antagonisti uključuju, na primer, RG-7888 (WO06/029879).

[0111] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je CD40 agonist, kao što je agonističko CD40 antitelo. U još jednom tehničkom rešenju, imunoonkološki agens je CD40 antagonist, kao što je antagonističko CD40 antitelo. Pogodna CD40 antitela uključuju, na primer, lukatumumab ili dacetuzumab.

[0112] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je CD27 agonist, poput agonističkog CD27 antitela. Pogodna CD27 antitela uključuju, na primer, varlilumab.

[0113] U drugom aspektu, imunoonkološki agens je MGA271 (na B7H3) (WO 11/109400).

[0114] Kombinovana terapija ima za cilj da obuhvati primenu ovih terapijskih agenasa na uzastopan način, to jest, pri čemu se svaki terapijski agens administrira u različito vreme, kao i administriranje ovih terapijskih agenasa, ili najmanje dva terapijska sredstva, suštinski istovremeno. U suštini istovremena administracija se može postići, na primer, administriranjem subjektu jednog doznog oblika koji ima fiksni odnos svakog terapijskog agensa ili u višestrukim, pojedinačnim doznim oblicima za svako od terapijskih sredstava. Sekvencionalna ili suštinski istovremena administracija svakog terapijskog agensa može se izvršiti bilo kojim odgovarajućim putem uključujući, ali bez ograničenja, oralne puteve, intravenske puteve, intramuskularne puteve i direktnu apsorpciju preko tkiva mukozne membrane. Terapijski agensi se mogu administrirati istim putem ili različitim putevima. Na primer, prvi terapijski agens odabrane kombinacije može se administrirati intravenskom injekcijom, dok se drugi terapijski agensi iz kombinacije mogu administrirati oralno. Alternativno, na primer, svi terapijski agensi se mogu administrirati oralno ili se svi terapijski agensi mogu administrirati intravenskom injekcijom. Kombinovana terapija takođe može da obuhvati administriranje terapijskih agenasa kao što je gore opisano u daljoj kombinaciji sa drugim biološki aktivnim sastojcima i nemedikamentoznim lečenjem (npr., hirurška intervencija ili tretman zračenjem.) Kada kombinovana terapija dalje obuhvata nemedikamentozno lečenje, nemedikamentozno lečenje se može sprovesti u bilo koje pogodno vreme sve dok se postiže blagotvoran efekat zajedničkog dejstva kombinacije terapijskih agenasa i nemedikamentoznog lečenja. Na primer, u odgovarajućim slučajevima, blagotvorni efekat se i dalje postiže kada se nemedikamentozno lečenje privremeno izuzme od administracije terapijskih agenasa, možda tokom više dana ili čak nedelja.

[0115] Kako se ovde koristi, pojam "ćelija" je namenjen da se odnosi na ćeliju koja je in vitro, ex vivo ili in vivo. U nekim tehničkim rešenjima, ex vivo ćelija može biti deo uzorka tkiva izdvojenog iz organizma kao što je sisar. U nekim tehničkim rešenjima, in vitro ćelija može biti ćelija u ćelijskoj kulturi. U nekim tehničkim rešenjima, in vivo ćelija je ćelija koja živi u organizmu kao što je sisar.

[0116] Kako se ovde koristi, pojam "kontaktiranje" se odnosi na dovođenje u kontakt naznačenih segmenata u in vitro sistemu ili in vivo sistemu. Na primer, "kontaktiranje" enzima DGKα i DGKζ sa jedinjenjem formule (I) uključuje administriranje jedinjenja predmetnog pronalaska pojedincu ili pacijentu, kao što je čovek, koji ima DGKα i DGKζ, kao i, na primer, uvođenje jedinjenja formule (I) u uzorak koji sadrži ćelijski ili prečišćeni preparat koji sadrži DGKα i DGKζ enzim.

[0117] Pojam "DGKα i DGKζ inhibitor" odnosi se na agens koji je sposoban da inhibira aktivnost diacilglicerol kinaze alfa i/ili diacilglicerol kinaze zeta (DGKα i DGKζ) u T ćelijama što rezultira stimulacijom T ćelija. Inhibitor DGKα i DGKζ može biti reverzibilni ili ireverzibilni inhibitor DGKα i DGKζ. "Reverzibilni inhibitor DGKα i DGKζ" je jedinjenje koje reverzibilno inhibira aktivnost DGKα i DGKζ enzima bilo na katalitičkom mestu ili na nekatalitičkom mestu, a "ireverzibilni inhibitor DGKα i DGKζ" je jedinjenje koje nepovratno uništava DGKα i DGKζ enzimsku aktivnost formiranjem kovalentne veze sa enzimom.

[0118] Tipovi kancera koji se mogu lečiti jedinjenjem formule (I) uključuju, ali nisu ograničeni na, kancere mozga, kancere kože, kancere mokraćne bešike, kancere jajnika, kancere dojke, kancere želuca, kancere pankreasa, kancere prostate, kancere debelog creva, kancere krvi, kancere pluća i kancere kostiju. Primeri takviһ vrsta kancera uključuju neuroblastom, karcinom creva, kao što je karcinom rektuma, karcinom debelog creva, familijarni adenomatozni polipozni karcinom i nasledni nepolipozni kolorektalni kancer, karcinom jednjaka, labijalni karcinom, karcinom grkljana, karcinom hipofarinksa, karcinom jezika, karcinom pluvačnih žlezda, karcinom želuca, adenokarcinom, medularni karcinom štitaste žlezde, papilarni karcinom štitaste žlezde, karcinom bubrega, karcinom bubrežnog parenhima, karcinom jajnika, karcinom grlića materice, karcinom tela materice, karcinom endometrijuma, horiokarcinom, karcinom pankrease, karcinom prostate, karcinom testisa, karcinom dojke, urinarni karcinom, melanoma, tomore mozga, poput glioblastoma, astrocitoma, meningioma, meduloblastoma i perifernih neuroektodermalnih tumora, Hočkinov limfom, ne-Hočkinov limfom, Burkitov limfom, akutnu limfocitnu leukemiju (ALL), һroničnu limfocitnu leukemiju (CLL), akutnu mijeloidnu leukemiju (AML), hroničnu mijeloidnu leukemiju (CML), T-ćelijska leukemija-limfom odraslih, difuzni B-krupnoćelijski limfom (DLBCL), hepatocelularni karcinom, karcinom žučne kese, bronhijalni karcinom, sitnoćelijski karcinom pluća, nesitnoćelijski karcinom pluća, multipli mijelom, bazaliom, teratom, retinoblastom, horoidni melanom, seminom, rabdomiosarkom, kraniofaringiom, osteosarkom, hondrosarkom, miosarkom, liposarkom, fibrosarkom, Juingov sarkom i plazmocitom.

[0119] Jedan ili više dodatnih farmaceutskih agenasa ili postupaka lečenja kao što su, na primer, antivirusni agensi, hemoterapeutici ili drugi agensi protiv kancera, pojačivači imuniteta, imunosupresivi, zračenje, antitumorske i antivirusne vakcine, citokinska terapija (npr., IL2 i GM-CSF), i/ili inhibitori tirozin kinaze mogu se opciono koristiti u kombinaciji sa jedinjenjima formule (I) za lečenje bolesti, poremećaja ili stanja koji su u vezi sa DGKa i DGKζ. Agensi se mogu kombinovati sa prisutnim jedinjenjima u jednom doznom obliku, ili se agensi mogu administrirati istovremeno ili uzastopno kao odvojeni dozni oblici.

[0120] Pogodni hemoterapijski ili drugi agensi protiv kancera uključuju, na primer, agense za alkilovanje (uključujući, bez ograničenja, azotne iperite, derivate etilenimina, alkil sulfonate, nitrozouree i triazene) kao što su uracil iperit, hlormetin, ciklofosfamid (CYTOXAN<®>), ifosfamid, melfalan, hlorambucil, pipobroman, trietilen-melamin, trietilentiofosforamin, busulfan, karmustin, lomustin, streptozocin, dakarbazin i temozolomid.

[0121] U lečenju melanoma, pogodna sredstva za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjima formule (I) uključuju: dakarbazin (DTIC), opciono, zajedno sa drugim hemoterapijskim lekovima kao što su karmustin (BCNU) i cisplatin; "Dartmouth režim", koji se sastoji od DTIC, BCNU, cisplatina i tamoksifena; kombinaciju cisplatina, vinblastina i DTIC, temozolomida ili IERVOI™. Jedinjenja formule (I) se takođe mogu kombinovati sa lekovima za imunoterapiju, uključujući citokine kao što su interferon alfa, interleukin 2 i faktor nekroze tumora (TNF) u lečenju melanoma.

[0122] Jedinjenja formule (I) se takođe mogu koristiti u kombinaciji sa terapijom vakcinom u lečenju melanoma. Vakcine protiv melanoma su na neki način slične antivirusnim vakcinama koje se koriste za prevenciju bolesti uzrokovanih virusima kao što su polio, male boginje i zauške. Oslabljene ćelije melanoma ili delovi ćelija melanoma koji se nazivaju antigeni mogu se ubrizgati pacijentu da bi se stimulisao imuni sistem tela da uništi ćelije melanoma.

[0123] Melanomi koji su ograničeni na ruke ili noge mogu se takođe lečiti kombinacijom agenasa uključujući jedno ili više jedinjenja formule (I), korišćenjem tehnike hipertermijske perfuzije izolovanog ekstremiteta. Ovaj protokol lečenja privremeno odvaja cirkulaciju zahvaćenog ekstremiteta od ostatka tela i ubrizgava visoke doze hemoterapije u arteriju koja hrani ekstremitet, čime se obezbeđuju visoke doze na području tumora bez izlaganja unutrašnjih organa ovim dozama koje bi inače mogle izazvati ozbiljne neželjene efekte. Obično se tečnost zagreva na 38.9 °C do 40 °C. Melfalan je lek koji se najčešće koristi u ovoj hemoterapijskoj proceduri. Ovo se može dati sa drugim agensom koji se zove faktor nekroze tumora (TNF).

[0124] Pogodni hemoterapijski ili drugi agensi protiv kancera uključuju, na primer, antimetabolite (uključujući, bez ograničenja, antagoniste folne kiseline, analoge pirimidina, analoge purina i inhibitore adenozin deaminaze) kao što su metotreksat, 5-fluorouracil, floksuridin, citarabin, 6-merkaptopurin, 6-tioguanin, fludarabin fosfat, pentostatin i gemcitabin.

[0125] Pogodni hemoterapijski ili drugi agensi protiv kancera dalje uključuju, na primer, određene prirodne proizvode i njihove derivate (na primer, vinka alkaloide, antitumorske antibiotike, enzime, limfokine i epipodofilotoksine) kao što su vinblastin, vinkristin, vindezin, bleomicin, daktinomicin, daunorubicin, doksorubicin, epirubicin, idarubicin, ara-C, paklitaksel (Taksol), mitramicin, deoksiko-formicin, mitomicin-C, L-asparaginaza, interferoni (posebno IFN-a), etopozid i tenipozid.

[0126] Ostali citotoksični agensi uključuju navelbene, CPT-11, anastrazol, letrazol, kapecitabin, reloksafin i droloksafin.

[0127] Takođe su pogodna citotoksična sredstva kao što je epidofilotoksin; antineoplastični enzim; inhibitor topoizomeraze; prokarbazin; mitoksantron; koordinacioni kompleksi platine kao što su cisplatin i karboplatin; modifikatori biološkog odgovora; inhibitori rasta; antihormonski terapijski agensi; leukovorin; tegafur; i hematopoetski faktori rasta.

[0128] Drugi agensi protiv kancera uključuju lekove-antitela kao što je trastuzumab (HERCEPTIN<®>), antitela na kostimulatorne molekule kao što su CTLA-4, 4-1BB i PD-1, ili antitela na citokine (IL-1O ili TGF-β).

[0129] Drugi agensi protiv kancera takođe uključuju one koji blokiraju migraciju imunih ćelija, kao što su antagonisti na receptore hemokina, uključujući CCR2 i CCR4.

[0130] Ostali agensi protiv kancera takođe uključuju one koji povećavaju imuni sistem, kao što su adjuvansi ili adaptivni transfer T ćelija.

[0131] Vakcine protiv kancera uključuju dendritske ćelije, sintetske peptide, DNK vakcine i rekombinantne viruse

[0132] Farmaceutska kompozicija pronalaska može opciono da sadrži najmanje jedan inhibitor signalne transdukcije (STI). "Inhibitor signalne transdukcije" je agens koji selektivno inhibira jedan ili više vitalnih koraka u signalnim putevima, u normalnoj funkciji ćelija kancera, što dovodi do apoptoze. Pogodni STI uključuju, ali nisu ograničeni na: (i) inhibitore bcr/abl kinaze kao što je, na primer, STI 571 (GLEEVEC<®>); (ii) inhibitore receptora epidermalnog faktora rasta (EGF) kao što su, na primer, inhibitori kinaze (IRESSA<®>, SSI-774) i antitela (Imclone: C225 [Goldstein i saradnici, Clin. Cancer Res., 1:1311-1318 (1995)], i Abgenix: ABX-EGF); (iii) inhibitore her-2/neu receptora kao što su inhibitori farnezil transferaze (FTI) kao što je, na primer, L-744,832 (Kohl i sarad., Nat. Med., 1(8):792-797 (1995)); (iv) inhibitori kinaza familije Akt ili Akt puta, kao što je, na primer, rapamicin (videti, npr. Sekulić i sarad., Cancer Res., 60:3504-3513 (2000.)); (v) inhibitore kinaze ćelijskog ciklusa kao što su, na primer, flavopiridol i UCN-O1 (videti, npr. Sausville, Curr. Med. Chem. Anti-Canc. Agents, 3:47-56 (2003)); i (vi) inhibitore fosfatidil inozitol kinaze kao što je, na primer, LY294002 (videti, npr. Vlahos i sarad., J. Biol. Chem., 269:5241-5248 (1994)). Alternativno, najmanje jedan STI i najmanje jedno jedinjenje formule (I) mogu biti u odvojenim farmaceutskim kompozicijama. U specifičnom tehničkom rešenju ovog pronalaska, najmanje jedno jedinjenje formule (I) i najmanje jedan STI se mogu administrirati pacijentu istovremeno ili uzastopno. Drugim rečima, najmanje jedno jedinjenje formule (I) se može administrirati prvo, najmanje jedan STI se može administrirati prvo, ili najmanje jedno jedinjenje formule (I) i najmanje jedan STI mogu biti administrirati u isto vreme. Dodatno, kada se koristi više od jednog jedinjenja formule (I) i/ili STI, jedinjenja se mogu administrirati bilo kojim redosledom.

[0133] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju za lečenje hronične virusne infekcije kod pacijenta koja sadrži najmanje jedno jedinjenje formule (I), opciono, najmanje jedan hemoterapijski lek i, opciono, najmanje jedno antivirusno sredstvo, u farmaceutski prihvatljivom nosaču.

[0134] Takođe je obezbeđena efikasna količina gornje farmaceutske kompozicije za primenu u lečenju hronične virusne infekcije kod pacijenta.

[0135] U specifičnom tehničkom rešenju predmetnog pronalaska, najmanje jedno jedinjenje formule (I) i najmanje jedan hemoterapijski agens se administriraju pacijentu istovremeno ili uzastopno. Drugim rečima, najmanje jedno jedinjenje formule (I) se može administrirati prvo, najmanje jedno hemoterapijsko sredstvo se može administrirati prvo, ili najmanje jedno jedinjenje formule (I) i najmanje jedan STI mogu biti administrirani u isto vreme. vreme. Dodatno, kada se koristi više od jednog jedinjenja formule (I) i/ili hemoterapijskog agensa, jedinjenja se mogu administrirati bilo kojim redosledom. Slično, bilo koji antivirusni agens ili STI se takođe mogu administrirati u bilo kom trenutku u poređenju sa administracijom jedinjenja formule (I).

[0136] Hronične virusne infekcije koje se mogu lečiti korišćenjem ovog kombinatornog tretmana uključuju, ali nisu ograničene na, bolesti uzrokovane: virusom hepatitisa C (HCV), humanim papiloma virusom (HPV), citomegalovirusom (CMV), virusom herpes simpleksa (HSV), Epstein-Barr virusom (EBV), varičela zoster virusom, koksaki virusom, virus humane imunodeficijencije (HIV). Posebno, parazitske infekcije (npr. malarija) se takođe mogu lečiti gore navedenim postupcima gde se jedinjenja za koja se zna da leče parazitska stanja opciono dodaju umesto antivirusnih agenasa.

[0137] Pogodni antivirusni agensi predviđeni za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjem formule (I) mogu sadržati inhibitore nukleozidne i nukleotidne reverzne transkriptaze (NRTI), inhibitore nenukleozidne reverzne transkriptaze (NNRTI), inhibitore proteaze i druge antivirusne lekove.

[0138] Primeri pogodnih NRTI uključuju zidovudin (AZT); didanozin (ddl); zalcitabin (ddC); stavudin (d4T); lamivudin (3TC); abakavir (1592U89); adefovir dipivoksil [bis(POM)-PMEA]; lobukavir (BMS-180194); BCH-I0652; emitricitabin [(-)-FTC]; beta-L-FD4 (takođe nazvan beta-L-D4C i nazvan beta-L-2',3'-dikleoksi-5-fluoro-citiden); DAPD, ((-)-beta-D-2,6-diamino-purin dioksolan); i lodenozin (FddA). Tipični pogodni NNRTI uključuju nevirapin (BI-RG-587); delaviradin (BHAP, U-90152); efavirenc (DMP-266); PNU-142721; AG-1549; MKC-442 (1-(etoksi-metil)-5-(1-metiletil)-6-(fenilmetil)-(2,4(1H,3H)-pirimidindion); i (+)-kalanolid A (NSC-675451 ) i B. Tipični pogodni inhibitori proteaze uključuju sakvinavir (Ro 31-8959), ritonavir (ABT-538), indinavir (MK-639), nelfnavir (AG-1343), amprenavir (141V94), lasinavir (BMS-234475); DMP-450; BMS-2322623; ABT-378; i AG-1549. Ostali antivirusni agensi uključuju hidroksiureu, ribavirin, IL-2, IL-12, pentafuzid i Yissum Projekat br.11607.

[0139] Predmetni pronalazak takođe uključuje farmaceutske komplete korisne, na primer, u lečenju ili prevenciji bolesti ili poremećaja koji su u vezi sa DGKα i DGKζ, i drugih bolesti koje se ovde pominju, a koji uključuju jednu ili više posuda koje sadrže farmaceutsku kompoziciju koja sadrži terapijski efikasnu količinu jedinjenje formule (I). Takvi kompleti mogu dalje da obuhvataju, ako se želi, jednu ili više različitih konvencionalnih komponenti farmaceutskog kompleta, kao što su, na primer, posude sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, dodatne posude, kao što će biti očigledno stručnjacima u ovoj oblasti. Uputstva, bilo kao umetci ili kao etikete, koja ukazuju na količine komponenti koje treba administrirati, uputstva za administriranje i/ili uputstva za mešanje komponenti, takođe mogu biti uključena u komplet.

[0140] Kombinovana terapija ima za cilj da obuhvati administriranje ovih terapijskih agenasa na sekvencijalni način, to jest, pri čemu se svaki terapijski agens primenjuje u različito vreme, kao i administriranje ovih terapijskih agenasa, ili najmanje dva terapijska sredstva, suštinski istovremeno. U suštini istovremena administracija se može postići, na primer, administriranjem subjektu jednog doznog oblika koji ima fiksni odnos svakog terapijskog agensa ili u višestrukim, pojedinačnim doznim oblicima za svako od terapijskih sredstava. Sekvencionalna ili suštinski istovremena primena svakog terapijskog agensa može se izvršiti bilo kojim odgovarajućim putem uključujući, ali bez ograničenja, oralne puteve, intravenske puteve, intramuskularne puteve i direktnu apsorpciju kroz tkiva mukozne membrane. Terapijski agensi se mogu administrirati istim putem ili različitim putevima. Na primer, prvi terapijski agens odabrane kombinacije može se administrirati intravenskom injekcijom, dok se drugi terapijski agensi iz kombinacije mogu administrirati oralno. Alternativno, na primer, svi terapijski agensi se mogu administrirati oralno ili se svi terapijski agensi mogu administrirati intravenskom injekcijom. Kombinovana terapija takođe može da obuhvati primenu terapijskih agenasa kao što je gore opisano u daljoj kombinaciji sa drugim biološki aktivnim sastojcima i nemedikamentoznim lečenjem (npr. operacija ili tretman zračenjem). Tamo gde kombinovana terapija dalje obuhvata nemedikamentozno lečenje, nemedikamentozno lečenje se može sprovesti u bilo koje pogodno vreme sve dok se postiže koristan efekat od sadejstva kombinacije terapijskih agenasa i nemedikamentoznog lečenja. Na primer, u odgovarajućim slučajevima, blagotvorno dejstvo se i dalje postiže kada se nemedikamentozno lečenje privremeno izuzme od primene terapijskih agenasa, možda tokom više dana ili čak nedelja.

[0141] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljive kompozicije koje sadrže terapijski efikasnu količinu jednog ili više jedinjenja formule (I), formulisanih zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (aditiva) i/ili razblaživača, i opciono, jednog ili više dodatnih gore opisani terapijskih agenasa.

[0142] Jedinjenja ovog pronalaska se mogu administrirati za bilo koju od ovde opisanih primena na bilo koji pogodan način, na primer, oralno, kao što su tablete, kapsule (svaka od njih uključuje formulacije sa produženim ili vremenskim oslobađanjem), pilule, praškovi, granule, eliksiri, tinkture, suspenzije (uključujući nanosuspenzije, mikrosuspenzije, raspršivanjem osušene disperzije), sirupe i emulzije; sublingvalno; bukalno; parenteralno, kao što su subkutane, intravenske, intramuskularne ili intrasternalne injekcije ili tehnike infuzije (npr., kao sterilni injektabilni vodeni ili nevodeni rastvori ili suspenzije za injekcije); nazalno, uključujući administriranje na nazalne membrane, kao što je inhalacioni sprej; lokalno, kao što je u obliku kreme ili masti; ili rektalno kao u obliku supozitorija. Mogu se administrirati sami, ali generalno će se primenjivati sa farmaceutskim nosačem odabranim na osnovu izabranog puta administracije i standardne farmaceutske prakse.

[0143] Izraz "farmaceutski prihvatljiv nosač" kako se ovde koristi označava farmaceutski prihvatljiv materijal, kompoziciju ili vehikulum, kao što je tečno ili čvrsto sredstvo za punjenje, razblaživač, ekscipijens, pomoćno sredstvo za proizvodnju (npr. lubrikans, talk magnezijum, kalcijum ili cink stearat ili sterinska kiselina ), ili materijal za inkapsuliranje rastvarača, uključen u nošenje ili transport predmetnog jedinjenja iz jednog organa, ili dela tela, do drugog organa ili dela tela. Svaki nosač mora biti "prihvatljiv" u smislu da je kompatibilan sa ostalim sastojcima formulacije, uključujući, tj. adjuvans, ekscipijens ili vehikulum, kao što su razblaživači, konzervansi, sredstva za punjenje, agensi za regulaciju protoka, agensi za dezintegraciju, agensi za vlaženje, emulgatori, agensi za suspendovanje, zaslađivači, arome, parfemi, antibakterijski agensi, agensi protiv gljivica, lubrikansi i sredstva za raspodelu, u zavisnosti od prirode načina administracije i doznih oblika; i da nije štetan za pacijenta.

[0144] Izraz "farmaceutska kompozicija" označava kompoziciju koja sadrži jedinjenje pronalaska u kombinaciji sa najmanje jednim dodatnim farmaceutski prihvatljivim nosačem.

[0145] Farmaceutski prihvatljivi nosači su formulisani u skladu sa brojnim faktorima koji su u okviru delokruga onih koji su obučeni u ovoj oblasti. Ovo uključuje, bez ograničenja: tip i prirodu aktivnog sredstva koje se formuliše; subjekta kome treba da se administrira kompozicija koja sadrži agens; nameravani put primene kompozicije; i terapijsku indikaciju koja je ciljana. Farmaceutski prihvatljivi nosači obuhvataju i vodene i nevodene tečne medijume, kao i različite čvrste i polučvrste dozne oblike. Takvi nosači mogu uključivati niz različitih sastojaka i aditiva pored aktivnog agensa, pri čemu su takvi dodatni sastojci uključeni u formulaciju iz različitih razloga, npr. stabilizacije aktivnog agensa, vezivnog sredstva, itd., što je dobro poznato prosečnom stručnjaku u ovoj oblasti. Opisi odgovarajućih farmaceutski prihvatljivih nosača i faktora koji su uključeni u njihov odabir nalaze se u različitim lako dostupnim izvorima kao što su, na primer, Allen, L.V. Jr. i sarad. Remington: The Science i Practice of Pharmacy (2 toma), 22. izdanje (2012), Pharmaceutical Press.

[0146] Režim doziranja za jedinjenja predmetnog pronalaska će, naravno, varirati u zavisnosti od poznatih faktora, kao što su farmakodinamičke karakteristike određenog agensa i njegov način i put primene; vrsta, starost, pol, zdravlje, zdravstveno stanje i masa primaoca; priroda i stepen simptoma; vrsta istovremenog lečenja; učestalost lečenja; put administracije, funkciju bubrega i jetre pacijenta i željeni efekat.

[0147] Kao opšte uputstvo, dnevna oralna doza svakog aktivnog sastojka, kada se koristi za naznačene efekte, kretaće se između oko 0.001 do oko 5000 mg dnevno, poželjno između oko 0.01 do oko 1000 mg dnevno, a najpoželjnije između oko 0.1 do oko 250 mg dnevno. Intravenski, najpoželjnije doze će se kretati od oko 0.01 do oko 10 mg/kg/minutu tokom infuzije konstantne brzine. Jedinjenja ovog pronalaska se mogu administrirati u jednoj dnevnoj dozi, ili se ukupna dnevna doza može administrirati u podeljenim dozama od dva, tri ili četiri puta dnevno.

[0148] Jedinjenja se tipično administriraju u smeši sa odgovarajućim farmaceutskim razblaživačima, ekscipijensima ili nosačima (koji se ovde zajednički nazivaju farmaceutski nosači) koji su prikladno odabrani u odnosu na predviđeni oblik administriranja, npr., oralne tablete, kapsule, eliksiri i sirupi, i u skladu sa konvencionalnom farmaceutskom praksom.

[0149] Dozni oblici (farmaceutske kompozicije) pogodni za administriranje mogu da sadrže od oko 1 miligram do oko 2000 miligrama aktivnog sastojka po doznoj jedinici. U ovim farmaceutskim kompozicijama aktivni sastojak će obično biti prisutan u količini od oko 0.1-95 mas% na osnovu ukupne mase kompozicije.

[0150] Tipična kapsula za oralnu primenu sadrži najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska (250 mg), laktozu (75 mg) i magnezijum stearat (15 mg). Smeša se propušta kroz sito od 60 mesh-a i pakuje u želatinsku kapsulu br. L.

[0151] Tipičan preparat za injekcije se proizvodi aseptičkim postavljanjem najmanje jednog od jedinjenja iz predmetnog pronalaska (250 mg) u bočicu, aseptičkim sušenjem zamrzavanjem i zatvaranjem. Za upotrebu, sadržaj bočice se pomeša sa 2 mL fiziološkog rastvora, da bi se dobio preparat za injekcije.

[0152] Predmetni pronalazak obuhvata u okviru svog obima farmaceutske kompozicije koje sadrže, kao aktivni sastojak, terapijski efikasnu količinu najmanje jednog od jedinjenja iz predmetnog pronalaska, samog ili u kombinaciji sa farmaceutskim nosačem. Opciono, jedinjenja iz ovog pronalaska se mogu koristiti sama, u kombinaciji sa drugim jedinjenjima pronalaska, ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih terapijskih agenasa, npr., sredstvom protiv kancera ili drugim farmaceutski aktivanim materijalom.

[0153] Bez obzira na odabrani put administriranja, jedinjenja iz predmetnog pronalaska, koja se mogu koristiti u odgovarajućem hidratisanom obliku, i/ili farmaceutske kompozicije predmetnog pronalaska, formulišu se u farmaceutski prihvatljive dozne oblike pomoću konvencionalnih postupaka poznatih onima koji su obučeni u ovoj oblasti.

[0154] Stvarni dozni nivoi aktivnih sastojaka u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska mogu da variraju tako da se dobije količina aktivnog sastojka koja je efikasna za postizanje željenog terapijskog odgovora za određenog pacijenta, kompoziciju i način primene, a da se izbegne toksičnost po pacijenta.

[0155] Odabrani nivo doze zavisiće od različitih faktora, uključujući aktivnost određenog jedinjenja iz predmetnog pronalaska koje se koristi, ili njegovog estra, soli ili amida, put administracije, vreme administracije, brzinu izlučivanja ili metabolizma određenog jedinjenja koje se koristi, brzinu i obim apsorpcije, trajanje lečenja, druge lekove, jedinjenja i/ili materijale koji se koriste u kombinaciji sa određenim upotrebljenim jedinjenjem, starost, pol, masu, stanje, opšte zdravstveno stanje i prethodno medicinsko stanje pacijenta koji se leči, i slični faktori dobro poznati u medicinskoj oblasti.

[0156] Lekar ili veterinar koji ima uobičajene veštine u ovoj oblasti može lako da odredi i prepiše efikasnu količinu potrebne farmaceutske kompozicije. Na primer, lekar ili veterinar bi mogao da započne sa dozama jedinjenja pronalaska koja se koriste u farmaceutskoj kompoziciji na nivoima nižim od potrebnih da bi se postigao željeni terapijski efekat i postepeno povećava dozu dok se ne postigne željeni efekat.

[0157] Generalno, pogodna dnevna doza jedinjenja pronalaska će biti ona količina jedinjenja koja je najniža doza koja je efikasna da proizvede terapijski efekat. Takva efikasna doza će generalno zavisiti od gore opisanih faktora. Generalno, oralne, intravenske, intracerebroventrikularne i supkutane doze jedinjenja ovog pronalaska za pacijenta će se kretati od oko 0.01 do oko 50 mg po kilogramu telesne mase dnevno.

[0158] Ako se želi, efikasna dnevna doza aktivnog jedinjenja se može administrirati kao dve, tri, četiri, pet, šest ili više poddoza koje se administriraju odvojeno u odgovarajućim intervalima tokom dana, opciono, u jediničnim doznim oblicima. U određenim aspektima pronalaska, doziranje je jedna administracija dnevno.

[0159] Iako je moguće da se jedinjenje iz predmetnog pronalaska primenjuje samostalno, poželjno je da se jedinjenje administrira u obliku farmaceutske formulacije (kompozicije).

[0160] Gorenavedeni drugi terapijski agensi, kada se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima iz predmetnog pronalaska, mogu se koristiti, na primer, u onim količinama koje su naznačene u Referentnom priručniku za lekare (PDR - Physicians' Desk Reference) ili kako drugačije odredi neko ko je obučen u ovoj oblasti. U tehničkim rešenjima predmetnog pronalaska, takvi drugi terapijski agensi se mogu administrirati pre, istovremeno sa ili posle primene inventivnih jedinjenja.

POSTUPCI PRIPREME

[0161] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se sintetisati mnogim postupcima dostupnim stručnjacima iz oblasti organske hemije. Opšte sintetičke sheme za dobijanje jedinjenja predmetnog pronalaska su opisane u nastavku. Ove sheme su ilustrativne i nisu namenjene da ograniče moguće tehnike koje stručnjak može da koristi za pripremu jedinjenja koja su ovde stavljena na uvid javnosti. Stručnjacima će biti očigledni različiti postupci za pripremu jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Primeri jedinjenja iz predmetnog pronalaska koja su pripremljena postupcima opisanim u opštim shemama su dati u odeljku Primeri koji je prikazan u daljem tekstu. Priprema homohiralnih primera može se izvesti tehnikama koje su poznate stručnjaku u ovoj oblasti. Na primer, homohiralna jedinjenja mogu biti pripremljena odvajanjem racemskih proizvoda ili dijastereoizomera pomoću preparativne HPLC sa hiralnom fazom. Alternativno, primeri jedinjenja mogu biti pripremljeni postupcima za koje je poznato da daju enantiomerno ili dijastereoizomerno obogaćene proizvode.

[0162] Reakcije i tehnike opisane u ovom odeljku se izvode u rastvaračima koji su pogodni za upotrebljene reagense i materijale i pogodni su za transformacije koje se vrše. Takođe, u opisu sintetičkih postupaka koji je dat u nastavku, treba razumeti da su svi predloženi reakcioni uslovi, uključujući izbor rastvarača, reakcione atmosfere, reakcione temperature, trajanja eksperimenta i postupaka obrade, izabrani da budu standardni uslovi za tu reakciju, koju stručnjak u ovoj oblasti treba lako da prepozna. Stručnjak u oblasti organske sinteze razume da funkcionalnost prisutna na različitim delovima molekula mora biti kompatibilna sa predloženim reagensima i reakcijama. Takva ograničenja na supstituente koji su kompatibilni sa reakcionim uslovima biće očigledna stručnjaku u ovoj oblasti, sa potrebnim alternativama kada su prisutni nekompatibilni supstituenti. Ovo će ponekad zahtevati procenu da se modifikuje redosled sintetičkih koraka ili da se izabere jedna posebna shema procesa u odnosu na drugu da bi se dobilo željeno jedinjenje pronalaska. Takođe će biti prepoznato da je još jedno glavno razmatranje u planiranju bilo kog sintetičkog puta u ovoj oblasti razborit izbor zaštitne grupe koja se koristi za zaštitu reaktivnih funkcionalnih grupa prisutnih u jedinjenjima opisanim u ovom pronalasku. Autoritativan izveštaj koji opisuje mnoge alternative obučenom praktičaru je Wuts i Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, četvrto izdanje, Wiley and Sons (2007).

PRIMERI

[0163] Sledeći primeri ilustruju određena i poželjna tehnička rešenja predmetnog pronalaska i ne ograničavaju obim zaštite predmetnog pronalaska. Hemijske skraćenice i simboli kao naučne skraćenice i simboli imaju svoja uobičajena i ustaljena značenja osim ako nije drugačije naznačeno. Dodatne skraćenice korišćene u primerima i drugde u ovoj prijavi su definisane gore. Uobičajeni intermedijeri su generalno korisni za pripremu više od jednog primera i identifikovani su sekvencijalno (npr., intermedijer 1, intermedijer 2, itd.) i skraćeni su kao int.1 ili I1, int.2 ili i2, itd. Jedinjenja iz primera su identifikovana primerom i korakom u kojem su pripremljena (npr., "1-A" označava primer 1, korak A), ili samo primerom gde je jedinjenje naslovno jedinjenje iz primera (na primer, "1" označava naslovljeno jedinjenje primera 1). U nekim slučajevima su opisane alternativne pripreme intermedijera ili primera. Često hemičari stručni u oblasti sinteze mogu osmisliti alternativne pripreme koje mogu biti poželjne na osnovu jednog ili više faktora kao što su kraće vreme reakcije, jeftiniji početni materijali, lakoća rada ili izolacije, poboljšani prinos, podložni katalizi, izbegavanje toksičnih reagenasa, dostupnost specijalizovanih instrumenata, i smanjeni broj linearnih koraka, itd. Namera opisa alternativnih priprema je da se dalje omogući priprema primera ovog pronalaska. U nekim primerima neke funkcionalne grupe u navedenim primerima i zahtevima mogu biti zamenjene dobro poznatim bioizosteričnim zamenama poznatim u toblasti tehnike, na primer, zamena grupe karboksilne kiseline sa tetrazolom ili fosfatnom grupom.<1>H NMR podaci prikupljeni u deuterisanom dimetil sulfoksidu koristili su supresiju vode u obradi podataka. Prijavljeni spektri nisu korigovani za efekte supresije vode. Protoni u blizini frekvencije supresije vode od 3.35ppm pokazuju smanjeni intenzitet signala.

SKRAĆENICE

[0164]

Ac acetil

anhid. anhidrovani

aq. vodeni

aza-HOBt 7-aza-1-hidroksibenzotriazol

Bn benzil

1-BOC-piperazin terc-butil piperazin-1-karboksilat

Bu butil

CV zapremina kolone

DCE dihloroetan

DCM dihlorometan

DEA dietilamin

DIEA diizopropil etil amin (Hunig-ova baza)

DIPEA diizopropil etil amin

DMA N,N-dimetilacetamin

DMF dimetilformamid

DMSO dimetil sulfoksid

EA etil acetat

EDC 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid

Et etil

h, sati ili sat sat(i)

HATU (1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b] piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat)

HCl hlorovodonična kiselina

HPLC tečna hromatografija visokih performansi

KHMDS kalijum bis(trimetilsilil)amid

LC tečna hromatografija

LCMS tečna hromatografija- masena spektrometrija

M molarni

mM milimolarni

Me metil

MHz megaherc

Min minut(i)

M<+1>(M+H)<+>

MS masena spektrometrija

n ili N normalni

NaHMDS natrijum bis(trimetilsilil)amid

NBS N-bromosukcinimid

nM nanomolarni

NMP N-metilpirolidinon

Ph fenil

PYBROP bromotripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat

RuPhos predkatalizator hloro(2-dicikloheksilfofhino-2',6'-diizopropoksi-1,1'-bifenil) [2-(2'-amino-1,1'-bifenil)] paladijum(II)

RT ili Ret time retenciono vreme

sat. saturisano

t-BuOH tercijarni butanol

TEA trietilamin

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

TLC tankoslojna hromatografija

POCl3fosfor oksihlorid

2. Gen Xphos CAS broj 1310584-14-5

INTERMEDIJER 1

2-(Metiltio)-3 -nitro-1,5-naftiridin-4-ol

[0165]

[0166] Etil 3-aminopikolinat (1.71 g, 10.29 mmol) i (2-nitroeten-1,1-diil) bis(metilsulfan) (1.75 g, 10.59 mmol) su kombinovani bez rastvarača i otopljeni zajedno na 130 °C. Nakon 44 sata, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i mešana sa viškom dietil etra. Narandžaste čvrste supstance su sakupljene na filter papiru (1.7 g, 68%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.75 (d, J=4.6 Hz, 1H), 8.53 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.99 (dd, J=8.4, 5.0 Hz, 1H), 2.59 (s, 3H).

INTERMEDIJER 2

4-hloro-2-(metiltio)-3-nitro-1,5-naftiridin

[0167]

[0168] Na sobnoj temperaturi, 2-(metiltio)-3-nitro-1,5-naftiridin-4-ol (1.5 g, 6.32 mmol) i fosfor oksihlorid (8.84 mL, 95 mmol) su kombinovani i zatim zagrejani sa mešanjem na 50 °C tokom noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i voda je polako dodata. Narandžaste čvrste supstance su sakupljene na filter papiru i osušene pod vakuumom da se dobije intermedijer 2 (1 g, 62%).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 9.06 (d, J=3.9 Hz, 1H), 8.35 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.79 (dd, J=8.6, 4.2 Hz, 1H), 2.77 (s, 3H). Analitička LC/MS uslovi: kolona: Fenomenex Luna C18, 2.0 × 50 mm, 3.0 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: 0-100% B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm. LC/MS rezultati: 3.7 minuta, 256, 258 (M+H).

INTERMEDIJER 3

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-2-(metiltio)-3-nitro-1,5-naftiridin

[0169]

[0170] U rastvor 4-hloro-2-(metiltio)-3-nitro-1,5-naftiridina (0.8 g, 3.13 mmol) u dihlorometanu (15.64 mL) dodati su 1-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin (0.992 g, 3.44 mmol) i trietilamin (0.436 mL, 3.13 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Određeno je da je reakcija završena pomoću LC/MS analize. Rastvarač je uklonjen rotacionim isparivačem. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom sa etil acetatom i heksanima da se dobije (0.7 g, 44%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.71 (dd, J=4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.15 (dd, J=8.6, 1.7 Hz, 1H), 7.56 (dd, J=8.6, 4.2 Hz, 1H), 7.47-7.37 (m, 4H), 7.07-6.96 (m, 4H), 5.32 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.73-3.60 (m, 4H), 2.69-2.63 (m, 7H). LC/MS Analitička LC/MS uslovi: kolona: Fenomenex Luna C18, 2.0 × 50 mm, 3.0 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: 0-100% B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV pri 220 nm. LC/MS rezultati: 4.1 minuta, 508 (M+H).

INTERMEDIJER 4

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0171]

[0172] 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-2-(metiltio)-3-nitro-1,5-naftiridin (0.69 g, 1.359 mmol) je rastvoren u sirćetnoj kiselini (13.59 mL) da se dobije žuta suspenzija. Vodonik peroksid (0.166 mL, 1.631 mmol) i natrijum volframat dihidrat (0.067 g, 0.204 mmol) dodavani su uzastopno i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Sirćetna kiselina je uklonjena rotacionim isparavanjem i ostatak je hromatografiran na silika gelu sa 0-80% etil acetata u heksanima. Bela čvrsta supstanca (400 mg, 62%) je izolovana.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.54-8.48 (m, 1H), 7.70-7.60 (m, 1H), 7.50-7.45 (m, 1H), 7.41 (dd, J=8.8, 5.4 Hz, 4H), 7.02 (t, J=8.7 Hz, 4H), 4.34 (s, 1H), 3.72 (br. s., 4H), 2.65 (d, J=4.4 Hz, 4H). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex Luna C18, 2.0 × 50 mm, 3.0 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: 0-100% B tokom 4 minuta, 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 3.3 minuta, 478 (M+H).

INTERMEDIJER 5

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-2-(metiltio)-3-nitro-1,5-naftiridin

[0174] U boci sa okruglim dnom, 4-hloro-2-(metiltio)-3-nitro-1,5-naftiridin (1 g, 3.91 mmol) i 1-benzhidrilpiperazin (0.987 g, 3.91 mmol) su rastvoreni u dihlorometanu (19.56 mL). Trietilamin (0.545 mL, 3.91 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. LC/MS analiza je pokazala da je reakcija završena. Rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem. Ostatak je prečišćen pomoću silika gel hromatografije sa etil acetatom i heksanima da se dobije jedinjenje iz naslova (1.5 g, 3.2 mmol, 81% prinos) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.66 (dd, J=4.1, 1.6 Hz, 1H), 8.10 (dd, J=8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.52 (dd, J=8.5, 4.0 Hz, 1H), 7.48-7.40 (m, 4H), 7.30-7.25 (m, 4H), 7.20-7.15 (m, 2H), 4.30 (s, 1H), 3.69-3.60 (m, 4H), 2.67-2.61 (m, 4H), 2.59 (s, 3H). Analitička LC/MS uslovi: kolona: Fenomenex Luna C18, 2.0 × 50 mm, 3.0 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: 0-100% B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 3.6 minuta, 472 (M+H).

INTERMEDIJER 6

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0175]

[0176] U boci sa okruglim dnom, 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-2-(metiltio)-3-nitro-1,5-naftiridin (1.5 g, 3.18 mmol) je rastvoren u sirćetnoj kiselini (31.8 mL) da se dobije žuta suspenzija. Vodonik peroksid (0.389 mL, 3.82 mmol) je dodat zatim natrijum volframat dihidrat (0.157 g, 0.477 mmol). Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći i zatim grejana na 30 °C tokom 72 sata. LC/MS je pokazala jedan pik u skladu sa željenim proizvodom. Isparljive komponente su uklonjene pod visokim vakuumom da se dobije jedinjenje iz naslova (1.4 g, 3.2 mmol, 78% prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.51 (d, J=4.2 Hz, 1H), 7.71-7.66 (m, 1H), 7.60 (dd, J=7.9, 4.3 Hz, 1H), 7.48 (d, J=7.6 Hz, 4H), 7.32 (t, J=7.3 Hz, 4H), 7.25-7.17 (m, 2H), 4.42 (s, 1H), 3.51 (d, J=4.2 Hz, 4H), 2.58-2.52 (m, 4H skriveno ostatkom DMSO). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: zadržavanje od 0.5 min pri 0% B, 0-100% B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 100% B; Protok: 1 mL/min. Analitička LC/MS rezultati su bili u skladu sa jedinjenjem iz naslova: 3.5 minuta, 440(M-H), 442(M+H).

INTERMEDIJER 7

6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0177]

[0178] U bocu od 500 mL sa okruglim dnom koja je napunjena sa 6-bromo-1-metil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrilom (2.50 g, 8.93 mmol) u acetonitrilu (89 mL) dodat je DIEA (9.4 mL, 53.8 mmol). Reakciona smeša je mešana nekoliko minuta. Reakciona smeša je postala homogeni rastvor nakon dodavanja DIEA. Fosfor oksihlorid (3.3 mL, 35.4 mmol) je dodat u reakcionu smešu zatim je dodat benziltrietilamonijum hlorid (2.68 g, 11.77 mmol). Reakciona smeša je mešana pod azotom na sobnoj temperaturi tokom noći da se dobije tamna braonkasta i heterogena smeša. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu korišćenjem kombinacije rotacioni isparivač/vakuum pumpa. U ostatak reakcije, dodati su led i 1.5 M rastvor dvobaznog kalijum fosfata i smeša je podeljena na dihlorometan i hloroform. Vodeni deo je ekstrahovan sa hloroformom. Kombinovani organski ekstrakti su oprani sa dvobaznim kalijum fosfatom, 1 N HCl, i zatim smešom dvobaznog kalijum fosfata i koncentrovanog rastvora soli. Organski delovi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i rastvarač je uklonjen pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije braon čvrsta supstanca (~ 3.1g). Čvrsta supstanca je ponovo rastvorena u smeši hloroform/dihlorometan i adsorbovana na 9.8 g silika gela. Materijal je prečišćen pomoću hromatografije na 83 g kaše silika gela napunjene na 2% etil acetat u dihlorometanu i eluiran sa 2% etil acetata u dihlorometanu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i rastvarač je uklonjen pod vakuumom da obezbedi 1.922 g (72%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (hloroform-d) δ 7.81 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J=9.0 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H). Analitička LC/MS uslovi: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Analitička LC/MS rezultati su bili u skladu sa jedinjenjem iz naslova: 1.3 minuta, 298, 300 (M+H).

INTERMEDIJER 8

terc-butil 4-([1,1'-bifenil]-2-ilmetil)piperazin-1-karboksilat

[0179]

[0180] 2-Fenilbenzil bromid (2.264 g, 9.16 mmol) je rastvoren u DMF (70 mL). Zatim, 1-BOC-piperazin (1.717 g, 9.22 mmol) je dodat, a zatim je dodat kalijum karbonat (1.272 g, 9.20 mmol). Reakcioni sud je zatvoren. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći (21 sati). Isparljive materije su uklonjene iz reakcione smeše u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata i vode. Vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom (1x). Organski ekstrakti su kombinovani i oprani koncentrovanim rastvorom soli i osušeni preko magnezijum sulfata. Agens za sušenje je izdvojen filtriranjem i rastvarač je uklonjen iz filtrata u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije intermedijer 8 kao bistro ulje. LCMS: Kolona: Waters Acquity BEH 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 1.24 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 353.3.<1>H NMR (Acetonitril-d3) δ 7.51 (dd, J=7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.28-7.45 (m, 7H), 7.21-7.28 (m, 1H), 3.37 (s, 2H), 3.24-3.32 (m, 4H), 2.18-2.26 (m, 4H), 1.39 (s, 9H).

INTERMEDIJER 9

1-([1,1'-bifenil]-2-ilmetil)piperazin, TFA

[0181]

[0182] terc-Butil 4-([1,1'-bifenil]-2-ilmetil)piperazin-1-karboksilat (3.219 g, 9.13 mmol) je rastvoren u dihlormetanu (25 mL), zatim TFA (50.0 mL) je dodat. Reakciona smeša je smeštena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Isparljive materije su uklonjene iz reakcione smeše u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Toluen je dodat u proizvod reakcije i isparljive materije su uklonjene u vakuumu da se pomogne u uklanjanju viška TFA. Ponovljeno je rastvaranje u toluenu i uklanjanje isparljivih materija. Da bi se konvertovao uljani proizvod u čvrstu supstancu, etil acetat, heksani, i dietil etar su dodavani, dajući polučvrsti bezbojni talog. Uklanjanje rastvarača i sušenje proizvoda u vakuumu na sobnoj temperaturi dalo je intermedijer 9 kao bezbojnu čvrstu supstancu. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 0.92 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 253.2.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.65 (br. s., 2H), 7.52-7.62 (m, 1H), 7.34-7.51 (m, 7H), 7.20-7.32 (m, 1H), 3.67 (br. s., 2H), 3.08 (br. s., 4H), 2.52-2.71 (m, 4H).

INTERMEDIJER 10

terc-butil 4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-karboksilat

[0183]

Intermedijer I-10A: 1-(jodometil)naftalen

[0184]

[0185] 1-(hlorometil)naftalen (1.5 g, 8.49 mmol) je rastvoren u acetonu (54 mL). Natrijum jodid (1.52 g, 10.14 mmol) je dodat u reakcionu smešu. Reakciona smeša je grejana uz refluks tokom 1.25 h. Reakciona smeša je ohlađena i filtrirana kroz čep od celita. Rastvarač je uklonjen iz filtrata korišćenjem rotacionog isparivača. Proizvod reakcije je rastvoren u dietil etru i filtriran kroz drugi čep od celita da se uklone preostale soli. Rastvarač je ponovo uklonjen pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača do se dobije 2.25g 1-(jodometil)naftalena kao čvrsta supstanca ćilibarne boje. Procenjena čistoća iz NMR bila je 80-85%.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.16-8.13 (m, 1.0H), 7.99 (d, J=8.2 Hz, 1.0H), 7.91 (d, J=8.4 Hz, 1.0H), 7.74-7.71 (m, 1.2H), 7.70-7.66 (m, 1.2H), 7.56 (ddd, J=8.1, 6.9, 1.1 Hz, 1.1H), 7.42 (dd, J=8.1, 7.2 Hz, 1.0H), 5.13 (s, 2.0H).

Intermedijer 10:

[0186] 1-(jodometil)naftalen (2.248 g, 8.39 mmol) je rastvoren u DMF (70 mL) i 1-BOC-piperazin (1.586 g, 8.52 mmol). kalijum karbonat (1.164 g, 8.42 mmol) su dodavani. Reakcioni sud je zatvoren. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača i ostatak reakcije je podeljen između etil acetata i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata. Organski ekstrakt je opran uzastopno sa smešom vode i koncentrovanog rastvora soli, i zatim samo sa koncentrovanim rastvorom soli. Organski ekstrakt je osušen preko magnezijum sulfata. Agens za sušenje je odfiltriran i rastvarač je uklonjen pod vakuumom da se dobije narandžasto ulje. Narandžasto ulje je prečišćeno korišćenjem kolone za silika gel hromatografiju eluiranjem sa 0% do 10% gradijenta etil acetata u dihlormetanu. Prečišćene frakcije proizvoda su kombinovane da daju 2.46 g terc-butil 4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-karboksilat kao bezbojno ulje. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH C182.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 2 %B do 98 %B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 3 µL. Retenciono vreme = 0.88 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 327.2.<1>H NMR (Acetonitril-d3) δ 8.28-8.35 (m, 1H), 7.87-7.92 (m, 1H), 7.80-7.85 (m, 1H), 7.48-7.57 (m, 2H), 7.41-7.47 (m, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.25-3.40 (m, 4H), 2.34-2.48 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).

INTERMEDIJER 11

1-(naftalen-1-ilmetil)piperazin

[0187]

[0188] terc-Butil 4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-karboksilat (2.41 g, 7.38 mmol) je rastvoren u dihlormetanu (37 mL). Zatim, TFA (37.0 mL) je dodat. Reakcioni sud je zatvoren pod atmosferom azota. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 sati. Toluen (70 mL) je dodat u reakcionu smešu i isparljive materije su uklonjene u vakuumu. Dihlorometan i toluen su dodavani u smešu. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu da pomognu u uklanjanju viška TFA. Proizvod je dobijen kao krem bež obojena čvrsta supstanca. LCMS: Kolona: Waters Acquity BEH C182.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 2 %B do 98 %B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 3 µL. Retenciono vreme = 0.68 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 227.1.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.73 (br. s., 2H), 8.28 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.87-8.06 (m, 2H), 7.39-7.69 (m, 4H), 4.26 (br. s., 2H), 3.17 (br. s., 4H), 2.91 (br. s., 3H).

INTERMEDIJER 12

Etil 3-amino-6-bromopikolinat

[0189]

[0190] Etil 3-aminopikolinat (8.0 g, 48.1 mmol) je suspendovan u vodi (66 mL) u trogrloj boci sa okrugli dnom od 250 mL opremljenoj sa mehaničkom mešalicom, dodatnim levkom i sondom za temperaturu termoelementa. Sumporna kiselina (1.7 mL, 31.9 mmol) i sirćetna kiselina (3.31 mL, 57.8 mmol) su dodavane polako dok je boca uronjena u vodeno kupatilo sobne temperture da se kontroliše temperatura. U reakcionu smešu, rastvor broma (2.5 mL, 48.5 mmol) u sirćetnoj kiselini (17.5 mL, 306 mmol) je dodat tokom 15 minuta na temperaturi okoline uz energično mešanje pri održavanju početne temperature reakcione smeše ispod 23 °C. Vodeno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 2 sata. Reakcija suspenzija je filtrirana i isprana sa malom količinom vode, a zatim osušena u vakuumu na sobnoj temperaturi da se dobije 9.305 g intermedijera 12 kao žuta čvrsta supstanca. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 0.94 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 245.0.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.44 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.21 (d, J=8.7 Hz, 1H), 6.88 (br. s., 2H), 4.29 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.31 (t, J=7.1 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 13

Etil 3-acetamido-6-bromopikolinat

[0191]

[0192] Etil 3-amino-6-bromopikolinat (1.31 g, 5.35 mmol) je rastvoren u THF (6 mL) zatim je dodat anhidrid sirćetne kiseline (1.6 mL, 16.96 mmol). Reakciona smeša je bila suspenzija/delimični rastvor. Reakciona smeša je stavljena pod atmosferu azota i zagrejana uz refluks. Reakciona smeša je postala homogena u okviru 15 minuta. Reakciona smeša je refluksovana tokom 4 h. Isparljive materije reakcije su uklonjene u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Mala količina etil acetata je dodata u ostatak reakcije i skoro bezbojna čvrsta supstanca je odfiltrirana i osušena u vakuumu da se dobije 787 mg intermedijera 13. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 0.98 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 287.0.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 10.40 (s, 1H), 8.32 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.83 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.33 (q, J=7.1 Hz, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.32 (t, J=7.2 Hz, 3H). Uklanjanje rastvarača iz filtrata obezbedilo je dodatnih 695 mg proizvoda (čist 87%).

INTERMEDIJER 14

Etil 3-acetamido-6-cijanopikolinat

[0193]

[0194] U Biotage bočicu za mikrotalasnu od 2.5 mL napunenju sa bakar(I) cijanidom (86 mg, 0.960 mmol) i etil 3-acetamido-6-bromopikolinatom (200mg, 0.697 mmol), N,N-dimetilformamidom (3.5 mL). Dodata je magnetna mešalica i bočica je zatvorena pod azotom. Reakciona smeša je zagrevana na 200 °C tokom 8 minuta u mikrotalasnoj pećnici Biotage Initiator podešenoj na normalnu adsorpciju. Reakciona smeša je prebačena u bocu sa okruglim dnom i rastvarač je uklonjen pod vakuumom korišćenjem kombinacije vakuum pumpa/rotacioni isparivač. Braon ostatak je triturisan sa etil acetatom (25 mL) koji sadrži DCM i dobijena suspenzija je filtrirana kroz čep od celita. Rastvarač je uklonjen iz filtrata da se dobije sirov proizvod kao 102 mg žute čvrste supstance. Sirov proizvod je prečišćen u Biotage Isolera One sistemu koju koristi 4 g Isco RediSep silica gel punjenje korišćenjem gradijenta od 1% etil acetata do 10% etil acetata u dihlormetanu. Čiste frakcije su kombinovane i rastvarač je uklonjen pod vakuumom da se dobije 84 mg čistog proizvoda kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 0.92 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 234.1.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 10.67 (s, 1H), 8.58 (d, J=8.7 Hz, 1H), 8.19 (d, J=8.7 Hz, 1H), 4.36 (q, J=7.1 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H), 1.33 (t, J=7.1 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 15

Etil 6-cijano-3-(N-metilacetamido)pikolinat

[0195]

[0196] Etil 3-acetamido-6-cijanopikolinat (20 mg, 0.086 mmol) je rastvoren u DMF (0.85 mL). Zatim, cezijum karbonat (39.1 mg, 0.120 mmol) je dodat zatim je dodat metil jodid (9 µL, 0.144 mmol). Reakcioni sud je zatvoren i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Reakciona smeša je razblažena sa 2.8 mL acetonitrila, i filtrirana kroz 0.45 µm sirindž filter. Isparljive materije su uklonjene iz filtrata, zatim je triturisano sa DCM/etil acetatom i filtrirano ponovo kroz 0.45 µm sirindž filter da se uklone soli. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije sirov proizvod kao ulje ćilibarne boje. Ulje je rastvoreno u deuterisanom hloroformu za protonsku NMR. Protonska NMR je ispoljila karakteristike ograničene rotacije (rotameri):<1>H NMR (HLOROFORM-d) δ 7.65-8.01 (m, 2H), 4.32-4.56 (m, 2H), 3.43 (br. s., 1H), 3.22 (s, 2H), 2.26 (br. s., 1H), 1.82 (s, 2H), 1.34-1.50 (m, 3H).<13>C DEPT spektar je bio u skladu sa N-metilacijom sa signalom na 37 ppm.

[0197] NMR uzorak je ponovno dobijen ukljanjanjem isparljive materije u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača i uzorak je rastvoren u 1 mL, 1:1 smeši DMF/acetonitril. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: 0-30% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog isparavanja. Prinos proizvoda je bio 17.9 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 99%. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati: Retenciono vreme = 1.11 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 248.0. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 1.01 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 248.0

INTERMEDIJER 16

8-Hidroksi-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0198]

[0199] U boci sa okruglim dnom od 250 mL, kalijum bis(trimetilsilil)amid (KHMDS) (3.0 mL, 1.500 mmol) u 0.5 M u toluenu je dodat. Boca je postavljena pod azot i ohlađena na -78 °C. U rastvor KHMDS je dodat rastvor etil 6-cijano-3-(N-metilacetamido)pikolinata (333 mg, 1.347 mmol) u THF (13.5 mL) preko kanile tokom približno 23 minuta. Nakon 20 minuta na -78 °C, kupatilo sa suvim ledom je uklonjeno i reakciona smeša je zagrejana do sobne temperatura tokom 1.25 sati. Etil acetat i voda su dodavani u reakcionu smešu. Reakciona smeša je prebačena u levak za razdvajanje i dodatni etil acetat je dodat. Reakciona smeša je nežno promućkana i zatim podeljena sakupljajući vodenu fazu u malom erlenmajeru. Vodena faza (~20 mL) je zakišeljena sa 1.6 mL 1N hlorovodonične kiseline. Fini žuti talog je odfiltriran i ispran sa ~2 mL dejonizovane vode i osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi dajući 229 mg intermedijera 16 kao žute čvrste supstance. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 0.68 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 202.1.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 11.51 (br. s., 1H), 8.21 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.11 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.16 (s, 1H), 3.54 (s, 3H).

INTERMEDIJER 17

8-Hidroksi-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0200]

[0201] U bočicu od 2 drama koja sadrži 8-hidroksi-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (227 mg, 1.128 mmol), dodati sirćetnu kiselinu (2.8 mL), mešati i polako dodati i azotnu kiselinu (0.151 mL, 3.39 mmol). Smeša je ostavljena uz mešanje približno jedan minut zatim je zatvorena i zagrejana na 100 °C tokom 18 minuta. Reakciona smeša je postala homogena nakon približno 3 minuta na100 °C. Smeša je ohlađena zastim stavljena u ledeno kupatilo i zatim je žut talog filtriran i ispran sa 2 × 0.5 mL hladnog etanola. Proizvod je osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi da se dobije 202 mg jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 0.67 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 247.1.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.30-8.38 (m, 1H), 8.19-8.28 (m, 1H), 3.59 (s, 3H).

INTERMEDIJER 18

8-Hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0202]

[0203] U bočicu od 2 drama koja sadrži 8-hidroksi-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (192 mg, 0.780 mmol) dodati su magnetna mešalica i acetonitril (3.1 mL). Zatim, DIEA (0.272 mL, 1.560 mmol) je dodat u suspenziju. Reakciona smeša je mešana tokom 1-2 minuta dok reakciona smeša nije postala homogeni žuti rastvor. U reakcionu smešu je dodat fosfor oksihlorid (0.131 mL, 1.404 mmol). Bočica je zatvorena pod azotom sa otvorom za uljni barboter. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 sati zatim benziltrietilamonijum hlorid (200 mg, 0.878 mmol) je dodat u reakcionu smešu. Bočica je zatvorena pod atmosferom azota i uronjena u uljano kupatilo (65 °C) i zagrejana tokom 1 sata. Reakciona smeša je ohlađena i isparljive materije reakcije su uklonjene u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Ostatak reakcije je rastvoren u etil acetatu, sipan u menzuru koja sadrži led (~10 mL), i zatim prenet u levak za odvajanje. Vodena faza je ekstrahovan sa etil acetatom. Organski ekstrakti su kombinovani i oprani uzastopno sa 1.5 M K2HPO4, zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom, i koncentrovanim rastvorom soli. Organski ekstrakt je osušen preko magnezijum sulfata, filtriran, i rastvarač je uklonjen pod vakuumom da se dobije 204 mg braonkaste kristalne čvrste supstance. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 1.01min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 265.0 (weak ionization).<1>H NMR (HLOROFORM-d) δ 8.03 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.89-7.97 (m, 1H), 3.82 (s, 3H).

INTERMEDIJER 19

6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0204]

[0205] 6-Bromo-1-metil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (2.50 g, 8.93 mmol) je suspendovan u acetonitrilu (89 mL). Zatim, DIEA (9.4 mL, 53.8 mmol) je dodat i smeša je mešana nekoliko minuta. Fosfor oksihlorid (POCl3) (3.3 mL, 35.4 mmol) je dodat u reakcionu smešu zatim je dodat benziltrietilamonijum hlorid (2.68 g, 11.77 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod atmosferom azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Isparljive komponente reakcione smeše su uklonjene u vakuumu korišćenjem kombinacije rotacionog isparivača i vakuum pumpe. Led je dodat u ostatak reakcije zatim 1.5 M rastvora dikalijum fosfata je dodat. Zatim, dodati su dihlorometan i hloroform. Smeša je prebačena u levak za odvajanje za mešanje i odvajanje vodene i organske faze. Vodena faza je ekstrahovana sa hloroformom. Organski ekstrakti su kombinovani i uzastopno oprani sa 1.5 M dikalijum fosfatom, 1 N hlorovodoničnom kiselinom i smešom dikalijum fosfata i koncentrovanog rastvora soli. Organski ekstrakt je osušen preko natrijum sulfata, zatim filtriran i rastvarači iz filtrata su uklonjeni pod vakuumom da se dobije braon čvrsta supstanca. Proizvod je prečišćen korišćenjem kolone za silika gel hromatografiju eluiranjem sa 2% etil acetata u dihlormetanu. Čiste frakcije sa TLC analizom su kombinovane i rastvarač je uklonjen pod vakuumom da se dobije 1.684 g jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1mm × 50mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 1.29 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 298.1.<1>H NMR (HLOROFORM-d) δ 7.81 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J=9.0 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H).

INTERMEDIJER 20

terc-butil 4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il) piperazin-1 -karboksilat

[0206]

[0207] 6-Bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (545 mg, 1.826 mmol) je rastvoren u DMF (18 mL). Zatim, 1-BOC-piperazin (354 mg, 1.901 mmol) i kalijum karbonat (381 mg, 2.76 mmol) su dodati. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod azotom. Nakon približno 1 h, reakciona smeša je homogena i postala je kaša. Kaša je mešana tokom 5.5 sati. HPLC analiza je ukazala da je reakcija bila završena 99%. DMF (9 mL) je dodat u reakcionu smešu i smeša je mešana tokom noći. Zatim, dodati su etil acetat i 1.0M dikalijum fosfat (pH~4.5). THF je dodat. Smeša je postavljena u levak za odvajanje i nešto vodene faze je oceđeno, preostala smeša je filtrirana kroz Bihnerov levak i dobijena filter pogača je oprana sa dejonizovanom vodom. Proizvod je osušen pod vakuumom na sobnoj temperaturi da se dobije 307 mg jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. Dodatni proizvod je ponovno dobijen iz filtrata. Etil acetat i THF su dodati u filtrat da se ponovo rastvori materijal koji se istaloži iz redukcije rastvarača u vakuumu. Organska faza je oprana sa koncentrovanim rastvorom soli i osušena preko magnezijum sulfata. Agens za sušenje je odfiltriran i rastvarači su uklonjeni pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije dodatnih 492 mg proizvoda.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.94-8.00 (m, 1H), 7.89-7.94 (m, 1H), 3.74-3.84 (m, J=4.4 Hz, 4H), 3.54-3.62 (m, J=4.3 Hz, 4H), 3.52 (s, 3H), 1.44 (s, 9H).

INTERMEDIJER 21

metil 8-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilat

[0209] Bočica od dva drama opremljena pregradnim poklopcem napunjena je sa paladijum(II) acetatom (1.502 mg, 6.69 µmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocenom (7.42 mg, 0.013 mmol) i tercbutil 4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il) piperazin-1-karboksilatom (30mg, 0.067 mmol). U bočicu je dodat DMF (1.1 mL) (barbotiran azotom tokom 30min). Bočica je uklonjena i ponovo napunjena sa ugljen monoksidom iz balona (10×) kroz iglu i 3-kraki ventil, zatim je dodat metanol (0.46 mL). Reakciona smeša je zagrejana na 60 °C tokom 1 sata. Zatim, trietilamin (0.020 mL, 0.143 mmol) je dodat. Zagrevanje reakcione smeše na 60 °C pod ugljen monoksidom (1atm) je nastavljeno tokom noći. Reakciona smeša je ohlađena i filtrirana kroz sirindž filter. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 20-60% B tokom 25 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultatui ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.9 %; Uočena masa: 428.11; Retenciono vreme: 1.65 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 428.13; Retenciono vreme: 1.69 min. Može se uticati na intenzitet protonskog NMR signala blizu frekvencije potiskivanja vode i nisu bili ispravljeni:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.25 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.09 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.85-3.92 (m, J=4.8 Hz, 4H), 3.60-3.70 (m, J=3.7 Hz, 4H), 3.56 (s, 3H), 1.45 (s, 9H).

INTERMEDIJER 22

metil 7-cijano-5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilat, HCl

[0210]

[0211] U bočicu od 2 drama koja sadrži metil 8-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilat (109 mg, 0.255 mmol) je dodat dioksan (1.5 mL). Smeša je zagrejana da se rastvore čvrste supstance. Zatim, smeša je ohlađena da se obezbedi taloženje, zatim je dodato 3 mL 4 N HCl u dioksanu. Bočica je zatvorena i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.45 sati. Praćenje reakcije sa HPLC ukazalo je da je reakcija završena. Reakciona smeša je preneta u bocu sa okruglim dnom. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Materijal je osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi da se dobije 94 mg proizvoda kao svetlo roze čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 0.812 min.; Uoč. adukti:

[M+H]; Uoč. mase: 328.2.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 9.22-9.43 (m, 2H), 8.30 (d, J=9.0 Hz, 1H), 8.16 (d, J=9.0 Hz, 1H), 4.01-4.15 (m, 4H), 3.93 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.42 (br. s., 4H).

INTERMEDIJER 23

terc-butil 4-(3-cijano-6-(metoksi(metil)karbamoil)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1 -karboksilat

[0212]

[0213] Bočica od dva drama opremljenoj sa pregradnim poklopcem je napunjena sa paladjium(II) acetatom (1.5 mg, 6.68 µmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksantenom (3.9 mg, 6.74 µmol), terc-butil 4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilatom (30 mg, 0.067 mmol) i N,O-dimetilhidroksilamin hidrohloridom (10.2 mg, 0.105 mmol). DMF (1.0 mL) (barbotiran azotom tokom 30 min) je dodat i bočica je uklonjena i ponovo napunjena sa ugljen monoksidom iz balona (10x) kroz iglu i 3-kraki ventil. Zatim, trietilamin (30 µl, 0.215 mmol) je dodat u reakcionu smešu. Reakciona smeša je zagrejana u uljanom kupatilu (60 °C) i mešana pod 1 atm ugljen monoksida (pritisak balona) tokom 18 sati. Sirov materijal je prečišćen preparativnom LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 20-60% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 457.12; Retenciono vreme: 1.48 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 457.15; Retenciono vreme: 1.59 min. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani u ovom merenju.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.08 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.79-3.88 (m, J=4.8 Hz, 4H), 3.61 (s, 2H), 3.53-3.59 (m, 6H), 3.31 (s, 2H), 1.45 (s, 9H).

INTERMEDIJER 24

8-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilna kiselina

[0214]

[0215] Intermedijer 24 je izolovan kao sporedni proizvod reakcije za gore navedeni proizvod tercbutil 4-(3-cijano-6-(metoksi(metil)karbamoil)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 20-60% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm).

Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; RT: 1.5; Uoč. adukti: [M+Na]; Uoč. mase: 436.05. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.21 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.04 (d, J=9.2 Hz, 1H), 3.87 (br s, 4H), 3.62 (br s, 2H), 3.54 (s, 1H), 1.43 (s, 9H).

INTERMEDIJER 25

etil 3-acetamidopikolinat

[0216]

[0217] Etil 3-aminopikolinat (5.0 g, 30.1 mmol) je rastvoren u THF (35 mL) zagrevanjem. Zatim, anhidrid sirćetne kiseline (13 mL, 138 mmol) je dodat u reakcionu smešu. Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i zagrejana do refluksa 3 sata Reakciona smeša je ohlađena i isparljive materije su uklonjene u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Bezbojan proizvod je osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi da se dobije 6.228g jedinjenja iz naslova. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 0.85 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 209.1.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 10.35 (br. s., 1H), 8.33-8.40 (m, 2H), 7.59 (dd, J=8.4, 4.5 Hz, 1H), 4.32 (q, J=7.1 Hz, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.32 (t, J=7.2 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 26

etil 3-(N-metilacetamido)pikolinat

[0218]

[0219] Etil 3-acetamidopikolinat (1.0 g, 4.80 mmol) je rastvoren u DMF (48.0 mL). Cezijum karbonat (2.191 g, 6.72 mmol) je dodat, zatim je dodat metil jodid (0.480 mL, 7.68 mmol). Reakciona bočica je zatvorena i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2.25 sati. Isparljive materije su uklonjene u vakuumu korišćenjem kombinacije rotacionog isparivača/vakuum pumpe. Ostatak je podeljen između etil acetata i zasićenog vodenog natrijum bikarbonata. Vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Organski ekstrakti su kombinovani i oprani uzastopno sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom, zatim koncentrovanim rastvorom soli. Organski ekstrakt je osušen preko magnezijum sulfata, filtriran i rastvarač je uklonjen u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Jedinjenje iz naslova je dobijeno kao svetlo braon čvrsta supstanca (891 mg). LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 0.80 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 223.1.<1>H NMR (Acetonitril-d3) δ 8.47-8.70 (m, 1H), 7.66-7.88 (m, 1H), 7.50-7.65 (m, 1H), 4.24-4.41 (m, 2H), 3.04-3.38 (m, 3H), 1.69 (s, 2H), 1.32 (t, J=7.0 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 27

4-hidroksi-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0220]

[0221] U boci sa okruglim dnom od 100 mL, rastvor KHMDS (4.1 mL, 4.10 mmol) u THF (1.0 M) je stavljen pod azot ohlađen na -78 °C. Zatim, rastvor etil 3-(N-metilacetamido)pikolinata (805 mg, 3.62 mmol) u THF (36.5 mL) je dodat tokom 26 minuta. Reakciona smeša je mešana na -78 °C jedan sat. Boca je uklonjena iz kupatila sa suvim ledom. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperatura sa mešanjem tokom 1.5 sat. Etil acetat i 30 mL dejonizovane vode dodavani su u reakcionu smešu, koja je zatim preneta u levak za odvajanje i nežno mućkana. Vodena faza je podeljena u erlenmajer, zakišeljena dodavanjem 1 N hlorovodonične kiseline (4.1 mL, 4.10 mmol), i mešana na sobnoj temperaturi. Formiran je talog i odfiltriran je korišćenjem Bihnerovog levka. pH filtrata je meren sa pH indikatorskom trakom i pronađeno je da je približno 4. Bezbojni talog je osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi da se dobije 531 mg jedinjenja iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 0.56 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 177.0.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 10.97 (br. s., 1H), 8.51 (dd, J=4.3, 1.0 Hz, 1H), 7.96 (dd, J=8.5, 1.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J=8.5, 4.5 Hz, 1H), 6.06 (s, 1H), 3.53 (s, 3H).

INTERMEDIJER 28

4-hloro-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0222]

[0223] Pripremljena je suspenzija koja sadrži 4-hidroksi-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (100 mg, 0.568 mmol) u acetonitrilu (2.8 mL). Fosfor oksihlorid (0.423 mL, 4.54 mmol) je dodat u suspenziju. Reakcioni sud je zatvoren pod atmosferom azota i zagrevan na 80 °C tokom 4 sata. Reakciona smeša je ohlađena i analizirana sa HPLC. Dodatnih fosfor oksihlorid (0.2 mL, 2.146 mmol) je dodat u reakcionu smešu i reakcioni sud je zatvoren pod atmosferom azota i zagrevan na 80 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je ohlađena, i isparljive materije su uklonjene pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača. Ostatak reakcije je podeljen između etil acetata i 1.5 M vodenog K2HPO4. Vodena faza (pH ~7, pH indikatorska traka) je načinjena baznijom dodavanjem zasićenog vodenog natrijum bikarbonata i zatim ekstrahovana sa etil acetatom. Organski ekstrakti su kombinovani i oprani uzastopno sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i koncentrovanim rastvorom soli. Organski ekstrakt je osušen preko magnezijum sulfata, filtriran i rastvarač je uklonjen pod vakuumom da se dobije 138 mg proizvoda. LCMS: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2mm × 50, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 1.69 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 194.9.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.64 (dd, J=4.4, 1.3 Hz, 1H), 8.10 (dd, J=8.7, 1.3 Hz, 1H), 7.76 (dd, J=8.6, 4.3 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 3.63 (s, 3H).

INTERMEDIJER 29

3-bromo-4-hidroksi-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0224]

[0225] 4-hidroksi-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (500 mg, 2.84 mmol) je rastvoren u DMF (8 mL), zatim je dodat NBS (535 mg, 3.01 mmol). Reakcioni sud je zatvoren pod atmosferom azota. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Rastvarač je uklonjen u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača i 8 mL dejonizovane vode je dodato u sirov proizvod reakcije. Suspenzija je mešana vrtložno i obrađena ultrazvukom (5-10 sec pulse), zatim filtrirana kroz Bihnerov levak, i isprana sa dejonizovanom vodom (8-10 mL u tri dela). Bezbojan proizvod je osušen u vakuumu da se dobije 681 mg jedinjenja iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH C182.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 2 %B do 98 %B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 3 µL. Rezultati: Retenciono vreme = 0.64 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 254.9.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 11.86 (br. s., 1H), 8.57 (d, J=3.5 Hz, 1H), 8.06 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.76 (dd, J=8.5, 4.4 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H).

INTERMEDIJER 30

3-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il trifluorometansulfonat

[0226]

[0227] 3-bromo-4-hidroksi-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (200 mg, 0.784 mmol) je rastvoren u acetonitrilu (5 mL) sa DIEA (0.548 mL, 3.14 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je postavljena pod atmosferom azota i ohlađena na 0 °C. Trifluorometansulfonski anhidrid (0.265 mL, 1.568 mmol) u acetonitrilu (2 mL) je dodat polako špricem (u kapima) u reakcionu smešu. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta, zatim zagrejana do sobne temperature tokom 40 minuta, i mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Isparljive materije su uklonjene iz reakcione smeše korišćenjem rotacionog isparivača i sirova reakciona smeša je podeljena između etil acetata i 1.5 M dikalijum fosfata. Vodena faza je ekstrahovana sa etil acetatom i organski ekstrakti su kombinovani i uzastopno oprani sa 1.5 M dikalijum fosfata i koncentrovanim rastvorom soli. Organski ekstrakt je osušen preko magnezijum sulfata, zatim filtriran, i isparljive materije su uklonjene iz filtrata korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije sirov proizvod kao tamno braon amorfna čvrsta supstanca. Pomoću LCMS procenjeno je da je sirov proizvod približno 78% čist sa UV na 220 nm. Sirov proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH C18 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 2 %B do 98 %B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 3 µL. Rezultati: Retenciono vreme = 1.01 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 386.9.

INTERMEDIJER 31

terc-butil 4-(1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat

[0228]

[0229] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-hloro-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (15mg, 0.077 mmol) u DMF (0.7 mL). Zatim, 1-BOC-piperazin (27.7 mg, 0.149 mmol) je dodat i rastvoren je mešanjem, zatim je dodat kalijum karbonat (19.2 mg, 0.139 mmol). Reakcioni sud je zatvoren pod atmosferom azota. Reakciona smeša je zagrejana na 85 °C tokom 16.5 h. LCMS analiza reakcione smeše ukazala je na konverziju od 45% u proizvod. Reakciona smeša je ponovo stavljena pod atmosferu azota i zagrejana na 85 °C tokom 71 sat. Reakciona smeša je razblažena sa 1 mL acetonitrila i filtrirana kroz sirindž filter. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 25-65% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Da bi se odredila konačna čistoća korišćena su dva analitička LC/MS ubrizgavanja. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. (Čistoća: 99.1%; RT: 1.61; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 345.18). Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. (Čistoća: 99.2%; RT: 1.48; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 345.18). Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.49 (dd, J=4.2, 1.3 Hz, 1H), 7.86-8.04 (m, 1H), 7.61 (dd, J=8.6, 4.2 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 3.53 (s, 4H), 1.42 (s, 9H).

INTERMEDIJER 32

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0230]

[0231] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-hloro-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (12.3mg, 0.063 mmol) u DMF (632 µl). Zatim, 1-(4,4'-difluorobenzhidril) piperazin (22.9 mg, 0.079 mmol) i kalijum karbonat (18.7 mg, 0.135 mmol) su dodati. Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i zagrejana na 80 °C tokom 18 sati. HPLC analiza je ukazala na približno 50% konverzije u proizvod. U reakcionu smešu je dodat kalijum karbonat (8.2 mg, 0.059 mmol). Reakciona smeša je zatvorena pod azotom i zagrejana na 85 °C tokom 19 sati. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 50-90% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Prinos proizvoda je bio 21.1 mg, a njegova procenjena čistoća sa LCMS analizom bila je 100%. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 1.42 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 447.1. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 2.25 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 447.1. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.42 (d, J=2.9 Hz, 1H), 7.91 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.57 (dd, J=8.8, 4.4 Hz, 1H), 7.48 (dd, J=8.6, 5.7 Hz, 4H), 7.14 (t, J=8.8 Hz, 4H), 5.98 (s, 1H), 4.47 (s, 1H), 3.51 (s, 2H).

INTERMEDIJER 33

etil 6-bromo-3-(N-metilacetamido)pikolinat

[0232]

[0233] Rastvor je pripremljen rastvaranjem etil 3-acetamido-6-bromopikolinata (5 g, 17.41 mmol) u DMF (100 mL). Zatim, cezijum karbonat (8.15 g, 25.01 mmol) i metil jodid (1.75 mL, 28.0 mmol) su dodati. Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata i 40 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu korišćenjem kombinacije rotacionog isparivača/vakuum pumpe. Etil acetat i DCM su dodati u ostatak reakcije zajedno sa hloroformom i toluenom. Smeša je filtrirana kroz podlogu od celita da se uklone soli. Rastvarači su ponovo uklonjeni pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača. Ostatak reakcija je ponovo rastvoren u hloroformu i toluenu i filtriran kroz podlogu od celita da se uklone tragovi nerastvorljivih materija koji su još prisutni. Uklanjanje rastvarača u vakuumu dalo je 5.35 g proizvoda kao narandžastog ulja. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1mm × 50mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 1.07 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 301.1. Protonska NMR je prikazala karakteristike ograničene rotacije (rotameri);<1>H NMR (500 MHz, HLOROFORM-d) δ 7.72 (d, J=8.4 Hz, 0.8H), 7.66 (d, J=8.4 Hz, 0.2H), 7.51 (d, J=8.4 Hz, 0.8H), 7.45 (d, J=8.4 Hz, 0.2H), 4.50-4.36 (m, 2.0H), 3.37 (s, 0.6H), 3.19 (s, 2.4H), 2.24 (s, 0.6H), 1.82 (s, 2.5H), 1.43-1.36 (m, 3.1H).

INTERMEDIJER 34

etil 6-metil-3-(N-metilacetamido)pikolinat

[0234]

[0235] Etil 6-bromo-3-(N-metilacetamido)pikolinat (3.01 g, 10.00 mmol) je rastvoren u THF (100 mL). Rastvor je barbotiran azotom tokom 20 min, zatim je dodat tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (235mg, 0.203 mmol). Reakcioni prostor je ispran azotom i dimetilcink (12 mL, 12.00 mmol) je dodat pomoću šprica. Reakciona smeša je zagrejana pod atmosferom azota na 70 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je ohlađena i preneta u erlenmajer od 500 mL koji sadrži magnetnu mešalicu. Etil acetat je dodat i zasićen rastvor natrijum bikarbonata je dodat polako sa mešanjem. Organska faza je razdvojena iz vodene faze, zatim oprana sa koncentrovanim rastvorom soli, i osušena preko magnezijum sulfata. Agens za sušenje je filtriran iz organskog ekstrakta i rastvarač je uklonjen pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača da be se dobilo 2.23 g proizvoda kao žutog ulja. Sirov proizvod je prečišćen na 80 g Isco Redi-sep silika gel ketridžu eluirajući sa gradijentom od 20%-50% etil acetata u dihlormetanu. Frakcije koje sadrže proizvod sa TLC analiza su kombinovane i rastvarač je uklonjen pod vakuumom da se dobije 1.937 g jedinjenja iz naslova kao bledo žuto ulje. HPLC čistoća ovog proizvoda je bila približno 92% sa UV na 220 nm. Analitičkii čist uzorak je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 5-45% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 237.17; Retenciono vreme: 1.05 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 237.18; Retenciono vreme: 1.01 min.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (d, J=8.1 Hz, 0.8H), 7.68 (d, J=8.1 Hz, 0.2H), 7.56 (d, J=8.1 Hz, 0.8H), 7.49 (d, J=8.3 Hz, 0.2H), 4.31 (q, J=7.1 Hz, 1.6H), 4.24 (q, J=7.1 Hz, 0.4H), 3.29 (s, 0.6H), 3.04 (s, 2.4H), 2.55 (s, 2.4H), 2.12 (s, 0.6H), 1.66 (s, 2.4H), 1.27 (t, J=7.1 Hz, 3.0H).

INTERMEDIJER 35

Etil 6-metil-3-(metilamino)pikolinat

[0236]

[0237] U rastvor etil 6-metil-3-(N-metilacetamido)pikolinata (1 g, 3.68 mmol) u etanolu (20 mL) je dodata HCl (1.841 mL, 22.09 mmol). Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 6 h. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, dobijeni ostatak je rastvoren u vodi (10 mL), učinjen baznim sa 10% NaHCO3(20 mL) i ekstrahovan sa DCM (3 × 20 mL). Kombinovani organski slojevi su oprani sa 10% NaHCO3(20 mL), vodom (20 mL), i koncentrovanim rastvorom soli (20 mL). Organski deo je osušen preko natrijum sulfata i koncentrovan da se dobije sirov proizvod (0.8 g). Sirov proizvod je prečišćen pomoću hromatografije na 12 g silika gel koloni sa 40% etil acetata u petrol etru da se izoluje željeni proizvod (0.5 g, 2.55 mmol, 69.2 % prinos).<1>H NMR (Acetonitril-d3) δ 7.38 (br s, 1H), 7.23 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.11 (d, J=8.7 Hz, 1H), 4.32 (q, J=7.1 Hz, 2H), 2.87 (d, J=5.2 Hz, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.34 (t, J=7.1 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 36

1,6-Dimetil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0238]

[0239] U rastvor etil 6-metil-3-(metilamino)pikolinata (3.0 g, 15.45 mmol), 2-cijanosirćetne kiseline (1.445 g, 16.99 mmol) i PYBROP (7.20 g, 15.45 mmol) u dihlormetanu (77 mL) dodat je trietilamin (5.40 mL, 30.9 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom noći. Reakciona smeša je oprana sa vodenim zasićenim NaHCO3rastvorom (30 mL) zatim koncentrovanim rastvorom soli (30 mL), i organski sloj je osušen (natrijum sulfat), filtriran, i uparen da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je rastvoren u minimalnoj količini dihlorometana i prečišćen fleš silika gel hromatografijom. Kolona za hromatografiju je prethodno kondicionirana sa 1%TEA/5%EA/94%Heksani 94:5:1 (v/v) heksan/ etil acetat i 1% TEA, i čisto jedinjenje je eluirano prateći postepeni gradijent od 20-100% etilacetat /heksane/1%TEA i zatim 0-20% (v/v) metanol u dihlormetanu sa 1% TEA. Čiste frakcije proizvoda su kombinovane, koncentrovane na rotacionom isparivaču, i osušene pod visokim vakuumom da se dobije svetlo žuta čvrsta supstanca (6 g). Čvrsta supstanca je ponovo rastvorena u DCM i oprana sa 1 N NaOH. Nakon mućkanja, bela čvrsta supstanca je istaložena iz smeše. Čvrsta supstanca je filtrirana iz smeša i osušena pod vakuumom da se dobije 1,6-dimetil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (3.1 g, 14.40 mmol, 93 % prinos). LCMS: Postupak S1; RT 1.027, M<+1>216.<1>H NMR (500 MHz, metanoli-d4) δ 7.87-7.73 (m, 1H), 7.47 (d, J=8.7 Hz, 1H), 3.56 (s, 3H), 2.61 (s, 3H).

INTERMEDIJER 37

4-Hloro-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0240]

[0241] Suspenzija 4-hidroksi-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (600 mg, 2.79 mmol) je rastvorena u POCl3(2.86 mL, 30.7 mmol). Reakciona smeša je mešana na 120 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperatura i sipana na ledeno hladan rastvor 1 N NaOH (20 mL). Odvojena čvrsta supstanca je filtrirana i oprana sa etrom i osušena pod vakuumom tokom noći da se dobije 4-hloro-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (400 mg, 1.712 mmol, 61.4 % prinos). LCMS: Postupak S1; RT 1.274, M<+1>262.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.25-8.04 (m, 1H), 7.77 (d, J=8.7 Hz, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.63 (s, 3H).

INTERMEDIJER 38

4-hidroksi-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0242]

[0243] U 1.0 M THF rastvor NaHMDS (9 mL, 9.00 mmol) na -78 °C pod atmosferom azota dodat je rastvor etil 6-metil-3-(N-metilacetamido) pikolinata (1.825 g, 7.51 mmol) u THF (60 mL) u kapima pomoću kanile tokom 50 minuta uz magnetno mešanje. Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom drugih 70 minuta, zatim je uklonjeno ledeno kupatilo, i reakciona smeša je zagrejana do sobne temperatura tokom 30 minuta. Etil acetat je dodat u reakcionu smešu zatim 45 mL dejonizovane vode. Smeša je prebačena u levak za odvajanje, agitovana i vodeni sloj je podeljen u erlenmajer. Vodeni sloj je zakišeljen uz mešanje dodavanjem 1.0 N hlorovodonične kiseline (9.0 mL, 9.00 mmol). Vodeni rastvor je mešan tokom nekoliko minuta da se omogući taloženje proizvoda kao narandžaste čvrste supstance iz vodene smeše sa pH koje je mereno da bude 4 sa pH trakom. Narandžasti proizvod je odfiltriran korišćenjem Bihnerovog levka ispranog sa veoma malom količinom dejonizovane vode. Proizvod je osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi da se dobije 840 mg jedinjenja iz naslova kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1mm × 50mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 % B do 100 % B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 % B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 1.12 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 191.2.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 10.67 (br. s., 1H), 7.86 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.53 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.03 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 2.57 (s, 3H).

INTERMEDIJER 39

4-hloro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0245] U bočicu od 2 drama pod pritiskom koja je opremljena poklopcem pod pritiskom, 4-hidroksi-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (54.5 mg, 0.287 mmol) je suspendovan u acetonitrilu (1.3 mL). Zatim, POCl3(0.3 mL, 3.22 mmol) i magnetno mešalica su dadati. Bočica je zatvorena pod atmosferom azota i reakciona smeša je zagrejana na 80 °C tokom 3 sati. Analiza reakcije sa LCMS ukazala je na konverziju od približno 40%. Reakciona smeša je zagrejana pod azotom na 80 °C tokom dodatnih 2 sata. Reakcija je gašena dodavanjem leda i zatim etil acetata. Smeša je prebačena u levak za odvajanje, dodatni etil acetat je dodat, i oprana je sa 1.5M dikalijum fosfatom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom. Organski ekstrakti su kombinovani i oprani uzastopno sa malom količinom 1.5 M dikalijum fosfata i koncentrovanim rastvorom soli. Organski ekstrakt je osušen preko magnezijum sulfata, zatim agens za sušenje je odfiltriran, i rastvarač je uklonjen iz filtrata u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije 51 mg jedinjenja iz naslova kao bež čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme =0. 99 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 209.3.<1>H NMR (HLOROFORM-d) δ 7.64 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.43 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.71 (s, 3H).

INTERMEDIJER 40

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0246]

[0247] U bočicu od 20 mL pod pritiskom napunjenu sa RuPhos predkatalizatorom 2. generacije (27.9 mg, 0.036 mmol), 4-hloro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-onom (150 mg, 0.719 mmol), 1-(4,4'-difluorobenzhidril)piperazin (249 mg, 0.863 mmol), i cezijum karbonatom (703 mg, 2.157 mmol), 7.1 mL rastvarača (DMA/t-BuOH; 1:4) je dodato. Reakciona bočica je zatvorena pod atmosferom azota i uronjena u uljano kupatilo na 70 °C. Temperatura kupatila je bila podignuta na 90 °C. Reakciona smeša je zagrejana na 90 °C tokom 18 sati. Isparljive materije su uklonjene iz reakcione smeše u vakuumu korišćenjem kombinacije rotacionog isparivača/vakuum pumpe. Hloroform i dihlorometan su dodati u reakcionu smešu i smeša je zagrejana sa mešanjem vorteksom pre nego što je filtrirana kroz Whatman-ov filter od 0.45 µm za autobočice sa celitnim predfilternim čepom. Uklanjanje rastvarača iz filtrata dalo je sirov proizvod kao narandžasto ulje. Sirov proizvod je prečišćen korišćenjem silika gel kolonske hromatografije eluiranjem sa 15% etil acetatom u dihlormetanu. Čiste frakcije analizirane po TLC su kombinovane i rastvarač je uklonjen pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača, dale su 290 mg proizvoda kao narandžastog ulja. Uklanjanje rastvarača u vakuumu obezbedilo je proizvod (217 mg) kao bledo žutu penu. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 1.18 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 461.3. LCMS; Kolona: Fenomenex Luna C18, 2 mm × 50mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 3 µL. Retenciono vreme = 3.61 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 461.2.<1>H NMR (Hloroform-d) δ 7.56 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.38-7.43 (m, 4H), 7.29 (d, J=8.7 Hz, 1H), 6.97-7.03 (m, 4H), 6.16 (s, 1H), 4.31 (s, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.57 (br. s., 4H), 2.63 (t, J=4.8 Hz, 4H), 2.57 (s, 3H).

INTERMEDIJER 41

terc-butil 4-(1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat

[0248]

[0249] U bočicu od 30 mL napunjenu sa RuPhos predkatalizatorom 2. generacije (46.5 mg, 0.060 mmol), 1-BOC-piperazinom (268 mg, 1.438 mmol) i 4-hloro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-onom (250 mg, 1.198 mmol), dodat je cezijum karbonat (1171 mg, 3.59 mmol) i magnetna mešalica. U reakcionu smešu je dodato 12 mL 4/1 smeše terc-butanol/dimetil acetamina. Bočica je zatvorena pod atmosferom azota i uronjena u uljano kupatilo (75 °C). Temperatura kupatila je podignuta do 90 °C. Reakciona smeša je zagrejana na 90 °C tokom 19 sati. Reakciona smeša je ohlađena i filtrirana kroz čep od celita da se uklone soli i isprana sa dihlorometanom. Isparljive materije su uklonjene iz filtrata u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije sirov proizvod kao narandžasta čvrsta supstanca. Sirov smeša reakcije je podvrgnuta silika gel hromatografiji eluiranjem sa 70% etil acetata u dihlormetanu. Proizvod frakcije su kombinovani na osnovu TLC analize i rastvarač je uklonjen u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije 304 mg kao narandžasta čvrsta supstanca. LCMS analiza hromatografisanog proizvoda ukazala je na čistoću od 70%. Analitički čist uzorak je pripremljen daljim prečišćavanjem korišćenjem preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-65% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 1.69 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 359.2. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 1.68 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 359.2. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.84 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J=8.4 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 3.48-3.57 (m, 4H), 3.41-3.47 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 1.43 (s, 9H). Ostatak smeše proizvoda je podvrgnut brominaciji i prečišćen u toj fazi.

INTERMEDIJER 42

terc-butil 4-(3-bromo-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat

[0250]

[0251] Rastvor je pripremljen rastvaranjem terc-butil 4-(1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata (575 mg, 1.364 mmol) u DMF (12 mL). Reakciona smeša je ohlađena na 0 °C pod atmosferom azota, NBS (270 mg, 1.517 mmol) je dodat, i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2 sata. Mala količina zasićenog rastvora natrijum bikarbonata je dodata u reakcionu smešu i smeša je mešana tokom nekoliko minuta pre nego što su rastvarači/isparljive materije uklonjene korišćenjem kombinacije rotacioni isparivač/vakuum pumpa. Ostatak reakcije je podeljen između etil acetata i 1.5 M dikalijum fosfata. Organski ekstrakt je uzastopno opran sa 1.5 M rastvorom dikalijum fosfata i koncentrovanim rastvorom soli. Organski ekstrakt je osušen preko magnezijum sulfata, filtriran, i rastvarač je uklonjen iz filtrata korišćenjem rotacionog isparivača. Sirov proizvod je prečišćen na silika gel koloni eluiranjem sa 15% etil acetata u dihlormetanu. Čiste proizvodne frakcije po TLC analizi su kombinovane i rastvarači su uklonjeni u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača obezbeđujući 611 mg jedinjenja iz naslova kao bledožute čvrste supstance. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1mm × 50mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 1.44 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 437.2.<1>H NMR (HLOROFORM-d) δ 7.57 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.33 (d, J=8.7 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.64-3.70 (m, 4H), 3.60 (br s, 4H), 2.62 (s, 3H), 1.52 (s, 9H).

INTERMEDIJER 43

3-bromo-1,6-dimetil-4-(piperazin-1-il)-1,5-naftiridin-2(1H)-on, TFA

[0252]

[0253] Rastvor je pripremljen rastvaranjem terc-butil 4-(3-bromo-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata (572 mg, 1.308 mmol) u dihlormetanu (6 mL) i zatim dodavanjem TFA (6.00 mL). Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 sati. Isparljive materije su uklonjene iz korišćenjem rotacionog isparivača. Proizvod reakcije je ponovo rastvoren u DCM i isparljive materije su uklonjene u vakuumu nekoliko puta da se ukloni višak TFA. Proizvod (1.086 g) je dobijen kao narandžasto ulje koji ima masu koja ukazuje na 4.4 ekvivalenta od TFA. LCMS; Kolona: Fenomenex Luna C18, 2 mm × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 3 µL. Retenciono vreme = 1.88 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 337.0

INTERMEDIJER 44

etil 6-bromo-3-(2-cijanoacetamido)pikolinat

[0254]

[0255] U bocu sa okruglim dnom od 25 mL napunjenu sa etil 3-amino-6-bromopikolinatom (1.0g, 4.08 mmol) i cijanosirćetnom kiselinom (0.417 g, 4.90 mmol), DCM (14 mL) i N,N-dimetilanilin (0.622 mL, 5.30 mmol) su dodati. Boca je zatvorena, ohlađena na 0 °C, zatim EDC (1.172 g, 6.11 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 10 minuta, zatim zagrejana do sobne temperatura i mešana tokom 2.5 sata. Reakciona smeša je prebačena u levak za odvajanje, razblažena sa dihlorometanom, i oprana uzastopno sa 1.0 N hlorovodoničnom kiselinom (3x) i koncentrovanim rastvorom soli (1x). Organski ekstrakt je osušen preko natrijum sulfata, filtriran, i rastvarač je uklonjen iz filtrata korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije 1.177 g jedinjenja iz naslova kao bež čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH C182.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 2 %B do 98 %B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 3 µL. Rezultati: Retenciono vreme = 0.95 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 312.0.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.67 (s, 1H), 8.23 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.89 (d, J=8.7 Hz, 1H), 4.34 (q, J=7.1 Hz, 2H), 4.06 (s, 2H), 1.33 (t, J=7.2 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 45

6-bromo-4-hidroksi-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0256]

[0257] Rastvor je pripremljen rastvaranjem etil 6-bromo-3-(2-cijanoacetamido) pikolinata (1.091g, 3.50 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (35.0 mL). Reakcioni rastvor je blago heterogen. U reakcioni rastvor na sobnoj temperaturi je dodat rastvor KHMDS (3.7 mL, 3.70 mmol) u THF (1.0 M). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 sati. Zatim, KHMDS (0.2 mL, 0.200 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom nekoliko minuta. Hlorovodonična kiselina (4.2 mL, 4.20 mmol) je dodata u dobijeno u pH u opsegu od 7-8 sa pH traka, zatim je dodato 2 mL 1 N HCl. Smeša je mešana vrtložno i isparljive materije su uklonjene u vakuumu korišćenjem kombinacije rotacionog isparivača/vakuum pumpe. Čvrsti sirov materijal je suspendovan u 20 mL dejonizovane vode i ohlađen u lednom kupatilu pre nego što je talog odfiltriran korišćenjem Bihnerovog levka. Materijal je ispran sa hladnom vodom koja je polako proceđena kroz filter pogaču. Proizvod je osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi. Protonska NMR uDMSO-d6je bila u skladu sa proizvodom ali je pokazala prisustvo amonijum hlorida. Materijal je ponovo suspendovan u 20 mL 1 N hlorovodonične kiseline i filtriran kroz Bihnerov levak. Filter pogača je isprana sa 1 N hlorovodoničnom kiselinom i vodom. Proizvod je osušen da se dobije 773 mg jedinjenja iz naslova kao svetlo bež čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1mm × 50mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 0.62 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 266.0.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.90 (br. s., 1H), 7.84 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.62 (d, J=8.8 Hz, 1H).

INTERMEDIJER 46

6-bromo-4-hidroksi-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0258]

[0259] Rastvor, pripremljen rastvaranjem 6-bromo-4-hidroksi-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (704 mg, 2.65 mmol) u DMF (24 mL), je ohlađen na 0 °C pod atmosferom azota. Natrijum hidrid (60% mas u mineralnom ulju) (270 mg, 6.75 mmol) je dodat odjednom. Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i mešana tokom 10 minuta, zatim je uklonjena iz ledenog kupatila i ostavljena da se zagreje do sobne temperatura tokom 35 minuta. Propargil bromid (80% u toluenu) (0.737 mL, 6.62 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Sirćetna kiselina (0.8 mL, 13.97 mmol) je dodata i isparljive materije su uklonjene iz reakcione smeše korišćenjem rotacionog isparivača. Sirov proizvod reakcije je osušen u vakuumu tokom približno 2 sata na sobnoj temperaturi da se dobije braon uljani ostatak. U sirov ostatak reakcije, 12 mL 1 N hlorovodonične kiseline je dodato, i smeša je mešana vrtložno i kratko ultrazvukom. Smeša je ohlađena u ledenom kupatilu, zatim je proizvod filtriran korišćenjem Bihnerovog levka i ispran sa 12 mL 1 N hlorovodonične kiseline. Proizvod osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi dao je 879 mg jedinjenja iz naslova kao tamno crvene čvrste supstance. Protonska NMR je bila u skladu sa željenim proizvodom. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1mm × 50mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 0.91 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 304.0. LCMS; Kolona: Fenomenex Luna C18, 2 mm × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 5 µL. Retenciono vreme = 1.48 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 303.8.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.94-8.02 (m, 2H), 5.00 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.33 (t, J=2.4 Hz, 1H).

INTERMEDIJER 47

6-bromo-4-hloro-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0260]

[0261] Suspenzija je pripremljena dodavanjem 6-bromo-4-hidroksi-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (874 mg, 2.87 mmol) u acetonitrilu (29 mL). Zatim, DIEA (3.1 mL, 17.75 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana tokom nekoliko minuta da se osigura rastvaranje. Fosfor oksihlorid (POCl3) (1.1 mL, 11.80 mmol) i benziltrietilamonijum hlorid (790 mg, 3.47 mmol) dodavani su u reakcionu smešu. Reakciona smeša je zatvorena pod atmosferom azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 19 sati. Isparljive materije su uklonjene iz reakcione smeše u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Led je dodat u ostatak reakcije, zatim dihlorometan, i smeša je preneta u levak za odvajanje. Vodeni rastvor 1.5 M dikalijum fosfata je dodat, i faze su razdvojene, i organski ekstrakt je opran sa 1.5 M dikalijum fosfata. Vodena ispiranja su kombinovana i ekstrahovana sa dihlorometanom. Kombinovani organski ekstrakti su uzastopno oprani sa 1.5 M dikalijum fosfatom i koncentrovanim rastvorom soli. Organski ekstrakt je osušen preko natrijum sulfata, i agens za sušenje odfiltriran. Isparljive materije su uklonjene iz filtrata u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije lepljiva braon čvrsta supstanca. Sirov proizvod je prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije sa normalnom fazom eluirajući smešu sa dihlorometanom. Čiste proizvodne frakcije po TLC su kombinovane i rastvarač je uklonjen pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača da se dobije 652 mg jedinjenja iz naslova kao bledožuta čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim zadržavanje od 1 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 1.30 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 321.95.<1>H NMR (HLOROFORM-d) δ 7.76-7.89 (m, 2H), 5.08 (d, J=2.5 Hz, 2H), 2.39 (t, J=2.5 Hz, 1H).

INTERMEDIJER 48

terc-butil 4-(6-bromo-3-cijano-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat

[0262]

[0263] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 6-bromo-4-hloro-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (502mg, 1.556 mmol) u DMF (15 mL). Zatim, 1-BOC-piperazin (296 mg, 1.588 mmol) je dodat zatim je dodat kalijum karbonat (323 mg, 2.335 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota tokom 2 sata. DMF je uklonjen u vakuumu korišćenjem kombinacije rotacionog isparivača i vakuum pumpe. Ostatak reakcije je podeljen između etil acetata i vode. THF je dodat da se poboljša rastvorljivost. Vodeni rastvor 1.5 M dikalijum fosfata je dodat da utiče na bolje odvajanje faza. Organski ekstrakt je opran uzastopno sa 1.5 M dikalijum fosfata i koncentrovanim rastvorom soli. Organska faza je osušena preko magnezijum sulfata i filtrirana. Rastvarač je uklonjen u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Proizvod je osušen u vakuumu na sobnoj temperaturi da se dobije jedinjenje iz naslova kao žuto želena čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2 mm × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 3.10 min.; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 471.9.<1>H NMR (HLOROFORM-d) δ 7.64-7.77 (m, 2H), 5.01 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.93 (br. s., 4H), 3.6.

INTERMEDIJER 49

6-bromo-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0264]

[0265] Rastvor je pripremljen rastvaranjem terc-butil 4-(6-bromo-3-cijano-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata i tetrahidrofurana (25 mg, 0.052 mmol) in DCM (260 µl). Zatim, TFA (260 µl) je dodat. Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 sata. Isparljive materije su uklonjene iz reakcione smeše u vakuumu korišćenjem rotacionog isparivača. Sirova reakciona smeša je rastvorena u smeši DMF/acetonitril. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 10-50% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 371.98; Retenciono vreme: 1.09 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 371.97; Retenciono vreme: 1.04 min. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.85-8.05 (m, 2H), 4.99 (d, J=2.6 Hz, 2H), 3.73-3.84 (m, 4H), 3.17-3.26 (m, 1H), 2.90-3.01 (m, 4H).

INTERMEDIJER 50

terc-butil 4-(6-bromo-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il) piperazin-1 -karboksilat

[0266]

[0267] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (20 mg, 0.063 mmol) dodati su terc-butil piperazin-1-karboksilat (11.70 mg, 0.063 mmol) i DIPEA (0.033 mL, 0.188 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 35 °C tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 40-80% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 468.0; Retenciono vreme: 2.1 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.1 %; Uočena masa: 468.0; Retenciono vreme: 2.1 minuta. Jedinjenje iz naslova (11.7 mg) je izolovana in 39.7% prinosu.

INTERMEDIJER 51

6-bromo-1-metil-3-nitro-4-(piperazin-1-il)-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0268]

[0269] U dihlorometanski (2 mL) rastvor terc-butil 4-(6-bromo-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata (10.43 mg, 0.022 mmol) je dodata trifluorosirćetna kiselina (1.716 µl, 0.022 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 5-40% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 367.9; Retenciono vreme: 1.0 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.8 %; Uočena masa: 367.9; Retenciono vreme: 0.9 minuta. Jedinjenje iz naslova (5.2 mg) je izolovana in 64.2% prinosu.

INTERMEDIJER 52

(1R,5S)-terc-butil 3-(6-hloro-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0270]

[0271] (1R,SS)-Terc-butil 3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (137 mg, 0.645 mmol) je dodat u rastvor 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (164 mg, 0.645 mmol) i trietilamina (0.270 mL, 1.936 mmol) u DMF (2 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je pokazala konverziju u proizvod sa posmatranom masom koja odgovara masi proizvoda minus t-butil ostatak. Sirova reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom, a ostatak je rastvoren u dihlorometanu i zatim adsorbovan na silika gel i podvrgnut fleš hromatografiji korišćenjem 100% etil acetata kao eluenta i silika gela kao stacionarne faze. Homogene frakcije su kombinovane i uparene u vakuumu da se dobije 200 mg žute čvrste supstance. Analitička LC/MS uslovi: Zapr. ubrizgavanja 1:8; 3 µL, Početak %B; 2, Konačni %B; 98, Vreme gradijenta; 1.5 min, Brzina protoka; 0.8 mL / min, Talasna dužina; 220 nm, Par rastvarača; Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A; 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B; 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona; Waters Aquity BEH C18 2.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice; 40]; RT: 0.794 min. (M+H-boc)<+>; 329. Čistoća procenjena da je 77%.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.84 (d, J=9.0 Hz, 1H), 4.25 (br. s., 2H), 4.12 (s, 2H), 3.61-3.47 (m, 4H), 2.22 (d, J=7.6 Hz, 2H), 1.88-1.80 (m, 2H), 1.46 (s, 9H). Zatim, 10 mg ovog materijala je prečišćeno pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: 35-75% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; 2.04 minuta; [M+Na]; 452.06 Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; 2.14 minuta; [M+Na]; 452.05.

INTERMEDIJER 53

[0272]

[0273] Terc-butil piperazin-1-karboksilat (62.4 mg, 0.335 mmol) je dodat u rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (100 mg, 0.335 mmol) i trietilamina (0.047 mL, 0.335 mmol) u DMF (5 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod azotom tokom noći. DMF je zatim je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u dihlormetanu i dobijeni rastvor je opran uzastopno sa vodom (1x) i zatim koncentrovanim rastvorom soli. Organski sloj je zatim osušen preko magnezijum sulfata, filtriran, i uparen pod sniženim pritiskom da se dobije proizvod kao žuto/narandžasta čvrsta supstanca (125 mg, 79%). Analitička LC/MS uslovi: Zapr ubrizgavanja Vol; 3 µL, Početak %B; 2, Konačni %B;98, Vreme gradijenta; 1.5 min, Brzina protoka; 0.8 mL / min, Talasna dužina; 220 nm, Par rastvarača; Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A; 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B; 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona; Waters Aquity BEH C18 2.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice; 40. LC/MS rezultati; 1.207 min. (M-tBu)<+>; 391.85.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.05-7.85 (m, 2H), 3.81 (br. s., 4H), 3.67-3.44 (m, 7H), 1.45 (s, 9H).

INTERMEDIJER 55

terc-butil 4-(6-cijano-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il) piperazin-1 -karboksilat

[0274]

[0275] U DMF (3 mL) rastvor 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (270 mg, 1.020 mmol) je dodata Hunigova baza (0.535 mL, 3.06 mmol) zatim je dodat terc-butil piperazin-1-karboksilat (209 mg, 1.122 mmol). Reakciona smeša je mućkana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. LC/MS je ukazala da je reakcija završena. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen eluiranjem sa 1: 1 heksani: etil acetat iz silika gel kolone od 40g. Frakcije koje sadrže jedinjenje iz naslova su kombinovane da daju žutu čvrstu supstancu (320 mg, 76 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Analitička LC/MS rezultati su bili u skladu sa sa jedinjenjem iz naslova: 1.8 minuta, 475 (M+H), 473 (M-H).

INTERMEDIJER 56

5-metil-7-nitro-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0276]

[0277] U dihlorometanski (4 mL) rastvor terc-butil 4-(6-cijano-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata (320 mg, 0.772 mmol) je dodat TFA (0.059 mL, 0.772 mmol) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. LC/MS analiza je pokazala da je reakcija završena. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da se dobije žuta čvrsta supstanca (240 mg, 73% prinos) koja se koristila bez daljeg prečišćavanja. Analitička LC/MS uslovi: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim zadržavanje od 0.5 min pri 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Analitička LC/MS rezultati su bili u skladu sa sa jedinjenjem iz naslova: 1.0 minuta, 315 (M+H).

INTERMEDIJER 57

6-bromo-1-metil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0278]

[0279] U rastvor 6-bromo-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (250 mg, 0.940 mmol) u DMF (5 mL), 60% natrijum hidrid (113 mg, 2.82 mmol) u mineralnom ulju je dodat u delovima. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Jodometan (0.176 mL, 2.82 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je pokazala neizreagovan početni materijal. Ekvivalent natrijum hidrida i jodometana je dodat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Reakcija je zatim gašena dodavanjem vode. Reakciona smeša je zakišeljena sa 1 N rastvorom hlorovodonične kiseline do pH~3. Prljavo bela čvrsta supstanca je sakupljena kao konačni proizvod (163 mg, 61.9 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Analitička LC/MS rezultati su bili u skladu sa sa jedinjenjem iz naslova: 1.9 minuta, 280, 282 (M+H).

INTERMEDIJER 58

6-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0280]

[0281] U DMF (1 mL) rastvoru, 6-bromo-1-metil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (100 mg, 0.357 mmol) je kombinovan sa natrijum metoksidom (0.5 N u metanolu) (2.142 mL, 1.071 mmol) i smeša je zagrejana na 85 °C u mikrotalasnom reaktoru tokom 5 sati, zatim na 100 °C tokom 2 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Čvrst proizvod (40 mg, 50% prinos) je sakupljen filtracijom.

INTERMEDIJER 59

4-hloro-o-metoksi-1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0282]

[0283] U rastvor acetonitrila(1.5 mL) koji sadrži 6-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (70 mg, 0.245 mmol) dodat je DIPEA (0.427 mL, 2.447 mmol) zatim je dodat fosfor oksihlorid (0.160 mL, 1.713 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza je pokazala da je formiran nov pik u skladu sa završnom reakcijom. Isparljive komponente su uklonjene pod vakuumom. Ostatak je ponovo rastvoren u etil acetatu i opran sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli i osušen preko magnezijum sulfata. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom da se dobije svetlo žuta čvrsta supstanca (40 mg, 74% prinos).

INTERMEDIJER 60

4,6-Dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0284]

[0285] 4 M rastvor HCl (20 mL, 80 mmol) u dioksanu je dodat u 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (1 g, 3.35 mmol). Reakciona smeša je zagrejana u zapečaćenoj epruveti na 85 °C tokom 4 dana. Reakciona smeša je koncentrovana i triturisana sa metanolom. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da se dobije hidrohloridna so jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca (810 mg, 83 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.9 min, 253.9 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.80-7.76 (m, 1H), 7.71-7.68 (m, 1H), 3.77 (s, 3H).

INTERMEDIJER 61

[0286]

[0287] U rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (1.2 g, 4.02 mmol) u DMF (10 mL), terc-butil piperazin-1-karboksilat (0.824 g, 4.42 mmol) i trietilamin (1.681 mL, 12.06 mmol) su dodati. Reakcija je gašena dodavanjem 1N HCl rastvora. Žuto obojena čvrsta supstanca je odvojena iz rastvora i sakupljena filtracijom da se dobije jedinjenje iz naslova (1.775 g, 98 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 4.0 min, 448.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.67 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.93 (br s, 4H), 3.79-3.69 (m, 4H), 3.64 (s, 3H), 1.52 (s, 9H).

INTERMEDIJER 62

6-Bromo-1-metil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0288]

[0289] Trifluorosirćetna kiselina (3 mL, 38.9 mmol) je dodata u rastvor terc-butil 4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata (700 mg, 1.561 mmol) u dihlormetanu (5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, nakon čega je koncentrovana pod vakuumom da se dobije bis-TFA so jedinjenja iz naslova kao braonkasta čvrsta supstanca (858 mg, 1.489 mmol, 95 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90: 10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 1.7 min, 348.0 (MH<+>).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.99 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.88 (d, J=9.0 Hz, 1H), 4.27-4.07 (m, 4H), 3.67 (s, 3H), 3.59-3.46 (m, 4H).

INTERMEDIJER 63

5-Metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[0290]

[0291] Terc-butil 4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat (100 mg, 0.223 mmol), cink (2.92 mg, 0.045 mmol), cink cijanid (15.72 mg, 0.134 mmol), i 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlorometan kompleks (18.22 mg, 0.022 mmol) dodati su u zapečaćenu bočicu. Sud je uzastopno evakuisan i ispran azotom tri puta. NMP (2 mL) je dodat i smeša je zagrejana na 75 °C tokom 1 sata. Metanol je dodat i dobijena suspenzija je filtrirana a filtrat prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze korišćenjem metanol-H2O-TFA kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i zatim koncentrovane u vakuumu tokom noći da daju svetlo žuto-obojenu čvrstu supstancu. Ovaj materijal je rastvoren u dihlormetanu (3 mL), i TFA (3 mL, 38.9 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h i zatim je uparena pod sniženim pritiskom da se dobije bis-TFA so jedinjenja iz naslova kao crvenkasta čvrsta supstanca (53 mg, 45.5 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 1.8 min, 295.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (d, J=8.8 Hz, 1H),8.13 (d, J=9.2 Hz, 1H), 3.87-3.75 (m, 4H), 3.55 (s, 3H), 3.08-2.92 (m, 4H).

INTERMEDIJER 64

6-Hloro-1-metil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0292]

[0293] U rastvor 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (115 mg, 0.453 mmol) u DMF (2 mL), terc-butil piperazin-1-karboksilat (84 mg, 0.453 mmol) i trietilamin (0.189 mL, 1.358 mmol) su dodati. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Reakcija je gašena dodavanjem vode. Bež čvrsta supstanca je odvojena iz rastvora i sakupljena filtracijom. Ovaj materijal je zatim rastvoren u dihlormetanu (5 mL) i 2 M rastvor HCl u etru (2.263 mL, 4.53 mmol) je dodat. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 dana, i zatim koncentrovana u vakuumu da se dobije tribazna hidrohloridna so jedinjenja iz naslova kao bež obojena čvrsta supstanca (133 mg, 71.1 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 1.8 min, 304.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.30 (br. s., 2H), 8.13 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J=9.0 Hz, 1H), 4.10-3.89 (m, 4H), 3.57 (s, 3H), 3.36 (br. s., 4H).

INTERMEDIJER 65

2,4-Diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0294]

[0295] 2-Cijanosirćetna kiselina je konvertovana u odgovarajući kiseli hlorid tretmanom rastvora 2-cijanosirćetne kiseline (1.388 g, 16.32 mmol) u dihlormetanu (10 mL) koji sadrži nekoliko kapi DMF sa smešom 2 M oksalil hlorida u dihlormetanu (10.83 mL, 21.66 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Smeša je zatim koncentrovana i ostatak podvrgnut vakuumu tokom noći. Ovaj materijal je rastvoren u dihlormetanu (10 mL) i dodat u kapima u rastvor etil 3-aminopikolinata (1.5 g, 9.03 mmol) u dihlormetanu (10 mL) koji sadrži DIPEA (6.31 mL, 36.1 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom vikenda i zatim gašena dodavanjem vode. Dobijena smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom. Vodeni sloj je zatim zakišeljen sa 1N rastvorom HCl do pH~2 nakon čega je formiran talog koji je sakupljen filtracijom da obezbedi hidrohloridnu so jedinjenja iz naslova kao braon obojenu čvrstu supstancu (689 mg, 40.8 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 0.44 min, 188.1 (MH<+>).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.56 (br s, 1H), 8.51 (dd, J=4.9, 1.2 Hz, 1H), 7.96 (dd, J=8.4, 1.1 Hz, 1H), 7.85 (dd, J=8.6, 4.9 Hz, 1H).

INTERMEDIJER 66

1-metil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0296]

[0297] Natrijum hidrid (60%, 278 mg, 6.95 mmol) u mineralnom ulju je dodat u delovima u rastvor 2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (650 mg, 3.47 mmol) u DMF (8 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Jodometan (0.651 mL, 10.42 mmol) je zatim dodat, i mešanje je nastavljeno tokom noći. Reakcija je zatim gašena dodavanjem vode. pH smeše je podešena na ~3 dodavanjem 1N rastvora HCl u kapima. Čvrsta supstanca je odvojena iz smeše i sakupljena filtracijom da obezbedi hidrohloridnu so jedinjenja iz naslova kao čvrst prah (403 mg, 57.7 %).

INTERMEDIJER 67

4-Hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0298]

[0299] U zapečaćenoj epruveti, 1-metil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (250 mg, 1.243 mmol) i fosfor oksihlorid (2 mL, 21.46 mmol) su zagrejani na 95 °C tokom 5 sati. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, ostatak preliven preko ledavode, i zatim neutralizovan dodavanjem čvrstog NaHCO3. Dobijena smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (2 × 20 mL) i organski slojevi su kombinovani, osušeni preko MgSO4, i filtrirani. Filtrati su koncentrovani u vakuumu da daju jedinjenje iz naslova kao braon obojenu čvrstu supstancu (105 mg, 38.5 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.3 min, 220.0 (MH<+>).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.80 (dd, J=4.4, 1.2 Hz, 1H), 7.83 (dd, J=8.8, 1.2 Hz, 1H), 7.72 (dd, J=8.6, 4.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H).

INTERMEDIJER 71

Etil 6-bromo-4-hidroksi-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karboksilat

[0300]

[0301] U rastvor etil 3-amino-6-bromopikolinata (500 mg, 2.040 mmol) i DIPEA (1.069 mL, 6.12 mmol) u dihlormetanu (10 mL), etil 3-hloro-3-oksopropanoat (0.313 mL, 2.448 mmol) je dodat u kapima na 0 °C. Reakciona smeša je zatim zagrejana do sobne temperatura i mešana tokom 1 sata.

Zatim 21 mas% natrijum etoksida (0.914 mL, 2.448 mmol) u etanolu je dodato u kapima i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Reakcija je zatim gašena dodavanjem vode. Reakciona smeša je zakišeljena do pH~4 korišćenjem 1 N rastvora HCl. Čvrst materijal je odvojen iz rastvor i sakupljen je filtracijom da se dobije jedinjenje iz naslova kao braon-obojena čvrsta supstanca (400 mg, 62.6 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 1.5 min, 312.9 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.81 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.45 (d, J=7.1 Hz, 2H), 1.42 (t, J=7.2 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 72

Etil 6-bromo-4-hidroksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karboksilat

[0302]

[0303] U rastvor etil 6-bromo-4-hidroksi-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karboksilata (400 mg, 1.278 mmol) u DMF (5 mL), 60% natrijum hidrid (128 mg, 3.19 mmol) u mineralnom ulju je dodat u delovima. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 min, nakon čega je dodat jodometan (0.200 mL, 3.19 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dodatnog 1 sata. Reakcija je gašena dodavanjem vode. Reakciona smeša je zakišeljena do pH~3 dodavanjem 1 N rastvora HCl do pH-3. Rastvor je ekstrahovan sa etil acetatom (2 × 40 mL) i organski slojevi su kombinovani, osušeni (MgSO4), i koncentrovani u vakuumu da daju narandžasto ulje. Materijal je prečišćen korišćenjem preparativne HPLC reverzne faze korišćenjem CH3OH-H2O-TFA kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane, neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHCO3i koncentrovane pod sniženim pritiskom da se ukloni acetonitril. Dobijena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (2 × 40 mL) i organski slojevi su kombinovani, osušeni (MgSO4) i koncentrovani u vakuumu da daju jedinjenje iz naslova kao žutu čvrstu supstancu (190 mg, 45.5 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati:: 3.1 min, 326.8 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.78 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.60 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.54 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 1.49 (t, J=7.1 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 73

Terc-butil 4-((1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-karboksilat

[0304]

[0305] 1H-indol-4-karbaldehid (1.5 g, 10.33 mmol) je dodat u rastvor terc-butil piperazin-1-karboksilata (2.89 g, 15.50 mmol) u DMF (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, i natrijum cijanoborohidrid (1.948 g, 31.0 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 7 dana. Voda je zatim dodata i odvojeni čvrst materijal je sakupljen filtracijom. Sirov proizvod je frakcionisan korišćenjem fleš hromatografije na silika gelu korišćenjem 35% etil acetata u heksanima kao eluentu. Homogene frakcije su kombinovane i uparene da daju jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (405 mg, 12.43 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18 kolona, 50x2, 3 µm čestice Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.9 min, 316 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.23 (br. s., 1H), 7.35 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.23 (br. s., 1H), 7.18 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.13-7.05 (m, 1H), 6.76 (br. s., 1H), 3.83 (s, 2H), 3.51-3.40 (m, 4H), 2.53-2.40 (m, 4H), 1.48 (s, 9H).

INTERMEDIJER 74

1-Etil-4-(piperazin-1-ilmetil)-1H-indol bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0306]

[0307] Natrijum hidrid (0.061 g, 1.522 mmol, 60 % u mineralnom ulju) je dodat u delovima u rastvor terc-butil 4-((1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-karboksilata (0.4 g, 1.268 mmol) u DMF (5 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je zatim zagrejana do sobne temperatura i mešana tokom 30 min. Etil jodid (0.205 mL, 2.54 mmol) je zatim dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min pre nego što je gašena dodavanjem vode. Dobijena smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (2 × 40 mL). Ekstrakti su kombinovani, osušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani u vakuumu da daju narandžasto obojeno ulje. Materijal je frakcionisan korišćenjem preparativne HPLC korišćenjem acetonitril-voda-TFA kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju tamno braon gusto ulje. Ovaj materijal je rastvoren u dihlormetanu (3 mL) i TFA (1 mL) je dodat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Zatim je koncentrova pod vakuumom da se dobije tamno ljubičasto ulje. Ovaj materijal je frakcionisan preparativnom HPLC reverzne faze korišćenjem acetonitril-voda-TFA kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i koncentrovane u vakuumu u jedinjenje iz naslova kao viskozno, ljubičasto obojeno ulje (373 mg, 62.4 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 1.9 min, 244 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.60 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.35-7.15 (m, 2H), 6.74 (d, J=2.7 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 4.29 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.68-3.43 (m, 8H), 1.45 (t, J=7.2 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 75

2-(fenil(piperazin-1-il)metil)fenol

[0309] U bocu sa okruglim dnom, fenilborna kiselina (1.309 g, 10.74 mmol), salicilaldehid (1.311 g, 10.74 mmol) i terc-butil piperazin-1-karboksilat (2 g, 10.74 mmol) su rstvoreni u DMF (12 mL). Reakciona smeša je zagrejana na 120 °C u uljanom kupatilu tokom vikenda. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom i oprana uzastopno sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli. Organski sloj je zatim osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan u vakuumu do žutog viskoznog ulja. Ovo ulje je podvrgnuto fleš hromatografiji korišćenjem silika gela i 20% etil acetata u heksanima kao eluentu. Homogene frakcije su kombinovane i koncentrovane pod vakuumom da daju zaštićeni derivat kao žuto ulje. Ovaj materijal je rastvoren u dihlormetanu (10 mL) i TFA (5 mL) je dodat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 dana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u etil acetatu. Ova smeša je oprana sa zasićenim rastvorom NaHCO3i organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i uparen do suva vakuumom. Dobijeni ostatak je triturisan sa 25% etil acetatom u heksanima, i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da se dobije jedinjenje iz naslova kao prljavo beli prah 0.506 g, 17.56 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.5 min, 267.3 (M-H-).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.55-7.43 (m, 2H), 7.36-7.27 (m, 3H), 7.27-7.20 (m, 1H), 7.08 (td, J=7.7, 1.5 Hz, 1H), 6.86-6.66 (m, 2H), 4.85 (s, 1H), 3.28 (t, J=5.3 Hz, 4H), 2.84-2.61 (m, 4H).

INTERMEDIJER 78

Terc-butil 4-((2-hidroksinaftalen-1-il)metil)piperazin-1-karboksilat

[0310]

[0311] 2-Hidroksi-1-naftaldehid (600 mg, 3.48 mmol) je dodat u rastvor terc-butil piperazin-1-karboksilata (779 mg, 4.18 mmol) u DMF (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (657 mg, 10.45 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 dana. Reakcija je gašena dodavanjem vode. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (2 × 40 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani u vakuumu da daju narandžasto ulje. Ovaj materijal je frakcionisan korišćenjem preparativne HPLC reverzne faze korišćenjem acetonitril-voda-TFA kao eluenta. Homogene frakcije su sakupljene, neutralizovane sa zasićenim rastvorom NaHCO3i zatim koncentrovane pod sniženim pritiskom da se ukloni acetonitril. Bež čvrsta supstanca je odvojena i sakupljena filtracijom, koja je sušenjem dala jedinjenje iz naslova kao prah (498 mg, 41.7 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18 kolona, 50x2, 3 µm čestice Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda. 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 3.6 min, 343.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.96 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.82-7.62 (m, 2H), 7.45 (td, J=7.7, 1.2 Hz, 1H), 7.29 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.06 (d, J=9.0 Hz, 1H), 4.17 (s, 2H), 3.60-3.43 (m, 4H), 2.63 (t, J=5.0 Hz, 4H), 1.48 (s, 9H).

INTERMEDIJER 79

1-(Piperazin-1-ilmetil)naftalen-2-ol bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0312]

[0313] TFA (2 mL, 26.0 mmol) je dodat u rastvor terc-butil 4-((2-hidroksinaftalen-1-il)metil)piperazin-1-karboksilata (494 mg, 1.443 mmol) u dihlormetanu (3 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći, i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije jedinjenje iz naslova kao ljubičasto obojena čvrsta supstanca (670 mg, 99 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.1 min, 243.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.03 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.91 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.85 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.64-7.54 (m, 1H), 7.39 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.23 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.84 (s, 2H), 3.67-3.56 (m, 4H), 3.55-3.45 (m, 4H).

INTERMEDIJER 80

1-(2-(4-fluorofenil)propan-2-il)-4-tozilpiperazin

[0314]

[0315] Smeša 2-(4-fluorofenil)propan-2-amin hidrohlorida (0.5 g, 2.64 mmol), N,N-bis(2-hloroetil)-4-metilbenzensulfonamida (0.820 g, 2.77 mmol) i DIPEA (1.381 mL, 7.91 mmol) je zagrejana pod mikrotalasnim zračenjem na 125 °C tokom 20 h. Voda je dodata i smeša ekstrahovana korišćenjem dihlorometana (2 × 30 mL). Organski slojevi su kombinovani, osušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da daju žuto ulje. Ulje je triturisano sa 25% etil acetatom u heksanima i prljavo bela čvrsta supstanca je odvojena koja je sakupljena filtracijom da se dobije jedinjenje iz naslova (505 mg, 50.9 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 3.7 min, 377.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.61 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.47 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.40 (dd, J=8.6, 5.9 Hz, 2H), 7.07 (t, J=8.8 Hz, 2H), 2.83 (br s, 4H), 2.44 (s, 7H), 1.25 (s, 6H).

INTERMEDIJER 81

1-(2-(4-fluorofenil)propan-2-il)piperazin

[0316]

[0317] Rastvor hidrogen bromida (6 mL, 33.1 mmol, 33 mas%) u sirćetnoj kiselini je dodat u smešu 1-(2-(4-fluorofenil)propan-2-il)-4-tozilpiperazina (495 mg, 1.315 mmol) i 4-hidroksibenzoeve kiseline (545 mg, 3.94 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom vikenda. Voda je zatim polako dodata i dobijena smeša je mešana tokom 2 h. Formirani beli talog je sakupljen filtracijom. Talog je opran uzastopno sa hladnom vodom i zatim toluenom. Vodeni filtrat i ispiranja su zatim ohlađeni u ledenom kupatilu i dovedeni u baznost sa NaOH granulama do pH>10. Ova smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (2 × 20 mL) i kombinovani ekstrakti su oprani sa koncentrovanim rastvorom soli, osušeni (MgSO4), filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da daju jedinjenje iz naslova kao prljavo belu čvrstu supstancu (195 mg, 66.7 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 1.8 min, 223.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.51 (dd, J=8.6, 5.6 Hz, 2H), 6.99 (t, J=8.7 Hz, 2H), 2.96-2.73 (m, 4H), 2.52-2.36 (m, 4H), 1.34 (s, 6H).

INTERMEDIJER 82

1-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)-4-tozilpiperazin

[0318]

[0319] Intermedijer 82 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom koja je korišćena da se sintetiše 1-(2-(4-fluorofenil)propan-2-il)piperazin ali korišćenjem 1-(4-fluorofenil) ciklopropan-1-amin hidrohlorida (0.5 g, 2.66 mmol). Jedinjenje iz naslova je sintetisano kao svetlo žuto obojena čvrsta supstanca (651 mg, 65.2 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 3.6 min, 375.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.61 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.31 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.20 (dd, J=8.4, 5.5 Hz, 2H), 7.01 (t, J=8.6 Hz, 2H), 3.15-2.78 (m, 4H), 2.58 (br m, 4H), 2.44 (s, 3H), 0.90-0.72 (m, 4H).

INTERMEDIJER 83

1-(1-(4-fluorofenil)ciklopropil)piperazin

[0320]

[0321] Intermedijer 83 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom koja je korišćena da se sintetiše 1-(2-(4-fluorofenil)propan-2-il)piperazin ali korišćenjem 1-(1-(4-fluorofenil) ciklopropil)-4-tozilpiperazina (600 mg, 1.602 mmol) da se dobije kao braon obojena čvrsta supstanca (235 mg, 66.6 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 1.8 min, 221.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.34 (br s, 2H), 7.06 (br d, J=2.0 Hz, 2H), 3.01-2.13 (m, 8H), 1.20-0.37 (m, 4H).

INTERMEDIJER 84

1-(1-(4-fluorofenil)-2-metilpropil)piperazin bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0322]

[0323] Titanijum (IV) hlorid (1.0 N u dihlormetanu) (1.956 mL, 1.956 mmol) je dodat u rastvor 1-(4-fluorofenil)-2-metilpropan-1-ona (250 mg, 1.504 mmol) u THF (4 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 0.5 h. Terc-butil piperazin-1-karboksilat (336 mg, 1.805 mmol) u THF (4 mL) je dodat. Reakciona smeša je promenila boju iz zelene u žutu. Reakciona smeša je mešana tokom 1 h i zatim je dodat natrijum cijanoborohidrid (123 mg, 1.956 mmol) i mešanje je nastavljeno tokom dodatna 3 dana. Sirćetna kiselina je dodata da prekine reakciju. Etil acetat je dodat da razblaži smešu. Dobijeni rastvor je opran sa koncentrovanim rastvorom soli i organski sloj je odvojen, osušen (MgSO4), filtriran i uparen pod sniženim pritiskom da se dobije viskozno žuto ulje. Sirov proizvod je rastvoren u dihlormetanu (4 mL) i TFA (2 mL) je dodat. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom noći pre nego što je koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom. Ostatak je frakcionisan korišćenjem preparativne HPLC reverzne faze korišćenjem acetonitril-voda-TFA kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da daju jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (103 mg, 14.74 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.3 min, 237.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.28 (dd, J=8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.19-7.01 (m, 2H), 3.33-3.17 (m, 5H), 2.78-2.60 (br m, 4H), 2.36 (dt, J=9.5, 6.6 Hz, 1H), 1.07 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.76 (d, J=6.6 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 85

1-(ciklobutil(4-fluorofenil)metil)piperazin bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0324]

[0325] Intermedijer 85 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom tokom sintetisanja 1-(2-(4-fluorofenil)propan-2-il)piperazina ali korišćenjem ciklobutil(4-fluorofenil) metanona (300 mg, 1.683 mmol). Jedinjenje iz naslova je sintetisano kao belo obojena čvrsta supstanca (40.2 mg, 5.01 % prinos). Analitička LC/MS uslovi: Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.3 min, 249.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.48 (dd, J=8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.20 (t, J=8.6 Hz, 2H), 4.22 (d, J=10.5 Hz, 1H), 3.54-3.43 (m, 4H), 3.41-3.28 (m, 2H), 3.27-3.11 (m, 3H), 2.55-2.29 (m, 1H), 2.16 (quin, J=9.8 Hz, 1H), 2.06-1.88 (m, 1H), 1.86-1.72 (m, 1H), 1.71-1.61 (m, 1H), 1.60-1.46 (m, 1H).

INTERMEDIJER 86

Terc-butil 4-(3-cijano-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat

[0326]

[0327] Intermedijer 86 je pripremljen opštim postupcima opisanim za intermedijere 55 i 61. LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača = Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C18 2.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT= 1.170 min. (M+H)<+>= 384.05

INTERMEDIJER 87

1,6-Dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril 2,2,2-trifluoroacetat

[0328]

[0329] Terc-butil 4-(3-cijano-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il) piperazin-1-karboksilat (26 mg, 0.068 mmol) je rastvoren u DCM (1 mL) i trifluorosirćetna kiselina (1.045 mL, 13.56 mmol) je dodata. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom oko1 h. Rastvarač i kiselina u višku su uklonjeni pod vakuumom da se dobije proizvod kao ulje. LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača = Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C182.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT= 0.799 min. (M+H)<+>= 284.05 (Free base).

INTERMEDIJER 88

Terc-butil (1R,5S)-3-(6-hloro-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat

[0331] (1R,SS)-Terc-butil 3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (137 mg, 0.645 mmol) je dodat u rastvor 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (164 mg, 0.645 mmol) i trietilamina (0.270 mL, 1.936 mmol) u DMF (2 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Sirova smeša reakcije je adsorbovana na silika gelu i podvrgnuta fleš hromatografiji korišćenjem EtOAc kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i uparene u vakuumu da daju proizvod kao žutu čvrstu supstancu (200 mg). LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača= Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C182.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT= 1.260 min. (M-tBu+H)<+>= 373.95.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.84 (d, J=9.0 Hz, 1H), 4.25 (br. s., 2H), 4.12 (s, 2H), 3.61-3.47 (m, 4H), 2.22 (d, J=7.6 Hz, 2H), 1.88-1.80 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).

INTERMEDIJER 89

4-((1R,5S)-3,8-Diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril 2,2,2-trifluoroacetat

[0332]

[0333] Trifluorosirćetna kiselina (0.717 mL, 9.30 mmol) je razblažena sa DCM (0.8 mL) i dobijena smeša je dodata u bocu koja sadrži (1R,5S)-terc-butil 3-(6-hloro-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-karboksilat (200 mg, 0.465 mmol). Žuti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 min, nakon čega je uparen pod vakuumom da se dobije jedinjenje iz naslova kao braon obojeno ulje. LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača= Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C182.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT = 0.756 min, (M H)<+>= 331.00.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.14 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.23 (br d, J=11.2 Hz, 4H), 3.84 (br d, J=13.0 Hz, 2H), 3.57 (s, 3H), 2.42 (br d, J=7.8 Hz, 2H), 1.84-2.03 (m, 2H).

INTERMEDIJER 90

Cikloheksil(fenil)metanol

[0334]

[0335] Natrijum borohidrid (0.201 g, 5.31 mmol) je dodat u rastvor cikloheksil (fenil)metanona (1 g, 5.31 mmol) u etanolu (20 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Reakciona smeša je uparena pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u DCM i opran uzastopno sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli. Organski sloj je zatim osušen preko MgSO4, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom da se dobije proizvod kao bezbojno ulje (1.01 g). LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača= Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C18 2.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT = 1.255 min. Masa nije primećena kao MWt < 200.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.34-7.17 (m, 5H), 5.01 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.23 (dd, J=6.4, 4.6 Hz, 1H), 1.89-0.85 (m, 11H).

INTERMEDIJER 91

Bromo(cikloheksil)metil)benzen

[0336]

[0337] U smešu pentabromofosforana (3.43 g, 7.96 mmol) u 20 mL DCM je dodat polako rastvor cikloheksil(fenil)metanola (1.01 g, 5.31 mmol) u 10 mL DCM na sobnoj temperaturi. Nakon 1 h, reakciona smeša je oprana sa vodom (1 × 30 mL), 10% rastvorom NaHSO3(1 × 25 mL) i vodom (1 × 30 mL). Materijal je osušen preko MgSO4, filtriran, i uparen pod sniženim pritiskom da se dobije proizvod kao bezbojno ulje (1.32g). LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača= Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C18 2.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT = 1.609 min. Masa nije primećena u korišćenim uslovima jonizacije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.52-7.18 (m, 5H), 5.03 (d, J=9.3 Hz, 1H), 2.26-0.75 (m, 11H).

INTERMEDIJER 92

Terc-butil 4-(cikloheksil(fenil)metil)piperazin-1-karboksilat

[0338]

[0339] Smeša kalijum karbonata (218 mg, 1.580 mmol), terc-butil piperazin-1-karboksilata (147 mg, 0.790 mmol) i (bromo(cikloheksil)metil)benzena (200 mg, 0.790 mmol) u acetonitrilu (10 mL) je zagrejana do refluksa pod azotom tokom noći. NaI je dodat (~2 mg) i smeša je zagrejana pod refluksom tokom dodatnih 24 hr. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je uparen do suva. Ostatak je rastvoren u 30% EtOAc u heksanima i smeša je filtrirana kroz čep silika gela. Eluirani materijal je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak smešten pod visokim vakuumom tokom 1 h da se dobije jedinjenje iz naslova (223 mg). LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača= Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C18 2.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT = 0.857 min. (M-Boc+AcOH+ACN)<+>= 403.25.

INTERMEDIJER 93

1-(Cikloheksil(fenil)metil)piperazin bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0340]

[0341] Trifluorosirćetna kiselina (0.479 mL, 6.22 mmol) je dodata u rastvor terc-butil 4-(cikloheksil(fenil)metil)piperazin-1-karboksilata (223 mg, 0.622 mmol) u DCM (0.5 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je uparena do suva. LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača= Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C18 2.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT = 0.850 min. (M+H)<+>= 259.1 (slobodna baza).

INTERMEDIJER 94

Terc-butil 4-(2-hidroksibenzil)piperazin-1-karboksilat

[0342]

[0343] Sirćetna kiselina (0.307 mL, 5.37 mmol) je dodata u rastvor terc-butil piperazin-1-karboksilata (1 g, 5.37 mmol) i 2-hidroksibenzaldehida (0.656 g, 5.37 mmol) u DCE preko 4 µm molekularnih sita. Smeša je mešana tokom 1 h na sobnoj temperaturi i natrijum triacetoksiborohidrid (0.993 mL, 5.37 mmol) je dodat. Nakon mešanja reakcione smeše tokom vikenda, reakcija je gašena dodavanjem MeOH (10 mL). Reakciona smeša je mešana tokom 30 min. i filtrirana. Filtrat je koncentrovan u vakuumu. Sirov ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom korišćenjem 5-50% EtOAc u heksanima kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i koncentrovane pod sniženim pritiskom da daju jedinjenje iz naslova kao bledožutoobojeno ulje (684 mg). LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača= Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C18 2.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT = 0.810 min. (M+H)<+>= 293.40.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.11-9.89 (s, 1H), 7.20-7.01 (m, 2H), 6.85-6.69 (m, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.41-3.27 (m, 4H), 2.39 (t, J=4.9 Hz, 4H), 1.48-1.34 (m, 9H).

INTERMEDIJER 95

2-(Piperazin-1-ilmetil)fenol bis(2,2,2-trifluoroacetat)

[0344]

[0345] Trifluorosirćetna kiselina (1.792 mL, 23.26 mmol) je dodata u rastvor terc-butil 4-(2-hidroksibenzil)piperazin-1-karboksilata (680 mg, 2.326 mmol) u DCM (2 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je koncentrovan pod vakuumom da se dobije proizvod kao crveno-obojeno ulje, koje je kristalisalo polako pri stajanju. LCMS. [Zapr ubrizgavanja = 3 µL, Početak %B = 2, Konačni %B =98, Vreme gradijenta = 1.5 min, Brzina protoka = 0.8 mL / min, Talasna dužina = 220 nm, Par rastvarača = Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A = 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B = 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona = Waters Aquity BEH C182.1 × 50 mm 1.7U MW1, Temp pećnice = 40] RT = 0.599 min.

INTERMEDIJER 96

8-hidroksi-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0346]

[0347] U bocu sa okruglim dnom opremljenu sa refluks kondenzatorom, 8-hidroksi-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (1g, 4.97 mmol) je suspendovan u acetonitrilu (25 mL). U ovaj rastvor, POCl3(6.02 mL, 64.6 mmol) je dodat. Reakciona smeša je zagrejana pod atmosferom azota na 85 °C tokom 3.5 sata. U reakciju je dodat led zatim 5 N vodeni natrijum hidroksid i zasićen natrijum bikarbonat dok nije prestalo razvijanje CO2gasa. Vodeni deo je ekstrahovan sa hloroformom. Organski deo je kombinovan i opran uzastopno sa 1.5M K2HPO4i koncentrovanim rastvorom soli. Nakon sušenja organskog dela preko natrijum sulfata, agens za sušenje je odfiltriran iz ekstrakta i rastvarač je uklonjen pod vakuumom korišćenjem rotacionog isparivača. Jedinjenje iz naslova (958 mg, 72% prinos) je izolovano kao žuto zelena čvrsta supstanca. LC/MS analiza je bila u skladu sa željenim proizvodom: Vreme gradijenta = 4 min, Brzina protoka = 0.8 mL/min, Talasna dužina = 220, Par rastvarača = ACN: Voda: Amonijum acetat, Rastvarač A = 5 % ACN: 95% Voda: 10 mM Amonijum acetat, Rastvarač B = 95 % ACN: 5% Voda: 10 mM Amonijum acetat, Kolona Fenomenex LUNA C18, 50x2, 3u, Temp pećnice. = 40. LC/MS rezultati: 1.9 min, 220.0 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 97

Terc-butil 4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat

[0348]

[0349] U dimetilformamidni (20 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (5 g, 16.75 mmol) dodat je terc-butil piperazin-1-karboksilat (3.12 g, 16.75 mmol) i Hunig-ova baza (5.85 mL, 33.5 mmol). Velika količina taloga je formirana odmah. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Talog je sakupljen i opran sa etrom, EtOAC, i DCM da se dobije jedinjenje iz naslova (6.2 g, 83% prinos). LC/MS analiza je korišćena da se odredi identitet i čistoća. Uslovi ubrizgavanja: Kolona: Waters Aquity BEH C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 1.5 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 % B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja: Čistoća: >90 %; Uočena masa: 448.1; Retenciono vreme: 1.4 min.

INTERMEDIJER 98

Terc-butil 4-(3-cijano-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il) piperazin-1 -karboksilat

[0350]

[0351] U zapečaćenu reakcionu bočicu, terc-butil 4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat (500 mg, 1.115 mmol), paladijum(II) acetat (12.52 mg, 0.056 mmol), cezijum karbonat (363 mg, 1.115 mmol) i 5-[di(1-adamantil)fosfino]-1',3',5'-trifenil-1'h-[1,4']bipirazol (73.9 mg, 0.112 mmol) su stavljeni pod vakuumom i zapečaćena je azotom. Metanol (0.2 mL) i acetonitril (4 mL) su dodati i reakcija je zagrejana na 80 °C tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Smeša je razblažena sa etil acetatom, filtrirana, koncentrovana i ostatak je prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije (heksan/etil acetat, 40 g silika kolona, 30 do 100% EtOAc). Jedinjenje iz naslova je izolovano kao žuta čvrsta supstanca (360 mg, 81% prinos). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 400.05; Retenciono vreme: 1.69 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 400.06; Retenciono vreme: 1.72 min.

INTERMEDIJER 99

6-metoksi-1-metil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0352]

[0353] U dihlorometanski (3 mL) rastvor terc-butil 4-(3-cijano-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata (350 mg, 0.876 mmol) dodata je trifluorosirćetna kiselina (0.675 mL, 8.76 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Rastvarač je uklonjen i sirov ostatak je razblažen sa etil acetatom. Ovaj rastvor je opran sa natrijum bikarbonatom i koncentrovanim rastvorom soli, i osušen preko natrijum sulfata da se dobije žuta čvrsta supstanca (250 mg, 90% prinos). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 300.11; Retenciono vreme: 0.95 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Bridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 % B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 94.8 %; Uočena masa: 300.09; Retenciono vreme: 0.81 min.

INTERMEDIJER 100

(4-fluorofenil)(2-metoksipiridin-3-il)metanol

[0354]

[0355] U bocu sa okruglim dnom od 500 mL, 2-metoksinikotinaldehid (2.5 g, 18.23 mmol) je rastvoren u THF (36.5 mL) i ohlađen u ledenom kupatilu. Nakon 5 minuta, (4-fluorofenil)magnezijum bromid u dietil etru (10.94 mL, 21.88 mmol) je dodat preko šprica i reakciona smeša je mešana tokom 50 minuta. Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakciona smeša je mešana tokom 10 minuta. Reakcija je gašena uzastopnim dodavanjem 1 mL zasićenog vodenog amonijum hlorida i 50 mL etil acetata. Čvrste supstance su uklonjene dekantovanjem. Rastvarač je uklonjen rotacionim isparavanjem i sirov ostatak je hromatografiran na silika gelu sa 5-15% metanola u etil acetatu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane. Rastvarač je uklonjen da se dobije (4-fluorofenil)(2-metoksipiridin-3-il)metanol (3 g, 12.22 mmol, 67.0 % prinos) kao žuta čvrsta supstanca. NMR analiza sje pokazala da je ovaj materijal bio > 95% čist.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.12 (d, J=4.9 Hz, 1H), 7.54 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.37 (dd, J=8.3, 5.6 Hz, 2H), 7.05 (t, J=8.6 Hz, 2H), 6.91 (dd, J=7.3, 5.1 Hz, 1H), 5.98 (d, J=4.6 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 2.92 (d, J=4.6 Hz, 1H).

INTERMEDIJER 101

(cijanometil)trimetilfosfonijum jodid

[0356]

[0357] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa postupkom Zaragoza i Stephensen (J. Org. Chem. 2001, 66, 2518-2521). U bocu sa okruglim dnom od 1 L, trimetil fosfan u toluenu (80 mL, 80 mmol) je razblažen sa THF (40 mL) i toluenom (40 mL) i ohlađen u ledenom kupatilu. Reakciona smeša je mešana energično dok je (cijanometil)trimetilfosfonijum jodid dodat u kapima da se proizvede žutobraon talog. Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakcija je mešana tokom noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je stavljena u sonikator da bi se razbile sve zgrudavne čvrste supstance i reakciona smeša je mešana dodatna 4 sata. Čvrste supstance su sakupljene filtracijom i osušene pod vakuumom da se dobije jedinjenje iz naslova (17.1 g, 88%). NMR konzistentan sa čistim željenim proizvodom.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.03 (d, J=16.4 Hz, 2H), 2.05 (d, J=15.4 Hz, 9H).

INTERMEDIJER 102

(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metanol

[0358]

[0359] Intermedijer 102 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom opisanom u intermedijeru 100 iz odgovarajućih početnih materijala.<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ 8.21 (dd, J=4.8, 1.1 Hz, 1H), 7.39-7.32 (m, 2H), 7.25 (dd, J=8.3, 4.8 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=8.2, 1.1 Hz, 1H), 7.01-6.94 (m, 2H), 5.94 (d, J=6.9 Hz, 1H), 5.50 (d, J=7.0 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H).

INTERMEDIJER 103

(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metanol

[0360]

[0361] Intermedijer 103 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom opisanom u intermedijeru 100 iz odgovarajućih početnih materijala.<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ 8.59 (d, J=4.9 Hz, 1H), 7.65 (td, J=7.6, 1.7 Hz, 1H), 7.36 (dd, J=8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.23 (dd, J=7.2, 5.0 Hz, 1H), 7.14 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.04 (t, J=8.7 Hz, 2H), 5.75 (d, J=2.0 Hz, 1H), 5.43-5.14 (m, 1H).

INTERMEDIJER 104

(4-fluoro-2-metoksifenil)(pirimidin-2-il)metanol

[0362]

[0363] Intermedijer 104 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom opisanom u intermedijeru 100 iz odgovarajućih početnih materijala.<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ 8.77 (d, J=4.9 Hz, 2H), 7.24 (t, J=4.9 Hz, 1H), 7.18 (dd, J=8.9, 6.7 Hz, 1H), 6.69-6.61 (m, 2H), 6.15 (d, J=5.4 Hz, 1H), 4.77 (d, J=5.6 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H).

INTERMEDIJER 105

bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metanol

[0364]

[0365] Intermedijer 105 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom opisanom u intermedijeru 100 iz odgovarajućih početnih materijala.<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ 7.17 (dd, J=8.9, 7.0 Hz, 2H), 6.72-6.58 (m, 4H), 6.26 (d, J=3.2 Hz, 1H), 3.83 (s, 6H), 3.26 (br d, J=4.4 Hz, 1H).

INTERMEDIJER 106

terc-butil 4-(3,6-dicijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat

[0366]

[0367] U zapečaćenu reakcionu bočicu, terc-butil 4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilat (150 mg, 0.335 mmol), cink (2.92 mg, 0.045 mmol), cink cijanid (15.72 mg, 0.134 mmol) i 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(ii)dihlorid dihlorometanski kompleks (54.6 mg, 0.067 mmol) su kombinovani. Reakciona smeša je postavljena pod vakuumom i zapečaćena pod azotom. Čvrste supstance su suspendovane u NMP (2 mL) iz nove, neotvorene boce. Reakciona bočica je zagrejana na 80 °C tokom 2.5 sati. LC/MS analiza je pokazala da je reakcija završena. Sirov proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (MeOH/voda) korišćenjem TFA kao pufera da se dobije željeni proizvod kao žuta čvrsta supstanca (95 mg, 67%). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.1 %; Uočena masa: 395.12; Retenciono vreme: 1.66 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.4 %; Uočena masa: 395.15; Retenciono vreme: 1.66 min.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.26 (d, J=8.9 Hz, 1H), 8.16 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.83 (br s, 4H), 3.69-3.36 (m, 3H), 1.44 (s, 9H).

INTERMEDIJER 107

5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[0369] Intermedijer 107 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom opisanom u intermedijeru 99 iz terc-butil 4-(3,6-dicijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-karboksilata. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja: Kolona: Waters Aquity BEH C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 1.5 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja: Čistoća: 91 %; Uočena masa: 294.8, Retenciono vreme: 0.87 min.

INTERMEDIJER 108

(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metanol

[0370]

[0371] Intermedijer 108 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom opisanom u intermedijeru 100 iz odgovarajućih početnih materijala.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.35 (dd, J=8.3, 5.6 Hz, 2H), 7.20 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.03 (t, J=8.7 Hz, 2H), 6.71-6.58 (m, 2H), 6.03 (d, J=4.6 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 2.78 (d, J=4.9 Hz, 1H, OH).

INTERMEDIJER 109

etil 4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1 -karboksilat

[0373] Intermedijer 109 je pripremljen u skladu sa opštom procedurom opisanom u intermedijeru 100 iz odgovarajućih početnih materijala.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.58-7.46 (m, 1H), 7.36 (dd, J=8.3, 5.6 Hz, 2H), 6.96 (t, J=8.6 Hz, 2H), 6.67 (td, J=8.3, 2.2 Hz, 1H), 6.56 (dd, J=10.8, 2.2 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.19-4.08 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.47 (br t, J=4.6 Hz, 4H), 2.46-2.24 (m, 4H), 1.26 (t, J=7.1 Hz, 3H).

INTERMEDIJERS 110 i 111

1-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin

[0374]

[0375] U bocu sa okruglim dnom od 500 mL, etil 4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-karboksilat (3.6 g, 9.22 mmol) je kombinovan sa vodom (23.05 mL) i metanolom (69.2 mL). Zatim, kalijum hidroksid (7.76 g, 138 mmol) je dodat. Reakciona smeša je zagrejana na refluksu i praćena je LC\MS analizom. Nakon 7 dana na refluksu reakcija je izgledala završena. Reakciona smeša je ekstrahovana 5 × 30 mL sa dietil etrom. Kombinovani organski delovi su koncentrovani, ponovo rastvoreni u dietil etru i osušeni preko magnezijum sulfata. Uklanjanje rastvarača dalo je 2.9 g bledo žutog ulja koje je osušeno pod visokim vakuumom tokom noći. LC\MS i NMR analiza su bile u skladu sa željenim racemskim proizvodom. Četiri dodatna vodonika bila su prisutna u alifatskom regionu H NMR.<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ 7.54 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.36 (dd, J=8.2, 5.6 Hz, 2H), 6.95 (t, J=8.5 Hz, 2H), 6.66 (td, J=8.3, 2.3 Hz, 1H), 6.55 (dd, J=10.9, 2.4 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 3.79 (d, J=1.1 Hz, 3H), 2.90 (t, J=4.8 Hz, 4H), 2.50-2.25 (m, 4H), 1.68 (br s, 3H). Enantiomeri su razdvojeni hiralnom hromatografijom pod sledećim uslovima: Kolona: Chiralpak AD-H, 30 × 250mm, 5 µm, Mobilna faza: 10% MeOH w/0.2% DEA / 90% CO2, Pritisak: 150 bar, Temperatura: 30 °C, Brzina protoka: 100 mL/min, UV: 275 nm, Ubrizgavanje: 0.5 mL (~75 mg/mL in EtOH:CHCl3(-9:1)), Sakupljanje frakcija: nagib i nivo bez dopunjavanja protoka, Enantiomer prvog eluiranja: 4.00' - 6.00', Enantiomer drugog eluiranja: 5.30' - 10.00'.

[0376] Intermedijer 110 (1.1g, 75% prinos) je izolovan enantiomer prvog eluiranja. Intermedijer 111 (1.1g, 75% prinos) je izolovan kao enantiomer drugog eluiranja.

PRIMER 1

Etil 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karboksilat

[0377]

[0378] 1,1,1 -Trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometil)sulfonil metansulfonamid (82 mg, 0.229 mmol) je dodat u rastvor etil 6-bromo-4-hidroksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karboksilata (25 mg, 0.076 mmol) i DIPEA (0.053 mL, 0.306 mmol) u THF (3 mL). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom noći. 1-(Bis(4-fluorofenil)metil)piperazin (22.04 mg, 0.076 mmol) i DIPEA (0.053 mL, 0.306 mmol) su dodati i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Reakciona smeša je zatim koncentrovana u vakuumu, i sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne HPLC korišćenjem smeše acetonitril-voda-amonijum acetat kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i uparene pod vakuumom da daju jedinjenje iz naslova (4.4 mg, 9.2% prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LC/MS rezultati: 2.6 min, 597.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.79 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=8.3, 5.7 Hz, 4H), 7.14 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.51 (s, 1H), 4.27 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.52 (s, 3H), 3.42 (br s, 4H), 2.51 (br s, 4H), 1.28 (t, J=7.0 Hz, 3H).

PRIMER 2

6-Bromo-4-(4-(2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0379]

[0380] 2-Hidroksibenzaldehid (7.95 mg, 0.065 mmol) je dodat u rastvor 6-bromo-1-metil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril bis(2,2,2-trifluoroacetata (25 mg, 0.043 mmol) u DMF (1.5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Natrijum cijanoborohidrid (8.18 mg, 0.130 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dodatnih 2 h. Metanol je dodat i dobijena smeša je filtrirana i zatim frakcionisana korišćenjem preparativne LC/MS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 60-100% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Homogene frakcije su kombinovane i uparene pod centrifugalnim isparavanjem u jedinjenje iz naslova (9.3 mg, 44.8% prinos). Analitička LC/MS uslovi: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LC/MS rezultati: 1.9 min, 454.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.00-7.94 (m, 1H), 7.93-7.88 (m, 1H), 7.19 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 7.13 (br t, J=7.5 Hz, 1H), 6.89-6.66 (m, 2H), 3.88 (br s, 4H), 3.70 (br s, 2H), 3.52 (s, 3H), 2.71 (br s, 4H).

PRIMER 3

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0381]

[0382] U bocu sa okruglim dnom, 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (400 mg, 0.838 mmol) i kalijum karbonat (463 mg, 3.35 mmol) su kombinovani u DMF (4189 µl). Jodometan (119 mg, 0.838 mmol) je dodat i reakciona smeša je zagrejana na 50 °C tokom noći. Reakciona smeša je ohlađena i razblažena sa vodom. Žute čvrste supstance (0.26 g, 63%) su sakupljene filtracijom i osušene pod visokim vakuumom.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (dd, J=4.4, 1.2 Hz, 1H), 8.04 (dd, J=8.8, 1.2 Hz, 1H), 7.72 (dd, J=8.7, 4.3 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=8.6, 5.6 Hz, 4H), 7.15 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.51 (s, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.49 (br. s., 4H).<13>C NMR (101MHz, hloroform-d) δ 163.2, 160.7, 155.8, 148.3, 143.2, 137.9, 137.8, 136.3, 134.6, 132.3, 129.3, 129.2, 125.8, 122.4, 115.7, 115.5, 74.5, 51.9, 50.9, 29.3. Analitička LC/MS uslovi: kolona: Fenomenex Luna C18, 2.0 × 50 mm, 3.0 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 metanol:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: 0-100% B tokom 4 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 3.2 minuta, 492 (M+H).

PRIMERI 5 DO 7

6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)[2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil]metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0383]

[0384] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (25 mg, 0.084 mmol) dodat je kalijum karbonat (23.15 mg, 0.167 mmol) i 1-((4-fluorofenil)(2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil)metil) piperazin, 2 TFA (55.1 mg, 0.126 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 35-100% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; retenciono vreme: 1.7; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 585.97. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; retenciono vreme: 2.4; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 585.99. Jedinjenje iz naslova (29.2 mg) je izolovana u prinosu od 59.3%. Racemsko jedinjenje je prečišćeno korišćenjem SFC-hiralne hromatografija.

[0385] Primer 6 (izomer prvog eluiranja) i Primer 7 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća.

[0386] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0387] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0388] Primer 6: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 585.99; Retenciono vreme: 2.32 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 585.94; Retenciono vreme: 1.66 minuta. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; retenciono vreme: 2.32; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 585.99. Primer 6 (7.4 mg) je izolovana u prinosu od 15%.

[0389] Primer 7: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 585.97; Retenciono vreme: 2.32 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 585.96; Retenciono vreme: 1.66 minuta. Primer 7 (7.3 mg) je izolovana u prinosu od 14.8%.

PRIMERI 8 TO 10

6-bromo-4- {4- [(4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil] piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0391] U DMF rastvor (1 mL) 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (50 mg, 0.167 mmol) dodati su kalijum karbonat (93 mg, 0.670 mmol) i 2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil)fenol, 2 TFA (86 mg, 0.167 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 60-100% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 548.05; Retenciono vreme: 2.24 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 % B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 548.05; Retenciono vreme: 1.47 Racemsko jedin jenje iz naslova (25.8 mg) je izolovano u prinosu od 28%. racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0392] Primer 9 (izomer prvog eluiranja) i Primer 10 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća.

[0393] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0394] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0395] Primer 9: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %;Uočena masa: 548.11; Retenciono vreme: 1.78 min. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 94.5 %; Uočena masa: 548.08; Retenciono vreme: 2.66 min. Primer 9 (11.1 mg) je izolovana sa 94% čistoće.

[0396] Primer 10: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 548.08; Retenciono vreme: 1.78 min. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 548.08; Retenciono vreme: 2.66 min. Primer 10 (11.8 mg) je izolovana sa 100% čistoće.

PRIMER 11

8-{4-[(4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il} -5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[0397]

[0398] DMF rastvor (1 mL) 5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitrila, TFA (20 mg, 0.049 mmol), (4-fluorofenil)boronske kiseline (6.85 mg, 0.049 mmol), i 2-hidroksibenzaldehida (5.98 mg, 0.049 mmol) je zapečaćen u mikrotalasnoj epruveti i zagrejan na 150 °C tokom 2 sata. LC/MS analiza je ukazala da je nešto proizvoda formirano, ali je ostao početni materijal (5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril, TFA). Još 2-hidroksibenzaldehida (5.98 mg, 0.049 mmol) i (4-fluorofenil)borne kiseline (6.85 mg, 0.049 mmol) je dodato i reakciona smeša je zagrejana na 150 °C tokom 2 sata. LC/MS analiza je ukazala da je približno 20% konvertovano u željeni proizvod. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 38-78% B tokom 22 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 495.14; Retenciono vreme: 1.41 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.6 %; Uočena masa: 495.14; Retenciono vreme: 2.06 minuta. Jedinjenje iz naslova (1.5 mg) je izolovano u prinosu od 6.2%.

PRIMERI 12 DO 14

6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0399]

[0400] U DMF rastvor (1.5 mL) 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (50 mg, 0.167 mmol) je dodata Hunig-ova baza (0.15 mL, 0.84 mmol) zatim je dodat 1-((4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil) piperazin, 2 TFA (89 mg, 0.167 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 562.12; Retenciono vreme: 2.46 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 562.12; Retenciono vreme: 1.59 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (50.4 mg) je izolovano u prinosu od 53.7%. racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0401] Primer 13 (izomer prvog eluiranja) i Primer 14 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća.

[0402] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0403] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0404] Primer 13: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 561.99; Retenciono vreme: 2.4 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 562; Retenciono vreme: 1.55 minuta. Primer 13 (15.2 mg) je izolovan u prinosu od 16.2%.

[0405] Primer 14: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 562; Retenciono vreme: 2.4 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.1 %; Uočena masa: 562; Retenciono vreme: 1.55 minuta. Primer 14 (15.3 mg) je izolovan u prinosu od 16.3%.

PRIMERI 15 DO 17

6-bromo-4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0406]

[0407] U DMF (1.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (50 mg, 0.167 mmol) je dodat kalijum karbonat (93 mg, 0.670 mmol) zatim je dodat 1-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin, 2 TFA (92 mg, 0.167 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Talog je formiran. DMF (2 mL) je dodat zatim etil acetat i oprano je sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.6 %; Uočena masa: 580.12; Retenciono vreme: 2.49 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 580.05; Retenciono vreme: 1.7 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (22.7 mg) je izolovano u prinosu od 23.4%. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0408] Primer 16 (izomer prvog eluiranja) i Primer 17 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0409] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0410] Primer 16: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 580.07; Retenciono vreme: 2.49 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.4 %; Uočena masa: 580.09; Retenciono vreme: 1.66 minuta. Primer 16 (7.5 mg) je izolovan u prinosu od 7.7%.

[0411] Primer 17: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 580.1; Retenciono vreme: 2.49 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 580.1; Retenciono vreme: 1.66 minuta. Primer 17 (7.4 mg) je izolovan u prinosu od 7.6%.

PRIMERI 18 DO 20

8-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0412]

[0413] U DMF (1 mL) rastvor 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (30 mg, 0.113 mmol) je dodata Hunig-ova baza (0.099 mL, 0.567 mmol) zatim je dodat 1-((4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil) piperazin, 2 TFA (59.9 mg, 0.113 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 47-87% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 529.17; Retenciono vreme: 2.38 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 529.15; Retenciono vreme: 1.62 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (42.4 mg) je izolovano u prinosu od 70%. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0414] Primer 19 (izomer prvog eluiranja) i Primer 20 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća.

[0415] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0416] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0417] Primer 19: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 529.16; Retenciono vreme: 2.38 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.4 %; Uočena masa: 529.18; Retenciono vreme: 1.62 minuta. Primer 19 (9 mg) je izolovan u prinosu od 29%.

[0418] Primer 20: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 529.17; Retenciono vreme: 2.38 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 529.15; Retenciono vreme: 1.62 minuta. Primer 20 (9.9 mg) je izolovan u prinosu od 33%.

PRIMER 21

6-bromo-4-[4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il]-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0419]

[0420] U DMF (1.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (50 mg, 0.167 mmol) je dodat kalijum karbonat (93 mg, 0.670 mmol) zatim je dodat 1-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin 2 TFA (77 mg, 0.167 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 40-80% B tokom 22 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutuu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.0 %; Uočena masa: 494.06; Retenciono vreme: 1.35 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.9 %; Uočena masa: 494.08; Retenciono vreme: 2.09 minuta. Jedinjenje iz naslova (19.7 mg) je izolovana u prinosu od 59.5%.

PRIMERI 22-24

6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)etil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0421]

[0422] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (20 mg, 0.067 mmol) i 1-(1-(4-fluorofenil)etil) piperazina (27.9 mg, 0.134 mmol) je dodata Hunig-ova baza (0.035 mL, 0.201 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 42-82% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 470.05; Retenciono vreme: 2.11 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 470.05; Retenciono vreme: 1.3 minuta. Jedinjenje iz naslova (19.8 mg) je izolovano u prinosu od 62.8%. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0423] Primer 23 (izomer prvog eluiranja) i Primer 24 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća.

[0424] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0425] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0426] Primer 23: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 470.06; Retenciono vreme: 2.11 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 470.05; Retenciono vreme: 1.26 minuta. Primer 23 (6.2 mg) je izolovan u prinosu od 19.7%.

[0427] Primer 24: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 470.03; Retenciono vreme: 2.11 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.5 %; Uočena masa: 470.04; Retenciono vreme: 1.26 minuta. Primer 24 (6.3 mg) je izolovan u prinosu od 20%.

PRIMERI 25 DO 27

6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0428]

[0429] U DMF (0.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15 mg, 0.050 mmol) dodati su Hunig-ova baza (0.026 mL, 0.151 mmol) i 1-(1-(4-fluorofenil)propil)piperazin (22.34 mg, 0.100 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 41-81% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 484.1; Retenciono vreme: 1.4 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 484.06; Retenciono vreme: 2.26 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (20.4 mg) je izolovano u prinosu od 84.2%. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0430] Primer 26 (izomer prvog eluiranja) i Primer 27 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća.

[0431] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0432] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0433] Primer 26: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 96.7 %; Uočena masa: 483.96; Retenciono vreme: 1.53 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 483.97; Retenciono vreme: 2.19 minuta. Primer 26 (7.6 mg) je izolovan u prinosu od 31.4%.

[0434] Primer 27: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.3 %; Uočena masa: 483.96; Retenciono vreme: 1.34 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.7 %; Uočena masa: 483.97; Retenciono vreme: 2.19 minuta. Primer 27 (7.4 mg) je izolovan u prinosu od 30.6%.

PRIMERI 28 DO 30

6-bromo-4-{4-[2-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0435]

[0436] U DMF (0.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15 mg, 0.050 mmol) dodati su Hunig-ova baza (0.026 mL, 0.151 mmol) i smeša 1-(4-fluorofenil)-2-(piperazin-1-il)etan-1-ola, TFA i 2-(4-fluorofenil)-2-(piperazin-1-il)etanola TFA(34.0 mg, 0.100 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 25-70% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 6-minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže sekundarni izomer alkohola su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.9%; retenciono vreme: 1.16; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 485.91. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; retenciono vreme: 1.61; Uoč. adukti:

[M+H]; Uoč. mase: 485.93. Racemsko jedinjenje iz naslova (15.4 mg) je izolovano u prinosu od 62%. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri. Izomer 6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril je takođe izolovan.

[0437] Primer 29 (izomer prvog eluiranja) i Primer 30 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća.

[0438] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0439] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0440] Primer 29: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.3 %; Uočena masa: 486.06; Retenciono vreme: 1.65 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.0 %; Uočena masa: 486.05; Retenciono vreme: 1.21 minuta. Primer 29 (6.2 mg) je izolovan u prinosu od 25.5%.

[0441] Primer 30: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.2 %; Uočena masa: 486.06; Retenciono vreme: 1.65 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.9 %; Uočena masa: 486.03; Retenciono vreme: 1.21 minuta. Primer 30 (5.3 mg) je izolovan u prinosu od 21.8%.

PRIMER 31

6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0442]

[0443] Frakcije koje sadrže primarni izomer alkohola su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 94.2%; retenciono vreme: 1.2; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 485.93. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 95.2%; retenciono vreme: 1.72; Uoč. adukti: [M+H]; Uoč. mase: 485.95. Jedinjenje iz naslova (3.5 mg) je izolovano u prinosu od 14.4%.

PRIMERI 32 DO 34

8-{4-[1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0444]

[0445] U DMF (1 mL) rastvor 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.076 mmol) je dodat 1-(1-(4-fluorofenil) propil)piperazin (18.48 mg, 0.083 mmol)) zatim Hunig-ova baza (0.040 mL, 0.227 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 40-80% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 451.14; Retenciono vreme: 1.33 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 451.15; Retenciono vreme: 2.17 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (27.3 mg) je izolovano u prinosu od 79.7%. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0446] Primer 33 (izomer prvog eluiranja) i Primer 34 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0447] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0448] Primer 33: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.9 %; Uočena masa: 451.11; Retenciono vreme: 1.33 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 451.15; Retenciono vreme: 2.17 minuta. Primer 33 (7.7 mg) je izolovan u prinosu od 22.5%.

[0449] Primer 34: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 451.13; Retenciono vreme: 1.33 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 451.14; Retenciono vreme: 2.17 minuta. Primer 34 (8.4 mg) je izolovan u prinosu od 24.5%.

PRIMER 35

6-bromo-4-{4-[ciklopropil(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0450]

[0451] U DMF (1 mL) rastvor 1-(ciklopropil(4-fluorofenil)metil)piperazin, TFA (23.34 mg, 0.067 mmol) i 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (20 mg, 0.067 mmol) je dodata Hunig-ova baza (0.012 mL, 0.067 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 43-83% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 496.13; Retenciono vreme: 2.25 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 496.07; Retenciono vreme: 1.39 minuta. Jedinjenje iz naslova (5.1 mg) je izolovano u prinosu od 15.3%.

PRIMER 36

8- {4-[2-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil] piperazin-1-il } -5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0452]

[0453] Etanolna (2 mL) smeša 5-metil-7-nitro-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.064 mmol) i 2-(4-fluorofenil) oksirana (26.4 mg, 0.191 mmol) je zagrejana na refluksu tokom noći. DMF (2 mL) je dodata i reakciona smeša je zagrejana u mikrotalasnoj pećnici na 110 °C tokom 45 minuta. LC/MS analiza je ukazala na približno 50% konverzije. Reakciona smeša je zagrejana na 120 °C u mikrotalasnoj pećnici tokom 1 h. LC/MS analiza je ukazala da je približno 80% željenog proizvoda formirano. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 20-80% B tokom 22 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 453.11; Retenciono vreme: 1.2 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.6 %; Uočena masa: 453.13; Retenciono vreme: 1.74 minuta. Jedinjenje iz naslova (3.2 mg) je izolovano u prinosu od 11.1%.

PRIMER 37

8-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0454]

[0455] Drugi izomer je izolovan pri sintezi 8-{4-[2-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila i prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 20-80% B tokom 22 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 96.8 %; Uočena masa: 453.16; Retenciono vreme: 1.16 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 453.1; Retenciono vreme: 1.61 minuta. Jedinjenje iz naslova (1.2 mg) je izolovano u prinosu od 4.1%.

PRIMER 38

1-metil-4-{4-[(naftalen-1-il)metil]piperazin-1-il} -3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on

[0456]

[0457] U DMF (1 mL) rastvor 4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (20 mg, 0.048 mmol) dodat je natrijum hidrid (2.311 mg, 0.096 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta. Jodometan (6.02 µl, 0.096 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 35-75% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 430.0; Retenciono vreme: 2.5 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 94.7 %; Uočena masa: 430.0; Retenciono vreme: 1.5 minuta. Jedinjenje iz naslova (5.4 mg) je izolovano u prinosu od 26.2%.

PRIMER 39

6-hloro-4-{4-[(4-fluorofenil)[2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil]metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0458]

[0459] U DMF (1 mL) rastvor 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (32 mg, 0.126 mmol) je dodat DIPEA (0.066 mL, 0.378 mmol) zatim 1-((4fluorofenil)(2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil)metil) piperazin, TFA (60.7 mg, 0.139 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata i LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 50-90% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 542.05; Retenciono vreme: 1.54 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 542.05; Retenciono vreme: 2.32 minuta. Jedinjenje iz naslova (33.8 mg) je izolovano u prinosu od 49.5%.

PRIMER 40

8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0460]

[0461] DMF je barbotiran azotom tokom 1sata. U bočicu od 1 drama je dodat cink (0.95 mg, 0.015 mmol), bromo(tri-terc-butilfosfin)paladijum(I) dimer (9.96 mg, 0.013 mmol) i 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (21.38 mg, 0.037 mmol). Barbotiran DMF (0.3 mL) je dodat i smeša je zatvorena pod azotom i uronjena u uljano kupatilo sa 50 °C tokom 15 minuta. Dicijanocink (2.86 mg, 0.024 mmol) je dodat. Reakciona smeša je zatvorena pod azotom i uronjena u uljano kupatilo sa 50 °C tokom 3 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 50-90% B tokom 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Jedinjenje iz naslova (11.4 mg) je izolovano u prinosu od 59.7%.

[0462] Alternativne sinteze: DMF (6 mL) rastvor 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (750 mg, 2.83 mmol) je kombinovan sa 1-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazinom (899 mg, 3.12 mmol)) zatim je dodata Hunig-ova baza (0.990 mL, 5.67 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je filtriran i prečišćen preparativnom HPLC koja je koristila vodeni acetonitril sa amonijum acetatom kao puferom da se dobije 1.02 g žute čvrste supstance. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 517.0; Retenciono vreme: 2.4 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.4 %; Uočena masa: 517.0; Retenciono vreme: 1.7 minuta.<1>H NMR (500 MHz, hloroform-d) δ 7.88 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.40 (dd, J=8.5, 5.5 Hz, 4H), 7.02 (t, J=8.7 Hz, 4H), 4.34 (s, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.62-3.55 (m, 4H), 2.64 (br s, 4H).<13>C NMR (126 MHz, hloroform-d) δ 163.0, 161.0, 155.4, 147.0, 138.0, 137.7, 137.7, 135.9, 132.4, 129.5, 129.2, 129.2, 126.0, 123.1, 116.5, 115.8, 115.6, 74.3, 51.6, 51.2, 29.7.

PRIMER 41

8-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0463]

[0464] DMF je barbotiran azotom tokom 1 sata. U bočicu od 1 drama, cink (1.2 mg, 0.018 mmol), bromo(tri-terc-butilfosfin)paladijum(i) dimer (16 mg, 0.021 mmol), i 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (22.82 mg, 0.043 mmol) su dodati. Barbotiran DMF (0.3 mL) je dodat i smeša je zatvorena pod azotom. Bočica je uronjena u uljano kupatilo od 50 °C tokom 15 minuta. Dicijanocink (3.7 mg, 0.032 mmol) je dodat. Bočica je zapečaćena pod azotom i uronjena u uljano kupatilo od 50 °C tokom 3 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 481.0; Retenciono vreme: 2.4 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 481.0; Retenciono vreme: 1.6 minuta. Jedinjenje iz naslova (13 mg) je izolovano u prinosu od 62.9%.

PRIMER 42

8-(4-((2-hidroksifenil)(fenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0465]

[0466] DMF je barbotiran sa azotom tokom 1 sata. U bočicu od 1 drama, cink (0.95 mg, 0.015 mmol), bromo(tri-terc-butilfosfin)paladijum(I) dimer (9.96 mg, 0.013 mmol), i 6-bromo-4-(4-((2-hidroksifenil)(fenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (22.02 mg, 0.040 mmol) su kombinovani. DMF (0.3 mL) je dodat. Bočica je zatvorena pod azotom i uronjena u uljano kupatilo od 50 °C tokom 15 minuta. Dicijanocink (2.86 mg, 0.024 mmol) je dodat. Bočica je zapečaćena pod azotom i uronjena u uljano kupatilo od 50 °C tokom 3 sata. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 40-90% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100% B; Protok: 1.0 mL/minutu; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 95.4 %; Uočena masa: 550.0; Retenciono vreme: 2.3 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 96.0 %; Uočena masa: 550.0; Retenciono vreme: 1.6 minuta. Jedinjenje iz naslova (5 mg) je izolovano u prinosu od 25.2%.

PRIMERI 43 TO 45

8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0467]

[0468] U DMF (1 mL) rastvor 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.060 mmol) i 1-(1-feniletil)piperazina (50.6 mg, 0.121 mmol) je dodata Hunig-ova baza (0.032 mL, 0.181 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 37-77% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 437.11; Retenciono vreme: 2.05 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 437.11; Retenciono vreme: 1.23 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (18 mg) je izolovano u prinosu od 68.7%. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0469] Primer 44 (izomer prvog eluiranja) i Primer 45 (izomer drugog eluiranja) su izolovani iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća.

[0470] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0471] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0472] Primer 44: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.5 %; Uočena masa: 437.14; Retenciono vreme: 1.24 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.4 %; Uočena masa: 437.11; Retenciono vreme: 2.06 minuta. Primer 44 (6.7 mg) je izolovan u prinosu od 25.6%.

[0473] Primer 45: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.5 %; Uočena masa: 437.14; Retenciono vreme: 1.24 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.4 %; Uočena masa: 437.11; Retenciono vreme: 2.06 minuta. Primer 45 (7.2 mg) je izolovan u prinosu od 27.5%.

PRIMER 46

8-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0474]

[0475] U DMF (1 mL) rastvor 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.060 mmol) i 1-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazina (55.7 mg, 0.121 mmol) je dodata Hunig-ova baza (0.032 mL, 0.181 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom noći. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 41-81% B tokom 20 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.3 %; Uočena masa: 461.15; Retenciono vreme: 2.03 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 461.15; Retenciono vreme: 1.29 minuta. Jedinjenje iz naslova (16.1 mg) je izolovano u prinosu od 58.3%.

PRIMER 47

8-(4-(2-hidroksi-1-feniletil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0476]

[0477] U etanolnu (2 mL) smešu 5-metil-7-nitro-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.064 mmol) je dodat 2-feniloksiran (15.29 mg, 0.127 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na refluksu tokom noći. LC/MS analiza je ukazala na odsustvo željenog proizvoda. DMF (2 mL) je dodat i reakciona smeša je zagrejana u mikrotalasnoj pećnici na 100 °C tokom 30 minuta. LC/MS analiza je ukazala na približno 50% konverzije. Reakciona smeša je zagrejana na 120 °C tokom 45 minuta. LC/MS analiza je ukazala da je reakcija završena. Sirov materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 2575% B tokom 25 minuta, zatim zadržavanje od 4 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/minutu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim isparavanjem. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 435.14; Retenciono vreme: 1.68 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 435.16; Retenciono vreme: 1.16 minuta. Jedinjenje iz naslova (7.1 mg) je izolovano u prinosu od 25.5%.

PRIMER 48

8-(4-(2-hidroksi-2-feniletil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0478]

[0479] Drugi izomer je izolovan iz sinteze 8-[4-(2-hidroksi-2-feniletil)piperazin-1-il]-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi konačna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 435.12; Retenciono vreme: 1.56 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/minutu; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 435.12; Retenciono vreme: 1.13 minuta. Jedinjenje iz naslova (2.2 mg) je izolovano u prinosu od 8% prinosu.

PRIMERI 49 DO 51

8-(4-(ciklopropil(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0480]

[0481] U DMF (1 mL) rastvor 1-(ciklopropil(4-fluorofenil)metil)piperazina, TFA (26.3 mg, 0.076 mmol) i 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.076 mmol) dodata je Hunigova baza (0.013 mL, 0.076 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza pokazala je da je reakcija završena. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 41-81% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanja 100% B; Protok: 20 mL/minuta. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Materijal je dalje prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 32-72% B tokom 25 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 463.12; Retenciono vreme: 1.35 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minut zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 463.12; Retenciono vreme: 2.18 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (13.7 mg) je izolovano u 39% prinosa. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0482] Primer 50 (prvi eluirajući izomer) i Primer 51 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0483] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0484] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0485] Primer 50: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 463.03; Retenciono vreme: 1.35 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 463.03; Retenciono vreme: 2.15 minuta. Primer 50 (6.7 mg) je izolovan u 19.1% prinosu.

[0486] Primer 51: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 463.02; Retenciono vreme: 1.35 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 463.02; Retenciono vreme: 2.16 minuta. Primer 51 (6.5 mg) je izolovan u 18.5% prinosu.

PRIMER 52

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0487]

[0488] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (20 mg, 0.063 mmol) dodati su DIPEA (0.033 mL, 0.188 mmol) i 1-benzhidrilpiperazin (15.85 mg, 0.063 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 35 °C preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Čist žuti rastvor je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 534.0; Retenciono vreme: 2.6 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 83.0 %; Uočena masa: 534.0; Retenciono vreme: 1.6 minuta. Jedinjenje iz naslova (9.8 mg) je izolovano u 29.1% prinosu.

PRIMER 53

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0489]

[0490] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (20 mg, 0.063 mmol) dodati su DIPEA (0.033 mL, 0.188 mmol) i 1-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin (18.11 mg, 0.063 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 35 °C preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Čist žuti rastvor je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 55-95% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 570.0; Retenciono vreme: 2.6 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 570.0; Retenciono vreme: 1.8 minuta. Jedinjenje iz naslova (16.4 mg) je izolovano u 45.6% prinosu.

PRIMER 54

6-bromo-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0491]

[0492] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (20 mg, 0.063 mmol) dodati su DIPEA (0.033 mL, 0.188 mmol) i 1-etil-4-(piperazin-1-ilmetil)-1H-indol, 2 TFA (29.6 mg, 0.063 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 35 °C preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Čist žuti rastvor je prečišćen korišćenjem reverzne faze HPLC za prečišćavanje. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 524.9; Retenciono vreme: 2.3 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.1 %; Uočena masa: 524.9; Retenciono vreme: 1.5 minuta. Jedinjenje iz naslova (14.9 mg) je izolovan u 45% prinosu.

PRIMER 55

6-bromo-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0493]

[0494] U DMF (1 mL) rastvoru 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (20 mg, 0.063 mmol) dodat je 1-(naftalen-1-ilmetil) piperazin (17.05 mg, 0.075 mmol), što je praćeno dodavanjem DIPEA (0.033 mL, 0.188 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 35 °C preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 55-95% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 508.0; Retenciono vreme: 2.5 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100 %; Uočena masa: 508.0; Retenciono vreme: 1.5 minuta. Jedinjenje iz naslova (18.3 mg) je izolovan u 57.1% prinosu.

PRIMERI 56 DO 58

6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0495]

[0496] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (50 mg, 0.157 mmol) dodati su 1-((4-fluoro-2-metoksifenil) (4-fluorofenil)metil)piperazin, TFA (102 mg, 0.235 mmol) i DIPEA (0.082 mL, 0.471 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 35 °C preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 18-58% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.0%; Retenciono vreme: 2.57; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 599.97. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 95.5%; Retenciono vreme: 1.69; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 600. Racemsko jedinjenje iz naslova (52.5 mg) je izolovano u 55.7% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0497] Primer 57 (prvi eluirajući izomer) i Primer 58 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0498] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0499] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0500] Primer 57: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.71; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 599.95. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.76; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 599.98. Primer 57 (13.2 mg) je izolovan u 14% prinosu.

[0501] Primer 58: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.71; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 599.96. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.1%; Retenciono vreme: 1.75; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 599.98. Primer 58 (13.7 mg) je izolovan u 14.5% prinosu.

PRIMERI 59 DO 61

6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-metoksi-6-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0502]

[0503] U DMF (2 mL) rastvor 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-6-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (30 mg, 0.052 mmol) dodat je cezijum karbonat (50.3 mg, 0.155 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta i metil jodid (9.66 µl, 0.155 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna.

Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 55-95% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.67; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 595.95. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.73; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 595.96. Racemsko jedinjenje iz naslova (17.1 mg) je izolovano u 55.1% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0504] Primer 60 (prvi eluirajući izomer) i Primer 61 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0505] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0506] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0507] Primer 60: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.65; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 595.97. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.67; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 595.96. Primer 60 (5.4 mg) je izolovan u 17.4% prinosu.

[0508] Primer 61: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.65; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 595.96. Primer 61 (5.1 mg) je izolovan u 16.4% prinosu.

PRIMER 62

terc-butil (8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-il)karbamat

[0509]

[0510] Smeša tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma(0) (9.38 mg, 10.24 µmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksantena (17.77 mg, 0.031 mmol), terc-butil karbamata (39.0 mg, 0.333 mmol), cezijum karbonata (125 mg, 0.384 mmol) i 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (146 mg, 0.256 mmol) stavljena je pod argon. Dioksan (2560 µl) i H2O (5.53 µl, 0.307 mmol) su dodati. Reakciona smeša je zatvorena pod argonom i zagrevana na 100 °C preko noći. LC/MS označila je da je reakcija kompletna. Rastvarač je uklonjen. Ostatak je prečišćen pomoću Biotage<™>MPLC sistema sa 1:1 heksanima: etil acetat; 24 g silika kolona). Frakcije su sakupljene da bi se dobilo 160 mg svetlo žutog filma u skladu sa jedinjenjem iz naslova. Uzorak od 10 mg je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 60-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.7%; Retenciono vreme: 2.55; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 607.03. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.0%; Retenciono vreme: 1.79; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 607.04. Jedinjenje iz naslova (3.2 mg) je izolovano u 32% prinosu.

PRIMER 63

6-amino-4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0511]

[0512] Dihlorometanski (3 mL) rastvor terc-butil (8-(4-(bis(4-fluorofenil) metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-il) karbamata (150 mg, 0.247 mmol) je kombinovan sa TFA (0.5 mL, 6.49 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS označila je da je reakcija kompletna. Rastvarač je uklonjen da se dobije žuta čvrsta supstanca. Uzorak od 6 mg je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 35-75% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.8%; Retenciono vreme: 2.16; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 507.1. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.7; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 507.08. Jedinjenje iz naslova (3.4 mg) je izolovano u 55.9% prinosu.

PRIMER 64

6-bromo-4-(4-(2-(difluorometil)benzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0513]

[0514] Polimerni N,N,N-trimetil-1-(p-tolil)metanamonijum cijanoborohidrid(4.1 mmol/g) (35 mg, 0.144 mmol) je dodat 2-(difluorometil)benzaldehidu (16.05 mg, 0.103 mmol). Smeša 6-bromo-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila, TFA (25 mg, 0.051 mmol) u dihlorometanu (2 mL) i sirćetne kiseline (0.250 mL) je dodata. Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 18 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 512.04; Retenciono vreme: 2.39 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 512.05; Retenciono vreme: 1.68 minuta. Jedinjenje iz naslova (16.6 mg) je izolovano u 63.5% prinosu.

PRIMER 65

6-bromo-4-(4-(2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0515]

[0516] Dihlorometan (2 mL) rastvor 2-hidroksibenzaldehida (22.60 mg, 0.185 mmol), 6-bromo-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila, TFA (60 mg, 0.123 mmol) i natrijum cijanoborohidrida (15.51 mg, 0.247 mmol) je mešan mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza je pokazala približno 30% konverzije. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 38-78% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridgeC18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 477.99; Retenciono vreme: 1.97 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 477.98; Retenciono vreme: 1.18 minuta. Jedinjenje iz naslova (16.7 mg) je izolovano u 28.4% prinosu.

PRIMER 66

6-bromo-4-(4-(2-hidroksi-4-metilbenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0517]

[0518] DMF (2 mL) rastvor 2-hidroksi-4-metilbenzaldehida (7.56 mg, 0.056 mmol) i 6-bromo-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila, TFA (18 mg, 0.037 mmol) je promešan mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (4.65 mg, 0.074 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 47-87% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 492.02; Retenciono vreme: 2.19 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 492.05; Retenciono vreme: 1.33 minuta. Jedinjenje iz naslova (8 mg) je izolovano u 43.9% prinosu.

PRIMER 67

6-bromo-4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0519]

[0520] DMF (2 mL) rastvor 4-fluoro-2-hidroksibenzaldehida (7.78 mg, 0.056 mmol) i 6-bromo-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila, TFA (18 mg, 0.037 mmol) je promešan mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (4.65 mg, 0.074 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 42-82% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 496.05; Retenciono vreme: 1.28 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 496.04; Retenciono vreme: 2.11 minuta. Jedinjenje iz naslova (9.8 mg) je izolovano u 53.4% prinosu.

PRIMER 68

6-bromo-4-(4-(4-fluoro-2-metoksibenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0521]

[0522] DMF (2 mL) rastvor 4-fluoro-2-metoksibenzaldehida (8.56 mg, 0.056 mmol) i 6-bromo-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila, TFA (18 mg, 0.037 mmol) je promešan mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (4.65 mg, 0.074 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 42-82% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 510.09; Retenciono vreme: 2.11 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 510.07; Retenciono vreme: 1.41 minuta. Jedinjenje iz naslova (4.9 mg) je izolovano u 25.9% prinosu.

PRIMER 69

6-bromo-4-(4-(2-hidroksi-4,6-dimetilbenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0523]

[0524] DMF (2 mL) rastvor 2-hidroksi-4,6-dimetilbenzaldehida (11.58 mg, 0.077 mmol) i 6-bromo-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila, TFA (25 mg, 0.051 mmol) je promešan mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (6.46 mg, 0.103 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 35-83% B tokom 20 minuta, zatim 6-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 506.04; Retenciono vreme: 2.27 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 506.08; Retenciono vreme: 1.46 minuta. Jedinjenje iz naslova (9.9 mg) je izolovan u 38.3% prinosu.

PRIMER 70

6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0525]

[0526] Bočica za mikrotalasnu je napunjena sa (4-fluorofenil)boronskom kiselinom (13.99 mg, 0.100 mmol), salicilaldehidom (12.21 mg, 0.100 mmol) i 6-bromo-1-metil-3-nitro-4-(piperazin-1-il)-1,5-naftiridin-2(1H)-onom (36.8 mg, 0.1 mmol). Reakciona bočica je zatvorena i podvrgnuta mikrotalasnom zračenju na 150 °C tokom 2 sata u Biotage<™>Initiator mikrotalasnoj pećnici. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.0%; Retenciono vreme: 1.59; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 567.99. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.42; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 568.02. Jedinjenje iz naslova (3 mg) je izolovano u 5.3% prinosu.

PRIMER 71

6-bromo-4-(4-((2-fluoro-4-metilfenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0527]

[0528] Bočica za mikrotalasnu je napunjena sa (2-fluoro-4-metilfenil)boronskom kiselinom (15.39 mg, 0.100 mmol), salicilaldehidom (12.21 mg, 0.100 mmol) i 6-bromo-1-metil-3-nitro-4-(piperazin-1-il)-1,5-naftiridin-2(1H)-onom (36.8 mg, 0.1 mmol). Reakciona bočica je zatvorena i podvrgnuta mikrotalasnom zračenju na 150 °C tokom 2 h u Biotage<™>Initiator mikrotalasnoj pećnici. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.69, 1.72; Uoč. Adukti: [M+H], Uoč. Mase: 582, 582. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.1%; Retenciono vreme: 2.51, 2.56; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 582. Jedinjenje iz naslova (2.1 mg) je izolovano u 3.6% prinosu.

PRIMER 72

6-bromo-4-(4-((2,4-dimetilfenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0529]

[0530] Primer 72 je pripremljen u skladu sa opštim postupkom za sintezu 6-bromo-4-{ 4-[(2-fluoro-4-metilfenil)(2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il} -1-metil-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-ona. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.59; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 577.98. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.3%; Retenciono vreme: 1.72; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 577.99. Jedinjenje iz naslova (2.1 mg) je izolovano u 3.6% prinosu.

PRIMER 73

6-bromo-4-(4-((2-hidroksifenil)(o-tolil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0531]

[0532] Primer 73 je pripremljen u skladu sa opštim postupkom za sintezu 6-bromo-4-{ 4-[(2-fluoro-4-metilfenil)(2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il} -1-metil-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-ona. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.48; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 564.01. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 95.2%; Retenciono vreme: 1.59; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 564.01. Jedinjenje iz naslova (6.2 mg) je izolovano u 15% prinosu.

PRIMERI 74 DO 76

6-bromo-4-(4-((3-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0533]

[0534] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (50 mg, 0.157 mmol) dodati su 2-fluoro-6-((4-fluorofenil) (piperazin-1-il)metil)fenol, TFA (99 mg, 0.235 mmol) i DIPEA (0.082 mL, 0.471 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 35 °C preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 92.2%; Retenciono vreme: 1.73; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 585.98. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.42; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 585.95. Jedinjenje iz naslova (60.7 mg) je izolovano u 65.9% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0535] Primer 75 (prvi eluirajući izomer) i Primer 76 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0536] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0537] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0538] Primer 75: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.31; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 585.97. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.7; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 585.98. Primer 75 (21 mg) je izolovan u 22.8% prinosu.

[0539] Primer 76: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.31; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 585.97. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.67, 1.7; Uoč. Adukti: [M+H],[M+H]; Uoč. Mase: 585.98, 585.98. Primer 76 (21.8 mg) je izolovan u 23.7% prinosu.

PRIMERI 77 DO 79

6-bromo-4-(4-((2-hidroksifenil)(fenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0540]

[0541] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (50 mg, 0.157 mmol) dodati su 2-(fenil(piperazin-1-il) metil)fenol, TFA (90 mg, 0.235 mmol) i DIPEA (0.082 mL, 0.471 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 35 °C preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-95% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati (acetonitril TFA)-2:Čistoća: 96.3%; Retenciono vreme: 1.65; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 550. LC/MS rezultati (acetonitril amonijum acetat)-2:Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.34; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 550. Racemsko jedinjenje iz naslova (27 mg) je izolovano u 31% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0542] Primer 78 (prvi eluirajući izomer) i Primer 79 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0543] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0544] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0545] Primer 78: LC/MS rezultati (acetonitril TFA)-2: Čistoća: 96.3%; Retenciono vreme: 1.65; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 550) LC/MS rezultati (acetonitril amonijum acetat)-2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.34; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 550. Primer 78 (11.4 mg) je izolovan u 13.2% prinosu.

[0546] Primer 79: LC/MS rezultati (acetonitril TFA)-2:Čistoća: 95.4%; Retenciono vreme: 1.63; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 550.04) LC/MS rezultati (acetonitril amonijum acetat)-2:Čistoća: 96.2%; Retenciono vreme: 2.35; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 550.01. Primer 79 (11.3 mg) je izolovan u 13.1% prinosu.

PRIMERI 80 DO 82

6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0547]

[0548] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (50 mg, 0.157 mmol) dodati su 5-fluoro-2-((4-fluorofenil) (piperazin-1-il)metil)fenol, TFA (99 mg, 0.235 mmol) i DIPEA (0.082 mL, 0.471 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 35 °C preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 93.2%; Retenciono vreme: 2.43; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 585.96. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 91.7%; Retenciono vreme: 1.7; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 585.95. Racemsko jedinjenje iz naslova (17 mg) je izolovano u 19% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0549] Primer 81 (prvi eluirajući izomer) i Primer 82 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0550] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0551] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0552] Primer 81: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 93.2%; Retenciono vreme: 2.43; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 585.96. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 91.7%; Retenciono vreme: 1.7; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 585.95. Primer 81 (7.2 mg) je izolovan u 7.8% prinosu.

[0553] Primer 82: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 90.8%; Retenciono vreme: 2.43; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 585.92. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 95.9%; Retenciono vreme: 1.7; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 585.9. Primer 82 (5.3 mg) je izolovan u 5.8% prinosu.

PRIMERI 83 DO 85

6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-3-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0554]

[0555] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (50 mg, 0.157 mmol) je dodat 2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil)-6-metilfenol (70.7 mg, 0.235 mmol), što je praćeno dodavanjem DIPEA (0.027 mL, 0.157 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 96.0%; Retenciono vreme: 1.85; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 582. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.8%; Retenciono vreme: 2.53, 2.6; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 581.98. Racemsko jedinjenje iz naslova (15.7 mg) je izolovano u 17.2% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0556] Primer 84 (prvi eluirajući izomer) i Primer 85 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0557] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0558] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0559] Primer 84: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.53; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 581.96. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.84; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 581.97. Primer 84 (5.1 mg) je izolovan u 5.6% prinosu.

[0560] Primer 85: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.53; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 581.95. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.0%; Retenciono vreme: 1.83; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 581.97. Primer 85 (5.3 mg) je izolovan u 5.8% prinosu.

PRIMER 86

6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-5-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0561]

[0562] U DMF (1.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (50 mg, 0.157 mmol) je dodat 2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil)-4-metilfenol (70.7 mg, 0.235 mmol) što je praćeno dodavanjem DIPEA (0.082 mL, 0.471 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 70 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 2.0-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 0.75 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters CSH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 70 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 2.0-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 0.75 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.5; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 582.08. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.4%; Retenciono vreme: 1.82; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 581.86. Jedinjenje iz naslova (5.3 mg) je izolovan u 5.8% prinosu.

PRIMER 87

6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-6-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0563]

[0564] U DMF (2 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (100 mg, 0.314 mmol) je dodat 2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil)-3-metilfenol (141 mg, 0.471 mmol), što je praćeno dodavanjem DIPEA (0.165 mL, 0.942 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je razblažen sa etil acetatom, opran sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli, i osušen tokom magnezijum sulfata. Ostatak je prečišćen pomoću Biotage<™>MPLC sistema sa 1:1 heksani: etil acetat; 40 g silika kolona. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane da se dobije željeni žuti proizvod. Jedinjenje iz naslova (100 mg) je izolovano u 54.7% prinosu. Otprilike trećina žute čvrste supstance je prečišćena pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 30-70% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.4; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 582. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.2%; Retenciono vreme: 1.7; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 581.94. Jedinjenje iz naslova (33.4 mg) je izolovano.

PRIMERI 88 DO 90

5-((2-((4-(6-bromo-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)(4-fluorofenil)metil)-3-metilfenoksi)metil)nikotinonitril

[0565]

[0566] U DMF (2 mL) rastvor 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-6-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (30 mg, 0.052 mmol) dodat je cezijum karbonat (50.3 mg, 0.155 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi za 20 minuta. 5-(Hlorometil)nikotinonitril (23.58 mg, 0.155 mmol) je dodat i reakciona smeša je zagrevana na 75 °C tokom 3 sata. LC/MS analiza ukazala je na približno 40% konverzije. Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 75 °C preko noći. LC/MS analiza ukazala je na približno 75% konverzije. Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 75 °C za dodatnih 24 sata. LC/MS analiza ukazala je da je reakcija skoro kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 18-58% B tokom 28 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati (acetonitril TFA)-3:Čistoća: 98.7%; Retenciono vreme: 1.72; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 697.92) LC/MS rezultati (acetonitril amonijum acetat)-3:Čistoća: 96.6%; Retenciono vreme: 2.49; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 697.9. Racemsko jedinjenje iz naslova (21.7 mg) je izolovano u 59.7% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0567] Primer 89 (prvi eluirajući izomer) i Primer 90 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0568] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0569] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0570] Primer 89: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.3%; Retenciono vreme: 2.51; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 697.93. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.0%; Retenciono vreme: 1.68; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 697.93. Primer 89 (5.4 mg) je izolovan u 14.9% prinosu.

[0571] Primer 90: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.2%; Retenciono vreme: 2.51; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 697.9. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.69; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 697.92. Primer 90 (5.9 mg) je izolovan u 16.2% prinosu.

PRIMERI 91 DO 93

5-((2-((4-(6-bromo-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)(4-fluorofenil)metil)-5-fluorofenoksi)metil)nikotinonitril

[0572]

[0573] U DMF (1.6 mL) rastvor 6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (20 mg, 0.034 mmol) dodat je cezijum karbonat (33.3 mg, 0.102 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi za 20 minuta. 5-(Hlorometil)nikotinonitril (15.61 mg, 0.102 mmol) je dodat i reakciona smeša je zagrevana na 75 °C preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: Waters CSH C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 15-55% B tokom 25 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati (acetonitril TFA)-2:Čistoća: 99.0%; Retenciono vreme: 1.74; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 701.88; LC/MS rezultati (acetonitril amonijum acetat)-2: Čistoća: 98.8%; Retenciono vreme: 2.4; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 701.91. Racemsko jedinjenje iz naslova (5.2 mg) je izolovano u 21.8% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0574] Primer 92 (prvi eluirajući izomer) i Primer 93 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0575] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0576] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0577] Primer 92: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.4; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 701.91. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.7; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 701.81. Primer 92 (1.4 mg) je izolovan u 5.9% prinosu.

[0578] Primer 93: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.4; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 701.92. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.7; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 701.94. Primer 93 (1.5 mg) je izolovan u 6.3% prinosu.

PRIMERI 94 DO 96

4-(4-((2-(aliloksi)-6-metilfenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0579]

[0580] U DMF (1.6 mL) rastvor 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-6-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (20 mg, 0.034 mmol) dodat je cezijum karbonat (33.6 mg, 0.103 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi za 20 minuta. Alil bromid (8.91 µL, 0.103 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na 60 °C preko noći. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Materijal je dalje prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 7-47% B tokom 25 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.59; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 621.9. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.4; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 621.92. Racemsko jedinjenje iz naslova (16.9 mg) je izolovano u 79.9% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0581] Primer 95 (prvi eluirajući izomer) i Primer 96 (drugi eluirajući izomer) izolovani su iz racemata korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0582] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0583] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0584] Primer 95: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.8%; Retenciono vreme: 2.77; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 621.94. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.83; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 621.96. Primer 95 (5.3 mg) je izolovan u 25% prinosu.

[0585] Primer 96: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.4%; Retenciono vreme: 2.77; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 621.94. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.83; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 621.93. Primer 96 (5.3 mg) je izolovan u 25% prinosu.

PRIMERI 97 DO 99

8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0587] U DMF (3 mL) rastvor 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (300 mg, 1.134 mmol) je dodat 2-((4-fluorofenil) (piperazin-1-il)metil)fenol (390 mg, 1.360 mmol) što je praćeno dodavanjem kalijum karbonata (313 mg, 2.267 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je razblažen sa etil acetatom, opran sa koncentrovanim rastvorom soli, i osušen preko magnezijum sulfata. Ostatak je prečišćen pomoću Biotage<™>MPLC sistema sa gradijentom od 1:1 heksani: etil acetat do 100% etil acetata; 24 g silika kolona. Frakcije su sakupljene da bi se dobio željeni proizvod kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Ovaj materijal je dalje prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 43-83% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.17; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 514.99. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.1%; Retenciono vreme: 1.51; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 515.01. Racemsko jedinjenje iz naslova (220 mg) je izolovano u 37.7% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0588] 30 mg dela racemskog materijala je dalje prečišćeno korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 98 (prvi eluirajući izomer) i Primer 99 (drugi eluirajući izomer). Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću.

[0589] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm.

[0590] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/minut; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.55; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 515.03.

[0591] Primer 98: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.2; Uoč. Adukti:

[M+H]; Uoč. Mase: 515.03. Primer 98 (3.3 mg) je izolovan u 11% prinosu.

[0592] Primer 99: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 2.17; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 515.01. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.5; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 515.01. Primer 99 (4.2 mg) je izolovan u 14% prinosu.

PRIMER 100

8-(4-((4-fluorofenil)(2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0593]

[0594] U DMF (1 mL) rastvor 8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil) piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (40 mg, 0.078 mmol) je dodat kalijum karbonat (32.2 mg, 0.233 mmol) što je praćeno dodavanjem propargil bromida (80 mas% u toluenu) (0.026 mL, 0.233 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 75 °C tokom vikenda. LC/MS analiza ukazala je da približno 40 % početnog materijala je pretvoreno u željeni proizvod. Dodatni propargil bromid (80 mas% u toluenu) (0.026 mL, 0.233 mmol) je dodat, zajedno sa dodavanjem cezijum karbonata (38.0 mg, 0.117 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na 75 °C preko noći. LC/MS analiza ukazala je da početni materijal je kompletno potrošen. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 40-85% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.08; Retenciono vreme: 1.61 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.07; Retenciono vreme: 2.41 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (13.5 mg) je izolovano sa prinosom od 31.3%. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

PRIMER 101

8-(4-((4-fluorofenil)(2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (prvi eluirajući izomer)

[0595]

[0596] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.08; Retenciono vreme: 1.66 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.12; Retenciono vreme: 2.33 minuta. Jedinjenje iz naslova (4 mg) je izolovano u 9.3% prinosu.

PRIMER 102

8-(4-((4-fluorofenil)(2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (drugi eluirajući izomer)

[0597]

[0598] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 40-85% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.07; Retenciono vreme: 2.33 minuta. Jedinjenje iz naslova (3.7 mg) je izolovano u 8.6% prinosu.

PRIMER 103

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0599]

[0600] U DMF (1 mL) rastvor 4-hloro-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (20 mg, 0.080 mmol) je dodata Hunigova baza (0.014 mL, 0.080 mmol) što je praćeno dodavanjem 1-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazina (23.10 mg, 0.080 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.0 %; Uočena masa: 502.09; Retenciono vreme: 1.5 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 502.09; Retenciono vreme: 2.25 minuta. Jedinjenje iz naslova (3.4 mg) je izolovano u 8.5% prinosu.

PRIMER 104

4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0601]

[0602] U DMF (1 mL) rastvor 4-hloro-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (20 mg, 0.080 mmol) je dodata Hunigova baza (0.014 mL, 0.080 mmol) što je praćeno dodavanjem 2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil) fenola, 2 TFA (41.2 mg, 0.080 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 17-57% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 500.09; Retenciono vreme: 2.1 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 500.09; Retenciono vreme: 1.4 minuta. Jedinjenje iz naslova (2.2 mg) je izolovan u 5.5% prinosu.

PRIMERI 105 DO 107

6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1, 2-dihidro-1, 5 -naftiridin-3-karbonitril

[0603]

[0604] DMF (1 mL) rastvor 2-hidroksibenzaldehida (15.07 mg, 0.123 mmol), 6-bromo-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin- 3-karbonitrila, TFA (60 mg, 0.123 mmol) i (4-fluorofenil)boronske kiseline (17.27 mg, 0.123 mmol) je zagrevan u mikrotalasnoj na 150 °C tokom 2 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 18 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.3 %; Uočena masa: 572.05; Retenciono vreme: 1.85 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.4 %; Uočena masa: 572.1; Retenciono vreme: 2.75 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (15.3 mg) je izolovano u 21.7% prinosu. Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobiju izomeri.

[0605] Racemski materijal iz primera 105 je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 106 (prvi eluirajući izomer) i Primer 107 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0606] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0607] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0608] Primer 106: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 572.1; Retenciono vreme: 1.91 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 572.08; Retenciono vreme: 2.72 minuta. Primer 106 (6.8 mg) je izolovan u 9.7% prinosu.

[0609] Primer 107: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 572.06; Retenciono vreme: 1.91 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 572.09; Retenciono vreme: 2.72 minuta. Primer 107 (7.4 mg) je izolovan u 10.5% prinosu.

PRIMER 113

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0611] U rastvor trietilamina (0.017 mL, 0.123 mmol), 1-metilpiperidina (0.015 mL, 0.123 mmol), i 6-bromo-4-hidroksi-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (20 mg, 0.062 mmol) u acetonitrilu (1 mL) je dodat 4-metilbenzen-1-sulfonil hlorid (23.53 mg, 0.123 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta.1-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin (35.6 mg, 0.123 mmol) je zatim dodat. Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza je pokazala da je početni materijal sav potrošen. Željeni proizvod je detektovan kao mali pik i prečišćen korišćenjem reverzne faze HPLC za prečišćavanje. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Materijal je dalje prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 25-65% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 594.09; Retenciono vreme: 1.78 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 594.1; Retenciono vreme: 2.56 minuta. Jedinjenje iz naslova (1.8 mg) je izolovan u 4.9% prinosu.

PRIMERI 114 DO 116

6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil) (4-fluorofenil)metil)piperazin-1 -il)-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0612]

[0613] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (20 mg, 0.058 mmol) dodati su Hunigova baza (0.051 mL, 0.292 mmol) i 1-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil) piperazin, 2 TFA (31.9 mg, 0.058 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 60-100% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 624.06; Retenciono vreme: 1.76 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 624.07; Retenciono vreme: 2.59 minuta. Racemsko jedinjenje, primer 114, (19.7 mg) je izolovano u 54.4% prinosu.

[0614] Primer 114 je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 115 (prvi eluirajući izomer) i Primer 116 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0615] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0616] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0617] Primer 115: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 624.05; Retenciono vreme: 1.76 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 624.06; Retenciono vreme: 2.58 minuta. Primer 115 (4.5 mg) je izolovan u 12.4% prinosu.

[0618] Primer 116: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 624.05; Retenciono vreme: 1.76 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 624.07; Retenciono vreme: 2.58 minuta. Primer 116 (4.2 mg) je izolovan u 11.6% prinosu.

PRIMER 117

6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0619]

[0620] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (20 mg, 0.058 mmol) dodati su Hunigova baza (0.041 mL, 0.234 mmol) i 2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil)fenol (16.72 mg, 0.058 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 592.04; Retenciono vreme: 2.29 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 592.03; Retenciono vreme: 1.54 minuta. Jedinjenje iz naslova (6.4 mg) je izolovano u 18.6% prinosu.

PRIMER 118

8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0621]

[0622] U DMF (1.5 mL) rastvor 8-hloro-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (25 mg, 0.087 mmol) je dodat 1-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin (24.97 mg, 0.087 mmol) što je praćeno dodavanjem Hunigove baze (0.08 mL, 0.43 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 22 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 541.08; Retenciono vreme: 1.74 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 541.09; Retenciono vreme: 2.38 minuta. Jedinjenje iz naslova (32.4 mg) je izolovano u 68.9% prinosu.

PRIMERI 119 DO 121

8-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0623]

[0624] U DMF (1.5 mL) rastvor 8-hloro-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (25 mg, 0.087 mmol) je dodata Hunigova baza (0.076 mL, 0.433 mmol) što je praćeno dodavanjem 5-fluoro-2-((4-fluorofenil) (piperazin-1-il)metil)fenola, TFA (36.2 mg, 0.087 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza pokazuje da su dobijena 2 glavna pika. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 557.11; Retenciono vreme: 2.31 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 557.11; Retenciono vreme: 1.69 minuta. Jedinjenje iz naslova (10.5 mg) je izolovano u 21.7% prinosu.

[0625] Deo od 8.37 mg racemskog materijala je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 120 (prvi eluirajući izomer) i Primer 121 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0626] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0627] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0628] Primer 120: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 557.13; Retenciono vreme: 1.7 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.6 %; Uočena masa: 557.17; Retenciono vreme: 2.32 minuta. Primer 120 (3.5 mg) je izolovan u 41.9% prinosu.

[0629] Primer 121: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 557.16; Retenciono vreme: 1.7 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 557.12; Retenciono vreme: 2.32 minuta. Primer 121 (3.2 mg) je izolovan u 38.3% prinosu.

PRIMER 122

8-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0630]

[0631]U DMF (1.5 mL) rastvor 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (15 mg, 0.057 mmol) je dodat kalijum karbonat (23.50 mg, 0.170 mmol) što je praćeno dodavanjem 5-fluoro-2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil)fenola, TFA (23.71 mg, 0.057 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza je pokazala da su dobijena 2 glavna pika. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-80% B tokom 27 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.2 %; Uočena masa: 533.11; Retenciono vreme: 1.53 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.8 %; Uočena masa: 533.09; Retenciono vreme: 2.17 minuta. Jedinjenje iz naslova (3.4 mg) je izolovano u 11.2% prinosu.

PRIMERI 123 DO 125

8-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0632]

[0633] U DMF (1 mL) rastvor 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (30 mg, 0.113 mmol) je dodata Hunigova baza (0.099 mL, 0.567 mmol) što je praćeno dodavanjem 1-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil) metil)piperazina, 2 TFA (61.9 mg, 0.113 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 48-88% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 547.16; Retenciono vreme: 2.41 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 547.15; Retenciono vreme: 1.67 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (18 mg) je izolovan u 29.1% prinosu.

[0634] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 124 (prvi eluirajući izomer) i Primer 125 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0635] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0636] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 547.14; Retenciono vreme: 2.41 minuta.

[0637] Primer 124: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 547.15; Retenciono vreme: 1.66 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0%; Retenciono vreme: 1.66; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 547.15). Primer 124 (8.1 mg) je izolovan u 13.1% prinosu.

[0638] Primer 125: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 547.21; Retenciono vreme: 1.66 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 547.14; Retenciono vreme: 2.41 minuta. Primer 125 (8.1 mg) je izolovan u 13.1% prinosu.

PRIMERI 126 DO 128

8-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0639]

[0640] U DMF (1.5 mL) rastvor 8-hloro-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (25 mg, 0.087 mmol) je dodat 1-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin, 2 TFA (47.3 mg, 0.087 mmol) što je praćeno dodavanjem Hunigove baze (0.08 mL, 0.43 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 571.14; Retenciono vreme: 2.47 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 571.17; Retenciono vreme: 1.73 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (21.3 mg) je izolovan u 42.9% prinosu.

[0641] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 127 (prvi eluirajući izomer) i Primer 128 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0642] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0643] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0644] Primer 127: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 571.12; Retenciono vreme: 1.75 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 571.16; Retenciono vreme: 2.48 minuta. Primer 127 (7.7 mg) je izolovan u 15.5% prinosu.

[0645] Primer 128: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 571.15; Retenciono vreme: 1.74 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 571.16; Retenciono vreme: 2.48 minuta. Primer 128 (7.5 mg) je izolovan u 15.1% prinosu.

PRIMERI 129 DO 131

8-(4-((4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0646]

[0647] U DMF (1.5 mL) rastvor 8-hloro-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (25 mg, 0.087 mmol) je dodat 1-((4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil)piperazin, 2 TFA (45.8 mg, 0.087 mmol) što je praćeno dodavanjem Hunigove baze (0.08 mL, 0.43 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-95% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.15; Retenciono vreme: 1.67 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.15; Retenciono vreme: 2.45 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (27.3 mg) je izolovan u 56.8% prinosu.

[0648] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 130 (prvi eluirajući izomer) i Primer 131 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0649] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0650] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0651] Primer 130: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.15; Retenciono vreme: 2.45 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.13; Retenciono vreme: 1.68 minuta. Primer 130 (8 mg) je izolovan u 16.6% prinosu.

[0652] Primer 131: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.14; Retenciono vreme: 2.45 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 553.17; Retenciono vreme: 1.71 minuta. Primer 131 (2.3 mg) je izolovan u 4.8% prinosu.

PRIMERI 132 DO 134

8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0653]

[0654] U DMF (1.5 mL) rastvor 8-hloro-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (25 mg, 0.087 mmol) je dodat 2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil)fenol, 2 TFA (44.6 mg, 0.087 mmol) što je praćeno dodavanjem Hunigove baze (0.08 mL, 0.43 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 539.13; Retenciono vreme: 2.26 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 539.14; Retenciono vreme: 1.62 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (9.7 mg) je izolovano u 20.7% prinosu.

[0655] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 133 (prvi eluirajući izomer) i Primer 134 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0656] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0657] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0658] Primer 133: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 539.17; Retenciono vreme: 2.25 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 539.15; Retenciono vreme: 1.61 minuta. Primer 133 (4.3 mg) je izolovan u 9.2% prinosu.

[0659] Primer 134: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 539.12; Retenciono vreme: 2.25 min. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 539.19; Retenciono vreme: 1.6 min. Primer 134 (2.8 mg) je izolovan u 6% prinosu.

PRIMERI 135 DO 137

8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0660]

[0661] U DMF (1 mL) rastvor 8-hloro-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.055 mmol) i 1-(1-feniletil) piperazina (46.4 mg, 0.111 mmol) dodati su Hunigova baza (0.029 mL, 0.166 mmol) i 1-(1-feniletil)piperazin (46.4 mg, 0.111 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 13-53% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 461.16; Retenciono vreme: 1.33 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 461.11; Retenciono vreme: 2.15 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (20.5 mg) je izolovano u 80.9% prinosu.

[0662] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 136 (prvi eluirajući izomer) i Primer 137 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0663] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0664] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0665] Primer 136: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.0 %; Uočena masa: 461.12; Retenciono vreme: 1.35 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.8 %; Uočena masa: 461.12; Retenciono vreme: 2.15 minuta. Primer 136 (6.1 mg) je izolovan u 24.1% prinosu.

[0666] Primer 137: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.6 %; Uočena masa: 461.14; Retenciono vreme: 1.35 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 461.13; Retenciono vreme: 2.15 minuta. Primer 137 (5.7 mg) je izolovan u 22.5% prinosu.

PRIMER 138

8-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0667]

[0668] U DMF (1 mL) rastvor 8-hloro-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.055 mmol) i Hunigove baze (0.029 mL, 0.166 mmol) je dodat 1-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin (51.0 mg, 0.111 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 15-55% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 485.18; Retenciono vreme: 2.13 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 485.16; Retenciono vreme: 1.4 minuta. Jedinjenje iz naslova (24 mg) je izolovano u 90.1% prinosu.

PRIMERI 139 DO 141

8-{4-[1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0669]

[0670] U DMF (1 mL) rastvor 8-hloro-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.055 mmol) i 1-(1-fenilpropil) piperazina, 2 TFA (35.9 mg, 0.083 mmol) dodati su Hunigova baza (0.048 mL, 0.277 mmol) i 1-(1-fenilpropil)piperazin, 2 TFA (35.9 mg, 0.083 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 475.16; Retenciono vreme: 1.45 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 475.16; Retenciono vreme: 2.29 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (15.3 mg) je izolovan u 58.6% prinosu.

[0671] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 140 (prvi eluirajući izomer) i Primer 141 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0672] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0673] Primer 140: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 475.19; Retenciono vreme: 2.28 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.3 %; Uočena masa: 475.19; Retenciono vreme: 1.47 minuta. Primer 140 (6.9 mg) je izolovan u 26.4% prinosu.

[0674] Primer 141: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.2 %; Uočena masa: 475.17; Retenciono vreme: 2.28 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.5 %; Uočena masa: 475.18; Retenciono vreme: 1.47 minuta. Primer 141 (6.4 mg) je izolovan u 24.5% prinosu.

PRIMERI 142 DO 144

8-(4-(ciklopropil(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0675]

[0676] U DMF (1 mL) rastvor 1-(ciklopropil(4-fluorofenil)metil)piperazina, TFA (24.14 mg, 0.069 mmol) i 8-hloro-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (20 mg, 0.069 mmol) je dodata Hunigova baza(0.036 mL, 0.208 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 20 minuta, zatim 6-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja.

[0677] Racemski materijal je prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 143 (prvi eluirajući izomer) i Primer 144 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0678] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0679] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0680] Primer 143: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 487.02; Retenciono vreme: 1.56 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 487.02; Retenciono vreme: 2.23 minuta. Primer 143 (3.8 mg) je izolovan u 11.3% prinosu.

[0681] Primer 144: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 487.03; Retenciono vreme: 1.41 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.1 %; Uočena masa: 487.03; Retenciono vreme: 2.23 minuta. Primer 144 (4 mg) je izolovan u 11.9% prinosu.

PRIMER 145

8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0682]

[0683] U DMF (0.5 mL) rastvor 8-hloro-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (5 mg, 0.016 mmol) dodati su Hunigova baza (8.49 µl, 0.049 mmol) i 2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil)fenol (9.28 mg, 0.032 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 38-78% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 559.23; Retenciono vreme: 1.6 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 559.19; Retenciono vreme: 2.27 minuta. Jedinjenje iz naslova (1.5 mg) je izolovano u 16.8% prinosu.

PRIMER 146

8-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0684]

[0685] U DMF (0.5 mL) rastvor 8-hloro-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (15 mg, 0.049 mmol) dodati su Hunigova baza (0.025 mL, 0.146 mmol) i 1-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin (16.93 mg, 0.073 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 505.21; Retenciono vreme: 1.41 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 505.2; Retenciono vreme: 2.13 minuta. Jedinjenje iz naslova (12.5 mg) je izolovano u 50.6% prinosu.

PRIMER 147

8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0686]

[0687] U DMF (0.5 mL) rastvor 8-hloro-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (15 mg, 0.049 mmol) dodati su Hunigova baza (0.025 mL, 0.146 mmol) i 1-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin (21.02 mg, 0.073 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 46-86% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 561.17; Retenciono vreme: 1.79 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 561.17; Retenciono vreme: 2.46 minuta. Jedinjenje iz naslova (13.5 mg) je izolovan u 49.1% prinosu.

PRIMERI 148 dO 150

8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0688]

[0689] U DMF (0.5 mL) rastvor 8-hloro-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (15 mg, 0.049 mmol) dodati su Hunigova baza (0.051 mL, 0.292 mmol) i 1-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin, 2 vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (20.50 mg, 0.073 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 38-78% B tokom 22 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 481.19; Retenciono vreme: 1.36 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 481.17; Retenciono vreme: 2.16 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (11.5 mg) je izolovan u 48.8% prinosu.

[0690] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 149 (prvi eluirajući izomer) i Primer 150 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0691] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0692] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0693] Primer 149: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.1 %; Uočena masa: 481.18; Retenciono vreme: 2.17 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.4 %; Uočena masa: 481.16; Retenciono vreme: 1.36 minuta. Primer 149 (3.7 mg) je izolovan u 15.7% prinosu.

[0694] Primer 150: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.1 %; Uočena masa: 481.2; Retenciono vreme: 2.17 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.3 %; Uočena masa: 481.18; Retenciono vreme: 1.36 minuta. Primer 150 (3.6 mg) je izolovan u 15.3% prinosu.

PRIMER 151

5-(cijanometil)-8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0695]

[0696] U DMF (0.5 mL) rastvor 8-hloro-5-(cijanometil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (15 mg, 0.052 mmol) dodati su Hunigova baza (0.027 mL, 0.155 mmol) i 1-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin (16.18 mg, 0.078 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 hr. LC/MS analiza pokazala je da je reakcija bila oko 80% završena. Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi za još 3 sata. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 28-68% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 462.14; Retenciono vreme: 1.28 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 462.15; Retenciono vreme: 2.07 minuta. Jedinjenje iz naslova (6.6 mg) je izolovano u 27.5% prinosu.

PRIMER 152

8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-(cijanometil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0697]

[0698] U DMF (0.5 mL) rastvor 8-hloro-5-(cijanometil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (15 mg, 0.052 mmol) dodati su Hunigova baza (0.027 mL, 0.155 mmol) i 1-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin (22.40 mg, 0.078 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 41-81% B tokom 23 minuta, zatim 6-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 542.09; Retenciono vreme: 1.71 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 542.11; Retenciono vreme: 2.32 minuta. Jedinjenje iz naslova (5.3 mg) je izolovano u 18.8% prinosu.

PRIMER 153

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-(cijanometil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0699]

[0700] U DMF (0.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(cijanometil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15 mg, 0.046 mmol) dodati su Hunigova baza (0.024 mL, 0.139 mmol) i 1-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin (20.05 mg, 0.070 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 43-83% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.1 %; Uočena masa: 577.13; Retenciono vreme: 2.39 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.7 %; Uočena masa: 575.07; Retenciono vreme: 1.74 minuta. Jedinjenje iz naslova (6.3 mg) je izolovano u 23.8% prinosu.

PRIMER 154

6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0701]

[0702]U DMF (0.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(cijanometil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15 mg, 0.046 mmol) dodati su Hunigova baza (0.024 mL, 0.139 mmol) i 1-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin (14.48 mg, 0.070 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 38-78% B tokom 20 minuta, zatim 6-minutnozadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 494.97; Retenciono vreme: 2.05 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 494.95; Retenciono vreme: 1.26 minuta. Jedinjenje iz naslova (6.6 mg) je izolovan u 29% prinosu.

PRIMER 155

6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-(1-(4-fluorofenil)propil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0703]

[0704] U DMF (0.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(cijanometil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15 mg, 0.046 mmol) dodati su Hunigova baza (0.024 mL, 0.139 mmol) i 1-(1-(4-fluorofenil)propil)piperazin (15.46 mg, 0.070 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza pokazala je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 38-78% B tokom 25 minuta, zatim 6-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 509.07; Retenciono vreme: 1.43 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 509.1; Retenciono vreme: 2.26 minuta. Jedinjenje iz naslova (6.8 mg) je izolovano u 29% prinosu.

PRIMER 156

6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0705]

[0706] U DMF (0.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(cijanometil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15 mg, 0.046 mmol) dodati su Hunigova baza (0.024 mL, 0.139 mmol) i 1-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin (16.16 mg, 0.070 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi preko noći. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 32-72% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.0 %; Uočena masa: 519.08; Retenciono vreme: 2.06 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.6 %; Uočena masa: 519.04; Retenciono vreme: 1.36 minuta. Jedinjenje iz naslova (2.8 mg) je izolovano u 11.7% prinosu.

PRIMER 157

6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil(metil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0707]

[0708] U DMF (0.5 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(cijanometil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (25 mg, 0.077 mmol) dodati su Hunigova baza (0.040 mL, 0.232 mmol) i 2-((4-fluorofenil)(piperazin-1-il)metil)fenol, TFA (37.1 mg, 0.093 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. LC/MS analiza pokazala je da je željeni proizvod primećen. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 36-76% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 573.08; Retenciono vreme: 2.26 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 573.1; Retenciono vreme: 1.58 minuta. Jedinjenje iz naslova (4.5 mg) je izolovan u 10.2% prinosu.

PRIMERI 158 DO 160

6-bromo-1-(ciklopropilmetil)-4-(4-((4-fluorofenil) (2-metoksifenil) metil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0709]

[0710] U DMF (1 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(ciklopropilmetil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15 mg, 0.044 mmol) je dodat 1-((4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil)piperazin, TFA (18.36 mg, 0.044 mmol)) što je praćeno dodavanjem Hunigove baze (0.023 mL, 0.133 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim 6-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 602.08; Retenciono vreme: 1.78 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 602.13; Retenciono vreme: 2.68 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (16.8 mg) je izolovano u 63.4% prinosu.

[0711] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 159 (prvi eluirajući izomer) i Primer 160 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0712] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0713] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0714] Primer 159: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 602.08; Retenciono vreme: 1.78 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 602.09; Retenciono vreme: 2.68 minuta. Primer 159 (6.6 mg) je izolovan u 24.9% prinosu.

[0715] Primer 160: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 602.08; Retenciono vreme: 1.78 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 602.11; Retenciono vreme: 2.68 minuta. Primer 160 (5.2 mg) je izolovan u 19.6% prinosu.

PRIMER 161

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-(ciklopropilmetil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0716]

[0717] U DMF (15 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(ciklopropilmetil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15 mg, 0.044 mmol) je dodat 1-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin, TFA (17.83 mg, 0.044 mmol)) što je praćeno Hunigovom bazom (0.023 mL, 0.133 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 55-100% B tokom 20 minuta, zatim 6-minutno zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 590.11; Retenciono vreme: 2.66 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 590.1; Retenciono vreme: 1.9 minuta. Jedinjenje iz naslova (14.5 mg) je izolovano u 55.8% prinosu.

PRIMERI 162 DO 164

6-bromo-1-(ciklopropilmetil)-4-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0718]

[0719] U DMF (15 mL) rastvor 6-bromo-4-hloro-1-(ciklopropilmetil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15 mg, 0.044 mmol) je dodat 1-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin, TFA (14.28 mg, 0.044 mmol)) što je praćeno Hunigovom bazom (0.023 mL, 0.133 mmol). Reakciona smeša je mešana mućkanjem na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. LC/MS analiza označila je da je reakcija kompletna. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/minut. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 510.07; Retenciono vreme: 1.49 minuta. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 510.09; Retenciono vreme: 2.38 minuta. Racemsko jedinjenje iz naslova (14.8 mg) je izolovano u 65.9% prinosu.

[0720] Racemski materijal je dalje prečišćen korišćenjem SFC-hiralne hromatografije da se dobije Primer 163 (prvi eluirajući izomer) i Primer 164 (drugi eluirajući izomer). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća.

[0721] Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0722] Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100 %B; Protok: 1 mL/minut; Detekcija: MS i UV (220 nm).

[0723] Primer 163: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.5 %; Uočena masa: 510.13; Retenciono vreme: 2.37 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.3 %; Uočena masa: 510.11; Retenciono vreme: 1.51 minuta. Primer 163 (3.5 mg) je izolovan u 15.6% prinosu.

[0724] Primer 164: Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.0 %; Uočena masa: 510.13; Retenciono vreme: 2.37 minuta. Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 510.11; Retenciono vreme: 1.51 minuta. Primer 164 (4.5 mg) je izolovan u 20% prinosu.

Generalni proces za pripremanje primera 204 i 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-alkil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on analoga:

[0725]

[0726] DMF (15.5 mL) rastvor 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona je pripremljen. Svakom od alkil halida koji je odmeren u bočice od 16 × 100 mm sa navojem dodato je 0.500 mL rastvora 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-ona, kalijum karbonata (25 mg, 0.18 mmol), i štapić za mešanje. Bočice su zatvorene i ostavljene da se mućkaju na sobnoj temperaturi tokom 4 sata pre zagrevanja do 50 °C sa mešanjem preko noći. Smeše su prenete u prazne SPE kertridže za filtraciju od 6-mL, sakupljene u bočice od 16 × 48 mm sa navojem. Svaka reakciona bočica je isprana sa 0.5 mL DMF. Ispiranja su preneta u filter kertridže. Sirove smeše su prečišćene preparativnom HPLC korišćenjem uslova opisanih za svaki primer.

PRIMER 165

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1-(prop-2-in-1-il)-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0727]

[0728] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 55-100% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslovaje izolovano u 54.7% prinosu (11.8 mg).

PRIMER 166

1-(2-(1,3-dioksan-2-il)etil)-4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0729]

[0730] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 70-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min.

Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslovaje izolovano u 36% prinos (9 mg).

PRIMER 176

1-alil-4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0731]

[0732] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 70-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnE kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslovaje izolovano u 37.4% prinosu (8.1 mg).

PRIMER 177

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-butil-3-nitro-1,5 -naftiridin-2(1H)-on

[0733]

[0734] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 70-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslova je izolovano u 26.3% prinosu (5.9 mg).

PRIMER 183

4-(4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-2-okso-1,5-naftiridin-1 (2H)-il)butannitril

[0735]

[0736] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslova je izolovano u 36.3% prinosu (8.3 mg).

PRIMER 185

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1-(3,3,3-trifluoropropil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0737]

[0738] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 70-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslova je izolovano u 22.7% prinosu (5.5 mg).

PRIMER 186

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-(4,4-difluorobut-3-en-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0739]

[0740] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 70-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslova je izolovano u 32.6% prinosu (7.8 mg).

PRIMER 187

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1-(4-oksopentil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0742] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 70-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslova je izolovano u 22% prinosu (5.2 mg).

PRIMER 189

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-(3-(2-metoksietoksi)propil)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0743]

[0744] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 65-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslova je izolovano u 32.3% prinosu (8.1 mg).

PRIMER 190

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-(3-metoksipropil)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0745]

[0746] Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 65-100% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters BEH C18, 2.0 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0%B, 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Jedinjenje iz naslova je izolovano u 32.9% prinosu (7.6 mg).

PRIMER 191

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0747]

[0748] 1-Benzhidrilpiperazin (85 mg, 0.335 mmol) je dodat u jednom delu u rastvor 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (100 mg, 0.335 mmol) i Hunigove baze (0.117 mL, 0.670 mmol) i DMF (5 mL) pod azotom. Reakcija je praćena pomoću HPLC. Nakon 2 hr, reakcija je bila završena. Reakciona smeša je zatim bila razblažena sa hloroformom i oprana (2x) sa zasićenim vodenim NaHCO3. Organski sloj je zatim osušen tokom MgSO4, filtriran i evaporisan pod sniženim pritiskom preko noći da se dobije proizvod kao prljavo bela čvrsta supstanca (132 mg, 77%). LC/MS uslovi: Zapremina ubrizgavanja; 3 µL, Početak %B; 2, Finalan %B;98, Vreme gradijenta; 1.5 min, Brzina protoka; 0.8 mL / min, Talasna dužina; 220 nm, Par rastvarača; Voda/Acetonitril/TFA, Rastvarač A; 100% Voda/ 0.05% TFA, Rastvarač B; 100% Acetonitril/0.05% TFA, Kolona; Waters Aquity BEH C182.1 X 50 mm 1.7U MW1, Temperatura pećnice; 40. LC/MS rezultati: 0.990 min. (M+H)<+>; 514.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.62 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.53-7.46 (m, 5H), 7.32 (t, J=7.6 Hz, 4H), 7.25-7.20 (m, 2H), 4.35 (s, 1H), 4.08-3.95 (m, 4H), 3.61 (s, 3H).

PRIMER 192

6-bromo-4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0749]

[0750] 5-Fluoro-2-(piperazin-1-ilmetil)fenol 2,2,2-trifluoroacetat (109 mg, 0.335 mmol) je dodat rastvoru 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (100 mg, 0.335 mmol) i trietilamina (0.140 mL, 1.005 mmol) u DMF (2 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom vikenda. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-60% B tokom 23 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 9.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 96%. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.95-7.92 (m, 1H), 7.88-7.85 (m, 1H), 7.20 (t, J=8.1 Hz, 1H), 6.63-6.57 (m, 2H), 3.91-3.85 (m, 4H), 3.67 (s, 2H), 3.53 (s, 3H), 2.74-2.69 (m, 4H).

PRIMER 193

6-hloro-4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0751]

[0752] 5-Fluoro-2-(piperazin-1-ilmetil)fenol (8.28 mg, 0.039 mmol) je dodat rastvoru 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (10 mg, 0.039 mmol) i trietilamina (0.016 mL, 0.118 mmol) u DMF (2 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 35-75% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Materijal je dalje prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 0-40% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da odrede finalnu čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Rezultati ubrizgavanja 2: 1.32 minuta, [M+H]: 428.05 Rezultati ubrizgavanja 1 2.04 minuta, [M+H]; 428.04.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (d, J=8 Hz, 1H), 7.82 (d, J=8 Hz, 1H), 7.42 (br. s., 1H), 6.74 (d, J=9.5 Hz, 2H), 4.25 (br. s., 2H), 4.14-3.91 (m, 2H), 3.57 (s, 3H), 2.55 (s, 2H).

PRIMER 194

4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0753]

[0754] Hunigova baza (10.48 µl, 0.060 mmol) je dodata rastvoru 5-fluoro-2-(piperazin-1-ilmetil)fenol 2,2,2-trifluoroacetata (19.46 mg, 0.060 mmol) i 4-hloro-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (14.02 mg, 0.06 mmol) u DMF (2 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, pod azotom. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 um čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 30-70% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda bio je 6.6 mg, (27%) i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize bila je 99%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje na 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.8 %; Uočena masa: 408.01; Retenciono vreme: 1.21 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje na 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 408.02; Retenciono vreme: 1.8 min.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.91 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.59 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.20 (t, J=7.5 Hz, 1H), 6.64-6.58 (m, 2H), 3.91 (br. s., J=3.3 Hz, 4H), 3.66 (s, 2H), 2.70 (br. s., 4H), 2.54 (s, 3H).

PRIMER 195

4-(4-(1-(2-(aliloksi)-4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0755]

[0756] Kalijum karbonat (82 mg, 0.590 mmol) je suspendovan u anhidrovanom DMF (4 mL).4,6-Dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (50 mg, 0.197 mmol) i 1-(1-(2-(aliloksi)-4-fluorofenil)etil)piperazin (52.0 mg, 0.197 mmol) su zatim dodati i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod azotom preko noći. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod visokim vakuumom. Ostatak je rastvoren u DMF i sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 42-82% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 6.5 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 100%. Analitička LC/MS korišćena je da odredi čistoću. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 482.08; Retenciono vreme: 1.54 min.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.04 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.89 (dd, J=11.6, 2.4 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.15-5.95 (m, 1H), 5.44 (s, 1H), 5.28 (d, J=10.6 Hz, 1H), 4.61 (br. s., 2H), 4.02-3.92 (m, 1H), 3.83 (br. s., 4H), 2.69-2.55 (m, 4H), 1.29 (d, J=6.6 Hz, 3H). N-CH3rezonanca nije jasno uočena zbog supresije vode koja se koristila u akviziciji spektra.

PRIMER 196

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0757]

[0758] 4-(4-Benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (20 mg, 0.039 mmol) je suspendovan u THF (2 mL). Dietilcink (0.093 mL, 0.093 mmol) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (4.49 mg, 3.89 µmol) su zatim dodati i reakciona smeša je zagrevana na 70 °C u zatvorenoj epruveti preko noći. Prilikom početnog zagrevanja, suspenzija je postala žuto obojen rastvor koji je potamnio pri zagrevanju preko noći. Smeša je zatim ohlađena, filtrirana, i evaporisana do suva, i ostatak se rastvorio u 2 mL DMF. Sirovi rastvor je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 5.2 mg, i i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 99%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.3 %; Uočena masa: 436.17; Retenciono vreme: 1.34 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 436.15; Retenciono vreme: 2.17 min.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.51 (d, J=2.9 Hz, 1H), 7.97 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.68 (dd, J=8.8, 4.4 Hz, 1H), 7.50 (d, J=7.3 Hz, 4H), 7.33 (t, J=7.7 Hz, 4H), 7.25-7.12 (m, 2H), 4.40 (s, 1H).

PRIMER 198

6-hloro-4-(4-(2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0759]

[0760] 2-(Piperazin-1-ilmetil)fenol-2,2,2,-trifluoroacetat (27.7 mg, 0.091 mmol) je dodat u rastvor trietilamina (0.050 mL, 0.362 mmol) i 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (23 mg, 0.091 mmol) u DMF-u (4 mL) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dobijena smeša je evaporisana do suva i zatim rastvorena u 2 mL DMF i ovo je bilo frakcionisano pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 10-60% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 10.6 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analiza je bila 95%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 410.04; Retenciono vreme: 1.36 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 95.1 %; Uočena masa: 410.09; Retenciono vreme: 1.9 min.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.82 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.38 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.29 (t, J=7.5 Hz, 1H), 6.96 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.90 (t, J=7.3 Hz, 1H), 4.29 (br. s., 2H), 4.05 (br. s., 2H), 3.57 (s, 3H), 2.55 (s, 2H).

4 H'S piperazina nedostaju zbog pika potiskivanja vode.

PRIMER 199

6-hloro-4-(4-(3-(etil(metil)amino)benzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0761]

[0762] 4,6-Dihloro-1 -metil-2-okso-1 ,2-dihidro-1 ,5-naftiridin-3-karbonitril (20 mg, 0.079 mmol) i Hunigova baza (0.030 mL, 0.173 mmol) su rastvoreni u DMF-u (2 mL). N-Etil-N-metil-3-(piperazin-1-ilmetil)anilin 2,2,2-trifluoroacetat (27.3 mg, 0.079 mmol) je zatim dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod azotom. Nakon 4 h reakcija je bila završena. Sirovi reakcioni proizvod je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 38-78% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 2.2 mg, i i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 100%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 451.13; Retenciono vreme: 1.02 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 451.11; Retenciono vreme: 2.19 min. Tehnika potiskivanja vode koja je korišćena u akviziciji spektra proizvoda sprečila je da se izvrši potpuna dodela, pri čemu su opisani samo aromatični signali.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.09 (br d, J=8.8 Hz, 1H), 7.83 (br d, J=8.8 Hz, 1H), 7.05-7.28 (m, 1H), 6.57-6.87 (m, 3H). Jedinjenje iz naslova 2.2 je izolovano u 6.2% prinosu.

PRIMER 200

4-(4-(7-(aliloksi)-5-fluoro-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0763]

[0764] Rastvor 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (54 mg, 0.213 mmol), 1-(7-(aliloksi)-5-fluoro-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin (58.7 mg, 0.213 mmol) i trietilamin (0.059 mL, 0.425 mmol) u DMF-u (5 mL) je mešan pod azotom tokom vikenda. Rastvarač je zatim uklonjen pod vakuumom i ostatak je rastvoren u dihlorometanu. Organski sloj je opran sa 1.5 M puferom kalijum fosfata (2x) i zatim je osušen tokom MgSO4, filtriran i oncentrovan in vacuo da se dobije 159 mg sirovog proizvoda. 127 mg ovog materijala je frakcionisan korišćenjem fleš hromatografije; 1-5% metanol u dihlorometanu kao eluent, i Biotage kolona sa 24 g silika gela. Homogene frakcije su kombinovane i evaporisane pod sniženim pritiskom da se dobije proizvod kao braon obojeno ulje, 73 mg, 87%. 32 mg od gorenavedenog sirovog proizvoda je prečišćeno pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 9.8 mg, i i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 100%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 494.05; Retenciono vreme: 1.41 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 494.05; Retenciono vreme: 2.22 min.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.64 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J=9.0 Hz, 1H), 6.56 (d, J=7.8 Hz, 1H), 6.44 (d, J=11.0 Hz, 1H), 6.13-6.00 (m, 1H), 5.52-5.41 (m, 1H), 5.29 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.62-4.50 (m, 2H), 4.37 (d, J=7.1 Hz, 1H), 4.03-3.86 (m, 4H), 3.81-3.68 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.03 (dt, J=16.4, 8.3 Hz, 1H), 2.85-2.69 (m, 5H), 2.31-2.06 (m, 2H).

PRIMER 201

6-hloro-4-(4-(5-fluoro-7-hidroksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0765]

[0766] U rastvor 4-(4-(7-(aliloksi)-5-fluoro-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (75 mg, 0.152 mmol) u THF-u (3 mL) pod azotom je dodata katalitička količina tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) (3.51 mg, 3.04 µmol). Blago smeđi rastvor je mešan tokom 5 min, nakon čega, natrijum borohidrid (8.62 mg, 0.228 mmol) i reakciona smeša su ostavljeni da se mešaju na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je prebačena na preparativnu TLC ploču sa silika gelom koja je eluirana korišćenjem 30% acetona u heksanima. Dve frakcije su eluirane sa ploče sa nižim Rfmaterijalom koji je dalje prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 3.4 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 94%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 95.6 %; Uočena masa: 453.97; Retenciono vreme: 2.09 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 94.2 %; Uočena masa: 453.95; Retenciono vreme: 1.27 min.<1>H NMR (500 MHz, DMSOd6) δ 8.04 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.53 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.41 (d, J=10.6 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 3.84 (br. s., 2H), 3.58 (br. s., 1H), 3.09-3.01 (m, 1H), 2.88 (br. s., 1H), 2.83-2.68 (m, 2H), 2.65-2.55 (m, 2H), 2.15-1.97 (m, 2H).

PRIMER 202

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-etil-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0767]

[0768] 4-(4-Benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (20 mg, 0.039 mmol) suspendovani su u THF-u (2 mL). Dietilcink (0.093 mL, 0.093 mmol) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (4.49 mg, 3.89 µmol) su dodati i reakciona smeša je zagrevana na 70 °C u zatvorenoj epruveti preko noći. Pri početnom zagrevanju suspenzija je postala žuto obojeni rastvor. Reakciona smeša je zatim ohlađena, filtrirana i evaporisana do suva. Ostatak je rastvoren u 2 mL DMF-a i ovaj rastvor je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 7.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 100%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 464.16; Retenciono vreme: 1.52 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 464.14; Retenciono vreme: 2. 4 min.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.50 (d, J=7.3 Hz, 4H), 7.33 (t, J=7.7 Hz, 4H), 7.24-7.18 (m, 2H), 4.42 (s, 1H), 3.95 (br. s., 2H), 3.50 (s, 3H*), 3.43 (br. s., 2H), 2.80 (q, J=7.5 Hz, 2H), 2.60-2.53 (m, 4H), 1.20 (t, J=7.5 Hz, 3H).

PRIMER 204

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0769]

[0770] (Bromometilen)dibenzen (16.17 mg, 0.065 mmol) je dodat rastvoru 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril 2,2,2-trifluoroacetata (26 mg, 0.065 mmol) i trietilaminu (0.027 mL, 0.196 mmol) u DMF-u (2 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod azotom preko noći. Dodatni ekvivalent (bromometilen)dibenzena (16.17 mg, 0.065 mmol) je dodat zajedno sa još 1 ekvivalentom trietilamina i reakciona smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi još 48 h. Sirova reakciona smeša je zatim frakcionisana pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 3.3 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 100%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 450.14; Retenciono vreme: 2.35 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 % B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 450.12; Retenciono vreme: 1.53 min.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J=7.7 Hz, 4H), 7.33 (t, J=7.5 Hz, 4H), 7.25-7.19 (m, 2H), 4.45 (s, 1H), 3.96 (br. s., 4H), 3.51 (s, 3H), 2.60 (br. s., 4H), 2.51 (s, 3H).

PRIMER 208

4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-metil-2-okso-6-vinil-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0771]

[0772] Smeša 4-(4-Benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (30 mg, 0.058 mmol), kalijum viniltrifluoroborat (9.37 mg, 0.070 mmol), i PdCl2(dppf) (4.27 mg, 5.83 µmol) je stavljena u suvu mikrotalasnu bočicu koja je zatim zatvorena. BuOH (2 mL) i TEA (0.012 mL, 0.087 mmol) dodati su i bočica je evakuisana i napunjena azotom (3x). Reakciona smeša je zagrejana u mikrotalasnoj na 110 °C tokom 2 sata pre nego što se ostavi da se ohladi i evaporisan do suva u vakuumu. Preostali materijal je zatim rastvoren u DMF (2 mL) i ovaj rastvor je bio frakcionisan pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bila 15.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 100%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 462.17, 462.17, 462.17; Retenciono vreme: 2.34, 2.42, 2.49 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 462.19; Retenciono vreme: 1.5 min.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.93 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J=7.7 Hz, 4H), 7.32 (t, J=7.7 Hz, 4H), 7.14-7.25 (m, 2H), 6.75-6.85 (m, 1H), 6.13 (d, J=18.0 Hz, 1H), 5.50 (d, J=11.7 Hz, 1H), 4.40 (s, 1H). Zbog tehnike potiskivanja vode koja se koristi u akviziciji spektra proizvoda, detekcija piperazina i N-Me protoni su bili zamućeni.

PRIMER 209

6-hloro-4-(4-(cikloheksil(fenil)metil)piperazin-1-il)-l-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0773]

[0774] Trietilamin (0.016 mL, 0.118 mmol) je dodat u rastvor 1-(cikloheksil (fenil)metil)piperazin 2,2,2-trifluoroacetata (16.12 mg, 0.043 mmol) i 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (10 mg, 0.039 mmol) u DMF-u (1 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Sirova reakciona smeša je zatim frakcionisana pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 60-100% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 3.7 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 98%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.5 %; Uočena masa: 476.1; Retenciono vreme: 1.72 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.2 %; Uočena masa: 476.11; Retenciono vreme: 2.81 min. NMR podaci nisu mogli u potpunosti da se interpretiraju usled koncentracije uzorka koji je bio previše razblažen.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.00 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.72 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.30-7.38 (m, 2H), 7.21 (br d, J=7.3 Hz, 3H), 3.83 (br t, J=5.0 Hz, 4H), 3.50 (s, 3H).

PRIMER 210

(R)-4-(4-benzil-3-((benziloksi)metil)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0775]

[0776] 4,6-Dihloro-1 -metil-2-okso-1 ,2-dihidro-1 ,5-naftiridin-3-karbonitril (20 mg, 0.079 mmol) je rastvoren u suvom DMF-u (2 mL) i kalijum karbonatu (32.6 mg, 0.236 mmol). (R)-1-benzil-2-((benziloksi)metil)piperazin (25.7 mg, 0.087 mmol) dodati su i reakciona smeša je mešana na 60 °C u zatvorenoj bočici tokom vikenda. Reakcionoj smeši je dozvoljeno da se ohladi, i zatim je filtrirana i sirovi proizvod je frakcionisan pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 60-100% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Prinos proizvoda je bio 1.2 mg, i i njegova procenjena čistoća pomoću LC/MS analize je bila 100%. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 514; Retenciono vreme: 1.8 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 514.04; Retenciono vreme: 2.8 min.

PRIMER 211

4-(4-(2-aminobenzil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0777]

[0778] Terc-butil (2-formilfenil)karbamat (92 mg, 0.416 mmol) je dodat u rastvor 6-bromo-1-metil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril bis(2,2,2-trifluoroacetata) (200 mg, 0.347 mmol) u DMF-u (5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, nakon čega natrijum cijanoborohidrid (65.4 mg, 1.041 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Metanol je zatim dodat i dobijena smeša je filtrirana i filtrat je frakcionisan primenom preparativne HPLC sa reverznom fazom primenom CH3OH-H2O-TFA kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da se dobije terc-butil (2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1il)metil)fenil)karbamat kao žuta čvrsta supstanca. Materijal je rastvoren u dihlorometanu (5 mL) i TFA (3 mL, 38.9 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h, i zatim je koncentrovana u vakuumu da se dobije narandžasto ulje. Ovaj materijal je dalje prečišćen primenom preparativne HPLC sa reverznom fazom primenom CH3OH-H2O-TFA kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i koncentrovane u vakuumu da se dobije TFA so jedinjenja iz naslova kao svetlo žuto obojena čvrsta supstanca (70 mg, 29.6 % prinos). Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LC/MS rezultati: 2.3 min, 453.0 (M+H)<+>·<1>H NMR (500 MHz, DMSOd6) δ 7.96-7.90 (m, 1H), 7.88-7.83 (m, 1H), 7.10-6.86 (m, 2H), 6.67 (d, J=7.7 Hz, 1H), 6.54 (t, J=7.5 Hz, 1H), 3.88-3.81 (m, 4H), 3.52 (s, 3H), 3.0 (s, 2H), 2.56-2.64 (m, 4H).

PRIMER 212

N-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il) piperazin-1-il)metil)fenil)metansulfonamid

[0779]

[0780] Metansulfonil hlorid (2.74 µl, 0.035 mmol) je dodat u rastvor 4-(4-(2-aminobenzil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril bis(2,2,2-trifluoroacetata) (12 mg, 0.018 mmol) i trietilamina (0.012 mL, 0.088 mmol) u dihlorometanu (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, nakon čega je koncentrovana i ostatak je rastvoren u smeši DMF-metanol. Ovaj rastvor je frakcionisan preparativnom reverzno faznom LC/MS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 36-76% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Homogene frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja da se dobije jedinjenje iz naslova (1.8 mg, 18.3% prinos). Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LC/MS rezultati: 1.8 min, 531.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSOd6) δ 7.99-7.92 (m, 1H), 7.91-7.82 (m, 1H), 7.43 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 7.39-7.28 (m, 2H), 7.15 (br d, J=6.2 Hz, 1H), 3.95-3.70 (m, 6H), 3.54 (s, 3H), 3.12 (s, 3H), 2.81-2.65 (m, 4H).

PRIMER 213

N-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il) piperazin-1-il)metil)fenil)benzamid

[0781]

[0782] Benzoil hlorid (4.34 µl, 0.037 mmol) je dodat u rastvor 4-(4-(2-aminobenzil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril bis(2,2,2-trifluoroacetamida) (17 mg, 0.025 mmol) i trietilamina (0.017 mL, 0.125 mmol) u dihlorometanu (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 hr, nakon čega je koncentrovana pod vakuumom, i ostatak je rastvoren u DMF-metanolu i ovaj rastvor je frakcionisan primenom preparativne LC/MS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 23 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Homogene frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja da se dobije jedinjenje iz naslova (7.5 mg, 51.2% prinos). Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LC/MS rezultati: 2.5 min, 557.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSOd6) δ 11.20 (br s, 1H), 8.31 (br d, J=8.1 Hz, 1H), 8.01 (br d, J=7.0 Hz, 2H), 7.97-7.91 (m, 1H), 7.90-7.83 (m, 1H), 7.69-7.50 (m, 3H), 7.44-7.26 (m, 2H), 7.12 (br t, J=7.3 Hz, 1H), 3.85 (br m, 6H), 3.53 (s, 3H), 2.74 (br s, 4H).

PRIMER 214

1-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil)-3-fenilurea

[0783]

[0784] Fenil izocijanat (4.09 µl, 0.037 mmol) je dodat u rastvor 4-(4-(2-aminobenzil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril bis(2,2,2-trifluoroacetamida) (17 mg, 0.025 mmol) i trietilamina (0.017 mL, 0.125 mmol) u THF-u (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, nakon čega je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u smeši DMF-a i metanola. Ovaj rastvor je frakcionisan primenom preparativne LC/MS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 37-77% B tokom 22 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Homogene frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja da se dobije jedinjenje iz naslova (6.8 mg, 45.2% prinos). Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LC/MS rezultati: 2.4 min, 572.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSOd6) δ 9.07 (s, 1H), 8.81 (br s, 1H), 7.98-7.90 (m, 2H), 7.89-7.80 (m, 1H), 7.50 (d, J=7.7 Hz, 2H), 7.37-7.18 (m, 4H), 7.07-6.84 (m, 2H), 3.91 (br s, 4H), 3.65 (br s, 2H), 3.52 (s, 3H), 2.65 (br s, 4H).

PRIMER 215

N-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil)acetamid

[0785]

[0786] Acetil hlorid (1.878 µl, 0.026 mmol) je dodat u rastvor 4-(4-(2-aminobenzil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril bis(2,2,2-trifluoroacetamida) i trietilamina (0.012 mL, 0.088 mmol) (12 mg, 0.018 mmol) u dihlorometanu (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, nakon čega je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je rastvoren u smeši DMF-a i metanola. Ovaj rastvor je frakcionisan primenom preparativne LC/MS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 26-76% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Homogene frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja da se dobije jedinjenje iz naslova (4.2 mg, 45.7% prinos). Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LC/MS rezultati: 2.1 min, 495.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSOd6) δ 10.15 (br s, 1H), 7.97-7.89 (m, 2H), 7.88-7.81 (m, 1H), 7.38-7.19 (m, 2H), 7.07 (t, J=7.5 Hz, 1H), 3.90 (br s, 4H), 3.67 (s, 2H), 3.52 (s, 3H), 2.61-2.71 (br m, 4H), 2.13 (s, 3H).

PRIMER 216

6-hloro-4-(4-(indolin-7-ilmetil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0787]

[0788] Terc-butil 7-formilindolin-1-karboksilat (13.95 mg, 0.056 mmol) je dodat u rastvor 6-hloro-1-metil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril bis(2,2,2-trifluoroacetata) (20 mg, 0.038 mmol) u DMF-u (1.5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Natrijum cijanoborohidrid (7.09 mg, 0.113 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Metanol je zatim dodat i dobijena smeša je filtrirana, i filtrat je frakcionisan putem preparativne HPLC reverznih faza primenom CH3OH-H2O-TFA kao eluenta. Homogene frakcije su prikupljene i koncentrovane pod sniženim pritiskom preko noći, da se dobije terc-butil 7-((4-(6-hloro-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)indolin-1-karboksilat kao čvrsta supstanca žute boje. Ovaj materijal je rastvoren u dihlorometanu (2 mL) i TFA (1 mL, 12.98 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je zatim frakcionisan primenom preparativne LC/MS pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 38-78% B tokom 19 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Homogene frakcije su kombinovane i uparene in vacuo da se dobije jedinjenje iz naslova (5.0 mg, 29% prinos). Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). LC/MS rezultati: 1.9 min, 435.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.04 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.77 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.98 (d, J=6.6 Hz, 1H), 6.87 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.53 (t, J=7.3 Hz, 1H), 4.00-3.75 (m, 4H), 3.56-3.47 (m, 4H), 3.45 (s, 3H), 2.99-2.90 (m, 2H), 2.58-2.66 (br m, 4H).

PRIMER 217

8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[0789]

[0790] U epruveti za mikrotalasnu, 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (30 mg, 0.059 mmol), cink (0.775 mg, 0.012 mmol), cink cijanid (4.18 mg, 0.036 mmol), i 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlorometan kompleks (4.84 mg, 5.93 µmοl) su dodati. Sud je zatvoren, sekvencijalno evakuisan, i spran azotom tri puta. NMP (2 mL) je dodat i reakciona smeša je zagrevana na 75 °C tokom 1 hr. Reakciona smeša je zatim ohlađena, acetonitril je dodat, i dobijena smeša je filtrirana. Filtrat je frakcionisan primenom preparativne HPLC reverznih faza primenom acetonitril-voda-amonijum acetat kao eluenta. Homogene frakcije su kombinovane i koncentrovane pod pritiskom preko noći da se dobije jedinjenje iz naslova kao svetlo žuto obojena čvrsta supstanca (22.3 mg, 72.0 % prinos). Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Phenomenex LUNA C18, 2.0 × 50mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 metanol:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B tokom 4 minuta, zatim 1 minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 3.3 min, 497.1(M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.28-8.22 (m, 1H), 8.17-8.12 (m, 1H), 7.53 (dd, J=8.6, 5.6 Hz, 4H), 7.16 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.54 (s, 1H), 3.91 (br. s., 4H), 2.56 (br. s., 4H).

[0791] Sledeći primeri su pripremljeni primenom postupka analognog onima koji su već opisani iz odgovarajućeg polaznog materijala.

PRIMER 218

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0792]

[0793] Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.4 min, 506.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.04 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.52 (dd, J=8.6, 5.7 Hz, 4H), 7.16 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.51 (s, 1H), 3.88 (br. s., 4H), 3.51 (s, 3H), 2.56-2.53 (m, 4H).

PRIMER 219

6-hloro-4-(4-((2-hidroksifenil)(fenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0794]

[0795] LC/MS (Metod LC-2): 2.1 min, 486.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.06 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.79 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.54-7.46 (m, 2H), 7.42-7.35 (m, 1H), 7.33 (t, J=7.7 Hz, 2H), 7.26-7.17 (m, 1H), 7.10-6.97 (m, 1H), 6.84-6.73 (m, 2H), 4.78 (s, 1H), 3.90 (br. s, 4H), 3.52 (s, 3H), 2.69-2.56 (m, 4H).

PRIMER 220

6-hloro-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0796]

[0797] Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.1 min, 461.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.05 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.79 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.45-7.33 (m, 2H), 7.12 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.03 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.65 (d, J=2.6 Hz, 1H), 4.21 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.90-3.74 (m, 6H), 3.52 (s, 3H), 2.68 (br. s., 4H), 1.37 (t, J=7.2 Hz, 3H).

PRIMER 221

6-hloro-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0798]

[0799] Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.3 min, 444.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.36 (d, J=8.8 Hz, 1H), 8.06 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.94 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.88 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.80 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.62-7.44 (m, 4H), 4.00 (s, 2H), 3.83 (br. s., 4H), 3.53 (s, 3H), 2.72 (br. s., 4H).

PRIMER 222

6-hloro-4-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0800]

[0801] Uslovi analitičke LC/MS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS rezultati: 2.4 min, 522.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.06 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.79 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=8.6, 5.7 Hz, 2H), 7.43-7.34 (m, 1H), 7.16 (t, J=8.8 Hz, 2H), 6.72-6.53 (m, 2H), 4.79 (s, 1H), 3.89 (br. s., 4H), 3.52 (s, 3H), 2.62 (br. s., 2H), 2.57-2.51 (m, 2H).

PRIMER 223

[0802]

[0803] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 8-hloro-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila, 0.22etil acetata (94mg, 0.331 mmol) u DMF-u (3.3 mL). U rastvor su dodati magnetni štapić za mešanje, 1-(difenilmetil)piperazin (89 mg, 0.353 mmol), i zatim kalijum karbonat (91 mg, 0.662 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom vikenda. Reakcioni rastvor je odstranjen pipetiranjem iz neorganskih soli. Nekoliko kapi vode i TFA (0.076 mL, 0.993 mmol) je dodato i smeša je razblažena na 6 mL primenom DMF i filrirana kroz 0.45 µm sirindž filter u tri bočice od 2 mL za uzorak. Uzorak je prečišćen reverzno faznom HPLC pod sledećim uslovima: Shimadzu Prep HPLC sistem primenjujući softver za otkrivanje: Kolona: Waters Sunfire C18, 19 mm × 150 mm; Stopa protoka: 25 mL/min; Rastvarač % A: 10% acetonitril- 90% voda- 0.1% TFA; Rastvarač %B: 90% acetonitril- 10% voda- 0.1% TFA; Detekcija: UV na 220 nm; Gradijent 20%B do 100% B tokom 20 minuta, zadržavanje na 100% B tokom 5 minuta. Retenciono vreme proizvoda= 6.48 minuta do 7.31 minuta. Proizvod je prikupljen i rastvarač uklonjen u vakuumu da se dobije 156 mg jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 100% acetonitril sa 0.05% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 2-98 % B tokom 1.5 minuta, zatim 0.5 minutno zadržavanje na 98% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono vreme = 0.96 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 481.2.<1>H NMR (Acetonitril-d3) δ 8.00-8.04 (m, 1H), 7.94-8.00 (m, 1H), 7.69 (d, J=7.6 Hz, 4H), 7.40-7.47 (m, 4H), 7.32-7.39 (m, 2H), 5.08 (br. s., 1H), 3.71 (t, J=4.5 Hz, 4H), 3.60 (s, 3H), 3.15 (br. s., 4H).

PRIMER 224

3-bromo-4-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0804]

[0805] U bočicu od 1 drama koja sadrži 1-(1-bromoetil)-4-fluorobenzen (21 mg, 0.103 mmol), DMF (0.7 mL) i 3-bromo-1,6-dimetil-4-(piperazin-1-il)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (30.6 mg, 0.091 mmol) su dodati što je praćeno dodavanjem kalijum karbonata (25.6 mg, 0.185 mmol). Reakciona smeša je mešana u poklopljenoj bočici na sobnoj temperaturi tokom 4.5 sata. HPLC analiza je naznačila reakciju nastavljenu do završetka. Isparljive materije su uklonjene iz reakcije u vakuumu primenom rotacionog evaporatora. Sirovi reakcioni proizvod je podeljen između etil acetata i zasićenog natrijum bikarbonata. Organski ekstrakt je opran sa koncentrovanim rastvorom soli i osušen preko magnezijum sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtarcijom. Rastvarač je uklonjen iz filtrata da se dobije sirov proizvod kao 31 mg žutosmeđeg ulja. Rf proizvoda na ploči od silika gela je ~0.26 u 20% etil acetata u hloroformu. Uzorak je rastvoren u smeši DMF/acetonitril i sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 30-78% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. NMR podatak je prijavljen netačno za efekte supresije vode.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.83 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.37 (br dd, J=8.2, 5.8 Hz, 2H), 7.13 (br t, J=8.9 Hz, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.51 (br t, J=4.4 Hz, 3H), 2.59 (br s, 2H), 2.51 (br s, 4H), 1.32 (br d, J=6.7 Hz, 3H). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.4 %; Uočena masa: 458.92; Retenciono vreme: 1.91 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.3 %; Uočena masa: 459.04; Retenciono vreme: 1.19 min.

PRIMER 225

6-bromo-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0806]

[0807] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15mg, 0.050 mmol) u DMF-u (0.5 mL). Dalje, 1-etil-4-(piperazin-1-ilmetil)-1H-indol, 2 HCl (16.5 mg, 0.052 mmol) je dodat što je praćeno dodavanjem kalijum karbonata (31 mg, 0.224 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod azot na sobnoj temperaturi tokom 1.75 sata. Sirćetna kiselina (20 µl, 0.349 mmol) je dodata u reakcionu smešu. Reakciona smeša je razblažena do 1.2 mL primenom acetonitrila i filtrirana kroz sirindž filter. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 18 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.89-7.95 (m, 1H), 7.81-7.88 (m, 1H), 7.30-7.41 (m, 2H), 7.07-7.15 (m, 1H), 7.03 (d, J=6.6 Hz, 1H), 6.66 (d, J=2.6 Hz, 1H), 4.20 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.74-3.95 (m, 6H), 3.51 (s, 3H), 2.69 (br. s., 2H), 1.39 (t, J=7.0 Hz, 3H). Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 505.01; Retenciono vreme: 2.16 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 505.02; Retenciono vreme: 1.50 min. Protonska NMR: Intenzitet signala je smanjen (integracija) pored frekvencije potiskivanja vode.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.89-7.95 (m, 1H), 7.81-7.88 (m, 1H), 7.30-7.41 (m, 2H), 7.07-7.15 (m, 1H), 7.03 (d, J=6.6 Hz, 1H), 6.66 (d, J=2.6 Hz, 1H), 4.20 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.74-3.95 (m, 6H), 3.51 (s, 3H), 2.69 (br. s., 2H), 1.39 (t, J=7.0 Hz, 3H).

PRIMER 226

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0808]

[0809] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-hloro-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (6.5 mg, 0.028 mmol) i 1-(4,4'-difluorobenzhidril) piperazina (8.8 mg, 0.031 mmol) u DMF-u (0.3 mL). Nadalje, kalijum karbonat (8 mg, 0.058 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Analiza pomoću LCMS ukazala je na približno 80% konverzije. Dodatni 1-(4,4'-difluorobenzhidril)piperazin (2.3 mg, 7.98 µmol) je dodat u reakcionu smešu. Reakcioni sud je poklopljen. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena sa acetonitrilom i filtrirana kroz sirindž filter. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 48-88% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 486.13; Retenciono vreme: 2.36 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 486.16; Retenciono vreme: 1.59 min. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.86 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.44-7.58 (m, 5H), 7.09-7.18 (m, 4H), 4.52 (s, 1H), 3.90-3.97 (m, 4H), 3.50 (s, 2H), 2.53-2.60 (m, 4H).

PRIMER 227

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-(2,2,2-trifluoroacetil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0810]

[0811] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (25mg, 0.056 mmol) u dioksanu (0.5 mL). Nadalje, piridin (0.023 mL, 0.280 mmol) je dodat što je praćeno dodavanjem trifluorosirćetnog anhidrida (0.016 mL, 0.112 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod azot i mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 60-100% B tokom 18 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. (Čistoća: 95.0%; RT: 2.54; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 543.07) Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. (Čistoća: 100.0%; RT: 1.7; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 543.24). Proton NMR intenziteti signala proksimalni frekvenciji potiskivanja vode su bilo pod uticajem i bili su neispravljeni:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.54 (d, J=4.0 Hz, 1H), 8.01 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=8.8, 4.0 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=8.3, 5.7 Hz, 4H), 7.14 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.48 (s, 1H), 3.52 (s, 3H).

PRIMER 228

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-3-(2,2,2-trifluoroacetil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0812]

[0813] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (25mg, 0.054 mmol) u dioksanu (0.5 mL). Nadalje, piridin (0.022 mL, 0.271 mmol) je dodat što je praćeno dodavanjem trifluorosirćetnog anhidrida (0.015 mL, 0.109 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod azot i mešana na sobnoj temperaturi tokom 5.5 sata. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 60-100% B tokom 18 minuta, zatim 7 minut zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 93.9 %; Uočena masa: 557.14; Retenciono vreme: 2.63 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 91.9 %; Uočena masa: 557.14; Retenciono vreme: 1.79 min. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.87 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.54 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.47 (dd, J=8.6, 5.7 Hz, 4H), 7.12 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.48 (s, 1H), 3.49 (s, 2H), 3.29 (s, 3H), 2.51-2.54 (m, 4H).

PRIMER 229

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0814]

[0815] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 6-bromo-4-hloro-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (16 mg, 0.050 mmol) u DMF-u (0.5 mL). Nadalje, 1-(4,4'-difluorobenzhidril)piperazin (14.6 mg, 0.051 mmol) je dodat što je praćeno dodavanjem kalijum karbonata (13.9 mg, 0.101 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod azot i mešana na sobnoj temperaturi tokom 3.5 sata. Sirćetna kiselina (10 µl, 0.175 mmol) je dodata u reakcionu smešu. Reakciona smeša je zatim bila razblažena do 1 mL primenom acetonitrila i filtrirana. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 55-95% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 573.96; Retenciono vreme: 1.9 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 573.96; Retenciono vreme: 2.55 min. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.86-8.00 (m, 2H), 7.50 (dd, J=8.4, 5.9 Hz, 4H), 7.14 (t, J=8.8 Hz, 4H), 5.00 (d, J=1.8 Hz, 2H), 4.53 (s, 1H), 3.91 (br. s., 4H), 2.56 (br. s., 4H).

PRIMER 230

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-bromo-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0816]

[0817] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (26.5 mg, 0.059 mmol) u DMF-u (0.2 mL) što je praćeno dodavanjem NBS-a (12.6 mg, 0.071 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 2.5 sata. Reakciona smeša je razblažena do 1 mL primenom acetonitrila i zatim filtrirana kroz sirindž filter. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. (Čistoća: 98.8%; RT: 2.61; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 524.99). Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. (Čistoća: 100.0%; RT: 1.44; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 525.02). Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.54 (d, J=4.4 Hz, 1H), 7.98 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.63 (dd, J=8.6, 4.2 Hz, 1H), 7.51 (dd, J=8.4, 5.5 Hz, 4H), 7.14 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.46 (s, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.56 (t, J=5.0 Hz, 4H).

PRIMER 231

8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-N,N,5-trimetil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksamid

[0818]

[0819] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilne kiseline (15 mg, 0.029 mmol) i aza-HOBt (5.0 mg, 0.037 mmol) u DMF-u (0.3 mL). U reakcionu smešu je dodat DIEA (5.4 µl, 0.031 mmol) što je praćeno dodavanjem EDC-a (9.1 mg, 0.047 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta, i zatim je dodat dimetilamin (29.1 µl, 0.058 mmol). Reakcioni sud je poklopljen i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Sirćetna kiselina (7 µl, 0.122 mmol) je dodata i reakciona smeša je razblažena sa acetonitrilom. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 38-78% B tokom 20 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 543.18; Retenciono vreme: 1.41 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 543.24; Retenciono vreme: 2.01 min. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.04 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=8.6, 5.7 Hz, 4H), 7.14 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.55 (s, 1H), 3.84-3.95 (m, 4H), 3.54 (s, 3H), 3.00 (br s, 2H), 2.91 (br s, 2H), 2.52-2.57 (m, 4H).

PRIMER 232

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-3-(trifluorometil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0820]

[0821] Reference: Togni i sarad. J. Fluorine Chem. 131 (2010) 951-957. Uočen početak >135 °C; Haller, J. Org. Process Res. Dev., 2013, 17 (3), str 318-319.

[0822] U bočicu od 1 dram pod pritiskom koja sadrži novi Teflon magnetski štapić, 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (15 mg, 0.033 mmol) i hlorotris(trimetilsilil)silan (16.2 mg, 0.057 mmol) su dodati i rastvoreni u acetonitrilu (0.35 mL). Nadalje, 1-trifluorometil-3,3-dimetil-1,2-benziodoksol (21.5 mg, 0.065 mmol) je dodat. Bočica je zatvorena poklopcem pod pritiskom i zagrevana u uljanom kupatilu, preekvilibrisanom na 80 °C, iza zaštite od eksplozije tokom 24 sata. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 60-100% B tokom 22 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 529.16; Retenciono vreme: 2.67 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 529.22; Retenciono vreme: 1.71 min.

Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.85 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.50 (dt, J=8.5, 5.6 Hz, 5H), 7.13 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.49 (s, 1H), 3.67 (br s, 4H), 3.50 (s, 3H), 2.52-2.58 (m, 4H).

PRIMER 233

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-hloro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0823]

[0824] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (15 mg, 0.033 mmol) u DMF-u (0.33 mL). Rastvor je ohlađen do 0 °C i zatim je dodat n-hlorosukcinimide(5.0 mg, 0.037 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod azot, mešana na 0 °C tokom jednog sata, zatim uklonjena iz ledenog kupatila, zagrejana do sobne temperature, i mešana tokom dodatnog sata. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-100% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 495.1; Retenciono vreme: 1.53 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 495.09; Retenciono vreme: 2.49 min. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.84 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.40-7.54 (m, 5H), 7.13 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.48 (s, 1H), 3.54-3.64 (m, 6H), 2.54 (s, 3H).

PRIMER 234

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-fluoro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0825]

[0826] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (20 mg, 0.043 mmol) u acetonitrilu (0.4 mL). Rastvor je ohlađen do 0 °C i 1-hlorometil-4-fluoro-1,4-diazoniabiciklo [2.2.2]oktan bis(tetrafluoroborat) (15.39 mg, 0.043 mmol) rastvoren u vodi (0.15 mL) i TF (0.15 mL) je dodat. Reakciona smeša je postavljena pod azot, mešana na 0 °C, zagrevana do sobne temperature tokom 1.5 sata, i zatim mešana tokom 3 sata. HPLC analiza reakcije je prikazala približno 25% konverzije u proizvod. Reakciona smeša je ohlađena do 0 °C i dodatni 1-hlorometil-4-fluoro-1,4-diazoniabiciklo [2.2.2]oktan bis(tetrafluoroborat) (16.3 mg, 0.046 mmol) u 0.2 mL vode je dodat. Reakcioni sud je poklopljen i reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 25 minuta. Reakcioni sud je uklonjen iz ledenog kupatila. Reakciona smeša je mešana tokom 35 minuta zagrevajući do sobne temperature. HPLC analiza je ukazala na približno 50% konverzije u proizvod. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 45-85% B tokom 23 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 96.4 %; Uočena masa: 479.2; Retenciono vreme: 2.42 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 96.3 %; Uočena masa: 479.2; Retenciono vreme: 1.48 min. Uticano je na intenzitete protonskih NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.81 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.48 (dd, J=8.6, 5.7 Hz, 4H), 7.41 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.12 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.48 (s, 1H), 3.58 (br s, 3H), 3.56 (s, 3H).

PRIMER 235

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril, TFA

[0827]

[0828] U bočicu od 1 drama napunjenu sa 6-bromo-1-metil-2,4-diokso-1,2,3,4-tetrahidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrilom (39.7 mg, 0.142 mmol) u acetonitrilu (1.4 mL) dodat je DIEA (0.149 mL, 0.850 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom nekoliko minuta i tozil hlorid (81 mg, 0.425 mmol) je dodat. Reakciona smeša je poklopljena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 sata. Jedna polovina gorepomenute reakcione zapremine (reakciona smeša je bila heterogena i boje ćilibara) je dodata u bočicu od jednog drama koja sadrži 1-(4,4'-difluorobenzhidril)piperazin (26.6 mg, 0.092 mmol), acetonitril (0.2 mL), i 1-metilpiperidin (0.011 mL, 0.092 mmol). Reakciona smeša je poklopljena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Nakon HPLC analize, 1-(4,4'-difluorbenzhidri)piperazin (20.47 mg, 0.071 mmol) je dodat u reakcionu smešu. Reakcioni sud je poklopljen. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dodatnih 1.5 sat. Sirćetna kiselina (0.020 mL, 0.355 mmol) je dodata u reakcionu smešu zajedno sa DMF i filtrirana kroz sirindž filter. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 15-55% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.4 %; Uočena masa: 549.94; Retenciono vreme: 2.5 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 549.95; Retenciono vreme: 1.8 min.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.89-7.96 (m, 1H), 7.81-7.88 (m, 1H), 7.54 (dd, J=8.3, 5.7 Hz, 4H), 7.17 (t, J=8.8 Hz, 4H), 4.73 (br. s., 1H), 3.91 (br. s., 4H), 3.51 (s, 3H), 2.68 (br. s., 4H).

PRIMER 236

3-bromo-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0829]

[0830] U bočicu od 1 drama koja sadrži 3-bromo-4-hidroksi-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (16.4 mg, 0.064 mmol), dodat je acetonitril (0.5 mL) što je praćeno dodavanjem DIEA (44.9 µl, 0.257 mmol). U reakcionu smešu je dodat triflični anhidrid (13.04 µl, 0.077 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 55 minuta. HPLC analiza reakcije je ukazala približno na 60% konverzije u proizvod. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod atmosferom azota preko noći. Sledećeg jutra HPLC analiza je pokazala da nije došlo do značajne promene u reakcionoj kompoziciji. Triflični anhidrid (5.5 µl, 0.033 mmol) je dodat u reakcionu smešu. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom azota tokom 45 minuta. Naknadna HPLC analiza je procenila konverziju u proizvod u 91%. Isparljive materije su uklonjene iz reakcije u vakuumu primenom rotacinog uparivača. Sirovi proizvod je podeljen između etil acetata i 1.5 M dikalijum fosfata. Organski ekstrakt je opran sekvencijalno sa 1.5 M dikalijum fosfata i slanim rastvorom, i osušen preko magnezijum sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtarcijom. Rastvarači su uklonjeni u vakuumu primenom rotacinog uparivača da se dobije intermedijerni proizvod, 3-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il trifluorometansulfonat, kao braon film (26 mg). LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH C18 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 100% voda sa 0.05% TFA; Mobilna faza B: 100% acetonitril wit 0.05% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 2 %B do 98 %B tokom 1.5 minuta, zatim 0.5 min zadržavanje na 98 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 3 µL. Retenciono vreme = 1.01 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 386.85.

[0831] Rastvor 3-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il trifluorometansulfonata (26mg, 0.067 mmol) u DCM-u (0.45 mL) je dodat u bočicu od 1 drama koja sadrži 1-etil-4-(piperazin-1-ilmetil)-1H-indol, 2 TFA (44.3 mg, 0.094 mmol) i DIEA (0.059 mL, 0.336 mmol). Bočica je poklopljena i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Isparljive materije su uklonjene iz reakcione smeše u vakuumu primenom rotacinog uparivača. Sirovi reakcioni proizvod je rastvoren u DMF/acetonitril (1:1, 1 mL). Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 40-80% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja.

[0832] Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. (Čistoća: 100.0%; RT: 1.88; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 480.04). Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. (Čistoća: 100.0%; RT: 1.29; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 480.04). Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.53 (d, J=2.9 Hz, 1H), 7.99 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.63 (dd, J=8.6, 4.2 Hz, 1H), 7.32-7.44 (m, 2H), 7.11 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.03 (d, J=5.9 Hz, 1H), 6.65 (br. s., 1H), 4.20 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.79 (br. s., 1H), 3.64 (s, 3H), 3.53 (br. s., 2H), 2.63 (br. s., 2H), 1.37 (t, J=7.2 Hz, 3H).

PRIMER 237

6-bromo-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0833]

[0834] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15mg, 0.050 mmol) u DMF-u (0.5 mL). Nadalje, 1-(naftalen-1-ilmetil)piperazin, 3 TFA (28.6 mg, 0.050 mmol) je dodat što je praćeno dodavanjem kalijum karbonata (34.7 mg, 0.251 mmol). Reakciona smeša je postavljena pod atmosferu azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Reakciona smeša je razblažena sa acetonitrilom i 15 µl sirćetne kiseline je dodato. Reakciona smeša je mešana i zatim filtrirana kroz sirindž filter. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 50-90% B tokom 15 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 487.9; Retenciono vreme: 1.35 min.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.36 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.92 (d, J=9.2 Hz, 2H), 7.82-7.88 (m, 2H), 7.43-7.62 (m, 4H), 4.00 (s, 2H), 3.83 (d, J=4.8 Hz, 4H), 3.52 (s, 3H), 2.67-2.77 (m, 4H).

PRIMER 238

4-(4-([1,1'-bifenil]-2-ilmetil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril, TFA

[0835]

[0836] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 6-bromo-4-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila (15mg, 0.050 mmol) u DMF-u (0.5 mL). Nadalje, 1-([1,1'-bifenil]-2-ilmetil)piperazin, 2 TFA (24.14 mg, 0.050 mmol) je dodat što je praćeno dodavanjem kalijum karbonata (29 mg, 0.210 mmol). Reakciona smeša je poklopljena pod atmosferom azota i mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Reakciona smeša je razblažena u DMF-u i acetonitrilu, i dve kapi vode i 30 µL sirćetne kiseline su dodati. Reakciona smeša je zagrevana da se rastvore čvrste materije i filtrirana kroz sirindž filter. Nakon hlađenja veoma mala količina ili materijal je izdvojen taloženjem i 15 µL TFA je dodato da se potpomogne solubilizacija. Rastvor je ponovo filtriran kroz sirindž filter. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Gradijent: 15-55% B tokom 18 minuta, zatim 4 minuta zadržavanje pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 513.93; Retenciono vreme: 2.42 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 514.18; Retenciono vreme: 1.46 min. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 7.90-7.97 (m, 1H), 7.83-7.89 (m, 1H), 7.71 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.48 (t, J=7.3 Hz, 4H), 7.35-7.43 (m, 3H), 7.28-7.34 (m, 1H), 4.08 (br. s., 1H), 3.89 (br. s., 3H), 3.51 (s, 2H), 2.93 (br. s., 1H).

PRIMER 239

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-bromo-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[0837]

[0838] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (25 mg, 0.054 mmol) u DMF-u (0.25 mL). Nadalje, NBS (12.3 mg, 0.069 mmol) je dodat. Reakciona smeša je poklopljena i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 sata. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 55-95% B tokom 20 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje na 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 539.07; Retenciono vreme: 2.58 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 % B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 539.06; Retenciono vreme: 1.65 min.<1>H NMR (HLOROFORM-d) δ 7.55 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.39-7.47 (m, 4H), 7.30 (d, J=8.7 Hz, 1H), 6.96-7.05 (m, 4H), 4.32 (s, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.65-3.70 (m, 4H), 2.56-2.64 (m, 7H).

PRIMER 240

metil 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilat

[0839]

[0840] U bočicu od 2 drama koja sadrži metil 7-cijano-5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilat, HCl (52 mg, 0.143 mmol), dodato je 1.5 mL DCM-a i 1.5 mL 1.0M natrijum karbonata. Nadalje, 4,4'-(bromometilen)bis (fluorobenzen) (59.5 mg, 0.210 mmol) je dodat. Reakcioni sud je poklopljen. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 dana. Reakciona smeša je dodatno razblažena sa DCM i slanim rastvorom. Proizvod je ekstrahovan u etil acetat. Organski ekstrakt je osušen preko magnezijum sulfata, filtriran, i rastvarač je uklonjen u vakuumu da se dobije sirovi proizvod. Sirova smeša je prečišćena primenom silika gel hromatografije eluiranjem prvo sa DCM da se uklone nepolarne nečistoće i zatim 15% etil acetatom u DCM-u. Čiste frakcije proizvoda (TLC) su kombinovane i rastvarač je ukonjen u vakuumu da se dobije proizvod kao bež čvrsta supstanca. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim 1 min zadržavanje na 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Retenciono vreme = 1.90 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 530.20. LCMS; Kolona: Phenomenex Luna C18, 2 mm × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 4 minuta, zatim 1 min zadržavanje na 100 %B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 3 µL. Retenciono vreme = 3.43 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 530.21.

PRIMER 241

8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilna kiselina

[0841]

[0842] U bočicu od 1 drama koja sadrži metil 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilat (50 mg, 0.094 mmol), dodato je 0.5 mL TF, dovodeći do formiranja suspenzije. Nadalje, 0.5 mL DCM-a je dodato da se potpomogne solubilizacija. Dodatni TF (0.45 mL) je dodat, što je istaložilo više polaznog materijala iz rastvora. DCM je dodat u delovima od 0.1 mL da se solubilizuje polazni materijal. Solubilizacija je postignuta nakon dodatnih 0.4 mL DCM-a. Sastav reakcionog rastvora je bio 0.9 mL DCM-a i 0.95 mL TF-a. Kalijum trimetilsilanolat (15.7 mg, 0.122 mmol) je dodat u reakcionu smešu i reakciona smeša je poklopljena i mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Hlorovodonična kiselina (1M, 0.123 mL, 0.123 mmol) je dodata u reakcionu smešu i reakciona smeša je mešana tokom nekoliko minuta. Hloroform je dodat. Reakciona smeša je prenešena u levak za odvajanje i dodatni hloroform je dodat zajedno sa nešto vode. Nakon mešanja, organska faza je odvojena i vodena faza je ekstrahovana hloroformom. Organski ekstrakti su kombinovani i oprani sa koncentrovanim rastvorom soli i osušeni preko magnezijum sulfata. Sredstvo za sušenje je izdvojeno filtriranjem i rastvarač iz filtrata je uklonjen u vakuumu primenom rotacinog uparivača. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne reverzno fazne HPLC primenom sistema rastvarača acetonitril/voda/0.1%TFA sa UV detekcijom na 220 nm. Frakcije su analizirane pomoću LCMS i rastvarač je uklonjen iz frakcije proizvoda u vakuumu primenom rotacinog uparivača da se dobije proizvod kao čvrsta supstanca prljavo bele boje. LCMS; Kolona: Waters Acquity BEH 2.1mm × 50mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 10:90 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna faza B: 90:10 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 40 °C; Gradijent 0 %B do 100 %B tokom 2 minuta, zatim 1 min zadržavanje na 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Zapremina ubrizgavanja: 1 µL. Rezultati: Retenciono vreme = 1.70 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 516.20.<1>H NMR (Acetonitril-d3) δ 8.25 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.92 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.64-7.78 (m, 4H), 7.17 (t, J=8.7 Hz, 4H), 5.05 (br. s., 1H), 4.16 (br. s., 4H), 3.57 (s, 3H), 3.15 (br. s., 4H).

PRIMER 242

4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-metil-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on

[0843]

[0844] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom primenjenim da se pripremi Primer 165. Jedinjenje (1.8 mg) je izolovano u 0.9% prinosu. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 243

4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-etil-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on

[0845]

[0846] Jedinjenje iz naslovaje pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 165. Jedinjenje (5 mg) je izolovano u 23.7% prinosu. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 244

4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-(2-metoksietil)-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on

[0847]

[0848] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 165. Jedinjenje (10.1 mg) je izolovano u 35.5% prinosu. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 245

2-{4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-1-il}

acetonitril

[0849]

[0850] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 165. Jedinjenje (5.9 mg) je izolovano u 21.5% prinosu. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 246

etil 2-{4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-1-il} acetat

[0851]

[0852] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 165. Jedinjenje (7.5 mg) je izolovano u 50.8% prinosu. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 248

4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-3-nitro-1-propil-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on

[0853]

[0854] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 165. Jedinjenje (9.5 mg) je izolovano u 27.9% prinosu. Dva analitička LC/MS ubrizgavanja su korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, zatim 0.75 minuta zadržavanja na 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 250

4- {4- [ciklopropil(4-fluorofenil)metil] piperazin-1-il } -1, 6-dimetil-2-okso-1, 2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0855]

[0856] U zatvoreni reakcioni sud od 2 drama, 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril, TFA (20 mg, 0.050 mmol), ciklopropil(4-fluorofenil)metanol (11.71 mg, 0.070 mmol), (cijanometil)trimetilfosfonium jodid (24.46 mg, 0.101 mmol) su kombinovani u proprionitrilu (252 µl). Hunigova baza (75 µl, 0.429 mmol) je dodata i reakciona smeša je zagrevana na 110 °C tokom 4 sata. LC\MS analiza je prikazala da je utrošen polazni materijal. Reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom (5 mL) i ekstrahovana 3 × sa vodom. Organski deo je koncentrovan pod strujom azota. Sirovi materijal je prečišćen pomoću preparativne LC/MS sa sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetata; Gradijent: 0-minutno zadržavanje na 30% B, 30-70% B tokom 23 minuta, zatim 5 minuta zadržavanja pri 100% B; Stopa protoka: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Prikupljanje frakcija je započeto sa MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene pomoću centrifugalnog evaporisanja. Jedinjenje (1.8 mg) je izolovano u 8.3% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.0 %; Uočena masa: 432.16; Retenciono vreme: 1.42 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.4 %; Uočena masa: 432.2; Retenciono vreme: 2.03 min.

PRIMER 251

4-{4-[bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0857]

[0858] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 250. Jedinjenje (23.2 mg) je izolovano u 42.5% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.1 %; Uočena masa: 546.16; Retenciono vreme: 2.31 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 546.19; Retenciono vreme: 1.51 min.

PRIMER 252

4-[4-(4-metoksibutan-2-il)piperazin-1-il]-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0859]

[0860] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 250. Jedinjenje (1.7 mg) je izolovano u 9.2% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 92.7 %; Uočena masa: 370.2; Retenciono vreme: 1.02 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 95.3 %; Uočena masa: 370.21; Retenciono vreme: 1.37 min.

PRIMER 253

4-[4-(3,4-dihidro-2H-1-benzopiran-4-il)piperazin-1-il]-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0861]

[0862] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 250. Jedinjenje (2.1 mg) je izolovano u 10.1% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 416.16; Retenciono vreme: 1.19 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 416.14; Retenciono vreme: 2.04 min.

PRIMER 254

4-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksipiridin-3-il)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0863]

[0864] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 250. Jedinjenje (0.8 mg) je izolovano u 3.2% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.5 %; Uočena masa: 499.22; Retenciono vreme: 1.44 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.3 %; Uočena masa: 499.19; Retenciono vreme: 2.2 min.

PRIMER 255

4-{4-[(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0865]

[0866] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 250. Jedinjenje (9.5 mg) je izolovano u 19.1% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.3 %; Uočena masa: 499.2; Retenciono vreme: 1.93 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.6 %; Uočena masa: 499.2; Retenciono vreme: 1.37 min.

PRIMER 256

4-{4-[(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0867]

[0868] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 250. Jedinjenje (17.2 mg) je izolovano u 36.7% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 98.6 %; Uočena masa: 469.18; Retenciono vreme: 1.89 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 469.19; Retenciono vreme: 1.33 min.

PRIMER 258

4- {4-[(2-bromo-6-hidroksifenil)metil] piperazin-1 -il} -6-hl oro-1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0869]

[0870] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 257. Jedinjenje (13 mg) je izolovano u 70% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 487.93; Retenciono vreme: 1.19 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 487.92; Retenciono vreme: 1.81 min.

PRIMER 259

6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-6-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0871]

[0872] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 2. Jedinjenje (4.9 mg) je izolovano u 20.1% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 467.99; Retenciono vreme: 1.18 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 467.99; Retenciono vreme: 1.71 min.

PRIMER 260

8-{4-[2-(4-fluorofenil)propan-2-il]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[0873]

[0874] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 18 primenom intermedijera 81. Jedinjenje (18.3 mg) je izolovano u 71.3% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.4 %; Uočena masa: 451.22; Retenciono vreme: 2.23 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 99.3 %; Uočena masa: 451.21; Retenciono vreme: 1.14 min.

PRIMER 261

4-{4-[(4-terc-butil-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0875]

[0876] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216. Jedinjenje (8.4 mg) je izolovano u 47.4% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 466.15; Retenciono vreme: 1.51 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 466.17; Retenciono vreme: 2.39 min.

PRIMER 262

4-(4-{[2-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0877]

[0878] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216 iz 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (9.4 mg) je izolovano u 37.5% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 474.14; Retenciono vreme: 2.5 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 474.14; Retenciono vreme: 1.59 min.

PRIMER 263

8-{4-[(4-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[0879]

[0880] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216 iz 5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril, 2 TFA. Jedinjenje (6.6 mg) je izolovano u 36.2% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 95.0 %; Uočena masa: 478.91; Retenciono vreme: 1.18 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 97.4 %; Uočena masa: 478.94; Retenciono vreme: 1.89 min.

PRIMER 264

6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-6-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0881]

[0882] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216. Jedinjenje (5.9 mg) je izolovano u 35.3% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 440.12; Retenciono vreme: 1.19 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 440.12; Retenciono vreme: 1.88 min.

PRIMER 265

8-(4-{ [2-hi droksi-4-(trifluorometoksi)fenil]metil} piperazin-1 -il)-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[0883]

[0884] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216 iz 5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitrila, 2 TFA. Jedinjenje (5 mg) je izolovano u 18.5% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 97.4 %; Uočena masa: 485.01; Retenciono vreme: 1.99 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 485.01; Retenciono vreme: 1.3 min.

PRIMER 266

6-bromo-4-{4-[(4-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0885]

[0886] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 2. Jedinjenje (7.9 mg) je izolovano u 37.6% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 487.93; Retenciono vreme: 1.26 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 487.97; Retenciono vreme: 2.15 min.

PRIMER 267

6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0887]

[0888] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216. Jedinjenje (11.7 mg) je izolovano u 69.3% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 443.96; Retenciono vreme: 1.77 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 443.96; Retenciono vreme: 1.18 min.

PRIMER 268

4-{4-[(3-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0889]

[0890] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216. Jedinjenje (13.8 mg) je izolovano u 74.3% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.2 %; Uočena masa: 488.04; Retenciono vreme: 2.49 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 98.1 %; Uočena masa: 487.98; Retenciono vreme: 1.5 min.

PRIMER 269

8-{4-[(4-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[0891]

[0892] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštom procedurom koja je korišćena da se pripremi primer 216 iz 5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitrila, 2 TFA. Jedinjenje (6.5 mg) je izolovano u 39.3% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 99.4 %; Uočena masa: 434.97; Retenciono vreme: 1.86 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 95.9 %; Uočena masa: 434.96; Retenciono vreme: 1.15 min.

PRIMER 270

6-bromo-4-(4- { [2-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0893]

[0894] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 2. Jedinjenje (4.8 mg) je izolovano u 20.7% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 96.6 %; Uočena masa: 538.04; Retenciono vreme: 2.63 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 538.03; Retenciono vreme: 1.67 min.

PRIMER 271

6-bromo-4-{4-[(2-bromo-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0895]

[0896] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 2. Jedinjenje (2.7 mg) je izolovano u 14.5% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 531.89; Retenciono vreme: 1.21 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 531.93; Retenciono vreme: 1.84 min.

PRIMER 272

6-hloro-4-{4-[(2-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0897]

[0898] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216. Jedinjenje (5.7 mg) je izolovano u 47.5% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 428.07; Retenciono vreme: 2.19 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 428.05; Retenciono vreme: 1.25 min.

PRIMER 273

6-hloro-4- {4-[(2-hidroksi-4-metilfenil)metil] piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1 ,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0899]

[0900] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216. Jedinjenje (8.1 mg) je izolovano u 68.2% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 424; Retenciono vreme: 1.71 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 423.99; Retenciono vreme: 1.16 min.

PRIMER 274

6-hloro-4- {4-[(3-fluoro-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0901]

[0902] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno u skladu sa opštim postupkom korišćenim da se pripremi primer 216. Jedinjenje (9.7 mg) je izolovano u 41.4% prinosu. Analitička LC/MS je korišćena da se odredi finalna čistoća. Uslovi ubrizgavanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetne kiseline; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 442.12; Retenciono vreme: 1.29 min. Uslovi ubrizgavanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B tokom 3 min, zatim 0.75 min zadržavanje pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati ubrizgavanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena masa: 442.12; Retenciono vreme: 2.04 min.

PRIMER 275

4-{4-[(5-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0903]

[0904] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (14.7 mg) je izolovano u 79.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 488.02; Retenciono Vreme: 1.52 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.3 %; Uočena Masa: 487.99; Retenciono Vreme: 2.51 min.

PRIMER 276

4- {4-[(4-bromo-2-hidroksifenil)metil] piperazin-1 -il} -6-hlo oro-1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0905]

[0906] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.3 mg) je izolovano u 46% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 488; Retenciono Vreme: 1.28 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 488.02; Retenciono Vreme: 2.17 min.

PRIMER 277

4-{4-[(5-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0907]

[0908] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (14.4 mg) je izolovano u 78.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 468; Retenciono Vreme: 1.2 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 468.02; Retenciono Vreme: 2.01 min.

PRIMER 278

6-bromo-4-{4-[(3-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0909]

[0910] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (5.6 mg) je izolovano u 26.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50°C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 488.05; Retenciono Vreme: 2.48 min. Uslovi Injektovanja 3: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 3: Čistoća: 99.3 %; Uočena Masa: 488.01; Retenciono Vreme: 1.48 min.

PRIMER 279

6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0911]

[0912] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6 mg) je izolovano u 35.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50°C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 442.09; Retenciono Vreme: 1.91 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 442.13; Retenciono Vreme: 1.22 min.

PRIMER 280

6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0913]

[0914] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.2 mg) je izolovano u 38.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.01; Retenciono Vreme: 1.11 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.01; Retenciono Vreme: 1.86 min.

PRIMER 281

6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-3-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0915]

[0916] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (10.8 mg) je izolovano u 47.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 425.97; Retenciono Vreme: 1.25 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 425.97; Retenciono Vreme: 2.02 min.

PRIMER 282

6-bromo-4-{4-[(5-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0917]

[0918] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (7.4 mg) je izolovano u 32.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50°C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 531.96; Retenciono Vreme: 2.6 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 531.98; Retenciono Vreme: 1.55 min.

PRIMER 283

6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-5-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0919]

[0920] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (7.5 mg) je izolovano u 46.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.11; Retenciono Vreme: 2.03 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.11; Retenciono Vreme: 1.21 min.

PRIMER 284

terc-butil N-(2-{[4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1 -il] metil} fenil)karbamat

[0921]

[0922] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (8.1 mg) je izolovano u 34% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50°C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 553.06; Retenciono Vreme: 2.48 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 553.07; Retenciono Vreme: 1.43 min.

PRIMER 285

6-hloro-1-metil-2-okso-4-(4-{[2-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0923]

[0924] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (9.8 mg) je izolovano u 38.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.13; Retenciono Vreme: 2.28 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.12; Retenciono Vreme: 1.4 min.

PRIMER 286

4-{4-[(3-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0925]

[0926] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (4.3 mg) je izolovano u 23.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 468.01; Retenciono Vreme: 1.97 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 467.99; Retenciono Vreme: 1.16 min.

PRIMER 287

6-hloro-4- {4-[(2-hloro-4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0927]

[0928] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (9.6 mg) je izolovano u 40.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 445.92; Retenciono Vreme: 1.26 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 445.91; Retenciono Vreme: 2.17 min.

PRIMER 288

6-hloro-4-{4-[(4-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0929]

[0930] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (9.6 mg) je izolovano u 77.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 443.96; Retenciono Vreme: 1.78 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 443.95; Retenciono Vreme: 1.18 min.

PRIMER 289

6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0931]

[0932] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.3 mg) je izolovano u 23.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 96.9 %; Uočena Masa: 426.11; Retenciono Vreme: 2.15 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.2 %; Uočena Masa: 426.08; Retenciono Vreme: 1.32 min.

PRIMER 290

6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-5-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0933]

[0934] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4.5 mg) je izolovano u 37.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 426; Retenciono Vreme: 1.28 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 426; Retenciono Vreme: 2.09 min.

PRIMER 291

6-hloro-4-{4-[(3,5-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0935]

[0936] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (7.3 mg) je izolovano u 44.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 430.11; Retenciono Vreme: 1.26 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 430.07; Retenciono Vreme: 2.11 min.

PRIMER 292

6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-6-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0937]

[0938] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (11.2 mg) je izolovano u 45.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.02; Retenciono Vreme: 1.16 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 95.7 %; Uočena Masa: 424.01; Retenciono Vreme: 1.69 min.

PRIMER 293

6-hloro-4-{4-[(3-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0939]

[0940] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (12.9 mg) je izolovano u 76.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 444.09; Retenciono Vreme: 1.42 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 444.08; Retenciono Vreme: 2.46 min.

PRIMER 294

6-bromo-4-{4-[(2-fluoro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0941]

[0942] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (10.5 mg) je izolovano u 63.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 471.93; Retenciono Vreme: 1.13 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 471.92; Retenciono Vreme: 1.9 min.

PRIMER 295

6-bromo-4- {4-[(2-hidroksi-4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0943]

[0944] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (12.5 mg) je izolovano u 60% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50°C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.3 %; Uočena Masa: 483.97; Retenciono Vreme: 1.81 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.1 %; Uočena Masa: 483.96; Retenciono Vreme: 1.14 min.

PRIMER 296

4- {4-[(5-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il} -1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0945]

[0946] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (10.5 mg) je izolovano u 46.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.09; Retenciono Vreme: 2.4 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.11; Retenciono Vreme: 1.43 min.

PRIMER 297

6-bromo-4-{4-[(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0947]

[0948] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (5.2 mg) je izolovano u 31.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 95.8 %; Uočena Masa: 468; Retenciono Vreme: 1.22 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 95.2 %; Uočena Masa: 468; Retenciono Vreme: 1.8 min.

PRIMER 298

6-hloro-4-{4-[(3,5-difluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0949]

[0950] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (11.6 mg) je izolovano u 68.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 96.6 %; Uočena Masa: 446.07; Retenciono Vreme: 2.32 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.9 %; Uočena Masa: 446.1; Retenciono Vreme: 1.4 min.

PRIMER 299

6-bromo-4-{4-[(2,3-dihidro-1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0951]

[0952] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (5.4 mg) je izolovano u 26.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.98; Retenciono Vreme: 1.19 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.99; Retenciono Vreme: 1.94 min.

PRIMER 300

6-bromo-4-{4-[(2-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0953]

[0954] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (7.3 mg) je izolovano u 44.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 472; Retenciono Vreme: 2.23 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 471.99; Retenciono Vreme: 1.3 min.

PRIMER 301

6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0955]

[0956] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.9 mg) je izolovano u 56% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 440.01; Retenciono Vreme: 1.58 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 439.98; Retenciono Vreme: 1.13 min.

PRIMER 302

6-hloro-4-{4-[(3-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0957]

[0958] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (14.3 mg) je izolovano u 69.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.05; Retenciono Vreme: 1.3 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.07; Retenciono Vreme: 2.17 min.

PRIMER 303

6-hloro-4-{4-[(1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0959]

[0960] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.3 mg) je izolovano u 38.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 433.02; Retenciono Vreme: 2.03 min. Uslovi Injektovanja 3: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 3: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 432.99; Retenciono Vreme: 1.25 min.

PRIMER 304

6-bromo-4-{4-[(3-fluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0961]

[0962] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (6.6 mg) je izolovano u 32.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 97.2 %; Uočena Masa: 472.04; Retenciono Vreme: 2.33 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 472.06; Retenciono Vreme: 1.37 min.

PRIMER 305

6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-5-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0963]

[0964] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (8.7 mg) je izolovano u 52% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 440.13; Retenciono Vreme: 1.13 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 440.12; Retenciono Vreme: 1.8 min.

PRIMER 306

6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0965]

[0966] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (11.6 mg) je izolovano u 71.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.09; Retenciono Vreme: 1.32 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.1; Retenciono Vreme: 2.28 min.

PRIMER 307

6-hloro-4-{4-[(3,5-dihloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0967]

[0968] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (7.9 mg) je izolovano u 43.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.02; Retenciono Vreme: 1.65 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.03; Retenciono Vreme: 2.66 min.

PRIMER 308

6-hloro-4-{4-[(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0969]

[0970] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (12.2 mg) je izolovano u 61.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 412.1; Retenciono Vreme: 1.97 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 91.9 %; Uočena Masa: 412.07; Retenciono Vreme: 1.21 min.

PRIMER 309

6-bromo-4-{4-[(3-terc-butil-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0971]

[0972] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (3.6 mg) je izolovano u 16.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 510.09; Retenciono Vreme: 3.04 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 510.12; Retenciono Vreme: 1.96 min.

PRIMER 310

6-hloro-4-{4-[(2,4-dihlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0973]

[0974] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (3.1 mg) je izolovano u 12.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 462.03; Retenciono Vreme: 2.46 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 462.07; Retenciono Vreme: 1.43 min.

PRIMER 311

6-hloro-4-(4-{[2-hidroksi-4-(trifluorometil)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0975]

[0976] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4.8 mg) je izolovano u 26.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.07; Retenciono Vreme: 2.18 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.11; Retenciono Vreme: 1.34 min.

PRIMER 312

6-hloro-4-{4-[(5-fluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0977]

[0978] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (8.6 mg) je izolovano u 52.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.12; Retenciono Vreme: 1.92 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.1; Retenciono Vreme: 1.14 min.

PRIMER 313

6-hloro-4-(4- { [3-fluoro-5-(trifluorometil)fenil] metil} piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0979]

[0980] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (7.4 mg) je izolovano u 40.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 480.09; Retenciono Vreme: 1.44 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 480.09; Retenciono Vreme: 2.3 min.

PRIMER 314

6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-6-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0981]

[0982] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (7.4 mg) je izolovano u 43.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 483.98; Retenciono Vreme: 1.17 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 483.98; Retenciono Vreme: 1.79 min.

PRIMERI 315 I 316

6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-metilpropil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0983]

[0984] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 193. Racemsko jedinjenje (17.5 mg) je izolovano u 55.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 454.17; Retenciono Vreme: 2.46 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 454.14; Retenciono Vreme: 1.39 min. Racemska smeša je razdvojena na Primer 315 (Izomer 1) i Primer 316 (Izomer 2).

[0985] Primer 315 (4.3 mg) je izolovan u 27.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 454.42; Retenciono Vreme: 2.61 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 454.15; Retenciono Vreme: 1.34 min.

[0986] Primer 316 (4.2 mg) je izolovan u 26.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 454.1; Retenciono Vreme: 2.62 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.4 %; Uočena Masa: 454.26; Retenciono Vreme: 1.35 min.

PRIMER 317

8-{4-[(2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[0987]

[0988] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitrila, 2 TFA. Jedinjenje (6 mg) je izolovano u 39.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.1 %; Uočena Masa: 400.98; Retenciono Vreme: 1.02 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.8 %; Uočena Masa: 400.99; Retenciono Vreme: 1.62 min.

PRIMER 318

6-hloro-4- {4-[(2,5-difluorofenil)metil]piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0989]

[0990] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (13.2 mg) je izolovano u 64% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 430.05; Retenciono Vreme: 2 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 430.08; Retenciono Vreme: 1.2 min.

PRIMER 319

6-hloro-4- {4-[(3,4-difluorofenil)metil]piperazin-1-il} -1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0991]

[0992] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (3.9 mg) je izolovano u 32.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 430.07; Retenciono Vreme: 1.25 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 430.09; Retenciono Vreme: 2.07 min.

PRIMER 320

6-bromo-4-{4-[(3,5-difluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0993]

[0994] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (9.8 mg) je izolovano u 46.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.9 %; Uočena Masa: 490.02; Retenciono Vreme: 2.39 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.9 %; Uočena Masa: 489.98; Retenciono Vreme: 1.42 min.

PRIMER 321

6-hloro-4-{4-[(3-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0995]

[0996] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4.5 mg) je izolovano u 39% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 412.07; Retenciono Vreme: 1.2 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 412.13; Retenciono Vreme: 2.02 min.

PRIMER 322

6-hloro-4-{4-[(1H-indazol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0998] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (3 mg) je izolovano u 24.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 434.11; Retenciono Vreme: 1.8 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 434.07; Retenciono Vreme: 1.11 min.

PRIMER 323

6-hloro-4-{4-[(4-hloro-3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[0999]

[1000] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5 mg) je izolovano u 40.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 444.08; Retenciono Vreme: 1.77 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 444.06; Retenciono Vreme: 1.19 min.

PRIMER 324

6-hloro-4-{4-[(3-hloro-5-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1001]

[1002] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4.3 mg) je izolovano u 25.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 446.05; Retenciono Vreme: 2.27 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 446.04; Retenciono Vreme: 1.34 min.

PRIMER 325

8-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1003]

[1004] U bočicu za mikrotalasnu, cink (0.696 mg, 10.64 µmol), bromo(tri-terc-butilfosfin) paladijum(i) dimer (8.27 mg, 10.64 µmol), dicijanocink (1.999 mg, 0.017 mmol) i 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (10 mg, 0.021 mmol) su dodati. Bočica je zatvorena, stavljena pod vakuum i napunjena azotom. DMF (0.5 mL) je dodat i reakciona smeša je zagrevana na 50 °C tokom 2 sata. LC/MS analiza je pokazala da je reakcija završena. Reakciona smeša je razblažena sa CH3CN, filtrirana i filtrat je prečišćen preparativnom LC/MS uz sledeće uslove: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 50-90% B preko 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Jedinjenje (4 mg) je izolovano u 41.4% prinosu. Upotrebljene su dve analitičke LC/MS injekcije za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 326

6-hloro-4-{4-[(4-hloro-3-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1005]

[1006] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.6 mg) je izolovano u 33% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 446.09; Retenciono Vreme: 1.36 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 446.08; Retenciono Vreme: 2.22 min.

PRIMER 327

6-hloro-4-{4-[(3-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1007]

[1008] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.3 mg) je izolovano u 31.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.1; Retenciono Vreme: 1.91 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.09; Retenciono Vreme: 1.24 min.

PRIMER 328

6-hloro-4- {4-[(3-hidroksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il} -1 -metil-2-okso-1 ,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1009]

[1010] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.3 mg) je izolovano u 53.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.1; Retenciono Vreme: 1.19 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.08; Retenciono Vreme: 1.72 min.

PRIMER 329

4-{4-[(3-fluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1011]

[1012] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (9.6 mg) je izolovano u 44.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 408.16; Retenciono Vreme: 1.27 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 408.16; Retenciono Vreme: 2.11 min.

PRIMER 330

6-hloro-4-{4-[(2,3-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1013]

[1014] Primer 330 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.1 mg) je izolovano u 26.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.1 %; Uočena Masa: 429.94; Retenciono Vreme: 1.94 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.3 %; Uočena Masa: 429.94; Retenciono Vreme: 1.19 min.

PRIMER 331

6-hloro-4-{4-[(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1015]

[1016] Primer 331 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (2.9 mg) je izolovano u 18% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.03; Retenciono Vreme: 1.2 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.02; Retenciono Vreme: 1.76 min.

PRIMER 332

8-{4-[(4-hloro-3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1017]

[1018] Primer 332 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitrila, 2 TFA. Jedinjenje (14 mg) je izolovano u 84.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.9 %; Uočena Masa: 434.94; Retenciono Vreme: 1.54 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.8 %; Uočena Masa: 434.96; Retenciono Vreme: 1.1 min.

PRIMER 333

6-bromo-4-{4-[(1H-indazol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1019]

[1020] Primer 333 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (3.5 mg) je izolovano u 20.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm x 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.5 %; Uočena Masa: 478.04; Retenciono Vreme: 1.14 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.6 %; Uočena Masa: 478.08; Retenciono Vreme: 1.84 min.

PRIMER 334

4- {4-[(1-etil-1H-indol-4-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1021]

[1022] Primer 334 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 66. Jedinjenje (21.3 mg) je izolovano u 73.4% prinosu. Upotrebljene su dve analitičke LC/MS injekcije za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 335

6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-6-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1023]

[1024] Primer 335 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (8.7 mg) je izolovano u 37.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 442.13; Retenciono Vreme: 1.89 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 442.1; Retenciono Vreme: 1.25 min.

PRIMER 336

6-hloro-4-{4-[(2-hidroksinaftalen-1-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1025]

[1026] Primer 336 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (10.4 mg) je izolovano u 19.2% prinosu. Upotrebljene su dve analitičke LC/MS injekcije za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 337

4-{4-[(2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1027]

[1028] Primer 337 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (5.9 mg) je izolovano u 28.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 390.16; Retenciono Vreme: 2.13 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.3 %; Uočena Masa: 390.15; Retenciono Vreme: 1.27 min.

PRIMER 338

6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-5-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1029]

[1030] Primer 338 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4.9 mg) je izolovano u 40.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 97.9 %; Uočena Masa: 428.07; Retenciono Vreme: 1.13 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.2 %; Uočena Masa: 428.07; Retenciono Vreme: 1.68 min.

PRIMER 339

6-hloro-4-{4-[(2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1031]

[1032] Primer 339 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.9 mg) je izolovano u 51.2% prinosu. Upotrebljene su dve analitičke LC/MS injekcije za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 340

6-hloro-4-{4-[(5-cijano-2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1033]

[1034] Primer 340 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (7.4 mg) je izolovano u 32% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.2 %; Uočena Masa: 437.09; Retenciono Vreme: 1.13 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.2 %; Uočena Masa: 437.07; Retenciono Vreme: 1.83 min.

PRIMER 341

6-hloro-4-{4-[(4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1035]

[1036] Primer 341 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.2 mg) je izolovano u 30.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.1; Retenciono Vreme: 1.86 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.11; Retenciono Vreme: 1.22 min.

PRIMER 342

8-{4-[1-(4-fluorofenil)ciklopropil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[1038] Primer 342 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 221. Jedinjenje (14.8 mg) je izolovano u 57.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 449.23; Retenciono Vreme: 1.27 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.4 %; Uočena Masa: 449.1; Retenciono Vreme: 2.14 min.

PRIMER 343

4-(4-benzilpiperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1039]

[1040] Primer 343 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.9 mg) je izolovano u 46.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 394.1; Retenciono Vreme: 1.19 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 394.1; Retenciono Vreme: 1.95 min.

PRIMER 344

6-bromo-4-{4-[(2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1041]

[1042] Primer 344 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (8.6 mg) je izolovano u 53.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 455.96; Retenciono Vreme: 1.91 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 455.96; Retenciono Vreme: 1.17 min.

PRIMER 345

6-hloro-4-{4-[(3-hloro-5-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1043]

[1044] Primer 345 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4.4 mg) je izolovano u 35.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.3 %; Uočena Masa: 444.09; Retenciono Vreme: 1.82 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.0 %; Uočena Masa: 444.1; Retenciono Vreme: 1.22 min.

PRIMER 346

6-hloro-1-metil-4-{4-[(2-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1045]

[1046] Primer 346 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (7.4 mg) je izolovano u 64.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 408.11; Retenciono Vreme: 1.26 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 408.12; Retenciono Vreme: 2.22 min.

PRIMER 347

4-{4-[bis(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1047]

[1048] Primer 347 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 66. Jedinjenje (23.1 mg) je izolovano u 72% prinosu. Upotrebljene su dve analitičke LC/MS injekcije za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 348

6-hloro-4-{4-[(4-fluoro-3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1049]

[1050] Primer 348 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.7 mg) je izolovano u 41.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.08; Retenciono Vreme: 1.09 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.1; Retenciono Vreme: 1.62 min.

PRIMER 349

4- {4-[(2-hidroksifenil)(fenil)metil]piperazin-1-i1}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1051]

[1052] Primer 349 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 66. Jedinjenje (22.2 mg) je izolovano u 72.3% prinosu. Upotrebljene su dve analitičke LC/MS injekcije za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 350

6-hloro-4-{4-[(2,4-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1053]

[1054] Primer 350 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.9 mg) je izolovano u 34.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 430.07; Retenciono Vreme: 2 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 430.06; Retenciono Vreme: 1.23 min.

PRIMER 351

6-hloro-4-{4-[(3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1055]

[1056] Primer 351 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4.5 mg) je izolovano u 39.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 410.11; Retenciono Vreme: 1.56 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 410.06; Retenciono Vreme: 1.06 min.

PRIMER 352

4-{4-[(2-hidroksi-3-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1057]

[1058] Primer 352 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (6.6 mg) je izolovano u 29.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 420.14; Retenciono Vreme: 1.41 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 420.15; Retenciono Vreme: 2.04 min.

PRIMER 353

6-hloro-4-{4-[(3-hidroksi-4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1059]

[1060] Primer 353 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.8 mg) je izolovano u 40.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 95.8 %; Uočena Masa: 440.08; Retenciono Vreme: 1.55 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 95.9 %; Uočena Masa: 440.12; Retenciono Vreme: 1.08 min.

PRIMER 354

6-hloro-4-{4-[(3-hloro-4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1061]

[1062] Primer 354 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (6.5 mg) je izolovano u 36.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 444.09; Retenciono Vreme: 1.66 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 444.09; Retenciono Vreme: 1.14 min.

PRIMER 355

6-hloro-4-(4-{[4-hidroksi-3-(trifluorometil)fenil]metil}piperazin-1-i1)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1063]

[1064] Primer 355 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.4 mg) je izolovano u 21.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.3 %; Uočena Masa: 478.11; Retenciono Vreme: 1.27 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.4 %; Uočena Masa: 478.13; Retenciono Vreme: 1.79 min.

PRIMER 356

6-hloro-4-{4-[(4-hidroksi-3-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1065]

[1066] Primer 356 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (8.7 mg) je izolovano u 38.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 423.99; Retenciono Vreme: 1.49 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424; Retenciono Vreme: 1.09 min.

PRIMER 357

6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1067]

[1068] Primer 357 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.9 mg) je izolovano u 49.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.07; Retenciono Vreme: 1.06 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 428.07; Retenciono Vreme: 1.56 min.

PRIMER 358

6-hloro-4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1069]

[1070] Primer 358 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 191. Jedinjenje (4.2 mg) je izolovano u 15.1% prinosu. Upotrebljene su dve analitičke LC/MS injekcije za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMER 359

4-{4-[(1H-1,3-benzodiazol-7-il)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1071]

[1072] Primer 359 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4.5 mg) je izolovano u 27.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 96.2 %; Uočena Masa: 434.09; Retenciono Vreme: 0.94 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.4 %; Uočena Masa: 434.1; Retenciono Vreme: 1.47 min.

PRIMER 360

4- {4-[(1H-1,3-benzodiazol-7-il)metil]piperazin-1-il}-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1073]

[1074] Primer 360 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (3.6 mg) je izolovano u 21.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.01; Retenciono Vreme: 1.5 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 478.04; Retenciono Vreme: 0.95 min.

PRIMER 362

6-hloro-4-{4-[(4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1075]

[1076] Primer 362 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.7 mg) je izolovano u 36.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 410.12; Retenciono Vreme: 1.46 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 410.12; Retenciono Vreme: 1.03 min.

PRIMER 363

8-{4-[(3-fluoro-4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1077]

[1078] Primer 363 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitrila, 2 TFA. Jedinjenje (7.4 mg) je izolovano u 30.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 419.01; Retenciono Vreme: 0.95 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 419.01; Retenciono Vreme: 1.32 min.

PRIMER 364

6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-5-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1079]

[1080] Primer 364 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (9.1 mg) je izolovano u 40.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.4 %; Uočena Masa: 426.14; Retenciono Vreme: 1.29 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 426.11; Retenciono Vreme: 2.1 min.

PRIMER 365

6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1081]

[1082] Primer 365 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (10.1 mg) je izolovano u 41.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.2 %; Uočena Masa: 458.09; Retenciono Vreme: 2.13 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.2 %; Uočena Masa: 458.06; Retenciono Vreme: 1.34 min.

PRIMER 366

6-bromo-4- {4-[(3,5-dihloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1084] Primer 366 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (8.3 mg) je izolovano u 36.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.3 %; Uočena Masa: 521.97; Retenciono Vreme: 2.76 min.

PRIMER 367

6-bromo-4-{4-[(5-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1085]

[1086] Primer 367 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (11.1 mg) je izolovano u 52.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 488; Retenciono Vreme: 2.56 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 488; Retenciono Vreme: 1.5 min.

PRIMER 368

6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-3-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1087]

[1088] Primer 368 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (14 mg) je izolovano u 67.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 97.6 %; Uočena Masa: 484.05; Retenciono Vreme: 1.41 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.2 %; Uočena Masa: 484.09; Retenciono Vreme: 2.18 min.

PRIMER 369

6-hloro-4-(4-{[2-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1089]

[1090] Primer 369 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (12.5 mg) je izolovano u 66.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 494.05; Retenciono Vreme: 1.64 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.0 %; Uočena Masa: 494.08; Retenciono Vreme: 2.6 min.

PRIMER 370

6-hloro-4-{4-[(5-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1091]

[1092] Primer 370 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (11.7 mg) je izolovano u 69.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 444.1; Retenciono Vreme: 2.5 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 444.07; Retenciono Vreme: 1.48 min.

PRIMER 371

6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-3-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1093]

[1094] Primer 371 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (9.4 mg) je izolovano u 56.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 440.11; Retenciono Vreme: 1.37 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 440.11; Retenciono Vreme: 2.13 min.

PRIMER 372

6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1095]

[1096] Primer 372 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (10.1 mg) je izolovano u 50.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 468.07; Retenciono Vreme: 1.22 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 468.05; Retenciono Vreme: 2.07 min.

PRIMER 373

6-bromo-4-{4-[(1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1097]

[1098] Primer 373 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (11.3 mg) je izolovano u 55.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.8 %; Uočena Masa: 477.08; Retenciono Vreme: 2.13 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 477.08; Retenciono Vreme: 1.31 min.

PRIMER 374

6-bromo-1-metil-2-okso-4-{4-[(2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1099]

[1100] Primer 374 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (5.8 mg) je izolovano u 27.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 493.37; Retenciono Vreme: 0.91 min.

PRIMER 375

6-hloro-4-(4- { [3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil] metil} piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1101]

[1102] Primer 375 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (8.1 mg) je izolovano u 44.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 480.1; Retenciono Vreme: 1.47 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 480.1; Retenciono Vreme: 2.27 min.

PRIMER 376

6-hloro-1-metil-2-okso-4-{4-[(2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1103]

[1104] Primer 376 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4 mg) je izolovano u 31.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 448.98; Retenciono Vreme: 1.44 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 449; Retenciono Vreme: 1.07 min.

PRIMER 377 i 378

6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)-3,3-dimetilbutil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1105]

[1106] Primer3 377-378 su pripremljeni prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 68. Racemsko jedinjenje (25 mg) je izolovano u 60.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.1 %; Uočena Masa: 482.32; Retenciono Vreme: 2.52 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.4 %; Uočena Masa: 482.06; Retenciono Vreme: 1.69 min.

[1107] Racemski materijal je dalje prečišćen upotrebom SFC-hiralne hromatografije da bi se dobio Primer 377 (prvi eluirani izomer) i Primer 378 (drugi eluirani izomer).

[1108] Primer 377: Jedinjenje (9.4 mg) je izolovano u 22.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.0 %; Uočena Masa: 482.31; Retenciono Vreme: 2.51 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 482.36; Retenciono Vreme: 1.56 min.

[1109] Primer 378: Jedinjenje (9.5 mg) je izolovano u 22.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.1 %; Uočena Masa: 482.32; Retenciono Vreme: 2.51 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.3 %; Uočena Masa: 482.31; Retenciono Vreme: 1.56 min.

PRIMER 379

6-hloro-4-{4-[(4-cijano-2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1110]

[1111] Primer 379 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (1.8 mg) je izolovano u 7.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.1 %; Uočena Masa: 436.92; Retenciono Vreme: 1.13 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.7 %; Uočena Masa: 436.93; Retenciono Vreme: 1.8 min.

PRIMER 380

6-bromo-4-{4-[(3-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1112]

[1113] Primer 380 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (2.3 mg) je izolovano u 10% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.2 %; Uočena Masa: 531.93; Retenciono Vreme: 1.52 min.

PRIMER 381

6-hloro-4-(4-{[2-hidroksi-4-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1114]

[1115] Primer 381 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (4.3 mg) je izolovano u 22.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 494.1; Retenciono Vreme: 2.23 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 494.09; Retenciono Vreme: 1.4 min.

PRIMERI 382A, 382, I 383

6-hloro-4- {4- [ci klobutil(4-fluorofenil)metil] pip erazin-1-il } -1-metil-2-okso-1, 2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1116]

[1117] Primer 382A su pripremljeni prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 68. Jedinjenje (24.6 mg) je izolovano u 63.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 466.12; Retenciono Vreme: 2.39 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 466.08; Retenciono Vreme: 1.38 min. Racemski materijal je razdvojen upotrebom SFC-hiralne hromatografije da bi se dobio Primer 382 (prvi eluirani izomer) i Primer 383 (drugi eluirani izomer).

[1118] Primer 382: Jedinjenje (7.7 mg) je izolovano u 19.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 95.5 %; Uočena Masa: 466.06; Retenciono Vreme: 2.63 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 95.4 %; Uočena Masa: 466.08; Retenciono Vreme: 1.55 min.

[1119] Primer 383: Jedinjenje (7.7 mg) je izolovano u 19.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 96.7 %; Uočena Masa: 466.04; Retenciono Vreme: 2.63 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 96.2 %; Uočena Masa: 466.08; Retenciono Vreme: 1.55 min.

PRIMER 384

4-{4-[(3-terc-butil-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1120]

[1121] Primer 384 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (1.3 mg) je izolovano u 7.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 466.17; Retenciono Vreme: 1.86 min.

PRIMER 385

6-hloro-1-metil-4-{4-[(3-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1122]

[1123] Primer 385 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (9.5 mg) je izolovano u 48.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 408.12; Retenciono Vreme: 1.3 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 408.13; Retenciono Vreme: 2.08 min.

PRIMER 386

6-hloro-1-metil-4-{4-[(4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1124]

[1125] Primer 386 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (18.8 mg) je izolovano u 29% prinosu. Upotrebljene su dve analitičke LC/MS injekcije za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm.

PRIMERI 387A, 387, I 388

6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)etil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1126]

[1127] Primer 387A je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 68. Jedinjenje (16.5 mg) je izolovano u 56.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 425.97; Retenciono Vreme: 1.37 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 425.98; Retenciono Vreme: 2 min. Racemski materijal je dalje prečišćen upotrebom SFC-hiralne hromatografije da bi se dobio Primer 387 (prvi eluirani izomer) i Primer 388 (drugi eluirani izomer).

[1128] Primer 387: Jedinjenje (4.4 mg) je izolovano u 15.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.4 %; Uočena Masa: 426.18; Retenciono Vreme: 2.05 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.7 %; Uočena Masa: 426.21; Retenciono Vreme: 1.15 min.

[1129] Primer 388: Jedinjenje (1.7 mg) je izolovano u 6.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.1 %; Uočena Masa: 426.16; Retenciono Vreme: 2.05 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.8 %; Uočena Masa: 426.2; Retenciono Vreme: 1.15 min.

PRIMER 389

4-{4-[(3-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1130]

[1131] Primer 389 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216 iz 1,6-dimetil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (4.4 mg) je izolovano u 10.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.14; Retenciono Vreme: 1.51 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.11; Retenciono Vreme: 2.39 min.

PRIMER 390

6-bromo-4-{4-[(2-hloro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1132]

[1133] Primer 390 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 2. Jedinjenje (0.8 mg) je izolovano u 4.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 488; Retenciono Vreme: 1.25 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 488; Retenciono Vreme: 2.14 min.

PRIMER 391

6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-3-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1134]

[1135] Primer 391 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 216. Jedinjenje (5.6 mg) je izolovano u 34.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.08; Retenciono Vreme: 2.12 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 424.08; Retenciono Vreme: 1.23 min.

PRIMER 392

8- {4- [(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil] piperazin-1-il } -5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[1137] U bočici od 1 drama, 8-hloro-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (19.8 mg, 0.090 mmol) je suspendovan u DMF (0.9 mL). Ovoj smeši su dodate 1-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin, 2 HCl (42.3 mg, 0.108 mmol) i kalijum karbonat (62.3 mg, 0.451 mmol). Reakciona smeša je zatvorena pod azotom i potopljena u uljno kupatilo na 120 °C tokom 6 h. LC/MS analiza je pokazala novi pik sa molekulskom težinom za željeni proizvod. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS uz sledeće uslove: Kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 0-minutno zadržavanje na 27% B, 27-77% B preko 25 minuta, zatim 4-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/min; Kolona Temperatura: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Jedinjenje (12.7 mg) je izolovano u 28.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 502.19; Retenciono Vreme: 1.47 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 502.19; Retenciono Vreme: 2.27 min.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.21-8.12 (m, 1.0H), 8.10-8.03 (m, 1.0H), 7.60 (br t, J=7.6 Hz, 1.0H), 7.45-7.38 (m, 2.1H), 7.13 (br t, J=8.7 Hz, 2.1H), 6.87 (br d, J=11.3 Hz, 1.0H), 6.81 (br t, J=8.2 Hz, 1.1H), 6.09 (s, 1.0H), 4.76 (s, 1.0H), 3.80 (s, 2.9H), 3.53 (s, 1.9H), 3.47 (br s, 0.9H), 2.60-2.53 (m, 2.0H), 2.47-2.39 (m, 2.0H).

PRIMER 393

4-{4-[bis(4-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1138]

[1139] Jedinjenje iz naslova je pripremljeno prema generalnom postupku upotrebljenom za pripremu Primera 191. Jedinjenje (35.8 mg) je izolovano u 61.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 582.01; Retenciono Vreme: 2.01 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 581.98; Retenciono Vreme: 2.72 min.

PRIMER 394

8-{4-[bis(4-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1140]

[1141] Primer 394 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 325. Jedinjenje (8.4 mg) je izolovano u 58.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 529.13; Retenciono Vreme: 2.52 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.9 %; Uočena Masa: 529.11; Retenciono Vreme: 1.89 min.

PRIMER 395

4-{4-[bis(4-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1142]

[1143] U bočicu za mikrotalasnu su dodati 4-(4-(bis(4-hlorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (15 mg, 0.026 mmol), paladijum(II) acetat (0.577 mg, 2.57 µmol), cezijum karbonat (8.38 mg, 0.026 mmol) i 5-[di(1-adamantil)fosfino]-1',3',5'-trifenil-1'h-[1,4']bipirazol (3.41 mg, 5.14 µmol). Bočica je stavljena pod vakum, ponovo napunjena azotom i zatvorena. Metanol (0.1 mL) i acetonitril (2 mL) su dodati i reakciona smeša je zagrevana na 80 °C tokom noći. LC/MS analiza je pokazala završetak reakcije. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS uz sledeće uslove: Kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 28% B, 28-68% B preko 20 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min; Kolona Temperatura: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Jedinjenje iz naslova (13.5 mg) je izolovano u 97.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 534.17; Retenciono Vreme: 2.59 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 534.17; Retenciono Vreme: 1.87 min.

PRIMER 396

4- {4- [(4-fluorofenil)(2-metoksi py ri din-3 -il)metil]piperazin-1 -il} -6-metoksi-1 - metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1144]

[1145] U 2 mL zatvorenoj bočici, 6-metoksi-1-metil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (30 mg, 0.100 mmol), (4-fluorofenil)(2-metoksipiridin-3-il)metanol (28.1 mg, 0.120 mmol), (cijanometil) trimetilfosfonijum jodid (48.7 mg, 0.200 mmol) su kombinovani u proprionitrilu (0.8 mL). Hunigova baza (0.053 mL, 0.301 mmol) je dodata i reakciona smeša je zatvorena i zagrevana na 110 °C u mikrotalasnom reaktoru tokom 4 sata. LC/MS analiza je pokazala završetak reakcije. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS uz sledeće uslove: Kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, 5 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 32% B, 32-72% B preko 25 minuta, zatim 4-minutno zadržavanje na 100% B; Protok: 20 mL/min; Kolona Temperatura: 25 C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Jedinjenje (11.4 mg) je izolovano u 22.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.2 %; Uočena Masa: 515.2; Retenciono Vreme: 2.14 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.2 %; Uočena Masa: 515.22; Retenciono Vreme: 1.41 min.

PRIMER 397

4-{4-[(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1146]

[1147] Primer 397 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 396. Jedinjenje (4.8 mg) je izolovano u 9.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.1 %; Uočena Masa: 515.13; Retenciono Vreme: 1.86 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.9 %; Uočena Masa: 515.13; Retenciono Vreme: 1.36 min.

PRIMERI 398, 398A, i 398B

4-{4-[1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1148]

[1149] Primer 398 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 226. Jedinjenje (28.8 mg) je izolovano u 64.2% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 420.18; Retenciono Vreme: 2.08 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.9 %; Uočena Masa: 420.18; Retenciono Vreme: 1.37 min. Racemski materijal je dalje prečišćen upotrebom SFC-hiralne hromatografije da bi se dobio Primer 398A (prvi eluirani izomer) i Primer 398B (drugi eluirani izomer).

[1150] Primer 398A (9.5 mg) je izolovan u 33.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 420.11; Retenciono Vreme: 2.21 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 420.31; Retenciono Vreme: 1.23 min.

[1151] Primer 398B (10.2 mg) je izolovan u 36.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 420.1; Retenciono Vreme: 2.21 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 420.29; Retenciono Vreme: 1.23 min.

PRIMER 399

8-{4-[(S)-(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[1152]

[1153] Primer 399 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 18. Jedinjenje (8.5 mg) je izolovano u 43.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 515.14; Retenciono Vreme: 2.5 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 515.17; Retenciono Vreme: 1.72 min.

PRIMER 400

8-{4-[(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1154]

[1155] Primer 400 je pripremljen iz 5-metil-6-okso-8-(piperazin-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril u skladu sa opštom procedurom korišćenom za pripremu Primera 396. Jedinjenje (5.5 mg) je izolovano u 23.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 96.9 %; Uočena Masa: 480.16; Retenciono Vreme: 1.81 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.1 %; Uočena Masa: 480.16; Retenciono Vreme: 1.29 min.

PRIMER 401

4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(pirimidin-2-il)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1156]

[1157] Primer 401 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 396. Jedinjenje (12.6 mg) je izolovano u 24.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 96.1 %; Uočena Masa: 516.21; Retenciono Vreme: 1.64 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 96.8 %; Uočena Masa: 516.2; Retenciono Vreme: 1.22 min.

PRIMER 402

4-{4-[bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1158]

[1159] Primer 402 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 396. Jedinjenje (33.9 mg) je izolovano u 60.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 562.2; Retenciono Vreme: 1.56 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 562.19; Retenciono Vreme: 2.31 min.

PRIMER 403

4-{4-[(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1160]

[1161] Primer 403 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 396. Jedinjenje (10.8 mg) je izolovano u 22.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.6 %; Uočena Masa: 485.17; Retenciono Vreme: 1.85 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.9 %; Uočena Masa: 485.18; Retenciono Vreme: 1.32 min.

PRIMER 404

5-metil-8-{4-[(naftalen-1-il)metil]piperazin-1-il}-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1162]

[1163] Primer 404 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 52 iz 6-bromo-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (3.7 mg) je izolovano u 8.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 90.2 %; Uočena Masa: 435.14; Retenciono Vreme: 1.27 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 90.1 %; Uočena Masa: 435.16; Retenciono Vreme: 2.07 min.

PRIMERI 405-407

8- {4- [(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil] piperazin-1-il } -5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1164]

[1165] Primer 405-407 su pripremljeni prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 52 iz 6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (12.1 mg) je izolovano u 33.3% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 97.8 %; Uočena Masa: 527.16; Retenciono Vreme: 1.65 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 96.1 %; Uočena Masa: 527.17; Retenciono Vreme: 2.24 min. Racemski materijal je dalje prečišćen upotrebom SFC-hiralne hromatografije da bi se dobio Primer 406 (prvi eluirani izomer) i Primer 407 (drugi eluirani izomer).

[1166] Primer 406:: Jedinjenje iz naslova (3.5 mg) je izolovano u 31.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 95.2 %; Uočena Masa: 527.08; Retenciono Vreme: 2.15 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.9 %; Uočena Masa: 526.97; Retenciono Vreme: 2.06 min.

[1167] Primer 407:: Jedinjenje iz naslova (27.8 mg) je izolovano u 61.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 527.14; Retenciono Vreme: 1.5 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 527.14; Retenciono Vreme: 2.25 min.

PRIMER 408

5-metil-8-{4-[(4-metilfenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1168]

[1169] Primer 408 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 52. Jedinjenje (2.6 mg) je izolovano u 45.7% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 475.25; Retenciono Vreme: 1.52 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.1 %; Uočena Masa: 475.24; Retenciono Vreme: 2.32 min.

PRIMER 409

8-{4-[bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1170]

[1171] Primer 409 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 396. Jedinjenje (0.8 mg) je izolovano u 2.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.0 %; Uočena Masa: 557.21; Retenciono Vreme: 1.56 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 557.17; Retenciono Vreme: 2.24 min.

PRIMER 410

8-{4-[(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1172]

[1173] Primer 410 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 396. Jedinjenje (1.9 mg) je izolovano u 7.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.7 %; Uočena Masa: 510.22; Retenciono Vreme: 1.83 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 98.4 %; Uočena Masa: 510.19; Retenciono Vreme: 1.36 min.

PRIMER 411

8-{4-[(4-fluorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1174]

[1175] Primer 411 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 52. Jedinjenje (11.6 mg) je izolovano u 48.5% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 97.9 %; Uočena Masa: 479.2; Retenciono Vreme: 1.48 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 479.21; Retenciono Vreme: 2.22 min.

PRIMER 412

4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1176]

[1177] Primer 412 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 395 iz racemskog 1-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil) piperazina. Jedinjenje (8.4 mg) je izolovano u 19.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 532.2; Retenciono Vreme: 1.54 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 532.18; Retenciono Vreme: 2.3 min.

PRIMER 413

[1179] Primer 413 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 395 iz homohiralnog 1-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil) piperazina (Intermedijer 110). Jedinjenje (13.8 mg) je izolovano u 60.4% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 532.18; Retenciono Vreme: 2.32 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 532.19; Retenciono Vreme: 1.53 min.

PRIMER 414

8-{4-[(S)-(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1180]

[1181] Primer 414 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 52. Jedinjenje (10 mg) je izolovano u 63.1% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 96.9 %; Uočena Masa: 495.12; Retenciono Vreme: 2.33 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.4 %; Uočena Masa: 495.14; Retenciono Vreme: 1.62 min.

PRIMER 415

5-metil-8-{4-[(naftalen-1-il)metil]piperazin-1-il}-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[1182]

[1183] Primer 415 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 18. Jedinjenje (10.1 mg) je izolovano u 39% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 99.0 %; Uočena Masa: 455.13; Retenciono Vreme: 1.34 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 99.0 %; Uočena Masa: 455.13; Retenciono Vreme: 2.31 min.

PRIMER 416

8-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[1184]

[1185] Primer 416 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 18. Jedinjenje (21.7 mg) je izolovano u 52.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 543.2; Retenciono Vreme: 2.48 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 543.22; Retenciono Vreme: 1.64 min.

PRIMER 417

6-hloro-4-{4-[(4-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1186]

[1187] Rastvoru 6-hloro-1-metil-2-okso-4-(piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila, 2 HCl (15 mg, 0.040 mmol) u DMF (1.5 mL), 4-hlorobenzaldehid (8.40 mg, 0.060 mmol) je dodat. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (7.51 mg, 0.119 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Reakciona smeša je razblažena sa metanolom, filtrirana i svetlo žuta čvrsta supstanca je dobijena kao finalni proizvod (2.6 mg, 5.77 µmol, 14.5 % prinos). Analitički LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50mm, 3 µm čestice; Mobilna Faza A: 10:90 metanol: voda sa 0.1% TFA; Mobilna Faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS Rezultati: Retenciono Vreme = 2.6 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 427.9. Analitički HPLC uslovi: Kolona: XTERRA 3.0 × 50mm s7; Mobilna Faza A: 10:90 acetonitril: voda sa 0.1% TFA; Mobilna Faza B: 90: 10 acetonitril:voda sa0. 1% TFA; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 2 minuta pri 100% B; Protok: 5 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. HPLC rezultat: 100% čisto.

PRIMER 418

8-{4-[(2-hidroksifenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril

[1188]

[1189] Primer 418 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 52. Jedinjenje (1.2 mg) je izolovano u 12% prinosu. Analitički LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2 × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna Faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna Faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS Rezultati: Retenciono Vreme = 3.2 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 477.1

PRIMER 419

6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1190]

[1191] Primer 419 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 417. Jedinjenje (6.8 mg) je izolovano u 28% prinosu. Analitički LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2 × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna Faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna Faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS Rezultati: Retenciono Vreme = 3.7 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 442.0.

PRIMER 420

6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1192]

[1193] Primer 420 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 417. Jedinjenje (10.1 mg) je izolovano u 42.7% prinosu. Analitički LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50mm, 3 µm čestice; Mobilna Faza A: 10:90 metanol: voda sa 0.1% TFA; Mobilna Faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS Rezultati: Retenciono Vreme = 2.4 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 445.9.

PRIMER 421

6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)ciklopropil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1194]

[1195] Primer 421 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 193 iz 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (14.1 mg) je izolovano u 54.5% prinosu. Analitički LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2mm x 50, 3 µm čestice; Mobilna Faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna Faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS Rezultati: Retenciono Vreme = 3.5 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 438.0.

PRIMER 422

6-hloro-4-{4-[(2,6-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1196]

[1197] Primer 422 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 417. Jedinjenje (7.3 mg) je izolovano u 30% prinosu. Analitički LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50 mm, 3 µm čestice; Mobilna Faza A: 10:90 metanol: voda sa 0.1% TFA; Mobilna Faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS Rezultati: Retenciono Vreme = 2.2 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 429.9.

PRIMER 423

6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1198]

[1199] Primer 423 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 417. Jedinjenje (9.4 mg) je izolovano u 40.3% prinosu. Analitički LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2mm × 50, 3µm čestice; Mobilna Faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna Faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS Rezultati: Retenciono Vreme = 3.2 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 426.1.

PRIMER 424

6-hloro-4-{4-[(4-cijano-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1200]

[1201] Primer 424 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 417. Jedinjenje (10.2 mg) je izolovano u 41.5% prinosu. Analitički LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2mm × 50, 3 µm čestice; Mobilna Faza A: 5 % acetonitril: 95% voda: 10 mM amonijum acetat; Mobilna Faza B: 95 % acetonitril: 5% voda: 10 mM amonijum acetat; Temperatura: 40 °C; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS Rezultati: Retenciono Vreme = 2.9 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 449.1.

PRIMER 425

6-hloro-4-{4-[2-(4-fluorofenil)propan-2-il]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1202]

[1203] Primer 425 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 193 iz 4,6-dihloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitrila. Jedinjenje (11.8 mg) je izolovano u 52.0% prinosu. Analitički LC/MS uslovi: Kolona: Fenomenex LUNA C18, 2.0 × 50mm, 3 µm čestice; Mobilna Faza A: 10:90 metanol: voda sa 0.1% TFA; Mobilna Faza B: 90:10 metanol:voda sa 0.1% TFA; Gradijent: 0-100 % B preko 4 minuta, zatim zadržavanje od 1 minuta pri 100% B; Protok: 0.8 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LC/MS Rezultati: Retenciono Vreme = 3.0 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 439.9.

PRIMER 426

4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on

[1204]

[1205] Rastvor je pripremljen rastvaranjem 4-hloro-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-ona (12.3mg, 0.063 mmol) u DMF (632 µL). Zatim, 1-(4,4'-difluorobenzhidril) piperazin (22.9 mg, 0.079 mmol) i kalijum karbonat (18.7 mg, 0.135 mmol) su dodati. Reakciona smeša je stavljena pod atmosferom azota i zagrevana na 80 °C tokom 18 sati. HPLC analiza je pokazala približno 50% konverzije u proizvod. Reakcionoj smeši je dodat kalijum karbonat (8.2 mg, 0.059 mmol). Reakciona smeša je poklopljena pod azotom i zagrevana na 85 °C tokom 19 sati. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS uz sledeće uslove: Kolona: XBridge C18, 19 × 200 mm, 5 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Gradijent: 50-90% B preko 15 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta pri 100% B; Protok: 20 mL/min. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Prinos proizvoda je bio 21.1 mg, i njegova procenjena čistoća pomoću LCMS analize je bila 100%. Upotrebljene su dve analitičke LC/MS injekcije za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono Vreme = 1.42 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 447.1. LCMS: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B preko 3 minuta, zatim zadržavanje od 0.75 minuta pri 100% B; Protok: 1.0 mL/min; Detekcija: UV na 220 nm. Retenciono Vreme = 2.25 min.; Uoč. Adukti: [M+H]; Uoč. Mase: 447.1. Uticalo se na intenzitete protonskog NMR signala proksimalne frekvenciji potiskivanja vode i nisu bili korigovani:<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.42 (d, J=2.9 Hz, 1H), 7.91 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.57 (dd, J=8.8, 4.4 Hz, 1H), 7.48 (dd, J=8.6, 5.7 Hz, 4H), 7.14 (t, J=8.8 Hz, 4H), 5.98 (s, 1H), 4.47 (s, 1H), 3.51 (s, 2H).

PRIMER 427

4-{4-[bis(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on

[1206]

[1207] U bočici od 20 mL, predkatalizator 2. generacije RuPhos (CAS br.1375325-68-0, 27.9 mg, 0.036 mmol), 4-hloro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (150 mg, 0.719 mmol), 1-(4,4'-difluorobenzhidril)piperazin (249 mg, 0.863 mmol) i cezijum karbonat (703 mg, 2.157 mmol) su kombinovani u 7.1 mL rastvarača (DMA/t-BuOH; 1:4). Smeša je poklopljena pod atmosferom azota i zagrevana na 90 °C tokom 72 sata. LC/MS analiza je pokazala da je reakcija završena. Isparljive supstance su uklonjene in vacuo upotrebom kombinacije rotacionog isparivača/vakuum pumpe. Ostatak je suspendovan u DCM i CHCl3i filtriran kroz umetak celita. Smeša je adsorbovana na 1.3 g silika gela i hromatografisana na 13.6 g suspenzije silika gela napunjenog u 15% etil acetatu u dihlorometanu, eluirano sa 15% etil acetata u dihlorometanu. Nakon sušenja pod vakuumom, jedinjenje iz naslova (217 mg) je izolovano u 62.3 % prinosu.<1>H NMR (hloroform-d) δ 7.56 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.38-7.43 (m, 4H), 7.29 (d, J=8.7 Hz, 1H), 6.97-7.03 (m, 4H), 6.16 (s, 1H), 4.31 (s, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.57 (br. s., 4H), 2.63 (t, J=4.8 Hz, 4H), 2.57 (s, 3H).

PRIMER 428

6-bromo-4-{4-[(S)-(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1208]

[1209] Primer 428 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 393 iz (S)-1-((4-hlorofenil)(fenil)metil)piperazina. Jedinjenje (23 mg) je izolovano u 41.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 548.07; Retenciono Vreme: 2.59 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 548.06; Retenciono Vreme: 1.72 min.

PRIMER 429

6-bromo-4- {4- [(4-hlorofenil) (fenil)metil] piperazin-1-il } -1-metil-2-okso-1, 2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1210]

[1211] Primer 429 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 393 iz racemskog 1-((4-hlorofenil)(fenil)metil)piperazina. Jedinjenje (29 mg) je izolovano u 52.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 548.09; Retenciono Vreme: 1.73 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 548.06; Retenciono Vreme: 2.56 min.

PRIMER 430

6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1212]

[1213] Primer 430 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 393 iz racemskog 1-((4-fluorofenil)(fenil)metil)piperazina. Jedinjenje (30.8 mg) je izolovano u 57.8% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 532.08; Retenciono Vreme: 2.41 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 100.0 %; Uočena Masa: 532.09; Retenciono Vreme: 1.58 min.

PRIMER 431

6-bromo-1-metil-4-{4-[(4-metilfenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril

[1214]

[1215] Primer 431 je pripremljen prema opštem postupku upotrebljenom za pripremu Primera 393. Jedinjenje (12.1 mg) je izolovano u 22.9% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 94.8 %; Uočena Masa: 528.15; Retenciono Vreme: 1.6 min. Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 94.9 %; Uočena Masa: 528.09; Retenciono Vreme: 2.54 min.

PRIMER 432

8-{4-[bis(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril

[1216]

[1217] Primer 432 je izolovan kao glavni proizvod u pokušanoj sintezi (4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-il)boronske kiseline. U -78°C rastvor 8-(4-(bis(4-fluorofenil) metil)piperazin-1-il)-7-bromo-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitrila (0.065 g, 0.118 mmol) u THF (1.181 mL) je dodat, kap po kap, 2.5 M rastvor n-butillitijuma (0.052 mL, 0.130 mmol). Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 1 sata, praćeno dodavanjem trimetil borata (0.020 mL, 0.177 mmol). Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 30 min. i onda na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. LC/MS analiza je pokazala hidro-dehalogenizovani proizvod. Sirovi materijal je prečišćen preparativnom LC/MS uz sledeće uslove: Kolona: XBridge C18, 200 mm × 19 mm, 5-µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetatom; Gradijent: zadržavanje od 0 minuta na 37% B, 37-77% B preko 22 minuta, zatim zadržavanje od 5 minuta na 100% B; Protok: 20 mL/min; Temperatura kolone: 25 °C. Sakupljanje frakcija je pokrenuto MS i UV signalima. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane i osušene centrifugalnim uparavanjem. Jedinjenje (22.6 mg) je izolovano u 40.6% prinosu. Analitička LC/MS je upotrebljena za određivanje finalne čistoće. Uslovi Injektovanja 1: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1 % trifluorosirćetnom kiselinom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 1: Čistoća: 98.6 %; Uočena Masa: 472.18; Retenciono Vreme: 1.46 min.

Uslovi Injektovanja 2: Kolona: Waters XBridge C18, 2.1 mm × 50 mm, 1.7 µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetatom; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0 %B do 100 %B preko 3 min, zatim zadržavanje od 0.75 min pri 100 %B; Protok: 1 mL/min; Detekcija: MS i UV (220 nm). Rezultati Injektovanja 2: Čistoća: 97.3 %; Uočena Masa: 472.19; Retenciono Vreme: 2.23 min.

BIOLOŠKA ISPITIVANJA

[1218] Farmakološka svojstva jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se potvrditi brojnim biološkim ispitivanjima. Primeri bioloških ispitivanja, koji slede, izvedeni su sa jedinjenjima pronalaska.

1. In vitro ispitivanje DGK inhibicije

[1219] DGKα i DGKζ reakcije su izvedene upotrebom ili ekstrudiranog lipozoma (DGKα i DGKζ LIPGLO ispitivanja) ili detergent/lipid micelarnog supstrata (DGKα i DGKζ ispitivanja). Reakcije su izvedene u 50 mM MOPS pH 7.5, 100 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 µM CaCl2, i 1 mM DTT (pufer za ispitivanje). Reakcije koje su upotrebljavale detergent/lipid micelarni supstrat su takođe sadržale 50 mM oktil B-D-glukopiranozida. Koncentracije lipidnog supstrata su bile 11 mM PS i 1 mM DAG za detergent/lipid micelarne reakcije. Koncentracije lipidnog supstrata su bile 2 mM PS, 0.25 mM DAG, i 2.75 mM PC za reakcije ekstrudiranog lipozoma. Reakcije su izvedene u 150 µM ATP. Koncentracije enzima za DGKα i DGKζ su bile 5 nM

[1220] Ispitivanja inhibicije jedinjenja su sprovedena na sledeći način: kapljice od 50 nL svakog test jedinjenja (vršna koncentracija 10 mM sa 11 tačaka, serija 3-strukog razblaženja za svako jedinjenje) solubilizovanog u DMSO su prebačene u bunarčiće ploče sa 1536 belih bunarčića (Corning 3725).5 mL rastvora enzim/supstrat pri 2x krajnoj koncentraciji reakcije je pripremljeno kombinovanjem 2.5 mL 4x rastvora enzima (20 nM DGKα ili DGKζ (pripremljenog prema daljem opisu) u puferu za ispitivanje) i 2.5 mL bilo 4x lipozoma ili 4x detergent/lipid micelarnog rastvora (kompozicije prema daljem opisu) i inkubirano na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Zatim, 1 µL 2x rastvora enzim/supstrat je dodat u bunarčiće koji sadrže test jedinjenje i reakcije su započete uz dodatak 1 µL 300 uM ATP-a. Reakcije su ostavljene da se odvijaju 1 h, nakon čega je 2 µL Glo reagensa (Promega V9101) dodato i inkubirano je tokom 40 minuta. Zatim, 4 µL kinaza detekcionog reagensa je dodato i inkubirano je tokom 30 minuta. Luminescencija je zabeležena upotrebom EnVision čitača za mikrotitar ploče. Procenat inhibicije je izračunat iz ATP konverzije generisane ne enzimski kontrolisanim reakcijama za 100% inhibiciju i reakcijama samo sa vehikulumom za 0% inhibicije. Jedinjenja su procenjena na 11 koncentracija da bi se odredila IC50.

4x Detergent/lipid micelarni preparat

[1221] Detergent/lipid micela je pripremljena kombinovanjem 15 g fosfatidilserina (Avanti 840035P) i 1 g diacilglicerola (8008110) i rastvaranjem u 150 mL hloroforma u posudi od 2 L sa okruglim dnom. Hloroform je uklonjen pod visokim vakuumom rotacionim isparavanjem. Dobijeno bezbojno, lepljivo ulje je resuspendovano u 400 mL 50 mM MOPS pH 7.5, 100 mM NaCl, 20 mM NaF, 10 mM MgCl2, 1 µM CaCl2, 1 mM DTT, i 200 mM oktil glukozida energičnim mešanjem. Rastvor lipid/detergent je podeljen na alikvote od 5 mL i skladišten na -80 °C.

4x lipozomni preparat

[1222] Lipidna kompozicija je bila 5 mol% DAG (Avanti 8008110), 40 mol% PS (Avanti 840035P), i 55 mol% PC (Avanti 850457) pri ukupnoj koncentraciji lipida od 15.2 mg/mL za 4x lipozomni rastvor. PC, DAG, i PS su rastvoreni u hloroformu, kombinovani i osušeni u vakuumu do tankog filma. Lipidi su hidrirani do 20 mM u 50 mM MOPS pH 7.5, 100 mM NaCl, 5 mM MgClz, i pet puta su zamrznuti-odmrznuti. Lipidna suspenzija je ekstrudirana kroz 100 nm polikarbonatni filter jedanaest puta. Izvršeno je dinamičko rasejanje svetlosti da bi se potvrdila veličina lipozoma (prečnik 50-60 nm). Preparat lipozoma je čuvan na 4 °C čak četiri nedelje.

Bkulovirusno eksprimiranje humanih DGKα i DGKζ

[1223] Humani DGK-alfa-TVMV-His-pFBgate i humani DGK-zeta-transkript varijanta-2-TVMV-His-pFBgate bakulovirus uzorci su generisani upotrebom Bak-na-Bak bakulovirus eksprimirajućeg sistema (Invitrogen) prema protokolu proizvođača. DNK upotrebljen za eksprimiranje DGK-alfa i DGK-zeta ima SEK ID brojeve: 1 i 3, redom. Amplifikacija bakulovirusa je postignuta korišćenjem inficiranih Sf9 ćelija pri odnosu virus/ćelija 1:1500 i uzgajanih 65 sati na 27 °C nakon transfekcije.

[1224] Uvećanje razmere eksprimiranja za svaki protein je sprovedeno u Cellbag 50L WAVE-bioreaktor sistemu 20/50 kompanije GE Healthcare Bioscience. 12 L od 2 × 10<6>ćelija/mL Sf9 ćelija (Expression System, Davis, CA) uzgojenih u medijumu insekata ESF921 (Expression System) inficirano je zalihom virusa (štok) u odnosima 1:200 virus/ćelija i uzgajano 66-68 sati na 27 °C posle infekcije. Inficirana ćelijska kultura je prikupljena centrifugiranjem na 2000 opm tokom 20 min na 4 °C u SORVALL<®>RC12BP centrifugi. Ćelijske pelete su čuvane na -70 °C do prečišćavanja.

Prečišćavanje humanog DGK-alfa i DGK-zeta

[1225] Humani DGKα i DGKζ pune dužine, od kojih je svaki eksprimiran da sadrži TVMVcepajuću C-terminalnu Heksa-His markiranu sekvencu (SEK ID brojevi: 2 i 4, redom) i proizveden kako je gore opisano, prečišćeni su iz paste Sf9 bakulovirus-inficiranih ćelija insekata. Ćelije su lizirane metodom azotne kavitacije sa posudom pod pritiskom azota (eng. nitrogen bomb) (Parr Instruments), a lizati su izbistreni centrifugiranjem. Prečišćeni lizati su prečišćeni do ~90% homogenosti, upotrebom tri uzastopna stupnja kolonske hromatografije na sistemu AKTA Purifier Plus. Trostepena kolonska hromatografija uključivala je hvatanje smole sa afinitetom ka niklu (tj. HisTrap FF Crude, GE Healthcare), praćeno hromatografijom sa izdvajanjem po veličini (tj. HiLoad 26/600 Superdex 200 prep grade, GE Healthcare za DGK-alfa, i HiPrep 26/600 Sefakril S 300_HR, GE Healthcare za DGK-zeta). Treći korak je bila jonoizmenjivačka hromatografija i razlikovala se za dve izoforme. DGKα je obrađen hromatografijom anjonske izmene Q-Sefaroze (GE Healthcare). DGKζ je obrađen upotrebom hromatografije katjonske izmene SP Sefaroze (GE Healthcare). Proteini su isporučeni u koncentracijama od ≥2 mg/mL. Puferi za formulaciju su bili identični za oba proteina: 50 mM Hepes, pH 7.2, 500 mM NaCl, 10% v/v glicerol, 1 mM TCEP, i 0.5 mM EDTA.

2. Raji CD4 T ćelija IL2 ispitivanje

[1226] IL-2 ispitivanje u 1536-bunarčića je izvedeno u zapremini od 4 µl upotrebom prethodno aktiviranih CD4 T ćelija i Raji ćelija. Prethodno ispitivanju, CD4 T ćelije su prethodno aktivirane tretmanom sa α-CD3, α-CD28 i PHA pri 1.5 µg/mL, 1 µg/mL, i 10 µg/mL, redom. Raji ćelije su tretirane stafilokoknim enterotoksinom B (SEB) pri 10,000 ng/mL. Serijski razblažena jedinjenja su prvo preneta na ploču za ispitivanje sa 1536-bunarčića (Corning, #3727), nakon čega je usledilo dodavanje 2 µl prethodno aktiviranih CD4 T ćelija (krajnja gustina pri 6000 ćelija/bunarčiću) i 2 µl SEB-tretiranih Raji ćelija (2000 ćelija/bunarčiću). Nakon 24 sata inkubacije u inkubatoru na 37 °C/5% CO2, 4 µl reagenasa za detekciju IL-2 je dodato na ploču za ispitivanje (Cisbio, #64IL2PEC). Ploče za ispitivanje su očitane na Envision čitaču. Da bi se procenila citotoksičnost jedinjenja, ili Raji ili CD4 T ćelije su inkubirane sa serijski razblaženim jedinjenjima. Nakon 24 sata inkubacije, dodato je 4 µl Cell Titer Glo (Promega, #G7572), i ploče su očitane na Envision čitaču. 50% efektivna koncentracija (IC50) je izračunata korišćenjem četvoroparametarske logističke formule y = A+((B-A)/(1+((C/x)^D))), gde A i B označavaju minimalni i maksimalni % aktivacije ili inhibicije, redom, C je IC50, D je nagib krive, a x predstavlja koncentraciju jedinjenja.

3. CellTiter-Glo ispitivanje proliferacije CD8 T ćelija

[1227] Zamrznute naivne humane CD8 T ćelije su odmrznute u RPMI+10% FBS, inkubirane tokom 2 h na 37 °C, i izbrojane. Ploča sa 384-bunarčića za kulturu tkiva je obložena tokom noći na 4 °C sa 20 µl anti-humanog CD3 pri 0.1 µg/mL u običnom RPMI, koji je uklonjen sa ploče pre nego što su 20k/40 µl CD8 T ćelije sa 0.5 µg/mL rastvornog anti-humanog CD28 dodate svakom bunarčiću. Jedinjenja su preneta na ploču za ćelije odmah nakon što su ćelije postavljene na ploču. Posle 72 h inkubacije u inkubatoru na 37 °C, 10 µl CellTiter-glo reagensa (Promega kataloški broj G7570) je dodato u svaki bunarčić. Ploča je energično trešena tokom 5 minuta, inkubirana na sobnoj temperaturi još 15 minuta i očitana na Envision za proliferaciju CD8 T ćelija. U analizi, 0.1 µg/mL anti-CD3 i 0.5 µg/mL anti-CD28 stimulisani CD8 T ćelijski signal je bio pozadinski. Primer 40 pri 3 µM je korišćen za postavljanje opsega od 100%, a EC50je bio na apsolutnih 50% da bi se podaci normalizovali.

4. DGK AP1-Reporter Ispitivanje

[1228] Jurkat AP1-luciferaza Reporter je generisan korišćenjem kompleta Cignal Lenti AP1 Reporter (luc) od SABiosciences (CLS-011L).

[1229] Jedinjenja su preneta sa Echo LDV ploče u pojedinačne bunarčiće ploče sa 384 bunarčića (bela, sa čvrstim dnom, neprozirna PE CulturPlate 6007768) upotrebom Echo550 instrumenta.

Veličina uzorka je bila 30 nl po bunarčiću; i jedna odredišna ploča po izvornoj ploči. Suspenzije ćelija su pripremljene prenošenjem 40 mL ćelija (2x 20 mL) u čiste konične epruvete od 50 mL. Ćelije su koncentrovane centrifugiranjem (1200 opm; 5 min; ambijentalna temperatura). Supernatant je uklonjen i sve ćelije su suspendovane u RPMI (Gibco 11875) 10% FBS da bi se dobila koncentracija od 1.35×10<6>ćelija/mL. Ćelije su ručno dodavane upotrebom višekanalne pipete, 30 µl/bunarčiću ćelijske suspenzije u TC ploču sa 384 bunarčića koji sadrže jedinjenja, 4.0×10<4>ćelija po bunarčiću. Ploče za ćelije su inkubirane tokom 20 minuta na 37 °C i 5% CO2.

[1230] Tokom inkubacije, pripremljeni su rastvori anti-CD3 antitela (αCD3) mešanjem 3 µl aCD3 (1.3 mg/mL) sa 10 mL medijuma [finalna konc = 0.4 µg/mL]. Zatim je 1.5 µl aCD3 (1.3 mg/mL) pomešano sa 0.5 mL medijuma [finalna konc = 4 µg/mL]. Posle 20 minuta, 10 µl medijuma je dodato u sve bunarčiće u koloni 1, bunarčići A do M, i 10 µl αCD3 (4 ug/mL) po bunarčiću je dodato u kolonu 1, redovi N do P u vidu reference. Zatim je pomoću višekanalne pipete dodato 10 µl αCD3 (0.4 ug/mL) po bunarčiću. αCD3 stimulisane /jedinjenjem stimulisane ćelije su inkubirane na 37 °C, 5% CO2tokom 6 sati.

[1231] Tokom ovog perioda inkubacije, Steady-Glo (Promega E2520) reagens se polako odmrzavao na ambijentalnoj temperaturi. Zatim, dodato je 20 µl Steady-Glo reagensa po bunarčiću upotrebom višekapljičnog Combi-dozatora. Mehurići su uklonjeni centrifugiranjem (2000 opm, temperatura okoline, 10 sekundi). Ćelije su inkubirane na sobnoj temperaturi 5 minuta. Uzorci su okarakterisani merenjem relativnih jedinica svetlosti (RLU) upotrebom instrumenta Envision čitača ploče na luminiscencionom protokolu. Podaci su analizirani korišćenjem jedinjenja iz Primera 40 da bi se normalizovala 100% inhibicija.

5. Ispitivanje mišjeg citotoksičnog T limfocita

[1232] Razvijeno je ispitivanje antigen-specifičnih citolitičnih T-ćelija (CTL) da bi se funkcionalno procenila sposobnost DGKα i DGKζ inhibitora da se pojača aktivnost ubijanja tumorskih ćelija posredovana efektorskim T ćelijama. CD8+ T-ćelije izolovane iz OT-1 transgenog miša prepoznaju antigen-eksprimirajuće ćelije, MC38, koje predstavljaju peptid SIINFEKL izveden iz ovalbumina. Prepoznavanje srodnog antigena pokreće citolitičku aktivnost CD8+ T ćelija specifičnih za OT-1 antigen.

[1233] Funkcionalne CTL ćelije su generisane na sledeći način: OT-1 splenociti iz miševa starih 8-12 nedelja su izolovani i ekspandovani u prisustvu SIINFEKI, peptida pri 1 µg/mL i mIL2 pri 10 U/mL. Posle tri dana, dodat je svež medijum sa mIL2 U/mL. Na 5. dan ekspanzije, CD8+ T ćelije su izolovane i spremne za upotrebu. Aktivirane CTL ćelije mogu se čuvati zamrznute 6 meseci. Odvojeno, milion MC38 tumorskih ćelija je pulsirano sa 1 µg/mL SIINFEKL-OVA peptida tokom 3 sata na 37 °C. Ćelije su isprane (3X) svežim medijumom da bi se uklonio višak peptida. Konačno, CTL ćelije koje su prethodno tretirane inhibitorima DGK tokom 1 sata u ploči sa 96-bunarčića oblika slova U su kombinovane sa MC38 tumorskim ćelijama opterećenim antigenom u odnosu 1:10. Ćelije su zatim obrtane pri 700 opm tokom 5 minuta i stavljene u inkubator preko noći na 37 ° C. Posle 24 sata, supernatant je sakupljen za analizu nivoa IFN- γ citokina pomoću AlphaLisa dobavljenog od Perkin Elmera.

6. Ispitivanje PHA proliferacije

[1234] Fitohemaglutininom (PHA) stimulisane blast ćelije iz zamrznutih zaliha su inkubirane u RPMI medijumu (Gibco, ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) dopunjene sa 10% fetalnog goveđeg seruma (Sigma Aldrich, St. Louis, MO) tokom jednog sata pre dodavanja u pojedinačne bunarčiće ploče sa 384 bunarčića (10,000 ćelija po bunarčiću). Jedinjenja su preneta u pojedinačne bunarčiće ploče sa 384 bunarčića i tretirane ćelije su održavane na 37 °C, 5% CO2tokom 72 h u medijumu za kulturu koji sadrži humani IL2 (20 ng/mL) pre merenja rasta primenom MTS reagensa [3-(4,5-dimetil-2-il)-5-(3-karboksimetoksifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolijum] prateći uputstva proizvođača (Promega, Madison, WI). Procentualna inhibicija je izračunata poređenjem vrednosti između IL2 stimulisane (0% inhibicije) i nestimulisane kontrole (100% inhibicije). Odrednice inhibicione koncentracije (IC50) su izračunate na osnovu 50% inhibicije na multiplikacionoj indukciji između IL2 stimulisanih i nestimulisanih tretmana.

7. IFN-γ ispitivanje humanih CD8 T ćelija

[1235] Zamrznute naivne humane CD8 T ćelije su odmrznute u AIM-V medijumu, inkubirane tokom 2 h pri 37 °C, i izbrojane. Ploča sa 384 bunarčića za kulturu tkiva je obložena preko noći na 4 °C sa 20 µl anti-humanog CD3 pri 0.05 µg/mL u PBS-u, koji je uklonjen sa ploče pre nego što je u svaki bunarčić dodato 40,000 ćelija po 40 mikrolitara CD8 T ćelija sa 0.1 µg/mL rastvornog anti-humanog CD28. Jedinjenja su prenešena primenom Echo držača tečnosti u ploču za ćelije odmah nakon što su ćelije stavljene na ploču. Nakon 20 h inkubacije u inkubatoru na 37 °C, 3 mikrolitra po bunarčiću supernatanata je prenešeno u novu belu ploču za ispitivanje sa 384 bunarčića za merenje citokina.

[1236] Interferon-γ (IFN-γ) je kvantifikovan primenom AlphLISA kompleta (kataloški br. AL217) kao što je opisano u priručniku proizvođača (Perkin Elmer). Brojevi iz svakog bunarčića su konvertovani u IFN-γ koncentraciju (pg/mL). Vrednosti EC50za jedinjenje su određene postavljanjem 0.05 µg/mL anti-CD3 plus 0.1 µg/mL anti-CD28 kao početne vrednosti, i kostimulacije 3 µM primera 40 sa anti-CD3 plus anti-CD28 kao 100% aktivacije.

8. pERK ispitivanje humanih CD8 T ćelija

[1237] Zamrznute naivne humane CD8 T ćelije su odmrznute u AIM-V medijumu, inkubirane tokom 2 h u 37 °C, i izbrojane. CD8 pozitivne T ćelije su dodate u ploču sa 384 bunarčića za kulturu ćelija pri 20,000 ćelija po bunarčiću u AIM-V medijumu. Jedno jedinjenje je dodato u svaki bunarčić, zatim su dodati za perlice vezan anti-humani CD3 i anti-CD28 mAt u konačnoj koncentraciji od 0.3 µg/mL. Ćelije su inkubirane na 37 °C tokom 10 minuta. Reakcija je zaustavljena dodavanjem pufera za lizu iz AlphaLISA Surefire kompleta. (Perkin Elmer, kat. br. ALSU-PERK-A). Lizat (5 µL po bunarčiću) je prenešen u novu belu ploču za ispitivanje sa 384 bunarčića za merenje pERK aktivacije.

[1238] EC50jedinjenja je određena kao podešavanje anti-CD3 plus anti-CD28 kao početne vrednosti, i kostimulacije 3 µM primera 40 sa anti-CD3 plus anti-CD28 kao 100% aktivacije.

9. IFN-γ ispitivanje ljudske pune krvi

[1239] Ljudska venska puna krv (22.5 µL po bunariću), dobijena od zdravih donora, je predtretirana sa jedinjenjima tokom jednog sata na 37 °C u vlažnom inkubatoru 95% vazduh/5% CO2. Krv je stimulisana sa 2.5 µL anti-humanog CD3 i anti-CD28 mAt u konačnoj koncentraciji od 1 µg/mL svako tokom 24 sata na 37 °C. IFN-γ u supernatantima je meren primenom AlphLISA kompleta (kat. br. AL217).

[1240] EC50jedinjenja je određena kao podešavanje anti-CD3 plus anti-CD28 kao početne vrednosti, i kostimulacije 3 µM primera 40 sa anti-CD3 plus anti-CD28 kao 100% aktivacije.

Tabela 1

Tabela 2

Tabela 3

Tabela 4

Tabela 5

Tabela 6

Tabela 7

Tabela 8

Tabela 9

Vrednosti aktivnosti EC50normalizovanog agoniste INF-γ pune krvi

Tabela 10

[1241] Tabela 1 izlistava vrednosti aktivnosti IC50inhibicije DGK in vitro merene u DGKα i DGKζ lipozomu (LIPGLO) i ispitivanjima detergent/lipid micela. Jedinjenja predmetnog pronalaska, prikazana Primerima 2-3, 6-37, 39-40, 43-55, 57-58, 60-61, 64-70, 73, 75-76, 78-79, 85, 89-90, 95-96, 98-99, 101, 103-106, 114-115, 117-141, 143-157, 159-160, 162-166, 176-177, 183, 189-190, 192-200, 202, 211-218, 220-234, 239, 244, 250-256, 258-308, 310, 312-324, 326-335, 337-357, 359-360, 362-373, 375, 377-383, 385-417, 419, i 421-432, su imala vrednosti IC50manje od <240 µM, u jednom ili više od DGKα i DGKζ LIPGLO ispitivanja i DGKα i DGKζ ispitivanja, indicirajući inhibiciju jednog ili oba od DGKα i DGKζ enzima.

[1242] Jedinjenja predmetnog pronalaska poseduju aktivnost u vidu inhibitora jednog ili oba od DGKα i DGKζ enzima, i stoga, se mogu koristiti u lečenju bolesti koje su u vezi sa inhibicijom aktivnosti DGKα i DGKζ.

Nukleotidna sekvenca koja kodira hDGKα-(M1-S735)-Ct-TVMV-His:

Aminokiselinska sekvenca iz hDGKα-(M1-S735)-Ct-TVMV-His:

Nukleotidna sekvenca koja kodira hDGKζ-(M1-A928)-transkript varijanta-2 Ct-TVMV-His:

Aminokiselinska sekvenca iz hDGKζ-(M1-A928)-transkript varijanta-2 Ct-TVMV-His:

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje sa formulom (I):

ili njegova so, pri čemu: R1je H, Cl, Br, -CN, C1-4alkil, C2-3alkenil, C1-3alkoksi, -C(O)OH, -C(O)O(C1-3alkil), -C(O)NRaRa, -NRaRa, -NRaC(O)O(C1-4alkil), ili -NRaC(O)NRa(C1-4alkil); svako Raje nezavisno H ili C1-2alkil; R2je C1-6alkil, C1-4cijanoalkil, C1-4fluoroalkil, C2-4alkenil, -(CH2)1-3CH=CF2, C3- 5alkinil, -(CH2)1-4O(C1-3alkil), -(CH2)1-4O(CH2)1-3O(C1-3alkil), -(CH2)1-3C(O)(C1-3alkil), -(CH2)1-3C(O)O(C1-3alkil), -(CH2)1-3Rb, -(CH2)1-3ORb, ili -(CH2)1-3OCH2Rb; Rbje C3-6cikloalkil ili dioksanil, svaki supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, -CN, -CH3, i -OCH3; R3je H, F, Cl, Br, -CN, C1-3alkil, C1-3fluoroalkil, -NO2, -C(O)(C1-3alkil), -C(O)O(C1- 3alkil), ili -C(O)(C1-3fluoroalkil); R4je: (a) 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-2alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, i -OCH2CH=CH2; ili (b) -CH2Ry, -C(CH3)2Ry, -CHRxRy, -CH2CH(OH)Rx, -CH(CH3)(CH2CH2OCH3), ili C3- 6cikloalkil supstituisan sa fluorofenilom; Rxje C1-6alkil, C1-3hidroksialkil, C1-2aminoalkil, C3-6cikloalkil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-3alkila, C1-2fluoroalkila, C1- 2alkoksi, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH; Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, indolinil, naftalenil, oksoindolinil, piridinil, pirimidinil, ili fenil, svaki supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-6alkila, C1-3fluoroalkila, C1-3alkoksi, C1-3fluoroalkoksi, OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NRaS(O)2(C1-3alkil), -NRaC(O)(C1-3alkil), -NRaC(O)O(C1-4alkil), -NRaC(O)Rd, -NRaC(O)NRaRd, i Rd; svako Rcje nezavisno H ili C1-2alkil; i Rdje fenil supstituisan sa nula do 1 supstituentom odabranim od Cl, -CH3, i -OCH3.
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, R1je H, Cl, Br, -CN, C1-3alkil, C2-3alkenil, C1-2alkoksi, -C(O)OH, -C(O)O(C1-2alkil), -C(O)NRaRa, -NRaRa, ili -NRaC(O)O(C1-4alkil); R2je C1-4alkil, C1-3cijanoalkil, C1-3fluoroalkil, C2-3alkenil, -CH2CH2CH=CF2, C3- 4alkinil, -(CH2)1-3OCH3, -(CH2)1-3O(CH2)1-2OCH3, -(CH2)1-3C(O)CH3, -(CH2)1- 3C(O)O(C1-2alkil), -(CH2)1-2Rb, -(CH2)1-3ORb, ili -(CH2)1-3OCH2Rb; Rbje C3-6cikloalkil ili dioksanil, svaki supstituisan sa nula do 1 supstituentom odabranim od F, -CN, -CH3, i -OCH3; R3je H, F, Cl, Br, -CN, C1-2alkil, C1-2fluoroalkil, -NO2, -C(O)O(C1-2alkil), ili -C(O)(C1- 2fluoroalkil); R4je: (a) 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, -CH3, -CF3, -OCH3, i -OCH2CH=CH2; ili (b) -CH2Ry, -C(CH3)2Ry, -CHRxRy, -CH2CH(OH)Rx, -CH(CH3)(CH2CH2OCH3), ili ciklopropil supstituisan sa fluorofenilom; Rxje C1-5alkil, C1-2hidroksialkil, C1-2aminoalkil, C3-6cikloalkil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-2alkila, -CHF2, -OCH3, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH; i Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, indolinil, naftalenil, oksoindolinil, piridinil, pirimidinil, ili fenil, svaki supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4alkil, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, C1-2fluoroalkoksi, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NHS(O)2CH3, -NHC(O)(C1-2alkil), -NHC(O)O(C1-4alkil), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila.
3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, pri čemu: R1je H, Cl, Br, -CN, C1-2alkil, -CH=CH2, -OCH3, -C(O)OH, -C(O)OCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, ili -NHC(O)OC(CH3)3; R2je -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH2CH2CH2CH3, -CH2CN, -CH2CH2CH2CN, -CH2CH2CF3, -CH2CH=CH2, -CH2CH2CH=CF2, -CH2C≡CH, -CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2OCH2CH2OCH3, -CH2CH2CH2C(O)CH3, -CH2C(O)OCH2CH3, -CH2(ciklopropil), ili -CH2CH2(dioksanil); R3je H, F, Cl, Br, -CN, -CH3, -CF3, -NO2, -C(O)OCH2CH3, ili -C(O)CF3; R4je: (a) 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa 1 do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, -OH, -OCH3, i -OCH2CH=CH2; ili (b) -CH2Ry, -C(CH3)2Ry, -CHRxRy, -CH2CH(OH)Rx, -CH(CH3)(CH2CH2OCH3), ili ciklopropil supstituisan sa fluorofenilom; Rxje C1-2alkil, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -CH2C(CH3)3, -CH2OH, -CH2NH2, ciklopropil, ciklobutil, cikloheksil, ili fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, i -OCH3; i Ryje 1,3-benzodiazolil, indazolil, indolil, etil indolil, indolinil, naftalenil, hidroksinaftalenil, oksoindolinil, piridinil, metoksipiridinil, pirimidinil, ili fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, -CH3, -C(CH3)3, -CHF2, -CF3, -OCH3, -OCF3, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NH2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)(CH2CH3), -NHC(O)CH3, -NHC(O)O(C(CH3)3), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila.
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, pri čemu R4je -CH2Ry, -CHRxRy, ili -CH2CH(OH)Rx.
5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 4 ili njegova so, pri čemu: Rxje fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1- 2alkila, -CHF2, -OCH3, -OCH2CH=CH2, i -OCH2C≡CH; i Ryje fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, C1-4alkila, C1-2fluoroalkila, C1-2alkoksi, C1-2fluoroalkoksi, -OCH2CH=CH2, OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NRcRc, -NHS(O)2CH3, -NHC(O)(C1-2alkil), -NHC(O)O(C1-4alkil), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila.
6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, pri čemu: R4je -CHRxRy; Rxje fenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, i -OCH3; i Ryje fenil supstituisan sa nula do 3 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, Br, -OH, -CN, -CH3, -C(CH3)3, -CHF2, -CF3, -OCH3, -OCF3, -OCH2CH=CH2, -OCH2C≡CH, -OCH2(cijanopiridinil), -NH2, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)(CH2CH3), -NHC(O)CH3, -NHC(O)O(C(CH3)3), -NHC(O)(fenil), -NHC(O)NH(fenil), i fenila.
7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, pri čemu R4je 2,3-dihidro-1H-indenil supstituisan sa nula do 2 supstituenta nezavisno odabrana od F, Cl, -OH, C1-2alkila, C1- 2fluoroalkila, C1-2alkoksi, i -OCH2CH=CH2.
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, pri čemu navedeno jedinjenje je: etil 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karboksilat (1); 6-bromo-4-(4-(2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (2); 4-(4-(bis(4-fluorofenil) metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (3); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil) [2-(prop-2-in-1 -iloksi)fenil]metil] piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (5); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)[2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil]metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (5-7); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)(2-hidroksifenil) metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (8-10); 8-{4-[(4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (11); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (12-14); 6-bromo-4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil) metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (15-17); 8-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (18-20); 6-bromo-4-[4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1il)piperazin-1-il]-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (21); 6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)etil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (22-24); 6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (25-27); 6-bromo-4-{4-[2-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (28-30); 6-bromo-4-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (31); 8-{4-[1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (32-34); 6-bromo-4-{4-[ciklopropil(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (35); 8-{4-[2-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil] piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (36); 8-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-hidroksietil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (37); 1-metil-4-{4-[(naftalen-1-il) metil]piperazin-1-il}-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (38); 6-hloro-4-{4-[(4-fluorofenil)[2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil]metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (39); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (40); 8-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (41); 8-(4-((2-hidroksifenil)(fenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (42); 8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (43-45); 8-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il) piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (46); 8-(4-(2-hidroksi-1-feniletil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (47); 8-(4-(2-hidroksi-2-feniletil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (48); 8-(4-(ciklopropil(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (49-51); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (52); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (53); 6-bromo-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (54); 6-bromo-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (55); 6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (56-58); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-metoksi-6-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (59-61); terc-butil (8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6dihidro-1,5-naftiridin-2-il)karbamat (62); 6-amino-4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (63); 6-bromo-4-(4-(2-(difluorometil)benzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (64); 6-bromo-4-(4-(2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (65); 6-bromo-4-(4-(2-hidroksi-4-metilbenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (66); 6-bromo-4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (67); 6-bromo-4-(4-(4-fluoro-2-metoksibenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (68); 6-bromo-4-(4-(2-hidroksi-4,6-dimetilbenzil)piperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (69); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (70); 6-bromo-4-(4-((2-fluoro-4-metilfenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (71); 6-bromo-4-(4-((2,4-dimetilfenil)(2-hidroksifenil) metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (72); 6-bromo-4-(4-((2-hidroksifenil)(o-tolil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (73); 6-bromo-4-(4-((3-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (74-76); 6-bromo-4-(4-((2-hidroksifenil)(fenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (77-79); 6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (80-82); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-3-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (83-85); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-5-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (86); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksi-6-metilfenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (87); 5-((2-((4-(6-bromo-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)(4-fluorofenil)metil)-3-metilfenoksi)metil)nikotinonitril (88-90); 5-((2-((4-(6-bromo-1-metil-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)(4-fluorofenil)metil)-5-fluorofenoksi)metil)nikotinonitril (91-93); 4-(4-((2-(aliloksi)-6-metilfenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (94-96); 8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (97-99); 8-(4-((4-fluorofenil) (2-(prop-2-in-1-iloksi)fenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (100-102); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro1,5-naftiridin-3-karbonitril (103); 4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (104); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)plperazin-1-il)-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (105-107); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-6-bromo-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (113); 6-bromo-4-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (114-116); 6-bromo-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-1-(2-metoksietil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (117); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (118); 8-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil) metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (119-121); 8-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (122); 8-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (123-125); 8-(4-((4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (126-128); 8-(4-((4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (129-131); 8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (132-134); 8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (135-137); 8-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (138); 8-{4-[1-(4-fluorofenil) propil] piperazin-1-il } -7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5, 6-dihi dro-1, 5-naftiridin-2-karbonitril (139-141); 8-(4-(ciklopropil(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5-(prop-2-in-1-il)-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (142-144); 8-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil)metil)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (145); 8-(4-(6-metoksi-2,3-dlhidro-1H-inden-1-il)plperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (146); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (147); 8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-5-(2-metoksietil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (148-150); 5-(cijanometil)-8-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (151); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-(cijanometil)-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (152); 4-(4-(bis(4-fluorofenil) metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-(cij anometil)-2-okso-1,2-dihi dro-1, 5-naftiridin-3-karbonitril (153); 6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (154); 6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-(1-(4-fluorofenil)propil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (155); 6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-(6-metoksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (156); 6-bromo-1-(cijanometil)-4-(4-((4-fluorofenil)(2-hidroksifenil) metil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (157); 6-bromo-1-(ciklopropilmetil)-4-(4-((4-fluorofenil)(2-metoksifenil)metil) piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (158-160); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-(ciklopropilmetil)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (161); 6-bromo-1-(ciklopropilmetil)-4-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (162-164); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1-(prop-2-in-1-il)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (165); 1-(2-(1,3-dioksan-2-il)etil)-4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (166); 1-alil-4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (176); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-butil-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (177); 4-(4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-2-okso-1,5-naftiridin-1(2H)-il)butannitril (183); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1-(3,3,3-trifluoropropil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (185); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-(4,4-difluorobut-3-en-1-il)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (186); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-3-nitro-1-(4-oksopentil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (187); 4-(4-benzhi dri Ipiperazin-1-il)-1-(3-(2-metoksietoksi)propil)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (189); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-(3-metoksipropil)-3-nitro-1,5-naftiridin-2(1H)-on (190); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (191); 6-bromo-4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (192); 6-hloro-4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (193); 4-(4-(4-fluoro-2-hidroksibenzil) piperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (194); 4-(4-(1-(2-(aliloksi)-4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (195); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (196); 6-hloro-4-(4-(2-hidroksibenzil) piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (198); 6-hloro-4-(4-(3(etil(metil)amino)benzil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (199); 4-(4-(7-(aliloksi)-5-fluoro-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (200); 6-hloro-4-(4-(5-fluoro-7-hidroksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il) piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (201); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-6-etil-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (202); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (204); 4-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-1-metil-2-okso-6-vinil-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (208); 6-hloro-4-(4-(cikloheksil(fenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (209); 4-(4-(2-aminobenzil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (211); N-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil) metansulfonamid (212); N-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil)benzamid (213); 1-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil)-3-fenilurea (214); N-(2-((4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il)metil)fenil)acetamid (215); 6-hloro-4-(4-(indolin-7-ilmetil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (216); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (217); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (218); 6-hloro-4-(4-((2-hidroksifenil)(fenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (219); 6-hloro-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil) piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (220); 6-hloro-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (221); 6-hloro-4-(4-((4-fluoro-2-hidroksifenil)(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (222); 8-(4-benzhidrilpiperazin-1-il)-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (223); 3-bromo-4-(4-(1-(4-fluorofenil)etil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (224); 6-bromo-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (225); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (226); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-3-(2,2,2-trifluoroacetil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (227); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1,6-dimetil-3-(2,2,2-trifluoroacetil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (228); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6bromo-2-okso-1-(prop-2-in-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (229); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-bromo-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (230); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-N,N,5-trimetil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksamid (231); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil) piperazin-1-il)-1,6-dimetil-3-(trifluorometil)-1,5-naftiridin-2(1H)-on (232); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-hloro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (233); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-fluoro-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (234); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril, TFA (235); 3-bromo-4-(4-((1-etil-1H-indol-4-il)metil)piperazin-1-il)-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (236); 6-bromo-1-metil-4-(4-(naftalen-1-ilmetil)piperazin-1-il)-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (237); 4-(4-([1,1'-bifenil]-2-ilmetil) piperazin-1-il)-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril, TFA (238); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-3-bromo-1,6-dimetil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (239); metil 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilat (240); 8-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-7-cijano-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karboksilna kiselina (241); 4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-metil-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (242); 4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-etil-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (243); 4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-1-(2-metoksietil)-3-nitro-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (244); 2-{4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-1-il} acetonitril (245); etil 2-{4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-3-nitro-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-1 -il} acetat (246); 4-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-3-nitro-1-propil-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (248); 4-{4-[ciklopropil(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (250); 4-{4-[bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (251); 4-[4-(4-metoksibutan-2-il)piperazin-1-il]-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (252); 4-[4-(3,4-dihidro-2H-1-benzopiran-4-il)piperazin-1-il]-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (253); 4-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksipiridin-3-il)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (254); 4-{4-[(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (255); 4-{4-[(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metil] piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (256); 4-{4-[(2-bromo-6-hi droksi fenil)metil] piperazin-1 -il} -6-hloro-1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (258); 6-bromo4-{4-[(2-hidroksi-6-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (259); 8-{4-[2-(4-fluorofenil)propan-2-il]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (260); 4-{4-[(4-terc-butil-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (261); 4-(4-{[2-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil] metil}piperazin-1-il)-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (262); 8-{4-[(4-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (263); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-6-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (264); 8-(4-{[2-hidroksi-4-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (265); 6-bromo-4-{4-[(4-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (266); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (267); 4-{4-[(3-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (268); 8-{4-[(4-hloro-2-hidroksifenil) metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (269); 6-bromo-4-(4-{[2-hidroksi-5-(trifluorometoksi)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (270); 6-bromo-4-{4-[(2-bromo-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (271); 6-hloro-4-{4-[(2-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (272); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (273); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-2-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (274); 4-{4-[(5-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (275); 4-{4-[(4-bromo-2-hidroksifenil) metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (276); 4-{4-[(5-bromo-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (277); 6-bromo-4-{4-[(3-hloro-2-hidroksifenil)metil] piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (278); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-4-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (279); 6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (280); 6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-3-metilfenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (281); 6-bromo-4-{4-[(5-bromo-2hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (282); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-5-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (283); terc-butil N-(2-{[4-(6-bromo-3-cijano-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-4-il)piperazin-1-il]metil}fenil)karbamat (284); 6-hloro-1-metil-2-okso-4-(4-{[2-(trifluorometoksi)fenil] metil} piperazin-1-il)-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (285); 4-{4-[(3-bromo-2-hidroksifenil) metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (286); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (287); 6-hloro-4-{4-[(4-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (288); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (289); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-5-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (290); 6-hloro-4-{4-[(3,5-difluorofenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (291); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-6-metilfenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (292); 6-hloro-4-{4-[(3-hloro-2-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (293); 6-bromo-4-{4-[(2-fluoro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (294); 6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-4-metoksifenil)metil] piperazin-1-il } -1-metil-2-okso-1, 2-dihi dro-1, 5-naftiridin-3-karbonitril (295); 4-{4-[(5-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (296); 6-bromo-4-{4-[(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (297); 6-hloro-4-{4-[(3,5-difluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (298); 6-bromo-4-{4-[(2,3-dihidro-1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (299); 6-bromo-4-{4-[(2-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (300); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-4-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (301); 6-hloro-4-{4-[(3-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (302); 6-hloro-4-{4-[(1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (303); 6-bromo-4-{4-[(3-fluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (304); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-5-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (305); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-2-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (306); 6-hloro-4-{4-[(3,5-dihloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (307); 6-hloro-4-{4-[(4-fluorofenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (308); 6-bromo-4-{4-[(3-terc-butil-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (309); 6-hloro-4-{4-[(2,4-dihlorofenil) metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (310); 6-hloro-4-(4-{[2-hidroksi-4-(trifluorometil)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (311); 6-hloro-4-{4-[(5-fluoro-2-hi droksifenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (312); 6-hloro-4-(4-{[3-fluoro-5-(trifluorometil)fenil] metil} piperazin-1 -il)-1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (313); 6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-6-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (314); 6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)-2-metilpropil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (315-316); 8-{4-[(2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (317); 6-hloro-4-{4-[(2,5-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (318); 6-hloro-4-{4-[(3,4-difluorofenil)metil]piperazin-1-il} -1-meti1-2-okso-1,2-dihidro-1,5 -naftiridin-3 -karbonitril (319); 6-bromo-4-{4-[(3,5-difluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (320); 6-hloro-4-{4-[(3-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (321); 6-hloro-4-{4-[(1H-indazol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (322); 6-hloro-4-{4-[(4-hloro-3-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (323); 6-hloro-4-{4-[(3-hloro-5-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (324); 8-[4-(difenilmetil)piperazin-1-il]-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (325); 6-hloro-4-{4-[(4-hloro-3-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (326); 6-hloro-4-{4-[(3-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (327); 6-hloro-4- {4-[(3-hidroksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (328); 4-{4-[(3-fluoro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (329); 6-hloro-4-{4-[(2,3-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (330); 6-hloro-4-{4-[(2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (331); 8-{4-[(4-hloro-3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (332); 6-bromo-4-{4-[(1H-indazol-7-il)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (333); 4-{4-[(1-etil-1H-indol-4-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (334); 6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-6-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (335); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksinaftalen-1 -il)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (336); 4-{4-[(2-hidroksifenil)metil] piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (337); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-5-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (338); 6-hloro-4-{4-[(2-fluorofenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (339); 6-hloro-4-{4-[(5-cijano-2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (340); 6-hloro-4-{4-[(4-metoksifenil) metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (341); 8-{4-[1-(4-fluorofenil)ciklopropil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (342); 4-(4-benzilpiperazin-1-il)-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (343); 6-bromo-4-{4-[(2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (344); 6-hloro-4-{4-[(3-hloro-5-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (345); 6-hloro-1-metil-4-{4-[(2-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (346); 4-{4-[bis(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (347); 6-hloro-4-{4-[(4-fluoro-3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (348); 4-{4-[(2-hidroksifenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (349); 6-hloro-4-{4-[(2,4-difluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (350); 6-hloro-4-{4-[(3-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (351); 4-{4-[(2-hidroksi-3-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (352); 6-hloro-4-{4-[(3-hidroksi-4-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (353); 6-hloro-4-{4-[(3-hloro-4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (354); 6-hloro-4-(4-{[4-hidroksi-3(trifluorometil)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (355); 6-hloro-4-{4-[(4-hidroksi-3-metilfenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (356); 6-hloro-4-{4-[(3-fluoro-4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (357); 6-hloro-4-[4-(difenilmetil) piperazin-1-il]-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (358); 4-{4-[(1H-1,3-benzodiazol-7-il)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (359); 4-{4-[(1H-1,3-benzodiazol-7-il)metil] piperazin-1-il}-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (360); 6-hloro-4-{4-[(4-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (362); 8-{4-[(3-fluoro-4-hidroksifenil) metil]piperazin-1-il} -5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (363); 6-hloro-4-{4-[(2-fluoro-5-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (364); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-metoksifenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (365); 6-bromo-4-{4-[(3,5-dihloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (366); 6-bromo-4-{4-[(5-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (367); 6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-3-metoksifenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (368); 6-hloro-4-(4- {[2-hi droksi-5-(trifluorometoksi)fenil]metil} piperazin-1 -il)-1 -metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (369); 6-hloro-4-{4-[(5-hloro-2-hi droksifenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (370); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-3-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (371); 6-bromo-4-{4-[(2-hidroksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (372); 6-bromo-4-{4-[(1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (373); 6-bromo-1-metil-2-okso-4-{4-[(2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (374); 6-hloro-4-(4-{[3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil]metil}piperazin-1-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (375); 6-hloro-1-metil-2-okso-4-{4-[(2-okso-2,3-dihidro-1H-indol-7-il)metil]piperazin-1-il}-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (376); 6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)-3,3-dimetilbutil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (377-378); 6-hloro-4-{4-[(4-cijano-2-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (379); 6-bromo-4-{4-[(3-bromo-2hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (380); 6-hloro-4-(4-{[2-hi droksi-4-(trifluorometoksi)fenil] metil } pip erazin-1-il)-1-metil-2-okso-1, 2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (381); 6-hloro-4-{4-[ciklobutil(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (382-383); 4-{4-[(3-terc-butil-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-hloro-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (384); 6-hloro-1-metil-4-{4-[(3-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (385); 6-hloro-1-metil-4-{4-[(4-metilfenil)metil] piperazin-1-il}-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (386); 6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)etil]piperazin-1-il}-1-meti1-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (387-388); 4-{4-[(3-hloro-2-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (389); 6-bromo-4-{4-[(2-hloro-6-hidroksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (390); 6-hloro-4-{4-[(2-hidroksi-3-metilfenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (391); 8-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (392); 4-{4-[bis(4-hlorofenil)metil] piperazin-1-il}-6-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (393); 8-{4-[bis(4-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (394); 4-{4-[bis(4-hlorofenil)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (395); 4-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksipiridin-3-il)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (396); 4-{4-[(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (397); 4-{4-[1-(4-fluorofenil)propil]piperazin-1-il}-1,6-dimetil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (398); 8-{4-[(S)-(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (399); 8-{4-[(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metil] piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (400); 4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(pirimidin-2-il)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (401); 4-{4-[bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (402); 4-{4-[(4-fluorofenil)(piridin-2-il)metil] piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (403); 5-metil-8-{4-[(naftalen-1-il)metil]piperazin-1-il}-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (404); 8-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7dikarbonitril (405-407); 5-metil-8-{4-[(4-metilfenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (408); 8-{4-[bis(4-fluoro-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-5-meti1-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (409); 8-{4-[(4-fluorofenil)(3-metoksipiridin-2-il)metil] piperazin-1-il} -5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (410); 8-{4-[(4-fluorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (411); 4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (412); 4-{4-[(4-fluoro-2-metoksifenil)(4-fluorofenil) metil]piperazin-1-il}-6-metoksi-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (413); 8-{4-[(S)-(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (414); 5-metil-8-{4-[(naftalen-1-il)metil]piperazin-1-il}-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (415); 8-{4-[(4-fluorofenil)(2-metoksi-4-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-5-metil-7-nitro-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (416); 6-hloro-4-{4-[(4-hlorofenil)metil]piperazin-1 -il} -1 -metil-2-okso-1,2-dihi dro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (417); 8-{4-[(2-hidroksifenil)(fenil)metil]piperazin-1 -il} -5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2,7-dikarbonitril (418); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-metilfenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (419); 6-hloro-4-{4-[(2-hloro-6-fluorofenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (420); 6-hloro-4-{4-[1-(4-fluorofenil)ciklopropil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (421); 6-hloro-4-{4-[(2,6-difluorofenil) metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5 -naftiridin-3 -karbonitril (422); 6-hloro-4- {4-[(2-fluoro-4-metilfenil)metil] pip erazin-1-il } -1-metil-2-okso-1,2-dihi dro-1, 5 - naftiridin-3-karbonitril (423); 6-hloro-4-{4-[(4-cijano-2-metoksifenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (424); 6-hloro-4- {4-[2-(4-fluorofenil)propan-2-il]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (425); 4-(4-(bis(4-fluorofenil)metil)piperazin-1-il)-1-metil-1,5-naftiridin-2(1H)-on (426); 4-{4-[bis(4-fluorofenil)metil]piperazin-1-il} -1,6-dimetil-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-2-on (427); 6-bromo-4- {4-[(S)-(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (428); 6-bromo-4-{4-[(4-hlorofenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (429); 6-bromo-4-{4-[(4-fluorofenil)(fenil)metil] piperazin-1-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (430); 6-bromo-1-metil-4-{4-[(4-metilfenil)(fenil)metil]piperazin-1-il}-2okso-1,2-dihidro-1,5-naftiridin-3-karbonitril (431); ili 8-{4-[bis(4-fluorofenil)metil] piperazin-1-il}-5-metil-6-okso-5,6-dihidro-1,5-naftiridin-2-karbonitril (432).
9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; i farmaceutski prihvatljiv nosač.
10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za primenu u terapiji.
11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za primenu u lečenju kancera ili virusnih infekcija.
12. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za primenu prema patentnom zahtevu 11, pri čemu navedeni kancer je odabran od kancera debelog creva, kancera pankreasa, kancera dojke, kancera prostate, kancera pluća, kancera jajnika, kancera grlića materice, kancera bubrega, kancera glave i vrata, limfoma, leukemije i melanoma. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Kneginje Ljubice 5, 11000 Beograd