RS64703B1 - Jedinjenja indolinona i njihova upotreba u lečenju fibroznih bolesti - Google Patents

Jedinjenja indolinona i njihova upotreba u lečenju fibroznih bolesti

Info

Publication number
RS64703B1
RS64703B1 RS20230860A RSP20230860A RS64703B1 RS 64703 B1 RS64703 B1 RS 64703B1 RS 20230860 A RS20230860 A RS 20230860A RS P20230860 A RSP20230860 A RS P20230860A RS 64703 B1 RS64703 B1 RS 64703B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
formula
methyl
cycloalkyl
phenyl
compound
Prior art date
Application number
RS20230860A
Other languages
English (en)
Inventor
Iain Walters
Louise Birch
Joseph Hill-Cousins
Stephen Paul Collingwood
Christopher Scott Stevenson
Original Assignee
Respivert Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Respivert Ltd filed Critical Respivert Ltd
Publication of RS64703B1 publication Critical patent/RS64703B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/49—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C07C205/57—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/32—Oxygen atoms
    • C07D209/34—Oxygen atoms in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

Opis
Oblast pronalaska
[0001] Pronalazak se, između ostalog, odnosi na nova jedinjenja koja inhibiraju protein kinaze i na njihovu upotrebu u terapiji, posebno za lečenje fibroznih bolesti ili intersticijalnih bolesti pluć a, posebno idiopatske plu ć ne fibroze i respiratornih bolesti. Pronalazak se takođe proširuje na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja.
Stanje tehnike
[0002] Intersticijalne pluć ne bolesti (ILD) karakterišu ožiljci na plu ć ima koji dovode do disfunkcije plu ć a, što na kraju može dovesti do respiratorne insuficijencije. Postoji mnogo ILD-a bez poznatog uzroka, koji se nazivaju idiopatskim. Idiopatska pluć na fibroza (IPF) je najčeš ć i tip ILD. IPF pogađa oko 170.000 ljudi u Evropi i 130.000 ljudi u Sjedinjenim Državama, sa oko 48.000 nov1H slučajeva dijagnostikovan1H svake godine samo u SAD i 40.000 ljudi koji umiru u SAD godišnje. Stope smrtnosti od IPF-a su veoma visoke sa srednjim preživljavanjem od 3-5 godina od postavljanja dijagnoze i prijavljenim stopama preživljavanja od 5 godina manjom od 30 %, uporedo sa najsmrtonosnijim karcinomima. Do nedavno se pokazalo da je nekoliko opcija lečenja, osim transplantacije pluć a, delotvorno, a tretman za već inu pacijenata je bio kontrola simptoma i palijativna nega.
[0003] IPF je hronična i fatalna bolest koju prvenstveno karakteriše progresivni pad pluć ne funkcije uzrokovan ožiljcima pluć nog tkiva što dovodi do pogoršanja dispneje. Faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF), faktor rasta fibroblasta (FGF) i faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF) su poznati moć ni mitogeni za ć elije fibroblasta, koji zatim zamenjuju normalno tkivo u pluć ima kada dođe do fibroze. Kod ILD-a, klinički su demonstrirani dokazi o patogenoj ulozi PDGF, VEGF i FGF. Primarno zahvać eno mesto je intersticijum, tkivo između vazdušnih kesa u plu ć ima, ali takođe utiče na vazdušne prostore, periferne disajne puteve i sudove. Veruje se da je proces bolesti pokrenut nizom mikropovreda alveolarnog epitela u pluć ima. Nakon povrede, pove ć ana vaskularna permeabilnost dovodi do stvaranja ugrušaka i rezidentne epitelne ć elije se razmnožavaju u pokušaju da zamene ć elije koje su umrle kao rezultat povrede. Ovaj proces pokreć e oslobađanje različitih faktora rasta (npr. PDGF, VEGF, FGF i transformišu ć i faktor rasta b (TGFb), što dovodi do aberantne aktivacije epitelnih ć elija, abnormalnog vaskularnog remodeliranja, i najvažnije, proliferaciju i migraciju fibroblasta u pluć a. Faktori rasta takođe podstiču rezidentne ć elije da se transformišu u miofibroblaste, koji se zajedno sa fibroblastima organizuju u žarišta (King TE Jr, et al., Lancet, 2011, 3;378(9807):1949-61; Selman M, et al., Ann Intern Med., 2001, 16;134(2):136-51). Ove ć elijske promene dovode do poremeć aja bazalne membrane i prekomerne akumulacije proteina ekstracelularnog matriksa u intersticijalnom prostoru. Rezultat je eventualno uništenje normalne arhitekture alveolarne kapilarne jedinice i ožiljci na pluć ima. Patologije koje definišu uobičajeni intersticijski obrazac (UIP) fibroze karakterističan za IPF su heterogeni obrazac naizmeničn1H područja normalnih pluć a, intersticijalne inflamacije, guste fibroze, fibroblastičnih žarišta i sa ć a, posebno u subpleuralnoj oblasti pluć a (Du Bois RM., Nat Rev Drug Discov., 2010, 9(2):129-40; Selman M, et al., Ann Intern Med., 2001, 16;134(2):136-51; King TE Jr, et al. al., Lancet, 2011, 3;378(9807):1949-61). Gubitak normalne strukture i ožiljci intersticijalnog prostora dovode do značajnog pada kapaciteta razmene gasova što dovodi do razvoja klasičn1H simptoma bolesti, a to su dispneja, hronični kašalj, inspiratorno pucketanje pri auskultaciji i abnormalna spirometrija (Castriotta RJ, et al. ., Sanduk, 2010, 138(3):693-703). Dok je tok bolesti heterogen, medijan preživljavanja je otprilike 3-5 godina, a najčešć i uzrok smrti je respiratorna insuficijencija zbog progresivnih patologija koje remete normalno funkcionisanje pluć a i razmenu gasova.
[0004] Da bi se postigla bolja podnošljivost i takođe bolja efikasnost u lečenju pluć nih poreme ć aja, može biti korisno da se lek isporuči direktno na mesto delovanja u pluć ima. Ovo omogu ć ava postizanje viših koncentracija leka na mestu delovanja, što rezultira nižom ukupnom dozom, što posledično smanjuje sistemske neželjene efekte.
[0005] Nintedanib, inhibitor protein kinaze, odobrila je FDA 2014. za lečenje IPF-a oralnom primenom. Međutim, povezan je sa značajnim sistemskim neželjenim događajima, uključujuć i bol u stomaku, povra ć anje i dijareju. WO2006/067165 navodi da se može očekivati da inhibitori VEGFR, FGFR i PDGFR, kao što je nintedanib, budu korisni u lečenju fibroznih bolesti, kao što je IPF. Fehrenbach. H., et al., Virchovs Arch., 1999, 435(1):20-31 otkriva da je VEGFR povezan sa uzrokom pluć ne fibroze. Lindroos. P., Am J Phisio Lung Cell Mol Phisiol., 2001, 280:L354-L362 navodi da je regulacija PDGF receptora mehanizam hiperplazije miofibroblasta tokom pluć ne fibroze. WO01/27081 pokazuje da su jedinjenja koja imaju inhibirajuć e efekte na kinaze, uključuju ć i VEGFR, PDGFR i FGFR, pogodna za lečenje fibroznih bolesti i otkriva seriju indolinona supstituisanih na 6 pozicija. Slično, WO2006/067165 i WO2006/067168 takođe otkrivaju indolinone sa 6 pozicija za upotrebu kao lekove za lečenje ili prevenciju fibrozn1H bolesti.
[0006] Ostaje potreba u tehnici da se razviju dodatna jedinjenja, posebno jedinjenja koja se bolje tolerišu od nintedaniba, za lečenje fibroznih bolesti i intersticijskih bolesti pluć a, kao što je IPF. Poželjno je da takva jedinjenja imaju nisku dozu, dugo trajanje delovanja pogodno za doziranje jednom, dva ili tri puta dnevno i dobru efikasnost i podnošljivost kada se primenjuje lokalno u plu ć a. Ovde opisana jedinjenja formule (I) rešavaju ovaj problem.
Suština pronalaska
[0007] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule (Ib)
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano;
R8i R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili -C1-C4alkoksi ili NR8R9predstavlja alifatični 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih od O, N i S; i R14i R15nezavisno predstavljaju H ili C1-C4alkil;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0008] Pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenje formule (Ic)
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano;
R8i R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili -C1-C4alkoksi ili NR8R9predstavlja alifatični 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih od O, N i S; i R14i R15nezavisno predstavljaju H ili C1-C4alkil;
Z predstavlja CO ili SO2;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
[0009] Opisano, ali nije predmet patentnih zahteva, jedinjenje Formule (I):
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano;
R3predstavlja (i)
ili (ii)
ili (iii)
Q predstavlja heteroatom izabran između O, N i S i ako N može opciono biti supstituisan sa C1-4alkilom;
Z predstavlja CO ili SO2;
Y1predstavlja (CH2)ni, osim kada n predstavlja 0, može opciono biti supstituisan sa Me;
X1predstavlja (CH2)mi, osim kada m predstavlja 0, može opciono biti supstituisan sa Me;
n i m nezavisno predstavljaju 0, 1, 2, 3, 4 ili 5;
Y2predstavlja (CH2)si može opciono biti supstituisan sa Me;
s predstavlja 2, 3, 4, 5 ili 6;
Y3predstavlja (CH2)ti može opciono biti supstituisan sa Me;
Y2predstavlja (CH2)vi može opciono biti supstituisan sa Me;
t i v nezavisno predstavljaju 2 ili 3 osim da je t v = 4 ili 5;
R4predstavlja H, OH, NR6R7ili alifatski 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih između O, N i S, osim da kada je R4OH ili NR6R7, m je 2, 3, 4 ili 5;
R5predstavlja H, OH, NR8R9ili alifatični 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih od O, N i S, kada je R5OH ili NR8R9, n je 2,3,4 ili 5;
u kojoj alifatične heterociklične grupe koje R4i R5mogu predstavljati mogu opciono da sadrže karbonil ili sulfon grupu i mogu opciono biti supstituisane sa jednom ili više grupa izabranih od -C1-4alkila, C1-4hidroksialkila, C1-4alkoksija
(C1-4) alkila, -C1-4alkilenaCONR10R11, CN, OH i NR12R13;
R6, R7, R8, R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili -C1-4alkoksijem; i
R10, R11, R12, R13, R14i R15nezavisno predstavljaju H ili C1-4alkil;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so (u daljem tekstu "jedinjenja pronalaska" ili "jedinjenje pronalaska").
Kratak opis slika
[0010]
Slika 1: prikazuje permeabilnost veštačke membrane reprezentativnih primera pronalaska i nintedaniba (pogledajte rezultate testa permeabilnosti PAMPA i tabelu 8: prosečne vrednosti su korišć ene za jedinjenja gde je eksperiment ponovljen)
Slika 2: prikazuje ukupnu izloženost pluć a nakon intravenske i intratrahealne primene primera pronalaska ili nintedaniba kod pacova (videti rezultate farmakokinetičkih merenja kod glodara)
Slika 3: prikazuje ukupnu izloženost pluć a nakon intravenske i intratrahealne primene primera pronalaska ili nintedaniba kod pacova (videti rezultate farmakokinetičkih merenja kod glodara)
Slika 4: prikazuje ukupnu izloženost pluć a nakon intravenske i intranazalne primene primera pronalaska ili nintedaniba kod miševa (pogledajte rezultate farmakokinetičkih merenja kod glodara)
Detaljan opis pronalaska
[0011] Alkil grupe mogu biti razgranatog ili linearnog lanca. C1-8alkil grupe mogu na primer predstavljati C1-6alkil, C1-4alkil ili C1-3alkil. Primeri alkil grupa uključuju metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, t-butil i CH2CHMe2. U jednom aspektu alkil se odnosi na alkil ravnog lanca. Alkilen treba tumačiti na isti način kao alkil osim što je dvovalentna grupa.
[0012] Alkoksi kako se ovde koristi znači -Oalkil i uključuje alkoksi linearnog ili razgranatog lanca, na primer metoksi, etoksi, propoksi, butoksi.
[0013] Hidroksialkil označava alkil sa hidroksil supstituentom u bilo kojoj poziciji. Primeri uključuju hidroksimetil, 2-hidroksietil, 3-hidroksi-n-propil i 4-hidroksi-n-butil.
[0014] Halogeni mogu pogodno biti Br, Cl ili F, posebno Cl ili F, posebno F.
[0015] Primeri alifatskih 4-8-član1H heterocikličnih prstenova koji sadrže jedan ili više heteroatoma izabranih od O, S i N uključuju azetidin, pirolidin, piperidin, piperazin, morfolin, dioksan, tetrahidrofuran i tiomorfolin. Poželjno, heterociklični prsten uključuje 1 ili 2, posebno 1 heteroatom. Takvi prstenovi mogu da sadrže karbonilnu ili sulfon grupu, a primeri uključuju pirolidinon ili piperidinon.
[0016] Cs-Cscikloalkil se odnosi na alifatični karbociklični prsten koji obično sadrži 3 do 8 članova prstena sa opcionim grananjem i koji sadrži ukupno 3 do 8 atoma ugljenika. Primeri uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, metilcikloheksil, cikloheptil i ciklooktil.
[0017] Alifatični 4-8-člani heterociklični prstenovi mogu opciono biti supstituisani. U jednom izvođenju prstenovi nisu zamenjeni. U drugom izvođenju, prsten nosi jedan supstituent. Supstituent može biti na atomu ugljenika ili atomu azota. Primeri supstituisan1H heterocikličnih prstenova uključuju N-metil-piperazin, N-metil-piperidin, N-etilpiperazin, 3-(N,N-dimetilamin)-pirolidin, N-(CH2CH2OH)-piperazin, 4-hidroksi-piperidin, 4-cijano-piperidin, 2,6-dimetilpiperidin, N-metoksietil-piperazin, 3-(N,N-dimetilamin)-piperidin i 4-metoksi-piperidin.
[0018] U jednom aspektu obezbeđena je farmaceutski pr1Hvatljiva so jedinjenja pronalaska.
[0019] Jedinjenja prema pronalasku uključuju ona gde je navedeni atom prirodno prisutan ili neprirodan javljajuć i izotop. U jednom aspektu izotop je stabilan izotop. Prema tome, jedinjenja prema pronalasku uključuju, na primer, ona koja sadrže jedan ili više atoma deuterijuma umesto atoma vodonika.
[0020] Pronalazak se takođe proširuje na sve polimorfne oblike ovde definisanih jedinjenja uključujuć i njihove soli.
[0021] Pronalazak se takođe proširuje na sve solvate ovde definisanih jedinjenja. Primeri solvata uključuju hidrate.
[0022] Poželjno R1predstavlja Me ili H, posebno Me.
[0023] Poželjno R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C6cikloalkil, halogen ili cijano, poželjnije H, C1-C4alkil ili halogen, još poželjnije H, Me ili halogen, najpoželjnije H, Me ili F, posebno H.
[0024] U poželjnoj varijanti Z predstavlja CO. U alternativnoj varijanti Z je SO2.
[0025] U jednom poželjnom izvođenju R3je Formula (i).
[0026] Poželjno ili R4predstavlja NR6R7ili alifatski 4-8-člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heterocikla oatoma izabran1H od O, N i S, osim da kada je R4NR6R7, m je 2, 3, 4 ili 5 i R5predstavlja H ili OH, osim da kada je R5OH, n je 2,3,4 ili5; ili R5predstavlja NR8R9ili alifatski 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabran1H između O, N i S, osim da kada je R5 NR8R9, n je 2, 3, 4 ili 5 i R4predstavlja H ili OH, osim da kada je R4OH , m je 2, 3, 4 ili 5.
[0027] Poželjno X1predstavlja (CH2)m.
[0028] Poželjno X1predstavlja (CH2)O, CH2, CH(CH3)CH2ili (CH2)2, posebno (CH2)Oili CH2, poželjno (CH2)O.
[0029] Poželjno R4predstavlja H, N-metil-piperidin ili dimetilamin, posebno H.
[0030] Poželjan deo -X1-R4predstavlja H, Me, CH2CH3, izopropil, 1-metil-piperidin-4-il ili N,N-dimetilamin, posebno H ili Me, poželjno H.
[0031] Poželjno Y1predstavlja (CH2)n.
[0032] Poželjno Y1predstavlja (CH2)0, CH2, (CH2)2ili (CH2)3, posebno (CH2)2.
[0033] Poželjno R5predstavlja H, dimetilamin, N-metiletanolamin, N-metil-piperazin, N-metil-piperidin, 1,2,6-trimetilpiperazin, N-etil-piperazin, 3-(N,N-dimetilamin)-pirolidin, N-(CH2CH2OH)-piperazin, piperidin, morfolin, 4-hidroksi-piperidin, 4-cijano- piperidin, 2,6-dimetil-piperidin, N-metoksietil-piperazin, 2-metil-piperazin, N-metil-2-(N-piperazinil)acetamid, 4-(N,N-dimetilamin)-piperidin, 4 -metoksi-piperidin, S-di-oksi-tiomorfolin, N-piperazin-3-on, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan, ili 3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan, 3,6- diazabiciklo[3.1.1]heptanil, posebno dimetilamin ili N-metil-piperazin, poželjno dimetilamin.
[0034] Poželjno R5ne predstavlja H kada n predstavlja 0.
[0035] Poželjan deo -I1-R5 predstavlja Me, -(CH2)2-dimetilamino, -(CH2)3-dimetilamino, -(CH2)2-(N-metil)-etanolamino, -(CH2)2-piperazin-1-il, -(CH2)2-(4-metil)-piperazin-1-il, -(CH2)2-(3-metil)-piperazin-1-il, -(CH2)3-(4 -metil)-piperazin-1-il, -(CH2)2-(1-metil)-piperidin-4-il,N-metil-piperidin-4-il,-(CH2)2-(4-etil)-piperazin-1-il,-(CH2)2-3-(N,N-dimetilamino)-pirolidin-1-il, -(CH2)2-(4-(CH2CH2OH)-piperazin-1-il), -(CH2)2-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il, -(CH2)2-piperidin-1-il, -(CH2)3-piperidin-1-il, -(CH2)2-morfolin- 4-il,-(CH2)2-(4-hidroksi-piperidin-1-il), -(CH2)2-(4-cijano-piperidin-1-il), -(CH2)2-(2,6-dimetil-piperidin-1-il), -(CH2)2-(4-metoksietil-piperazin-1-il), -(CH2)2-4-(N,N-dimetilamino-piperidin-1-il) ), -(CH2)2-(4-metoksi-piperidin-1-il), -(CH2)3-(4-metoksi-piperidin-1-il), -(CH2)2-4-(N-metilacetamido )-piperazin-1-il)), -(CH2)2-(4-dioksi-tiomorfolin-1-il), -(CH2)2-(3-oksopiperazin-1-il), -(CH2)2- (2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il), -(CH2)2-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-il), (CH2)2-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il), (CH2)2-3,6-diazabiciklo[3.1.1]heptan-3-il, posebno -(CH2)2-dimetilamin ili -(CH2)2-(4-metil-piperazin-1-il), poželjnije -(CH2)2-dimetilamino.
[0036] Poželjno formula (i) predstavlja deo u kome: (a) -X1-R4predstavlja H i -Y1-R5predstavlja -(CH2)2-dimetilamino, -(CH2)3-dimetilamino, -(CH2)2-(N-metil)-etanolamino, -(CH2)2-4-metil-piperazin-1-il, -(CH2)3-(4-metil)-piperazin-1-il, N-metil -pipridin-4-il, -(CH2)2-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il, -(CH2)2-4-etil-piperazin-N-il, -(CH2)2-3-(N,N-dimetilamino)pirolidin-1-il, -(CH2)2-(4-(CH2CH2OH)-piperazin-1-il), -(CH2)2-piperidin-1-il, -(CH2)3-piperidin-1-il, -(CH2)2-morfolin-4-il, -(CH2)2-(4-hidroksi-piperidin-1-il), -(CH2)2-4-cijano-piperidin-1 -il, -(CH2)2-(2,6-dimetil-piperidin-1-il), -(CH2)2-4-metoksietil-piperazin-1-il, -(CH2)2-4-(N, N-dimetilamino)-piperidin-1-il, -(CH2)2-4-metoksi-piperidin-1-il, -(CH2)3-4-metoksi-piperidin-1-il, -(CH2)2-4 -dioksi-tiomorfolin-1-il, -(CH2)2-(3-oksopiperazin-1-il), posebno -X1-R4predstavlja H, a -Y1-R5predstavlja -(CH2)2-dimetilamino ili -(CH2)2-4-metil-piperazin-1-il, poželjnije -X1-R4predstavlja H i -Y1-R5predstavlja -(CH2)2-dimetilamino; ili (b) -X1-R4predstavlja Me i -Y1-R5predstavlja Me, -(CH2)2-dimetilamino, -(CH2)2-(N-metil)-etanolamino, -(CH2)2-piperazin- 1-il, -(CH2)2-4-metil-piperazin-1-il, -(CH2)2-(3-metil)-piperazin-1-il, -(CH2)2-(4-(CH2CH2OH) - piperazin-1-il), -(CH2)2-(4-(N-metilacetamido)-piperazin-1-il)), -(CH2)2-(2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan- 2-il),-(CH2)2-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-il),(CH2)2-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il),(CH2)2-3,6-diazabiciklo [3.1.1] heptan-3-il, posebno -X1-R4predstavlja Me i -Y1-R5predstavlja (CH2)2-dimetilamino ili -(CH2)2-4-metil-piperazin-1-il, poželjnije -X1-R4predstavlja Me i - Y1-R5predstavlja -(CH2)2-4-metil-piperazin-1-il; ili (c) -X1-R4predstavlja 1-metilpiperidin-4-il i -Y1-R5predstavlja Me; ili (d) -X1-R4predstavlja N,N-dimetilamino i -Y1-R5predstavlja Me; ili (e) -X1-R4predstavlja CH2CH3i -Y1-R5predstavlja (CH2)2-piperazin-1-il ili (f) -X1-R4predstavlja izopropil i -Y1-R5predstavlja (CH2)2-piperazin-1-il. Deo formule (i) je poželjno predstavljen sa (a).
[0037] U jednom aspektu R3je formula (ii).
[0038] Poželjno Y2predstavlja (CH2)s.
[0039] Poželjno s je 2, 3 ili 4, poželjnije 2 ili 3 naročito 2.
[0040] Poželjno formula (ii) predstavlja 1,2-oksazetidin.
[0041] U jednom aspektu R3je formula (iii).
[0042] Poželjno Y3predstavlja (CH2)t.
[0043] Poželjno X2predstavlja (CH2)v.
[0044] Poželjno t je 2 i v je 2.
[0045] Poželjno K je N ili O, posebno N. Kada K predstavlja N, može se pogodno supstituisati sa metilom.
[0046] U jednom aspektu formula (iii) predstavlja 5-metil-[1,2,5]-oksadiazepan.
[0047] Poželjno R6, R7, R8, R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili-OMe.
[0048] Poželjno R6i R7nezavisno predstavljaju Me.
[0049] Poželjno R8predstavlja Me i R9predstavlja Me ili CH2CH2OH, posebno Me.
[0050] Poželjno R10predstavlja ruku, R11predstavlja Me.
[0051] Poželjno R12i R13nezavisno predstavljaju Me.
[0052] Poželjno, R14i R15su nezavisno izabrani između H i Me.
[0053] Jedinjenja formule (I) mogu se prikladno pripremiti postupkom koji obuhvata reakciju jedinjenja od formule (II), u kojoj je L odlazeć a grupa, kao što je -OC1-C4alkil, npr. oetil:
ili njegov zaštić eni derivat sa jedinjenjem Formule (III):
[0054] Tipično, jedinjenja formula (II) i (III) mogu da reaguju u prisustvu rastvarača, kao što je DMF, i da se zagrevaju na oko 80 °C tokom približno 18 sati. Nakon ovog koraka, izvodi se korak uklanjanja zaštite da bi se uklonila zaštitna grupa, acetil. Da bi se ovo postiglo, reakciona smeša se može ohladiti do sobne temperature i dodati nukleofil, kao što je piperidin, i mešati 1 do 24 sata.
[0055] Jedinjenja Formule (II) u kojima L predstavlja -Oetil mogu se dobiti reakcijom jedinjenja Formule (IV):
ili njegov zaštić eni derivat sa jedinjenjem Formule (V):
[0056] Obično jedinjenja Formula (IV) i (V) mogu da reaguju u prisustvu anhidrida sirć etne kiseline na temperaturi od oko 110 °C tokom približno 4 sata. Druga jedinjenja Formule (II) mogu se dobiti na analogan način.
[0057] Jedinjenja Formule (IV) se mogu dobiti reakcijom jedinjenja Formule (VI):
sa anhidridom sirć etne kiseline. Obično se reakcija izvodi na oko 110 °C. Alternativno, jedinjenja Formule (II) u kojima L predstavlja -Oetil mogu se dobiti direktno od jedinjenja Formule (VI) tretmanom sa jedinjenjem Formule (V) u prisustvu anhidrida sirć etne kiseline na temperaturi od oko 110 °C u trajanju od približno 4 sata.
[0058] Jedinjenja Formule (VI) se mogu dobiti redukcijom -NO2grupe jedinjenja Formule (VII) u -NH2grupu:
nakon čega sledi ciklizacija koja formira amid, što je dobro poznata procedura u ovoj oblasti. Uslovi redukcije mogu tipično uključiti upotrebu H2-Pd/C na sobnoj temperaturi, pritisku od 5 bara tokom oko 36 sati u rastvaraču, kao što je sirć etna kiselina, što je dobro poznata procedura u struci.
[0059] Jedinjenja Formule (VII) mogu se dobiti reakcijom jedinjenja Formule (VIII):
sa metilhloracetatom. Obično se reakcija odvija u prisustvu polarnog organskog rastvarača, kao što je DMF, i baze, kao što je KO<t>Bu, u atmosferi azota između približno -20 do -10 °C.
[0060] Alternativno, jedinjenja Formule (Ia), koja su jedinjenja Formule (I) u kojoj je Z CO i R3je Formula (i) ili (iii), mogu se dobiti reakcijom jedinjenja Formule (IX):
ili njegov zaštić eni derivat sa jedinjenjem Formule (X):
u kojima R' može predstavljati Y1-R5i R" može predstavljati X1-R4, ili njegov zaštić eni derivat, ili su R' i R" spojeni zajedno sa N i O atomima da bi se napravio heterociklični prsten po izboru iz navedenih primera. Jedinjenja mogu tipično reaguje oko 2 do 18 sati na sobnoj temperaturi u prisustvu agensa za spajanje, kao što je HATU i baze, kao što je Hunigova baza (DIPEA), u polarnom organskom rastvaraču kao što je DMF, iako drugi polarni organski rastvarači mogu budi upotrebljeni. Ovaj proces može biti prać en, gde je to prikladno, uklanjanjem zaštite.
[0061] Jedinjenja Formule (IX) se mogu dobiti uklanjanjem zaštite sa jedinjenja Formule (XI):
[0062] Uklanjanje zaštite se može postić i koriš ć enjem standardn1H reagenasa u struci, kao što je TFA, a jedinjenja su obično mešana na sobnoj temperaturi oko 16 sati u rastvaraču, kao što je DCM.
[0063] Jedinjenja Formule (XI) se mogu dobiti reakcijom jedinjenja Formule (II) sa jedinjenjem Formule (XII):
[0064] Jedinjenja mogu reagovati u prisustvu DMF-a oko 18 sati na 100 °C.
[0065] Pronalazak obezbeđuje jedinjenja Formule (Ib) koja su jedinjenja Formule (I) u kojima je R3formula (i) i X1-R4predstavlja H. NR8R9predstavlja NR8R9kao što je prethodno definisano, ili alifatski 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih između O, N i S, kao što je prethodno definisano:
može se dobiti reakcijom jedinjenja Formule (XIII):
sa jedinjenjem formule (XIV):
ili NR8R9predstavlja alifatični 4-8-člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih između O, N i S, kao što je prethodno definisano. Tipični reakcioni uslovi mogu biti mešanje smeše na sobnoj temperaturi oko 16 sati. Ovaj proces može biti prać en, gde je to moguće, uklanjanjem zaštite.
[0066] Jedinjenja Formule (XIII) se mogu dobiti reakcijom jedinjenja Formule (IX) sa jedinjenjem Formule (XV):
[0067] Jedinjenja mogu obično da reaguju u prisustvu HATU, Hunigove baze (DIPEA) i DMF, ili drugog polarnog organskog rastvarača.
[0068] Pronalazak obezbeđuje jedinjenja Formule (Ic) koja su jedinjenja Formule (I) u kojoj Z predstavlja CO ili SO2i R3predstavlja formulu (i), X1-R4predstavlja Me i NR8R9predstavlja NR8R9kao što je prethodno definisano, ili alifatski 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabran1H između O, N i S, kao što je prethodno definisano:
može se dobiti reakcijom jedinjenja Formule (XVI):
sa jedinjenjem Formule (XIV). Tipični reakcioni uslovi mogu biti mešanje smeše u rastvaraču kao što je DMF na približno 60 °C tokom oko 5 sati opciono u prisustvu baze kao što je Hunigova baza (DIPEA), nakon čega sledi korak uklanjanja zaštite, kao što je tretman sa nukleofil kao što je piperidin u rastvaraču kao što je DMF na približno 60 °C tokom oko 18 sati.
[0069] Jedinjenja formule (XVI) se mogu dobiti reakcijom jedinjenja Formule (XVII):
sa CBr4i PPh3u blagim uslovima, uobičajena reakcija poznata u ovoj oblasti kao Apelova reakcija. Tipično, reakcija se može mešati između 2 i 16 sati na sobnoj temperaturi u rastvaraču kao što je DCM.
[0070] Jedinjenja formule (XVII), gde Z predstavlja CO, mogu se dobiti reakcijom jedinjenja Formule (IX) sa jedinjenjem Formule (XVIII):
[0071] Jedinjenja mogu tipično da reaguju u prisustvu HATU, Hunigove baze (DIPEA) i DMF, ili drugog polarnog organskog rastvarača. Tipično, reakcija se može mešati oko 2 sata na sobnoj temperaturi.
[0072] Jedinjenja formule (XVII), gde Z predstavlja SO2, mogu se dobiti reakcijom jedinjenja Formule (II) sa jedinjenjem Formule (III) u kojoj Z predstavlja SO2, a R3je Formula (i) gde X1-R4predstavlja Me i Y1-R5predstavlja CH2CH2OH. Jedinjenja obično mogu reagovati u prisustvu Hunigove baze (DIPEA) i DMF, ili drugog polarnog organskog rastvarača na temperaturi kao što je 80 °C tokom oko 18 sati.
[0073] Sinteza jedinjenja Formule (III) se može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule (X) sa jedinjenjem Formule (XIX):
[0074] Jedinjenja obično mogu reagovati u prisustvu Hunigove baze (DIPEA) i DMF tokom oko 16 sati na sobnoj temperaturi, nakon čega sledi korak uklanjanja zaštite korišć enjem standardn1H reagensa u struci, kao što je TFA.
[0075] Jedinjenja Formule (III), gde je R3Formule (ii) i (iii), mogu se dobiti reakcijom jedinjenja Formule (X), gde su R' i R" spojeni zajedno sa N i O atomima da se napravi heterociklični prsten po izboru iz navedenih primera, sa jedinjenjem Formule (XIX). Ovi heterociklični prstenovi i metode njihove pripreme su opšte poznate u ovoj oblasti.
[0076] Jedinjenja formule (X), gde je R" H, mogu se dobiti reakcijom jedinjenja Formule (XX):
sa, obično, hidrazin hidratom u prisustvu rastvarača, obično metanola i DCM, oko 18 sati na sobnoj temperaturi.
[0077] Jedinjenja Formule (XX) se mogu dobiti reakcijom jedinjenja HOR’ sa jedinjenjem 2-hidroksi-izoindolin-1,3-diona. Jedinjenja mogu obično da reaguju u prisustvu trifenilfosfina, azodikarboksilata, kao što je DIAD, i polarnog rastvarača, kao što je THF. Obično, reakcija je mešana 1 sat na 0 °C, a zatim zagrejana do sobne temperature i mešana oko 16 sati.
[0078] Jedinjenja Formule (X), gde je R" Me, mogu se dobiti redukcijom jedinjenja Formule (XXI):
korišć enjem standardnih metoda u struci, na primer, upotrebom redukcionog agensa, kao što je jedinjenje Formule (XXII):
1
[0079] Reakcija se obično može odvijati u prisustvu polarnog rastvarača, kao što je THF, kiselina, kao što je hlorovodonična kiselina i aprotičnog rastvarača, kao što je dioksan.
[0080] Jedinjenja Formule (XXI) mogu se dobiti kondenzacijom jedinjenja Formule (XXIII):
sa, na primer, formaldehidom. Kondenzacija se obično može desiti korišć enjem paraformaldehida kao izvora formaldehida u prisustvu rastvarača, kao što je etanol, i zagrevanja pod refluksom oko 18 sati.
[0081] Novi intermedijeri uključujuć i jedinjenja Formule (II), (VII), (IX), (XI) (XIII), (XVI) i (XVII) gde je R1Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me, i Formule (VI) u kojoj je R1Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me, i njihove soli za koje se traži zaštita kao aspekt pronalaska.
[0082] Jedinjenja Formula (V), (VIII), (X), (XII), (XIV), (XV), (XVIII), (XIX), (XXII) i (XXIII) mogu se dobiti poznatim metodama, ili metodama analognim onima opisanim ovde.
[0083] Jedinjenja Formule (I) se mogu pripremiti ili upotrebiti u obliku farmaceutski pr1Hvatljive soli, uključujuć i terapeutski aktivne netoksične kisele adicione soli koje jedinjenja Formule (I) mogu da formiraju. Ove farmaceutski pr1Hvatljive kiselinske adicione soli mogu se poželjno dobiti tretiranjem oblika slobodne baze sa takvim odgovarajuć im kiselinama u odgovaraju ć em rastvaraču ili smeši rastvarača. Odgovaraju ć e kiseline obuhvataju, na primer, etansulfonsku, maleinsku, malonsku, L-vinsku, fumarnu, limunsku, jantarnu, sirć etnu, trifenil sir ć etnu, hlorovodoničnu, sumpornu, fosfornu, 1-hidroksi-2-naftojevu, bromovodonu, metan, sulfonovodnu, metan, sulfonsku kiselinu, izetionsku, pamoičnu, mravlju, cimetnu, benzojevu, askorbinsku, galaktarnu, mlečnu, jabučnu, oksalnu, paratoluensulfonsku, benzensulfonsku, propionsku, furonsku, fosfonsku i glutarnu. Nasuprot tome, navedeni oblici soli mogu se konvertovati tretmanom sa odgovarajuć om bazom u oblik slobodne baze.
[0084] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje pronalaska za upotrebu kao farmaceutski lek.
[0085] Dalje, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje prema pronalasku opciono u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih razblaživača ili nosača.
[0086] Razblaživači i nosači mogu da obuhvataju one pogodne za parenteralnu, oralnu, lokalnu, uključujuć i inhalaciju preko usta u pluć a ili inhalaciju preko nosa, mukoznu i rektalnu primenu, i mogu biti različiti u zavisnosti od načina primene.
[0087] U jednom aspektu kompozicije se mogu pripremiti npr. za parenteralnu primenu, npr., subkutanu, intramuskularnu, intravenoznu, intradermalnu, intraartikularnu ili periartikularnu primenu, posebno u obliku tečn1H rastvora ili suspenzija; za oralnu primenu, posebno u obliku tableta, kapsula, praha, granula, čvrst1H disperzija ili u obliku tečn1H rastvora ili suspenzija uključujuć i nanosuspenzije; za udisanje u plu ć a ili nos npr. plu ć na ili intranazalna primena, posebno u obliku suv1H prahova, rastvora, suspenzija uključujuć i nanosuspenzije za nebulizaciju, nazalne sprejeve ili kapi koji sadrže rastvore ili suspenzije ili suspenzije ili rastvore pod pritiskom ili aerosole pod pritiskom; za lokalnu ili transdermalnu primenu, npr. kao kreme, sprejevi, pene, gelovi, masti, tečnosti, flasteri; za mukoznu primenu npr. na bukalnu, sublingvalnu ili vaginalnu sluzokožu, a za rektalnu primenu npr. u obliku pene ili supozitorija.
[0088] Kompozicije se mogu prikladno davati u obliku jedinične doze i mogu se pripremiti bilo kojim od metoda dobro poznat1H u farmaceutskoj struci, na primer kako je opisano u Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. izdanje, Mack Publishing Company, Easton, PA ., (1985). Kompozicije se takođe mogu pogodno davati u obliku višestruke jedinične doze.
[0089] Formulacije za parenteralnu primenu mogu sadržati kao ekscipijente sterilnu vodu ili fiziološki rastvor, pufere, agense za podešavanje toničnosti, konzervanse, antioksidante, agense za podešavanje viskoziteta, alkilen glikole kao što je propilen glikol, polialkilen glikole kao što je biljno ulje, polietilen g. porekla, hidrogenizovani naftaleni.
[0090] Kompozicije pogodne za oralnu primenu mogu da sadrže jedan ili više fiziološki kompatibiln1H nosača i/ili ekscipijenata i mogu biti u čvrstom ili tečnom obliku. Tablete i kapsule se mogu pripremiti sa vezivnim agensima, na primer, sirupom, bagremom, želatinom, sorbitolom, tragakantom, celulozom ili polivinilpirolidonom; punila, kao što su laktoza, saharoza, kukuruzni skrob, kalcijum fosfat, sorbitol ili glicin; maziva, kao što su magnezijum stearat, talk, polietilen glikol ili silicijum dioksid; i surfaktanti, kao što je natrijum lauril sulfat. Tečne kompozicije mogu da sadrže konvencionalne aditive kao što su sredstva za suspendovanje, na primer sorbitol sirup, metil celuloza, šeć erni sirup, želatin, karboksimetil-celuloza ili jestive masti; emulgatori i surfaktanti kao što su lecitin ili bagrem; biljna ulja kao što su bademovo ulje, kokosovo ulje, ulje jetre bakalara ili ulje od kikirikija; konzervansi kao što su butilovani hidroksianizol (BHA) i butilovani hidroksitoluen (BHT). Tečne kompozicije mogu biti inkapsulirane u, na primer, želatinu da bi se obezbedio jedinični oblik doze.
[0091] Čvrsti oralni dozni oblici uključuju tablete, dvodelne kapsule sa tvrdim omotačem i meke elastične želatinske (SEG) kapsule. Takve dvodelne kapsule sa tvrdim omotačem mogu biti napravljene od, na primer, želatina ili hidroksipropil metilceluloze (HPMC).
[0092] Formulacija suve ljuske tipično sadrži oko 40% -60% koncentracije želatina, oko 20% -30% koncentracije plastifikatora (kao što je glicerin, sorbitol ili propilen glikol) i oko 30% -40% koncentracije vode. Ostali materijali kao što su konzervansi, boje, opciono mogu biti prisutni i sastojci i ukusi. Tečni materijal za punjenje se sastoji od čvrstog leka koji je rastvoren, raspršen ili dispergovan (sa agensima za suspendovanje kao što su pčelinji vosak, hidrogenizovano ricinusovo ulje ili polietilen glikol 4000) ili tečni lek u nosačima ili kombinacijama nosača kao što su mineralno ulje, biljna ulja, trigliceridi, glikoli, polioli i površinski aktivni agensi.
[0093] Formulacije za nazalnu primenu mogu biti praškovi i mogu sadržati ekscipijente, na primer, laktozu ili dekstran, ili mogu biti vodeni ili uljni rastvori za upotrebu u obliku kapi za nos ili doziranog spreja. Formulacije za nazalnu primenu mogu takođe biti u obliku voden1H suspenzija ili nevoden1H rastvora ili suspenzija pod pritiskom. Za bukalnu primenu tipični ekscipijenti uključuju šeć ere, kalcijum stearat, magnezijum stearat i preželatinirani skrob.
[0094] Pogodno jedinjenje Formule (I) se primenjuje lokalno u pluć a. Stoga je u jednom aspektu obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema ovom pronalasku opciono u kombinaciji sa jednim ili više topikalno pr1Hvatljiv1H razblaživača ili nosača.
[0095] Lokalna primena u pluć a može se posti ć i upotrebom formulacije bez pritiska, kao što je vodeni rastvor ili suspenzija. Ove formulacije se mogu davati pomoć u nebulizatora, npr. onaj koji može biti ručni i prenosiv ili za ku ć nu ili bolničku upotrebu (tj. neprenosiv). Formulacija može da sadrži ekscipijente kao što su voda, puferi, agensi za podešavanje toničnosti, agensi za podešavanje pH, surfaktante, konzervanse, agense za suspendovanje, agense za poveć anje zapremine i ko-rastvarače. Tečne suspenzije i formulacije aerosola (bilo pod pritiskom ili bez pritiska) ć e obično sadržati jedinjenje pronalaska u fino podeljenom obliku pogodnom za taloženje u pluć a, na primer sa D50od 0,5-10 µm, npr. oko 1-5 µm. Prašci u fino usitnjenom obliku mogu se pripremiti postupkom mikronizacije ili mlevenja, sušenjem raspršivanjem, zamrzavanjem sprejom ili vlažnim mlevenjem prać enim sušenjem raspršivanjem. Mikronizacija se može izvršiti korišć enjem mlaznog mlina poput on1H koje proizvodi Hosokawa Alpine. Dobijena distribucija veličine čestica se može meriti korišć enjem laserske difrakcije (npr. sa Malvern Mastersizer 2000S ili Mastersizer 3000 instrumentom). Distribucija veličine čestica može biti predstavljena korišć enjem vrednosti D10, D50i D90. Srednja vrednost D50distribucije veličine čestica je definisana kao veličina čestice koja pravi raspodelu na pola. Merenje izvedeno laserskom difrakcijom se preciznije opisuje kao distribucija zapremine, pa se prema tome vrednost D50dobijena ovom procedurom se logičnije naziva Dv50vrednost (medijan za raspodelu zapremine). Kao što se ovde koristi, Dv vrednosti se odnose na raspodelu veličine čestica merenu korišć enjem laserske difrakcije. Slično, vrednosti D10i D90, koje se koriste u kontekstu laserske difrakcije, podrazumevaju vrednosti Dv10i Dv90i odnose se na veličinu čestica pri čemu 10% raspodele leži ispod vrednosti D10, a 90% raspodele leži ispod vrednosti D90vrednosti, respektivno. U drugom izvođenju, kompozitne čestice jedinjenja prema pronalasku i ekscipijenata za upotrebu u raspršivanju formulacije suspenzije mogu se formirati zajedničkim mlevenjem i/ili sušenjem zajedno sa raspršivanjem jedinjenja i ekscipijenata zajedno, pri čemu kompozitne čestice sadrže i aktivne i ekscipijenti imaju D50od 1-10 µm. Formulacije vodene suspenzije za isporuku u pluć a mogu takođe da sadrže nanosuspenzije ili suspenzije kompozitn1H čestica koje sadrže nanočestice.
[0096] Lokalna primena u pluć a se takođe može posti ć i upotrebom formulacije aerosola pod pritiskom. Formulacije aerosola tipično sadrže aktivni sastojak suspendovan ili rastvoren u pogodnom propelantu aerosola, kao što je hlorofluorougljenik (CFC) ili hidrofluorougljenik (HFC). Odgovarajuć i CFC pogonski gasovi uključuju tr1Hloromonofluorometan (propelant 11), d1Hlorotetrafluorometan (propelant 114) i d1Hlorodifluorometan (propelant 12). Pogodna HFC pogonska sredstva uključuju tetrafluoroetan (HFC-134a) i heptafluoropropan (HFC-227). Pogonsko gorivo tipično sadrži 40% -99,5% npr. 40%-90% težine ukupne inhalacione kompozicije. Formulacija može da sadrži ekscipijente uključujuć i ko-rastvarače (npr. etanol) i surfaktante ili stabilizatore (npr. lecitin, sorbitan trioleat i slično). Drugi moguć i ekscipijenti uključuju polietilen glikol, polivinilpirolidon, glicerin. Formulacije aerosola su upakovane u kanistere i odgovarajuć a doza se isporučuje pomo ć u mernog ventila (npr. kako 1H isporučuju Bespak, Aptar ili 3M ili alternativno od Coster ili Vari). Formulacije suspenzija pod pritiskom za isporuku u pluć a takođe mogu da sadrže nanosuspenzije ili suspenzije kompozitn1H čestica koje sadrže nanočestice.
[0097] Lokalna primena u pluć a se takođe može posti ć i upotrebom formulacije suvog praha. Formulacija suvog praha ć e sadržati jedinjenje prema pronalasku u fino podeljenom obliku, tipično sa D50od 0,5-10 µm, npr. oko 1-5 mm. Prašci u fino usitnjenom obliku mogu se pripremiti postupkom mikronizacije ili mlevenja, sušenjem raspršivanjem, zamrzavanjem sprejom ili vlažnim mlevenjem prać enim sušenjem raspršivanjem. Mikronizacija se može izvršiti korišć enjem mlaznog mlina poput on1H koje proizvodi Hosokawa Alpine. Dobijena distribucija veličine čestica se može meriti korišć enjem laserske difrakcije (npr. sa Malvern Mastersizer 2000S ili Mastersizer 3000 instrumentom). Formulacija ć e tipično sadržati jedan ili više topikalno pr1Hvatljiv1H razblaživača kao što su laktoza, glukoza, trehaloza ili manitol (poželjno laktoza), obično relativno velike veličine čestica, npr. a D50od 15-250 µm. U drugom izvođenju, kompozitne čestice jedinjenja prema pronalasku i ekscipijenata mogu se takođe formirati zajedničkim mlevenjem i/ili sušenjem zajedno sa raspršivanjem jedinjenja i ekscipijenata zajedno, pri čemu kompozitne čestice koje sadrže i aktivne i ekscipijente imaju D50od 1- 10 µm. Kako se ovde koristi, izraz "laktoza" se odnosi na komponentu koja sadrži laktozu, uključuju ć i α-laktozu monohidrat, β-laktozu monohidrat, α-laktozu bezvodnu, βlaktozu bezvodnu i amorfnu laktozu. Komponente laktoze se mogu obraditi mikronizacijom, prosejavanjem, mlevenjem, kompresijom, aglomeracijom ili sušenjem raspršivanjem. Komercijalno dostupni oblici laktoze u različitim oblicima su takođe obuhvać eni, na primer Lactohale<®>(DFE Pharma), InhaLac<®>(Meggle), Pharmatose<®>(DFE Pharma) i Respitose<®>(DFE Pharma) proizvodi. U jednom aspektu, komponenta laktoze je izabrana iz grupe koju čine α-laktoza monohidrat, α-laktoza anhidrovana i amorfna laktoza. Poželjno, laktoza je α-laktoza monohidrat.
[0098] Formulacije suvog praha mogu takođe da sadrže druge ekscipijente kao što su leucin, natrijum stearat, kalcijum stearat ili magnezijum stearat. Čestice suvog praha mogu biti kompozitne čestice i mogu se sastojati od nanočestica u kompozitnoj matrici.
[0099] Formulacija suvog praha se obično isporučuje korišć enjem uređaja za inhalaciju suvog praha (DPI). Ovo može biti uređaj za jediničnu dozu gde je formulacija predstavljena u pojedinačnim jedinicama, bilo kao kapsule ili blisteri, ili u uređaju za više doza gde je više od jedne doze formulacije sadržano u uređaju, bilo u rezervoaru za rasuti teret ili kao više posuda unutar uređaja (npr. više blistera ili džepova). Primeri inhalatora suvog praha uključuju SPINHALER, DISKHALER, TUR- BOHALER, DISKUS, ELLIPTA,CLICKHALER, ECLIPSE, ROTAHALER, HAND1HALER, AEROLISER, CYCLOHALER, MONODOSE, BREEZHALER/NEOHALER, FLOWCAPS, TWINCAPS, X-CAPS, TWISTER, TURBOSPIN, ELPENHAL-ER, TURBUHALER, MIATHALER, NEXTHaler, TWISTHALER, NOVOLIZER, GENUAIR, SKYEHALER, ORIEL suvi inhalator praha, MICRODOSE, ACCUHALER, PULVINAL, EASYHALER, ULTRAHALER, TAIFUN, PULMOJET, OM- N1HALER, GYROHALER, TAPER, CONIX, XCELOVAIR i PROHALER.
[0100] Očekuje se da ć e jedinjenja pronalaska biti korisna u lečenju fibrozn1H bolesti kao što su fibroza plu ć a i pluć ne bolesti sa fibroznom komponentom, npr. odabrana od IPF-a, intersticijalne pneumonije gigantsk1H ć elija, sarkoidoze, cistične fibroze, respiratornog distres sindroma, fibroze pluć a izazvane lekovima, granulomatoze, silikoze, azbestoze, sistemske skleroderme, virusno izazvane ciroze jetre ili ciroze hepatitisa C, kože sa fibroznom komponentom npr. odabrani od skleroderme, sarkoidoze i sistemskog eritematoznog lupusa, a posebno IPF-a. Uopštenije, očekuje se da ć e jedinjenja pronalaska biti korisna u lečenju intersticijaln1H bolesti plu ć a. Pored toga, očekuje se da ć e jedinjenja pronalaska biti korisna u lečenju bolesti koje karakteriše hiperproliferacija ć elija, na primer, kancera i gde se jedinjenja sprovode inhalacijom, posebno raka pluć a. Dalje, jedinjenja pronalaska mogu takođe biti korisna u lečenju respiratorn1H poremeć aja uključuju ć i COPD (uključuju ć i hronični bronhitis i emfizem), astmu, pedijatrijsku astmu, alergijski rinitis, rinitis, sinusitis, posebno astmu, hronični bronhitis i COPD.
[0101] Takođe se očekuje da ć e jedinjenja pronalaska biti korisna u lečenju drug1H fibrotičnih bolesti kao što je fibroza pluć a povezana sa reumatoidnim artritisom, respiratorni distres sindrom uključuju ć i akutni respiratorni distres sindrom, akutna povreda pluć a, zračenjem izazvana fibroza plu ć a ili pneumonitis, hronični preosetljivi pneumonitis, sistemska skleroza, Sjogrenov sindrom, intersticijske bolesti pluć a, plu ć na arterijska hipertenzija (PAH), uključuju ć i vaskularnu komponentu PAH, ili bolesti kože sa fibroznom komponentom, npr. odabrani od hipertrofičn1H ožiljaka i keloida, ili bolesti oka gde je fibroza komponenta uključujuć i glaukom, degeneraciju makule povezane sa uzrastom, dijabetički makularni edem, bolest suvog oka i dijabetičku retinopatiju, ili fibrozu u crevima, npr. povezana sa inflamatornom bolešć u creva.
[0102] Pored toga, očekuje se da ć e jedinjenja pronalaska biti korisna u prevenciji bolesti koje karakteriše hiperproliferacija ć elija, na primer, kancera, npr. pri čemu se jedinjenja isporučuju inhalacijom, posebno kod raka pluć a.
[0103] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje pronalaska za upotrebu u lečenju jedne ili više napred navedenih bolesti.
[0104] Reč "lečenje" ima za cilj da obuhvati profilaksu kao i terapeutski tretman.
[0105] Jedinjenja pronalaska se mogu davati jednom, dvaput ili tri puta dnevno, posebno jednom ili dva puta dnevno. Odgovarajuć a količina doze može se odrediti na osnovu težine bolesti i veličine subjekta. Tipične količine doze su u opsegu od 0,01 mg do 100 mg, npr. 0,1 mg do 10 mg npr. 0,25 mg do 5 mg po ljudskoj dozi koja se daje jednom, dvaput ili tri puta dnevno, posebno jednom ili dva puta dnevno.
[0106] Jedinjenje prema pronalasku se takođe može primeniti u kombinaciji sa jednim ili više drugih aktivnih sastojaka, npr. aktivni sastojci pogodni za lečenje napred naveden1H stanja. Na primer, moguć i aktivni sastojci uključuju nintedanib ili pirfenidon (oni su poznati za lečenje IPF-a). Ostali aktivni sastojci koji se koriste u kombinaciji uključuju supstance sa sekretolitičkim, bronholitičkim i/ili antiinflamatornim delovanjem, kao što su ant1Holinergici, beta-2 mimetici, steroidi, PDE-IV inhibitori, inhibitori p38 MAP kinaze, MK2 inhibitori, inhibitori galektina , NK, antagonisti, LTD4 antagonisti, EGFR inhibitori, VEGF inhibitori, PDGF inhibitori, FGF inhibitori, TGFbeta inhibitori, LPA1 antagonisti, LOKSL2 inhibitori, CTGF inhibitori, pentoksifilin, N-acetilcistein, inhibitori Alintegrinb agensi, anti-IL13IL4 inhibitori Agensi , IGF inhibitori, PI3K inhibitori, mTOR inhibitori, JNK inhibitori, pentrakin2 i antagonisti endotelina.
[0107] Ostali aktivni sastojci koji se koriste u kombinaciji uključuju supstance sa antifibrotskom aktivnošć u, kao što su PDE-III inhibitori, kombinovani anti-IL4/13 agensi, kombinovani inhibitori PI3k/mTOR, inhibitori autotaksina, P2X3 antagonisti, CTGF antagonisti, 5-LO antagonisti, antagonisti leukotriena i ROCK inhibitori.
[0108] U jednom aspektu, kombinacija aktivn1H sastojaka je ko-formulisana.
[0109] U jednom aspektu, kombinacija aktivn1H sastojaka se primenjuje uzastopno ili istovremeno.
[0110] U jednom aspektu jedinjenja pronalaska se daju inhalacijom, a drugi moguć i aktivni sastojci se daju oralno ili parenteralno.
[0111] U jednoj realizaciji obezbeđen je kombinovani proizvod koji sadrži:
(A) jedinjenje pronalaska; i
(B) dodatni aktivni sastojak (kao što je napred navedeno)
pri čemu je svaka od komponenti (A) i (B) formulisana u smeši sa farmaceutski pr1Hvatljivim razblaživačem(ima) ili nosačem(ima). Kombinacija može opciono da sadrži dodatne relevantne ekscipijente.
[0112] U jednom aspektu obezbeđeno je jedinjenje pronalaska za upotrebu kao lek koji se primenjuje u kombinaciji sa jednim ili više dalj1H aktivn1H sastojaka (kao što je napred navedeno).
[0113] Dalji aspekti pronalaska su definisani sledeć im klauzulama:
1
1. Jedinjenje formule (Ib)
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C ≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano;
R8i R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili -C1-C4alkoksi ili NR8R9predstavlja alifatični 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih od O, N i S; i R14i R15nezavisno predstavljaju H ili C1-C4alkil;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
2. Jedinjenje formule (Ic)
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano;
R8i R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili -C1-C4alkoksi ili NR8R9predstavlja alifatični 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih od O, N i S; i R14i R15nezavisno predstavljaju H ili C1-C4alkil;
Z predstavlja CO ili SO2;
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
3. Postupak za dobijanje jedinjenja formule (lb), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, prema patentnom zahtevu 1, koji sadrži:
reakciju jedinjenja Formule (XIII):
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njihovu so;
sa jedinjenjem formule (XIV):
pri čemu
R8i R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili -C1-C4alkoksi ili NR8R9predstavlja alifatični 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabran1H od O, N i S; R14i R15nezavisno predstavljaju H ili C1-C4alkil ili
njegovu so.
4. Postupak prema patentnom zahtevu 3, koji dalje obuhvata uklanjanje zaštite jedinjenja Formule (Ib) da bi se uklonila acetil grupa.
5. Postupak za dobijanje jedinjenja Formule (XIII)
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano;
ili njihovu so;
koji obuhvata:
reakciju jedinjenja Formule (IX):
1
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njihovu so;
sa jedinjenjem Formule (XV):
ili njegovom soli.
6. Postupak prema patentnom zahtevu 5, pri čemu je postupak za dobijanje jedinjenja Formule (IX):
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njegovu so,
obuhvata
uklanjanje zaštite jedinjenja Formule (XI)
1
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano;
ili njegovu so.
7. Postupak prema patentnom zahtevu 6, pri čemu je postupak za dobijanje jedinjenja formule (XI):
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano;
ili njegovu so,
obuhvata
reakciju jedinjenja Formule (II)
pri čemu
R1predstavlja Me, Et, CH=CH2, C ≡ C-H ili C ≡ C-Me;
L predstavlja -OC1-C4alkil;
ili njihovu so;
sa jedinjenjem Formule (XII)
pri čemu R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njegovu so.
1
8. Postupak prema patentnom zahtevu 7, pri čemu je postupak dobijanja jedinjenja Formule (II)
pri čemu
R1predstavlja Me, Et, CH=CH2, C ≡ C-H ili C ≡ C-Me;
L predstavlja -Oetil;
ili njegovu so,
obuhvata:
(a) reagovanje jedinjenja Formule (IV):
pri čemu R1predstavlja Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; ili njihovu so;
sa jedinjenjem Formule (V):
ili njegovom soli; ili
(b) reagovanje jedinjenja Formule (VI):
gde R1predstavlja Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; ili njihova so;
sa jedinjenjem Formule (V)
ili njegovom soli.
9. Postupak za dobijanje jedinjenja Formule (XVI)
1
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; Z predstavlja CO ili SO2;
ili njihovu so;
koji obuhvata:
reakciju jedinjenja formule (XVII)
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; Z predstavlja CO ili SO2;
ili njihovom soli;
sa CBr4i PPh3.
pak za dobijanje jedinjenja Formule (XVII)
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; Z predstavlja CO,
ili njegovu so,
1
koji obuhvata:
reakciju jedinjenja Formule (IX)
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njihovu so;
sa jedinjenjem Formule (XVIII)
ili njegovom soli.
11. Postupak za dobijanje jedinjenja Formule (XVII)
pri čemu
R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me;
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; Z predstavlja SO2,
ili njegovu so,
koji obuhvata:
reakciju jedinjenja Formule (II)
pri čemu
R1predstavlja Me, Et, CH=CH2, C ≡ C-H ili C ≡ C-Me;
2
L predstavlja -OC1-C4alkil;
ili njihovu so;
sa jedinjenjem Formule (III)
pri čemu
R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano;
R3predstavlja Formulu (i)
pri čemu X1-R4predstavlja Me i Y1-R5predstavlja CH2CH2OH;
Z predstavlja SO2;
ili njegovu so.
12. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje Formule (lb) prema patentnom zahtevu 1 ili Formulu (Ic) prema patentnom zahtevu 2, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih razblaživača ili nosača.
13. Jedinjenje Formule (lb) prema patentnom zahtevu 1 ili Formule (Ic) prema patentnom zahtevu 2 za upotrebu kao lek.
14. Jedinjenje Formule (lb) prema patentnom zahtevu 1 ili Formule (Ic) prema patentnom zahtevu 2 ili kompozicija prema patentnom zahtevu 12 za upotrebu u lečenju fibroznih bolesti ili intersticijaln1H bolesti pluć a, npr. odabrano od IPF-a, intersticijalne pneumonije gigantsk1H ć elija, sarkoidoze, cistične fibroze, respiratornog distres sindroma, fibroze pluć a izazvane lekovima, granulomatoze, silikoze, azbestoze, sistemske skleroderme, virusno izazvane ciroze jetre, hepatitisa C ili bolesti hepatitisa C sa fibroznom komponentom npr. izabrani od skleroderme, sarkoidoze i sistemskog eritematoznog lupusa, ili za upotrebu u lečenju bolesti koje karakteriše hiperproliferacija ć elija, na primer, raka, posebno raka pluć a ili za upotrebu u lečenju respiratornih poreme ć aja uključuju ć i HOBP (uključuju ć i hronični bronhitis i emfizem), astme, pedijatrijske astme, alergijskog rinitisa, rinitisa i sinusitisa.
15. Jedinjenje Formule (lb) prema patentnom zahtevu 1 ili Formule (Ic) prema patentnom zahtevu 2 ili kompozicija prema patentnom zahtevu 12 u kombinaciji sa nintedanibom ili pirfenidonom za upotrebu u lečenju fibrozn1H bolesti ili intersticijalnih bolesti pluć a odabranih od IPF-a, intersticijalne pneumonije gigantskih ć elija, sarkoidoze, cistične fibroze, sindroma respiratornog distresa, lekom izazvane fibroze pluć a, granulomatoze, silikoze, azbestoze, sistemskog skleroderma, virusno indukovane ciroze jetre odabrana od ciroze jetre izazvane hepatitisom C, ili bolesti kože sa fibroznom komponentom, npr. poželjno izabrani od skleroderme, sarkoidoze i sistemskog eritematoznog lupusa, ili za upotrebu u lečenju bolesti naznačeno time da je bolest izabrana od hiperproliferacije ć elije, na primer, raka, posebno raka pluć a ili za upotrebu u lečenju respiratornih poreme ć aja uključuju ć i HOBP (uključuju ć i hronični bronhitis i emfizem), astme, pedijatrijske astme, alergijskog rinitisa, rinitisa i sinusitisa.
[0114] Očekuje se da jedinjenja pronalaska imaju jedno ili više od sledeć 1H korisnih svojstava:
- Dobra inhibitorna aktivnost kinaza odabranih od VEGFR (npr. VEGFR1 i VEGFR2), FGFR i PDGFR;
- Dobra antifibrozna aktivnost npr. kako je određeno u in vivo modelima (npr. model fibroze bleomicina) kada se administriraju lokalno na pluć a;
- Odgovarajuć a fizička i hemijska svojstva i niska doza za lek, posebno onaj koji je namenjen da bude administriran lokalno u pluć a;
- Dobro vreme zadržavanja u pluć ima ili trajanje delovanja kada se primenjuje lokalno na plu ć a;
- Niska permeabilnost u PAMPA testu permeabilnosti;
- Dobro trajanje delovanja npr. mereno inhibicijom fosforilacije BDGFRβ indukovane PDGF-BB kod ljudi
ć elije fibroblasta plu ć a fetusa;
- Dobra sigurnost i podnošljivost pri lokalnoj primeni u pluć a;
- Niska oralna bioraspoloživost.
EKSPERIMENTALNA SEKCIJA
[0115] Skrać enice koje se koriste ovde su definisane u nastavku (Tabela 1). Sve skra ć enice koje nisu definisane imaju svoje opšte pr1Hvać eno značenje.
Tabela 1: Skraćenice
AcOH glacijalna sirć etna kiselina
aq vodeni
BAL bronhoalveolarni lavaž
br opšti
BEH etilenski premoš ć eni hibrid naelektrisani
Boc terc-butoksikarbonil
CSH površinski hibrid
konc koncentrisano
d dublet
δ hemijski pomak
DCM d1Hlorometan
DIAD diizopropil azodikarboksilat
DMF N,N-dimetilformamid
DMSO dimetil sulfoksid
(ES+) jonizacija elektrosprejom, pozitivni režim
(ES-) elektrosprej jonizacija, negativan režim
Et etil
EtOAc etil acetat
EtOH etanol
h sat (i)
HATU 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat Hunigova
baza N,N-diizopropiletilamin
M molar
m multiplet
(M+H)+ protonirani molekularni jon
(M-H)- deprotonirani molekularni jon
Me metil
MeCN acetonitril
MeOH metanol
MHz megaherc
min minuta
m/z odnos mase i naelektrisanja
NMR nuklearna magnetna rezonanca (spektroskopija)
p pentuplet
Ph fenil
Py piridin
q kvartet
rt sobna temperatura
HPLC tečna hromatografija visok1H performansi
s singlet
sat zasić enost
SAX čvrsto podržana anjonska razmena (smola)
SCX čvrsto podržana katjonska razmena (smola)
t triplet
<t>Bu terc-butil
THF tetrahidrofuran
TFA trifluorosirć etna kiselina
UV ultraljubičasto
tež težina
Primeri iz hemije
Opšte procedure
[0116] Svi početni materijali i rastvarači su dobijeni ili iz komercijaln1H izvora ili pripremljeni prema literaturi. Osim ako nije drugačije navedeno, sve reakcije su mešane. Organski rastvori su rutinski sušeni preko anhidrovanog magnezijum sulfata. Hidrogenacije su vršene na Thales H-cube protočnom reaktoru pod navedenim uslovima ili pod pritiskom u gasnom autoklavu (bombi).
[0117] Hromatografija na koloni je izvedena na prethodno upakovanim kertridžima od silicijum dioksida (230-400 mesh, 40-63 µm) korišć enjem naznačene količine. SCX je kupljen od Supelca i tretiran sa 1 M hlorovodoničnom kiselinom pre upotrebe. Osim ako nije drugačije navedeno, reakciona smeša koju treba prečistiti je prvo razblažena sa MeOH i zakiseljena sa nekoliko kapi AcOH. Ovaj rastvor je stavljen direktno na SCX i ispran sa MeOH. Željeni materijal je zatim eluiran ispiranjem sa 1% NH3u MeOH.
Preparativna tečna hromatografija visok1H performansi reverzne faze
[0118] Izvedeno koriš ć enjem UV detekcije na 215 i 254 nm sa Waters X-Select Prep-C18, 5 µm, 19x50 mm kolonom eluiranjem sa H2O-MeCN gradijentom koji sadrži 0,1 % tež/tež mravlje kiseline tokom 10 minuta (Metoda A ), ili Waters X-Bridge Prep-C18, 5 µm, 19x50 mm kolona eluiranjem sa H2O-MeCN gradijentom koji sadrži 0,1 % amonijum bikarbonata tokom 10 minuta (Metoda B).
Analitičke metode
Tečna hromatografija visok1H performansi reverzne faze
[0119] Metod 1: Waters XSelect CSH C182,5 µm (4,6 X 30 mm) na 40°C; brzina protoka 2,5-4,5 mL min<-1>eluiran sa H2O-MeCN gradijentom koji sadrži 0,1% tež/tež mravlje kiseline tokom 4 min koristeć i UV detekciju na 254 i 215 nm. Informacije o gradijentu: 0-3,00 min, poveć ano sa 95% H2O5% MeCN na 5% H2O-95% MeCN; 3,00-3,01 min, održavano na 5% H2O-95% MeCN, brzina protoka poveć ana na 4,5 mL min<-1>; 3,01-3,50 min, održano na 5% H20-95% MeCN; 3,50-3,60 min, vrać eno na 95% H2O-5% MeCN, brzina protoka smanjena na 3,50 mL min-<1>; 3,60-3,90 min, održano na 95% H2O-5% MeCN; 3,90-4,00 min, održavano na 95% H2O-5% MeCN, brzina protoka smanjena na 2,5 mL min<-1>
[0120] Metod 2: Waters XBridge BEH C18, 2,5 µm (4,6 X 30 mm) na 40°C; brzina protoka 2,5-4,5 mL min<-1>eluiran sa H2O-MeCN gradijentom koji sadrži 10 mM amonijum bikarbonata tokom 4 min koristeć i UV detekciju na 254 nm. Informacije o gradijentu: 0-3,00 min, poveć ano sa 95% H2O-5% MeCN na 5% H2O-95% MeCN; 3,00-3,01 min, održavano na 5% H2O-95% MeCN, brzina protoka poveć ana na 4,5 mL min-1; 3,01-3,50 min, održano na 5% H2O-95% MeCN; 3,50-3,60 min, vrać eno na 95% H2O-5% MeCN, brzina protoka smanjena na 3,50 mL min<-1>; 3,60-3,90 min, održano na 95% H2O-5% MeCN; 3,90-4,00 min, održavano na 95% H2O-5% MeCN, brzina protoka smanjena na 2,5 mL min<-1>.
<1>H NMR spektroskopija
[0121]<1>H NMR spektri su dobijeni na Bruker Avance III spektrometru na 400 MHz korišć enjem rezidualnog nedeuterisanog rastvarača kao referentnog i osim ako nije drugačije naznačeno, rađeni su u DMSO-de.
[0122] Sva hemijska imena su generisana korišć enjem CambridgeSoft ENotebook 12.0.
[0123] U sledeć im primerima, samo jedinjenja koja spadaju u obim Formule (Ib) i (Ic) se smatraju delom ovog pronalaska.
Primer 1: (Z)-metil 3-(((4-(metoksi(metil)karbamoil)fenil)amino) (fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Intermedijer A: (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0124]
[0125] U mešani rastvor metil 2-oksoindolin-6-karboksilata (1,00 g, 5,23 mmol) u anhidridu sirć etne kiseline (10,9 mL, 115 mmol) dodat je (trietoksimetil)benzen (3,55 mL, 15,7 mmol) i smeša je bila mešano na 110 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i dobijeni precipitat je sakupljen filtracijom. Talog je ispran heksanom (100 mL) i osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat kao bež čvrsta supstanca (1,66 g, 82%); R<t>2,61 min (Metod 1); m/z 366 (M+H)+ (ES+).
(Z)-metil 3-(((4-(metoksi(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0126]
2
[0127] Mešavina 4-amino-N-metoksi-N-metilbenzamida (32,6 mg, 0,181 mmol) i (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6- karboksilata (Intermedijer A) (60 mg, 0,16 mmol) u DMF (1 mL) je zagrevan na 80 °C tokom 18 h, a zatim ostavljen da se ohladi do sobne temperature. Piperidin (45.0 mL, 0.455 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 24 h. Reakciona smeša je podeljena između DCM (25 mL) i zasić enog rastvora NaHC03(25 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom (25 mL) i zatim koncentrovan pod redukovanim pritisak. Tako dobijeni sirovi proizvod je prečišć en preparativnom HPLC (Metoda A, 30-50% MeCN u vodi) da bi se dobilo naslovljeno jedinjenje (Z)-metil 3-(((4-(metoksi(metil)karbamoil)fenil)amino) (fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (21 mg, 28%); R<t>2,14 min (Metod 1); m/z 458 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ : 3,19 (3H, s), 3,48 (3H, s), 3,77 (3H, s), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,36-7,45 ( 3H, preklapanje m), 7,53 (2H, m), 7,56-7,68 (3H, preklapanje m), 11,01 (1H, s), 12,29 (1H, s).
Primer 2: (Z)-metil 5-metil-3-(((4-(N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)sulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)- 2-oksoindolin-6-karboksilat, format
Intermedijer B: metil 4-(2-metoksi-2-oksoetil)-2-metil-5-nitrobenzoat
[0128]
[0129] U mešani rastvor kalijum terc-butoksida (35,9 g, 320 mmol) u DMF (350 mL), u atmosferi azota na -20 °C, dodat je rastvor metil 2-metil-5-nitrobenzoata ( 25,0 g, 128 mmol) i metil 2-hloracetat (16,9 mL, 192 mmol) u DMF (300 mL) kap po kap tokom 40 minuta. Reakciona smeša je zagrejana na -10 °C tokom 2 h, a zatim izlivena na suspenziju led-HCl (900 g leda, 500 mL 35 tež% HCl). Smeša je ekstrahovana sa DCM (2 X 600 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (2 X 400 mL) i zatim upareni pod sniženim pritiskom. Tako dobijeni sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (SiO2, 330 g, 0-10% EtOAc u DCM, gradijentno eluiranje) da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova metil 4-(2-metoksi-2-oksoetil)-2-metil-5-nitrobenzoat kao narandžasti sirup (31,0 g, 89%); R<t>2,06 min (Metod 1); m/z 266 (M-H)-(ES-);<1>H NMR δ: 2,61 (3H, s), 3,62 (3H, s), 3,88 (3H, s), 4,12 (2H, s), 7,59 (1H, s), 8,51 (1H, s).
Intermedijer C: metil 5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0130]
[0131] U rastvor metil 4-(2-metoksi-2-oksoetil)-2-metil-5-nitrobenzoata (Intermedijer B) (23,0 g, 86,0 mmol) u sirć etnoj kiselini (301 mL, 5,25 mol) dodat je paladijum na ugljeniku [5 tež%, 58% vode, tip 87L] (3,30 g, 1,55 mmol). Smeša je hidrogenizovana na sobnoj temperaturi u atmosferi H2(5 bara) tokom 36 h, a zatim filtrirana kroz sloj celita. Filterski kolač je ispran sa EtOAc (500 mL) i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je rastvoren u vruć em refluksuju ć em MeOH (200 mL) i smeša je ohlađena do sobne temperature. Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana sa MeOH (200 mL) i osušena in vacuo da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova metil 5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat kao braon prah (7,00 g, 39%); R<t>1,48 min (Metod 1); m/z 206 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 2,45 (3H, s), 3,32 (2H, s), 3,81 (3H, s), 7,17 (1H, s), 7,22 (1H, s), 10,43 (1H, s).
Intermedijer D: (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0132]
[0133] U mešani rastvor metil 5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilata (Intermedijer C) (5,00 g, 24,4 mmol) u anhidridu sirć etne kiseline (50,6 mL, 536 mmol) dodat je (trietoksimetil)1 benzen (22.1 mL, 97.0 mmol) i smeša je mešana na 110 °C tokom 3 h. Posle toga, mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi 18 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je triturisan sa MeOH (50 mL). Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana sa MeOH (50 mL) i osušena u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6 -karboksilat kao žuti prah (4,50 g, 48%); R<t>2,70 min (Metod 1); m/z 380 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,35 (3H, t), 2,42 (3H, s), 2,58 (3H, s), 3,84 (3H, s), 4,01 (2H, q), 7,45-7,62 (5H, preklapanje m), 7,90 (1H, s), 8,64 (1H, s).
Intermedijer E: 2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)izoindolin-1,3-dion
[0134]
[0135] U rastvor 2-hidroksiizoindolin-1,3-diona (2,04 g, 12,5 mmol) i trifenilfosfina (3,27 g, 12,5 mmol) u THF (40 mL) na 0 °C dodat je 2-(4-metilpiperazin-1-il)etanol (1,50 mL, 10,4 mmol) kap po kap. Smeša je zatim mešana na 0 °C tokom 30 min pre nego što je DIAD (2,43 mL, 12,5 mmol) dodat u kapima. Reakcija je mešana još 30 min na 0 °C pre nego što je zagrejana do sobne temperature i mešana 16 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (75 mL). Organski sloj je ispran zasić enim rastvorom NaHC03(2 X 50 mL), a zatim osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom do približno 30 mL. Organski sloj je ohlađen na 0 °C i dodat je hladan 1M vodeni rastvor HCl (30 mL). Po završetku dodavanja, smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana 20 min. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ispran sa Et20 (2 X 30 mL). Posle hlađenja na 0 °C, vodeni sloj je bazifikovan sporim dodavanjem zasić enog rastvora NaHC03pre ekstrahovanja sa CHCl3(3 X 50 mL). Organski ekstrakti su kombinovani i zatim osušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova 2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)izoindolin-1,3-dion u obliku bež čvrste supstance (1,96 g, 63%);<1>H NMR δ: 1,84-2,47 (8H, preklapanje m), 1,98 (3H, s), 2,65 (2H, t), 4,24 (2H, t), 7,85-7,87 (4H, preklapanje m).
Intermedijer F: O-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)hidroksilamin
[0136]
2
[0137] U rastvor 2-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)izoindolin-1,3-diona (Intermedijer E) (1,88 g, 6,50 mmol) u MeOH/DCM (2:1, 15 mL) je dodat 25% vodeni rastvor hidrazina (2,45 mL, 19,5 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 h, zatim je razblažena sa Et20 (100 mL). Talog je uklonjen filtracijom, a rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u DCM (30 mL) i osušen preko Na2S04. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova O-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)hidroksilamin kao bledo žuto ulje (0,902 g, 83%);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,18-2,47 (8H, preklapanje m), 2,43 (2H, t), 3,60 (2H, t), 5,96 (2H, s).
Intermedijer G: terc-butil (4-(N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)sulfamoil)fenil)karbamat
[0138]
[0139] U suspenziju O-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)hidroksilamina (intermedijer F) (464 mg, 2,91 mmol) u DMF (15 mL) dodata je Hunigova baza (1,05 mL, 6,00). mmol) a zatim terc-butil (4-(hlorosulfonil)fenil)karbamat (500 mg, 1,71 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noć i. Ve ć ina rastvarača je uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u MeOH (50 mL) i filtriran kroz SCX kolonu (5 g), ispran sa MeOH (75 mL). Filtrat je odbačen pre nego što je kolona isprana sa 1% NH3u MeOH (75 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova terc-butil (4-(N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)sul-famoil)fenil)karbamat kao bleda bezbojna guma (552 mg, 70%); R<t>1,77 min (Metod 1); m/z 415 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1,49 (9H, s), 2,12 (3H, s), 2,16-2,46 (10H, preklapanje m), 3,93 (2H, t), 7,64 (2H, m), 7,74 (2H, m), 9,87 (1H, s), 10,19 (1H, br s).
Intermedijer H: 4-amino-N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)benzensulfonamid, di-trifluoroacetatna so
[0140]
[0141] U rastvor terc-butil (4-(N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)sulfamoil)fenil)karbamata (Intermedijer G) (334 mg, 0,806 mmol) u DCM (5 mL) je dodata TFA (1 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da se dobije 4-amino-N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)benzensulfonamid, di-trifluoroacetatna so kao bistro ulje (334 mg, 67%); R<t>1,01 min (Metod 2); m/z 315 (M+H)+ (ES+).
(Z)-metil 5-metil-3-(((4-(N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)sulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6 -karboksilat, format
[0142]
2
[0143] (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat (intermedijer D) (100 mg, 0,264 mmol) i 4-amino-N -(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)benzensulfonamid, di-trifluoroacetatna so (Intermedijer H) (172 mg, 0,316 mmol) su kombinovani u DMF (3 mL). Smeša je zagrevana na 80 °C tokom 24 h. Dodato je još 4-amino-N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)benzensulfonamida, di-trifluoroacetatne soli (50 mg) i reakciona smeša je ponovo zagrevana na 80 °C tokom 24 h. Dodan je piperidin (261 ml, 2,64 mmol) i smeša je mešana 1,5 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Materijal je stavljen u 10% MeOH u rastvoru DCM (20 mL) i ispran vodom (20 mL). Faze su razdvojene pomoć u patrona za razdvajanje faza. Sirovi proizvod je prečiš ć en fleš hromatografijom na koloni (Si02, 40 g, 0-10% MeOH u DCM, gradijent eluiranja). Proizvod sa kolonom je prečišć en preparativnom HPLC (Metod A, 20-50% MeCN u vodi) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (Z)-metil 5-metil-3-((4-(N-(2-(4-)) metilpiperazin-1-il)etoksi)sulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat, format kao svetlo žuta čvrsta supstanca (17,4 mg, 10%); R<t>1,64 min (Metod 1); m/z 606 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,15 (3H, s), 2,18-2,36 (8H, preklapanje m), 2,42 (2H, t), 3,76 (3H, s), 3,91 (2H, t), 5,63 (1H, s), 6,95 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,53-7,60 (2H, preklapanje m), 7,60-7,73 (5H, preklapanje m), 8,20 (1H, s), 10,27 (1H , br s), 10,94 (1H, s), 12,28 (1H, s).
Primer 3: (Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Intermedijer I: (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(terc-butoksikarbonil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0144]
[0145] Mešavina (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilata (Intermedijer A) (4,00 g, 11,0 mmol) i terc-butil 4-aminobenzoata (2,12 g, 11,0 mmol) u DMF (20 mL) je zagrevana na 100 °C tokom 16 h. Posle hlađenja do sobne temperature, talog je sakupljen filtracijom, ispran sa Et2O (100 mL) i osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-metil 1-acetil-3-((4-(terc-butoksikarbonil)fenil))amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (3,68 g, 59%); R<t>3,17 min (Metod 1); m/z 513 (M+H)+ (ES+).
Intermedijer J: (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)benzojeva kiselina, adukt trifluoroacetata
[0146]
[0147] U rastvor (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(terc-butoksikarbonil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilata (Intermedijer I ) (3,67 g, 7,16 mmol) u DCM (75 mL) dodata je TFA (5,52 mL, 71,6 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)benzojeva kiselina, trifluoracetat adukt kao žuta čvrsta supstanca (3,63 g, 84%); R<t>2,59 min (Metod 1); m/z 457 (M+H)+ (ES+).
Intermedijer K: 2-(2-(dimetilamino)etoksi)izoindolin-1,3-dion
[0148]
2
[0149] U rastvor 2-hidroksiizoindolin-1,3-diona (2,34 g, 14,3 mmol) i trifenilfosfina (3,75 g, 14,3 mmol) u THF (40 mL) na 0 °C dodat je 2-(dimetilamino)etanol (1,20 mL, 11,9 mmol) kap po kap. Smeša je zatim mešana na 0 °C tokom 30 min pre nego što je DIAD (2,78 mL, 14,3 mmol) dodat u kapima. Reakcija je mešana još 30 min na 0 °C pre nego što je zagrejana do sobne temperature i mešana 16 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (75 mL). Organski sloj je ispran zasić enim rastvorom NaHC03(2 X 50 mL), a zatim osušen preko Na2S04, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom do približno 30 mL. Organski sloj je ohlađen na 0 °C i dodat je hladan 1M vodeni rastvor HCl (20 mL). Po završetku dodavanja, smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana 20 min. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ispran sa Et20 (2 X 30 mL). Vodeni sloj je zatim ohlađen na 0 °C i bazifikovan sporim dodavanjem zasić enog rastvora NaHC03pre nego što je ekstrahovan sa CHCl3(3 X 50 mL). Organski ekstrakti su kombinovani i zatim sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova 2-(2-(dimetilamino)etoksi)izoindolin-1,3-dion kao žuto ulje (2,29 g, 78%);<1>H NMR (CDCl3) δ: 2,34 (6H, s), 2,76 (2H, t), 4,31 (2H, t), 7,71-7,77 (2H, preklapanje m), 7,80-7,86 (2H, preklapanje m).
Intermedijer L: 2-(Aminooksi)-N,N-dimetiletanamin, 2HCl
[0150]
[0151] U rastvor 2-(2-(dimetilamino)etoksi)izoindolin-1,3-diona (intermedijer K) (2,29 g, 9,78 mmol) u Me-OH/DCM (2:1, 30 mL) je dodat je 25% vodeni rastvor hidrazina (3.68 mL, 29.3 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 h. Smeša je razblažena sa Et20 (100 mL) i filtrirana kroz separator faza. Filtrat je degaziran pre nego što je dodat 4M HCl u dioksanu (10 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je triturisan sa Et2O (2 X 50 mL) da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova 2-(ami-nooksi)-N,N-dimetiletanamin, 2HCl kao bela čvrsta supstanca (891 mg, 50%);<1>H NMR δ: 2,79 (6H, s), 3,42 (2H, m), 4,45 (2H, m), 11,13 (4H, brs).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0152]
[0153] U rastvor (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)benzoeve kiseline, trifluoracetat adukt (Intermedijer J) (0,050 g, 0,088 mmol), 2-(aminooksi)-N,N-dimetiletanamin, 2HCl (intermedijer L) (0,031 g, 0,18 mmol) i HATU (0,067 g, 0,18 mmol) u DMF (2 mL) dodata je u kapima Hunigova baza (0,077 mL, 0,44 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h pre nego što je dodat piperidin (0,087 mL, 0,876 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h pre nego što je rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u MeOH (5 mL) i filtriran kroz SCX kolonu, ispran sa MeOH (100 mL). Filtrat je odbačen pre nego što je kolona isprana sa 1% NH3u MeOH (100 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišć en preparativnom HPLC (Metod B, 35-65% MeCN u vodi) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etoksi)karbamoil)fenil) amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (13
2
mg, 28%); R<t>1,80 min (Metod 2); m/z 501 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,20 (6H, s), 2,54 (2H, m), 3,79 (3H, s), 3,94 (2H, t), 5,90 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,20 (1H, dd), 7,45 (1H, d), 7,48-7,68 (7H, preklapanje m), 9,41 (1H, s), 10,73 (1H, s), 12,28 (1H, s).
Primer 4: (Z)-metil 3-(((4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0154]
[0155] U rastvor (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)benzojeve kiseline, trifluoracetat adukt (Intermedijer J) (100 mg, 0,18 mmol), O-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)hidroksilamin (Intermedijer F) (28 mg, 0,18 mmol) i HATU (73 mg, 0,19 mmol) u DMF (3 mL ) dodata je u kapima Hunigova baza (0,092 mL, 0,53 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 h. Doda se piperidin (0,17 mL, 1,75 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1,5 h pre nego što je već ina rastvarača uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između EtOAc (10 mL) i vode/zasić enog rastvora NaHC03(1:1, 10 mL). Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj ekstrahovan sa EtOAc (3 X 10 mL). Organski ekstrakti su kombinovani i zatim sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je ponovo rastvoren u MeOH (10 mL) i filtriran kroz SCX kolonu, ispran sa MeOH (100 mL). Filtrat je odbačen pre nego što je kolona isprana sa 1% NH3u MeOH (100 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (SiO2, 24 g, 10% MeOH u DCM, zatim 1% NH3u MeOH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (Z)-metil 3-(((4-((2-(4)) -metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino) (fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (64 mg, 64%); R<t>1,45 min (Metod 1); m/z 556 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,20-2,47 (8H, preklapanje m), 2,54 (2H, t), 3,77 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,49-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 11,03 (1H, s), 12,28 (1H, s).
Primer 5: (Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etoksi)karbamoil)-3-metilfenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Intermedijer M: (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(terc-butoksikarbonil)-3-metilfenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0156]
[0157] Mešavina (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilata (Intermedijat D) (1,11 g, 2,91 mmol) i terc-butil 4-amino-2-metilbenzoat (604 mg, 2.91 mmol) u DMF (9 mL) je zagrevan na 100 °C tokom 18 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, talog je sakupljen filtracijom, ispran sa Et2O (10 mL) i osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-metil 1-acetil-3-((4-(terc-butoksikarbonil)- 3-metilfenil)amino) (fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (1,05 g, 65%); R<t>3,28 min (Metod 1); m/z 541 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,49 (9H, s), 2,13 (3H, s), 2,33 (3H, s), 2,73 (3H, s), 3,77 (3H, s), 5,53 (1H, s), 6,74 (1H, s), dd), 6,92 (1H, m), 7,43-7,56 (3H, preklapanje m), 7,57-7,71 (3H, preklapanje m), 8,67 (1H, s), 11,87 (1H, s).
2
Intermedijer N: (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-5-metil-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)-2-metilbenzoeva kiselina, adukt trifluoroacetata
[0158]
[0159] U rastvor (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(terc-butoksikarbonil)-3-metilfenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6 -karboksilat (Intermedijer M) (1.0 g, 1.85 mmol) u DCM (14 mL) je dodat TFA (1.42 mL, 18.5 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-5-metil-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino) -2-metilbenzojeva kiselina, adukt trifluoroacetata kao žuta čvrsta supstanca (1,1 g, 97%); R<t>2,85 min (Metod 1); m/z 485 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,36 (3H, s), 2,73 (3H, s), 3,77 (3H, s), 5,53 (1H, s), 6,74 (1H, dd), 6,91 (1H, m), 7,48-7,56 (2H, preklapanje m), 7,55-7,73 (4H, preklapanje m), 8,68 (1H, s), 11,89 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etoksi)karbamoil)-3-metilfenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0160]
[0161] U rastvor (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-5-metil-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)-2-metilbenzoeve kiseline , trifluoroacetatni adukt (Intermedijer N) (400 mg, 0,668 mmol), 2-(aminooksi)-N,N-dimetiletan-amin, 2HCl (166 mg, 0,936 mmol) (Intermedijer L) i HATU (305 mg, 0,802 mmol) u DMF (20 mL) dodata je Hunigova baza (0,584 mL, 3,34 mmol) kap po kap. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Dodat je piperidin (0,662 mL, 6,68 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 h pre nego što je već ina rastvarača uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između 10% MeOH u DCM rastvoru (10 mL) i voda/zasić enog rastvora NaHCO (1:1, 10 mL). Slojevi su razdvojeni i vodeni ekstrahovani sa 10% MeOH u DCM rastvoru (3 X 10 mL). Organski ekstrakti su kombinovani i zatim filtrirani kroz SCX kolonu, isprani sa MeOH (50 mL). Filtrat je bio odbačen pre nego što je kolona isprana sa 1% NH3u MeOH (50 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (SiO2, 24 g, 0-10% MeOH u DCM, zatim 1% NH3u MeOH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (Z)-metil 3-(((4-((2-)) (dimetilamino)etoksi)karbamoil)-3-metilfenil)ami-no)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (100 mg, 28%); R<t>1,66 min (Metod 1); m/z 529 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,17 (9H, s), 2,44-2,48 (2H, preklapanje m), 3,75 (3H, s), 3,91 (2H, t), 5,58 (1H, s), 6,59 (1H, dd), 6,78 (1H, m), 7,08 (1H, d), 7,36 (1H, s), 7,53 (2H, m), 7,57-7,71 (3H, preklapanje m), 10,86 (1H, s) , 12,18 (1H, s).
Primer 6: (Z)-metil 5-metil-3-(((4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Intermedijer O: (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(terc-butoksikarbonil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0162]
[0163] Mešavina (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilata (intermedijat D) (1,00 g, 2,64 mmol) i terc-butil 4-aminobenzoat (509 mg, 2.64 mmol) u DMF (9 mL) je zagrevana na 100 °C tokom 18 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, talog je sakupljen filtracijom, ispran sa Et2O (10 mL) i osušen u vakuumu da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(terc-butoksikarbonil)fenil) )amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (1,20 g, 86%); Rt 3,23 min (Metod 1); m/z 527 (M+H)+ (ES+).
Intermedijer P: (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-5-metil-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)benzoeva kiselina, adukt trifluoroacetata
[0164]
[0165] U rastvor (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(terc-butoksikarbonil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilata (Intermedijer O) (1.20 g, 2.28 mmol) u DCM (14 mL) je dodat TFA (1.76 mL, 22.8 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 72 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-5-metil-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino) benzojeva kiselina, trifluoracetatni adukt kao žuta čvrsta supstanca (1,00 g, 72%); R<t>2,72 min (Metod 1); m/z 471 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,73 (3H, s), 3,78 (3H, s), 5,54 (1H, s), 7,04 (2H, m), 7,50 (2H, m), 7,57-7,76 ( 5H, preklapanje m), 8,68 (1H, s), 11,89 (1H, s), 12,89 (1H, s).
(Z)-metil 5-metil-3-(((4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6 -karboksilat
[0166]
1
[0167] U rastvor (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-5-metil-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)benzojeve kiseline, trifluoroacetatni adukt (Intermedijer P) (57 mg, 0,098 mmol), O-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)hidroksilamin (Intermedijer F) (16 mg, 0,098 mmol) i HATU (41 mg, 0,107 mmol) u DMF (3 mL) dodata je u kapima Hunigova baza (0,051 mL, 0,293 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Doda se piperidin (0,097 mL, 0,975 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h pre nego što je već ina rastvarača uklonjena pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između EtOAc (10 mL) i vode/zasić enog rastvora NaHC03(1:1, 10 mL). Slojevi su razdvojeni i vodeni ekstrahovani sa EtOAc (3 X 10 mL). Organski ekstrakti su kombinovani i zatim filtrirani kroz SCX kolonu, isprani sa MeOH (50 mL). Filtrat je odbačen pre nego što je kolona isprana sa 1% NH3u MeOH (50 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (SiO2, 12 g, 0-10% MeOH u DCM, zatim 1% NH3u MeOH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (Z)-metil 5-metil-3-(((4-) ((2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (36 mg, 64%); R<t>1,49 min (Metod 1); m/z 570 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,13 (3H, s), 2,17-2,35 (4H, preklapanje m), 2,34-2,47 (4H, preklapanje m), 2,54 (2H, t), 3,75 (3H, s ), 3,92 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,47-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,71 (3H, preklapanje m), 10,88 (1H, s), 11,52 (1H, s), 12,22 (1H, s).
Primer 7: (Z)-metil 3-(((4-((2-(4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5? -metil-2-oksoindolin-6-karboksilat, format
Intermedijer Q: 2-(2-bromoetoksi)izoindolin-1,3-dion
[0168]
[0169] 2-hidroksiizoindolin-1,3-dion (5,00 g, 30,7 mmol), trietilamin (9,40 mL, 67,4 mmol) i 1,2-dibromoetan (12,4 mL, 144 mmol) su kombinovani u DMF (32 mL) i mešani na sobnoj temperaturi 16 h. Talog je uklonjen filtracijom, ispran sa DMF (3 X 5 mL) i čvrsta supstanca je odbačena. Filtrat je razblažen vodom (250 mL) i proizvod je ekstrahovan sa EtOAc (50 mL). Organski sloj je ispran sa 1M vodenim rastvorom HCl (50 mL) i vodom (50 mL), osušen preko MgS04, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova 2-(2-bromoetoksi)izoindolin-1,3-dion kao krem čvrsta supstanca (6,28 g, 68%);<1>H NMR δ: 3,75 (2H, t), 4,45 (2H, t), 7,82-7,91 (4H, preklapanje m).
Intermedijer R: O-(2-bromoetil)hidroksilamin, HBr
[0170]
[0171] 2-(2-bromoetoksi)izoindolin-1,3-dion (intermedijar Q) (1,00 g, 3,70 mmol) je kombinovan sa konc. HBr (48 tež. % u vodi, 4,5 mL) i sirć etnom kiselinom (3 mL, 52,4 mmol). Smeša je zagrevana na 120 °C tokom 15 min. Reakciona smeša je ohlađena, precipitat je uklonjen filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova O-(2-bromoetil)hidroksilamin, HBr kao smeđa čvrsta supstanca (550 mg, 74%);<1>H NMR δ: 3,72 (2H, m), 4,28 (2H, m), 10,70 (3H, br s).
Intermedijer S: (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-((2-bromoetoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0172]
2
[0173] U rastvor (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-5-metil-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)benzoeve kiseline, adukt trifluoroacetata (Intermedijer P) (300 mg, 0,638 mmol), HATU (291 mg, 0,765 mmol) i Hunigove baze (334 mL, 1,91 mmol) u DMF (2 mL) je dodat O-(2-bromoetil)hidroksilamin (Intermedijer R) (211 mg, 0,956 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 min. Reakciona smeša je razblažena sa 10% MeOH u DCM i isprana zasić enim vodenim rastvorom amonijum hlorida. Organski sloj je osušen preko MgSO4i rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobio (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-((2-bromoetoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil) metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat; R<t>2,67 min (Metod 1); m/z 592/594 (M+H)+ (ES+). Sirovi materijal je direktno korišć en u slede ć em koraku pod pretpostavkom kvantitativnog prinosa.
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat, format
[0174]
[0175] (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-((2-bromoetoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat (Intermedijer S) (100 mg, 0,169 mmol) je kombinovan sa 2-(piperazin-1-il)etanolom (659 mg, 5,06 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa 10% MeOH u DCM (10 mL) i isprana vodom (5 mL). Vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa 10% MeOH u DCM (10 mL) i kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišć en preparativnom HPLC (Metoda A, 20-50% MeCN u vodi) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (Z)-metil 3-(((4-((2-(4-(2-hidroksietil)piperazin) -1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat, format kao žuta čvrsta supstanca (25 mg, 23%); R<t>1,86 min (Metod 2); m/z 600 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,30-2,50 (8H, preklapanje m), 2,36 (2H, t), 2,54 (2H, m), 3,47 (2H, t), 3,75 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,50-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,70 (4H, preklapanje m), 8,17 (1H , s), 10,89 (1H, s), 12,21 (1H, s).
Primer 8: (Z)-metil 2-okso-3-(fenil((4-((2-(piperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)metilen)indolin-6-karboksilat, 0,7 mravlja kiselina
[0176]
[0177] U rastvor (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)benzoeve kiseline, trifluoracetat adukt (Intermedijer J) (100 mg, 0,2 mmol), HATU (80 mg, 0,21 mmol) i Hunigove baze (0,092 ml, 0,526 mmol) u DMF (3 mL) je dodat O-(2-bromoetil)hidroksilamin, HBr (Intermedijer R) (27 mg, 0,123 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Dodato je još O-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)hidroksilamina, HBr (20 mg). Reakciona smeša je mešana još jedan sat. Polovina reakcione smeše je izvađena i dodata u 0,35 mL piperidina i reakciona smeša je mešana 16 h. Rastvarač je uparen, a ostatak je prečišć en preparativnom HPLC (Metoda A, 15-70% MeCN u vodi) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (Z)-metil 2-okso-3-(fenil(4-((2-). (piperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)metilen)indolin-6-karboksilat, 0,7 mravlja kiselina (1,6 mg, 2%). R<t>1,66 min (Metod 1); m/z 541 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,33-1,42 (2H, preklapanje m), 1,45-1,52 (4H, preklapanje m), 2,40-2,47 (4H, preklapanje m), 2,57 (2H, t), 3,77 (3H, s), 3,94 (3H, s), 3,94 (3H, s). , t), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,50-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,69 (3H, preklapanje m) ), 8,19 (0,7 H, s), 11,04 (1H, s), 12,27 (1 H, s).
Primer 9: (Z)-Metil 5-metil-3-(((4-(metil(2-(4-(2-(metilamino)-2-oksoetil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil) fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Intermedijer T: Formaldehid O-(2-hidroksietil) oksim
[0178]
[0179] Smeša 2-(aminooksi)etanola (3,16 g, 41,0 mmol) i paraformaldehida (1,23 g, 41,0 mmol) u EtOH (50 mL) je zagrevana pod refluksom 18 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova formaldehid O-(2-hidroksietil) oksim kao bezbojno ulje (3,56 g, 97%);<1>H NMR δ: 3,57 (2H, k), 4,05-3,96 (2H, m), 4,67 (1H, t), 6,57 (1H, d), 7,05 (1H, d).
Intermedijer U: 2-((metilamino)oksi)etanol
[0180]
[0181] U rastvor formaldehida O-(2-hidroksietil) oksima (Intermedijer T) (3,56 g, 40,0 mmol) u THF (25 mL) na 0 °C dodat je Py-BH3(6,05 ml, 59,9 mmol). 4M HCl u dioksanu (15 mL) je dodavan tokom 1 h. Smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana 24 h, zatim je polako razblažena sa MeOH (30 mL) i filtrirana kroz SCX kolonu, isprana sa MeOH (250 mL). Filtrat je odbačen pre nego što je kolona isprana sa 1% NH3u MeOH (250 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova 2-((metilamino)oksi)etanol kao bezbojno ulje (0,833 g, 18%);<1>H NMR δ: 2,51 (3H, m), 3,50 (2H, m), 3,57 (2H, m), 4,53 (1H, s), 6,45 (1H, m).
Intermedijer V: (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-((2-hidroksietoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metil-en)-5-metil-2-oksoindolin- 6-karboksilat
[0182]
[0183] U rastvor (Z)-4-(((1-acetil-6-(metoksikarbonil)-5-metil-2-oksoindolin-3-iliden)(fenil)metil)amino)benzojeve kiseline, trifluoroacetatni adukt (intermedijer P) (0,528 g, 0,903 mmol), 2-((metilamino)oksi)etanol (intermedijer U) (0,158 g, 1,36 mmol) i HATU (0,378 g, 0,99 mmol) u DMF (3 mmol) ) je dodata u kapima Hunigova baza (0,47 ml, 2,71 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između 10% MeOH u EtOAc (10 mL) i vode (10 mL). Slojevi su razdvojeni i vodeni ekstrahovani sa EtOAc (3 X 10 mL). Organski ekstrakti su kombinovani i zatim sušeni preko Na2S04, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (SiO2, 24 g, 0-5% MeOH u DCM, gradijent
4
eluiranja) da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-((2)) -hidroksietoksi) (metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (0,482 g, 88%); Rt 2,38 min (Metod 1); m/z 544 (M+H)+ (ES+).
Intermedijer W: (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-((2-bromoetoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metil-en)-5-metil-2-oksoindolin- 6-karboksilat
[0184]
[0185] U rastvor (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-((2-hidroksietoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil- 2-oksoindolin-6-karboksilat (Intermedijer V) (0,482 g, 0,887 mmol) u DCM (10 mL) na 0 °C dodat je trifenilfosfin (0,256 g, 0,975 mmol) i CBr4(0,397 g, mmol). Smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana 2 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (Si02, 24 g, 0-2% MeOH u DCM, gradijent eluiranja) da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-metil 1-acetil- 3-(((4-((2-bromoetoksi) (metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat kao narandžasta čvrsta supstanca (681 mg, kvant. .); R<t>2,80 min (Metod 2); m/z 606/608 (M+H)+ (ES+).
(Z)-Metil 5-metil-3-(((4-(metil(2-(4-(2-(metilamino)-2-oksoetil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino? ) (fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0186]
[0187] U smešu (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-((2-bromoetoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metil-5-metil- 2-oksoindolin-6-karboksilat (intermedijer W) (75 mg, 0,124 mmol) i N-metil-2-(piperazin-1-il)acetamid, 2HCl (142 mg, 0,618 mmol) u DMF (2 mL) dodata je Hunigova baza (0,259 ml, 1,48 mmol). Smeša je zagrevana na 60 °C tokom 5 h. Posle hlađenja do sobne temperature, dodat je piperidin (0,245 ml, 2,47 mmol) i smeša je zagrevana na 60 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između EtOAc (10 mL) i vode/zasić enog vodenog rastvora NaHCOs (1:1, 10 mL). Slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (3 X 10 mL). Organski ekstrakti su kombinovani i filtrirani direktno kroz SCX kolonu, isprani sa MeOH (50 mL). Filtrat je odbačen pre nego što je kolona isprana sa 1% NH3u MeOH (50 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (SiO2, 12 g, 0-10% 0,7 M amonijaka u MeOH u DCM, gradijent eluiranja) da bi se dobilo naslovno jedinjenje (Z)-metil 5- metil-3-(((4-(metil(2-(4-(2-(metilamino)-2-oksoetil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)- 2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (11 mg, 13%); R<t>1,58 min (Metod 1); m/z 641 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,14 (3H, s), 2,23-2,36 (8H, preklapanje m), 2,59 (3H, d), 2,87 (2H, m), 3,21 (3H, s), 3,31 (2H, s), 3,75 (3H, s), 3,78 (2H, t), 5,62 (1H, s), 6,86 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,42 (2H, m), 7,53 (2H, m), 7,58- 7,66 (3H, preklapanje m), 10,89 (1H, s), 12,22 (1H, s).
Primer 10: (Z)-Metil 5-metil-3-(((4-(metil(2-(4-(2-(metilamino)-2-oksoetil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil) fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Intermedijer X: terc-butil (4-(N-(2-hidroksietoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)karbamat
[0189] U rastvor 2-((metilamino)oksi)etanola (Intermedijer U) (0,116 g, 1,27 mmol) u DMF (3 mL) dodata je Hunigova baza (0,445 ml, 2,55 mmol), a zatim terc-butil ( 4-(hlorosulfonil)fenil)karbamat (0,371 g, 1,27 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je podeljen između DCM (10 mL) i 1M vodenog rastvora HCl (10 mL). Slojevi su razdvojeni i vodeni ekstrahovani sa DCM (2 X 10 mL). Organski ekstrakti su kombinovani i filtrirani kroz fazni separator. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (SiO2, 24 g, 0-70% EtOAc u heksanima, gradijent eluiranja) da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova terc-butil (4-(N-(2)-hidroksietoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)karbamat kao ružičasta guma, koja se očvrsnula stajanjem preko noć i (246 mg, 41%); R<t>1,97 min (Metod 2); m/z 347 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,49 (9H, s), 2,71 (3H, s), 3,54 (2H, k), 3,93 (2H, dd), 4,68 (1H, t), 7,69-7,76 (4H, preklapanje m), 9,97 (1H, s).
Intermedijer Y: 4-amino-N-(2-hidroksietoksi)-N-metilbenzensulfonamid, trifluoracetatna so
[0190]
[0191] U rastvor terc-butil (4-(N-(2-hidroksietoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)karbamata (intermedijer X) (202 mg, 0,583 mmol) u DCM (3 mL) je dodat TFA ( 0,449 ml, 5,83 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je ponovo rastvoren u MeOH (3 mL) i filtriran kroz SAX kolonu, ispran sa MeOH (75 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova 4-amino-N-(2-hidroksietoksi)-N-metilbenzensulfonamid, T trifluoroacetatna so kao narandžasta guma (0,23 g, 95%); R<t>1,13 min (Metod 2); m/z 247 (M+H)+ (ES+).
Intermedijer Z: (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(N-(2-hidroksietoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)amino)(fenil)metil-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0192]
[0193] Mešavina (E)-metil 1-acetil-3-(etoksi(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilata (intermedijat D) (0,231 g, 0,61 mmol) i 4-amino-N-(2-hidroksietoksi)-N-metilbenzensulfonamid, trifluoroacetatna so (Intermedijer Y) (0,219 g, 0,608 mmol) u DMF (3 mL) je tretirana Hunigovom bazom (0,106 ml, 0,608 mmol) i zagrejana 80 °C tokom 18 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (SiO2, 24 g, 0-2% MeOH u DCM, gradijent eluiranja) da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-metil 1-acetil-3- (((4-(N-(2-hidroksietoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat kao narandžasta guma (226 mg, 63 %); Rt 2,58 min (Metod 2); m/z 580 (M+H)+ (ES+).
Intermedijer AA: (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(N-(2-bromoetoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2- oksoindolin-6-karboksilat
[0194]
[0195] U rastvor (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(N-(2-hidroksietoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5- metil-2-oksoindolin-6-karboksilata (0,226 g, 0,390 mmol) (Intermedijer Z) u DCM (4 mL) dodat je trifenilfosfin (0,112 g, 0,429 mmol) i CBr4(41 mL, 0,429 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 h. Dodati su dodatni delovi PPh3(0,112 g, 0,429 mmol) i CBr4(41 mL, 0,429 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (SiO2, 12 g, 0-2% MeOH u DCM, gradijent eluiranja) da bi se dobilo jedinjenje iz podnaslova (Z)-metil 1-acetil- 3-(((4-(N-(2-bromoetoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (161 mg, 64 %); R<t>3,01 min (Metod 2); m/z 642/644 (M+H)+ (ES+).
(Z)-metil 3-(((4-(N-(2-((2-hidroksietil)(metil)amino)etoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5- metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0196]
[0197] Rastvor (Z)-metil 1-acetil-3-(((4-(N-(2-bromoetoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil -2-oksoindolin-6-karboksilata (Intermedijer AA) (77 mg, 0,120 mmol) i 2-(metilamino)etanol (0,096 ml, 1,20 mmol) u DMF (2 mL) su zagrevani na 60 °C tokom 16 h. Posle hlađenja do sobne temperature, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, a ostatak je podeljen između EtOAc (10 mL) i vode/zasić enog vodenog rastvora NaHCOs (1:1, 10 mL). Slojevi su razdvojeni i ekstrahovani sa EtOAc (3 X 10 mL). Organski ekstrakti su kombinovani i filtrirani kroz SCX kolonu, isprani sa MeOH (50 mL). Filtrat je odbačen pre nego što je kolona isprana sa 1% NH3u MeOH (50 mL). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišć en fleš hromatografijom na koloni (Si02, 12 g, 0-10% 0,7 M amonijaka u MeOH u DCM) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (Z)-metil 3-((( 4-(N-(2-((2-hidroksietil) (metil)amino)etoksi)-N-metilsulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (41 mg, 55%); R<t>1,72 min (Metod 1); m/z 595 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,14 (3H, s), 2,17-2,30 (4H, preklapanje m), 2,68 (3H, s), 3,43-3,54 (2H, preklapanje m), 3,76 (3H, s), 3,96-4,08 (2H , preklapanje m), 4,40 (1H, m), 5,65 (1H, s), 6,96 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,53-7,75 (7H, preklapanje m), 10,96 (1H, s), 12,29 (1H, s), (Nedostaje 3H-pretpostavljeno preklapanje sa rastvaračem).
[0198] Sledeć i primeri jedinjenja (Tabela 2) mogu biti pripremljeni sličnim sintetičkim metodama kao u prethodno navedenim primerima ili postupcima opisanim na drugom mestu:
Tabela 2: Dodatni primeri jedinjenja pronalaska
*Indeks šifre rute:
Ruta 1A: videti Primer 1 ili Primer 2
Ruta 1B: videti Primer 3, Primer 4, Primer 5 ili Primer 6
Ruta 1C: videti Primer 7 ili Primer 8
Ruta 1D: videti primer 9
Ruta 1E: videti primer 10
Primer br., struktura, naziv, šifra rute, LC-MS analiza i<1>H NMR spektralni podaci
Primer 11:
[0199]
[0200] R<t>2,43 min (Metod 1); m/z 494 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,66 (3H, s), 3,66 (3H, s), 3,78 (3H, s), 5,91 (1H, d), 6,98 (2H, d), 7,22 (1H, dd), 7,43 (1H, d), 7,53-7,60 (4H, preklapanje m), 7,60-7,72 (3H, preklapanje m), 11,08 (1H, s), 12,34 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-(N-metoksi-N-metilsulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1A
Primer 12:
[0201]
[0202] R<t>1,56 min (Metod 1); m/z 543 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,39-2,46 (4H, preklapanje m), 2,54 (2H, t), 3,50-3,58 (4H, preklapanje m), 3,77 (3H, s), 3,94 (2H, t), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, d), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,50-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 11,05 (1H, s), 11,59 (1H, s), 12,27 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-((2-morfolinoetoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)m etilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra puta*: 1B
Primer 13:
[0203]
(Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etoksi)karbamoil)-3-metilfenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat? Šifra rute*: 1B
Primer 14:
[0204] R<t>1,56 min (Metod 1); m/z 515 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,16 (9H, s), 2,47 (2H, m), 3,77 (3H, s), 3,90 (2H, t), 5,84 (1H, m), 6,57 (1H, dd), 6,77 (1H, d), 7,07 (1H, d), 7,20 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,52 (2H, m ), 7,55-7,68 (3H, preklapanje m), 11,02 (1H, s), 12,25 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-(metil(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
[0205] R<t>1,50 min (Metod 1); m/z 570 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,15-2,28 (8H, preklapanje m), 2,27 (2H, t), 3,21 (3H, s), 3,75-3,78 (5H, preklapanje m), 5,88 (1H, d ), 6,85 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,35-7,46 (3H, preklapanje m), 7,49-7,56 (2H, m), 7,55-7,69 (3H, preklapanje m), 11,03 (1H, s, s). ), 12,29 (1H, s).
Šifra rute*: 1B
Primer 15:
[0206]
[0207] R<t>1,66 min (Metod 1); m/z 537 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,12 (6H, s), 2,38-2,46 (2H, m), 3,78 (3H, s), 3,90 (2H, t), 5,89 (1H, d), 6,91-6,99 (2H, preklapanje m) , 7,22 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,53-7,71 (7H, m), 10,34 (1H, s), 11,08 (1H, s), 12,31 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-(N-(2-(dimetilamino)etoksi)sulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat šifra rute*: 1A
Primer 16:
[0208]
(Z)-metil 3-(((3-metil-4-((2-morfolinoetoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)m etilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat [0209] R<t>1,59 min (Metod 1); m/z 557 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,17 (3H, s), 2,40-2,45 (4H, preklapanje m), 2,54 (2H, t), 3,54-3,56 (4H, preklapanje m), 3,77 (3H, s), 3,95 (2H, t ), 5,84 (1H, d), 6,57 (1H, dd), 6,78 (1H, d), 7,08 (1H, d), 7,20 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,51-7,53 (2H, preklapanje m), 7,56-7,70 (3H, preklapanje m), 11,02 (1H, s), 11,31 (1H, s), 12,25 (1H, s).
Šifra rute*: 1B
Primer 17:
[0210]
[0211] R<t>1,46 min (Metod 1); m/z 570 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,17 (3H, s), 2,18 (3H, s), 2,28-2,49 (8H, preklapanje m), 2,55 (2H, t), 3,77 (3H, s), 3,93 (2H, t), 5,84 (1H, d), 6,57 (1H, dd), 6,78 (1H, d), 7,08 (1H, d), 7,20 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,47-7,56 (2H, preklapanje m) , 7,55-7,69 (3H, preklapanje m), 11,03 (1H, s), 11,25 (1H, s), 12,26 (1H, s). (Z)-metil 3-(((3-metil-4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6? -karboksilat
Šifra rute*: 1B
Primer 18:
[0212]
4
(Z)-metil 3-(((3-metil-4-(metil(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
Primer 19:
[0213] R<t>1,53 min (Metod 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,06 (3H, s), 2,11 (3H, s), 2,08-2,28 (10H, preklapanje m), 3,18 (3H, s), 3,64-3,72 (2H, preklapanje m), 3,77 (3H, s ), 5,87 (1H, d), 6,59 (1H, dd), 6,79 (1H, d), 7,02 (1H, d), 7,20 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,51 (2H, m) , 7,55-7,68 (3H, preklapanje m), 11,01 (1H, s), 12,25 (1H, s).
(Z)-Metil 3-(((4-((3-(dimetilamino)propoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
Primer 20:
[0214] R<t>1,54 min (Metod 1); m/z 515 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,69 (2H, m), 2,11 (6H, s), 2,31 (2H, t), 3,77 (3H, s), 3,84 (2H, t), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,50-7,55 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 11,03 (1H, s), 12,28 (1H, s) .
(Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etoksi)karbamoil)-3-fluorofenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
Primer 21:
[0215] R<t>1,55 min (Metod 1); m/z 519 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,17 (6H, s), 2,46-2,48 (2H, preklapanje m), 3,78 (3H, s), 3,90 (2H, t), 5,89 (1H, d), 6,58 (1H, d), 6,72 -6,80 (1H, preklapanje m), 7,22 (1H, dd), 7,35-7,44 (2H, preklapanje m), 7,51-7,58 (2H, preklapanje m), 7,59-7,72 (3H, m), 11,06 (1H, s), 7,51-7,58 (2H, preklapanje m), 7,59-7,72 (3H, m), 11,06 (1H, s). ), 12,21 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-(metoksi(1-metilpiperidin-4-il)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
Primer 22:
[0216] R<t>1,57 min (Metod 1); m/z 541 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,64-1,69 (2H, preklapanje m), 1,82-1,87 (4H, preklapanje m), 2,14 (3H, s), 2,79-2,84 (2H, preklapanje m), 3,45 (3H, s), 3,77 ( 3H, s), 3,80-3,90 (1H, preklapanje m), 5,89 (1H, d), 6,82-6,92 (2H, preklapanje m), 7,21 (1H, dd), 7,30-7,38 (2H, preklapanje m), 7,42 (1H, d), 7,50-7,53 (2H, preklapanje m), 7,54-7,67 (3H, preklapanje m), 11,02 (1H, s), 12,26 (1H, s).
[0217] R<t>1,58 min (Metod 1); m/z 529 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR (glavni rotamer) δ: 1,97 (6H, s), 2,17 (3H, s), 3,17 (3H, s), 3,72-3,79 (5H, preklapanje m), 5,86 (1H, d), 6,60 (1H, dd), 6,80 (1H, d), 7,03 (1H, d), 7,20 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,46-7,54 (2H, preklapanje m), 7,55-7,69 (3H, preklapanje m), 10,99 (1H, s), 12,23 (1H, s). (Nedostaje 2H-pretpostavljeno preklapanje sa rastvaračem).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etoksi)(metil)karbamoil)-3-metilfenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1B
Primer 23:
[0218]
[0218] R<t>1,57 min (Metod 1); m/z 515 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,09 (6H, s), 2,43 (2H, t), 3,46 (3H, s), 3,66 (2H, t), 3,77 (3H, s), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,37 (2H, m), 7,42 (1H, d), 7,51 (2H, m), 7,55-7,67 (3H, preklapanje m), 11,02 (1H, s), 12,27 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etil)(metoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat? Šifra rute*: 1B
Primer 24:
[0220]
(Z)-metil 3-(((4-(5-metil-1,2,5-oksadiazepan-2-karbonil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
[0221] Rt 1,55 min (Metod 1); m/z 513 (M+H)+ (ES+); 1H NMR 5: 2,33 (3H, s), 2,59-2,61 (2H, preklapanje m), 2,68-2,71 (2H, preklapanje m), 3,77 (3H, s), 3,74-3,79 (4H, preklapanje m), 5,87 (1H, d), 6,85 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,37-7,45 (3H , preklapanje m), 7,51 (2H, m), 7,56-7,70 (3H, preklapanje m), 11,00 (1H, s), 12,29 (1H, s).
Primer 25:
[0222]
[0223] R<t>1,70 min (Metod 1); m/z 606 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,30-2,48 (6H, preklapanje m), 2,67 (3H, s), 3,78 (3H, s), 4,00 (2H, t), 5,90 (1H, d), 6,96 (2H, m), 7,23 (1H, dd), 7,43 (1H, d), 7,58 (2H, m), 7,61-7,75 (5H, preklapanje m), 11,09 (1H, s), 12,37 (1H, s). (Nedostaje 7H-pretpostavljeno preklapanje sa rastvaračem).
(Z)-metil 3-(((4-(N-metil-N-(2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)sulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin? -6-karboksilat
Šifra rute*: 1A
Primer 26:
[0224]
4
(Z)-metil 3-(((4-((2-(dimetilamino)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
[0225] R<t>1,95 min (Metod 1); m/z 515 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,13 (3H, s), 2,17 (3H, s), 2,53 (2H, m), 3,75 (3H, s), 3,93 (2H, t), 5,58 (1H, s), 6,58 (1H, dd), 6,79 (1H, d), 7,08 (1H, d), 7,36 (1H, s ), 7,52 (2H, m), 7,57-7,71 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 11,31 (1H, s), 12,19 (1H, s).
Primer 27:
[0226]
(Z)-Metil 3-(((4-((3-(dimetilamino)propoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
[0227] R<t>2,00 min (Metod 1); m/z 529 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,70 (2H, m), 2,09-2,18 (9H, preklapanje m), 2,34 (2H, t), 3,75 (3H, s), 3,84 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,88 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,48-7,57 (4H, preklapanje m), 7,58-7,70 (3H, preklapanje m), 10,88 (1H, s), 12,22 (1H, s).
Primer 28:
[0228]
(Z)-metil 5-metil-3-(((3-metil-4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin? -6-karboksilat
Šifra rute*: 1B
Primer 29:
[0229] R<t>1,93 min (Metod 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,18 (6H, s), 3,75 (3H, s), 3,91 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,49-7,57 (4H, preklapanje m), 7,57-7,70 (3H, preklapanje m), 10,89 (1H, s), 12,22 (1H, s), (Nedostaje 10H-pretpostavljeno preklapanje sa rastvaračem).
[0230] R<t>2,02 min (Metod 1); m/z 543 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,69 (2H, m), 2,12 (6H, s), 2,13 (3H, s), 2,16 (3H, s), 2,31 (2H, t), 3,75 (3H, s), 3,85 (2H, t), 5,58 (1H, s), 6,59 (1H, dd), 6,79 (1H, d), 7,07 (1H, d), 7,36 (1H, s), 7,52 (2H, dd), 7,57-7,71 (3H , preklapanje m), 10,87 (1H, s), 12,18 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-((3-(dimetilamino)propoksi)karbamoil)-3-metilfenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oks-indolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1B
Primer 30:
[0231]
(Z)-metil 5-metil-3-(((4-(((1-metilpiperidin-4-il)oksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
Primer 31:
[0232] R<t>1,96 min (Metod 1); m/z 541 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1.49-1.61 (2H, preklapanje m), 1.78-1.87 (2H, preklapanje m), 1.96-2.06 (2H, preklapanje m), 2.13 (6H, s), 2.55-2.64 (2H, preklapanje) , 3,75 (3H, s), 3,82 (1H, m), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,50-7,56 (4H, preklapanje m), 7,58-7,69 ( 3H, preklapanje m), 10,89 (1H, s), 11,36 (1H, s), 12,22 (1H, s).
(Z)-metil 5-metil-3-(((3-metil-4-(((1-metilpiperidin-4-il)oksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin? -6-karboksilat
Šifra rute*: 1B
4
[0233] R<t>1,99 min (Metod 1); m/z 555 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,50-1,62 (2H, preklapanje m), 1,77-1,89 (2H, preklapanje m), 1,97-2,07 (2H, preklapanje m), 2,10-2,18 (9H, preklapanje m), 2,53-2, 6,32-2. preklapanje m), 3,75 (3H, s), 3,82 (1H, m), 5,58 (1H, s), 6,58 (1H, dd), 6,79 (1H, d), 7,08 (1H, d), 7,36 (1H, s), 7,52 (2H, m), 7,57-7,71 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 11,13 (1H, s), 12,19 (1H, s).
Primer 32:
[0234]
(Z)-metil 3-(((3-fluoro-4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin -6-karboksilat
Šifra rute*: 1B
Primer 33:
[0235] R<t>1,86 min (Metod 1); m/z 588 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,10-2,15 (6H, preklapanje m), 2,19-2,46 (8H, preklapanje m), 2,52-2,55 (2H, preklapanje m), 3,76 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,631H, s), 6,59 (1H, dd), 6,77 (1H, dd), 7,36 (1H, s), 7,40 (1H, t), 7,51-7,59 (2H, preklapanje m), 7,61-7,72 (3H, preklapanje m), 10,92 (1H, s), 12,15 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((3-fluoro-4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6 -karboksilat
Šifra rute*: 1B
[0236] R<t>1,73 min (Metod 1); m/z 574 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,16-2,47 (8H, preklapanje m), 2,51-2,56 (2H, preklapanje m), 3,78 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,89 (1H, d ), 6,57 (1H, d), 6,76 (1H, d), 7,22 (1H, dd), 7,35-7,44 (2H, preklapanje m), 7,51-7,58 (2H, preklapanje m), 7,58-7,70 (3H, preklapanje m), 11,06 (1H, s), 12,21 (1H, s).
Primer 34:
[0237]
4
(Z)-metil 3-(((4-(metoksi(1-metilpiperidin-4-il)karbamoil)-3-metilfenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1B
Primer 35:
[0238] R<t>1,69 min (Metod 1); m/z 569 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1.57-1.69 (2H, preklapanje m), 1.74-1.89 (4H, preklapanje m), 2.06 (3H, s), 2.10-2.18 (6H, preklapanje m), 2.73-2.84 (2H, preklapanje m) 3,35-3,45 (3H, br s), 3,75 (3H, s), 5,64 (1H, s), 6,63 (1H, d), 6,83 (1H, s), 7,01 (1H, d), 7,36 (1H, s), 7,49 (2H, m), 7,54-7,67 (3H, preklapanje m), 10,85 (1H, s), 12,13 (1H, s). (Nedostaje 1H-pretpostavlja se da je prikriven rastvaračem).
(Z)-metil 3-(((4-(metoksi(1-metilpiperidin-4-il)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1B
[0239] R<t>1,67 min (Metod 1); m/z 555 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,61-1,69 (2H, preklapanje m), 1,74-1,89 (4H, preklapanje m), 2,13 (3H, s), 2,14 (3H, s), 2,74-2,83 (2H, preklapanje m), 3,45 ( 3H, s), 3,75 (3H, s), 3,85 (1H, m), 5,64 (1H, s), 6,89 (2H, d), 7,31-7,39 (3H, preklapanje m), 7,51 (2H, m), 7,56-7,68 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 12,20 (1H, s).
Primer 36:
[0240]
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-etilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6 -karboksilat
Šifra rute*: 1B
Primer 37:
[0241] R<t>1,54 min (Metod 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 0,97 (3H, m), 2,13 (3H, s), 2,22-2,48 (10H, preklapanje m), 2,54 (2H, t), 3,75 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,49-7,56 (4H, preklapanje m), 7,58-7,69 (3H, preklapanje m), 10,89 (1H, s), 11,57 (1H , br s), 12,22 (1H, s).
4
(Z)-metil 3-(((4-(1,2-oksazetidin-2-karbonil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1C
Primer 38:
[0242] R<t>2,35 min (Metod 1); m/z 456 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 3,77 (3H, s), 4,05-4,12 (2H, preklapanje m), 4,40-4,47 (2H, preklapanje m), 5,88 (1H, d), 6,85 (2H, m), 7,21 (1H, dd ), 7,39-7,54 (5H, preklapanje m), 7,55-7,66 (3H, preklapanje m), 11,02 (1H, s), 12,26 (1H, s).
[0243] R<t>1,30 min (Metod 1); m/z 570 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,60 (1H, m), 1,83 (1H, m), 2,13 (6H, s), 2,36 (1H, m), 2,57-2,79 (6H, preklapanje m), 3,77 (3H, s), 3,91 (2H, t), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,50-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 8,20 (1H, s), 11,04 (1H, s), 12,28 (1H, s).
(S,Z)-metil 3-(((4-((2-(3-(dimetilamino)pirolidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin- 6-karboksilat, format
Šifra rute*: 1C
Primer 39:
[0244]
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin- 6-karboksilat
Šifra rute*: 1C
Primer 40:
[0245] R<t>1,41 min (Metod 1); m/z 586 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,30-2,47 (8H, preklapanje m), 2,53 (2H, m), 3,47
4
(2H, t), 3,77 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,50-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,70 (3H, preklapanje m), 8,23 (1H, s), 11,04 (1H , s), 12,28 (1H, s). (Nedostaje 2H-pretpostavlja se da je prikriven rastvaračem).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-hidroksipiperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1C
[0246] R<t>1,59 min (Metod 1); m/z 557 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,27-1,44 (2H, preklapanje m), 1,60-1,76 (2H, preklapanje m), 2,00-2,19 (2H, preklapanje m), 2,54-2,58 (2H, preklapanje m), 2,71-2, 2,71-2. preklapanje m), 3,43 (1H, m), 3,61 (1H, m), 3,77 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,86 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,20 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,48-7,56 (4H, preklapanje m), 7,56-7,68 (3H, preklapanje m), 8,20 (1H, s), 11,03 (1H, s), 12,28 (1H, s) .
Primer 41:
[0247]
(Z)-metil 3-(((4-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etoksi)karbamoil)fenil)amin o)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1C
Primer 42:
[0248] R<t>1,75 min (Metod 1); m/z 591 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,82-2,89 (2H, m), 3,05-3,17 (8H, preklapanje m), 3,77 (3H, s), 3,97 (2H, t), 5,87 (1H, d), 6,87 (2H, m) , 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,50-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 11,03 (1H, s), 11,63 (1H, s), 12,28 (1H, s).
(Z)-metil 2-okso-3-(((4-((2-(3-oksopiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)indolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1C
Primer 43:
[0249] R<t>1,47 min (Metod 1); m/z 556 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,60-2,67 (4H, preklapanje m), 3,02 (2H, s), 3,09-3,17
4
(2H, preklapanje m), 3,77 (3H, s), 3,95 (2H, t), 5,87 (1H, d ), 6,86 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,49-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 7,69-7,75 (1H, m ), 11,03 (1H, s), 11,58 (1H, s), 12,28 (1H, s).
[0250] R<t>1,55 min (Metod 1); m/z 566 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,59-2,00 (4H, preklapanje d), 2,52-2,96 (6H, preklapanje m), 3,77 (3H, s), 3,98 (2H, m), 5,87 (1H, d), 6,87 (2H, m ), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,49-7,57 (4H, preklapanje m), 7,57-7,70 (3H, preklapanje m), 8,13 (0,5H, s), 11,02 (1H, d) , 12,28 (1H, s). (Nedostaje 1H-pretpostavlja se da je prikriven rastvaračem).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-cijanopiperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat, hemiformat
Šifra rute*: 1C
Primer 44:
[0251]
(Z)-metil 3-(((4-((2-((2S,6R)-2,6-dimetilpiperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoin – dolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1C
Primer 45:
[0252] R<t>1,59 min (Metod 1); m/z 569 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: (mešavina rotamera): 0,80 i 0,87 (3H, 2 k d), 0,92-1,67 (9H, preklapanje m), 1,74-1,98 (2H, preklapanje m), 3,77 (3H, s), 5,85 i 5,851H, 2 x d), 6,83 (2H, d), 6,92-7,19 (1H, m), 7,06 (1H, m), 7,43 (2H, m), 7,52 (2H, m), 7,54-7,68 (3H, preklapanje) m), 8,45 (1H, s), 11,03 (1H, m), 12,28 (1H, m), (Nedostaje 4H-pretpostavlja se da je prikriven rastvaračem).
(Z)-metil-3-(((4-((2-((2-hidroksietil)(metil)amino)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1C
[0253] R<t>1,40 min (Metod 1); m/z 531 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,22 (3H, s), 2,45 (2H, t), 2,62 (2H, t), 3,45 (2H, t), 3,77 (3H, s), 3,91 (2H, t), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,20 (1H, m), 7,42 (1H, d), 7,47-7,57 (4H, preklapanje m), 7,57-7,70 (3H, preklapanje m), 8,32 (1H, s) , 11,03 (1H, s), 12,28 (1H, s).
Primer 46:
[0254]
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-(2-metoksietil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin- 6-karboksilat, format
Šifra rute*: 1C
Primer 47:
[0255] R<t>1,44 min (Metod 1); m/z 600 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,31-2,47 (8H, preklapanje m), 2,51-2,56 (2H, preklapanje m), 3,22 (3H, s), 3,40 (2H, t), 3,77 (3H, s), 3,92 (2H, t ), 5,87 (1H, d), 6,86 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,48-7,56 (4H, preklapanje m), 7,56-7,69 (3H, preklapanje m), 8,19 (1H, s), 11,03 (1H, s), 12,28 (1H, s). (Nedostaje 2H-pretpostavlja se da je prikriven rastvaračem).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat, format
Šifra rute*: 1C
[0256] R<t>1,20 min (Metod 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,25-1,45 (2H, preklapanje m), 1,68-1,78 (2H, preklapanje m), 1,88-2,03 (2H, preklapanje m), 2,27 (6H, s), 2,51-2,59 (3H), preklapanje , 2,92-2,99 (2H, preklapanje m), 3,77 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,86 (1H, d), 6,85 (2H, m), 7,20 (1H, dd), 7,42 (1H, m), 7,49-7,68 (7H, preklapanje m), 8,22 (1H, s), 11,04 (1H, s), 12,28 (1H, s).
1
Primer 48:
[0257]
(Z)-metil 3-(((4-(N-(2-(dimetilamino)etoksi)sulfamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat? Šifra rute*: 1A
Primer 49:
[0258] Rt 1,65 min (Metod 1); m/z 551 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,09 (6H, s), 2,14 (3H, s), 2,39 (2H, t), 3,76 (3H, s), 3,89 (2H, t), 5,64 (1H, s), 6,96 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,52-7,73 (7H, preklapanje m), 8,20 (1H, s), 10,94 (1H, s), 12,25 (1H, s).
(Z)-metil 5-metil-2-okso-3-(fenil((4-((2-(piperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)metilen)indolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1C
Primer 50:
[0259] R<t>1,73 min (Metod 1); m/z 555 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,33-1,39 (2H, preklapanje m), 1,42-1,52 (4H, preklapanje m), 2,13 (3H, s), 2,34-2,44 (4H, preklapanje m), 2,53 (2H, m), 3,753H, s), 3,92 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,49-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,69 (3H, preklapanje) m), 8,20 (1H, s), 10,89 (1H, s), 12,21 (1H, s).
[0260] R<t>1,33 min (Metod 1); m/z 598 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,30-1,43 (2H, preklapanje m), 1,68-1,76 (2H, preklapanje m), 1,89-2,01 (2H, preklapanje m), 2,10-2,19 (5H, preklapanje m), 2,22 (6H) , 2,90-2,98 (2H, preklapanje m), 3,75 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,49-7,57 ( 4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 8,22 (1H, s), 10,89 (1H, s), 12,22 (1H, s). (Nedostaje 1H-pretpostavlja se da je prikriven rastvaračem).
2
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-(dimetilamino)piperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat, format
Šifra rute*: 1C
Primer 51:
[0261]
(S,Z)-metil 3-(((4-((2-(3-(dimetilamino)pirolidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil- 2-oksoindolin-6-karboksilat, format
Šifra rute*: 1C
Primer 52:
[0262] R<t>1,32 min (Metod 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,59 (1H, m), 1,82 (1H, m), 2,08-2,17 (9H, preklapanje m), 2,35 (1H, m), 2,55-2,79 (5H, preklapanje m), 3,75 (3H, s preklapanjem), 2,35 (1H, m), 2,55-2,79 (5H, preklapanje m), 3,75 (3H, s). ), 3,91 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,49-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,70 (3H, preklapanje m), 8,20 (1H, s), 10,89 (1H, s),12,22 (1H, s). (Nedostaje 1H- pretpostavlja se da je zamagljen rastvaračem).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-metoksipiperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6 -karboksilat
Šifra rute*: 1C
[0263] R<t>2,05 min (Metod 2); m/z 585 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,30-1,43 (2H, preklapanje m), 1,75-1,83 (2H, preklapanje m), 2,06-2,16 (5H, preklapanje m), 2,53 (1H, m), 2,68-2,76 (2H), preklapanje , 3,07-3,17 (2H, preklapanje m), 3,21 (3H, s), 3,75 (3H, s), 3,91 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,49-7,57 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 8,34 (1H, s), 10,89 (1H, s), 12,21 (1H, s).
Primer 53:
[0264]
(Z)-metil 5-metil-2-okso-3-(fenil((4-((3-(piperidin-1-il)propoksi)karbamoil)fenil)amino)metilen)indolin e-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
Primer 54:
[0265] R<t>1,77 min (Metod 1); m/z 569 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,32-1,41 (2H, preklapanje m), 1,43-1,53 (4H, preklapanje m), 1,72 (2H, m), 2,14 (3H, s), 2,26-2,40 (6H, preklapanje m), 3,76 (3H, m preklapanje). , s), 3,85 (2H, t), 5,62 (1H, s), 6,88 (2H, m), 7,37 (1H, s), 7,48-7,57 (4H, preklapanje m), 7,59-7,69 (3H, preklapanje m) ), 10,89 (1H, s), 12,22 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-hidroksipiperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6 -karboksilat, format
Šifra rute*: 1C
[0266] R<t>1,60 min (Metod 1); m/z 571 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,27-1,40 (2H, preklapanje m), 1,48 (1H, m), 1,60-1,70 (2H, preklapanje m), 1,81 (1H, m), 2,07 (1H, preklapanje m), 2,13 (3H, s), 2,70-2,84 (2H, preklapanje m), 3,10 (1H, m), 3,41 (1H, m), 3,67 (1H, m), 3,76 (3H, s), 3,91 (2H, t), 5,61 ( 1H, s), 6,85 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,47-7,56 (4H, preklapanje m), 7,58-7,67 (3H, preklapanje m), 8,31 (2H, s), 10,89 (1H, s), 12,22 (1H, s).
Primer 55:
[0267]
(Z)-metil 3-(((4-((3-(4-metoksipiperidin-1-il)propoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen e)-5-metil-2-ok-oindolin- 6-karboksilat
Šifra rute*: 1B
4
Primer 56:
[0268] R<t>1,74 min (Metod 1); m/z 599 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,31-1,43 (2H, preklapanje m), 1,70 (2H, m), 1,76-1,83 (2H, preklapanje m), 1,96-2,09 (2H, preklapanje m), 2,14 (3H, s), 2,36 2H, t), 2,60-2,70 (2H, preklapanje m), 3,14 (1H, m), 3,22 (3H, s), 3,76 (3H, s), 3,84 (2H, t), 5,62 (1H, s), 6,88 (2H, m), 7,37 (1H, s), 7,48-7,57 (4H, preklapanje m), 7,59-7,69 (3H, preklapanje m), 10,89 (1H, s), 12,22 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-((2-((2-hidroksietil)(metil)amino)etoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1D
[0269] R<t>1,61 min (Metod 1); m/z 559 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,06 (3H, s), 2,14 (3H, s), 2,32-2,38 (4H, preklapanje m), 3,22 (3H, s), 3,39 (2H, m), 3,76 (2H, m), 3,76 (3H, s), 4,26 (1H, m), 5,62 (1H, s), 6,86 (2H, m), 7,37 (1H, s), 7,44 (2H, m), 7,52 (2H, m), 7,57- 7,69 (3H, preklapanje m), 10,84 (1H, s), 12,22 (1H, s).
Primer 57:
[0270]
(Z)-metil 5-metil-3-(((4-(metil(2-(piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1D
Primer 58:
[0271] R<t>1,51 min (Metod 1); m/z 570 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,14 (3H, s), 2,26-2,34 (6H, preklapanje m), 2,77-2,79 (4H, preklapanje m), 3,21 (3H, s), 3,75 (3H, s), 3,79 (2H, t ), 5,61 (1H, s), 6,86 (2H, m), 7,37 (1H, s), 7,43 (2H, m), 7,52 (2H, m), 7,57-7,69 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H , s), 12,22 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il)etoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)m etilen)-5- metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1D
Primer 59:
[0272] R<t>1,56 min (Metod 1); m/z 614 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,14 (s, 3H), 2,17-2,44 (12H, preklapanje m), 3,21 (3H, s), 3,48 (2H, m), 3,70-3,83 (5H, preklapanje m), 4,36 (1H, m), 3,48 (2H, m), 3,70-3,83 (5H, m preklapanje). ), 5,62 (1H, s), 6,86 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,42 (2H, m), 7,52 (2H, m), 7,56-7,69 (3H, preklapanje m), 10,88 (1H , s), 12,22 (1H, s).
[0273] R<t>1,42 min (Metod 1); m/z 582 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,38 (1H, m), 1,53 (1H, m), 2,14 (3H, s), 2,21 (1H, m), 2,42-2,54 (2H, preklapanje m), 2,58-2,70 (2H, preklapanje m) ), 2,85 (1H, m), 3,18 (1H, m), 3,21 (3H, s), 3,44 (1H, m), 3,70 (2H, t), 3,75 (3H, s), 5,61 (1H, s) , 6,86 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,45 (2H, m), 7,53 (2H, m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 12,22 (1H, br.s).
(Z)-metil 3-(((4-((2-((1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)etoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino) (fenil)m etilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1D
Primer 60:
[0274]
(Z)-metil 3-(((4-((2-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-il)etoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)m etilen) - 5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1D
Primer 61:
[0275] R<t>1,47 min (Metod 1); m/z 596 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,56-1,65 (2H, preklapanje m), 1,66-1,75 (2H, preklapanje m), 2,13 (3H, s), 2,22 (2H, t), 2,64-2,70 (2H, preklapanje m), 2,892,94 (2H, preklapanje m), 3,22 (3H, s), 3,72-3,78 (5H, preklapanje m), 5,60 (1H, s), 6,86 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,45 (2H, m), 7,53 (2H, m), 7,57-7,70 (3H, preklapanje m), 10,88 (1H, s), 12,23 (1H, s), (Nedostaje 2H-pretpostavljeno preklapanje sa rastvaračem).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-il)etoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)m etilen) - 5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1D
[0276] R<t>1,65 min (Metod 1); m/z 596 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,57-1,67 (4H, preklapanje m), 2,04-2,10 (2H, preklapanje m), 2,14 (3H, s), 2,27 (2H, t), 2,45-2,48 (2H, preklapanje m), 3,213H, s), 3,39-3,45 (2H, preklapanje m), 3,74 (2H, t), 3,75 (3H, s), 5,62 (1H, s), 6,86 (2H, m), 7,32-7,42 (3H, preklapanje m), 7,52 (2H, m), 7,56- 7,70 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 12,21 (1H, s).
Primer 62:
[0277]
(S,Z)-metil 5-metil-3-(((4-(metil(2-(3-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin- 6-karboksilat
Šifra rute*: 1D
Primer 63:
[0278] R<t>1,56 min (Metod 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 0,88 (3H, d), 1,43 (1H, m), 1,75 (1H, m), 2,13 (3H, s), 2,25 (2H, t), 2,73 (1H, m), 3,21 (3H, s), 3,71-3,83 (5H, preklapanje m), 5,61 (1H, s), 6,85 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,44 (2H, m), 7,53 (2H, m), 7,56- 7,69 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 12,24 (1H, s), (Nedostaje 4H-pretpostavljeno preklapanje sa rastvaračem).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-cijanopiperidin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6 -karboksilat, 0,4 format
Šifra rute*: 1C
[0279] R<t>1,70 min (Metod 1); m/z 580 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,60-1,72 (2H, preklapanje m), 1,77-1,87 (2H, preklapanje m), 2,13 (3H, s), 2,32 (2H, m), 2,52-2,63 (4H, preklapanje m), 2,831H, m), 3,75 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,62 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,49-7,56 (4H, preklapanje m), 7,58-7,68 (3H, preklapanje m), 8,15 (0,4H, s), 10,88 (1H, s), 12,21 (1H, s).
Primer 64:
[0280]
(Z)-metil 5-metil-3-(((4-((3-(4-metilpiperazin-1-il)propoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen e)-2-oksoindolin- 6-karboksilat
Šifra rute*: 1B
Primer 65:
[0281] R<t>1,42 min (Metod 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,70 (2H, m), 2,13 (6H, s), 2,21-2,42 (10H, preklapanje m), 3,75 (3H, s), 3,84 (2H, t), 5,61 (1H, s), 6,86 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,48-7,56 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (3H, preklapanje m), 10,88 (1H, s), 12,22 (1H, s).
(R,Z)-metil 5-metil-3-(((4-(metil(2-(3-metilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin- 6-karboksilat
Šifra rute*: 1D
[0282] R<t>1,54 min (Metod 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 0,88 (3H, d), 1,43 (1H, m), 1,75 (1H, m), 2,13 (3H, s), 2,24 (2H, t), 2,51-2,60 (2H, preklapanje m), 2,72 (1H, m), 3,21 (3H, s), 3,72-3,83 (5H, preklapanje m), 5,61 (1H, s), 6,84 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,44 (2H, m) , 7,53 (2H, m), 7,57-7,69 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 12,24 (1H, s), (Nedostaje 2H-pretpostavljeno preklapanje sa rastvaračem).
Primer 66:
[0283]
(Z)-metil 3-(((4-((2-(3,6-diazabiciklo[3.1.1]heptan-3-il)etoksi)(metil)karbamoil)fenil)amino)(fenil)m etilen) - 5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1D
Primer 67:
[0284] R<t>1,57 min (Metod 1); m/z 582 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,70 (1H, m), 2,14 (3H, s), 2,25 (1H, m), 2,51-2,57 (3H, preklapanje m), 2,79-2,87 (2H, preklapanje m), 3,23 (3H, s), 2,79-2,87 (3H, s). ), 3,42-3,48 (2H, preklapanje m), 3,75 (3H, s), 3,81 (2H, t), 5,62 (1H, s), 6,83 (2H, m), 7,37 (1H, s), 7,42 (2H , m), 7,53 (2H, m), 7,57-7,69 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 12,17 (1H, br s). (Nedostaje 1H-pretpostavljeno preklapanje sa rastvaračem).
(Z)-metil 5-metil-2-okso-3-(fenil((4-((2-((3R,5S)-3,4,5-trimetilpiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino) metilen)indolin-6-karboksilat
Šifra rute*: 1C
[0285] R<t>2,05 min (Metod 1); m/z 598 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 0,95 (6H, d), 1,77 (2H, t), 2,04-2,17 (8H, preklapanje m), 2,76 (2H, m), 3,76 (3H, s), 3,92 (2H, t), 5,62 (1H, s), 6,88 (2H, m), 7,37 (1H, s), 7,49-7,58 (4H, preklapanje m), 7,58-7,70 (3H, preklapanje m), 8,25 (1H, s), 10,89 (1H , s), 12,22 (1H, s), (Nedostaje 2H-pretpostavljeno preklapanje sa rastvaračem).
Primer 68:
[0286]
(Z)-metil 3-(((4-(etil(2-(piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat Šifra rute*: 1B
Primer 69:
[0287] R<t>1,57 min (Metod 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,13 (3H, t), 2,13 (3H, s), 2,16-2,24 (4H, preklapanje m), 2,27 (2H, t), 2,60-2,68 (4H, preklapanje m), 3,64 (2H, m ), 3,73-3,78 (5H, preklapanje m), 5,61 (1H, s), 6,86 (2H, m), 7,37 (1H, s), 7,41 (2H, m), 7,52 (2H, m), 7,57-7,69 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 12,24 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-(izopropil(2-(piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-5-metil-2-oksoindolin-6-karboksilat
Šifra rute* : 1B
Primer 70
[0288] R<t>1,59 min (Metod 1); m/z 598 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 1,18 (6H, d), 2,14 (3H, s), 2,16-2,25 (4H, preklapanje m), 2,26 (2H, t), 2,60-2,69 (4H, preklapanje m), 3,71 (2H, t ), 3,75 (3H, s), 4,30 (1H, m), 5,61 (1H, s), 6,87 (2H, m), 7,29-7,39 (3H, preklapanje m), 7,53 (2H, m), 7,56-7,69 (3H, preklapanje m), 10,87 (1H, s), 12,23 (1H, s).
[0289] R<t>1,61 min (Metod 1); m/z 570 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,13 (3H, s), 2,59-2,67 (4H, preklapanje m), 3,02 (2H, br s), 3,13 (2H, m), 3,75 (3H, s), 3,95 (2H, m), 5,62 (1H, s), 6,88 (2H, m), 7,36 (1H, s), 7,51-7,56 (4H, preklapanje m), 7,59-7,69 (3H, preklapanje m), 7,72 (1H, br s), 10,89 (1H, s), 11,58 (1H, br s), 12,22 (1H, s).
(Z)-metil 5-metil-2-okso-3-(((4-((2-(3-oksopiperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)indolin-6-karboksilat
Ruta* : 1C
Primer 71:
[0290]
(Z)-metil 3-(((4-(metil(2-(4-(2-(metilamino)-2-oksoetil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen) -2-oksoindolin-6-karboksilat
Ruta*: 1D
Primer 72
[0291] R<t>1,56 min (Metod 1); m/z 627 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,24-2,36 (10H, preklapanje m), 2,59 (3H, d), 2,87 (2H, s), 3,21 (3H, s), 3,75-3,80 (5H, preklapanje m), 5,87 (1H, d ), 6,85 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,40-7,44 (3H, preklapanje m), 7,51-7,55 (3H, preklapanje m), 7,57-7,67 (3H, preklapanje m), 11,03 (1H, s), 12,28 (1H, s).
(Z)-metil 3-(((4-((2-(4-(2-(metilamino)-2-oksoetil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil)metilen)-2-oksoindolin-6-karboksilat
Ruta*: 1C
Primer 73
[0292] R<t>1,52 min (Metod 1); m/z 613 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,35-2,58 (10H, preklapanje m), 2,60 (3H, d), 2,86 (2H, br s), 3,77 (3H, s), 3,93 (2H, t), 5,87 (1H, d), 6,87 (2H, m), 7,21 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,51-7,55 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (4H, preklapanje m), 11,04 (1H, s), 11,56 ( 1H, br s), 12,28 (1H, s).
(Z)-metil 5-metil-3-(((4-((2-(4-(2-(metilamino)-2-oksoetil)piperazin-1-il)etoksi)karbamoil)fenil)amino)(fenil) )metilen )-2-oksoindolin-6-karboksilat
1
Ruta*: 1C
[0293] R<t>1,57 min (Metod 1); m/z 627 (M+H)+ (ES+);<1>H NMR δ: 2,14 (3H, s), 2,34-2,54 (8H, preklapanje m), 2,55 (2H, t), 2,60 (3H, s), 2,70 (2H, s), 3,76 (3H, s), 3,94 (2H, t), 5,62 (1H, s), 6,38 (2H, m), 7,37 (1H, s), 7,50-7,55 (4H, preklapanje m), 7,57-7,68 (4H, preklapanje m), 10,90 (1H , s), 11,56 (1H, br s), 12,22 (1H, s).
Biološka ispitivanja: Eksperimentalne metode
Testovi inhibicije enzima
[0294] Enzimske inhibitorne aktivnosti jedinjenja koja su ovde otkrivena su određene korišć enjem ADP-Glo<TM>testa (Promega, UK). Testovi za FGFR1, PDGFRα, PDGFRβ i VEGFR2 su izvedeni u puferu koji sadrži 40 mM Tris pH 7,5, 20 mM MgCl2, 0,1 mg/mL BSA i 1 mM DTT; dok su testovi za FGFR3 i VEGFR1 izvedeni u gornjem puferu sa dodatkom 2 mM MnCl2.
Inhibicija enzima FGFR1
[0295] Inhibiciona aktivnost jedinjenja pronalaska protiv FGFR1 (FGFR1 kinazni enzimski sistem: Promega) procenjena je mešanjem proteina FGFR1 (3,12 ng/mL, 2 µL), supstrata (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 ng/mL, 2 µL) sa ispitivanim jedinjenjem (2 µL na bilo 3 µM, 0,67 µM, 0,15 µM, 0,033 µM, 0,0073 µM, 0,0016 µM, 0,0036 µM, 0,0036 µM ili 0,00008 µM) 90 minuta na 25°C. Reakcija kinaze je zatim započeta dodavanjem ATP (50 µM, 2 µL) i smeša je inkubirana 1 sat na 25°C. ADP-Glo<TM>reagens je dodat 40 min (8 µL), a zatim je dodat reagens za razvoj (16 µL) 40 min pre detekcije u čitaču mikroploča (EnVision<®>Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Inhibicija enzima FGFR3
[0296] Inhibiciona aktivnost jedinjenja pronalaska protiv FGFR3 (FGFR3 kinazni enzimski sistem: Promega) procenjena je mešanjem proteina FGFR3(12,5 ng/mL, 2 µL), supstrata (Poly (Ala6, Glu2, Lis5, Tyr1), 100 ng/mL, 2 µL) sa test jedinjenjem (2 µL na bilo 3 µM, 0,67 µM, 0,15 µM, 0,033 µM, 0,0073 µM, 0,0016 µM, 0,0036 µM ili 0,00008 µM) 90 minuta na 25°C. Reakcija kinaze je započeta dodavanjem ATP (50 µM, 2 µL) i smeša je inkubirana 90 min na 25°C. ADP-Glo<TM>reagens je dodat 40 min (8 µL), a zatim je dodat reagens za razvoj (16 µL) 40 min pre detekcije u čitaču mikroploča (EnVision<®>Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Inhibicija enzima PDGFRα
[0297] Inhibitorne aktivnosti jedinjenja pronalaska protiv PDGFRα (sistem enzima PDGFRα kinaze: Promega), procenjene su mešanjem proteina PDGFRα (12,5 ng/mL, 2 µL), supstrata (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 ng/mL, 2 µL) sa test jedinjenjem (2 µL na bilo 3 µM, 0,67 µM, 0,15 µM, 0,033 µM, 0,0073 µM, 0,0016 µM, 0,0036 µM ili 0,00008 µM) 90 minuta na 25°C. Reakcija kinaze je započeta dodavanjem ATP (25 µM, 2 µL) i smeša je inkubirana 1 sat na 25°C. ADP-Glo<TM>reagens je dodat 40 min (8 µL), a zatim je dodat reagens za razvoj (16 µL) 40 min pre detekcije u čitaču mikroploča (EnVision<®>Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Inhibicija enzima PDGFRβ
[0298] Inhibitorne aktivnosti jedinjenja pronalaska protiv PDGFRβ (PDGFRβ kinazni enzimski sistem: Promega), procenjene su mešanjem proteina PDGFRβ (6,25 ng/mL, 2 µL), supstrata (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 ng/mL, 2 µL) sa test jedinjenjem (2 µL na bilo 3 µM, 0,67 µM, 0,15 µM, 0,033 µM, 0,0073 µM, 0,0016 µM, 0,0036 ili µM0,00008 µM) 90 minuta na 25°C. Reakcija kinaze je započeta dodavanjem ATP (25 µM, 2 µL) i smeša je inkubirana 1 sat na 25°C. ADP-Glo<TM>reagens je dodat 40 min (8 µL), a zatim je dodat reagens za razvoj (16 µL) 40 min pre detekcije u čitaču mikroploča (EnVision<®>Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Inhibicija enzima VEGFR1
[0299] Inhibitorne aktivnosti jedinjenja pronalaska protiv VEGFR1 (VEGFR1 kinazni enzimski sistem: Promega), procenjene su mešanjem proteina VEGFR1 (12,5 ng/mL, 2 µL), supstrata (IGFR1Rtide, 100 ng/mL, 2 µL) sa test jedinjenjem (2 µL na 3 µM, 0,67 µM, 0,15 µM, 0,033 µM, 0,0073 µM, 0,0016 µM, 0,0036 µM ili 0,00008 µM) na 25°C za 90 minuta. Reakcija kinaze je započeta dodavanjem ATP (50 mM, 2 µL) i smeša je inkubirana 90 min na 25°C. ADP-Glo<TM>reagens je dodat 40 min (8 µL), a zatim je dodat reagens za razvoj (16 µL) 40 min pre detekcije u čitaču mikroploča (EnVision<®>Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Inhibicija enzima VEGFR2
[0300] Inhibiciona aktivnost jedinjenja pronalaska protiv VEGFR2 (VEGFR2 kinazni enzimski sistem: Promega), procenjena je mešanjem proteina VEGFR2 (1,56 ng/mL, 2 µL), supstrata (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 ng/mL, 2 µL) sa test jedinjenjem (2 µL na bilo 3 µM, 0,67 µM, 0,15 µM, 0,033 µM, 0,0073 µM, 0,0016 µM, 0,0036 µM ili 0,00008 µM) na 25°C za 90 minuta. Reakcija kinaze je započeta dodavanjem ATP (50 mM, 2 µL) i smeša je inkubirana 1 sat na 25°C. ADP-Glo<TM>reagens je dodat 40 min (8 µL), a zatim je dodat reagens za razvoj (16 µL) 40 min pre detekcije u čitaču
2
mikroploča (EnVision<®>Multilabel Reader, Perkin Elmer).
[0301] U svim slučajevima, kinaza pretvara ATP u ADP, a ADP-Glo<TM>reagens zatim iscrpljuje preostali ATP. Reagens za detekciju pretvara ADP koji je proizveden nazad u ATP i generiše luciferazu koja se može detektovati kao luminiscencija. Zbog toga je luminiscentni signal direktno proporcionalan količini ADP-a proizvedenog enzimskom reakcijom i smanjenje ovog signala nakon tretmana jedinjenjem pokazuje inhibiciju. Procenat inhibicije proizveden od strane svake koncentracije jedinjenja je izračunat koriš ć enjem jednačine prikazane u nastavku:
[0302] Procenat inhibicije je zatim nacrtan u odnosu na koncentraciju jedinjenja, a relativna 50% inhibitorna koncentracija (RIC50) je određena iz rezultujuć e krive koncentracija-odgovor. Kada je ovo utvrđeno, Ki je izračunat korišć enjem jednačine:
Ć elijski i drugi in vitro testovi
PDGF-BB je izazvao normalnu proliferaciju human1H plu ć n1H fibroblasta (NHLF).
[0303] NHLF-ovi (Lonza group Ltd) su prošireni do 90% konfluencije u FGM-2 medijumu za rast dopunjen sa 2% FBS (plus SingleQuot<TM>faktori rasta; Lonza). Fibroblasti su sakupljeni (Trypsin/EDTA), suspendovani na 25X10<3>po ml u medijumu za rast i dodato je 200 µl po bunarčić u (5X10<3>ć elija/bunari ć u) ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarči ć a. Posle 24 sata inkubacije (37 C/5% CO2/95%O2), ć elije su izgladnjene u serumu (24 sata) smanjenjem koncentracije FBS na 0,1% u medijumu za kulturu. Ć elije su prethodno inkubirane sa test jedinjenjem 1 sat, zatim stimulisane sa rhuPDGF-BB (100 ng/ml, R&D Systems) tokom 48 sati. Proliferacija ć elija se procenjuje ugradnjom BrdU (Cell Proliferation colorimetric ELISA, Roche). Procenat inhibicije proliferacije NHLF izazvane rhuPDGF-BB test jedinjenjem pri svakoj koncentraciji se izračunava kao procenat onog postignutog rhuPDGF-BB pri svakoj koncentraciji test jedinjenja upoređivanjem sa kontrolom nosača (bazalna proliferacija). Relativna inhibitorna koncentracija od 50% (RIC50) se određuje iz rezultuju ć e krive koncentracija-odgovor.
PDGF-BB/FGF-Basic indukovana MRC-5 proliferacija fetaln1H human1H plu ć nih fibroblasta
[0304] MRC-5 fibroblasti (LGC standardi) su prošireni do 90% konfluencije u DMEM medijumu sa dodatkom 10% FBS. Ć elije su sakupljene (Trypsin/EDTA), suspendovane na 25X10<3>po ml u medijumu za rast i dodato je 200 µl po bunarčić u (5X10<3>ć elija/bunari ć u) ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarči ć a. Posle 24 sata inkubacije (37 C/5% CO2/95%O2), ć elije su izgladnjene u serumu (3 sata) zamenom medijuma za rast medijumom koji sadrži 0,1% FBS. Ć elije se zatim prethodno inkubiraju sa test jedinjenjem tokom 1 sata, nakon čega sledi stimulacija sa rhuPDGF-BB (100 ng/ml, R&D Systems) ili rhuFGF-basic (5 ng/ml; R&D Systems) tokom 48 sati. Proliferacija ć elija se procenjuje ugradnjom BrdU (Cell Proliferation colorimetric ELISA, Roche). Procenat inhibicije rhuPDGF-BB/rhuFGF-indukovane proliferacije MRC-5 test jedinjenjem pri svakoj koncentraciji se izračunava kao procenat onog postignutog rhuPDGF-BB/FGF-basic pri svakoj koncentraciji test jedinjenja upoređivanjem sa kontrolom nosača (bazalni proliferacija). Relativna 50% inhibitorna koncentracija (RIC50) je određena iz rezultuju ć e krive koncentracija-odgovor.
VEGF165/ FGF-Basic indukovana proliferacija endotelnih ć elija
[0305] TeloHAEC (telomerazom ovekovečene ljudske endotelne ć elije aorte; ATCC) se poseju u ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarčića pri gustini ć elija od 4000 ć elija po bunarči ć u (100 ml) u medijumu za izgladnjivanje endoteln1H ć elija (0,5% FBS i VEGF FGF rasta faktori) i kultivisani 3 sata (37 C/5%CO2/95%O2). Ć elije su prethodno inkubirane sa test jedinjenjem 1 sat, nakon čega je usledila stimulacija sa rhuVEGF165 (10 ng/ml, R&D Systems) ili rhuFGF-basic (5 ng/ml, R&D Systems) tokom 48 sati. Proliferacija ć elija se procenjuje ugradnjom BrdU (Cell Proliferation colorimetric ELISA, Roche). Procenat inhibicije proliferacije TeloHAEC izazvane rhuVEGF165/ rhuFGF-basic pomoć u test jedinjenja u svakoj koncentraciji se izračunava kao procenat onog postignutog sa rhuVEGF165/FGF-basic u svakoj koncentraciji test jedinjenja upoređivanjem sa kontrolom nosača (bazalna proliferacija). Relativna 50% inhibitorna koncentracija (RIC50) je određena iz rezultuju ć e krive koncentracija-odgovor.
PDGF-BB je indukovao fosforilaciju PDGFRb u fibroblastima
[0306] MRC-5/NHLF/N1H-3T3 (mišji embrionalni fibroblasti, LGC standardi) su korišć eni za procenu inhibitornog efekta test jedinjenja na fosforilaciju PDGFRb korišć enjem HTRF (Homogena vremenski razrešena fluorescencija) fosfo-PDGFR7b phospho-PDGFR7b1 komplet (Cisbio). MRC-5 / NHLF su posejani u ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarčića pri gustini ć elija od 10000 ć elija po bunarči ć u u medijumu za rast DMEM (10% FBS) ili FGM-2 medijumu za rast (2% FBS) i kultivisani 48 sati ( 37 C/5%CO2/95%O2). N1H-3T3 su zasejane u ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarčić a pri gustini ć elija od 7000 ć elija po bunarči ć u u DMEM medijumu za rast (10% FBS) i kultivisane su 48 sati (37 C/5% CO2/95%O2).Ć elijski medijum je zamenjen odgovaraju ć im medijumom za izgladnjivanje koji sadrži 0,1% FBS i ploče su dalje inkubirane tokom 24 sata (37 C/5%CO2/95%O2) za MRC-5/NHLFs i 3 sata za N1H-3T3s. Ć elije su prethodno inkubirane sa test jedinjenjem 1 sat, a zatim stimulisane sa rhuPDGF-BB (25-50 ng/ml, R&D Systems) tokom 5 minuta i rmPDGF-BB (25 ng/ml, Life Technologies) za N1H- 3T3s. Medijum je aspiriran ić elije su odmah lizirane dodavanjem 50 µl pufera za lizu obezbeđenog u kompletu za HTRF test. 16 µl ć elijskog lizata iz svakog bunarči ć a je prebačeno na belu ploču sa 384 bunarčić a male zapremine u koju su dodati reagensi odgovaraju ć eg kompleta prema uputstvima iz kompleta. Fosforilacija PDGFRb je kvantifikovana izračunavanjem odnosa očitane fluorescencije na 665 nm i 620 nm. Procenat inhibicije rPDGF-BB indukovane fosforilacije PDGFRb test jedinjenjem je izračunat kao procenat onog postignutog rPDGF-BB pri svakoj koncentraciji test jedinjenja upoređivanjem sa kontrolom nosača. Relativna 50% inhibitorna koncentracija (RIC50) je određena iz rezultuju ć e krive koncentracija-odgovor.
VEGF165je izazvao fosforilaciju VEGFR2 u endotelnimć elijama
[0307] TeloHAECs (telomerazom ovekovečene ljudske endotelne ć elije aorte; ATCC) su koriš ć eni za procenu inhibicionog efekta test jedinjenja na VEGFR2 fosforilaciju korišć enjem HTRF (Homogena vremenski razrešena fluorescencija) fosfo-VEGFR17T) fosfo-VEGFR17T Cisbio). TeloHAEC su zasejane u ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarčića pri gustini ć elija od 12000 ć elija po bunarči ć u u medijumu za rast endotela (ATCC; 2% FBS) i kultivisane 48 sati (37 C/5% CO2/95%O2). Ć elijski medijum je zamenjen medijumom za izgladnjivanje (bez VEGF i FGF faktora rasta) koji sadrži 0,5% FBS i ploče su dalje inkubirane 24 sata (37 C/5% CO2/95%O2). Ć elije su prethodno inkubirane sa test jedinjenjem 1 sat, nakon čega je usledila stimulacija sa rhuVEGF165(50 ng/ml, R&D Systems) tokom 5 minuta. Medijum je aspiriran i ć elije su odmah lizirane dodavanjem 50 µl pufera za lizu obezbeđenog u kompletu za HTRF test. 16 µl ć elijskog lizata iz svakog bunar je prebačen na belu ploču sa 384 bunarči ć a male zapremine u koju su dodati reagensi odgovarajuć eg kompleta prema uputstvima za komplet. Fosforilacija VEGFR2 je kvantifikovana izračunavanjem odnosa fluorescencije očitane na 665 nm i 620 nm. Procenat inhibicije rhuVEGF165indukovane fosforilacije VEGFR2 test jedinjenjem je izračunat kao procenat onog koji je postigao rhuVEGF165pri svakoj koncentraciji test jedinjenja upoređivanjem sa kontrolom nosača. Relativna 50% inhibitorna koncentracija (RIC50) je određena iz rezultujuć e krive koncentracija-odgovor.
Test kontrakcije fibroblast gela
[0308] NHLF-ovi su prošireni do 90% ušć a u FGM-2 medijumu za rast (Lonza) dopunjenom sa 2% FBS (plus SingleKuotTM faktori rasta). Fibroblasti su sakupljeni (Trypsin/EDTA) i suspendovani na 1X10<6>po ml u medijumu bez seruma. Na osnovu kompleta za ispitivanje kontrakcije ć elija (Cell Biolabs) ć elijska rešetka je pripremljena mešanjem 1 dela ć elijske suspenzije 4 dela rastvora kolagen gela prema uputstvima za komplet. Alikvoti od 0,9 ml kolagenske rešetke se dodaju u epruvete za centrifugiranje od 1,5 ml i tretiraju konačnim koncentracijama test jedinjenja.250 µl rešetke tretirane jedinjenjem se zatim pipetira u svaki bunar ploče za kulturu tkiva sa 48 bunarčić a (triplikat po test koncentraciji). Ploča je inkubirana 90 min (37 C/5%CO2/95%O2) da bi se omogu ć ilo da se gelovi polimerizuju. 250 µl medijuma bez seruma koji sadrži konačne koncentracije test jedinjenja se zatim dodaje svakom odgovarajuć em gelu. Posle dalje inkubacije od 30 min, gelovi su stimulisani sa TGFβ1 (10 ng/ml; R&D Systems). Nakon perioda inkubacije od 24 sata (37 C/5%CO2/95%O2), svaki pojedinačni gel se uklanja i meri na preciznoj vagi. Efekat testiranog jedinjenja na svakoj koncentraciji je izražen kao procenat preokreta TGFβ1 indukovane kontrakcije u odnosu na bazalnu kontrakciju tretiranu nosačem.
Test oslobađanja fibroblasta IL-6
[0309] NHLF-ovi su prošireni do 90% ušć a u FGM-2 medijumu za rast (Lonza) dopunjenom sa 2% FBS (plus SingleQuot<TM>faktori rasta). Fibroblasti su sakupljeni (Trypsin/EDTA), suspendovani na 50X10<3>po ml u medijumu za rast i dodato 200 µl po bunarčić u (10X10<3>ć elija/bunari ć u) ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarči ć a. Posle 24 sata inkubacije (37 C/5%CO2/95%O2), ć elije su izgladnjene u serumu (24h) smanjenjem koncentracije FBS u medijumu na 0,1%. Ć elije su prethodno inkubirane sa test jedinjenjem 1 sat, zatim stimulisane sa TGFβ1 (5 ng/ml, R&D Systems) tokom 24 sata. Supernatanti bez ć elija se dobijaju za određivanje koncentracija IL-6 pomo ć u sendvič ELISA (Duo-set, R&D Systems). Inhibicija proizvodnje IL-6 se izračunava kao procenat onog postignutog sa 5 ng/ml TGFβ1 pri svakoj koncentraciji test jedinjenja upoređivanjem sa kontrolom nosača. Relativna 50% inhibitorna koncentracija (RIC50) se određuje iz rezultuju ć e krive koncentracija-odgovor.
Apoptoza mastocita
[0310] Mastociti se diferenciraju od CD34+ć elija iz krvi pupčane vrpce (Lonza) tokom 8 nedelja u medijumu za rast sa dodatkom 100 ng/ml SCF i 10 ng/ml IL-6. Mastociti su zasejani u 384 bunarčić a belih prozirnih ploča dna između 2500 do 10000 ć elija/bunari ć u u medijumu za rast koji sadrži SCF (100 ng/ml). Kao pozitivna kontrola za apoptozu, 8
4
bunarčić a je inkubirano u medijumu za rast bez SCF. Ć elije su inkubirane sa test jedinjenjima ili nosačem 24 sata (37 C/5%CO2/95%O2). Caspase-3/7 luminogeni supstrat (Caspase-Glo 3/7 Assay, Promega) se dodajeć elijama i inkubira na sobnoj temperaturi 30 minuta, pre očitavanja signala luminiscencije. Indukcija apoptoze test jedinjenjima se izračunava kao procenat onog postignutog u ć elijama inkubiranim u odsustvu SCF (maksimalni apoptotički odgovor) za svaku koncentraciju test jedinjenja u poređenju sa nosačem (osnovna apoptoza). Relativna 50% inhibitorna koncentracija (RIC50) je određena iz rezultuju ć e krive koncentracija-odgovor.
Efekat test jedinjenja na vitalnost ć elije
[0311] MRC-5 ć elije su zasejane u belo prozirno dno (za očitavanje fluorescencije/luminiscencije) ili providne (za kolorimetrijsko očitavanje) ploče za kulturu tkiva sa 96 bunarčića pri gustinić elija od 12 X 10<3>ć elije po otvoru u DMEM medijumu za rast (10% FBS). Posle 24 h inkubacije (37 C/5% CO2/95%O2), medijum za rast je zamenjen medijumom koji sadrži 0,1% FBS plus test jedinjenje/nosač i inkubiran je narednih 48 sati. Za kolorimetrijski MTT test (procena ć elijske metaboličke aktivnosti), supernatanti iz svakog ležišta su aspirirani, zamenjeni sa 100 µl/bunarić u svežeg medijuma (0,1% FBS) i 10 µl/bunarčić u od 5 mg/ml MTT. Posle perioda inkubacije od 1 sata (37 C/5% CO2/95%O2), medijum je usisan i 100% DMSO (100 µl) je dodat u svaki bunar. Ploče su lagano muć kane 15 minuta pre očitavanja apsorbancije na 550 nm.
[0312] Procenat gubitka vitalnosti ć elija (predstavljen smanjenjem vrednosti apsorpcije) je izračunat za svaku koncentraciju jedinjenja u odnosu na ć elije tretirane nosačem (0,5% DMSO). MultiTox-Fluor Multiplex citotoksični test u kombinaciji sa Caspase-Glo 3/7 testom (Promega) korišć en je za merenje ć elijske citotoksičnosti/vijabiliteta i apoptoze. MultiTox-Fluor Multiplex citotoksični test je fluorescentni test sa dodavanjem jednog reagensa koji istovremeno meri relativni broj živih i mrtvih ć elija u ć elijskoj populaciji. Test daje ratiometrijske, inverzno korelirane mere vitalnosti ć elije i citotoksičnosti. Odnos živih ć elija i mrtvih ć elija je nezavisan od broja ć elija i stoga se može koristiti za normalizaciju podataka. Dodavanje pojedinačnog Caspase-Glo<®>3/7 reagensa u formatu "dodavanje-mešanje-merenje" dovodi do lize ć elije, nakon čega sledi cepanje supstrata kaspazom i stvaranje luminiscentnog signala "sjajnog tipa". Za ovaj multipleks citotoksični test, 100 µl ć elijskih supernatanata iz ć elija tretiranih jedinjenjem od 48 sati je pažljivo uklonjeno iz svakog bazena, a zatim je dodato 50 µl MultiTox reagensa (radni rastvor zašti ć enih MultiTox reagensa je pripremljen razblaživanjem 10 µl GF-AFC i bis u AAF-R11010 ml pufera za ispitivanje prema uputstvima za komplet). Ć elije su inkubirane u mraku 30 minuta pre dva odvojena očitavanja fluorescencije na; 400Ex/ 505Em(očitavanje žive ć elije) i 485Ex/520Em(očitavanje mrtve ć elije). Zatim, 100 µl supernatanta je pažljivo uklonjeno iz svakog ležišta i 50 µl Caspase 3/7 Glo reagensa je dodato na ć elijsku ploču i inkubirano 30 minuta u mraku. Aktivnost kaspaze 3/7 je kvantifikovana čitanjem signala luminescencije. Poveć anje signala iznad kontrolnih ć elija tretiranih nosačem predstavljalo je pove ć anje apoptoze ć elije.
Test tranzicije fibroblasta u miofibroblast
[0313] Da bi se procenila anti-fibrotička aktivnost test jedinjenja, korišć ena su dva alternativna protokola. U prvom, izolovani pluć ni fibroblasti su zasejani na ploče sa 96 bunarčića pri 3000 ć elija/bunari ć u. Pet (5) dana posle sejanja, ć elije se osvežavaju i ć elijama se dodaju testna jedinjenja ili nosač. Posle jednog (1) sata, dodat je TGF-ß1 (1,25 ng/mL) da bi se indukovao prelaz fibroblasta u miofibroblast. Ekspresija αSMA, markera tranzicije miofibroblasta, meri se nakon 72 sata imunobojenjem, procenjuje se snimanjem sa visokim sadržajem na IN Cell Analyzer 2200 (GE Healthcare) i kvantifikuje korišć enjem vlasničkog (BioFocus) algoritma sa softverom za razvijanje IN Cell. (GE Healthcare). Izlaz algoritma predstavlja intenzitet bojenja pomnožen sa obojenom površinom (nivoi DxA). Zajedničko bojenje ć elijskih jezgara sa 4’,6-diamidino-2-fenilindolom (DAPI) se izvodi kako bi se kvantifikovao broj ć elija, kao mera potencijalne toksičnosti i/ili da bi se normalizovao αSMA za razlike u gustini ć elija.
[0314] U alternativnom protokolu, izolovani fibroblasti pluć a su zasejani na ploče sa 96 bunarči ć a na 5100 ć elija/bunari ć u. Posle 24 sata, ć elije se osvežavaju izgladnjelim medijumom još 24 sata. U ć elije se dodaju testna jedinjenja ili nosač. Posle jednog (1) sata, dodat je TGF-ß1 (0,1 ng/mL) da bi se indukovao prelaz fibroblasta u miofibroblast. Ekspresija αSMA, markera tranzicije miofibroblasta, meri se posle 48 sati imunobojenjem, procenjuje se snimanjem sa visokim sadržajem na ImageXpres micro (Molecular Devices) i kvantifikuje korišć enjem MetaXpress softvera (Molecular Devices). Procenat pozitivnih ć elija se koristi za procenu bojenja αSMA, a samim tim i stepena prelaza fibroblasta u miofibroblast. Zajedničko bojenje ć elijskih jezgara sa 4’,6-diamidino-2-fenilindolom (DAPI) se izvodi kako bi se kvantifikovao broj ć elija, kao mera potencijalne toksičnosti i/ili da bi se normalizovao αSMA za razlike u gustini ć elija.
Procena trajanja delovanja testiranih jedinjenja protiv fosforilacije PDGFRß izazvane PDGF-BB uć elijama fibroblasta plu ć a fetusa čoveka
[0315] Da bi se odredila relativna postojanost efekata izlaganja leku na PDGF-BB indukovanu fosforilaciju PDGFRß, korišć en je eksperiment ispiranja koriste ć i MRC-5 humane fetalne ć elije fibroblasta plu ć a i Homogenu HTRF (Homogenu vremensko razrešenu fluorescentnu) PDGFRß (Tyr751) komplet za ć elijski test (Cisbio), koji detektuje modulaciju receptora fosforilacije PDGFRß izazvane PDGF-BB.
Protokol ispiranja
[0316] MRC-5 ć elije su inicijalno izmeštene sa tripsinom i neutralisane sa punim medijumom (DMEM medijum za rast, 10% FBS). 1.2X10<6>ć elija se stavlja u epruvete za mikrofugiranje, centrifugira na 10.000 obrtaja u minuti 30 sekundi koristeć i stočnu centrifugu, supernatant se uklanja i ć elije se isperu u 1 ml prethodno zagrejanog (37°C) pufera za ispiranje (HBSS pH7,4, 0,1% BSA i 0,04% pluronske kiseline) da bi se uklonio bilo koji preostali FBS. Ć elije su zatim ponovo centrifugirane, supernatant je uklonjen i inkubiran sa 500 µL nosača, test kontrolnog jedinjenja i test jedinjenja (u koncentraciji koja daje 70% inhibicije) tokom 1 sata uz lagano muć kanje na 37°C. Posle inkubacije, ć elije su ravnomerno dispergovane i alikvot od 100 µL je uklonjen iz svake epruvete, za kontrolu bez pranja. Preostale ć elije se zatim podvrgavaju 5 ponovljenih koraka ispiranja u kojima se ć elije centrifugiraju, supernatant se uklanja i ponovo suspenduje u 1 ml sveže zagrejanog (37°C) pufera za ispiranje. Da bi se izbegli efekti prenošenja jedinjenja usled lepljenja za plastiku, ć elije se prebacuju u sveže epruvete nakon svakog koraka pranja i stavljaju u šejker na 37°C (900 rpm) na 10 minuta inkubacije između pranja kako bi se omoguć ila ponovna ravnoteža između ć elija i pufera. Nakon završnog koraka ispiranja, ć elije se ponovo suspenduju u 360 ul prethodno zagrejanog pufera za ispiranje. 5 µL iz obe epruvete bez ispiranja i iz opranih epruveta se stavlja u 384 belu polipropilensku mikrotitarsku ploču (Greiner) i inkubira na 37°C tokom 15 minuta. Ć elije su zatim stimulisane sa 5 µL rhuPDGF-BB (3 ng/ml, R&D Systems) tokom 5 minuta, nakon čega se ć elije odmah liziraju dodavanjem 10 µl pufera za lizu koji se nalazi u kompletu za HTRF test. Ć elije se stavljaju na šejker za ploče (rpm 1450) na 1 sat, nakon čega se ploča kratko centrifugira 30 sekundi (3000 rpm) i dodaju se reagensi vlasničkog HTRF kompleta prema uputstvima za komplet. Fosforilacija PDGFRß se kvantifikuje izračunavanjem odnosa fluorescencije očitane na 665 nm i 620 nm. Procenat inhibicije rhuPDGF-BB indukovane fosforilacije PDGFRß test jedinjenjem se izračunava kao procenat onog postignutog pri 3 µg/ml rhuPDGF-BB u odnosu na kontrolu test nosača. Tabela 7 predstavlja podatke kao procenat fosforilacije nakon ispiranja u odnosu na maksimalnu fosforilaciju kontrole (što je 100 minus napred navedena cifra procenta inhibicije).
PAMPA test permeabilnosti
[0317] Ovaj test meri permeabilnost kroz veštačku membranu i izveden je od strane Ciprotexa korišć enjem paralelnog testa permeabilnosti veštačke membrane. To je in vitro model pasivne, transcelularne permeacije kroz veštačku heksadekansku membranu (Wohnsland F et al., Med. Chem., 2001 44; 923-930). Jedinjenja se mogu kategorisati na nisku i visoku permeabilnost. Generalno, jedinjenja koja imaju Papp< 10 X 10<-6>cm/s se klasifikuju kao niska permeabilnost, a jedinjenja sa Papp> 10 X 10<-6>cm/s se klasifikuju kao visoka permeabilnost. Veruje se da ć e jedinjenja koja imaju nisku permeabilnost verovatno imati dugo vreme zadržavanja u pluć ima zbog njihove sporije apsorpcije (Tronde Ann et al., J Pharm. Sci., 2003, 92(6), 1216-33).
Rezime protokola
[0318] Test jedinjenje se dodaje na donatorsku stranu veštačke PAMPA membrane obložene filterom, a permeabilnost se meri prać enjem izgleda test jedinjenja na strani akceptora ć elijske membrane koriš ć enjem LC-MS/MS.
Eksperimentalni postupak
[0319] Pripremljen je rastvor heksadekana u heksanu (5 % tež/tež) i alikvot je dodat na membranu svakog bunarčić a u filterskoj (donatorskoj) ploči (Multiscreen filter ploča za permeabilnost, Millipore). Donorske ploče su zatim ostavljene da se osuše da bi se obezbedilo isparavanje heksana. Pufer (pH 7) koji sadrži DMSO (5 %) je dodat u svaki bunar akceptorskih ploča. Rastvori test jedinjenja su pripremljeni razblaživanjem 10 mM DMSO koncentrata u puferu koji je dao konačnu koncentraciju test jedinjenja od 10 µM (konačna koncentracija DMSO 5 %). Žuti marker fluorescentnog integriteta je takođe uključen u rastvor test jedinjenja. Donorska ploča je umetnuta u akceptorsku ploču i ploče su zatim inkubirane na sobnoj temperaturi 5 sati. Analitički standardi su pripremljeni iz rastvora test jedinjenja. Permeabilnost ispitivanog jedinjenja je procenjena u četiri primerka. Na svakoj ploči jedinjenja poznatih karakteristika permeabilnosti su korišć ena kao kontrole.
[0320] Na kraju perioda inkubacije donorska ploča je uklonjena sa akceptorske ploče. Uzorci donora i akceptora za testna i kontrolna jedinjenja su kvantifikovani analizom LC-MS/MS kaseta korišć enjem kalibracije u 5 tačaka sa odgovarajuć im razblaženjem uzoraka. Eksperimentalni oporavak je izračunat na osnovu koncentracija donatora i akceptora.
[0321] Ako je žuta permeacija bila iznad QC granica za jedan, dva ili tri pojedinačna bunarčić a za test jedinjenja, tada su prijavljeni rezultati n = 3, 2 ili 1.
Analiza podataka
[0322] Koeficijent prividne permeabilnosti (Papp) za svako jedinjenje je izračunat iz sledeć e jednačine:
pri čemu
gde su VDi VAzapremine donorskog i primaočevog odeljka, respektivno, površina je površina membrane pomnožena sa poroznošć u, a ravnotežna koncentracija leka je koncentracija test jedinjenja u ukupnoj zapremini odeljka donora i primaoca.
In vivo skrining: Farmakodinamika i Farmakokinetika
Fibroza izazvana bleomicinom kod miševa (mišji model fibroze pluć a)
[0323] C57BL6/J miševima se intratrahealnim putem dozira ili nosač ili bleomicin sulfat (MP Biomedicals, 2 U/kg) na dan 0. Jedinjenja se daju intranazalno (kao vodeni rastvori ili suspenzije, 25-50 µl) jednom dnevno od 5 do 20 dana. Posle naredna 24 sata životinje su anestezirane, traheje su im kanulirane i životinje su mehanički ventilirane korišć enjem kompjuterski kontrolisanog klipnog ventilatora (flexiVent, SCIREQ Inc., Montreal, Kanada). Nakon merenja pluć ne funkcije, miševi su iskrvavljeni i izvučena je tečnost za bronhoalveolarno ispiranje (BALF). Ukupni i diferencijalni broj belih krvnih zrnaca u BALF uzorcima se meri pomoć u Neubaur hemocitometra. Citospin razmazi BALF uzoraka su pripremljeni centrifugiranjem i obojeni korišć enjem DiffQuik sistema bojenja (Dade Behring). Ć elije se broje korišć enjem uljne imerzione mikroskopije. Preostali BALF supernatanti se čuvaju za analizu citokina.
[0324] Cela pluć a su naduvana pod pritiskom od 25 cm H2O sa 10% neutralnog puferovanog formalina kroz trahealnu kanilu i potopljena u formalin najmanje 24 h. Nakon prerade u parafinske blokove, plu ć a se iseku (5 µm) i boje ili hematoksilinom i eozinom (H&E) ili pikro-sirius crvenom (PSR). Konstantan broj slika se nasumično snima od 4 poprečna preseka. Slike su ocenjene od 0 (bez PF) do 8 (maksimalni PF) od strane 2 slepa istraživača da bi procenili fibrozne promene u pluć ima. Pored toga, bojenje za aktin glatkih miši ć a alfa (Thermo Scientific, Freemont, CA) se vrši korišć enjem standardnih metodologija. Rastvorljivi kolagen u homogenatu celog plu ć a je procenjen Sircol testom kolagena (Biocolor Ltd, Carrickfergus, UK).
Fosforilacija PDGFRß izazvana PDGFBB kod miševa
[0325] C57BL/6 miševi stari od 7 do 12 nedelja (Charles River) smešteni su u 12-časovnom ciklusu svetlost/mrak i primaju hranu i vodu ad libitum. Vodeni rastvori ili suspenzije jedinjenja se pripremaju da daju naznačene doze (mg/kg) na osnovu prosečne težine miševa u grupama. Životinje su anestezirane i jedinjenja ili nosači se daju intranazalno (50 µl). Nakon oporavka u naznačenim vremenskim tačkama, životinje se ponovo anesteziraju i rekombinantni mišji PDGF-BB (50 ug/životinji, Cambridge Biosciences) ili nosač se daju intratrahealno, a zatim, 5 do 30 minuta nakon instilacije PDGF-BB, uzimaju se završni uzorci krvi i izrezuju se cela pluć a. Plazma se izoluje iz krvi centrifugiranjem. Približno jedna polovina levog režnja je homogenizovana korišć enjem FastPrep-245G instrumenta u Matrix D epruvetama za lizu (MP Biomedicals). Nivoi fosforilacije PDGFRß mere se Western blotom korišć enjem antifosfo-PDGFRα(Y849)/ß(Y857), anti-totalnog PDGFRß/a i anti GAPDH antitela (ć elijska signalizacija). Nivoi fosforilacije PDGFRß su prijavljeni kao odnosi prema ukupnim nivoima PDGFRß ili prema GAPDH. Procenat inhibicije fosforilacije PDGFRß se izračunava za svaki tretman u odnosu na tretman nosačem. Merenje nivoa jedinjenja u plazmi ili homogenatima pluć a određuju se pomo ć u LC-MS/MS.
Farmakokinetička merenja kod glodara
[0326] Mužjaci CD pacova ili C57BL/6J miša su korišć eni za farmakokinetičke studije gde su jedinjenja životinjama davana intratrahealno, oralno ili intravenozno za pacove i intranazalno, oralno ili intravenozno za miševe.
[0327] Životinje su dozirane intravenozno preko lateralne repne vene. Životinje koje su dozirane intratrahealnim ili intranazalnim putem anestezirane su pre doziranja korišć enjem izoflurana i azot-oksida u studijama na pacovima ili kiseonika u studijama na miševima.
[0328] Životinje su kanulirane u lateralnu repnu venu i stavljene u vruć u kutiju (37-40°C) otprilike 5 minuta pre svake vremenske tačke uzorkovanja da bi se proširile repne vene. Jedinjenja su formulisana kao rastvori za intravensku primenu i kao rastvori ili suspenzije za sve druge metode. Životinje su izmerene na dan doziranja i dobile su jednokratnu primenu formulacije sa zapreminom prilagođenom telesnoj težini pojedinca (Tabela 3). Za serijske uzorke, uzorci krvi pacova od 150-200 µl ili uzorci krvi miševa od 20 µl (sa dodatkom vode u istoj zapremini) uzeti su iz otvora za kanilu u mikrotastere obložene K2EDTA u unapred određenim vremenskim tačkama tokom 24 sata. Plazma je izolovana centrifugiranjem (8200 rcf tokom 5 minuta), samo u studijama na pacovima.
[0329] Po završetku, uzorci krvi su sakupljeni kroz silaznu šuplju venu u mikrotejnere obložene K2EDTA i BAL tečnost je dobijena ispiranjem pluć a preko traheje sa 3 X 4 ml instilacije 4% BSA u PBS za pacove i 3 X 0,4 ml instilacije 4 % BSA u PBS za miševe. Pluć a su izrezana, izmerena i zabeležena težina i brzo zamrznuta u tečnom azotu.
[0330] Merenja nivoa jedinjenja u plazmi ili krvi, pluć nim homogenatima i BAL tečnosti su određena pomo ć u LC-MS/MS. Lek je ekstrahovan proteinima taloženjem i korišć enjem viška rastvarača koji sadrži odgovaraju ć i interni standard. Koncentracije leka su određene na osnovu standardne krive usklađene sa eksternom matricom.
[0331] Koncentracije leka su prikazane u odnosu na vreme na polulogaritamskom dijagramu (videti slike 1, 2 i 3). Standardni farmakokinetički parametri su izračunati korišć enjem nekompartmentalne analize. Koncentracije u pluć ima i BAL tečnosti u svakoj vremenskoj tački su izražene kao procenat primenjene doze.
Rezultati
[0332] Rezultati testiranja u testovima inhibicije enzima i u ć elijskim i drugim in vitro testovima prikazani su u tabelama 4 do 10 ispod i slikama 1 do 4.
Tabela 4 Inhibitorne aktivnosti jedinjenja pronalaska i nintedaniba protiv FGFR1, FGFR3, PDGFRα, PDGFRß, VEGFR1 i
VEGFR2.
(nastavak)
(nastavak)
Tabela 5 Inhibicijski efekti jedinjenja pronalaska i nintedaniba na fosforilaciju PDGFRß u fibroblastima indukovanu PDGFBB u MRC5ć elijama i na fosforilaciju VEGFR2 u endotelnim ć elijama indukovanu VEGF165.
(nastavak)
1 (nastavak)
Tabela 6. Efekat jedinjenja pronalaska i nintedaniba na vitalnostć elija MRC5 ć elija (MTT test).
2
(nastavak)
(nastavak)
Tabela 7 Trajanje dejstva primera jedinjenja kao inhibitora PDGF-BB indukovane fosforilacijom PDGFRß u ć elijama fibroblasta pluć a humanog fetusa. Procenat fosforilacije nakon ispiranja u odnosu na maksimalnu fosforilaciju (100%) od 3 µgml rhuPDGF-BB kontrole testnog nosača.
4
[0333] Pošto niže vrednosti ukazuju na već i procenat inhibicije fosforilacije PDGFR ß, podaci iz Tabele 7 otkrivaju da jedinjenja iz Primera 4 i 6 imaju duže trajanje delovanja kao inhibitori PDGFRß od nintedaniba u ovom testu.
Tabela 8 Određivanje Pappza jedinjenja pronalaska u testu permeabilnosti PAMPA
(nastavak)
(nastavak)
Tabela 9 Farmakokinetička merenja tokom perioda od 24 sata kod pacova koji su dozirali intravenozno (i.v.) i intratrahealno (i.t.) sa jedinjenjima pronalaska ili nintedanibom.
(nastavak)
(nastavak)
Tabela 10 Farmakokinetička merenja tokom perioda od 24 sata kod miševa koji su intravenozno (i.v.) i intranazalno (i.n.) dozirani sa jedinjenjem pronalaska ili nintedanibom.
(nastavak)
Rezime rezultata
[0334] Jedinjenja pronalaska, kao što je ovde otkriveno, pokazuju inhibitornu aktivnost protiv FGFR1, FGFR3,<PDGFRα, PDGFR>ß<, VEGFR1 i VEGFR2 (Tabela 4 i Tabela 5) i nanomolarnu moć . Velika ve ć ina testiranih jedinjenja ne>pokazuje štetne efekte u testovima vitalnosti ć elija (Tabela 6). Štaviše, jedinjenja generalno imaju nisku permeabilnost kroz membrane (Tabela 8 i Slika 1). Određena jedinjenja su pokazala dokaze o produženom trajanju delovanja u odnosu na nintedanib kako je utvrđeno u pogledu inhibicije fosforilacije ć elija fibroblasta plu ć a humanog fetusa izazvane PDGF-BB (videti tabelu 7). Farmakokinetička merenja pokazuju da je generalno pronađeno da jedinjenja pronalaska imaju već i relativni sadržaj koji ostaje u plu ć ima 24 sata nakon lokalnog davanja nakon što subjekt primi dozu od nintedaniba (Tabele 9 i 10 i Slike 2 do 4). Niski nivoi BAL-a zabeleženi zajedno sa smanjenim količinama tokom perioda od 24 h ukazuju na brzo rastvaranje i apsorpciju u pluć no tkivo kod jedinjenja pronalaska.
[0335] Ovaj profil ukazuje da se očekuje da su jedinjenja pronalaska pogodna kao lekovi, između ostalog, za lečenje fibroznih bolesti ili intersticijalnih bolesti pluć a, kao što je IPF, ili respiratornih poreme ć aja, posebno kada se daju lokalno u pluć a.
Reference
[0336]
Castriotta RJ, et al., Chest, 2010, 138(3):693-703
Du Bois RM., Nat Rev Drug Discov., 2010, 9(2):129-40
Fehrenbach. H., et al., Virchows Arch., 1999, 435(1):20-31
King TE Jr, et al., Lancet, 2011, 3;378(9807):1949-61
Lindroos. P., Am J Physio Lung Cell Mol Physiol., 2001, 280:L354-L362
Tronde Ann et al., J Pharm. Sci., 2003, 92(6), 1216-33
Selman M, et al., Ann Intern Med., 2001, 16;134(2):136-51
Wohnsland F et al., Med Chem., 2001, 44;923-930
1

Claims (15)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (Ib)
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C ≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; R8i R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili -C1-C4alkoksi ili NR8R9predstavlja alifatični 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih od O, N i S; i R14i R15nezavisno predstavljaju H ili C1-C4alkil; ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
  2. 2. Jedinjenje formule (Ic)
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; R8i R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili -C1-C4alkoksi ili NR8R9predstavlja alifatični 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabranih od O, N i S; i R14i R15nezavisno predstavljaju H ili C1-C4alkil; Z predstavlja CO ili SO2; ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
  3. 3. Postupak za dobijanje jedinjenja formule (lb), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, prema patentnom zahtevu 1, koji sadrži: reakciju jedinjenja Formule (XIII): 2
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njihovu so; sa jedinjenjem formule (XIV):
    pri čemu R8i R9nezavisno predstavljaju H, ili C1-C4alkil opciono supstituisan sa OH, okso, NR14R15ili -C1-C4alkoksi ili NR8R9predstavlja alifatični 4-8 člani heterocikl koji sadrži jedan ili više heteroatoma izabran1H od O, N i S; R14i R15nezavisno predstavljaju H ili C1-C4alkil ili njegovu so.
  4. 4. Postupak prema patentnom zahtevu 3, koji dalje obuhvata uklanjanje zaštite jedinjenja Formule (Ib) da bi se uklonila acetil grupa.
  5. 5. Postupak za dobijanje jedinjenja Formule (XIII)
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njihovu so; koji obuhvata: reakciju jedinjenja Formule (IX):
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njihovu so; sa jedinjenjem Formule (XV):
    ili njegovom soli.
  6. 6. Postupak prema patentnom zahtevu 5, pri čemu je postupak za dobijanje jedinjenja Formule (IX):
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njegovu so, obuhvata uklanjanje zaštite jedinjenja Formule (XI)
    4 pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njegovu so.
  7. 7. Postupak prema patentnom zahtevu 6, pri čemu je postupak za dobijanje jedinjenja formule (XI):
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njegovu so, obuhvata reakciju jedinjenja Formule (II)
    pri čemu R1predstavlja Me, Et, CH=CH2, C ≡ C-H ili C ≡ C-Me; L predstavlja -OC1-C4alkil; ili njihovu so; sa jedinjenjem Formule (XII)
    pri čemu R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njegovu so.
  8. 8. Postupak prema patentnom zahtevu 7, pri čemu je postupak dobijanja jedinjenja Formule (II)
    pri čemu R1predstavlja Me, Et, CH=CH2, C ≡ C-H ili C ≡ C-Me; L predstavlja -Oetil; ili njegovu so, obuhvata: (a) reagovanje jedinjenja Formule (IV):
    pri čemu R1predstavlja Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; ili njihovu so; sa jedinjenjem Formule (V):
    ili njegovom soli; ili (b) reagovanje jedinjenja Formule (VI):
    gde R1predstavlja Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; ili njihova so; sa jedinjenjem Formule (V)
    ili njegovom soli.
  9. 9. Postupak za dobijanje jedinjenja Formule (XVI)
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; Z predstavlja CO ili SO2; ili njihovu so; koji obuhvata: reakciju jedinjenja formule (XVII)
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; Z predstavlja CO ili SO2; ili njihovom soli; sa CBr4i PPh3.
  10. 10. Postupak za dobijanje jedinjenja Formule (XVII)
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; Z predstavlja CO, ili njegovu so, koji obuhvata: reakciju jedinjenja Formule (IX)
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; ili njihovu so; sa jedinjenjem Formule (XVIII)
    ili njegovom soli.
  11. 11. Postupak za dobijanje jedinjenja Formule (XVII)
    pri čemu R1predstavlja H, Me, Et, CH=CH2, C≡ C-H ili C ≡ C-Me; R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; Z predstavlja SO2, ili njegovu so, koji obuhvata: reakciju jedinjenja Formule (II)
    pri čemu R1predstavlja Me, Et, CH=CH2, C ≡ C-H ili C ≡ C-Me; L predstavlja -OC1-C4alkil; ili njihovu so; sa jedinjenjem Formule (III)
    pri čemu R2predstavlja H, C1-C6alkil, C1-C6alkoksi, C3-C8cikloalkil, -CH2-(C3-C8cikloalkil), halogen ili cijano; R3predstavlja Formulu (i)
    pri čemu X1-R4predstavlja Me i Y1-R5predstavlja CH2CH2OH; Z predstavlja SO2; ili njegovu so.
  12. 12. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje Formule (lb) prema patentnom zahtevu 1 ili Formulu (Ic) prema patentnom zahtevu 2, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih razblaživača ili nosača.
  13. 13. Jedinjenje Formule (lb) prema patentnom zahtevu 1 ili Formule (Ic) prema patentnom zahtevu 2 za upotrebu kao lek.
  14. 14. Jedinjenje Formule (lb) prema patentnom zahtevu 1 ili Formule (Ic) prema patentnom zahtevu 2 ili kompozicija prema patentnom zahtevu 12 za upotrebu u lečenju fibroznih bolesti ili intersticijaln1H bolesti pluć a, npr. odabrano od IPF-a, intersticijalne pneumonije gigantsk1H ć elija, sarkoidoze, cistične fibroze, respiratornog distres sindroma, fibroze pluć a izazvane lekovima, granulomatoze, silikoze, azbestoze, sistemske skleroderme, virusno izazvane ciroze jetre, hepatitisa C ili bolesti hepatitisa C sa fibroznom komponentom npr. izabrani od skleroderme, sarkoidoze i sistemskog eritematoznog lupusa, ili za upotrebu u lečenju bolesti koje karakteriše hiperproliferacija ć elija, na primer, raka, posebno raka pluć a ili za upotrebu u lečenju respiratornih poreme ć aja uključuju ć i HOBP (uključuju ć i hronični bronhitis i emfizem), astme, pedijatrijske astme, alergijskog rinitisa, rinitisa i sinusitisa.
  15. 15. Jedinjenje Formule (lb) prema patentnom zahtevu 1 ili Formule (Ic) prema patentnom zahtevu 2 ili kompozicija prema patentnom zahtevu 12 u kombinaciji sa nintedanibom ili pirfenidonom za upotrebu u lečenju fibrozn1H bolesti ili intersticijalnih bolesti pluć a odabranih od IPF-a, intersticijalne pneumonije gigantskih ć elija, sarkoidoze, cistične fibroze, sindroma respiratornog distresa, lekom izazvane fibroze pluć a, granulomatoze, silikoze, azbestoze, sistemskog skleroderma, virusno indukovane ciroze jetre odabrana od ciroze jetre izazvane hepatitisom C, ili bolesti kože sa fibroznom komponentom, npr. poželjno izabrani od skleroderme, sarkoidoze i sistemskog eritematoznog lupusa, ili za upotrebu u lečenju bolesti naznačeno time da je bolest izabrana od hiperproliferacije ć elije, na primer, raka, posebno raka pluć a ili za upotrebu u lečenju respiratornih poreme ć aja uključuju ć i HOBP (uključuju ć i hronični bronhitis i emfizem), astme, pedijatrijske astme, alergijskog rinitisa, rinitisa i sinusitisa.
RS20230860A 2015-12-24 2016-12-23 Jedinjenja indolinona i njihova upotreba u lečenju fibroznih bolesti RS64703B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15202764 2015-12-24
EP20162043.2A EP3722291B1 (en) 2015-12-24 2016-12-23 Indolinone compounds and their use in the treatment of fibrotic diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64703B1 true RS64703B1 (sr) 2023-11-30

Family

ID=55068868

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230860A RS64703B1 (sr) 2015-12-24 2016-12-23 Jedinjenja indolinona i njihova upotreba u lečenju fibroznih bolesti

Country Status (29)

Country Link
US (1) US11046672B2 (sr)
EP (2) EP3722291B1 (sr)
JP (1) JP7068172B2 (sr)
KR (1) KR20180128390A (sr)
CN (1) CN109302846B (sr)
AU (1) AU2016376011B2 (sr)
BR (1) BR112018013033A2 (sr)
CA (1) CA3009778A1 (sr)
CL (1) CL2018001742A1 (sr)
CO (1) CO2018007663A2 (sr)
DK (1) DK3722291T3 (sr)
EA (1) EA038796B1 (sr)
ES (2) ES2956820T3 (sr)
FI (1) FI3722291T3 (sr)
HR (1) HRP20230833T1 (sr)
HU (1) HUE062784T2 (sr)
IL (1) IL260221A (sr)
LT (1) LT3722291T (sr)
MX (1) MX379859B (sr)
MY (1) MY195904A (sr)
PH (1) PH12018501575A1 (sr)
PL (1) PL3722291T3 (sr)
PT (1) PT3722291T (sr)
RS (1) RS64703B1 (sr)
SG (1) SG11201805423TA (sr)
SI (1) SI3722291T1 (sr)
SM (1) SMT202300260T1 (sr)
WO (1) WO2017109513A1 (sr)
ZA (1) ZA201804950B (sr)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6938510B2 (ja) 2015-12-24 2021-09-22 ザ・リージエンツ・オブ・ザ・ユニバーシテイー・オブ・カリフオルニア Ｃｆｔｒ制御因子及びこの使用方法
CN109153666B (zh) 2016-03-08 2021-07-16 莱斯彼维特有限公司 吲哚衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途
US11839616B2 (en) 2017-08-24 2023-12-12 The Regents Of The University Of California Ocular pharmaceutical compositions
CN109678810B (zh) * 2019-01-23 2022-10-28 南京工业大学 一种1,2-氧氮杂环丁烷类化合物及其制备方法与应用
IL293013A (en) * 2019-11-20 2022-07-01 Angion Biomedica Corp Methods for treating inflammatory bowel disease
CN111789842B (zh) * 2020-08-07 2021-09-21 南开大学 尼达尼布在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用
KR102739882B1 (ko) * 2021-04-02 2024-12-06 연세대학교 원주산학협력단 로베글리타존을 유효성분으로 하는 안과질환 치료용 조성물
CN113200936B (zh) * 2021-05-19 2022-10-21 南京工业大学 10-甲基吩噁嗪衍生物、其锆金属有机框架材料及制备方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA75054C2 (uk) * 1999-10-13 2006-03-15 Бьорінгер Інгельхайм Фарма Гмбх & Ко. Кг Заміщені в положенні 6 індолінони, їх одержання та їх застосування як лікарського засобу
DE10117204A1 (de) 2001-04-06 2002-10-10 Boehringer Ingelheim Pharma In 6-Stellung substituierte Indolinone, ihre Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
JP2004182726A (ja) 2002-11-22 2004-07-02 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd ２−オキソインドリン誘導体
PE20060777A1 (es) 2004-12-24 2006-10-06 Boehringer Ingelheim Int Derivados de indolinona para el tratamiento o la prevencion de enfermedades fibroticas
US20060154939A1 (en) 2004-12-24 2006-07-13 Boehringer Ingelheim International Gmbh Medicaments for the Treatment or Prevention of Fibrotic Diseases
AU2006268265A1 (en) 2005-07-13 2007-01-18 Allergan, Inc. Kinase inhibitors
WO2010009166A1 (en) * 2008-07-14 2010-01-21 Gilead Colorado, Inc. Oxindolyl inhibitor compounds
CN109153666B (zh) 2016-03-08 2021-07-16 莱斯彼维特有限公司 吲哚衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的用途

Also Published As

Publication number Publication date
HUE062784T2 (hu) 2023-12-28
LT3722291T (lt) 2023-12-11
AU2016376011B2 (en) 2021-02-11
CN109302846A (zh) 2019-02-01
ES2796358T3 (es) 2020-11-26
CN109302846B (zh) 2021-05-11
BR112018013033A2 (pt) 2018-12-04
SMT202300260T1 (it) 2023-09-06
EP3394048B1 (en) 2020-03-11
EP3722291B1 (en) 2023-07-19
PT3722291T (pt) 2023-09-22
ES2956820T3 (es) 2023-12-28
EP3722291A1 (en) 2020-10-14
EA201891506A1 (ru) 2019-02-28
PH12018501575A1 (en) 2019-04-15
CA3009778A1 (en) 2017-06-29
JP7068172B2 (ja) 2022-05-16
EP3394048A1 (en) 2018-10-31
IL260221A (en) 2018-07-31
MY195904A (en) 2023-02-27
JP2019501910A (ja) 2019-01-24
MX2018007852A (es) 2018-11-09
AU2016376011A1 (en) 2018-08-09
DK3722291T3 (da) 2023-09-18
CO2018007663A2 (es) 2018-10-10
PL3722291T3 (pl) 2023-11-27
SI3722291T1 (sl) 2023-10-30
SG11201805423TA (en) 2018-07-30
EA038796B1 (ru) 2021-10-20
ZA201804950B (en) 2020-11-25
US20190337929A1 (en) 2019-11-07
US11046672B2 (en) 2021-06-29
FI3722291T3 (fi) 2023-09-05
WO2017109513A1 (en) 2017-06-29
HRP20230833T1 (hr) 2023-11-10
CL2018001742A1 (es) 2018-11-23
KR20180128390A (ko) 2018-12-03
MX379859B (es) 2025-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS64703B1 (sr) Jedinjenja indolinona i njihova upotreba u lečenju fibroznih bolesti
KR101970837B1 (ko) 항바이러스제로서의 피라졸로[1,5-ａ]피리미딘
KR101959194B1 (ko) 신규한 피페리디노-디하이드로티에노피리미딘 설폭사이드 및 ｃｏｐｄ 및 천식을 치료하기 위한 이들의 용도
US11208381B2 (en) Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors
PT2215092E (pt) Piperidino-di-hidrotienopirimidinas substituídas
CN111620815B (zh) 手性氯喹、羟氯喹和其衍生物及其制备方法与用途
HK40039709A (en) Indolinones compounds and their use in the treatment of fibrotic diseases
HK40003052A (en) Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors
HK40003052B (en) Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors
AU2019207140A1 (en) Compound, preparation method therefor and use thereof
HK40002826A (en) Indolinones compounds and their use in the treatment of fibrotic diseases
HK40002827A (en) Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors