RS64356B1 - Topikalna formulacija za pospešivanje zarastanja rana - Google Patents

Description

Opis

UNAKRSNA REFERENCA NA POVEZANE PATENTNE PRIJAVE

[0001] Ova patentna prijava zahteva pravo na korist od datuma podnošenja privremene SAD prijave br.62/363,284, podnete 17. jula 2016.

OSNOV PRONALASKA

[0002] Plectranthus amboinicus (takođe poznat ranije ili alternativno kao Coleus amboinicus Lour., Coleus aromaticus Benth., Coleus aromaticus auct., Plectranthus aromaticus Roxb., Plectranthus aromaticus Benth., i Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng.), je višegodišnja lekovita biljka iz familije Lamiaceae (poznate i kao Labiatae) poreklom iz južne i istočne Afrike. Plectranthus amboinicus je takođe poznat kao pačuli, kubanski origano, indijska boražina, indijska menta, meksička menta, meksički origano, seoska boražina i španski timijan.

[0003] Centella asiatica (takođe poznata ranije ili alternativno kao Centella asiatica Urban, Centella asiatica (L.) Urban, Hydrocotyle asiatica L., i Trisanthus cochinchinensis Lour.) je višegodišnja lekovita biljka iz familije Mackinlayaceae ili subfamilije Mackinlayoideae familije Apiaceae (poznata i kao Umbelliferae) poreklom iz Azije, Afrike i Južne Amerike. Centella asiatica je takođe poznata kao evropsko vodeno čudo, gotu kola, Kola, penivort, indijski penivort, močvarni penivort, penivid, indijski ženšen, konjska trava, pegaga, mandookaparni, tigar trava, spejdlif ili tono. Ekstrakti Centella asiatica generalno se sastoje od dva glavna jedinjenja: azijatikozida i madekasinske kiseline.

[0004] US 2007/237841 otkriva kompozicije koje se primenjuju topikalno, koje sadrže ekstrakte Plectranthus amboinicus i Centella asiatica za lečenje kožnih poremećaja, uključujući poboljšanje zarastanja rana kod pacijenata sa dijabetesom. Glavne aktivne komponente Centella asiatica su azijatikozid i madekasinska kiselina.

[0005] EP 1925 310 A1 otkriva kompozicije koje sadrže ekstrakte Plectranthus amboinicus za poboljšanje zarastanja rana kod pacijenata sa dijabetesom.

[0006] US 2013/309337 otkriva topikalne farmaceutske kompozicije za lečenje kožnih poremećaja, koje sadrže sirove ekstrakte Plectranthus amboinicus i ekstrakte Centella asiatica Urban.

[0007] Grayer et al. prikazuju u Biochemical Systematics and Ecology 38 (2010), 335-341, prisustvo i distribuciju eksudatnih flavonoida u Plecanthus i Coleus. Najčešći flavonoidi koji se javljaju u obe klade su cismaritin i salvigenin.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0008] Predmetno otkriće se zasniva, najmanje delom, na superiornim terapeutskim efektima topikalne formulacije koja sadrži kombinaciju ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica kao što je ovde opisano, koji sadrže salvigenin i/ili azijatikozid, za pospešivanje zarastanja rana kod, na primer, pacijenata sa dijabetesom koji imaju dijabetesni čir na stopalu. Na primer, topikalna formulacijaje uspešno poboljšala zarastanje čira na stopalu kod pacijenata sa dijabetesom i efikasnost je bila mnogo veća od preparata Aquacel<®>, pozitivne kontrole. Lokalna primena topikalne formulacije je takođe pokazala ograničenu sistemsku distribuciju najmanje aktivnih sastojaka u njoj (salvigenin i/ili azijatikozid) kod pacijenata sa DFU, i utvrđeno je da je bezbedna kod pacijenata.

[0009] Shodno tome, ovde je obezbeđena topikalna formulacija, koja sadrži: (i) aktivni agens koji sadrži salvigenin u količini od oko 0,0001% do 0,5% (tež./tež.) (npr., oko 0,0001% do 0,1% po težini) i azijatikozid u količini od oko 0,05% do 5% (tež./tež.) (npr., oko 0,05% do 1% po težini); (ii) agens za povećanje viskoznosti u količini od oko 1,0-10% (tež./tež.);; (iii) podlogu za mast u količini od oko 5-30% (tež./tež.); (iv) antimikrobni konzervans u količini od oko 0,005-0,2% (tež./tež.); i (v) emulgator u količini od oko 0,5-10% (tež./tež.).

[0010] U nekim primera izvođenjama, aktivni agens je ekstrakt Plectranthus amboinicus (PA), ekstrakt Centella asiatica (CA) ili kombinacija ekstrakta PA i CA, koji (pojedinačno ili u kombinaciji) sadrži salvigenin i azijatikozid.

[0011] U jednom primeru izvođenja, aktivni agens je kombinacija ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica. Aktivni agens može biti oko 0,1-30% (tež./tež.) i sadržati najmanje salvigenin i azijatikozid. U nekim slučajevima, topikalna formulacija može da sadrži salvigenin u rasponu od oko 0,0001% do 0,5% (tež./tež.), na primer, oko 0,0001% do 0,1% (tež./tež.). U nekim slučajevima, topikalna formulacija može da sadrži salvigenin u rasponu od oko 0,0001% do 0,1% (tež./tež.) i azijatikozid u rasponu od 0,05% do 1% (tež./tež.). U bilo kojoj od ovde opisanih topikalna formulacija, aktivni agens može dalje da sadrži cirsimaritin, madekasozid ili njihovu kombinaciju.

[0012] Ekstrakt Plectranthus amboinicus može biti oko 0,1-5% (tež./tež.) ili oko 0,1-1% (tež./tež.) u topikalnoj formulaciji. U nekim primera izvođenjama, ekstrakt Plectranthus amboinicus sadrži flavonoide, eterična ulja, fenole, terpenoide ili njihovu kombinaciju.

[0013] Ekstrakt Plectranthus amboinicus se može pripremiti dovođenjem u kontakt celog Plectranthus amboinicus ili njegovog dela sa rastvaračem koji ima indeks polarnosti manji od 7 (npr. manji od 5) da bi se dobio rastvor i sušenjem rastvora da bi se dobio Plectranthus amboinicus ekstrakt. U specifičnom primeru izvođenja, ekstrakt Plectranthus amboinicus se priprema postupkom koji obuhvata: (i) dovođenje u kontakt celog Plectranthus amboinicus ili njegovog dela sa alkoholom (npr. etanol) da bi se dobio sirovi ekstrakt Plectranthus amboinicus; (ii) dovođenje u kontakt sirovog ekstrakta sa nejonskom adsorbujućom smolom; (iii) eluiranje nejonske adsorbentne smole sa rastvaračem koji ima indeks polarnosti manji od 7 (npr. manji od 5) da bi se dobio rastvor; i (iv) sušenje rastvora da bi se dobio ekstrakt Plectranthus amboinicus.

[0014] Alternativno ili kao dodatak, ekstrakt Centella asiatica može da sadrži azijatikozid, madekasozid ili oboje. U nekim primera izvođenjama, ekstrakt Centella asiatica je oko 0,1-20% (tež./tež.) ili oko 0,5-5% (tež./tež.) u topikalnoj formulaciji.

[0015] U nekim primera izvođenjama, odnos između ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica je oko 1:10 do oko 10:1, na primer, oko 1:5 do 5:1.

[0016] topikalna formulacija može da sadrži agens za povećanje viskoznosti od oko 1,0-10% (tež./tež.). Primeri agenasa za povećanje viskoznosti uključuju, ali nisu ograničeni na, cetostearil alkohol, holesterol, stearil alkohol, hlorokrezol, beli vosak, stearinsku kiselinu, cetil alkohol ili njihovu kombinaciju.

[0017] topikalna formulacija može da sadrži bazu masti u količini od oko 5-30% (tež./tež.) (npr., 10-30% po težini). U nekim slučajevima, podloga za mast može biti krema. Primeri baze za mast uključuju, ali nisu ograničeni na, jedno ili više jedinjenja vazelina (npr. tečni vazelin, beli vazelin).

[0018] Antimikrobni konzervans u topikalnoj formulaciji opisanoj ovde može biti oko 0,005-0,2% (tež./tež.) (npr., 0,01-0,2% po težini). Može da sadrži jedno ili više jedinjenja parabena (npr. metil paraben i/ili propil paraben).

[0019] Emulgator (npr. Span<®>60 i/ili Tween<®>60) u topikalnoj formulaciji može biti oko 0,5-10% (tež./tež.) (npr., 0,5-6% po težini).

[0020] U nekim primerima, ovde opisana topikalna formulacija može da sadrži bazu masti u količini od oko 10-30% (tež./tež.), antimikrobni konzervans od oko 0,01-0,2% (tež./tež.) i emulgator u oko 0,5-6% (tež./tež.).

[0021] Bilo koja od ovde opisanih topikalna formulacija može opciono da sadrži jedan ili više rastvarača, na primer, propilen glikol.

[0022] U jednom primeru, ovde opisana topikalna formulacija sadrži kombinaciju ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica u količini od oko 0,1-30% (tež./tež.), cetostearil alkohola u količini od oko 1,0-10 % (tež./tež.) (npr., oko 2 do 8% ili oko 3-7%), kombinacija belog vazelina i tečnog vazelina u ukupnoj količini od oko 5-30% (tež./tež.) (npr., oko 5 -25% ili oko 5-20%), kombinacija metil parabena i propil parabena u ukupnoj količini od oko 0,005-0,2% (tež./tež.), i kombinacija sorbitan monostearata i polisorbata 60 u ukupnoj količini od oko 0,5-10% (tež./tež.) (npr. 0,5-8% ili 0,5-6%). Takva topikalna formulacijamože dalje da sadrži propilen glikol u količini od oko 2-20% (tež./tež.) (npr.2-10% ili 4-15%).

[0023] U drugom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje metod za zarastanje rana, koji se sastoji od primene topikalne formulacije koja je ovde otkrivena na mestu rane subjekta kome je to potrebno. U jednom aspektu, topikalna formulacija se može primeniti najmanje jednom dnevno, na primer, dva puta dnevno.

[0024] U jednom primeru, subjekt koji se leči može biti pacijent sa dijabetesom koji pati od dijabetičkog čira na stopalu. Na primer, pacijent sa dijabetesom može imati dijabetes tipa I ili tipa II. U drugom primeru, subjekt je ljudski pacijent koji ima otvorenu ranu, na primer, abraziju, rez, razderotinu, punkciju ili avulziju. U drugom primeru, subjekt je čovek koji ima hroničnu ranu, koja može biti hirurška rana, traumatska rana, dekubitus, venski čir, dijabetesni čir ili rana uzrokovana karcinomom, opekotinama, atopijskim dermatitisom. , rana. U nekim primerima, subjekt je pacijent koji ima akne.

[0025] Takođe u okviru ovog otkrića su (i) topikalna formulacija kao što je ovde opisana za upotrebu u pospešivanju zarastanja rana, i (ii) upotreba ekstrakta Plectranthus amboinicus, ekstrakta Centella asiatica ili njihove kombinacije u proizvodnji leka za upotrebu u pospešivanju zarastanja rana, pri čemu se ekstrakt Plectranthus amboinicus, ekstrakt Centella asiatica ili njihova kombinacija formuliše u topikalnu formulaciju kao što je ovde opisano.

[0026] Detalji jednog ili više primera izvođenja prema pronalasku su izloženi u opisu ispod. Druge karakteristike ili prednosti ovog pronalaska biće očigledne iz sledećih crteža i detaljnog opisa nekoliko primera izvođenja, kao i iz priloženih zahteva.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0027]

Slika 1 je dijagram toka koji prikazuje primer postupka za pripremu ekstrakta Plectranthus amboinicus.

Slika 2 je dijagram toka koji prikazuje primer procesa za pripremu ekstrakta Centella asiatica.

Slike 3A i 3B uključuju grafikone koji pokazuju efekat ekstrakta Plectranthus amboinicus (PA) i ekstrakta Centella asiatica (CA) na proliferaciju endotelnih ćelija kao što je utvrđeno MTT testom (Slika 3A) i na migraciju endotelnih ćelija kao što je utvrđeno u testu grebanja (slika 3B).

Slike 4A i 4B uključuju grafikone koji pokazuju efekat ekstrakta Plectranthus amboinicus (PA) i ekstrakta Centella asiatica (CA) na proliferaciju ćelija keratinocita kao što je utvrđeno u SRB testu (slika 4A) i na migraciju ćelija keratinocita kao što je utvrđeno u testu ogrebotina (slika 4B).

Slike 5A i 5B uključuju grafikon koji pokazuje efekat salvigenina u pospešivanju zarastanja rana u in vitro testu formiranja kapilarne cevi i grafikon koji pokazuje efekat azijatikozida u pospešivanju migracije keratinocita.

Slika 6 je grafikon koji pokazuje efekat ekstrakta Plectranthus amboinicus (PA) i ekstrakta Centella asiatica (CA) na normalno zarastanje rana na životinjskom modelu.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0028] Čirevi na stopalima su česta komplikacija povezana sa dijabetesom kao rezultat razlaganja tkiva kože i otkrivanja donjih slojeva. Svi dijabetičari su u opasnosti od razvoja čireva na stopalima. Oko 15-20% dijabetičara bi razvilo čireve na stopalu. Među njima, približno 33% pacijenata bi zahtevalo amputaciju.

[0029] Trenutno dostupni tretmani za dijabetičke čireve na stopalu (DFU) uključuju nošenje zaštitnih instrumenata, kao što su dijabetičke cipele, gipsi, proteze za hranu, kompresioni omotači i ulošci za cipele za sprečavanje kurjih očiju i žuljeva. Takvi medicinski instrumenti mogu biti skupi i često izazivaju neprijatnosti u svakodnevnom životu pacijenata. Alternativno, mogu se izvršiti hirurške procedure za uklanjanje čireva na stopalu sa debridmantom. Do danas, Regranex<®>je jedini lek koji je odobrila Uprava za hranu i lekove (FDA) za lečenje DFU. U junu 2008. FDA je objavila novu promenu etikete Regranex<®>kako bi ukazala da postoji petostruko povećan rizik od smrtnosti od raka u grupi izloženoj Regranex<®>.

[0030] Ovo otkriće se zasniva, barem delimično, na razvoju topikalne formulacije koja sadrži kombinaciju ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica, koji je pokazao značajno veću efikasnost u pospešivanju zarastanja rana i niskim sporednim efektima u DFU pacijenata. Ova topikalna formulacija je na bazi kreme i sadrži najmanje oko 0,0001% do 0,5% (tež./tež.) salvigenina kao aktivnog sastojka. U nekim primera izvođenjama, topikalna formulacija može dalje da sadrži oko 0,05% do 5% (tež./tež.) azijatikozida kao dodatnog aktivnog sastojka. Topikalna formulacija dalje sadrži oko 1,0-10% (tež./tež.) agenasa(a) za povećanje viskoznosti, oko 5-30% (tež./tež.) baze(a) masti (npr. podloga za kremu), oko 0,005-0,2% ( tež./tež.) antimikrobni konzervans(i); i oko 0,5-10% (tež./tež.) emulgatora(a). Sve komponente mogu biti rastvorene u jednom ili više odgovarajućih rastvarača kao što su propilen glikol i voda.

[0031] Farmakokinetičke studije gore pomenute formulacije topikalne kreme pokazale su njenu bezbednost kod pacijenata sa DFU. Što je još važnije, lokalna primena formulacije kreme dovela je do veoma niske sistemske distribucije najmanje dva aktivna sastojka, salvigenina i azijatikozida, nakon topikalne primene na mesta rana kod pacijenata, i utvrđeno je da je bezbedno kod pacijenata koji su lečeni topikalnom formulacijom lokalno.

[0032] Dalje, sprovedeno je kliničko ispitivanje faze III da bi se procenila efikasnost topikalne formulacije na bazi kreme za lečenje hroničnog dijabetičkog čira na stopalu. Neočekivano, topikalna mast je pokazala značajno veću efikasnost u pospešivanju zatvaranja čira kod pacijenata sa dijabetesom, posebno kod onih koji imaju velike čireve ili plantarne čireve; u poređenju sa kontrolnim proizvodom, Aquacel<®>.

[0033] Shodno tome, ovde su obezbeđene topikalne formulacije koje sadrže jedan ili oba ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakt Centella asiatica, i metode za njihovo korišćenje za pospešivanje zarastanja rana kod subjekta kome je potreban tretman.

Topikalne formulacije

[0034] Ovo otkriće ovde daje topikalni formulaciju za pospešivanje zarastanja rana (npr., zarastanje rana za dijabetičare), koji sadrži aktivni agens, koji može biti ekstrakt Plectranthus amboinicus koji sadrži salvigenin, ekstrakt Centella asiatica koji sadrži azijatikozid , ili kombinacija ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica. Ovde opisana topikalna formulacijamože da sadrži salvigenin u količini koja se kreće od oko 0,0001% do oko 0,5% (tež./tež.), i opciono azijatikozid, koji može biti u količini u rasponu od oko 0.05% do oko 5% (tež./tež.) . U nekim primera izvođenjama, topikalna formulacija sadrži ekstrakt Plectranthus amboinicus, ekstrakt Centella asiatica, ili oba u količini od oko 0,1-30% (tež./tež.).

[0035] Topikalna formulacija dalje sadrži jedan ili više nosača ili ekscipijenasa, uključujući jedan ili više agenasa za povećanje viskoznosti (npr., oko 1,0-10%), jednu ili više podloga za mast (npr. jednu ili više podloga za kremu) koje mogu varirati od oko 5-30%, jedan ili više antimikrobnih konzervansa (npr., oko 0,005-0,2% po težini), jedan ili više emulgatora (oko 0,5-10% po težini) ili njihova kombinacija. Ove komponente se mogu rastvoriti ili rastvarati u odgovarajućem rastvaraču.

(i) Aktivni agensi

[0036] Aktivni agens u topikalnoj formulaciji koja je ovde opisana sadrži salvigenin i opciono azijatikozid. U nekim primera izvođenjama, aktivni agens može biti ili ekstrakt Plectranthus amboinicus koji sadrži salvigenin ili ekstrakt Centella asiatica koji sadrži sam azijatikozid ili njihovu kombinaciju. Koncentracija aktivnog agensa u topikalnoj formulaciji može da se kreće od oko 0,1-30% (tež./tež.). Na primer, aktivni agens može da sadrži oko 0,1-5%, 0,5-3%, 1-2%, 1-3%, 2-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15 -20%, 10-20%, 20-25%, 15-30%, 20-30%, 10-30% ili 25-30% (tež./tež.) topikalne formulacije. Koncentracija aktivnog sredstva u topikalnoj formulaciji koja je ovde opisana odnosi se na procenat ukupne težine aktivnog agensa u suvom obliku od ukupne težine topikalne formulacije kao celine.

[0037] Ovde opisana topikalna formulacija može da sadrži oko 0,0001% do 0,5% (tež./tež.) salvigenina, na primer, oko 0,001% do 0,5% (tež./tež.), oko 0,001% do 0,3% (tež./tež.), oko 0,001% do 0,2% (tež./tež.), oko 0.01% do 0.1% (tež./tež.), oko 0,002% do 0,5% (tež./tež.), oko 0,002% do 0,4% (tež./tež.), oko 0,002% do 0,3% (tež./tež.), oko 0,001% do 0,1% (tež./tež.), oko 0,005% do 0,01% (tež./tež.), oko 0,01% do 0,5% (tež./tež.), oko 0,02% do 0,5% (tež./tež.) i oko 0,1% do 0,5% (tež./tež.). Alternativno ili kao dodatak, ovde opisana topikalna formulacija može sadržati azijatikozid u količini koja se kreće od oko 0,05% do oko 5% (tež./tež.), npr. oko 0,1-2,5% (tež./tež.), oko 0,1-2% ( tež./tež.), oko 0,1 do 1% (tež./tež.), oko 0,25-2,5% (tež./tež.), oko 0,5-5% (tež./tež.), oko 0,5-2,5% (tež./tež.), ili oko 0,5-1% (tež./tež.).

[0038] Kako se ovde koristi, izraz "oko" ima za cilj strogu numeričku granicu specificiranih parametara (uključujući i gornju i donju granicu). Stručnjak u ovoj oblasti tehnike bi razumeo značenje reči "oko" u vezi sa specifičnim kontekstom. U nekim slučajevima, izraz „oko“ odnosi se na određenu vrednost /- 5% (npr. /- 3% ili /- 2%).

[0039] U jednom aspektu, aktivni agens u topikalnoj formulaciji je kombinacija ekstrakta Plectranthus amboinicus koji sadrži salvigenin i ekstrakta Centella asiatica koji sadrži azijatikozid. Odnos između ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica može biti oko 1:10 do 10:1. Na primer, odnos između ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica u topikalnoj formulaciji može biti oko 1:10 do 1:1, oko 1:1 do 10:1, oko 1:10 do 1:5, oko 1 :5 do 1:1, oko 10:1 do 5:1, oko 5:1 do 1:1, oko 1:10 do 1:4, oko 1:4 do 1:1, oko 10:1 do 4: 1, ili otprilike 4:1 do 1:1.

[0040] Ekstrakt Plectranthus amboinicus se odnosi na ekstrakt dobijen iz biljke Plectranthus amboinicus korišćenjem jednog ili više odgovarajućih rastvarača. U nekim slučajevima, najmanje jedan od rastvarača koji se koristi za pripremu ekstrakta ima indeks polarnosti manji od 7 (npr. manji od 5). Pogledati tabelu 1 u nastavku. Kako se ovde koristi, rastvarač se odnosi na supstancu ili smešu supstanci koja rastvara drugu da bi se formirao rastvor. Ekstrakt Plectranthus amboinicus kako je ovde opisan može se pripremiti korišćenjem jednog rastvarača. Rastvarač koji se koristi u svakom koraku ekstrakcije za pripremu ovde opisanih ekstrakata (uključujući ekstrakte Plectranthus amboinicus i Centella asiatica) može biti jedan rastvarač. Alternativno, to može biti mešavina dva ili više rastvarača.

[0041] Ekstrakt Plectranthus amboinicus opisan ovde može da sadrži terpenoide (npr. monoterpenoide, diterpenoide, triterpenoide i/ili seskviterpenoide), flavonoide, fenole, eterična ulja ili njihovu kombinaciju. Ekstrakt Plectranthus amboinicus može biti prisutan u topikalnoj formaciji u koncentraciji od oko 0,1-5% (tež./tež.). Na primer, topikalna formulacija može da sadrži oko 0,1-0,5%, 0,5-1%, 1-1,5%, 1,5-2%, 2-2,5%, 2,5-3%, 3-3,5%, 3,5-4%, 4 -4,5% ili 4,5-5% (tež./tež.) ekstrakta Plectranthus amboinicus. Alternativno, topikalna formulacija može da sadrži oko 0,1-1%, 0,1-2%, 0,1-3%, 0,1-4% ili 0,1-5% procenata (tež./tež.) ekstrakta Plectranthus amboinicus. U specifičnom izvođenju, topikalna formulacija sadrži oko 0,1-1% ili 0,1-0,5% ekstrakta Plectranthus amboinicus.

[0042] Ekstrakt Plectranthus amboinicus opisan ovde može biti pripremljen ekstrahovanjem cele biljke Plectranthus amboinicus ili njenog dela sa jednim ili više odgovarajućih rastvarača da bi se dobio rastvor i zatim sušenjem rastvora da bi se dobio ekstrakt Plectranthus amboinicus. Pošto ekstrakt Plectranthus amboinicus sadrži flavonoide, terpenoide (npr. monoterpenoide, diterpenoide, triterpenoide i/ili seskviterpenoide), fenole ili eterična ulja, koji su nepolarni molekuli, bar jedan od rastvarača za ekstrakciju može imati relativno nizak polaritet (npr. imaju indeks polarnosti manji od 7) da bi se olakšalo rastvaranje nepolarnih molekula. „Ekstrahovanje“ se može izvesti bilo direktnim kontaktom materijala Plectranthus amboinicus sa odgovarajućim rastvaračem ili eluiranjem aktivnih komponenti Plectranthus amboinicus iz smola na koje su aktivne komponente pričvršćene.

[0043] Tabela 1 ispod navodi najčešće korišćene rastvarače i njihov indeks polarnosti (Sniderov indeks polarnosti):

Tabela 1. Primeri rastvarača i njihov indeks polarnosti

[0044] U nekim primerima, rastvarač koji ima indeks polarnosti niži od 7 može se koristiti za ekstrakciju aktivnih komponenti iz Plectranthus amboinicus da bi se dobio ekstrakt Plectranthus amboinicus. Takav rastvarač može biti etil acetat, metil acetat, propanol, butanol ili hloroform. Alternativno, rastvarač može biti mešavina jednog ili više rastvarača koji imaju različit indeks polarnosti. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, mešavinu etanola i etil acetata, etil acetata i butanola, etanola i propanola, metil acetata i butanola.

[0045] U nekim primerima izvođenja, ekstrakt Plectranthus amboinicus može biti pripremljen postupkom koji uključuje upotrebu jednog rastvarača, kao što je rastvarač koji ima indeks polarnosti niži od 7 (npr. < oko 6,5, < oko 6,0; < oko 5,5, < oko 5,0, <4,9, <4,8, <4,7, <4,6 ili <4,5). Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, metanol, etanol, aceton, etil acetat, butanol, dihlorometan, ili njihovu kombinaciju.

[0046] Primer postupka za pripremu ekstrakta Plectranthus amboinicus je dat u nastavku. Takođe pogledati sliku 1.

[0047] Materijali Plectranthus amboinicus, koji mogu biti ceo Plectranthus amboinicus ili njegov deo (npr. listovi), mogu se pripremiti rutinskom metodologijom. Materijal Plectranthus amboinicus može biti sveža biljka ili njen deo. Alternativno, materijal Plectranthus amboinicus može biti u sušenom obliku. Plectranthus amboinicus se opciono može osušiti da bi se formirao prah, koji se može koristiti kao materijal Plectranthus amboinicus za pripremu ekstrakta Plectranthus amboinicus.

[0048] Bilo koji od materijala Plectranthus amboinicus kao što je ovde opisano može se ekstrahovati, jednom ili više puta, odgovarajućim rastvaračem da bi se dobio sirovi ekstrakt. Rastvarač za upotrebu u pripremi sirovog ekstrakta može biti rastvarač visokog polarnosti, na primer, koji ima indeks polarnosti iznad 5 i poželjno ispod 7 (npr. >5,2; >5,5, >5,8, >6 ili iznad i poželjno ispod 7). Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, etanol, aceton, metanol, vodu ili njihovu kombinaciju. Ako je potrebno, sirovi ekstrakt se može koncentrovati konvencionalnom metodom da bi se dobio koncentrovani sirovi ekstrakt.

[0049] Sirovi ekstrakt se zatim može dovesti u kontakt sa odgovarajućom smolom (npr., nejonskom apsorbujućom smolom) pod pogodnim uslovima koji omogućavaju vezivanje aktivnih komponenti u sirovom ekstraktu na smolu. Primeri smola za upotrebu u pripremi ekstrakta Plectranthus amboinicus uključuju, ali nisu ograničeni na, DIAION<®>HP20, DIAION<®>HP20SS, Sepabeads<®>SP207, Amberlite™ XAD-2 ili Amberlite™ XAD-4.

[0050] Nakon toga, smola se može isprati jednom ili više puta i eluirati sa odgovarajućim rastvaračem, na primer, rastvaračem koji ima indeks polarnosti nižim od 7, da bi se dobio ekstrakt Plectranthus amboinicus, koji se zatim može osušiti konvencionalnom metodom (npr. sušenje zamrzavanjem, sušenje raspršivanjem ili sušenje u koncentraciji, koje se može proizvesti sušenje u koncentraciji plemisolnicu). ili zalepite oblik.

[0051] U nekim primerima izvođenja, korak apsorpcije smole se može izvesti mešanjem sirovog ekstrakta sa smolom u kontejneru. U drugim primerima izvođenja, korak odvajanja smole može da se izvede podešavanjem hromatografske kolone.

[0052] Ekstrakt Centella asiatica, kako je ovde opisan, odnosi se na ekstrakt dobijen iz celih biljaka Centella asiatica ili njihovog dela. Ekstrakt Centella asiatica može da sadrži azijatikozid, madekasičnu kiselinu ili njihovu kombinaciju.

[0053] Ekstrakt Centella asiatica može biti prisutan u topikalnoj formaciji u koncentraciji od oko 0,1-20% (tež./tež.). Na primer, topikalna formulacija može sadržati oko 0,1-0,5%, 0,5-1%, 1-1,5%, 1,5-2%, 2-2,5%, 2,5-3%, 3-3,5%, 3,5-4%, 4-4,5%, 4,5-5%, 5-5,5%, 5,6-7%, 5,6-7%, 5,6-7,5%, .5-8%, 8-8.5%, 8.5-9%, 9-9.5%, 9.510%, 10-10.5%, 10.5-11%, 11-11.5%, 11.5-12%, 12-12.5%, 12.5-13%, 13-13.5%, 13-13.5%, 13-13.5,5%, 13-13.5%, %, 15-15,5%, 15,5-16%, 16-16,5%, 16,5-17%, 17-17,5%, 17,5-18%, 18-18,5%, 18,5-19%, 19-19,5%, ili 19,5-20% ekstrakta C/v. Alternativno, topikalna formulacija može da sadrži oko 0,1-5%, 0,1-10%, 0,1-15%, 0,1-20%, 0,5-5%, 0,5-10%, 0,5-15% ili 0,5-20% (tež./tež.) ekstrakta Centella asiatica. U specifičnim primerima, topikalna formulacija može sadržati oko 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 2 , 19 ili 20 procenata (tež./tež.) ekstrakta Centella asiatica.

[0054] Ekstrakt Centella asiatica može se pripremiti prema uobičajenom postupku, na primer, onima opisanim u patentu SAD. br. 5,834,437, 6,417,349, 6,475,536 i 6,267,996, CN 1313124, CN 1089497 i CN 1194154. Ispod je primer.

[0055] Materijali Centella asiatica mogu se pripremiti rutinskom praksom. Takvi materijali mogu biti sveža biljka Centella asiatica ili njen deo, ili sušena Centella asiatica. Materijali Centella asiatica mogu se ekstrahovati sa odgovarajućim rastvaračem kao što je voda, etanol ili njihova mešavina, da bi se dobio sirovi ekstrakt. Sirovi ekstrakt, koji se opciono može koncentrovati, može se ili pomešati sa odgovarajućom smolom ili staviti u kolonu napunjenu smolom. Nakon pranja jednom ili više puta, smola se može eluirati odgovarajućim rastvaračem. Dobijeni eluent se može koncentrovati da bi se formirala pasta, koja se može osušiti konvencionalnom metodom, na primer, sušenjem u vakuumu, da bi se dobili praškovi ekstrakta Centella asiatica. Kada je potrebno, prah Centella asiatica se može samleti kroz mrežicu (npr. br. 100 okca). Takođe pogledati sliku 2.

[0056] U jednom primeru, ekstrakt Plectranthus amboinicus se može pripremiti na sledeći način. Nadzemni deo Plectranthus amboinicus (oko 1,5 g), uključujući listove i/ili stabljike, može se sakupiti i ekstrahovati rastvaračem koji ima polaritet manji od 7 (npr. metanol, etanol, aceton, etil acetat, butanol, dihlorometan ili njihova kombinacija) na sobnoj temperaturi od min do 6 sati3. Alternativno, ovaj proces ekstrakcije može da se izvede na temperaturi od oko 50 do 80 °C. Dobijeni sirovi ekstrakt se može direktno uneti u kolonu nejonske adsorbentne smole i eluirati rastvaračem koji ima polaritet manji od 6 (npr. etanol, etilacetat, butanol, dihlorometan, heksan ili heksan). Eluirane komponente mogu da se sakupe i prečiste ekstrakcijom sa rastvaračem koji ima polaritet manji od 6 (npr. oni koji su ovde opisani). Dobijeni filtrat se može prikupiti da bi se dobio PA ekstrakt.

[0057] Ekstrakt Centella asiatica može se pripremiti istim ili sličnim postupkom kao što je gore opisano. Ekstrakt PA i/ili CA ekstrakt se može koncentrovati korišćenjem rotacionog isparivača koji smanjuje pritisak.

(ii) Nosači i ekscipijensi

[0058] Topikalna formulacija dalje sadrži jedan ili više nosača i ekscipijenata, uključujući agense za povećanje viskoznosti, podloge za masti (npr. podloge za kreme), antimikrobne konzervanse, emulgatore i/ili rastvarače.

[0059] "Sredstvo za povećanje viskoznosti" je agens koji se koristi za zgušnjavanje formulacije. Primeri agenasa za povećanje viskoznosti mogu uključivati, na primer, cetostearil alkohol, holesterol, stearil alkohol, hlorokrezol, beli vosak, stearinsku kiselinu, cetil alkohol ili njihovu kombinaciju. Sredstvo za povećanje viskoznosti može biti prisutno u topikalnoj formaciji u koncentraciji od oko 1,0-10% (tež./tež.). Na primer, topikalna formulacija može da sadrži oko 1-1,5%, 1,5-2%, 22,5%, 2,5-3%, 3-3,5%, 3,5-4%, 4-4,5%, 4,5-5%, 5-5,5%, 5,5-6%, 6-6,5%, 6,5-7,5%, 6,5-7,5%, 7,5-7,5%, -9%, 9-9,5% ili 9,5-10% (tež./tež.) agensa za povećanje viskoznosti. Alternativno, topikalna formulacija može da sadrži oko 1-5%, 2,5-7,5% ili 5-10% (tež./tež.) agensa za povećanje viskoznosti.

[0060] "Podloga za mast" može biti bilo koji polučvrsti preparat ili vehikulum u koji se može ugraditi aktivni agens. Primeri podloga za masti uključuju, ali nisu ograničeni na, uljne podloge za masti (npr. beli vazelin ili bela mast), podloge za apsorpcione masti (npr. hidrofilni vazelin, anhidrovani lanolin, Aquabase™, Aquaphor® i Polysorb<®>), podloge za emulziju voda/ulje, Hydrocream™, Eucerin<®>i Nivea®), podloge za emulziju ulje/voda (npr. hidrofilne masti, Dermabase™, Velvachol<®>i Unibase<®>) i podloge za masti koje se mešaju sa vodom (npr. polietilen glikol i Polybase™). Podloge za masti mogu biti farmakološki inertne, ali mogu da zarobe vodu da bi obezbedile zaštitni film za omekšavanje. U specifičnom izvođenju, podloga za mast može biti bilo koje jedinjenje vazelina (npr. vazelin, beli vazelin, beli meki parafin, tečni vazelin, tečni parafin). U sledećem specifičnom primeru izvođenja, podloga za mast je beli vazelin (CAS broj 8009-03-8). Podloga za mast može biti prisutna u topikalnoj formaciji u koncentraciji od oko 5-30% (tež./tež.), npr., 10-30% (tež./tež.). Na primer, topikalna formulacija može da sadrži oko 5-25%, 5-20%, 5-15%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 20-25% ili 25-30% (tež./tež.) baze masti. Konkretno, topikalna formulacija može sadržati oko 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 7, 2, 2, 2, 26 ili intment base.

[0061] U nekim primerima izvođenja, ovde opisana "podloga za mast" sadrži manje od 20% vode i isparljivih materija i više od 50% ugljovodonika, voskova ili poliola kao nosač.

[0062] U nekim primerima izvođenja, "podloga za mast" koja je ovde opisana je "podloga za kremu", koja sadrži više od 20% vode i isparljivih materija i/ili tipično sadrži manje od 50% ugljovodonika, voskova ili poliola kao nosača za lekovitu supstancu. Baza kreme može biti višefazni preparat koji sadrži lipofilnu fazu i vodenu fazu. U nekim slučajevima, podloga za kremu je lipofilna podloga za kremu, koja ima lipofilnu fazu kao kontinuiranu fazu. Takva baza kreme obično sadrži emulgatore vode u ulju kao što su vuneni alkoholi, estri sorbitana i monogliceridi. U drugim slučajevima, podloga za kremu je hidrofilna baza kreme, koja ima vodenu fazu kao kontinuiranu fazu. Takva baza kreme obično sadrži emulgatore ulje u vodi kao što su natrijum ili trolamin sapuni, sulfatni masni alkoholi, polisorbati i estri polioksil masnih kiselina i masnog alkohola, koji mogu biti u kombinaciji sa emulgatorima voda u ulju, ako je potrebno.

[0063] „Antimikrobni konzervans“ može biti bilo koje jedinjenje sposobno da uništi mikrobe, spreči razmnožavanje ili rast mikroba ili spreči patogeno delovanje mikroba. Primeri antimikrobnih konzervansa uključuju, ali nisu ograničeni na, jedinjenje parabena (estar parahidroksibenzoeve kiseline; npr. paraben, metilparaben, etilparaben, propilparaben, butilparaben, heptilparaben, benzilparaben, izobutilparaben, izopropilbenzalparaben, so benzil hlorid benzil, benzilparaben, tonijum hlorid, benzil alkohol, borna kiselina, bronopol, cetrimid, cetilpiridinijum hlorid, hlorheksidin, hlorobutanol, hlorokrezol, hloroksilenol, krezol, etil alkohol, glicerin, heksetidin, imidurea, fenol, fenoksietil gl. i timerosal. Antimikrobni konzervans može biti prisutan u topikalnoj formaciji u koncentraciji od oko 0,005-0,2%, na primer, oko 0,01-0,2% (tež./tež.). Na primer, topikalna formulacija može da sadrži oko 0,005-0,01%, 0,01-0,05%, 0,05-0,1%, 0,1-0,15% ili 0,15-0,2% (tež./tež.) antimikrobnog konzervansa. Konkretno, topikalna formulacija može sadržati oko 0,005, 0,006, 0,007, 0,008, 0,009, 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,01, 0,01, 0,08, 0,01, 0,08 .13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19 ili 0.2 procenta (tež./tež.) antimikrobnog konzervansa.

[0064] "Emulgator" je jedinjenje ili supstanca koja deluje kao stabilizator za smešu dve ili više tečnosti koje se normalno ne mešaju (ne mogu se mešati ili se ne mogu mešati). Primeri emulgatora mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, prirodne emulgatore (npr. bagrem, agar, alginsku kiselinu, natrijum alginat, tragakant, hondruks, holesterol, ksantan, pektin, želatin, žumance, mast, kazein, klalisva, kazein, vunu, vune) ., bentonit [aluminijum silikat] i Veegum [magnezijum aluminijum silikat]), derivati aminokiselina dugog lanca, alkoholi visoke molekulske težine (npr. stearil alkohol, cetil alkohol, oleil alkohol, triacetin monostearat, etilen glikol distearat, gliceril karabolom monostearat i gliceril-karbomomoster monostearat karboksi polimetilen, poliakrilna kiselina, polimer akrilne kiseline i karboksivinil polimer), karagenan, derivati celuloze (npr., natrijum karboksimetilceluloza, celuloza u prahu, hidroksimetil celuloza, hidroksipropil celuloza, hidroksipropilceluloza i metilceluloza hidroksipropilceluloze, hidroksipropilceluloza, metilceluloza (npr., polioksietilen sorbitan monolaurat [Tween<®>20], polioksietilen sorbitan [Tween<®>60], polioksietilen sorbitan monooleat [Tween<®>80], sorbitan monopalmitat [Span<®>40], sorbitan monostearat [Span<®>60], sorbitan tristearat [Span<®>65], glicerol monooleat i sorbitan monooleat [Span<®>80]), polioksietilen estri (npr., polioksietilen monostearat [Myrj<®>45], polioksietilen hidrogenizovano ricinusovo ulje, polietoksilovano ricinusovo ulje, polioksimetilen stearat, i solutol masnoće sukrosetilne kiseline), na primer, Cremophor<®>), polioksietilen etri (npr., polioksietilen lauril etar [Brij<®>30]), i poli(vinilpirolidon), dietilen glikol monolaurat, trietanolamin oleat, natrijum oleat, kalijum oleat, etil oleat, oleinska kiselina, etil laurat, natrijum lauril-sulfat, Pluronic F 68, Poloksamer 188, cetrimonijum bromid, cetilpiridinijum hlorid, benzalkonijum hlorid i dokusat natrijum, i/ili njihove kombinacije. Emulgator može biti prisutan u topikalnoj formulaciji u koncentraciji od oko 0,5-10% (tež./tež.), npr., 0,5-6% (tež./tež.). Na primer, topikalna formulacija može sadržati oko 0,5-1%, 1-1,5%, 1,5-2%, 2-2,5%, 2,5-3%, 3-3,5%, 3,5-4%, 4-4,5%, 4,5-5%, 5-5,5%, 5,5-6%, 5-10% tež. agent. Konkretno, topikalna formulacija može sadržati oko 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 5, 8, 9, 5, 8 ili 8 procenata. emulgator.

[0065] Topikalna formulacija prema pronalasku može dalje da sadrži jedan ili više rastvarača (npr. nevodeni rastvarači ili voda). Primeri rastvarača koji nisu vodeni mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, bilo koji poznati rastvarač uključujući propilen glikol, glikol i njihove smeše. Nevodeni rastvarač može biti prisutan u topikalnoj formaciji u koncentraciji od oko 2-65% (tež./tež.). Na primer, topikalna formulacija može da sadrži oko 2-15%, 15-30%, 30-45% ili 4565% (tež./tež.) rastvarača. U nekim primerima izvođenja, formulacija pronalaska može takođe da sadrži vodu.

[0066] U nekim primerima izvođenja, topikalna formulacijapronalaska može dalje da sadrži jedan ili više emolijensa, mirisa ili pigmenata. Topikalna formulacija se takođe može koristiti zajedno sa zavojem za ranu (npr. zavoj sa lepkom, gipsani flaster i slično). (npr. cikloheksan, nheksan, n-dekan, i-oktan, oktan, butil etar, ugljen-tetrahlorid, trietilamin, i-propil etar, toluen, pksilen, t-butil metil etar, benzen, dihlorometil etar, dihlorometil etar, dihlorometil etar, dihlorometil etar, dihlorometil etar e, etilen dihlorid, 1-butanol, i-butil alkohol, tetrahidrofuran, etil acetat, 1-propanol, 2-propanol, metil acetat, cikloheksanon, metil etil keton (MEK), nitrobenzen, benzonitril, 1,4-dioksan, ili p/dioksan)

Metode za pospešivanje zarastanja rana

[0067] Bilo koja od ovde opisanih topikalna formulacija može da se koristi za pospešivanje zarastanja rana kod subjekta kome je potreban tretman. Topikalna formulacijase može primeniti na mesto rane prema odgovarajućoj dozi i režimu lečenja. Doziranje i režim primene za opisani metod zavisiće od prirode i stanja rane koja se leči, starosti i stanja pacijenta, i bilo koje prethodne ili istovremene terapije. U nekim slučajevima, topikalna formulacija se može primeniti jednom nedeljno, jednom svakog drugog dana, jednom dnevno, dva puta dnevno, tri puta dnevno ili četiri puta dnevno tokom odgovarajućeg vremenskog perioda. Lečenje se može prekinuti kada se rana oporavi. Kada je potrebno, tretman se može nastaviti, na primer, ako se rana ponovi.

[0068] Izraz "rana" se odnosi na povredu živog tkiva izazvanu posekotinom, udarcem ili drugim udarom (npr. uzrokovanu medicinskim stanjem kao što je poremećaj kože), tipično pri čemu je koža posečena ili pukla. Rana može biti povezana sa zdravstvenim stanjem, na primer, poremećajem kože. Termin "zaceljivanje rana" označava dinamičan i složen proces zamene devitalizovanih ili nedostajućih ćelijskih struktura i/ili slojeva tkiva. Izraz "pospešivanje zarastanja rana" ili "pospešenje zarastanja rana" označava izazivanje povećanog nivoa ili stope zamene devitalizovanih ili nedostajućih ćelijskih struktura i/ili slojeva tkiva. Kao primer, unapređenje zarastanja rana može biti naznačeno delimičnim ili potpunim zatvaranjem čira ili povećanjem stope zarastanja čira (uključujući, ali ne ograničavajući se na brže promene u veličini, površini ili težini čira, brže zatvaranje čira i/ili povećanje procentualne promene u odnosu na početnu liniju ili kontrolno mesto ulkusa, u poređenju sa veličinom ulkusa, područjem lečenja).

[0069] Subjekt koji se leči topikalnom formulacijom može biti čovek ili sisar koji nije čovek. U nekim primerima izvođenja, subjekt je čovek koji ima otvorenu ranu, što se odnosi na povredu ili oštećenje živih tkiva (npr. kože) koje izazivaju poremećaj u normalnom kontinuitetu bioloških struktura. Otvorena rana može uključivati, ali nije ograničena na, abraziju, rez, razderotinu, punkciju, avulziju, posekotinu ili druge slične povrede.

[0070] U drugim primerima izvođenja, subjekt je ljudski pacijent koji ima hroničnu ranu, koja može biti povreda ili oštećenje živih tkiva (npr. kože) koje izazivaju poremećaj normalnog kontinuiteta bioloških struktura i ne zarastaju u pravilnom skupu faza i/ili u predvidljivom vremenskom periodu. Hronična rana može uključivati, ali nije ograničena na: hiruršku ranu, traumatsku ranu, dekubitus, venski čir ili dijabetesni čir. U drugim primerima, hronična rana može biti povezana sa bolešću ili poremećajem, na primer, karcinomom, opekotinom, ranom od kreveta, kožnim poremećajem kao što je atopijski dermatitis.

[0071] U jednom primeru, subjekt je ljudski pacijent koji ima čir na stopalu povezan sa dijabetesom (npr. tip I ili tip II). Dijabetes melitus (takođe poznat kao dijabetes) je grupa metaboličkih bolesti koje dovode do visokog nivoa šećera u krvi tokom dužeg perioda. Dijabetes može biti rezultat toga što pankreas ne proizvodi dovoljno insulina ili ćelije tela ne reaguju pravilno na proizvedeni insulin. Tri glavna tipa dijabetes melitusa su tip I (takođe poznat kao „insulin-zavisni dijabetes melitus” (IDDM) ili „juvenilni dijabetes”; nastaje usled neuspeha pankreasa da proizvodi dovoljno insulina), tip 2 (takođe poznat kao „neinsulinsko-zavisni dijabetes melitus” (NIDDM)), ili „dijabetes koji se javlja kod odraslih tokom dijabetesa kod odraslih (dijabetes dijabetesa kod odraslih) kada pravilno reaguje na neuspeh dijabetesa u krvi na nivo dijabetesa u krvi”; nivoi se primećuju u odsustvu prethodne istorije dijabetesa). Mnoge ozbiljne komplikacije se primećuju kod pacijenata sa dijabetesom, uključujući, ali ne ograničavajući se na, hronične rane kao što su dijabetesni čir na stopalu (takođe poznat kao dijabetesni čir).

[0072] U nekim primerima izvođenja, subjekt koji se leči ovde opisanim metodama pati od teške rane, na primer, ima čir sa površinom većom od 2 cm2 (npr. 3 cm2, 4 cm2 ili 5 cm2). U nekim primerima, subjekt pati od jednog ili više plantarnih ulkusa

Kompleti za uporebu u pospešivanju zarastanja rana

[0073] Ovo otkriće takođe obezbeđuje komplete za upotrebu u pospešivanju zarastanja rana. Takvi kompleti mogu uključivati jedan ili više kontejnera koji sadrže topikalnu formulaciju kao što je ovde opisano, koja sadrži ekstrakt Plectranthus amboinicus, ekstrakt Centella asiatica, ili kombinaciju ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica.

[0074] U nekim primerima izvođenja, komplet može da sadrži uputstva za upotrebu u skladu sa bilo kojim od ovde opisanih metoda. Uključena uputstva mogu da sadrže opis primene topikalne formulacije za unapređenje zarastanja rana u skladu sa bilo kojim od ovde opisanih metoda. Komplet može dalje da sadrži opis odabira pojedinca pogodnog za lečenje na osnovu identifikacije da li ta osoba ima rane kojima je potreban tretman.

[0075] Uputstva koja se odnose na upotrebu topikalne formulacije generalno uključuju informacije o doziranju, rasporedu doziranja i načinu primene za nameravani tretman. Kontejneri mogu biti jedinične doze, rasuti paketi (npr. paketi sa više doza) ili podjedinične doze. Instrukcije koje se nalaze u kompletima prema pronalasku su obično napisana uputstva na etiketi ili umetku pakovanja (npr., list papira koji je uključen u komplet), ali su i mašinski čitljiva uputstva (npr. uputstva koja se nalaze na magnetnom ili optičkom disku za skladištenje) takođe prihvatljiva.

[0076] Etiketa ili umetak pakovanja ukazuje da se kompozicija koristi za pospešivanje zarastanja rana. Uputstva se mogu dati za praktikovanje bilo koje metode opisane ovde.

[0077] Kompleti ovog pronalaska su u pogodnom pakovanju. Odgovarajuća ambalaža uključuje, ali nije ograničena na, bočice, boce, tegle, fleksibilnu ambalažu (npr. zapečaćene milar ili plastične kese) i slično. Najmanje jedan aktivni agens u kompoziciji je aktivni agens izabran iz grupe koju čine ekstrakt Plectranthus amboinicus, ekstrakt Centella asiatica i kombinacija ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica.

[0078] Kompleti mogu opciono da obezbede dodatne komponente kao što su informacije za tumačenje. Normalno, komplet se sastoji od kontejnera i etikete ili uloška(a) na pakovanju ili u vezi sa kontejnerom. U nekim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje proizvode koji sadrže sadržaj gore opisanih kompleta.

[0079] Bez daljeg elaboriranja, veruje se da stručnjak u ovoj oblasti može, na osnovu gornjeg opisa, da iskoristi ovaj pronalazak u njegovoj najvećoj meri.

PRIMER 1: Efekti ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica na proliferaciju i migraciju endotelnih ćelija

(i) MTT test - Proliferacija

[0080] Ekstrakt Plectranthus amboinicus (PA) i ekstrakt Centella asiatica (CA) su pripremljeni prema ovde datim opisima. Za ovu studiju je korišćena linija endotelnih ćelija EA.hy926. Ćelije su postavljene u gustinu od 4 × 10<4>ćelije/bunariću u ploču sa 96 bunarčića jedan dan i zatim tretirane PA ili CA ekstraktom u medijumu bez seruma tokom 70 sati. Posle tretmana, ćelije su obojene MTT bojom 2 sata.

[0081] Kao što je prikazano na slici 3A, ekstrakt PA je pojačao proliferaciju ćelija, dok efekat CA na proliferaciju ćelija nije bio tako dobar kao ekstrakt PA.

(ii) Analiza ogrebotina – migracija

[0082] EA.hy926 endotelne ćelije su postavljene na ploču sa gustinom od 8 × 10<4>ćelije/bunariću u ploču sa 48 bunarčića tokom 24 sata. Tako formiran konfluentni ćelijski monosloj je izgreban i tretiran PA ili CA ekstraktom u medijumu bez seruma tokom 72 sata.

[0083] Rezultati dobijeni iz ove studije pokazuju da ekstrakt PA značajno poboljšava migraciju endotelnih ćelija, što je od suštinskog značaja za zarastanje rana. Ćelije tretirane ekstraktom CA takođe su pokazale znake migracije, ali rezultat nije toliko značajan kao kod ekstrakta PA. Slika 3B.

PRIMER 2: Efekti ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica na proliferaciju i migraciju keratinocita

(i) SRB test-proliferacija

[0084] Ćelijska linija keratinocita, HaCaT ćelije, korišćena je u ovoj studiji. Ćelije su postavljene na gustinu od 4 × 10<4>ćelije/mL u ploči sa 96 bunarčića jedan dan, a zatim su tretirani PA ili CA ekstraktom opisanim u Primeru 1 iznad tokom 24 sata. Nakon tretmana, ćelije su fiksirane i obojene SRB bojom.

[0085] Kao što je prikazano na slici 4A, i PA i CA povećavaju ćelijsku proliferaciju ćelija keratinocita.

(ii) Analiza ogrebotina – migracija

[0086] HaCaT keratinocitne ćelije su postavljene u gustinu od 8 × 10<4>ćelije/bunariću u ploču sa 48 bunarčića tokom jednog dana. Tako formiran konfluentni ćelijski monosloj je izgreban i tretiran ekstraktom PA ili CA tokom 24 sata. Kvantifikovana je oblast zarastanja rana.

[0087] Rezultati dobijeni iz ove studije pokazali su da ekstrakt PA izaziva migraciju ćelija (efekat zarastanja rana) u keratinocitima na način koji zavisi od doze. Ekstrakt CA takođe je poboljšao migraciju ćelija keratinocita u relativno visokoj koncentraciji (npr.30 mg/mL).

PRIMER 3: Efekat salvigenina i azijatikozida na zarastanje rana

[0088] In vitro test formiranja kapilarne cevi korišćenjem ćelija humanih umbilikalnih vena (HUVEC) je izveden da bi se ispitao efekat zarastanja rana salvigenina, aktivnog agensa ekstrakta PA koji je ovde otkriven.

[0089] Ukratko, Nunclon ploče sa devedeset i šest bunarčića su obložene Matrigelom (50 µL/bunariću) i inkubirane na 37°C tokom 30 minuta da bi se promovisalo geliranje. HUVEC su kultivisane u medijumu M200 i ćelije između pasaža 2 i 4 su zasejane (na 3 × 10<5>ćelija u 100 µL medijuma) u svaki od bunarčića obloženih Matrigelom. Serija razblaženja jedinjenja za testiranje, kao što je prikazano na slici 5A (uključujući osnovni faktor rasta fibroblasta (bFGF) kao pozitivnu kontrolu, i salvigenin), dodato je u medijum za kulturu da se ispita njihov biološki efekat na formiranje epruvete. Posle 6 h inkubacije na 37°C u atmosferi vlažnoj sa 5% CO2, HUVEC ćelije su aspirirani iz medija, fiksne i kompletne mreže kapilarnih cevi unutar određenog područja polja sa malim uvećanjem (x10) su fotografisane i prebrojane uz pomoć softvera za kompjutersku sliku, ImagePro Plus V.4.5. Podaci testa su izraženi kao procenat kompletnog formiranja kapilarne cevi u odnosu na neobrađene HUVEC kontrolne kulture inkubirane pod istim uslovima.

[0090] Kao što je prikazano na slici 5A, salvigenin značajno povećava formiranje cevi od strane HUVEC ćelija.

[0091] Da bi se istražio efekat zarastanja rana azijatikozida, izveden je test migracije ogrebotina na sledeći način. HaCaT keratinocitne ćelije su postavljene u gustinu od 8 × 10<4>ćelije/bunariću u ploču sa 48 bunarčića tokom jednog dana. Tako formiran konfluentni ćelijski monosloj je izgreban i tretiran azijatikozidom tokom 24 sata. Kvantifikovana je oblast zarastanja rana. Rezultati dobijeni iz ove studije pokazali su da azijatikozid izaziva migraciju ćelija (efekat zarastanja rana) u keratinocitima.

[0092] Kao što je prikazano na slici 5B, azijatikozid je značajno promovisao migraciju HaCaT ćelija, što bi doprinelo zarastanju rana.

PRIMER 4: Ekstrakti Plectranthus amboinicus pospešili su normalno zarastanje rana

[0093] Ova studija je sprovedena da bi se istražio efekat različitih topikalnih formulacija na bazi kreme uključujući PA ekstrakt na normalno zatvaranje rane na životinjskom modelu. Sprague-Davlei pacovi su nasumično raspoređeni u 4 grupe. Pacovi su zatim anestezirani pentobarbitalom i dlake na hirurškom području su uklonjene. Koža na dorzalnom medijumu kod svakog pacova je izrezana (puna debljina) hirurškim nožem (2 cm × 2 cm).

[0094] Pacovi iz četiri grupe su tretirani sledećim formulacijama kreme, koje su pripremljene prema metodama opisanim ovde:

- G1: krema kao blank kontrola,

- G2: Vinsolve-b mast (od Yungshin Pharma, Co. LTD, Tajvan) kao referentna kontrola, - G3: Formulacija I (1,25% ekstrakt PA), i

- G4: Formulacija II (0,25% ekstrakt PA).

[0095] Formulacije su primenjivane na svako mesto rane dva puta dnevno i rane su prekrivene gazom. Kapuljače su se nosile na vratovima pacova Sprague-Dawley (n = 6; starost 12 nedelja) da bi se sprečilo da životinje ogrebu rane. Za merenje zatvaranja rane, slike rane su napravljene 4., 6., 8., 10., 12., 14. i 16. dana. Prilikom snimanja, pored rana je postavljen standardni lenjir. Pre analize rana pomoću Image pro (Media cybernetics), dužina je standardizovana standardnim lenjirom na slici kako bi se izbegle greške uzrokovane različitim razdaljinama slikanja.

[0096] Rezultati dobijeni iz ove studije su pokazali da su sve formulacije I i II pokazale obećavajuće efekte u pospešivanju zatvaranja rana kod pacova. Tabela 2 i slika 6.

Tabela 2. Efekti na zatvaranje rana

PRIMER 5: Farmakokinetička studija in vivo na topikalnoj kremi koja se sastoji od ekstrakta Plectranthus amboinicus i ekstrakta Centella asiatica

[0097] Farmakokinetička svojstva topikalne formulacije koja sadrži ekstrakte Plectranthus amboinicus i Centella asiatica (ukupno 1,25%, koja sadrži 0,0001% do 0,1% salvigenina po težini i 0,05% do 1% azijatikozida po težini) su procenjena kod pacijenata sa hroničnim dijabetesom kod ljudi (DF). Ekstrakti PA i CA u topikalnoj formulaciji su pripremljeni prema metodama opisanim ovde. topikalna formulacija je na bazi kreme i dalje sadrži cetostearil alkohol (oko 1,0-10% po težini, na primer, oko 3,5-6,5% po težini), beli vazelin i tečni vazelin 350 cps (oko 5%-30% po težini ukupno), na primer, oko 5-15% po težini, na primer, oko 5-15% po težini i propil parabenol0 do ukupno 5-15% po težini (propil parabenol0% po težini).0,2% po težini ukupno, na primer, 0,005-0,2% po težini ukupno), emulgatori kao što su Span<®>60 i Tween<®>60 (oko 0,5-10% po težini ukupno, na primer, oko 0,5-5% po težini ukupno), i jedan ili više rastvarača kao što je 4-2% po težini (npr. po težini). Ekstrakti su formulisani u topikalnoj formulaciji na bazi kreme koja dodatno sadrži tečni petrolatum, propilen glikol, cetil stearil alkohol, beli vazelin, Span<®>60, Tween<®>60, propil paraben, metil paraben i vodu.

[0098] Ukupno 12 pacijenata je završilo studiju. Svaki subjekt je primio jednu dozu formulacije kreme 1. dana, nakon čega je usledilo uzimanje uzoraka krvi, zatim dva puta dnevno od 2. do 13. dana, a dalje uzimanje uzoraka krvi je zakazano za 14. dan nakon konačne doze. Uzorci krvi su analizirani za merenje koncentracije salvigenina i azijatikozida u plazmi, dva aktivna sastojka kreme, validiranom LC/MS/MS metodologijom. Rezultati dobijeni od 1. dana pokazali su da su kod 12 pacijenata, 2 pacijenta imala detektabilne koncentracije salvigenina u plazmi ≤12,403 pg/mL; a 5 pacijenata je imalo detektabilne koncentracije azijatikozida ≤ 9,276 ng/mL.

[0099] Rezultati dobijeni od 14. dana su pokazali da je 4 od 12 pacijenata imalo detektabilne koncentracije salvigenina u plazmi ≤ 16,972 pg/mL; a 5 od 12 pacijenata je imalo detektabilne koncentracije azijatkozida ≤ 6,154 ng/mL.

[0100] Sveukupno, rezultati dobijeni iz ove studije pokazali su da je lokalna primena topikalne formulacije korišćene u ovoj kliničkoj studiji rezultirala ograničenom sistemskom distribucijom i salvigenina i azijatkozida.

[0101] Ukupno 6 neželjenih događaja (AE) su prijavila 3 pacijenta. Svi neželjeni efekti su smatrani blagim intenzitetom, a te neželjene reakcije su smatrane "nepovezanim" ili "malo verovatno povezanim" sa studijskim tretmanom od strane istraživača. Po završetku, 4 AE su poboljšana, a 2 AE su ostala nepromenjena. Nije bilo izveštaja o značajnim neželjenim reakcijama, smrti ili ozbiljnim neželjenim reakcijama.

[0102] Zaključak: Ova 14-dnevna studija je otkrila da je lokalna primena topikalne formulacije korišćene u ovoj studiji rezultirala ograničenom sistemskom distribucijom najmanje aktivnih sastojaka salvigenina i azijatikozida i bezbedna je kod pacijenata sa DFU.

PRIMER 6: Kliničko ispitivanje faze III korišćenjem topikalne kreme koja sadrži ekstrakt Plectranthus amboinicus i ekstrakt Centella asiatica

[0103] U prelaznoj analizi, ukupno 124 pacijenta sa DFU su randomizovana u multicentričnom ispitivanju za procenu efekta zarastanja rana formulacije topikalne kreme opisanu u Primeru 5 iznad. Kriterijumi za uključivanje i isključenje za učešće u ispitivanju su navedeni u nastavku. Aquacel<®>Hydrofiber® oblog (ConvaTec, Princeton, NJ, SAD) je korišćen kao kontrolni tretman.

Kriterijumi za izbor

Kriterijumi za uključivanje pacijenata

[0104] Pacijenti su bili kvalifikovani za učešće ako su ispunjeni svi sledeći kriterijumi:

1. potpisao pismeni informisani pristanak pre prve evaluacije studije;

2. najmanje 20, a manje od 80 godina života;

3. dijabetes melitus (tip 1 ili 2) sa HbA1c < 12,0% izmerenim tokom skrininga ili u roku od tri meseca pre randomizacije;

4. skočni brahijalni indeks na ciljnom ekstremitetu najmanje 0,8 meren tokom skrininga ili u roku od tri meseca pre randomizacije;

5. ciljni čir sa sledećim karakteristikama:

a. stepen 1 ili 2 po Vagnerovom sistemu klasifikacije ulkusa;

b. ne više od skočnog zgloba;

c. nema aktivne infekcije;

d. površina poprečnog preseka između 1 i 25 cm<2>nakon debridmana; i

e. prisutan najmanje 4 nedelje pre randomizacije;

6. osobe u reproduktivnoj dobi su imale negativan test na trudnoću i nisu dojile na pregledu; i 7. sposoban i voljan da prisustvuje zakazanim posetama i da se pridržava procedura studiranja.

Kriterijumi za isključenje

[0105] Pacijenti su bili isključeni iz učešća ako je bilo šta od sledećeg bilo primenljivo:

1. prisustvo nekroze, gnoja ili sinusnih puteva koji se ne mogu ukloniti debridacijom;

2. akutna Charcotova neuroartropatija utvrđena kliničkim i/ili radiografskim pregledom;

3. podvrgnuti proceduri revaskularizacije u cilju povećanja protoka krvi u ciljnom ekstremitetu lečenja < 4 nedelje

pre randomizacije;

4. loš nutritivni status definisan kao albumin < 2,5 g/dL;

5. AST i/ili ALT >3 puta iznad gornje granice normale;

6. kreatinin u serumu >2 puta veći od gornje granice normale;

7. tretman imunosupresivima ili hemoterapeutskim agensima, radioterapijom ili sistemskim kortikosteroidima u roku od 4 nedelje pre randomizacije;

8. upotreba bilo kog ispitivanog leka ili terapije u roku od 4 nedelje pre randomizacije;

9. psihijatrijsko stanje (npr. samoubilačke ideje), trenutni ili hronični problem zloupotrebe alkohola ili droga za koji se smatra da predstavlja pretnju za poštovanje propisa; ili

10. za koje je istraživač ocenio da nisu pogodni za studiju iz bilo kog drugog razloga.

Kriterijumi za prekid terapije za pojedinačne pacijente

[0106] Pacijenti su bili slobodni da se povuku iz studije iz bilo kog razloga i u bilo koje vreme bez navođenja razloga za to i bez kazne ili predrasuda.

[0107] Pored toga, pacijenti su isključeni iz studije ako je bilo šta od sledećeg primenjivo:

1. kršenje i/ili značajno odstupanje od protokola studije;

2. nedostatak zadovoljavajuće efikasnosti (definisano kao pogoršanje Vagnerove ocene do nivoa 3);

3. zabrinutost za bezbednost;

4. izgubljeno zbog praćenja;

5. povukao saglasnost;

6. ako se smatralo da je to u najboljem interesu pacijenta; ili

7. prekid studija od strane sponzora.

Ciljevi i ishodi studija

[0108] Primarni cilj ove studije je bio da se proceni upotreba topikalne formulacije na bazi kreme za zarastanje rana kod pacijenata koji pate od DFU.

[0109] Primarna varijabla je broj ciljnih čireva koji su izlečeni u svakoj grupi u roku od 16 nedelja. Primarni ishod efikasnosti bio je poređenje incidence potpunog zarastanja ciljnog ulkusa između dve grupe tretmana na kraju lečenja.

[0110] Za potrebe ove studije, potpuno zarastanje je definisano kao potpuna epitelizacija koja je održavana bez drenaže najmanje 2 nedelje i potvrđena od strane slepog procenjivača.

[0111] Sekundarni ishodi efikasnosti su bili: vreme do potpunog zarastanja čira (vreme prvobitnog zarastanja je uzeto kao vreme do zarastanja); procentualna promena površine ulkusa u odnosu na početnu liniju; procenat ispitanika sa 50% smanjenjem površine ulkusa; i incidenca infekcije ciljnog ulkusa.

[0112] Bezbednosni ishodi su uključivali procenu incidencije neželjenih događaja izazvanih lečenjem, kliničke laboratorijske vrednosti i vitalne znakove.

[0113] Eksploratorna krajnja tačka je bila recidiv ciljnog ulkusa u periodu praćenja procenjenog kod onih subjekata koji su pokazali potpuno zarastanje rana na kraju perioda poređenja.

Rezultati

[0114] Efikasnost zarastanja rana kod pacijenata sa dijabetesom lečenih formulacijom topikalne kreme opisanom u Primeru 5 ili Aquacel<®>, analizirana je u kompletnom setu za analizu (FAS) i populaciji modifikovane namere za lečenje (mITT). U ukupnoj populaciji FAS i mITT, rezultati prikazani u tabeli 3 pokazuju da je veći procenat pacijenata lečenih topikalnim formulacijama postigao potpuno zarastanje čira u poređenju sa pacijentima lečenim sa Aquacel<®>. Ovaj rezultat je pokazao da je topikalna formulacija korišćena u ovoj studiji bila bolja od Aquacel<®>, postojećeg proizvoda za lečenje zarastanja rana, u najmanje potpunom zarastanju čira, što je primarna krajnja tačka studije.

[0115] Dalje, urađena je analiza podgrupa u populaciji pacijenata sa početnim površinama ulkusa > 5 cm2 i plantarnim ulkusima. Ovaj tip čira je poznat u tehnici kao teško oporavljiv. Rezultati u tabeli 3 pokazuju da je stopa potpunog izlečenja pacijenata lečenih topikalnom formulacijom bila veća od stope potpunog izlečenja pacijenata lečenih sa Aquacel<®>.

Tabela 3 Primarna krajnja tačka: stope potpunog isceljenja

[0116] Prema tome, privremeni rezultati ovog kliničkog ispitivanja faze III ukazuju da je formulacija topikalne kreme testirana u njoj, koja sadrži i PA i CA ekstrakte, pokazala superiorne terapeutske efekte u pospešivanju zarastanja rana kod pacijenata sa DFU u odnosu na Aquacel<®>Hydrofiber<®>kontrolu.

DRUGI PRIMERI IZVOĐENJA

[0117] Sve karakteristike otkrivene u ovoj specifikaciji mogu se kombinovati zajedno na bilo koji način. Svaka karakteristika otkrivena u ovoj specifikaciji može biti zamenjena alternativnom karakteristikom koja služi istoj, ekvivalentnoj ili sličnoj svrsi. Stoga, osim ako nije izričito drugačije navedeno, svaka otkrivena karakteristika je samo primer generičke serije ekvivalentnih ili sličnih karakteristika.

[0118] Iz gornjeg opisa, stručnjak u ovoj oblasti može lako da utvrdi suštinske karakteristike predmetnog pronalaska, i bez odstupanja od njegovog duha i obima, može napraviti različite izmene i modifikacije pronalaska kako bi ga prilagodio različitim upotrebama i uslovima. Dakle, druge primere izvođenja su takođe unutar patentnih zahteva.

EKVIVALENTI I OBIM ZAŠTITE

[0119] U patentnim zahtevima, oblici jednine mogu značiti jedan ili više od jednog osim ako nije naznačeno suprotno ili na drugi način očigledno iz konteksta. Tvrdnje ili opisi koji uključuju „ili“ između jednog ili više članova grupe smatraju se ispunjenim ako je jedan, više od jednog ili svi članovi grupe prisutni u, upotrebljeni, ili na drugi način relevantni za dati proizvod ili postupak, osim ako nije naznačeno suprotno ili na drugi način očigledno iz konteksta. Pronalazak uključuje primere izvođenja u kojima je tačno jedan član grupe prisutan, upotrebljen u, ili na drugi način relevantan za dati proizvod ili proces. Pronalazak uključuje primere izvođenja u kojima je više od jednog, ili svi članovi grupe prisutni u, upotrebljeni u, ili na drugi način relevantni za dati proizvod ili postupak.

[0120] Dalje, pronalazak obuhvata sve varijacije, kombinacije i permutacije u kojima je jedno ili više ograničenja, elemenata, klauzula i opisnih termina iz jednog ili više navedenih zahteva uvedeno u drugi zahtev. Na primer, bilo koji zahtev koji zavisi od drugog zahteva može se modifikovati tako da uključuje jedno ili više ograničenja koja se nalaze u bilo kom drugom zahtevu koji zavisi od istog osnovnog zahteva. Tamo gde su elementi predstavljeni kao liste, na primer, u formatu Markuš grupe, svaka podgrupa elemenata je takođe otkrivena, a bilo koji element(i) se može ukloniti iz grupe. Trebalo bi da se razume da se, uopšteno govoreći, gde se pronalazak ili aspekti pronalaska pominju kao da sadrže određene elemente i/ili karakteristike, određene primere izvođenja pronalaska ili aspekata pronalaska se sastoje, ili se u suštini sastoje od takvih elemenata i/ili karakteristika. Radi jednostavnosti, ove primere izvođenja nisu posebno izložene u haec verba ovde. Takođe je primećeno da su termini „sadrži“ i „koji sadrži“ namenjeni da budu otvoreni i da dozvoljavaju uključivanje dodatnih elemenata ili koraka. Tamo gde su dati opsezi, uključene su i krajnje tačke. Štaviše, osim ako nije drugačije naznačeno ili na drugi način očigledno iz konteksta i razumevanja stručnjaka u ovoj oblasti, vrednosti koje su izražene kao opsezi mogu uzeti bilo koju specifičnu vrednost ili podopseg unutar navedenih opsega u različitim primerima izvođenja pronalaska, do desetine jedinice donje granice opsega, osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije.

Claims (15)

Patentni zahtevi

1. Topikalna formulacija koja sadrži:

(i) aktivni agens koji sadrži salvigenin u količini od oko 0,0001% do 0.5% (tež./tež.) i azijatikozid u količini od oko 0,05% do 5% (tež./tež.);

(ii) sredstvo koje povećava viskoznost u količini od oko 1.0-10% (tež./tež.);

(iii) podlogu za mast u količini od oko 5-30% (tež./tež.);

(iv) antimikrobijalni konzervans u količini od oko 0,005-0.2% (tež./tež.); i

(v) emulgator u količini od oko 0.5-10% (tež./tež.).

2. Topikalna formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što je aktivni agens ekstrakt biljke Plectranthus amboinicus, ekstrakt biljke Centella asiatica, ili njihova kombinacija, i pri čemu ekstrakt biljke Plectranthus amboinicus i/ili ekstrakt biljke Centella asiatica sadrži salvigenin i/ili azijatikozid.

3. Topikalna formulacija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačena time što je aktivni agens u topikalnoj formulaciji u količini od oko 0,1-30% (tež./tež.).

4. Topikalna formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačena time što topikalna formulacija sadrži salvigenin u opsegu od 0,0001% do 0,1% (tež./tež.), i/ili pri čemu topikalna formulacija sadrži azijatikozid u opsegu od 0,05% do 1% (tež./tež.).

5. Topikalna formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, naznačena time što aktivni agens dalje sadrži cirsimaritin, madekasozid, ili njihovu kombinaciju.

6. Topikalna formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, naznačena time što je u topikalnoj formulaciji podloga za mast u količini od oko 10-30% (tež./tež.), antimikrobijalni konzervans je oko 0,01-0,2% (tež./tež.) i emulgator je oko 0,5-6% (tež./tež.).

7. Topikalna formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, naznačena time što se Plectranthus amboinicus ekstrakt priprema dovođenjem cele biljke Plectranthus amboinicus ili njenog dela, u kontakt sa rastvaračem koji ima indeks polarnosti niži od 7, kako bi se proizveo rastvor, i sušenjem rastvora kako bi se proizveo Plectranthus amboinicus ekstrakt.

8. Topikalna formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, naznačena time što topikalna formulacija sadrži i ekstrakt biljke Plectranthus amboinicus i ekstrakt biljke Centella u težinskom odnosu od oko 1:10 do 10:1, poželjno oko 1:5 do 5:1.

9. Topikalna formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8, naznačena time što što je sredstvo za povećanje viskoznosti cetostearil alkohol, holesterol, stearil alkohol, hlorokrezol, beli vosak, stearinska kiselinia, cetil alkohol ili njihova kombinacija, podloga za mast sadrži jedno ili više jedinjenja vazelina, i/ili antimikrobijalni konzervans sadrži jedno ili više jedinjenja parabena.

10. Topikalna formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9, naznačena time što podloga za mast predstavlja podlogu za kremu; poželjno pri čemu formulacija dalje sadrži jedan ili više rastvarača; gde poželjno jedan ili više rastvarača sadrži propilen glikol.

11. Topikalna formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što topikalna formulacija sadrži kombinaciju Plectranthus amboinicus ekstrakta i Centella asiatica ekstrakta u količini od oko 0,1-30% (tež./tež.), cetostearil alkohol u količini od oko 1,0-10% (tež./tež.), kombinaciju belog vazelina i tečnog vazelina u ukupnoj količini od oko 5-30% (tež./tež.), kombinaciju metil parabena i propil parabena u ukupnoj količini od oko 0,005-0,2% (tež./tež.) i kombinaciju sorbitan monostearata i polisorbata 60 u ukupnoj količini od oko 0,5-10% (tež./tež.);

koja poželjno dalje sadrži propilen glikol u količini od oko 2-20% (tež./tež.).

12. Topikalna formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11, za uporebu u pospešivanju zarastanja rana kod subjekta.

13. Topikalna formulacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 12,

naznačena time što je formulacija za topikalnu primenu najmanje jednom na dan, poželjno dvaput dnevno;

ili/poželjno, gde je subjekt čovek, pacijent sa dijabetesom, koji pati od čira na dijabetesnom stopalu.

14. Topikalna formulacija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 12-13, naznačena time što je subjekt čovek, pacijent koji ima otvorenu ranu, koja je opciono abrazija, incizija, laceracija, punkcija ili avulzija.

15. Topikalna formulacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 14,

naznačena time što je subjekt čovek, pacijent koji ima hroničnu ranu, koja je opciono hirurška rana, traumatska rana, dekubitusni čir, venski čir, dijabetesni čir ili rana uzrokovana karcinomom, opekotinom, dekubitusom ili atopijskim dermatitisom; ili

gde je subjekt čovek, pacijent koji ima akne.