RS64480B1

RS64480B1 - Postupak pripreme novih blokatora povećane vaskularne permeabilnosti u visokom prinosu

Info

Publication number: RS64480B1
Application number: RS20230583A
Authority: RS
Inventors: Koo Hyeon Ahn; Myung-Hwa Kim; Jung-In Pyo; Chuk Su Baek; Sung Hwan Kim
Original assignee: Curacle Co Ltd
Priority date: 2019-12-13
Filing date: 2020-07-28
Publication date: 2023-09-29
Also published as: ES2954771T3; JP7116384B2; US11453698B2; WO2021118003A1; EP3854800A4; EP3854800C0; CN113286802A; HUE062421T2; CN113286802B; JP2022503397A; US20210395297A1; HRP20230806T1; PL3854800T3; KR102124470B1; EP3854800A1; EP3854800B1

Description

Opis

OSNOVA PRONALASKA

UNAKRSNE REFERENCE NA POVEZANE PRIJAVE

[0001] Ova patentna prijava je nacionalna faza Međunarodne prijave br.

PCT/KR2020/009908 podnete 28. jula 2020. godine, koja ima prioritet u odnosu na Korejsku prijavu br.10-2019-0166864, podnetu 13. decembra 2019. godine.

1. Oblast pronalaska

[0002] Predmetni pronalazak se odnosi na postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti u visokom prinosu.

2. Opis povezanog stanja tehnike

[0003] Jedinjenje sledeće formule 1-1 ima naziv (E)-metil 6-((3S,8S,9S,10R,13S,14S,17R)-3-(((5S,6R)-5-acetoksi-6-(acetoksimetil)-5,6-dihidro-2H-piran-2-il)oksi)-10,13-dimetil-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradekahidro-1H-ciklopenta[a]fenantren-17-il)hept-5-enoat, i predstavlja jedinjenje koje je otkriveno u Korejskoj patentnoj publikaciji br.10-2011-0047170 pod šifrom SAC-1004.

[0004] Prethodno jedinjenje inhibira apoptozu vaskularnih endotelnih ćelija, potiskuje nastanak aktinskih stres vlakana indukovanih putem VEGF, poboljšava strukturu kortikalnog aktinskog prstena i stabilnost čvrste veze (tight junction, TJ) između vaskularnih ćelija, što inhibira povećanu vaskularnu permeabilnost. Pored toga, poznato je da je jedinjenje korisno za prevenciju ili lečenje različitih bolesti uzrokovanih povećanom vaskularnom permeabilnošću jer ima izvrsno dejstvo ne samo u inhibiciji permeabilnosti krvnih sudova, već i obnavlja integritet oštećenih krvnih sudova.

[0005] Postupak za pripremu jedinjenja formule 1-1 je otkriven u Korejskoj patentnoj publikaciji br.10-2011-0047170 (EP-A-2,495,242). Konkretno, kao što je prikazano ispod u reakcionoj formuli 1A, otkriveno je da jedinjenje može da se pripremi sledećim postupkom: zaštita -OH pomoću THP (tetrahidropiran) (korak 1); izvođenje Vitigove reakcije za nastanak alkenilne veze (korak 2); alkilovanje putem esterifikacije (korak 3); vršenje deprotekcije THP-a (korak 4); i priprema finalnog jedinjenja putem glikozilacije (korak 5).

Reakciona formula 1A

[0006] Mana prethodnog postupka pripreme je loš prinos jer se prečišćavanje vrši hromatografijom na koloni. Pored toga, razdvajanje, određivanje strukture i masovna proizvodnja stereoizomera nisu otkriveni u postupku pripreme jedinjenja formule 1-1.

[0007] Zato je neophodno razviti postupak hemijske pripreme za proizvodnju jedinjenja u visokom prinosu uz omogućavanje razdvajanja i masovne proizvodnje stereoizomera za proizvodnju visokokvalitetnog aktivnog farmaceutskog sastojka.

SAŽETAK PRONALASKA

[0008] Cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi postupak za pripremu blokatora povećane vaskularne permeabilnosti u visokom prinosu.

[0009] Još jedan cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi postupak za masovnu proizvodnju blokatora povećane vaskularne permeabilnosti u visokom prinosu.

[0010] Da bi se prethodni ciljevi ostvarili, u jednom aspektu predmetnog pronalaska, predmetni pronalazak daje postupak za pripremu blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 koji se sastoji od sledećih koraka, kao što je prikazano u reakcionoj formuli 1, ispod:

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 2 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 4 sa jedinjenjem predstavljenim formulom 5 (korak 1); i

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 1 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 2 koje je dobijeno iznad u koraku 1 sa jedinjenjem predstavljenim formulom 3, u prisustvu katalizatora (korak 2).

Reakciona formula 1

U reakcionoj formuli 1,

R<1>je ravni ili razgranati C1-10alkil.

[0011] U još jednom aspektu predmetnog pronalaska, predmetni pronalazak daje postupak za pripremu blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 koji se sastoji od sledećih koraka, kao što je prikazano u reakcionoj formuli 3 ispod:

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 6 putem reakcije pregnenolona sa jedinjenjem predstavljenim formulom 8 (korak 1);

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 4 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 6 koje je dobijeno u koraku 1 iznad sa jedinjenjem predstavljenim formulom 7 (korak 2);

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 2 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 4 koje je dobijeno u koraku 2 iznad sa jedinjenjem predstavljenim formulom 5 (korak 3); i

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 1 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 2 koje je dobijeno iznad u koraku 3 sa jedinjenjem predstavljenim formulom 3, u prisustvu katalizatora (korak 4).

Reakciona formula 3

U reakcionoj formuli 3,

R<1>je ravni ili razgranati C1-10alkil.

[0012] U još jednom aspektu predmetnog pronalaska, predmetni pronalazak daje postupak za masovnu proizvodnju blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 koji sadrži korak obavljanja postupka pripreme reakcione formule 1 ili postupka pripreme reakcione formule 3.

[0013] U još jednom aspektu predmetnog pronalaska, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predstavljeno formulom 4, koje je intermedijer proizveden u procesu pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 1.

Formula 4

POVOLJNI EFEKTI

[0014] Postupak pripreme iz predmetnog pronalaska je lak za izvođenje reakcije i produktivniji je i isplativiji od uobičajenog postupka zahvaljujući korišćenju intermedijera koji lako može da ukloni nečistoće nastale tokom reakcije. Pored toga, postupak pripreme može da proizvede blokator povećane vaskularne permeabilnosti u visokom prinosu putem korišćenja novog reagensa koji nije ranije korišćen u koraku stvaranja izomera, i veoma je koristan u proizvodnji visokokvalitetnog aktivnog farmaceutskog sastojka.

OPIS POŽELJNIH OTELOTVORENJA

[0015] Predmetni pronalazak je detaljno opisan u nastavku teksta.

[0016] U jednom aspektu predmetnog pronalaska, predmetni pronalazak daje postupak za pripremu blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 koji se sastoji od sledećih koraka, kao što je prikazano u reakcionoj formuli 1 ispod

Reakciona formula 1

U reakcionoj formuli 1,

R<1>je ravni ili razgranati C1-10alkil.

[0017] U reakcionoj formuli 1, R<1>može biti ravni ili razgranati C1-5alkil, ravni ili razgranati C1-3alkil, ili metil.

[0018] U nastavku teksta detaljno je opisan postupak pripreme koji je predstavljen reakcionom formulom 1.

[0019] Korak 1 je za pripremu estarskog jedinjenja predstavljenog formulom 2 putem dovođenja u reakciju karboksilne kiseline jedinjenja predstavljenog formulom 4 sa alkoholnim jedinjenjem predstavljenim formulom 5. U ovom koraku, zahvaljujući korišćenju sumporne kiseline kao katalizatora u metanolnom rastvaraču, postupak pripreme je bezbedniji, jednostavniji i isplativiji nego kada se koristi konvencionalni metan.

[0020] Korak 1 može da se obavi u prisustvu organskog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od nepolarnog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od heksana, benzena, toluena, 1,4-dioksana, hloroforma, dietil etra (Et2O), terc-butil metil etra i dihlormetana (DCM); i polarnog aprotičnog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od N-metilpirolidona, tetrahidrofurana (THF), etil acetata (EtOAc), acetona, dimetilformamida (DMF), acetonitrila (MeCN), dimetil sulfoksida (DMSO) i propilen karbonata (PC), ili smeše prethodnih rastvarača, ali bez ograničavanja na prethodno. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, korišćen je metanol, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0021] Pored toga, korak 1 može da se obavi na 0-80 °C, a poželjno može da se obavi na 50-80 °C. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, korak 1 je obavljen na 80 °C, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0022] Nadalje, vreme reakcije iz koraka 1 može biti od 1 sat do 5 sati, a poželjno može biti od 2 sata do 4 sata. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, reakcija je izvedena tokom 3 sata.

[0023] Temperatura reakcije i vreme reakcije mogu odgovarajuće da se prilagode u skladu sa vrstom supstituenata i napredovanjem reakcije.

[0024] Korak 2 je za pripremu blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1, to jest finalnog ciljnog jedinjenja, putem dovođenja u reakciju alkohola estarskog jedinjenja predstavljenog formulom 2 pripremljenog u koraku 1 iznad sa tri-O-acetil D-glukalom predstavljenim formulom 3 u prisustvu katalizatora. U ovom koraku, poboljšan je prinos i smanjena je proizvodnja β-izomera.

[0025] Reakcioni katalizator može biti bilo koji katalizator izabran iz grupe koja se sastoji od katjon perfluor-1-alkilsulfonata (katjon je litijum, natrijum, kalijum ili cezijum, alkil je ravni ili razgranati perfluor C1-10alkil), (s)-kamfor sulfonske kiseline, joda, Amberlyst 15 i bor trifluorid eterata, ili smeše prethodnog, ali bez ograničavanja na prethodno. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, korišćena je smeša litijum nonafluor-1-butilsulfonata (Li-NFBS) i (s)-kamfor sulfonske kiseline, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0026] Korak 2 može da se obavi u prisustvu organskog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od nepolarnog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od heksana, benzena, toluena, 1,4-dioksana, hloroforma, dietil etra (Et2O), terc-butil metil etra i dihlormetana (DCM); i polarnog aprotičnog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od N-metilpirolidona, tetrahidrofurana (THF), etil acetata (EtOAc), acetona, dimetilformamida (DMF), acetonitrila (MeCN), dimetil sulfoksida (DMSO) i propilen karbonata (PC), ili smeše prethodnih rastvarača, ali bez ograničavanja na prethodno.

[0027] Pored toga, korak 2 može da se obavlja na 0-80 °C, poželjno može da se obavlja na 10-50 °C, a poželjnije može da se obavlja na 30-40 °C. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, korak 2 je obavljen na 30-35 °C, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0028] Nadalje, vreme reakcije iz koraka 2 može biti od 30 minuta do 5 sati, a poželjno može biti od 1 sat do 3 sata. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, reakcija je izvedena tokom 2 sata.

[0029] Temperatura reakcije i vreme reakcije mogu odgovarajuće da se prilagode u skladu sa vrstom supstituenata i napredovanjem reakcije.

[0030] Jedinjenje predstavljeno formulom 2 iz koraka 1 može da se prečisti prekristalizacijom.

[0031] Prekristalizacija može da se obavi koristeći bilo koji rastvarač izabran iz grupe koja se sastoji od metanola, etanola, toluena, etil acetata, acetonitrila i petrol etra, ili smešu prethodnih rastvarača kao rastvarač za prekristalizaciju.

[0032] Poželjnije, jedinjenje predstavljeno formulom 2 iz koraka 1 može da se prekristališe koristeći metanol kao rastvarač za prekristalizaciju.

[0033] U ovom trenutku, prekristalizacija može da se obavi u rasponu temperature od 0 °C do 25 °C, ali to predstavlja samo primer, a ne i ograničenje.

[0034] U postupku pripreme reakcione formule 1, jedinjenje predstavljeno formulom 4, to jest polazna supstanca, može da se pripremi u skladu sa postupkom pripreme koji se sastoji od sledećih koraka, kao što je prikazano u reakcionoj formuli 2 ispod:

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 6 putem reakcije pregnenolona sa jedinjenjem predstavljenim formulom 8 (korak 1); i

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 4 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 6 koje je dobijeno u koraku 1 iznad i jedinjenja predstavljenog formulom 7 (korak 2).

Reakciona formula 2

[0035] U nastavku teksta detaljno je opisan postupak pripreme koji je predstavljen reakcionom formulom 2.

[0036] Korak 1 je korak zaštite alkoholne grupe pregnenolona pomoću THP-a koristeći jedinjenje predstavljeno formulom 8, što je dobro poznat postupak zaštite alkohola, i može da se obavi saopštenim postupkom. U predmetnom pronalasku, p-toluensulfonska kiselina monohidrat je korišćena kao katalizator, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0037] Korak 1 može da se obavi u prisustvu organskog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od nepolarnog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od heksana, benzena, toluena, 1,4-dioksana, hloroforma, dietil etra (Et2O), terc-butil metil etra i dihlormetana (DCM); i polarnog aprotičnog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od N-metilpirolidona, tetrahidrofurana (THF), etil acetata (EtOAc), acetona, dimetilformamida (DMF), acetonitrila (MeCN), dimetil sulfoksida (DMSO) i propilen karbonata (PC), ili smeše prethodnih rastvarača, ali bez ograničavanja na prethodno. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska korišćen je dihlormetan, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0038] Pored toga, korak 1 može da se obavi na 0-50°C, a poželjno može da se obavi na 0-5°C. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, korak 1 je obavljen na 0°C, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0039] Nadalje, vreme reakcije iz koraka 1 može biti od 30 minuta do 5 sati, a poželjno može biti od 1 sat do 3 sata. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, reakcija je izvedena tokom 2 sata.

[0040] Temperatura reakcije i vreme reakcije mogu odgovarajuće da se prilagode u skladu sa vrstom supstituenata i napredovanjem reakcije.

[0041] Korak 2 je korak u kome je alkenil karboksilna kiselina uvedena putem dovođenja u reakciju acetila pregnenolona sa alkoholnom grupom zaštićenom pomoću THP-a predstavljenom formulom 6, koja je pripremljena iznad u koraku 1, sa trifenil fosfonijum bromidom jedinjenja predstavljenog formulom 7. U ovom koraku, nakon uvođenja alkenil karboksilne kiseline, uklonjen je samo reakcioni rastvarač (destilacija pod sniženim pritiskom) bez preduzimanja zasebnog postupka prečišćavanja, a odmah zatim je obavljena reakcija deprotekcije zaštitne THP grupe. Postupak deprotekcije može da se obavi saopštenim postupkom kojim može da se ukloni THP, i, na primer, reakcija može da se obavi u kiselim uslovima.

[0042] U koraku 2, uvođenje alkenil karboksilne kiseline može da se obavi u prisustvu organskog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od nepolarnog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od heksana, benzena, toluena, 1,4-dioksana, hloroforma, dietil etra (Et2O), terc-butil metil etra i dihlormetana (DCM); i polarnog aprotičnog rastvarača izabranog iz grupe koja se sastoji od N-metilpirolidona, tetrahidrofurana (THF), etil acetata (EtOAc), acetona, dimetilformamida (DMF), acetonitrila (MeCN), dimetil sulfoksida (DMSO) i propilen karbonata (PC), ili smeše prethodnih rastvarača, ali bez ograničavanja na prethodno. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, korišćena je smeša rastvarača toluena i tetrahidrofurana, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0043] Pored toga, u jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, acetonitril je korišćen u reakciji deprotekcije THP iz koraka 2, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0044] Reakcija uvođenja alkenil karboksilne kiseline iz koraka 2 je reakcija zagrevanja, i može da se obavi na spoljašnjoj temperaturi od 100-130 °C, a poželjno na 115-125 °C. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, reakcija je obavljena na 119 °C, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje. Unutrašnja temperatura je raspon temperature koji može da održava stanje blagog refluksa.

[0045] Nadalje, vreme reakcije za uvođenje alkenil karboksilne kiseline u koraku 2 može biti od 1 sat do 30 sati, a poželjno može biti od 10 sati do 24 sata. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, reakcija je vršena tokom 22 sata, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0046] U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, reakcija deprotekcije THP u koraku 2 može da se obavi na sobnoj temperaturi, ili može da se obavi uz zagrevanje u zavisnosti od napredovanja reakcije.

[0047] Pored toga, vreme reakcije za deprotekciju THP u koraku 2 može biti od 1 sat do 30 sati, a poželjno može biti od 10 sati do 24 sata. U jednom otelotvorenju predmetnog pronalaska, reakcija je vršena tokom 18 sati, ali to je samo primer i ne predstavlja ograničenje.

[0048] Temperatura reakcije i vreme reakcije mogu odgovarajuće da se prilagode u skladu sa vrstom supstituenata i napredovanjem reakcije.

[0049] Jedinjenje predstavljeno formulom 6 iz koraka 1 ili jedinjenje predstavljeno formulom 4 iz koraka 2 može da se prečisti prekristalizacijom.

[0050] Prekristalizacija može da se obavi koristeći bilo koji rastvarač izabran iz grupe koja se sastoji od metanola, etanola, toluena, etil acetata, acetonitrila i petrol etra, ili smešu prethodnih rastvarača kao rastvarač za prekristalizaciju, i mala količina trietilamina (TEA) ili slično može da se doda u rastvarač da bi se osigurala stabilnost jedinjenja.

[0051] Poželjnije, jedinjenje predstavljeno formulom 6 iz koraka 1 može da se prekristališe koristeći metanol kao rastvarač za prekristalizaciju uz dodavanje male količine TEA.

[0052] Pored toga, jedinjenje predstavljeno formulom 4 iz koraka 2 može da se prekristališe koristeći metanol kao rastvarač za prekristalizaciju.

[0053] U ovom trenutku, prekristalizacija može da se obavi u rasponu temperature od 0 °C do 25 °C, ali to predstavlja samo primer, a ne i ograničenje.

[0054] U još jednom aspektu predmetnog pronalaska, predmetni pronalazak daje postupak za pripremu blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 koji se sastoji od sledećih koraka, kao što je prikazano u reakcionoj formuli 3 ispod:

Reakciona formula 3

U reakcionoj formuli 3,

R<1>je ravni ili razgranati C1-10alkil.

[0055] U postupku pripreme koji je predstavljen reakcionom formulom 3, detaljan opis koraka 1 i 2 je isti kao za postupak pripreme koji je predstavljen reakcionom formulom 2, a detaljan opis koraka 3 i 4 je isti kao za postupak pripreme koji je predstavljen reakcionom formulom 1.

[0056] U jednom aspektu koji ne predstavlja deo predmetnog pronalaska, obezbeđen je postupak za pripremu blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 koji se sastoji od sledećih koraka, kao što je prikazano u reakcionoj formuli 4 ispod:

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 10 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 6, jedinjenja predstavljenog formulom 7 i jedinjenja predstavljenog formulom 9 (korak 1);

pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 2 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 10 koje je dobijeno u koraku 1 iznad sa kiselom supstancom (korak 2); i pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 1 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 2 koje je dobijeno iznad u koraku 2 sa jedinjenjem predstavljenim formulom 3, u prisustvu katalizatora (korak 3).

Reakciona formula 4

U reakcionoj formuli 4,

R<1>je ravni ili razgranati C1-10alkil; i

X<1>je halogen.

[0057] U nastavku teksta, detaljno je opisan postupak pripreme koji je predstavljen reakcionom formulom 4 (ali koji ne predstavlja deo predmetnog pronalaska).

[0058] Korak 1 je korak u kome je alkenil karboksilna kiselina uvedena putem dovođenja u reakciju acetila pregnenolona sa alkoholnom grupom zaštićenom pomoću THP-a predstavljenom formulom 6 sa trifenil fosfonijum bromidom jedinjenja predstavljenog formulom 7. U ovom koraku, nakon uvođenja alkenil karboksilne kiseline, odmah se vrši alkilovanje koristeći alkil halid bez preduzimanja zasebnog postupka prečišćavanja. O-alkilovanje koristeći alkil halid može da se obavi saopštenim postupkom.

[0059] Korak 2 je korak deprotekcije zaštitne THP grupe jedinjenja predstavljenog formulom 10. Postupak deprotekcije može da se obavi saopštenim postupkom kojim može da se ukloni THP, i, na primer, reakcija može da se obavi u kiselim uslovima.

[0060] Detaljan opis koraka 3 je isti kao opis postupka pripreme reakcione formule 1.

[0061] U još jednom aspektu predmetnog pronalaska, predmetni pronalazak daje postupak za masovnu proizvodnju blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 koji sadrži korak obavljanja postupka pripreme reakcione formule 1 ili postupka pripreme reakcione formule 3.

[0062] Postupak pripreme iz predmetnog pronalaska je lak za izvođenje reakcije i produktivniji je i isplativiji od uobičajenog postupka zahvaljujući korišćenju intermedijera koji lako može da ukloni nečistoće nastale tokom reakcije. Pored toga, postupak pripreme može da proizvede blokator povećane vaskularne permeabilnosti u visokom prinosu putem korišćenja novog reagensa koji nije ranije korišćen u koraku stvaranja izomera, i veoma je koristan u proizvodnji visokokvalitetnog aktivnog farmaceutskog sastojka.

[0063] U još jednom aspektu predmetnog pronalaska, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predstavljeno formulom 4, koje je intermedijer proizveden u procesu pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 1.

Formula 4

[0064] U još jednom aspektu koji ne predstavlja deo predmetnog pronalaska, blokator povećane vaskularne permeabilnosti je predstavljen formulom 1-1 pripremljenom putem postupka pripreme iz reakcione formule 1, postupka pripreme iz reakcione formule 3 ili postupka pripreme iz reakcione formule 4.

Formula 1-1

[0065] U nastavku teksta, predmetni pronalazak će biti detaljno opisan putem sledećih primera i eksperimentalnih primera.

Primer 1: Priprema blokatora povećane vaskularne permeabilnosti 1

[0066] Blokator povećane vaskularne permeabilnosti predstavljen formulom 1-1 je pripremljen u skladu sa postupkom pripreme koji je prikazan u reakcionoj formuli A ispod.

Reakciona formula A

Korak 1: Priprema jedinjenja predstavljenog formulom 6-1

[0067]

[0068] Termometar je montiran na balon od 5 l, u koji je dodato 2000 ml dihlormetana koji sadrži 200 g (0,632 mol) pregnenolona i 173 ml (1,896 mol) 3,4-dihidro-2H-pirana.

Temperatura je snižena na 0-5 °C, i 3,0 g (15,8 mmol) monohidrata p-toluensulfonske kiseline je rastvoreno u 50 ml tetrahidrofurana (THF), pa je ukapavanjem dodato u smešu, nakon čega je usledilo mešanje na 0 °C tokom 1,5 sati.800 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i 10 ml trietilamina (TEA) dodato je u reakcionu smešu na 0 °C, nakon čega je usledilo mešanje. Nakon razdvajanja slojeva, organski sloj je ispran sa 800 ml zasićenog vodenog rastvora soli, i vodeni slojevi su ponovo ekstrahovani sa 200 ml dihlormetana, kombinovani sa organskim slojem, osušeni i filtrirani sa 200 g anhidrovanog natrijum sulfata, i destilovani pod sniženim pritiskom. 1000 ml MeOH i 5 ml TEA je dodato u dobijeni ostatak, zagrejano do potpunog rastvaranja, i temperatura je snižena, nakon čega je usledilo mešanje na -5 °C tokom 1 sata. Nakon dodavanja 1000 ml MeOH i 5 ml TEA u dobijeni ostatak, smeša je zagrevana dok se nije potpuno rastvorila, i temperatura je snižena, nakon čega je usledilo mešanje na -5 °C tokom 1 sata. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa 200 ml MeOH. Usled toga, 232,0 g (0,579 mol) THP-pregnenolona predstavljenog formulom 6-1 dobijeno je kao čista bela čvrsta supstanca (prinos: 91,6%).

[0069]<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5,33-5,36 (m, 1H), 4,71-4,72 (m, 1H), 3,85-3,94 (m, 1H), 3,46-3,56 (m, 2H), 1,00-2,55 (m, 32H), 0,62 (s, 3H).

Korak 2: Priprema jedinjenja predstavljenog formulom 4-1

[0070]

[0071] Nakon montiranja kondenzatora, grejne obloge i mehaničke mešalice na reaktor od 5 l, spoljašnja temperatura je povišena na 119 °C, a zatim je ohlađen i osušen uz protok azota tokom 5 minuta. Nakon dodavanja 332,5 g (0,75 mol) 4-(karboksibutil)trifenil fosfonijum bromida i 168,1 g (1,50 mol) kalijum t-butoksida, u to je dodato 2000 ml anhidrovanog toluena i 750 ml anhidrovanog tetrahidrofurana, nakon čega je usledilo mešanje tokom oko 2 sata uz zagrevanje na 119 °C (spoljašnja temperatura, interno stanje: blagi refluks).

[0072] 100,0 g (0,250 mol) jedinjenja predstavljenog formulom 6-1 (THP-pregnenolon) pripremljenog u koraku 1 rastvoreno je u 500 ml anhidrovanog toluena, što je dodato u reakcioni rastvor, nakon čega je usledila reakcija tokom oko 20 sati. Nakon završetka reakcije, reakcioni rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu, i reakcioni rastvarač je uklonjen destilacijom pod sniženim pritiskom, nakon čega je usledilo vakuum sušenje tokom jednog sata. Nakon što je dodato 3000 ml acetonitrila, 82,5 ml hlorovodonične kiseline i 62,5 ml vode je pomešano i dodato u to, nakon čega je usledilo mešanje na sobnoj temperaturi tokom 18 sati i filtriranje. Filtrirana čvrsta supstanca je isprana sa 250 ml etil acetata i 500 ml heksana, tim redosledom, nakon čega je usledilo vakuum sušenje. Usled toga, 200,0 g sirovog jedinjenja predstavljenog formulom 4-1 dobijeno je kao bela čvrsta supstanca.

[0073]<1>H NMR(DMSO-d6, 400MHz): δ(ppm) 11,97(s, 1H), 5,27(d, J=4,80 Hz, 1H), 5,16(t, J=7,00 Hz, 1H), 4,60(d, J=4,56 Hz, 1H), 3,27(m, 1H), 2,21-0,88(m, 32H), 0,52(s, 3H).

Korak 3: Priprema jedinjenja predstavljenog formulom 2-1

[0074]

[0075] Termometar je montiran na balon od 2 l u koji je dodato 1000 ml metanola koji sadrži 200 g (0,250 mol) sirovog jedinjenja predstavljenog formulom 4-1 koje je dobijeno u koraku 2 i 4 ml (0,0075 mol) sumporne kiseline, nakon čega je usledilo mešanje na 80 °C tokom 3 sata. (Napredovanje reakcije je potvrđeno putem TLC.)

[0076] Nakon završetka reakcije, reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se uklonio metanol, i u njega je dodato 200 ml vodenog rastvora natrijum bikarbonata i 800 ml vode, nakon čega je usledila ekstrakcija sa 1000 ml etil acetata. Organski sloj je dva puta ispran sa 1000 ml vode i 1000 ml zasićenog vodenog rastvora soli, osušen iznad 30 g anhidrovanog magnezijum sulfata, filtriran i destilovan pod sniženim pritiskom.

[0077] Dobijeni ostatak je osušen pod vakuumom da bi se potpuno uklonio organski rastvarač, i rastvoren je u 750 ml metanola putem zagrevanja, nakon čega je usledilo mešanje na sobnoj temperaturi. Kada je nastala čvrsta supstanca, smeša je mešana na 0 °C tokom 1 sata, filtrirana, isprana sa 100 ml metanola na -10 °C i osušena pod vakuumom. Usled toga, 51,0 g (0,123 mol) jedinjenja predstavljenog formulom 2-1 dobijeno je kao bela čvrsta supstanca (u 2 koraka iz jedinjenja 6-1) (prinos: 49,2%).

[0078]<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5,33-5,35(m, 1H), 5,12-5,16 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,50-3,52 (m, 1H), 0,98-2,32 (m, 33H), 0,53 (s, 3H).

Korak 4: Priprema jedinjenja predstavljenog formulom 1-1

[0079]

[0080] Nakon montiranja termometra i vodenog kupatila na balon od 3 l, 100 g (0,241 mol) jedinjenja predstavljenog formulom 2-1 koje je dobijeno u koraku 3 i 83,7 g (0,301 mol) tri-O-acetil D-glukala rastvoreno je u 300 ml toluena i 600 ml acetonitrila, i smeša je dodata u balon. Uz održavanje temperature na 30-35 °C, 9,22 g (0,030 mol) litijum nonafluor-1-butilsulfonata (Li-NFBS) i 0,28 g (0,00121 mol) (s)-kamfor sulfonske kiseline dodato je u prethodno, nakon čega je usledilo mešanje tokom 2 sata. Nakon završetka reakcije, reakcija je deaktivirana sa 1200 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata, nakon čega je usledila ekstrakcija sa 1500 ml petrol etra. Organski sloj je ispran sa 1200 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata dva puta i sa 1200 ml zasićenog vodenog rastvora soli, tim redosledom, a vodeni slojevi su ponovo ekstrahovani sa 200 ml smeše toluen/petrol etar (1/5). Ekstrakt je kombinovan sa organskim slojem, i u to je dodato 100 g anhidrovanog natrijum sulfata i 10 g aktivnog uglja, nakon čega je usledilo mešanje tokom jednog sata. Reaktant je filtriran koristeći 40 g celita i ispran sa 300 ml smeše toluen/petrol etar (1/5). Filtrat je koncentrovan i osušen pod vakuumom, što daje 102,9 g jedinjenja predstavljenog formulom 1-1 (prinos: 68,1%).

[0081]<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5,79-5,88 (m, 2H), 5,35-5,36 (m, 1H), 5,27-5,29 (m, 1H), 5,12-5,16 (m, 2H), 4,15-4,24 (m, 3H), 3,66 (s, 3H), 3,54-3,57 (m, 1H), 0,91-2,32 (m, 38H), 0,54 (s, 3H).

Primer 2: Priprema blokatora povećane vaskularne permeabilnosti 2

[0082] Blokator povećane vaskularne permeabilnosti predstavljen formulom 1-1 pripremljen je u skladu sa postupkom pripreme koji je prikazan u reakcionoj formuli B ispod.

Reakciona formula B

korak 2 korak 3

Korak 1: Priprema jedinjenja predstavljenog formulom 4-2

[0083]

[0084] Nakon montiranja kondenzatora, grejne obloge i mehaničke mešalice na reaktor od 5 l, spoljašnja temperatura je povišena na 119 °C, a zatim je ohlađen i osušen uz protok azota tokom 5 minuta. Nakon dodavanja 332,5 g (0,75 mol) 4-(karboksibutil)trifenil fosfonijum bromida i 168,1 g (1,50 mol) kalijum t-butoksida, u to je dodato 2000 ml anhidrovanog toluena i 750 ml anhidrovanog tetrahidrofurana, nakon čega je usledilo mešanje tokom oko 2 sata uz zagrevanje na 119 °C (spoljašnja temperatura, interno stanje: blagi refluks).

[0085] 100,0 g (0,250 mol) jedinjenja predstavljenog formulom 6-1 rastvoreno je u 500 ml anhidrovanog toluena, što je dodato u reakcioni rastvor, nakon čega je usledila reakcija tokom oko 20 sati. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu. 320 ml (5,14 mol) metil jodida i 1000 ml acetona dodato je u reakcionu smešu, nakon čega je usledilo mešanje na sobnoj temperaturi tokom 15 sati. Reakciona smeša je destilovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio najveći deo organskog rastvarača, i u to je dodato 1500 ml etil acetata za rastvaranje, nakon čega je usledilo ispiranje sa 1000 ml zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida. Organski sloj je ispran sa 1000 ml vode dva puta i sa 1000 ml zasićenog vodenog rastvora soli, osušen iznad 100 g natrijum sulfata, i koncentrovan filtracijom sa 80 g celita.

[0086] Dobijeni ostatak je rastvoren u 2000 ml metanola, nakon čega je usledilo mešanje na 10 °C tokom 13 sati i na 4-5 °C tokom 1 sata. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana sa 200 ml metanola i osušena pod vakuumom da se dobije 66,2 g jedinjenja predstavljenog formulom 4-2 kao bela čvrsta supstanca (prinos: 53,2%).

[0087]<1>H NMR (400MHz, CDCl3): δ 5,36 (t, J=5,80 Hz, 1H), 5,16 (t, J=7,00 Hz, 1H), 4,71 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,56 (m, 2H), 2,37-0,88 (m, 38H), 0,54 (s, 3H).

Korak 2: Priprema jedinjenja predstavljenog formulom 2-1

[0088]

[0089] Termometar je montiran na balon od 2 l u koji je dodato 1000 ml metanola koji sadrži 100 g (0,200 mol) jedinjenja predstavljenog formulom 4-2 i 3,82 g (0,020 mol) monohidrata p-toluensulfonske kiseline, nakon čega je usledilo mešanje na 60 °C tokom 3 sata.

[0090] Nakon završetka reakcije, reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Dobijena čvrsta supstanca je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta i na 10 °C tokom 1 sata, filtrirana, isprana sa 100 ml ohlađenog metanola, i osušena pod vakuumom da bi se dobilo 61,2 g (0,150 mol) jedinjenja predstavljenog formulom 2-1 kao bela čvrsta supstanca (prinos: 75,0%).

[0091]<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5,33-5,35 (m, 1H), 5,12-5,16 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,50-3,52 (m, 1H), 0,98-2,32 (m, 33H), 0,53 (s, 3H).

Korak 3: Priprema jedinjenja predstavljenog formulom 1-1

[0092]

[0093] Nakon montiranja termometra i vodenog kupatila na balon od 3 l, 100 g (0,241 mol) jedinjenja predstavljenog formulom 2-1 i 83,7 g (0,301 mol) tri-O-acetil D-glukala rastvoreno je u 300 ml anhidrovanog toluena i 600 ml acetonitrila, i smeša je dodata u balon. Uz održavanje temperature na 30-35 °C, 9,22 g (0,030 mol) litijum nonafluor-1-butilsulfonata i 0,28 g (0,00121 mol) (s)-kamfor sulfonske kiseline dodato je u prethodnu smešu, nakon čega je usledilo mešanje tokom 2 sata. Nakon završetka reakcije, reakcija je deaktivirana sa 1200 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata, nakon čega je usledila ekstrakcija sa 1500 ml petrol etra. Organski sloj je ispran sa 1200 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata dva puta i sa 1200 ml zasićenog vodenog rastvora soli, tim redosledom, a vodeni slojevi su ponovo ekstrahovani sa 200 ml smeše toluen/petrol etar (1/5). Organski sloj je osušen iznad 100 g anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran koristeći 40 g celita i ispran sa 300 ml smeše toluen/petrol etar (1/5). Filtrat je koncentrovan i osušen pod vakuumom, što daje 102,9 g jedinjenja predstavljenog formulom 1-1 (prinos: 68,2%).

[0094]<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5,79-5,88 (m, 2H), 5,35-5,36 (m, 1H), 5,27-5,29 (m, 1H), 5,12-5,16 (m, 2H), 4,15-4,24 (m, 3H), 3,66 (s, 3H), 3,54-3,57 (m, 1H), 0,91-2,32 (m, 38H), 0,54 (s, 3H).

Eksperimentalni primer 1: Potvrđivanje prinosa sa povećanjem obima

[0095] Kako bi se potvrdilo da li je postupak pripreme iz primera 1 primenljiv za proces masovne proizvodnje, prinos iz svakog koraka je ispitan uz prilagođavanje proizvodne količine do obima od 100 g ili više. Pored toga, prethodni prinos je upoređen sa prinosom iz postupka pripreme iz reakcione formule 12 iz Korejske patentne publikacije br.10-2011-0047170, koja otkriva postupak hemijske sinteze za isto jedinjenje.

[0096] Razlike između postupka pripreme iz predmetnog pronalaska i postupka iz reakcione formule 12 iz Korejske patentne publikacije br.10-2011-0047170 su sledeće.

[0097] Redosled proizvodnje: U predmetnom pronalasku, estarsko jedinjenje je proizvedeno selektivnim uvođenjem alkila samo u karboksilnu kiselinu intermedijera alkohol-karboksilna kiselina iz kog je THP uklonjen u prisustvu sumporne kiseline, a tri-O-acetil D-glukal je uveden koristeći Li-NFBS.

[0098] U Korejskoj patentnoj publikaciji br.10-2011-0047170, estarsko jedinjenje je proizvedeno uvođenjem alkila u karboksilnu kiselinu koristeći tritil silil diazometan u stanju kada je TTHP vezan, THP je uklonjen u prisustvu p-toluensulfonske kiseline, a zatim je tri-O-acetil D-glukal uveden u prisustvu bor trifluorid dietil etarata.

[0099] Eksperimentalni rezultati svakog koraka iz primera 1 prema predmetnom pronalasku i prinosi po koracima postupka pripreme iz reakcione formule 12 iz Korejske patentne publikacije br.10-2011-0047170 sažeti su u Tabeli 1 ispod.

[Tabela 1]

[0100] Kao što je prikazano u Tabeli 1, ukupni prinos (ukupni prinos procesa pripreme) poboljšan je na 32,5% u predmetnom pronalasku, u poređenju sa 13,7% u Korejskoj patentnoj publikaciji br.10-2011-0047170. Imajući u vidu da je proces u predmetnom pronalasku bio na nivou velikog obima u g, a proces u Korejskoj patentnoj publikaciji br.10-2011-0047170 na nivou malog obima u mg, i da se prinos obično smanjuje sa povećanjem obima procesa pripreme jedinjenja sa mg na g, poboljšanje prinosa je izuzetno povećano. Konkretno, postupak pripreme iz predmetnog pronalaska je uprostio korak pripreme koristeći novi intermedijer u postupku pripreme i pokazao je visok prinos čak i kod proizvodnje u velikom obimu putem variranja reagenasa koji su korišćeni u svakom koraku i postupka prečišćavanja, tako da postupkom pripreme iz predmetnog pronalaska može da se proizvede blokator povećane vaskularne permeabilnosti u visokom prinosu, i postupak pripreme iz predmetnog pronalaska može ekonomično i efikasno da se primeni na masovnu proizvodnju lekova.

[0101] Stoga, postupak pripreme iz predmetnog pronalaska je lak za izvođenje reakcije i produktivniji je i isplativiji od uobičajenog postupka zahvaljujući korišćenju intermedijera koji lako može da ukloni nečistoće nastale tokom reakcije. Pored toga, postupkom pripreme iz predmetnog pronalaska može da se proizvede blokator povećane vaskularne permeabilnosti u visokom prinosu putem korišćenja novog reagensa koji nije ranije korišćen u koraku stvaranja izomera, pa je postupak pripreme iz predmetnog pronalaska veoma koristan u proizvodnji aktivnog farmaceutskog sastojka visokog kvaliteta.

[0102] Postupak pripreme iz predmetnog pronalaska je lak za izvođenje reakcije i produktivniji je i isplativiji od uobičajenog postupka zahvaljujući korišćenju intermedijera koji lako može da ukloni nečistoće nastale tokom reakcije. Pored toga, postupkom pripreme iz predmetnog pronalaska može da se proizvede blokator povećane vaskularne permeabilnosti u visokom prinosu putem korišćenja novog reagensa koji nije ranije korišćen u koraku stvaranja izomera, pa je postupak pripreme iz predmetnog pronalaska veoma koristan u proizvodnji aktivnog farmaceutskog sastojka visokog kvaliteta.

Claims

Patentni zahtevi 1. Postupak za pripremu blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 koji se sastoji od sledećih koraka, kao što je prikazano u reakcionoj formuli 1, ispod: pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 2 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 4 sa jedinjenjem predstavljenim formulom 5 (korak 1); i pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 1 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 2 koje je dobijeno iznad u koraku 1 sa jedinjenjem predstavljenim formulom 3 u prisustvu katalizatora (korak 2): Reakciona formula 1

U reakcionoj formuli 1, R<1>je ravni ili razgranati C1-10alkil.
2. Postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 1, pri čemu je jedinjenje predstavljeno formulom 2 iz koraka 1 prečišćeno prekristalizacijom.
3. Postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 2, pri čemu se prekristalizacija iz koraka 1 obavlja koristeći bilo koji rastvarač izabran iz grupe koja se sastoji od metanola, etanola, toluena, etil acetata, acetonitrila i petrol etra, ili smešu prethodnih rastvarača kao rastvarač za prekristalizaciju.
4. Postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 1, pri čemu je katalizator jedan ili više od katjon perfluor-1-alkilsulfonata, (s)-kamfor sulfonske kiseline, joda, Amberlyst 15 i bor trifluorid eterata.
5. Postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 4, pri čemu je katjon litijum, natrijum, kalijum ili cezijum, a alkil je ravni ili razgranati perfluor C1-10alkil.
6. Postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 1, pri čemu postupak pripreme dalje obuhvata korak pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 4 putem dovođenja u reakciju jedinjenja predstavljenog formulom 6 sa jedinjenjem predstavljenim formulom 7, a zatim njegovo tretiranje u kiselim uslovima.
7. Postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 6, pri čemu je jedinjenje predstavljeno formulom 4 prečišćeno prekristalizacijom.
8. Postupak za pripremu blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 1, koji se sastoji od sledećih koraka, kao što je prikazano u reakcionoj formuli 3 ispod: pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 6 putem reakcije pregnenolona sa jedinjenjem predstavljenim formulom 8 (korak 1); pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 4 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 6 koje je dobijeno iznad u koraku 1 sa jedinjenjem predstavljenim formulom 7, a zatim njegovog tretiranja u kiselim uslovima (korak 2); pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 2 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 4 koje je dobijeno u koraku 2 iznad sa jedinjenjem predstavljenim formulom 5 (korak 3); i pripreme jedinjenja predstavljenog formulom 1 putem reakcije jedinjenja predstavljenog formulom 2 koje je dobijeno iznad u koraku 3 sa jedinjenjem predstavljenim formulom 3 u prisustvu katalizatora (korak 4): Reakciona formula 3

U reakcionoj formuli 3, R<1>je ravni ili razgranati C1-10alkil.
9. Postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 8, pri čemu je trietilamin (TEA) dodat u koraku 1.
10. Postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 8, pri čemu je jedinjenje predstavljeno formulom 6 iz koraka 1, jedinjenje predstavljeno formulom 4 iz koraka 2 ili jedinjenje predstavljeno formulom 2 iz koraka 3 prečišćeno prekristalizacijom.
11. Postupak pripreme blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 u skladu sa zahtevom 10, pri čemu se prekristalizacija obavlja koristeći jedan ili više rastvarača izabranih iz grupe koja se sastoji od metanola, etanola, toluena, etil acetata, acetonitrila i petrol etra, ili smešu prethodnih rastvarača kao rastvarač za prekristalizaciju.
12. Postupak za masovnu proizvodnju blokatora povećane vaskularne permeabilnosti predstavljenog formulom 1 koji obuhvata korak izvođenja postupka pripreme iz bilo kog od zahteva 1 i 8.
13. Jedinjenje predstavljeno formulom 4, koje je intermedijer proizveden u postupku pripreme iz zahteva 8:

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Kneginje Ljubice 5, 11000 Beograd 29