RS64763B1 - Methylobacterium sp. nov. soj, kompozicije koje ga sadrže i njegova upotreba kao bio-stimulansa i endofitne bakterije za fiksiranje azota - Google Patents

Methylobacterium sp. nov. soj, kompozicije koje ga sadrže i njegova upotreba kao bio-stimulansa i endofitne bakterije za fiksiranje azota

Info

Publication number
RS64763B1
RS64763B1 RS20230986A RSP20230986A RS64763B1 RS 64763 B1 RS64763 B1 RS 64763B1 RS 20230986 A RS20230986 A RS 20230986A RS P20230986 A RSP20230986 A RS P20230986A RS 64763 B1 RS64763 B1 RS 64763B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
methylobacterium
nov
strain
nitrogen
plants
Prior art date
Application number
RS20230986A
Other languages
English (en)
Inventor
Molina Jesús Juárez
Martín Félix Fernández
García Antonio José Bernabé
Martínez Ana Vila
Álvarez Francisco José Carmona
Vera Rocío Torres
Original Assignee
Symborg S L
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Symborg S L filed Critical Symborg S L
Publication of RS64763B1 publication Critical patent/RS64763B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing liquids as carriers, diluents or solvents
    • A01N25/04—Dispersions, emulsions, suspoemulsions, suspension concentrates or gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing solids as carriers or diluents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P21/00—Plant growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/32—Processes using, or culture media containing, lower alkanols, i.e. C1 to C6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/30—Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
    • Y02P60/20—Reduction of greenhouse gas [GHG] emissions in agriculture, e.g. CO2
    • Y02P60/21—Dinitrogen oxide [N2O], e.g. using aquaponics, hydroponics or efficiency measures
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W30/00—Technologies for solid waste management
    • Y02W30/40—Bio-organic fraction processing; Production of fertilisers from the organic fraction of waste or refuse

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Fertilizers (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na oblast agronomije. Konkretno, odnosi se na Methylobacterium sp. nov. soj, na kompozicije koje ga sadrže i na njegovu upotrebu kao biostimulansa i endofitne bakterije koja fiksira azot u biljkama.
STANJE TEHNIKE
[0002] U oblasti poljoprivrede poznata su mnoga đubriva. Posebno, đubriva na bazi azota, kao što su amonijak, amonijum nitrat (NH4NO3) i urea, se obično koriste kako bi se prinos useva održao što je moguće više. U stvari, mnogi biološki procesi u biljkama uključuju azot; na primer, azot je uključen u proizvodnju aminokiselina i, prema tome, proteina.
[0003] Međutim, samo deo đubriva na bazi azota koji se primenjuje na useve pretvara se u biljnu materiju. Količina đubriva koja nije pretvorena u biljnu materiju može da se akumulira u zemljištu ili da iscuri u površinske ili podzemne vode, uzrokujući zagađenje vode.
[0004] Da bi se smanjila upotreba hemijskih đubriva, mogu se koristiti inokulanti uključujući bakterije koje fiksiraju azot da delimično zamene takva hemijska đubriva.
[0005] Glavni rezervoari metilotrofnih bakterija su, generalno, zemlja i voda (i slatka i slana), ali ove bakterije su takođe prisutne u širokom spektru prirodnih i veštačkih okruženja, uključujući prašinu, sedimente jezera, vazduh, kreme za lice, fermentisane proizvode, vodovodne mreže, kupatila i sisteme klimatizacije.
[0006] Međutim, poznati inokulanti ne omogućavaju zadovoljavajuće rezultate u stimulaciji rasta biljaka i takođe ne dozvoljavaju zamenu hemijskih đubriva, niti značajno smanjenje upotrebe takvih hemijskih proizvoda.
[0007] Većina poznatih mikroorganizama koji deluju kao stimulatori rasta i/ili fiksiranje azota nisu u stanju da proizvedu značajan sadržaj azota kako bi značajno smanjili azotne jedinice potrebne za rast biljaka. Ovi poznati mikroorganizmi proizvode neke vrste auksina, poput indolsirćetne kiseline i podstiču ukorenjivanje više nego fiksaciju azota.
[0008] US 2015/101373 A1 otkriva fiksiranje azota i podsticanje rasta biljaka Methylobacterium NRRL B-50628 i NRRL B-50629.
[0009] KR 2007 0106867 A otkriva fiksiranje azota i podsticanje rasta biljaka Methylobacterium fujisawaense CBMB 20.
[0010] US 2018/168167 A1 otkriva gljive koje podstiču rast biljaka Glomus Iranicum var. tenuihypharum BCCM 54871.
[0011] SI-WON LEE ET AL: "Methylobacterium dankookense sp. nov., isolated from drinking water", THE JOURNAL OF MICROBIOLOGY, vol.47, no.6, (2009-12-01), pages 716-720, XP055350364, DOI: 10.1007/s12275-009-0126-6, otkriva enzimsku aktivnost i genetsku sličnost Methylobacterium dankookense.
SUŠTINA PRONALASKA
[0012] Stoga je cilj ovog pronalaska da obezbedi soj Methylobacterium sp. nov., kao i kompozicije koje ga sadrže, da bi se obezbedio pozitivan uticaj na useve. Drugi cilj pronalaska je da obezbedi soj Methylobacterium sp. nov. Koji omogućava da se barem smanji upotreba hemijskih đubriva na bazi azota. Ovi i drugi ciljevi se postižu pomoću Methylobacterium sp. nov. soja deponovanog pod pristupnim brojem CECT 9580.
DETALJAN OPIS
[0013] U sledećem opisu, karakteristike pronalaska će biti opisane u vezi sa ilustrativnim primerima izvođenja; međutim, bilo koja karakteristika pronalaska koja je ovde otkrivena, može se kombinovati sa jednom ili više drugih karakteristika koje su ovde otkrivene da bi se obezbedili dodatni primeri izvođenja ovog pronalaska. Takvi primeri izvođenja će se smatrati otkrivenim u ovoj prijavi.
[0014] Predmet ovog pronalaska je stoga soj Methylobacterium sp. nov., deponovan pod pristupnim brojem CECT 9580.
[0015] Soj Methylobacterium sp. nov. pronalaska, koji je deponent identifikovao sa referencom SB0023/3, deponovan je 21.3.2018. u Međunarodnom depozitarnom organu Colección Española De Cultivos Tipo (CECT), Edificio 3 CUE, Parc Científic Universitat de Valencia, Catedrático Agustin Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia) ESPAÑA, od strane Symborg S.L., sa adresom Campus de Espinardo, 7, edificio CEEIM, 30100 Murcia, Spain, pod brojem CECT 9580.
[0016] Soj pronalaska je izolovan iz unutrašnjosti spora mikorizne gljive Glomus iranicum var. tenuihypharum. Glomus iranicum var. tenuihypharum je arbuskularna mikorizna gljiva koja je sama po sebi poznata u tehnici. Glomus iranicum var. tenuihypharum je deponovan 19.04.2013. godine, pod brojem BCCM depozita 54871, kod međunarodnog depozitarnog autoriteta Belgian Coordinated Collections of Micro-Organisms (BCCM) sa adresom Université Catholique de Louvain, Mycothèque de l'Université catholique de Louvain (MUCL), Croix du Sud 2, Box L7.05.06, 1348 Louvain-la-Neuve, by Symborg, S.L.
[0017] Glomus iranicum var. tenuihypharum je otkriven u WO2015/000612 i WO2015/000613.
[0018] Soj prema pronalasku, pokazuje veliku sličnost sa Methylobacterium dankookense (98.7% na osnovu sekvence gena 16S).
[0019] Filogenomska analiza kroz UBCG je pokazala Methylobacterium dankookense kao najbliži srodnik soju pronalaska. Prikupljeni podaci podržali su stvaranje nove vrste za prilagođavanje soju pronalaska, za koji je, na primer, ime Methylobacterium simbioense nov. mogao biti predložen.
[0020] Da bi se pokazalo da li se može smatrati novom vrstom, analizirana je fenotipska i genotipska karakterizacija.
[0021] Soj pronalaska je gram-negativan, striktno aeroban, u obliku je bacila (0.8-1 µm širine i 1.2-1.6 µm dužine) sa bočnom flagelom, prikazan pojedinačno ili u paru po dva, bez formiranja spora. Kolonije uzgajane na MMM agaru ili NFbM agaru 5 do 7 dana su kružne, ružičaste boje sa definisanom jasnom granicom, što nije opisano kod drugih sličnih sojeva. Ima optimalnu temperaturu od 28ºC. U prisustvu NaCl, stopa rasta je smanjena do 3% NaCl ili više tamo gde ne raste.
[0022] Filogenetski pristup zasnovan na više gena je postignut korišćenjem UBCG alata kako bi se bolje identifikovali najbliži srodnici soja pronalaska, CECT 9580. Položaj soja prema pronalasku je istražen u UBCG stablu koje sadrži 15 genoma srodnika unutar roda. Stablo (slika 13) pokazuje specifičan odnos prema M. dankookense.
[0023] Prednost, u skladu sa primerima izvođenja, soj prema pronalasku karakteriše činjenica da je endofitna bakterija koja fiksira azot sposobna da obezbedi azot biljci, omogućavajući smanjenje spoljnog unosa azota do 60%. Drugim rečima, soj prema pronalasku omogućava smanjenje spoljašnjeg unosa azota do 60%, u odnosu na spoljašnji unos azota koje bi bilo neophodno u odsustvu pomenutog soja.
[0024] Povoljno, soj prema pronalasku može da se kreće kroz biljku od korena do listova i obrnuto.
[0025] Postupak za izolaciju soja prema pronalasku sadrži sledeće korake:
- obezbeđivanja jedne ili više spora Glomus iranicum var. tenuihypharum;
- ekstrakcije citoplazme iz spora;
- inokulacije ekstrahovane citoplazme u medijumu koji sadrži metanol; i
- inkubiranja inokulisane podloge za rast Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska.
[0026] U skladu sa primerima izvođenja, postupak za izolaciju soja prema pronalasku sadrži sledeće korake:
- izolovanja iz spora Glomus iranicum var. tenuihypharum, prethodno površinski dezinfikovanih kroz postupak eksternih ciklusa dezinfekcije, da bi se dobio rastvor spora;
- nakon pomenutog postupka, rastvori spora se maceriraju i citoplazma gljive se kultiviše u metanolskom medijumu sa minimalnom količinom soli (MMM);
- kolonije soja pronalaska su identifikovane, a jedna od onih koje su pokazale ružičastu boju su pokupljene i ponovo izolovane iz medijuma.
[0027] Prema primerima izvođenja, pre ekstrakcije citoplazme, spore se tretiraju dezinfekcionim sredstvom, da bi se dezinfikovali spoljni zidovi spora.
[0028] Dezinfekcija spoljašnjih zidova spora može se izvesti prema tehnikama koje su same po sebi poznate u tehnici. Na primer, dezinfekcija spoljašnjeg zida spora može se izvršiti tretiranjem spora natrijum hipohloritom (npr. 5% rastvorom natrijum hipohlorita u puferu, na primer Tween<®>80).
[0029] Ekstrakcija citoplazme iz spora Glomus iranicum var. tenuihypharum se može izvesti prema tehnikama koje su same po sebi poznate u tehnici, na primer, maceracijom spora u pogodnom puferu, poželjno Ringerovom rastvoru.
[0030] Posle inokulacije ekstrahovane citoplazme u medijumu koji sadrži metanol (npr., metanolski medijum sa minimalnom količinom soli (MMM)). Poželjno, medijum koji sadrži metanol ima sledeći sastav: Metanol, 20.0 ml; NaNO3, 0.5 g; (NH4)2SO4, 0.5 g; MgSO4·7H2O, 0.5 g; K2HPO4, 1.0 g; FeSO4·7H2O, 0.01 g; CaCl2·2H2O, 0.01 g; KCI, 0.5 g; Rastvor vitamina, 1.0 ml; rastvor mikronutrijenata, 2.0 ml; Agar, 12 g; pH 7.20. Inokulisani medijum se inkubira, poželjno na 28ºC tokom 5 dana, da bi se omogućio rast Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska.
[0031] U skladu sa primerom izvođenja, inkubacija se može izvesti na temperaturi u rasponu od 25°C do 30°C (poželjno na 28°C).
[0032] U skladu sa primerima izvođenja, inkubacija se može izvesti na pH u rasponu od 5 do 9 (poželjno 7).
[0033] Posle inkubacije i uzgoja soja prema pronalasku, kolonije se vizuelno identifikuju, stvaranjem tipične ružičaste boje. Zatim se jedna ili više kolonija pokupe i ponovo izoluju, po mogućnosti, najmanje tri puta da bi se potvrdilo da su čiste od bilo kakve moguće kontaminacije.
[0034] Soj ovog pronalaska je pogodan da se uključi u kompoziciju.
[0035] Drugi predmet ovog pronalaska je stoga kompozicija koja sadrži soj Methylobacterium sp. nov., deponovan pod pristupnim brojem CECT 9580.
[0036] U skladu sa primerima izvođenja, kompozicija pronalaska može da sadrži jedan ili više poljoprivredno prihvatljivih nosača i/ili jedan ili više poljoprivredno prihvatljivih koformulanata.
[0037] Poljoprivredno prihvatljivi nosači i poljoprivredno prihvatljivi koformulanti su sami po sebi poznati u tehnici.
[0038] U skladu sa primerima izvođenja, nosači i/ili koformulanti mogu biti izabrani iz grupe koja se sastoji od talka, gline, maltodekstrina, obranog mleka, glukoze, suvih ekstrakata povrća, kao što su oni od čaja, kasave i kinoe, kaolina, kokosa, dijatomejske zemlje, hitina, CaCO3, alginata, karagena, surfaktina, ramnolipida, soforolipida, saponina, kalijum oleata i njihovih smeša.
[0039] U skladu sa primerima izvođenja, kompozicija može biti u čvrstom obliku, vodenom tečnom obliku, uljanom tečnom obliku, obliku emulzije, polučvrstom obliku ili u obliku gela.
[0040] Poželjno, kompozicija je u čvrstom obliku, poželjnije, kompozicija je u obliku praha.
[0041] Takođe predmet pronalaska je postupak za proizvodnju kompozicije koja sadrži soj pronalaska, tj. Methylobacterium sp. nov., deponovan pod pristupnim brojem CECT 9580.
[0042] U skladu sa primerima izvođenja, kompozicija pronalaska se karakteriše činjenicom da se primenjuje kao omotač semena, primenom na zemljište, na primer, sistemom za navodnjavanje kap po kap ili kvašenjem, ili folijarnom primenom.
[0043] Postupak za proizvodnju kompozicije pronalaska sadrži sledeće korake:
- obezbeđivanja najmanje jednog Methylobacterium sp. nov. deponovanog pod pristupnim brojem CECT 9580 prema pronalasku,
- inokulacije navedenog Methylobacterium sp. nov. u tečnom medijumu za kulturu uključujući metanol,
- kultivisanja navedenog Methylobacterium sp. nov. da bi se dobila tečna kultura koja sadrži Methylobacteria i;
- sušenja navedene tečne kulture da bi se dobila suva kompozicija.
[0044] Povoljno, na kraju koraka kultivisanja, konačna proizvodnja Methylobacteria pronalaska, potvrđuje se merenjem optičke gustine bakterija u kulturi i proizvodnje biomase.
[0045] U skladu sa primerima izvođenja, medijum koji uključuje metanol je MMMM, tj., minimalni mineralni medijum sa metanolom.
[0046] Prema primerima izvođenja, navedeni korak kultivisanja navedenog Methylobacterium sp. nov. da bi se dobila tečna kultura koja sadrži Methylobacteria može se izvesti inkubacijom na temperaturi u rasponu od 25°C do 30°C (poželjno na 28°C) tokom 3-10 dana, poželjno 5-7 dana.
[0047] Prema primerima izvođenja, gore pomenuti korak obezbeđivanja najmanje jednog Methylobacterium sp. nov. pronalaska, može da sadrži korak izolacije soja pronalaska korišćenjem medijuma bez azota, na primer, NFBG (bakterijski medijum bez azota dopunjen glukozom), na primer NFBG medijum može imati sledeći sastav: glukoza, jabučna kiselina 5.0 g, metanol 20.0 ml, (NH4)6Mo7O244H2O 0.002 g, MgSO47H2O 0.2 g, K2HPO40.1 g, KH2PO40.4 g, FeCl30.01 g, NaCl 0.1 g, KOH 4.8 g, rastvor mikronutrijenata 2.0 ml, rastvor vitamina 1.0 ml, rastvor bromotimol plavog 0.5% na KOH 2N 2.0 ml, pH 6.9.
[0048] U skladu sa primerima izvođenja, izolacija Methylobacterium sp. nov. pronalaska korišćenjem medijuma bez azota može se izvesti inkubacijom na temperaturi u rasponu od 25°C do 30°C (poželjno na 28°C) tokom 3-10 dana, poželjno 5-7 dana.
[0049] Povoljno, soj prema pronalasku formira kolonije crveno-ružičaste boje. Prema tome, kolonije soja pronalaska mogu se lako identifikovati.
[0050] Prema primerima izvođenja, gore pomenuti korak obezbeđivanja najmanje jednog Methylobacterium sp. nov. pronalaska, može dalje da sadrži korak izbora kolonije Methylobacterium sp. nov. pronalaska i selektivni rast navedenog Methylobacterium sp. nov. koristeći medijum bez azota, koji sadrži metanol (npr., MMMNF, Mineralni minimalni medijum sa metanolom bez azota).
[0051] U skladu sa primerima izvođenja, nakon selektivnog uzgoja koristeći medijum bez azota, koji sadrži metanol, kolonija Methylobacterium sp. nov. pronalaska može biti izabrana i inokulisana u tečnom medijumu za kulturu uključujući metanol. U skladu sa primerima izvođenja, navedeni korak selektivnog uzgoja može da se izvede inkubacijom na temperaturi u rasponu od 25°C do 30°C (poželjno na 28°C) tokom 3-10 dana, poželjno 5-7 dana.
[0052] Prema primerima izvođenja, gore navedeni korak kultivisanja navedenog Methylobacterium sp. nov. da bi se dobila tečna kultura koja sadrži Methylobacteria može se izvršiti fermentacijom.
[0053] Prema primerima izvođenja, gore navedeni korak kultivisanja navedenog Methylobacterium sp. nov. da bi se dobila tečna kultura koja sadrži Methylobasteria, može da sadrži prvi korak uzgoja da bi se dobila kultura Methylobacterium sp. nov. koja bi se koristila kao pre-inokulum, i drugi korak masovnog uzgoja, poželjno fermentacijom.
[0054] Sledeći predmet ovog pronalaska je upotreba soja Methylobacterium sp. nov., deponovanog pod pristupnim brojem CECT 9580 pronalaska kao biostimulans i/ili endofitne bakterije koja fiksira azot u biljkama.
[0055] Ustvari, iznenađujuće je primećeno da soj pronalaska, kao i kompozicija koja ga sadrži, može da stimuliše biljku u cilju povećanja zdravlja i prinosa biljke.
[0056] Takođe, povoljno, iznenađujuće je primećeno da se soj pronalaska, kao i kompozicija koja ga sadrži, može koristiti za obezbeđivanje azota u biljkama. Konkretno, primećeno je da, obezbeđivanjem soja ovog pronalaska biljci, upotreba hemijskog azotnog đubriva može biti značajno smanjena; na primer, primećeno je da se smanjenje količine hemijskog azotnog đubriva do 60% može postići korišćenjem soja pronalaska ili kompozicije koja ga sadrži.
[0057] Povoljno, soj prema pronalasku može biti obezbeđen samoj biljci ili kao komponenta kompozicije koja uključuje druge poljoprivredno prihvatljive komponente.
[0058] Primećeno je da soj pronalaska može stimulisati biljku iz korena i/ili nadzemnog dela fiksiranjem atmosferskog azota. Bez vezivanja za specifično naučno objašnjenje, primećeno je da soj pronalaska prodire u tkiva biljke i aktivira mikrobni enzimski sistem, koji sadrži enzimski kompleks nitrogenaze, koji redukuje atmosferski azot u NH4<+>, koji se može direktno ugraditi u Glu (glutaminsku kiselinu) aminacijom 2-oksoglutarata preko mitohondrijalne Glu dehidrogenaze (NADH-GDH) i, potom, u glutamin pomoću citosolne glutamin sintetaze 1 (GS1), pod određenim fiziološkim uslovima. Glutamin oksoglutarat aminotransferaza je enzim, često skraćen kao GOGAT, koji proizvodi glutamat iz glutamina i α-ketoglutarata i, zajedno sa glutamin sintetazom, igra centralnu ulogu u regulaciji asimilacije azota u fotosintetici koji asimiluje biljka.
[0059] Korisno, takođe je primećeno da soj ovog pronalaska povećava rastvorljivost fosfora (koji je posebno koristan u fazama klijanja), sposoban je da proizvodi auksine i karotene, koji stimulišu razvoj sekundarnih korena.
[0060] Povoljno, soj prema pronalasku može da se obezbedi različitim kulturama.
[0061] Na primer, soj ovog pronalaska je posebno koristan kada se koristi za hortikulturne uzgoje, biljke graminate, uzgoj citrusa, uzgoj koštičavog voća (koštunice), uzgoj vinove loze i šumarstvo.
[0062] Još jedna prednost soja ovog pronalaska je u tome što favorizuje fotosintezu u biljci domaćinu, a samim tim i povećanje biljne biomase.
KRATAK OPIS SLIKA
[0063]
● Slika 1 prikazuje biljke koje rastu u alveolama u komori za rast.
● Slika 2 prikazuje uzorke biljnog tkiva (korenje (a), stabljike (b) i listove (c)) izložene specifičnom medijumu za kulturu nakon dezinfekcije radi rasta metilobakterija.
● Na slici 3 prikazane su slike uzoraka biljnih tkiva biljaka tretiranih sojem prema pronalasku, tretiranjem semena (a-c), navodnjavanjem (d-f) i folijarnom primenom (g-i), izloženih specifičnom hranljivom medijumu za metilobakterije.
● Slika 4 prikazuje slike distribucije ogleda sa tretmanom 1 sojem prema pronalasku i kontrolom tretmana 2. Polje 1 (a), Polje 2 (b), Polje 3 (c).
● Slika 5 prikazuje grafikon sa SPAD merenjima nakon 30 dana primene.
● Na slici 6 prikazan je NDVI indeks za polje 1 (a), polje 2 (b) i polje 3 (c).
● Na slici 7 prikazan je kombinovani CIR indeks za polje 1 (a), polje 2 (b) i polje 3 (c). ● Slika 8 prikazuje slike distribucije ogleda sa tretmanom 1 sojem prema pronalasku i kontrolom tretmana 2. Polje 1 (a), Polje 2 (b).
● Slika 9 prikazuje grafikon sa SPAD merenjima nakon 30 dana primene.
● Slika 10 prikazuje indeks NDVI u polju 1 nakon 45 dana tretmana, meren svakih 15 dana.
● Slika 11 prikazuje indeks NDVI u polju 2 nakon 45 dana tretmana, meren svakih 15 dana.
● Slika 12A prikazuje nebulizator u vreme primene tretmana (jednog ili više) i Slika 12B prikazuje veličinu zrna u vreme primene tretmana (jednog ili više).
● Slika 13 prikazuje filogenetsko stablo generisano sa UBCG korišćenjem aminokiselinskih sekvenci. Brojevi u čvorovima označavaju indeks podrške gena (maksimalna vrednost je 92). Pristupni brojevi genoma su navedeni u zagradama. Stubić, 0.05 zamena po poziciji.
EKSPERIMENTALNI DEO
[0064] Dodatni aspekti i prednosti ovog pronalaska će biti ilustrovani pozivanjem na sledeće neograničavajuće primere.
[0065] Soj pronalaska je dobijen od spora Glomus iranicum var. tenuihypharum.
[0066] Izolovan je iz unutrašnjeg dela spora, postupkom višestruke dezinfekcije spoljašnjih zidova spora ispiranjem sa 0.5% natrijum hipohloritom plus Tween 80 tokom 5 minuta, izvodeći 5 ciklusa dezinfekcije. Nakon toga, rastvori spora su macerirani i citoplazma gljive je zasejana u minimalni slani metanolski medijum (MMM) (Metanol, 20.0 ml; NaNO3, 0.5 g; (NH4)2SO4, 0.5 g; MgSO4·7H2O, 0.5 g; K2HPO4, 1.0 g; FeSO4·7H2O, 0.01 g; CaCl2·2H2O, 0.01 g; KCI, 0.5 g; rastvor vitamina 1.0 ml; rastvor mikronutrijenata, 2.0 ml; Agar, 12 g; pH 7.20) na 28ºC tokom 5 dana. Iz medijuma je identifikovano 5 različitih kolonija, a one koje su pokazivale ružičastu boju su pokupljene i ponovo izolovane najmanje tri puta kako bi se potvrdilo da su čiste od bilo koje druge moguće kontaminacije.
Primer 1
Ogled 1. Putevi primene soja pronalaska.
[0067] Eksperimenti su sprovedeni u komori za kultivaciju primenom soja pronalaska, tj., Methylobacterium sp. nov., soja deponovanog pod pristupnim brojem CECT 9580, folijarnom primenom, nanošenjem na zemljište i oblaganjem semena, tj. premazivanjem semena.
[0068] Prisustvo soja pronalaska je procenjeno u listovima, stabljikama i korenu. Takođe je procenjeno vreme putovanja soja u biljci, od korena do lista i od lista do korena, kao i prodiranje soja kroz korenove stomate i seme.
[0069] Da bi se potvrdio ulazak metilobakterija u biljku i kolonizacija različitih tkiva, sproveden je ogled inokulacije semena u alveole i biljaka kukuruza u posudama za kulturu. U ovom slučaju primenjena su tri tretmana: oblaganje semena, primena navodnjavanjem i folijarna primena. Prisustvo kolonija soja pronalaska je analizirano u korenu, stabljici i listovima tri biološke replike u različitim satima i danima nakon inokulacije („h.a.i.“ i „d.a.i.“).
• Materijali i metode
Korišćeni biljni materijal i mikroorganizmi.
[0070] Seme kukuruza (Zea mais L.) obloženo fungicidima fludioksonilom i mefenoksamom korišćeno je kao biljni materijal. Bakterije koje pripadaju soju Methylobacterium sp. nov. pronalaska i Herbaspirillum seropedicae korišćeni su kao mikrobni inokulanti.
Uslovi uzgoja biljaka kukuruza.
[0071] Za uzgoj biljaka kukuruza korišćene su male plastične posude, sa mešavinom sterilnog supstrata na bazi silicijum peska i kokosovog vlakna u odnosu 2:1, raspoređene u komori za rast na 24°C i 60% relativne vlažnosti (RH) u prisustvu svetlosti, kao što je prikazano na slici 1, tokom 4 nedelje. Biljke su zalivane dva puta nedeljno sterilnom dekalcifikovanom vodom. Posle 15 dana od setve, biljke su zalivene samo jednom hranljivim rastvorom N:P:K: 4:1.7:4.5 u 0.3 %, plus rastvor mikroelemenata.
Tretmani sojem prema pronalasku kod biljaka kukuruza.
[0072] Sprovedeni su različiti tretmani biljaka kukuruza, tj., Methylobacterium sp. nov. deponovanog pod pristupnim brojem CECT 9580 oblaganjem semena (tj., premazivanjem semena), navodnjavanjem i folijarnom primenom, odnosno folijarnim putem. Inokulum je korišćen u čvrstom obliku (prah). Koncentracija bakterija u prahu je bila reda veličine 1 x-10<9>CFU/g. Svaki ispitivani tretman je upoređen sa biljkama koje nisu tretirane kao negativna kontrola. Pored toga, bakterija koja fiksira azot Herbaspirillum seropedicae je korišćena kao pozitivna kontrola ogleda pri koncentraciji čvrstog formata od 1.2-x 10<6>CFU/g.
a) Oblaganje semena.
[0073] Seme kukuruza je obloženo inokulumom u prahu Methylobacterium sp. nov. soja prema pronalasku.
b) put za navodnjavanje
[0074] Posle 4 dana nakon setve, Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska i Herbaspirillum seropedicae inokulisani su navodnjavanjem sa koncentracijom između 1-1.2 x 10<6>CFU po biljci. U tu svrhu, bakterijski inokulum u čvrstom obliku je razblažen u vodi radi daljeg tretmana.
c) Folijarni put
[0075] Kada se biljke pojave između dva i tri prava lista, što odgovara klasifikaciji BBCH 12-13, Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska i Herbaspirillum seropedicae inokulisani su folijarnim putem. Čvrsti bakterijski inokulum je razblažen u vodi do koncentracije od 1-x 10<6>CFU/biljci. Prethodno je podloga bila prekrivena plastikom kako bi se sprečila kontaminacija tretmanom.
[0076] Tretman bakterijama je vršen prskanjem listova prskalicom.
• Detekcija kolonija Methylobacterium sp. nov. soja prema pronalasku u korenu, stabljici i listu.
[0077] Nakon tretmana sa Methylobacterium sp. nov. sojem pronalaska, prisustvo ove bakterije je analizirano zajedno sa njenom pozitivnom kontrolom Herbaspirillum seropedicae u različitim biljnim tkivima. Oni su površno dezinfikovani kako bi se izbegli lažni pozitivni rezultati. Da bi se to uradilo, potopljeni su na 30 sekundi u rastvor etanola (70 %) i natrijum hipohlorita (1 %) u trajanju od 2 minuta, uz naknadno pranje dvostruko destilovanom vodom. Nakon dezinfekcije (koren i list), napravljeni su uzdužni i poprečni rezovi u stabljici za naknadni transfer u specifičnu podlogu za kulturu za metilobakterije. Slika 2 prikazuje takve uzorke biljnog tkiva, izložene specifičnom medijumu za kulturu nakon dezinfekcije radi rasta metilobakterija. Naročito, panel "a" na slici 2 prikazuje uzorke korena, panel "b" na slici 2 prikazuje uzorke stabljika i panel "c" na slici 2 prikazuje uzorke listova. Uzorci tkiva stavljeni u medijum kulture inkubirani su 7 dana na 28°C. Rast kolonije je primećen na stereomikroskopu Leica Wetzlar, a fotografije su snimljene MC170 HD Leica kamerom. Biljke su sakupljene za analizu između 1 i 24 h prvog dana i između 2-10 dana nakon inokulacije (navodnjavanje i folijarna) ili klijanja (oblaganje). Za svaki od tri tretmana i analizirana vremena korišćene su tri biološke replike.
• Statistička analiza dobijenih rezultata
[0078] Za statističku analizu rezultata korišćena je jednostavna ANOVA zajedno sa Fišerovim testom minimalne značajne razlike, za nivo značajnosti p<0.05. Korišćen je softver STATGRAPHICS Centurion 18, kao i Microsoft Excel za obradu podataka i grafičko predstavljanje.
• Rezultati
[0079] Efekat primene Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska: Infekcija i kolonizacija biljke.
(a) Tretiranje semena
[0080] Prva procena za detekciju kolonija bakterija u tretiranim biljkama inokulisanim oblaganjem izvršena je na 48 sati, što se poklapa sa vremenom klijanja semena. Analize su to otkrile posle dva dana Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska je bio prisutan u unutrašnjem tkivu, nakon 4 dana su bili u stabljici i nakon 6 dana su se pojavili u listovima. Dakle, prolaz bakterija ka novim strukturama odvijao se kako se biljka razvijala.
b) Navodnjavanje
[0081] U slučaju inokulacije putem navodnjavanja, bakterije su bile u unutrašnjim tkivima korena 1 sat i porasle na stabljiku između 4 i 8 dana, dostižući listove 10 nakon tretiranja. Dobro je naglasiti da u ovom slučaju nije bila homogena u svim replikama.
c) Folijarni put
[0082] Folijarnim putem, bakterije su pronađene u unutrašnjem tkivu listova 1 sat nakon inokulacije, nakon 6 sati nakon tretmana, otkrivene su i u stabljici i u korenu.
[0083] Slika 3 prikazuje slike uzoraka biljnih tkiva biljaka tretiranih sojem prema pronalasku, tretiranjem semena (a-c), navodnjavanjem (d-f) i folijarnom primenom (g-i), izloženih specifičnom hranljivom medijumu za metilobakterije.
[0084] Tabela 1, prikazana u nastavku, prikazuje podatke koji se odnose na detekciju kolonija Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska u različitim delovima biljke tokom 10 dana. Legenda: H: sati, d: dan, prisustvo bakterija u 20-40 % (+), 50-80 % (++) i 90-100 % (+++). Stablo A: Apikalno stablo; Stablo B: Bazalno stablo.
TABELA 1
Vreme
Tretmani Biljka 1h 3h 6h 9h 12h 24h 2d 3d 4d 6d 8d 10d Koren - - - - - - - - - - - -Stabljika A - - - - - - - - - - - -Kontrola Stabljika B - - - - - - - - - - - -List - - - - - - - - - - - -Koren - - - - - - ++ ++ ++ ++ + + Stabljika A - - - - - - - - ++ ++ + + Tretman Stabljika B - - - - - - - - ++ ++ + + semena List - - - - - - - - - + Koren + + + + + ++ ++ ++ Stabljika A NA NA NA NA NA NA - - + Navodnjavanje Stabljika B NA NA NA NA NA NA - - - - - + List NA NA NA NA NA NA - - - - - + Koren NA NA NA NA NA NA - - - + Stabljika A NA NA NA NA NA NA - - - + Folijarna Stabljika B NA NA NA NA NA NA - - - + primena List ++ ++ ++ + + + + + ++
• Zaključci
[0085] U ovom ogledu je utvrđeno da je ulazak mikroorganizma bio efikasan kako kroz zonu korena tako i preko nadzemnog dela. Stoga, u biljkama tretiranim bilo kojim postupkom, kolonije Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska su locirane, što ukazuje da se ovaj endofitni mikroorganizam transportuje od korena do lista i nazad.
Primer 2 Ogled 2. Efikasnost upotrebe soja pronalaska u smanjenju od 40% azotnog đubriva u kultivaciji kukuruza dugog ciklusa.
• Ciljevi.
[0086] Da bi upoznali efikasnost soja pronalaska na razvoj kukuruza (kukuruz), protiv smanjenja đubrenja od 40% azotnog pokrivača u konvencionalnim uslovima uzgoja, kroz pojavu zelene boje lista (SPAD), vegetacijske indekse, nivo azota u biljci, koncentraciju mikroorganizma u listu i proizvodni prinos.
• Materijali i metode.
Ogledna polja i đubrenje.
[0087] Ogled je obavljen u Španiji, na tri farme u Hueski. Prva farma sa koordinatama 41° 52'12.7"N 0° 23'11.1" W u Montesusinu, Hueska; druga farma sa koordinatama 41° 40'47.6"N 0° 17'09.5" E Belver de Cinca, Hueska; treća farma sa koordinatama 41 °47'58.1"N 0° 23'56.0" E Tamarite de litera, Hueska.
[0088] Preporuke za đubrenje bile su konvencionalno đubrenje i 40% smanjenje tretmana redukcije azota. U tu svrhu, đubrivo je distribuirano rasipačem đubriva u količinama navedenim u tabeli 2, koja je ovde navedena.
[0089] Tabela 2 prikazuje količinu, vrstu đubriva i jedinice azotnog đubriva (NFU) koje se koriste za svako đubrivo na svakoj parceli.
TABELA 2
Kontrola Tretirani
Fund đubrenje Đubrenje Fund đubrenje Đubrenje oblaganjem oblaganjem Polje 1 500 kg NPK 6-9-11+280 kg 700 kg N32 500 kg NPK 6-9-11+ 333 kg N32
NPK 18-46-0 280 kg NPK 18-46-0
Polje 2 10 tona pilećeg komposta 652 kg uree N 10 tona pilećeg 250 kg uree N46
46 komposta
Polje 3 35 tona ovčjeg komposta 600 kg 650 kg 30N-15S 35 tona ovčjeg 334kg 30N-15S D-Coder<®>komposta+600kg D-Coder<®>
Ukupna UFN Ukupni UFN Uobičajeno Kontrola Tretirani kontrola tretirani đubrenje
100% NFU 60% NFU Fun (NFU) Oblaganje (NFU) Oblaganje (NFU) Polje 1 293 175 69 224 106
Polje 2 480 295 180 300 115
Polje 3 237 142 42 195 100
• Distribucija tretmana na poljima.
[0090] Polja su imala sledeće površine: Polje 1 (5.43 ha), Polje 2 (3.28 ha) i Polje 3 (2.34 ha). Za procenu parametara uzete su dve susedne oblasti širine 16 metara. Područje označeno sa "1" je tretirano područje, a područje označeno sa "2" je kontrolno područje.
[0091] Na slici 4 prikazana je distribucija testova sa tretmanom 1 (u oblasti 1) sa Methylobacterium sp. nov. sojem pronalaska i tretmanom 2 kontrola (u oblasti 2). Konkretno, panel „a“ na slici 4 prikazuje polje 1, panel „b“ na slici 4 prikazuje polje 2 i panel c“ na slici 4 prikazuje polje 3.
• Karakteristike kulture i primena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska kod kukuruza dugog ciklusa.
[0092] Seme kukuruza (Zea mais) izabrano je za zrno sorte „40F“ sa zasadnim odnosom od 300 kg/ha, posejano na dubini od 3 cm sa razmakom između redova od 75 cm i razdvajanjem unutar istog reda od 15 cm. Širina svake setvene trake je 16 m između prskalica. Datum setve je bio od 1. do 5. maja 2018. godine, nakon pet dana iznikla je stabljika i datum primene Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska bio je 40 dana nakon setve, 12. juna 2018. godine i posejan je, uz pomoć sejalice, na poljima koja su označili poljoprivrednici, reprezentativno područje gajenja kukuruza u Španiji. Napravljen je slučajni dizajn odabirom parcele polja za svaki tretman.
[0093] Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska je primenjen u dozi od 333 g/ha (3 x 10<7>CFU/g) folijarnom primenom, uz smanjenje đubrenja azotom za 40%. Rezultati su upoređeni sa konvencionalnim tretmanom đubrenja. Folijarna primena je vršena prskalicom sa 300-400 litara bujona po hektaru, kada je biljka bila u fazi 13-14 BBCH skale, sa temperaturom vazduha od 17ºC i relativnom vlažnošću od 52 %, uz brzinu vetra od 2.3 mps severnog pravca, bez prisustva rose na lišću i oblačnosti od 60 %.
• Parametri i metodologija procene
Brojanje jedinica koje formiraju kolonije po gramu lista (CFU/g)
[0094] Ovaj parametar je meren da bi se utvrdilo da li se mikroorganizam nalazi u celom ciklusu kulture i u kojoj količini na listovima. Merenje se izvodi uzimanjem jednog grama listova iz četvrtog lista sa ispod 20 biljaka i serijskim razblaženjima tako što se seju u selektivnu podlogu za kulturu bez azota sa metanolom kao izvorom ugljenika.
SPAD (nivo hlorofila u listu)
[0095] Ovaj parametar je pokazatelj dobrog nutritivnog statusa biljke i usko je povezan sa nivoom azota i gvožđa. Za ovo je korišćen merač poznat kao SPAD (Soil Plant Analisys Development) i izvedeno je 100 merenja četvrtog lista sa ispod 100 biljaka svakog tretmana.
Azot u listu, stablu i zrnu klipa
[0096] Ovaj parametar je pokazatelj količine azota u svakom biljnom tkivu akumulirane u vreme žetve. List, stabljika i zrno klipa uzimaju se sa 100 biljaka za analizu ukupnog azota Kjeldahlovom metodom.
Fotografije dronova (Let drona za dobijanje različitih indeksa)
[0097] NDVI (Normalizovani indeks razlika vegetacije). On kontrastira trake crvene svetlosti i blizu infracrvene svetlosti koje se reflektuju u listovima biljaka. To je opšti pokazatelj gustine krošnje i često se koristi za razlikovanje žive zelene vegetacije od zemljišta koje izgleda plavo što ima više hlorofila.
[0098] Kombinovani CIR (infracrvena boja). Infracrvena kompozitna boja koja kombinuje NIR (bliski infracrveni), crvenu i zelenu traku. Zdrava vegetacija odražava visok nivo NIR (bliski infracrveni) i izgleda crveno. Latentna vegetacija je često zelena ili bronzana, dok su peskovita zemljišta svetlo smeđa, a glinasta tamno smeđa ili plavkasto zelena.
Prinos
[0099] Da bi se procenio prinos žetve, uzima se 6 nasumičnih blokova i bere se 30 kvadratnih metara površine. Dobijeno zrno se vaga prekidom gubitka od vlage u svakoj zoni.
Statistička analiza
[0100] Faktori (SPAD i performanse) i njihova interakcija su analizirani za svaki parametar pomoću ANOVA, koristeći Statgraphics Plus softver za Windows 5.1 (Manugistics, Inc., SAD).
• Rezultati
Brojanje jedinica koje formiraju kolonije (cfu)
[0101] Tabela 3, prikazana u nastavku, prikazuje podatke koji se odnose na jedinice koje formiraju kolonije (CFU) po gramu lista i u rezervoaru za nanošenje, nakon tretmana (4/6/18) i nakon jednog meseca od tretmana (4/6/18).
[0102] U rezervoaru za primenu bila je homogena mešavina proizvoda i pravilna primena u biljci da se nakon mesec dana primene u listu kukuruza populacije održavaju i povećavaju njihov rast što se vidi na svim parcelama.
SPAD
[0103] Slika 5 prikazuje SPAD merenje 30 dana nakon primene Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska.
[0104] Posle mesec dana od primene, biljke su održavale nivo SPAD na nivou kontrole, bez značajnih razlika na svim poljima, potvrđujući da smanjenje hemijskog azota nije negativno uticalo na biljku jer su tome doprinele bakterije.
Azot u listu, stablu i klipu
[0105] Tabela 4, prikazana u nastavku, prikazuje podatke o koncentracijama azota (g/biljci) pronađenim u različitim tkivima biljke kukuruza u vreme žetve.
Fotografije sa drona (45 dat)
[0106] Na slici 6 prikazane su fotografije dronova koje se koriste za određivanje NDVI indeksa, za polje 1 (panel "a"), polje 2 (panel "b") i polje 3 (panel "c").
[0107] Na slici 7 prikazane su fotografije dronova koje se koriste za kombinovano određivanje CIR indeksa, za polje 1 (panel "a"), polje 2 (panel "b") i polje 3 (panel "c").
[0108] Uzimajući u obzir indekse NDVI i kombinovani CIR, nisu uočene razlike u gustini biljne krošnje, hlorofilu i zdravstvenom stanju biljaka (intenzitet plave i crvene boje) ni na jednom polju, u poređenju sa kontrolom, osim u polju 3 gde je bilo problema sa pritiskom vode za navodnjavanje i razlika u boji se primećuje u usevima u oblastima gde prskalica nije pravilno zalivala.
Prinos
[0109] Tabela 5, prikazana ovde dole, prikazuje podatke o prinosu svake njive.
[0110] U tabeli 5, proseci praćeni različitim slovima na liniji značajno se razlikuju jedni od drugih.
[0111] Na polju 1 kontrola je imala prinos od 16881 kg/ha. Uz primenu Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska, dobijen je prinos od 17511 kg/ha; što je značilo 4 % više proizvodnje.
[0112] Na polju 2 kontrola je imala prinos od 14346 kg/ha. Primena Methylobacterium sp. nov. soja prema pronalasku dala je prinos od 18335 kg/ha, odnosno povećanje produktivnosti od 28%.
[0113] Na polju 3 kontrola je dala 14312 kg/ha. Primena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska dala je prinos od 17539 kg/ha, što je rezultiralo povećanjem neto proizvodnje od 22.5%
[0114] Tabela 6, prikazana u nastavku, prikazuje podatke o ravnoteži azota - azot koji se dobija (unos) đubrenjem, azot koji biljka asimilira nakon ekstrakcije, ravnoteža asimilacije između unesenog i ekstrahovanog u biljci. Potreba za azotom (tj. potreban unos) po toni zrna i ekstrakcija azota po toni zrna.
• Zaključci
[0115] Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska ima efikasnu primenu u uzgoju kukuruza i postojanosti mikroorganizma u biljci.
[0116] Soj prema pronalasku održava nivo SPAD (hlorofila), zdravlje biljaka i gustinu krošnje biljaka (NDVI indeks i kombinovani CIR indeks) jednak konvencionalnom đubrenju, pri čemu se koristi veća količina azotnog đubriva.
[0117] Soj pronalaska obezbeđuje 40% ukupnih jedinica azotnog đubriva koje su smanjene u đubrenju pokrivača i takođe obezbeđuje povećanje proizvodnje između 4 i 27%. Pošto su biljke imale samo jedan klip po biljci, ovo povećanje bi bilo povezano sa specifičnom težinom zrna i/ili brojem ciklusa.
[0118] Ako posmatramo ravnotežu jedinica azotnog đubriva doprinesenih đubrenjem i ekstrakcijom azota u biljci koja je izvršena, dolazi do prirasta azota između 66 i 111 kg azota po hektaru. To znači da su ti kilogrami azota fiksirani sojem prema pronalasku tokom ciklusa kulture. Ovaj rezultat se indirektno primećuje u potrebi za azotom po toni proizvedenog zrna u tretiranim biljkama, pošto je zahtev za proizvodnju jedne tone zrna manji od kontrole. Takođe se mora imati na umu da su zahtevi za proizvodnju tone tretiranog zrna niži od ekstrakcije azota koja je napravljena za proizvodnju te tone zrna. U kontroli je suprotno, jer je za proizvodnju iste količine zrna potrebno više azota.
Primer 3
Ogled 3. Efikasnost upotrebe Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska u smanjenju 30% azotnog đubriva u kratkom ciklusu uzgoja kukuruza.
• Ciljevi.
[0119] Da biste saznali efikasnost Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska na razvoj kukuruza (kukuruz), protiv smanjenja đubrenja za pokrivanje azota u konvencionalnim uslovima uzgoja od 30% kroz evoluciju zelene boje lista (SPAD), vegetacijske indekse, nivoe azota u biljci, koncentraciju mikroorganizama u listu i produktivnog prinosa.
• Materijali i metode
Ogledna polja i đubrenje.
[0120] Ogled je sproveden u Španiji, na dva polja: polje Pomar de Cinca u Hueski sa koordinatama 41° 50'13.8 "N 0° 05'38.0" E i drugo u Finca Oranu, Albasete sa koordinatama 38°49' 55.3" N 1 ° 50'27.1" W.
[0121] Preporuke za đubrenje bile su konvencionalno đubrenje i 30% smanjenje tretmana redukcije azota. Za to je đubrivo distribuirano rasipačem đubriva u količinama navedenim u tabeli 7, koja je ovde navedena.
[0122] Tabela 7 prikazuje količinu, vrstu đubriva i jedinice azotnog đubriva (NFU) koje se koriste za svako đubrivo na svakoj parceli.
• Distribucija tretmana na poljima
[0123] Polja su imala sledeću površinu: za ocenu parametara uzete su polje 1 (74 ha), polje 2 (3.67 ha) i dve susedne površine širine 16 metara. Područje označeno sa "1" je tretirano područje, a područje označeno sa "2" je kontrolno područje.
[0124] Na slici 8 prikazana je distribucija testova sa tretmanom 1 (u oblasti 1) sa Methylobacterium sp. nov. sojem pronalaska i tretman 2 kontrolom (u oblasti 2). Konkretno, panel "a" na slici 8 prikazuje polje 1 i panel "b" na slici 8 prikazuje polje 2.
• Karakteristike kulture i primena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska
[0125] U polju 1 odabrano je seme kukuruza sorte „Guasi“ i u polju 2 sorte DKC 5032 YG, sa odnosom sadnje od 300 kg/ha, posejano na dubinu od 3 cm sa razmakom između redova od 75 cm i odvajanjem unutar istog reda od 15 cm. Širina svake setvene trake je 16 m. Datum setve je bio 20. jun na njivi 1 i 30. jun na njivi 2, nakon deset dana stablo je izniklo i datum primene Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska bio je 22, odnosno 20 dana nakon setve, 12. jula (polje 1) i 20. jula 2018. godine (polje 2).
[0126] Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska je primenjen u dozi od 333 g/ha (3 x 10<7>CFU/g) folijarnom primenom.
[0127] Folijarna primena je vršena prskalicom sa 300-400 litara bujona po hektaru, kada je biljka bila u fazi 13-14 BBCH skale, sa temperaturom vazduha od 22 i 20ºC i relativnom vlažnošću od 72 i 58%, sa brzinom vetra od 2.3 i 12 mps severnog i severozapadnog pravca, bez prisustva rose na lišću i oblačnosti od 0 i 15 % respektivno.
• Parametri i metodologija procene
Brojanje jedinica koje formiraju kolonije po gramu lista (CFU/g)
[0128] Ovaj parametar je meren da bi se utvrdilo da li se mikroorganizam nalazi u celom ciklusu kulture i u kojoj količini na listovima. Merenje se izvodi uzimanjem jednog grama listova iz četvrtog lista sa ispod 20 biljaka i serijskim razblaženjima tako što se seju u selektivnu podlogu za kulturu bez azota sa metanolom kao izvorom ugljenika.
SPAD (nivo hlorofila u listu)
[0129] Ovaj parametar je pokazatelj dobrog nutritivnog statusa biljke i usko je povezan sa nivoom azota i gvožđa. Za ovo je korišćen merač poznat kao SPAD (Soil Plant Analisys Development) i izvedeno je 100 merenja četvrtog lista sa ispod 100 biljaka svakog tretmana.
Azot u listu, stablu i zrnu klipa
[0130] Ovaj parametar je pokazatelj količine azota u svakom biljnom tkivu akumulirane u vreme žetve. List, stabljika i zrno klipa uzimaju se sa 100 biljaka za analizu ukupnog azota Kjeldahlovom metodom.
Satelitske fotografije
[0131] Fotografije sa satelita ESA Copernicus se preuzimaju i obrađuju pomoću programa Qgis da bi se dobio NDVI indeks.
[0132] NDVI (Normalizovani indeks razlika vegetacije). On kontrastira trake crvene svetlosti i blizu infracrvene svetlosti koje se reflektuju u listovima biljaka. To je opšti pokazatelj gustine krošnje i često se koristi za razlikovanje žive zelene vegetacije od zemljišta koje izgleda plavo što ima više hlorofila.
Prinos
[0133] Da bi se procenio prinos žetve, uzima se 6 nasumičnih blokova i bere se 30 kvadratnih metara površine. Dobijeno zrno se vaga diskontiranjem gubitka od vlage u svakoj zoni.
Statistička analiza
[0134] Faktori (SPAD i prinos) i njihova interakcija su analizirani za svaki parametar pomoću ANOVA, koristeći Statgraphics Plus softver za Windows 5.1 (Manugistics, Inc., SAD).
• Rezultati
Brojanje jedinica koje formiraju kolonije (CFU)
[0135] Tabela 8, prikazana u nastavku, prikazuje podatke koji se odnose na jedinice koje formiraju kolonije (CFU) po gramu lista u i rezervoaru za nanošenje (12-20/7/18), nakon tretmana (12-20/7/18) i nakon mesec dana od lečenja (15/8/18).
[0136] U rezervoaru za nanošenje je postojala homogena smeša proizvoda i pravilna primena u biljci da se nakon mesec dana primene u listu kukuruza, populacije održavaju i povećavaju njihov rast što se može videti na svim poljima.
SPAD
[0137] Slika 9 prikazuje SPAD merenja 30 dana nakon primene.
[0138] Posle mesec dana od primene, biljke su održavale nivo SPAD na nivou kontrole, bez značajnih razlika na svim poljima, potvrđujući da smanjenje hemijskog azota nije negativno uticalo na biljku jer su tome doprinele bakterije.
Azot u listu, stablu i klipu
[0139] Tabela 9, prikazana u nastavku, prikazuje podatke o količini azota (grama) svakog tkiva biljke kukuruza.
Satelitske fotografije.
[0140] Slika 10 prikazuje satelitske fotografije koje se koriste za određivanje NDVI indeksa za polje 1 nakon 45 dana tretmana mereno svakih 15 dana
[0141] Slika 11 prikazuje satelitske fotografije korišćene za određivanje NDVI indeksa za polje 2 nakon 45 dana tretmana merenog svakih 15 dana.
[0142] Uočena je homogenost vrednosti NDVI (intenzitet zelene boje) tokom ciklusa kultivacije upoređujući kontrolu, sa tretmanom Methylobacterium sp. nov. sojem pronalaska sa smanjenjem đubrenja.
Prinos
[0143] Tabela 10, prikazana u nastavku, prikazuje podatke o prinosu svakog polja
[0144] U Polju 1 kontrola je imala prinos od 10515 kg/ha, međutim primenom soja pronalaska dobijen je prinos od 11828 kg/ha, uz povećanje produktivnosti od 12.5 %.
[0145] U polju 2 kontrola je imala prinos od 12525 kg/ha, a kod soja pronalaska dobijen je prinos od 12863 kg/ha, uz povećanje od 2.7%.
[0146] U tabeli 11 prikazani su podaci o ravnoteži azota: azot dobijen đubrenjem, azot koji biljka asimiluje nakon ekstrakcije, ravnoteža asimilacije između unesenog i ekstrahovanog u biljci. Potreba za azotom po toni zrna i ekstrakcija azota po toni zrna.
• Zaključci
[0147] Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska ima efikasnu primenu u uzgoju kukuruza i postojanosti mikroorganizma u biljci.
[0148] Methylobacterium sp. nov. soj prema pronalasku održava nivo SPAD (hlorofila), zdravlje biljaka i gustinu krošnje biljaka (NDVI indeks) jednak konvencionalnom đubrenju, pri čemu se koristi veća količina azotnog đubriva.
[0149] Što se tiče prinosa, soj pronalaska obezbeđuje 30% ukupnih jedinica azotnog đubriva koje su smanjene u đubrenju oblaganjem i takođe obezbeđuje povećanje proizvodnje između 2.7 i 12.5%. Pošto su biljke imale samo jedan klip po biljci, ovo povećanje bi bilo povezano sa specifičnom težinom zrna i/ili brojem ciklusa.
[0150] Ako posmatramo ravnotežu jedinica azotnog đubriva dobijenih đubrenjem i izvršenom ekstrakcijom azota u biljci, dolazi do prirasta azota između 43 i 57 kg azota po hektaru. To znači da su ti kilogrami azota fiksirani sojem pronalaska tokom ciklusa rasta. Ovaj rezultat je indirektno primećen u potrebi za azotom po toni zrna proizvedenog u biljkama tretiranim sojem prema pronalasku, pošto je zahtev za proizvodnju jedne tone zrna niži od kontrole. Takođe se mora uzeti u obzir da su zahtevi za proizvodnju jedne tone tretiranog zrna manji od ekstrakcije azota koja je izvršena za proizvodnju te tone zrna, a u kontroli je suprotno, jer je potrebno više azota za proizvodnju iste količine zrna.
Primer 4
Ogled 4 - Procena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska u kulturi jagode za različite doze đubrenja azotom
• Ciljevi.
[0151] Da biste saznali efikasnost Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska na razvoj useva jagode podvrgnutih različitim dozama azotnog đubrenja od 0, 25, 50, 75 i 100% konvencionalnog đubrenja, kroz pojavu zelene boje lista (SPAD), nivoe azota u biljci, koncentracija mikroorganizma u listu i produktivni prinos.
• Materijali i metode
Ogledno polje i đubrenje.
[0152] Ogled je sproveden na polju koje se nalazi na eksperimentalnoj farmi Simborg sa koordinatama 37° 48'59.6 "N 1°05'43.6" W u Los Martinez del Puerto, Mursija. Teren se sastoji od 192 m<2>, a bio je širok 8 m i dugačak 24 m.
[0153] Upravljanje navodnjavanjem i đubrenjem je različito za sve tretmane. Program mineralnog đubrenja sastoji se od 5 rastvora sa različitim sadržajem azota.
[0154] Tabela 12 prikazuje različite tretmane đubrenja, merene u UFN.
• Tretmani
[0155] Tabela 13 se odnosi na 10 tretmana zasnovanih na 5 nivoa đubrenja koji su zauzvrat podeljeni na tretirane Methylobacterium sojem prema pronalasku i netretirane.
• Karakteristike kulture i primena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska
Biljni materijal.
[0156] Jagode sa golim korenom, sorta Fortuna, posađene su od rasadnika.
Okvir i gustina zasada.
[0157] Okvir za sadnju je 2 m između redova uzgoja, 0.1 m između biljaka, zasađeno u vreće od kokosovih vlakana od 1 m x 0.18 m x 0.15 m u kvinkunsu, daje gustinu od 100000 biljaka po hektaru, 10 biljaka po m<2>, polje se sastoji od 192 m<2>tako da za ceo ogled ima 1920 biljaka.
Datum sadnje i uklanjanja useva.
[0158] Presađivanje jagode je izvršeno 11.02.2017. godine, čime je došlo do uklanjanja roda 01.06.2018.
Hidraulični dizajn
[0159] Korišćena je električna pumpa od 3.5 kv, koja ide na sekundarnu cev od 32 mm, koja se povezuje sa crevima od 16 mm sa samokompenzirajućim spoljnim kapaljkom od 3 l/h.
voda za navodnjavanje
[0160] Voda za navodnjavanje koja je korišćena u ogledu potiče iz postrojenja za desalinizaciju iu celom ogledu uneto je 130 litara vode po biljci, sa koncentracijom od 0.1 grama po litru nitrata (13 grama po biljci). Karakteristike navedene vode su sumirane u sledećoj tabeli (Tabela 14). Tabela 14, koja je ovde prikazana, prikazuje podatke koji se odnose na karakteristike vode za navodnjavanje.
[0161] Soj pronalaska je primenjen u dozi od 333 g/ha (3 x 10<7>CFU / g) folijarnom primenom.
[0162] Folijarna primena je vršena prskalicom u količini od 200 litara bujona po hektaru kada je biljka bila u fazi 13-14 BBCH skale, sa temperaturom vazduha od 20ºC i relativnom vlažnošću od 50 %, bez prisustva rose na lišću, i oblačnosti od 15 %.
• Parametri i metodologija procene
Brojanje jedinica koje formiraju kolonije po gramu lista (CFU/g)
[0163] Ovaj parametar je meren da bi se utvrdilo da li se mikroorganizam nalazi u celom ciklusu kulture iu kojoj količini na listovima. Merenje se izvodi uzimanjem jednog grama listova sa 50 biljaka i serijskim razblaženjima sejanjem u selektivne podloge za kulturu bez azota sa metanolom kao izvorom ugljenika.
Azot u listu.
[0164] Ovaj parametar je indikator količine azota u svakom biljnom tkivu akumulirane u vreme analize. Uzima se 100 biljaka iz lista, stabljike i ploda za analizu ukupnog azota Kjeldahlovom metodom.
Prinos
[0165] Da bi se procenio prinos useva, 30 biljaka se nasumično bira iz svakog tretmana i bere tokom ciklusa useva.
Statistička analiza.
[0166] Faktor (prinos) i njihova interakcija su analizirani za svaki parametar pomoću ANOVA, koristeći Statgraphics Plus softvera za Windows 5.1 (Manugistics, Inc., SAD).
• Rezultati
Brojanje jedinica koje formiraju kolonije po gramu lista (CFU/q)
[0167] Tabela 15, prikazana u nastavku, prikazuje rezultate koji se odnose na jedinice koje formiraju kolonije po gramu lista merene mesečno od primene.
[0168] Uz pomoć uzorkovanja kolonija, trajnost Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska se posmatra tokom ciklusa kulture u biljci.
Ukupni azot
[0169] Tabela 16, u nastavku prikazana, prikazuje podatke koji se odnose na koncentraciju azota (g/100 g biljke), ukupnog azota (g/biljka) i sveže mase biljaka u usevu jagode.
[0170] Tabela 16 pokazuje da postoji povećanje koncentracije azota kako se đubrenje azotom povećava, kako kod kontrolne tako i kod onih tretiranih Methylobacterium sp. nov. sojem pronalaska.
[0171] Uočeno je povećanje ukupnog azota do dostizanja 75% azotnog đubriva u biljkama tretiranim sojem pronalaska, pri čemu je najveća vrednost pronađena u 3.28, najviša vrednost koncentracije azota u biljkama tretiranim sojem pronalaska. Sa 100% đubrenja smanjuje se sadržaj N u tretiranoj biljci.
Proizvodnja
[0172] Od trenutka kada počnu da proizvode, 30 biljaka se bere nedeljno, nasumično odabranih iz svakog tretmana tokom čitavog ciklusa kulture.
[0173] Tabela 17, prikazana u nastavku, prikazuje prinos u kilogramima po biljci za svaki tretman.
[0174] Tretman sa najvećom proizvodnjom bio je 9 (75 % azota uz primenu Methylobacterium sp. nov. soja prema pronalasku) sa 1.4 kg po biljci, što se značajno razlikuje od ostalih tretmana.
[0175] Tretmani sa 0 UFN su bili oni sa najmanjom proizvodnjom kg jagoda po biljci, sa značajnim razlikama.
[0176] Tabela 18, prikazana u nastavku, prikazuje podatke koji se odnose na ravnotežu azota: azot obezbeđen đubrenjem, azot koji biljka asimiluje nakon ekstrakcije, ravnoteža asimilacije između ulaza (tj. obezbeđenog azota) i ekstrahovanog u biljci.
• Zaključci
Jedinice koje formiraju kolonije po gramu lista (CFU/g lista)
[0177] Trajnost mikroorganizama u listu se primećuje tokom celog ciklusa uzgoja jagode.
Ukupni azot
[0178] Biljke tretirane Methylobacterium sp. nov. sojem pronalaska u tretmanu 9 ima najveću koncentraciju azota u listu, u poređenju sa svim kontrolnim tretmanima.
Proizvodnja
[0179] Primena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska u tretmanu 9 (503 UFN), stimulisala je povećanje proizvodnje od 21% u odnosu na kontrolni Tretman 5 (671 UFN) i povećanje od 33% u odnosu na tretman 4 nađubren njegovim homologom (503 UFN).
Primer 5
Ogled 5 - Ogled validacije na terenu u kulturi vinove loze
• Cilj.
[0180] Da bi saznali efikasnost soja pronalaska na razvoj kulture vinove loze, podvrgnute konvencionalnoj dozi đubrenja azotom, kroz pojavu zelene boje lista (SPAD), koncentraciju mikroorganizma u listu i prinos proizvodnje.
• Materijali i metode
Ogledna polja i đubrenje.
[0181] Ogled je sproveden na dva polja, locirana u Jumili, sa koordinatama 38°33'13.9"N 1°21'16.5"W, i Tomelloso, sa koordinatama 39°11'22.4"N 2°59'15.8"W.
[0182] Preporuke za đubrenje bile su konvencionalno đubrenje sa pozadinskim đubrenjem sa 700 kg NPK (15-15-15), što odgovara 105 UFN za ceo ciklus kulture.
• Distribucija tretmana na poljima.
[0183] Polja su imala sledeću površinu: za procenu parametara uzeto je polje 1 (1 ha), polje 2 (2,20 ha) i dva susedna bloka širine 16 metara (tj. površine).
• Karakteristike kulture i primena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska
[0184] U polju 1 sorta vinove loze je petit verdot u polju 2 sorta je Grenache, datum prijave soja pronalaska je 10. maj 2018. (polje 1) i 15. maj 2018. (polje 2).
[0185] Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska je primenjen u dozi od 333 g/ha (3 x 10<7>CFU/g) folijarnom primenom.
[0186] Folijarna primena je obavljena nebulizatorom sa 350 litara bujona po hektaru kada je biljka bila u fazi zrna bibera sa temperaturom vazduha od 17 i 20ºC i relativnom vlažnošću od 20 i 38 %, pri brzini vetra od 5.4 i 9 mps južnog i severozapadnog pravca, bez prisustva rose na lišću i oblačnosti od 10 i 25 % respektivno.
[0187] Slika 12A prikazuje nebulizator u vreme primene tretmana (jednog ili više) i Slika 12B prikazuje veličinu zrna u vreme primene tretmana (jednog ili više).
• Parametri i metodologija procene
Prinos
[0188] Da bi se procenio prinos useva, nasumično se uzima 6 blokova i bere se 30 kvadratnih metara površine, odmeravajući grožđe dobijeno u biljkama.
Statistička analiza.
[0189] Faktor (prinos) i njihova interakcija su analizirani za svaki parametar pomoću ANOVA, koristeći Statgraphics Plus softver za Windows 5.1 (Manugistics, Inc., SAD).
• Rezultati
Prinos
[0190] Tabela 19A i tabela 19B, prikazane u nastavku, prikazuju rezultate koji se odnose na prinos u kilogramima po biljci za svaki tretman.
Zaključak
[0191] U polju 1, primena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska mogla povećati prinos za 18% u odnosu na netretiranu kontrolu.
[0192] U polju 2, primena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska mogla bi povećati prinos za 41% u odnosu na netretiranu kontrolu.
Primer 6
Ogled 6 - Procena efekata Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska na prinos useva addivije (Cichorium endivia latifolia, sorta Lempika)
[0193] Sledeći test je sproveo nezavisni akreditovani entitet za realizaciju GEP ogleda.
[0194] Dizajn, analiza rezultata i izveštavanje o ovoj studiji su sprovedeni prema EPPO-Smernicama PP 1/152(4), PP 135(4) i PP 1/181(4).
Opšte informacije o ogledu
[0195] Ogled je počeo 17. avgusta 2018. u Vila-Sacra, provinciji Gerona u Španiji, a završio se 12. novembra iste godine. Datum transplantacije je 21. avgust 2018. Konvencionalno đubrenje obavljeno je 23. avgusta, a primena Methylobacterium sp. nov. soja prema pronalasku bila je 28. septembra, kada je kultura dostigla odgovarajuću fazu razvoja (BBCH 17-19).
Dizajn suđenja
[0196] Ogled se sastojao od randomizovanog blok sistema sa 4 tretmana i 5 ponavljanja. Svaka osnovna njiva (parcela) bila je široka 2.5 metara i duga 7 metara, površine 17.5 m<2>. Razmak između redova biljaka iznosio je 0.56 metara, a prostor u redu 0.35 m, što je dovelo do ukupno 80 biljaka u 4 reda.
Kultura
[0197] Efekat Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska je proučavan u usevu endivije (Cichorium endivia latifolia, sorta Lempika). Prethodni usevi na tom području bili su luk 2018. i suncokret i zelena salata 2017. godine.
Zemljište
[0198] Zemljište je pokazalo dobar nivo đubrenja:
% MO: 2.02
Tekstura: glina ilovača
pH: 7.70
CEC: 0.22
Drenaža zemljišta: dobra
Održavanje
[0199] Tokom ciklusa uzgoja, primenjivani su fitosanitarni tretmani neophodni za održavanje zdravlja biljaka.
Statistički komentari
[0200] Statistička analiza i izveštaji su realizovani pomoću softvera menadžera poljoprivrednih istraživanja (ARM) (koji je razvio Gilling Dates Management Inc.). Procenjeni podaci su analizirani korišćenjem jednosmerne analize varijanse (ANOVA) u kombinaciji sa Student-Newman -Keuls u α = 5 % za poređenje srednjih vrednosti. Srednje vrednosti praćene istim slovom se ne razlikuju značajno.
Ciljevi ogleda
[0201]
1.- Procena efekata Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska na ponašanje useva i prinos na usevu endivije, primenjen sa normalnom stopom đubrenja ili smanjenim đubrenjem.
2.- Upoređivanje efekata Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska u poređenju sa standardnim komercijalnim đubrenjem
3.- Procena bilo kog neželjenog efekta Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska na ciljnom usevu.
Sažetak ogleda
[0202] Cilj ovog ogleda je bio da se procene efekti Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska, (3 x 10<7>CFU/g) kada se smanji doza azota (đubrenje), na prinos useva endivije. Ogled je održan na severoistoku Španije, u opštini Vila-Sacra (Girona), na otvorenom polju, u tipičnom malom prostoru za uzgoj povrća. Studija je sprovedena u skladu sa principima dobre eksperimentalne prakse definisanim Uredbom 1107/2009 Evropske unije.
[0203] Soj pronalaska je testiran pri istoj količini (300 g f.p./ha) u tri oblasti sa različitim stopama đubrenja azotom (100 % (uobičajeno), 60 % i 40 %), i procenjen je i upoređen sa "netretiranom" kontrolom (sa 100% N đubrenja, ali bez Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska).
[0204] Đubrenje je obavljeno pre transplantacije (23. avgusta 2018.). Proizvod je primenjen u fazi BBCH 17-19 (28.09.2018.), korišćenjem kalibrisane prskalice za ranac HONDA WRJ2525.
[0205] Urađene su tri procene bujnosti useva tokom razvoja useva u procentima. U toku žetve ili blizu berbe evidentirani su parametri prinosa za procenu dva centralna reda parcela, sa po 20 biljaka, a dva granična reda nisu uzeta u obzir za procene. Prečnik biljke (cm), broj prisutnih biljaka (razlikuje biljke koje se mogu prodati, biljke koje se ne mogu prodati, mrtve i hlorotične biljke), težina biljke i prinos (broj i kg u 2 centralna reda (7.84 m<2>)). Prinos i broj biljaka koje sde mogu prodati po hektaru i procenat prirasta u odnosu na tretman bez standardnog đubrenja (tretman 1) je automatski izračunat korišćenjem ARM softvera. Procene fitotoksičnosti i vitalnosti vršene su tokom celog ogleda.
Tabela 20, prikazana u nastavku, prikazuje listu tretmana
[0206] U tabeli 20 koriste se sledeće reference:
UTC: Netretirana kontrola
UF: Uobičajeno đubrenje
F: Đubrenje
M.s.: Methylobacterium sp. nov. soj, tj., Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska
Zaključci
Efekti proizvoda
[0207] Prema uslovima ogleda, može se zaključiti da je primena Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska sa smanjenom dozom azota dobija brojčano povećanje srednje težine biljke (kg) i komercijalnog prinosa (broj biljaka po hektaru) u poređenju sa samo jednom primenom konvencionalnog đubriva (bez Methylobacterium sp. nov. soja pronalaska), što znači da je Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska obezbedio neophodan azot za pravilan razvoj biljke.
[0208] Tretmani 3 i 4 su postigli povećanje prinosa od 3.8 odnosno 13.89 % u poređenju sa tretmanom 1, čime su dobijene značajne statističke razlike. Nisu dobijene značajne razlike među tretmanima Methylobacterium sp. nov. sojem prema pronalasku različitim dozama azota u ostalim procenjenim parametrima, uprkos dobijenim rezultatima sugerišu najbolje rezultate kod veće redukcije azota.
[0209] Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska je primenjen u dozi 300 g/ha (3 x 10<7>cfu/g) kada je usev imao između 7 i 9 listova (BBCH 17-19).
[0210] Soj pronalaska primenjen na 300 g/ha (3 x 10<7>cfu/g) sa konvencionalnim đubrenjem (N= 40 %) pokazao je najbolje rezultate ogleda sa povećanjem prinosa od 13.89 %, uz statistički značajnu razliku.
[0211] Što se tiče ostalih procenjenih parametara, nije bilo značajnih statističkih razlika među tretmanima, što ukazuje da Methylobacterium sp. nov. soj pronalaska je bio u stanju da obezbedi neophodan azot za pravilan razvoj biljaka.
[0212] Upotreba Methylobacterium sp. nov. soja prema pronalasku smanjuje količinu azotnog đubrenja potrebnog za useve jer su rezultati procenjenih parametara slični ili čak bolji od onih dobijenih konvencionalnim đubrenjem.
Primer 7 - Postupak za proizvodnju primera kompozicije prema pronalasku
[0213]
● Izolovati Methylobacterium sp. nov. soj NFBG medijum (bakterijski medijum bez azota sa dodatkom glukoze).
● Parametri rasta:
∘ Temperatura rasta 20-35ºC.
∘ Vreme inkubacije 5 - 7 dana.
● Izabrati izolovanu ružičasto-crvenu koloniju i ponovo je posaditi u selektivnu podlogu MMMNF (minimalni medijum sa metanolom bez azota).
● Parametri rasta:
∘ Temperatura rasta 20-35ºC.
∘ Vreme inkubacije 5 - 7 dana.
● Izabrati izolovanu koloniju (ružičasto-crvenu) i ponovo je posaditi u MMM (minimalni mineralni medijum sa metanolom), da biste uzgajali tečnu kulturu koja će se koristiti kao preinokulum
● Parametri fermentacije:
∘ Temperatura rasta 20-35ºC.
∘Mešanje (o/min) 50-250.
∘ Vreme fermentacije 5 - 7 dana.
● Inokulacija kompletne zapremine bioreaktora sa pre-inokulumom mikroorganizma. ● Parametri fermentacije:
∘ Temperatura rasta 20-35ºC.
∘Mešanje (o/min) 50-250.
∘ Aeracija 0.3-3.2 N*m<3>/h.
∘ Vreme fermentacije 80-130 sati.
● Pomešati sa nosačima i osušiti sušenjem raspršivanjem
o Svaki litar fermentisanog bujona sa mikroorganizmom pomeša se sa poljoprivredno prihvatljivim nosačima
● Nakon što se smeša osuši raspršivanjem, u skladu sa sledećim parametrima sušenja:
∘ Protok unosa 7-11 ml/l.
∘ Protok komprimovanog vazduha 225-375 l/h.
∘ Protok vazduha za sušenje 35-50 m<3>/h.
∘ Ulazna temperatura 100-180 ºC.
∘ Performanse ciklona 25-40 %.
● Mešavina proizvoda za formulaciju finalnog proizvoda
[0214] Svaki 1 g suvog proizvoda (prah mikroorganizam) pomeša se sa sledećim koformatorima, do dobijanja 101-550 g finalnog proizvoda, koji se koristi za đubrenje jednog hektara.
∘ 1-50 g poljoprivredno prihvatljivog koformulanta.
∘ 100-500 g poljoprivredno prihvatljivog nosača.
[0215] Tabela 21, prikazana u nastavku, prikazuje sastav u g/L medijuma za kulturu koji se koristi tokom postupka proizvodnje.
[0216] Komponente sterilisane filtracijom se dodaju posle autoklava, kada se medijum za kulturu ohladi na temperaturi < 60°C.
[0217] Tabela 22, prikazana u nastavku, odnosi se na količinu u gramima mikronutrijenata i vitamina.

Claims (20)

Patentni zahtevi
1. Soj Methylobacterium sp. nov., deponovan pod pristupnim brojem CECT 9580.
2. Kompozicija koja sadrži soj Methylobacterium sp. nov., deponovan pod pristupnim brojem CECT 9580.
3. Kompozicija prema patentnom zahtevu 2, koja dalje sadrži jedan ili više poljoprivredno prihvatljivih nosača i/ili jedan ili više poljoprivredno prihvatljivih koformulanata.
4. Kompozicija prema patentnom zahtevu 3, naznačena time što je navedeni nosač i/ili koformulant izabran iz grupe koja se sastoji od talka, gline, maltodekstrina, obranog mleka, glukoze, suvih ekstrakata povrća, kao što su oni od čaja, kasave i kinoe, kaolina, kokosovih vlakana, dijatomejske zemlje, hitina, CaCOs, alginata, karagena, surfaktina, ramnolipida, soforolipida, saponina, kalijum oleata i njihovih smeša.
5. Kompozicija prema patentnom zahtevu 2, naznačena time što je navedena kompozicija u obliku izabranom od čvrstog oblika, vodenog tečnog oblika, uljanog tečnog oblika, oblika emulzije, polučvrstog oblika ili oblika gela.
6. Kompozicija prema patentnom zahtevu 5, naznačena time što je navedena kompozicija u čvrstom obliku.
7. Kompozicija prema patentnom zahtevu 6, naznačena time što je pomenuta kompozicija u obliku praha.
8. Kompozicija prema patentnom zahtevu 2, naznačena činjenicom da se primenjuje kao omotač semena, primenom na zemljište, poželjno sistemom za navodnjavanje kap po kap ili kvašenjem, ili folijarnom primenom.
9. Postupak za proizvodnju kompozicije prema patentnom zahtevu 2, koji sadrži sledeće korake:
• obezbeđivanje najmanje jednog Methylobacterium sp. nov. deponovanog pod pristupnim brojem CECT 9580 prema pronalasku,
• inokulaciju navedenog Methylobacterium sp. nov. u tečnom medijumu za kulturu uključujući metanol,
• kultivisanje navedenog Methylobacterium sp. nov. da bi se dobila tečna kultura koja sadrži Methylobacteria
• sušenje navedene tečne kulture da bi se dobila suva kompozicija.
10. Postupak prema patentnom zahtevu 9, naznačen time što je navedeni Methylobacterium sp. nov. deponovan pod pristupnim brojem CECT 9580 izolovan iz unutrašnjeg dela spora mikorizne gljive Glomus iranicum var. tenuihypharum, deponovane pod brojem depozita BCCM 54871.
11. Postupak prema patentnom zahtevu 9, koji dalje sadrži korak dodavanja jednog ili više poljoprivredno prihvatljivih nosača u tečnu kulturu koja sadrži Methylobacteria pre sušenja.
12. Postupak prema patentnom zahtevu 9, koji dalje sadrži korak dodavanja jednog ili više poljoprivredno prihvatljivih koformulanata.
13. Postupak prema patentnom zahtevu 12, naznačen time što se navedeni jedan ili više poljoprivredno prihvatljivih koformulanata dodaje pomenutoj suvoj kompoziciji.
14. Upotreba Methylobacterium sp. nov. soja prema patentnom zahtevu 1 kao biostimulansa u biljkama.
15. Upotreba prema patentnom zahtevu 14, naznačena time što su navedene biljke hortikulturni usevi, ekstenzivne zeljaste i kulture žitarica, drvene kulture kao što su vinova loza, bobičasto voće i mahunarke.
16. Upotreba prema patentnom zahtevu 14, za povećanje prinosa navedenih biljaka.
17. Upotreba Methylobacterium sp. nov. soja prema patentnom zahtevu 1 za smanjenje spoljašnjeg unosa azota do 60 %.
18. Upotreba kompozicije prema patentnom zahtevu 2 kao biostimulansa u biljkama.
19. Upotreba prema patentnom zahtevu 18, naznačena time što su navedene biljke hortikulturni usevi, ekstenzivne zeljaste i kulture žitarica, drvene kulture kao što su vinova loza, bobičasto voće i mahunarke.
20. Upotreba prema patentnom zahtevu 18, za povećanje prinosa navedenih biljaka.
RS20230986A 2019-06-03 2019-06-03 Methylobacterium sp. nov. soj, kompozicije koje ga sadrže i njegova upotreba kao bio-stimulansa i endofitne bakterije za fiksiranje azota RS64763B1 (sr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP19382457.0A EP3747267B1 (en) 2019-06-03 2019-06-03 Methylobacterium sp. nov. strain, compositions comprising it, and its use as bio-stimulant and endophyte nitrogen-fixing bacterium

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64763B1 true RS64763B1 (sr) 2023-11-30

Family

ID=66821146

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230986A RS64763B1 (sr) 2019-06-03 2019-06-03 Methylobacterium sp. nov. soj, kompozicije koje ga sadrže i njegova upotreba kao bio-stimulansa i endofitne bakterije za fiksiranje azota

Country Status (30)

Country Link
US (1) US12426600B2 (sr)
EP (2) EP4230043A1 (sr)
JP (1) JP7644934B2 (sr)
KR (1) KR102889501B1 (sr)
CN (2) CN114423291B (sr)
AR (1) AR119045A1 (sr)
AU (1) AU2020288736B2 (sr)
BR (1) BR112021024415A2 (sr)
CA (1) CA3140962A1 (sr)
CL (1) CL2021003210A1 (sr)
CO (1) CO2021018249A2 (sr)
CR (1) CR20210680A (sr)
DK (1) DK3747267T3 (sr)
EA (1) EA202192916A1 (sr)
EC (1) ECSP21091556A (sr)
ES (1) ES2962935T3 (sr)
HR (1) HRP20231365T1 (sr)
HU (1) HUE064295T2 (sr)
IL (1) IL288286B2 (sr)
MA (1) MA53537B1 (sr)
MX (1) MX2021014723A (sr)
PE (1) PE20220493A1 (sr)
PH (1) PH12021553043A1 (sr)
PL (1) PL3747267T3 (sr)
PT (1) PT3747267T (sr)
PY (1) PY2020973A (sr)
RS (1) RS64763B1 (sr)
UY (1) UY38704A (sr)
WO (1) WO2020245675A1 (sr)
ZA (2) ZA202110898B (sr)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2024006748A (es) * 2021-12-01 2024-08-27 Newleaf Symbiotics Inc Cepas de methylobacterium y métodos para mejorar la producción vegetal.
CN114591877B (zh) * 2022-05-09 2022-07-26 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一株甲基杆菌和其发酵产物及其在抑制藻类生长中的应用
CN118028136B (zh) * 2022-11-11 2025-06-10 慕恩（广州）生物科技有限公司 一株扭托甲基杆菌及其微生物菌剂的应用
US12365868B2 (en) 2023-06-20 2025-07-22 Tenfold Technologies, LLC Systems for production of products to promote nitrogen use efficiency in plants
CN116831191B (zh) * 2023-07-05 2024-11-22 江西广恩和药业股份有限公司 复合乳化剂及保健饮料
WO2025243816A1 (ja) * 2024-05-24 2025-11-27 東洋製罐グループホールディングス株式会社 細胞培養用足場材、細胞培養用足場材の製造方法、細胞培養食品、細胞培養基材、及び細胞培養方法

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003284634A1 (en) 2002-11-21 2004-06-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Sustained release drug carrier
KR100873961B1 (ko) * 2006-05-01 2008-12-15 충북대학교 산학협력단 신규한 메틸로박테리움 푸지사와엔스 씨비엠비 20 균주 및이를 이용한 식물 생장촉진방법
KR100873962B1 (ko) * 2006-05-01 2008-12-15 충북대학교 산학협력단 신규 메틸로박테리움 푸지사와엔스 씨비엠비 110 균주 및이를 이용한 식물 생장촉진방법
JP5074866B2 (ja) 2007-09-12 2012-11-14 株式会社前川製作所 マメ科植物の害虫による摂食を阻害する方法
EP2197996B1 (en) 2007-10-11 2012-12-05 Promega Corporation Cleavable surfactants
US20090203068A1 (en) 2008-02-07 2009-08-13 Battelle Memorial Institute High Pressure Enzymatic Digestion System For Protein Characterization
JP5299956B2 (ja) 2008-09-29 2013-09-25 国立大学法人東北大学 質量分析装置を用いた代謝酵素群の一斉タンパク質定量に用いるペプチド
US9580363B2 (en) * 2012-03-21 2017-02-28 Temasek Life Sciences Laboratory Limited Nitrogen-fixing bacterial inoculant for improvement of crop productivity and reduction of nitrous oxide emission
AU2013267137B2 (en) 2012-06-01 2018-03-15 Newleaf Symbiotics, Inc. Microbial fermentation methods and compositions
HUE027082T2 (en) 2013-07-02 2016-08-29 Symborg S L Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. strain and application as biostimulant
EP2821478B1 (en) 2013-07-02 2016-02-10 Symborg, S.L. Glomus iranicum var. tenuihypharum var. nov. strain and its use as bio-nematicide
UA121377C2 (uk) * 2013-12-04 2020-05-25 Ньюліф Сімбіотікс, Інк. Композиція та виділена methylobacterium для поліпшення продуктивності рослин, їхнє застосування та рослина, покрита вказаною композицією
US20160376628A1 (en) * 2013-12-10 2016-12-29 Hyundai Motor Company Method for screening antimicrobial agent
RU2730863C2 (ru) * 2015-09-11 2020-08-26 Новозимс Биоаг А/С Стабильные композиции с инокулянтом и способы их получения
AR110299A1 (es) 2016-12-02 2019-03-13 Sanofi Sa Conjugados que comprenden un agonista dual de glp-1 / glucagón, un conector y ácido hialurónico
US20180201549A1 (en) * 2017-01-13 2018-07-19 Novozymes Bioag A/S Use of fungal strains to solubilize phosphate and enhance plant growth/yield
CN107841479A (zh) 2017-12-19 2018-03-27 广州菌落生物科技有限公司 一株甲基杆菌及其在制备微生物肥料中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN116970526A (zh) 2023-10-31
WO2020245675A1 (en) 2020-12-10
BR112021024415A2 (pt) 2022-01-18
EP3747267B1 (en) 2023-08-02
CN114423291B (zh) 2023-08-18
PT3747267T (pt) 2023-11-03
IL288286B2 (en) 2025-12-01
HRP20231365T1 (hr) 2024-02-16
PH12021553043A1 (en) 2023-08-23
EP4230043A1 (en) 2023-08-23
AU2020288736A1 (en) 2021-12-09
JP7644934B2 (ja) 2025-03-13
MX2021014723A (es) 2022-01-18
JP2022538745A (ja) 2022-09-06
KR102889501B1 (ko) 2025-11-21
IL288286B1 (en) 2025-08-01
IL288286A (en) 2022-01-01
CL2021003210A1 (es) 2022-10-07
PE20220493A1 (es) 2022-04-07
AU2020288736B2 (en) 2026-01-29
ES2962935T3 (es) 2024-03-21
CN114423291A (zh) 2022-04-29
HUE064295T2 (hu) 2024-02-28
PL3747267T3 (pl) 2024-02-12
MA53537B1 (fr) 2023-11-30
UY38704A (es) 2020-10-30
PY2020973A (es) 2021-08-13
ZA202305460B (en) 2025-09-25
CR20210680A (es) 2022-03-21
CA3140962A1 (en) 2020-12-10
AR119045A1 (es) 2021-11-17
DK3747267T3 (da) 2023-10-23
ECSP21091556A (es) 2022-06-30
EA202192916A1 (ru) 2022-03-22
US20220248684A1 (en) 2022-08-11
KR20220016154A (ko) 2022-02-08
US12426600B2 (en) 2025-09-30
ZA202110898B (en) 2023-10-25
CO2021018249A2 (es) 2022-01-17
EP3747267A1 (en) 2020-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020288736B2 (en) Methylobacterium sp. nov. strain, compositions comprising it, and its use as bio-stimulant and endophyte nitrogen-fixing bacterium
CN101891548B (zh) 一种三株地衣芽孢杆菌制作的多效微生物菌肥
CN107667737A (zh) 一种无农药立体综合防控果蔬病虫害的方法
KR20150050578A (ko) 식물의 비생물적 스트레스 저항성을 증가시키는 방법
US20230189817A1 (en) Agricultural compositions comprising microbial consortia, and methods of use thereof
CN103789229A (zh) 一种用于农林作物种植的复合益生菌
KR102000472B1 (ko) 식물의 비생물적 스트레스 저항성을 증진시키는 바실러스 아리아바타이 균주 및 이의 용도
US11674118B2 (en) PGPR compositions and methods for improved cultivation of tomato and potato species
Kusuma et al. The use of fish waste based organic fertilizer to improve the growth of balinese red rice (Oryza sativa L Cv. Barak Cenana)
KR102132065B1 (ko) 정균형미생물군, 발효형미생물군 및 합성형미생물군과 유기질원료로 제조된 유기비료 제조방법 및 그 제조방법으로 생성된 유기비료
RU2459402C1 (ru) Способ возделывания ярового рапса на семена
RU2558291C2 (ru) Полифункциональное средство для растениеводства
CN103907423A (zh) 小球藻有机大米培育方法
RU2826882C1 (ru) Штамм эндомикоризного гриба Rhizophagus intraradices и микробиологическое удобрение на его основе
Sundar et al. Unraveling the novel synergistic effects of crop rotation and Rhodopseudomonas palustris inoculation on rice productivity and soil nutrient dynamics
EA048780B1 (ru) Штамм эндофитной азотфиксирующей бактерии methylobacterium sp. nov., содержащая его композиция и их применение в качестве биостимулятора для растений
RU2640286C1 (ru) Способ выращивания льна-долгунца
Suryani The Effect of Provision of Chicken Manure and Local Micro-Organisms of Bamboo Shoots on the Growth and Yield of Chickpeas (Phaseolus vulgaris L.) in Red Yellow Podsolic Soil
Uzor Production of liquid biofertilizer and biochemical characterisation of component nitrogen-fixing and phosphate-solubilising bacteria species
WO2025193932A1 (en) Microorganisms compositions for improvement of plant traits and methods of use thereof
Kumar Biofertilizers-Structure and characteristic features of bacterial biofertilizers
WO2025118066A1 (en) Biofertilizer composition for plant growth promotion
Harshavardhan Integrated Nutrient Management on Growth Flower Yield and Postharvest Quality of Carnation (Dianthus Caryophyllus L.) Cv. Big Mama Under Polyhouse Condition
SOPIALENA et al. The diversity of fungal endophytes of Piper Ningrum at tropical areas: a recent study from Kutai Kartanegara, Indonesia